JP2022509412A - 毛髪ケア活性剤 - Google Patents
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Abstract
Description
色素沈着の喪失が生じ始めたとき、毛髪の3つのタイプが同定され得る:有色の毛髪(メラニンの高含量)、グレイヘア(低メラノサイト数およびメラニンの希薄な含量)、および白髪(メラノサイトを完全に欠乏)。
この目標に向かって、US 2012/0114583は、(a)ジヒドロケルセチンおよび/またはジヒドロケルセチン誘導体;および(b)少なくとも1種のアミノ酸を含む、毛髪処理剤を記載している。好ましい態様は、タウリン、プロリン、バリン、アルギニン、リシン、およびグリシンの6種のアミノ酸混合物を包含する。
さらにまた、タキシフォリンは、メラニン生成を阻害することが知られている(Sang Mi An et al.Phytother.Res.22,1200-1207(2008))。
この目的は、本発明の毛髪ケア活性剤、および同じものを含む毛髪ケア組成物によって達成される。
第2の側面において、本発明は、本発明の毛髪ケア活性剤および好適な担体を含む、毛髪ケア組成物を提供する。
作用のモードは、性別、毛髪のタイプまたは毛髪の色から完全に独立しており、それは普遍的に標的としている毛髪のグレイ化を理想的に解決する。
本発明の毛髪ケア活性剤は、幹細胞の増殖を刺激する、毛包における活性メラノサイト生成を刺激する、毛包における抗酸化剤の防御作用を活性化させる、酸化ストレスに対するメラノサイトを保護する、グレイヘアにおけるメラニン産生を再活性化させる、グレイヘア/白髪の密度を減少させる、および毛髪を再色素沈着させることが見出された。したがって、それは、毛髪のアンチエイジング、およびアンチグレイヘア剤およびアンチ白髪剤として、具体的に有用である。
驚くべきことに、本発明の毛髪ケア活性剤はメラノサイトにおけるメラニン合成を有意に刺激することができる一方で、タキシフォリングルコシド単独は何らの影響も与えず、およびタキシフォリングルコシドおよびL-チロシンの混合物はわずかなおよび非有意な上昇を生じさせるのみであることが見出された(下記の例7を参照)。
さらにまた、本発明の毛髪ケア活性剤はまた、改善された可溶性も示した。
本発明の毛髪ケア活性剤において、タキシフォリングルコシドおよびN-アセチルチロシンは、単独でまたは化粧品用途に好適な他の活性成分、アジュバントおよび/または溶媒と組み合わせて使用されてもよい。
タキシフォリングルコシドおよびタキシフォリンは、100:0~約40:60の重量比において存在してもよい。好ましく、タキシフォリングルコシド対タキシフォリンの重量比は、90:10~40:60、より好ましくは70:30~50:50、および最も好ましくは約60:40である。
グリシンは、あり得る最も単純なアミノ酸である。グリシンは、典型的には、化粧品において、緩衝剤として使用される。さらにまた、グリシンは、コラーゲン前駆体である。
没食子酸エピガロカテキン(EGCG、エピガロカテキン-3-ガラートとしても知られる)は、エピガロカテキンおよび没食子酸のエステルであり、カテキンの型である。没食子酸エピガロカテキンは、毛髪成長を刺激することが知られている。没食子酸エピガロカテキンアルファ-D-グルコシドを調製する好適な方法は、実例として、WO 2007/144368に記載されている。
本発明の毛髪ケア活性剤は、他の有益な活性剤、例えば、塩化亜鉛などをさらに含んでもよい。亜鉛は、毛髪成長に有利に働く酵素補因子である。
本発明の毛髪ケア活性剤におけるタキシフォリングルコシドの濃度は、実例として、0.01~0.50wt%、より好ましくは0.05~0.25wt%、および最も好ましくは0.7~0.15wt%、例えば、約0.10wt%であり得る。
本発明の毛髪ケア活性剤において、タキシフォリングルコシド対N-アセチルチロシンの重量比は、好ましくは1:5’100~1:3.4、より好ましくは1:340~1:70、および最も好ましくは1:200~1:100、例えば、約1:150である。
実例として、グリシンは、0.01~0.50wt%、より好ましくは0.10~0.30wt%、および最も好ましくは0.12~0.18wt%、例えば、約0.15wt%の濃度において使用され得る。
