JP2022520060A - リン酸化タウペプチドワクチンの安全な投与の方法 - Google Patents

Abstract

抗リン酸化タウ抗体を、重度有害事象を誘発せずに、ヒトにおいて誘導するための方法が記載される。方法は、ｔｏｌｌ様受容体４アゴニストとリポソームの表面に提示されているタウホスホペプチドとを含む有効量のリポソームを対象に投与することを含む。

Description

電子的に提出された配列表の参照
本出願は、２０２０年２月７日の作成日、および２２ＫＢのサイズを有する「Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｌｉｓｔｉｎｇ ６８９００１＿６６Ｕ１」というファイル名のＡＳＣＩＩフォーマットの配列表としてＥＦＳ－Ｗｅｂを介して電子的に提出される配列表を含有する。ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して提出される配列表は、本明細書の一部であり、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。

本発明は医学の分野におけるものである。本発明は詳細には、リン酸化タウ（ｐタウ）ペプチドのリポソーム、およびアルツハイマー病等のタウオパチーを防止または処置するためのその使用に関する。

アルツハイマー病（ＡＤ）は、世界中で推定４４００万人が患う進行性衰弱性神経変性疾患である（Alzheimers.net）。現在商業化されているＡＤ療法は、臨床症状に作用することを目的としているが、疾患の根底にある発病過程（疾患修飾効果）を標的としていない。残念なことに、現在の療法は最小限度で有効であるに過ぎず、したがって追加の防止および治療措置を開発して試験する緊急の必要性が存在する。

アルツハイマー病に特徴的な病態は、著しく凝集したアミロイドベータタンパク質を含む細胞外プラークの蓄積、および過剰リン酸化タウタンパク質の細胞内「濃縮体（tangle）」または凝集である。これらのタンパク質の蓄積を引き起こす分子事象は特徴付けが不十分である。アミロイドに関しては、アミロイド前駆体タンパク質の異常な切断がアミノ酸１～４２を含む易凝集性断片の蓄積を引き起こすと仮定されている。タウに関しては、キナーゼ、ホスファターゼ、またはその両方の調節不全がタウの異常なリン酸化を引き起こすと仮定されている。タウは、過剰リン酸化すると、微小管と効果的に結合してそれを安定化させる能力を喪失し、代わりに影響を受けたニューロンの細胞質に蓄積する。未結合過剰リン酸化タウは、初めにオリゴマー、次いでより高次の凝集体を形成するようであり、これらの存在は、それらが形成されるニューロンの機能に、おそらくは正常な軸索輸送の中断を介して、負の影響を及ぼすと考えられる。

先進諸国では、アルツハイマー病または他の認知症性タウオパチーと診断された個体は、一般的にコリンエステラーゼ阻害薬（例えばＡｒｉｃｅｐｔ（登録商標））またはメマンチン（例えばＮａｍｅｎｄａ（商標））を用いて処置される。これらの薬物は、適度に良好な忍容性を示すが、非常にわずかな有効性を有する。例えば、Ａｒｉｃｅｐｔ（登録商標）は、処置された個体のうちのおよそ５０％において、症状の悪化を６～１２か月遅延させる。残りの処置は、非薬理的であり、患者の認知能力が低下する一方で患者が日々の課題をより処理できるようにすることに焦点を当てている。

ＡＤの防止および処置のための免疫療法は現在開発中である。ＡＤと関連がある抗原を用いる能動免疫化は、ＡＤに対する抗体性免疫と細胞性免疫の両方の応答を潜在的に賦活化することができる。しかしながら、最初の広く試験されたヒト抗アミロイドベータワクチンの評価は２００２年に停止された。致死的となり得る中枢神経系炎症の一種である髄膜脳炎は、Ａβを標的とした能動免疫療法剤ＡＮ－１７９２のＡＤ患者における臨床研究において観察された（Orgogozo et al., 2003）。ＡＮ－１７９２に曝露された患者のうちの６％に生じた脳炎反応は、望まないＡβ特異的Ｔ細胞活性化によって誘導されたと考えられる。

今日まで、タウ病態を特異的に標的とする薬剤を用いて行われた研究はほとんど存在しない。現在、タウ免疫療法は臨床試験に移行しているが、この分野は依然として初期の段階にあり、様々な手法の有効性および安全性の機構的理解は十分に確立していない（Sigurdsson, Neurodegener Dis. 2016; 16(0):34-38）。脳炎、すなわち脳の炎症は、全長タウタンパク質に対して免疫化されたマウスにおいても報告されている。しかしながら、有害作用は、ＣＮＳ炎症誘発性環境下でリン酸化タウペプチドの単回注射を用いて免疫化された動物からは報告されなかった（Rosenmann H., 2013. Curr. Alzheimer Res. 10, 217-228）。

軽度から中等度のアルツハイマー病を有するヒト患者における非リン酸化タウペプチドワクチン（ＡＡＤｖａｃ１）の長期安全性プロファイルが近年公開された（Novak et al., Alzheimer's Research & Therapy (2018) 10:108）。このワクチンは、Ｎ末端システインを介してキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）とカップリングしたタウ配列のアミノ酸２９４～３０５に由来する合成ペプチドを含有する。このワクチンは、０．３ｍｌのリン酸緩衝液容量中、４０μｇの用量のＫＬＨとカップリングしたペプチド（ＣＫＤＮＩＫＨＶＰＧＧＧＳ）において水酸化アルミニウムアジュバント（０．５ｍｇのＡｌ^３＋を含有する）と共に投与された。研究に登録され、第１相研究（ＦＵＮＤＡＭＡＮＴ研究）においてＡＡＤｖａｃ１処置と関連付けられた２６名の患者から観察された有害事象（ＡＥ）は、注射部位反応（紅斑、腫脹、熱感、掻痒、疼痛、小結節）であった。これらのＡＥのうちの１つまたは複数が、ＡＡＤｖａｃ１処置の患者のうちの５０％に観察された。注射部位反応は可逆的であり、発現においては主に軽度であった。６つの重度有害事象（ＳＡＥ）が観察された（腹部絞扼性ヘルニア、脱水、急性精神病、認知症の行動および精神症状、第２度房室ブロック、ならびに洞性徐脈）。ＳＡＥのいずれも、研究者によってＡＡＤｖａｃ１処置と関連があると判断されなかった。アレルギー反応もアナフィラキシー反応も観察されなかった。安全性シグナルは、臨床検査評価（凝固、血液生化学、血液学、および尿検査）においても、バイタルサイン評価においても、神経学的および理学的検査においても出現しなかった。安全性シグナルは、ＭＲＩ評価によって検出されなかった。浮腫状変化は生じなかった。髄膜変化および髄膜脳炎は観察されなかった。新たな微小出血が１名のＡｐｏＥ４ホモ接合体において観察され、脳表ヘモジデリンが１名のＡｐｏＥ４ヘテロ接合体において検出され、両事象は臨床的に無症状であった。このことは、ＡＤ患者集団におけるそのような病変の背景発生率と矛盾しないと考えられた。

しかしながら、ヒト患者におけるリン酸化タウペプチドワクチンの安全性プロファイルは報告されていない。アルツハイマー病等のニューロン変性疾患に対する安全かつ効果的な処置の必要性が存在する。

本発明は、リポソームの表面に提示されているリン酸化タウペプチドを含むリポソームワクチンの臨床研究からの知見に基づく。ワクチンはヒトにおいて良好な忍容性を示すようであった。タウコンジュゲートワクチンＡＡＤｖａｃ１試験において使用した用量よりもはるかに多い用量において、ｐタウペプチドリポソームワクチンは重度有害事象を誘発せずに抗リン酸化タウ抗体をヒト対象において誘導したことが示された。

したがって、全般的な一態様では、本発明は、抗リン酸化タウ抗体を、脳炎等の重度有害事象を誘発せずに、それを必要とするヒト対象において誘導する方法であって、ｔｏｌｌ様受容体４アゴニストと、配列番号１～配列番号３および配列番号５～配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むタウホスホペプチドとを含む有効量のリポソームを対象に投与することを含み、タウホスホペプチドが、１用量当たり約２５ｎｍｏｌｅ～約７５０ｎｍｏｌｅ、例えば１用量当たり約２９．７ｎｍｏｌｅ～約７４２．５ｎｍｏｌｅ、好ましくは１用量当たり約９０ｎｍｏｌｅ～約７１５ｎｍｏｌｅ、例えば約８９．１ｎｍｏｌｅ～約７１２．８ｎｍｏｌｅ、または１用量当たり約９０ｎｍｏｌｅ～約５３５ｎｍｏｌｅ、例えば１用量当たり約８９．１ｎｍｏｌｅ～約５３４．６ｎｍｏｌｅ、または１用量当たり約９０ｎｍｏｌｅ～約２７５ｎｍｏｌｅ、例えば１用量当たり約８９．１ｎｍｏｌｅ～約２６７．３ｎｍｏｌｅの量投与され、タウホスホペプチドがリポソームの表面に提示されている、方法を提供する。ある特定の実施形態では、タウホスホペプチドは、配列番号２７～配列番号２９および配列番号３１～配列番号３８からなる群から選択されるアミノ酸配列からなり、好ましくは配列番号２８のアミノ酸配列からなる。一実施形態では、有効量のリポソームは、ｔｏｌｌ様受容体４アゴニストと、配列番号２８のアミノ酸配列からなるテトラパルミトイル化タウホスホペプチドとを含み、テトラパルミトイル化タウホスホペプチドは、リポソームの表面に提示されており、１用量当たり２９．７ｎｍｏｌｅ～７４２．５ｎｍｏｌｅに対応する１用量当たり１００μｇ～２５００μｇ、好ましくは１用量当たり８９．１ｎｍｏｌｅ～７１２．８ｎｍｏｌｅに対応する１用量当たり３００μｇ～２４００μｇ、例えば１用量当たり８９．１ｎｍｏｌｅ、２６７．３ｎｍｏｌｅ、５３４．６ｎｍｏｌｅ、または７１２．８ｎｍｏｌｅに対応する１用量当たり３００μｇ、９００μｇ、１８００μｇ、または２４００μｇの量が投与される。

一部の実施形態では、本発明は、抗リン酸化タウ抗体を、脳炎等の重度有害事象を誘発せずに、それを必要とするヒト対象において誘導する方法であって、ｔｏｌｌ様受容体４アゴニストとリポソームの表面に提示されているタウホスホペプチドとを含む有効量のリポソームを対象に投与することを含み、タウホスホペプチドが配列番号１～配列番号３および配列番号５～配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、タウホスホペプチドが１用量当たり約２５ｎｍｏｌｅ～約７５０ｎｍｏｌｅの量投与され、好ましくは、タウホスホペプチドが、配列番号２８のアミノ酸配列からなるテトラパルミトイル化タウホスホペプチドであり、１用量当たり約３００μｇ、約９００μｇ、約１８００μｇ、もしくは約２４００μｇの量、またはそれらの間の任意の量投与される、方法を提供する。

ある特定の実施形態では、抗リン酸化タウ抗体を、脳炎等の重度有害事象を誘発せずに、それを必要とするヒト対象において誘導する方法であって、ｔｏｌｌ様受容体４アゴニストとリポソームの表面に提示されているタウホスホペプチドとを含む有効量のリポソームを対象に投与することを含み、タウホスホペプチドが配列番号２７～配列番号２９および配列番号３１～配列番号３８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、タウホスホペプチドが、１用量当たり約９０ｎｍｏｌｅ～約７１５ｎｍｏｌｅ、例えば１用量当たり約２９．７ｎｍｏｌｅ、約２６７．３ｎｍｏｌｅ、約５３４．６ｎｍｏｌｅ、もしくは約７１２．８ｎｍｏｌｅの量、またはそれらの間の任意の量投与される、方法。一実施形態では、有効量のリポソームは、１用量当たり２６５～２７５ｎｍｏｌｅ、例えば１用量当たり２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３、２７４、もしくは２７５ｎｍｏｌｅ、またはそれらの間の任意の値、例えば１用量当たり約２６７．３ｎｍｏｌｅの量のタウホスホペプチドを含む。別の実施形態では、有効量のリポソームは、１用量当たり５３０～５４０ｎｍｏｌｅ、例えば１用量当たり５３０、５３１、５３２、５３３、５３４、５３５、５３６、５３７、５３８、５３９、もしくは５４０ｎｍｏｌｅ、またはそれらの間の任意の値、例えば１用量当たり５３４．６ｎｍｏｌｅの量のタウホスホペプチドを含む。別の実施形態では、有効量のリポソームは、１用量当たり７１０～７２０ｎｍｏｌｅ、例えば１用量当たり７１０、７１１、７１２、７１３、７１４、７１５、７１６、７１７、７１８、７１９、もしくは７２０ｎｍｏｌｅ、またはそれらの間の任意の値、例えば１用量当たり７１２．８ｎｍｏｌｅの量のタウホスホペプチドを含む、方法。

ある特定の実施形態では、リポソームは皮下投与される。

ある特定の実施形態では、リポソームは筋肉内投与される。

ある特定の実施形態では、方法は、初回投与の１～２４週間後に第２の用量の有効量のリポソームを対象に投与することをさらに含む。

ある特定の実施形態では、リポソームは、ヘルパーＴ細胞エピトープおよび脂質化ＣｐＧオリゴヌクレオチドのうちの少なくとも一方をさらに含む。ある特定の実施形態では、脂質化ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、配列番号１８～配列番号２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有し、好ましくは配列番号１８のヌクレオチド配列を有し、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは１つまたは複数のホスホロチオエートヌクレオチド間連結を有し、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは少なくとも１つの親油基とリンカー、好ましくはＰＥＧリンカーを介して共有結合により連結している。

ある特定の実施形態では、リポソームは、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホリル－３’－ｒａｃ－グリセロール（ＤＭＰＧ）、およびコレステロールからなる群から選択される１つまたは複数の脂質をさらに含む。

ある特定の実施形態では、ヘルパーＴ細胞エピトープは、配列番号２３～配列番号２６からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列を含み、好ましくは配列番号２３～２５のアミノ酸配列を含む。

ある特定の実施形態では、ｔｏｌｌ様受容体４アゴニストはモノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬＡ）である。

ある特定の実施形態では、有効量のリポソームは、１用量当たり３０μｇ～９００μｇ、好ましくは１００μｇ～５８５μｇの量のｔｏｌｌ様受容体４アゴニストを含む。ある特定の実施形態では、有効量のリポソームは、１用量当たり３０μｇ～９００μｇ、好ましくは１００μｇ～５８５μｇの量のｔｏｌｌ様受容体アゴニストであるモノホスホリルヘキサアシルリピドＡ、３－脱アシルを含む。

ある特定の実施形態では、有効量のリポソームは、１用量当たり２５μｇ～６２５μｇ、好ましくは７５μｇ～４５０μｇの量のヘルパーＴ細胞エピトープを含む。ある特定の実施形態では、有効量のリポソームは、１用量当たり２５μｇ～６２５μｇ、好ましくは７５μｇ～４５０μｇの量の、配列番号１３のアミノ酸配列からなるＴ５０ヘルパーＴ細胞エピトープを含む。

ある特定の実施形態では、有効量のリポソームは、１用量当たり約２ｎｍｏｌｅ～約１１０ｎｍｏｌｅ、例えば１用量当たり約４．０２ｎｍｏｌｅ～約１００．４４ｎｍｏｌｅ、または１用量当たり約４ｎｍｏｌｅ～約７５ｎｍｏｌｅ、例えば１用量当たり約４．０２ｎｍｏｌｅ～約７２．３２ｎｍｏｌｅ、または１用量当たり約１０ｎｍｏｌｅ～約１０５ｎｍｏｌｅ、例えば１用量当たり約１２．０６ｎｍｏｌｅ～約１００．４４ｎｍｏｌｅ、または１用量当たり約７０～約１０５ｎｍｏｌｅ、例えば１用量当たり約７２．３２ｎｍｏｌｅ～約１００．４４ｎｍｏｌｅの量のヘルパーＴ細胞エピトープを含む。ある特定の実施形態では、有効量のリポソームは、１用量当たり約３ｎｍｏｌｅ～約１０５ｎｍｏｌｅ、好ましくは１用量当たり約１０ｎｍｏｌｅ～約１０５ｎｍｏｌｅ、例えば１用量当たり約１２．０６ｎｍｏｌｅ～約１００．４４ｎｍｏｌｅの量の、配列番号１３のアミノ酸配列からなるＴ５０ヘルパーＴ細胞エピトープを含む。一実施形態では、有効量のリポソームは、１用量当たり２～５ｎｍｏｌｅ、例えば１用量当たり２、３、４、もしくは５ｎｍｏｌｅ、またはそれらの間の任意の値、例えば１用量当たり約３．８２、３．９２、４．０２、もしくは４．１２ｎｍｏｌｅの量のヘルパーＴ細胞エピトープを含む。別の実施形態では、有効量のリポソームは、１用量当たり１０～１５ｎｍｏｌｅ、例えば１用量当たり１０、１１、１２、１３、１４、もしくは１５ｎｍｏｌｅ、またはそれらの間の任意の値、例えば１用量当たり１１．８６、１１．９６、１２．０６、１２．１６ｎｍｏｌｅの量のヘルパーＴ細胞エピトープを含む。別の実施形態では、有効量のリポソームは、１用量当たり７０～７５ｎｍｏｌｅ、例えば１用量当たり７０、７１、７２、７３、７４、もしくは７５ｎｍｏｌｅ、またはそれらの間の任意の値、例えば７２．０２、７２．１２、７２．２２、７２．３２、７２．４２の量のヘルパーＴ細胞エピトープを含む。さらに別の実施形態では、有効量のリポソームは、１用量当たり９８～１０３ｎｍｏｌｅ、例えば１用量当たり９８、９９、１００、１０１、１０２、もしくは１０３ｎｍｏｌｅ、またはそれらの間の任意の値、例えば１用量当たり１００．２４、１００．３４、１００．４４、１００．５４、もしくは１００．６４ｎｍｏｌｅの量のヘルパーＴ細胞エピトープを含む。

ある特定の実施形態では、有効量のリポソームは、１用量当たり５０μｇ～１２５０μｇ、好ましくは１５０μｇ～８００μｇの量の脂質化ＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、有効量のリポソームは、１用量当たり５０μｇ～１２５０μｇ、好ましくは１５０μｇ～８００μｇの量の、配列番号１８のヌクレオチド配列からなるＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。

ある特定の実施形態では、リポソームは、
（１）配列番号２８のアミノ酸配列を有するタウホスホペプチド、
（２）モノホスホリルヘキサアシルリピドＡ、３－脱アシルを含むｔｏｌｌ様受容体４アゴニスト、
（３）配列番号３９のアミノ酸配列を含むヘルパーＴ細胞エピトープ、
（４）配列番号１８のヌクレオチド配列を含む脂質化ＣｐＧオリゴヌクレオチド、ならびに
（５）１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホリル－３’－ｒａｃ－グリセロール（ＤＭＰＧ）、およびコレステロールからなる群から選択される少なくとも１つの脂質
を含む。

ある特定の実施形態では、対象は、アルツハイマー病、例えば、早期アルツハイマー病、アルツハイマー病に起因する軽度認知障害（ＭＣＩ）、軽度アルツハイマー病、または軽度から中等度のアルツハイマー病の処置を必要とする。他の実施形態では、対象は、脳においてアミロイド陽性であるが、顕著な認知障害をまだ示していない。

