JP2022521972A - アジュバントとして有用な化合物 - Google Patents

Abstract

本開示は、アジュバントとして有用なヘテロアリール化合物及びその薬学的に許容される塩、ならびにワクチンなどの医薬組成物におけるそれらの使用を提供する。対象において免疫応答を刺激するためのヘテロアリール化合物及びその薬学的に許容される塩の使用がさらに開示される。

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本開示は、アジュバントとして有用なヘテロアリール化合物及びその薬学的に許容される塩、ならびにワクチンなどの医薬組成物におけるそれらの使用を提供する。対象において免疫応答を刺激するためのヘテロアリール化合物及びその薬学的に許容される塩の使用がさらに開示される。

ワクチンは、特定の疾患もしくは状態に対する防御を提供すること及び／またはそれを治療することを意図して、個体内で免疫応答を刺激するために使用される。いくつかのワクチンは、抗原の使用を介して免疫応答を誘導する。しかしながら、抗原単独の投与で十分な免疫応答が誘導されることは稀である。アジュバントを抗原と共に使用することで、抗原単独よりも速いかまたは大きな免疫応答を誘発することができ、しばしば、応答を刺激するために必要とされる抗原の量及び投薬頻度を低減させることができる。加えて、アジュバントを使用して、免疫応答を特定の免疫学的経路に指向させ、抗原のための送達ビヒクルとして作用させ得る。

多数のアジュバントが知られているが、大部分のアジュバント製剤に伴う有害な副作用に起因して、ヒト使用のために承認されているものはほとんどない。現在承認されているアジュバントは、それらの活性と望ましくない副作用との間の妥協を反映している。新たなアジュバントの開発は、しばしば、特定のアジュバントの有効性が少数の抗原のみに関連付けられることによって妨げられる。加えて、信頼できる動物モデルがしばしば利用可能でなく、このことは、有望な製剤が臨床試験において有効性を示すことができないことを導き得る。

今日、ヒト使用のための最も一般的なアジュバントは、水酸化アルミニウム及びリン酸アルミニウムであるが、小分子アジュバントは、これらの薬剤を上回る改善を提供する。生物学的に活性な分子として、小分子は、合理的薬物設計、及びＱＳＡＲのような計算アプローチなどの、その特性を最適化するために使用される多数の薬物発見技術を受けることができる。従って、原理的に、任意の特性または特徴を化合物の中または外に設計することができ、これにより、小分子アジュバントを、種々の疾患により良く対処するための特定の細胞または経路の標的化など、特定の生物学的機能に合わせることができる。したがって、感染症もしくはがんなどの様々な疾患及び状態の有効な予防として、またはその治療において使用することができる新たな小分子アジュバントを提供することの必要性が存在する。

第１の態様において、本開示は、免疫応答の誘発または増強を必要とする対象においてそれを行うための方法であって、対象に、１つ以上の抗原と、化合物Ｉ－２６３ａの化合物、

またはその薬学的に許容される塩を含む治療有効量のアジュバントと、を投与することを含む、方法を提供する。

第１の態様の第１の実施形態において、アジュバントは、１つ以上の抗原と混合または共製剤化された形態で提供される。別の実施形態において、アジュバントは、非経口投与のために製剤化される。別の実施形態において、アジュバントは、皮下、静脈内、皮内、及び筋肉内投与から選択される経路によって投与される。

第１の態様の別の実施形態において、アジュバントは、ＴＬＲ９アゴニストをさらに含む。別の実施形態において、ＴＬＲ９アゴニストは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチドである。

第２の態様において、本開示は、抗原提示細胞の抗原提示機能を活性化する方法であって、１つ以上の異なる抗原を有するアジュバントとして、それを必要とする対象に、化合物Ｉ－２６３ａ、

またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。

第２の態様の第１の実施形態において、アジュバントは、１つ以上の抗原と混合または共製剤化された形態で提供される。別の実施形態において、アジュバントは、非経口投与のために製剤化される。別の実施形態において、アジュバントは、皮下、静脈内、皮内、及び筋肉内投与から選択される経路によって投与される。

