JP2023018772A - Pharmaceutical composition for treating breast cancer - Google Patents

Abstract

To provide a pharmaceutical composition for treating breast cancer, particularly triple-negative breast cancer.SOLUTION: A pharmaceutical composition for treating breast cancer contains a macrophage inhibitor as an active ingredient.SELECTED DRAWING: None

Description

特許法第３０条第２項適用申請有り 令和３年３月１２日、ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｃ－ｌｉｎｋａｇｅ．ｃｏ．ｊｐ／ｃｖｍｗ２０２０／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ 令和３年３月１２日～１３日（発表日：令和３年３月１３日）、第２８回日本血管生物医学会学術集会（オンライン開催、ｈｔｔｐｓ：／／ｓｉｔｅｓ５．ｎｅｔ－ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ．ｃｏｍ／ｃｖｍｗ２０２０＿ｏｎｌｉｎｅ／ｌｏｇｉｎ／） 令和３年５月１９日、ｈｔｔｐ：／／ｊｓｍｉ２０２１．ｋｅｎｋｙｕｕｋａｉ．ｊｐ／ｊｏｕｒｎａｌ２／、ｈｔｔｐ：／／ｊｓｍｉ２０２１．ｋｅｎｋｙｕｕｋａｉ．ｊｐ／ｊｏｕｒｎａｌ２／ｊｏｕｒｎａｌ＿ｄｅｔａｉｌ．ａｓｐ？ｊｏｕｒｎａｌ＿ｉｄ＝３９２２ 令和３年５月２６日～２７日（発表日：令和３年５月２６日）、第１５回日本分子イメージング学会学術総会・学術集会（オンライン開催、ｈｔｔｐ：／／ｊｓｍｉ２０２１．ｋｅｎｋｙｕｕｋａｉ．ｊｐ／ｅｖｅｎｔ／ｅｖｅｎｔ＿ｄｅｔａｉｌ．ａｓｐ？ｉｄ＝４５５１１）Patent Law Article 30, Paragraph 2 application filed March 12, 2021, https://www. c-linkage. co. jp/cvmw2020/index. html March 12-13, 3rd year of Reiwa (Announcement date: March 13th, 3rd year of Reiwa), 28th Annual Meeting of the Japanese Society of Vascular Biology and Medicine (held online, https://sites5.net-convention. com/cvmw2020_online/login/) May 19, 2021, http://jsmi2021. kenkyuukai. jp/journal2/, http://jsmi2021. kenkyuukai. jp/journal2/journal_detail. asp? journal_id=3922 May 26-27, 2021 (announcement date: May 26, 2021), The 15th Annual Scientific Meeting of the Molecular Imaging Society of Japan (held online, http://jsmi2021. kenkyuukai.jp/event/event_detail.asp?id=45511)

本発明は、乳がん治療用医薬組成物に関する。 The present invention relates to a pharmaceutical composition for treating breast cancer.

乳がんは、女性において一般的ながんであり死亡率も高い。乳がんを分類する場合に、エストロゲンレセプター（ＥＲ）、プロゲステロンレセプター（ＰＲ）およびヒト上皮成長因子受容体２が用いられる。これらのマーカー（レセプター）の有無で、ＥＲ陽性（ＥＲ＋）、ＥＲ陰性（ＥＲ－）、ＰＲ陽性（ＰＲ＋）、ＰＲ陰性（ＰＲ－）、ＨＥＲ２陽性（ＨＥＲ２＋）又はＨＥＲ２陰性（ＨＥＲ２－）などに分類される。これらのマーカーは、乳がん治療の分子標的としても用いられている。従って、これらの３つのマーカーがすべて陰性のトリプルネガティブの乳がんは、治療の分子標的を有さないために、治療が困難であると考えられている（特許文献１）。また、トリプルネガティブの乳がんは、化学療法にも抵抗性であると考えられている。術後の再発率は他の乳がんに比べて高い（非特許文献１及び２）。 Breast cancer is a common cancer and has a high mortality rate in women. When classifying breast cancer, estrogen receptor (ER), progesterone receptor (PR) and human epidermal growth factor receptor 2 are used. ER positive (ER+), ER negative (ER-), PR positive (PR+), PR negative (PR-), HER2 positive (HER2+) or HER2 negative (HER2-) depending on the presence or absence of these markers (receptors) being classified. These markers are also used as molecular targets for breast cancer therapy. Therefore, triple-negative breast cancer in which all three of these markers are negative is thought to be difficult to treat because it does not have a therapeutic molecular target (Patent Document 1). Triple-negative breast cancer is also believed to be resistant to chemotherapy. The postoperative recurrence rate is higher than other breast cancers (Non-Patent Documents 1 and 2).

特開２０１７－２５０８２号公報JP 2017-25082 A

「クリニカル・キャンサー・リサーチ（Clinical Cancer Research）」２００７年（米国）第１３巻、ｐ４４２９－３４"Clinical Cancer Research" 2007 (USA) Vol. 13, p4429-34 「メディカル・オンコロジー（Medical Oncology）」２００７年（米国）第３０巻、ｐ３８８－"Medical Oncology" 2007 (USA) Vol. 30, p388-

従って、本発明の目的は、乳がん、特にはトリプルネガティブ乳がんの治療用医薬組成物を提供することである。 It is therefore an object of the present invention to provide pharmaceutical compositions for the treatment of breast cancer, particularly triple-negative breast cancer.

