JP2022536740A - ヒト免疫不全ウイルスの治療のための組成物及び方法 - Google Patents
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Abstract
ウイルス感染症の治療のための組成物及び方法は、Fc単量体、Fcドメイン、及びFc結合ペプチド、アルブミンタンパク質、またはアルブミン結合ペプチドに連結したウイルスgp120受容体の阻害剤(例えば、テムサビル、BMS-818251、DMJ-II-121、BNM-IV-147、またはその類似体)を含む複合体を含む。特に、複合体は、ウイルス感染症(例えば、HIV感染症)の治療に使用することができる。【選択図】なし
Description
ヒト免疫不全ウイルス(HIV)の新規抗ウイルス治療の必要性は大きく、医療分野では特に重要である。30年以上前にHIVの最初の症例が特定されて以来、7,800万人がHIVに感染し、3,500万人が後天性免疫不全症候群(AIDS)関連の疾病で亡くなっている。現在、世界中で3,690万人がHIVまたはAIDSに感染しており、そのうち15歳未満の子供は180万人である。2017年には、世界中で推定180万人が新たにHIVに感染した。
HIVの抗ウイルス治療法の開発は、継続的な課題となっている。1987年に最初に米国FDAが抗HIV薬を承認して以来、一連の抗レトロウイルス療法が開発されてきた。しかしながら、薬剤耐性株が出現し、これらの抗レトロウイルス療法を使用可能な患者の数は制限されてきた。
HIV抗ウイルス阻害剤は、HIVサイクルの異なるステップを対象とする多くのいくつかのクラスに分類される。抗ウイルス剤の1つのクラスであるヌクレオシド逆転写酵素阻害剤(NRTI)は、HIV逆転写酵素によって伸長中のDNA鎖に組み込まれた後、連鎖反応を停止させることによってウイルス複製を阻害する。別のクラスである非ヌクレオシド逆転写阻害剤(NNRTI)も同様に逆転写を標的とするが、ヌクレオシド逆転写阻害剤とは異なる部位でそれを行う。異なるクラスの抗ウイルス剤であるインテグラーゼ阻害剤は、宿主細胞ゲノムへのウイルスDNAの挿入を阻害する。プロテアーゼ阻害剤は、新規ウイルス粒子の集合において重要な酵素であるプロテアーゼ酵素を阻害する薬剤である。ウイルス侵入阻害剤として知られる抗ウイルス剤の1つのクラスとして、HIVエンベロープ(Env)糖タンパク質に結合することによって細胞へのウイルス侵入を妨害する薬剤が挙げられる。特に、ウイルス侵入阻害剤は、HIVウイルスの表面サブユニットgp120受容体を標的とする。
しかしながら、これらの薬剤の多くは腎臓から分泌または除去されるため、腎臓機能が低下している場合は用量を調整する必要があり、特に臓器移植を受けているHIV陽性の個体では、副作用の影響を増大させ得る薬物間相互作用がある。さらに、これらの薬剤の多くからは、様々な腎障害を引き起こす直接的な腎毒性が示されている。HIVを治療するための、新しいより効果的な治療法が必要である。
本開示は、ウイルス増殖を阻害するための複合体、組成物、及び方法、ならびにウイルス感染症の治療方法に関する。特に、そのような複合体は、例えば、Fc単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質、またはアルブミンタンパク質結合ペプチドに複合させたgp120糖タンパク質(gp120結合剤、例えば、テムサビル、BMS-818251、DMJ-II-121、BNM-IV-147、またはその類似体)に結合することによって、ヒト免疫不全ウイルスを阻害する部分の単量体または二量体を含む。好ましい実施形態では、複合体中のHIV標的化部分(例えば、テムサビル、BMS-818251、DMJ-II-121、BNM-IV-147、またはその類似体)は、HIV Env遺伝子によってコードされるタンパク質、特にウイルス粒子表面のgp120糖タンパク質を標的化し、それによって宿主CD4+T細胞へのウイルスの接着と宿主免疫細胞への侵入を防ぐ。複合体中のFc単量体またはFcドメインは、免疫細胞、例えば、好中球のFcγR(例えば、FcRn、FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIc、FcγRIIIa、及びFcγRIIIb)に結合して、食作用及びエフェクター機能、例えば、抗体依存性細胞傷害(ADCC)を活性化し、したがって、媒介性細胞傷害により、免疫細胞によるウイルス粒子の飲み込みと破壊を引き起こし、複合体の抗ウイルス活性をさらに高める。アルブミンまたはアルブミン結合ペプチドは、例えば、リサイクル中の新生児Fc受容体へのアルブミンの結合によって、複合体の半減期を延長し得る。そのような組成物は、ウイルス増殖の阻害方法、及びウイルス感染症、例えば、HIV-1及びHIV-2によって引き起こされる感染症の治療方法において有用である。
第1の態様では、本発明は、式(D-I)、(M-I)、(1)、または(2):
R1、R2、R3は、各々、独立して、H、OH、ハロゲン、ニトリル、ニトロ、任意選択的に置換されたアミン、任意選択的に置換されたスルフヒドリル、任意選択的に置換されたカルボキシル、任意選択的に置換されたC1-C20アルキル、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニル、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニル、任意選択的に置換されたC5-C20アリール、任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリール、及び任意選択的に置換されたC1-C20アルコキシから選択され;
R4は、任意選択的に置換されたC1-C20アルキル、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリール、及び結合から選択され;
R5は、Hまたは任意選択的に置換されたC1-C6アルキルから選択され;
R6は、任意選択的に置換されたC1-C20アルキル、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、及び任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリールから選択され;
R7及びYは、各々独立して、
各R8は、独立して、H、任意選択的に置換されたC1-C20アルキル、任意選択的に置換されたC1-C20アルキレン、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、及び任意選択的に置換されたC2-C15ヘテロアリールから選択され;
各R9は、独立して、任意選択的に置換されたC1-C20アルキレン、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、及び任意選択的に置換されたC2-C15ヘテロアリールから選択され;
xは、1または2であり;
kは、0、1、2、3、4、または5であり;
Arは、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、及び任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリールからなる群から選択され;
nは、1または2であり;
いくつかの実施形態では、nは1であり、各Eは、Fcドメイン単量体(例えば、配列番号1~95のいずれか1つの配列を有するFcドメイン単量体)、アルブミンタンパク質(例えば、配列番号96~98のいずれか1つを有するアルブミンタンパク質)、アルブミンタンパク質結合ペプチド、またはFc結合ペプチドを含み;
いくつかの実施形態では、nは2であり、各Eは、Fcドメイン単量体(例えば、配列番号1~95のいずれか1つの配列を有するFcドメイン単量体)を含み、その場合、Fcドメイン単量体は、二量体化してFcドメインを形成し;
Lは、各Eならびに各A1及び/またはA2の各Yに共有結合したリンカーであり;
Tは、1~20の整数(例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20)であり、式(D-I)、(M-I)、(1)、または(2)中の各波線は、Lが各Eに共有結合している(例えば、共有結合またはリンカーを介して)ことを示す。Tが1より大きい(例えば、Tが、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)場合、各A1-Lまたは各A1-L-A2を、独立して選択(例えば、本明細書に記載のA1-LまたはA1-L-A2構造のいずれかから独立して選択)してもよい。
本明細書に記載の態様のいずれかの好ましい実施形態(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの複合体)では、A1及び/またはA2が(A-I)で記述された構造から選択される場合、xは2である。
本明細書に記載の態様のいずれかの好ましい実施形態(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの複合体)では、A1及び/またはA2が(A-II)で記述された構造から選択される場合、xは2である。
本明細書に記載の態様のいずれかの好ましい実施形態では、nは2であり、各Eは、Fcドメイン単量体(例えば、配列番号1~95のいずれか1つの配列を有するFcドメイン単量体)を含む。2つのFcドメイン単量体を有する複合体(例えば、式(1)、式(2)、式(D-I)(nは2である)、または(M-I)(nは2である)の複合体)では、Fcドメイン単量体は二量体化してFcドメインを形成する。
特定の実施形態では、各A1及び各A2は、独立して、式(A-Ia)~(A-Ih):
さらなる実施形態では、各A1及び各A2は、独立して、式(A-Ia-i)~(A-Ih-i):
いくつかの実施形態では、各A1及び各A2は、独立して、式(A-Ii)~(A-Ip):
別の実施形態では、各A1及び各A2は、独立して、式(A-Iq)~(A-Ix):
いくつかの実施形態では、各A1及び各A2は、独立して、式(A-Iq-i)~(A-Ix-i):
さらに別の実施形態では、各A1及び各A2は、独立して、式(A-Iaa)~(A-Ihh):
いくつかの実施形態では、各A1及び各A2は、独立して、式(A-Iii)~(A-Ipp):
別の実施形態では、各A1及び各A2は、独立して、式(A-Iii-i)~(A-Ipp-i):
いくつかの実施形態では、R1はHである。特定の実施形態では、R2はHである。好ましい実施形態では、R2は、-OCH3である。特定の実施形態では、R3はHである。別の実施形態では、R4はHである。いくつかの実施形態では、R5はHである。特定の実施形態では、R7は、カルボニルである。特定の実施形態では、XはNである。他の実施形態では、XはCである。
特定の実施形態では、各A1及び各A2は、独立して、式(A-IIa)~(A-IId):
別の実施形態では、各A1及び各A2は、独立して、式(A-IIa-i)~(A-IId-i):
別の態様では、本発明は、式(D-I):
式中、各Eは、Fcドメイン単量体(例えば、配列番号1~95のいずれか1つの配列を有するFcドメイン単量体)を含み;各A1-L-A2のLは、Eのヒンジシステインの硫黄原子とA1及びA2の各々に共有結合しているリンカーであり;nは、1または2であり(例えば、nが2の場合、2つのFcドメイン単量体が二量体化してFcドメインを形成する);Tは、1~20の整数(例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20)であり、Eに接続された波線は、各A1-L-A2がEのヒンジシステインの硫黄原子、または薬学的に許容される塩に共有結合している(例えば、共有結合またはリンカーを介して)ことを示す。Tが1より大きい(例えば、Tが、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)場合、各A1-L-A2は、独立して選択され得る(例えば、本明細書に記載のA1-L-A2構造のいずれかから独立して選択される)。
別の態様では、本発明は、式(D-I):
式中、各Eは、Fcドメイン単量体(例えば、配列番号1~95のいずれか1つの配列を有するFcドメイン単量体)を含み;各A1-L-A2は、Eの表面露出リジンの窒素原子とA1及びA2の各々に共有結合したリンカーであり;nは、1または2であり(例えば、nが2の場合、2つのFcドメイン単量体が二量体化してFcドメインを形成する);Tは、1~20の整数(例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20)であり、Eに接続された波線は、各A1-L-A2がEの表面露出リジンの窒素原子またはその薬学的に許容される塩に共有結合している(例えば、共有結合またはリンカーを介して)ことを示す。Tが1より大きい(例えば、Tが、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)場合、各A1-L-A2は、独立して選択され得る(例えば、本明細書に記載のA1-L-A2構造のいずれかから独立して選択される)。
別の態様では、本発明は、式(M-I):
式中、各Eは、Fcドメイン単量体(例えば、配列番号1~95のいずれか1つの配列を有するFcドメイン単量体)を含み;各L-A1のLは、Eのヒンジシステインの硫黄原子とA1に共有結合しているリンカーであり;nは1または2であり(例えば、nが2の場合、2つのFcドメイン単量体が二量体化してFcドメインを形成する);Tは、1~20の整数(例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20)であり;Eに接続された波線は、各L-A1がEのヒンジシステインの硫黄原子、またはその薬学的に許容される塩に共有結合している(例えば、共有結合またはリンカーを介して)ことを示す。Tが1より大きい(例えば、Tが、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)場合、各A1は、式(A-I)によって記述される任意の構造から独立して選択され得る。
別の態様では、本発明は、式(M-I):
式中、各Eは、Fcドメイン単量体(例えば、配列番号1~95のいずれか1つの配列を有するFcドメイン単量体)を含み;各L-A1のLは、表面露出Eのリジンの窒素原子とA1に共有結合したリンカーであり;nは、1または2であり(例えば、nが2の場合、2つのFcドメイン単量体が二量体化してFcドメインを形成する);Tは、1~20の整数(例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20)であり;Eに接続された波線は、各L-A1がEの表面露出リジンまたはその薬学的に許容される塩の窒素原子に共有結合している(例えば、共有結合またはリンカーを介して)ことを示す。Tが1より大きい(例えば、Tが、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)場合、各A1は、式(A-I)によって記述される任意の構造から独立して選択され得る。
別の態様では、本発明は、式(1):
式中、各Eは、Fcドメイン単量体(例えば、配列番号1~95のいずれか1つの配列を有するFcドメイン単量体)を含み;各A1-L-A2のLは、各Eのヒンジシステインの硫黄原子とA1及びA2の各々に共有結合しているリンカーであり;Tは、1~20の整数(例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20)であり;2つのEに接続された2つの波線は、各A1-L-A2が2つのEの2つのヒンジシステインの硫黄原子のペアに共有結合している(例えば、共有結合またはリンカーを介して)ことを示す。Tが1より大きい(例えば、Tは2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20)場合、各A1-L-A2は、独立して選択され得る(例えば、本明細書に記載のA1-L-A2構造のいずれかから独立して選択される)。
別の態様では、本発明は、式(2):
式中、各Eは、Fcドメイン単量体(例えば、配列番号1~95のいずれか1つの配列を有するFcドメイン単量体)を含み;各L-A1のLは、Eのヒンジシステインの硫黄原子とA1に共有結合しているリンカーであり;Tは、1~20の整数(例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20)であり、2つの硫黄原子に接続された2つの波線は、各L-A1が2つのEの2つのヒンジシステインの硫黄原子のペアに共有結合していることを示す。Tが1より大きい(例えば、Tが、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)場合、各Aは、式(A-I)によって記述される構造から独立して選択され得る。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、各Eは、配列番号1~95のいずれか1つの配列を有するFcドメイン単量体を含む。
いくつかの実施形態では、対になっている硫黄原子の少なくとも1つは、配列番号10または配列番号11のヒンジシステイン、すなわち配列番号10または配列番号11のCys10、Cys13、Cys16またはCys18に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)である。いくつかの実施形態では、対になっている硫黄原子は、配列番号10もしくは配列番号11の中のCys10とCys13、配列番号10もしくは配列番号11の中のCys10とCys16、配列番号10もしくは配列番号11の中のCys30とCys18、配列番号10もしくは配列番号11の中のCys13とCys36、配列番号10もしくは配列番号11の中のCys13及びCys38、及び/または配列番号10もしくは配列番号11の中のCys36とCys38に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)である。
いくつかの実施形態では、Tが2である場合、対になっている硫黄原子は、配列番号10もしくは配列番号11の中のCys10とCys13、または配列番号10もしくは配列番号11の中のCys36とCys38(例えばそれに対応する硫黄原子)である。
いくつかの実施形態では、硫黄原子の対は、各Eから1つずつの、システインの硫黄原子を含み、つまり、L-A1はそれに結合している硫黄原子と一緒になって2つのFcドメイン(例えば、配列番号10または配列番号11の配列を含む2つのFcドメイン)の間の架橋を形成している。いくつかの実施形態では、硫黄原子の対は、1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys10に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys10に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)である。いくつかの実施形態では、硫黄原子の対は、1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys13に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys13に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)である。いくつかの実施形態では、硫黄原子の対は、1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys16に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys16に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)である。いくつかの実施形態では、硫黄原子の対は、1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys18に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys18に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)である。
いくつかの実施形態では、Tが2である場合、硫黄原子の対は、1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys10に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys10に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)、及び1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys13に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys13に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)である。いくつかの実施形態では、Tが2である場合、硫黄原子の対は、1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys10に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys10に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)、及び1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys16に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys16に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)である。いくつかの実施形態では、Tが2である場合、硫黄原子の対は、1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys10に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys10に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)、及び1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys18に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys18に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)である。
いくつかの実施形態では、Tが2である場合、硫黄原子の対は、1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys13に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys13に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)、及び1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys16に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys16に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)である。いくつかの実施形態では、Tが2である場合、硫黄原子の対は、1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys13に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys13に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)、及び1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys18に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys18に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)である。
いくつかの実施形態では、Tが2である場合、硫黄原子の対は、1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys16に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys16に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)、及び1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys18に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys18に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)である。
いくつかの実施形態では、Tが3である場合、硫黄原子の対は、1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys10に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys10に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子);1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys13に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys13に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子);及び1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys16に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys16に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)である。いくつかの実施形態では、Tが3である場合、硫黄原子の対は、1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys10に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys10に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子);1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys13に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys13に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子);及び1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys18に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys18に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)である。いくつかの実施形態では、Tが3である場合、硫黄原子の対は、1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys10に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys10に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子);1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys18に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys18に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子);及び1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys16に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys16に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)である。いくつかの実施形態では、Tが3である場合、硫黄原子の対は、1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys13に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys13に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子);1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys18に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys18に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子);及び1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys16に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys16に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)である。
いくつかの実施形態では、Tが3である場合、硫黄原子の対は、1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys10に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys10に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子);1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys13に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys13に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子);1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys16に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys16に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子);及び1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys18に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号10または配列番号11のCys18に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)である。
いくつかの実施形態では、複合体は構造:
いくつかの実施形態では、aは1であり、b、c及びdは0である。いくつかの実施形態では、a及びbは1であり、c及びdは0である。いくつかの実施形態では、a及びcは1であり、b及びdは0である。いくつかの実施形態では、a及びdは1であり、b及びcは0である。いくつかの実施形態では、a、b及びcは1であり、dは0である。いくつかの実施形態では、a、b及びdは1であり、cは0である。いくつかの実施形態では、a、c及びdは1であり、bは0である。いくつかの実施形態では、b及びcは1であり、a及びdは0である。いくつかの実施形態では、b及びdは1であり、a及びcは0である。いくつかの実施形態では、b、c及びdは1であり、aは0である。いくつかの実施形態では、c及びdは1であり、a及びbは0である。いくつかの実施形態では、a、b、c及びdは1である。
いくつかの実施形態では、対になっている硫黄原子の少なくとも1つは、配列番号4または配列番号33のヒンジシステイン、すなわちCys10及び/またはCys13に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)である。いくつかの実施形態では、硫黄原子の対は、配列番号4または配列番号33の中のCys10及びCys13に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)である。
いくつかの実施形態では、硫黄原子の対は、各Eから1つずつの、システインの硫黄原子を含み、つまり、L-A1はそれに結合している硫黄原子と一緒になって2つのFcドメイン(例えば、配列番号4または配列番号33の配列を含む2つのFcドメイン)の間の架橋を形成している。いくつかの実施形態では、硫黄原子の対は、1つのEからの配列番号4または配列番号33のCys10に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号4または配列番号33のCys10に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)である。いくつかの実施形態では、硫黄原子の対は、1つのEからの配列番号4または配列番号33のCys13に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号4または配列番号33のCys13に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)である。いくつかの実施形態では、Tが2である場合、硫黄原子の対は、1つのEからの配列番号4または配列番号33のCys10に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号4または配列番号33のCys10に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)、及び1つのEからの配列番号4または配列番号33のCys13に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号4または配列番号33のCys13に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)である。
いくつかの実施形態では、複合体は構造:
いくつかの実施形態では、対になっている硫黄原子の少なくとも1つは、配列番号8のヒンジシステイン、すなわちCys10及び/またはCys13に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)である。いくつかの実施形態では、硫黄原子の対は、配列番号8の中のCys10及びCys13に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)である。
いくつかの実施形態では、硫黄原子の対は、各Eから1つずつの、システインの硫黄原子を含み、つまり、L-A1はそれに結合している硫黄原子と一緒になって2つのFcドメイン(例えば、配列番号8の配列を含む2つのFcドメイン)の間の架橋を形成している。いくつかの実施形態では、硫黄原子の対は、1つのEからの配列番号8のCys10に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号8のCys10に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)である。いくつかの実施形態では、硫黄原子の対は、1つのEからの配列番号8のCys13に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号8のCys13に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)である。いくつかの実施形態では、Tが2である場合、硫黄原子の対は、1つのEからの配列番号8のCys10に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号8のCys10に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)、及び1つのEからの配列番号8のCys13に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)と、もう1つのEからの配列番号8のCys13に対応する硫黄原子(例えばそれの硫黄原子)である。
いくつかの実施形態では、複合体は構造:
いくつかの実施形態では、複合体は構造:
いくつかの実施形態では、複合体は構造:
いくつかの実施形態では、複合体は構造:
いくつかの実施形態では、窒素原子は、表面露出リジンの窒素、例えば、配列番号10または配列番号11のLys35、Lys63、Lys77、Lys79、Lys106、Lys123、Lys129、Lys181、Lys203、Lys228またはLys236に対応する窒素原子(例えばそれの窒素原子)である。いくつかの実施形態では、窒素原子は、配列番号10または配列番号11のLys65、Lys79、Lys108、Lys230及び/またはLys238に対応する窒素原子(例えばそれの窒素原子)である。
いくつかの実施形態では、複合体は構造:
本明細書に記載の複合体のいくつかの実施形態では、複合体は、Fcドメインを含むホモ二量体を形成する。本明細書に記載の複合体のいくつかの実施形態では、Eは別のEとホモ二量体化してFcドメインを形成する。
別の態様では、本発明は、式(D-I):
式中、Eは、アルブミンタンパク質(例えば、配列番号96~98のいずれか1つの配列を有するアルブミンタンパク質)、アルブミンタンパク質結合ペプチド、またはFc結合ペプチドを含み;各A1-L-A2のLは、独立して、Eの表面露出システインの硫黄原子または表面露出リジンの窒素原子、ならびにA1及びA2の各々に共有結合しているリンカーであり;nは1であり;Tは、1~20の整数(例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20)であり、Eに接続された波線は、各A1-L-A2が、独立して、Eの溶媒に露出したシステインの硫黄原子または溶媒に露出したリジンの窒素原子に共有結合していることを示す。Tが1より大きい(例えば、Tは2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)場合、各A1-L-A2は、独立して選択され得る(例えば、本明細書に記載のA1-L-A2構造のいずれかから独立して選択される)。上記の好ましい実施形態では、xは2である。
別の態様では、本発明は、式(M-I):
式中、Eは、アルブミンタンパク質(例えば、配列番号96~98のいずれか1つの配列を有するアルブミンタンパク質)、アルブミンタンパク質結合ペプチド、またはFc結合ペプチドを含み;各L-A1のLは、独立して、Eの表面露出システインの硫黄原子または表面露出リジンの窒素原子及びA1に共有結合しているリンカーであり;nは1であり;Tは、1~20の整数(例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20)であり;Eに接続された波線は、各L-A1が、独立して、Eの溶媒に露出したシステインの硫黄原子または溶媒に露出したリジンの窒素原子に共有結合していることを示す。Tが1より大きい(例えば、Tが、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)場合、各A1は、独立して、式(A-I)によって記述される任意の構造から選択され得る。上記の好ましい実施形態では、xは2である。
いくつかの実施形態では、各Eは、配列番号96~98のいずれか1つの配列を有するアルブミンタンパク質を含む。
いくつかの実施形態では、Tは1であり、L-A1は、配列番号96のCys34に対応する硫黄原子に共有結合している。
別の態様では、本発明は、表1の中間体(Int)を特徴とする。これらの中間体は、1つ以上のgp120結合剤及びリンカー(例えば、PEG2-PEG20リンカー)を含み、本明細書に記載の複合体の合成に使用し得る。表1の中間体を、本明細書に記載または例示する方法のいずれかを含む、当業者に公知の任意の適切な方法によって、例えば、FcドメインまたはFcドメイン単量体、アルブミンタンパク質、アルブミンタンパク質結合ペプチド、またはFc結合ペプチド(例えば、リンカーを介して)に複合することができる。いくつかの実施形態では、複合体(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つによって記述される複合体)は、Eを含み、Eは、Fcドメイン単量体またはFcドメイン(例えば、Fcドメイン単量体、または各Fcドメイン単量体が独立して配列番号1~95のいずれか1つの配列を有するFcドメイン)である。好ましい実施形態では、Eの1つ以上の表面露出リジン残基の1つ以上の窒素原子、またはEの1つ以上の表面露出システインの1つ以上の硫黄原子は、リンカー(例えば、PEG2-PEG20リンカー)に共有結合している。Eに複合したリンカーは、それが反応して、本明細書に記載のIntのいずれか(例えば、表1のInt)と共有結合を形成し得るように官能化され得る。好ましい実施形態では、Eを、アジド基で官能化されたリンカーに複合し、Int(例えば、表1のInt)を、アルキン基で官能化する。Eのリンカー-アジド及びIntのリンカー-アルキンの複合(例えば、クリックケミストリーによる)は、本発明の複合体、例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つによって記述される複合体を形成する。さらに他の実施形態では、Eを、アルキン基で官能化されたリンカーに複合し、Int(例えば、表1のInt)を、アジド基で官能化する。Eのリンカー-アルキンとIntのリンカー-アジドの複合(例えば、クリックケミストリーによる)は、本発明の複合体、例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つによって記述される複合体を形成する。
別の態様では、本発明は、表2の複合体を特徴とする。表2の各複合体は、示すように、式(M-I)または式(D-I)のいずれかの複合体に対応する。表2の複合体には、表1のIntとリンカーとの共有結合反応と、その後のEとの複合によって形成される複合体(例えば、Fcドメイン単量体、アルブミンタンパク質、アルブミンタンパク質結合ペプチド、またはFc結合ペプチド)が含まれる。いくつかの実施形態では、Intの反応性部分(例えば、アルキンまたはアジド基)は、Eに共有結合しているリンカー(L’で表される)の対応する反応性基(例えば、アルキンまたはアジド基)と反応し、その結果、表1のIntがEに共有結合する。表2に示すように、L’は、(M-I)または(D-I)で定義されるLの残りの部分に対応する(例えば、L’は、IntとEを共有結合するリンカーである)。例えば、L’は、トリアゾール(Intと、Eに複合したリンカーとの間のクリックケミストリー反応によって形成される)及びリンカー(例えば、PEG2-PEG20リンカー)を含み得、これを次いで、Eのアミノ酸側鎖に複合させる。
表2の任意の複合体におけるいくつかの実施形態では、nは、1または2である。nが1である場合、各Eは、Fcドメイン単量体(例えば、配列番号1~95のいずれか1つの配列を有するFcドメイン単量体)、アルブミンタンパク質(例えば、配列番号96~98のいずれか1つの配列を有するアルブミンタンパク質)、アルブミンタンパク質結合ペプチド、またはFc結合ペプチドを含む。nが2の場合、各Eは、Fcドメイン単量体(例えば、配列番号1~95のいずれか1つの配列を有するFcドメイン単量体)を含み、Fcドメイン単量体は二量体化してFcドメインを形成する。
表2の任意の複合体におけるいくつかの実施形態では、Tは、1~20の整数(例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20)である。本開示はまた、Tの平均値が1から20である(例えば、Tの平均値が、1~2、1~3、1~4、1~5、5~10、10~15、または15~20である)表2の複合体のいずれかの集団を提供する。いくつかの実施形態では、Tの平均値は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である。特定の実施形態では、平均Tは、1~10(例えば、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5.5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、または10)である。特定の実施形態では、平均Tは、1~5(例えば、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、または5)である。いくつかの実施形態では、平均Tは、5~10(例えば、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、または10)である。いくつかの実施形態では、平均Tは、2.5~7.5(例えば、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、または7.5)である。
表2の複合体の波線は、各L’-Intが、Eまたはその薬学的に許容される塩のアミノ酸側鎖(例えば、Eの表面露出リジンの窒素原子または表面露出システインの硫黄原子)に共有結合していることを示している。
別の態様では、本発明は、(i)第1の部分A1;(ii)第2の部分A2;(iii)Fcドメイン単量体またはFcドメイン;ならびに(iv)A1及びA2、ならびにFcドメイン単量体またはFcドメインに共有結合しているリンカーを含む複合体を特徴とし;各A1及び各A2は、独立して、式(A-I)または(A-II)によって記述される任意の構造から選択される。上記の好ましい実施形態では、xは2である。
別の態様では、本発明は、(i)第1の部分Int;(ii)Fcドメイン単量体またはFcドメイン;ならびに(iv)Int、及びFcドメイン単量体またはFcドメインに共有結合しているリンカーを含む複合体を特徴とし;各Intは、独立して、表1の中間体のいずれか1つから選択される。
別の態様では、本発明は、(i)第1の部分A1;(ii)第2の部分A2;(iii)アルブミンタンパク質、アルブミンタンパク質結合ペプチド、またはFc結合ペプチド;ならびに(iv)A1及びA2、ならびにFcドメイン単量体またはFcドメインに共有結合しているリンカーを含む複合体を特徴とし;各A1及び各A2は、式(A-I)または(A-II)によって記述される任意の構造から独立して選択される。上記の好ましい実施形態では、xは2である。
別の態様では、本発明は、式(D-I):
式中、各A1及び各A2は、独立して、式(A-I)または(A-II)によって記述される。各Eは、Fcドメイン単量体(例えば、配列番号1~95のいずれか1つの配列を有するFcドメイン単量体)、アルブミンタンパク質(例えば、配列番号96~98のいずれか1つの配列を有するアルブミンタンパク質)、アルブミンタンパク質結合ペプチド、またはFc結合ペプチドを含み;nは、1または2であり;Tは、1~20の整数であり(例えば、Tは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20であり);Lは、E、A1、及びA2の各々に共有結合しているリンカーである。Tが1より大きい(例えば、Tが、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)場合、各A1-L-A2は、独立して選択され得る(例えば、本明細書に記載のA1-L-A2構造のいずれかから独立して選択される)。上記の好ましい実施形態では、xは2である。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-II):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-III):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-III-1):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-III-2):
式中、L’は、Lの残部であり、y1とy2は、各々独立して、1~20の整数である(例えば、y1とy2は、各々独立して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)。いくつかの実施形態では、L’は窒素原子である。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-III-3):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-III-4):
式中、L’は、Lの残部であり、y1とy2は、各々独立して、1~20の整数である(例えば、y1とy2は、各々独立して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)。いくつかの実施形態では、L’は窒素原子である。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-III-5):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-III-6):
式中、L’は、Lの残部であり、y1とy2は、各々独立して、1~20の整数である(例えば、y1とy2は、各々独立して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)。いくつかの実施形態では、L’は窒素原子である。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-IV):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-IV-1):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-IV-2):
またはその薬学的に許容される塩によって記述され、
式中、L’は、Lの残部であり、y1とy2は、各々独立して、1~20の整数である(例えば、y1とy2は、各々独立して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)。いくつかの実施形態では、L’は窒素原子である。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-IV-3):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-IV-4):
式中、L’は、Lの残部であり、y1とy2は、各々独立して、1~20の整数である(例えば、y1とy2は、各々独立して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)。いくつかの実施形態では、L’は窒素原子である。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-IV-5):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-IV-6):
式中、L’は、Lの残部であり、y1とy2は、各々独立して、1~20の整数である(例えば、y1とy2は、各々独立して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)。いくつかの実施形態では、L’は窒素原子である。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-V):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-V-1):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-V-2):
式中、L’は、Lの残部であり、y1とy2は、各々独立して、1~20の整数である(例えば、y1とy2は、各々独立して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)。いくつかの実施形態では、L’は窒素原子である。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-V-3):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-V-4):
式中、L’は、Lの残部であり、y1とy2は、各々独立して、1~20の整数である(例えば、y1とy2は、各々独立して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)。いくつかの実施形態では、L’は窒素原子である。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-V-5):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-V-6):
式中、L’は、Lの残部であり、y1とy2は、各々独立して、1~20の整数である(例えば、y1とy2は、各々独立して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)。いくつかの実施形態では、L’は窒素原子である。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-VI):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-VI-1):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-VI-2):
式中、L’は、Lの残部であり、y1とy2は、各々独立して、1~20の整数である(例えば、y1とy2は、各々独立して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)。いくつかの実施形態では、L’は窒素原子である。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-VI-3):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-VI-4):
式中、L’は、Lの残部であり、y1とy2は、各々独立して、1~20の整数である(例えば、y1とy2は、各々独立して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)。いくつかの実施形態では、L’は窒素原子である。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-VI-5):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-VI-6):
式中、L’は、Lの残部であり、y1とy2は、各々独立して、1~20の整数である(例えば、y1とy2は、各々独立して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)。いくつかの実施形態では、L’は窒素原子である。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-VII):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-VIII):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-VIII-1):
式中、L’は、Lの残部であり、y1とy2は、各々独立して、1~20の整数である(例えば、y1とy2は、各々独立して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)。いくつかの実施形態では、L’は窒素原子である。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-IX):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-IX-1):
式中、L’は、Lの残部であり、y1とy2は、各々独立して、1~20の整数である(例えば、y1とy2は、各々独立して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)。いくつかの実施形態では、L’は窒素原子である。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-X):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-X-1):
式中、L’は、Lの残部であり、y1とy2は、各々独立して、1~20の整数である(例えば、y1とy2は、各々独立して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)。いくつかの実施形態では、L’は窒素原子である。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-XI):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-XI-1):
式中、L’は、Lの残部であり、y1とy2は、各々独立して、1~20の整数である(例えば、y1とy2は、各々独立して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)。いくつかの実施形態では、L’は窒素原子である。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-XII):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-XII-1):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-XII-2):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-XIII):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-XIII-1):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-XIII-2):
いくつかの実施形態では、本発明は、式(D-I):
式中、各A1及び各A2は、独立して、式(A-II)によって記述され;
各Eは、Fcドメイン単量体を含み;
Eに接続された波線は、各A1-L-A2がEに共有結合していることを示す。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-XIV):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-XIV-1):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-XIV-2):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-XIV-3):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-XIV-4):
式中、L’は、Lの残部であり、
e1、e2、e3及びe4は、各々独立して、1~10の整数であり、
y1及びy2は、各々独立して、1~20の整数である。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-XIV-5):
式中、L’は、Lの残部であり、
e1、e2、e3及びe4は、各々独立して、1~10の整数であり、
y1及びy2は、各々独立して、1~20の整数である。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-XV):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-XV-1):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-XV-2):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-XV-3):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-XV-4):
式中、L’は、Lの残部であり、
e1、e2、e3及びe4は、各々独立して、1~10の整数であり、
y1及びy2は、各々独立して、1~20の整数である。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-XV-5):
式中、L’は、Lの残部であり、
e1、e2、e3及びe4は、各々独立して、1~10の整数であり、
y1及びy2は、各々独立して、1~20の整数である。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-XVI):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-XVI-1):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-XVI-2):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-XVI-3):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-XVI-4):
式中、L’は、Lの残部であり、
e1、e2、e3及びe4は、各々独立して、1~10の整数であり、
y1及びy2は、各々独立して、1~20の整数である。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-XVI-5):
式中、L’は、Lの残部であり、
e1、e2、e3、及びe4は、各々独立して、1~10の整数であり、
y1及びy2は、各々独立して、1~20の整数である。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-XVII):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-XVII-1):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-XVII-2):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-XVII-3):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-XVII-4):
式中、L’は、Lの残部であり、
e1、e2、e3及びe4は、各々独立して、1~10の整数であり、
y1及びy2は、各々独立して、1~20の整数である。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(D-XVII-5):
式中、L’は、Lの残部であり、
e1、e2、e3及びe4は、各々独立して、1~10の整数であり、