第３の態様において、本開示は、免疫応答の刺激を必要とする対象においてそれを行うための方法であって、対象に、免疫刺激有効量の化合物Ｉ－２６３ａ、

またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。

第３の態様の第１の実施形態において、方法は、ＴＬＲ９アゴニストを投与することをさらに含む。

第４の態様において、本開示は、医薬組成物であって、化合物Ｉ－２６３ａ、

またはその薬学的に許容される塩と、１つ以上の非複製抗原と、を含む、医薬組成物を提供する。

第４の態様の第１の実施形態において、医薬組成物は、ＴＬＲ９アゴニストをさらに含む。

ビヒクル、及びＣｐＧ単独と比較した、化合物Ｉ－２６３ａ単独、及びＣｐＧとの組み合わせの皮下注射の１８時間後の、上腕及び鼠径リンパ節における活性化マーカーＣＤ４０を発現する樹状細胞の増加を示す。 ビヒクル、及びＣｐＧ単独と比較した、化合物Ｉ－２６３ａ単独、及びＣｐＧとの組み合わせの皮下注射の１８時間後の、上腕及び鼠径リンパ節における活性化マーカーＣＤ８６を発現する樹状細胞の増加を示す。 ビヒクル、及びＣｐＧ単独と比較した、化合物Ｉ－２６３ａ単独、及びＣｐＧとの組み合わせの皮下注射の１８時間後の、上腕及び鼠径リンパ節における活性化マーカーＣＤ６９を発現するＴ細胞の増加を示す。 ビヒクル、及びＣｐＧ単独と比較した、化合物Ｉ－２６３ａ単独、及びＣｐＧとの組み合わせの皮下注射の１８時間後の、上腕及び鼠径リンパ節における活性化マーカーＣＤ６９を発現するＮＫ細胞の増加を示す。 ＯＶＡ単独、及びＯＶＡとＣｐＧとの組み合わせと比較した、ＯＶＡ、及び化合物Ｉ－２６３ａ単独またはＣｐＧとの組み合わせのいずれかでの処置の２４時間後の、上腕及び鼠径リンパ節におけるＫｂ－ＳＩＩＮＦＥＫＬ四量体陽性ＣＤ８ Ｔ細胞の増加を示す。 初回処置の１４日後の、ＯＶＡ単独、及びＯＶＡとＣｐＧの組み合わせと比較した、ＯＶＡ、及び化合物Ｉ－２６３ａ単独またはＣｐＧとの組み合わせのいずれかで処置したマウスの脾臓におけるＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の増加を示す。 ＯＶＡ単独、及びＯＶＡとＣｐＧとの組み合わせと比較した、ＯＶＡ、及び化合物Ｉ－２６３ａ単独またはＣｐＧとの組み合わせのいずれかでの初回処置の１４日後の、Ｈ－２Ｋｂ上にペプチドＳＩＩＮＦＥＫＬをロードしたＣＤ８α＋樹状細胞の増加を示す。 ビヒクル、化合物Ｉ－２６３ａ、もしくはポリ（Ｉ：Ｃ）を用いたマウスの前処置、またはＯＶＡ、ＯＶＡ＋化合物Ｉ－２６３ａ、もしくはＯＶＡ＋ポリ（Ｉ：Ｃ）を用いたワクチン接種後の、雌性Ｃ５７ＢＬ／６マウスに移植したＢ１６Ｆ１０－ＯＶＡ腫瘍の平均成長を示す。 Ｉ－２６３ａ、ポリ（Ｉ：Ｃ）、ＯＶＡ、ＯＶＡ＋化合物Ｉ－２６３ａ、またはＯＶＡ＋ポリ（Ｉ：Ｃ）での処置と比較した、ビヒクルでの処置後に雌性Ｃ５７ＢＬ／６マウスに移植したＢ１６Ｆ１０－ＯＶＡ腫瘍の個々の成長速度を示す。

別段定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術及び科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書で言及される全ての特許及び刊行物は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、別段文脈により指図されない限り、複数の指示物を含む。

本明細書で使用される場合、「または」という用語は、論理和（すなわち、及び／または）であり、「どちらか」、「である場合を除いて」、「二者択一的に」という用語、及び同様の効果の単語を用いるなどで明示的に示されない限り、排他的論理和を示さない。

医薬組成物
いくつかの実施形態において、本開示は、アジュバントであって、化合物Ｉ－２６３ａ、

またはその薬学的に許容される塩を含む、アジュバントを提供する。本明細書で使用される場合、「アジュバント」という用語は、適切な抗原と組み合わせて使用されるときに、結果として生じる免疫応答を増大させるか、またはそうでなければ変更もしくは改変する１つまたは複数の化合物を指す。

化合物Ｉ－２６３ａ、［（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ）－４－｛［５－（｛４－［（１Ｒ）－７－クロロ－１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン－１－イル］－５－メチル－２－チエニル｝カルボニル）ピリミジン－４－イル］アミノ｝－２－ヒドロキシシクロペンチル］メチルスルファメートは、ＳＵＭＯ活性化酵素の阻害剤であり、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１６／００４１３６（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）の実施例２０１に記載されている。

本明細書に記載の化合物は、薬学的に許容される塩の形態であってもよい。いくつかの実施形態において、そのような塩は、無機または有機の酸または塩基から誘導される。好適な塩の総説については、例えば、Ｂｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，１９７７，６６，１ １９及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ Ｅｄ．，Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ（ｅｄ．），Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ（２０００）を参照されたい。

好適な酸付加塩の例としては、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、ルコヘプタン酸塩（ｌｕｃｏｈｅｐｔａｎｏａｔｅ）、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２－ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩（ｐｅｃｔｉｎａｔｅ）、過硫酸塩、３－フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシル酸塩、及びウンデカン酸塩が挙げられる。

好適な塩基付加塩の例としては、アンモニウム塩；ナトリウム及びカリウム塩などのアルカリ金属塩；カルシウム及びマグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩；ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ－メチルＤ－グルカミンなどの有機塩基を有する塩；ならびにアルギニン、リジンなどのアミノ酸を有する塩などが挙げられる。

例えば、Ｂｅｒｇｅは、以下のＦＤＡ承認市販塩を列挙している：アニオン酢酸塩、ベシル酸塩（ベンゼンスルホン酸塩）、安息香酸塩、炭酸水素塩、重酒石酸塩、臭化物、エデト酸カルシウム（エチレンジアミン四酢酸塩）、カムシル酸塩（樟脳スルホン酸塩）、炭酸塩、塩化物、クエン酸塩、二塩酸塩、エデト酸塩（エチレンジアミン四酢酸塩）、エジシル酸塩（１，２エタンジスルホン酸塩）、エストレート（ラウリル硫酸塩）、エシル酸塩（エタンスルホン酸塩）、フマル酸塩、グルセプチン酸塩（グルコヘプトン酸塩）、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニル酸塩（グリコールアミドフェニルアルソン酸塩）、ヘキシルレゾルシン酸塩、ヒドラバミン（Ｎ，Ｎ’ジ（デヒドロ－アビエチル）－エチレン－ジアミン）、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、ヨウ化物、イセチオン酸塩（２ヒドロキシ－エタンスルホン酸塩）、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩（メタン－スルホン酸塩）、臭化メチル、硝酸メチル、硫酸メチル、ムチン酸塩、ナプシル酸塩（２－ナフタレンースルホン酸塩）、硝酸塩、パモ酸塩（エンボン酸塩）、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ポリガラクトウロン酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクル酸塩（８－クロロテオフィリン酸塩）、及びトリエチオダイド；有機カチオンベンザチン（Ｎ，Ｎ’ジベンジルエチレンジアミン）、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン（Ｎメチルグルカミン）、及びプロカイン；ならびに金属カチオンアルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、及び亜鉛。