実例として、メタ重亜硫酸ナトリウムは、0.01~1.00wt%、より好ましくは0.10~0.750wt%、および最も好ましくは0.45~0.55wt%、例えば、約0.50wt%の濃度において使用され得る。メタ重亜硫酸ナトリウムは、ポリフェノールの酸化を防止する。
「毛髪(hair)」は、本明細書に使用されるとき、頭皮の毛髪、顔の毛、および体毛を包含するヒトの毛髪、具体的には睫毛、顎髭および口髭を包含する、ヒトの頭部および頭皮上記の毛髪を意味する。
用語「毛髪ケア組成物」は、シャンプー、スプレー、ローション等々の付けたままの(leave-on)製品と洗い流すものとの両方を包含する。
「美容上許容し得る」は、本明細書に使用されるとき、過度な毒性、非相溶性、非安定性、アレルギー反応等がない、ヒトのケラチン組織と接触する用途に好適な担体を意味する。ケラチン組織に直接適用される狙いを有する本明細書に記載のすべての組成物が、美容上許容し得るものに限定される。
増粘剤として、毛髪ケア組成物は、使い心地(feel)、使用特性および懸濁安定性を改善するためにレオロジー改質剤を含んでもよい。例えば、レオロジー特性は、毛髪ケア組成物がその保管および輸送の間不変であるように、および、その使用の間に体、衣服または家具の他のエリアに不必要に滴り落ちないように調整されてもよい。あらゆる好適なレオロジー改質剤が、使用され得る。典型的には、約0.01~約3wt%の増粘剤が包含される。好適な増粘剤の例は、WO 2015/03516およびUS 2001/0043912に開示されている。
好ましくは、本発明の毛髪ケア活性剤は、上に記載の本発明の毛髪ケア組成物の形態で適用される。
本発明の毛髪ケア活性剤の上記の有益な効果は、豊富なin vitro、ex vivoおよび臨床研究によって確認されており、そのいくつかは下記の例に記載される。
この特許出願は、以下の図を含む:
よって、標準溶液を、そのまま使用してもよい。
代替的に、標準溶液をまた、溶媒、緩衝液または培養培地中で希釈してもよい。
下記の例のいくつかのために(例中の表示を参照)、試験溶液をウィリアム培地E中で、上記の標準溶液を希釈することによって調製し、0.01~1%v/vの最終的な濃度とした。
INCI
本発明の毛髪ケア活性剤を含む毛髪ケア組成物は、以下のINCI(化粧品原料国際命名法)の表示によって記載され得る:
水、グリセリン/アセチルチロシン/メタ重亜硫酸ナトリウム/ラリックスエウロパエア木エキス/グリシン/塩化亜鉛/没食子酸エピガロカテキングルコシド、安息香酸ナトリウム、クエン酸、クエン酸ナトリウム、PPG-26ブテス-26、PEG-40水添ヒマシ油、アクア/水、フレグランス、ブチルフェニル、メチルプロピオナール、D-リモネン、アルファ-イソメチルイオノン。
培養および実験の設計
この研究において使用した細胞は、8歳のコーカサス人の男性ドナー(表現型III/IV)の皮膚外科手術(***)後に抽出した正常なヒトケラチノサイト(NHK)および正常ヒトメラノサイト(NHM)の初代培養であった。
ウェルを200’000NHK/9.6cm2および50’000NHM/9.6cm2で塗布し、24時間、補充培地(1:1 NHM補充培地/NHK補充培地)中で成長させた。培養の24時間後、細胞を3回、24時間処理した(条件:未処理;補充なしのNHM補充培地およびNHK補充培地の1:1混合物中の例1からの0.01%の試験溶液;および1μMラパマイシン)。
細胞ペレット中のメラニン含量について、並行してタンパク質アッセイを実施した。
細胞ペレットを、NaOH中に、60℃で、30分間取り込んだ。上澄中のメラニンの濃度およびメラニン合成の標準的な範囲を、対照として合成メラニンを使用して、405nmでのレクチャー(lecture)によって決定した。
細胞ペレット中の総タンパク質アッセイを、ビシンコニン酸に基づく比色方法によって並行して実施した。標準的な範囲を、BSA(ウシ血清アルブミン)を用いて調製した。
細胞ペレットを、NaOH中に、60℃で、30分間取り込んだ。投与を、試薬の混合物(ビシンコニン酸+CuSO4)をライセート(溶解された細胞ペレット)のアリコートへ添加することによって認識した。プレートを、37℃で30分間インキュベートし、次いでレクチャーを570nmで実施する。
メラニンおよびタンパク質の両方の用量について、生データ、すなわち夫々の標準のために得られたOD測定をグラフ上にプロットし、標準硬正曲線を得た。次いで、試料中の測定されたタンパク質またはメラニンの量/濃度を決定した。
各条件の定量的な値を平均化した。データを、量/濃度(μg/mL)として図示した。各条件について得られた結果をまた、100%に設定した未処理の対照に対して相対的に表現した:
%≪試料≫=(平均OD≪試料≫/平均OD≪対照≫)×100
総タンパク質量に対するメラニン濃度(μg/mL/タンパク質のmg)を得るために、各濃度の値(μg/mL)を各タンパク質データ(mg)でウェル毎に割った。次いで、各条件の値を平均化した。
結果の統計的に有意な効果を、スチューデントt検定によって決定した。
処理の72時間後、陽性参照(1μMラパマイシン)が共培養モデルにおいてメラニンの産生を有意に刺激することを見出し(+282%*)、モデルが堅牢であり、反応性がよかったことが確認された(図1)。
0.01%の例1からの試験溶液の存在によって、メラニン産生に関する効果を刺激することもまた実証された。実に、メラニンの分量は363%**増大した。
組織試料
顕微切断した毛包(HF)を、インフォームドコンセントおよび倫理承認の後、毛髪移植の外科手術を受けた健康的な女性ドナー(35歳;ドナー1)から得た後頭部の健康的なヒトの毛包ユニット皮膚から、または、男性ドナー(53歳;ドナー2)からの頭皮生検から得た(University of Muenster、n.2015-602-f-S)。
顕微切断したヒトの成長期VI頭皮HF(60および26HF/実験、夫々)を、37℃で、5%CO2を用いて、2mMのL-グルタミン(Gibco)、10ng/mL ヒドロコルチゾン(Sigma-Aldrich)、10μg/mL インスリン(Sigma-Aldrich)および1% ペニシリン/ストレプトマイシンミックス(Gibco)で補充したウィリアム培地Eの最小限の培地中で培養し、ウィリアムの完全培地を作成した(WCM;J Cell Sci.1990 Nov;97(Pt 3):463-71.Human hair growth in vitro.Philpott MP1,Green MR,Kealey T;Exp Dermatol.2010 Mar;19(3):305-12。
凍結試料をクリオスタット(CM3050S、Leica Bio Systems)を用いて分割し、6μm切片を採取した。HFを慎重に方向付けし、無傷の毛包切片および開いた真皮乳頭を得た。毛包の連続的な切片を採取し、スライドを-80℃で保管した。
HF色素沈着についてのマーカーとしてのメラニンを評価するために、これまでに記載したとおり、凍結スライドに対してマッソンフォンタナ(MF)染色を実施した(Exp Dermatol. 2010 Mar;19(3):305-12. Methods in hair research: how to objectively distinguish between anagen and catagen in human hair follicle organ culture. Kloepper JE1, Sugawara K, Al-Nuaimi Y, Gaspar E, van Beek N, Paus R)。要するに、メラニンを窒化銀(Caesar & Loretz、Hilden、Germany)のアンモニアをベースとした溶液を用いて染色し、5%水性チオ硫酸ナトリウム(Merck Millipore、Darmstadt、Germany)を用いて定着させた(developed)。
写真を、Keyence Biozero Microscope 8100および9000を用いて、元の倍率の200xで撮影した。
成長期VI毛包中のメラニン含量
オーベル線(Auber’s line)上の100×175または113×159ピクセルの3つのエリアを、ImageJ ソフトウェア (Rasband、W.S.、imageJ、U.S.National Institutes of Health、Bethesda、Maryand、USA、https://imagej.nih.gov/ij/)を使用して測定し、成長期HFにおけるドナー1または2についての色素沈着の強度を夫々査定した。
すべてのデータを、平均±SEMの平均または倍率変化として表現した。ガウス分布を、シャピロ・ウィルク正規性検定を用いて試験した。外れ値分析を、ドナー1および2についてのプールされたデータの両側グラブス検定によって実施した。有意な外れ値を除き、続いて、統計分析をスチューデントt検定を使用して実施し、GraphPad Prism 6 (GraphPad ソフトウェア)を使用して各検定群の結果をビヒクルと比較した。<0.05のp値を統計的に有意であると考えた(*)。
メラニン産生の誘導を、フォンタナマッソン染色定量を介して評価した。
図2および図3からわかるように、例1からの試験溶液はグレイ化毛包におけるメラニン生成を誘導することができ、メラニン産生を15%刺激した(p<0.05)。これらの結果によって、本発明の毛髪ケア活性剤は、メラノサイトにおいてだけではなく、グレイ化毛包においても、メラニン生成を刺激することができることが示されている。
皮膚の外植片の培養
試験を、固体および栄養価の高いマトリックス中に包理された全層皮膚生検である皮膚の外植片、NativeSkin(登録商標)に対して、その真皮表面を空気と接触させながら、実行した。皮膚生検を、局所的に適用した製剤のあらゆる側面の拡散を防止するマトリックス中に堅く包理する。
- ドナー1:未処理のための18の毛包、酸化処理のための19の毛包、およびCarbopol(登録商標)中1%の例1からの試験溶液を用いた酸化処理のための19の毛包を有する66歳のコーカサス人女性。
- ドナー2:未処理のための10の毛包、酸化処理のための10の毛包、およびCarbopol(登録商標)中1%の例1からの試験溶液を用いた酸化処理のための9の毛包を有する58歳のコーカサス人女性。
- ドナー3:未処理のための30の毛包、酸化処理のための30の毛包、およびCarbopol(登録商標)中1%の例1からの試験溶液を用いた酸化処理のための31の毛包を有する64歳のコーカサス人女性。
Carbopol(登録商標)は、アリルスクロースまたはアリルペンタエリスリトールで架橋されたアクリル酸からなる。
研究を、3人のドナーに対して行った(1条件毎に1外植片)。
酸化ストレスを、3日間、1日に1回、9mgのヒポキサンチン+10ユニットのキサンチンオキシダーゼを反応の1hの間添加することによって適用し、皮膚表面に遊離のO2 -ラジカルを産生した。
-外植片+酸化ストレス+プラセボ(Carbopol(登録商標)) 48時間
-外植片+酸化ストレス+1%の例1からの試験溶液 48時間
処理後、各外植片の真皮をマイクロ外科手術によって除去し、表皮細胞の遺伝子の定量に焦点をあてた。
Fluidigm(登録商標)のプロトコルに従うqPCRマイクロ流体技術(BMC Genomics. 2011 Mar 9;12:144. Quantitative miRNA expression analysis using fluidigm microfluidics dynamic arrays. Jang JS1, Simon VA, Feddersen RM, Rakhshan F, Schultz DA, Zschunke MA, Lingle WL, Kolbert CP, Jen J)を使用した。マイクロ流体技術は、ナノ技術の世界とq-PCRによる遺伝子分析とを掛け合わせることによって生じる。システムの小型化により、48の遺伝子に対する48の条件を分析することを目下可能にするチップの開発がもたらされた。
-毛髪生理
-抗酸化剤活性
-色素沈着
皮膚の外植片を、mRNA抽出のための特定の溶解溶液中に採取した。ライセートを、mRNAを精製するために、プレート上に移した。その後、逆転写システムを使用した。Fluidigm(登録商標)プロトコルに従って、48×48チップ調製のための特定の段階を開始した。前増幅ステップを、チップ中で使用したプライマーを用いて実行した。前増幅したcDNA/PCRミックスおよびプライマーを、チップ上に堆積させた。リアルタイムPCRを実行するために、混合物のブレンドをIFCコントローラによって行い、次いでチップをBioMark(商標)システム中に置いた。
酸化ストレスの影響を、トランスクリプトームレベルで調査した。ヒトの寿命の間に毛包が経験する酸化ストレスを模倣するために、頭皮をキサンチンおよびヒポキサンチンの混合物によって繰り返し刺激した。次いで、試験溶液を治療的処理として48時間適用した。
図4に提示した結果によって、酸化ストレス対照と比較した相対的な発現の違いが示されている。
実に、例1からの試験溶液は、AP3B1(+37.8%#)、CTNS(+130.4%***)、HPS5(+105.14**)、KRT5(+58.7%*)およびMYO5A(+55.07%**)などの、メラノソームの生合成および輸送に関与するタンパク質の発現を刺激することを見出した。
EDN1(+165.56%***)、MC1R(+72.64%#)、MITF(+80.51%*)およびPOMC(+130.51%**)などの、メラニン合成の調節に関与する主要遺伝子の発現を刺激することもまた見出した。
最終的に、例1からの試験溶液によって、HMOX1(+110.47%**)、GLRX(+37.47%*)、GSS(+39.70%**)、MGST1(+118.63%**)およびNRF2(+30.41%#)などの、抗酸化剤の応答に様々なレベルで参加する遺伝子の発現が誘導された。
顕微切断および毛幹伸長
成長期VIヒト毛包(HF)を、頭皮(ドナー:1962年生まれの女性)から切断した。使用するHFを、18時間の前培養後に選択した。以下のパラメータを、選択手順において評価した:成長率(>0.18mm/18時間)、形態(栄養不足の兆候がない)。
0日目に選択後、1日目から開始し、試験化合物を試験培地中に溶解し、HFを設定したエンドポイントまで培養した。各読み出すパラメータのために、12の毛包を処理毎に使用した。培養培地を、1日おきに新しくした。
選択後、HFを、ウィリアム培地E中に溶解した例1からの標準溶液を用いて1時間インキュベートした。その後、HFを、ROSと反応して蛍光となるプローブであるジクロロフルオレセインジアセタート(DCFH-DA)の存在下、30min間培養した。DCFH-DAインキュベーションに続き、HFをPBS中で洗い、クメンヒドロペルオキシドを用いて50μM(酸化的刺激)で1時間インキュベートした。実験段階の最後に、結果の画像獲得および切片内の蛍光の画像分析のために、HFを採取し、凍結固定し(cryo-fixed)、クライオミクロトーム(cryo-micro-tome)で切断した。各HFについてのスライドを、画像獲得および関連する分析によって加工した(すなわち、各処理についての12の画像)。
総メラノサイト定量を、以下の凍結切片(cryo-section)のNKI/beteb-DAPI二重免疫染色によって得た。NKI/beteb抗体 (Monosanによる#MON7006-1)によって、すべてのメラノサイト中に存在する(前)メラノソームの抗原(すなわち、活性メラノサイトおよびメラノブラストの両方)が認識される。
免疫染色切片に対して、各毛包内のNKI-beteb陽性細胞の数を定量するために、画像分析を行った。得られた値を、考慮したエリアの細胞の総数と比べて正規化した。
画像分析を、ImageJソフトウェア(NIH、USA)を使用して実施した。すべての定量的なデータを、各処理についての平均スコア、平均の標準偏差および標準誤差の観点からまとめた。
群間の相違を、並べ替え検定を用いたone-way ANOVA、これに続き並べ替えを用いたテューキー検定およびt検定によって評価した。
50μMのクメンヒドロペルオキシドを用いた処理によって表された酸化ストレスによって、ROS産生の有意な増加が誘導された(未処理条件と比較して+256%**)。例1からの標準溶液を用いた前処理によって、ROS産生が53%と大幅に低減された。よって、低減は、活性剤の防止的効果を示すp<0.01と共に、クメンヒドロペルオキシドと比較して有意であった(図5)。
代表的な写真を、図6に提示する。
クメンヒドロペルオキシドによって、メラノサイトの数が未処理条件と比較して78%有意に低減されたことを確認した。例1からの標準溶液を用いて処理したとき、酸化ストレスによってメラノサイトのわずかな減少が誘導されたが、活性剤の存在によってその有害な効果は軽減された。実に、クメンヒドロペルオキシド対照と比較して、例1からの標準溶液によって、NKI/beteb陽性細胞のパーセンテージは+189%**増大され、毛包のメラノサイトおよびメラノブラスト保護に対する重要な影響が確認された(図7)。
代表的な写真を、図8に提示する。
導入
本発明の毛髪ケア活性剤を含有するローションのプラセボローションに対するin vivo有効性を実証するために、2つの臨床評価方法を実施した:
-採点方法を使用した白髪の割合の低減
-白髪の密度を計数する方法を使用した白髪の割合の低減(白髪の数/cm2)。
1%の本発明の毛髪ケア活性剤を含有する毛髪ローション:
水、グリセリン/アセチルチロシン/メタ重亜硫酸ナトリウム/ラリックスエウロパエア木エキス/グリシン/塩化亜鉛/没食子酸エピガロカテキングルコシド、安息香酸ナトリウム、クエン酸、クエン酸ナトリウム、PPG-26ブテス-26、PEG-40水添ヒマシ油、アクア/水、フレグランス、ブチルフェニル、メチルプロピオナール、D-リモネン、アルファ-イソメチルイオノン。
水、安息香酸ナトリウム、クエン酸、クエン酸ナトリウム、PPG-26ブテス-26PEG-40水添ヒマシ油、アクア/水、フレグランス、ブチルフェニル、メチルプロピオナール、D-リモネン、アルファ-イソメチルイオノン。
二重盲検の、個体間の、およびプラセボ対照の臨床評価を、白髪を有する44人のコーカサス人の男性ボランティア(18歳以上)に対して実施した。
22人のボランティアの第1群によってプラセボ毛髪ローションが試験され、22人のボランティアの第2群によって1%の本発明の毛髪ケア活性剤を含有する毛髪ローションが試験された。
処理を、1日に1回、4ヶ月間、頭皮に対するマッサージによって適用した。
頭皮の写真を、試験の初日および製品の4ヶ月の毎日の適用後に、システムCanfield Epiflash(登録商標)と組み合わせたNikon D7100を使用して撮影した。毛髪を分けるエリアは、白髪の局在化に従って決定する。盲検採点を実施して、写真における白髪の割合を評価した。
白髪の割合が目に見えて低減し、最良の応答について-50%の白髪の低減を伴った(図9)。
処理の前に、1cm2の頭皮ゾーンを剃った2日後に、画像を撮影した。使用した器械は、コンタクトレンズを備えたシステムCanfield Epiflash(登録商標)を組み合わせたNikon D7100デジタルカメラであった。コンタクトレンズによって、頭皮の上の毛髪の平坦化が可能になる。
次いで、白髪の計数を、画像上で画定された0.7cm2試験エリア(1×0.7cm)上でPhotoshopの特定のツールを用いて行った。ゾーン内の白色根を有するすべての毛髪を計数した。
研究したエリアのサイズおよび位置は、すべての評価時について同じであった。オフセットの場合、試験エリアの位置を調整した。
結果を、以下の表に示す:
4ヶ月後、白髪の密度は目に見えて低減し、最良の応答について、cm2毎に-55.7の白髪の減少を伴った(図10)。
導入
この研究の目的は、タキシフォリングルコシドおよびN-アセチルチロシンを含む本発明の毛髪ケア活性剤の効果と、L-チロシン(陽性参照)の効果とを、タキシフォリングルコシドの効果とを、およびタキシフォリングルコシドおよびL-チロシンの混合物の効果とを比較することであった。この比較のために使用したモデルは、正常ヒト表皮ケラチノサイト(NHEK)および正常ヒトメラノサイト(NHM)の共培養であった。
細胞培養を、ヒト皮膚生検から単離した初代細胞を用いて実際に行った。
正常なヒトケラチノサイト(NHK)を、コラーゲンIで前被覆した6-ウェルプレートにおいて、ウェル毎に60,000細胞で播種した。4時間後に、正常ヒトメラノサイト(NHM)を、同じ6-ウェルプレートにおいて、ウェル毎に60,000細胞で播種した。細胞を、完全培地(HKGS=Human Kerationcyte Growth Supplementで補充したEpliLife(登録商標))中で48時間インキュベートした。
-450μg/mLのL-チロシン(Sigma)
-0.13μg/mLのタキシフォリングルコシド
-0.13μg/mLのタキシフォリングルコシド+15μg/mLのN-アセチルチロシン(例1と同様)
-0.13μg/mLのタキシフォリングルコシド+15μg/mLのL-チロシン(Sigma)
組成物を、補充なしの基礎培地(EpiLife(登録商標))中で希釈した。2日毎に、処理を新しくした。
処置の5日後、細胞をPBSを用いて洗った。次いで、各ウェルにおいて、200μLの0.5N NaOH溶液を添加した。細胞ライセートを、セキュアキャップを備えた1.5mLマイクロ管中に採取した。並行して、標準的な範囲のメラニンを調製した(100~0μg/mL)。試料および標準的な範囲のマイクロ管を、1時間、80℃でドライバス中で加熱した。加熱後、100μLの各試料を、96-ウェルプレートへ移した。
光学密度を405nmで測定し、メラニン含量を決定した。
すべての実験を、少なくとも3回行った。
シャビロ・ウィルク正規性検定を実際に行って、データがガウス法則に則するかどうか評価した。
有意でない場合、データを統計的なパラメトリック検定を用いて評価した(ANOVA、これに続きダネットの多重比較検定)。
有意でない場合、データを統計的なノンパラメトリック検定を用いて評価した(クラスカル・ウォリスのANOVA、これに続きマン・ホイットニーのU検定)。
結果を、図11に示す。
陽性参照(450μg/mlのL-チロシン)は、未処理条件と比較して、メラニンの合成を35%(p<0.001)誘導した。これにより、共培養モデルはメラニンを産生することに対応し、メラニンを産生することができることが確認される。
しかしながら、タキシフォリングルコシド単独は、メラニンの合成を誘導することができなかった。
タキシフォリングルコシドおよびN-アセチルチロシンの組み合わせを用いた処理によって、未処理条件と比較して、メラニン含量における+18%(p<0.001)の増大がもたらされた。
タキシフォリングルコシドとN-アセチルチロシンとを用いた刺激およびタキシフォリングルコシドとL-チロシンとを用いた刺激の間の有意差もまた存在する。
Claims (11)
- タキシフォリングルコシドおよびN-アセチルチロシンを含む、毛髪ケア活性剤。
- タキシフォリングルコシドの少なくとも一部が、タキシフォリンアルファ-D-グルコシドである、請求項1に記載の毛髪ケア活性剤。
- タキシフォリンをさらに含む、請求項1または2に記載の毛髪ケア活性剤。
- タキシフォリングルコシド対タキシフォリンの重量比が、90:10~40:60、より好ましくは70:30~50:50、および最も好ましくは約60:40である、請求項3に記載の毛髪ケア活性剤。
- グリシンおよび/または没食子酸エピガロカテキンおよび/または没食子酸エピガロカテキングルコシドをさらに含む、請求項1~4のいずれか一項に記載の毛髪ケア活性剤。
- 0.01~0.50wt%、より好ましくは0.10~0.25wt%、および最も好ましくは0.08~0.12wt%のタキシフォリングルコシドを含む、請求項1~5のいずれか一項に記載の毛髪ケア活性剤。
- 1.0~30wt%、より好ましくは10~20wt%、および最も好ましくは13.5~16.5wt%のN-アセチルチロシンを含む、請求項1~6のいずれか一項に記載の毛髪ケア活性剤。
- タキシフォリングルコシド対N-アセチルチロシンの重量比が、1:5’100~1:2、より好ましくは1:340~1:70、および最も好ましくは1:200~1:150である、請求項1~7のいずれか一項に記載の毛髪ケア活性剤。
- 請求項1~8のいずれか一項に記載の毛髪ケア活性剤および好適な担体を含む、毛髪ケア組成物。
- 請求項1~9のいずれか一項に記載の毛髪ケア活性剤の、毛包幹細胞の増殖を刺激するための、活性メラノサイト産生を刺激するための、メラニン生成を刺激するための、毛髪の色素沈着の回復を刺激するための、グレイヘアにおけるメラニン産生を再活性化させるための、毛包における抗酸化剤の防御作用を活性化させるための、酸化ストレスに対するメラノサイトを保護するための、毛髪の再色素沈着のための、および/または、白髪またはグレイヘアの割合および/または密度を低減させるための、非治療的使用。
- 毛包幹細胞の増殖を刺激する、活性メラノサイト産生を刺激する、メラニン生成を刺激する、毛髪の色素沈着の回復を刺激する、グレイヘアにおけるメラニン産生を再活性化させる、毛包における抗酸化剤の防御作用を活性化させる、酸化ストレスに対するメラノサイトを保護する、毛髪の再色素沈着の、および/または、白髪またはグレイヘアの割合および/または密度を低減させる方法であって、該方法が、請求項1~8のいずれか一項に記載の毛髪ケア活性剤をヒトの毛髪へ局所的に適用するステップを含む、前記方法。
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