JP2022548310A - Anti-CD47 antibodies, activatable anti-CD47 antibodies, and methods of use thereof - Google Patents

Anti-CD47 antibodies, activatable anti-CD47 antibodies, and methods of use thereof Download PDF

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Abstract

本発明は全体に、ＣＤ４７に結合する活性化可能抗体、およびこれらの活性化可能抗体の製造方法、および種々の治療、予防および診断の状況における使用方法に関する。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７活性化可能抗体は、ヒトおよびカニクイザルＣＤ４７を結合する。【選択図】図１Ａおよび１ＢThe present invention relates generally to activatable antibodies that bind CD47 and methods of making these activatable antibodies and methods of use in various therapeutic, prophylactic and diagnostic contexts. In some embodiments, the CD47 activatable antibody binds human and cynomolgus monkey CD47. [Selection] FIGS. 1A and 1B

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年９月２３日に出願された米国特許仮出願第６２／９０４，５３４号の利益を主張する。この仮出願の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。 CROSS-REFERENCE TO RELATED APPLICATIONS This application claims the benefit of US Provisional Patent Application No. 62/904,534, filed September 23, 2019. The contents of this provisional application are incorporated herein by reference in their entirety.

発明の分野
本発明は全体として、ＣＤ４７に特異的に結合する抗体、ＣＤ４７に特異的に結合する活性化可能抗体、ならびにこれらの抗体および活性化可能抗体の作製、および種々の治療、予防および診断の状況における使用方法に関する。 FIELD OF THE INVENTION The present invention relates generally to antibodies that specifically bind to CD47, activatable antibodies that specifically bind to CD47, and the production of these antibodies and activatable antibodies and various therapeutic, prophylactic and diagnostic methods. of use in the context of

配列表の参照
米国特許法施行規則３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．８２１に基づいて本明細書と同時にコンピューター可読形式（ＣＦＲ）で、ファイル名「ＣＹＴＸ－０６６－ＰＣＴ＿ＳＴ２５」としてＥＦＳ－Ｗｅｂ経由で電子申請された「配列表」は、参照により本明細書に組み込まれる。配列表の電子コピーは、２０２０年９月２３日に作成され、ディスクサイズは１９７キロバイトである。 SEQUENCE LISTING REFERENCE 37 C.F.R. F. R. A "Sequence Listing" filed electronically via EFS-Web under the file name "CYTX-066-PCT_ST25" in computer readable form (CFR) concurrently herewith under § 1.821 is hereby incorporated by reference. incorporated into. An electronic copy of the Sequence Listing was created on September 23, 2020 and has a disk size of 197 kilobytes.

抗体ベース治療薬は、いくつかの疾患については効果的治療薬であることが実証されているが、場合によっては、広い範囲の標的発現による毒性があるために、それらの治療効果が制約されている。加えて、抗体ベース治療薬は、投与後の循環からの急速排出などの他の制約を示した。 Although antibody-based therapeutics have been demonstrated to be effective therapeutics for several diseases, in some cases toxicity due to broad target expression limits their therapeutic efficacy. there is In addition, antibody-based therapeutics have exhibited other limitations such as rapid clearance from circulation after administration.

小分子治療法の分野では、活性化学物質のプロドラッグを提供する戦略が開発されてきた。このようなプロドラッグは、比較的不活性な（またはかなり活性が低い）形態で投与される。一旦投与されると、プロドラッグは、インビボで活性化合物に代謝される。このようなプロドラッグ戦略は、その目的の標的に対する薬物の高められた選択性、および有害作用の低減をもたらし得る。 In the field of small molecule therapeutics, strategies have been developed to provide prodrugs of active chemicals. Such prodrugs are administered in a relatively inactive (or significantly less active) form. Once administered, the prodrug is metabolized in vivo to the active compound. Such prodrug strategies may result in enhanced selectivity of the drug for its intended target and reduced adverse effects.

したがって、抗体ベース治療薬の分野では、小分子プロドラッグの望ましい特徴を摸倣する抗体が引き続き必要とされている。 Therefore, there is a continuing need in the antibody-based therapeutics field for antibodies that mimic the desirable characteristics of small molecule prodrugs.

ＣＤ４７に結合する活性化可能抗体、ならびにこれらの活性化可能抗体の製造方法、および種々の治療、予防および診断の状況における使用方法が、本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、ヒトおよびカニクイザルＣＤ４７を結合する。 Provided herein are activatable antibodies that bind CD47, as well as methods of making these activatable antibodies and methods of use in various therapeutic, prophylactic and diagnostic contexts. In some embodiments, the activatable antibody binds human and cynomolgus monkey CD47.

本発明の一態様では、活性化状態で、（ａ）ヒトＣＤ４７およびカニクイザルＣＤ４７に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ）；（ｂ）ＡＢにカップリングされたマスキング部分（ＭＭ）であって、活性化可能抗体が非切断状態（非活性化状態）にある場合に、ＣＤ４７へのＡＢの結合を阻害し、配列番号１６～２９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、ＭＭ；および（ｃ）ＡＢにカップリングされた切断可能部分（ＣＭ）であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである、ＣＭ、を含む、ＣＤ４７を結合する活性化可能抗体が、本明細書で提供される。 In one aspect of the invention, in the activated state, (a) an antibody or antigen-binding fragment thereof (AB) that specifically binds human CD47 and cynomolgus monkey CD47; (b) a masking moiety (MM) coupled to AB; which inhibits AB binding to CD47 when the activatable antibody is in the uncleaved (non-activated) state and comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 16-29; and (c) a cleavable moiety (CM) coupled to an AB, wherein CM is a polypeptide that functions as a substrate for a protease, an activatable antibody that binds CD47 is provided herein. provided in writing.

本明細書で提供される別の態様では、本明細書で提供される活性化可能抗体のいずれか１つが薬剤にコンジュゲートされ、コンジュゲートされた活性化可能抗体を生成する。いくつかの実施形態では、薬剤は毒素またはそのフラグメントである。いくつかの実施形態では、薬剤は微小管阻害剤である。いくつかの実施形態では、薬剤は核酸損傷剤である。いくつかの実施形態では、薬剤は検出可能な部分である。いくつかの実施形態では、検出可能な部分は診断薬である。関連態様では、活性化状態で、ＣＤ４７を結合する抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ）；およびリンカーを介してＡＢにコンジュゲートされた毒素を含むコンジュゲートされた活性化可能抗体、が本明細書で提供され、コンジュゲートされた活性化可能抗体は、表Ｄの単列から選択されるアミノ酸配列、リンカー、および毒素を含み、所与の組み合わせについて、（ａ）ＡＢは、表Ｄに列挙された単列内の所与の組み合わせに対応する重鎖配列または重鎖可変ドメイン配列のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、（ｂ）ＡＢは、表Ｄに列挙された単列内の所与の組み合わせに対応する軽鎖配列または軽鎖可変ドメイン配列のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、（ｃ）リンカーおよび毒素は、表Ｄに列挙された単列内の所与の組み合わせに対応するリンカーおよび毒素を含む。 In another aspect provided herein, any one of the activatable antibodies provided herein is conjugated to an agent to produce a conjugated activatable antibody. In some embodiments, the agent is a toxin or fragment thereof. In some embodiments, the agent is a microtubule inhibitor. In some embodiments, the agent is a nucleic acid damaging agent. In some embodiments, the agent is a detectable moiety. In some embodiments, the detectable moiety is a diagnostic agent. In a related aspect, an antibody or antigen-binding fragment thereof (AB) that, in an activated state, binds CD47; and a conjugated activatable antibody comprising a toxin conjugated to the AB via a linker are comprising an amino acid sequence, a linker, and a toxin selected from the single columns of Table D, wherein for a given combination, (a) AB is listed in Table D (b) AB is a given combination in a single row listed in Table D. a light chain comprising an amino acid sequence of a light chain sequence or a light chain variable domain sequence corresponding to a combination, and (c) a linker and a toxin are the linker and Contains toxins.

別の態様では、本明細書で提供される活性化可能抗体、コンジュゲートされた活性化可能抗体のいずれか；および担体、を含む医薬組成物が、本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は追加の薬剤を含む。いくつかの実施形態では、追加の薬剤は治療薬である。 In another aspect, provided herein are pharmaceutical compositions comprising any of the activatable antibodies provided herein, a conjugated activatable antibody; and a carrier. In some embodiments, the pharmaceutical composition comprises additional agents. In some embodiments, the additional agent is a therapeutic agent.

別の態様では、本明細書で記載の活性化可能抗体のいずれか１種をコードする単離核酸分子が、本明細書で提供される。関連する態様では、単離核酸分子を含むベクターが、本明細書で提供される。別の関連する態様では、本明細書で提供される核酸分子またはベクターを含む細胞を、活性化可能抗体の発現をもたらす条件下で培養することにより活性化可能抗体を産生する方法が、本明細書で提供される。 In another aspect, provided herein is an isolated nucleic acid molecule encoding any one of the activatable antibodies described herein. In a related aspect, provided herein is a vector comprising the isolated nucleic acid molecule. In another related aspect, methods of producing an activatable antibody by culturing a cell containing a nucleic acid molecule or vector provided herein under conditions conducive to expression of the activatable antibody are described herein. provided in writing.

別の態様では、活性化状態でＣＤ４７を結合する本明細書で提供される活性化可能抗体を製造する方法が、本明細書で提供され、方法は、（ａ）本明細書で記載の活性化可能抗体のいずれか１種の発現をもたらす条件下で活性化可能抗体をコードする核酸構築物を含む細胞を培養すること、および（ｂ）活性化可能抗体を回収することを含む。 In another aspect, provided herein is a method of making an activatable antibody provided herein that binds CD47 in an activated state, the method comprising: (a) an activity described herein; culturing a cell containing a nucleic acid construct encoding an activatable antibody under conditions conducive to expression of any one of the activatable antibodies; and (b) recovering the activatable antibody.

別の態様では、疾患細胞がＣＤ４７を発現する障害もしくは疾患、またはＣＤ４７媒介疾患もしくは障害を予防する、治療する、その症状を緩和する、その進行を遅らせる、あるいは、それを改善する方法が、本明細書で提供され、方法は、本明細書で提供される活性化可能抗体もしくはコンジュゲート活性化可能抗体、またはその医薬組成物のいずれか１種の治療有効量を、それを必要としている対象に投与するステップを含む。別の態様では、疾患細胞がＣＤ４７を発現する細胞に関連する障害もしくは疾患、またはＣＤ４７媒介疾患もしくは障害を予防する、治療する、その症状を緩和する、その進行を遅らせる、あるいは、それを改善する方法が、本明細書で提供され、方法は、本明細書で提供される活性化可能抗体もしくはコンジュゲートされた活性化可能抗体、またはその医薬組成物のいずれか１種の治療有効量を、それを必要としている対象に投与するステップを含む。いくつかの実施形態では、障害または疾患は癌である。いくつかの実施形態では、癌は、腺癌、胆管（胆嚢）癌、膀胱癌、骨癌、乳癌、トリプルネガティブ乳癌、Ｈｅｒ２陰性乳癌、カルチノイド癌、子宮頸癌、胆管細胞癌、結腸直腸癌、結腸癌、子宮内膜癌、食道癌、神経膠腫、頭頸部癌、頭頸部扁平上皮癌、白血病、肝臓癌、肺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、リンパ腫、黒色腫、中咽頭癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、転移性去勢抵抗性前立腺癌、腎癌、肉腫、皮膚癌、扁平上皮癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、泌尿生殖器癌、または尿路上皮癌である。 In another aspect, methods of preventing, treating, alleviating symptoms of, slowing progression of, or ameliorating a disorder or disease in which the diseased cells express CD47, or a CD47-mediated disease or disorder, are provided herein. Provided herein, the methods provide a therapeutically effective amount of any one of the activatable antibodies or conjugated activatable antibodies provided herein, or pharmaceutical compositions thereof, to a subject in need thereof. administering to. In another aspect, preventing, treating, alleviating symptoms of, slowing progression of, or ameliorating a disorder or disease in which the diseased cells are associated with cells expressing CD47, or a CD47-mediated disease or disorder Methods are provided herein comprising administering a therapeutically effective amount of any one of the activatable antibodies or conjugated activatable antibodies provided herein, or pharmaceutical compositions thereof, including administering to a subject in need thereof. In some embodiments, the disorder or disease is cancer. In some embodiments, the cancer is adenocarcinoma, bile duct (gallbladder) cancer, bladder cancer, bone cancer, breast cancer, triple negative breast cancer, Her2 negative breast cancer, carcinoid cancer, cervical cancer, cholangiocellular carcinoma, colorectal cancer, Colon cancer, endometrial cancer, esophageal cancer, glioma, head and neck cancer, head and neck squamous cell carcinoma, leukemia, liver cancer, lung cancer, non-small cell lung cancer, small cell lung cancer, lymphoma, melanoma, oropharyngeal cancer, Ovarian cancer, pancreatic cancer, prostate cancer, metastatic castration-resistant prostate cancer, renal cancer, sarcoma, skin cancer, squamous cell carcinoma, gastric cancer, testicular cancer, thyroid cancer, urogenital cancer, or urothelial cancer.

関連態様では、本明細書で提供される活性化可能抗体もしくはコンジュゲートされた活性化可能抗体、またはその医薬組成物のいずれか１種の治療有効量を、それを必要としている対象に投与するステップを含む、ＣＤ４７を発現する細胞の成長、増殖または転移を阻害または低減する方法が、本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７の発現および／または活性は異常である。 In a related aspect, a therapeutically effective amount of any one of the activatable antibodies or conjugated activatable antibodies provided herein, or pharmaceutical compositions thereof, is administered to a subject in need thereof Provided herein are methods of inhibiting or reducing growth, proliferation or metastasis of cells expressing CD47 comprising steps. In some embodiments, CD47 expression and/or activity is aberrant.

別の態様では、本明細書で提供される活性化可能抗体、コンジュゲートされた活性化可能抗体、またはその医薬組成物のいずれか１種の治療有効量を、それを必要としている対象に投与するステップを含む、ＣＤ４７への天然リガンドの結合を阻害する、遮断する、または防止する方法が、本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７の発現および／または活性は異常である。 In another aspect, a therapeutically effective amount of any one of the activatable antibodies, conjugated activatable antibodies provided herein, or pharmaceutical compositions thereof, is administered to a subject in need thereof. Provided herein are methods of inhibiting, blocking or preventing the binding of a natural ligand to CD47 comprising the step of: In some embodiments, CD47 expression and/or activity is aberrant.

別の態様では、活性化可能抗体、コンジュゲートされた活性化可能抗体、その医薬組成物、ならびにその使用方法が、本明細書で提供され、活性化可能抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体は、ＣＤ４７に結合する場合、ＳＩＲＰαとのＣＤ４７の相互作用を遮断する。 In another aspect, provided herein are activatable antibodies, conjugated activatable antibodies, pharmaceutical compositions thereof, and methods of use thereof, wherein the activatable antibody or conjugated activatable antibody blocks the interaction of CD47 with SIRPα when it binds to CD47.

本開示の抗ヒトＣＤ４７活性化可能抗体のヒトＣＤ４７抗原に結合する能力の例示的なインビボ試験を表すグラフである。1 is a graph depicting exemplary in vivo testing of the ability of anti-human CD47 activatable antibodies of the present disclosure to bind to human CD47 antigen. 本開示の抗ヒトＣＤ４７活性化可能抗体のヒトＣＤ４７抗原に結合する能力の例示的なインビボ試験を表すグラフである。1 is a graph depicting exemplary in vivo testing of the ability of anti-human CD47 activatable antibodies of the present disclosure to bind to human CD47 antigen. 本開示の抗ヒトＣＤ４７活性化可能抗体の抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を活性化する能力の例示的なインビボ試験を表すグラフである。FIG. 10 is a graph representing exemplary in vivo testing of the ability of anti-human CD47 activatable antibodies of the present disclosure to activate antibody-dependent cellular phagocytosis (ADCP). 本開示の抗ヒトＣＤ４７抗体および抗ＣＤ４７活性化可能抗体のＡＤＣＰを活性化する能力の例示的なインビボ試験を表すグラフである。FIG. 10 is a graph depicting exemplary in vivo testing of the ability of anti-human CD47 and anti-CD47 activatable antibodies of the present disclosure to activate ADCP. 本開示の抗ヒトＣＤ４７抗体および抗ＣＤ４７活性化可能抗体のＡＤＣＰを活性化する能力の例示的なインビボ試験を表すグラフである。FIG. 10 is a graph depicting exemplary in vivo testing of the ability of anti-human CD47 and anti-CD47 activatable antibodies of the present disclosure to activate ADCP. 本開示の抗ヒトＣＤ４７抗体および抗ＣＤ４７活性化可能抗体のＡＤＣＰを活性化する能力の例示的なインビボ試験を表すグラフである。FIG. 10 is a graph depicting exemplary in vivo testing of the ability of anti-human CD47 and anti-CD47 activatable antibodies of the present disclosure to activate ADCP. 本開示の抗ヒトＣＤ４７抗体および抗ＣＤ４７活性化可能抗体のＡＤＣＰを活性化する能力の例示的なインビボ試験を表すグラフである。FIG. 10 is a graph depicting exemplary in vivo testing of the ability of anti-human CD47 and anti-CD47 activatable antibodies of the present disclosure to activate ADCP. 本開示の抗ヒトＣＤ４７抗体のＡＤＣＰを活性化する能力の例示的なインビボ試験を表すグラフである。FIG. 10 is a graph depicting an exemplary in vivo test of the ability of anti-human CD47 antibodies of the present disclosure to activate ADCP. 本開示の抗ヒトＣＤ４７抗体のＡＤＣＰを活性化する能力の例示的なインビボ試験を表すグラフである。FIG. 10 is a graph depicting an exemplary in vivo test of the ability of anti-human CD47 antibodies of the present disclosure to activate ADCP. 本開示の抗ヒトＣＤ４７抗体のＡＤＣＰを活性化する能力の例示的なインビボ試験を表すグラフである。FIG. 10 is a graph depicting an exemplary in vivo test of the ability of anti-human CD47 antibodies of the present disclosure to activate ADCP. 異種移植マウスモデルにおける抗ヒトＣＤ４７抗体のインビボ有効性の例示的試験を表すグラフである。FIG. 10 is a graph representing an exemplary test of in vivo efficacy of anti-human CD47 antibodies in a xenograft mouse model. 異種移植マウスモデルにおける抗ヒトＣＤ４７抗体のインビボ有効性の例示的試験を表すグラフである。FIG. 10 is a graph representing an exemplary test of in vivo efficacy of anti-human CD47 antibodies in a xenograft mouse model.

インテグリン関連タンパク質（ＩＡＰ）としても知られるＣＤ４７は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する膜貫通型糖タンパク質である。ＣＤ４７は、他の細胞上の膜インテグリンと相互作用することが示されている。ＣＤ４７はまた、リガンドのトロンボスポンジン－１（ＴＳＰ－１）およびシグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰα）を結合することも示されている。ＣＤ４７は、マクロファージなどの骨髄細胞による細胞の消費を防ぐことにより免疫系から癌細胞を保護できる。ＣＤ４７はヒト細胞中で発現され、また、多くの腫瘍細胞上で過剰発現されることが示されている。 CD47, also known as integrin-associated protein (IAP), is a transmembrane glycoprotein belonging to the immunoglobulin superfamily. CD47 has been shown to interact with membrane integrins on other cells. CD47 has also been shown to bind the ligands thrombospondin-1 (TSP-1) and signal regulatory protein alpha (SIRPα). CD47 can protect cancer cells from the immune system by preventing cell consumption by myeloid cells such as macrophages. CD47 is expressed in human cells and has also been shown to be overexpressed on many tumor cells.

標的細胞上のＣＤ４７と、マクロファージまたは他の食細胞上のＳＩＲＰαとの間の相互作用の遮断は、標的細胞の食作用を誘導できる。場合によっては、標的細胞上のＣＤ４７と、マクロファージまたは他の食細胞上のＳＩＲＰαとの間の相互作用の遮断は、食細胞上のＦｃ受容体による係合と同調して、標的細胞の食作用を誘導できる。場合によっては、Ｆｃ受容体の係合は、ＣＤ４７結合抗体上のＦｃドメインにより行われ得る。 Blocking the interaction between CD47 on target cells and SIRPα on macrophages or other phagocytic cells can induce phagocytosis of target cells. In some cases, blocking the interaction between CD47 on target cells and SIRPα on macrophages or other phagocytic cells, in concert with engagement by Fc receptors on phagocytic cells, results in phagocytosis of target cells. can be induced. In some cases, Fc receptor engagement may be performed by the Fc domain on the CD47 binding antibody.

ＣＤ４７は、複数の癌の適応症で過剰発現されることが示されているため、望ましい標的である。 CD47 is a desirable target because it has been shown to be overexpressed in multiple cancer indications.

したがって、本開示は、哺乳動物ＣＤ４７を特異的に結合する抗体、活性化可能抗体、コンジュゲートされた抗体、およびコンジュゲートされた活性化可能抗体、その作製および使用方法を提供する。 Accordingly, the present disclosure provides antibodies, activatable antibodies, conjugated antibodies, and conjugated activatable antibodies that specifically bind mammalian CD47, methods of making and using the same.

より具体的には、本開示は、ＣＤ４７を発現する細胞に関連した疾患または障害を治療する、予防する、その進行を遅らせる、その症状を改善するおよび／または緩和する方法において有用である抗哺乳動物ＣＤ４７抗体およびそのフラグメント（本明細書で互換的にＣＤ４７抗体またはＡＢと呼ばれる）、コンジュゲートされたＣＤ４７抗体、活性化可能ＣＤ４７抗体、およびコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体を提供する。いくつかの実施形態では、細胞は、正常なＣＤ４７発現および／または活性に関連する。いくつかの実施形態では、細胞は、異常なＣＤ４７発現および／または活性に関連する。いくつかの実施形態では、細胞は、疾患細胞におけるＣＤ４７発現および／または活性に関連している。例えば、本明細書で記載の抗体／活性化可能抗体のいずれかを、癌または他の腫瘍状態を治療する、予防する、その進行を遅らせる、その症状を改善するおよび／または緩和する方法において用いることができる。本明細書で記載の抗体／活性化可能抗体のいずれかを、検出／診断用途のために用いることもできる。 More specifically, the present disclosure provides anti-mammalian compounds useful in methods of treating, preventing, slowing the progression of, ameliorating and/or alleviating the symptoms of a disease or disorder associated with cells expressing CD47. Animal CD47 antibodies and fragments thereof (interchangeably referred to herein as CD47 antibodies or ABs), conjugated CD47 antibodies, activatable CD47 antibodies, and conjugated activatable CD47 antibodies are provided. In some embodiments, the cells are associated with normal CD47 expression and/or activity. In some embodiments, the cells are associated with aberrant CD47 expression and/or activity. In some embodiments, the cells are associated with CD47 expression and/or activity in diseased cells. For example, any of the antibodies/activatable antibodies described herein are used in methods of treating, preventing, slowing progression of, ameliorating and/or alleviating symptoms of cancer or other tumor conditions. be able to. Any of the antibodies/activatable antibodies described herein can also be used for detection/diagnostic applications.

本開示のいくつかの実施形態では、抗体および活性化可能抗体は、ヒトＣＤ４７およびカニクイザルＣＤ４７を特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体および活性化可能抗体はヒトＣＤ４７を結合する。いくつかの実施形態では、抗体および活性化可能抗体はカニクイザルＣＤ４７を結合する。いくつかの実施形態では、抗体および活性化可能抗体は、ＣＤ４７含有細胞によって内部に取り込まれる。いくつかの実施形態では、抗体および活性化可能抗体は、ＣＤ４７抗原のグリコシル化型および脱グリコシル化型の両方を結合する。 In some embodiments of the disclosure, the antibodies and activatable antibodies specifically bind human CD47 and cynomolgus monkey CD47. In some embodiments, the antibodies and activatable antibodies bind human CD47. In some embodiments, the antibodies and activatable antibodies bind cynomolgus monkey CD47. In some embodiments, antibodies and activatable antibodies are internalized by CD47-containing cells. In some embodiments, antibodies and activatable antibodies bind both glycosylated and deglycosylated forms of the CD47 antigen.

本開示のいくつかの実施形態では、抗体および活性化可能抗体は、ヒトＣＤ４７およびカニクイザルＣＤ４７を特異的に結合し、ＳＩＲＰαとの相互作用を遮断する。本開示のいくつかの実施形態では、抗体および活性化可能抗体は、ヒトＣＤ４７およびカニクイザルＣＤ４７を特異的に結合し、抗体依存性細胞食作用を活性化する。本開示のいくつかの実施形態では、抗体および活性化可能抗体は、ヒトＣＤ４７およびカニクイザルＣＤ４７を特異的に結合し、Ｆｃ受容体経路を結合する。 In some embodiments of the disclosure, the antibodies and activatable antibodies specifically bind human CD47 and cynomolgus monkey CD47 and block interaction with SIRPα. In some embodiments of the present disclosure, antibodies and activatable antibodies specifically bind human CD47 and cynomolgus monkey CD47 and activate antibody-dependent cellular phagocytosis. In some embodiments of the disclosure, the antibodies and activatable antibodies specifically bind human CD47 and cynomolgus monkey CD47 and bind the Fc receptor pathway.

定義：
別に定めのない限り、本開示に関連して用いられる科学的および技術的用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有するものとする。「ａ」実体または「ａｎ」実体という用語は、その実体の１つまたは複数を指す。例えば、１種の化合物（ａ ｃｏｍｐｏｕｎｄ）は、１種または複数の化合物（ｏｎｅまたはｍｏｒｅ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ）を指す。したがって、「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、「１つまたは複数の（ｏｎｅまたはｍｏｒｅ）」および「少なくとも１つの（ａｔ ｌｅａｓｔ ｏｎｅ）」という用語は、互換的に用いることができる。さらに、文脈に別段の定めがない限り、単数形の用語は複数形を含むものとし、複数形の用語は単数形を含むものとする。一般的に、本明細書に記載される細胞および組織培養、分子生物学、およびタンパク質およびオリゴーまたはポリヌクレオチド化学およびハイブリダイゼーションに関連しておよびそれらの技術に関連して使用される命名法は、当業界においてよく知られており、通常使用されるものである。標準的な技術が、組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、組織培養および形質転換（例えば、電気穿孔、リポフェクションなど）に用いられる。酵素反応および精製技術は、製造業者の仕様に従って、または当技術分野で一般的に達成されるように、または本明細書に記載されるように実施される。前述の技術および手順は、一般に、当技術分野で周知の従来の方法に従って、本明細書全体を通して引用され、考察されている様々な一般的およびより具体的な参考文献に記載されているとおりに実施される。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２ｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照されたい。本明細書に記載される分析化学、合成有機化学、および医薬品化学（ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）に関連して利用される命名法、ならびにこれらの実験室手順および技術は、当技術分野で周知であり、一般的に使用されるものである。標準的な技術が、化学合成、化学分析、医薬品調製、処方、ならびに患者への送達および患者の治療のために用いられる。 Definition:
Unless defined otherwise, scientific and technical terms used in connection with the present disclosure shall have the meanings that are commonly understood by those of ordinary skill in the art. The term "a" entity or "an" entity refers to one or more of that entity. For example, a compound refers to one or more compounds. Thus, the terms "a", "an", "one or more" and "at least one" should be used interchangeably. can be done. Further, unless otherwise required by context, singular terms shall include pluralities and plural terms shall include the singular. In general, the nomenclature used in reference to and in connection with the techniques of cell and tissue culture, molecular biology, and protein and oligo- or polynucleotide chemistry and hybridization described herein are: They are well known and commonly used in the art. Standard techniques are used for recombinant DNA, oligonucleotide synthesis, tissue culture and transformation (eg, electroporation, lipofection, etc.). Enzymatic reactions and purification techniques are performed according to manufacturer's specifications or as commonly accomplished in the art or as described herein. The foregoing techniques and procedures are generally performed according to conventional methods well known in the art and as described in various general and more specific references cited and discussed throughout this specification. be implemented. For example, Sambrook et al. See Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989)). The nomenclature utilized in connection with analytical, synthetic organic, and medicinal and pharmaceutical chemistry, and the laboratory procedures and techniques described herein, are well known in the art. , are commonly used. Standard techniques are used for chemical syntheses, chemical analyses, pharmaceutical preparation, formulation, and delivery to and treatment of patients.

本開示により使用される場合、以下の用語は、別段の指示がない限り、下記の意味を有すると理解されるものとする。 As used by this disclosure, the following terms shall be understood to have the following meanings unless otherwise indicated.

本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子、および免疫グロブリン（Ｉｇ）分子の免疫学的活性部分、すなわち抗原を特異的に結合する（抗原と免疫反応する）抗原結合部位を含む分子を指す。「特異的に結合する」または「免疫反応する」または「免疫特異的に結合する」とは、抗体が所望の抗原の１個または複数の抗原決定基と反応し、他のポリペプチドと反応しないか、またははるかに低い親和性（Ｋｄ＞１０－６）で結合することを意味する。抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ドメイン抗体、単鎖、ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２フラグメント、ｓｃＦｖ、ならびにＦａｂ発現ライブラリーを含むが、これらに限定されない。本明細書で提供する抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥおよびＩｇＤのクラス（またはこれらのサブクラス）のいずれかのものであり得る。 As used herein, the term "antibody" refers to immunoglobulin molecules and immunologically active portions of immunoglobulin (Ig) molecules, i.e. antigens that specifically bind (immunoreact with) antigens. Refers to a molecule that contains a binding site. "Specifically binds" or "immunoreacts" or "immunospecifically binds" means that the antibody reacts with one or more antigenic determinants of the desired antigen and does not react with other polypeptides. or with a much lower affinity (K d >10 −6 ). Antibodies include, but are not limited to, polyclonal antibodies, monoclonal antibodies, chimeric antibodies, domain antibodies, single chains, Fab and F(ab') 2 fragments, scFv, and Fab expression libraries. The antibodies provided herein can be of any of the IgG, IgM, IgA, IgE and IgD classes (or subclasses thereof).

用語「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）または「モノクローナル抗体組成物」は、本明細書において使用される場合、ユニーク軽鎖遺伝子生成物およびユニーク重鎖遺伝子生成物からなる抗体分子の１つの分子種のみを含む抗体分子集団を指す。特に、モノクローナル抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）は、集団のすべての分子で同一である。ＭＡｂは、抗原に対する固有の結合親和性によって特徴付けられる特定の抗原エピトープと免疫反応できる抗原結合部位を含む。 The term "monoclonal antibody" (mAb) or "monoclonal antibody composition" as used herein refers to only one species of antibody molecule consisting of a unique light chain gene product and a unique heavy chain gene product. It refers to a population of antibody molecules comprising In particular, the complementarity determining regions (CDRs) of monoclonal antibodies are identical in all molecules of the population. MAbs contain an antigen-binding site capable of immunoreacting with a particular antigenic epitope characterized by a unique binding affinity for the antigen.

「抗原結合部位」または「結合部分」という用語は、抗原結合に関与する免疫グロブリン分子の部分を指す。抗原結合部位は、重（「Ｈ」）鎖および軽（「Ｌ」）鎖のＮ末端可変（「Ｖ」）領域のアミノ酸残基によって形成される。「超可変領域」と称される重鎖および軽鎖のＶ領域内の３つの高度に異なるストレッチは、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」として知られる、より保存された隣接ストレッチ間に挿入される。したがって、用語「ＦＲ」は、免疫グロブリンの超可変領域間に、およびそれに隣接して天然で認められるアミノ酸配列を指す。抗体分子において、軽鎖の３つの超可変領域および重鎖の３つの超可変領域は、３次元空間で互いに対して配置されて抗原結合表面を形成する。抗原結合表面は、結合された抗原の三次元表面に相補的であり、重鎖および軽鎖のそれぞれの３つの超可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」と称される。各ドメインへのアミノ酸の割り当ては、Ｋａｂａｔ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９８７年および１９９１年））、またはＣｈｏｔｈｉａ＆Ｌｅｓｋ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７年）、Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７８－８８３（１９８９年）の定義に従う。 The term "antigen-binding site" or "binding portion" refers to the part of the immunoglobulin molecule that participates in antigen binding. The antigen-binding site is formed by amino acid residues of the N-terminal variable (“V”) regions of the heavy (“H”) and light (“L”) chains. Three highly distinct stretches within the V regions of the heavy and light chains, termed "hypervariable regions," are interposed between adjacent stretches that are more conserved, known as "framework regions" or "FRs." be. Thus, the term "FR" refers to amino acid sequences that are naturally found between and adjacent to hypervariable regions in immunoglobulins. In an antibody molecule, the three hypervariable regions of the light chain and the three hypervariable regions of the heavy chain are arranged relative to each other in three-dimensional space to form the antigen-binding surface. The antigen-binding surface is complementary to the three-dimensional surface of the bound antigen, and the three hypervariable regions of each heavy and light chain are called "complementarity determining regions" or "CDRs." The assignment of amino acids to each domain is according to the Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987 and 1991)) or Chothia & Lesk J. Am. Mol. Biol. 196:901-917 (1987), Chothia et al., Nature 342:878-883 (1989).

本明細書において使用される場合、用語「エピトープ」は、免疫グロブリン、ｓｃＦｖまたはＴ細胞受容体に特異的結合できる任意のタンパク質決定因子を包含する。「エピトープ」という用語は、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体に特異的に結合できるあらゆるタンパク質決定基を含む。エピトープ決定基は通常、アミノ酸または糖側鎖などの化学的に活性な分子表面基で構成されており、通常、特定の３次元構造特性ならびに特定の電荷特性を有する。例えば、抗体は、ポリペプチドのＮ末端ペプチドまたはＣ末端ペプチドに対して作製され得る。抗体は、解離定数が１μＭ以下、いくつかの実施形態では、１００ｎＭ以下、いくつかの実施形態では、１０ｎＭ以下である場合、抗原を特異的に結合すると言われる。 As used herein, the term "epitope" includes any protein determinant capable of specific binding to an immunoglobulin, scFv or T-cell receptor. The term "epitope" includes any protein determinant capable of specific binding to an immunoglobulin or T-cell receptor. Epitopic determinants usually consist of chemically active molecular surface groupings such as amino acids or sugar side chains and usually have specific three dimensional structural characteristics, as well as specific charge characteristics. For example, antibodies can be raised against N-terminal or C-terminal peptides of a polypeptide. An antibody is said to specifically bind an antigen if the dissociation constant is 1 μM or less, in some embodiments 100 nM or less, in some embodiments 10 nM or less.

本明細書で使用される場合、「特異的結合」、「免疫学的結合」、および「免疫学的結合特性」という用語は、免疫グロブリン分子と、それに対し免疫グロブリンが特異的である抗原との間に生じるタイプの非共有結合相互作用を指す。免疫学的結合相互作用の強度または親和性は、相互作用の解離定数（Ｋｄ）で表すことができ、より小さいＫｄはより大きな親和性を示す。選択されたポリペプチドの免疫学的結合特性は、当該分野で周知の方法を使用して定量化できる。このような方法の１つは、抗原結合部位／抗原複合体の形成および解離の速度を測定することを伴い、これらの速度は、複合体パートナーの濃度、相互作用の親和性、および両方向の速度に等しく影響を与える幾何学的パラメーターに依存する。従って、「オン速度定数」（Ｋｏｎ）および「オフ速度定数」（Ｋｏｆｆ）の両者は、濃度、および会合および解離の実際の速度の計算により決定され得る。（Ｎａｔｕｒｅ ３６１：１８５－８７（１９９３）を参照）。Ｋｏｆｆ／Ｋｏｎの比率は、親和性に関係のないすべてのパラメーターを解除でき、かつ解離定数Ｋｄと等しい。（一般に、Ｄａｖｉｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ ５９：４３９－４７３を参照）。本開示の抗体は、放射性リガンド結合アッセイまたは当業者に既知の同様のアッセイなどのアッセイによって測定した場合、結合定数（Ｋｄ）が１μＭ以下、いくつかの実施形態では１００ｎＭ以下、いくつかの実施形態では１０ｎＭ以下、いくつかの実施形態では１００ｐＭ以下～約１ｐＭである場合、標的に特異的に結合すると言われる。 As used herein, the terms "specific binding,""immunologicalbinding," and "immunological binding properties" refer to immunoglobulin molecules and antigens for which immunoglobulins are specific. refers to the type of non-covalent interaction that occurs between The strength or affinity of an immunological binding interaction can be expressed as the dissociation constant (K d ) of the interaction, with a smaller K d indicating greater affinity. Immunological binding properties of selected polypeptides can be quantified using methods well known in the art. One such method involves measuring the rates of formation and dissociation of antigen-binding site/antigen complexes, which are determined by the concentration of complex partners, the affinity of the interaction, and the kinetics in both directions. depends on geometrical parameters that affect equally on . Thus, both the "on rate constant" (K on ) and the "off rate constant" (K off ) can be determined by calculating the concentration and the actual rate of association and dissociation. (See Nature 361:185-87 (1993)). The ratio of K off /K on can cancel all parameters not related to affinity and is equal to the dissociation constant K d . (See generally Davies et al. (1990) Annual Rev Biochem 59:439-473). Antibodies of the present disclosure have a binding constant (K d ) of 1 μM or less, in some embodiments 100 nM or less, in some It is said to specifically bind a target when it is in the form of 10 nM or less, and in some embodiments from 100 pM or less to about 1 pM.

本明細書で使用される場合、「単離ポリヌクレオチド」という用語は、ゲノム、ｃＤＮＡ、または合成起源のポリヌクレオチド、またはそれらのいくつかの組み合わせを意味するものとする。その起源により「単離ポリヌクレオチド」は、（１）「単離ポリヌクレオチド」が天然で認められるポリヌクレオチドの全てまたは一部と関連していない、（２）天然では結合されないポリヌクレオチドに作動可能に連結される、または（３）天然では、より大きい配列の一部として発生しない。本開示によるポリヌクレオチドは、本明細書で示される重鎖免疫グロブリン分子をコードする核酸分子、および本明細書で示される軽鎖免疫グロブリン分子をコードする核酸分子を含む。 As used herein, the term "isolated polynucleotide" shall mean a polynucleotide of genomic, cDNA, or synthetic origin, or some combination thereof. By its origin, an "isolated polynucleotide" is operable on a polynucleotide that (1) is not associated with all or part of the polynucleotide with which it is found in nature, and (2) is not associated with it in nature. or (3) does not occur naturally as part of a larger sequence. Polynucleotides according to the present disclosure include nucleic acid molecules that encode the heavy chain immunoglobulin molecules presented herein and nucleic acid molecules that encode the light chain immunoglobulin molecules presented herein.

本明細書で言及される「単離タンパク質」という用語は、ｃＤＮＡ、組換えＲＮＡ、または合成起源またはそれらのいくつかの組み合わせのタンパク質を意味し、その起源または誘導源により、「単離タンパク質」は、（１）天然で認められるタンパク質には結合していない、（２）同じ供給源の他のタンパク質を含まない、例えばマウスタンパク質を含まない、（３）異なる種からの細胞によって発現される、または（４）天然で生じない。 The term "isolated protein" as referred to herein means a protein of cDNA, recombinant RNA, or synthetic origin or some combination thereof; is (1) not bound to a protein found in nature, (2) free of other proteins of the same source, e.g. free of murine proteins, (3) expressed by cells from different species or (4) not occurring in nature.

「ポリペプチド」という用語は、本明細書では、ポリペプチド配列の天然のタンパク質、フラグメント、または類似体を指す総称として使用される。従って、天然タンパク質フラグメントおよび類似体は、ポリペプチド属の種である。本開示のポリペプチドは、本明細書に示される重鎖免疫グロブリン分子、および本明細書に示される軽鎖免疫グロブリン分子、並びに、軽鎖免疫グロブリン分子、例えばカッパ軽鎖免疫グロブリンと共に、重鎖免疫グロブリン分子を含む組合せにより形成される抗体分子を含み、逆もまた同様であり、さらにそれらのフラグメントおよび類似体も含む。 The term "polypeptide" is used herein as a generic term to refer to native proteins, fragments, or analogs of a polypeptide sequence. Naturally occurring protein fragments and analogs are thus species of the polypeptide genus. The polypeptides of the present disclosure can be combined with heavy chain immunoglobulin molecules as shown herein, and light chain immunoglobulin molecules as shown herein, as well as light chain immunoglobulin molecules such as kappa light chain immunoglobulin. It includes antibody molecules formed in combination with immunoglobulin molecules, and vice versa, as well as fragments and analogs thereof.

本明細書において目的物に適用される「天然起源の」という用語は、目的物が天然で見出され得ることを指す。例えば、天然の供給源から単離でき、かつ実験室その他において人によって意図的に改変されていない生物（ウイルスなど）中に存在するポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列は、天然起源である。 The term "naturally occurring" as applied to an object herein means that the object can be found in nature. For example, a polypeptide or polynucleotide sequence present in an organism (such as a virus) that can be isolated from a natural source and has not been intentionally modified by man in the laboratory or otherwise is naturally occurring.

本明細書で使用される「作動可能に連結された」という用語は、そのように記述された構成要素の位置を指し、それらを意図された様式で機能させることができる関係にあることを指す。コード配列に「作動可能に連結された」制御配列は、コード配列の発現が制御配列に適合する条件下で達成されるように、連結される。 As used herein, the term "operably linked" refers to the positioning of the components so described and to being in a relationship permitting them to function in their intended manner. . A control sequence "operably linked" to a coding sequence is ligated such that expression of the coding sequence is achieved under conditions compatible with the control sequences.

本明細書で使用される「制御配列」という用語は、それらが連結されるコード配列の発現およびプロセシングを行うのに必要なポリヌクレオチド配列を指す。このような制御配列の性質は、宿主生物に依存して異なり、原核生物では、このような制御配列としては一般に、プロモーター、リボソーム結合部位、および転写終結配列が挙げられ、真核生物では、一般的に、このような制御配列としては、プロモーターおよび転写終結配列が挙げられる。「制御配列」という用語は、少なくとも、その存在が発現およびプロセッシングに必須であるすべての成分を含むことを意図しており、その存在が有益である追加の成分、例えばリーダー配列および融合パートナー配列も含んでよい。本明細書で言及される「ポリヌクレオチド」という用語は、少なくとも１０塩基長のヌクレオチド、リボヌクレオチドまたはデオキシヌクレオチドのいずれか、またはいずれかのタイプのヌクレオチドの修飾された形態を意味する。この用語は、ＤＮＡの一本鎖型および二本鎖型を含む。 The term "control sequences" as used herein refers to polynucleotide sequences necessary to effect the expression and processing of coding sequences to which they are ligated. The nature of such control sequences varies depending on the host organism; in prokaryotes, such control sequences generally include promoters, ribosome binding sites, and transcription termination sequences; Typically, such regulatory sequences include promoters and transcription termination sequences. The term "regulatory sequence" is intended to include at least all components whose presence is essential for expression and processing, as well as additional components whose presence is beneficial, such as leader sequences and fusion partner sequences. may contain. The term "polynucleotide" as referred to herein means a nucleotide, either ribonucleotide or deoxynucleotide, or a modified form of either type of nucleotide, that is at least 10 bases long. The term includes single- and double-stranded forms of DNA.

本明細書で言及されるオリゴヌクレオチドという用語は、天然起源ヌクレオチド、および天然起源オリゴヌクレオチドの結合および天然に存在しないオリゴヌクレオチドの連結によって共に連結される修飾ヌクレオチドを含む。オリゴヌクレオチドは、２００個またはそれよりも少ない長さの塩基を通常含むポリヌクレオチドサブセットである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、長さが１０～６０塩基であり、いくつかの実施形態では、長さが１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０～４０塩基である。オリゴヌクレオチドは通常、例えば、プローブ用に一本鎖であるが、オリゴヌクレオチドは、例えば、遺伝子変異体の構築に使用するために二本鎖であり得る。本開示のオリゴヌクレオチドは、センスまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドのいずれかである。 The term oligonucleotide referred to herein includes naturally occurring nucleotides and modified nucleotides that are linked together by linkage of naturally occurring oligonucleotides and ligation of non-naturally occurring oligonucleotides. Oligonucleotides are a polynucleotide subset usually containing 200 or fewer bases in length. In some embodiments, oligonucleotides are from 10 to 60 bases in length, and in some embodiments from 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, or 20 or more bases in length. 40 bases. Oligonucleotides are usually single-stranded, eg, for probes, but oligonucleotides can be double-stranded, eg, for use in constructing gene variants. Oligonucleotides of the present disclosure are either sense or antisense oligonucleotides.

本明細書で言及される「天然起源ヌクレオチド」という用語は、デオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドを含む。本明細書で言及される「修飾ヌクレオチド」という用語は、修飾または置換された糖基などを有するヌクレオチドを含む。本明細書で言及される用語「オリゴヌクレオチド結合」は、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレルロエート、ホスホロジセレノエート、ホスホロアニロチオエート、ホスホラニラデート、ホスホロンミデートなどのオリゴヌクレオチド結合を含む。例えば、ＬａＰｌａｎｃｈｅ ｅｔ ａｌ．Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１４：９０８１（１９８６）；Ｓｔｅｃ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０６：６０７７（１９８４），Ｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１６：３２０９（１９８８），Ｚｏｎ ｅｔ ａｌ．Ａｎｔｉ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ ６：５３９（１９９１）；Ｚｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ｐｐ．８７－１０８（Ｆ．Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，Ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｅｎｇｌａｎｄ（１９９１））；Ｓｔｅｃ ｅｔ ａｌ．Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ Ｎｏ．５，１５１，５１０；Ｕｈｌｍａｎｎ ａｎｄ Ｐｅｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ９０：５４３（１９９０）を参照されたい。オリゴヌクレオチドは、必要に応じ、検出用の標識を含み得る。 The term "naturally occurring nucleotides" referred to herein includes deoxyribonucleotides and ribonucleotides. The term "modified nucleotides" referred to herein includes nucleotides with modified or substituted sugar groups and the like. The term "oligonucleotide linkage" referred to herein includes phosphorothioates, phosphorodithioates, phosphorocerelloates, phosphorodiselenoates, phosphoroanilothioates, phosphoraniladates, phosphoronmidates, and the like. Includes oligonucleotide binding. For example, LaPlanche et al. Nucl. Acids Res. 14:9081 (1986); Stec et al. J. Am. Chem. Soc. 106:6077 (1984), Stein et al. Nucl. Acids Res. 16:3209 (1988), Zon et al. Anti Cancer Drug Design 6:539 (1991); Zon et al. Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, pp. 87-108 (F. Eckstein, Ed., Oxford University Press, Oxford England (1991)); Stec et al. U.S.A. S. Patent no. 5,151,510; Uhlmann and Peyman Chemical Reviews 90:543 (1990). Oligonucleotides may optionally include a label for detection.

本明細書で使用される場合、２０種類の従来のアミノ酸およびその略語は、通常の使用法に従う。Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ－Ａ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（第２版、Ｅ．Ｓ．Ｇｏｌｕｂ ａｎｄ Ｄ．Ｒ．Ｇｒｅｅｎ、編、Ｓｉｎａｕｅｒ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ、Ｍａｓｓ（１９９１年））を参照されたい。２０個の従来のアミノ酸、α、α二置換アミノ酸、Ｎ－アルキルアミノ酸、乳酸、および他の従来のものではないアミノ酸などの非天然アミノ酸の立体異性体（例えば、Ｄ－アミノ酸）も、本開示のポリペプチドの好適な成分であり得る。従来のものではないアミノ酸の例としては、以下が挙げられる：４ヒドロキシプロリン、γ－カルボキシグルタミン酸、ε－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチルリジン、ε－Ｎ－アセチルリジン、Ｏ－ホスホセリン、Ｎ－アセチルセリン、Ｎ－ホルミルメチオニン、３－メチルヒスチジン、５－ヒドロキシリジン、σ－Ｎ－メチルアルギニン、および他の類似のアミノ酸およびイミノ酸（例えば、４－ヒドロキシプロリン）。本明細書において使用されるポリペプチド表記では、標準の使用法および規則に準拠して、左方向はアミノ末端方向であり、右方向はカルボキシ末端方向である。 As used herein, the twenty conventional amino acids and their abbreviations follow conventional usage. See Immunology-A Synthesis (2nd ed., ES Golub and DR Green, eds., Sinauer Associates, Sunderland, Mass (1991)). Stereoisomers of unnatural amino acids (eg, D-amino acids) such as the 20 conventional amino acids, alpha, alpha disubstituted amino acids, N-alkylamino acids, lactic acid, and other non-conventional amino acids are also disclosed in this disclosure. can be a suitable component of a polypeptide of Examples of non-conventional amino acids include: 4-hydroxyproline, γ-carboxyglutamic acid, ε-N,N,N-trimethyllysine, ε-N-acetyllysine, O-phosphoserine, N-acetyl. Serine, N-formylmethionine, 3-methylhistidine, 5-hydroxylysine, σ-N-methylarginine, and other similar amino acids and imino acids (eg, 4-hydroxyproline). In the polypeptide notation used herein, the left direction is the amino-terminal direction and the right direction is the carboxy-terminal direction, in accordance with standard usage and conventions.

同様に、特に明記しない限り、一本鎖ポリヌクレオチド配列の左端は５’末端であり、二本鎖ポリヌクレオチド配列の左方向は５’方向と称される。新生ＲＮＡ転写産物の５’方向から３’方向への付加は、転写方向配列と称され、ＲＮＡと同じ配列を有し、ＲＮＡ転写産物の５’ 末端に対し５’であるＤＮＡ鎖の配列領域は、「上流配列」と称され、ＲＮＡと同じ配列を有し、ＲＮＡ転写産物の３’ 末端に対し３’であるＤＮＡ鎖の配列領域は、「下流配列」と称される。 Similarly, unless specified otherwise, the left-hand end of single-stranded polynucleotide sequences is the 5' end; the left-hand direction of double-stranded polynucleotide sequences is referred to as the 5' direction. The 5′ to 3′ addition of the nascent RNA transcript is referred to as the transcription direction sequence, the sequence region of the DNA strand that has the same sequence as the RNA and is 5′ to the 5′ end of the RNA transcript. is called the "upstream sequence" and the sequence region of the DNA strand that has the same sequence as the RNA and is 3' to the 3' end of the RNA transcript is called the "downstream sequence".

ポリペプチドに適用される場合、「実質的に同一である」という用語は、２つのペプチド配列が、デフォルトのギャップ加重を使用するプログラムＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴなどにより最適に整列された場合、少なくとも８０％の配列同一性、いくつかの実施形態では、少なくとも９０％の配列同一性、いくつかの実施形態では、少なくとも９５％の配列同一性、いくつかの実施形態では、少なくとも９９％の配列同一性を共有することを意味する。 As applied to polypeptides, the term "substantially identical" means that two peptide sequences are at least 80% identical when optimally aligned, such as by the programs GAP or BESTFIT, using default gap weights. share sequence identity, in some embodiments at least 90% sequence identity, in some embodiments at least 95% sequence identity, in some embodiments at least 99% sequence identity means to

いくつかの実施形態では、同一でない残基位置は、保存性アミノ酸置換により異なる。 In some embodiments, residue positions that are not identical differ by conservative amino acid substitutions.

本明細書で考察されるように、抗体または免疫グロブリン分子のアミノ酸配列のわずかな変化は、本開示に包含されると考えられ、アミノ酸配列における変化は、少なくとも７５％、いくつかの実施形態では少なくとも８０％、９０％、９５％、およびいくつかの実施形態では９９％を維持することを条件とする。特に、保存的アミノ酸置換が意図される。保存的置換は、それらの側鎖に関連するアミノ酸ファミリー内で生じるものである。遺伝的にコードされたアミノ酸は、通常次のファミリーに分類される：（１）酸性アミノ酸はアスパラギン酸、グルタミン酸である、（２）塩基性アミノ酸はリジン、アルギニン、ヒスチジンである、（３）非極性アミノ酸は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファンである、および（４）非荷電極性アミノ酸は、グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、チロシンである。親水性アミノ酸としては、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸塩、グルタミン、グルタミン酸塩、ヒスチジン、リジン、セリン、およびトレオニンが挙げられる。疎水性アミノ酸としては、アラニン、システイン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、チロシンおよびバリンが挙げられる。アミノ酸の他のファミリーは、次のものを含む：（ｉ）脂肪族－ヒドロキシファミリーである、セリンおよびトレオニン；（ｉｉ）アミド含有ファミリーである、アスパラギンおよびグルタミン；（ｉｉｉ）脂肪族ファミリーである、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン；および（ｉｖ）芳香族ファミリーである、フェニルアラニン、トリプトファンおよびチロシン。例えば、イソロイシンまたはバリンによるロイシン、グルタミン酸塩によるアスパラギン酸塩、セリンによるトレオニンの単独置換、または構造的に関連したアミノ酸によるアミノ酸の同様の置換は、特に置換がフレームワーク部位内のアミノ酸を伴わない場合、得られる分子の結合または特性に大きな影響を有しないと予測することは合理的である。アミノ酸変化が機能的ペプチドをもたらすかどうかは、ポリペプチド誘導体の比活性をアッセイすることにより、容易に決定され得る。アッセイは、本明細書において詳細に記載されている。抗体または免疫グロブリン分子のフラグメントまたは類似体は、当業者により容易に調製され得る。フラグメントまたは類似体の好適なアミノおよびカルボキシ末端は、機能的ドメインの境界近くで発生する。構造および機能ドメインは、公的または独自の配列データベースと、ヌクレオチドおよび／またはアミノ酸配列とを比較することにより特定できる。いくつかの実施形態では、コンピューター化された比較方法を用いて、既知構造および／または機能の他のタンパク質で発生する配列モチーフまたは予測されるタンパク質コンフォメーションドメインを特定する。既知の三次元構造に折り畳まれるタンパク質配列を特定する方法は、既知である。Ｂｏｗｉｅ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５３：１６４（１９９１）。このように、前述の例は、当業者が、本開示によって構造的および機能的ドメインを定義するために使用できる配列モチーフおよび構造的コンフォメーションを認識できることを実証する。 As discussed herein, minor changes in the amino acid sequence of an antibody or immunoglobulin molecule are considered to be encompassed by the present disclosure, with changes in amino acid sequence of at least 75%, in some embodiments provided that it maintains at least 80%, 90%, 95%, and in some embodiments 99%. In particular, conservative amino acid substitutions are contemplated. Conservative substitutions are those that occur within a family of amino acids related to their side chains. Genetically encoded amino acids are usually classified into the following families: (1) acidic amino acids are aspartic acid, glutamic acid; (2) basic amino acids are lysine, arginine, histidine; Polar amino acids are alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, phenylalanine, methionine, tryptophan, and (4) uncharged polar amino acids are glycine, asparagine, glutamine, cysteine, serine, threonine, tyrosine. Hydrophilic amino acids include arginine, asparagine, aspartate, glutamine, glutamate, histidine, lysine, serine, and threonine. Hydrophobic amino acids include alanine, cysteine, isoleucine, leucine, methionine, phenylalanine, proline, tryptophan, tyrosine and valine. Other families of amino acids include: (i) the aliphatic-hydroxy family, serine and threonine; (ii) the amide-containing family, asparagine and glutamine; (iii) the aliphatic family. alanine, valine, leucine and isoleucine; and (iv) the aromatic family members phenylalanine, tryptophan and tyrosine. For example, single substitutions of leucine for isoleucine or valine, aspartate for glutamate, threonine for serine, or similar substitutions of amino acids with structurally related amino acids, particularly if the substitution does not involve an amino acid within a framework site , it is reasonable to expect that it will have no significant effect on the binding or properties of the resulting molecule. Whether an amino acid change results in a functional peptide can be readily determined by assaying the specific activity of the polypeptide derivative. Assays are described in detail herein. Fragments or analogs of antibodies or immunoglobulin molecules can be readily prepared by those of ordinary skill in the art. Preferred amino- and carboxy-termini of fragments or analogs occur near boundaries of functional domains. Structural and functional domains can be identified by comparison of the nucleotide and/or amino acid sequences to public or proprietary sequence databases. In some embodiments, computerized comparison methods are used to identify sequence motifs or predicted protein conformation domains that occur in other proteins of known structure and/or function. Methods to identify protein sequences that fold into a known three-dimensional structure are known. Bowie et al. Science 253:164 (1991). Thus, the foregoing examples demonstrate that one skilled in the art can recognize sequence motifs and structural conformations that can be used to define structural and functional domains according to the present disclosure.

好適なアミノ酸置換は、（１）タンパク質分解に対する感受性を低下させる、（２）酸化に対する感受性を低下させる、（３）タンパク質複合体を形成するための結合親和性を変化させる、（４）結合親和性を変化させる、および（５）このような類似体の他の物理化学的特性または機能的特性を付与するか、または変更する、置換である。類似体は、天然起源ペプチド配列以外の配列の様々な変異タンパク質を含んでよい。例えば、単一または複数のアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）は、天然起源配列（例えば、分子間接触を形成するドメイン外のポリペプチドの部分）中で行われ得る。保存的アミノ酸置換は、親配列の構造的特徴を実質的に変化させないはずである（例えば、置換アミノ酸は、親配列に生じるらせんを破壊する傾向がない、または親配列を特徴付ける他のタイプの二次構造を破損させる傾向がないはずである）。当該分野で認められているポリペプチドの二次および三次構造の例は、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８４））；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｃ．Ｂｒａｎｄｅｎ ａｎｄ Ｊ．Ｔｏｏｚｅ，ｅｄｓ．，Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９１））；およびＴｈｏｒｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３５４：１０５（１９９１）に記載されている。 Suitable amino acid substitutions may (1) reduce susceptibility to proteolysis, (2) reduce susceptibility to oxidation, (3) alter binding affinity for forming protein complexes, (4) binding affinity and (5) confer or alter other physicochemical or functional properties of such analogs. Analogs may include various mutant proteins of sequences other than the naturally occurring peptide sequence. For example, single or multiple amino acid substitutions (eg, conservative amino acid substitutions) may be made within the naturally occurring sequence (eg, portions of the polypeptide outside domains that form intermolecular contacts). Conservative amino acid substitutions should not substantially alter the structural characteristics of the parent sequence (e.g., the substituted amino acid will not tend to disrupt the resulting helix in the parent sequence, or other types of bifurcations that characterize the parent sequence). (should not tend to disrupt secondary structures). Art-recognized examples of secondary and tertiary polypeptide structures are in Proteins, Structures and Molecular Principles (Creighton, Ed., WH Freeman and Company, New York (1984)); (C. Branden and J. Tooze, eds., Garland Publishing, New York, N.Y. (1991)); and Thornton et al. Nature 354:105 (1991).

本明細書で使用される用語「ポリペプチドフラグメント」は、例えば、完全長のｃＤＮＡ配列から導き出される天然起源配列において、アミノ末端および／またはカルボキシ末端の欠失、および／または１つまたは複数の内部欠失を有するが、残りのアミノ酸配列が対応する位置と同一である、ポリペプチドを指す。フラグメントは典型的には、少なくとも５、６、８または１０アミノ酸長、例えば、いくつかの実施形態では、少なくとも１４アミノ酸長、いくつかの実施形態では、少なくとも２０アミノ酸長、通常、少なくとも５０アミノ酸長、およびいくつかの実施形態では、７０アミノ酸長である。本明細書で使用される用語「類似体」は、推定されるアミノ酸配列の一部分に対する実質的な同一性を有し、好適な結合条件下で標的に対する特異的結合を有する少なくとも２５個のアミノ酸のセグメントから構成されるポリペプチドを指す。通常、ポリペプチド類似体は、天然起源配列に関して保存的アミノ酸置換（または付加または欠失）を含む。類似体は、通常少なくとも２０アミノ酸長であり、いくつかの実施形態では少なくとも５０アミノ酸長以上であり、多くの場合、完全長の天然起源ポリペプチドと同じ長さであり得る。 As used herein, the term "polypeptide fragment" refers to, for example, amino- and/or carboxy-terminal deletions and/or one or more internal Refers to a polypeptide having a deletion, but in which the remaining amino acid sequence is identical to the corresponding position. Fragments are typically at least 5, 6, 8 or 10 amino acids long, such as in some embodiments at least 14 amino acids long, in some embodiments at least 20 amino acids long, and usually at least 50 amino acids long. , and in some embodiments is 70 amino acids long. As used herein, the term "analog" has substantial identity to a portion of the deduced amino acid sequence and has at least 25 amino acids that have specific binding to a target under suitable binding conditions. Refers to a polypeptide made up of segments. Polypeptide analogs usually contain conservative amino acid substitutions (or additions or deletions) with respect to the naturally occurring sequence. Analogs are usually at least 20 amino acids long, in some embodiments at least 50 amino acids long or longer, and often can be as long as a full-length naturally occurring polypeptide.

用語の「薬剤」は、本明細書では、化学化合物、化学化合物の混合物、生体巨大分子、または生体材料からの抽出物を示すために使用される。 The term "agent" is used herein to denote a chemical compound, a mixture of chemical compounds, a biomacromolecule, or an extract from a biomaterial.

本明細書で使用する「標識」または「標識された」という用語は、例えば、放射標識されたアミノ酸の組み込みによる、またはマークされたアビジン（例えば、光学的方法または熱量測定法によって検出できる蛍光マーカーまたは酵素活性を含むストレプトアビジン）により検出できるビオチニル部分のポリペプチドへの結合による、検出可能なマーカーの組み込みを指す。特定の状況では、標識またはマーカーも治療薬であり得る。ポリペプチドおよび糖タンパク質を標識する様々な方法が当技術分野において既知であり、使用できる。ポリペプチドの標識の例としては、これらに限定されないが、放射性同位元素または放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、１５Ｎ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ）、蛍光標識（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニド蛍光体）、酵素標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ｐ－ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）、化学発光、ビオチニル基、二次レポーターによって認識される所定のポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパーペア配列、二次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）が挙げられる。いくつかの実施形態では、標識は、潜在的な立体障害を減少させるために、様々な長さのスペーサーアームによって付着される。本明細書において使用される用語「医薬品または薬物（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ａｇｅｎｔ ｏｒ ｄｒｕｇ）」は、患者に正しく投与される場合、所望の治療効果を誘導できる化合物または組成物を指す。 The term "label" or "labeled" as used herein refers to, for example, by incorporation of radiolabeled amino acids or marked avidin (e.g., a fluorescent marker detectable by optical or calorimetric methods). or streptavidin containing enzymatic activity) refers to the incorporation of a detectable marker by conjugation to the polypeptide of a biotinyl moiety that can be detected. In certain circumstances, labels or markers can also be therapeutic agents. Various methods of labeling polypeptides and glycoproteins are known in the art and can be used. Examples of labels of polypeptides include, but are not limited to, radioisotopes or radionuclides (e.g., 3 H, 14 C, 15 N, 35 S, 90 Y, 99 Tc, 111 In, 125 I, 131 I ), fluorescent labels (e.g. FITC, rhodamine, lanthanide fluorophores), enzymatic labels (e.g. horseradish peroxidase, p-galactosidase, luciferase, alkaline phosphatase), chemiluminescence, biotinyl groups, certain Polypeptide epitopes (eg, leucine zipper pair sequences, binding sites for secondary antibodies, metal binding domains, epitope tags) are included. In some embodiments, labels are attached by spacer arms of various lengths to reduce potential steric hindrance. As used herein, the term "pharmaceutical agent or drug" refers to a chemical compound or composition capable of inducing a desired therapeutic effect when properly administered to a patient.

本明細書の他の化学用語は、Ｔｈｅ ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｒｍｓ（Ｐａｒｋｅｒ，Ｓ．，Ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ（１９８５））に例示される当技術分野における従来の用法に従って使用される。 Other chemical terms herein are used according to conventional usage in the art as exemplified in The McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (Parker, S., Ed., McGraw-Hill, San Francisco (1985)). be done.

本明細書で使用される「実質的に純粋な」は、対象種が、存在する優勢な種であることを意味し（すなわち、モル基準で、それは組成物中の他の個々のいかなる種よりも豊富である）、いくつかの実施形態では、実質的に精製された画分は、対象種が、存在するすべての高分子種の少なくとも約５０パーセント（モル基準）を占める、組成物である。 As used herein, "substantially pure" means that the species of interest is the predominant species present (i.e., on a molar basis, it is are also abundant), in some embodiments, a substantially purified fraction is a composition in which the species of interest comprises at least about 50 percent (on a molar basis) of all macromolecular species present .

一般的に、実質的に純粋な組成物は、組成物中に存在する全ての高分子種の約８０％超、いくつかの実施形態では、約８５％、９０％、９５％および９９％超を構成するであろう。いくつかの実施形態では、目的種は、本質的な均一性（夾雑種が、通常の検出法によって組成物中で検出できない）へと精製され、組成物が、単一の高分子種から本質的に構成される。 Generally, a substantially pure composition will have greater than about 80%, and in some embodiments greater than about 85%, 90%, 95% and 99% of all macromolecular species present in the composition. would constitute In some embodiments, the species of interest is purified to essential homogeneity (no contaminating species are detectable in the composition by routine detection methods), and the composition is essentially composed of a single macromolecular species. configured

用語「患者」は、ヒトおよび獣医学的対象を含む。 The term "patient" includes human and veterinary subjects.

ＣＤ４７抗体
哺乳動物ＣＤ４７に特異的に結合する抗体およびその抗原結合フラグメント（ＡＢ）が、本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ＡＢは、ヒトＣＤ４７およびカニクイザルＣＤ４７を特異的に結合する。 CD47 Antibodies Antibodies and antigen-binding fragments (ABs) thereof that specifically bind to mammalian CD47 are provided herein. In some embodiments, the AB specifically binds human CD47 and cynomolgus monkey CD47.

ＣＤ４７を結合する本明細書で提供されるＡＢは、モノクローナル抗体、ドメイン抗体、単鎖抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、ｓｃＦｖ、ｓｃＡｂ、ｄＡｂ、単一ドメイン重鎖抗体、または単一ドメイン軽鎖抗体を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７を結合するこのようなＡＢは、マウス、他のげっ歯類、キメラ、ヒト化または完全ヒトモノクローナル抗体である。 The ABs provided herein that bind CD47 can be monoclonal antibodies, domain antibodies, single chain antibodies, Fab fragments, F(ab') 2 fragments, scFvs, scAbs, dAbs, single domain heavy chain antibodies, or single Includes single domain light chain antibodies. In some embodiments, such ABs that bind CD47 are murine, other rodent, chimeric, humanized or fully human monoclonal antibodies.

ＭＭのカップリングがＣＤ４７を結合する抗体またはその抗原結合フラグメントの能力を低減させるように、マスキング部分（ＭＭ）にカップリングされたＣＤ４７を特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ）を含む、活性化可能ＣＤ４７抗体も本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ＭＭは、プロテアーゼ、例えば、対象における治療部位でＣＤ４７と共局在するプロテアーゼの基質（切断可能部分、ＣＭ）を含む配列を介してカップリングされる。（本開示の活性化可能ＣＤ４７抗体は、以下のセクションでさらに詳細に記述される）。 An antibody or antigen-binding fragment thereof (AB) that specifically binds CD47 coupled to a masking moiety (MM) such that coupling of the MM reduces the ability of the antibody or antigen-binding fragment thereof to bind CD47 Also provided herein are activatable CD47 antibodies, including: In some embodiments, the MM is coupled via a sequence that includes a substrate (cleavable moiety, CM) for a protease, eg, a protease that co-localizes with CD47 at the treatment site in the subject. (Activatable CD47 antibodies of the present disclosure are described in further detail in the sections below).

本開示のＣＤ４７抗体は、例えば、ヒトＣＤ４７などの、哺乳動物ＣＤ４７標的を特異的に結合する。本開示には、本開示の抗体および／または本明細書で記載の活性化された活性化可能抗体と同じＣＤ４７エピトープに結合するＣＤ４７抗体およびＡＢも含まれる。本開示には、ＣＤ４７標的、例えば、ヒトＣＤ４７への結合について、本明細書で記載のＣＤ４７抗体と競合するＣＤ４７抗体も含まれる。本開示には、ＣＤ４７標的、例えば、ヒトＣＤ４７への結合について、本明細書で記載のＣＤ４７抗体および／または活性化されたＣＤ４７活性化可能抗体と交差競合する（その結合を阻害する）ＣＤ４７抗体も含まれる。 The CD47 antibodies of this disclosure specifically bind mammalian CD47 targets, eg, human CD47. The disclosure also includes CD47 antibodies and ABs that bind to the same CD47 epitope as the antibodies of the disclosure and/or the activated activatable antibodies described herein. The disclosure also includes CD47 antibodies that compete with the CD47 antibodies described herein for binding to a CD47 target, eg, human CD47. The present disclosure provides a CD47 antibody that cross-competes (inhibits binding thereof) with a CD47 antibody described herein and/or an activated CD47 activatable antibody for binding to a CD47 target, e.g., human CD47. is also included.

本開示の抗体および／または活性化可能抗体は、哺乳動物ＣＤ４７、例えばヒトＣＤ４７およびカニクイザルＣＤ４７を特異的に結合する。本開示には、本明細書で記載の抗体および／または活性化可能抗体のいずれかと同じエピトープに結合する抗体および／または活性化可能抗体も含まれる。本開示には、ＣＤ４７、例えばヒトＣＤ４７への結合について、本明細書で記載のＣＤ４７抗体および／またはＣＤ４７活性化可能抗体と競合する（その結合を阻害する）抗体および／または活性化可能抗体も含まれる。本開示には、ＣＤ４７、例えばヒトＣＤ４７への結合について、本明細書で記載のＣＤ４７抗体および／またはＣＤ４７活性化可能抗体と交差競合する（ＣＤ４７への結合を阻害する）抗体および／または活性化可能抗体も含まれる。 Antibodies and/or activatable antibodies of the present disclosure specifically bind mammalian CD47, eg, human CD47 and cynomolgus monkey CD47. The present disclosure also includes antibodies and/or activatable antibodies that bind to the same epitope as any of the antibodies and/or activatable antibodies described herein. The disclosure also includes antibodies and/or activatable antibodies that compete with (inhibit the binding of) CD47 antibodies and/or CD47 activatable antibodies described herein for binding to CD47, e.g., human CD47. included. The present disclosure includes antibodies that cross-compete (inhibit binding to CD47) and/or activating CD47 antibodies and/or CD47 activatable antibodies described herein for binding to CD47, e.g., human CD47. Antibodies are also included.

いくつかの実施形態では、哺乳動物ＣＤ４７は、ヒトＣＤ４７、マウスＣＤ４７、ラットＣＤ４７、およびカニクイザルＣＤ４７からなる群より選択される。いくつかの実施形態では、ＡＢは、１ｎＭ未満の解離定数でヒトＣＤ４７、マウスＣＤ４７またはカニクイザルＣＤ４７に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、哺乳動物ＣＤ４７は、ヒトＣＤ４７である。 In some embodiments, the mammalian CD47 is selected from the group consisting of human CD47, mouse CD47, rat CD47, and cynomolgus monkey CD47. In some embodiments, the AB specifically binds human CD47, mouse CD47 or cynomolgus monkey CD47 with a dissociation constant of less than 1 nM. In some embodiments, the mammalian CD47 is human CD47.

いくつかの実施形態では、ＡＢは、次の特徴の１つまたは複数を有する：（ａ）ＡＢはヒトＣＤ４７に特異的に結合する；および（ｂ）ＡＢはヒトＣＤ４７およびカニクイザルＣＤ４７に特異的に結合する。 In some embodiments, the AB has one or more of the following characteristics: (a) the AB specifically binds to human CD47; and (b) the AB specifically binds to human CD47 and cynomolgus monkey CD47. Join.

いくつかの実施形態では、ＡＢは、次の特徴の１つまたは複数を有する：（ａ）ＡＢは、ヒトＣＤ４７およびカニクイザルＣＤ４７に特異的に結合する；（ｂ）ＡＢは、哺乳動物ＣＤ４７への、ＣＤ４７の１つまたは複数の天然哺乳動物リガンドの結合を阻害する；（ｃ）ＡＢは、ヒトＣＤ４７への、ＣＤ４７の１つまたは複数の天然ヒトリガンドの結合を阻害する；および（ｄ）ＡＢは、カニクイザルＣＤ４７への、ＣＤ４７の１つまたは複数の天然カニクイザルリガンドの結合を阻害する。 In some embodiments, the AB has one or more of the following characteristics: (a) the AB specifically binds to human CD47 and cynomolgus monkey CD47; (b) the AB binds to mammalian CD47; , inhibits binding of one or more natural mammalian ligands of CD47; (c) AB inhibits binding of one or more natural human ligands of CD47 to human CD47; and (d) AB inhibits binding of one or more natural cynomolgus ligands of CD47 to cynomolgus CD47.

いくつかの実施形態では、ＡＢは、ＣＤ４７のグリコシル化型および脱グリコシル化型の両方を結合する。 In some embodiments, ABs bind both glycosylated and deglycosylated forms of CD47.

いくつかの実施形態では、ＡＢは、５ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、１００ｎＭ以下、５００ｎＭ以下、および／または１０００ｎＭ以下のＥＣ５０で哺乳動物ＣＤ４７に結合する天然リガンドの能力を遮断する。いくつかの実施形態では、ＡＢは、５ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、１００ｎＭ以下、５００ｎＭ以下、および／または１０００ｎＭ以下のＥＣ５０で哺乳動物ＣＤ４７に結合する天然リガンドの能力を遮断する。 In some embodiments, the AB blocks the ability of the natural ligand to bind mammalian CD47 with an EC50 of 5 nM or less, 10 nM or less, 50 nM or less, 100 nM or less, 500 nM or less, and/or 1000 nM or less. In some embodiments, the AB blocks the ability of the natural ligand to bind mammalian CD47 with an EC50 of 5 nM or less, 10 nM or less, 50 nM or less, 100 nM or less, 500 nM or less, and/or 1000 nM or less.

いくつかの実施形態では、ＡＢは、５ｎＭ～１０００ｎＭ、５ｎＭ～５００ｎＭ、５ｎＭ～１００ｎＭ ５ｎＭ～５０ｎＭ、５ｎＭ～１０ｎＭ、１０ｎＭ～１０００ｎＭ、１０ｎＭ～５００ｎＭ、１０ｎＭ～１００ｎＭ １０ｎＭ～５０ｎＭ、５０ｎＭ～１０００ｎＭ、５０ｎＭ～５００ｎＭ、５０ｎＭ～１００ｎＭ、１００ｎＭ～１０００ｎＭ、１００ｎＭ～５００ｎＭ、５００ｎＭ～１０００ｎＭのＥＣ５０で哺乳動物ＣＤ４７に結合する天然リガンドの能力を遮断する。いくつかの実施形態では、ＡＢは、５ｎＭ～１０００ｎＭ、５ｎＭ～５００ｎＭ、５ｎＭ～１００ｎＭ ５ｎＭ～５０ｎＭ、５ｎＭ～１０ｎＭ、１０ｎＭ～１０００ｎＭ、１０ｎＭ～５００ｎＭ、１０ｎＭ～１００ｎＭ １０ｎＭ～５０ｎＭ、５０ｎＭ～１０００ｎＭ、５０ｎＭ～５００ｎＭ、５０ｎＭ～１００ｎＭ、１００ｎＭ～１０００ｎＭ、１００ｎＭ～５００ｎＭ、５００ｎＭ～１０００ｎＭのＥＣ５０で哺乳動物ＣＤ４７に結合する天然リガンドの能力を遮断する。 In some embodiments, AB is 5 nM-1000 nM, 5 nM-500 nM, 5 nM-100 nM 5 nM-50 nM, 5 nM-10 nM, 10 nM-1000 nM, 10 nM-500 nM, 10 nM-100 nM 10 nM-50 nM, 50 nM-1000 nM, 50 nM- Blocks the ability of the natural ligand to bind mammalian CD47 with an EC50 of 500 nM, 50 nM-100 nM, 100 nM-1000 nM, 100 nM-500 nM, 500 nM-1000 nM. In some embodiments, AB is 5 nM-1000 nM, 5 nM-500 nM, 5 nM-100 nM 5 nM-50 nM, 5 nM-10 nM, 10 nM-1000 nM, 10 nM-500 nM, 10 nM-100 nM 10 nM-50 nM, 50 nM-1000 nM, 50 nM- Blocks the ability of the natural ligand to bind mammalian CD47 with an EC50 of 500 nM, 50 nM-100 nM, 100 nM-1000 nM, 100 nM-500 nM, 500 nM-1000 nM.

いくつかの実施形態では、本開示のＡＢは、哺乳動物ＣＤ４７を発現する細胞の成長、増殖、および／または転移を阻害または低減する。いかなる理論にも束縛されることを意図するものではないが、本開示のＡＢは、ＣＤ４７に特異的に結合し、哺乳動物ＣＤ４７ への天然リガンドの結合を阻害、遮断および／または防止することにより、哺乳動物ＣＤ４７を発現する細胞の成長、増殖および／または転移を阻害または低減し得る。 In some embodiments, the ABs of this disclosure inhibit or reduce growth, proliferation, and/or metastasis of cells expressing mammalian CD47. Without intending to be bound by any theory, the ABs of the present disclosure specifically bind CD47 and inhibit, block and/or prevent the binding of natural ligands to mammalian CD47 by can inhibit or reduce the growth, proliferation and/or metastasis of cells expressing mammalian CD47.

いくつかの実施形態では、ＡＢは、哺乳動物ＣＤ４７への結合に関し、約１００ｎＭ以下の解離定数を有する。いくつかの実施形態では、ＡＢは、哺乳動物ＣＤ４７への結合に対し、約１０ｎＭ以下の解離定数を有する。いくつかの実施形態では、ＡＢは、ＣＤ４７への結合に関し、約５ｎＭ以下の解離定数を有する。いくつかの実施形態では、ＡＢは、ＣＤ４７への結合に関し、約１ｎＭ以下の解離定数を有する。いくつかの実施形態では、ＡＢは、ＣＤ４７への結合に関し、約０．５ｎＭ以下の解離定数を有する。いくつかの実施形態では、ＡＢは、ＣＤ４７への結合に関し、約０．１ｎＭ以下の解離定数を有する。いくつかの実施形態では、ＡＢは、哺乳動物ＣＤ４７への結合に関し、０．０１ｎＭ～１００ｎＭ、０．０１ｎＭ～１０ｎＭ、０．０１ｎＭ～５ｎＭ、０．０１ｎＭ～１ｎＭ、０．０１～０．５ｎＭ、０．０１ ｎｍ～０．１ｎＭ、０．０１ ｎｍ～０．０５ｎＭ、０．０５ｎＭ～１００ｎＭ、０．０５ｎＭ～１０ｎＭ、０．０５ｎＭ～５ｎＭ、０．０５ｎＭ～１ｎＭ、０．０５～０．５ｎＭ、０．０５ ｎｍ～０．１ｎＭ、０．１ｎＭ～１００ｎＭ、０．１ｎＭ～１０ｎＭ、０．１ｎＭ～５ｎＭ、０．１ｎＭ～１ｎＭ、０．１～０．５ｎＭ、０．５ｎＭ～１００ｎＭ、０．５ｎＭ～１０ｎＭ、０．５ｎＭ～５ｎＭ、０．５ｎＭ～１ｎＭ、１ｎＭ～１００ｎＭ、１ｎＭ～１０ｎＭ、１ｎＭ～５ｎＭ、５ｎＭ～１００ｎＭ、５ｎＭ～１０ｎＭ、または１０ｎＭ～１００ｎＭの解離定数を有する。 In some embodiments, the AB has a dissociation constant of about 100 nM or less for binding to mammalian CD47. In some embodiments, the AB has a dissociation constant of about 10 nM or less for binding to mammalian CD47. In some embodiments, the AB has a dissociation constant of about 5 nM or less for binding to CD47. In some embodiments, the AB has a dissociation constant of about 1 nM or less for binding to CD47. In some embodiments, the AB has a dissociation constant of about 0.5 nM or less for binding to CD47. In some embodiments, the AB has a dissociation constant of about 0.1 nM or less for binding to CD47. In some embodiments, the AB is 0.01 nM-100 nM, 0.01 nM-10 nM, 0.01 nM-5 nM, 0.01 nM-1 nM, 0.01-0.5 nM for binding to mammalian CD47, 0.01 nm to 0.1 nM, 0.01 nm to 0.05 nM, 0.05 nM to 100 nM, 0.05 nM to 10 nM, 0.05 nM to 5 nM, 0.05 nM to 1 nM, 0.05 to 0.5 nM, 0.05 nm-0.1 nM, 0.1 nM-100 nM, 0.1 nM-10 nM, 0.1 nM-5 nM, 0.1 nM-1 nM, 0.1-0.5 nM, 0.5 nM-100 nM, 0.5 nM It has a dissociation constant of ˜10 nM, 0.5 nM to 5 nM, 0.5 nM to 1 nM, 1 nM to 100 nM, 1 nM to 10 nM, 1 nM to 5 nM, 5 nM to 100 nM, 5 nM to 10 nM, or 10 nM to 100 nM.

本発明の例示的なＣＤ４７抗体および活性化可能ＣＤ４７抗体は、以下に示される重鎖可変および軽鎖可変配列である、またはそれらに由来する、重鎖および軽鎖を含み得る（ＣＤＲ配列は太字および下線で示される）：
ｈｕ Ｈ４Ｌ２ Ｈ４ ＶＨ：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧＲＡＴＬＴＶＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＧＶＧＧＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１）
ｈｕ Ｈ４Ｌ２ Ｌ２ ＶＬ：
ＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号２） Exemplary CD47 and activatable CD47 antibodies of the invention may comprise heavy and light chains that are or are derived from the heavy and light chain variable sequences shown below (CDR sequences are in bold). and underlined):
hu H4L2 H4 VH:
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKLSCKASGYTFTNYWMTWVRQAPGQGLEWIGRIDPYDVETHYAQKFQGRATLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGVGGMDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1)
hu H4L2 L2 VL:
DVVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSIVHSNGNTYLEWYQQKPGQPPKLLIYRVSKRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVGVYYCFQGSHVPRTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 2)

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７抗体／活性化可能抗体の抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１および５７～５９のいずれか１つの重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。 In some embodiments, the CD47 antibody/activatable antibody antibody or antigen-binding fragment thereof comprises the heavy chain variable region amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 1 and 57-59.

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７抗体／活性化可能抗体の抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２および７６～７９のいずれか１つの軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。 In some embodiments, the CD47 antibody/activatable antibody antibody or antigen-binding fragment thereof comprises the light chain variable region amino acid sequence of any one of SEQ ID NOS:2 and 76-79.

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７抗体／活性化可能抗体の抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。 In some embodiments, the CD47 antibody/activatable antibody antibody or antigen-binding fragment thereof comprises the heavy chain variable region amino acid sequence of SEQ ID NO:1.

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７抗体／活性化可能抗体の抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。 In some embodiments, the CD47 antibody/activatable antibody antibody or antigen-binding fragment thereof comprises the light chain variable region amino acid sequence of SEQ ID NO:2.

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７抗体／活性化可能抗体の抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列、および配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。 In some embodiments, the CD47 antibody/activatable antibody antibody or antigen-binding fragment thereof comprises the heavy chain variable region amino acid sequence of SEQ ID NO:1 and the light chain variable region amino acid sequence of SEQ ID NO:2.

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７抗体／活性化可能抗体の抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。 In some embodiments, the CD47 antibody/activatable antibody antibody or antigen-binding fragment thereof has an amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 and at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% %, 97%, 98% or 99% identical heavy chain variable region amino acid sequences.

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７抗体／活性化可能抗体の抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。 In some embodiments, the CD47 antibody/activatable antibody antibody or antigen-binding fragment thereof comprises at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% the amino acid sequence of SEQ ID NO:2 %, 97%, 98% or 99% identical light chain variable region amino acid sequences.

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７抗体／活性化可能抗体の抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である重鎖可変領域アミノ酸配列、および配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。 In some embodiments, the CD47 antibody/activatable antibody antibody or antigen-binding fragment thereof has an amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 and at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% a heavy chain variable region amino acid sequence that is %, 97%, 98% or 99% identical and at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% to the amino acid sequence of SEQ ID NO:2; Includes light chain variable region amino acid sequences that are 97%, 98% or 99% identical.

本発明の例示的なＣＤ４７抗体および活性化可能ＣＤ４７抗体は、可変重鎖相補性決定領域１（ＶＨ ＣＤＲ１、本明細書でＣＤＲＨ１とも呼ばれる）配列、可変重鎖相補性決定領域２（ＶＨ ＣＤＲ２、本明細書でＣＤＲＨ２とも呼ばれる）配列、可変重鎖相補性決定領域３（ＶＨ ＣＤＲ３、本明細書でＣＤＲＨ３とも呼ばれる）配列、可変軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ ＣＤＲ１、本明細書でＣＤＲＬ１とも呼ばれる）配列、可変軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ ＣＤＲ２、本明細書でＣＤＲＬ２とも呼ばれる）配列および可変軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ ＣＤＲ３、本明細書でＣＤＲＬ３とも呼ばれる）配列の組み合わせを含み、少なくとも１つのＣＤＲ配列は、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号３）またはアミノ酸配列ＮＹＷＭＴ（配列番号４）を含むＶＨ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＤＰＹＤＶＥ（配列番号５）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号６）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＮＨＫ（配列番号３９）を含むＶＨ ＣＤＲ２配列；アミノ酸配ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含むＶＨ ＣＤＲ３配列；アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＱＴＹＬＥ（配列番号５５）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＳＴＹＬＥ（配列番号５６）を含むＶＬ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含むＶＬ ＣＤＲ２配列；およびアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含むＶＬ ＣＤＲ３配列からなる群より選択される。 Exemplary CD47 antibodies and activatable CD47 antibodies of the invention have a variable heavy chain complementarity determining region 1 (VH CDR1, also referred to herein as CDRH1) sequence, a variable heavy chain complementarity determining region 2 (VH CDR2, variable heavy chain complementarity determining region 3 (VH CDR3, also referred to herein as CDRH3) sequence; variable light chain complementarity determining region 1 (VL CDR1, also referred to herein as CDRL1) sequence; ) sequence, the combination of the variable light chain complementarity determining region 2 (VL CDR2, also referred to herein as CDRL2) sequence and the variable light chain complementarity determining region 3 (VL CDR3, also referred to herein as CDRL3) sequence at least one CDR sequence is a VH CDR1 sequence comprising the amino acid sequence GYTFTNY (SEQ ID NO:3) or the amino acid sequence NYWMT (SEQ ID NO:4); the amino acid sequence DPYDVE (SEQ ID NO:5) or the amino acid sequence RIDPYDVETHYAQKFQG (SEQ ID NO:6) or VH CDR2 sequence comprising amino acid sequence RIDPYDVETHYNHK (SEQ ID NO:39); VH CDR3 sequence comprising amino acid sequence GGVGGMDY (SEQ ID NO:7); amino acid sequence RSSQSIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO:8) or RSSQSIVHSSSGNTYLE (SEQ ID NO:40) or RSSQSIVHSSSGQTYLE (SEQ ID NO:55) or VL CDR1 sequence comprising RSSQSIVHSSGSTYLE (SEQ ID NO:56); VL CDR2 sequence comprising amino acid sequence RVSKRFS (SEQ ID NO:9); and VL CDR3 sequence comprising amino acid sequence FQGSHVPRT (SEQ ID NO:10).

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＶＨ ＣＤＲ１配列、ＶＨ ＣＤＲ２配列、ＶＨ ＣＤＲ３配列、ＶＬ ＣＤＲ１配列、ＶＬ ＣＤＲ２配列、およびＶＬ ＣＤＲ３配列の組み合わせを含み、少なくとも１つのＣＤＲ配列は、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号３）またはアミノ酸配列ＮＹＷＭＴ（配列番号４）を含むＶＨ ＣＤＲ１配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一である配列を含むＶＨ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配列ＤＰＹＤＶＥ（配列番号５）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号６）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＮＨＫ（配列番号３９）を含むＶＨ ＣＤＲ２配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一である配列を含むＶＨ ＣＤＲ２配列；アミノ酸配列ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含むＶＨ ＣＤＲ３配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一である配列を含むＶＨ ＣＤＲ３配列；アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＱＴＹＬＥ（配列番号５５）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＳＴＹＬＥ（配列番号５６）を含むＶＬ ＣＤＲ１配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一である配列を含むＶＬ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配列ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含むＶＬ ＣＤＲ２配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一である配列を含むＶＬ ＣＤＲ２配列；およびアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含むＶＬ ＣＤＲ３配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一である配列を含むＶＬ ＣＤＲ３配列からなる群より選択される。 In some embodiments, the CD47 antibody or antigen-binding fragment thereof comprises a combination of VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, and VL CDR3 sequences, wherein at least one CDR sequence is is at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% with a VH CDR1 sequence comprising the amino acid sequence GYTFTNY (SEQ ID NO:3) or the amino acid sequence NYWMT (SEQ ID NO:4); a VH CDR1 sequence comprising a sequence that is 98%, 99% or more identical; a VH CDR2 comprising the amino acid sequence DPYDVE (SEQ ID NO:5) or the amino acid sequence RIDPYDVETHYAQKFQG (SEQ ID NO:6) or the amino acid sequence RIDPYDVETHYNHK (SEQ ID NO:39) A VH CDR2 sequence comprising a sequence that is at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more identical to the sequence; the amino acid sequence GGVGGMDY A sequence that is at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more identical to a VH CDR3 sequence comprising (SEQ ID NO: 7) at least 90%, 91%, 92% with a VL CDR1 sequence comprising the amino acid sequence RSSQSIVHSSNGNTYLE (SEQ ID NO: 8) or RSSQSIVHSSGNTYLE (SEQ ID NO: 40) or RSSQSIVHSSGQTYLE (SEQ ID NO: 55) or RSSQSIVHSSGSTYLE (SEQ ID NO: 56) , 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more identical; a VL CDR2 sequence comprising the amino acid sequence RVSKRFS (SEQ ID NO: 9); a VL CDR2 sequence comprising a sequence that is at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more identical; and the amino acid sequence FQGSHVPRT ( a sequence that is at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more identical to the VL CDR3 sequence comprising SEQ ID NO: 10) is selected from the group consisting of the VL CDR3 sequences comprising

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７抗体またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号３）またはアミノ酸配列ＮＹＷＭＴ（配列番号４）を含むＶＨ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＤＰＹＤＶＥ（配列番号５）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号６）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＮＨＫ（配列番号３９）を含むＶＨ ＣＤＲ２配列；アミノ酸配ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含むＶＨ ＣＤＲ３配列；アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＱＴＹＬＥ（配列番号５５）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＳＴＹＬＥ（配列番号５６）を含むＶＬ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含むＶＬ ＣＤＲ２配列；およびアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含むＶＬ ＣＤＲ３配列を含む、ＶＨ ＣＤＲ１配列、ＶＨ ＣＤＲ２配列、ＶＨ ＣＤＲ３配列、ＶＬ ＣＤＲ１配列、ＶＬ ＣＤＲ２配列およびＶＬ ＣＤＲ３配列の組み合わせを含む。 In some embodiments, the CD47 antibody or antigen-binding fragment thereof has a VH CDR1 sequence comprising the amino acid sequence GYTFTNY (SEQ ID NO:3) or the amino acid sequence NYWMT (SEQ ID NO:4); VH CDR2 sequence comprising RIDPYDVETHYAQKFQG (SEQ ID NO: 6) or amino acid sequence RIDPYDVETHYNHK (SEQ ID NO: 39); VH CDR3 sequence comprising amino acid sequence GGVGGGMDY (SEQ ID NO: 7); amino acid sequence RSSQSIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO: 8) or RSSQSIVHSSSGNTYLE (SEQ ID NO: 40) or a VL CDR1 sequence comprising RSSQSIVHSSGQTYLE (SEQ ID NO: 55) or RSSQSIVHSSGSTYLE (SEQ ID NO: 56); a VL CDR2 sequence comprising amino acid sequence RVSKRFS (SEQ ID NO: 9); and a VL CDR3 sequence comprising amino acid sequence FQGSHVPRT (SEQ ID NO: 10). , VH CDR1 sequences, VH CDR2 sequences, VH CDR3 sequences, VL CDR1 sequences, VL CDR2 sequences and combinations of VL CDR3 sequences.

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７抗体またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号３）を含むＶＨ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＤＰＹＤＶＥ（配列番号５）を含むＶＨ ＣＤＲ２配列；アミノ酸配ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含むＶＨ ＣＤＲ３配列；アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）を含むＶＬ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含むＶＬ ＣＤＲ２配列；およびアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含むＶＬ ＣＤＲ３配列を含むアミノ酸配列を含む。 In some embodiments, the CD47 antibody or antigen-binding fragment thereof has a VH CDR1 sequence comprising the amino acid sequence GYTFTNY (SEQ ID NO:3); a VH CDR2 sequence comprising the amino acid sequence DPYDVE (SEQ ID NO:5); VL CDR1 sequence comprising amino acid sequence RSSQSIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO:8); VL CDR2 sequence comprising amino acid sequence RVSKRFS (SEQ ID NO:9); and VL CDR3 sequence comprising amino acid sequence FQGSHVPRT (SEQ ID NO:10). containing an amino acid sequence containing

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７抗体またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列ＮＹＷＭＴ（配列番号４）を含むＶＨ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号６）を含むＶＨ ＣＤＲ２配列；アミノ酸配ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含むＶＨ ＣＤＲ３配列；アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）を含むＶＬ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含むＶＬ ＣＤＲ２配列；およびアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含むＶＬ ＣＤＲ３配列を含むアミノ酸配列を含む。 In some embodiments, the CD47 antibody or antigen-binding fragment thereof has a VH CDR1 sequence comprising the amino acid sequence NYWMT (SEQ ID NO:4); a VH CDR2 sequence comprising the amino acid sequence RIDPYDVETHYAQKFQG (SEQ ID NO:6); VL CDR1 sequence comprising amino acid sequence RSSQSIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO:8); VL CDR2 sequence comprising amino acid sequence RVSKRFS (SEQ ID NO:9); and VL CDR3 sequence comprising amino acid sequence FQGSHVPRT (SEQ ID NO:10). containing an amino acid sequence containing

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７抗体またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号３）またはアミノ酸配列ＮＹＷＭＴ（配列番号４）を含むＶＨ ＣＤＲ１配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一である配列を含むＶＨ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配列ＤＰＹＤＶＥ（配列番号５）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号６）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＮＨＫ（配列番号３９）を含むＶＨ ＣＤＲ２配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一である配列を含むＶＨ ＣＤＲ２配列；アミノ酸配列ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含むＶＨ ＣＤＲ３配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一である配列を含むＶＨ ＣＤＲ３配列；アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＱＴＹＬＥ（配列番号５５）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＳＴＹＬＥ（配列番号５６）を含むＶＬ ＣＤＲ１配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一である配列を含むＶＬ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配列ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含むＶＬ ＣＤＲ２配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一である配列を含むＶＬ ＣＤＲ２配列；およびアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含むＶＬ ＣＤＲ３配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一である配列を含むＶＬ ＣＤＲ３配列を含む、ＶＨ ＣＤＲ１配列、ＶＨ ＣＤＲ２配列、ＶＨ ＣＤＲ３配列、ＶＬ ＣＤＲ１配列、ＶＬ ＣＤＲ２配列、およびＶＬ ＣＤＲ３配列の組み合わせを含む。 In some embodiments, the CD47 antibody or antigen-binding fragment thereof is at least 90%, 91%, 92%, 93% with a VH CDR1 sequence comprising the amino acid sequence GYTFTNY (SEQ ID NO:3) or the amino acid sequence NYWMT (SEQ ID NO:4). %, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more of a VH CDR1 sequence; ) or at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more of a VH CDR2 sequence comprising the amino acid sequence RIDPYDVETHYNHK (SEQ ID NO:39) at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, to a VH CDR3 sequence comprising the amino acid sequence GGVGGMDY (SEQ ID NO: 7); a VH CDR3 sequence comprising a sequence that is 98%, 99% or more identical; the amino acid sequence RSSQSIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO:8) or RSSQSIVHSSGNTYLE (SEQ ID NO:40) or RSSQSIVHSSGQTYLE (SEQ ID NO:55) or RSSQSIVHSSSGSTYLE (SEQ ID NO:56); a VL CDR1 sequence comprising a sequence that is at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more identical to a VL CDR1 sequence comprising; at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more identical to the VL CDR2 sequence comprising the amino acid sequence RVSKRFS (SEQ ID NO: 9) and a VL CDR3 sequence comprising the amino acid sequence FQGSHVPRT (SEQ ID NO: 10) and at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% VH CDR1 sequences, VH CDR2 sequences, VH CDR3 sequences, VL CDR1 sequences, VL CDR2 sequences, and combinations of VL CDR3 sequences, including VL CDR3 sequences comprising sequences that are %, 99% or more identical.

本開示の好適なＣＤ４７抗体はまた、ヒトＣＤ４７および／またはカニクイザルＣＤ４７上の、配列番号１および５７～５９のいずれか１つの重鎖可変領域アミノ酸配列、および配列番号２および７６～７９のいずれか１つの軽鎖可変領域アミノ酸配列を含むＣＤ４７抗体と同じエピトープに結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。 Preferred CD47 antibodies of this disclosure also include the heavy chain variable region amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 1 and 57-59 and any of SEQ ID NOs: 2 and 76-79 on human CD47 and/or cynomolgus monkey CD47. Antibodies or antigen-binding fragments thereof that bind to the same epitope as a CD47 antibody comprising one light chain variable region amino acid sequence.

本開示の好適なＣＤ４７抗体はまた、ヒトＣＤ４７および／またはカニクイザルＣＤ４７上の、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列、および配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含むＣＤ４７抗体と同じエピトープに結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。 Preferred CD47 antibodies of the present disclosure are also directed to the same epitope as a CD47 antibody comprising the heavy chain variable region amino acid sequence of SEQ ID NO:1 and the light chain variable region amino acid sequence of SEQ ID NO:2 on human CD47 and/or cynomolgus monkey CD47. A binding antibody or antigen-binding fragment thereof is included.

本開示の好適なＣＤ４７抗体はまた、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号３）またはアミノ酸配列ＮＹＷＭＴ（配列番号４）を含むＶＨ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＤＰＹＤＶＥ（配列番号５）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号６）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＮＨＫ（配列番号３９）を含むＶＨ ＣＤＲ２配列；アミノ酸配ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含むＶＨ ＣＤＲ３配列；アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＱＴＹＬＥ（配列番号５５）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＳＴＹＬＥ（配列番号５６）を含むＶＬ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含むＶＬ ＣＤＲ２配列；およびアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含むＶＬ ＣＤＲ３配列を含む、ＣＤ４７抗体と同じヒトＣＤ４７および／またはカニクイザルＣＤ４７上のエピトープに結合する抗体またはその抗原結合フラグメントも含む。 Preferred CD47 antibodies of this disclosure also have a VH CDR1 sequence comprising the amino acid sequence GYTFTNY (SEQ ID NO:3) or the amino acid sequence NYWMT (SEQ ID NO:4); or a VH CDR2 sequence comprising the amino acid sequence RIDPYDVETHYNHK (SEQ ID NO:39); a VH CDR3 sequence comprising the amino acid sequence GGVGGMDY (SEQ ID NO:7); an amino acid sequence RSSQSIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO:8) or RSSQSIVHSSSGNTYLE (SEQ ID NO:40) or RSSQSIVHSSSGQTYLE (SEQ ID NO:55) ) or RSSQSIVHSSGSTYLE (SEQ ID NO: 56); a VL CDR2 sequence comprising the amino acid sequence RVSKRFS (SEQ ID NO: 9); and a VL CDR3 sequence comprising the amino acid sequence FQGSHVPRT (SEQ ID NO: 10). Also included are antibodies or antigen-binding fragments thereof that bind to an epitope on CD47 and/or cynomolgus monkey CD47.

本開示の好適なＣＤ４７抗体はまた、配列番号１および５７～５９のいずれか１つの重鎖可変領域アミノ酸配列、および配列番号２および７６～７９のいずれか１つの軽鎖可変領域アミノ酸配列を含むＣＤ４７抗体と、ヒトＣＤ４７および／またはカニクイザルＣＤ４７への結合について交差競合する（その結合を阻害する）抗体またはその抗原結合フラグメントも含む。 Preferred CD47 antibodies of this disclosure also comprise a heavy chain variable region amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 1 and 57-59 and a light chain variable region amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 2 and 76-79. Also included are antibodies or antigen-binding fragments thereof that cross-compete with (inhibit the binding of) CD47 antibodies for binding to human CD47 and/or cynomolgus monkey CD47.

本開示の好適なＣＤ４７抗体はまた、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列、および配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含むＣＤ４７抗体と、ヒトＣＤ４７および／またはカニクイザルＣＤ４７への結合について交差競合する（その結合を阻害する）抗体またはその抗原結合フラグメントも含む。 A preferred CD47 antibody of the present disclosure also crosses a CD47 antibody comprising the heavy chain variable region amino acid sequence of SEQ ID NO:1 and the light chain variable region amino acid sequence of SEQ ID NO:2 for binding to human CD47 and/or cynomolgus monkey CD47. Competing (inhibiting its binding) antibodies or antigen-binding fragments thereof are also included.

本開示の好適なＣＤ４７抗体はまた、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号３）またはアミノ酸配列ＮＹＷＭＴ（配列番号４）を含むＶＨ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＤＰＹＤＶＥ（配列番号５）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号６）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＮＨＫ（配列番号３９）を含むＶＨ ＣＤＲ２配列；アミノ酸配ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含むＶＨ ＣＤＲ３配列；アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＱＴＹＬＥ（配列番号５５）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＳＴＹＬＥ（配列番号５６）を含むＶＬ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含むＶＬ ＣＤＲ２配列；およびアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含むＶＬ ＣＤＲ３配列を含む、ＣＤ４７抗体と、ヒトＣＤ４７および／またはカニクイザルＣＤ４７への結合について交差競合する（その結合を阻害する）抗体またはその抗原結合フラグメントも含む。 Preferred CD47 antibodies of this disclosure also have a VH CDR1 sequence comprising the amino acid sequence GYTFTNY (SEQ ID NO:3) or the amino acid sequence NYWMT (SEQ ID NO:4); or a VH CDR2 sequence comprising the amino acid sequence RIDPYDVETHYNHK (SEQ ID NO:39); a VH CDR3 sequence comprising the amino acid sequence GGVGGMDY (SEQ ID NO:7); an amino acid sequence RSSQSIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO:8) or RSSQSIVHSSSGNTYLE (SEQ ID NO:40) or RSSQSIVHSSSGQTYLE (SEQ ID NO:55) ) or RSSQSIVHSSGSTYLE (SEQ ID NO: 56); a VL CDR2 sequence comprising the amino acid sequence RVSKRFS (SEQ ID NO: 9); and a VL CDR3 sequence comprising the amino acid sequence FQGSHVPRT (SEQ ID NO: 10); Also included are antibodies or antigen-binding fragments thereof that cross-compete for binding to (inhibit the binding of) CD47 and/or cynomolgus monkey CD47.

いくつかの実施形態では、本開示のＣＤ４７抗体は、哺乳動物ＣＤ４７に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ）を含み、ＡＢは、ヒトＣＤ４７およびカニクイザルＣＤ４７を特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号３）またはアミノ酸配列ＮＹＷＭＴ（配列番号４）を含むＶＨ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＤＰＹＤＶＥ（配列番号５）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号６）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＮＨＫ（配列番号３９）を含むＶＨ ＣＤＲ２配列；アミノ酸配ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含むＶＨ ＣＤＲ３配列；アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＱＴＹＬＥ（配列番号５５）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＳＴＹＬＥ（配列番号５６）を含むＶＬ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含むＶＬ ＣＤＲ２配列；およびアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含むＶＬ ＣＤＲ３配列を含む。 いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。 In some embodiments, the CD47 antibodies of this disclosure comprise an isolated antibody or antigen-binding fragment thereof (AB) that specifically binds mammalian CD47, wherein the AB specifically binds human CD47 and cynomolgus monkey CD47. do. In some embodiments, the antibody or antigen-binding fragment thereof has a VH CDR1 sequence comprising the amino acid sequence GYTFTNY (SEQ ID NO:3) or the amino acid sequence NYWMT (SEQ ID NO:4); (SEQ ID NO:6) or the amino acid sequence RIDPYDVETHYNHK (SEQ ID NO:39); the VH CDR3 sequence containing the amino acid sequence GGVGGMDY (SEQ ID NO:7); the amino acid sequence RSSQSIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO:8) or RSSQSIVHSSGNTYLE (SEQ ID NO:40) or VL CDR1 sequences comprising RSSQSIVHSSGQTYLE (SEQ ID NO:55) or RSSQSIVHSSGSTYLE (SEQ ID NO:56); VL CDR2 sequences comprising amino acid sequence RVSKRFS (SEQ ID NO:9); and VL CDR3 sequences comprising amino acid sequence FQGSHVPRT (SEQ ID NO:10). In some embodiments, the antibody or antigen-binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:1 and a light chain variable region comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:2.

