JP2022502090A - ヒト心筋トロポニンiに対する組換え抗体 - Google Patents
ヒト心筋トロポニンiに対する組換え抗体 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2022502090A JP2022502090A JP2021542251A JP2021542251A JP2022502090A JP 2022502090 A JP2022502090 A JP 2022502090A JP 2021542251 A JP2021542251 A JP 2021542251A JP 2021542251 A JP2021542251 A JP 2021542251A JP 2022502090 A JP2022502090 A JP 2022502090A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- complementarity determining
- determining regions
- regions cdr
- binding protein
- troponin
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 102000013394 Troponin I Human genes 0.000 title claims abstract description 53
- 108010065729 Troponin I Proteins 0.000 title claims abstract description 53
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 title claims abstract description 44
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims abstract description 116
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 claims abstract description 64
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 48
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 48
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 48
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 48
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims abstract description 36
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 17
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 5
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 4
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 claims description 62
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 32
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 23
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 23
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 17
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 16
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 15
- 229910052727 yttrium Inorganic materials 0.000 claims description 15
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 14
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 14
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 14
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 12
- 208000004476 Acute Coronary Syndrome Diseases 0.000 claims description 10
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 10
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 10
- 206010000891 acute myocardial infarction Diseases 0.000 claims description 10
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 9
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 7
- 206010002388 Angina unstable Diseases 0.000 claims description 6
- 208000006193 Pulmonary infarction Diseases 0.000 claims description 6
- 208000007814 Unstable Angina Diseases 0.000 claims description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 6
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 6
- 201000004332 intermediate coronary syndrome Diseases 0.000 claims description 6
- 230000007575 pulmonary infarction Effects 0.000 claims description 6
- 241000272814 Anser sp. Species 0.000 claims description 5
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 5
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 208000037891 myocardial injury Diseases 0.000 claims description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 claims description 4
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 claims description 3
- 241000282994 Cervidae Species 0.000 claims description 3
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 claims description 3
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 claims description 3
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims description 3
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims description 3
- 241000288906 Primates Species 0.000 claims description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 claims description 3
