JP2022506341A - 処置、予防、および診断の方法 - Google Patents

処置、予防、および診断の方法 Download PDF

Info

Publication number
JP2022506341A
JP2022506341A JP2021523659A JP2021523659A JP2022506341A JP 2022506341 A JP2022506341 A JP 2022506341A JP 2021523659 A JP2021523659 A JP 2021523659A JP 2021523659 A JP2021523659 A JP 2021523659A JP 2022506341 A JP2022506341 A JP 2022506341A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
sting
cgas
inhibitor
tdp
alkyl
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2021523659A
Other languages
English (en)
Inventor
セス マスターズ
チェン－ション ユ
Original Assignee
ザ ウォルター アンド イライザ ホール インスティテュート オブ メディカル リサーチ
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from AU2018904175A external-priority patent/AU2018904175A0/en
Application filed by ザ ウォルター アンド イライザ ホール インスティテュート オブ メディカル リサーチ filed Critical ザ ウォルター アンド イライザ ホール インスティテュート オブ メディカル リサーチ
Publication of JP2022506341A publication Critical patent/JP2022506341A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A61K31/4184—1,3-Diazoles condensed with carbocyclic rings, e.g. benzimidazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7084—Compounds having two nucleosides or nucleotides, e.g. nicotinamide-adenine dinucleotide, flavine-adenine dinucleotide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/502—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing non-proliferative effects
    • G01N33/5041—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing non-proliferative effects involving analysis of members of signalling pathways
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6863—Cytokines, i.e. immune system proteins modifying a biological response such as cell growth proliferation or differentiation, e.g. TNF, CNF, GM-CSF, lymphotoxin, MIF or their receptors
    • G01N33/6866—Interferon
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G01N33/6896—Neurological disorders, e.g. Alzheimer's disease
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/52—Assays involving cytokines
    • G01N2333/525—Tumor necrosis factor [TNF]
    • G01N2333/5255—Lymphotoxin [LT]
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/28—Neurological disorders
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本発明は、筋萎縮性側索硬化症(ALS)および前頭側頭葉変性症(FTLD)のようなTDP-43タンパク質症を処置または予防するための方法に関する。本発明はまた、TDP-43タンパク質症を診断する方法に関する。