本発明はまた、抗リン酸化タウ抗体を、脳炎等の重度有害事象を誘発せずに、それを必要とするヒト対象において誘導することにおける使用のためのワクチン組合せ体であって、本発明の実施形態のプライミングワクチンおよびブースターワクチンを含む、ワクチン組合せ体に関する。本発明はまた、抗リン酸化タウ抗体を、脳炎等の重度有害事象を誘発せずに、それを必要とするヒト対象において誘導するための医薬品の製造におけるワクチン組合せ体の使用であって、ワクチン組合せ体が本発明の実施形態のプライミングワクチンおよびブースターワクチンを含む、使用を提供する。抗リン酸化タウ抗体を、脳炎等の重度有害事象を誘発せずに、ヒト対象において誘導する方法に関する、本明細書に記載される本発明の全ての態様および実施形態は、抗リン酸化タウ抗体を、脳炎等の重度有害事象を誘発せずに、それを必要とするヒト対象において誘導するための使用のためのワクチン組合せ体、および／または抗リン酸化タウ抗体を、脳炎等の重度有害事象を誘発せずに、それを必要とするヒト対象において誘導するための医薬品の製造におけるワクチン組合せ体の使用に適用することができる。

本発明のさらなる態様、特色、および利点は、本発明の以下の詳細な説明および特許請求の範囲を読むことでより良好に理解されるだろう。

前述の概要、および本出願の好ましい実施形態の以下の詳細な説明は、添付の図面と併せて読む場合、より良好に理解されるだろう。しかしながら、本出願は図面に示される正確な実施形態に限定されないことが理解されるべきである。

２週間ごとに１回の、３５および８０ｐｇ／用量のＡＣＩ－３５．０３０の雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスへの３回の筋肉内投与後のｐタウＩｇＧ力価を示すグラフであり、１０匹のマウスの群１つ当たりの幾何平均＋９５％ＣＩが表される。 １２００μｇ／用量および２４００μｇ／用量のＡＣＩ－３５．０３０が持続的な力価の抗リン酸化タウ抗体をアカゲザルにおいて誘導したことを示すグラフであり、ＥＬＩＳＡによって測定した、ＡＵ／ｍＬで表される群１つ当たりの抗体力価の幾何平均が表される。 ２４００μｇ／用量のＡＣＩ－３５．０３０の３回の注射が、結腸切片（パネルＤ）との交差反応性を伴わずに、ＡＤ脳切片（パネルＢ）のタウ濃縮体に結合する抗体を誘導したことを示す図である。処置前試料は、ＡＤ脳切片（パネルＡ）にも結腸切片（パネルＣ）にも結合しなかった。 １８００μｇ／用量のＡＣＩ－３５．０３０の筋肉内注射が、同じ用量の同じワクチンの皮下注射と比較して低い群内変動性により抗ｅＰＨＦ ＩｇＧ抗体力価を誘導したことを示すグラフである。

様々な刊行物、論文、および特許が背景技術および本明細書全体にわたって引用または記載されるが、これらの参考文献のそれぞれはその全体が参照によって本明細書に組み込まれる。本明細書に含まれている文書、行為、材料、デバイス、物品等に関する考察は、本発明のための文脈を提供することを目的とする。そのような考察は、開示または特許請求されるいかなる発明に関しても、これらの事項のいずれかまたは全てが先行技術の一部を形成することを承認するものではない。

別段の定義がない限り、本明細書で使用する全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般的に理解されるものと同じ意味を有する。その他の場合、本明細書で使用するある特定の用語は本明細書に記載される意味を有する。

本明細書および添付の特許請求の範囲で使用する場合、単数形の「１つの（a）」、「１つの（an）」、および「その（the）」は、文脈上別段の指示が明確にない限り、複数の指示対象を含むことに留意しなければならない。

別段の記述がない限り、本明細書に記載されるあらゆる数値、例えば濃度または濃度範囲は、全ての場合において「約」という用語によって修飾されていると理解されるべきである。したがって、数値は典型的には示された値の±１０％を含む。例えば、１ｍｇ／ｍＬの濃度は０．９ｍｇ／ｍＬ～１．１ｍｇ／ｍＬを含む。同様に、１％～１０％（ｗ／ｖ）の濃度範囲は０．９％（ｗ／ｖ）～１１％（ｗ／ｖ）を含む。本明細書で使用する場合、数値範囲の使用は、文脈上別段の指示が明確にない限り、全ての可能な部分範囲、すなわち、そのような範囲内の整数およびその値の小数部を含むその範囲内の全ての個々の数値を明白に含む。

別段の指示がない限り、一連の要素に先行する「少なくとも」という用語は、その一連のあらゆる要素を指すと理解されるべきである。当業者は、単に慣例的な実験を使用して、本明細書に記載される本発明の具体的な実施形態の多くの均等物を認識するかまたは確かめることができるだろう。そのような均等物は本発明によって包含されると意図される。

本明細書で使用する場合、「含む（comprises）」、「含む（comprising）」、「含む（includes）」、「含む（including）」、「有する（has）」、「有する（having）」、「含有する（contains）」、もしくは「含有する（containing）」という用語、またはそれらの任意の他の変化形は、述べられた整数または整数群を含むがいかなる他の整数も整数群も除外するものではないということを含意すると理解することができ、非排他的または非限定的であると意図される。例えば、リストの要素を含む組成物、混合物、工程、方法、物品、または装置は、必ずしもそれらの要素のみに限定されず、明示的に列挙されていないかまたはそのような組成物、混合物、工程、方法、物品、もしくは装置に固有の他の要素を含むことができる。さらに、反対のことが明示的に述べられていない限り、「または」は、排他的なまたはではなく、非排他的なまたはを指す。例えば、条件ＡまたはＢは、以下：Ａが真である（または存在する）かつＢが偽である（または存在しない）、Ａが偽である（または存在しない）かつＢが真である（または存在する）、およびＡとＢの両方が真である（または存在する）のうちのいずれか１つによって満たされる。

好ましい発明の構成成分の寸法または特徴に言及する場合に本明細書で使用する「約」、「およそ」、「全般的に」、「実質的に」という用語、および同様の用語が、記載された寸法／特徴は、当業者によって理解され得るように、厳密な境界でもパラメータでもなく、機能的に同じであるかまたは類似するそこからのわずかな変動を除外しないことを示すということもまた理解されるべきである。少なくとも、数値パラメータを含むような指示対象は、当技術分野で受け入れられている数学的および工業的原理（例えば、丸め、測定または他の系統誤差、製作公差等）を使用する、最下位桁を変えることのない変動を含み得る。

本発明は、抗リン酸化タウ抗体を、脳炎等の重度有害事象を誘発せずに、それを必要とするヒト対象において誘導する方法を提供する。特定の実施形態では、方法は、リポソームの表面に提示されているタウホスホペプチドとｔｏｌｌ様受容体４アゴニストとを含む有効量のリポソームを対象に投与することを含む。

本明細書で使用する場合、「抗リン酸化タウ抗体」という用語は、タウのアミノ酸配列の１つまたは複数の位置のアミノ酸残基がリン酸化されているタウに結合する抗体を指す。リン酸化されるアミノ酸残基は例えば、セリン（Ｓｅｒ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、またはチロシン（Ｔｙｒ）であり得る。抗リン酸化タウ抗体が結合するリン酸化タウの部位は好ましくは、アルツハイマー病等の神経変性疾患において特異的にリン酸化される部位である。抗リン酸化タウ抗体が結合するリン酸化タウの部位の例としては、例えば、Ｔｙｒ１８、Ｓｅｒ１９９、Ｓｅｒ２０２、Ｔｈｒ２０５、Ｔｈｒ２１２、Ｓｅｒ２１４、Ｓｅｒ３９６、Ｓｅｒ４０４、Ｓｅｒ４０９、Ｓｅｒ４２２、Ｔｈｒ４２７が挙げられる。本出願全体にわたって使用する場合、アミノ酸位は、アミノ酸配列がＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００５９０１．２に表されるヒト微小管関連タンパク質タウアイソフォーム２の配列を参照して得られる。

投与時に抗リン酸化タウ抗体を誘導することができるかどうかは、対象由来の生体試料（例えば、血液、血漿、血清、ＰＢＭＣ、尿、唾液、糞便、ＣＳＦ、またはリンパ液）を、医薬組成物において投与された免疫原性タウペプチドを対象とする抗体、例えばＩｇＧまたはＩｇＭ抗体の存在に関して試験することによって決定することができる（例えばHarlow, 1989, Antibodies, Cold Spring Harbor Pressを参照のこと）。例えば、免疫原を提供する組成物の投与に応答して産生される抗体の力価は、酵素連結免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、他のＥＬＩＳＡに基づくアッセイ（例えば、ＭＳＤ－Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）、ドットブロット、ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル、ＥＬＩＳＰＯＴ、または抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）アッセイによって測定することができる。

本明細書で使用する場合、「有害事象」（ＡＥ）という用語は、医薬製剤が投与された患者における、処置との因果関係を必ずしも有しないあらゆる好ましくない医療上の出来事を指す。本発明の実施形態において、ＡＥは以下の定義を使用する、重症度が増加する３段階の尺度により評価される：軽度（グレード１）、対象によって容易に耐えられ、最小の不快感を引き起こし、日常活動を妨害しないＡＥを指す；中等度（グレード２）、正常な日常活動を妨害するほど十分に不快であり、介入が必要となる場合があるＡＥを指す；重度（グレード３）、正常な日常活動を妨げ、処置または他の介入が通例必要であるＡＥを指す。重度ＡＥ（ＳＡＥ）とは、以下の転帰のいずれかをもたらす任意の用量において生じるいかなるＡＥであってもよい：事象ではなく転帰である死亡；事象の発現時点で患者が死亡のリスクにさらされているある事象を指す、生命を脅かすもの；生命を脅かすものは、仮により重度であった場合に死亡を引き起こした可能性がある事象を指さない；治療のための入院、すなわち、計画外の一晩の入院、または現行の入院の延長；正常な生活機能を遂行する能力の、永続的もしくは顕著な機能不全または実質的な破壊；先天異常／先天性欠損；患者を危険にさらすおそれがあるか、または上に列挙した他の転帰のうちの１つを防止するための医学的もしくは外科的介入を必要とし得る重要な医学的事象（研究者によって判断される）（例えば、アレルギー性気管支痙攣のための緊急治療室もしくは自宅での集中処置、または入院に至らない血液疾患もしくは痙攣）。入院とは、病院への公式な受け入れである。入院または入院の延長は、ＡＥが重篤となる基準を構成するが、それ自体はＳＡＥとは見なされない。ＡＥの非存在下では、入院または入院の延長は、参加している研究者によってＳＡＥとして報告されるべきではない。これは、以下の状況において当てはまり得る：入院もしくは入院の延長がプロトコルによって必要とされる手順に必要である；または入院もしくは入院の延長が、中央施設が従う慣例的な手順（例えば外科処置後のステント除去）の一部である。このことは、研究ファイルに記録されるべきである。研究中に悪化しなかった既存の状態の待機的処置のための入院は、ＡＥとは見なされない。

入院中に生じる合併症はＡＥである。合併症が入院を延長させるか、または他のＳＡＥ基準のいずれかを満たす場合、その事象はＳＡＥである。

本明細書で使用する場合、「脳炎」という用語は、感染性および非感染性の原因に起因し得る脳の炎症を指す。本明細書で使用する場合、「髄膜脳炎」という用語は、脳髄膜および脳の感染症または炎症によって特徴付けられる状態を指す。脳炎または髄膜脳炎の診断は、本開示を考慮すると、当業者に公知の技法によって、例えば、臨床的、神経学的、および精神医学的検査、血液およびＣＳＦ試料採取を含む生体試料採取、ＭＲＩ走査法、ならびに脳波記録法（ＥＥＧ）によって決定することができる。

本明細書で使用する場合、「リポソーム」という用語は全般的に、高脂質含量を有する材料、例えば、リン脂質、コレステロールから作製される脂質小胞を指す。これらの小胞の脂質は全般的に脂質二重層の形態に組織化される。脂質二重層は全般的に、多重ラメラ脂質小胞（ＭＬＶ）を形成する脂質二重層の複数のタマネギ様の骨組みの間に散在しているかまたは中心部の無定形な空洞内に含有される容量を封入する。中心部の無定形な空洞を有する脂質小胞は、単ラメラ脂質小胞、すなわち、空洞を囲む単一の外縁の二重層を有する脂質小胞である。大単ラメラ小胞（ＬＵＶ）は全般的に、１００ｎｍ～数マイクロメートル、例えば１００～２００ｎｍまたはそれ以上の直径を有し、小単ラメラ脂質小胞（ＳＵＶ）は全般的に、１００ｎｍ未満、例えば２０～１００ｎｍ、典型的には１５～３０ｎｍの直径を有する。

本明細書で使用する場合、微小管関連タンパク質タウ、ＭＡＰＴ、神経原線維濃縮体タンパク質、対らせん状細線維－タウ、ＰＨＦ－タウ、ＭＡＰＴＬ、ＭＴＢＴ１としても公知である「タウ」または「タウタンパク質」という用語は、複数のアイソフォームを有する豊富に存在する中枢および末梢神経系タンパク質を指す。ヒト中枢神経系（ＣＮＳ）では、３５２～４４１アミノ酸長のサイズの範囲の６種類の主要なタウアイソフォームが選択的スプライシングのために存在する（Hanger et al., Trends Mol Med. 15:112-9, 2009）。タウの例としては、これらに限定されないが、ＣＮＳにおけるタウアイソフォーム、例えば４つの反復配列と２つの挿入断片とを有する、微小管関連タンパク質タウアイソフォーム２とも命名される４４１アミノ酸の最も長いタウアイソフォーム（４Ｒ２Ｎ）、例えばアミノ酸配列がＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００５９０１．２に表されるヒトタウアイソフォーム２が挙げられる。タウの他の例としては、３つの反復配列を有し、挿入断片を有しない、微小管関連タンパク質タウアイソフォーム４とも命名される３５２アミノ酸の長さの最も短い（胎児型）アイソフォーム（３Ｒ０Ｎ）、例えばアミノ酸配列がＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０５８５２５．１に表されるヒトタウアイソフォーム４が挙げられる。タウの例としてはまた、３００の追加の残基（エクソン４ａ）を含有する、末梢神経に発現する「大型タウ」アイソフォームが挙げられる。Friedhoff et al., Biochimica et Biophysica Acta 1502 (2000) 122-132。タウの例としては、６７６２ヌクレオチドの長さのｍＲＮＡ転写物（ＮＭ＿０１６８３５．４）によってコードされる７５８アミノ酸の長さのタンパク質であるヒト大型タウ、またはそのアイソフォームが挙げられる。例示されるヒト大型タウのアミノ酸配列はＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０５８５１９．３に表される。本明細書で使用する場合、「タウ」という用語には、ヒト以外の種、例えば、カニクイザル（Macaca Fascicularis）（カニクイザル）、リーサスザル、またはチンパンジー（Pan troglodytes）（チンパンジー）由来のタウの相同体が含まれる。本明細書で使用する場合、「タウ」という用語には、全長野生型タウの変異、例えば点変異、断片、挿入、欠失、およびスプライスバリアントを含むタンパク質が含まれる。「タウ」という用語にはまた、タウアミノ酸配列の翻訳後修飾が包含される。翻訳後修飾としては、これに限定されないが、リン酸化が挙げられる。

本明細書で使用する場合、「ペプチド」または「ポリペプチド」という用語は、ペプチド結合を介して連結した、アミノ酸残基から構成されるポリマー、関連する天然に存在する構造バリアント、およびその天然に存在しない合成アナログを指す。この用語は、任意のサイズ、構造、または機能のペプチドを指す。典型的には、ペプチドは少なくとも３アミノ酸の長さである。ペプチドは、天然に存在するペプチド、組換えペプチド、もしくは合成ペプチド、またはそれらの任意の組合せであり得る。合成ペプチドは、例えば全自動ポリペプチド合成装置を使用して合成することができる。タウペプチドの例としては、約５～約３０アミノ酸長、好ましくは約１０～約２５アミノ酸長、より好ましくは約１６～約２１アミノ酸長のタウタンパク質の任意のペプチドが挙げられる。本開示では、ペプチドは、リン酸残基が「ｐ」で示される標準的な３または１文字アミノ酸略記法を使用してＮ末端からＣ末端へと列挙される。本発明に有用なタウペプチドの例としては、これらに限定されないが、配列番号１～１２のいずれかのアミノ酸配列を含むタウペプチド、または配列番号１～１２のいずれかのアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一のアミノ酸配列を有するタウペプチドが挙げられる。

本明細書で使用する場合、「ホスホペプチド」または「ホスホエピトープ」という用語は、１つまたは複数のアミノ酸残基においてリン酸化されているペプチドを指す。タウホスホペプチドの例としては、１つまたは複数のリン酸化アミノ酸残基を含む任意のタウペプチドが挙げられる。

本発明のタウペプチドは、固相ペプチド合成法または組換え発現系によって合成することができる。自動ペプチド合成装置は数多くの供給業者、例えばＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ、Ｃａｌｉｆ．）から市販されている。組換え発現系としては、細菌、例えば大腸菌（E. coli）、酵母、昆虫細胞、または哺乳動物細胞を挙げることができる。組換え発現の手順は、Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (C.S.H.P. Press, NY 2d ed., 1989)によって記載されている。

特定の実施形態において、リポソームは１つまたは複数のタウペプチドを含む。特定の実施形態において、リポソーム中のタウペプチドは同じであっても異なっていてもよい。本開示を考慮すると、当業者に公知のいかなる好適なタウペプチドも本発明に使用することができる。特定の実施形態において、１つまたは複数のタウペプチドは、配列番号１～１２のうちの１つのアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、１つまたは複数のタウペプチドは、配列番号１～１２のうちの１つのアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一のアミノ酸配列を含み、いずれのアミノ酸残基もリン酸化されていないか、または１つもしくは複数のアミノ酸残基がリン酸化されている。

特定の実施形態において、１つまたは複数のタウペプチドはタウホスホペプチドである。特定の実施形態において、１つまたは複数のタウホスホペプチドは、配列番号１～３もしくは５～１２のうちの１つのアミノ酸配列、または配列番号１～３もしくは５～１２のうちの１つのアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、もしくは９５％同一のアミノ酸配列を含み、１つまたは複数の示されたアミノ酸残基はリン酸化されている。好ましくは、タウホスホペプチドは、配列番号１～３のうちの１つのアミノ酸配列を含む。タウペプチドは、Ｃ末端がアミド化されていてもよい。

本出願の実施形態において、タウペプチドはリポソームの表面に提示されている。タウペプチド、好ましくは、タウホスホペプチドは、本開示を考慮すると、当技術分野で公知の方法を使用してリポソームの表面に提示され得る。例えば、それらの内容が参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第８，６４７，６３１号および同第９，６８７，４４７号、ならびに国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ１８／５７２８６号における関連する開示を参照のこと。特定の実施形態において、ホスホペプチドを含む１つまたは複数のタウペプチドは、タウペプチドをリポソームの表面に提示させる１つまたは複数の修飾、例えばパルミトイル化またはドデシル修飾をさらに含む。追加のアミノ酸残基、例えば、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ、または場合によりＳｅｒもしくはＴｈｒは、タウペプチドに付加されて修飾を容易にすることができる。脂質アンカーの位置がペプチド配列の異なる立体構造を誘導することが報告された（Hickman et al., J. Biol. Chem. vol. 286, NO. 16, pp. 13966-13976, April 22, 2011）。理論に拘束されることを望むものではないが、疎水性部分を両末端に付加することは、タウペプチドの病理的なベータシート立体構造を増大し得ると考えられる。したがって、１つまたは複数のタウペプチドは、両末端に疎水性部分をさらに含む。修飾タウペプチドは、Ｃ末端がアミド化されていてもよい。好ましくは、リポソームの表面に提示されているタウペプチドは、配列番号２７～配列番号３８のうちの１つのアミノ酸配列からなる。