- 102100036859 Troponin I, cardiac muscle Human genes 0.000 claims description 3
- 101710128251 Troponin I, cardiac muscle Proteins 0.000 claims description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 3
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 claims description 3
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 claims description 3
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 claims description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 3
- 241000272525 Anas platyrhynchos Species 0.000 claims description 2
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 claims description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 claims description 2
- 241000772415 Neovison vison Species 0.000 claims description 2
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 claims description 2
- 241000009328 Perro Species 0.000 claims 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 4
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 abstract 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 abstract 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 21
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 17
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 11
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 11
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 10
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 10
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 10
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 6
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 6
- 101100537532 Rattus norvegicus Tnni3 gene Proteins 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- DRBBFCLWYRJSJZ-UHFFFAOYSA-N N-phosphocreatine Chemical compound OC(=O)CN(C)C(=N)NP(O)(O)=O DRBBFCLWYRJSJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 4
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 4
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- QTWJRLJHJPIABL-UHFFFAOYSA-N 2-methylphenol;3-methylphenol;4-methylphenol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1.CC1=CC=CC(O)=C1.CC1=CC=CC=C1O QTWJRLJHJPIABL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 3
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 3
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- 229930003836 cresol Natural products 0.000 description 3
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 3
- 230000003680 myocardial damage Effects 0.000 description 3
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- ABZLKHKQJHEPAX-UHFFFAOYSA-N tetramethylrhodamine Chemical compound C=12C=CC(N(C)C)=CC2=[O+]C2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C([O-])=O ABZLKHKQJHEPAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- VGIRNWJSIRVFRT-UHFFFAOYSA-N 2',7'-difluorofluorescein Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(F)C(=O)C=C2OC2=CC(O)=C(F)C=C21 VGIRNWJSIRVFRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzoic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical compound O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 2
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 2
- 108010053210 Phycocyanin Proteins 0.000 description 2
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 2
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 2
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 2
- KKEYFWRCBNTPAC-UHFFFAOYSA-N Terephthalic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(C(O)=O)C=C1 KKEYFWRCBNTPAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004903 Troponin Human genes 0.000 description 2
- 108090001027 Troponin Proteins 0.000 description 2
- 238000012197 amplification kit Methods 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- -1 azomethine Chemical compound 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 2