y1及びy2は、各々独立して、1~20の整数である。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、LまたはL’は、1つ以上の、任意選択的に置換されたC1-C20アルキレン、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたC2-C20シクロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC5-C15アリーレン、任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリーレン、O、S、NRi、P、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート、ホスホリルまたはイミノを含み、Riは、H、任意選択的に置換されたC1-C20アルキル、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニル、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニル、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニル、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、または任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリールである。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、LまたはL’の主鎖は、1つ以上の、任意選択的に置換されたC1-C20アルキレン、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC5-C15アリーレン、任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリーレン、O、S、NRi、P、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート、ホスホリルまたはイミノからなり、Riは、H、任意選択的に置換されたC1-C20アルキル、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニル、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニル、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニル、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、または任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリールである。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、LまたはL’はオキソ置換されている。いくつかの実施形態では、LまたはL’の主鎖は、250個以下の原子を含む。いくつかの実施形態では、LまたはL’は、アミド、カルバメート、スルホニル、または尿素リンケージを形成することができる。いくつかの実施形態では、LまたはL’は結合である。いくつかの実施形態では、LまたはL’は原子である。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、各Lは式(D-L-I):
式中、LAは、式GA1-(ZA1)g1-(YA1)h1-(ZA2)i1-(YA2)j1-(ZA3)k1-(YA3)l1-(ZA4)m1-(YA4)n1-(ZA5)o1-GA2で表され;LBは、式GB1-(ZB1)g2-(YB1)h2-(ZB2)i2-(YB2)j2-(ZB3)k2-(YB3)l2-(ZB4)m2-(YB4)n2-(ZB5)o2-GB2で表され;LCは、式GC1-(ZC1)g3-(YC1)h3-(ZC2)i3-(YC2)j3-(ZC3)k3-(YC3)l3-(ZC4)m3-(YC4)n3-(ZC5)o3-GC2で表され;GA1はQiとの結合であり;GA2はA1との結合であり;GB1はQiとの結合であり);GB2はA2との結合であり;GC1はQiとの結合であり;GC2は、Eとの結合であり、またはEに複合している官能基と反応することができる官能基(例えば、マレイミドとシステイン、アミンと活性カルボン酸、チオールとマレイミド、活性スルホン酸とアミン、イソシアネートとアミン、アジドとアルキン、及びアルケンとテトラジン)であり;ZA1、ZA2、ZA3、ZA4、ZA5、ZB1、ZB2、ZB3、ZB4、ZB5、ZC1、ZC2、ZC3、ZC4及びZC5の各々は独立して、任意選択的に置換されたC1-C20アルキレン、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC5-C15アリーレン、または任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリーレンであり;YA1、YA2、YA3、YA4、YB1、YB2、YB3、YB4、YC1、YC2、YC3及びYC4の各々は独立して、O、S、NRi、P、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート、ホスホリルまたはイミノであり;Riは、H、任意選択的に置換されたC1-C20アルキル、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニル、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニル、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニル、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、または任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリールであり;g1、h1、i1、j1、k1、l1、m1、n1、o1、g2、h2、i2、j2、k2、l2、m2、n2、o2、g3、h3、i3、j3、k3、l3、m3、n3及びo3の各々は独立して0または1であり;Qは、窒素原子、任意選択的に置換されたC1-C20アルキレン、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC5-C15アリーレン、または任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリーレンである。
いくつかの実施形態では、任意選択的に置換されたは、ポリエチレングリコール(PEG)による置換を含む。PEGは繰り返し単位構造(-CH2CH2O-)nを有し、式中、nは2~100の整数である。ポリエチレングリコールは、PEG2~PEG100(例えば、PEG2、PEG3、PEG4、PEG5、PEG5-PEG10、PEG10-PEG20、PEG20-PEG30、PEG30-PEG40、PEG50-PEG60、PEG60-PEG70、PEG70-PEG80、PEG80-PEG90、PEG90-PEG100)のいずれか1つを選択し得る。
いくつかの実施形態では、LCは、Fcドメインへの2つの結合点、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質、またはアルブミンタンパク質結合ペプチド(例えば、2つのGC2)を有し得る。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、Lは、ポリエチレングリコール(PEG)リンカーを含む。PEGリンカーとして、繰り返し単位構造(-CH2CH2O-)nを有するリンカーが挙げられ、式中、nは、2~100の整数である。ポリエチレングリコールリンカーは、gp120結合剤とEを共有結合することができる(例えば、式(M-I)~(M-XVII))。ポリエチレングリコールリンカーは、第1のgp120結合剤と第2のgp120結合剤を共有結合させることができる(例えば、式(D-I)~(D-XVII)のいずれか1つの複合体において)。ポリエチレングリコールリンカーは、gp120結合剤二量体とEを共有結合させることができる(例えば、式(D-I)~(D-XVII)のいずれか1つの複合体において)。ポリエチレングリコールリンカーは、PEG2~PEG100(例えば、PEG2、PEG3、PEG4、PEG5、PEG5-PEG10、PEG10-PEG20、PEG20-PEG30、PEG30-PEG40、PEG50-PEG60、PEG60-PEG70、PEG70-PEG80、PEG80-PEG90、PEG90-PEG100)のいずれか1つから選択してもよい。いくつかの実施形態では、LcとしてPEGリンカーが挙げられ、その場合、LCがQi及びEの各々に共有結合している。
いくつかの実施形態では、Lは、
であり、
式中、z1、z2、y1、y2、y3、及びy4は、各々独立して、1~20の整数であり;R9は、H、C1-C20アルキル、C3-C20シクロアルキル、C2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、及びC3-C15ヘテロアリールから選択される。
いくつかの実施形態では、Lは、
式中、R*は、結合であるか、または任意選択的に置換されたC1-C20アルキレン、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC5-C15アリーレン、任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリーレン、O、S、NRi、P、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート、及びイミノのうちの1つ以上を含み、Riは、H、任意選択的に置換されたC1-C20アルキル、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアリール、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニル、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニル、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニル、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、または任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリールである。
別の態様では、本発明は、式(M-I):
式中、各A1は、独立して、式(A-I)によって記述され;各Eは、Fcドメイン単量体(例えば、配列番号1~95のいずれか1つの配列を有するFcドメイン単量体)、アルブミンタンパク質(例えば、配列番号96~98のいずれか1つの配列を有するアルブミンタンパク質)、アルブミンタンパク質結合ペプチド、またはFc結合ペプチドを含み;nは、1または2であり;Tは、1~20の整数であり(例えば、Tは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20であり);Lは、E及びA1の各々に共有結合しているリンカーである。Tが1より大きい(例えば、Tが、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)場合、各A1は、独立して、式(A-I)によって記述される任意の構造から選択され得る。上記の好ましい実施形態では、xは2である。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-II):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-III):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-III-1):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-III-2):
式中、L’はLの残部であり、y1は1~20の整数である(例えば、y1は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-III-3):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-III-4):
式中、L’はLの残部であり、y1は1~20の整数である(例えば、y1は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-III-5):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-III-6):
またはその薬学的に許容される塩によって記述され、
式中、L’はLの残部であり、y1は1~20の整数である(例えば、y1は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-IV):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-IV-1):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-IV-2):
式中、L’はLの残部であり、y1は1~20の整数である(例えば、y1は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-IV-3):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-IV-4):
式中、L’はLの残部であり、y1は1~20の整数である(例えば、y1は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-IV-5):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-IV-6):
式中、L’はLの残部であり、y1は1~20の整数である(例えば、y1は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-V):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-V-1):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-V-2):
式中、L’はLの残部であり、y1は1~20の整数である(例えば、y1は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-V-3):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-V-4):
式中、L’はLの残部であり、y1は1~20の整数である(例えば、y1は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-V-5):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-V-6):
式中、L’はLの残部であり、y1は1~20の整数である(例えば、y1は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-VI):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-VI-1):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-VI-2):
式中、L’はLの残部であり、y1は1~20の整数である(例えば、y1は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-VI-3):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-VI-4):
式中、L’はLの残部であり、y1は1~20の整数である(例えば、y1は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-VI-5):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-VI-6):
式中、L’はLの残部であり、y1は1~20の整数である(例えば、y1は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-VII):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-VIII):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-VIII-1):
式中、L’はLの残部であり、y1は1~20の整数である(例えば、y1は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-IX):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-IX-1):
式中、L’はLの残部であり、y1は1~20の整数である(例えば、y1は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-X):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-X-1):
式中、L’はLの残部であり、y1は1~20の整数である(例えば、y1は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-XI):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-XI-1):
式中、L’はLの残部であり、y1は1~20の整数である(例えば、y1は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-XII):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-XII-1):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-XII-2):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-XIII):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-XIII-1):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-XIII-2):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-I):
またはその薬学的に許容される塩によって記述され、
式中、各A1は、独立して、式(A-II)によって記述され;
各Eは、Fcドメイン単量体を含み;
Eに接続された波線は、各A1-L-A2がEに共有結合していることを示す。
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-XIV):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-XIV-1):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-XIV-2):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-XIV-3):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-XIV-4):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-XIV-5):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-XV):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-XV-1):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-XV-2):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-XV-3):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-XV-4):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-XV-5):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-XVI):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-XVI-1):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-XVI-3):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-XVI-4):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-XVI-5):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-XVII):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-XVII-1):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-XVII-2):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-XVII-3):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-XVII-4):
いくつかの実施形態では、複合体は、式(M-XVII-5):
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、LまたはL’は、1つ以上の、任意選択的に置換されたC1-C20アルキレン、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC5-C15アリーレン、任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリーレン、O、S、NRi、P、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート、ホスホリルまたはイミノを含み、Riは、H、任意選択的に置換されたC1-C20アルキル、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニル、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニル、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニル、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、または任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリールである。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、LまたはL’の主鎖は、1つ以上の、任意選択的に置換されたC1-C20アルキレン、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC5-C15アリーレン、任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリーレン、O、S、NRi、P、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート、ホスホリルまたはイミノからなり、Riは、H、任意選択的に置換されたC1-C20アルキル、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニル、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニル、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニル、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、または任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリールである。
本明細書に記載の態様のいずれかの、いくつかの実施形態では、LまたはL’は、オキソで置換されている。いくつかの実施形態では、LまたはL’の主鎖は、250個以下の原子を含む。いくつかの実施形態では、LまたはL’は、アミド、カルバメート、スルホニルまたは尿素リンケージを形成することができる。いくつかの実施形態では、LまたはL’は結合である。いくつかの実施形態では、LまたはL’は原子である。いくつかの実施形態では、L’は窒素原子である。
いくつかの実施形態では、各Lは、式(M-L-1):
J1-(Q1)g-(T1)h-(Q2)i-(T2)j-(Q3)k-(T3)l-(Q4)m-(T4)n-(Q5)o-J2
またはその薬学的に許容される塩によって記述され、式中、J1はA1との結合であり、J2はEとの結合であり、またはEに複合している官能基と反応することができる官能基(例えば、マレイミドとシステイン、アミンと活性カルボン酸、チオールとマレイミド、活性スルホン酸とアミン、イソシアネートとアミン、アジドとアルキン、及びアルケンとテトラジン)であり、Q1、Q2、Q3、Q4及びQ5の各々は独立して、任意選択的に置換されたC1-C20アルキレン、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC5-C15アリーレン、または任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリーレンであり、T1、T2、T3、T4の各々は独立して、O、S、NRi、P、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート、ホスホリルまたはイミノであり、Riは、H、任意選択的に置換されたC1-C20アルキル、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニル、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニル、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニル、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、または任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロ
アリールであり、g、h、i、j、k、l、m、n及びoの各々は独立して0または1である。
J1-(Q1)g-(T1)h-(Q2)i-(T2)j-(Q3)k-(T3)l-(Q4)m-(T4)n-(Q5)o-J2
またはその薬学的に許容される塩によって記述され、式中、J1はA1との結合であり、J2はEとの結合であり、またはEに複合している官能基と反応することができる官能基(例えば、マレイミドとシステイン、アミンと活性カルボン酸、チオールとマレイミド、活性スルホン酸とアミン、イソシアネートとアミン、アジドとアルキン、及びアルケンとテトラジン)であり、Q1、Q2、Q3、Q4及びQ5の各々は独立して、任意選択的に置換されたC1-C20アルキレン、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC5-C15アリーレン、または任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリーレンであり、T1、T2、T3、T4の各々は独立して、O、S、NRi、P、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート、ホスホリルまたはイミノであり、Riは、H、任意選択的に置換されたC1-C20アルキル、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニル、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニル、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニル、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、または任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロ
アリールであり、g、h、i、j、k、l、m、n及びoの各々は独立して0または1である。
いくつかの実施形態では、任意選択的に置換されたには、ポリエチレングリコール(PEG)による置換が含まれる。PEGは繰り返し単位構造(-CH2CH2O-)nを有し、式中、nは2~100の整数である。ポリエチレングリコールは、PEG2~PEG100(例えば、PEG2、PEG3、PEG4、PEG5、PEG5-PEG10、PEG10-PEG20、PEG20-PEG30、PEG30-PEG40、PEG50-PEG60、PEG60-PEG70、PEG70-PEG80、PEG80-PEG90、PEG90-PEG100)のいずれか1つから選択され得る。
いくつかの実施形態では、J2は、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドに対する2つの結合点(例えば2つのJ2)を有し得る。
いくつかの実施形態では、Lは、
いくつかの実施形態では、Lは、
であり、
式中、各Yは、独立して、(-O-)、(-S-)、(-R8-)、(-O(C=O)NR8-)、(-O(C=S)NR8-)、(-O(C=O)O-)、(-O(C=O)-)、(-NH(C=O)O-)、(-NH(C=O)-)、(-NH(C=NH)-)、(-NH(C=O)NR8-)、(-NH(C=NH)NR8-)、(-NH(C=S)NR8-)、(-NH(C=S)-)、(-OCH2(C=O)NR8-)、(-NH(SO2)-)、(-NH(SO2)NR8-)、(-OR9-)、(-NR9-)、(-SR9-)、(-R9NH(C=O)-)、(-R9OR9C(=O)NH-)、(-CH2NH(C=O)-)、(-CH2OCH2(C=O)NH-)、(-(C=NR8)NH-)、(-NH(SO2)-)、(-(C=O)NH-)、(-C(=O)-)、(-C(NR8)-)、または(-R9C(=O)-)から選択され;
各R8は、独立して、H、任意選択的に置換されたC1-C20アルキル、任意選択的に置換されたC1-C20アルキレン、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、及び任意選択的に置換されたC2-C15ヘテロアリールから選択され;
各R9は、独立して、任意選択的に置換されたC1-C20アルキレン、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、及び任意選択的に置換されたC2-C15ヘテロアリールから選択され;ならびに
d、e、y1、及びx1の各々は、独立して、1~26の整数である(例えば、dは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、または26である)。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、Lは、ポリエチレングリコール(PEG)リンカーを含む。PEGリンカーには、繰り返し単位構造(-CH2CH2O-)nを有するリンカーが含まれ、式中、nは、2~100の整数である。ポリエチレングリコールリンカーは、gp120結合剤とEを共有結合させ得る(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの複合体において)。ポリエチレングリコールリンカーは、gp120結合剤二量体とEを共有結合させ得る(例えば、式のいずれか1つの複合体において)。ポリエチレングリコールリンカーは、PEG2~PEG100(例えば、PEG2、PEG3、PEG4、PEG5、PEG5-PEG10、PEG10-PEG20、PEG20-PEG30、PEG30-PEG40、PEG50-PEG60、PEG60-PEG70、PEG70-PEG80、PEG80-PEG90、PEG90-PEG100)のいずれか1つから選択され得る。いくつかの実施形態では、Lcは、PEGリンカーを含み、その場合、LCは、Qi及びEの各々に共有結合している。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、Lは、Eの表面露出リジンの窒素原子に共有結合しているか、またはLは、Eの表面露出システインの硫黄原子に共有結合している。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、Eは、Fcドメイン単量体である。いくつかの実施形態では、nは2であり、各Eは二量体化してFcドメインを形成する。
いくつかの実施形態では、nは2であり、各EはFcドメイン単量体であり、各Eは二量体化してFcドメインを形成し、複合体は、式(D-I-1):
いくつかの実施形態では、nは2であり、各EはFcドメイン単量体であり、各Eは二量体化してFcドメインを形成し、複合体は、式(M-I-1):
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、Eは、配列番号1~95のいずれか1つの配列を有する。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、Eは、アルブミンタンパク質、アルブミンタンパク質結合ペプチド、またはFc結合ペプチドである。いくつかの実施形態では、Eがアルブミンタンパク質、アルブミンタンパク質結合ペプチド、またはFc結合ペプチドである場合、nは1である。
いくつかの実施形態では、nは1であり、Eは、アルブミンタンパク質、アルブミンタンパク質結合ペプチド、またはFc結合ペプチドであり、複合体は、式(D-I-2):
いくつかの実施形態では、nは1であり、Eは、アルブミンタンパク質、アルブミンタンパク質結合ペプチド、またはFc結合ペプチドであり、複合体は、式(M-I-2):
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、Eは、配列番号96~98のいずれか1つの配列を有するアルブミンタンパク質である。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、Tは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である。
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の複合体のいずれかの構造を有する複合体の集団(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの式を有する複合体の集団)を提供し、Tの平均値は1~20である(例えば、Tの平均値は、1~2、1~3、1~4、1~5、5~10、10~15、または15~20である)。いくつかの実施形態では、Tの平均値は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である。
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の複合体のいずれか(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの複合体)、またはその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
別の態様では、本発明は、ウイルス感染しているか、またはウイルス感染していると推定される対象の治療方法を提供し、方法は、有効量の本明細書に記載の複合体または組成物のいずれか(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの複合体)を対象に投与することを含む。
別の態様では、本発明は、それを必要とする対象におけるウイルス感染症の予防的治療方法を提供し、方法は、有効量の本明細書に記載の複合体または組成物のいずれか(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの複合体)を対象に投与することを含む。
いくつかの実施形態では、ウイルス感染症は、HIVによって引き起こされる。いくつかの実施形態では、ウイルス感染症は、HIV-1またはHIV-2である。
いくつかの実施形態では、対象は免疫無防備状態である。
いくつかの実施形態では、対象は、体液性免疫不全症、T細胞不全症、好中球減少症、無脾症、または補体欠損症と診断されている。
いくつかの実施形態では、対象は、免疫抑制療法で治療されているか、または治療されようとしている。
いくつかの実施形態では、対象は、免疫抑制を引き起こす疾患と診断されている。いくつかの実施形態では、疾患は、がんまたは後天性免疫不全症候群である。いくつかの実施形態では、がんは、白血病、リンパ腫、または多発性骨髄腫である。
いくつかの実施形態では、対象は、造血幹細胞移植を受けたか、または受けようとしている。
いくつかの実施形態では、対象は、臓器移植を受けたか、または受けようとしている。
いくつかの実施形態では、組成物の複合体を、筋肉内、静脈内、皮内、動脈内、腹膜腔内、病巣内、頭蓋内、関節内、前立腺内、胸膜内、気管内、鼻腔内、硝子体内、膣内、直腸内、局所、腫瘍内、腹膜内、皮下、結膜下、小嚢内、経粘膜、心嚢内、臍帯内、眼内、経口、局部、吸入、注射または輸注投与する。
いくつかの実施形態では、対象を、第2の治療薬で治療する。いくつかの実施形態では、第2の治療薬は抗ウイルス剤である。いくつかの実施形態では、第2の治療薬はウイルスワクチンである。いくつかの実施形態では、ウイルスワクチンは、対象において、HIV(例えば、HIV-1またはHIV-2)に対する免疫応答を誘発する。
いくつかの実施形態では、Fcドメイン含有組成物を、Fcドメインの代わりとしてもよく、Fcドメイン単量体含有組成物を、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つ(例えば、式(1)、(2)、 (D-I)、(D-II)、(D-III)、(D-III-1)、(D-III-2)、(D-III-3)、(D-III-4)、(D-III-5)、(D-III-6)、(D-IV)、(D-IV-1)、(D-IV-2)、(D-IV-3)、(D-IV-4)、(D-IV-5)、(D-IV-6)、(D-V)、(D-V-1)、(D-V-2)、(D-V-3)、(D-V-4)、(D-V-5)、(D-V-6)、(D-VI)、(D-VI-1)、(D-VI-2)、(D-VI-3)、(D-VI-4)、(D-VI-5)、(D-VI-6)、(D-VII)、(D-VIII)、(D-VIII-1)、(D-IX)、(D-IX-1)、(D-X)、(D-X-1)、(D-XI)、(D-XI-1)、(D-XII)、(D-XII-1)、(D-XII-2)、(D-XIII)、(D-XIII-1)、(D-XIII-2)、(D-XIV)、(D-XIV-1)、(D-XIV-2)、(D-XIV-3)、(D-XIV-4)、(D-XIV-5)、(D-XV)、(D-XV-1)、(D-XV-2)、(D-XV-3)、(D-XV-4)、(D-XV-5)、(D-XVI)、(D-XVI-1)、(D-XVI-2)、(D-XVI-3)、(D-XVI-4)、(D-XVI-5)、(D-XV)、(D-XVII-1)、(D-XVII-2)、(D-XVII-3)、(D-XVII-4)、(D-XVII-5)、(M-I)、(M-II)、(M-III)、(M-III-1)、(M-III-2)、(M-III-3)、(M-III-4)、(M-III-5)、(M-III-6)、(M-IV)、(M-IV-1)、(M-IV-2)、(M-IV-3)、(M-IV-4)、(M-IV-5)、(M-IV-6)、(M-V)、(M-V-1)、(M-V-2)、(M-V-3)、(M-V-4)、(M-V-5)、(M-V-6)、(M-VI)、(M-VI-1)、(M-VI-2)、(M-VI-3)、(M-VI-4)、(M-VI-5)、(M-VI-6)、(M-VII)、(M-VIII)、(M-VIII-1)、(M-IX)、(M-IX-1)、(M-X)、(M-X-1)、(M-XI)、または (M-XI-1)、(M-XII)、(M-XII-1)、(M-XII-2)、(M-XIII)、(M-XIII-1)、(M-XIII-2)、(M-XIV)、(M-XIV-1)、(M-XIV-2)、(M-XIV-3)、(M-XIV-4)、(M-XIV-5)、(M-XV)、(M-XV-1)、(M-XV-2)、(M-XV-3)、(M-XV-4)、(M-XV-5)、(M-XVI)、(M-XVI-1)、(M-XVI-2)、(M-XVI-3)、(M-XVI-4)、(M-XVI-5)、(M-XV)、(M-XVII-1)、(M-XVII-2)、(M-XVII-3)、(M-XVII-4)、(M-XVII-5))においてFcドメイン単量体の代わりとしてもよい。本明細書に記載の式のいずれか(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つ)において、nが1の場合、Eは、Fcドメイン単量体含有組成物である。本明細書に記載の式のいずれか(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つ)において、nが2である場合、Eは、Fcドメイン含有組成物である。
特定の実施形態では、Fcドメイン含有組成物は、抗体または抗体断片である。抗体は、任意の形態の免疫グロブリン、重鎖抗体、軽鎖抗体、LRRベースの抗体、または抗体様特性を有する他のタンパク質骨格、ならびに、例えば、抗体断片(例えば、Fab、Fab’、Fab’2、F(ab’)2、Fd、Fv、Feb、scFv、またはSMIP)を含む、当技術分野で公知の他の免疫学的結合部分を含み得る。異なるクラスの抗体のサブユニット構造及び三次元構成は、当技術分野で公知である。抗体断片は、抗体の抗原決定領域など、抗体に由来するか、または抗体に対して有意な相同性を有する部分を含む結合部分を含み得る。例示的な抗体断片として、Fab、Fab’、Fab’2、F(ab’)2、Fd、Fv、Feb、scFv、及びSMIPが挙げられる。
特定の実施形態では、抗体または抗体断片は、ヒト、マウス、ラクダ類(例えば、ラマ、アルパカまたはラクダ)、ヤギ、ヒツジ、ウサギ、ニワトリ、モルモット、ハムスター、ウマ、またはラットの抗体または抗体断片である。特定の実施形態では、抗体は、IgG、IgA、IgD、IgE、IgM、またはイントラボディである。特定の実施形態では、抗体断片は、scFv、sdAb、dAb、Fab、Fab’、Fab’2、F(ab’)2、Fd、Fv、Feb、またはSMIPを含む。
いくつかの実施形態では、Fcドメイン含有構成物(例えば抗体または抗体断片)は、1つ以上の標的(例えば、抗原、例えば、HIV関連抗原)に対する結合特異性を付与する。HIV標的化抗体は、例えば、Wibmer et al. Curr.Opin.HIV AIDS、10(3):135-143(2015)に記載されているように(その全体が参照により本明細書に援用される)、当技術分野で公知である。
いくつかの実施形態では、Fcドメイン含有組成物(例えば、抗体または抗体断片)が結合する1つ以上の標的(例えば、抗原)は、gp41またはgp120受容体などのウイルス(例えば、HIV)タンパク質である。いくつかの実施形態では、抗体または抗体断片は、ウイルス表面抗原を認識する。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号1のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号1のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号2のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号2のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号3のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号3のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号4のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号4のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号5のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号5のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号6のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号6のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号7のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号7のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号8のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号8のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号9のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号9のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号10のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号10のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号11のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号11のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号12のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号12のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号13のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号13のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号14のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号14のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号15のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号15のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号16のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号16のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号17のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号17のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号18のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号18のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号19のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号19のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号20のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号20のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号21のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号21のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号22のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号22のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号23のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号23のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号24のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号24のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号25のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号25のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号26のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号26のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号27のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号27のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号28のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号28のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号29のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号29のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号30のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号30のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号31のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号31のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号32のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号32のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号33のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号33のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号34のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号34のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号35のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号35のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号36のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号36のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号37のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号37のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号38のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号38のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号39のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号39のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号40のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号40のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号41のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号41のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号42のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号42のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号43のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号43のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号45のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号45のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号46のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号46のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号47のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号47のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号48のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号48のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号49のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号49のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号50のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号50のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号51のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号51のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号52のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号52のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号53のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号53のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号54のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号54のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号55のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号55のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号56のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号56のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号57のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号57のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号58のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号58のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号59のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号59のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号60のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号60のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号61のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号61のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号62のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号62のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号63のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号63のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号64のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号64のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号65のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号65のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号66のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号66のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号67のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号67のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号68のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号68のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号69のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号69のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号70のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号70のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号71のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号71のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号72のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号72のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号73のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号73のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号74のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号74のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号75のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号75のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号76のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号76のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号77のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号77のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号78のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号78のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号79のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号79のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号80のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号80のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号81のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号81のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号82のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号82のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号83のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号83のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号84のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号84のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号85のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号85のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号86のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号86のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号87のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号87のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号88のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号88のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号89のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号89のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号90のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号90のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号91のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号91のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号92のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号92のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号93のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号93のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号94のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号94のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号95のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号95のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号96のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号96のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号97のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号97のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、E(例えば各E)は、配列番号98のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Eは、配列番号98のアミノ酸配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%同一であるアミノ酸配列を含む。