いくつかの実施形態では、単離抗体またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号３）またはアミノ酸配列ＮＹＷＭＴ（配列番号４）を含むＶＨ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＤＰＹＤＶＥ（配列番号５）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号６）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＮＨＫ（配列番号３９）を含むＶＨ ＣＤＲ２配列；アミノ酸配ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含むＶＨ ＣＤＲ３配列；アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＱＴＹＬＥ（配列番号５５）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＳＴＹＬＥ（配列番号５６）を含むＶＬ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含むＶＬ ＣＤＲ２配列；およびアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含むＶＬ ＣＤＲ３配列を含む、単離抗体と同じ、ヒトＣＤ４７および／またはカニクイザルＣＤ４７上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。 In some embodiments, the isolated antibody or antigen-binding fragment thereof has a VH CDR1 sequence comprising the amino acid sequence GYTFTNY (SEQ ID NO:3) or the amino acid sequence NYWMT (SEQ ID NO:4); VH CDR2 sequences comprising the sequence RIDPYDVETHYAQKFQG (SEQ ID NO: 6) or the amino acid sequence RIDPYDVETHYNHK (SEQ ID NO: 39); VH CDR3 sequences comprising the amino acid sequence GGVGGMDY (SEQ ID NO: 7); amino acid sequences RSSQSIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO: 8) or RSSQSIVHSSGNTYLE (SEQ ID NO: 40). ) or RSSQSIVHSSGQTYLE (SEQ ID NO: 55) or RSSQSIVHSSGSTYLE (SEQ ID NO: 56); VL CDR2 sequence comprising amino acid sequence RVSKRFS (SEQ ID NO: 9); binds to the same epitope on human CD47 and/or cynomolgus monkey CD47 as the isolated antibody. In some embodiments, the antibody or antigen-binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:1 and a light chain variable region comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:2.

いくつかの実施形態では、単離抗体またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号３）またはアミノ酸配列ＮＹＷＭＴ（配列番号４）を含むＶＨ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＤＰＹＤＶＥ（配列番号５）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号６）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＮＨＫ（配列番号３９）を含むＶＨ ＣＤＲ２配列；アミノ酸配ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含むＶＨ ＣＤＲ３配列；アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＱＴＹＬＥ（配列番号５５）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＳＴＹＬＥ（配列番号５６）を含むＶＬ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含むＶＬ ＣＤＲ２配列；およびアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含むＶＬ ＣＤＲ３配列を含む、単離抗体と、交差競合する（その結合を阻害する）。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。 In some embodiments, the isolated antibody or antigen-binding fragment thereof has a VH CDR1 sequence comprising the amino acid sequence GYTFTNY (SEQ ID NO:3) or the amino acid sequence NYWMT (SEQ ID NO:4); VH CDR2 sequences comprising the sequence RIDPYDVETHYAQKFQG (SEQ ID NO: 6) or the amino acid sequence RIDPYDVETHYNHK (SEQ ID NO: 39); VH CDR3 sequences comprising the amino acid sequence GGVGGMDY (SEQ ID NO: 7); amino acid sequences RSSQSIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO: 8) or RSSQSIVHSSGNTYLE (SEQ ID NO: 40). ) or RSSQSIVHSSGQTYLE (SEQ ID NO: 55) or RSSQSIVHSSGSTYLE (SEQ ID NO: 56); VL CDR2 sequence comprising amino acid sequence RVSKRFS (SEQ ID NO: 9); cross-compete with (inhibit its binding to) the isolated antibody, including In some embodiments, the antibody or antigen-binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:1 and a light chain variable region comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:2.

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７抗体／活性化可能ＣＤ４７抗体は、例えば、米国特許第５，３３０，８９６号に開示され、寄託番号ＨＢ８２１４でＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマなどの、ハイブリドーマにより製造、分泌、あるいは産生される抗体を含むか、またはそれに由来する。 In some embodiments, the CD47 antibody/activatable CD47 antibody is produced and secreted by a hybridoma, such as the hybridoma disclosed in U.S. Pat. No. 5,330,896 and deposited with the ATCC under deposit number HB8214. , or comprising or derived from antibodies produced.

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７抗体／活性化可能ＣＤ４７抗体は、例えば、米国特許第７，７３６，６４７号において開示され、番号ＣＮＣＭ Ｉ－３４４９として２００５年６月１４日付でＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｎａｔｉｏｎａｌｅ ｄｅ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ ｄｅ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｓ（ＣＮＣＭ）（Ｉｎｓｔｉｔｕｔ Ｐａｓｔｅｕｒ，Ｐａｒｉｓ，Ｆｒａｎｃｅ，２５，Ｒｕｅ ｄｕ Ｄｏｃｔｅｕｒ Ｒｏｕｘ，Ｆ－７５７２４，Ｐａｒｉｓ，Ｃｅｄｅｘ １５）に寄託されたＢＡ１２０と命名されたハイブリドーマ；米国特許第７，５７２，８９５号において開示され、ＰＴＡ－６０５５としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマ；国際公開第２０１４／０２０１４０号および同第２００５／１１１０８２号で開示され、番号１－２６６５として２００１年５月１０日付でＣＮＣＭに寄託されたハイブリドーマ；米国特許第４，４３４，１５６号で開示され、ＨＢ－８０９４としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマ；米国特許第５，６４８，４６９号で開示され、ＨＢ－１１６１およびＨＢ－１１６０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマなどの、ハイブリドーマにより製造され、分泌され、あるいは産生される抗体を含むか、またはそれに由来する。 In some embodiments, the CD47 antibody/activatable CD47 antibody is disclosed, for example, in US Pat. Hybridoma named BA120 deposited with Microorganismes (CNCM) (Institut Pasteur, Paris, France, 25, Rue du Doctor Roux, F-75724, Paris, Cedex 15); disclosed in US Pat. No. 7,572,895 and deposited with the ATCC as PTA-6055; hybridomas disclosed in WO 2014/020140 and WO 2005/111082 and deposited with the CNCM on May 10, 2001 under numbers 1-2665; Hybridomas disclosed in US Pat. No. 4,434,156 and deposited with ATCC as HB-8094; hybridomas disclosed in US Pat. No. 5,648,469 and deposited with ATCC as HB-1161 and HB-1160 It includes or is derived from, such as a hybridoma, an antibody produced, secreted or produced by a hybridoma.

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７抗体／活性化可能ＣＤ４７抗体は、国際公開第２０１４／１４４０６０号、同第２０１４／１８９９７３号、同第２０１４／０２０１４０号、米国特許第８，６６３，５９８号；同第８，１２９，５０３号；同第７，７３６，６４７号；同第７，５７２，８９５号；同第４，４３４，１５６号で；米国特許出願公開第２０１４１１４０５４号、同第２０１４０２１２４２３号、同第２０１３１７７５７９号、同第２０１３０４５２０６号、同第２０１３０２１６４７６号、同第２０１２０２８２１７６号で、および／または中国特許第ＣＮ１６２４５１０７Ｂ号で示される重鎖アミノ酸配列を含むか、またはそれに由来する重鎖を含み、これら特許文献のそれぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。 In some embodiments, the CD47 antibody/activatable CD47 antibody is described in WO2014/144060; 8,129,503; 7,736,647; 7,572,895; 4,434,156; 2013177579, 2013045206, 20130216476, 20120282176, and/or a heavy chain derived from or comprising a heavy chain amino acid sequence shown in Chinese patent CN16245107B, The contents of each of the documents are hereby incorporated by reference in their entirety.

本開示はまた、抗体またはそのフラグメントの発現をもたらす条件下で細胞を培養することにより本開示のＣＤ４７ ＡＢを産生する方法を提供し、細胞は、本開示の核酸分子または本開示のベクターを含む。 The disclosure also provides methods of producing a CD47 AB of the disclosure by culturing the cell under conditions conducive to expression of the antibody or fragment thereof, the cell comprising a nucleic acid molecule of the disclosure or a vector of the disclosure. .

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１を含むアミノ酸配列を含む重鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によりコードされる。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１～１４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によりコードされる。 In some embodiments, the CD47 antibody or antigen-binding fragment thereof is encoded by a nucleic acid sequence comprising a nucleic acid sequence encoding a heavy chain variable region amino acid sequence comprising an amino acid sequence comprising SEQ ID NO:1. In some embodiments, the antibody or antigen-binding fragment thereof is encoded by a nucleic acid sequence comprising a nucleic acid sequence encoding a heavy chain amino acid sequence comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 11-14.

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によりコードされる。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によりコードされる。 In some embodiments, the CD47 antibody or antigen-binding fragment thereof is encoded by a nucleic acid sequence comprising a nucleic acid sequence encoding a light chain variable region amino acid sequence comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:2. In some embodiments, the antibody or antigen-binding fragment thereof is encoded by a nucleic acid sequence comprising a nucleic acid sequence encoding a light chain amino acid sequence comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:15.

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である核酸配列を含む核酸配列によりコードされる。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１～１４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である核酸配列を含む核酸配列によりコードされる。 In some embodiments, the CD47 antibody or antigen-binding fragment thereof is at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, a nucleic acid sequence encoding a heavy chain variable region amino acid sequence comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:1 %, 95%, 96%, 97%, 98% or 99% identical nucleic acid sequences. In some embodiments, the antibody or antigen-binding fragment thereof is at least 90%, 91%, 92% with a nucleic acid sequence encoding a heavy chain amino acid sequence comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 11-14 , 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% or 99% identical nucleic acid sequences.

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である核酸配列を含む核酸配列によりコードされる。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である核酸配列を含む核酸配列によりコードされる。 In some embodiments, the CD47 antibody or antigen-binding fragment thereof is at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94% with a nucleic acid sequence encoding a light chain variable region amino acid sequence comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:2. %, 95%, 96%, 97%, 98% or 99% identical nucleic acid sequences. In some embodiments, the antibody or antigen-binding fragment thereof is at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, a nucleic acid sequence encoding a light chain amino acid sequence comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:15 %, 96%, 97%, 98% or 99% identical nucleic acid sequences.

活性化可能ＣＤ４７抗体
上記のように、本開示はまた、マスキング部分（ＭＭ）のカップリングがＣＤ４７を結合する抗体またはその抗原結合フラグメントの能力を低減させるような、ＭＭにカップリングされたＣＤ４７を特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを含む活性化可能抗体を提供する。いくつかの実施形態では、ＭＭは、プロテアーゼの基質（ＣＭ、切断可能部分）、例えば、患部組織において活性であるプロテアーゼおよび／または対象における治療部位でＣＤ４７と共存するプロテアーゼを含む配列を介してカップリングされる。本明細書で提供される活性化可能ＣＤ４７抗体は、循環中で安定であり、目的の治療部位および／または診断部位で活性化されるが、しかし正常な、例えば健常な組織または治療および／または診断の標的とされない他の組織では活性化されず、活性化されると、対応する、本明細書で親抗体とも呼ばれる、非修飾抗体に少なくとも匹敵するＣＤ４７への結合を示す。 Activatable CD47 Antibodies As noted above, the present disclosure also provides CD47 coupled to MM, such that coupling of the masking moiety (MM) reduces the ability of the antibody or antigen-binding fragment thereof to bind CD47. An activatable antibody is provided that includes an antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds. In some embodiments, the MM is coupled via a sequence comprising a protease substrate (CM, cleavable moiety), e.g., a protease that is active in diseased tissue and/or a protease that coexists with CD47 at the treatment site in a subject. be ringed. The activatable CD47 antibodies provided herein are stable in circulation and activated at the therapeutic and/or diagnostic site of interest, but in normal, e.g., healthy tissue or therapeutic and/or It is not activated in other tissues not targeted for diagnosis and, when activated, exhibits binding to CD47 that is at least comparable to the corresponding unmodified antibody, also referred to herein as the parent antibody.

本明細書で記載の活性化可能ＣＤ４７抗体は、抗体治療薬、特にインビボで少なくともある程度まで毒性であることが知られる抗体治療薬の制限を克服する。標的を介した毒性は、治療用抗体の開発にとって大きな制限となる。本明細書で提供される活性化可能ＣＤ４７抗体は、従来の治療用抗体による正常組織における標的の阻害に関連する毒性に対処するように設計される。これらの活性化可能ＣＤ４７抗体は、疾患部位でタンパク質分解的に活性化されるまでマスクされたままである。親治療用抗体としてのＣＤ４７抗体で始め、本発明の活性化可能ＣＤ４７抗体は、プロテアーゼ基質を組み入れるリンカーを介して阻害性マスクに抗体をカップリングすることにより設計された。 The activatable CD47 antibodies described herein overcome limitations of antibody therapeutics, particularly those known to be toxic in vivo, at least to some extent. Target-mediated toxicity is a major limitation for the development of therapeutic antibodies. The activatable CD47 antibodies provided herein are designed to address toxicities associated with target inhibition in normal tissues by conventional therapeutic antibodies. These activatable CD47 antibodies remain masked until proteolytically activated at the disease site. Starting with the CD47 antibody as the parent therapeutic antibody, the activatable CD47 antibodies of the invention were designed by coupling the antibody to an inhibitory mask via a linker incorporating a protease substrate.

本明細書で用いられる場合、活性化可能抗体の切断状態という用語は、少なくとも１種のプロテアーゼによるＣＭの修飾後の活性化可能抗体の状態を指す。非切断状態という用語は、本明細書で用いられる場合、プロテアーゼによるＣＭの切断のない活性化可能抗体の状態を指す。上で考察されたように、用語「活性化可能抗体（ａｃｔｉｖａｔａｂｌｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」は、その切断されていない（天然の）状態およびその切断された状態の両方での活性化可能抗体を指すために本明細書で使用される。いくつかの実施形態では、切断された活性化可能抗体は、プロテアーゼによるＣＭの切断のためにＭＭを欠き、少なくともＭＭの放出を生じる（例えば、その場合、ＭＭは共有結合（例えば、システイン残基間のジスルフィド結合）により活性化可能抗体に結合されない）ことは、当業者に明らかであろう。 As used herein, the term cleavage state of an activatable antibody refers to the state of an activatable antibody after modification of CM by at least one protease. The term uncleaved state, as used herein, refers to the state of an activatable antibody without protease cleavage of CM. As discussed above, the term "activatable antibody" is used herein to refer to an activatable antibody in both its uncleaved (native) state and its cleaved state. used in the specification. In some embodiments, the cleaved activatable antibody lacks the MM due to protease cleavage of the CM, resulting in the release of at least the MM (e.g., where the MM is a covalent bond (e.g., a cysteine residue It will be apparent to those skilled in the art that the disulfide bond between the

活性化可能または切り替え可能とは、活性化可能抗体は、活性化可能抗体が阻害された、マスクされた、または非切断の状態（すなわち、第１のコンフォメーション）にある場合、標的への結合の第１のレベルを示し、阻害されず、マスクされず、および／または切断された状態（すなわち、第２のコンフォメーション）にある場合は、標的への結合の第２のレベルを示し、標的結合の第２のレベルが結合の第１のレベルよりも高いことを意味する。一般に、活性化可能抗体のＡＢに対する標的のアクセスは、ＣＭを切断できる切断剤、すなわちプロテアーゼの存在下では、そのような切断剤の非存在下よりも大きい。従って、活性化可能抗体が非切断状態下にある場合、ＡＢは標的結合から阻害され、標的結合からマスクされ得（すなわち、第１のコンフォメーションは、ＡＢが標的を結合できないようなものである）、切断された状態下で、ＡＢは阻害されず、または標的結合に対しマスクされない。 Activatable or switchable means that an activatable antibody binds to a target when the activatable antibody is in an inhibited, masked, or uncleaved state (i.e., first conformation). and when in an uninhibited, unmasked and/or cleaved state (i.e., second conformation), indicates a second level of binding to the target, the target It means that the second level of binding is higher than the first level of binding. In general, target access of an activatable antibody to an AB is greater in the presence of a cleaving agent capable of cleaving CM, ie, a protease, than in the absence of such a cleaving agent. Thus, when the activatable antibody is in an uncleaved state, the ABs can be inhibited from target binding and masked from target binding (i.e., the first conformation is such that the ABs are unable to bind the target). ), under cleaved conditions, AB is not inhibited or masked to target binding.

活性化可能抗体のＣＭおよびＡＢは、ＡＢが所定の標的に対する結合部分であり、ＣＭがプロテアーゼに対する基質であるように選択される。いくつかの実施形態では、プロテアーゼは、対象における治療部位または診断部位で標的と共局在する。本明細書で用いられる場合、共局在は、同じ部位または相対的にすぐ近くにあることをいう。いくつかの実施形態では、プロテアーゼはＣＭを切断し、切断部位の近くに位置する標的に結合する活性化抗体を生じる。本明細書で開示される活性化可能抗体は、例えば、ＣＭ中の部位を切断できるプロテアーゼ、すなわちプロテアーゼが、治療部位または診断部位の標的含有組織において、非治療部位の組織において（例えば、健常組織において）より相対的に高いレベルで存在する場合に特定の用途がある。いくつかの実施形態では、本開示のＣＭはまた、１種または複数の他のプロテアーゼによって切断される。いくつかの実施形態では、標的と共局在しインビボでＣＭの切断を担うのは１個または複数の他のプロテアーゼである。 The CM and AB of an activatable antibody are selected such that AB is the binding portion for the desired target and CM is the substrate for the protease. In some embodiments, the protease co-localizes with the target at the therapeutic or diagnostic site in the subject. As used herein, co-localization refers to being at the same site or in relatively close proximity. In some embodiments, the protease cleaves the CM, producing an activated antibody that binds to targets located near the cleavage site. The activatable antibodies disclosed herein are, for example, proteases capable of cleaving sites in CM, i.e., proteases, in target-containing tissue at therapeutic or diagnostic sites, in tissue at non-therapeutic sites (e.g., healthy tissue). has particular use when present at relatively higher levels. In some embodiments, the CMs of this disclosure are also cleaved by one or more other proteases. In some embodiments, it is one or more other proteases that co-localize with the target and are responsible for cleaving CM in vivo.

いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、ＡＢが標的への結合からマスクされないか、あるいは阻害されない場合に、非治療部位でのＡＢの結合にさもなければ起因し得る、毒性および／または有害副作用の低減を提供する。 In some embodiments, the activatable antibody is toxic and/or otherwise attributable to binding of ABs at non-therapeutic sites, where ABs are not masked or inhibited from binding to targets. Provides reduced adverse side effects.

一般に、活性化可能抗体は、目的のＡＢ（本明細書で記載のいずれかのＣＤ４７抗体またはそのフラグメントなど）を選択すること、および、コンフォメーション上の制約がある場合に、ＭＭがＡＢのマスキングまたはＡＢのその標的への結合の低減を提供するように、活性化可能抗体の残りの部分を構築することによって設計できる。構造設計基準は、この機能的特色を提供するように考慮に入れることができる。 In general, the activatable antibody selects for the AB of interest (such as any CD47 antibody or fragment thereof described herein) and, when conformational constraints are present, the MM masks the AB. Alternatively, it can be designed by constructing the remainder of the activatable antibody to provide reduced binding of the AB to its target. Structural design criteria can be considered to provide this functional feature.

阻害されたコンフォメーション対阻害されないコンフォメーションにおいて、標的結合について望ましいダイナミックレンジの切り替え可能な表現型を示す活性化可能抗体が、提供される。ダイナミックレンジは一般に、（ａ）第１のセットの条件下でのパラメーターの最大検出レベル対（ｂ）第２のセットの条件下でのそのパラメーターの最小検出値の比を指す。例えば、活性化可能抗体の文脈において、ダイナミックレンジとは、（ａ）活性化可能抗体のＣＭを切断できる少なくとも１種のプロテアーゼの存在下での活性化可能抗体に対する標的タンパク質結合の最大検出レベルの、（ｂ）プロテアーゼの非存在下での活性化可能抗体に対する標的タンパク質結合の最小検出レベルに対する比をいう。活性化可能抗体のダイナミックレンジは、複数活性化可能抗体切断剤（例えば、酵素）処理の解離定数に対する、活性化可能抗体切断剤処理の解離定数の比率として計算できる。活性化可能抗体のダイナミックレンジが大きければ大きいほど、活性化可能抗体の切り替え可能な表現型は良好である。相対的に高い（例えば、１よりも大きい）ダイナミックレンジ値を有する活性化可能抗体は、活性化可能抗体による標的タンパク質結合が、活性化可能抗体のＣＭを切断できる切断剤（例えば、酵素）の存在下で、切断剤の非存在下よりも大きい程度まで起こる（例えば、優勢に起こる）ように、より望ましい切り替え表現型を示す。 An activatable antibody is provided that exhibits a desirable dynamic range switchable phenotype for target binding in an inhibited versus an uninhibited conformation. Dynamic range generally refers to the ratio of (a) the maximum detectable level for a parameter under a first set of conditions to (b) the minimum detectable value for that parameter under a second set of conditions. For example, in the context of an activatable antibody, dynamic range refers to (a) the maximum detectable level of target protein binding to an activatable antibody in the presence of at least one protease capable of cleaving the CM of the activatable antibody; , (b) refers to the ratio of target protein binding to the activatable antibody in the absence of protease to the minimum detectable level. The dynamic range of an activatable antibody can be calculated as the ratio of the dissociation constant of the activatable antibody cleaving agent treatment to the dissociation constant of the multiple activatable antibody cleaving agent (eg, enzyme) treatment. The greater the dynamic range of the activatable antibody, the better the switchable phenotype of the activatable antibody. An activatable antibody with a relatively high (e.g., greater than 1) dynamic range value indicates that target protein binding by the activatable antibody results in a cleaving agent (e.g., an enzyme) capable of cleaving the CM of the activatable antibody. In the presence, a more desirable switching phenotype is exhibited such that it occurs to a greater extent (eg, occurs predominantly) than in the absence of the cleaving agent.

上記のように、本明細書で提供される活性化可能ＣＤ４７抗体は、マスキング部分（ＭＭ）を含む。いくつかの実施形態では、マスキング部分は、ＣＤ４７抗体にカップリングされるかまたは別の方法で付加されるアミノ酸配列であり、マスキング部分が、ＣＤ４７抗体のＣＤ４７に特異的に結合する能力を低減させるように、活性化可能ＣＤ４７抗体構築物内に配置される。好適なマスキング部分は、種々の既知の技術のいずれかを用いて特定される。例えば、ペプチドマスキング部分は、Ｄａｕｇｈｅｒｔｙらによる国際公開第２００９／０２５８４６号に記述されている方法を用いて特定され、この内容は、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。 As noted above, the activatable CD47 antibodies provided herein comprise a masking moiety (MM). In some embodiments, the masking moiety is an amino acid sequence coupled or otherwise attached to the CD47 antibody, wherein the masking moiety reduces the ability of the CD47 antibody to specifically bind to CD47. As such, it is placed within an activatable CD47 antibody construct. Suitable masking moieties are identified using any of a variety of known techniques. For example, peptide masking moieties are identified using methods described in WO 2009/025846 by Daugherty et al., the contents of which are incorporated herein by reference in their entirety.

上記のように、本明細書で提供される活性化可能ＣＤ４７抗体は、切断可能部分（ＣＭ）を含む。いくつかの実施形態では、切断可能部分は、プロテアーゼ、通常は細胞外プロテアーゼに対する基質であるアミノ酸配列を含む。好適な基質は、種々の既知の技術のいずれかを用いて特定される。例えば、ペプチド基質は、Ｄａｕｇｈｅｒｔｙらによる米国特許第７，６６６，８１７号、Ｓｔａｇｌｉａｎｏらによる米国特許第８，５６３，２６９号、また、Ｌａ Ｐｏｒｔｅらによる国際公開第２０１４／０２６１３６号（これらの各々の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている方法を使用して特定される。（Ｂｏｕｌｗａｒｅ ｅｔ ａｌ．“Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｕｂｓｔｒａｔｅｓ ｆｏｒ ｐｒｏｔｅａｓｅｓ ｔｈａｔ ｅｘｈｉｂｉｔ ｒａｐｉｄ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ｋｉｎｅｔｉｃｓ．” Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ．１０６．３（２０１０）：３３９－４６、も参照されたい）。 As noted above, the activatable CD47 antibodies provided herein comprise a cleavable moiety (CM). In some embodiments, a cleavable moiety comprises an amino acid sequence that is a substrate for a protease, usually an extracellular protease. Suitable substrates are identified using any of a variety of known techniques. For example, peptide substrates are disclosed in U.S. Patent No. 7,666,817 by Daugherty et al., U.S. Patent No. 8,563,269 by Stagliano et al. The content is identified using the methods described in (herein incorporated by reference in its entirety). (See also Boulware et al. "Evolutionary optimization of peptide substrates for proteases that exhibit rapid hydrolysis kinetics." Biotechnol Bioeng. 106.3 (2010):339-46).

例示的な基質には、表Ａに列挙した以下の酵素またはプロテアーゼの１種または複数によって切断可能な基質が含まれるが、これらに限定されない。

Figure 2022548310000002

Figure 2022548310000003
Exemplary substrates include, but are not limited to, substrates cleavable by one or more of the following enzymes or proteases listed in Table A.
Figure 2022548310000002
Figure 2022548310000003

活性化可能抗体は、活性化状態ではＣＤ４７に結合し、（ｉ）ＣＤ４７に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ）と、（ｉｉ）活性化可能抗体が非切断状態にある場合にＡＢとＣＤ４７との結合を阻害するマスキング部分（ＭＭ）と、（ｃ）ＡＢにカップリングされた切断可能部分（ＣＭ）とを含み、ＣＭは、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである。 The activatable antibody binds to CD47 in its activated state and comprises (i) an antibody or antigen-binding fragment thereof (AB) that specifically binds to CD47 and (ii) when the activatable antibody is in its uncleaved state. contains a masking moiety (MM) that inhibits binding of AB to CD47, and (c) a cleavable moiety (CM) coupled to AB, wherein CM is a polypeptide that functions as a substrate for proteases.

いくつかの実施形態では、非切断状態における活性化可能抗体は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、以下の構造配置：ＭＭ－ＣＭ－ＡＢまたはＡＢ－ＣＭ－ＭＭを有する。 In some embodiments, an activatable antibody in its uncleaved state has, from N-terminus to C-terminus, the following structural arrangement: MM-CM-AB or AB-CM-MM.

いくつかの実施形態では、活性化可能抗体はＭＭとＣＭとの間に連結ペプチドを含む。 In some embodiments, the activatable antibody comprises a connecting peptide between MM and CM.

いくつかの実施形態では、活性化可能抗体はＣＭとＡＢとの間に連結ペプチドを含む。 In some embodiments, the activatable antibody comprises a connecting peptide between CM and AB.

いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は第１の連結ペプチド（ＬＰ１）および第２の連結ペプチド（ＬＰ２）を含み、非切断状態の活性化可能抗体は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、次の構造配置：ＭＭ－ＬＰ１－ＣＭ－ＬＰ２－ＡＢまたはＡＢ－ＬＰ２－ＣＭ－ＬＰ１－ＭＭを有する。いくつかの実施形態では、２つの連結ペプチドは互いに同一である必要はない。 In some embodiments, the activatable antibody comprises a first connecting peptide (LP1) and a second connecting peptide (LP2), wherein the uncleaved activatable antibody is N-terminal to C-terminal , has the following structural arrangement: MM-LP1-CM-LP2-AB or AB-LP2-CM-LP1-MM. In some embodiments, the two connecting peptides need not be identical to each other.

いくつかの実施形態では、ＬＰ１またはＬＰ２の少なくとも一方は、（ＧＳ）ｎ、（ＧＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ（配列番号１１６）および（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１１７）（ｎは少なくとも１の整数である）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。 In some embodiments, at least one of LP1 or LP2 is (GS) n , (GGS) n , (GSGGS) n (SEQ ID NO: 116) and (GGGS) n (SEQ ID NO: 117) (where n is at least 1). are integers).

いくつかの実施形態では、ＬＰ１またはＬＰ２の少なくとも１つは、ＧＧＳＧ（配列番号１１８）、ＧＧＳＧＧ（配列番号１１９）、ＧＳＧＳＧ（配列番号１２０）、ＧＳＧＧＧ（配列番号１２１）、ＧＧＧＳＧ（配列番号１２２）、およびＧＳＳＳＧ（配列番号１２３）からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。 In some embodiments, at least one of LP1 or LP2 is GGSG (SEQ ID NO:118), GGSGG (SEQ ID NO:119), GSGSG (SEQ ID NO:120), GSGGG (SEQ ID NO:121), GGGSG (SEQ ID NO:122) , and GSSSG (SEQ ID NO: 123).

いくつかの実施形態では、ＬＰ１は、アミノ酸配列ＧＳＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧ（配列番号１２４）、ＧＳＳＧＧＳＧＧＳＧＧ（配列番号１２５）、ＧＳＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号１２６）、ＧＳＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号１２７）、ＧＳＳＧＧＳＧＧＳＧ（配列番号１２８）、ＧＳＳＧＧＳＧＧＳＧＳ（配列番号１２９）、およびＧＧＧＳＳＧＧＳ（配列番号１３４）を含む。 In some embodiments, LP1 has the amino acid sequence GSSGGSGGSGGSG (SEQ ID NO: 124), GSSGGSGGSGG (SEQ ID NO: 125), GSSGGSGGSGGS (SEQ ID NO: 126), GSSGGSGGSGGGSGGGS (SEQ ID NO: 127), GSSGGSGGSG (SEQ ID NO: 128), GSSGGSGGSGS (SEQ ID NO: 128), No. 129), and GGGSSGGS (SEQ ID NO: 134).

いくつかの実施形態では、ＬＰ２は、アミノ酸配列ＧＳＳ、ＧＧＳ、ＧＧＧＳ（配列番号１３０）、ＧＳＳＧＴ（配列番号１３１）、またはＧＳＳＧ（配列番号１３２）を含む。 In some embodiments, LP2 comprises the amino acid sequence GSS, GGS, GGGS (SEQ ID NO:130), GSSGT (SEQ ID NO:131), or GSSG (SEQ ID NO:132).

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７を結合する抗体またはその抗原結合フラグメントは、モノクローナル抗体、ドメイン抗体、単鎖、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、ｓｃＦｖ、ｓｃＡｂ、ｄＡｂ、単一ドメイン重鎖抗体、または単一ドメイン軽鎖抗体である。いくつかの実施形態では、このような、ＣＤ４７を結合する抗体またはその抗原結合フラグメントは、マウス抗体、他のげっ歯類抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、または完全ヒトモノクローナル抗体である。 In some embodiments, the antibody or antigen-binding fragment thereof that binds CD47 is a monoclonal antibody, domain antibody, single chain, Fab fragment, F(ab') 2 fragment, scFv, scAb, dAb, single domain heavy chain antibodies, or single domain light chain antibodies. In some embodiments, such antibodies or antigen-binding fragments thereof that bind CD47 are murine antibodies, other rodent antibodies, chimeric antibodies, humanized antibodies, or fully human monoclonal antibodies.

いくつかの実施形態では、非切断状態にある活性化可能抗体は、１ｎＭ以下、５ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１５ｎＭ以下、２０ｎＭ以下、２５ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、１００ｎＭ以下、１５０ｎＭ以下、２５０ｎＭ以下、５００ｎＭ以下、７５０ｎＭ以下、１０００ｎＭ以下、および／または２０００ｎＭ以下の解離定数で哺乳動物ＣＤ４７に特異的に結合する。 In some embodiments, the uncleaved activatable antibody is , specifically binds mammalian CD47 with a dissociation constant of 750 nM or less, 1000 nM or less, and/or 2000 nM or less.

いくつかの実施形態では、非切断状態にある活性化可能抗体は、１ｎＭ～２０００ｎＭ、１ｎＭ～１０００ｎＭ、１ｎＭ～７５０ｎＭ、１ｎＭ～５００ｎＭ、１ｎＭ～２５０ｎＭ、１ｎＭ～１５０ｎＭ、１ｎＭ～１００ｎＭ、１ｎＭ～５０ｎＭ、１ｎＭ～２５ｎＭ、１ｎＭ～１５ｎＭ、１ｎＭ～１０ｎＭ、１ｎＭ～５ｎＭ、５ｎＭ～２０００ｎＭ、５ｎＭ～１０００ｎＭ、５ｎＭ～７５０ｎＭ、５ｎＭ～５００ｎＭ、５ｎＭ～２５０ｎＭ、５ｎＭ～１５０ｎＭ、５ｎＭ～１００ｎＭ、５ｎＭ～５０ｎＭ、５ｎＭ～２５ｎＭ、５ｎＭ～１５ｎＭ、５ｎＭ～１０ｎＭ、１０ｎＭ～２０００ｎＭ、１０ｎＭ～１０００ｎＭ、１０ｎＭ～７５０ｎＭ、１０ｎＭ～５００ｎＭ、１０ｎＭ～２５０ｎＭ、１０ｎＭ～１５０ｎＭ、１０ｎＭ～１００ｎＭ、１０ｎＭ～５０ｎＭ、１０ｎＭ～２５ｎＭ、１０ｎＭ～１５ｎＭ、１５ｎＭ～２０００ｎＭ、１５ｎＭ～１０００ｎＭ、１５ｎＭ～７５０ｎＭ、１５ｎＭ～５００ｎＭ、１５ｎＭ～２５０ｎＭ、１５ｎＭ～１５０ｎＭ、１５ｎＭ～１００ｎＭ、１５ｎＭ～５０ｎＭ、１５ｎＭ～２５ｎＭ、２５ｎＭ～２０００ｎＭ、２５ｎＭ～１０００ｎＭ、２５ｎＭ～７５０ｎＭ、２５ｎＭ～５００ｎＭ、２５ｎＭ～２５０ｎＭ、２５ｎＭ～１５０ｎＭ、２５ｎＭ～１００ｎＭ、２５ｎＭ～５０ｎＭ、５０ｎＭ～２０００ｎＭ、５０ｎＭ～１０００ｎＭ、５０ｎＭ～７５０ｎＭ、５０ｎＭ～５００ｎＭ、５０ｎＭ～２５０ｎＭ、５０ｎＭ～１５０ｎＭ、５０ｎＭ～１００ｎＭ、１００ｎＭ～２０００ｎＭ、１００ｎＭ～１０００ｎＭ、１００ｎＭ～７５０ｎＭ、１００ｎＭ～５００ｎＭ、１００ｎＭ～２５０ｎＭ、１００ｎＭ～１５０ｎＭ、１５０ｎＭ～２０００ｎＭ、１５０ｎＭ～１０００ｎＭ、１５０ｎＭ～７５０ｎＭ、１５０ｎＭ～５００ｎＭ、１５０ｎＭ～２５０ｎＭ、２５０ｎＭ～２０００ｎＭ、２５０ｎＭ～１０００ｎＭ、２５０ｎＭ～７５０ｎＭ、２５０ｎＭ～５００ｎＭ、５００ｎＭ～２０００ｎＭ、５００ｎＭ～１０００ｎＭ、５００ｎＭ～７５０ｎＭ、５００ｎＭ～５００ｎＭ、５００ｎＭ～２５０ｎＭ、５００ｎＭ～１５０ｎＭ、５００ｎＭ～１００ｎＭ、５００ｎＭ～５０ｎＭ、７５０ｎＭ～２０００ｎＭ、７５０ｎＭ～１０００ｎＭ、または１０００ｎＭ～２０００ｎＭの範囲の解離定数で哺乳動物ＣＤ４７に特異的に結合する。 In some embodiments, the activatable antibody in its uncleaved state has 1nM-25nM, 1nM-15nM, 1nM-10nM, 1nM-5nM, 5nM-2000nM, 5nM-1000nM, 5nM-750nM, 5nM-500nM, 5nM-250nM, 5nM-150nM, 5nM-100nM, 5nM-50nM, 5nM- 25nM, 5nM-15nM, 5nM-10nM, 10nM-2000nM, 10nM-1000nM, 10nM-750nM, 10nM-500nM, 10nM-250nM, 10nM-150nM, 10nM-100nM, 10nM-50nM, 10nM-25nM, 10nM-15nM, 10nM 15nM-2000nM, 15nM-1000nM, 15nM-750nM, 15nM-500nM, 15nM-250nM, 15nM-150nM, 15nM-100nM, 15nM-50nM, 15nM-25nM, 25nM-2000nM, 25nM-1000nM, 25nM-1000nM, 25nM-1000nM, 25nM-25nM 500nM, 25nM-250nM, 25nM-150nM, 25nM-100nM, 25nM-50nM, 50nM-2000nM, 50nM-1000nM, 50nM-750nM, 50nM-500nM, 50nM-250nM, 50nM-150nM, 50nM-1000nM, 50nM-1000nM １００ｎＭ～１０００ｎＭ、１００ｎＭ～７５０ｎＭ、１００ｎＭ～５００ｎＭ、１００ｎＭ～２５０ｎＭ、１００ｎＭ～１５０ｎＭ、１５０ｎＭ～２０００ｎＭ、１５０ｎＭ～１０００ｎＭ、１５０ｎＭ～７５０ｎＭ、１５０ｎＭ～５００ｎＭ、１５０ｎＭ～２５０ｎＭ、２５０ｎＭ～２０００ｎＭ、２５０ｎＭ～１０００ｎＭ、２５０ｎＭ～ ７５０ｎＭ、２５０ｎＭ～５００ｎＭ、５００ｎＭ～２０００ｎＭ、５００ｎＭ～１０００ｎＭ、５００ｎＭ～７５０ｎＭ、５００ｎＭ～５００ｎＭ、５００ｎＭ～２５０ｎＭ、５００ｎＭ～１５０ｎＭ、５００ｎＭ～１００ｎＭ、５００ｎＭ～５０ｎＭ、７５０ｎＭ～２０００ｎＭ、７５０ｎＭ～１０００ｎＭ、または１０００ｎＭ～２０００ｎＭ It specifically binds to mammalian CD47 with dissociation constants in the range of .

いくつかの実施形態では、活性化状態の活性化可能抗体は、０．０１ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．１ｎＭ、０．５ｎＭ、１ｎＭ、５ｎＭ、または１０ｎＭ以下である解離定数で哺乳動物ＣＤ４７に特異的に結合する。 In some embodiments, the activated state activatable antibody is specific for mammalian CD47 with a dissociation constant of 0.01 nM, 0.05 nM, 0.1 nM, 0.5 nM, 1 nM, 5 nM, or 10 nM or less. physically connect.

いくつかの実施形態では、活性化状態の活性化可能抗体は、０．０１ｎＭ～１００ｎＭ、０．０１ｎＭ～１０ｎＭ、０．０１ｎＭ～５ｎＭ、０．０１ｎＭ～１ｎＭ、０．０１～０．５ｎＭ、０．０１ ｎｍ～０．１ｎＭ、０．０１ ｎｍ～０．０５ｎＭ、０．０５ｎＭ～１００ｎＭ、０．０５ｎＭ～１０ｎＭ、０．０５ｎＭ～５ｎＭ、０．０５ｎＭ～１ｎＭ、０．０５～０．５ｎＭ、０．０５ ｎｍ～０．１ｎＭ、０．１ｎＭ～１００ｎＭ、０．１ｎＭ～１０ｎＭ、０．１ｎＭ～５ｎＭ、０．１ｎＭ～１ｎＭ、０．１～０．５ｎＭ、０．５ｎＭ～１００ｎＭ、０．５ｎＭ～１０ｎＭ、０．５ｎＭ～５ｎＭ、０．５ｎＭ～１ｎＭ、１ｎＭ～１００ｎＭ、１ｎＭ～１０ｎＭ、１ｎＭ～５ｎＭ、５ｎＭ～１００ｎＭ、５ｎＭ～１０ｎＭ、または１０ｎＭ～１００ｎＭの範囲の解離定数で哺乳動物ＣＤ４７に特異的に結合する。 In some embodiments, the activatable antibody in the activated state is 0.01 nM-100 nM, 0.01 nM-10 nM, 0.01 nM-5 nM, 0.01 nM-1 nM, 0.01-0.5 nM, 0 0.01 nm-0.1 nM, 0.01 nm-0.05 nM, 0.05 nM-100 nM, 0.05 nM-10 nM, 0.05 nM-5 nM, 0.05 nM-1 nM, 0.05-0.5 nM, 0 0.05 nm-0.1 nM, 0.1 nM-100 nM, 0.1 nM-10 nM, 0.1 nM-5 nM, 0.1 nM-1 nM, 0.1-0.5 nM, 0.5 nM-100 nM, 0.5 nM- specific for mammalian CD47 with dissociation constants in the range of 10 nM, 0.5 nM to 5 nM, 0.5 nM to 1 nM, 1 nM to 100 nM, 1 nM to 10 nM, 1 nM to 5 nM, 5 nM to 100 nM, 5 nM to 10 nM, or 10 nM to 100 nM bind to

ＡＢがＭＭで修飾され、さらに標的の存在下にある場合、ＡＢのその標的への特異的結合は、標的への、ＭＭで修飾されていないＡＢの特異的結合または親ＡＢの特異的結合と比較して、低減または阻害される。 When an AB is modified with an MM and in the presence of a target, the specific binding of the AB to its target is similar to the specific binding of the non-MM-modified AB or the parent AB to the target. Comparatively reduced or inhibited.

ＣＤ４７標的に対する、ＭＭで修飾されたＡＢのＫｄは、ＣＤ４７標的に対する、ＭＭで修飾されていないＡＢまたは親ＡＢのＫｄよりも、少なくとも５、１０、２５、５０、１００、２５０、５００、１，０００、２，５００、５，０００、１０，０００、５０，０００、１００，０００、５００，０００、１，０００，０００、５，０００，０００、１０，０００，０００、５０，０００，０００倍もしくはそれよりも大きい、または５～１０、１０～１００、１０～１，０００、１０～１０，０００、１０～１００，０００、１０～１，０００，０００、１０～１０，０００，０００、１００～１，０００、１００～１０，０００、１００～１００，０００、１００～１，０００，０００、１００～１０，０００，０００、１，０００～１０，０００、１，０００～１００，０００、１，０００～１，０００，０００、１０００～１０，０００，０００、１０，０００～１００，０００、１０，０００～１，０００，０００、１０，０００～１０，０００，０００、１００，０００～１，０００，０００もしくは１００，０００～１０，０００，０００倍大きい。逆に、ＣＤ４７標的に対する、ＭＭで修飾されたＡＢの結合親和性は、ＣＤ４７標的に対する、ＭＭで修飾されていないＡＢまたは親ＡＢの結合親和性よりも、少なくとも２、３、４、５、１０、２５、５０、１００、２５０、５００、１，０００、２，５００、５，０００、１０，０００、５０，０００、１００，０００、５００，０００、１，０００，０００、５，０００，０００、１０，０００，０００、５０，０００，０００倍もしくはそれよりも大きい、または５～１０、１０～１００、１０～１，０００、１０～１０，０００、１０～１００，０００、１０～１，０００，０００、１０～１０，０００，０００、１００～１，０００、１００～１０，０００、１００～１００，０００、１００～１，０００，０００、１００～１０，０００，０００、１，０００～１０，０００、１，０００～１００，０００、１，０００～１，０００，０００、１０００～１０，０００，０００、１０，０００～１００，０００、１０，０００～１，０００，０００、１０，０００～１０，０００，０００、１００，０００～１，０００，０００もしくは１００，０００～１０，０００，０００倍低い。 The Kd of MM-modified ABs on CD47 targets is at least 5, 10, 25, 50, 100, 250, 500, 1 greater than the Kd of non-MM-modified ABs or parental ABs on CD47 targets ,000,2,500,5,000,10,000,50,000,100,000,500,000,1,000,000,5,000,000,10,000,000,50,000,000 times or more, or 5 to 10, 10 to 100, 10 to 1,000, 10 to 10,000, 10 to 100,000, 10 to 1,000,000, 10 to 10,000,000, 100 to 1,000, 100 to 10,000, 100 to 100,000, 100 to 1,000,000, 100 to 10,000,000, 1,000 to 10,000, 1,000 to 100,000, 1,000-1,000,000, 1000-10,000,000, 10,000-100,000, 10,000-1,000,000, 10,000-10,000,000, 100,000- 1,000,000 or 100,000 to 10,000,000 times larger. Conversely, the binding affinity of MM-modified ABs for CD47 targets is at least 2, 3, 4, 5, 10 greater than the binding affinities of non-MM-modified ABs or parental ABs for CD47 targets. , 25, 50, 100, 250, 500, 1,000, 2,500, 5,000, 10,000, 50,000, 100,000, 500,000, 1,000,000, 5,000,000 , 10,000,000, 50,000,000 times or more, or 5-10, 10-100, 10-1,000, 10-10,000, 10-100,000, 10-1, 000,000, 10-10,000,000, 100-1,000, 100-10,000, 100-100,000, 100-1,000,000, 100-10,000,000, 1,000- 10,000; 000 to 10,000,000, 100,000 to 1,000,000 or 100,000 to 10,000,000 times lower.

ＡＢに対するＭＭの解離定数（Ｋｄ）は一般に、ＣＤ４７標的に対するＡＢのＫｄよりも大きい。ＡＢに対するＭＭのＫｄは、ＣＤ４７標的に対するＡＢのＫｄよりも少なくとも５、１０、２５、５０、１００、２５０、５００、１，０００、２，５００、５，０００、１０，０００、１００，０００、１，０００，０００倍、またはさらに１０，０００，０００倍大きいことがある。逆に、ＡＢに対するＭＭの結合親和性は一般に、ＣＤ４７標的に対するＡＢの結合親和性よりも低い。ＡＢに対するＭＭの結合親和性は、ＣＤ４７標的に対するＡＢの結合親和性よりも少なくとも５、１０、２５、５０、１００、２５０、５００、１，０００、２，５００、５，０００、１０，０００、１００，０００、１，０００，０００倍低く、またはさらに１０，０００，０００倍低いことがある。 The dissociation constant (K d ) of MM for ABs is generally greater than the K d of ABs for CD47 targets. Kd of MM for AB is at least 5, 10, 25, 50, 100, 250, 500, 1,000, 2,500, 5,000, 10,000, 100,000 greater than Kd of AB for CD47 target , 1,000,000 times, or even 10,000,000 times larger. Conversely, the binding affinity of MMs for ABs is generally lower than that of ABs for CD47 targets. The binding affinity of MM for AB is at least 5, 10, 25, 50, 100, 250, 500, 1,000, 2,500, 5,000, 10,000, greater than the binding affinity of AB for CD47 target, It can be 100,000, 1,000,000 times lower, or even 10,000,000 times lower.

いくつかの実施形態では、ＡＢに対するＭＭの解離定数（Ｋｄ）は、ＣＤ４７標的に対するＡＢのＫｄとほぼ同等である。いくつかの実施形態では、ＡＢに対するＭＭの解離定数（Ｋｄ）は、ＣＤ４７標的に対するＡＢの解離定数以下である。いくつかの実施形態では、ＡＢに対するＭＭの解離定数（Ｋｄ）は、ＣＤ４７標的に対するＡＢの解離定数に等しい。 In some embodiments, the dissociation constant (K d ) of MM for AB is approximately equivalent to the K d of AB for CD47 targets. In some embodiments, the dissociation constant (K d ) of MM for AB is less than or equal to that of AB for its CD47 target. In some embodiments, the dissociation constant (K d ) of MM for AB is equal to the dissociation constant of AB for its CD47 target.

いくつかの実施形態では、ＡＢに対するＭＭの解離定数（Ｋｄ）は、ＣＤ４７標的に対するＡＢの解離定数よりも小さい。 In some embodiments, the dissociation constant (K d ) of MM for AB is less than the dissociation constant of AB for CD47 targets.

いくつかの実施形態では、ＡＢに対するＭＭの解離定数（Ｋｄ）は、ＣＤ４７標的に対するＡＢの解離定数よりも大きい。 In some embodiments, the dissociation constant (K d ) of MM for AB is greater than the dissociation constant of AB for its CD47 target.

いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＡＢへの結合について、標的へのＡＢの結合についてのＫｄ以下であるＫｄを有する。 In some embodiments, the MM has a K d for binding to the AB that is less than or equal to the K d for binding the AB to the target.

いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＡＢへの結合について、標的へのＡＢの結合についてのＫｄ以上であるＫｄを有する。 In some embodiments, the MM has a K d for binding to the AB that is greater than or equal to the K d for binding the AB to the target.

いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＡＢへの結合について、標的へのＡＢの結合についてのＫｄとほぼ等しいＫｄを有する。 In some embodiments, the MM has a K d for binding to the AB that is approximately equal to the K d for binding the AB to the target.

いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＡＢへの結合について、標的へのＡＢの結合についてのＫｄよりも小さいＫｄを有する。 In some embodiments, the MM has a K d for binding to the AB that is less than the K d for binding the AB to the target.

いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＡＢへの結合について、標的へのＡＢの結合についてのＫｄよりも大きいＫｄを有する。 In some embodiments, the MM has a K d for binding to the AB that is greater than the K d for binding the AB to the target.

いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＡＢへの結合について、標的へのＡＢの結合についてのＫｄの２、３、４、５、１０、２５、５０、１００、２５０、５００、または１，０００倍以下だけ大きいＫｄを有する。いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＡＢへの結合について、標的へのＡＢの結合のＫｄの１～５、２～５、２～１０、５～１０、５～２０、５～５０、５～１００、１０～１００、１０～１，０００、２０～１００、２０～１０００、または１００～１，０００倍大きいＫｄを有する。 In some embodiments, the MM has a K d of 2, 3, 4, 5, 10, 25, 50, 100, 250, 500, or 1, 3, 4, 5, 10, 25, 50, 100, 250, 500, or 1, 2, 3, 4, 5, 10, 25, 50, 100, 250, 500, or 1, for binding to the AB, for binding the AB to the target. It has a Kd greater than 000 times. In some embodiments, the MM is 1-5, 2-5, 2-10, 5-10, 5-20, 5-50, 5-50, 1-5, 2-5, 2-10, 5-10, 5-20, 5-50, K d for binding of AB to target for binding to AB. 5-100, 10-100, 10-1,000, 20-100, 20-1000, or 100-1,000 times greater Kd .

いくつかの実施形態では、ＭＭは、標的へのＡＢの結合の親和性よりも低い、ＡＢへの結合の親和性を有する。 In some embodiments, the MM has a lower affinity of binding to the AB than the affinity of binding of the AB to the target.

いくつかの実施形態では、ＭＭは、標的へのＡＢの結合の親和性以下である、ＡＢへの結合の親和性を有する。 In some embodiments, the MM has an affinity for binding to the AB that is equal to or less than the affinity for binding of the AB to the target.

いくつかの実施形態では、ＭＭは、標的へのＡＢの結合の親和性とほぼ同等である、ＡＢへの結合の親和性を有する。 In some embodiments, the MM has an affinity of binding to the AB that is about the same as the affinity of binding the AB to the target.

いくつかの実施形態では、ＭＭは、標的へのＡＢの結合の親和性以上である、ＡＢへの結合の親和性を有する。 In some embodiments, the MM has an affinity for binding to the AB that is greater than or equal to the affinity for binding of the AB to the target.

いくつかの実施形態では、ＭＭは、標的へのＡＢの結合の親和性よりも高い、ＡＢへの結合の親和性を有する。 In some embodiments, the MM has a higher affinity of binding to the AB than the affinity of binding of the AB to the target.

いくつかの実施形態では、ＭＭは、標的へのＡＢの結合の親和性よりも２、３、４、５、１０、２５、５０、１００、２５０、５００、または１，０００倍低い、ＡＢへの結合の親和性を有する。いくつかの実施形態では、ＭＭは、標的へのＡＢの結合の親和性よりも１～５、２～５、２～１０、５～１０、５～２０、５～５０、５～１００、１０～１００、１０～１，０００、２０～１００、２０～１０００、または１００～１，０００倍低い、ＡＢへの結合の親和性を有する。いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＡＢの標的への結合の親和性よりも２～２０倍低い、ＡＢへの結合の親和性を有する。いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＡＢに共有的に連結されておらず、ＡＢと等モル濃度では、標的へのＡＢの結合を阻害しない。 In some embodiments, the MM is 2, 3, 4, 5, 10, 25, 50, 100, 250, 500, or 1,000 times lower than the affinity of AB binding to the target. has a binding affinity of In some embodiments, the MM is 1-5, 2-5, 2-10, 5-10, 5-20, 5-50, 5-100, 10 -100, 10-1,000, 20-100, 20-1000, or 100-1,000 fold lower affinity for binding to AB. In some embodiments, the MM has an affinity for binding to AB that is 2-20 fold lower than the affinity for binding of AB to its target. In some embodiments, the MM is not covalently linked to the AB and does not inhibit binding of the AB to the target at equimolar concentrations with the AB.

ＡＢがＭＭで修飾され、さらに標的の存在下にある場合、ＡＢのその標的への特異的結合は、標的への、ＭＭで修飾されないＡＢの特異的結合または親ＡＢの特異的結合と比較して、低減または阻害される。ＭＭで修飾されないＡＢの標的への結合または親ＡＢの標的への結合を比較すると、ＭＭで修飾された場合の標的を結合するＡＢの能力は、インビボまたはインビトロアッセイで測定した場合、少なくとも２時間、４時間、６時間、８時間、１２時間、２８時間、２４時間、３０時間、３６時間、４８時間、６０時間、７２時間、８４時間、もしくは９６時間、５日、１０日、１５日、３０日、４５日、６０日、９０日、１２０日、１５０日、もしくは１８０日、または、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、または１２ヶ月の、またはそれを超える期間にわたり、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、さらには１００％低減され得る。 When an AB is modified with an MM and in the presence of a target, the specific binding of the AB to its target is compared to the specific binding of the non-MM-modified AB or the parent AB to the target. reduced or inhibited. Comparing the binding of ABs unmodified with MM to targets or the binding of parental ABs to targets, the ability of ABs modified with MM to bind target was measured in in vivo or in vitro assays for at least 2 hours. , 4 hours, 6 hours, 8 hours, 12 hours, 28 hours, 24 hours, 30 hours, 36 hours, 48 hours, 60 hours, 72 hours, 84 hours, or 96 hours, 5 days, 10 days, 15 days, 30 days, 45 days, 60 days, 90 days, 120 days, 150 days, or 180 days, or 1 month, 2 months, 3 months, 4 months, 5 months, 6 months, 7 months, 8 months, 9 months , at least 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, over a period of 10, 11, or 12 months or more; It can be reduced by 97%, 98%, 99% or even 100%.

ＭＭは、標的へのＡＢの結合を阻害する。ＭＭは、ＡＢの抗原結合ドメインを結合し、標的へのＡＢの結合を阻害する。ＭＭは、その標的へのＡＢの結合を立体的に阻害する。ＭＭは、その標的へのＡＢの結合をアロステリックに抑制できる。これらの実施形態では、ＡＢがＭＭに修飾されるかまたはＭＭにカップリングされ、標的の存在下にある場合、インビボまたはインビトロアッセイで測定される場合、ＭＭにより修飾されないＡＢ、親ＡＢ、またはＭＭにカップリングされないＡＢの標的への結合に比べて、少なくとも２、４、６、８、１２、２８、２４、３０、３６、４８、６０、７２、８４または ９６ 時間、または５、１０、１５、３０、４５、６０、９０、１２０、１５０または１８０日、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２か月の、またはそれを超える期間にわたり、標的へのＡＢの結合は存在しないか、または実質的に存在しないか、またはわずか０．００１％、０．０１％、０．１％、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％または５０％の標的へのＡＢの結合しか存在しない。 MM inhibits binding of ABs to targets. MM binds the antigen-binding domain of ABs and inhibits binding of ABs to targets. MM sterically inhibits AB binding to its target. MM can allosterically inhibit AB binding to its target. In these embodiments, when an AB is modified to an MM or coupled to an MM and in the presence of a target, the AB unmodified by the MM, the parent AB, or the MM as measured in an in vivo or in vitro assay at least 2, 4, 6, 8, 12, 28, 24, 30, 36, 48, 60, 72, 84 or 96 hours, or 5, 10, 15 hours, or 5, 10, 15 , 30, 45, 60, 90, 120, 150 or 180 days, or 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, or 12 months or more binding of ABs to target is absent, substantially absent, or only 0.001%, 0.01%, 0.1%, 1%, 2%, 3%, 4%, There is only 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40% or 50% binding of ABs to target.

ＡＢがＭＭにカップリングされるか、またはＭＭにより修飾される場合、ＭＭはその標的へのＡＢの特異的結合を「マスクするか」または低減するか、あるいは、さもなければ抑制する 。ＡＢがＭＭにカップリングされるかまたはＭＭにより修飾される場合、そのようなカップリングまたは修飾は、それが、その標的に特異的に結合するＡＢの能力を低減または阻害する構造変化をもたらすことができる。 When an AB is coupled to or modified by an MM, the MM "masks" or reduces or otherwise inhibits the specific binding of the AB to its target. When an AB is coupled to or modified by an MM, such coupling or modification results in a conformational change that reduces or inhibits the ability of the AB to specifically bind its target. can be done.

ＭＭにカップリングされた、またはＭＭに修飾されたＡＢは、次の式により表すことができる（アミノ（Ｎ）末端領域からカルボキシル（Ｃ）末端領域へ順に）：
（ＭＭ）－（ＡＢ）
（ＡＢ）－（ＭＭ）
（ＭＭ）－Ｌ－（ＡＢ）
（ＡＢ）－Ｌ－（ＭＭ）
式中、ＭＭはマスキング部分であり、ＡＢは抗体またはその抗体フラグメントであり、Ｌはリンカーである。多くの実施形態では、可動性を与えるように、１個または複数のリンカー、例えば、可動性リンカーを組成物中に挿入することが望ましい場合がある。 An MM-coupled or MM-modified AB can be represented by the following formula (in order from the amino (N)-terminal region to the carboxyl (C)-terminal region):
(MM)-(AB)
(AB)-(MM)
(MM)-L-(AB)
(AB)-L-(MM)
where MM is a masking moiety, AB is an antibody or antibody fragment thereof, and L is a linker. In many embodiments, it may be desirable to insert one or more linkers, eg, flexible linkers, into the composition to provide flexibility.

特定の実施形態では、ＭＭは、ＡＢの天然の結合パートナーではない。いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＡＢの任意の天然の結合パートナーを含まないかまたはそのパートナーに対する相同性を実質的に含まない。いくつかの実施形態では、ＭＭの、ＡＢのいずれかの天然の結合パートナーに対する類似性は、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、または８０％以下である。いくつかの実施形態では、ＭＭの、ＡＢのいずれかの天然の結合パートナーに対する同一性は、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、または８０％以下である。いくつかの実施形態では、ＭＭの、ＡＢのいずれかの天然の結合パートナーに対する同一性は、２５％以下である。いくつかの実施形態では、ＭＭの、ＡＢのいずれかの天然の結合パートナーに対する同一性は、５０％以下である。いくつかの実施形態では、ＭＭの、ＡＢのいずれかの天然の結合パートナーに対する同一性は、２０％以下である。いくつかの実施形態では、ＭＭの、ＡＢのいずれかの天然の結合パートナーに対する同一性は、１０％以下である。 In certain embodiments, MM is not an AB's natural binding partner. In some embodiments, the MM is free of or substantially free of homology to any of the AB's natural binding partners. In some embodiments, the similarity of MM to any natural binding partner of AB is 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45% , 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, or 80% or less. In some embodiments, the identity of MM to any natural binding partner of AB is 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45% , 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, or 80% or less. In some embodiments, the identity of MM to any natural binding partner of AB is 25% or less. In some embodiments, the identity of MM to any natural binding partner of AB is 50% or less. In some embodiments, the identity of MM to any natural binding partner of AB is 20% or less. In some embodiments, the identity of MM to any natural binding partner of AB is 10% or less.

いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、ＭＭにより修飾されかつ１つまたは複数の切断可能部分（ＣＭ）も含む、ＡＢを含む。そのような活性化可能抗体は、ＡＢの標的への活性化可能／切替可能な結合を示す。活性化可能抗体は一般に、マスキング部分（ＭＭ）により修飾されるかまたはそれにカップリングされた、抗体または抗体フラグメント（ＡＢ）および修飾可能または切断可能な部分（ＣＭ）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、少なくとも１種のプロテアーゼに対する基質として働くアミノ酸配列を含有する。 In some embodiments, an activatable antibody comprises an AB modified with an MM and also comprising one or more cleavable moieties (CM). Such activatable antibodies exhibit activatable/switchable binding to targets of ABs. An activatable antibody generally comprises an antibody or antibody fragment (AB) and a modifiable or cleavable moiety (CM) modified by or coupled to a masking moiety (MM). In some embodiments, CM contains amino acid sequences that serve as substrates for at least one protease.

活性化可能抗体の構成要素は、切断された（または相対的に活性の）状態および標的の存在下で、ＡＢが標的を結合し、活性化可能抗体が切断されていない（または相対的に不活性の）状態で標的の存在下にある間は、その標的へのＡＢの特異的結合が低減または阻害されるように、ＭＭおよびＣＭが配置される。標的へのＡＢの特異的結合は、ＭＭによるその標的を特異的に結合するＡＢの能力の阻害またはマスキングにより低減され得る。 The components of an activatable antibody are such that, in the presence of a cleaved (or relatively active) state and target, the AB binds the target and the activatable antibody is uncleaved (or relatively inactive). The MM and CM are arranged such that specific binding of the AB to its target is reduced or inhibited while in the presence of the target (in an active) state. Specific binding of an AB to its target can be reduced by inhibiting or masking the AB's ability to specifically bind its target by MM.

ＣＤ４７標的に対するＭＭおよびＣＭで修飾されたＡＢのＫｄは、ＣＤ４７標的に対するＭＭおよびＣＭで修飾されていないＡＢまたは親ＡＢのＫｄよりも、少なくとも５、１０、２５、５０、１００、２５０、５００、１，０００、２，５００、５，０００、１０，０００、５０，０００、１００，０００、５００，０００、１，０００，０００、５，０００，０００、１０，０００，０００、５０，０００，０００倍もしくはそれより大きい、または、５～１０、１０～１００、１０～１，０００、１０～１０，０００、１０～１００，０００、１０～１，０００，０００、１０～１０，０００，０００、１００～１，０００、１００～１０，０００、１００～１００，０００、１００～１，０００，０００、１００～１０，０００，０００、１，０００～１０，０００、１，０００～１００，０００、１，０００～１，０００，０００、１０００～１０，０００，０００、１０，０００～１００，０００、１０，０００～１，０００，０００、１０，０００～１０，０００，０００、１００，０００～１，０００，０００、もしくは１００，０００～１０，０００，０００倍大きい。逆に、ＣＤ４７標的に対するＭＭおよびＣＭで修飾されたＡＢの結合親和性は、ＣＤ４７標的に対するＭＭおよびＣＭで修飾されていないＡＢまたは親ＡＢの結合親和性よりも、少なくとも５、１０、２５、５０、１００、２５０、５００、１，０００、２，５００、５，０００、１０，０００、５０，０００、１００，０００、５００，０００、１，０００，０００、５，０００，０００、１０，０００，０００、５０，０００，０００倍もしくはそれより大きい、または、５～１０、１０～１００、１０～１，０００、１０～１０，０００、１０～１００，０００、１０～１，０００，０００、１０～１０，０００，０００、１００～１，０００、１００～１０，０００、１００～１００，０００、１００～１，０００，０００、１００～１０，０００，０００、１，０００～１０，０００、１，０００～１００，０００、１，０００～１，０００，０００、１０００～１０，０００，０００、１０，０００～１００，０００、１０，０００～１，０００，０００、１０，０００～１０，０００，０００、１００，０００～１，０００，０００、もしくは１００，０００～１０，０００，０００倍低い。 The K d of the MM- and CM-modified ABs for the CD47 target is at least 5, 10, 25, 50, 100, 250, 250, 250, 250, 250 greater than the K d of the non-MM- and CM-modified ABs or the parental AB for the CD47 target. 500, 1,000, 2,500, 5,000, 10,000, 50,000, 100,000, 500,000, 1,000,000, 5,000,000, 10,000,000, 50, 000,000 times or more, or 5 to 10, 10 to 100, 10 to 1,000, 10 to 10,000, 10 to 100,000, 10 to 1,000,000, 10 to 10,000 ,000,100-1,000,100-10,000,100-100,000,100-1,000,000,100-10,000,000,1,000-10,000,1,000-100 ,000, 1,000-1,000,000, 1000-10,000,000, 10,000-100,000, 10,000-1,000,000, 10,000-10,000,000, 100 ,000 to 1,000,000, or 100,000 to 10,000,000 times larger. Conversely, the binding affinities of MM- and CM-modified ABs to CD47 targets are at least 5, 10, 25, 50 greater than those of non-MM- and CM-modified ABs or parental ABs to CD47 targets. , 100, 250, 500, 1,000, 2,500, 5,000, 10,000, 50,000, 100,000, 500,000, 1,000,000, 5,000,000, 10,000 ,000, 50,000,000 times or more, or 5 to 10, 10 to 100, 10 to 1,000, 10 to 10,000, 10 to 100,000, 10 to 1,000,000, 10 to 10,000,000, 100 to 1,000, 100 to 10,000, 100 to 100,000, 100 to 1,000,000, 100 to 10,000,000, 1,000 to 10,000, 1,000-100,000, 1,000-1,000,000, 1000-10,000,000, 10,000-100,000, 10,000-1,000,000, 10,000-10, 000,000, 100,000 to 1,000,000, or 100,000 to 10,000,000 times lower.

ＡＢがＭＭおよびＣＭで修飾され、標的の存在下にあるが修飾剤（例えば、少なくとも１種のプロテアーゼ）の存在下にはない時、その標的へのＡＢの特異的結合は、標的へのＭＭおよびＣＭで修飾されていないＡＢまたは親ＡＢの特異的結合と比較して、低減または阻害される。親ＡＢの結合、またはその標的へのＭＭおよびＣＭにより修飾されていないＡＢの結合と比較した場合、ＭＭおよびＣＭにより修飾された場合の標的を結合するＡＢの能力は、インビボまたはインビトロアッセイで測定した場合、少なくとも２時間、４時間、６時間、８時間、１２時間、２８時間、２４時間、３０時間、３６時間、４８時間、６０時間、７２時間、８４時間、または９６時間、５日、１０日、１５日、３０日、４５日、６０日、９０日、１２０日、１５０日、もしくは１８０日間、または１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、もしくは１２ヶ月の、もしくはそれを超える間、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、およびさらには１００％低下し得る。 When ABs are modified with MM and CM and in the presence of target but not in the presence of a modifying agent (e.g., at least one protease), specific binding of AB to its target results in MM to target and specific binding of non-CM-modified ABs or parental ABs is reduced or inhibited. The ability of an AB to bind a target when modified with MM and CM when compared to the binding of the parental AB or the binding of an AB unmodified by MM and CM to its target is measured in vivo or in vitro assays. at least 2 hours, 4 hours, 6 hours, 8 hours, 12 hours, 28 hours, 24 hours, 30 hours, 36 hours, 48 hours, 60 hours, 72 hours, 84 hours, or 96 hours, 5 days, 10 days, 15 days, 30 days, 45 days, 60 days, 90 days, 120 days, 150 days, or 180 days, or 1 month, 2 months, 3 months, 4 months, 5 months, 6 months, 7 months, at least 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 92%, 93%, 94%, 95% for 8 months, 9 months, 10 months, 11 months, or 12 months or more , 96%, 97%, 98%, 99%, and even 100%.

活性化可能抗体は、種々の構造配置で提供できる。活性化可能抗体の例示的な式は、下記で提供される。ＡＢ、ＭＭ、およびＣＭのＮ末端からＣ末端への順序は、活性化可能抗体内で逆でありうることが、特に意図される。また、ＣＭおよびＭＭは、例えば、ＣＭがＭＭ内に含まれるように、アミノ酸配列中でオーバーラップ可能であることも特に意図される。 An activatable antibody can be provided in a variety of structural configurations. Exemplary formulas for activatable antibodies are provided below. It is specifically contemplated that the N-terminal to C-terminal order of AB, MM, and CM may be reversed within an activatable antibody. It is also specifically contemplated that CM and MM can overlap in amino acid sequence, eg, CM is included within MM.

例えば、活性化可能抗体は、以下の式によって表すことができる（アミノ（Ｎ）末端領域からカルボキシル（Ｃ）末端領域への順に）：
（ＭＭ）－（ＣＭ）－（ＡＢ）
（ＡＢ）－（ＣＭ）－（ＭＭ）
式中、ＭＭはマスキング部分であり、ＣＭは切断可能部分であり、ＡＢは抗体またはそのフラグメントである。ＭＭおよびＣＭは、上記の式では別個の成分として示されているが、本明細書に開示されるすべての例示的な実施形態（式を含む）において、ＭＭおよびＣＭのアミノ酸配列は、例えば、ＣＭが、ＭＭ内に完全にまたは部分的に含まれるように、重複し得ることが想定されることに留意されたい。加えて、上記の式は、活性化可能抗体要素のＮ末端またはＣ末端に配置され得る追加的なアミノ酸配列を提供する。 For example, an activatable antibody can be represented by the following formula (in order from the amino (N)-terminal region to the carboxyl (C)-terminal region):
(MM)-(CM)-(AB)
(AB)-(CM)-(MM)
wherein MM is a masking moiety, CM is a cleavable moiety and AB is an antibody or fragment thereof. Although MM and CM are shown as separate components in the formulas above, in all exemplary embodiments (including formulas) disclosed herein, the amino acid sequences of MM and CM are, for example: Note that it is envisioned that CMs may overlap such that they are wholly or partially contained within MMs. In addition, the above formula provides additional amino acid sequences that can be placed at the N-terminus or C-terminus of the activatable antibody element.

特定の実施形態では、ＭＭは、ＡＢの天然の結合パートナーではない。いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＡＢの任意の天然の結合パートナーを含まないかまたはそのパートナーに対する相同性を実質的に含まない。いくつかの実施形態では、ＭＭの、ＡＢのいずれかの天然の結合パートナーに対する類似性は、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、または８０％以下である。いくつかの実施形態では、ＭＭの、ＡＢのいずれかの天然の結合パートナーに対する同一性は、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、または８０％以下である。いくつかの実施形態では、ＭＭの、ＡＢのいずれかの天然の結合パートナーに対する同一性は、５０％以下である。いくつかの実施形態では、ＭＭの、ＡＢのいずれかの天然の結合パートナーに対する同一性は、２５％以下である。いくつかの実施形態では、ＭＭの、ＡＢのいずれかの天然の結合パートナーに対する同一性は、２０％以下である。いくつかの実施形態では、ＭＭの、ＡＢのいずれかの天然の結合パートナーに対する同一性は、１０％以下である。 In certain embodiments, MM is not an AB's natural binding partner. In some embodiments, the MM is free of or substantially free of homology to any of the AB's natural binding partners. In some embodiments, the similarity of MM to any natural binding partner of AB is 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45% , 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, or 80% or less. In some embodiments, the identity of MM to any natural binding partner of AB is 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45% , 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, or 80% or less. In some embodiments, the identity of MM to any natural binding partner of AB is 50% or less. In some embodiments, the identity of MM to any natural binding partner of AB is 25% or less. In some embodiments, the identity of MM to any natural binding partner of AB is 20% or less. In some embodiments, the identity of MM to any natural binding partner of AB is 10% or less.

多くの実施形態では、ＭＭ－ＣＭ接合部、ＣＭ－ＡＢ接合部、またはその両方の１つまたは複数で可動性を提供するために、１つまたは複数のリンカー、例えば、可動性リンカーを、活性化可能抗体構築物中に挿入することが望ましい可能性がある。例えば、ＡＢ、ＭＭおよび／またはＣＭは、所望の可動性を得るのに十分な数の残基（例えば、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、特にＧｌｙおよびＳｅｒ、特にＧｌｙ）を含むことができない。そのため、そのような活性化可能抗体構築物の切り替え可能な表現型は、可動性リンカーを提供するための１つまたは複数のアミノ酸の導入から恩恵を受ける場合がある。加えて、下記のように、活性化可能抗体がコンフォメーション的に束縛された構築物として提供される場合、可動性リンカーを、切断されていない活性化可能抗体における環状構造の形成および維持を促進するために機能的に挿入できる。 In many embodiments, one or more linkers, e.g. It may be desirable to insert into a tunable antibody construct. For example, AB, MM and/or CM may not contain a sufficient number of residues (eg, Gly, Ser, Asp, Asn, especially Gly and Ser, especially Gly) to provide the desired flexibility. As such, the switchable phenotype of such activatable antibody constructs may benefit from the introduction of one or more amino acids to provide flexible linkers. In addition, when the activatable antibody is provided as a conformationally constrained construct, as described below, the flexible linker facilitates the formation and maintenance of a circular structure in the uncleaved activatable antibody. can be functionally inserted for

例えば、特定の実施形態では、活性化可能抗体は、次の式（下記式は、Ｎ末端からＣ末端方向に、またはＣ末端からＮ末端方向に、アミノ酸配列を表す）：
（ＭＭ）－Ｌ１－（ＣＭ）－（ＡＢ）
（ＭＭ）－（ＣＭ）－Ｌ２－（ＡＢ）
（ＭＭ）－Ｌ１－（ＣＭ）－Ｌ２－（Ａｂ）
式中、ＭＭ、ＣＭ、およびＡＢは上記で定義の通りであり、Ｌ１およびＬ２は、それぞれ独立に、任意選択で存在してもしなくてもよい、少なくとも１個の可動性アミノ酸（例えば、Ｇｌｙ）を含む、同じまたは異なる可動性リンカーである。加えて、上記の式は、活性化可能抗体要素のＮ末端またはＣ末端に配置され得る追加的なアミノ酸配列を提供する。例としては、限定されないが、標的化部分（例えば、標的組織に存在する細胞の受容体に対するリガンド）および血清半減期延長部分（例えば、免疫グロブリン（例えば、ＩｇＧ）または血清アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＡＳ））などの、血清タンパク質を結合するポリペプチド）が挙げられる。 For example, in certain embodiments, an activatable antibody has the following formula (the following formula represents the amino acid sequence in N-terminal to C-terminal or C-terminal to N-terminal direction):
(MM)-L1-(CM)-(AB)
(MM)-(CM)-L2-(AB)
(MM)-L1-(CM)-L2-(Ab)
wherein MM, CM, and AB are as defined above, and L1 and L2 are each independently, optionally present or absent, at least one flexible amino acid (e.g., Gly ) are the same or different flexible linkers. In addition, the above formula provides additional amino acid sequences that can be placed at the N-terminus or C-terminus of the activatable antibody element. Examples include, but are not limited to, targeting moieties (e.g., ligands for receptors on cells present in target tissues) and serum half-life extending moieties (e.g., immunoglobulins (e.g., IgG) or serum albumin (e.g., human serum polypeptides that bind serum proteins, such as albumin (HAS)).

ＣＭは、少なくとも１種のプロテアーゼにより、約０．００１～１５００ｘ１０４Ｍ－１Ｓ－１の速度で、または少なくとも、０．００１，０．００５、０．０１、０．０５、０．１、０．５、１、２．５、５、７．５、１０、１５、２０、２５、５０、７５、１００、１２５、１５０、２００、２５０、５００、７５０、１０００、１２５０、または１５００ｘ１０４Ｍ－１Ｓ－１の速度で特異的に切断される。いくつかの実施形態では、ＣＭは、約１００，０００Ｍ－１Ｓ－１の速度で特異的に切断される。いくつかの実施形態では、ＣＭは、約１ｘ１０Ｅ２～約１ｘ１０Ｅ６ Ｍ－１Ｓ－１（すなわち、約１ｘ１０２から約１ｘ１０６Ｍ－１Ｓ－１）の速度で特異的に切断される。 CM is induced by at least one protease at a rate of about 0.001 to 1500×10 4 M −1 S −1 or at least 0.001, 0.005, 0.01, 0.05, 0.1, 0.5, 1, 2.5, 5, 7.5, 10, 15, 20, 25, 50, 75, 100, 125, 150, 200, 250, 500, 750, 1000, 1250, or 1500x104M It is specifically cleaved with a rate of −1 S −1 . In some embodiments, CM is specifically cleaved at a rate of about 100,000 M −1 S −1 . In some embodiments, CM is specifically cleaved at a rate of about 1×10E2 to about 1×10E6 M −1 S −1 (ie, about 1×10 2 to about 1×10 6 M −1 S −1 ).

酵素による特異的切断のために、酵素とＣＭとの間の接触がなされる。ＭＭおよびＣＭにカップリングされたＡＢを含む活性化可能抗体が、標的および十分な酵素活性の存在下にある場合、ＣＭは切断され得る。十分な酵素活性は、ＣＭと接触して切断をもたらす酵素の能力を指してよい。酵素はＣＭの付近にありうるが、他の細胞因子または酵素のタンパク質修飾のために切断できないことを、容易に想定できる。 Contact is made between the enzyme and CM for specific cleavage by the enzyme. When an activatable antibody containing AB coupled to MM and CM is in the presence of target and sufficient enzymatic activity, CM can be cleaved. Sufficient enzymatic activity may refer to the ability of the enzyme to contact CM and effect cleavage. It can be readily assumed that the enzyme may be in the vicinity of the CM but unable to cleave due to protein modifications of other cellular factors or enzymes.

本明細書で記載の組成物における使用に適したリンカーは一般に、修飾されたＡＢまたは活性化可能抗体の可動性を提供して、標的へのＡＢの結合の阻害を促進するものである。そのようなリンカーは一般に、可動性リンカーと呼ばれる。好適なリンカーは、容易に選択でき、４アミノ酸～１０アミノ酸、５アミノ酸～９アミノ酸、６アミノ酸～８アミノ酸、または７アミノ酸～８アミノ酸を含む、例えば、１アミノ酸（例えば、Ｇｌｙ）～２０アミノ酸、２アミノ酸～１５アミノ酸、３アミノ酸～１２アミノ酸などのいずれかの好適な異なる長さであってよく、および１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０アミノ酸長であってよい。 Linkers suitable for use in the compositions described herein generally provide mobility for the modified AB or activatable antibody to facilitate inhibition of binding of the AB to its target. Such linkers are commonly referred to as flexible linkers. Suitable linkers can be readily selected and comprise 4-10 amino acids, 5-9 amino acids, 6-8 amino acids, or 7-8 amino acids, such as 1 amino acid (eg, Gly) to 20 amino acids, can be of any suitable different length, such as 2 to 15 amino acids, 3 to 12 amino acids, and 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 , 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, or 20 amino acids long.

例示的な可動性リンカーとしては、グリシンポリマー（Ｇ）ｎ、グリシン－セリンポリマー（例えば、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ（配列番号１１６）および（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１１７）（式中、ｎは少なくとも１の整数である）を含む）、グリシン－アラニンポリマー、アラニン－セリンポリマー、および当技術分野において既知である他の可動性リンカーが挙げられる。グリシンポリマーおよびグリシン－セリンポリマーは、相対的に構造化されておらず、そのため、構成成分間の中性のつなぎとして機能できる。グリシンは、互角のアラニンよりもかなり多くのΦ－Ψ空間にアクセスし、より長い側鎖を有する残基よりもずっと制限されない（Ｓｃｈｅｒａｇａ，Ｒｅｖ．Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｃｈｅｍ．１１１７３－１４２（１９９２）を参照）。例示的な可動性リンカーとしては、限定されないが、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ（配列番号１１８）、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ（配列番号１１９）、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ（配列番号１２０）、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ（配列番号１２１）、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ（配列番号１２２）、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ（配列番号１２３）などが挙げられる。当業者は、リンカーが、可動性リンカー、およびより可動性が低い構造を付与して望ましい活性化可能抗体構造を与える１つまたは複数の部分を含むことができるように、活性化可能抗体の設計が、全体的または部分的に可動性であるリンカーを含み得ることを理解するであろう。 Exemplary flexible linkers include glycine polymer (G)n, glycine-serine polymers such as (GS)n, (GSGGS)n (SEQ ID NO: 116) and (GGGS)n (SEQ ID NO: 117), wherein , n is an integer of at least 1), glycine-alanine polymers, alanine-serine polymers, and other flexible linkers known in the art. Glycine and glycine-serine polymers are relatively unstructured and thus can serve as neutral tethers between constituents. Glycine accesses considerably more Φ-Ψ space than the evenly matched alanine, and is much less restricted than residues with longer side chains (see Scheraga, Rev. Computational Chem. 11173-142 (1992)). Exemplary flexible linkers include, but are not limited to, Gly-Gly-Ser-Gly (SEQ ID NO:118), Gly-Gly-Ser-Gly-Gly (SEQ ID NO:119), Gly-Ser-Gly-Ser-Gly (SEQ ID NO: 120), Gly-Ser-Gly-Gly-Gly (SEQ ID NO: 121), Gly-Gly-Gly-Ser-Gly (SEQ ID NO: 122), Gly-Ser-Ser-Ser-Gly (SEQ ID NO: 123) etc. One skilled in the art will design activatable antibodies such that the linker can include a flexible linker and one or more moieties that impart a less flexible structure to give the desired activatable antibody structure. may contain a linker that is wholly or partially flexible.

本開示はまた、ＣＤ４７を特異的に結合する抗体または抗体フラグメント（ＡＢ）を含み、ＡＢが、その標的を結合するＡＢの能力を減少させるマスキング部分（ＭＭ）にカップリングされている、活性化可能ＣＤ４７抗体を含む組成物および方法も提供する。いくつかの実施形態では、活性化可能ＣＤ４７抗体は、プロテアーゼに対する基質である切断可能部分（ＣＭ）をさらに含む。本明細書で提供される組成物および方法は、活性化可能ＣＤ４７抗体の活性（例えば、マスキング活性、活性化活性、または結合活性）を損なうことなく、ＡＢ中の１つまたは複数のシステイン残基への１種または複数の薬剤の付加を可能にする。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される組成物および方法は、ＭＭ内の１つまたは複数のジスルフィド結合を低減させるかまたはさもなくば妨害することなく、ＡＢ中の１つまたは複数のシステイン残基への１種または複数の薬剤の付加を可能にする。本明細書で提供される組成物および方法は、１種または複数の薬剤、例えば、種々の治療用、診断用、および／または予防用薬剤のいずれかにコンジュゲートされる活性化可能ＣＤ４７抗体を生成し、例えば、いくつかの実施形態では、薬剤のいずれも活性化可能ＣＤ４７抗体のＭＭにコンジュゲートされていない。本明細書で提供される組成物および方法は、ＭＭが、非切断状態において活性化可能抗体のＡＢを効果的にかつ効率的にマスクする能力を保持する、コンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体を生じる。本明細書で提供される組成物および方法は、活性化可能抗体がさらに活性化される、すなわち、ＣＭを切断できるプロテアーゼの存在下で切断されている、コンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体を生成する。 The disclosure also includes an antibody or antibody fragment (AB) that specifically binds CD47, wherein the AB is coupled to a masking moiety (MM) that reduces the ability of the AB to bind its target, activated Also provided are compositions and methods comprising the possible CD47 antibodies. In some embodiments, an activatable CD47 antibody further comprises a cleavable moiety (CM) that is a substrate for proteases. The compositions and methods provided herein allow the use of one or more cysteine residues in AB without compromising activity (e.g., masking activity, activating activity, or binding activity) of an activatable CD47 antibody. allows for the addition of one or more agents to the In some embodiments, the compositions and methods provided herein provide one or more disulfide bonds in AB without reducing or otherwise interfering with one or more disulfide bonds in MM. allows for the addition of one or more agents to the cysteine residues of The compositions and methods provided herein include activatable CD47 antibodies conjugated to one or more agents, such as any of a variety of therapeutic, diagnostic, and/or prophylactic agents. For example, in some embodiments, none of the agents are conjugated to the MM of the activatable CD47 antibody. The compositions and methods provided herein are conjugated activatable CD47 antibodies in which the MM retains the ability to effectively and efficiently mask the AB of the activatable antibody in the uncleaved state. produces The compositions and methods provided herein provide a conjugated activatable CD47 antibody in which the activatable antibody is further activated, i.e. cleaved in the presence of a protease capable of cleaving CM. Generate.

いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。 In some embodiments, the activatable antibody comprises the heavy chain variable region amino acid sequence of SEQ ID NO:1. In some embodiments, the activatable antibody comprises the light chain variable region amino acid sequence of SEQ ID NO:2.

いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。 In some embodiments, the activatable antibody is at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% or 99% the amino acid sequence of SEQ ID NO:1 It comprises a heavy chain variable region amino acid sequence that is identical. In some embodiments, the activatable antibody is at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% or 99% the amino acid sequence of SEQ ID NO:2 It comprises a light chain variable region amino acid sequence that is identical.

いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である重鎖可変領域アミノ酸配列、および配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。 In some embodiments, the activatable antibody is at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% or 99% the amino acid sequence of SEQ ID NO:1 a heavy chain variable region amino acid sequence that is identical and at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% or 99% identical to the amino acid sequence of SEQ ID NO:2 It contains a light chain variable region amino acid sequence.

いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、可変重鎖相補性決定領域１（ＶＨ ＣＤＲ１、本明細書でＣＤＲＨ１とも呼ばれる）配列、可変重鎖相補性決定領域２（ＶＨ ＣＤＲ２、本明細書でＣＤＲＨ２とも呼ばれる）配列、可変重鎖相補性決定領域３（ＶＨ ＣＤＲ３、本明細書でＣＤＲＨ３とも呼ばれる）配列、可変軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ ＣＤＲ１、本明細書でＣＤＲＬ１とも呼ばれる）配列、可変軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ ＣＤＲ２、本明細書でＣＤＲＬ２とも呼ばれる）配列および可変軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ ＣＤＲ３、本明細書でＣＤＲＬ３とも呼ばれる）配列の組み合わせを含み、少なくとも１つのＣＤＲ配列は、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号３）またはアミノ酸配列ＮＹＷＭＴ（配列番号４）を含むＶＨ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＤＰＹＤＶＥ（配列番号５）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号６）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＮＨＫ（配列番号３９）を含むＶＨ ＣＤＲ２配列；アミノ酸配ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含むＶＨ ＣＤＲ３配列；アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＱＴＹＬＥ（配列番号５５）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＳＴＹＬＥ（配列番号５６）を含むＶＬ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含むＶＬ ＣＤＲ２配列；およびアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含むＶＬ ＣＤＲ３配列からなる群より選択される。 In some embodiments, the activatable antibody has a variable heavy chain complementarity determining region 1 (VH CDR1, also referred to herein as CDRH1) sequence, a variable heavy chain complementarity determining region 2 (VH CDR2, herein (also referred to herein as CDRH2) sequence, variable heavy chain complementarity determining region 3 (VH CDR3, also referred to herein as CDRH3) sequence, variable light chain complementarity determining region 1 (VL CDR1, also referred to herein as CDRL1) sequence , a combination of a variable light chain complementarity determining region 2 (VL CDR2, also referred to herein as CDRL2) sequence and a variable light chain complementarity determining region 3 (VL CDR3, also referred to herein as CDRL3) sequence, comprising at least One CDR sequence is a VH CDR1 sequence comprising amino acid sequence GYTFTNY (SEQ ID NO:3) or amino acid sequence NYWMT (SEQ ID NO:4); amino acid sequence DPYDVE (SEQ ID NO:5) or amino acid sequence RIDPYDVETHYAQKFQG (SEQ ID NO:6) or amino acid sequence RIDPYDVETHYNHK (SEQ ID NO: 39); VH CDR3 sequence comprising the amino acid sequence GGVGGMDY (SEQ ID NO: 7); amino acid sequence RSSQSIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO: 8) or RSSQSIVHSSSGNTYLE (SEQ ID NO: 40) or RSSQSIVHSSGQTYLE (SEQ ID NO: 55) or RSSQSIVHSSGSTYLE (SEQ ID NO: 55) or VL CDR1 sequence comprising amino acid sequence RVSKRFS (SEQ ID NO:9); and VL CDR3 sequence comprising amino acid sequence FQGSHVPRT (SEQ ID NO:10).

いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、ＶＨ ＣＤＲ１配列、ＶＨ ＣＤＲ２配列、ＶＨ ＣＤＲ３配列、ＶＬ ＣＤＲ１配列、ＶＬ ＣＤＲ２配列、およびＶＬ ＣＤＲ３配列の組み合わせを含み、少なくとも１つのＣＤＲ配列は、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号３）またはアミノ酸配列ＮＹＷＭＴ（配列番号４）を含むＶＨ ＣＤＲ１配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一である配列を含むＶＨ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配列ＤＰＹＤＶＥ（配列番号５）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号６）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＮＨＫ（配列番号３９）を含むＶＨ ＣＤＲ２配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一である配列を含むＶＨ ＣＤＲ２配列；アミノ酸配列ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含むＶＨ ＣＤＲ３配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一である配列を含むＶＨ ＣＤＲ３配列；アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＱＴＹＬＥ（配列番号５５）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＳＴＹＬＥ（配列番号５６）を含むＶＬ ＣＤＲ１配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一である配列を含むＶＬ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配列ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含むＶＬ ＣＤＲ２配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一である配列を含むＶＬ ＣＤＲ２配列；およびアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含むＶＬ ＣＤＲ３配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一である配列を含むＶＬ ＣＤＲ３配列からなる群より選択される。 In some embodiments, the activatable antibody comprises a combination of VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, and VL CDR3 sequences, wherein at least one CDR sequence comprises an amino acid at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%; a VH CDR1 sequence comprising a sequence that is 99% or more identical; a VH CDR2 sequence comprising the amino acid sequence DPYDVE (SEQ ID NO:5) or the amino acid sequence RIDPYDVETHYAQKFQG (SEQ ID NO:6) or the amino acid sequence RIDPYDVETHYNHK (SEQ ID NO:39) and at least VH CDR2 sequences comprising sequences that are 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more identical; the amino acid sequence GGVGGMDY (SEQ ID NO: 7) a VH comprising a sequence that is at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more identical to the VH CDR3 sequence comprising CDR3 sequence; at least 90%, 91%, 92%, 93% with a VL CDR1 sequence comprising the amino acid sequence RSSQSIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO: 8) or RSSQSIVHSSGNTYLE (SEQ ID NO: 40) or RSSQSIVHSSGQTYLE (SEQ ID NO: 55) or RSSQSIVHSSGSTYLE (SEQ ID NO: 56) , 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more identical to a VL CDR1 sequence; , 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more identical VL CDR2 sequences; and the amino acid sequence FQGSHVPRT (SEQ ID NO: 10 A VL CDR3 comprising a sequence that is at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more identical to a VL CDR3 sequence comprising selected from the group consisting of sequences;

いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、ＶＨ ＣＤＲ１配列、ＶＨ ＣＤＲ２配列、ＶＨ ＣＤＲ３配列、ＶＬ ＣＤＲ１配列、ＶＬ ＣＤＲ２配列、およびＶＬ ＣＤＲ３配列の組み合わせを含み、ＶＨ ＣＤＲ１配列は、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号３）またはアミノ酸配列ＮＹＷＭＴ（配列番号４）を含み；ＶＨ ＣＤＲ２配列は、アミノ酸配ＤＰＹＤＶＥ（配列番号５）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号６）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＮＨＫ（配列番号３９）を含み；ＶＨ ＣＤＲ３配列は、アミノ酸配ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含み；ＶＬ ＣＤＲ１配列は、アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＱＴＹＬＥ（配列番号５５）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＳＴＹＬＥ（配列番号５６）を含み；ＶＬ ＣＤＲ２配列は、アミノ酸配ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含み；およびＶＬ ＣＤＲ３配列は、アミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含む。 In some embodiments, the activatable antibody comprises a combination of VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, and VL CDR3 sequences, wherein the VH CDR1 sequence comprises the amino acid sequence GYTFTNY (SEQ ID NO:3) or the amino acid sequence NYWMT (SEQ ID NO:4); the VH CDR2 sequence comprises the amino acid sequence DPYDVE (SEQ ID NO:5) or the amino acid sequence RIDPYDVETHYAQKFQG (SEQ ID NO:6) or the amino acid sequence RIDPYDVETHYNHK (SEQ ID NO:39) the VH CDR3 sequence comprises the amino acid sequence GGVGGMDY (SEQ ID NO:7); the VL CDR1 sequence comprises the amino acid sequence RSSQSIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO:8) or RSSQSIVHSSGNTYLE (SEQ ID NO:40) or RSSQSIVHSSGQTYLE (SEQ ID NO:55) or RSSQSIVHSSGSTYLE (SEQ ID NO:56); ); the VL CDR2 sequence comprises the amino acid sequence RVSKRFS (SEQ ID NO:9); and the VL CDR3 sequence comprises the amino acid sequence FQGSHVPRT (SEQ ID NO:10).

いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、ＶＨ ＣＤＲ１配列、ＶＨ ＣＤＲ２配列、ＶＨ ＣＤＲ３配列、ＶＬ ＣＤＲ１配列、ＶＬ ＣＤＲ２配列、およびＶＬ ＣＤＲ３配列の組み合わせを含み、ＶＨ ＣＤＲ１配列は、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号３）またはアミノ酸配列ＮＹＷＭＴ（配列番号４）を含み；ＶＨ ＣＤＲ２配列は、アミノ酸配列ＤＰＹＤＶＥ（配列番号５）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号６）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＮＨＫ（配列番号３９）を含むＶＨ ＣＤＲ２配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一である配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３配列は、アミノ酸配列ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含むＶＨ ＣＤＲ３配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一である配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１配列は、アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＱＴＹＬＥ（配列番号５５）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＳＴＹＬＥ（配列番号５６）を含むＶＬ ＣＤＲ１配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一である配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２配列は、アミノ酸配列ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含むＶＬ ＣＤＲ２配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一である配列を含み；およびＶＬ ＣＤＲ３配列は、アミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含むＶＬ ＣＤＲ３配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一である配列を含む。 In some embodiments, the activatable antibody comprises a combination of VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, and VL CDR3 sequences, wherein the VH CDR1 sequence comprises the amino acid sequence GYTFTNY (SEQ ID NO:3) or the amino acid sequence NYWMT (SEQ ID NO:4); the VH CDR2 sequence comprises the amino acid sequence DPYDVE (SEQ ID NO:5) or the amino acid sequence RIDPYDVETHYAQKFQG (SEQ ID NO:6) or the amino acid sequence RIDPYDVETHYNHK (SEQ ID NO:39) sequences that are at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more identical to the VH CDR2 sequences; , a VH CDR3 sequence comprising the amino acid sequence GGVGGMDY (SEQ ID NO: 7) and at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more A VL CDR1 sequence is at least 90% identical to a VL CDR1 sequence comprising the amino acid sequence RSSQSIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO:8) or RSSQSIVHSSGNTYLE (SEQ ID NO:40) or RSSQSIVHSSGQTYLE (SEQ ID NO:55) or RSSQSIVHSSGSTYLE (SEQ ID NO:56). , 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more identical; the VL CDR2 sequence comprises the amino acid sequence RVSKRFS (SEQ ID NO: 9) at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more identical to the VL CDR2 sequence comprising; and the VL CDR3 sequence is at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% with a VL CDR3 sequence comprising the amino acid sequence FQGSHVPRT (SEQ ID NO: 10) or more identical sequences.

いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＣＤ４７へのＡＢの結合の解離定数よりも大きいＡＢへの結合の解離定数を有する。 In some embodiments, the MM has a dissociation constant for binding to AB that is greater than the dissociation constant for binding of AB to CD47.

いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＣＤ４７へのＡＢの結合の解離定数以下であるＡＢへの結合の解離定数を有する。 In some embodiments, the MM has a dissociation constant for binding to AB that is less than or equal to the dissociation constant for binding of AB to CD47.

いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＣＤ４７へのＡＢの結合の解離定数に等しいＡＢへの結合の解離定数を有する。 In some embodiments, the MM has a dissociation constant for binding to AB equal to the dissociation constant for binding of AB to CD47.

いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＣＤ４７へのＡＢの結合の解離定数よりも小さいＡＢへの結合の解離定数を有する。 In some embodiments, the MM has a dissociation constant for binding to AB that is less than the dissociation constant for binding of AB to CD47.

いくつかの実施形態では、ＡＢに対するＭＭの解離定数（Ｋｄ）は、ＣＤ４７標的に対するＡＢの解離定数の２、３、４、５、１０、２５、５０、１００、２５０、５００、１，０００、２，５００、５，０００、１０，０００、５０，０００、１００，０００、５００，０００、１，０００，０００、５，０００，０００、１０，０００，０００、５０，０００，０００倍もしくはそれを超える程度であるか、または１～５、５～１０、１０～１００、１０～１，０００、１０～１０，０００、１０～１００，０００、１０～１，０００，０００、１０～１０，０００，０００、１００～１，０００、１００～１０，０００、１００～１００，０００、１００～１，０００，０００、１００～１０，０００，０００、１，０００～１０，０００、１，０００～１００，０００、１，０００～１，０００，０００、１０００～１０，０００，０００、１０，０００～１００，０００、１０，０００～１，０００，０００、１０，０００～１０，０００，０００、１００，０００～１，０００，０００もしくは１００，０００～１０，０００，０００倍もしくはそれを超える程度である。 In some embodiments, the dissociation constant ( Kd ) of MM for AB is 2, 3, 4, 5, 10, 25, 50, 100, 250, 500, 1,000 that of AB for its CD47 target. , 2,500, 5,000, 10,000, 50,000, 100,000, 500,000, 1,000,000, 5,000,000, 10,000,000 or 1 to 5, 5 to 10, 10 to 100, 10 to 1,000, 10 to 10,000, 10 to 100,000, 10 to 1,000,000, 10 to 10 100-10000 ~100,000, 1,000 to 1,000,000, 1000 to 10,000,000, 10,000 to 100,000, 10,000 to 1,000,000, 10,000 to 10,000,000 , 100,000 to 1,000,000 or 100,000 to 10,000,000 times or more.

いくつかの実施形態では、ＭＭは、活性化可能抗体が切断状態にある場合、ＣＤ４７への結合に関し、ＡＢに干渉も競合もしない。 In some embodiments, MM does not interfere with or compete with AB for binding to CD47 when the activatable antibody is in a cleaved state.

いくつかの実施形態では、ＭＭは、約２～４０アミノ酸長のポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＭＭは、最大約４０アミノ酸長のポリペプチドである。 In some embodiments, the MM is a polypeptide about 2-40 amino acids long. In some embodiments, the MM is a polypeptide up to about 40 amino acids in length.

いくつかの実施形態では、ＭＭポリペプチド配列は、ＣＤ４７のポリペプチド配列とは異なる。いくつかの実施形態では、ＭＭポリペプチド配列は、ＡＢのいずれかの天然の結合パートナーに対する同一性が、５０％以下である。いくつかの実施形態では、ＭＭポリペプチド配列は、ＣＤ４７のポリペプチド配列とは異なり、ＡＢのいずれかの天然の結合パートナーに対する同一性が４０％、３０％、２５％、２０％、１５％、または１０％以下である。 In some embodiments, the MM polypeptide sequence differs from that of CD47. In some embodiments, the MM polypeptide sequence has 50% or less identity to any of the natural binding partners of AB. In some embodiments, the MM polypeptide sequence differs from the polypeptide sequence of CD47 by 40%, 30%, 25%, 20%, 15% identity to any of the natural binding partners of AB, Or 10% or less.

いくつかの実施形態では、ＡＢへのＭＭのカップリングは、ＭＭにカップリングされる場合のＡＢのＣＤ４７に対する解離定数（Ｋｄ）が、ＭＭにカップリングされない場合のＡＢのＣＤ４７に対するＫｄよりも少なくとも２倍大きいように、ＣＤ４７を結合するＡＢの能力を低減させる。 In some embodiments, the coupling of MM to AB is such that the dissociation constant ( Kd ) of AB for CD47 when coupled to MM is greater than the Kd for CD47 of AB when not coupled to MM. reduces the ability of ABs to bind CD47 such that the .

いくつかの実施形態では、ＡＢへのＭＭのカップリングは、ＭＭにカップリングされる場合のＡＢのＣＤ４７に対する解離定数（Ｋｄ）が、ＭＭにカップリングされない場合のＡＢのＣＤ４７に対するＫｄよりも少なくとも５倍大きいように、ＣＤ４７を結合するＡＢの能力を低減させる。 In some embodiments, the coupling of MM to AB is such that the dissociation constant ( Kd ) of AB for CD47 when coupled to MM is greater than the Kd for CD47 of AB when not coupled to MM. reduces the ability of ABs to bind CD47 such that the Δ is at least five times greater.

いくつかの実施形態では、ＡＢへのＭＭのカップリングは、ＭＭにカップリングされる場合のＡＢのＣＤ４７に対する解離定数（Ｋｄ）が、ＭＭにカップリングされない場合のＡＢのＣＤ４７に対するＫｄよりも少なくとも１０倍大きいように、ＣＤ４７を結合するＡＢの能力を低減させる。 In some embodiments, the coupling of MM to AB is such that the dissociation constant ( Kd ) of AB for CD47 when coupled to MM is greater than the Kd for CD47 of AB when not coupled to MM. reduces the ability of ABs to bind CD47 such that the Δ is at least 10 times greater.

いくつかの実施形態では、ＡＢへのＭＭのカップリングは、ＭＭにカップリングされる場合のＡＢのＣＤ４７に対する解離定数（Ｋｄ）が、ＭＭにカップリングされない場合のＡＢのＣＤ４７に対するＫｄよりも少なくとも２０倍大きいように、ＣＤ４７を結合するＡＢの能力を低減させる。 In some embodiments, the coupling of MM to AB is such that the dissociation constant ( Kd ) of AB for CD47 when coupled to MM is greater than the Kd for CD47 of AB when not coupled to MM. reduces the ability of ABs to bind CD47 such that the Δ is at least 20 times greater.

いくつかの実施形態では、ＡＢへのＭＭのカップリングは、ＭＭにカップリングされる場合のＡＢのＣＤ４７に対する解離定数（Ｋｄ）が、ＭＭにカップリングされない場合のＡＢのＣＤ４７に対するＫｄよりも少なくとも４０倍大きいように、ＣＤ４７を結合するＡＢの能力を低減させる。 In some embodiments, the coupling of MM to AB is such that the dissociation constant ( Kd ) of AB for CD47 when coupled to MM is greater than the Kd for CD47 of AB when not coupled to MM. also reduces the ability of ABs to bind CD47 such that Δ is at least 40-fold greater.

いくつかの実施形態では、ＡＢへのＭＭのカップリングは、ＭＭにカップリングされる場合のＡＢのＣＤ４７に対する解離定数（Ｋｄ）が、ＭＭにカップリングされない場合のＡＢのＣＤ４７に対するＫｄよりも少なくとも１００倍大きいように、ＣＤ４７を結合するＡＢの能力を低減させる。 In some embodiments, the coupling of MM to AB is such that the dissociation constant ( Kd ) of AB for CD47 when coupled to MM is greater than the Kd for CD47 of AB when not coupled to MM. reduces the ability of ABs to bind CD47 such that Δ is at least 100-fold greater.

いくつかの実施形態では、ＡＢへのＭＭのカップリングは、ＭＭにカップリングされる場合のＡＢのＣＤ４７に対する解離定数（Ｋｄ）が、ＭＭにカップリングされない場合のＡＢのＣＤ４７に対するＫｄよりも少なくとも１，０００倍大きいように、ＣＤ４７を結合するＡＢの能力を低減させる。 In some embodiments, the coupling of MM to AB is such that the dissociation constant ( Kd ) of AB for CD47 when coupled to MM is greater than the Kd for CD47 of AB when not coupled to MM. reduces the ability of ABs to bind CD47 such that the binding capacity of AB is at least 1,000-fold greater.

いくつかの実施形態では、ＡＢへのＭＭのカップリングは、ＭＭにカップリングされる場合のＡＢのＣＤ４７に対する解離定数（Ｋｄ）が、ＭＭにカップリングされない場合のＡＢのＣＤ４７に対するＫｄよりも少なくとも１０，０００倍大きいように、ＣＤ４７を結合するＡＢの能力を低減させる。 In some embodiments, the coupling of MM to AB is such that the dissociation constant ( Kd ) of AB for CD47 when coupled to MM is greater than the Kd for CD47 of AB when not coupled to MM. also reduces the ability of ABs to bind CD47 such that it is at least 10,000-fold greater.