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- QQVIHTHCMHWDBS-UHFFFAOYSA-N isophthalic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC(C(O)=O)=C1 QQVIHTHCMHWDBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 229950007002 phosphocreatine Drugs 0.000 description 2
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 2
- XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-N phthalic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1C(O)=O XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 2
- 229910052761 rare earth metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000002910 rare earth metals Chemical class 0.000 description 2
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000013517 stratification Methods 0.000 description 2
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 2
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- COCMHKNAGZHBDZ-UHFFFAOYSA-N 4-carboxy-3-[3-(dimethylamino)-6-dimethylazaniumylidenexanthen-9-yl]benzoate Chemical compound C=12C=CC(=[N+](C)C)C=C2OC2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC(C([O-])=O)=CC=C1C(O)=O COCMHKNAGZHBDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 6-carboxyfluorescein Chemical compound C12=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C11OC(=O)C2=CC=C(C(=O)O)C=C21 BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 241000272517 Anseriformes Species 0.000 description 1
- 102000004625 Aspartate Aminotransferases Human genes 0.000 description 1
- 108010003415 Aspartate Aminotransferases Proteins 0.000 description 1
- 241000282832 Camelidae Species 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 229910052693 Europium Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 1
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 108010044467 Isoenzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241000282339 Mustela Species 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- AWZJFZMWSUBJAJ-UHFFFAOYSA-N OG-514 dye Chemical compound OC(=O)CSC1=C(F)C(F)=C(C(O)=O)C(C2=C3C=C(F)C(=O)C=C3OC3=CC(O)=C(F)C=C32)=C1F AWZJFZMWSUBJAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N Thiamine Natural products CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GYDJEQRTZSCIOI-UHFFFAOYSA-N Tranexamic acid Chemical compound NCC1CCC(C(O)=O)CC1 GYDJEQRTZSCIOI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150066719 VH1 gene Proteins 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000007259 addition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229960004050 aminobenzoic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 238000002869 basic local alignment search tool Methods 0.000 description 1
- 239000003150 biochemical marker Substances 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000001045 blue dye Substances 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000008828 contractile function Effects 0.000 description 1
- 239000002872 contrast media Substances 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 150000004985 diamines Chemical class 0.000 description 1
- 230000003205 diastolic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 239000002961 echo contrast media Substances 0.000 description 1
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 description 1
- IINNWAYUJNWZRM-UHFFFAOYSA-L erythrosin B Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(I)C(=O)C(I)=C2OC2=C(I)C([O-])=C(I)C=C21 IINNWAYUJNWZRM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- VYXSBFYARXAAKO-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-[3-(ethylamino)-6-ethylimino-2,7-dimethylxanthen-9-yl]benzoate;hydron;chloride Chemical compound [Cl-].C1=2C=C(C)C(NCC)=CC=2OC2=CC(=[NH+]CC)C(C)=CC2=C1C1=CC=CC=C1C(=O)OCC VYXSBFYARXAAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N europium atom Chemical compound [Eu] OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000037433 frameshift Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 1
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 1