本発明に有用なタウリポソームの例としては、これらに限定されないが、米国特許第８，６４７，６３１号および同第９，６８７，４４７号、ならびに国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ１８／５７２８６号に記載されているタウリポソームが挙げられ、それぞれの開示は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。

本明細書で使用する場合、「有効量」という用語は、対象において所望の生物学的または医学的応答を誘発する有効成分または構成成分の量を指す。特定の有効用量の選択は、処置または防止される疾患、関係している症状、患者の体重、患者の免疫状況、および当業者によって公知の他の因子を含むいくつかの因子の考慮に基づいて、当業者によって（例えば臨床試験を介して）決定することができる。製剤に用いられる正確な用量は、投与方法、投与経路、標的部位、患者の生理状態、投与される他の医薬、および疾患の重症度にも依存し得、実施者の判断および各患者の状況に従って決定されるべきである。例えば、タウホスホペプチドの有効量は、アジュバントもまた投与されるか否かにも依存し、アジュバントの非存在下ではより高い投薬量が必要とされる。有効用量は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたは動物モデル試験系に由来する用量応答曲線から外挿することができる。

本出願の実施形態において、有効量のリポソームは、脳炎等の重度有害事象を誘発せずに抗リン酸化タウ抗体のレベルを増加させるのに十分な量のタウホスホペプチドを含む。特定の実施形態では、有効量のリポソームは、１用量当たり約２５ｎｍｏｌｅ～約７５０ｎｍｏｌｅ、例えば１用量当たり約２９．７ｎｍｏｌｅ～約７４２．５ｎｍｏｌｅ、好ましくは１用量当たり約９０ｎｍｏｌｅ～約７１５ｎｍｏｌｅ、例えば１用量当たり約８９．１ｎｍｏｌｅ～約７１２．８ｎｍｏｌｅ、または１用量当たり約９０ｎｍｏｌｅ～約５３５ｎｍｏｌｅ、例えば１用量当たり約８９．１ｎｍｏｌｅ～約５３４．６ｎｍｏｌｅ、または１用量当たり約９０ｎｍｏｌｅ～約２７５ｎｍｏｌｅ、例えば１用量当たり約８９．１ｎｍｏｌｅ～約２６７．３ｎｍｏｌｅの量のタウホスホペプチドを含む。投与されるタウホスホペプチドの量は、重量で表すこともできる。例えば、１用量当たり２９．７ｎｍｏｌｅは１用量当たり１００μｇの配列番号２８のアミノ酸配列からなるテトラパルミトイル化タウホスホペプチドに対応し、１用量当たり７４２．５ｎｍｏｌｅは１用量当たり２５００μｇの配列番号２８のアミノ酸配列からなるテトラパルミトイル化タウホスホペプチドに対応し、１用量当たり８９．１ｎｍｏｌｅは１用量当たり３００μｇの配列番号２８のアミノ酸配列からなるテトラパルミトイル化タウホスホペプチドに対応し、１用量当たり７１２．８ｎｍｏｌｅは１用量当たり２４００μｇの配列番号２８のアミノ酸配列からなるテトラパルミトイル化タウホスホペプチドに対応し、１用量当たり５３４．６ｎｍｏｌｅは１用量当たり１８００μｇの配列番号２８のアミノ酸配列からなるテトラパルミトイル化タウホスホペプチドに対応する。テトラパルミトイル化タウホスホペプチドは、タウホスホペプチドのリポソームの表面への提示を可能にする４本の脂質鎖を有する。３００、９００、１８００μｇの用量の配列番号２８のアミノ酸配列からなるテトラパルミトイル化タウホスホペプチドは、それぞれ１６９、５０８、１０１６μｇの、いずれの脂質鎖も有しない対応する「裸の」ペプチドに対応する。

本出願の実施形態において、有効量のリポソームは、１用量当たり約２５ｎｍｏｌｅ～約７５０ｎｍｏｌｅの量のタウホスホペプチド、例えば１用量当たり約２５ｎｍｏｌｅ、約３０ｎｍｏｌｅ、約３５ｎｍｏｌｅ、約４０ｎｍｏｌｅ、約４５ｎｍｏｌｅ、約５０ｎｍｏｌｅ、約５５ｎｍｏｌｅ、約６０ｎｍｏｌｅ、約６５ｎｍｏｌｅ、約７０ｎｍｏｌｅ、約７５ｎｍｏｌｅ、約８０ｎｍｏｌｅ、約８５ｎｍｏｌｅ、約９０ｎｍｏｌｅ、約９５ｎｍｏｌｅ、約１００ｎｍｏｌｅ、約１２５ｎｍｏｌｅ、約１５０ｎｍｏｌｅ、約１７５ｎｍｏｌｅ、約２００ｎｍｏｌｅ、約２２５ｎｍｏｌｅ、約２５０ｎｍｏｌｅ、約２７５ｎｍｏｌｅ、約３００ｎｍｏｌｅ、約３２５ｎｍｏｌｅ、約３５０ｎｍｏｌｅ、約３７５ｎｍｏｌｅ、約４００ｎｍｏｌｅ、約４２５ｎｍｏｌｅ、約４５０ｎｍｏｌｅ、約４７５ｎｍｏｌｅ、約５００ｎｍｏｌｅ、約５２５ｎｍｏｌｅ、約５５０ｎｍｏｌｅ、約５７５ｎｍｏｌｅ、約６００ｎｍｏｌｅ、約６２５ｎｍｏｌｅ、約６５０ｎｍｏｌｅ、約６７５ｎｍｏｌｅ、約７００ｎｍｏｌｅ、約７２５ｎｍｏｌｅ、約７５０ｎｍｏｌｅの配列番号１～３または５～１２のうちの１つのアミノ酸配列を含むタウホスホペプチドを含む。好ましくは、タウホスホペプチドは配列番号２７～配列番号３８のうちの１つのアミノ酸配列からなる。より好ましくは、タウホスホペプチドは配列番号２８のアミノ酸配列からなる。

本出願の実施形態において、有効量のリポソームは、１用量当たり１００μｇ～２５００μｇ、３００μｇ～２４００μｇ、３００μｇ～１８００μｇ、または３００μｇ～９００μｇ、例えば１用量当たり１００μｇ、１５０μｇ、２００μｇ、２５０μｇ、３００μｇ、４００μｇ、５００μｇ、６００μｇ、７００μｇ、８００μｇ、９００μｇ、１０００μｇ、１１００μｇ、１２００μｇ、１３００μｇ、１４００μｇ、１５００μｇ、１６００μｇ、１７００μｇ、１８００μｇ、１９００μｇ、２０００μｇ、２１００μｇ、２２００μｇ、２３００μｇ、２４００μｇ、または２５００μｇの量のテトラパルミトイル化タウホスホペプチドを含む。

本出願の実施形態において、タウホスホペプチドはリポソームの表面に提示されている。本出願の実施形態において、タウホスホペプチドは配列番号１～３または５～１２のうちの１つのアミノ酸配列を含む。好ましくは、タウホスホペプチドは配列番号２７～配列番号３８のうちの１つのアミノ酸配列からなる。より好ましくは、タウホスホペプチドは配列番号２８のアミノ酸配列からなる。

本出願の他の実施形態において、有効量のリポソームは、１用量当たり３０μｇ～９００μｇ、好ましくは１００μｇ～５８５μｇの量のｔｏｌｌ様受容体４アゴニストをさらに含む。例えば、有効量のリポソームは、１用量当たり３０μｇ、５０μｇ、１００μｇ、１５０μｇ、２００μｇ、２５０μｇ、３００μｇ、３３０μｇ、３６０μｇ、３９０μｇ、４２０μｇ、４５０μｇ、４８０μｇ、５００μｇ、５２０μｇ、５４０μｇ、５６０μｇ、５８０μｇ、６００μｇ、７００μｇ、８００μｇ、または９００μｇの量のｔｏｌｌ様受容体４アゴニストを含むことができる。

本出願の実施形態において、ｔｏｌｌ様受容体４は３Ｄ－（６－ａｃｙｌ）ＰＨＡＤ（登録商標）を含む。

本出願の他の実施形態において、有効量のリポソームは、１用量当たり２５μｇ～６２５μｇ、好ましくは７５μｇ～４５０μｇの量のヘルパーＴ細胞エピトープをさらに含む。例えば、有効量のリポソームは、１用量当たり２５μｇ、５０μｇ、７５μｇ、１００μｇ、１２５μｇ、１５０μｇ、１７５μｇ、２００μｇ、２２５μｇ、２５０μｇ、２７５μｇ、３００μｇ、３２５μｇ、３５０μｇ、３７５μｇ、４００μｇ、４２５μｇ、４５０μｇ、４７５μｇ、５００μｇ、５２５μｇ、５５０μｇ、５７５μｇ、６００μｇ、または６２５μｇの量のヘルパーＴ細胞エピトープを含むことができる。

本出願の他の実施形態において、有効量のリポソームは、１用量当たり約３ｎｍｏｌｅ～約１０５ｎｍｏｌｅ、例えば１用量当たり約４ｎｍｏｌｅ、約５ｎｍｏｌｅ、約６ｎｍｏｌｅ、約７ｎｍｏｌｅ、約８ｎｍｏｌｅ、約９ｎｍｏｌｅ、約１０ｎｍｏｌｅ、約１５ｎｍｏｌｅ、約２０ｎｍｏｌｅ、約２５ｎｍｏｌｅ、約３０ｎｍｏｌｅ、約３５ｎｍｏｌｅ、約４０ｎｍｏｌｅ、約４５ｎｍｏｌｅ、約５０ｎｍｏｌｅ、約５５ｎｍｏｌｅ、約６０ｎｍｏｌｅ、約６５ｎｍｏｌｅ、約７０ｎｍｏｌｅ、約７５ｎｍｏｌｅ、約８０ｎｍｏｌｅ、約８５ｎｍｏｌｅ、約９０ｎｍｏｌｅ、約９５ｎｍｏｌｅ、約１００ｎｍｏｌｅ、または約１０５ｎｍｏｌｅの量のヘルパーＴ細胞エピトープをさらに含む。

本出願の実施形態において、ヘルパーＴ細胞エピトープは、配列番号１３のアミノ酸配列からなるＴ５０ヘルパーＴ細胞エピトープ、配列番号１４のアミノ酸配列からなるＴ４６ヘルパーＴ細胞エピトープ、配列番号１５のアミノ酸配列からなるＴ４８ヘルパーＴ細胞エピトープ、配列番号１６のアミノ酸配列からなるＴ５１ヘルパーＴ細胞エピトープ、または配列番号１７のアミノ酸配列からなるＴ５２ヘルパーＴ細胞エピトープであり、好ましくは、ヘルパーＴ細胞エピトープは、配列番号１３のアミノ酸配列からなるＴ５０ヘルパーＴ細胞エピトープである。

ある特定の実施形態では、有効量のリポソームは、１用量当たり５０μｇ～１２５０μｇ、好ましくは１５０μｇ～８００μｇの量の脂質化ＣｐＧオリゴヌクレオチドをさらに含む。例えば、有効量のリポソームは、１用量当たり５０μｇ、１００μｇ、１５０μｇ、２００μｇ、２５０μｇ、３００μｇ、３５０μｇ、４００μｇ、４５０μｇ、５００μｇ、５５０μｇ、６００μｇ、６５０μｇ、７００μｇ、７５０μｇ、８００μｇ、８５０μｇ、９００μｇ、９５０μｇ、１０００μｇ、１０５０μｇ、１１００μｇ、１２００μｇ、または１２５０μｇの量の脂質化ＣｐＧオリゴヌクレオチドを含むことができる。

本出願の実施形態において、脂質化ＣｐＧオリゴヌクレオチドは配列番号１８～２２のうちの１つのヌクレオチド配列を含むＣｐＧオリゴヌクレオチドであり、好ましくは、脂質化ＣｐＧオリゴヌクレオチドは配列番号１８のヌクレオチド配列を含むＣｐＧオリゴヌクレオチドである。本出願の実施形態において、脂質化ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、１つまたは複数のホスホロチオエートヌクレオチド間連結を有し、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含むリンカーを介してコレステロールと共有結合により連結している、配列番号１８のヌクレオチド配列を含むＣｐＧオリゴヌクレオチドである。

実施形態において、有効量のリポソームは、１用量当たり５０μｇ、１００μｇ、１５０μｇ、２００μｇ、２５０μｇ、３００μｇ、３５０μｇ、４００μｇ、４５０μｇ、５００μｇ、５５０μｇ、６００μｇ、６５０μｇ、７００μｇ、７５０μｇ、８００μｇ、８５０μｇ、９００μｇ、９５０μｇ、１０００μｇ、１０５０μｇ、１１００μｇ、１２００μｇ、または１２５０μｇの、コレステロールとＰＥＧリンカーを介して共有結合により連結しているＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。

特定の実施形態において、ヒト対象は、神経変性疾患、障害、または状態の処置を必要とする。

本明細書で使用する場合、「神経変性疾患、障害、または状態」には、本開示を考慮すると、当業者に公知のあらゆる神経変性疾患、障害、または状態が含まれる。神経変性疾患、障害、または状態の例としては、神経原線維病変の形成によって引き起こされるかまたはそれと関連する神経変性疾患または障害、例えばタウオパチーと称されるタウ関連疾患、障害、または状態が挙げられる。特定の実施形態において、神経変性疾患、障害、または状態としては、アルツハイマー病、パーキンソン病、クロイツフェルト・ヤコブ病、ボクサー認知症、ダウン症候群、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、封入体筋炎、プリオンタンパク質脳アミロイド血管症、外傷性脳損傷、筋萎縮性側索硬化症、グアム島のパーキンソン認知症複合、神経原線維濃縮体を伴う非グアム型運動ニューロン疾患、嗜銀顆粒性認知症、大脳皮質基底核変性症、レビー認知症を伴う筋萎縮性側索硬化症（Dementia Lewy Amyotrophic Lateral sclerosis）、石灰化を伴うびまん性神経原線維濃縮体、前頭側頭型認知症、好ましくは第１７染色体と連鎖するパーキンソン症候群を伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、前頭側頭葉型認知症、ハラーホルデン・スパッツ病、多系統萎縮症、ニーマン・ピック病Ｃ型、ピック病、進行性皮質下グリオーシス、進行性核上性麻痺、亜急性硬化性全脳炎、濃縮体型認知症（Tangle only dementia）、脳炎後パーキンソン症候群、筋強直性ジストロフィー、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、原発性年齢関連タウオパチー（ＰＡＲＴ）、脳血管症、またはレビー小体型認知症（ＬＢＤ）を含むがこれらに限定されない、タウとアミロイド病理との共存を示す任意の疾患または障害が挙げられる。特定の実施形態において、神経変性疾患、障害、または状態は、アルツハイマー病または別のタウオパチーである。好ましい実施形態において、神経変性疾患、障害、または状態は、アルツハイマー病である。

アルツハイマー病の臨床経過は、認知および機能障害の進行パターンにより複数の段階に分けることができる。段階は、例えばＮＩＡ－ＡＡ研究枠組みを含む当技術分野で公知の評価尺度を使用して定義することができる。例えば、それぞれの内容の全体が参照によって本明細書に組み込まれる、Dubois et al., Alzheimer's & Dementia 12 (2016) 292-323、Dubois et al., Lancet Neurol 2014; 13: 614-29、Jack et al., Alzheimer's & Dementia 14 (2018) 535-562を参照のこと。

好ましい実施形態において、神経変性疾患、障害、または状態は、早期アルツハイマー病、アルツハイマー病に起因する軽度認知障害（ＭＣＩ）、軽度アルツハイマー病、または軽度から中等度のアルツハイマー病である。

一部の実施形態では、処置を必要とする対象は、脳においてアミロイド陽性であるが、顕著な認知障害をまだ示していない。脳におけるアミロイド沈着は、当技術分野で公知の方法、例えば、ＰＥＴ走査、免疫沈降質量分析、または他の方法を使用して検出することができる。

本明細書で使用する場合、「ｔｏｌｌ様受容体」または「ＴＬＲ」という用語は、自然免疫応答において重要な役割を果たすパターン認識受容体（ＰＲＲ）タンパク質のクラスを指す。ＴＬＲは、宿主分子と区別することができる、微生物病原体、例えば、細菌、真菌、寄生虫、およびウイルス由来の病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を認識する。ＴＬＲは、典型的には二量体として機能し、抗原提示樹状細胞および貪食マクロファージを含む自然免疫応答に関与する細胞によって発現される膜貫通タンパク質である。少なくとも１０のヒトＴＬＲファミリーメンバー、すなわちＴＬＲ１～ＴＬＲ１０、ならびに少なくとも１２のマウスＴＬＲファミリーメンバー、すなわちＴＬＲ１～ＴＬＲ９およびＴＬＲ１１～ＴＬＲ１３が存在し、これらは認識する抗原の種類の点で異なる。例えば、ＴＬＲ４は、多くのグラム陰性菌に存在する構成成分であるリポ多糖（ＬＰＳ）、ならびにウイルスタンパク質、多糖、および内在性タンパク質、例えば、低密度リポタンパク質、ベータデフェンシン、および熱ショックタンパク質を認識し、ＴＬＲ９は、原核ゲノムにおいては豊富に存在するが脊椎動物ゲノムにおいては希少である非メチル化シトシン－リン酸－グアニン（ＣｐＧ）一本鎖または二本鎖ジヌクレオチドによって活性化するヌクレオチド感知性ＴＬＲである。ＴＬＲの活性化は一連のシグナル伝達事象を引き起こし、Ｉ型インターフェロン（ＩＦＮ）、炎症性サイトカイン、およびケモカインの産生、ならびに免疫応答の誘導をもたらす。最終的に、この炎症は獲得免疫系も活性化させ、次いで侵入病原体および感染細胞の排除をもたらす。

本明細書で使用する場合、「アゴニスト」という用語は、１つまたは複数のＴＬＲに結合し、受容体媒介性応答を誘導する分子を指す。例えば、アゴニストは、受容体の活性を誘導するか、賦活化するか、上昇させるか、活性化させるか、容易にするか、増強するか、または上方調節することができる。そのような活性は「アゴニスト活性」と称される。例えば、ＴＬＲ４またはＴＬＲ９アゴニストは、結合した受容体を介して細胞シグナル伝達を活性化または増加させることができる。アゴニストとしては、これらに限定されないが、核酸、低分子、タンパク質、炭水化物、脂質、または受容体と結合もしくは相互作用する任意の他の分子が挙げられる。アゴニストは天然受容体リガンドの活性を模倣することができる。アゴニストは、配列、立体構造、電荷、またはアゴニストが受容体によって認識されることが可能となるような他の特徴に関して、これらの天然受容体リガンドと一致し得る。この認識は、天然受容体リガンドが存在する場合と同様に細胞がアゴニストの存在に反応するように、生理学的および／または生化学的変化を細胞内に生じ得る。特定の実施形態において、ｔｏｌｌ様受容体アゴニストは、ｔｏｌｌ様受容体４アゴニストおよびｔｏｌｌ様受容体９アゴニストのうちの少なくとも一方である。

本明細書で使用する場合、「誘導する」および「賦活化する」という用語ならびにそれらの変化形は、細胞活性の任意の測定可能な上昇を指す。免疫応答の誘導としては、例えば、免疫細胞の集団の活性化、増殖、もしくは成熟、サイトカインの産生を増加させること、および／または免疫機能の増加の別の指標を挙げることができる。ある特定の実施形態では、免疫応答の誘導としては、Ｂ細胞の増殖を高めること、抗原特異的抗体を産生させること、抗原特異的Ｔ細胞の増殖を高めること、樹状細胞抗原提示を向上すること、ならびに／またはある特定のサイトカイン、ケモカイン、および共刺激マーカーの発現を増加させることを挙げることができる。