EがFcドメイン単量体を含む、本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、Fcドメイン単量体(例えば、配列番号1~95のいずれか1つの配列を有するFcドメイン単量体)は、M252Y/S254T/T256E(YTE)に対応する三重変異を含む。本明細書中で使用する場合、特定のアミノ酸残基(例えば、特定の配列番号の)に「対応する」アミノ酸は、特定のアミノ酸残基(例えば、特定の配列の)に対してアラインメントすることを当業者が理解するであろう任意のアミノ酸残基を含むと理解すべきである。例えば、配列番号1~95のいずれか1つを、YTE変異を含むように変異させてもよい。
EがFcドメイン単量体を含む、本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、Fcドメイン単量体(例えば、配列番号1~95のいずれか1つの配列を有するFcドメイン単量体)は、M428L/N434S(LS)に対応する二重変異体を含む。本明細書中で使用する場合、特定のアミノ酸残基(例えば、特定の配列番号の)に「対応する」アミノ酸は、特定のアミノ酸残基(例えば、特定の配列の)に対してアラインメントすることを当業者が理解するであろう任意のアミノ酸残基を含むと理解すべきである。例えば、配列番号1~95のいずれか1つを、LS変異を含むように変異させてもよい。
EがFcドメイン単量体を含む、本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、Fcドメイン単量体(例えば、配列番号1~95のいずれか1つの配列を有するFcドメイン単量体)は、N434Hに対応する変異体を含む。本明細書中で使用する場合、特定のアミノ酸残基(例えば、特定の配列番号の)に「対応する」アミノ酸は、特定のアミノ酸残基(例えば、特定の配列の)に対してアラインメントすることを当業者が理解するであろう任意のアミノ酸残基を含むと理解すべきである。例えば、配列番号1~95のいずれか1つを、N434H変異を含むように変異させてもよい。
EがFcドメイン単量体を含む、本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、Fcドメイン単量体(例えば、配列番号1~95のいずれか1つの配列を有するFcドメイン単量体)は、C220Sに対応する変異体を含む。本明細書中で使用する場合、特定のアミノ酸残基(例えば、特定の配列番号の)に「対応する」アミノ酸は、特定のアミノ酸残基(例えば、特定の配列の)に対してアラインメントすることを当業者が理解するであろう任意のアミノ酸残基を含むと理解すべきである。例えば、配列番号1~95のいずれか1つを、C220S変異を含むように変異させてもよい。
EがFcドメイン単量体を含む、本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、Fcドメイン単量体(例えば、配列番号1~95のいずれか1つの配列を有するFcドメイン単量体)は、配列番号1~95由来のFcドメイン単量体の断片(例えば、長さが少なくとも25(例えば、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50以上)、少なくとも50(例えば、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75以上)、少なくとも75(例えば、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100以上)の連続アミノ酸の断片)である。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの複合体)では、Eの1つ以上の表面露出リジン残基の1つ以上の窒素原子、またはEの1つ以上の表面露出システインの1つ以上の硫黄原子が、リンカー(例えば、PEG2-PEG20リンカー)に共有結合している。Eと複合したリンカーを、反応して本明細書に記載の任意のA1-Lまたは任意のA2-L-A1のLと共有結合を形成し得るように官能化してもよい。好ましい実施形態では、Eを、アジド基で官能化したリンカーと複合させ、A1-Lまたは任意のA2-L-A1のLを、アルキン基で官能化する。Eのリンカー-アジドとA1-LまたはA2-L-A1のリンカー-アルキンとの複合(例えば、クリックケミストリーによる)により、本発明の複合体、例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つに記載の複合体が形成される。さらに他の実施形態では、Eを、アルキン基で官能化したリンカーと複合させ、任意のA1-LまたはA2-L-A1のLを、アジド基で官能化する。Eのリンカー-アルキンと任意のA1-LまたはA2-L-A1のリンカー-アジドの複合(例えば、クリックケミストリーによる)により、本発明の複合体、例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つに記載の複合体が形成される。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの波線は、A1-LもしくはA2-L-A1のLまたはA1-L’もしくはA1-L’-A2のL’間の共有結合を表す。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、式(1)、(2)、(D-I)~(D-X)、(D’-I)、(M-I)~(M-X)、または(M’-I)のいずれか1つの波線は、Eの1つ以上のアミノ酸側鎖(例えば、Eの1つ以上の表面露出リジン残基の1つ以上の窒素原子またはEの1つ以上の表面露出システインの1つ以上の硫黄原子)が、リンカー(例えば、PEG2-PEG20リンカー)と複合しており、その場合、リンカーは、反応性部分が本明細書に記載の任意のA1-Lまたは任意のA2-L-A1のLと共有結合を形成するように、反応性部分で官能化されている(例えば、上記のように、アジド官能化リンカーとアルキン官能化リンカーとの間のクリックケミストリーによる)。
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、A1及び/またはA2は、(A-I):
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、A1及び/またはA2は:
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、A1及び/またはA2は:
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、A1及び/またはA2は:
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、A1及び/またはA2は:
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、A1及び/またはA2は:
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、A1及び/またはA2は:
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、A1及び/またはA2は:
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、A1及び/またはA2は:
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、A1及び/またはA2は:
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、A1及び/またはA2は:
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、A1及び/またはA2は:
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、A1及び/またはA2は:
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、A1及び/またはA2は:
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、A1及び/またはA2は:
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、A1及び/またはA2は:
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、A1及び/またはA2は:
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、A1及び/またはA2は:
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、A1及び/またはA2は:
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、A1及び/またはA2は:
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、A1及び/またはA2は:
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、A1及び/またはA2は、(A-II):
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、A1及び/またはA2は、(A-IIaa):
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、A1及び/またはA2は、(A-IIbb):
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、A1及び/またはA2は、(A-IIcc):
本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、A1及び/またはA2は、(A-IIdd):
いくつかの実施形態では、複合体は複合体1またはその任意の位置異性体であり、薬物抗体比(DAR)(例えばT)は、0.5~10.0、例えば、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9または10.0である。いくつかの実施形態では、DARは、0.5~2.0、2.0~4.0、4.0~6.0、6.0~8.0、または8.0~10.0である。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体2またはその任意の位置異性体であり、DAR(例えばT)は、0.5~10.0、例えば、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9または10.0である。いくつかの実施形態では、DARは、0.5~2.0、2.0~4.0、4.0~6.0、6.0~8.0、または8.0~10.0である。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体3またはその任意の位置異性体であり、DAR(例えばT)は、0.5~10.0、例えば、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9または10.0である。いくつかの実施形態では、DARは、0.5~2.0、2.0~4.0、4.0~6.0、6.0~8.0、または8.0~10.0である。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体4またはその任意の位置異性体であり、DAR(例えばT)は、0.5~10.0、例えば、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9または10.0である。いくつかの実施形態では、DARは、0.5~2.0、2.0~4.0、4.0~6.0、6.0~8.0、または8.0~10.0である。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体5またはその任意の位置異性体であり、DAR(例えばT)は、0.5~10.0、例えば、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9または10.0である。いくつかの実施形態では、DARは、0.5~2.0、2.0~4.0、4.0~6.0、6.0~8.0、または8.0~10.0である。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体6またはその任意の位置異性体であり、DAR(例えばT)は、0.5~10.0、例えば、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9または10.0である。いくつかの実施形態では、DARは、0.5~2.0、2.0~4.0、4.0~6.0、6.0~8.0、または8.0~10.0である。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体7またはその任意の位置異性体であり、DAR(例えばT)は、0.5~10.0、例えば、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9または10.0である。いくつかの実施形態では、DARは、0.5~2.0、2.0~4.0、4.0~6.0、6.0~8.0、または8.0~10.0である。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体8またはその任意の位置異性体であり、DAR(例えばT)は、0.5~10.0、例えば、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9または10.0である。いくつかの実施形態では、DARは、0.5~2.0、2.0~4.0、4.0~6.0、6.0~8.0、または8.0~10.0である。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体9またはその任意の位置異性体であり、DAR(例えばT)は、0.5~10.0、例えば、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9または10.0である。いくつかの実施形態では、DARは、0.5~2.0、2.0~4.0、4.0~6.0、6.0~8.0、または8.0~10.0である。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体10またはその任意の位置異性体であり、DAR(例えばT)は、0.5~10.0、例えば、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9または10.0である。いくつかの実施形態では、DARは、0.5~2.0、2.0~4.0、4.0~6.0、6.0~8.0、または8.0~10.0である。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体11またはその任意の位置異性体であり、DAR(例えばT)は、0.5~10.0、例えば、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9または10.0である。いくつかの実施形態では、DARは、0.5~2.0、2.0~4.0、4.0~6.0、6.0~8.0、または8.0~10.0である。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体12またはその任意の位置異性体であり、DAR(例えばT)は、0.5~10.0、例えば、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9または10.0である。いくつかの実施形態では、DARは、0.5~2.0、2.0~4.0、4.0~6.0、6.0~8.0、または8.0~10.0である。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体13またはその任意の位置異性体であり、DAR(例えばT)は、0.5~10.0、例えば、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9または10.0である。いくつかの実施形態では、DARは、0.5~2.0、2.0~4.0、4.0~6.0、6.0~8.0、または8.0~10.0である。
いくつかの実施形態では、複合体は複合体14またはその任意の位置異性体であり、DAR(例えばT)は、0.5~10.0、例えば、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9または10.0である。いくつかの実施形態では、DARは、0.5~2.0、2.0~4.0、4.0~6.0、6.0~8.0、または8.0~10.0である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の集団は、1~2、2~4、4~6、6~8、8~10、1~10、1~20、1~5、3~7、5~10、または10~20のDAR(例えば、T)を有する。
いくつかの実施形態では、Fcドメイン単量体は、約300未満のアミノ酸残基(例えば、約300未満、約295未満、約290未満、約285未満、約280未満、約275未満、約270未満、約265未満、約260未満、約255未満、約250未満、約245未満、約240未満、約235未満、約230未満、約225未満、または約220未満のアミノ酸残基)を含む。いくつかの実施形態では、Fcドメイン単量体は、約40kDa未満(例えば、約35kDa未満、約30kDa未満、約25kDa未満)である。
いくつかの実施形態では、Fcドメイン単量体は、少なくとも200アミノ酸残基(例えば、少なくとも210、少なくとも220、少なくとも230、少なくとも240、少なくとも250、少なくとも260、少なくとも270、少なくとも280、少なくとも290、または少なくとも300アミノ残基)を含む。いくつかの実施形態では、Fcドメイン単量体は、少なくとも20kDa(例えば、少なくとも25kDa、少なくとも30kDa、または少なくとも35kDa)である。
いくつかの実施形態では、Fcドメイン単量体は、200~400アミノ酸残基(例えば、200~250、250~300、300~350、350~400、200~300、250~350、または300~400アミノ酸残基)を含む。いくつかの実施形態では、Fcドメイン単量体は、20~40kDa(例えば、20~25kDa、25~30kDa、35~40kDa、20~30kDa、25~35kDa、または30~40KDa)である。
いくつかの実施形態では、Fcドメイン単量体は、配列番号1~95のいずれか1つの配列、またはその領域と少なくとも90%(例えば、少なくとも95%、少なくとも98%)同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Fcドメイン単量体は、配列番号1~95のいずれか1つのアミノ酸配列、またはその領域を含む。
いくつかの実施形態では、Fcドメイン単量体は、配列番号1~95のいずれか1つの領域を含み、領域は、位置220、252、254、及び256を含む。いくつかの実施形態では、領域は、少なくとも40アミノ酸残基、少なくとも50アミノ酸残基、少なくとも60アミノ酸残基、少なくとも70アミノ酸残基、少なくとも80アミノ酸残基、少なくとも90アミノ酸残基、少なくとも100アミノ酸残基、少なくとも110アミノ酸残基、少なくとも120アミノ酸残基、少なくとも130アミノ酸残基、少なくとも140アミノ酸残基、少なくとも150アミノ酸残基、少なくとも160アミノ酸残基、少なくとも170アミノ酸残基、少なくとも180アミノ酸残基、少なくとも190アミノ酸残基、または少なくとも200アミノ酸残基を含む。
定義
本発明の理解を容易にするために、いくつかの用語を以下に定義する。本明細書中で定義される用語は、本発明が該当する分野の当業者によって一般的に理解される意味を有する。「a」、「an」及び「the」などの用語は、単数形の実体だけに言及することを意図しておらず、例示のために特定の例が用いられ得る一般的部類を含む。本明細書中の専門用語は、本発明の特定の実施形態を説明するために使用されているが、その用法は、特許請求の範囲の中で画定されている場合を除き、本発明を制限しない。
本発明の理解を容易にするために、いくつかの用語を以下に定義する。本明細書中で定義される用語は、本発明が該当する分野の当業者によって一般的に理解される意味を有する。「a」、「an」及び「the」などの用語は、単数形の実体だけに言及することを意図しておらず、例示のために特定の例が用いられ得る一般的部類を含む。本明細書中の専門用語は、本発明の特定の実施形態を説明するために使用されているが、その用法は、特許請求の範囲の中で画定されている場合を除き、本発明を制限しない。
「ウイルス感染症」とは、宿主生物(例えば、ヒト対象)における病原となるウイルス(例えば、ヒト免疫不全ウイルス)の増殖を意味する。ウイルス感染症は、ウイルス集団(複数可)の存在が宿主の体に損傷を与えている任意の状況であり得る。したがって、過剰な量のウイルス集団が対象の体の中もしくは上に存在する場合、またはウイルス集団(複数可)の存在が対象の細胞もしくは他の組織に損傷を与えている場合、対象はウイルス感染症に「罹患している」。
本明細書中で使用する場合、「Fcドメイン単量体」という用語は、少なくともヒンジドメインと、第2及び第3抗体定常ドメイン(CH2及びCH3)またはそれらの機能性断片(例えば、(i)別のFcドメイン単量体と二量体化してFcドメインを形成すること及び(ii)Fc受容体に結合することができる断片)とを含むポリペプチド鎖を指す。Fcドメイン単量体は、IgG、IgE、IgM、IgAまたはIgDを含めた任意の免疫グロブリン抗体アイソタイプ(例えばIgG)であり得る。加えて、Fcドメイン単量体はIgGサブタイプ(例えば、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3またはIgG4)(例えばIgG1)であってもよい。Fcドメイン単量体は、抗原認識領域として作用することができる免疫グロブリンの部分、例えば可変ドメインまたは相補性決定領域(CDR)を何ら含まない。本明細書に記載の複合体の中のFcドメイン単量体は、FcドメインとFc受容体との相互作用を変化させる、野生型Fcドメイン単量体配列からの1つ以上の変更(例えば、1~10、1~8、1~6、1~4個のアミノ酸置換、付加または欠失)を含有し得る。好適な変更の例は当技術分野で知られている。ある実施形態では、ヒトFcドメイン単量体(例えば、IgG重鎖、例えばIgG1)は、Asn208、Glu216、Asp221、Lys222またはCys226のいずれかからLys447にある重鎖のカルボキシ末端まで延びている領域を含む。Fc領域のC末端Lys447は、Fc領域の構造または安定性に影響を与えることなく、存在していてもいなくてもよい。本明細書中で特に明記しない限り、IgGまたはFcドメイン単量体の中のアミノ酸残基の付番は、例えばKabat et al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD,1991に記載されているような、Kabat EU指標とも呼称される抗体のためのEU付番体系に従う。
本明細書中で使用する場合、「Fcドメイン」という用語は、Fc受容体に結合することができる2つのFcドメイン単量体の二量体を指す。野生型Fcドメインにおいて2つのFcドメイン単量体は、2つのCH3抗体定常ドメインの間の相互作用によって二量体化し、いくつかの実施形態では、二量体化している2つのFcドメイン単量体のヒンジドメインの間に1つ以上のジスルフィド結合が形成される。「共有結合している」という用語は、複合体の2つの部分が、複合体の当該2つの部分の中の2つの原子の間に形成された共有結合によって互いに連結されていることを意味する。
本明細書中で使用する場合、「Fc結合ペプチド」という用語は、Fcドメイン、例えば本明細書に記載のFcドメインのいずれかに対する親和性及び結合機能を有する5~50(例えば、5~40、5~30、5~20、5~15、5~10、10~50、10~30、または10~20)アミノ酸残基のアミノ酸配列を有するポリペプチドを指す。Fc結合ペプチドペプチドは由来が様々であり得、例えば、合成、ヒト、マウスまたはラットに由来し得る。本発明のFc結合ペプチドには、本発明の化合物との複合(例えば、リンカーによる場合を含めて、gp120結合剤単量体または二量体との複合)のための部位を提供し得るものである溶媒曝露システインまたはリジン残基を1つ以上(例えば、2つ、3つ、4つまたは5つ)含むように操作されたFc結合ペプチドが含まれる。Fc結合ペプチドは、単一の溶媒曝露システインまたはリジンを含有してこれによって本発明の化合物の部位特異的な複合を可能にしていることが最も好ましかろう。Fc結合ペプチドは、天然に存在するアミノ酸残基のみを含んでいてもよいし、または天然に存在しないアミノ酸残基を1つ以上含んでいてもよい。天然に存在しないアミノ酸残基(例えば、天然に存在しないアミノ酸残基の側鎖)は、含まれている場合、本発明の化合物(例えば、リンカーによる場合を含めて、gp120結合剤単量体または二量体)に対する結合点として使用され得る。本発明のFc結合ペプチドは、直鎖状であってもよいし、または環状であってもよい。本発明のFc結合ペプチドには、当業者に知られている任意のFc結合ペプチドが含まれる。
本明細書で使用する場合、「アルブミンタンパク質」という用語は、天然に存在するアルブミンタンパク質(例えばヒト血清アルブミン)またはそのバリアント、例えば天然に存在するアルブミンタンパク質の改変型バリアントに対応するアミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。アルブミンタンパク質のバリアントには、多型、断片、例えばドメイン及びサブドメイン、ならびに融合タンパク質(例えば、C末端またはN末端に融合、例えばポリペプチドリンカーを有するアルブミンタンパク質)が含まれる。好ましくは、アルブミンタンパク質は、ヒト血清アルブミン(HSA)、またはそのバリアントもしくは断片、最も好ましくはその機能性バリアントもしくは断片のアミノ酸配列を有する。本発明のアルブミンタンパク質は、配列番号96~98のいずれか1つとの少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%の同一性を有するタンパク質を含む。本発明のアルブミンタンパク質には、本発明の化合物との複合(例えば、リンカーによる場合を含めて、gp120結合剤単量体または二量体との複合)のための部位を提供し得るものである溶媒曝露システインまたはリジン残基を1つ以上(例えば、2つ、3つ、4つまたは5つ)含むように操作されたアルブミンタンパク質が含まれる。アルブミンタンパク質は、単一の溶媒曝露システインまたはリジンを含有してこれによって本発明の化合物の部位特異的な複合を可能にしていることが最も好ましかろう。アルブミンタンパク質は、天然に存在するアミノ酸残基のみを含んでいてもよいし、または天然に存在しないアミノ酸残基を1つ以上含んでいてもよい。天然に存在しないアミノ酸残基(例えば、天然に存在しないアミノ酸残基の側鎖)は、含まれている場合、本発明の化合物(例えば、リンカーによる場合を含めて、gp120結合剤単量体または二量体)に対する結合点として使用され得る。
本明細書中で使用する場合、「アルブミンタンパク質結合ペプチド」という用語は、アルブミンタンパク質、例えば本明細書に記載のアルブミンタンパク質のいずれかに対する親和性及び結合機能を有する5~50(例えば、5~40、5~30、5~20、5~15、5~10、10~50、10~30、または10~20)アミノ酸残基のアミノ酸配列を有するポリペプチドを指す。好ましくは、アルブミンタンパク質結合ペプチドは、天然に存在する血清アルブミン、最も好ましくはヒト血清アルブミンに結合する。アルブミンタンパク質結合ペプチドは由来が様々であり得、例えば、合成、ヒト、マウスまたはラットに由来し得る。本発明のアルブミンタンパク質結合ペプチドには、本発明の化合物との複合(例えば、リンカーによる場合を含めて、gp120結合剤単量体または二量体との複合)のための部位を提供し得るものである溶媒曝露システインまたはリジン残基を1つ以上(例えば、2つ、3つ、4つまたは5つ)含むように操作されたアルブミンタンパク質結合ペプチドが含まれる。アルブミンタンパク質結合ペプチドは、単一の溶媒曝露システインまたはリジンを含有してこれによって本発明の化合物の部位特異的な複合を可能にしていることが最も好ましかろう。アルブミンタンパク質結合ペプチドは、天然に存在するアミノ酸残基のみを含んでいてもよいし、または天然に存在しないアミノ酸残基を1つ以上含んでいてもよい。天然に存在しないアミノ酸残基(例えば、天然に存在しないアミノ酸残基の側鎖)は、含まれている場合、本発明の化合物(例えば、リンカーによる場合を含めて、gp120結合剤単量体または二量体)に対する結合点として使用され得る。本発明のアルブミンタンパク質結合ペプチドは、直鎖状であってもよいし、または環状であってもよい。本発明のアルブミンタンパク質結合ペプチドには、当業者に知られている任意のアルブミンタンパク質結合ペプチドが含まれ、その例は本明細書中に提供されている。さらなる例示的なアルブミンタンパク質結合ペプチドは米国特許出願第2005/0287153号に示されており、参照によりこの全体を本明細書に援用する。
本明細書中で使用する場合、「表面露出アミノ酸」または「溶媒曝露アミノ酸」、例えば、表面露出システインまたは表面露出リジンは、タンパク質を取り囲んでいる溶媒との接触が可能なアミノ酸を指す。表面露出アミノ酸は、天然に存在するものであってもよいし、またはタンパク質の改変型バリアント(例えば置換または挿入)であってもよい。いくつかの実施形態では、表面露出アミノ酸は、置換されたときにタンパク質の三次元構造を実質的に変化させないアミノ酸である。
「リンカー」、「L」及び「L’」という用語は、本明細書中で使用される場合、複合体中の2つ以上の構成要素の間(例えば、本明細書に記載の複合体の中の2つのgp120結合剤の間、本明細書に記載の複合体の中のgp120結合剤とFcドメインまたはアルブミンタンパク質との間、及び本明細書に記載の複合体の中の2つのgp120結合剤の二量体とFcドメインまたはアルブミンタンパク質との間)の共有結合リンケージまたは連結子を指す。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体は、三価の構造を有するリンカー(例えば三価リンカー)を含有し得る。三価リンカーは3本のアームを有し、各アームは複合体の構成要素に共有結合で連結されている(例えば、第1アームは第1のgp120結合剤と複合しており、第2アームは第2のgp120結合剤と複合しており、第3アームはFcドメインまたはアルブミンタンパク質と複合している)。
リンカーとして使用され得る分子は、同じまたは異なるものであり得る少なくとも2つの官能基、例えば、2つのカルボン酸基、2つのアミン基、2つのスルホン酸基、カルボン酸基とマレイミド基、カルボン酸基とアルキン基、カルボン酸基とアミン基、カルボン酸基とスルホン酸基、アミン基とマレイミド基、アミン基とアルキン基、またはアミン基とスルホン酸基を含む。第1官能基は複合体中の第1構成要素との共有結合リンケージを形成し得、第2官能基は複合体中の第2構成要素との共有結合リンケージを形成し得る。三価リンカーのいくつかの実施形態では、リンカーの2本のアームは2つのジカルボン酸を含有し得、ここで、第1カルボン酸は複合体中の第1のgp120結合剤との共有結合リンケージを形成するものであり得、第2カルボン酸は複合体中の第2のgp120結合剤との共有結合リンケージを形成するものであり得、そして、リンカーの3本目のアームは複合体中のFcドメインまたはアルブミンタンパク質との共有結合リンケージのためのものであり得る。ジカルボン酸の例は本明細書中にさらに記載されている。いくつかの実施形態では、1つ以上のマレイミド基を含有する分子がリンカーとして使用され得、この場合、マレイミド基は複合体中の構成要素(例えばFcドメイン単量体、Fcドメイン、またはアルブミンタンパク質)の中のシステインとの炭素-硫黄リンケージを形成し得る。いくつかの実施形態では、1つ以上のアルキン基を含有する分子がリンカーとして使用され得、この場合、アルキン基は複合体中の構成要素(例えばFcドメイン単量体、Fcドメイン、またはアルブミンタンパク質)の中のアジドとの1,2,3-トリアゾールリンケージを形成し得る。いくつかの実施形態では、1つ以上のアジド基を含有する分子がリンカーとして使用され得、この場合、アジド基は複合体中の構成要素(例えばFcドメイン単量体、Fcドメイン、またはアルブミンタンパク質)の中のアルキンとの1,2,3-トリアゾールリンケージを形成し得る。いくつかの実施形態では、1つ以上のビススルホン基を含有する分子がリンカーとして使用され得、この場合、ビススルホン基は複合体中の構成要素(例えばFcドメイン単量体、Fcドメイン、またはアルブミンタンパク質)のアミン基とのリンケージを形成し得る。いくつかの実施形態では、1つ以上のスルホン酸基を含有する分子がリンカーとして使用され得、この場合、スルホン酸基は複合体中の構成要素とのスルホンアミドリンケージを形成し得る。いくつかの実施形態では、1つ以上のイソシアネート基を含有する分子がリンカーとして使用され得、この場合、イソシアネート基は複合体中の構成要素との尿素リンケージを形成し得る。いくつかの実施形態では、1つ以上のハロアルキル基を含有する分子がリンカーとして使用され得、この場合、ハロアルキル基は複合体中の構成要素との共有結合リンケージ、例えばC-N及びC-Oリンケージを形成し得る。
いくつかの実施形態では、リンカーは2つ以上の構成要素の間に空間、剛直性及び/または柔軟性を提供する。いくつかの実施形態では、リンカーは結合、例えば共有結合であり得る。「結合」という用語は、化学結合、例えば、アミド結合、ジスルフィド結合、C-O結合、C-N結合、N-N結合、C-S結合、または化学反応、例えば化学的複合によって作り出された任意の種類の結合を指す。いくつかの実施形態では、リンカーは250個以下の原子を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは250個以下の非水素原子を含む。いくつかの実施形態では、リンカーの主鎖は250個以下の原子を含む。リンカーの「主鎖」は、複合体のある部分から複合体の別の部分までの最短経路(例えば、第1のgp120結合剤と第2のgp120結合剤とを連結する最短経路)を一緒になって形成しているリンカー中の原子を指す。リンカーの主鎖中の原子は、複合体のある部分と複合体の別の部分との連結(例えば、第1のgp120結合剤と第2のgp120結合剤との連結)に直接関与している。例えば、リンカーの主鎖中の炭素に結合している水素原子は、複合体のある部分と複合体の別の部分との連結に直接関与しているとはみなされない。
いくつかの実施形態では、リンカーは、例えば合成ポリマー(例えばポリエチレングリコール(PEG)ポリマー)に由来する合成基を含み得る。いくつかの実施形態では、リンカーは1つ以上のアミノ酸残基、例えばD-またはL-アミノ酸残基を含み得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、アミノ酸配列(例えば、1~25アミノ酸、1~10アミノ酸、1~9アミノ酸、1~8アミノ酸、1~7アミノ酸、1~6アミノ酸、1~5アミノ酸、1~4アミノ酸、1~3アミノ酸、1~2アミノ酸または1アミノ酸配列)の残基であり得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、1個以上、例えば、1~100個、1~50個、1~25個、1~10個、1~5個、または1~3個の任意選択的に置換されたアルキレン、任意選択的に置換されたヘテロアルキレン(例えばPEG単位)、任意選択的に置換されたアルケニレン、任意選択的に置換されたヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたアルキニレン、任意選択的に置換されたヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたシクロアルキレン、任意選択的に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたアリーレン、任意選択的に置換されたヘテロアリーレン(例えばピリジン)、O、S、NRi(Riは、H、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたヘテロアルキル、任意選択的に置換されたアルケニル、任意選択的に置換されたヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたアルキニル、任意選択的に置換されたヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたシクロアルキル、任意選択的に置換されたヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたシクロアルケニル、任意選択的に置換されたヘテロシクロアルケニル、任意選択的に置換されたシクロアルキニル、任意選択的に置換されたヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたアリール、または任意選択的に置換されたヘテロアリールである)、P、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート、ホスホリルまたはイミノを含み得る。例えば、リンカーは、1つ以上の任意選択的に置換されたC1-C20アルキレン、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキレン(例えばPEG単位)、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニレン(例えばC2アルケニレン)、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキレン(例えば、シクロプロピレン、シクロブチレン)、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC5-C15アリーレン(例えばC6アリーレン)、任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリーレン(例えば、イミダゾール、ピリジン)、O、S、NRi(Riは、H、任意選択的に置換されたC1-C20アルキル、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニル、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニル、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニル、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、または任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリールである)、P、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート、ホスホリルまたはイミノを含み得る。
本明細書中で使用する場合、「アルキル」、「アルケニル」及び「アルキニル」という用語は、置換されていないときにC及びHのみを含有する、直鎖及び分岐鎖の一価置換基ならびにこれらの組合せを含む。アルキル基が少なくとも1つの炭素-炭素二重結合または炭素-炭素三重結合を含んでいる場合、当該アルキル基は、それぞれ「アルケニル」または「アルキニル」基と呼称され得る。アルキル、アルケニルまたはアルキニル基が一価であることは、アルキル、アルケニルまたはアルキニル基に任意選択の置換基が付いていることを含まない。例えば、アルキル、アルケニルまたはアルキニル基が化合物に結合している場合、アルキル、アルケニルまたはアルキニル基が一価であることが意味するのは、それが化合物に結合しており、アルキル、アルケニルまたはアルキニル基上に存在し得る追加の置換基を何ら含んでいない、ということである。いくつかの実施形態では、アルキルまたはヘテロアルキル基は、例えば、1~20、1~18、1~16、1~14、1~12、1~10、1~8、1~6、1~4、または1~2個の炭素原子を含有し得る(例えば、C1-C20、C1-C18、C1-C16、C1-C14、C1-C12、C1-C10、C1-C8、C1-C6、C1-C4、またはC1-C2)。いくつかの実施形態では、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニルまたはヘテロアルキニル基は、例えば、2~20、2~18、2~16、2~14、2~12、2~10、2~8、2~6、または2~4個の炭素原子を含有し得る(例えば、C2-C20、C2-C18、C2-C16、C2-C14、C2-C12、C2-C10、C2-C8、C2-C6、またはC2-C4)。例としては、メチル、エチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、2-プロペニル、及び3-ブチニルが挙げられるが、これらに限定されない。
「シクロアルキル」という用語は、本明細書中で使用される場合、一価の飽和または不飽和の非芳香環式アルキル基を表す。シクロアルキルは例えば3~20個の炭素を有し得る(例えば、C3-C7、C3-C8、C3-C9、C3-C10、C3-C11、C3-C12、C3-C14、C3-C16、C3-C18、またはC3-C20シクロアルキル)。シクロアルキルの例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル及びシクロヘプチルが挙げられるが、これらに限定されない。シクロアルキル基が少なくとも1つの炭素-炭素二重結合を含む場合、当該シクロアルキル基は「シクロアルケニル」基と呼称され得る。シクロアルケニルは例えば4~20個の炭素を有し得る(例えば、C4-C7、C4-C8、C4-C9、C4-C10、C4-C11、C4-C12、C4-C14、C4-C16、C4-C18、またはC4-C20シクロアルケニル)。例示的なシクロアルケニル基としては、シクロペンテニル、シクロヘキセニル及びシクロヘプテニルが挙げられるが、これらに限定されない。シクロアルキル基が少なくとも1つの炭素-炭素三重結合を含む場合、当該シクロアルキル基は「シクロアルキニル」基と呼称され得る。シクロアルキニルは例えば8~20個の炭素を有し得る(例えば、C8-C9、C8-C10、C8-C11、C8-C12、C8-C14、C8-C16、C8-C18、またはC8-C20シクロアルキニル)。「シクロアルキル」という用語は、1つ以上の炭素が単環の2つの非隣接構成員を架橋している架橋型多環式構造を有する環式化合物、例えばビシクロ[2.2.1]ヘプチル及びアダマンタンも含む。「シクロアルキル」という用語は、二環式、三環式及び四環式縮合環構造、例えばデカリン及びスピロ環式化合物も含む。「ヘテロシクロアルキル」、「ヘテロシクロアルケニル」、または「ヘテロシクロアルキニル」基は、例えば、独立して、N、O、及びSから選択される1つ以上のヘテロ原子を有する1つ以上の環(例えば、1、2、3、4またはそれ以上の環)を有するシクロアルキル、シクロアルケニル、またはシクロアルキニル基を指す。例示的なヘテロシクロアルキル基として、ピロリジン、チオフェン、チオラン、テトラヒドロフラン、ピペリジン、テトラヒドロフラン、キノリン、イソキノリン、シン
ノリン、フタラジン、キナゾリン、キノキサリン、インドール、ベンゾチオフェン、ベンゾフラン、イソインドール、ベンゾ[c]チオフェン、イソベンゾフラン、ベンズイミダゾール、ベンゾキサゾール、ベンゾチアゾール、1H-インダゾール、1,2-ベンズイソキサゾール、1,2-ベンズイソチアゾール、2,1-ベンズイソチアゾール、2,1-ベンズイソキサゾール、プリン、ピロリジジン、インデン、フルオレン、カルバゾール、ジベンゾフラン、アクリジン、フェナジン、及びフェノキサジンが挙げられる。
ノリン、フタラジン、キナゾリン、キノキサリン、インドール、ベンゾチオフェン、ベンゾフラン、イソインドール、ベンゾ[c]チオフェン、イソベンゾフラン、ベンズイミダゾール、ベンゾキサゾール、ベンゾチアゾール、1H-インダゾール、1,2-ベンズイソキサゾール、1,2-ベンズイソチアゾール、2,1-ベンズイソチアゾール、2,1-ベンズイソキサゾール、プリン、ピロリジジン、インデン、フルオレン、カルバゾール、ジベンゾフラン、アクリジン、フェナジン、及びフェノキサジンが挙げられる。
「アリール」という用語は、本明細書中で使用される場合、環系全体にわたる電子分布に関して芳香族性の特徴を有する任意の単環系または縮合二環もしくは三環系、例えば、フェニル、ナフチルまたはフェナントレンを指す。いくつかの実施形態では、環系は、5~15個の環構成員原子または5~10個の環構成員原子を含有する。アリール基は例えば5~15個の炭素を有し得る(例えば、C5-C6、C5-C7、C5-C8、C5-C9、C5-C10、C5-C11、C5-C12、C5-C13、C5-C14、またはC5-C15アリール)。「ヘテロアリール」という用語も、O、S及びNから選択される1つ以上、例えば、1~4、1~3、1、2、3または4個のヘテロ原子を含有するそのような単環系または縮合二環系を指す。ヘテロアリール基は例えば2~15個の環構成員原子を有し得る(例えば、C2-C3、C2-C4、C2-C5、C2-C6、C2-C7、C2-C8、C2-C9、C2-C10、C2-C11、C2-C12、C2-C13、C2-C14、またはC3-C15ヘテロアリール)。ヘテロ原子を含むことによって、5員環を含むことを6員環と同様に芳香族とみなすことが可能になる。したがって、典型的なヘテロアリール系には、例えば、ピリジル、ピリミジル、インドリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾトリアゾリル、イソキノリル、キノリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾフラニル、チエニル、フリル、ピロリル、チアゾリル、トリアゾリル(例えば、1,2,3-または1,2,4-トリアゾリル)オキサゾリル、イソオキサゾリル、ベンゾキサゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、及びイミダゾリルが含まれる。互変異性体が可能であるため、フタルイミドなどの基もヘテロアリールとみなされる。いくつかの実施形態では、1~2個の窒素原子を任意選択的に含有するアリールまたはヘテロアリール基は5員または6員芳香環系である。いくつかの実施形態では、アリールまたはヘテロアリール基は、任意選択的に置換されたフェニル、ピリジル、インドリル、ピリミジル、ピリダジニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾイミダゾリル、ピラゾリル、イミダゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリルまたはイミダゾピリジニルである。いくつかの実施形態では、アリール基はフェニルである。いくつかの実施形態では、アリール基は、アリール置換基などの置
換基で任意選択的に置換されたもの、例えばビフェニルであり得る。
換基で任意選択的に置換されたもの、例えばビフェニルであり得る。
「アルカリール」という用語は、アルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン基に連結されているアリール基を指す。化合物がアルカリール基に結合している場合、大抵、アルカリールのアルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン部分が化合物に結合している。いくつかの実施形態では、アルカリールは、C6-C35アルカリール(例えば、C6-C16、C6-C14、C6-C12、C6-C10、C6-C9、C6-C8、C7またはC6アルカリール)であり、ここで、炭素の数は、アルカリールのアリール部分とアルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン部分との両方の炭素の総数を表す。アルカリールの例としては、(C1-C8)アルキレン(C6-C12)アリール、(C2-C8)アルケニレン(C6-C12)アリール、または(C2-C8)アルキニレン(C6-C12)アリールが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、アルカリールはベンジルまたはフェネチルである。ヘテロアルカリールにおいては、N、O及びSから選択される1つ以上のヘテロ原子が、アルカリール基のアルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン部分の中に存在していてもよく、及び/またはアルカリール基のアリール部分の中に存在していてもよい。任意選択的に置換されたアルカリールにおいて置換基は、アルカリール基のアルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン部分上に存在していてもよく、及び/またはアルカリール基のアリール部分上に存在していてもよい。
「アミノ」という用語は、本明細書中で使用される場合、-N(Rx)2、または-N+(Rx)3を表し、式中の各Rxは、独立してH、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アルカリール、シクロアルキルであるか、または2つのRxが合わさってヘテロシクロアルキルを形成している。いくつかの実施形態では、アミノ基は-NH2である。
「アルカミノ」という用語は、本明細書に記載のアミノ基がアルキレン(例えばC1-C5アルキレン)、アルケニレン(例えばC2-C5アルケニレン)またはアルキニレン基(例えばC2-C5アルキニレン)に結合したものを指す。化合物がアルカミノ基に結合している場合、大抵、アルカミノのアルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン部分が化合物に結合している。アルカミノのアミノ部分は、-N(Rx)2、または-N+(Rx)3を指し、式中の各Rxは、独立してH、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アルカリール、シクロアルキルであるか、または2つのRxが合わさってヘテロシクロアルキルを形成している。いくつかの実施形態では、アルカミノのアミノ部分は-NH2である。アルカミノ基の一例はC1-C5アルカミノ、例えばC2アルカミノ(例えばCH2CH2NH2またはCH2CH2N(CH3)2)である。ヘテロアルカミノ基においては、N、O及びSから選択される1つ以上、例えば、1~4、1~3、1、2、3または4個のヘテロ原子がヘテロアルカミノ基のアルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン部分の中に存在し得る。いくつかの実施形態では、アルカミノ基は任意選択的に置換されていてもよい。置換されているアルカミノ基において置換基は、アルカミノ基のアルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン部分中に存在していてもよく、及び/またはアルカミノ基のアミノ部分上に存在していてもよい。
「アルカミド」という用語は、本明細書中で使用される場合、アミド基がアルキレン(例えばC1-C5アルキレン)、アルケニレン(例えばC2-C5アルケニレン)またはアルキニレン(例えばC2-C5アルキニレン)基に結合したものを指す。化合物がアルカミド基に結合している場合、大抵、アルカミドのアルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン部分が化合物に結合している。アルカミドのアミド部分は、-C(O)-N(Rx)2を指し、式中の各Rxは、独立してH、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アルカリール、シクロアルキルであるか、または2つのRxが合わさってヘテロシクロアルキルを形成している。いくつかの実施形態では、アルカミドのアミド部分は、-C(O)NH2である。アルカミド基は、-(CH2)2-C(O)NH2または-CH2-C(O)NH2であり得る。ヘテロアルカミド基においては、N、O及びSから選択される1つ以上、例えば、1~4、1~3、1、2、3または4個のヘテロ原子がヘテロアルカミド基のアルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン部分の中に存在し得る。いくつかの実施形態では、アルカミド基は任意選択的に置換されていてもよい。置換されているアルカミド基において置換基は、アルカミド基のアルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン部分中に存在していてもよく、及び/またはアルカミド基のアミド部分上に存在していてもよい。
「アルキレン」、「アルケニレン」及び「アルキニレン」という用語は、本明細書中で使用される場合、指定の大きさを有する二価基を指す。いくつかの実施形態では、アルキレンは、例えば、1~20、1~18、1~16、1~14、1~12、1~10、1~8、1~6、1~4、または1~2個の炭素原子を含有し得る(例えば、C1-C20、C1-C18、C1-C16、C1-C14、C1-C12、C1-C10、C1-C8、C1-C6、C1-C4、またはC1-C2)。いくつかの実施形態では、アルケニレンまたはアルキニレンは、例えば、2~20、2~18、2~16、2~14、2~12、2~10、2~8、2~6、または2~4個の炭素原子(例えば、C2-C20、C2-C18、C2-C16、C2-C14、C2-C12、C2-C10、C2-C8、C2-C6、またはC2-C4)を含有し得る。アルキレン、アルケニレン及び/またはアルキニレンには直鎖及び分岐鎖形態ならびにこれらの組合せが含まれる。アルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン基が二価であることは、アルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン基に任意選択の置換基が付いていることを含まない。例えば、2つのgp120結合剤は、アルキレン、アルケニレン及び/またはアルキニレンまたはその組合せを含むリンカーによって互いに結合していてもよい。リンカー中のアルキレン、アルケニレン及び/またはアルキニレン基の各々は、アルキレン、アルケニレン及び/またはアルキニレン基の両端にある2つの結合に関して二価であるとみなされる。例えば、リンカーが、-(任意選択的に置換されたアルキレン)-(任意選択的に置換されたアルケニレン)-(任意選択的に置換されたアルキレン)-を含む場合、アルケニレンは、それとリンカーの端部にある2つのアルキレンとの結合に関して二価であるとみなされる。アルケニレンに任意選択の置換基が付いていることは、アルケニレンが二価であることには含まれない。アルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン基(例えば、リンカー中のアルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン基)の二価的性質は、基の両端に関するものであり、アルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン基中に存在し得る任意選択の置換基を含まない。それらは二価であるので、それらは複合体の複数(例えば2つ)の部分、例えば第
1のgp120結合剤及び第2のgp120結合剤を連結することができる。アルキレン、アルケニレン及び/またはアルキニレン基は、本明細書中に示されるアルキル、アルケニル及びアルキニル基の置換基として典型的に適した基で置換され得る。例えばC=Oは、オキソ(=O)で置換されたC1アルキレンである。例えば-HCR-C≡C-は、任意選択的に置換されたアルキニレンとみなされ得、任意選択の置換基Rを有していても二価基とみなされる。ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン及び/またはヘテロアルキニレン基は、アルキレン、アルケニレン及び/またはアルキニレン基が1つ以上、例えば、1~4、1~3、1、2、3または4個のヘテロ原子、例えば、N、O及びSを含んだものを指す。例えば、ポリエチレングリコール(PEG)ポリマーまたはPEGポリマー中のPEG単位-(CH2)2-O-は、1つ以上の酸素原子を含有するヘテロアルキレンとみなされる。
1のgp120結合剤及び第2のgp120結合剤を連結することができる。アルキレン、アルケニレン及び/またはアルキニレン基は、本明細書中に示されるアルキル、アルケニル及びアルキニル基の置換基として典型的に適した基で置換され得る。例えばC=Oは、オキソ(=O)で置換されたC1アルキレンである。例えば-HCR-C≡C-は、任意選択的に置換されたアルキニレンとみなされ得、任意選択の置換基Rを有していても二価基とみなされる。ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン及び/またはヘテロアルキニレン基は、アルキレン、アルケニレン及び/またはアルキニレン基が1つ以上、例えば、1~4、1~3、1、2、3または4個のヘテロ原子、例えば、N、O及びSを含んだものを指す。例えば、ポリエチレングリコール(PEG)ポリマーまたはPEGポリマー中のPEG単位-(CH2)2-O-は、1つ以上の酸素原子を含有するヘテロアルキレンとみなされる。
「シクロアルキレン」という用語は、本明細書中で使用される場合、化合物の2つの部分を連結している二価の環式基を指す。例えば、シクロアルキレン基中の1つの炭素が化合物の1つの部分に連結され得る一方、シクロアルキレン基中の別の炭素は化合物の別の部分に連結され得る。シクロアルキレン基は、飽和または不飽和の非芳香環基を含み得る。シクロアルキレンはシクロアルキレンの環部分に例えば3~20個の炭素を有し得る(例えば、C3-C7、C3-C8、C3-C9、C3-C10、C3-C11、C3-C12、C3-C14、C3-C16、C3-C18、またはC3-C20シクロアルキレン)。シクロアルキレン基が少なくとも1つの炭素-炭素二重結合を含む場合、シクロアルキレン基は「シクロアルケニレン」基と呼称され得る。シクロアルケニレンはシクロアルケニレンの環部分に例えば4~20個の炭素を有し得る(例えば、C4-C7、C4-C8、C4-C9、C4-C10、C4-C11、C4-C12、C4-C14、C4-C16、C4-C18、またはC4-C20シクロアルケニル)。シクロアルキレン基が少なくとも1つの炭素-炭素三重結合を含む場合、シクロアルキレン基は「シクロアルキニレン」基と呼称され得る。シクロアルキニレンはシクロアルキニレンの環部分に例えば4~20個の炭素を有し得る(例えば、C4-C7、C4-C8、C4-C9、C4-C10、C4-C11、C4-C12、C4-C14、C4-C16、C4-C18、またはC8-C20シクロアルキニレン)。シクロアルキレン基は、本明細書中に示されるアルキル、アルケニル及びアルキニル基の置換基として典型的に適した基で置換され得る。ヘテロシクロアルキレンは、シクロアルキレン基が1つ以上、例えば、1~4、1~3、1、2、3または4個のヘテロ原子、例えば、N、O及びSを含んだものを指す。シクロアルキレンの例としてはシクロプロピレン及びシクロブチレンが挙げられるが、これらに限定されない。テトラヒドロフランはヘテロシクロアルキレンとみなされ得る。