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 1
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Substances C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000008065 myocardial cell damage Effects 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- VYNDHICBIRRPFP-UHFFFAOYSA-N pacific blue Chemical compound FC1=C(O)C(F)=C2OC(=O)C(C(=O)O)=CC2=C1 VYNDHICBIRRPFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 230000005298 paramagnetic effect Effects 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003504 photosensitizing agent Substances 0.000 description 1
- IEQIEDJGQAUEQZ-UHFFFAOYSA-N phthalocyanine Chemical compound N1C(N=C2C3=CC=CC=C3C(N=C3C4=CC=CC=C4C(=N4)N3)=N2)=C(C=CC=C2)C2=C1N=C1C2=CC=CC=C2C4=N1 IEQIEDJGQAUEQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000002096 quantum dot Substances 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 1
- KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N thiamine Chemical compound CC1=C(CCO)SCN1CC1=CN=C(C)N=C1N KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 description 1
- 235000019157 thiamine Nutrition 0.000 description 1
- 239000011721 thiamine Substances 0.000 description 1
- ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M thionine Chemical compound [Cl-].C1=CC(N)=CC2=[S+]C3=CC(N)=CC=C3N=C21 ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6887—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids from muscle, cartilage or connective tissue
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/12—Pulmonary diseases
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/32—Cardiovascular disorders
- G01N2800/324—Coronary artery diseases, e.g. angina pectoris, myocardial infarction
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/32—Cardiovascular disorders
- G01N2800/325—Heart failure or cardiac arrest, e.g. cardiomyopathy, congestive heart failure
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
相補性決定領域CDR−VH1はG−F−T−X1−S−N−Y−A−M−Sであり、
X1はYまたはFであり、
相補性決定領域CDR−VH2はI−S−X1−G−G−S−Y−S−X2−Y−P−D−S−V−Kであり、
X1はTまたはSであり、X2はYまたはFであり、
相補性決定領域CDR−VH3はA−R−X1−D−N−Y−X2−G−S−X3−F−M−D−Yであり、
X1はKまたはRであり、X2はY、PまたはFであり、X3はTまたはSであり、
相補性決定領域CDR−VL1はR−A−S−Q−X1−I−T−X2−Y−L−Nであり、
X1はDまたはEであり、X2はQまたはNであり、
相補性決定領域CDR−VL2はI−Y−Y−X1−S−R−X2−H−S−G−V−Sであり、
X1はSまたはTであり、X2はIまたはLであり、
相補性決定領域CDR−VL3はQ−Q−G−X1−T−X2−P−L−Tであり、
X1はNまたはHであり、X2はIまたはLである。
前記相補性決定領域CDR−VH2では、X1はSであり、
前記相補性決定領域CDR−VH3では、X1はRであり、
前記相補性決定領域CDR−VL1では、X2はNであり、
前記相補性決定領域CDR−VL2では、X1はTである。
軽鎖定常領域配列はSEQ ID NO:9に示され、
重鎖定常領域配列はSEQ ID NO:10に示される。
培養培地中および適切な培養条件下で上記のような宿主細胞を培養し、培養培地または培養される宿主細胞からこのように生成される結合タンパク質を回収するステップ、を含む。
a)抗体/抗原結合反応が起こるのに十分な条件下で、前記試験サンプル中のトロポニンI抗原と上記のような結合タンパク質を接触させて、免疫複合体を形成するステップ、及び
b)前記試験サンプルに前記トロポニンI抗原が存在することを示す前記免疫複合体の存在を検出するステップ、を含み、
この実施形態において、前記結合タンパク質は信号強度を示すインジケーターでラベル付けでき、前記免疫複合体が簡単に検出されるようにする。
A)結合反応が起こるのに十分な条件下で、被験体からのサンプルと本開示に記載の結合タンパク質を接触させて結合反応を行うステップ、及び
B)結合反応によって生成される免疫複合体を検出するステップ、を含み、
前記免疫複合体の存在は、心筋トロポニンIに関連する疾患が存在することを示す。
「抗原結合ドメインを含む単離された結合タンパク質」は、一般にCDR領域を含むすべてのタンパク質/タンパク質フラグメントを指す。「抗体」という用語は、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体、及びこれらの抗体の抗原化合物結合フラグメントを含み、Fab、F(ab’)2、Fd、Fv、scFv、二重特異性抗体および抗体の最小認識単位、及びこれらの抗体とフラグメントの単鎖誘導体を含む。抗体のタイプには、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE、IgDを選択することができる。なお、「抗体」という用語は、天然に存在する抗体と非天然に存在する抗体を含み、例えばキメラ(chimeric)、二機能性(bifunctional)およびヒト化(humanized)抗体、並びに関連する合成アイソフォーム(isoforms)を含む。「抗体」という用語は、「免疫グロブリン」と同じ意味で使用できる。
本開示は抗原結合ドメインを含む単離された結合タンパク質に関し、前記抗原結合ドメインは以下のアミノ酸配列から選ばれる少なくとも1つの相補性決定領域を含み、または、以下のアミノ酸配列の相補性決定領域と少なくとも80%の配列同一性を有し、且つ心筋トロポニンIとKD≦3.33×10−8mol/Lの親和性を有し、
相補性決定領域CDR−VH1はA−S−G−F−X1−F−X2−T−F−A−M−Sであり、
相補性決定領域CDR−VH1はG−F−T−X1−S−N−Y−A−M−Sであり、
X1はYまたはFであり、
相補性決定領域CDR−VH2はI−S−X1−G−G−S−Y−S−X2−Y−P−D−S−V−Kであり、
X1はTまたはSであり、X2はYまたはFであり、
相補性決定領域CDR−VH3はA−R−X1−D−N−Y−X2−G−S−X3−F−M−D−Yであり、
X1はKまたはRであり、X2はY、PまたはFであり、X3はTまたはSであり、
相補性決定領域CDR−VL1はR−A−S−Q−X1−I−T−X2−Y−L−Nであり、