Ｂｅｒｇｅは、以下の非ＦＤＡ承認市販（米国外）塩をさらに列挙している：アニオンアジピン酸塩、アルギン酸塩、アミノサリチル酸塩、アンヒドロメチレンクエン酸塩、アレコリン、アスパラギン酸塩、重硫酸塩、臭化ブチル、樟脳酸塩、ジグルコン酸塩、二臭化水素酸塩、ジコハク酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、フッ化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、メチレンビス（サリチル酸塩）、ナパジシル酸塩（１，５ナフタレン－ジスルホン酸塩）、シュウ酸塩、ペクチン酸塩（ｐｅｃｔｉｎａｔｅ）、過硫酸塩、フェニルエチルバルビツール酸塩、ピクリン酸塩、プロピオン酸塩、チオシアン酸塩、トシル酸塩、及びウンデカン酸塩；有機カチオンベネタミン（Ｎベンジルフェネチルアミン）、クレミゾール（１ｐクロロ－ベンジル－２ピロリジン－１’イルメチルベンズイミダゾール）、ジエチルアミン、ピペラジン、及びトロメタミン（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）；ならびに金属カチオンバリウム及びビスマス。

他の実施形態において、アジュバントは、１つ以上の抗原と混合された形態で提供される。本明細書で使用される場合、「抗原」という用語は、適切な文脈で動物またはヒトに導入されるときに、免疫応答を誘起する化合物または組成物を意味する。この免疫応答は、抗体産生、もしくは特異的免疫学的能力を有する細胞の活性化のいずれか、またはその両方を含み得る。抗原の例としては、タンパク質、ウイルス、真菌、細菌、毒素、化学物質、薬物、及び外来粒子が挙げられる。「非複製抗原」は、宿主の内部で一度も複製しない抗原である。

いくつかの実施形態において、アジュバントは、ＴＬＲ９アゴニストをさらに含む。ＴＬＲ９（ｔｏｌｌ様受容体９）は、細菌ＤＮＡまたは合成オリゴヌクレオチド（ＯＤＮ）において見出されるものを含む、非メチル化ＣｐＧ含有配列によって活性化される。そのような非メチル化ＣｐＧ含有配列は、細菌ＤＮＡにおいて高頻度で存在するが、哺乳動物ＤＮＡにおいては稀である。したがって、非メチル化ＣｐＧ配列は、微生物ＤＮＡを哺乳動物ＤＮＡから区別する。ＴＬＲ９アゴニストは、Ｅ．ｃｏｌｉ ＤＮＡ、エンドトキシン非含有Ｅ．ｃｏｌｉ ＤＮＡ、またはＥ．ｃｏｌｉ Ｋ１２由来のエンドトキシン非含有細菌ＤＮＡを含むがこれらに限定されない、微生物ＤＮＡの調製物であり得る。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ９は、本明細書において「ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド」、「ＣｐＧＯＤＮ」、「ＯＤＮ」、または「ＣｐＧ」ともいう、非メチル化ＣｐＧモチーフを含有する合成オリゴヌクレオチドである。ＣｐＧ ＯＤＮは、シトシン（「Ｃ」ヌクレオチド）、続いてグアニン（「Ｇ」ヌクレオチド）を含有する短い一本鎖ＤＮＡ分子である。「ｐ」は、典型的には、ＤＮＡのホスホジエステル骨格を指す。本開示のＴＬＲ９アゴニストは、これまでに記載されている少なくとも３つの型の刺激性ＯＤＮ、Ａ型、Ｂ型、及びＣ型のいずれかを含み得る。ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチドは、ポリヌクレオチドの化学合成のための標準的な方法によって作製され得るか、または商業的に購入され得る。

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物は、薬学的に許容される担体をさらに含む。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」という用語は、生理学的に適合性である任意のそしてすべての溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌及び抗真菌剤、等張及び吸収遅延剤などを含む。一実施形態において、薬学的に許容される担体は、皮下、静脈内、皮内、または筋肉内投与に好適である。投与経路に応じて、活性化合物は、化合物を不活性化し得る天然条件から化合物を保護するために材料中にコーティングされ得る。

本明細書に記載の医薬組成物において用いられ得る好適な水性及び非水性担体の例としては、水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、及びそれらの好適な混合物、オリーブ油などの植物油、及びオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルが挙げられる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用によって、分散液の場合は必要とされる粒径の維持によって、及び界面活性剤の使用によって維持され得る。

他の実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物は、薬学的に許容される抗酸化物質を含み得る。薬学的に許容される抗酸化物質の例としては、以下が挙げられる：（１）アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなどの水溶性抗酸化物質；（２）パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、αトコフェロールなどの油溶性抗酸化物質；及び（３）クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などの金属キレート剤。

本明細書に記載の組成物はまた、保存剤、湿潤剤、乳化剤及び分散剤などのアジュバントを含有し得る。微生物の存在の防止は、滅菌手順と、様々な抗菌及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などの含有との両方によって確実にされ得る。

薬学的に許容される担体としては、滅菌水溶液または分散液、及び滅菌注射液または分散液の即時調製のための滅菌粉末が挙げられる。薬学的に活性な物質のためのそのような媒体及び薬剤の使用は、当該技術分野で知られている。任意の従来の媒体または薬剤が活性化合物と非適合性である場合を除き、本開示の医薬組成物におけるそれらの使用が企図される。補助的な活性化合物を組成物に組み入れることもできる。

治療組成物は、典型的には、製造及び貯蔵の条件下で無菌かつ安定でなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、リポソーム、または高薬物濃度に好適な他の秩序構造として製剤化され得る。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール等）、及びそれらの好適な混合物を含有する溶媒または分散媒であり得る。多くの場合、等張化剤、例えば、糖、多価アルコール、例えば、マンニトール、ソルビトール、または塩化ナトリウムを組成物中に含めることが好ましい。注射用組成物の持続的吸収は、組成物中に吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸塩及びゼラチンを含めることによってもたらされ得る。

滅菌注射液は、適切な溶媒中に、必要とされる量の活性化合物を、必要に応じて上記で列挙される成分の１つまたはその組み合わせと共に組み入れ、続いて滅菌精密濾過をすることによって調製され得る。一般に、分散液は、活性化合物を、基礎分散媒、及び上記で列挙されるものからの必要とされる他の成分を含有する滅菌ビヒクルに組み入れることによって調製される。滅菌注射液の調製のための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、活性成分及び任意の追加の所望の成分の粉末を、予め滅菌濾過されたその溶液から得る、真空乾燥及びフリーズドライ（凍結乾燥）である。

単回剤形を作製するために担体材料と組み合わせることができる活性成分（複数可）の量は、治療される対象、及び特定の投与様式に応じて変動する。単回剤形を作製するために担体材料と組み合わせることができる活性成分（複数可）の量は、一般に、治療効果をもたらす組成物の量である。概して、１００パーセントのうち、この量は、約０．０１パーセント～約９９パーセントの活性成分（複数可）の範囲である。いくつかの実施形態において、範囲は、約０．１パーセント～約７０パーセントであり、他の実施形態において、範囲は、薬学的に許容される担体と組み合わせた約１パーセント～約３０パーセントの活性成分（複数可）である。

投与計画は、最適な所望の応答（例えば、治療応答）を提供するように調整される。例えば、単回ボーラスを投与してもよく、いくつかの分割用量を経時的に投与してもよく、または用量を治療状況の緊急性による指示に合わせて低減または増加させてもよい。非経口組成物を、投与の容易さ及び投薬量の均一性のために、単位剤形に製剤化することが特に有利である。本明細書で使用される単位剤形は、治療される対象のための単位投薬量として適した物理的に分離した単位を指し；各単位は、必要とされる薬学的担体と共同して所望の治療効果をもたらすように計算された所定の量の活性化合物を含有する。本開示の単位剤形の仕様は、（ａ）活性化合物の特有の特徴及び達成されるべき特定の治療効果、ならびに（ｂ）個体における感受性の治療のためにそのような活性化合物を調合する技術分野に固有の制限によって左右され、かつそれらに直接依存する。

化合物Ｉ－２６３ａの投与については、投薬量は、約０．０００１～１００ｍｇ／ｋｇ、より通常には、０．０１～５０ｍｇ／ｋｇ、例えば、約１ｍｇ／ｋｇ～約２５ｍｇ／ｋｇ宿主体重の範囲である。例えば、投薬量は、０．３ｍｇ／ｋｇ体重、１ｍｇ／ｋｇ体重、３ｍｇ／ｋｇ体重、５ｍｇ／ｋｇ体重、または１０ｍｇ／ｋｇ体重であり得る。例示的な治療計画は、１日に１回、１週間に１回、２週間毎に１回、３週間毎に１回、４週間毎に１回、１ヶ月毎に１回、３ヶ月毎に１回、または３～６ヶ月毎に１回の投与を伴う。

医薬組成物中の活性成分（複数可）の実際の投薬量レベルは、患者に対する毒性なしに、特定の患者、組成物、及び投与様式について所望の治療応答を達成するのに有効な量の活性成分（複数可）を得るように変動され得る。選択された投薬量レベルは、用いられる本開示の特定の組成物またはその塩の活性、投与経路、投与時間、用いられる特定の化合物の***速度、治療期間、用いられる特定の組成物と組み合わせて使用される他の薬物、化合物、及び／または材料、治療される患者の年齢、性別、体重、状態、全般的な健康状態、及び既往歴を含む様々な薬物動態的因子、ならびに医学分野で周知の同様の因子に依存する。

「治療有効量」は、抗原（複数可）と組み合わせて対象に与えられるときに、疾患症状の重症度の減少、無疾患症状期の頻度及び持続期間の増加、または疾患の苦痛に起因する機能障害もしくは身体障害の防止をもたらすアジュバントの量である。当業者であれば、対象のサイズ、対象の症状の重症度、及び選択される特定の組成物または投与経路などの因子に基づいて、そのような量を決定することができる。

「免疫刺激量」は、対象に与えられるときに、身体自体の構成物質として認識されない物質の存在に対する身体の細胞及び体液の反応の規模または量を誘発するかまたは増加させるアジュバントの量である。当業者であれば、対象のサイズ、対象の症状の重症度、及び選択される特定の組成物または投与経路などの因子に基づいて、そのような量を決定することができる。

本明細書に開示される組成物を、当該技術分野で知られている様々な方法のうちの１つ以上を使用して、１つ以上の投与経路を介して投与することができる。当業者によって理解されるように、投与経路及び／または投与様式は、所望される結果に応じて変動する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の化合物及び組成物のための投与経路には、例えば、注射または注入による、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、皮下、脊髄、または他の非経口投与経路が含まれるが、これらに限定されない。本明細書で使用される「非経口投与」という語句は、通常、注射による、経腸及び局所投与以外の投与様式を意味し、限定するものではないが、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、硬膜外、及び胸骨内注射及び注入を含む。他の実施形態において、組成物は、局所、表皮、または粘膜投与経路などの非非経口経路を介して、例えば、鼻腔内、経口、膣、直腸、舌下、または局所で投与され得る。

活性化合物を、インプラント、経皮パッチ、及びマイクロカプセル化送達システムを含む、制御放出製剤などの、化合物を急速な放出に対して保護する担体と共に調製することができる。エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーを使用することができる。そのような製剤を調製するための多くの方法は、特許されているか、または当業者に一般に知られている。

化合物及び組成物の使用方法
いくつかの実施形態において、本開示は、免疫応答の誘発または増強を必要とする対象においてそれを行うための方法であって、対象に、１つ以上の抗原と、化合物Ｉ－２６３ａ、

またはその薬学的に許容される塩を含む治療有効量のアジュバントと、を投与することを含む、方法を提供する。本明細書で使用される場合、「免疫応答の増強」は、身体自体の構成物質として認識されない物質の存在に対する身体の細胞及び体液の反応の規模または量を増加させることを意味する。免疫応答は、Ｂ細胞の、特異的抗原に対する抗体を産生及び分泌する形質細胞への変換、ならびに／または感作されたＴ細胞が外来抗原を直接攻撃し、身体の体液性免疫応答を開始するリンホカインを分泌するときに生じる細胞媒介性応答を含む、体液性応答であり得る。

いくつかの実施形態において、本開示は、抗原提示細胞の抗原提示機能を活性化する方法であって、１つ以上の異なる抗原を有するアジュバントとして、それを必要とする対象に、化合物Ｉ－２６３ａ、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。本明細書で使用される場合、「抗原提示細胞」という用語は、その細胞表面上またはその細胞表面において、少なくとも１つの抗原または抗原断片を呈する、獲得する、または提示することができる細胞を指す。一般に、抗原提示細胞は、抗原または抗原組成物に対する免疫応答の増強を補助する任意の細胞であり得る。

本明細書に記載のアジュバント及び組成物を、ワクチンにおいて使用することができる。本明細書で使用される場合、「ワクチン」という用語は、抗体、サイトカイン、及び／または他の細胞応答の産生を含むがこれらに限定されない、抗原特異的免疫応答を生じさせるために、動物またはヒトに、典型的にはアジュバントと共に投与される１つ以上の抗原を含む組成物を指す。

本明細書に記載のアジュバントと抗原との組み合わせは、がんの治療に有用であり得る。本明細書で使用される場合、「がん」という用語は、制御不能または調節不全の細胞増殖、細胞分化の減少、周囲組織に侵入する不適正な能力、及び／または異所性部位における新たな成長を確立する能力によって特徴付けられる細胞障害を指す。「がん」という用語には、固形腫瘍及び血液由来腫瘍（血液悪性腫瘍）が含まれるが、これらに限定されない。「がん」という用語は、皮膚、組織、器官、骨、軟骨、血液、及び血管の疾患を包含する。「がん」という用語はさらに、原発性及び転移性の癌を包含する。

開示される組成物を用いて治療することができる固形腫瘍の非限定的な例としては、膵臓癌、膀胱癌（浸潤性膀胱癌を含む）、結腸直腸癌、甲状腺癌、胃癌、乳癌（転移性乳癌を含む）、前立腺癌（アンドロゲン依存性及びアンドロゲン非依存性前立腺癌を含む）、腎臓癌（例えば、転移性腎細胞癌を含む）、肝臓癌（例えば、肝細胞癌及び肝内胆管を含む）、肺及び気管支癌（非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、扁平上皮肺癌、細気管支肺胞上皮癌（ＢＡＣ）、肺の腺癌、及び小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）を含む）、卵巣癌（例えば、進行性上皮または原発性腹膜癌を含む）、子宮頸癌、子宮癌（例えば、子宮体部及び子宮頸部を含む）、子宮内膜癌、胃癌、食道癌、頭頸部癌（例えば、頭頸部の扁平上皮癌、上咽頭癌、口腔及び咽頭を含む）、黒色腫、神経内分泌癌（転移性神経内分泌腫瘍を含む）、脳癌（例えば、神経膠腫／神経膠芽腫、退形成乏突起膠腫、成人多形神経膠芽腫、及び成人退形成星細胞腫を含む）、神経内分泌（転移性神経内分泌腫瘍を含む）、骨癌、ならびに軟部組織肉腫が挙げられる。

開示される組成物を用いて治療することができる血液悪性腫瘍の非限定的な例としては、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）（移行ＣＭＬ及びＣＭＬ急性転化期（ＣＭＬ－ＢＰ）を含む）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、ホジキン病（ＨＤ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）（濾胞性リンパ腫及びマントル細胞リンパ腫を含む）、Ｂ細胞リンパ腫（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）を含む）、Ｔ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫（ＭＭ）、アミロイドーシス、ワルデンストレームマクログロブリン血症、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）（不応性貧血（ＲＡ）、環状鉄芽球を伴う不応性貧血（ＲＡＲＳ）、芽球増加を伴う不応性貧血（ＲＡＥＢ）、及び移行期のＲＡＥＢ（ＲＡＥＢ－Ｔ）を含む）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、辺縁帯リンパ腫、くすぶり型多発性骨髄腫、ならびに骨髄増殖症候群が挙げられる。

いくつかの実施形態において、本開示の組成物は、乳癌、肺癌、卵巣癌、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病、または急性リンパ芽球性白血病の治療に好適である。いくつかの実施形態において、本開示の組成物は、ＮＨＬの治療に好適である。いくつかの実施形態において、本開示の組成物は、低悪性度ＮＨＬの治療に好適である。いくつかの実施形態において、本開示の組成物は、濾胞性リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、または辺縁帯リンパ腫の治療に好適である。いくつかの実施形態において、本開示の組成物は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、または慢性リンパ球性リンパ腫（ＣＬＬ）の治療に好適である。いくつかの実施形態において、本開示の組成物は、多発性骨髄腫の治療に好適である。いくつかの実施形態において、本開示の組成物は、ＡＬＬ、ＡＭＬ、またはＭＤＳの治療に好適である。

他の実施形態において、本開示の組成物は、アレルギー／アナフィラキシー、急性及び／または慢性炎症、関節リウマチ、自己免疫障害、血栓症、高血圧、心肥大、心不全、ハンチントン病、ならびにアルツハイマー病を含むがこれらに限定されない、炎症、心血管、及び神経変性障害の治療に好適である。

他の実施形態において、本開示の組成物は、単純ヘルペスウイルス、ＨＩＶ（ＨＩＶ－１及びＨＩＶ－２を含む）、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）、サイトメガロウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、肝炎、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、及びヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）などの感染症の治療に好適である。

他の実施形態において、本開示の組成物は、アクチノバクテリウム（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ及びＭ．ｌａｐｒａｅなどのマイコバクテリウムを含むがこれらに限定されない）、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ、ならびにＢｏｒｄａｔｅｌｌａによって引き起こされるものなどの細菌感染の治療に好適である。

他の実施形態において、本開示の組成物は、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｄｅｓ、及びＰｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓによって引き起こされるものなどの真菌感染の治療に好適である。