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７の存在下で、ＭＭは、例えば、内容の全体が参照により本明細書に組み入れられる国際公開第２０１０／０８１１７３号において記述されるアッセイなどの、標的置換（ｔａｒｇｅｔ ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ）アッセイを用いてインビトロでアッセイした場合、ＣＭが切断されている場合と比較して、ＣＭが切断されていない場合、ＣＤ４７を結合するＡＢの能力を少なくとも９０％だけ低減する。 In some embodiments, in the presence of CD47, MM is used for target displacement, e.g., assays described in WO2010/081173, the entire contents of which are incorporated herein by reference. ) reduces the ability of ABs to bind CD47 by at least 90% when the CM is uncleaved compared to when the CM is cleaved, when assayed in vitro using the assay.

いくつかの実施形態では、ＭＭは、配列番号１６～２９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＭＭは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＭＭは、配列番号２３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＭＭは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＭＭは、配列番号２６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＭＭは、配列番号２７のアミノ酸配列を含む。 In some embodiments, the MM comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs:16-29. In some embodiments, the MM comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO:17. In some embodiments, the MM comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO:23. In some embodiments, the MM comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO:24. In some embodiments, the MM comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO:26. In some embodiments, the MM comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO:27.

いくつかの実施形態では、ＣＭを切断するプロテアーゼは、患部組織において、活性であり、例えば上方制御されるか、あるいは未制御であり、プロテアーゼは、活性化可能抗体がプロテアーゼに曝露されると、活性化可能抗体中のＣＭを切断する。 In some embodiments, the CM-cleaving protease is active, e.g., upregulated, or unregulated in the diseased tissue, and the protease is activatable upon exposure of the antibody to the protease. Cleaves the CM in the activatable antibody.

いくつかの実施形態では、プロテアーゼは、組織中でＣＤ４７と共局在し、プロテアーゼは、活性化可能抗体がプロテアーゼに曝露されると、活性化可能抗体中のＣＭを切断する。 In some embodiments, the protease co-localizes with CD47 in the tissue, and the protease cleaves CM in the activatable antibody when the activatable antibody is exposed to the protease.

いくつかの実施形態では、ＣＭは、活性化可能抗体が非切断状態にある場合、ＣＤ４７への活性化可能抗体の結合が、ＣＤ４７への修飾されていないＡＢの結合の解離定数の少なくとも２倍の解離定数で起こるように低下され、一方で切断された状態にある場合（すなわち、活性化可能抗体が切断された状態にある場合）、ＡＢがＣＤ４７を結合するように、活性化可能抗体中に配置される。 In some embodiments, the CM is such that binding of the activatable antibody to CD47 is at least twice the dissociation constant for binding of unmodified AB to CD47 when the activatable antibody is in the uncleaved state. in the activatable antibody such that AB binds CD47 when in a cleaved state (i.e., when the activatable antibody is in a cleaved state) while being lowered to occur with a dissociation constant of placed in

いくつかの実施形態では、ＣＭは、活性化可能抗体が非切断状態にある場合、ＣＤ４７への活性化可能抗体の結合が、ＣＤ４７への修飾されていないＡＢの結合の解離定数の少なくとも５倍の解離定数で起こるように低下され、一方で切断された状態にある場合（すなわち、活性化可能抗体が切断された状態にある場合）、ＡＢがＣＤ４７を結合するように、活性化可能抗体中に配置される。 In some embodiments, the CM is such that binding of the activatable antibody to CD47 is at least 5 times the dissociation constant for binding of unmodified AB to CD47 when the activatable antibody is in the uncleaved state. in the activatable antibody such that AB binds CD47 when in a cleaved state (i.e., when the activatable antibody is in a cleaved state) while being lowered to occur with a dissociation constant of placed in

いくつかの実施形態では、ＣＭは、活性化可能抗体が非切断状態にある場合、ＣＤ４７への活性化可能抗体の結合が、ＣＤ４７への修飾されていないＡＢの結合の解離定数の少なくとも１０倍の解離定数で起こるように低下され、一方で切断された状態にある場合（すなわち、活性化可能抗体が切断された状態にある場合）、ＡＢがＣＤ４７を結合するように、活性化可能抗体中に配置される。 In some embodiments, the CM is such that binding of the activatable antibody to CD47 is at least 10 times the dissociation constant for binding of unmodified AB to CD47 when the activatable antibody is in the uncleaved state. in the activatable antibody such that AB binds CD47 when in a cleaved state (i.e., when the activatable antibody is in a cleaved state) while being lowered to occur with a dissociation constant of placed in

いくつかの実施形態では、ＣＭは、活性化可能抗体が非切断状態にある場合、ＣＤ４７への活性化可能抗体の結合が、ＣＤ４７への修飾されていないＡＢの結合の解離定数の少なくとも２０倍の解離定数で起こるように低下され、一方で切断された状態にある場合（すなわち、活性化可能抗体が切断された状態にある場合）、ＡＢがＣＤ４７を結合するように、活性化可能抗体中に配置される。 In some embodiments, the CM is such that binding of the activatable antibody to CD47 is at least 20 times the dissociation constant for binding of unmodified AB to CD47 when the activatable antibody is in the uncleaved state. in the activatable antibody such that AB binds CD47 when in a cleaved state (i.e., when the activatable antibody is in a cleaved state) while being lowered to occur with a dissociation constant of placed in

いくつかの実施形態では、ＣＭは、活性化可能抗体が非切断状態にある場合、ＣＤ４７への活性化可能抗体の結合が、ＣＤ４７への修飾されていないＡＢの結合の解離定数の少なくとも４０倍の解離定数で起こるように低下され、一方で切断状態にある場合、ＡＢがＣＤ４７を結合するように、活性化可能抗体中に配置される。 In some embodiments, the CM is such that binding of the activatable antibody to CD47 is at least 40 times the dissociation constant for binding of unmodified AB to CD47 when the activatable antibody is in the uncleaved state. is placed in the activatable antibody such that AB binds CD47 when in the cleaved state, while being lowered to occur with a dissociation constant of .

いくつかの実施形態では、ＣＭは、活性化可能抗体が非切断状態にある場合、ＣＤ４７への活性化可能抗体の結合が、ＣＤ４７への修飾されていないＡＢの結合の解離定数の少なくとも５０倍の解離定数で起こるように低下され、一方で切断された状態にある場合、ＡＢがＣＤ４７を結合するように、活性化可能抗体中に配置される。 In some embodiments, the CM is such that binding of the activatable antibody to CD47 is at least 50 times the dissociation constant for binding of unmodified AB to CD47 when the activatable antibody is in the uncleaved state. is placed in the activatable antibody such that AB binds CD47 when in the cleaved state while being lowered to occur with a dissociation constant of .

いくつかの実施形態では、ＣＭは、活性化可能抗体が非切断状態にある場合、ＣＤ４７への活性化可能抗体の結合が、ＣＤ４７への修飾されていないＡＢの結合の解離定数の少なくとも１００倍の解離定数で起こるように低下され、一方で切断された状態にある場合、ＡＢがＣＤ４７を結合するように、活性化可能抗体中に配置される。 In some embodiments, the CM is such that binding of the activatable antibody to CD47 is at least 100 times the dissociation constant for binding of unmodified AB to CD47 when the activatable antibody is in the uncleaved state. is placed in the activatable antibody such that AB binds CD47 when in the cleaved state while being lowered to occur with a dissociation constant of .

いくつかの実施形態では、ＣＭは、活性化可能抗体が非切断状態にある場合、ＣＤ４７への活性化可能抗体の結合が、ＣＤ４７への修飾されていないＡＢの結合の解離定数の少なくとも２００倍の解離定数で起こるように低下され、一方で切断された状態にある場合、ＡＢがＣＤ４７を結合するように、活性化可能抗体中に配置される。 In some embodiments, the CM is such that binding of the activatable antibody to CD47 is at least 200 times the dissociation constant for binding of unmodified AB to CD47 when the activatable antibody is in the uncleaved state. is placed in the activatable antibody such that AB binds CD47 when in the cleaved state while being lowered to occur with a dissociation constant of .

いくつかの実施形態では、ＣＭは、最大１５アミノ酸長のポリペプチドである。 In some embodiments, CM is a polypeptide up to 15 amino acids long.

いくつかの実施形態では、ＣＭは、少なくとも１種のマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）の基質である第１の切断可能部分（ＣＭ１）と、少なくとも１種類のセリンプロテアーゼ（ＳＰ）の基質である第２の切断可能部分（ＣＭ２）を含むポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質のそれぞれのＣＭ１基質配列およびＣＭ２基質配列は、独立に、最大１５アミノ酸長のポリペプチドである。 In some embodiments, the CM comprises a first cleavable moiety (CM1) that is a substrate for at least one matrix metalloprotease (MMP) and a second cleavable moiety (CM1) that is a substrate for at least one serine protease (SP). is a polypeptide containing a cleavable portion (CM2) of In some embodiments, each CM1 substrate sequence and CM2 substrate sequence of CM1-CM2 substrates is independently a polypeptide up to 15 amino acids in length.

いくつかの実施形態では、ＣＭは、癌において上方制御されるか、あるいは未制御であり、または癌において上方制御されるか、あるいは未制御であると考えられている、少なくとも１種のプロテアーゼの基質である。 In some embodiments, the CM is upregulated or unregulated in cancer, or at least one protease believed to be upregulated or unregulated in cancer. Substrate.

いくつかの実施形態では、ＣＭは、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）、トロンビン、好中球エラスターゼ、システインプロテアーゼ、レグマイン、およびセリンプロテアーゼ、例えば、マトリプターゼ（ＭＴ－ＳＰ１）、ならびにウロキナーゼ（ｕＰＡ）からなる群より選択される少なくとも１種のプロテアーゼの基質である。理論に束縛されるものではないが、これらのプロテアーゼは、癌の少なくとも１つにおいて上方制御されるか、あるいは未制御であると考えられている。 In some embodiments, CM consists of matrix metalloprotease (MMP), thrombin, neutrophil elastase, cysteine protease, legumain, and serine protease such as matriptase (MT-SP1), and urokinase (uPA) A substrate for at least one protease selected from the group. Without wishing to be bound by theory, these proteases are believed to be upregulated or unregulated in at least one cancer.

例示的な基質は、表Ａに列挙した以下の酵素またはプロテアーゼの１種または複数により切断可能な基質を含むが、これらに限定されない。 Exemplary substrates include, but are not limited to, substrates cleavable by one or more of the following enzymes or proteases listed in Table A.

いくつかの実施形態では、ＣＭは、特定のプロテアーゼ、例えば、活性化可能抗体の標的と共局在することが知られているプロテアーゼと共に使用するために選択される。 In some embodiments, the CM is selected for use with a particular protease, eg, a protease known to co-localize with the target of the activatable antibody.

いくつかの実施形態では、ＣＭは、少なくとも１種のＭＭＰの基質である。ＭＭＰの例は、表Ａに列挙したＭＭＰを含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、ＭＭＰ９、ＭＭＰ１４、ＭＭＰ１、ＭＭＰ３、ＭＭＰ１３、ＭＭＰ１７、ＭＭＰ１１、およびＭＭＰ１９からなる群より選択されるプロテアーゼの基質である。いくつかの実施形態では、ＣＭは、ＭＭＰ９の基質である。いくつかの実施形態では、ＣＭは、ＭＭＰ１４の基質である。 In some embodiments, CM is a substrate for at least one MMP. Examples of MMPs include those listed in Table A. In some embodiments, CM is a substrate for a protease selected from the group consisting of MMP9, MMP14, MMP1, MMP3, MMP13, MMP17, MMP11, and MMP19. In some embodiments, CM is a substrate for MMP9. In some embodiments, CM is a substrate for MMP14.

いくつかの実施形態では、ＣＭは、配列ＴＧＲＧＰＳＷＶ（配列番号３５６）；ＳＡＲＧＰＳＲＷ（配列番号３５７）；ＴＡＲＧＰＳＦＫ（配列番号３５８）；ＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号３５９）；ＧＧＷＨＴＧＲＮ（配列番号３６０）；ＨＴＧＲＳＧＡＬ（配列番号３６１）；ＰＬＴＧＲＳＧＧ（配列番号３６２）；ＡＡＲＧＰＡＩＨ（配列番号３６３）；ＲＧＰＡＦＮＰＭ（配列番号３６４）；ＳＳＲＧＰＡＹＬ（配列番号３６５）；ＲＧＰＡＴＰＩＭ（配列番号３６６）；ＲＧＰＡ（配列番号３６７）；ＧＧＱＰＳＧＭＷＧＷ（配列番号３６８）；ＦＰＲＰＬＧＩＴＧＬ（配列番号３６９）；ＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰ（配列番号３７０）；ＳＰＬＴＧＲＳＧ（配列番号３７１）；ＳＡＧＦＳＬＰＡ（配列番号３７２）；ＬＡＰＬＧＬＱＲＲ（配列番号３７３）；ＳＧＧＰＬＧＶＲ（配列番号３７４）；ＰＬＧＬ（配列番号３７５）；ＬＳＧＲＳＧＮＨ（配列番号７８９）；ＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号７９０）；ＬＳＧＲＳＤＤＨ（配列番号７９１）；ＬＳＧＲＳＤＩＨ（配列番号７９２）；ＬＳＧＲＳＤＱＨ（配列番号７９３）；ＬＳＧＲＳＤＴＨ（配列番号７９４）；ＬＳＧＲＳＤＹＨ（配列番号７９５）；ＬＳＧＲＳＤＮＰ（配列番号７９６）；ＬＳＧＲＳＡＮＰ（配列番号７９７）；ＬＳＧＲＳＡＮＩ（配列番号７９８）；ＬＳＧＲＳＤＮＩ（配列番号７９９）；ＭＩＡＰＶＡＹＲ（配列番号８００）；ＲＰＳＰＭＷＡＹ（配列番号８０１）；ＷＡＴＰＲＰＭＲ（配列番号８０２）；ＦＲＬＬＤＷＱＷ（配列番号８０３）；ＩＳＳＧＬ（配列番号８０４）；ＩＳＳＧＬＬＳ（配列番号８０５）；および／またはＩＳＳＧＬＬ（配列番号８０６）を含む基質である。 SARGPSRW (SEQ ID NO:357); TARGPSSFK (SEQ ID NO:358); LSGRSDNH (SEQ ID NO:359); GGWHTGRN (SEQ ID NO:360); PLTGRSGG (SEQ ID NO: 362); AARGPAIH (SEQ ID NO: 363); RGPAFNPM (SEQ ID NO: 364); SSRGPAYL (SEQ ID NO: 365); RGPATPIM (SEQ ID NO: 366); SPLTGRSG (SEQ ID NO:371); SAGFSLPA (SEQ ID NO:372); LAPLGLQRR (SEQ ID NO:373); SGGPLGVR (SEQ ID NO:374); PLGL (SEQ ID NO:375) LSGRSGNH (SEQ ID NO: 789); SGRSANPRG (SEQ ID NO: 790); LSGRSDDH (SEQ ID NO: 791); LSGRSDIH (SEQ ID NO: 792); LSGRSDQH (SEQ ID NO: 793); LSGRSDNP (SEQ ID NO: 796); LSGRSANP (SEQ ID NO: 797); LSGRSANI (SEQ ID NO: 798); LSGRSDNI (SEQ ID NO: 799); MIAPVAYR (SEQ ID NO: 800); (SEQ ID NO: 803); ISSGL (SEQ ID NO: 804); ISSGLLS (SEQ ID NO: 805); and/or ISSGLL (SEQ ID NO: 806).

いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号３５９）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＴＧＲＧＰＳＷＶ（配列番号３５６）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＰＬＴＧＲＳＧＧ（配列番号３６２）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＧＧＱＰＳＧＭＷＧＷ（配列番号３６８）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＦＰＲＰＬＧＩＴＧＬ（配列番号３６９）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰ（配列番号３７０）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＰＬＧＬ（配列番号３７５）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＳＡＲＧＰＳＲＷ（配列番号３５７）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＴＡＲＧＰＳＦＫ（配列番号３５８）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＧＧＷＨＴＧＲＮ（配列番号３６０）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＨＴＧＲＳＧＡＬ（配列番号３６１）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＡＡＲＧＰＡＩＨ（配列番号３６３）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＲＧＰＡＦＮＰＭ（配列番号３６４）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＳＳＲＧＰＡＹＬ（配列番号３６５）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＲＧＰＡＴＰＩＭ（配列番号３６６）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＲＧＰＡ（配列番号３６７）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭはアミノ酸配列ＬＳＧＲＳＧＮＨ（配列番号７８９）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭはアミノ酸配列ＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号７９０）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭはアミノ酸配列ＬＳＧＲＳＤＤＨ（配列番号７９１）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭはアミノ酸配列ＬＳＧＲＳＤＩＨ（配列番号７９２）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭはアミノ酸配列ＬＳＧＲＳＤＱＨ（配列番号７９３）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭはアミノ酸配列ＬＳＧＲＳＤＴＨ（配列番号７９４）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭはアミノ酸配列ＬＳＧＲＳＤＹＨ（配列番号７９５）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭはアミノ酸配列ＬＳＧＲＳＤＮＰ（配列番号７９６）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭはアミノ酸配列ＬＳＧＲＳＡＮＰ（配列番号７９７）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭはアミノ酸配列ＬＳＧＲＳＡＮＩ（配列番号７９８）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭはアミノ酸配列ＬＳＧＲＳＤＮＩ（配列番号７９９）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭはアミノ酸配列ＭＩＡＰＶＡＹＲ（配列番号８００）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭはアミノ酸配列ＲＰＳＰＭＷＡＹ（配列番号８０１）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭはアミノ酸配列ＷＡＴＰＲＰＭＲ（配列番号８０２）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭはアミノ酸配列ＦＲＬＬＤＷＱＷ（配列番号８０３）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭはアミノ酸配列ＩＳＳＧＬ（配列番号８０４）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭはアミノ酸配列ＩＳＳＧＬＬＳ（配列番号８０５）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭはアミノ酸配列および／またはＩＳＳＧＬＬ（配列番号８０６）を含む。 In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence LSGRSDNH (SEQ ID NO:359). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence TGRGPSWV (SEQ ID NO:356). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence PLTGRSGG (SEQ ID NO:362). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence GGQPSGMWGW (SEQ ID NO:368). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence FPRPLGITGL (SEQ ID NO:369). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence VHMPLGFLGP (SEQ ID NO:370). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence PLGL (SEQ ID NO:375). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence SARGPSRW (SEQ ID NO:357). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence TARGPSSFK (SEQ ID NO:358). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence GGWHTGRN (SEQ ID NO:360). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence HTGRSGAL (SEQ ID NO:361). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence AARGPAIH (SEQ ID NO:363). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence RGPAFNPM (SEQ ID NO:364). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence SSRGPAYL (SEQ ID NO:365). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence RGPATPIM (SEQ ID NO:366). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence RGPA (SEQ ID NO:367). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence LSGRSGNH (SEQ ID NO:789). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence SGRSANPRG (SEQ ID NO:790). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence LSGRSDDH (SEQ ID NO:791). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence LSGRSDIH (SEQ ID NO:792). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence LSGRSDQH (SEQ ID NO:793). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence LSGRSDTH (SEQ ID NO:794). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence LSGRSDYH (SEQ ID NO:795). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence LSGRSDNP (SEQ ID NO:796). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence LSGRSANP (SEQ ID NO:797). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence LSGRSANI (SEQ ID NO:798). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence LSGRSDNI (SEQ ID NO:799). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence MIAPVAYR (SEQ ID NO:800). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence RPSPMWAY (SEQ ID NO:801). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence WATPRPMR (SEQ ID NO:802). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence FRLLDWQW (SEQ ID NO:803). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence ISSGL (SEQ ID NO:804). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence ISSGLLS (SEQ ID NO:805). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence and/or ISSGLL (SEQ ID NO:806).

いくつかの実施形態では、ＣＭは、ＭＭＰの基質であり、配列ＩＳＳＧＬＳＳ（配列番号３７６）；ＱＮＱＡＬＲＭＡ（配列番号３７７）；ＡＱＮＬＬＧＭＶ（配列番号３７８）；ＳＴＦＰＦＧＭＦ（配列番号３７９）；ＰＶＧＹＴＳＳＬ（配列番号３８０）；ＤＷＬＹＷＰＧＩ（配列番号３８１），ＩＳＳＧＬＬＳＳ（配列番号３８２），ＬＫＡＡＰＲＷＡ（配列番号３８３）；ＧＰＳＨＬＶＬＴ（配列番号３８４）；ＬＰＧＧＬＳＰＷ（配列番号３８５）；ＭＧＬＦＳＥＡＧ（配列番号３８６）；ＳＰＬＰＬＲＶＰ（配列番号３８７）；ＲＭＨＬＲＳＬＧ（配列番号３８８）；ＬＡＡＰＬＧＬＬ（配列番号３８９）；ＡＶＧＬＬＡＰＰ（配列番号３９０）；ＬＬＡＰＳＨＲＡ（配列番号３９１）；ＰＡＧＬＷＬＤＰ（配列番号３９２）；ＡＬＡＨＧＬＦ（配列番号４２４）；ＤＬＡＨＰＬＬ（配列番号４２５）；ＡＦＲＨＬＲ（配列番号４２６）；ＰＨＧＦＦＱ（配列番号４２７）；ＳＶＨＨＬＩ（配列番号４２８）；ＲＧＰＫＬＹＷ（配列番号４２９）；ＲＦＰＹＧＶＷ（配列番号４３０）；ＨＶＰＲＱＶ（配列番号４３１）；ＳＮＰＦＫＹ（配列番号４３２）；ＲＦＰＬＫＶ（配列番号４３３）；ＰＦＨＬＳＲ（配列番号４３４）；ＳＴＶＦＨＭ（配列番号４３５）；ＭＧＰＷＦＭ（配列番号４３６）；ＲＨＬＡＫＬ（配列番号４３７）；ＰＬＧＶＲＧＫ（配列番号４３８）；および／またはＱＮＱＡＬＲＩＡ（配列番号４３９）を含む。 In some embodiments, CM is a substrate of an MMP and has the sequence ISSGLSS (SEQ ID NO:376); QNQALRMA (SEQ ID NO:377); AQNLLGMV (SEQ ID NO:378); STFPFGMF (SEQ ID NO:379); ); DWLYWPGI (SEQ ID NO: 381), ISSGLLSS (SEQ ID NO: 382), LKAAPRWA (SEQ ID NO: 383); GPSHLVLT (SEQ ID NO: 384); LPGGLSPW (SEQ ID NO: 385); RMHLRSLG (SEQ ID NO: 388); LAAPLGLL (SEQ ID NO: 389); AVGLLAPP (SEQ ID NO: 390); LLAPSHRA (SEQ ID NO: 391); PAGLWLDP (SEQ ID NO: 392); AFRHLR (SEQ ID NO: 426); PHGFFQ (SEQ ID NO: 427); SVHHLI (SEQ ID NO: 428); RGPKLYW (SEQ ID NO: 429); RFPYGVW (SEQ ID NO: 430); PFHLSR (SEQ ID NO:434); STVFHM (SEQ ID NO:435); MGPWFM (SEQ ID NO:436); RHLAKL (SEQ ID NO:437); PLGVRGK (SEQ ID NO:438); including.

いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＩＳＳＧＬＳＳ（配列番号３７６）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＱＮＱＡＬＲＭＡ（配列番号３７７）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＡＱＮＬＬＧＭＶ（配列番号３７８）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＳＴＦＰＦＧＭＦ（配列番号３７９）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＰＶＧＹＴＳＳＬ（配列番号３８０）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＤＷＬＹＷＰＧＩ（配列番号３８１）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＩＳＳＧＬＬＳＳ（配列番号３８２）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＬＫＡＡＰＲＷＡ（配列番号３８３）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＧＰＳＨＬＶＬＴ（配列番号３８４）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＬＰＧＧＬＳＰＷ（配列番号３８５）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＭＧＬＦＳＥＡＧ（配列番号３８６）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＳＰＬＰＬＲＶＰ（配列番号３８７）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＲＭＨＬＲＳＬＧ（配列番号３８８）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＬＡＡＰＬＧＬＬ（配列番号３８９）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＡＶＧＬＬＡＰＰ（配列番号３９０）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＬＬＡＰＳＨＲＡ（配列番号３９１）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＰＡＧＬＷＬＤＰ（配列番号３９２）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭはアミノ酸配列ＡＬＡＨＧＬＦ（配列番号４２４）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭはアミノ酸配列ＤＬＡＨＰＬＬ（配列番号４２５）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭはアミノ酸配列ＡＦＲＨＬＲ（配列番号４２６）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭはアミノ酸配列ＰＨＧＦＦＱ（配列番号４２７）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭはアミノ酸配列ＳＶＨＨＬＩ（配列番号４２８）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭはアミノ酸配列ＲＧＰＫＬＹＷ（配列番号４２９）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭはアミノ酸配列ＲＦＰＹＧＶＷ（配列番号４３０）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭはアミノ酸配列ＨＶＰＲＱＶ（配列番号４３１）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭはアミノ酸配列ＳＮＰＦＫＹ（配列番号４３２）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭはアミノ酸配列ＲＦＰＬＫＶ（配列番号４３３）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭはアミノ酸配列ＰＦＨＬＳＲ（配列番号４３４）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭはアミノ酸配列ＳＴＶＦＨＭ（配列番号４３５）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭはアミノ酸配列ＭＧＰＷＦＭ（配列番号４３６）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭはアミノ酸配列ＲＨＬＡＫＬ（配列番号４３７）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭはアミノ酸配列ＰＬＧＶＲＧＫ（配列番号４３８）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭはアミノ酸配列ＱＮＱＡＬＲＩＡ（配列番号４３９）を含む。 In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence ISSGLSS (SEQ ID NO:376). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence QNQALRMA (SEQ ID NO:377). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence AQNLLGMV (SEQ ID NO:378). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence STFPFGMF (SEQ ID NO:379). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence PVGYTSSL (SEQ ID NO:380). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence DWLYWPGI (SEQ ID NO:381). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence ISSGLLSS (SEQ ID NO:382). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence LKAAPRWA (SEQ ID NO:383). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence GPSHLVLT (SEQ ID NO:384). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence LPGGLSPW (SEQ ID NO:385). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence MGLFSEAG (SEQ ID NO:386). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence SPPLLRVP (SEQ ID NO:387). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence RMHLRSLG (SEQ ID NO:388). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence LAAPLGLL (SEQ ID NO:389). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence AVGLLAPP (SEQ ID NO:390). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence LLAPSHRA (SEQ ID NO:391). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence PAGLWLDP (SEQ ID NO:392). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence ALAHGLF (SEQ ID NO:424). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence DLAHPLL (SEQ ID NO:425). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence AFRHLR (SEQ ID NO:426). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence PHGFFQ (SEQ ID NO:427). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence SVHHLI (SEQ ID NO:428). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence RGPKLYW (SEQ ID NO:429). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence RFPYGVW (SEQ ID NO:430). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence HVPRQV (SEQ ID NO:431). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence SNPFKY (SEQ ID NO:432). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence RFPLKV (SEQ ID NO:433). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence PFHLSR (SEQ ID NO:434). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence STVFHM (SEQ ID NO:435). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence MGPWFM (SEQ ID NO:436). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence RHLAKL (SEQ ID NO:437). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence PLGVRGK (SEQ ID NO:438). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence QNQALRIA (SEQ ID NO:439).

いくつかの実施形態では、ＣＭは、トロンビンの基質である。いくつかの実施形態では、ＣＭは、トロンビンの基質であり、配列ＧＰＲＳＦＧＬ（配列番号３９３）またはＧＰＲＳＦＧ（配列番号３９４）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＧＰＲＳＦＧＬ（配列番号３９３）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＧＰＲＳＦＧ（配列番号３９４）を含む。 In some embodiments, CM is a substrate for thrombin. In some embodiments, CM is a substrate for thrombin and comprises the sequence GPRSFGL (SEQ ID NO:393) or GPRSFG (SEQ ID NO:394). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence GPRSFGL (SEQ ID NO:393). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence GPRSFG (SEQ ID NO:394).

いくつかの実施形態では、ＣＭは、ＮＴＬＳＧＲＳＥＮＨＳＧ（配列番号３９５）；ＮＴＬＳＧＲＳＧＮＨＧＳ（配列番号３９６）；ＴＳＴＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号３９７）；ＴＳＧＲＳＡＮＰ（配列番号３９８）；ＶＡＧＲＳＭＲＰ（配列番号３９９）；ＶＶＰＥＧＲＲＳ（配列番号４００）；ＩＬＰＲＳＰＡＦ（配列番号４０１）；ＭＶＬＧＲＳＬＬ（配列番号４０２）；ＱＧＲＡＩＴＦＩ（配列番号４０３）；ＳＰＲＳＩＭＬＡ（配列番号４０４）；およびＳＭＬＲＳＭＰＬ（配列番号４０５）からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。 In some embodiments, CM is NTLSGRSENHSG (SEQ ID NO:395); NTTLSGRSGNHGS (SEQ ID NO:396); TSTSGRSANPRG (SEQ ID NO:397); TSGRSANP (SEQ ID NO:398); MVLGRSLL (SEQ ID NO:402); QGRAITFI (SEQ ID NO:403); SPRSIMLA (SEQ ID NO:404); and SMLRSMPL (SEQ ID NO:405).

いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＮＴＬＳＧＲＳＥＮＨＳＧ（配列番号３９５）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＮＴＬＳＧＲＳＧＮＨＧＳ（配列番号３９６）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＴＳＴＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号３９７）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＴＳＧＲＳＡＮＰ（配列番号３９８）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＶＡＧＲＳＭＲＰ（配列番号３９９）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＶＶＰＥＧＲＲＳ（配列番号４００）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＩＬＰＲＳＰＡＦ（配列番号４０１）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＭＶＬＧＲＳＬＬ（配列番号４０２）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＱＧＲＡＩＴＦＩ（配列番号４０３）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＳＰＲＳＩＭＬＡ（配列番号４０４）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸配列ＳＭＬＲＳＭＰＬ（配列番号４０５）を含む。 In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence NTLSGRSENHSG (SEQ ID NO:395). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence NTLSGRSGNHGS (SEQ ID NO:396). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence TSTSGRSANPRG (SEQ ID NO:397). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence TSGRSANP (SEQ ID NO:398). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence VAGRSMRP (SEQ ID NO:399). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence VVPEGRRS (SEQ ID NO:400). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence ILPRSPAF (SEQ ID NO:401). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence MVLGRSLL (SEQ ID NO:402). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence QGRAITFI (SEQ ID NO:403). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence SPRSIMLA (SEQ ID NO:404). In some embodiments, CM comprises the amino acid sequence SMLRSMPL (SEQ ID NO:405).

いくつかの実施形態では、ＣＭは、好中球エラスターゼの基質である。いくつかの実施形態では、ＣＭは、セリンプロテアーゼの基質である。いくつかの実施形態では、ＣＭは、ｕＰＡの基質である。いくつかの実施形態では、ＣＭは、レグマインの基質である。いくつかの実施形態では、ＣＭは、マトリプターゼの基質である。いくつかの実施形態では、ＣＭは、セリンプロテアーゼの基質である。いくつかの実施形態では、ＣＭは、カテプシンなどの、システインプロテアーゼの基質である。 In some embodiments, CM is a substrate for neutrophil elastase. In some embodiments, CM is a substrate for a serine protease. In some embodiments, CM is a substrate for uPA. In some embodiments, CM is a substrate for legumain. In some embodiments, CM is a substrate for matriptase. In some embodiments, CM is a substrate for a serine protease. In some embodiments, CM is a substrate for cysteine proteases, such as cathepsins.

いくつかの実施形態では、ＣＭは、ＣＭ１－ＣＭ２基質であり、配列ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号４０６）；ＩＳＳＧＬＬＳＳＧＧＳＧＧＳＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号４０７）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＴＳＴＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号４０８）；ＴＳＴＳＧＲＳＡＮＰＲＧＧＧＡＶＧＬＬＡＰＰ（配列番号４０９）；ＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰＧＧＴＳＴＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号４１０）；ＴＳＴＳＧＲＳＡＮＰＲＧＧＧＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰ（配列番号４１１）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号４１２）；ＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＡＶＧＬＬＡＰＰ（配列番号４１３）；ＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰＧＧＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号４１４）；ＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰ（配列番号４１５）；ＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＳＧＧＳＩＳＳＧＬＬＳＳ（配列番号４１６）；ＬＳＧＲＳＧＮＨＧＧＳＧＧＳＩＳＳＧＬＬＳＳ（配列番号４１７）；ＩＳＳＧＬＬＳＳＧＧＳＧＧＳＬＳＧＲＳＧＮＨ（配列番号４１８）；ＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＳＧＧＳＱＮＱＡＬＲＭＡ（配列番号４１９）；ＱＮＱＡＬＲＭＡＧＧＳＧＧＳＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号４２０）；ＬＳＧＲＳＧＮＨＧＧＳＧＧＳＱＮＱＡＬＲＭＡ（配列番号４２１）；ＱＮＱＡＬＲＭＡＧＧＳＧＧＳＬＳＧＲＳＧＮＨ（配列番号４２２）；ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＧＮＨ（配列番号４２３）；ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号６８０）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＴＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号６８１）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号６８２）；ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＤＨ（配列番号６８３）；ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＩＨ（配列番号６８４）；ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＱＨ（配列番号６８５）；ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＴＨ（配列番号６８６）；ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＹＨ（配列番号６８７）；ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＰ（配列番号６８８）；ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＡＮＰ（配列番号６８９）；ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＡＮＩ（配列番号６９０）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＤＨ（配列番号６９１）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＩＨ（配列番号６９２）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＱＨ（配列番号６９３）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＴＨ（配列番号６９４）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＹＨ（配列番号６９５）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＮＰ（配列番号６９６）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＡＮＰ（配列番号６９７）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＡＮＩ（配列番号６９８），ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＩ（配列番号７１３）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＮＩ（配列番号７１４）；ＧＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＡＶＧＬＬＡＰＰ（配列番号８０７）；および／またはＧＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰ（配列番号８０８）を含む。 In some embodiments, the CM is a CM1-CM2 substrate and has the sequence ISSGLLSGRSDNH (SEQ ID NO: 406); ISSGLLSSGGSGGSLSGRSDNH (SEQ ID NO: 407); ４１０）；ＴＳＴＳＧＲＳＡＮＰＲＧＧＧＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰ（配列番号４１１）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号４１２）；ＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＡＶＧＬＬＡＰＰ（配列番号４１３）；ＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰＧＧＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号４１４）；ＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰ（配列番号４１５）；ＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＳＧＧＳＩＳＳＧＬＬＳＳ（配列番号４１６）；ＬＳＧＲＳＧＮＨＧＧＳＧＧＳＩＳＳＧＬＬＳＳ（配列番号４１７ ）；ＩＳＳＧＬＬＳＳＧＧＳＧＧＳＬＳＧＲＳＧＮＨ（配列番号４１８）；ＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＳＧＧＳＱＮＱＡＬＲＭＡ（配列番号４１９）；ＱＮＱＡＬＲＭＡＧＧＳＧＧＳＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号４２０）；ＬＳＧＲＳＧＮＨＧＧＳＧＧＳＱＮＱＡＬＲＭＡ（配列番号４２１）；ＱＮＱＡＬＲＭＡＧＧＳＧＧＳＬＳＧＲＳＧＮＨ（配列番号４２２）；ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＧＮＨ（配列番号４２３）；ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号６８０） AVGLLAPPTSGRSANPRG (SEQ ID NO: 681); AVGLLAPPTSGRSANPRG (SEQ ID NO: 682); ISSGLLSGRSDDH (SEQ ID NO: 683); ISSGLLSGRSDIH (SEQ ID NO: 684); ISSGLLSGRSDQH (SEQ ID NO: 685); ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＰ（配列番号６８８）；ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＡＮＰ（配列番号６８９）；ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＡＮＩ（配列番号６９０）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＤＨ（配列番号６９１）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＩＨ（配列番号６９２）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＱＨ（配列番号６９３）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＴＨ（配列番号６９４）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＹＨ (SEQ ID NO: 695); ＤＮＰ（配列番号６９６）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＡＮＰ（配列番号６９７）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＡＮＩ（配列番号６９８），ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＩ（配列番号７１３）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＮＩ（配列番号７１４）；ＧＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＡＶＧＬＬＡＰＰ（配列番号８０７）；および／またはＧＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰ（配列番号８０８ )including.

いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号４０６）を含み、これは本明細書で基質２００１とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＩＳＳＧＬＬＳＳＧＧＳＧＧＳＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号４０７）を含み、これは本明細書で基質１００１／ＬＰ’／０００１とも呼ばれ、このＣＭ１－ＣＭ２基質で使用されるＬＰ’は、アミノ酸配列ＧＧＳＧＧＳ（配列番号１３３）である。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＴＳＴＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号４０８）を含み、これは本明細書で基質２０１５および／または基質１００４／ＬＰ’／０００３とも呼ばれ、このＣＭ１－ＣＭ２基質で使用されるＬＰ’は、アミノ酸配列ＧＧである。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＴＳＴＳＧＲＳＡＮＰＲＧＧＧＡＶＧＬＬＡＰＰ（配列番号４０９）を含み、これは本明細書で基質０００３／ＬＰ’／１００４とも呼ばれ、このＣＭ１－ＣＭ２基質で使用されるＬＰ’は、アミノ酸配列ＧＧである。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰＧＧＴＳＴＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号４１０）を含み、これは本明細書で基質１００３／ＬＰ’／０００３とも呼ばれ、このＣＭ１－ＣＭ２基質で使用されるＬＰ’は、アミノ酸配列ＧＧである。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＴＳＴＳＧＲＳＡＮＰＲＧＧＧＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰ（配列番号４１１）を含み、これは本明細書で基質０００３／ＬＰ’／１００３とも呼ばれ、このＣＭ１－ＣＭ２基質で使用されるＬＰ’は、アミノ酸配列ＧＧである。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号４１２）を含み、これは本明細書で基質３００１および／または基質１００４／ＬＰ’／０００１とも呼ばれ、このＣＭ１－ＣＭ２基質で使用されるＬＰ’は、アミノ酸配列ＧＧである。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＡＶＧＬＬＡＰＰ（配列番号４１３）を含み、これは本明細書で基質０００１／ＬＰ’／１００４とも呼ばれ、このＣＭ１－ＣＭ２基質で使用されるＬＰ’は、アミノ酸配列ＧＧである。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰＧＧＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号４１４）を含み、これは本明細書で基質１００３／ＬＰ’／０００１とも呼ばれ、このＣＭ１－ＣＭ２基質で使用されるＬＰ’は、アミノ酸配列ＧＧである。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰ（配列番号４１５）を含み、これは本明細書で基質０００１／ＬＰ’／１００３とも呼ばれ、このＣＭ１－ＣＭ２基質で使用されるＬＰ’は、アミノ酸配列ＧＧである。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＳＧＧＳＩＳＳＧＬＬＳＳ（配列番号４１６）を含み、これは本明細書で基質０００１／ＬＰ’／１００１とも呼ばれ、このＣＭ１－ＣＭ２基質で使用されるＬＰ’は、アミノ酸配列ＧＧＳＧＧＳ（配列番号１３３）である。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＬＳＧＲＳＧＮＨＧＧＳＧＧＳＩＳＳＧＬＬＳＳ（配列番号４１７）を含み、これは本明細書で基質０００２／ＬＰ’／１００１とも呼ばれ、このＣＭ１－ＣＭ２基質で使用されるＬＰ’は、アミノ酸配列ＧＧＳＧＧＳ（配列番号１３３）である。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＩＳＳＧＬＬＳＳＧＧＳＧＧＳＬＳＧＲＳＧＮＨ（配列番号４１８）を含み、これは本明細書で基質１００１／ＬＰ’／０００２とも呼ばれ、このＣＭ１－ＣＭ２基質で使用されるＬＰ’は、アミノ酸配列ＧＧＳＧＧＳ（配列番号１３３）である。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＳＧＧＳＱＮＱＡＬＲＭＡ（配列番号４１９）を含み、これは本明細書で基質０００１／ＬＰ’／１００２とも呼ばれ、このＣＭ１－ＣＭ２基質で使用されるＬＰ’は、アミノ酸配列ＧＧＳＧＧＳ（配列番号１３３）である。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＱＮＱＡＬＲＭＡＧＧＳＧＧＳＬＳＧＲＳＤＮＨ（配列番号４２０）を含み、これは本明細書で基質１００２／ＬＰ’／０００１とも呼ばれ、このＣＭ１－ＣＭ２基質で使用されるＬＰ’は、アミノ酸配列ＧＧＳＧＧＳ（配列番号１３３）である。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＬＳＧＲＳＧＮＨＧＧＳＧＧＳＱＮＱＡＬＲＭＡ（配列番号４２１）を含み、これは本明細書で基質０００２／ＬＰ’／１００２とも呼ばれ、このＣＭ１－ＣＭ２基質で使用されるＬＰ’は、アミノ酸配列ＧＧＳＧＧＳ（配列番号１３３）である。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＱＮＱＡＬＲＭＡＧＧＳＧＧＳＬＳＧＲＳＧＮＨ（配列番号４２２）を含み、これは本明細書で基質１００２／ＬＰ’／０００２とも呼ばれ、このＣＭ１－ＣＭ２基質で使用されるＬＰ’は、アミノ酸配列ＧＧＳＧＧＳ（配列番号１３３）である。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＧＮＨ（配列番号４２３）を含み、これは本明細書で基質２００２とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号６８０）を含み、これは本明細書で基質２００３とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＡＶＧＬＬＡＰＰＴＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号６８１）を含み、これは本明細書で基質２００４とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＡＶＧＬＬＡＰＰＳＧＲＳＡＮＰＲＧ（配列番号６８２）を含み、これは本明細書で基質２００５とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＤＨ（配列番号６８３）を含み、これは本明細書で基質２００６とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＩＨ（配列番号６８４）を含み、これは本明細書で基質２００７とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＱＨ（配列番号６８５）を含み、これは本明細書で基質２００８とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＴＨ（配列番号６８６）を含み、これは本明細書で基質２００９とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＹＨ（配列番号６８７）を含み、これは本明細書で基質２０１０とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＰ（配列番号６８８）を含み、これは本明細書で基質２０１１とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＡＮＰ（配列番号６８９）を含み、これは本明細書で基質２０１２とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＡＮＩ（配列番号６９０）を含み、これは本明細書で基質２０１３とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＤＨ（配列番号６９１）を含み、これは本明細書で基質３００６とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＩＨ（配列番号６９２）を含み、これは本明細書で基質３００７とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＱＨ（配列番号６９３）を含み、これは本明細書で基質３００８とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＴＨ（配列番号６９４）を含み、これは本明細書で基質３００９とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＹＨ（配列番号６９５）を含み、これは本明細書で基質３０１０とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＮＰ（配列番号６９６）を含み、これは本明細書で基質３０１１とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＡＮＰ（配列番号６９７）を含み、これは本明細書で基質３０１２とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＡＮＩ（配列番号６９８）を含み、これは本明細書で基質３０１３とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＩ（配列番号７１３）を含み、これは本明細書で基質２０１４とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＮＩ（配列番号７１４）を含み、これは本明細書で基質３０１４とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＧＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＡＶＧＬＬＡＰＰ（配列番号８０７）を含み、これは本明細書で基質０００１／ＬＰ’／１００４とも呼ばれ、このＣＭ１－ＣＭ２基質で使用されるＬＰ’は、アミノ酸配列 ＧＧである。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＧＬＳＧＲＳＤＮＨＧＧＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰ（配列番号８０８）を含み、これは本明細書で基質０００１／ＬＰ’／１００３とも呼ばれ、このＣＭ１－ＣＭ２基質で使用されるＬＰ’は、アミノ酸配列 ＧＧである。 In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence ISSGLLSGRSDNH (SEQ ID NO:406), also referred to herein as substrate 2001. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence ISSGLLSSGGSGGSLSGRSDNH (SEQ ID NO: 407), also referred to herein as substrate 1001/LP'/0001, the LP used in this CM1-CM2 substrate. ' is the amino acid sequence GGSGGS (SEQ ID NO: 133). In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence AVGLLAPPGGTSTSGRSANPRG (SEQ ID NO: 408), also referred to herein as substrate 2015 and/or substrate 1004/LP'/0003, this CM1-CM2 substrate LP' used in is the amino acid sequence GG. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence TSTSGRSANPRGGGAVGLLAPP (SEQ ID NO: 409), also referred to herein as substrate 0003/LP'/1004, the LP used in this CM1-CM2 substrate. ' is the amino acid sequence GG. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence VHMPLGFLGPGGTSTSGRSANPRG (SEQ ID NO: 410), also referred to herein as substrate 1003/LP'/0003, the LP used in this CM1-CM2 substrate. ' is the amino acid sequence GG. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence TSTSGRSANPRGGGVHMPLGFLGP (SEQ ID NO: 411), also referred to herein as substrate 0003/LP'/1003, the LP used in this CM1-CM2 substrate. ' is the amino acid sequence GG. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence AVGLLAPPGGLSGRSDNH (SEQ ID NO:412), also referred to herein as substrate 3001 and/or substrate 1004/LP'/0001, this CM1-CM2 substrate LP' used in is the amino acid sequence GG. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence LSGRSDNGGAVGLLAPP (SEQ ID NO: 413), also referred to herein as substrate 0001/LP'/1004, the LP used in this CM1-CM2 substrate. ' is the amino acid sequence GG. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence VHMPLGFLGPGGLSGRSDNH (SEQ ID NO: 414), also referred to herein as substrate 1003/LP'/0001, the LP used in this CM1-CM2 substrate. ' is the amino acid sequence GG. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence LSGRSDNHGGVHMPLGFLGP (SEQ ID NO: 415), also referred to herein as substrate 0001/LP'/1003, the LP used in this CM1-CM2 substrate. ' is the amino acid sequence GG. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence LSGRSDNHGGSGGSISSGLLSS (SEQ ID NO: 416), also referred to herein as substrate 0001/LP'/1001, the LP used in this CM1-CM2 substrate. ' is the amino acid sequence GGSGGS (SEQ ID NO: 133). In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence LSGRSGNHGGSGGSISSGLLSS (SEQ ID NO: 417), also referred to herein as substrate 0002/LP'/1001, the LP used in this CM1-CM2 substrate. ' is the amino acid sequence GGSGGS (SEQ ID NO: 133). In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence ISSGLLSSGGSGGSLSGRSGNH (SEQ ID NO: 418), also referred to herein as substrate 1001/LP'/0002, the LP used in this CM1-CM2 substrate. ' is the amino acid sequence GGSGGS (SEQ ID NO: 133). In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence LSGRSDNHGGSGGSQNQALRMA (SEQ ID NO: 419), also referred to herein as substrate 0001/LP'/1002, the LP used in this CM1-CM2 substrate. ' is the amino acid sequence GGSGGS (SEQ ID NO: 133). In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence QNQALRMAGGSGGSLSGRSDNH (SEQ ID NO: 420), also referred to herein as substrate 1002/LP'/0001, the LP used in this CM1-CM2 substrate. ' is the amino acid sequence GGSGGS (SEQ ID NO: 133). In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence LSGRSGNHGGSGGSQNQALRMA (SEQ ID NO: 421), also referred to herein as substrate 0002/LP'/1002, the LP used in this CM1-CM2 substrate. ' is the amino acid sequence GGSGGS (SEQ ID NO: 133). In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence QNQALRMAGGSGGSLSGRSGNH (SEQ ID NO: 422), also referred to herein as substrate 1002/LP'/0002, the LP used in this CM1-CM2 substrate. ' is the amino acid sequence GGSGGS (SEQ ID NO: 133). In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence ISSGLLSGRSGNH (SEQ ID NO:423), also referred to herein as substrate 2002. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence ISSGLLSGRSANPRG (SEQ ID NO:680), also referred to herein as substrate 2003. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence AVGLAPPTSGRSANPRG (SEQ ID NO:681), also referred to herein as substrate 2004. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence AVGLAPPSGRSANPRG (SEQ ID NO:682), also referred to herein as substrate 2005. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence ISSGLLSGRSDDH (SEQ ID NO:683), also referred to herein as substrate 2006. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence ISSGLLSGRSDIH (SEQ ID NO:684), also referred to herein as substrate 2007. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence ISSGLLSGRSDQH (SEQ ID NO:685), also referred to herein as substrate 2008. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence ISSGLLSGRSDTH (SEQ ID NO:686), also referred to herein as substrate 2009. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence ISSGLLSGRSDYH (SEQ ID NO:687), also referred to herein as substrate 2010. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence ISSGLLSGRSDNP (SEQ ID NO:688), also referred to herein as substrate 2011. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence ISSGLLSGRSANP (SEQ ID NO:689), also referred to herein as substrate 2012. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence ISSGLLSGRSANI (SEQ ID NO:690), also referred to herein as substrate 2013. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence AVGLLAPPGGLSGRSDDH (SEQ ID NO:691), also referred to herein as substrate 3006. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence AVGLLAPPGGLSGRSDIH (SEQ ID NO:692), also referred to herein as substrate 3007. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence AVGLLAPPGGLSGRSDQH (SEQ ID NO:693), also referred to herein as substrate 3008. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence AVGLLAPPGGLSGRSDTH (SEQ ID NO:694), also referred to herein as substrate 3009. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence AVGLLAPPGGLSGRSDYH (SEQ ID NO:695), also referred to herein as substrate 3010. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence AVGLLAPPGGLSGRSDNP (SEQ ID NO:696), also referred to herein as substrate 3011. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence AVGLLAPPGGLSGRSANP (SEQ ID NO:697), also referred to herein as substrate 3012. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence AVGLLAPPGGLSGRSANI (SEQ ID NO:698), also referred to herein as substrate 3013. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence ISSGLLSGRSDNI (SEQ ID NO:713), also referred to herein as substrate 2014. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence AVGLLAPPGGLSGRSDNI (SEQ ID NO:714), also referred to herein as substrate 3014. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence GLSGRSDNGGAVGLLAPP (SEQ ID NO: 807), also referred to herein as substrate 0001/LP'/1004, the LP used in this CM1-CM2 substrate. ' is the amino acid sequence GG. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence GLSGRSDNHGGVHMPLGFLGP (SEQ ID NO: 808), also referred to herein as substrate 0001/LP'/1003, the LP used in this CM1-CM2 substrate. ' is the amino acid sequence GG.

いくつかの実施形態では、ＣＭは、ＣＭ１－ＣＭ２基質であり、配列ＬＳＧＲＳＡＬＡＨＧＬＦ（配列番号４４０）；ＡＬＡＨＧＬＦＳＧＲＳＡＮ（配列番号４４１）；ＨＶＰＲＱＶＬＳＧＲＳ（配列番号４４２）；ＨＶＰＲＱＶＬＳＧＲＳＡＮ（配列番号４４３）；ＴＡＲＧＰＡＬＡＨＧＬＦ（配列番号４４４）；ＴＡＲＧＰＶＰＲＱＶ（配列番号４４５）；ＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦ（配列番号４４６）；ＡＬＡＨＧＬＦＡＰＲＳＦ（配列番号４４７）；ＨＶＰＲＱＶＡＰＲＳＦ（配列番号４４８）；ＡＬＡＨＧＬＰＴＦＶＨＬ（配列番号４４９）；ＧＬＰＴＦＶＨＬＰＲＱＶ（配列番号４５０）；ＡＡＮＡＬＡＨＧＬＦ（配列番号４５１）；ＧＰＴＮＡＬＡＨＧＬＦ（配列番号４５２）；ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＮＩ（配列番号４５３）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＮＩ（配列番号４５４）；ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＮＩＧＳ（配列番号４５５）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＮＩＧＳ（配列番号４５６）；ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＮＩＧ（配列番号４５７）；ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＮＩＧ（配列番号４５８）を含む。 In some embodiments, the CM is a CM1-CM2 substrate and has the sequence LSGRSALAHGLF (SEQ ID NO: 440); ALAHGLFSGRSAN (SEQ ID NO: 441); HVPRQVLSGRS (SEQ ID NO: 442); ALAHGLPTFVHL (SEQ ID NO: 449); GLPTFVHLPRQV (SEQ ID NO: 450); AANALAHGLF (SEQ ID NO: 451); ISSGLLSGRSNI (SEQ ID NO: 453); AVGLAPPGGLSGRSNIGS (SEQ ID NO: 454); ISSGLLSGRSNIGS (SEQ ID NO: 455); including.

いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＬＳＧＲＳＡＬＡＨＧＬＦ（配列番号４４０）を含み、これは本明細書で基質５００１とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＡＬＡＨＧＬＦＳＧＲＳＡＮ（配列番号４４１）を含み、これは本明細書で基質５００２とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＨＶＰＲＱＶＬＳＧＲＳ（配列番号４４２）を含み、これは本明細書で基質５００３とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＨＶＰＲＱＶＬＳＧＲＳＡＮ（配列番号４４３）を含み、これは本明細書で基質５００４とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＴＡＲＧＰＡＬＡＨＧＬＦ（配列番号４４４）を含み、これは本明細書で基質５００５とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＴＡＲＧＰＶＰＲＱＶ（配列番号４４５）を含み、これは本明細書で基質５００６とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦ（配列番号４４６）を含み、これは本明細書で基質５００７とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＡＬＡＨＧＬＦＡＰＲＳＦ（配列番号４４７）を含み、これは本明細書で基質５００８とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＨＶＰＲＱＶＡＰＲＳＦ（配列番号４４８）を含み、これは本明細書で基質５００９とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＡＬＡＨＧＬＰＴＦＶＨＬ（配列番号４４９）を含み、これは本明細書で基質５０１０とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＧＬＰＴＦＶＨＬＰＲＱＶ（配列番号４５０）を含み、これは本明細書で基質５０１１とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＡＡＮＡＬＡＨＧＬＦ（配列番号４５１）を含み、これは本明細書で基質５０１２とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＧＰＴＮＡＬＡＨＧＬＦ（配列番号４５２）を含み、これは本明細書で基質５０１３とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＮＩ（配列番号４５３）を含み、これは本明細書で基質５０１４とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＮＩ（配列番号４５４）を含み、これは本明細書で基質５０１５とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＮＩＧＳ（配列番号４５５）を含み、これは本明細書で基質５０１６とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＮＩＧＳ（配列番号４５６）を含み、これは本明細書で基質５０１７とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＮＩＧ（配列番号４５７）を含み、これは本明細書で基質５０１８とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＭ１－ＣＭ２基質は、配列ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＮＩＧ（配列番号４５８）を含み、これは本明細書で基質５０１９とも呼ばれる。 In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence LSGRSALAHGLF (SEQ ID NO:440), also referred to herein as substrate 5001. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence ALAHGLFSGRSAN (SEQ ID NO:441), also referred to herein as substrate 5002. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence HVPRQVLSGRS (SEQ ID NO:442), also referred to herein as substrate 5003. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence HVPRQVLSGRSAN (SEQ ID NO:443), also referred to herein as substrate 5004. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence TARGPALAHGLF (SEQ ID NO:444), also referred to herein as substrate 5005. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence TARGPVPRQV (SEQ ID NO:445), also referred to herein as substrate 5006. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence APRSALAHGLF (SEQ ID NO:446), also referred to herein as substrate 5007. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence ALAHGLFAPRSF (SEQ ID NO:447), also referred to herein as substrate 5008. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence HVPRQVAPRSF (SEQ ID NO:448), also referred to herein as substrate 5009. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence ALAHGLPTFVHL (SEQ ID NO:449), also referred to herein as substrate 5010. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence GLPTFVHLPRQV (SEQ ID NO:450), also referred to herein as substrate 5011. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence AANALAHGLF (SEQ ID NO:451), also referred to herein as substrate 5012. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence GPTNALAHGLF (SEQ ID NO:452), also referred to herein as substrate 5013. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence ISSGLLSGRSNI (SEQ ID NO:453), also referred to herein as substrate 5014. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence AVGLLAPPGGLSGRSNI (SEQ ID NO:454), also referred to herein as substrate 5015. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence ISSGLLSGRSNIGS (SEQ ID NO:455), also referred to herein as substrate 5016. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence AVGLLAPPGGLSGRSNIGS (SEQ ID NO:456), also referred to herein as substrate 5017. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence ISSGLLSGRSNIG (SEQ ID NO:457), also referred to herein as substrate 5018. In some embodiments, the CM1-CM2 substrate comprises the sequence AVGLLAPPGGLSGRSNIG (SEQ ID NO:458), also referred to herein as substrate 5019.

いくつかの実施形態では、ＣＭは、少なくとも２種類のプロテアーゼの基質である。いくつかの実施形態では、それぞれのプロテアーゼは、表Ａに示したプロテアーゼからなる群より選択される。いくつかの実施形態では、ＣＭは、少なくとも２種類のプロテアーゼの基質であり、プロテアーゼの一方は、ＭＭＰ、トロンビン、好中球エラスターゼ、システインプロテアーゼ、ｕＰＡ、レグマイン、およびマトリプターゼからなる群より選択され、他方のプロテアーゼは、表Ａに示したプロテアーゼからなる群より選択される。いくつかの実施形態では、ＣＭは、ＭＭＰ、トロンビン、好中球エラスターゼ、システインプロテアーゼ、ｕＰＡ、レグマイン、およびマトリプターゼからなる群より選択される少なくとも２種類のプロテアーゼの基質である。 In some embodiments, CM is a substrate for at least two proteases. In some embodiments, each protease is selected from the group consisting of proteases shown in Table A. In some embodiments, the CM is a substrate for at least two proteases, one of which is selected from the group consisting of MMP, thrombin, neutrophil elastase, cysteine protease, uPA, legumain, and matriptase. , the other protease is selected from the group consisting of the proteases shown in Table A. In some embodiments, CM is a substrate for at least two proteases selected from the group consisting of MMP, thrombin, neutrophil elastase, cysteine protease, uPA, legumain, and matriptase.

いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、少なくとも第１のＣＭおよび第２のＣＭを含む。いくつかの実施形態では、第１のＣＭおよび第２のＣＭはそれぞれ、１５アミノ酸長以下のポリペプチドである。いくつかの実施形態では、非切断状態の活性化可能抗体中の第１のＣＭおよび第２のＣＭは、Ｎ末端からＣ末端に向かい以下の：ＭＭ－ＣＭ１－ＣＭ２－ＡＢまたはＡＢ－ＣＭ２－ＣＭ１－ＭＭのような構造配置を有する。いくつかの実施形態では、第１のＣＭおよび第２のＣＭの少なくとも１つは、ＭＭＰ、トロンビン、好中球エラスターゼ、システインプロテアーゼ、ｕＰＡ、レグマイン、およびマトリプターゼからなる群より選択されるプロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである。いくつかの実施形態では、第１のＣＭは、標的組織中のＭＭＰ、トロンビン、好中球エラスターゼ、システインプロテアーゼ、ｕＰＡ、レグマイン、およびマトリプターゼからなる群より選択される第１の切断剤によって切断され、第２のＣＭは、標的組織中の第２の切断剤によって切断される。いくつかの実施形態では、他のプロテアーゼは、表Ａに示したプロテアーゼからなる群より選択される。いくつかの実施形態では、第１の切断剤および第２の切断剤は、ＭＭＰ、トロンビン、好中球エラスターゼ、システインプロテアーゼ、ｕＰＡ、レグマイン、およびマトリプターゼからなる群より選択される同じプロテアーゼであり、第１のＣＭおよび第２のＣＭは、この酵素の異なる基質である。いくつかの実施形態では、第１の切断剤および第２の切断剤は、表Ａに示したプロテアーゼからなる群より選択される同じプロテアーゼである。いくつかの実施形態では、第１の切断剤および第２の切断剤は、異なるプロテアーゼである。いくつかの実施形態では、第１の切断剤および第２の切断剤は、標的組織中で共局在する。いくつかの実施形態では、第１のＣＭおよび第２のＣＭは、標的組織中の少なくとも１種の切断剤によって切断される。 In some embodiments, an activatable antibody comprises at least a first CM and a second CM. In some embodiments, the first CM and the second CM are each polypeptides of 15 amino acids or less in length. In some embodiments, the first CM and the second CM in the uncleaved activatable antibody are, from N-terminus to C-terminus, the following: MM-CM1-CM2-AB or AB-CM2- It has a structural arrangement like CM1-MM. In some embodiments, at least one of the first CM and the second CM is a protease selected from the group consisting of MMP, thrombin, neutrophil elastase, cysteine protease, uPA, legumain, and matriptase. A polypeptide that functions as a substrate. In some embodiments, the first CM is cleaved by a first cleaving agent selected from the group consisting of MMP, thrombin, neutrophil elastase, cysteine protease, uPA, legumain, and matriptase in the target tissue. and the second CM is cleaved by a second cleaving agent in the target tissue. In some embodiments, the other protease is selected from the group consisting of proteases shown in Table A. In some embodiments, the first cleaving agent and the second cleaving agent are the same protease selected from the group consisting of MMP, thrombin, neutrophil elastase, cysteine protease, uPA, legumain, and matriptase. , the first CM and the second CM are different substrates of this enzyme. In some embodiments, the first cleaving agent and the second cleaving agent are the same protease selected from the group consisting of proteases shown in Table A. In some embodiments, the first cleaving agent and the second cleaving agent are different proteases. In some embodiments, the first cleaving agent and the second cleaving agent are co-localized in the target tissue. In some embodiments, the first CM and the second CM are cleaved by at least one cleaving agent in the target tissue.

いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、プロテアーゼに曝露され、プロテアーゼがＣＭを切断した後に活性化された抗体が、活性化状態または切断状態で、ＬＰ２および／またはＣＭ配列の少なくとも一部を含む軽鎖アミノ酸配列を含むように、プロテアーゼによって切断される。 In some embodiments, the activatable antibody is exposed to a protease, and after the protease cleaves the CM, the activated antibody, in an activated or cleaved state, comprises at least a portion of the LP2 and/or CM sequences. is cleaved by a protease to include the light chain amino acid sequence containing

本開示の好適な活性化可能ＣＤ４７抗体はまた、ヒトＣＤ４７および／またはカニクイザルＣＤ４７上の、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列、および配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含むＣＤ４７抗体と同じエピトープに結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。 Preferred activatable CD47 antibodies of the present disclosure also include CD47 antibodies comprising the heavy chain variable region amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 and the light chain variable region amino acid sequence of SEQ ID NO: 2 on human CD47 and/or cynomolgus monkey CD47. It includes antibodies or antigen-binding fragments thereof that bind to the same epitope.

本開示の好適な活性化可能ＣＤ４７抗体はまた、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号３）またはアミノ酸配列ＮＹＷＭＴ（配列番号４）を含むＶＨ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＤＰＹＤＶＥ（配列番号５）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号６）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＮＨＫ（配列番号３９）を含むＶＨ ＣＤＲ２配列；アミノ酸配ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含むＶＨ ＣＤＲ３配列；アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＱＴＹＬＥ（配列番号５５）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＳＴＹＬＥ（配列番号５６）を含むＶＬ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含むＶＬ ＣＤＲ２配列；およびアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含むＶＬ ＣＤＲ３配列を含む、ＣＤ４７抗体と同じヒトＣＤ４７および／またはカニクイザルＣＤ４７上のエピトープに結合する抗体またはその抗原結合フラグメントも含む。 Preferred activatable CD47 antibodies of the present disclosure also have a VH CDR1 sequence comprising the amino acid sequence GYTFTNY (SEQ ID NO:3) or the amino acid sequence NYWMT (SEQ ID NO:4); number 6) or the amino acid sequence RIDPYDVETHYNHK (SEQ ID NO: 39); VH CDR3 sequence comprising the amino acid sequence GGVGGMDY (SEQ ID NO: 7); a VL CDR1 sequence comprising the amino acid sequence RVSKRFS (SEQ ID NO:9); and a VL CDR3 sequence comprising the amino acid sequence FQGSHVPRT (SEQ ID NO:10). Also included are antibodies or antigen-binding fragments thereof that bind to the same epitopes on human CD47 and/or cynomolgus monkey CD47.

本開示の好適な活性化可能ＣＤ４７抗体はまた、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列、および配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含むＣＤ４７抗体に対し、ヒトＣＤ４７および／またはカニクイザルＣＤ４７への結合について交差競合する（その結合を阻害する）抗体またはその抗原結合フラグメントも含む。 A preferred activatable CD47 antibody of the present disclosure also includes a CD47 antibody comprising the heavy chain variable region amino acid sequence of SEQ ID NO:1 and the light chain variable region amino acid sequence of SEQ ID NO:2. Also included are antibodies or antigen-binding fragments thereof that cross-compete for the binding of (inhibit its binding).

本開示の好適な活性化可能ＣＤ４７抗体はまた、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号３）またはアミノ酸配列ＮＹＷＭＴ（配列番号４）を含むＶＨ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＤＰＹＤＶＥ（配列番号５）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号６）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＮＨＫ（配列番号３９）を含むＶＨ ＣＤＲ２配列；アミノ酸配ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含むＶＨ ＣＤＲ３配列；アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＱＴＹＬＥ（配列番号５５）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＳＴＹＬＥ（配列番号５６）を含むＶＬ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含むＶＬ ＣＤＲ２配列；およびアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含むＶＬ ＣＤＲ３配列を含む、ＣＤ４７抗体に対し、ヒトＣＤ４７および／またはカニクイザルＣＤ４７への結合について交差競合する（その結合を阻害する）抗体またはその抗原結合フラグメントも含む。 Preferred activatable CD47 antibodies of the present disclosure also have a VH CDR1 sequence comprising the amino acid sequence GYTFTNY (SEQ ID NO:3) or the amino acid sequence NYWMT (SEQ ID NO:4); number 6) or the amino acid sequence RIDPYDVETHYNHK (SEQ ID NO: 39); VH CDR3 sequence comprising the amino acid sequence GGVGGMDY (SEQ ID NO: 7); SEQ ID NO: 55) or RSSQSIVHSSGSTYLE (SEQ ID NO: 56); a VL CDR2 sequence comprising the amino acid sequence RVSKRFS (SEQ ID NO: 9); and a VL CDR3 sequence comprising the amino acid sequence FQGSHVPRT (SEQ ID NO: 10). Also included are antibodies or antigen-binding fragments thereof that cross-compete for binding to (inhibit the binding of) human CD47 and/or cynomolgus monkey CD47.

いくつかの実施形態では、活性化可能ＣＤ４７抗体は、活性化状態で、ＣＤ４７を結合し、哺乳動物ＣＤ４７に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ）であって、ヒトＣＤ４７およびカニクイザルＣＤ４７を特異的に結合する、ＡＢ；活性化可能抗体が非切断状態にある場合ＣＤ４７へのＡＢの結合を阻害するマスキング部分（ＭＭ）；ならびにＡＢにカップリングされた切断可能部分（ＣＭ）であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである、ＣＭを含む。 In some embodiments, the activatable CD47 antibody, in an activated state, binds CD47 and is an antibody or antigen-binding fragment (AB) thereof that specifically binds to mammalian CD47, comprising human CD47 and cynomolgus monkey AB, which specifically binds CD47; a masking moiety (MM) that inhibits binding of AB to CD47 when the activatable antibody is in an uncleaved state; and a cleavable moiety (CM) coupled to AB. and contains CM, a polypeptide that functions as a substrate for proteases.

いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＣＤ４７へのＡＢの結合の解離定数よりも大きいＡＢへの結合の解離定数を有する。いくつかの実施形態では、ＭＭは、活性化可能抗体が切断状態にある場合、ＣＤ４７への結合に関し、ＡＢに干渉も競合もしない。いくつかの実施形態では、ＭＭは、４０アミノ酸長以下のポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＭＭポリペプチド配列は、ヒトＣＤ４７のポリペプチド配列とは異なる。いくつかの実施形態では、ＭＭポリペプチド配列は、ＡＢのいずれかの天然の結合パートナーに対する同一性が、５０％以下である。いくつかの実施形態では、ＭＭは、配列番号１６～１０９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＭＭは、配列番号１０７～１０９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。 In some embodiments, the MM has a dissociation constant for binding to AB that is greater than the dissociation constant for binding of AB to CD47. In some embodiments, MM does not interfere with or compete with AB for binding to CD47 when the activatable antibody is in a cleaved state. In some embodiments, MM is a polypeptide that is 40 amino acids or less in length. In some embodiments, the MM polypeptide sequence differs from the polypeptide sequence of human CD47. In some embodiments, the MM polypeptide sequence has 50% or less identity to any of the natural binding partners of AB. In some embodiments, the MM comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs:16-109. In some embodiments, the MM comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs:107-109.

いくつかの実施形態では、ＣＭは、患部組織中で活性であるプロテアーゼの基質である。いくつかの実施形態では、ＣＭは、配列番号３５６～４５８、６８０～６９８、７１３、７１４、および７８９～８０８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、配列番号３５９、３７０、３７７、３８２、３９０、３９７、４０６～４２５、４２９、４３０、４４６、４４７、４５０、６８０～６９８、７１３、７１４、および８０７～８０８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。 In some embodiments, CM is a substrate for proteases that are active in diseased tissue. In some embodiments, the CM comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs:356-458, 680-698, 713, 714, and 789-808. In some embodiments, CM is SEQ ID NOs: 359, 370, 377, 382, 390, 397, 406-425, 429, 430, 446, 447, 450, 680-698, 713, 714, and 807-808 An amino acid sequence selected from the group consisting of

いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、ｓｃＦｖ、ｓｃＡｂ、ｄＡｂ、単一ドメイン重鎖抗体、および単一ドメイン軽鎖抗体からなる群より選択されるその抗原結合フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体のＡＢは、ヒトＣＤ４７を特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＡＢは、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号３）またはアミノ酸配列ＮＹＷＭＴ（配列番号４）を含むＶＨ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＤＰＹＤＶＥ（配列番号５）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号６）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＮＨＫ（配列番号３９）を含むＶＨ ＣＤＲ２配列；アミノ酸配ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含むＶＨ ＣＤＲ３配列；アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＱＴＹＬＥ（配列番号５５）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＳＴＹＬＥ（配列番号５６）を含むＶＬ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含むＶＬ ＣＤＲ２配列；およびアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含むＶＬ ＣＤＲ３配列を含む。 いくつかの実施形態では、ＡＢは、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列、および配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。 In some embodiments, the activatable antibody is selected from the group consisting of Fab fragments, F(ab') 2 fragments, scFvs, scAbs, dAbs, single domain heavy chain antibodies, and single domain light chain antibodies. including antigen-binding fragments thereof. In some embodiments, the AB of the activatable antibody specifically binds human CD47. In some embodiments, AB is a VH CDR1 sequence comprising the amino acid sequence GYTFTNY (SEQ ID NO:3) or the amino acid sequence NYWMT (SEQ ID NO:4); the amino acid sequence DPYDVE (SEQ ID NO:5) or the amino acid sequence RIDPYDVETHYAQKFQG (SEQ ID NO:6) or a VH CDR2 sequence comprising the amino acid sequence RIDPYDVETHYNHK (SEQ ID NO:39); a VH CDR3 sequence comprising the amino acid sequence GGVGGMDY (SEQ ID NO:7); an amino acid sequence RSSQSIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO:8) or RSSQSIVHSSSGNTYLE (SEQ ID NO:40) or RSSQSIVHSSSGQTYLE (SEQ ID NO:55) ) or RSSQSIVHSSGSTYLE (SEQ ID NO:56); a VL CDR2 sequence containing the amino acid sequence RVSKRFS (SEQ ID NO:9); and a VL CDR3 sequence containing the amino acid sequence FQGSHVPRT (SEQ ID NO:10). In some embodiments, AB comprises the heavy chain variable region amino acid sequence of SEQ ID NO:1 and the light chain variable region amino acid sequence of SEQ ID NO:2.

いくつかの実施形態では、ＡＢは、ＣＭに連結される。いくつかの実施形態では、ＡＢは、ＣＭに直接連結される。いくつかの実施形態では、ＡＢは、連結ペプチドを介してＣＭに連結される。いくつかの実施形態では、ＭＭは、非切断状態での活性化可能抗体がＮ末端からＣ末端に向かって以下の構造配置：ＭＭ－ＣＭ－ＡＢまたはＡＢ－ＣＭ－ＭＭを含むように、ＣＭに連結される。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、ＭＭとＣＭの間に連結ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、ＣＭとＡＢの間に連結ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、第１の連結ペプチド（ＬＰ１）および第２の連結ペプチド（ＬＰ２）を含み、非切断状態の活性化可能抗体は、Ｎ末端からＣ末端に向かって次の構造配置：ＭＭ－ＬＰ１－ＣＭ－ＬＰ２－ＡＢまたはＡＢ－ＬＰ２－ＣＭ－ＬＰ１－ＭＭを有する。いくつかの実施形態では、２つの連結ペプチドは互いに同一である必要はない。いくつかの実施形態では、ＬＰ１およびＬＰ２の各々は、約１～２０アミノ酸長のペプチドである。 In some embodiments, AB is linked to CM. In some embodiments, AB is directly linked to CM. In some embodiments, AB is linked to CM via a connecting peptide. In some embodiments, MM is CM such that the activatable antibody in its uncleaved state comprises, from N-terminus to C-terminus, the following structural configuration: MM-CM-AB or AB-CM-MM. connected to In some embodiments, an activatable antibody comprises a connecting peptide between MM and CM. In some embodiments, an activatable antibody comprises a connecting peptide between CM and AB. In some embodiments, the activatable antibody comprises a first connecting peptide (LP1) and a second connecting peptide (LP2), wherein the uncleaved activatable antibody is N-terminal to C-terminal have the following structural configuration: MM-LP1-CM-LP2-AB or AB-LP2-CM-LP1-MM. In some embodiments, the two connecting peptides need not be identical to each other. In some embodiments, each of LP1 and LP2 is a peptide about 1-20 amino acids long.

いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、配列番号１１～１４からなる群より選択される重鎖配列、ならびに配列番号１５、４１～５４、６１～７４、８１～９４、および１６～１１４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。 In some embodiments, the activatable antibody has a heavy chain sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 11-14, and SEQ ID NOs: 15, 41-54, 61-74, 81-94, and 16-114. and a light chain comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of

いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、アミノ酸配列の組み合わせを含み、アミノ酸配列の組み合わせは、表Ｂの単列から選択され、所与の組み合わせについて、（ａ）ＡＢの重鎖は、表Ｂに列挙された単列中の所与の組み合わせに対応するＶＨ ＣＤＲ配列のアミノ酸配列を含み、（ｂ）ＡＢの軽鎖は、表Ｂに列挙された単列中の所与の組み合わせに対応するＶＬ ＣＤＲ配列のアミノ酸配列を含み、（ｃ）ＭＭは、表Ｂに列挙された単列中の所与の組み合わせに対応するマスク配列（ＭＭ）のアミノ酸配列を含み、および（ｄ）ＣＭは、表Ｂに列挙された単列中の所与の組み合わせに対応する基質配列（ＣＭ）のアミノ酸配列を含む。 In some embodiments, the activatable antibody comprises a combination of amino acid sequences, wherein the combination of amino acid sequences is selected from a single column of Table B, wherein for a given combination (a) the heavy chains of AB are (b) the light chain of AB, comprising the amino acid sequences of the VH CDR sequences corresponding to the given combinations in the single row listed in Table B; (c) MM contains the amino acid sequence of the mask sequence (MM) corresponding to the given combination in a single row listed in Table B; and (d) CM contains the amino acid sequence of the substrate sequence (CM) corresponding to the given combination in the single row listed in Table B.

いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、アミノ酸配列の組み合わせを含み、アミノ酸配列の所与の組み合わせについて、（ａ）ＡＢの重鎖は、表Ｃの対応する縦列に列挙されたＶＨ配列またはＶＨ ＣＤＲ配列からなる群より選択されるＶＨ配列またはＶＨ ＣＤＲ配列のアミノ酸配列を含み、（ｂ）ＡＢの軽鎖は、表Ｃの対応する縦列に列挙されたＶＬ配列またはＶＬ ＣＤＲ配列からなる群より選択されるＶＬ配列またはＶＬ ＣＤＲ配列のアミノ酸配列を含み、（ｃ）ＭＭは、表Ｃの対応する縦列に列挙されたＭＭ配列からなる群より選択されるマスク配列（ＭＭ）のアミノ酸配列を含み、および（ｄ）ＣＭは、表Ｃの対応する縦列に列挙されたＣＭ配列からなる群より選択される基質配列（ＣＭ）のアミノ酸配列を含む。 In some embodiments, the activatable antibody comprises a combination of amino acid sequences, wherein for a given combination of amino acid sequences, (a) the AB heavy chain is a VH sequence listed in the corresponding column of Table C or an amino acid sequence of a VH sequence or a VH CDR sequence selected from the group consisting of the VH CDR sequences, and (b) the light chain of AB consists of a VL sequence or a VL CDR sequence listed in the corresponding column of Table C. (c) MM is the amino acid sequence of a mask sequence (MM) selected from the group consisting of the MM sequences listed in the corresponding column of Table C. and (d) CM comprises an amino acid sequence of a substrate sequence (CM) selected from the group consisting of the CM sequences listed in the corresponding column of Table C.

いくつかの実施形態では、活性化可能ＣＤ４７抗体は、哺乳動物ＣＤ４７に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ）、ＭＭ、およびＣＭを含み、活性化可能抗体は、配列番号１１～１４の重鎖配列；ならびに配列番号１５、４１～５４、６１～７４、８１～９４、および１６～１１４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、ＭＭは、配列番号１６～２９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、ＣＭは、配列番号３５９、３７０、３７７、３８２、３９０、３９７、４０６～４２５、４２９、４３０、４４６、４４７、４５０、６８０～６９８、７１３、７１４、および８０７～８０８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＢは、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号３）またはアミノ酸配列ＮＹＷＭＴ（配列番号４）を含むＶＨ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＤＰＹＤＶＥ（配列番号５）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号６）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＮＨＫ（配列番号３９）を含むＶＨ ＣＤＲ２配列；アミノ酸配ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含むＶＨ ＣＤＲ３配列；アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＱＴＹＬＥ（配列番号５５）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＳＴＹＬＥ（配列番号５６）を含むＶＬ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含むＶＬ ＣＤＲ２配列；およびアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含むＶＬ ＣＤＲ３配列を含む。 いくつかの実施形態では、ＡＢは、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列、および配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。 In some embodiments, the activatable CD47 antibody comprises an antibody or antigen-binding fragment (AB) thereof, MM, and CM that specifically binds mammalian CD47, wherein the activatable antibody comprises SEQ ID NOs: 11- 14 heavy chain sequences; and light chains comprising amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 15, 41-54, 61-74, 81-94, and 16-114. In some embodiments, MM comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 16-29 and CM is SEQ ID NOs: 359, 370, 377, 382, 390, 397, 406-425, 429, 430, 446, 447, 450, 680-698, 713, 714, and 807-808. In some embodiments, AB is a VH CDR1 sequence comprising the amino acid sequence GYTFTNY (SEQ ID NO:3) or the amino acid sequence NYWMT (SEQ ID NO:4); the amino acid sequence DPYDVE (SEQ ID NO:5) or the amino acid sequence RIDPYDVETHYAQKFQG (SEQ ID NO:6) or a VH CDR2 sequence comprising the amino acid sequence RIDPYDVETHYNHK (SEQ ID NO:39); a VH CDR3 sequence comprising the amino acid sequence GGVGGMDY (SEQ ID NO:7); an amino acid sequence RSSQSIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO:8) or RSSQSIVHSSSGNTYLE (SEQ ID NO:40) or RSSQSIVHSSSGQTYLE (SEQ ID NO:55) ) or RSSQSIVHSSGSTYLE (SEQ ID NO:56); a VL CDR2 sequence containing the amino acid sequence RVSKRFS (SEQ ID NO:9); and a VL CDR3 sequence containing the amino acid sequence FQGSHVPRT (SEQ ID NO:10). In some embodiments, AB comprises the heavy chain variable region amino acid sequence of SEQ ID NO:1 and the light chain variable region amino acid sequence of SEQ ID NO:2.

いくつかの実施形態では、活性化可能ＣＤ４７抗体は、哺乳動物ＣＤ４７に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ）、配列番号１６～２９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＭＭ、ならびに配列番号３５６～４５８、６８０～６９８、７１３、７１４、および７８９～８０８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＣＭを含む。いくつかの実施形態では、ＭＭは、配列番号１６～２９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、ＣＭは、配列番号３５９、３７０、３７７、３８２、３９０、３９７、４０６～４２５、４２９、４３０、４４６、４４７、４５０、６８０～６９８、７１３、７１４、および８０７～８０８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＢは、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号３）またはアミノ酸配列ＮＹＷＭＴ（配列番号４）を含むＶＨ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＤＰＹＤＶＥ（配列番号５）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号６）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＮＨＫ（配列番号３９）を含むＶＨ ＣＤＲ２配列；アミノ酸配ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含むＶＨ ＣＤＲ３配列；アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＱＴＹＬＥ（配列番号５５）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＳＴＹＬＥ（配列番号５６）を含むＶＬ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含むＶＬ ＣＤＲ２配列；およびアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含むＶＬ ＣＤＲ３配列を含む。 いくつかの実施形態では、ＡＢは、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列、および配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。 In some embodiments, the activatable CD47 antibody comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of an antibody that specifically binds mammalian CD47, or an antigen-binding fragment (AB) thereof, SEQ ID NOS: 16-29. , and CM comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs:356-458, 680-698, 713, 714, and 789-808. In some embodiments, MM comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 16-29 and CM is SEQ ID NOs: 359, 370, 377, 382, 390, 397, 406-425, 429, 430, 446, 447, 450, 680-698, 713, 714, and 807-808. In some embodiments, AB is a VH CDR1 sequence comprising the amino acid sequence GYTFTNY (SEQ ID NO:3) or the amino acid sequence NYWMT (SEQ ID NO:4); the amino acid sequence DPYDVE (SEQ ID NO:5) or the amino acid sequence RIDPYDVETHYAQKFQG (SEQ ID NO:6) or a VH CDR2 sequence comprising the amino acid sequence RIDPYDVETHYNHK (SEQ ID NO:39); a VH CDR3 sequence comprising the amino acid sequence GGVGGMDY (SEQ ID NO:7); an amino acid sequence RSSQSIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO:8) or RSSQSIVHSSSGNTYLE (SEQ ID NO:40) or RSSQSIVHSSSGQTYLE (SEQ ID NO:55) ) or RSSQSIVHSSGSTYLE (SEQ ID NO:56); a VL CDR2 sequence containing the amino acid sequence RVSKRFS (SEQ ID NO:9); and a VL CDR3 sequence containing the amino acid sequence FQGSHVPRT (SEQ ID NO:10). In some embodiments, AB comprises the heavy chain variable region amino acid sequence of SEQ ID NO:1 and the light chain variable region amino acid sequence of SEQ ID NO:2.

いくつかの実施形態では、活性化可能ＣＤ４７抗体は、哺乳動物ＣＤ４７に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ）であって、ヒトＣＤ４７および／またはカニクイザルＣＤ４７上の、本開示の単離抗体と同じエピトープに特異的に結合する、ＡＢ；活性化可能抗体が非切断状態にある場合ＣＤ４７へのＡＢの結合を阻害するマスキング部分（ＭＭ）；ならびにＡＢにカップリングされた切断可能部分（ＣＭ）であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである、ＣＭ、を含む。 In some embodiments, the activatable CD47 antibody is an antibody or antigen-binding fragment (AB) thereof that specifically binds to mammalian CD47 and is a single antibody of the present disclosure on human CD47 and/or cynomolgus monkey CD47. an AB that specifically binds to the same epitope as the detached antibody; a masking moiety (MM) that inhibits AB binding to CD47 when the activatable antibody is in the uncleaved state; and a cleavable moiety coupled to the AB. (CM), which is a polypeptide that functions as a substrate for proteases.

いくつかの実施形態では、本開示のＣＤ４７活性化可能抗体は、哺乳動物ＣＤ４７に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ）であって、ヒトＣＤ４７およびカニクイザルＣＤ４７に特異的に結合する、ＡＢを含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号３）またはアミノ酸配列ＮＹＷＭＴ（配列番号４）を含むＶＨ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＤＰＹＤＶＥ（配列番号５）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号６）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＮＨＫ（配列番号３９）を含むＶＨ ＣＤＲ２配列；アミノ酸配ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含むＶＨ ＣＤＲ３配列；アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＱＴＹＬＥ（配列番号５５）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＳＴＹＬＥ（配列番号５６）を含むＶＬ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含むＶＬ ＣＤＲ２配列；およびアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含むＶＬ ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＢは、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列、および配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。 In some embodiments, a CD47 activatable antibody of the present disclosure is an isolated antibody or antigen-binding fragment (AB) thereof that specifically binds to mammalian CD47, and specifically to human CD47 and cynomolgus monkey CD47. Bind, including AB. In some embodiments, the antibody or antigen-binding fragment thereof has a VH CDR1 sequence comprising the amino acid sequence GYTFTNY (SEQ ID NO:3) or the amino acid sequence NYWMT (SEQ ID NO:4); (SEQ ID NO:6) or the amino acid sequence RIDPYDVETHYNHK (SEQ ID NO:39); the VH CDR3 sequence containing the amino acid sequence GGVGGMDY (SEQ ID NO:7); the amino acid sequence RSSQSIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO:8) or RSSQSIVHSSGNTYLE (SEQ ID NO:40) or VL CDR1 sequences comprising RSSQSIVHSSGQTYLE (SEQ ID NO:55) or RSSQSIVHSSGSTYLE (SEQ ID NO:56); VL CDR2 sequences comprising amino acid sequence RVSKRFS (SEQ ID NO:9); and VL CDR3 sequences comprising amino acid sequence FQGSHVPRT (SEQ ID NO:10). In some embodiments, AB comprises the heavy chain variable region amino acid sequence of SEQ ID NO:1 and the light chain variable region amino acid sequence of SEQ ID NO:2.

いくつかの実施形態では、活性化可能ＣＤ４７抗体は、哺乳動物ＣＤ４７に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ）であって、ヒトＣＤ４７および／またはカニクイザルＣＤ４７への結合について本開示の単離抗体と特異的に交差競合する（その結合を阻害する）、ＡＢ；活性化可能抗体が非切断状態にある場合ＣＤ４７へのＡＢの結合を阻害するマスキング部分（ＭＭ）；ならびにＡＢにカップリングされた切断可能部分（ＣＭ）であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである、ＣＭ、を含む。 In some embodiments, the activatable CD47 antibody is an antibody or antigen-binding fragment (AB) thereof that specifically binds to mammalian CD47, wherein the antibodies of the present disclosure for binding to human CD47 and/or cynomolgus monkey CD47. AB, which specifically cross-competes with the isolated antibody (inhibits its binding); a masking moiety (MM), which inhibits binding of AB to CD47 when the activatable antibody is in the uncleaved state; It includes a ringed cleavable moiety (CM), a polypeptide that functions as a substrate for proteases.

いくつかの実施形態では、本開示のＣＤ４７活性化可能抗体は、哺乳動物ＣＤ４７に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ）であって、ヒトＣＤ４７およびカニクイザルＣＤ４７に特異的に結合する、ＡＢ、を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号３）またはアミノ酸配列ＮＹＷＭＴ（配列番号４）を含むＶＨ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＤＰＹＤＶＥ（配列番号５）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号６）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＮＨＫ（配列番号３９）を含むＶＨ ＣＤＲ２配列；アミノ酸配ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含むＶＨ ＣＤＲ３配列；アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＱＴＹＬＥ（配列番号５５）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＳＴＹＬＥ（配列番号５６）を含むＶＬ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含むＶＬ ＣＤＲ２配列；およびアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含むＶＬ ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＢは、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列、および配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。 In some embodiments, a CD47 activatable antibody of the present disclosure is an isolated antibody or antigen-binding fragment (AB) thereof that specifically binds to mammalian CD47, and specifically to human CD47 and cynomolgus monkey CD47. Include, AB, to bind. In some embodiments, the antibody or antigen-binding fragment thereof has a VH CDR1 sequence comprising the amino acid sequence GYTFTNY (SEQ ID NO:3) or the amino acid sequence NYWMT (SEQ ID NO:4); (SEQ ID NO:6) or the amino acid sequence RIDPYDVETHYNHK (SEQ ID NO:39); the VH CDR3 sequence containing the amino acid sequence GGVGGMDY (SEQ ID NO:7); the amino acid sequence RSSQSIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO:8) or RSSQSIVHSSGNTYLE (SEQ ID NO:40) or VL CDR1 sequences comprising RSSQSIVHSSGQTYLE (SEQ ID NO:55) or RSSQSIVHSSGSTYLE (SEQ ID NO:56); VL CDR2 sequences comprising amino acid sequence RVSKRFS (SEQ ID NO:9); and VL CDR3 sequences comprising amino acid sequence FQGSHVPRT (SEQ ID NO:10). In some embodiments, AB comprises the heavy chain variable region amino acid sequence of SEQ ID NO:1 and the light chain variable region amino acid sequence of SEQ ID NO:2.

いくつかの実施形態では、活性化可能抗体はまた、ＡＢにコンジュゲートされた薬剤を含む。いくつかの実施形態では、ＡＢまたは活性化可能抗体のＡＢにコンジュゲートされた薬剤は、治療薬である。いくつかの実施形態では、薬剤は、抗腫瘍薬である。いくつかの実施形態では、薬剤は、毒素またはそのフラグメントである。本明細書において使用される場合、毒素フラグメントは、毒性活性を保持するフラグメントである。いくつかの実施形態では、薬剤は、切断可能リンカーを介してＡＢにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、薬剤は、少なくとも１種のＣＭ１－ＣＭ２基質配列を含むリンカーを介してＡＢにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、薬剤は、切断可不能リンカーを介してＡＢにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、薬剤は、細胞内環境またはリソソーム環境において切断可能なリンカーを介してＡＢにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、薬剤は、微小管阻害剤である。いくつかの実施形態では、薬剤は、ＤＮＡアルキル化剤、ＤＮＡ切断剤、ＤＮＡ架橋剤、ＤＮＡインターカレーター、または他のＤＮＡ損傷剤などの、核酸損傷剤である。いくつかの実施形態では、薬剤は、表Ｅに列挙された群から選択される薬剤である。いくつかの実施形態では、薬剤は、ドラスタチンである。いくつかの実施形態では、薬剤は、オーリスタチンまたはその誘導体である。いくつかの実施形態では、薬剤は、オーリスタチンＥまたはその誘導体である。いくつかの実施形態では、薬剤は、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）である。いくつかの実施形態では、薬剤は、モノメチルオーリスタチンＤ（ＭＭＡＤ）である。いくつかの実施形態では、薬剤は、メイタンシノイドまたはメイタンシノイド誘導体である。いくつかの実施形態では、薬剤は、ＤＭ１またはＤＭ４である。いくつかの実施形態では、薬剤は、デュオカルマイシンまたはその誘導体である。いくつかの実施形態では、薬剤は、カリケアマイシンまたはその誘導体である。いくつかの実施形態では、薬剤は、ピロロベンゾジアゼピンである。いくつかの実施形態では、薬剤は、ピロロベンゾジアゼピン二量体である。 In some embodiments, activatable antibodies also include agents conjugated to ABs. In some embodiments, the AB or the agent conjugated to the AB of an activatable antibody is a therapeutic agent. In some embodiments, the drug is an antineoplastic drug. In some embodiments, the agent is a toxin or fragment thereof. As used herein, a toxin fragment is a fragment that retains toxic activity. In some embodiments, agents are conjugated to ABs via cleavable linkers. In some embodiments, the agent is conjugated to the AB via a linker comprising at least one CM1-CM2 substrate sequence. In some embodiments, the agent is conjugated to AB via a non-cleavable linker. In some embodiments, the agent is conjugated to the AB via a linker that is cleavable in the intracellular or lysosomal environment. In some embodiments, the agent is a microtubule inhibitor. In some embodiments, the agent is a nucleic acid damaging agent, such as a DNA alkylating agent, DNA cleaving agent, DNA cross-linking agent, DNA intercalator, or other DNA damaging agent. In some embodiments, the drug is a drug selected from the group listed in Table E. In some embodiments, the drug is dolastatin. In some embodiments, the agent is an auristatin or derivative thereof. In some embodiments, the agent is auristatin E or a derivative thereof. In some embodiments, the drug is monomethylauristatin E (MMAE). In some embodiments, the drug is monomethylauristatin D (MMAD). In some embodiments, the agent is a maytansinoid or maytansinoid derivative. In some embodiments, the drug is DM1 or DM4. In some embodiments, the drug is a duocarmycin or derivative thereof. In some embodiments, the drug is a calicheamicin or derivative thereof. In some embodiments, the drug is a pyrrolobenzodiazepine. In some embodiments, the drug is a pyrrolobenzodiazepine dimer.

いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、１当量または複数当量の薬剤にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、１当量の薬剤にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０当量、または１０当量を超える当量の薬剤にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、均一な当量数のコンジュゲートされた薬剤を有する活性化可能抗体の混合物の一部である。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、不均一な当量数のコンジュゲートされた薬剤を有する活性化可能抗体の混合物の一部である。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体の混合物は、各活性化可能抗体にコンジュゲートされた薬剤の平均数が０～１、１～２、２～３、３～４、４～５、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０である、ならびに１０を超えるようなものである。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体の混合物は、各活性化可能抗体にコンジュゲートされた薬剤の平均数が１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０である、またはそれを超えるようなものである。 In some embodiments, an activatable antibody is conjugated to one or more equivalents of drug. In some embodiments, the activatable antibody is conjugated to 1 equivalent of drug. In some embodiments, the activatable antibody is conjugated to 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 equivalents, or more than 10 equivalents of the drug. In some embodiments, the activatable antibody is part of a mixture of activatable antibodies having a uniform equivalent number of conjugated agents. In some embodiments, the activatable antibody is part of a mixture of activatable antibodies having a heterogeneous equivalent number of conjugated agents. In some embodiments, the mixture of activatable antibodies has an average number of agents conjugated to each activatable antibody of 0-1, 1-2, 2-3, 3-4, 4-5, 5-6, 6-7, 7-8, 8-9, 9-10, as well as greater than 10. In some embodiments, the mixture of activatable antibodies has an average number of agents conjugated to each activatable antibody of 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10. is, or is more than.

いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、リジンおよび／またはシステイン残基の数が活性化可能抗体の元のアミノ酸配列に対して増加または減少されるように、１種または複数の部位特異的アミノ酸配列修飾を含み、したがっていくつかの実施形態では、活性化可能抗体にコンジュゲートされ得る薬剤の数を相応に増加または減少させ、またはいくつかの実施形態では、部位特異的に活性化可能抗体に対する薬剤のコンジュゲーションを制限する。いくつかの実施形態では、修飾された活性化可能抗体は、部位特異的に１つまたは複数の非天然アミノ酸により修飾され、したがっていくつかの実施形態では、薬剤のコンジュゲーションを非天然アミノ酸の部位のみに制限する。 In some embodiments, the activatable antibody has one or more site-specific sites such that the number of lysine and/or cysteine residues is increased or decreased relative to the original amino acid sequence of the activatable antibody. specific amino acid sequence modifications, thus, in some embodiments, correspondingly increasing or decreasing the number of agents that can be conjugated to an activatable antibody, or in some embodiments, site-specifically activatable Limit conjugation of drugs to antibodies. In some embodiments, the modified activatable antibody is modified with one or more unnatural amino acids in a site-specific manner; only.

いくつかの実施形態では、薬剤は、抗炎症剤である。 In some embodiments the agent is an anti-inflammatory agent.

いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、検出可能な部分も含む。いくつかの実施形態では、検出可能な部分は、診断薬である。 In some embodiments, an activatable antibody also includes a detectable moiety. In some embodiments, the detectable moiety is a diagnostic agent.

いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、シグナルペプチドも含む。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、スペーサーを介して活性化可能抗体にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、スペーサーは、シグナルペプチドの非存在下で活性化可能抗体にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、スペーサーは、活性化可能抗体のＭＭに直接接続される。いくつかの実施形態では、スペーサーは、スペーサー－ＭＭ－ＣＭ－ＡＢであるＮ末端からＣ末端への構造配置で、活性化可能抗体のＭＭに直接接続される。活性化可能抗体のＭＭのＮ末端に直接接続されるスペーサーの例は、ＱＧＱＳＧＱ（配列番号３１）である。活性化可能抗体のＭＭのＮ末端に直接接続されるスペーサーの他の例は、ＱＧＱＳＧＱＧ（配列番号３０）、ＱＧＱＳＧ（配列番号３２）、ＱＧＱＳ（配列番号３３）、ＱＧＱ、ＱＧ、およびＱを含む。活性化可能抗体のＭＭのＮ末端に直接接続されるスペーサーの他の例は、ＧＱＳＧＱＧ（配列番号３４）、ＱＳＧＱＧ（配列番号３５）、ＳＧＱＧ（配列番号３６）、ＧＱＧ、およびＧを含む。いくつかの実施形態では、ＭＭのＮ末端にスペーサーは接続されない。いくつかの実施形態では、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列ＱＧＱＳＧＱ（配列番号３１）を含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列ＱＧＱＳＧＱＧ（配列番号３０）を含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列ＱＧＱＳＧ（配列番号３２）を含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列ＱＧＱＳ（配列番号３３）を含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列ＱＧＱを含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列ＱＧを含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、少なくともアミノ酸残基Ｑを含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列ＧＱＳＧＱＧ（配列番号３４）を含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列ＱＳＧＱＧ（配列番号３５）を含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列ＳＧＱＧ（配列番号３６）を含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列ＧＱＧを含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列Ｇを含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは存在しない。 In some embodiments, an activatable antibody also includes a signal peptide. In some embodiments, the signal peptide is conjugated to the activatable antibody via a spacer. In some embodiments, the spacer is conjugated to the activatable antibody in the absence of signal peptide. In some embodiments, the spacer is directly attached to the MM of the activatable antibody. In some embodiments, the spacer is directly connected to the MM of the activatable antibody in the N-terminal to C-terminal structural configuration Spacer-MM-CM-AB. An example of a spacer directly attached to the N-terminus of an activatable antibody MM is QGQSGQ (SEQ ID NO:31). Other examples of spacers directly attached to the N-terminus of the MM of an activatable antibody include QGQSGQG (SEQ ID NO:30), QGQSG (SEQ ID NO:32), QGQS (SEQ ID NO:33), QGQ, QG, and Q . Other examples of spacers directly attached to the N-terminus of the MM of an activatable antibody include GQSGQG (SEQ ID NO:34), QSGQG (SEQ ID NO:35), SGQG (SEQ ID NO:36), GQG, and G. In some embodiments, no spacer is attached to the N-terminus of the MM. In some embodiments, the spacer comprises at least the amino acid sequence QGQSGQ (SEQ ID NO:31). In some embodiments, the spacer comprises at least the amino acid sequence QGQSGQG (SEQ ID NO:30). In some embodiments, the spacer comprises at least the amino acid sequence QGQSG (SEQ ID NO:32). In some embodiments, the spacer comprises at least the amino acid sequence QGQS (SEQ ID NO:33). In some embodiments the spacer comprises at least the amino acid sequence QGQ. In some embodiments the spacer comprises at least the amino acid sequence QG. In some embodiments, the spacer comprises at least amino acid residue Q. In some embodiments, the spacer comprises at least the amino acid sequence GQSGQG (SEQ ID NO:34). In some embodiments, the spacer comprises at least the amino acid sequence QSGQG (SEQ ID NO:35). In some embodiments, the spacer comprises at least the amino acid sequence SGQG (SEQ ID NO:36). In some embodiments the spacer comprises at least the amino acid sequence GQG. In some embodiments, the spacer comprises at least the amino acid sequence G. In some embodiments, no spacer is present.

いくつかの実施形態では、活性化可能抗体のＡＢは天然では、１つまたは複数のジスルフィド結合を含む。いくつかの実施形態では、ＡＢは、１つまたは複数のジスルフィド結合を含むように設計できる。 In some embodiments, an AB of an activatable antibody naturally contains one or more disulfide bonds. In some embodiments, AB can be designed to contain one or more disulfide bonds.

いくつかの実施形態では、活性化可能抗体またはその抗原結合フラグメントは、薬剤にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号３）またはアミノ酸配列ＮＹＷＭＴ（配列番号４）を含むＶＨ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＤＰＹＤＶＥ（配列番号５）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号６）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＮＨＫ（配列番号３９）を含むＶＨ ＣＤＲ２配列；アミノ酸配ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含むＶＨ ＣＤＲ３配列；アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＱＴＹＬＥ（配列番号５５）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＳＴＹＬＥ（配列番号５６）を含むＶＬ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含むＶＬ ＣＤＲ２配列；およびアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含むＶＬ ＣＤＲ３配列を含む、単離抗体と、交差競合する（その結合を阻害する）抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列、および配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む単離抗体と、交差競合する（その結合を阻害する）抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、毒素またはそのフラグメントである。いくつかの実施形態では、薬剤は、微小管阻害剤である。いくつかの実施形態では、薬剤は、核酸損傷剤である。いくつかの実施形態では、薬剤は、ドラスタチンまたはその誘導体、オーリスタチンまたはその誘導体、メイタンシノイドまたはその誘導体、デュオカルマイシンまたはその誘導体、カリケアマイシンまたはその誘導体、およびピロロベンゾジアゼピンまたはその誘導体からなる群より選択される。いくつかの実施形態では、薬剤は、オーリスタチンＥまたはその誘導体である。いくつかの実施形態では、薬剤は、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）である。いくつかの実施形態では、薬剤は、モノメチルオーリスタチンＤ（ＭＭＡＤ）である。いくつかの実施形態では、薬剤は、ＤＭ１およびＤＭ４からなる群より選択されるメイタンシノイドである。いくつかの実施形態では、薬剤はメイタンシノイドＤＭ４である。いくつかの実施形態では、薬剤は、デュオカルマイシンである。いくつかの実施形態では、薬剤は、リンカーを介してＡＢにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、それにより薬剤がＡＢにコンジュゲートされるリンカーは、ＳＰＤＢ部分、ｖｃ部分、またはＰＥＧ２－ｖｃ部分を含む。いくつかの実施形態では、ＡＢにコンジュゲートされるリンカーおよび毒素は、ＳＰＤＢ－ＤＭ４部分、ｖｃ－ＭＭＡＤ部分、ｖｃ－ＭＭＡＥ部分、ｖｃ－デュオカルマイシン、またはＰＥＧ２－ｖｃ－ＭＭＡＤ部分を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、切断可能リンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、切断可不能リンカーである。いくつかの実施形態では、薬剤は、検出可能な部分である。いくつかの実施形態では、検出可能な部分は、診断薬である。 In some embodiments, an activatable antibody or antigen-binding fragment thereof is conjugated to an agent. In some embodiments, the activatable antibody has a VH CDR1 sequence comprising the amino acid sequence GYTFTNY (SEQ ID NO:3) or the amino acid sequence NYWMT (SEQ ID NO:4); number 6) or the amino acid sequence RIDPYDVETHYNHK (SEQ ID NO: 39); VH CDR3 sequence comprising the amino acid sequence GGVGGMDY (SEQ ID NO: 7); SEQ ID NO: 55) or RSSQSIVHSSGSTYLE (SEQ ID NO: 56); a VL CDR2 sequence comprising the amino acid sequence RVSKRFS (SEQ ID NO: 9); and a VL CDR3 sequence comprising the amino acid sequence FQGSHVPRT (SEQ ID NO: 10). It includes antibodies or antigen-binding fragments thereof that cross-compete with (inhibit the binding of) antibodies. In some embodiments, the activatable antibody cross-competes (inhibits binding thereof) with an isolated antibody comprising the heavy chain variable region amino acid sequence of SEQ ID NO:1 and the light chain variable region amino acid sequence of SEQ ID NO:2. ) including antibodies or antigen-binding fragments thereof. In some embodiments, the agent is a toxin or fragment thereof. In some embodiments, the agent is a microtubule inhibitor. In some embodiments, the agent is a nucleic acid damaging agent. In some embodiments, the agent consists of dolastatin or derivatives thereof, auristatin or derivatives thereof, maytansinoids or derivatives thereof, duocarmycins or derivatives thereof, calicheamicin or derivatives thereof, and pyrrolobenzodiazepines or derivatives thereof Selected from the group. In some embodiments, the agent is auristatin E or a derivative thereof. In some embodiments, the drug is monomethylauristatin E (MMAE). In some embodiments, the drug is monomethylauristatin D (MMAD). In some embodiments, the agent is a maytansinoid selected from the group consisting of DM1 and DM4. In some embodiments, the agent is the maytansinoid DM4. In some embodiments, the drug is a duocarmycin. In some embodiments, the agent is conjugated to AB via a linker. In some embodiments, the linker by which the agent is conjugated to the AB comprises an SPDB moiety, vc moiety, or PEG2-vc moiety. In some embodiments, linkers and toxins conjugated to ABs comprise SPDB-DM4 moieties, vc-MMAD moieties, vc-MMAE moieties, vc-duocarmycins, or PEG2-vc-MMAD moieties. In some embodiments, the linker is a cleavable linker. In some embodiments, the linker is a non-cleavable linker. In some embodiments, the agent is a detectable moiety. In some embodiments, the detectable moiety is a diagnostic agent.

