JP2022501395A - バシラス・アミロリクエファシエンスｆｃｃ１２５６組成物および植物病原菌の防除方法 - Google Patents

Abstract

本出願は、植物上の植物病原菌、例えば真菌性および細菌性病原菌を防除する方法であって、ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ−１２２１６２として寄託されたバシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６を含む組成物を、植物に、特に植物の地上部分に適用する方法を開示する。組成物は、１．３：１．０から３．０：１．０の相対質量比でイツリンとフェンギシンを含む場合がある。本出願はまた、菌株、担体、界面活性剤および場合により緩衝剤を含む農業用組成物、ならびに対応する濃縮物を開示する。

Description

本開示の主題は、植物病原菌によって引き起こされる植物の病気を処置するために植物または植物の周囲の土壌に適用するための、単離されたバシラス・アミロリクエファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＦＣＣ１２５６株を含む組成物に関する。

ボトリチス種（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｓｐｐ．）、フザリウム種（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐｐ．）、リゾクトニア種（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｐｐ．）を含むがこれらに限定されるものではない真菌性植物病原菌は、農業および園芸業界において深刻な経済的損失をもたらす植物有害生物の一種である。化学薬剤を使用して真菌性植物病原菌を防除できるが、化学薬剤の使用には、高コスト、効能の欠如、真菌の耐性株の出現、望ましくない環境への影響などの欠点がある。さらに、このような化学処理は無差別に行われる傾向があり、処理の標的となる植物病原菌に加えて、有益な細菌、真菌、節足動物にも悪影響を及ぼす場合がある。第２の植物有害生物は、エルウィニア種（Ｅｒｗｉｎｉａ ｓｐｐ．）、キサントモナス種（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｓｐｐ．）、シュードモナス種（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐｐ．）を含むがこれらに限定されない細菌性植物病原菌であり、農業や園芸産業に深刻な経済的損失をもたらす。これらの細菌性病原菌を処置するために化学薬品を使用することには、病原性真菌と同様に欠点がある。したがって、植物中の病原性真菌および細菌を防除する生物農薬として適用される微生物は、農業の持続可能性を向上させるために望ましいものであり、高い需要がある。

バシラス種のメンバーの中には、生物防除用の菌株として報告されているものがあり、市販の製品に応用されているものもある。例えば、現在市販の生物防除製品に使用されている菌株としては以下のものが挙げられる：Ｂａｙｅｒ ＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅ製造のＳｅｒｅｎａｄｅ（登録商標）が有効成分として使用されているバシラス・ヴェレゼンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｖｅｌｅｚｅｎｓｉｓ）ＱＳＴ７１３、Ｃｅｒｔｉｓ製造のＤｏｕｂｌｅ Ｎｉｃｋｅｌが有効成分として使用されているバシラス・アミロリクエファシエンスＤ７４７。さらに、現在市販の生物賦活剤（ｂｉｏｓｔｉｍｕｌａｎｔ）製品に使用されているバシラス株としては、ＡＢｉＴＥＰ ＧｍｂＨ製造のＲｈｉｚｏＶｉｔａｌ（登録商標）４２において有効成分として使用されているバシラス・ヴェレゼンシスＦＺＢ４２が挙げられる。

さらに、特許文献１では、植物の成長に利益を与え、真菌および細菌感染のような植物の病気を処置するために使用するバシラス・アミロリクエファシエンスＲＴＩ４７２が開示されている。

さらに、特許文献２では、植物の成長に利益を与え、真菌および細菌感染のような植物の病気を処置するために使用するバシラス・アミロリクエファシエンスＲＴＩ３０１が開示されている。

また、特許文献３では、とりわけ、真菌性植物病原菌の増殖および／または活性を阻害するためのバシラス・アミロリクエファシエンス株が開示されている。

しかし、ある種の生物農薬が利用可能であるにもかかわらず、当技術分野では、標的となる病気およびその原因となる病原菌に対する特異性を向上させることが必要とされている。さらに、様々な生物学的および非生物学的要因によって影響を受ける可能性のある生物農薬の効能および効力を改善する必要がある。本発明は、植物病原菌の成長を制御し、それによって植物の病気を軽減または予防する、新規な微生物組成物およびその使用方法を提供することによって、当技術分野における必要性に対処する。

ＷＯ２０１６／１０９３９６Ａ１ ＷＯ２０１６／１０９３９５Ａ１ ＷＯ２０１５／０２３６６２Ａ１

本発明は、イチゴ植物土壌から新しいバシラス・アミロリクエファシエンス株を分離することにある。バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６株は、特許アクセッション番号ＰＴＡ−１２２１６２でＡＴＣＣに寄託されている。実施例１を参照。

少なくとも１つの実施形態では、本発明は、植物上の植物病原菌を防除する方法であって、バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６を含む組成物を、植物に、植物の一部に、および／または植物もしくは植物の一部が生育するもしくは植えられる予定の部位に、適用する工程を含む方法、を対象にする。

別の実施形態では、本発明は、植物上の真菌性植物病原菌および／または細菌性植物病原菌を防除する方法であって、バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６を含む組成物を、植物の地上部分に適用する工程を含む方法、に関する。

一実施形態では、ａ）バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６、ならびにｂ）例えば、適切な担体、界面活性剤および場合により緩衝剤を含む農業的に適切な製剤媒体、を含む農業用組成物が提供される。農業用組成物は、例えば本明細書に記載の方法にしたがって、植物を病原菌から保護したり、感受性の高い植物の病原性感染症を処置したりするための適用に特に有用である。一部の実施形態では、組成物は、それぞれ１．３：１．０から３．０：１．０の範囲、例えば１．５：１．０から２．８：１．０の範囲の相対比でイツリンおよびフェンギシンを含む。

さらなる実施形態では、ａ）バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６、ならびにｂ）農業的に適切な製剤媒体、例えば、適切な担体、界面活性剤および場合により緩衝剤を含む媒体、を含む農業用組成物の濃縮物が提供される。

本開示の主題をこのように一般的な用語で説明してきたが、以下では、下記に説明する添付の図面を参照する。

切断コショウリーフディスク（Ｄｅｔａｃｈｅｄ Ｐｅｐｐｅｒ Ｌｅａｆ Ｄｉｓｋ）アッセイにおいて、バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６の活性を、無処理の対照および市販のＳｅｒｅｎａｄｅ（登録商標）Ｏｐｔｉｍｕｍと比較した結果を示す図である。 ＦＣＣ１２５６およびＲＴＩ４７２の培養物由来のイツリン、サーファクチン、フェンギシン、エリシンＡ／Ｓの典型的な比率をそれぞれ示す図である。

本明細書で使用される場合、「バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６」および「ＦＣＣ１２５６」という名称は、特許アクセッション番号ＰＴＡ−１２２１６２で寄託されたバシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６菌株の生物学的に純粋な培養物を表す。実施例１を参照。本明細書に記載の方法、組成物などにおいて、菌株は、１つまたは形態の組合せ：単離された菌株の胞子として、菌株の胞子を含む発酵ブロスとして、菌株の胞子を含む加工発酵製品として、菌株の単離された栄養細胞として、菌株の栄養細胞を含む発酵ブロスとして、および菌株の栄養細胞を含む加工発酵製品として、存在する場合がある。

「生物学的に純粋な培養物」という用語は、単一種の生物、すなわち本ケースでは実質的に専らバシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６菌株を含む、実験室または発酵培養物を表す。これは純粋培養物の発酵ブロスに含まれる他の微生物は、ごくわずかな量しか存在せず、ブロスの物理的および化学的組成に測定可能な変化をもたらさない汚染物とみなされるということを意味する。

「加工発酵製品」という用語は、その下流で加工された形態を表し、発酵ブロスの濃縮物、ろ過した発酵ブロスの固形物、再構成した発酵ブロスの濃縮物、および乾燥した発酵ブロス（例えば、凍結乾燥または噴霧乾燥）を含むが、これらに限定されない。

一部の実施形態では、ＦＣＣ１２５６は、ＦＣＣ１２５６の胞子を含む発酵ブロス、またはＦＣＣ１２５６の胞子を含む加工発酵製品、例えば、発酵ブロスの濃縮物または噴霧乾燥した発酵ブロスとして存在する。

本明細書で開示された組成物および方法にバシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６の生物学的に純粋な培養物が含まれているという事実は、組成物および方法がそれぞれ、他の定義された微生物株、特に他の生物学的に純粋な微生物株を含む場合があることを排除するものではない。

「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」という用語は、特許請求の範囲を含む本出願で使用される場合、「１つまたはそれ以上」を表す。したがって、例えば、「ａ ｐｌａｎｔ」への言及は、文脈が明らかに反対でない限り、複数の植物を含む。

本明細書および特許請求の範囲では、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、および「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、文脈上そうでない場合を除き、非限定的な意味で使用される。同様に、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」という用語およびその文法上の変形は、非限定的であることを意図し、リスト内に項目を記載することは、リストされた項目に置換または追加できる他の同様の項目を除外するものではない。

本明細書および特許請求の範囲の目的のために、１つまたはそれ以上の数値または数値範囲に関連して使用される「約」という用語は、範囲内のすべての数値を含むそのような全ての数値に言及すると理解されるべきであり、記載された数値の上および下に境界を拡張することによってその範囲を改変する。端点による数値範囲の記載は、すべての数字、例えば、その範囲内に包含されるその小数を含めた全ての整数（例えば、１から５という記載は、１、２、３、４および５、ならびにその小数、例えば、１．５、２．２５、３．７５、４．１などを含む）、ならびにその範囲内の任意の範囲を含む。

本明細書および特許請求の範囲の目的のために、「代謝物（ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ）」および「代謝物（ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ）」という用語は、イツリン、フェンギシンおよびサーファクチンのような、バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６によって産生される抗菌活性を有する化合物に関連して使用される。「イツリン」、「フェンギシン」および「サーファクチン」と呼ばれる代謝物は、それぞれ、かなり類似した分子構造のクラスを示す。イツリン、フェンギシンおよびサーファクチンを含む量または比率に言及する限り、その量／比率は、それぞれの代謝物の総量（重量）に関連することが意図される。量は、適切な市販の標準物質を用いたＨＰＬＣ分析によって決定される。

本発明の方法
本発明の特定の実施形態では、感受性の高い植物における病原菌感染に対する保護を付与するために植物に適用するためのバシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６を含む組成物および方法が提供される。本発明の方法により、植物病原菌を防除することは、病原菌感染の減少、植物病原菌に対する抵抗性の向上（例えば、その後の攻撃に対する抵抗性）、苗の活力の向上、根の発達の向上、植物の成長の向上、植物の健康の向上、収量の増加、外観の向上、またはそれらの組合せに反映される。

したがって、本発明は、とりわけ、植物上の植物病原菌を防除する方法であって、バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６を含む組成物を、植物に、植物の一部に、および／または植物もしくは植物の一部が生育するもしくは植えられる予定の部位に、適用する工程を含む方法に関する。

本明細書で使用される場合、「植物病原菌（ｐｌａｎｔ ｐａｔｈｏｇｅｎ）」という用語は、真菌、細菌、ウイルス、ウイロイド、ウイルス様生物、卵菌、ファイトプラズマ、原生動物、線虫、寄生植物を含む、植物に感染症を引き起こす生物を表す。一部の実施形態では、植物病原菌は、真菌および細菌から選択される。一変形例では、植物病原菌は、真菌性植物病原菌から選択される。別の変形例では、植物病原菌は、細菌性植物病原菌から選択される。

別の実施形態では、方法は、さび病菌、ボトリチス種（灰色かび病菌、ボトリチス・スクアモサ（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｓｑｕａｍｏｓａ）など）、エルウィニア種（軟腐病菌（Ｅｒｗｉｎｉａ ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ）、火傷病菌（Ｅｒｗｉｎｉａ ａｍｙｌｏｖｏｒａ）など）、ディッケヤ種（Ｄｉｃｋｅｙａ ｓｐｐ．）（ディッケヤ・ダダンチイ（Ｄｉｃｋｅｙａ ｄａｄａｎｔｉｉ）、ディッケヤ・ソラニ（Ｄｉｃｋｅｙａ ｓｏｌａｎｉ）など）、アグロバクテリウム種（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ．）（アグロバクテリウム・ツメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）、アグロバクテリウム・ツメファシエンスなど）、キサントモナス種（かいよう病菌（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ）、キサントモナス・カンペストリス病原型カロタエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ．ｃａｒｏｔａｅ）、キサントモナス・プルニ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｐｒｕｎｉ）、キサントモナス・アルボリコラ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ａｒｂｏｒｉｃｏｌａ）、イネ白葉枯病菌病原型オリザエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ｐｖ．ｏｒｙｚａｅなど）、キシレラ種（Ｘｙｌｅｌｌａ ｓｐｐ．）（ピアス病菌（Ｘｙｌｅｌｌａ ｆａｓｔｉｄｉｏｓａ）など）、カンジダタス種（Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ ｓｐｐ．）（カンジダタス・リベリバクター（Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ ｌｉｂｅｒｉｂａｃｔｅｒ）など）、フザリウム種（フザリウム・コルモラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｃｏｌｍｏｒｕｍ）、ムギノアカカビ病菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ）、フザリウム・オキシスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、フザリウム・オキシスポラムｆ種キューベンセ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ．ｓｐ．ｃｕｂｅｎｓｅ）、フザリウム・オキシスポラムｆ種リコペルシシ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ．ｓｐ．ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｉ）、フザリウム・ヴィグリフォルメ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｖｉｒｇｕｌｉｆｏｒｍｅ）など）、スクレロティニア種（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｐｐ．）（スクレロティニア・スクレロチオラム（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）、スクレロティニア・ミノール（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｍｉｎｏｒ）、スクレロティニア・ホメオカルパ（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｈｏｍｅｏｃａｒｐａ）など）、セルコスポラ／セルコスポリディウム種（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ／Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｓｐｐ．）、ウンシヌラ種（Ｕｎｃｉｎｕｌａ ｓｐｐ．）（ウンシヌラ・ネカトル（Ｕｎｃｉｎｕｌａ ｎｅｃａｔｏｒ）など）、ポドスファエラ種（Ｐｏｄｏｓｐｈａｅｒａ ｓｐｐ．）（ポドスファエラ・ロイコトリカ（Ｐｏｄｏｓｐｈａｅｒａ ｌｅｕｃｏｔｒｉｃｈａ）、ポドスファエラ・クランデスチン（Ｐｏｄｏｓｐｈａｅｒａ ｃｌａｎｄｅｓｔｉｎｅ）など）、フォモプシス種（フォモプシス・ビチコラ（Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ ｖｉｔｉｃｏｌａ）など）、アルテルナリア種（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｐｐ．）（アルテルナリア・テヌイッシマ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｔｅｎｕｉｓｓｉｍａ）、アルテルナリア・ポーリ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｐｏｒｒｉ）、アルテルナリア・アルテルナータ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｔａ）、アルテルナリア・ソラニ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｏｌａｎｉ）、アルテルナリア・テヌイス（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｔｅｎｕｉｓ）など）、シュードモナス種（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐｐ．）（シュードモナス・シリンガエ病原型トマト（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ．Ｔｏｍａｔｏ）など）、フィトフトラ種（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｓｐｐ．）（ジャガイモ疫病菌（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ）、フィトフトラ・パラシティカ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐａｒａｓｉｔｉｃａ）、フィトフトラ・ソジャエ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｓｏｊａｅ）、フィトフトラ・カプシシ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃａｐｓｉｃｉ）、フィトフトラ・シナモン（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃｉｎｎａｍｏｎ）、フィトフトラ・フラガリアエ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｆｒａｇａｒｉａｅ）、フィトフトラ・ラモラム（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｒａｍｏｒｕｍ）、フィトフトラ・パルミヴォラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐａｌｍｉｖａｒａ）、フィトフトラ・ニコチアナエ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）など）、ファコプソラ種（Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａ ｓｐｐ．）（ファコプソラ・パキリジ（Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａ ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ）、ファコプソラ・メイボミアエ（Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａ ｍｅｉｂｏｍｉａｅ）など）、アスペルギルス種（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．）（黄色コウジ菌（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ）、クロコウジカビ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）など）、ウロマイセス種（Ｕｒｏｍｙｃｅｓ ｓｐｐ．）（ウロマイセス・アペンディキュラタス（Ｕｒｏｍｙｃｅｓ ａｐｐｅｎｄｉｃｕｌａｔｕｓ）など）、クラドスポリウム種（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ｓｐｐ．）（クラドスポリウム・ヘルバラム（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ｈｅｒｂａｒｕｍ）など）、クモノスカビ種（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｓｐｐ．）（リゾプス・アリザス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ａｒｒｈｉｚｕｓ）など）、リゾクトニア種（リゾクトニア・ソラニ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ）、リゾクトニア・ゼアエ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｚｅａｅ）、リゾクトニア・オリザエ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｏｒｙｚａｅ）、リゾクトニア・カリタエ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｃａｒｉｔａｅ）、リゾクトニア・セレアリス（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｃｅｒｅａｌｉｓ）、リゾクトニア・クロコラム（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｃｒｏｃｏｒｕｍ）、リゾクトニア・フラガリアエ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｆｒａｇａｒｉａｅ）、リゾクトニア・ラミコラ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｒａｍｉｃｏｌａ）、リゾクトニア・ルビ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｒｕｂｉ）、リゾクトニア・レグミニコラ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｌｅｇｕｍｉｎｉｃｏｌａ）など）、マクロフォミナ種（Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｉｎａ ｓｐｐ．）（マクロフォミナ・ファセオリナ（Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｉｎａ ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ）など）、マグナポルテ種（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｓｐｐ．）（イネいもち病菌（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｇｒｉｓｅａ）、マグナポルテ・オリザエ（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｏｒｙｚａｅ）など）、ミコスファエレラ種（Ｍｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ ｓｐｐ．）、ミコスファエレラ・グラミノコラ（Ｍｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ ｇｒａｍｉｎｏｃｏｌａ）、ミコスファエレラ・フィジエンシス（Ｍｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ ｆｉｊｉｅｎｓｉｓ）（ブラックシガトガ（Ｂｌａｃｋ ｓｉｇａｔｏｇａ））、ミコスファエレラ・ポミ（Ｍｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ ｐｏｍｉ）、ミコスファエレラ・シトリ（Ｍｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ ｃｉｔｒｉ）など）、モニリニア種（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ ｓｐｐ．）（モニリニア・フルチコラ（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ ｆｒｕｔｉｃｏｌａ）、モニリニア・バクシニイコリムボシ（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ ｖａｃｃｉｎｉｉｃｏｒｙｍｂｏｓｉ）、モニリニア・ラクサ（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ ｌａｘａ）など）、コレトトリカム種（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｓｐｐ．）（コレトトリカム・ゴレオスポリオデス（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｄｅｓ）、コレトトリカム・アクタタム（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ａｃｕｔａｔｕｍ）、コレトトリカム・カンジダム（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ Ｃａｎｄｉｄｕｍ）など）、ディアポルテ種（Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ ｓｐｐ．）（ディアポルテ・シトリ（Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ ｃｉｔｒｉ）、コリネスポラ種（Ｃｏｒｙｎｅｓｐｏｒａ ｓｐｐ．）（コリネスポラ・カッシイコラ（Ｃｏｒｙｎｅｓｐｏｒａ Ｃａｓｓｉｉｃｏｌａ）など）、ギムノスポランギウム種（Ｇｙｍｎｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ ｓｐｐ．）（ギムノスポランギウム・ジュニペリ−バージニアナエ（Ｇｙｍｎｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ ｊｕｎｉｐｅｒｉ−ｖｉｒｇｉｎｉａｎａｅ）など）、シゾチリウム種（Ｓｃｈｉｚｏｔｈｙｒｉｕｍ ｓｐｐ．）（シゾチリウム・ポミ（Ｓｃｈｉｚｏｔｈｙｒｉｕｍ ｐｏｍｉ）など）、ゴレオデス種（Ｇｌｏｅｏｄｅｓ ｓｐｐ．）、ゴレオデス・ポミゲナ（Ｇｌｏｅｏｄｅｓ ｐｏｍｉｇｅｎａ）など）、ボトリオスファエリア種（Ｂｏｔｒｙｏｓｐｈａｅｒｉａ ｓｐｐ．）（ボトリオスファエリア・ドチデア（Ｂｏｔｒｙｏｓｐｈａｅｒｉａ ｄｏｔｈｉｄｅａ）など）、ネオファブラエア種（Ｎｅｏｆａｂｒａｅａ ｓｐｐ．）、ウィルソノマイセス種（Ｗｉｌｓｏｎｏｍｙｃｅｓ ｓｐｐ．）、ウィルソノマイセス・カルポフィラス（Ｗｉｌｓｏｎｏｍｙｃｅｓ ｃａｒｐｏｐｈｉｌｕｓ）など）、スファエロテカ種（Ｓｐｈａｅｒｏｔｈｅｃａ ｓｐｐ．）（スファエロテカ・マキュラリス（Ｓｐｈａｅｒｏｔｈｅｃａ ｍａｃｕｌａｒｉｓ）、スファエロテカ・パンノサ（Ｓｐｈａｅｒｏｔｈｅｃａ ｐａｎｎｏｓａ）など）、エリシフェ種（Ｅｒｙｓｉｐｈｅ ｓｐｐ．）、スタゴノスポラ種（Ｓｔａｇｏｎｏｓｐｏｒａ ｓｐｐ．）（スタゴノスポラ・ノドラム（Ｓｔａｇｏｎｏｓｐｏｒａ ｎｏｄｏｒｕｍ）など）、フハイカビ種（Ｐｙｔｈｉｕｍ ｓｐｐ．）（フィチウム・ウルチマム（Ｐｙｔｈｉｕｍ ｕｌｔｉｍｕｍ）、フィチウム・アファニデルマタム（Ｐｙｔｈｉｕｍ ａｐｈａｎｉｄｅｒｍａｔｕｍ）、フィチウム・イレギュララム（Ｐｙｔｈｉｕｍ ｉｒｒｅｇｕｌａｒｕｍ）、フィチウム・ウロサム（Ｐｙｔｈｉｕｍ ｕｌｏｓｕｍ）、フィチウム・ルトリアリウム（Ｐｙｔｈｉｕｍ ｌｕｔｒｉａｒｉｕｍ）、フィチウム・シルバチウム（Ｐｙｔｈｉｕｍ ｓｙｌｖａｔｉｕｍ）など）、ベンチュリア種（Ｖｅｎｔｕｒｉａ ｓｐｐ．）（ベンチュリア・イナエキュアリス（Ｖｅｎｔｕｒｉａ ｉｎａｅｑｕａｌｉｓ）など）、ベルチシリウム種（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐｐ．）、
ウスチラゴ種（Ｕｓｔｉｌａｇｏ ｓｐｐ．）（ウスチラゴ・ヌーダ（Ｕｓｔｉｌａｇｏ ｎｕｄａ）、ウスチラゴ・マイディス（Ｕｓｔｉｌａｇｏ ｍａｙｄｉｓ）、ウスチラゴ・サイタミネア（Ｕｓｔｉｌａｇｏ ｓｃｉｔａｍｉｎｅａ）など）、麦角種（Ｃｌａｖｉｃｅｐｓ ｓｐｐ．）（クラビセプス・ププレア（Ｃｌａｖｉｃｅｐｓ ｐｕｐｒｒｅａ）など）、ティレチア種（Ｔｉｌｌｅｔｉａ ｓｐｐ．）（ティレチア・トリチシ（Ｔｉｌｌｅｔｉａ ｔｒｉｔｉｃｉ）、ティレチア・ラエビス（Ｔｉｌｌｅｔｉａ ｌａｅｖｉｓ）、ティレチア・ホリド（Ｔｉｌｌｅｔｉａ ｈｏｒｒｉｄ）、ティレチア・コントロベルサ（Ｔｉｌｌｅｔｉａ ｃｏｎｔｒｏｖｅｒｓａ）など）、フォーマ種（Ｐｈｏｍａ ｓｐｐ．）（フォーマ・グリシニコラ（Ｐｈｏｍａ ｇｌｙｃｉｎｉｃｏｌａ）、フォーマ・エキシグア（Ｐｈｏｍａ ｅｘｉｇｕａ）、フォーマ・リンガム（Ｐｈｏｍａ ｌｉｎｇａｍ）など）、コクリオボラス種（Ｃｏｃｌｉｏｂｏｌｕｓ ｓｐｐ．）（コクリオボラス・サチバス（Ｃｏｃｌｉｏｂｏｌｕｓ ｓａｔｉｖｕｓ）など）、ガエウマノマイセス種（Ｇａｅｕｍａｎｏｍｙｃｅｓ ｓｐｐ．）（ガエウマノマイセス・ガミニス（Ｇａｅｕｍａｎｏｍｙｃｅｓ ｇａｍｉｎｉｓ）、コレトトリカム種、リコスポリウム種（Ｒｈｙｃｈｏｓｐｏｒｉｕｍ ｓｐｐ．）（リコスポリウム・セカリス（Ｒｈｙｃｈｏｓｐｏｒｉｕｍ ｓｅｃａｌｉｓ）など）、ビオポラリス種（Ｂｉｏｐｏｌａｒｉｓ ｓｐｐ．）、ヘルミントスポリウム種（Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍ ｓｐｐ．）（ヘルミントスポリウム・セカリス（Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍ ｓｅｃａｌｉｓ）、ヘルミントスポリウム・マイディス（Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍ ｍａｙｄｉｓ）、ヘルミントスポリウム・ソライ（Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍ ｓｏｌａｉ）、ヘルミントスポリウム・トリチシレペンチス（Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍ ｔｒｉｔｉｃｉｒｅｐｅｎｔｉｓ）、およびこれらの亜種のバリアントを含むこれらの組合せ、からなる群から選択される植物病原菌を防除するために、バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６を含む組成物を、植物に、植物の一部に、および／または植物もしくは植物の一部が生育するもしくは植えられる予定の部位に、適用することを含む。

一部の実施形態では、本方法は、亜種のバリアントを含む、灰色かび病菌、ボトリチス・スクアモサ、ムギノアカカビ病菌、フザリウム・オキシスポラム、フザリウム・ヴィグリフォルメ、ジャガイモ疫病菌、フィトフトラ・パラシティカ、フィトフトラ・ソジャエ、フィトフトラ・カプシシ、フィトフトラ・シナモン、フィトフトラ・フラガリアエ、フィトフトラ・ラモラム、フィトフトラ・パルミヴォラ、フィトフトラ・ニコチアナエ、スクレロティニア・スクレロチオラム、スクレロティニア・ミノール、スクレロティニア・ホメオカルパ、黄色コウジ菌、シュードモナス・シリンガエ病原型トマト、火傷病菌、リゾクトニア・ソラニ、キサントモナス・ユーベシカトリア、およびこれらの任意の組合せから選択される、１つまたはそれ以上の植物病原菌を防除するように適合される。

一部の実施形態では、本発明の方法は、バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６を含む組成物を利用して、コショウ灰色かび病（灰色かび病菌）、コショウフィトフトラ胴枯れ病（フィトフトラ・カプシシ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃａｐｓｉｃｉ））、トマトフザリウム根頭腐敗病（フザリウム種）、リンゴ火傷病（火傷病菌）、トマト斑葉細菌病（シュードモナス・シリンガエ）、コショウ斑点細菌病（キサントモナス・ユーベシカトリア）、ダイズ立ち枯れ病（リゾクトニア・ソラニ）などの病原菌によって引き起こされる病気を防除する。