他の実施形態において、本開示の組成物は、原生動物（Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｐ．ｖｉｖａｘ、Ｐ．ｍａｌａｒｉａｓ、及びＰ．ｏｖａｌｅなどのＰｌａｓｍｏｄｉｕｍを含むが、これらに限定されない）、Ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ、Ａｎｇｉｏｓｔｒｏｎｇｌｙｌｕｓ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｍａｎｓｏｎｉｉ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｈａｅｍａｔｏｂｉｕｍ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｍｅｋｏｎｇｉ、Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｄｉｕｍ、Ａｎｃｌｙｏｓｔｏｍａ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｃｏｌｉ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｄｉｓｐａｒ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈａｒｔａｎｎｉ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｐｏｌｅｃｋｉ、Ｗｕｃｈｅｒｉａ ｂａｎｃｒｏｆｔｉ、Ｇｉａｒｄｉａ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ、Ｅｎｔｅｒｏｂｉｕｓ ｖｅｒｍｉｃｕｌａｒｉｓ、Ａｓｃａｒｉｓ ｌｕｍｂｒｉｃｏｉｄｅｓ、Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｔｒｉｃｈｉｕｒａ、Ｎｅｃａｔｏｒ ａｍｅｒｉｃａｎｕｓ、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｄｕｏｄｅｎａｌｅ、Ｂｒｕｇｉａ ｍａｌａｙｉ、Ｏｎｃｈｏｃｅｒｃａ ｖｏｌｖｕｌｕｓ、Ｄｒａｃａｎｃｕｌｕｓ ｍｅｄｉｎｅｓｉｓ、Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ、ｓｐｉｒａｌｉｓ、Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ ｓｔｅｒｃｏｒａｌｉｓ、Ｏｐｉｓｔｈｏｒｃｈｉｓ ｓｉｎｅｓｉｓ、Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓ ｓｐ、Ｆａｓｃｉｏｌａ ｈｅｐａｔｉｃａ、Ｆａｓｃｉｏｌａ ｍａｇｎａ、Ｆａｓｃｉｏｌａ ｇｉｇａｎｔｉｃａ、Ｔａｅｎｉａ ｓａｇｉｎａｔａ、及びＴａｅｎｉａ ｓｏｌｉｕｍによって引き起こされるものなどの寄生虫感染の治療に好適である。

他の実施形態において、本開示は、第１の容器中の本明細書に記載のアジュバントと、第２の容器中の１つ以上の抗原と、を含むキットを提供し、ここで、アジュバント組成物は、１つ以上の抗原と接触していない。
本開示のこれら及び他の実施形態は、例示として提供され限定するものではない以下の実施例を参照して明らかになる。

実施例
略語：
ＣＴＬ 細胞傷害性Ｔリンパ球
ＬＮ リンパ節
ＯＶＡ トリ卵白アルブミンタンパク質

一般的な分析方法：
別段明言しない限り、免疫細胞プロファイリングを、ＢＤ（Ｂｅｃｋｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）ＬＳＲＩＩ Ｆｏｒｔｅｓｓａ上でのフローサイトメトリーを使用して行った。

抗原特異的ＣＤ８ Ｔ細胞（ＯＶＡのクラスＩ ＭＨＣエピトープ、ＳＩＩＮＦＥＫＬ（配列番号１）を認識する）の検出のために、同族ペプチド（ＳＩＩＮＦＥＫＬ）（配列番号１）をロードし、蛍光タグで標識したＭＨＣ－Ｉ四量体を使用した（ＭＢＬ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｗｏｂｕｒｎ，ＭＡ）。ＭＨＣクラスＩ四量体試薬は、主として、ＭＨＣクラスＩ四量体／ペプチド複合体が抗原特異的ＣＴＬの検出及び定量のためのプローブとして使用され得ることを実証したＡｌｔｍａｎ ｅｔ ａｌ．によって開発された方法を使用して生成される（Ｓｃｉｅｎｃｅ １９９６，２７４：９４－９６）。

本明細書に記載され、以下の実施例で使用される化合物Ｉ－２６３ａを、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１６／００４１３６（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）中の実施例２０１に記載される手順に従って合成することができる。

一般的な実験条件：
トリ卵白アルブミンタンパク質（ＯＶＡ）を用いたワクチン接種：ＯＶＡは、ワクチン接種実験のための重要な参照タンパク質である。トリ卵白の主要なタンパク質構成物質である卵白アルブミンは、軽度に免疫原性であるために十分に大きくかつ複雑な糖タンパク質である。その結果、それは免疫化研究のための抗原として広く使用されている。ＯＶＡに対する効率的なインビボ細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）応答のために、それは、抗原提示細胞（ＡＰＣ）によって獲得され、短い抗原ペプチドにタンパク質切断され、その後ＣＤ８ Ｔ細胞に提示されるようにクラスＩ ＭＨＣ分子と複合体形成される必要がある。この現象は、抗原交差提示と呼ばれ、ＡＰＣの中で、樹状細胞（ＤＣ）は、外因性抗原の交差提示の誘導及び同族抗原特異的免疫応答の誘発において最も効率的である（Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ，１９９８）。ワクチンアジュバントは、ＤＣ及び他のＡＰＣの活性化を介して外因性抗原の交差提示を強化することができる。本研究では、低内毒素レベルの高品質ＯＶＡタンパク質（ＥｎｄｏＦｉｔ Ｏｖａｌｂｕｍｉｎ，ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；カタログ番号：Ｖａｃ－ｐｏｖａ－１０）を使用し、これをインビボでの使用に適したエンドトキシン非含有水に溶解させた。

試験物：
以下の試験物を示す研究において使用した：

１．ＣｐＧ：ＣｐＧ ＯＤＮ（オリゴ－ジ－ヌクレオチド）は、特定の配列文脈（ＣｐＧモチーフ）で非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含有する合成オリゴヌクレオチドである。これらのＣｐＧモチーフは、哺乳動物ＤＮＡと比較して、細菌ＤＮＡにおいて２０倍高い頻度で存在する。ＣｐＧ ＯＤＮは、ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）によって認識され、強い免疫刺激効果を導く。ＣｐＧは、Ｈｅｐｌｉｓａｖ－Ｂワクチンにおいて使用される臨床的に承認されたアジュバントであり、いくつかの前臨床研究においてアジュバント活性が実証されている。本研究では、厳密な無菌エンドトキシン非含有条件下で調製されたＣｐＧのワクチングレード製剤（ＯＤＮ２３９５，ＶａｃｃｉＧｒａｄｅ（商標），ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；カタログ番号：ｖａｃ－２３９５－１）を使用した。１ｍｇ／ｍＬのＣｐＧの原液を、滅菌エンドトキシン非含有水中で調製した。

２．化合物Ｉ－２６３ａ：化合物Ｉ－２６３ａの２．５ｍｇ／ｍＬまたは１．５ｍｇ／ｍＬの原液を、２０％ＨＰβＣＤ中で毎週調合し、１０ｍＬ／ｋｇ体重の投薬量を使用して、処置の各日の正確な動物体重に基づいて、皮下または静脈内のいずれかで（それぞれの研究に示されるように）投与した。与えた最終投与量は７．５ｍｇ／ｋｇであった。