いくつかの実施形態では、コンジュゲートされた活性化可能抗体は、活性化状態でＣＤ４７を結合する、次記を含むコンジュゲートされた活性化可能抗体を含む：哺乳動物ＣＤ４７に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ）であって、ヒトＣＤ４７およびカニクイザルＣＤ４７を特異的に結合する、ＡＢ；活性化可能抗体が非切断状態にある場合ＣＤ４７へのＡＢの結合を阻害するマスキング部分（ＭＭ）；ＡＢにカップリングされた切断可能部分（ＣＭ）であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである、ＣＭ；ならびにＡＢにコンジュゲートされた薬剤。いくつかの実施形態では、薬剤は、ドラスタチンまたはその誘導体、オーリスタチンまたはその誘導体、メイタンシノイドまたはその誘導体、デュオカルマイシンまたはその誘導体、カリケアマイシンまたはその誘導体、およびピロロベンゾジアゼピンまたはその誘導体からなる群より選択される。いくつかの実施形態では、薬剤は、オーリスタチンＥ、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルオーリスタチンＤ（ＭＭＡＤ）、メイタンシノイドＤＭ４、メイタンシノイドＤＭ１、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、およびピロロベンゾジアゼピン二量体からなる群より選択される。いくつかの実施形態では、薬剤は、リンカーを介してＡＢにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、それにより薬剤がＡＢにコンジュゲートされるリンカーは、ＳＰＤＢ部分、ｖｃ部分、またはＰＥＧ２－ｖｃ部分を含む。いくつかの実施形態では、ＡＢにコンジュゲートされるリンカーおよび毒素は、ＳＰＤＢ－ＤＭ４部分、ｖｃ－ＭＭＡＤ部分、ｖｃ－ＭＭＡＥ部分、ｖｃ－デュオカルマイシン、またはＰＥＧ２－ｖｃ－ＭＭＡＤ部分を含む。いくつかの実施形態では、コンジュゲートされた活性化可能抗体またはその抗原結合フラグメントのＡＢは、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号３）またはアミノ酸配列ＮＹＷＭＴ（配列番号４）を含むＶＨ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＤＰＹＤＶＥ（配列番号５）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号６）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＮＨＫ（配列番号３９）を含むＶＨ ＣＤＲ２配列；アミノ酸配ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含むＶＨ ＣＤＲ３配列；アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＱＴＹＬＥ（配列番号５５）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＳＴＹＬＥ（配列番号５６）を含むＶＬ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含むＶＬ ＣＤＲ２配列；およびアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含むＶＬ ＣＤＲ３配列を含む。 いくつかの実施形態では、コンジュゲートされた活性化可能抗体またはその抗原結合フラグメントのＡＢは、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列、および配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＭＭは、配列番号１６～２９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＭＭは、配列番号１７、２３、２４、２５、２７、および２８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、配列番号３５６～４５８、６８０～６９８、７１３、７１４、および７８９～８０８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、配列番号３５９、３７０、３７７、３８２、３９０、３９７、４０６～４２５、４２９、４３０、４４６、４４７、４５０、６８０～６９８、７１３、７１４、および８０７～８０８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、アミノ酸配列の組み合わせを含み、アミノ酸配列の組み合わせは、表Ｂの単列から選択され、所与の組み合わせについて、（ａ）ＡＢの重鎖は、表Ｂに列挙された単列中の所与の組み合わせに対応するＶＨ ＣＤＲ配列のアミノ酸配列を含み、（ｂ）ＡＢの軽鎖は、表Ｂに列挙された単列中の所与の組み合わせに対応するＶＬ ＣＤＲ配列のアミノ酸配列を含み、（ｃ）ＭＭは、表Ｂに列挙された単列中の所与の組み合わせに対応するマスク配列（ＭＭ）のアミノ酸配列を含み、および（ｄ）ＣＭは、表Ｂに列挙された単列中の所与の組み合わせに対応する基質配列（ＣＭ）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、アミノ酸配列の組み合わせを含み、アミノ酸配列の所与の組み合わせについて、（ａ）ＡＢの重鎖は、表Ｃの対応する縦列に列挙されたＶＨ配列またはＶＨ ＣＤＲ配列からなる群より選択されるＶＨ配列またはＶＨ ＣＤＲ配列のアミノ酸配列を含み、（ｂ）ＡＢの軽鎖は、表Ｃの対応する縦列に列挙されたＶＬ配列またはＶＬ ＣＤＲ配列からなる群より選択されるＶＬ配列またはＶＬ ＣＤＲ配列のアミノ酸配列を含み、（ｃ）ＭＭは、表Ｃの対応する縦列に列挙されたＭＭ配列からなる群より選択されるマスク配列（ＭＭ）のアミノ酸配列を含み、および（ｄ）ＣＭは、表Ｃの対応する縦列に列挙されたＣＭ配列からなる群より選択される基質配列（ＣＭ）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、配列番号１～４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；ならびに配列番号１５、４１～５４、６１～７４、８１～９４、および１６～１１４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。 In some embodiments, the conjugated activatable antibody that binds CD47 in an activated state comprises a conjugated activatable antibody comprising: specifically binds mammalian CD47 an antibody or antigen-binding fragment thereof (AB) that specifically binds human CD47 and cynomolgus monkey CD47, AB; a masking moiety that inhibits binding of AB to CD47 when the activatable antibody is in the uncleaved state ( MM); a cleavable moiety (CM) coupled to an AB, a polypeptide that functions as a substrate for proteases; CM; as well as an agent conjugated to the AB. In some embodiments, the agent consists of dolastatin or derivatives thereof, auristatin or derivatives thereof, maytansinoids or derivatives thereof, duocarmycins or derivatives thereof, calicheamicin or derivatives thereof, and pyrrolobenzodiazepines or derivatives thereof Selected from the group. In some embodiments, the agent is auristatin E, monomethylauristatin F (MMAF), monomethylauristatin E (MMAE), monomethylauristatin D (MMAD), maytansinoid DM4, maytansinoid DM1, duocal selected from the group consisting of mycins, pyrrolobenzodiazepines, and pyrrolobenzodiazepine dimers. In some embodiments, the agent is conjugated to AB via a linker. In some embodiments, the linker by which the agent is conjugated to the AB comprises an SPDB moiety, vc moiety, or PEG2-vc moiety. In some embodiments, linkers and toxins conjugated to ABs comprise SPDB-DM4 moieties, vc-MMAD moieties, vc-MMAE moieties, vc-duocarmycins, or PEG2-vc-MMAD moieties. In some embodiments, the AB of the conjugated activatable antibody or antigen-binding fragment thereof is a VH CDR1 sequence comprising the amino acid sequence GYTFTNY (SEQ ID NO:3) or the amino acid sequence NYWMT (SEQ ID NO:4); (SEQ ID NO: 5) or the amino acid sequence RIDPYDVETHYAQKFQG (SEQ ID NO: 6) or the amino acid sequence RIDPYDVETHYNHK (SEQ ID NO: 39); the VH CDR3 sequence comprising the amino acid sequence GGVGGMDY (SEQ ID NO: 7); ) or RSSQSIVHSSGNTYLE (SEQ ID NO: 40) or RSSQSIVHSSGQTYLE (SEQ ID NO: 55) or RSSQSIVHSSGSTYLE (SEQ ID NO: 56); VL CDR2 sequence comprising the amino acid sequence RVSKRFS (SEQ ID NO: 9); ). In some embodiments, the AB of the conjugated activatable antibody or antigen-binding fragment thereof comprises the heavy chain variable region amino acid sequence of SEQ ID NO:1 and the light chain variable region amino acid sequence of SEQ ID NO:2. In some embodiments, the MM comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS:16-29. In some embodiments, the MM comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 17, 23, 24, 25, 27, and 28. In some embodiments, the CM comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs:356-458, 680-698, 713, 714, and 789-808. In some embodiments, CM is SEQ ID NOs: 359, 370, 377, 382, 390, 397, 406-425, 429, 430, 446, 447, 450, 680-698, 713, 714, and 807-808 Amino acid sequences selected from the group consisting of In some embodiments, the activatable antibody comprises a combination of amino acid sequences, wherein the combination of amino acid sequences is selected from a single column of Table B, wherein for a given combination (a) the heavy chain of AB is (b) the light chain of AB, comprising the amino acid sequences of the VH CDR sequences corresponding to the given combinations in the single row listed in Table B; (c) MM contains the amino acid sequence of the mask sequence (MM) corresponding to the given combination in a single row listed in Table B; and (d) CM contains the amino acid sequence of the substrate sequence (CM) corresponding to the given combination in the single row listed in Table B. In some embodiments, the activatable antibody comprises a combination of amino acid sequences, wherein for a given combination of amino acid sequences, (a) the AB heavy chain is a VH sequence listed in the corresponding column of Table C or an amino acid sequence of a VH sequence or a VH CDR sequence selected from the group consisting of the VH CDR sequences, and (b) the light chain of AB consists of a VL sequence or a VL CDR sequence listed in the corresponding column of Table C. (c) MM is the amino acid sequence of a mask sequence (MM) selected from the group consisting of the MM sequences listed in the corresponding column of Table C. and (d) CM comprises an amino acid sequence of a substrate sequence (CM) selected from the group consisting of the CM sequences listed in the corresponding column of Table C. In some embodiments, the activatable antibody is a heavy chain comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 1-4; A light chain comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of 16-114 is included.

いくつかの実施形態では、コンジュゲートされた活性化可能抗体は、哺乳動物ＣＤ４７に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ）であって、ヒトＣＤ４７およびカニクイザルＣＤ４７に特異的に結合する、ＡＢ；活性化可能抗体が非切断状態にある場合ＣＤ４７へのＡＢの結合を阻害するマスキング部分（ＭＭ）；ＡＢにカップリングされた切断可能部分（ＣＭ）であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである、ＣＭ；ならびにＡＢにコンジュゲートされた薬剤を含む、活性化状態でＣＤ４７に結合する、コンジュゲートされた活性化可能抗体を含み、ＡＢは、（ｉ）アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号３）またはアミノ酸配列ＮＹＷＭＴ（配列番号４）を含むＶＨ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＤＰＹＤＶＥ（配列番号５）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号６）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＮＨＫ（配列番号３９）を含むＶＨ ＣＤＲ２配列；アミノ酸配ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含むＶＨ ＣＤＲ３配列；アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＱＴＹＬＥ（配列番号５５）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＳＴＹＬＥ（配列番号５６）を含むＶＬ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含むＶＬ ＣＤＲ２配列；およびアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含むＶＬ ＣＤＲ３配列、または（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または（ｉｉｉ）配列番号１１～１４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１５、４１～５４、６１～７４、８１～９４、および１６～１１４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；および薬剤は、オーリスタチンＥ、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルオーリスタチンＤ（ＭＭＡＤ）、マイタンシノイドＤＭ４、マイタンシノイドＤＭ１、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、およびデュオカルマイシンからなる群より選択される。いくつかの実施形態では、ＭＭは、配列番号１６～２９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＭＭは、配列番号１７、２３、２４、２５、２７、および２８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、配列番号３５６～４５８、６８０～６９８、７１３、７１４、および７８９～８０８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、配列番号３５９、３７０、３７７、３８２、３９０、３９７、４０６～４２５、４２９、４３０、４４６、４４７、４５０、６８０～６９８、７１３、７１４、および８０７～８０８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、リンカーを介してＡＢにコンジュゲートされ、薬剤をＡＢにコンジュゲートするリンカーは、ＳＰＤＢ部分、ｖｃ部分、またはＰＥＧ２－ｖｃ部分を含む。いくつかの実施形態では、ＡＢにコンジュゲートされるリンカーおよび毒素は、ＳＰＤＢ－ＤＭ４部分、ｖｃ－ＭＭＡＤ部分、ｖｃ－ＭＭＡＥ部分、ｖｃ－デュオカルマイシン、またはＰＥＧ２－ｖｃ－ＭＭＡＤ部分を含む。 In some embodiments, the conjugated activatable antibody is an antibody or antigen-binding fragment (AB) thereof that specifically binds mammalian CD47 and specifically binds human CD47 and cynomolgus monkey CD47. , AB; a masking moiety (MM) that inhibits binding of AB to CD47 when the activatable antibody is in an uncleaved state; a cleavable moiety (CM) coupled to AB that functions as a substrate for the protease. and a conjugated activatable antibody that binds CD47 in an activated state, comprising an agent conjugated to AB, wherein AB has (i) the amino acid sequence GYTFTNY (sequence No. 3) or a VH CDR1 sequence comprising the amino acid sequence NYWMT (SEQ ID No. 4); a VH CDR2 sequence comprising the amino acid sequence DPYDVE (SEQ ID No. 5) or the amino acid sequence RIDPYDVETHYAQKFQG (SEQ ID No. 6) or the amino acid sequence RIDPYDVETHYNHK (SEQ ID No. 39); VH CDR3 sequence comprising amino acid sequence GGVGGMDY (SEQ ID NO:7); VL CDR1 sequence comprising amino acid sequence RSSQSIVHSSNGNTYLE (SEQ ID NO:8) or RSSQSIVHSSSGNTYLE (SEQ ID NO:40) or RSSQSIVHSSGQTYLE (SEQ ID NO:55) or RSSQSIVHSSSGSTYLE (SEQ ID NO:56); amino acids and (ii) a heavy chain variable region comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:1 and a VL CDR3 sequence comprising the amino acid sequence FQGSHVPRT (SEQ ID NO:10); a light chain variable region comprising an amino acid sequence, or (iii) a heavy chain comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 11-14, and SEQ ID NOs: 15, 41-54, 61-74, 81-94, and a light chain comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of 16-114; and the agent is auristatin E, monomethylauristatin F (MMAF), monomethylauristatin E (MMAE), monomethylauristatin D (MMAD) , maytansinoid DM4, maytansinoid DM1, pyrrolobenzodiazepines, pyrrolobenzodiazepine dimers, and duocarmycins. In some embodiments, the MM comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS:16-29. In some embodiments, the MM comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 17, 23, 24, 25, 27, and 28. In some embodiments, the CM comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs:356-458, 680-698, 713, 714, and 789-808. In some embodiments, CM is SEQ ID NOs: 359, 370, 377, 382, 390, 397, 406-425, 429, 430, 446, 447, 450, 680-698, 713, 714, and 807-808 Amino acid sequences selected from the group consisting of In some embodiments, the agent is conjugated to AB via a linker, and the linker that conjugates the agent to AB comprises an SPDB moiety, vc moiety, or PEG2-vc moiety. In some embodiments, linkers and toxins conjugated to ABs comprise SPDB-DM4 moieties, vc-MMAD moieties, vc-MMAE moieties, vc-duocarmycins, or PEG2-vc-MMAD moieties.

いくつかの実施形態では、コンジュゲートされた活性化可能抗体は、活性化状態で、ＣＤ４７を結合する抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ）；およびリンカーを介してＡＢにコンジュゲートされた毒素を含むコンジュゲートされた活性化可能抗体を含み、コンジュゲートされた活性化可能抗体は、表Ｄの単列から選択されるアミノ酸配列、リンカー、および毒素を含み、所与の組み合わせについて、（ａ）ＡＢは、表Ｄに列挙された単列中の所与の組み合わせに対応する重鎖配列または重鎖可変ドメイン配列のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、（ｂ）ＡＢは、表Ｄに列挙された単列中の所与の組み合わせに対応する軽鎖配列または軽鎖可変ドメイン配列のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、（ｃ）リンカーおよび毒素は、表Ｄに列挙された単列中の所与の組み合わせに対応するリンカーおよび毒素を含む。 In some embodiments, the conjugated activatable antibody comprises an antibody or antigen-binding fragment thereof (AB) that, in its activated state, binds CD47; and a toxin conjugated to the AB via a linker A conjugated activatable antibody comprising a conjugated activatable antibody comprising an amino acid sequence, a linker, and a toxin selected from the single columns of Table D, wherein for a given combination: (a) AB includes heavy chains comprising the amino acid sequences of the heavy chain sequences or heavy chain variable domain sequences corresponding to the given combination in a single row listed in Table D; (b) AB is listed in Table D (c) a linker and a toxin comprising a light chain sequence or light chain variable domain sequence amino acid sequence corresponding to a given combination in a single string; The linker and toxin corresponding to the combination of

いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によりコードされる。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸配列によりコードされる。 In some embodiments, the activatable antibody is encoded by a nucleic acid sequence comprising a nucleic acid sequence encoding the heavy chain variable region amino acid sequence of SEQ ID NO:1. In some embodiments, the activatable antibody is encoded by a nucleic acid sequence comprising a nucleic acid sequence encoding the light chain variable region amino acid sequence of SEQ ID NO:2.

いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である核酸配列を含む核酸配列によりコードされる。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列をコードする核酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である核酸配列を含む核酸配列によりコードされる。 In some embodiments, the activatable antibody is at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% a nucleic acid sequence encoding the heavy chain variable region amino acid sequence of SEQ ID NO:1. , including nucleic acid sequences that are 97%, 98% or 99% identical. In some embodiments, the activatable antibody is at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% nucleic acid sequence encoding the light chain variable region amino acid sequence of SEQ ID NO:2. , including nucleic acid sequences that are 97%, 98% or 99% identical.

本開示はまた、、活性化可能抗体の発現をもたらす条件下で細胞を培養することにより本開示の活性化可能抗体を産生するための方法を提供し、細胞は、本開示の核酸分子または本開示のベクターを含む。 The disclosure also provides methods for producing an activatable antibody of the disclosure by culturing the cell under conditions conducive to expression of the activatable antibody, wherein the cell comprises a nucleic acid molecule of the disclosure or a Including disclosed vectors.

本開示はまた、活性化状態でＣＤ４７を結合する活性化可能抗体を製造する方法であって、（ａ）活性化可能抗体の発現をもたらす条件下で活性化可能抗体をコードする核酸構築物を含む細胞を培養するステップであって、活性化可能抗体が、本開示の活性化可能抗体を含む、ステップ；および（ｂ）活性化可能抗体を回収するステップを含む、方法を提供する。 The disclosure also provides a method of producing an activatable antibody that binds CD47 in an activated state, comprising (a) a nucleic acid construct encoding an activatable antibody under conditions conducive to expression of the activatable antibody. culturing a cell, wherein the activatable antibody comprises an activatable antibody of the present disclosure; and (b) recovering the activatable antibody.

いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、表Ｂの所与の列における配列の組み合わせまたは表Ｃのマスク配列（ＭＭ）、基質配列（ＣＭ）、軽鎖可変ドメイン配列もしくは軽鎖可変ドメインＣＤＲ配列および重鎖可変ドメイン配列もしくは重鎖可変ドメインＣＤＲ配列の任意の組み合わせを含む、１種または複数のポリペプチドを含む。

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In some embodiments, the activatable antibody is a combination of sequences in a given column of Table B or a mask sequence (MM), substrate sequence (CM), light chain variable domain sequence or light chain variable domain sequence of Table C Includes one or more polypeptides comprising CDR sequences and heavy chain variable domain sequences or any combination of heavy chain variable domain CDR sequences.
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Figure 2022548310000044

いくつかの実施形態では、本開示の活性化可能抗体は、表Ｂまたは表Ｃから選択される配列の組み合わせを含む、１種または複数のポリペプチドを含み、ポリペプチドは、表Ｂまたは表Ｃの「マスク配列（ＭＭ）」というタイトルの縦列から選択されるマスキング配列、表Ｂまたは表Ｃの「基質配列（ＣＭ）」というタイトルの縦列からの基質配列、表Ｂまたは表Ｃの「ＶＬもしくはＶＬ ＣＤＲ」または「ＶＬ ＣＤＲ配列番号」というタイトルの縦列からの軽鎖可変ドメインまたは軽鎖ＣＤＲ、および表Ｂまたは表Ｃの「ＶＨもしくはＶＨ ＣＤＲ」または「ＶＨ ＣＤＲ配列番号」というタイトルの縦列からの重鎖可変ドメインまたは重鎖ＣＤＲの組み合わせを含む。例えば、本開示の活性化可能抗体は、組み合わせ番号１４７のアミノ酸配列を含んでよく、これは、配列番号１７のマスキング配列、配列番号４１２の基質配列、配列番号１５、１６、および１８のＶＬ ＣＤＲ配列を含む軽鎖可変ドメイン、ならびに１１、１２、および１３のＶＨ ＣＤＲ配列を含む重鎖可変ドメインを含む。従って、少なくとも表Ｂの任意の所与の横列における配列の組み合わせを含む、活性化可能抗体が本明細書で記載される。同様に、表Ｃのマスク配列（ＭＭ）、基質配列（ＣＭ）、軽鎖可変ドメイン配列または軽鎖可変ドメインＣＤＲ配列、および重鎖可変ドメイン配列または重鎖可変ドメインＣＤＲ配列の任意の組み合わせが、本明細書で記載される。少なくとも表Ｂまたは表Ｃの対応する縦列から選択されるマスキング配列、基質配列、可変重鎖または可変重鎖ＣＤＲ、および可変軽鎖または可変軽鎖ＣＤＲの任意の組み合わせを含む活性化可能抗体も、本明細書で記載される。いくつかの例示的な実施形態では、少なくとも表Ｂの任意の所与の横列における配列の組み合わせ、または表Ｃのマスク配列（ＭＭ）、基質配列（ＣＭ）、軽鎖可変ドメイン配列もしくは軽鎖可変ドメインＣＤＲ配列、および重鎖可変ドメイン配列もしくは重鎖可変ドメインＣＤＲ配列の任意の組み合わせを含む活性化可能抗体は、ドラスタチンもしくはその誘導体、オーリスタチンもしくはその誘導体、メイタンシノイドもしくはその誘導体、デュオカルマイシンもしくはその誘導体、カリケアマイシンもしくはその誘導体、またはピロロベンゾジアゼピンもしくはその誘導体を含む、１種または複数の毒素と組み合わされてよい。いくつかの例示的な実施形態では、少なくとも表Ｂの任意の所与の横列における配列の組み合わせ、または表Ｃのマスク配列（ＭＭ）、基質配列（ＣＭ）、軽鎖可変ドメイン配列もしくは軽鎖可変ドメインＣＤＲ配列、および重鎖可変ドメイン配列もしくは重鎖可変ドメインＣＤＲ配列の任意の組み合わせを含む活性化可能抗体は、オーリスタチンＥ、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルオーリスタチンＤ（ＭＭＡＤ）、メイタンシノイドＤＭ４、メイタンシノイドＤＭ１、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、および／またはデュオカルマイシンを含む、１種または複数の毒素と組み合わされてよい。 In some embodiments, an activatable antibody of the present disclosure comprises one or more polypeptides comprising a combination of sequences selected from Table B or Table C, wherein the polypeptides are a masking sequence selected from the column titled "Mask Sequence (MM)" in Table B or Table C, a substrate sequence from the column titled "Substrate Sequence (CM)" in Table B or Table C; the light chain variable domain or light chain CDR from the column entitled "VL CDR" or "VL CDR SEQ ID NO" and from the column entitled "VH or VH CDR" or "VH CDR SEQ ID NO" in Table B or Table C. heavy chain variable domain or combination of heavy chain CDRs. For example, an activatable antibody of the present disclosure may comprise the amino acid sequence of combination number 147, which includes the masking sequence of SEQ ID NO: 17, the substrate sequence of SEQ ID NO: 412, the VL CDRs of SEQ ID NOs: 15, 16, and 18. A light chain variable domain containing sequence and a heavy chain variable domain containing 11, 12 and 13 VH CDR sequences. Thus, activatable antibodies are described herein that include at least a combination of sequences in any given row of Table B. Similarly, any combination of the mask sequence (MM), substrate sequence (CM), light chain variable domain sequence or light chain variable domain CDR sequence, and heavy chain variable domain sequence or heavy chain variable domain CDR sequence of Table C is described herein. Also an activatable antibody comprising any combination of at least a masking sequence, a substrate sequence, a variable heavy chain or variable heavy chain CDRs, and a variable light chain or variable light chain CDRs selected from the corresponding columns of Table B or Table C, described herein. In some exemplary embodiments, at least a combination of sequences in any given row of Table B or a mask sequence (MM), substrate sequence (CM), light chain variable domain sequence or light chain variable of Table C The activatable antibodies comprising the domain CDR sequences and the heavy chain variable domain sequences or any combination of heavy chain variable domain CDR sequences include dolastatin or derivatives thereof, auristatins or derivatives thereof, maytansinoids or derivatives thereof, duocarmycins. Or in combination with one or more toxins, including derivatives thereof, calicheamicin or derivatives thereof, or pyrrolobenzodiazepines or derivatives thereof. In some exemplary embodiments, at least a combination of sequences in any given row of Table B or a mask sequence (MM), substrate sequence (CM), light chain variable domain sequence or light chain variable of Table C An activatable antibody comprising the domain CDR sequences and the heavy chain variable domain sequences or any combination of heavy chain variable domain CDR sequences can be auristatin E, monomethyl auristatin F (MMAF), monomethyl auristatin E (MMAE), monomethyl It may be combined with one or more toxins, including auristatin D (MMAD), maytansinoid DM4, maytansinoid DM1, pyrrolobenzodiazepines, pyrrolobenzodiazepine dimers, and/or duocarmycins.

上記の表Ｂまたは表Ｃにおける組み合わせのいずれかを、ヒト免疫グロブリン定常領域と組み合わせて、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ４を含む完全ヒトＩｇＧをもたらすこともでき、または変異型定常領域と組み合わせて、ＩｇＧ１ Ｎ２９７Ａ、ＩｇＧ１ Ｎ２９７Ｑ、もしくはＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐなどの改変された機能を有するヒトＩｇＧをもたらすこともできる。表Ｂまたは表Ｃに記述される組み合わせは、任意の所与の横列に示される特定の組み合わせに制限されず、したがって表Ｂの縦列２（または表Ｃの縦列１）からの任意のマスク配列を、表Ｂの縦列３（または表Ｃの縦列２）からの任意の基質配列と組み合わせて、表Ｂの縦列４（または表Ｃの縦列３）からの任意のＶＬ配列またはＶＬ ＣＤＲ配列セットと組み合わせて、表Ｂの縦列５（または表Ｃの縦列４）からの任意のＶＨ配列またはＶＨ ＣＤＲ配列セットと組み合わせて含み得る。表Ｂの縦列２または表Ｃの縦列１に開示されるマスク配列に加えて、本明細書で開示される任意のマスク配列を、組み合わせて用いることができる。表Ｂの縦列３または表Ｃの縦列２に開示される基質配列に加えて、本明細書で開示される任意のＣＭを、組み合わせて用いることができる。表Ｂの縦列４または表Ｃの縦列３に開示される軽鎖可変領域配列または軽鎖ＣＤＲ配列に加えて、本明細書で開示される任意の軽鎖可変領域配列または軽鎖ＣＤＲ配列を、組み合わせて用いることができる。表Ｂの縦列５または表Ｃの縦列４に開示される重鎖可変領域配列または重鎖ＣＤＲ配列に加えて、本明細書で開示される任意の重鎖可変領域配列または重鎖ＣＤＲ配列を、組み合わせて用いることができる。 Any of the combinations in Table B or Table C above can also be combined with a human immunoglobulin constant region to yield a fully human IgG, including IgG1, IgG2, IgG4, or with a variant constant region to yield IgG1 N297A , IgG1 N297Q, or IgG4 S228P. The combinations described in Table B or Table C are not limited to the specific combinations shown in any given row, so any mask sequence from column 2 of Table B (or column 1 of Table C) , in combination with any substrate sequence from column 3 of Table B (or column 2 of Table C) in combination with any VL sequence or set of VL CDR sequences from column 4 of Table B (or column 3 of Table C) may be included in combination with any VH sequence or VH CDR sequence set from column 5 of Table B (or column 4 of Table C). In addition to the mask sequences disclosed in Column 2 of Table B or Column 1 of Table C, any of the mask sequences disclosed herein can be used in combination. In addition to the substrate sequences disclosed in column 3 of Table B or column 2 of Table C, any CM disclosed herein can be used in combination. Any light chain variable region sequence or light chain CDR sequence disclosed herein, in addition to the light chain variable region sequences or light chain CDR sequences disclosed in column 4 of Table B or column 3 of Table C, They can be used in combination. Any heavy chain variable region sequence or heavy chain CDR sequence disclosed herein, in addition to the heavy chain variable region sequences or heavy chain CDR sequences disclosed in column 5 of Table B or column 4 of Table C, They can be used in combination.

いくつかの実施形態では、活性化可能抗体の血清半減期は、対応する抗体の血清半減期より長く、例えば、活性化可能抗体のｐＫは、対応する抗体のｐＫより長い。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体の血清半減期は、対応する抗体の血清半減期と類似である。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与される場合、少なくとも１５日である。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与される場合、少なくとも１２日である。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与される場合、少なくとも１１日である。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与される場合、少なくとも１０日である。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与される場合、少なくとも９日である。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与される場合、少なくとも８日である。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与される場合、少なくとも７日である。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与される場合、少なくとも６日である。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与される場合、少なくとも５日である。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与される場合、少なくとも４日である。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与される場合、少なくとも３日である。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与される場合、少なくとも２日である。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与される場合、少なくとも２４時間である。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与される場合、少なくとも２０時間である。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与される場合、少なくとも１８時間である。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与される場合、少なくとも１６時間である。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与される場合、少なくとも１４時間である。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与される場合、少なくとも１２時間である。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与される場合、少なくとも１０時間である。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与される場合、少なくとも８時間である。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与される場合、少なくとも６時間である。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与される場合、少なくとも４時間である。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体の血清半減期は、生物に投与される場合、少なくとも３時間である。 In some embodiments, the serum half-life of the activatable antibody is greater than the serum half-life of the corresponding antibody, eg, the pK of the activatable antibody is greater than the pK of the corresponding antibody. In some embodiments, the serum half-life of the activatable antibody is similar to that of the corresponding antibody. In some embodiments, the activatable antibody has a serum half-life of at least 15 days when administered to an organism. In some embodiments, the activatable antibody has a serum half-life of at least 12 days when administered to an organism. In some embodiments, the activatable antibody has a serum half-life of at least 11 days when administered to an organism. In some embodiments, the activatable antibody has a serum half-life of at least 10 days when administered to an organism. In some embodiments, the activatable antibody has a serum half-life of at least 9 days when administered to an organism. In some embodiments, the activatable antibody has a serum half-life of at least 8 days when administered to an organism. In some embodiments, the activatable antibody has a serum half-life of at least 7 days when administered to an organism. In some embodiments, the activatable antibody has a serum half-life of at least 6 days when administered to an organism. In some embodiments, the activatable antibody has a serum half-life of at least 5 days when administered to an organism. In some embodiments, the activatable antibody has a serum half-life of at least 4 days when administered to an organism. In some embodiments, the activatable antibody has a serum half-life of at least 3 days when administered to an organism. In some embodiments, the activatable antibody has a serum half-life of at least 2 days when administered to an organism. In some embodiments, the activatable antibody has a serum half-life of at least 24 hours when administered to an organism. In some embodiments, the activatable antibody has a serum half-life of at least 20 hours when administered to an organism. In some embodiments, the activatable antibody has a serum half-life of at least 18 hours when administered to an organism. In some embodiments, the activatable antibody has a serum half-life of at least 16 hours when administered to an organism. In some embodiments, the activatable antibody has a serum half-life of at least 14 hours when administered to an organism. In some embodiments, the activatable antibody has a serum half-life of at least 12 hours when administered to an organism. In some embodiments, the activatable antibody has a serum half-life of at least 10 hours when administered to an organism. In some embodiments, the activatable antibody has a serum half-life of at least 8 hours when administered to an organism. In some embodiments, the activatable antibody has a serum half-life of at least 6 hours when administered to an organism. In some embodiments, the activatable antibody has a serum half-life of at least 4 hours when administered to an organism. In some embodiments, the activatable antibody has a serum half-life of at least 3 hours when administered to an organism.

本開示はまた、活性化可能ＣＤ４７抗体ポリペプチドの発現をもたらす条件下で細胞を培養することによりポリペプチドを産生する方法であって、細胞が、本明細書に記載の抗体および／または活性化可能抗体をコードする単離された核酸分子、および／またはこれらの単離された核酸配列を含むベクターを含む、方法も提供する。本開示は、抗体および／または活性化可能抗体の発現をもたらす条件下で細胞を培養することにより抗体および／または活性化可能抗体を産生する方法であって、細胞が、本明細書に記載の抗体および／または活性化可能抗体をコードする単離された核酸分子、および／またはこれらの単離された核酸配列を含むベクターを含む、方法を提供する。 The disclosure also provides a method of producing a polypeptide by culturing a cell under conditions conducive to expression of an activatable CD47 antibody polypeptide, wherein the cell comprises an antibody described herein and/or an activating CD47 antibody polypeptide. Methods are also provided, including isolated nucleic acid molecules encoding the antibodies, and/or vectors containing these isolated nucleic acid sequences. The present disclosure provides a method of producing antibodies and/or activatable antibodies by culturing the cells under conditions conducive to expression of the antibodies and/or activatable antibodies, wherein the cells are a Methods are provided comprising isolated nucleic acid molecules encoding antibodies and/or activatable antibodies, and/or vectors containing these isolated nucleic acid sequences.

本発明はまた、以下のステップにより、活性化状態でＣＤ４７を結合する活性化可能抗体を製造する方法も提供する：（ａ）活性化可能抗体の発現をもたらす条件下で、活性化可能抗体をコードする核酸構築物を含む細胞を培養するステップであって、活性化可能抗体が、マスキング部分（ＭＭ）と、切断可能部分（ＣＭ）と、ＣＤ４７に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ）とを含み、（ｉ）ＣＭが、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドであり、（ｉｉ）ＣＭが、活性化可能抗体が非切断状態にある場合、ＭＭがＣＤ４７へのＡＢの特異的結合に干渉するように、および活性化可能抗体が切断状態にある場合ＭＭがＣＤ４７へのＡＢの特異的結合に干渉も競合もしないように、活性化可能抗体に配置される、ステップ、および（ｂ）活性化可能抗体を回収するステップ。好適なＡＢ、ＭＭ、および／またはＣＭには、本明細書で開示されるいずれかのＡＢ、ＭＭ、および／またはＣＭを含む。 The present invention also provides a method of producing an activatable antibody that binds CD47 in an activated state by the following steps: (a) activating the activatable antibody under conditions conducive to expression of the activatable antibody; Culturing cells containing a nucleic acid construct encoding, wherein the activatable antibody comprises a masking moiety (MM), a cleavable moiety (CM), and an antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to CD47 ( AB), wherein (i) CM is a polypeptide that functions as a substrate for a protease, and (ii) CM is the specificity of AB to CD47 when the activatable antibody is in an uncleaved state. positioning the activatable antibody so as to interfere with binding and such that the MM does not interfere or compete with the specific binding of the AB to CD47 when the activatable antibody is in a cleaved state, and ( b) recovering the activatable antibody; Suitable AB, MM and/or CM include any AB, MM and/or CM disclosed herein.

いくつかの実施形態では、非切断状態における活性化可能抗体は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、次のような構造配置を有する：ＭＭ－ＣＭ－ＡＢまたはＡＢ－ＣＭ－ＭＭ。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、ＭＭとＣＭの間に連結ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、ＣＭとＡＢの間に連結ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、第１の連結ペプチド（ＬＰ１）および第２の連結ペプチド（ＬＰ２）を含み、非切断状態の活性化可能抗体は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、次の構造配置を有する：ＭＭ－ＬＰ１－ＣＭ－ＬＰ２－ＡＢまたはＡＢ－ＬＰ２－ＣＭ－ＬＰ１－ＭＭ。いくつかの実施形態では、２つの連結ペプチドは互いに同一である必要はない。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は非切断状態では、Ｎ末端からＣ末端に向かって、以下の構造配置を有する：スペーサー－ＭＭ－ＬＰ１－ＣＭ－ＬＰ２－ＡＢまたはＡＢ－ＬＰ２－ＣＭ－ＬＰ１－ＭＭ－スペーサー。 In some embodiments, the activatable antibody in its uncleaved state has the following structural arrangement from N-terminus to C-terminus: MM-CM-AB or AB-CM-MM. In some embodiments, an activatable antibody comprises a connecting peptide between MM and CM. In some embodiments, an activatable antibody comprises a connecting peptide between CM and AB. In some embodiments, the activatable antibody comprises a first connecting peptide (LP1) and a second connecting peptide (LP2), wherein the uncleaved activatable antibody is N-terminal to C-terminal and have the following structural arrangement: MM-LP1-CM-LP2-AB or AB-LP2-CM-LP1-MM. In some embodiments, the two connecting peptides need not be identical to each other. In some embodiments, the activatable antibody in the uncleaved state has the following structural arrangement from N-terminus to C-terminus: Spacer-MM-LP1-CM-LP2-AB or AB-LP2-CM -LP1-MM-spacer.

いくつかの実施形態では、ＬＰ１またはＬＰ２の少なくとも一方は、（ＧＳ）ｎ、（ＧＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ（配列番号１１６）および（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１１７）（ｎは少なくとも１の整数である）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。 In some embodiments, at least one of LP1 or LP2 is (GS) n , (GGS) n , (GSGGS) n (SEQ ID NO: 116) and (GGGS) n (SEQ ID NO: 117) (where n is at least 1). are integers).

いくつかの実施形態では、ＬＰ１またはＬＰ２の少なくとも１つは、ＧＧＳＧ（配列番号１１８）、ＧＧＳＧＧ（配列番号１１９）、ＧＳＧＳＧ（配列番号１２０）、ＧＳＧＧＧ（配列番号１２１）、ＧＧＧＳＧ（配列番号１２２）、およびＧＳＳＳＧ（配列番号１２３）からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。 In some embodiments, at least one of LP1 or LP2 is GGSG (SEQ ID NO:118), GGSGG (SEQ ID NO:119), GSGSG (SEQ ID NO:120), GSGGG (SEQ ID NO:121), GGGSG (SEQ ID NO:122) , and GSSSG (SEQ ID NO: 123).

いくつかの実施形態では、ＬＰ１は、アミノ酸配列ＧＳＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧ（配列番号１２４）、ＧＳＳＧＧＳＧＧＳＧＧ（配列番号１２５）、ＧＳＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号１２６）、ＧＳＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号１２７）、ＧＳＳＧＧＳＧＧＳＧ（配列番号１２８）、ＧＳＳＧＧＳＧＧＳＧＳ（配列番号１２９）、およびＧＧＧＳＳＧＧＳ（配列番号１３４）を含む。 In some embodiments, LP1 has the amino acid sequence GSSGGSGGSGGSG (SEQ ID NO: 124), GSSGGSGGSGG (SEQ ID NO: 125), GSSGGSGGSGGS (SEQ ID NO: 126), GSSGGSGGSGGGSGGGS (SEQ ID NO: 127), GSSGGSGGSG (SEQ ID NO: 128), GSSGGSGGSGS (SEQ ID NO: 128), No. 129), and GGGSSGGS (SEQ ID NO: 134).

いくつかの実施形態では、ＬＰ２は、アミノ酸配列ＧＳＳ、ＧＧＳ、ＧＧＧＳ（配列番号１３０）、ＧＳＳＧＴ（配列番号１３１）、またはＧＳＳＧ（配列番号１３２）を含む。 In some embodiments, LP2 comprises the amino acid sequence GSS, GGS, GGGS (SEQ ID NO:130), GSSGT (SEQ ID NO:131), or GSSG (SEQ ID NO:132).

いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は非切断状態で、Ｎ末端からＣ末端に向かって、次の構造配置：スペーサー－ＭＭ－ＬＰ１－ＣＭ－ＬＰ２－ＡＢまたはＡＢ－ＬＰ２－ＣＭ－ＬＰ１－ＭＭ－スペーサーを有し、ＬＰ１は、アミノ酸配列ＧＧＧＳＳＧＧＳ（配列番号１３４）を含み、ＬＰ２は、アミノ酸配列ＧＧＳを含む。 In some embodiments, the activatable antibody, in its uncleaved state, has the following structural arrangement from N-terminus to C-terminus: Spacer-MM-LP1-CM-LP2-AB or AB-LP2-CM-LP1 -MM-spacer, LP1 contains the amino acid sequence GGGSSGGS (SEQ ID NO: 134) and LP2 contains the amino acid sequence GGS.

いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は非切断状態で、Ｎ末端からＣ末端に向かって、次の構造配置：スペーサー－ＭＭ－ＬＰ１－ＣＭ－ＬＰ２－ＡＢまたはＡＢ－ＬＰ２－ＣＭ－ＬＰ１－ＭＭ－スペーサーを有し、ＬＰ１は、アミノ酸配列ＧＧＧＳＳＧＧＳ（配列番号１３４）を含み、ＬＰ２は、アミノ酸配列ＧＧＧＳ（配列番号１３０）を含む。 In some embodiments, the activatable antibody, in its uncleaved state, has the following structural arrangement from N-terminus to C-terminus: Spacer-MM-LP1-CM-LP2-AB or AB-LP2-CM-LP1 -MM-spacer, LP1 contains the amino acid sequence GGGSSGGS (SEQ ID NO: 134) and LP2 contains the amino acid sequence GGGS (SEQ ID NO: 130).

コンジュゲートされたＣＤ４７抗体および活性化可能抗体
いくつかの実施形態では、本明細書で記載のＣＤ４７抗体および活性化可能抗体はまた、抗体／活性化可能抗体にコンジュゲートされた薬剤も含む。いくつかの実施形態では、コンジュゲートされた薬剤は、抗炎症剤および／または抗腫瘍剤などの、治療薬である。このような実施形態では、薬剤は、例えば、炭水化物部分が、活性化可能抗体中の抗体または抗原結合フラグメントの抗原結合領域の外側に位置する、いくつかの実施形態では、抗体／活性化可能抗体の炭水化物部分にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、薬剤は、抗体／活性化可能抗体中の抗体または抗原結合フラグメントのスルフヒドリル基にコンジュゲートされる。 Conjugated CD47 Antibodies and Activatable Antibodies In some embodiments, the CD47 antibodies and activatable antibodies described herein also include agents conjugated to the antibodies/activatable antibodies. In some embodiments, the conjugated agent is a therapeutic agent, such as an anti-inflammatory agent and/or an anti-tumor agent. In such embodiments, the agent is, for example, an antibody/activatable antibody in which the carbohydrate moieties are located outside the antigen binding region of the antibody or antigen binding fragment in the activatable antibody. is conjugated to the carbohydrate moiety of In some embodiments, the agent is conjugated to the sulfhydryl groups of the antibody or antigen-binding fragment in the antibody/activatable antibody.

いくつかの実施形態では、薬剤は、毒素（例えば、細菌、真菌、植物、もしくは動物起源の酵素的に活性な毒素、またはそのフラグメント）、または放射性同位体（すなわち、放射性コンジュゲート）などの細胞傷害薬である。 In some embodiments, the agent is a toxin (e.g., an enzymatically active toxin of bacterial, fungal, plant, or animal origin, or a fragment thereof), or a radioisotope (i.e., a radioconjugate). It is an injury drug.

いくつかの実施形態では、薬剤は、例えば、標識または他のマーカーなどの検出可能部分である。例えば、薬剤は、放射標識アミノ酸、マークされたアビジンによって検出可能な１つまたは複数のビオチニル部分（例えば、蛍光マーカーまたは光学的方法もしくは熱量測定法によって検出可能な酵素活性を含むストレプトアビジン）、１種または複数の放射性同位体もしくは放射性核種、１種または複数の蛍光標識、１種または複数の酵素標識、および／または１種または複数の化学発光剤であるか、またはこれらを含む。いくつかの実施形態では、検出可能部分は、スペーサー分子によって付加される。 In some embodiments, the agent is a detectable moiety such as, for example, a label or other marker. For example, the agent may be a radiolabeled amino acid, one or more biotinyl moieties detectable by marked avidin (e.g., fluorescent markers or streptavidin containing an enzymatic activity detectable by optical or calorimetric methods),1 is or includes a species or more radioisotopes or radionuclides, one or more fluorescent labels, one or more enzymatic labels, and/or one or more chemiluminescent agents. In some embodiments, the detectable moiety is attached by a spacer molecule.

本開示はまた、毒素（例えば、細菌、真菌、植物、もしくは動物起源の酵素的に活性な毒素、またはそのフラグメント）、または放射性同位体（すなわち、放射性コンジュゲート）などの細胞傷害薬にコンジュゲートされた抗体を含む免疫複合体にも関する。好適な細胞毒性剤としては、例えば、ドラスタチンおよびその誘導体（例えば、オーリスタチンＥ、ＡＦＰ、ＭＭＡＦ、ＭＭＡＥ、ＭＭＡＤ、ＤＭＡＦ、ＤＭＡＥ）が挙げられる。例えば、薬剤は、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）またはモノメチルオーリスタチンＤ（ＭＭＡＤ）である。いくつかの実施形態では、薬剤は、表Ｅに列挙された群から選択される薬剤である。いくつかの実施形態では、薬剤は、ドラスタチンである。いくつかの実施形態では、薬剤は、オーリスタチンまたはその誘導体である。いくつかの実施形態では、薬剤は、オーリスタチンＥまたはその誘導体である。いくつかの実施形態では、薬剤は、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）である。いくつかの実施形態では、薬剤は、モノメチルオーリスタチンＤ（ＭＭＡＤ）である。いくつかの実施形態では、薬剤は、メイタンシノイドまたはメイタンシノイド誘導体である。いくつかの実施形態では、薬剤は、ＤＭ１またはＤＭ４である。いくつかの実施形態では、薬剤は、デュオカルマイシンまたはその誘導体である。いくつかの実施形態では、薬剤は、カリケアマイシンまたはその誘導体である。いくつかの実施形態では、薬剤は、ピロロベンゾジアゼピンである。いくつかの実施形態では、薬剤は、ピロロベンゾジアゼピン二量体である。 The disclosure also conjugates to cytotoxic agents such as toxins (e.g., enzymatically active toxins of bacterial, fungal, plant, or animal origin, or fragments thereof), or radioisotopes (i.e., radioconjugates). It also relates to an immunoconjugate comprising the antibody produced by the antibody. Suitable cytotoxic agents include, for example, dolastatin and its derivatives (eg, auristatin E, AFP, MMAF, MMAE, MMAD, DMAF, DMAE). For example, the drug is monomethylauristatin E (MMAE) or monomethylauristatin D (MMAD). In some embodiments, the drug is a drug selected from the group listed in Table E. In some embodiments, the drug is dolastatin. In some embodiments, the agent is an auristatin or derivative thereof. In some embodiments, the agent is auristatin E or a derivative thereof. In some embodiments, the drug is monomethylauristatin E (MMAE). In some embodiments, the drug is monomethylauristatin D (MMAD). In some embodiments, the agent is a maytansinoid or maytansinoid derivative. In some embodiments, the drug is DM1 or DM4. In some embodiments, the drug is a duocarmycin or derivative thereof. In some embodiments, the drug is a calicheamicin or derivative thereof. In some embodiments, the drug is a pyrrolobenzodiazepine. In some embodiments, the drug is a pyrrolobenzodiazepine dimer.

使用できる酵素的に活性な毒素およびそのフラグメントは、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性フラグメント、外毒素Ａ鎖（緑膿菌由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ－サルシン、シナアブラギリタンパク質、ジアンチンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩおよびＰＡＰ－Ｓ）、ツルレイシ阻害剤、クルシン、クロチン、サボンソウ（ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、ならびにトリコテセンを含む。様々な放射性核種が、放射性コンジュゲート抗体の産生に利用可能である。例としては、２１２Ｂｉ、１３１Ｉ、１３１Ｉｎ、９０Ｙ、および１８６Ｒｅが挙げられる。 Enzymatically active toxins and fragments thereof that can be used include diphtheria A chain, non-binding active fragments of diphtheria toxin, exotoxin A chain (from Pseudomonas aeruginosa), ricin A chain, abrin A chain, modecin A chain, alpha- sarcin, chinensis protein, diantin protein, pokeweed protein (PAPI, PAPII and PAP-S), mongrel inhibitor, curcin, crotin, sapaonaria officinalis inhibitor, gelonin, mitgerin, restrictocin, phenomycin , enomycin, and trichothecenes. A variety of radionuclides are available for the production of radioconjugated antibodies. Examples include 212 Bi, 131 I, 131 In, 90 Y, and 186 Re.

いくつかの実施形態では、薬剤は、毒素またはそのフラグメントである。いくつかの実施形態では、薬剤は、微小管阻害剤である。いくつかの実施形態では、薬剤は、核酸損傷剤である。いくつかの実施形態では、薬剤は、ドラスタチンまたはその誘導体、オーリスタチンまたはその誘導体、メイタンシノイドまたはその誘導体、デュオカルマイシンまたはその誘導体、カリケアマイシンまたはその誘導体、およびピロロベンゾジアゼピンまたはその誘導体からなる群より選択される。いくつかの実施形態では、薬剤は、オーリスタチンＥまたはその誘導体である。いくつかの実施形態では、薬剤は、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）である。いくつかの実施形態では、薬剤は、モノメチルオーリスタチンＤ（ＭＭＡＤ）である。いくつかの実施形態では、薬剤は、ＤＭ１およびＤＭ４からなる群より選択されるメイタンシノイドである。いくつかの実施形態では、薬剤は、メイタンシノイドＤＭ４である。いくつかの実施形態では、薬剤は、デュオカルマイシンである。いくつかの実施形態では、薬剤は、リンカーを介してＡＢにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、それにより薬剤がＡＢにコンジュゲートされるリンカーは、ＳＰＤＢ部分、ｖｃ部分、またはＰＥＧ２－ｖｃ部分を含む。いくつかの実施形態では、ＡＢにコンジュゲートされるリンカーおよび毒素は、ＳＰＤＢ－ＤＭ４部分、ｖｃ－ＭＭＡＤ部分、ｖｃ－ＭＭＡＥ部分、ｖｃ－デュオカルマイシン、またはＰＥＧ２－ｖｃ－ＭＭＡＤ部分を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、切断可能リンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、切断可不能リンカーである。いくつかの実施形態では、薬剤は、検出可能な部分である。いくつかの実施形態では、検出可能な部分は、診断薬である。 In some embodiments, the agent is a toxin or fragment thereof. In some embodiments, the agent is a microtubule inhibitor. In some embodiments, the agent is a nucleic acid damaging agent. In some embodiments, the agent consists of dolastatin or derivatives thereof, auristatin or derivatives thereof, maytansinoids or derivatives thereof, duocarmycins or derivatives thereof, calicheamicin or derivatives thereof, and pyrrolobenzodiazepines or derivatives thereof Selected from the group. In some embodiments, the agent is auristatin E or a derivative thereof. In some embodiments, the drug is monomethylauristatin E (MMAE). In some embodiments, the drug is monomethylauristatin D (MMAD). In some embodiments, the agent is a maytansinoid selected from the group consisting of DM1 and DM4. In some embodiments, the agent is the maytansinoid DM4. In some embodiments, the drug is a duocarmycin. In some embodiments, the agent is conjugated to AB via a linker. In some embodiments, the linker by which the agent is conjugated to the AB comprises an SPDB moiety, vc moiety, or PEG2-vc moiety. In some embodiments, linkers and toxins conjugated to ABs comprise SPDB-DM4 moieties, vc-MMAD moieties, vc-MMAE moieties, vc-duocarmycins, or PEG2-vc-MMAD moieties. In some embodiments, the linker is a cleavable linker. In some embodiments, the linker is a non-cleavable linker. In some embodiments, the agent is a detectable moiety. In some embodiments, the detectable moiety is a diagnostic agent.

いくつかの実施形態では、コンジュゲートされた活性化可能抗体は、（ａ）哺乳動物ＣＤ４７に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ）であって、（ｉ）アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号３）またはアミノ酸配列ＮＹＷＭＴ（配列番号４）を含むＶＨ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＤＰＹＤＶＥ（配列番号５）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号６）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＮＨＫ（配列番号３９）を含むＶＨ ＣＤＲ２配列；アミノ酸配ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含むＶＨ ＣＤＲ３配列；アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＱＴＹＬＥ（配列番号５５）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＳＴＹＬＥ（配列番号５６）を含むＶＬ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含むＶＬ ＣＤＲ２配列；およびアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含むＶＬ ＣＤＲ３配列、または（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、ＡＢ；（ｂ）ＡＢにコンジュゲートされた薬剤であって、オーリスタチンＥ、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルオーリスタチンＤ（ＭＭＡＤ）、マイタンシノイドＤＭ４、マイタンシノイドＤＭ１、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、およびデュオカルマイシンからなる群より選択される、薬剤、を含む抗体を含む。 In some embodiments, the conjugated activatable antibody is (a) an antibody or antigen-binding fragment (AB) thereof that specifically binds to mammalian CD47, comprising (i) the amino acid sequence GYTFTNY (sequence No. 3) or a VH CDR1 sequence comprising the amino acid sequence NYWMT (SEQ ID No. 4); a VH CDR2 sequence comprising the amino acid sequence DPYDVE (SEQ ID No. 5) or the amino acid sequence RIDPYDVETHYAQKFQG (SEQ ID No. 6) or the amino acid sequence RIDPYDVETHYNHK (SEQ ID No. 39); VH CDR3 sequence comprising amino acid sequence GGVGGMDY (SEQ ID NO:7); VL CDR1 sequence comprising amino acid sequence RSSQSIVHSSNGNTYLE (SEQ ID NO:8) or RSSQSIVHSSSGNTYLE (SEQ ID NO:40) or RSSQSIVHSSGQTYLE (SEQ ID NO:55) or RSSQSIVHSSSGSTYLE (SEQ ID NO:56); amino acids and (ii) a heavy chain variable region comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:1 and a VL CDR3 sequence comprising the amino acid sequence FQGSHVPRT (SEQ ID NO:10); (b) an agent conjugated to an AB comprising a light chain variable region comprising an amino acid sequence, comprising auristatin E, monomethylauristatin F (MMAF), monomethylauristatin E (MMAE), monomethylauristatin D(MMAD), maytansinoid DM4, maytansinoid DM1, pyrrolobenzodiazepines, pyrrolobenzodiazepine dimers, and agents selected from the group consisting of duocarmycins.

本開示のＣＤ４７抗体および活性化可能抗体は、薬剤に対する少なくとも１つのコンジュゲーション位置を有するが、本明細書で提供される方法および組成物では、全ての可能なコンジュゲーション位置より少ない位置が、薬剤に対するコンジュゲーションのために利用可能である。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のコンジュゲーション位置は、ジスルフィド結合に関与する硫黄原子である。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のコンジュゲーション位置は、鎖間ジスルフィド結合に関与する硫黄原子である。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のコンジュゲーション位置は、鎖間スルフィド結合に関与する硫黄原子であるが、鎖内ジスルフィド結合に関与する硫黄原子ではない。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のコンジュゲーション位置は、システインまたは硫黄原子を含有する他のアミノ酸残基の硫黄原子である。このような残基は、抗体構造中に天然に存在し得、または、部位特異的変異誘発、化学変換、または非天然アミノ酸の誤取り込みによって抗体中に組み込むことができる。 Although the CD47 antibodies and activatable antibodies of the present disclosure have at least one conjugation position for an agent, in the methods and compositions provided herein fewer than all possible conjugation positions are for an agent. available for conjugation to In some embodiments, one or more conjugation positions are sulfur atoms that participate in disulfide bonds. In some embodiments, one or more of the conjugation positions is a sulfur atom that participates in an interchain disulfide bond. In some embodiments, one or more of the conjugation positions is a sulfur atom that participates in an interchain sulfide bond, but not a sulfur atom that participates in an intrachain disulfide bond. In some embodiments, one or more of the conjugation positions is the sulfur atom of a cysteine or other amino acid residue containing a sulfur atom. Such residues may occur naturally in the antibody structure or may be incorporated into the antibody by site-directed mutagenesis, chemical transformation, or misincorporation of unnatural amino acids.

ＡＢ中の１つまたは複数の鎖間ジスルフィド結合、およびＭＭ中の１つまたは複数の鎖内ジスルフィド結合を有するＣＤ４７抗体／ＣＤ４７活性化可能抗体と、遊離チオールと反応する薬物とのコンジュゲートを調製する方法もまた提供される。方法は一般に、活性化可能抗体中の鎖間ジスルフィド結合を、例えばＴＣＥＰなどの還元剤で部分的に還元するステップ；および、遊離チオールと反応する薬物を、部分的に還元された抗体／活性化可能抗体にコンジュゲーションするステップを含む。本明細書で使用される際、部分的還元という用語は、ａｃｔ抗体／活性化可能抗体を還元剤と接触させ、全てのジスルフィド結合より少ない、例えば、全ての可能なコンジュゲーション部位より少ないジスルフィド結合が還元される、状況を指す。いくつかの実施形態では、すべての可能なコンジュゲーションの部位の９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％未満、または５％未満が、還元される。 Prepare a conjugate of a CD47 antibody/CD47 activatable antibody with one or more interchain disulfide bonds in AB and one or more intrachain disulfide bonds in MM and a drug that reacts with free thiols A method is also provided. The method generally involves partially reducing interchain disulfide bonds in the activatable antibody with a reducing agent such as TCEP; and conjugating to a capable antibody. As used herein, the term partial reduction means that the act antibody/activatable antibody is contacted with a reducing agent and has fewer than all disulfide bonds, e.g., fewer than all possible conjugation sites. refers to the situation in which is reduced. In some embodiments, 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60% of all possible conjugation sites %, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, less than 10%, or less than 5% is reduced.

さらに他の実施形態では、薬剤、例えば薬物を還元してＣＤ４７抗体／ＣＤ４７活性化可能抗体にコンジュゲートし、薬剤の配置における選択性をもたらす方法が提供される。方法は一般に、ＣＤ４７抗体／ＣＤ４７活性化可能抗体のマスキング部分または他の非ＡＢ部分中の全てのコンジュゲーション部位が還元されないように、ＣＤ４７抗体／ＣＤ４７活性化可能抗体を還元剤で部分的に還元するステップ、および、薬剤をＡＢ中の鎖間チオールにコンジュゲートするステップを含む。コンジュゲーション部位は、薬剤の望ましい配置を可能にして、望ましい部位でコンジュゲーションを起こさせるように選択される。還元剤は、例えばＴＣＥＰである。例えば、還元剤の抗体／活性化可能抗体に対する比、インキュベーションの長さ、インキュベーションの温度、還元反応溶液のｐＨなどなどの還元反応条件は、例えば、ＭＭが、非切断状態において活性化可能抗体のＡＢを効果的、効率的にマスキングする能力を保持する、コンジュゲートされた活性化可能抗体を生じる条件下でコンジュゲートされた抗体／活性化可能抗体を生じる条件を特定することによって決定される。還元剤対抗体／活性化可能抗体の比は、抗体／活性化可能抗体に応じて変わるであろう。いくつかの実施形態では、還元剤対抗体／活性化可能抗体の比は、約２０：１～１：１、約１０：１～１：１、約９：１～１：１、約８：１～１：１、約７：１～１：１、約６：１～１：１、約５：１～１：１、約４：１～１：１、約３：１～１：１、約２：１～１：１、約２０：１～１：１．５、約１０：１～１：１．５、約９：１～１：１．５、約８：１～１：１．５、約７：１～１：１．５、約６：１～１：１．５、約５：１～１：１．５、約４：１～１：１．５、約３：１～１：１．５、約２：１～１：１．５、約１．５：１～１：１．５、または約１：１～１：１．５の範囲であろう。いくつかの実施形態では、比は、約５：１～１：１の範囲である。いくつかの実施形態では、比は、約５：１～１．５：１の範囲である。いくつかの実施形態では、比は、約４：１～１：１の範囲である。いくつかの実施形態では、比は、約４：１～１．５：１の範囲である。いくつかの実施形態では、比は、約８：１～１：１の範囲である。いくつかの実施形態では、比は、約２．５：１～１：１の範囲である。 In still other embodiments, methods are provided for reducing and conjugating an agent, eg, a drug, to a CD47 antibody/CD47 activatable antibody to provide selectivity in the placement of the agent. The method generally involves partially reducing the CD47 antibody/CD47 activatable antibody with a reducing agent such that all conjugation sites in the masking portion or other non-AB portion of the CD47 antibody/CD47 activatable antibody are not reduced. and conjugating the agent to the interchain thiol in AB. The conjugation site is chosen to allow desired placement of the agent to cause conjugation to occur at the desired site. The reducing agent is for example TCEP. Reduction reaction conditions, such as, for example, the ratio of reducing agent to antibody/activatable antibody, length of incubation, temperature of incubation, pH of the reduction reaction solution, etc., are determined, for example, by the reduction of activatable antibody in the uncleaved state by MM. Determined by identifying conditions that yield conjugated/activatable antibodies under conditions that yield conjugated/activatable antibodies that retain the ability to effectively and efficiently mask ABs. The ratio of reducing agent to antibody/activatable antibody will vary depending on the antibody/activatable antibody. In some embodiments, the ratio of reducing agent to antibody/activatable antibody is about 20:1 to 1:1, about 10:1 to 1:1, about 9:1 to 1:1, about 8: 1-1:1, about 7:1-1:1, about 6:1-1:1, about 5:1-1:1, about 4:1-1:1, about 3:1-1:1 , about 2:1 to 1:1, about 20:1 to 1:1.5, about 10:1 to 1:1.5, about 9:1 to 1:1.5, about 8:1 to 1:1: 1.5, about 7:1 to 1:1.5, about 6:1 to 1:1.5, about 5:1 to 1:1.5, about 4:1 to 1:1.5, about 3 : 1 to 1:1.5, about 2:1 to 1:1.5, about 1.5:1 to 1:1.5, or about 1:1 to 1:1.5. In some embodiments, the ratio ranges from about 5:1 to 1:1. In some embodiments, the ratio ranges from about 5:1 to 1.5:1. In some embodiments, the ratio ranges from about 4:1 to 1:1. In some embodiments, the ratio ranges from about 4:1 to 1.5:1. In some embodiments, the ratio ranges from about 8:1 to 1:1. In some embodiments, the ratio ranges from about 2.5:1 to 1:1.

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７は、最初にコンジュゲーションを受け、その後、ＣＭおよびＭＭを含むようにさらに修飾される（活性化可能抗体をもたらす）。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７活性化可能抗体は、コンジュゲートされている。 In some embodiments, CD47 is first conjugated and then further modified to include CM and MM (resulting in an activatable antibody). In some embodiments, the CD47 activatable antibody is conjugated.

いくつかの実施形態では、活性化可能ＣＤ４７抗体のＡＢ中の鎖間ジスルフィド結合を還元し、薬剤、例えば薬物などのチオール含有薬剤を、得られた鎖間チオールにコンジュゲートして薬剤をＡＢ上に選択的に置く方法が、提供される。この方法は一般に、ＡＢを還元剤により部分的に還元して、活性化可能抗体においてすべての可能な鎖間チオールを形成することなく、少なくとも２つの鎖間チオールを形成すること、および部分的に還元されたＡＢの鎖間チオールに薬剤をコンジュゲートすることを含む。例えば、活性化可能抗体のＡＢは、還元剤：活性化可能抗体の所望の比率にて、約３７℃で約１時間にわたり部分的に還元される。いくつかの実施形態では、還元剤対活性化可能抗体の比は、約２０：１～１：１、約１０：１～１：１、約９：１～１：１、約８：１～１：１、約７：１～１：１、約６：１～１：１、約５：１～１：１、約４：１～１：１、約３：１～１：１、約２：１～１：１、約２０：１～１：１．５、約１０：１～１：１．５、約９：１～１：１．５、約８：１～１：１．５、約７：１～１：１．５、約６：１～１：１．５、約５：１～１：１．５、約４：１～１：１．５、約３：１～１：１．５、約２：１～１：１．５、約１．５：１～１：１．５、または約１：１～１：１．５の範囲であろう。いくつかの実施形態では、比は、約５：１～１：１の範囲である。いくつかの実施形態では、比は、約５：１～１．５：１の範囲である。いくつかの実施形態では、比は、約４：１～１：１の範囲である。いくつかの実施形態では、比は、約４：１～１．５：１の範囲である。いくつかの実施形態では、比は、約８：１～１：１の範囲である。いくつかの実施形態では、比は、約２．５：１～１：１の範囲である。 In some embodiments, the interchain disulfide bonds in the ABs of an activatable CD47 antibody are reduced and an agent, e.g., a thiol-containing agent such as a drug, is conjugated to the resulting interchain thiol to render the agent on the AB. A method is provided for selectively placing the . The method generally involves partially reducing AB with a reducing agent to form at least two interchain thiols without forming all possible interchain thiols in the activatable antibody, and partially Including conjugating the drug to the reduced interchain thiol of AB. For example, the AB of the activatable antibody is partially reduced at about 37° C. for about 1 hour at the desired ratio of reducing agent:activatable antibody. In some embodiments, the ratio of reducing agent to activatable antibody is about 20:1 to 1:1, about 10:1 to 1:1, about 9:1 to 1:1, about 8:1 to 1:1, about 7:1 to 1:1, about 6:1 to 1:1, about 5:1 to 1:1, about 4:1 to 1:1, about 3:1 to 1:1, about 2:1 to 1:1, about 20:1 to 1:1.5, about 10:1 to 1:1.5, about 9:1 to 1:1.5, about 8:1 to 1:1. 5, about 7:1 to 1:1.5, about 6:1 to 1:1.5, about 5:1 to 1:1.5, about 4:1 to 1:1.5, about 3:1 ~1:1.5, about 2:1 to 1:1.5, about 1.5:1 to 1:1.5, or about 1:1 to 1:1.5. In some embodiments, the ratio ranges from about 5:1 to 1:1. In some embodiments, the ratio ranges from about 5:1 to 1.5:1. In some embodiments, the ratio ranges from about 4:1 to 1:1. In some embodiments, the ratio ranges from about 4:1 to 1.5:1. In some embodiments, the ratio ranges from about 8:1 to 1:1. In some embodiments, the ratio ranges from about 2.5:1 to 1:1.

チオール含有試薬は、例えば、システインまたはＮ－アセチルシステインであり得る。還元剤は、例えば、ＴＣＥＰであり得る。いくつかの実施形態では、還元された活性化可能抗体は、コンジュゲーションの前に、例えば、カラムクロマトグラフィー、透析、または透析濾過を用いて精製されてよい。あるいは、還元された抗体は、部分的還元の後、およびコンジュゲーションの前に精製されない。 A thiol-containing reagent can be, for example, cysteine or N-acetylcysteine. The reducing agent can be, for example, TCEP. In some embodiments, the reduced activatable antibody may be purified using, for example, column chromatography, dialysis, or diafiltration prior to conjugation. Alternatively, the reduced antibody is not purified after partial reduction and prior to conjugation.

本発明はまた、抗体／活性化可能抗体中の少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合が、抗体／活性化可能抗体中のいずれの鎖内ジスルフィド結合も妨害することなく還元剤で還元されている、部分的に還元された抗体／活性化可能抗体も提供し、活性化可能抗体は、ＣＤ４７に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ）と、非切断状態においてＣＤ４７標的への活性化可能抗体のＡＢの結合を阻害するマスキング部分（ＭＭ）と、ＡＢにカップリングされた切断可能部分（ＣＭ）とを含み、ＣＭは、プロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＣＭを介してＡＢにカップリングされる。いくつかの実施形態では、抗体／活性化可能抗体の１つまたは複数の鎖内ジスルフィド結合は、還元剤によって妨害されない。いくつかの実施形態では、抗体／活性化可能抗体内のＭＭの１つまたは複数の鎖内ジスルフィド結合は、還元剤によって妨害されない。いくつかの実施形態では、非切断状態における活性化可能抗体は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、次の構造配置を有する：ＭＭ－ＣＭ－ＡＢまたはＡＢ－ＣＭ－ＭＭ。いくつかの実施形態では、還元剤は、ＴＣＥＰである。 The invention also provides a moiety wherein at least one interchain disulfide bond in the antibody/activatable antibody has been reduced with a reducing agent without interfering with any intrachain disulfide bond in the antibody/activatable antibody. A positively reduced/activatable antibody is also provided, wherein the activatable antibody is an antibody or antigen-binding fragment (AB) thereof that specifically binds to CD47 and an activatable antibody to CD47 targets in the uncleaved state. It contains a masking moiety (MM) that inhibits binding of the AB of the antibody and a cleavable moiety (CM) coupled to the AB, the CM being a polypeptide that functions as a substrate for proteases. In some embodiments, MM is coupled to AB via CM. In some embodiments, one or more intrachain disulfide bonds of the antibody/activatable antibody are not disrupted by the reducing agent. In some embodiments, one or more intrachain disulfide bonds of the MM within the antibody/activatable antibody are not disrupted by the reducing agent. In some embodiments, the activatable antibody in its uncleaved state has the following structural arrangement from N-terminus to C-terminus: MM-CM-AB or AB-CM-MM. In some embodiments, the reducing agent is TCEP.

さらに他の実施形態では、薬剤、例えば薬物を還元し、ＣＤ４７抗体／ＣＤ４７活性化可能抗体にコンジュゲートする方法は、所定の数および位置のリジンおよび／またはシステイン残基を有する活性化可能ＣＤ４７抗体を提供することにより、薬剤の配置における選択性をもたらす。いくつかの実施形態では、リジンおよび／またはシステイン残基の定義された数は、親抗体または活性化可能抗体のアミノ酸配列における対応する残基の数より多いかまたは少ない。いくつかの実施形態では、定義された数のリジンおよび／またはシステイン残基は、ＣＤ４７抗体または活性化可能ＣＤ４７抗体にコンジュゲートできる定義された数の薬剤等価物をもたらし得る。いくつかの実施形態では、定義された数のリジンおよび／またはシステイン残基は、部位特異的様式でＣＤ４７抗体または活性化可能ＣＤ４７にコンジュゲートできる定義された数の薬剤等価物をもたらし得る。いくつかの実施形態では、修飾された活性化可能抗体は、部位特異的に１つまたは複数の非天然アミノ酸により修飾され、したがっていくつかの実施形態では、薬剤のコンジュゲーションを非天然アミノ酸の部位のみに制限する。いくつかの実施形態では、所定の数および位置のリジンおよび／またはシステイン残基を有するＣＤ４７抗体または活性化可能ＣＤ４７抗体は、活性化可能抗体のマスキング部分または他の非ＡＢ部分におけるいずれのコンジュゲーション部位も還元されず、ＡＢにおける鎖間チオールに薬剤をコンジュゲートするような、本明細書で検討された還元剤で部分的に還元できる。 In still other embodiments, the method of reducing and conjugating an agent, e.g., a drug, to a CD47 antibody/CD47 activatable antibody comprises an activatable CD47 antibody having a predetermined number and positions of lysine and/or cysteine residues. provides selectivity in drug placement. In some embodiments, the defined number of lysine and/or cysteine residues is greater or less than the number of corresponding residues in the amino acid sequence of the parent antibody or activatable antibody. In some embodiments, a defined number of lysine and/or cysteine residues can provide a defined number of drug equivalents that can be conjugated to a CD47 antibody or activatable CD47 antibody. In some embodiments, a defined number of lysine and/or cysteine residues can provide a defined number of drug equivalents that can be conjugated to a CD47 antibody or activatable CD47 in a site-specific manner. In some embodiments, the modified activatable antibody is modified with one or more unnatural amino acids in a site-specific manner; only. In some embodiments, a CD47 antibody or activatable CD47 antibody with a predetermined number and positions of lysine and/or cysteine residues is used for any conjugation in the masking portion or other non-AB portion of the activatable antibody. The site is also not reduced and can be partially reduced with reducing agents discussed herein, such as conjugating the drug to the interchain thiol in AB.

本開示はまた、活性化可能抗体中の少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合が、活性化可能抗体中のいずれの鎖内ジスルフィド結合も妨害することなく還元剤で還元されている、部分的に還元された活性化可能抗体も提供し、活性化可能抗体は、標的、例えばＣＤ４７に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ）と、非切断状態で標的への活性化可能抗体のＡＢの結合を阻害するマスキング部分（ＭＭ）と、ＡＢにカップリングされた切断可能部分（ＣＭ）とを含み、ＣＭは、少なくとも１種のプロテアーゼに対する基質として機能するポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＣＭを介してＡＢにカップリングされる。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体の１つまたは複数の鎖内ジスルフィド結合は、還元剤によって妨害されない。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体内のＭＭの１個または複数の鎖内ジスルフド結合は、還元剤により妨害されない。いくつかの実施形態では、非切断状態での活性化可能抗体は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、次の構造配置を有する：ＭＭ－ＣＭ－ＡＢまたはＡＢ－ＣＭ－ＭＭ。いくつかの実施形態では、還元剤は、ＴＣＥＰである。 The disclosure also provides partially reduced antibodies, wherein at least one interchain disulfide bond in the activatable antibody has been reduced with a reducing agent without disturbing any intrachain disulfide bonds in the activatable antibody. An activatable antibody is also provided, wherein the activatable antibody is an antibody or antigen-binding fragment thereof (AB) that specifically binds to a target, e.g., CD47, and an AB of the activatable antibody to the target in an uncleaved state. It comprises a masking moiety (MM) that inhibits binding and a cleavable moiety (CM) coupled to AB, wherein CM is a polypeptide that functions as a substrate for at least one protease. In some embodiments, MM is coupled to AB via CM. In some embodiments, one or more intrachain disulfide bonds of the activatable antibody are not disrupted by the reducing agent. In some embodiments, one or more intrachain disulfide bonds of the MM within the activatable antibody are not disrupted by the reducing agent. In some embodiments, an activatable antibody in its uncleaved state has, from N-terminus to C-terminus, the following structural arrangement: MM-CM-AB or AB-CM-MM. In some embodiments, the reducing agent is TCEP.

いくつかの実施形態では、薬剤は、マレイミドカプロイル－バリン－シトルリンリンカーまたはマレイミドＰＥＧ－バリン－シトルリンリンカーを用いてＡＢに連結される。いくつかの実施形態では、薬剤は、マレイミドカプロイル－バリン－シトルリンリンカーを使用してＡＢに連結される。いくつかの実施形態では、薬剤は、マレイミドＰＥＧ－バリン－シトルリンリンカーを使用してＡＢに連結される。いくつかの実施形態では、薬剤は、マレイミドＰＥＧ－バリン－シトルリン－パラ－アミノベンジルオキシカルボニルリンカーを使用してＡＢに連結されたモノメチルオーリスタチンＤ（ＭＭＡＤ）であり、このリンカーペイロード構築物は、本明細書では「ｖｃ－ＭＭＡＤ」と呼ばれる。いくつかの実施形態では、薬剤は、マレイミドＰＥＧ－バリン－シトルリン－パラ－アミノベンジルオキシカルボニルリンカーを使用してＡＢに連結されたモノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）であり、このリンカーペイロード構築物は本明細書では「ｖｃ－ＭＭＡＥ」と称される。いくつかの実施形態では、薬剤は、マレイミドＰＥＧ－バリン－シトルリンリンカーを使用してＡＢに連結される。いくつかの実施形態では、薬剤は、マレイミドビス－ＰＥＧ－バリン－シトルリン－パラ－アミノベンジルオキシカルボニルリンカーを使用してＡＢに連結されたモノメチルオーリスタチンＤ（ＭＭＡＤ）であり、このリンカーペイロード構築物は、本明細書では「ＰＥＧ２－ｖｃ－ＭＭＡＤ」と称される。ｖｃ－ＭＭＡＤ、ｖｃ－ＭＭＡＥ、およびＰＥＧ２－ｖｃ－ＭＭＡＤの構造を以下に示す：

Figure 2022548310000045
In some embodiments, the drug is linked to the AB using a maleimidocaproyl-valine-citrulline linker or a maleimide PEG-valine-citrulline linker. In some embodiments, the drug is linked to AB using a maleimidocaproyl-valine-citrulline linker. In some embodiments, the drug is linked to AB using a maleimido PEG-valine-citrulline linker. In some embodiments, the drug is monomethylauristatin D (MMAD) linked to AB using a maleimido PEG-valine-citrulline-para-aminobenzyloxycarbonyl linker, and this linker payload construct is Referred to herein as "vc-MMAD". In some embodiments, the drug is monomethylauristatin E (MMAE) linked to AB using a maleimido PEG-valine-citrulline-para-aminobenzyloxycarbonyl linker, and this linker payload construct is described herein. referred to in the literature as "vc-MMAE". In some embodiments, the drug is linked to AB using a maleimido PEG-valine-citrulline linker. In some embodiments, the drug is monomethylauristatin D (MMAD) linked to AB using a maleimidobis-PEG-valine-citrulline-para-aminobenzyloxycarbonyl linker, and this linker payload construct is , referred to herein as "PEG2-vc-MMAD." The structures of vc-MMAD, vc-MMAE, and PEG2-vc-MMAD are shown below:
Figure 2022548310000045

本開示はまた、モノメチルオーリスタチンＤ（ＭＭＡＤ）ペイロードに連結された活性化可能抗体を含むコンジュゲートされた活性化可能抗体を提供し、活性化可能抗体は、標的に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ）、標的への非切断状態の活性化可能抗体のＡＢの結合を阻害するマスキング部分（ＭＭ）、およびＡＢにカップリングされた切断可能部分（ＣＭ）を含み、ＣＭは、少なくとも１種のＭＭＰプロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである。 The disclosure also provides conjugated activatable antibodies comprising an activatable antibody linked to a monomethylauristatin D (MMAD) payload, wherein the activatable antibody is an antibody that specifically binds to a target or comprising an antigen-binding fragment thereof (AB), a masking moiety (MM) that inhibits binding of AB of the uncleaved activatable antibody to a target, and a cleavable moiety (CM) coupled to AB, CM , is a polypeptide that functions as a substrate for at least one MMP protease.

いくつかの実施形態では、ＭＭＡＤコンジュゲートされた活性化可能抗体は、ＡＢに薬剤を付着させるためのいくつかの方法：（ａ）ＡＢの炭水化物部分への付着、または（ｂ）ＡＢのスルフヒドリル基への付着、または（ｃ）ＡＢのアミノ基への付着、または（ｄ）ＡＢのカルボキシレート基への付着、のいずれかを用いてコンジュゲートされてよい。 In some embodiments, the MMAD-conjugated activatable antibody can be attached to the AB by several methods: (a) attachment to the carbohydrate moiety of the AB, or (b) sulfhydryl groups of the AB. or (c) to an amino group of AB, or (d) to a carboxylate group of AB.

いくつかの実施形態では、ＭＭＡＤペイロードは、リンカーを介してＡＢにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＭＭＡＤペイロードは、リンカーを介してＡＢ中のシステインにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＭＭＡＤペイロードは、リンカーを介してＡＢ中のリジンにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＭＭＡＤペイロードは、リンカーを介して、本明細書で開示の残基などのＡＢの別の残基にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、リンカーは、チオール含有リンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、切断可能リンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、切断可不能リンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、表７および８に示されるリンカーからなる群より選択される。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体およびＭＭＡＤペイロードは、マレイミドカプロイル－バリン－シトルリンリンカーを介して連結される。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体およびＭＭＡＤペイロードは、マレイミドＰＥＧ－バリン－シトルリンリンカーを介して連結される。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体およびＭＭＡＤペイロードは、マレイミドカプロイル－バリン－シトルリン－パラ－アミノベンジルオキシカルボニルリンカーを介して連結される。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体およびＭＭＡＤペイロードは、マレイミドＰＥＧ－バリン－シトルリン－パラ－アミノベンジルオキシカルボニルリンカーを介して連結される。いくつかの実施形態では、ＭＭＡＤペイロードは、本明細書で開示される部分的還元およびコンジュゲーション技術を用いてＡＢにコンジュゲートされる。 In some embodiments, the MMAD payload is conjugated to the AB via a linker. In some embodiments, the MMAD payload is conjugated to a cysteine in AB via a linker. In some embodiments, the MMAD payload is conjugated to lysines in AB via a linker. In some embodiments, the MMAD payload is conjugated via a linker to another residue of AB, such as those disclosed herein. In some embodiments, the linker is a thiol containing linker. In some embodiments, the linker is a cleavable linker. In some embodiments, the linker is a non-cleavable linker. In some embodiments, the linker is selected from the group consisting of linkers shown in Tables 7 and 8. In some embodiments, the activatable antibody and MMAD payload are linked via a maleimidocaproyl-valine-citrulline linker. In some embodiments, the activatable antibody and MMAD payload are linked via a maleimide PEG-valine-citrulline linker. In some embodiments, the activatable antibody and MMAD payload are linked via a maleimidocaproyl-valine-citrulline-para-aminobenzyloxycarbonyl linker. In some embodiments, the activatable antibody and MMAD payload are linked via a maleimide PEG-valine-citrulline-para-aminobenzyloxycarbonyl linker. In some embodiments, MMAD payloads are conjugated to ABs using partial reduction and conjugation techniques disclosed herein.

いくつかの実施形態では、本開示のリンカーのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）成分は、２個のエチレングリコール単量体、３個のエチレングリコール単量体、４個のエチレングリコール単量体、５個のエチレングリコール単量体、６個のエチレングリコール単量体、７個のエチレングリコール単量体、８個のエチレングリコール単量体、９個のエチレングリコール単量体、または少なくとも１０個のエチレングリコール単量体から形成される。本開示のいくつかの実施形態では、ＰＥＧ成分は、分岐ポリマーである。本開示のいくつかの実施形態では、ＰＥＧ成分は、非分岐ポリマーである。いくつかの実施形態では、ＰＥＧポリマー成分は、アミノ基もしくはその誘導体、カルボキシル基もしくはその誘導体、またはアミノ基もしくはその誘導体とカルボキシル基もしくはその誘導体の両方で官能化される。 In some embodiments, the polyethylene glycol (PEG) moieties of linkers of the present disclosure are 2 ethylene glycol monomers, 3 ethylene glycol monomers, 4 ethylene glycol monomers, 5 ethylene glycol monomer, 6 ethylene glycol monomers, 7 ethylene glycol monomers, 8 ethylene glycol monomers, 9 ethylene glycol monomers, or at least 10 ethylene glycol monomers It is formed from mers. In some embodiments of the disclosure, the PEG component is a branched polymer. In some embodiments of the disclosure, the PEG component is an unbranched polymer. In some embodiments, the PEG polymer component is functionalized with an amino group or derivative thereof, a carboxyl group or derivative thereof, or both an amino group or derivative thereof and a carboxyl group or derivative thereof.

いくつかの実施形態では、本開示のリンカーのＰＥＧ成分は、アミノ－テトラ－エチレングリコール－カルボキシル基またはその誘導体である。いくつかの実施形態では、本開示のリンカーのＰＥＧ成分は、アミノトリエチレングリコールカルボキシル基またはその誘導体である。いくつかの実施形態では、本開示のリンカーのＰＥＧ成分は、アミノジエチレングリコールカルボキシル基またはその誘導体である。いくつかの実施形態では、アミノ誘導体は、アミノ基と、アミノ基がコンジュゲートされているカルボキシル基との間のアミド結合の形成によるものである。いくつかの実施形態では、カルボキシル誘導体は、カルボキシル基と、それがコンジュゲートされるアミノ基との間のアミド結合の形成によるものである。いくつかの実施形態では、カルボキシル誘導体は、カルボキシル基と、それがコンジュゲートされるヒドロキシル基との間のエステル結合の形成によるものである。 In some embodiments, the PEG component of linkers of the present disclosure is an amino-tetra-ethyleneglycol-carboxyl group or derivative thereof. In some embodiments, the PEG component of linkers of the present disclosure is an aminotriethylene glycol carboxyl group or derivative thereof. In some embodiments, the PEG component of linkers of the disclosure is an aminodiethylene glycol carboxyl group or derivative thereof. In some embodiments, amino derivatives are through the formation of an amide bond between an amino group and a carboxyl group to which the amino group is conjugated. In some embodiments, carboxyl derivatives are through the formation of an amide bond between a carboxyl group and an amino group to which it is conjugated. In some embodiments, carboxyl derivatives result from the formation of an ester bond between a carboxyl group and a hydroxyl group to which it is conjugated.

抗体および細胞毒性剤のコンジュゲートは、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオール）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（ジメチルアジピミデートＨＣＬなどの）、活性エステル（スベリン酸ジスクシンイミジルなどの）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなどの）、ビス－アジド化合物（ビス（ｐ－アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなどの）、ビス－ジアゾニウム誘導体（ビス－（ｐ－ジアゾニウムベンゾイル）－ エチレンジアミンなどの）、ジイソシアネート（トリエン２，６－ジイソシアネートなどの）、およびビス－活性フッ素化合物（１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼンなどの）などの種々の二官能性タンパク質カップリング剤を用いて作製される。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３８：１０９８（１９８７年）に記載のように調製できる。１４Ｃ－標識１－イソチオシアネートベンジル－３－メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ－ＤＴＰＡ）は、抗体への放射性核種のコンジュゲーションのための例示的キレート化剤である。（国際公開第９４／１１０２６号を参照されたい）。 Conjugates of antibodies and cytotoxic agents include N-succinimidyl-3-(2-pyridyldithiol)propionate (SPDP), iminothiolane (IT), bifunctional derivatives of imidoesters (such as dimethyladipimidate HCL), Active esters (such as disuccinimidyl suberate), aldehydes (such as glutaraldehyde), bis-azido compounds (such as bis(p-azidobenzoyl)hexanediamine), bis-diazonium derivatives (such as bis-(p-diazonium benzoyl)-ethylenediamine), diisocyanates (such as triene 2,6-diisocyanate), and bis-active fluorine compounds (such as 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenzene). It is made using a coupling agent. For example, a ricin immunotoxin can be prepared as described in Vitetta et al., Science 238:1098 (1987). 14C-labeled 1-isothiocyanatobenzyl-3-methyldiethylenetriaminepentaacetic acid (MX-DTPA) is an exemplary chelating agent for conjugation of radionuclides to antibodies. (See WO 94/11026).

表Ｅは、本明細書で記載の開示において利用できる例示的な医薬品のいくつかを列挙しているが、決して網羅的なリストであることを意味するものではない。

Figure 2022548310000046

Figure 2022548310000047

Figure 2022548310000048
Table E lists some of the exemplary pharmaceutical agents available in the disclosure set forth herein, but is by no means meant to be an exhaustive list.
Figure 2022548310000046
Figure 2022548310000047

Figure 2022548310000048

当業者は、多種多様の可能な部分を、得られた本開示の抗体にカップリングできることを理解するであろう。（例えば、その全内容が参照により本明細書に組み入れられる”Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｖａｃｃｉｎｅｓ”，Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓ ｔｏ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｍ．Ｃｒｕｓｅ ａｎｄ Ｒ．Ｅ．Ｌｅｗｉｓ，Ｊｒ（ｅｄｓ），Ｃａｒｇｅｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，（１９８９）を参照されたい）。 Those skilled in the art will appreciate that a wide variety of possible moieties can be coupled to the resulting antibodies of this disclosure. (For example, "Conjugate Vaccines," Contributions to Microbiology and Immunology, J.M. Cruse and R.E. Lewis, Jr. (eds), Carger Press, New York, the entire contents of which are incorporated herein by reference.) 1989)).

カップリングは、抗体および他の部分がそのそれぞれの活性を保持する限り、２つの分子を結合する任意の化学反応によって達成できる。この連携は、多くの化学的機構、例えば、共有結合、親和性結合、インターカレーション、配位結合、および複合体化を含んでよい。しかし、いくつかの実施形態では、結合は、共有結合である。共有結合は、既存の側鎖の直接縮合、または外部架橋分子の取り込みのいずれかによって達成できる。多くの二価または多価の連結剤は、本開示の抗体などのタンパク質分子を他の分子にカップリングするのに有用である。例えば、代表的なカップリング剤としては、チオエステル、カルボジイミド、スクシンイミドエステル、ジイソシアネート、グルタルアルデヒド、ジアゾベンゼン、およびヘキサメチレンジアミンなどの有機化合物を挙げることができる。このリストは、当該技術分野において既知の種々のカップリング剤を網羅することを意図するものではなく、むしろ、よりよく使われる代表的カップリング剤の例示である。（Ｋｉｌｌｅｎ ａｎｄ Ｌｉｎｄｓｔｒｏｍ，Ｊｏｕｒ．Ｉｍｍｕｎ．１３３：１３３５－２５４９（１９８４）；Ｊａｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ６２：１８５－２１６（１９８２）；およびＶｉｔｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３８：１０９８（１９８７）を参照）。 Coupling can be accomplished by any chemical reaction that joins two molecules, so long as the antibody and other moieties retain their respective activities. This association may involve many chemical mechanisms such as covalent bonding, affinity bonding, intercalation, coordinative bonding, and complexation. However, in some embodiments the bond is a covalent bond. Covalent attachment can be achieved either by direct condensation of existing side chains or by the incorporation of external bridging molecules. Many bivalent or multivalent linking agents are useful for coupling protein molecules, such as the antibodies of this disclosure, to other molecules. For example, representative coupling agents can include organic compounds such as thioesters, carbodiimides, succinimide esters, diisocyanates, glutaraldehyde, diazobenzene, and hexamethylenediamine. This list is not intended to be exhaustive of the variety of coupling agents known in the art, but rather is illustrative of representative coupling agents that are more commonly used. (See Killen and Lindstrom, Jour. Immun. 133:1335-2549 (1984); Jansen et al., Immunological Reviews 62:185-216 (1982); and Vitetta et al., Science 238:1098 (1987)). .

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される組成物および方法に加えて、活性化可能抗体はまた、活性化可能抗体配列中に挿入されるかまたは別の方法で含まれる修飾アミノ酸配列を通して、部位特異的コンジュゲーションのために修飾されてもよい。これらの修飾アミノ酸配列は、コンジュゲートされた活性化可能抗体内で、コンジュゲートされた薬剤の配置および／または投与量の制御を可能にするように設計される。例えば、活性化可能抗体は、反応性チオール基を提供し、かつタンパク質の折りたたみおよび構築に悪影響を与えず、または抗原結合を変えない、軽鎖および重鎖上の位置でのシステイン置換を含むように改変され得る。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、コンジュゲーションのための適切な部位を提供するために、活性化可能抗体内に１個または複数の非天然のアミノ酸残基を含むか、さもなければ導入するように改変され得る。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、活性化可能抗体配列内に酵素的に活性化可能なペプチド配列を含むか、さもなければ導入するように操作できる。 In some embodiments, in addition to the compositions and methods provided herein, the activatable antibody also has a modified amino acid sequence inserted or otherwise included in the activatable antibody sequence. may be modified for site-specific conjugation through These modified amino acid sequences are designed to allow control of the placement and/or dosage of the conjugated agent within the conjugated activatable antibody. For example, activatable antibodies may contain cysteine substitutions at positions on the light and heavy chains that provide reactive thiol groups and do not adversely affect protein folding and assembly or alter antigen binding. can be modified to In some embodiments, the activatable antibody contains one or more non-natural amino acid residues within the activatable antibody to provide suitable sites for conjugation. can be modified to introduce In some embodiments, an activatable antibody can be engineered to include or otherwise introduce an enzymatically activatable peptide sequence within the activatable antibody sequence.

適切なリンカーは、文献に記載されている。（例えば、Ｒａｍａｋｒｉｓｈｎａｎ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４４：２０１－２０８（１９８４）ｄｅｓｃｒｉｂｉｎｇ ｕｓｅ ｏｆ ＭＢＳ（Ｍ－ｍａｌｅｉｍｉｄｏｂｅｎｚｏｙｌ－Ｎ－ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ ｅｓｔｅｒを参照）。また、オリゴペプチドリンカーを介して抗体にカップリングされたハロゲン化アセチルヒドラジド誘導体の使用を記載する米国特許第５，０３０，７１９号も参照されたい。いくつかの実施形態では、好適なリンカーとしては、（ｉ）ＥＤＣ（１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩；（ｉｉ）ＳＭＰＴ（４－スクシンイミジルオキシカルボニル－α－メチル－α－（２－ピリジルジチオ）トルエン）（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｃａｔ．（２１５５８Ｇ）；（ｉｉｉ）ＳＰＤＰ（スクシンイミジル－６［３－（２－ピリジルジチオ）プロピオンアミド］ヘキサノエート（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，カタログ番号２１６５１Ｇ）；（ｉｖ）スルホ－ＬＣ－ＳＰＤＰ（スルホスクシンイミジル６［３－（２－ピリジルジチオ）プロピオンアミド］ヘキサノエート（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．カタログ番号２１６５－Ｇ）；および（ｖ）ＥＤＣにコンジュゲートしているスルホ－ＮＨＳ（Ｎ－ヒドロキシスルホスクシンイミド：Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，カタログ番号２４５１０）が挙げられる。追加のリンカーとしては、ＳＭＣＣ（（スクシンイミジル ４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート）、スルホ－ＳＭＣＣ（スクシンイミジル ４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート）、ＳＰＤＢ（Ｎ－スクシンイミジル－４－（２－ピリジルジチオ）ブタノエート）、またはスルホ－ＳＰＤＢ（Ｎ－スクシンイミジル－４－（２－ピリジルジチオ）－２－スルホ ブタノエート）が挙げられるが、これらに限定されない。 Suitable linkers are described in the literature. (See, eg, Ramakrishnan, S. et al., Cancer Res. 44:201-208 (1984) describing use of MBS (M-maleimidobenzoyl-N-hydroxysuccinimide ester). Alternatively, antibodies may be coupled via an oligopeptide linker. See also US Patent No. 5,030,719 which describes the use of ringed halogenated acetyl hydrazide derivatives In some embodiments, suitable linkers include (i) EDC (1-ethyl-3 -(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride; (ii) SMPT (4-succinimidyloxycarbonyl-α-methyl-α-(2-pyridyldithio)toluene) (Pierce Chem. Co., Cat. ( (iii) SPDP (succinimidyl-6[3-(2-pyridyldithio)propionamido]hexanoate (Pierce Chem. Co., Catalog No. 21651G); (iv) sulfo-LC-SPDP (sulfosuccinimidyl 6[3-(2-pyridyldithio)propionamido]hexanoate (Pierce Chem. Co. Catalog No. 2165-G); and (v) sulfo-NHS (N-hydroxysulfosuccinimide conjugated to EDC: Pierce Chem. Co., Cat. ) cyclohexane-1-carboxylate), SPDB (N-succinimidyl-4-(2-pyridyldithio)butanoate), or sulfo-SPDB (N-succinimidyl-4-(2-pyridyldithio)-2-sulfobutanoate) include, but are not limited to.

上記のリンカーは、様々な属性を有する成分を含み、したがって、異なる物理化学的特性を有するコンジュゲートをもたらす。例えば、アルキルカルボキシレートのスルホ－ＮＨＳエステルは、芳香族カルボキシレートのスルホ－ＮＨＳエステルよりも安定である。ＮＨＳエステル含有リンカーは、スルホＮＨＳエステルよりも溶解性が低い。さらに、リンカーＳＭＰＴは、立体障害のあるジスルフィド結合を含み、安定性が向上したコンジュゲートを形成できる。ジスルフィド結合は一般に、ジスルフィド結合がインビトロで切断されるため、他の結合ほど安定でなく、その結果利用可能なコンジュゲートが少ない。スルホ－ＮＨＳは、特に、カルボジイミドカップリングの安定性を強化できる。カルボジイミドカップリング（ＥＤＣなど）は、スルホ－ＮＨＳと共に使用される時、カルボジイミドカップリング反応単独よりも加水分解に対して耐性であるエステルを形成する。 The linkers described above contain moieties with different attributes, thus resulting in conjugates with different physico-chemical properties. For example, sulfo-NHS esters of alkyl carboxylates are more stable than sulfo-NHS esters of aromatic carboxylates. NHS ester-containing linkers are less soluble than sulfo-NHS esters. Additionally, the linker SMPT can contain sterically hindered disulfide bonds to form conjugates with improved stability. Disulfide bonds are generally less stable than other bonds because disulfide bonds are cleaved in vitro, resulting in fewer conjugates available. Sulfo-NHS, in particular, can enhance the stability of carbodiimide couplings. Carbodiimide coupling (such as EDC), when used with sulfo-NHS, forms esters that are more resistant to hydrolysis than the carbodiimide coupling reaction alone.

いくつかの実施形態では、リンカーは、切断可能である。いくつかの実施形態では、リンカーは、切断不能である。いくつかの実施形態では、２つ以上のリンカーが存在する。２つ以上のリンカーは、すべて同じである、すなわち切断可能か、もしくは切断不能である、または２つ以上のリンカーは、異なる、すなわち少なくとも１つが切断可能であり、少なくとも１つが切断不能である。 In some embodiments, the linker is cleavable. In some embodiments, the linker is non-cleavable. In some embodiments, more than one linker is present. The two or more linkers are all the same, ie, cleavable or non-cleavable, or the two or more linkers are different, ie, at least one is cleavable and at least one is non-cleavable.

本開示は、薬剤をＡＢに付着するためのいくつかの方法：（ａ）ＡＢの炭水化物部分への付着、または（ｂ）ＡＢのスルフヒドリル基への付着、または（ｃ）ＡＢのアミノ基への付着、または（ｄ）ＡＢのカルボキシレート基への付着、を利用する。本開示によると、ＡＢは、少なくとも２つの反応基、ＡＢと反応する１つの反応器および薬剤と反応する１つの反応基を有する中間体リンカーを通して、薬剤に共有的に付着できる。任意の適合性有機化合物を含み得るリンカーは、ＡＢ（または薬剤）との反応がＡＢの反応性および選択性に有害な影響を及ぼさないように選択できる。さらに、薬剤へのリンカーの付着は、薬剤の活性を破壊しないであろう。酸化された抗体または酸化された抗体フラグメントとの反応に適するリンカーは、一級アミン、二級アミン、ヒドラジン、ヒドラジド、ヒドロキシルアミン、フェニルヒドラジン、セミカルバジド、およびチオセミカルバジド基からなる群より選択されるアミンを含有するものを含む。そのような反応性官能基は、リンカーの構造の一部として存在し得、または、そのような基を含有しないリンカーの適切な化学修飾によって導入できる。 The present disclosure describes several methods for attaching agents to AB: (a) attachment to carbohydrate moieties of AB, or (b) attachment to sulfhydryl groups of AB, or (c) attachment to amino groups of AB. attachment, or (d) attachment to carboxylate groups of AB. According to the present disclosure, AB can be covalently attached to a drug through an intermediate linker having at least two reactive groups, one reactive group that reacts with AB and one reactive group that reacts with the drug. The linker, which can comprise any compatible organic compound, can be chosen such that reaction with the AB (or drug) does not adversely affect the reactivity and selectivity of the AB. Furthermore, attachment of the linker to the drug will not destroy the activity of the drug. Linkers suitable for reaction with oxidized antibodies or oxidized antibody fragments contain amines selected from the group consisting of primary amines, secondary amines, hydrazines, hydrazides, hydroxylamines, phenylhydrazines, semicarbazides, and thiosemicarbazide groups. Including what it contains. Such reactive functional groups can be present as part of the structure of the linker or can be introduced by suitable chemical modification of linkers that do not contain such groups.

本開示によると、還元されたＡＢへの付着に適するリンカーは、還元された抗体またはフラグメントのスルフヒドリル基と反応できる、特定の反応基を有するものを含む。そのような反応基は、反応性ハロアルキル基（例えば、ハロアセチル基を含む）、ｐ－水銀安息香酸基、およびマイケル型付加反応が可能である基（例えば、マレイミド類およびＭｉｔｒａ ａｎｄ Ｌａｗｔｏｎ，１９７９，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１６：３０９７－３１１０に記載されているタイプの基を含む）を含むが、それらに限定されない。 According to the present disclosure, linkers suitable for attachment to reduced AB include those with specific reactive groups that can react with the sulfhydryl groups of the reduced antibody or fragment. Such reactive groups include reactive haloalkyl groups (including, for example, haloacetyl groups), p-mercuric benzoic acid groups, and groups capable of Michael-type addition reactions (e.g., maleimides and Mitra and Lawton, 1979, J. .Amer.Chem.Soc.16:3097-3110).

本開示では、酸化も還元もされていないＡｂへの付着に適するリンカーは、Ａｂ中の修飾されていないリジン残基に存在する一級アミノ基と反応できる、特定の官能基を有するものを含む。そのような反応基は、ＮＨＳカルボン酸または炭酸エステル、スルホ－ＮＨＳカルボン酸または炭酸エステル、４－ニトロフェニルカルボン酸または炭酸エステル、ペンタフルオロフェニルカルボン酸または炭酸エステル、アシルイミダゾール、イソシアナート、およびイソチオシアナートを含むが、これらに限定されない。 In the present disclosure, linkers suitable for attachment to Abs that are neither oxidized nor reduced include those with specific functional groups that can react with primary amino groups present in unmodified lysine residues in Abs. Such reactive groups include NHS carboxylic acids or carbonates, sulfo-NHS carboxylic acids or carbonates, 4-nitrophenyl carboxylic acids or carbonates, pentafluorophenyl carboxylic acids or carbonates, acylimidazoles, isocyanates, and isothiocyanates. Including, but not limited to, oceanates.

本開示によると、酸化も還元もされていないＡｂへの付着に適するリンカーは、試薬で活性化されている、Ａｂ中のアスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基に存在するカルボン酸基と反応できる、特定の官能基を有するものを含む。好適な活性化試薬としては、追加されたＮＨＳまたはスルホ－ＮＨＳの有無にかかわらず、ＥＤＣ、およびカルボキサミド形成に利用される他の脱水剤が挙げられる。これらの例では、リンカー中に存在する官能基は、一級および二級アミン、ヒドラジン、ヒドロキシルアミン、ならびにヒドラジドを含むであろう。 According to the present disclosure, linkers suitable for attachment to Abs that are neither oxidized nor reduced are capable of reacting with carboxylic acid groups present on aspartic acid or glutamic acid residues in Abs that have been activated with reagents. Including those with specific functional groups. Suitable activating reagents include EDC, with or without added NHS or sulfo-NHS, and other dehydrating agents utilized for carboxamide formation. In these examples, functional groups present in the linker would include primary and secondary amines, hydrazine, hydroxylamine, and hydrazide.

薬剤は、リンカーがＡＢに付着される前または後に、リンカーに付着されてよい。特定の適用において、リンカーが結合薬剤を含まない、ＡＢ－リンカー中間体を最初に生じることが望ましい場合がある。特定の用途に応じて、特定の薬剤をリンカーに共有的に付着し得る。いくつかの実施形態では、ＡＢは、ＭＭ、ＣＭ、および会合したリンカーに最初に付着され、次いで、コンジュゲーションの目的でリンカーに付着される。 The drug may be attached to the linker before or after the linker is attached to the AB. In certain applications, it may be desirable to first produce an AB-linker intermediate in which the linker does not contain a binding agent. Certain agents may be covalently attached to the linker, depending on the particular application. In some embodiments, the AB is first attached to the MM, CM and associated linker and then attached to the linker for conjugation purposes.

分岐リンカー：特定の実施形態では、薬剤の付着のための複数の部位を有する分岐リンカーが利用される。複数部位リンカーについては、ＡＢへの単一の共有的付着が、数多くの部位で薬剤に結合できるＡＢ－リンカー中間体をもたらす。部位は、アルデヒド基もしくはスルフヒドリル基、またはそれに薬剤が付着できる任意の化学的部位であってよい。 Branched linkers: In certain embodiments, branched linkers with multiple sites for attachment of agents are utilized. For multi-site linkers, a single covalent attachment to AB results in an AB-linker intermediate that can bind drugs at numerous sites. A site can be an aldehyde or sulfhydryl group, or any chemical site to which an agent can be attached.

