JP2022551672A - 乳癌治療法 - Google Patents

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Abstract

本発明は乳癌治療法に関連する。前記治療法は有効量のダパンストリルまたは医薬として許容される量の溶媒和物の、乳癌治療を必要とする対象への投与を含む。前記治療法は有効量のチェックポイント阻害剤の対象へのさらなる投与を随意に含む。【選択図】図１Ｂ

Description

本発明は有効量のダパンストリルを投与することにより乳癌を治療する方法に関する。
腫瘍形成は、点突然変異、遺伝子欠失、細胞の形質転換に繋がる染色体再構築、増殖の自己充足、抗増殖シグナルに対する不感受性、アポトーシスの回避および無制限の複製可能性を含むゲノム変化により生じ、最終的に組織浸潤および転移に繋がる。しかしながら、腫瘍細胞の拡大は、がん細胞と非がん細胞の両方を含む複雑な事象のネットワークに関連している。慢性炎症は、そのような促進する状態の古典的な例である(1,2)。
前記炎症誘発性サイトカインIL-1βは、多くの慢性炎症性疾患の強力な伝達物質である(3)。 慢性炎症への癌の関連性と一致して、IL-1βはいくつかの腫瘍で過剰発現され、血管新生、免疫抑制、腫瘍関連マクロファージ(TAMs)の動員および転移を含む腫瘍促進機構の誘導因子として機能することが示されている(4-6)。
乳癌の種類には、非浸潤性乳管癌(DCIS)、浸潤性乳管癌(IDC)、トリプルネガティブ乳癌(TNBC)、炎症性乳癌(IBC)、転移性乳癌、および妊娠中の乳癌などが含まれる。 トリプルネガティブ乳癌腫瘍は、エストロゲン受容体(ER)およびプロゲステロン受容体(PR)の欠失とヒト上皮成長因子受容体2(HER2)タンパク質レベルの上昇によって特徴付けられる(7)。
NLRP3(NOD様受容体ファミリー、ピリンドメイン含有3)は、NLRP3またはクリオピリンとしても知られており、インターロイキン-1β(IL-1β)およびIL-18プロセシングに関与する高分子構造のセンサーであるインフラマソームの1つである。 NLRP3は、細胞内感染(細菌性およびウイルス性タンパク質)または組織損傷(虚血)中の細胞内危険性を感知する。NLRP3の活性化によりASC(カルボキシ末端カスパーゼ導入ドメイン含有アポトーシス関連スペック様タンパク質)およびカスパーゼ１が導入され、インフラマソーム形成に繋がり最終的に細胞死をもたらす。
ダパンストリルはβ-スルホニルニトリルの合成小分子で、NLRP3インフラマソームを選択的に阻害し、健常者に経口投与すると安全であることが実証されている(8)。
乳癌を治療するための方法が必要とされている。前記乳癌治療法は効果的でなければならず、重大な副作用は全くみられるべきでない。
図１Aは、実験計画の概要を示す。 図１Bは、ダパンストリル(OLT1177（登録商標）)で処理されたマウスにおける腫瘍体積をビヒクル処理されたものと比較したチャートを示す。測定は腫瘍切除後に行った。**P < 0.01 (N＝５)。 図１Cは、ダパンストリルで処理されたマウスにおける腫瘍体積を、標準食を与えたマウスの腫瘍と比較した成長曲線を示す。測定は、表示された日に生きたマウスから行った。図１C (N＝5)。 図１Dは、ダパンストリル豊富(OLT1177（登録商標）)飼料を与えられたマウスにおける生存率を示す。*P < 0.05.
図２Aは、実験計画の概要を示す。 図２Bは、ダパンストリル(OLT1177（登録商標）)およびダパンストリルと抗IL1α抗体で処理されたマウスにおいて腫瘍体積が減少することを示す腫瘍体積分析のチャートを示す。 図２Cは、ダパンストリル処理されたマウスと、ビヒクルコントロールで処理したマウスを比較した腫瘍の成長曲線を示す。測定は、表示された日に生きたマウスから行った。図２C (N＝5)。 図２Dおよび図２Eは、ビヒクル処理したマウスと比較したダパンストリル処理したマウス由来の原発4T1腫瘍内のTSLP(図２D)およびその関連受容体(TSLPR;図２E)のmRNA発現レベルを示す。*P＜0.05 (N＝8、2回の独立した実験)。 図２Dと同じ。 図２Fおよび図２Gは、ヒトTNBC細胞株MDA-468を用いたインビトロでのTSLP(図２F)およびTSLPR(図２G)の相対mRNA発現を示す。細胞は表示されているようにIL-1αで刺激し、ダパンストリルで処理した。*P＜0.05 (N＝8、2回の独立した実験)。 図２Fと同じ。
図３Aは、実験計画の概要を示す。 図３Bは、ダパンストリル(OLT1177（登録商標）)、抗PD-1抗体、抗PD-1抗体およびダパンストリルの両方、またはビヒクル処理を施した4T1 TNBCマウスにおける腫瘍体積を示すチャートである。 測定は腫瘍切除後に行った。（ビヒクル対抗PD-1抗体、P＝0.0069。ビヒクル対ダパンストリル、P=0.0041。ビヒクル対抗PD-1抗体およびダパンストリル、P=0.0014。）（N=5）。 図３Cは、抗PD-1抗体、ダパンストリル、抗PD-1抗体およびダパンストリルの両方、またはビヒクル処理を施したマウスの腫瘍体積の15日間の成長曲線を示す。測定は、表示された日に生きたマウスから行った。図３C (N＝5)。 図３Dは、ビヒクル処理したマウスと比較したダパンストリル処理したマウス由来の4T1腫瘍内の相対PDL-1 mRNA発現レベルを示す。*P＜0.05 (N＝8、2回の独立した実験)。 図３Eは、マウスのトリプルネガティブ乳癌細胞株（E0771）を用いたインビトロでの相対PDL-1 mRNA発現を示すチャートである。前記E0771細胞はIL-1αで刺激し、ビヒクルまたは示されている濃度のダパンストリルで処理した。*P＜0.05 (N＝３)。
図４Aは、実験計画の概要を示す。 図４Bは、ダパンストリル(OLT1177（登録商標）)、抗PD-1抗体、抗PD-1抗体およびダパンストリルの両方、またはビヒクルで処置されたマウスの脾細胞におけるIL-22レベルを定量化したチャートを示す。（ビヒクル対ダパンストリル、P=0.037。ビヒクル対抗PD-1抗体およびダパンストリル、P=0.048。） 図４Cは、ダパンストリル、抗PD-1抗体、抗PD-1抗体およびダパンストリルの両方、またはビヒクルで処置されたマウスの脾細胞におけるINFγレベルを定量化したチャートを示す。（ビヒクル対ダパンストリル、P=0.044。ビヒクル対抗PD-1抗体およびダパンストリル、P=0.022。）（N=5）。
NLRP3インフラマソームの活性化は、組織損傷に対する炎症反応を増幅し、さらなる損傷を媒介する。 ダパンストリルは選択的NLRP3インフラマソーム阻害剤である。ダパンストリルは、NLRP3インフラマソームの活性化を阻害することにより炎症を軽減する。ダパンストリルは、インビトロでマウスおよびヒト細胞における成熟IL-1βおよびIL-18の産生を阻害する。 この機構を介して、ダパンストリルはIL-1βの産生および/または放出を防止し、動物およびヒト対象におけるNLRP3インフラマソームの形成を阻害する。
本発明は、対象に有効量のダパンストリルを投与することによって乳癌を治療する方法に向けられる。***腫瘍進行の主なドライバーであるIL-1βを阻害することにより、ダパンストリルは腫瘍体積を減少させ、および/または腫瘍のさらなる増殖を防止する。
化合物
本発明は精製されたダパンストリル（３－メタンスルホニル－プロピオニトリル）、またはその医薬として許容される塩またはそれらの溶媒和物を使用する。
Figure 2022551672000002
本明細書で使用される「医薬として許容される塩」は、親化合物の所望の生物学的活性を保持し、望ましくない毒物学的効果を与えない塩である。
本明細書で使用される「医薬として許容される溶媒和物」は、親化合物の所望の生物学的活性を保持し、望ましくない毒物学的効果を付与しない溶媒和物である。本明細書で使用される「溶媒和物」は、化合物がいくつかの固定された割合で許容可能な共溶媒と組み合わされた付加錯体である。共溶媒は以下を含むが、それらだけに限定されない。水、酢酸、エタノール、およびその他の適切な有機溶媒。
医薬組成物
医薬組成物における活性化合物ダパンストリル、またはその医薬として許容される塩もしくは溶媒和物は、一般に、注射用製剤では約0.1～5%、錠剤製剤では約1～90%、カプセル製剤では1～100%、局所製剤では約0.01～20%、0.05～20%、0.1～20%、0.2～15%、0.5～10%、または約1～5%(w/w)、パッチ製剤では約0.1～5%の量である。
本出願で使用される「約」は、記載された値の±10％を指す。
不活性成分である医薬として許容される担体は、従来の基準を用いて当業者によって選択され得る。医薬として許容される担体は以下を含むが、それらだけに限定されない。非水性ベースの溶液、懸濁液、エマルジョン、マイクロエマルジョン、ミセル溶液、ゲル、および軟膏が挙げられる。医薬として許容される担体はまた、それらに限定されないが、以下に含まれる成分を含有することがある。生理食塩水および電解質水溶液；イオン性および非イオン性の浸透剤、例えば塩化ナトリウム、塩化カリウム、グリセロール、およびデキストロース；pH調整剤および緩衝剤、例えば水酸化物の塩、リン酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、ホウ酸塩およびトロラミン；抗酸化剤；例えば亜硫酸水素塩、亜硫酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ亜硫酸塩、アスコルビン酸、アセチルシステイン、システイン、グルタチオン、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、トコフェロール、およびパルミチン酸アスコルビルの塩、酸および/または塩基；界面活性剤、例えば、限定されないがホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミンおよびホスファチジルイノシチオールを含むレシチン、リン脂質；ポロキサマーおよびプロキサミン、ポリソルベート、例えばポリソルベート80、ポリソルベート60、およびポリソルベート20、ポリエーテル、例えば、ポリエチレングリコールおよびポリプロピレングリコール；ポリビニル、例えばポリビニルアルコールおよびポビドン；セルロース誘導体、例えば、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロースおよびヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびそれらの塩；石油誘導体、例えば、鉱油および白色ワセリン；脂肪、例えば、ラノリン、ピーナッツ油、パーム油、大豆油；モノ－、ジ－、およびトリグリセリド；アクリル酸重合体、例えば、カルボキシポリメチレンゲルおよび疎水変性架橋アクリレート共重合体；多糖類、例えば、デキストランおよびグリコサミノグリカン、例えばヒアルロン酸ナトリウム。
このような医薬として許容される担体は、よく知られているような防腐剤を用いて細菌汚染に対して保存されてもよく、これらの防腐剤には、限定されないが、塩化ベンザルコニウム、エチレンジアミン四酢酸およびその塩、塩化ベンゼトニウム、クロルヘキシジン、クロロブタノール、メチルパラベン、チメロサール、およびフェニルエチルアルコールが含まれ、または単回または複数回の使用のための非保存製剤として製剤化され得る。
例えば、ダパンストリルの錠剤製剤またはカプセル製剤は、生理活性を有さず、活性化合物との反応を有さない他の賦形剤を含むことがある。錠剤の賦形剤は、充填剤、結合剤、潤滑剤および流動促進剤、崩壊剤、湿潤剤、ならびに放出速度調節剤を含むことがある。結合剤は、製剤の粒子の接着を促進し、錠剤製剤にとって重要である。結合剤の例には、カルボキシメチルセルロース、セルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、カラヤガム、デンプン、およびトラガントガム、ポリ(アクリル酸)、およびポリビニルピロリドンが含まれるが、これらに限定されない。
例えば、ダパンストリルのパッチ製剤は、いくつかの不活性成分、例えば、1,3-ブチレングリコール、ジヒドロキシアルミニウムアミノアセテート、エデト酸二ナトリウム、D-ソルビトール、ゼラチン、カオリン、メチルパラベン、ポリソルベート80、ポビドン、プロピレングリコール、プロピルパラベン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸ナトリウム、酒石酸、二酸化チタン、および精製水を含み得る。パッチ製剤はまた、乳酸エステル(例えば、乳酸ラウリル)またはジエチレングリコールモノエチルエーテルなどの皮膚透過性増強剤を含有し得る。
ダパンストリルを含む局所製剤は、ゲル、クリーム、ローション、液体、エマルジョン、軟膏、スプレー、溶液、および懸濁液の形態であり得る。局所製剤中の不活性成分には、例えば、乳酸ラウリル(エモリエント/浸透促進剤)、ジエチレングリコールモノエチルエーテル(エモリエント/浸透促進剤)、DMSO(溶解促進剤)、シリコーンエラストマー(レオロジー/テクスチャー調整剤)、カプリル酸/カプリン酸トリグリセリド、(エモリエント)、オクチサレート、(エモリエント/UVフィルター)、シリコーン液(エモリエント/希釈剤)、スクアレン(エモリエント)、ヒマワリ油(エモリエント)、および二酸化ケイ素(増粘剤)が含まれるが、これらに限定されない。一実施形態においては、ジエチレングリコールモノエチルエーテルが局所ゲル製剤に含まれる。
使用方法
ダパンストリルはNLRP3インフラソームの凝集を阻害することで、炎症誘発性サイトカインIL-1βおよびIL-22の産生および/または放出を妨げ、最終的に乳癌腫瘍の成長が治癒する。
本発明は乳癌治療法に関連する。該治療法は、有効量のダパンストリルを乳癌治療の必要とする対象に投与する工程を含む。本明細書で使用される「有効量」は、病的状態を改善すること、および/または疾患の症状を軽減、改善、および/または排除することによって疾患を治療するのに有効な量である。例えば、効果的な量は乳癌の成長を減少させる、および/または乳腺腫瘍の大きさを減少させる量である。
本方法によって治療されるのに適した乳癌には、トリプルネガティブ乳癌(TNBC)、非浸潤性乳管癌(DCIS)、浸潤性乳管癌(IDC)、炎症性乳癌(IBC)、転移性乳癌、および妊娠中の乳癌が含まれる。
チェックポイント阻害剤療法は、癌免疫療法の一形態である。 この療法は、刺激されると免疫学的刺激に対する免疫応答を減衰させることができる免疫系の主要な調節因子である免疫チェックポイントを標的とする。いくつかの癌は、免疫チェックポイント標的を刺激することによって攻撃から身を守ることができる。
免疫療法は、乳がん患者の標準治療を有意に改善した。しかしながら、非応答者および再発患者数は依然として高い。それゆえ、チェックポイント阻害剤の効果を高める併用療法は、重要な臨床的利点を示す。
一実施形態において、本発明は、乳癌を治療するためのダパンストリルとチェックポイント阻害剤とを組み合わせることによる併用療法を対象にする。前記治療法は、有効量のダパンストリルおよび有効量のチェックポイント阻害剤を、前記治療を必要とする対象へ投与することを含む。ダパンストリルおよびチェックポイント阻害剤は、同時にまたは連続して投与することができる。ダパンストリルはチェックポイント阻害剤の効果を改善し、ダパンストリルは安全な薬剤プロファイルを有するため、ダパンストリルをチェックポイント阻害剤と共投与する利点がある。共投与はまた、チェックポイント阻害剤の必要な投与量を減少させることもあり、これは免疫療法関連の有害事象を減少させる。
乳癌を治療するためダパンストリルと共に使用するのに適したチェックポイント阻害剤には、細胞傷害性Tリンパ球関連タンパク質4(CTLA-4)、プログラム細胞死タンパク質1(PD-1)、およびプログラム死リガンド1(PD-L1)が含まれる。
PD-1はT細胞の表面に存在し、PD-L1の受容体である。PD-1は、炎症性T細胞活性を抑制することにより免疫応答を下方制御する役割を果たす。この機構は身体が自己免疫疾患を防ぐのに有用であるが、癌細胞が殺されるのを防ぐこともまたし得る(9)。
好ましい実施形態においては、チェックポイント阻害剤は、抗PD-1抗体である。この方法は、有効量のダパンストリルおよび有効量の抗PD-1抗体を、前記治療を必要とする対象に投与することを含む。ダパンストリルおよび抗PD-1抗体は、同時にまたは連続して投与することができる。ダパンストリルは抗PD-1の効果を改善し、ダパンストリルは安全な薬剤プロファイルを有するため、ダパンストリルを抗PD-1抗体と共投与する利点がある。共投与はまた、抗PD-1抗体の必要な投与量を減少させることもあり、これは免疫療法関連の有害事象を減少させる。
本発明者らは、ダパンストリル処理がビヒクルと比較してマウスにおける4T1 TNBCの腫瘍成長を軽減させることを実証した。
さらに、本発明者らは、ダパンストリルが腫瘍促進因子IL-22を減少させ、処理を施したマウスにおいて脾細胞中のINFγを増加させることを実証した。
本発明の医薬組成物は、全身投与又は局所投与により適用してもよい。全身投与には、限定するものではないが、経口、非経口(静脈内、筋肉内、皮下または直腸内など)、および吸入投与が含まれる。 全身投与では、活性化合物は最初に血漿に到達し、次いで標的組織に分布する。経口投与は、本発明の好ましい投与経路である。局所投与には外用の投与が含まれる。
前記組成物の投与は、対象の乳癌の程度および各患者の個々の応答に基づいて変化し得る。 全身投与の場合、送達される活性化合物の血漿中濃度は変化し得る；一般に１×10-10～１×10-4モル/リットル、好ましくは１×10-8～１×10-5モル/リットルである。
一実施形態において、前記医薬組成物は対象に経口で投与される。経口投与のための投与量は、対象の年齢および状態に応じて、一般に少なくとも1mg / kg /日および100mg / kg /日未満、好ましくは5～100mg / kg /日である。例えば、経口投与の投与量は、ヒト対象について1～10、1～50、1～100、5～50、5～100、10～50、または10～100mg / kg/日である。例えば、経口投与の投与量は、ヒト対象について100～10,000mg/日、そして好ましくは100～2500、500～2500、500～4000、1000～5000、2000～5000、2000～6000、または2000～8000mg /日である。薬剤は、1日に1～4回経口で服用することができる。患者は、毎日14日間から１か月、２か月又は、３か月または生涯にわたり、治療される。
一実施形態において、前記医薬組成物は対象の静脈内に投与される。静脈内ボーラス投与または静脈内点滴による投与量は、一般的に0.03～５、または0.03～１mg / kg /日である。
一実施形態において、前記医薬組成物は対象の皮下に投与される。皮下投与の投与量は、一般的に0.3～20、0.3～３、または0.1～１mg / kg /日である。
一実施形態において、前記組成物は局所的に塗布される。組成物は、医学的問題および疾患病状に応じて、1日1回または2回、または1日あたり3～4回局所的に塗布される。一般に、局所用組成物は、約0.01～20%、または0.05～20%、または0.1～20%、または0.2～15%、0.5～10、または1～5%(w/w)の活性化合物を含む。典型的には、0.2～10mLの局所用組成物が、用量あたり個人に適用される。
当業者は、多種多様な送達機構もまた本発明に適していることを認識する。
本発明は、哺乳動物対象、例えばヒト、ウマ、イヌおよびネコを治療するのに有用である。本発明は、ヒトの治療に特に有用である。
以下の実施例は本発明をさらに説明する。これらの実施例は単に本発明を説明することを意図しており、限定するものと解釈されるものではない。
以下の材料およびプロトコールを、以下に記載する実施例において使用した。
細胞株。乳癌細胞株4T1、E0771、およびMDA-468をATCC(Manassas, VA)から入手した。 細胞を、10%FBS、100ユニット/mLペニシリン、0.1mg/mlストレプトマイシンを添加したDMEM培地中で培養した。 細胞は、37°Cの加湿された5%CO2雰囲気中に維持された。
インビトロ。腫瘍細胞株を、1ウェルあたり200,000の濃度で一晩吸着させた。翌日、ヒト組換えIL-1αまたはIL-1β(R&D Systems, Minneapolis, MN)を、ダパンストリル(OLT1177（特定商標）)の有無にかかわらず添加し、24時間インキュベートした。次いで、細胞をTRIzol試薬(Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA)を用いて溶解した。
遺伝子発現。その後、RNAをトリゾール(Thermo Fisher Scientific)を用いて単離し、SuperScript III First-Strand (Thermo Fisher Scientific)を用いてcDNAを合成した。定量PCR(qPCR)は、バイオラッドCFX96リアルタイムシステムのPower SYBR Green PCR master mix(Thermo Fisher Scientific)を用いてcDNAに対して行った。以下のプライマーを用いて示されたように、Tslp、Tslpr、およびPdcd-11L1 mRNAの遺伝子発現を評価した。
Tslpフォワード、5'-TACTCTCAATCCTATCCCTGGCTG-3'(配列番号1);
Tslpリバース、5'-TGTGAGGTTTGATTCAGGCAGATG-3'(配列番号2);
Tslprフォワード、5'-TGACGTCACGGGGTGATGTC-3'(配列番号3);
Tslprリバース、5'-GAGGATGCACCCGGAAGTGA-3'(配列番号4);
Pdcd1L1フォワード、5'-GCTCCAAAGGACTTGTACGTG3'(配列番号5);
Pdcd1L1リバース、5'-TGATCTGAAGGGCAGCATTTC3'(配列番号6)。
腫瘍モデル。 動物実験プロトコールは、コロラド大学健康科学センター動物ケアおよび使用委員会によって承認された。6～8週齢の雌BALB/cマウス(The Jackson Laboratory)に、4T1注射当日に標準食またはダパンストリル(OLT1177（特定商標）)飼料(4)を与え始めた。4T1細胞(２×105)を乳腺脂肪パッドに同所的に注射した。ダパンストリル処理されたマウスに、7.5 g/kg ダパンストリルを含むフードペレットを自由に摂取させ、4T1注射当日から開始して15日間継続した。マウスは通常、1日あたり約4gの食物を消費し、その結果、コントロール群では0mg / kg /日、トリートメント群では1,000mg / kg /日の１日でのおおよその服用量が得られる。マウスの固形飼料中のこの食物ペレット濃度(食物中に7.5g/kgダパンストリルを含む)は、1000mg/日(40μg/mLの血中濃度)の用量でダパンストリルを経口投与されたヒトの血中濃度とほぼ同じ血中濃度をもたらした(14)。 コントロール(「ビヒクル」)マウスには、ダパンストリルを含まないコントロール食物ペレットを与えた。マウスは4T1注射後15日後に屠殺した。
抗PD-1併用療法。4T1細胞を前述の通り注射した。4T1細胞の注入後、マウスは前述の通りダパンストリル(OLT1177（特定商標）)飼料を与え始めるか、または標準食を継続し、7日目にPD-1に対する中和抗体(200μg/mouse；BioXCell, West Lebanon, NH)を腹膜に注射した。 B16F10注入から15日後にマウスを屠殺した。
抗IL-1α併用療法。4T1細胞を前述の通り注射した。4T1細胞の注入後、マウスは前述の通りダパンストリル(OLT1177（特定商標）)飼料を与え始めるか、または標準食を継続し、３日ごとに抗IL-1αに対する中和抗体(200μg/mouse；XBioTech, Austin, TX)を腹膜に注射した。 B16F10注入から15日後にマウスを屠殺した。
脾細胞サイトカイン分泌。4T1細胞を前述の通り注射した。担癌マウス由来の脾臓を、機械的な解離を通して細胞培養のために処理した。RPMI培地に懸濁した細胞に10%FBS、100ユニット/mLペニシリン、0.1mg/mlストレプトマイシンを添加し、5.0e^5で播種し、10μg/mLのLPSで刺激した。72時間後、上清を除去し、サイトカインをELISA法(R&D Systems, Minneapolis, MN)を利用して測定した。
実施例1. ダパンストリルは4N1 TNBCマウスの乳腺腫瘍体積を減少させる。本実施例において、発明者らは、経口NLRP3阻害剤であるダパンストリルが、マウス4T1 TNBCモデルにおける腫瘍成長の軽減に有効であったかどうかを評価した。
4T1 TNBCマウスを作成し、標準食またはダパンストリル飼料を15日間与えた。腫瘍を表示された日に測定し、成長曲線を生成した(図１C)。最終的な腫瘍体積は、腫瘍の切除後に測定した(図１B)。ダパンストリル飼料を与えた担癌マウスは、有意に減少した腫瘍体積を示した。(図1B、**P＜0.01)。生存試験において、ダパンストリル処理した4T1 TNBCマウスは標準食を与えたマウスと比較して有意に高い生存率を示し(図1D、N＝10、*P＜0.05)、ダパンストリル飼料を与えたマウスの半分が30日を超えて生存した。
これらの実験では、ダパンストリルで処理したマウスはビヒクルコントロールと比較して有意な腫瘍体積の減少を示した。まとめると、図１A～１Dはダパンストリルが腫瘍体積を減少させ、結果としてトリプルネガティブ乳癌マウスモデル(4T1 TNBCマウス)において有意に高い生存率になることを示した。
実施例２. ダパンストリルは、単独で、および抗IL-1αと共投与された場合に乳腺腫瘍体積を減少させる。これまでの研究は、IL1Rアンタゴニストアナキンラ治療を受けているHER2-転移性乳癌患者が転移性乳癌患者に見られる炎症シグネチャーの成分を下方制御したことを示している(10)。4T1腫瘍進行の駆動におけるIL-1αおよびIL-1βの役割をさらに評価するために、発明者らはマウスを抗IL-1α(200μg/マウス)、ダパンストリル飼料、および両方の組み合わせで処置した。4T1 TNBCマウスを作成し、標準食またはダパンストリル飼料を15日間与えた。マウスには、表示されたように３日ごとに抗IL-1αを注射した。続いて、腫瘍体積を解析した。図2Bおよび図2Cは、ビヒクルと比較した場合、ダパンストリル飼料単独およびIL-1αとの併用で処理された担癌マウスについて有意に減少した腫瘍体積(*P＜0.05)を示す。
これらの実験において、ダパンストリルで処理されたマウスは腫瘍体積の減少に有効であったが、抗IL-1α単独療法は腫瘍体積を有意に減少させなかった。これらのデータは共に4T1 TNBCにおいてIL-1βがIL-1αより強い腫瘍促進効果を持ち得ることを示唆している。
トリプルネガティブ乳がんにおける腫瘍-骨髄系細胞間相互作用に関するこれまでの研究は、腫瘍由来IL-1αは、骨髄系細胞への浸潤を促進してTSLPを分泌し、原発および遠隔転移部位の両方で腫瘍の進行に重要であることを示している(15)。4T1腫瘍進行におけるNLRP3阻害の効果をさらに評価するために、本発明者らは、原発性4T1腫瘍におけるTSLPおよびそれに関連する受容体TSLPRの遺伝子発現を、相対的mRNA発現レベルによって測定し、定量化した。図2Dおよび図2Eは、ダパンストリル飼料で処理された担癌マウスにおいて、ビヒクルと比較して有意に低いTSLPおよびTSLPR発現レベル(*P＜0.05)を示す。この解析は、図2Bおよび図2Cと同じマウスについて行った。インビトロでのこれらの知見を確認するため、発明者らはヒトTNBC細胞株MDA-468を用いた。MDA-468細胞をIL-1α(20ng/mL)で刺激し、ダパンストリル(10μM)またはダパンストリルなし(コントロール)で24時間インキュベートした。図２Fおよび図２Gはコントロールと比較して有意に低いTSLPおよびTSLPRの発現レベル(*P＜0.05)を示す。これらの知見は、IL-1αとIL-1βの両方がTSLP/TSLPRを促進し、その経路が腫瘍内因性および腫瘍骨髄性の両方であることを示す。
実施例３. ダパンストリルは、単独で、および抗PD-1と共投与された場合に乳腺腫瘍体積を減少させる。本実施例において、発明者らはダパンストリルおよび抗PD-1の持つ腫瘍減少効果を調査した。
4T1 TNBCマウスを作成し、標準食またはダパンストリル飼料を15日間与えた。併用療法を受けるマウスには、表示されたように７日目に抗PD-1を注射した(図３A)。
結果は図３Bと３Cに示されている。腫瘍体積の測定は、図３Cに示された日にインビボでマウスの腫瘍から行った。15日目に屠殺後、腫瘍を除去し、図３Bに示されているように腫瘍体積を測定した。ダパンストリル単独療法で処理した担癌マウスはビヒクルと比較して有意な腫瘍縮小を示した(**P＝0.0041)。抗PD-1のみを投与されたマウスもまた、有意な腫瘍縮小を示した(**P＝0.0069)。ダパンストリルと抗PD-を併用して投与されたマウスは、さらに有意な腫瘍縮小を示した(**P＝0.0014)。
PD-L1遺伝子発現レベルに対するダパンストリルの効果を調べるために、図２Bおよび図２Cにおける4T1 TNBCマウス由来の腫瘍についてさらなるインビボ分析を行った。
結果は図３Dに示されている。ダパンストリル飼料を与えたマウスにおける４T1腫瘍は標準食を与えられたマウスより有意に少ないPD-L1遺伝子発現を発現し、相対的mRNA発現によって定量化した。図３D(*P＜0.05；N＝8、2回の独立した実験)。この知見は、抗PD-1療法における効果の増強が起こりうる機構を示唆している。
マウストリプルネガティブ乳癌細胞株E0771のインビトロ分析は、細胞死シグナル伝達後のPD-L1発現レベルに対するダパンストリルの効果を調べるために行われた。IL-1α刺激は腫瘍微小環境における細胞死シグナル伝達の模擬実験をするために用いた。細胞を10ng/mL IL-1αで刺激し、示された濃度のダパンストリルで処理、または未処理（ビヒクル）した。
結果を図３Eに示す。IL-1α刺激後にダパンストリルで処理したE0771細胞において、PD-L1発現レベルは著しく低下した(*P＜0.05) (N＝3)。
実施例4. ダパンストリルはIL-22を減少させ、脾細胞中のINFγを増加させる。サイトカインIL-22に関する最近の見識により、サイトカインIL-22が免疫抑制細胞を腫瘍微小環境に導入するという点で乳癌における腫瘍促進の役割が明らかになった(11)。実験は、ダパンストリルおよび抗PD-1の単独療法後、並びに併用後の担癌マウスの脾臓におけるサイトカイン産生を調べるためにここで行われた。
本実施例において、4T1 TNBCマウスを作成し、標準食またはダパンストリル飼料を15日間与えた。マウスには、図４Aで示されたように７日目の併用試験において抗PD-1を注射した。
これらの実験において、ダパンストリル単独療法、および抗PD-1との併用療法による処理は有意にIL-22レベルを減少させた(*P＜0.05)。しかしながら、抗PD-1単独による治療は、ビヒクルと比較してIL-22レベルを減少させなかった。図４B参照。これらのデータは、IL-22のIL-1β誘導が最終的にダパンストリル供給マウスにおいて抑制されたことを示唆する。本結果はまた、ダパンストリルおよび併用群においてIFNγレベルが増加したことを示し、これは殺腫瘍性NK細胞活性の増加を示唆する(*P＜0.05)。 図４C参照。
参考文献
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15.E.L. Kuan, et al. Nat Immunol 19, 366-374 (2018).
前述のことから、本発明の特定の実施形態が例示の目的で本明細書に記載されたが、本発明の範囲を逸脱することなく様々な変更が加えられ得ることが理解されよう。 従って、本発明は、特許請求の範囲によって限定されるものではない。

Claims (7)

  1. 有効量のダパンストリルまたは医薬として許容される量の溶媒和物を、乳癌治療を必要とする対象に投与する工程を含む乳癌を治療する方法。
  2. 前記乳癌が非浸潤性乳管癌（ＤＣＩＳ）、浸潤性乳管癌（ＩＤＣ）、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）、炎症性乳癌(IBC)、転移性乳癌、および妊娠中の乳癌からなる群から選択される請求項1に記載の方法。
  3. ダパンストリルを経口投与により投与する請求項１に記載の方法。
  4. 前記方法が乳腺腫瘍の大きさを減少させる請求項１に記載の方法。
  5. 前記方法が特に乳腺腫瘍のさらなる成長を減少させる請求項１に記載の方法。
  6. 前記方法が対象への効果的な量のチェックポイント阻害剤のさらなる投与を含む請求項１に記載の方法。
  7. 前記チェックポイント阻害剤が抗ＰＤ－１抗体である請求項６に記載の方法。
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