方法及び結果：
化合物Ｉ－２６３ａ、ＣｐＧ、抗原ＯＶＡ有りまたは無しでの免疫化をマウスにおいて行って、異なる免疫細胞サブセットに対する化合物の効果、及び抗原を提示し、ＯＶＡを発現する腫瘍の成長を防止するそれらの能力を評価した。

研究１：自然免疫細胞に対する効果：
本研究の目標は、局所排出リンパ節（ＬＮ）における自然免疫細胞の動員及び活性化に関する、化合物Ｉ－２６３ａ単独またはＴＬＲ９アゴニスト（ＣｐＧ）との組み合わせのインビボ効果を調査することであった。０日目の夕方に、８～１０週齢の雌性Ｂａｌｂ／ｃマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、表１に示す製剤のうちの１つを、２つの上腕ＬＮの近くで両側に（各側５０μｌ）皮下注入した（群当たりｎ＝５匹のマウス）。１日目（注射後約１８時間）に、マウスを安楽死させた。炎症上腕ＬＮならびに遠位非炎症鼠径ＬＮを各マウスから個別に採取した。単一細胞懸濁液を、３ｍＬシリンジプランジャーを使用して７０μセルストレーナー上でＬＮを均質化し、続いてＦＡＣＳ染色緩衝液（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，カタログ番号５５４６５７）で洗浄することによって生成した。細胞ペレットを、９６ウェルＵ底組織培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）上での染色のために、１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁した。各試料を、抗体のフローサイトメトリーパネル（以下の表２を参照）を使用して染色し、続いてＢＤ ＬＳＲＩＩ Ｆｏｒｔｅｓｓａ上での獲得及び分析を行った。陽性対照のために、１滴のｕｌｔｒａｃｏｍｐビーズ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，カタログ番号０１－２２２２－４２）を１μＬのそれぞれの抗体で染色した。
表１：処置群

表２：研究１のためのフローサイトメトリー抗体パネル

図１に示すように、上腕リンパ節における化合物Ｉ－２６３ａの皮下注射は、ビヒクル処置マウスと比較して、遠位鼠径ＬＮではなく、上腕ＬＮにおいて、ＣＤ１１ｃ＋細胞上のマーカーＣＤ４０（図１ａ）及びＣＤ８６（図１ｂ）の発現の増加として観察される、樹状細胞の活性化を引き起こした。同様の増加は、ＣｐＧならびに化合物Ｉ－２６３ａ＋ＣｐＧの組み合わせについても認められた。

加えて、初期リンパ球活性化マーカーＣＤ６９の変化が、上腕ＬＮにおける化合物Ｉ－２６３ａ、ＣｐＧ、または化合物Ｉ－２６３ａ＋ＣｐＧの組み合わせのいずれかの投与に際して、Ｔ細胞（図２ａ）及びＮＫ細胞（図２ｂ）上で観察された。これらの結果は、化合物Ｉ－２６３ａが、既知のＴＬＲ９アゴニストであり、そして強力なワクチンアジュバントであるＣｐＧと同様に、自然及び適応両方の免疫細胞をインビボで活性化することができることを示唆する。

研究２：抗原提示及びＴ細胞プライミングに対する効果
調査した次の概念は、ＤＣの活性化の増強が、Ｔ細胞への抗原提示の改善に転換されるかどうかであった。０日目に、８～１０週齢の雌性Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、表３に示す製剤のうちの１つを、２つの上腕ＬＮの近くで両側に（各側５０ｕｌ）皮下注射した（群当たりｎ＝１０匹のマウス）。１日目（注射後約１８時間）に、群あたり５匹のマウスを安楽死させた。炎症上腕ＬＮならびに遠位非炎症鼠径ＬＮを各マウスから個別に採取した。単一細胞懸濁液を、３ｍＬシリンジプランジャーを使用して７０ｕＭセルストレーナー上でＬＮを均質化し、続いてＦＡＣＳ染色緩衝液（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号５５４６５７）で洗浄することによって生成した。細胞ペレットを、９６ウェルＵ底組織培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）上での染色のために、１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁した。各試料を、抗体のフローサイトメトリーパネル（以下の表３を参照）及びＫｂ－ＳＩＩＮＦＥＫＬ四量体（配列番号３）（ＭＢＬ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｗｏｂｕｒｎ，ＭＡ）を使用して染色し、続いてＢＤ ＬＳＲＩＩ Ｆｏｒｔｅｓｓａ上での獲得及び分析を行った。陽性対照のために、１滴のｕｌｔｒａｃｏｍｐビーズ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，カタログ番号０１－２２２２－４２）を、１ｕＬのそれぞれの抗体で染色した。
表３：研究２のための処置群

表４：研究２のためのフローサイトメトリー抗体パネル

図３に示すように、Ｋｂ－ＳＩＩＮＦＥＫＬ四量体（配列番号３）陽性ＣＤ８ Ｔ細胞の頻度の増加が、化合物Ｉ－２６３ａ＋ＯＶＡを用いた処置の１８時間後に排出リンパ節において観察され、化合物Ｉ－２６３ａが、ＯＶＡのクラスＩ ＭＨＣエピトープであるＳＩＩＮＦＥＫＬ（配列番号１）の、同族抗原特異的ＣＤ８ Ｔ細胞への交差提示を促進することが示唆された。

７日目に、残りの５匹のマウス／群に、０日目に与えたものと同様の、表３の製剤のブースト用量を与えた。１４日目に、マウスを安楽死させ、上記のように四量体＋ＣＤ８ Ｔ細胞の存在を試験するために、それらの脾臓及びＬＮを採取した。０日目の結果と同様に、ＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞は、化合物Ｉ－２６３ａ＋ＯＶＡ処置マウスの脾臓に蓄積し、化合物Ｉ－２６３ａが、ＣＤ８ Ｔ細胞への細胞外抗原の交差提示を促進することが確認された（図４ａ）。注目すべきことに、Ｈ－２Ｋｂ（Ｃ５７ＢＬ／６マウスのクラス－Ｉ ＭＨＣ）上にペプチドＳＩＩＮＦＥＫＬ（配列番号１）をロードしたＣＤ８α＋ＤＣの頻度の増加も観察され、抗原交差提示の増強の直接的な証拠が提供された（図４ｂ）。