本発明者は、乳がん、特にはトリプルネガティブ乳がんの治療用医薬組成物について、鋭意研究した結果、驚くべきことに、マクロファージ抑制物質を有効成分として用いることにより、乳がん、特にはトリプルネガティブ乳がんに優れた治療効果を示す医薬組成物を見出した。
本発明は、こうした知見に基づくものである。
従って、本発明は、
［１］マクロファージ抑制物質を有効成分として含む、乳がん治療用医薬組成物、
［２］マクロファージ抑制物質がリポソームに内包されている、［１］に記載の乳がん治療用医薬組成物、
［３］マクロファージ抑制物質がクロドロン酸である、［１］又は［２］に記載の乳がん治療用医薬組成物、
［４］再発抑制用又は転移抑制用である、［１］～［３］のいずれかに記載の乳がん治療用医薬組成物、
［５］外科的治療の後に投与される、［１］～［４］のいずれかに記載の乳がん治療用医薬組成物、
［６］前記マクロファージが組織常在性マクロファージである、［１］～［５］のいずれかに記載の乳がん治療用医薬組成物、及び
［７］前記乳がんが、エストロゲン受容体（ＥＲ）、プロゲステロン受容体（ＰＲ）、及びヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）を有さないトリプルネガティブ乳がんである、［１］～［６］のいずれかに記載の乳がん治療用医薬組成物、
に関する。 As a result of intensive research on a pharmaceutical composition for treating breast cancer, particularly triple-negative breast cancer, the present inventors surprisingly found that, by using a macrophage-inhibiting substance as an active ingredient, it is superior to breast cancer, particularly triple-negative breast cancer. We have found a pharmaceutical composition exhibiting a therapeutic effect.
The present invention is based on these findings.
Accordingly, the present invention provides
[1] A pharmaceutical composition for treating breast cancer, comprising a macrophage inhibitory substance as an active ingredient,
[2] The pharmaceutical composition for treating breast cancer according to [1], wherein the macrophage inhibitory substance is encapsulated in liposomes;
[3] The pharmaceutical composition for treating breast cancer of [1] or [2], wherein the macrophage inhibitory substance is clodronic acid;
[4] The pharmaceutical composition for treating breast cancer according to any one of [1] to [3], which is for suppressing recurrence or metastasis;
[5] The pharmaceutical composition for treating breast cancer according to any one of [1] to [4], which is administered after surgical treatment;
[6] The pharmaceutical composition for treating breast cancer according to any one of [1] to [5], wherein the macrophages are tissue-resident macrophages, and [7] the breast cancer is estrogen receptor (ER), progesterone The pharmaceutical composition for treating breast cancer according to any one of [1] to [6], which is triple-negative breast cancer that does not have receptor (PR) and human epidermal growth factor receptor 2 (HER2),
Regarding.

本発明の医薬組成物によれば、乳がん、特にはトリプルネガティブ乳がんを効果的に治療することができる。 The pharmaceutical composition of the present invention can effectively treat breast cancer, particularly triple-negative breast cancer.

がん組織における、組織常在性のマクロファージ及び血液系マクロファージの侵入を模式的に示した図である。FIG. 1 is a diagram schematically showing invasion of tissue-resident macrophages and blood-system macrophages into cancer tissues. 乳がん組織における組織常在性のマクロファージの侵入、及び腫瘍血管形成後の血液系マクロファージ前駆細胞の侵入を示した図である。FIG. 1 shows invasion of tissue-resident macrophages in breast cancer tissue and invasion of blood-lineage macrophage progenitor cells after tumor angiogenesis. 乳がん（Ｅ０７７１細胞）移植マウスを用いて、マクロファージ抑制物質の乳がん細胞の増殖抑制効果を示した実験のプロトコール及びグラフである。Fig. 10 is an experimental protocol and graphs showing the inhibitory effect of macrophage-inhibiting substances on breast cancer cell proliferation using breast cancer (E0771 cells)-transplanted mice. 乳がん（Ｅ０７７１細胞）移植マウスを用いて、乳がん組織に侵入する細胞の多くが、組織常在性のマクロファージであることを示した図である。Fig. 2 shows that, using breast cancer (E0771 cell)-transplanted mice, most of the cells that invade breast cancer tissue are tissue-resident macrophages. 乳がん（４Ｔ１細胞）移植マウスを用いて、マクロファージ抑制物質の乳がん細胞の増殖抑制効果を示した実験のプロトコール及びグラフである。Fig. 2 is an experimental protocol and graph showing the effect of a macrophage inhibitor on the growth of breast cancer cells using breast cancer (4T1 cell)-transplanted mice. 肺がん（ＬＬＣ細胞）移植マウスを用いて、マクロファージ抑制物質の肺がん細胞の増殖抑制効果を検討した実験のプロトコール及びグラフである。Fig. 10 is an experimental protocol and graphs for investigating the effect of a macrophage inhibitor on the growth of lung cancer cells using lung cancer (LLC cell)-transplanted mice. 肺がん細胞（ＬＬＣ細胞）組織に侵入した、組織常在性マクロファージの細胞数を検討した図である。FIG. 10 is a diagram examining the number of tissue-resident macrophages that have invaded lung cancer cell (LLC cell) tissue. 大腸がん（Ｃｏｌｏｎ２６細胞）移植マウスを用いて、マクロファージ抑制物質の大腸がん細胞の増殖抑制効果を検討した実験のプロトコール及びグラフである。1 is a protocol and graphs for experiments in which colon cancer (Colon26 cells)-transplanted mice were used to examine the effects of macrophage-inhibiting substances on colon cancer cell proliferation. 乳がん（４Ｔ１細胞）再発モデルマウスを用いて、マクロファージ抑制物質の乳がんの増殖再発抑制効果を示した実験のプロトコール及びグラフである。Fig. 10 is an experimental protocol and graphs showing the inhibitory effects of macrophage-inhibiting substances on growth and recurrence of breast cancer using breast cancer (4T1 cell) recurrence model mice.

本発明の医薬組成物は、マクロファージ抑制物質を有効成分として含む。 The pharmaceutical composition of the present invention contains a macrophage inhibitory substance as an active ingredient.

《マクロファージ抑制物質》
前記マクロファージ抑制物質は、試験管内又は生体においてマクロファージの機能を抑制、阻害、又は低下させる物質が挙げられる。また、試験管内又は生体内において、マクロファージを枯渇させる物質が挙げられる。マクロファージの機能を抑制、阻害、又は低下させる物質としては、例えばクロドロン酸、ゾレドロン酸、トラベクテディン（Trabectedin）、ＰＬＸ７４８６、ＪＮＪ－４０３４６５２７、ＡＲＲＹ－３８２、ＢＬＺ９４５、ＩＭＣ－ＣＳ４、Ｒ０５５０９５５４、ＲＧ７１５５、又はＦＰＡ００８が挙げられる。マクロファージを枯渇させる物質としては、例えばクロドロン酸、又はビスホスホン酸誘導体が挙げられる。 《Macrophage inhibitor》
Examples of the macrophage-suppressing substance include substances that suppress, inhibit, or reduce the function of macrophages in vitro or in vivo. Also included are substances that deplete macrophages in vitro or in vivo. Substances that suppress, inhibit, or reduce macrophage function include, for example, clodronic acid, zoledronic acid, Trabectedin, PLX7486, JNJ-40346527, ARRY-382, BLZ945, IMC-CS4, R05509554, RG7155, or and FPA008. Substances that deplete macrophages include, for example, clodronic acid or bisphosphonic acid derivatives.

（クロドロン酸）
前記クロドロン酸は、下記式（Ｉ）：

で表される化合物である。
クロドロン酸（Ｃｌｏｄｒｏｎａｔｅ）は、ビスホスホン酸の１種であり、骨粗鬆病の治療薬と知られている。クロドロン酸は、破骨細胞に取り込まれて、細胞内でＡＴＰ類似体としてＡＴＰ代謝を阻害し、破骨細胞を枯渇させる。破骨細胞は、マクロファージ系の細胞であるが、クロドロン酸は、組織常在性マクロファージ、又は血中マクロファージに取り込まれると、組織常在性マクロファージ、又は血中マクロファージも同様に枯渇させることができる。 (clodronic acid)
The clodronic acid has the following formula (I):

It is a compound represented by
Clodronate is a type of bisphosphonic acid and is known as a therapeutic agent for osteoporosis. Clodronic acid is taken up by osteoclasts and inhibits ATP metabolism as an ATP analogue intracellularly, depleting osteoclasts. Osteoclasts are cells of the macrophage lineage, but when clodronic acid is taken up by tissue-resident macrophages or blood macrophages, it can deplete tissue-resident macrophages or blood macrophages as well. .

ビスホスホン酸誘導体としては、下記式（II）:

（式中、Ｃｙはフェニル基又は複素環基であり、Ｙは水素原子、アルキル基、ハロゲン原子、ハロゲン化アルキル基、水酸基、ハロゲン原子若しくはアルコキシ基で置換されてもよいアリール基、又は、アラルキルオキシ基であり、Ｆはフッ素原子であり、Ｐはリン原子を表し、Ｒは水素原子又はアルキル基であり、Ｒ_１及びＲ_２は、同一又は互いに異なって、水素原子又はアルキルカルボニルオキシアルキル基であり、ｊは０又は１の数を表し、ｍは０又は１の数を表し、ｎは１～６の整数を表す。ただし、Ｃｙが３－ピリジル基であり、ｍが１であり、ｎが１であり、Ｙが水素原子であり、Ｒ_１及びＲ_２が水素原子である場合を除く）で表される化合物が挙げられ、具体的には下記式（１）～（５）：

で表される化合物が挙げられる。 As the bisphosphonic acid derivative, the following formula (II):

(Wherein, Cy is a phenyl group or a heterocyclic group, Y is a hydrogen atom, an alkyl group, a halogen atom, a halogenated alkyl group, a hydroxyl group, a halogen atom or an aryl group optionally substituted with an alkoxy group, or an aralkyl is an oxy group, F is a fluorine atom, P represents a phosphorus atom, R is a hydrogen atom or an alkyl group, R ₁ and R ₂ are the same or different and are a hydrogen atom or an alkylcarbonyloxyalkyl group and j represents the number of 0 or 1, m represents the number of 0 or 1, and n represents an integer of 1 to 6. However, Cy is a 3-pyridyl group, m is 1, excluding the case where n is 1, Y is a hydrogen atom, and R ₁ and R ₂ are hydrogen atoms), specifically the following formulas (1) to (5):

The compound represented by is mentioned.

《リポソーム》
前記マクロファージ抑制物質は、好ましくはリポソームに内包されている。マクロファージ抑制物質をリポソームに封入することにより、マクロファージ貪食効率および細胞透過性を向上することができる。
リポソームは、少なくとも１つの脂質二重層を有する球形の小胞である。薬剤を投与するための輸送手段として利用することができる。リポソームは、リン脂質（例えば、ホスファチジルコリン）によって構成されることができる。また、超音波処理などによって、生体膜を破壊することによって製造することができる。
リポソームの粒子径は、マクロファージに取り込まれる限りにおいて、特に限定されるものではないが、例えば５０～５００ｎｍ程度であればよい。組織常在性マクロファージの場合、比較的粒子径が大きい方が好ましく（例えば、２００～５００ｎｍ）、腫瘍随伴性のマクロファージの場合、比較的粒子径が小さい方が好ましい（例えば５０～２００ｎｍ）。 《Liposome》
The macrophage inhibitory substance is preferably encapsulated in liposomes. Macrophage phagocytosis efficiency and cell permeability can be improved by encapsulating macrophage inhibitory substances in liposomes.
Liposomes are spherical vesicles with at least one lipid bilayer. It can be used as a transport means for administering drugs. Liposomes can be composed of phospholipids, such as phosphatidylcholines. It can also be produced by destroying biological membranes, such as by ultrasonic treatment.
The particle size of the liposome is not particularly limited as long as it can be taken up by macrophages, and may be, for example, about 50 to 500 nm. For tissue-resident macrophages, the particle size is preferably relatively large (eg, 200-500 nm), and for tumor-associated macrophages, the particle size is preferably relatively small (eg, 50-200 nm).