「アリーレン」という用語は、本明細書中で使用される場合、化合物の複数の(例えば2つまたは3つの)部分を連結している多価(例えば二価または三価)アリール基を指す。例えば、アリーレン基中の1つの炭素が化合物の1つの部分に連結され得る一方、アリーレン基中の別の炭素は化合物の別の部分に連結され得る。アリーレンは、アリーレンのアリール部分に例えば5~15個の炭素を有し得る(例えば、C5-C6、C5-C7、C5-C8、C5-C9、C5-C10、C5-C11、C5-C12、C5-C13、C5-C14、またはC5-C15アリーレン)。アリーレン基は、本明細書中に示されるアルキル、アルケニル及びアルキニル基の置換基として典型的に適した基で置換され得る。ヘテロアリーレンは、芳香族基が1つ以上、例えば、1~4、1~3、1、2、3または4個のヘテロ原子、例えば、N、O及びSを含んだものを指す。ヘテロアリーレン基は例えば2~15個の炭素を有し得る(例えば、C2-C3、C2-C4、C2-C5、C2-C6、C2-C7、C2-C8、C2-C9、C2-C10、C2-C11、C2-C12、C2-C13、C2-C14、またはC3-C15ヘテロアリーレン)。
「任意選択的に置換された」という用語は、本明細書中で使用される場合、0個、1個またはそれより多くの置換基、例えば、0~25、0~20、0~10または0~5個の置換基を有することを意味する。置換基には、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アルカリール、アシル、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、ヘテロアルキニル、ヘテロアルカリール、ハロゲン、オキソ、シアノ、ニトロ、アミノ、アルカミノ、ヒドロキシ、アルコキシ、アルカノイル、カルボニル、カルバモイル、グアニジニル、ウレイド、アミジニル、上記の基または部分のいずれか、及び上記の基または部分のいずれかのヘテロ型が含まれるが、これらに限定されない。置換基としては、限定されないが、F、Cl、メチル、フェニル、ベンジル、OR、NR2、SR、SOR、SO2R、OCOR、NRCOR、NRCONR2、NRCOOR、OCONR2、RCO、COOR、アルキル-OOCR、SO3R、CONR2、SO2NR2、NRSO2NR2、CN、CF3、OCF3、SiR3及びNO2が挙げられ、式中の各Rは独立してH、アルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニルまたはヘテロアリールであり、同一または隣接原子上の任意選択の置換基のうち2つが結び合わさって、3~8個の環構成員を含有する任意選択的に置換された芳香または非芳香縮合環を形成していることもあるし、または同一原子上の任意選択の置換基のうち2つが結び合わさって、3~8個の環構成員を含有する任意選択的に置換された芳香または非芳香、飽和または不飽和の環を形成していることもある。
任意選択的に置換された基または部分は、原子の1つ(例えば水素原子)が任意選択的に別の置換基で置き換えられた基または部分(例えば上記の基または部分のいずれか1つ)を指す。例えば、任意選択的に置換されたアルキルは、メチル基の水素原子が例えばOHで置き換えられている任意選択的に置換されたメチルであり得る。別の例を挙げると、ヘテロアルキルまたはその二価対応物であるヘテロアルキレンに付いている置換基が、炭素に付いている水素、またはNなどのヘテロ原子に付いている水素に取って代わっていてもよい。例えば、基-R-NH-R-の中の水素原子が、アルカミド置換基、例えば-R-N[(CH2C(O)N(CH3)2]-Rに置き換わっていてもよい。
一般的に、任意の置換基は非干渉性置換基である。「非干渉性置換基」とは、本明細書に記載の複合体(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの複合体)の、ウイルスgp41またはgp120受容体に結合するか、またはHIVの増殖を阻害する能力を残す置換基を指す。したがって、いくつかの実施形態では、置換基は、そのような活性の程度を変化させる場合がある。しかしながら、複合体がウイルスgp41またはgp120受容体に結合する能力、またはHIV増殖を阻害する能力を保持している限り、置換基は「非干渉性」として分類される。例えば、非干渉性置換基は、ウイルスプラーク減少アッセイにおいて10μM以下のIC50値に基づいて抗ウイルス効果を提供する化合物の能力を残すであろう。したがって、置換基は、プラーク減少またはgp120受容体阻害に基づいて阻害の程度を変化させる場合がある。しかしながら、本明細書に記載の化合物、例えば、式(A-I)の任意の化合物がgp120受容体を阻害する能力を保持している限り、置換基は「非干渉性」として分類される。ウイルスプラークの減少またはgp120受容体を阻害する任意の化合物の能力を測定するための多くのアッセイが当技術分野で利用可能であり、いくつかは以下の実施例に例示されている。
「ヘテロ」という用語は、化学基または部分を表現するために使用される場合、炭素または水素ではない少なくとも1つのヘテロ原子、例えば、N、O及びSを有することを意味する。上記の基または部分のいずれか1つは、それが少なくとも1つのヘテロ原子を含有する場合、ヘテロと呼称され得る。例えば、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルケニルまたはヘテロシクロアルキニル基は、例えばN、O及びSから独立して選択される1つ以上のヘテロ原子をシクロアルキル、シクロアルケニルまたはシクロアルキニル基が有したものを指す。ヘテロシクロアルケニル基の一例はマレイミドである。例えば、ヘテロアリール基は、例えばN、O及びSから独立して選択される1つ以上のヘテロ原子を芳香族基が有したものを指す。本明細書に記載の基または部分の中の水素原子を置き換えた置換基の中に1つ以上のヘテロ原子が含まれていてもよい。例えば、任意選択的に置換されたヘテロアリール基は、ヘテロアリール基中の水素原子の1つが置換基(例えばメチル)で置換されている場合、置換基が1つ以上のヘテロ原子を含有していてもよい(例えばメタノール)。
「アシル」という用語は、本明細書中で使用される場合、構造:
「ハロ」または「ハロゲン」という用語は、本明細書中で使用される場合、任意のハロゲン原子、例えば、F、Cl、Br、またはIを指す。本明細書に記載の基または部分のいずれか1つは、それがハロアルキルのように少なくとも1つのハロゲン原子を含有する場合、「ハロ部分」と呼称され得る。
「ヒドロキシル」という用語は、本明細書中で使用される場合、-OH基を表す。
「オキソ」という用語は、本明細書中で使用される場合、原子と酸素原子との間に二重結合が存在する構造=Oを有する置換基を指す。
「カルボニル」という用語は、本明細書中で使用される場合、構造:
「チオカルボニル」という用語は、本明細書中で使用される場合、構造:
「ホスフェート」という用語は、本明細書中で使用される場合、構造:
「ホスホリル」という用語は、本明細書中で使用される場合、構造:
「スルホニル」という用語は、本明細書中で使用される場合、構造:
「イミノ」という用語は、本明細書中で使用される場合、構造:
「N保護基」という用語は、本明細書中で使用される場合、合成手順の間にアミノ基を望ましくない反応から守ることを意図した基を表す。一般的に使用されるN保護基は、Greene,“Protective Groups in Organic Synthesis,”5th Edition(John Wiley &Sons,New York,2014)の中で開示されており、参照によりこれを本明細書に援用する。N保護基としては、例えば、アシル、アリーロイル、及びカルバミル基、例えば、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ピバロイル、t-ブチルアセチル、2-クロロアセチル、2-ブロモアセチル、トリフルオロアセチル、トリクロロアセチル、フタロイル、o-ニトロフェノキシアセチル、α-クロロブチリル、ベンゾイル、カルボキシベンジル(CBz)、4-クロロベンゾイル、4-ブロモベンゾイル、4-ニトロベンゾイル、及び不斉補助剤、例えば保護されているまたは保護されていないD、LまたはD,L-アミノ酸残基、例えば、アラニン、ロイシン、フェニルアラニン;スルホニル含有基、例えばベンゼンスルホニル及びp-トルエンスルホニル;カルバメート形成基、例えば、ベンジルオキシカルボニル、p-クロロベンジルオキシカルボニル、p-メトキシベンジルオキシカルボニル、p-ニトロベンジルオキシカルボニル、2-ニトロベンジルオキシカルボニル、p-ブロモベンジルオキシカルボニル、3,4-ジメトキシベンジルオキシカルボニル、3,5-ジメトキシベンジルオキシカルボニル、2,4-ジメトキシベンジルオキシカルボニル、4-メトキシベンジルオキシカルボニル、2-ニトロ-4,5-ジメトキシベンジルオキシカルボニル、3,4,5-トリメトキシベンジルオキシカルボニル、1-(p-ビフェニリル)-1-メチルエトキシカルボニル、α,α-ジメチル-3,5-ジメトキシベンジルオキシカルボニル、ベンズヒドリルオキシカルボニル、t-ブチルオキシカルボニル(BOC)、ジイソプロピルメトキシカルボニル、イソプロピルオキシカルボニル、エトキシカルボニル、メトキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、2,2,2-トリクロロエトキシカルボニル、フェノキシカルボニル、4-ニトロフェノキシカルボニル、フルオレニル-9-メトキシカルボニル(Fmoc)、シクロペンチルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、シクロヘキシルオキシカルボニル、及びフェニルチオカルボニル;アルカリール基、例えば、ベンジル、トリフェニルメチル及びベンジルオキシメチル;ならびにシリル基、例えばトリメチルシリルが挙げられる。
「アミノ酸」という用語は、本明細書中で使用される場合、天然に存在するアミノ酸及び天然に存在しないアミノ酸を意味する。
「天然に存在するアミノ酸」という用語は、本明細書中で使用される場合、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、及びValを含むアミノ酸を意味する。
「天然に存在しないアミノ酸」という用語は、本明細書中で使用される場合、哺乳動物において天然に産生されることまたは見つかることがないアルファアミノ酸を意味する。天然に存在しないアミノ酸の例としては、D-アミノ酸;システインの硫黄原子に結合したアセチルアミノメチル基を有するアミノ酸;ペグ化アミノ酸;式NH2(CH2)nCOOH(式中、nは2~6である)のオメガアミノ酸、中性非極性アミノ酸、例えば、サルコシン、t-ブチルアラニン、t-ブチルグリシン、N-メチルイソロイシン、及びノルロイシン;オキシメチオニン;フェニルグリシン;シトルリン;メチオニンスルホキシド;システイン酸;オルニチン;ジアミノ酪酸;3-アミノアラニン;3-ヒドロキシ-D-プロリン;2,4-ジアミノ酪酸;2-アミノペンタン酸;2-アミノオクタン酸、2-カルボキシピペラジン;ピペラジン-2-カルボン酸、2-アミノ-4-フェニルブタン酸;3-(2-ナフチル)アラニン、及びヒドロキシプロリンが挙げられる。他のアミノ酸は、α-アミノ酪酸、α-アミノ-α-メチルブチレート、アミノシクロプロパン-カルボキシレート、アミノイソ酪酸、アミノノルボルニル-カルボキシレート、L-シクロヘキシルアラニン、シクロペンチルアラニン、L-N-メチルロイシン、L-N-メチルメチオニン、L-N-メチルノルバリン、L-N-メチルフェニルアラニン、L-N-メチルプロリン、L-N-メチルセリン、L-N-メチルトリプトファン、D-オルニチン、L-N-メチルエチルグリシン、L-ノルロイシン、α-メチル-アミノイソブチレート、α-メチルシクロヘキシルアラニン、D-α-メチルアラニン、D-α-メチルアルギニン、D-α-メチルアスパラギン、D-α-メチルアスパルテート、D-α-メチルシステイン、D-α-メチルグルタミン、D-α-メチルヒスチジン、D-α-メチルイソロイシン、D-α-メチルロイシン、D-α-メチルリジン、D-α-メチルメチオニン、D-α-メチルオルニチン、D-α-メチルフェニルアラニン、D-α-メチルプロリン、D-α-メチルセリン、D-N-メチルセリン、D-α-メチルスレオニン、D-α-メチルトリプトファン、D-α-メチルチロシン、D-α-メチルバリン、D-N-メチルアラニン、D-N-メチルアルギニン、D-N-メチルアスパラギン、D-N-メチルアスパルテート、D-N-メチルシステイン、D-N-メチルグルタミン、D-N-メチルグルタメート、D-N-メチルヒスチジン、D-N-メチルイソロイシン、D-N-メチルロイシン、D-N-メチルリジン、N-メチルシクロヘキシルアラニン、D-N-メチルオルニチン、N-メチルグリシン、N-メチルアミノイソブチレート、N-(1-メチルプロピル)グリシン、N-(2-メチルプロピル)グリシン、D-N-メチルトリプトファン、D-N-メチルチロシン、D-N-メチルバリン、γ-アミノ酪酸、L-t-ブチルグリシン、L-エチルグリシン、L-ホモフェニルアラニン、L-α-メチルアルギニン、L-α-メチルアスパルテート、L-α-メチルシステイン、L-α-メチルグルタミン、L-α-メチルヒスチジン、L-α-メチルイソロイシン、L-α-メチルロイシン、L-α-メチルメチオニン、L-α-メチルノルバリン、L-α-メチルフェニルアラニン、L-α-メチルセリン、L-α-メチルトリプトファン、L-α-メチルバリン、N-(N-(2,2-ジフェニルエチル)カルバミルメチルグリシン、1-カルボキシ-1-(2,2-ジフェニル-エチルアミノ)シクロプロパン、4-ヒドロキシプロリン、オルニチン、2-アミノベンゾイル(アントラニロイル)、D-シクロヘキシルアラニン、4-フェニル-フェニルアラニン、L-シトルリン、α-シクロヘキシルグリシン、L-1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン-3-カルボン酸、L-チアゾリジン-4-カルボン酸、L-ホモチロシン、L-2-フリルアラニン、L-ヒスチジン(3-メチル)、N-(3-グアニジノプロピル)グリシン、O-メチル-L-チロシン、O-グリカン-セリン、メタ-チロシン、ノル-チロシン、L-N,N’,N”-トリメチルリジン、ホモリジン、ノルリジン、N-グリカンアスパラギン、7-ヒドロキシ-1,2,3,4-テトラヒドロ-4-フルオロフェニルアラニン、4-メチルフェニルアラニン、ビス-(2-ピコリル)アミン、ペンタフルオロフェニルアラニン、インドリン-2-カルボン酸、2-アミノ安息香酸、3-アミノ-2-ナフトエ酸、不斉ジメチルアルギニン、L-テトラヒドロイソキノリン-1-カルボン酸、D-テトラヒドロイソキノリン-1-カルボン酸、1-アミノ-シクロヘキサン酢酸、D/L-アリルグリシン、4-アミノ安息香酸、1-アミノ-シクロブタンカルボン酸、2または3または4-アミノシクロヘキサンカルボン酸、1-アミノ-1-シクロペンタンカルボン酸、1-アミノインダン-1-カルボン酸、4-アミノ-ピロリジン-2-カルボン酸、2-アミノテトラリン-2-カルボン酸、アゼチジン-3-カルボン酸、4-ベンジル-ピロリジン-2-カルボン酸、tert-ブチルグリシン、b-(ベンゾチアゾリル-2-イル)-アラニン、b-シクロプロピルアラニン、5,5-ジメチル-1,3-チアゾリジン-4-カルボン酸、(2R,4S)4-ヒドロキシピペリジン-2-カルボン酸、(2S,4S)及び(2S,4R)-4-(2-ナフチルメトキシ)-ピロリジン-2-カルボン酸、(2S,4S)及び(2S,4R)4-フェノキシ-ピロリジン-2-カルボン酸、(2R,5S)及び(2S,5R)-5-フェニル-ピロリジン-2-カルボン酸、(2S,4S)-4-アミノ-1-ベンゾリル-ピロリジン-2-カルボン酸、t-ブチルアラニン、(2S,5R)-5-フェニル-ピロリジン-2-カルボン酸、1-アミノメチル-シクロヘキサン-酢酸、3,5-ビス-(2-アミノ)エトキシ-安息香酸、3,5-ジアミノ-安息香酸、2-メチルアミノ-安息香酸、N-メチルアントラニル酸、L-N-メチルアラニン、L-N-メチルアルギニン、L-N-メチルアスパラギン、L-N-メチルアスパラギン酸、L-N-メチルシステイン、L-N-メチルグルタミン、L-N-メチルグルタミン酸、L-N-メチルヒスチジン、L-N-メチルイソロイシン、L-N-メチルリジン、L-N-メチルノルロイシン、L-N-メチルオルニチン、L-N-メチルスレオニン、L-N-メチルチロシン、L-N-メチルバリン、L-N-メチル-t-ブチルグリシン、L-ノルバリン、α-メチル-γ-アミノブチレート、4,4’-ビフェニルアラニン、α-メチルシクロペンチルアラニン、α-メチル-α-ナフチルアラニン、α-メチルペニシラミン、N-(4-アミノブチル)グリシン、N-(2-アミノエチル)グリシン、N-(3-アミノプロピル)グリシン、N-アミノ-α-メチルブチレート、α-ナフチルアラニン、N-ベンジルグリシン、N-(2-カルバミルエチル)グリシン、N-(カルバミルメチル)グリシン、N-(2-カルボキシエチル)グリシン、N-(カルボキシメチル)グリシン、N-シクロブチルグリシン、N-シクロデシルグリシン、N-シクロヘプチルグリシン、N-シクロヘキシルグリシン、N-シクロデシルグリシン、N-シクロドデシルグリシン、N-シクロオクチルグリシン、N-シクロプロピルグリシン、N-シクロウンデシルグリシン、N-(2,2-ジフェニルエチル)グリシン、N-(3,3-ジフェニルプロピル)グリシン、N-(3-グアニジノプロピル)グリシン、N-(1-ヒドロキシエチル)グリシン、N-(ヒドロキシエチル))グリシン、N-(イミダゾリルエチル))グリシン、N-(3-インドリルエチル)グリシン、N-メチル-γ-アミノブチレート、D-N-メチルメチオニン、N-メチルシクロペンチルアラニン、D-N-メチルフェニルアラニン、D-N-メチルプロリン、D-N-メチルスレオニン、N-(1-メチルエチル)グリシン、N-メチル-ナフチルアラニン、N-メチルペニシラミン、N-(p-ヒドロキシフェニル)グリシン、N-(チオメチル)グリシン、ペニシラミン、L-α-メチルアラニン、L-α-メチルアスパラギン、L-α-メチル-t-ブチルグリシン、L-メチルエチルグリシン、L-α-メチルグルタメート、L-α-メチルホモフェニルアラニン、N-(2-メチルチオエチル)グリシン、L-α-メチルリジン、L-α-メチルノルロイシン、L-α-メチルオルニチン、L-α-メチルプロリン、L-α-メチルスレオニン、L-α-メチルチロシン、L-N-メチル-ホモフェニルアラニン、N-(N-(3,3-ジフェニルプロピル)カルバミルメチルグリシン、L-ピログルタミン酸、D-ピログルタミン酸、O-メチル-L-セリン、O-メチル-L-ホモセリン、5-ヒドロキシリジン、α-カルボキシグルタメート、フェニルグリシン、L-ピペコリン酸(ホモプロリン)、L-ホモロイシン、L-リジン(ジメチル)、L-2-ナフチルアラニン、L-ジメチルドパまたはL-ジメトキシ-フェニルアラニン、L-3-ピリジルアラニン、L-ヒスチジン(ベンゾイルオキシメチル)、N-シクロヘプチルグリシン、L-ジフェニルアラニン、O-メチル-L-ホモチロシン、L-β-ホモリジン、O-グリカン-スレオニン、オルト-チロシン、L-N,N’-ジメチルリジン、L-ホモアルギニン、ネオトリプトファン、3-ベンゾチエニルアラニン、イソキノリン-3-カルボン酸、ジアミノプロピオン酸、ホモシステイン、3,4-ジメトキシフェニルアラニン、4-クロロフェニルアラニン、L-1,2,3,4-テトラヒドロノルハルマン-3-カルボン酸、アダマンチルアラニンアラニン、対称性ジメチルアルギニン、3-カルボキシチオモルホリン、D-1,2,3,4-テトラヒドロノルハルマン-3-カルボン酸、3-アミノ安息香酸、3-アミノ-1-カルボキシメチル-ピリジン-2-オン、1-アミノ-1-シクロヘキサンカルボン酸、2-アミノシクロペンタンカルボン酸、1-アミノ-1-シクロプロパンカルボン酸、2-アミノインダン-2-カルボン酸、4-アミノ-テトラヒドロチオピラン-4-カルボン酸、アゼチジン-2-カルボン酸、b-(ベンゾチアゾール-2-イル)-アラニン、ネオペンチルグリシン、2-カルボキシメチルピペリジン、b-シクロブチルアラニン、アリルグリシン、ジアミノプロピオン酸、ホモ-シクロヘキシルアラニン、(2S,4R)-4-ヒドロキシピペリジン-2-カルボン酸、オクタヒドロインドール-2-カルボン酸、(2S,4R)及び(2S,4R)-4-(2-ナフチル)、ピロリジン-2-カルボン酸、ニペコチン酸、(2S,4R)及び(2S,4S)-4-(4-フェニルベンジル)ピロリジン-2-カルボン酸、(3S)-1-ピロリジン-3-カルボン酸、(2S,4S)-4-トリチルメルカプト-ピロリジン-2-カルボン酸、(2S,4S)-4-メルカプトプロリン、t-ブチルグリシン、N,N-ビス(3-アミノプロピル)グリシン、1-アミノ-シクロヘキサン-1-カルボン酸、N-メルカプトエチルグリシン、ならびにセレノシステインである。いくつかの実施形態では、アミノ酸残基は荷電性または極性であり得る。荷電アミノ酸としては、アラニン、リジン、アスパラギン酸もしくはグルタミン酸、またはその天然に存在しない類縁体が挙げられる。極性アミノ酸としては、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、セリン、スレオニン、チロシン、メチオニンもしくはトリプトファン、またはその天然に存在しない類縁体が挙げられる。特に、いくつかの実施形態ではアミノ酸中の末端アミノ基がアミド基またはカルバメート基であり得ることが企図される。
本明細書中で使用する場合、「同一性パーセント(%)」という用語は、配列を整列させ必要に応じてギャップを導入して最大の同一性パーセントを得た後に基準配列のアミノ酸残基と同一となっている、候補配列、例えばFcIgG、またはその断片のアミノ酸残基の百分率を指す(つまり、ギャップは最適なアラインメントのために候補及び基準配列の片方または両方に導入され得、非相同配列は比較目的のために無視され得る)。同一性パーセントを決定する目的のためのアラインメントは、当技術分野の様々な方法によって、例えば公的に入手可能であるコンピュータソフトウェア、例えば、BLAST、ALIGNまたはMegalign(DNASTAR)ソフトウェアを使用して、成し遂げられ得る。当業者であれば、比較する配列の完全長にわたって最大限のアラインメントを成し遂げるのに必要な何らかのアルゴリズムを含めた、アラインメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。いくつかの実施形態では、所与の基準配列に対する、それとの、またはそれと対比したときの、所与の候補配列(あるいは、所与の基準配列に対する、それとの、またはそれと対比したときの特定のアミノ酸配列同一性パーセントを有するまたは含む所与の候補配列、とも表現され得る)のアミノ酸配列同一性パーセントは、以下:
100×(A/Bの分数)
のとおりに計算され、式中、Aは、候補配列と基準配列とのアラインメントにおいて同一であると評価されたアミノ酸残基の数であり、Bは、基準配列中のアミノ酸残基の総数である。候補配列の長さが基準配列の長さと等しくないいくつかの実施形態では、基準配列に対する候補配列のアミノ酸配列同一性パーセントは、候補配列に対する基準配列のアミノ酸配列同一性パーセントと等しくはならないであろう。
100×(A/Bの分数)
のとおりに計算され、式中、Aは、候補配列と基準配列とのアラインメントにおいて同一であると評価されたアミノ酸残基の数であり、Bは、基準配列中のアミノ酸残基の総数である。候補配列の長さが基準配列の長さと等しくないいくつかの実施形態では、基準配列に対する候補配列のアミノ酸配列同一性パーセントは、候補配列に対する基準配列のアミノ酸配列同一性パーセントと等しくはならないであろう。
2つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列は、上記のように最大限の一致のためのアラインメントを行ったときに2つの配列の中のヌクレオチドまたはアミノ酸の配列が同じである場合に、「同一である」といわれている。2つの配列の比較は通常、配列が類似している局所領域の同定及び比較のために配列を比較枠にわたって比較することによって実施される。本明細書中で使用する場合、「比較枠」は、配列と同じ連続位置数の基準配列との比較が2つの配列の最適なアラインメントの後に行われ得る、少なくとも約15連続位置、約20連続位置、約25連続位置の、またはそれより大きな(例えば、約30~約75連続位置、または約40~約50連続位置の)セグメントを指す。
「治療すること(treating)」または「治療すること(to treat)」という用語は、本明細書中で使用される場合、対象におけるウイルス感染症(例えばHIV感染症などのウイルス感染症)の治療処置を指す。いくつかの実施形態では、治療処置は、ウイルス感染症の進行を減速させるもの、対象の転帰を改善するもの、及び/または感染症を排除するものであり得る。いくつかの実施形態では、対象におけるウイルス感染症の治療処置は、治療処置の非存在下でのウイルス感染症の状態及び/または症状と比較して、ウイルス感染症に関連する1つ以上の症候または症状を緩和または改善するもの、ウイルス感染症の程度を弱めるもの、ウイルス感染症の状態を安定させる(つまり悪化させない)もの、ウイルス感染症の拡散を防止するもの、及び/またはウイルス感染症の進行を遅らせるもしくは減速させるものであり得る。
「Tの平均値」という用語は、本明細書中で使用される場合、複合体の集団の中でFcドメインまたはアルブミンタンパク質に複合しているgp120結合剤の単量体またはgp120結合剤の二量体の平均数を指す。いくつかの実施形態では、複合体の集団の中で、Fcドメイン単量体に複合しているgp120結合剤の単量体またはgp120結合剤の二量体の平均数は1~20であり得る(例えば、Tの平均値は1~2、1~3、1~4、1~5、5~10、10~15、または15~20である)。いくつかの実施形態では、Tの平均値は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20である。
「対象」という用語は、本明細書中で使用される場合、ヒトもしくは非ヒト霊長類または他の哺乳動物、例えば、限定されないが、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、シチメンチョウ、ヤギ、魚類、サル、ニワトリ、ラット、マウス、またはヒツジであり得る。
「治療的有効量」という用語は、本明細書中で使用される場合、対象において所望の効果をもたらす上で、または本明細書に記載の症状もしくは障害(例えばウイルス感染症、例えばHIV感染症)を有する対象を治療する上で有効である量、例えば薬学的用量を指す。本明細書において「治療的有効量」が、1回分以上の用量または任意の投薬量もしくは経路で及び/または単独でもしくは他の治療剤(例えば本明細書に記載の抗ウイルス剤)との組合せで所望の治療的及び/または予防的効果をもたらす量と解釈され得ることも、理解されるべきである。例えば、ウイルス感染症の治療のために使用される本明細書に記載の複合体(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの複合体)を投与することに関して、複合体の有効量は、例えば、複合体の投与なしで得られる応答と比較してウイルス感染症の進行を予防する、減速させるまたは逆転させるのに十分な量である。
本明細書中で使用する場合、「医薬組成物」という用語は、少なくとも1つの有効成分(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの複合体)、ならびに有効成分を投与方法に適したものにすることを可能にする1つ以上の賦形剤及び希釈剤を含有する、医療用または医薬製剤を指す。本開示の医薬組成物は、本明細書に記載の複合体(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの複合体)に適合する薬学的に許容される成分を含む。
本明細書中で使用する場合、「薬学的に許容される担体」という用語は、医薬組成物中の賦形剤または希釈剤を指す。例えば、薬学的に許容される担体は、活性な複合体(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの複合体)を懸濁または溶解させることができるビヒクルであり得る。薬学的に許容される担体は、製剤の他成分との相溶性を有しレシピエントに有害でないものでなければならない。本開示において、薬学的に許容される担体は、本明細書に記載の複合体に十分な薬学的安定性を提供するものでなければならない。担体の性質は投与様式によって様々である。例えば、経口投与のためには固体担体が好ましく、静脈内投与のためには水溶液担体(例えば、WFI、及び/または緩衝液)が一般的に使用される。
「薬学的に許容される塩」は、本明細書中で使用される場合、健全な医学的判断の範囲内で過度の毒性、刺激及び/またはアレルギー反応を伴わずに本明細書に記載の方法における使用に適する、本明細書に記載の複合体(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの複合体)の塩を表す。薬学的に許容される塩は当技術分野でよく知られている。例えば、薬学的に許容される塩は、Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use(Eds.P.H.Stahl and C.G.Wermuth),Wiley-VCH,2008に記載されている。塩は、本明細書に記載の複合体の最終的な単離及び精製の間に系中で調製され得るか、または別々に、遊離塩基基を好適な有機酸と反応させることによって調製され得る。
本明細書中で使用される「gp120結合剤」という用語は、HIV gp120糖タンパク質に結合する小分子(例えば、テムサビル、BMS-818251、DMJ-II-121、BNM-IV-147またはその類似体)などの部分を指す。ウイルスのgp120糖タンパク質を遮断することにより、gp120結合剤は、ウイルスが宿主CD4+T細胞に接着して宿主免疫細胞に侵入することを防止する。本発明のgp120結合剤には、式(A-I)によって記述される化合物、好ましくはテムサビル、BMS-818251、DMJ-II-212、BNM-IV-147、またはその類似体が含まれる。
「約」という用語は、本明細書中で使用される場合、±5%の偏差を表す。例えば、約10%は9.5%~10.5%を意味する。
値の範囲に示されるいかなる値も、上限と下限の両方、ならびに上限及び下限の範囲の中に入っている任意の値を含む。
本明細書中で使用される「(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)」という用語は、(1)、(2)、(D-I)、(D-II)、(D-III)、(D-III-1)、(D-III-2)、(D-III-3)、(D-III-4)、(D-III-5)、(D-III-6)、(D-IV)、(D-IV-1)、(D-IV-2)、(D-IV-3)、(D-IV-4)、(D-IV-5)、(D-IV-6)、(D-V)、(D-V-1)、(D-V-2)、(D-V-3)、(D-V-4)、(D-V-5)、(D-V-6)、(D-VI)、(D-VI-1)、(D-VI-2)、(D-VI-3)、(D-VI-4)、(D-VI-5)、(D-VI-6)、(D-VII)、(D-VIII)、(D-VIII-1)、(D-IX)、(D-IX-1)、(D-X)、(D-X-1)、(D-XI)、(D-XI-1)、(D-XII)、(D-XII-1)、(D-XII-2)、(D-XIII)、(D-XIII-1)、(D-XIII-2)、(D-XIV)、(D-XIV-1)、(D-XIV-2)、(D-XIV-3)、(D-XIV-4)、(D-XIV-5)、(D-XV)、(D-XV-1)、(D-XV-2)、(D-XV-3)、(D-XV-4)、(D-XV-5)、(D-XVI)、(D-XVI-1)、(D-XVI-2)、(D-XVI-3)、(D-XVI-4)、(D-XVI-5)、(D-XV)、(D-XVII-1)、(D-XVII-2)、(D-XVII-3)、(D-XVII-4)、(D-XVII-5)、(M-I)、(M-II)、(M-III)、(M-III-1)、(M-III-2)、(M-III-3)、(M-III-4)、(M-III-5)、(M-III-6)、(M-IV)、(M-IV-1)、(M-IV-2)、(M-IV-3)、(M-IV-4)、(M-IV-5)、(M-IV-6)、(M-V)、(M-V-1)、(M-V-2)、(M-V-3)、(M-V-4)、(M-V-5)、(M-V-6)、(M-VI)、(M-VI-1)、(M-VI-2)、(M-VI-3)、(M-VI-4)、(M-VI-5)、(M-VI-6)、(M-VII)、(M-VIII)、(M-VIII-1)、(M-IX)、(M-IX-1)、(M-X)、(M-X-1)、(M-XI)、または(M-XI-1)、(M-XII)、(M-XII-1)、(M-XII-2)、(M-XIII)、(M-XIII-1)、(M-XIII-2)、(M-XIV)、(M-XIV-1)、(M-XIV-2)、(M-XIV-3)、(M-XIV-4)、(M-XIV-5)、(M-XV)、(M-XV-1)、(M-XV-2)、(M-XV-3)、(M-XV-4)、(M-XV-5)、(M-XVI)、(M-XVI-1)、(M-XVI-2)、(M-XVI-3)、(M-XVI-4)、(M-XVI-5)、(M-XV)、(M-XVII-1)、(M-XVII-2)、(M-XVII-3)、(M-XVII-4)、(M-XVII-5)のいずれか1つの式を表す。
本明細書に記載の複合体の他の特徴及び利点は以下の詳細な説明及び特許請求の範囲から明らかとなろう。
本開示は、ウイルス感染症(例えば、ヒト免疫不全ウイルス感染症)の治療のための複合体、組成物、及び方法を特徴とする。本明細書に開示の複合体は、Fc単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質、またはアルブミンタンパク質結合ペプチドに複合させたウイルスgp120結合剤(例えば、テムサビル、BMS-818251、DMJ-II-121、BNM-IV-147、またはその類似体)の単量体または二量体を含む。複合体中のgp120結合剤(例えば、テムサビル、BMS-818251、DMJ-II-121、BNM-IV-147、またはその類似体)は、ウイルス粒子の表面にあるgp120受容体を標的とする。複合体中のFc単量体またはFcドメインは、免疫細胞、例えば、好中球のFcγR(例えば、FcRn、FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIc、FcγRIIIa、及びFcγRIIIb)に結合して、食作用及びエフェクター機能、例えば、抗体依存性細胞傷害(ADCC)を活性化し、したがって免疫細胞によるウイルス粒子の貪食と破壊を生じさせ、複合体の抗ウイルス活性をさらに増強する。アルブミンまたはアルブミン結合ペプチドは、例えば、リサイクル中の新生児Fc受容体へのアルブミンの結合によって、複合体の半減期を延長し得る。そのような組成物は、ウイルス増殖の阻害方法、及びウイルス感染症、例えば、HIV-1またはHIV-2によって引き起こされるウイルス感染症の治療方法において有用である。
I.ウイルス感染症
本明細書に記載の化合物及び医薬組成物(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII))は、ウイルス感染症(例えばHIV-1またはHIV-2ウイルス感染症)を治療するために使用され得る。
本明細書に記載の化合物及び医薬組成物(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII))は、ウイルス感染症(例えばHIV-1またはHIV-2ウイルス感染症)を治療するために使用され得る。
ウイルス感染症とは、宿主生物(例えばヒト対象)における病原となるウイルス(例えばヒト免疫不全ウイルス)の増殖を意味する。ウイルス感染症は、ウイルス集団(複数可)の存在が宿主の体に損傷を与えている任意の状況であり得る。したがって、過剰な量のウイルス集団が対象の体の中もしくは上に存在する場合、またはウイルス集団(複数可)の存在が対象の細胞もしくは他の組織に損傷を与えている場合、対象はウイルス感染症に罹患している。
ヒト免疫不全ウイルス(HIV)は、HIV感染及び時間の経過とともに後天性免疫不全症候群(AIDS)を引き起こすレンチウイルス(レトロウイルスのサブグループ)の2つの種である。AIDSは、免疫系の進行性の障害が生命を脅かす日和見感染症やがんの繁殖を可能にするヒトにおける病態である。治療を行わない場合、HIV感染後の平均生存期間は、HIVのサブタイプにもよるが、9~11年と推定される。ほとんどの場合、HIVは性感染症であり、血液、カウパー腺液、***、及び膣液との接触または移行によって発症する。
2種類のHIV:HIV-1及びHIV-2が特徴決定されている。HIVは、ヒトの免疫系の重要な細胞、例えば、ヘルパーT細胞(特にCD4+T細胞)、マクロファージ、及び樹状細胞に感染する。HIV感染症は、不稔感染T細胞のピロトーシス、非感染バイスタンダー細胞のアポトーシス、感染細胞の直接ウイルス殺傷、及び感染細胞を認識するCD8+細胞傷害性リンパ球による感染CD4+T細胞の殺傷を含む、多くのメカニズムを通じて低レベルのCD4+T細胞を生じさせる。CD4+T細胞数が臨界レベルを下回ると、細胞性免疫が失われ、体は日和見感染症にかかりやすくなり、AIDSの発症につながる。
II.本開示の複合体
本明細書において、ウイルス感染症(例えば、HIV感染症)の治療に有用な合成複合体を提供する。本明細書中で開示される複合体は、1つ以上の単量体gp120結合剤または2つのgp120結合剤の1つ以上の二量体(例えば、テムサビル、BMS-818251、DMJ-II-121、BNM-IV-147、またはその類似体から選択されるgp120結合剤)と複合したFcドメイン単量体、Fcドメイン、またはアルブミンタンパク質を含む。2つのgp120結合剤の二量体は、gp120結合剤(例えば、式(A-I)または(A-II)の第1のgp120結合剤)及び第2のgp120結合剤(例えば、式(A-I)または(A-II)の第2のgp120結合剤)を含む。第1及び第2のgp120結合剤は、リンカーを介して互いに連結されている。
本明細書において、ウイルス感染症(例えば、HIV感染症)の治療に有用な合成複合体を提供する。本明細書中で開示される複合体は、1つ以上の単量体gp120結合剤または2つのgp120結合剤の1つ以上の二量体(例えば、テムサビル、BMS-818251、DMJ-II-121、BNM-IV-147、またはその類似体から選択されるgp120結合剤)と複合したFcドメイン単量体、Fcドメイン、またはアルブミンタンパク質を含む。2つのgp120結合剤の二量体は、gp120結合剤(例えば、式(A-I)または(A-II)の第1のgp120結合剤)及び第2のgp120結合剤(例えば、式(A-I)または(A-II)の第2のgp120結合剤)を含む。第1及び第2のgp120結合剤は、リンカーを介して互いに連結されている。
理論に拘泥するものではないが、いくつかの態様では、本明細書に記載の複合体は、複合体中のgp120結合剤の部分と、ウイルス粒子表面のタンパク質との相互作用を介してウイルス粒子表面に結合する(例えば、ヒト免疫不全ウイルス粒子上の表面上のウイルスgp120受容体に結合する)。gp120結合剤は、特にヘルパーT細胞上のCD4受容体と結合する外被糖タンパク質gp120を破壊する。CD4に結合すると、gp120とgp41のコンフォメーション変化のカスケードが開始され、ウイルス膜と宿主細胞膜との融合が生じ、ウイルスが拡散できるようになる。
本発明の複合体は、Fcドメイン、Fc単量体、またはFc結合ペプチドに複合したgp120結合剤単量体及び二量体を含む。本明細書に記載の複合体中のFcドメインは、免疫細胞上のFcγR(例えば、FcRn、FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIc、FcγRIIIa、及びFcγRIIIb)に結合する。本明細書に記載の複合体中のFcドメインが免疫細胞上のFcγRに結合すると、食作用及びエフェクター機能、例えば、抗体依存性細胞傷害(ADCC)が活性化され、免疫細胞によるウイルス粒子の貪食及び破壊が生じ、複合体の抗ウイルス活性をさらに高める。
本発明の複合体は、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドと複合したgp120結合剤単量体及び二量体を含む。アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドは、例えば、リサイクル中の新生児Fc受容体へのアルブミンの結合によって、複合体の半減期を延長し得る。
本明細書中で提供される複合体は、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれかによって記述される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体は、Fcドメインまたはアルブミンタンパク質と複合したgp120結合剤の1つ以上の単量体を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体は、Fcドメイン単量体、Fcドメイン、またはアルブミンタンパク質と複合したgp120結合剤の1つ以上の二量体を含む。いくつかの実施形態では、nが2である場合、E(Fcドメイン単量体)は二量体化してFcドメインを形成する。
本明細書に記載の複合体は、当技術分野の利用可能な化学合成技術を用いて合成され得る。官能基が複合体形成で利用可能でない場合には、分子を当技術分野でよく知られている従来の化学合成技術を用いて誘導体化してもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体は1つ以上のキラル中心を含有する。複合体は、単離された各立体異性体、及びラセミ混合物を含めた様々な度合いのキラル純度の立体異性体の混合物を含む。それはまた、形成され得る様々なジアステレオマー、エナンチオマー及び互変異性体も包含する。
gp120結合剤
本明細書に記載の複合体の成分は、HIV gp120結合剤部分である。gp120結合剤は、特にヘルパーT細胞上でCD4受容体と結合する外被糖タンパク質であるgp120を破壊する。CD4に結合すると、gp120とgp41のコンフォメーション変化のカスケードが開始され、ウイルス膜と宿主細胞膜との融合が生じ、ウイルスが拡散できるようになる。gp120結合剤の例として、テムサビル、BMS-818251、DMJ-II-121、及びBNM-IV-147が挙げられる。さらに、テムサビル、BMS-818251、DMJ-II-121、及びBNM-IV-147の誘導体、例えば、文献に記載されている誘導体は、gp120結合剤活性を有し、本明細書の化合物のgp120阻害剤部分として有用である(例えば、Lu et al. Curr.Top.Med.Chem.16(10):1074-1090を参照されたい)。
本明細書に記載の複合体の成分は、HIV gp120結合剤部分である。gp120結合剤は、特にヘルパーT細胞上でCD4受容体と結合する外被糖タンパク質であるgp120を破壊する。CD4に結合すると、gp120とgp41のコンフォメーション変化のカスケードが開始され、ウイルス膜と宿主細胞膜との融合が生じ、ウイルスが拡散できるようになる。gp120結合剤の例として、テムサビル、BMS-818251、DMJ-II-121、及びBNM-IV-147が挙げられる。さらに、テムサビル、BMS-818251、DMJ-II-121、及びBNM-IV-147の誘導体、例えば、文献に記載されている誘導体は、gp120結合剤活性を有し、本明細書の化合物のgp120阻害剤部分として有用である(例えば、Lu et al. Curr.Top.Med.Chem.16(10):1074-1090を参照されたい)。
本明細書に記載の複合体は、2つのタイプに分けられる:(1)Fcドメイン単量体、Fcドメイン、またはアルブミンタンパク質と複合したgp120結合剤の1つ以上の二量体及び(2)Fcドメイン単量体、Fcドメイン、またはアルブミンタンパク質と複合したgp120結合剤の1つ以上の単量体。gp120結合剤の二量体は、リンカー、例えば、本明細書に記載のリンカーを介して互いに連結されている。
本発明のウイルスgp120結合剤は、テムサビル、BMS-818251、DMJ-II-121、BNM-IV-147、及びその類似体、例えば、式(A-I)及び(A-II):
R1、R2、R3は、各々独立して、H、OH、ハロゲン、ニトリル、ニトロ、任意選択的に置換されたアミン、任意選択的に置換されたスルフヒドリル、任意選択的に置換されたカルボキシル、任意選択的に置換されたC1-C20アルキル、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニル、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニル、任意選択的に置換されたC5-C20アリール、任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリール、及び任意選択的に置換されたC1-C20アルコキシから選択され;
R4は、任意選択的に置換されたC1-C20アルキル、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリール、及び結合から選択され;
R5は、Hまたは任意選択的に置換されたC1-C6アルキルから選択され;
R6は、任意選択的に置換されたC1-C20アルキル、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、及び任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリールから選択され;
R7及びYは、各々独立して、
各R8は、独立して、H、任意選択的に置換されたC1-C20アルキル、任意選択的に置換されたC1-C20アルキレン、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、及び任意選択的に置換されたC2-C15ヘテロアリールから選択され;
各R9は、独立して、任意選択的に置換されたC1-C20アルキレン、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、及び任意選択的に置換されたC2-C15ヘテロアリールから選択され;
xは、1または2であり;
kは、0、1、2、3、4、または5であり;
Arは、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、及び任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリールからなる群から選択される。上記の好ましい実施形態では、xは2である。
好ましくは、gp120阻害剤は、テムサビル、BMS-818251、DMJ-II-121、またはBNM-IV-147:
Fcドメインまたはアルブミンタンパク質に連結したgp120結合剤の二量体の複合体
本明細書に記載の複合体は、gp120結合剤の1つ以上の二量体に共有結合したFcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、及びアルブミンタンパク質、またはアルブミンタンパク質結合ペプチドを含む。2つのgp120結合剤の二量体は、第1のgp120結合剤(例えば、式(A-I)または(A-II)の第1のウイルスgp120結合剤)及び第2のgp120結合剤(例えば、式(A-I)または(A-II)の第2のウイルスgp120結合剤)を含む。第1及び第2のgp120結合剤は、リンカー、例えば、本明細書に記載のリンカーを介して互いに連結されている。gp120結合剤の二量体のいくつかの実施形態では、第1及び第2のgp120結合剤は同じである。いくつかの実施形態では、第1及び第2のgp120結合剤は異なる。
本明細書に記載の複合体は、gp120結合剤の1つ以上の二量体に共有結合したFcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、及びアルブミンタンパク質、またはアルブミンタンパク質結合ペプチドを含む。2つのgp120結合剤の二量体は、第1のgp120結合剤(例えば、式(A-I)または(A-II)の第1のウイルスgp120結合剤)及び第2のgp120結合剤(例えば、式(A-I)または(A-II)の第2のウイルスgp120結合剤)を含む。第1及び第2のgp120結合剤は、リンカー、例えば、本明細書に記載のリンカーを介して互いに連結されている。gp120結合剤の二量体のいくつかの実施形態では、第1及び第2のgp120結合剤は同じである。いくつかの実施形態では、第1及び第2のgp120結合剤は異なる。
いくつかの実施形態では、Tが1より大きい場合(例えば、Tが、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)場合、各A1-L-A2は、独立して選択され得る(例えば、本明細書に記載のA1-L-A2構造のいずれかから独立して選択される)。いくつかの実施形態では、Eを、2、3、4、5、6、7、8、9、10、またはそれ以上の異なるA1-L-A2部分と複合させてもよい。いくつかの実施形態では、Eを、第1のA1-L-A2部分、及び第2のA1-L-A2部分と複合させる。いくつかの実施形態では、第1のA1-L-A2部分及び第2のA1-L-A2部分のA1及びA2の各々は、式(A-I)及び(A-II):
上記の好ましい実施形態では、xは2である。
いくつかの実施形態では、第1のA1-L-A2部分はEのリジン残基(例えばEの表面露出リジン残基の窒素原子)と特異的に複合しており、第2のA1-L-A2部分はEのシステイン残基(例えばEの表面露出システイン残基の硫黄原子)と特異的に複合している。いくつかの実施形態では、第1のA1-L-A2部分はEのシステイン残基(例えばEの表面露出システイン残基の硫黄原子)と特異的に複合しており、第2のA1-L-A2部分はEのリジン残基(例えばEの表面露出リジン残基の窒素原子)と特異的に複合している。
いくつかの実施形態では、本開示は、以下の式によって記述される複合体またはその薬学的に許容される塩を提供する:
本明細書に記載の複合体において、Eに連結された波線は、Fcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドにgp120結合剤の二量体が1つ以上(例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20個)結合し得ることを表す。いくつかの実施形態では、nが1である場合、Fcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドにgp120結合剤の二量体が1つ以上(例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9または10個)結合し得る。いくつかの実施形態では、nが2である場合、Fcドメインにgp120結合剤の二量体が1つ以上(例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20個)結合し得る。本明細書に記載の複合体の中の波線は、1つ以上のgp120結合剤の二量体とFcドメイン単量体、Fcドメイン、またはアルブミンタンパク質の中の原子との間の単一の結合とみなされるべきでない。いくつかの実施形態では、Tが1である場合、Fcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドの中の原子にgp120結合剤の二量体が1つ結合し得る。いくつかの実施形態では、Tが2である場合、Fcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドの中の原子にgp120結合剤の二量体が2つ結合し得る。
本明細書中でさらに説明されるように、本明細書に記載の複合体の中のリンカー(例えばLまたはL’)は分岐構造であってもよい。本明細書中でさらに説明されるように、本明細書に記載の複合体の中のリンカー(例えばLまたはL’)は、多価構造、例えば、それぞれ2本または3本のアームを有する二価または三価構造であってもよい。リンカーが3本のアームを有するときのいくつかの実施形態では、アームのうち2本は第1及び第2のgp120結合剤に結合し得、第3のアームはFcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドに結合し得る。
上記式で表される、1つ以上のgp120結合剤の二量体に共有結合で連結されたFcドメインを有する複合体において、nが2である場合、2つのFcドメイン単量体(各Fcドメイン単量体はEで表される)が二量体化してFcドメインを形成する。
Fcドメイン単量体、Fcドメイン、またはアルブミンタンパク質にgp120結合剤の単量体を連結した複合体
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体は、1つ以上のgp120結合剤の単量体に共有結合した、Fcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドを含む。Fcドメイン単量体またはアルブミンタンパク質と、1つ以上のgp120結合剤の単量体との複合体は、リンカー、例えば、本明細書に記載のリンカーのいずれかを介してgp120結合剤の単量体の各々にFcドメイン単量体、Fcドメイン、またはアルブミンタンパク質を連結することによって形成され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体は、1つ以上のgp120結合剤の単量体に共有結合した、Fcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドを含む。Fcドメイン単量体またはアルブミンタンパク質と、1つ以上のgp120結合剤の単量体との複合体は、リンカー、例えば、本明細書に記載のリンカーのいずれかを介してgp120結合剤の単量体の各々にFcドメイン単量体、Fcドメイン、またはアルブミンタンパク質を連結することによって形成され得る。
本明細書に記載の1つ以上のgp120結合剤の単量体に共有結合で連結されたFcドメインまたはアルブミンタンパク質を有する複合体において、Eに連結された波線は、Fcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドにgp120結合剤の単量体が1つ以上(例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20個)結合し得ることを表す。いくつかの実施形態では、nが1である場合、Fcドメイン単量体、Fcドメイン、またはアルブミンタンパク質にgp120結合剤の単量体が1つ以上(例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9または10個)結合し得る。いくつかの実施形態では、nが2である場合、Fcドメインにgp120結合剤の単量体が1つ以上(例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20個)結合し得る。本明細書に記載の複合体の中の波線は、1つ以上のgp120結合剤の単量体とFcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドの中の原子との間の単一の結合とみなされるべきでない。いくつかの実施形態では、Tが1である場合、Fcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドの中の原子にgp120結合剤の単量体が1つ結合し得る。いくつかの実施形態では、Tが2である場合、Fcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドの中の原子にgp120結合剤の単量体が2つ結合し得る。
いくつかの実施形態では、Tが1より大きい(例えば、Tが、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)場合、各A1-Lは、独立して選択され得る(例えば、本明細書に記載のA1-L構造のいずれかから独立して選択される)。いくつかの実施形態では、Eを、2、3、4、5、6、7、8、9、10個またはそれ以上の異なるA1-L部分と複合させてもよい。いくつかの実施形態では、Eを、第1のA1-L部分及び第2のA1-L部分と複合させる。いくつかの実施形態では、第1のA1-L部分及び第2のA1-L部分の各々のA1は、独立して、式(A-I)または(A-II):
好ましい実施形態では、xは2である。
いくつかの実施形態では、第1のA1-L部分は、Eのリジン残基(例えば、Eの表面露出リジン残基の窒素原子)と特異的に複合しており、第2のA1-L部分は、Eのシステイン残基(例えば、Eの表面露出システイン残基の硫黄原子)と特異的に複合している。いくつかの実施形態では、第1のA1-L部分は、Eのシステイン残基(例えば、Eの表面露出システイン残基の硫黄原子)と特異的に複合しており、第2のA1-L部分は、Eのリジン残基(例えば、Eの表面露出リジン残基の窒素原子)と特異的に複合している。
本明細書にさらに記載されるとおり、本明細書に記載の1つ以上のgp120結合剤の単量体に共有結合で連結されたFcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドを有する複合体の中のリンカー(例えばLまたはL’)は、2本のアームを有する二価構造であり得る。二価リンカー中の片方のアームはgp120結合剤の単量体に結合し得、もう片方のアームは、Fcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドに結合し得る。
いくつかの実施形態では、本明細書中で提供される1つ以上のgp120結合剤の単量体に共有結合で連結されたFcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドを含有する複合体は、以下の式のいずれか1つによって記述される:
上記の式で表されるように、gp120結合剤の1つ以上の単量体に共有結合したFcドメインを有する複合体では、nが2の場合、2つのFcドメイン単量体(各Fcドメイン単量体はEで表される)が二量体化してFcドメインを形成する。
III.Fcドメイン単量体及びFcドメイン
Fcドメイン単量体には、ヒンジドメイン、CH2抗体定常ドメイン、及びCH3抗体定常ドメインが含まれる。Fcドメイン単量体は、免疫グロブリン抗体アイソタイプIgG、IgE、IgM、IgA、またはIgDのFcドメイン単量体であり得る。Fcドメイン単量体はまた、任意の免疫グロブリン抗体アイソタイプ(例えば、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3、またはIgG4)のFcドメイン単量体であり得る。Fcドメイン単量体は、任意の免疫グロブリン抗体アロタイプ(例えば、IGHG1*01(すなわち、G1m(za))、IGHG1*07(すなわち、G1m(zax))、IGHG1*04(すなわち、G1m(zav))、IGHG1*03(G1m(f))、IGHG1*08(すなわち、G1m(fa))、IGHG2*01、IGHG2*06、IGHG2*02、IGHG3*01、IGHG3*05、IGHG3*10、IGHG3*04、IGHG3*09、IGHG3*11、IGHG3*12、IGHG3*06、IGHG3*07、IGHG3*08、IGHG3*13、IGHG3*03、IGHG3*14、IGHG3*15、IGHG3*16、IGHG3*17、IGHG3*18、IGHG3*19、IGHG2*04、IGHG4*01、IGHG4*03、またはIGHG4*02)(例えば、Vidarsson et al. IgG subclasses and allotypes:from structure to effector function. Frontiers in Immunology.5(520):1-17(2014)に記載されているような)のFcドメイン単量体であり得る。Fcドメイン単量体はまた、任意の種、例えば、ヒト、ネズミ、またはマウスのFcドメイン単量体であり得る。Fcドメイン単量体の二量体は、白血球の表面に位置する受容体であるFc受容体に結合することができるFcドメインである。
Fcドメイン単量体には、ヒンジドメイン、CH2抗体定常ドメイン、及びCH3抗体定常ドメインが含まれる。Fcドメイン単量体は、免疫グロブリン抗体アイソタイプIgG、IgE、IgM、IgA、またはIgDのFcドメイン単量体であり得る。Fcドメイン単量体はまた、任意の免疫グロブリン抗体アイソタイプ(例えば、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3、またはIgG4)のFcドメイン単量体であり得る。Fcドメイン単量体は、任意の免疫グロブリン抗体アロタイプ(例えば、IGHG1*01(すなわち、G1m(za))、IGHG1*07(すなわち、G1m(zax))、IGHG1*04(すなわち、G1m(zav))、IGHG1*03(G1m(f))、IGHG1*08(すなわち、G1m(fa))、IGHG2*01、IGHG2*06、IGHG2*02、IGHG3*01、IGHG3*05、IGHG3*10、IGHG3*04、IGHG3*09、IGHG3*11、IGHG3*12、IGHG3*06、IGHG3*07、IGHG3*08、IGHG3*13、IGHG3*03、IGHG3*14、IGHG3*15、IGHG3*16、IGHG3*17、IGHG3*18、IGHG3*19、IGHG2*04、IGHG4*01、IGHG4*03、またはIGHG4*02)(例えば、Vidarsson et al. IgG subclasses and allotypes:from structure to effector function. Frontiers in Immunology.5(520):1-17(2014)に記載されているような)のFcドメイン単量体であり得る。Fcドメイン単量体はまた、任意の種、例えば、ヒト、ネズミ、またはマウスのFcドメイン単量体であり得る。Fcドメイン単量体の二量体は、白血球の表面に位置する受容体であるFc受容体に結合することができるFcドメインである。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体中のFcドメイン単量体は、配列番号1~95のいずれか1つの配列を有するFcドメイン単量体と比較して、1つ以上のアミノ酸置換、付加、及び/または欠失を含み得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体中のFcドメイン単量体内のAsnを、N結合型グリコシル化を防ぐためにAlaに置き換えてもよい(例えば、配列番号12~15を参照されたい(AsnからAlaへの置換を*でラベル付けしている))。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体中のFcドメイン単量体はまた、追加のCys付加を含み得る(例えば、配列番号9、10、及び11を参照されたい(Cys付加を*でラベル付けしている))。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体中のFcドメイン単量体は、追加の部分、例えば、アルブミン結合ペプチド、精製ペプチド(例えば、ヘキサヒスチジンペプチド(HHHHHH(配列番号99))、またはFcドメイン単量体のN末端またはC末端に結合したシグナル配列(例えば、IL2シグナル配列MYRMQLLSCIALSLALVTNS(配列番号100))を含む。いくつかの実施形態では、複合体中のFcドメイン単量体は、任意のタイプの抗体可変領域、例えば、VH、VL、相補性決定領域(CDR)、または超可変領域(HVR)を含まない。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体中のFcドメイン単量体は、以下に示す配列番号1~95のいずれか1つの配列と少なくとも95%同一(例えば、97%、99%、または99.5%同一)の配列を有し得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体中のFcドメイン単量体は、以下に示す配列番号1~95のいずれか1つの配列を有し得る。