いくつかの実施形態では、より高い比活性（または薬剤のＡＢに対するより高い比）は、ＡＢ上の複数の部位での単一部位リンカーの付着により達成できる。この複数の部位は、２つの方法のいずれかによりＡＢ中に導入できる。第１に、同じＡＢ中に複数のアルデヒド基および／またはスルフヒドリル基を生成し得る。第２に、ＡＢのアルデヒドまたはスルフヒドリルに、その後のリンカーへの付着のための複数の官能部位を有する「分岐リンカー」を付着し得る。分岐リンカーまたは複数部位リンカーの官能部位は、アルデヒド基もしくはスルフヒドリル基であってよく、または、それにリンカーを付着できる任意の化学的部位であってよい。さらにより高い比活性は、これらの２つのアプローチを組み合わせること、すなわち、ＡＢ上のいくつかの部位で複数部位リンカーを組み合わせすることによって得ることができる。 In some embodiments, higher specific activity (or higher ratio of drug to AB) can be achieved by attachment of single-site linkers at multiple sites on AB. This multiple site can be introduced into the AB by either of two methods. First, multiple aldehyde and/or sulfhydryl groups can be generated in the same AB. Second, the aldehydes or sulfhydryls of ABs can be attached with "branched linkers" that have multiple functional sites for subsequent attachment to linkers. The functional site of a branched or multi-site linker can be an aldehyde or sulfhydryl group, or any chemical site to which a linker can be attached. Even higher specific activities can be obtained by combining these two approaches, ie combining multi-site linkers at several sites on the AB.

切断可能リンカー：限定されないが、ｕ－プラスミノーゲンアクチベーター、組織プラスミノーゲンアクチベーター、トリプシン、プラスミン、またはタンパク質分解活性を有する別の酵素などの、補体系の酵素による切断を受けやすいペプチドリンカーを、本開示の一実施形態で使用できる。本開示の１つの方法によると、薬剤は、補体による切断を受けやすいリンカーを介して付着される。抗体は、補体を活性化できるクラスから選択される。抗体－薬剤コンジュゲートは、したがって、補体カスケードを活性化し、標的部位で薬剤を放出する。本開示の別の方法によると、薬剤は、ｕ－プラスミノーゲンアクチベーター、組織プラスミノーゲンアクチベーター、プラスミン、またはトリプシンなどのタンパク質分解活性を有する酵素による切断を受けやすいリンカーを介して付着される。これらの切断可能なリンカーは、細胞外毒素、例えば非限定的な例として表Ｅに示される細胞外毒素のいずれかを含む、コンジュゲートされた活性化可能抗体において有用である。 Cleavable Linker: A peptide linker susceptible to cleavage by enzymes of the complement system such as, but not limited to, u-plasminogen activator, tissue plasminogen activator, trypsin, plasmin, or another enzyme with proteolytic activity can be used in one embodiment of the present disclosure. According to one method of the disclosure, the agent is attached via a linker that is susceptible to cleavage by complement. Antibodies are selected from classes that are capable of activating complement. The antibody-drug conjugate thus activates the complement cascade and releases the drug at the target site. According to another method of the disclosure, the agent is attached via a linker that is susceptible to cleavage by an enzyme with proteolytic activity, such as u-plasminogen activator, tissue plasminogen activator, plasmin, or trypsin. be. These cleavable linkers are useful in conjugated activatable antibodies that contain exotoxins, such as any of the exotoxins shown in Table E as non-limiting examples.

切断可能なリンカー配列の非限定的な例を、表Ｆで提供する。

Figure 2022548310000049

Non-limiting examples of cleavable linker sequences are provided in Table F.
Figure 2022548310000049

さらに、薬剤を、ジスルフィド結合（例えば、システイン分子上のジスルフィド結合）を介してＡＢに付着できる。多くの腫瘍は天然で高レベルのグルタチオン（還元剤）を放出するため、これは、ジスルフィド結合を還元し、送達の部位でのその後の薬剤の放出を伴い得る。いくつかの実施形態では、ＣＭを修飾すると思われる還元剤はまた、コンジュゲートされた活性化可能抗体のリンカーも修飾するであろう。 Additionally, agents can be attached to ABs via disulfide bonds (eg, disulfide bonds on cysteine molecules). Since many tumors naturally release high levels of glutathione (a reducing agent), this may reduce disulfide bonds with subsequent release of the drug at the site of delivery. In some embodiments, reducing agents that would modify the CM will also modify the linker of the conjugated activatable antibody.

スペーサーおよび切断可能要素：いくつかの実施形態では、活性化可能抗体の薬剤とＡＢと間の間隔を最適化するような方式で、リンカーを構築することが必要な場合がある。これは、下記の一般構造のリンカーの使用によって達成できる：
Ｗ－（ＣＨ２）ｎ－Ｑ
式中、
Ｗは、－ＮＨ－ＣＨ２－または－ＣＨ２－のいずれかであり、
Ｑは、アミノ酸、ペプチドであり、および
ｎは、０～２０の整数である。 Spacers and Cleavable Elements: In some embodiments, it may be necessary to construct the linker in such a way as to optimize the spacing between the drug and the AB of the activatable antibody. This can be achieved by using a linker of the following general structure:
W—(CH 2 ) n —Q
During the ceremony,
W is either -NH-CH 2 - or -CH 2 -;
Q is an amino acid, peptide, and n is an integer from 0-20.

いくつかの実施形態では、リンカーは、スペーサー要素および切断可能要素を含み得る。スペーサー要素は、切断可能要素が切断を担う酵素により接近しやすいように、切断可能要素をＡＢのコアから離して配置するのに役立つ。上記の特定の分岐型リンカーは、スペーサー要素として機能し得る。 In some embodiments, a linker can include a spacer element and a cleavable element. The spacer element serves to position the cleavable element away from the core of the AB so that the cleavable element is more accessible to the enzyme responsible for cutting. Certain branched linkers described above can function as spacer elements.

この考察を通して、薬剤への（またはスペーサー要素の切断可能要素への、または切断可能要素の薬剤への）リンカーの付着は、特定の様式の付着または反応である必要はないことを理解されたい。適切な安定性および生物学的適合性の産物を提供する任意の反応が、受け入れられる。 It should be understood throughout this discussion that the attachment of the linker to the drug (or to the cleavable element of the spacer element, or to the drug of the cleavable element) need not be in any particular manner of attachment or reaction. Any reaction that provides a product of suitable stability and biocompatibility is acceptable.

血清補体およびリンカーの選択：本開示の一方法では、薬剤の放出が望まれる場合、補体を活性化できるクラスの抗体であるＡＢが、使用される。得られたコンジュゲートは、抗原に結合する能力および補体カスケードを活性化する能力の両方を保持する。したがって、本開示のこの実施形態では、薬剤は、切断可能なリンカーまたは切断可能要素の１つの末端に接続され、リンカー基のもう１つの末端は、ＡＢ上の特定の部位に付着される。例えば、薬剤がヒドロキシ基またはアミノ基を有する場合、それは、ペプチド、アミノ酸、または他の適するように選択されたリンカーのカルボキシ末端に、それぞれ、エステル結合またはアミド結合を介して付着され得る。例えば、そのような薬剤は、カルボジイミド反応を介してリンカーペプチドに付着され得る。薬剤が、リンカーへの付着に干渉すると思われる官能基を含有する場合、これらの干渉する官能基を、付着の前に遮断し、産物コンジュゲートまたは中間体が作製されると、遮断解除してよい。リンカーの反対の末端またはアミノ末端をその後、直接使用する、または、補体を活性化できるＡＢへの結合のためのさらなる修飾後に使用する。 Serum Complement and Linker Selection: In one method of the present disclosure, ABs, a class of antibodies that can activate complement, are used when drug release is desired. The resulting conjugate retains both the ability to bind antigen and the ability to activate the complement cascade. Thus, in this embodiment of the disclosure, the agent is attached to one end of the cleavable linker or cleavable element and the other end of the linker group is attached to a specific site on AB. For example, if the drug has a hydroxy or amino group, it can be attached to the carboxy terminus of a peptide, amino acid, or other suitably selected linker via an ester or amide bond, respectively. For example, such agents can be attached to linker peptides via a carbodiimide reaction. If the agent contains functional groups that would interfere with attachment to the linker, these interfering functional groups are blocked prior to attachment and unblocked once the product conjugate or intermediate is made. good. The opposite or amino terminus of the linker is then used directly or after further modification for binding to ABs capable of activating complement.

リンカー（またはリンカーのスペーサー要素）は、任意の望ましい長さであってよく、その１つの末端は、活性化可能抗体のＡＢ上の特定の部位に共有的に付着されてよい。リンカーまたはスペーサー要素のもう１つの末端は、アミノ酸またはペプチドリンカーに付着され得る。 The linker (or spacer element of the linker) may be of any desired length and one end thereof may be covalently attached to a specific site on the AB of the activatable antibody. Another end of the linker or spacer element can be attached to an amino acid or peptide linker.

したがって、これらのコンジュゲートが補体の存在下で抗原に結合すると、薬剤をリンカーに付着させるアミドまたはエステル結合が切断され、その結果、活性型の薬剤が放出される。これらのコンジュゲートは、対象に投与される時、標的部位での薬剤の送達および放出を達成し、限定されないが、表Ｅに示される、薬学的薬剤、抗生物質、代謝拮抗物質、抗増殖薬剤などのインビボ送達に特に有効である。 Therefore, when these conjugates bind to antigen in the presence of complement, the amide or ester bond attaching the drug to the linker is cleaved, resulting in the release of the drug in its active form. These conjugates achieve delivery and release of drugs at target sites when administered to a subject, including, but not limited to, pharmaceutical agents, antibiotics, antimetabolites, antiproliferative agents, shown in Table E. It is particularly effective for in vivo delivery such as

補体活性化を伴わない放出用リンカー：標的化送達のさらに別の用途では、補体カスケードの活性化が最終的に標的細胞を溶解するため、補体活性化のない薬剤の放出が望ましい。したがって、この手法は、標的細胞を死滅させることなく薬剤の送達および放出を達成する必要がある場合、有用である。標的細胞へのホルモン、酵素、コルチコステロイド、神経伝達物質、遺伝子または酵素などの細胞媒介物質の送達が望ましいとき、前述のことが到達目標である。これらのコンジュゲートは、血清プロテアーゼによる切断を少々受けやすいリンカーを介して、補体を活性化できないＡＢに薬剤を付着することによって調製され得る。このコンジュゲートが個体に投与されると、抗原－抗体複合体が急速に形成され、一方で薬剤の切断はゆっくり起こり、したがって標的部位での化合物の放出をもたらす。 Linkers for release without complement activation: In yet another application of targeted delivery, drug release without complement activation is desirable because activation of the complement cascade ultimately lyses the target cell. Therefore, this approach is useful when there is a need to achieve drug delivery and release without killing target cells. The foregoing is the goal when delivery of cellular mediators such as hormones, enzymes, corticosteroids, neurotransmitters, genes or enzymes to target cells is desired. These conjugates can be prepared by attaching the drug to an AB that is incapable of activating complement via a linker that is somewhat susceptible to cleavage by serum proteases. When this conjugate is administered to an individual, the antigen-antibody complex forms rapidly while cleavage of the drug occurs slowly, thus resulting in release of the compound at the target site.

生化学的架橋剤：いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、特定の生化学的架橋剤を用いて１種または複数の治療薬にコンジュゲートされ得る。架橋試薬は、２つの異なる分子の官能基を結びつける分子架橋を形成する。２つの異なるタンパク質を段階的に連結するために、望ましくないホモポリマー形成を排除するヘテロ二官能性架橋剤を使用できる。 Biochemical Cross-Linking Agents: In some embodiments, activatable antibodies may be conjugated to one or more therapeutic agents using specific biochemical cross-linking agents. Cross-linking reagents form molecular bridges that link functional groups of two different molecules. Heterobifunctional cross-linkers that eliminate unwanted homopolymer formation can be used to link two different proteins in a stepwise manner.

リソソームプロテアーゼによって切断できるペプチジルリンカー、例えば、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ａｌａ、または他のジペプチドもまた、有用である。加えて、リソソームの低ｐＨ環境で切断できる酸に不安定なリンカー、例えば、ビスシアリルエーテルが、使用され得る。他のリンカーは、カテプシンに不安定な基質、特に酸性ｐＨで最適な機能を示すものを含む。 Peptidyl linkers cleavable by lysosomal proteases such as Val-Cit, Val-Ala, or other dipeptides are also useful. In addition, acid-labile linkers that are cleavable in the low pH environment of lysosomes, such as bis-sialyl ethers, can be used. Other linkers include cathepsin-labile substrates, especially those that exhibit optimal function at acidic pH.

例示的なヘテロ二官能性架橋剤を、表Ｇに示す。

Figure 2022548310000050

Figure 2022548310000051
Exemplary heterobifunctional crosslinkers are shown in Table G.
Figure 2022548310000050
Figure 2022548310000051

切断不能リンカーまたは直接付着：本開示のいくつかの実施形態では、コンジュゲートは、薬剤が標的に送達されるが放出されないように設計され得る。これは、直接または切断不能リンカーを介してのいずれかで、薬剤をＡＢに付着することにより達成できる。 Uncleavable Linkers or Direct Attachments: In some embodiments of the present disclosure, conjugates may be designed such that the drug is delivered to the target but not released. This can be accomplished by attaching the drug to the AB either directly or via an uncleavable linker.

これらの切断不能リンカーは、アミノ酸、ペプチド、Ｄ－アミノ酸、または、本明細書に記載される方法によるＡＢへの付着においてその後利用できる官能基を含むように改変され得る、他の有機化合物を含み得る。このような有機リンカーのための一般式は、式：
Ｗ－（ＣＨ２）ｎ－Ｑ
であり得、式中、
Ｗは、－ＮＨ－ＣＨ２－または－ＣＨ２－のいずれかであり、
Ｑは、アミノ酸、ペプチドであり、および
ｎは、０～２０の整数である。 These non-cleavable linkers include amino acids, peptides, D-amino acids, or other organic compounds that can be modified to include functional groups that can then be utilized for attachment to ABs by the methods described herein. obtain. A general formula for such organic linkers is the formula:
W—(CH 2 ) n —Q
can be, where
W is either -NH-CH 2 - or -CH 2 -;
Q is an amino acid, peptide, and n is an integer from 0-20.

切断不能コンジュゲート：いくつかの実施形態では、化合物は、補体を活性化しないＡＢに付着され得る。補体活性化ができないＡＢを使用する時、この付着は、活性化された補体による切断を受けやすいリンカーを用いて、または、活性化された補体による切断を受けやすくないリンカーを用いて達成できる。 Uncleavable Conjugates: In some embodiments, compounds may be attached to ABs that do not activate complement. When using ABs that are incapable of complement activation, this attachment is either with a linker that is susceptible to cleavage by activated complement, or with a linker that is not susceptible to cleavage by activated complement. achievable.

本明細書で開示される抗体はまた、イムノリポソームとして処方されてよい。抗体を含むリポソームは、Ｅｐｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２：３６８８（１９８５）；Ｈｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４０３０（１９８０）；および米国特許第４，４８５，０４５号および同第４，５４４，５４５号に記載のものなどの当該分野で既知の方法により調製される。循環時間が延長されたリポソームは、米国特許第５，０１３，５５６号に開示される。 Antibodies disclosed herein may also be formulated as immunoliposomes. Liposomes containing antibodies are described in Epstein et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82:3688 (1985); Hwang et al. , Proc. Natl Acad. Sci. USA, 77:4030 (1980); and US Pat. Nos. 4,485,045 and 4,544,545. Liposomes with extended circulation time are disclosed in US Pat. No. 5,013,556.

特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール、およびＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ－ＰＥ）を含む脂質組成物を用いて、逆相蒸発法により生成できる。リポソームは、所定の孔径のフィルターを通して押し出されて、所望の直径のリポソームを生じる。本開示の抗体のＦａｂ’フラグメントは、Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５７：２８６－２８８（１９８２）に記載されているジスルフィド交換反応によりリポソームにコンジュゲートされ得る。 Particularly useful liposomes can be produced by reverse-phase evaporation using a lipid composition comprising phosphatidylcholine, cholesterol, and PEG-derivatized phosphatidylethanolamine (PEG-PE). Liposomes are extruded through filters of defined pore size to yield liposomes with the desired diameter. Fab' fragments of the antibodies of the disclosure are described in Martin et al. , J. Biol. Chem. , 257:286-288 (1982).

ＣＤ４７抗体薬物コンジュゲートおよびＣＤ４７活性化可能抗体薬物コンジュゲート
いくつかの実施形態では、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）および活性化可能抗体薬物コンジュゲート（ＡＡＤＣ）は、表Ｄの所与の横列における軽鎖配列もしくは軽鎖可変ドメイン配列、および重鎖配列もしくは重鎖可変ドメイン配列、リンカー、ならびに毒素の組み合わせ、または表Ｄの軽鎖配列もしくは軽鎖可変ドメイン配列、および重鎖配列もしくは重鎖可変ドメイン配列、リンカー、ならびに毒素の任意の組み合わせを含む１つまたは複数のポリペプチドを含んでよい。例えば、組み合わせ番号１は、配列番号１の重鎖、配列番号１６０の軽鎖、ＭＭＡＤ毒素にコンジュゲートされたｖｃリンカーを含む。

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CD47 Antibody Drug Conjugates and CD47 Activatable Antibody Drug Conjugates A combination of chain sequence or light chain variable domain sequence and heavy chain sequence or heavy chain variable domain sequence, linker and toxin or light chain sequence or light chain variable domain sequence and heavy chain sequence or heavy chain variable domain of Table D It may contain one or more polypeptides containing any combination of sequences, linkers, and toxins. For example, Combination No. 1 comprises the heavy chain of SEQ ID NO: 1, the light chain of SEQ ID NO: 160, the vc linker conjugated to MMAD toxin.
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重鎖および軽鎖可変領域を列挙する表Ｄにおける組み合わせのいずれかを、ヒト免疫グロブリン定常領域と組み合わせて、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ４を含む完全ヒトＩｇＧをもたらすことができ、または変異型定常領域と組み合わせて、ＩｇＧ１ Ｎ２９７Ａ、ＩｇＧ１ Ｎ２９７Ｑ、もしくはＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐなどの改変された機能を有するヒトＩｇＧをもたらすことができる。表Ｄに記載の組み合わせは、任意の所与の横列に示される特定の組み合わせに制限されず、したがって表Ｄの縦列２からの任意の重鎖配列または重鎖可変領域配列を、表Ｄの縦列３からの任意の軽鎖配列または軽鎖可変領域配列と組み合わせて、縦列４からの任意のリンカーと組み合わせて、縦列５からの任意の毒素と組み合わせて、含んでよい。縦列２に列挙された重鎖配列または重鎖可変領域配列に加えて、本明細書で開示される任意の重鎖配列または重鎖可変領域配列を、組み合わせて用いることができる。縦列３に列挙された軽鎖配列または軽鎖可変領域配列に加えて、本明細書で開示される任意の軽鎖配列または軽鎖可変領域配列を、組み合わせて用いることができる。縦列４に列挙されたリンカーに加えて、本明細書で開示される任意のリンカーを、組み合わせて用いることができる。縦列５に列挙された毒素に加えて、本明細書で開示される任意の毒素を、組み合わせて用いることができる。 Any of the combinations in Table D listing heavy and light chain variable regions can be combined with human immunoglobulin constant regions to yield fully human IgGs, including IgG1, IgG2, IgG4, or with variant constant regions. The combination can result in human IgG with altered function, such as IgG1 N297A, IgG1 N297Q, or IgG4 S228P. The combinations listed in Table D are not limited to the specific combinations shown in any given row, thus any heavy chain sequence or heavy chain variable region sequence from column 2 of Table D may be in combination with any light chain sequence or light chain variable region sequence from column 3, in combination with any linker from column 4, in combination with any toxin from column 5. In addition to the heavy chain sequences or heavy chain variable region sequences listed in column 2, any heavy chain sequence or heavy chain variable region sequence disclosed herein can be used in combination. In addition to the light chain sequences or light chain variable region sequences listed in column 3, any light chain sequence or light chain variable region sequence disclosed herein can be used in combination. In addition to the linkers listed in column 4, any linker disclosed herein can be used in combination. In addition to the toxins listed in column 5, any toxin disclosed herein can be used in combination.

多重特異性抗体および活性化可能抗体
いくつかの実施形態では、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体は、単一特異性である。いくつかの実施形態では、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体は、多重特異性であり、例えば非限定的な例として、二重特異性または三機能性である。 Multispecific and activatable antibodies In some embodiments, the activatable CD47 antibody and/or the conjugated activatable CD47 antibody is monospecific. In some embodiments, the activatable CD47 antibodies and/or conjugated activatable CD47 antibodies are multispecific, such as, for non-limiting examples, bispecific or trifunctional .

いくつかの実施形態では、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体は、プロ二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢＩＴＥ）分子の一部として処方される。いくつかの実施形態では、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体は、プロキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）改変Ｔ細胞または他の操作された受容体の一部として処方される。 In some embodiments, activatable CD47 antibodies and/or conjugated activatable CD47 antibodies are formulated as part of a pro-bispecific T cell engager (BITE) molecule. In some embodiments, activatable CD47 antibodies and/or conjugated activatable CD47 antibodies are formulated as part of prochimeric antigen receptor (CAR) engineered T cells or other engineered receptors. be.

したがって、本開示はまた、多重特異性ＣＤ４７抗体も提供する。本明細書で提供される多重特異性抗体は、ＣＤ４７および少なくとも１種または複数の異なる抗原またはエピトープを認識する、多重特異性抗体である。 Accordingly, the present disclosure also provides multispecific CD47 antibodies. Multispecific antibodies provided herein are multispecific antibodies that recognize CD47 and at least one or more different antigens or epitopes.

本開示はまた、多重特異性ＣＤ４７活性化可能抗体を提供する。本明細書で提供される多重特異性活性化可能抗体は、ＣＤ４７および少なくとも１種または複数の異なる抗原またはエピトープを認識し、および多重特異性抗体の少なくとも１つの抗原結合ドメインまたはエピトープ結合ドメインに連結された少なくとも１つのマスキング部分（ＭＭ）を含む、多重特異性抗体であり、それによりＭＭのカップリングが、その標的を結合する抗原結合ドメインまたはエピトープ結合ドメインの能力を低減する。いくつかの実施形態では、ＭＭは、少なくとも１種のプロテアーゼの基質として機能する切断可能部分（ＣＭ）を介して、多重特異性抗体の抗原結合ドメインまたはエピトープ結合ドメインにカップリングされる。本明細書で提供される活性化可能な多重特異性抗体は、循環中で安定であり、意図された治療部位および／または診断部位で活性化されるが、正常な、すなわち健康な組織では活性化されず、活性化された場合、対応する非修飾の多重特異性抗体に少なくとも匹敵する標的への結合を示す。 The disclosure also provides multispecific CD47 activatable antibodies. The multispecific activatable antibodies provided herein recognize CD47 and at least one or more different antigens or epitopes and are linked to at least one antigen- or epitope-binding domain of the multispecific antibody. A multispecific antibody comprising at least one masking moiety (MM) that has been modified so that coupling of the MM reduces the ability of the antigen or epitope binding domain to bind its target. In some embodiments, the MM is coupled to the antigen- or epitope-binding domain of the multispecific antibody via a cleavable moiety (CM) that functions as a substrate for at least one protease. The activatable multispecific antibodies provided herein are stable in the circulation and activated at the intended therapeutic and/or diagnostic site, but active in normal, i.e., healthy tissue. When unmodified and activated, they exhibit binding to a target that is at least comparable to the corresponding unmodified multispecific antibody.

いくつかの実施形態では、活性化可能抗体またはその抗原結合フラグメントは、多重特異性活性化可能抗体またはその抗原結合フラグメントに組み入れられ、多重特異性活性化可能抗体の少なくとも１つのアームはＣＤ４７を特異的に結合する。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体またはその抗原結合フラグメントは、二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメントに組み入れられ、二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメントの少なくとも１つのアームはＣＤ４７を特異的に結合する。 In some embodiments, the activatable antibody or antigen-binding fragment thereof is incorporated into a multispecific activatable antibody or antigen-binding fragment thereof, wherein at least one arm of the multispecific activatable antibody is specific for CD47. physically connect. In some embodiments, the activatable antibody or antigen-binding fragment thereof is incorporated into a bispecific antibody or antigen-binding fragment thereof, wherein at least one arm of the bispecific antibody or antigen-binding fragment thereof binds CD47. Binds specifically.

いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは多重特異性抗体または、その抗原結合フラグメントに組み入れられ、多重特異性抗体またはその抗原結合フラグメントの少なくとも１つのアームはＣＤ４７を特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメントに組み入れられ、二重特異性活性化可能抗体の少なくとも１つのアームはＣＤ４７を特異的に結合する。 In some embodiments, the antibody or antigen-binding fragment thereof is incorporated into a multispecific antibody or antigen-binding fragment thereof, wherein at least one arm of the multispecific antibody or antigen-binding fragment thereof specifically binds CD47 . In some embodiments, the antibody or antigen-binding fragment thereof is incorporated into a bispecific antibody or antigen-binding fragment thereof, wherein at least one arm of the bispecific activatable antibody specifically binds CD47 .

いくつかの実施形態では、多重特異性抗体またはその抗原結合フラグメント、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメントの少なくとも１つのアームは、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体またはその抗原結合フラグメント、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメントの少なくとも１つのアームは、配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。 In some embodiments, at least one arm of a multispecific antibody or antigen-binding fragment thereof, eg, a bispecific antibody or antigen-binding fragment thereof, comprises the heavy chain variable region amino acid sequence of SEQ ID NO:1. In some embodiments, at least one arm of a multispecific antibody or antigen-binding fragment thereof, eg, a bispecific antibody or antigen-binding fragment thereof, comprises the light chain variable region amino acid sequence of SEQ ID NO:2.

いくつかの実施形態では、多重特異性抗体またはその抗原結合フラグメント、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメントの少なくとも１つのアームは、配列番号１～４からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体またはその抗原結合フラグメント、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメントの少なくとも１つのアームは、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体またはその抗原結合フラグメント、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメントの少なくとも１つのアームは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。 In some embodiments, at least one arm of a multispecific antibody or antigen-binding fragment thereof, e.g., a bispecific antibody or antigen-binding fragment thereof, has an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 1-4 A heavy chain variable region amino acid sequence that is at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% or 99% identical to . In some embodiments, at least one arm of a multispecific antibody or antigen-binding fragment thereof, e.g., a bispecific antibody or antigen-binding fragment thereof, is at least 90%, 91%, Includes heavy chain variable region amino acid sequences that are 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% or 99% identical. In some embodiments, at least one arm of a multispecific antibody or antigen-binding fragment thereof, e.g., a bispecific antibody or antigen-binding fragment thereof, is at least 90%, 91%, Include light chain variable region amino acid sequences that are 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% or 99% identical.

いくつかの実施形態では、多重特異性抗体または抗体またはその抗原結合フラグメント、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメントの少なくとも１つのアームは、可変重鎖相補性決定領域１（ＶＨ ＣＤＲ１、本明細書でＣＤＲＨ１とも呼ばれる）配列、可変重鎖相補性決定領域２（ＶＨ ＣＤＲ２、本明細書でＣＤＲＨ２とも呼ばれる）配列、可変重鎖相補性決定領域３（ＶＨ ＣＤＲ３、本明細書でＣＤＲＨ３とも呼ばれる）配列、可変軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ ＣＤＲ１、本明細書でＣＤＲＬ１とも呼ばれる）配列、可変軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ ＣＤＲ２、本明細書でＣＤＲＬ２とも呼ばれる）配列および可変軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ ＣＤＲ３、本明細書でＣＤＲＬ３とも呼ばれる）配列の組み合わせを含み、少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）配列は、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号３）またはアミノ酸配列ＮＹＷＭＴ（配列番号４）を含むＶＨ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＤＰＹＤＶＥ（配列番号５）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号６）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＮＨＫ（配列番号３９）を含むＶＨ ＣＤＲ２配列；アミノ酸配ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含むＶＨ ＣＤＲ３配列；アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＱＴＹＬＥ（配列番号５５）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＳＴＹＬＥ（配列番号５６）を含むＶＬ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含むＶＬ ＣＤＲ２配列；およびアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含むＶＬ ＣＤＲ３配列からなる群より選択される。 In some embodiments, at least one arm of a multispecific antibody or antibody or antigen-binding fragment thereof, e.g., a bispecific antibody or antigen-binding fragment thereof, comprises variable heavy chain complementarity determining region 1 (VH CDR1, variable heavy chain complementarity determining region 2 (VH CDR2, also referred to herein as CDRH2) sequence, variable heavy chain complementarity determining region 3 (VH CDR3, also referred to herein as CDRH3) sequence ), variable light chain complementarity determining region 1 (VL CDR1, also referred to herein as CDRL1) sequence, variable light chain complementarity determining region 2 (VL CDR2, also referred to herein as CDRL2) sequence and variable light comprising a combination of strand complementarity determining region 3 (VL CDR3, also referred to herein as CDRL3) sequences, wherein at least one complementarity determining region (CDR) sequence has the amino acid sequence GYTFTNY (SEQ ID NO: 3) or the amino acid sequence NYWMT ( SEQ ID NO: 4); a VH CDR2 sequence comprising the amino acid sequence DPYDVE (SEQ ID NO: 5) or the amino acid sequence RIDPYDVETHYAQKFQG (SEQ ID NO: 6) or the amino acid sequence RIDPYDVETHYNHK (SEQ ID NO: 39); the amino acid sequence GGVGGMDY (SEQ ID NO: 7). a VH CDR3 sequence comprising the amino acid sequence RSSQSIVHSSNGNTYLE (SEQ ID NO:8) or RSSQSIVHSSGNTYLE (SEQ ID NO:40) or RSSQSIVHSSGQTYLE (SEQ ID NO:55) or RSSQSIVHSSGSTYLE (SEQ ID NO:56); a VL CDR1 sequence comprising the amino acid sequence RVSKRFS (SEQ ID NO:9) and a VL CDR3 sequence comprising the amino acid sequence FQGSHVPRT (SEQ ID NO: 10).

いくつかの実施形態では、多重特異性抗体または抗体またはその抗原結合フラグメント、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメントの少なくとも１つのアームは、ＶＨ ＣＤＲ１配列、ＶＨ ＣＤＲ２配列、ＶＨ ＣＤＲ３配列、ＶＬ ＣＤＲ１配列、ＶＬ ＣＤＲ２配列、およびＶＬ ＣＤＲ３配列の組み合わせを含み、少なくとも１つのＣＤＲ配列は、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＮＹＷＭＮ（配列番号３７）またはアミノ酸配列ＧＦＴＦＳＮＹＷＭＤ（配列番号３８）を含むＶＨ ＣＤＲ１配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一である配列を含むＶＨ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配列ＤＰＹＤＶＥ（配列番号５）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号６）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＮＨＫ（配列番号３９）を含むＶＨ ＣＤＲ２配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一である配列を含むＶＨ ＣＤＲ２配列；アミノ酸配列ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含むＶＨ ＣＤＲ３配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一である配列を含むＶＨ ＣＤＲ３配列；アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＱＴＹＬＥ（配列番号５５）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＳＴＹＬＥ（配列番号５６）を含むＶＬ ＣＤＲ１配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一である配列を含むＶＬ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配列ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含むＶＬ ＣＤＲ２配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一である配列を含むＶＬ ＣＤＲ２配列；およびアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含むＶＬ ＣＤＲ３配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一である配列を含むＶＬ ＣＤＲ３配列からなる群より選択される。 In some embodiments, at least one arm of a multispecific antibody or antibody or antigen-binding fragment thereof, e.g., a bispecific antibody or antigen-binding fragment thereof, comprises a VH CDR1 sequence, a VH CDR2 sequence, a VH CDR3 sequence, a combination of VL CDR1 sequences, VL CDR2 sequences, and VL CDR3 sequences, wherein at least one CDR sequence is at least 90% with a VH CDR1 sequence comprising the amino acid sequence GFTFSNYWMN (SEQ ID NO:37) or the amino acid sequence GFTFSNYWMD (SEQ ID NO:38) , 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more of a VH CDR1 sequence; amino acid sequence DPYDVE (SEQ ID NO: 5) or at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% with a VH CDR2 sequence comprising the amino acid sequence RIDPYDVETHYAQKFQG (SEQ ID NO: 6) or the amino acid sequence RIDPYDVETHYNHK (SEQ ID NO: 39) A VH CDR2 sequence comprising a sequence that is %, 99% or more identical; at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95% to a VH CDR3 sequence comprising the amino acid sequence GGVGGMDY (SEQ ID NO: 7) %, 96%, 97%, 98%, 99% or more identical VH CDR3 sequence; or at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more identical to a VL CDR1 sequence comprising RSSQSIVHSSSGSTYLE (SEQ ID NO: 56) a VL CDR1 sequence comprising a sequence; a VL CDR2 sequence comprising the amino acid sequence RVSKRFS (SEQ ID NO: 9) and at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, a VL CDR2 sequence comprising a sequence that is 99% or more identical; and at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95% with a VL CDR3 sequence comprising the amino acid sequence FQGSHVPRT (SEQ ID NO: 10) , 96%, 97%, 98%, 99% or more identical sequences selected from the group consisting of VL CDR3 sequences including

いくつかの実施形態では、多重特異性抗体または抗体またはその抗原結合フラグメント、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメントの少なくとも１つのアームは、ＶＨ ＣＤＲ１配列、ＶＨ ＣＤＲ２配列、ＶＨ ＣＤＲ３配列、ＶＬ ＣＤＲ１配列、ＶＬ ＣＤＲ２配列、およびＶＬ ＣＤＲ３配列の組み合わせを含み、ＶＨ ＣＤＲ１配列は、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号３）またはアミノ酸配列ＮＹＷＭＴ（配列番号４）を含み；ＶＨ ＣＤＲ２配列は、アミノ酸配ＤＰＹＤＶＥ（配列番号５）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号６）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＮＨＫ（配列番号３９）を含み；ＶＨ ＣＤＲ３配列は、アミノ酸配ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含み；ＶＬ ＣＤＲ１配列は、アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＱＴＹＬＥ（配列番号５５）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＳＴＹＬＥ（配列番号５６）を含み；ＶＬ ＣＤＲ２配列は、アミノ酸配ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含み；およびＶＬ ＣＤＲ３配列は、アミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含む。 In some embodiments, at least one arm of a multispecific antibody or antibody or antigen-binding fragment thereof, e.g., a bispecific antibody or antigen-binding fragment thereof, comprises a VH CDR1 sequence, a VH CDR2 sequence, a VH CDR3 sequence, The VH CDR1 sequence comprises the amino acid sequence GYTFTNY (SEQ ID NO:3) or the amino acid sequence NYWMT (SEQ ID NO:4); the VH CDR2 sequence comprises the amino acid sequence DPYDVE; (SEQ ID NO:5) or amino acid sequence RIDPYDVETHYAQKFQG (SEQ ID NO:6) or amino acid sequence RIDPYDVETHYNHK (SEQ ID NO:39); VH CDR3 sequence comprises amino acid sequence GGVGGMDY (SEQ ID NO:7); VL CDR1 sequence comprises amino acid sequence RSSQSIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO:8) or RSSQSIVHSSGNTYLE (SEQ ID NO:40) or RSSQSIVHSSGQTYLE (SEQ ID NO:55) or RSSQSIVHSSGSTYLE (SEQ ID NO:56); the VL CDR2 sequence comprises the amino acid sequence RVSKRFS (SEQ ID NO:9); and the VL CDR3 sequence comprises , containing the amino acid sequence FQGSHVPRT (SEQ ID NO: 10).

いくつかの実施形態では、多重特異性抗体または抗体またはその抗原結合フラグメント、例えば、二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメントの少なくとも１つのアームは、ＶＨ ＣＤＲ１配列、ＶＨ ＣＤＲ２配列、ＶＨ ＣＤＲ３配列、ＶＬ ＣＤＲ１配列、ＶＬ ＣＤＲ２配列、およびＶＬ ＣＤＲ３配列の組み合わせを含み、ＶＨ ＣＤＲ１配列は、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＮＹＷＭＮ（配列番号３７）またはアミノ酸配列ＧＦＴＦＳＮＹＷＭＤ（配列番号３８）を含むＶＨ ＣＤＲ１配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一である配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ２配列は、アミノ酸配列ＤＰＹＤＶＥ（配列番号５）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号６）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＮＨＫ（配列番号３９）を含むＶＨ ＣＤＲ２配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一である配列を含み；ＶＨ ＣＤＲ３配列は、アミノ酸配列ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含むＶＨ ＣＤＲ３配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一である配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ１配列は、アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＱＴＹＬＥ（配列番号５５）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＳＴＹＬＥ（配列番号５６）を含むＶＬ ＣＤＲ１配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一である配列を含み；ＶＬ ＣＤＲ２配列は、アミノ酸配列ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含むＶＬ ＣＤＲ２配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一である配列を含み；およびＶＬ ＣＤＲ３配列は、アミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含むＶＬ ＣＤＲ３配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一である配列を含む。 In some embodiments, at least one arm of a multispecific antibody or antibody or antigen-binding fragment thereof, e.g., a bispecific antibody or antigen-binding fragment thereof, comprises a VH CDR1 sequence, a VH CDR2 sequence, a VH CDR3 sequence, A combination of a VL CDR1 sequence, a VL CDR2 sequence, and a VL CDR3 sequence, wherein the VH CDR1 sequence is at least 90%, 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more identical; the VH CDR2 sequence comprises the amino acid sequence DPYDVE (SEQ ID NO: 5) or at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% with a VH CDR2 sequence comprising the amino acid sequence RIDPYDVETHYAQKFQG (SEQ ID NO: 6) or the amino acid sequence RIDPYDVETHYNHK (SEQ ID NO: 39) %, 99% or more identical; the VH CDR3 sequence is at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94% with a VH CDR3 sequence comprising the amino acid sequence GGVGGMDY (SEQ ID NO: 7) , 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more identical; the VL CDR1 sequence comprises the amino acid sequence RSSQSIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO: 8) or RSSQSIVHSSSGNTYLE (SEQ ID NO: 40) or RSSQSIVHSSGQTYLE (SEQ ID NO: 40) or SEQ ID NO: 55) or RSSQSIVHSSGSTYLE (SEQ ID NO: 56) and at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or thereof the VL CDR2 sequence is at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, including sequences that are 97%, 98%, 99% or more identical; and the VL CDR3 sequence is at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more identical contains an array that is

いくつかの実施形態では、多重特異性抗体／活性化可能抗体は、免疫エフェクター細胞と係合するように設計され、本明細書で免疫エフェクター細胞エンゲージング多重特異性活性化可能抗体（ｉｍｍｕｎｅ－ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｃｅｌｌ ｅｎｇａｇｉｎｇ ｍｕｌｔｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｃｔｉｖａｔａｂｌｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ）とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体／活性化可能抗体は、白血球と係合するように設計され、本明細書で白血球エンゲージング多重特異性活性化可能抗体（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ｅｎｇａｇｉｎｇ ｍｕｌｔｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｃｔｉｖａｔａｂｌｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ）とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体／活性化可能抗体は、Ｔ細胞と係合するように設計され、本明細書でＴ細胞エンゲージング多重特異性抗体／活性化可能抗体（Ｔ－ｃｅｌｌ ｅｎｇａｇｉｎｇ ｍｕｌｔｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ／ａｃｔｉｖａｔａｂｌｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ）とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体／活性化可能抗体は、白血球上の、例えばＴ細胞上の、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上の、骨髄単核細胞上の、マクロファージ上の、および／または別の免疫エフェクター細胞上の表面抗原と係合する。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞は、白血球である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞は、ＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞は、骨髄単核細胞などの単核細胞である。いくつかの実施形態では、多重特異性活性化可能抗体は、２つ以上の標的および／または２つ以上のエピトープと結合するか、あるいは相互作用するように設計され、本明細書で多重抗原標的化活性化可能抗体とも呼ばれる。本明細書で使用される場合、用語「標的」および「抗原」は、同義に使用される。 In some embodiments, the multispecific/activatable antibodies are designed to engage immune effector cells, herein referred to as immune effector cell-engaging multispecific activatable antibodies (immune-effector cell-engaging multispecific activatable antibody). In some embodiments, the multispecific/activatable antibody is designed to engage leukocytes, also referred to herein as a leukocyte-engaging multispecific activatable antibody. be called. In some embodiments, the multispecific antibody/activatable antibody is designed to engage T cells, herein referred to as T cell-engaging multispecific antibody/activatable antibody (T-cell Also called engaging multispecific antibodies/activatable antibodies). In some embodiments, the multispecific/activatable antibody is directed against leukocytes, e.g., T cells, natural killer (NK) cells, bone marrow mononuclear cells, macrophages, and/or or engage a surface antigen on another immune effector cell. In some embodiments, immune effector cells are leukocytes. In some embodiments, immune effector cells are T cells. In some embodiments, immune effector cells are NK cells. In some embodiments, immune effector cells are mononuclear cells, such as bone marrow mononuclear cells. In some embodiments, a multispecific activatable antibody is designed to bind or otherwise interact with more than one target and/or more than one epitope, herein referred to as multiple antigen targets. Also called activatable antibody. As used herein, the terms "target" and "antigen" are used interchangeably.

いくつかの実施形態では、本開示の免疫エフェクター細胞エンゲージング多重特異性活性化可能抗体は、ＣＤ４７を結合する標的化抗体またはその抗原結合フラグメント、および免疫エフェクター細胞エンゲージング抗体またはその抗原結合部分を含み、標的化抗体もしくはその抗原結合フラグメントおよび／または免疫エフェクター細胞エンゲージング抗体もしくはその抗原結合部分の少なくとも１つは、マスクされている。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞エンゲージング抗体またはその抗原結合フラグメントは、第１の免疫エフェクター細胞エンゲージング標的を結合する第１の抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ１）を含み、ＡＢ１はマスキング部分（ＭＭ１）に、ＭＭ１のカップリングが第１の標的を結合するＡＢ１の能力を低減させるように付着されている。いくつかの実施形態では、標的化抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＣＤ４７を結合する第２の抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ２）を含む第２の抗体またはそのフラグメントを含み、ＡＢ２はマスキング部分（ＭＭ２）に、ＭＭ２のカップリングがＣＤ４７を結合するＡＢ２の能力を低減させるように付着されている。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞エンゲージング抗体またはその抗原結合フラグメントは、第１の免疫エフェクター細胞エンゲージング標的を結合する第１の抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ１）を含み、ＡＢ１はマスキング部分（ＭＭ１）に、ＭＭ１のカップリングが第１の標的を結合するＡＢ１の能力を低減させるように付着され、標的化抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＣＤ４７を結合する第２の抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ２）を含む第２の抗体またはそのフラグメントを含み、ＡＢ２はマスキング部分（ＭＭ２）に、ＭＭ２のカップリングがＣＤ４７を結合するＡＢ２の能力を低減させるように付着されている。いくつかの実施形態では、非免疫エフェクター細胞エンゲージング抗体は、癌標的化抗体である。いくつかの実施形態では、非免疫細胞エフェクター抗体は、ＩｇＧである。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞エンゲージング抗体は、ｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７標的化抗体（例えば、非免疫細胞エフェクター抗体）は、ＩｇＧであり、免疫エフェクター細胞エンゲージング抗体は、ｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞は、白血球である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞は、ＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞は、骨髄単核細胞である。 In some embodiments, the immune effector cell-engaging multispecific activatable antibodies of the present disclosure comprise a targeting antibody or antigen-binding fragment thereof that binds CD47 and an immune effector cell-engaging antibody or antigen-binding portion thereof. At least one of the targeting antibody or antigen-binding fragment thereof and/or the immune effector cell-engaging antibody or antigen-binding portion thereof is masked. In some embodiments, the immune effector cell-engaging antibody or antigen-binding fragment thereof comprises a first antibody or antigen-binding fragment thereof (AB1) that binds a first immune effector cell-engaging target, wherein AB1 is a masking A moiety (MM1) is attached such that coupling of MM1 reduces the ability of AB1 to bind the first target. In some embodiments, the targeting antibody or antigen-binding fragment thereof comprises a second antibody or fragment thereof comprising a second antibody or antigen-binding fragment thereof that binds CD47 (AB2), wherein AB2 is a masking moiety ( MM2) is attached such that coupling of MM2 reduces the ability of AB2 to bind CD47. In some embodiments, the immune effector cell-engaging antibody or antigen-binding fragment thereof comprises a first antibody or antigen-binding fragment thereof (AB1) that binds a first immune effector cell-engaging target, wherein AB1 is a masking A moiety (MM1) is attached such that coupling of MM1 reduces the ability of AB1 to bind the first target, and the targeting antibody or antigen-binding fragment thereof is attached to a second antibody or antigen thereof that binds CD47. A second antibody or fragment thereof comprising a binding fragment (AB2) is attached to a masking moiety (MM2) such that coupling of MM2 reduces AB2's ability to bind CD47. In some embodiments, the non-immune effector cell-engaging antibody is a cancer targeting antibody. In some embodiments, the non-immune cell effector antibody is IgG. In some embodiments, the immune effector cell-engaging antibody is a scFv. In some embodiments, the CD47-targeting antibody (eg, non-immune cell effector antibody) is an IgG and the immune effector cell-engaging antibody is a scFv. In some embodiments, immune effector cells are leukocytes. In some embodiments, immune effector cells are T cells. In some embodiments, immune effector cells are NK cells. In some embodiments, the immune effector cells are bone marrow mononuclear cells.

いくつかの実施形態では、本開示のＴ細胞エンゲージング多重特異性活性化可能抗体は、ＣＤ４７標的化抗体またはその抗原結合フラグメントおよびＴ細胞エンゲージングの抗体またはその抗原結合部分を含み、ＣＤ４７標的化抗体もしくはその抗原結合フラグメントおよび／またはＴ細胞エンゲージング抗体もしくはその抗原結合部分の少なくとも１つはマスクされている。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞エンゲージング抗体またはその抗原結合フラグメントは、第１のＴ細胞エンゲージング標的を結合する第１の抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ１）を含み、ＡＢ１はマスキング部分（ＭＭ１）に、ＭＭ１のカップリングが第１の標的を結合するＡＢ１の能力を低減させるように付着される。いくつかの実施形態では、標的化抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＣＤ４７を結合する第２の抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ２）を含む第２の抗体またはそのフラグメントを含み、ＡＢ２はマスキング部分（ＭＭ２）に、ＭＭ２のカップリングがＣＤ４７を結合するＡＢ２の能力を低減させるように付着される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞エンゲージング抗体またはその抗原結合フラグメントは、第１のＴ細胞エンゲージング標的を結合する第１の抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ１）を含み、ＡＢ１はマスキング部分（ＭＭ１）に、ＭＭ１のカップリングが第１の標的を結合するＡＢ１の能力を低減させるように付着され、標的化抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＣＤ４７を結合する第２の抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ２）を含む第２の抗体またはそのフラグメントを含み、ＡＢ２はマスキング部分（ＭＭ２）に、ＭＭ２のカップリングがＣＤ４７を結合するＡＢ２の能力を低減させるように付着される。 In some embodiments, a T cell-engaging multispecific activatable antibody of the present disclosure comprises a CD47-targeting antibody or antigen-binding fragment thereof and a T-cell-engaging antibody or antigen-binding portion thereof, wherein a CD47-targeting At least one of the antibody or antigen binding fragment thereof and/or the T cell engaging antibody or antigen binding portion thereof is masked. In some embodiments, the T-cell-engaging antibody or antigen-binding fragment thereof comprises a first antibody or antigen-binding fragment thereof (AB1) that binds a first T-cell-engaging target, wherein AB1 is a masking moiety ( MM1) is attached such that coupling of MM1 reduces the ability of AB1 to bind the first target. In some embodiments, the targeting antibody or antigen-binding fragment thereof comprises a second antibody or fragment thereof comprising a second antibody or antigen-binding fragment thereof that binds CD47 (AB2), wherein AB2 is a masking moiety ( MM2) is attached such that coupling of MM2 reduces the ability of AB2 to bind CD47. In some embodiments, the T-cell-engaging antibody or antigen-binding fragment thereof comprises a first antibody or antigen-binding fragment thereof (AB1) that binds a first T-cell-engaging target, wherein AB1 is a masking moiety ( MM1) is attached such that coupling of MM1 reduces the ability of AB1 to bind the first target, and the targeting antibody or antigen-binding fragment thereof is attached to a second antibody or antigen-binding fragment thereof that binds CD47 A second antibody or fragment thereof comprising (AB2) is attached to a masking moiety (MM2) such that coupling of MM2 reduces AB2's ability to bind CD47.

免疫エフェクター細胞エンゲージング多重特異性抗体／活性化可能抗体のいくつかの実施形態では、１種の抗原はＣＤ４７であり、別の抗原は典型的には、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、骨髄単核細胞、マクロファージ、および／または限定されないが、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１６ａ、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３２、ＣＤ５６、ＣＤ１３７、ＣＴＬＡ－４、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳ、ＬＡＧ３、ＮＫＧ２Ｄ、ＯＸ４０、ＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３もしくはＶＩＳＴＡなどの、他の免疫エフェクター細胞の表面上に存在する刺激性または阻害性の受容体である。いくつかの実施形態では、抗原は、Ｔ細胞またはＮＫ細胞の表面上に存在する刺激性受容体であり；そのような刺激性受容体の例としては、ＣＤ３、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４－１ＢＢとも呼ばれる）、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳ、ＮＫＧ２ＤおよびＯＸ４０が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、抗原は、Ｔ細胞の表面上に存在する阻害性受容体であり；そのような阻害性受容体の例としては、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３およびＮＫ発現ＫＩＲが挙げられるが、これらに限定されない。Ｔ細胞表面抗原に特異性を付与する抗体ドメインはまた、限定されないが、Ｂ７－１、Ｂ７－２、Ｂ７Ｈ３、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２またはＴＮＦＳＦ９などの、Ｔ細胞受容体、ＮＫ細胞受容体、マクロファージ受容体、および／または他の免疫エフェクター細胞受容体に結合するリガンドまたはリガンドドメインによって置換され得る。 In some embodiments of the immune effector cell-engaging multispecific antibody/activatable antibody, one antigen is CD47 and another antigen is typically T cells, natural killer (NK) cells, Bone marrow mononuclear cells, macrophages, and/or, without limitation, B7-H4, BTLA, CD3, CD4, CD8, CD16a, CD25, CD27, CD28, CD32, CD56, CD137, CTLA-4, GITR, HVEM, ICOS, Other stimulatory or inhibitory receptors on the surface of immune effector cells, such as LAG3, NKG2D, OX40, PD-1, TIGIT, TIM3 or VISTA. In some embodiments, the antigen is a stimulatory receptor present on the surface of T cells or NK cells; examples of such stimulatory receptors include CD3, CD27, CD28, CD137 (4- 1BB), GITR, HVEM, ICOS, NKG2D and OX40. In some embodiments, the antigen is an inhibitory receptor present on the surface of T cells; examples of such inhibitory receptors include BTLA, CTLA-4, LAG3, PD-1, TIGIT , TIM3 and NK-expressing KIR. Antibody domains that confer specificity for T cell surface antigens may also be T cell receptors, NK cell receptors, macrophage receptors, such as, but not limited to, B7-1, B7-2, B7H3, PDL1, PDL2 or TNFSF9. , and/or by ligands or ligand domains that bind to other immune effector cell receptors.

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞エンゲージング多重特異性活性化可能抗体は、抗ＣＤ３イプシロン（ＣＤ３ε、本明細書でＣＤ３ｅおよびＣＤ３とも呼ばれる）ｓｃＦｖならびに標的化抗体またはその抗原結合フラグメントを含み、抗ＣＤ３ε ｓｃＦｖおよび／または標的化抗体もしくはその抗原結合部分の少なくとも１つはマスクされる。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ε ｓｃＦｖは、ＣＤ３εを結合する第１の抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ１）を含み、ＡＢ１はマスキング部分（ＭＭ１）に、ＭＭ１のカップリングがＣＤ３εを結合するＡＢ１の能力を低減させるように付着される。いくつかの実施形態では、標的化抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＣＤ４７を結合する第２の抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ２）を含む第２の抗体またはそのフラグメントを含み、ＡＢ２はマスキング部分（ＭＭ２）に、ＭＭ２のカップリングがＣＤ４７を結合するＡＢ２の能力を低減させるように付着される。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ε ｓｃＦｖは、ＣＤ３εを結合する第１の抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ１）を含み、ＡＢ１はマスキング部分（ＭＭ１）に、ＭＭ１のカップリングがＣＤ３εを結合するＡＢ１の能力を低減させるように付着され、標的化抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＣＤ４７を結合する第２の抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ２）を含む第２の抗体またはそのフラグメントを含み、ＡＢ２はマスキング部分（ＭＭ２）に、ＭＭ２のカップリングがＣＤ４７を結合するＡＢ２の能力を低減させるように付着される。 In some embodiments, the T cell-engaging multispecific activatable antibody comprises an anti-CD3 epsilon (CD3ε, also referred to herein as CD3e and CD3) scFv and a targeting antibody or antigen-binding fragment thereof, At least one of the CD3ε scFv and/or targeting antibody or antigen binding portion thereof is masked. In some embodiments, the CD3ε scFv comprises a first antibody or antigen binding fragment thereof (AB1) that binds CD3ε, AB1 to a masking moiety (MM1) and coupling of MM1 to AB1 that binds CD3ε. Attached to reduce capacity. In some embodiments, the targeting antibody or antigen-binding fragment thereof comprises a second antibody or fragment thereof comprising a second antibody or antigen-binding fragment thereof that binds CD47 (AB2), wherein AB2 is a masking moiety ( MM2) is attached such that coupling of MM2 reduces the ability of AB2 to bind CD47. In some embodiments, the CD3ε scFv comprises a first antibody or antigen binding fragment thereof (AB1) that binds CD3ε, AB1 to a masking moiety (MM1) and coupling of MM1 to AB1 that binds CD3ε. Attached to reduce capacity, the targeting antibody or antigen-binding fragment thereof comprises a second antibody or fragment thereof comprising a second antibody or antigen-binding fragment thereof that binds CD47 (AB2), wherein AB2 is a masking A moiety (MM2) is attached such that coupling of MM2 reduces the ability of AB2 to bind CD47.

いくつかの実施形態では、多重抗原標的化抗体および／または多重抗原標的化活性化可能抗体は、少なくとも、第１の標的および／または第１のエピトープを結合する第１の抗体またはその抗原結合フラグメント、ならびに第２の標的および／または第２のエピトープを結合する第２の抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、多重抗原標的化抗体および／または多重抗原標的化活性化可能抗体は、複数の異なる標的を結合する。いくつかの実施形態では、多重抗原標的化抗体および／または多重抗原標的化活性化可能抗体は、同じ標的上の複数の異なるエピトープを結合する。いくつかの実施形態では、多重抗原標的化抗体および／または多重抗原標的化活性化可能抗体は、複数の異なる標的と同じ標的上の複数の異なるエピトープの組み合わせを結合する。 In some embodiments, the multi-antigen targeting antibody and/or multi-antigen targeting activatable antibody is at least a first antibody or antigen-binding fragment thereof that binds a first target and/or a first epitope , and a second antibody or antigen-binding fragment thereof that binds a second target and/or a second epitope. In some embodiments, a multi-antigen targeting antibody and/or a multi-antigen targeting activatable antibody binds multiple different targets. In some embodiments, multi-antigen targeting antibodies and/or multi-antigen targeting activatable antibodies bind multiple different epitopes on the same target. In some embodiments, a multi-antigen targeting antibody and/or a multi-antigen targeting activatable antibody binds a combination of multiple different targets and multiple different epitopes on the same target.

いくつかの実施形態では、ＩｇＧを含む多重特異性活性化可能抗体は、ＩｇＧ可変ドメインがマスクされている。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖを含む多重特異性活性化可能抗体は、マスクされたｓｃＦｖドメインを有する。いくつかの実施形態では、多重特異性活性化可能抗体は、ＩｇＧ可変ドメインおよびｓｃＦｖドメインの両方を有し、ＩｇＧ可変ドメインの少なくとも１つは、マスキング部分にカップリングされる。いくつかの実施形態では、多重特異性活性化可能抗体は、ＩｇＧ可変ドメインおよびｓｃＦｖドメインの両方を有し、ｓｃＦｖドメインの少なくとも１つはマスキング部分にカップリングされる。いくつかの実施形態では、多重特異性活性化可能抗体は、ＩｇＧ可変ドメインおよびｓｃＦｖドメインの両方を有し、ＩｇＧ可変ドメインの少なくとも１つは、マスキング部分にカップリングされ、ｓｃＦｖドメインの少なくとも１つはマスキング部分にカップリングされる。いくつかの実施形態では、多重特異性活性化可能抗体は、ＩｇＧ可変ドメインおよびｓｃＦｖドメインの両方を有し、ＩｇＧ可変ドメインおよびｓｃＦｖドメインの個々は、それ自体のマスキング部分にカップリングされる。いくつかの実施形態では、多重特異性活性化可能抗体の１個の抗体ドメインは、標的抗原に対する特異性を有し、別の抗体ドメインは、Ｔ細胞表面抗原に対する特異性を有する。いくつかの実施形態では、多重特異性活性化可能抗体の１個の抗体ドメインは、標的抗原に対する特異性を有し、別の抗体ドメインは、別の標的抗原に対する特異性を有する。いくつかの実施形態では、多重特異性活性化可能抗体の１つの抗体ドメインは標的抗原のエピトープに対する特異性を有し、別の抗体ドメインは標的抗原の別のエピトープに対する特異性を有する。 In some embodiments, the IgG-comprising multispecific activatable antibody has a masked IgG variable domain. In some embodiments, the scFv-containing multispecific activatable antibody has a masked scFv domain. In some embodiments, the multispecific activatable antibody has both IgG variable domains and scFv domains, at least one of the IgG variable domains being coupled to a masking moiety. In some embodiments, the multispecific activatable antibody has both IgG variable domains and scFv domains, at least one of the scFv domains coupled to a masking moiety. In some embodiments, the multispecific activatable antibody has both IgG variable domains and scFv domains, wherein at least one of the IgG variable domains is coupled to a masking moiety and at least one of the scFv domains is coupled to the masking portion. In some embodiments, the multispecific activatable antibody has both IgG variable domains and scFv domains, each of which is coupled to its own masking moiety. In some embodiments, one antibody domain of the multispecific activatable antibody has specificity for a target antigen and another antibody domain has specificity for a T cell surface antigen. In some embodiments, one antibody domain of the multispecific activatable antibody has specificity for a target antigen and another antibody domain has specificity for another target antigen. In some embodiments, one antibody domain of the multispecific activatable antibody has specificity for an epitope of the target antigen and another antibody domain has specificity for another epitope of the target antigen.

多重特異性活性化可能抗体において、ｓｃＦｖは、ＩｇＧ活性化可能抗体の重鎖のカルボキシル末端に、ＩｇＧ活性化可能抗体の軽鎖のカルボキシル末端に、またはＩｇＧ活性化可能抗体の重鎖および軽鎖の両方のカルボキシル末端に融合されてよい。多重特異性活性化可能抗体では、ｓｃＦｖは、ＩｇＧ活性化可能抗体の重鎖のアミノ末端に、ＩｇＧ活性化可能抗体の軽鎖のアミノ末端に、またはＩｇＧ活性化可能抗体の重鎖および軽鎖の両方のアミノ末端に融合されてよい。多重特異性活性化可能抗体では、ｓｃＦｖは、ＩｇＧ活性化可能抗体の１つまたは複数のカルボキシル末端および１つまたは複数のアミノ末端の任意の組み合わせに融合されてよい。いくつかの実施形態では、切断可能部分（ＣＭ）に連結されるマスキング部分（ＭＭ）は、ＩｇＧの抗原結合ドメインに付着され、そのドメインをマスクする。いくつかの実施形態では、切断可能部分（ＣＭ）に連結されるマスキング部分（ＭＭ）は、少なくとも１つのｓｃＦｖの抗原結合ドメインに付着され、そのドメインをマスクする。いくつかの実施形態では、切断可能部分（ＣＭ）に連結されたマスキング部分（ＭＭ）は、ＩｇＧの抗原結合ドメインに付着され、それをマスクし、切断可能部分（ＣＭ）に連結されたマスキング部分（ＭＭ）は、少なくとも１種のｓｃＦｖの抗原結合ドメインに付着され、それをマスクする。 In multispecific activatable antibodies, the scFv is at the carboxyl terminus of the heavy chain of an IgG activatable antibody, at the carboxyl terminus of the light chain of an IgG activatable antibody, or at the heavy and light chains of an IgG activatable antibody. may be fused to both carboxyl termini of For multispecific activatable antibodies, the scFv is at the amino terminus of the heavy chain of an IgG activatable antibody, at the amino terminus of the light chain of an IgG activatable antibody, or at the heavy and light chains of an IgG activatable antibody. may be fused to both amino termini of For multispecific activatable antibodies, the scFv may be fused to any combination of one or more carboxyl termini and one or more amino termini of an IgG activatable antibody. In some embodiments, a masking moiety (MM) linked to a cleavable moiety (CM) is attached to the antigen binding domain of an IgG to mask that domain. In some embodiments, a masking moiety (MM) linked to a cleavable moiety (CM) is attached to at least one scFv antigen binding domain to mask that domain. In some embodiments, a masking moiety (MM) linked to a cleavable moiety (CM) is attached to and masks the antigen-binding domain of an IgG and a masking moiety linked to a cleavable moiety (CM) (MM) is attached to and masks the antigen binding domain of at least one scFv.

本開示は、次記を含むがそれらに限定されない、多重特異性活性化可能抗体の構造の例を提供する：（ＶＬ－ＣＬ）２：（ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｌ４－ＶＨ＊－Ｌ３－ＶＬ＊－Ｌ２－ＣＭ－Ｌ１－ＭＭ）２；（ＶＬ－ＣＬ）２：（ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｌ４－ＶＬ＊－Ｌ３－ＶＨ＊－Ｌ２－ＣＭ－Ｌ１－ＭＭ）２；（ＭＭ－Ｌ１－ＣＭ－Ｌ２－ＶＬ－ＣＬ）２：（ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｌ４－ＶＨ＊－Ｌ３－ＶＬ＊）２；（ＭＭ－Ｌ１－ＣＭ－Ｌ２－ＶＬ－ＣＬ）２：（ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３－Ｌ４－ＶＬ＊－Ｌ３－ＶＨ＊）２；（ＶＬ－ＣＬ）２：（ＭＭ－Ｌ１－ＣＭ－Ｌ２－ＶＬ＊－Ｌ３－ＶＨ＊－Ｌ４－ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３）２；（ＶＬ－ＣＬ）２：（ＭＭ－Ｌ１－ＣＭ－Ｌ２－ＶＨ＊－Ｌ３－ＶＬ＊－Ｌ４－ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３）２；（ＭＭ－Ｌ１－ＣＭ－Ｌ２－ＶＬ－ＣＬ）２：（ＶＬ＊－Ｌ３－ＶＨ＊－Ｌ４－ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３）２；（ＭＭ－Ｌ１－ＣＭ－Ｌ２－ＶＬ－ＣＬ）２：（ＶＨ＊－Ｌ３－ＶＬ＊－Ｌ４－ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３）２；（ＶＬ－ＣＬ－Ｌ４－ＶＨ＊－Ｌ３－ＶＬ＊－Ｌ２－ＣＭ－Ｌ１－ＭＭ）２：（ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３）２；（ＶＬ－ＣＬ－Ｌ４－ＶＬ＊－Ｌ３－ＶＨ＊－Ｌ２－ＣＭ－Ｌ１－ＭＭ）２：（ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３）２；（ＭＭ－Ｌ１－ＣＭ－Ｌ２－ＶＬ＊－Ｌ３－ＶＨ＊－Ｌ４－ＶＬ－ＣＬ）２：（ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３）２；（ＭＭ－Ｌ１－ＣＭ－Ｌ２－ＶＨ＊－Ｌ３－ＶＬ＊－Ｌ４－ＶＬ－ＣＬ）２：（ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３）２；（ＶＬ－ＣＬ－Ｌ４－ＶＨ＊－Ｌ３－ＶＬ＊－Ｌ２－ＣＭ－Ｌ１－ＭＭ）２：（ＭＭ－Ｌ１－ＣＭ－Ｌ２－ＶＬ＊－Ｌ３－ＶＨ＊－Ｌ４－ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３）２；（ＶＬ－ＣＬ－Ｌ４－ＶＨ＊－Ｌ３－ＶＬ＊－Ｌ２－ＣＭ－Ｌ１－ＭＭ）２：（ＭＭ－Ｌ１－ＣＭ－Ｌ２－ＶＨ＊－Ｌ３－ＶＬ＊－Ｌ４－ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３）２；（ＶＬ－ＣＬ－Ｌ４－ＶＬ＊－Ｌ３－ＶＨ＊－Ｌ２－ＣＭ－Ｌ１－ＭＭ）２：（ＭＭ－Ｌ１－ＣＭ－Ｌ２－ＶＬ＊－Ｌ３－ＶＨ＊－Ｌ４－ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３）２；（ＶＬ－ＣＬ－Ｌ４－ＶＬ＊－Ｌ３－ＶＨ＊－Ｌ２－ＣＭ－Ｌ１－ＭＭ）２：（ＭＭ－Ｌ１－ＣＭ－Ｌ２－ＶＨ＊－Ｌ３－ＶＬ＊－Ｌ４－ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３）２；（ＶＬ－ＣＬ－Ｌ４－ＶＨ＊－Ｌ３－ＶＬ＊）２：（ＭＭ－Ｌ１－ＣＭ－Ｌ２－ＶＬ＊－Ｌ３－ＶＨ＊－Ｌ４－ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３）２；（ＶＬ－ＣＬ－Ｌ４－ＶＨ＊－Ｌ３－ＶＬ＊）２：（ＭＭ－Ｌ１－ＣＭ－Ｌ２－ＶＨ＊－Ｌ３－ＶＬ＊－Ｌ４－ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３）２；（ＶＬ－ＣＬ－Ｌ４－ＶＬ＊－Ｌ３－ＶＨ＊）２：（ＭＭ－Ｌ１－ＣＭ－Ｌ２－ＶＬ＊－Ｌ３－ＶＨ＊－Ｌ４－ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３）２；（ＶＬ－ＣＬ－Ｌ４－ＶＬ＊－Ｌ３－ＶＨ＊）２：（ＭＭ－Ｌ１－ＣＭ－Ｌ２－ＶＨ＊－Ｌ３－ＶＬ＊－Ｌ４－ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３）２；（ＶＬ－ＣＬ－Ｌ４－ＶＨ＊－Ｌ３－ＶＬ＊－Ｌ２－ＣＭ－Ｌ１－ＭＭ）２：（ＶＬ＊－Ｌ３－ＶＨ＊－Ｌ４－ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３）２；（ＶＬ－ＣＬ－Ｌ４－ＶＨ＊－Ｌ３－ＶＬ＊－Ｌ２－ＣＭ－Ｌ１－ＭＭ）２：（ＶＨ＊－Ｌ３－ＶＬ＊－Ｌ４－ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３）２；（ＶＬ－ＣＬ－Ｌ４－ＶＬ＊－Ｌ３－ＶＨ＊－Ｌ２－ＣＭ－Ｌ１－ＭＭ）２：（ＶＬ＊－Ｌ３－ＶＨ＊－Ｌ４－ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３）２；または（ＶＬ－ＣＬ－Ｌ４－ＶＬ＊－Ｌ３－ＶＨ＊－Ｌ２－ＣＭ－Ｌ１－ＭＭ）２：（ＶＨ＊－Ｌ３－ＶＬ＊－Ｌ４－ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３）２、式中、ＶＬおよびＶＨは、ＩｇＧに含まれる、第１の特異性の軽鎖および重鎖可変ドメインを表し；ＶＬ＊およびＶＨ＊は、ｓｃＦｖに含まれる、第２の特異性の可変ドメインを表し；Ｌ１は、マスキング部分（ＭＭ）と切断可能部分（ＣＭ）とをつなぐリンカーペプチドであり；Ｌ２は、切断可能部分（ＣＭ）と抗体とをつなぐリンカーペプチドであり；Ｌ３は、ｓｃＦｖの可変ドメイン間をつなぐリンカーペプチドであり；Ｌ４は、第１の特異性の抗体を第２の特異性の抗体につなぐリンカーペプチドであり；ＣＬは軽鎖定常ドメインであり；およびＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３は重鎖定常ドメインである。第１および第２の特異性は、任意の抗原またはエピトープに対するものであり得る。 This disclosure provides examples of structures of multispecific activatable antibodies, including but not limited to: (VL-CL) 2 : (VH-CH1-CH2-CH3-L4-VH*- L3-VL*-L2-CM-L1-MM) 2 ; (VL-CL) 2 : (VH-CH1-CH2-CH3-L4-VL*-L3-VH*-L2-CM-L1-MM) 2 ;(MM-L1-CM-L2-VL-CL) 2 :(VH-CH1-CH2-CH3-L4-VH*-L3-VL*) 2 ;(MM-L1-CM-L2-VL-CL) 2 : (VH-CH1-CH2-CH3-L4-VL*-L3-VH*) 2 : (VL-CL) 2 : (MM-L1-CM-L2-VL*-L3-VH*-L4-VH —CH1-CH2-CH3) 2 ; (VL-CL) 2 : (MM-L1-CM-L2-VH*-L3-VL*-L4-VH-CH1-CH2-CH3) 2 ;(MM-L1- CM-L2-VL-CL) 2 : (VL*-L3-VH*-L4-VH-CH1-CH2-CH3) 2 ; (MM-L1-CM-L2-VL-CL) 2 : (VH*- L3-VL*-L4-VH-CH1-CH2-CH3) 2 ; (VL-CL-L4-VH*-L3-VL*-L2-CM-L1-MM) 2 : (VH-CH1-CH2-CH3 ) 2 ; (VL-CL-L4-VL*-L3-VH*-L2-CM-L1-MM) 2 : (VH-CH1-CH2-CH3) 2 ; (MM-L1-CM-L2-VL* -L3-VH*-L4-VL-CL) 2 : (VH-CH1-CH2-CH3) 2 ; (MM-L1-CM-L2-VH*-L3-VL*-L4-VL-CL) 2 : (VH-CH1-CH2-CH3) 2 ; (VL-CL-L4-VH*-L3-VL*-L2-CM-L1-MM) 2 : (MM-L1-CM-L2-VL*-L3- VH*-L4-VH-CH1-CH2-CH3) 2 ; (VL-CL-L4-VH*-L3-VL*-L2-CM-L1-MM) 2 : (MM-L1-CM-L2-VH *-L3-VL*-L4-VH-CH1-CH2-CH3) 2 ;(VL-CL-L4-VL*-L3-VH*-L2-CM-L1-MM) 2 :(MM-L1-CM -L2-VL*-L3-VH*-L4-VH-CH1-CH2-CH3) 2 ;(VL-CL-L4-VL*-L3-VH*-L 2-CM-L1-MM) 2 : (MM-L1-CM-L2-VH*-L3-VL*-L4-VH-CH1-CH2-CH3) 2 ;(VL-CL-L4-VH*-L3 -VL*) 2 : (MM-L1-CM-L2-VL*-L3-VH*-L4-VH-CH1-CH2-CH3) 2 ; (VL-CL-L4-VH*-L3-VL*) 2 : (MM-L1-CM-L2-VH*-L3-VL*-L4-VH-CH1-CH2-CH3) 2 : (VL-CL-L4-VL*-L3-VH*) 2 : (MM -L1-CM-L2-VL*-L3-VH*-L4-VH-CH1-CH2-CH3) 2 ;(VL-CL-L4-VL*-L3-VH*) 2 :(MM-L1-CM -L2-VH*-L3-VL*-L4-VH-CH1-CH2-CH3) 2 ;(VL-CL-L4-VH*-L3-VL*-L2-CM-L1-MM) 2 :(VL *-L3-VH*-L4-VH-CH1-CH2-CH3) 2 ;(VL-CL-L4-VH*-L3-VL*-L2-CM-L1-MM) 2 :(VH*-L3- VL*-L4-VH-CH1-CH2-CH3) 2 ; (VL-CL-L4-VL*-L3-VH*-L2-CM-L1-MM) 2 : (VL*-L3-VH*-L4 -VH-CH1-CH2-CH3) 2 ; or (VL-CL-L4-VL*-L3-VH*-L2-CM-L1-MM) 2 : (VH*-L3-VL*-L4-VH- CH1-CH2-CH3) 2 , where VL and VH represent the first specificity light and heavy chain variable domains contained in IgG; L1 is the linker peptide that connects the masking moiety (MM) and the cleavable moiety (CM); L2 is the linker peptide that connects the cleavable moiety (CM) and the antibody. Yes; L3 is the linker peptide that connects the variable domains of the scFv; L4 is the linker peptide that connects the antibody of the first specificity to the antibody of the second specificity; CL is the light chain constant domain and CH1, CH2, CH3 are heavy chain constant domains. The first and second specificities can be for any antigen or epitope.

Ｔ細胞エンゲージング多重特異性抗体／活性化可能抗体のいくつかの実施形態では、１つの抗原はＣＤ４７であり、別の抗原は、典型的には、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、骨髄単核細胞、マクロファージ、および／または限定されないが、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１６ａ、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３２、ＣＤ５６、ＣＤ１３７（ＴＮＦＲＳＦ９とも呼ばれる）、ＣＴＬＡ－４、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳ、ＬＡＧ３、ＮＫＧ２Ｄ、ＯＸ４０、ＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３もしくはＶＩＳＴＡなどの、他の免疫エフェクター細胞の表面上に存在する刺激性（本明細書で活性化とも呼ばれる）または阻害性の受容体である。Ｔ細胞表面抗原に特異性を付与する抗体ドメインはまた、Ｔ細胞受容体、ＮＫ細胞受容体、マクロファージ受容体、および／または他の免疫エフェクター細胞受容体に結合するリガンドまたはリガンドドメインによって置換され得る。 In some embodiments of the T cell-engaging multispecific/activatable antibody, one antigen is CD47 and another antigen is typically T cells, natural killer (NK) cells, bone marrow monocytes, macrophages, and/or, without limitation, B7-H4, BTLA, CD3, CD4, CD8, CD16a, CD25, CD27, CD28, CD32, CD56, CD137 (also called TNFRSF9), CTLA-4, GITR, Stimulatory (also referred to herein as activation) or inhibitory receptors present on the surface of other immune effector cells, such as HVEM, ICOS, LAG3, NKG2D, OX40, PD-1, TIGIT, TIM3 or VISTA is the body. Antibody domains that confer specificity for T cell surface antigens may also be replaced by ligands or ligand domains that bind T cell receptors, NK cell receptors, macrophage receptors, and/or other immune effector cell receptors. .

いくつかの実施形態では、標的化抗体は、本明細書で開示されるＣＤ４７抗体である。いくつかの実施形態では、標的化抗体は、活性化可能抗体の形態であり得る。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖはＰｒｏ－ｓｃＦｖの形態であり得る（例えば、国際公開第２００９／０２５８４６号、同第２０１０／０８１１７３号を参照されたい）。 In some embodiments, the targeting antibody is a CD47 antibody disclosed herein. In some embodiments, targeting antibodies may be in the form of activatable antibodies. In some embodiments, the scFv can be in the form of a Pro-scFv (see, eg, WO2009/025846, WO2010/081173).

いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、ＣＤ３εの結合に特異的であり、ＣＤ３εを結合する抗体またはそのフラグメント、例えばＣＨ２５２７、ＦＮ１８、Ｈ２Ｃ、ＯＫＴ３、２Ｃ１１、ＵＣＨＴ１またはＶ９を含むか、またはそれらから誘導される。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、ＣＴＬＡ－４（本明細書でＣＴＬＡおよびＣＴＬＡ４とも呼ばれる）の結合に特異的である。 In some embodiments, the scFv is specific for binding CD3ε and comprises or is derived from an antibody or fragment thereof that binds CD3ε such as CH2527, FN18, H2C, OKT3, 2C11, UCHT1 or V9 be done. In some embodiments, the scFv is specific for binding CTLA-4 (also referred to herein as CTLA and CTLA4).

いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ－４ ｓｃＦｖは、次記アミノ酸配列を含む：
ＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＳＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＳＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＳＧＧＳＴＩＴＳＹＮＶＹＹＴＫＬＳＳＳＧＴＱＶＱＬＶＱＴＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＮＳＬＹＷＹＦＤＬＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳ（配列番号６４３） In some embodiments, the anti-CTLA-4 scFv comprises the amino acid sequence:
ＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＳＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＳＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＳＧＧＳＴＩＴＳＹＮＶＹＹＴＫＬＳＳＳＧＴＱＶＱＬＶＱＴＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＮＳＬＹＷＹＦＤＬＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳ（配列番号６４３）

いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ－４ ｓｃＦｖは、配列番号６４３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一であるアミノ酸配列を含む。 In some embodiments, the anti-CTLA-4 scFv comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 643 and at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% It includes amino acid sequences that are 10% or more identical.

いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３ε ｓｃＦｖは、次記アミノ酸配列を含む：
ＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＳＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹＴＭＨＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＳＲＧＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＴＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＹＹＤＤＨＹＣＬＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＮＷＹＱＱＫＳＧＴＳＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＡＨＦＲＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＧＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＮＲ（配列番号６４４） In some embodiments, the anti-CD3ε scFv comprises the following amino acid sequence:
ＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＳＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹＴＭＨＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＳＲＧＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＴＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＹＹＤＤＨＹＣＬＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＮＷＹＱＱＫＳＧＴＳＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＡＨＦＲＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＧＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＮＲ（配列番号６４４）

いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３ε ｓｃＦｖは、配列番号６４４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて同一であるアミノ酸配列を含む。 In some embodiments, the anti-CD3ε scFv is at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or It includes amino acid sequences beyond which it is identical.

いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、１つもしくは複数のＴ細胞、１つもしくは複数のＮＫ細胞および／または１つもしくは複数のマクロファージの結合に特異的である。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１６ａ、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３２、ＣＤ５６、ＣＤ１３７、ＣＴＬＡ－４、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳ、ＬＡＧ３、ＮＫＧ２Ｄ、ＯＸ４０、ＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３またはＶＩＳＴＡからなる群より選択される標的の結合に特異的である。 In some embodiments, the scFv is specific for binding one or more T cells, one or more NK cells and/or one or more macrophages. In some embodiments, the scFv is B7-H4, BTLA, CD3, CD4, CD8, CD16a, CD25, CD27, CD28, CD32, CD56, CD137, CTLA-4, GITR, HVEM, ICOS, LAG3, NKG2D, Specific for binding a target selected from the group consisting of OX40, PD-1, TIGIT, TIM3 or VISTA.

いくつかの実施形態では、多重特異性抗体／活性化可能抗体はまた、ＡＢにコンジュゲートされた薬剤を含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、治療薬である。いくつかの実施形態では、薬剤は、抗腫瘍薬である。いくつかの実施形態では、薬剤は、毒素またはそのフラグメントである。いくつかの実施形態では、薬剤は、リンカーを介して多重特異性抗体／活性化可能抗体にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、薬剤は、切断可能リンカーを介してＡＢにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、リンカーは、切断可不能リンカーである。いくつかの実施形態では、薬剤は、微小管阻害剤である。いくつかの実施形態では、薬剤は、ＤＮＡアルキル化剤またはＤＮＡ挿入剤などの核酸損傷剤、または他のＤＮＡ損傷剤である。いくつかの実施形態では、リンカーは、切断可能リンカーである。いくつかの実施形態では、薬剤は、表Ｅに列挙された群から選択される薬剤である。いくつかの実施形態では、薬剤は、ドラスタチンである。いくつかの実施形態では、薬剤は、オーリスタチンまたはその誘導体である。いくつかの実施形態では、薬剤は、オーリスタチンＥまたはその誘導体である。いくつかの実施形態では、薬剤は、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）である。いくつかの実施形態では、薬剤は、モノメチルオーリスタチンＤ（ＭＭＡＤ）である。いくつかの実施形態では、薬剤は、メイタンシノイドまたはメイタンシノイド誘導体である。いくつかの実施形態では、薬剤は、ＤＭ１またはＤＭ４である。いくつかの実施形態では、薬剤は、デュオカルマイシンまたはその誘導体である。いくつかの実施形態では、薬剤は、カリケアマイシンまたはその誘導体である。いくつかの実施形態では、薬剤は、ピロロベンゾジアゼピンである。いくつかの実施形態では、薬剤は、ピロロベンゾジアゼピン二量体である。 In some embodiments, the multispecific/activatable antibodies also include agents conjugated to ABs. In some embodiments, the drug is a therapeutic agent. In some embodiments, the drug is an antineoplastic drug. In some embodiments, the agent is a toxin or fragment thereof. In some embodiments, the agent is conjugated to the multispecific/activatable antibody via a linker. In some embodiments, agents are conjugated to ABs via cleavable linkers. In some embodiments, the linker is a non-cleavable linker. In some embodiments, the agent is a microtubule inhibitor. In some embodiments, the agent is a nucleic acid damaging agent, such as a DNA alkylating agent or DNA intercalating agent, or other DNA damaging agent. In some embodiments, the linker is a cleavable linker. In some embodiments, the drug is a drug selected from the group listed in Table E. In some embodiments, the drug is dolastatin. In some embodiments, the agent is an auristatin or derivative thereof. In some embodiments, the agent is auristatin E or a derivative thereof. In some embodiments, the drug is monomethylauristatin E (MMAE). In some embodiments, the drug is monomethylauristatin D (MMAD). In some embodiments, the agent is a maytansinoid or maytansinoid derivative. In some embodiments, the drug is DM1 or DM4. In some embodiments, the drug is a duocarmycin or derivative thereof. In some embodiments, the drug is a calicheamicin or derivative thereof. In some embodiments, the drug is a pyrrolobenzodiazepine. In some embodiments, the drug is a pyrrolobenzodiazepine dimer.

いくつかの実施形態では、多重特異性抗体／活性化可能抗体はまた、検出可能な部分を含む。いくつかの実施形態では、検出可能な部分は、診断薬である。 In some embodiments, the multispecific/activatable antibody also comprises a detectable moiety. In some embodiments, the detectable moiety is a diagnostic agent.

いくつかの実施形態では、多重特異性抗体／活性化可能抗体は天然では、１つまたは複数のジスルフィド結合を含む。いくつかの実施形態では、多重特異性活性化可能抗体は、１つまたは複数のジスルフィド結合を含むように操作できる。 In some embodiments, a multispecific/activatable antibody naturally comprises one or more disulfide bonds. In some embodiments, multispecific activatable antibodies can be engineered to contain one or more disulfide bonds.

本開示はまた、本明細書で記載の多重特異性抗体／活性化可能抗体をコードする単離された核酸分子、およびこれらの単離された核酸配列を含むベクターを提供する。本開示は、抗体／活性化可能抗体の発現をもたらす条件下で細胞を培養することにより多重特異性抗体／活性化可能抗体を産生する方法を提供し、細胞は、そのような核酸分子を含む。いくつかの実施形態では、細胞は、そのようなベクターを含む。 The disclosure also provides isolated nucleic acid molecules encoding the multispecific/activatable antibodies described herein, and vectors containing these isolated nucleic acid sequences. The present disclosure provides methods of producing multispecific antibodies/activatable antibodies by culturing cells under conditions conducive to expression of the antibodies/activatable antibodies, the cells comprising such nucleic acid molecules . In some embodiments the cell comprises such a vector.

本開示はまた、（ａ）多重特異性抗体の発現をもたらす条件下で多重特異性抗体をコードする核酸構築物を含む細胞を培養すること、により本開示の多重特異性ＣＤ４７抗体を製造する方法を提供する。 The disclosure also provides a method of producing a multispecific CD47 antibody of the disclosure by (a) culturing a cell containing a nucleic acid construct encoding the multispecific antibody under conditions conducive to expression of the multispecific antibody. offer.

本開示はまた、（ａ）多重特異性活性化可能抗体の発現をもたらす条件下で多重特異性活性化可能抗体をコードする核酸構築物を含む細胞を培養すること、および（ｂ）多重特異性活性化可能抗体を回収すること、により本開示の多重特異性活性化可能ＣＤ４７抗体を製造する方法を提供する。好適なＡＢ、ＭＭ、および／またはＣＭは、本明細書で開示されるいずれかのＡＢ、ＭＭ、および／またはＣＭを含む。 The disclosure also provides (a) culturing a cell containing a nucleic acid construct encoding a multispecific activatable antibody under conditions conducive to expression of the multispecific activatable antibody, and (b) A method of producing a multispecific activatable CD47 antibody of the present disclosure is provided by recovering the activatable antibody. Suitable AB, MM and/or CM include any AB, MM and/or CM disclosed herein.

本開示はまた、少なくとも、第１の標的または第１のエピトープを特異的に結合する第１の抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ１）および第２の標的または第２のエピトープを特異的に結合する第２の抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ２）を含む、多重特異性活性化可能抗体および／または多重特異性活性化可能抗体組成物を提供し、少なくともＡＢ１はマスキング部分（ＭＭ１）に、ＭＭ１のカップリングがその標的を結合するＡＢ１の能力を低減させるようにカップリングされるか、または他の方法で付着される。いくつかの実施形態では、ＭＭ１は、プロテアーゼ、例えば対象における治療部位または診断部位でＡＢ１の標的と共局在するプロテアーゼの基質を含む第１の切断可能部分（ＣＭ１）配列を介してＡＢ１にカップリングされる。本明細書において提供される多重特異性活性化可能抗体は、循環中で安定であり、治療および／または診断の意図される部位で活性化されるが、しかし正常な、すなわち健康な組織中で活性化されず、活性化される場合、その対応する修飾されていない多重特異性抗体に少なくとも匹敵する、ＡＢ１の標的への結合を示す。好適なＡＢ、ＭＭ、および／またはＣＭは、本明細書で開示されるいずれかのＡＢ、ＭＭ、および／またはＣＭを含む。 The disclosure also provides at least a first antibody or antigen-binding fragment thereof (AB1) that specifically binds a first target or first epitope and a second target or second epitope that specifically binds A multispecific activatable antibody and/or multispecific activatable antibody composition is provided, comprising a second antibody or antigen-binding fragment thereof (AB2), wherein at least AB1 is a masking moiety (MM1); It is coupled or otherwise attached such that the coupling reduces AB1's ability to bind its target. In some embodiments, MM1 is coupled to AB1 via a first cleavable moiety (CM1) sequence that includes a substrate for a protease, e.g., a protease that co-localizes with a target of AB1 at a therapeutic or diagnostic site in a subject. be ringed. The multispecific activatable antibodies provided herein are stable in circulation and activated at the intended site of treatment and/or diagnosis, but in normal, i.e., healthy tissue. It shows binding of AB1 to its target that is at least comparable to its corresponding unmodified multispecific antibody when it is not activated and when activated. Suitable AB, MM and/or CM include any AB, MM and/or CM disclosed herein.

本開示はまた、少なくとも、標的を特異的に結合する第１の抗体または抗体フラグメント（ＡＢ１）および第２の抗体または抗体フラグメント（ＡＢ２）を含む多重特異性活性化可能抗体を含む組成物および方法を提供し、多重特異性活性化可能抗体における少なくとも第１のＡＢは、その標的を結合するＡＢ１の能力を低下させるマスキング部分（ＭＭ１）にカップリングされる。いくつかの実施形態では、各ＡＢは、各標的に対するその対応するＡＢの能力を低減するＭＭにカップリングされる。例えば、多重特異性活性化可能抗体の実施形態では、ＡＢ１は、その標的を結合するＡＢ１の能力を低減する第１のマスキング部分（ＭＭ１）にカップリングされ、ＡＢ２は、その標的を結合するＡＢ２の能力を低減する第２のマスキング部分（ＭＭ２）にカップリングされる。いくつかの実施形態では、多重特異性活性化可能抗体は、２つを超えるＡＢ領域を含み、そのような実施形態では、活性化可能抗体の各ＡＢについて、ＡＢ１は、その標的を結合するＡＢ１の能力を低減する第１のマスキング部分（ＭＭ１）にカップリングされ、ＡＢ２は、その標的を結合するＡＢ２の能力を低減する第２のマスキング部分（ＭＭ２）にカップリングされ、ＡＢ３は、その標的を結合するＡＢ３の能力を低減する第３のマスキング部分（ＭＭ３）にカップリングされる、等々である。好適なＡＢ、ＭＭ、および／またはＣＭは、本明細書で開示されるいずれかのＡＢ、ＭＭ、および／またはＣＭを含む。 The disclosure also provides compositions and methods comprising at least a multispecific activatable antibody comprising a first antibody or antibody fragment (AB1) and a second antibody or antibody fragment (AB2) that specifically binds a target and at least the first AB in the multispecific activatable antibody is coupled to a masking moiety (MM1) that reduces the ability of AB1 to bind its target. In some embodiments, each AB is coupled to an MM that reduces the ability of its corresponding AB to each target. For example, in a multispecific activatable antibody embodiment, AB1 is coupled to a first masking moiety (MM1) that reduces the ability of AB1 to bind its target, and AB2 is an AB2 is coupled to a second masking portion (MM2) that reduces the ability of In some embodiments, a multispecific activatable antibody comprises more than two AB regions, and in such embodiments, for each AB of the activatable antibody, AB1 AB2 is coupled to a second masking moiety (MM2) that reduces the ability of AB2 to bind its target, and AB3 is coupled to a second masking moiety (MM2) that reduces the ability of AB2 to bind its target is coupled to a third masking moiety (MM3) which reduces the ability of AB3 to bind , and so on. Suitable AB, MM and/or CM include any AB, MM and/or CM disclosed herein.

いくつかの実施形態では、多重特異性活性化可能抗体は、プロテアーゼの基質である少なくとも１つの切断可能部分（ＣＭ）をさらに含み、ＣＭは、ＡＢにＭＭを連結する。例えば、いくつかの実施形態では、多重特異性活性化可能抗体は、少なくとも、標的を特異的に結合する第１の抗体または抗体フラグメント（ＡＢ１）および第２の抗体または抗体フラグメント（ＡＢ２）を含み、多重特異性活性化可能抗体における少なくとも第１のＡＢは、その標的を結合するＡＢ１の能力を低下させるマスキング部分（ＭＭ１）に第１の切断可能部分（ＣＭ１）を介してカップリングされる。いくつかの二重特異性の活性化可能抗体の実施形態では、ＡＢ１は、ＭＭ１にＣＭ１を介してカップリングされ、ＡＢ２は、その標的を結合するＡＢ２の能力を低下させる第２のマスキング部分（ＭＭ２）に第２の切断可能部分（ＣＭ２）を介してカップリングされる。いくつかの実施形態では、多重特異性活性化可能抗体は、２つを超えるＡＢ領域を含み、これらの実施形態のいくつかにおいて、多重特異性活性化可能抗体における各ＡＢについて、ＡＢ１は、ＭＭ１にＣＭ１を介してカップリングされ、ＡＢ２は、ＭＭ２にＣＭ２を介してカップリングされ、ＡＢ３は、その標的を結合するＡＢ３の能力を低下させる第３のマスキング部分（ＭＭ３）に第３の切断可能部分（ＣＭ３）を介してカップリングされる、などである。好適なＡＢ、ＭＭ、および／またはＣＭは、本明細書で開示されるいずれかのＡＢ、ＭＭ、および／またはＣＭを含む。 In some embodiments, the multispecific activatable antibody further comprises at least one cleavable moiety (CM) that is a substrate for a protease, the CM linking the MM to the AB. For example, in some embodiments, a multispecific activatable antibody comprises at least a first antibody or antibody fragment (AB1) and a second antibody or antibody fragment (AB2) that specifically binds a target. , at least the first AB in the multispecific activatable antibody is coupled via a first cleavable moiety (CM1) to a masking moiety (MM1) that reduces the ability of AB1 to bind its target. In some bispecific activatable antibody embodiments, AB1 is coupled to MM1 through CM1, and AB2 carries a second masking moiety that reduces AB2's ability to bind its target ( MM2) via a second cleavable moiety (CM2). In some embodiments, the multispecific activatable antibody comprises more than two AB regions, and in some of these embodiments, for each AB in the multispecific activatable antibody, AB1 is MM1 AB2 is coupled to MM2 via CM2 and AB3 is cleavable to a third masking moiety (MM3) that reduces the ability of AB3 to bind its target. coupled via portion (CM3), and so on. Suitable AB, MM and/or CM include any AB, MM and/or CM disclosed herein.

非結合性立体部分または非結合性立体部分の結合パートナーを有する活性化可能抗体
本開示はまた、非結合性立体部分（ＮＢ）または非結合性立体部分に対する結合パートナー（ＢＰ）を含む活性化可能抗体を提供し、ＢＰは、活性化可能抗体にＮＢを動員するか、あるいは誘引する。本明細書に提供される活性化可能抗体は、例えば、非結合性立体部分（ＮＢ）、切断可能リンカー（ＣＬ）および標的を結合する抗体または抗体フラグメント（ＡＢ）を含む活性化可能抗体； 非結合性立体部分に対する結合パートナー（ＢＰ）、ＣＬおよびＡＢを含む活性化可能抗体； およびそこへＮＢが動員されているＢＰ、ＣＬ、および標的を結合するＡＢを含む、活性化可能抗体を包含する。ＮＢが活性化可能抗体のＣＬおよびＡＢに共有的に連結されるか、または活性化可能抗体のＣＬおよびＡＢに共有的に連結されるＢＰとの相互作用により結合される活性化可能抗体は、本明細書で「ＮＢを含有する活性化可能抗体」と呼ばれる。活性化可能または切替可能とは、活性化可能抗体が阻害された、マスクされた、または非切断の状態にある場合、標的への結合の第１のレベル（第１のコンフォメーション）を、および阻害されない、マスクされない、および／または切断された状態にある場合、標的への結合の第２のレベル（すなわち、第２のコンフォメーション）を示し、標的結合の第２のレベルは、結合の第１のレベルよりも大きいことを意味する。活性化可能抗体組成物は、従来の抗体治療薬と比べて、増大された生物学的利用能およびさらに好ましい生体内分布を示し得る。 Activatable Antibodies Having Non-Binding Steric Portions or Binding Partners of Non-Binding Steric Portions The present disclosure also includes activatable antibodies comprising non-binding steric portions (NB) or binding partners to the non-binding steric portions (BP). Providing antibodies, BPs recruit or attract NBs to activatable antibodies. The activatable antibodies provided herein include, for example, an activatable antibody comprising a non-binding steric portion (NB), a cleavable linker (CL) and a target-binding antibody or antibody fragment (AB); activatable antibodies comprising a binding partner (BP) for the binding steric moiety, CL and AB; and activatable antibodies comprising BP to which NB is recruited, CL and AB binding a target. . activatable antibody bound by interaction with BP covalently linked to CL and AB of the activatable antibody or NB covalently linked to CL and AB of the activatable antibody Referred to herein as "activatable antibodies containing NBs". Activatable or switchable refers to a first level of binding to the target (first conformation) when the activatable antibody is in an inhibited, masked, or uncleaved state, and When in an uninhibited, unmasked, and/or cleaved state, it exhibits a second level of binding to the target (i.e., a second conformation), wherein the second level of target binding is the second level of binding. It means greater than 1 level. An activatable antibody composition can exhibit increased bioavailability and more favorable biodistribution compared to conventional antibody therapeutics.

いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、ＡＢが非治療部位および／または非診断部位への結合からマスクされないかまたはそれ以外の方法で阻害されない場合そのような部位での結合からさもなければ生じ得る、毒性および／または有害な副作用の低減をもたらす。 In some embodiments, the activatable antibody is otherwise prevented from binding at non-therapeutic and/or non-diagnostic sites unless the AB is masked or otherwise inhibited from binding to such sites. resulting in reduced toxicity and/or adverse side effects that may otherwise occur.

非結合性立体部分（ＮＢ）を含むＣＤ４７活性化可能抗体は、国際公開第２０１３／１９２５４６号に記載された方法を用いて作製でき、この特許の内容は参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。 CD47 activatable antibodies comprising a non-binding steric portion (NB) can be made using methods described in WO2013/192546, the contents of which are incorporated herein by reference in their entirety. be done.

抗体、および活性化可能抗体の治療的使用
本発明は、それを必要としている対象に本明細書で記載のＣＤ４７抗体、コンジュゲートされたＣＤ４７抗体、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体の治療有効量を投与することにより、対象においてＣＤ４７媒介疾患を予防する、疾患の進行を遅らせる、疾患を治療する、疾患の症状を緩和する、あるいは疾患を改善する方法を提供する。 Antibodies, and Therapeutic Uses of Activatable Antibodies Methods are provided for preventing, slowing progression of, treating, alleviating symptoms of, or ameliorating a CD47-mediated disease in a subject by administering a therapeutically effective amount of an activatable CD47 antibody. do.

ＣＤ４７媒介疾患を予防する、疾患の進行を遅らせる、疾患を治療する、疾患の症状を緩和する、あるいは疾患を改善するために用いるＣＤ４７抗体、コンジュゲートされたＣＤ４７抗体、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体が提供される。 CD47 antibodies, conjugated CD47 antibodies, activatable CD47 antibodies and/or CD47 antibodies used to prevent, slow disease progression, treat, alleviate symptoms of, or ameliorate CD47-mediated disease Alternatively, conjugated activatable CD47 antibodies are provided.

本発明はまた、それを必要としている対象に本明細書で記載のＣＤ４７抗体、コンジュゲートされたＣＤ４７抗体、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体の治療有効量を投与することにより、対象において癌を予防する、癌の進行を遅らせる、癌を治療する、癌の症状を緩和する、あるいは癌を改善する方法を提供する。 The present invention also provides therapeutically effective amounts of the CD47 antibodies, conjugated CD47 antibodies, activatable CD47 antibodies and/or conjugated activatable CD47 antibodies described herein to a subject in need thereof. Methods of preventing cancer, slowing progression of cancer, treating cancer, alleviating symptoms of cancer, or ameliorating cancer in a subject by administering are provided.

癌を予防する、癌の進行を遅らせる、癌を治療する、癌の症状を緩和する、あるいは癌を改善するために用いるＣＤ４７抗体、コンジュゲートされたＣＤ４７抗体、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体が提供される。 CD47 antibodies, conjugated CD47 antibodies, activatable CD47 antibodies and/or conjugates used to prevent cancer, slow cancer progression, treat cancer, alleviate symptoms of cancer, or ameliorate cancer. Gated, activatable CD47 antibodies are provided.

本発明はまた、ＣＤ４７を結合する抗体／活性化可能抗体、特に結合し少なくとも１種のＣＤ４７および／またはＣＤ４７媒介シグナル伝達の生物学的活性を中和する、あるいは阻害する活性化可能抗体を用いて、対象においてＣＤ４７の異常な発現および／または活性に関連した症状を治療する、予防する、および／または症状の発症もしくは進行を遅らせる、あるいは症状を緩和する方法を提供する。 The invention also employs antibodies/activatable antibodies that bind CD47, particularly activatable antibodies that bind and neutralize or inhibit at least one biological activity of CD47 and/or CD47-mediated signaling. Thus, methods of treating, preventing, and/or delaying the onset or progression of, or alleviating symptoms associated with aberrant expression and/or activity of CD47 in a subject are provided.

したがって、ＣＤ４７の異常な発現および／または活性に関連した症状を治療する、予防する、および／または症状の発症もしくは進行を遅らせる、症状を改善する、または症状を緩和するために用いるＣＤ４７を結合する抗体／活性化可能抗体が提供される。 Thus, binding CD47 for use in treating, preventing, and/or delaying the onset or progression of, ameliorating, or alleviating symptoms associated with aberrant expression and/or activity of CD47 Antibodies/activatable antibodies are provided.

本発明はまた、ＣＤ４７を結合する抗体／活性化可能抗体、特にＣＤ４７を発現しているまたはＣＤ４７を異常に発現している細胞を結合する、標的化する、中和する、死滅させる、あるいはその少なくとも１種の生物学的活性を阻害する活性化可能抗体を用いて、対象においてＣＤ４７を発現しているまたはＣＤ４７を異常に発現している細胞の存在、成長、増殖、転移、および／または活性に関連した症状を治療する、予防する、および／または症状の発症もしくは進行を遅らせる、あるいは症状を緩和する方法を提供する。 The present invention also provides antibodies/activatable antibodies that bind CD47, particularly those that bind, target, neutralize, kill, or otherwise inhibit cells expressing CD47 or aberrantly expressing CD47. presence, growth, proliferation, metastasis, and/or activity of cells expressing or abnormally expressing CD47 in a subject using an activatable antibody that inhibits at least one biological activity methods of treating, preventing and/or delaying the onset or progression of, or alleviating symptoms associated with

本発明はまた、ＣＤ４７を結合する抗体／活性化可能抗体、特にＣＤ４７を発現している細胞を結合する、標的化する、中和する、死滅させる、あるいはその少なくとも１種の生物学的活性を阻害する抗体／活性化可能抗体を用いて、対象においてＣＤ４７を発現している細胞の存在、成長、増殖、転移、および／または活性に関連した症状を治療する、予防する、および／または症状の発症もしくは進行を遅らせる、あるいは症状を緩和する方法を提供する。 The present invention also provides antibodies/activatable antibodies that bind CD47, particularly those that bind, target, neutralize, kill, or exhibit at least one biological activity thereof, cells expressing CD47. Using an inhibitory/activatable antibody to treat, prevent, and/or alleviate a condition associated with the presence, growth, proliferation, metastasis, and/or activity of CD47-expressing cells in a subject. To provide a method of delaying onset or progression or alleviating symptoms.

本発明はまた、ＣＤ４７を結合する抗体／活性化可能抗体、特にＣＤ４７を異常に発現している細胞を結合する、標的化する、中和する、死滅させる、あるいはその少なくとも１種の生物活性を阻害する抗体／活性化可能抗体を用いて、対象においてＣＤ４７を異常に発現している細胞の存在、成長、増殖、転移、および／または活性に関連した症状を治療する、予防する、および／または症状の発症もしくは進行を遅らせる、あるいは症状を緩和する方法を提供する。 The present invention also provides antibodies/activatable antibodies that bind CD47, particularly those that bind, target, neutralize, kill, or exhibit at least one biological activity thereof, cells that aberrantly express CD47. Using inhibitory/activatable antibodies to treat, prevent, and/or conditions associated with the presence, growth, proliferation, metastasis, and/or activity of cells aberrantly expressing CD47 in a subject To provide a method for delaying the onset or progression of symptoms or for alleviating symptoms.

ＣＤ４７は、非限定的な例として、腺癌、胆管（胆道）癌、膀胱癌、乳癌、例えば、トリプルネガティブ乳癌およびＨｅｒ２陰性乳癌などの、種々の癌；カルチノイド癌；子宮頸癌；胆管細胞癌；結腸直腸癌；子宮内膜癌；食道癌；神経膠腫；頭頸部癌、例えば、頭頸部扁平上皮癌；白血病；肝臓癌；肺癌、例えば、ＮＳＣＬＣ、ＳＣＬＣ；リンパ腫；黒色腫；中咽頭癌；卵巣癌；膵臓癌；前立腺癌、例えば、転移性去勢抵抗性前立腺癌；腎癌；皮膚癌；扁平上皮癌、胃癌；精巣癌；甲状腺癌；および尿路上皮癌において発現されることが知られている。 CD47 is useful in a variety of cancers, including, but not limited to, adenocarcinoma, bile duct (biliary) carcinoma, bladder cancer, breast cancer, e.g., triple-negative breast cancer and Her2-negative breast cancer; carcinoid cancer; cervical cancer; esophageal cancer; glioma; head and neck cancer, such as head and neck squamous cell carcinoma; leukemia; liver cancer; lung cancer, such as NSCLC, SCLC; ovarian cancer; pancreatic cancer; prostate cancer, such as metastatic castration-resistant prostate cancer; renal cancer; skin cancer; It is

いくつかの実施形態では、癌は、ＣＤ４７発現腫瘍に関連している。いくつかの実施形態では、癌は、ＣＤ４７発現腫瘍に起因する。 In some embodiments, the cancer is associated with a CD47-expressing tumor. In some embodiments, the cancer results from a CD47-expressing tumor.