本明細書で使用する場合、「ｔｏｌｌ様受容体４アゴニスト」という用語は、ＴＬＲ４のアゴニストとして作用する任意の化合物を指す。本開示を考慮すると、当業者に公知のいかなる好適なｔｏｌｌ様受容体４アゴニストも本発明に使用することができる。本発明に有用なｔｏｌｌ様受容体４リガンドの例としては、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬＡ）を含むがこれに限定されないＴＬＲ４アゴニストが挙げられる。本明細書で使用する場合、「モノホスホリルリピドＡ」または「ＭＰＬＡ」という用語は、内毒素であるグラム陰性菌リポ多糖（ＬＰＳ）の生物学的に活性な部分であるリピドＡの修飾形態を指す。ＭＰＬＡは、ＬＰＳよりも毒性が低いが、免疫賦活活性を維持する。ワクチンアジュバントとして、ＭＰＬＡは、ワクチン抗原に対する細胞性応答と液性応答の両方を賦活化する。ＭＰＬＡの例としては、これらに限定されないが、３－Ｏ－デスアシル－４’－モノホスホリルリピドＡ、モノホスホリルヘキサアシルリピドＡ、３－脱アシル（合成）（３Ｄ－（６－ａｃｙｌ）ＰＨＡＤ（登録商標）とも称される）、モノホスホリル３－脱アシルリピドＡ、およびそれらの構造的に関連する変種が挙げられる。本発明に有用なＭＰＬＡは、当技術分野で公知の方法を使用するか、または商業的供給源から取得することができ、例えば、Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ（Ａｌａｂａｓｔｅｒ、Ａｌａｂａｍａ、ＵＳＡ）製の３Ｄ－（６－ａｃｙｌ）ＰＨＡＤ（登録商標）、ＰＨＡＤ（登録商標）、ＰＨＡＤ（登録商標）－５０４、３Ｄ－ＰＨＡＤ（登録商標）、または様々な商業的供給源からのＭＰＬ（商標）である。特定の実施形態において、ｔｏｌｌ様受容体４アゴニストはＭＰＬＡである。特定の実施形態において、タウホスホペプチドとｔｏｌｌ様受容体４アゴニストとを含むリポソームは、大半または全てのＨＬＡ ＤＲ（ヒト白血球抗原－抗原Ｄ関連）分子と結合することができるヘルパーＴ細胞エピトープも含む。ヘルパーＴ細胞エピトープは次いで、ＣＤ４^＋Ｔ細胞を活性化させることができ、不可欠な成熟および生存シグナルをタウ特異的Ｂ細胞に提供する。タウリポソームは、リポソームがプライムおよび／またはブーストにおいて使用される同種または異種免疫化スキームにおいて、ｐタウ抗原に対する高品質抗体を生成するために使用することができる。

本明細書で使用する場合、「ヘルパーＴ細胞エピトープ」という用語は、ヘルパーＴ細胞による認識が可能であるエピトープを含むポリペプチドを指す。ヘルパーＴ細胞エピトープの例としては、これらに限定されないが、破傷風トキソイド（例えば、それぞれＴ２およびＴ３０とも命名されるＰ２およびＰ３０エピトープ）、Ｂ型肝炎表面抗原、コレラ毒素Ｂ、トキソイド、ジフテリアトキソイド、麻疹ウイルスＦタンパク質、クラミジア・トラコマチス（Chlamydia trachomatis）主要外膜タンパク質、熱帯熱マラリア原虫（Plasmodium falciparum）スポロゾイト周囲Ｔ、熱帯熱マラリア原虫（P. falciparum）ＣＳ抗原、マンソン住血吸虫（Schistosoma mansoni）トリオースリン酸イソメラーゼ、百日咳菌（Bordetella pertussis）、破傷風菌（Clostridium tetani）、ペルツサリア・トラキタリナ（Pertusaria trachythallina）、大腸菌（Escherichia coli）ＴｒａＴ、ならびにインフルエンザウイルスヘマグルチニン（ＨＡ）が挙げられる。

本開示を考慮すると、当業者に公知のいかなる好適なヘルパーＴ細胞エピトープも本発明に使用することができる。特定の実施形態において、ヘルパーＴ細胞エピトープは配列番号２３～配列番号２６からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列を含む。好ましくは、ヘルパーＴ細胞エピトープは、リンカー、例えば１つまたは複数のアミノ酸、例えば、Ｖａｌ（Ｖ）、Ａｌａ（Ａ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｌｙｓ（Ｋ）を含むペプチドリンカーを介して一緒に融合した、配列番号２３～配列番号２６のアミノ酸配列のうちの２つ以上を含む。リンカーの長さは変えることができ、好ましくは１～５アミノ酸である。好ましくは、ヘルパーＴ細胞エピトープは、ＶＶＲ、ＧＳ、ＲＲ、ＲＫからなる群から選択される１つまたは複数のリンカーを介して一緒に融合した、配列番号２３～配列番号２６のアミノ酸配列のうちの３つ以上を含む。ヘルパーＴ細胞エピトープは、そのＣ末端がアミド化されていてもよい。

本出願の実施形態において、ヘルパーＴ細胞エピトープは、リポソーム表面に組み込む、例えば共有結合した疎水性部分によって固定することができ、ここで前記疎水性部分は、特に少なくとも３個の炭素原子、特に少なくとも４個の炭素原子、特に少なくとも６個の炭素原子、特に少なくとも８個の炭素原子、特に少なくとも１２個の炭素原子、特に少なくとも１６個の炭素原子の炭素骨格を有する、アルキル基、脂肪酸、トリグリセリド、ジグリセリド、ステロイド、スフィンゴ脂質、糖脂質、またはリン脂質、特にアルキル基または脂肪酸である。本発明の一実施形態では、疎水性部分はパルミチン酸である。あるいは、ヘルパーＴ細胞エピトープはリポソームに封入することができる。特定の実施形態において、ヘルパーＴ細胞エピトープはリポソームに封入される。

本開示を考慮すると、ヘルパーＴ細胞エピトープは、リポソームにおける所望の位置のために当技術分野で公知の方法を使用して修飾することができる。特定の実施形態において、本発明に有用なヘルパーＴ細胞エピトープは配列番号３９～配列番号４４のうちの１つのアミノ酸配列を含む。好ましくは、ヘルパーＴ細胞エピトープは配列番号１３～配列番号１７からなる群から選択されるアミノ酸配列からなる。

特定の実施形態において、タウホスホペプチドとｔｏｌｌ様受容体４アゴニストとを含むリポソームは、ｔｏｌｌ様受容体９アゴニストも含む。本明細書で使用する場合、「ｔｏｌｌ様受容体９アゴニスト」という用語は、ＴＬＲ９のアゴニストとして作用する任意の化合物を指す。本開示を考慮すると、当業者に公知のいかなる好適なｔｏｌｌ様受容体９アゴニストも本発明に使用することができる。本発明に有用なｔｏｌｌ様受容体９リガンドの例としては、ＣｐＧオリゴヌクレオチドを含むがこれに限定されないＴＬＲ９アゴニストが挙げられる。

本明細書で使用する場合、「ＣｐＧオリゴヌクレオチド」、「ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド」、または「ＣｐＧ ＯＤＮ」という用語は、少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチドを指す。本明細書で使用する場合、「オリゴヌクレオチド」、「オリゴデオキシヌクレオチド」または「ＯＤＮ」とは、複数の連結したヌクレオチド単位から形成されるポリヌクレオチドを指す。そのようなオリゴヌクレオチドは、現存する核酸源から取得することができるか、または合成法によって生産することができる。本明細書で使用する場合、「ＣｐＧモチーフ」という用語は、リン酸結合またはホスホジエステル骨格または他のヌクレオチド間連結によって連結した非メチル化シトシン－リン酸－グアニン（ＣｐＧ）ジヌクレオチド（すなわち、シトシン（Ｃ）の次にグアニン（Ｇ）が続く）を含有するヌクレオチド配列を指す。

特定の実施形態において、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは脂質化、すなわち脂質部分とコンジュゲート（共有結合により連結）している。

本明細書で使用する場合、「脂質部分」とは、親油性構造を含有する部分を指す。脂質部分、例えば、アルキル基、脂肪酸、トリグリセリド、ジグリセリド、ステロイド、スフィンゴ脂質、糖脂質、またはリン脂質、特にコレステロール等のステロールまたは脂肪酸は、高度に親水性の分子、例えば核酸に結合する場合、血漿タンパク結合、および結果として親水性分子の循環半減期を実質的に向上させることができる。加えて、ある特定の血漿タンパク質、例えばリポタンパク質に結合することは、対応するリポタンパク質受容体（例えば、ＬＤＬ受容体、ＨＤＬ受容体、またはスカベンジャー受容体ＳＲ－Ｂ１）を発現する特定の組織への取込みを増加させることが示されている。特に、ホスホペプチドおよび／またはＣｐＧオリゴヌクレオチドとコンジュゲートした脂質部分は、前記ペプチドおよび／またはオリゴヌクレオチドをリポソームの膜に疎水性部分を介して固定することを可能にする。

特定の実施形態において、本開示を考慮すると、ＣｐＧオリゴヌクレオチドはいかなる好適なヌクレオチド間連結も含むことができる。

本明細書で使用する場合、「ヌクレオチド間連結」という用語は、２つのヌクレオチドをそれらの糖を介してつなぐ、隣接するヌクレオシド間のリン原子および荷電または中性基からなる化学的連結を指す。ヌクレオチド間連結の例としては、ホスホジエステル（ｐｏ）、ホスホロチオエート（ｐｓ）、ホスホロジチオエート（ｐｓ２）、メチルホスホネート（ｍｐ）、およびメチルホスホロチオエート（ｒｐ）が挙げられる。ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、メチルホスホネート、およびメチルホスホロチオエートは安定化ヌクレオチド間連結であり、ホスホジエステルは天然に存在するヌクレオチド間連結である。オリゴヌクレオチドホスホロチオエートは典型的にはＲｐおよびＳｐホスホロチオエート連結の無作為なラセミ混合物として合成される。

本開示を考慮すると、当業者に公知のいかなる好適なＣｐＧオリゴヌクレオチドも本発明に使用することができる。そのようなＣｐＧオリゴヌクレオチドの例としては、これらに限定されないが、ＣｐＧ２００６（ＣｐＧ７９０９としても公知）（配列番号１８）、ＣｐＧ１０１８（配列番号１９）、ＣｐＧ２３９５（配列番号２０）、ＣｐＧ２２１６（配列番号２１）、またはＣｐＧ２３３６（配列番号２２）が挙げられる。

ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、本開示を考慮すると、当技術分野で公知の方法を使用して脂質化することができる。一部の実施形態では、ＣｐＧオリゴヌクレオチドはコレステロール分子と共有結合により直接連結する。一部の実施形態では、ＣｐＧオリゴヌクレオチドの３’末端はコレステロール分子とリン酸結合によって、任意選択でＰＥＧリンカーを介して、共有結合により連結する。一部の実施形態では、ＣｐＧオリゴヌクレオチドの５’末端はコレステロール分子とリン酸結合によって、任意選択でＰＥＧリンカーを介して、共有結合により連結する。他の親油性部分もまたＣｐＧオリゴヌクレオチドの５’または３’末端と共有結合により連結することができる。例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、リポソーム由来のリン脂質と同じ長さの脂質アンカー、例えば１本のパルミチン酸鎖（カップリングのために活性化させたＰａｌ－ＯＨもしくは類似体を使用する）、または２つのパルミチン酸（例えば、カップリングのために活性化させた１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－（スクシニル）もしくは類似体を使用する）と、任意選択でＰＥＧリンカーを介して、共有結合により連結することができる。例えば、その内容が参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第７，７４１，２９７号における関連する開示を参照のこと。ＰＥＧの長さは変えることができ、例えば１～５ＰＥＧ単位である。

他のリンカーもまた、ＣｐＧオリゴヌクレオチドを親油性部分（例えばコレステロール分子）に共有結合により接続するために使用することができ、その例としては、これに限定されないが、３～１２個の炭素を有するアルキルスペーサーが挙げられる。オリゴヌクレオチド化学と適合性の短いリンカーはアミノジオールとして必要である。ある実施形態では、リンカーは共有結合に使用されない。例えば、その関連する開示が参照によって本明細書に組み込まれる、Ries et al., "Convenient synthesis and application of versatile nucleic acid lipid membrane anchors in the assembly and fusion of liposomes, Org. Biomol. Chem., 2015, 13, 9673を参照のこと。

特定の実施形態において、本発明に有用な脂質化ＣｐＧオリゴヌクレオチドは配列番号１８～配列番号２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチド配列は１つまたは複数のホスホロチオエートヌクレオチド間連結を含み、ヌクレオチド配列は少なくとも１つのコレステロールとリンカーを介して共有結合により連結している。好ましい実施形態において、脂質化ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、配列番号１８のヌクレオチド配列を含み、１つまたは複数のホスホロチオエートヌクレオチド間連結を有し、コレステロールと共有結合により連結している。いかなる好適なリンカーも、ＣｐＧオリゴヌクレオチドをコレステロール分子と共有結合により連結するために使用することができる。好ましくは、リンカーはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。

特定の実施形態において、リポソームは、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホリル－３’－ｒａｃ－グリセロール（ＤＭＰＧ）、およびコレステロールからなる群から選択される１つまたは複数の脂質をさらに含む。

特定の実施形態において、リポソームは緩衝液をさらに含む。本開示を考慮すると、当業者に公知のいかなる好適な緩衝液も本発明に使用することができる。一実施形態では、リポソームはリン酸緩衝食塩水を含む。特定の実施形態において、緩衝液はヒスチジンおよびスクロースを含む。

本発明に使用される例示的なリポソームは、タウテトラパルミトイル化ホスホペプチド（ｐタウペプチドＴ３、配列番号２８）であって、該タウペプチドの各末端の２つのパルミチン酸を介してリポソームの表面に提示されている、タウテトラパルミトイル化ホスホペプチド；コレステロール分子を介してリポソーム膜に組み込まれている脂質化ＣｐＧ（アジュバントＣｐＧ７９０９－Ｃｈｏｌ、配列番号１８）を含むＴＬＲ－９リガンドであって、コレステロール分子がＣｐＧとＰＥＧリンカーを介して共有結合により連結している、ＴＬＲ－９リガンド；膜に組み込まれているＴＬＲ－４リガンド（モノホスホリルリピドＡ（例えば３Ｄ－（６－ａｃｙｌ）ＰＨＡＤ（登録商標）））；封入されたヘルパーＴ細胞エピトープ（ＰＡＮ－ＤＲ結合部位Ｔ５０、配列番号１３）；ならびにリポソームの脂質構成成分としての１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－コリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－［ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）］ナトリウム塩（ＤＭＰＧ）、およびコレステロールを含む。

本発明のリポソームは、本開示を考慮すると、当技術分野で公知の方法を使用して作製することができる。リポソームの各構成成分の最適な比は、本開示を考慮すると、当業者に公知の技法によって決定することができる。

リポソームは、予防および／または治療処置に好適な手段によって投与することができる。好ましい実施形態において、リポソームは皮下または筋肉内注射によって投与される。筋肉内注射は最も典型的には腕または脚の筋肉に対して実施される。

全般的な一態様では、本発明は、治療有効量のリポソームを薬学的に許容される賦形剤および／または担体と一緒に含む医薬組成物に関する。薬学的に許容される賦形剤および／または担体は当技術分野で周知である（Remington's Pharmaceutical Science (15th ed.), Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1980を参照のこと）。医薬組成物の好ましい製法は、所期の投与方法および治療用途に依存する。組成物は、動物またはヒト投与のための医薬組成物を製剤化するために一般的に使用されるビヒクルとして定義される、薬学的に許容される非毒性の担体または希釈剤を含むことができる。希釈剤は、組合せ体の生物活性に影響を及ぼさないように選択される。そのような希釈剤の例は、蒸留水、生理学的リン酸緩衝食塩水、リンガー液、デキストロース溶液、およびハンクス液である。加えて、医薬組成物または製剤はまた、他の担体、アジュバント、または非毒性、非治療性、および非免疫原性安定剤等を含んでもよい。担体、賦形剤、または希釈剤の特徴は特定の用途のための投与経路に依存し得ることが理解されるだろう。

ワクチンの標的抗原は脳に位置しており、脳は血液脳関門（ＢＢＢ）と呼ばれる特殊な細胞構造によって循環から隔てられている。ＢＢＢは物質の循環から脳への移行を制限する。このことは毒素、微生物等の中枢神経系への進入を防止する。ＢＢＢはまた、免疫メディエーター（例えば抗体）の、脳を囲む間質液および脳脊髄液への効率的な進入を妨げるという潜在的により望ましくない効果を有する。

体循環に存在する抗体のうちのおよそ０．１％がＢＢＢを越えて脳に進入する。これは、ＣＮＳ抗原を標的とするワクチンによって誘導される全身力価が、脳において有効となる最小有効力価よりも少なくとも１０００倍大きくなければならないことを示唆する。有効性をもたらすために必要となる血清中の抗体の最小力価は容易には明らかでない。加えて、免疫応答の量だけでなく質（例えばアビディティ）も、ＣＮＳ障害、例えば神経変性疾患、障害、または状態を標的とする安全かつ効果的な免疫療法のために考慮しなければならない。

したがって、特定の実施形態において、本発明の医薬組成物は、対象において所望の免疫応答を達成するために１種または複数種の好適なアジュバントをさらに含む。好適なアジュバントは、リポソームの投与の前、後、または同時に投与することができる。好ましいアジュバントは、応答の質的な形式に影響を及ぼす免疫原の立体構造変化を引き起こさずに、免疫原に対する固有の応答を増大させる。アジュバントの例は、アルミニウム塩（アラム）、例えば、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、および硫酸アルミニウムである。そのようなアジュバントは、他の特異的免疫賦活剤、例えば、ＭＰＬＡ類（３脱－Ｏ－アシル化モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ（商標））、モノホスホリルヘキサアシルリピドＡ ３－脱アシル合成（３Ｄ－（６－ａｃｙｌ）ＰＨＡＤ（登録商標）、ＰＨＡＤ（商標）、ＰＨＡＤ（登録商標）－５０４、３Ｄ－ＰＨＡＤ（登録商標））リピドＡ）、ポリマーもしくはモノマーアミノ酸、例えばポリグルタミン酸もしくはポリリジンと共にまたはこれらを伴わずに使用することができる。そのようなアジュバントは、他の特異的免疫賦活剤、例えば、ムラミルペプチド（例えば、Ｎ－アセチルムラミル－Ｌ－スレオニル－Ｄ－イソグルタミン（ｔｈｒ－ＭＤＰ）、Ｎ－アセチル－ノルムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミン（ｎｏｒ－ＭＤＰ）、Ｎ－アセチルムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミニル－Ｌ－アラニン－２－（１’－２’ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ヒドロキシホスホリルオキシ）－エチルアミン（ＭＴＰ－ＰＥ）、Ｎ－アセチルグルコサミニル－Ｎ－アセチルムラミル－Ｌ－Ａｌ－Ｄ－ｉｓｏｇｌｕ－Ｌ－Ａｌａ－ジパルミトキシプロピルアミド（ＤＴＰ－ＤＰＰ）Ｔｈｅｒａｍｉｄｅ（商標））、もしくは他の細菌細胞壁構成成分と共にまたはこれらを伴わずに使用することができる。水中油型エマルションとしては、マイクロ流動化装置を使用してマイクロメートル未満の粒子に製剤化される、５％スクアレン、０．５％Ｔｗｅｅｎ８０、および０．５％Ｓｐａｎ８５を含有する（任意選択で、様々な量のＭＴＰ－ＰＥを含有する）ＭＦ５９（国際公開第９０／１４８３７号パンフレットを参照のこと）；マイクロメートル未満のエマルションにマイクロ流動化されるかまたはより大きな粒径のエマルションを生成するためにボルテックスされる、１０％スクアレン、０．４％Ｔｗｅｅｎ８０、５％ｐｌｕｒｏｎｉｃブロックポリマーＬ１２１、およびｔｈｒ－ＭＤＰを含有するＳＡＦ；ならびに０．２％Ｔｗｅｅｎ８０、および、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ（商標））、トレハロースジミコール酸（ＴＤＭ）、および細胞壁骨格（ＣＷＳ）、好ましくはＭＰＬ（商標）＋ＣＷＳ（Ｄｅｔｏｘ（商標））からなる群から選択される１つまたは複数の細菌細胞壁構成成分を含有するＲｉｂｉ（商標）アジュバントシステム（ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ、Ｈａｍｉｌｔｏｎ、Ｍｏｎｔ．）が挙げられる。他のアジュバントとしては、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）、ならびにサイトカイン、例えば、インターロイキン（ＩＬ－１、ＩＬ－２、およびＩＬ－１２）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）、および腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）が挙げられる。