X1はDまたはEであり、X2はQまたはNであり、
相補性決定領域CDR−VL2はI−Y−Y−X1−S−R−X2−H−S−G−V−Sであり、
X1はSまたはTであり、X2はIまたはLであり、
相補性決定領域CDR−VL3はQ−Q−G−X1−T−X2−P−L−Tであり、
X1はNまたはHであり、X2はIまたはLである。
前記相補性決定領域CDR−VH2では、X1はSであり、
前記相補性決定領域CDR−VH3では、X1はRであり、
前記相補性決定領域CDR−VL1では、X2はNであり、
前記相補性決定領域CDR−VL2では、X1はTである。
scFv(sc=単鎖)、二重特異性抗体(diabodies)。
軽鎖定常領域配列はSEQ ID NO:9に示され、
重鎖定常領域配列はSEQ ID NO:10に示される。
培養培地中および適切な培養条件下で上記のような宿主細胞を培養し、培養培地または培養される宿主細胞からこのように生成される結合タンパク質を回収するステップを含む。
a)抗体/抗原結合反応が起こるのに十分な条件下で、前記試験サンプル中のトロポニンI抗原と上記のような結合タンパク質を接触させて、免疫複合体を形成するようにするステップ、及び
b)前記試験サンプルに前記トロポニンI抗原が存在することを示す免疫複合体の存在を検出するステップ、を含み、
この実施形態において、前記結合タンパク質は信号強度を示すインジケーターでラベル付けでき、前記免疫複合体が簡単に検出されるようにする。
この実施形態において、前記結合タンパク質は、cTnIの異なる抗原エピトープに結合するために、一次抗体の形で前記二次抗体と抗体ペアを形成し、
前記の二次抗体は信号強度を示すインジケーターでラベル付けでき、前記免疫複合体が簡単に検出されるようにする。
この実施形態において、前記結合タンパク質は前記二次抗体の抗原として、前記の二次抗体は信号強度を示すインジケーターでラベル付けでき、前記免疫複合体が簡単に検出されるようにする。
A)結合反応が起こるのに十分な条件下で、被験体からのサンプルと本開示に記載の結合タンパク質を接触させて結合反応を行うステップ、及び
B)結合反応によって生成される免疫複合体を検出するステップ、を含み、
前記免疫複合体の存在は、心筋トロポニンIに関連する疾患が存在することを示す。
本実施例は、ヒト心筋トロポニンIに対する組換え抗体の例示的な調製方法を提供する。
本実施例における制限エンドヌクレアーゼ、Prime Star DNAポリメラーゼはTakara会社から購入し、
MagExtractor−RNA抽出試薬テストキットはTOYOBO会社から購入し、
BD SMARTTM RACE cDNA Amplification Kit試薬テストキットはTakara会社から購入し、
pMD−18TベクターはTakara会社から購入し、
プラスミド抽出試薬テストキットは天根会社から購入し、
プライマー合成と遺伝子配列決定はInvitrogen会社により完成される。
重鎖と軽鎖を増幅する5’RACE上流プライマー、
重鎖と軽鎖を増幅する5’RACEプライマー、
SMARTER II A オリゴヌクレオチド:
5’>AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTACXXXXX<3’、
5’−RACE CDS プライマー(5’−CDS):
5’>(T)25VN<3’(N=A、C、G、orT;V=A、G、orC)、
ユニバーサルプライマーA混合物(UPM):
5’>CTAATACGACTCACTATAGGGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT<3’
ネストユニバーサルプライマーA(NUP):
5’>AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT<3’、
軽鎖遺伝子を増幅する下流プライマー、
mkR、
5’>TTTTCCTTTTGAATTCCTAACACTCATTCCTGTTGAAGC<3’。
重鎖遺伝子を増幅する下流プライマー、
mHR、
5’> TTTTCCTTTTGAATTCTCATTTACCAGGAGAGTGGGAGA<3’。
Anti−cTnI 8C4モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマ細胞株からミドルRNAを抽出し、SMARTERTM RACE cDNA Amplification Kit試薬テストキット及び試薬テストキットにおけるSMARTER II Aオリゴヌクレオチドと5’−CDSプライマーを使用して第一鎖cDNA合成を行い、得られた第一鎖cDNA生成物をPCR増幅テンプレートとして使用する。軽鎖遺伝子はユニバーサルプライマーA混合物(UPM)、ネストユニバーサルプライマーA(NUP)及びmkRプライマーで増幅され、重鎖遺伝子はユニバーサルプライマーA混合物(UPM)、ネストユニバーサルプライマーA(NUP)及びmHRプライマーで増幅される。軽鎖のプライマーペアは約0.8KBのターゲットバンドを増幅し、重鎖のプライマーペアは約1.4KBのターゲットバンドを増幅する。アガロースゲル電気泳動で精製して回収し、生成物をrTaq DNAポリメラーゼでA添加反応を行った後pMD−18Tベクターに挿入し、DH5αコンピテント細胞に形質転換し、細菌が成長した後、それぞれ重鎖及び軽鎖遺伝子を取って4つのクローンをクローニングして、Invitrogen会社に送って配列決定を行う。
上記の配列決定で得られた遺伝子配列をIMGT抗体データベースに入れて分析し、且つVNTI11.5ソフトウェアを使用して分析し、重鎖と軽鎖プライマーペアにより増幅された遺伝子がすべて正しいものであることを分析して判定し、軽鎖により増幅された遺伝子フラグメントの中で、VL遺伝子配列は342bpであり、VkII遺伝子家族に属し、その前に57bpのリーダーペプチド配列があり、重鎖プライマーペアにより増幅された遺伝子フラグメントの中で、VH遺伝子配列は357bpであり、VH1遺伝子家族に属し、その前に57bpのリーダーペプチド配列を有する。
pcDNATM3.4TOPO(登録商標)ベクターは構築された組換え抗体真核発現ベクターであり、該発現ベクターは、HindIII、BamHI、EcoRIなどのポリクローナル酵素制限部位に導入されており、且つpcDNA3.4A発現ベクターと呼ばれ、後続で3.4A発現ベクターと略称され、上記pMD−18Tにおける抗体可変領域遺伝子配列決定結果に応じて、CTNI 8C4抗体のVLとVH遺伝子特異性プライマーを設計し、両端にそれぞれHindIII、EcoRI酵素制限部位と保護塩基が付き、プライマーは以下の通りであり、
C8C4−HF:
5’>CAGCAAGCTTGCCGCCACCATGGAATGCAGCTGTGTCATGCTCTTCTTC<3’、
C8C4−HR:5’>CATCGAATTCTTATCATTTACCAGGAGAGTGGGAGA<3’、
C8C4−LF:5’>CATCAAGCTTGCCGCCACCATGAAGTTGCCTGTTAGGCTGTTGG<3’、
C8C4−LR: 5’>CAGCGAATTCTTACTAACACTCATTCCTGTTGAAGC<3’、
PCR増幅方法によって0.75KBの軽鎖遺伝子フラグメントと1.42kbの重鎖遺伝子フラグメントを増幅する。重鎖と軽鎖遺伝子フラグメントには、それぞれHindIII/EcoRI二重酵素消化を使用し、3.4AベクターにはHindIII/EcoRI二重酵素消化を採用し、フラグメントとベクターを精製して回収した後、重鎖遺伝子と軽鎖遺伝子をそれぞれ3.4A発現ベクターに接続し、それぞれ重鎖と軽鎖の組換え発現プラスミドを取得する。
実施例1で得られた抗体(配列がSEQ ID NO:11及び12で示される軽鎖と重鎖を含む)は分析によって、重鎖の相補性決定領域(WT):
CDR−VH1はG−F−T−Y(X1)−S−N−Y−A−M−Sであり、
CDR−VH2はI−S−T(X1)−G−G−S−Y−S−Y(X2)−Y−P−D−S−V−Kであり、
CDR−VH3はA−R−K(X1)−D−N−Y−Y(X2)−G−S−T(X3)−F−M−D−Yである。
軽鎖の相補性決定領域:
CDR−VL1はR−A−S−Q−D(X1)−I−T−Q(X2)−Y−L−Nであり、
CDR−VL2はI−Y−Y−S(X1)−S−R−I(X2)−H−S−G−V−Sであり、
CDR−VL3はQ−Q−G−N(X1)−T−I(X2)−P−L−Tであり、
X1、X2、X3はすべて変異部位である。
AMCセンサーを使用して、精製された抗体をPBSTで10ug/mlに希釈し、CTNI品質管理製品組換えタンパク質(自社の抗原)をPBSTで段階希釈し、769.2nmol/ml、384.6nmol/ml、192.3nmol/ml、96.2nmol/ml、48.1nmol/ml、24nmol/ml、12nmol/ml、0nmol/ml、