これらの方法および使用の実施形態のいずれかにおいて用いられるＣＤ４７抗体、コンジュゲートされたＣＤ４７抗体、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体は、任意の疾患の段階で投与されてれよい。例えば、そのようなＣＤ４７抗体、コンジュゲートされたＣＤ４７抗体、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体は、早期～転移の、任意の癌の段階に罹患している患者に投与されてれよい。対象および患者という用語は、本明細書で同義に用いられる。 The CD47 antibody, conjugated CD47 antibody, activatable CD47 antibody and/or conjugated activatable CD47 antibody used in any of these method and use embodiments may be administered at any disease stage. be done. For example, such CD47 antibodies, conjugated CD47 antibodies, activatable CD47 antibodies and/or conjugated activatable CD47 antibodies may be used in patients suffering from any stage of cancer, early to metastatic. may be administered to The terms subject and patient are used interchangeably herein.

いくつかの実施形態では、対象はヒト、非ヒト霊長類、伴侶動物（例えば、ネコ、イヌ、ウマ）、家畜、作業用動物、または動物園の動物などの、哺乳動物である。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。いくつかの実施形態では、対象は伴侶動物である。いくつかの実施形態では、対象は、獣医師のケアを受けている動物である。 In some embodiments, the subject is a mammal, such as a human, non-human primate, companion animal (eg, cat, dog, horse), farm animal, working animal, or zoo animal. In some embodiments, the subject is human. In some embodiments, the subject is a companion animal. In some embodiments, the subject is an animal under veterinary care.

ＣＤ４７抗体、コンジュゲートされたＣＤ４７抗体、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体ならびにその治療用製剤は、異常なＣＤ４７発現および／または活性に関連する疾患または障害に罹患している、または感受性が高い対象に投与される。異常なＣＤ４７発現および／または活性に関連する疾患または障害に罹患しているまたは感受性が高い対象は、当技術分野において既知の種々の方法のいずれかを用いて特定される。例えば、癌または他の新生物状態に罹患している対象は、健康状態を評価するための身体検査ならびに血液、尿および／または便分析などの種々の臨床検査および／または検査室検査のいずれかを用いて特定される。例えば、炎症および／または炎症性障害に罹患している対象は、健康状態を評価するための身体検査および／または体液分析、例えば血液、尿および／または便分析などの種々の臨床検査および／または検査室検査のいずれかを用いて特定される。 CD47 antibodies, conjugated CD47 antibodies, activatable CD47 antibodies and/or conjugated activatable CD47 antibodies and therapeutic formulations thereof are used to treat diseases or disorders associated with aberrant CD47 expression and/or activity. administered to subjects who are or are susceptible. Subjects suffering from or susceptible to diseases or disorders associated with aberrant CD47 expression and/or activity are identified using any of a variety of methods known in the art. For example, subjects suffering from cancer or other neoplastic conditions undergo any of a physical examination and various clinical and/or laboratory tests such as blood, urine and/or stool analysis to assess health status. is specified using For example, a subject suffering from inflammation and/or an inflammatory disorder may undergo a physical examination and/or body fluid analysis, e.g., blood, urine and/or stool analysis, and/or various laboratory tests to assess health status. Identified using any laboratory test.

異常なＣＤ４７発現および／または活性に関連する疾患または障害に罹患している患者へのＣＤ４７抗体、コンジュゲートされたＣＤ４７抗体、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体の投与は、種々の検査室または臨床の目的のいずれかが達成される場合、成功と見なされる。例えば、異常なＣＤ４７発現および／または活性に関連する疾患または障害に罹患している患者へのＣＤ４７抗体、コンジュゲートされたＣＤ４７抗体、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体の投与は、疾患または障害に関連する症状の１つまたは複数が軽減する、低減する、阻害される、または、進行しない、すなわち、さらに悪い状態に進行しない場合、成功と見なされる。異常なＣＤ４７発現および／または活性に関連する疾患または障害に罹患している患者へのＣＤ４７抗体、コンジュゲートされたＣＤ４７抗体、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体の投与は、疾患または障害が寛解期に入る場合、または進行しない、すなわちさらに悪い状態に進行しない場合、成功と見なされる。 CD47 antibodies, conjugated CD47 antibodies, activatable CD47 antibodies and/or conjugated activatable CD47 antibodies to patients suffering from diseases or disorders associated with aberrant CD47 expression and/or activity Administration is considered successful if any of various laboratory or clinical objectives are achieved. For example, CD47 antibodies, conjugated CD47 antibodies, activatable CD47 antibodies and/or conjugated activatable CD47 to patients suffering from diseases or disorders associated with aberrant CD47 expression and/or activity Administration of an antibody is considered successful if one or more of the symptoms associated with the disease or disorder are alleviated, reduced, inhibited, or do not progress, ie, do not progress to a worse condition. CD47 antibodies, conjugated CD47 antibodies, activatable CD47 antibodies and/or conjugated activatable CD47 antibodies to patients suffering from diseases or disorders associated with aberrant CD47 expression and/or activity Administration is considered successful if the disease or disorder goes into remission or does not progress or worsen.

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７抗体、コンジュゲートされたＣＤ４７抗体、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体ならびにその治療用製剤は、癌または他の新生物に罹患している対象などの、疾患または障害に罹患しているまたは感受性が高い対象に投与され、対象の疾患細胞はＣＤ４７を発現している。いくつかの実施形態では、疾患細胞は、異常なＣＤ４７発現および／または活性に関連する。いくつかの実施形態では、疾患細胞は、正常なＣＤ４７発現および／または活性に関連する。対象の疾患細胞がＣＤ４７を発現する、疾患または障害に罹患している、または罹患しやすい対象は、当該技術分野において既知の種々の方法のいずれかを用いて特定される。例えば、癌または他の新生物状態に罹患している対象は、健康状態を評価するための身体検査ならびに血液、尿および／または便分析などの種々の臨床検査および／または検査室検査のいずれかを用いて特定される。例えば、炎症および／または炎症性障害に罹患している対象は、健康状態を評価するための身体検査および／または体液分析、例えば血液、尿および／または便分析などの種々の臨床検査および／または検査室検査のいずれかを用いて特定される。 In some embodiments, the CD47 antibody, conjugated CD47 antibody, activatable CD47 antibody and/or conjugated activatable CD47 antibody and therapeutic formulations thereof are associated with cancer or other neoplasms. is administered to a subject suffering from or susceptible to a disease or disorder, such as a subject with disease, and the subject's diseased cells express CD47. In some embodiments, diseased cells are associated with abnormal CD47 expression and/or activity. In some embodiments, diseased cells are associated with normal CD47 expression and/or activity. Subjects suffering from or susceptible to a disease or disorder whose disease cells express CD47 are identified using any of a variety of methods known in the art. For example, subjects suffering from cancer or other neoplastic conditions undergo any of a physical examination and various clinical and/or laboratory tests such as blood, urine and/or stool analysis to assess health status. is specified using For example, a subject suffering from inflammation and/or an inflammatory disorder may undergo a physical examination and/or body fluid analysis, e.g., blood, urine and/or stool analysis, and/or various laboratory tests to assess health status. Identified using any laboratory test.

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７抗体、コンジュゲートされたＣＤ４７抗体、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体ならびにその治療用製剤は、癌または他の新生物に罹患している対象などの、ＣＤ４７を発現する細胞またはそのような細胞の存在、成長、増殖、転移および／または活性に関連する疾患または障害に罹患しているまたは感受性が高い対象に投与される。いくつかの実施形態では、細胞は、異常なＣＤ４７発現および／または活性に関連する。いくつかの実施形態では、細胞は、正常なＣＤ４７発現および／または活性に関連する。ＣＤ４７を発現する細胞に関連する疾患または障害に罹患しているまたは感受性が高い対象は、当技術分野において既知の種々の方法のいずれかを用いて特定される。例えば、癌または他の新生物状態に罹患している対象は、健康状態を評価するための身体検査ならびに血液、尿および／または便分析などの種々の臨床検査および／または検査室検査のいずれかを用いて特定される。例えば、炎症および／または炎症性障害に罹患している対象は、健康状態を評価するための身体検査および／または体液分析、例えば血液、尿および／または便分析などの種々の臨床検査および／または検査室検査のいずれかを用いて特定される。 In some embodiments, the CD47 antibody, conjugated CD47 antibody, activatable CD47 antibody and/or conjugated activatable CD47 antibody and therapeutic formulations thereof are associated with cancer or other neoplasms. Subjects suffering from or susceptible to cells expressing CD47 or diseases or disorders associated with the presence, growth, proliferation, metastasis and/or activity of such cells, such as subjects with In some embodiments, the cells are associated with aberrant CD47 expression and/or activity. In some embodiments, the cells are associated with normal CD47 expression and/or activity. Subjects suffering from or susceptible to a disease or disorder associated with cells expressing CD47 are identified using any of a variety of methods known in the art. For example, subjects suffering from cancer or other neoplastic conditions undergo any of a physical examination and various clinical and/or laboratory tests such as blood, urine and/or stool analysis to assess health status. is specified using For example, a subject suffering from inflammation and/or an inflammatory disorder may be subjected to various laboratory tests such as physical examination and/or body fluid analysis, e.g., blood, urine and/or stool analysis, and/or Identified using any laboratory test.

ＣＤ４７を発現する細胞に関連する疾患または障害に罹患している患者へのＣＤ４７抗体、コンジュゲートされたＣＤ４７抗体、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体の投与は、種々の検査室または臨床の目的のいずれかが達成される場合、成功と見なされる。例えば、ＣＤ４７を発現する細胞に関連する疾患または障害に罹患している患者に対するＣＤ４７抗体、コンジュゲートされたＣＤ４７抗体、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体の投与は、疾患または障害に関連する症状の１つまたは複数が軽減する、低減する、阻害される、または進行しない、すなわちさらに悪い状態に進行しない場合、成功と見なされる。ＣＤ４７を発現する細胞に関連する疾患または障害に罹患している患者へのＣＤ４７抗体、コンジュゲートされたＣＤ４７抗体、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体の投与は、疾患または障害が寛解期に入る場合、または進行しない、すなわちさらに悪い状態に進行しない場合、成功と見なされる。 Administration of a CD47 antibody, a conjugated CD47 antibody, an activatable CD47 antibody and/or a conjugated activatable CD47 antibody to a patient suffering from a disease or disorder associated with cells expressing CD47 is A success is considered if any of the various laboratory or clinical objectives are achieved. For example, administration of a CD47 antibody, conjugated CD47 antibody, activatable CD47 antibody and/or conjugated activatable CD47 antibody to a patient suffering from a disease or disorder associated with cells expressing CD47 is , is considered successful if one or more of the symptoms associated with the disease or disorder are alleviated, reduced, inhibited, or do not progress, ie, do not progress to a worse condition. Administration of a CD47 antibody, a conjugated CD47 antibody, an activatable CD47 antibody and/or a conjugated activatable CD47 antibody to a patient suffering from a disease or disorder associated with cells expressing CD47 is Success is considered if the disease or disorder goes into remission or does not progress or worsen.

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７抗体、コンジュゲートされたＣＤ４７抗体、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体は、例えば、化学療法剤、抗炎症剤、および／または免疫抑制剤などの１種または複数種の追加の薬剤と組み合わせて治療中および／または治療後に投与される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７抗体、コンジュゲートされたＣＤ４７抗体、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体と追加の薬剤は、同時に投与される。例えば、ＣＤ４７抗体、コンジュゲートされたＣＤ４７抗体、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体と追加の薬剤は、単一の組成物中に処方されてよく、または２種もしくはそれ以上の別々の組成物として投与されてよい。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７抗体、コンジュゲートされたＣＤ４７抗体、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体と追加の薬剤は、連続して投与される。 In some embodiments, the CD47 antibody, conjugated CD47 antibody, activatable CD47 antibody and/or conjugated activatable CD47 antibody is administered to, for example, a chemotherapeutic agent, an anti-inflammatory agent, and/or an immunological agent. It is administered during and/or after treatment in combination with one or more additional agents, such as inhibitors. In some embodiments, the CD47 antibody, conjugated CD47 antibody, activatable CD47 antibody and/or conjugated activatable CD47 antibody and the additional agent are administered simultaneously. For example, the CD47 antibody, conjugated CD47 antibody, activatable CD47 antibody and/or conjugated activatable CD47 antibody and the additional agent may be formulated in a single composition, or two or may be administered as more separate compositions. In some embodiments, the CD47 antibody, conjugated CD47 antibody, activatable CD47 antibody and/or conjugated activatable CD47 antibody and the additional agent are administered sequentially.

本開示はまた、それを必要としている対象に治療有効量の本開示の抗体／コンジュゲートされた抗体／活性化可能抗体／コンジュゲートされた活性化可能抗体または本開示の抗体／コンジュゲートされた抗体／活性化可能抗体／コンジュゲートされた活性化可能抗体を含む医薬組成物を投与することを含む、疾患細胞がＣＤ４７を発現する障害または疾患を治療する、その症状を緩和する、またはその進行を遅らせる方法を提供する。いくつかの実施形態では、障害または疾患は、癌である。 The present disclosure also provides a subject in need thereof with a therapeutically effective amount of an antibody of the disclosure/conjugated antibody/activatable antibody/conjugated activatable antibody or antibody of the disclosure/conjugated Treating, alleviating symptoms of, or progression of a disorder or disease in which the diseased cells express CD47 comprising administering a pharmaceutical composition comprising the antibody/activatable antibody/conjugated activatable antibody provide a way to delay In some embodiments, the disorder or disease is cancer.

本開示はまた、それを必要としている対象に治療有効量の本開示の抗体／コンジュゲートされた抗体／活性化可能抗体／コンジュゲートされた活性化可能抗体または本開示の抗体／コンジュゲート抗体／活性化可能抗体／コンジュゲートされた活性化可能抗体を含む医薬組成物を投与することを含む、ＣＤ４７を発現する細胞に関連する障害または疾患を治療する、その症状を緩和する、またはその進行を遅らせる方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７を発現する細胞に関連する障害または疾患は、癌である。いくつかの実施形態では、癌は、腺癌、胆管（胆嚢）癌、膀胱癌、骨癌、乳癌、トリプルネガティブ乳癌、Ｈｅｒ２陰性乳癌、カルチノイド癌、子宮頸癌、胆管細胞癌、結腸直腸癌、結腸癌、子宮内膜癌、食道癌、神経膠腫、頭頸部癌、頭頸部扁平上皮癌、白血病、肝臓癌、肺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、リンパ腫、黒色腫、中咽頭癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、転移性去勢抵抗性前立腺癌、腎癌、肉腫、皮膚癌、扁平上皮癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、泌尿生殖器癌、または尿路上皮癌である。いくつかの実施形態では、哺乳動物ＣＤ４７の発現および／または活性は、異常である。いくつかの実施形態では、本方法は、追加の薬剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、治療薬である。 The present disclosure also provides a subject in need thereof with a therapeutically effective amount of an antibody of the disclosure/conjugated antibody/activatable antibody/conjugated activatable antibody or antibody/conjugated antibody of the disclosure. Treating, alleviating symptoms of, or halting the progression of disorders or diseases associated with cells expressing CD47 comprising administering an activatable antibody/pharmaceutical composition comprising a conjugated activatable antibody. Provide a way to delay. In some embodiments, the disorder or disease associated with cells expressing CD47 is cancer. In some embodiments, the cancer is adenocarcinoma, bile duct (gallbladder) cancer, bladder cancer, bone cancer, breast cancer, triple negative breast cancer, Her2 negative breast cancer, carcinoid cancer, cervical cancer, cholangiocellular carcinoma, colorectal cancer, Colon cancer, endometrial cancer, esophageal cancer, glioma, head and neck cancer, head and neck squamous cell carcinoma, leukemia, liver cancer, lung cancer, non-small cell lung cancer, small cell lung cancer, lymphoma, melanoma, oropharyngeal cancer, Ovarian cancer, pancreatic cancer, prostate cancer, metastatic castration-resistant prostate cancer, renal cancer, sarcoma, skin cancer, squamous cell carcinoma, gastric cancer, testicular cancer, thyroid cancer, urogenital cancer, or urothelial cancer. In some embodiments, mammalian CD47 expression and/or activity is aberrant. In some embodiments, the method includes administering additional agents. In some embodiments, the additional agent is a therapeutic agent.

本開示はまた、それを必要としている対象に治療有効量の本開示の抗体／コンジュゲートされた抗体／活性化可能抗体／コンジュゲートされた活性化可能抗体または本開示の抗体／コンジュゲートされた抗体／活性化可能抗体／コンジュゲートされた活性化可能抗体を含む医薬組成物を投与することを含む、哺乳動物ＣＤ４７を発現する細胞の成長、増殖または転移を阻害するまたは低減する方法を提供する。いくつかの実施形態では、哺乳動物ＣＤ４７の発現および／または活性は、異常である。いくつかの実施形態では、本方法は、追加の薬剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、治療薬である。 The present disclosure also provides a subject in need thereof with a therapeutically effective amount of an antibody of the disclosure/conjugated antibody/activatable antibody/conjugated activatable antibody or antibody of the disclosure/conjugated Methods of inhibiting or reducing growth, proliferation or metastasis of cells expressing mammalian CD47 comprising administering an antibody/activatable antibody/pharmaceutical composition comprising a conjugated activatable antibody are provided. . In some embodiments, mammalian CD47 expression and/or activity is aberrant. In some embodiments, the method includes administering additional agents. In some embodiments, the additional agent is a therapeutic agent.

本開示はまた、それを必要としている対象に治療有効量の本開示の抗体／コンジュゲートされた抗体／活性化可能抗体／コンジュゲートされた活性化可能抗体または本開示の抗体／コンジュゲートされた抗体／活性化可能抗体／コンジュゲートされた活性化可能抗体を含む医薬組成物を投与することを含む、哺乳動物ＣＤ４７に対する天然リガンドの結合を阻害する、遮断する、または防止する方法を提供する。いくつかの実施形態では、哺乳動物ＣＤ４７の発現および／または活性は、異常である。いくつかの実施形態では、本方法は、追加の薬剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、治療薬である。 The present disclosure also provides a subject in need thereof with a therapeutically effective amount of an antibody of the disclosure/conjugated antibody/activatable antibody/conjugated activatable antibody or antibody of the disclosure/conjugated Methods of inhibiting, blocking or preventing binding of a natural ligand to mammalian CD47 are provided comprising administering an antibody/activatable antibody/pharmaceutical composition comprising a conjugated activatable antibody. In some embodiments, mammalian CD47 expression and/or activity is aberrant. In some embodiments, the method includes administering additional agents. In some embodiments, the additional agent is a therapeutic agent.

本開示はまた、それを必要としている対象に治療有効量の本開示の抗体／コンジュゲートされた抗体／活性化可能抗体／コンジュゲートされた活性化可能抗体または本開示の抗体／コンジュゲートされた抗体／活性化可能抗体／コンジュゲートされた活性化可能抗体を含む医薬組成物を投与することを含む、疾患細胞がＣＤ４７を発現する障害または疾患を治療する、その症状を緩和する、またはその進行を遅らせる方法を提供する。いくつかの実施形態では、障害または疾患は、癌である。 The present disclosure also provides a subject in need thereof with a therapeutically effective amount of an antibody of the disclosure/conjugated antibody/activatable antibody/conjugated activatable antibody or antibody of the disclosure/conjugated Treating, alleviating symptoms of, or progression of a disorder or disease in which the diseased cells express CD47 comprising administering a pharmaceutical composition comprising the antibody/activatable antibody/conjugated activatable antibody provide a way to delay In some embodiments, the disorder or disease is cancer.

本開示はまた、それを必要としている対象に治療有効量の本開示の抗体／コンジュゲートされた抗体／活性化可能抗体／コンジュゲートされた活性化可能抗体または本開示の抗体／コンジュゲートされた抗体／活性化可能抗体／コンジュゲートされた活性化可能抗体を含む医薬組成物を投与することを含む、ＣＤ４７を発現する細胞に関連する障害または疾患を治療する、その症状を緩和する、またはその進行を遅らせる方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７を発現する細胞に関連する障害または疾患は、癌である。いくつかの実施形態では、癌は、腺癌、胆管（胆嚢）癌、膀胱癌、骨癌、乳癌、トリプルネガティブ乳癌、Ｈｅｒ２陰性乳癌、カルチノイド癌、子宮頸癌、胆管細胞癌、結腸直腸癌、結腸癌、子宮内膜癌、食道癌、神経膠腫、頭頸部癌、頭頸部扁平上皮癌、白血病、肝臓癌、肺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、リンパ腫、黒色腫、中咽頭癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、転移性去勢抵抗性前立腺癌、腎癌、肉腫、皮膚癌、扁平上皮癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、泌尿生殖器癌、または尿路上皮癌である。いくつかの実施形態では、哺乳動物ＣＤ４７の発現および／または活性は、異常である。いくつかの実施形態では、本方法は、追加の薬剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、治療薬である。 The present disclosure also provides a subject in need thereof with a therapeutically effective amount of an antibody of the disclosure/conjugated antibody/activatable antibody/conjugated activatable antibody or antibody of the disclosure/conjugated Treating, alleviating symptoms of, or treating a disorder or disease associated with cells expressing CD47 comprising administering a pharmaceutical composition comprising an antibody/activatable antibody/conjugated activatable antibody. Provide a way to slow progression. In some embodiments, the disorder or disease associated with cells expressing CD47 is cancer. In some embodiments, the cancer is adenocarcinoma, bile duct (gallbladder) cancer, bladder cancer, bone cancer, breast cancer, triple negative breast cancer, Her2 negative breast cancer, carcinoid cancer, cervical cancer, cholangiocellular carcinoma, colorectal cancer, Colon cancer, endometrial cancer, esophageal cancer, glioma, head and neck cancer, head and neck squamous cell carcinoma, leukemia, liver cancer, lung cancer, non-small cell lung cancer, small cell lung cancer, lymphoma, melanoma, oropharyngeal cancer, Ovarian cancer, pancreatic cancer, prostate cancer, metastatic castration-resistant prostate cancer, renal cancer, sarcoma, skin cancer, squamous cell carcinoma, gastric cancer, testicular cancer, thyroid cancer, urogenital cancer, or urothelial cancer. In some embodiments, mammalian CD47 expression and/or activity is aberrant. In some embodiments, the method includes administering additional agents. In some embodiments, the additional agent is a therapeutic agent.

本開示はまた、それを必要としている対象に治療有効量の本開示の抗体／コンジュゲートされた抗体／活性化可能抗体／コンジュゲートされた活性化可能抗体または本開示の抗体／コンジュゲートされた抗体／活性化可能抗体／コンジュゲートされた活性化可能抗体を含む医薬組成物を投与することを含む、哺乳動物ＣＤ４７を発現する細胞の成長、増殖または転移を阻害するまたは低減する方法を提供する。いくつかの実施形態では、哺乳動物ＣＤ４７の発現および／または活性は、異常である。いくつかの実施形態では、本方法は、追加の薬剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、治療薬である。 The present disclosure also provides a subject in need thereof with a therapeutically effective amount of an antibody of the disclosure/conjugated antibody/activatable antibody/conjugated activatable antibody or antibody of the disclosure/conjugated Methods of inhibiting or reducing growth, proliferation or metastasis of cells expressing mammalian CD47 comprising administering an antibody/activatable antibody/pharmaceutical composition comprising a conjugated activatable antibody are provided. . In some embodiments, mammalian CD47 expression and/or activity is aberrant. In some embodiments, the method includes administering additional agents. In some embodiments, the additional agent is a therapeutic agent.

本開示はまた、それを必要としている対象に治療有効量の本開示の抗体／コンジュゲートされた抗体／活性化可能抗体／コンジュゲートされた活性化可能抗体または本開示の抗体／コンジュゲートされた抗体／活性化可能抗体／コンジュゲートされた活性化可能抗体を含む医薬組成物を投与することを含む、哺乳動物ＣＤ４７に対する天然リガンドの結合を阻害する、遮断する、または防止する方法を提供する。いくつかの実施形態では、哺乳動物ＣＤ４７の発現および／または活性は、異常である。いくつかの実施形態では、本方法は、追加の薬剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、治療薬である。 The present disclosure also provides a subject in need thereof with a therapeutically effective amount of an antibody of the disclosure/conjugated antibody/activatable antibody/conjugated activatable antibody or antibody of the disclosure/conjugated Methods of inhibiting, blocking or preventing binding of a natural ligand to mammalian CD47 are provided comprising administering an antibody/activatable antibody/pharmaceutical composition comprising a conjugated activatable antibody. In some embodiments, mammalian CD47 expression and/or activity is aberrant. In some embodiments, the method includes administering additional agents. In some embodiments, the additional agent is a therapeutic agent.

処方
本開示による治療物質の投与は、改善された導入、送達、耐容性などを提供するよう製剤に組み込まれる、好適な担体、賦形剤および他の薬剤とともに投与されることが理解されよう。多数の適切な配合物を、すべての医薬品化学者に既知である処方書、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１５ｔｈ ｅｄ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９７５））、特に第８７章（Ｂｌａｕｇ、Ｓｅｙｍｏｕｒ）で見つけることができる。 これらの配合物としては、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、油、脂質、脂質（カチオン性またはアニオン性）含有ベシクル（リポフェクチン（商標）など）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油型および油中水型乳剤、カーボワックス乳剤（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、およびカーボワックス含有半固体混合物が挙げられる。前述の混合物はいずれも、配合物中の有効成分が配合によって不活化されずかつ配合物が投与経路に生理学的に適合しており許容可能であるという条件で、本開示による治療および治療法に適切であり得る。Ｂａｌｄｒｉｃｋ Ｐ．“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ：ｔｈｅ ｎｅｅｄ ｆｏｒ ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ ｇｕｉｄａｎｃｅ．” Ｒｅｇｕｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３２（２）：２１０－８（２０００），Ｗａｎｇ Ｗ．“Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｓｏｌｉｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ．” Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．２０３（１－２）：１－６０（２０００），Ｃｈａｒｍａｎ ＷＮ “Ｌｉｐｉｄｓ，ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ ｄｒｕｇｓ，ａｎｄ ｏｒａｌ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ－ｓｏｍｅ ｅｍｅｒｇｉｎｇ ｃｏｎｃｅｐｔｓ．” Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ．８９（８）：９６７－７８（２０００），Ｐｏｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．“Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ ｆｏｒ ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ” ＰＤＡ Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈｎｏｌ．５２：２３８－３１１（１９９８）および薬剤師に公知である配合物、賦形剤、および担体に関連する追加情報のためのそれらの中の引用物も参照されたい。 Formulations It will be appreciated that administration of therapeutic agents according to the present disclosure is administered with suitable carriers, excipients and other agents that are incorporated into formulations to provide improved introduction, delivery, tolerability, and the like. A large number of suitable formulations are prepared in formulary known to all medicinal chemists, Remington's Pharmaceutical Sciences (15th ed, Mack Publishing Company, Easton, Pa. (1975)), especially Chapter 87 (Blaug, Seymour). can be found at These formulations include, for example, powders, pastes, ointments, jellies, waxes, oils, lipids, lipid (cationic or anionic)-containing vesicles (such as Lipofectin™), DNA conjugates, anhydrous absorbent pastes, aqueous Oil and water-in-oil emulsions, carbowax emulsions (polyethylene glycols of various molecular weights), semisolid gels, and carbowax-containing semisolid mixtures are included. Any of the foregoing mixtures are suitable for treatment and therapeutic methods according to the present disclosure, provided that the active ingredients in the formulation are not inactivated by the formulation and the formulation is physiologically compatible and acceptable for the route of administration. can be appropriate. Baldrick P. "Pharmaceutical excipient development: the need for preclinical guidance." Regul. Toxicol Pharmacol. 32(2):210-8 (2000), Wang W.; "Lyophilization and development of solid protein pharmaceuticals." Int. J. Pharm. 203(1-2):1-60(2000), Charman WN "Lipids, lipophilic drugs, and oral drug delivery-some emerging concepts." J Pharm Sci. 89(8):967-78 (2000), Powell et al. "Compendium of excipients for parental formulations" PDA J Pharm Sci Technol. 52:238-311 (1998) and citations therein for additional information relating to formulations, excipients, and carriers known to the pharmacist.

非限定的な例として、抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体などの、ＣＤ４７抗体および／または活性化可能ＣＤ４７抗体を含む、本開示の治療用製剤は、異常な標的発現および／または活性に関連する疾患または障害を予防、治療、あるいは改善するために用いられる。例えば、抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体を含む、本開示の治療用製剤は、癌または他の新生物状態、炎症、炎症性障害、および／または自己免疫疾患を治療、あるいは改善するために用いられる。いくつかの実施形態では、癌は、標的が発現される固形腫瘍または血液悪性腫瘍である。いくつかの実施形態では、癌は、標的を発現している固形腫瘍である。いくつかの実施形態では、癌は、標的を発現している血液悪性腫瘍である。いくつかの実施形態では、標的は実質（例えば、癌において、器官または組織の機能を多くの場合実行する器官または組織の一部分）で発現される。いくつかの実施形態では、標的は、細胞、組織、または器官で発現される。いくつかの実施形態では、標的は、間質（すなわち、細胞、組織、または器官の結合支持フレームワーク）で発現される。いくつかの実施形態では、標的は、骨芽細胞で発現される。いくつかの実施形態では、標的は、内皮（脈管構造）で発現される。いくつかの実施形態では、標的は、癌幹細胞上で発現される。いくつかの実施形態では、それに抗体および／または活性化可能抗体がコンジュゲートされる薬剤は、微小管阻害剤である。いくつかの実施形態では、それに抗体および／または活性化可能抗体がコンジュゲートされる薬剤は、核酸損傷剤である。 Treatments of the present disclosure comprising CD47 antibodies and/or activatable CD47 antibodies, such as antibodies, conjugated antibodies, activatable antibodies and/or conjugated activatable antibodies, as non-limiting examples Formulations for use are used to prevent, treat, or ameliorate diseases or disorders associated with aberrant target expression and/or activity. For example, therapeutic formulations of the present disclosure, including antibodies, conjugated antibodies, activatable antibodies and/or conjugated activatable antibodies, may be used to treat cancer or other neoplastic conditions, inflammation, inflammatory disorders, and/or used to treat or ameliorate autoimmune diseases. In some embodiments, the cancer is a target-expressed solid tumor or hematologic malignancy. In some embodiments, the cancer is a target-expressing solid tumor. In some embodiments, the cancer is a target-expressing hematologic malignancy. In some embodiments, the target is expressed in the parenchyma (eg, in cancer, the part of the organ or tissue that often performs the function of the organ or tissue). In some embodiments, targets are expressed in cells, tissues, or organs. In some embodiments, targets are expressed in the stroma (ie, the binding support framework of a cell, tissue, or organ). In some embodiments, the target is expressed in osteoblasts. In some embodiments, the target is expressed in the endothelium (vasculature). In some embodiments, targets are expressed on cancer stem cells. In some embodiments, the agent to which the antibody and/or activatable antibody is conjugated is a microtubule inhibitor. In some embodiments, the agent to which the antibody and/or activatable antibody is conjugated is a nucleic acid damaging agent.

予防、改善または治療の有効性は、例えば、異常な標的発現および／または活性などの、標的発現および／または活性に関連する疾患または障害を診断または治療するための任意の公知の方法に関連して決定される。対象の生存時間を延長させるか、あるいは対象における標的発現および／または活性、例えば異常な標的発現および／または活性に関連する疾患または障害の進行を遅らせることは、抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体、および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体が臨床的利益をもたらすことを示す。 Efficacy of prevention, amelioration or treatment relates to any known method for diagnosing or treating a disease or disorder associated with target expression and/or activity, e.g., aberrant target expression and/or activity. determined by Prolonging the survival time of a subject or slowing the progression of a disease or disorder associated with target expression and/or activity in a subject, e.g. shows that activatable antibodies and/or conjugated activatable antibodies provide clinical benefit.

抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体、および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体は、医薬組成物の形態で投与できる。このような組成物の調製に関わる原則および考慮事項、ならびに成分の選択におけるガイダンスは、例えば、以下により提供される；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ Ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ １９ｔｈ ｅｄ．（Ａｌｆｏｎｓｏ Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄｉｔｏｒｓ）Ｍａｃｋ Ｐｕｂ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．：１９９５；Ｄｒｕｇ Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ：Ｃｏｎｃｅｐｔｓ，Ｐｏｓｓｉｂｉｌｉｔｉｅｓ，Ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎｓ，Ａｎｄ Ｔｒｅｎｄｓ，Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｌａｎｇｈｏｒｎｅ，Ｐａ．，１９９４；およびＰｅｐｔｉｄｅ Ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（Ａｄｖａｎｃｅｓ Ｉｎ Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｖｏｌ．４），１９９１，Ｍ．Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ。 Antibodies, conjugated antibodies, activatable antibodies, and/or conjugated activatable antibodies can be administered in the form of pharmaceutical compositions. Principles and considerations involved in preparing such compositions, as well as guidance in selecting ingredients, are provided, for example, by Remington: The Science And Practice Of Pharmacy 19th ed. (Alfonso R. Gennaro, et al., editors) Mack Pub. Co. , Easton, Pa. : 1995; Drug Absorption Enhancement: Concepts, Possibility, Limitations, And Trends, Harwood Academic Publishers, Langhorne, Pa.; , 1994; and Peptide And Protein Drug Delivery (Advances In Parental Sciences, Vol. 4), 1991, M.J. Dekker, New York.

抗体フラグメントが用いられるいくつかの実施形態では、標的タンパク質の結合ドメインに特異的に結合する最小のフラグメントが、選択される。例えば、抗体の可変領域配列に基づき、ペプチド分子を、標的タンパク質配列を結合する能力を保持するように設計できる。そのようなペプチドは、化学的合成、および／または組換えＤＮＡ技術により産生され得る。（例えば、Ｍａｒａｓｃｏ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：７８８９－７８９３（１９９３）を参照されたい）。製剤はまた、治療される特定の適応症のために必要な２種以上の活性化合物、例えば、いくつかの実施形態では、お互い悪影響を与えない相補的活性を有するもの、も含んでよい。いくつかの実施形態では、または追加で、組成物は、例えば細胞傷害剤、サイトカイン、化学療法剤、または成長抑制剤などの、その機能を向上させる薬剤を含んでよい。そのような分子は、意図された目的に有効である量で組み合わせて適切に存在する。 In some embodiments where antibody fragments are used, the smallest fragment that specifically binds to the binding domain of the target protein is selected. For example, based on the variable region sequences of an antibody, peptide molecules can be designed that retain the ability to bind the target protein sequence. Such peptides may be chemically synthesized and/or produced by recombinant DNA technology. (See, eg, Marasco et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:7889-7893 (1993)). The formulation may also contain two or more active compounds as required for the particular indication being treated, eg, in some embodiments, those with complementary activities that do not adversely affect each other. In some embodiments, or in addition, the composition may include agents that enhance its function, such as, for example, cytotoxic agents, cytokines, chemotherapeutic agents, or growth inhibitors. Such molecules are suitably present in combination in amounts that are effective for the purpose intended.

有効成分はまた、例えば、コアセルベーション技術または界面重合により調製されたマイクロカプセル、例えば、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、およびナノカプセル）またはマクロエマルジョン中で、それぞれヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ（メチルメタクリレート）マイクロカプセル中に封入されてよい。 The active ingredient may also be in microcapsules, e.g. colloidal drug delivery systems (e.g., liposomes, albumin microspheres, microemulsions, nanoparticles, and nanocapsules) or macroemulsions prepared, for example, by coacervation techniques or interfacial polymerization. and may be encapsulated in hydroxymethylcellulose or gelatin microcapsules and poly(methyl methacrylate) microcapsules, respectively.

インビボ投与に用いられる製剤は、無菌でなければならない。これは、滅菌濾過膜による濾過により容易に達成される。 Formulations to be used for in vivo administration must be sterile. This is readily accomplished by filtration through sterile filtration membranes.

徐放性製剤を調製できる。徐放性製剤の好適な例としては、抗体を含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられ、このマトリックスは、成形品、例えばフィルム、またはマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリックスの例は、ポリエステル、ヒドロゲル（例えばポリ（２－ヒドロキシエチルメタクリレート）、またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ－グルタミン酸およびγ－エチルＬ－グルタミメートの共重合体、非分解性エチレンビニル酢酸塩、分解性の乳酸－グリコール酸共重合体、例えば、ＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸－グリコール酸共重合体および酢酸ロイプロリドからなる注射可能なマイクロスフェア）、およびポリＤ－（－）－３－ヒドロキシ酪酸を含む。エチレン酢酸ビニルおよび乳酸－グリコール酸などのポリマーは、分子の１００日を超える放出を可能にするが、特定のヒドロゲルは、より短い期間でタンパク質を放出する。 Sustained-release formulations can be prepared. Suitable examples of sustained-release preparations include semipermeable matrices of solid hydrophobic polymers containing the antibody, which matrices are in the form of shaped articles, eg films, or microcapsules. Examples of sustained release matrices include polyesters, hydrogels (such as poly(2-hydroxyethyl methacrylate), or poly(vinyl alcohol)), polylactides (US Pat. No. 3,773,919), L-glutamic acid and γ-ethyl Copolymers of L-glutamimate, non-degradable ethylene vinyl acetate, degradable lactic acid-glycolic acid copolymers such as LUPRON DEPOT™ (injectable consisting of lactic-co-glycolic acid and leuprolide acetate). microspheres), and poly D-(-)-3-hydroxybutyrate. While polymers such as ethylene vinyl acetate and lactic acid-glycolic acid enable release of molecules for over 100 days, certain hydrogels release proteins for shorter time periods.

併用療法
いくつかの実施形態では、本明細書で記載のＣＤ４７抗体、コンジュゲートされたＣＤ４７抗体、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体は、１種もしくは複数の追加の薬剤または追加の薬剤の組み合わせと併せて用いられる。好適な追加の薬剤は、例えば、癌などの、意図した用途のための現行の薬学的および／または外科的療法を含む。例えば、ＣＤ４７抗体、コンジュゲートされたＣＤ４７抗体、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体は、さらなる化学療法剤、抗新生物剤、抗炎症剤、免疫抑制剤、アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗微小管剤、トポイソメラーゼ阻害剤、細胞傷害性抗生物質、および／または他の任意の核酸損傷剤と併せて用いることができる。 Combination Therapy In some embodiments, the CD47 antibodies, conjugated CD47 antibodies, activatable CD47 antibodies and/or conjugated activatable CD47 antibodies described herein are combined with one or more additional drug or combination of additional drugs. Suitable additional agents include current pharmaceutical and/or surgical therapies for the intended use, eg cancer. For example, the CD47 antibody, conjugated CD47 antibody, activatable CD47 antibody and/or conjugated activatable CD47 antibody may be further chemotherapeutic, anti-neoplastic, anti-inflammatory, immunosuppressive, alkyl agents, antimetabolites, antimicrotubule agents, topoisomerase inhibitors, cytotoxic antibiotics, and/or any other nucleic acid damaging agents.

いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、ドセタキセル、パクリタキセル、アブラキサン（すなわち、アルブミンにコンジュゲートしたパクリタキセル）、ドキソルビシン、オキサリプラチン、カルボプラチン、シスプラチン、イリノテカン、およびゲムシタビンからなる群より選択される化学療法剤などの、化学療法剤である。 In some embodiments, the additional agent is a chemotherapy selected from the group consisting of docetaxel, paclitaxel, Abraxane (i.e. paclitaxel conjugated to albumin), doxorubicin, oxaliplatin, carboplatin, cisplatin, irinotecan, and gemcitabine is a chemotherapeutic agent, such as a drug.

いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、チェックポイント阻害剤、キナーゼ阻害剤、腫瘍微小環境中の阻害因子を標的とする薬剤、および／またはＴ細胞アゴニストもしくはＮＫアゴニストである。いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、単独の、または化学療法剤もしくは抗新生物剤などの別の追加の薬剤と組み合わせた放射線療法である。いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、ワクチン、オンコウイルス、および／またはＤＣ活性化剤、例えば、非限定的な例として、トール様受容体（ＴＬＲ）アゴニストおよび／またはα－ＣＤ４０である。いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、ＡＤＣＣを介して、または毒素への直接的なコンジュゲーション（例えば、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ））を介して腫瘍を死滅するように設計された、腫瘍を標的とする抗体である。 In some embodiments, the additional agent is a checkpoint inhibitor, a kinase inhibitor, an agent targeting inhibitors in the tumor microenvironment, and/or a T cell agonist or NK agonist. In some embodiments, the additional agent is radiation therapy alone or in combination with another additional agent, such as a chemotherapeutic agent or an anti-neoplastic agent. In some embodiments, the additional agent is a vaccine, an oncovirus, and/or a DC activator, such as, as non-limiting examples, a Toll-like receptor (TLR) agonist and/or α-CD40 . In some embodiments, the additional agent is designed to kill the tumor via ADCC or via direct conjugation to a toxin (e.g., antibody drug conjugate (ADC)). Antibodies that target tumors.

いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ－３、ＰＤ－１、ＣＤ４７、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ－３、Ｂ７Ｈ４、およびＶｉｓｔａからなる群より選択される標的の阻害剤である。いくつかの実施形態では、キナーゼ阻害剤は、Ｂ－ＲＡＦｉ、ＭＥＫｉ、およびＢｔｋ阻害剤、例えば、イブルチニブからなる群より選択される。いくつかの実施形態では、キナーゼ阻害剤は、クリゾチニブである。いくつかの実施形態では、腫瘍微小環境阻害剤は、ＩＤＯ阻害剤、α－ＣＳＦ１Ｒ阻害剤、α－ＣＣＲ４阻害剤、ＴＧＦ－β、骨髄由来サプレッサー細胞、またはＴ－調節細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、アゴニストは、Ｏｘ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、およびＨＶＥＭからなる群より選択される。 In some embodiments, the checkpoint inhibitor is a targeted inhibitor selected from the group consisting of CTLA-4, LAG-3, PD-1, CD47, TIGIT, TIM-3, B7H4, and Vista . In some embodiments, the kinase inhibitor is selected from the group consisting of B-RAFi, MEKi, and Btk inhibitors such as ibrutinib. In some embodiments, the kinase inhibitor is crizotinib. In some embodiments, the tumor microenvironment inhibitor is selected from the group consisting of an IDO inhibitor, an α-CSF1R inhibitor, an α-CCR4 inhibitor, TGF-β, myeloid-derived suppressor cells, or T-regulatory cells. be. In some embodiments, the agonist is selected from the group consisting of Ox40, GITR, CD137, ICOS, CD27, and HVEM.

いくつかの実施形態では、阻害剤は、ＣＴＬＡ－４阻害剤である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、ＬＡＧ－３阻害剤である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、ＰＤ－１阻害剤である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、ＣＤ４７阻害剤である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、ＴＩＧＩＴ阻害剤である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、ＴＩＭ－３である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、Ｂ７Ｈ４阻害剤である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、Ｖｉｓｔａ阻害剤である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、Ｂ－ＲＡＦｉ阻害剤である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、ＭＥＫｉ阻害剤である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、Ｂｔｋ阻害剤である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、イブルチニブである。いくつかの実施形態では、阻害剤は、クリゾチニブである。いくつかの実施形態では、阻害剤は、ＩＤＯ阻害剤である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、α－ＣＳＦ１Ｒ阻害剤である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、α－ＣＣＲ４阻害剤である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、ＴＧＦ－βである。いくつかの実施形態では、阻害剤は、骨髄由来サプレッサー細胞である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、制御性Ｔ細胞である。 In some embodiments, the inhibitor is a CTLA-4 inhibitor. In some embodiments the inhibitor is a LAG-3 inhibitor. In some embodiments the inhibitor is a PD-1 inhibitor. In some embodiments the inhibitor is a CD47 inhibitor. In some embodiments, the inhibitor is a TIGIT inhibitor. In some embodiments, the inhibitor is TIM-3. In some embodiments, the inhibitor is a B7H4 inhibitor. In some embodiments, the inhibitor is a Vista inhibitor. In some embodiments, the inhibitor is a B-RAFi inhibitor. In some embodiments, the inhibitor is a MEKi inhibitor. In some embodiments the inhibitor is a Btk inhibitor. In some embodiments, the inhibitor is ibrutinib. In some embodiments, the inhibitor is crizotinib. In some embodiments, the inhibitor is an IDO inhibitor. In some embodiments, the inhibitor is an α-CSF1R inhibitor. In some embodiments, the inhibitor is an α-CCR4 inhibitor. In some embodiments, the inhibitor is TGF-β. In some embodiments, the inhibitor is a myeloid-derived suppressor cell. In some embodiments, the inhibitor is a regulatory T cell.

いくつかの実施形態では、アゴニストは、Ｏｘ４０である。いくつかの実施形態では、アゴニストは、ＧＩＴＲである。いくつかの実施形態では、アゴニストは、ＣＤ１３７である。いくつかの実施形態では、アゴニストは、ＩＣＯＳである。いくつかの実施形態では、アゴニストは、ＣＤ２７である。いくつかの実施形態では、アゴニストは、ＨＶＥＭである。 In some embodiments, the agonist is Ox40. In some embodiments, the agonist is GITR. In some embodiments, the agonist is CD137. In some embodiments, the agonist is ICOS. In some embodiments, the agonist is CD27. In some embodiments, the agonist is HVEM.

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体は、１種または複数種の追加の薬剤、例えば、化学療法剤、抗炎症剤、および／または免疫抑制剤と組み合わせて治療中および／または治療後に投与される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７抗体、コンジュゲートされたＣＤ４７抗体、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体と追加の薬剤は、単一の治療用組成物中に処方され、ＣＤ４７抗体、コンジュゲートされたＣＤ４７抗体、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体と追加の薬剤は、同時に投与される。あるいは、ＣＤ４７抗体、コンジュゲートされたＣＤ４７抗体、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体と追加の薬剤は、互いに分かれており、例えば、それぞれは、別々の治療用組成物中に処方され、ＣＤ４７抗体、コンジュゲートされたＣＤ４７抗体、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体と追加の薬剤は、同時に投与されるか、またはＣＤ４７抗体、コンジュゲートされたＣＤ４７抗体、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体と追加の薬剤は、治療レジメン中に異なる時間に投与される。例えば、ＣＤ４７抗体、コンジュゲートされたＣＤ４７抗体、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体は、追加の薬剤の投与の前に投与されるか、ＣＤ４７抗体、コンジュゲートされたＣＤ４７抗体、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体は、追加の薬剤の投与の後に投与されるか、またはＣＤ４７抗体、コンジュゲートされたＣＤ４７抗体、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体と、追加の薬剤は、交互に投与される。本明細書で記載のように、ＣＤ４７抗体、コンジュゲートされたＣＤ４７抗体、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体と追加の薬剤は、単一の用量で、または複数の用量で投与される。 In some embodiments, the CD47 antibody, conjugated antibody, activatable antibody and/or conjugated activatable antibody is combined with one or more additional agents, e.g., chemotherapeutic agents, It is administered during and/or after treatment in combination with inflammatory agents and/or immunosuppressants. In some embodiments, the CD47 antibody, conjugated CD47 antibody, activatable CD47 antibody and/or conjugated activatable CD47 antibody and the additional agent are formulated in a single therapeutic composition. and the CD47 antibody, conjugated CD47 antibody, activatable CD47 antibody and/or conjugated activatable CD47 antibody and the additional agent are administered concurrently. Alternatively, the CD47 antibody, the conjugated CD47 antibody, the activatable CD47 antibody and/or the conjugated activatable CD47 antibody and the additional agent are separate from each other, e.g., each is a separate therapeutic composition. The CD47 antibody, the conjugated CD47 antibody, the activatable CD47 antibody and/or the conjugated activatable CD47 antibody and the additional agent formulated in the product may be administered simultaneously, or the CD47 antibody, conjugated The gated CD47 antibody, activatable CD47 antibody and/or conjugated activatable CD47 antibody and the additional agent are administered at different times during the therapeutic regimen. For example, the CD47 antibody, conjugated CD47 antibody, activatable CD47 antibody and/or conjugated activatable CD47 antibody are administered prior to administration of the additional agent, or the CD47 antibody is conjugated. The CD47 antibody, activatable CD47 antibody and/or conjugated activatable CD47 antibody is administered after administration of an additional agent, or the CD47 antibody, conjugated CD47 antibody, activatable CD47 The antibody and/or conjugated activatable CD47 antibody and the additional agent are alternately administered. As described herein, the CD47 antibody, conjugated CD47 antibody, activatable CD47 antibody and/or conjugated activatable CD47 antibody and the additional agent may be administered in a single dose or in multiple doses. is administered at a dose of

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７抗体、コンジュゲートされたＣＤ４７抗体、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体と追加の薬剤は、同時に投与される。例えば、ＣＤ４７抗体、コンジュゲートされたＣＤ４７抗体、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体と追加の薬剤は、単一の組成物中に処方されてよく、または２種のもしくはそれより多い別々の組成物として投与されてよい。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７抗体、コンジュゲートされたＣＤ４７抗体、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体と追加の薬剤は、連続して投与されるか、またはＣＤ４７抗体、コンジュゲートされたＣＤ４７抗体、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体と追加の薬剤は、治療レジメン中の異なる時間で投与される。 In some embodiments, the CD47 antibody, conjugated CD47 antibody, activatable CD47 antibody and/or conjugated activatable CD47 antibody and the additional agent are administered simultaneously. For example, the CD47 antibody, conjugated CD47 antibody, activatable CD47 antibody and/or conjugated activatable CD47 antibody and the additional agent may be formulated in a single composition, or two may be administered as one or more separate compositions. In some embodiments, the CD47 antibody, conjugated CD47 antibody, activatable CD47 antibody and/or conjugated activatable CD47 antibody and the additional agent are administered sequentially or The antibody, conjugated CD47 antibody, activatable CD47 antibody and/or conjugated activatable CD47 antibody and the additional agent are administered at different times during the therapeutic regimen.

いくつかの実施形態では、ＣＤ４７抗体、コンジュゲートされたＣＤ４７抗体、活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体は、１種または複数種の追加の薬剤、例えば、非限定的例として、化学療法剤、抗炎症剤、および／または免疫抑制剤、例えば、アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗微小管剤、トポイソメラーゼ阻害剤、細胞傷害性抗生物質、および／または他の任意の核酸損傷剤と組み合わせて、治療の間および／または治療の後に投与される。いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、パクリタキセル（例えば、アブラキサン（登録商標））などのタキサンである。いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、ゲムシタビンなどの代謝拮抗剤である。いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、カルボプラチンまたはシスプラチンなどの白金ベースの化学療法剤などのアルキル化剤である。いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、キナーゼ阻害剤、例えば、ソラフェニブまたはエルロチニブなどの標的薬である。いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、別の抗体、例えばモノクローナル抗体（例えばベバシズマブ）、二重特異性抗体、または多重特異性抗体などの標的薬である。いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、ボルテゾミブまたはカルフィルゾミブなどのプロテオソーム阻害剤である。いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、レナリドミドまたはＩＬ－２などの免疫調節薬である。いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、放射線である。いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、当業者によって標準治療と考えられる薬剤である。いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、当業者に周知の化学療法剤である。 In some embodiments, the CD47 antibody, conjugated CD47 antibody, activatable CD47 antibody and/or conjugated activatable CD47 antibody are combined with one or more additional agents, including but not limited to Exemplary chemotherapeutic agents, anti-inflammatory agents, and/or immunosuppressive agents such as alkylating agents, antimetabolite agents, antimicrotubule agents, topoisomerase inhibitors, cytotoxic antibiotics, and/or any other is administered during and/or after treatment in combination with a nucleic acid damaging agent. In some embodiments, the additional agent is a taxane, such as paclitaxel (eg, Abraxane®). In some embodiments, the additional agent is an antimetabolite such as gemcitabine. In some embodiments, the additional agent is an alkylating agent such as a platinum-based chemotherapeutic agent such as carboplatin or cisplatin. In some embodiments, the additional agent is a kinase inhibitor, eg, a targeted agent such as sorafenib or erlotinib. In some embodiments, the additional agent is another antibody, eg, a targeted agent such as a monoclonal antibody (eg, bevacizumab), a bispecific antibody, or a multispecific antibody. In some embodiments, the additional agent is a proteosome inhibitor such as bortezomib or carfilzomib. In some embodiments, the additional agent is an immunomodulatory drug such as lenalidomide or IL-2. In some embodiments, the additional agent is radiation. In some embodiments, the additional agent is an agent considered standard of care by those skilled in the art. In some embodiments, the additional agent is a chemotherapeutic agent known to those skilled in the art.

いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、別の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、別のコンジュゲートされた抗体もしくはその抗原結合フラグメント、別の活性化可能抗体もしくはその抗原結合フラグメントおよび／または別のコンジュゲートされた活性化可能抗体もしくはその抗原結合フラグメントである。いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、第１の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、第１のコンジュゲートされた抗体もしくはその抗原結合フラグメント、活性化可能抗体もしくはその抗原結合フラグメントおよび／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体もしくはその抗原結合フラグメントと同じ標的に対する、例えば、ＣＤ４７に対する、別の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、別のコンジュゲートされた抗体もしくはその抗原結合フラグメント、別の活性化可能抗体もしくはその抗原結合フラグメントおよび／または別のコンジュゲートされた活性化可能抗体もしくはその抗原結合フラグメントである。いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、第１の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、第１のコンジュゲートされた抗体もしくはその抗原結合フラグメント、活性化可能抗体もしくはその抗原結合フラグメントおよび／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体もしくはその抗原結合フラグメントの標的とは異なる標的に対する、別の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、別のコンジュゲートされた抗体もしくはその抗原結合フラグメント、別の活性化可能抗体もしくはその抗原結合フラグメントおよび／または別のコンジュゲートされた活性化可能抗体もしくはその抗原結合フラグメントである。 In some embodiments, the additional agent is another antibody or antigen-binding fragment thereof, another conjugated antibody or antigen-binding fragment thereof, another activatable antibody or antigen-binding fragment thereof and/or another A conjugated activatable antibody or antigen-binding fragment thereof. In some embodiments, the additional agent is a first antibody or antigen-binding fragment thereof, a first conjugated antibody or antigen-binding fragment thereof, an activatable antibody or antigen-binding fragment thereof and/or a conjugate another antibody or antigen-binding fragment thereof, another conjugated antibody or antigen-binding fragment thereof, another activatable antibody or an antigen-binding fragment thereof and/or another conjugated activatable antibody or antigen-binding fragment thereof. In some embodiments, the additional agent is a first antibody or antigen-binding fragment thereof, a first conjugated antibody or antigen-binding fragment thereof, an activatable antibody or antigen-binding fragment thereof and/or a conjugate another antibody or antigen-binding fragment thereof, another conjugated antibody or antigen-binding fragment thereof, another activatable antibody or antigen thereof, to a target different from that of the activatable antibody or antigen-binding fragment thereof; A binding fragment and/or another conjugated activatable antibody or antigen-binding fragment thereof.

非限定的例として、（追加の薬剤の）抗体、抗原結合フラグメントおよび／または活性化可能抗体のＡＢは、表Ｈに列挙した任意の標的の結合パートナーである。

Figure 2022548310000058

Figure 2022548310000059

Figure 2022548310000060
As a non-limiting example, the antibody (of the additional agent), antigen-binding fragment and/or activatable antibody AB are binding partners of any of the targets listed in Table H.
Figure 2022548310000058
Figure 2022548310000059

Figure 2022548310000060

非限定的な例として、（追加の薬剤の）抗体、抗原結合フラグメントおよび／または活性化可能抗体のＡＢは、表Ｊに列挙した抗体であるか、または抗体に由来する。

Figure 2022548310000061

Figure 2022548310000062
As non-limiting examples, the ABs of antibodies (of additional agents), antigen-binding fragments and/or activatable antibodies are or are derived from antibodies listed in Table J.
Figure 2022548310000061
Figure 2022548310000062

いくつかの実施形態では、追加の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、コンジュゲートされた抗体もしくはその抗原結合フラグメント、活性化可能抗体もしくはその抗原結合フラグメント、および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、モノクローナル抗体、ドメイン抗体、単鎖、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、ｓｃＦｖ、ｓｃＡｂ、ｄＡｂ、シングルドメイン重鎖抗体、またはシングルドメイン軽鎖抗体である。いくつかの実施形態では、追加の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、コンジュゲートされた抗体もしくはその抗原結合フラグメント、活性化可能抗体もしくはその抗原結合フラグメント、および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、マウス抗体、他のげっ歯類抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、または完全ヒトモノクローナル抗体である。 In some embodiments, additional antibodies or antigen-binding fragments thereof, conjugated antibodies or antigen-binding fragments thereof, activatable antibodies or antigen-binding fragments thereof, and/or conjugated activatable antibodies or antigen-binding fragments thereof Antigen-binding fragments are monoclonal antibodies, domain antibodies, single chains, Fab fragments, F(ab') 2 fragments, scFvs, scAbs, dAbs, single domain heavy chain antibodies, or single domain light chain antibodies. In some embodiments, additional antibodies or antigen-binding fragments thereof, conjugated antibodies or antigen-binding fragments thereof, activatable antibodies or antigen-binding fragments thereof, and/or conjugated activatable antibodies or antigen-binding fragments thereof Antigen-binding fragments are murine antibodies, other rodent antibodies, chimeric antibodies, humanized antibodies, or fully human monoclonal antibodies.

検出、診断、イメージング、患者選択
本発明はまた、様々な診断および／または予防適用において、本明細書で提供される抗体／コンジュゲートされた抗体／活性化可能抗体／コンジュゲーされたト活性化可能抗体を使用するための方法およびキットも提供する。例えば、本発明は、以下のステップによって、対象または試料における切断剤および着目標的の有無を検出するための方法およびキットを提供する：（ｉ）対象または試料をＣＤ４７活性化可能抗体と接触させるステップであって、ＣＤ４７活性化可能抗体が、マスキング部分（ＭＭ）、切断剤によって切断される切断可能部分（ＣＭ）、および着目標的を特異的に結合する抗原結合ドメインまたはそのフラグメント（ＡＢ）を含み、切断されておらず活性化されていない状態にあるＣＤ４７活性化可能抗体はＮ末端からＣ末端に向かって以下の構造配置：ＭＭ－ＣＭ－ＡＢまたはＡＢ－ＣＭ－ＭＭを含み；（ａ）ＭＭがＣＤ４７へのＡＢの結合を阻害するペプチドであり、ＭＭがＡＢの天然結合パートナーのアミノ酸配列を有さず、およびＡＢの天然結合パートナーの改変型ではなく、（ｂ）ＡＢが切断されておらず活性化されていない状態にある場合、ＭＭがＣＤ４７へのＡＢの特異的結合に干渉し、ＡＢが切断され活性化状態にある場合、ＭＭがＣＤ４７へのＡＢの特異的結合に干渉も競合もしない、ステップと、（ｉｉ）対象または試料における活性化されたＣＤ４７活性化可能抗体のレベルを測定するステップであって、対象または試料における検出可能なレベルの活性化されたＣＤ４７活性化可能抗体が、切断剤およびＣＤ４７が対象または試料に存在することを示し、対象または試料における検出可能なレベルでない活性化されたＣＤ４７活性化可能抗体が、切断剤、ＣＤ４７、または切断剤とＣＤ４７の両方が対象または試料に存在しないことを示す、ステップ。本明細書で提供されるように、ＣＤ４７活性化可能抗体は、ヒトおよびカニクイザルＣＤ４７の両方を結合できる。 Detection, Diagnosis, Imaging, Patient Selection The present invention is also useful in various diagnostic and/or prophylactic applications. Also provided are methods and kits for using the antibodies. For example, the invention provides methods and kits for detecting the presence or absence of a cleaving agent and target of interest in a subject or sample by the following steps: (i) contacting the subject or sample with a CD47 activatable antibody; A step wherein the CD47 activatable antibody comprises a masking moiety (MM), a cleavable moiety (CM) that is cleaved by a cleaving agent, and an antigen binding domain or fragment thereof (AB) that specifically binds a target of interest A CD47 activatable antibody in its uncleaved, non-activated state comprises, from N-terminus to C-terminus, the following structural arrangement: MM-CM-AB or AB-CM-MM; a) MM is a peptide that inhibits binding of AB to CD47, MM does not have the amino acid sequence of the natural binding partner of AB and is not a modified form of the natural binding partner of AB, and (b) AB is cleaved MM interferes with specific binding of ABs to CD47 when in a non-activated and non-activated state, and MM interferes with specific binding of ABs to CD47 when ABs are cleaved and in an activated state. (ii) measuring the level of activated CD47 activatable antibodies in the subject or sample, wherein a detectable level of activated CD47 activity in the subject or sample; The activatable antibody indicates the presence of the cleaving agent and CD47 in the subject or sample, and no detectable levels of activated CD47 activatable antibody in the subject or sample indicate the presence of the cleaving agent, CD47, or the cleaving agent and CD47. are not present in the subject or sample. As provided herein, a CD47 activatable antibody can bind both human and cynomolgus monkey CD47.

いくつかの実施形態では、活性化可能ＣＤ４７抗体は、それに治療薬がコンジュゲートされる、活性化可能ＣＤ４７抗体である。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、薬剤にコンジュゲートされない。いくつかの実施形態では、活性化可能ＣＤ４７抗体は、検出可能な標識を含む。いくつかの実施形態では、検出可能な標識は、ＡＢに配置される。いくつかの実施形態では、対象または試料中の活性化可能抗体のレベルの測定は、活性化された抗体に特異的に結合する二次試薬を用いて達成され、試薬は検出可能標識を含む。いくつかの実施形態では、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。 In some embodiments, the activatable CD47 antibody is an activatable CD47 antibody to which a therapeutic agent is conjugated. In some embodiments, an activatable antibody is not conjugated to an agent. In some embodiments, an activatable CD47 antibody includes a detectable label. In some embodiments, the detectable label is placed on the AB. In some embodiments, measuring the level of activatable antibody in a subject or sample is accomplished using a secondary reagent that specifically binds to the activated antibody, the reagent comprising a detectable label. In some embodiments, the secondary reagent is an antibody with a detectable label.

これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、活性化可能ＣＤ４７抗体は、検出可能な標識を含む。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、検出可能な標識は、造影剤、コントラスト剤、酵素、蛍光標識、発色団、色素、１種もしくは複数の金属イオン、またはリガンドベース標識を含む。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、造影剤は、放射性同位元素を含む。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、放射性同位元素は、インジウムまたはテクネチウムである。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、コントラスト剤は、ヨウ素、ガドリニウムまたは酸化鉄を含む。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、酵素は、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、またはβ－ガラクトシダーゼを含む。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、蛍光標識は、黄色蛍光タンパク質（ＹＦＰ）、シアン蛍光タンパク質（ＣＦＰ）、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、改変赤色蛍光タンパク質（ｍＲＦＰ）、赤色蛍光タンパク質ｔｄｉｍｅｒ２（ＲＦＰ ｔｄｉｍｅｒ２）、ＨＣＲＥＤ、またはユーロピウム誘導体を含む。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、発光標識は、Ｎ－メチルアクリジウム誘導体を含む。これらの方法のいくつかの実施形態では、標識は、Ａｌｅｘ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６８０またはＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）７５０などのＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）標識を含む。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、リガンドに基づく標識は、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジンまたは１種もしくは複数のハプテンを含む。 In some embodiments of these methods and kits, the activatable CD47 antibody comprises a detectable label. In some embodiments of these methods and kits, detectable labels include imaging agents, contrast agents, enzymes, fluorescent labels, chromophores, dyes, one or more metal ions, or ligand-based labels. In some embodiments of these methods and kits, the imaging agent comprises a radioisotope. In some embodiments of these methods and kits, the radioisotope is indium or technetium. In some embodiments of these methods and kits, the contrast agent comprises iodine, gadolinium, or iron oxide. In some embodiments of these methods and kits, the enzyme comprises horseradish peroxidase, alkaline phosphatase, or β-galactosidase. In some embodiments of these methods and kits, the fluorescent label is yellow fluorescent protein (YFP), cyan fluorescent protein (CFP), green fluorescent protein (GFP), modified red fluorescent protein (mRFP), red fluorescent protein tdimer2 (RFP tdimer2), HCRED, or europium derivatives. In some embodiments of these methods and kits, the luminescent label comprises an N-methyl acridium derivative. In some embodiments of these methods, the label comprises an Alexa Fluor® label, such as Alex Fluor® 680 or Alexa Fluor® 750. In some embodiments of these methods and kits, the ligand-based label comprises biotin, avidin, streptavidin or one or more haptens.

これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、対象は、哺乳動物である。これらの方法のいくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。いくつかの実施形態では、対象は、非ヒト霊長類、コンパニオンアニマル（ネコ、イヌ、ウマなど）、家畜、作業用動物、動物園動物などの非ヒト哺乳動物である。いくつかの実施形態では、対象は、げっ歯類である。 In some embodiments of these methods and kits, the subject is a mammal. In some embodiments of these methods, the subject is human. In some embodiments, the subject is a non-human mammal, such as a non-human primate, companion animal (cat, dog, horse, etc.), farm animal, working animal, zoo animal. In some embodiments, the subject is a rodent.

これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、方法は、インビボ法である。これらの方法のいくつかの実施形態では、方法は、インサイツ法である。これらの方法のいくつかの実施形態では、方法は、エクスビボ法である。これらの方法のいくつかの実施形態では、方法は、インビトロ法である。 In some embodiments of these methods and kits, the method is an in vivo method. In some embodiments of these methods, the method is an in situ method. In some embodiments of these methods, the method is an ex vivo method. In some embodiments of these methods, the method is an in vitro method.

方法およびキットのいくつかの実施形態では、方法は、本開示のＣＤ４７活性化可能抗体を用いた治療に適した患者集団を特定するか、あるいは精密化し、その後、それを必要とする対象に、その活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体を投与することによる治療が続く。例えば、標的（例えば、ＣＤ４７）と、これらの方法で試験されるＣＤ４７活性化可能抗体の切断可能部分（ＣＭ）中の基質を切断するプロテアーゼの両方について陽性の試験結果を得た患者は、このようなＣＭを含む、このようなＣＤ４７活性化可能抗体を用いた治療に適した候補であると特定され、この患者は次いで、試験された活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体の治療有効量を投与される。同様に、標的（例えば、ＣＤ４７）と、これらの方法で試験される活性化可能抗体のＣＭ中の基質を切断するプロテアーゼのいずれか、または両方について陰性の試験結果を得た患者は、別の形の療法に適した候補であると特定される可能性がある。いくつかの実施形態では、このような患者は、治療に適したＣＤ４７活性化可能抗体（例えば、疾患部位で患者により切断されるＣＭを含むＣＤ４７活性化可能抗体）が特定されるまで、他のＣＤ４７活性化可能抗体を用いて試験されてよい。いくつかの実施形態では、患者はその後、それに対し陽性の試験結果を得た活性化可能ＣＤ４７抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能ＣＤ４７抗体の治療有効量を投与される。好適なＡＢ、ＭＭ、および／またはＣＭは、本明細書で開示されるいずれかのＡＢ、ＭＭ、および／またはＣＭを含む。 In some embodiments of the methods and kits, the method identifies or refines a patient population suitable for treatment with a CD47-activatable antibody of the present disclosure, and then subjects in need thereof, Treatment is followed by administering the activatable CD47 antibody and/or a conjugated activatable CD47 antibody. For example, patients who test positive for both the target (e.g., CD47) and the protease that cleaves the substrate in the cleavable portion (CM) of the CD47 activatable antibody tested in these methods are Identified as a good candidate for treatment with such CD47 activatable antibodies, including CM such as, the patient then receives a tested activatable CD47 antibody and/or a conjugated activating A therapeutically effective amount of a possible CD47 antibody is administered. Similarly, patients who test negative for either or both the target (e.g., CD47) and the protease that cleaves the substrate in the CM of the activatable antibody tested in these methods may be sent to another may be identified as suitable candidates for modal therapy. In some embodiments, such patients are treated with other therapeutic agents until a therapeutically appropriate CD47-activatable antibody (e.g., a CM-comprising CD47-activatable antibody that is cleaved by the patient at the site of disease) is identified. It may be tested with a CD47 activatable antibody. In some embodiments, the patient is then administered a therapeutically effective amount of an activatable CD47 antibody and/or a conjugated activatable CD47 antibody for which it has tested positive. Suitable AB, MM and/or CM include any AB, MM and/or CM disclosed herein.

いくつかの実施形態では、抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体は、検出可能な標識を含む。完全な抗体またはそのフラグメント（例えば、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、またはＦ（ａｂ）２）が使用される。プローブまたは抗体に関する「標識された」という用語は、プローブまたは抗体への検出可能な物質のカップリング（すなわち、物理的結合）によるプローブまたは抗体の直接標識、および直接標識された別の試薬との反応性によるプローブまたは抗体の間接標識を包含することを意図している。間接的標識の例としては、蛍光標識された二次抗体を用いる一次抗体の検出、および蛍光標識されたストレプトアビジンにより検出できるようにビオチンを用いたＤＮＡプローブの末端標識、が挙げられる。「生体試料」という用語は、対象から単離された組織、細胞、および体液、ならびに対象内に存在する組織、細胞、および体液を含むことを意図している。したがって、「生体試料」という用語の用法に含まれるのは、血液と、血清、血漿、またはリンパ液などの血液の一画分または成分である。すなわち、本開示の検出方法を使用して、インビトロおよびインビボで生体試料中の検体ｍＲＮＡ、タンパク質、またはゲノムＤＮＡを検出できる。例えば、分析物ｍＲＮＡを検出するためのインビトロ技術としては、ノーザンハイブリダイゼーションおよびインサイツハイブリダイゼーションが挙げられる。検体タンパク質を検出するためのインビトロ技術としては、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、ウェスタンブロット、免疫沈降、免疫化学染色、および免疫蛍光法が挙げられる。検体ゲノムＤＮＡを検出するためのインビトロ技術としては、サザンハイブリダイゼーションが挙げられる。イムノアッセイを実施するための手順は、例えば、ＥＬＩＳＡ：Ｔｈｅｏｒｙ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ”，Ｖｏｌ．４２，Ｊ．Ｒ．Ｃｒｏｗｔｈｅｒ（Ｅｄ．）Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，１９９５；“Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ”，Ｅ．Ｄｉａｍａｎｄｉｓ ａｎｄ Ｔ．Ｃｈｒｉｓｔｏｐｏｕｌｕｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，１９９６；および“Ｐｒａｃｔｉｃｅ ａｎｄ Ｔｈｅｏｒｙ ｏｆ Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ”，Ｐ．Ｔｉｊｓｓｅｎ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，１９８５、に記載されている。さらに、分析物タンパク質を検出するためのインビボ技術としては、標識された抗分析物タンパク質抗体を対象に導入することが挙げられる。例えば、抗体を、標準的なイメージング技術により対象におけるその存在および位置を検出できる放射性マーカーで標識できる。 In some embodiments, the antibody, conjugated antibody, activatable antibody and/or conjugated activatable antibody comprises a detectable label. Whole antibodies or fragments thereof (eg, Fab, scFv, or F(ab) 2 ) are used. The term "labeled" with respect to a probe or antibody includes direct labeling of the probe or antibody by coupling (i.e., physical association) of a detectable substance to the probe or antibody, as well as the direct labeling of the probe or antibody with another reagent. It is intended to include indirect labeling of probes or antibodies by reactivity. Examples of indirect labeling include detection of the primary antibody with a fluorescently labeled secondary antibody and end labeling of the DNA probe with biotin for detection by fluorescently labeled streptavidin. The term "biological sample" is intended to include tissues, cells and fluids isolated from a subject as well as tissues, cells and fluids present within a subject. Thus, included in the usage of the term "biological sample" are blood and fractions or components of blood such as serum, plasma, or lymph. That is, the detection methods of the present disclosure can be used to detect analyte mRNA, protein, or genomic DNA in biological samples in vitro and in vivo. For example, in vitro techniques for detection of analyte mRNA include Northern hybridizations and in situ hybridizations. In vitro techniques for detection of analyte protein include enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), Western blot, immunoprecipitation, immunochemical staining, and immunofluorescence. In vitro techniques for detection of specimen genomic DNA include Southern hybridizations. Procedures for performing immunoassays are described, for example, in ELISA: Theory and Practice: Methods in Molecular Biology", Vol. 42, JR Crowther (Ed.) Human Press, Totowa, NJ, 1995; ．Ｄｉａｍａｎｄｉｓ ａｎｄ Ｔ．Ｃｈｒｉｓｔｏｐｏｕｌｕｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，１９９６；および“Ｐｒａｃｔｉｃｅ ａｎｄ Ｔｈｅｏｒｙ ｏｆ Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ”，Ｐ．Ｔｉｊｓｓｅｎ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，１９８５、に記載されている。さらに、 In vivo techniques for detecting an analyte protein include introducing into a subject a labeled anti-analyte protein antibody, e.g., the antibody is used to detect its presence and location in the subject by standard imaging techniques. can be labeled with a radioactive marker that can

本開示の抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体は、種々の診断および予防用製剤においても有用である。一実施形態では、抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体は、上記の障害の１つまたは複数を発症する危険性のある患者に投与される。前述の障害の１種または複数に対する患者または器官の素因は、遺伝子型、血清学的または生化学的マーカーを使用して決定できる。 The antibodies, conjugated antibodies, activatable antibodies and/or conjugated activatable antibodies of the present disclosure are also useful in various diagnostic and prophylactic formulations. In one embodiment, the antibody, conjugated antibody, activatable antibody and/or conjugated activatable antibody is administered to a patient at risk of developing one or more of the above disorders. . A patient's or organ's predisposition to one or more of the aforementioned disorders can be determined using genotypic, serological or biochemical markers.

本開示のいくつかの実施形態では、抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体、および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体は、前述の障害の１種または複数に関連する臨床適応症と診断されたヒト個体に投与される。診断時に、抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体、および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体が、臨床適応症の影響を緩和するか、または回復させるために投与される。 In some embodiments of the disclosure, the antibody, conjugated antibody, activatable antibody, and/or conjugated activatable antibody is used for clinical indications associated with one or more of the aforementioned disorders. administered to a human individual diagnosed with At diagnosis, antibodies, conjugated antibodies, activatable antibodies, and/or conjugated activatable antibodies are administered to alleviate or reverse the effects of clinical indications.

本開示の抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体、および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体はまた、患者試料中の標的の検出において有用であり、したがって診断薬として有用である。例えば、本開示の抗体および／または活性化可能抗体、およびそのコンジュゲート化抗体は、患者試料中の標的レベルを検出するために、インビトロアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＡで使用される。 The antibodies, conjugated antibodies, activatable antibodies, and/or conjugated activatable antibodies of the present disclosure are also useful in detecting targets in patient samples and are therefore useful as diagnostic agents. For example, the disclosed antibodies and/or activatable antibodies, and conjugated antibodies thereof, are used in in vitro assays, such as ELISA, to detect target levels in patient samples.

一実施形態では、本開示の抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体は、固体支持体（例えば、マイクロタイタープレートのウェル）上に固定される。固定された抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体は、試験試料中に存在し得る任意の標的の捕捉抗体として機能する。固定された抗体および／または活性化可能抗体、および／またはそれらのコンジュゲート化抗体を患者試料と接触させる前に、固体支持体を、すすぎ、乳タンパク質またはアルブミンなどのブロッキング剤で処理して被分析物の非特異的吸着を防ぐ。 In one embodiment, the antibodies, conjugated antibodies, activatable antibodies and/or conjugated activatable antibodies of the disclosure are immobilized on a solid support (e.g. wells of a microtiter plate) . Immobilized, conjugated, activatable and/or conjugated activatable antibodies serve as capture antibodies for any target that may be present in the test sample. Prior to contacting the immobilized and/or activatable antibodies and/or their conjugated antibodies with the patient sample, the solid support is rinsed and treated with a blocking agent such as milk protein or albumin to remove the Prevents non-specific adsorption of analytes.

引き続いて、ウェルを、抗原の含有が疑われる試験試料を用いて、または標準の抗原量を含有する溶液を用いて処理する。このような試料は、例えば、病状を示すと見なされる循環抗原レベルを有することが疑われる対象からの血清試料である。試験試料または標準物質を洗い流した後、固体支持体は、検出可能なように標識された第２の抗体で処理される。標識された第２の抗体は、検出抗体として機能する。検出可能な標識のレベルを測定し、試験試料中の標的抗原の濃度を、標準試料から作成した標準曲線との比較により測定する。 Subsequently, wells are treated with test samples suspected of containing antigen or with solutions containing standard amounts of antigen. Such samples are, for example, serum samples from subjects suspected of having circulating antigen levels considered indicative of a medical condition. After washing away the test sample or standard, the solid support is treated with a detectably labeled second antibody. A labeled second antibody serves as the detection antibody. The level of detectable label is determined and the concentration of target antigen in the test sample is determined by comparison to a standard curve generated from standard samples.

インビトロ診断アッセイ法において、本開示の抗体および活性化可能抗体、ならびにそれらのコンジュゲート化抗体を用いて得られた結果に基づき、標的抗原の発現レベルに基づき対象における疾患を病期分類することが可能であると理解されよう。所与の疾患について、血液試料は、疾患進行の様々な段階にあると診断された対象から、および／または疾患の治療的処置における様々な時点で採取される。進行または治療の各段階について統計的に有意な結果を提供する試料の集団を用いて、各段階に特徴的であるとみなされ得る抗原の濃度の範囲が指定される。 Based on results obtained using the antibodies and activatable antibodies of the present disclosure, and conjugated antibodies thereof, in in vitro diagnostic assays, disease can be staged in a subject based on the level of expression of the target antigen. It should be understood that it is possible. For a given disease, blood samples are taken from subjects diagnosed with various stages of disease progression and/or at various points in the therapeutic treatment of the disease. Using populations of samples that provide statistically significant results for each stage of progression or therapy, ranges of antigen concentrations that can be considered characteristic of each stage are specified.

抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体はまた、診断方法および／またはイメージング方法においても使用できる。いくつかの実施形態では、このような方法は、インビトロ法である。いくつかの実施形態では、このような方法は、インビボ法である。いくつかの実施形態では、このような方法は、インサイツ法である。いくつかの実施形態では、このような方法は、エクスビボ法である。例えば、酵素的に切断可能なＣＭを有する活性化可能抗体を用いて、ＣＭを切断できる酵素の有無を検出できる。このような活性化可能抗体は、診断において使用でき、それは、所定の宿主生物の所定の細胞または組織中の活性化された抗体（すなわち、活性化可能抗体の切断から生じた抗体）の蓄積の測定による酵素活性（または、いくつかの実施形態では、高められた還元電位の環境、例えば、ジスルフィド結合の還元を提供できる環境）のインビボ検出（例えば、定性的または定量的）を含み得る。活性化された抗体のそのような蓄積は、組織が酵素活性（またはＣＭの性質に依って増大した還元電位）を発現することだけでなく、活性化された抗体が結合する標的を組織が発現することも示す。 Antibodies, conjugated antibodies, activatable antibodies and/or conjugated activatable antibodies can also be used in diagnostic and/or imaging methods. In some embodiments, such methods are in vitro methods. In some embodiments, such methods are in vivo methods. In some embodiments, such methods are in situ methods. In some embodiments, such methods are ex vivo methods. For example, an activatable antibody with an enzymatically cleavable CM can be used to detect the presence or absence of an enzyme capable of cleaving the CM. Such activatable antibodies can be used in diagnosis of the accumulation of activated antibodies (i.e., antibodies resulting from cleavage of activatable antibodies) in a given cell or tissue of a given host organism. It can include in vivo detection (eg, qualitative or quantitative) of enzymatic activity (or, in some embodiments, an environment of elevated reduction potential, eg, an environment capable of providing reduction of disulfide bonds) by measurement. Such accumulation of activated antibody not only causes the tissue to express enzymatic activity (or increased reduction potential, depending on the properties of the CM), but also causes the tissue to express a target to which the activated antibody binds. Also indicate that

例えば、ＣＭは、腫瘍の部位で、生物学的に閉じ込められた部位（例えば、膿瘍、器官など）などでのウイルスまたは細菌感染の部位で認められる少なくとも１つのプロテアーゼの基質であるように選択できる。ＡＢは、標的抗原を結合するものであり得る。本明細書に開示の方法、または適切な場合には当業者によく知られた方法を使用して、検出可能な標識（例えば、蛍光標識または放射性標識または放射性トレーサー）をＡＢまたは抗体および／または活性化可能抗体の他の領域にコンジュゲートさせ得る。検出可能な標識は、上記のスクリーニング方法の観点で考察され、さらなる具体的な例が以下に提供される。着目の疾患組織においてその活性が上昇する少なくとも１種のプロテアーゼとともに、疾患状態のタンパク質またはペプチドに特異的なＡＢを用いて、活性化可能抗体は、ＣＭ特異的な酵素が検出可能なレベルで存在しない、もしくは疾患組織におけるよりも低いレベルで存在するか不活性である（例えば、酵素前駆体の形態にあるもしくは阻害物質との複合体の状態にある）組織と比べて、増大された疾患組織への結合速度を示すであろう。小さなタンパク質およびペプチドが腎臓濾過システムによって血液から迅速に除去されるため、およびＣＭに特異的な酵素が検出可能なレベルで存在しない（または非疾患組織ではより低いレベルで存在するか不活性なコンフォメーションで存在する）ので、疾患組織中の活性化された抗体の蓄積は、非疾患組織と比べて増大する。 For example, the CM can be selected to be a substrate for at least one protease found at sites of viral or bacterial infections, such as at sites of tumors, at sites of biological confinement (e.g., abscesses, organs, etc.). . The AB can be one that binds a target antigen. A detectable label (e.g., a fluorescent label or a radiolabel or a radiotracer) is added to the AB or antibody and/or Other regions of the activatable antibody may be conjugated. Detectable labels are discussed in the context of the screening methods above, and further specific examples are provided below. Using an AB specific for a disease state protein or peptide, along with at least one protease whose activity is elevated in the diseased tissue of interest, the activatable antibody is a CM-specific enzyme present at detectable levels. increased diseased tissue relative to tissue that is absent, present at a lower level than in diseased tissue, or is inactive (e.g., in the form of a proenzyme or in a complex with an inhibitor) will indicate the rate of binding to Because small proteins and peptides are rapidly cleared from the blood by the renal filtration system, and CM-specific enzymes are not present at detectable levels (or present at lower or inactive levels in non-diseased tissues). formation), the accumulation of activated antibodies in diseased tissue is increased compared to non-diseased tissue.

別の例では、活性化可能抗体を用いて、試料中の切断剤の有無を検出できる。例えば、活性化可能抗体が酵素による切断を受けやすいＣＭを含む場合、活性化可能抗体を用いて、試料中の酵素の存在を（定性的または定量的に）検出できる。別の例では、活性化可能抗体が還元剤による切断を受けやすいＣＭを含む場合、活性化可能抗体を用いて、試料における還元条件の存在を（定性的または定量的に）検出できる。これらの方法での分析を促進するために、活性化可能抗体を、検出可能に標識でき、支持体（例えば、固体支持体、例えばスライドまたはビーズ）に結合できる。検出可能標識は、活性化可能抗体の切断後に放出されない部分上に配置でき、例えば、検出可能標識は、消光蛍光標識、または切断が生じるまで検出できない他の標識であり得る。アッセイは、例えば、固定された、検出可能的に標識された活性化可能抗体を、酵素および／または還元剤を含むことが疑われる試料と、切断が生じるのに十分な時間にわたり接触させた後、過剰の試料および混入物質を除去するために洗浄することにより実施できる。試料中の切断（例えば、酵素または還元剤による）の存在または非存在を次に、試料との接触の前に、活性化可能抗体の検出可能シグナルの変化、例えば、試料中の切断剤による活性化可能抗体の切断による検出可能シグナルの存在および／または増大により評価する。 In another example, an activatable antibody can be used to detect the presence or absence of a cleaving agent in a sample. For example, if the activatable antibody comprises a CM that is susceptible to enzymatic cleavage, the activatable antibody can be used to detect (either qualitatively or quantitatively) the presence of the enzyme in the sample. In another example, an activatable antibody can be used to detect (qualitatively or quantitatively) the presence of reducing conditions in a sample if the activatable antibody comprises a CM that is susceptible to cleavage by a reducing agent. To facilitate analysis in these methods, the activatable antibody can be detectably labeled and attached to a support (eg, a solid support such as a slide or bead). A detectable label can be placed on a portion of the activatable antibody that is not released after cleavage, for example, the detectable label can be a quenching fluorescent label or other label that is not detectable until cleavage occurs. The assay may be performed, for example, by contacting an immobilized, detectably labeled, activatable antibody with a sample suspected of containing an enzyme and/or a reducing agent for a time sufficient for cleavage to occur. , washing to remove excess sample and contaminants. The presence or absence of cleavage (e.g., by an enzyme or reducing agent) in the sample is then determined by a change in the detectable signal of the activatable antibody, e.g., activity by a cleaving agent in the sample, prior to contact with the sample. Cleavage of the activatable antibody is assessed by the presence and/or increase in detectable signal.

そのような検出方法は、切断時に活性化可能抗体のＡＢを結合できる標的の有無の検出も提供するように適合させることができる。したがって、アッセイは、切断剤の存在または非存在、および目的の標的の存在または非存在を評価するように適合させることができる。切断剤の存在または非存在は、上記のような活性化可能抗体の検出可能レベルの存在および／または増大により検出でき、標的の存在または非存在は、標的－ＡＢ複合体の検出により、例えば、検出可能に標識された抗標的抗体の使用により検出できる。 Such detection methods can be adapted to also provide detection of the presence or absence of a target capable of binding the AB of the activatable antibody upon cleavage. Assays can therefore be adapted to assess the presence or absence of a cleaving agent and the presence or absence of a target of interest. The presence or absence of a cleaving agent can be detected by the presence and/or increase in detectable levels of an activatable antibody as described above, and the presence or absence of a target can be detected by detection of target-AB complexes, e.g. Detection can be achieved through the use of a detectably labeled anti-target antibody.

活性化可能抗体はまた、例えば、プロテアーゼ切断による、活性化可能抗体の活性化、および特定の標的への結合の検証のためのインサイツイメージングにおいても有用である。インサイツイメージングは、細胞培養物または組織切片などの生体試料におけるタンパク質分解活性および標的の局在化を可能にする技術である。この技術を用いて、検出可能な標識（例えば、蛍光標識）の存在に基づき、所与の標的への結合およびタンパク質分解活性の両方を確認することが可能である。 Activatable antibodies are also useful in in situ imaging for verification of activation of activatable antibodies and binding to a particular target, eg, by protease cleavage. In situ imaging is a technique that allows localization of proteolytic activity and targets in biological samples such as cell cultures or tissue sections. Using this technique, it is possible to confirm both binding to a given target and proteolytic activity based on the presence of a detectable label (eg, fluorescent label).

これらの技術は、疾患部位（例えば、腫瘍組織）または健康組織由来の任意の凍結細胞または組織で有用である。これらの技術はまた、新鮮な細胞または組織試料でも有用である。 These techniques are useful with any frozen cells or tissue from a diseased site (eg, tumor tissue) or healthy tissue. These techniques are also useful with fresh cell or tissue samples.

これらの技術において、活性化可能抗体は、検出可能な標識で標識される。検出可能な標識は、蛍光色素（例えばフルオロフォア、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、ローダミンイソチオシアネート（ＴＲＩＴＣ）、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）標識）、近赤外（ＮＩＲ）色素（例えば、Ｑｄｏｔ（登録商標）ナノクリスタル）、コロイド金属、ハプテン、放射性マーカー、ビオチンおよびストレプトアビジンなどの増幅試薬、または酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼ）であり得る。 In these techniques, an activatable antibody is labeled with a detectable label. Detectable labels include fluorescent dyes (e.g. fluorophores, fluorescein isothiocyanate (FITC), rhodamine isothiocyanate (TRITC), Alexa Fluor® labels), near infrared (NIR) dyes (e.g. Qdot® ) nanocrystals), colloidal metals, haptens, radioactive markers, amplification reagents such as biotin and streptavidin, or enzymes such as horseradish peroxidase or alkaline phosphatase.

標識された活性化可能抗体とインキュベートされた試料中の標識の検出は、試料が標的を含み、活性化可能抗体のＣＭに特異的なプロテアーゼを含有することを示す。いくつかの実施形態では、プロテアーゼの存在を、本明細書で記載のものなどの広域プロテアーゼ阻害剤を用いることにより、および／またはプロテアーゼに特異的な薬剤、例えば、プロテアーゼのマトリプターゼに特異的であり、マトリプターゼのタンパク質分解活性を阻害する、Ａ１１などの抗体を用いることにより確認できる；例えば、１０１０年１１月１１日公開の国際公開第２０１０／１２９６０９号を参照されたい。活性化可能抗体のＣＭに特異的なプロテアーゼを特定するために、本明細書で記載のものなどの広域プロテアーゼ阻害剤を用いる、および／またはより選択的な阻害剤を用いることによる同じ手法を用いることができる。いくつかの実施形態では、標的の存在は、その標的に特異的である薬剤、例えば、別の抗体を使用して確認でき、または、検出可能な標識を、標識されていない標的と競合させることができる。いくつかの実施形態では、標識されていない活性化可能抗体を、標識された二次抗体またはより複雑な検出系による検出とともに用いることができる。 Detection of label in a sample incubated with a labeled activatable antibody indicates that the sample contains the target and contains a protease specific for the CM of the activatable antibody. In some embodiments, the presence of a protease is determined by using a broad-spectrum protease inhibitor, such as those described herein, and/or a protease-specific agent, such as one specific for the protease matriptase. Yes, and can be confirmed by using an antibody such as A11 that inhibits the proteolytic activity of matriptase; Using the same approach by using broad-spectrum protease inhibitors such as those described herein and/or using more selective inhibitors to identify CM-specific proteases of activatable antibodies be able to. In some embodiments, the presence of a target can be confirmed using an agent that is specific for that target, such as another antibody, or by allowing a detectable label to compete with unlabeled target. can be done. In some embodiments, unlabeled activatable antibodies can be used with detection by labeled secondary antibodies or more complex detection systems.

同様の手法は、インビボイメージングにも有用であり、ここでは、例えばヒトを含む哺乳動物などの対象における蛍光シグナルの検出は、疾患部位が標的を含み、かつ活性化可能抗体のＣＭに特異的なプロテアーゼを含むことを示す。 Similar techniques are also useful for in vivo imaging, where detection of a fluorescent signal in a subject, such as a mammal, including humans, where the disease site contains a target and is specific for the CM of an activatable antibody. Indicates that it contains a protease.

これらの技術はまた、活性化可能抗体におけるプロテアーゼ特異的ＣＭに基づく種々の細胞、組織および生物におけるプロテアーゼ活性の検出、特定、または特徴付けのためのキットにおいておよび／または試薬として有用である。 These techniques are also useful in kits and/or as reagents for the detection, identification, or characterization of protease activity in various cells, tissues and organisms based on protease-specific CM in activatable antibodies.

本開示は、種々の診断および／または予防適用において抗体および／または活性化可能抗体を用いる方法を提供する。例えば、本開示は、以下のステップによって、対象または試料における切断剤および着目標的の有無を検出する方法を提供する：（ｉ）対象または試料を活性化可能抗体と接触させるステップであって、活性化可能抗体が、マスキング部分（ＭＭ）、切断剤、例えば、プロテアーゼによって切断される切断可能部分（ＣＭ）、および着目標的を特異的に結合する抗原結合ドメインまたはそのフラグメント（ＡＢ）を含み、切断されておらず活性化されていない状態にある活性化可能抗体はＮ末端からＣ末端に向かって以下の構造配置：ＭＭ－ＣＭ－ＡＢまたはＡＢ－ＣＭ－ＭＭを含み；（ａ）ＭＭが標的へのＡＢの結合を阻害するペプチドであり、ＭＭがＡＢの天然結合パートナーのアミノ酸配列を有さず、およびＡＢの天然結合パートナーの改変型ではなく、および（ｂ）切断されておらずに活性化されていない状態にある場合、ＭＭが標的へのＡＢの特異的結合に干渉し、切断されて活性化状態にある場合、ＭＭが標的へのＡＢの特異的結合に干渉も競合もしない、ステップと、（ｉｉ）対象または試料における活性化された活性化可能抗体のレベルを測定するステップであって、対象または試料における検出可能なレベルの活性化された活性化可能抗体が、切断剤および標的が対象または試料に存在することを示し、対象または試料における検出可能なレベルでない活性化された活性化可能抗体が、対象または試料に切断剤、標的、または切断剤と標的の両方が存在しないか、および／または充分に存在しないことを示す、ステップ。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、それに治療薬がコンジュゲートされている、活性化可能抗体である。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は薬剤にコンジュゲートされていない。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、検出可能標識を含む。いくつかの実施形態では、検出可能な標識は、ＡＢに配置される。いくつかの実施形態では、対象または試料中の活性化可能抗体のレベルの測定は、活性化された抗体に特異的に結合する二次試薬を用いて達成され、試薬は検出可能標識を含む。いくつかの実施形態では、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。 The disclosure provides methods of using antibodies and/or activatable antibodies in various diagnostic and/or prophylactic applications. For example, the disclosure provides a method of detecting the presence or absence of a cleaving agent and a target of interest in a subject or sample by: (i) contacting the subject or sample with an activatable antibody, comprising: An activatable antibody comprises a masking moiety (MM), a cleavable moiety (CM) that is cleaved by a cleaving agent, e.g., a protease, and an antigen binding domain or fragment thereof (AB) that specifically binds the target of interest. , an activatable antibody in its uncleaved, non-activated state contains, from N-terminus to C-terminus, the following structural configurations: MM-CM-AB or AB-CM-MM; (a) MM is a peptide that inhibits binding of AB to a target, MM does not have the amino acid sequence of the natural binding partner of AB and is not a modified form of the natural binding partner of AB, and (b) is not cleaved When in the non-activated state, MM interferes with the specific binding of ABs to the target, and when cleaved and in the activated state, MM neither interferes nor competes with the specific binding of ABs to the target. and (ii) measuring the level of activated activatable antibody in the subject or sample, wherein detectable levels of the activated activatable antibody in the subject or sample cleave indicating that the agent and target are present in the subject or sample, and that no detectable levels of activated activatable antibody in the subject or sample indicate that the subject or sample contains the cleaving agent, the target, or both the cleaving agent and the target; A step that is absent and/or not sufficiently present. In some embodiments, an activatable antibody is an activatable antibody that has a therapeutic agent conjugated thereto. In some embodiments, an activatable antibody is not conjugated to a drug. In some embodiments, an activatable antibody includes a detectable label. In some embodiments, the detectable label is placed on the AB. In some embodiments, measuring the level of activatable antibody in a subject or sample is accomplished using a secondary reagent that specifically binds to the activated antibody, the reagent comprising a detectable label. In some embodiments, the secondary reagent is an antibody with a detectable label.

本開示はまた、以下のステップにより、対象または試料における切断剤の有無を検出する方法を提供する：（ｉ）着目標的、例えば、標的の存在下で、対象または試料を活性化可能抗体と接触させるステップであって、活性化可能抗体が、マスキング部分（ＭＭ）、切断剤、例えば、プロテアーゼによって切断される切断可能部分（ＣＭ）、および着目標的を特異的に結合する抗原結合ドメインまたはそのフラグメント（ＡＢ）を含み、切断されておらず活性化されていない状態にある活性化可能抗体はＮ末端からＣ末端に向かって以下の構造配置：ＭＭ－ＣＭ－ＡＢまたはＡＢ－ＣＭ－ＭＭを含み；（ａ）ＭＭが標的へのＡＢの結合を阻害するペプチドであり、ＭＭがＡＢの天然結合パートナーのアミノ酸配列を有さず、およびＡＢの天然結合パートナーの改変型ではなく、および（ｂ）切断されておらずに活性化されていない状態にある場合、ＭＭが標的へのＡＢの特異的結合に干渉し、切断されて活性化状態にある場合、ＭＭが標的へのＡＢの特異的結合に干渉も競合もしない、ステップと、（ｉｉ）対象または試料における活性化された活性化可能抗体のレベルを測定するステップであって、対象または試料における検出可能なレベルの活性化された活性化可能抗体が、切断剤が対象または試料に存在することを示し、対象または試料における検出可能なレベルでない活性化された活性化可能抗体が、対象または試料に切断剤が存在しないか、および／または充分に存在しないことを示す、ステップ。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、それに治療薬がコンジュゲートされている活性化可能抗体である。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、薬剤にコンジュゲートされていない。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、検出可能標識を含む。いくつかの実施形態では、検出可能な標識はＡＢに配置される。いくつかの実施形態では、対象または試料中の活性化可能抗体のレベルの測定は、活性化された抗体に特異的に結合する二次試薬を用いて達成され、試薬は検出可能標識を含む。いくつかの実施形態では、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。 The present disclosure also provides a method of detecting the presence or absence of a cleaving agent in a subject or sample by the following steps: (i) the subject or sample in the presence of a target of interest, e.g. contacting, wherein the activatable antibody comprises a masking moiety (MM), a cleavable moiety (CM) that is cleaved by a cleaving agent, e.g., a protease, and an antigen binding domain that specifically binds the target of interest or An activatable antibody that comprises a fragment thereof (AB) and is in its uncleaved, non-activated state has the following structural configuration from N-terminus to C-terminus: MM-CM-AB or AB-CM-MM (a) the MM is a peptide that inhibits binding of the AB to the target, the MM does not have the amino acid sequence of the AB's natural binding partner and is not a modified form of the AB's natural binding partner, and ( b) when in the uncleaved and non-activated state the MM interferes with the specific binding of the AB to the target and when cleaved and in the activated state the MM interferes with the specificity of the AB to the target (ii) measuring the level of activated activatable antibody in the subject or sample, wherein a detectable level of activated activatable antibody in the subject or sample The activatable antibody indicates the presence of a cleaving agent in the subject or sample, the activated activatable antibody at no detectable level in the subject or sample indicates the absence of the cleaving agent in the subject or sample, and / or indicating that there is not enough. In some embodiments, an activatable antibody is an activatable antibody that has a therapeutic agent conjugated thereto. In some embodiments, an activatable antibody is not conjugated to an agent. In some embodiments, an activatable antibody includes a detectable label. In some embodiments, the detectable label is placed on the AB. In some embodiments, measuring the level of activatable antibody in a subject or sample is accomplished using a secondary reagent that specifically binds to the activated antibody, the reagent comprising a detectable label. In some embodiments, the secondary reagent is an antibody with a detectable label.

本開示はまた、対象または試料中の切断剤および標的の存在の有無の検出における使用のキットを提供し、キットは、マスキング部分（ＭＭ）、切断剤、例えば、プロテアーゼによって切断される切断可能部分（ＣＭ）、および着目標的を特異的に結合する抗原結合ドメインまたはそのフラグメント（ＡＢ）を含む、少なくとも活性化可能抗体を含み、切断されておらず活性化されていない状態にある活性化可能抗体は、Ｎ末端からＣ末端に向かって以下の構造配置：ＭＭ－ＣＭ－ＡＢまたはＡＢ－ＣＭ－ＭＭを含み；（ａ）ＭＭは標的へのＡＢの結合を阻害するペプチドであり、ＭＭはＡＢの天然結合パートナーのアミノ酸配列を有さず、およびＡＢの天然結合パートナーの改変型ではなく、および（ｂ）切断されておらずに活性化されていない状態にある場合、ＭＭは標的へのＡＢの特異的結合に干渉し、切断されて活性化状態にある場合、ＭＭは標的へのＡＢの特異的結合に干渉も競合もせず、および、（ｉｉ）対象または試料における活性化された活性化可能抗体のレベルを測定し、対象または試料における検出可能なレベルの活性化された活性化可能抗体が、切断剤が対象または試料に存在することを示し、対象または試料における検出可能なレベルでない活性化された活性化可能抗体が、対象または試料に切断剤が存在しないか、および／または充分に存在しないことを示す。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、それに治療薬がコンジュゲートされている活性化可能抗体である。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、薬剤にコンジュゲートされていない。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、検出可能標識を含む。いくつかの実施形態では、検出可能な標識は、ＡＢに配置される。いくつかの実施形態では、対象または試料中の活性化可能抗体のレベルの測定は、活性化された抗体に特異的に結合する二次試薬を用いて達成され、試薬は検出可能標識を含む。いくつかの実施形態では、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。 The disclosure also provides kits for use in detecting the presence or absence of a cleaving agent and target in a subject or sample, the kit comprising a masking moiety (MM), a cleaving agent, e.g., a cleavable moiety that is cleaved by a protease. (CM) and at least an activatable antibody comprising an antigen-binding domain or fragment thereof (AB) that specifically binds a target of interest, in an uncleaved and non-activated state Antibodies comprise, from N-terminus to C-terminus, the following structural configurations: MM-CM-AB or AB-CM-MM; (a) MM is a peptide that inhibits binding of AB to a target; If it does not have the amino acid sequence of the natural binding partner of the AB and is not a modified form of the natural binding partner of the AB and (b) is in an uncleaved and non-activated state, then the MM is capable of binding to the target. Interfering with specific binding of ABs, when cleaved and in an activated state, MMs do not interfere or compete with specific binding of ABs to targets, and (ii) activated activity in a subject or sample measuring the level of activatable antibody, wherein a detectable level of activated activatable antibody in the subject or sample indicates that a cleaving agent is present in the subject or sample, and no detectable level in the subject or sample An activated activatable antibody indicates the absence and/or insufficient presence of the cleaving agent in the subject or sample. In some embodiments, an activatable antibody is an activatable antibody that has a therapeutic agent conjugated thereto. In some embodiments, an activatable antibody is not conjugated to an agent. In some embodiments, an activatable antibody includes a detectable label. In some embodiments, the detectable label is placed on the AB. In some embodiments, measuring the level of activatable antibody in a subject or sample is accomplished using a secondary reagent that specifically binds to the activated antibody, the reagent comprising a detectable label. In some embodiments, the secondary reagent is an antibody with a detectable label.

本開示はまた、以下のステップにより対象または試料中の切断剤の有無を検出するための方法を提供する：（ｉ）対象または試料を活性化可能抗体と接触させるステップであって、活性化可能抗体が、マスキング部分（ＭＭ）、切断剤、例えば、プロテアーゼによって切断される切断可能部分（ＣＭ）、および標的を特異的に結合する抗原結合ドメイン（ＡＢ）、および検出可能な標識、を含み、切断されておらず活性化されていない状態にある活性化可能抗体はＮ末端からＣ末端に向かって以下の構造配置：ＭＭ－ＣＭ－ＡＢまたはＡＢ－ＣＭ－ＭＭを含み；ＭＭは標的へのＡＢの結合を阻害するペプチドであり、ＭＭはＡＢの天然結合パートナーのアミノ酸配列を有さず、およびＡＢの天然結合パートナーの改変型ではなく；切断されておらずに活性化されていない状態にある場合、ＭＭは標的へのＡＢの特異的結合に干渉し、切断されて活性化状態にある場合、ＭＭは標的へのＡＢの特異的結合に干渉も競合もせず；検出可能な標識は、ＣＭの切断後に放出される活性化可能抗体の一部上に配置される、ステップ；および（ｉｉ）対象または試料の検出可能標識のレベルを測定するステップであって、対象または試料における検出可能なレベルの検出可能な標識が、対象または試料に切断剤が存在しないおよび／または充分に存在しないことを示し、対象または試料における検出可能なレベルでない検出可能な標識が、対象または試料に切断剤が存在することを示す、ステップ。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、それに治療薬がコンジュゲートされている活性化可能抗体である。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、薬剤にコンジュゲートされていない。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、検出可能標識を含む。いくつかの実施形態では、検出可能な標識はＡＢに配置される。いくつかの実施形態では、対象または試料中の活性化可能抗体のレベルの測定は、活性化された抗体に特異的に結合する二次試薬を用いて達成され、試薬は検出可能標識を含む。いくつかの実施形態では、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。 The present disclosure also provides methods for detecting the presence or absence of a cleaving agent in a subject or sample by: (i) contacting the subject or sample with an activatable antibody, wherein the antibody comprises a masking moiety (MM), a cleaving agent, e.g., a cleavable moiety (CM) that is cleaved by a protease, and an antigen binding domain (AB) that specifically binds a target, and a detectable label; An activatable antibody in its uncleaved, non-activated state contains, from N-terminus to C-terminus, the following structural arrangement: MM-CM-AB or AB-CM-MM; A peptide that inhibits binding of AB, MM does not have the amino acid sequence of the natural binding partner of AB and is not a modified form of the natural binding partner of AB; In some cases, the MM interferes with the specific binding of the AB to the target, and when cleaved and in an activated state, the MM neither interferes nor competes with the specific binding of the AB to the target; and (ii) measuring the level of a detectable label in the subject or sample, wherein the detectable antibody in the subject or sample comprises: A level of detectable label indicates the absence and/or insufficient presence of the cleaving agent in the object or sample, and a non-detectable level of detectable label in the object or sample indicates the presence of the cleaving agent in the object or sample. A step that indicates that it exists. In some embodiments, an activatable antibody is an activatable antibody that has a therapeutic agent conjugated thereto. In some embodiments, an activatable antibody is not conjugated to an agent. In some embodiments, an activatable antibody includes a detectable label. In some embodiments, the detectable label is placed on the AB. In some embodiments, measuring the level of activatable antibody in a subject or sample is accomplished using a secondary reagent that specifically binds to the activated antibody, the reagent comprising a detectable label. In some embodiments, the secondary reagent is an antibody with a detectable label.