本明細書で使用する場合、「組合せにおいて」という用語は、対象への２種以上の療法の投与の文脈では、１種類よりも多い療法の使用を指す。「組合せにおいて」という用語の使用は、療法が対象に投与される順番を制限しない。例えば、第１の療法（例えば本明細書に記載される組成物）は、第２の療法の投与の前（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、または１２週間前）、同時、または後（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、または１２週間後）に対象に投与することができる。

投与のタイミングは、１日に１回から１年に１回、１０年に１回まで大きく変えることができる。典型的なレジメンは、免疫化と、その後の時間間隔、例えば１～２４週間の間隔を空けたブースター注射とからなる。別のレジメンは、免疫化と、その後の１、２、４、６、８、１０、および１２か月後のブースター注射とからなる。別のレジメンは、生涯にわたる２か月ごとの注射を伴う。あるいは、ブースター注射は、免疫応答のモニタリングによって適応となる場合、不定期であってもよい。

プライミングおよびブースティング投与に関するレジメンが投与後に測定される免疫応答に基づいて調整できることは当業者によって容易に理解される。例えば、ブースティング組成物は全般的に、プライミング組成物の投与の数週間もしくは数か月後、例えば、約１週間、もしくは２週間、もしくは３週間、もしくは４週間、もしくは８週間、もしくは１６週間、もしくは２０週間、もしくは２４週間、もしくは２８週間、もしくは３２週間、もしくは３６週間、もしくは４０週間、もしくは４４週間、もしくは４８週間、もしくは５２週間、もしくは５６週間、もしくは６０週間、もしくは６４週間、もしくは６８週間、もしくは７２週間、もしくは７６週間、またはプライミング組成物の投与の１～２年後に投与される。

特定の態様において、１回または複数回の追加免疫が投与され得る。それぞれのプライミングおよびブースティング組成物における抗原は、いかに多くのブースティング組成物が用いられるとしても、同一である必要はなく、共通の抗原決定基を有するかまたは互いに実質的に類似するべきである。

本発明の医薬組成物は、本開示を考慮すると、当技術分野で公知の方法に従って製剤化することができる。組成物における各構成成分の最適な比は、本開示を考慮すると、当業者に公知の技法によって決定することができる。

本発明の好ましい実施形態では、本発明のある実施形態に従った医薬組成物の投与を介したタウペプチドの投与はタウペプチドおよびタウの病理形態に対する能動免疫応答を対象において誘導し、それにより、関連するタウ凝集体の排除を容易にし、タウ病態関連行動の進行を緩慢にし、および／または根底にあるタウオパチーを処置する。

タウはヒト「自己」タンパク質である。このことは、原則として、タウに特異的な受容体を保有する全てのリンパ球が発達中に取り除かれる（中枢性免疫寛容）か、または末梢性免疫寛容機構によって不応性となるはずだったことを意味する。この問題は、自己または「変化した自己」タンパク質（例えば腫瘍抗原）に対するワクチンの開発における大きな障害であることが判明している。抗原（自己または感染性）に対する高品質抗体を生成することは、抗体を産生するＢリンパ球だけでなく、ＣＤ４^＋Ｔ「ヘルパー」リンパ球の作用も必要とする。ＣＤ４^＋Ｔ細胞は極めて重要な生存および成熟シグナルをＢリンパ球に提供し、ＣＤ４^＋Ｔ細胞欠損動物は大いに免疫抑制される。ＣＤ４^＋Ｔ細胞はまた免疫寛容機構の影響を受けやすく、強力な抗自己（例えば抗タウ）抗体応答を引き起こすことにおけるさらなる障害は、タウ反応性ＣＤ４^＋Ｔ細胞がまた、ヒト／動物レパートリーにおいて希少であるかまたは存在しない可能性が高いことである。

本発明のこの態様においては、免疫応答は、タウペプチドを対象にする有益な液性（抗体媒介性）応答、およびＴ細胞エピトープまたは免疫原性担体を対象にする細胞性（抗原特異的Ｔ細胞またはその分泌産物によって媒介される）応答の発生を伴う。

本明細書で使用する場合、タウ病態関連行動表現型としては、限定されないが、認知障害、早期人格変化および脱抑制、感情鈍麻、無為、無言症、失行、保続、常同運動／行動、***傾向、解体、連続した課題を計画または整理する能力の欠如、利己的行動／冷淡、***的特徴、共感の欠如、一貫性の欠如、頻繁な錯誤的誤りを含むが理解力は比較的保たれている失文法的発言、理解力障害および喚語障害、緩徐進行性歩行不安定、後方突進、すくみ、頻回転倒、非レボドパ応答性体軸性固縮、核上性注視麻痺、矩形波眼球運動、緩徐な垂直性衝動性眼球運動、仮性球麻痺、四肢失行、ジストニア、皮質性感覚消失、ならびに振戦が挙げられる。

本発明の方法を実行する場合、本発明の特定の実施形態において、本発明の免疫原性ペプチドまたは抗体を投与する前にアルツハイマー病もしくは他のタウオパチーを有しているかもしくは有しているリスクがある対象、タウ凝集体を脳に有している対象、または濃縮体関連行動表現型を呈している対象を選択することが好ましい。処置可能な対象としては、疾患のリスクがあるが症状を示していない個体、および症状を現在示している患者が挙げられる。アルツハイマー病の場合、事実上全ての人がアルツハイマー病に罹患するリスクがある。したがって、本方法は、対象患者のリスクに関するいかなる評価も必要とせずに、一般集団に予防的に投与することができる。本方法は、アルツハイマー病の公知の遺伝的リスクを有する個体にとりわけ有用である。そのような個体としては、該疾患を経験している親族を有する個体、および遺伝子マーカーまたは生化学的マーカーの分析によってリスクが決定される個体が挙げられる。好ましい実施形態では、対象は、アルツハイマー病、好ましくは早期アルツハイマー病、アルツハイマー病に起因する軽度認知障害（ＭＣＩ）、軽度アルツハイマー病、または軽度から中等度のアルツハイマー病の処置を必要とする。

無症候性患者では、処置は任意の年齢（例えば、１０、２０、３０歳）で開始することができる。しかしながら、通例、患者が４０、５０、６０、または７０歳に達するまでは処置を開始する必要はない。処置は典型的にはある期間にわたり複数の投薬量を伴う。処置は、抗体、または治療剤に対する活性化Ｔ細胞もしくはＢ細胞応答をアッセイすることによって経時的にモニタリングすることができる。応答が低下する場合、ブースター投薬量が適応となる。

予防用途では、タウペプチドを含有する医薬組成物は、アルツハイマー病もしくは他のタウオパチーに罹患しやすいかまたはそうでなければそれらのリスクがある患者に、疾患の生化学的、組織学的、および／または行動学的症状、その合併症、ならびに疾患の発生中に現れる病理学的中間表現型を含む疾患の、リスクを取り除くもしくは低下させるか、重症度を軽減するか、または発症を遅延させるのに十分な量投与される。治療用途では、タウペプチドを含有する医薬組成物は、そのような疾患の疑いがあるか、またはすでに罹患している患者に、疾患の合併症および疾患の発生における病理学的中間表現型を含む疾患の症状（生化学的、組織学的、および／または行動学的）を治療するか、または少なくとも部分的に停止させるのに十分な量投与される。

組成物は、所望される場合、有効成分を含有する１つまたは複数の単位剤形を含有することができるキット、容器、または分注装置において提供することができる。キットは、例えば、ブリスターパックのように金属またはプラスチック箔を含むことができる。キット、容器、または分注装置には投与のための説明書を添付することができる。

実施形態
本発明はまた、以下の非限定的な実施形態を提供する。

実施形態１は、抗リン酸化タウ抗体を、重度有害事象を誘発せずに、それを必要とする対象において誘導する方法であって、１用量当たり約２５ｎｍｏｌｅ～約７５０ｎｍｏｌｅ、好ましくは１用量当たり約９０ｎｍｏｌｅ～約７１５ｎｍｏｌｅ、１用量当たり約９０ｎｍｏｌｅ～約５３５ｎｍｏｌｅ、または１用量当たり約９０ｎｍｏｌｅ～約２７５ｎｍｏｌｅ、例えば１用量当たり約２５ｎｍｏｌｅ、約３０ｎｍｏｌｅ、約３５ｎｍｏｌｅ、約４０ｎｍｏｌｅ、約４５ｎｍｏｌｅ、約５０ｎｍｏｌｅ、約５５ｎｍｏｌｅ、約６０ｎｍｏｌｅ、約６５ｎｍｏｌｅ、約７０ｎｍｏｌｅ、約７５ｎｍｏｌｅ、約８０ｎｍｏｌｅ、約８５ｎｍｏｌｅ、約９０ｎｍｏｌｅ、約９５ｎｍｏｌｅ、約１００ｎｍｏｌｅ、約１２５ｎｍｏｌｅ、約１５０ｎｍｏｌｅ、約１７５ｎｍｏｌｅ、約２００ｎｍｏｌｅ、約２２５ｎｍｏｌｅ、約２５０ｎｍｏｌｅ、約２７５ｎｍｏｌｅ、約３００ｎｍｏｌｅ、約３２５ｎｍｏｌｅ、約３５０ｎｍｏｌｅ、約３７５ｎｍｏｌｅ、約４００ｎｍｏｌｅ、約４２５ｎｍｏｌｅ、約４５０ｎｍｏｌｅ、約４７５ｎｍｏｌｅ、約５００ｎｍｏｌｅ、約５２５ｎｍｏｌｅ、約５５０ｎｍｏｌｅ、約５７５ｎｍｏｌｅ、約６００ｎｍｏｌｅ、約６２５ｎｍｏｌｅ、約６５０ｎｍｏｌｅ、約６７５ｎｍｏｌｅ、約７００ｎｍｏｌｅ、約７２５ｎｍｏｌｅ、約７５０ｎｍｏｌｅ、またはそれらの間の任意の値の量の、配列番号１～配列番号３および配列番号５～配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むタウホスホペプチドと、ｔｏｌｌ様受容体４アゴニストとを含む有効量のリポソームを対象に投与することを含み、タウホスホペプチドがリポソームの表面に提示されている、方法である。

実施形態１ａは、抗リン酸化タウ抗体を、脳炎を誘発せずに、それを必要とする対象において誘導する方法であって、１用量当たり１００μｇ～２５００μｇ、好ましくは３００μｇ～２４００μｇ、３００μｇ～１８００μｇ、または３００μｇ～９００μｇ、例えば１用量当たり１００μｇ、１５０μｇ、２００μｇ、２５０μｇ、３００μｇ、４００μｇ、５００μｇ、６００μｇ、７００μｇ、８００μｇ、９００μｇ、１０００μｇ、１１００μｇ、１２００μｇ、１３００μｇ、１４００μｇ、１５００μｇ、１６００μｇ、１７００μｇ、１８００μｇ、１９００μｇ、２０００μｇ、２１００μｇ、２２００μｇ、２３００μｇ、２４００μｇ、２５００μｇ、またはそれらの間の任意の値の、リポソームの表面に提示されているテトラパルミトイル化タウホスホペプチドと、ｔｏｌｌ様受容体４アゴニストとを含む有効量のリポソームを対象に投与することを含み、タウホスホペプチドが、配列番号１～配列番号３および配列番号５～配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、方法である。

実施形態２は、タウホスホペプチドが配列番号２７～配列番号２９および配列番号３１～配列番号３８からなる群から選択されるアミノ酸配列からなる、実施形態１または１ａに記載の方法である。

実施形態３ａは、タウホスホペプチドが配列番号２７のアミノ酸配列からなる、実施形態１から２のいずれかに記載の方法である。

実施形態３ｂは、タウホスホペプチドが配列番号２８のアミノ酸配列からなる、実施形態１から２のいずれかに記載の方法である。

実施形態３ｃは、タウホスホペプチドが配列番号２９のアミノ酸配列からなる、実施形態１から２のいずれかに記載の方法である。

実施形態３ｄは、タウホスホペプチドが配列番号３１のアミノ酸配列からなる、実施形態１から２のいずれかに記載の方法である。

実施形態３ｅは、タウホスホペプチドが配列番号３２のアミノ酸配列からなる、実施形態１から２のいずれかに記載の方法である。

実施形態３ｆは、タウホスホペプチドが配列番号３３のアミノ酸配列からなる、実施形態１から２のいずれかに記載の方法である。

実施形態３ｇは、タウホスホペプチドが配列番号３４のアミノ酸配列からなる、実施形態１から２のいずれかに記載の方法である。

実施形態３ｈは、タウホスホペプチドが配列番号３５のアミノ酸配列からなる、実施形態１から２のいずれかに記載の方法である。

実施形態３ｉは、タウホスホペプチドが配列番号３６のアミノ酸配列からなる、実施形態１から２のいずれかに記載の方法である。

実施形態３ｊは、タウホスホペプチドが配列番号３７のアミノ酸配列からなる、実施形態１から２のいずれかに記載の方法である。

実施形態３ｋは、タウホスホペプチドが配列番号３８のアミノ酸配列からなる、実施形態１から２のいずれかに記載の方法である。

実施形態４は、リポソームが皮下投与される、実施形態１から３ｋのいずれかに記載の方法である。

実施形態５は、リポソームが筋肉内投与される、実施形態１から３ｋのいずれかに記載の方法である。

実施形態６は、初回投与の１～２４週間後に第２の用量の有効量のリポソームを対象に投与することをさらに含む、実施形態１から５のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態７は、リポソームがヘルパーＴ細胞エピトープおよび脂質化ＣｐＧオリゴヌクレオチドのうちの少なくとも一方、好ましくはヘルパーＴ細胞エピトープおよび脂質化ＣｐＧオリゴヌクレオチドをさらに含む、実施形態１から６のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態７ａは、有効量のリポソームが、１用量当たり３０μｇ～９００μｇ、好ましくは１００μｇ～５８５μｇ、例えば３０μｇ、５０μｇ、１００μｇ、１５０μｇ、２００μｇ、２５０μｇ、３００μｇ、３３０μｇ、３６０μｇ、３９０μｇ、４２０μｇ、４５０μｇ、４８０μｇ、５００μｇ、５２０μｇ、５４０μｇ、５６０μｇ、５８０μｇ、６００μｇ、７００μｇ、８００μｇ、もしくは９００μｇ、またはそれらの間の任意の値の量のｔｏｌｌ様受容体４アゴニストを含む、実施形態７に記載の方法である。

実施形態７ｂは、ｔｏｌｌ様受容体４アゴニストがモノホスホリルヘキサアシルリピドＡ、３－脱アシルである、実施形態７または７ａに記載の方法である。

実施形態７ｃは、有効量のリポソームが、１用量当たり２５μｇ～６２５μｇ、好ましくは７５μｇ～４５０μｇ、例えば２５μｇ、５０μｇ、７５μｇ、１００μｇ、１２５μｇ、１５０μｇ、１７５μｇ、２００μｇ、２２５μｇ、２５０μｇ、２７５μｇ、３００μｇ、３２５μｇ、３５０μｇ、３７５μｇ、４００μｇ、４２５μｇ、４５０μｇ、４７５μｇ、５００μｇ、５２５μｇ、５５０μｇ、５７５μｇ、６００μｇ、もしくは６２５μｇ、またはそれらの間の任意の値の量のヘルパーＴ細胞エピトープを含む、実施形態７から７ｂのいずれか１つに記載の方法である。

実施形態７ｄは、ヘルパーＴ細胞エピトープが、配列番号１３のアミノ酸配列からなるＴ５０ヘルパーＴ細胞エピトープ、配列番号１４のアミノ酸配列からなるＴ４６ヘルパーＴ細胞エピトープ、配列番号１５のアミノ酸配列からなるＴ４８ヘルパーＴ細胞エピトープ、配列番号１６のアミノ酸配列からなるＴ５１ヘルパーＴ細胞エピトープ、または配列番号１７のアミノ酸配列からなるＴ５２ヘルパーＴ細胞エピトープである、実施形態７から７ｃのいずれか１つに記載の方法である。

実施形態７ｅは、ヘルパーＴ細胞エピトープが配列番号１３のアミノ酸配列からなるＴ５０ヘルパーＴ細胞エピトープである、実施形態７ｄに記載の方法である。

実施形態７ｆは、有効量のリポソームが、１用量当たり５０μｇ～１２５０μｇ、好ましくは１５０μｇ～８００μｇ、例えば５０μｇ、１００μｇ、１５０μｇ、２００μｇ、２５０μｇ、３００μｇ、３５０μｇ、４００μｇ、４５０μｇ、５００μｇ、５５０μｇ、６００μｇ、６５０μｇ、７００μｇ、７５０μｇ、８００μｇ、８５０μｇ、９００μｇ、９５０μｇ、１０００μｇ、１０５０μｇ、１１００μｇ、１２００μｇ、もしくは１２５０μｇ、またはそれらの間の任意の値の量の脂質化ＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む、実施形態７から７ｅのいずれか１つに記載の方法である。

実施形態８は、脂質化ＣｐＧオリゴヌクレオチドが配列番号１８～配列番号２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有する、実施形態７から７ｆのいずれか１つに記載の方法である。

実施形態９ａは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドが配列番号１８のヌクレオチド配列を有する、実施形態８に記載の方法である。

実施形態９ｂは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドが配列番号１９のヌクレオチド配列を有する、実施形態８に記載の方法である。

実施形態９ｃは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドが配列番号２０のヌクレオチド配列を有する、実施形態８に記載の方法である。

実施形態９ｄは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドが配列番号２１のヌクレオチド配列を有する、実施形態８に記載の方法である。

実施形態９ｅは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドが配列番号２２のヌクレオチド配列を有する、実施形態８に記載の方法である。

実施形態１０は、ＣｐＧオリゴヌクレオチドが１つまたは複数のホスホロチオエートヌクレオチド間連結を有する、実施形態８から９ｅのいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１１は、ＣｐＧオリゴヌクレオチドが少なくとも１つの親油基と共有結合により連結している、実施形態８から１０のいずれかに記載の方法である。

実施形態１１ａは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドが少なくとも１つの親油基とＰＥＧリンカーを介して共有結合により連結している、実施形態８から１０のいずれかに記載の方法である。

実施形態１２は、ＣｐＧオリゴヌクレオチドがコレステロール基と共有結合により連結している、実施形態１１または１１ａに記載の方法である。

実施形態１２ａは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドがコレステロール基とＰＥＧリンカーを介して共有結合により連結している、実施形態１２に記載の方法である。