実行プロセスは以下の通りであり、緩衝液1(PBST)で60s平衡化し、抗体溶液で抗体を300s硬化し、緩衝液2(PBST)で180sインキュベートし、抗原溶液で420s結合し、緩衝液2で1200s解離し、10mM pH 1.69 GLY溶液及び緩衝液3でセンサーを再生し、データを出力する。(KDは平衡溶液親和性定数である親和性を示し、KONは結合速度を示し、kdisは解離速度を示す。)
本開示による心筋トロポニンIに結合される抗原結合ドメインを含む単離された結合タンパク質は、特定の重鎖CDRと軽鎖CDRを含む。該結合タンパク質は、心筋トロポニンIタンパク質を特異的に認識して結合することができ、高い感度と特異性を有し、特に、該結合タンパク質はヒトcTnIタンパク質と高い親和性を有する。それにより、心筋トロポニンIに関連する疾患の検出と診断を実現する。
相補性決定領域CDR−VH1はG−F−T−X1−S−N−Y−A−M−S(SEQ ID NO:13)であり、
X1はYまたはFであり、
相補性決定領域CDR−VH2はI−S−X1−G−G−S−Y−S−X2−Y−P−D−S−V−K(SEQ ID NO:14)であり、
X1はTまたはSであり、X2はYまたはFであり、
相補性決定領域CDR−VH3はA−R−X1−D−N−Y−X2−G−S−X3−F−M−D−Y(SEQ ID NO:15)であり、
X1はKまたはRであり、X2はY、PまたはFであり、X3はTまたはSであり、
相補性決定領域CDR−VL1はR−A−S−Q−X1−I−T−X2−Y−L−N(SEQ ID NO:16)であり、
X1はDまたはEであり、X2はQまたはNであり、
相補性決定領域CDR−VL2はI−Y−Y−X1−S−R−X2−H−S−G−V−S(SEQ ID NO:17)であり、
X1はSまたはTであり、X2はIまたはLであり、
相補性決定領域CDR−VL3はQ−Q−G−X1−T−X2−P−L−T(SEQ ID NO:18)であり、
X1はNまたはHであり、X2はIまたはLである。
本開示は抗原結合ドメインを含む単離された結合タンパク質に関し、前記抗原結合ドメインは以下のアミノ酸配列から選ばれる少なくとも1つの相補性決定領域を含み、または、以下のアミノ酸配列の相補性決定領域と少なくとも80%の配列同一性を有し、且つ心筋トロポニンIとKD≦3.33×10−8mol/Lの親和性を有し、
相補性決定領域CDR−VH1はG−F−T−X1−S−N−Y−A−M−Sであり、
X1はYまたはFであり、
相補性決定領域CDR−VH2はI−S−X1−G−G−S−Y−S−X2−Y−P−D−S−V−Kであり、
X1はTまたはSであり、X2はYまたはFであり、
相補性決定領域CDR−VH3はA−R−X1−D−N−Y−X2−G−S−X3−F−M−D−Yであり、
X1はKまたはRであり、X2はY、PまたはFであり、X3はTまたはSであり、
相補性決定領域CDR−VL1はR−A−S−Q−X1−I−T−X2−Y−L−Nであり、
X1はDまたはEであり、X2はQまたはNであり、
相補性決定領域CDR−VL2はI−Y−Y−X1−S−R−X2−H−S−G−V−Sであり、
X1はSまたはTであり、X2はIまたはLであり、
相補性決定領域CDR−VL3はQ−Q−G−X1−T−X2−P−L−Tであり、
X1はNまたはHであり、X2はIまたはLである。
重鎖と軽鎖を増幅する5’RACE上流プライマー、
重鎖と軽鎖を増幅する5’RACEプライマー、
SMARTER II A オリゴヌクレオチド:
5’>AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTACXXXXX<3’(SEQ ID NO:19)、
5’−RACE CDS プライマー(5’−CDS):
5’>(T)25VN<3’(N=A、C、G、orT;V=A、G、orC)(SEQ ID NO:20)、
ユニバーサルプライマーA混合物(UPM):
5’>CTAATACGACTCACTATAGGGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT<3’(SEQ ID NO:21)
ネストユニバーサルプライマーA(NUP):
5’>AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT<3’(SEQ ID NO:22)、
軽鎖遺伝子を増幅する下流プライマー、
mkR、
5’>TTTTCCTTTTGAATTCCTAACACTCATTCCTGTTGAAGC<3’(SEQ ID NO:23)。
重鎖遺伝子を増幅する下流プライマー、
mHR、
5’> TTTTCCTTTTGAATTCTCATTTACCAGGAGAGTGGGAGA<3’(SEQ ID NO:24)。
pcDNATM3.4TOPO(R)ベクターは構築された組換え抗体真核発現ベクターであり、該発現ベクターは、HindIII、BamHI、EcoRIなどのポリクローナル酵素制限部位に導入されており、且つpcDNA3.4A発現ベクターと呼ばれ、後続で3.4A発現ベクターと略称され、上記pMD−18Tにおける抗体可変領域遺伝子配列決定結果に応じて、CTNI 8C4抗体のVLとVH遺伝子特異性プライマーを設計し、両端にそれぞれHindIII、EcoRI酵素制限部位と保護塩基が付き、プライマーは以下の通りであり、
C8C4−HF:
5’>CAGCAAGCTTGCCGCCACCATGGAATGCAGCTGTGTCATGCTCTTCTTC<3’(SEQ ID NO:25)、
C8C4−HR:5’>CATCGAATTCTTATCATTTACCAGGAGAGTGGGAGA<3’(SEQ ID NO:26)、
C8C4−LF:5’>CATCAAGCTTGCCGCCACCATGAAGTTGCCTGTTAGGCTGTTGG<3’(SEQ ID NO:27)、
C8C4−LR: 5’>CAGCGAATTCTTACTAACACTCATTCCTGTTGAAGC<3’(SEQ ID NO:28)、
PCR増幅方法によって0.75KBの軽鎖遺伝子フラグメントと1.42kbの重鎖遺伝子フラグメントを増幅する。重鎖と軽鎖遺伝子フラグメントには、それぞれHindIII/EcoRI二重酵素消化を使用し、3.4AベクターにはHindIII/EcoRI二重酵素消化を採用し、フラグメントとベクターを精製して回収した後、重鎖遺伝子と軽鎖遺伝子をそれぞれ3.4A発現ベクターに接続し、それぞれ重鎖と軽鎖の組換え発現プラスミドを取得する。
Claims (18)
- 抗原結合ドメインを含む単離された結合タンパク質であって、前記抗原結合ドメインは、以下のアミノ酸配列から選ばれる少なくとも1つの相補性決定領域を含み、または以下のアミノ酸配列の相補性決定領域と少なくとも80%の配列同一性を有し、且つ心筋トロポニンIとKD≦3.33×10−8mol/Lの親和性を有し、
相補性決定領域CDR−VH1はG−F−T−X1−S−N−Y−A−M−Sであり、
X1はYまたはFであり、
相補性決定領域CDR−VH2はI−S−X1−G−G−S−Y−S−X2−Y−P−D−S−V−Kであり、
X1はSまたはTであり、X2はYまたはFであり、
相補性決定領域CDR−VH3はA−R−X1−D−N−Y−X2−G−S−X3−F−M−D−Yであり、
X1はRまたはKであり、X2はY、PまたはFであり、X3はTまたはSであり、
相補性決定領域CDR−VL1はR−A−S−Q−X1−I−T−X2−Y−L−Nであり、
X1はDまたはEであり、X2はNまたはQであり、
相補性決定領域CDR−VL2はI−Y−Y−X1−S−R−X2−H−S−G−V−Sであり、
X1はTまたはSであり、X2はIまたはLであり、
相補性決定領域CDR−VL3はQ−Q−G−X1−T−X2−P−L−Tであり、
X1はNまたはHであり、X2はIまたはLであり、
好ましくは、
前記相補性決定領域CDR−VH2では、X1はSであり、
前記相補性決定領域CDR−VH3では、X1はRであり、
前記相補性決定領域CDR−VL1では、X2はNであり、
前記相補性決定領域CDR−VL2では、X1はTであり、
好ましくは、前記相補性決定領域CDR−VH1では、X1はYであり、
好ましくは、前記相補性決定領域CDR−VH1では、X1はFであり、
好ましくは、前記相補性決定領域CDR−VH2では、X2はYであり、
好ましくは、前記相補性決定領域CDR−VH2では、X2はFであり、
好ましくは、前記相補性決定領域CDR−VH3では、X2はYであり、X3はTであり、
好ましくは、前記相補性決定領域CDR−VH3では、X2はPであり、X3はTであり、
好ましくは、前記相補性決定領域CDR−VH3では、X2はFであり、X3はTであり、
好ましくは、前記相補性決定領域CDR−VH3では、X2はYであり、X3はSであり、
好ましくは、前記相補性決定領域CDR−VH3では、X2はPであり、X3はSであり、
好ましくは、前記相補性決定領域CDR−VH3では、X2はFであり、X3はSであり、