本発明の医薬組成物が、標的とするマクロファージは、限定されるものではないが、組織常在性マクロファージである。組織常在性マクロファージは、乳がんの組織に特異的に侵入し、乳がんの増殖を促進すると考えられる。従って、乳がんの増殖を抑制するために、組織常在性マクロファージを抑制（例えば、枯渇）することによって、乳がんを治療することが可能であり、特に再発又は転移を抑制することができる。 Macrophages targeted by the pharmaceutical compositions of the present invention include, but are not limited to, tissue-resident macrophages. Tissue-resident macrophages are thought to specifically invade breast cancer tissue and promote breast cancer growth. Thus, breast cancer can be treated by suppressing (eg, depleting) tissue-resident macrophages in order to suppress the growth of breast cancer, in particular recurrence or metastasis.

《乳がん》
本発明の医薬組成物は、乳がん治療用医薬組成物である。乳がんは、30歳代から高齢になるほど、罹患率が高い。非浸潤乳管癌（ｄｕｃｔａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｉｎ ｓｉｔｕ）、非浸潤性小葉癌（ｌｏｂｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｉｎ ｓｉｔｕ）、浸潤乳管癌（ｉｎｖａｓｉｖｅ ｄｕｃｔａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）に代表される浸潤癌、及びパジェット病の４つに大別され、日本では、浸潤乳管癌が更に、乳頭腺管癌、充実腺管癌、及び硬癌の３つに分類される。
乳がんのステージは、０期、Ｉ期、ＩＩＡ期、ＩＩＢ期、ＩＩＩＡ期、ＩＩＩＢ期、ＩＩＩＣ期、及びＩＶ期に分けられる。
乳がんの治療は原則として外科的切除であり、外科的切除に加えて、抗がん剤又は抗エストロゲン剤などの化学療法若しくは放射線療法が併用される。外科的手術の適応は、ステージＩ～ＩＩＩＡ期である。 《Breast cancer》
The pharmaceutical composition of the present invention is a pharmaceutical composition for treating breast cancer. The incidence of breast cancer increases with age from the age of 30 onwards. Invasive carcinoma represented by ductal carcinoma in situ, lobular carcinoma in situ, invasive ductal carcinoma, and Paget's disease In Japan, invasive ductal carcinoma is further classified into three types: papillary ductal carcinoma, solid ductal carcinoma, and sclerocarcinoma.
Breast cancer stages are divided into 0, I, IIA, IIB, IIIA, IIIB, IIIC, and IV.
Treatment of breast cancer is, in principle, surgical resection, and in addition to surgical resection, chemotherapy such as an anticancer agent or an anti-estrogen agent, or radiotherapy is used in combination. Indications for surgery are stages I-IIIA.

（トリプルネガティブ乳がん）
更に、乳がんは、エストロゲンレセプター（ＥＲ）、プロゲステロンレセプター（ＰＲ）およびヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）の発現によっても分類される。例えば、エストロゲンリセプター陽性乳がんに対しては、抗エストロゲン薬であるタモキシフェンが使用される。また、ＥＧＦＲ・ＨＥＲ２低分子阻害薬として、ラパチニブが使用されている。更に、ＨＥＲ２に対するモノクローナル抗体医薬として、トラスツズマブ、又はベルツヅマブが使用されている。
前記３つのマーカーが陰性のトリプルネガティブ乳がんは、術前または術後にスラサイクリンベースのレジメンとタキサン系薬剤の逐次投与が行われることが多いが、化学療法に抵抗性であることも多い。
本発明の乳がん治療用医薬組成物は、前記トリプルネガティブ乳がんにも有効である。本明細書においてトリプルネガティブ乳がんとは、エストロゲン受容体（ＥＲ）及びプロゲステロン受容体（ＰＲ）の発現がなく、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）の増幅がない乳がんである。 (triple negative breast cancer)
In addition, breast cancer is also classified by the expression of estrogen receptor (ER), progesterone receptor (PR) and human epidermal growth factor receptor 2 (HER2). For example, the anti-estrogen drug tamoxifen is used for estrogen receptor-positive breast cancer. Lapatinib is also used as an EGFR/HER2 small molecule inhibitor. Furthermore, trastuzumab or veltuzumab is used as a monoclonal antibody drug against HER2.
Triple-negative breast cancers that are negative for the above three markers are often treated with sequential administration of thuracycline-based regimens and taxanes preoperatively or postoperatively, but are also often resistant to chemotherapy.
The pharmaceutical composition for treating breast cancer of the present invention is also effective for triple-negative breast cancer. Triple-negative breast cancer, as used herein, is breast cancer that lacks estrogen receptor (ER) and progesterone receptor (PR) expression and lacks human epidermal growth factor receptor 2 (HER2) amplification.

乳がんが形成され腫瘍血管が侵入後に、血液系マクロファージが侵入する（図１）。本発明者らの研究によれば、乳がんにおいては、前記腫瘍血管が乳がん組織に侵入する前に、組織常在性のマクロファージが乳がんに侵入することが分かった。そして、この組織常在性マクロファージは、乳がんの増殖を促進させていると考えられた。
従って、組織常在性マクロファージの活性を抑制することによって、乳がんの増殖又は悪性化を阻害できると考えられる。後述の実施例に示すように、組織常在性マクロファージを枯渇させることによって、乳がんの増殖を抑制することができる。 After breast cancer formation and invasion of tumor blood vessels, hematological macrophages invade (Fig. 1). According to the study of the present inventors, in breast cancer, tissue-resident macrophages invade the breast cancer before the tumor blood vessels invade the breast cancer tissue. These tissue-resident macrophages were thought to promote the growth of breast cancer.
Therefore, it is thought that the growth or malignant transformation of breast cancer can be inhibited by suppressing the activity of tissue-resident macrophages. As shown in the examples below, depletion of tissue-resident macrophages can suppress growth of breast cancer.