実施形態１３は、リポソームが、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホリル－３’－ｒａｃ－グリセロール（ＤＭＰＧ）、およびコレステロールからなる群から選択される１つまたは複数の脂質をさらに含む、実施形態１から１２ａのいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１４は、ヘルパーＴ細胞エピトープが配列番号２３～配列番号２６からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列を含む、実施形態１から１３のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１５は、ヘルパーＴ細胞エピトープが、配列番号２３、配列番号２４、および配列番号２５のアミノ酸配列を含む、実施形態１４に記載の方法である。

実施形態１６は、ヘルパーＴ細胞エピトープが配列番号１３～１７および３９～４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態１４または１５に記載の方法である。

実施形態１７は、ｔｏｌｌ様受容体４アゴニストがモノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬＡ）である、実施形態１から１６のいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１８は、抗リン酸化タウ抗体を、重度有害事象を誘発せずに、それを必要とする対象において誘導する方法であって、１用量当たり約２５ｎｍｏｌｅ～約７５０ｎｍｏｌｅ、好ましくは約９０ｎｍｏｌｅ～約７１５ｎｍｏｌｅ、もしくは１用量当たり約９０ｎｍｏｌｅ～約５３５ｎｍｏｌｅ、もしくは１用量当たり約９０ｎｍｏｌｅ～約２７５ｎｍｏｌｅ、例えば１用量当たり約２５ｎｍｏｌｅ、約３０ｎｍｏｌｅ、約３５ｎｍｏｌｅ、約４０ｎｍｏｌｅ、約４５ｎｍｏｌｅ、約５０ｎｍｏｌｅ、約５５ｎｍｏｌｅ、約６０ｎｍｏｌｅ、約６５ｎｍｏｌｅ、約７０ｎｍｏｌｅ、約７５ｎｍｏｌｅ、約８０ｎｍｏｌｅ、約８５ｎｍｏｌｅ、約９０ｎｍｏｌｅ、約９５ｎｍｏｌｅ、約１００ｎｍｏｌｅ、約１２５ｎｍｏｌｅ、約１５０ｎｍｏｌｅ、約１７５ｎｍｏｌｅ、約２００ｎｍｏｌｅ、約２２５ｎｍｏｌｅ、約２５０ｎｍｏｌｅ、約２７５ｎｍｏｌｅ、約３００ｎｍｏｌｅ、約３２５ｎｍｏｌｅ、約３５０ｎｍｏｌｅ、約３７５ｎｍｏｌｅ、約４００ｎｍｏｌｅ、約４２５ｎｍｏｌｅ、約４５０ｎｍｏｌｅ、約４７５ｎｍｏｌｅ、約５００ｎｍｏｌｅ、約５２５ｎｍｏｌｅ、約５５０ｎｍｏｌｅ、約５７５ｎｍｏｌｅ、約６００ｎｍｏｌｅ、約６２５ｎｍｏｌｅ、約６５０ｎｍｏｌｅ、約６７５ｎｍｏｌｅ、約７００ｎｍｏｌｅ、約７２５ｎｍｏｌｅ、約７５０ｎｍｏｌｅ、またはそれらの間の任意の値、あるいは１用量当たり３００μｇ～２４００μｇ、例えば３００μｇ～１８００μｇ、もしくは３００μｇ～９００μｇ、例えば１用量当たり１００μｇ、１５０μｇ、２００μｇ、２５０μｇ、３００μｇ、４００μｇ、５００μｇ、６００μｇ、７００μｇ、８００μｇ、９００μｇ、１０００μｇ、１１００μｇ、１２００μｇ、１３００μｇ、１４００μｇ、１５００μｇ、１６００μｇ、１７００μｇ、１８００μｇ、１９００μｇ、２０００μｇ、２１００μｇ、２２００μｇ、２３００μｇ、２４００μｇ、２５００μｇ、またはそれらの間の任意の値の、リポソームの表面に提示されているテトラパルミトイル化タウホスホペプチドを含む有効量のリポソームを対象に投与することを含み、タウホスホペプチドが配列番号１～配列番号３および配列番号５～配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、リポソームが、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬＡ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホリル－３’－ｒａｃ－グリセロール（ＤＭＰＧ）、コレステロール、および緩衝液をさらに含む、方法である。

実施形態１８ａは、抗リン酸化タウ抗体を、脳炎を誘発せずに、それを必要とする対象において誘導する方法であって、１用量当たり約２５ｎｍｏｌｅ～約７５０ｎｍｏｌｅ、好ましくは約９０ｎｍｏｌｅ～約７１５ｎｍｏｌｅ、もしくは１用量当たり約９０ｎｍｏｌｅ～約５３５ｎｍｏｌｅ、もしくは１用量当たり約９０ｎｍｏｌｅ～約２７５ｎｍｏｌｅ、例えば１用量当たり約２５ｎｍｏｌｅ、約３０ｎｍｏｌｅ、約３５ｎｍｏｌｅ、約４０ｎｍｏｌｅ、約４５ｎｍｏｌｅ、約５０ｎｍｏｌｅ、約５５ｎｍｏｌｅ、約６０ｎｍｏｌｅ、約６５ｎｍｏｌｅ、約７０ｎｍｏｌｅ、約７５ｎｍｏｌｅ、約８０ｎｍｏｌｅ、約８５ｎｍｏｌｅ、約９０ｎｍｏｌｅ、約９５ｎｍｏｌｅ、約１００ｎｍｏｌｅ、約１２５ｎｍｏｌｅ、約１５０ｎｍｏｌｅ、約１７５ｎｍｏｌｅ、約２００ｎｍｏｌｅ、約２２５ｎｍｏｌｅ、約２５０ｎｍｏｌｅ、約２７５ｎｍｏｌｅ、約３００ｎｍｏｌｅ、約３２５ｎｍｏｌｅ、約３５０ｎｍｏｌｅ、約３７５ｎｍｏｌｅ、約４００ｎｍｏｌｅ、約４２５ｎｍｏｌｅ、約４５０ｎｍｏｌｅ、約４７５ｎｍｏｌｅ、約５００ｎｍｏｌｅ、約５２５ｎｍｏｌｅ、約５５０ｎｍｏｌｅ、約５７５ｎｍｏｌｅ、約６００ｎｍｏｌｅ、約６２５ｎｍｏｌｅ、約６５０ｎｍｏｌｅ、約６７５ｎｍｏｌｅ、約７００ｎｍｏｌｅ、約７２５ｎｍｏｌｅ、約７５０ｎｍｏｌｅ、またはそれらの間の任意の値、あるいは１用量当たり１００μｇ～２５００μｇもしくは３００μｇ～２４００μｇ、例えば３００μｇ～１８００μｇもしくは３００μｇ～９００μｇ、例えば１用量当たり１００μｇ、１５０μｇ、２００μｇ、２５０μｇ、３００μｇ、４００μｇ、５００μｇ、６００μｇ、７００μｇ、８００μｇ、９００μｇ、１０００μｇ、１１００μｇ、１２００μｇ、１３００μｇ、１４００μｇ、１５００μｇ、１６００μｇ、１７００μｇ、１８００μｇ、１９００μｇ、２０００μｇ、２１００μｇ、２２００μｇ、２３００μｇ、２４００μｇ、２５００μｇ、またはそれらの間の任意の値の、リポソームの表面に提示されているテトラパルミトイル化タウホスホペプチドを含む有効量のリポソームを対象に投与することを含み、タウホスホペプチドが配列番号１～配列番号３および配列番号５～配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、リポソームが、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬＡ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホリル－３’－ｒａｃ－グリセロール（ＤＭＰＧ）、コレステロール、および緩衝液をさらに含む、方法である。

実施形態１９は、リポソームが、ヘルパーＴ細胞エピトープ、およびコレステロール基と共有結合により連結したＣｐＧオリゴヌクレオチドをさらに含む、実施形態１８または１８ａに記載の方法である。

実施形態１９ａは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドがコレステロール基とＰＥＧリンカーを介して共有結合により連結している、実施形態１９に記載の方法である。

実施形態１９ｂは、ヘルパーＴ細胞エピトープが、配列番号２３、配列番号２４、および配列番号２５のアミノ酸配列を含む、実施形態１９または１９ａに記載の方法である。

実施形態１９ｃは、ヘルパーＴ細胞エピトープが配列番号１３～１７および３９～４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態１９または１９ａに記載の方法である。

実施形態１９ｄは、ヘルパーＴ細胞エピトープが配列番号３９のアミノ酸配列を含む、実施形態１９または１９ａに記載の方法である。

実施形態１９ｅは、ヘルパーＴ細胞エピトープが配列番号１３のアミノ酸配列を含む、実施形態１９または１９ａに記載の方法である。

実施形態１９ｆは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドが配列番号１８のヌクレオチド配列を有する、実施形態１９から１９ｅのいずれか１つに記載の方法である。

実施形態１９ｇは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドが配列番号１９のヌクレオチド配列を有する、実施形態１９から１９ｅのいずれか１つに記載の方法である。

実施形態２０ａは、タウホスホペプチドが配列番号２７のアミノ酸配列からなる、実施形態１８から１９ｇのいずれか１つに記載の方法である。

実施形態２０ｂは、タウホスホペプチドが配列番号２８のアミノ酸配列からなる、実施形態１８から１９ｇのいずれか１つに記載の方法である。

実施形態２０ｃは、タウホスホペプチドが配列番号２９のアミノ酸配列からなる、実施形態１８から１９ｇのいずれか１つに記載の方法である。

実施形態２１ａは、緩衝液がリン酸緩衝液を含む、実施形態１８から２０ｃのいずれか１つに記載の方法である。

実施形態２１ｂは、緩衝液がヒスチジンおよびスクロースのうちの少なくとも一方を含む、実施形態１８から２０ｃのいずれか１つに記載の方法である。

実施形態２２ａは、ＭＰＬＡがモノホスホリルリピドＡ（例えば３Ｄ－（６－ａｃｙｌ）ＰＨＡＤ（登録商標））を含む、実施形態１８から２１ｂのいずれか１つに記載の方法である。

実施形態２３は、対象がアルツハイマー病の処置を必要とする、実施形態１から２２ａのいずれか１つに記載の方法である。

実施形態２４は、対象がアルツハイマー病の防止を必要とする、実施形態１から２２ａのいずれか１つに記載の方法である。

実施形態２５は、対象が、早期アルツハイマー病、アルツハイマー病に起因する軽度認知障害（ＭＣＩ）、軽度アルツハイマー病、または軽度から中等度のアルツハイマー病の処置を必要とする、実施形態２３に記載の方法である。

実施形態２６は、対象がヒト対象である、実施形態１から２５のいずれか１つに記載の方法である。

以下の本発明の実施例は本発明の本質をさらに例証するためのものである。以下の実施例は本発明を限定せず、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によって決定されるべきであることが理解されるべきである。

以下の実施例において使用される実験方法は、別段の指示がない限り、全て常法である。以下の実施形態において使用される試薬は、別段の指示がない限り、全て通常の試薬供給業者から購入されている。

以下の全ての実施例では、ＡＣＩ－３５．０３０とは、１２００μｇ／ｍＬの配列番号２８のアミノ酸配列を有するリン酸化タウペプチド、ＭＰＬＡ（３Ｄ－（６－ａｃｙｌ）ＰＨＡＤ（登録商標））、ＤＭＰＣ、ＤＭＰＧ、コレステロール、３００μｇ／ｍＬの配列番号１３のヘルパーＴ細胞エピトープ、コレステロール基とＰＥＧリンカーを介して共有結合により連結しているＣｐＧオリゴヌクレオチド、および緩衝液を含有する本発明の実施形態のリポソーム製剤であり、ＡＣＩ－３５とは、配列番号２８のアミノ酸配列を有するリン酸化タウペプチド、ＭＰＬＡ、ＤＭＰＣ、ＤＭＰＧ、コレステロール、および緩衝液を含有する本発明の実施形態のリポソーム製剤である。

[実施例１]
Ｃ５７ＢＬ／６ＪマウスにおけるＡＣＩ－３５．０３０の用量応答
目的：筋肉内（ｉ．ｍ．）注射によってＣ５７ＢＬ／６雌マウスに投与した場合のＡＣＩ－３５．０３０ワクチンの免疫原性を評価すること。

方法：研究デザインを表１で説明する。

リン酸化タウペプチドを対象にする特異的ＩｇＧ抗体応答（ＥＬＩＳＡによって決定した）を測定した。

結果／結論：
ＡＣＩ－３５．０３０（１２００：３００）ワクチン中３５および８０μｇの標的用量のＴ３を用いた免疫化は、配列番号２のアミノ酸配列を有するＴ３．５ペプチドを対象にする抗体を誘導した（図１を参照のこと）。

[実施例２]
アカゲザルにおけるＡＣＩ－３５．０３０（リポソーム表面のテトラパルミトイル化Ｔ３ホスホ－タウペプチド、ＭＰＬＡ（３Ｄ－（６－ａｃｙｌ）ＰＨＡＤ（登録商標））、およびＣｐＧ７９０９－Ｃｈｏｌ、ならびに封入されたＴ５０）ワクチンによって誘導されたＩｇＧ応答の評価
目的：皮下または筋肉内注射によって雄および雌アカゲザルに投与したＡＣＩ－３５．０３０（リポソーム表面のテトラパルミトイル化Ｔ３ホスホ－タウペプチド、ＭＰＬＡ（３Ｄ－（６－ａｃｙｌ）ＰＨＡＤ（登録商標））、およびＣｐＧ７９０９－Ｃｈｏｌ、ならびに封入されたＴ５０）ワクチンの免疫原性を評価して、それによりワクチンの最適な投与経路および濃度を決定すること。

方法：研究デザインを表２で説明する。

リポソームワクチンの理論用量は、動物１匹当たり１８００μｇのテトラパルミトイル化ホスホペプチド（Ｔ３）および１８００μｇのＴ５０ペプチドであった。

用量を以下の間隔で４回投与した：１、２９、８５、および１６９日目。抗体決定のための血液試料を以下の間隔で回収した：－１４、８、２２、３６、５０、６４、７８、９２、１０６、１２０、１３４、１４８、１６２、１７６、および１９０日目。

リン酸化および非リン酸化タウペプチド（それぞれＴ３．５およびＴ３．６；ＥＬＩＳＡによって決定した）、全長ホスホ－タウ（ｐタウ）タンパク質（ＥＬＩＳＡによって決定した）、ならびにアルツハイマー病患者のヒト脳から抽出したタウの病理形態（ヒトＰＨＦ；ＭＳＤによって決定した）を対象にする特異的ＩｇＧ抗体応答を測定した。臨床徴候（健康状態、行動変化等）を動物に関して、授受の当日から研究全体にわたって毎日２回記録した。体重を全ての動物に関して、処置の開始前に少なくとも１回、その後は毎週少なくとも１回記録した。

結果／結論：
全体として、全身性有害作用も注射部位における永続的な皮膚感受性も、いずれのワクチンレジメンを用いた免疫化後においても観察することができなかった。

濃縮（１２００：１２００）および非濃縮（４００：４００）ＡＣＩ－３５．０３０ワクチンは、類似したＴ３．５およびヒトＰＨＦ特異的ＩｇＧ力価を誘導した。Ｔ３．５特異的ＩｇＧ力価とヒトＰＨＦ特異的ＩｇＧ力価との差は、同じワクチン製剤のｓ．ｃ．投与とｉ．ｍ．投与との間において検出されなかった。

[実施例３]
２週間の無処置期間（ＧＬＰ）が後に続く、２週間ごとのＡＣＩ－３５の８回の皮下注射後のＣ５７ＢＬ／６マウスにおける反復投与毒性研究
目的：１４週間にわたる２週間ごとの皮下注射後のＣ５７ＢＬ／６マウスにおけるＡＣＩ－３５の潜在的な毒性を評価すること。処置期間の完了後、指定した動物を２週間の無処置期間の間維持して、任意の所見の可逆性を評価した。加えて、ＡＣＩ－３５の免疫原性を研究中に評価した。

方法：研究デザインを表３で説明する。

結果／結論：
ＡＣＩ－３５－非含有または３９０μｇ／注射の最も高い用量レベルでのＡＣＩ－３５の反復注射は、８回の注射後にアルブミン／グロブリン（Ａ／Ｇ）比の低下を引き起こした。免疫化した動物において一般的に示されるこの変化はグロブリン（抗体）血漿割合の増分と一致すると考えられ、このことは、全てのＡＣＩ－３５処置動物が抗体（ＩｇＭおよびＩｇＧのクラスにおける）を生じたために説明される。全般的に、ＩｇＧ力価は反復注射後ではＩｇＭ力価よりも高く、雌は雄よりも多くの抗体を生じる傾向を有した。

注射の部位において、局所かつ一過性の反応（肥厚）が９８または３９０μｇのペプチドのＡＣＩ－３５を用いて処置した群に観察された。これらの用量では、両方の性別において脾臓重量と肝臓重量との増加および胸腺重量の減少、ならびに雌のみにおいて腎臓重量の増加が記録された。注射部位において、肉眼所見が主に９８および３９０μｇ／注射でのＡＣＩ－３５の場合に見られた。顕微鏡的に、ＰＢＳ対照、ＡＣＩ－３５－非含有、または２４μｇ／注射のＡＣＩ－３５の投与は、局所において良好な忍容性を示した。非含有リポソームと関連がある泡沫状マクロファージおよび単核炎症性浸潤物は、用量依存性の重症度を伴って全ての用量レベルにおいて見られたが、ＰＢＳ対照群では見られなかった。皮下組織の線維症および場合により変性／壊死を伴う亜急性炎症反応は、３９０μｇ／注射でのＡＣＩ－３５の場合にわずかに増加した。

ＡＣＩ－３５－非含有または３９０μｇ／注射でのＡＣＩ－３５の投与は、髄外造血を脾臓および肝臓において誘導し、骨髄の骨髄細胞数を増加し、これらは非含有リポソームの投与と関連した。加えて、複数の全身臓器における単核炎症性細胞の浸潤物が、主に雌における３９０μｇ／注射でのＡＣＩ－３５の場合に見られ、ＡＣＩ－３５非含有ではより小さな程度であった。この所見は、容易に誘導可能な免疫系を有することが周知のマウスの系統であったために、これらの動物においては予期することができた種類の応答であり、したがって臨床的に重要ではないと考えられた。９８μｇ／注射でのＡＣＩ－３５の投与後の唯一の全身所見は脾臓および肝臓における髄外造血であった。２４μｇ／注射でのＡＣＩ－３５の投与後の全身所見は存在しなかった。

これらの所見のいずれも、それらの軽度から中等度の重症度、２週間後の完全または部分的な回復、および顕著な臨床的相関物または臨床病理相関物の非存在を考慮すると、研究の定義に従って有害であると考えられなかった。結果として、この研究の実験条件下では、３か月にわたって２週間ごとにＣ５７ＢＬ／６Ｊ雄および雌マウスに投与された３９０μｇのペプチドのＡＣＩ－３５用量レベルはＮＯＡＥＬ（全身毒性の徴候がなく、局所レベルにおいて有害な徴候が存在しない）と考えられた。

[実施例４]
４週間の回復期間（ＧＬＰ）が後に続く、ＡＣＩ－３５を用いたカニクイザルにおける６か月にわたる皮下毒性研究
目的：４週間ごとに１回の頻度でカニクイザルに７回皮下投与した場合のＡＣＩ－３５の累計毒性を評価すること。処置関連変化の可逆性もしくは進行、または任意の遅延毒性を、処置期間後に一部の動物に関して４週間の回復期間中に評価した。

方法：研究デザインを表４で説明する。

結果／結論：
６か月の期間にわたる２８日ごとに１回の３５８、７１６、および１４３１μｇ／注射でのカニクイザルへのＡＣＩ－３５の皮下投与は、全ての動物において良好な忍容性を示した。