好ましくは、前記相補性決定領域CDR−VL1では、X1はDであり、
好ましくは、前記相補性決定領域CDR−VL1では、X1はEであり、
好ましくは、前記相補性決定領域CDR−VL2では、X2はIであり、
好ましくは、前記相補性決定領域CDR−VL2では、X2はLであり、
好ましくは、前記相補性決定領域CDR−VL3では、X1はNであり、X2はIであり、
好ましくは、前記相補性決定領域CDR−VL3では、X1はHであり、X2はIであり、
好ましくは、前記相補性決定領域CDR−VL3では、X1はNであり、X2はLであり、
好ましくは、前記相補性決定領域CDR−VL3では、X1はHであり、X2はLであり、
好ましくは、各相補性決定領域の変異部位は、以下の変異の組み合わせのいずれかから選ばれる、
ことを特徴とする抗原結合ドメインを含む単離された結合タンパク質。 - 前記結合タンパク質に少なくとも3つのCDRsが含まれ、或いは、前記結合タンパク質に少なくとも6つのCDRsが含まれ、
好ましくは、前記結合タンパク質は、ナノ抗体、F(ab’)2、Fab’、Fab、Fv、scFv、二重特異性抗体及び抗体の最小認識単位の中の1つであり、
好ましくは、前記結合タンパク質は、配列が順次SEQ ID NO:1−4で示される軽鎖フレームワーク領域FR−L1、FR−L2、FR−L3及びFR−L4、および/または、配列が順次SEQ ID NO:5−8で示される重鎖フレームワーク領域FR−H1、FR−H2、FR−H3及びFR−H4を含む、
ことを特徴とする請求項1に記載の抗原結合ドメインを含む単離された結合タンパク質。 - 前記結合タンパク質に抗体定常領域配列も含まれ、
好ましくは、前記定常領域配列は、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE、IgDのいずれかの定常領域の配列から選ばれ、
好ましくは、前記定常領域の種源は、牛、馬、乳牛、豚、羊、山羊、ラット、マウス、犬、猫、ウサギ、ラクダ、ロバ、鹿、ミンク、鶏、アヒル、ガチョウ、七面鳥、コックファイティング、または人間であり、
好ましくは、前記定常領域はネズミに由来し、
軽鎖定常領域配列はSEQ ID NO:9に示され、
重鎖定常領域配列はSEQ ID NO:10に示される、
ことを特徴とする請求項2に記載の抗原結合ドメインを含む単離された結合タンパク質。 - 単離された核酸分子であって、DNAまたはRNAであり、請求項1〜3のいずれかに記載の結合タンパク質をコードする、
ことを特徴とする単離された核酸分子。 - 請求項4に記載の核酸分子を含むベクター。
- 請求項5に記載のベクターによって形質転換される宿主細胞。
- 請求項1〜3のいずれかに記載の結合タンパク質を生成する方法であって、
培養培地中および適切な培養条件下で請求項6に記載の宿主細胞を培養し、培養培地または培養される宿主細胞からこのように生成される結合タンパク質を回収するステップを含む、
ことを特徴とする結合タンパク質を生成する方法。 - 急性心筋梗塞、急性冠症候群、肺梗塞、不安定狭心症、心筋損傷を診断するための診断薬または試薬テストキットの調製における請求項1〜3のいずれかに記載の結合タンパク質の適用。
- 試験サンプル中のトロポニンI抗原を検出するための方法であって、
a)抗体/抗原結合反応が起こるのに十分な条件下で、前記試験サンプル中のトロポニンI抗原と請求項3に記載の結合タンパク質を接触させ、免疫複合体を形成するステップ、及び
b)前記試験サンプルに前記トロポニンI抗原が存在することを示す前記免疫複合体の存在を検出するステップ、を含み、
好ましくは、ステップa)において、前記免疫複合体に前記結合タンパク質に結合される二次抗体も含まれ、
好ましくは、ステップa)において、前記免疫複合体に前記トロポニンI抗原に結合される二次抗体も含まれる、試験サンプル中のトロポニンI抗原を検出するための方法。 - 前記トロポニンI抗原は心筋トロポニンI抗原である請求項9に記載の方法。
- 請求項1〜3のいずれかに記載の結合タンパク質を含む試薬テストキット。
- 心筋トロポニンIに関連する疾患の診断における請求項1〜3のいずれかに記載の結合タンパク質の適用。
- 心筋トロポニンIに関連する疾患を診断する方法であって、
A)結合反応が起こるのに十分な条件下で、被験体からのサンプルと請求項1〜3のいずれかに記載の結合タンパク質を接触させ、結合反応を行うステップ、及び
B)結合反応によって生成される免疫複合体を検出するステップ、を含み、
前記免疫複合体の存在は、心筋トロポニンIに関連する疾患が存在することを示す心筋トロポニンIに関連する疾患を診断する方法。 - 前記方法は、蛍光免疫技術、化学発光技術、コロイド状金免疫技術、放射性免疫分析および/または酵素結合免疫技術に基づくものである請求項13に記載の方法。
- 前記サンプルは、全血、末梢血、血清、血漿または心筋組織の少なくとも1つから選ばれる請求項13または14に記載の方法。
- 前記被験体は、哺乳動物であり、好ましくは霊長類動物であり、より好ましくは人間である請求項13〜15のいずれかに記載の方法。
- 前記心筋トロポニンIに関連する疾患は心血管疾患である請求項12に記載の適用または請求項13〜16のいずれかに記載の方法。
- 前記心筋トロポニンIに関連する疾患は、急性心筋梗塞、急性冠症候群、肺梗塞、不安定狭心症、心筋損傷またはそれらの組合わせからなる群から選ばれる請求項12に記載の適用または請求項13〜16のいずれかに記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201811180362.8 | 2018-10-10 | ||
CN201811180362.8A CN111018976B (zh) | 2018-10-10 | 2018-10-10 | 一种抗人心肌肌钙蛋白i的重组抗体 |
PCT/CN2019/108681 WO2020073831A1 (zh) | 2018-10-10 | 2019-09-27 | 一种抗人心肌肌钙蛋白i的重组抗体 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2022502090A true JP2022502090A (ja) | 2022-01-11 |
JP7439108B2 JP7439108B2 (ja) | 2024-02-27 |
Family
ID=70164420
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021542251A Active JP7439108B2 (ja) | 2018-10-10 | 2019-09-27 | ヒト心筋トロポニンiに対する組換え抗体 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP3872092A4 (ja) |
JP (1) | JP7439108B2 (ja) |
KR (1) | KR20210049894A (ja) |
CN (1) | CN111018976B (ja) |
WO (1) | WO2020073831A1 (ja) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112679607B (zh) * | 2020-07-28 | 2022-11-25 | 美康生物科技股份有限公司 | 一种肌钙蛋白i e13单链抗体的制备方法 |
CN115703837B (zh) * | 2021-08-17 | 2023-10-03 | 东莞市朋志生物科技有限公司 | 一种抗生长刺激表达基因2蛋白的重组抗体 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103694355A (zh) * | 2013-12-11 | 2014-04-02 | 深圳市菲鹏生物股份有限公司 | 抗人心肌肌钙蛋白i的重组抗体及其构建方法和应用 |
JP2018510617A (ja) * | 2015-01-28 | 2018-04-19 | プロセナ バイオサイエンシーズ リミテッド | 抗トランスサイレチン抗体 |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20060275849A1 (en) * | 2005-06-07 | 2006-12-07 | Beckman Coulter, Inc. | Monoclonal antibody reagents |
US8030026B2 (en) * | 2009-02-24 | 2011-10-04 | Abbott Laboratories | Antibodies to troponin I and methods of use thereof |