配列番号1:N末端にIL2シグナル配列(太字)を有するマウスFc-IgG2a
配列番号2:成熟マウスFc-IgG2a
PRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK
配列番号3:N末端にIL2シグナル配列(太字)を有し、N末端MVRSアミノ酸残基(下線)が付加されたヒトFc-IgG1
配列番号4:N末端MVRSアミノ酸残基(下線)が付加された成熟ヒトFc-IgG1
配列番号5:N末端にIL2シグナル配列(太字)及びC末端にヘキサヒスチジンペプチド(斜体)を有するマウスFc-IgG2a
配列番号6:C末端にヘキサヒスチジンペプチド(斜体)を有する成熟マウスFc-IgG2a
配列番号7:N末端にIL2シグナル配列(太字)、N末端MVRSアミノ酸残基(下線)が付加され、C末端にヘキサヒスチジンペプチド(斜体)を有するヒトFc-IgG1
配列番号8:C末端にヘキサヒスチジンペプチド(斜体)及びN末端MVRSアミノ酸残基(下線)が付加された成熟ヒトFc-IgG1
配列番号9:N末端にIL2シグナル配列(太字)を有し、N末端MVRSアミノ酸残基(下線)が付加され、ヒンジ領域に2つの追加のシステイン(*)、及びC末端にヘキサヒスチジンペプチド(斜体)を有するヒトFc-IgG1
配列番号10:N末端MVRSアミノ酸残基(下線)が付加され、ヒンジ領域に2つの追加のシステイン(*)、C末端にヘキサヒスチジンペプチド(斜体)を有する成熟ヒトFc-IgG1
配列番号11:N末端MVRSアミノ酸残基(下線)が付加され、ヒンジ領域に2つの追加のシステイン(*)を有する成熟ヒトFc-IgG1
配列番号12:N末端にIL2シグナル配列(太字)、AsnからAlaへの置換(*)、及びC末端にヘキサヒスチジンペプチド(斜体)を有するマウスFc-IgG2a
配列番号13:AsnからAlaへの置換(*)及びC末端にヘキサヒスチジンペプチド(斜体)を有する成熟マウスFc-IgG2a
配列番号14:N末端にIL2シグナル配列(太字)、N末端MVRSアミノ酸残基(下線)が付加され、AsnからAlaへの置換(*)、及びC末端にヘキサヒスチジンペプチド(斜体)を有するヒトFc-IgG1
配列番号15:AsnからAlaへの置換(*)、N末端MVRSアミノ酸残基(下線)が付加され、及びC末端にヘキサヒスチジンペプチド(斜体)を有する成熟ヒトFc-IgG1
配列番号16:N末端にヒト血清アルブミンシグナル配列(太字)を有し、N末端ISAMVRSアミノ酸残基(下線)が付加されたヒトIgG1 Fc
配列番号17:N末端にヒト血清アルブミンシグナル配列(太字)を有し、N末端ISAMVRSアミノ酸残基(下線)が付加され、C末端G4Sリンカー(斜体)、及びC末端c-Mycタグ(下線、斜体)を有するヒトIgG1 Fc
配列番号18:N末端ISAMVRSアミノ酸残基(下線)が付加され、C末端G4Sリンカー(斜体)、及びC末端c-Mycタグ(下線、斜体)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号19:ヒト血清アルブミンシグナル配列(太字)、N末端ISAMVRSアミノ酸残基(下線)が付加され、当該部位でのリジン複合体化を防ぐためのリジンからセリンへの改変(*)を有するヒトIgG1 Fc
配列番号20:N末端ISAMVRSアミノ酸残基(下線)が付加され、当該部位でのリジン複合体化を防ぐためのリジンからセリンへの改変(*)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号21:N末端にヒト血清アルブミンシグナル配列(太字)を有し、N末端ISAMVRSアミノ酸残基(下線)が付加され、当該部位でのリジン複合体化を防ぐためのリジンからセリンへの改変(*)、C末端G4Sリンカー(斜体)、及びC末端C-Mycタグ(下線、斜体)を有するヒトIgG1 Fc
配列番号22:N末端ISAMVRSアミノ酸残基(下線)が付加され、当該部位でのリジン複合体化を防ぐためのリジンからセリンへの改変(*)、C末端G4Sリンカー(斜体)、及びC末端C-Mycタグ(下線、斜体)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号23:N末端にヒト血清アルブミンシグナル配列(太字)を有し、N末端ISAMVRSアミノ酸残基(下線)が付加され、AsnからAlaへの置換(*)、C末端G4Sリンカー(斜体)、及びC末端C-mycタグ(下線、斜体)を有するヒトIgG1 Fc
配列番号24:N末端ISAMVRSアミノ酸残基(下線)が付加され、AsnからAlaへの置換(*)、C末端G4Sリンカー(斜体)、及びC末端C-mycタグ(下線、斜体)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号25:N末端にヒト血清アルブミンシグナル配列(太字)を有し、N末端ISAMVRSアミノ酸残基(下線)が付加され、FcRn結合を妨げるH310A(*)及びH435A(*)変異、C末端G4S(斜体)、及びC末端C-mycタグ(下線、斜体)を有するヒトIgG1 Fc
配列番号26:N末端にヒト血清アルブミンシグナル配列(太字)を有し、N末端ISAMVRSアミノ酸残基(下線)が付加され、FcRn結合を妨げるH310A(*)及びH435A(*)変異、C末端G4S(斜体)、及びC末端C-mycタグ(下線、斜体)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号27:N末端にヒト血清アルブミンシグナル配列(太字)、N末端ISAMVRSアミノ酸残基(下線)が付加され、C末端G4Sリンカー(斜体)、及びC末端変異(リジンからフェニルアラニン、太字)を含むC-mycタグ(下線、斜体)を有するヒトIgG1 Fc
配列番号28:N末端ISAMVRSアミノ酸残基(下線)が付加され、C末端G4Sリンカー(斜体)、及びC末端変異 (リジンからフェニルアラニン、太字)を含むC-mycタグ(下線、斜体)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号29:N末端にヒト血清アルブミンシグナル配列(太字),N末端ISAMVRSアミノ酸残基(下線)が付加され,AsnからAlaへの置換(*),C末端G4Sリンカー(斜体),及びC末端変異(リジンからフェニルアラニン,太字)を含むC-mycタグ(下線,斜体)を有するヒトIgG1 Fc
配列番号30:N末端MVRSアミノ酸残基(下線)が付加され,AsnからAlaへの置換(*),C末端G4Sリンカー(斜体),及びC末端変異(リジンからフェニルアラニン,太字)を含むC-mycタグ(下線,斜体)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号31:N末端にヒト血清アルブミンシグナル配列(太字),アロタイプG1m(fa) (太字 斜体),C末端G4Sリンカー(斜体),及びC末端変異(リジンからフェニルアラニン,太字)を含むC-mycタグ(下線)を有するヒトIgG1 Fc
配列番号32:N末端にヒト血清アルブミンシグナル配列(太字),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)を有するヒトIgG1 Fc
配列番号33:YTE三重変異 (太字及び下線)を有し、N末端MVRSアミノ酸残基(下線)が付加された成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号34:N末端にヒト血清アルブミンシグナル配列(太字)を有し,成熟ヒトIgG1 FcのN末端に全長ヒンジ領域を含む残基EPKSS(下線)を含み,CysからSerへの置換(#),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)を有するヒトIgG1 Fc
配列番号35:N末端にマウスIgGシグナル配列(太字)を有し,成熟ヒトIgG1 FcのN末端からEPKSSDヒンジ残基が除去され,アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)を有するヒトIgG1 Fc
配列番号36:YTE三重変異(太字及び下線)を有し,成熟ヒトIgG1 FcのN末端からEPKSSDヒンジ残基が除去され,アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号37:LS二重変異(太字及び下線)を有し,成熟ヒトIgG1 FcのN末端からEPKSSDヒンジ残基が除去され,アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号38: N末端にヒト血清アルブミンシグナル配列(太字)を有し,YTE三重変異(太字及び下線),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体),C末端G4Sリンカー(斜体),及びC末端C-mycタグ(下線)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号39:成熟ヒトFc IgG1(X1はMetまたはTrp,X2はSerまたはThr,X3はThrまたはGlu,X4はAspまたはGlu,及びX5はLeuまたはMet,X6はMetまたはLeu,及びX7はAsnまたはSerである)
配列番号40:成熟ヒトFc IgG1(X4はAspまたはGlu,及びX5はLeuまたはMetである)
DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRX4EX5TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
配列番号41:YTE三重変異(太字及び下線)を有する成熟ヒトFc IgG1(X4はAspまたはGlu,及びX5はLeuまたはMetである)
配列番号42:YTE三重変異(太字及び下線),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)を有する成熟ヒトFc IgG1
配列番号43:YTE三重変異(太字及び下線),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)を有する成熟ヒトFc IgG1
配列番号44:LS二重変異(太字及び下線)を有する成熟ヒトFc IgG1(X4はAspまたはGlu,及びX5はLeuまたはMetである)
配列番号45:LS二重変異(太字及び下線),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)を有する成熟ヒトFc IgG1
配列番号46:LS二重変異(太字及び下線),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)を有する成熟ヒトFc IgG1
配列番号47:マウス重鎖MIgG Vhシグナル配列 (太字)を有し,Asp欠失([D])、CysからSerへの置換(#)を有する成熟ヒトFc IgG1(X1はMetまたはTrp,X2はSerまたはThr,X3はThrまたはGlu,X4はAspまたはGlu,及びX5はLeuまたはMet,X6はMetまたはLeu,及びX7はAsnまたはSerである)
配列番号48:マウス重鎖MIgG Vhシグナル配列(太字),CysからSerへの置換(#),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号49:マウス重鎖MIgG Vhシグナル配列(太字),CysからSerへの置換(#),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号50:マウス重鎖MIgG Vhシグナル配列(太字),CysからSerへの置換(#),M428L,N434S変異(太字/下線),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号51:マウス重鎖MIgG Vhシグナル配列(太字),CysからSerへの置換(#),M428L,N434S変異(太字/下線),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号52:マウス重鎖MIgG Vhシグナル配列(太字),CysからSerへの置換(#),YTE三重変異(太字及び下線),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号53:マウス重鎖MIgG Vhシグナル配列(太字),CysからSerへの置換(#),YTE三重変異(太字及び下線),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号54:マウス重鎖MIgG Vhシグナル配列(太字)を有し,N末端ISAMVRSアミノ酸残基(斜体)が付加され,M428L,N434S変異(太字/下線),G4Sリンカー(斜体),及びC末端C-mycタグ(下線),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号55:マウス重鎖MIgG Vhシグナル配列(太字)を有し,N末端ISAMVRSアミノ酸残基(斜体)が付加され,M428L,N434S変異(太字/下線),G4Sリンカー(斜体),C末端C-mycタグ(下線),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号56:マウス重鎖MIgG Vhシグナル配列(太字)を有し,N末端ISAMVRSアミノ酸残基(斜体)が付加され,YTE三重変異体(太字/下線),G4Sリンカー(斜体),及びC末端C-mycタグ(下線),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号57:マウス重鎖MIgG Vhシグナル配列(太字)を有し,N末端ISAMVRSアミノ酸残基(斜体)が付加され,YTE三重変異体(太字/下線),G4Sリンカー(斜体),C末端C-mycタグ(下線),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号58:マウス重鎖MIgG1シグナル配列(太字),CysからSerへの置換(#),C末端G4S(斜体),及びC末端IgAペプチド(下線),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)を有する成熟ヒトIgG1
配列番号59:マウス重鎖MIgG1シグナル配列(太字),CysからSerへの置換(#),M428L,N434S変異(太字/下線),C末端G4S(斜体),及びC末端IgAペプチド(下線),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)を有する成熟ヒトIgG1
配列番号60:成熟ヒトFc IgG1(Z1はCysまたはSer,及びX1はMetまたはTrp,X2はSerまたはThr,X3はThrまたはGlu,X4はAspまたはGlu,及びX5はLeuまたはMet,X6はMetまたはLeu,及びX7はAsnまたはSerである)
配列番号61:成熟ヒトFc IgG1,CysからSerへの置換(#)(X1はMetまたはTrp,X2はSerまたはThr,X3はThrまたはGlu,X4はAspまたはGlu,及びX5はLeuまたはMet,X6はMetまたはLeu,及びX7はAsnまたはSerである)
配列番号62:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#)(X4はAspまたはGlu,及びX5はLeuまたはMetである)
配列番号63:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)
配列番号64:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)
配列番号65:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),M428L,N434S変異(太字/下線),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)
配列番号66: 成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),M428L,N434S変異(太字/下線),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)
配列番号67:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),YTE三重変異(太字及び下線),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)
配列番号68:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),YTE三重変異(太字及び下線),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)
配列番号69:成熟ヒトFc IgG1(Z1はCysまたはSer,及びX1はMetまたはTrp,X2はSerまたはThr,X3はThrまたはGlu,X4はAspまたはGlu,及びX5はLeuまたはMet,X6はMetまたはLeu,及びX7はAsnまたはSerである)
配列番号70:成熟ヒトFc IgG1,CysからSerへの置換(#)(X1はMetまたはTrp,X2はSerまたはThr,X3はThrまたはGlu,X4はAspまたはGlu,及びX5はLeuまたはMet,X6はMetまたはLeu,及びX7はAsnまたはSerである)
配列番号71:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#)(X4はAspまたはGlu,及びX5はLeuまたはMetである)
配列番号72:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)
配列番号73:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)
配列番号74:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),M428L,N434S変異(太字/下線),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)
配列番号75:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),M428L,N434S変異(太字/下線),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)
配列番号76:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),YTE三重変異(太字及び下線),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)
配列番号77:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),YTE三重変異(太字及び下線),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)
配列番号78:成熟ヒトFc IgG1(Z1はCysまたはSer,及びX1はMetまたはTrp,X2はSerまたはThr,X3はThrまたはGlu,X4はAspまたはGlu,及びX5はLeuまたはMet,X6はMetまたはLeu,及びX7はAsnまたはSerである)
配列番号79:成熟ヒトFc IgG1,CysからSerへの置換(#)(X1はMetまたはTrp,X2はSerまたはThr,X3はThrまたはGlu,X4はAspまたはGlu,及びX5はLeuまたはMet,X6はMetまたはLeu,及びX7はAsnまたはSerである)
配列番号80:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#)(X4はAspまたはGlu,及びX5はLeuまたはMetである)
配列番号81:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)
配列番号82:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)
配列番号83:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),M428L,N434S変異(太字/下線),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)
配列番号84:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),M428L,N434S変異(太字/下線),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)
配列番号85:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),YTE三重変異(太字及び下線),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)
配列番号86:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),YTE三重変異(太字及び下線),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)
配列番号87:成熟ヒトFc IgG1(Z1はCysまたはSer、及びX1はMetまたはTrp,X2はSerまたはThr,X3はThrまたはGlu,X4はAspまたはGlu,及びX5はLeuまたはMet,X6はMetまたはLeu,及びX7はAsnまたはSerである)
配列番号88:成熟ヒトFc IgG1,CysからSerへの置換(#)(X1はMetまたはTrp,X2はSerまたはThr,X3はThrまたはGlu,X4はAspまたはGlu,及びX5はLeuまたはMet,X6はMetまたはLeu,及びX7はAsnまたはSerである)
配列番号89:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#)(X4はAspまたはGlu,及びX5はLeuまたはMetである)
配列番号90:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)
配列番号91:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)
配列番号92:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),M428L,N434S変異(太字/下線),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)
配列番号93:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),M428L,N434S変異(太字/下線),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)
配列番号94:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),YTE三重変異(太字及び下線),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)
配列番号95:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),YTE三重変異(太字及び下線),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)
配列番号1:N末端にIL2シグナル配列(太字)を有するマウスFc-IgG2a
配列番号2:成熟マウスFc-IgG2a
PRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK
配列番号3:N末端にIL2シグナル配列(太字)を有し、N末端MVRSアミノ酸残基(下線)が付加されたヒトFc-IgG1
配列番号4:N末端MVRSアミノ酸残基(下線)が付加された成熟ヒトFc-IgG1
配列番号5:N末端にIL2シグナル配列(太字)及びC末端にヘキサヒスチジンペプチド(斜体)を有するマウスFc-IgG2a
配列番号6:C末端にヘキサヒスチジンペプチド(斜体)を有する成熟マウスFc-IgG2a
配列番号7:N末端にIL2シグナル配列(太字)、N末端MVRSアミノ酸残基(下線)が付加され、C末端にヘキサヒスチジンペプチド(斜体)を有するヒトFc-IgG1
配列番号8:C末端にヘキサヒスチジンペプチド(斜体)及びN末端MVRSアミノ酸残基(下線)が付加された成熟ヒトFc-IgG1
配列番号9:N末端にIL2シグナル配列(太字)を有し、N末端MVRSアミノ酸残基(下線)が付加され、ヒンジ領域に2つの追加のシステイン(*)、及びC末端にヘキサヒスチジンペプチド(斜体)を有するヒトFc-IgG1
配列番号10:N末端MVRSアミノ酸残基(下線)が付加され、ヒンジ領域に2つの追加のシステイン(*)、C末端にヘキサヒスチジンペプチド(斜体)を有する成熟ヒトFc-IgG1
配列番号11:N末端MVRSアミノ酸残基(下線)が付加され、ヒンジ領域に2つの追加のシステイン(*)を有する成熟ヒトFc-IgG1
配列番号12:N末端にIL2シグナル配列(太字)、AsnからAlaへの置換(*)、及びC末端にヘキサヒスチジンペプチド(斜体)を有するマウスFc-IgG2a
配列番号13:AsnからAlaへの置換(*)及びC末端にヘキサヒスチジンペプチド(斜体)を有する成熟マウスFc-IgG2a
配列番号14:N末端にIL2シグナル配列(太字)、N末端MVRSアミノ酸残基(下線)が付加され、AsnからAlaへの置換(*)、及びC末端にヘキサヒスチジンペプチド(斜体)を有するヒトFc-IgG1
配列番号15:AsnからAlaへの置換(*)、N末端MVRSアミノ酸残基(下線)が付加され、及びC末端にヘキサヒスチジンペプチド(斜体)を有する成熟ヒトFc-IgG1
配列番号16:N末端にヒト血清アルブミンシグナル配列(太字)を有し、N末端ISAMVRSアミノ酸残基(下線)が付加されたヒトIgG1 Fc
配列番号17:N末端にヒト血清アルブミンシグナル配列(太字)を有し、N末端ISAMVRSアミノ酸残基(下線)が付加され、C末端G4Sリンカー(斜体)、及びC末端c-Mycタグ(下線、斜体)を有するヒトIgG1 Fc
配列番号18:N末端ISAMVRSアミノ酸残基(下線)が付加され、C末端G4Sリンカー(斜体)、及びC末端c-Mycタグ(下線、斜体)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号19:ヒト血清アルブミンシグナル配列(太字)、N末端ISAMVRSアミノ酸残基(下線)が付加され、当該部位でのリジン複合体化を防ぐためのリジンからセリンへの改変(*)を有するヒトIgG1 Fc
配列番号20:N末端ISAMVRSアミノ酸残基(下線)が付加され、当該部位でのリジン複合体化を防ぐためのリジンからセリンへの改変(*)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号21:N末端にヒト血清アルブミンシグナル配列(太字)を有し、N末端ISAMVRSアミノ酸残基(下線)が付加され、当該部位でのリジン複合体化を防ぐためのリジンからセリンへの改変(*)、C末端G4Sリンカー(斜体)、及びC末端C-Mycタグ(下線、斜体)を有するヒトIgG1 Fc
配列番号22:N末端ISAMVRSアミノ酸残基(下線)が付加され、当該部位でのリジン複合体化を防ぐためのリジンからセリンへの改変(*)、C末端G4Sリンカー(斜体)、及びC末端C-Mycタグ(下線、斜体)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号23:N末端にヒト血清アルブミンシグナル配列(太字)を有し、N末端ISAMVRSアミノ酸残基(下線)が付加され、AsnからAlaへの置換(*)、C末端G4Sリンカー(斜体)、及びC末端C-mycタグ(下線、斜体)を有するヒトIgG1 Fc
配列番号24:N末端ISAMVRSアミノ酸残基(下線)が付加され、AsnからAlaへの置換(*)、C末端G4Sリンカー(斜体)、及びC末端C-mycタグ(下線、斜体)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号25:N末端にヒト血清アルブミンシグナル配列(太字)を有し、N末端ISAMVRSアミノ酸残基(下線)が付加され、FcRn結合を妨げるH310A(*)及びH435A(*)変異、C末端G4S(斜体)、及びC末端C-mycタグ(下線、斜体)を有するヒトIgG1 Fc
配列番号26:N末端にヒト血清アルブミンシグナル配列(太字)を有し、N末端ISAMVRSアミノ酸残基(下線)が付加され、FcRn結合を妨げるH310A(*)及びH435A(*)変異、C末端G4S(斜体)、及びC末端C-mycタグ(下線、斜体)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号27:N末端にヒト血清アルブミンシグナル配列(太字)、N末端ISAMVRSアミノ酸残基(下線)が付加され、C末端G4Sリンカー(斜体)、及びC末端変異(リジンからフェニルアラニン、太字)を含むC-mycタグ(下線、斜体)を有するヒトIgG1 Fc
配列番号28:N末端ISAMVRSアミノ酸残基(下線)が付加され、C末端G4Sリンカー(斜体)、及びC末端変異 (リジンからフェニルアラニン、太字)を含むC-mycタグ(下線、斜体)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号29:N末端にヒト血清アルブミンシグナル配列(太字),N末端ISAMVRSアミノ酸残基(下線)が付加され,AsnからAlaへの置換(*),C末端G4Sリンカー(斜体),及びC末端変異(リジンからフェニルアラニン,太字)を含むC-mycタグ(下線,斜体)を有するヒトIgG1 Fc
配列番号30:N末端MVRSアミノ酸残基(下線)が付加され,AsnからAlaへの置換(*),C末端G4Sリンカー(斜体),及びC末端変異(リジンからフェニルアラニン,太字)を含むC-mycタグ(下線,斜体)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号31:N末端にヒト血清アルブミンシグナル配列(太字),アロタイプG1m(fa) (太字 斜体),C末端G4Sリンカー(斜体),及びC末端変異(リジンからフェニルアラニン,太字)を含むC-mycタグ(下線)を有するヒトIgG1 Fc
配列番号32:N末端にヒト血清アルブミンシグナル配列(太字),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)を有するヒトIgG1 Fc
配列番号33:YTE三重変異 (太字及び下線)を有し、N末端MVRSアミノ酸残基(下線)が付加された成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号34:N末端にヒト血清アルブミンシグナル配列(太字)を有し,成熟ヒトIgG1 FcのN末端に全長ヒンジ領域を含む残基EPKSS(下線)を含み,CysからSerへの置換(#),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)を有するヒトIgG1 Fc
配列番号35:N末端にマウスIgGシグナル配列(太字)を有し,成熟ヒトIgG1 FcのN末端からEPKSSDヒンジ残基が除去され,アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)を有するヒトIgG1 Fc
配列番号36:YTE三重変異(太字及び下線)を有し,成熟ヒトIgG1 FcのN末端からEPKSSDヒンジ残基が除去され,アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号37:LS二重変異(太字及び下線)を有し,成熟ヒトIgG1 FcのN末端からEPKSSDヒンジ残基が除去され,アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号38: N末端にヒト血清アルブミンシグナル配列(太字)を有し,YTE三重変異(太字及び下線),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体),C末端G4Sリンカー(斜体),及びC末端C-mycタグ(下線)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号39:成熟ヒトFc IgG1(X1はMetまたはTrp,X2はSerまたはThr,X3はThrまたはGlu,X4はAspまたはGlu,及びX5はLeuまたはMet,X6はMetまたはLeu,及びX7はAsnまたはSerである)
配列番号40:成熟ヒトFc IgG1(X4はAspまたはGlu,及びX5はLeuまたはMetである)
DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRX4EX5TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
配列番号41:YTE三重変異(太字及び下線)を有する成熟ヒトFc IgG1(X4はAspまたはGlu,及びX5はLeuまたはMetである)
配列番号42:YTE三重変異(太字及び下線),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)を有する成熟ヒトFc IgG1
配列番号43:YTE三重変異(太字及び下線),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)を有する成熟ヒトFc IgG1
配列番号44:LS二重変異(太字及び下線)を有する成熟ヒトFc IgG1(X4はAspまたはGlu,及びX5はLeuまたはMetである)
配列番号45:LS二重変異(太字及び下線),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)を有する成熟ヒトFc IgG1
配列番号46:LS二重変異(太字及び下線),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)を有する成熟ヒトFc IgG1
配列番号47:マウス重鎖MIgG Vhシグナル配列 (太字)を有し,Asp欠失([D])、CysからSerへの置換(#)を有する成熟ヒトFc IgG1(X1はMetまたはTrp,X2はSerまたはThr,X3はThrまたはGlu,X4はAspまたはGlu,及びX5はLeuまたはMet,X6はMetまたはLeu,及びX7はAsnまたはSerである)
配列番号48:マウス重鎖MIgG Vhシグナル配列(太字),CysからSerへの置換(#),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号49:マウス重鎖MIgG Vhシグナル配列(太字),CysからSerへの置換(#),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号50:マウス重鎖MIgG Vhシグナル配列(太字),CysからSerへの置換(#),M428L,N434S変異(太字/下線),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号51:マウス重鎖MIgG Vhシグナル配列(太字),CysからSerへの置換(#),M428L,N434S変異(太字/下線),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号52:マウス重鎖MIgG Vhシグナル配列(太字),CysからSerへの置換(#),YTE三重変異(太字及び下線),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号53:マウス重鎖MIgG Vhシグナル配列(太字),CysからSerへの置換(#),YTE三重変異(太字及び下線),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号54:マウス重鎖MIgG Vhシグナル配列(太字)を有し,N末端ISAMVRSアミノ酸残基(斜体)が付加され,M428L,N434S変異(太字/下線),G4Sリンカー(斜体),及びC末端C-mycタグ(下線),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号55:マウス重鎖MIgG Vhシグナル配列(太字)を有し,N末端ISAMVRSアミノ酸残基(斜体)が付加され,M428L,N434S変異(太字/下線),G4Sリンカー(斜体),C末端C-mycタグ(下線),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号56:マウス重鎖MIgG Vhシグナル配列(太字)を有し,N末端ISAMVRSアミノ酸残基(斜体)が付加され,YTE三重変異体(太字/下線),G4Sリンカー(斜体),及びC末端C-mycタグ(下線),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号57:マウス重鎖MIgG Vhシグナル配列(太字)を有し,N末端ISAMVRSアミノ酸残基(斜体)が付加され,YTE三重変異体(太字/下線),G4Sリンカー(斜体),C末端C-mycタグ(下線),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)を有する成熟ヒトIgG1 Fc
配列番号58:マウス重鎖MIgG1シグナル配列(太字),CysからSerへの置換(#),C末端G4S(斜体),及びC末端IgAペプチド(下線),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)を有する成熟ヒトIgG1
配列番号59:マウス重鎖MIgG1シグナル配列(太字),CysからSerへの置換(#),M428L,N434S変異(太字/下線),C末端G4S(斜体),及びC末端IgAペプチド(下線),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)を有する成熟ヒトIgG1
配列番号60:成熟ヒトFc IgG1(Z1はCysまたはSer,及びX1はMetまたはTrp,X2はSerまたはThr,X3はThrまたはGlu,X4はAspまたはGlu,及びX5はLeuまたはMet,X6はMetまたはLeu,及びX7はAsnまたはSerである)
配列番号61:成熟ヒトFc IgG1,CysからSerへの置換(#)(X1はMetまたはTrp,X2はSerまたはThr,X3はThrまたはGlu,X4はAspまたはGlu,及びX5はLeuまたはMet,X6はMetまたはLeu,及びX7はAsnまたはSerである)
配列番号62:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#)(X4はAspまたはGlu,及びX5はLeuまたはMetである)
配列番号63:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)
配列番号64:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)
配列番号65:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),M428L,N434S変異(太字/下線),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)
配列番号66: 成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),M428L,N434S変異(太字/下線),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)
配列番号67:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),YTE三重変異(太字及び下線),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)
配列番号68:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),YTE三重変異(太字及び下線),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)
配列番号69:成熟ヒトFc IgG1(Z1はCysまたはSer,及びX1はMetまたはTrp,X2はSerまたはThr,X3はThrまたはGlu,X4はAspまたはGlu,及びX5はLeuまたはMet,X6はMetまたはLeu,及びX7はAsnまたはSerである)
配列番号70:成熟ヒトFc IgG1,CysからSerへの置換(#)(X1はMetまたはTrp,X2はSerまたはThr,X3はThrまたはGlu,X4はAspまたはGlu,及びX5はLeuまたはMet,X6はMetまたはLeu,及びX7はAsnまたはSerである)
配列番号71:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#)(X4はAspまたはGlu,及びX5はLeuまたはMetである)
配列番号72:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)
配列番号73:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)
配列番号74:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),M428L,N434S変異(太字/下線),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)
配列番号75:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),M428L,N434S変異(太字/下線),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)
配列番号76:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),YTE三重変異(太字及び下線),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)
配列番号77:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),YTE三重変異(太字及び下線),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)
配列番号78:成熟ヒトFc IgG1(Z1はCysまたはSer,及びX1はMetまたはTrp,X2はSerまたはThr,X3はThrまたはGlu,X4はAspまたはGlu,及びX5はLeuまたはMet,X6はMetまたはLeu,及びX7はAsnまたはSerである)
配列番号79:成熟ヒトFc IgG1,CysからSerへの置換(#)(X1はMetまたはTrp,X2はSerまたはThr,X3はThrまたはGlu,X4はAspまたはGlu,及びX5はLeuまたはMet,X6はMetまたはLeu,及びX7はAsnまたはSerである)
配列番号80:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#)(X4はAspまたはGlu,及びX5はLeuまたはMetである)
配列番号81:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)
配列番号82:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)
配列番号83:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),M428L,N434S変異(太字/下線),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)
配列番号84:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),M428L,N434S変異(太字/下線),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)
配列番号85:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),YTE三重変異(太字及び下線),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)
配列番号86:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),YTE三重変異(太字及び下線),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)
配列番号87:成熟ヒトFc IgG1(Z1はCysまたはSer、及びX1はMetまたはTrp,X2はSerまたはThr,X3はThrまたはGlu,X4はAspまたはGlu,及びX5はLeuまたはMet,X6はMetまたはLeu,及びX7はAsnまたはSerである)
配列番号88:成熟ヒトFc IgG1,CysからSerへの置換(#)(X1はMetまたはTrp,X2はSerまたはThr,X3はThrまたはGlu,X4はAspまたはGlu,及びX5はLeuまたはMet,X6はMetまたはLeu,及びX7はAsnまたはSerである)
配列番号89:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#)(X4はAspまたはGlu,及びX5はLeuまたはMetである)
配列番号90:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)
配列番号91:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)
配列番号92:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),M428L,N434S変異(太字/下線),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)
配列番号93:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),M428L,N434S変異(太字/下線),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)
配列番号94:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),YTE三重変異(太字及び下線),アロタイプG1m(fa)(太字 斜体)
配列番号95:成熟ヒトIgG1 Fc,CysからSerへの置換(#),YTE三重変異(太字及び下線),アロタイプG1m(f)(太字 斜体)
本明細書中で定義されるとおり、Fcドメインは、CH3抗体定常ドメイン間の相互作用、及び二量体化する2つのFcドメイン単量体のヒンジドメイン間に形成される1つ以上のジスルフィド結合によって二量体化する、2つのFcドメイン単量体を含む。Fcドメインは、Fc受容体、例えば、Fcガンマ受容体(すなわちFcγ受容体(FcγR))、Fcアルファ受容体(すなわちFcα受容体(FcαR))、Fcイプシロン受容体(すなわちFcε受容体(FcεR))及び/または新生児Fc受容体(FcRn)に結合する最小限の構造を形成する。いくつかの実施形態では、本発明のFcドメインは、Fcγ受容体(例えば、FcRn、FcγRI(CD64)、FcγRIIa(CD32)、FcγRIIb(CD32)、FcγRIIIa(CD16a)、FcγRIIIb(CD16b))、及び/またはFcγRIV及び/または新生児Fc受容体(FcRn)に結合する。
いくつかの実施形態では、本発明のFcドメイン単量体またはFcドメインは、非グリコシル化Fcドメイン単量体またはFcドメイン(例えば、Fc受容体(例えばFcRn)との係合を維持するFcドメイン単量体またはFcドメインである。例えば、Fcドメインは、Fc受容体との係合を維持する非グリコシル化IgG1バリアント(例えば、グリコシル化モチーフのN297及び/またはT299にアミノ酸置換を有するIgG1)である。例示的な非グリコシル化Fcドメイン、及び非グリコシル化Fcドメインを作る方法は、例えば本明細書に全体が援用されるSazinsky S.L.et al.,Aglycosylated immunoglobulin G1 variants productively engage activating Fc receptors,PNAS,2008,105(51):20167-20172に記載されているように、当技術分野において公知である。
いくつかの実施形態では、本発明のFcドメインまたはFcドメイン単量体は、新生児Fc受容体(FcRn)に対する結合性を増強するように操作される。例えば、Fcドメインは、M252Y/S254T/T256E(YTE)に対応する三重変異を含み得る(例えば、YTE変異を有するヒトまたはヒト化IgG1などのIgG1、例えば、配列番号33、配列番号36、配列番号38、配列番号39、配列番号41、配列番号42、配列番号43、配列番号52、配列番号53、配列番号56または配列番号57)。Fcドメインは、M428L/N434S(LS)に対応する二重変異体を含んでいてもよい(例えば、LS変異を有するヒトまたはヒト化IgG1などのIgG1、例えば、配列番号37、配列番号39、配列番号44、配列番号45、配列番号46、配列番号50、配列番号51、配列番号54、配列番号55または配列番号59)。Fcドメインは、N434Hに対応する単一の変異体を含んでいてもよい(例えば、N434H変異を有するヒトまたはヒト化IgG1などのIgG1)。Fcドメインは、C220Sに対応する単一の変異体を含んでいてもよい(例えば、C220S変異を有するヒトまたはヒト化IgG1などのIgG1、例えば、配列番号34、配列番号47、配列番号48、配列番号49、配列番号50、配列番号51、配列番号52、配列番号53、配列番号58、配列番号59、配列番号61、配列番号62、配列番号63、配列番号64、配列番号65、配列番号66、配列番号67、または配列番号68)。Fcドメインは、FcRnに対する結合性を増強する上記変異の1つ以上の組合せを含んでいてもよい。FcRnに対する結合性が増強されるとFcドメイン含有複合体の半減期が延び得る。例えば、FcRnに対する結合性を向上させる1つ以上のアミノ酸変異(例えば、YTE変異、LS変異またはN434H変異)を組み込むと複合体の半減期は、FcRn結合性を増強する変異を有していない対応するFcドメインを有する複合体に比べて5%、10%、15%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%.100%、200%、300%、400%、500%またはそれより大きく延び得る。FcRNに対する結合性が増強された例示的なFcドメイン、及びFcRNに対する結合性が増強されたFcドメインを作る方法は、例えば本明細書に全体が援用されるMaeda,A.et al.,Identification of human IgG1 variant with enhanced FcRn binding and without increased binding to rheumatoid factor autoantibody,MABS,2017,9(5):844-853に記載されているように、当技術分野において既知である。本明細書中で使用する場合、(例えば特定の配列番号の)特定のアミノ酸残基「に対応する」アミノ酸は、(例えば特定の配列の)特定の残基と並ぶことが当業者によって理解されるであろう任意のアミノ酸残基を含むと理解されるべきである。例えば、アミノ酸配列の「対応する残基」を変異させることによって、配列番号1~95のいずれか1つが変異してYTE変異、LS変異及び/またはN434H変異を含んでいてもよい。
本明細書中で使用する場合、特定の配列番号の特定のシステイン残基「に対応する」硫黄原子は、特定の配列の特定のシステインと並ぶことが当業者によって理解されるであろう任意のシステイン残基の硫黄原子を含むと理解されるべきである。ヒトIgG1(UniProtKB:P01857;配列番号121)と、ヒトIgG2(UniProtKB:P01859;配列番号122)と、ヒトIgG3(UniProtKB:P01860;配列番号123)と、ヒトIgG4(UniProtKB:P01861;配列番号124)とのタンパク質配列アラインメントを以下に示す(Clustal Omegaマルチプルペアワイズアラインメントを用いて整列させた)。アラインメントは、(四角内に符号・で示される)互い「に対応している」システイン残基(例えばシステイン残基の硫黄原子)を示している。当業者であれば、本明細書に記載の特定の配列番号(例えば配列番号1~95のいずれか1つ)の特定のシステインの任意の硫黄原子に対応するシステインの硫黄原子を決定するために本発明の任意のIgGバリアントとのそのようなアラインメントを容易に実施することができよう。例えば、当業者であれば、配列番号10のCys10(Fcドメインのヒンジ領域の保存されたCPPCモチーフの最初のシステイン)が例えば、IgG1のCys109、IgG2のCys106、IgG3のCys156、配列番号1のCys29、配列番号2のCys9、配列番号3のCys30、または配列番号10のCys10に対応していることを容易に判定できよう。
いくつかの実施形態では、本発明のFcドメインまたはFcドメイン単量体は配列番号39~95のいずれか1つの配列を有し、N末端に付加アミノ酸(Xaa)xを、及び/またはC末端に付加アミノ酸(Xaa)zをさらに含んでいてもよく、ここで、Xaaは任意のアミノ酸であり、x及びzは、0以上の自然数であり、一般的に100未満、好ましくは10未満、より好ましくは0、1、2、3、4または5である。いくつかの実施形態では、付加アミノ酸は配列番号103の1つ以上の連続アミノ酸と少なくとも70%(例えば、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%)同一である。例えば、付加アミノ酸は、IgG1(配列番号121)のLys330に対応するC末端上の単一のアミノ酸であってもよい。
本明細書中で使用する場合、特定の配列番号の特定のリジン残基「に対応する」窒素原子は、特定の配列の特定のリジンと並ぶことが当業者によって理解されるであろう任意のリジン残基の窒素原子を含むと理解されるべきである。ヒトIgG1(UniProtKB:P01857;配列番号121)と、ヒトIgG2(UniProtKB:P01859;配列番号122)と、ヒトIgG3(UniProtKB:P01860;配列番号123)と、ヒトIgG4(UniProtKB:P01861;配列番号124)とのタンパク質配列アラインメントを以下に示す(Clustal Omegaマルチプルペアワイズアラインメントを用いて整列させた)。アラインメントは、(四角内に符号*で示される)互い「に対応している」リジン残基(例えばリジン残基の窒素原子)を示している。当業者であれば、本明細書に記載の特定の配列番号(例えば配列番号1~95のいずれか1つ)の特定のリジンの任意の窒素原子に対応するリジンの窒素原子を決定するために本発明の任意のIgGバリアントとのそのようなアラインメントを容易に実施することができよう。例えば、当業者であれば、配列番号10のLys35が例えば、IgG1のLys129、IgG2のLys126、IgG3のLys176、配列番号1のLys51、配列番号2のLys31、配列番号3のLys50、または配列番号10のLys30に対応していることを容易に判定できよう。
いくつかの実施形態では、Fcドメイン単量体は、約300未満のアミノ酸残基(例えば、約300未満、約295未満、約290未満、約285未満、約280未満、約275未満、約270未満、約265未満、約260未満、約255未満、約250未満、約245未満、約240未満、約235未満、約230未満、約225未満、または約220未満のアミノ酸残基)を含む。いくつかの実施形態では、Fcドメイン単量体は、約40kDa未満(例えば、約35kDa未満、約30kDa未満、約25kDa未満)である。
いくつかの実施形態では、Fcドメイン単量体は、少なくとも200アミノ酸残基(例えば、少なくとも210、少なくとも220、少なくとも230、少なくとも240、少なくとも250、少なくとも260、少なくとも270、少なくとも280、少なくとも290、または少なくとも300アミノ残基)である。いくつかの実施形態では、Fcドメイン単量体は、少なくとも20kDa(例えば、少なくとも25kDa、少なくとも30kDa、または少なくとも35kDa)である。
いくつかの実施形態では、Fcドメイン単量体は、200~400アミノ酸残基(例えば、200~250、250~300、300~350、350~400、200~300、250~350、または300~400アミノ酸残基)を含む。いくつかの実施形態では、Fcドメイン単量体は、20~40kDa(例えば、20~25kDa、25~30kDa、35~40kDa、20~30kDa、25~35kDa、または30~40KDa)である。
いくつかの実施形態では、Fcドメイン単量体は、配列番号1~95のいずれか1つの配列またはその領域と少なくとも90%同一(例えば、少なくとも95%、少なくとも98%)のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Fcドメイン単量体は、配列番号1~95のいずれか1つのアミノ酸配列、またはその領域を含む。
いくつかの実施形態では、Fcドメイン単量体は、配列番号1~95のいずれか1つの領域を含み、領域は、位置220、252、254、及び256を含む。いくつかの実施形態では、領域は、少なくとも40アミノ酸残基、少なくとも50アミノ酸残基、少なくとも60アミノ酸残基、少なくとも70アミノ酸残基、少なくとも80アミノ酸残基、少なくとも90アミノ酸残基、少なくとも100アミノ酸残基、少なくとも110アミノ酸残基、少なくとも120アミノ酸残基、少なくとも130アミノ酸残基、少なくとも140アミノ酸残基、少なくとも150アミノ酸残基、少なくとも160アミノ酸残基、少なくとも170アミノ酸残基、少なくとも180アミノ酸残基、少なくとも190アミノ酸残基、または少なくとも200アミノ酸残基を含む。
免疫細胞の活性化
Fcガンマ受容体(FcγR)は、免疫グロブリンG(IgG)のFc部分と結合し、免疫賦活及び調節において重要な役割を果たす。例えば、免疫複合体(IC)中のIgG Fcドメインは高い結合活性でFcγRに係合し、したがって、免疫細胞活性化を調節するシグナル伝達カスケードが誘発される。ヒトFcγRファミリーはいくつかの活性化型受容体(FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIc、FcγRIIIa及びFcγRIIIb)及び1つの抑制型受容体(FcγRIIb)を含有する。FcγRシグナル伝達は、活性化型FcγRのための免疫チロシン活性化モチーフ(ITAM)、及び抑制型受容体FcγRIIbのための免疫チロシン抑制モチーフ(ITIM)を含有する細胞内ドメインによって媒介される。いくつかの実施形態では、FcγRとFcドメインとの結合はSrcファミリーキナーゼによるITAMリン酸化をもたらし、これがSykファミリーキナーゼを活性化させ、PI3K及びRas経路を含む下流シグナル伝達網を誘起する。
Fcガンマ受容体(FcγR)は、免疫グロブリンG(IgG)のFc部分と結合し、免疫賦活及び調節において重要な役割を果たす。例えば、免疫複合体(IC)中のIgG Fcドメインは高い結合活性でFcγRに係合し、したがって、免疫細胞活性化を調節するシグナル伝達カスケードが誘発される。ヒトFcγRファミリーはいくつかの活性化型受容体(FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIc、FcγRIIIa及びFcγRIIIb)及び1つの抑制型受容体(FcγRIIb)を含有する。FcγRシグナル伝達は、活性化型FcγRのための免疫チロシン活性化モチーフ(ITAM)、及び抑制型受容体FcγRIIbのための免疫チロシン抑制モチーフ(ITIM)を含有する細胞内ドメインによって媒介される。いくつかの実施形態では、FcγRとFcドメインとの結合はSrcファミリーキナーゼによるITAMリン酸化をもたらし、これがSykファミリーキナーゼを活性化させ、PI3K及びRas経路を含む下流シグナル伝達網を誘起する。
本明細書に記載の複合体において、複合体のgp120結合剤の単量体または二量体を含んでいる部分は、ウイルスのgp120受容体に結合してそれを阻害し、ウイルス複製の阻害をもたらすが、一方、複合体のFcドメイン部分は免疫細胞上のFcγR(例えば、FcRn、FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIc、FcγRIIIa及びFcγRIIIb)に結合して食作用及びエフェクター機能、例えば抗体依存性細胞傷害(ADCC)を活性化させ、したがって、免疫細胞によるウイルス粒子の貪食及び破壊が引き起こされ、複合体の抗ウイルス活性がさらに増強される。本明細書に記載の複合体によって活性化され得る免疫細胞の例としては、マクロファージ、好中球、好酸球、好塩基球、リンパ球、濾胞樹状細胞、ナチュラルキラー細胞及びマスト細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
組織分布
治療薬が体循環に入った後、それは体の組織に分配される。血液灌流、組織結合、局所pH、及び細胞膜の透過性が異なるため、分布は一般的に不均一である。組織への薬物の侵入速度は、組織への血流速度、組織の質量、及び血液と組織の間の分配特性に依存する。細胞膜を横切る拡散が律速段階でない限り、血液と組織の間の分布平衡(侵入速度と排出速度が同じ場合)は、血管が豊富な領域においてより迅速に到達する。サイズ、形状、電荷、標的結合、FcRn及び標的結合メカニズム、投与経路、及び製剤化は、組織分布に影響を与える。
治療薬が体循環に入った後、それは体の組織に分配される。血液灌流、組織結合、局所pH、及び細胞膜の透過性が異なるため、分布は一般的に不均一である。組織への薬物の侵入速度は、組織への血流速度、組織の質量、及び血液と組織の間の分配特性に依存する。細胞膜を横切る拡散が律速段階でない限り、血液と組織の間の分布平衡(侵入速度と排出速度が同じ場合)は、血管が豊富な領域においてより迅速に到達する。サイズ、形状、電荷、標的結合、FcRn及び標的結合メカニズム、投与経路、及び製剤化は、組織分布に影響を与える。
いくつかの場合では、本明細書に記載の複合体を、肺組織に分布させるように最適化してもよい。いくつかの場合では、複合体は、投与後2時間以内に、血漿中の複合体の濃度に対して少なくとも30%の濃度比で上皮内層液中の分布を有する。特定の実施形態では、濃度比は、投与後2時間以内に少なくとも45%である。いくつかの実施形態では、濃度比は、投与後2時間以内に少なくとも55%である。特に、投与後2時間以内の濃度比は60%以上である。実施例35及び図13に示すように、注射後2時間までに、1つ以上の小分子抗ウイルス阻害剤ELFで装飾されたFcドメイン(配列番号64)を有する複合体のレベルは、残りの時間経過にわたってのAUCによる測定で、驚くべきことに血漿曝露レベルの約60%であり、このことは、血漿から肺内のELFへの複合体のほぼ即時の分配を示すしている。これは、Fc含有複合体が肺に急速に分布し、血漿中のレベルと比較して肺内で高濃度を維持することを示している。