処置との関連性を除外することはできなかったが、好中球数のわずかな増加およびグルコースレベルのわずかな減少は、全ての値が過去の背景データの範囲内であり、予備試験値に関して関連する変動が記録されなかったため、有害ではないと考えられた。

全ての被験物質処置群は抗体を生じた。１回目の投与の２週間後の免疫応答は、全ての被験物質処置群において類似した。その後、平均抗ｐタウ抗体力価は、処置期間全体にわたって、用量効果関係の傾向に従って増加した。４週間の回復を経た動物は、７回目の投与の２週間後に記録された抗体レベルに関して明確な減少を示した。

取得された結果に基づくと、これらの研究条件下では、６か月にわたり２８日ごとに１回投与された１４３１μｇ／注射の用量は、この研究に関してＮＯＡＥＬ（無毒性量）と考えられた。

[実施例５]
４週間の回復期間（ＧＬＰ）が後に続く、ＡＣＩ－３５．０３０を用いたリーサスザルにおける３か月にわたる筋肉内毒性研究
目的：この研究の目的は、月に１回の頻度で３回ナイーブ雄および雌リーサスザルに筋肉内投与した場合のＡＣＩ－３５．０３０の潜在的な毒性を評価することであった。起こり得る処置関連変化の可逆性を、対照および高用量群の２匹／性別に関して４週間の回復期間中に評価した。

デザイン：適用した研究プロトコルは以下の通りであった（表５）。

被験および参照物質を単回筋肉内注射によって１、２９、および８５日目に大腿の３つの異なる部位に投与した。研究全体にわたって、全ての動物を生存／死亡および臨床徴候に関して毎日少なくとも２回観察した。各投与日において、動物を、投薬前ならびに投薬の６、２４、および４８時間後に、投薬部位における局所反応に関する評価（ドレイズスコア化）に供した。

食物消費を、研究を通してケージごとに定性的に推定した。体重を馴化期間の開始から研究の終了まで毎週評価した。眼底検査を予備試験中および最終投与の３／４日後に１回実施した。心電図（四肢誘導Ｉ、ＩＩ、およびＩＩＩ、ならびに増高誘導ａＶＲ（増高電位右）、ａＶＬ（増高電位左）、およびａＶＦ（増高電位足））を、予備試験中および最終投与のおよそ２４時間後に１回動物ごとに記録した。

臨床病理評価（血液学、臨床化学、凝固、および尿検査）を、全ての動物に関して予備試験期間中、最終注射の２日後（８７日目）に１回、および全ての生存動物に関して回復期間の終了頃（１２５日目）に１回実施した。

抗ｐ－タウおよび抗Ｔ５０のＥＬＩＳＡによる決定のための血清の血液試料を、－１４、８、２２、３６、５０、６４、７８、９２、９９、１０６、１２０、および１２７日目に採取した（１０６、１２０、および１２７日目は回復動物に関してのみ採取した）。

ＰＢＭＣを全ての群において－１４日目、最終免疫化の２週間後、および回復群において剖検前に収集した。ＩＬ－４およびＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＰＯＴ分析を実施して、タウ特異的Ｔ細胞応答を決定した。

免疫表現型同定を全ての動物において、予備試験中および剖検時に１回、試料採取した血液に基づいて評価した。

血液を－１４および９９日目（主要および回復）ならびに１２７日目（回復）にＰＭＢＣ（Ｔ３．５に対するＴ細胞応答に関するＥＬＩＳｐｏｔ）のために採取した。

脳脊髄液（ＣＳＦ）試料を全ての動物から鎮静下で、予備試験中および各死後検査前に、細胞学評価のために採取した。

予定された処置または回復期間の完了後、全ての動物を剖検し、様々な臓器の重量を測定した。組織病理学的検査を、全ての研究動物の脳、注射部位、およびリンパ節に対して実施した。

免疫組織化学（ＩＨＣ）技法により、ＡＣＩ－３５．０３０によって誘導された抗体の種々のヒト組織に対する潜在的な結合活性を専用の研究段階において評価し、ここで、ヒト組織に対するＡＣＩ－３５．０３０誘導サル抗体の交差反応性は、２４００μｇのＴ３を投薬された動物の９９日目に試料採取した血清を使用して、３名の関連のない個体由来の４２の凍結ヒト組織および血液塗抹のパネルにおいて評価した。

結果：
死亡も、体重、身体変化、性向（appetence）、眼科学、心電図検査、臨床病理（血液学、凝固、臨床化学、および尿検査）、または免疫表現型同定に対するＡＣＩ－３５．０３０関連効果も存在しなかった。

注射部位における皮膚刺激症状（紅斑および浮腫）の一過性の軽微から中等度の徴候が、免疫化後に全ての群にわたって数匹の動物に観察された。一時的な重度の局所浮腫が、２４００μｇのＴ３／注射を投与した５匹の雌のうちの１匹の処置した後肢に４８時間で２９日目および８７日目に観察された。しかしながら、浮腫は１日後（３０日目および８８日目）に消失した。

平均臓器重量における用量非依存性のいくつかの差が対照群とおよび被験物質投薬群との間に認められた。肉眼的に、鼠径、腸骨、および骨盤リンパ節は、対照を含む全ての群にわたって腫大していると無作為に評され、多くの場合顕微鏡的にリンパ球過形成と相関し、４週間の回復期間後に大半が回復し、ワクチン／ワクチンアジュバントによる賦活化に起因する可能性が高いと解釈された。顕微鏡的に、最小から軽度の炎症が、注射部位の骨格筋、ならびに真皮および／または皮下組織に観察され、これに付随して、骨格筋の最小の変性および／または再生が対照を含む全ての群にわたって認められた。炎症は、針穿刺に関連する注射手技と注射した材料に対する局所免疫応答との組合せに起因する可能性が高いと考えられた。これらの変化は有害とは考えられず、４週間の回復期間後に回復すると予測された。

ＡＣＩ－３５．０３０の投与と関連がある脳の顕微鏡的変化は存在しなかった。

ＡＣＩ－３５．０３０は、１２００μｇ／用量と２４００μｇ／用量の両方において持続的な抗ｐタウＩｇＧ力価を誘導した（図２）。

タウ特異的Ｔ細胞応答は処置の終了時に観察されず、Ｔ細胞活性化関連毒性、例えば髄膜脳炎の低いリスクを示唆した。

３名の関連のない個体由来の４２の凍結ヒト組織および血液塗抹に基づいて行った免疫組織化学検査は、１／３００および１／１００において検査したＡＣＩ－３５．０３０誘導サル抗体が、ＡＤ脳切片におけるタウ濃縮体を特異的に染色した（図３、パネルＡ、ＡＣＩ－３５．０３０を用いた処置前、パネルＢ：２４００μｇ／用量でのＡＣＩ－３５．０３０の３回の注射後、１／１００に希釈した血清）が、試験した対照組織のいずれにおいても、オンターゲット染色もオフターゲット染色ももたらさなかったことを強調した。一例として、処置前および後の血清を用いた結腸切片染色（それぞれパネルＣおよびパネルＤ）を図３に示す。

結論：
全体として、１、２９、および８５日目の免疫化後のＡＣＩ－３５関連変化の非存在のために、２４００μｇのＴ３の最も高い用量レベルは無影響量（ＮＯＥＬ）と考えられた。

[実施例６]
ペプチドのＥｐｉＳｃｒｅｅｎ（商標）免疫原性分析
目的：
２種の１６マーペプチド、すなわちタウ３９３～４０８［ｐＳ３９６／ｐＳ４０４］（配列番号２のアミノ酸配列を有するＴ３．５）およびタウ３９３～４０８（配列番号４のアミノ酸配列を有するＴ３．６）を、５１名のヒトドナーにおいて、ＣＤ４^＋Ｔ細胞応答を誘導する能力に関してＥｐｉＳｃｒｅｅｎ（商標）経時的Ｔ細胞アッセイにて試験した。

デザイン：
ＥｐｉＳｃｒｅｅｎ（商標）経時的Ｔ細胞増殖アッセイおよびＩＬ－２ ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ
５１名のヒトドナー由来のＰＢＭＣを、５μＭの最終濃度のいずれかのペプチドを用いて刺激した。ドナーごとに、再現性対照（１００μｇ／ｍＬ ＫＬＨと共にインキュベートした細胞）、ベンチマーク臨床対照（０．３μＭヒト化Ａ３３と共にインキュベートした細胞）、および培養培地のみのウェルも含めた。増殖およびＩＬ－２産生を種々の時点後に評価した。

ＥｐｉＳｃｒｅｅｎ（商標）データ分析
増殖アッセイおよびＩＬ－２ ＥＬＩＳＰＯＴアッセイに関して、２以上の刺激指数（ＳＩ）という経験的な閾値（ＳＩ≧２．００）がこれまでに確立されており、それによって、この閾値を超える応答を誘導する試料を陽性と見なし、ＳＩ≧１．９０を境界応答試料と考えた。

ある範囲の生物製剤を用いたこれまでのＥｐｉＳｃｒｅｅｎ（商標）経時的Ｔ細胞アッセイは、ＥｐｉＳｃｒｅｅｎ（商標）アッセイにおけるドナーＴ細胞応答の百分率と臨床において観察された免疫原性のレベルとの明確な相関を示している。全般に、ＥｐｉＳｃｒｅｅｎ（商標）アッセイにおいて１０％超の陽性応答を誘導するタンパク質治療薬は、臨床における免疫原性の顕著なリスクと関連する。

結果：
増殖アッセイとＩＬ－２ ＥＬＩＳＰＯＴアッセイとの全体的な相関は高く（ＫＬＨの場合に９８％）、したがって応答性ドナーを、各試料に対する陽性応答をＩＬ－２ ＥＬＩＳＰＯＴアッセイと増殖アッセイの両方において開始したドナーとして定義した。これらの２種のアッセイから組み合わせたデータセットの分析は、５１名中１名（２％）のドナーがタウ３９３～４０８［ｐＳ３９６／ｐＳ４０４］に応答し、５１名中２名（４％）のドナーがタウ３９３～４０８に応答したことを明らかにした。境界応答、および２種のアッセイのうちの一方にのみ応答するドナーを考慮すると、５１名中４名のドナー（８％）がタウ３９３～４０８［ｐＳ３９６／ｐＳ４０４］に応答し、５１名中４名のドナー（８％）がタウ３９３～４０８に応答した。したがって、応答の全体的な頻度および規模は両方のペプチドに関して低く、最大で８％のドナーが応答性であった。

結論：
増殖およびＩＬ－２分泌によって測定される被験ペプチド（タウ３９３～４０８［ｐＳ３９６／ｐＳ４０４］およびタウ３９３～４０８）のＣＤ４^＋Ｔ細胞応答を誘導する能力を、５１名のＨＬＡ型のドナーのコホートに対して試験した。研究のデータは、ＣＤ４^＋Ｔ細胞応答を誘導する全体的な相対リスクが両方のペプチドに関して低かった（２～８％）ことを示した。

ＥｐｉＳｃｒｅｅｎ（商標）アッセイにおいて試験したタンパク質治療薬との比較において、この研究のデータは、両方のペプチドがＣＤ４^＋Ｔ細胞応答をヒトにおいて誘導する低い潜在的リスクを有すると考えられ得ることを示す。

[実施例７]
ヒトにおけるＡＣＩ－３５の安全性および有効性
ＡＣＩ－３５ワクチン（ＡＣＩ－３５）の安全性、忍容性、および免疫原性を、ＵＫおよびフィンランドの軽度から中等度のＡＤを有する患者において行った第Ｉｂ相臨床研究において評価した（ＡＣＩ－３５－１２０１：軽度から中等度のアルツハイマー病を有する患者におけるＡＣＩ－３５の安全性、忍容性、および免疫原性に関する第Ｉｂ相多施設二重盲検無作為化プラセボ対照研究）。

目的：軽度から中等度のＡＤを有する患者における３用量および３回投薬レジメンでのＡＣＩ－３５を、安全性および忍容性、ならびに抗ホスホ－タウ（ｐタウ）免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）力価の血清への誘導に関して予備的に評価すること。

方法：５つのコホートのそれぞれは、表５に記載されているように、種々の用量（３００μｇ、９００μｇ、または１８００μｇのテトラパルミトイル化ホスホペプチド（ｐタウペプチドＴ３、配列番号２８））、および／または６か月にわたって続く投薬レジメン（２、３、または５用量投与）と、その後の最終注射の１２～１６か月後（コホート１）または６か月後（コホート２～５）のブースター注射とからなった。

２４名の患者を無作為化し、少なくとも１用量の研究薬ワクチンを投与した。平均患者年齢は７３．６±５．８８歳であり、平均ＭＭＳＥスコアはスクリーニング時において２３．３±２．７１であった。１５名の女性と９名の男性を無作為化した。２２名の患者が研究を完了した。コホート２の２名の患者（１名は９００μｇ、１名はプラセボ）は、研究の完了を著しく妨げたかまたは不可能にしたＡＣＩ－３５と関連のない重大な医学的状態のために研究を中止した。

選択基準は以下の通りであった：
１．米国立神経疾患・コミュニケーション疾患・脳卒中研究所－アルツハイマー病・関連障害協会の基準に従ってアルツハイマー病（ＡＤ）である可能性が高い
２．６０歳以上かつ８５歳以下の年齢
３．スクリーニング時に１８～２８点のミニメンタルステート検査（ＭＭＳＥ）
４．患者は安定用量のアセチルコリンエステラーゼ阻害薬をスクリーニング前に少なくとも３か月間受けていなければならなかった
５．同意書を提出して、臨床評価を支援し、安全性問題を報告する信頼できる配偶者または他の在宅介護者によって介護されている患者
６．研究者の見解において、書面によるインフォームドコンセントを理解して署名し、全ての研究手順に従うことができた患者（同意は任意の試験関連手順を行う前に取得しなければならなかったことに留意されたい）
７．女性は閉経後少なくとも１年経過していなければならない、および／または外科的に不妊となっていなければならなかった
８．閉経後でもなく、外科的に不妊となってもいない男性患者の女性パートナーは、信頼性の高い避妊措置、例えば二重バリア避妊法またはホルモン避妊法を使用しなければならなかった

結果／結論：
全体として、ＡＣＩ－３５は、ヒト対象において試験した全ての用量および処置レジメンにおいて安全であり、良好な忍容性を示し、注射は、全ての研究コホートにおいて１回目の注射直後に抗ｐタウ抗体の急速な誘導を引き起こした。注射部位紅斑、注射部位反応、および疲労は、研究薬と関連する最も一般的な治療下で発現した有害事象（ＴＥＡＥ）であった。ＣＮＳ炎症の発生を示唆する証拠は、臨床的にも臨床検査所見または放射線所見からも存在しなかった。注射部位反応を除いては、プラセボと比較したＡＥのパターンは研究医薬との関連性を示唆しなかった。全般的に軽度かつ自己限定的であった注射部位反応は、高用量であるほど高頻度であり、コホート４および５では活性医薬を投与された全ての患者によって報告された。無症候性低血糖は、プラセボよりも活性医薬においてより一般的に観察されたが、この現象の自然発生が公知であることを考慮すると、研究医薬との不確かな関連性を有する。５例のＳＡＥが報告され、全てコホート２の患者においてであり、そのうちの１名の患者はプラセボを用いて処置され、２例のＳＡＥ（尿路性敗血症および腎盂腎炎）を経験した。これらの２例のＳＡＥは研究薬と関連しなかった。３例の研究薬と関連する可能性があるＳＡＥ（急性腎盂腎炎、洞結節機能不全、およびめまい）はＡＣＩ－３５を用いて処置した２名の患者に関して報告され、これらが唯一の観察された有害反応であった。死亡はこの研究では報告されなかった。

[実施例７]
ヒトにおけるＡＣＩ－３５．０３０の安全性および有効性
ＡＣＩ－３５．０３０ワクチン（ＡＣＩ－３５．０３０）の安全性、忍容性、および免疫原性を、欧州の早期ＡＤ（ＡＤに起因する軽度認知障害（ＭＣＩ）および軽度ＡＤ）を有する患者において行った第Ｉｂ／ＩＩａ相多施設二重盲検無作為化プラセボ対照臨床研究において評価する（ＡＣＩ－３５－１８０２研究）。

目的：早期ＡＤ（例えばＡＤに起因する軽度認知障害（ＭＣＩ）および軽度ＡＤ）を有する参加者における最大３用量でのＡＣＩ－３５．０３０を、早期ＡＤを有する参加者における安全性および忍容性、ならびに抗ホスホ－タウ（抗ｐタウ）の血清への誘導を含むタウタンパク質の異常形態に対する免疫応答の誘導に関して、７４週の時間枠で予備的に評価すること。

副次的目的：７４週の時間枠で、例えばタウに対するＩｇＧ力価およびｐタウとタウとに対するＩｇＭ力価の血清への誘導を評価することによって研究ワクチンの免疫原性をさらに評価すること、ならびに免疫化によって誘発される抗体のアビディティを評価すること。

探索的目的：それぞれ７４週の時間枠で、ＡＤの進行に関する推定バイオマーカー、すなわち総タウおよびｐタウタンパク質の血中および／またはＣＳＦ中濃度に対する研究ワクチンの効果を探索すること；血中のＴ細胞の活性化に対する研究ワクチンの効果を探索すること；血中炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＦＮ－γ、およびＴＮＦ－α）に対する研究ワクチンの効果を探索すること；行動、認知的および機能的活動に対する研究ワクチンの効果を探索すること。

方法：３つのコホートのそれぞれは、４８週間にわたって続く（０、８、２４、および４８週目に用量投与）、組成物におけるｐタウペプチドＴ３の量（３００μｇ、９００μｇ、または１８００μｇのテトラパルミトイル化ホスホペプチドｐタウペプチドＴ３、配列番号２８）によって言及される種々の用量のＡＣＩ－３５．０３０と、その後の２４週間（６か月）の安全性追跡期間とを受ける患者からなる。

２４名の患者を３つのサブコホートに無作為化し、各サブコホートにおいて２名の患者はプラセボを受け、６名の患者はＡＣＩ－３５．０３０を受ける。投薬量を筋肉内投与する。

安全性評価は、各投薬直後およびその４８～７２時間後に電話によって全ての研究患者に関して実施する。各サブコホートでは、最初の４名の患者の１回目の投薬は、前の患者の４８～７２時間での安全性評価を実施して、現場の研究責任者によって研究ワクチンと関連がある臨床的に関連のある安全性問題が存在しないことを確認してから実施する。

全ての処置患者は、処置期間の終了後に２４週間（６か月）の安全性追跡期間を有する。この期間中、患者は、最終投与の１９週間後の１回目の追跡来院と、追跡期間の終了時（最終投与の２６週間後）の最終来院とをするように求められる。参加者の安全性は、データ安全性モニタリング委員会（ＤＳＭＢ）による安全性データの定期的な検討によって研究全体にわたってモニタリングする。

中間分析を以下の通りに実行する：

第１の中間分析は、全てのコホート１患者が４回目の来院（１０週目）を完了してから、すなわち２回目の注射の２～４週間後に行う。目的は、この時点までの安全性、忍容性、および免疫原性データを検討して、コホート２を開始すべきか否かを決定することである。

第２の中間分析は、全てのコホート２患者が４回目の来院（１０週目）を完了してから、すなわち２回目の注射の２～４週間後に行う。目的は、この時点までの安全性、忍容性、および免疫原性データを収集して、コホート３を開始すべきか否かを決定することである。