従って、限定されるものではないが、本発明の乳がん治療用医薬組成物は、乳がん組織の形成の初期に投与されることが効果的である。すなわち、乳がんの再発時の乳がん組織の形成時に、組織常在性マクロファージを抑制又は枯渇させることにより、特に効果的に乳がんの再発を抑えることができる。
また、乳がんが転移した場合に、転移した乳がんの形成時に組織常在性マクロファージを抑制又は枯渇させることにより、特に効果的に乳がんの転移を抑えることができる。
更に、外科的治療の後に、本発明の乳がん治療用医薬組成物を投与することにより、残存した乳がん細胞の増殖によって形成される乳がん組織の増殖を抑制することが可能である。 Therefore, although not limited, the pharmaceutical composition for treating breast cancer of the present invention is effectively administered at an early stage of breast cancer tissue formation. That is, recurrence of breast cancer can be particularly effectively suppressed by suppressing or depleting tissue-resident macrophages at the time of breast cancer tissue formation at the time of breast cancer recurrence.
In addition, when breast cancer metastasizes, it is possible to particularly effectively suppress breast cancer metastasis by suppressing or depleting tissue-resident macrophages at the time of formation of metastatic breast cancer.
Furthermore, by administering the pharmaceutical composition for treating breast cancer of the present invention after surgical treatment, it is possible to suppress the proliferation of breast cancer tissue formed by the proliferation of remaining breast cancer cells.

本発明の医薬組成物の投与剤型としては、特には限定がなく、経口剤及び非経口剤を挙げることができるが、非経口剤が好ましい。前記経口剤は、例えば、細粒剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、及び丸剤等の固形状又は粉末状製剤、並びに懸濁液、エマルジョン剤、シロップ剤、及びエキス剤等の液状製剤を挙げることができる。非経口剤としては、例えば、注射剤を挙げることができる。 The dosage form of the pharmaceutical composition of the present invention is not particularly limited, and oral agents and parenteral agents can be mentioned, but parenteral agents are preferred. The oral preparations include, for example, solid or powder preparations such as fine granules, granules, tablets, capsules, and pills, and liquid preparations such as suspensions, emulsions, syrups, and extracts. can be mentioned. Examples of parenteral agents include injections.

本発明の医薬組成物は、前記マクロファージ抑制物質からなるものでもよく、また、前記マクロファージ抑制物質を含むものでもよい。本発明の医薬組成物が、前記マクロファージ抑制物質を含むものである場合、他の添加剤を含むことができる。 The pharmaceutical composition of the present invention may consist of the macrophage inhibitory substance, or may contain the macrophage inhibitory substance. When the pharmaceutical composition of the present invention contains the macrophage inhibitory substance, it may contain other additives.

本発明の医薬組成物が経口剤である場合、他の添加剤としては、賦形剤、結合剤、崩壊剤、乳化剤、滑沢剤、流動性促進剤、希釈剤、保存剤、着色剤、香料、矯味剤、安定化剤、保湿剤、防腐剤、酸化防止剤、又は懸濁化剤を挙げることができ、具体的には、例えば、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、澱粉、コーンスターチ、白糖、乳糖、ぶどう糖、マンニット、カルボキシメチルセルロース、デキストリン、ポリビニルピロリドン、結晶セルロース、大豆レシチン、ショ糖、脂肪酸エステル、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール、ケイ酸マグネシウム、無水ケイ酸、又は合成ケイ酸アルミニウムなどであることができる。 When the pharmaceutical composition of the present invention is an oral formulation, other additives include excipients, binders, disintegrants, emulsifiers, lubricants, fluidity enhancers, diluents, preservatives, coloring agents, Flavors, flavoring agents, stabilizers, moisturizers, preservatives, antioxidants, or suspending agents can be mentioned, and specific examples include gelatin, sodium alginate, starch, cornstarch, sucrose, lactose, Glucose, mannite, carboxymethylcellulose, dextrin, polyvinylpyrrolidone, crystalline cellulose, soybean lecithin, sucrose, fatty acid ester, talc, magnesium stearate, polyethylene glycol, magnesium silicate, anhydrous silicic acid, or synthetic aluminum silicate. be able to.

本発明の医薬組成物が非経口剤である場合、他の添加剤としては、生理食塩水若しくはリンゲル液等の水溶性溶剤、植物油若しくは脂肪酸エステル等の非水溶性溶剤、ブドウ糖若しくは塩化ナトリウム等の等張化剤、溶解補助剤、安定化剤、防腐剤、懸濁化剤、又は乳化剤などを挙げることができる。 When the pharmaceutical composition of the present invention is a parenteral preparation, other additives include water-soluble solvents such as physiological saline or Ringer's solution, water-insoluble solvents such as vegetable oils or fatty acid esters, glucose or sodium chloride, and the like. Tonicity agents, solubilizing agents, stabilizers, preservatives, suspending agents, emulsifying agents, and the like can be mentioned.

本発明の医薬組成物は、前記マクロファージ抑制物質を、９０重量％以上、５０重量％以上、１０重量％以上、又は１重量％以上含むことができる。 The pharmaceutical composition of the present invention can contain 90% by weight or more, 50% by weight or more, 10% by weight or more, or 1% by weight or more of the macrophage inhibitory substance.

本発明の医薬組成物の投与量又は摂取量は、製剤形態、並びに使用する対象の年齢、性別、体重及び疾患の症状の程度などに応じて適宜調整することができるが、当該医薬組成物を投与又は摂取することで、乳がんの増殖を抑制若しくは治療することができる量であることが好ましい。具体的には、マクロファージ抑制物質の添加量に換算して、０．０１～１０００ｍｇ／ｋｇ体重／日、好ましくは、０．１～７５０ｍｇ／ｋｇ体重／日、より好ましくは１～５００ｍｇ／ｋｇ体重／日、更に好ましくは５～４００ｍｇ／ｋｇ体重／日、更に好ましくは１０～３００ｍｇ／ｋｇ体重／日、更に好ましくは１５～２００ｍｇ／ｋｇ体重／日、又は最も好ましくは２０～１５０ｍｇ／ｋｇ体重／日であることができる。 The dosage or intake of the pharmaceutical composition of the present invention can be appropriately adjusted according to the dosage form, age, sex, body weight and degree of symptoms of the disease of the subject to be used. It is preferably an amount that can suppress or treat the growth of breast cancer by administration or ingestion. Specifically, in terms of the added amount of the macrophage inhibitory substance, 0.01 to 1000 mg/kg body weight/day, preferably 0.1 to 750 mg/kg body weight/day, more preferably 1 to 500 mg/kg body weight /day, more preferably 5-400 mg/kg body weight/day, more preferably 10-300 mg/kg body weight/day, more preferably 15-200 mg/kg body weight/day, or most preferably 20-150 mg/kg body weight/day can be days.

もちろん、上記の投与法は一例であり、他の投与法であってもよい。ヒトへの医薬組成物の投与方法、投与量、投与期間、及び投与間隔等は、管理された臨床治験によって決定されることが望ましい。 Of course, the above administration method is an example, and other administration methods may be used. The administration method, dosage, administration period, administration interval, etc. of the pharmaceutical composition to humans are desirably determined by controlled clinical trials.

本発明の医薬組成物は、ヒトに対して投与することができるが、投与対象はヒト以外の動物であってもよく、イヌ、ネコ、ウサギ、ハムスター、モルモット、及びリス等のペット；牛及び豚等の家畜；マウス、ラット等の実験動物；並びに、動物園等で飼育されている動物等が挙げられる。 The pharmaceutical composition of the present invention can be administered to humans, but the subject of administration may be animals other than humans, such as pets such as dogs, cats, rabbits, hamsters, guinea pigs, and squirrels; Domestic animals such as pigs; experimental animals such as mice and rats; and animals raised in zoos and the like.

《作用》
本発明の乳がん治療用医薬組成物が、乳がんを効果的に治療できるメカニズムは、以下のように推定することができる。
図２に示すように、乳がん組織の初期の形成時には、腫瘍血管が乳がん組織には侵入していない。しかし、生体内の組織に内在している組織常在性マクロファージが乳がん組織特異的に侵入する。この組織常在性マクロファージは、乳がんの増殖等を促進すると考えられる。従って、この乳がん組織に侵入した組織常在性マクロファージを抑制又は枯渇させることによって、乳がんを治療することができると推定させる。特に、組織常在性マクロファージの抑制又は枯渇は、乳がん組織形成の初期段階が有効であると推定される。
更に、マクロファージ抑制物質は、マクロファージを抑制又は枯渇できるものであれば有効であると推定される。すなわち、乳がん組織に侵入する組織常在性マクロファージを抑制又は枯渇できれば、組織常在性マクロファージによる、乳がんの増殖の促進を抑えることができるからである。例えば、ビスホスホン酸の基本骨格を有している化合物は、マクロファージに取り込まれることによって、マクロファージのＡＴＰ代謝を阻害し、マクロファージを枯渇させることができる。従って、乳がん組織の形成を抑制し、乳がんを治療することができると推定される。 《Action》
The mechanism by which the pharmaceutical composition for treating breast cancer of the present invention can effectively treat breast cancer can be presumed as follows.
As shown in Figure 2, during the early formation of breast cancer tissue, tumor blood vessels do not invade the breast cancer tissue. However, tissue-resident macrophages endogenous to tissues in vivo invade breast cancer tissue-specifically. These tissue-resident macrophages are thought to promote the proliferation of breast cancer. Therefore, it is presumed that breast cancer can be treated by suppressing or depleting tissue-resident macrophages that have invaded breast cancer tissue. In particular, suppression or depletion of tissue-resident macrophages is presumed to be effective in early stages of breast cancer histogenesis.
Furthermore, macrophage inhibitory substances are presumed to be effective as long as they can inhibit or deplete macrophages. That is, if tissue-resident macrophages that invade breast cancer tissue can be suppressed or depleted, promotion of breast cancer proliferation by tissue-resident macrophages can be suppressed. For example, a compound having a bisphosphonic acid backbone can inhibit ATP metabolism of macrophages and deplete macrophages by being taken up by macrophages. Therefore, it is presumed that the formation of breast cancer tissue can be suppressed and breast cancer can be treated.

以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。 EXAMPLES The present invention will be specifically described below with reference to Examples, but these are not intended to limit the scope of the present invention.

《実施例１》
本実施例では、乳がん（Ｅ０７７１細胞）移植マウスを用いて、マクロファージ抑制物質クロドロン酸リポソーム（CL）の乳がん細胞の増殖抑制効果を検討した。
Ｅ０７７１細胞移植１日前に、４匹ずつに群分けしたＣ５７ＢＬマウスに対して、０．１ｍｇのクロドロン酸リポソーム（CL）、又はＰＢＳをマウス乳腺に注射により投与した。１日後に、発光酵素Ｌｕｃ２を恒常発現するＥ０７７１／Ｌｕｃ２を、３ｘ１０^５細胞、移植した。移植後の細胞の増殖を蛍光強度で測定した。
図３に示すように、クロドロン酸リポソーム（CL）の投与により、Ｅ０７７１細胞の増殖が顕著に抑制された。 <<Example 1>>
In this example, breast cancer (E0771 cells)-transplanted mice were used to examine the effect of a macrophage inhibitor, clodronate liposome (CL), on the growth of breast cancer cells.
One day before E0771 cell transplantation, 0.1 mg of clodronate liposome (CL) or PBS was injected into the mouse mammary gland to C57BL mice divided into groups of four. One day later, 3×10 ⁵ cells of E0771/Luc2 constitutively expressing luciferase Luc2 were transplanted. Proliferation of cells after transplantation was measured by fluorescence intensity.
As shown in FIG. 3, administration of clodronate liposomes (CL) significantly inhibited the growth of E0771 cells.

《参考例１》
本参考例では、乳がん（Ｅ０７７１細胞）移植マウスを用いて、乳がん組織に侵入する細胞を同定した。具体的には、全身にＧＦＰを発現するトランスジェニックマウスＧＦＰ－Ｔｇの乳腺組織にＥ０７７１細胞を同所移植し、Ｅ０７７１細胞の乳がん組織に侵入する細胞を免疫染色によって解析した。
ＧＦＰ－Ｔｇに、ＧＦＰ（－）のＥ０７７１細胞を３ｘ１０^５細胞移植した。移植３日後に、乳腺組織を取り出し、マクロファージに特異的に発現しているＦ４／８０に対する抗体を用いて免疫染色を行った。
図４に示すように、腫瘍組織内のＧＦＰ陽性細胞中のＦ４／８０陽性細胞は５６％であり、多くの組織常在性マクロファージが、乳がん組織中に侵入していることがわかった。
実施例１では、組織常在性マクロファージをクロドロン酸リポソーム（CL）で枯渇させることにより、乳がん細胞の増殖が抑制されており、乳がん組織に侵入した組織常在性マクロファージが、乳がん細胞の増殖を促進していると考えられた。 <<Reference example 1>>
In this reference example, a mouse transplanted with breast cancer (E0771 cells) was used to identify cells that invade breast cancer tissue. Specifically, E0771 cells were orthotopically transplanted into the mammary gland tissue of transgenic mice GFP-Tg expressing GFP systemically, and the cells invading the mammary gland tissue of E0771 cells were analyzed by immunostaining.
3×10 ⁵ cells of GFP(−) E0771 cells were transplanted into GFP-Tg. Three days after transplantation, the mammary tissue was taken out and immunostained using an antibody against F4/80, which is specifically expressed in macrophages.
As shown in FIG. 4, F4/80-positive cells in GFP-positive cells in tumor tissue accounted for 56%, indicating that many tissue-resident macrophages invaded breast cancer tissue.
In Example 1, the proliferation of breast cancer cells was suppressed by depleting tissue-resident macrophages with clodronate liposomes (CL). thought to promote.

《実施例２》
本実施例では、Ｅ０７７１細胞と異なる乳がん細胞、４Ｔ１細胞を用いて、マクロファージ抑制物質クロドロン酸リポソーム（CL）の乳がん細胞の増殖抑制効果を検討した。Ｅ０７７１細胞に代えて、４Ｔ１細胞を用いたこと、及びＣ５７ＢＬマウスに代えてＢａｌｂ／ｃマウスを用いたことを除いては、実施例１の操作を繰り返した。
図５に示すように、クロドロン酸リポソーム（CL）の投与により、４Ｔ１細胞の増殖が顕著に抑制された。 <<Example 2>>
In this example, using breast cancer cells different from E0771 cells, 4T1 cells, the growth inhibitory effect of the macrophage inhibitor clodronate liposome (CL) on breast cancer cells was examined. The procedure of Example 1 was repeated except that 4T1 cells were used instead of E0771 cells and Balb/c mice were used instead of C57BL mice.
As shown in FIG. 5, administration of clodronate liposomes (CL) markedly inhibited proliferation of 4T1 cells.

《比較例１》
本比較例では、マクロファージ抑制物質クロドロン酸リポソーム（CL）に乳がん細胞の増殖抑制効果が乳がんに特異的なものであるかを検討した。Ｅ０７７１細胞に代えて、肺がん細胞であるＬＬＣ細胞を用いたことを除いては、実施例１の操作を繰り返した。
図６に示すように、肺がん細胞では、クロドロン酸リポソーム（CL）の投与により、乳がん細胞とは異なり、逆にＬＬＣ細胞の増殖が促進された。 <<Comparative example 1>>
In this comparative example, it was examined whether the effect of clodronate liposome (CL), a macrophage inhibitor, on the growth of breast cancer cells is specific to breast cancer. The procedure of Example 1 was repeated except that LLC cells, which are lung cancer cells, were used instead of E0771 cells.
As shown in FIG. 6, in lung cancer cells, the administration of clodronate liposome (CL) promoted the growth of LLC cells, unlike breast cancer cells.

《参考例２》
本参考例では、肺がん細胞（ＬＬＣ細胞）組織に、組織常在性マクロファージが侵入するか否かを検討した。
Ｅ０７７１細胞に加えて、ＬＬＣ細胞を用いて、参考例１の操作を繰り返した。図７に示すように、乳がん細胞であるＥ０７７１細胞の組織中には、多くの組織常在性マクロファージが侵入していたが、肺がん細胞であるＬＬＣ細胞の組織中への組織常在性マクロファージの侵入は非常に少なかった。 <<Reference example 2>>
In this reference example, it was examined whether or not tissue-resident macrophages invade lung cancer cell (LLC cell) tissue.
The procedure of Reference Example 1 was repeated using LLC cells in addition to E0771 cells. As shown in FIG. 7, many tissue-resident macrophages invaded the tissue of E0771 cells, which are breast cancer cells. Intrusion was very low.