Description

発明の分野
本発明は、筋萎縮性側索硬化症(ALS)および前頭側頭葉変性症(FTLD)のようなTDP-43タンパク質症を処置または予防するための方法に関する。本発明はまた、TDP-43タンパク質症を診断するための方法に関する。
発明の背景
トランス活性化応答DNA結合タンパク質43 kDa(TDP-43)は、選択的スプライシングと輸送と翻訳のためのmRNA安定性とを含む、転写後プロセシングを取りまとめる上で必須の役割を果たす広く発現するRNA結合タンパク質である(Lee et al., 2012)。細胞ストレスおよび細胞毒性のいくつかの非特異的機構は、過剰発現しており誤って局在化され（mislocalised）かつ凝集されたTDP-43によってトリガーされて、疾患をもたらすと考えられている。これは、凝集されたTDP-43がアポトーシス(Rutherford et al., 2008; Sreedharan et al., 2008)およびERストレス(Walker et al., 2013)を誘導するという報告を含む。TDP-43の凝集および／または誤った局在化と関連する神経変性疾患は、「TDP-43タンパク質症」として公知である。
ALSおよび前頭側頭葉変性症(FTLD)のような疾患におけるTDP-43媒介神経変性は、NF-κB関連サイトカイン発現(Swarup et al., 2011)、ならびに上昇したI型インターフェロン(IFN)産生(Wang et al., 2011)のような、過剰な炎症反応(hyperinflammatory response)と関連付けられた。興味深いことに、これらの炎症シグナルは、疾患のマウスモデル中の明らかな症状に先行した(Wang et al., 2011)。これらの兆候にもかかわらず、どのようにTDP-43が神経炎症を引き起こすかに関する分子情報は入手不可能のままであり、TDP-43タンパク質症の処置および予防についての治療選択肢を限定する。さらに、TDP-43タンパク質症の処置についての既存の療法は大部分が無効である。
従って、TDP-43タンパク質症の処置、予防、および診断のための新しい方法についての必要性がある。
本発明者らは、TDP-43タンパク質症において神経変性を駆動する原因である、以前は不明であった自然免疫シグナル伝達経路を同定した。具体的には、本発明者らは、驚くべきことに、cGAS-STING経路が、TDP-43によってミトコンドリアから放出される細胞質ゾルmtDNAに応答して活性化されることを見出した。本発明者らはまた、TDP-43タンパク質症の症状および影響は、cGAS-STING経路を阻害することによって減少させることができることを見出した。
従って、一局面において、本発明は、対象におけるTDP-43タンパク質症を処置または予防する方法を提供し、該方法は、cGAS-STING経路阻害物質を対象へ投与する工程を含む。
本発明はまた、対象におけるTDP-43タンパク質症の処置または予防のための医薬の製造におけるcGAS-STING経路阻害物質の使用を提供する。
本発明はまた、対象におけるTDP-43タンパク質症の処置または予防において使用するためのcGAS-STING経路阻害物質を提供する。
一態様において、TDP-43タンパク質症は神経変性疾患である。本発明の方法を使用して処置または予防され得るTDP-43タンパク質症の例としては、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、運動ニューロン疾患(MND)、前頭側頭型認知症(FTD)、前頭側頭葉変性症(FTLD)、アルツハイマー病、パーキンソン病、および封入体筋炎(IBM)が挙げられるが、これらに限定されない。
一態様において、TDP-43タンパク質症はALSである。一態様において、TDP-43タンパク質症はFTLDである。
一態様において、ALSは孤発性ALSである。従って、そのような態様において、ALSは家族から遺伝しない。他の態様において、ALSは家族性ALSであり、即ち、それは遺伝性遺伝子突然変異によって引き起こされる。
一態様において、FTLDはユビキチン陽性封入体を伴うFTLD(FTLD-U)である。FTLD-Uは、典型的に、ユビキチンおよびTDP-43陽性、タウ陰性、FUS陰性封入体を特徴とする。
一態様において、cGAS-STING経路阻害物質はSTING阻害物質である。STING阻害物質は、例えば、STINGもしくはSTINGをコードする核酸(例えば、DNAもしくはRNA)と直接相互作用することによる、直接阻害物質であり得るか、または、別の分子と相互作用することによってSTING活性を減少させる間接阻害物質であり得る。
一態様において、STING阻害物質はSTINGへ結合する。例えば、STING阻害物質は、STINGへ結合し、STINGへの他の分子の結合を立体的に妨害し、それによってSTING活性を阻害し得る。従って、一態様において、STING阻害物質は、STINGへのcGAMP結合を競合的に阻害する。一態様において、STING阻害物質はSTINGへ共有結合する。一態様において、STING阻害物質はSTINGのCys91へ共有結合する。
一態様において、STING阻害物質は環状ジヌクレオチドである。STINGは、環状ジヌクレオチドであるcGAMPへ結合すると、活性化される。従って、環状ジヌクレオチドSTING阻害物質はcGAMP類似体として作用し得、これは、STINGがTPK1を活性化するのを妨げながら、STING上のcGAMP結合部位へ結合しこれを占領する。一態様において、環状ジヌクレオチドは環状プリンジヌクレオチドである。一態様において、STING阻害物質は、WO2017093933に記載される環状プリンジヌクレオチドである。
一態様において、STING阻害物質はニトロフラン誘導体である。一態様において、STING阻害物質は、STINGのパルミトイル化誘導クラスタリングを遮断する。
一態様において、STING阻害物質は、式：
Figure 2022506341000001
の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、互変異性体、もしくはプロドラッグである。
いくつかの態様において、STING阻害物質は、H-151、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、互変異性体、もしくはプロドラッグである。
一態様において、STING阻害物質は、ジクロフェナク、R(-)-2,10,11-トリヒドロキシアポルフィン臭化水素酸塩、ジプロピルドーパミン臭化水素酸塩、(±)-trans-U-50488、2,2'-ビピリジン、SP600125、メシル酸ドキサゾシン、ミトキサントロン、MRS 2159、ネマジピン-A、(±)-PPHT塩酸塩、SMER28、キニーネ、またはキスカル酸である。
一態様において、STING阻害物質はSTINGの発現を減少させる。例えば、STING阻害物質は、STING mRNAレベルを減少させることによって、例えばRNA干渉によって、STINGの発現を減少させ得る。従って、一態様において、STING阻害物質はsiRNAである。
一態様において、cGAS-STING経路阻害物質はcGAS阻害物質である。cGAS阻害物質は、例えば、cGASまたはcGASをコードする核酸(例えば、DNAもしくはRNA)と直接相互作用することによる、直接阻害物質であり得るか、または、別の分子と相互作用することによってcGAS活性を減少させる間接阻害物質であり得る。
一態様において、cGAS阻害物質はcGASへ結合する。例えば、cGAS阻害物質は、cGASへ結合し、cGASへの他の分子の結合を立体的に妨害し、それによってcGAS活性を阻害し得る。いくつかの態様において、cGAS阻害物質は、DNAへのcGAS結合を競合的に阻害する。
一態様において、cGAS阻害物質はcGASの活性部位へ結合する。一態様において、cGAS阻害物質はcGAMP触媒作用を阻害する。例えば、cGAS阻害物質は、活性部位へのATPおよびGTPのアクセスを遮断し得るか、またはそうでなければ、cGASの活性部位中の触媒残基がcGAMPへのATPおよびGTPの変換を触媒するのを妨げ得る。一態様において、cGAS阻害物質は、cGASのArg364および／またはTyr421と相互作用する。
一態様において、cGAS阻害物質は、式：
Figure 2022506341000002
の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、互変異性体、もしくはプロドラッグである。
一態様において、cGAS阻害物質は、RU.521、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、互変異性体、もしくはプロドラッグである。
一態様において、cGAS阻害物質はcGASの発現を減少させる。例えば、cGAS阻害物質は、cGAS mRNAレベルを減少させることによって、例えばRNA干渉によって、cGASの発現を減少させ得る。従って、一態様において、cGAS阻害物質はsiRNAである。
一態様において、cGAS-STING経路阻害物質はcGAMP阻害物質である。cGAMP阻害物質は、例えば、cGAMPと直接相互作用することによる、直接阻害物質であり得るか、または、別の分子と相互作用することによってcGAMP媒介活性を減少させる間接阻害物質であり得る。
一態様において、cGAMP阻害物質はcGAMPへ結合する。例えば、cGAMP阻害物質は、cGAMPへ結合し、cGAMPへの他の分子の結合を立体的に妨害し得る。いくつかの態様において、cGAMP阻害物質は、cGAMPへ結合し、それによってcGAMPがSTINGへ結合しそしてSTINGを活性化するのを妨げる。一態様において、cGAMP阻害物質は、cGAMPへ結合する抗原結合部位を含むポリペプチドである。
一態様において、対象はヒトである。一態様において、対象は非ヒト哺乳動物である。
驚くべきことに本発明者らが発見したとおり、TDP-43媒介mtDNA放出によるcGAS-STING経路の活性化は、NF-κB関連サイトカインおよびI型インターフェロンの発現をもたらし、これは次に神経炎症を引き起こし、それによって神経変性症状をもたらす。従って、一態様において、cGAS-STING経路阻害物質を、TNFαおよび／またはI型インターフェロン発現の増大を減少させるかまたは阻止するために十分な量で投与する。
別の局面において、本発明は、TDP-43タンパク質症の疑いがある神経変性疾患を患っている対象におけるcGAS-STING経路阻害物質による処置に対する応答性の見込みを判定するための方法を提供し、該方法は、対象由来のサンプルにおいてcGAS-STING経路の活性化を検出する工程を含み、ここで、cGAS-STING経路の活性化が処置に対する応答性のより高い見込みを示す。
別の局面において、本発明は、対象をTDP-43タンパク質症と診断する方法を提供し、該方法は、対象由来のサンプルにおいてcGAS-STING経路の活性化を検出する工程を含む。
一態様において、cGAS-STING経路の活性化を検出する工程は、対象由来のサンプル中のcGAMPのレベルを測定することを含む。一態様において、ELISAを使用してサンプル中のcGAMPのレベルを測定する。
一態様において、サンプルは血液サンプルである。別の態様において、サンプルは尿サンプルである。
別の局面において、本発明は、(a)本明細書に記載されるようなcGAS-STING経路阻害物質を、任意で、薬学的に許容される担体または希釈剤中に含む、容器と；(b)対象におけるTDP-43タンパク質症を処置または予防するための指示を含む添付文書とを含む、キットを提供する。
本明細書中の任意の態様が、特に指定されない限り、必要な変更を加えて任意の他の態様に適用されると解釈されるものとする。例えば、当業者が理解するように、本発明の方法について上記に概説された阻害物質および疾患の例は、本発明の、使用、使用のためのcGAS-STING経路阻害物質、およびキットに等しく適用される。
本発明は、例示目的のためにのみ意図される、本明細書に記載される具体的な態様によって範囲が限定されない。機能的に等価の生成物、組成物、および方法は、明らかに、本明細書に記載されるような、本発明の範囲内にある。
本明細書全体にわたって、特に指定されない限りまたは文脈が要求しない限り、単一の工程、組成物、工程の群、または組成物の群への言及は、1つおよび複数の(即ち、1つまたは複数の)それらの工程、組成物、工程の群または組成物の群を包含すると解釈されるものとする。
野生型(WT)TDP-43またはALS突然変異(Q331K)をコードするプラスミドを、異なる自然免疫センサーが遺伝的に欠損しているマウス胎仔線維芽細胞(MEF)において一過性に過剰発現させた。Ifnb1およびTnfの産生を48時間後にqPCRによって測定し、Ifnb1およびTnfの産生は、cGASまたはSTINGが遺伝的に欠損している場合にのみ除去された。 誘導性TDP-43構築物(WTまたはQ331K)を、WTまたはSTING CRISPR KO Thp1細胞中へ形質導入した。ドキシサイクリン誘導から72時間後、IFNB1およびTNFについてのqPCRを行った。 図2におけるようなTDP-43過剰発現Thp1細胞を、IFNおよびNF-κBに関連している炎症シグナル伝達経路のウエスタンブロット解析へ供した。 cGAS阻害物質RU.521およびSTING阻害物質H-151は、図2において使用されたTDP-43過剰発現Thp1細胞からのIFNB1およびTNF誘導を妨げる。 TDP-43-EGFP (WT、A315TまたはQ331K)およびFlag-cGASを、293T細胞において一過性に過剰発現させ、続いてFlag免疫沈降物（Flag-immunoprecipitant）からDNAを抽出した。直接的qPCRは、Flag-cGASへ結合された、核起源のDNA(NC1およびNC2)ではなく、mtDNA (MT2およびMT3)の存在を明らかにする。 臭化エチジウム中の2週間処置にわたるThp1細胞からのミトコンドリアDNA枯渇の代表的なqPCR分析。未処理細胞に対する枯渇を示すために、ミトコンドリア遺伝子(MT2およびMT3)を核のそれ(NC1)に対して正規化した。 誘導性TDP-43 (WTまたはQ331K)を有するヒトThp1細胞から、EtBrを使用してmtDNAを枯渇させた(ρ0)。TDP-43誘導から72時間後、IFNB1およびTNFについてのqPCRを行った。 図7におけるようなTDP-43過剰発現Thp1細胞を、IFNおよびNF-κBに関連している炎症シグナル伝達経路のウエスタンブロット解析へ供した。 2’3’-c-di-AM(PS)2(Rp, Rp) (20μM)で4時間またはポリ(dA:dT) (1μg/ml)およびht-DNA (2μg/ml)で6時間の刺激に応答した、未処理およびρ0 thp-1細胞中の、qPCRによって測定された、IFNB1発現。 超解像共焦点顕微鏡法の定量化は、TDP-43(FLAGタグ化)が、ミトコンドリア(TOM20)から細胞質中へのDNA (抗DNA)の再配置を誘導したことを明らかにする。 WTまたはAGKノックアウト293T中のFlagタグ化TDP-43 (WTまたはQ331K)を溶解し、Flag-cGAS免疫沈降させ、ここからDNAを抽出し、qPCRによって直接増幅し、核起源のDNA(NC1、NC2およびNC3)ではなく、mtDNA(MT1、MT2およびMT3)の存在が明らかにされた。 ドキシサイクリン処理から48時間後のTDP-43過剰発現MEF中の切断カスパーゼ3の代表的なウエスタンブロット。 野生型TDP-43(WT)またはALS突然変異(Q331K)をコードするプラスミドを、BaxおよびBakが遺伝的に欠損しているマウス胎仔線維芽細胞(MEF)において一過性に過剰発現させた。Ifnb1およびTnfの産生を48時間後にqPCRによって測定した。 安定誘導性TDP-43(WTまたはQ331K)を有するヒトThp1細胞を、誘導から72時間後にmitoSOX redで処理し、FACS解析へ供した(MFI：平均蛍光強度)。 超解像共焦点顕微鏡法の定量化は、ミトコンドリア(TOM20)から細胞質中へのTDP-43(FLAGタグ化)媒介DNA(抗DNA)再配置が、MEFにおけるmPTPの阻害(CsA、25μM)によって有意に減少したことを明らかにする。 293T細胞におけるmPTPの阻害(CsA、25μM)は、FLAG-cGAS溶出液上におけるmtDNA蓄積を妨げる。 MEFにおけるPpif(CypDをコードする)のCRISPR媒介遺伝子欠失は、FLAG-cGAS溶出液上におけるmtDNA蓄積を妨げる。 293T細胞におけるmPTPの阻害(CsA、25μM)は、TDP-43によって誘導されるIfnb1遺伝子発現を妨げる。 MEFにおけるPpif(CypDをコードする)のCRISPR媒介遺伝子欠失は、TDP-43によって誘導されるIfnb1遺伝子発現を妨げる。 実験エンドポイントでの、WTマウス、およびヒトTDP-43突然変異対立遺伝子A315Tについてトランスジェニックであるマウス(n=2～5)の皮質、脊髄および血清中のcGAMPの定量化。 TDP-43突然変異マウス(n=17)は、約150日で致死的である進行性神経変性疾患を発症する。STINGのヘテロ接合(n=9)またはホモ接合(n=12)喪失は、寿命を有意に延長させる。 120日で、TDP-43突然変異マウスは、有意に低下した歩行障害を示し(n=6～21)、これは、STINGの遺伝子欠失によって大いに正される。 120日で、TDP-43突然変異マウスは、ロータロッド試験において有意に減少した落下するまでの時間を示し(n=3～8)、これは、STINGの遺伝子欠失によって大いに正される。 オープンフィールド(OF)試験におけるマウス運動を、ビデオ撮影し、ImageJおよびMouseMoveによって解析した。a) 130日での、TDP-43T/+STING+/+ (n=8)、TDP-43T/+STING+/- (n=5)およびTDP-43T/+STING-/- (n=8)からの代表的な雄性マウスの累積的軌跡。b) STINGのヘテロ接合型およびホモ接合型欠失は、10分間のOF試験中の移動距離(m)およびc)それらの小数点以下の静止時間（fractional time spent stationary）の点から、WT対照(n=12)と比べて、ALSのTDP-43T/+モデルにおいて運動協調性を有意に回復させる。データは、4つの独立した神経学的行動試験からの平均値±SEMである。WTマウスに対して一元配置分散分析を使用して、P値を計算した。 皮質および脊髄中の炎症性遺伝子発現のqPCRは、IFNおよびNF-κB依存性サイトカインの増大したレベルが、STINGの遺伝子欠失に起因して大いに減少することを明らかにする(n=4～6)。 WTおよびSTINGの遺伝子欠失有りまたは無しのTDP-43突然変異マウスの脳を通っての冠状断面の代表的なニッスル小体染色(クレシルバイオレット)。 図26中の茶色のバーによってマークされた皮質層Vニューロンの定量化。 ALS(n=16)またはMS(n=12)を有する患者の死後の脊髄サンプルからのELISAによるcGAMPの定量化。 疾患症状が120日齢のTDP-43突然変異マウスにおいて最初に現れたときに、H-151 (3.75 mM)を4週間、1日おきにi.p.投与した。これは、ロータロッド試験において落下するまでの時間を有意に改善した(n=5)。データは平均値+/- SDであり、対応のないt-検定によって解析される。**P<0.01。 皮質および脊髄中の炎症性遺伝子発現のqPCRは、IFNおよびNF-kB依存性サイトカインの増大したレベルが、H-151を使用したSTINGの阻害に起因して大いに減少することを明らかにする(n=2～3)。120日齢で、4週間、1日おきにH-151 (3.75 mM)でi.p.処置されたTDP-43突然変異マウス。 iPSC由来運動ニューロンにおけるフローサイトメトリー(FACS)によるミトコンドリア不安定化マーカーa) mitoSOX redおよびb)テトラメチルローダミンメチルエステル(TMRM)の定量化。これらは、ALS患者iPSC由来運動ニューロンにおけるROSのアップレギュレーションおよび膜電位(mΔψ)の低下を実証している。データは、3つの独立した実験からプールされ、そして健常対照およびALS患者のiPSC-MN株間で対応のないt-検定を使用して解析された、平均値+/- SEMである；**P<0.01。 ROS阻害物質MitoQおよびMitoTEMPO (0.1～1μM)は、健常対照およびTDP-43中に突然変異を有するALS患者由来のヒトiPSC由来運動ニューロンにおいてIFNB1およびTNF遺伝子誘導を妨げる。DMSOを溶媒対照(0)として使用した。データは、3つの独立した実験からプールされ、そして健常対照およびALS患者のiPSC-MN株間で対応のないt-検定を使用して解析された、平均値+/- SEMである；*P<0.05。 cGAS阻害物質RU.521(10μM)およびSTING阻害物質H-151(1μM)は、健常対照およびTDP-43中に突然変異を有するALS患者由来のヒトiPSC由来運動ニューロンにおいてIFNB1およびTNF遺伝子誘導を妨げる。DMSOを溶媒対照として使用した。データは、4つの独立した実験からプールされ、そして健常対照およびALS患者のiPSC-MN株間で対応のないt-検定を使用して解析された、平均値+/- SEMである；**P<0.01。 STINGの阻害はALS関連細胞傷害性を軽減する。H-151(1μM)または溶媒対照としてのDMSOによる4週間処理後の健常対照およびALS患者iPSC由来運動ニューロンの、a)明視野顕微鏡イメージングおよびb)LDH細胞傷害性アッセイ。データは、3つの独立した実験からの、そして対応のないt-検定を使用して解析された、平均値+/- SEMである；**P<0.01。スケール：50μm。 iPSC由来運動ニューロンの細胞溶解物からのELISAによるcGAMPの定量化は、TDP-43中に突然変異を有するALS患者における活性cGAS/STINGシグナル伝達およびバイオマーカーとしてのcGAMPについての可能性を示す。データは、5つの独立した実験からプールされ、そして健常対照およびALS患者のiPSC-MN株間で対応のないt-検定を使用して解析された、平均値+/- SEMである；***P<0.001。
発明の詳細な説明
一般的技法および定義
特に定義されない限り、本明細書において使用される全ての専門用語および科学用語は、当技術分野における(例えば、神経学、免疫学、分子遺伝学、神経変性疾患の処置、薬理学、タンパク質化学、および生化学における)当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有すると解釈されるものとする。
別段の指示がない限り、本発明において利用される技法は、当業者に周知の、標準手順である。そのような技法は、J. Perbal, A Practical Guide to Molecular Cloning, John Wiley and Sons (1984)、J. Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbour Laboratory Press (1989)、T.A. Brown (editor), Essential Molecular Biology: A Practical Approach, Volumes 1 and 2, IRL Press (1991)、D.M. Glover and B.D. Hames (editors), DNA Cloning: A Practical Approach, Volumes 1-4, IRL Press (1995および1996)、およびF.M. Ausubel et al., (editors), Current Protocols in Molecular Biology, Greene Pub. Associates and Wiley-Interscience (1988、現在までの全ての更新を含む)、Ed Harlow and David Lane (editors) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbour Laboratory, (1988)、およびJ.E. Coligan et al., (editors) Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons (現在までの全ての更新を含む)のような出典において文献全体にわたって記載および説明されている。
本明細書において使用される場合、約という用語は、それとは反対であるように示されない限り、指定値の+/- 10%、より好ましくは +/- 5%を指す。
本明細書全体にわたって、「含む（comprise）」、または「含む（comprises）」もしくは「含む（comprising）」という単語のような変化形は、記載される要素、整数もしくは工程、または要素、整数もしくは工程の群の包含を暗示するように理解されるが、任意の他の要素、整数もしくは工程、または要素、整数もしくは工程の群の除外を暗示するようには理解されない。
本出願において使用される場合、「または」は、排他的な「または」という用語よりはむしろ包含的な「または」を意味するように意図される。即ち、特に指定のない限り、または文脈から明らかでない限り、「XはAまたはBを用いる」は、自然の包含的な順列のいずれかを意味するように意図される。即ち、XがAを用いる；XがBを用いる；またはXがAおよびBの両方を用いる場合、「XはAまたはBを用いる」は、前述の場合のいずれかの下で満たされる。さらに、AおよびBのうちの少なくとも1つなどは、一般に、AまたはBまたはAおよびBの両方を意味する。さらに、冠詞「1つの（a）」および「1つの（an）」は、本出願および添付の特許請求の範囲において使用される場合、単数形に向けられるように特に指定のない限りまたは文脈から明らかでない限り、「1つまたは複数」を意味すると一般に解釈され得る。
「cGAS」という用語は、細胞質ゾルDNAへ結合すると、cGAMP合成を触媒する、環状GMP-AMPシンターゼを指す。「STING」という用語は、「膜貫通タンパク質173」(TMEM173)および「MPYS/MITA/ERIS」としても公知である、インターフェロン遺伝子刺激因子(STING)を指す。「cGAMP」という用語は、本明細書において使用される場合、環状グアノシン一リン酸-アデノシン一リン酸を指す。cGAMPはまた、「環状GMP AMP」および「2′3′-cGAMP (環状[G(2’,5’)pA(3’,5’)p])」とも呼ばれる。
「cGAS-STING経路阻害物質」という用語は、本明細書において使用される場合、cGAS-STING経路によって媒介されるシグナル伝達活性を減少させることができる任意の作用物質を指す。cGAS-STING経路阻害物質は、例えば、cGAS-STING経路の成分と直接相互作用することによる、直接阻害物質であり得るか、または、別の分子と相互作用することによってcGAS-STINGシグナル伝達活性を減少させる間接阻害物質であり得る。例えば、cGAS-STING経路阻害物質は、I型インターフェロンおよびNF-κB関連サイトカインのような下流炎症性遺伝子の発現を減少させるように作用し得る。そのような阻害物質は、cGAS-STING経路の任意の1つまたは複数の成分に作用し得る。そのような阻害物質は、それらの標的への結合(例えば、STINGへのcGAMP結合)を阻害すること、触媒作用を遮断することによって(例えば、cGASの触媒部位へ結合することによって)、または、mRNAレベルを減少させることによってなどのcGASもしくはSTINGタンパク質の総レベルを減少させることによってを含むが、これらに限定されない、多数の異なる作用様式のいずれかによって、cGAS-STINGシグナル伝達活性を減少させるように作用し得る。cGAS-STING経路阻害物質の例としては、例えば、ポリヌクレオチド(例えば、siRNAおよびmRNA)、小分子、ペプチド、ポリペプチド(例えば抗体)、またはそれらの組み合わせが挙げられる。「cGAS」阻害物質は、cGASに特異的に作用するものである。同様に、「STING阻害物質」および「cGAMP阻害物質」は、それぞれ、STINGおよびcGAMPに特異的に作用する。いくつかの態様において、1つまたは複数のそのような阻害物質を組み合わせて使用する。
「競合的阻害物質」または「競合的に阻害する」という用語は、本明細書において使用される場合、阻害物質が、標的分子自体上(例えば、リガンド結合部位)または標的分子についてのリガンド上(例えば、結合パートナー分子)の機能的に重要な部位へ結合し、それによって標的分子とリガンドとの相互作用を立体的に妨害する、標的分子の阻害の様式を指す。競合的阻害物質は、それが競合する分子(例えば、リガンド)よりも高い標的分子についての親和性を有し得るが、必ずしも有するとは限らない。
「ポリペプチド」または「タンパク質」という用語は、本明細書において使用される場合、一般に約50アミノ酸長を超えるアミノ酸のポリマーを指す。
本明細書において使用される場合、「結合する」という用語は、2つの分子間の、例えば、阻害物質およびその標的間の、検出可能な相互作用に関する。本明細書において使用される場合、「特異的に結合する（specifically binds）」または「特異的に結合する（binds specifically）」という用語、またはそれらの変化形は、結合分子が、それが代替分子と会合するのと比べて、特定の分子と、より頻繁に、より迅速に、より長い期間かつ／またはより大きな親和性で、会合することを意味すると解釈されるものとする。一般に、しかし必ずしもではなく、結合への言及は特異的結合を意味し、各用語は、他の用語についての明確なサポートを提供すると理解されるものとする。
本明細書において使用される場合、「対象」という用語は任意の動物であり得る。一態様において、動物は脊椎動物である。例えば、動物は、哺乳類、鳥類、脊索動物、両生類または爬虫類であり得る。例示的な対象としては、ヒト、霊長動物、家畜(例えば、ヒツジ、ウシ、ニワトリ、ウマ、ロバ、ブタ)、伴侶動物(例えば、イヌ、ネコ)、実験室での実験動物(例えば、マウス、ウサギ、ラット、モルモット、ハムスター)、捕獲野生動物(例えば、キツネ、シカ)が挙げられるが、これらに限定されない。一態様において、哺乳動物はヒトである。
当業者が理解するように、本明細書に記載される阻害物質は治療有効量で投与される。「有効量」または「治療有効量」という用語は、本明細書において使用される場合、処置される疾患または状態の症状の1つまたは複数をある程度緩和するかまたはその悪化を防止する、投与されるcGAS-STING経路阻害物質の十分な量を指す。結果は、疾患の徴候、症状、または原因の減少またはその進行の防止、あるいは生物システムの任意の他の所望の変化であり得る。例えば、治療的使用についての「有効量」は、過度の有害な副作用無しに疾患症状の臨床的に有意な減少を提供するために必要とされるcGAS-STING経路阻害物質の量である。任意の個々の症例における適切な「有効量」は、用量漸増試験のような、技法を使用して決定され得る。「治療有効量」という用語は、例えば、予防有効量を含む。cGAS-STING経路阻害物質の「有効量」は、過度の有害な副作用無しに所望の薬理学的効果または治療的改善を達成するために有効な量である。「有効量（effect amount）」または「治療有効量」は、対象の年齢、体重、全身状態のいずれかの化合物の代謝の変動、処置される状態、処置される状態の重症度、および処方医師の判断に起因して、対象ごとに変動し得ることが理解される。ほんの一例として、治療有効量は、用量漸増臨床試験を含むがこれに限定されない、ルーチンな実験によって決定され得る。2つ以上の治療用物質が組み合わせて使用される場合、各治療用物質の「治療有効量」は、それだけで使用される場合に治療的に有効である治療用物質の量を指してもよく、または、1つまたは複数の追加の治療用物質とのその組み合わせのおかげで治療的に有効である減少した量を指してもよい。
「小分子」という用語は、本明細書において使用される場合、2000ダルトン未満の分子量を有する分子を指す。
「治療する」または「治療」という用語は、本明細書において使用される場合、(例えば、治療用物質を対象へ投与することによる)医療専門家による対象の直接的処置と、あるいは、(i)特許請求される方法に従って自己処置する(例えば、薬物を自己投与する)ように対象に指示する、または(ii)特許請求される方法に従って対象を処置するように第三者に指示する、任意の形態の、指示を提供することにより、少なくとも1人の当事者(例えば、医師、看護師、薬剤師、または医薬品販売員)によって、行われる、間接的処置との両方を指す。例えば、その進行を予防するまたは遅らせるために疾患の十分に初期の段階で治療薬を投与することによる、処置される疾患の予防または軽減もまた、「処置する」または「処置」という用語の意味内に包含される。
「予防する」または「予防」という用語は、本明細書において使用される場合、疾患またはその症状の発症を予防する目的で対象へ化合物を投与するプロセスを指す。これらの用語は、疾患の完全な予防および一時的な予防の両方を包含する。具体的には、本明細書に記載される方法は、TDP-43タンパク質症を完全に予防するために、またはTDP-43タンパク質症もしくはその症状の発症を遅らせるために使用することができる。そのような予防方法は、TDP-43タンパク質症の素因を有するが、TDP-43タンパク質症の症状をまだ患っていない対象について特に有用である。
「同時投与」または「組み合わせて投与する」という用語などは、本明細書において使用される場合、単一の対象への選択された治療用物質の投与を包含するように意図され、かつ、該物質を同じもしくは異なる投与経路によってまたは同じもしくは異なる時に投与する処置レジメンを含むように意図される。
TDP-43タンパク質症
本明細書に記載される方法は、対象におけるTDP-43タンパク質症を処置または予防することを含み、該方法は、cGAS-STING経路阻害物質を対象へ投与する工程を含む。
cGAS-STING経路は、細胞質ゾルDNAの存在を検出するように機能し、それに応答して、老化、または防御機構の活性化をもたらし得る炎症性遺伝子の発現をトリガーする、自然免疫系のコンポーネントである。DNAは、通常、細胞の核中に見られ、従って、細胞質ゾルへのDNAの局在化は、通常、腫瘍形成またはウイルス感染と関連する。
DNAに結合すると、cGASは、GTPおよびATPの反応をトリガーして、環状GMP-AMP(cGAMP)を形成する。cGAMPはSTINGへ結合し、これはTBK1によるIRF3のリン酸化をトリガーする。リン酸化IRF3は、次いで、NF-κB関連サイトカインおよびI型インターフェロンのような炎症性遺伝子の転写をトリガーし得る。cGAS-STING経路は、従って、細胞質ゾルDNAを検出しそして免疫応答を誘導するように作用する。
本発明者らは、驚くべきことに、過剰発現しており、突然変異した、かつ／または誤って局在化されたTDP-43が、細胞質ゾルへのミトコンドリアDNA(mtDNA)の放出を引き起こし、これは、次に、cGAS経路を活性化し、ALS、FTLD、アルツハイマー病、およびパーキンソン病のようなTDP-43タンパク質症における神経炎症をもたらすことを見出した。従って、初めて、本発明者らは、そのような疾患における神経変性の原因である、以前は不明であった自然免疫センサー経路を同定した。これは、TDP-43タンパク質症の処置および予防のための経路の治療的介入への新しい道を拓く。
理論によって拘束されないが、cGAS-STING経路を阻害することは、少なくとも部分的に、cGAS-STING媒介炎症によって、引き起こされる神経変性を減少させて、TDP-43タンパク質症における治療効果を達成すると考えられる。
本明細書において使用される場合、「TDP-43タンパク質症」という句は、ニューロンの細胞質中のTDP-43の誤った局在化および／または凝集と関連する疾患を指す。態様において、TDP-43タンパク質症は神経変性疾患である。例示的なTDP-43タンパク質症としては、運動ニューロン疾患(MND)、例えば、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、認知症、前頭側頭葉変性症(FTLD)、例えば、ユビキチン/TDP-43陽性かつタウ陰性封入体を伴う前頭側頭葉変性症(FTLD-U)、前頭側頭型認知症(FTD)、パーキンソン病(PD)、グアムパーキンソニズム-認知症、またはレヴィー小体関連疾患、例えば、アルツハイマー病(AD)が挙げられる。
一態様において、TDP-43タンパク質症はMNDである。本明細書において使用される場合、「MND」は、ALS、脊髄性筋萎縮症および球脊髄性筋萎縮症(SBMA、またはケネディ病)を含む、疾患のクラスを指す。
一態様において、TDP-43タンパク質症はALSである。ALSは、進行性筋萎縮および消耗、虚弱ならびに痙縮へ至る、上位および下位運動ニューロンの変性を特徴とする。ALS症例のおよそ10%は、スーパーオキシドジスムターゼ(SODl)、ダイナクチン(DCTNl)、および小胞輸送タンパク質(VAPB)のような遺伝子中の突然変異と関連する陽性家族歴を有する。そのような症例は「家族性ALS」と呼ばれる。残りの症例は「孤発性」ALSと呼ばれる。一態様において、ALSは孤発性ALSである。他の態様において、ALSは家族性ALSである。
一態様において、TDP-43タンパク質症はFTDである。一態様において、TDP-43タンパク質症はFTLDである。前頭側頭葉変性症(FTLD)は、FTDにおいて生じる病的過程であり、表在性前頭皮質および前側頭葉中のニューロンの変性を特徴とする。FTLDは2つの主なグループに分類され得る：タウオパシーとして公知のタウ陽性病態を伴う症例(FTLD-tau)、およびFTLD-Uとして公知のユビキチンおよびTDP-43封入体を伴う頻度がより高い症例。従って、いくつかの態様において、TDP-43タンパク質症はFTLD-Uである。
一態様において、TDP-43タンパク質症は封入体筋炎(IBM)である。IBMは、筋肉の炎症、虚弱、および萎縮(消耗)を特徴とする進行性筋肉障害である。それは炎症性ミオパシーの一種であり、典型的に成人期に、通常は50歳以降に発症する。
cGAS-STING経路阻害物質
cGAS-STING経路阻害は、本明細書において使用される場合、正味のcGASもしくはSTING発現、正味のcGASもしくはSTINGタンパク質レベル、またはcGAS-STINGシグナル伝達活性のうちの1つまたは複数を減少させること(例えば、炎症性サイトカインの発現の阻害)を指す。cGAS-STING経路の阻害は、その非存在下でのcGAS-STING活性レベルと比べての、所定の用量のcGAS-STING経路阻害物質の存在下での、またはこれに起因するcGAS-STING活性のレベルの少なくとも約10%～100%減少、例えば、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、90%、95%、または約10%～約100%からのcGAS-STING活性の別のパーセント減少を含み得る。
cGAS-STING経路阻害は、例えば、NF-κBおよび／またはI型インターフェロン関連サイトカインの発現および／またはタンパク質レベルを測定することによって、定量化することができる。cGAS-STING経路阻害はまた、Hall et al. (2017)に記載されるもののような、cGAMPについてのアッセイを使用して定量化することができる。NF-κBおよび／またはI型インターフェロン関連サイトカインのレベルを測定するための好適な方法は、当技術分野において公知であり、qPCRおよび酵素結合免疫吸着測定法(ELISA)を含む。例えば、1型インターフェロン産生は、Seeds and Miller (2011)に記載されるアッセイを使用して測定することができる。NF-κBサイトカイン産生は、Cisbio製の「Human TNF alpha Assay Kit」(カタログ番号62HTNFAPEG)またはThermoFisher製の「TNF alpha Human ELISA Kit」(カタログ番号KHC3011)のようなTNFαを定量化するための市販のアッセイを使用して評価することができる。cGAS-STING経路阻害を定量化するために使用され得るcGAS-STING媒介シグナル伝達を定量化するための他の方法は、実施例に記載されている。
本発明に有用なcGAS-STING経路阻害物質のタイプの例としては、小分子、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、またはペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。
小分子
いくつかの態様において、cGAS-STING経路阻害物質は小分子である。いくつかの態様において、小分子は、cGASまたはSTINGへ結合し、それらの活性、例えば、cGASによるcGAMPの触媒作用またはSTINGによるTBK1の活性化を減少させる。本発明における使用についての好適な小分子cGAS-STING経路阻害物質は、当技術分野においてルーチンであるスクリーニング方法を使用して同定することができる。
いくつかの態様において、投与される小分子は、不活性または比較的弱く活性であるが、投与後、活性cGAS-STING経路阻害物質へ変換される(即ち、代謝される)、「プロドラッグ」と一般的に呼ばれる、前駆体化合物であり得る。それらの態様において、投与される化合物はプロドラッグと呼ばれ得る。代わりに、または加えて、投与される化合物は、代謝されて、cGAS-STING媒介シグナル伝達活性を減少させることにおいて活性を有する活性代謝産物を生成し得る。そのような活性代謝産物の使用もまた本開示の範囲内にある。
化合物中に存在する置換基に依存して、化合物は任意で、薬学的に許容される塩の形態で存在し得る。記載される方法における使用に適している化合物の塩は、対イオンが薬学的に許容されるものである。好適な塩としては、有機または無機酸または塩基で形成されるものが挙げられる。特に、酸で形成される好適な塩としては、鉱酸、強有機カルボン酸、例えば、非置換であるかまたは例えばハロゲンによって置換されている1～4個の炭素原子のアルカンカルボン酸、例えば、飽和または不飽和ジカルボン酸、例えば、ヒドロキシカルボン酸、例えば、アミノ酸で、あるいは有機スルホン酸、例えば、例えばハロゲンによって置換されているかまたは非置換である(C1～4)-アルキル-またはアリール-スルホン酸で形成されるものが挙げられる。薬学的に許容される酸付加塩としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、クエン酸、酒石酸、酢酸、リン酸、乳酸、ピルビン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、コハク酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、オキサロ酢酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、p-トルエンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン-2-スルホン酸、ベンゼンスルホン酸、イセチオン酸、アスコルビン酸、リンゴ酸、フタル酸、アスパラギン酸、ならびにグルタミン酸、リジンおよびアルギニンから形成されるものが挙げられる。薬学的に許容される塩基塩としては、アンモニウム塩、アルカリ金属塩、例えば、カリウムおよびナトリウムのもの、アルカリ土類金属塩、例えば、カルシウムおよびマグネシウムのもの、ならびに有機塩基、例えば、ジシクロヘキシルアミン、N-メチル-D-グルコミン（glucomine）、モルホリン、チオモルホリン、ピペリジエン（piperidien）、ピロリジン、モノ-、ジ-もしくはトリ-低級アルキルアミン、例えば、エチル-、tブチル-、ジエチル-、ジイソプロピル-、トリエチル-、トリブチル-もしくはジメチル-プロピルアミン、またはモノ-、ジ-もしくはトリヒドロキシ低級アルキルアミン、例えば、モノ-、ジ-もしくはトリエタノールアミンとの塩が挙げられる。対応する分子内塩も形成され得る。
有機および／または医薬品化学の当業者は、多くの有機化合物が溶媒と複合体を形成し得、溶媒中でそれらは反応されるか、または溶媒からそれらが沈殿もしくは結晶化されることを認識すると考えられる。これらの複合体は「溶媒和物」として公知である。例えば、水との複合体は「水和物」として公知である。水和物のような、溶媒和物は、原薬が、化学量論量または非化学量論量のいずれかで結晶格子中に水のような溶媒を組み込む場合に存在する。原薬は水和物のような溶媒和物の存在についてルーチンにスクリーニングされ、何故ならばこれらはいかなる段階でも遭遇され得るためである。従って、本発明に有用な化合物が水和物のような溶媒和物の形態で存在し得ることが理解されると考えられる。本発明における使用に適している化合物の溶媒和形態は、会合される溶媒が薬学的に許容されるものである。例えば、水和物は、薬学的に許容される溶媒和物の例である。
本発明に有用な化合物は、非晶形または結晶形で存在し得る。多くの化合物が複数の多形形態で存在し、全てのそのような形態での化合物の使用が本開示によって包含される。本開示に有用な小分子は、cGASまたはSTINGへの結合について候補化合物のライブラリーをスクリーニングし、次いで、結合する化合物のいずれがcGAS-STING媒介シグナル伝達活性を減少させるかどうかを判定することなど、標準手順を使用して同定することができる。いくつかの態様において、本発明における使用について化合物をスクリーニングすることは、化合物が細胞においてcGAS-STINGシグナル伝達活性を阻害するかどうかを評価することを含む。本発明に有用な小分子はまた、インシリコスクリーニングについての手順を使用して同定することができ、これは、cGAS-STINGシグナル伝達活性を減少させる候補を同定するための、既知のライブラリー化合物のスクリーニングを含み得る。
式(I)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)、(IV)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、および(V)のうちのいずれか1つに従う化合物の特徴に関して、以下の用語について定義を提供する。
「炭素環式」という用語は、例えば約3～約20個の炭素原子の、環原子が全て炭素原子である単環式または多環式環系を示し、これは、芳香族、非芳香族、飽和、または不飽和であってもよく、置換されていてもよくかつ／または縮合環を含有してもよい。そのような基の例としては、アリール基、例えばベンゼン、飽和基、例えば、シクロペンチル、または完全にもしくは部分的に水素化されたフェニル、ナフチルおよびフルオレニルが挙げられる。多環式環系は二環式または三環式環系を含むことが認識されると考えられる。
「複素環式」は、環原子が、セレン、ホウ素、リン、ビスマスおよびケイ素のような環原子についての他の元素を含み得るが、少なくとも2つの異なる元素、典型的に、炭素と、窒素、硫黄および酸素のうちの1つまたは複数との組み合わせによって提供され、環系が約3～約20個の原子である、単環式または多環式環系を示し、これは、「ヘテロアリール」基のような芳香族、非芳香族、飽和、または不飽和であってもよく、置換されていてもよくかつ／または縮合環を含有してもよい。例えば、複素環式は、(i)窒素、酸素、または硫黄のような1つまたは複数のヘテロ原子を含有し得る、例えば約3～約20個の環員の、置換されていてもよいシクロアルキルまたはシクロアルケニル基(例としては、ピロリジニル、モルホリノ、チオモルホリノ、または完全にもしくは部分的に水素化されたチエニル、フリル、ピロリル、チアゾリル、オキサゾリル、オキサジニル、チアジニル、ピリジルおよびアゼピニルが挙げられる)；(ii)アリール(またはヘテロアリール)環と複素環式基とが一緒に縮合して環状構造を形成している、置換されていてもよい、部分的に飽和した、単環式または多環式環系(例としては、クロマニル、ジヒドロベンゾフリルおよびインドリニルが挙げられる)；または、(iii)1つまたは複数の架橋を有する、置換されていてもよい、完全にまたは部分的に飽和した、多環式縮合環系(例としては、キヌクリジニルおよびジヒドロ-1,4-エポキシナフチルが挙げられる)であり得る。多環式環系は二環式または三環式環系を含むことが認識されると考えられる。
理解されるように、「芳香族」基は、4m+2個のπ電子を有する環状基を意味し、ここで、mは1または1超の整数である。本明細書において使用される場合、「芳香族」は、「アリール」と交換可能に使用されて、芳香族基の原子価に関係なく芳香族基を指す。
「アリール」は、単独で、またはアリールアルキル、アリールオキシもしくはアリールチオのような複合語で使用されるかどうかにかかわらず、(i)例えば約6～約20個の炭素原子の、置換されていてもよい単環式または多環式芳香族炭素環式部分、例えば、フェニル、ナフチルまたはフルオレニル；または、(ii)アリールとシクロアルキルまたはシクロアルケニル基とが一緒に縮合して環状構造を形成している、置換されていてもよい、部分的に飽和した、多環式炭素環式芳香族環系、例えば、テトラヒドロナフチル、インデニル、インダニルまたはフルオレン環を示す。多環式環系は二環式または三環式環系を含むことが認識されると考えられる。
「ヘタリール」、「ヘテロアリール」、またはヘテロ芳香族基は、N、O、S、Se、SiまたはPのような、1つまたは複数のヘテロ原子を含有する芳香族基または環である。本明細書において使用される場合、「ヘテロ芳香族」は、「ヘタリール」または「ヘテロアリール」と交換可能に使用され、ヘテロアリール基は、1つまたは複数のヘテロ原子を含有する、一価芳香族基、二価芳香族基、およびより高次の多価の芳香族基を指す。例えば、「ヘテロアリール」は、単独で、またはヘテロアリールオキシのような複合語で使用されるかどうかにかかわらず、(i)環員のうちの1つまたは複数が炭素以外の元素、例えば、窒素、酸素、硫黄またはケイ素である、例えば約5～約20個の環員の、置換されていてもよい単環式または多環式芳香族有機部分を示し；ヘテロ原子は、炭素環式環構造を中断し、芳香族性を提供するために十分な数の非局在化π電子を有し、但し、環は隣接する酸素および／または硫黄原子を含有しない。典型的な6員のヘテロアリール基は、ピラジニル、ピリダジニル、ピラゾリル、ピリジルおよびピリミジニルである。全ての位置異性体、例えば、2-ピリジル、3-ピリジルおよび4-ピリジルが、企図される。典型的な5員のヘテロアリール環は、フリル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、ピロリル、1,3,4-チアジアゾリル、チアゾリル、チエニル、トリアゾリル、およびシロールである。全ての位置異性体、例えば、2-チエニルおよび3-チエニルが企図される。二環式基は、典型的に、上に挙げたヘテロアリール基に由来するベンゾ縮合環系、例えば、ベンゾフリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、インドリル、インドリジニル、イソキノリル、キナゾリニル、キノリルおよびベンゾチエニル；または、(ii)ヘテロアリールとシクロアルキルまたはシクロアルケニル基とが一緒に縮合して環状構造を形成している、置換されていてもよい、部分的に飽和した、多環式ヘテロアリール環系、例えば、テトラヒドロキノリルまたはピリンジニル（pyrindinyl）環である。多環式環系は二環式または三環式環系を含むことが認識されると考えられる。
「縮合されていてもよい」という用語は、基が別の環系によって縮合されているかまたは縮合されていないことを意味し、「縮合された」は、1つまたは複数の他の環と少なくとも1つの共通環原子を共有する、1つまたは複数の環を指す。縮合は、単一の共通環原子によって提供され得る；例えばスピロ化合物。縮合は少なくとも2つの共通原子によって提供され得る。縮合は、本明細書に定義されるような、1つまたは複数の炭素環式、複素環式、アリールまたはヘタリール環によって提供され得るか、またはさらなる環系を形成するために一緒に連結される環の置換基によって提供され得る。縮合環は、サイズが5～10個の環原子を有し得る；例えば、5、6、または7員環。縮合環は、1つまたは複数の他の環へ縮合され得、例えば、1～4個の環を含有し得る。
「置換されていてもよい」という用語は、任意の利用可能な位置で、官能基が置換されているかまたは非置換であることを意味する。置換は、例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、ホルミル、アルカノイル、シクロアルカノイル、アロイル、ヘテロアロイル、カルボキシル、アルコキシカルボニル、シクロアルキルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、ヘテロシクリルオキシカルボニル、ヘテロアリールオキシカルボニル、アルキルアミノカルボニル、シクロアルキルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニル、ヘテロシクリルアミノカルボニル、ヘテロアリールアミノカルボニル、シアノ、アルコキシ、シクロアルコキシ、アリールオキシ、ヘテロシクリルオキシ、ヘテロアリールオキシ、アルカノエート、シクロアルカノエート、アリーロエート（aryloate）、ヘテロシクリロエート（heterocyclyloate）、ヘテロアリーロエート（heteroaryloate）、アルキルカルボニルアミノ、シクロアルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、ヘテロシクリルカルボニルアミノ、ヘテロアリールカルボニルアミノ、ニトロ、アルキルチオ、シクロアルキルチオ、アリールチオ、ヘテロシクリルチオ、ヘテロアリールチオ、アルキルスルホニル、シクロアルキルスルホニル、アリールスルホニル、ヘテロシクリスルホニル（heterocyclysulfonyl）、ヘテロアリールスルホニル、ヒドロキシル、ハロ、ハロアルキル、ハロアリール、ハロヘテロシクリル、ハロヘテロアリール、ハロアルコキシ、ハロアルキルスルホニル、シリルアルキル、アルケニルシリルアルキル、およびアルキニルシリルアルキルより選択される1つまたは複数の官能基によるものであり得る。具体的に記載されていない他の基も使用できることが認識されると考えられる。
「ハロ」または「ハロゲン」という用語は、単独で、またはハロアルキル、ハロアルコキシ、もしくはハロアルキルスルホニルのような複合語で使用されるかどうかにかかわらず、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を示す。さらに、ハロアルキル、ハロアルコキシまたはハロアルキルスルホニルのような複合語で使用される場合、アルキルは、独立して同じであっても異なっていてもよいハロゲン原子で、部分的にハロゲン化されてもよく、または完全に置換されてもよい。ハロアルキルの例としては、非限定的に、-CH2CH2F、-CF2CF3および-CH2CHFClが挙げられる。ハロアルコキシの例としては、非限定的に、-OCHF2、-OCF3、-OCH2CCl3、-OCH2CF3および-OCH2CH2CF3が挙げられる。ハロアルキルスルホニルの例としては、非限定的に、-SO2CF3、-SO2CCl3、-SO2CH2CF3および-SO2CF2CF3が挙げられる。
「アルキル」は、単独で、またはアルコキシ、アルキルチオ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノまたはハロアルキルのような複合語で使用されるかどうかにかかわらず、1～約20個の炭素原子またはそれ以上のサイズ範囲の、直鎖または分岐鎖炭化水素を示す。従って、アルキル部分は、より小さな基に明示的に限定されない限り、例えば、1～約6個の炭素原子またはそれ以上のサイズ範囲の部分、例えば、メチル、エチル、n-プロピル、iso-プロピルおよび／またはブチル、ペンチル、ヘキシル、ならびに、例えば、約6～約20個の炭素原子またはそれ以上のサイズ範囲の直鎖または分岐鎖炭化水素を含む、より高次の異性体を含む。
「アルケニル」は、単独で、またはアルケニルオキシまたはハロアルケニルのような複合語で使用されるかどうかにかかわらず、少なくとも1つの炭素-炭素二重結合を含む直鎖または分岐鎖炭化水素を示し、これは、より小さな基に明示的に限定されない限り、2～約6個の炭素原子またはそれ以上のサイズ範囲の部分、例えば、メチレン、エチレン、1-プロペニル、2-プロペニル、および／またはブテニル、ペンテニル、ヘキセニル、ならびに、例えば、例えば約6～約20個の炭素原子またはそれ以上のサイズ範囲の直鎖または分岐鎖炭化水素を含む、より高次の異性体を含む。
「アルキニル」は、単独で、またはアルキニルオキシのような複合語で使用されるかどうかにかかわらず、少なくとも1つの炭素-炭素三重結合を含む直鎖または分岐鎖炭化水素を示し、これは、より小さな基に明示的に限定されない限り、例えば、2～約6個の炭素原子またはそれ以上のサイズ範囲の部分、例えば、エチニル、1-プロピニル、2-プロピニル、および／またはブチニル、ペンチニル、ヘキシニル、ならびに、例えば、例えば約6～約20個の炭素原子またはそれ以上のサイズ範囲の直鎖または分岐鎖炭化水素を含む、より高次の異性体を含む。
「シクロアルキル」は、様々なサイズ、例えば、約3～約20個の炭素原子のモノまたはポリ炭素環式環系、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルまたはシクロヘプチルを示す。シクロアルキルオキシという用語は、シクロペンチルオキシおよびシクロヘキシルオキシのような、酸素原子を通して連結された同じ基を示す。シクロアルキルチオという用語は、シクロペンチルチオおよびシクロヘキシルチオのような、硫黄原子を通して連結された同じ基を示す。
「シクロアルケニル」は、少なくとも1つの炭素-炭素二重結合を含む、例えば、約3～約20個の炭素原子の、非芳香族のモノまたはポリ炭素環式環系、例えば、シクロペンテニル、シクロヘキセニルまたはシクロヘプテニルを示す。「シクロアルケニルオキシ」という用語は、シクロペンテニルオキシおよびシクロヘキセニルオキシのような、酸素原子を通して連結された同じ基を示す。「シクロアルケニルチオ」という用語は、シクロペンテニルチオおよびシクロヘキセニルチオのような、硫黄原子を通して連結された同じ基を示す。
「シクロアルキニル」は、少なくとも1つの炭素-炭素二重結合を含む、例えば、約3～約20個の炭素原子の、非芳香族のモノまたはポリ炭素環式環系、例えば、シクロペンテニル、シクロヘキセニルまたはシクロヘプテニルを示す。「シクロアルケニルオキシ」という用語は、シクロペンテニルオキシおよびシクロヘキセニルオキシのような、酸素原子を通して連結された同じ基を示す。「シクロアルケニルチオ」という用語は、シクロペンテニルチオおよびシクロヘキセニルチオのような、硫黄原子を通して連結された同じ基を示す。
「ホルミル」は-CHO部分を示す。
「アルカノイル」は-C(=O)-アルキル基を示し、ここで、アルキル基は上記に定義される通りである。特定の態様において、アルカノイルは約C2～C20のサイズ範囲である。一例はアシルである。
「アロイル」は-C(=O)-アリール基を示し、ここで、アリール基は上記に定義される通りである。特定の態様において、アロイルは約C7～C20のサイズ範囲である。例としてはベンゾイルならびに1-ナフトイルおよび2-ナフトイルが挙げられる。
「ヘテロシクロイル」は-C(=O)-ヘテロシクリル基を示し、ここで、ヘテロシリック基（heterocylic group）は上記に定義される通りである。特定の態様において、ヘテロシクロイルは約C4～C20のサイズ範囲である。
「ヘテロアロイル」は-C(=O)-ヘテロアリール基を示し、ここで、ヘテロアリール基は上記に定義される通りである。特定の態様において、ヘテロアロイルは約C6～C20のサイズ範囲である。例はピリジルカルボニルである。
「カルボキシル」は-CO2H部分を示す。
「オキシカルボニル」は、炭素原子を通して分子の残りへ連結されているカルボン酸エステル基-CO2Rを示す。
「アルコキシカルボニル」は-CO2-アルキル基を示し、ここで、アルキル基は上記に定義される通りである。特定の態様において、アルコキシカルボニルは約C2～C20のサイズ範囲である。例としてはメトキシカルボニルおよびエトキシカルボニルが挙げられる。
「アリールオキシカルボニル」は-CO2-アリール基を示し、ここで、アリール基は上記に定義される通りである。例としてはフェノキシカルボニルおよびナフトキシカルボニルが挙げられる。
「ヘテロシクリルオキシカルボニル」は-CO2-ヘテロシクリル基を示し、ここで、複素環式基は上記に定義される通りである。
「ヘテロアリールオキシカルボニル」は-CO-ヘテロアリール基を示し、ここで、ヘテロアリール基は上記に定義される通りである。
「アミノカルボニル」は、炭素原子を通して分子の残りへ連結されているカルボン酸アミド基-C(=O)NHRまたは-C(=O)NR2を示す。
「アルキルアミノカルボニル」は-C(=O)NHRまたは--C(=O)NR2基を示し、ここで、Rは上記に定義されるようなアルキル基である。
「アリールアミノカルボニル」は-C(=O)NHRまたは-C(=O)NR2基を示し、ここで、Rは上記に定義されるようなアリール基である。
「ヘテロシクリルアミノカルボニル」は-C(=O)NHRまたは-C(=O)NR2基を示し、ここで、Rは上記に定義されるような複素環式基である。ある態様において、NR2は、置換されていてもよい、複素環式環である。
「ヘテロアリールアミノカルボニル」は-C(=O)NHRまたは-C(=O)NR2基を示し、ここで、Rは上記に定義されるようなヘテロアリール基である。ある態様において、NR2は、置換されていてもよい、ヘテロアリール環である。
「シアノ」は-CN部分を示す。
「ヒドロキシル」は-OH部分を示す。
「アルコキシ」は-O-アルキル基を示し、ここで、アルキル基は上記に定義される通りである。例としては、メトキシ、エトキシ、n-プロポキシ、iso-プロポキシ、および種々のブトキシ、ペントキシ、ヘキシルオキシ、およびより高次の異性体が挙げられる。
「アリールオキシ」は-O-アリール基を示し、ここで、アリール基は上記に定義される通りである。例としては、非限定的に、フェノキシおよびナフトキシが挙げられる。
「アルケニルオキシ」は-O-アルケニル基を示し、ここで、アルケニル基は上記に定義される通りである。例はアリルオキシである。
「ヘテロシクリルオキシ」は-O-ヘテロシクリル基を示し、ここで、複素環式基は上記に定義される通りである。
「ヘテロアリールオキシ」は-O-ヘテロアリール基を示し、ここで、ヘテロアリール基は上記に定義される通りである。例はピリジルオキシである。
「アルカノエート」は-OC(=O)-R基を示し、ここで、Rは上記に定義されるようなアルキル基である。
「アリーロエート」は-OC(=O)-R基を示し、ここで、Rは上記に定義されるようなアリール基である。
「ヘテロシクリロエート」は-OC(=O)--R基を示し、ここで、Rは上記に定義されるような複素環式基である。
「ヘテロアリーロエート」は-OC(=O)-R基を示し、ここで、Pは上記に定義されるようなヘテロアリール基である。
「アミノ」は-NH2部分を示す。
「アルキルアミノ」は-NHRまたは-NR2基を示し、ここで、Rは上記に定義されるようなアルキル基である。例としては、非限定的に、メチルアミノ、エチルアミノ、n-プロピルアミノ、イソプロピルアミノ、および種々のブチルアミノ、ペンチルアミノ、ヘキシルアミノ、およびより高次の異性体が挙げられる。
「アリールアミノ」は-NHRまたは-NR2基を示し、ここで、Rは上記に定義されるようなアリール基である。例はフェニルアミノである。
「ヘテロシクリルアミノ」は-NHRまたは-NR2基を示し、ここで、Rは上記に定義されるような複素環式基である。ある態様において、NR2は、置換されていてもよい、複素環式環である。
「ヘテロアリールアミノ」は-NHRまたは--NR2基を示し、ここで、Rは上記に定義されるようなヘテロアリール基である。ある態様において、NR2は、置換されていてもよい、ヘテロアリール環である。
「カルボニルアミノ」は、窒素原子を通して分子の残りへ連結されているカルボン酸アミド基-NHC(=O)Rを示す。
「アルキルカルボニルアミノ」は-NHC(=O)R基を示し、ここで、Rは上記に定義されるようなアルキル基である。
「アリールカルボニルアミノ」は-NHC(=O)R基を示し、ここで、Rは上記に定義されるようなアリール基である。
「ヘテロシクリルカルボニルアミノ」は-NHC(=O)R基を示し、ここで、Rは上記に定義されるような複素環式基である。
「ヘテロアリールカルボニルアミノ」は-NHC(=O)R基を示し、ここで、Rは上記に定義されるようなヘテロアリール基である。
「ニトロ」は-NO2部分を示す。
「アルキルチオ」は-S-アルキル基を示し、ここで、アルキル基は上記に定義される通りである。例としては、非限定的に、メチルチオ、エチルチオ、n-プロピルチオ、イソプロピルチオ、および種々のブチルチオ、ペンチルチオ、ヘキシルチオ、およびより高次の異性体が挙げられる。
「アリールチオ」は-S-アリール基を示し、ここで、アリール基は上記に定義される通りである。例としてはフェニルチオおよびナフチルチオが挙げられる。
「ヘテロシクリルチオ」は-S-ヘテロシクリル基を示し、ここで、複素環式基は上記に定義される通りである。
「ヘテロアリールチオ」は-S-ヘテロアリール基を示し、ここで、ヘテロアリール基は上記に定義される通りである。
「スルホニル」は、硫黄原子を通して分子の残りへ連結されている-SO2R基を示す。
「アルキルスルホニル」は-SO2-アルキル基を示し、ここで、アルキル基は上記に定義される通りである。
「アリールスルホニル」は-SO2-アリール基を示し、ここで、アリール基は上記に定義される通りである。
「ヘテロシクリルスルホニル」は-SO2-ヘテロシクリル基を示し、ここで、複素環式基は上記に定義される通りである。
「ヘテロアリールスルホニル（heteoarylsulfonyl）」は-SO2-ヘテロアリール基を示し、ここで、ヘテロアリール基は上記に定義される通りである。
「アルデヒド」は-C(=O)H基を示す。
「アルカナール」はアルキル-(C=O)H基を示し、ここで、アルキル基は上記に定義される通りである。
「アルキルシリル」は、最大3個までの独立して選択されたアルキル基で置換されていてもよい、ケイ素原子を通して分子の残りへ連結されているアルキル基を示し、ここで、各アルキル基は上記に定義される通りである。
「アルケニルシリル」は、最大3個までの独立して選択されたアルケニル基で置換されていてもよい、ケイ素原子を通して分子の残りへ連結されているアルケニル基を示し、ここで、各アルケニル基は上記に定義される通りである。
「アルキニルシリル」は、最大3個までの独立して選択されたアルキニル基で置換されていてもよい、ケイ素原子を通して分子の残りへ連結されているアルキニル基を示し、ここで、各アルケニル基は上記に定義される通りである。
「アリール」は、炭素環式芳香族基を指す。アリール基の例としては、フェニル、ナフチル、およびアントラセニルが挙げられるが、これらに限定されない。炭素環式芳香族基または複素環式芳香族基は、-C1～C8アルキル、-O-(C1～C8アルキル)、-アリール、-C(O)R′、-OC(O)R′、-C(O)OR′、-C(O)NH2、-C(O)NHR′、-C(O)N(R′)2-NHC(O)R′、-S(O)2R′、-S(O)R′、-OH、-ハロゲン、-N3、-NH2、-NH(R′)、-N(R′)2、および-CNを含むが、これらに限定されない、1つまたは複数の基で置換されていてもまたは非置換であってもよく；ここで、各R′は、独立して、H、-C1～C8アルキル、およびアリールより選択される。
「C1～10アルキル」という用語は、本明細書において使用される場合、1～10個の炭素原子を有する、直鎖または分岐鎖、飽和または不飽和炭化水素を指す。代表的な「C1～10アルキル」基としては、-メチル、-エチル、-n-プロピル、-n-ブチル、-n-ペンチル、-n-ヘキシル、-n-ヘプチル、-n-オクチル、-n-ノニル、および-n-デシルが挙げられるが、これらに限定されず；一方、分岐C1～C8アルキルとしては、-イソプロピル、-sec-ブチル、-イソブチル、-tert-ブチル、-イソペンチル、2-メチルブチルが挙げられるが、これらに限定されず、不飽和C1～C8アルキルとしては、-ビニル、-アリル、-1-ブテニル、-2-ブテニル、-イソブチレニル、-1-ペンテニル、-2-ペンテニル、-3-メチル-1-ブテニル、-2-メチル-2-ブテニル、-2,3-ジメチル-2-ブテニル、1-ヘキシル、2-ヘキシル、3-ヘキシル、-アセチレニル、-プロピニル、-1-ブチニル、-2-ブチニル、-1-ペンチニル、-2-ペンチニル、-3-メチル-1 ブチニル、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、n-ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、n-ヘキシル、イソヘキシル、2-メチルペンチル、3-メチルペンチル、2,2-ジメチルブチル、2,3-ジメチルブチル、2,2-ジメチルペンチル、2,3-ジメチルペンチル、3,3-ジメチルペンチル、2,3,4-トリメチルペンチル、3-メチルヘキシル、2,2-ジメチルヘキシル、2,4-ジメチルヘキシル、2,5-ジメチルヘキシル、3,5-ジメチルヘキシル、2,4-ジメチルペンチル、2-メチルヘプチル、3-メチルヘプチル、n-ヘプチル、イソヘプチル、n-オクチル、およびイソオクチルが挙げられるが、これらに限定されない。C1～C8アルキル基は、-C1～C8アルキル、-O-(C1～C8アルキル)、-アリール、-C(O)R′、-OC(O)R′、-C(O)OR′、-C(O)NH2、-C(O)NHR′、-C(O)N(R′)2-NHC(O)R′、-SO3R′、-S(O)2R′、-S(O)R′、-OH、-ハロゲン、-N3、-NH2、-NH(R′)、-N(R′)2、および-CNを含むが、これらに限定されない、1つまたは複数の基で置換されていてもまたは非置換であってもよく；ここで、各R′は、独立して、H、-C1～C8アルキル、およびアリールより選択される。
「C3～12カルボシクリル」は、3、4、5、6、7、または8員の飽和または不飽和非芳香族炭素環式環である。代表的なC3～12炭素環としては、-シクロプロピル、-シクロブチル、-シクロペンチル、-シクロペンタジエニル、-シクロヘキシル、-シクロヘキセニル、-1,3-シクロヘキサジエニル、-1,4-シクロヘキサジエニル、-シクロヘプチル、-1,3-シクロヘプタジエニル、-1,3,5-シクロヘプタトリエニル、-シクロオクチル、および-シクロオクタジエニルが挙げられるが、これらに限定されない。C3～C8炭素環基は、-C1～12アルキル、-O-(C1～12アルキル)、-アリール、-C(O)R′、-OC(O)R′、-C(O)OR′、-C(O)NH2、-C(O)NHR′、-C(O)N(R′)2-NHC(O)R′、-S(O)2R′、-S(O)R′、-OH、-ハロゲン、-N3、-NH2、-NH(R′)、-N(R′)2、および-CNを含むが、これらに限定されない、1つまたは複数の基で置換されていてもまたは非置換であってもよく；ここで、各R′は、独立して、H、-C1～12アルキル、およびアリールより選択される。
「C3～12カルボシクロ」は、炭素環基の水素原子のうちの1つが結合で置き換えられている、上記に定義されるC3～C8炭素環基を指す。
「C1～10アルキレン」は、式-(CH2)1～10-の直鎖、飽和炭化水素である。C1～C10アルキレンの例としては、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、ヘキシレン、ヘプチレン、オクチレン（ocytylene）、ノニレンおよびデカレンが挙げられる。
「アリーレン」は、2つの共有結合を有するアリール基であり、次の構造：
Figure 2022506341000003
に示されるようなオルト、メタ、またはパラ配置にあり得、
ここで、フェニル基は、-C1～C8アルキル、-O-(C1～C8アルキル)、-アリール、-C(O)R′、-OC(O)R′、-C(O)OR′、-C(O)NH2、-C(O)NHR′、-C(O)N(R′)2-NHC(O)R′、-S(O)2R′、-S(O)R′、-OH、-ハロゲン、-N3、-NH2、-NH(R′)、-N(R′)2、および-CNを含むが、これらに限定されない、最大4個の基で置換されていてもまたは非置換であってもよく；ここで、各R′は、独立して、H、-C1～C8アルキルおよびアリールより選択される。
「C3～12ヘテロシクリル」は、環炭素原子のうちの1～4個が独立して、O、S、およびNからなる群からのヘテロ原子で置き換えられている、芳香族または非芳香族C3～12炭素環を指す。C3～C8複素環の代表的な例としては、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェン、インドリル、ベンゾピラゾリル、クマリニル、イソキノリニル、ピロリル、チオフェニル、フラニル、チアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、キノリニル、ピリミジニル、ピリジニル、ピリドニル、ピラジニル、ピリダジニル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、およびテトラゾリルが挙げられるが、これらに限定されない。C3～C12複素環は、-C1～C8アルキル、-O-(C1～C8アルキル)、-アリール、-C(O)R′、-OC(O)R′、-C(O)OR′、-C(O)NH2、-C(O)NHR′、-C(O)N(R′)2-NHC(O)R′、-S(O)2R′、-S(O)R′、-OH、-ハロゲン、-N3、-NH2、-NH(R′)、-N(R′)2、および-CNを含むが、これらに限定されない、最大7個の基で置換されていてもまたは非置換であってもよく；ここで、各R′は、独立して、H、-C1～C8アルキルおよびアリールより選択される。
「C3～12ヘテロシクロ」は、複素環基の水素原子のうちの1つが結合で置き換えられている、上記に定義されるC3～12複素環基を指す。C3～C12ヘテロシクロは、-C1～C12アルキル、-O-(C1～C12アルキル)、-アリール、-C(O)R′、-OC(O)R′、-C(O)OR′、-C(O)NH2、-C(O)NHR′、-C(O)N(R′)2-NHC(O)R′、-S(O)2R′、-S(O)R′、-OH、-ハロゲン、-N3、-NH2、-NH(R′)、-N(R′)2、および-CNを含むが、これらに限定されない、最大6個の基で置換されていてもまたは非置換であってもよく；ここで、各R′は、独立して、H、-C1～C12アルキル、およびアリールより選択される。
「アルケニレン」は、2～18個の炭素原子からなり、親アルケンの同じまたは2個の異なる炭素原子からの2個の水素原子の除去によってもたらされる2つの一価ラジカル中心を有する、不飽和の分岐鎖または直鎖または環状炭化水素基を指す。典型的なアルケニレン基には、1,2-エチレン(-CH＝CH-)が含まれるが、これに限定されない。
「アルキニレン」は、2～18個の炭素原子からなり、親アルキンの同じまたは2個の異なる炭素原子からの2個の水素原子の除去によってもたらされる2つの一価ラジカル中心を有する、不飽和の分岐鎖または直鎖または環状炭化水素基を指す。典型的なアルキニレン基には、アセチレン(-C≡C-)、プロパルギル(-CH2C≡C-)、および4-ペンチニル(-CH2CH2CH2C≡CH-)が含まれるが、これらに限定されない。
「アリールアルキル」は、炭素原子、典型的には末端またはsp3炭素原子に結合した水素原子のうちの1つが、アリール基で置き換えられている、非環式アルキル基を指す。典型的なアリールアルキル基には、ベンジル、2-フェニルエタン-1-イル、2-フェニルエテン-1-イル、ナフチルメチル、2-ナフチルエタン-1-イル、2-ナフチルエテン-1-イル、ナフトベンジル、2-ナフトフェニルエタン-1-イルなどが含まれるが、これらに限定されない。アリールアルキル基は、6～20個の炭素原子を含み、例えば、アリールアルキル基のアルカニル、アルケニル、またはアルキニル基を含む、アルキル部分は、1～6個の炭素原子であり、アリール部分は、5～14個の炭素原子である。
「ヘテロアリールアルキル」は、炭素原子、典型的には末端またはsp3炭素原子に結合した水素原子のうちの1つが、ヘテロアリール基で置き換えられている、非環式アルキル基を指す。典型的なヘテロアリールアルキル基には、2-ベンゾイミダゾリルメチル、2-フリルエチルなどが含まれるが、これらに限定されない。ヘテロアリールアルキル基は、6～20個の炭素原子を含み、例えば、ヘテロアリールアルキル基のアルカニル、アルケニル、またはアルキニル基を含む、アルキル部分は、1～6個の炭素原子であり、ヘテロアリール部分は、5～14個の炭素原子、ならびにN、O、P、およびSから選択される1～3個のヘテロ原子である。ヘテロアリールアルキル基のヘテロアリール部分は、3～7個の環員を有する単環(2～6個の炭素原子、または7～10環員を有する二環(4～9個の炭素原子ならびにN、O、P、およびSから選択される1～3個のヘテロ原子)、例えば、ビシクロ[4,5]、[5,5]、[5,6]、または[6,6]系であり得る。
「置換アルキル」、「置換アリール」、および「置換アリールアルキル」は、1つまたは複数の水素原子が各々独立して置換基で置き換えられている、それぞれ、アルキル、アリール、およびアリールアルキルを意味する。典型的な置換基としては、-X、-R、-O-、-OR、-SR、-S-、-NR2、-NR3、＝NR、-CX3、-CN、-OCN、-SCN、-N＝C＝O、-NCS、-NO、-NO2、＝N2、-N3、NC(＝O)R、-C(＝O)R、-C(＝O)NR2、-SO3 -、-SO3H、-S(＝O)2R、-OS(＝O)2OR、-S(＝O)2NR、-S(＝O)R、-OP(＝O)(OR)2、-P(＝O)(OR)2、-PO- 3、-PO3H2、-C(＝O)R、-C(＝O)X、-C(＝S)R、-CO2R、-CO2 -、-C(＝S)OR、-C(＝O)SR、-C(＝S)SR、-C(＝O)NR2、-C(＝S)NR2、-C(＝NR)NR2が挙げられるが、これらに限定されず、ここで、各Xは、独立して、ハロゲン：F、Cl、BrまたはIであり；各Rは、独立して、-H、C2～C20アルキル、C6～C20アリール、C3～C14複素環、保護基、またはプロドラッグ部分である。上述のアルキレン、アルケニレン、およびアルキニレン基もまた、同様に置換され得る。
複素環の例としては、限定ではなく例として、ピリジル、ジヒドロイピリジル（dihydroypyridyl）、テトラヒドロピリジル(ピペリジル)、チアゾリル、テトラヒドロチオフェニル、硫黄酸化型テトラヒドロチオフェニル、ピリミジニル、フラニル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、テトラゾリル、ベンゾフラニル、チアナフタレニル、インドリル、インドレニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンゾイミダゾリル、ピペリジニル、4-ピペリドニル、ピロリジニル、2-ピロリドニル、ピロリニル、テトラヒドロフラニル、bis-テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、bis-テトラヒドロピラニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、デカヒドロキノリニル、オクタヒドロイソキノリニル、アゾシニル、トリアジニル、6H-1,2,5-チアジアジニル、2H,6H-1,5,2-ジチアジニル、チエニル、チアントレニル、ピラニル、イソベンゾフラニル、クロメニル、キサンテニル、フェノキサチニル（phenoxathinyl）、2H-ピロリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、ピラジニル、ピリダジニル、インドリジニル、イソインドリル、3H-インドリル、1H-インダゾリル、プリニル、4H-キノリジニル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、プテリジニル、4aH-カルバゾリル、カルバゾリル、β-カルボリニル、フェナントリジニル、アクリジニル、ピリミジニル、フェナントロリニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フラザニル、フェノキサジニル、イソクロマニル、クロマニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピペラジニル、インドリニル、イソインドリニル、キヌクリジニル、モルホリニル、オキサゾリジニル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、オキシンドリル、ベンゾオキサゾリニル、およびイサチノイル（isatinoyl）が挙げられる。
限定ではなく例として、炭素結合複素環は、ピリジンの2、3、4、5、もしくは6位、ピリダジンの3、4、5、もしくは6位、ピリミジンの2、4、5、もしくは6位、ピラジンの2、3、5、もしくは6位、フラン、テトラヒドロフラン、チオフラン、チオフェン、ピロール、もしくはテトラヒドロピロールの2、3、4、もしくは5位、オキサゾール、イミダゾール、もしくはチアゾールの2、4、もしくは5位、イソキサゾール、ピラゾール、もしくはイソチアゾールの3、4、もしくは5位、アジリジンの2もしくは3位、アゼチジンの2、3、もしくは4位、キノリンの2、3、4、5、6、7、もしくは8位、またはイソキノリンの1、3、4、5、6、7、もしくは8位において結合される。さらにより典型的に、炭素結合複素環にとしては、2-ピリジル、3-ピリジル、4-ピリジル、5-ピリジル、6-ピリジル、3-ピリダジニル、4-ピリダジニル、5-ピリダジニル、6-ピリダジニル、2-ピリミジニル、4-ピリミジニル、5-ピリミジニル、6-ピリミジニル、2-ピラジニル、3-ピラジニル、5-ピラジニル、6-ピラジニル、2-チアゾリル、4-チアゾリル、または5-チアゾリルが挙げられる。
限定ではなく例として、窒素結合複素環は、アジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリジン、2-ピロリン、2-ピロリン、イミダゾール、イミダゾリジン、2-イミダゾリン、3-イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、2-ピラゾリン、3-ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドール、インドリン、1H-インダゾールの1位、イソインドール、またはイソインドリンの2位、モルホリンの4位、およびカルバゾールまたはβ-カルボリンの9位において結合される。さらにより典型的に、窒素結合複素環には、1-アジリジル、1-アゼテジル（1-azetedyl）、1-ピロリル、1-イミダゾリル、1-ピラゾリル、および1-ピペリジニルが挙げられる。
ポリヌクレオチド
いくつかの態様において、cGAS-STING経路阻害物質は、多数の異なる機構のうちの少なくとも1つによってcGAS-STING媒介シグナル伝達活性を阻害し得る、ポリヌクレオチドである。
RNA干渉
いくつかの態様において、ポリヌクレオチドcGAS-STING経路阻害物質は、それらのmRNAを標的とすることにより、cGASおよび／またはSTINGタンパク質の発現を減少させることによって作用する。例えば、ポリヌクレオチドは、RNA干渉によってcGASまたはSTINGの発現を減少させ得る。
「RNA干渉」、「RNAi」、または「遺伝子サイレンシング」という用語は、一般に、二本鎖RNA分子が、その二本鎖RNA分子が実質的なまたは完全な相同性を共有する核酸配列の発現を減少させるプロセスを指す。しかし、RNA干渉はまた、非RNA二本鎖分子を使用して達成され得ることが示された(例えば、US20070004667を参照のこと)。
いくつかの態様において、cGAS-STING経路阻害物質は、cGAS mRNAまたはSTING mRNAに対するRNA干渉についての二本鎖領域を含むかつ／またはコードする核酸分子を含む。核酸分子は典型的にRNAであるが、化学的に修飾されたヌクレオチドおよび非ヌクレオチドを含み得る。
二本鎖領域は、少なくとも19個の連続ヌクレオチド、例えば約19～23ヌクレオチドであるべきであるか、または、より長くてもよい、例えば30もしくは50ヌクレオチド、または100ヌクレオチドもしくはそれ以上であってもよい。遺伝子転写物全体に対応する全長配列を用いることができる。好ましくは、それらは約19～約23ヌクレオチド長である。
標的とする転写物に対する核酸分子の二本鎖領域の同一性の程度は、少なくとも90%、より好ましくは95～100%であるべきである。核酸分子は当然、分子を安定させるように機能し得る、関連した配列を含むことができる。
「短干渉RNA」または「siRNA」という用語は、本明細書において使用される場合、例えば配列特異的方法でRNAiを仲介することによって、遺伝子発現を阻害するかまたは下方制御することのできるリボヌクレオチドを含む、核酸分子を指し、ここで、二本鎖部分は、50ヌクレオチド長未満、好ましくは約19～約23ヌクレオチド長である。例えば、siRNAは、自己相補的センスおよびアンチセンス領域を含む核酸分子であり得、ここで、アンチセンス領域は、標的核酸分子またはその一部中のヌクレオチド配列と相補的であるヌクレオチド配列を含み、センス領域は、標的核酸配列またはその一部に対応するヌクレオチド配列を有する。siRNAは、1本の鎖がセンス鎖であり、他方の鎖がアンチセンス鎖である、2つの別々のオリゴヌクレオチドから組み立てることができ、アンチセンスおよびセンス鎖は自己相補的である。
本明細書において使用される場合、siRNAという用語は、配列特異的RNAiを媒介することができる核酸分子を記載するために使用されるその他の用語、例えば、マイクロRNA(miRNA)、短ヘアピンRNA(shRNA)、短干渉オリゴヌクレオチド、短干渉核酸(siNA)、短干渉修飾オリゴヌクレオチド、化学修飾siRNA、転写後遺伝子サイレンシングRNA(ptgsRNA)などと同等であることを意味する。さらに、本明細書において使用される場合、RNAiという用語は、転写後遺伝子サイレンシング、翻訳阻害、またはエピジェネティクスのような、配列特異的RNA干渉を記載するために使用されるその他の用語と同等であることを意味する。例えば、siRNA分子を、転写後レベルまたは転写前レベルの両方において、エピジェネティックに遺伝子をサイレンシングするために使用することができる。非限定的な例において、siRNA分子による遺伝子発現のエピジェネティック調節は、遺伝子発現を変化させるために、クロマチン構造のsiRNA媒介修飾によって生じてもよい。
「shRNA」または「短ヘアピンRNA」とは、約50ヌクレオチド未満、好ましくは約19～約23ヌクレオチドのRNA分子を意味し、同一のRNA分子上に位置する相補的配列と対合しており、この配列および相補配列は、塩基相補性の2つの領域によって生成されるステム構造の上に一本鎖ループを形成する、少なくとも約4～約15ヌクレオチドの不対領域によって分離されている。
包含されるshRNAは、二重または二指および多指のヘアピンdsRNAであり、ここで、RNA分子は、一本鎖スペーサー領域によって分離された2つまたはそれ以上のこのようなステム-ループ構造を含む。
一旦設計されると、二本鎖領域を含む核酸分子は、当技術分野で公知の任意の方法、例えば、インビトロ転写によって、組換えで、または合成手段によって生成され得る。
ヌクレオチドの修飾または類似体を導入して、核酸分子の特性を改善することができる。改良された性質には、ヌクレアーゼ耐性の増大および／または細胞膜透過能の増大が含まれる。従って、「核酸分子」および「二本鎖RNA分子」という用語は、イノシン、キサンチン、ヒポキサンチン、2-アミノアデニン、6-メチル-、2-プロピル-、および他のアルキル-アデニン、5-ハロウラシル、5-ハロシトシン、6-アザシトシン、および6-アザチミン、シュードウラシル、4-チウラシル、8-ハロアデニン、8-アミノアデニン、8-チオオールアデニン、8-チオールアルキルアデニン、8-ヒドロキシルアデニン、および他の8-置換アデニン、8-ハログアニン、8-アミノグアニン、8-チオールグアニン、8-チオアルキルグアニン、8-ヒドロキシルグアニン、および他の置換グアニン、他のアザおよびデアザアデニン、他のアザおよびデアザグアニン、5-トリフルオロメチルウラシルおよび5-トリフルオロシトシンのような合成修飾塩基を含むが、これらに限定されない。
インビボ送達に特に適している化学修飾siRNAは、当技術分野に、例えば、WO2014201306、WO2007051303に記載されている。
ペプチドまたはポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
いくつかの態様において、ポリヌクレオチドベースのcGAS-STING経路阻害物質はポリペプチドをコードし、その結果、細胞へのポリヌクレオチドの送達は、コードされたペプチドまたはポリペプチドcGAS-STING経路タンパク質阻害物質の発現を生じさせる。
いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは、cGAS-STING媒介シグナル伝達活性のドミナントネガティブサプレッサーをコードする。
いくつかの態様において、ポリヌクレオチドcGAS-STING経路阻害物質は、cGASまたはSTINGをコードする遺伝子の発現を不活性化するかまたは減少させることによってcGAS-STING媒介シグナル伝達活性を阻害するプログラム可能なヌクレアーゼをコードする。本明細書において使用される場合、「プログラム可能なヌクレアーゼ」という用語は、予め決定されたゲノム位置を認識し編集するための、「標的とされた」（「プログラムされた」）ヌクレアーゼに関する。いくつかの態様において、コードされたポリペプチドは、cGASもしくはSTINGコード遺伝子またはその調節領域中へ遺伝子改変を導入するように「標的とされた」または「プログラムされた」プログラム可能なヌクレアーゼである。いくつかの態様において、遺伝子改変は、cGASもしくはSTINGコード遺伝子中またはその調節領域中の欠失または置換である。
いくつかの態様において、プログラム可能なヌクレアーゼは、DNA結合ジンクフィンガータンパク質(ZFP)ドメインの組み合わせによってゲノム位置を認識するようプログラムされてもよい。ZFPはＤＮＡ配列中の特異的な3-bpを認識し、ZFPの組み合わせは特異的なゲノム位置を認識するために使用できる。いくつかの態様において、プログラム可能なヌクレアーゼは、転写アクチベーター様エフェクター(TALE)DNA結合ドメインによってゲノム位置を認識するようプログラムされてもよい。代替の態様において、プログラム可能なヌクレアーゼは、1つまたは複数のRNA配列によってゲノム位置を認識するようプログラムされてもよい。代替の態様において、プログラム可能なヌクレアーゼは、1つまたは複数のDNA配列によってプログラムされてもよい。代替の態様において、プログラム可能なヌクレアーゼは、1つまたは複数のハイブリッドDNA/RNA配列によってプログラムされてもよい。代替の態様において、プログラム可能なヌクレアーゼは、1つまたは複数のRNA配列、DNA配列、およびハイブリッドDNA/RNA配列によってプログラムされてもよい。
本開示に従って使用することのできるプログラム可能なヌクレアーゼとしては、細菌のクラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート(CRISPR)-cas (CRISPR関連)システム由来のRNA誘導操作ヌクレアーゼ(RGEN)、ジンクフィンガーヌクレアーゼ(ZFN)、転写活性化因子様ヌクレアーゼ(TALEN)、およびアルゴノートが挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの態様において、ヌクレアーゼは、RNA誘導操作ヌクレアーゼ(RGEN)である。いくつかの態様において、RGENは古細菌ゲノム由来であるか、またはその組換えバージョンである。いくつかの態様において、RGENは、細菌ゲノム由来であるか、またはその組換えバージョンである。いくつかの態様において、RGENは、I型(CRISPR)-cas (CRISPR関連)システムに由来する。いくつかの態様において、RGENは、II型(CRISPR)-cas (CRISPR関連)システムに由来する。いくつかの態様において、RGENは、III型(CRISPR)-cas (CRISPR関連)システムに由来する。いくつかの態様において、ヌクレアーゼは、I型RGENである。いくつかの態様において、ヌクレアーゼは、II型RGENである。いくつかの態様において、RGENは、複数成分の酵素である。いくつかの態様において、RGENは、単一成分の酵素である。いくつかの態様において、RGENは、CAS3である。いくつかの態様において、RGENは、CAS10である。いくつかの態様において、RGENは、CAS9である。いくつかの態様において、RGENは、Cpf1(Zetsche et al., 2015)である。いくつかの態様において、RGENは、単一のRNAまたはDNAによって標的とされる。いくつかの態様において、RGENは、2つ以上のRNAおよび／またはDNAによって標的とされる。いくつかの態様において、プログラム可能なヌクレアーゼは、DNAプログラムされたアルゴノート(WO 14/189628)であってもよい。
いくつかの態様において、ポリヌクレオチドcGAS-STING経路阻害物質は、当技術分野において公知の多数のルーチンなターゲティング方法のいずれかを使用して細胞(例えば、ニューロン)へ送達される発現ベクターで提供される。
本明細書において使用される場合、「発現ベクター」は、宿主細胞(例えば、ニューロン)において1つまたは複数のポリヌクレオチドの発現をもたらすことができるDNAまたはRNAベクターである。ベクターは、典型的に、プラスミドまたは組換えウイルスである。任意の好適な発現ベクターを使用することができ、その例としては、プラスミドまたはウイルスベクターが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの態様において、ウイルスベクターは、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、またはアデノ随伴ウイルスベクターである。
そのようなベクターは、遺伝子サイレンシングのためのdsRNAのようなポリヌクレオチドを発現するための1つまたは複数のプロモーターを含むと考えられる。好適なプロモーターには、レトロウイルスLTR；SV40プロモーター；およびヒトサイトメガロウイルス(CMV)プロモーターが含まれるがこれらに限定されないヒストンプロモーター、RNAポリメラーゼIIIプロモーター(shRNAまたはmiRNAの発現の事例において)、およびβ-アクチンプロモーターが含まれるがこれに限定されない真核細胞プロモーターのような細胞プロモーターも、使用され得る。いくつかの態様において、プロモーターはNK細胞選択的プロモーター、例えば、ヒトNKp46プロモーターである(例えば、Walzer et al., 2007を参照のこと)。好適なプロモーターの選択は、本明細書において含有される教示から当業者へ明らかである。
ポリペプチド
いくつかの態様において、cGAS-STING経路阻害物質は、多数の異なる機構のうちの少なくとも1つ、例えば、cGAS、STING、cGAMPまたはTBK-1へ特異的に結合しそれによってこれらの分子とそれらのリガンド／結合パートナーとの相互作用を減少させることによって、cGAS-STINGシグナル伝達活性を阻害し得る、ポリペプチドである。
抗原結合部位を含むポリペプチド
いくつかの態様において、cGAS-STING経路阻害物質は、抗体またはその断片のような、抗原結合部位を含むポリペプチドである。好ましくは、抗体またはその断片は、哺乳動物細胞、特にニューロンを透過するか、またはそれらの細胞中に取り込まれる（受動的または能動的に）ように修飾される。
「抗体」という用語には、本明細書において使用される場合、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、二重特異性抗体、融合ダイアボディ、トリアボディ、ヘテロコンジュゲート抗体、およびキメラ抗体が含まれる。対応する全長抗体に比べて、少なくとも実質的な(約10%の)抗原結合を保持する抗体断片も企図される。かかる抗体断片は、本明細書において「抗原結合断片」と称され、抗体の抗原結合部位を含む。抗体には多様な形態の修飾が含まれ、それらには、例えばVHドメインもしくはVLドメインのいずれかを含むドメイン抗体、重鎖可変領域の二量体(VHH、ラクダについて記載されるような)、軽鎖可変領域の二量体(VLL)、直接的にもしくはリンカーを介して連結され得る軽鎖(VL)および重鎖(VH)の可変領域のみを含有するFv断片、または重鎖可変領域およびCH1ドメインを含有するFd断片が含まれるがこれらに限定されない。
一本鎖抗体を形成するように一緒に連結される重鎖および軽鎖の可変領域からなるscFv、ならびにscFvのオリゴマー、例えばダイアボディおよびトリアボディも、「抗体」という用語によって包含される。可変領域および定常領域の一部を含有する抗体の断片、例えば、Fab、(Fab')2、およびFabFc2断片も包含される。相補性決定領域(CDR)をグラフトした抗体断片および抗体断片のオリゴマーも包含される。Fvの重鎖および軽鎖の構成要素は同じ抗体または異なる抗体に由来し、それによってキメラFv領域を産生し得る。抗体は、動物(例えばマウス、ウサギまたはラット)起源もしくはヒト起源であり得るか、またはキメラかであるもしくはヒト化され得る。
本明細書において使用される場合、「抗体」という用語にはこれらの様々な形態が含まれる。本明細書において提供されるガイドライン、ならびに上で引用される参照文献およびHarlow & Lane, Antibodies: a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, (1988)のような刊行物中で記載される当業者に周知の方法を使用して、本発明の方法で使用される抗体は容易に作製することができる。
抗体は可変軽鎖(VL)および可変重鎖(VH)を含むFv領域であり得、ここで、軽鎖および重鎖は直接的にまたはリンカーを介して連結され得る。本明細書において使用される場合、リンカーは、軽鎖および重鎖へ共有結合で連結され、指向されるエピトープを特異的に結合できる構造を達成することができるように、2つの鎖の間に十分な間隔および柔軟性を提供する、分子を指す。タンパク質リンカーは、融合ポリペプチドのIg部分の内因性構成要素として発現することができるので、特に好ましい。
別の態様において、組換えにより産生された一本鎖scFv抗体、好ましくはヒト化scFvが、本発明の方法において使用される。
一態様において、抗体は細胞内伝達のための能力を有する。細胞内伝達のための能力を有する抗体には、ラクダおよびラマの抗体、サメ抗体(IgNAR)、scFv抗体、イントラボディまたはナノボディ、例えばscFvイントラボディ、VHHイントラボディ等の抗体が含まれる。酵母SPLINT抗体ライブラリーが、タンパク質-タンパク質相互作用を破壊できるイントラボディについて試験するために利用可能である。かかる作用物質は、Constantini et al. (2008)に開示されるもののような、細胞透過性ペプチド配列または核局在ペプチド配列を含み得る。De Coupade et al. (2005)に開示されるもののような、VectocellまたはDiatoのペプチドベクターもインビボの送達のために有用である。
加えて、抗体は、細胞透過物質、例えば細胞透過性ペプチドへ融合され得る。細胞透過性ペプチドには、Tatペプチド、ペネトラチン、PepファミリーおよびMPGファミリー由来のもの等の短い両親媒性ペプチド、オリゴアルギニン、およびオリゴリジンが含まれる。一例において、細胞透過性ペプチドは細胞内送達を改善するために脂質(C6～C18脂肪酸)ドメインへもコンジュゲートされる(Koppelhus et al., 2008)。細胞透過性ペプチドの例は、Howl et al. (2007)およびDeshayes et al. (2008)中で見出され得る。従って、本発明は、共有結合(例えばペプチド結合)経由で、細胞透過性ペプチド配列へ任意でN末端またはC末端で融合される抗体の治療的使用も提供する。
抗体およびその断片を作製するための方法は、当技術分野において公知でありかつ／またはHarlow and Lane (editors) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, (1988)に記載されている。一般に、そのような方法において、任意の好適なまたは所望の担体、アジュバント、または薬学的に許容される賦形剤と共に任意で製剤化された、抗原もしくはその領域(例えば、細胞外ドメイン)またはその免疫原性断片もしくはエピトープあるいはそれ(即ち、免疫原)を発現および提示する細胞が、非ヒト動物、例えば、マウス、ニワトリ、ラット、ウサギ、モルモット、イヌ、ウマ、ウシ、ヤギまたはブタへ投与される。免疫原は、鼻腔内に、筋肉内に、皮下に、静脈内に、皮内に、腹腔内に、または他の公知の経路によって、投与され得る。
モノクローナル抗体は、本開示によって企図される抗体の一つの例示的な形態である。「モノクローナル抗体」または「mAb」という用語は、同じ抗原へ、例えば、抗原内の同じエピトープへ結合することができる均一な抗体集団を指す。この用語は、抗体の供給源またはそれが作製される様式に関して限定的であるように意図されない。
mAbの産生について、例えば、US4196265に例示される手順のような、多数の公知の技法のうちのいずれか1つが使用され得る。
あるいは、ABL-MYC技術(NeoClone, Madison WI 53713, USA)を使用して、MAbを分泌する細胞系を生成する(例えば、Largaespada et al., 1996に記載される通り)。
抗体はまた、ディスプレイライブラリー、例えば、例えばUS6300064および／またはUS5885793に記載されるような、ファージディスプレイライブラリーをスクリーニングすることによって生成または単離され得る。
本開示の抗体は合成抗体であり得る。例えば、抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体または脱免疫化抗体である。
一態様において、本明細書に記載される抗体はキメラ抗体である。「キメラ抗体」という用語は、重鎖および／または軽鎖の一部が特定の種(例えば、ネズミ科、例えばマウス)に由来するかまたは特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一または相同であり、一方、鎖の残りが別の種(例えば、霊長動物、例えばヒト)に由来するかまたは別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一または相同である、抗体を指す。キメラ抗体を作製するための方法は、例えば、US4816567およびUS5807715に記載されている。
本開示の抗体は、ヒト化またはヒト抗体であり得る。
「ヒト化抗体」という用語は、非ヒト種からの抗体に由来する抗原結合部位または可変領域、ならびにヒト抗体の構造および／または配列に基づく残りの抗体構造を有する、キメラ抗体のサブセットを指すように理解されるものとする。ヒト化抗体において、抗原結合部位は、一般に、ヒト抗体の可変領域中の適切なFR上へグラフトされた非ヒト抗体由来の相補性決定領域(CDR)、およびヒト抗体由来の残りの領域を含む。抗原結合部位は、野生型(即ち、非ヒト抗体のものと同一)であってもよいか、または1つまたは複数のアミノ酸置換によって改変されていてもよい。いくつかの場合において、ヒト抗体のFR残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられている。
非ヒト抗体またはその一部(例えば、可変領域)をヒト化するための方法は、当技術分野において公知である。ヒト化は、US5225539またはUS5585089の方法に従い行うことができる。抗体をヒト化するための他の方法は排除されない。
STING阻害物質
いくつかの態様において、cGAS-STING経路阻害物質はSTING阻害物質である。そのような阻害物質は、例えば、STING活性(例えば、TPK1活性化)を減少させること、cGAMPへのSTINGの結合を競合的に阻害すること、またはSTING発現を減少させることによって、STINGを特異的に標的とし得る。
いくつかの態様において、STING阻害物質は環状ジヌクレオチドである。そのような環状ジヌクレオチド阻害物質は、STINGがTPK1を活性化するのを妨げながら、STING上のcGAMP結合部位を占領すると考えられる。好適な環状ジヌクレオチドはUS20140341976およびWO2015185565に記載されている。いくつかの態様において、環状ジヌクレオチドは、
(b)
Figure 2022506341000004
へ共有結合的に連結された式(I)：
(a)
Figure 2022506341000005
の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、互変異性体、もしくはプロドラッグであり、
式中、式(I)の化合物の置換に関して以下の定義が提供され、
R3は、(b)の5′炭素への共有結合であり、
R4は、(b)の2′または3′炭素への共有結合であり、
R1は、(a)のリボース環へそのN9窒素を通して連結されたプリンであり、
R5は、(b)のリボース環へそのN9窒素を通して連結されたプリンであり、
X1およびX2の各々は、独立して、OまたはSであり、
R2は、H、または、1～18個の炭素および0～3個のヘテロ原子の置換されていてもよい直鎖アルキル、1～9個の炭素の置換されていてもよいアルケニル、1～9個の炭素の置換されていてもよいアルキニル、または置換されていてもよいアリールであり、ここで、置換は、存在する場合、独立して、C1～6アルキル直鎖または分岐鎖、ベンジル、ハロゲン、トリハロメチル、C1～6アルコキシ、-NO2、-NH2、-OH、＝O、R′がHもしくは低級アルキルである-COOR′、-CH2OH、および-CONH2からなる群より選択され得、かつ
(a)と共有結合していない(b)の2′または3′炭素は、-O-R6であり、ここで、R6は、H、または、1～18個の炭素および0～3個のヘテロ原子の置換されていてもよい直鎖アルキル、1～9個の炭素の置換されていてもよいアルケニル、1～9個の炭素の置換されていてもよいアルキニル、または置換されていてもよいアリールであり、ここで、置換は、存在する場合、独立して、C1～6アルキル直鎖または分岐鎖、ベンジル、ハロゲン、トリハロメチル、C1～6アルコキシ、-NO2、-NH2、-OH、＝O、R′がHもしくは低級アルキルである-COOR′、-CH2OH、および-CONH2からなる群より選択され得る。
いくつかの態様において、R2およびR6は両方ともがHではない。いくつかの態様において、R2およびR6の一方または両方は、独立して、1～18個の炭素の非置換直鎖アルキル、1～9個の炭素の非置換アルケニル、1～9個の炭素の非置換アルキニル、または非置換アリールであり、最も好ましくは、アリル、プロパルギル、ホモアリル、ホモプロパルギル、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、イソブチル、シクロプロピルメチル、およびベンジルからなる群より選択される。いくつかの態様において、R2およびR6の一方または両方は、アリルである。いくつかの態様において、R2およびR6の一方または両方は、プロパルギルを含む。いくつかの態様において、R2およびR6の一方または両方は、メチルである。いくつかの態様において、R2およびR6の一方または両方は、エチルである。いくつかの態様において、R2およびR6の一方または両方は、プロピルである。いくつかの態様において、R2およびR6の一方または両方は、ベンジルである。いくつかの態様において、R2またはR6の一方は、アリル、プロパルギル、ホモアリル、ホモプロパルギル、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、イソブチル、シクロプロピルメチル、およびベンジルからなる群より選択され、R2またはR6の他方はプロドラッグ脱離基を含む。
いくつかの態様において、プロドラッグ脱離基は、細胞エステラーゼによって除去される部分である。いくつかの態様において、プロドラッグ脱離基は、C6～C18脂肪酸エステルである。
いくつかの態様において、X1およびX2は両方ともSである。
いくつかの態様において、R1およびR5は、独立して、アデニン、グアニン、イノシン、およびキサンチンからなる群より選択される。いくつかの態様において、R1およびR5の一方または両方は、アデニンである。いくつかの態様において、R1およびR5の一方または両方は、グアニンである。いくつかの態様において、R1はアデニンであり、R5はグアニンである。
本開示によって包含される他のSTING阻害物質としては、Haag et al. (2018)に記載される小分子化合物が挙げられる。そのような化合物は、予測される膜貫通残基Cys91を共有結合的に標的とし、それによってSTINGの活性化誘導パルミトイル化を遮断する。STINGのパルミトイル化は、ゴルジ装置における多量体複合体へのそのアセンブリに、次に、下流シグナル伝達因子の動員に必須であると考えられる。従って、Cys91を標的とするSTING阻害物質およびその誘導体は、STING媒介炎症性サイトカイン産生を減少させると予測される。従って、いくつかの態様において、本発明において使用するためのSTING阻害物質は、STINGのパルミトイル化誘導クラスタリングを遮断する。いくつかの態様において、STING阻害物質はSTINGへ共有結合する。いくつかの態様において、STING阻害物質はSTINGのCys91へ共有結合する。いくつかの態様において、STING阻害物質はニトロフラン誘導体である。いくつかの態様において、STING阻害物質はHaag et al. (2018)に記載されるようなH-151である。
一態様において、STING阻害物質は、式(II)：
Figure 2022506341000006
の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、互変異性体、もしくはプロドラッグであり得、
式中、式(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IId)、(IIe)、(IIf)を含む式(II)の化合物の置換に関して以下の定義が提供され、
nは、0～5を示し；
環Aは、複素環式または炭素環式環であり、ここで、複素環式および炭素環式は、ハロ、CN、NO2、OC(O)R2、C(O)R2、C(O)NR2R3、C(O)OR2、OR2、OS(O)2R2、NR2R3、SR2、およびR2で置換されていてもよく；ここで、R2およびR3は、各々独立して、水素、C1～10アルキル、C1～10アルキルハロ、アリールC1～10アルキル、ヘタリールC1～10アルキル、および複素環式より選択され；
Xは、存在しないか、または、NR2、C1～10アルキル、C1～10アルケニル、C2～10アルキニルからなる群より選択され、ここで、C1～10アルキル、C2～10アルケニル、C2～10アルキニルは、各々、O、NおよびSより独立して選択される1つまたは複数のヘテロ原子で中断されていてもよく、ここで、C1～10アルキル、C2～10アルケニル、C2～10アルキニルは、各々、ハロ、CN、NO2、OC(O)R2、C(O)R2、C(O)NR2R3、C(O)OR2、OR2、OS(O)2R2、NR2R3、SR2、およびR2で置換されていてもよく；ここで、R2およびR3は、本明細書に記載されるような任意の態様に従って提供され得；かつ
R1は、独立して、水素、ハロ、CN、NO2、OC(O)R4、C(O)R4、C(O)NR4R5、C(O)OR4、OR4、OS(O)2R4、NR4R5、SR4およびR4より選択され、ここで、R4およびR5は、各々独立して、水素、C1～10アルキル、C1～10アルキルハロ、アリールC1～10アルキル、ヘタリールC1～10アルキル、および複素環式より選択され、ここで、C1～10アルキル部分は、O、NおよびSより独立して選択される1つまたは複数のヘテロ原子で中断されていてもよく、C1～10アルキル、アリールC1～10アルキル、ヘタリールC1～10アルキル、および複素環式基は、各々、ハロ、CN、NO2、OC(O)R2、C(O)R2、C(O)NR2R3、C(O)OR2、OR2、OS(O)2R2、NR2R3、SR2、およびR2で置換されていてもよく；ここで、R2およびR3は、本明細書に記載されるような任意の態様に従って提供され得る。
いくつかの態様において、STING阻害物質は、式(IIa)または式(IIb)：
Figure 2022506341000007
の化合物であり得、
式中、n、環AおよびR1は、式(II)に従って本明細書に記載されるような任意の態様に従って提供され得る。
いくつかの態様において、R1は、水素、ハロ、C1～10アルキル、C1～10アルキルハロ、アリールC1～10アルキル、ヘタリールC1～10アルキル、複素環式、CN、およびNO2からなる群より独立して選択される。いくつかの態様において、R1は、水素、ハロおよびC1～10アルキルより独立して選択され得る。一態様において、R1は、C1～10アルキル、例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニルまたはデシルである。一態様において、R1は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、またはヘキシルである。別の態様において、R1は、ハロ、例えばIまたはBrである。別の態様において、R1は、C1～10アルキルハロ、例えばCF3である。
いくつかの態様において、環Aは、複素環式、例えば、単環式または多環式複素環式であり得、ここで、単環式または多環式複素環式は、完全にまたは部分的に飽和した複素環式で置換されていてもよい。多環式複素環式は、置換されていてもよい単環式炭素環式基と縮合されていてもよい、5または6員の複素環式環であり得る。例えば、環Aは、ピリジル、ジヒドロイピリジル、テトラヒドロピリジル(ピペリジル)、チアゾリル、テトラヒドロチオフェニル、硫黄酸化型テトラヒドロチオフェニル、ピリミジニル、フラニル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、テトラゾリル、ベンゾフラニル、チアナフタレニル、インドリル、インドレニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンゾイミダゾリル、ピペリジニル、4-ピペリドニル、ピロリジニル、2-ピロリドニル、ピロリニル、テトラヒドロフラニル、bis-テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、bis-テトラヒドロピラニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、デカヒドロキノリニル、オクタヒドロイソキノリニル、アゾシニル、トリアジニル、6H-1,2,5-チアジアジニル、2H,6H-1,5,2-ジチアジニル、チエニル、チアントレニル、ピラニル、イソベンゾフラニル、クロメニル、キサンテニル、フェノキサチニル、2H-ピロリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、ピラジニル、ピリダジニル、インドリジニル、イソインドリル、3H-インドリル、1H-インダゾリル、プリニル、4H-キノリジニル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、プテリジニル、4aH-カルバゾリル、カルバゾリル、β-カルボリニル、フェナントリジニル、アクリジニル、ピリミジニル、フェナントロリニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フラザニル、フェノキサジニル、イソクロマニル、クロマニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピペラジニル、インドリニル、イソインドリニル、キヌクリジニル、モルホリニル、オキサゾリジニル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、オキシンドリル、ベンゾオキサゾリニル、およびイサチノイルからなる群より選択される複素環式であり得、ここで、複素環式環は、水素、ハロ、CN、NO2、OC(O)R4、C(O)R4、C(O)NR4R5、C(O)OR4、OR4、OS(O)2R4、NR4R5、SR4およびR4で置換されていてもよく、ここで、R4およびR5は、式(II)に従って本明細書に記載されるような任意の態様に従って提供され得る。
いくつかの態様において、環Aは、式(IIIa)または式(IIIb)：
Figure 2022506341000008
の基より選択される複素環式であり得、
式中、式(IIIa)および(IIIb)の化合物の置換に関して以下の定義が提供され、
A1およびA2は、各々独立して、CR6より選択され得るか、またはA1およびA2は、一緒に結合して炭素環式または複素環式環を形成し得；
R6は、独立して、水素、ハロ、水素、ハロ、CN、NO2、OC(O)R4、C(O)R4、C(O)NR4R5、C(O)OR4、OR4、OS(O)2R4、NR4R5、SR4より選択され得、ここで、R4およびR5は、式(II)に従って本明細書に記載されるような任意の態様に従って提供され得；
ここで、C1～10アルキル部分、炭素環式および複素環式は、各々、ハロ、CN、NO2、OC(O)R4、C(O)R4、C(O)NR4R5、C(O)OR4、OR5、OS(O)2R4、NR4R5、SR4、およびR4より独立して選択される1つまたは複数の置換基で置換されていてもよく；ここで、R4およびR5は、式(II)に従って本明細書に記載されるような任意の態様に従って提供され得る。
一態様において、環Aは、式(IIIc)：
Figure 2022506341000009
の基より選択され得、
式中、式(IIIc)の化合物の置換に関して以下の定義が提供され、
A3、A4、A5、およびA6は、各々独立して、NおよびCR6より選択され得、
R6は、水素、ハロ、水素、ハロ、CN、NO2、OC(O)R4、C(O)R4、C(O)NR4R5、C(O)OR4、OR4、OS(O)2R4、NR4R5、SR4より選択され得、ここで、R4およびR5は、式(II)に従って本明細書に記載されるような任意の態様に従って提供され得る。
一態様において、環Aは、インドリルまたはフラニルであり、ここで、インドニル（indonyl）またはフラニルは、水素、ハロ、CN、NO2、OC(O)R4、C(O)R4、C(O)NR4R5、C(O)OR4、OR4、OS(O)2R4、NR4R5、SR4で置換されていてもよく、ここで、R4およびR5は、式(II)に従って本明細書に記載されるような任意の態様に従って提供され得る。一態様において、環Aは、1つまたは複数のC1～6アルキルで置換されていてもよいインドリルである。別の態様において、環Aは、NO2で置換されていてもよいフラニルである。
いくつかの態様において、STING阻害物質は、式(IIc)または式(IId)：
Figure 2022506341000010
の化合物であり得、
式中、A1～A6、R1およびnは、式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIIa)、(IIIb)、および(IIIc)のうちのいずれか1つに従って本明細書に記載されるような任意の態様に従って提供され得る。
いくつかの態様において、STING阻害物質は、式(IIe)または式(IIf)：
Figure 2022506341000011
の化合物であり得、
式中、
R1、およびnは、式(II)、(IIa)、および(IIb)のうちのいずれか1つに従って本明細書に記載されるような任意の態様に従って提供され得；
R7は、独立して、水素、ハロ、水素、ハロ、CN、NO2、OC(O)R4、C(O)R4、C(O)NR4R5、C(O)OR4、OR4、OS(O)2R4、NR4R5、SR4より選択され得、ここで、R4およびR5は、本明細書に記載されるような任意の態様に従って提供され得る。
一態様において、STING阻害物質は、以下の化合物：
Figure 2022506341000012
のうちのいずれか1つより選択される化合物であり得る。
一つの好ましい態様において、STING阻害物質はH-151である。
いくつかの態様において、STING阻害物質はWO2013/166000に記載される化合物である。そのようなSTING阻害物質としては、ジクロフェナク、R(-)-2,10,11-トリヒドロキシアポルフィン臭化水素酸塩、ジプロピルドーパミン臭化水素酸塩、(±)-trans-U-50488、2,2'-ビピリジン、SP600125、メシル酸ドキサゾシン、ミトキサントロン、MRS 2159、ネマジピン-A、(±)-PPHT塩酸塩、SMER28、キニーネ、またはキスカル酸が挙げられる。そのような化合物は市販されている。
いくつかの態様において、STING阻害物質はポリヌクレオチドである。例えば、ポリヌクレオチドは、STINGの発現を減少させることによってSTINGを阻害し得る。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは、RNA干渉によってSTINGの発現を減少させる。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドはsiRNAである。STING mRNAを標的とするために使用され得る例示的なsiRNAは、例えば、ThermoFisherから市販されている(siRNA ID: s50644、s50645、s50646、およびs226307)。
いくつかの態様において、STING阻害物質はポリペプチドである。いくつかの態様において、ポリペプチドは、STINGへ結合する抗体の抗原結合部位を含む。いくつかの態様において、STING阻害物質は抗体またはその断片である。STINGを標的とする抗体は、R&D Systems (例えば、カタログ番号MAB7169)のような様々な供給源から市販されている。そのような抗体は、ルーチンな方法を使用して、抗原結合部位を含む他のポリペプチド、例えば、本明細書に記載されるようなscFv抗体、イントラボディまたはナノボディを誘導するために使用することができる。
cGAS阻害物質
いくつかの態様において、cGAS-STING経路阻害物質はcGAS阻害物質である。そのような阻害物質は、例えば、cGAS活性(例えば、cGAMP触媒作用)を減少させること、mtDNAへのcGASの結合を阻害すること、またはcGAS発現を減少させることによって、cGASを特異的に標的とし得る。cGASによるcGAMPの生成は、酵素がdsDNAへ結合し、その2つの基質、ATPおよびGTPを使用して、環状ジヌクレオチドであるcGAMPを生成することを必要とする。従って、cGAS阻害物質は、例えば、dsDNA結合を破壊すること、ATPおよび／もしくはGTPが活性部位に入るのを遮断すること、またはATPおよびGTP間のホスホジエステル結合の生成を阻害してcGAMPの環化を妨げることによって、cGAS活性を減少させることができる。
いくつかの態様において、cGAS阻害物質はWO2017176812に記載される化合物である。
いくつかの態様において、cGAS阻害物質は、式(IV)：
Figure 2022506341000013
の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、互変異性体、もしくはプロドラッグであり、
式中、式(IVa)、(IVb)、および(IVc)を含む式(IV)の化合物の置換に関して以下の定義が提供され、
Xは、NHまたはSであり；
Yは、OまたはSであり；
Zは、O、S、CHR1aまたはNR1aであり；
R1aは、水素、C1～6アルキル、または、1つもしくは複数のハロゲン、チオール、ヒドロキシル、カルボニル、カルボキシル、カルボニルオキシル、C1～6アルコキシ、C1～6ヒドロキシアルコキシ、アミノ、C1～6アルキルアミノ、ジ(C1～6アルキル)アミノ、もしくはアジド基で選択的に官能化されたC1～6アルキルであり；
Gは、NまたはCであり；
GがNである場合、R1は、水素 C1～6アルキル、または、1つもしくは複数のハロゲン、チオール、ヒドロキシル、カルボニル、カルボキシル、カルボニルオキシル、C1～6アルコキシ、C1～6ヒドロキシアルコキシ、アミノ、C1～6アルキルアミノ、ジ(C1～6アルキル)アミノ、もしくはアジド基で選択的に官能化されたC1～6アルキルであり、
GがNである場合、かつZがR1aを含む場合、R1-R1aは、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH＝CH-、-C(CH3)＝CH-または-CH＝C(CH3)-基として連結され；かつ
GがCである場合、かつZがR1aを含む場合、R1-R1aは、＝CH-CH＝CH-、＝N-CH＝CH-、または＝CH-N＝CH-基として連結され；
R1は水素もしくはC1～6アルキルであるか、または、R1-R1aは、連結されて-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH＝CH-、-C(CH3)＝CH-、もしくは-CH＝C(CH3)-基を形成する、またはそれらが結合している炭素もしくは窒素原子と一緒になってピリジン、ピリミジン、もしくはピラジン環を形成し；
R2は、水素、ハロゲン、C1～6アルキル、または、1つもしくは複数のハロゲン、チオール、ヒドロキシル、カルボニル、カルボキシル、カルボニルオキシル、C1～6アルコキシ、C1～6ヒドロキシアルコキシ、アミノ、C1～6アルキルアミノ、ジ(C1～6アルキル)アミノ、もしくはアジド基で選択的に官能化されたC1～6アルキルであり；
R2aは、フェニル、または、イミダゾリル、ピリジル、ピリジジニル（pyridizinyl）、ピリミジニル、およびピラジニルからなる群より選択されるヘテロアリール基であり、ここで、フェニルまたは複素環式基は、ハロゲン、-SR3a、-S(O)R3a、-OR3a、-OCH2R3b、-OCH(CH3)R3b、-OC(O)NHR3a、-NR3aR4、-NHSO2R3a、アジド、-CHO、-CO2R3a、シアノ、C1～6アルキルまたは-CR5aR6aR7a、C2～6アルケニル、-C(R5a)＝C(R8a)(R9a)、C2～6アルキニル、および-C≡CR8aからなる群ハロより独立して選択される1～4個の置換基で置換されていてもよく；
R3a、R3b、およびR4aは、独立して、水素、フェニル、ナフチル、ピリジル、ピリミジニル、イミダゾリル、1,2,3-トリアゾリル、キノリニル、イソキノリニル、チアゾリル、テトラゾリル基、C1～6アルキル、環状-(C1～8アルキル)-、環状-(C1～6オキサアルキル)-、環状-(C1～6アザアルキル)-、C2～6アルケニル、またはC2～6アルキニルであり；
ここで、フェニル、ナフチル、ピリジル、ピリミジニル、イミダゾリル、1,2,3-トリアゾリル、キノリニル、イソキノリニル、チアゾリル、またはテトラゾリル基は、ハロゲン、チオール、C1～6アルキルチオエーテル、C1～6アルキルスルホキシド、C1～6アルキル、C1～6アルコキシル、アミノ、C1～6アルキルアミノ、C1～6ジアルキルアミノ、C1～6アルキルスルホンアミド、アジド、-CHO、-CO2H、C1～6アルキルカルボキシレート、シアノ、C2～6アルケニル、およびC2～6アルキニル基からなる群より独立して選択される1～3個の置換基で置換されていてもよく；かつ、C1～6アルキル、環状-(C1～8アルキル)-、環状-(C1～6オキサアルキル)-、環状-(C1～4アザアルキル)-、C2～6アルケニル、またはC2～6アルキニル基は、1つもしくは複数のハロゲン、チオール、ヒドロキシル、カルボニル、カルボキシル、カルボニルオキシル、C1～6アルコキシ、C1～6ヒドロキシアルコキシ、アミノ、C1～6アルキルアミノ、ジ(C1～6アルキル)アミノ、アジド、ピペリジニル、フェニル、ナフチル、ピリジル、ピリミジニル、イミダゾリル、1,2,3-トリアゾリル、キノリニル、イソキノリニル、チアゾリル、またはテトラゾリル基で選択的に官能化されており；かつ
R5a、R6a、R7a、R8a、およびR9aは、独立して、水素、フェニル、ナフチル、ピリジル、ピリミジニル、イミダゾリル、1,2,3-トリアゾリル、キノリニル、イソキノリニル、チアゾリル、テトラゾリル基、C1～6アルキル、環状-(C1～8アルキル)-、環状-(C1～6オキサアルキル)-、環状-(C1～6アザアルキル)-、C2～6アルケニル、C2～6アルキニル、C1～6アルコキシル、環状-(C1～8アルコキシル)-、環状-(C1～6オキサアルコキシル)-、環状-(C1～6アザアルコキシル)-であり；
ここで、フェニル、ナフチル、ピリジル、ピリミジニル、イミダゾリル、1,2,3-トリアゾリル、キノリニル、イソキノリニル、またはチアゾリル、テトラゾリル基は、ハロゲン、チオール、C1～6アルキルチオエーテル、C1～6アルキルスルホキシド、C1～6アルキル、C1～6アルコキシル、アミノ、C1～6アルキルアミノ、C1～6ジアルキルアミノ、C1～6アルキルスルホンアミド、アジド、-CHO、-CO2H、C1～6アルキルカルボキシレート、シアノ、C2～6アルケニル、およびC2～6アルキニル基からなる群より独立して選択される1～3個の置換基で置換されていてもよく、かつ、C1～6アルキル、環状-(C1～8アルキル)-、環状-(C1～6オキサアルキル)-、環状-(C1～6アザアルキル)-、C2～6アルケニル、またはC2～6アルキニル基は、1つもしくは複数のハロゲン、チオール、ヒドロキシル、カルボニル、カルボキシル、カルボニルオキシル、C1～6アルコキシ、C1～6ヒドロキシアルコキシ、アミノ、C1～6アルキルアミノ、ジ(C1～6アルキル)アミノ、アジド、ピペリジニル、フェニル、ナフチル、ピリジル、ピリミジニル、イミダゾリル、1,2,3-トリアゾリル、キノリニル、イソキノリニル、チアゾリル、またはテトラゾリル基で選択的に官能化されている。
いくつかの態様において、XはSであり、YはOまたはSであり、かつ、R2aは、ハロゲン、-SR3a、-S(O)R3a、-OR3a、-OCH2R3b、-OCH(CH3)R3b、-OC(O)NHR3a、-NR3aR4a、-NHSO2R3a、アジド、カルボニル、-CHO、CO2R3a、シアノ、C1～6アルキルまたは-CR5aR6aR7a、C2～6アルケニ（alkeny）、-C(R5a)＝C(R8a)(R9a)、C2～6アルキニル、および-C≡CR8aからなる群より独立して選択される0～3個の置換基を有する、イミダゾリル、ピリジル、ピリジジニル、ピリミジニル、またはピラジニル基である。
いくつかの態様において、XはSであり、YはOまたはSであり、かつ、R2aは、ハロゲン、-SR3a、-S(O)R3a、-OR3a、-OCH2R3b、-OCH(CH3)R3b、-OC(O)NHR3a、-NR3aR4a、-NHSO2R3a、アジド、-CHO、CO2R3a、シアノ、C1～6アルキルまたは-CR5aR6aR7a、C2～6アルケニ、-C(R5a)＝C(R8a)(R9a)、C2～6アルキニル、および-C≡CR8aからなる群より独立して選択される0～3個の置換基を有するイミダゾリル基である。
いくつかの態様において、XはSであり、YはOまたはSであり、かつ、R2aは、ハロゲン、-SR3a、-S(O)R3a、-OR3a、-OCH2R3b、-OCH(CH3)R3b、-OC(O)NHR3a、-NR3aR4a、-NHSO2R3a、アジド、-CHO、CO2R3a、シアノ、C1～6アルキルまたは-CR5aR6aR7a、C2～6アルケニ、-C(R5a)＝C(R8a)(R9a)、C2～6アルキニル、および-C≡CR8aからなる群より独立して選択される0～3個の置換基を有するピリジル基である。
いくつかの態様において、XはSであり、YはOまたはSであり、かつ、R2aは、ハロゲン、-SR3a、-S(O)R3a、-OR3a、-OCH2R3b、-OCH(CH3)R3b、-OC(O)NHR3a、-NR3aR4a、-NHSO2R3a、アジド、-CHO、CO2R3a、シアノ、C1～6アルキルまたは-CR5aR6aR7a、C2～6アルケニ、-C(R5a)＝C(R8a)(R9a)、C2～6アルキニル、および-C≡CR8aからなる群より独立して選択される0～3個の置換基を有するピリジジニル基である。
いくつかの態様において、XはSであり、YはOまたはSであり、かつ、R2aは、ハロゲン、-SR3a、-S(O)R3a、-OR3a、-OCH2R3b、-OCH(CH3)R3b、-OC(O)NHR3a、-NR3aR4、-NHSO2R3a、アジド、-CHO、CO2R3a、シアノ、C1～6アルキルまたは-CR5aR6aR7a、C2～6アルケニ、-C(R5a)＝C(R8a)(R9a)、C2～6アルキニル、および-C≡CR8aからなる群より独立して選択される0～3個の置換基を有するピリミジニル基である。
いくつかの態様において、XはSであり、YはOまたはSであり、かつ、R2aは、ハロゲン、-SR3a、-S(O)R3a、-OR3a、-OCH2R3b、-OCH(CH3)R3b、-OC(O)NHR3a、-NR3aR4a、-NHSO2R3a、アジド、-CHO、CO2R3a、シアノ、C1～6アルキルまたは-CR5aR6aR7a、C2～6アルケニ、-C(R5a)＝C(R8a)(R9a)、C2～6アルキニル、および-C≡CR8aからなる群より独立して選択される0～3個の置換基を有するピラジニル基である。
いくつかの態様において、XはSであり、YはOまたはSであり、かつ、R2aは、ハロゲン、-SR3a、-S(O)R3a、-OR3a、-OCH2R3b、-OCH(CH3)R3b、-OC(O)NHR3a、-NR3aR4a、-NHSO2R3a、アジド、-CHO、CO2R3a、シアノ、C1～6アルキルまたは-CR5aR6aR7a、C2～6アルケニ、-C(R5a)＝C(R5a)(R5a)、C2～6アルキニル、および-C≡CR8aからなる群より独立して選択される0～4個の置換基を有するフェニル基である。
いくつかの態様において、XはSであり、YはOまたはSであり、GはNであり、かつ、R1は、水素 C1～6アルキル、または、1つもしくは複数のハロゲン、チオール、ヒドロキシル、カルボニル、カルボキシル、カルボニルオキシル、C1～6アルコキシ、C1～6ヒドロキシアルコキシ、アミノ、C1～6アルキルアミノ、ジ(C1～6アルキル)アミノ、もしくはアジド基で選択的に官能化されたC1～6アルキルである。
いくつかの態様において、XはSであり、YはOまたはSであり、GはNであり、かつ、R1-R1aは、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH＝CH-、-C(CH3)＝CH-、または-CH＝C(CH3)-基として連結される。
いくつかの態様において、XはSであり、YはOまたはSであり、GはCであり、ZはNR1aであり、かつ、R1-R1aは、＝CH-CH＝CH-、＝N-CH＝CH-、または＝CH-N＝CH-基として連結される。
いくつかの態様において、XはSであり、YはOまたはSであり、かつ、R2は、水素、ハロゲン、C1～6アルキル、または、1つもしくは複数のハロゲン、チオール、ヒドロキシル、カルボニル、カルボキシル、カルボニルオキシル、C1～6アルコキシ、C1～6ヒドロキシアルコキシ、アミノ、C1～6アルキルアミノ、ジ(C1～6アルキル)アミノ、もしくはアジド基で選択的に官能化されたC1～6アルキルである。
いくつかの態様において、R2は、水素、Cl、Br、またはメチルである。
いくつかの態様において、cGAS阻害物質は、式(IVa)：
Figure 2022506341000014
の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、互変異性体、もしくはプロドラッグであり、
式中、
Xは、NHまたはSであり；
Yは、OまたはSであり；
Zは、O、S、CHR1aまたはNR1aであり；
R1aは、水素、C1～6アルキル、または、1つもしくは複数のハロゲン、チオール、ヒドロキシル、カルボニル、カルボキシル、カルボニルオキシル、C1～6アルコキシ、C1～6ヒドロキシアルコキシ、アミノ、C1～6アルキルアミノ、ジ(C1～6アルキル)アミノ、もしくはアジド基で選択的に官能化されたC1～6アルキルであり；
Gは、NまたはCであり；
GがNである場合、R1は、水素 C1～6アルキル、または、1つもしくは複数のハロゲン、チオール、ヒドロキシル、カルボニル、カルボキシル、カルボニルオキシル、C1～6アルコキシ、C1～6ヒドロキシアルコキシ、アミノ、C1～6アルキルアミノ、ジ(C1～6アルキル)アミノ、もしくはアジド基で選択的に官能化されたC1～6アルキルであるか、または、R1-R1aは、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH＝CH-、-C(CH3)＝CH-、もしくは-CH＝C(CH3)-基として連結され；かつ、GがCである場合、R1-R1aは、＝CH-CH＝CH-、＝N-CH＝CH-、または＝CH-N＝CH-基として連結され；
R1は水素もしくはC1～6アルキルであるか、または、R1-R1aは、連結されて-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH＝CH-、-C(CH3)＝CH-、もしくは-CH＝C(CH3)-基を形成する、またはそれらが結合している炭素もしくは窒素原子と一緒になってピリジン、ピリミジン、もしくはピラジン環を形成し；
R2は、水素、ハロ、C1～6アルキル、または、1つもしくは複数のハロゲン、チオール、ヒドロキシル、カルボニル、カルボキシル、カルボニルオキシル、C1～6アルコキシ、C1～6ヒドロキシアルコキシ、アミノ、C1～6アルキルアミノ、ジ(C1～6アルキル)アミノ、もしくはアジド基で選択的に官能化されたC1～6アルキルであり：
R3、R5、およびR6は、独立して、水素、ハロゲン、-SR3a、-S(O)R3a、-OR3a、-OCH2R3b、-OCH(CH3)R3b、-OC(O)NHR3a、-NR3aR4a、-NHSO2R3a、アジド、-CHO、CO2R3a、シアノ、C1～6アルキルもしくは-CR5aR6aR7a、C2～6アルケニ、-C(R5a)＝C(R8a)(R9a)、C2～6アルキニル、-C≡CR8aであるか、または、R2-R3は-CH2CH2-もしくは-CH2CH2CH2-基として連結され；
R3a、R3b、およびR48は、独立して、水素、フェニル、ナフチル、ピリジル、ピリミジニル、イミダゾリル、1,2,3-トリアゾリル、キノリニル、イソキノリニル、チアゾリル、テトラゾリル基、C1～6アルキル、環状-(C1～8アルキル)-、環状-(C1～6オキサアルキル)-、環状-(C1～6アザアルキル)-、C2～6アルケニル、C2～6アルキニルであり；
ここで、フェニル、ナフチル、ピリジル、ピリミジニル、イミダゾリル、1,2,3-トリアゾリル、キノリニル、イソキノリニル、チアゾリル、またはテトラゾリル基は、ハロゲン、チオール、C1～6アルキルチオエーテル、C1～6アルキルスルホキシド、C1～6アルキル、C1～6アルコキシル、アミノ、C1～6アルキルアミノ、C1～6ジアルキルアミノ、C1～6アルキルスルホンアミド、アジド、-CHO、-CO2H、C1～6アルキルカルボキシレート、シアノ、C2～6アルケニ、およびC2～6アルキニル基からなる群より独立して選択される1～3個の置換基で置換されていてもよく；かつ、C1～6アルキル、環状-(C1～8アルキル)-、環状-(C1～6オキサアルキル)-、環状-(C1～6アザアルキル)-、C2～6アルケニル、またはC2～6アルキニル基は、1つもしくは複数のハロゲン、チオール、ヒドロキシル、カルボニル、カルボキシル、カルボニルオキシル、C1～6アルコキシ、C1～6ヒドロキシアルコキシ、アミノ、C1～6アルキルアミノ、ジ(C1～6アルキル)アミノ、アジド、ピペリジニル、フェニル、ナフチル、ピリジル、ピリミジニル、イミダゾリル、1,2,3-トリアゾリル、キノリニル、イソキノリニル、チアゾリル、またはテトラゾリル基で選択的に官能化されており；
R4は、水素またはハロゲンである。
いくつかの態様において、XはSであり、YはOまたはSであり、GはNであり、かつ、R1は、水素 C1～6アルキル、または、1つもしくは複数のハロゲン、チオール、ヒドロキシル、カルボニル、カルボキシル、カルボニルオキシル、C1～6アルコキシ、C1～6ヒドロキシアルコキシ、アミノ、C1～6アルキルアミノ、ジ(C1～6アルキル)アミノ、もしくはアジド基で選択的に官能化されたC1～6アルキルである。
いくつかの態様において、XはSであり、YはOまたはSであり、GはNであり、かつ、R1-R1aは、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH＝CH-、-C(CH3)＝CH-、または-CH＝C(CH3)-基として連結される。
いくつかの態様において、XはSであり、YはOまたはSであり、GはCであり、ZはNR1aであり、かつ、R1-R1aは、＝CH-CH＝CH-、＝N-CH＝CH-、または＝CH-N＝CH-基として連結される。
いくつかの態様において、R2aは、水素、Cl、Br、またはメチルである。
いくつかの態様において、XはSであり、YはOまたはSであり、GはNであり、かつ、R1は、水素 C1～6アルキル、または、1つもしくは複数のハロゲン、チオール、ヒドロキシル、カルボニル、カルボキシル、カルボニルオキシル、C1～6アルコキシ、C1～6ヒドロキシアルコキシ、アミノ、C1～6アルキルアミノ、ジ(C1～6アルキル)アミノ、もしくはアジド基で選択的に官能化されたC1～6アルキルである。
いくつかの態様において、XはSであり、YはOまたはSであり、GはCであり、ZはNR1aであり、かつ、R1-R1aは、＝CH-CH＝CH-、＝N-CH＝CH-、または＝CH-N＝CH-基として連結される。
いくつかの態様において、cGAS阻害物質は、式(IVb)：
Figure 2022506341000015
の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、互変異性体、もしくはプロドラッグであり、
式中、
Xは、NHまたはSであり；
Yは、OまたはSであり；
Zは、O、S、CHR1a、またはNR1aであり；
R11は、水素、C1～6アルキル、または、1つもしくは複数のハロゲン、チオール、ヒドロキシル、カルボニル、カルボキシル、カルボニルオキシル、C1～6アルコキシ、C1～6ヒドロキシアルコキシ、アミノ、C1～6アルキルアミノ、ジ(C1～6アルキル)アミノ、もしくはアジド基で選択的に官能化されたC1～6アルキルであり；
Gは、NまたはCであり；
GがNである場合、R1は、水素 C1～6アルキル、または、1つもしくは複数のハロゲン、チオール、ヒドロキシル、カルボニル、カルボキシル、カルボニルオキシル、C1～6アルコキシ、C1～6ヒドロキシアルコキシ、アミノ、C1～6アルキルアミノ、ジ(C1～6アルキル)アミノ、もしくはアジド基で選択的に官能化されたC1～6アルキルであるか、または、R1-R1aは、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH＝CH-、-C(CH3)＝CH-、もしくは-CH＝C(CH3)-基として連結され；かつ、GがCである場合、R1-R1aは、＝CH-CH＝CH-、＝N-CH＝CH-、または＝CH-N＝CH-基として連結され；
Wは、OR10aまたはNHR10aであり；
ここで、R10aは、水素、C1～6アルキル、1つもしくは複数のハロゲン、チオール、ヒドロキシル、カルボニル、カルボキシル、カルボニルオキシル、C1～6アルコキシ、C1～6ヒドロキシアルコキシ、アミノ、C1～6アルキルアミノ、ジ(C1～6アルキル)アミノ、もしくはアジド基で選択的に官能化されたC1～6アルキルであるか、または、R10a-R6は、-CH2-CH2-、-CH＝CH-、-N＝CH-、もしくは-CH＝N-基として連結され；
R2は、水素、ハロ、C1～6アルキル、または、1つもしくは複数のハロゲン、チオール、ヒドロキシル、カルボニル、カルボキシル、カルボニルオキシル、C1～6アルコキシ、C1～6ヒドロキシアルコキシ、アミノ、C1～6アルキルアミノ、ジ(C1～6アルキル)アミノ、もしくはアジド基で選択的に官能化されたC1～6アルキルであり；
R3およびR6は、独立して、水素、ハロゲン、-SR3a、-S(O)R3a、-OR3a、-OCH2R3b、-OCH(CH3)R3b、-OC(O)NHR3a、-NR3aR4a、-NHSO2R3a、アジド、-CHO、CO2R3a、シアノ、C1～6アルキルまたは-CR5aR6aR7a、C2～6アルケニ、-C(R5a)＝C(R8a)(R9a)、C2～6アルキニル、-C≡CR8aであるか、または、R2-R3は、-CH2CH2-もしくは-CH2CH2CH2-基として連結され；
R3a、R3b、およびR4aは、独立して、水素、フェニル、ナフチル、ピリジル、ピリミジニル、イミダゾリル、1,2,3-トリアゾリル、キノリニル、イソキノリニル、チアゾリル、テトラゾリル基、C1～6アルキル、環状-(C1～8アルキル)-、環状-(C1～6オキサアルキル)-、環状-(C1～6アザアルキル)-、C2～6アルケニル、C2～6アルキニルであり；
ここで、フェニル、ナフチル、ピリジル、ピリミジニル、イミダゾリル、1,2,3-トリアゾリル、キノリニル、イソキノリニル、チアゾリル、またはテトラゾリル基は、ハロゲン、チオール、C1～6アルキルチオエーテル、C1～6アルキルスルホキシド、C1～6アルキル、C1～6アルコキシル、アミノ、C1～6アルキルアミノ、C1～6ジアルキルアミノ、C1～6アルキルスルホンアミド、アジド、-CHO、-CO2H、C1～6アルキルカルボキシレート、シアノ、C2～6アルケニ、およびC2～6アルキニル基からなる群より独立して選択される1～3個の置換基で置換されていてもよく；かつ、C1～6アルキル、環状-(C1～8アルキル)-、環状-(C1～6オキサアルキル)-、環状-(C1～6アザアルキル)-、C2～6アルケニル、またはC2～6アルキニル基は、1つもしくは複数のハロゲン、チオール、ヒドロキシル、カルボニル、カルボキシル、カルボニルオキシル、C1～6アルコキシ、C1～6ヒドロキシアルコキシ、アミノ、C1～6アルキルアミノ、ジ(C1～6アルキル)アミノ、アジド、ピペリジニル、フェニル、ナフチル、ピリジル、ピリミジニル、イミダゾリル、1,2,3-トリアゾリル、キノリニル、イソキノリニル、チアゾリル、またはテトラゾリル基で選択的に官能化されており；
R4は、水素またはハロゲンである。
いくつかの態様において、XはSであり、YはOまたはSであり、ZはOまたはSであり、GはNであり、かつ、R1は、水素 C1～6アルキル、または、1つもしくは複数のハロゲン、チオール、ヒドロキシル、カルボニル、カルボキシル、カルボニルオキシル、C1～6アルコキシ、C1～6ヒドロキシアルコキシ、アミノ、C1～6アルキルアミノ、ジ(C1～6アルキル)アミノ、もしくはアジド基で選択的に官能化されたC1～6アルキルである。
いくつかの態様において、XはSであり、YはOまたはSであり、GはNであり、ZはNR1aであり、かつ、R1-R1aは、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH＝CH-、-C(CH3)＝CH-、または-CH＝C(CH3)-基として連結される。
いくつかの態様において、XはSであり、YはOまたはSであり、GはCであり、ZはNR1aであり、かつ、R1-R1aは、＝CH-CH＝CH-、＝N-CH＝CH-、または＝CH-N＝CH-基として連結される。
いくつかの態様において、R2は、水素、Cl、Br、またはメチルである。
いくつかの態様において、cGAS阻害物質は、式(IVc)：
Figure 2022506341000016
の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、互変異性体、もしくはプロドラッグであり、
式中、
Zは、O、S、CHR1aまたはNR1aであり；
R1aは、水素、C1～6アルキル、または、1つもしくは複数のハロゲン、チオール、ヒドロキシル、カルボニル、カルボキシル、カルボニルオキシル、C1～6アルコキシ、C1～6ヒドロキシアルコキシ、アミノ、C1～6アルキルアミノ、ジ(C1～4アルキル)アミノ、もしくはアジド基で選択的に官能化されたC1～6アルキルであり；
Gは、NまたはCであり；
GがNである場合、R1は、水素 C1～6アルキル、または、1つもしくは複数のハロゲン、チオール、ヒドロキシル、カルボニル、カルボキシル、カルボニルオキシル、C1～6アルコキシ、C1～6ヒドロキシアルコキシ、アミノ、C1～6アルキルアミノ、ジ(C1～6アルキル)アミノ、もしくはアジド基で選択的に官能化されたC1～6アルキルであるか、または、R1-R1aは、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH＝CH-、-C(CH3)＝CH-、もしくは-CH＝C(CH3)-基として連結され；かつ、GがCである場合、R1-R1aは、＝CH-CH＝CH-、＝N-CH＝CH-、または＝CH-N＝CH-基として連結され；
R3およびR4は、独立して、水素またはハロゲンであり；
R6は、水素、ハロゲン、-SR3a、-S(O)R3a、-OR3a、-OCH2R3b、-OCH(CH3)R3b、-OC(O)NHR3a、-NR3aR4a、-NHSO2R3a、アジド、-CHO、CO2R3a、シアノ、C1～6アルキルもしくは-CR5aR6aR7a、C2～6アルケニ、-C(R5a)＝C(R8a)(R9a)、C2～6アルキニル、-C≡CR8aであるか、または、R2-R3は、-CH2CH2-もしくは-CH2CH2CH2-基として連結され；
R3a、R3b、およびR4aは、独立して、水素、フェニル、ナフチル、ピリジル、ピリミジニル、イミダゾリル、1,2,3-トリアゾリル、キノリニル、イソキノリニル、チアゾリル、テトラゾリル基、C1～6アルキル、環状-(C1～8アルキル)-、環状-(C1～6オキサアルキル)-、環状-(C1～6アザアルキル)-、C2～6アルケニル、C2～6アルキニルであり；
ここで、フェニル、ナフチル、ピリジル、ピリミジニル、イミダゾリル、1,2,3-トリアゾリル、キノリニル、イソキノリニル、チアゾリル、またはテトラゾリル基は、ハロゲン、チオール、C1～6アルキルチオエーテル、C1～6アルキルスルホキシド、C1～6アルキル、C1～6アルコキシル、アミノ、C1～6アルキルアミノ、C1～6ジアルキルアミノ、C1～6アルキルスルホンアミド、アジド、-CHO、-CO2H、C1～6アルキルカルボキシレート、シアノ、C2～6アルケニ、およびC2～6アルキニル基からなる群より独立して選択される1～3個の置換基で置換されていてもよく；かつ、C1～6アルキル、環状-(C1～8アルキル)-、環状-(C1～6オキサアルキル)-、環状-(C1～6アザアルキル)-、C2～6アルケニル、またはC2～6アルキニル基は、1つもしくは複数のハロゲン、チオール、ヒドロキシル、カルボニル、カルボキシル、カルボニルオキシル、C1～6アルコキシ、C1～6ヒドロキシアルコキシ、アミノ、C1～6アルキルアミノ、ジ(C1～6アルキル)アミノ、アジド、ピペリジニル、フェニル、ナフチル、ピリジル、ピリミジニル、イミダゾリル、1,2,3-トリアゾリル、キノリニル、イソキノリニル、チアゾリル、またはテトラゾリル基で選択的に官能化されている。
いくつかの態様において、ZはOまたはSであり、GはNであり、かつ、R1は、水素 C1～6アルキル、または、1つもしくは複数のハロゲン、チオール、ヒドロキシル、カルボニル、カルボキシル、カルボニルオキシル、C1～6アルコキシ、C1～6ヒドロキシアルコキシ、アミノ、C1～6アルキルアミノ、ジ(C1～6アルキル)アミノ、もしくはアジド基で選択的に官能化されたC1～6アルキルである。
いくつかの態様において、GはNであり、ZはNR1aであり、かつ、R1-R1aは、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH＝CH-、-C(CH3)＝CH-、または-CH＝C(CH3)-基として連結される。
いくつかの態様において、GはCであり、ZはNR1aであり、かつ、R1-R1aは、＝CH-CH＝CH-、＝N-CH＝CH-、または＝CH-N＝CH-基として連結される。
いくつかの態様において、GはNであり、R1はメチルであり、ZはOであり、R3およびR4は、独立して、水素またはハロゲンであり、かつ、R6は、-OR3a、-OCH2R3b、または-OCH(CH3)R3bであり；
ここで、R3aおよびR3bは、独立して、水素、フェニル、ナフチル、ピリジル、ピリミジニル、イミダゾリル、1,2,3-トリアゾリル、キノリニル、イソキノリニル、チアゾリル、テトラゾリル基、C1～6アルキル、環状-(C1～8アルキル)-、環状-(C1～8オキサアルキル)-、環状-(C1～4アザアルキル)-、C2～6アルケニル、C2～6アルキニルであり；
ここで、フェニル、ナフチル、ピリジル、ピリミジニル、イミダゾリル、1,2,3-トリアゾリル、キノリニル、イソキノリニル、チアゾリル、またはテトラゾリル基は、ハロゲン、チオール、C1～6アルキルチオエーテル、C1～6アルキルスルホキシド、C1～6アルキル、C1～6アルコキシル、アミノ、C1～6アルキルアミノ、C1～6アルキルアミノ、C1～6アルキルスルホンアミド、アジド、-CHO、-CO2H、C1～6アルキルカルボキシレート、シアノ、C2～6アルケニ、およびC2～6アルキニル基からなる群より独立して選択される1～3個の置換基で置換されていてもよく；かつ、C1～6アルキル、環状-(C1～8アルキル)-、環状-(C1～6オキサアルキル)-、環状-(C1～6アザアルキル)-、C2～6アルケニル、またはC2～6アルキニル基は、1つもしくは複数のハロゲン、チオール、ヒドロキシル、カルボニル、カルボキシル、カルボニルオキシル、C1～6アルコキシ、C1～6ヒドロキシアルコキシ、アミノ、C1～6アルキルアミノ、ジ(C1～6アルキル)アミノ、アジド、ピペリジニル、フェニル、ナフチル、ピリジル、ピリミジニル、イミダゾリル、1,2,3-トリアゾリル、キノリニル、イソキノリニル、チアゾリル、またはテトラゾリル基で選択的に官能化されている。
いくつかの態様において、cGAS阻害物質は、
Figure 2022506341000017
からなる群より選択される化合物である。
いくつかの態様において、cGAS阻害物質は、
Figure 2022506341000018
からなる群より選択される化合物である。
いくつかの態様において、cGAS阻害物質は、
Figure 2022506341000019
Figure 2022506341000020
Figure 2022506341000021
からなる群より選択される化合物である。
構造研究は、dsDNA結合で、cGASは構造変化を通して活性化され、cGAMPの生成についての触媒的にコンピテントでアクセス可能なヌクレオチド結合ポケットを形成させることを示した(Gao et al., 2013)。従って、いくつかの態様において、cGAS阻害物質は、cGASの触媒部位へ結合する。Arg364およびTyr421は、マウスおよびヒトcGASにおいて見られる2つの高度に保存された触媒部位アミノ酸残基である。これらの残基中の点突然変異は、cGASをdsDNAに対して応答することを不可能にし、下流炎症シグナル伝達を無効にする(Gao et al., 2013)。従って、いくつかの態様において、cGAS阻害物質は、cGASのArg364および／またはTyr421と相互作用する。いくつかの態様において、cGAS阻害物質はGao et al. (2013)に記載される化合物である。一態様において、cGAS阻害物質は、Gao et al. (2013)に記載されるような、RU.521である。
一態様において、cGAS阻害物質は、式(V) ：
Figure 2022506341000022
の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、互変異性体、もしくはプロドラッグであり得
式中、R1～R4およびXは、式(V)に関して以下のように定義される。
Xは、O、S、またはNR5であり、
R1～R4は、各々独立して、水素、ハロ、C1～10アルキル、C2～10アルケニル（alkyenyl）、C2～10アルキニル、CN、NO2、OC(O)R5、C(O)R5、C(O)NR5R6、C(O)OR5、OR6、OS(O)2R5、NR5R6、SR5からなる群より選択され、ここで、R5およびR6は、各々独立して、水素、C1～10アルキル、C2～10アルケニル、C2～10アルキニル、およびC1～10アルキルハロより選択される。
一態様において、R1は、水素またはハロゲンであり得る。R1は、水素、塩素、臭素、またはフッ素であり得る。
一態様において、R2およびR3は、水素、ハロゲン、またはC1～10アルキルであり得る。R2およびR3は、水素、臭素、塩素、フッ素、またはメチルであり得る。例えば、R2およびR3は塩素であり得る。
一態様において、R4は、水素、ハロゲン、またはメトキシであり得る。
一態様において、Xは、NHまたはSであり得る。
一態様において、R1は水素であり、R2およびR3は各々独立して塩素であり、R4は水素であり、かつ、XはNHである。一つの好ましい態様において、cGAS阻害物質は、式：
Figure 2022506341000023
の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、互変異性体、もしくはプロドラッグであり得る。
いくつかの態様において、cGAS阻害物質はHall et al. (2017)に記載される化合物である。いくつかの態様において、cGAS阻害物質は、PF-06928215またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、互変異性体、もしくはプロドラッグである。いくつかの態様において、cGAS阻害物質は、式：
Figure 2022506341000024
の化合物である。
いくつかの態様において、cGAS阻害物質はポリヌクレオチドである。例えば、ポリヌクレオチドは、cGASの発現を減少させることによってcGASを阻害し得る。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは、RNA干渉によってcGASの発現を減少させる。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドはsiRNAである。cGAS mRNAを標的とするために使用され得る例示的なsiRNAは、例えば、ThermoFisherから市販されている(siRNA ID: s41748、s41746、およびs41747)。
いくつかの態様において、cGAS阻害物質はポリペプチドである。いくつかの態様において、ポリペプチドは、cGASへ結合する抗体の抗原結合部位を含む。いくつかの態様において、cGAS阻害物質は抗体またはその断片である。STINGを標的とする抗体は、Santa Cruz Biotechnology (例えば、カタログ番号sc-515777)のような様々な供給源から市販されている。そのような抗体は、ルーチンな方法を使用して、抗原結合部位を含む他のポリペプチド、例えば、本明細書に記載されるようなscFv抗体、イントラボディまたはナノボディを誘導するために使用することができる。
cGAMP阻害物質
いくつかの態様において、cGAS-STING経路阻害物質はcGAMP阻害物質である。そのような阻害物質は、例えば、cGAMPを隔離し／cGAMPへ結合してそれがSTINGと相互作用するのを防ぎそしてそれによって炎症性サイトカイの下流転写を阻害することによって、cGAMPを特異的に標的とし得る。
いくつかの態様において、cGAMP阻害物質はcGAMPへ結合する。いくつかの態様において、cGAMP阻害物質は、cGAMPへ結合する抗体の抗原結合部位を含むポリペプチドである。抗原結合部位を含む好適なポリペプチドは、本明細書に記載されている。いくつかの態様において、cGAMP阻害物質は、cGAMPへ結合する、抗体、またはその断片である。好適な抗体は、Hall et al. (2017)およびWO2018045369に記載されている。従って、一態様において、cGAMP阻害物質は、Hall et al. (2017)またはWO2018045369に記載される抗体のうちのいずれか1つの抗原結合部位を含むポリペプチドである。
cGAS-STING経路阻害物質の投与
いくつかの態様において、対象におけるTDP-43タンパク質症を処置または予防するための方法は、該対象への治療有効量での、少なくとも1つのcGAS-STING経路阻害物質、またはその薬学的に許容される塩、薬学的に許容されるN-オキシド、薬学的に活性な代謝産物、薬学的に許容されるプロドラッグ、もしくは薬学的に許容される溶媒和物を含有する薬学的組成物の投与を含む。
cGAS-STING経路阻害物質は、TDP-43タンパク質症、例えば、ALSまたはFTDを既に患っているかつ／またはこれを有すると診断された対象の症状を処置する、予防する、または少なくとも部分的に止めるために投与される。この使用について有効な量は、疾患の重症度および経過、以前の療法、対象の健康状態、体重、および処置に対する応答に依存する。ルーチンな実験(用量漸増臨床試験を含むが、これに限定されない)によってそのような治療有効量を決定することは、十分に当技術分野の技能内にあると考えられる。
予防適用において、cGAS-STING経路阻害物質を含有する組成物は、TDP-43タンパク質症、例えば、ALSまたはFTDに罹りやすいまたはそうでなければこれを発症する危険性がある対象へ投与される。そのような量は、「予防有効量または用量」、即ち、神経変性症状の発症を予防するかまたは減少させるために十分な用量であると定義される。この使用において、正確な量はまた、特定の疾患、対象の健康状態、体重、タイミングなどに依存する。ルーチンな実験(例えば、用量漸増臨床試験)によってそのような予防有効量を決定することは、十分に当技術分野の技能内にあると考えられる。
対象の状態が改善する場合、信頼できる医学的助言に従って、GAS-STING経路阻害物質の投与は、継続的に与えられてもよく；あるいは、投与される薬物の用量は、一時的に減らされてもよく、または、ある時間の長さの間、一時的に中断してもよい(即ち、「休薬期間」)。休薬期間の長さは、ほんの一例として2日間、3日間、4日間、5日間、6日間、7日間、10日間、12日間、15日間、20日間、28日間、35日間、50日間、または60日間を含む、2日間～1年の間で変動し得る。休薬期間中の用量減少は、ほんの一例として、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、または100%を含む、10%～100%であり得る。
治療有効用量として好適である所定のcGAS-STING経路阻害物質の量は、投与されるcGAS-STING経路阻害物質のタイプおよび効力、対象の疾患の重症度/病期、処置の必要がある対象の特徴(例えば、体重)、ならびに以前または同時の処置のような因子に依存して変動すると考えられるが、それにもかかわらず、例えば、投与される具体的な作用物質、投与経路、処置または予防される状態、および処置される対象またはホストなど、その事例を取り巻く特定の状況に従って、当技術分野において公知の様式でルーチンに決定することができる。しかし、一般に、成人処置について用いられる用量は、典型的に、0.02～5000 mg／日、または約1～1500 mg／日の範囲内であろう。所望の用量は、単回用量で、または同時に(もしくは短期間にわたって)または適切な間隔で投与される分割用量として、例えば、1日当たり2、3、4個、またはそれ以上のサブ用量として、好都合に提示され得る。
個々の処置レジメンに関して変数の数が多く、また、これらの推奨値からのかなりの逸脱は珍しいことではないため、前述の範囲は示唆的であるに過ぎない。そのような投薬量は、使用されるcGAS-STING経路阻害物質の活性、処置または予防されるTDP-43タンパク質症のタイプおよび重症度、投与様式、ならびに専門家の判断に限定されない、多数の変数に依存して、変更され得る。
そのような治療レジメンの毒性および治療有効性は、LD50(集団の50％に致死的な用量)およびED50(集団の50％において治療的に有効な用量)の決定を含むがこれに限定されない、細胞培養物または実験動物における標準の薬学的手順によって決定することができる。毒性効果と治療効果との間の用量比は治療指数であり、それはLD50とED50との間の比として表すことができる。高い治療指数を示すcGAS-STING経路阻害物質が好ましい。細胞培養アッセイおよび動物研究から得られるデータは、ヒトおよび非ヒト対象における使用のための投薬量の範囲を処方することにおいて使用され得る。そのような化合物の投薬量は、好ましくは、最小限の毒性を伴うED50を含む循環濃度範囲内にある。投薬量は、用いられる投薬形態および利用される投与経路に依存して、この範囲内で変動し得る。
いくつかの態様において、cGAS-STING経路阻害物質は、神経炎症の増大を減少させるかまたは阻止するために十分な量で投与される。本明細書において使用される場合、「神経炎症」という用語は、脳または脊髄組織のような、神経組織の炎症を指す。神経炎症は、NF-κB関連サイトカインおよびI型インターフェロンを含む、多種多様の炎症性サイトカインに応答して引き起こされる。TDP-43タンパク質症において、神経炎症は神経変性に寄与し、これは次に症状の進行性悪化をもたらすと考えられる。従って、いくつかの態様において、cGAS-STING経路阻害物質は、神経変性の増大を減少させるかまたは阻止するために十分である量で投与される。そのような量は、筋力低下、萎縮、筋痙攣、運動技能低下、発話障害、記憶喪失、および認知または行動機能障害のような、TDP-43タンパク質症の症状の重症度の増大を減少させるかまたは阻止することができる。
いくつかの態様において、cGAS-STING経路阻害物質は、I型インターフェロン発現の増大を減少させるかまたは阻止するために十分な量で投与される。cGAS-STING経路の活性化はI型インターフェロンの産生を生じさせ、これは次に神経炎症を引き起こし、それによってALSのようなTDP-43タンパク質症の神経変性症状に寄与すると考えられる。従って、いくつかの態様において、cGAS-STING経路阻害物質の治療有効量は、I型インターフェロン発現の増大を減少させるかまたは阻止する量である。
I型インターフェロン(IFN)は、免疫系の活性を調節するのを助けるインターフェロンタンパク質の大きなサブグループである。哺乳類のタイプは、IFN-α (アルファ)、IFN-β (ベータ)、IFN-κ (カッパ)、IFN-δ (デルタ)、IFN-ε (イプシロン)、IFN-τ (タウ)、IFN-ω (オメガ)、およびIFN-ζ (ゼータ、リミチンとしても公知)と呼ばれる。従って、I型インターフェロン発現は、これらのI型IFNサブタイプのうちのいずれか1つまたは複数の発現を測定することによって定量化することができる。いくつかの態様において、IFN-βの発現を測定する。従って、いくつかの態様において、cGAS-STING経路阻害物質は、IFN-β発現の増大を減少させるかまたは阻止するために十分な量で投与される。発現レベルは、mRNAレベル(例えば、RT-qPCRによって)またはタンパク質レベル(例えば、ELISAによって)のいずれかを測定することによってルーチンな方法を使用して評価することができる。好適な方法は、本明細書およびSeeds and Miller (2011)に記載されている。
いくつかの態様において、cGAS-STING経路阻害物質は、NF-κB関連サイトカイン発現の増大を減少させるかまたは阻止するために十分な量で投与される。本明細書において使用される場合、「NF-κB関連サイトカイン」という句は、その産生がNF-κB媒介活性に応答して増大する任意のサイトカインを指す。そのようなNF-κB関連サイトカインはTNFα、IL-1α、IL-1β、およびIL-6を含む。cGAS-STING経路の活性化は、NF-κB関連サイトカインの産生を生じさせ、これは次に神経炎症を引き起こし、それによってALSのようなTDP-43タンパク質症の神経変性症状に寄与すると考えられる。従って、いくつかの態様において、cGAS-STING経路阻害物質は、TNFα、IL-1α、IL-1β、およびIL-6のうちのいずれか1つまたは複数の発現の増大を減少させるかまたは阻止するために十分な量で投与される。いくつかの態様において、TNFαの発現が増大するのを減少させるかまたは阻止する。NF-κB関連サイトカインの発現レベルは、mRNAレベル(例えば、RT-qPCRによって)またはタンパク質レベル(例えば、ELISAによって)のいずれかを測定することによってルーチンな方法を使用して評価することができる。例えば、TNFαの発現レベルは、Cisbio製の「Human TNF alpha Assay Kit」(カタログ番号62HTNFAPEG)またはThermoFisher製の「TNF alpha Human ELISA Kit」(カタログ番号KHC3011)のような、TNFαを定量化するための市販のアッセイを使用して測定することができる。
併用処置
cGAS-STING経路阻害物質はまた、TDP-43タンパク質症、例えば、ALSおよびFTDの処置または予防において治療的価値がある他の作用物質と組み合わせて使用することができる。いくつかの態様において、他の作用物質は、神経変性疾患を処置または予防するために通常使用されるものである。一般に、他の作用物質は、必ずしも同じ薬学的組成物で投与される必要はなく、異なる物理的および化学的特徴に起因して、異なる経路によって好ましくは投与され得る。投与様式の決定、および、可能であれば、同じ薬学的組成物における投与の可否は、十分に、熟練した臨床医の知識内にある。最初の投与は、当技術分野において公知の確立されたプロトコルに従って行われ得、次いで、観察された効果に基づいて、投薬量、投与様式および投与時間が、熟練した臨床医によって改変され得る。
cGAS-STING経路阻害物質および追加の治療用物質は、感染症の性質および段階、対象の状態、ならびに使用される治療用物質の実際の選択に依存して、同時期に(例えば、同時に、本質的に同時にもしくは同じ処置プロトコル内で)または逐次的に、投与され得る。処置プロトコル中の各治療用物質の投与順序および投与の繰り返し数の決定は、処置または予防される疾患ならびに対象の状態の評価後、十分に、熟練した医師の知識内にある。
薬物が処置組み合わせにおいて使用される場合、治療有効投薬量が変動し得ることは、当業者に公知である。併用処置レジメンにおける使用のための薬物および他の剤の治療有効投薬量を実験的に決定するための方法は、文献に記載されている。例えば、メトロノミック投薬の使用、即ち、毒性副作用を最小限にするためにより頻繁でより低い用量を提供することは、文献に広く記載されている。併用処置は、対象の臨床管理を補助するために、様々な時間で開始および終了する周期的な処置をさらに含む。
併用療法について、同時投与される治療用物質の投薬量は、当然ながら、用いられる補助的剤（co-agent）のタイプ、具体的なcGAS-STING経路阻害物質、および処置または予防されるTDP-43タンパク質症に依存して、変動すると考えられる。
緩和が求められる状態を処置、予防、または改善するための投薬レジメンは、様々な因子に従って改変され得ることが理解される。これらの因子としては、対象が患っている状態、ならびに対象の年齢、体重、性別、食事、および全身医学的状態が挙げられる。従って、実際に用いられる投薬レジメンは大きく異なり得、従って、本明細書に記載される投薬レジメンから逸脱し得る。
本明細書に開示される併用療法を構成するcGAS-STING経路阻害物質および追加の治療用物質は、組み合わされた投薬形態であってもよく、実質的に同時の投与に意図される別個の投薬形態であってもよい。併用療法を構成する薬剤はまた、二段階投与を求めるレジメンによって投与されるいずれかの治療用化合物と共に、逐次的に投与され得る。二段階投与レジメンは、活性作用物質の逐次的投与、または別個の活性作用物質の間隔を空けた投与を求め得る。複数の投与ステップ間の期間は、薬剤の効能、溶解性、バイオアベイラビリティ、血漿半減期および動態プロフィールのような、各薬剤の特性に依存して、数分から数時間までの範囲であり得る。様々な生理学的パラメータの概日変動もまた、最適な投与間隔を決定するために評価され得る。
さらに、TDP-43タンパク質症の処置または予防のためのcGAS-STING経路阻害物質の投与または同時投与は、対象へ追加のまたは相乗的な利益を提供し得る手順と組み合わせて使用され得る。ほんの一例として、対象は、ゲノム中の遺伝的変異を同定して処置パラメータ、例えば、投与されるcGAS-STING経路阻害物質のタイプ、投薬レジメン、および追加の治療用物質との同時投与を最適化するために、遺伝子検査を受け得る。
最初の投与は、例えば、静脈内注射、ボーラス注射、5分間～約5時間にわたる注入、丸剤、カプセル剤、吸入器、注射、経皮パッチ、頬側送達など、またはそれらの組み合わせのような、任意の実用的な経路を介してであり得る。化合物は、疾患または状態の発症が検出されたかまたは疑われた後可能な限り早く、かつ、TDP-43タンパク質症の処置または予防に必要な時間の長さの間、投与されるべきである。
いくつかの態様において、cGAS-STING経路阻害物質は、神経変性疾患を処置または予防するために通常使用される療法と組み合わせて投与される。例えば、他の療法は、抗うつ薬、神経弛緩薬、抗痙攣薬、メドロキシプロゲステロン（medroxyprogestrone）、ドーパミン作動薬、コリンエステラーゼ阻害薬、リルゾール、および／またはエダラボンであり得る。
いくつかの態様において、cGAS-STING経路阻害物質は、抗炎症剤と組み合わせて投与される。いくつかの態様において、抗炎症剤は非ステロイド性抗炎症薬(NSAID)である。いくつかの態様において、抗炎症剤は、サイトカイン阻害物質、例えば、TNFα、IL-6、IL-1、またはIFNβへ結合し、それらがそれらの受容体へ結合するのを妨げる分子である。
投薬形態
cGAS-STING経路阻害物質を含む組成物は、経口、非経口(例えば、静脈内、皮下、もしくは筋肉内)、頬、吸入、鼻腔内、直腸、または経皮投与経路を含むが、これらに限定されない、任意の従来の手段を介した対象への投与のために製剤化され得る。
cGAS-STING経路阻害物質を単独でまたは1つもしくは複数の治療用物質と組み合わせて含む薬学的組成物は、処置される対象による経口摂取については、水性経口分散液、液体、ミスト、ゲル、シロップ、エリキシル、スラリー、懸濁剤など、固体経口投薬形態、エアロゾル、制御放出製剤、急速溶解製剤、発泡製剤、凍結乾燥製剤、錠剤、散剤、丸剤、糖衣錠、カプセル剤、遅延放出製剤、持続放出製剤、パルス放出製剤、多粒子製剤、ならびに混合即時放出および制御放出製剤を含むがこれらに限定されない、任意の好適な投薬形態へ製剤化され得る。
経口使用のための薬学的調製物は、1つまたは複数の固体賦形剤と1つまたは複数の化合物とを混合すること、任意で、得られた混合物を粉砕すること、および、必要に応じて、適切な補助剤を添加した後に、顆粒の混合物を処理して、錠剤または糖衣錠コアを得ることによって、得ることができる。好適な賦形剤としては、例えば、充填剤、例えば、糖類、例えば、ラクトース、スクロース、マンニトールまたはソルビトール；セルロース調製物、例えば、トウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、微結晶性セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム；またはその他、例えば：ポリビニルピロリドン(PVPもしくはポピドン)またはリン酸カルシウムが挙げられる。所望の場合、崩壊剤、例えば、架橋クロスカルメロースナトリウム、ポリビニルピロリドン、寒天またはアルギン酸またはその塩、例えばアルギン酸ナトリウムが添加されてもよい。
別の局面において、投薬形態はマイクロカプセル化製剤を含み得る。いくつかの態様において、1つまたは複数の他の適合性材料がマイクロカプセル化材料中に存在する。例示的な材料としては、pH調整剤、侵食促進剤、消泡剤、抗酸化剤、香味剤、ならびに、結合剤、懸濁化剤、崩壊剤、充填剤、界面活性剤、可溶化剤、安定剤、滑沢剤、湿潤剤、および希釈剤などの担体材料が挙げられるが、これらに限定されない。
cGAS-STING経路阻害物質のマイクロカプセル化製剤は、当業者に公知の方法によって製剤化され得る。そのような公知の方法としては、例えば、噴霧乾燥プロセス、回転ディスク溶媒プロセス、ホットメルトプロセス、噴霧冷却法、流動床、静電沈着、遠心押出し、回転懸濁分離、液体-ガスまたは固体-ガスの境界面での重合、圧力押出し、または噴霧溶媒抽出浴が挙げられる。これらに加え、いくつかの化学技術、例えば、複合コアセルベーション、溶解蒸発、ポリマー-ポリマー非相容性、液体媒体中の界面重合、インサイチュ重合、液中乾燥、および液体媒体中の脱溶媒和も、使用され得る。さらに、ローラー圧縮、押出し／球形化、コアセルベーション、またはナノ粒子コーティングなど他の方法も使用され得る。
製剤を含む薬学的固体経口投薬形態は、cGAS-STING経路阻害物質の制御放出を提供するためにさらに製剤化され得る。制御放出は、長期間にわたって所望のプロフィールに従っての、それらが組込まれる投薬形態からの1つまたは複数の活性作用物質の放出を指す。制御放出プロフィールは、例えば、持続放出、長期放出、パルス放出、および遅延放出プロフィールを含む。即時放出組成物とは対照的に、制御放出組成物は、あらかじめ定められたプロフィールに従っての長期間にわたる対象への作用物質の送達を可能にする。そのような放出速度は、長期間、治療有効レベルの作用物質を提供し、それによって、従来の急速放出投薬形態と比較して、副作用を最小限にする一方でより長い期間の薬理学的応答を提供することができる。応答のかかるより長い期間は、対応する短時間作用型即時放出調製物により達成されない多くの固有の利益を提供する。
いくつかの態様において、固体投薬形態は、腸溶性コーティング遅延放出経口投薬形態として、即ち、胃腸管の小腸における放出に影響を与えるために腸溶コーティングを利用する、薬学的組成物の経口投薬形態として、製剤化することができる。腸溶性コーティング投薬形態は、活性成分および／または他の組成物成分の顆粒、粉末、ペレット、ビーズ、または粒子（それら自体がコーティングされるかまたはコーティングされない）を含有する、圧縮または成型または押出された錠剤／型（コーティングされるかまたはコーティングされない）であり得る。腸溶性コーティング経口投薬形態は、固体担体または組成物のペレット、ビーズ、または顆粒（それら自体はコーティングされるかまたはコーティングされない）を含有する、カプセル剤（コーティングされるかまたはコーティングされない）でもあり得る。
「遅延放出」という用語は、本明細書において使用される場合、遅延放出の変化がなかった場合に達成されたであろうものより遠位の腸管内のいくつかの一般的に予測可能な場所で、放出が達成され得るような送達を指す。いくつかの態様において、放出の遅延のための方法はコーティングである。コーティング全体が、約5未満のpHでは消化管液中で溶解しないが、pH約5またはそれを上回るpHでは溶解するように、コーティングを充分な厚さに適用すべきである。pH依存性溶解度プロフィールを示す任意のアニオン性ポリマーが、下部消化管への送達を達成するために、方法および組成物において腸溶コーティングとして使用できることが予想される。いくつかの態様において、ポリマーはアニオン性カルボン酸ポリマーである。
いくつかの態様において、コーティングは、当技術分野において周知である、可塑剤、ならびに恐らく、着色剤、タルク、および／またはステアリン酸マグネシウムなどの他のコーティング賦形剤を含有することができ、そして通常含有する。適切な可塑剤は、クエン酸トリエチル(Citroflex 2)、トリアセチン(グリセリルトリアセテート)、クエン酸アセチルトリエチル(Citroflec A2)、Carbowax 400 (ポリエチレングリコール400)、フタル酸ジエチル、クエン酸トリブチル、アセチル化モノグリセリド、グリセロール、脂肪酸エステル、プロピレングリコール、およびフタル酸ジブチルを含む。特に、アニオン性カルボン酸アクリルポリマーは、通常、10～25重量%の可塑剤、特にフタル酸ジブチル、ポリエチレングリコール、クエン酸トリエチル、およびトリアセチンを含有する。噴霧またはパンコーティングなどの従来のコーティング技術が、コーティングを適用するために使用される。コーティング厚さは、腸管における局所送達の所望の部位に到達するまで、経口投薬形態が無傷のままであることを保証するのに十分でなければならない。
コーティング材料を可溶化させるかまたは分散させ、コーティング性能およびコーティング生成物を改善するために、可塑剤に加えて、着色剤、粘着防止剤、界面活性剤、消泡剤、滑沢剤(例えば、カルヌバろう（carnuba wax）またはPEG)をコーティングに加えてもよい。
他の態様において、cGAS-STING経路阻害物質製剤は、パルス投薬形態を使用して送達される。パルス投薬形態は、制御された遅延時間後のあらかじめ決められた時点で、または特定の部位で、1つまたは複数の即時放出パルスを提供することができる。パルス投薬形態は、当技術分野において公知の様々なパルス製剤を使用して投与され得る。例えば、そのような製剤としては、US 5,011,692、同5,017,381、同5,229,135、および同5,840,329に記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない。本製剤と共の使用に適した他のパルス放出投薬形態としては、例えば、US 4,871,549、同5,260,068、同5,260,069、同5,508,040、同5,567,441、および同5,837,284が挙げられるが、これらに限定されない。一態様において、制御放出投薬形態は、各々が製剤を含有する、少なくとも2つのグループの粒子(即ち、多粒子)を含むパルス放出固体経口投薬形態である。第1グループの粒子は、摂取されると、実質的に即時の用量のcGAS-STING経路阻害物質を提供する。第1グループの粒子は、コーティングされないか、またはコーティングおよび／またはシーラントを含むことができる。第2グループの粒子はコーティングされた粒子を含み、これは、1つまたは複数の結合剤と混合されて、製剤中の活性作用物質の総用量の重量で、約2%～約75%、約2.5%～約70%、または約40%～約70%を含む。コーティングは、第2用量の放出前に、摂取に続いて約2時間～約7時間の遅延を提供するために十分な量で、薬学的に許容される成分を含む。好適なコーティングは、1つまたは複数の差異的に分解可能なコーティング、例えば、ほんの一例として、pH感受性コーティング(腸溶コーティング)、例えば、単独でのもしくはセルロース誘導体、例えばエチルセルロースとブレンドされた、アクリル樹脂、または、製剤の差異的な放出を提供するために可変の厚みを有する非腸溶コーティングを含む。
当業者に公知の他の多くのタイプの制御放出系が、本明細書に記載される製剤と共の使用に適している。こうした送達システムの例としては、例えば、ポリ乳酸とポリグリコール酸、ポリ酸無水物（plyanhydride）、およびポリカプロラクトンのようなポリマーベースの系；多孔性のマトリックス、ステロール、例えば、コレステロール、コレステロールエステル、および脂肪酸、または中性脂肪、例えば、モノグリセリド、ジグリセリド、およびトリグリセリドなどの、脂質である非ポリマーベースの系；ヒドロゲル放出系；サイラスティック系；ペプチドベースの系；ワックスコーティング、生体内分解性の投薬形態、従来の結合剤を使用する圧縮錠剤などが挙げられる。例えば、US 4,327,725、4,624,848、同4,968,509、同5,461,140、同5,456,923、同5,516,527、同5,622,721、同5,686,105、同5,700,410、同5,977,175、同6,465,014、および同6,932,983を参照のこと。
経口投与用の液体製剤の投薬形態は、薬学的に許容される水性経口分散液、エマルジョン、溶液、エリキシル、ゲル、およびシロップを含むがこれらに限定されない群より選択される、水性懸濁液であり得る。
USP Pharmacists' Pharmacopeia (2005年版、905章)中で定義されるように、水性懸濁液および分散液は、少なくとも4時間均一な状態でとどまることができる。均一性は、組成物全体の均一性の決定に関して一貫したサンプリング法によって決定されるべきである。一態様において、水性懸濁液は、1分間未満続く物理的撹拌によって均一な懸濁液へと再懸濁することができる。別の態様において、水性懸濁液は、45秒間未満続く物理的撹拌によって均一な懸濁液へと再懸濁することができる。さらに別の態様において、水性懸濁液は、30秒間未満続く物理的撹拌によって均一な懸濁液へと再懸濁することができる。さらに別の態様において、均一な水性分散液の維持には、撹拌は必要ではない。
上でリストされた添加剤に加えて、液体製剤は、当技術分野において通常は使用される不活性希釈剤、例えば、水または他の溶媒、可溶化剤、および乳化剤も含むことができる。例示的な乳化剤は、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、1,3-ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、ラウリル硫酸ナトリウム、ドクサートナトリウム（sodium doccusate）、コレステロール、コレステロールエステル、タウロコール酸、ホスファチジルコリン（phosphotidylcholine）、油、例えば、綿実油、落花生油、トウモロコシ胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、ソルビタンの脂肪酸エステル、またはこれらの物質の混合物などである。
注射可能製剤
筋肉内、皮下、静脈内注射に適した製剤には、生理学的に許容される滅菌された水性または非水性溶液、分散液、懸濁液またはエマルション、および滅菌された注射可能な溶液または分散液への再構成のための滅菌された粉末が含まれ得る。好適な水性および非水性担体、希釈剤、溶媒またはビヒクルの例としては、水、エタノール、ポリオール（プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセロール、クレモフォールなど）、好適なその混合物、植物油（例えばオリーブ油）および注射可能な有機エステル、例えばオレイン酸エチルが挙げられる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどコーティングの使用によって、分散液の事例では要求される粒子サイズの維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持することができる。皮下注射に適した製剤は、添加剤、例えば、保存剤、湿潤剤、乳化剤および分配剤も含有し得る。微生物の増殖の防止は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などによって、確実にすることができる。等張剤、例えば、糖類、塩化ナトリウムなどを含むことも所望され得る。注射可能な薬学的形態の持続吸収は、吸収を遅延させる作用物質、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンの使用によって、もたらされ得る。
静脈内注射については、化合物は、水溶液中で、好ましくは、生理学的に適合性のある緩衝液、例えば、ハンクス溶液、リンガー溶液または生理食塩水緩衝液中で、製剤化され得る。経粘膜投与については、透過されるバリアに適切な浸透剤が製剤中で使用される。かかる浸透剤は当技術分野において一般に知られている。他の非経口注射については、適切な製剤は、好ましくは生理学的に適合性のある緩衝剤または賦形剤と共に水性または非水性溶液を含み得る。かかる賦形剤は当技術分野において一般に知られている。
非経口注射はボーラス注射または持続注入を包含し得る。注射のための製剤は、例えばアンプル中の単位投薬形態で、または保存剤を添加して多回投与用容器中で提供され得る。薬学的組成物は、油性または水性ビヒクル中の滅菌された懸濁液、溶液またはエマルションとしての非経口注射に適した形態であり得、製剤化剤、例えば、懸濁化剤、安定化剤および／または分散剤を含有し得る。非経口投与のための薬学的製剤は、水溶性形態での活性化合物の水溶液を包含する。加えて、活性化合物の懸濁液は、適切な油性注射懸濁液として調製され得る。好適な親油性溶媒またはビヒクルには、脂肪油、例えばゴマ油、または合成脂肪酸エステル、例えばオレイン酸エチルもしくはトリグリセリド、またはリポソームが含まれる。水性注射懸濁液は、懸濁液の粘度を増大させる物質、例えば、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストランを含有し得る。任意で、懸濁液は、好適な安定剤、または高度に濃縮された溶液の調製を可能にするように化合物の溶解度を増大させる作用物質も含有し得る。あるいは、活性成分は、使用の前に、好適なビヒクル、例えば滅菌されたパイロジェンフリー水による構成のための粉末形態であり得る。
薬学的組成物は、正確な投薬量の単回投与に適した単位投薬形態であり得る。単位投薬形態において、製剤は、適切な量の1つまたは複数の化合物を含有する単位用量へと分割される。単位投薬量は、製剤の分離量を含有するパッケージの形態であり得る。非限定的な例は、パッケージングされた錠剤またはカプセル剤、およびバイアルまたはアンプル中の散剤である。水性懸濁組成物は、単一用量の再び密閉できない容器中でパッケージングされ得る。あるいは、複数用量の再び密閉できる容器を使用することができ、その事例において、組成物中に保存剤を含むことが典型的である。ほんの一例として、非経口注射のための製剤は、アンプルが含まれるがこれに限定されない単位投薬形態で、または保存剤を添加して多回投与用容器中で提供され得る。
診断方法
本発明者らは、ALSおよびFTDのようなTDP-43タンパク質症において神経炎症を促進する自然免疫感知経路としてcGAS-STING経路を同定した。この驚くべき知見は、そのような疾患を診断するための以前は利用不可能であった道を開く。
従って、一局面において、本発明は、対象をTDP-43タンパク質症と診断する方法を提供し、該方法は、対象由来のサンプルにおいてcGAS-STING経路の活性化を検出する工程を含む。同様に、本発明はまた、TDP-43タンパク質症を患っている対象におけるcGAS-STING経路阻害物質による処置に対する応答性の見込みを判定するための方法を提供し、該方法は、対象由来のサンプルにおいてcGAS-STING経路の活性化を検出する工程を含み、ここで、cGAS-STING経路の活性化が処置に対する応答性のより高い見込みを示す。
cGAS-STING経路の活性化を検出する工程は、cGAS-STING経路の成分またはそれらの下流シグナル伝達標的のいずれかの活性を測定することを伴い得る。例えば、いくつかの態様において、cGAS-STING経路の活性化を検出する工程は、対象由来のサンプル中のcGAMPのレベルを測定することを含む。cGAMPは、細胞質ゾルDNAの検出でcGASによって産生される二次メッセンジャーであり、STINGを刺激してTBK1を活性化し、これは次に炎症性サイトカインの発現を駆動する。従って、上昇したcGAMPレベルは、TDP-43タンパク質症、またはcGAS-STING経路阻害物質による処置に対する応答性のより高い見込みを示す。cGAMPは、細胞から放出される可溶性因子である(Ablasser et al., 2013)。従って、cGAMPは、TDP-43タンパク質症を有する対象を同定するために対象由来のサンプルにおける測定についての好適なバイオマーカーを提供する。いくつかの態様において、サンプルは血液サンプルである。いくつかの態様において、サンプルは尿サンプルである。いくつかの態様において、サンプルは、例えば生検由来の、組織サンプルである。いくつかの態様において、組織サンプルは神経組織サンプルである。
cGAMPのレベルは、質量分析およびELISAのような当技術分野において公知であるルーチンな方法を使用して測定することができる。cGAMPレベルを測定するためのキットは、例えば、Cayman chemical (カタログ番号501700)から市販されている。cGAMPの測定のための他のアッセイは、Hall et al. (2017)およびWO2018045369に記載されている。
cGAMPの「閾値」レベルは、例えば、対照サンプル中のcGAMPのレベルの比較に基づいて決定することができる。好適な対照は当業者に容易に明らかであり、TDP-43タンパク質症を患っていない個体由来のサンプルを含む。好適な閾値レベルは、ルーチンな実験を使用して当業者によって容易に決定することができる。
いくつかの態様において、cGAS-STING経路活性化を検出する工程は、細胞質ゾルmtDNAの存在を検出することを含む。他の態様において、cGAS-STING経路活性化を検出する工程は、本明細書に記載されるような、I型IFNまたはNF-κB発現を検出することを含む。
いくつかの態様において、対象は、TDP-43病態が不明である神経変性疾患を患っている場合がある。従って、本明細書に記載される方法は、神経変性疾患を患っている対象におけるcGAS-STING経路阻害物質による処置に対する応答性の見込みを判定するために使用することができ、該方法は、対象由来のサンプルにおいてcGAS-STING経路の活性化を検出する工程を含み、ここで、cGAS-STING経路の活性化が処置に対する応答性のより高い見込みを示す。そのような方法は、TDP-43の誤った局在化および／または凝集を含む複数の根本原因を有し得る神経変性疾患に特に有用である。いくつかの態様において、対象は、TDP-43タンパク質症の疑いがある神経変性疾患を患っている。
キット
本明細書においてさらに提供されるのは、上記に記載されるようなTDP-43タンパク質症の処置または予防に有用な阻害物質を含有するキットである。
一例において、キットは、(a)本明細書に記載されるようなcGAS-STING経路阻害物質を、任意で、薬学的に許容される担体または希釈剤中に含む、容器と；(b)対象におけるTDP-43タンパク質症を処置または予防するための指示を含む添付文書とを含む。
本開示のこの例によれば、添付文書は、容器上にあるかまたは容器に付随する。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、注射器などが挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックのような様々な材料から形成され得る。容器は、TDP-43タンパク質症を処置または予防するために有効である組成物を保持または含有し、また、滅菌アクセスポートを有し得る(例えば、容器は、皮下注射針によって貫通可能な栓を有する静脈内溶液バッグまたはバイアルであり得る)。組成物中の少なくとも1つの活性作用物質はcGAS-STING経路阻害物質である。ラベルまたは添付文書は、提供される化合物および任意の他の医薬の投薬量および間隔に関する具体的な指図と共に、組成物は、処置に適格な対象、例えば、例えば、TDP-43タンパク質症を有するかまたはその素因を有する対象への投与のために使用されることを示す。キットは、薬学的に許容される希釈緩衝液、例えば、注射用静菌水(BWFI)、リン酸緩衝食塩水、リンゲル液、および／またはデキストロース溶液を含む、追加の容器をさらに含み得る。キットは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、注射針、および注射器を含む、商業的なおよび利用者の観点から望ましい他の材料をさらに含み得る。
実施例1 - 材料および方法
細胞培養およびトランスフェクション
WT対照またはMAVS、PKR、cGAS、STING、Bax/Bak、Mcl1を欠いている不死化マウス胎仔線維芽細胞(MEF)を、10% FBS (Sigma-Aldrich)が補われたDME/KELSO培地(40 mM重炭酸ナトリウム、1 mM HEPES、0.0135 mM葉酸、0.24 mM L-アスパラギン、0.55 mM L-アルギニン、1×Pen/Strepおよび22.2 mM D-グルコースを含有するインハウスDMEM)中に維持した。MEFのトランスフェクションを、FuGENE HD (Promega)を使用して行った。AGK-/- (D. Stojanovskiからの寄贈)およびWT HEK293T細胞を、10% FBS、100 U/mLペニシリンおよび100μg/mLストレプトマイシンが補われたDMEM中に維持した。製造業者の説明書に従ってHEK293T細胞にトランスフェクトするために、リポフェクタミン2000 (Life Technologies)を使用した。ヒト単球性THP-1細胞を、10% FBS、100 U/mLペニシリンおよび100μg/mLストレプトマイシンを含むRPMI-1640中で増殖させた。上記の細胞培養を、10% CO2を含む加湿雰囲気中で37℃で行った。ミトコンドリアDNA枯渇細胞(ρ0)を、HashiguchiおよびZhang-Akiyama (2009)において以前に実証されたように、100 ng/ml臭化エチジウム、100μg/mlピルビン酸ナトリウムおよび50μg/mlウリジンを含有する適切な培養培地中で調製した。ミトコンドリアDNA遺伝子および核遺伝子の発現を測定するためにリアルタイムqPCRを使用して、枯渇を分析した(下記の定量的リアルタイムPCRを参照のこと)。
CRISPR/Cas9媒介遺伝子欠失
以下のようなターゲッティングガイド配列を使用して、BakerおよびMasters (2018)に記載されたように、STINGCRISPR-/- THP-1およびPpifCRISPR-/- MEFを作製するために、CRISPR/Cas9技術を使用した：
Figure 2022506341000025
。欠失を次いでウエスタンブロットによって確認した。
構築物、試薬、および阻害物質
pSLIK-Neo、hTDP-43 WTおよびQ331Kを含む第三世代レンチウイルス構築物(Aaron D. Gitlerからの寄贈) (Armakola et al., 2012)を使用して、THP-1およびMcl1-/- MEFを形質導入し、ドキシサイクリン誘導性Flagタグ化TDP-43を有する安定細胞株を作製し、その後、G418 (ThermoFisher Scientific)で抗生物質選択を行った。cGAS-Flag免疫沈降のために、QuickChange Lightning Kit (Agilent Technologies)および以下のようなオリゴを使用して、HEK293T細胞に、pMIH-Flag-mmcGAS 3およびpGW1-hTDP-43-EGFP (S. Finkeinerからの寄贈) (Armakola et al., 2012)、ならびに部位特異的突然変異誘発によって得られたpGW1-hTDP-43 A315TまたはQ331Kをトランスフェクトした:
Figure 2022506341000026
。cGAS/STINGについての刺激は以下を含んだ：ポリ(dA:dT) (Invivogen)、htDNA (Sigma-Aldrich)および2’3’-c-di-AM(PS)2(Rp, Rp) (Invivogen)。記載されたように(White et al., 2014)、アポトーシスをトリガーするために、細胞をABT-737 (Active Biochemicals A-1002)で同時刺激した。ミトコンドリアストレスの際のスーパーオキシド産生を示すために、MitoSOXTM Red (ThermoFisher Scientific, M36008)を使用し、フローサイトメトリー(BD LSRFortessa X-20)によって分析した。細胞質へのTDP-43媒介DNA再配置を遮断するために、細胞をシクロスポリンA (Sigma-Aldrich)、RU.521 (M. Ascanoからの寄贈) (Vincent et al., 2017)またはH-151 (aka Life Chemicals) (Haag et al., 2018)で処理した。
超解像顕微鏡法
ドキシサイクリン誘導性フラグ化TDP-43を発現するMEF細胞株を、以前に記載されたように(McArthur et al., 2018)、示される時間の間、カバーガラス(18mm×18mm, 厚さ1 1/2, Zeiss)上へ播種し、イメージングについて調製した。手短には、細胞を固定し、ブロッキングし、ブロッキング緩衝液中で以下のとおりの一次抗体：抗Flag (In-house, 9H1)、抗DNA (ProGen, AC-30-10)、および抗TOM20 (Santa Cruz Biotech, sc-11415)と共に4℃で一晩インキュベートした。PBS中で2回洗浄し、二次抗体[Life Technologies製のヤギ抗ウサギAF647 (A21245)、ヤギ抗マウスAF488 (A11001およびヤギ抗ラットAF568, A11077)]と共に1時間インキュベートした後、カバーガラスを、Prolong Diamond Antifade Mountant (ThermoFisher Scientific)を使用して顕微鏡スライド上に載せた。三色画像化を、60Å～1.42 NA油浸レンズ(Olympus)を使用してOMX-SRシステム(GE Healthcare)上において行った。
マウス
TDP-43A315Tトランスジェニックマウスは、以前に記載された(Wegorzewska et al., 2009) (例えば、B6.Cg-Tg(Prnp-TARDBP*A315T)95Balo/J, JAXストック番号:010700)。TDP-43T/+マウスを少なくとも10世代について戻し交配し、次いで、C57BL/6バックグランドにおいて維持した。STING (Jin et al., 2011)およびIfnar1 (Hwang et al., 1995)ノックアウト系統は、以前に記載された。類遺伝子性C57/BL6バックグランド上のSTING+/-およびIfnar1+/-マウスを、TDP-43T/+マウスと交配し、それぞれ、TDP-43T/+STING+/-またはTDP-43T/+Ifnar1+/-を作り、そして、TDP-43T/+STING+/+、TDP-43T/+STING+/-、TDP-43T/+STING-/-、TDP-43T/+Ifnar1+/-およびTDP-43T/+Ifnar1-/-の子孫を作るために、同じ遺伝子型の他の非同腹仔のマウスと各々さらに交配させた。TDP-43マウスのケアを、以前記載された方法(Hwang et al., 1995)から適合させた。以下のとおりのプライマーを使用して、マウスを遺伝子型決定した：
Figure 2022506341000027
。障害のあるマウスがそれらの食物および水に容易にアクセスできることを確実にするために、P30から実験エンドポイントまで、全てのマウスにケージの床上のカップ中にDietGel Boost (ClearH2O)を与えた。それらが重度運動機能障害の安楽死エンドポイントに達するまで、毎日、動物専門家によって、マウスが計量され、ALS表現型について視覚的に検査された(歩行障害スコアリングを参照のこと)。動物手順は、Walter and Eliza Hall Institute Animal Ethics Committeeによって承認された。
表現型スコアリングおよび運動評価
本発明者らは、適合したまたは以前記載された方法(Hwang et al., 1995; Samson et al., 2015; Wang et al., 2014)を使用して、各マウス株において歩行障害および他の運動表現型についてのデータを集めた。
歩行障害スコアリング。TDP-43マウスは、異常運動制御に特徴的な水泳歩行をおよそP80で示し、スコアリングが、人道的な安楽死エンドポイントまたはP300まで動物専門家によって週2回、遺伝子型に対して盲検化して行われた。手短には、スコア0は、運動障害を有さないマウスへ与えられ；スコア1は、歩行時に振戦を有するマウスへ与えられ；スコア2は、前進時に低下した骨盤および水泳歩行を示すマウスへ与えられ；スコア3は、必死で前進しようとしそしてその腹部を地面上に引きずるマウスへ与えられ；スコア4は、マウスが30秒以内に直立できなかった、安楽死エンドポイントを示した。スコアリングは、マウス当たりの寿命にわたる線形回帰の傾きについて解釈され、これは、ALS関連運動機能障害の進行を示す。
ロータロッド試験。運動協調性およびバランスを、回転ロッド(Rotamex-5, Columbus Instruments)を使用して測定した。それは、288秒で4から40 rpmまで(1 rpm/8秒)加速する装置からマウスが落下するまでに要する時間(レイテンシー)を測定した。P120～130での全てのマウスが、アッセイ前に1日3回のトライアルを含む3日間訓練を受けた。試験日に、マウスをケージ中に維持し、少なくとも15分間、手順部屋に慣れさせた。試験段階は、慣れを回避するために15分間間隔によって分離された3つのアッセイからなり、3つのアッセイの平均値をデータ解析に取り入れた。
オープンフィールド(OF)試験。全身性自発運動活動の差異を定量化するために、マウスを記載されたようなOF試験(Samson et al., 2015)へ供した。手短には、P120～130でのマウスを、白色メラミン床(直径: 90cm)および黒色プラスチック壁(高さ: 39cm)を有する特注の円形アリーナの中心に配置した。これを静か（quite）(約50デシベル)かつ薄暗い(約35ルクス)部屋において行った。嗅覚の手がかりを最小限にするために、試験セッション間に、OFを70%エタノールできれいに拭きそして乾燥させた。OF中の各マウスの運動を、頭上のHD C615ウェブカメラ(Logitech)を使用してビデオ撮影し、次いで、運動の詳細な解析を、オープンソースのImageJ (National Institutes of Health, USA)およびMouseMovを使用して行った。「移動距離」および「小数点以下の静止時間」を、非罹患マウスおよびALS罹患マウス間の自発運動差を測定するために最適であるとして選択した。
マウスCNS組織収集
脳および脊髄を、PBSを用いた心臓灌流後にマウスから収集した。サイトカインプロファイリングのために、組織を、TissueLyser II (Qiagen)を使用して1 mL Trizol (ThermoFisher Scientific)中で30Hzにて90秒間金属ビーズでホモジナイズし、次いで、トータルRNAをqPCRのために単離した。免疫化学のために、PBSを用いた灌流後、マウスを4%パラホルムアルデヒド(PFA)で灌流した。組織を次いで3日間4% PFA中に浸漬し、凍結保護し、凍結切片(7μm)のために包埋した。皮質層Vニューロン中のニューロン密度(ニューロン/mm2)を比較するためのマーカーとしてニッスル小体を染色するために、クレシルバイオレットを使用した。
ウエスタンブロット解析
細胞を、1 mM PMSFおよびcOmpleteプロテアーゼ阻害物質(Roche Biochemicals)が補われた1×RIPA緩衝液(20mM Tris-HCl pH 7.4、150 mM NaCl、1 mM EDTA、1% Triton X-100、10%グリセロール、0.1% SDS、0.5%デオキシコール酸塩、10 mM NaPPi、5 mM NaFおよび1 mM Na3VO4)中に溶解させ、DNAを除去するためにPierce遠心分離カラム(Thermo Scientific)によって処理し、95℃で10分間変性させた。サンプルを、MESランニングバッファー(Thermo Scientific)でNovex 4-12%プレキャストSDS-PAGEゲル(Thermo Scientific)上で分離し、その後、ポリフッ化ビニリデン(PVDF)膜(Millipore)上へ移した。膜を、0.1% Tween 20 (Sigma)を含有するTris緩衝食塩水(TBS)中5%脱脂乳中でブロッキングし、その後、4℃で特異的な一次抗体と共に一晩インキュベートした：抗P-TBK1 Ser172 (CST; クローンD52C2, 8483)、抗TBK1 (CST; D1B4, クローン3504)、抗P-IRF-3 Ser396 (CST; クローンD6O1M, 29047)、抗IRF-3 (CST; クローンD83B9, 4302)、抗P-p65 Ser536 (CST; クローン93H1, 3033)、抗p65 (CST; クローンC22B4, 4764)、抗TFAM (CST; クローンD5C8, 8076)、抗STING (CST; クローンD2P2F, 13647)、抗切断カスパーゼ-3 Asp175 (CST; クローン5A1E, 9664)、抗GFP (Thermo Scientific; A-11122)、抗サイクロフィリンF (abcam; クローンEPR11311-121, ab231155)、抗FLAG (In-house; クローン9H1, 1:2000)、または抗β-アクチン-HRP (Santa Cruz Biotech, クローンC4, sc-47778; 1:5000)。全ての列挙された一次抗体を、明示されない限り、1:1000で使用した。膜を次いで洗浄し、適切なHRP結合二次抗体と共にインキュベートし、免疫反応性を現像し(化学発光HRP基質, Millipore)、そしてChemiDoc Touch Imaging System (BioRad)を使用して画像化した。
TDP-43/mtDNA免疫沈降
示される時間の間TDP-43を誘導した後、およそ10×106のHEK293TまたはMEFを、1 mM PMSFおよびcOmpleteプロテアーゼ阻害物質(Roche Biochemicals)が補われた、1 mLの1% NP-40緩衝液(1% NP-40、20 mM Tris-HCl pH 7.4、150 mM NaCl、1 mM EGTA、10%グリセロール、10 mM NaPPi、5 mM NaFおよび1 mM Na3VO4)で、4℃にて30分間、溶解した。FLAGタグ化hTDP-43またはマウスcGASの免疫沈降を、抗FLAG M2アフィニティーゲル(Sigma)を使用して行った。サンプルを、ローテーター上において4℃で2時間インキュベートし、広く洗浄し、次いで、NucleoSpin Tissue XSキット(Macherey-NaGel)を使用するDNA抽出へ供した。共沈されたDNAを、記載されたように(White et al., 2014)リアルタイムPCRによって分析した。
定量的リアルタイムPCR
トータルRNAを、製造業者の説明書に従ってISOLATE II RNA Mini Kit (Bioline)を使用して単離し、オリゴ(dT)ヌクレオチドを使用して逆転写した。サイトカイン、ミトコンドリアDNAおよびハウスキーピング遺伝子についてのプライマーを、以前記載されたように使用した(White et al., 2014; De Nardo et al., 2014)。以下のようにIntegrated DNA Technologiesオンラインツールを使用して、他のものを設計した：
Figure 2022506341000028
。定量的リアルタイムPCRを、ViiA 7 Real-Time PCRシステム(Thermo Scientific)においてSYBR Green/ROX qPCR Master Mix (Thermo Scientific)を使用して行った。
cGAMP競合ELISA
TDP-43T/+マウスおよびALS患者からの細胞溶解物、マウス血清およびCNS組織中のcGAMPのレベルを、2’3’-cGAMP競合ELISAキット(Cayman Chemical, 501700)によって測定した。サンプル調製について、細胞をM-PERTM Mammalian Protein Extraction Reagent (Thermo Scientific)中に溶解し、一方、CNS組織を、80%メタノール中にホモジナイズし、4℃にて5分間21,000×gで遠心分離して破片を除去し、そして可溶性画分を凍結乾燥し、その後、PBS中に再懸濁した。死後のヒト組織を使用することの承認が、University of Melbourne Human Ethics Committee (承認番号1238124および1750665)から与えられ、全ての組織をVictorian Brain Bankから得た。
データ表示および統計解析
qPCRからのサイトカイン発現は、δCt法としてのHprt発現と比べての遺伝子発現として示される。示される場合、TDP-43 WTまたは突然変異体過剰発現細胞中の相対的遺伝子発現を、同じ実験中の同じ遺伝子型のベクター対照トランスフェクト／過剰発現細胞中の発現に対してさらに正規化し、変化倍率として示した。データは典型的に平均値±s.e.mであり、適切である場合、2つの群間でt検定によってまたは一元もしくは二元配置分散分析、続いてSidakまたはDunnett多重比較検定によって、解析される。GraphPad Prism 7を全てのチャートおよび統計解析について使用した。0.05未満のP値を有意と見なした。
実施例2 - TDP-43からの炎症シグナル伝達はcGAS/STINGに依存する
ヒト細胞株中の野生型または突然変異TDP-43の過剰発現は、NF-kBおよびIFN経路の活性化を生じさせる。厳選された少数の細胞質自然免疫センサーのみが、これらの炎症経路の両方をトリガーすることができ、従って、これらの候補が欠損しているマウス胎仔線維芽細胞(MEF)細胞株の一団を、野生型または突然変異TDP-43の誘導性発現に対する応答について試験した。
免疫センサーの間接的活性化を回避するために、TDP-43誘導から72時間後、細胞死の開始前に、細胞を分析した。TDP-43はRNA結合タンパク質であるため、RIG-IまたはMDA-5 (保存されたシグナリングアダプターMAVSの欠失を介して)およびPKRを含む、細胞質RNAのセンサーを先ずインターロゲートした(図1)。驚くべきことに、これらの自然免疫センサーはいずれも、TDP-43の下流のNF-kBまたはIFN活性化を減少させず、代わりに、細胞質DNAのセンサーである、cGASの欠失が、これらの経路をベースラインへ戻した(図1)。cGASは、二次メッセンジャー、cGAMPを介してシグナル伝達し、STINGをトリガーする。これらの知見を確認するために、STINGの遺伝子欠失を試験した。図1は、STINGの遺伝子欠失もまたTDP-43誘導性炎症を妨げることを示す。
これらの結果はマウス線維芽細胞細胞株に由来するため、STINGのCRISPR媒介欠失を用いて、ヒト骨髄性Thp1細胞において、知見を確認した。このヒト細胞株において、IFNおよびNF-KB経路は、サイトカイン産生(図2)、およびウエスタンブロットによるシグナル伝達経路の分析(図3)によって実証されたように、STINGの欠失によって有意に減少する。
最後に、cGAS-STING経路の薬理学的遮断が実行可能であるかどうかを判定するために、cGAS (Vincent et al., 2017に記載された、RU.521)およびSTING (Haag et alに記載された、H-151)の最近記載された阻害物質を試験した。実際に、これらの薬物は、過剰発現している野生型および突然変異TDP-43に応答したIFNおよびTNFの産生を妨げた(図4)。これらの結果は、TDP-43と関連する神経炎症を調節する免疫センサーとしてcGASを同定し、さらに、cGAS-STING経路阻害物質を投与することによってTDP-43タンパク質症における神経炎症を減少させる有効性を実証している。
実施例3 - TDP-43は細胞質中へのmtDNA放出をトリガーする
無菌設定において、cGASは、ミトコンドリアまたは核起源のdsDNAに応答することが公知である。TDP-43に応答してcGASを活性化するDNAの供給源を確認するために、FLAGタグ化cGASを、野生型または突然変異TDP-43を過剰発現する細胞から免疫沈降させ（immunoprecipiated）、ミトコンドリア(Nd2およびNd5)または核(POLG)遺伝子についてのqPCR (White et al., 2014)を、沈降物に対して直接行った。これは、TDP-43に応答して、cGASが、核DNAではなく、ミトコンドリアDNAへ結合されたことを示した(図5)。
低用量臭化エチジウムと共に細胞株を培養することによって、ミトコンドリアDNAが欠損している細胞株を作ることがまた可能である。従って、WTおよび突然変異TDP-43を過剰発現するThp1モデルを低用量の臭化エチジウムへ曝露し、ρ0と呼んだ(図6)。炎症性サイトカイン産生(図7)およびcGAS-STINGシグナル伝達経路の活性化(図8)を次いで定量化した。炎症性サイトカイン産生および下流シグナル伝達の活性化は、全て、ミトコンドリアDNAが枯渇されたρ0細胞においてベースラインへ戻った。STINGリガンドに対する適切な応答の誘導によって実証されたように、これらの細胞のcGAS/STINGシグナル伝達能力の内因性機能的異常はなかた(図9)。最終確認として、細胞を画像化し、TDP-43に応答した細胞質中へのミトコンドリアDNAの漏出を示し、これは、突然変異TDP-43によってさらに増大された(図10)。
実施例4 - TDP-43はmPTPを介して細胞質中へのmtDNA放出をトリガーする
以前に、TDP-43はTIM22を介してミトコンドリア基質へのアクセスを得ることが報告された(Wang et al., 2016)。これは、TDP-43 (WTまたは突然変異)は、TIM22が非機能性である細胞においてミトコンドリアDNAへ結合しなかったという知見によって確認された(図11)。
TDP-43は、ミトコンドリア外膜のBak/Bax透過化および細胞質中のDNAの漏出をトリガーし得る、ある条件下でアポトーシスを誘導することができることがさらに報告された。しかし、図12(切断カスパーゼ-3)に示されるアッセイにおいて研究された時点で、アポトーシスの証拠はない。さらに、Bak/Baxの欠失は、野生型または突然変異TDP-43に応答した炎症性サイトカイン産生に対して影響を有さなかった(図13)。代わりに、ROSのアップレギュレーションのような、ミトコンドリア不安定化の他のマーカーが観察され(図14)、これらは、ミトコンドリア膜透過性遷移孔(mPTP)を不安定化し、従って開くと考えられる(Nguyen et al., 2011)。これと一致して、シクロスポリンA (CsA)を使用したmPTPの薬理学的不活性化は、細胞質中へのmtDNA漏出を妨げた(図15)。さらに、mPTPの阻害(CsA)、または重要なmPTP成分サイクロフィリンD(CypD)のCRISPR媒介遺伝子欠失は、cGASへのmtDNA結合(それぞれ図16および17)およびTDP-43に応答した炎症(それぞれ図18および19)を妨げた。これらのデータは、TDP-43がミトコンドリア中に誤って局在化し、mPTPを開き、細胞質中へのmtDNA漏出を生じさせ、それによってcGAS-STING経路を活性化し得る、機構を実証している。
実施例5 - STINGの遺伝子欠失はALSマウスモデルにおいて疾患を予防する
cGAS-STING経路がインビボでTDP-43に応答した神経変性の原因であるかどうかを確立するために、マウスにおけるヒトTDP-43(A315T)過剰発現を伴うALSおよびFTLDの十分に記載されたモデルを使用した(Wils et al., 2010)。ゼリー状の食事に置かれる場合、この系統は、胃腸閉塞に起因する早期致死を回避し、約140日齢で運動ニューロン変性の症状で死ぬ。重要なことに、上昇したレベルのcGAS-STING媒介シグナル伝達のメッセンジャー、cGAMPが、検死時にこれらのマウスの脊髄および皮質において、また、確立された疾患を有するマウスの循環においても観察された(図20)。この後、ALSモデル系統を、STINGを遺伝的に欠失させるために交配させた。STINGのホモ接合型欠失を有するマウスにおいて、およそ180日間への、40％の寿命の非常に有意な延長があった(図21)。特に、STINGの単一の対立遺伝子のみの欠失もまた、170日間へ増大した生存を伴う、寿命の有意な延長を与え(図21)、これは、ALSおよびFTLDを処置または予防するためのSTINGの薬理学的介入の適合性を示している。
TDP-43と関連する神経変性を有する対象について、寿命を延長するだけでなく、疾患症状を改善することも必須である。120日目で、TDP-43突然変異マウスは、ゴールドスタンダード「ロータロッド」試験においてレイテンシーを維持することができず、歩行の進行性悪化を患っていた(図22および23)。しかし、STINGが欠損しているマウスは、有意に改善された(図22および23)。この時点で、STINGの欠失はまた、オープンフィールド試験においてTDP-43突然変異マウスによる移動距離を有意に増加させ、それらの停止フラクション（stop fraction）を減少させた(図24)。
最後に、ALSおよびFTLDのこのマウスモデルにおけるSTING欠失の有利な効果は、減少した神経炎症および神経変性と関連すると確認された。具体的には、炎症性サイトカインは、皮質および脊髄においてもはやアップレギュレートされず(図25)、ニッスル小体染色によって定量化されたように、皮質層5からのニューロンの有意な減少はもはやなかった(図26および図27)。
従って、これらの結果は、STINGの欠失が寿命の劇的な延長、ならびにマウスにおける攻撃的なALSおよびFTLD関連突然変異についての症状の減少を生じさせることを実証している。STINGのたった一つの対立遺伝子の欠失もまた疾患を有意に改善するという観察は、cGAS-STING経路の薬理学的阻害が有効であることをさらに示す。
実施例6 - ALSを有する患者の脊髄中の上昇したcGAMP
最後に、cGAMPのレベルを、ALSを有した人由来の脊髄サンプルにおいて定量化し、神経学的対照としての進行性多発性硬化症(MS)の症例由来のサンプルとこれとを比較した(表1)。これは、年齢、性別または死後間隔と無関係な、ALSサンプルについてのcGAMPの有意な増大を立証した(図28)。これらの結果は、ALSにおけるTDP-43と関連する神経炎症を調節する重要な免疫センサーとしてcGASを暗示する。
（表１）患者の人口統計学的特徴
Figure 2022506341000029
実施例7 - 確立された疾患を処置するためのSTING阻害
実施例5に記載されるマウスモデルを使用して、本発明者らは、小分子STING阻害物質H-151が、確立された疾患を処置することができるかどうかを調べた。疾患症状が120日齢のTDP-43突然変異マウスにおいて最初に現れたときに、H-151 (3.75 mM)を4週間、1日おきにi.p.投与した。
H-151の投与は、ロータロッド試験において落下するまでの時間を有意に改善した(図29)。さらに、皮質および脊髄中の炎症性遺伝子発現のqPCRは、IFNおよびNF-kB依存性サイトカインの増大したレベルが、H-151を使用したSTINGの阻害に起因して大いに減少することを明らかにした(図30)。従って、分子レベルで、および疾患症状の観点から、STINGのH-151阻害は、TDP-43タンパク質症に起因する、ALSおよびFTLDのマウスモデルにおける確立された疾患を処置することができた。
実施例8 - ALS患者由来のiPSC運動ニューロンにおけるミトコンドリア損傷およびcGAS/Sting活性化
ヒトiPSC株
この研究において使用された確立されたヒトiPSC株は、National Institute of Neurological Disorders and Strokeからの2つの対照(NCRM-1およびNCRM-5)、Alessandro Rosaからの1つの対照および1つのALS患者、RIKENからの1つのALS患者、ならびにTarget ALS Foundationからの1つのALS患者(TALSTDP-47.10)を含んだ。全てのiPSCを、1×Primocin (Invivogen, ant-pm-1)を含有するmTeSR1 (STEMCell Technologies, 85850)中のMatrigel (Corning, 354277)コート6-ウェルプレート上に維持し、最初の24時間、ROCK阻害物質Y-27632 (STEMCell Technologies, 72304)を伴ってReLeSR (STEMCell Technologies, 05872)を使用して1:6で継代した。培地を毎日交換した。細胞をmTeSR1/10% DMSO中に凍結保存した（cyropreserved）。
運動ニューロン前駆体およびiPSC由来運動ニューロンの作製
ChAT+運動ニューロンへのiPSCの分化を、以前記載されたように行った(Du et al., 2015)。特に明記しない限り、全ての培地および試薬はGibco製であった。
神経上皮前駆体(NEP)の誘導
ヒトiPSCを、化学的に定義された神経培地：3μM CHIR99021 (STEMCell Technologies, 72054)、2μMドルソモルフィン(STEMCell Technologies, 72102)および2μM SB431542 (STEMCell Technologies, 72234)を含有する、0.5×N2、0.5×B27、0.1mM L-アスコルビン酸(Sigma)、1×Glutamaxおよび1×Primocin (Invivogen)が補われたDMEM/F12:Neurobasal (1:1)中で6日間培養し、培地を1日おきに変更した。
MNPの誘導
NEPをReLeSRで解離させ、6日間、1μM CHIR99021、2μMドルソモルフィンおよび2μM SB431542を含有する神経培地中のMatrigelコートプレート上において1:6で培養した。Y-27632を最初の24時間使用した。培地を1日おきに変更した。分化のこの段階で、MNPを、MN分化（diffrenertiation）の前に、3μM CHIR99021、2μMドルソモルフィン、2μM SB431542、0.1μMオールトランスレチノイン酸(Sigma, R2500)、0.5μMプルモルファミン(STEMCell Technologies, 72204)および0.5mMバルプロ酸（Valporic Acid）(STEMCell Technologies, 72292)を含有する神経培地中で増殖させたか、または10% FBSおよび10% DMSOを含有するDMEM/F12中に凍結保存した。
MNの分化
MNPをReLeSRで解離させ、未熟MNX1+ MNへと、6日間、0.5μMオールトランスRAおよび0.1μM Purを含有する神経培地中のMatrigelコートプレート上において培養した。Y-27632を最初の24時間使用し、培地を1日おきに交換した。その後、細胞をAccutase (Merck Millipore, SCR005)で切り離して単個細胞浮遊液を生じさせ、ChAT+ MNへと、10日間、0.1μM化合物E (STEMCell Technologies, 73954)が補われた培地中で成熟させた。培地を1日おきに交換した。細胞をMatrigelコート8ウェルチャンバースライド(iBidi, 80826)中にプレーティングし、倒立型SP8共焦点顕微鏡(Leica)を使用して、βIII-チューブリン(Promega, クローン5G8, G7121)染色と共に、MNX1 (Merck Millipore, ABN174)およびChAT (Merck Millipore, ABN174)を含む、MNの細胞マーカーを確認した。
結果
iPSC由来MNを使用して、ミトコンドリア損傷およびcGAS/STING経路を確認した。具体的には、ミトコンドリア不安定化マーカーa)mitoSOX redおよびb)テトラメチルローダミンメチルエステル(TMRM)を、iPSC由来運動ニューロンにおいてフローサイトメトリー(FACS)によって定量化した。これらは、ALS患者iPSC由来運動ニューロン中のROSのアップレギュレーションおよび膜電位(mΔψ)の低下を実証した(図31)。さらに、ROS阻害物質MitoQおよびMitoTEMPOは、図32に示されるように、健常対照およびTARDBP(TDP-43)中に突然変異を有するALS患者由来のヒトiPSC由来運動ニューロンにおいてIFNB1およびTNF遺伝子誘導を妨げた。
cGAS/Sting経路の役割を暗示するために、cGAS阻害物質RU.521およびSTING阻害物質H-151を試験し、それらは、図33に示されるように、健常対照およびTARDBP(TDP-43)中に突然変異を有するALS患者由来のヒトiPSC由来運動ニューロンにおいてIFNB1およびTNF遺伝子誘導を妨げることが分かった。さらに、運動ニューロンが培養下で4週間置かれると、細胞死がこの期間にわたって観察され、しかし、STINGの阻害はALS関連細胞傷害性を軽減した。これは、細胞の画像化によって実証され(図34a)、細胞数の読み出しとしてのLDHによって測定された(図34b)。シグナル伝達代謝物cGAMPは、ALS中のcGAS活性化についてのバイオマーカーとして提案され、3つの健常対照と比較して3つのALS患者由来運動ニューロンにおいて上昇することが実証された(図35)。
多数の変更および／または改変が、広く記載されるような本発明の精神または範囲から逸脱することなく、具体的な態様において示されるような本発明に対して行われ得ることが、当業者によって認識されると考えられる。本態様は、従って、全ての点において、説明的と見なされ、限定的とは見なされないものとする。
本出願は、2018年11月2日付けで出願された、「Methods of treatment, prevention and diagnosis」という表題のオーストラリア特許出願第2018904175号からの優先権を主張する。その出願の全内容は参照により本明細書に組み入れられる。
本明細書において援用される全ての刊行物は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる。URLまたは他のそのような識別子またはアドレスが言及される場合、そのような識別子は変化し得、インターネット上の特定の情報は移り変わり得、しかし、インターネットを検索することによって同等の情報を見つけることができることが理解される。それへの言及はそのような情報の入手可能性および一般への普及を証拠立てる。
本明細書中に含まれた文書、行為、材料、装置、物品などのいずれの議論も、本発明の文脈を提供するためのものにすぎない。これらの事項のいずれかまたは全てが、先行技術の基礎の一部を形成する、または、本出願の各請求項の優先日以前に存在していたために本発明に関連する分野における一般知識であったという承認として解釈されないものとする。
参照文献
Figure 2022506341000030
Figure 2022506341000031
配列リスト
Figure 2022506341000032
Figure 2022506341000033
Figure 2022506341000034
Figure 2022506341000035
Figure 2022506341000036
Figure 2022506341000037
本明細書全体にわたって、特に指定されない限りまたは文脈が要求しない限り、単一の工程、組成物、工程の群、または組成物の群への言及は、1つおよび複数の(即ち、1つまたは複数の)それらの工程、組成物、工程の群または組成物の群を包含すると解釈されるものとする。
[本発明1001]
cGAS-STING経路阻害物質を対象へ投与する工程を含む、該対象におけるTDP-43タンパク質症を処置または予防する方法。
[本発明1002]
TDP-43タンパク質症が神経変性疾患である、本発明1001の方法。
[本発明1003]
前記TDP-43タンパク質症が、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、運動ニューロン疾患(MND)、前頭側頭型認知症(FTD)、前頭側頭葉変性症(FTLD)、アルツハイマー病、パーキンソン病、または封入体筋炎(IBM)である、本発明1001または本発明1002の方法。
[本発明1004]
前記ALSが孤発性ALSであるか、または前記FTLDが、ユビキチン陽性封入体を伴うFTLD(FTLD-U)である、本発明1003の方法。
[本発明1005]
前記cGAS-STING経路阻害物質がSTING阻害物質である、本発明1001～1004のいずれかの方法。
[本発明1006]
前記STING阻害物質がSTINGへ結合する、本発明1005の方法。
[本発明1007]
前記STING阻害物質がSTINGへのcGAMP結合を競合的に阻害する、本発明1005または本発明1006の方法。
[本発明1008]
前記STING阻害物質がSTINGの発現を減少させる、本発明1005の方法。
[本発明1009]
前記STING阻害物質がsiRNAである、本発明1008の方法。
[本発明1010]
前記STING阻害物質が環状ジヌクレオチドである、本発明1005～1007のいずれかの方法。
[本発明1011]
前記環状ジヌクレオチドが環状プリンジヌクレオチドである、本発明1010の方法。
[本発明1012]
前記STING阻害物質がニトロフラン誘導体である、本発明1005～1007のいずれかの方法。
[本発明1013]
前記STING阻害物質が、STINGのパルミトイル化誘導クラスタリングを遮断する、本発明1005～1007または本発明1012のいずれかの方法。
[本発明1014]
前記STING阻害物質がSTINGへ共有結合する、本発明1005～1013のいずれかの方法。
[本発明1015]
前記STING阻害物質がSTINGのCys91へ共有結合する、本発明1014の方法。
[本発明1016]
前記STING阻害物質が、式：
Figure 2022506341000077
の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、互変異性体、もしくはプロドラッグである、本発明1013～1015のいずれかの方法。
[本発明1017]
前記STING阻害物質が、ジクロフェナク、R(-)-2,10,11-トリヒドロキシアポルフィン臭化水素酸塩、ジプロピルドーパミン臭化水素酸塩、(±)-trans-U-50488、2,2'-ビピリジン、SP600125、メシル酸ドキサゾシン、ミトキサントロン、MRS 2159、ネマジピン-A、(±)-PPHT塩酸塩、SMER28、キニーネ、またはキスカル酸である、本発明1005の方法。
[本発明1018]
前記cGAS-STING経路阻害物質がcGAS阻害物質である、本発明1001～1004のいずれかの方法。
[本発明1019]
前記cGAS阻害物質がcGASへ結合する、本発明1018の方法。
[本発明1020]
前記cGAS阻害物質がcGASの活性部位へ結合する、本発明1019の方法。
[本発明1021]
前記cGAS阻害物質が、cGASのArg364および／またはTyr421と相互作用する、本発明1020の方法。
[本発明1022]
前記cGAS阻害物質がcGAMP触媒作用を阻害する、本発明1018～1021のいずれかの方法。
[本発明1023]
前記cGAS阻害物質がcGASの発現を減少させる、本発明1018の方法。
[本発明1024]
前記cGAS阻害物質がsiRNAである、本発明1023の方法。
[本発明1025]
前記cGAS阻害物質が、式：
Figure 2022506341000078
の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、互変異性体、もしくはプロドラッグである、本発明1018～1022のいずれかの方法。
[本発明1026]
前記cGAS-STING経路阻害物質がcGAMP阻害物質である、本発明1001～1004のいずれかの方法。
[本発明1027]
前記cGAMP阻害物質がcGAMPへ結合する、本発明1026の方法。
[本発明1028]
前記cGAMP阻害物質が、cGAMPへ結合する抗原結合部位を含むポリペプチドである、本発明1027の方法。
[本発明1029]
前記対象がヒトである、本発明1001～1028のいずれかの方法。
[本発明1030]
前記cGAS-STING経路阻害物質を、TNFαおよび／またはI型インターフェロン発現の増大を減少させるかまたは阻止するために十分な量で投与する、本発明1001～1029のいずれかの方法。
[本発明1031]
対象におけるTDP-43タンパク質症の処置または予防のための医薬の製造におけるcGAS-STING経路阻害物質の使用。
[本発明1032]
対象におけるTDP-43タンパク質症の処置または予防において使用するためのcGAS-STING経路阻害物質。
[本発明1033]
TDP-43タンパク質症の疑いがある神経変性疾患を患っている対象におけるcGAS-STING経路阻害物質による処置に対する応答性の見込みを判定するための方法であって、
該方法が、該対象由来のサンプルにおいてcGAS-STING経路の活性化を検出する工程を含み、ここで、該cGAS-STING経路の活性化が該処置に対する応答性のより高い見込みを示す、該方法。
[本発明1035]
対象由来のサンプルにおいてcGAS-STING経路の活性化を検出する工程を含む、該対象をTDP-43タンパク質症と診断する方法。
[本発明1036]
前記cGAS-STING経路の活性化を検出する工程が、前記対象由来のサンプル中のcGAMPのレベルを測定することを含む、本発明1034または本発明1035の方法。
[本発明1037]
ELISAを使用して前記サンプル中のcGAMPのレベルを測定する、本発明1036の方法。
[本発明1038]
前記サンプルが血液サンプルである、本発明1034～1037のいずれかの方法。
[本発明1039]
(a)cGAS-STING経路阻害物質を、任意で、薬学的に許容される担体または希釈剤中に含む、容器と；(b)対象におけるTDP-43タンパク質症を処置または予防するための指示を含む添付文書とを含む、キット。

Claims (38)

  1. cGAS-STING経路阻害物質を対象へ投与する工程を含む、該対象におけるTDP-43タンパク質症を処置または予防する方法。
  2. TDP-43タンパク質症が神経変性疾患である、請求項1記載の方法。
  3. 前記TDP-43タンパク質症が、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、運動ニューロン疾患(MND)、前頭側頭型認知症(FTD)、前頭側頭葉変性症(FTLD)、アルツハイマー病、パーキンソン病、または封入体筋炎(IBM)である、請求項1または請求項2記載の方法。
  4. 前記ALSが孤発性ALSであるか、または前記FTLDが、ユビキチン陽性封入体を伴うFTLD(FTLD-U)である、請求項3記載の方法。
  5. 前記cGAS-STING経路阻害物質がSTING阻害物質である、請求項1～4のいずれか一項記載の方法。
  6. 前記STING阻害物質がSTINGへ結合する、請求項5記載の方法。
  7. 前記STING阻害物質がSTINGへのcGAMP結合を競合的に阻害する、請求項5または請求項6記載の方法。
  8. 前記STING阻害物質がSTINGの発現を減少させる、請求項5記載の方法。
  9. 前記STING阻害物質がsiRNAである、請求項8記載の方法。
  10. 前記STING阻害物質が環状ジヌクレオチドである、請求項5～7のいずれか一項記載の方法。
  11. 前記環状ジヌクレオチドが環状プリンジヌクレオチドである、請求項10記載の方法。
  12. 前記STING阻害物質がニトロフラン誘導体である、請求項5～7のいずれか一項記載の方法。
  13. 前記STING阻害物質が、STINGのパルミトイル化誘導クラスタリングを遮断する、請求項5～7または請求項12のいずれか一項記載の方法。
  14. 前記STING阻害物質がSTINGへ共有結合する、請求項5～13のいずれか一項記載の方法。
  15. 前記STING阻害物質がSTINGのCys91へ共有結合する、請求項14記載の方法。
  16. 前記STING阻害物質が、式：
    Figure 2022506341000038
    の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、互変異性体、もしくはプロドラッグである、請求項13～15のいずれか一項記載の方法。
  17. 前記STING阻害物質が、ジクロフェナク、R(-)-2,10,11-トリヒドロキシアポルフィン臭化水素酸塩、ジプロピルドーパミン臭化水素酸塩、(±)-trans-U-50488、2,2'-ビピリジン、SP600125、メシル酸ドキサゾシン、ミトキサントロン、MRS 2159、ネマジピン-A、(±)-PPHT塩酸塩、SMER28、キニーネ、またはキスカル酸である、請求項5記載の方法。
  18. 前記cGAS-STING経路阻害物質がcGAS阻害物質である、請求項1～4のいずれか一項記載の方法。
  19. 前記cGAS阻害物質がcGASへ結合する、請求項18記載の方法。
  20. 前記cGAS阻害物質がcGASの活性部位へ結合する、請求項19記載の方法。
  21. 前記cGAS阻害物質が、cGASのArg364および／またはTyr421と相互作用する、請求項20記載の方法。
  22. 前記cGAS阻害物質がcGAMP触媒作用を阻害する、請求項18～21のいずれか一項記載の方法。
  23. 前記cGAS阻害物質がcGASの発現を減少させる、請求項18記載の方法。
  24. 前記cGAS阻害物質がsiRNAである、請求項23記載の方法。
  25. 前記cGAS阻害物質が、式：
    Figure 2022506341000039
    の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、互変異性体、もしくはプロドラッグである、請求項18～22のいずれか一項記載の方法。
  26. 前記cGAS-STING経路阻害物質がcGAMP阻害物質である、請求項1～4のいずれか一項記載の方法。
  27. 前記cGAMP阻害物質がcGAMPへ結合する、請求項26記載の方法。
  28. 前記cGAMP阻害物質が、cGAMPへ結合する抗原結合部位を含むポリペプチドである、請求項27記載の方法。
  29. 前記対象がヒトである、請求項1～28のいずれか一項記載の方法。
  30. 前記cGAS-STING経路阻害物質を、TNFαおよび／またはI型インターフェロン発現の増大を減少させるかまたは阻止するために十分な量で投与する、請求項1～29のいずれか一項記載の方法。
  31. 対象におけるTDP-43タンパク質症の処置または予防のための医薬の製造におけるcGAS-STING経路阻害物質の使用。
  32. 対象におけるTDP-43タンパク質症の処置または予防において使用するためのcGAS-STING経路阻害物質。
  33. TDP-43タンパク質症の疑いがある神経変性疾患を患っている対象におけるcGAS-STING経路阻害物質による処置に対する応答性の見込みを判定するための方法であって、
    該方法が、該対象由来のサンプルにおいてcGAS-STING経路の活性化を検出する工程を含み、ここで、該cGAS-STING経路の活性化が該処置に対する応答性のより高い見込みを示す、該方法。
  34. 対象由来のサンプルにおいてcGAS-STING経路の活性化を検出する工程を含む、該対象をTDP-43タンパク質症と診断する方法。
  35. 前記cGAS-STING経路の活性化を検出する工程が、前記対象由来のサンプル中のcGAMPのレベルを測定することを含む、請求項34または請求項35記載の方法。
  36. ELISAを使用して前記サンプル中のcGAMPのレベルを測定する、請求項36記載の方法。
  37. 前記サンプルが血液サンプルである、請求項34～37のいずれか一項記載の方法。
  38. (a)cGAS-STING経路阻害物質を、任意で、薬学的に許容される担体または希釈剤中に含む、容器と；(b)対象におけるTDP-43タンパク質症を処置または予防するための指示を含む添付文書とを含む、キット。
JP2021523659A 2018-11-02 2019-10-31 処置、予防、および診断の方法 Pending JP2022506341A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AU2018904175A AU2018904175A0 (en) 2018-11-02 Methods of treatment, prevention and diagnosis
AU2018904175 2018-11-02
PCT/AU2019/051201 WO2020087126A1 (en) 2018-11-02 2019-10-31 Methods of treatment, prevention and diagnosis

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2022506341A true JP2022506341A (ja) 2022-01-17

Family

ID=70461776

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2021523659A Pending JP2022506341A (ja) 2018-11-02 2019-10-31 処置、予防、および診断の方法

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20220071955A1 (ja)
EP (1) EP3873461A4 (ja)
JP (1) JP2022506341A (ja)
AU (1) AU2019373407A1 (ja)
WO (1) WO2020087126A1 (ja)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH04234323A (ja) * 1990-07-19 1992-08-24 E R Squibb & Sons Inc パーキンソン病の治療剤
JP2016524593A (ja) * 2013-04-29 2016-08-18 メモリアル スローン−ケタリング キャンサー センター セカンドメッセンジャーのシグナル伝達を変えるための組成物及び方法
WO2017175156A1 (en) * 2016-04-07 2017-10-12 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Heterocyclic amides useful as protein modulators
WO2017176812A1 (en) * 2016-04-05 2017-10-12 Immune Sensor, Llc cGAS ANTAGONIST COMPOUNDS

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5236932A (en) * 1990-07-19 1993-08-17 E. R. Squibb & Sons, Inc. Method for treating Parkinson's disease employing quinine
EP1674580A1 (en) * 2004-12-23 2006-06-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Method for identifying activators and/or inhibitors of enzyme activity
EP3556362A1 (en) * 2018-04-16 2019-10-23 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) Sting inhibitors

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH04234323A (ja) * 1990-07-19 1992-08-24 E R Squibb & Sons Inc パーキンソン病の治療剤
JP2016524593A (ja) * 2013-04-29 2016-08-18 メモリアル スローン−ケタリング キャンサー センター セカンドメッセンジャーのシグナル伝達を変えるための組成物及び方法
WO2017176812A1 (en) * 2016-04-05 2017-10-12 Immune Sensor, Llc cGAS ANTAGONIST COMPOUNDS
WO2017175156A1 (en) * 2016-04-07 2017-10-12 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Heterocyclic amides useful as protein modulators

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
YANG, B. ET AL: "AMYLOID BETA (Aβ) PEPTIDE INDUCED TNF-α RELEASE FROM ALZHEIMER MICROGLIA IS INHIBITED BY DICLOFENA", SOCIETY FOR NEUROSCIENCE, vol. 26, JPN6022034714, 2000, pages 2049, ISSN: 0005036373 *
徳田 隆彦: "１．バイオマーカー", 日本内科学会雑誌, vol. 第100巻、第８号, JPN6022034715, 2011, pages 2177 - 2186, ISSN: 0005036374 *

Also Published As

Publication number Publication date
AU2019373407A1 (en) 2021-05-20
EP3873461A4 (en) 2022-08-10
EP3873461A1 (en) 2021-09-08
WO2020087126A1 (en) 2020-05-07
US20220071955A1 (en) 2022-03-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US8372861B2 (en) Inhibitors of the unfolded protein response and methods for their use
EP2285366B1 (fr) Molecules inhibant une voie metabolique impliquant la proteine tyrosine kinase syk et procede d&#39;identification de ces molecules
JP5612482B2 (ja) 癌の処理のためのγ−セクレターゼインヒビターの使用
JP6509386B2 (ja) ｍＴＯＲ経路関連疾患を治療するための化合物
JP2023159152A (ja) がんを治療するための組成物及び方法
AU2018253937A1 (en) Intracellular kinase associated with resistance against anti-tumour immune responses, and uses thereof
US20080269123A1 (en) Methods for treating polycystic kidney disease (PKD) or other cyst forming diseases
US10420814B2 (en) Composition for treating cancer stem cells
US20200123127A1 (en) Removal of senescence-associated macrophages
EA030808B1 (ru) ПРИМЕНЕНИЕ 1-ЭТИЛ-7-(2-МЕТИЛ-6-(1Н-1,2,4-ТРИАЗОЛ-3-ИЛ)ПИРИДИН-3-ИЛ)-3,4-ДИГИДРОПИРАЗИНО[2,3-b]ПИРАЗИН-2(1Н)-ОНА В ЛЕЧЕНИИ МУЛЬТИФОРМНОЙ ГЛИОБЛАСТОМЫ
US20200197392A1 (en) Compositions and methods for treating tuberous sclerosis complex
KR101387985B1 (ko) 전이 종양의 치료
WO2020132259A1 (en) Compositions and methods of treating cancers by administering a phenothiazine-related drug that activates protein phosphatase 2a (pp2a)
WO2017208174A2 (en) Methods of treating disease with pfkfb3 inhibitors
JP2019522658A (ja) 線維症の治療に使用するためのＷｎｔ阻害剤
JP2020529418A (ja) Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病を治療するための化合物、組成及び方法
Zhelev et al. From Roscovitine to CYC202 to Seliciclib–from bench to bedside: discovery and development
WO2015039187A1 (en) Stem cell modulation ii
JP6373252B2 (ja) オーロラキナーゼ阻害薬を使用する癌の治療方法
JP2022506341A (ja) 処置、予防、および診断の方法
KR101351682B1 (ko) 전신 비만세포증 치료용 조성물
KR20200028982A (ko) 시냅스 기능을 증진시키기 위한 hdac2-sp3 복합체 표적화
JP7072260B2 (ja) マックル・ウェルズ症候群の治療用医薬組成物
Tefera Hedgehog Signaling Inhibators and Their Importance for Cancer Treatment
JP2023542066A (ja) 抗体－薬物コンジュゲートとａｔｒ阻害剤との組み合わせ

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20210714

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20210512

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20210714

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20220822

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20221121

A02 Decision of refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02

Effective date: 20230413