CN101942416B (zh) * | 2010-07-23 | 2012-03-28 | 中国医学科学院放射医学研究所 | 抗人心肌肌钙蛋白i特异性单克隆抗体及其制备方法 |
CN107557345B (zh) * | 2017-09-06 | 2020-06-16 | 暨南大学 | 人心肌肌钙蛋白i的杂交瘤细胞株7d2及单克隆抗体和应用 |
-
2018
- 2018-10-10 CN CN201811180362.8A patent/CN111018976B/zh active Active
-
2019
- 2019-09-27 WO PCT/CN2019/108681 patent/WO2020073831A1/zh unknown
- 2019-09-27 JP JP2021542251A patent/JP7439108B2/ja active Active
- 2019-09-27 EP EP19872158.1A patent/EP3872092A4/en active Pending
- 2019-09-27 KR KR1020217009161A patent/KR20210049894A/ko not_active Application Discontinuation
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103694355A (zh) * | 2013-12-11 | 2014-04-02 | 深圳市菲鹏生物股份有限公司 | 抗人心肌肌钙蛋白i的重组抗体及其构建方法和应用 |
JP2018510617A (ja) * | 2015-01-28 | 2018-04-19 | プロセナ バイオサイエンシーズ リミテッド | 抗トランスサイレチン抗体 |
Non-Patent Citations (7)
Title |
---|
"Igh protein [Mus musculus]", GENEBANK: AAH02121.1 [ONLINE], JPN6023008711, ISSN: 0005144984 * |
AUTOMATED ANTIBODY SEQUENCING USING PEAKS AB SOFTWARE [ONLINE], JPN6023008716, 4 October 2016 (2016-10-04), ISSN: 0005144989 * |
GUY, MOLTU J. ET AL.: "The impact of antibody selection on the detection of cardiac troponin I", CLIN CHIM ACTA, vol. 420, JPN6023008714, 2013, pages 82 - 88, ISSN: 0005144987 * |
PRODUCT CATALOG 2016-2017 ANTIBODIES AND ANTIGENS, JPN6023008712, 2016, pages 10, ISSN: 0005144985 * |
SVASTI, J ET AL.: "The Complete Amino Acid Sequence of a Mouse x Light Chain", BIOCHEM J., vol. 128, JPN6023008717, 1972, pages 427 - 444, ISSN: 0005144983 * |
TRAN, NGOC HIEU ET AL.: "Complete De Novo Assembly of Monoclonal Antibody Sequences", SCIENTIFIC REPORTS, vol. 6:31730, JPN6023008715, 2016, pages 1 - 10, ISSN: 0005144988 * |
宣言書, JPN6023008713, 16 February 2023 (2023-02-16), ISSN: 0005144986 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN111018976B (zh) | 2022-04-01 |
EP3872092A1 (en) | 2021-09-01 |
JP7439108B2 (ja) | 2024-02-27 |
WO2020073831A1 (zh) | 2020-04-16 |
CN111018976A (zh) | 2020-04-17 |
EP3872092A4 (en) | 2022-03-09 |
KR20210049894A (ko) | 2021-05-06 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
KR102671155B1 (ko) | Ns1 단백질의 결합 단백질 | |
CN111217911B (zh) | 一种抗人胃蛋白酶原ii的重组抗体 | |
JP7339338B2 (ja) | 抗ヒトn末端脳性ナトリウム利尿ペプチド前駆体の組換え抗体 | |
JP7439108B2 (ja) | ヒト心筋トロポニンiに対する組換え抗体 | |
JP7299309B2 (ja) | 抗ヒト心筋型トロポニンi組換え抗体 | |
US20210395394A1 (en) | Antibody against pan-species-specific plasmodium lactate dehydrogenase | |
JP7307158B2 (ja) | 抗ヒト心筋型トロポニンi抗体及びその応用 | |
CN110818797B (zh) | 一种抗人ca153蛋白的重组抗体 | |
CN111018975B (zh) | 一种抗人心肌肌钙蛋白i的重组抗体 | |
CN111018973B (zh) | 一种抗人心肌肌钙蛋白i的重组抗体 | |
CN113004405B (zh) | 一种包含NT-proBNP抗原结合结构域的分离的结合蛋白 | |
CN110818796A (zh) | 一种抗人ca153蛋白的重组抗体 | |
CN111349172B (zh) | 一种抗人肌酸激酶同工酶ck-mb的重组抗体 | |
CN111363035B (zh) | 一种抗心型脂肪酸结合蛋白的重组抗体 | |
CN111363036B (zh) | 一种抗心型脂肪酸结合蛋白的重组抗体 | |
CN111018977B (zh) | 一种抗人心肌肌钙蛋白i的重组抗体 | |
KR102686392B1 (ko) | 항 범종 특이적 말라리아 원충 젖산 탈수소효소의 항체 | |
WO2020073833A1 (zh) | 一种抗人心肌肌钙蛋白i的抗体及其应用 | |
CN117417450A (zh) | 髓过氧化物酶结合蛋白、制备方法和应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210329 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20210330 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20210329 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20210329 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220308 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220608 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220830 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20221128 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20230307 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230607 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20230905 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20231113 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20240116 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20240214 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7439108 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |