JP2023016529A - Immunochromatographic test piece - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、インフルエンザウイルスＡ（Ｆｌｕ－Ａ）のヌクレオカプシドタンパク質（Ｎタンパク質）、インフルエンザウイルスＢ（Ｆｌｕ－Ｂ）のＮタンパク質、および重症急性呼吸器症候群（Ｓｅｖｅｒｅ Ａｃｕｔｅ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）のＮタンパク質を同時かつ高感度に検出し得るイムノクロマト試験片、およびイムノクロマト試験片を含むキットに関する。 The present invention provides the nucleocapsid protein (N protein) of influenza virus A (Flu-A), the N protein of influenza virus B (Flu-B), and Severe Acute Respiratory Syndrome coronavirus 2 (SARS- The present invention relates to an immunochromatographic test strip capable of simultaneously and highly sensitively detecting the N protein of CoV-2), and a kit containing the immunochromatographic test strip.
インフルエンザは冬期に流行する感染症で、高熱、上気道炎、倦怠感などの臨床症状を呈するが、それらの症状のみではＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、アデノ、ＲＳなど他のウイルスに起因する感染症と区別することは容易ではない。ここで、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の原因ウイルスであり、２０２０年初より世界中で急速に流行している。 Influenza is an infectious disease that is prevalent in winter and presents with clinical symptoms such as high fever, upper respiratory tract inflammation, and malaise. It is not easy to distinguish between them. Here, SARS-CoV-2 is the causative virus of the novel coronavirus infection (COVID-19), and has been rapidly prevalent all over the world since the beginning of 2020.
インフルエンザウイルスは分節状のマイナス鎖ＲＮＡをゲノム遺伝子とするウイルスで、ＨＡ、ＮＡ、ＰＡ、ＰＢ１、ＰＢ２、Ｍ、ＮＰ、ＮＳの８分節から成る。インフルエンザウイルスは、構成するタンパク質のうち、マトリックスタンパク質（Ｍ１）とＮタンパク質（ＮＰ）の抗原性の違いにより、Ａ型、Ｂ型およびＣ型に分類される。該タンパク質は抗原性がそれぞれ異なるため、異なる型の間で交差反応を示さない。 Influenza virus is a virus whose genomic gene is a segmented negative-strand RNA, and consists of eight segments: HA, NA, PA, PB1, PB2, M, NP, and NS. Influenza viruses are classified into types A, B and C according to the difference in antigenicity between the matrix protein (M1) and the N protein (NP) among the constituent proteins. Since the proteins differ in their antigenicity, they do not show cross-reactivity between different types.
インフルエンザに対する治療薬として、オセルタミビルリン酸塩、ザナミビル水和物、ペラミビル水和物、ラニナミビルオクタン酸エステル水和物、アマンタジン塩酸塩が用いられているが、Ｍ２阻害剤であるアマンタジン塩酸塩はＢ型インフルエンザウイルスの感染増殖を阻害しないためＡ型インフルエンザの治療にのみ用いられる。さらに前４者はノイラミニダーゼ（ＮＡ）阻害剤として同一の作用点を示す治療薬であるが、インフルエンザの型によって解熱時間やウイルス残存率などの有効性に差異があることが指摘されている。（非特許文献１）。従って、インフルエンザの型の鑑別は、その後の適切な治療薬選択のために重要である。 Oseltamivir phosphate, zanamivir hydrate, peramivir hydrate, laninamivir octanoate hydrate, and amantadine hydrochloride are used as therapeutic agents for influenza, but amantadine hydrochloride, which is an M2 inhibitor, It is used only for the treatment of influenza A because it does not inhibit the infection and proliferation of influenza B virus. Furthermore, although the former four are therapeutic agents that exhibit the same action point as neuraminidase (NA) inhibitors, it has been pointed out that there are differences in efficacy, such as fever-reducing time and virus survival rate, depending on the type of influenza. (Non-Patent Document 1). Therefore, influenza type discrimination is important for the subsequent selection of appropriate therapeutic agents.
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、一般的なコロナウイルスと同様に、ヌクレオカプシドおよび当該ヌクレオカプシドを取り囲むエンベロープで構成され、前記ヌクレオカプシドには、ウイルスゲノム（ＲＮＡ）および当該ウイルスゲノムに結合するヌクレオカプシドタンパク質（Ｎタンパク質）が含まれ、前記エンベロープには、脂質および当該脂質に結合するスパイクタンパク質（Ｓタンパク質）、膜タンパク質（Ｍタンパク質）、およびエンベロープタンパク質（Ｅタンパク質）が含まれる。Ｎタンパク質は、ウイルスコアの形成、並びに、ウイルスゲノムのパッケージングおよび転写等に関与するタンパク質であり、セリン（Ｓ）／アルギニン（Ｒ）リッチな領域を有するリンカーを介してＮ末端ドメイン（ＮＴＤ）およびＣ末端ドメイン（ＣＴＤ）が結合した構造を有する。非特許文献２には、Ｎタンパク質が多量にリン酸化されることが記載され、リン酸化部位のマッピングが示されている。Ｎタンパク質のアミノ酸配列は株間で保存されているため、Ｎタンパク質は診断マーカー等として使用される。
SARS-CoV-2, like common coronaviruses, is composed of a nucleocapsid and an envelope surrounding the nucleocapsid. The nucleocapsid contains a viral genome (RNA) and a nucleocapsid protein (N protein) that binds to the viral genome. and the envelope includes a lipid and a spike protein (S protein) that binds to the lipid, a membrane protein (M protein), and an envelope protein (E protein). The N protein is a protein involved in the formation of the viral core, packaging of the viral genome, transcription, etc., and is linked to the N-terminal domain (NTD) via a linker having a serine (S)/arginine (R)-rich region. and a C-terminal domain (CTD) bound together. Non-Patent
複数ある感染症診断法の中でも迅速・簡便・安価であるイムノクロマト法は最も普及した技術の１つである。イムノクロマト法とは毛細管現象を利用した免疫測定法であり、インフルエンザ検査などにおいて世界的に普及している。イムノクロマト法を用いて測定対象物質を検出する手法の一つとしては、抗原抗体反応を利用したサンドイッチ法が挙げられる。サンドイッチ法では測定対象物質に対してエピトープの異なる２種類の抗体を利用する。一方の抗体は、金コロイド、着色ラテックス粒子、蛍光粒子等の検出粒子と感作した検出抗体として使用する。他方の抗体は、多孔質支持体の表面に線状に固定した捕捉抗体としてテストラインを形成する。加えて、前記検出抗体を特異的に捕捉する抗体を多孔質支持体の表面の、前記テストラインとは異なる位置に線状に固定しコントロールラインを形成する。測定試料中に含まれる測定対象物質は、多孔質支持体の一端（上流側）から展開し、検出抗体と免疫複合体を形成しながら移動し、テストライン上で捕捉抗体と接触して捕捉され発色する。測定対象物質と免疫複合体を形成しなかった遊離の検出粒子と感作した検出抗体はテストライン上を通過し、コントロールラインの抗体に捕捉され発色する。これらの発色強度を目視で確認することで測定対象物質の有無を判定することができる。従来のインフルエンザの検出には抗ＮＰ抗体（特許文献１および２）などが特に用いられていた。
Immunochromatography, which is rapid, simple, and inexpensive, is one of the most widely used diagnostic methods for infectious diseases. Immunochromatography is an immunoassay method that utilizes capillary action, and is widely used worldwide in influenza testing and the like. One technique for detecting a substance to be measured using immunochromatography is a sandwich method that utilizes an antigen-antibody reaction. In the sandwich method, two types of antibodies with different epitopes are used for the substance to be measured. One antibody is used as a detection antibody sensitized with detection particles such as colloidal gold, colored latex particles, fluorescent particles and the like. The other antibody forms the test line as a capture antibody linearly immobilized on the surface of the porous support. In addition, an antibody that specifically captures the detection antibody is linearly immobilized on the surface of the porous support at a position different from the test line to form a control line. The substance to be measured contained in the measurement sample develops from one end (upstream side) of the porous support, moves while forming an immune complex with the detection antibody, and is captured by coming into contact with the capture antibody on the test line. develop color. Free detection particles that did not form an immune complex with the substance to be measured and the sensitized detection antibody pass through the test line, are captured by the control line antibody, and develop color. The presence or absence of the substance to be measured can be determined by visually confirming these color development intensities. Anti-NP antibodies (
現在、インフルエンザおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検査は、項目ごとに個別の検査キットを用いて行われている。このため、例えば、高熱、上気道炎、倦怠感などの臨床症状を示した患者のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検査が陰性であった場合、インフルエンザの検査を行うために、再度、患者から検体を採取する必要がある。検体は、鼻腔や咽頭から綿棒等を用いて採取するが、患者にとっては苦痛を伴い、負担を強いられることになる。 Currently, influenza and SARS-CoV-2 testing is performed using individual test kits for each item. For this reason, for example, if a patient who shows clinical symptoms such as high fever, upper respiratory tract inflammation, and malaise tests negative for SARS-CoV-2, the patient should be re-tested for influenza. must be taken. A specimen is collected from the nasal cavity or pharynx using a cotton swab or the like, which is painful and burdensome for the patient.
本発明は、Ｆｌｕ－ＡのＮタンパク質、Ｆｌｕ－ＢのＮタンパク質、およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質を同時かつ高感度に検出し得るイムノクロマト試験片、イムノクロマト試験片を含むキットを提供することを課題とするものである。 The present invention provides an immunochromatographic test strip that can detect Flu-A N protein, Flu-B N protein, and SARS-CoV-2 N protein simultaneously and with high sensitivity, and a kit containing the immunochromatographic test strip. is the subject.
本発明者は、上記課題を解決するために鋭意研究した結果、Ｆｌｕ－ＡのＮタンパク質と特異的に結合する抗体Ａ１と検出粒子との複合体、Ｆｌｕ－ＢのＮタンパク質と特異的に結合する抗体Ｂ１と検出粒子との複合体、およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質と特異的に結合する抗体Ｃ１と検出粒子との複合体を担持したコンジュゲーションパッドと、Ｆｌｕ－ＡのＮタンパク質と特異的に結合する抗体Ａ２を線状に固定したテストラインＡ、Ｆｌｕ－ＢのＮタンパク質と特異的に結合する抗体Ｂ２を線状に固定したテストラインＢ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質と特異的に結合する抗体Ｃ２を線状に固定したテストラインＣ、および前記抗体Ａ２、Ｂ２、またはＣ２のいずれか１以上と特異的に結合する抗体Ｄを線状に固定したコントロールラインを具備したメンブレンを使用することで、Ｆｌｕ－ＡのＮタンパク質、Ｆｌｕ－ＢのＮタンパク質、およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質を同時かつ高感度に検出し得るイムノクロマト試験片を得られることを見出した。また、検出粒子としてセルロース系着色微粒子を使用することにより、Ｆｌｕ－ＡのＮタンパク質、Ｆｌｕ－ＢのＮタンパク質、およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質をさらに高感度で検出できることを見出し、本発明を完成させた。 As a result of intensive research to solve the above problems, the present inventors found that a complex of antibody A1 that specifically binds to N protein of Flu-A and detection particles, specifically binds to N protein of Flu-B A conjugation pad carrying a complex of the antibody B1 and the detection particles that binds specifically to the antibody B1 and the detection particles, and a complex of the antibody C1 and the detection particles that specifically binds to the N protein of SARS-CoV-2, and the N protein of Flu-A Test line A linearly immobilized antibody A2 that specifically binds, test line B linearly immobilized antibody B2 that specifically binds to Flu-B N protein, SARS-CoV-2 N protein and A test line C in which antibody C2 that specifically binds is linearly immobilized, and a control line in which antibody D that specifically binds to one or more of the antibodies A2, B2, or C2 is linearly immobilized. It was found that the use of a membrane provides an immunochromatographic test strip capable of detecting Flu-A N protein, Flu-B N protein, and SARS-CoV-2 N protein simultaneously and with high sensitivity. In addition, by using cellulose-based colored fine particles as detection particles, it was found that Flu-A N protein, Flu-B N protein, and SARS-CoV-2 N protein can be detected with higher sensitivity. completed.
すなわち、代表的な本発明は以下の通りである。
１． （１）サンプルパッドと、
（２）測定試料中のインフルエンザウイルスＡ（Ｆｌｕ－Ａ）のヌクレオカプシドタンパク質（Ｎタンパク質）と特異的に結合する抗体Ａ１とセルロース系着色微粒子Ａとの複合体、インフルエンザウイルスＢ（Ｆｌｕ－Ｂ）のＮタンパク質と特異的に結合する抗体Ｂ１とセルロース系着色微粒子Ｂとの複合体、および重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）のＮタンパク質と特異的に結合する抗体Ｃ１とセルロース系着色微粒子Ｃとの複合体を担持したコンジュゲーションパッドと、
（３）Ｆｌｕ－ＡのＮタンパク質と特異的に結合する抗体Ａ２を線状に固定したテストラインＡ、Ｆｌｕ－ＢのＮタンパク質と特異的に結合する抗体Ｂ２を線状に固定したテストラインＢ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質と特異的に結合する抗体Ｃ２を線状に固定したテストラインＣ、および前記抗体Ａ２、Ｂ２、またはＣ２のいずれか１以上と特異的に結合する抗体Ｄを線状に固定したコントロールラインを具備したメンブレンと、
（４）吸収パッドと、
から構成されることを特徴とするイムノクロマト試験片。
２． 前記メンブレンの上流（サンプルパッド）側から、テストラインＣ、テストラインＢ、テストラインＡ、コントロールラインの順、またはテストラインＡ、テストラインＢ、テストラインＣ、コントロールラインの順に配置されることを特徴とする１．に記載のイムノクロマト試験片。
３． 前記テストラインＡ～Ｃにおいて、隣り合うテストラインの発色がそれぞれ異なることを特徴とする１．または２．に記載のイムノクロマト試験片。
４． 前記テストラインＡ／テストラインＢ／テストラインＣの発色がそれぞれ赤／青／赤、赤／青／緑、赤／緑／青、青／赤／青、青／赤／緑、青／緑／赤、緑／赤／青、緑／青／赤のいずれかであることを特徴とする３．に記載のイムノクロマト試験片。
５． 前記テストラインＡ／テストラインＢ／テストラインＣの発色がそれぞれ赤／青／赤、青／赤／青のいずれかであることを特徴とする４．に記載のイムノクロマト試験片。
６． 前記テストラインＡとテストラインＢの発色が同じで、かつテストラインＣの発色とは異なることを特徴とする１．または２．に記載のイムノクロマト試験片。
７． 前記テストラインＡ／テストラインＢ／テストラインＣの発色がそれぞれ赤／赤／青、青／青／赤のいずれかであることを特徴とする６．に記載のイムノクロマト試験片。
８． １．から７．のいずれかに記載のイムノクロマト試験片、測定試料採取具、フィルター、測定試料希釈液からなることを特徴とするイムノクロマトキット。
That is, the representative present invention is as follows.
1. (1) a sample pad;
(2) A complex of antibody A1 that specifically binds to the nucleocapsid protein (N protein) of influenza virus A (Flu-A) in the measurement sample and cellulose-based colored fine particles A, and influenza virus B (Flu-B) Complexes of antibody B1 that specifically binds to N protein and cellulose-based colored fine particles B, and antibody C1 that specifically binds to N protein of severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) and cellulose a conjugation pad supporting a complex with the colored microparticles C;
(3) Test line A in which antibody A2 that specifically binds to Flu-A N protein is linearly immobilized, and test line B in which antibody B2 that specifically binds to Flu-B N protein is linearly immobilized , test line C linearly immobilized antibody C2 that specifically binds to the N protein of SARS-CoV-2, and antibody D that specifically binds to any one or more of the antibodies A2, B2, or C2 a membrane with linearly fixed control lines;
(4) an absorbent pad;
An immunochromatographic test strip characterized by comprising:
2. It is arranged from the upstream (sample pad) side of the membrane in the order of test line C, test line B, test line A, and control line, or in the order of test line A, test line B, test line C, and control line.
3. 1. In the test lines A to C, colors of adjacent test lines are different from each other. or 2. Immunochromatographic test piece according to.
4. The colors of the test line A/test line B/test line C are red/blue/red, red/blue/green, red/green/blue, blue/red/blue, blue/red/green, blue/green/ 2. Red, green/red/blue, or green/blue/red. Immunochromatographic test piece according to.
5. 4. The color development of the test line A/test line B/test line C is red/blue/red or blue/red/blue, respectively. Immunochromatographic test piece according to.
6. 1. The test line A and the test line B have the same coloring, and the coloring of the test line C is different. or 2. Immunochromatographic test piece according to.
7. 6. The color development of the test line A/test line B/test line C is red/red/blue or blue/blue/red, respectively. Immunochromatographic test piece according to.
8. 1. to 7. An immunochromatographic kit comprising the immunochromatographic test piece according to any one of 1, a measurement sample collecting tool, a filter, and a measurement sample diluent.
本発明のイムノクロマト試験片は、特定の抗体、および検出粒子を、特定の配置で担持させているため、同時かつ高感度にＦｌｕ－ＡのＮタンパク質、Ｆｌｕ－ＢのＮタンパク質、およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質を検出することができる。 Since the immunochromatographic test strip of the present invention carries specific antibodies and detection particles in a specific arrangement, Flu-A N protein, Flu-B N protein, and SARS-CoV can be detected simultaneously and with high sensitivity. -2 N proteins can be detected.
本発明のイムノクロマト試験片は測定試料中のインフルエンザウイルスＡ（Ｆｌｕ－Ａ）のヌクレオカプシドタンパク質（Ｎタンパク質）、インフルエンザウイルスＢ（Ｆｌｕ－Ｂ）のＮタンパク質、および重症急性呼吸器症候群（Ｓｅｖｅｒｅ Ａｃｕｔｅ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）のＮタンパク質を検出するための試験片である。 The immunochromatographic test strip of the present invention includes influenza virus A (Flu-A) nucleocapsid protein (N protein), influenza virus B (Flu-B) N protein, and severe acute respiratory syndrome (Severe Acute Respiratory Syndrome) in the measurement sample. ) is a test strip for detecting the N protein of coronavirus 2 (SARS-CoV-2).
本発明において、Ｆｌｕ－Ａは、Ｈ１Ｎ１、Ｈ１Ｎ２、Ｈ２Ｎ２、Ｈ２Ｎ３、Ｈ３Ｎ２、Ｈ３Ｎ８、Ｈ４Ｎ６、Ｈ５Ｎ１、Ｈ５Ｎ２、Ｈ６Ｎ２、Ｈ７Ｎ１、Ｈ７Ｎ７、Ｈ７Ｎ９、Ｈ８Ｎ４、Ｈ９Ｎ２、Ｈ１０Ｎ７、Ｈ１１Ｎ６、Ｈ１２Ｎ５、Ｈ１３Ｎ６、Ｈ１４Ｎ５、Ｈ１５Ｎ８、およびＨ１６Ｎ３の各亜型を含む、公知の全てのＦｌｕ－Ａ株を対象とする。 In the present invention, Flu-A is H1N1, H1N2, H2N2, H2N3, H3N2, H3N8, H4N6, H5N1, H5N2, H6N2, H7N1, H7N7, H7N9, H8N4, H9N2, H10N7, H11N6, H12N5, H13N6, H14N5, H15N8 , and H16N3 subtypes.
本発明において、Ｆｌｕ－Ｂ型は、抗原的・遺伝系統的に異なる２つのグループ、すなわち山形系統およびビクトリア系統に分類されるが、いずれの系統のウイルス株も含む、公知の全てのＦｌｕ－Ｂ株を対象とする。 In the present invention, the Flu-B type is classified into two groups that are antigenically and genetically different, namely, the Yamagata lineage and the Victoria lineage. Target stocks.
本発明において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号（ＭＮ９０８９４７）に開示されたアミノ酸配列を有するものを指す。なお、ＳＡＲＳ－ＣｏＶのＮタンパク質は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号（ＡＹ２７８７４１）に開示されたアミノ酸配列を有するものを指す。 In the present invention, SARS-CoV-2 N protein refers to that having the amino acid sequence disclosed in GenBank Accession No. (MN908947). The N protein of SARS-CoV refers to one having the amino acid sequence disclosed in GenBank Accession No. (AY278741).
本発明において、測定試料は、生物試料であってもよく非生物試料であってもよい。また、測定試料には、採取したままの試料のみならず、当該試料に対して夾雑物の除去等の前処理を施したものも含まれる。 In the present invention, the measurement sample may be a biological sample or a non-biological sample. Moreover, the measurement sample includes not only the sample as it is collected but also the sample subjected to pretreatment such as removal of contaminants.
前記生物試料としては、特に限定されないが例えば血液、血清、血漿、骨髄液、リンパ液、涙、鼻汁、鼻腔洗浄液、鼻腔拭い液、唾液、うがい液、喀痰、咽頭拭い液、汗、気管吸引液、気管支洗浄液、胸水、腹水、羊水、腸管洗浄液、尿、糞便、細胞抽出液、組織抽出液、臓器抽出液等が挙げられる。前記非生物試料としては、特に限定されないが例えば蛇口、取っ手、手すり、つり革、スイッチ、壁、床、机、椅子、便座等の環境表面から採取した試料等が挙げられる。 Examples of the biological sample include, but are not limited to, blood, serum, plasma, bone marrow fluid, lymph, tears, nasal discharge, nasal wash, nasal swab, saliva, gargle, sputum, pharyngeal swab, sweat, tracheal aspirate, Bronchial lavage, pleural effusion, ascites, amniotic fluid, intestinal lavage, urine, feces, cell extract, tissue extract, organ extract and the like. Examples of non-biological samples include, but are not limited to, samples collected from environmental surfaces such as faucets, handles, handrails, straps, switches, walls, floors, desks, chairs, and toilet seats.
本発明のイムノクロマト試験片の構成は、イムノクロマト試験片の測定試料溶液の添加部（滴下部）を上流側として、前記添加部を有するサンプルパッド、コンジュゲーションパッド、メンブレン、吸収パッドの順に連接配置されている。次いで、本発明のイムノクロマト試験片の一例を、図面を参照して説明する。図１および２において、１はサンプルパッド、２はコンジュゲーションパッド、３はメンブレン、４は吸収パッド、５はバッキングシート、６～８はテストライン、９はコントロールライン、１０は粘着シートをそれぞれ示す。 The configuration of the immunochromatographic test strip of the present invention is such that, with the addition portion (dropping portion) of the measurement sample solution of the immunochromatographic test strip as the upstream side, the sample pad having the addition portion, the conjugation pad, the membrane, and the absorbent pad are connected in this order. ing. Next, an example of the immunochromatographic test strip of the present invention will be described with reference to the drawings. 1 and 2, 1 is a sample pad, 2 is a conjugation pad, 3 is a membrane, 4 is an absorbent pad, 5 is a backing sheet, 6 to 8 are test lines, 9 is a control line, and 10 is an adhesive sheet, respectively. .
図１および図２の例では、イムノクロマト試験片は、幅３～５ｍｍ（好ましくは、４ｍｍ程度）、長さ４０～１００ｍｍ（好ましくは６０ｍｍ程度）の細長い短冊状の形態をしている。なお、イムノクロマト試験片のコンジュゲーションパッド２には測定試料中のＦｌｕ－ＡのＮタンパク質と特異的に結合する抗体Ａ１とセルロース系着色微粒子Ａとの複合体、Ｆｌｕ－ＢのＮタンパク質と特異的に結合する抗体Ｂ１とセルロース系着色微粒子Ｂとの複合体、およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質と特異的に結合する抗体Ｃ１とセルロース系着色微粒子Ｃとの複合体が担持されている。また、イムノクロマト試験片のメンブレン３の上流側の端部から約５ｍｍの位置にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質と特異的に結合する抗体Ｃ２を線状に固定したテストラインＣ、前記端部から約９ｍｍの位置にＦｌｕ－ＢのＮタンパク質と特異的に結合する抗体Ｂ２を線状に固定したテストラインＢ、前記端部から約１３ｍｍの位置にＦｌｕ－ＡのＮタンパク質と特異的に結合する抗体Ａ２を線状に固定したテストラインＡが形成される。また、前記端部から約１７ｍｍの位置に前記抗体Ａ２、Ｂ２、またはＣ２のいずれか１以上と特異的に結合する抗体Ｄを線状に固定したコントロールラインが形成される。
In the examples of FIGS. 1 and 2, the immunochromatographic test piece is in the form of an elongated strip with a width of 3-5 mm (preferably about 4 mm) and a length of 40-100 mm (preferably about 60 mm). In the
本発明で用いるサンプルパッド１の材質は、測定試料を速やかに吸収した後、下流のコンジュゲーションパッド、メンブレン、吸収パッドへ展開できる材質のものであれば、特に限定されないが、例えばセルロース製のろ紙または不織布、ガラス製のろ紙または不織布、ポリエステル製のろ紙または不織布、ポリエチレン製のろ紙または不織布が挙げられる。これらの中でも、セルロース製のろ紙が好ましい。また、前記サンプルパッド１の厚さは、０．１ｍｍ～２．０ｍｍが好ましく、０．２ｍｍ～１．０ｍｍがより好ましい。厚さが小さいと、下流での測定試料の流れが不均一となり測定精度が低下することがある。一方、厚さが大きいと、下流への展開が遅くなり測定時間が長くなることがある。また、下流への展開に必要となる測定試料量が多くなる。
The material of the
本発明で用いるコンジュゲーションパッド２の材質は、測定試料中のＦｌｕ－ＡのＮタンパク質と特異的に結合する抗体Ａ１とセルロース系着色微粒子Ａとの複合体、Ｆｌｕ－ＢのＮタンパク質と特異的に結合する抗体Ｂ１とセルロース系着色微粒子Ｂとの複合体、およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質と特異的に結合する抗体Ｃ１とセルロース系着色微粒子Ｃとの複合体を乾燥状態で保持でき、かつ測定試料の下流への展開と共に前記複合体を速やかに放出することができる材質のものであれば、特に限定されないが、例えばセルロース製のろ紙または不織布、ガラス製のろ紙または不織布、ポリエステル製のろ紙または不織布、ポリエチレン製のろ紙または不織布が挙げられる。これらの中でも、ガラス製のろ紙が好ましい。また、前記コンジュゲーションパッド２の厚さは、０．１ｍｍ～２．０ｍｍが好ましく、０．２ｍｍ～１．０ｍｍがより好ましい。厚さが小さいと、目的量の前記複合体を乾燥状態で保持できないことがある。一方、厚さが大きいと、下流への展開が遅くなり測定時間が長くなることがある。また、下流への展開に必要となる測定試料量が多くなる。
The material of the
本発明で用いるメンブレン３は、測定試料を精度よく均一に展開できるものであれば、特に限定されないが、例えばセルロース、セルロース誘導体、ニトロセルロース、酢酸セルロース、ポリウレタン、ポリエステル、ポリエチレン、ポリ塩化ビニル、ポリフッ化ビニリデン、またはナイロン製のメンブレンが挙げられる。これらの中でも、ニトロセルロース製のメンブレンが好ましい。
The
本発明で用いる吸収パッド４は、上流より展開してきた測定試料を速やかに吸収した後、逆流しないよう保持できるものであれば、特に限定されないが、例えばセルロース製のろ紙または不織布、ガラス製のろ紙または不織布、ポリエステル製のろ紙または不織布、ポリエチレン製のろ紙または不織布が挙げられる。これらの中でも、セルロース製のろ紙が好ましい。また、前記吸収パッド４の厚さは、０．２ｍｍ～５．０ｍｍが好ましく、０．５ｍｍ～２．０ｍｍがより好ましい。厚さが小さいと、測定試料の滴下量によっては一度吸収パッドに吸収された測定試料がメンブレン側に逆流することがある。一方、厚さが大きいと、イムノクロマト試験片およびイムノクロマト試験片を覆うハウジングケースのサイズも大きくなり、ＰＯＣＴの観点から好ましくない。
The
なお、本発明で用いる抗体Ａ１～Ｃ１、抗体Ａ２～Ｃ２、抗体Ｄはモノクローナル抗体であってもポリクローナル抗体であってもよいが、モノクローナル抗体が好ましい。抗体は、任意のアイソタイプ、例えばＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ等であることができるが、ＩｇＧが好ましい。また、抗体は、市販品を用いてもよいし、別途公知の方法で製造してもよい。 Antibodies A1 to C1, antibodies A2 to C2, and antibody D used in the present invention may be monoclonal antibodies or polyclonal antibodies, but monoclonal antibodies are preferred. Antibodies can be of any isotype, eg, IgG, IgA, IgD, IgE, IgM, etc., but IgG is preferred. In addition, the antibody may be a commercially available product, or may be separately produced by a known method.
前記セルロース系着色微粒子Ａ～Ｃは、大量の水酸基を有するため、多くの反応性染料を共有結合により保持することができるだけでなく、濃染化した後も水などへの安定分散性を保持することができる。セルロース系着色微粒子として、再生セルロース、精製セルロース、天然セルロース等を用いることができるし、一部誘導体化されたセルロースを用いてもよい。前記セルロース系着色微粒子の質量の２０～９０質量％はセルロース由来であることが好ましく、２０～８０質量％がより好ましく、２０～７０質量％がさらに好ましい。 Since the cellulose-based colored fine particles A to C have a large amount of hydroxyl groups, they can not only hold many reactive dyes by covalent bonds, but also maintain stable dispersibility in water etc. even after deep dyeing. be able to. As the cellulose-based colored fine particles, regenerated cellulose, purified cellulose, natural cellulose, etc. can be used, and partially derivatized cellulose may also be used. 20 to 90 mass % of the mass of the cellulose-based colored fine particles is preferably derived from cellulose, more preferably 20 to 80 mass %, even more preferably 20 to 70 mass %.
前記セルロース系着色微粒子Ａ～Ｃの平均粒子径は、特に限定されないが、１００ｎｍ～１０００ｎｍが好ましく、２００ｎｍ～８００ｎｍがより好ましい。平均粒子径が大きいと、下流への展開が遅くなり、測定時間が長くなる。また、メンブレン上に捕捉されやすくなり、バックグラウンド自体が発色してしまうことでテストラインおよびコントロールラインでの発色が不明瞭になる。一方、平均粒子径が小さいと、物理吸着または化学結合できる抗体量が低下し、測定感度が低下する。 The average particle size of the cellulose-based colored fine particles A to C is not particularly limited, but is preferably 100 nm to 1000 nm, more preferably 200 nm to 800 nm. If the average particle size is large, the development to the downstream becomes slow and the measurement time becomes long. In addition, they are likely to be trapped on the membrane, and the background itself develops color, which makes the color development on the test line and control line unclear. On the other hand, when the average particle size is small, the amount of antibody that can be physically adsorbed or chemically bonded is reduced, resulting in decreased measurement sensitivity.
前記セルロース系着色微粒子としては、旭化成社製の着色セルロースナノビーズ（ＮａｎｏＡｃｔ（登録商標））が挙げられる。前記セルロース系着色微粒子の色は、特に限定されないが、例えば赤、橙、黄、緑、青、紺、紫、黒、蛍光が挙げられる。特に、ＮａｎｏＡｃｔ（登録商標）赤（ＲＥ２）の粒子濃度１質量％でのＯＤは２４０、ＮａｎｏＡｃｔ（登録商標）青（ＢＬ２）の粒子濃度１質量％でのＯＤは２６５、ＮａｎｏＡｃｔ（登録商標）緑（ＧＲ１）の粒子濃度１質量％でのＯＤは１６０、ＮａｎｏＡｃｔ（登録商標）黒（ＫＲ１）の粒子濃度１質量％でのＯＤは１５０であるため、赤および青が好ましい。 Examples of the cellulose-based colored fine particles include colored cellulose nanobeads (NanoAct (registered trademark)) manufactured by Asahi Kasei Corporation. The color of the cellulose-based colored fine particles is not particularly limited, but examples thereof include red, orange, yellow, green, blue, navy blue, purple, black, and fluorescence. Specifically, NanoAct® Red (RE2) has an OD of 240 at 1% by weight particle concentration, NanoAct® Blue (BL2) has an OD of 265 at 1% by weight of particle concentration, and NanoAct® Green Red and blue are preferred because (GR1) has an OD of 160 at a particle concentration of 1% by weight and NanoAct® Black (KR1) has an OD of 150 at a particle concentration of 1% by weight.
前記セルロース系着色微粒子Ａ～Ｃへの前記抗体Ａ１～Ｃ１の結合量は、セルロース系着色微粒子と抗体の仕込み質量比を調整することで制御でき特に限定されないが、セルロース系着色微粒子と抗体との仕込み質量比は１：０．０１～１：１が好ましく、１：０．０２～１：０．５がより好ましく、１：０．０２～１：０．２がさらに好ましい。質量比が前記範囲を外れると、セルロース系着色微粒子への抗体の結合量が不十分となるとか、セルロース系着色微粒子への抗体の結合量が増えすぎ、抗原抗体反応に寄与しない抗体が増えるため、測定感度が低下することがある。 The binding amount of the antibodies A1 to C1 to the cellulose-based colored fine particles A to C can be controlled by adjusting the charged mass ratio of the cellulose-based colored fine particles and the antibody, and is not particularly limited. The charged mass ratio is preferably 1:0.01 to 1:1, more preferably 1:0.02 to 1:0.5, and even more preferably 1:0.02 to 1:0.2. If the mass ratio is out of the above range, the amount of antibody binding to the cellulose-based colored fine particles becomes insufficient, or the amount of antibody binding to the cellulose-based colored fine particles increases excessively, resulting in an increase in the number of antibodies that do not contribute to the antigen-antibody reaction. , the measurement sensitivity may decrease.
前記抗体Ａ１～Ｃ１と前記セルロース系着色微粒子Ａ～Ｃとの結合方法は特に限定されないが、疎水結合による物理吸着または共有結合による化学結合で感作するのが好ましく、操作が簡便でありかつコストも安い物理吸着がより好ましい。なお、感作効率を向上させるため、セルロース系着色微粒子に反応性活性基を導入してもよい。反応性活性基としては、特に限定されないが、例えばカルボキシル基、アミノ基、アルデヒド基、チオール基、エポキシ基、水酸基が挙げられる。これらの中でも、カルボキシル基、アミノ基が好ましい。カルボキシル基の場合は、カルボジイミドを用いてリガンドのアミノ基と共有結合を形成することができる。 The method of binding the antibodies A1 to C1 and the cellulose-based colored microparticles A to C is not particularly limited, but sensitization is preferably performed by physical adsorption by hydrophobic bonding or chemical bonding by covalent bonding, and the operation is simple and cost effective. Physical adsorption, which is also cheaper, is more preferable. In addition, in order to improve the sensitization efficiency, a reactive active group may be introduced into the cellulose-based colored fine particles. Examples of reactive active groups include, but are not limited to, carboxyl groups, amino groups, aldehyde groups, thiol groups, epoxy groups, and hydroxyl groups. Among these, a carboxyl group and an amino group are preferred. In the case of carboxyl groups, carbodiimides can be used to form covalent bonds with amino groups of ligands.
前記コンジュゲーションパッド２に測定試料中のＦｌｕ－ＡのＮタンパク質と特異的に結合する抗体Ａ１とセルロース系着色微粒子Ａとの複合体、Ｆｌｕ－ＢのＮタンパク質と特異的に結合する抗体Ｂ１とセルロース系着色微粒子Ｂとの複合体、およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質と特異的に結合する抗体Ｃ１とセルロース系着色微粒子Ｃとの複合体を担持させる方法は、特に限定されないが、例えば前記複合体の溶液をコンジュゲーションパッドに均一に塗布、噴霧または含浸した後、恒温槽内で適当な温度で一定時間乾燥することで作製することができる。前記複合体の溶液の塗布量は、特に限定されないが、ライン長１ｃｍ辺り５μＬ～５０μＬが好ましい。また、前記複合体の溶液におけるセルロース系着色微粒子濃度は、特に限定されないが、０．０１～０．５質量％が好ましく、０．０２～０．２質量％がより好ましく、０．０２～０．１質量％がさらに好ましい。濃度が低いと、Ｆｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質を十分捕捉・検出することができず、測定感度が低下することがある。一方、濃度が高くても、測定感度の向上は見られず、コストだけが高くなる。次いで、前記塗布後に乾燥するのが好ましい。乾燥温度は、特に限定されないが、２０℃～８０℃が好ましく、２０℃～６０℃がより好ましい。乾燥時間は乾燥温度によって異なるが、通常は５分間～１２０分間である。
On the
メンブレン３に前記テストラインＡ～Ｃを形成する捕捉抗体Ａ２～Ｃ２と前記コントロールラインを形成する捕捉抗体Ｄを線状に固定する方法は、特に限定されないが、例えば前記テストラインＡ～Ｃを形成する捕捉抗体Ａ２～Ｃ２と前記コントロールラインを形成する捕捉抗体Ｄを、それぞれ線上に一定量を異なる位置に塗布した後、恒温槽内で適当な温度で一定時間乾燥することで作製することができる。前記両捕捉抗体の塗布量は、特に限定されないが、ライン長１ｃｍ辺り０．１μＬ～２μＬが好ましい。また、前記両捕捉抗体の塗布濃度は、特に限定されないが、０．１ｍｇ／ｍＬ～１０ｍｇ／ｍＬが好ましく、０．２ｍｇ／ｍＬ～８ｍｇ／ｍＬがより好ましく、０．５ｍｇ／ｍＬ～５ｍｇ／ｍＬがさらに好ましい。濃度が低いと、Ｆｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質を十分捕捉・検出することができず、測定感度が低下する。一方、濃度が高くても、測定感度の向上は見られず、コストだけが高くなる。次いで、前記塗布後に乾燥するのが好ましい。乾燥温度は、特に限定されないが、２０℃～８０℃が好ましく、２０℃～６０℃がより好ましい。乾燥時間は乾燥温度によって異なるが、通常は５分間～１２０分間である。
The method of linearly immobilizing the capturing antibodies A2 to C2 forming the test lines A to C and the capturing antibody D forming the control line on the
本発明のイムノクロマト試験片は、前記作製したメンブレン３を粘着シート１０の中央付近に貼り付け、次いでコンジュゲーションパッド２をメンブレン３の一方の末端上に一部重ね合わせて貼り付け、次いでサンプルパッド１をコンジュゲーションパッド２のメンブレン３との重なりとは逆の末端上に一部重ね合わせて貼り付け、次いで吸収パッド４をメンブレン３の他方の末端上に一部重ね合わせて貼り付けた後、一定幅の短冊状に切断することで作製することができる。なお、テストラインＡ～Ｃおよびコントロールラインは試験片を作製した後に調製してもよいし、試験片を作製する前に調製してもよい。
In the immunochromatographic test piece of the present invention, the
前記イムノクロマト試験片は、少なくともサンプルパッド１上に測定試料を滴下するための第一の開口部、メンブレン３上にテストラインＡ～Ｃとコントロールラインを目視で確認するための第二の開口部を有する適当なプラスチック製のハウジングケースに収容されたものでも良い。
The immunochromatographic test strip has at least a first opening for dropping a measurement sample on the
前記テストラインＡ～Ｃおよびコントロールラインは、視認性の観点から、Ｆｌｕ－Ａを検出するためのテストラインＡおよびＦｌｕ－Ｂを検出するためのテストラインＢが隣り合う配置である、メンブレンの上流（サンプルパッド）側から、テストラインＣ／Ｂ／Ａ／コントロールライン、テストラインＣ／Ａ／Ｂ／コントロールライン、テストラインＡ／Ｂ／Ｃ／コントロールライン、テストラインＢ／Ａ／Ｃ／コントロールラインが好ましく、テストラインＣ／Ｂ／Ａ／コントロールライン、テストラインＡ／Ｂ／Ｃ／コントロールラインがより好ましい。前記配置であれば、仮にラインが出現した際に、Ｆｌｕ－ＡまたはＦｌｕ－ＢとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を誤認する可能性を低減することができる。なお、コントロールラインはこのラインまで検体が流れたことを保証するという性質上、メンブレンの最も下流（吸収パッド）側に配すのが好ましい。 From the viewpoint of visibility, the test lines A to C and the control line are arranged so that the test line A for detecting Flu-A and the test line B for detecting Flu-B are adjacent to each other, upstream of the membrane From the (sample pad) side, test line C/B/A/control line, test line C/A/B/control line, test line A/B/C/control line, test line B/A/C/control line is preferred, and test line C/B/A/control line and test line A/B/C/control line are more preferred. With this arrangement, it is possible to reduce the possibility of misidentifying Flu-A or Flu-B as SARS-CoV-2 when a line appears. The control line is preferably arranged on the most downstream side (absorption pad) of the membrane, in order to guarantee that the specimen has flowed up to this line.
本発明のイムノクロマト試験片は、視認性の観点から、テストラインＡ～Ｃにおいて、隣り合うテストラインの発色がそれぞれ異なることが好ましく、テストラインＡ～Ｃの発色がそれぞれ赤／青／赤、赤／青／緑、赤／緑／青、青／赤／青、青／赤／緑、青／緑／赤、緑／赤／青、緑／青／赤のいずれかであることがより好ましく、テストラインＡ～Ｃの発色が赤／青／赤または青／赤／青であることがさらに好ましい。前記発色は隣り合うラインの色が異なるため、仮にラインが出現した際に、ラインの色および位置からＦｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のどれが陽性であったかが一目で判断することができる。特に、前述の通りＮａｎｏＡｃｔ（登録商標）では、特に赤と青の視認性が高いため、赤と青の組み合わせが好適である。前記発色であれば、仮にラインが出現した際に、Ｆｌｕ－ＡまたはＦｌｕ－ＢとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を誤認する恐れを減ずることができる。なお、コントロールラインはテストラインに捕捉されなかった検出粒子を捕捉して発色するメカニズムであるため、テストラインＡ～Ｃで赤青の２色を使用した場合はコントロールラインが紫、テストラインＡ～Ｃで赤青緑の３色を使用した場合はコントロールラインが黒となり、いずれもコントロールラインとテストラインＡ～Ｃとは異なる色をなるため視認性に優れる。 In the immunochromatographic test piece of the present invention, from the viewpoint of visibility, it is preferable that adjacent test lines have different colors in the test lines A to C, and the colors of the test lines A to C are red / blue / red, red, respectively. / blue/green, red/green/blue, blue/red/blue, blue/red/green, blue/green/red, green/red/blue, green/blue/red, More preferably, the test lines A to C are colored red/blue/red or blue/red/blue. Since the colors of the adjacent lines are different, it is possible to determine at a glance which of Flu-A, Flu-B, and SARS-CoV-2 was positive from the color and position of the line when the line appeared. be able to. In particular, in NanoAct (registered trademark), as described above, red and blue are particularly highly visible, so a combination of red and blue is suitable. With the color development, if a line appears, it is possible to reduce the risk of misidentifying Flu-A or Flu-B as SARS-CoV-2. In addition, since the control line is a mechanism that captures the detection particles that were not captured by the test line and develops color, when two colors of red and blue are used for the test lines A to C, the control line is purple, and the test lines A to C are purple. When three colors of red, blue and green are used for C, the control line is black, and the color of the control line and the test lines A to C are different from each other, so visibility is excellent.
また、本発明のイムノクロマト試験片は、視認性の観点から、テストラインＡとテストラインＢの発色が同じで、かつテストラインＣの発色とは異なることが好ましく、テストラインＡ～Ｃの発色がそれぞれ赤／赤／青または青／青／赤であることがより好ましい。前記発色はＦｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂの色が同じで、かつＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の色とは異なるため、仮にラインが出現した際に、ラインの色からＦｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のどちらかが陽性であったかを一目で判断することができる。特に、前述の通りＮａｎｏＡｃｔ（登録商標）では、特に赤と青の視認性が高いため、赤と青の組み合わせが好適である。前記配置であれば、仮にラインが出現した際に、Ｆｌｕ－ＡまたはＦｌｕ－ＢとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を誤認する恐れを減ずることができる。なお、コントロールラインはテストラインに捕捉されなかった検出粒子を捕捉して発色するメカニズムであるため、テストラインＡ～Ｃで赤青の２色を使用した場合はコントロールラインが紫、テストラインＡ～Ｃで赤青緑の３色を使用した場合はコントロールラインが黒となり、いずれもコントロールラインとテストラインＡ～Ｃとは異なる色をなるため視認性に優れる。 Further, in the immunochromatographic test piece of the present invention, from the viewpoint of visibility, it is preferable that the test line A and the test line B have the same color development and are different from the test line C color development, and the test lines A to C have the same color development. More preferred are red/red/blue or blue/blue/red, respectively. Since the color development has the same color of Flu-A and Flu-B and is different from the color of SARS-CoV-2, if a line appears, from the color of the line, Flu-A, Flu-B, or You can tell at a glance which of the SARS-CoV-2 was positive. In particular, in NanoAct (registered trademark), as described above, red and blue are particularly highly visible, so a combination of red and blue is suitable. With this arrangement, it is possible to reduce the risk of misidentifying Flu-A or Flu-B as SARS-CoV-2 when a line appears. In addition, since the control line is a mechanism that captures the detection particles that were not captured by the test line and develops color, when two colors of red and blue are used for the test lines A to C, the control line is purple, and the test lines A to C are purple. When three colors of red, blue and green are used for C, the control line is black, and the color of the control line and the test lines A to C are different from each other, so visibility is excellent.
本発明において、イムノクロマト測定キットは、イムノクロマト試験片に加え、測定試料を採取するための測定試料採取具、測定試料を前処理および／または希釈するための測定試料希釈液、測定試料をろ過するためのフィルターを含むのが好ましい。 In the present invention, the immunochromatographic measurement kit includes, in addition to the immunochromatographic test strip, a measurement sample collecting tool for collecting a measurement sample, a measurement sample diluent for pretreating and / or diluting the measurement sample, and a measurement sample for filtering. preferably contains a filter of
前記測定試料希釈液は、測定試料の展開性を向上させ、かつ免疫反応に影響しないノニオン性界面活性剤を含むことが好ましい。前記ノニオン性界面活性剤としては、特に限定されないが、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル（Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）系界面活性剤等）、ポリオキシエチレンアルキルエーテル（Ｂｒｉｊ（登録商標）系界面活性剤等）、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）系界面活性剤等）、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、アルキルグルコシド、ショ糖脂肪酸エステル等が挙げられる。また、前記界面活性剤は単独で用いても、二種以上を組み合わせて用いてもよい。ノニオン性界面活性剤の濃度としては、０．０１～５．０質量％が好ましく、０．０５～４．０質量％がより好ましく、０．１～３．０質量％がさらに好ましい。濃度が低いと、下流への展開が困難となることがある。また、展開が不均一となり測定精度が低下することがある。一方、濃度が高いと、物理的に吸着している、検出粒子と抗体、および／またはメンブレンと抗体が乖離し、測定値が得られないことがある。 The measurement sample diluent preferably contains a nonionic surfactant that improves the spreadability of the measurement sample and does not affect immune reactions. The nonionic surfactant is not particularly limited, but polyoxyethylene alkylphenyl ether (Triton (registered trademark) surfactant, etc.), polyoxyethylene alkyl ether (Brij (registered trademark) surfactant, etc.) , polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters (Tween (registered trademark) surfactants, etc.), polyoxyethylene fatty acid esters, sorbitan fatty acid esters, alkyl glucosides, sucrose fatty acid esters, and the like. Moreover, the said surfactant may be used individually, or may be used in combination of 2 or more types. The concentration of the nonionic surfactant is preferably 0.01 to 5.0% by mass, more preferably 0.05 to 4.0% by mass, even more preferably 0.1 to 3.0% by mass. Low concentrations can make downstream deployment difficult. In addition, the deployment may become uneven and the measurement accuracy may be lowered. On the other hand, if the concentration is high, the physically adsorbed detection particles and the antibody, and/or the membrane and the antibody may separate, resulting in failure to obtain a measurement value.
前記測定試料希釈液は、無機塩類やｐＨ調整に用いる緩衝剤を添加しても良い。前記緩衝剤としては、目的とするｐＨ範囲において充分な緩衝能力を有していれば、いかなる種類の緩衝剤を用いてもよく、例えば、トリス、リン酸、フタル酸、クエン酸、マレイン酸、コハク酸、シュウ酸、ホウ酸、酒石酸、酢酸、炭酸、グッドバッファー（ＭＥＳ、ＡＤＡ、ＰＩＰＥＳ、ＡＣＥＳ、コラミン塩酸、ＢＥＳ、ＴＥＳ、ＨＥＰＥＳ、アセトアミドグリシン、トリシン、グリシンアミド、ビシン）が挙げられる。これらの中でも、本発明に用いる抗体の至適ｐＨ範囲である７．０付近において充分な緩衝能力を有する等の理由から、トリス、リン酸、ＭＥＳ、ＰＩＰＥＳ、ＴＥＳ、ＨＥＰＥＳが好ましく、トリス、リン酸、ＰＩＰＥＳがより好ましい。 An inorganic salt or a buffer used for pH adjustment may be added to the measurement sample diluent. As the buffering agent, any type of buffering agent may be used as long as it has sufficient buffering capacity in the target pH range. succinic acid, oxalic acid, boric acid, tartaric acid, acetic acid, carbonic acid, Good's buffer (MES, ADA, PIPES, ACES, colamin hydrochloride, BES, TES, HEPES, acetamidoglycine, tricine, glycinamide, bicine). Among these, tris, phosphoric acid, MES, PIPES, TES, and HEPES are preferable, because they have sufficient buffering capacity around 7.0, which is the optimum pH range of the antibody used in the present invention. Acid, PIPES is more preferred.
以下、本発明を実施例に基づいて詳細に説明する。本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。 Hereinafter, the present invention will be described in detail based on examples. The invention is not limited to these examples.
（実施例１）
（１）抗体Ａ１とセルロース系着色微粒子Ａとの複合体の調製
１．０質量％の青色のセルロース系着色微粒子Ａ（ＮａｎｏＡｃｔ（登録商標）、ＢＬ２：Ｄａｒｋ Ｎａｖｙ、平均粒子径３６５ｎｍ、旭化成社製）１００μＬ、１０ｍＭのトリス緩衝液（２０４－０７８８５、富士フィルム和光純薬社製）（ｐＨ８．０）９００μＬ、抗体Ａ１として１．０ｍｇ／ｍＬのマウス由来抗Ｆｌｕ－ＡのＮタンパク質モノクローナル抗体１（Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ ｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎ、ａｎｔｉｂｏｄｙ、Ｃａｔ：3ＩＮ5、ＭＡｂｓ：ＩｎＡ２４５、ＨｙＴｅｓｔ社製）１００μＬを１５ｍＬの遠沈管に加え、ボルテックスで撹拌した。次いで、３７℃で１２０分間静置した。次いで、１．０質量％のカゼイン（０３０－０１５０５、富士フィルム和光純薬社製）、１００ｍＭのホウ酸緩衝液（０２１－０２１９５、富士フィルム和光純薬社製）からなるブロッキング液（ｐＨ８．０）１２ｍＬを加え、さらに３７℃で６０分間静置した。次いで、遠心分離機（ＭＸ－３０７、トミー精工社製）を用い、１３，０００×ｇの遠心を２５℃で１５分間行い、抗体感作セルロース系着色微粒子を沈降させた後に上澄みを除去した。次いで、５０ｍＭのホウ酸緩衝液（０２１－０２１９５、富士フィルム和光純薬社製）からなる洗浄液（ｐＨ１０．０）１２ｍＬを加え、超音波分散機（ＵＨ－５０、エスエムテー社製）で１０秒間処理した。次いで、遠心分離機（ＭＸ－３０７、トミー精工社製）を用い、１３，０００×ｇの遠心を２５℃で１５分間行い、抗体感作セルロース系着色微粒子を沈降させた後に上澄みを除去した。次いで、１５質量％のスクロース（１９６－０００１５、富士フィルム和光純薬社製）、０．２質量％のカゼイン（０３０－０１５０５、富士フィルム和光純薬社製）、６２ｍＭのホウ酸緩衝液（０２１－０２１９５、富士フィルム和光純薬社製）からなる塗布液（ｐＨ９．２）２．０ｍＬを加え、超音波分散機（ＵＨ－５０、エスエムテー社製）で１０秒間処理し、抗体Ａ１とセルロース系着色微粒子Ａとの複合体１を得た。
(Example 1)
(1) Preparation of complex of antibody A1 and cellulose-based colored fine particles A
1.0% by mass of blue cellulose-based colored fine particles A (NanoAct (registered trademark), BL2: Dark Navy, average particle size 365 nm, manufactured by Asahi Kasei) 100 μL, 10 mM Tris buffer (204-07885, Fujifilm Wako Pure) Pharmaceutical company) (pH 8.0) 900 μL, 1.0 mg / mL mouse-derived anti-Flu-A N protein monoclonal antibody 1 (Influenza A nucleoprotein, antibody, Cat: 3IN5, MAbs: InA245, HyTest Co., Ltd.) as antibody A1 ) was added to a 15 mL centrifuge tube and vortexed. Then, it was allowed to stand at 37°C for 120 minutes. Next, a blocking solution (pH 8.0) consisting of 1.0% by mass of casein (030-01505, manufactured by Fujifilm Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and 100 mM borate buffer (021-02195, manufactured by Fujifilm Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) ) was added, and the mixture was allowed to stand at 37° C. for 60 minutes. Then, using a centrifuge (MX-307, manufactured by Tomy Seiko Co., Ltd.), centrifugation was performed at 13,000×g at 25° C. for 15 minutes to precipitate the antibody-sensitized cellulose-based colored fine particles, and then the supernatant was removed. Next, 12 mL of a cleaning solution (pH 10.0) consisting of 50 mM borate buffer (021-02195, manufactured by Fujifilm Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) is added, and treated for 10 seconds with an ultrasonic disperser (UH-50, manufactured by SMTE). bottom. Then, using a centrifuge (MX-307, manufactured by Tomy Seiko Co., Ltd.), centrifugation was performed at 13,000×g at 25° C. for 15 minutes to precipitate the antibody-sensitized cellulose-based colored fine particles, and then the supernatant was removed. Next, 15% by mass of sucrose (196-00015, manufactured by Fujifilm Wako Pure Chemical Industries), 0.2% by mass of casein (030-01505, manufactured by Fujifilm Wako Pure Chemical Industries), 62 mM borate buffer (021 -02195, manufactured by Fujifilm Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) was added with 2.0 mL of a coating solution (pH 9.2) and treated with an ultrasonic disperser (UH-50, manufactured by SMTE) for 10 seconds. A composite 1 with colored fine particles A was obtained.
（２）抗体Ｂ１とセルロース系着色微粒子Ｂとの複合体の調製
抗体Ａ１の代わりに抗体Ｂ１としてマウス由来抗Ｆｌｕ－ＢのＮタンパク質モノクローナル抗体１（Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｂ ｖｉｒｕｓ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ、Ｃａｔ：１１３１、ＶｉｒｏＳｔａｔ社製）を、赤色のセルロース系着色微粒子Ａの代わりにセルロース系着色微粒子Ｂ（ＮａｎｏＡｃｔ（登録商標）、ＲＥ２：Ｄａｒｋ Ｒｅｄ、平均粒子径３４０ｎｍ、旭化成社製）を、それぞれ使用する以外は（１）抗体Ａ１とセルロース系着色微粒子Ａとの複合体の調製と同様の方法で、抗体Ｂ１とセルロース系着色微粒子Ｂとの複合体１を得た。
(2) Preparation of a complex of antibody B1 and cellulose-based colored fine particles B Mouse-derived anti-Flu-B N protein monoclonal antibody 1 (Influenza B virus Monoclonal Antibody, Cat: 1131, ViroStat) as antibody B1 instead of antibody A1 ) instead of red cellulose-based colored fine particles A, cellulose-based colored fine particles B (NanoAct (registered trademark), RE2: Dark Red, average particle size 340 nm, manufactured by Asahi Kasei Co., Ltd.) (1) A
（３）抗体Ｃ１とセルロース系着色微粒子Ｃとの複合体の調製
抗体Ａ１の代わりに抗体Ｃ１としてマウス由来抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質モノクローナル抗体１（Ａｎｔｉ－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２－ＮＰ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ、ＳＣＶ－１０８、東洋紡社製）を使用する以外は（１）抗体Ａ１とセルロース系着色微粒子Ａとの複合体の調製と同様の方法で、抗体Ｃ１と青色のセルロース系着色微粒子Ｃ（ＮａｎｏＡｃｔ（登録商標）、ＢＬ２：Ｄａｒｋ Ｎａｖｙ、平均粒子径３６５ｎｍ、旭化成社製）との複合体１を得た。
(3) Preparation of complex of antibody C1 and cellulose-based colored fine particle C Mouse-derived anti-SARS-CoV-2 N protein monoclonal antibody 1 (Anti-SARS-CoV-2-NP Monoclonal) as antibody C1 instead of antibody A1 Antibody, SCV-108, manufactured by Toyobo Co., Ltd.), in the same manner as in (1) Preparation of complex of antibody A1 and cellulose-based colored fine particles A, antibody C1 and blue cellulose-based colored fine particles C (NanoAct (registered trademark), BL2: Dark Navy, average particle size 365 nm, manufactured by Asahi Kasei Corporation).
（４）Ｆｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用メンブレンカードの作製
抗体Ａ２として２．０ｍｇ／ｍＬのマウス由来抗Ｆｌｕ－ＡのＮタンパク質モノクローナル抗体２（Ａｎｔｉ－Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ ７３０７ ＳＰＴＮ－５、Ｐｒｏｄｕｃｔ：１０００８３、Ｍｅｄｉｘ Ｂｉｏｃａｍｉｃａ社製）、抗体Ｂ２として２．０ｍｇ／ｍＬのマウス由来抗Ｆｌｕ－ＢのＮタンパク質モノクローナル抗体２（Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｂ ｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎ, ａｎｔｉｂｏｄｙ、Ｃａｔ：３ＩＦ１８/ＲＩＦ１７、ＭＡｂｓ：Ｒ２／３、ＨｙＴｅｓｔ社製）、抗体Ｃ２として２．０ｍｇ／ｍＬのマウス由来抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質モノクローナル抗体２（Ａｎｔｉ－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２－ＮＰ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ、ＳＣＶ－１０９、東洋紡社製）、抗体Ｄとして１．０ｍｇ／ｍＬのウサギ由来抗マウスＩｇＧポリクローナル抗体（Ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ－ｈｅａｖｙ ａｎｄ ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ、Ａ９０－１１７Ａ、ＢＥＴＨＹＬ社製）を準備した。次いで、分注プラットフォーム（ＸＹＺ３０６０、ＢＩＯＤＯＴ社製）と、Ｂｉｏ Ｊｅｔノズル（ＢＨＱＨＲ－ＸＹＺ、ＢＩＯＤＯＴ社製）を用い、上流側に２０ｍｍ×３００ｍｍの粘着テープ部、中央に２５ｍｍ×３００ｍｍのメンブレン部、下流側に１５ｍｍ×３００ｍｍの粘着テープ部から構成される６０ｍｍ×３００ｍｍのメンブレンカード（Ｈｉ－Ｆｌｏｗ Ｐｌｕｓ １２０ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｃａｒｄｓ、ＨＦ１２０、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）のメンブレン部の上流側から５ｍｍの位置に、前記抗体Ｃ２を１．０μＬ／ｃｍの塗布量で塗布し（テストラインＣ）、メンブレン部の上流側から９ｍｍの位置に前記抗体Ｂ２を１．０μＬ／ｃｍの塗布量で塗布し（テストラインＢ）、メンブレン部の上流側から１３ｍｍの位置に前記抗体Ａ２を１．０μＬ／ｃｍの塗布量で塗布し（テストラインＡ）、メンブレン部の上流側から１７ｍｍの位置に、前記抗体Ｄを１．０μＬ／ｃｍの塗布量で塗布した後（コントロールライン）、４５℃に調整した乾燥機（ＷＦＯ－５１０、東京理化器械社製）で３０分間乾燥し、ライン幅約１ｍｍのテストラインＡ～Ｃおよびコントロールラインを形成することで、Ｆｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用メンブレンカード１を得た。
(4) Preparation of membrane card for detecting N protein of Flu-A, Flu-B, SARS-CoV-2 As antibody A2, 2.0 mg/mL mouse-derived anti-Flu-A N protein monoclonal antibody 2 (Anti-Influenza) A 7307 SPTN-5, Product: 100083, manufactured by Medix Biocamica), 2.0 mg/mL mouse-derived anti-Flu-B N protein monoclonal antibody 2 as antibody B2 (Influenza B nucleoprotein, antibody, Cat: 3IF18/RIF17, MAbs: R2/3, manufactured by HyTest), 2.0 mg / mL mouse-derived anti-SARS-CoV-2 N protein monoclonal antibody 2 as antibody C2 (Anti-SARS-CoV-2-NP Monoclonal antibody, SCV-109 , Toyobo Co., Ltd.), and a 1.0 mg/mL rabbit-derived anti-mouse IgG polyclonal antibody (Mouse IgG-heavy and light chain antibody, A90-117A, BETHYL) was prepared as Antibody D. Next, using a dispensing platform (XYZ3060, manufactured by BIODOT) and a BioJet nozzle (BHQHR-XYZ, manufactured by BIODOT), a 20 mm × 300 mm adhesive tape section on the upstream side, a 25 mm × 300 mm membrane section in the center, and a downstream At a position 5 mm from the upstream side of the membrane part of a 60 mm × 300 mm membrane card (Hi-Flow Plus 120 Membrane Cards, HF120, manufactured by Millipore) composed of a 15 mm × 300 mm adhesive tape part on the side, the antibody C2 was applied. Apply an amount of 1.0 μL / cm (test line C), apply the antibody B2 at a
（５）Ｆｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用コンジュゲーションパッドの作製
１０ｍｍ×３００ｍｍのコンジュゲーションパッド（ＧＬＡＳＳＦＩＢＥＲ ＤＩＡＧＮＯＳＴＩＣ ＰＡＤ、ＧＦＤＸ００１０５０、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）の全面に、分注プラットフォーム（ＸＹＺ３０６０、ＢＩＯＤＯＴ社製）と、Ａｉｒ Ｊｅｔノズル（ＡＪＱＨＲ－ＸＹＺ、ＢＩＯＤＯＴ社製）を用い、抗体Ａ１とセルロース系着色微粒子Ａとの複合体１を１５μＬ／ｃｍの塗布量で均一に塗布し、抗体Ｂ１とセルロース系着色微粒子Ｂとの複合体１を１５μＬ／ｃｍの塗布量で均一に塗布し、抗体Ｃ１とセルロース系着色微粒子Ｃとの複合体１を１５μＬ／ｃｍの塗布量で均一に塗布した後、４５℃に調整した乾燥機（ＷＦＯ－５１０、東京理化器械社製）で３０分間乾燥し、Ｆｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用コンジュゲーションパッド１を得た。
(5) Flu-A, Flu-B, preparation of conjugation pad for N protein detection of SARS-CoV-2 Dispense over the entire surface of a 10 mm × 300 mm conjugation pad (GLASSFIBER DIAGNOSTIC PAD, GFDX001050, manufactured by Millipore) Using a platform (XYZ3060, manufactured by BIODOT) and an Air Jet nozzle (AJQHR-XYZ, manufactured by BIODOT), the
（６）Ｆｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用イムノクロマト試験片およびデバイスの作製
前記Ｆｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用メンブレンカード１の上流側の２０ｍｍ×３００ｍｍの粘着テープ部に、メンブレン部と２ｍｍ重なるよう前記Ｆｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用コンジュゲーションパッド１を貼り合わせた。次いで、さらに上流側に前記コンジュゲーションパッドと３ｍｍ重なるよう１５ｍｍ×３００ｍｍのサンプルパッド（ＣＥＬＬＵＬＯＳＥ ＦＩＢＥＲ ＳＡＭＰＬＥ ＰＡＤＳ、ＣＦＳＰ００２０００、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）を貼り合わせた。次いで、前記Ｆｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用メンブレンカード１の下流側の１５ｍｍ×３００ｍｍの粘着テープ部に、メンブレン部と５ｍｍ重なるよう２０ｍｍ×３００ｍｍの吸収パッド（ＣＥＬＬＵＬＯＳＥ ＦＩＢＥＲ ＳＡＭＰＬＥ ＰＡＤＳ、ＣＦＳＰ００２０００、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）を貼り合わせた。次いで、ギロチン式カッティングモジュール（ＣＭ５０００、ＢＩＯＤＯＴ社製）を用い、幅４ｍｍ、長さ６０ｍｍの短冊状にカットすることで、Ｆｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用イムノクロマト試験片１を得た。得られたＦｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用イムノクロマト試験片１をハウジングケース（Ｋ００７、Ｓｈｅｎｇｆｅｎｇ Ｐｌａｓｔｉｃ社製）に収納することでＦｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用イムノクロマトデバイス１を得た。
(6) Flu-A, Flu-B and SARS-CoV-2 N protein detection immunochromatographic test strip and device
（７）測定試料希釈液の調製
１００ｍＭのトリス緩衝液（２０４－０７８８５、富士フィルム和光純薬社製）（ｐＨ８．５）１Ｌ、塩化ナトリウム（１９１－０１６６５、富士フィルム和光純薬社製）８．７７ｇ、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート：Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０（１６６－２１２１３、富士フィルム和光純薬社製）２ｇ、ポリオキシエチレン（１０）オクチルフェニルエーテル：ＴｒｉｔｏｎＸ（登録商標）－１００（１６０－２４７５１、富士フィルム和光純薬社製）９ｇを５００ｍＬガラス瓶に加え、溶解することで測定試料希釈液を調製した。
(7) Preparation of measurement sample dilution solution 100 mM Tris buffer (204-07885, manufactured by Fujifilm Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) (pH 8.5) 1 L, sodium chloride (191-01665, manufactured by Fujifilm Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) 8 .77 g, polyoxyethylene (20) sorbitan monolaurate: Tween (registered trademark) 20 (166-21213, manufactured by Fujifilm Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) 2 g, polyoxyethylene (10) octylphenyl ether: TritonX (registered trademark) -100 (160-24751, manufactured by Fujifilm Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) (9 g) was added to a 500 mL glass bottle and dissolved to prepare a diluted measurement sample solution.
（８）Ｆｌｕ－Ａ試料、Ｆｌｕ－Ｂ試料およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ２試料の調製
市販のＦｌｕ－ＡのＮタンパク質であるＰｕｒｉｆｉｅｄ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ ｐｒｏｔｅｉｎ （Ｈ1Ｎ1 ｓｔｒａｉｎ）（３０－ＡＩ５０、Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ社製）を、前記測定試料希釈液にて１０μｇ/ｍＬに希釈することでＦｌｕ－Ａ試料を得た。市販のＦｌｕ－ＢのＮタンパク質であるＰｕｒｉｆｉｅｄ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｂ ｐｒｏｔｅｉｎ（３０－ＡＩ７５、Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ社製）を、前記測定試料希釈液にて１０μｇ/ｍＬに希釈することでＦｌｕ－Ｂ試料を得た。市販のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質であるＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎｕｃｌｅｏｃａｐｓｉｄ ｐｒｏｔｅｉｎ（２３０－３０１６４、ＲａｙＢｉｏｔｅｃｈ社製）を、前記測定試料希釈液にて１０ｎｇ/ｍＬに希釈することでＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２試料を得た。
(8) Preparation of Flu-A sample, Flu-B sample and SARS-CoV2 sample Purified Influenza A protein (H1N1 strain) (30-AI50, manufactured by Fitzgerald), which is the N protein of commercially available Flu-A, was measured as described above. Flu-A samples were obtained by diluting to 10 μg/mL with sample diluent. Purified Influenza B protein (30-AI75, manufactured by Fitzgerald), which is the N protein of Flu-B on the market, was diluted to 10 μg/mL with the measurement sample diluent to obtain a Flu-B sample. Recombinant SARS-CoV-2 Nucleocapsid protein (230-30164, manufactured by RayBiotech), which is a commercially available SARS-CoV-2 N protein, is diluted to 10 ng/mL with the measurement sample diluent to obtain SARS-CoV- Two samples were obtained.
（９）Ｆｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用イムノクロマト試験片の評価：非特異吸着の評価
前記Ｆｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用イムノクロマトデバイスを水平な台に設置した。次いで、前記測定試料希釈液１００μＬを、マイクロピペットで分取し、サンプルパッドに緩やかに滴下し、２５℃で１５分間静置した。次いで、メンブレン上のテストラインＡ～Ｃの反射吸光度（ｍＡｂｓ）をイムノクロマトリーダー（Ｃ１００６０－１０、測定モード：Ｇｏｌｄ Ｃｏｌｌｏｉｄ、Ｌｉｎｅ（赤色ライン測定時）またはＬａｔｅｘ、Ｌｉｎｅ（青色または緑色ライン測定時）、浜松ホトニクス社製）を用いて測定した。得られた結果を表１に示す。なお、非特異吸着は反射吸光度が１０ｍＡｂｓ以下であれば良好と判断できる。
(9) Flu-A, Flu-B, evaluation of immunochromatographic test strip for N protein detection of SARS-CoV-2: Evaluation of non-specific adsorption Flu-A, Flu-B, N protein detection of SARS-CoV-2 An immunochromatographic device for chromatographic analysis was placed on a horizontal table. Next, 100 μL of the diluted measurement sample solution was dispensed with a micropipette, gently dropped onto the sample pad, and allowed to stand at 25° C. for 15 minutes. Then, the reflection absorbance (mAbs) of the test lines A to C on the membrane was measured using an immunochromatographic reader (C10060-10, measurement mode: Gold Colloid, Line (when measuring the red line) or Latex, Line (when measuring the blue or green line), (manufactured by Hamamatsu Photonics K.K.). Table 1 shows the results obtained. It should be noted that non-specific adsorption can be judged to be good if the reflection absorbance is 10 mAbs or less.
（１０）Ｆｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用イムノクロマト試験片の評価：感度の評価
前記Ｆｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用イムノクロマトデバイスを水平な台に設置した。次いで、前記Ｆｌｕ－Ａ試料、Ｆｌｕ－Ｂ試料、またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２試料１００μＬを、マイクロピペットで分取し、サンプルパッドに緩やかに滴下し、２５℃で１５分間静置した。次いで、メンブレン上のコントロールラインおよびテストラインの反射吸光度（ｍＡｂｓ）をイムノクロマトリーダー（Ｃ１００６０－１０、測定モード：Ｇｏｌｄ Ｃｏｌｌｏｉｄ、Ｌｉｎｅ（赤色ライン測定時）またはＬａｔｅｘ、Ｌｉｎｅ（青色または緑色ライン測定時）、浜松ホトニクス社製）を用いて測定した。得られた結果を表１に示す。なお、感度は反射吸光度が５０ｍＡｂｓ以下であれば不良、５０ｍＡｂｓ超であれば良好と判断した。
(10) Flu-A, Flu-B, evaluation of immunochromatographic test strip for N protein detection of SARS-CoV-2: evaluation of sensitivity Flu-A, Flu-B, immunochromatography for N protein detection of SARS-CoV-2 The device was placed on a horizontal table. Then, 100 μL of the Flu-A sample, Flu-B sample, or SARS-CoV-2 sample was dispensed with a micropipette, gently dropped onto the sample pad, and left at 25° C. for 15 minutes. Then, the reflected absorbance (mAbs) of the control line and the test line on the membrane was measured using an immunochromatographic reader (C10060-10, measurement mode: Gold Colloid, Line (when measuring the red line) or Latex, Line (when measuring the blue or green line), (manufactured by Hamamatsu Photonics K.K.). Table 1 shows the results obtained. The sensitivity was judged to be poor when the reflection absorbance was 50 mAbs or less, and good when it exceeded 50 mAbs.
（１１）Ｆｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用イムノクロマト試験片の評価：視認性の評価
前記Ｆｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用イムノクロマトデバイスを水平な台に設置した。次いで、前記Ｆｌｕ－Ａ試料１００μＬ（テストラインＡおよびコントロールラインが発色）、Ｆｌｕ－Ｂ試料１００μＬ（テストラインＢおよびコントロールラインが発色）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２試料１００μＬ（テストラインＣおよびコントロールラインが発色）、またはＦｌｕ－Ａ試料３３μＬ、Ｆｌｕ－Ｂ試料３３μＬ、およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２試料３３μＬの混合液９９μＬ（テストラインＡ～Ｃおよびコントロールラインが発色）を、マイクロピペットで分取し、サンプルパッドに緩やかに滴下し、２５℃で１５分間静置した。次いで、メンブレン上のコントロールラインおよびテストラインを１０名で目視し、１０名中１０名が項目判定容易であると判定したものを◎、１０名中８～９名が項目判定容易であると判定したものを〇、１０名中６～７名が項目判定容易であると判定したものを△、１０名中５名以下が項目判定容易であると判定したものを×と評価した。ここで項目判定は、前記メンブレン上のコントロールラインおよびテストラインを目視し、出現した４本ラインがそれぞれどの項目のラインであるかを即座に判定できるかで評価した。得られた結果を表１に示す。
(11) Flu-A, Flu-B, Evaluation of immunochromatographic test strip for detecting N protein of SARS-CoV-2: Evaluation of visibility Flu-A, Flu-B, for detecting N protein of SARS-CoV-2 The immunochromatographic device was placed on a horizontal table. Then, 100 μL of the Flu-A sample (test line A and control line developed), 100 μL of Flu-B sample (test line B and control line developed), 100 μL of SARS-CoV-2 sample (test line C and control line developed Coloring), or 99 μL of a mixture of 33 μL of Flu-A sample, 33 μL of Flu-B sample, and 33 μL of SARS-CoV-2 sample (test lines A to C and control line are colored) are dispensed with a micropipette and sample It was gently dropped onto the pad and allowed to stand at 25°C for 15 minutes. Next, the control line and the test line on the membrane were visually observed by 10 people, and 10 out of 10 people judged that the item was easy to judge ◎, 8 to 9 out of 10 people judged that the item was easy ◯ when 6 to 7 out of 10 panelists determined that the item was easy to determine; Here, item determination was made by visually observing the control line and the test line on the membrane, and evaluating whether or not it was possible to immediately determine to which item each of the four lines that appeared were lines. Table 1 shows the results obtained.
（実施例２）
テストラインＣをメンブレン部の上流側から５ｍｍの位置から１３ｍｍの位置へ、テストラインＡをメンブレン部の上流側から１３ｍｍの位置から５ｍｍの位置へ変更する以外は実施例１と同様の方法にてＦｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用イムノクロマトデバイス２を作製し、（９）非特異吸着、（１０）感度、（１１）視認性を評価した。得られた結果を表１に示す。
(Example 2)
In the same manner as in Example 1, except that the test line C is changed from the position of 5 mm to the position of 13 mm from the upstream side of the membrane part, and the test line A is changed from the position of 13 mm to the position of 5 mm from the upstream side of the membrane part.
（実施例３）
セルロース系着色微粒子Ａに赤色粒子（ＮａｎｏＡｃｔ（登録商標）、ＲＥ２：Ｄａｒｋ Ｒｅｄ、平均粒子径３４０ｎｍ、旭化成社製）を、セルロース系着色微粒子Ｂに青色粒子（ＮａｎｏＡｃｔ（登録商標）、ＢＬ２：Ｄａｒｋ Ｎａｖｙ、平均粒子径３６５ｎｍ、旭化成社製）を、セルロース系着色微粒子Ｃに赤色粒子（ＮａｎｏＡｃｔ（登録商標）、ＲＥ２：Ｄａｒｋ Ｒｅｄ、平均粒子径３４０ｎｍ、旭化成社製）を、それぞれ使用する以外は実施例１と同様の方法にてＦｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用イムノクロマトデバイス３を作製し、（９）非特異吸着、（１０）感度、（１１）視認性を評価した。得られた結果を表１に示す。
(Example 3)
Red particles (NanoAct (registered trademark), RE2: Dark Red, average particle size 340 nm, manufactured by Asahi Kasei Corporation) are added to cellulose-based colored fine particles A, and blue particles (NanoAct (registered trademark), BL2: Dark Navy are added to cellulose-based colored fine particles B. , average particle size 365 nm, manufactured by Asahi Kasei), and red particles (NanoAct (registered trademark), RE2: Dark Red, average particle size 340 nm, manufactured by Asahi Kasei) for the cellulose-based colored fine particles C).
（実施例４）
セルロース系着色微粒子Ａに赤色粒子（ＮａｎｏＡｃｔ（登録商標）、ＲＥ２：Ｄａｒｋ Ｒｅｄ、平均粒子径３４０ｎｍ、旭化成社製）を使用する以外は実施例１と同様の方法にてＦｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用イムノクロマトデバイス４を作製し、（９）非特異吸着、（１０）感度、（１１）視認性を評価した。得られた結果を表１に示す。
(Example 4)
Flu-A and Flu-B in the same manner as in Example 1 except that red particles (NanoAct (registered trademark), RE2: Dark Red, average particle size 340 nm, manufactured by Asahi Kasei Corporation) are used as the cellulose-based colored fine particles A. , SARS-CoV-2 N protein detection
（実施例５）
セルロース系着色微粒子Ｂに青色粒子（ＮａｎｏＡｃｔ（登録商標）、ＢＬ２：Ｄａｒｋ Ｎａｖｙ、平均粒子径３６５ｎｍ、旭化成社製）を、セルロース系着色微粒子Ｃに赤色粒子（ＮａｎｏＡｃｔ（登録商標）、ＲＥ２：Ｄａｒｋ Ｒｅｄ、平均粒子径３４０ｎｍ、旭化成社製）を、それぞれ使用する以外は実施例１と同様の方法にてＦｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用イムノクロマトデバイス５を作製し、（９）非特異吸着、（１０）感度、（１１）視認性を評価した。得られた結果を表１に示す。
(Example 5)
Blue particles (NanoAct (registered trademark), BL2: Dark Navy, average particle size 365 nm, manufactured by Asahi Kasei Corporation) are added to cellulose-based colored fine particles B, and red particles (NanoAct (registered trademark), RE2: Dark Red are added to cellulose-based colored fine particles C. , average particle size 340 nm, manufactured by Asahi Kasei Corporation) in the same manner as in Example 1 except that each was used to prepare an
（実施例６）
セルロース系着色微粒子Ａに赤色粒子（ＮａｎｏＡｃｔ（登録商標）、ＲＥ２：Ｄａｒｋ Ｒｅｄ、平均粒子径３４０ｎｍ、旭化成社製）を、セルロース系着色微粒子Ｂに青色粒子（ＮａｎｏＡｃｔ（登録商標）、ＢＬ２：Ｄａｒｋ Ｎａｖｙ、平均粒子径３６５ｎｍ、旭化成社製）を、セルロース系着色微粒子Ｃに緑色粒子（ＮａｎｏＡｃｔ（登録商標）、ＧＲ１：Ｇｒｅｅｎ、平均粒子径３３５ｎｍ、旭化成社製）を、それぞれ使用する以外は実施例１と同様の方法にてＦｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用イムノクロマトデバイス６を作製し、（９）非特異吸着、（１０）感度、（１１）視認性を評価した。得られた結果を表１に示す。
(Example 6)
Red particles (NanoAct (registered trademark), RE2: Dark Red, average particle size 340 nm, manufactured by Asahi Kasei Corporation) are added to cellulose-based colored fine particles A, and blue particles (NanoAct (registered trademark), BL2: Dark Navy are added to cellulose-based colored fine particles B. , average particle size 365 nm, manufactured by Asahi Kasei), and green particles (NanoAct (registered trademark), GR1: Green, average particle size 335 nm, manufactured by Asahi Kasei) in cellulose-based colored fine particles C. Example 1 Prepare an
（実施例７）
セルロース系着色微粒子Ｃに緑色粒子（ＮａｎｏＡｃｔ（登録商標）、ＧＲ１：Ｇｒｅｅｎ、平均粒子径３３５ｎｍ、旭化成社製）を使用する以外は実施例１と同様の方法にてＦｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用イムノクロマトデバイス７を作製し、（９）非特異吸着、（１０）感度、（１１）視認性を評価した。得られた結果を表１に示す。
(Example 7)
Flu-A, Flu-B, An
（実施例８）
セルロース系着色微粒子Ａに赤色粒子（ＮａｎｏＡｃｔ（登録商標）、ＲＥ２：Ｄａｒｋ Ｒｅｄ、平均粒子径３４０ｎｍ、旭化成社製）を、セルロース系着色微粒子Ｂに緑色粒子（ＮａｎｏＡｃｔ（登録商標）、ＧＲ１：Ｇｒｅｅｎ、平均粒子径３３５ｎｍ、旭化成社製）を、それぞれ使用する以外は実施例１と同様の方法にてＦｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用イムノクロマトデバイス８を作製し、（９）非特異吸着、（１０）感度、（１１）視認性を評価した。得られた結果を表１に示す。
(Example 8)
Red particles (NanoAct (registered trademark), RE2: Dark Red, average particle size 340 nm, manufactured by Asahi Kasei Corporation) are added to the cellulose-based colored fine particles A, and green particles (NanoAct (registered trademark), GR1: Green, are added to the cellulose-based colored fine particles B. An
（実施例９）
セルロース系着色微粒子Ｂに緑色粒子（ＮａｎｏＡｃｔ（登録商標）、ＧＲ１：Ｇｒｅｅｎ、平均粒子径３３５ｎｍ、旭化成社製）を、セルロース系着色微粒子Ｃに赤色粒子（ＮａｎｏＡｃｔ（登録商標）、ＲＥ２：Ｄａｒｋ Ｒｅｄ、平均粒子径３４０ｎｍ、旭化成社製）を、それぞれ使用する以外は実施例１と同様の方法にてＦｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用イムノクロマトデバイス９を作製し、（９）非特異吸着、（１０）感度、（１１）視認性を評価した。得られた結果を表１に示す。
(Example 9)
Green particles (NanoAct (registered trademark), GR1: Green, average particle size 335 nm, manufactured by Asahi Kasei Corporation) are added to the cellulose-based colored fine particles B, and red particles (NanoAct (registered trademark), RE2: Dark Red, are added to the cellulose-based colored fine particles C. Flu-A, Flu-B, and SARS-CoV-2 in the same manner as in Example 1 except that each of them uses an average particle size of 340 nm, manufactured by Asahi Kasei). (9) non-specific adsorption, (10) sensitivity, and (11) visibility were evaluated. Table 1 shows the results obtained.
（実施例１０）
セルロース系着色微粒子Ａに緑色粒子（ＮａｎｏＡｃｔ（登録商標）、ＧＲ１：Ｇｒｅｅｎ、平均粒子径３３５ｎｍ、旭化成社製）を使用する以外は実施例１と同様の方法にてＦｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用イムノクロマトデバイス１０を作製し、（９）非特異吸着、（１０）感度、（１１）視認性を評価した。得られた結果を表１に示す。
(Example 10)
Flu-A, Flu-B, An
（実施例１１）
セルロース系着色微粒子Ａに緑色粒子（ＮａｎｏＡｃｔ（登録商標）、ＧＲ１：Ｇｒｅｅｎ、平均粒子径３３５ｎｍ、旭化成社製）を、セルロース系着色微粒子Ｂに青色粒子（ＮａｎｏＡｃｔ（登録商標）、ＢＬ２：Ｄａｒｋ Ｎａｖｙ、平均粒子径３６５ｎｍ、旭化成社製）を、セルロース系着色微粒子Ｃに赤色粒子（ＮａｎｏＡｃｔ（登録商標）、ＲＥ２：Ｄａｒｋ Ｒｅｄ、平均粒子径３４０ｎｍ、旭化成社製）を、それぞれ使用する以外は実施例１と同様の方法にてＦｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用イムノクロマトデバイス１１を作製し、（９）非特異吸着、（１０）感度、（１１）視認性を評価した。得られた結果を表１に示す。
(Example 11)
Green particles (NanoAct (registered trademark), GR1: Green, average particle size 335 nm, manufactured by Asahi Kasei Corporation) are added to the cellulose-based colored fine particles A, and blue particles (NanoAct (registered trademark), BL2: Dark Navy, are added to the cellulose-based colored fine particles B. Example 1 except that red particles (NanoAct (registered trademark), RE2: Dark Red, average particle size 340 nm, Asahi Kasei Co., Ltd.) are used for the cellulose-based colored fine particles C, respectively. Prepare an immunochromatographic device 11 for N protein detection of Flu-A, Flu-B, and SARS-CoV-2 in the same manner as above, and evaluate (9) nonspecific adsorption, (10) sensitivity, and (11) visibility. bottom. Table 1 shows the results obtained.
（実施例１２）
セルロース系着色微粒子Ａに緑色粒子（ＮａｎｏＡｃｔ（登録商標）、ＧＲ１：Ｇｒｅｅｎ、平均粒子径３３５ｎｍ、旭化成社製）を、セルロース系着色微粒子Ｂに緑色粒子（ＮａｎｏＡｃｔ（登録商標）、ＧＲ１：Ｇｒｅｅｎ、平均粒子径３３５ｎｍ、旭化成社製）を、セルロース系着色微粒子Ｃに赤色粒子（ＮａｎｏＡｃｔ（登録商標）、ＲＥ２：Ｄａｒｋ Ｒｅｄ、平均粒子径３４０ｎｍ、旭化成社製）を、それぞれ使用する以外は実施例１と同様の方法にてＦｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用イムノクロマトデバイス１２を作製し、（９）非特異吸着、（１０）感度、（１１）視認性を評価した。得られた結果を表１に示す。
(Example 12)
Green particles (NanoAct (registered trademark), GR1: Green, average particle size 335 nm, manufactured by Asahi Kasei Corporation) are added to the cellulose-based colored fine particles A, and green particles (NanoAct (registered trademark), GR1: Green, average Particle diameter 335 nm, manufactured by Asahi Kasei), and red particles (NanoAct (registered trademark), RE2: Dark Red, average particle diameter 340 nm, manufactured by Asahi Kasei) for the cellulose-based colored fine particles C). An immunochromatographic device 12 for N protein detection of Flu-A, Flu-B, and SARS-CoV-2 was prepared in the same manner, and (9) nonspecific adsorption, (10) sensitivity, and (11) visibility were evaluated. . Table 1 shows the results obtained.
（実施例１３）
セルロース系着色微粒子Ａに緑色粒子（ＮａｎｏＡｃｔ（登録商標）、ＧＲ１：Ｇｒｅｅｎ、平均粒子径３３５ｎｍ、旭化成社製）を、セルロース系着色微粒子Ｂに緑色粒子（ＮａｎｏＡｃｔ（登録商標）、ＧＲ１：Ｇｒｅｅｎ、平均粒子径３３５ｎｍ、旭化成社製）を、それぞれ使用する以外は実施例１と同様の方法にてＦｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用イムノクロマトデバイス１３を作製し、（９）非特異吸着、（１０）感度、（１１）視認性を評価した。得られた結果を表１に示す。
(Example 13)
Green particles (NanoAct (registered trademark), GR1: Green, average particle size 335 nm, manufactured by Asahi Kasei Corporation) are added to the cellulose-based colored fine particles A, and green particles (NanoAct (registered trademark), GR1: Green, average Flu-A, Flu-B, and SARS-CoV-2 N protein detection immunochromatographic device 13 was prepared in the same manner as in Example 1 except that each of the particles had a particle size of 335 nm and was manufactured by Asahi Kasei Corporation. 9) non-specific adsorption, (10) sensitivity, and (11) visibility were evaluated. Table 1 shows the results obtained.
（実施例１４）
セルロース系着色微粒子Ａに緑色粒子（ＮａｎｏＡｃｔ（登録商標）、ＧＲ１：Ｇｒｅｅｎ、平均粒子径３３５ｎｍ、旭化成社製）を、セルロース系着色微粒子Ｃに緑色粒子（ＮａｎｏＡｃｔ（登録商標）、ＧＲ１：Ｇｒｅｅｎ、平均粒子径３３５ｎｍ、旭化成社製）を、それぞれ使用する以外は実施例１と同様の方法にてＦｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用イムノクロマトデバイス１４を作製し、（９）非特異吸着、（１０）感度、（１１）視認性を評価した。得られた結果を表１に示す。
(Example 14)
Green particles (NanoAct (registered trademark), GR1: Green, average particle size 335 nm, manufactured by Asahi Kasei Corporation) are added to cellulose-based colored fine particles A, and green particles (NanoAct (registered trademark), GR1: Green, average Flu-A, Flu-B, and SARS-CoV-2 N protein detection immunochromatographic device 14 was prepared in the same manner as in Example 1, except that each of the particles had a particle size of 335 nm and was manufactured by Asahi Kasei Corporation. 9) non-specific adsorption, (10) sensitivity, and (11) visibility were evaluated. Table 1 shows the results obtained.
（実施例１５）
セルロース系着色微粒子Ａに緑色粒子（ＮａｎｏＡｃｔ（登録商標）、ＧＲ１：Ｇｒｅｅｎ、平均粒子径３３５ｎｍ、旭化成社製）を、セルロース系着色微粒子Ｂに青色粒子（ＮａｎｏＡｃｔ（登録商標）、ＢＬ２：Ｄａｒｋ Ｎａｖｙ、平均粒子径３６５ｎｍ、旭化成社製）を、セルロース系着色微粒子Ｃに緑色粒子（ＮａｎｏＡｃｔ（登録商標）、ＧＲ１：Ｇｒｅｅｎ、平均粒子径３３５ｎｍ、旭化成社製）を、それぞれ使用する以外は実施例１と同様の方法にてＦｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用イムノクロマトデバイス１５を作製し、（９）非特異吸着、（１０）感度、（１１）視認性を評価した。得られた結果を表１に示す。
(Example 15)
Green particles (NanoAct (registered trademark), GR1: Green, average particle size 335 nm, manufactured by Asahi Kasei Corporation) are added to the cellulose-based colored fine particles A, and blue particles (NanoAct (registered trademark), BL2: Dark Navy, are added to the cellulose-based colored fine particles B. Average particle size 365 nm, manufactured by Asahi Kasei), and green particles (NanoAct (registered trademark), GR1: Green, average particle size 335 nm, manufactured by Asahi Kasei) for the cellulose-based colored fine particles C). Immunochromatographic device 15 for N protein detection of Flu-A, Flu-B, and SARS-CoV-2 was prepared in the same manner, and (9) nonspecific adsorption, (10) sensitivity, and (11) visibility were evaluated. . Table 1 shows the results obtained.
（実施例１６）
テストラインＡをメンブレン部の上流側から１３ｍｍの位置から９ｍｍの位置へ、テストラインＢをメンブレン部の上流側から９ｍｍの位置から１３ｍｍの位置へ変更する以外は実施例１と同様の方法にてＦｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用イムノクロマトデバイス１６を作製し、（９）非特異吸着、（１０）感度、（１１）視認性を評価した。得られた結果を表１に示す。
(Example 16)
In the same manner as in Example 1 except that the test line A is changed from the position 13 mm to 9 mm from the upstream side of the membrane part, and the test line B is changed from the
（実施例１７）
テストラインＡをメンブレン部の上流側から１３ｍｍの位置から９ｍｍの位置へ、テストラインＢをメンブレン部の上流側から９ｍｍの位置から５ｍｍの位置へ、テストラインＣをメンブレン部の上流側から５ｍｍの位置から１３ｍｍの位置へ変更する以外は実施例１と同様の方法にてＦｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用イムノクロマトデバイス１７を作製し、（９）非特異吸着、（１０）感度、（１１）視認性を評価した。得られた結果を表１に示す。
(Example 17)
Test line A from 13 mm to 9 mm from the upstream side of the membrane, test line B from 9 mm to 5 mm from the upstream of the membrane, and test line C from the upstream of the membrane to 5 mm. An immunochromatographic device 17 for N protein detection of Flu-A, Flu-B, and SARS-CoV-2 was produced in the same manner as in Example 1 except that the position was changed to a position of 13 mm, and (9) non-specific adsorption. , (10) sensitivity, and (11) visibility were evaluated. Table 1 shows the results obtained.
（実施例１８）
テストラインＡをメンブレン部の上流側から１３ｍｍの位置から９ｍｍの位置へ、テストラインＢをメンブレン部の上流側から９ｍｍの位置から１３ｍｍの位置へ変更する以外は実施例５と同様の方法にてＦｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用イムノクロマトデバイス１８を作製し、（９）非特異吸着、（１０）感度、（１１）視認性を評価した。得られた結果を表１に示す。
(Example 18)
In the same manner as in Example 5 except that the test line A is changed from the position of 13 mm to the position of 9 mm from the upstream side of the membrane part, and the test line B is changed from the position of 9 mm to the position of 13 mm from the upstream side of the membrane part. An immunochromatographic device 18 for N protein detection of Flu-A, Flu-B, and SARS-CoV-2 was produced, and (9) nonspecific adsorption, (10) sensitivity, and (11) visibility were evaluated. Table 1 shows the results obtained.
（実施例１９）
テストラインＡをメンブレン部の上流側から１３ｍｍの位置から９ｍｍの位置へ、テストラインＢをメンブレン部の上流側から９ｍｍの位置から５ｍｍの位置へ、テストラインＣをメンブレン部の上流側から５ｍｍの位置から１３ｍｍの位置へ変更する以外は実施例５と同様の方法にてＦｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用イムノクロマトデバイス１９を作製し、（９）非特異吸着、（１０）感度、（１１）視認性を評価した。得られた結果を表１に示す。
(Example 19)
Test line A from 13 mm to 9 mm from the upstream side of the membrane, test line B from 9 mm to 5 mm from the upstream of the membrane, and test line C from the upstream of the membrane to 5 mm. An immunochromatographic device 19 for N protein detection of Flu-A, Flu-B, SARS-CoV-2 was produced in the same manner as in Example 5 except that the position was changed to a position of 13 mm, and (9) non-specific adsorption. , (10) sensitivity, and (11) visibility were evaluated. Table 1 shows the results obtained.
（実施例２０）
抗体Ａ１として１．０ｍｇ／ｍＬのマウス由来抗Ｆｌｕ－ＡのＮタンパク質モノクローナル抗体１（Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ ｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎ、ａｎｔｉｂｏｄｙ、Ｃａｔ：３ＩＮ５、ＭＡｂｓ：ＩｎＡ２４５、ＨｙＴｅｓｔ社製）の代わりに、１．０ｍｇ／ｍＬのマウス由来抗Ｆｌｕ－ＡのＮタンパク質モノクローナル抗体３（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔｏ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ （Ｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎ）、Ｃ０１７３２Ｍ、Ｍｅｒｉｄｉａｎ社製）を使用し、抗体Ａ２として２．０ｍｇ／ｍＬのマウス由来抗Ｆｌｕ－ＡのＮタンパク質モノクローナル抗体２（Ａｎｔｉ－Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ ７３０７ ＳＰＴＮ－５、Ｐｒｏｄｕｃｔ：１０００８３、Ｍｅｄｉｘ Ｂｉｏｃａｍｉｃａ社製）の代わりに、２．０ｍｇ／ｍＬのマウス由来抗Ｆｌｕ－ＡのＮタンパク質モノクローナル抗体４（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔｏ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ （Ｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎ）、Ｃ０１７３１Ｍ、Ｍｅｒｉｄｉａｎ社製）を使用する以外は実施例１と同様の方法にてＦｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用イムノクロマトデバイス２０を作製し、（９）非特異吸着、（１０）感度、（１１）視認性を評価した。得られた結果を表１に示す。
(Example 20)
1.0 mg / mL mouse-derived anti-Flu-A N protein
（実施例２１）
抗体Ｂ１としてマウス由来抗Ｆｌｕ－ＢのＮタンパク質モノクローナル抗体１（Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｂ ｖｉｒｕｓ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ、Ｃａｔ：１１３１、ＶｉｒｏＳｔａｔ社製）の代わりに、１．０ｍｇ／ｍＬのマウス由来抗Ｆｌｕ－ＢのＮタンパク質モノクローナル抗体３（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔｏ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｂ （Ｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎ）、Ｃ０１７４４Ｍ、Ｍｅｒｉｄｉａｎ社製）を使用し、抗体Ｂ２として２．０ｍｇ／ｍＬのマウス由来抗Ｆｌｕ－ＢのＮタンパク質モノクローナル抗体２（Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｂ ｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎ, ａｎｔｉｂｏｄｙ、Ｃａｔ：３ＩＦ１８/ＲＩＦ１７、ＭＡｂｓ：Ｒ２／３、ＨｙＴｅｓｔ社製）の代わりに、２．０ｍｇ／ｍＬのマウス由来抗Ｆｌｕ－ＢのＮタンパク質モノクローナル抗体４（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ、Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｂ、ＭＡＢ７０４２Ｐ、ＢＢＩ社製）を使用する以外は実施例１と同様の方法にてＦｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用イムノクロマトデバイス２１を作製し、（９）非特異吸着、（１０）感度、（１１）視認性を評価した。得られた結果を表１に示す。
(Example 21)
Mouse-derived anti-Flu-B N protein
（比較例１）
（１２）抗体Ａ１と金コロイドとの複合体の調製
ＯＤ５２０＝１．０の金コロイド粒子（ＥＭＧＣ４０：Ｒｅｄ、平均粒子径４０ｎｍ、ＢＢＩ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ社製）１３．５ｍＬ、５０ｍＭのりん酸二水素カリウム（１６６－０４２５５、富士フィルム和光純薬工業社製）（ｐＨ７．０）１．５ｍＬ、および抗体Ａ１として０．０５ｍｇ／ｍＬのマウス由来抗Ｆｌｕ－ＡのＮタンパク質モノクローナル抗体１（Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ ｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎ、ａｎｔｉｂｏｄｙ、Ｃａｔ：３ＩＮ５、ＭＡｂｓ：ＩｎＡ２４５、ＨｙＴｅｓｔ社製）１．５ｍＬを５０ｍＬの遠沈管に加え、軽く撹拌し、２５℃で１０分間静置した。次いで、１０質量％のＢｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ ａｌｂｕｍｉｎ：ＢＳＡ（Ａ７９０６、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）からなるブロッキング液１ｍＬを加え、軽く撹拌した。次いで、遠心分離機（ＭＸ－３０７、トミー精工社製）とラックインローター（ＴＭＡ－３００、トミー精工社製）を用い、８，０００×ｇの遠心を２５℃で１５分間行い、抗体感作金コロイド粒子を沈降させた後に上澄みを除去した。次いで、１．０質量％のＢｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ ａｌｂｕｍｉｎ：ＢＳＡ（Ａ７９０６、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）、１５０ｍＭの塩化ナトリウム（１９２－１３９２５、富士フィルム和光純薬工業社製）、２０ｍＭのトリス緩衝液（２０４－０７８８５、富士フィルム和光純薬工業社製）からなる洗浄液（ｐＨ８．２）３０ｍＬを加え、超音波分散機（ＵＨ－５０、エスエムテー社製）で１０秒間処理した。次いで、遠心分離機（ＭＸ－３０７、トミー精工社製）を用い、８，０００×ｇの遠心を２５℃で１５分間行い、抗体感作金コロイド粒子を沈降させた後に上澄みを除去した。次いで、２．５質量％のスクロース（１９６－０００１５、富士フィルム和光純薬工業社製）、０．２５質量％のＢｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ ａｌｂｕｍｉｎ：ＢＳＡ（Ａ７９０６、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）、３７．５ｍＭの塩化ナトリウム（１９２－１３９２５、富士フィルム和光純薬工業社製）、２０ｍＭのトリス緩衝液（２０４－０７８８５、富士フィルム和光純薬工業社製）からなる塗布液（ｐＨ８．２）を加え、超音波分散機（ＵＨ－５０、エスエムテー社製）で１０秒間処理し、塗布液の液量によりＯＤ５２０＝４．０になるよう調整することで、抗体Ａ１と金コロイドとの複合体Ｘを得た。
(Comparative example 1)
(12) Preparation of complex of antibody A1 and colloidal gold
OD520 = 1.0 colloidal gold particles (EMGC40: Red, average particle size 40 nm, manufactured by BBI Solutions) 13.5 mL, 50 mM potassium dihydrogen phosphate (166-04255, manufactured by Fujifilm Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) ( pH 7.0) 1.5 mL, and 0.05 mg / mL mouse-derived anti-Flu-A N protein monoclonal antibody 1 (Influenza A nucleoprotein, antibody, Cat: 3IN5, MAbs: InA245, manufactured by HyTest) 1 as antibody A1 0.5 mL was added to a 50 mL centrifuge tube, vortexed gently, and allowed to stand at 25° C. for 10 minutes. Next, 1 mL of a blocking solution consisting of 10% by mass of Bovine serum albumin:BSA (A7906, manufactured by Sigma-Aldrich) was added and gently stirred. Next, using a centrifuge (MX-307, manufactured by Tomy Seiko) and a rack-in rotor (TMA-300, manufactured by Tomy Seiko), centrifugation was performed at 8,000 × g for 15 minutes at 25 ° C. to perform antibody sensitization. After allowing the colloidal gold particles to settle, the supernatant was removed. Next, 1.0% by mass of Bovine serum albumin: BSA (A7906, manufactured by Sigma-Aldrich), 150 mM sodium chloride (192-13925, manufactured by Fujifilm Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), 20 mM Tris buffer (204- 07885, manufactured by Fujifilm Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) (pH 8.2) was added, and treated for 10 seconds with an ultrasonic disperser (UH-50, manufactured by SMTE). Then, using a centrifuge (MX-307, Tomy Seiko Co., Ltd.), centrifugation was performed at 8,000×g for 15 minutes at 25° C. to settle the antibody-sensitized colloidal gold particles, and then the supernatant was removed. Then, 2.5% by mass of sucrose (196-00015, manufactured by Fujifilm Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), 0.25% by mass of Bovine serum albumin: BSA (A7906, manufactured by Sigma-Aldrich), 37.5 mM chloride A coating solution (pH 8.2) containing sodium (192-13925, manufactured by Fujifilm Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and 20 mM Tris buffer (204-07885, manufactured by Fujifilm Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) was added, followed by ultrasonic dispersion. A complex X of antibody A1 and colloidal gold was obtained by treating for 10 seconds with a machine (UH-50, manufactured by SMTE) and adjusting the amount of coating liquid so that OD520 was 4.0.
（１３）抗体Ｂ１と金コロイドとの複合体の調製
抗体Ａ１の代わりに抗体Ｂ１としてマウス由来抗Ｆｌｕ－ＢのＮタンパク質モノクローナル抗体１（Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｂ ｖｉｒｕｓ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ、Ｃａｔ：１１３１、ＶｉｒｏＳｔａｔ社製）を使用する以外は（１２）抗体Ａ１と金コロイドとの複合体の調製と同様の方法で、抗体Ｂ１と金コロイドとの複合体Ｙを得た。
(13) Preparation of complex of antibody B1 and colloidal gold Instead of antibody A1, mouse-derived anti-Flu-B N protein monoclonal antibody 1 (Influenza B virus Monoclonal Antibody, Cat: 1131, manufactured by ViroStat) was used as antibody B1. Complex Y of antibody B1 and colloidal gold was obtained in the same manner as in (12) Preparation of complex of antibody A1 and colloidal gold, except that it was used.
（１４）抗体Ｃ１と金コロイドとの複合体の調製
抗体Ａ１の代わりに抗体Ｃ１としてマウス由来抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質モノクローナル抗体１（Ａｎｔｉ－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２－ＮＰ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ、ＳＣＶ－１０８、東洋紡社製）を使用する以外は（１２）抗体Ａ１と金コロイドとの複合体の調製と同様の方法で、抗体Ｃ１と金コロイドとの複合体Ｚを得た。
(14) Preparation of complex of antibody C1 and colloidal gold Mouse-derived anti-SARS-CoV-2 N protein monoclonal antibody 1 (Anti-SARS-CoV-2-NP Monoclonal antibody, SCV -108, manufactured by Toyobo), a complex Z of antibody C1 and colloidal gold was obtained in the same manner as in (12) Preparation of complex of antibody A1 and colloidal gold.
（１５）Ｆｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用メンブレンカードの作製
（４）Ｆｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用メンブレンカードの作製と同様の方法で、Ｆｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用メンブレンカード１を得た。
(15) Preparation of membrane card for detecting N protein of Flu-A, Flu-B, and SARS-CoV-2 (4) Preparation of membrane card for detecting N protein of Flu-A, Flu-B, and SARS-CoV-2
（１６）Ｆｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用コンジュゲーションパッドの作製
抗体Ａ１とセルロース系着色微粒子Ａとの複合体１の代わりに抗体Ａ１と金コロイドとの複合体Ｘを、抗体Ｂ１とセルロース系着色微粒子Ｂとの複合体１の代わりに抗体Ｂ１と金コロイドとの複合体Ｙを、抗体Ｃ１とセルロース系着色微粒子Ｃとの複合体１の代わりに抗体Ｃ１と金コロイドとの複合体Ｚを、それぞれ使用する以外は（５）Ｆｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用コンジュゲーションパッドの作製と同様の方法で、Ｆｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用コンジュゲーションパッドＸを得た。
(16) Flu-A, Flu-B, preparation of conjugation pad for N protein detection of SARS-CoV-2 Conjugation of antibody A1 and gold colloid instead of complex 1 of antibody A1 and cellulose-based colored fine particle A body X, complex Y of antibody B1 and gold colloid instead of complex 1 of antibody B1 and cellulose-based colored fine particle B, and antibody C1 instead of complex 1 of antibody C1 and cellulose-based colored fine particle C. and gold colloid complex Z, respectively, in the same manner as in (5) Flu-A, Flu-B, SARS-CoV-2 N protein detection conjugation pad preparation, Flu-A , Flu-B, SARS-CoV-2 N protein detection conjugation pad X was obtained.
（１７）Ｆｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用イムノクロマト試験片およびデバイスの作製
Ｆｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用コンジュゲーションパッド１の代わりにＦｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用コンジュゲーションパッドＸを使用する以外は（６）Ｆｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用イムノクロマト試験片およびデバイスの作製と同様の方法で、Ｆｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用イムノクロマトデバイスＸを作製し、（９）非特異吸着、（１０）感度、（１１）視認性を評価した。得られた結果を表２に示す。
(17) Flu-A, Flu-B, preparation of immunochromatographic test strip and device for detecting N protein of Flu-A, Flu-B, SARS-CoV-2
（比較例２）
テストラインＣをメンブレン部の上流側から５ｍｍの位置から１３ｍｍの位置へ、テストラインＡをメンブレン部の上流側から１３ｍｍの位置から５ｍｍの位置へ変更する以外は比較例１と同様の方法にてＦｌｕ－Ａ、Ｆｌｕ－Ｂ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質検出用イムノクロマトデバイスＹを作製し、（９）非特異吸着、（１０）感度、（１１）視認性を評価した。得られた結果を表２に示す。
(Comparative example 2)
In the same manner as in Comparative Example 1, except that the test line C was changed from 5 mm to 13 mm from the upstream side of the membrane, and the test line A was changed from 13 mm to 5 mm from the upstream side of the membrane. Flu-A, Flu-B, and SARS-CoV-2 N protein detection immunochromatographic device Y was prepared, and (9) nonspecific adsorption, (10) sensitivity, and (11) visibility were evaluated. Table 2 shows the results obtained.
実施例１～２１のデバイスはテストラインＡ～Ｃ、およびコントロールラインが濃く発色しており、視認性も良好であった。一方、比較例１、２のデバイスはテストラインＡ～Ｃ、およびコントロールラインが薄く、また４本のラインが全て同じ色であるため、項目の識別は困難であった。 In the devices of Examples 1 to 21, the test lines A to C and the control line were darkly colored and had good visibility. On the other hand, in the devices of Comparative Examples 1 and 2, the test lines A to C and the control line were thin, and the four lines were all the same color, making it difficult to identify the items.
本発明により、Ｆｌｕ－ＡのＮタンパク質、Ｆｌｕ－ＢのＮタンパク質、およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質を同時かつ高感度に検出し得るイムノクロマト試験片およびイムノクロマトキットを提供することができる。 INDUSTRIAL APPLICABILITY According to the present invention, an immunochromatographic test strip and an immunochromatographic kit that can detect Flu-A N protein, Flu-B N protein, and SARS-CoV-2 N protein simultaneously and with high sensitivity can be provided.
１：サンプルパッド
２：コンジュゲーションパッド
３：メンブレン
４：吸収パッド
５：バッキングシート
６：テストラインＡまたはＣ
７：テストラインＢ
８：テストラインＣまたはＡ
９：コントロールライン
１０：粘着シート
1: sample pad 2: conjugation pad 3: membrane 4: absorbent pad 5: backing sheet 6: test line A or C
7: Test line B
8: Test line C or A
9: Control line 10: Adhesive sheet
Claims (8)
（２）測定試料中のインフルエンザウイルスＡ（Ｆｌｕ－Ａ）のヌクレオカプシドタンパク質（Ｎタンパク質）と特異的に結合する抗体Ａ１とセルロース系着色微粒子Ａとの複合体、インフルエンザウイルスＢ（Ｆｌｕ－Ｂ）のＮタンパク質と特異的に結合する抗体Ｂ１とセルロース系着色微粒子Ｂとの複合体、および重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）のＮタンパク質と特異的に結合する抗体Ｃ１とセルロース系着色微粒子Ｃとの複合体を担持したコンジュゲーションパッドと、
（３）Ｆｌｕ－ＡのＮタンパク質と特異的に結合する抗体Ａ２を線状に固定したテストラインＡ、Ｆｌｕ－ＢのＮタンパク質と特異的に結合する抗体Ｂ２を線状に固定したテストラインＢ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質と特異的に結合する抗体Ｃ２を線状に固定したテストラインＣ、および前記抗体Ａ２、Ｂ２、またはＣ２のいずれか１以上と特異的に結合する抗体Ｄを線状に固定したコントロールラインを具備したメンブレンと、
（４）吸収パッドと、
から構成されることを特徴とするイムノクロマト試験片。 (1) a sample pad;
(2) A complex of antibody A1 that specifically binds to the nucleocapsid protein (N protein) of influenza virus A (Flu-A) in the measurement sample and cellulose-based colored fine particles A, and influenza virus B (Flu-B) Complexes of antibody B1 that specifically binds to N protein and cellulose-based colored fine particles B, and antibody C1 that specifically binds to N protein of severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) and cellulose a conjugation pad supporting a complex with the colored microparticles C;
(3) Test line A in which antibody A2 that specifically binds to Flu-A N protein is linearly immobilized, and test line B in which antibody B2 that specifically binds to Flu-B N protein is linearly immobilized , test line C linearly immobilized antibody C2 that specifically binds to the N protein of SARS-CoV-2, and antibody D that specifically binds to any one or more of the antibodies A2, B2, or C2 a membrane with linearly fixed control lines;
(4) an absorbent pad;
An immunochromatographic test strip characterized by comprising:
Priority Applications (1)
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| WO2024005055A1 (en) * | 2022-06-30 | 2024-01-04 | 積水メディカル株式会社 | Test method, test reagent, and test kit |
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