これらの結果は、化合物Ｉ－２６３ａが、１）樹状細胞の活性化、及び２）ＣＤ８α＋樹状細胞による細胞外抗原の交差提示を介した抗原特異的免疫応答の促進によって、ワクチンアジュバントとして作用する潜在力を有することを実証する。

研究３：腫瘍成長に対する効果
本研究の目標は、ＯＶＡ抗原を発現する腫瘍（Ｂ１６Ｆ１０－ＯＶＡ）でチャレンジしたマウスにおけるＯＶＡ＋化合物Ｉ－２６３ａワクチン接種の予防効果を評価することであった。Ｂ１６Ｆ１０－ＯＶＡ細胞株を、トリ卵白アルブミン遺伝子のＲｏｓａ２６遺伝子座への安定的組み込みによってインハウスで生成した。８～１０週齢の雌性Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、表５に示す製剤のうちの１つを、頂部の近くで皮下（ＳＣ）注射した。その後、全てのマウスを、０日目に、０．３ｅ６個のＢ１６Ｆ１０－ＯＶＡ腫瘍細胞／マウスで皮下にチャレンジした（ｎ＝１６匹のマウス／群、ただし、群５（卵白アルブミン＋化合物Ｉ－２６３ａ）についてはｎ＝１５）。腫瘍成長を、デジタルカリパスを使用して２～３日毎に測定し、腫瘍体積を以下として計算した：ＬｘＷｘ（Ｗ／２）。
表５．研究３のためにマウスに投与した薬物製剤

図５Ａは、任意の所与の群内のコホート全体が腫瘍サイズ測定のために利用可能であった最後の日まで、すなわち、腫瘍サイズに基づいて人道的エンドポイントのためにマウスを取り除く前の各群の平均腫瘍体積を示す。図５Ｂは、印を付した各群内の個々のマウスの腫瘍体積を示す。これらの図は、化合物Ｉ－２６３ａ＋ＯＶＡタンパク質を用いたワクチン接種が、ＯＶＡを発現するＢ１６－Ｆ１０腫瘍の成長を完全に防止し、一方、いずれかの処置単独では、マウスにおける腫瘍防御を与えなかったことを実証している。同様の結果は、ＯＶＡ＋ポリＩ：Ｃ（これは、ＴＬＲ３アゴニストであり、そして広く使用されているワクチンアジュバントである）でのワクチン接種（群６）について観察された。これらの結果は、化合物Ｉ－２６３ａのアジュバント様の特性を確証する。

本開示を、特定された機能及びその関係の実施態様を例示する機能的ビルディングブロックを用いて上記で説明している。これらの機能的ビルディングブロックの境界を、説明の便宜のために本明細書で任意に定義している。特定された機能及びその関係が適切に実行される限り、代替の境界を定義することができる。

概要及び要約の節ではなく、詳細な説明の節が、特許請求の範囲を解釈するために使用されることを意図することを理解されたい。概要及び要約の節は、発明者（複数可）によって企図される本開示のすべてではないが１つ以上の例示的な実施形態を示し得るものであり、したがって、本開示及び添付の特許請求の範囲をいかなる方法でも限定することを意図するものではない。

特定の実施形態の前述の説明は、他者が、当業者の技術の範囲内で知識を適用することによって、過度の実験なしに、本開示の一般的な概念から逸脱することなく、そのような特定の実施形態を様々な適用のために容易に改変する及び／または適応させることができるように、本開示の一般的な性質を完全に明らかにする。したがって、そのような適応及び改変は、本明細書に提示される教示及び手引きに基づく、開示される実施形態の等価物の意味及び範囲内であることが意図される。本明細書における語法または用語は、本明細書の用語または語法が教示及び手引きに照らして当業者によって解釈されるように説明する目的のためのものであって、限定するものではないことを理解されたい。

本開示の広さ及び範囲は、上記の例示的な実施形態のいずれによっても制限されるべきではなく、以下の特許請求の範囲及びそれらの等価物に従ってのみ定義されるべきである。

Claims (14)

1. 免疫応答の誘発または増強を必要とする対象においてそれを行うための方法であって、前記対象に、１つ以上の抗原と、化合物Ｉ－２６３ａ、
   

   

   またはその薬学的に許容される塩を含む治療有効量のアジュバントと、を投与することを含む、前記方法。
2. 前記アジュバントが、前記１つ以上の抗原と混合または共製剤化された形態で提供される、請求項１に記載の方法。
3. 前記アジュバントが、非経口投与のために製剤化される、請求項１に記載の方法。
4. 前記アジュバントが、皮下、静脈内、皮内、及び筋肉内投与から選択される経路によって投与される、請求項３に記載の方法。
5. 前記アジュバントが、ＴＬＲ９アゴニストをさらに含む、請求項１に記載の方法。
6. 前記ＴＬＲ９アゴニストが、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチドである、請求項５に記載の方法。
7. 抗原提示細胞の抗原提示機能を活性化する方法であって、１つ以上の異なる抗原を有するアジュバントとして、それを必要とする対象に、化合物Ｉ－２６３ａ、
   

   

   またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、前記方法。
8. 前記アジュバントが、前記１つ以上の抗原と混合または共製剤化された形態で提供される、請求項７に記載の方法。
9. 前記アジュバントが、非経口投与のために製剤化される、請求項７に記載の方法。
10. 前記アジュバントが、皮下、静脈内、皮内、及び筋肉内投与から選択される経路によって投与される、請求項９に記載の方法。
11. 免疫応答の刺激を必要とする対象においてそれを行うための方法であって、前記対象に、免疫刺激有効量の化合物Ｉ－２６３ａ、
    

    

    またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、前記方法。
12. ＴＬＲ９アゴニストを投与することをさらに含む、請求項１１に記載の方法。
13. 医薬組成物であって、
    化合物Ｉ－２６３ａ、
    

    

    またはその薬学的に許容される塩と、
    １つ以上の非複製抗原と、を含む、医薬組成物。
14. ＴＬＲ９アゴニストをさらに含む、請求項１３に記載の医薬組成物。

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