IV.アルブミンタンパク質及びアルブミンタンパク質結合ペプチド
アルブミンタンパク質
本発明のアルブミンタンパク質は、天然に存在するアルブミン、またはそのバリアント、例えば天然に存在するアルブミンタンパク質の改変型バリアントであり得る。バリアントには、多型、断片、例えばドメイン及びサブドメイン、ならびに融合タンパク質が含まれる。アルブミンタンパク質は、いかなる供給源から得られるアルブミンタンパク質の配列を含んでいてもよい。好ましくは、供給源は哺乳動物、例えばヒトまたはウシである。最も好ましくは、アルブミンタンパク質はヒト血清アルブミン(HSA)またはそのバリアントである。ヒト血清アルブミンには、ヒトに天然に存在するアミノ酸配列を有する任意のアルブミンタンパク質、及びそのバリアントが含まれる。アルブミンタンパク質コード配列は、ヒト遺伝子に対応するcDNAの単離及び配列決定のための当業者に知られている方法によって得ることができる。本発明のアルブミンタンパク質は、配列番号96もしくは配列番号97に示されるヒト血清アルブミン(HSA)のアミノ酸配列、または配列番号98に示されるマウス血清アルブミン(MSA)のアミノ酸配列、またはそのバリアントもしくは断片、好ましくはその機能性バリアントもしくは断片を含み得る。断片またはバリアントは、機能性であってもなくてもよいし、またはアルブミンの機能をある程度保持していてもよい。例えば、断片またはバリアントは、HSAまたはMSAなどのアルブミン受容体と結合する能力を、親アルブミン(例えば、断片またはバリアントを得る元となる親アルブミン)の能力の少なくとも10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%または105%保持していてもよい。相対結合能は、当技術分野で知られている方法、例えば表面プラズモン共鳴によって決定され得る。
アルブミンタンパク質
本発明のアルブミンタンパク質は、天然に存在するアルブミン、またはそのバリアント、例えば天然に存在するアルブミンタンパク質の改変型バリアントであり得る。バリアントには、多型、断片、例えばドメイン及びサブドメイン、ならびに融合タンパク質が含まれる。アルブミンタンパク質は、いかなる供給源から得られるアルブミンタンパク質の配列を含んでいてもよい。好ましくは、供給源は哺乳動物、例えばヒトまたはウシである。最も好ましくは、アルブミンタンパク質はヒト血清アルブミン(HSA)またはそのバリアントである。ヒト血清アルブミンには、ヒトに天然に存在するアミノ酸配列を有する任意のアルブミンタンパク質、及びそのバリアントが含まれる。アルブミンタンパク質コード配列は、ヒト遺伝子に対応するcDNAの単離及び配列決定のための当業者に知られている方法によって得ることができる。本発明のアルブミンタンパク質は、配列番号96もしくは配列番号97に示されるヒト血清アルブミン(HSA)のアミノ酸配列、または配列番号98に示されるマウス血清アルブミン(MSA)のアミノ酸配列、またはそのバリアントもしくは断片、好ましくはその機能性バリアントもしくは断片を含み得る。断片またはバリアントは、機能性であってもなくてもよいし、またはアルブミンの機能をある程度保持していてもよい。例えば、断片またはバリアントは、HSAまたはMSAなどのアルブミン受容体と結合する能力を、親アルブミン(例えば、断片またはバリアントを得る元となる親アルブミン)の能力の少なくとも10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%または105%保持していてもよい。相対結合能は、当技術分野で知られている方法、例えば表面プラズモン共鳴によって決定され得る。
アルブミンタンパク質は、ヒト血清アルブミンなどのアルブミンタンパク質の天然に存在する多型バリアントであってもよい。ヒト血清アルブミンのバリアントまたは断片は、大抵、ヒト血清アルブミンまたはマウス血清アルブミンのリガンド結合活性の少なくとも5%、10%、15%、20%、30%、40%、50%、60%または70%、好ましくは80%、90%、95%、100%または105%、またはそれ以上を有しているものである。
アルブミンタンパク質はウシ血清アルブミンのアミノ酸配列を含んでいてもよい。ウシ血清アルブミンタンパク質には、ウシに天然に存在するアミノ酸配列を有する任意のアルブミン、例えば、Swissprot受託番号P02769で表されるもの、及び本明細書中で定義されるそのバリアントが含まれる。ウシ血清アルブミンタンパク質には、完全長ウシ血清アルブミンまたは本明細書中で定義されるそのバリアントの断片も含まれる。
アルブミンタンパク質は、イヌ(例えばSwissprot受託番号P49822-1)、ブタ(例えばSwissprot受託番号P08835-1)、ヤギ(例えばSigma製品番号A2514またはA4164)、ネコ(例えばSwissprot受託番号P49064-1)、ニワトリ(例えばSwissprot受託番号P19121-1)、オボアルブミン(例えばニワトリオボアルブミン)(例えばSwissprot受託番号P01012-1)、シチメンチョウオボアルブミン(例えばSwissprot受託番号O73860-1)、ロバ(例えばSwissprot受託番号Q5XLE4-1)、モルモット(例えばSwissprot受託番号Q6WDN9-1)、ハムスター(例えば、DeMarco et al.International Journal for Parasitology 37(11):1201-1208(2007)に記載のもの)、ウマ(例えばSwissprot受託番号P35747-1)、アカゲザル(例えばSwissprot受託番号Q28522-1)、マウス(例えばSwissprot受託番号P07724-1)、ハト(例えば、Khan et al.Int.J.Biol.Macromol.30(3-4),171-8(2002)で定義されているもの)、ウサギ(例えばSwissprot受託番号P49065-1)、ラット(例えばSwissprot受託番号P02770-1)、またはヒツジ(例えばSwissprot受託番号P14639-1)からの血清アルブミンの1つに由来するアルブミンの配列を含み得、本明細書中で定義されるそのバリアント及び断片を含む。
アルブミンの多くの天然に存在する変異体形態が当業者に知られている。アルブミンの天然に存在する変異体形態は例えば、Peters,et al.All About Albumin:Biochemistry,Genetics and Medical Applications,Academic Press,Inc.,San Diego,Calif.,p.170-181(1996)に記載されている。
本発明のアルブミンタンパク質には、天然に存在するアルブミンタンパク質のバリアントが含まれる。バリアント型アルブミンは、保存的か非保存的かのどちらかである少なくとも1つのアミノ酸変異、例えば、挿入、欠失または置換によって生じるアミノ酸変異を有するアルブミンタンパク質を指し、但し、そのような変更は、少なくとも1つの基本的特性が大幅に変化していない(例えば、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%または40%よりも大きく変化していない)アルブミンタンパク質をもたらすものであることを条件とする。アルブミンタンパク質の活性を定義し得る例示的な特性としては、結合活性(例えば、ビリルビンまたは脂肪酸、例えば長鎖脂肪酸に対する結合特異性または親和性を含む)、浸透圧、または特定pH範囲での挙動が挙げられる。
典型的にはアルブミンタンパク質バリアントは、天然に存在するアルブミンタンパク質、例えば配列番号96~98のいずれか1つのアルブミンタンパク質との少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも60%、好ましくは少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%または少なくとも99%のアミノ酸配列同一性を有するものである。
組換えヒトアルブミンを製造及び精製する方法は十分に確立されており(Sleep et al.Biotechnology,8(1):42-6(1990))、薬学的用途のための組換えヒトアルブミンの製造(Bosse et al.J Clin Pharmacol 45(1):57-67(2005))を含む。HSAの三次元構造はX線結晶構造解析によって明らかにされている(Carter et al.Science.244(4909):1195-8(1998))、Sugio et al.Protein Eng.12(6):439-46(1999))。HSAポリペプチド鎖は35個のシステイン残基を有するが、これらは、17個のジスルフィド結合と、成熟タンパク質の位置34にある対形成していない(例えば遊離の)1個のシステインとを形成している。HSAのCys-34は、分子とアルブミンとの複合のために使用されたことがあり(Leger et al.Bioorg Med Chem Lett 14(17):4395-8(2004)、Thibaudeau et al.Bioconjug Chem 16(4):1000-8(2005))、部位特異的な複合のための部位を提供する。
配列番号96(ヒト血清アルブミン(HSA)、バリアント1)
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配列番号97(ヒト血清アルブミン(HSA)、バリアント2)
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配列番号98(マウス血清アルブミン(MSA))
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配列番号96(ヒト血清アルブミン(HSA)、バリアント1)
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配列番号97(ヒト血清アルブミン(HSA)、バリアント2)
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配列番号98(マウス血清アルブミン(MSA))
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アルブミンタンパク質の複合
本発明のアルブミンタンパク質は、(例えば、gp120結合剤単量体または二量体のリンカー部分によって)本発明の任意の化合物に(例えば共有結合で)複合され得る。アルブミンタンパク質は、低分子タンパク質複合体を製造するための当業者によく知られている任意の方法によって本発明の任意の化合物に複合され得る。これは、溶媒曝露システインまたはリジンなどの溶媒曝露アミノ酸に対する共有結合による複合を含み得る。例えば、ヒト血清アルブミンは、配列番号96のCys34または配列番号97のCys40に対応する硫黄原子に対する共有結合リンケージによって本発明の化合物に複合され得る。
本発明のアルブミンタンパク質は、(例えば、gp120結合剤単量体または二量体のリンカー部分によって)本発明の任意の化合物に(例えば共有結合で)複合され得る。アルブミンタンパク質は、低分子タンパク質複合体を製造するための当業者によく知られている任意の方法によって本発明の任意の化合物に複合され得る。これは、溶媒曝露システインまたはリジンなどの溶媒曝露アミノ酸に対する共有結合による複合を含み得る。例えば、ヒト血清アルブミンは、配列番号96のCys34または配列番号97のCys40に対応する硫黄原子に対する共有結合リンケージによって本発明の化合物に複合され得る。
本発明のアルブミンタンパク質は、アルブミンタンパク質のC末端部またはN末端部の10アミノ酸残基以内に位置するアミノ酸によって本発明の任意の化合物に複合され得る。アルブミンタンパク質は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15または20個以上のアミノ酸のC末端またはN末端ポリペプチド融合を含み得る。C末端またはN末端ポリペプチド融合は、1つ以上の溶媒曝露システインまたはリジン残基を含み得、これが本発明の化合物の共有結合による複合(例えば、リンカーによる場合を含めて、gp120結合剤単量体または二量体との複合)に使用され得る。
本発明のアルブミンタンパク質には、本発明の化合物との複合(例えば、リンカーによる場合を含めて、gp120結合剤単量体または二量体との複合)のための部位を提供し得るものである1つ以上の溶媒曝露システインまたはリジン残基を含むように操作された任意のアルブミンタンパク質が含まれる。アルブミンタンパク質は、単一の溶媒曝露システインまたはリジンを含有してこれによって本発明の化合物の部位特異的な複合を可能にしていることが最も好ましかろう。
1つ以上の複合可能システイン残基を含んだアルブミンタンパク質の改変型バリアントを製造する例示的な方法は米国特許出願第2017/0081389号に示されており、参照によりこの全体を本明細書に援用する。手短に述べると、好ましいアルブミンタンパク質バリアントは、対形成していない(例えば遊離の)単一の溶媒曝露システイン残基を含んでこれによってリンカーとシステイン残基との部位特異的な複合を可能にしているものである。
対形成していない溶媒曝露システイン残基との化学的複合を可能にする操作がなされたアルブミンタンパク質としては、以下のアルブミンタンパク質バリアントが挙げられる:
(a)配列番号96のL585、D1、A2、D562、A364、A504、E505、T79、E86、D129、D549、A581、D121、E82、S270、Q397及びA578のいずれかに対応するアミノ酸残基のところにシステインによる非システインアミノ酸残基の置換を有するアルブミンタンパク質、
(b)配列番号96のL585、D1、A2、D562、A364、A504、E505、T79、E86、D129、D549、A581、D121、E82、S270、Q397及びA578のいずれかに対応するアミノ酸残基のNもしくはC末端側に隣接する位置にシステインの挿入を有するアルブミンタンパク質、
(c)配列番号96のC369、C361、C91、C177、C567、C316、C75、C169、C124もしくはC558のいずれかに対応する残基のところに、遊離チオール基を有する対形成していないシステインを有するように操作されたものであり、配列番号96のC360、C316、C75、C168、C558、C361、C91、C124、C169もしくはC567に対応する残基の欠失もしくは置換によって作り出されていてもいなくてもよい、アルブミンタンパク質、及び/または
(d)アルブミンタンパク質のNもしくはC末端にシステインを付加したもの。
(a)配列番号96のL585、D1、A2、D562、A364、A504、E505、T79、E86、D129、D549、A581、D121、E82、S270、Q397及びA578のいずれかに対応するアミノ酸残基のところにシステインによる非システインアミノ酸残基の置換を有するアルブミンタンパク質、
(b)配列番号96のL585、D1、A2、D562、A364、A504、E505、T79、E86、D129、D549、A581、D121、E82、S270、Q397及びA578のいずれかに対応するアミノ酸残基のNもしくはC末端側に隣接する位置にシステインの挿入を有するアルブミンタンパク質、
(c)配列番号96のC369、C361、C91、C177、C567、C316、C75、C169、C124もしくはC558のいずれかに対応する残基のところに、遊離チオール基を有する対形成していないシステインを有するように操作されたものであり、配列番号96のC360、C316、C75、C168、C558、C361、C91、C124、C169もしくはC567に対応する残基の欠失もしくは置換によって作り出されていてもいなくてもよい、アルブミンタンパク質、及び/または
(d)アルブミンタンパク質のNもしくはC末端にシステインを付加したもの。
本発明のいくつかの実施形態では、(a)、(b)、(c)及び/または(d)の置換、欠失、付加または挿入事象の最終的結果としてポリペプチド配列の複合可能システイン残基の数が親アルブミン配列に比べて増加する。本発明のいくつかの実施形態では、(a)、(b)、(c)及び/または(d)の置換、欠失、付加または挿入事象の最終的結果としてポリペプチド配列の複合可能システイン残基の数は1つになり、したがって、部位特異的な複合が可能になる。
単一の溶媒曝露リジン残基を有してこれによってリンカーとリジン残基との部位特異的な複合を可能にしているアルブミンタンパク質も、好ましいアルブミンタンパク質バリアントとして挙げられる。そのようなバリアントは、上記方法のいずれかを含めたアルブミンタンパク質の操作(例えば、挿入、欠失、置換、またはC末端もしくはN末端融合)によって作り出され得る。
アルブミンタンパク質結合ペプチド
生物活性化合物とアルブミンタンパク質結合ペプチドとを複合させることで生物活性化合物の薬力学の変化、例えば、組織取込み、浸透及び拡散の変化をもたらすことができる。好ましい実施形態では、アルブミンタンパク質結合ペプチドと本発明の化合物(例えば、リンカーによる場合を含めて、gp120結合剤単量体または二量体)とを複合させることで、化合物単独の場合と比較して有効性が向上する、または化合物の毒性が低下する。
生物活性化合物とアルブミンタンパク質結合ペプチドとを複合させることで生物活性化合物の薬力学の変化、例えば、組織取込み、浸透及び拡散の変化をもたらすことができる。好ましい実施形態では、アルブミンタンパク質結合ペプチドと本発明の化合物(例えば、リンカーによる場合を含めて、gp120結合剤単量体または二量体)とを複合させることで、化合物単独の場合と比較して有効性が向上する、または化合物の毒性が低下する。
本発明のアルブミンタンパク質結合ペプチドは、アルブミンタンパク質、例えば本明細書に記載のアルブミンタンパク質のいずれかに対する親和性及び結合機能を有する5~50(例えば、5~40、5~30、5~20、5~15、5~10、10~50、10~30、または10~20)アミノ酸残基のアミノ酸配列を有する任意のポリペプチドを含む。好ましくは、アルブミンタンパク質結合ペプチドは、天然に存在する血清アルブミン、最も好ましくはヒト血清アルブミンに結合する。アルブミンタンパク質結合ペプチドは由来が様々であり得、例えば、合成、ヒト、マウスまたはラットに由来し得る。本発明のアルブミンタンパク質結合ペプチドには、本発明の化合物との複合(例えば、リンカーによる場合を含めて、gp120結合剤単量体または二量体との複合)のための部位を提供し得るものである溶媒曝露システインまたはリジン残基を1つ以上(例えば、2つ、3つ、4つまたは5つ)含むように操作されたアルブミンタンパク質結合ペプチドが含まれる。アルブミンタンパク質結合ペプチドは、単一の溶媒曝露システインまたはリジンを含有してこれによって本発明の化合物の部位特異的な複合を可能にしていることが最も好ましかろう。アルブミンタンパク質結合ペプチドは、天然に存在するアミノ酸残基のみを含んでいてもよいし、または天然に存在しないアミノ酸残基を1つ以上含んでいてもよい。天然に存在しないアミノ酸残基(例えば、天然に存在しないアミノ酸残基の側鎖)は、含まれている場合、本発明の化合物(例えば、リンカーによる場合を含めて、gp120結合剤単量体または二量体)に対する結合点として使用され得る。本発明のアルブミンタンパク質結合ペプチドは、直鎖状であってもよいし、または環状であってもよい。本発明のアルブミンタンパク質結合ペプチドには、当業者に知られている任意のアルブミンタンパク質結合ペプチドが含まれ、その例は本明細書中に提供されている。
好ましくは、アルブミンタンパク質結合ペプチド、及びアルブミンタンパク質結合ペプチドを含む複合体は、約100μM未満、好ましくは約100nM未満の解離定数Kdによって特徴付けられる親和性でアルブミンタンパク質(例えばヒト血清アルブミン)に結合し、最も好ましくは他の血漿タンパク質に実質的に結合しない。そのような化合物の具体例は直鎖状または環状ペプチドであり、好ましくはその長さが約10~20アミノ酸残基であり、任意選択的にN末端もしくはC末端またはその両方において修飾されている。
アルブミンタンパク質結合ペプチドには、以下の一般式を含む直鎖状及び環状ペプチドが含まれ、式中、Xaaは任意のアミノ酸である:
配列番号101
Xaa-Xaa-Cys-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Cys-Xaa-Xaa-Phe-Cys-Xaa-Asp-Trp-Pro-Xaa-Xaa-Xaa-Ser-Cys
配列番号102
Val-Cys-Tyr-Xaa-Xaa-Xaa-Ile-Cys-Phe
配列番号103
Cys-Tyr-Xaa-Pro-Gly-Xaa-Cys
配列番号104
Asp-Xaa-Cys-Leu-Pro-Xaa-Trp-Gly-Cys-Leu-Trp
配列番号105
Trp-Cys-Asp-Xaa-Xaa-Leu-Xaa-Ala-Xaa-Asp-Leu-Cys
配列番号106
Asp-Leu-Val-Xaa-Leu-Gly-Leu-Glu-Cys-Trp
配列番号101
Xaa-Xaa-Cys-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Cys-Xaa-Xaa-Phe-Cys-Xaa-Asp-Trp-Pro-Xaa-Xaa-Xaa-Ser-Cys
配列番号102
Val-Cys-Tyr-Xaa-Xaa-Xaa-Ile-Cys-Phe
配列番号103
Cys-Tyr-Xaa-Pro-Gly-Xaa-Cys
配列番号104
Asp-Xaa-Cys-Leu-Pro-Xaa-Trp-Gly-Cys-Leu-Trp
配列番号105
Trp-Cys-Asp-Xaa-Xaa-Leu-Xaa-Ala-Xaa-Asp-Leu-Cys
配列番号106
Asp-Leu-Val-Xaa-Leu-Gly-Leu-Glu-Cys-Trp
本発明のアルブミンタンパク質結合ペプチドにはさらに、直鎖状または環状であり得る以下のペプチド配列のいずれかが含まれる:
配列番号107 DLCLRDWGCLW
配列番号108 DICLPRWGCLW
配列番号109 MEDICLPRWGCLWGD
配列番号110 QRLMEDICLPRWGCLWEDDE
配列番号111 QGLIGDICLPRWGCLWGRSV
配列番号112 QGLIGDICLPRWGCLWGRSVK
配列番号113 EDICLPRWGCLWEDD
配列番号114 RLMEDICLPRWGCLWEDD
配列番号115 MEDICLPRWGCLWEDD
配列番号116 MEDICLPRWGCLWED
配列番号117 RLMEDICLARWGCLWEDD
配列番号118 EVRSFCTRWPAEKSCKPLRG
配列番号119 RAPESFVCYWETICFERSEQ
配列番号120 EMCYFPGICWM
配列番号107 DLCLRDWGCLW
配列番号108 DICLPRWGCLW
配列番号109 MEDICLPRWGCLWGD
配列番号110 QRLMEDICLPRWGCLWEDDE
配列番号111 QGLIGDICLPRWGCLWGRSV
配列番号112 QGLIGDICLPRWGCLWGRSVK
配列番号113 EDICLPRWGCLWEDD
配列番号114 RLMEDICLPRWGCLWEDD
配列番号115 MEDICLPRWGCLWEDD
配列番号116 MEDICLPRWGCLWED
配列番号117 RLMEDICLARWGCLWEDD
配列番号118 EVRSFCTRWPAEKSCKPLRG
配列番号119 RAPESFVCYWETICFERSEQ
配列番号120 EMCYFPGICWM
配列番号101~120のアルブミンタンパク質結合ペプチドは、N末端に付加アミノ酸(Xaa)xを、及び/またはC末端に付加アミノ酸(Xaa)zをさらに含んでいてもよく、ここで、Xaaは任意のアミノ酸であり、x及びzは、0以上の自然数であり、一般的に100未満、好ましくは10未満、より好ましくは0、1、2、3、4または5である。
さらなる例示的なアルブミンタンパク質結合ペプチドは米国特許出願第2005/0287153号に示されており、参照によりこの全体を本明細書に援用する。
アルブミンタンパク質結合ペプチドの複合
本発明のアルブミンタンパク質結合ペプチドは、(例えば、gp120結合剤単量体または二量体のリンカー部分によって)本発明の任意の化合物に(例えば共有結合で)複合され得る。アルブミンタンパク質結合ペプチドは、ペプチド-低分子複合体を製造するための当業者に知られている任意の方法によって本発明の任意の化合物に複合され得る。これは、アミノ酸残基、例えば、システイン、リジンまたは非天然アミノ酸の側鎖基に対する共有結合による複合を含み得る。あるいは、共有結合による複合が、C末端で(例えば、C末端カルボン酸に対して、またはC末端残基の側鎖基に対して)、またはN末端で(例えば、N末端アミノ基に対して、またはN末端アミノ酸の側鎖基に対して)起こってもよい。
本発明のアルブミンタンパク質結合ペプチドは、(例えば、gp120結合剤単量体または二量体のリンカー部分によって)本発明の任意の化合物に(例えば共有結合で)複合され得る。アルブミンタンパク質結合ペプチドは、ペプチド-低分子複合体を製造するための当業者に知られている任意の方法によって本発明の任意の化合物に複合され得る。これは、アミノ酸残基、例えば、システイン、リジンまたは非天然アミノ酸の側鎖基に対する共有結合による複合を含み得る。あるいは、共有結合による複合が、C末端で(例えば、C末端カルボン酸に対して、またはC末端残基の側鎖基に対して)、またはN末端で(例えば、N末端アミノ基に対して、またはN末端アミノ酸の側鎖基に対して)起こってもよい。
V.リンカー
リンカーは、本明細書に記載の複合体の中の2つ以上の構成要素の間(例えば、本明細書に記載の複合体の中の2つのgp120結合剤の間、本明細書に記載の複合体の中のgp120結合剤とFcドメイン単量体、Fcドメイン、またはアルブミンタンパク質との間、及び本明細書に記載の複合体の中の2つのgp120結合剤の二量体とFcドメイン単量体、Fcドメインまたはアルブミンタンパク質との間)のリンケージまたは連結子を指す。
リンカーは、本明細書に記載の複合体の中の2つ以上の構成要素の間(例えば、本明細書に記載の複合体の中の2つのgp120結合剤の間、本明細書に記載の複合体の中のgp120結合剤とFcドメイン単量体、Fcドメイン、またはアルブミンタンパク質との間、及び本明細書に記載の複合体の中の2つのgp120結合剤の二量体とFcドメイン単量体、Fcドメインまたはアルブミンタンパク質との間)のリンケージまたは連結子を指す。
gp120結合剤の二量体に共有結合で連結されたFcドメイン単量体、Fcドメイン、またはアルブミンタンパク質を有する複合体中のリンカー
本明細書に記載の1つ以上のgp120結合剤の二量体に共有結合で連結されたFcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドを含有する複合体において、複合体中のリンカー(例えばLまたはL’)は分岐構造であってもよい。本明細書にさらに記載されるように、本明細書に記載の複合体の中のリンカー(例えばLまたはL’)は多価構造、例えば、それぞれ2本または3本のアームを有する二価または三価構造であってもよい。リンカーが3本のアームを有する場合のいくつかの実施形態では、アームのうち2本は第1及び第2のgp120結合剤と結合し得、3本目のアームは、Fcドメイン単量体及びFcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドと結合し得る。リンカーが2本のアームを有する場合のいくつかの実施形態では、片方のアームはFcドメイン単量体、Fcドメイン、またはアルブミンタンパク質に結合し得、もう片方のアームは、2つのgp120結合剤のうちの1つに結合し得る。他の実施形態では、3本のアームを有するリンカーは、1つ以上のgp120結合剤の二量体に共有結合で連結されたFcドメイン単量体、Fcドメイン、またはアルブミンタンパク質を含有する複合体に2つのgp120結合剤を結合させるために使用され得る。
本明細書に記載の1つ以上のgp120結合剤の二量体に共有結合で連結されたFcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドを含有する複合体において、複合体中のリンカー(例えばLまたはL’)は分岐構造であってもよい。本明細書にさらに記載されるように、本明細書に記載の複合体の中のリンカー(例えばLまたはL’)は多価構造、例えば、それぞれ2本または3本のアームを有する二価または三価構造であってもよい。リンカーが3本のアームを有する場合のいくつかの実施形態では、アームのうち2本は第1及び第2のgp120結合剤と結合し得、3本目のアームは、Fcドメイン単量体及びFcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドと結合し得る。リンカーが2本のアームを有する場合のいくつかの実施形態では、片方のアームはFcドメイン単量体、Fcドメイン、またはアルブミンタンパク質に結合し得、もう片方のアームは、2つのgp120結合剤のうちの1つに結合し得る。他の実施形態では、3本のアームを有するリンカーは、1つ以上のgp120結合剤の二量体に共有結合で連結されたFcドメイン単量体、Fcドメイン、またはアルブミンタンパク質を含有する複合体に2つのgp120結合剤を結合させるために使用され得る。
いくつかの実施形態では、1つ以上のgp120結合剤の二量体に共有結合で連結されたFcドメイン単量体、Fcドメイン、またはアルブミンタンパク質を有する複合体中のリンカーは、式(D-L-I):
式中、LAは、式GA1-(ZA1)g1-(YA1)h1-(ZA2)i1-(YA2)j1-(ZA3)k1-(YA3)l1-(ZA4)m1-(YA4)n1-(ZA5)o1-GA2で表され、LBは、式GB1-(ZB1)g2-(YB1)h2-(ZB2)i2-(YB2)j2-(ZB3)k2-(YB3)l2-(ZB4)m2-(YB4)n2-(ZB5)o2-GB2で表され、LCは、式GC1-(ZC1)g3-(YC1)h3-(ZC2)i3-(YC2)j3-(ZC3)k3-(YC3)l3-(ZC4)m3-(YC4)n3-(ZC5)o3-GC2で表され、GA1は式(D-L-I)中のQiとの結合であり、GA2は第1のgp120結合剤(例えばA1)との結合であり、GB1は式(D-L-I)中のQiとの結合であり、GB2は第2のgp120結合剤(例えばA2)との結合であり、GC1は式(D-L-I)中のQiとの結合であり、GC2は、Fcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質もしくはアルブミンタンパク質結合ペプチドとの結合であり、またはEに複合している官能基と反応することができる官能基(例えば、マレイミドとシステイン、アミンと活性カルボン酸、チオールとマレイミド、活性スルホン酸とアミン、イソシアネートとアミン、アジドとアルキン、及びアルケンとテトラジン)であり、ZA1、ZA2、ZA3、ZA4、ZA5、ZB1、ZB2、ZB3、ZB4、ZB5、ZC1、ZC2、ZC3、ZC4及びZC5の各々は独立して、任意選択的に置換されたC1-C20アルキレン、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC5-C15アリーレン、または任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリーレンであり、YA1、YA2、YA3、YA4、YB1、YB2、YB3、YB4、YC1、YC2、YC3及びYC4の各々は独立して、O、S、NRi、P、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート、ホスホリルまたはイミノであり、Riは、H、任意選択的に置換されたC1-C20アルキル、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニル、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニル、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニル、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、または任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリールであり、g1、h1、i1、j1、k1、l1、m1、n1、o1、g2、h2、i2、j2、k2、l2、m2、n2、o2、g3、h3、i3、j3、k3、l3、m3、n3及びo3の各々は独立して0または1であり、Qは、窒素原子、任意選択的に置換されたC1-C20アルキレン、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC5-C15アリーレン、または任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリーレンである。
いくつかの実施形態では、任意選択的に置換されたには、ポリエチレングリコール(PEG)による置換が含まれる。PEGは、繰り返し単位構造(-CH2CH2O-)nを有し、式中、nは、2~100の整数である。ポリエチレングリコールは、PEG2~PEG100(例えば、PEG2、PEG3、PEG4、PEG5、PEG5-PEG10、PEG10-PEG20、PEG20-PEG30、PEG30-PEG40、PEG50-PEG60、PEG60-PEG70、PEG70-PEG80、PEG80-PEG90、PEG90-PEG100)のいずれか1つから選択され得る。
いくつかの実施形態では、LCは、Fcドメインへの2つの結合点(例えば、2つのGC2)を有し得る。
いくつかの実施形態では、Lは、ポリエチレングリコール(PEG)リンカーを含む。PEGリンカーには、繰り返し単位構造(-CH2CH2O-)nを有するリンカーが含まれ、式中、nは、2~100の整数である。ポリエチレングリコールリンカーは、gp120結合剤とE(例えば、式(M-I)~(MX))を共有結合させ得る。ポリエチレングリコールリンカーは、第1のgp120結合剤と第2のgp120結合剤(例えば、式(D-I)~(D-X)のいずれか1つの複合体中の)を共有結合させ得る。ポリエチレングリコールリンカーは、gp120結合剤二量体とE(例えば、式(D-I)~(D-X)のいずれか1つの複合体内の)を共有結合させ得る。ポリエチレングリコールリンカーは、PEG2~PEG100(例えば、PEG2、PEG3、PEG4、PEG5、PEG5-PEG10、PEG10-PEG20、PEG20-PEG30、PEG30-PEG40、PEG50-PEG60、PEG60-PEG70、PEG70-PEG80、PEG80-PEG90、PEG90-PEG100)のいずれか1つから選択され得る。いくつかの実施形態では、Lcは、PEGリンカーを含み、その場合、LCは、Qi及びEの各々に共有結合している。
本明細書に記載の複合体に使用され得る式(D-L-I)のリンカーとして、
が挙げられるが、これらに限定されず;
式中、z1、z2、y1、y2、y3、及びy4は、各々独立して、1~20の整数であり;R9は、H、C1-C20アルキル、C3-C20シクロアルキル、C2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、及びC3-C15ヘテロアリールから選択される。
式(D-L-I)のリンカーはまた、
gp120結合剤の単量体に共有結合で連結されたFcドメイン単量体、Fcドメイン、またはアルブミンタンパク質を有する複合体中のリンカー
本明細書に記載の1つ以上のgp120結合剤の単量体に共有結合で連結されたFcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質、またはアルブミンタンパク質結合ペプチドを含有する複合体において、複合体中のリンカー(例えば、LまたはL’)は、2本のアームを有する二価構造であり得る。二価リンカー中の片方のアームはgp120結合剤の単量体に結合し得、もう片方のアームは、Fcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質、またはアルブミンタンパク質結合ペプチドに結合し得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の中の1つ以上のgp120結合剤の単量体は各々独立して、Fcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドの中の原子に連結され得る。
本明細書に記載の1つ以上のgp120結合剤の単量体に共有結合で連結されたFcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質、またはアルブミンタンパク質結合ペプチドを含有する複合体において、複合体中のリンカー(例えば、LまたはL’)は、2本のアームを有する二価構造であり得る。二価リンカー中の片方のアームはgp120結合剤の単量体に結合し得、もう片方のアームは、Fcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質、またはアルブミンタンパク質結合ペプチドに結合し得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の中の1つ以上のgp120結合剤の単量体は各々独立して、Fcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドの中の原子に連結され得る。
いくつかの実施形態では、リンカーは、式(M-L-I):
J1-(Q1)g-(T1)h-(Q2)i-(T2)j-(Q3)k-(T3)l-(Q4)m-(T4)n-(Q5)o-J2
によって記述され、式中、J1は、gp120結合剤との結合であり、J2は、Fcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質もしくはアルブミンタンパク質結合ペプチドとの結合であり、またはFcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質もしくはアルブミンタンパク質結合ペプチドに複合している官能基と反応することができる官能基(例えば、マレイミドとシステイン、アミンと活性カルボン酸、チオールとマレイミド、活性スルホン酸とアミン、イソシアネートとアミン、アジドとアルキン、及びアルケンとテトラゼン)であり、Q1、Q2、Q3、Q4及びQ5の各々は独立して、任意選択的に置換されたC1-C20アルキレン、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC5-C15アリーレン、または任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリーレンであり、T1、T2、T3、T4の各々は独立して、O、S、NRi、P、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート、ホスホリルまたはイミノであり、Riは、H、任意選択的に置換されたC1-C20アルキル、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニル、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケ
ニル、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニル、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、または任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリールであり;g、h、i、j、k、l、m、n及びoの各々は、独立して、0または1である。
J1-(Q1)g-(T1)h-(Q2)i-(T2)j-(Q3)k-(T3)l-(Q4)m-(T4)n-(Q5)o-J2
によって記述され、式中、J1は、gp120結合剤との結合であり、J2は、Fcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質もしくはアルブミンタンパク質結合ペプチドとの結合であり、またはFcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質もしくはアルブミンタンパク質結合ペプチドに複合している官能基と反応することができる官能基(例えば、マレイミドとシステイン、アミンと活性カルボン酸、チオールとマレイミド、活性スルホン酸とアミン、イソシアネートとアミン、アジドとアルキン、及びアルケンとテトラゼン)であり、Q1、Q2、Q3、Q4及びQ5の各々は独立して、任意選択的に置換されたC1-C20アルキレン、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC5-C15アリーレン、または任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリーレンであり、T1、T2、T3、T4の各々は独立して、O、S、NRi、P、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート、ホスホリルまたはイミノであり、Riは、H、任意選択的に置換されたC1-C20アルキル、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニル、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケ
ニル、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニル、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、または任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリールであり;g、h、i、j、k、l、m、n及びoの各々は、独立して、0または1である。
いくつかの実施形態では、任意選択的に置換されたには、ポリエチレングリコール(PEG)による置換が含まれる。PEGは、繰り返し単位構造(-CH2CH2O-)nを有し、式中、nは、2~100の整数である。ポリエチレングリコールは、PEG2~PEG100(例えば、PEG2、PEG3、PEG4、PEG5、PEG5-PEG10、PEG10-PEG20、PEG20-PEG30、PEG30-PEG40、PEG50-PEG60、PEG60-PEG70、PEG70-PEG80、PEG80-PEG90、PEG90-PEG100)のいずれか1つから選択され得る。
いくつかの実施形態では、J2は、Fcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドに対する2つの結合点(例えば2つのJ2)を有し得る。
本明細書に記載の複合体に使用され得る式(M-L-I)のリンカーとして、
本明細書に記載の複合体で使用し得る式(M-L-I)のリンカーとして、
が挙げられるが、これらに限定されず、
式中、各Yは、独立して、(-O-)、(-S-)、(-R8-)、(-O(C=O)NR8-)、(-O(C=S)NR8-)、(-O(C=O)O-)、(-O(C=O)-)、(-NH(C=O)O-)、(-NH(C=O)-)、(-NH(C=NH)-)、(-NH(C=O)NR8-)、(-NH(C=NH)NR8-)、(-NH(C=S)NR8-)、(-NH(C=S)-)、(-OCH2(C=O)NR8-)、(-NH(SO2)-)、(-NH(SO2)NR8-)、(-OR9-)、(-NR9-)、(-SR9-)、(-R9NH(C=O)-)、(-R9OR9C(=O)NH-)、(-CH2NH(C=O)-)、(-CH2OCH2(C=O)NH-)、(-(C=NR8)NH-)、(-NH(SO2)-)、(-(C=O)NH-)、(-C(=O)-)、(-C(NR8)-)、または(-R9C(=O)-)から選択され;
各R8は、独立して、H、任意選択的に置換されたC1-C20アルキル、任意選択的に置換されたC1-C20アルキレン、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、及び任意選択的に置換されたC2-C15ヘテロアリールから選択され;
各R9は、独立して、任意選択的に置換されたC1-C20アルキレン、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、及び任意選択的に置換されたC2-C15ヘテロアリールから選択され;
d、e、y1、及びx1の各々は、独立して、1~26の整数である(例えば、dは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、または26である)。
連結基
いくつかの実施形態では、リンカーは、本明細書に記載の複合体中のgp120結合剤と、Fcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質もしくはアルブミンタンパク質結合ペプチドとの間に、または本明細書に記載の複合体中の2つのgp120結合剤の間に空間、剛直性及び/または柔軟性を提供する。いくつかの実施形態では、リンカーは、結合、例えば共有結合、例えば、アミド結合、ジスルフィド結合、C-O結合、C-N結合、N-N結合、C-S結合、または化学反応、例えば化学的複合によって作り出される任意の種類の結合であり得る。いくつかの実施形態では、リンカー(式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つに示されるLまたはL’)は、250個以下の原子(例えば、1~2、1~4、1~6、1~8、1~10、1~12、1~14、1~16、1~18、1~20、1~25、1~30、1~35、1~40、1~45、1~50、1~55、1~60、1~65、1~70、1~75、1~80、1~85、1~90、1~95、1~100、1~110、1~120、1~130、1~140、1~150、1~160、1~170、1~180、1~190、1~200、1~210、1~220、1~230、1~240、または1~250個の原子(複数可);250、240、230、220、210、200、190、180、170、160、150、140、130、120、110、100、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、28、26、24、22、20、18、16、14、12、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1個の原子(複数可))を含む。いくつかの実施形態では、リンカー(LまたはL)は、250個以下の非水素原子(例えば、1~2、1~4、1~6、1~8、1~10、1~12、1~14、1~16、1~18、1~20、1~25、1~30、1~35、1~40、1~45、1~50、1~55、1~60、1~65、1~70、1~75、1~80、1~85、1~90、1~95、1~100、1~110、1~120、1~130、1~140、1~150、1~160、1~170、1~180、1~190、1~200、1~210、1~220、1~230、1~240、または1~250個の非水素原子(複数可);250、240、230、220、210、200、190、180、170、160、150、140、130、120、110、100、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、28、26、24、22、20、18、16、14、12、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1個の非水素原子(複数可))を含む。いくつかの実施形態では、リンカー(LまたはL)の主鎖は、250個以下の原子(例えば、1~2、1~4、1~6、1~8、1~10、1~12、1~14、1~16、1~18、1~20、1~25、1~30、1~35、1~40、1~45、1~50、1~55、1~60、1~65、1~70、1~75、1~80、1~85、1~90、1~95、1~100、1~110、1~120、1~130、1~140、1~150、1~160、1~170、1~180、1~190、1~200、1~210、1~220、1~230、1~240、または1~250個の原子(複数可);250、240、230、220、210、200、190、180、170、160、150、140、130、120、110、100、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、28、26、24、22、20、18、16、14、12、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1個の原子(複数可)を含む。リンカーの「主鎖」は、複合体のある部分から複合体の別の部分までの最短経路を一緒になって形成しているリンカー中の原子を指す。リンカーの主鎖中の原子は、複合体のある部分と複合体の別の部分との連結に直接関与している。例えば、リンカーの主鎖中の炭素に結合している水素原子は、複合体のある部分と複合体の別の部分との連結に直接関与しているとはみなされない。
いくつかの実施形態では、リンカーは、本明細書に記載の複合体中のgp120結合剤と、Fcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質もしくはアルブミンタンパク質結合ペプチドとの間に、または本明細書に記載の複合体中の2つのgp120結合剤の間に空間、剛直性及び/または柔軟性を提供する。いくつかの実施形態では、リンカーは、結合、例えば共有結合、例えば、アミド結合、ジスルフィド結合、C-O結合、C-N結合、N-N結合、C-S結合、または化学反応、例えば化学的複合によって作り出される任意の種類の結合であり得る。いくつかの実施形態では、リンカー(式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つに示されるLまたはL’)は、250個以下の原子(例えば、1~2、1~4、1~6、1~8、1~10、1~12、1~14、1~16、1~18、1~20、1~25、1~30、1~35、1~40、1~45、1~50、1~55、1~60、1~65、1~70、1~75、1~80、1~85、1~90、1~95、1~100、1~110、1~120、1~130、1~140、1~150、1~160、1~170、1~180、1~190、1~200、1~210、1~220、1~230、1~240、または1~250個の原子(複数可);250、240、230、220、210、200、190、180、170、160、150、140、130、120、110、100、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、28、26、24、22、20、18、16、14、12、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1個の原子(複数可))を含む。いくつかの実施形態では、リンカー(LまたはL)は、250個以下の非水素原子(例えば、1~2、1~4、1~6、1~8、1~10、1~12、1~14、1~16、1~18、1~20、1~25、1~30、1~35、1~40、1~45、1~50、1~55、1~60、1~65、1~70、1~75、1~80、1~85、1~90、1~95、1~100、1~110、1~120、1~130、1~140、1~150、1~160、1~170、1~180、1~190、1~200、1~210、1~220、1~230、1~240、または1~250個の非水素原子(複数可);250、240、230、220、210、200、190、180、170、160、150、140、130、120、110、100、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、28、26、24、22、20、18、16、14、12、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1個の非水素原子(複数可))を含む。いくつかの実施形態では、リンカー(LまたはL)の主鎖は、250個以下の原子(例えば、1~2、1~4、1~6、1~8、1~10、1~12、1~14、1~16、1~18、1~20、1~25、1~30、1~35、1~40、1~45、1~50、1~55、1~60、1~65、1~70、1~75、1~80、1~85、1~90、1~95、1~100、1~110、1~120、1~130、1~140、1~150、1~160、1~170、1~180、1~190、1~200、1~210、1~220、1~230、1~240、または1~250個の原子(複数可);250、240、230、220、210、200、190、180、170、160、150、140、130、120、110、100、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、28、26、24、22、20、18、16、14、12、10、9、8、7、6、5、4、3、2、または1個の原子(複数可)を含む。リンカーの「主鎖」は、複合体のある部分から複合体の別の部分までの最短経路を一緒になって形成しているリンカー中の原子を指す。リンカーの主鎖中の原子は、複合体のある部分と複合体の別の部分との連結に直接関与している。例えば、リンカーの主鎖中の炭素に結合している水素原子は、複合体のある部分と複合体の別の部分との連結に直接関与しているとはみなされない。
リンカー(LまたはL’)を作るために使用され得る分子は、少なくとも2つの官能基、例えば2つのカルボン酸基を含む。三価リンカーのいくつかの実施形態では、リンカーの2本のアームは2つのジカルボン酸を含有し得、ここで、第1カルボン酸は複合体中の第1のgp120結合剤との共有結合リンケージを形成するものであり得、第2カルボン酸は複合体中の第2のgp120結合剤との共有結合リンケージを形成するものであり得、そして、リンカーの3本目のアームは複合体中のFcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドとの共有結合リンケージ(例えばC-O結合)のためのものであり得る。二価リンカーのいくつかの実施形態では、二価リンカーは2つのカルボン酸を含有し得、ここで、第1カルボン酸は複合体中のある構成要素(例えばgp120結合剤)との共有結合リンケージを形成するものであり得、第2カルボン酸は複合体中の別の構成要素(例えば、Fcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチド)との共有結合リンケージ(例えばC-S結合またはC-N結合)を形成するものであり得る。
いくつかの実施形態では、ジカルボン酸分子がリンカー(例えばジカルボン酸リンカー)として使用され得る。例えば、1つ以上のgp120結合剤の二量体に共有結合で連結されたFcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドを含有する複合体において、ジカルボン酸分子中の第1カルボン酸は第1のgp120結合剤のヒドロキシルまたはアミン基と共有結合リンケージを形成し得、第2カルボン酸は第2のgp120結合剤のヒドロキシルまたはアミン基と共有結合リンケージを形成し得る。
リンカーを形成するために使用され得るジカルボン酸分子の例としては、
式中、nは1~20の整数である(例えば、nは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)。
リンカーを形成するために使用され得るジカルボン酸分子の他の例として、
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されているものなどのジカルボン酸分子は、1つ以上の追加の置換基を含有するようにさらに官能化され得る。ジカルボン酸がさらに官能化されて、例えば、Fcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドに対する(例えば、PEGリンカーなどのリンカーによる)結合点を提供していてもよい。
いくつかの実施形態では、gp120結合剤がFcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドに結合している場合、連結基は、原子1~25個分の間隔で離隔したカルボン酸部分及びアミノ部分を含む部分を含み得る。そのような連結基の例として、
式中、nは1~20の整数である(例えば、nは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)。
いくつかの実施形態では、連結基は、カルボン酸部分及びアミノ酸部分を含む部分、例えば本明細書に記載のものを含み得、1つ以上の追加の官能基を含有するようにさらに官能化され得る。そのような連結基は、例えばFcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドに対する(例えば、PEGリンカーなどのリンカーによる)結合点を提供するようにさらに官能化され得る。
いくつかの実施形態では、gp120結合剤がFcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドに結合している場合、連結基は、原子1~25個分の間隔で離隔した2つのまたはアミノ部分(two or amino moieties)(例えばジアミノ部分)を含む部分を含み得る。そのような連結基の例として、
式中、nは1~20の整数である(例えば、nは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20である)。
いくつかの実施形態では、連結基は、ジアミノ部分、例えば本明細書に記載のものを含み得、1つ以上の追加の官能基を含有するようにさらに官能化され得る。そのようなジアミノ連結基は、例えばFcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチドに対する(例えば、PEGリンカーなどのリンカーによる)結合点を提供するようにさらに官能化され得る。
いくつかの実施形態では、アジド基を含有する分子を使用してリンカーが形成され得、この場合、アジド基はアルキンとの環化付加を経て1,2,3-トリアゾールリンケージを形成し得る。いくつかの実施形態では、アルキン基を含有する分子を使用してリンカーが形成され得、この場合、アルキン基はアジドとの環化付加を経て1,2,3-トリアゾールリンケージを形成し得る。いくつかの実施形態では、マレイミド基を含有する分子を使用してリンカーが形成され得、この場合、マレイミド基はシステインと反応してC-Sリンケージを形成し得る。いくつかの実施形態では、1つ以上のハロアルキル基を含有する分子を使用してリンカーが形成され得、この場合、ハロアルキル基はgp120結合剤との共有結合リンケージ、例えばC-N及びC-Oリンケージを形成し得る。
いくつかの実施形態では、リンカー(LまたはL’)は、例えば合成ポリマー(例えばポリエチレングリコール(PEG)ポリマー)に由来する合成基を含み得る。いくつかの実施形態では、リンカーは1つ以上のアミノ酸残基を含み得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、アミノ酸配列(例えば、1~25アミノ酸、1~10アミノ酸、1~9アミノ酸、1~8アミノ酸、1~7アミノ酸、1~6アミノ酸、1~5アミノ酸、1~4アミノ酸、1~3アミノ酸、1~2アミノ酸または1アミノ酸配列)であり得る。いくつかの実施形態では、リンカー(LまたはL’)は、1つ以上の任意選択的に置換されたC1-C20アルキレン、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキレン(例えばPEG単位)、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニレン(例えばC2アルケニレン)、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキレン(例えば、シクロプロピレン、シクロブチレン)、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC5-C15アリーレン(例えばC6アリーレン)、任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリーレン(例えば、イミダゾール、ピリジン)、O、S、NRi(Riは、H、任意選択的に置換されたC1-C20アルキル、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニル、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニル、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキ
ニル、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、または任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリールである)、P、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート、ホスホリルまたはイミノを含み得る。
ニル、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、または任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリールである)、P、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート、ホスホリルまたはイミノを含み得る。
複合体形成化学
gp120結合剤単量体または二量体(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの複合体中の)は、当業者に公知の任意の標準的な複合体形成化学によって、Fcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質、またはアルブミンタンパク質結合ペプチドに、例えば、リンカーで複合され得る。以下の複合体形成化学が、例えば、PEGリンカー(例えば、官能化PEGリンカー)と、Fcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質、またはアルブミンタンパク質結合ペプチドとの複合のために特に企図される。
gp120結合剤単量体または二量体(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの複合体中の)は、当業者に公知の任意の標準的な複合体形成化学によって、Fcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質、またはアルブミンタンパク質結合ペプチドに、例えば、リンカーで複合され得る。以下の複合体形成化学が、例えば、PEGリンカー(例えば、官能化PEGリンカー)と、Fcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質、またはアルブミンタンパク質結合ペプチドとの複合のために特に企図される。
リンカーを使用する、複合体中の2つ以上の構成要素の共有結合による複合は、周知の有機化学合成技術及び方法を用いて成し遂げられ得る。2つの構成要素に付いている相補的な官能基が互いに反応して共有結合を形成し得る。相補的な反応性官能基の例として、例えば、マレイミドとシステイン、アミンと活性カルボン酸、チオールとマレイミド、活性スルホン酸とアミン、イソシアネートとアミン、アジドとアルキン、及びアルケンとテトラジンが挙げられるが、これらに限定されない。ポリペプチド(例えば、Fcドメイン単量体、Fcドメイン、Fc結合ペプチド、アルブミンタンパク質またはアルブミンタンパク質結合ペプチド)に対する部位特異的な複合は、当技術分野で公知の技術を用いて成し遂げられ得る。Fcドメインに対する小分子の部位特異的な複合のための例示的な技術は、Agarwall.P.,et al.Bioconjugate Chem.26:176-192(2015)の中で提供されている。