第３の中間分析は、全てのコホート３患者が６回目の来院（２６週目）を完了してから、すなわち３回目の注射の２～４週間後に行う。目的は、コホート１、２、または３のいずれかを延長して、免疫原性、安全性、および忍容性の点で最も好ましいプロファイルを提示する用量での追加の安全性／忍容性データを収集することを決定することである。

第４の中間分析は、処置期間の終了時（すなわち４回目の注射の２～４週間後）に実施する。目的は、該当する場合はサブコホート拡大の患者のデータを含む、この時点までの安全性／忍容性および免疫原性データを検討することである。バイオマーカー結果は、支持的な探索データとして含めることができる。結果を、他のコホートに関してその後に取得された結果と比較して、さらなる臨床開発のための最良の戦略を全ての研究コホートから選択する。

第５の中間分析は、安全性追跡期間の終了時、すなわち全てのコホート１患者が１１回目の来院（７４週目）を完了してから実施する。目的は、第４の中間分析と同じであり、その後、結果を全てのコホートにわたって比較する。

研究集団は、ＮＩＡ－ＡＡ基準に従った軽度ＡＤまたはＡＤに起因するＭＣＩの診断を有する５０～７５歳（男性および女性）である。

選択基準は以下の通りである：
１．５０から７５歳までの男性または女性。
２．ＮＩＡ－ＡＡ基準に従ったＡＤに起因する軽度認知障害（ＭＣＩ）または軽度ＡＤ、かつ０．５または１の臨床認知症評価尺度（ＣＤＲ）総合スコア。
３．２２以上のミニメンタルステート検査（ＭＭＳＥ）スコア。
４．ＡＤ病態に関するＮＩＡ－ＡＡ２０１８基準と矛盾しないスクリーニング時のＣＳＦアミロイドベータ４２（Ａβ４２）およびリン酸化タウのレベル。ＣＳＦ Ａβ４２レベルに関して境界である症例では、アミロイド陽性を決定するのに役立つ他の結果、例えばＡβ４２／Ａβ４０比、および症例ごとの陽性アミロイドＰＥＴ走査または陽性ＣＳＦ Ａβ４２レベルの病歴を考慮してもよい。スクリーニング前３か月以内に実施したＣＳＦ試料採取の結果は、それらがアミロイド病理の存在と矛盾せず、かつ対応するＣＳＦ試料を検査のために研究に使用することができるという条件で、症例ごとに許容される。
５．ベースライン前の少なくとも３か月間に、販売されているＡＤのためのいかなる処置も受けていないか、または安定用量のアセチルコリンエステラーゼ阻害薬および／もしくはメマンチンを受けている患者。
６．服薬遵守を保証し、臨床評価を支援し、安全性問題を報告する信頼できる情報提供者または介護者によって介護されている患者。
７．女性は閉経後少なくとも１年経過していなければならない、および／または外科的に不妊となっていなければならない。出産の可能性があるかまたは閉経後ではない女性は、スクリーニング時に陰性の妊娠検査結果を有し、かつスクリーニング来院から参加の終了まで高度に効果的な避妊方法を使用する意思を有していなければならない。尿妊娠再検査を処置期間の全体にわたって実施して、対象が研究ワクチンを受け続けることができるかどうかを決定する。出産の可能性があるパートナーを有する男性患者は、研究中適切な避妊措置を使用する意思を有していなければならない。
８．研究者の見解において、書面によるインフォームドコンセントを理解して同意することができる患者。
９．患者および情報提供者または介護者は、研究の言語のうちの１つが流暢であり、腰椎穿刺を含む全ての研究手順に従うことができなければならない。

除外基準は以下の通りである：
１．患者がプラセボのみを用いて処置され、プラセボ製剤がいかなる特異的免疫応答も誘導すると予期されないという文書化された証拠が存在する場合を除く、能動免疫化を使用したＡＤおよび／または神経障害に関する以前の臨床試験への参加。
２．対象がプラセボのみを用いて処置され、プラセボがいかなる特異的免疫応答も誘導すると予期されないという文書化された証拠が存在する場合を除く、任意の受動的免疫化を使用したＡＤおよび／または神経障害に関する以前の臨床試験へのスクリーニング前過去１２か月以内の参加。
３．ＢＡＣＥ－１阻害薬を含む任意の低分子薬を使用したＡＤおよび／または神経障害に関する以前の臨床試験へのスクリーニング前過去３か月以内の参加。
４．実験的または承認された医薬または療法を使用する任意の他の臨床試験への同時参加。
５．自己免疫疾患の臨床症状を有しない患者における少なくとも１／１６０の希釈度での陽性抗核抗体（ＡＮＡ）力価の存在。
６．自己免疫疾患、または自己免疫疾患の存在と矛盾しない臨床症状の現在または過去の病歴。
７．スクリーニング前に３か月を超えて一時的に処方されている場合を除く、免疫抑制薬または全身性ステロイドの使用を含むがこれに限定されない免疫抑制。
８．以前のワクチンおよび／または医薬に対する重度のアレルギー反応を含むがこれに限定されない重度のアレルギー反応（例えばアナフィラキシー）の病歴。
９．臨床的に有意な低血糖エピソードの前歴。
１０．精神障害の診断・統計マニュアルＶ（ＤＳＭ－Ｖ）基準に従って現在満たされているかまたは過去５年以内に満たされていた薬物またはアルコール乱用または依存。
１１．研究処置の安全性および忍容性の評価、ならびに／または全研究来院予定の遵守を妨害する可能性が高い任意の臨床的に有意な医学的状態。
１２．患者における、免疫系に影響を与える可能性が高い、および／または研究ワクチンの免疫化可能性を潜在的に損なうと予期される任意の臨床的に有意な医学的状態（例えば獲得または自然免疫抑制障害の任意の病歴）。
１３．ヒドララジン、プロカインアミド、キニジン、イソニアジド、ＴＮＦ阻害薬、ミノサイクリンのスクリーニング直前１２か月以内の使用。
１４．安定用量の場合を除く、スクリーニング前の少なくとも３か月間のジルチアゼムの使用。
１５．コロンビア自殺重症度評価尺度を使用して、対象が自殺念慮質問４もしくは５に「はい」と回答するかまたは過去１２か月以内の自殺行動に「はい」と回答することとして定義される、顕しい自殺のリスク。
１６．ＡＤと関連があると考えられるもの以外の併発している精神または神経性障害（例えば、意識喪失を伴う頭部損傷、症候性脳卒中、パーキンソン病、重度の頸動脈閉塞性疾患、ＴＩＡ）。
１７．非制御型てんかん発作の病歴または存在。てんかん発作の病歴の場合、てんかん発作は、その発生がベースライン前２年以内に存在しないように良好に制御されていなければならない。抗てんかん薬の使用は、スクリーニング前の少なくとも３か月間安定用量である場合に容認される。
１８．スクリーニング前過去１０年以内の髄膜脳炎の病歴。
１９．出血性および／または非出血性脳卒中の病歴を有する患者。
２０．末梢神経障害の存在または病歴。
２１．ＣＮＳ関与の可能性を有する炎症性神経障害の病歴。
２２．患者の症状を引き起こし得るＡＤと矛盾する代替病態の構造的証拠を示すスクリーニングＭＲＩ走査。１ｃｍ未満の直径の良性髄膜腫、３つ以上のラクナ梗塞もしくは直径１ｃｍ超のただ１つの梗塞、または脳表ヘモジデリン沈着症の任意の単一の領域以外の空間占有性病変の証拠、あるいは１０ｍｍ以上の以前の大出血の証拠。Ｔ２^＊ＭＲＩにおける微小出血は、部位にかかわらず最大で１０まで認められる。
２３．ＭＲＩ検査を、ＭＲＩ研究が禁忌である金属インプラントおよび／または重度の閉所恐怖症を含むがこれらに限定されない何らかの理由のために行うことができない。
２４．顕著な聴力もしくは視力障害、またはプロトコルに従うことおよびアウトカム測定を実施することを妨げることに関連すると研究者によって判断される他の問題。
２５．スクリーニング前３か月以内の臨床的に有意な感染症または大きな外科手術。研究への参加中に行われることが予想される計画された外科処置は、スクリーニング時に医療監視者によって検討および承認されなければならない。
２６．インフルエンザワクチンを含む、ベースライン前過去２か月以内に投与された任意のワクチン。
２７．スクリーニング時のＥＣＧにおける臨床的に有意な不整脈または他の臨床的に有意な異常。
２８．ベースライン前１年以内の心筋梗塞、不安定狭心症、または重大な冠動脈疾患。
２９．処置された扁平上皮癌腫、基底細胞癌腫、および表皮内黒色腫、または完全に除去され、治療されたと考えられる非浸潤性前立腺癌もしくは非浸潤性乳癌以外の癌の病歴を過去５年以内に有する患者。
３０．現場の研究者の見解における、血液学的パラメータ、肝機能検査、および他の生化学的測定に関する、臨床的に有意と判断される正常値からの臨床的に有意な逸脱。
３１．スクリーニング時の血清検査によって確認した場合に妊娠しているか、または妊娠を計画しているかまたは授乳中の女性対象。
３２．毎日１００ｍｇ未満の用量のアスピリンを除く任意の抗凝固薬または抗血小板薬を受けている患者（予定されているかまたは予定されていない腰椎穿刺中の出血のリスクを避けるため）。
３３．不眠症の処置のための安定低用量の場合を除く、抗精神病薬を受けている患者。
３４．スクリーニング前３０日の間に血液もしくは血液製剤を提供したか、または研究に参加している間に血液を提供することを計画している患者。
３５．スクリーニング時の活性梅毒と矛盾しない陽性のＶＤＲＬ（性病研究所）。
３６．スクリーニング時に陽性のＨＩＶ検査結果を有する患者。
３７．スクリーニング時に検査によって測定した場合に活性Ｂおよび／またはＣ型肝炎を有する患者。
３８．正常の上限の１．５倍超のクレアチニン、異常な甲状腺機能検査結果、または血清Ｂ１２もしくは葉酸レベルの臨床的に有意な低下を有する患者（注：甲状腺補充剤の全ての経口用量、Ｂ１２、または葉酸は、スクリーニング前の少なくとも３か月間安定でなければならない）。

結果／結論：
以下の主要評価項目を評価する：
安全性および忍容性－有害事象、即時および遅延型反応原性（例えばアナフィラキシー、疼痛、発赤、免疫複合体疾患、腫脹、発熱を含む局所および全身性反応原性）；忍容性の総合評価；自殺念慮（Ｃ－ＳＳＲＳ）；行動（ＮＰＩ）；安全性を評価するための認知および機能評価（ＲＢＡＮＳ、ＣＤＲ－ＳＢ）；バイタルサイン；ＭＲＩ画像診断；心電図；血液および尿における慣例的な血液学および生化学評価；血液における抗ＤＮＡ抗体を含む自己免疫抗体の評価；血中およびＣＳＦ中の炎症性マーカー。
免疫応答－血清中の抗ｐタウＩｇＧ力価（幾何平均、ベースラインからの変化、応答者率、ピーク、および曲線下面積）。

以下の副次的評価項目を評価する：
免疫応答－血清中の抗タウＩｇＧ、抗ｐタウおよび抗タウＩｇＭ力価（幾何平均、ベースラインからの変化、応答者率、ピーク、および曲線下面積）、アビディティ検査によるＩｇＧ応答プロファイルの決定。

以下の探索的評価項目を評価する：
血中および／またはＣＳＦ中のバイオマーカー力価のベースラインからの変化（例えば総タウおよびｐタウタンパク質）、血中のＴ細胞活性化レベルのベースラインからの変化、血中の炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ－１Ｂ、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＦＮ－γ、およびＴＮＦ－α）力価のベースラインからの変化、自殺念慮（Ｃ－ＳＳＲＳ）、行動（ＮＰＩ）、認知的および機能的活動（ＲＢＡＮＳ、ＣＤＲ－ＳＢ）スコアのベースラインからの変化。

[実施例８]
筋肉内注射は皮下注射よりも多くの同種免疫応答を誘導した
アカゲザルの群（群１つ当たりｎ＝３匹の雄および３匹の雌）を、１８００μｇ／用量のＡＣＩ－３５．０３０を用いた１日目、２９日目、８５日目、および１６９日目のワクチン接種によって筋肉内または皮下免疫化した。

濃縮対らせん状細線維（ｅＰＨＦ）の調製物を、修正したＧｒｅｅｎｂｅｒｇおよびＤａｖｉｅｓの方法（1991, Proc Natl Acad Sci U S A, 87(15):5827-31）を使用して、不溶性タウのサルコシル抽出によって組織学的に確認したＡＤ対象の死後脳組織から取得した。濃縮対らせん状細線維（ｅＰＨＦ）に特異的な抗体力価を、Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）プラットフォームを使用して評価した。ＭＳＤストレプトアビジンプレートを、ビオチン化抗タウ捕捉抗体（ＨＴ７－ビオチン、ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いてコーティングした後に、ＡＤ患者から単離したｅＰＨＦを用いてインキュベーションし、ｅＰＨＦに特異的なＩｇＧ抗体を、サルＩｇＧ抗体と交差反応するＳｕｌｆｏＴａｇ標識抗ヒトＩｇＧ抗体を使用してさらに検出した。より詳細には、ｅＰＨＦを、事前に１％ＢＳＡで飽和させ、ビオチン化ＨＴ－７（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いてコーティングしたＭＳＤ Ｇｏｌｄ小スポットストレプトアビジン９６ウェルプレート（ＭＳＤ）に添加した。１時間のインキュベーション後、プレートを、ＰＢＳＴを用いて洗浄し、血清の段階希釈液を添加し、２時間インキュベートした。結合した抗体を、ＳｕｌｆｏＴａｇ標識抗ヒトＩｇＧ抗体を使用し、続いて１％ＰＦＡへの固定ステップを行った後、読取り緩衝液Ｔを添加して検出した。プレートを、Ｓｅｃｔｏｒ Ｉｍａｇｅｒ（ＭＳＤ）を使用して分析した。結果を個々のサルごとに、群１つ当たりの幾何平均と一緒に１ミリリットル当たりの任意単位（ＡＵ／ｍＬ）で表した（図４）。１回目の免疫化後５０日目、１０６日目、および１９０日目のｅＰＨＦに特異的な抗体力価を表す。

図４は、リポソームワクチンが高いｅＰＨＦ特異的ＩｇＧ力価を誘導したこと、および筋肉内注射が皮下注射よりも多い同種抗体応答を誘導したことを示す。
［配列表］

Claims (18)

1. 抗リン酸化タウ抗体を、重度有害事象を誘発せずに、それを必要とするヒト対象において誘導する方法であって、ｔｏｌｌ様受容体４アゴニストと、配列番号１～配列番号３および配列番号５～配列番号１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むタウホスホペプチドとを含む有効量のリポソームを前記対象に投与することを含み、前記タウホスホペプチドが１用量当たり約２５ｎｍｏｌｅ～約７５０ｎｍｏｌｅの量投与され、前記タウホスホペプチドが前記リポソームの表面に提示されている、方法。
2. 前記タウホスホペプチドが配列番号２７～配列番号２９および配列番号３１～配列番号３８からなる群から選択されるアミノ酸配列からなり、好ましくは、前記タウホスホペプチドが配列番号２８のアミノ酸配列からなる、請求項１に記載の方法。
3. 前記有効量のリポソームが、１用量当たり１００μｇ～２５００μｇの前記タウホスホペプチド、好ましくは１用量当たり３００μｇ～２４００μｇ、１用量当たり３００μｇ～１８００μｇ、または１用量当たり３００μｇ～９００μｇの前記タウホスホペプチドを含む、請求項１または２に記載の方法。
4. 前記有効量のリポソームが、１用量当たり３００μｇ、１用量当たり９００μｇ、１用量当たり１８００μｇ、または１用量当たり２４００μｇの前記タウホスホペプチドを含む、請求項３に記載の方法。
5. 前記リポソームが皮下投与される、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
6. 前記リポソームが筋肉内投与される、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
7. 初回投与の１～２４週間後に第２の用量の前記有効量のリポソームを前記対象に投与することをさらに含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
8. 前記リポソームが、ヘルパーＴ細胞エピトープおよび脂質化ＣｐＧオリゴヌクレオチドをさらに含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
9. 前記脂質化ＣｐＧオリゴヌクレオチドが配列番号１８～配列番号２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有し、前記ＣｐＧオリゴヌクレオチドが１つまたは複数のホスホロチオエートヌクレオチド間連結を有し、前記ＣｐＧオリゴヌクレオチドが少なくとも１つの親油基と、任意選択でＰＥＧリンカーを介して、共有結合により連結している、請求項８に記載の方法。
10. 前記ＣｐＧオリゴヌクレオチドが少なくとも１つの親油基とＰＥＧリンカーを介して共有結合により連結している、請求項９に記載の方法。
11. 前記リポソームが、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホリル－３’－ｒａｃ－グリセロール（ＤＭＰＧ）、およびコレステロールからなる群から選択される１つまたは複数の脂質をさらに含む、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
12. 前記ヘルパーＴ細胞エピトープが、配列番号１３～配列番号１７、配列番号２３～配列番号２６、および配列番号３９～配列番号４４からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列を含む、請求項８から１１のいずれか一項に記載の方法。
13. 前記有効量のリポソームが、１用量当たり約２ｎｍｏｌｅ～約１１０ｎｍｏｌｅの量の前記ヘルパーＴ細胞エピトープを含む、請求項８から１２のいずれか一項に記載の方法。
14. 前記有効量のリポソームが、１用量当たり２５μｇ～６２０μｇ、好ましくは１用量当たり７５μｇ～４５０μｇの量の、配列番号１３～配列番号１７、配列番号２３～配列番号２６、および配列番号３９～配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する前記ヘルパーＴ細胞エピトープを含み、好ましくは前記ヘルパーＴ細胞エピトープが配列番号１３のアミノ酸配列からなるＴ５０ヘルパーＴ細胞エピトープである、請求項８から１３のいずれか一項に記載の方法。
15. 前記有効量のリポソームが、１用量当たり３０μｇ～９００μｇ、好ましくは１用量当たり１００μｇ～５８５μｇの量の前記ｔｏｌｌ様受容体４アゴニストを含み、好ましくは前記ｔｏｌｌ様受容体４アゴニストがモノホスホリルヘキサアシルリピドＡ、３－脱アシルである、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
16. 前記有効量のリポソームが、１用量当たり５０μｇ～１２５０μｇ、好ましくは１用量当たり１５０μｇ～８００μｇの量の、配列番号１８～配列番号２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有する前記脂質化ＣｐＧオリゴヌクレオチドを含み、好ましくは前記脂質化ＣｐＧオリゴヌクレオチドが配列番号１８のヌクレオチド配列からなる、請求項８から１５のいずれか一項に記載の方法。
17. 前記リポソームが、
    （１）配列番号２８のアミノ酸配列を有する前記タウホスホペプチド、
    （２）モノホスホリルヘキサアシルリピドＡ、３－脱アシルを含む前記ｔｏｌｌ様受容体４アゴニスト、
    （３）配列番号３９のアミノ酸配列を含む前記ヘルパーＴ細胞エピトープ、
    （４）配列番号１８のヌクレオチド配列を含む前記脂質化ＣｐＧオリゴヌクレオチド、ならびに
    （５）１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホリル－３’－ｒａｃ－グリセロール（ＤＭＰＧ）、およびコレステロールからなる群から選択される少なくとも１つの脂質
    を含む、請求項１から１６のいずれか一項に記載の方法。
18. 前記対象が、アルツハイマー病、好ましくは早期アルツハイマー病、アルツハイマー病に起因する軽度認知障害（ＭＣＩ）、または軽度から中等度のアルツハイマー病の処置を必要とする、請求項１から１７のいずれか一項に記載の方法。
    

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