本開示はまた、対象または試料における切断剤および標的の有無を検出する方法で用いるためのキットを提供し、キットは、少なくとも、対象または生体試料と接触させるのに用いるための本明細書で記載の活性化可能抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体（例えば、治療薬がコンジュゲートされている活性化可能抗体）ならびに対象または生体試料中の活性化された活性化可能抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体のレベルを検出するための手段を含み、対象または生体試料中の検出可能なレベルの活性化された活性化可能抗体は、切断剤および標的が対象または生体試料中に存在することを示し、かつ対象または生体試料中の検出可能なレベルでない活性化された活性化可能抗体は、切断剤、標的、もしくは切断剤と標的の両方が対象もしくは生体試料中に存在せず、および／または十分に存在せず、それにより、活性化可能抗体中の標的結合および／またはプロテアーゼ切断が、対象または生体試料中で検出され得ないことを示す。 The present disclosure also provides kits for use in methods of detecting the presence or absence of a cleaving agent and target in a subject or sample, wherein the kit comprises at least one of the methods described herein for use in contacting the subject or biological sample. activatable antibodies and/or conjugated activatable antibodies (e.g., activatable antibodies conjugated with therapeutic agents) of and activated activatable antibodies and/or in a subject or biological sample comprising means for detecting a level of conjugated activatable antibody, wherein a detectable level of activated activatable antibody in the subject or biological sample indicates that the cleaving agent and the target are in the subject or biological sample; and no detectable levels in the subject or biological sample, the activated activatable antibody indicates that the cleaving agent, the target, or both the cleaving agent and the target are present in the subject or biological sample. and/or not present sufficiently, thereby indicating that target binding and/or protease cleavage in the activatable antibody cannot be detected in the subject or biological sample.

本開示はまた、（ｉ）標的の存在下で活性化可能抗体と対象または生体試料をを接触させること、および（ｉｉ）対象または生体試料中の活性化された活性化可能抗体のレベルを測定すること、により、対象または試料中の切断剤の有無を検出する方法を提供し、対象または生体試料中の検出可能なレベルの活性化された活性化可能抗体が、切断剤が対象または生体試料中に存在することを示し、かつ対象または生体試料中の検出可能なレベルでない活性化された活性化可能抗体が、切断剤が対象もしくは生体試料中に検出可能なレベルで存在せず、および／または十分に存在せず、それにより、活性化可能抗体のプロテアーゼ切断を対象または生体試料中で検出できないことを示す。このような活性化可能抗体は、マスキング部分（ＭＭ）と、切断剤、例えば、プロテアーゼにより切断される切断可能部分（ＣＭ）と、標的を特異的に結合する抗原結合ドメインまたはそのフラグメント（ＡＢ）とを含み、非切断（すなわち非活性化）状態にある活性化可能抗体は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、次記：ＭＭ－ＣＭ－ＡＢまたはＡＢ－ＣＭ－ＭＭ、のような構造配置を含み；（ａ）ＭＭは、標的へのＡＢの結合を阻害するペプチドであり、さらにＭＭは、天然起源ＡＢ結合パートナーのアミノ酸配列を持たず；および（ｂ）非切断状態において、活性化可能抗体のＭＭは、標的へのＡＢの特異的結合に干渉し、および切断された（すなわち、活性化）状態で、活性化可能抗体のＭＭは、標的へのＡＢの特異的結合に干渉も競合もしない。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、それに治療薬がコンジュゲートされている活性化可能抗体である。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、薬剤にコンジュゲートされていない。いくつかの実施形態では、検出可能な標識は、マスキング部分に付着される。いくつかの実施形態では、検出可能標識は、プロテアーゼ切断部位のＮ末端側の切断可能部分に付着される。いくつかの実施形態では、ＡＢの単一の抗原結合部位は、マスクされる。いくつかの実施形態では、本開示の抗体が少なくとも２つの抗原結合部位を有する場合、少なくとも１つの抗原結合部位はマスクされ、少なくとも１つの抗原結合部位はマスクされない。いくつかの実施形態では、すべての抗原結合部位が、マスクされる。いくつかの実施形態では、測定するステップは、検出可能な標識を含む二次試薬の使用を含む。 The disclosure also provides (i) contacting a subject or biological sample with an activatable antibody in the presence of a target, and (ii) measuring the level of activated activatable antibody in the subject or biological sample. providing a method of detecting the presence or absence of a cleaving agent in a subject or sample, wherein a detectable level of an activated activatable antibody in the subject or biological sample is detected when the cleaving agent is present in the subject or biological sample; and no detectable levels of activated activatable antibodies in the subject or biological sample, the cleaving agent is not present in the subject or biological sample at detectable levels, and/ or not sufficiently present, thereby indicating that protease cleavage of the activatable antibody cannot be detected in the subject or biological sample. Such activatable antibodies comprise a masking moiety (MM), a cleavable moiety (CM) that is cleaved by a cleaving agent, e.g., a protease, and an antigen binding domain or fragment thereof (AB) that specifically binds a target. and an activatable antibody in its uncleaved (i.e., non-activated) state has, from N-terminus to C-terminus, a structural configuration such as: MM-CM-AB or AB-CM-MM (a) the MM is a peptide that inhibits binding of the AB to the target, and the MM does not have the amino acid sequence of the naturally occurring AB binding partner; and (b) in the uncleaved state, is activatable The MM of the antibody interferes with the specific binding of the AB to the target, and in the cleaved (i.e. activated) state, the MM of the activatable antibody neither interferes nor competes with the specific binding of the AB to the target. Neither. In some embodiments, an activatable antibody is an activatable antibody that has a therapeutic agent conjugated thereto. In some embodiments, an activatable antibody is not conjugated to an agent. In some embodiments, a detectable label is attached to the masking moiety. In some embodiments, a detectable label is attached to the cleavable moiety N-terminal to the protease cleavage site. In some embodiments, a single antigen binding site of AB is masked. In some embodiments, when an antibody of the present disclosure has at least two antigen binding sites, at least one antigen binding site is masked and at least one antigen binding site is unmasked. In some embodiments, all antigen binding sites are masked. In some embodiments, the measuring step includes using a secondary reagent that includes a detectable label.

本開示はまた、対象または試料における切断剤および標的の有無を検出する方法で用いるためのキットを提供し、キットは、少なくとも、標的の存在下で活性化可能抗体と対象または生体試料を接触させ、また対象または生体試料における活性化された活性化可能抗体のレベルを測定するのに用いるための、本明細書で記載の活性化可能抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体を含み、対象または生体試料中の検出可能なレベルの活性化された活性化可能抗体が、切断剤が対象または生体試料中に存在することを示し、かつ対象または生体試料中の検出可能でないレベルの活性化された活性化可能抗体が、切断剤が対象もしくは生体試料中に検出可能なレベルで存在せず、および／または十分に存在せず、それにより、活性化可能抗体のプロテアーゼ切断を対象または生体試料中で検出できないことを示す。このような活性化可能抗体は、マスキング部分（ＭＭ）と、切断剤、例えば、プロテアーゼにより切断される切断可能部分（ＣＭ）と、標的を特異的に結合する抗原結合ドメインまたはそのフラグメント（ＡＢ）とを含み、非切断（すなわち非活性化）状態にある活性化可能抗体は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、次記：ＭＭ－ＣＭ－ＡＢまたはＡＢ－ＣＭ－ＭＭ、のような構造配置を含み；（ａ）ＭＭは、標的へのＡＢの結合を阻害するペプチドであり、さらにＭＭは、天然起源ＡＢ結合パートナーのアミノ酸配列を持たず；および（ｂ）非切断状態において、活性化可能抗体のＭＭは、標的へのＡＢの特異的結合に干渉し、および切断された（すなわち、活性化）状態で、活性化可能抗体のＭＭは、標的へのＡＢの特異的結合に干渉も競合もしない。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、それに治療薬がコンジュゲートされている活性化可能抗体である。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、薬剤にコンジュゲートされていない。いくつかの実施形態では、検出可能な標識は、マスキング部分に付着される。いくつかの実施形態では、検出可能標識は、プロテアーゼ切断部位のＮ末端側の切断可能部分に付着される。いくつかの実施形態では、ＡＢの単一の抗原結合部位は、マスクされる。いくつかの実施形態では、本開示の抗体が少なくとも２つの抗原結合部位を有する場合、少なくとも１つの抗原結合部位はマスクされ、少なくとも１つの抗原結合部位はマスクされない。いくつかの実施形態では、すべての抗原結合部位が、マスクされる。いくつかの実施形態では、測定するステップは、検出可能な標識を含む二次試薬の使用を含む。 The present disclosure also provides kits for use in methods of detecting the presence or absence of a cleaving agent and target in a subject or sample, the kit comprising at least contacting the subject or biological sample with an activatable antibody in the presence of the target. , an activatable antibody and/or a conjugated activatable antibody as described herein for use in measuring the level of activated activatable antibody in a subject or biological sample; A detectable level of activated activatable antibody in the subject or biological sample indicates that the cleaving agent is present in the subject or biological sample and no detectable level of activation in the subject or biological sample The activatable antibody is not present in the subject or biological sample at detectable levels and/or not present in sufficient amounts, thereby preventing protease cleavage of the activatable antibody from the subject or biological sample. indicates that it cannot be detected in Such activatable antibodies comprise a masking moiety (MM), a cleavable moiety (CM) that is cleaved by a cleaving agent, e.g., a protease, and an antigen binding domain or fragment thereof (AB) that specifically binds a target. and an activatable antibody in its uncleaved (i.e., non-activated) state has, from N-terminus to C-terminus, a structural configuration such as: MM-CM-AB or AB-CM-MM (a) the MM is a peptide that inhibits binding of the AB to the target, and the MM does not have the amino acid sequence of the naturally occurring AB binding partner; and (b) in the uncleaved state, is activatable The MM of the antibody interferes with the specific binding of the AB to the target, and in the cleaved (i.e. activated) state, the MM of the activatable antibody neither interferes nor competes with the specific binding of the AB to the target. Neither. In some embodiments, an activatable antibody is an activatable antibody that has a therapeutic agent conjugated thereto. In some embodiments, an activatable antibody is not conjugated to an agent. In some embodiments, a detectable label is attached to the masking moiety. In some embodiments, a detectable label is attached to the cleavable moiety N-terminal to the protease cleavage site. In some embodiments, a single antigen binding site of AB is masked. In some embodiments, when an antibody of the present disclosure has at least two antigen binding sites, at least one antigen binding site is masked and at least one antigen binding site is unmasked. In some embodiments, all antigen binding sites are masked. In some embodiments, the measuring step includes using a secondary reagent that includes a detectable label.

本開示はまた、対象または試料における切断剤の有無を検出する方法で用いるためのキットを提供し、キットは、少なくとも、対象または生体試料と接触させるのに用いるための本明細書で記載の活性化可能抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体ならびに対象または生体試料中の活性化された活性化可能抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体のレベルを検出するための手段を含み、活性化可能抗体は、活性化可能抗体の、ＣＭの切断後に放出される部分に配置される検出可能な標識を含み、対象または生体試料中の検出可能なレベルの活性化された活性化可能抗体が、切断剤が対象もしくは生体試料中に存在せず、および／または十分に存在せず、それにより、活性化可能抗体の標的結合および／またはプロテアーゼ切断を、対象または生体試料中で検出できないことを示し、かつ対象または生体試料中の検出可能なレベルにない活性化された活性化可能抗体が、切断剤が対象または生体試料中に検出可能なレベルで存在することを示す。 The present disclosure also provides kits for use in methods of detecting the presence or absence of a cleaving agent in a subject or sample, the kits comprising at least an activity described herein for use in contact with the subject or biological sample. activatable antibody and/or conjugated activatable antibody and means for detecting the level of activated activatable antibody and/or conjugated activatable antibody in a subject or biological sample , the activatable antibody comprises a detectable label disposed on the portion of the activatable antibody that is released after cleavage of the CM, and a detectable level of activated activatable antibody in a subject or biological sample; the antibody is absent and/or insufficiently present in the subject or biological sample such that target binding and/or protease cleavage of the activatable antibody cannot be detected in the subject or biological sample and an activated activatable antibody that is not at detectable levels in the subject or biological sample indicates that the cleaving agent is present at detectable levels in the subject or biological sample.

本開示は、（ｉ）活性化可能抗体と対象または生体試料とを接触させるステップであって、活性化可能抗体が、ＣＭの切断後に放出される活性化可能抗体の部分に配置される検出可能な標識を含む、ステップ、および（ｉｉ）対象または生体試料における活性化された活性化可能抗体のレベルを測定するステップ、によって、対象または試料中の切断剤および標的の有無を検出する方法を提供し、対象または生体試料中の検出可能なレベルの活性化された活性化可能抗体が、切断剤、標的、もしくは切断剤と標的の両方が対象または生体試料中に存在せず、および／または十分に存在せず、それにより、活性化可能抗体の標的結合および／またはプロテアーゼ切断を、対象または生体試料中で検出できないことを示し、かつ対象または生体試料中の低減された検出可能なレベルの活性化された活性化可能抗体が、切断剤および標的が対象または生体試料中に存在することを示す。検出可能な標識の低減されたレベルは、例えば、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％および／または約１００％の低減である。このような活性化可能抗体は、マスキング部分（ＭＭ）と、切断剤により切断される切断可能部分（ＣＭ）と、標的を特異的に結合する抗原結合ドメインまたはそのフラグメント（ＡＢ）とを含み、非切断（すなわち非活性化）状態にある活性化可能抗体は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、次記：ＭＭ－ＣＭ－ＡＢまたはＡＢ－ＣＭ－ＭＭ、のような構造配置を含み；（ａ）ＭＭは、標的へのＡＢの結合を阻害するペプチドであり、またＭＭは、天然起源ＡＢ結合パートナーのアミノ酸配列を持たず；および（ｂ）非切断状態において、活性化可能抗体のＭＭは、標的へのＡＢの特異的結合に干渉し、さらに切断された（すなわち、活性化）状態で、活性化可能抗体のＭＭは、標的へのＡＢの特異的結合に干渉も競合もしない。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、それに治療薬がコンジュゲートされている活性化可能抗体である。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、薬剤にコンジュゲートされない。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、検出可能標識を含む。いくつかの実施形態では、検出可能な標識は、ＡＢに配置される。いくつかの実施形態では、対象または試料中の活性化可能抗体のレベルの測定は、活性化された抗体に特異的に結合する二次試薬を用いて達成され、試薬は検出可能標識を含む。いくつかの実施形態では、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。 The present disclosure provides (i) contacting an activatable antibody with a subject or biological sample, wherein the activatable antibody is located on the portion of the activatable antibody that is released after cleavage of the CM. and (ii) measuring the level of activated activatable antibody in the subject or biological sample, the presence or absence of the cleaving agent and the target in the subject or sample. and that the cleaving agent, the target, or both the cleaving agent and the target are not present in the subject or biological sample and/or sufficient , thereby indicating that target binding and/or protease cleavage of the activatable antibody cannot be detected in the subject or biological sample, and a reduced detectable level of activity in the subject or biological sample An activated activatable antibody indicates that the cleaving agent and target are present in the subject or biological sample. A reduced level of detectable label is, for example, about 5%, about 10%, about 15%, about 20%, about 25%, about 30%, about 35%, about 40%, about 45%, about A reduction of 50%, about 55%, about 60%, about 65%, about 70%, about 75%, about 80%, about 85%, about 90%, about 95% and/or about 100%. Such activatable antibodies comprise a masking portion (MM), a cleavable portion (CM) that is cleaved by a cleaving agent, and an antigen binding domain or fragment thereof (AB) that specifically binds a target, An activatable antibody in its uncleaved (ie, non-activated) state comprises, from N-terminus to C-terminus, a structural configuration such as: MM-CM-AB or AB-CM-MM; a) the MM is a peptide that inhibits binding of the AB to the target, and the MM does not have the amino acid sequence of the naturally occurring AB binding partner; and (b) in the uncleaved state, the MM of the activatable antibody is , interferes with the specific binding of the AB to the target, and in the cleaved (i.e., activated) state, the MM of the activatable antibody neither interferes nor competes with the specific binding of the AB to the target. In some embodiments, an activatable antibody is an activatable antibody that has a therapeutic agent conjugated thereto. In some embodiments, an activatable antibody is not conjugated to an agent. In some embodiments, an activatable antibody includes a detectable label. In some embodiments, the detectable label is placed on the AB. In some embodiments, measuring the level of activatable antibody in a subject or sample is accomplished using a secondary reagent that specifically binds to the activated antibody, the reagent comprising a detectable label. In some embodiments, the secondary reagent is an antibody with a detectable label.

本開示はまた、対象または試料中の切断剤および標的の有無を検出する方法で用いるためのキットを提供し、キットは、少なくとも、対象または生体試料と接触させるために用いる本明細書で記載の活性化可能抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体ならびに対象または生体試料中の活性化された活性化可能抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体のレベルを検出するための手段を含み、対象または生体試料中の検出可能なレベルの活性化された活性化可能抗体が、切断剤、標的、もしくは切断剤と標的の両方が対象または生体試料中に存在せず、および／または十分に存在せず、それにより、活性化可能抗体の標的結合および／またはプロテアーゼ切断を、対象または生体試料中で検出できないことを示し、かつ対象または生体試料中の低減された検出可能なレベルの活性化された活性化可能抗体が、切断剤および標的が対象または生体試料に存在することを示す。検出可能な標識の低減されたレベルは、例えば、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％および／または約１００％の低減である。 The present disclosure also provides kits for use in methods of detecting the presence or absence of a cleaving agent and target in a subject or sample, wherein the kit comprises at least the methods described herein for contacting the subject or biological sample. activatable antibodies and/or conjugated activatable antibodies and means for detecting the level of activated activatable antibodies and/or conjugated activatable antibodies in a subject or biological sample wherein a detectable level of activated activatable antibody in the subject or biological sample is absent and/or sufficient that the cleaving agent, the target, or both the cleaving agent and the target are absent and/or sufficient , thereby indicating that target binding and/or protease cleavage of the activatable antibody cannot be detected in the subject or biological sample, and a reduced detectable level of activity in the subject or biological sample A activated activatable antibody indicates that the cleaving agent and target are present in the subject or biological sample. A reduced level of detectable label is, for example, about 5%, about 10%, about 15%, about 20%, about 25%, about 30%, about 35%, about 40%, about 45%, about A reduction of 50%, about 55%, about 60%, about 65%, about 70%, about 75%, about 80%, about 85%, about 90%, about 95% and/or about 100%.

本開示はまた、（ｉ）活性化可能抗体と対象または生体試料を接触させるステップであって、活性化可能抗体が、ＣＭの切断後に放出される活性化可能抗体の部分に配置される検出可能な標識を含む、ステップ；および（ｉｉ）対象または生体試料における検出可能な標識のレベルを測定するステップ、により対象または試料における切断剤の有無を検出する方法を提供し、対象または生体試料中の検出可能なレベルの検出可能な標識が、切断剤が対象または生体試料に検出可能なレベルで存在せず、および／または十分に存在せず、それにより、活性化可能抗体のプロテアーゼ切断を、対象または生体試料において検出できないことを示し、かつ対象または生体試料中の低減された検出可能なレベルの検出可能な標識が、切断剤が対象または生体試料中に存在することを示す。検出可能な標識の低減されたレベルは、例えば、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％および／または約１００％の低減である。このような活性化可能抗体は、マスキング部分（ＭＭ）と、切断剤により切断される切断可能部分（ＣＭ）と、標的に特異的に結合する抗原結合ドメインまたはそのフラグメント（ＡＢ）とを含み、非切断（すなわち非活性化）状態にある活性化可能抗体は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、次記：ＭＭ－ＣＭ－ＡＢまたはＡＢ－ＣＭ－ＭＭ、のような構造配置を含み；（ａ）ＭＭは、標的へのＡＢの結合を阻害するペプチドであり、またＭＭは、天然起源ＡＢ結合パートナーのアミノ酸配列を持たず；および（ｂ）非切断状態において、活性化可能抗体のＭＭは、標的へのＡＢの特異的結合に干渉し、さらに切断された（すなわち、活性化）状態で、活性化可能抗体のＭＭは、標的へのＡＢの特異的結合に干渉も競合もしない。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、それに治療薬がコンジュゲートされている活性化可能抗体である。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、薬剤にコンジュゲートされない。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、検出可能標識を含む。いくつかの実施形態では、検出可能な標識は、ＡＢに配置される。いくつかの実施形態では、対象または試料中の活性化可能抗体のレベルの測定は、活性化された抗体に特異的に結合する二次試薬を用いて達成され、試薬は検出可能標識を含む。いくつかの実施形態では、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。 The present disclosure also provides (i) contacting a subject or biological sample with an activatable antibody, wherein the activatable antibody is located on the portion of the activatable antibody that is released after cleavage of the CM. and (ii) measuring the level of the detectable label in the subject or biological sample, comprising: A detectable level of a detectable label is present in the subject or biological sample in which the cleaving agent is absent at detectable levels and/or absent in sufficient amounts, thereby protease cleaving the activatable antibody in the subject. or not detectable in the biological sample, and a reduced detectable level of the detectable label in the subject or biological sample indicates that the cleaving agent is present in the subject or biological sample. A reduced level of detectable label is, for example, about 5%, about 10%, about 15%, about 20%, about 25%, about 30%, about 35%, about 40%, about 45%, about A reduction of 50%, about 55%, about 60%, about 65%, about 70%, about 75%, about 80%, about 85%, about 90%, about 95% and/or about 100%. Such activatable antibodies comprise a masking portion (MM), a cleavable portion (CM) that is cleaved by a cleaving agent, and an antigen binding domain or fragment thereof (AB) that specifically binds to a target, An activatable antibody in its uncleaved (ie, non-activated) state comprises, from N-terminus to C-terminus, a structural configuration such as: MM-CM-AB or AB-CM-MM; a) the MM is a peptide that inhibits binding of the AB to the target, and the MM does not have the amino acid sequence of the naturally occurring AB binding partner; and (b) in the uncleaved state, the MM of the activatable antibody is , interferes with the specific binding of the AB to the target, and in the cleaved (i.e., activated) state, the MM of the activatable antibody neither interferes nor competes with the specific binding of the AB to the target. In some embodiments, an activatable antibody is an activatable antibody that has a therapeutic agent conjugated thereto. In some embodiments, an activatable antibody is not conjugated to an agent. In some embodiments, an activatable antibody includes a detectable label. In some embodiments, the detectable label is placed on the AB. In some embodiments, measuring the level of activatable antibody in a subject or sample is accomplished using a secondary reagent that specifically binds to the activated antibody, the reagent comprising a detectable label. In some embodiments, the secondary reagent is an antibody with a detectable label.

本開示はまた、対象または試料における注目の切断剤の有無を検出する方法で用いるためのキットであって、キットは、少なくとも、対象または生体試料と接触させるのに用いるための本明細書で記載の活性化可能抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体ならびに対象または生体試料中の活性化された活性化可能抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体のレベルを検出するための手段を含み、活性化可能抗体が、ＣＭの切断後に放出される活性化可能抗体の部分に配置される検出可能な標識を含み、対象または生体試料中の検出可能なレベルの検出可能な標識が、切断剤、標的、もしくは切断剤と標的の両方が対象もしくは生体試料中に存在せず、および／または十分に存在せず、それにより、活性化可能抗体の標的結合および／またはプロテアーゼ切断を、対象または生体試料において検出できないことを示し、かつ対象または生体試料における低減された検出可能なレベルの検出可能な標識が、切断剤および標的が対象または生体試料中に存在することを示す。検出可能な標識の低減されたレベルは、例えば、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％および／または約１００％の低減である。 The present disclosure also provides kits for use in methods of detecting the presence or absence of a cleaving agent of interest in a subject or sample, wherein the kit comprises at least one of the methods described herein for use in contact with the subject or biological sample. and means for detecting the level of activated activatable antibodies and/or conjugated activatable antibodies in a subject or biological sample wherein the activatable antibody comprises a detectable label disposed on the portion of the activatable antibody that is released after cleavage of the CM, wherein a detectable level of the detectable label in the subject or biological sample is The cleaving agent, the target, or both the cleaving agent and the target are absent and/or insufficiently present in the subject or biological sample, thereby inhibiting target binding and/or protease cleavage of the activatable antibody from the subject. or non-detectable in the biological sample, and a reduced detectable level of detectable label in the subject or biological sample indicates that the cleaving agent and target are present in the subject or biological sample. A reduced level of detectable label is, for example, about 5%, about 10%, about 15%, about 20%, about 25%, about 30%, about 35%, about 40%, about 45%, about A reduction of 50%, about 55%, about 60%, about 65%, about 70%, about 75%, about 80%, about 85%, about 90%, about 95% and/or about 100%.

これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、検出可能な標識を含む。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、検出可能な標識は、造影剤、コントラスト剤、酵素、蛍光標識、発色団、色素、１種もしくは複数の金属イオン、またはリガンドベース標識を含む。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、造影剤は、放射性同位元素を含む。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、放射性同位元素は、インジウムまたはテクネチウムである。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、コントラスト剤は、ヨウ素、ガドリニウムまたは酸化鉄を含む。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、酵素は、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、またはβ－ガラクトシダーゼを含む。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、蛍光標識は、黄色蛍光タンパク質（ＹＦＰ）、シアン蛍光タンパク質（ＣＦＰ）、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、改変赤色蛍光タンパク質（ｍＲＦＰ）、赤色蛍光タンパク質ｔｄｉｍｅｒ２（ＲＦＰ ｔｄｉｍｅｒ２）、ＨＣＲＥＤ、またはユーロピウム誘導体を含む。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、発光標識は、Ｎ－メチルアクリジウム誘導体を含む。これらの方法のいくつかの実施形態では、標識は、Ａｌｅｘ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６８０またはＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）７５０などのＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）標識を含む。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、リガンドに基づく標識は、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジンまたは１種もしくは複数のハプテンを含む。 In some embodiments of these methods and kits, the activatable antibody comprises a detectable label. In some embodiments of these methods and kits, detectable labels include imaging agents, contrast agents, enzymes, fluorescent labels, chromophores, dyes, one or more metal ions, or ligand-based labels. In some embodiments of these methods and kits, the imaging agent comprises a radioisotope. In some embodiments of these methods and kits, the radioisotope is indium or technetium. In some embodiments of these methods and kits, the contrast agent comprises iodine, gadolinium, or iron oxide. In some embodiments of these methods and kits, the enzyme comprises horseradish peroxidase, alkaline phosphatase, or β-galactosidase. In some embodiments of these methods and kits, the fluorescent label is yellow fluorescent protein (YFP), cyan fluorescent protein (CFP), green fluorescent protein (GFP), modified red fluorescent protein (mRFP), red fluorescent protein tdimer2 (RFP tdimer2), HCRED, or europium derivatives. In some embodiments of these methods and kits, the luminescent label comprises an N-methyl acridium derivative. In some embodiments of these methods, the label comprises an Alexa Fluor® label, such as Alex Fluor® 680 or Alexa Fluor® 750. In some embodiments of these methods and kits, the ligand-based label comprises biotin, avidin, streptavidin or one or more haptens.

これらの方法のいくつかの実施形態では、方法は、インビボ法である。これらの方法のいくつかの実施形態では、方法は、インサイツ法である。これらの方法のいくつかの実施形態では、方法は、エクスビボ法である。これらの方法のいくつかの実施形態では、方法は、インビトロ法である。 In some embodiments of these methods, the method is an in vivo method. In some embodiments of these methods, the method is an in situ method. In some embodiments of these methods, the method is an ex vivo method. In some embodiments of these methods, the method is an in vitro method.

いくつかの実施形態では、インサイツイメージングおよび／またはインビボイメージングは、治療する患者を特定する方法において有用である。例えば、インサイツイメージングでは、活性化可能抗体は、適切な位置で、例えば、腫瘍部位で、適切なプロテアーゼおよび標的を有するそれらの患者を特定するために患者試料をスクリーニングするために使用される。 In some embodiments, in situ imaging and/or in vivo imaging are useful in methods of identifying patients for treatment. For example, in in situ imaging, activatable antibodies are used to screen patient samples to identify those patients with appropriate proteases and targets at appropriate locations, eg, at tumor sites.

いくつかの実施形態では、本開示の活性化可能抗体での治療に適した患者集団を特定するか、あるいは精密化するためにインサイツイメージングが用いられる。例えば、試験される活性化可能抗体の切断可能部分（ＣＭ）中の基質を切断するプロテアーゼおよび標的（例えば、標的）の両方について検査で陽性である（例えば、疾患部位に活性化された抗体を蓄積する）患者は、そのようなＣＭを含むそのような活性化可能抗体による治療に適した候補として特定される。同様に、これらの方法を用いて試験される活性化可能抗体中のＣＭ中の基質を切断するプロテアーゼおよび標的（例えば、標的）の一方または両方について検査で陰性である患者は、別の治療形態に適した候補として特定され得る。いくつかの実施形態では、第１の活性化可能抗体に関する検査で陰性であるそのような患者は、治療に適した活性化可能抗体（例えば、疾患の部位で患者により切断されるＣＭを含む活性化可能抗体）が特定されるまで、異なるＣＭを含む他の活性化可能抗体で試験されてよい。いくつかの実施形態では、患者はその後、それについて患者が試験で陽性であった活性化可能抗体の治療有効量を投与される。 In some embodiments, in situ imaging is used to identify or refine patient populations suitable for treatment with activatable antibodies of the present disclosure. For example, testing positive for both the protease that cleaves the substrate and the target (e.g., target) in the cleavable portion (CM) of the activatable antibody being tested (e.g., disease site activated antibody accumulate) are identified as good candidates for treatment with such activatable antibodies, including such CM. Similarly, patients who test negative for one or both of a protease that cleaves a substrate in CM and a target (e.g., target) in an activatable antibody tested using these methods may be treated with alternative forms of treatment. can be identified as a suitable candidate for In some embodiments, such patients who test negative for the first activatable antibody are treated with a therapeutically suitable activatable antibody (e.g., an active CM comprising CM cleaved by the patient at the site of disease). Other activatable antibodies, including different CMs, may be tested until an activatable antibody) is identified. In some embodiments, the patient is then administered a therapeutically effective amount of an activatable antibody for which the patient has tested positive.

いくつかの実施形態では、本開示の活性化可能抗体での治療に適した患者集団を特定するか、あるいは精密化するためにインビボイメージングが用いられる。例えば、試験される活性化可能抗体の切断可能部分（ＣＭ）中の基質を切断するプロテアーゼおよび標的（例えば、標的）の両方について検査で陽性である（例えば、疾患部位に活性化された抗体を蓄積する）患者は、そのようなＣＭを含むそのような活性化可能抗体による治療に適した候補として特定される。同様に、検査で陰性である患者は、別の治療形態に適した候補として特定され得る。いくつかの実施形態では、第１の活性化可能抗体に関する検査で陰性であるそのような患者は、治療に適した活性化可能抗体（例えば、疾患の部位で患者により切断されるＣＭを含む活性化可能抗体）が特定されるまで、異なるＣＭを含む他の活性化可能抗体で試験されてよい。いくつかの実施形態では、患者はその後、それについて患者が試験で陽性であった活性化可能抗体の治療有効量を投与される。 In some embodiments, in vivo imaging is used to identify or refine patient populations suitable for treatment with activatable antibodies of the present disclosure. For example, testing positive for both the protease that cleaves the substrate and the target (e.g., target) in the cleavable portion (CM) of the activatable antibody being tested (e.g., disease site activated antibody accumulate) are identified as good candidates for treatment with such activatable antibodies, including such CM. Similarly, patients who test negative may be identified as good candidates for another form of treatment. In some embodiments, such patients who test negative for the first activatable antibody are treated with a therapeutically suitable activatable antibody (e.g., an active CM comprising CM cleaved by the patient at the site of disease). Other activatable antibodies, including different CMs, may be tested until an activatable antibody) is identified. In some embodiments, the patient is then administered a therapeutically effective amount of an activatable antibody for which the patient has tested positive.

本方法およびキットのいくつかの実施形態では、本開示の活性化可能抗体での治療に適した患者集団を特定するか、あるいは精密化するために本方法またはキットが用いられる。例えば、これらの方法において試験される活性化可能抗体の切断可能部分（ＣＭ）中の基質を切断するプロテアーゼおよび標的（例えば、標的）の両方について検査で陽性である患者は、そのようなＣＭを含むそのような活性化可能抗体による治療に適した候補として特定される。同様に、これらの方法を用いて試験される活性化可能抗体中のＣＭ中の基質を切断するプロテアーゼおよび標的（例えば、標的）の両方の検査について陰性である患者は、別の治療形態に適した候補として特定され得る。いくつかの実施形態では、そのような患者は、治療に適した活性化可能抗体（例えば、疾患の部位で患者により切断されるＣＭを含む活性化可能抗体）が特定されるまで他の活性化可能抗体で試験されてよい。いくつかの実施形態では、標的（例えば、標的）の一方の検査で陰性である患者は、そのようなＣＭを含むそのような活性化可能抗体による治療に適した候補として特定される。いくつかの実施形態では、標的（例えば、標的）の一方の検査で陰性である患者は、そのようなＣＭを含むそのような活性化可能抗体による治療に適した候補ではないとして特定される。いくつかの実施形態では、そのような患者は、治療に適した活性化可能抗体（例えば、疾患の部位で患者により切断されるＣＭを含む活性化可能抗体）が特定されるまで他の活性化可能抗体で試験されてよい。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、それに治療薬がコンジュゲートされている活性化可能抗体である。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、薬剤にコンジュゲートされない。いくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、検出可能標識を含む。いくつかの実施形態では、検出可能な標識は、ＡＢに配置される。いくつかの実施形態では、対象または試料中の活性化可能抗体のレベルの測定は、活性化された抗体に特異的に結合する二次試薬を用いて達成され、試薬は検出可能標識を含む。いくつかの実施形態では、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。 In some embodiments of the methods and kits, the methods or kits are used to identify or refine patient populations suitable for treatment with an activatable antibody of the present disclosure. For example, a patient who tests positive for both a protease that cleaves a substrate and a target (e.g., target) in the cleavable portion (CM) of an activatable antibody tested in these methods may be tested for such CM. identified as suitable candidates for treatment with such activatable antibodies comprising. Similarly, patients who test negative for both proteases that cleave substrates in CM and targets (e.g., targets) in activatable antibodies tested using these methods are suitable for alternative forms of treatment. can be identified as a candidate for In some embodiments, such patients may be treated with other activatable antibodies until a therapeutically appropriate activatable antibody (e.g., an activatable antibody comprising CM that is cleaved by the patient at the site of disease) is identified. possible antibodies. In some embodiments, patients who test negative for one of the targets (eg, targets) are identified as good candidates for treatment with such activatable antibodies comprising such CM. In some embodiments, patients who test negative for one of the targets (eg, targets) are identified as not suitable candidates for treatment with such activatable antibodies comprising such CM. In some embodiments, such patients may be treated with other activatable antibodies until a therapeutically appropriate activatable antibody (e.g., an activatable antibody comprising CM that is cleaved by the patient at the site of disease) is identified. possible antibodies. In some embodiments, an activatable antibody is an activatable antibody that has a therapeutic agent conjugated thereto. In some embodiments, an activatable antibody is not conjugated to an agent. In some embodiments, an activatable antibody includes a detectable label. In some embodiments, the detectable label is placed on the AB. In some embodiments, measuring the level of activatable antibody in a subject or sample is accomplished using a secondary reagent that specifically binds to the activated antibody, the reagent comprising a detectable label. In some embodiments, the secondary reagent is an antibody with a detectable label.

いくつかの実施形態では、本開示の抗標的活性化可能抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体（例えば、それに治療薬がコンジュゲートされている活性化可能抗体）での治療に適した患者集団を特定し、あるいは精密化するために方法またはキットが用いられ、その後それを必要としている対象にその活性化可能抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体を投与することによる治療が続く。例えば、これらの方法において試験される活性化可能抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体の切断可能部分（ＣＭ）中の基質を切断するプロテアーゼおよび標的（例えば、標的）の両方について検査で陽性である患者は、そのようなＣＭを含むそのような抗体および／またはそのようなコンジュゲートされた活性化可能抗体による治療に適した候補として特定され、患者はその後、試験された活性化可能抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体の治療有効量が投与される。同様に、これらの方法を用いて試験される活性化可能抗体中のＣＭ中の基質を切断するプロテアーゼおよび標的（例えば、標的）の一方または両方について検査で陰性である患者は、別の治療形態に適した候補として特定され得る。いくつかの実施形態では、そのような患者は、治療に適した抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体（例えば、疾患の部位で患者により切断されるＣＭを含む活性化可能抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体）が特定されるまで他の抗体および／またはコンジュゲート活性化可能抗体で試験されてよいできる。いくつかの実施形態では、患者はその後、患者が試験で陽性であった活性化可能抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体の治療有効量を投与される。 In some embodiments, suitable for treatment with anti-target activatable antibodies and/or conjugated activatable antibodies of the present disclosure (e.g., activatable antibodies conjugated thereto with therapeutic agents) A method or kit is used to identify or refine a patient population, followed by treatment by administering the activatable antibody and/or conjugated activatable antibody to a subject in need thereof. Continue. For example, both the protease and the target (e.g., target) that cleave the substrate in the activatable antibody and/or the cleavable portion (CM) of the conjugated activatable antibody tested in these methods can be tested. Patients who are positive are identified as suitable candidates for treatment with such antibodies comprising such CM and/or such conjugated activatable antibodies, and patients are subsequently tested for activatable antibodies. A therapeutically effective amount of antibody and/or conjugated activatable antibody is administered. Similarly, patients who test negative for one or both of a protease that cleaves a substrate in CM and a target (e.g., target) in an activatable antibody tested using these methods may be treated with alternative forms of treatment. can be identified as a suitable candidate for In some embodiments, such patients receive therapeutic antibodies and/or activatable antibodies conjugated (e.g., activatable antibodies comprising CM that are cleaved by the patient at the site of disease and/or or conjugated activatable antibodies) may be tested with other antibodies and/or conjugated activatable antibodies until one is identified. In some embodiments, the patient is then administered a therapeutically effective amount of the activatable antibody and/or conjugated activatable antibody for which the patient has tested positive.

これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、ＭＭは、約４～４０アミノ酸長を有するペプチドである。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、ＭＭとＣＭの間に配置されるリンカーペプチドを含む。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、ＡＢとＣＭの間に配置されるリンカーペプチドを含む。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、活性化可能抗体は、第１のリンカーペプチド（Ｌ１）および第２のリンカーペプチド（Ｌ２）を含み、第１のリンカーペプチドはＭＭとＣＭの間に位置し、第２のリンカーペプチドはＡＢとＣＭの間に位置している。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、Ｌ１およびＬ２の各々は、約１～２０アミノ酸長のペプチドであり、Ｌ１およびＬ２の各々は同じリンカーである必要はない。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、Ｌ１およびＬ２の一方または両方は、グリシン－セリンポリマーを含む。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、Ｌ１およびＬ２の少なくとも一方は、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ（配列番号１１６）および（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１１７）からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、ｎは少なくとも１の整数である。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、Ｌ１およびＬ２の少なくとも一方は、式（ＧＧＳ）ｎを有するアミノ酸配列を含み、ｎは少なくとも１の整数である。これらの方法およびキットのいくついくつかの実施形態では、Ｌ１およびＬ２の少なくとも一方は、下記からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ（配列番号１１８）、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ（配列番号１１９）、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ（配列番号１２０）、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ（配列番号１２１）、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ（配列番号１２２）、およびＧｌｙ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ（配列番号１２３）。 In some embodiments of these methods and kits, the MM is a peptide having a length of about 4-40 amino acids. In some embodiments of these methods and kits, the activatable antibody comprises a linker peptide positioned between the MM and CM. In some embodiments of these methods and kits, the activatable antibody comprises a linker peptide positioned between AB and CM. In some embodiments of these methods and kits, the activatable antibody comprises a first linker peptide (L1) and a second linker peptide (L2), wherein the first linker peptide is between MM and CM. and a second linker peptide is located between AB and CM. In some embodiments of these methods and kits, each of L1 and L2 is a peptide of about 1-20 amino acids in length, and each of L1 and L2 need not be the same linker. In some embodiments of these methods and kits, one or both of L1 and L2 comprise a glycine-serine polymer. In some embodiments of these methods and kits, at least one of L1 and L2 is selected from the group consisting of (GS)n, (GSGGS)n (SEQ ID NO: 116) and (GGGS)n (SEQ ID NO: 117) where n is an integer of at least one. In some embodiments of these methods and kits, at least one of L1 and L2 comprises an amino acid sequence having the formula (GGS)n, where n is an integer of at least one. In some embodiments of these methods and kits, at least one of L1 and L2 comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of: Gly-Gly-Ser-Gly (SEQ ID NO: 118), Gly- Gly-Ser-Gly-Gly (SEQ ID NO: 119), Gly-Ser-Gly-Ser-Gly (SEQ ID NO: 120), Gly-Ser-Gly-Gly-Gly (SEQ ID NO: 121), Gly-Gly-Gly-Ser -Gly (SEQ ID NO: 122), and Gly-Ser-Ser-Ser-Gly (SEQ ID NO: 123).

これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、ＡＢは、本明細書で提示される交差反応性抗体配列から選択される抗体または抗体フラグメント配列を含む。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、ＡＢは、Ｆａｂフラグメント、ｓｃＦｖまたは単鎖抗体（ｓｃＡｂ）を含む。 In some embodiments of these methods and kits, the ABs comprise antibody or antibody fragment sequences selected from the cross-reactive antibody sequences presented herein. In some embodiments of these methods and kits, the AB comprises a Fab fragment, scFv or single chain antibody (scAb).

これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、切断剤は、対象または試料中に標的と共局在するプロテアーゼであり、ＣＭは、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドであり、プロテアーゼは、活性化可能抗体がプロテアーゼに曝露されると活性化可能抗体中のＣＭを切断する。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、ＣＭは、最大１５アミノ酸長のポリペプチドである。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、ＣＭは、ＡＢのＮ末端にカップリングされる。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、ＣＭは、ＡＢのＣ末端にカップリングされる。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、ＣＭは、ＡＢのＶＬ鎖のＮ末端にカップリングされる。 In some embodiments of these methods and kits, the cleaving agent is a protease that co-localizes with the target in the subject or sample, CM is a polypeptide that functions as a substrate for the protease, and the protease is active When the activatable antibody is exposed to a protease, it cleaves the CM in the activatable antibody. In some embodiments of these methods and kits, CM is a polypeptide up to 15 amino acids in length. In some embodiments of these methods and kits, CM is coupled to the N-terminus of AB. In some embodiments of these methods and kits, CM is coupled to the C-terminus of AB. In some embodiments of these methods and kits, CM is coupled to the N-terminus of the AB VL chain.

本開示の抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体、および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体は、診断および予防用製剤で用いられる。一実施形態では、活性化可能抗体は、前述の炎症、炎症性障害、癌または他の障害の１種または複数を発症する危険性のある患者に投与される。 The antibodies, conjugated antibodies, activatable antibodies, and/or conjugated activatable antibodies of the disclosure find use in diagnostic and prophylactic formulations. In one embodiment, an activatable antibody is administered to a patient at risk of developing one or more of the aforementioned inflammations, inflammatory disorders, cancer or other disorders.

前述の障害の１種または複数に対する患者または器官の素因は、遺伝子型、血清学的または生化学的マーカーを使用して決定できる。 A patient's or organ's predisposition to one or more of the aforementioned disorders can be determined using genotypic, serological or biochemical markers.

本開示のいくつかの実施形態では、抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体、および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体は、前述の障害の１種または複数に関連する臨床適応症と診断されたヒト個体に投与される。診断時に、抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体、および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体は、臨床適応症の影響を緩和するか、または回復させるために投与される。 In some embodiments of the disclosure, the antibody, conjugated antibody, activatable antibody, and/or conjugated activatable antibody is used for clinical indications associated with one or more of the aforementioned disorders. administered to a human individual diagnosed with At diagnosis, antibodies, conjugated antibodies, activatable antibodies, and/or conjugated activatable antibodies are administered to alleviate or reverse the effects of clinical indications.

本開示の抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体、および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体はまた、患者試料中の標的の検出においても有用であり、したがって診断薬として有用である。例えば、本開示の抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体、および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体は、患者試料における標的レベルを検出するためにインビトロアッセイ法、例えばＥＬＩＳＡにおいて用いられる。 Antibodies, conjugated antibodies, activatable antibodies, and/or conjugated activatable antibodies of the present disclosure are also useful in detecting targets in patient samples and are therefore useful as diagnostic agents. . For example, antibodies, conjugated antibodies, activatable antibodies, and/or conjugated activatable antibodies of the present disclosure are used in in vitro assays, such as ELISA, to detect target levels in patient samples. .

一実施形態では、本開示の抗体および／または活性化可能抗体は、固体支持体（例えば、マイクロタイタープレートのウェル）上に固定される。固定された抗体および／または活性化可能抗体は、試験試料中に存在し得る任意の標的の捕捉抗体として機能する。固定された抗体および／または活性化可能抗体を患者試料と接触させる前に、固体支持体を、すすぎ、乳タンパク質またはアルブミンなどのブロッキング剤で処理して被分析物の非特異的吸着を防ぐ。 In one embodiment, antibodies and/or activatable antibodies of the disclosure are immobilized on a solid support (eg, wells of a microtiter plate). The immobilized and/or activatable antibody serves as a capture antibody for any target that may be present in the test sample. Prior to contacting the immobilized and/or activatable antibody with the patient sample, the solid support is rinsed and treated with a blocking agent such as milk protein or albumin to prevent non-specific adsorption of the analyte.

次に、ウェルを、抗原の含有が疑われる試験試料を用いて、または標準の抗原量を含有する溶液を用いて処理する。このような試料は、例えば、病状を示すと見なされる循環抗原レベルを有することが疑われる対象からの血清試料である。試験試料または標準物質を洗い流した後、固体支持体は、検出可能なように標識された第２の抗体で処理される。標識された第２の抗体は、検出抗体として機能する。検出可能な標識のレベルを測定し、試験試料中の標的抗原の濃度を、標準試料から作成した標準曲線との比較により測定する。 Wells are then treated with a test sample suspected of containing antigen or with a solution containing a standard amount of antigen. Such samples are, for example, serum samples from subjects suspected of having circulating antigen levels considered indicative of a medical condition. After washing away the test sample or standard, the solid support is treated with a detectably labeled second antibody. A labeled second antibody serves as the detection antibody. The level of detectable label is determined and the concentration of target antigen in the test sample is determined by comparison to a standard curve generated from standard samples.

インビトロ診断アッセイ法で本開示の抗体および／または活性化可能抗体を用いて得られた結果に基づき、標的抗原の発現レベルに基づき対象において疾患を病期分類できることは理解されよう。所与の疾患について、血液試料を、疾患進行の様々な段階にあると診断された対象から、および／または疾患の治療的処置における様々な時点で採取する。進行または治療の各段階について統計的に有意な結果を提供する試料の集団を用いて、各段階に特徴的であるとみなされ得る抗原の濃度の範囲が指定される。 Based on the results obtained using the antibodies and/or activatable antibodies of the present disclosure in in vitro diagnostic assays, it will be appreciated that disease can be staged in a subject based on the level of expression of the target antigen. For a given disease, blood samples are taken from subjects diagnosed with various stages of disease progression and/or at various points in the therapeutic treatment of the disease. Using populations of samples that provide statistically significant results for each stage of progression or therapy, ranges of antigen concentrations that can be considered characteristic of each stage are specified.

抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体はまた、診断方法および／またはイメージング方法において用いることもできる。いくつかの実施形態では、このような方法は、インビトロ法である。いくつかの実施形態では、このような方法は、インビボ法である。いくつかの実施形態では、このような方法は、インサイツ法である。いくつかの実施形態では、このような方法は、エクスビボ法である。例えば、酵素的に切断可能なＣＭを有する活性化可能抗体を用いて、ＣＭを切断できる酵素の有無を検出できる。このような活性化可能抗体は、所定の宿主生物の所定の細胞または組織中の活性化された抗体（すなわち、活性化可能抗体の切断から生じた抗体）の蓄積の測定による酵素活性（または、いくつかの実施形態では、高められた還元電位の環境、例えば、ジスルフィド結合の還元を提供できる環境）のインビボ検出（例えば、定性的または定量的）を含み得る、診断で使用できる。活性化された抗体のそのような蓄積は、組織が酵素活性（またはＣＭの性質に依って増大した還元電位）を発現することだけでなく、活性化された抗体が結合する標的を組織が発現することも示す。 Antibodies, conjugated antibodies, activatable antibodies and/or conjugated activatable antibodies can also be used in diagnostic and/or imaging methods. In some embodiments, such methods are in vitro methods. In some embodiments, such methods are in vivo methods. In some embodiments, such methods are in situ methods. In some embodiments, such methods are ex vivo methods. For example, an activatable antibody with an enzymatically cleavable CM can be used to detect the presence of an enzyme capable of cleaving the CM. Such activatable antibodies are characterized by enzymatic activity (or In some embodiments, it can be used in diagnostics, which can include in vivo detection (eg, qualitative or quantitative) of an environment of elevated reduction potential, eg, an environment capable of providing reduction of disulfide bonds. Such accumulation of activated antibody not only causes the tissue to develop enzymatic activity (or increased reduction potential, depending on the properties of the CM), but also to the tissue to which the activated antibody binds. Also indicate that

例えば、ＣＭは、腫瘍の部位で、生物学的に閉じ込められた部位（例えば、膿瘍、器官など）などでのウイルスまたは細菌感染の部位で見つかるプロテアーゼに対するプロテアーゼ基質であるように選択できる。ＡＢは、標的抗原を結合するものであり得る。当業者によく知られている方法を使用して、検出可能な標識（例えば、蛍光標識または放射性標識または放射性トレーサー）をＡＢまたは活性化可能抗体の他の領域にコンジュゲートさせることができる。検出可能な標識は、上記のスクリーニング方法の観点で考察されており、さらなる具体的な例が以下に提供される。着目疾患組織中で活性が上昇するプロテアーゼとともに、疾患状態のタンパク質またはペプチドに特異的なＡＢを用いて、活性化可能抗体は、ＣＭ特異的な酵素が検出可能なレベルで存在しない、もしくは疾患組織におけるよりも低いレベルで存在するか不活性である（例えば、酵素前駆体の形態にあるもしくは阻害物質と複合体の状態にある）組織と比べて、増大した疾患組織への結合速度を示すであろう。小さなタンパク質およびペプチドが腎臓濾過システムによって血液から迅速に除去されるために、およびＣＭに特異的な酵素が検出可能なレベルで存在しない（または非疾患組織ではより低いレベルで存在するか、もしくは不活性なコンフォメーションで存在する）ので、疾患組織における活性化された抗体の蓄積は、非疾患組織と比べて増大する。 For example, CM can be selected to be a protease substrate for proteases found at sites of tumors, at sites of biologically confined sites (eg, abscesses, organs, etc.), and at sites of viral or bacterial infections. The AB can be one that binds a target antigen. Detectable labels (e.g., fluorescent labels or radiolabels or radiotracers) can be conjugated to ABs or other regions of activatable antibodies using methods well known to those of skill in the art. Detectable labels are discussed in the context of the screening methods above, and further specific examples are provided below. Using an AB specific for a disease state protein or peptide, along with a protease whose activity is elevated in the diseased tissue of interest, the activatable antibody will show that the CM-specific enzyme is absent at detectable levels, or that the diseased tissue can exhibit increased rates of binding to diseased tissue relative to tissues that are present at lower levels than in zymogens or are inactive (e.g., in the form of zymogens or in complexes with inhibitors). be. Because small proteins and peptides are rapidly cleared from the blood by the renal filtration system, and CM-specific enzymes are not present at detectable levels (or are present at lower levels or absent in non-diseased tissues). active conformation), the accumulation of activated antibodies in diseased tissue is increased compared to non-diseased tissue.

別の例では、活性化可能抗体を用いて、試料中の切断剤の有無を検出できる。例えば、活性化可能抗体が酵素による切断を受けやすいＣＭを含む場合、活性化可能抗体を用いて、試料中の酵素の存在を（定性的または定量的に）検出できる。別の例では、活性化可能抗体が還元剤による切断を受けやすいＣＭを含む場合、活性化可能抗体を用いて、試料における還元条件の存在を（定性的または定量的に）検出できる。これらの方法での分析を促進するために、活性化可能抗体は、検出可能に標識でき、支持体（例えば、固体支持体、例えばスライドまたはビーズ）に結合できる。検出可能標識は、活性化可能抗体の切断後に放出されない部分上に配置でき、例えば、検出可能標識は、消光蛍光標識、または切断が生じるまで検出できない他の標識であり得る。アッセイは、例えば、固定された、検出可能的に標識された活性化可能抗体を、酵素および／または還元剤を含むことが疑われる試料と切断が生じるのに十分な時間にわたり接触させた後、過剰の試料および混入物質を除去するために洗浄することにより実施できる。次に、試料中の切断（例えば、酵素または還元剤による）の存在または非存在を次いで、試料との接触の前に、活性化可能抗体の検出可能シグナルの変化、例えば、試料中の切断剤による活性化可能抗体の切断による検出可能シグナルの存在および／または増大、により評価する。 In another example, an activatable antibody can be used to detect the presence or absence of a cleaving agent in a sample. For example, if the activatable antibody comprises a CM that is susceptible to enzymatic cleavage, the activatable antibody can be used to detect (either qualitatively or quantitatively) the presence of the enzyme in the sample. In another example, an activatable antibody can be used to detect (qualitatively or quantitatively) the presence of reducing conditions in a sample if the activatable antibody comprises a CM that is susceptible to cleavage by a reducing agent. To facilitate analysis in these methods, the activatable antibody can be detectably labeled and attached to a support (eg, a solid support such as a slide or bead). A detectable label can be placed on a portion of the activatable antibody that is not released after cleavage, for example, the detectable label can be a quenching fluorescent label or other label that is not detectable until cleavage occurs. The assay comprises, for example, contacting an immobilized, detectably labeled, activatable antibody with a sample suspected of containing an enzyme and/or a reducing agent for a time sufficient for cleavage to occur, followed by This can be done by washing to remove excess sample and contaminants. The presence or absence of cleavage (e.g., by an enzyme or reducing agent) in the sample is then determined by a change in the detectable signal of the activatable antibody, e.g., a cleaving agent in the sample, prior to contact with the sample. Cleavage of the activatable antibody by the presence and/or enhancement of a detectable signal.

そのような検出方法は、切断時に活性化可能抗体のＡＢを結合できる標的の有無の検出も提供するように適合させることができる。したがって、アッセイは、切断剤の存在または非存在、および目的の標的の存在または非存在を評価するように適合させることができる。切断剤の存在または非存在は、上記のような活性化可能抗体の検出可能レベルの存在および／または増大により検出でき、標的の存在または非存在は、標的－ＡＢ複合体の検出により、例えば、検出可能に標識された抗標的抗体の使用により検出できる。 Such detection methods can be adapted to also provide detection of the presence or absence of a target capable of binding the AB of the activatable antibody upon cleavage. Assays can thus be adapted to assess the presence or absence of a cleaving agent and the presence or absence of a target of interest. The presence or absence of a cleaving agent can be detected by the presence and/or increase in detectable levels of an activatable antibody as described above, and the presence or absence of a target can be detected by detection of target-AB complexes, e.g. Detection can be achieved through the use of a detectably labeled anti-target antibody.

活性化可能抗体はまた、例えば、プロテアーゼ切断、および特定の標的への結合による、活性化可能抗体の活性化の検証のためのインサイツイメージングにおいても有用である。インサイツイメージングは、細胞培養物または組織切片などの生体試料中のタンパク質分解活性および標的の局在化を可能にする技術である。この技術を用いて、検出可能な標識（例えば、蛍光標識）の存在に基づき、所与の標的への結合およびタンパク質分解活性の両方を確認できる。 Activatable antibodies are also useful in in situ imaging for verification of activation of activatable antibodies, eg, by protease cleavage and binding to a specific target. In situ imaging is a technique that allows localization of proteolytic activity and targets in biological samples such as cell cultures or tissue sections. Using this technique, both binding to a given target and proteolytic activity can be confirmed based on the presence of a detectable label (eg, fluorescent label).

これらの技術は、疾患部位（例えば、腫瘍組織）または健康組織由来の任意の凍結された細胞または組織で有用である。これらの技術はまた、新鮮な細胞または組織試料でも有用である。 These techniques are useful with any frozen cell or tissue from a diseased site (eg, tumor tissue) or healthy tissue. These techniques are also useful with fresh cell or tissue samples.

これらの技術において、活性化可能抗体は、検出可能な標識で標識される。検出可能な標識は、蛍光色素（例えばフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、ローダミンイソチオシアネート（ＴＲＩＴＣ）、近赤外（ＮＩＲ）色素（例えば、Ｑｄｏｔ（登録商標）ナノクリスタル）、コロイド金属、ハプテン、放射性マーカー、ビオチンおよびストレプトアビジンなどの増幅試薬、または酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼ）であり得る。 In these techniques, an activatable antibody is labeled with a detectable label. Detectable labels include fluorescent dyes (e.g. fluorescein isothiocyanate (FITC), rhodamine isothiocyanate (TRITC), near-infrared (NIR) dyes (e.g. Qdot® nanocrystals), colloidal metals, haptens, radioactive markers). , amplification reagents such as biotin and streptavidin, or enzymes such as horseradish peroxidase or alkaline phosphatase.

標識された活性化可能抗体とインキュベートされた試料中の標識の検出は、試料が標的を含み、かつ活性化可能抗体のＣＭに特異的なプロテアーゼを含有することを示す。いくつかの実施形態では、プロテアーゼの存在を、本明細書で記載のものなどの広域プロテアーゼ阻害剤を用いて、および／またはプロテアーゼに特異的である薬剤、例えば、プロテアーゼのマトリプターゼに特異的でありマトリプターゼのタンパク質分解活性を阻害する、Ａ１１などの抗体を用いることにより、確認できる；例えば、１０１０年１１月１１日公開の国際公開第２０１０／１２９６０９号を参照されたい。本明細書で記載のものなどの広域プロテアーゼ阻害剤を用いる、および／またはより選択的な阻害剤を用いることによる同じ手法を用いて、活性化可能抗体のＣＭに特異的なプロテアーゼまたはプロテアーゼのクラスを特定できる。いくつかの実施形態では、標的の存在を、その標的に特異的な薬剤、例えば、別の抗体を使用して確認でき、または、検出可能な標識を、標識されていない標的と競合させることができる。いくつかの実施形態では、標識されていない活性化可能抗体を、標識された二次抗体またはより複雑な検出系による検出とともに、用いることができる。 Detection of label in a sample incubated with a labeled activatable antibody indicates that the sample contains the target and contains a protease specific for the CM of the activatable antibody. In some embodiments, the presence of a protease is monitored using broad-spectrum protease inhibitors such as those described herein and/or agents that are specific for proteases, such as the protease matriptase. This can be confirmed by using an antibody such as A11 that inhibits the proteolytic activity of ant matriptase; Using the same approach by using broad-spectrum protease inhibitors such as those described herein and/or by using more selective inhibitors, proteases or classes of proteases specific to CM of activatable antibodies can be identified. In some embodiments, the presence of the target can be confirmed using an agent specific for that target, such as another antibody, or the detectable label can be competed with the unlabeled target. can. In some embodiments, unlabeled activatable antibodies can be used with detection by labeled secondary antibodies or more complex detection systems.

同様の手法は、インビボイメージングにも有用であり、ここでは、例えばヒトを含む哺乳動物などの対象中での蛍光シグナルの検出は、疾患部位が標的を含み、かつ活性化可能抗体のＣＭに特異的なプロテアーゼを含むことを示す。 A similar approach is also useful for in vivo imaging, where detection of fluorescent signals in a subject, such as a mammal, including humans, is performed by determining that the disease site contains a target and that the activatable antibody is CM-specific. containing a specific protease.

これらの技術はまた、活性化可能抗体におけるプロテアーゼ特異的ＣＭに基づく種々の細胞、組織および生物におけるプロテアーゼ活性の検出、特定、または特性づけのためのキットにおいておよび／または試薬として有用である。 These techniques are also useful in kits and/or as reagents for the detection, identification or characterization of protease activity in various cells, tissues and organisms based on protease-specific CM in activatable antibodies.

いくつかの実施形態では、インサイツイメージングおよび／またはインビボイメージングは、治療する患者を特定する方法において有用である。例えば、インサイツイメージングでは、活性化可能抗体は、適切な位置で、例えば、腫瘍部位で、適切なプロテアーゼおよび標的を有するそれらの患者を特定するために患者試料をスクリーニングするために使用される。 In some embodiments, in situ imaging and/or in vivo imaging are useful in methods of identifying patients for treatment. For example, in in situ imaging, activatable antibodies are used to screen patient samples to identify those patients with appropriate proteases and targets at appropriate locations, eg, at tumor sites.

いくつかの実施形態では、本開示の活性化可能抗体での治療に適した患者集団を特定するか、あるいは精密化するためにインサイツイメージングが用いられる。例えば、試験される活性化可能抗体の切断可能部分（ＣＭ）中の基質を切断するプロテアーゼおよび標的の両方について検査で陽性である（例えば、疾患部位に活性化された抗体を蓄積する）患者は、そのようなＣＭを含むそのような活性化可能抗体による治療に適した候補として特定される。同様に、これらの方法を用いて試験される活性化可能抗体中のＣＭ中の基質を切断するプロテアーゼおよび標的の一方または両方について検査で陰性である患者は、別の治療形態に適した（すなわち、試験される活性化可能抗体での治療に適していない）候補として特定される。いくつかの実施形態では、第１の活性化可能抗体に関する検査で陰性であるそのような患者は、治療に適した活性化可能抗体（例えば、疾患の部位で患者により切断されるＣＭを含む活性化可能抗体）が特定されるまで、異なるＣＭを含む他の活性化可能抗体で試験されてよい。 In some embodiments, in situ imaging is used to identify or refine patient populations suitable for treatment with activatable antibodies of the present disclosure. For example, a patient who tests positive for both the protease and the target that cleaves the substrate in the cleavable portion (CM) of the activatable antibody being tested (e.g., accumulates activated antibody at disease sites) , are identified as suitable candidates for treatment with such activatable antibodies, including such CMs. Similarly, patients who test negative for one or both of the proteases and targets that cleave substrates in CM in activatable antibodies tested using these methods are suitable for alternative forms of treatment (i.e. , unsuitable for treatment with the activatable antibody being tested) are identified as candidates. In some embodiments, such patients who test negative for the first activatable antibody are treated with a therapeutically suitable activatable antibody (e.g., an active CM comprising CM cleaved by the patient at the site of disease). Other activatable antibodies, including different CMs, may be tested until an activatable antibody) is identified.

いくつかの実施形態では、本開示の活性化可能抗体での治療に適した患者集団を特定するか、あるいは精密化するためにインビボイメージングが用いられる。例えば、試験される活性化可能抗体の切断可能部分（ＣＭ）中の基質を切断するプロテアーゼおよび標的の両方について検査で陽性である（例えば、疾患部位に活性化された抗体を蓄積する）患者は、そのようなＣＭを含むそのような活性化可能抗体による治療に適した候補として特定される。同様に、陰性である患者は、別の形の治療のための適切な候補として特定され得る（すなわち、試験された活性化可能抗体による治療に好適でない）。いくつかの実施形態では、第１の活性化可能抗体に関する検査で陰性であるそのような患者は、治療に適した活性化可能抗体（例えば、疾患の部位で患者により切断されるＣＭを含む活性化可能抗体）が特定されるまで、異なるＣＭを含む他の活性化可能抗体で試験されてよい。
医薬組成物
本開示の抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体、および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体（本明細書で「活性化合物」とも呼ばれる）、ならびにその誘導体、フラグメント、類似体および相同体は、投与に適した医薬組成物中に組み入れることができる。このような組成物は典型的には、抗体、コンジュゲートされた抗体、活性化可能抗体、および／またはコンジュゲートされた活性化可能抗体ならびに薬学的に許容される担体を含む。本明細書で使用される「薬学的に許容可能な担体」という用語は、薬学的投与に適合する任意のすべての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを含むことが意図される。好適な担体は、本分野の標準的な参考テキストである、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓの最新版に記載されている。この文献は、参照により本明細書に組み込まれる。このような担体または希釈剤の好適な例としては、限定されないが、水、生理食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液、および５％ヒト血清アルブミンが挙げられる。リポソームおよび不揮発性油などの非水性ビークルも使用され得る。薬学的に活性な物質に対するこのような媒体および薬剤の使用は、当該分野において周知である。任意の従来の媒体または薬剤が活性化合物と不適合である場合を除き、組成物中でのこれらの使用が意図される。補充活性化合物を組成物中に組み入れることもできる。 In some embodiments, in vivo imaging is used to identify or refine patient populations suitable for treatment with activatable antibodies of the present disclosure. For example, a patient who tests positive for both the protease and the target that cleaves the substrate in the cleavable portion (CM) of the activatable antibody being tested (e.g., accumulates activated antibody at disease sites) , are identified as suitable candidates for treatment with such activatable antibodies, including such CMs. Similarly, patients who are negative may be identified as suitable candidates for another form of treatment (ie, unsuitable for treatment with the activatable antibody tested). In some embodiments, such patients who test negative for the first activatable antibody are treated with a therapeutically suitable activatable antibody (e.g., an active CM comprising CM cleaved by the patient at the site of disease). Other activatable antibodies, including different CMs, may be tested until an activatable antibody) is identified.
Pharmaceutical Compositions Antibodies, conjugated antibodies, activatable antibodies, and/or conjugated activatable antibodies of the present disclosure (also referred to herein as "active compounds"), and derivatives, fragments, analogs thereof Entities and homologues can be incorporated into pharmaceutical compositions suitable for administration. Such compositions typically comprise an antibody, conjugated antibody, activatable antibody, and/or conjugated activatable antibody and a pharmaceutically acceptable carrier. The term "pharmaceutically acceptable carrier" as used herein means any and all solvents, dispersion media, coatings, antibacterial and antifungal agents, isotonic and absorption delaying agents compatible with pharmaceutical administration. It is intended to include agents and the like. Suitable carriers are described in the most recent edition of Remington's Pharmaceutical Sciences, a standard reference text in this field. This document is incorporated herein by reference. Suitable examples of such carriers or diluents include, but are not limited to, water, saline, Ringer's solutions, dextrose solution, and 5% human serum albumin. Non-aqueous vehicles such as liposomes and fixed oils may also be used. The use of such media and agents for pharmaceutically active substances is well known in the art. Except insofar as any conventional media or agent is incompatible with the active compound, its use in the composition is contemplated. Supplementary active compounds can also be incorporated into the compositions.

本発明による医薬組成物は、本発明の抗体／活性化可能抗体と担体を含んでよい。これらの医薬組成物は、例えば、診断キットなどの、キットに含まれてよい。 A pharmaceutical composition according to the invention may comprise an antibody/activatable antibody of the invention and a carrier. These pharmaceutical compositions may be included in kits, eg, diagnostic kits.

いくつかの実施形態では、医薬組成物は、本開示の抗体、本開示の活性化可能抗体、本開示のコンジュゲートされた抗体、および／または本開示のコンジュゲートされた活性化可能抗体、および担体を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、追加の薬剤を含む。いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、治療薬である。 In some embodiments, the pharmaceutical composition comprises an antibody of this disclosure, an activatable antibody of this disclosure, a conjugated antibody of this disclosure, and/or a conjugated activatable antibody of this disclosure, and Contains a carrier. In some embodiments, the pharmaceutical composition comprises additional agents. In some embodiments, the additional agent is a therapeutic agent.

本開示の医薬組成物は、その意図される投与経路に適合するように処方される。投与経路の例としては、非経口、例えば静脈内、皮内、皮下、経口（例えば、吸入）、経皮（すなわち局所）、経粘膜、および直腸投与が挙げられる。非経口、皮内、もしくは皮下適用に使用される溶液または懸濁液は、次の成分：注射用の水、食塩水溶液、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、もしくは他の合成溶媒のような無菌希釈剤、ベンジルアルコールもしくはメチルパラベンのような抗菌剤、アスコルビン酸もしくは亜硫酸水素ナトリウムのような酸化防止剤、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）のようなキレート化剤、アセテート、シトレート、もしくはホスフェートのような緩衝剤、ならびに、塩化ナトリウムもしくはデキストロースのような張度調節用の薬剤を含んでよい。ｐＨは、塩酸または水酸化ナトリウムなどの酸または塩基により調節できる。非経口調製物は、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、使い捨て注射器または複数回投与バイアルに封入できる。 A pharmaceutical composition of the disclosure is formulated to be compatible with its intended route of administration. Examples of routes of administration include parenteral, eg, intravenous, intradermal, subcutaneous, oral (eg, inhalation), transdermal (ie, topical), transmucosal, and rectal administration. Solutions or suspensions for parenteral, intradermal, or subcutaneous application may contain the following ingredients: water for injection, saline solutions, fixed oils, polyethylene glycols, glycerine, propylene glycol, or other synthetic solvents. antimicrobial agents such as benzyl alcohol or methylparaben; antioxidants such as ascorbic acid or sodium bisulfite; chelating agents such as ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA); Buffers may be included, as well as tonicity adjusting agents such as sodium chloride or dextrose. pH can be adjusted with acids or bases, such as hydrochloric acid or sodium hydroxide. A parenteral preparation can be enclosed in ampoules, disposable syringes or multiple dose vials made of glass or plastic.

注射可能な用途に適した医薬組成物は、滅菌水溶液（水溶性の場合）または滅菌分散液および注射可能な滅菌溶液または滅菌分散液の即時調製用の滅菌粉末を含む。静脈内投与の場合、担体としては、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，Ｎ．Ｊ．）またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。いずれの場合も、組成物は無菌でなければならず、容易に注射できる程度の流体であるべきである。それは、製造および貯蔵条件下で安定でなければならず、細菌及び菌類のような微生物の汚染作用を受けないように保護されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、ならびにこれらの適切な混合物を含有する、溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用、分散液の場合は必要な粒径の維持、および界面活性剤の使用により維持できる。微生物の作用からの保護は、さまざまな抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどにより達成できる。いくつかの実施形態では、等張剤、例えば、糖、ポリアルコール、例えば、マンニトール、ソルビトール、塩化ナトリウムを組成物に含めることが望ましい。注射可能な組成物の持続的吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを組成物の中に含めることにより実現できる。 Pharmaceutical compositions suitable for injectable use include sterile aqueous solutions (where water soluble) or sterile dispersions and sterile powders for the extemporaneous preparation of sterile injectable solutions or dispersion. For intravenous administration, carriers include physiological saline, bacteriostatic water, Cremophor EL™ (BASF, Parsippany, N.J.) or phosphate buffered saline (PBS). In all cases, the composition must be sterile and should be fluid to the extent that easy syringability exists. It must be stable under the conditions of manufacture and storage and must be preserved against the contaminating action of microorganisms such as bacteria and fungi. The carrier can be a solvent or dispersion medium containing, for example, water, ethanol, polyols such as glycerol, propylene glycol, and liquid polyethylene glycols, and suitable mixtures thereof. Proper fluidity can be maintained, for example, by use of a coating such as lecithin, maintenance of required particle size in the case of dispersions, and use of surfactants. Protection from the action of microorganisms can be achieved with various antibacterial and antifungal agents such as parabens, chlorobutanol, phenol, ascorbic acid, thimerosal, and the like. In some embodiments, it may be desirable to include isotonic agents, for example, sugars, polyalcohols such as mannitol, sorbitol, sodium chloride into the composition. Prolonged absorption of the injectable compositions can be achieved by including in the composition an agent that delays absorption, such as aluminum monostearate and gelatin.

注射可能な滅菌溶液は、必要とされる量の活性化合物を適切な溶媒中に、必要に応じて、上記に列挙した成分の１つまたは組み合わせと共に組み入れ、続けて濾過滅菌を行うことによって調製できる。一般に、分散液は、活性化合物を、基本的な分散媒および上記に列挙したもの由来の必要な他の成分を含む滅菌ビークルに組み込むことにより調製される。無菌の注射可能な溶液を調製するための無菌粉末の場合、調製の方法は、真空乾燥および凍結乾燥であり、これは、以前に滅菌濾過したその溶液からの有効成分および任意の追加の所望の成分の粉末を与える。 Sterile injectable solutions can be prepared by incorporating the active compound in the required amount in an appropriate solvent with one or a combination of ingredients enumerated above, as required, followed by filtered sterilization. . Generally, dispersions are prepared by incorporating the active compound into a sterile vehicle that contains a basic dispersion medium and the required other ingredients from those enumerated above. In the case of sterile powders for the preparation of sterile injectable solutions, methods of preparation include vacuum-drying and lyophilization, which removes the active ingredient from a previously sterile-filtered solution thereof plus any additional desired additives. Give powder of ingredients.

経口用組成物は一般に、不活性希釈剤または食用担体を含む。それらは、ゼラチンカプセルに封入でき、または錠剤へと圧縮できる。治療用経口投与では、活性化合物を、賦形剤とともに組み込むことができ、錠剤、トローチ剤、またはカプセル剤の形態で使用できる。経口組成物はまた、うがい薬としての使用のために流体担体を用いて調製することもでき、流体担体中の化合物は、経口適用され、うがいをして、吐き出されるか、または飲み込まれる。薬学的に適合性のある結合剤、および／または補助物質を、組成物の一部として含めることができる。錠剤、丸剤、カプセル、トローチなどは、次の成分：微結晶性セルロース、トラガカントゴムもしくはゼラチンなどの結合剤；でんぷんもしくはラクトースなどの賦形剤、アルギン酸、プリモゲル、もしくはとうもろこしでんぷんなどの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムもしくはステロート（Ｓｔｅｒｏｔｅ）などの潤滑剤；コロイド状二酸化ケイ素などの流動促進剤；スクロースもしくはサッカリンなどの甘味剤；またはペパーミント、サリチル酸メチル、もしくはオレンジ風味などの香料添加剤、のいずれかまたは類似の性質の化合物を含んでよい。 Oral compositions generally include an inert diluent or an edible carrier. They can be enclosed in gelatin capsules or compressed into tablets. For oral therapeutic administration, the active compound can be incorporated with excipients and used in the form of tablets, troches, or capsules. Oral compositions can also be prepared using a fluid carrier for use as a mouthwash, wherein the compound in the fluid carrier is applied orally and swished and expectorated or swallowed. Pharmaceutically compatible binding agents, and/or adjuvant materials can be included as part of the composition. Tablets, pills, capsules, troches, etc. may contain the following ingredients: binders such as microcrystalline cellulose, gum tragacanth or gelatin; excipients such as starch or lactose; disintegrants such as alginic acid, primogel, or corn starch; stearin. glidants such as colloidal silicon dioxide; sweeteners such as sucrose or saccharin; or flavoring agents such as peppermint, methyl salicylate, or orange flavor. It may contain compounds of the nature of

吸入による投与の場合、化合物は、好適な噴射剤、例えば、二酸化炭素などのガスを含む加圧容器もしくはディスペンサー、またはネブライザーからのエアロゾルスプレーの形態で送達される。 For administration by inhalation, the compounds are delivered in the form of a pressurized container or dispenser with a suitable propellant, eg a gas such as carbon dioxide, or an aerosol spray from a nebulizer.

全身投与はまた、経粘膜的なまたは経皮的な手段によってでよい。経粘膜または経皮的投与の場合、通過すべきバリアに適した浸透剤が、配合物中で使用される。このような浸透剤は通常、当技術分野において既知であり、かつ例えば、経粘膜投与のために、浄化剤、胆汁酸塩、およびフシジン酸誘導体を含む。経粘膜投与は、鼻内噴霧または坐剤の使用により達成され得る。経皮投与の場合、活性化合物は、当技術分野において一般に既知である軟膏、膏薬、ゲル、またはクリームに処方される。 Systemic administration can also be by transmucosal or transdermal means. For transmucosal or transdermal administration, penetrants appropriate to the barrier to be permeated are used in the formulation. Such penetrants are generally known in the art, and include, for example, for transmucosal administration, clearing agents, bile salts, and fusidic acid derivatives. Transmucosal administration can be accomplished through the use of nasal sprays or suppositories. For transdermal administration, the active compounds are formulated into ointments, salves, gels, or creams commonly known in the art.

化合物はまた、坐剤（例えば、ココアバターおよび他のグリセリドなどの従来の坐剤基剤を用いて）または直腸送達用の停留かん腸剤の形態でも調製され得る。 The compounds can also be prepared in the form of suppositories (eg, with conventional suppository bases such as cocoa butter and other glycerides) or retention enemas for rectal delivery.

一実施形態では、活性化合物は、インプラントおよびマイクロカプセル化した送達系を含む、制御放出製剤などの、体内からの迅速除去から化合物を保護する担体を用いて調製される。エチレンビニルアセテート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸のような、生分解性、生体適合性ポリマーを使用できる。このような製剤の調製のための方法は、当業者には自明である。材料を、Ａｌｚａ ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎおよびＮｏｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃから商業的に入手することもできる。リポソーム懸濁液（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体を用いて感染細胞を標的とするリポソームを含む）もまた、薬学的に許容可能な担体として使用できる。これらは、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号に記載の、当業者に既知の方法に従って調製され得る。 In one embodiment, the active compounds are prepared with carriers that will protect the compound against rapid elimination from the body, such as a controlled release formulation, including implants and microencapsulated delivery systems. Biodegradable, biocompatible polymers can be used, such as ethylene vinyl acetate, polyanhydrides, polyglycolic acid, collagen, polyorthoesters, and polylactic acid. Methods for preparation of such formulations will be readily apparent to those skilled in the art. Materials are also commercially available from Alza Corporation and Nova Pharmaceuticals, Inc. Liposomal suspensions (including liposomes targeted to infected cells with monoclonal antibodies to viral antigens) can also be used as pharmaceutically acceptable carriers. These can be prepared according to methods known to those skilled in the art, for example, as described in US Pat. No. 4,522,811.

投与を容易にするために、および投薬量を一様にするために、経口または非経口組成物を投与単位剤形に処方することが、特に有利である。本明細書で使用するとき、投与単位剤形は、治療すべき被験体にとって１回投薬量として適する、物理的に別個の単位を指し、各単位が、必要な医薬担体と関連して所望の治療効果を生み出すように計算された、所定の量の活性化合物を含有する。本開示の投与量単位形態の仕様は、活性化合物の特有の特性および達成されるべき特定の治療効果、ならびにそのような活性化合物を個体の治療のために配合する技術に固有の制限により決定され、それらに直接依存する。 It is especially advantageous to formulate oral or parenteral compositions in dosage unit form for ease of administration and uniformity of dosage. Dosage unit form, as used herein, refers to physically discrete units suited as unitary dosages for the subject to be treated, each unit containing the desired pharmaceutical carrier in association with the required pharmaceutical carrier. It contains a predetermined amount of active compound calculated to produce a therapeutic effect. Specifications for dosage unit forms of the present disclosure are determined by the unique properties of the active compounds and the particular therapeutic effect to be achieved, as well as limitations inherent in the art of formulating such active compounds for the treatment of individuals. , directly depends on them.

医薬組成物は、投与のための使用説明書とともに容器、パックまたはディスペンサーに含まれてよい。 Pharmaceutical compositions may be included in a container, pack or dispenser together with instructions for administration.

本発明は、特許請求の範囲に記述された本発明の範囲を限定するものではない、以下の実施例においてさらに記述される。 The invention is further described in the following examples, which are not intended to limit the scope of the invention described in the claims.

実施例
実施例１．抗ヒトＣＤ４７抗体のキャラクタリゼーション
本明細書で提供される試験は、本開示の抗ヒトＣＤ４７抗体の結合を評価するために設計された。
本開示の抗ヒトＣＤ４７モノクローナル抗体は、当技術分野において既知の技術に従ってマウスハイブリドーマ技術を用いて得られた。マウスを、ヒトＣＤ４７で免疫し、その後のハイブリドーマを、ＥＬＩＳＡによりヒトＣＤ４７への結合に関しスクリーニングし、続いてピギーバックアッセイ（ｐｉｇｇｙｂａｃｋ ａｓｓａｙ）で細胞毒性であることを確認し、ＦＡＣＳにより細胞表面に結合することを確認した。本開示のマウス抗ヒトＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２モノクローナル抗体は、配列番号１の重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号２の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。本開示のいくつかの実施形態では、本開示の例示的抗体は、配列番号１のＨ４Ｌ２重鎖可変領域を有する重鎖および配列番号２のＨ４Ｌ２軽鎖可変領域を有する軽鎖を含む。 Examples Example 1. Characterization of Anti-Human CD47 Antibodies The studies provided herein were designed to assess the binding of the anti-human CD47 antibodies of the disclosure.
The anti-human CD47 monoclonal antibodies of this disclosure were obtained using murine hybridoma technology according to techniques known in the art. Mice were immunized with human CD47 and subsequent hybridomas were screened for binding to human CD47 by ELISA, subsequently confirmed to be cytotoxic by piggyback assay, and bound to the cell surface by FACS. Confirmed to do. The mouse anti-human CD47 H4L2 monoclonal antibody of the present disclosure comprises a heavy chain variable region (VH) of SEQ ID NO:1 and a light chain variable region (VL) of SEQ ID NO:2. In some embodiments of the disclosure, an exemplary antibody of the disclosure comprises a heavy chain having the H4L2 heavy chain variable region of SEQ ID NO:1 and a light chain having the H4L2 light chain variable region of SEQ ID NO:2.

マウス抗ヒトＣＤ４７モノクローナル抗体Ｈ４Ｌ２は、ヒト化抗ヒトＣＤ４７重鎖および軽鎖を形成するようにヒト化された。表１に示すように、本開示のこれらのヒト化抗体重鎖は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメイン（配列番号１１）を有するＨ４Ｌ２－ｈＩｇＧ１重鎖、改変ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメイン（配列番号１２）を有するＨ４Ｌ２－ｈＩｇＧ１強化重鎖、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃドメイン（配列番号１３）を有するＨ４Ｌ２－ｈＩｇＧ４重鎖、および改変ヒトＩｇＧ２ Ｆｃドメイン（配列番号１４）を有するＨ４Ｌ２－ｈＩｇＧ２σを含む。本開示のこれらのヒト化抗体軽鎖の例示的実施形態は、ヒト軽鎖カッパ領域（配列番号１５）を有するＨ４Ｌ２－ｈ－カッパ軽鎖を含む。本開示のこれらの例示的重鎖および軽鎖のアミノ酸配列を下表１に示す。 Mouse anti-human CD47 monoclonal antibody H4L2 was humanized to form humanized anti-human CD47 heavy and light chains. As shown in Table 1, these humanized antibody heavy chains of this disclosure are H4L2-hIgG1 heavy chain with human IgG1 Fc domain (SEQ ID NO:11), H4L2-hIgG1 heavy chain with modified human IgG1 Fc domain (SEQ ID NO:12) hIgG1 enhanced heavy chain, H4L2-hIgG4 heavy chain with human IgG4 Fc domain (SEQ ID NO:13), and H4L2-hIgG2σ with modified human IgG2 Fc domain (SEQ ID NO:14). Exemplary embodiments of these humanized antibody light chains of the disclosure include H4L2-h-kappa light chains with a human light chain kappa region (SEQ ID NO: 15). The amino acid sequences of these exemplary heavy and light chains of this disclosure are shown in Table 1 below.

本開示のいくつかの実施形態では、本開示の例示的抗体は、配列番号１５の軽鎖Ｈ４Ｌ２－ｈ－カッパを有する配列番号１１の重鎖Ｈ４Ｌ２－ｈＩｇＧ１を含む。本開示のいくつかの実施形態では、本開示の例示的抗体は、配列番号１５の軽鎖Ｈ４Ｌ２－ｈ－カッパを有する配列番号１２の重鎖Ｈ４Ｌ２－ｈＩｇＧ１強化を含む。本開示のいくつかの実施形態では、本開示の例示的抗体は、配列番号１５の軽鎖Ｈ４Ｌ２－ｈ－カッパを有する配列番号１３の重鎖Ｈ４Ｌ２－ｈＩｇＧ４を含む。本開示のいくつかの実施形態では、本開示の例示的抗体は、配列番号１５の軽鎖Ｈ４Ｌ２－ｈ－カッパを有する配列番号１４の重鎖Ｈ４Ｌ２－ｈＩｇＧ２σを含む。
表１．
抗ヒトＣＤ４７マウスおよびヒト化抗体配列
１．抗ｈｕＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－ｈＩｇＧ１ Ｈ４重鎖（アミノ酸配列）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧＲＡＴＬＴＶＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＧＶＧＧＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１１）
２．抗ｈｕＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－ｈＩｇＧ１強化 Ｈ４重鎖（アミノ酸配列）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧＲＡＴＬＴＶＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＧＶＧＧＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＡＧＰＤＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＥＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１２）
３．抗ｈｕＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－ｈＩｇＧ４ Ｈ４重鎖（アミノ酸配列）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧＲＡＴＬＴＶＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＧＶＧＧＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号１３）
４．抗ｈｕＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－ｈＩｇＧ２σ Ｈ４重鎖（アミノ酸配列）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧＲＡＴＬＴＶＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＧＶＧＧＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＡＡＡＳＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＡＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＳＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１４）
５．抗ｈｕＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－ｈカッパ Ｌ２軽鎖（アミノ酸配列）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１５）
６．抗ｈｕＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２ Ｈ４ ＶＨドメイン（アミノ酸配列）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧＲＡＴＬＴＶＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＧＶＧＧＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１）
７．抗ｈｕＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２ Ｌ２ ＶＬドメイン（アミノ酸配列）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号２）
８．抗ｈｕＣＤ４７親ハイブリドーマ Ｍ１－ｖｈ１ ＶＨドメイン（アミノ酸配列）
ＱＶＱＬＱＱＰＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＲＡＳＧＹＴＦＴＮＹＷＭＴＷＶＫＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＮＨＫＦＱＤＫＡＩＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＧＶＧＧＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（配列番号５７）
９．抗ｈｕＣＤ４７ Ｈ１ ＶＨドメイン（アミノ酸配列）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＧＶＧＧＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５８）
１０．抗ｈｕＣＤ４７ Ｈ２ ＶＨドメイン（アミノ酸配列）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＶＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＧＶＧＧＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５９）
１１．抗ｈｕＣＤ４７ Ｈ３ ＶＨドメイン（アミノ酸配列）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧＲＡＴＬＴＶＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＧＶＧＧＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６０）
１２．抗ｈｕＣＤ４７親ハイブリドーマ Ｍ１－ｖｋ１ ＶＬドメイン（アミノ酸配列）
ＤＶＬＭＴＱＴＰＬＳＬＰＶＳＬＧＤＱＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＬＱＫＰＧＨＳＰＮＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＴＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号７５）
１３．抗ｈｕＣＤ４７ Ｌ１ ＶＬドメイン（アミノ酸配列）
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号７６）
１４．抗ｈｕＣＤ４７ Ｌ３ ＶＨドメイン（アミノ酸配列）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号７７）
１５．抗ｈｕＣＤ４７ Ｌ４ ＶＨドメイン（アミノ酸配列）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＱＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号７８）
１６．抗ｈｕＣＤ４７ Ｌ５ ＶＨドメイン（アミノ酸配列）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＳＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号７９） In some embodiments of this disclosure, an exemplary antibody of this disclosure comprises heavy chain H4L2-hIgG1 of SEQ ID NO:11 with light chain H4L2-h-kappa of SEQ ID NO:15. In some embodiments of the disclosure, an exemplary antibody of the disclosure comprises heavy chain H4L2-hIgG1 enrichment of SEQ ID NO:12 with light chain H4L2-h-kappa of SEQ ID NO:15. In some embodiments of this disclosure, an exemplary antibody of this disclosure comprises heavy chain H4L2-hIgG4 of SEQ ID NO:13 with light chain H4L2-h-kappa of SEQ ID NO:15. In some embodiments of this disclosure, an exemplary antibody of this disclosure comprises heavy chain H4L2-hIgG2σ of SEQ ID NO:14 with light chain H4L2-h-kappa of SEQ ID NO:15.
Table 1.
Anti-Human CD47 Mouse and Humanized Antibody Sequences1. Anti-huCD47 H4L2-hIgG1 H4 heavy chain (amino acid sequence)
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧＲＡＴＬＴＶＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＧＶＧＧＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１１）
2. Anti-huCD47 H4L2-hIgG1 enhanced H4 heavy chain (amino acid sequence)
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧＲＡＴＬＴＶＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＧＶＧＧＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＡＧＰＤＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＥＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１２）
3. Anti-huCD47 H4L2-hIgG4 H4 heavy chain (amino acid sequence)
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧＲＡＴＬＴＶＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＧＶＧＧＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号１３）
4. Anti-huCD47 H4L2-hIgG2σ H4 heavy chain (amino acid sequence)
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧＲＡＴＬＴＶＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＧＶＧＧＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＡＡＡＳＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＡＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＳＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１４）
5. Anti-huCD47 H4L2-hKappa L2 light chain (amino acid sequence)
ＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１５）
6. Anti-huCD47 H4L2 H4 VH domain (amino acid sequence)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKLSCKASGYTFTNYWMTWVRQAPGQGLEWIGRIDPYDVETHYAQKFQGRATLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGVGGMDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1)
7. anti-huCD47 H4L2 L2 VL domain (amino acid sequence)
DVVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSIVHSNGNTYLEWYQQKPGQPPKLLIYRVSKRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVGVYYCFQGSHVPRTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 2)
8. Anti-huCD47 parental hybridoma M1-vh1 VH domain (amino acid sequence)
QVQLQQPGAELVRPGASVKLSCRASGYTFTNYWMTWVKQRPEQGLEWIGRIDPYDVETHYNHKFQDKAILTVDKSSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARGGVGGMDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 57)
9. Anti-huCD47 H1 VH domain (amino acid sequence)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTNYWMTWVRQAPGQGLEWMGRIDPYDVETHYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGVGGMDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 58)
10. Anti-huCD47 H2 VH domain (amino acid sequence)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTNYWMTWVRQAPGQGLEWIGRIDPYDVETHYAQKFQGRVTITTVDESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGVGGMDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 59)
11. Anti-huCD47 H3 VH domain (amino acid sequence)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKLSCCKASGYTFTNYWMTWVRQAPGQGLEWIGRIDPYDVETHYAQKFQGRATLTVDESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGVGGMDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 60)
12. Anti-huCD47 parental hybridoma M1-vk1 VL domain (amino acid sequence)
DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGHSPNLLIYRVSKRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKITRVEAEDLGVYYCFQGSHVPRTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 75)
13. Anti-huCD47 L1 VL domain (amino acid sequence)
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSIVHSNGNTYLEWYQQKPGQPPKLLIYRVSKRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCFQGSHVPRTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 76)
14. Anti-huCD47 L3 VH domain (amino acid sequence)
DVVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSIVHSSGNTYLEWYQQKPGQPPKLLIYRVSKRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVGVYYCFQGSHVPRTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 77)
15. Anti-huCD47 L4 VH domain (amino acid sequence)
DVVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSIVHSSGQTYLEWYQQKPGQPPKLLIYRVSKRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVGVYYCFQGSHVPRTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 78)
16. Anti-huCD47 L5 VH domain (amino acid sequence)
DVVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSIVHSSGSTYLEWYQQKPGQPPKLLIYRVSKRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVGVYYCFQGSHVPRTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 79)

本開示の例示的抗ＣＤ４７抗体を、標準ＥＬＩＳＡ法を用いて、ヒトおよびカニクイザルＣＤ４７抗原に対するそれらの親和性についてアッセイした。これらの結合親和性を、抗ＣＤ４７抗体Ｂ６Ｈ１２－ＩｇＧ１および５Ｆ９－ＩｇＧ４と比較した。表２に示すように、これらの例示的結果は、本開示の例示的抗体が、５Ｆ９－ＩｇＧ４およびＢ６Ｈ１２－ＩｇＧ１ 抗ＣＤ４７抗体に比べて、同等またはより良好な親和性で、ヒトＣＤ４７に結合することを実証する。これらの例示的結果は、本開示の例示的抗体が、同等の親和性でヒトおよびカニクイザルＣＤ４７に結合することを示す。

Figure 2022548310000063
Exemplary anti-CD47 antibodies of this disclosure were assayed for their affinity to human and cynomolgus monkey CD47 antigens using standard ELISA methods. Their binding affinities were compared to the anti-CD47 antibodies B6H12-IgG1 and 5F9-IgG4. As shown in Table 2, these exemplary results demonstrate that the exemplary antibodies of this disclosure bind human CD47 with equal or better affinity than the 5F9-IgG4 and B6H12-IgG1 anti-CD47 antibodies. Demonstrate that. These exemplary results demonstrate that the exemplary antibodies of this disclosure bind human and cynomolgus monkey CD47 with comparable affinities.
Figure 2022548310000063

本開示の抗ＣＤ４７抗体を、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα相互作用を遮断するそれらの能力についてもアッセイした。標準プロトコルを用いて行われたこの例示的マイクロタイタープレートアッセイでは、リン酸塩緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中のＳＩＲＰα／ヒトＦｃ融合タンパク質を、漸増濃度の示される抗ＣＤ４７抗体の非存在下または存在下で、ＣＤ４７／マウスＦｃタンパク質と組み合わせた。プレートをその後、洗浄し、ＨＲＰ標識抗マウスＦｃ二次抗体とインキュベートし、ＴＭＢ基質で現像した。表３に示すように、これらの例示的結果は、本開示の例示的抗体が、５Ｆ９－ＩｇＧ４およびＢ６Ｈ１２－ＩｇＧ１ 抗ＣＤ４７抗体のものに比べて、同等のまたはより良好なＩＣ５０で、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα相互作用を遮断することを実証する。

Figure 2022548310000064
Anti-CD47 antibodies of the disclosure were also assayed for their ability to block the CD47-SIRPα interaction. In this exemplary microtiter plate assay, performed using standard protocols, SIRPα/human Fc fusion protein in phosphate-buffered saline (PBS) was tested in the absence or presence of increasing concentrations of the indicated anti-CD47 antibody. Combined with CD47/mouse Fc protein in the presence. Plates were then washed, incubated with HRP-labeled anti-mouse Fc secondary antibody, and developed with TMB substrate. As shown in Table 3, these exemplary results demonstrate that exemplary antibodies of the present disclosure exhibited comparable or better IC50s than those of the 5F9-IgG4 and B6H12-IgG1 anti-CD47 antibodies to CD47-SIRPα. Demonstrate blocking interactions.
Figure 2022548310000064

実施例２．マスクの開発
本明細書で提供される試験は、本開示の活性化可能抗ヒトＣＤ４７抗体で用いるためのマスキング部分を特定しおよび特徴付けるために設計された。
本開示のヒト化抗ヒトＣＤ４７ ｈｕ Ｈ４Ｌ２モノクローナル抗体（配列番号１のＶＨおよび配列番号２のＶＬ）を、２０１０年７月１５に公開された国際公開第２０１０／０８１１７３に記述される方法と類似の方法を使い、４ｘ１６０の総多様性を有し、Ｘが任意のアミノ酸である、ランダムＸ１５ペプチドライブラリーをスクリーニングするために用いた。スクリーニングは、磁気活性化セルソーティング（ＭＡＣＳ）および蛍光活性化セルソーター（ＦＡＣＳ）を含んだ。単離され配列決定されたマスキングペプチド（ＭＭ）の例示的なそれぞれのクローンのアミノ酸配列を、表４に示す。
表４．
抗ヒトＣＤ４７マスキングペプチド（ＭＭ）
クローン＃ 配列 配列番号
４７．１ ＬＹＤＣＹＡＬＳＫＳＹＣＭＧＬ （配列番号１６）
４７．２ ＧＤＣＴＹＴＨＳＫＨＹＣＥＳＶ （配列番号１７）
４７．３ ＬＥＣＤＰＹＭＧＫＡＭＣＩＮＹ （配列番号１８）
４７．４ ＤＲＡＦＣＲＦＹＧＴＣＷＤＴＷ （配列番号１９）
４７．５ ＥＹＤＨＣＱＹＫＬＫＣＧＬＹＴ （配列番号２０）
４７．６ ＴＤＣＴＹＩＨＳＫＳＹＣＱＮＹ （配列番号２１）
４７．７ ＳＳＣＱＹＧＷＲＰＥＶＣＰＬＫ （配列番号２２）
４７．８ ＫＣＳＲＰＴＨＰＦＫＮＥＣＱＮ （配列番号２３）
４７．９ ＧＷＤＣＹＳＩＳＫＨＩＣＮＰＫ （配列番号２４）
４７．１０ ＳＳＬＲＣＩＮＭＬＫＣＹＰＡＴ （配列番号２５）
４７．１１ ＬＳＣＹＧＰＫＬＫＱＥＣＴＭＬ （配列番号２６）
４７．１２ ＰＮＬＣＴＹＰＲＱＴＣＰＦＫＴ （配列番号２７）
４７．１３ ＳＲＣＹＧＰＹＬＡＲＱＣＬＳＨ （配列番号２８）
４７．１４ ＫＣＬＮＨＷＮＮＰＮＨＴＣＮＫ （配列番号２９） Example 2. Mask Development The studies provided herein were designed to identify and characterize masking moieties for use in the activatable anti-human CD47 antibodies of the present disclosure.
Humanized anti-human CD47 hu H4L2 monoclonal antibodies of the present disclosure (VH of SEQ ID NO: 1 and VL of SEQ ID NO: 2) were prepared using methods similar to those described in WO 2010/081173, published Jul. 15, 2010. The method was used to screen a random X15 peptide library with a total diversity of 4x160 and X being any amino acid. Screening included magnetic activated cell sorting (MACS) and fluorescence activated cell sorting (FACS). The amino acid sequences of each exemplary masking peptide (MM) clone isolated and sequenced are shown in Table 4.
Table 4.
Anti-human CD47 masking peptide (MM)
Clone # Sequence SEQ ID NO:47.1 LYDCYALSKSYCMGL (SEQ ID NO:16)
47.2 GDCTYTHSKHYCESV (SEQ ID NO: 17)
47.3 LECDPYMGKAMCINY (SEQ ID NO: 18)
47.4 DRAFCRFYGTCWDTW (SEQ ID NO: 19)
47.5 EYDHCQYKLKCGLYT (SEQ ID NO: 20)
47.6 TDCTYIHSKSYCQNY (SEQ ID NO: 21)
47.7 SSCQYGWRPEVCPLK (SEQ ID NO: 22)
47.8 KCSRPTHPFKNECQN (SEQ ID NO: 23)
47.9 GWDCYSISKHICNPK (SEQ ID NO: 24)
47.10 SSLRCINMLKCYPAT (SEQ ID NO: 25)
47.11 LSCYGPKLKQECTML (SEQ ID NO: 26)
47.12 PNLCTYPRQTCPFKT (SEQ ID NO: 27)
47.13 SRCYGPYLARQCLSH (SEQ ID NO:28)
47.14 KCLNHWNNPNHTCNK (SEQ ID NO: 29)

これらのマスキングペプチドを用いて、本開示の抗ヒトＣＤ４７活性化可能抗体を生成した。これらの特定の抗ヒトＣＤ４７活性化可能抗体の配列を、下表５に示す。いくつかの実施形態では、これらの抗ヒトＣＤ４７活性化可能抗体は、示されるように、切断可能部分２００１（ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＨ；配列番号４０６） 、切断可能部分３００１（ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＮＨ；配列番号４１２）、切断可能部分２００７（ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＩＨ；配列番号６８４）、切断可能部分２００８（ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＱＨ；配列番号６８５）、切断可能部分２０１１（ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＤＮＰ；配列番号６８８）、切断可能部分２０１２（ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＡＮＰ；配列番号６８９）、切断可能部分２０１３（ＩＳＳＧＬＬＳＧＲＳＡＮＩ；配列番号６９０）、切断可能部分３００７（ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＩＨ；配列番号６９２）、切断可能部分３００８（ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＱＨ；配列番号６９３、切断可能部分３０１１（ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＤＮＰ；配列番号６９６）、切断可能部分３０１２（ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＡＮＰ；配列番号６９７）、切断可能部分３０１３（ＡＶＧＬＬＡＰＰＧＧＬＳＧＲＳＡＮＩ；配列番号６９８）、または切断可能部分５００７（ＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦ；配列番号４４６）、切断可能部分５００８（ＡＬＡＨＧＬＦＡＰＲＳＦ；配列番号４４７）、または切断可能部分５０１１（ＧＬＰＴＦＶＨＬＰＲＱＶ；配列番号４５０）を含む。 These masking peptides were used to generate anti-human CD47 activatable antibodies of the disclosure. The sequences of these particular anti-human CD47 activatable antibodies are shown in Table 5 below. In some embodiments, these anti-human CD47 activatable antibodies are cleavable moiety 2001 (ISSGLLSGRSDNH; SEQ ID NO: 406), cleavable moiety 3001 (AVGLLAPPGGLSGRSDNH; SEQ ID NO: 412), cleavable moiety 2007 (ISSGLLSGRSDIH; SEQ ID NO: 684), cleavable portion 2008 (ISSGLLSGRSDQH; SEQ ID NO: 685), cleavable portion 2011 (ISSGLLSGRSDNP; SEQ ID NO: 688), cleavable portion 2012 (ISSGLLSGRSANP; ISSGLLSGRSANI; SEQ ID NO: 690), cleavable portion 3007 (AVGLLAPPGGLSGRSDIH; SEQ ID NO: 692), cleavable portion 3008 (AVGLLAPPGGLSGRSDQH; SEQ ID NO: 693, cleavable portion 3011 (AVGLLAPPGGLSGRSDNP; 697), cleavable portion 3013 (AVGLAPPGGLSGRSANI; SEQ ID NO: 698), or cleavable portion 5007 (APRSALAHGLF; SEQ ID NO: 446), cleavable portion 5008 (ALAHGLFAPRSF; SEQ ID NO: 447), or cleavable portion 5011 (GLPTFVHLPRQV; sequence number 450).

以下に示される特定の配列は、配列番号６４５のスペーサー配列を含むが、当業者は、本開示の活性化可能抗ヒトＣＤ４７抗体が、例えば、ＱＧＱＳＧＱＧ（配列番号３０）、ＱＧＱＳＧＱ（配列番号３１）、ＱＧＱＳＧ（配列番号３２）、ＱＧＱＳ（配列番号３３）、ＱＧＱ、ＱＧ、ＧＱＳＧＱＧ（配列番号３４）、ＱＳＧＱＧ（配列番号３５）、ＳＧＱＧ（配列番号３６）、ＧＱＧ、Ｇ、またはＱからなる群より選択されるスペーサーなどの、任意の好適なスペーサー配列を含み得ることを理解する。いくつかの実施形態では、本開示の活性化可能抗ヒトＣＤ４７抗体は、Ｎ末端に接続されたスペーサーを有することができない。
表５．
抗ヒトＣＤ４７活性化可能抗体配列
８．［スペーサー（配列番号３０）］［ｈｕＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－４７．１－５００７ ＶＬドメイン（配列番号４１）］
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＬＹＤＣＹＡＬＳＫＳＹＣＭＧＬＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ］（配列番号６１）
９．［スペーサー（配列番号３０）］［ｈｕＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－４７．２－５００７ ＶＬドメイン（配列番号４２）］
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＧＤＣＴＹＴＨＳＫＨＹＣＥＳＶＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ］（配列番号６２）
１０．［スペーサー（配列番号３０）］［ｈｕＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－４７．３－５００７ ＶＬドメイン（配列番号４３）］
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＬＥＣＤＰＹＭＧＫＡＭＣＩＮＹＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ］（配列番号６３）
１１．［スペーサー（配列番号３０）］［ｈｕＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－４７．４－５００７ ＶＬドメイン（配列番号４４）］
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＤＲＡＦＣＲＦＹＧＴＣＷＤＴＷＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ］（配列番号６４）
１２．［配列番号（配列番号３０）］［ｈｕＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－４７．５－５００７ ＶＬドメイン（配列番号４５）］
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＥＹＤＨＣＱＹＫＬＫＣＧＬＹＴＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ］（配列番号６５）
１３．［スペーサー（配列番号３０）］［ｈｕＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－４７．６－５００７ ＶＬドメイン（配列番号４６）］
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＴＤＣＴＹＩＨＳＫＳＹＣＱＮＹＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ］（配列番号６６）
１４．［スペーサー（配列番号３０）］［ｈｕＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－４７．７－５００７ ＶＬドメイン（配列番号４７）］
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＳＳＣＱＹＧＷＲＰＥＶＣＰＬＫＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ］（配列番号６７）
１５．［スペーサー（配列番号３０）］［ｈｕＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－４７．８－５００７ ＶＬドメイン（配列番号４８）］
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＫＣＳＲＰＴＨＰＦＫＮＥＣＱＮＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ］（配列番号６８）
１６．［スペーサー（配列番号３０）］［ｈｕＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－４７．９－５００７ ＶＬドメイン（配列番号４９）］
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＧＷＤＣＹＳＩＳＫＨＩＣＮＰＫＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ］（配列番号６９）
１７．［スペーサー（配列番号３０）］［ｈｕＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－４７．１０－５００７ ＶＬドメイン（配列番号５０）］
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＳＳＬＲＣＩＮＭＬＫＣＹＰＡＴＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ］（配列番号７０）
１８．［スペーサー（配列番号３０）］［ｈｕＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－４７．１１－５００７ ＶＬドメイン（配列番号５１）］
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＬＳＣＹＧＰＫＬＫＱＥＣＴＭＬＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ］（配列番号７１）
１９．［スペーサー（配列番号３０）］［ｈｕＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－４７．１２－５００７ ＶＬドメイン（配列番号５２）］
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＰＮＬＣＴＹＰＲＱＴＣＰＦＫＴＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ］（配列番号７２）
２０．［スペーサー（配列番号３０）］［ｈｕＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－４７．１３－５００７ ＶＬドメイン（配列番号５３）］
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＳＲＣＹＧＰＹＬＡＲＱＣＬＳＨＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ］（配列番号７３）
２１．［スペーサー（配列番号３０）］［ｈｕＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－４７．１４－５００７ ＶＬドメイン（配列番号５４）］
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＫＣＬＮＨＷＮＮＰＮＨＴＣＮＫＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ］（配列番号７４）
２２．［スペーサー（配列番号３０）］［ｈｕＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－４７．１－５００７軽鎖（配列番号８１）］
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＬＹＤＣＹＡＬＳＫＳＹＣＭＧＬＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ］（配列番号１０１）
２３．［スペーサー（配列番号３０）］［ｈｕＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－４７．２－５００７軽鎖（配列番号８２）］
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＧＤＣＴＹＴＨＳＫＨＹＣＥＳＶＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ］（配列番号１０２）
２４．［スペーサー（配列番号３０）］［ｈｕＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－４７．３－５００７軽鎖（配列番号８３）］
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＬＥＣＤＰＹＭＧＫＡＭＣＩＮＹＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ］（配列番号１０３）
２５．［スペーサー（配列番号３０）］［ｈｕＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－４７．４－５００７軽鎖（配列番号８４）］
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＤＲＡＦＣＲＦＹＧＴＣＷＤＴＷＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ］（配列番号１０４）
２６．［スペーサー（配列番号３０）］［ｈｕＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－４７．５－５００７軽鎖（配列番号８５）］
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＥＹＤＨＣＱＹＫＬＫＣＧＬＹＴＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ］（配列番号１０５）
２７．［スペーサー（配列番号３０）］［ｈｕＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－４７．６－５００７配列番号（配列番号８６）］
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＴＤＣＴＹＩＨＳＫＳＹＣＱＮＹＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ］（配列番号１０６）
２８．［スペーサー（配列番号３０）］［ｈｕＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－４７．７－５００７配列番号（配列番号８７）］
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＳＳＣＱＹＧＷＲＰＥＶＣＰＬＫＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ］（配列番号１０７）
２９．［スペーサー（配列番号３０）］［ｈｕＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－４７．８－５００７軽鎖（配列番号８８）］
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＫＣＳＲＰＴＨＰＦＫＮＥＣＱＮＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ］（配列番号１０８）
３０．［スペーサー（配列番号３０）］［ｈｕＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－４７．９－５００７軽鎖（配列番号８９）］
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＧＷＤＣＹＳＩＳＫＨＩＣＮＰＫＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ］（配列番号１０９）
３１．［スペーサー（配列番号３０）］［ｈｕＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－４７．１０－５００７軽鎖（配列番号９０）］
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＳＳＬＲＣＩＮＭＬＫＣＹＰＡＴＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ］（配列番号１１０）
３２．［スペーサー（配列番号３０）］［ｈｕＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－４７．１１－５００７軽鎖（配列番号９１）］
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＬＳＣＹＧＰＫＬＫＱＥＣＴＭＬＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ］（配列番号１１１）
３３．［スペーサー（配列番号３０）］［ｈｕＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－４７．１２－５００７軽鎖（配列番号９２）］
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＰＮＬＣＴＹＰＲＱＴＣＰＦＫＴＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ］（配列番号１１２）
３４．［スペーサー（配列番号３０）］［ｈｕＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－４７．１３－５００７軽鎖（配列番号９３）］
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＳＲＣＹＧＰＹＬＡＲＱＣＬＳＨＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ］（配列番号１１３）
３５．［スペーサー（配列番号３０）］［ｈｕＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－４７．１４－５００７軽鎖（配列番号９４）］
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＫＣＬＮＨＷＮＮＰＮＨＴＣＮＫＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ］（配列番号１１４） Although the specific sequences shown below include the spacer sequence of SEQ ID NO: 645, one skilled in the art will appreciate that the activatable anti-human CD47 antibodies of the present disclosure include, for example, QGQSGQG (SEQ ID NO: 30), QGQSGQ (SEQ ID NO: 31) , QGQSG (SEQ ID NO:32), QGQS (SEQ ID NO:33), QGQ, QG, GQSGQG (SEQ ID NO:34), QSGQG (SEQ ID NO:35), SGQG (SEQ ID NO:36), GQG, G, or Q It is understood that any suitable spacer sequence may be included, such as spacers of choice. In some embodiments, an activatable anti-human CD47 antibody of this disclosure cannot have a spacer attached to the N-terminus.
Table 5.
Anti-human CD47 activatable antibody sequences8. [spacer (SEQ ID NO:30)] [huCD47 H4L2-47.1-5007 VL domain (SEQ ID NO:41)]
[QGQSGQG] [LYDCYALSKSYCMGLGGGGSSGGSAPRSALAHGLFGGGSDVVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSIVHSNGNTYLEWYQQKPGQPPKLLIYRVSKRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVGVYYCFQGSHVPK1] (sequence number GSKGVPK1)
9. [spacer (SEQ ID NO:30)] [huCD47 H4L2-47.2-5007 VL domain (SEQ ID NO:42)]
[QGQSGQG] [GDCTYTHSKHYCESVGGGSSGGSSAPRSALAHGLFGGGSDVVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSIVHSNGNTYLEWYQQKPGQPPKLLIYRVSKRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVGVYYCFQGSHIGVPK2]
10. [spacer (SEQ ID NO:30)] [huCD47 H4L2-47.3-5007 VL domain (SEQ ID NO:43)]
[QGQSGQG] [LECDPYMGKAMCINYGGGSSGGSAPRSALAHGLFGGGSDVVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSIVHSNGNTYLEWYQQKPGQPPKLLIYRVSKRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVGVYYCFQGSHVPLFGQ] (sequence number GSHVPRTEG6)
11. [spacer (SEQ ID NO:30)] [huCD47 H4L2-47.4-5007 VL domain (SEQ ID NO:44)]
[QGQSGQG] [DRAFCRFYGTCWDTWGGGSSGGSAPRSALAHGLFGGGSDVVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSIVHSNGNTYLEWYQQKPGQPPKLLIYRVSKRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVGVYYCFQGSHVPK]
12. [SEQ ID NO: (SEQ ID NO: 30)] [huCD47 H4L2-47.5-5007 VL domain (SEQ ID NO: 45)]
[QGQSGQG] [EYDHCQYKLKCGLYTGGGSSGGSAPRSALAHGLFGGGGSDVVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSIVHSNGNTYLEWYQQKPGQPPKLLIYRVSKRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVRTGVYKPFQGSLIQ5G] (sequence number)
13. [spacer (SEQ ID NO:30)] [huCD47 H4L2-47.6-5007 VL domain (SEQ ID NO:46)]
[QGQSGQG] [TDCTYIHSKSYCQNYGGGSSGGSSAPRSALAHGLFGGGGSDVVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSIVHSNGNTYLEWYQQKPGQPPKLLIYRVSKRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVGVYYCFQGLIQGTK]
14. [spacer (SEQ ID NO:30)] [huCD47 H4L2-47.7-5007 VL domain (SEQ ID NO:47)]
[QGQSGQG] [SSCQYGWRPEVCPLKGGGSSGGSSAPRSALAHGLFGGGSDVVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSIVHSNGNTYLEWYQQKPGQPPKLLIYRVSKRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVGVYYCFQGSKHVPLTFQ7]
15. [spacer (SEQ ID NO:30)] [huCD47 H4L2-47.8-5007 VL domain (SEQ ID NO:48)]
[QGQSGQG] [KCSRPTHPFKNECQNGGGSSGGSSAPRSALAHGLFGGGSDVVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSIVHSNGNTYLEWYQQKPGQPPKLLIYRVSKRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVGVYYCFQGSKHVPRTG6]
16. [spacer (SEQ ID NO:30)] [huCD47 H4L2-47.9-5007 VL domain (SEQ ID NO:49)]
[QGQSGQG] [GWDCYSISKHICNPKGGGSSGGSAPRSALAHGLFGGGSDVVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSIVHSNGNTYLEWYQQKPGQPPKLLIYRVSKRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVGVYYCFQGSKHVPGTLGQ9]
17. [spacer (SEQ ID NO:30)] [huCD47 H4L2-47.10-5007 VL domain (SEQ ID NO:50)]
[QGQSGQG] [SSLRCINMLKCYPATGGGSSGGSAPRSALAHGLFGGGSDVVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSIVHSNGNTYLEWYQQKPGQPPKLLIYRVSKRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVGVYYCFQISKHVPLGT0]
18. [spacer (SEQ ID NO:30)] [huCD47 H4L2-47.11-5007 VL domain (SEQ ID NO:51)]
[QGQSGQG] [LSCYGPKLKQECTMLGGGSSGGSSAPRSALAHGLFGGGSDVVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSIVHSNGNTYLEWYQQKPGQPPKLLIYRVSKRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVGVYYCFQISKHVPRTG1]
19. [spacer (SEQ ID NO:30)] [huCD47 H4L2-47.12-5007 VL domain (SEQ ID NO:52)]
[QGQSGQG] [PNLCTYPRQTCPFKTGGGSSGGSSAPRSALAHGLFGGGSDVVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSIVHSNGNTYLEWYQQKPGQPPKLLIYRVSKRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVGVYYCFQISKVPRTFGQ2]
20. [spacer (SEQ ID NO:30)] [huCD47 H4L2-47.13-5007 VL domain (SEQ ID NO:53)]
[QGQSGQG] [SRCYGPYLARQCLSHGGGSSGGSAPRSALAHGLFGGGGSDVVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSIVHSNGNTYLEWYQQKPGQPPKLLIYRVSKRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVGVYYCFQGSIGSHVK]
21. [spacer (SEQ ID NO:30)] [huCD47 H4L2-47.14-5007 VL domain (SEQ ID NO:54)]
[QGQSGQG] [KCLNHWNNPNHTCNKGGGGSSGGSSAPRSALAHGLFGGGSDVVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSIVHSNGNTYLEWYQQKPGQPPKLLIYRVSKRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVGVYYCFQGSHVPK4]
22. [spacer (SEQ ID NO:30)] [huCD47 H4L2-47.1-5007 light chain (SEQ ID NO:81)]
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＬＹＤＣＹＡＬＳＫＳＹＣＭＧＬＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ］（配列番号１０１）
23. [spacer (SEQ ID NO:30)] [huCD47 H4L2-47.2-5007 light chain (SEQ ID NO:82)]
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＧＤＣＴＹＴＨＳＫＨＹＣＥＳＶＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ］（配列番号１０２）
24. [spacer (SEQ ID NO:30)] [huCD47 H4L2-47.3-5007 light chain (SEQ ID NO:83)]
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＬＥＣＤＰＹＭＧＫＡＭＣＩＮＹＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ］（配列番号１０３）
25. [spacer (SEQ ID NO:30)] [huCD47 H4L2-47.4-5007 light chain (SEQ ID NO:84)]
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＤＲＡＦＣＲＦＹＧＴＣＷＤＴＷＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ］（配列番号１０４）
26. [spacer (SEQ ID NO:30)] [huCD47 H4L2-47.5-5007 light chain (SEQ ID NO:85)]
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＥＹＤＨＣＱＹＫＬＫＣＧＬＹＴＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ］（配列番号１０５）
27. [Spacer (SEQ ID NO:30)] [huCD47 H4L2-47.6-5007 SEQ ID NO: (SEQ ID NO:86)]
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＴＤＣＴＹＩＨＳＫＳＹＣＱＮＹＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ］（配列番号１０６）
28. [Spacer (SEQ ID NO:30)] [huCD47 H4L2-47.7-5007 SEQ ID NO: (SEQ ID NO:87)]
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＳＳＣＱＹＧＷＲＰＥＶＣＰＬＫＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ］（配列番号１０７）
29. [spacer (SEQ ID NO:30)] [huCD47 H4L2-47.8-5007 light chain (SEQ ID NO:88)]
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＫＣＳＲＰＴＨＰＦＫＮＥＣＱＮＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ］（配列番号１０８）
30. [spacer (SEQ ID NO:30)] [huCD47 H4L2-47.9-5007 light chain (SEQ ID NO:89)]
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＧＷＤＣＹＳＩＳＫＨＩＣＮＰＫＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ］（配列番号１０９）
31. [spacer (SEQ ID NO:30)] [huCD47 H4L2-47.10-5007 light chain (SEQ ID NO:90)]
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＳＳＬＲＣＩＮＭＬＫＣＹＰＡＴＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ］（配列番号１１０）
32. [spacer (SEQ ID NO:30)] [huCD47 H4L2-47.11-5007 light chain (SEQ ID NO:91)]
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＬＳＣＹＧＰＫＬＫＱＥＣＴＭＬＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ］（配列番号１１１）
33. [spacer (SEQ ID NO:30)] [huCD47 H4L2-47.12-5007 light chain (SEQ ID NO:92)]
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＰＮＬＣＴＹＰＲＱＴＣＰＦＫＴＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ］（配列番号１１２）
34. [spacer (SEQ ID NO:30)] [huCD47 H4L2-47.13-5007 light chain (SEQ ID NO:93)]
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＳＲＣＹＧＰＹＬＡＲＱＣＬＳＨＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ］（配列番号１１３）
35. [spacer (SEQ ID NO:30)] [huCD47 H4L2-47.14-5007 light chain (SEQ ID NO:94)]
［ＱＧＱＳＧＱＧ］［ＫＣＬＮＨＷＮＮＰＮＨＴＣＮＫＧＧＧＳＳＧＧＳＡＰＲＳＡＬＡＨＧＬＦＧＧＧＳＤＶＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＶＳＫＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ］（配列番号１１４）

図１Ａに示すように、ヒトＣＤ４７ポリペプチドに対する本開示の抗ヒトＣＤ４７活性化可能抗体の結合親和性を、ＥＬＩＳＡを用いてアッセイした。この例示的試験でアッセイした本開示の活性化可能抗体は、（ａ）ｈｕ Ｈ４Ｌ２－ＩｇＧ４ ＨＣ／ Ｈ４Ｌ２－４７．１－５００７ ＬＣ（配列番号１のＶＨおよび配列番号４１のＶＬ）、ｈｕ Ｈ４Ｌ２－ＩｇＧ４ ＨＣ／ Ｈ４Ｌ２－４７．２－５００７ ＬＣ（配列番号１のＶＨおよび配列番号４２のＶＬ）、ｈｕ Ｈ４Ｌ２－ＩｇＧ４ ＨＣ／ Ｈ４Ｌ２－４７．１－５００７ ＬＣ（配列番号１納品ファイルＶＨおよび配列番号４３のＶＬ）、ｈｕ Ｈ４Ｌ２－ＩｇＧ４ ＨＣ／ Ｈ４Ｌ２－４７．１－５００７ ＬＣ（配列番号１のＶＨおよび配列番号４４のＶＬ）、ｈｕ Ｈ４Ｌ２－ＩｇＧ４ ＨＣ／ Ｈ４Ｌ２－４７．１－５００７ ＬＣ（配列番号１のＶＨおよび配列番号４５のＶＬ）、ｈｕ Ｈ４Ｌ２－ＩｇＧ４ ＨＣ／ Ｈ４Ｌ２－４７．１－５００７ ＬＣ（配列番号１のＶＨおよび配列番号４６のＶＬ）、ｈｕ Ｈ４Ｌ２－ＩｇＧ４ ＨＣ／ Ｈ４Ｌ２－４７．１－５００７ ＬＣ（配列番号１のＶＨおよび配列番号４７のＶＬ）、ｈｕ Ｈ４Ｌ２－ＩｇＧ４ ＨＣ／ Ｈ４Ｌ２－４７．１－５００７ ＬＣ（配列番号１のＶＨおよび配列番号４８のＶＬ）、ｈｕ Ｈ４Ｌ２－ＩｇＧ４ ＨＣ／ Ｈ４Ｌ２－４７．１－５００７ ＬＣ（配列番号１のＶＨおよび配列番号４９のＶＬ）、ｈｕ Ｈ４Ｌ２－ＩｇＧ４ ＨＣ／ Ｈ４Ｌ２－４７．１－５００７ ＬＣ（配列番号１のＶＨおよび配列番号５０のＶＬ）、ｈｕ Ｈ４Ｌ２－ＩｇＧ４ ＨＣ／ Ｈ４Ｌ２－４７．１－５００７ ＬＣ（配列番号１のＶＨおよび配列番号５１のＶＬ）、ｈｕ Ｈ４Ｌ２－ＩｇＧ４ ＨＣ／ Ｈ４Ｌ２－４７．１－５００７ ＬＣ（配列番号１のＶＨおよび配列番号５２のＶＬ）、ｈｕ Ｈ４Ｌ２－ＩｇＧ４ ＨＣ／ Ｈ４Ｌ２－４７．１－５００７ ＬＣ（配列番号１のＶＨおよび配列番号５３のＶＬ）、およびｈｕ Ｈ４Ｌ２－ＩｇＧ４ ＨＣ／ Ｈ４Ｌ２－４７．１－５００７ ＬＣ（配列番号１のＶＨおよび配列番号５４のＶＬ）であった。本開示のヒト化抗ヒトＣＤ４７抗体ｈｕ Ｈ４Ｌ２－ＩｇＧ４ ＨＣ／ Ｈ４Ｌ２ ＬＣ（配列番号１のＶＨおよび配列番号２のＶＬ）を、対照として使用した。本開示のこれらのマスキングペプチドのマスキング効率（すなわち、活性化可能抗体の結合親和性対親抗体の結合親和性の比率）を測定し、表６に示す。これらの例示的結果は、例示的マスキングペプチドのすべてが、少なくとも２桁程度のマスキング効率を示し、１４個の例示的マスキングペプチドの１２個が３桁を越えるマスキング効率を示すことを明らかにした。

Figure 2022548310000065
As shown in FIG. 1A, the binding affinities of anti-human CD47 activatable antibodies of the disclosure to human CD47 polypeptides were assayed using ELISA. The activatable antibodies of the disclosure assayed in this exemplary test are: (a) hu H4L2-IgG4 HC/ H4L2-47.1-5007 LC (VH of SEQ ID NO:1 and VL of SEQ ID NO:41), hu H4L2- IgG4 HC/H4L2-47.2-5007 LC (VH of SEQ ID NO:1 and VL of SEQ ID NO:42), hu H4L2-IgG4 HC/H4L2-47.1-5007 LC (SEQ ID NO:1 delivery file VH and SEQ ID NO:43 VL of SEQ. hu H4L2-IgG4 HC/H4L2-47.1-5007 LC (VH of SEQ ID NO:1 and VL of SEQ ID NO:46), hu H4L2-IgG4 HC/H4L2-47.1- 5007 LC (VH of SEQ ID NO:1 and VL of SEQ ID NO:47), hu H4L2-IgG4 HC/ H4L2-47.1-5007 LC (VH of SEQ ID NO:1 and VL of SEQ ID NO:48), hu H4L2-IgG4 HC/ H4L2-47.1-5007 LC (VH of SEQ ID NO:1 and VL of SEQ ID NO:49), hu H4L2-IgG4 HC/ H4L2-47.1-5007 LC (VH of SEQ ID NO:1 and VL of SEQ ID NO:50), hu H4L2-IgG4 HC/H4L2-47.1-5007 LC (VH of SEQ ID NO:1 and VL of SEQ ID NO:51), hu H4L2-IgG4 HC/H4L2-47.1-5007 LC (VH of SEQ ID NO:1 and SEQ ID NO:51) VL of number 52), hu H4L2-IgG4 HC/ H4L2-47.1-5007 LC (VH of SEQ ID NO: 1 and VL of SEQ ID NO: 53), and hu H4L2-IgG4 HC/ H4L2-47.1-5007 LC ( VH of SEQ ID NO: 1 and VL of SEQ ID NO: 54). The humanized anti-human CD47 antibody hu H4L2-IgG4 HC/H4L2 LC of the present disclosure (VH of SEQ ID NO:1 and VL of SEQ ID NO:2) was used as a control. The masking efficiency (ie, ratio of binding affinity of the activatable antibody to binding affinity of the parental antibody) of these masking peptides of the present disclosure was measured and shown in Table 6. These exemplary results revealed that all of the exemplary masking peptides exhibited masking efficiencies on the order of at least two orders of magnitude, with 12 of the 14 exemplary masking peptides exhibiting masking efficiencies greater than three orders of magnitude.
Figure 2022548310000065

図１Ｂに示すように、特定の例示的抗ＣＤ４７活性化可能抗体を、プロテアーゼマトリプターゼで処理し（３７℃で一晩）、その後、ＥＬＩＳＡでアッセイして、ヒトＣＤ４７抗原に対するそれらの結合親和性を決定した。これらの例示的結果で示されるように、切断可能部分を特異的に切断できるプロテアーゼによる活性化可能抗体の切断は、それらが親抗ＣＤ４７抗体と実質的に同じとなるように、活性化可能抗体の結合親和性を回復させた。これらの例示的結果は、本開示の例示的抗ＣＤ４７活性化可能抗体は、マトリプターゼにより活性されると、親抗体のものと同等の親和性でそれらのＣＤ４７標的に特異的に結合できることを示した。 As shown in FIG. 1B, certain exemplary anti-CD47 activatable antibodies were treated with the protease matriptase (overnight at 37° C.) and then assayed by ELISA to determine their binding affinities to the human CD47 antigen. It was determined. As shown by these exemplary results, cleavage of the activatable antibodies by a protease capable of specifically cleaving the cleavable moiety results in the activatable antibodies being substantially identical to the parental anti-CD47 antibody. restored the binding affinity of These exemplary results demonstrate that exemplary anti-CD47 activatable antibodies of the present disclosure, when activated by matriptase, can specifically bind to their CD47 target with an affinity comparable to that of the parental antibody. rice field.

実施例３：マスキングペプチドの抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）アッセイ
本明細書で提供される試験は、ＦｃγＲＩＩａ受容体経路の使用を介して抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を誘導する本開示の活性化可能抗ヒトＣＤ４７抗体をアッセイするために設計された。これらの例示的結果で示されるように、本開示のマスキングペプチドを含む手付かずの活性化可能抗体は、マスクされていない親抗ＣＤ４７抗体と比べて、ＦｃγＲＩＩａ受容体経路を介する、より低いＡＤＣＰ活性化を示した。 Example 3: Antibody Dependent Cellular Phagocytosis (ADCP) Assay of Masking Peptides Tests Provided Herein Induce Antibody Dependent Cellular Phagocytosis (ADCP) Through Use of the FcγRIIa Receptor Pathway This Disclosure of activatable anti-human CD47 antibodies. As shown by these exemplary results, pristine activatable antibodies comprising masking peptides of the present disclosure exhibit lower ADCP activation through the FcγRIIa receptor pathway compared to the unmasked parental anti-CD47 antibody. showed that.

このアッセイ（ＦｃγＲＩＩａ－Ｈ ＡＤＣＰレポーターバイオアッセイ、Ｐｒｏｍｅｇａ）では、標的抗原を発現する標的細胞を、ＦｃγＲＩＩａ－Ｈ受容体を有する改変エフェクター細胞株と共培養した。そのＦｃエフェクタードメインを介してエフェクター細胞上のＦｃγＲＩＩａを同時に結合しながら、その抗原結合ドメインを介して標的抗原を結合する抗体の存在下で、抗体結合は、ＦｃγＲＩＩａ受容体クラスタリング、細胞内シグナル伝達、およびエフェクター細胞株からのＮＦＡＴ－ＲＥ媒介ルシフェラーゼ活性を生じる。ルシフェラーゼ活性から生じた発光の大きさを、ＡＤＣＰの代用評価値として測定した。 In this assay (FcγRIIa-H ADCP reporter bioassay, Promega), target cells expressing the target antigen were co-cultured with a modified effector cell line bearing the FcγRIIa-H receptor. In the presence of an antibody that binds a target antigen through its antigen binding domain while simultaneously binding FcγRIIa on effector cells through its Fc effector domain, antibody binding results in FcγRIIa receptor clustering, intracellular signaling, and NFAT-RE-mediated luciferase activity from effector cell lines. The magnitude of luminescence resulting from luciferase activity was measured as a surrogate metric for ADCP.

表７および図２を参照して、ＦｃγＲＩＩａ媒介ＡＤＣＰアッセイで測定した、前述の本開示の抗ＣＤ４７活性化可能抗体（本明細書の実施例１で定義したもの）のＥＣ５０およびマスキング効率を示す。示された試験品の量を、細胞共培養物に添加し、発光を測定した。これらの例示的結果は、全ての例示的抗ＣＤ４７活性化可能抗体が、親抗体（Ａｂ）に比べて、マスキングを示すことを明らかにする。観察された最高のマスキング効率は、マスキングペプチド４７．１１および４７．１２を有する本開示の抗ＣＤ４７活性化可能抗体で認められた。

Figure 2022548310000066
Referring to Table 7 and Figure 2, the EC50 and masking efficiency of the aforementioned anti-CD47 activatable antibodies of the disclosure (as defined in Example 1 herein) as measured in the FcγRIIa-mediated ADCP assay are shown. The indicated amount of test article was added to the cell co-cultures and luminescence was measured. These exemplary results demonstrate that all exemplary anti-CD47 activatable antibodies show masking compared to the parental antibody (Ab). The highest observed masking efficiency was observed with anti-CD47 activatable antibodies of the present disclosure having masking peptides 47.11 and 47.12.
Figure 2022548310000066

実施例４：Ｆｃエフェクタードメインの抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）アッセイ
本明細書で提供される試験は、ＦｃγＲＩＩａ受容体経路の使用を介して抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を誘導する本開示の活性化可能抗ヒトＣＤ４７抗体をアッセイするために設計された。これらの例示的結果が示すように、本開示のマスキングペプチドを含む手付かずの活性化可能抗体は、マスクされていない親抗ＣＤ４７抗体と比べて、ＦｃγＲＩＩａ受容体経路を介する、より低いＡＤＣＰ活性化を示した。これらの例示的結果はまた、本開示のＩｇＧ１ Ｆｃエフェクタードメインを有する抗体および活性化可能抗体は、ＩｇＧ４ Ｆｃエフェクタードメインに比べて、より高レベルのＡＤＣＰを示したことを明らかにする。 Example 4: Antibody Dependent Cellular Phagocytosis (ADCP) Assay of Fc Effector Domains The study provided herein demonstrates the use of the FcγRIIa receptor pathway to induce antibody dependent cellular phagocytosis (ADCP). Designed to assay the disclosed activatable anti-human CD47 antibodies. These exemplary results demonstrate that pristine activatable antibodies comprising masking peptides of the present disclosure exhibit lower ADCP activation through the FcγRIIa receptor pathway compared to the unmasked parental anti-CD47 antibody. Indicated. These exemplary results also demonstrate that antibodies with IgG1 Fc effector domains and activatable antibodies of the present disclosure exhibited higher levels of ADCP compared to IgG4 Fc effector domains.

表８および図３Ａ～３Ｄを参照する、実施例３に記載のように、ＦｃγＲＩＩａ媒介ＡＤＣＰアッセイで決定した、本開示の示された抗ＣＤ４７活性化可能抗体のＩＣ５０およびマスキング効率。アッセイした試験品は、ｈｕ 抗ＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－ｈＩｇＧ１（“Ｈ４Ｌ２－ＩｇＧ１”；配列番号１１のＨＣ、配列番号１５のＬＣ）、ｈｕ 抗ＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－ｈＩｇＧ１強化（“Ｈ４Ｌ２－ＩｇＧ１－ｅｎ”；配列番号１２のＨＣ、配列番号１５のＬＣ）、ｈｕ 抗ＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－ｈＩｇＧ４（“Ｈ４Ｌ２－ＩｇＧ４”；配列番号１３のＨＣ、配列番号１５のＬＣ）、ｈｕ 抗ＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－ｈＩｇＧ１－４７．３－５００７（“Ｈ４Ｌ２－ＩｇＧ１”；配列番号１１のＨＣ、配列番号８３のＶＬ）、ｈｕ 抗ＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－ｈＩｇＧ１－４７．１０－５００７（“Ｈ４Ｌ２－ＩｇＧ１”；配列番号１１のＨＣ、配列番号９０のＶＬ）、およびｈｕ 抗ＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－ｈＩｇＧ１－４７．１４－５００７（“Ｈ４Ｌ２－ＩｇＧ１”；配列番号１１のＨＣ、配列番号９４のＶＬ）であった。本開示のこれらの抗体を、抗ＣＤ４７抗体５Ｆ９－ＩｇＧ４に対して試験した。これらのアッセイで試験した標的細胞は、ＮＣＩ Ｈ８２細胞（図３Ａおよび３Ｂ）およびジャーカット細胞（図３Ｃおよび３Ｄ）であった。

Figure 2022548310000067
IC50s and masking efficiencies of the indicated anti-CD47 activatable antibodies of this disclosure as determined in the FcγRIIa-mediated ADCP assay, as described in Example 3, referring to Table 8 and FIGS. 3A-3D. The test articles assayed were hu anti-CD47 H4L2-hIgG1 (“H4L2-IgG1”; HC of SEQ ID NO:11, LC of SEQ ID NO:15), hu anti-CD47 H4L2-hIgG1 enriched (“H4L2-IgG1-en”; 12 HC, SEQ ID NO: 15 LC), hu anti-CD47 H4L2-hIgG4 (“H4L2-IgG4”; SEQ ID NO: 13 HC, SEQ ID NO: 15 LC), hu anti-CD47 H4L2-hIgG1-47.3-5007 ( “H4L2-IgG1”; HC of SEQ ID NO:11, VL of SEQ ID NO:83), hu anti-CD47 H4L2-hIgG1-47.10-5007 (“H4L2-IgG1”; HC of SEQ ID NO:11, VL of SEQ ID NO:90) , and hu anti-CD47 H4L2-hIgG1-47.14-5007 (“H4L2-IgG1”; HC of SEQ ID NO:11, VL of SEQ ID NO:94). These antibodies of this disclosure were tested against the anti-CD47 antibody 5F9-IgG4. Target cells tested in these assays were NCI H82 cells (Figures 3A and 3B) and Jurkat cells (Figures 3C and 3D).
Figure 2022548310000067

これらの例示的結果は、ＩｇＧ１エフェクターＦｃドメインをベースにした例示的抗ＣＤ４７抗体は、ＩｇＧ４ドメインを有するものに比べて、より高いＡＤＣＰ活性を示したことを明らかにする。これらの例示的結果は、例示的抗ＣＤ４７活性化可能抗体は、手付かずの場合、マスクされていない親抗体（Ａｂ）に比べて、より低いＡＤＣＰ活性を示したことを明らかにする。 These exemplary results demonstrate that exemplary anti-CD47 antibodies based on IgG1 effector Fc domains exhibited higher ADCP activity compared to those with IgG4 domains. These exemplary results demonstrate that exemplary anti-CD47 activatable antibodies, when pristine, exhibited lower ADCP activity compared to the unmasked parental antibody (Ab).

実施例５：Ｆｃエフェクタードメインの抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）アッセイ
本明細書で提供される試験は、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を誘導するそれらの能力を測定するために本開示の活性化可能抗ヒトＣＤ４７抗体をアッセイするために設計された。これらの例示的結果はまた、本開示のＩｇＧ１ Ｆｃエフェクタードメインを有する抗体および活性化可能抗体が、ＩｇＧ２σ Ｆｃエフェクタードメインを有するものに比べて、より高レベルのＡＤＣＰを示したことを明らかにする。 Example 5 Antibody Dependent Cellular Phagocytosis (ADCP) Assay of Fc Effector Domains Tests provided herein are used to measure their ability to induce antibody dependent cellular phagocytosis (ADCP). of activatable anti-human CD47 antibodies. These exemplary results also demonstrate that antibodies and activatable antibodies with IgG1 Fc effector domains of the present disclosure exhibited higher levels of ADCP compared to those with IgG2σ Fc effector domains.

このアッセイでは、新しい末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を、フィコールヒストパック（ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ）溶液を用いて３人のドナーから単離した。ＰＢＭＣを選別し、抗ＣＤ１４マイクロ磁気ビーズを用いて精製し、抗ＣＤ１４ ＡＰＣ抗体およびＦＡＣＳ分析で確認した。精製細胞を、１４日間培養し、分化マクロファージを、ＣＤ１１ｂ ＰＥ抗体、続いてＦＡＣＳ分析で確認した。ウェル当り約２５，０００個のマクロファージ細胞を、９６ウェルプレートに播種した。各試験品を、示した濃度でＰＢＳ中で調製し、プレートに加えた。約１ｘ１０６個の標的細胞を、洗浄し、蛍光染料で標識し、マクロファージを含む９６ウェルプレートに加えた。プレートを、Ｉｎｃｕｃｙｔｅ Ｓ３を用いて、３０分毎に１０ｘイメージングで走査し、強度を、示したように測定した。 In this assay, fresh peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were isolated from 3 donors using Ficoll histopaque solution. PBMC were sorted and purified using anti-CD14 micromagnetic beads and confirmed with anti-CD14 APC antibody and FACS analysis. Purified cells were cultured for 14 days and differentiated macrophages were confirmed with CD11b PE antibody followed by FACS analysis. Approximately 25,000 macrophage cells per well were seeded in 96-well plates. Each test article was prepared in PBS at the concentrations indicated and added to the plate. Approximately 1×10 6 target cells were washed, labeled with fluorescent dyes and added to 96-well plates containing macrophages. Plates were scanned with 10x imaging every 30 minutes using an Incucyte S3 and intensities were measured as indicated.

図４Ａ～４Ｃを参照して、アッセイした試験品は、ｈｕ 抗ＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－ｈＩｇＧ１（“Ｈ４Ｌ２－ＩｇＧ１”；配列番号１１のＨＣ、配列番号１５のＬＣ）、ｈｕ 抗ＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－ｈＩｇＧ１強化（“Ｈ４Ｌ２－ＩｇＧ１－ｅｎ”；配列番号１２のＨＣ、配列番号１５のＬＣ）、およびｈｕ 抗ＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－ｈＩｇＧ２σ（“Ｈ４Ｌ２－ＩｇＧ２σ”；配列番号１４のＨＣ、配列番号１５のＬＣ）であった。これらのアッセイでの試験した標的細胞は、ヒトＢリンパ芽球細胞由来のＤａｕｄｉ細胞であった。 4A-4C, the test articles assayed were hu anti-CD47 H4L2-hIgG1 (“H4L2-IgG1”; HC of SEQ ID NO: 11, LC of SEQ ID NO: 15), hu anti-CD47 H4L2-hIgG1 enhanced (“ HC of SEQ ID NO: 12, LC of SEQ ID NO: 15), and hu anti-CD47 H4L2-hIgG2σ ("H4L2-IgG2σ"; HC of SEQ ID NO: 14, LC of SEQ ID NO: 15). Target cells tested in these assays were Daudi cells derived from human B lymphoblastoid cells.

これらの例示的結果は、ＡＤＣＰ効果が、本開示のＨ４Ｌ２－ＩｇＧ１およびＨ４Ｌ２－ＩｇＧ１－ｅｎ 抗ＣＤ４７抗体で観察され、これは、本開示のＨ４Ｌ２－ＩｇＧ２σで観察されたものより大きかったことを示した。 These exemplary results show that the ADCP effect was observed with the H4L2-IgG1 and H4L2-IgG1-en anti-CD47 antibodies of the present disclosure and was greater than that observed with the H4L2-IgG2σ of the present disclosure. rice field.

実施例６：Ｈ８２およびラージ異種移植片モデルにおける抗ヒトＣＤ４７－ＡＡＤＣのインビボ有効性
本実施例は、本開示の抗ヒトＣＤ４７活性化可能抗体が、マウス異種移植片モデルにおいて、ビークル対照に比べて効果的であることを示す。これらの例示的結果は、本開示のこれらの抗ＣＤ４７抗体が、ビークル対照に比べて、このモデルでインビボ有効性を示すことを明らかにする。 Example 6: In vivo efficacy of anti-human CD47-AADC in H82 and large xenograft models Show that it is effective. These exemplary results demonstrate that these anti-CD47 antibodies of the disclosure demonstrate in vivo efficacy in this model compared to vehicle controls.

図５Ａおよび５Ｂは、本開示の抗ヒトＣＤ４７抗体：ｈｕ 抗ＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－ｈＩｇＧ１（“Ｈ４Ｌ２－ＩｇＧ１”；配列番号１１のＨＣ、配列番号１５のＬＣ）、ｈｕ 抗ＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－ｈＩｇＧ１強化（“Ｈ４Ｌ２－ＩｇＧ１ ｅｎ”；配列番号１２のＨＣ、配列番号１５のＬＣ）、ｈｕ 抗ＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－ｈＩｇＧ４（“Ｈ４Ｌ２－ＩｇＧ４”；配列番号１３のＨＣ、配列番号１５のＬＣ）、およびｈｕ 抗ＣＤ４７ Ｈ４Ｌ２－ｈＩｇＧ２σ（“Ｈ４Ｌ２－ＩｇＧ２σ”；配列番号１４のＨＣ、配列番号１５のＬＣ）の有効性を示す。本開示のこれらの抗体を、ＰＢＳバッファービークル対照および抗ＣＤ４７抗体５Ｆ９－ＩｇＧ４に対して試験した。Ｈ８２細胞株異種移植片（ヒト小細胞肺癌由来）を有するＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスに、示した試験品を、１日置きに１０ｍｇ／ｋｇを４週間投与し、腫瘍サイズを、示した日に測定した。図５Ａを参照して、これらの例示的結果は、本開示の抗ＣＤ４７抗体が、５Ｆ９抗体と同等の抗腫瘍活性を示すことを明らかにする。 Figures 5A and 5B show anti-human CD47 antibodies of the present disclosure: hu anti-CD47 H4L2-hIgG1 ("H4L2-IgG1"; HC of SEQ ID NO:11, LC of SEQ ID NO:15), hu anti-CD47 H4L2-hIgG1 enhanced ("H4L2 -IgG1 en"; HC of SEQ ID NO: 12, LC of SEQ ID NO: 15), hu anti-CD47 H4L2-hIgG4 ("H4L2-IgG4"; HC of SEQ ID NO: 13, LC of SEQ ID NO: 15), and hu anti-CD47 H4L2- Figure 2 shows efficacy of hIgG2σ ("H4L2-IgG2σ"; HC of SEQ ID NO: 14, LC of SEQ ID NO: 15). These antibodies of this disclosure were tested against a PBS buffer vehicle control and the anti-CD47 antibody 5F9-IgG4. NOD/SCID mice bearing H82 cell line xenografts (derived from human small cell lung cancer) were dosed with the indicated test articles at 10 mg/kg every other day for 4 weeks and tumor sizes were measured on the indicated days. . Referring to FIG. 5A, these exemplary results demonstrate that the anti-CD47 antibodies of the present disclosure exhibit comparable anti-tumor activity to the 5F9 antibody.

図５Ｂを参照して、本開示の示された抗ＣＤ４７抗体を、ＣＤ２０発現ラージ細胞異種移植片（ヒトＢ細胞リンパ腫由来）を有するＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスで、インビボ有効性について試験した。本開示のこれらの抗体を、ＰＢＳバッファービークル対照および抗ＣＤ２０抗体リツキシマブに対して試験した。試験品を、４週の間１日置きに１０ｍｇ／ｋｇで投与し、腫瘍サイズを、示した日に測定した。試験品をまた、単独でまたは本開示のＨ４Ｌ２－ＩｇＧ４抗体と組み合わせてリツキシマブに対し比較した。図５Ｂで示される例示的結果は、本開示の抗ＣＤ４７抗体が、ビークル対照およびリツキシマブのものより、より高い抗腫瘍活性を示し、Ｈ４Ｌ２－ＩｇＧ４／リツキシマブとの組み合わせが最高の相対的有効性を示すことを実証する。 Referring to FIG. 5B, the indicated anti-CD47 antibodies of this disclosure were tested for in vivo efficacy in NOD/SCID mice bearing CD20-expressing large cell xenografts (derived from human B-cell lymphoma). These antibodies of this disclosure were tested against a PBS buffer vehicle control and the anti-CD20 antibody rituximab. Test articles were dosed at 10 mg/kg every other day for 4 weeks and tumor sizes were measured on the days indicated. Test articles were also compared against rituximab alone or in combination with the H4L2-IgG4 antibodies of the present disclosure. Exemplary results shown in FIG. 5B show that the anti-CD47 antibodies of the present disclosure exhibited higher anti-tumor activity than those of vehicle control and rituximab, with the combination with H4L2-IgG4/rituximab showing the highest relative efficacy. Demonstrate what you show.

Claims (106)

ヒトＣＤ４７およびカニクイザルＣＤ４７を特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ）。 An isolated antibody or antigen-binding fragment (AB) thereof that specifically binds human CD47 and cynomolgus monkey CD47. 前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、下記からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離された抗体：
（ａ）アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号３）またはアミノ酸配列ＮＹＷＭＴ（配列番号４）を含むＶＨ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＤＰＹＤＶＥ（配列番号５）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号６）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＮＨＫ（配列番号３９）を含むＶＨ ＣＤＲ２配列；アミノ酸配ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含むＶＨ ＣＤＲ３配列；アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＱＴＹＬＥ（配列番号５５）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＳＴＹＬＥ（配列番号５６）を含むＶＬ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含むＶＬ ＣＤＲ２配列；およびアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含むＶＬ ＣＤＲ３配列；
（ｂ）アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号３）を含むＶＨ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＤＰＹＤＶＥ（配列番号５）を含むＶＨ ＣＤＲ２配列；アミノ酸配ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含むＶＨ ＣＤＲ３配列；アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）を含むＶＬ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含むＶＬ ＣＤＲ２配列；およびアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含むＶＬ ＣＤＲ３配列、および
（ｃ）アミノ酸配列ＮＹＷＭＴ（配列番号４）を含むＶＨ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号６）を含むＶＨ ＣＤＲ２配列；アミノ酸配ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含むＶＨ ＣＤＲ３配列；アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）を含むＶＬ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含むＶＬ ＣＤＲ２配列；およびアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含むＶＬ ＣＤＲ３配列。 2. The isolated antibody of claim 1, wherein said antibody or antigen-binding fragment thereof comprises an amino acid sequence comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of:
(a) a VH CDR1 sequence comprising the amino acid sequence GYTFTNY (SEQ ID NO:3) or the amino acid sequence NYWMT (SEQ ID NO:4); VH CDR2 sequence comprising amino acid sequence GGVGGMDY (SEQ ID NO: 7); amino acid sequence RSSQSIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO: 8) or RSSQSIVHSSGNTYLE (SEQ ID NO: 40) or RSSQSIVHSSGQTYLE (SEQ ID NO: 55) or RSSQSIVHSSGSTYLE (SEQ ID NO: 56); ); a VL CDR2 sequence comprising the amino acid sequence RVSKRFS (SEQ ID NO: 9); and a VL CDR3 sequence comprising the amino acid sequence FQGSHVPRT (SEQ ID NO: 10);
(b) VH CDR1 sequence comprising amino acid sequence GYTFTNY (SEQ ID NO:3); VH CDR2 sequence comprising amino acid sequence DPYDVE (SEQ ID NO:5); VH CDR3 sequence comprising amino acid sequence GGVGGGMDY (SEQ ID NO:7); VL CDR2 sequence comprising amino acid sequence RVSKRFS (SEQ ID NO:9); and VL CDR3 sequence comprising amino acid sequence FQGSHVPRT (SEQ ID NO:10), and (c) amino acid sequence NYWMT (SEQ ID NO:4). a VH CDR1 sequence comprising the amino acid sequence RIDPYDVETHYAQKFQG (SEQ ID NO:6); a VH CDR3 sequence comprising the amino acid sequence GGVGGMDY (SEQ ID NO:7); a VL CDR1 sequence comprising the amino acid sequence RSSQSIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO:8); a VL CDR2 sequence comprising RVSKRFS (SEQ ID NO: 9); and a VL CDR3 sequence comprising the amino acid sequence FQGSHVPRT (SEQ ID NO: 10). 前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１および５８～６０のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２および７６～７９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１または請求項２に記載の単離された抗体。 wherein said antibody or antigen-binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region comprising the amino acid sequences of any one of SEQ ID NOs: 1 and 58-60, and a light chain variable region comprising the amino acid sequences of any one of SEQ ID NOs: 2 and 76-79 3. The isolated antibody of claim 1 or claim 2, comprising the region. 請求項１～３のいずれか１項に記載の単離された抗体と同じヒトＣＤ４７および／またはカニクイザルＣＤ４７上のエピトープに結合する、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。 An isolated antibody or antigen-binding fragment thereof that binds to the same epitope on human CD47 and/or cynomolgus monkey CD47 as the isolated antibody of any one of claims 1-3. ヒトＣＤ４７および／またはカニクイザルＣＤ４７への請求項１～３のいずれか１項に記載の単離された抗体の結合を阻害する単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。 An isolated antibody or antigen-binding fragment thereof that inhibits binding of the isolated antibody of any one of claims 1-3 to human CD47 and/or cynomolgus monkey CD47. 活性化状態で、ＣＤ４７を結合する活性化可能抗体であって、
ヒトＣＤ４７およびカニクイザルＣＤ４７に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ）；
前記ＡＢにカップリングされたマスキング部分（ＭＭ）であって、前記活性化可能抗体が非切断状態にある場合ＣＤ４７への前記ＡＢの結合を阻害する、ＭＭ；および
前記ＡＢにカップリングされた切断可能部分（ＣＭ）であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである、ＣＭ、
を含む、活性化可能抗体。 An activatable antibody that, in an activated state, binds CD47,
an antibody or antigen-binding fragment thereof (AB) that specifically binds to human CD47 and cynomolgus monkey CD47;
a masking moiety (MM) coupled to said AB, which inhibits binding of said AB to CD47 when said activatable antibody is in an uncleaved state; and cleavage coupled to said AB. a CM, which is a polypeptide that functions as a substrate for proteases,
An activatable antibody, comprising: 前記ＭＭが、ＣＤ４７への前記ＡＢの解離定数よりも大きい前記ＡＢへの結合についての解離定数を有する、請求項６に記載の活性化可能抗体。 7. The activatable antibody of claim 6, wherein said MM has a dissociation constant for binding to said AB that is greater than the dissociation constant of said AB to CD47. 前記ＭＭが、前記活性化可能抗体が切断状態にある場合ＣＤ４７への結合に関し前記ＡＢに干渉または競合しない、請求項６または請求項７に記載の活性化可能抗体。 8. The activatable antibody of claim 6 or claim 7, wherein said MM does not interfere with or compete with said AB for binding to CD47 when said activatable antibody is in a cleaved state. 前記ＭＭが、４０アミノ酸長以下のポリペプチドである、請求項６～８のいずれか１項に記載の活性化可能抗体。 An activatable antibody according to any one of claims 6-8, wherein said MM is a polypeptide of 40 amino acids or less in length. 前記ＭＭポリペプチド配列が、ヒトＣＤ４７のポリペプチド配列とは異なる、請求項６～９のいずれか１項に記載の活性化可能抗体。 An activatable antibody according to any one of claims 6 to 9, wherein said MM polypeptide sequence differs from the polypeptide sequence of human CD47. 前記ＭＭポリペプチド配列が、前記ＡＢのいずれかの天然の結合パートナーに５０％以下同一である、請求項６～１０のいずれか１項に記載の活性化可能抗体。 An activatable antibody according to any one of claims 6 to 10, wherein said MM polypeptide sequence is 50% or less identical to any natural binding partner of said AB. 前記ＭＭが、配列番号１６～２９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項６～１１のいずれか１項に記載の活性化可能抗体。 The activatable antibody of any one of claims 6-11, wherein said MM comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 16-29. 前記ＭＭが、配列番号１７、２３～２５、２７、および２８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項６～１２のいずれか１項に記載の活性化可能抗体。 13. The activatable antibody of any one of claims 6-12, wherein said MM comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 17, 23-25, 27, and 28. 前記ＣＭが、患部組織中で活性であるプロテアーゼの基質である、請求項６～１３のいずれか１項に記載の活性化可能抗体。 The activatable antibody of any one of claims 6-13, wherein said CM is a substrate for a protease active in diseased tissue. 前記ＣＭが、配列番号３５６～４５８、６８０～６９８、７１３、７１４、および７８９～８０８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項６～１４のいずれか１項に記載の活性化可能抗体。 15. The activatable of any one of claims 6-14, wherein said CM comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 356-458, 680-698, 713, 714, and 789-808 antibody. 前記ＣＭが、配列番号３５９、３７０、３７７、３８２、３９０、３９７、４０６～４２５、４２９、４３０、４４６、４４７、４５０、６８０～６９８、７１３、７１４、および８０７～８０８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項６～１５のいずれか１項に記載の活性化可能抗体。 said CM is selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 359, 370, 377, 382, 390, 397, 406-425, 429, 430, 446, 447, 450, 680-698, 713, 714, and 807-808 16. An activatable antibody according to any one of claims 6 to 15, comprising the amino acid sequence of 前記その抗原結合フラグメントが、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、ｓｃＦｖ、ｓｃＡｂ、ｄＡｂ、単一ドメイン重鎖抗体、および単一ドメイン軽鎖抗体からなる群より選択される、請求項１～５および９９～１０２のいずれか１項に記載の抗体または請求項６～１６のいずれか１項に記載の活性化可能抗体。 1- wherein said antigen-binding fragment thereof is selected from the group consisting of Fab fragments, F(ab')2 fragments, scFv, scAbs, dAbs, single domain heavy chain antibodies, and single domain light chain antibodies 5 and 99-102 or an activatable antibody according to any one of claims 6-16. 前記ＡＢが、ヒトＣＤ４７を特異的に結合する、請求項１～５および９９～１０２のいずれか１項に記載の抗体または請求項６～１７のいずれか１項に記載の活性化可能抗体。 The antibody of any one of claims 1-5 and 99-102 or the activatable antibody of any one of claims 6-17, wherein said AB specifically binds human CD47. ＡＢが、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号３）またはアミノ酸配列ＮＹＷＭＴ（配列番号４）を含むＶＨ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＤＰＹＤＶＥ（配列番号５）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号６）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＮＨＫ（配列番号３９）を含むＶＨ ＣＤＲ２配列；アミノ酸配ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含むＶＨ ＣＤＲ３配列；アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＱＴＹＬＥ（配列番号５５）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＳＴＹＬＥ（配列番号５６）を含むＶＬ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含むＶＬ ＣＤＲ２配列；およびアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含むＶＬ ＣＤＲ３配列を含む、請求項６～１８のいずれか１項に記載の活性化可能抗体。 VH CDR1 sequence where AB comprises the amino acid sequence GYTFTNY (SEQ ID NO:3) or the amino acid sequence NYWMT (SEQ ID NO:4); the amino acid sequence DPYDVE (SEQ ID NO:5) or the amino acid sequence RIDPYDVETHYAQKFQG (SEQ ID NO:6) or the amino acid sequence VH CDR2 sequence comprising amino acid sequence GGVGGMDY (SEQ ID NO: 7); amino acid sequence RSSQSIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO: 8) or RSSQSIVHSSGNTYLE (SEQ ID NO: 40) or RSSQSIVHSSGQTYLE (SEQ ID NO: 55) or RSSQSIVHSSGSTYLE (SEQ ID NO: 56); ); a VL CDR2 sequence comprising the amino acid sequence RVSKRFS (SEQ ID NO: 9); and a VL CDR3 sequence comprising the amino acid sequence FQGSHVPRT (SEQ ID NO: 10). activatable antibody. 前記ＡＢが、配列番号１および５８～６０のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２および７６～７９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項６～１９のいずれか１項に記載の活性化可能抗体。 wherein said AB comprises a heavy chain variable region comprising the amino acid sequences of any one of SEQ ID NOs: 1 and 58-60, and a light chain variable region comprising the amino acid sequences of any one of SEQ ID NOs: 2 and 76-79; 20. The activatable antibody of any one of Items 6-19. 前記ＡＢが、前記ＣＭに連結される、請求項６～２０のいずれか１項に記載の活性化可能抗体。 The activatable antibody of any one of claims 6-20, wherein said AB is linked to said CM. 前記ＡＢが、前記ＣＭに直接連結される、請求項６～２１のいずれか１項に記載の活性化可能抗体。 The activatable antibody of any one of claims 6-21, wherein said AB is directly linked to said CM. 前記ＡＢが、連結ペプチドを介して前記ＣＭに連結される、請求項６～２１のいずれか１項に記載の活性化可能抗体。 The activatable antibody of any one of claims 6-21, wherein said AB is linked to said CM via a linking peptide. 前記ＭＭが、非切断状態の前記活性化可能抗体が以下の：ＭＭ－ＣＭ－ＡＢまたはＡＢ－ＣＭ－ＭＭのようにＮ末端からＣ末端へ構造配置を含むよう前記ＣＭに連結される、請求項６～２３のいずれか１項に記載の活性化可能抗体。 wherein said MM is linked to said CM such that said activatable antibody in uncleaved state comprises the following structural arrangement from N-terminus to C-terminus: MM-CM-AB or AB-CM-MM. Item 24. The activatable antibody of any one of Items 6-23. 前記活性化可能抗体が、前記ＭＭと前記ＣＭの間に連結ペプチドを含む、請求項６～２４のいずれか１項に記載の活性化可能抗体。 25. The activatable antibody of any one of claims 6-24, wherein said activatable antibody comprises a connecting peptide between said MM and said CM. 前記活性化可能抗体が、前記ＣＭと前記ＡＢの間に連結ペプチドを含む、請求項６～２４のいずれか１項に記載の活性化可能抗体。 The activatable antibody of any one of claims 6-24, wherein said activatable antibody comprises a connecting peptide between said CM and said AB. 前記活性化可能抗体が、第１の連結ペプチド（ＬＰ１）および第２の連結ペプチド（ＬＰ２）を含み、かつ前記非切断状態での前記活性化可能抗体が、以下の：ＭＭ－ＬＰ１－ＣＭ－ＬＰ２－ＡＢまたはＡＢ－ＬＰ２－ＣＭ－ＬＰ１－ＭＭのようにＮ末端からＣ末端へ構造配置を有する、請求項６～２６のいずれか１項に記載の活性化可能抗体。 said activatable antibody comprises a first connecting peptide (LP1) and a second connecting peptide (LP2), and said activatable antibody in said uncleaved state comprises: MM-LP1-CM- 27. An activatable antibody according to any one of claims 6 to 26, having a structural arrangement from N-terminus to C-terminus such as LP2-AB or AB-LP2-CM-LP1-MM. 前記２種の連結ペプチドが、互いに同一である必要はない、請求項２７に記載の活性化可能抗体。 28. The activatable antibody of claim 27, wherein said two connecting peptides need not be identical to each other. 各ＬＰ１およびＬＰ２が、約１～２０アミノ酸長のペプチドである、請求項２７または２８に記載の活性化可能抗体。 29. The activatable antibody of claim 27 or 28, wherein each LP1 and LP2 is a peptide of about 1-20 amino acids in length. 前記活性化可能抗体が、配列番号１の重鎖配列および配列番号１５、４１～５４、６１～７４、８１～９４、および１０１～１１４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項６～２９のいずれか１項に記載の活性化可能抗体。 said activatable antibody comprises a heavy chain sequence of SEQ ID NO: 1 and a light chain comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 15, 41-54, 61-74, 81-94, and 101-114 The activatable antibody of any one of claims 6-29. 前記活性化可能抗体が、アミノ酸配列の組み合わせを含み、前記アミノ酸配列の組み合わせが、表Ｂ中の単列から選択され、
所与の組み合わせについて、
（ａ）前記ＡＢの重鎖が、表Ｂに列挙された単列中の前記所与の組み合わせに対応する前記ＶＨ ＣＤＲ配列のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）前記ＡＢの軽鎖が、表Ｂに列挙された単列中の前記所与の組み合わせに対応する前記ＶＬ ＣＤＲ配列のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）前記ＭＭが、表Ｂに列挙された単列中の前記所与の組み合わせに対応する前記マスク配列（ＭＭ）のアミノ酸配列を含み、
（ｄ）前記ＣＭが、表Ｂに列挙された単列中の前記所与の組み合わせに対応する前記基質配列（ＣＭ）のアミノ酸配列を含む、
請求項６～２９のいずれか１項に記載の活性化可能抗体。 said activatable antibody comprises a combination of amino acid sequences, said combination of amino acid sequences selected from the single columns in Table B;
For a given combination,
(a) the heavy chain of said AB comprises amino acid sequences of said VH CDR sequences corresponding to said given combination in a single row listed in Table B;
(b) the light chain of said AB comprises an amino acid sequence of said VL CDR sequences corresponding to said given combination in a single row listed in Table B;
(c) said MM comprises an amino acid sequence of said mask sequence (MM) corresponding to said given combination in a single row listed in Table B;
(d) said CM comprises an amino acid sequence of said substrate sequence (CM) corresponding to said given combination in a single row listed in Table B;
An activatable antibody according to any one of claims 6-29. 前記活性化可能抗体が、アミノ酸配列の組み合わせを含み、所与のアミノ酸配列の組み合わせについて、
（ａ）前記ＡＢの重鎖が、表Ｃの対応する縦列中に列挙されたＶＨ配列またはＶＨ ＣＤＲ配列からなる群より選択されるＶＨ配列またはＶＨ ＣＤＲ配列のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）前記ＡＢの軽鎖が、表Ｃの対応する縦列中に列挙されたＶＬ配列またはＶＬ ＣＤＲ配列からなる群より選択されるＶＬ配列またはＶＬ ＣＤＲ配列のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）前記ＭＭが、表Ｃの対応する縦列中に列挙されたＭＭ配列からなる群より選択されるマスク配列（ＭＭ）のアミノ酸配列を含み、および
（ｄ）前記ＣＭが、表Ｃの対応する縦列中に列挙されたＣＭ配列からなる群より選択される基質配列（ＣＭ）のアミノ酸配列を含む、
請求項６～２９のいずれか１項に記載の活性化可能抗体。 The activatable antibody comprises a combination of amino acid sequences, and for a given combination of amino acid sequences,
(a) the heavy chain of said AB comprises an amino acid sequence of a VH sequence or VH CDR sequence selected from the group consisting of the VH sequences or VH CDR sequences listed in the corresponding column of Table C;
(b) the light chain of said AB comprises an amino acid sequence of a VL sequence or VL CDR sequence selected from the group consisting of the VL sequences or VL CDR sequences listed in the corresponding column of Table C;
(c) said MM comprises an amino acid sequence of a mask sequence (MM) selected from the group consisting of MM sequences listed in the corresponding column of Table C; and (d) said CM is the correspondence of Table C. comprising the amino acid sequence of a substrate sequence (CM) selected from the group consisting of the CM sequences listed in the column
An activatable antibody according to any one of claims 6-29. 哺乳動物ＣＤ４７、ＭＭ、およびＣＭに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ）を含む活性化可能抗体であって、
配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖配列、および
配列番号１５、４１～５４、６１～７４、８１～９４、および１０１～１１４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖、
を含む、活性化可能抗体。 An activatable antibody comprising an antibody or antigen-binding fragment (AB) thereof that specifically binds to mammalian CD47, MM, and CM, wherein
a heavy chain sequence comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:1; and a light chain comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 15, 41-54, 61-74, 81-94, and 101-114;
An activatable antibody, comprising: 哺乳動物ＣＤ４７に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ）、配列番号１６～２９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＭＭ、ならびに配列番号３５６～４５８、６８０～６９８、７１３、７１４、および７８９～８０８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＣＭを含む活性化可能抗体。 an antibody or antigen-binding fragment (AB) thereof that specifically binds to mammalian CD47, an MM comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 16-29, and SEQ ID NOs: 356-458, 680-698, 713; 714, and an activatable antibody comprising a CM comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of 789-808. 前記ＭＭが、配列番号１７、２３～２５、２７、および２８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、かつ前記ＣＭが、配列番号３５９、３７０、３７７、３８２、３９０、３９７、４０６～４２５、４２９、４３０、４４６、４４７、４５０、６８０～６９８、７１３、７１４、および８０７～８０８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項３４に記載の活性化可能抗体。 said MM comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 17, 23-25, 27, and 28, and said CM comprises SEQ ID NOs: 359, 370, 377, 382, 390, 397, 406-425 , 429, 430, 446, 447, 450, 680-698, 713, 714, and 807-808. 前記ＡＢが、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号３）またはアミノ酸配列ＮＹＷＭＴ（配列番号４）を含むＶＨ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＤＰＹＤＶＥ（配列番号５）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号６）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＮＨＫ（配列番号３９）を含むＶＨ ＣＤＲ２配列；アミノ酸配ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含むＶＨ ＣＤＲ３配列；アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＱＴＹＬＥ（配列番号５５）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＳＴＹＬＥ（配列番号５６）を含むＶＬ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含むＶＬ ＣＤＲ２配列；およびアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含むＶＬ ＣＤＲ３配列を含む、請求項３４または３５に記載の活性化可能抗体。 A VH CDR1 sequence wherein AB comprises the amino acid sequence GYTFTNY (SEQ ID NO:3) or the amino acid sequence NYWMT (SEQ ID NO:4); the amino acid sequence DPYDVE (SEQ ID NO:5) or the amino acid sequence RIDPYDVETHYAQKFQG (SEQ ID NO:6) or the amino acid sequence VH CDR2 sequence comprising amino acid sequence GGVGGMDY (SEQ ID NO: 7); amino acid sequence RSSQSIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO: 8) or RSSQSIVHSSSGNTYLE (SEQ ID NO: 40) or RSSQSIVHSSGQTYLE (SEQ ID NO: 55) or RSSQSIVHSSGSTYLE (SEQ ID NO: 55) 56); a VL CDR2 sequence comprising the amino acid sequence RVSKRFS (SEQ ID NO: 9); and a VL CDR3 sequence comprising the amino acid sequence FQGSHVPRT (SEQ ID NO: 10). antibody. 前記ＡＢが、配列番号 １～３からなる群より選択されるアミノ 酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号５～８、１４０～１８２、および１８５～２２７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項３４～３６のいずれか１項に記載の活性化可能抗体。 A heavy chain variable region in which said AB comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 1-3, and an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 5-8, 140-182, and 185-227 37. The activatable antibody of any one of claims 34-36, comprising a light chain variable region comprising: 活性化可能抗ヒトＣＤ４７抗体であって、
哺乳動物ＣＤ４７に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ）であって、前記ＡＢが、請求項１～５および９９～１０２のいずれか１項に記載の単離抗体と同じヒトＣＤ４７および／またはカニクイザルＣＤ４７上のエピトープに結合する、抗体またはそのＡＢ、
前記活性化可能抗体が非切断状態にある場合ＣＤ４７への前記ＡＢの結合を阻害するマスキング部分（ＭＭ）、および
前記ＡＢにカップリングされた切断可能部分（ＣＭ）であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである、ＣＭ、
を含む、活性化可能ヒトＣＤ４７抗体。 An activatable anti-human CD47 antibody, comprising:
An antibody or antigen-binding fragment (AB) thereof that specifically binds to mammalian CD47, wherein said AB is the same human CD47 as the isolated antibody of any one of claims 1-5 and 99-102 and/or an antibody or AB thereof that binds to an epitope on cynomolgus monkey CD47,
a masking moiety (MM) that inhibits binding of said AB to CD47 when said activatable antibody is in an uncleaved state, and a cleavable moiety (CM) coupled to said AB, as a substrate for a protease CM, which is a functional polypeptide;
An activatable human CD47 antibody comprising: 活性化可能抗ヒトＣＤ４７抗体であって、
哺乳動物ＣＤ４７に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ）であって、前記ＡＢが、請求項１～５および９９～１０２のいずれか１項に記載の単離抗体とヒトＣＤ４７および／またはカニクイザルＣＤ４７への結合をについて特異的に交差競合する、抗体またはそのＡＢ、
前記活性化可能抗体が非切断状態にある場合ＣＤ４７への前記ＡＢの結合を阻害するマスキング部分（ＭＭ）、および
前記ＡＢにカップリングされた切断可能部分（ＣＭ）であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである、ＣＭ、
を含む、活性化可能ヒトＣＤ４７抗体。 An activatable anti-human CD47 antibody, comprising:
An antibody or antigen-binding fragment (AB) thereof that specifically binds to mammalian CD47, said AB comprising the isolated antibody of any one of claims 1-5 and 99-102 and human CD47 and /or an antibody or AB thereof that specifically cross-competes for binding to cynomolgus monkey CD47;
a masking moiety (MM) that inhibits binding of said AB to CD47 when said activatable antibody is in an uncleaved state, and a cleavable moiety (CM) coupled to said AB, as a substrate for a protease CM, which is a functional polypeptide;
An activatable human CD47 antibody comprising: 薬剤にコンジュゲートされた請求項１～５および９９～１０２のいずれか１項に記載の抗体または薬剤にコンジュゲートされた請求項６～３９のいずれか１項に記載の活性化可能抗体を含むコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。 comprising an antibody according to any one of claims 1-5 and 99-102 conjugated to a drug or an activatable antibody according to any one of claims 6-39 conjugated to a drug Conjugated antibody or conjugated activatable antibody. 前記薬剤が、毒素またはそのフラグメントである、請求項４０に記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。 41. The conjugated antibody or activatable antibody of claim 40, wherein said agent is a toxin or fragment thereof. 前記薬剤が、微小管阻害剤である、請求項４０または請求項４１に記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。 42. The conjugated antibody or activatable antibody of claim 40 or claim 41, wherein said agent is a microtubule inhibitor. 前記薬剤が、核酸損傷剤である、請求項４０または請求項４１に記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。 42. The conjugated antibody or activatable antibody of claim 40 or claim 41, wherein said agent is a nucleic acid damaging agent. 前記薬剤が、ドラスタチンまたはその誘導体、オーリスタチンまたはその誘導体、メイタンシノイドまたはその誘導体、デュオカルマイシンまたはその誘導体、カリケアマイシンまたはその誘導体、およびピロロベンゾジアゼピンまたはその誘導体からなる群より選択される、請求項４０または請求項４１に記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。 said agent is selected from the group consisting of dolastatin or derivatives thereof, auristatin or derivatives thereof, maytansinoids or derivatives thereof, duocarmycins or derivatives thereof, calicheamicins or derivatives thereof, and pyrrolobenzodiazepines or derivatives thereof; 42. A conjugated antibody or conjugated activatable antibody according to claim 40 or claim 41. 前記薬剤が、オーリスタチンＥまたはその誘導体である、請求項４０～４２および４４のいずれか１項に記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。 The conjugated antibody or activatable antibody of any one of claims 40-42 and 44, wherein said agent is auristatin E or a derivative thereof. 前記薬剤が、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）である、請求項４０～４２および４４のいずれか１項に記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。 The conjugated antibody or activatable antibody of any one of claims 40-42 and 44, wherein said agent is monomethylauristatin E (MMAE). 前記薬剤が、モノメチルオーリスタチンＤ（ＭＭＡＤ）である、請求項４０～４２および４４のいずれか１項に記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。 The conjugated antibody or activatable antibody of any one of claims 40-42 and 44, wherein said agent is monomethylauristatin D (MMAD). 前記薬剤が、ＤＭ１およびＤＭ４からなる群より選択されるマイタンシノイドである、請求項４０～４２および４４のいずれか１項に記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。 The conjugated antibody or activatable antibody of any one of claims 40-42 and 44, wherein said agent is a maytansinoid selected from the group consisting of DM1 and DM4. 前記薬剤が、マイタンシノイドＤＭ４である、請求項４０～４２および４４のいずれか１項に記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。 The conjugated antibody or activatable antibody of any one of claims 40-42 and 44, wherein said agent is the maytansinoid DM4. 前記薬剤が、デュオカルマイシンである、請求項４０、４１、４３および４４のいずれか１項に記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。 45. The conjugated antibody or activatable antibody of any one of claims 40, 41, 43 and 44, wherein said agent is a duocarmycin. 前記薬剤が、リンカーを介して前記ＡＢにコンジュゲートされる、請求項４０～５０のいずれか１項に記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。 The conjugated antibody or activatable antibody of any one of claims 40-50, wherein said agent is conjugated to said AB via a linker. それにより前記薬剤が前記ＡＢにコンジュゲートされる前記リンカーが、ＳＰＤＢ部分、ｖｃ部分、またはＰＥＧ２－ｖｃ部分を含む、請求項４０～５１のいずれか１項に記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。 The conjugated antibody or conjugate of any one of claims 40-51, wherein the linker by which the agent is conjugated to the AB comprises an SPDB moiety, a vc moiety, or a PEG2-vc moiety. Gated activatable antibody. 前記ＡＢにコンジュゲートされる前記リンカーおよび毒素が、ＳＰＤＢ－ＤＭ４部分、ｖｃ－ＭＭＡＤ部分、ｖｃ－ＭＭＡＥ部分、ｖｃ－デュオカルマイシン部分、またはＰＥＧ２－ｖｃ－ＭＭＡＤ部分を含む、請求項４０～５２のいずれか１項に記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。 Claims 40-52, wherein said linker and toxin conjugated to said AB comprise a SPDB-DM4 moiety, a vc-MMAD moiety, a vc-MMAE moiety, a vc-duocarmycin moiety, or a PEG2-vc-MMAD moiety. A conjugated antibody or a conjugated activatable antibody according to any one of . 前記リンカーが、切断可能なリンカーである、請求項５１に記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。 52. The conjugated antibody or activatable antibody of claim 51, wherein said linker is a cleavable linker. 前記リンカーが、切断不能リンカーである、請求項５１に記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。 52. The conjugated antibody or activatable antibody of claim 51, wherein said linker is a non-cleavable linker. 前記薬剤が、検出可能部分である、請求項４０および５１～５５のいずれか１項に記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。 The conjugated antibody or activatable antibody of any one of claims 40 and 51-55, wherein said agent is a detectable moiety. 前記検出可能部分が、診断薬である、請求項５６に記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体。 57. The conjugated antibody or activatable antibody of claim 56, wherein said detectable moiety is a diagnostic agent. 活性化状態で、ＣＤ４７を結合するコンジュゲートされた活性化可能抗体であって、
ヒトＣＤ４７およびカニクイザルＣＤ４７に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ）、
前記活性化可能抗体が非切断状態にある場合ＣＤ４７への前記ＡＢの結合を阻害するマスキング部分（ＭＭ）、および
前記ＡＢにカップリングされた切断可能部分（ＣＭ）であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである、ＣＭ、および
前記ＡＢにコンジュゲートされた薬剤、
を含む、コンジュゲートされた活性化可能抗体。 A conjugated activatable antibody that, in an activated state, binds CD47,
an antibody or antigen-binding fragment thereof (AB) that specifically binds to human CD47 and cynomolgus monkey CD47;
a masking moiety (MM) that inhibits binding of said AB to CD47 when said activatable antibody is in an uncleaved state, and a cleavable moiety (CM) coupled to said AB, as a substrate for a protease CM, which is a functional polypeptide, and an agent conjugated to said AB;
A conjugated activatable antibody comprising: 前記薬剤が、ドラスタチンまたはその誘導体、オーリスタチンまたはその誘導体、メイタンシノイドまたはその誘導体、デュオカルマイシンまたはその誘導体、カリケアマイシンまたはその誘導体、およびピロロベンゾジアゼピンまたはその誘導体からなる群より選択される、請求項５８に記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。 said agent is selected from the group consisting of dolastatin or derivatives thereof, auristatin or derivatives thereof, maytansinoids or derivatives thereof, duocarmycins or derivatives thereof, calicheamicins or derivatives thereof, and pyrrolobenzodiazepines or derivatives thereof; 59. A conjugated activatable antibody according to claim 58. 前記薬剤が、オーリスタチンＥ、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルオーリスタチンＤ（ＭＭＡＤ）、メイタンシノイドＤＭ４、メイタンシノイドＤＭ１、カリチアマイシン、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、およびピロロベンゾジアゼピン二量体からなる群より選択される、請求項５８または５９に記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。 said agent is auristatin E, monomethylauristatin F (MMAF), monomethylauristatin E (MMAE), monomethylauristatin D (MMAD), maytansinoid DM4, maytansinoid DM1, calicheamicin, duocarmycin, 60. The conjugated activatable antibody of claim 58 or 59, selected from the group consisting of pyrrolobenzodiazepines and pyrrolobenzodiazepine dimers. 前記薬剤が、リンカーを介して前記ＡＢにコンジュゲートされる、請求項５８～６０のいずれか１項に記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。 The conjugated activatable antibody of any one of claims 58-60, wherein said agent is conjugated to said AB via a linker. それにより前記薬剤が前記ＡＢにコンジュゲートされる前記リンカーが、ＳＰＤＢ部分、ｖｃ部分、またはＰＥＧ２－ｖｃ部分を含む、請求項５８～６１のいずれか１項に記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。 Conjugated activatable according to any one of claims 58-61, wherein said linker by which said agent is conjugated to said AB comprises an SPDB moiety, a vc moiety, or a PEG2-vc moiety antibody. 前記ＡＢにコンジュゲートされる前記リンカーおよび毒素が、ＳＰＤＢ－ＤＭ４部分、ｖｃ－ＭＭＡＤ部分、ｖｃ－ＭＭＡＥ部分、ｖｃ－デュオカルマイシン部分、またはＰＥＧ２－ｖｃ－ＭＭＡＤ部分を含む、請求項５８～６２のいずれか１項に記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。 claims 58-62, wherein said linker and toxin conjugated to said AB comprise a SPDB-DM4 moiety, a vc-MMAD moiety, a vc-MMAE moiety, a vc-duocarmycin moiety, or a PEG2-vc-MMAD moiety A conjugated activatable antibody according to any one of 前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号３）またはアミノ酸配列ＮＹＷＭＴ（配列番号４）を含むＶＨ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＤＰＹＤＶＥ（配列番号５）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号６）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＮＨＫ（配列番号３９）を含むＶＨ ＣＤＲ２配列；アミノ酸配ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含むＶＨ ＣＤＲ３配列；アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＱＴＹＬＥ（配列番号５５）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＳＴＹＬＥ（配列番号５６）を含むＶＬ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含むＶＬ ＣＤＲ２配列；およびアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含むＶＬ ＣＤＲ３配列を含む、請求項５８～６３のいずれか１項に記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。 wherein said antibody or antigen-binding fragment thereof comprises the amino acid sequence GYTFTNY (SEQ ID NO:3) or the amino acid sequence NYWMT (SEQ ID NO:4); the amino acid sequence DPYDVE (SEQ ID NO:5) or the amino acid sequence RIDPYDVETHYAQKFQG (SEQ ID NO:6) or VH CDR2 sequence comprising amino acid sequence RIDPYDVETHYNHK (SEQ ID NO:39); VH CDR3 sequence comprising amino acid sequence GGVGGMDY (SEQ ID NO:7); amino acid sequence RSSQSIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO:8) or RSSQSIVHSSSGNTYLE (SEQ ID NO:40) or RSSQSIVHSSGQTYLE (SEQ ID NO:55) or a VL CDR1 sequence comprising RSSQSIVHSSGSTYLE (SEQ ID NO: 56); a VL CDR2 sequence comprising the amino acid sequence RVSKRFS (SEQ ID NO: 9); and a VL CDR3 sequence comprising the amino acid sequence FQGSHVPRT (SEQ ID NO: 10). A conjugated activatable antibody according to any one of paragraphs. 前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１および５８～６０のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２および７６～７９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項５８～６４のいずれか１項に記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。 wherein said antibody or antigen-binding fragment thereof comprises a heavy chain variable region comprising the amino acid sequences of any one of SEQ ID NOs: 1 and 58-60, and a light chain variable region comprising the amino acid sequences of any one of SEQ ID NOs: 2 and 76-79 A conjugated activatable antibody according to any one of claims 58-64, comprising a region. 前記ＭＭが、配列番号１６～２９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項５８～６５のいずれか１項に記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。 The conjugated activatable antibody of any one of claims 58-65, wherein said MM comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS:16-29. 前記ＭＭが、配列番号１７、２３～２５、２７、および２８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項５８～６６のいずれか１項に記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。 67. The conjugated activatable antibody of any one of claims 58-66, wherein said MM comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 17, 23-25, 27, and 28. 前記ＣＭが、配列番号３５６～４５８、６８０～６９８、７１３、７１４、および７８９～８０８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項５８～６７のいずれか１項に記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。 68. The conjugate of any one of claims 58-67, wherein said CM comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs:356-458, 680-698, 713, 714, and 789-808. an activatable antibody. 前記ＣＭが、配列番号３５９、３７０、３７７、３８２、３９０、３９７、４０６～４２５、４２９、４３０、４４６、４４７、４５０、６８０～６９８、７１３、７１４、および８０７～８０８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項５８～６８のいずれか１項に記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。 said CM is selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 359, 370, 377, 382, 390, 397, 406-425, 429, 430, 446, 447, 450, 680-698, 713, 714, and 807-808 69. The conjugated activatable antibody of any one of claims 58-68, comprising the amino acid sequence of 前記活性化可能抗体が、アミノ酸配列の組み合わせを含み、前記アミノ酸配列の組み合わせが、表Ｂ中の単列から選択され、
所与の組み合わせについて、
（ａ）前記ＡＢの重鎖が、表Ｂに列挙された単列中の前記所与の組み合わせに対応する前記ＶＨ ＣＤＲ配列のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）前記ＡＢの軽鎖が、表Ｂに列挙された単列中の前記所与の組み合わせに対応する前記ＶＬ ＣＤＲ配列のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）前記ＭＭが、表Ｂに列挙された単列中の前記所与の組み合わせに対応する前記マスク配列（ＭＭ）のアミノ酸配列を含み、および
（ｄ）前記ＣＭが、表Ｂに列挙された単列中の前記所与の組み合わせに対応する前記基質配列（ＣＭ）のアミノ酸配列を含む、
請求項５８～６９のいずれか１項に記載の活性化可能抗体。 said activatable antibody comprises a combination of amino acid sequences, said combination of amino acid sequences selected from the single columns in Table B;
For a given combination,
(a) the heavy chain of said AB comprises amino acid sequences of said VH CDR sequences corresponding to said given combination in a single row listed in Table B;
(b) the light chain of said AB comprises an amino acid sequence of said VL CDR sequences corresponding to said given combination in a single row listed in Table B;
(c) said MM comprises an amino acid sequence of said mask sequence (MM) corresponding to said given combination in a single row listed in Table B; and (d) said CM is listed in Table B. amino acid sequence of said substrate sequence (CM) corresponding to said given combination in a single string
An activatable antibody according to any one of claims 58-69. 前記活性化可能抗体が、アミノ酸配列の組み合わせを含み、所与のアミノ酸配列の組み合わせについて、
（ａ）前記ＡＢの重鎖が、表Ｃの対応する縦列中に列挙されたＶＨ配列またはＶＨ ＣＤＲ配列からなる群より選択されるＶＨ配列またはＶＨ ＣＤＲ配列のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）前記ＡＢの軽鎖が、表Ｃの対応する縦列中に列挙されたＶＬ配列またはＶＬ ＣＤＲ配列からなる群より選択されるＶＬ配列またはＶＬ ＣＤＲ配列のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）前記ＭＭが、表Ｃの対応する縦列中に列挙されたＭＭ配列からなる群より選択されるマスク配列（ＭＭ）のアミノ酸配列を含み、および
（ｄ）前記ＣＭが、表Ｃの対応する縦列中に列挙されたＣＭ配列からなる群より選択される基質配列（ＣＭ）のアミノ酸配列を含む、
請求項５８～７０のいずれか１項に記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。 The activatable antibody comprises a combination of amino acid sequences, and for a given combination of amino acid sequences,
(a) the heavy chain of said AB comprises an amino acid sequence of a VH sequence or VH CDR sequence selected from the group consisting of the VH sequences or VH CDR sequences listed in the corresponding column of Table C;
(b) the light chain of said AB comprises an amino acid sequence of a VL sequence or VL CDR sequence selected from the group consisting of the VL sequences or VL CDR sequences listed in the corresponding column of Table C;
(c) said MM comprises an amino acid sequence of a mask sequence (MM) selected from the group consisting of MM sequences listed in the corresponding column of Table C; and (d) said CM is the correspondence of Table C. comprising the amino acid sequence of a substrate sequence (CM) selected from the group consisting of the CM sequences listed in the column
A conjugated activatable antibody according to any one of claims 58-70. 前記活性化可能抗体が、
配列番号１および１～１４のアミノ酸配列を含む重鎖、および
配列番号２、１５、４１～５７、６１～７７、８１～９７、および１０１～１１７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖、
を含む、請求項５８～７１のいずれか１項に記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。 wherein the activatable antibody is
a heavy chain comprising the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 1 and 1-14; chain,
The conjugated activatable antibody of any one of claims 58-71, comprising a コンジュゲートされた抗体であって、
（ａ）哺乳動物ＣＤ４７に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ）であって、
（ｉ）アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号３）またはアミノ酸配列ＮＹＷＭＴ（配列番号４）を含むＶＨ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＤＰＹＤＶＥ（配列番号５）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号６）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＮＨＫ（配列番号３９）を含むＶＨ ＣＤＲ２配列；アミノ酸配ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含むＶＨ ＣＤＲ３配列；アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＱＴＹＬＥ（配列番号５５）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＳＴＹＬＥ（配列番号５６）を含むＶＬ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含むＶＬ ＣＤＲ２配列；およびアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含むＶＬ ＣＤＲ３配列、
（ｉｉ）配列番号１および５８～６０のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２および７６～７９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、抗体またはそのＡＢ、
（ｂ）前記ＡＢにコンジュゲートされた薬剤であって、オーリスタチンＥ、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルオーリスタチンＤ（ＭＭＡＤ）、メイタンシノイドＤＭ４、メイタンシノイドＤＭ１、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、デュオカルマイシン、およびカリチアマイシンからなる群より選択される、薬剤、
を含む、コンジュゲートされた抗体。 A conjugated antibody,
(a) an antibody or antigen-binding fragment (AB) thereof that specifically binds to mammalian CD47,
(i) a VH CDR1 sequence comprising the amino acid sequence GYTFTNY (SEQ ID NO:3) or the amino acid sequence NYWMT (SEQ ID NO:4); VH CDR2 sequence comprising amino acid sequence GGVGGMDY (SEQ ID NO: 7); amino acid sequence RSSQSIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO: 8) or RSSQSIVHSSGNTYLE (SEQ ID NO: 40) or RSSQSIVHSSGQTYLE (SEQ ID NO: 55) or RSSQSIVHSSGSTYLE (SEQ ID NO: 56); ); a VL CDR2 sequence comprising the amino acid sequence RVSKRFS (SEQ ID NO: 9); and a VL CDR3 sequence comprising the amino acid sequence FQGSHVPRT (SEQ ID NO: 10).
(ii) an antibody comprising a heavy chain variable region comprising the amino acid sequences of any one of SEQ ID NOs: 1 and 58-60 and a light chain variable region comprising the amino acid sequences of any one of SEQ ID NOs: 2 and 76-79; or that AB,
(b) Agents conjugated to the ABs, wherein auristatin E, monomethylauristatin F (MMAF), monomethylauristatin E (MMAE), monomethylauristatin D (MMAD), maytansinoid DM4, maytansinoid a drug selected from the group consisting of noid DM1, pyrrolobenzodiazepines, pyrrolobenzodiazepine dimers, duocarmycins, and calicheamicins;
A conjugated antibody comprising 活性化状態で、ＣＤ４７に結合するコンジュゲートされた活性化可能抗体であって、
ヒトＣＤ４７およびカニクイザルＣＤ４７に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ）、
前記活性化可能抗体が非切断状態にある場合ＣＤ４７への前記ＡＢの結合を阻害するマスキング部分（ＭＭ）、
前記ＡＢにカップリングされた切断可能部分（ＣＭ）であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである、ＣＭ、および
前記ＡＢにコンジュゲートされた薬剤、
を含み、
前記ＡＢが、
（ｉ）アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹ（配列番号３）またはアミノ酸配列ＮＹＷＭＴ（配列番号４）を含むＶＨ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＤＰＹＤＶＥ（配列番号５）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号６）またはアミノ酸配列ＲＩＤＰＹＤＶＥＴＨＹＮＨＫ（配列番号３９）を含むＶＨ ＣＤＲ２配列；アミノ酸配ＧＧＶＧＧＭＤＹ（配列番号７）を含むＶＨ ＣＤＲ３配列；アミノ酸配列ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号８）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＮＴＹＬＥ（配列番号４０）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＱＴＹＬＥ（配列番号５５）またはＲＳＳＱＳＩＶＨＳＳＧＳＴＹＬＥ（配列番号５６）を含むＶＬ ＣＤＲ１配列；アミノ酸配ＲＶＳＫＲＦＳ（配列番号９）を含むＶＬ ＣＤＲ２配列；およびアミノ酸配列ＦＱＧＳＨＶＰＲＴ（配列番号１０）を含むＶＬ ＣＤＲ３配列、または
（ｉｉ）配列番号１および５７～５９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２および７６～７９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
（ｉｉｉ）配列番号１および１１～１４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２、１５、４１～５７、６１～７７、８１～９７、および１０１～１１７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖、
を含み、および
前記薬剤が、オーリスタチンＥ、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルオーリスタチンＤ（ＭＭＡＤ）、メイタンシノイドＤＭ４、メイタンシノイドＤＭ１、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、デュオカルマイシン、およびカリチアマイシンからなる群より選択される、コンジュゲートされた活性化可能抗体。 A conjugated activatable antibody that, in an activated state, binds to CD47,
an antibody or antigen-binding fragment thereof (AB) that specifically binds to human CD47 and cynomolgus monkey CD47;
a masking moiety (MM) that inhibits binding of said AB to CD47 when said activatable antibody is in an uncleaved state;
a cleavable moiety (CM) coupled to said AB, said CM being a polypeptide that functions as a substrate for a protease; and an agent conjugated to said AB;
including
said AB
(i) a VH CDR1 sequence comprising the amino acid sequence GYTFTNY (SEQ ID NO:3) or the amino acid sequence NYWMT (SEQ ID NO:4); VH CDR2 sequence comprising amino acid sequence GGVGGMDY (SEQ ID NO: 7); amino acid sequence RSSQSIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO: 8) or RSSQSIVHSSGNTYLE (SEQ ID NO: 40) or RSSQSIVHSSGQTYLE (SEQ ID NO: 55) or RSSQSIVHSSGSTYLE (SEQ ID NO: 56); ); a VL CDR2 sequence comprising the amino acid sequence RVSKRFS (SEQ ID NO: 9); and a VL CDR3 sequence comprising the amino acid sequence FQGSHVPRT (SEQ ID NO: 10); or (ii) any of SEQ ID NOs: 1 and 57-59. a heavy chain variable region comprising one amino acid sequence and a light chain variable region comprising any one of the amino acid sequences of SEQ ID NOS: 2 and 76-79; or (iii) selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 1 and 11-14 and a light chain comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 2, 15, 41-57, 61-77, 81-97, and 101-117;
and the agent is auristatin E, monomethylauristatin F (MMAF), monomethylauristatin E (MMAE), monomethylauristatin D (MMAD), maytansinoid DM4, maytansinoid DM1, pyrrolobenzodiazepine, pyrrolo A conjugated activatable antibody selected from the group consisting of benzodiazepine dimers, duocarmycins, and calicheamicins. 前記ＭＭが、配列番号１６～２９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項７４に記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。 75. The conjugated activatable antibody of claim 74, wherein said MM comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS:16-29. 前記ＭＭが、配列番号１７、２３～２５、２７、および２８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項７４または７５に記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。 76. The conjugated activatable antibody of claim 74 or 75, wherein said MM comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 17, 23-25, 27, and 28. 前記ＣＭが、配列番号３５６～４５８、６８０～６９８、７１３、７１４、および７８９～８０８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項７４～７６のいずれか１項に記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。 77. The conjugate of any one of claims 74-76, wherein said CM comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 356-458, 680-698, 713, 714, and 789-808. an activatable antibody. 前記ＣＭが、配列番号３５９、３７０、３７７、３８２、３９０、３９７、４０６～４２５、４２９、４３０、４４６、４４７、４５０、６８０～６９８、７１３、７１４、および８０７～８０８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項７４～７７のいずれか１項に記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。 said CM is selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 359, 370, 377, 382, 390, 397, 406-425, 429, 430, 446, 447, 450, 680-698, 713, 714, and 807-808 78. The conjugated activatable antibody of any one of claims 74-77, comprising the amino acid sequence of 前記薬剤が、リンカーを介して前記ＡＢにコンジュゲートされ、前記薬剤がＡＢにコンジュゲートされる前記リンカーが、ＳＰＤＢ部分、ｖｃ部分、またはＰＥＧ２－ｖｃ部分を含む、請求項７４～７８のいずれか１項に記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。 79. Any of claims 74-78, wherein the agent is conjugated to the AB via a linker, and wherein the linker through which the agent is conjugated to AB comprises an SPDB moiety, a vc moiety, or a PEG2-vc moiety. A conjugated activatable antibody according to paragraph 1. 前記ＡＢにコンジュゲートされる前記リンカーおよび毒素が、ＳＰＤＢ－ＤＭ４部分、ｖｃ－ＭＭＡＤ部分、ｖｃ－ＭＭＡＥ部分、ｖｃ－デュオカルマイシン部分、またはＰＥＧ２－ｖｃ－ＭＭＡＤ部分を含む、請求項７４～７９のいずれか１項に記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。 claims 74-79, wherein said linker and toxin conjugated to said AB comprises a SPDB-DM4 moiety, a vc-MMAD moiety, a vc-MMAE moiety, a vc-duocarmycin moiety, or a PEG2-vc-MMAD moiety A conjugated activatable antibody according to any one of コンジュゲートされた活性化可能抗体またはコンジュゲートされた抗体であって、
活性化状態で、ＣＤ４７を結合する抗体またはその抗原結合フラグメント（ＡＢ）、および
リンカーを介して前記ＡＢにコンジュゲートされた毒素、
を含み、
表Ｄ中の単列から選択されるアミノ酸配列、リンカー、および毒素を含み、所与の組み合わせについて、
（ａ）前記ＡＢが、表Ｄに列挙された単列中の前記所与の組み合わせに対応する前記重鎖配列または重鎖可変ドメイン配列のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、
（ｂ）前記ＡＢが、表Ｄに列挙された単列中の前記所与の組み合わせに対応する前記軽鎖配列または軽鎖可変ドメイン配列のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、および
（ｃ）前記リンカーおよび前記毒素が、表Ｄに列挙された単列中の前記所与の組み合わせに対応する前記リンカーおよび前記毒素を含む、
コンジュゲートされた活性化可能抗体またはコンジュゲートされた抗体。 A conjugated activatable antibody or a conjugated antibody,
an antibody or antigen-binding fragment thereof (AB) that, in an activated state, binds CD47; and a toxin conjugated to said AB via a linker;
including
comprising amino acid sequences, linkers, and toxins selected from the single columns in Table D, for a given combination:
(a) said AB comprises a heavy chain comprising the amino acid sequence of said heavy chain sequence or heavy chain variable domain sequence corresponding to said given combination in a single row listed in Table D;
(b) said AB comprises a heavy chain comprising the amino acid sequence of said light chain sequence or light chain variable domain sequence corresponding to said given combination in a single row listed in Table D; and (c) said wherein the linker and said toxin comprise said linker and said toxin corresponding to said given combination in a single row listed in Table D;
Conjugated activatable antibody or conjugated antibody. 請求項１～５および９９～１０２のいずれか１項に記載の抗体、請求項６～３９のいずれか１項に記載の活性化可能抗体、または請求項４０～８１のいずれか１項に記載のコンジュゲートされた抗体もしくはコンジュゲートされた活性化可能抗体；および担体を含む医薬組成物。 The antibody of any one of claims 1-5 and 99-102, the activatable antibody of any one of claims 6-39, or the activatable antibody of any one of claims 40-81. and a carrier. 追加の薬剤を含む請求項８２に記載の医薬組成物。 83. The pharmaceutical composition of claim 82, comprising an additional drug. 前記追加の薬剤が、治療薬である、請求項８３に記載の医薬組成物。 84. The pharmaceutical composition of Claim 83, wherein said additional agent is a therapeutic agent. 請求項１～５および９９～１０２のいずれか１項に記載の単離された抗体、または請求項６～３９のいずれか１項に記載の活性化可能抗体をコードする単離された核酸分子。 An isolated antibody according to any one of claims 1-5 and 99-102, or an isolated nucleic acid molecule encoding an activatable antibody according to any one of claims 6-39 . 請求項８５に記載の単離された核酸分子を含むベクター。 86. A vector comprising the isolated nucleic acid molecule of claim 85. 前記抗体または前記活性化可能抗体の発現をもたらす条件下で細胞を培養することにより抗体または活性化可能抗体を産生する方法であって、前記細胞が、請求項８５に記載の核酸分子または請求項８６に記載のベクターを含む、方法。 A method of producing an antibody or an activatable antibody by culturing a cell under conditions conducive to expression of said antibody or said activatable antibody, wherein said cell comprises the nucleic acid molecule of claim 85 or 86. A method comprising the vector of 86. 活性化状態で、ＣＤ４７を結合する活性化可能抗体を製造する方法であって、
（ａ）前記活性化可能抗体の発現をもたらす条件下で前記活性化可能抗体をコードする核酸構築物を含む細胞を培養することであって、前記活性化可能抗体が、請求項６～３９のいずれか１項に記載の活性化可能抗体を含む、培養すること、
および
（ｂ）前記活性化可能抗体を回収すること、
を含む、方法。 A method of producing an activatable antibody that, in an activated state, binds CD47, comprising:
(a) culturing a cell comprising a nucleic acid construct encoding said activatable antibody under conditions conducive to expression of said activatable antibody, wherein said activatable antibody is any of claims 6-39 or culturing containing the activatable antibody of claim 1,
and (b) recovering said activatable antibody;
A method, including 疾患細胞がＣＤ４７を発現する障害または疾患を治療する、その症状を緩和する、またはその進行を遅らせる方法であって、それを必要としている対象に請求項１～５および９９～１０２のいずれか１項に記載の抗体、請求項６～３９のいずれか１項に記載の活性化可能抗体、請求項４０～８１のいずれか１項に記載のコンジュゲートされた抗体またはコンジュゲートされた活性化可能抗体、または請求項８２～８４のいずれか１項に記載の医薬組成物の治療有効量を投与することを含む、方法。 A method of treating, ameliorating symptoms of, or slowing progression of a disorder or disease in which the diseased cells express CD47, in a subject in need thereof, any one of claims 1-5 and 99-102 An antibody according to any one of claims 6 to 39, an activatable antibody according to any one of claims 40 to 81 or a conjugated activatable antibody according to any one of claims 40 to 81 A method comprising administering a therapeutically effective amount of an antibody or a pharmaceutical composition according to any one of claims 82-84. 前記障害または疾患が、癌である、請求項８９に記載の方法。 90. The method of claim 89, wherein said disorder or disease is cancer. ＣＤ４７を発現する細胞と関連する障害または疾患を治療する、その症状を緩和する、またはその進行を遅らせる方法であって、それを必要としている対象に請求項１～５および９９～１０２のいずれか１項に記載の抗体、請求項６～３９のいずれか１項に記載の活性化可能抗体、請求項４０～８１のいずれか１項に記載のコンジュゲートされた抗体もしくはコンジュゲートされた活性化可能抗体、または請求項８２～８４のいずれか１項に記載の医薬組成物の治療有効量を投与することを含む、方法。 A method of treating, alleviating symptoms of, or slowing progression of a disorder or disease associated with cells expressing CD47, in a subject in need thereof, of any of claims 1-5 and 99-102 Antibody according to claim 1, activatable antibody according to any one of claims 6-39, conjugated antibody or conjugated activation according to any one of claims 40-81 A method comprising administering a therapeutically effective amount of a possible antibody or a pharmaceutical composition according to any one of claims 82-84. 前記ＣＤ４７を発現する細胞と関連する障害または疾患が、癌である、請求項９１に記載の方法。 92. The method of claim 91, wherein the disorder or disease associated with cells expressing CD47 is cancer. 前記癌が、腺癌、胆管（胆嚢）癌、膀胱癌、骨癌、乳癌、トリプルネガティブ乳癌、Ｈｅｒ２陰性乳癌、カルチノイド癌、子宮頸癌、胆管細胞癌、結腸直腸癌、結腸癌、子宮内膜癌、食道癌、神経膠腫、頭頸部癌、頭頸部扁平上皮癌、白血病、肝臓癌、肺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、リンパ腫、黒色腫、中咽頭癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、転移性去勢抵抗性前立腺癌、腎癌、肉腫、皮膚癌、扁平上皮癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、泌尿生殖器癌、または尿路上皮癌である、請求項９０または請求項９２に記載の方法。 The cancer is adenocarcinoma, bile duct (gallbladder) cancer, bladder cancer, bone cancer, breast cancer, triple-negative breast cancer, Her2-negative breast cancer, carcinoid cancer, cervical cancer, cholangiocellular carcinoma, colorectal cancer, colon cancer, endometrial cancer cancer, esophageal cancer, glioma, head and neck cancer, head and neck squamous cell carcinoma, leukemia, liver cancer, lung cancer, non-small cell lung cancer, small cell lung cancer, lymphoma, melanoma, oropharyngeal cancer, ovarian cancer, pancreatic cancer, Claim 90 or claim 92, wherein the cancer is prostate cancer, metastatic castration-resistant prostate cancer, renal cancer, sarcoma, skin cancer, squamous cell carcinoma, gastric cancer, testicular cancer, thyroid cancer, urogenital cancer, or urothelial cancer The method described in . 哺乳動物ＣＤ４７を発現する細胞の成長、増殖、または転移を抑制するまたは低減する方法であって、それを必要としている対象に請求項１～５のいずれか１項に記載の抗体、請求項６～３９のいずれか１項に記載の活性化可能抗体、請求項４０～８１のいずれか１項に記載のコンジュゲートされた抗体もしくはコンジュゲートされた活性化可能抗体、または請求項８２～８４のいずれか１項に記載の医薬組成物の治療有効量を投与することを含む、方法。 A method of inhibiting or reducing growth, proliferation, or metastasis of cells expressing mammalian CD47, wherein the antibody of any one of claims 1-5, claim 6, in a subject in need thereof 39, the conjugated antibody or activatable antibody of any one of claims 40-81, or the activatable antibody of any one of claims 82-84 A method comprising administering a therapeutically effective amount of the pharmaceutical composition of any one. 哺乳動物ＣＤ４７への天然リガンドの結合を阻害する、遮断する、または防止する方法であって、それを必要としている対象に請求項１～５および９９～１０２のいずれか１項に記載の抗体、請求項６～３９のいずれか１項に記載の活性化可能抗体、請求項４０～８１のいずれか１項に記載のコンジュゲートされた抗体もしくはコンジュゲートされた活性化可能抗体、または請求項８２～８４のいずれか１項に記載の医薬組成物の治療有効量を投与することを含む、方法。 a method of inhibiting, blocking or preventing binding of a natural ligand to mammalian CD47, wherein the antibody of any one of claims 1-5 and 99-102 in a subject in need thereof; An activatable antibody according to any one of claims 6-39, a conjugated antibody or activatable antibody according to any one of claims 40-81, or claim 82 84. A method comprising administering a therapeutically effective amount of the pharmaceutical composition of any one of claims 1-84. 前記哺乳動物ＣＤ４７の発現および／または活性が、異常である、請求項９４または９５に記載の方法。 96. The method of claim 94 or 95, wherein said mammalian CD47 expression and/or activity is abnormal. 追加の薬剤を投与することを含む、請求項８９～９６のいずれか１項に記載の方法。 97. The method of any one of claims 89-96, comprising administering an additional agent. 前記追加の薬剤が、治療薬である、請求項９７に記載の方法。 98. The method of claim 97, wherein said additional agent is a therapeutic agent. 前記単離された抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＣＤ４７への結合時に、ＣＤ４７とＳＩＲＰαの相互作用を遮断する、請求項１～５のいずれか１項に記載の単離された抗体。 The isolated antibody of any one of claims 1-5, wherein the isolated antibody, or antigen-binding fragment thereof, upon binding to CD47 blocks the interaction of CD47 and SIRPα. 前記ＣＤ４７が、ヒトＣＤ４７でありかつＳＩＲＰαが、ヒトＳＩＲＰαである、請求項９９に記載の単離された抗体。 100. The isolated antibody of claim 99, wherein said CD47 is human CD47 and SIRPα is human SIRPα. 前記単離された抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＣＤ４７への結合時に、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を誘導する、請求項１～５のいずれか１項に記載の単離された抗体。 The isolated antibody of any one of claims 1-5, wherein said isolated antibody, or antigen-binding fragment thereof, upon binding to CD47 induces antibody-dependent cell phagocytosis (ADCP). . 前記ＡＤＣＰが、Ｆｃ受容体への前記抗体のＦｃドメインの結合を介して誘導される、請求項１０１に記載の単離された抗体。 102. The isolated antibody of claim 101, wherein said ADCP is induced via binding of said antibody's Fc domain to an Fc receptor. 前記ＡＢが、ＣＤ４７に結合時に、ＣＤ４７とＳＩＲＰαの相互作用を遮断する、請求項６～３９のいずれか１項に記載の活性化可能抗体、または請求項４０～５７、７３および８１のいずれか１項に記載のコンジュゲートされた抗体または請求項４０～７２および７４～８１のいずれか１項に記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。 The activatable antibody of any one of claims 6-39, or any of claims 40-57, 73 and 81, wherein said AB blocks the interaction of CD47 with SIRPα when bound to CD47 A conjugated antibody according to claim 1 or a conjugated activatable antibody according to any one of claims 40-72 and 74-81. 前記ＣＤ４７が、ヒトＣＤ４７でありかつＳＩＲＰαが、ヒトＳＩＲＰαである、請求項１０３に記載の活性化可能抗体。 104. The activatable antibody of claim 103, wherein said CD47 is human CD47 and SIRPα is human SIRPα. 前記ＡＢが、ＣＤ４７に結合時に、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を誘導する、請求項６～３９のいずれか１項に記載の活性化可能抗体、または請求項４０～５７、７３および８１のいずれか１項に記載のコンジュゲートされた抗体または請求項４０～７２および７４～８１のいずれか１項に記載のコンジュゲートされた活性化可能抗体。 The activatable antibody of any one of claims 6-39, or claims 40-57, 73 and 81, wherein said AB induces antibody-dependent cellular phagocytosis (ADCP) upon binding CD47 or a conjugated activatable antibody according to any one of claims 40-72 and 74-81. 前記ＡＤＣＰが、Ｆｃ受容体への前記抗体のＦｃドメインの結合を介して誘導される、請求項１０５に記載の単離された抗体。 106. The isolated antibody of claim 105, wherein said ADCP is induced through binding of said antibody's Fc domain to an Fc receptor.
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