アミノ基と反応することができる官能基の他の例としては、例えばアルキル化及びアシル化剤が挙げられる。代表的なアルキル化剤としては、(i)α-ハロアセチル基、例えば、XCH2CO-(式中、X=Br、Cl、またはI)、(ii)マイケル型反応か、環カルボニル基に対する付加によるアシル化かのどちらかによってアミノ基と反応するものであるN-マレイミド基、(iii)アリールハライド、例えば、ニトロハロ芳香族基、(iv)アルキルハライド、(v)アミノ基とのシッフ塩基形成が可能なアルデヒドまたはケトン、(vi)アミノ、スルフヒドリルまたはフェノール性ヒドロキシル基と反応し得るものであるエポキシド、例えばエピクロロヒドリン及びビスオキシラン、(vii)アミノ、スルフヒドリル及びヒドロキシル基などの求核剤に対する反応性を有するものである塩素含有s-トリアジン、(viii)開環によるアミノ基などの求核剤に対する反応性を有するものであるアジリジン、(ix)スクアリン酸ジエチルエステル、ならびに(x)α-ハロアルキルエーテルが挙げられる。
アミノ反応性アシル化基の例としては、例えば、(i)イソシアネート及びイソチオシアネート、(ii)塩化スルホニル、(iii)酸ハライド、(iv)活性エステル、例えばニトロフェニルエステルもしくはN-ヒドロキシスクシンイミジルエステル、(v)酸無水物、例えば、混成、対称またはN-カルボン酸無水物、(vi)アシルアジド、ならびに(vii)イミドエステルが挙げられる。アルデヒド及びケトンはアミンと反応してシッフ塩基を形成し得、これは還元的アミノ化によって安定化され得る。
反応前に特定の官能基を例えばさらなる反応性または選択性の付与のために他の官能基に変換してもよいことは理解されよう。この目的のために有用な方法の例としては、ジカルボン酸無水物などの試薬を使用するアミンからカルボキシルへの変換;N-アセチルホモシステインチオラクトン、S-アセチルメルカプトコハク酸無水物、2-イミノチオランまたはチオール含有スクシンイミジル誘導体などの試薬を使用するアミンからチオールへの変換;α-ハロアセテートなどの試薬を使用するチオールからカルボキシルへの変換;エチレンイミンまたは2-ブロモエチルアミンなどの試薬を使用するチオールからアミンへの変換;カルボジイミドなどの試薬に続いてジアミンを使用するカルボキシルからアミンへの変換;ならびにトシルクロリドなどの試薬の使用に続いてチオアセテートによるエステル交換及び酢酸ナトリウムによるチオールへの加水分解を行う、アルコールからチオールへの変換が挙げられる。
いくつかの実施形態では、本発明のリンカー(例えばLまたはL’、例えばD-L-IのLC)を(例えば本明細書に記載の方法のいずれかによって)E(例えばFcドメイン単量体、Fcドメイン、またはアルブミンタンパク質)と複合させる。本発明の好ましい実施形態では、リンカーを、(a)Eのリジンに対するチオ尿素リンケージ(すなわち、-NH(C=S)NH-)、(b)Eのリジンに対するカルバメートリンケージ(すなわち、-NH(C=O)-O)、(c)還元的アミノ化によるE及びリジンとの間のアミンリンケージ(すなわち、-NHCH2)、(d)Eのリジンに対するアミド(すなわち、-NH-(C=O)CH2)、(e)リンカーのマレイミドとEのシステインとの間のシステイン-マレイミド複合体、(f)リンカーとEの炭水化物(例えばFcドメイン単量体またはFcドメインのグリコシル基)との間の還元的アミノ化によるアミンリンケージ(すなわち、-NHCH2)、(g)Eの2つのシステインにリンカーが複合した再架橋システイン複合体、(h)リンカーとEの炭水化物(例えばFcドメイン単量体またはFcドメインのグリコシル基)との間のオキシムリンケージ、(i)リンカーとEのアミノ酸残基との間のオキシムリンケージ、(j)リンカーとEとの間のアジドリンケージ、(k)Eに対するリンカーの直接的アシル化、または(l)リンカーとEとの間のチオエーテルリンケージによって複合させる。
いくつかの実施形態では、リンカーはEと複合しており、リンケージが構造-NH(C=NH)X-を含み、式中のXは、O、HNまたは結合である。いくつかの実施形態では、リンカーはEと複合しており、リンカーの残部とEとの間のリンケージが構造-NH(C=O)NH-を含む。
いくつかの実施形態では、リンカーをEに複合させ、リンケージは、構造-R9OR9C(= O)NH-を含み、式中、R9は、H、任意選択的に置換されたC1-C20アルキル、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、または任意選択的に置換されたC2-C15ヘテロアリールである。いくつかの実施形態では、リンカーをEに複合させ、リンカーの残りの部分とEとの間のリンケージは、構造-CH2OCH2C(=O)NH-を含む。
例示的な連結戦略(例えば、gp120結合剤の単量体または二量体を、例えば、リンカーを介してEに連結するための方法)を、図1~4及び14にさらに示す。
いくつかの実施形態では、リンカー(例えば活性エステル、例えばニトロフェニルエステルもしくはN-ヒドロキシスクシンイミジルエステル、またはその誘導体(例えば官能化PEGリンカー(例えば、アジド-PEG2~PEG40-NHSエステル)はEと複合しており、T(例えばDAR)が約0.5~10.0、例えば、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9または10.0である。これらの場合、E-(PEG2~PEG40)-アジドはクリック複合体形成によって、末端アルキンリンカー(例えばLまたはL’、例えばD-L-IのLC)を有するIntと反応し得る。クリック複合体形成の間、アジド(例えば、Fc-(PEG2~PEG40)-アジド)とアルキン(例えば、末端アルキンリンカー(例えばLまたはL’、例えばD-L-IのLC)を有するInt)との銅触媒反応で5員ヘテロ原子環が形成される。いくつかの実施形態では、Eに複合するリンカーは末端アルキンであり、末端アジドを有するIntと複合する。E-(PEG2~PEG40)-アジドの調製物の例示的な調製については、実施例2、3、及び12に記載されている。当業者であればクリックケミストリー複合体形成による最終生成物を容易に理解するであろう。
例示的な連結戦略(例えば、ノイラミニダーゼ阻害剤の単量体または二量体を、例えばリンカーによってEに連結する方法)は、図1~4及び14にさらに示されている。
VI.併用療法
抗ウイルス剤
いくつかの実施形態では、1つ以上の抗ウイルス剤を、本明細書に記載の複合体(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの複合体)と組み合わせて投与してもよい(例えば、実質的に同時に投与する(例えば、同じ医薬組成物または別個の医薬組成物中で)か、または異なる時間に別々に投与する)。
抗ウイルス剤
いくつかの実施形態では、1つ以上の抗ウイルス剤を、本明細書に記載の複合体(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの複合体)と組み合わせて投与してもよい(例えば、実質的に同時に投与する(例えば、同じ医薬組成物または別個の医薬組成物中で)か、または異なる時間に別々に投与する)。
いくつかの実施形態では、抗ウイルス剤は、HIVの治療用の抗ウイルス剤である。例えば、抗ウイルス剤は、ヌクレオシド/ヌクレオチド逆転写酵素阻害剤、gp120阻害剤、ポリメラーゼ阻害剤、または融合タンパク質阻害剤であり得る。抗ウイルス剤は、ウイルスまたは宿主対象のいずれかを標的とし得る。本明細書に記載の複合体(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII))と組み合わせてHIVの治療に使用する抗ウイルス剤は、インテグラーゼ阻害剤(例えば、ドルテグラビル、エルビテグラビル、またはラルテグラビル)、ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤(NRTI)(例えば、アバカビル、ラミブジン、ジドブジン、エムトリシタビン、テノホビル、エムトリシタビン、ジダノシン、またはスタブジン)、非ヌクレオシド系逆転写酵素阻害剤(NNRTI)(例えば、エファビレンツ、エトラビリン、ネビラピン、リルピビリン、またはデラビルジン)、プロテアーゼ阻害剤(例えば、アタザナビル、コビシスタット、ダルナビル、コビシスタット、ロピナビル、リトナビル、フォサンプレナビル、ティプラナビル、ネルフィナビル、インジナビル、またはサキナビル)、ウイルス侵入の阻害剤(例えば、エンフビリチド)、CCR5アンタゴニスト(例えば、マラビロック)、またはCYP3A阻害剤(例えば、コビシスタットまたはリトナビル)、または宿主もしくはウイルス遺伝子を標的とするsiRNA、またはそのプロドラッグ、またはその薬学的に許容される塩から選択され得る。
抗ウイルスワクチン
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体のいずれか1つ(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの複合体)を抗ウイルスワクチン(例えば、対象におけるウイルスに対して向けられる免疫応答を誘発する組成物)と組み合わせて投与する。抗ウイルスワクチンは、複合体と実質的に同時に(例えば、同じ医薬組成物として、または別個の医薬組成物として)投与してもよく、または複合体よりも前もしくは後に(例えば、1日、2日、5日、1週間、2週間、3週間、1ヶ月、2ヶ月、6ヶ月または12ヶ月またはそれより長い期間の内に)投与してもよい。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体のいずれか1つ(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの複合体)を抗ウイルスワクチン(例えば、対象におけるウイルスに対して向けられる免疫応答を誘発する組成物)と組み合わせて投与する。抗ウイルスワクチンは、複合体と実質的に同時に(例えば、同じ医薬組成物として、または別個の医薬組成物として)投与してもよく、または複合体よりも前もしくは後に(例えば、1日、2日、5日、1週間、2週間、3週間、1ヶ月、2ヶ月、6ヶ月または12ヶ月またはそれより長い期間の内に)投与してもよい。
いくつかの実施形態では、ウイルスワクチンは、対象において、HIV-1またはHIV-2に対する免疫応答を誘発する免疫原を含む。いくつかの実施形態では、ワクチンを、点鼻薬として投与する。
VII.方法
本明細書に記載の方法は、例えば、対象におけるウイルス感染症(例えばHIV感染症)を防御または治療する方法、及びウイルス粒子の成長を防止する、安定させる、または阻害する方法を含む。対象におけるウイルス感染症(例えばHIV感染症)を治療する方法は、本明細書に記載の複合体(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの複合体)またはその医薬組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、ウイルス感染症はヒト免疫不全ウイルス(例えば、HIV-1またはHIV-2)によって引き起こされる。いくつかの実施形態では、ウイルス感染症はウイルスの耐性株によって引き起こされる。ウイルス粒子の成長を防止する、安定させる、もしくは阻害する、またはウイルスの複製及び拡散を防止する方法は、ウイルスを、またはウイルス成長が許容されやすい部位を本明細書に記載の複合体(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの複合体)またはその医薬組成物に接触させることを含む。
本明細書に記載の方法は、例えば、対象におけるウイルス感染症(例えばHIV感染症)を防御または治療する方法、及びウイルス粒子の成長を防止する、安定させる、または阻害する方法を含む。対象におけるウイルス感染症(例えばHIV感染症)を治療する方法は、本明細書に記載の複合体(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの複合体)またはその医薬組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、ウイルス感染症はヒト免疫不全ウイルス(例えば、HIV-1またはHIV-2)によって引き起こされる。いくつかの実施形態では、ウイルス感染症はウイルスの耐性株によって引き起こされる。ウイルス粒子の成長を防止する、安定させる、もしくは阻害する、またはウイルスの複製及び拡散を防止する方法は、ウイルスを、またはウイルス成長が許容されやすい部位を本明細書に記載の複合体(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの複合体)またはその医薬組成物に接触させることを含む。
さらに、本明細書に記載の方法は、本明細書に記載の複合体(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの複合体)を対象に投与することによって対象におけるウイルス感染症を防御または治療する方法も含む。いくつかの実施形態では、方法は、抗ウイルス剤または抗ウイルスワクチンを対象に投与することをさらに含む。
本明細書に記載の方法はまた、(1)本明細書に記載の複合体(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの複合体)、及び(2)抗ウイルス剤または抗ウイルスワクチンを対象に投与することによって上記対象におけるウイルス感染症を防御または治療する方法も含む。本明細書に記載の方法はまた、ウイルスを、またはウイルス成長が許容されやすい部位を(1)本明細書に記載の複合体(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの複合体)、及び(2)抗ウイルス剤または抗ウイルスワクチンに接触させることによって、ウイルス粒子の成長を防止する、安定させる、もしくは阻害する、またはウイルスの複製もしくは拡散を防止する方法も含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの複合体)を先に投与し、続いて抗ウイルス剤または抗ウイルスワクチンを単独で投与する。いくつかの実施形態では、抗ウイルス剤または抗ウイルスワクチンを先に投与し、続いて本明細書に記載の複合体を単独で投与する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体、及び抗ウイルス剤または抗ウイルスワクチンを実質的に同時に(例えば、同じ医薬組成物として、または別個の医薬組成物として)投与する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体、または抗ウイルス剤もしくは抗ウイルスワクチンを先に投与し、続いて本明細書に記載の複合体、及び抗ウイルス剤または抗ウイルスワクチンを実質的に同時に(例えば、同じ医薬組成物として、または別個の医薬組成物として)投与する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体、及び抗ウイルス剤または抗ウイルスワクチンを先に実質的に同時に(例えば、同じ医薬組成物として、または別個の医薬組成物として)投与し、続いて本明細書に記載の複合体、または抗ウイルス剤もしくは抗ウイルスワクチンを単独で投与する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの複合体)と、抗ウイルス剤または抗ウイルスワクチンとを一緒に(例えば、同じもしくは別個の医薬組成物として実質的に同時に、または同じ治療計画の中で別個に)投与する場合、複合体及び抗ウイルス剤または抗ウイルスワクチンの各々によるウイルス複製の阻害は、各々を治療計画の中で単独で使用した場合の複合体及び抗ウイルス剤または抗ウイルスワクチンの各々によるウイルス複製の阻害に比べてより大きくなり得る(例えばより低い濃度で起こり得る)。
VIII.医薬組成物及び調製
本明細書に記載の複合体は、本明細書に記載の方法に使用するための医薬組成物に製剤化され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体は単独で医薬組成物に製剤化され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体は抗ウイルス剤または抗ウイルスワクチンと組み合わせて医薬組成物に製剤化され得る。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、本明細書に記載の複合体(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つで表される複合体)、ならびに薬学的に許容される担体及び賦形剤を含む。
本明細書に記載の複合体は、本明細書に記載の方法に使用するための医薬組成物に製剤化され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体は単独で医薬組成物に製剤化され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体は抗ウイルス剤または抗ウイルスワクチンと組み合わせて医薬組成物に製剤化され得る。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、本明細書に記載の複合体(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つで表される複合体)、ならびに薬学的に許容される担体及び賦形剤を含む。
医薬組成物に許容される担体及び賦形剤は、採用される投薬量及び濃度でレシピエントに対して無毒である。許容される担体及び賦形剤には、緩衝剤、例えば、ホスフェート、シトレート、HEPES及びTAE、酸化防止剤、例えばアスコルビン酸及びメチオニン、保存剤、例えば、塩化ヘキサメトニウム、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、レゾルシノール及び塩化ベンザルコニウム、タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミン、ゼラチン、デキストラン及び免疫グロブリン、親水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン、アミノ酸残基、例えば、グリシン、グルタミン、ヒスチジン及びリジン、ならびに炭水化物、例えば、グルコース、マンノース、スクロース及びソルビトールが含まれ得る。
他の賦形剤の例としては、付着防止剤、結合剤、コーティング剤、圧縮助剤、崩壊剤、色素、保湿剤、乳化剤、フィラー(希釈剤)、膜形成剤またはコーティング剤、香味剤、香料、滑剤(流動性増強剤)、滑沢剤、収着剤、懸濁もしくは分散剤、または甘味剤が挙げられるが、これらに限定されない。例示的な賦形剤としては、ブチル化ヒドロキシトルエン(BHT)、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム(二塩基性)、ステアリン酸カルシウム、クロスカルメロース、架橋ポリビニルピロリドン、クエン酸、クロスポビドン、システイン、エチルセルロース、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ラクトース、ステアリン酸マグネシウム、マルチトール、マンニトール、メチオニン、メチルセルロース、メチルパラベン、微結晶セルロース、ポリエチレングリコール、ポビドン、アルファ化澱粉、プロピルパラベン、パルミチン酸レチニル、セラック、二酸化ケイ素、カルボキシメチルセルロースナトリウム、クエン酸ナトリウム、澱粉グリコール酸ナトリウム、ソルビトール、澱粉(トウモロコシ)、ステアリン酸、ステアリン酸、スクロース、タルク、二酸化チタン、ビタミンA、ビタミンE、ビタミンC及びキシリトールが挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書の複合体は、薬学的に許容される塩としての調製が可能であるように電離基を有し得る。これらの塩は、無機もしくは有機酸を含んだ酸付加塩であり得、または本明細書の複合体の酸形態の場合には塩は無機もしくは有機塩基から調製され得る。複合体は、薬学的に許容される酸または塩基の付加生成物として調製された薬学的に許容される塩として調製または使用されることが多い。好適な薬学的に許容される酸及び塩基は当技術分野でよく知られており、例えば、酸付加塩を形成するためには塩酸、硫酸、臭化水素酸、酢酸、乳酸、クエン酸または酒石酸であり、塩基性塩を形成するためには水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化アンモニウム、カフェイン、種々のアミンなどである。適切な塩を調製する方法は当技術分野で十分に確立されている。
代表的な酸付加塩としては、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、カンファー酸塩、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプトン酸塩、ヘキサン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、2-ヒドロキシ-エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、2-ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチニン酸塩、過硫酸塩、3-フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩及び吉草酸塩が挙げられるが、これらに限定されない。代表的なアルカリまたはアルカリ土類金属塩としては、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム及びマグネシウム、ならびに無毒のアンモニウム、第四級アンモニウム及びアミンカチオン、例えば、限定されないが、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン及びエチルアミンが挙げられるが、これらに限定されない。
投与経路及び投薬量に応じて、本明細書に記載の方法に使用される本明細書の複合体またはその医薬組成物を、容易な送達を可能にするのに適した医薬組成物に製剤化することになる。複合体(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの複合体)またはその医薬組成物は、筋肉内、静脈内(例えば、静脈内への使用に適した溶媒系に溶かした無菌溶液として)、皮内、動脈内、腹腔内、病巣内、頭蓋内、関節内、前立腺内、胸腔内、気管内、鼻腔内、硝子体内、膣内、直腸内、局所、腫瘍内、腹膜、皮下、結膜下、小嚢内、粘膜、心嚢内、臍帯内、眼内、経口(例えば、錠剤、カプセル剤、カプレット剤、ゲルキャップ剤またはシロップ剤)、局所(例えば、クリーム剤、ゲル剤、ローション剤または軟膏剤)、局部、吸入、注射、または輸注(例えば、連続輸注、標的細胞を直接曝露させる局部的灌流、カテーテル、洗浄、クリームまたは脂質組成物)投与されるように製剤化され得る。投与経路に応じて本明細書の複合体またはその医薬組成物は例えば、錠剤、カプセル剤、丸剤、散剤、顆粒剤、懸濁剤、乳剤、液剤、ハイドロゲルを含めたゲル剤、ペースト剤、軟膏剤、クリーム剤、膏薬、ドレンチ剤、浸透圧薬物送達装置、坐剤、浣腸剤、注射剤、埋植剤、スプレー剤、イオン導入による送達に適した調製物、またはエアゾール剤の形態であり得る。組成物は従来の薬務に従って製剤化され得る。
本明細書に記載の複合体は、当技術分野で知られている様々な方法で製剤化され得る。ヒト及び動物対象の治療として使用するためには本明細書に記載の複合体は医薬組成物または動物用組成物として製剤化され得る。治療する対象(例えばヒト)、投与様式、及び望まれる治療の種類、例えば予防または療法に応じて、本明細書に記載の複合体はこれらのパラメータに添った方法で製剤化される。そのような技術の概要は、Remington:The Science and Practice of Pharmacy,22nd Edition,Lippincott Williams &Wilkins(2012)、及びEncyclopedia of Pharmaceutical Technology,4th Edition,J.Swarbrick and J.C.Boylan,Marcel Dekker,New York(2013)の中に見出され、参照によりこれらの各々を本明細書に援用する。
製剤は、全身投与または局所もしくは局部投与に適した方法で調製され得る。全身製剤は、注射(例えば、筋肉内、静脈内または皮下注射)のために設計されたものを含み、または経皮、経粘膜もしくは経口投与のために調製されたものであってもよい。製剤は一般に、希釈剤、ならびに場合によって佐薬、緩衝剤及び保存剤を含むことになる。複合体は、リポソーム製剤またはマイクロエマルジョンとしても投与され得る。全身投与には、比較的非侵襲的な方法、例えば、坐剤、経皮パッチの使用、経粘膜送達、及び鼻腔内投与も含まれ得る。経口投与も本明細書の複合体に適している。好適な形態としては、当技術分野で理解されるようにシロップ剤、カプセル剤及び錠剤が挙げられる。
医薬組成物を注射製剤の形態で非経口投与することもできる。注射用の医薬組成物は、無菌溶液または任意の薬学的に許容される脂質をビヒクルとして使用して製剤化され得る。脂質による溶液または懸濁液に適した固体形態として製剤を調製してもよい。薬学的に許容されるビヒクルとしては、無菌水、生理食塩水、及び細胞培地(例えば、ダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)、α-改変イーグル培地(α-MEM)、F-12培地)が挙げられるが、これらに限定されない。そのような注射組成物はまた、一定量の無毒な補助物質、例えば、湿潤または乳化剤、pH緩衝剤、例えば酢酸ナトリウム及びソルビタンモノラウレートを含有していてもよい。製剤化方法は当技術分野において既知であり、例えば、Pharmaceutical Preformulation and Formulation,2nd Edition,M.Gibson,Taylor &Francis Group,CRC Press(2009)を参照されたい。
医薬組成物を経口製剤の形態で調製することができる。経口使用のための製剤には、有効成分(複数可)を無毒の薬学的に許容される賦形剤との混合物の中に含有する錠剤が含まれる。これらの賦形剤は、例えば、不活性な希釈剤またはフィラー(例えば、スクロース、ソルビトール、砂糖、マンニトール、微結晶セルロース、澱粉、例えばジャガイモ澱粉、炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウム、硫酸カルシウムまたはリン酸ナトリウム);造粒及び崩壊剤(例えば、微結晶セルロースを含めたセルロース誘導体、ジャガイモ澱粉を含めた澱粉、クロスカルメロースナトリウム、アルギネートまたはアルギン酸);結合剤(例えば、スクロース、グルコース、ソルビトール、アラビアガム、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、澱粉、アルファ化澱粉、微結晶セルロース、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、エチルセルロース、ポリビニルピロリドンまたはポリエチレングリコール);ならびに滑沢剤、滑剤及び付着防止剤(例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸、シリカ、水素添加植物油またはタルク)であり得る。経口使用のための製剤は、チュアブル錠としても、または有効成分と不活性固体希釈剤(例えば、ジャガイモ澱粉、ラクトース、微結晶セルロース、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリン)とが混合された硬ゼラチンカプセル剤としても、あるいは有効成分と水または油媒体、例えば、ピーナッツ油、流動パラフィンもしくはオリーブ油とが混合された軟ゼラチンカプセル剤としても提供され得る。散剤、顆粒剤及び小丸剤は、錠剤及びカプセル剤について上に述べた原料を使用して従来の方法で例えばミキサー、流動床装置または噴霧乾燥設備を使用して調製され得る。
経口製剤のための他の薬学的に許容される賦形剤としては、着色剤、香味剤、可塑剤、保湿剤及び緩衝剤が挙げられるが、これらに限定されない。経口使用のための製剤は、チュアブル錠としても、または有効成分と不活性固体希釈剤(例えば、ジャガイモ澱粉、ラクトース、微結晶セルロース、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリン)とが混合された硬ゼラチンカプセル剤としても、あるいは有効成分と水または油媒体、例えば、ピーナッツ油、流動パラフィンもしくはオリーブ油とが混合された軟ゼラチンカプセル剤としても提供され得る。散剤、顆粒剤及び小丸剤は、錠剤及びカプセル剤について上に述べた原料を使用して従来の方法で例えばミキサー、流動床装置または噴霧乾燥設備を使用して調製され得る。
本明細書に記載の複合体(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの複合体)またはその医薬組成物の溶解制御放出または拡散制御放出は、複合体の錠剤、カプセル剤、小丸剤もしくは顆粒製剤を適切にコーティングすることによって、または適切なマトリックスの中に複合体を組み込むことによって成し遂げられ得る。制御放出型コーティングは、上記のコーティング物質、及び/または例えばセラック、蜜蝋、glycowax、カスターワックス、カルナウバ蝋、ステアリルアルコール、モノステアリン酸グリセリル、ジステアリン酸グリセリル、パルミトステアリン酸グリセロール、エチルセルロース、アクリル樹脂、dl-ポリ乳酸、酢酸酪酸セルロース、ポリ塩化ビニル、ポリ酢酸ビニル、ビニルピロリドン、ポリエチレン、ポリメタクリレート、メチルメタクリレート、2-ヒドロキシメタクリレート、メタクリレートハイドロゲル、1,3ブチレングリコール、メタクリル酸エチレングリコール及び/またはポリエチレングリコールのうちの1つ以上を含み得る。制御放出マトリックス製剤において、マトリックス材料も、例えば、水和メチルセルロース、カルナウバ蝋及びステアリルアルコール、カーボポール934、シリコーン、トリステアリン酸グリセリル、アクリル酸メチル-メタクリル酸メチル、ポリ塩化ビニル、ポリエチレン及び/またはハロゲン化フルオロカーボンを含み得る。
医薬組成物は、必要に応じて単位用量形態で形成されてもよい。医薬組成物中に含まれる活性成分、例えば本明細書に記載の複合体(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの複合体)の量は、指定範囲内で好適な用量(例えば、0.01~100mg/kg体重の範囲内の用量)を提供するような量とする。
IX.投与経路及び投薬量
本明細書に記載の方法のいずれかにおいて、本明細書の複合体は、ウイルス感染症(例えばHIV感染症)の治療もしくは防御、またはウイルス(例えばHIVウイルス)の増殖もしくは拡散の防止、安定化もしくは抑制に適した任意の経路で投与され得る。本明細書に記載の複合体は、薬学的に許容される希釈剤、担体または賦形剤と共にヒト、飼育ペット、家畜または他の動物に投与され得る。いくつかの実施形態では、投与することは、本明細書に記載の複合体(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの複合体)のいずれかまたは組成物の筋肉内、静脈内(例えば、静脈内への使用に適した溶媒系に溶かした無菌溶液として)、皮内、動脈内、腹腔内、病巣内、頭蓋内、関節内、前立腺内、胸腔内、気管内、鼻腔内、硝子体内、膣内、直腸内、局所、腫瘍内、腹膜、皮下、結膜下、小嚢内、粘膜、心嚢内、臍帯内、眼内、経口(例えば、錠剤、カプセル剤、カプレット剤、ゲルキャップ剤またはシロップ剤)、局所(例えば、クリーム剤、ゲル剤、ローション剤または軟膏剤)、局部、吸入、注射、または輸注(例えば、連続輸注、標的細胞を直接曝露させる局部的灌流、カテーテル、洗浄、クリームまたは脂質組成物)投与を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体に加えて抗ウイルス剤も投与する場合、抗ウイルス剤またはその医薬組成物も、本明細書に記載の投与経路のいずれかで投与され得る。
本明細書に記載の方法のいずれかにおいて、本明細書の複合体は、ウイルス感染症(例えばHIV感染症)の治療もしくは防御、またはウイルス(例えばHIVウイルス)の増殖もしくは拡散の防止、安定化もしくは抑制に適した任意の経路で投与され得る。本明細書に記載の複合体は、薬学的に許容される希釈剤、担体または賦形剤と共にヒト、飼育ペット、家畜または他の動物に投与され得る。いくつかの実施形態では、投与することは、本明細書に記載の複合体(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの複合体)のいずれかまたは組成物の筋肉内、静脈内(例えば、静脈内への使用に適した溶媒系に溶かした無菌溶液として)、皮内、動脈内、腹腔内、病巣内、頭蓋内、関節内、前立腺内、胸腔内、気管内、鼻腔内、硝子体内、膣内、直腸内、局所、腫瘍内、腹膜、皮下、結膜下、小嚢内、粘膜、心嚢内、臍帯内、眼内、経口(例えば、錠剤、カプセル剤、カプレット剤、ゲルキャップ剤またはシロップ剤)、局所(例えば、クリーム剤、ゲル剤、ローション剤または軟膏剤)、局部、吸入、注射、または輸注(例えば、連続輸注、標的細胞を直接曝露させる局部的灌流、カテーテル、洗浄、クリームまたは脂質組成物)投与を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体に加えて抗ウイルス剤も投与する場合、抗ウイルス剤またはその医薬組成物も、本明細書に記載の投与経路のいずれかで投与され得る。
本明細書に記載の複合体(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの複合体)またはその医薬組成物の投薬量は、投与経路、治療する疾患(例えばウイルス感染症の程度及び/または症状)、及び身体特性、例えば、対象の年齢、体重、全身の健康状態を含めた因子によって決まる。典型的には、単回用量が含有する複合体またはその医薬組成物の量は、毒性をあまりもたらさずにウイルス感染症を効果的に予防する、遅くする、または治療する量であり得る。医薬組成物は、0.01~500mg/kgの範囲(例えば、0.01、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、100、150、200、250、300、350、400、450または500mg/kg)、より具体的な実施形態では約0.1~約30mg/kg、より具体的な実施形態では約1~約30mg/kgの投薬量の本明細書に記載の複合体を含み得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの複合体)と抗ウイルス剤または抗ウイルスワクチンとを組み合わせて(例えば、同じもしくは別個の医薬組成物として実質的に同時に、または同じ治療計画の中で別個に)投与する場合、本明細書に記載の複合体の必要投薬量は、治療計画の中で複合体を単独で使用する場合の複合体の必要投薬量よりも少なくなり得る。
本明細書に記載の複合体(例えば、式(1)、(2)、(D-I)~(D-XVII)、または(M-I)~(M-XVII)のいずれか1つの複合体)またはその医薬組成物は、それを必要とする対象に例えば、1日に、1週間に、1ヶ月に、半年に、1年に、または医学的必要に応じて、1回以上(例えば、1~10回以上;1、2、3、4、5、6、7、8、9または10回)投与され得る。投薬量は単一あるいは複数の投薬計画において提供され得る。投与間のタイミングは、病状が改善するにつれて減少してもよく、または患者の健康状態が悪化するにつれて増加してもよい。投薬量及び投与頻度は、一般的な因子、例えば、感染の程度、及び対象の種々のパラメータに応じて医師によって調整され得る。
以下の実施例は、本明細書に記載の組成物及び方法がどのように用いられ得、作られ得、評価され得るかについての説明を当業者に提供するために示したものであり、純粋に本発明を例示することを意図したものであり、本発明者らが自らの発明であるとみなす範囲を限定する意図はない。
実施例1:Fc構築物の調製
タンパク質構築物(配列番号1、3、5、7、9、12及び14)を含むアミノ酸の逆翻訳物を固相合成によって合成した。オリゴヌクレオチド鋳型をpcDNA3.1(Life Technologies,Carlsbad,CA,USA)のクローニング部位BamHI及びXhoI(New England Biolabs,Ipswich,MA,USA)にクローニングし、ヒトインターロイキン-2またはヒトアルブミンに由来するシグナル配列を含ませた。pcDNA3.1プラスミドをTop10 E.coli細胞(LifeTech)に形質転換した。DNAを増幅し、抽出し、PURELINK(登録商標)HiPureプラスミドフィルターMaxiprepキット(LifeTech)を使用して精製した。プラスミドDNAを、製造業者のプロトコルに従ってExpiFectamine(商標)293トランスフェクションキット(LifeTech)を使用してHEK-293細胞に送達した。細胞を遠心分離し、濾過し、MabSelect Sure樹脂(GE Healthcare,Chicago,IL,USA)を使用して上清を精製した。ゲル中に1~2μgの各分子を装填すること及びinstant Blue染色を用いて染色することによってビストリス4~12%のSDS PAGEゲルを使用して精製分子を分析した。各ゲルは、示された分子量基準を有する分子量ラダーを含んでいた。還元及び非還元レーンを「R」及び「NR」で表す。図5~11は、Fcドメインの非還元及び還元SDS-PAGEが、それぞれ配列番号1、3、5、7、9、12及び14の配列を有するFcドメイン単量体から形成されていることを示している。
タンパク質構築物(配列番号1、3、5、7、9、12及び14)を含むアミノ酸の逆翻訳物を固相合成によって合成した。オリゴヌクレオチド鋳型をpcDNA3.1(Life Technologies,Carlsbad,CA,USA)のクローニング部位BamHI及びXhoI(New England Biolabs,Ipswich,MA,USA)にクローニングし、ヒトインターロイキン-2またはヒトアルブミンに由来するシグナル配列を含ませた。pcDNA3.1プラスミドをTop10 E.coli細胞(LifeTech)に形質転換した。DNAを増幅し、抽出し、PURELINK(登録商標)HiPureプラスミドフィルターMaxiprepキット(LifeTech)を使用して精製した。プラスミドDNAを、製造業者のプロトコルに従ってExpiFectamine(商標)293トランスフェクションキット(LifeTech)を使用してHEK-293細胞に送達した。細胞を遠心分離し、濾過し、MabSelect Sure樹脂(GE Healthcare,Chicago,IL,USA)を使用して上清を精製した。ゲル中に1~2μgの各分子を装填すること及びinstant Blue染色を用いて染色することによってビストリス4~12%のSDS PAGEゲルを使用して精製分子を分析した。各ゲルは、示された分子量基準を有する分子量ラダーを含んでいた。還元及び非還元レーンを「R」及び「NR」で表す。図5~11は、Fcドメインの非還元及び還元SDS-PAGEが、それぞれ配列番号1、3、5、7、9、12及び14の配列を有するFcドメイン単量体から形成されていることを示している。
実施例2.h-IgG1 Fc-PEG4-アジドの合成
DMF/PBS中の0.05M PEG4-アジドNHSエステル溶液の調製:195.8mgのPEG4-アジドNHSエステルを0℃で0.500mLのDMFに溶解し、0℃でPBS緩衝液を加えることにより9.88mLに希釈した。このPEG4-アジドNHSエステル溶液の当量を調整することにより、様々なDAR値を有する他のPEG4-アジドFcを調製するためにこの溶液を使用した。
DMF/PBS中の0.05M PEG4-アジドNHSエステル溶液の調製:195.8mgのPEG4-アジドNHSエステルを0℃で0.500mLのDMFに溶解し、0℃でPBS緩衝液を加えることにより9.88mLに希釈した。このPEG4-アジドNHSエステル溶液の当量を調整することにより、様々なDAR値を有する他のPEG4-アジドFcを調製するためにこの溶液を使用した。
PEG4-アジドFcの調製:0.05M PEG4-アジドNHSエステルPBS緩衝液(9.88mL、494.0μmol、9.5当量)をh-IgG1 Fc(配列番号4)の溶液に添加し(213.0mLのpH7.4 PBS中に3027mg、分子量約58,200Da、16.5μmol)、混合物を周囲温度で2時間穏やかに振とうした。この溶液を、10個の遠心濃縮器(30,000MWCO、15mL)を使用して約1.5mLの容量まで濃縮した。粗混合物をPBS pH7.4で1:10に希釈し、再び濃縮した。この洗浄手順を合計3回繰り返した。この洗浄手順で小分子試薬を除去した。濃縮されたFc-PEG4-アジド(配列番号4)をpH7.4 PBS 1×緩衝液で213.0mLに希釈し、クリックコンジュゲーションの準備をした。精製された物質を、NANODROP(商標)UV可視分光光度計を使用して定量化した(h-IgG1のアミノ酸配列に基づいて計算した吸光係数を使用)。精製後の収量は定量的である。
Fc-PEG4-アジド(配列番号35)も同様に調製した。
実施例3.組換えマウス血清アルブミン(MSA)-PEG4-アジドの合成
PEG4-アジドNHSエステル(98%、81.7μmol、4.5当量、32.4mgを含んだ0.3mLのDMFをpH7.4のPBS 1×緩衝液で1.63mLに希釈した溶液)を、組換えマウス血清アルブミン(配列番号71)の溶液(1200mgを75.0mLのpH7.4 PBSの中に含んだもの、MW約66,000Da、18.2μmol)に添加し、混合物を周囲温度で12時間穏やかに振盪した。遠心濃縮器(30,000MWCO)を使用して溶液を約1.5mLの体積に濃縮した。粗混合物をPBS pH7.4で1:10に希釈し、再び濃縮した。この洗浄手順を合計3回繰り返した。この洗浄手順によって低分子試薬が除去された。濃縮されたMSA-PEG4-アジドをpH7.4のPBS 1×緩衝液で75.0mLに希釈してクリック複合体形成に備えた。精製された材料を、NANODROP(商標)UV可視分光光度計を使用して(h-IgG1のアミノ酸配列に基づいて算出された消衰係数を用いて)定量した。精製後の収量は定量的である。MALDIによって決定してDAR=3.5である。DAR値は、h-IgG1 Fc(実施例2)と同様にPEG4-アジドNHSエステルの当量を変化させることによって調整され得る。
PEG4-アジドNHSエステル(98%、81.7μmol、4.5当量、32.4mgを含んだ0.3mLのDMFをpH7.4のPBS 1×緩衝液で1.63mLに希釈した溶液)を、組換えマウス血清アルブミン(配列番号71)の溶液(1200mgを75.0mLのpH7.4 PBSの中に含んだもの、MW約66,000Da、18.2μmol)に添加し、混合物を周囲温度で12時間穏やかに振盪した。遠心濃縮器(30,000MWCO)を使用して溶液を約1.5mLの体積に濃縮した。粗混合物をPBS pH7.4で1:10に希釈し、再び濃縮した。この洗浄手順を合計3回繰り返した。この洗浄手順によって低分子試薬が除去された。濃縮されたMSA-PEG4-アジドをpH7.4のPBS 1×緩衝液で75.0mLに希釈してクリック複合体形成に備えた。精製された材料を、NANODROP(商標)UV可視分光光度計を使用して(h-IgG1のアミノ酸配列に基づいて算出された消衰係数を用いて)定量した。精製後の収量は定量的である。MALDIによって決定してDAR=3.5である。DAR値は、h-IgG1 Fc(実施例2)と同様にPEG4-アジドNHSエステルの当量を変化させることによって調整され得る。
実施例4.Int-1の合成
ステップb.
ステップc.
実施例5.Int-2の合成
ステップb.
実施例6.Int-3の合成
ステップb.
ステップc.
ステップd.
実施例7.Int-4の合成
ステップb.
ステップc.
実施例8.複合体の合成
PBS緩衝溶液クリック試薬中の0.0050M CuSO4の調製を行った。簡潔に述べると、10.0mgのCuSO4を12.53mLのPBSに溶解し、次に6.00mLのCuSO4溶液に、51.7mgのBTTAA(CAS番号1334179-85-9)及び297.2mgのアスコルビン酸ナトリウムを加えてクリック試薬溶液(0.0050M CuSO4、0.020M BTTAA及び0.25Mアスコルビン酸ナトリウム)を得た。このクリック試薬溶液を、その後のすべての複合体化に使用した。
PBS緩衝溶液クリック試薬中の0.0050M CuSO4の調製を行った。簡潔に述べると、10.0mgのCuSO4を12.53mLのPBSに溶解し、次に6.00mLのCuSO4溶液に、51.7mgのBTTAA(CAS番号1334179-85-9)及び297.2mgのアスコルビン酸ナトリウムを加えてクリック試薬溶液(0.0050M CuSO4、0.020M BTTAA及び0.25Mアスコルビン酸ナトリウム)を得た。このクリック試薬溶液を、その後のすべての複合体化に使用した。
ペイロードのクリック複合体化の一般的手順:アジド官能化Fcの溶液を、アルキン誘導体化小分子(各DARに対して2当量)を含む15mLの遠心分離管に加えた。穏やかに振とうしてすべての固形物を溶解した後、混合物を(L-アスコルビン酸ナトリウム、0.25M、400当量、硫酸銅(II)0.0050M、8当量、及びBTTAA 0.020M、32当量)のクリック試薬溶液で処理した。得られた混合物を周囲温度で6時間穏やかに回転させた。これを、プロテインAカラムでのアフィニティークロマトグラフィー、続いてサイズ排除クロマトグラフィー(本明細書に記載)により精製した。精製された最終生成物のMaldi TOF分析により、以下の表3に記載する平均質量、平均DAR、及び収率が得られた。
実施例9.複合体の精製の一般的手順
粗混合物をPBS pH7.4で1:10に希釈し、MabSelect Sure樹脂(GE Healthcare,Chicago,IL,USA)を用いて精製し、続いてサイズ排除クロマトグラフィー(HiLoad 26/600 Superdex200 pg,GE Healthcare,Chicago,IL,USA)によって精製した。精製された複合体を含有する画分を溜めて、遠心濃縮器(30,000MWCO)を使用しておよそ20mg/mLに濃縮した。精製された材料を、NANODROP(商標)UV可視分光光度計を使用して、hIgG1 Fc(myc)のアミノ酸配列に基づいて算出された消衰係数を用いて定量した。1μgの各分子をゲルに装填すること及びInstant Blue(Expedeon,San Diego,CA,USA)を使用して染色することによってビストリス4~12%のSDS PAGEゲルを使用して精製分子を分析した。各ゲルは、示された分子量基準を有する分子量ラダーを含んでいた。収率を算出し、純度をAgilent分析用HPLCによって決定した。Maldi MSによって生成物のピーク及びMWを調べ、最終DARを算出した。
粗混合物をPBS pH7.4で1:10に希釈し、MabSelect Sure樹脂(GE Healthcare,Chicago,IL,USA)を用いて精製し、続いてサイズ排除クロマトグラフィー(HiLoad 26/600 Superdex200 pg,GE Healthcare,Chicago,IL,USA)によって精製した。精製された複合体を含有する画分を溜めて、遠心濃縮器(30,000MWCO)を使用しておよそ20mg/mLに濃縮した。精製された材料を、NANODROP(商標)UV可視分光光度計を使用して、hIgG1 Fc(myc)のアミノ酸配列に基づいて算出された消衰係数を用いて定量した。1μgの各分子をゲルに装填すること及びInstant Blue(Expedeon,San Diego,CA,USA)を使用して染色することによってビストリス4~12%のSDS PAGEゲルを使用して精製分子を分析した。各ゲルは、示された分子量基準を有する分子量ラダーを含んでいた。収率を算出し、純度をAgilent分析用HPLCによって決定した。Maldi MSによって生成物のピーク及びMWを調べ、最終DARを算出した。
実施例10.gp120糖タンパク質結合アッセイ
Nunc MaxiSorp平底96ウェルプレート(12-565-136、Fisher Scientific)を、PBS(pH7.4)(10-010-049、Fisher Scientific)中の2μg/mLの組換えHIV-1GP120(SAE0071、Sigma)で、4℃にて一晩コーティングした(100μL、0.2μg/ウェル)。プレートを洗浄緩衝液(PBS 0.05%Tween20)で洗浄(5×300μL)し、オービタルマイクロプレートシェーカー(BT908、BT LabSystems)上で500rpm、室温にて1時間、洗浄緩衝液中の1%BSA(A5611-10G、Sigma;200μL/ウェル)でブロッキングした。ブロッキング剤を除去し、ウェルを、サンプル希釈液中の複合体の1μMから開始する3倍段階希釈液(PBS 0.025%Tween20中の0.5%BSA)と共に、室温で振とうしながら、1時間インキュベートした。5×300μLで洗浄した後、プレートを、サンプル希釈液で1:1,000に希釈したHRP結合ロバ抗ヒトIgG Fc F(ab’)2(709-036-098、Jackson ImmunoResearch)二次抗体と共に1時間振とうしながらインキュベートした。次いで、室温でプレートを洗浄し(8×300μL)、TMB基質(BD555214、Fisher Scientific)を使用して室温で3~5分間現像した。1N H2SO4で反応を停止させ、EnSpireマルチモードプレートリーダー(PerkinElmer)を使用して450nmで吸光度を読み取った。最大半量有効濃度(EC50)を、結合曲線の非線形回帰分析(Sigmoidal、4PL)を使用してGraphPadPrismバージョン8で計算した。ポリクローナルヤギ抗GP120HRP(PA1-73097、Invitrogen)及び非結合Fc分子を、それぞれ正及び負の結合対照として実行した。結果を図12及び表4に示す。
Nunc MaxiSorp平底96ウェルプレート(12-565-136、Fisher Scientific)を、PBS(pH7.4)(10-010-049、Fisher Scientific)中の2μg/mLの組換えHIV-1GP120(SAE0071、Sigma)で、4℃にて一晩コーティングした(100μL、0.2μg/ウェル)。プレートを洗浄緩衝液(PBS 0.05%Tween20)で洗浄(5×300μL)し、オービタルマイクロプレートシェーカー(BT908、BT LabSystems)上で500rpm、室温にて1時間、洗浄緩衝液中の1%BSA(A5611-10G、Sigma;200μL/ウェル)でブロッキングした。ブロッキング剤を除去し、ウェルを、サンプル希釈液中の複合体の1μMから開始する3倍段階希釈液(PBS 0.025%Tween20中の0.5%BSA)と共に、室温で振とうしながら、1時間インキュベートした。5×300μLで洗浄した後、プレートを、サンプル希釈液で1:1,000に希釈したHRP結合ロバ抗ヒトIgG Fc F(ab’)2(709-036-098、Jackson ImmunoResearch)二次抗体と共に1時間振とうしながらインキュベートした。次いで、室温でプレートを洗浄し(8×300μL)、TMB基質(BD555214、Fisher Scientific)を使用して室温で3~5分間現像した。1N H2SO4で反応を停止させ、EnSpireマルチモードプレートリーダー(PerkinElmer)を使用して450nmで吸光度を読み取った。最大半量有効濃度(EC50)を、結合曲線の非線形回帰分析(Sigmoidal、4PL)を使用してGraphPadPrismバージョン8で計算した。ポリクローナルヤギ抗GP120HRP(PA1-73097、Invitrogen)及び非結合Fc分子を、それぞれ正及び負の結合対照として実行した。結果を図12及び表4に示す。
実施例11.in vitro細胞融合アッセイにおける複合体化前の中間体(Int)化合物の活性
HIV化合物の活性を、HIV感染プロセスにおける重要なステップである細胞間融合の阻害を測定するように設計されたアッセイで測定した。簡潔に述べると、このアッセイでは、AIDS Research Reagent and Reference Program(Rockville、MD)から入手した2つの細胞株HeLa-CD4-LTR-β-Gal(カタログ番号1294)及びHL2/3細胞(カタログ番号1294)の融合を測定する。HeLa-CD4-LTR-β-Gal細胞を、ウェルあたり5×103細胞の密度、50μLの容量で、化合物の9つの連続対数希釈液50μLと共に、3つ組で37℃/5%CO2にて1時間プレーティングした。インキュベーション後、100μLのHL2/3細胞をプレートに添加した。培養物を37℃/5%CO2でさらに48時間インキュベートした。インキュベーション後、有効性プレートのβ-ガラクトシダーゼ産生を、化学発光基質を使用して評価し、毒性プレートをXTTで染色して細胞生存率を評価した。
HIV化合物の活性を、HIV感染プロセスにおける重要なステップである細胞間融合の阻害を測定するように設計されたアッセイで測定した。簡潔に述べると、このアッセイでは、AIDS Research Reagent and Reference Program(Rockville、MD)から入手した2つの細胞株HeLa-CD4-LTR-β-Gal(カタログ番号1294)及びHL2/3細胞(カタログ番号1294)の融合を測定する。HeLa-CD4-LTR-β-Gal細胞を、ウェルあたり5×103細胞の密度、50μLの容量で、化合物の9つの連続対数希釈液50μLと共に、3つ組で37℃/5%CO2にて1時間プレーティングした。インキュベーション後、100μLのHL2/3細胞をプレートに添加した。培養物を37℃/5%CO2でさらに48時間インキュベートした。インキュベーション後、有効性プレートのβ-ガラクトシダーゼ産生を、化学発光基質を使用して評価し、毒性プレートをXTTで染色して細胞生存率を評価した。
これらの試験では、細胞毒性も評価した(TC50)。被験物質は、テトラゾリウム染料XTT(2,3-ビス(2-メトキシ-4-ニトロ-5-スルホフェニル)-5-[(フェニルアミノ)カルボニル]-2H-テトラゾリウムヒドロキシド)の還元を測定することによって導出した。代謝的に活性な細胞内のXTTは、ミトコンドリア酵素NADPHオキシダーゼによって可溶性ホルマザン生成物に代謝される。XTT溶液は、添加剤を含まないRPMI-1640で1mg/mLのストックとして毎日調製した。フェナジンメトサルフェート(PMS)溶液を、DPBS中で0.15mg/mLに調製し、暗所にて-20℃で保存した。XTT/PMSストックを、XTT溶液1mLあたり40μLのPMSを添加することにより、使用直前に調製した。50μLのXTT/PMSをプレートの各ウェルに添加し、プレートを37℃で4時間インキュベートした。4時間のインキュベーションは、各アッセイについて指定の細胞数でXTT色素還元の線形応答範囲内にあることが経験的に決定されている。プレートを密封し、数回反転させて可溶性ホルマザン生成物を混合し、Molecular Devices SpectraMax Plus 384 96ウェルプレート型分光光度計を使用してプレートを450nm(650nm参照波長)で読み取った。
このアッセイでは、ベンチマーク化合物(テムサビル)の10倍以内のEC50値を有するいくつかの化合物が同定された(表5)。特に活性があったのは、EC50が4nM未満のInt-1であった。重要なことに、試験した濃度の化合物では細胞毒性は明らかではなかった。nMでの阻害及び検出可能な細胞毒性がないことの組み合わせは、これが有意な治療の可能性を秘めた強力なシリーズであることを示している。
実施例12.アジドFcの合成の一般的手順
PEG4-アジドNHSエステル(0.050M)のDMF/PBS溶液の調製:16.75mgのPEG4-アジドNHSエステルを0.100mLのDMFに0℃で溶解させ、0℃でPBS 1×緩衝液を添加することによって0.837mLに希釈した。この溶液を、このPEG4-アジドNHSエステルのPBS溶液の当量を調節することによる様々なDAR値を有する他のPEG4-アジドFcの調製のために使用した。
PEG4-アジドNHSエステル(0.050M)のDMF/PBS溶液の調製:16.75mgのPEG4-アジドNHSエステルを0.100mLのDMFに0℃で溶解させ、0℃でPBS 1×緩衝液を添加することによって0.837mLに希釈した。この溶液を、このPEG4-アジドNHSエステルのPBS溶液の当量を調節することによる様々なDAR値を有する他のPEG4-アジドFcの調製のために使用した。
配列番号48のh-IgG1 Fc(8.800mLのpH7.4 PBSの中に107.2mg、MW約57891Da、1.852μmol)の前処理:Fc溶液を4つの遠心濃縮器(30,000MWCO、15mL)に移し、PBS×1緩衝液で15mLに希釈し、濃縮して約1.5mLの体積に濃縮した。残渣をPBS pH7.4で1:10に希釈し、再び濃縮した。この洗浄手順を合計4回繰り返し、その後、8.80mLに希釈した。
PEG4-アジドFcの調製:0.050MのPEG4-アジドNHSエステルのPBS緩衝液溶液(0.593mL、29.6μmol、16当量)をh-IgG1 Fc(配列番号48)の上記溶液に添加し、混合物を周囲温度で2時間、振盪回転させた。溶液を、4つの遠心濃縮器(30,000MWCO、15mL)を使用して約1.5mLの体積に濃縮した。粗混合物をPBS pH7.4で1:10に希釈し、再び濃縮した。この洗浄手順を合計3回繰り返した。濃縮されたFc-PEG4-アジドをpH7.4のPBS緩衝液で8.80mLに希釈してクリック複合体形成に備えた。精製された材料を、NANODROP(商標)UV可視分光光度計を使用して(h-IgG1のアミノ酸配列に基づいて算出された消衰係数を用いて)定量した。精製後の収量は定量的であった。
実施例13.Int-12の合成
実施例14.Int-13の合成
実施例15.Int-14の合成
ステップb.
ステップc.
ステップd.
Boc保護された中間体(238mg、0.53mmol)を4H HCl(ジオキサン中のガス、10mL)中で1時間撹拌した。溶媒を回転蒸発により除去した。得られた油状物を脱イオン水に溶解し、次いで凍結乾燥して、HCl塩を透明で粘稠な油状物として得た。収量215mg、約99%。LC/MS[M+H]+=522.4。
ステップe.
実施例16.Int-15の合成
ステップb.
ステップc.
ステップd.
ステップcの生成物(0.72g、2.55mmol)、プロパギル-PEG-4-酸(0.75g、2.81mmol)及びHATU(1.48g、3.83mmol)のDMF(4mL)溶液に、室温でDIEA(1.36mL、7.65mmol)を加えた。得られた溶液を室温で2時間撹拌し、次いで逆相液体クロマトグラフィー(Isco、修飾剤を含まない0~30%アセトニトリル及び水)によって精製した。収量1.04g、69.5%。LCMSで検出されたイオン [M-Boc+H]+=425.2。
ステップe.
ステップf.
実施例17.Int-16の合成
ステップb.
ステップc.
ステップd.
ステップe.
実施例18.Int-17の合成
ステップb.
ステップc.
ステップd.
実施例19.in vitro細胞融合アッセイにおけるInt及び複合体のスクリーニング
Intの活性を、HIV感染プロセスにおける重要なステップである細胞間融合の阻害を測定するように設計されたアッセイで測定した。簡潔に述べると、このアッセイでは、AIDS Research Reagent and Reference Program(Rockville、MD)から入手した2つの細胞株HeLa-CD4-LTR-β-Gal(カタログ番号1294)とHL2/3細胞(カタログ番号1294)の融合を測定する。HeLa-CD4-LTR-β-Gal細胞を、ウェルあたり5×103細胞の密度で50μLの容量にて、化合物の9つの連続半対数希釈液50μLの3つ組と共に、37℃/5%CO2で1時間プレーティングした。インキュベーション後、100μLのHL2/3細胞をプレートに添加した。培養物を37℃/5%CO2でさらに48時間インキュベートした。インキュベーション後、有効性プレートのβ-ガラクトシダーゼ産生を、化学発光基質を使用して評価し、毒性プレートをXTTで染色して細胞生存率を評価した。
Intの活性を、HIV感染プロセスにおける重要なステップである細胞間融合の阻害を測定するように設計されたアッセイで測定した。簡潔に述べると、このアッセイでは、AIDS Research Reagent and Reference Program(Rockville、MD)から入手した2つの細胞株HeLa-CD4-LTR-β-Gal(カタログ番号1294)とHL2/3細胞(カタログ番号1294)の融合を測定する。HeLa-CD4-LTR-β-Gal細胞を、ウェルあたり5×103細胞の密度で50μLの容量にて、化合物の9つの連続半対数希釈液50μLの3つ組と共に、37℃/5%CO2で1時間プレーティングした。インキュベーション後、100μLのHL2/3細胞をプレートに添加した。培養物を37℃/5%CO2でさらに48時間インキュベートした。インキュベーション後、有効性プレートのβ-ガラクトシダーゼ産生を、化学発光基質を使用して評価し、毒性プレートをXTTで染色して細胞生存率を評価した。
これらの試験において、細胞毒性も評価した(TC50)。被験物質は、テトラゾリウム染料XTT(2,3-ビス(2-メトキシ-4-ニトロ-5-スルホフェニル)-5-[(フェニルアミノ)カルボニル]-2H-テトラゾリウムヒドロキシド)の還元を測定することによって導出された。代謝的に活性な細胞内のXTTは、ミトコンドリア酵素NADPHオキシダーゼによって可溶性ホルマザン生成物に代謝される。XTT溶液は、添加剤を含まないRPMI-1640で1mg/mLのストックとして毎日調製した。フェナジンメトサルフェート(PMS)溶液は、DPBS中で0.15mg/mLに調製し、暗所にて-20℃で保存した。XTT/PMSストックは、XTT溶液1mLあたり40μLのPMSを添加することにより、使用直前に調製した。50μL(50μL)のXTT/PMSをプレートの各ウェルに添加し、プレートを37℃で4時間インキュベートした。4時間のインキュベーションは、各アッセイについて指定の細胞数でXTT色素還元の線形応答範囲内にあることが経験的に決定されている。プレートを密封し、数回反転させて可溶性ホルマザン生成物を混合し、Molecular Devices SpectraMax Plus 384 96ウェルプレート型分光光度計を使用してプレートを450nm(650nm参照波長)で読み取った。
このアッセイにより、ベンチマーク化合物(テムサビル)にほぼ等しいEC50値を有する4つの化合物が同定された(表6)。これらの化合物は、細胞融合を阻害するのに非常に強力であり、EC50値は0.9nM未満であった。これらの化合物の1つであるInt-17も、hIgG1 Fcへの複合(複合体5)に際して、明らかな活性の喪失は認められず、これは重要な発見であった。最後に、この試験において試験した濃度で細胞毒性を示した化合物はなかった。したがって、最も活性の高い化合物の場合、EC50と細胞毒性の差は10,000倍を上回る。以前の融合阻害試験では、いくつかの高活性化合物(Int-2及びInt-4)も同定された。しかしながら、両方の化合物は、複合時に有意な効力を失い(それぞれ、複合体2及び3)、複合体4の重要性をさらに強調した。
実施例20.DMJ-II-121の合成
ステップb.
ステップc.
ステップd.
ステップe.
ステップf.
ステップg.
ステップh.
ステップi.
ステップj.
ステップk.
ステップl.
実施例21.複合体8の合成
pH8.5のEPPES中のアルキン誘導体化小分子(15.83mg、0.012mmol、Int-15、実施例16)、及びTHTPA(0.43mL、0.0216mmol、水中の50nM)と混合した水中の硫酸銅(II)(1.1mg、0.0043mmol)、アミノグアニジンHCl(2.16mL、水中100mM)、及びアスコルビン酸ナトリウム(2.16mL、水中100mM)の添加に続いて、アジド官能化Fc(50mg、28.43mL、0.862μmol、1.76mg/mL;配列番号64、実施例2)の溶液を、50mLの遠心分離管に添加した。得られた溶液を4時間穏やかに振とうした。それをプロテインAカラムでのアフィニティークロマトグラフィー、続いてサイズ排除クロマトグラフィー(実施例8に記載されているように)によって精製した。精製された最終生成物のMaldiTOF分析では、平均質量60593Da(DAR2.5)が得られた。収量12.71mg、25%。
pH8.5のEPPES中のアルキン誘導体化小分子(15.83mg、0.012mmol、Int-15、実施例16)、及びTHTPA(0.43mL、0.0216mmol、水中の50nM)と混合した水中の硫酸銅(II)(1.1mg、0.0043mmol)、アミノグアニジンHCl(2.16mL、水中100mM)、及びアスコルビン酸ナトリウム(2.16mL、水中100mM)の添加に続いて、アジド官能化Fc(50mg、28.43mL、0.862μmol、1.76mg/mL;配列番号64、実施例2)の溶液を、50mLの遠心分離管に添加した。得られた溶液を4時間穏やかに振とうした。それをプロテインAカラムでのアフィニティークロマトグラフィー、続いてサイズ排除クロマトグラフィー(実施例8に記載されているように)によって精製した。精製された最終生成物のMaldiTOF分析では、平均質量60593Da(DAR2.5)が得られた。収量12.71mg、25%。
実施例22.Int-18の合成
Boc保護された中間体を、DCM/TFA(10ml)の1/1混合物中で周囲温度で2時間撹拌し、次いでロータリーエバポレーターで濃縮し、RPLC Isco COMBIFLASH(登録商標)(DI水中の20~95%ACN、0.1%TFA、30分の濃度勾配)によって精製した。純粋な画分をプールして凍結乾燥した。収量120mg、44%、2段階。LC/MSで検出されたイオン [M+H]+=637.2。
ステップb.
実施例23.Int-19の合成
この生成物(5.38g、14.8mmol)を、バルーンからの水素下で、メタノール(100mL)中の5%Pd/C(1.57g、0.74mmol)で3時間処理した。セライト濾過及び溶媒除去後、生成物が定量的収率で白色の泡状物として得られ、これをさらに精製することなく次のステップに使用した。LCMSで検出されたイオン:M+H+:230.2。
ステップb.
この生成物(5.45g、11.13mmol)を、バルーンからの水素下で、メタノール(100mL)中の5%Pd(OH)2/C(3.91g、5.57mmol)で一晩処理した。セライト濾過及び溶媒除去後、所望の生成物が定量的収率で白色の泡状物として得られ、これをさらに精製することなく次のステップに使用した。LCMSで検出されたイオン:M+H+:356.2;M-Boc+H+:256.2。
ステップc.
この生成物(0.104g、0.183mmol)を、ジオキサン(10mL)中の4M HClで2時間処理した。溶媒を除去した後、生成物を定量的収率で白色の泡状物として得て、さらに精製することなく次のステップで使用した。
ステップd.
実施例24.Int-20の合成
ステップb.
ステップc.
実施例25.Int-21の合成
tert-ブチル[3-(ピペラジン-1-イル)プロピル]カルバメート(1.73g、7.09mmol)、トリエチレングリコールメタンスルホネートプロパルギルエーテル(2.00g、6.44mmol)、炭酸カリウム(1.96g、14.18mmol)、及びアセトニトリル(20mL)の混合物を70℃の湯浴で24時間加熱し、その時点で、LCMSは、ほとんどの出発物質が消費されたことを示した。得られた混合物を濾過して、塩及び炭酸カリウムを除去した。濾液を濃縮し、RPLC(0.1%TFAを含有する10%~100%ACN/水)によって精製して、2.60gの二重TFA塩(収率59%)を得た。
ステップb.
前のステップの生成物(2.60g、5.68mmol)をHCl/ジオキサン(4M、15mL)で室温にて1時間処理し、次いで濃縮乾固し、さらに精製することなく使用した(収量:定量的)。
前のステップの生成物(2.60g、5.68mmol)をHCl/ジオキサン(4M、15mL)で室温にて1時間処理し、次いで濃縮乾固し、さらに精製することなく使用した(収量:定量的)。
ステップc.
密閉管内において、窒素下で、前述の中間体(145mg、0.308mmol、Int-20、実施例24のステップbを参照)、メチル1,2,4-トリアゾール-3-カルボキシレート(59mg、0.461mmol)、KOH(50mg、0.892mmol)、水(166mg、9.230mmol)、trans-N,N’-ジメチルシクロヘキサン-1,2-ジアミン(35mg、0.246mmol)及びCuI(18mg、0.092mmol)の撹拌懸濁液を、100℃で2日間加熱した。冷却に際して、ロータリーエバポレーターを介して揮発性物質を蒸発させた。固体残留物を酢酸エチル(3×12mL)、次いでジクロロメタン(3×12mL)で洗浄した。得られた固形物を水に溶解し、SiliaMetS TAAcONa(300mg、0.45mmol/g充填)で撹拌しながら3時間処理した。懸濁液を濾過し、すべての揮発性物質を回転蒸発により除去した。得られた残留物、ステップbのプロパルギル-PEG4ピペラジンリンカー(HCl塩、144mg、0.308mmol)、DIPEA(241uL、1.384mmol)の、0℃のDMF(2.0mL)撹拌溶液に、DMF中のプロピルホスホン酸無水物の50%溶液(196μL、0.338mmol)を加えた。完了に際し、すべての揮発性物質を真空技術ごとに蒸発させた。残留物を、0%~100%の水及びメタノールで溶出するIsco COMBIFLASH(登録商標)液体クロマトグラフィーを使用するRPLCによって精製した。収量29mg、2ステップで11%。LCMSで検出されたイオン:[(M+H)+Na]+=865.2;[(M+H]]+=843.2;[(M+2H)/2]+=422.2。
密閉管内において、窒素下で、前述の中間体(145mg、0.308mmol、Int-20、実施例24のステップbを参照)、メチル1,2,4-トリアゾール-3-カルボキシレート(59mg、0.461mmol)、KOH(50mg、0.892mmol)、水(166mg、9.230mmol)、trans-N,N’-ジメチルシクロヘキサン-1,2-ジアミン(35mg、0.246mmol)及びCuI(18mg、0.092mmol)の撹拌懸濁液を、100℃で2日間加熱した。冷却に際して、ロータリーエバポレーターを介して揮発性物質を蒸発させた。固体残留物を酢酸エチル(3×12mL)、次いでジクロロメタン(3×12mL)で洗浄した。得られた固形物を水に溶解し、SiliaMetS TAAcONa(300mg、0.45mmol/g充填)で撹拌しながら3時間処理した。懸濁液を濾過し、すべての揮発性物質を回転蒸発により除去した。得られた残留物、ステップbのプロパルギル-PEG4ピペラジンリンカー(HCl塩、144mg、0.308mmol)、DIPEA(241uL、1.384mmol)の、0℃のDMF(2.0mL)撹拌溶液に、DMF中のプロピルホスホン酸無水物の50%溶液(196μL、0.338mmol)を加えた。完了に際し、すべての揮発性物質を真空技術ごとに蒸発させた。残留物を、0%~100%の水及びメタノールで溶出するIsco COMBIFLASH(登録商標)液体クロマトグラフィーを使用するRPLCによって精製した。収量29mg、2ステップで11%。LCMSで検出されたイオン:[(M+H)+Na]+=865.2;[(M+H]]+=843.2;[(M+2H)/2]+=422.2。
実施例26.Int-22の合成
Cbz保護生成物(4.84g、12.8mmol)を、水素バルーン下で、メタノール(100mL)中の5%Pd/C(1.34g、0.64mmol)で3時間処理した。セライト濾過及び溶媒除去後、純粋な生成物が定量的収率で白色泡状物として得られ、さらに精製することなく次のステップに使用した。LCMSで検出されたイオン:M+H+:244.2。
ステップb.
この生成物(5.45g、11.13mmol)を、水素バルーン下でメタノール(100mL)中の5%Pd(OH)2/C(1.34g、0.64mmol)で12時間処理した。セライト濾過及び溶媒除去後、純粋な生成物が定量的収率で白色の泡状物として得られ、さらに精製することなく次のステップで使用した。LC/MS質量:M+H+:370.2。
ステップc.
この生成物(0.107g、0.183mmol)を、ジオキサン(10mL)中の4M HClで2時間処理した。溶媒を除去した後、生成物が白色の泡状物として得られ、さらに精製することなく次のステップで使用した。
ステップd.
実施例27.複合体9の合成
クリック試薬溶液の調製:PBS緩衝液中の0.0050M CuSO4:10.0mg CuSO4を12.53mL PBSに溶解し、次いでこのCuSO4溶液6.00mLを取り、64.8mg BTTAA(CAS番号1334179-85-9)及び297mgアスコルビン酸ナトリウムを添加して、クリック試薬溶液(0.0050M CuSO4、0.025M BTTAA及び0.25Mアスコルビン酸ナトリウム)を生成した。
クリック試薬溶液の調製:PBS緩衝液中の0.0050M CuSO4:10.0mg CuSO4を12.53mL PBSに溶解し、次いでこのCuSO4溶液6.00mLを取り、64.8mg BTTAA(CAS番号1334179-85-9)及び297mgアスコルビン酸ナトリウムを添加して、クリック試薬溶液(0.0050M CuSO4、0.025M BTTAA及び0.25Mアスコルビン酸ナトリウム)を生成した。
15mLの遠心分離管中のアジド官能化Fc(122.1mg、8.55mL、21.1μmol、配列番号64、実施例2、DAR=3.9、25mM MES、150mM NaCl、pH6.0緩衝液)の溶液に、1.5mLのMES緩衝液中のアルキン誘導体化小分子(25.0mg、19.0mmol、Fc上の各アジドに対して3.0当量、実施例26に記載、Int-22)を添加した。穏やかに撹拌した後、混合物をクリック試薬溶液(5.05mL)で処理した。得られた混合物を周囲温度で4時間穏やかに回転させた。次いで、プロテインAカラムでのアフィニティークロマトグラフィー、続いてサイズ排除クロマトグラフィーによって精製した(一般的な複合体精製プロトコルを参照のこと)。精製された最終生成物のMaldi TOF分析では、平均質量65,947Da(DAR=3.4)が得られた。収量50mg/41%。
実施例28.Int-23の合成
前の反応のエステルを、LiOH(97mg、4.1mmol)を含有するメタノール/二水(5mL)の4/1混合物中で1時間撹拌した。氷酢酸でpHを約5に上げ、濃縮した。残留物をDMF(2mL)に溶解し、RPLC Isco COMBIFLASH(複数可)(DI水中の20~95%ACN、0.1%TFA、30分の濃度勾配)で精製した。純粋な画分をプールして凍結乾燥させた。収量375mg、2ステップで52%。LC/MSで検出されたイオン [M+H]+=525.8。
ステップb.
Boc保護された中間体をDCM/TFA(10ml)の1/1混合物中で周囲温度で2時間撹拌し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、逆相HPLC Isco COMBIFLASH(登録商標)(DI水中の20~95%ACN、0.1%TFA、30分濃度勾配)で精製した。純粋な画分をプールして凍結乾燥させた。収量67mg、45%、2ステップ LC/MSで検出されたイオン [M+H]+=651.2。
ステップc.
実施例29.Int-24の合成
ステップb.
ステップc.
実施例30.Int-25の合成
DMF(10mL)及びDCM(10mL)中のFmoc-N-(tert-ブチルオキシカルボニルメチル)-グリシン(2.00g、4.861mmol)、2-アジドエタン-1-アミン塩酸塩(626mg、5.104mmol)及びDIPEA(3.387mL、19.44mmol)の0℃撹拌溶液に、HATU(1.885mg、4.958mmol)を加えた。温度を周囲温度に上げ、LCMSによって完了したと決定されるまで撹拌を続けた。真空技術ごとにすべての揮発性物質を除去した。残留物を、ヘキサン中の0%~100%酢酸エチルで溶出するIsco COMBIFLASH(登録商標)液体クロマトグラフィーを使用するシリカカラムによって精製した。収量2.26g、収率97%。LCMSで検出されたイオン:[(M+H-t-Bu)]+=424.2。
ステップb.
ステップaの生成物(2.26g、4.713mmol)をTFA(10mL)に取り、LCMSによって反応が完了するまで撹拌を続けた。揮発性物質を真空技術ごとに蒸発させた。残留物を、0%~100%の水及びメタノールで溶出するIsco COMBIFLASH(登録商標)液体クロマトグラフィーを使用するRP-C18カラムによって精製した。収量990mg、45%。LCMSで検出されたイオン:[(M+H)+Na]+=446.2;[(M+H]]+=424.2。
ステップaの生成物(2.26g、4.713mmol)をTFA(10mL)に取り、LCMSによって反応が完了するまで撹拌を続けた。揮発性物質を真空技術ごとに蒸発させた。残留物を、0%~100%の水及びメタノールで溶出するIsco COMBIFLASH(登録商標)液体クロマトグラフィーを使用するRP-C18カラムによって精製した。収量990mg、45%。LCMSで検出されたイオン:[(M+H)+Na]+=446.2;[(M+H]]+=424.2。
ステップc.
DMF(5.0mL)及びDCM(5.0mL)中のステップbの化合物(990mg、2.338mmol)、メチル-PEG12-アミン(1.335g、2.385mmol)及びDIPEA(1.018mL、5.845mmol)の0℃撹拌溶液に、HATU(907mg、2.385mmol)を加えた。温度を周囲温度に温め、LCMSにより反応が完了するまで撹拌を続けた。すべての揮発性物質を、真空技術ごとに除去した。残留物を、0%~100%の水及びメタノールで溶出するIsco COMBIFLASH(登録商標)液体クロマトグラフィーを使用するRP-C18カラムによって精製した。収量1.704g、76%。LCMSで検出されたイオン:[(M+H)]+=965.2、[(M+2H)/2]+=483.2。
DMF(5.0mL)及びDCM(5.0mL)中のステップbの化合物(990mg、2.338mmol)、メチル-PEG12-アミン(1.335g、2.385mmol)及びDIPEA(1.018mL、5.845mmol)の0℃撹拌溶液に、HATU(907mg、2.385mmol)を加えた。温度を周囲温度に温め、LCMSにより反応が完了するまで撹拌を続けた。すべての揮発性物質を、真空技術ごとに除去した。残留物を、0%~100%の水及びメタノールで溶出するIsco COMBIFLASH(登録商標)液体クロマトグラフィーを使用するRP-C18カラムによって精製した。収量1.704g、76%。LCMSで検出されたイオン:[(M+H)]+=965.2、[(M+2H)/2]+=483.2。
ステップd.
エタノール(10mL)及び水(5mL)中の実施例5のアルキン官能化化合物、Int-2(668mg、0.922mmol)、ステップcの化合物(907mg、0.940mmol)、TBTA(51mg、0.097mmol)及び硫酸銅(15mg、0.092mmol)に、アスコルビン酸ナトリウム(91mg、0.460mmol)を加えた。所望の生成物が形成され、LCMSデータによって確認された:{[(M+H)+2Na]+=867.8;[(M+H)+Na]+=856.5;[(M+H]]+=845.4、[(M+2H)/2]+=563.8}。完了に際して、銅スカベンジャーSiliaMetS TAAcONa(205mg、0.45mmol/g充填)を加え、撹拌を一晩続けた。混合物を濾過し、エタノールですすいだ。得られた溶液(約20mL)をピペリジン(1.0mL)で処理してFmoc基を除去した。完了に際して、真空法によりすべての揮発性物質を除去した。残留物を、0%~100%の水及びエタノールで溶出するIsco COMBIFLASH(複数可)液体クロマトグラフィーを使用するRP-C18カラムで精製した。収量696mg、51%。LCMSで検出されたイオン:[(M+H]]+=734.4、[(M+2H)/2]+=490.0。
エタノール(10mL)及び水(5mL)中の実施例5のアルキン官能化化合物、Int-2(668mg、0.922mmol)、ステップcの化合物(907mg、0.940mmol)、TBTA(51mg、0.097mmol)及び硫酸銅(15mg、0.092mmol)に、アスコルビン酸ナトリウム(91mg、0.460mmol)を加えた。所望の生成物が形成され、LCMSデータによって確認された:{[(M+H)+2Na]+=867.8;[(M+H)+Na]+=856.5;[(M+H]]+=845.4、[(M+2H)/2]+=563.8}。完了に際して、銅スカベンジャーSiliaMetS TAAcONa(205mg、0.45mmol/g充填)を加え、撹拌を一晩続けた。混合物を濾過し、エタノールですすいだ。得られた溶液(約20mL)をピペリジン(1.0mL)で処理してFmoc基を除去した。完了に際して、真空法によりすべての揮発性物質を除去した。残留物を、0%~100%の水及びエタノールで溶出するIsco COMBIFLASH(複数可)液体クロマトグラフィーを使用するRP-C18カラムで精製した。収量696mg、51%。LCMSで検出されたイオン:[(M+H]]+=734.4、[(M+2H)/2]+=490.0。
ステップe.
DMF(5.0mL)及びDCM(0.5mL)中のステップdの生成物(255mg、0.174mmol)、プロパルギル-PEG4-酸(68mg、0.261mmol)及びDIPEA(121uL、0.695mmol)の0℃撹拌溶液に、HATU(67mg、0.177mmol)を加えた。温度を周囲温度に上げ、LCMSによって完了するまで撹拌を続けた。真空技術ごとにすべての揮発性物質を除去した。残留物を、0%~100%の水及びメタノールで溶出するIsco COMBIFLASH(登録商標)液体クロマトグラフィーを使用するRP-C18カラムによって精製した。収量157mg、収率53%。LCMSで検出されたイオン:[(M+2H)/2]+=855.8;[(M+3H)/3]+=570.8。
DMF(5.0mL)及びDCM(0.5mL)中のステップdの生成物(255mg、0.174mmol)、プロパルギル-PEG4-酸(68mg、0.261mmol)及びDIPEA(121uL、0.695mmol)の0℃撹拌溶液に、HATU(67mg、0.177mmol)を加えた。温度を周囲温度に上げ、LCMSによって完了するまで撹拌を続けた。真空技術ごとにすべての揮発性物質を除去した。残留物を、0%~100%の水及びメタノールで溶出するIsco COMBIFLASH(登録商標)液体クロマトグラフィーを使用するRP-C18カラムによって精製した。収量157mg、収率53%。LCMSで検出されたイオン:[(M+2H)/2]+=855.8;[(M+3H)/3]+=570.8。
実施例31.Int-26の合成
ステップb.
ステップc.
ステップd.
ステップe.
ステップf.
実施例32.Int-27の合成
ステップb.
ステップc.
ステップd.
ステップe.
ステップf.
実施例33.in vitro細胞融合アッセイにおけるHIVリード化合物のスクリーニング
HIV感染プロセスにおける重要なステップであるgp120及びCD4相互作用によって媒介される細胞間融合の阻害を測定するように設計されたアッセイにおいて、HIV化合物の活性を測定した。簡潔に述べると、このアッセイでは、AIDS Research Reagent and Reference Program(Rockville、MD)から入手した2つの細胞株HeLa-CD4-LTR-β-Gal(カタログ番号1294)及びHL2/3細胞(カタログ番号1299)の融合を測定する。HeLa-CD4-LTR-β-Gal細胞をウェルあたり5×103細胞の密度で50μLの容量にて、化合物の9つの連続半対数希釈液50μLの3つ組と共に、37℃/5%CO2で1時間プレーティングした。インキュベーション後、100μLのHL2/3細胞をプレートに添加した。培養物を37℃/5%CO2でさらに48時間インキュベートした。インキュベーション後、有効性プレートのβ-ガラクトシダーゼ産生を、化学発光基質を使用して評価し、毒性プレートをXTTで染色して細胞生存率を評価した。
HIV感染プロセスにおける重要なステップであるgp120及びCD4相互作用によって媒介される細胞間融合の阻害を測定するように設計されたアッセイにおいて、HIV化合物の活性を測定した。簡潔に述べると、このアッセイでは、AIDS Research Reagent and Reference Program(Rockville、MD)から入手した2つの細胞株HeLa-CD4-LTR-β-Gal(カタログ番号1294)及びHL2/3細胞(カタログ番号1299)の融合を測定する。HeLa-CD4-LTR-β-Gal細胞をウェルあたり5×103細胞の密度で50μLの容量にて、化合物の9つの連続半対数希釈液50μLの3つ組と共に、37℃/5%CO2で1時間プレーティングした。インキュベーション後、100μLのHL2/3細胞をプレートに添加した。培養物を37℃/5%CO2でさらに48時間インキュベートした。インキュベーション後、有効性プレートのβ-ガラクトシダーゼ産生を、化学発光基質を使用して評価し、毒性プレートをXTTで染色して細胞生存率を評価した。
これらの試験において、細胞毒性も評価した(TC50)。被験物質は、テトラゾリウム染料XTT(2,3-ビス(2-メトキシ-4-ニトロ-5-スルホフェニル)-5-[(フェニルアミノ)カルボニル]-2H-テトラゾリウムヒドロキシド)の還元を測定することによって導出された。代謝的に活性な細胞内のXTTは、ミトコンドリア酵素NADPHオキシダーゼによって可溶性ホルマザン生成物に代謝される。XTT溶液は、添加剤を含まないRPMI-1640で1mg/mLのストックとして毎日調製した。フェナジンメトサルフェート(PMS)溶液は、DPBS中で0.15mg/mLに調製し、暗所にて-20℃で保存した。XTT/PMSストックは、XTT溶液1mLあたり40μLのPMSを添加することにより、使用直前に調製した。50μL(50μL)のXTT/PMSをプレートの各ウェルに添加し、プレートを37℃で4時間インキュベートした。4時間のインキュベーションは、各アッセイについて指定の細胞数でXTT色素還元の線形応答範囲内にあることが経験的に決定されている。プレートを密封し、数回反転させて可溶性ホルマザン生成物を混合し、Molecular Devices SpectraMax Plus 384 96ウェルプレート型分光光度計を使用してプレートを450nm(650nm参照波長)で読み取った。
このアッセイでは、7つのIntと5つの複合体を、ウイルスgp120の宿主細胞受容体(CD4)への結合によって媒介される細胞融合を防ぐことがわかっている2つの対照化合物(シカゴスカイブルー(CSB)とエンフビルチド)で実行した。CSB及びエンフビルチドのEC50値は、201及び409nMであり、細胞融合が中程度に阻害されていることを示している。対照的に、7つのIntは、1.56~72.8nMの範囲であった。まとめると、このアッセイで試験したIntは、承認されたHIV治療薬であるエンフビルチドよりも有意に高い活性を示す。重要なことに、複合体5は非常に強力で、EC50値は3.62nMであった。複合体014(EC50値406nM)を除いて、他のAVCは>500nMであった。しかしながら、これらの化合物のEC50は500nMを超えていたが、この濃度でシグナルが検出されたことは注目に値するものであり、これは、真の値が500nMをはるかに超えているわけではないことを示している。最も重要なことは、これらの化学系列の少なくとも1つがhIgG1 Fcに結合し、強力な活性を保持できるという観察結果である(Int-17複合体、複合体5)。最後に、この試験で試験した濃度で細胞毒性を示した被験物質はなかった。
実施例34.C220S/YTE四重変異を有するFcドメインを含む複合体の合成
クリック試薬溶液の調製:PBS緩衝液中の0.0050M CuSO4:10.0mg CuSO4を12.53mL PBSに溶解し、次いでこのCuSO4溶液5.00mLを取り、43.1mg BTTAA(CAS番号1334179-85-9)及び247.5mgアスコルビン酸ナトリウムを添加して、クリック試薬溶液(0.0050M CuSO4、0.020M BTTAA及び0.25Mアスコルビン酸ナトリウム)を得た。
クリック試薬溶液の調製:PBS緩衝液中の0.0050M CuSO4:10.0mg CuSO4を12.53mL PBSに溶解し、次いでこのCuSO4溶液5.00mLを取り、43.1mg BTTAA(CAS番号1334179-85-9)及び247.5mgアスコルビン酸ナトリウムを添加して、クリック試薬溶液(0.0050M CuSO4、0.020M BTTAA及び0.25Mアスコルビン酸ナトリウム)を得た。
15mLの遠心分離管中のC220S変異及びYTE変異(65.5mg、10.0mL、1.13μmol、アジドDAR約5.9、配列番号67)を有するアジド官能化Fcの溶液に、アルキン誘導体化小分子(Fcの各アジドあたり3.0当量)を加えた。穏やかに撹拌してすべての固形物を溶解した後、混合物をクリック試薬溶液(1.80mL)で処理した。得られた混合物を周囲温度で12時間穏やかに回転させた。プロテインAカラムでのアフィニティークロマトグラフィー、続いてサイズ排除クロマトグラフィーで精製した(一般的な複合体精製プロトコルを参照のこと)。精製された最終生成物のMaldi TOF分析では、平均質量66,420Da(DAR=5.8)が得られた。収量57mg、純度98%。
実施例35.C220S/YTE四重変異体を有するFcドメインを含む複合体のIV投与後の30日間の非ヒト霊長類比較PK試験
C220S変異及びYTE変異を有するFcドメイン(配列番号67)を含む複合体を、実施例34に記載のように合成した。非ヒト霊長類PK試験を実施して、C220S/YTE Fc複合体(配列番号67)と、C220S変異のみを有するFcドメインを含む複合体(配列番号64)のIV投与を比較した。
C220S変異及びYTE変異を有するFcドメイン(配列番号67)を含む複合体を、実施例34に記載のように合成した。非ヒト霊長類PK試験を実施して、C220S/YTE Fc複合体(配列番号67)と、C220S変異のみを有するFcドメインを含む複合体(配列番号64)のIV投与を比較した。
非ヒト霊長類(NHP)PK試験は、体重3.5~8.5kgの5~9歳のオスとメスのカニクイザルを使用して、BTS Research(San Diego、CA)によって実施した。NHPに、2mg/kgの被験物質(0.4mL/kg用量)を静脈内注射した。動物は、標準的なIACUC承認の飼育条件下で飼育した。適切な時期に、凝固を防ぐために、K2EDTAチューブに採血した血液で動物を非末端から出血させた(大腿静脈または橈側皮静脈を介して)。採取した血液を遠心分離し(2,000×g、10分間)、血漿を採取して、経時的な被験物質濃度の分析を行った。各時点でのC220S/YTE Fc複合体及びC220S複合体の血漿濃度をサンドイッチELISAによって測定した。簡潔に述べると、被験物質をFcコーティングプレートに捕捉し、HRP標識抗ヒトIgG-Fc抗体を使用して検出した。C220S/YTE Fc複合体またはC220S複合体の標準曲線の4PL非線形回帰を使用して、タンパク質濃度をGraphPadPrismで計算した。より詳細な方法の説明は上記のとおりである。対応する曲線を図13に示す。C220S/YTE Fc複合体は、C220S Fc複合体の約10日と比較して、約45日の有意に改善された終末半減期を示す。C220S/YTE Fc複合体のAUCは、C220S複合体のAUCの2倍である(表8)。
実施例36.in vitro細胞融合アッセイにおけるHIV化合物のスクリーニング
HIV感染プロセスにおける重要なステップであるgp120及びCD4相互作用によって媒介される細胞間融合の阻害を測定するように設計されたアッセイにおいて、HIV化合物の活性を測定した。簡潔に述べると、このアッセイでは、AIDS Research Reagent and Reference Program(Rockville、MD)から入手した2つの細胞株HeLa-CD4-LTR-β-Gal(カタログ番号1294)及びHL2/3細胞(カタログ番号1299)の融合を測定する。HeLa-CD4-LTR-β-Gal細胞をウェルあたり5×103細胞の密度で50μLの容量にて、化合物の9つの連続半対数希釈液50μLの3つ組と共に、37℃/5%CO2で1時間プレーティングした。インキュベーション後、100μLのHL2/3細胞をプレートに添加した。培養物を37℃/5%CO2でさらに48時間インキュベートした。インキュベーション後、有効性プレートのβ-ガラクトシダーゼ産生を、化学発光基質を使用して評価し、毒性プレートをXTTで染色して細胞生存率を評価した。
HIV感染プロセスにおける重要なステップであるgp120及びCD4相互作用によって媒介される細胞間融合の阻害を測定するように設計されたアッセイにおいて、HIV化合物の活性を測定した。簡潔に述べると、このアッセイでは、AIDS Research Reagent and Reference Program(Rockville、MD)から入手した2つの細胞株HeLa-CD4-LTR-β-Gal(カタログ番号1294)及びHL2/3細胞(カタログ番号1299)の融合を測定する。HeLa-CD4-LTR-β-Gal細胞をウェルあたり5×103細胞の密度で50μLの容量にて、化合物の9つの連続半対数希釈液50μLの3つ組と共に、37℃/5%CO2で1時間プレーティングした。インキュベーション後、100μLのHL2/3細胞をプレートに添加した。培養物を37℃/5%CO2でさらに48時間インキュベートした。インキュベーション後、有効性プレートのβ-ガラクトシダーゼ産生を、化学発光基質を使用して評価し、毒性プレートをXTTで染色して細胞生存率を評価した。
これらの試験において、細胞毒性も評価した(TC50)。被験物質は、テトラゾリウム染料XTT(2,3-ビス(2-メトキシ-4-ニトロ-5-スルホフェニル)-5-[(フェニルアミノ)カルボニル]-2H-テトラゾリウムヒドロキシド)の還元を測定することによって導出された。代謝的に活性な細胞内のXTTは、ミトコンドリア酵素NADPHオキシダーゼによって可溶性ホルマザン生成物に代謝される。XTT溶液は、添加剤を含まないRPMI-1640で1mg/mLのストックとして毎日調製した。フェナジンメトサルフェート(PMS)溶液は、DPBS中で0.15mg/mLに調製し、暗所にて-20℃で保存した。XTT/PMSストックは、XTT溶液1mLあたり40μLのPMSを添加することにより、使用直前に調製した。50μL(50μL)のXTT/PMSをプレートの各ウェルに添加し、プレートを37℃で4時間インキュベートした。4時間のインキュベーションは、各アッセイについて指定の細胞数でXTT色素還元の線形応答範囲内にあることが経験的に決定されている。プレートを密封し、数回反転させて可溶性ホルマザン生成物を混合し、Molecular Devices SpectraMax Plus 384 96ウェルプレート型分光光度計を使用してプレートを450nm(650nm参照波長)で読み取った。
このアッセイでは、5つのIntと4つの複合体を、ウイルスgp120の宿主細胞受容体(CD4)への結合によって媒介される細胞融合を防ぐことがわかっている2つの対照化合物(シカゴスカイブルー(CSB)とエンフビルチド)で実行した。CSB及びエンフビルチドのEC50値は、781及び358nMであり、細胞融合が中程度に阻害されていることを示している。対照的に、5つのIntは、<0.0051~70.1nMの範囲であった。まとめると、このアッセイで試験したIntは、承認されたHIV治療薬であるエンフビルチドよりも有意に高い活性を示す。4つの複合体はまた、複合体14を除いて、許容可能な活性を示した。最後に、この試験で試験した濃度で細胞毒性を示した被験物質はなかった。
Claims (235)
- 式(D-I)、(M-I)、(1)、または(2):
式中、各A1及び各A2が、独立して、式(A-I)または(A-II):
Qが:
Sが:
R1、R2、R3が、各々、独立して、H、OH、ハロゲン、ニトリル、ニトロ、任意選択的に置換されたアミン、任意選択的に置換されたスルフヒドリル、任意選択的に置換されたカルボキシル、任意選択的に置換されたC1-C20アルキル、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニル、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニル、任意選択的に置換されたC5-C20アリール、任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリール、及び任意選択的に置換されたC1-C20アルコキシから選択され;
R4が、任意選択的に置換されたC1-C20アルキル、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリール、及び結合から選択され;
R5が、Hまたは任意選択的に置換されたC1-C6アルキルから選択され;
R6が、任意選択的に置換されたC1-C20アルキル、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、及び任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリールから選択され;
U1、U2、U3、U4、及びU5が、各々、独立して、H、任意選択的に置換されたC1-C20アルキル、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニル、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、及び任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリールから選択され、
R7及びYが、各々独立して、
各R8が、独立して、H、任意選択的に置換されたC1-C20アルキル、任意選択的に置換されたC1-C20アルキレン、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、及び任意選択的に置換されたC2-C15ヘテロアリールから選択され;
各R9が、独立して、任意選択的に置換されたC1-C20アルキレン、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、及び任意選択的に置換されたC2-C15ヘテロアリールから選択され;
xが、1または2であり;
kが、0、1、2、3、4、または5であり;
Arが、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、及び任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリールからなる群から選択され;
nが、1または2であり;
各Eが、Fcドメイン単量体、アルブミンタンパク質、アルブミンタンパク質結合ペプチド、またはFc結合ペプチドを含み;
Lが、Eならびに各A1または各A1及びA2の各Yに共有結合したリンカーであり;
Tが、1~20の整数であり、式(D-I)、(M-I)、(1)、または(2)中の各波線が、Lが各Eに共有結合していることを示す、前記複合体、
またはその薬学的に許容される塩。 - 各A1及び各A2が、独立して、式(A-I)によって記述される、請求項1に記載の複合体。
- L’が窒素原子である、請求項17に記載の複合体。
- L’が窒素原子である、請求項20に記載の複合体。
- L’が窒素原子である、請求項23に記載の複合体。
- L’が窒素原子である、請求項27に記載の複合体。
- L’が窒素原子である、請求項30に記載の複合体。
- L’が窒素原子である、請求項33に記載の複合体。
- L’が窒素原子である、請求項37に記載の複合体。
- L’が窒素原子である、請求項40に記載の複合体。
- L’が窒素原子である、請求項43に記載の複合体。
- L’が窒素原子である、請求項47に記載の複合体。
- L’が窒素原子である、請求項50に記載の複合体。
- L’が窒素原子である、請求項53に記載の複合体。
- L’が窒素原子である、請求項57に記載の複合体。
- L’が窒素原子である、請求項60に記載の複合体。
- L’が窒素原子である、請求項63に記載の複合体。
- L’が窒素原子である、請求項66に記載の複合体。
- 式中、LまたはL’が、1つ以上の任意選択的に置換されたC1-C20アルキレン、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC5-C15アリーレン、任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリーレン、O、S、NRi、P、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート、ホスホリル、またはイミノを含み、
Riが、H、任意選択的に置換されたC1-C20アルキル、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニル、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニル、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニル、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、または任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリールである、請求項1~98のいずれか一項に記載の複合体。 - LまたはL’の主鎖が、1つ以上の、任意選択的に置換されたC1-C20アルキレン、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC5-C15アリーレン、任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリーレン、O、S、NRi、P、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート、ホスホリルまたはイミノからなり、
Riが、H、任意選択的に置換されたC1-C20アルキル、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニル、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニル、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニル、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、または任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリールである、請求項99に記載の複合体。 - 式中、LまたはL’がオキソ置換されている、請求項99または100に記載の複合体。
- 式中、LまたはL’の主鎖が、250個以下の原子を含む、請求項1~101のいずれか一項に記載の複合体。
- 式中、LまたはL’が、アミド、カルバメート、スルホニル、または尿素リンケージを形成することができる、請求項1~102のいずれか一項に記載の複合体。
- 式中、LまたはL’が結合である、請求項1~98のいずれか一項に記載の複合体。
- 式中、LまたはL’が原子である、請求項1~98のいずれか一項に記載の複合体。
- 式中、各Lが、式(D-L-I):
式中、LAが、式GA1-(ZA1)g1-(YA1)h1-(ZA2)i1-(YA2)j1-(ZA3)k1-(YA3)l1-(ZA4)m1-(YA4)n1-(ZA5)o1-GA2で表され;
LBが、式GB1-(ZB1)g2-(YB1)h2-(ZB2)i2-(YB2)j2-(ZB3)k2-(YB3)l2-(ZB4)m2-(YB4)n2-(ZB5)o2-GB2で表され;
LCが、式GC1-(ZC1)g3-(YC1)h3-(ZC2)i3-(YC2)j3-(ZC3)k3-(YC3)l3-(ZC4)m3-(YC4)n3-(ZC5)o3-GC2で表され;
GA1が、Qiとの結合であり;
GA2が、A1との結合であり;
GB1が、Qiとの結合であり;
GB2が、A2との結合であり;
GC1が、Qiとの結合であり;
GC2が、Eとの結合であり、またはEに複合している官能基と反応することができる官能基(例えば、マレイミドとシステイン、アミンと活性カルボン酸、チオールとマレイミド、活性スルホン酸とアミン、イソシアネートとアミン、アジドとアルキン、及びアルケンとテトラジン)であり;
ZA1、ZA2、ZA3、ZA4、ZA5、ZB1、ZB2、ZB3、ZB4、ZB5、ZC1、ZC2、ZC3、ZC4及びZC5の各々が、独立して、任意選択的に置換されたC1-C20アルキレン、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC5-C15アリーレン、または任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリーレンであり;
YA1、YA2、YA3、YA4、YB1、YB2、YB3、YB4、YC1、YC2、YC3及びYC4の各々が、独立して、O、S、NRi、P、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート、ホスホリルまたはイミノであり;
Riが、H、任意選択的に置換されたC1-C20アルキル、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニル、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニル、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニル、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、または任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリールであり;
g1、h1、i1、j1、k1、l1、m1、n1、o1、g2、h2、i2、j2、k2、l2、m2、n2、o2、g3、h3、i3、j3、k3、l3、m3、n3及びo3の各々が、独立して、0または1であり;
Qiが、窒素原子、任意選択的に置換されたC1-C20アルキレン、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC5-C15アリーレン、または任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリーレンである、
請求項1~105のいずれか一項に記載の複合体。 - 式中、L’が窒素原子である、請求項112に記載の複合体。
- 式中、L’が窒素原子である、請求項115に記載の複合体。
- 式中、L’が窒素原子である、請求項118に記載の複合体。
- 式中、L’が窒素原子である、請求項122に記載の複合体。
- 式中、L’が窒素原子である、請求項125に記載の複合体。
- 式中、L’が窒素原子である、請求項128に記載の複合体。
- 式中、L’が窒素原子である、請求項132に記載の複合体。
- 式中、L’が窒素原子である、請求項135に記載の複合体。
- 式中、L’が窒素原子である、請求項138に記載の複合体。
- 式中、L’が窒素原子である、請求項142に記載の複合体。
- 式中、L’が窒素原子である、請求項145に記載の複合体。
- 式中、L’が窒素原子である、請求項148に記載の複合体。
- 式中、L’が窒素原子である、請求項152に記載の複合体。
- 式中、L’が窒素原子である、請求項155に記載の複合体。
- 式中、L’が窒素原子である、請求項158に記載の複合体。
- 式中、L’が窒素原子である、請求項161に記載の複合体。
- 式中、LまたはL’が、1つ以上の、任意選択的に置換されたC1-C20アルキレン、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC5-C15アリーレン、任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリーレン、O、S、NRi、P、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート、ホスホリルまたはイミノを含み、
Riが、H、任意選択的に置換されたC1-C20アルキル、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニル、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニル、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニル、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、または任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリールである、
請求項108~193のいずれか一項に記載の複合体。 - 式中、LまたはL’の主鎖が、1つ以上の、任意選択的に置換されたC1-C20アルキレン、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC5-C15アリーレン、任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリーレン、O、S、NRi、P、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート、ホスホリルまたはイミノからなり、
Riが、H、任意選択的に置換されたC1-C20アルキル、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニル、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニル、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニル、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、または任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリールである、
請求項194に記載の複合体。 - 式中、LまたはL’が、オキソで置換されている、請求項194または195に記載の複合体。
- 式中、LまたはL’の主鎖が、250個以下の原子を含む、
請求項108~196のいずれか一項に記載の複合体。 - 式中、LまたはL’が、アミド、カルバメート、スルホニルまたは尿素リンケージを形成することができる、
請求項108~197のいずれか一項に記載の複合体。 - 式中、LまたはL’が結合である、
請求項108~197のいずれか一項に記載の複合体。 - 式中、LまたはL’が原子である、
請求項108~197のいずれか一項に記載の複合体。 - 式中、各Lが、式(M-L-1):
J1-(Q1)g-(T1)h-(Q2)i-(T2)j-(Q3)k-(T3)l-(Q4)m-(T4)n-(Q5)o-J2
によって記述され、
式中、J1がA1との結合であり;
J2がEとの結合であり;
Q1、Q2、Q3、Q4及びQ5の各々が、独立して、任意選択的に置換されたC1-C20アルキレン、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニレン、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニレン、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキレン、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキレン、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニレン、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニレン、任意選択的に置換されたC5-C15アリーレン、または任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリーレンであり;
T1、T2、T3、T4の各々が、独立して、O、S、NRi、P、カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスフェート、ホスホリルまたはイミノであり;
Riが、H、任意選択的に置換されたC1-C20アルキル、任意選択的に置換されたC1-C20ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C20アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたC3-C20シクロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C20ヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたC4-C20シクロアルケニル、任意選択的に置換されたC4-C20ヘテロシクロアルケニル、任意選択的に置換されたC8-C20シクロアルキニル、任意選択的に置換されたC8-C20ヘテロシクロアルキニル、任意選択的に置換されたC5-C15アリール、または任意選択的に置換されたC3-C15ヘテロアリールであり;g、h、i、j、k、l、m、n及びoの各々が、独立して、0または1である、
請求項108~200のいずれか一項に記載の複合体。 - Eに接続された波線が、各A1-Lまたは各A1-L-A2のLが、Eの溶媒曝リジンの窒素原子に共有結合していることを示す、請求項1~201のいずれか一項に記載の複合体。
- Eに接続された波線が、各A1-Lまたは各A1-L-A2のLが、Eの溶媒露出システインの硫黄原子に共有結合していることを示す、請求項1~201のいずれか一項に記載の複合体。
- 各EがFcドメイン単量体である、請求項1~203のいずれか一項に記載の複合体。
- nが2であり、各Eが二量体化してFcドメインを形成する、請求項204に記載の複合体。
- 各Eが、配列番号1~95のいずれか1つの配列を有する、請求項1~207のいずれか一項に記載の複合体。
- Tが、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10である、請求項1~208のいずれか一項に記載の複合体。
- Tの平均値が1~10である、請求項1~208のいずれか一項に記載の複合体の集団。
- Tの平均値が1~5である、請求項210に記載の複合体の集団。
- 請求項1~209のいずれか一項に記載の複合体、または請求項210もしくは211に記載の複合体の集団、またはその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
- ウイルス感染症を有するかまたはウイルス感染症を有すると推定される対象の治療方法であって、前記方法が、有効量の請求項1~209のいずれか一項に記載の複合体、請求項210もしくは211に記載の複合体の集団、または請求項212に記載の組成物を前記対象に投与することを含む、前記治療方法。
- それを必要とする対象におけるウイルス感染症の予防的治療方法であって、前記方法が、有効量の請求項1~209のいずれか一項に記載の複合体、請求項210もしくは211に記載の複合体の集団、または請求項212に記載の組成物を前記対象に投与することを含む、前記治療方法。
- 前記ウイルス感染症が、ヒト免疫不全ウイルス(HIV)によって引き起こされる、請求項213または214に記載の方法。
- 前記HIVが、HIV-1またはHIV-2である、請求項215に記載の方法。
- 前記対象が免疫無防備状態である、請求項213~216のいずれか一項に記載の方法。
- 前記対象が、体液性免疫不全症、T細胞不全症、好中球減少症、無脾症、または補体欠損症と診断されている、請求項213~217のいずれか一項に記載の方法。
- 前記対象が、免疫抑制療法で治療されているか、または治療されようとしている、請求項213~218のいずれか一項に記載の方法。
- 前記対象が、免疫抑制を引き起こす疾患と診断されている、請求項213~219のいずれか一項に記載の方法。
- 前記疾患ががんである、請求項220に記載の方法。
- 前記がんが、白血病、リンパ腫、または多発性骨髄腫である、請求項221に記載の方法。
- 前記対象が、造血幹細胞移植を受けたか、または受けようとしている、請求項213~222のいずれか一項に記載の方法。
- 前記対象が、臓器移植を受けたか、または受けようとしている、請求項213~223のいずれか一項に記載の方法。
- 前記組成物の複合体を、筋肉内、静脈内、皮内、動脈内、腹膜腔内、病巣内、頭蓋内、関節内、前立腺内、胸膜内、気管内、鼻腔内、硝子体内、膣内、直腸内、局所、腫瘍内、腹膜内、皮下、結膜下、小嚢内、経粘膜、心嚢内、臍帯内、眼内、経口、局部、吸入、注射、または輸注投与によって投与する、請求項213~224のいずれか一項に記載の方法。
- 前記対象を、第2の治療薬で治療する、請求項213~225のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第2の治療薬が抗ウイルス薬である、請求項226に記載の方法。
- 前記抗ウイルス剤が、インテグラーゼ阻害剤、ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤(NRTI)、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤(NNRTI)、プロテアーゼ阻害剤、ウイルス侵入阻害剤、CCR5アンタゴニスト、またはCYP3A阻害剤から選択される、請求項227に記載の方法。
- 前記インテグラーゼ阻害剤が、ドルテグラビル、エルビテグラビル、またはラルテグラビルから選択される、請求項228に記載の方法。
- 前記ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤(NRTI)が、アバカビル、ラミブジン、ジドブジン、エムトリシタビン、テノホビル、エムトリシタビン、ジダノシン、またはスタブジンから選択される、請求項228に記載の方法。
- 非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤(NNRTI)が、エファビレンツ、エトラビリン、ネビラピン、リルピビリン、またはデラビルジンから選択される、請求項228に記載の方法。
- 前記プロテアーゼ阻害剤が、アタザナビル、コビシスタット、ダルナビル、コビシスタット、ロピナビル、リトナビル、ホスアンプレナビル、ティプラナビル、ネルフィナビル、インジナビル、またはサキナビルから選択される、請求項228に記載の方法。
- 前記ウイルス侵入阻害剤がエンフビルチドである、請求項228に記載の方法。
- 前記CCR5アンタゴニストがマラビロックである、請求項228に記載の方法。
- 前記CYP3A阻害剤がコビシスタットまたはリトナビルである、請求項228に記載の方法。
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