《比較例２》
本比較例では、マクロファージ抑制物質クロドロン酸リポソーム（CL）に乳がん細胞の増殖抑制効果が乳がんに特異的なものであるかを検討した。Ｅ０７７１細胞に代えて、大腸がん細胞であるＣｏｌｏｎ２６細胞を用いたことを除いては、実施例１の操作を繰り返した。
図８に示すように、肺がん細胞では、クロドロン酸リポソーム（CL）の投与により、乳がん細胞とは異なり、逆にＬＬＣ細胞の増殖が促進された。 <<Comparative Example 2>>
In this comparative example, it was examined whether the effect of clodronate liposome (CL), a macrophage inhibitor, on the growth of breast cancer cells is specific to breast cancer. The procedure of Example 1 was repeated except that Colon26 cells, which are colon cancer cells, were used instead of the E0771 cells.
As shown in FIG. 8, in lung cancer cells, the administration of clodronate liposome (CL) promoted the proliferation of LLC cells, unlike breast cancer cells.

《実施例３》
本実施例では、乳がんの再発モデルマウスを用い、外科手術により腫瘍のおよそ９５％を摘出した後の乳腺における腫瘍増殖に対するマクロファージ抑制物質クロドロン酸リポソーム（CL）の効果を検討した。
４匹又は５匹ずつに群分けしたＢａｌｂ／ｃマウスに対して、発光酵素Ｌｕｃ２を恒常発現する４Ｔ１／Ｌｕｃ２を、３ｘ１０^５細胞、移植した。１４日後に乳がん細胞塊のおよそ９５％を、外科的に切除した。０．１ｍｇのクロドロン酸リポソーム（CL）若しくはＰＢＳを切除当日にマウス乳腺に注射により１回投与するか、又は０．２５ｍｇのクロドロン酸リポソーム、若しくはＰＢＳを、切除当日から４日間（４回）マウス乳腺に注射により投与した。移植後の細胞の増殖を蛍光強度およびノギス（キャリパー）で測定した（図９Ａ）。
図９Ｂに示すように、クロドロン酸リポソーム（CL）の１回投与でＰＢＳと比較して再発した乳がんの増殖が抑えられた。また、図９Ｃに示すように、クロドロン酸リポソーム（CL）の４回投与により、４Ｔ１細胞による再発した乳がんの増殖が顕著に抑制された。 <<Example 3>>
In the present example, the effect of the macrophage-inhibiting substance clodronate liposome (CL) on tumor growth in mammary glands after approximately 95% of the tumor had been surgically removed was examined using breast cancer recurrence model mice.
Balb/c mice grouped into groups of 4 or 5 were transplanted with 3×10 ⁵ cells of 4T1/Luc2 constitutively expressing luciferase Luc2. Approximately 95% of the breast cancer cell mass was surgically excised after 14 days. 0.1 mg of clodronate liposome (CL) or PBS was injected into the mouse mammary gland once on the day of resection, or 0.25 mg of clodronate liposome or PBS was administered to the mouse for 4 days (4 times) from the day of resection. It was administered by injection into the mammary gland. Proliferation of cells after transplantation was measured by fluorescence intensity and vernier caliper (Fig. 9A).
As shown in Figure 9B, a single dose of clodronate liposomes (CL) reduced the growth of recurrent breast cancer compared to PBS. In addition, as shown in FIG. 9C, 4 administrations of clodronate liposome (CL) significantly inhibited the growth of recurrent breast cancer by 4T1 cells.

本発明の医薬組成物は、乳がん細胞の増殖を特異的に抑制することができる。 The pharmaceutical composition of the present invention can specifically suppress the proliferation of breast cancer cells.

Claims (7)

マクロファージ抑制物質を有効成分として含む、乳がん治療用医薬組成物。 A pharmaceutical composition for treating breast cancer, comprising a macrophage inhibitory substance as an active ingredient. マクロファージ抑制物質がリポソームに内包されている、請求項１に記載の乳がん治療用医薬組成物。 The pharmaceutical composition for treating breast cancer according to claim 1, wherein the macrophage inhibitory substance is encapsulated in liposomes. マクロファージ抑制物質がクロドロン酸である、請求項１又は２に記載の乳がん治療用医薬組成物。 3. The pharmaceutical composition for treating breast cancer according to claim 1 or 2, wherein the macrophage inhibitory substance is clodronic acid. 再発抑制用又は転移抑制用である、請求項１～３のいずれか一項に記載の乳がん治療用医薬組成物。 The pharmaceutical composition for treating breast cancer according to any one of claims 1 to 3, which is for suppressing recurrence or metastasis. 外科的治療の後に投与される、請求項１～４のいずれか一項に記載の乳がん治療用医薬組成物。 The pharmaceutical composition for treating breast cancer according to any one of claims 1 to 4, which is administered after surgical treatment. 前記マクロファージが組織常在性マクロファージである、請求項１～５のいずれか一項に記載の乳がん治療用医薬組成物。 The pharmaceutical composition for treating breast cancer according to any one of claims 1 to 5, wherein said macrophages are tissue-resident macrophages. 前記乳がんが、エストロゲン受容体（ＥＲ）、プロゲステロン受容体（ＰＲ）、及びヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）を有さないトリプルネガティブ乳がんである、請求項１～６のいずれか一項に記載の乳がん治療用医薬組成物。 7. The breast cancer of any one of claims 1-6, wherein the breast cancer is a triple-negative breast cancer that lacks estrogen receptor (ER), progesterone receptor (PR), and human epidermal growth factor receptor 2 (HER2). A pharmaceutical composition for treating breast cancer as described.

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