本明細書で使用される場合、本発明の方法および組成物の文脈における「植物病原菌を防除する」という表現は、本方法または本組成物が利用されない対応する条件と比較して、植物病原菌の成長を少なくとも１０％減少させること、例えば、一部の実施形態では、成長を少なくとも３０％減少させるか、少なくとも５０％減少させるか、少なくとも７０％減少させるか、少なくとも８０％減少させるか、少なくとも９０％減少させるか、または本質的に排除することを意味することを意図する。後者の例では、成長の排除は、植物病原菌の視覚的排除をもたらす場合がある。実施例３、５、６および７は、バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６を利用して様々な植物病原菌の防除の程度を決定するための方法論のタイプを示す。

本発明による方法および組成物は、トウモロコシ、スイートコーン、シードコーン、サイレージコーン、フィールドコーン、イネ、コムギ、オオムギ、ソルガム、アスパラガス、ブルーベリー、ブラックベリー、ラズベリー、ローガンベリー、ハックルベリー、クランベリー、スグリ、エルダーベリー、カラント、ケーンベリー、ブッシュベリー、ブロッコリー、キャベツ、カリフラワー、メキャベツ、コラード、ケール、マスタードグリーン、コールラビ、キュウリ、カンタループ、メロン、マスクメロン、カボチャ（Ｓｑｕａｓｈ）、スイカ、カボチャ（Ｐｕｍｐｋｉｎ）、ナス、タマネギ、ニンニク、エシャロット、オレンジ、グレープフルーツ、レモン、タンジェリン、タンジェロ、ポメロ、コショウ、トマト、グランドチェリー、トマティロ、オクラ、ブドウ、レタス、セロリ、ホウレンソウ、パセリ、ラディッキオ、豆類、サヤインゲン、スナップインゲン、シェルインゲン、ダイズ、乾燥豆、ガルバンゾマメ、リママメ、エンドウマメ、ヒヨコマメ、スプリットエンドウ、レンズマメ、キャノーラ、トウゴマ、ココナツ、ワタ、アマ、アブラヤシ、オリーブ、ピーナッツ、ナタネ、ベニバナ、ゴマ、ヒマワリ、ダイズ、リンゴ、クラブアップル、ナシ、マルメロ、サンザシ、ニンジン、ジャガイモ、サツマイモ、キャッサバ、ビート、ショウガ、ワサビ、ラディッシュ、朝鮮人参、カブ、アプリコット、チェリー、ネクタリン、モモ、プラム、プルーン、ストロベリー、アーモンド、ピスタチオ、ピーカン、クルミ、ハシバミ、クリ、カシュー、ビーチナッツ、バターナッツ、マカデミア、キウイ、バナナ、（青）アガベ、草、芝、ポインセチア、クリ、オーク、メープル、サトウキビ、テンサイ、などを含むがこれらに限定されない広範な植物において、植物病原菌によって引き起こされる病気を予防または処置するのに有用である。

一部の実施形態では、植物は、ダイズ、マメ、スナップインゲン、コムギ、ワタ、トウモロコシ、コショウ、トマト、ジャガイモ、キャッサバ、ブドウ、ストロベリー、バナナ、ピーナッツ、カボチャ（Ｓｑｕａｓｈ）、カボチャ（Ｐｕｍｐｋｉｎ）、ナス、およびキュウリである。

他の実施形態では、植物は、リンゴ、アスパラガス、ヤマモモ、クマコケモモ、ブラックベリー、高潅木および低潅木ブルーベリー、チョークチェリー、カラント、エルダーベリー、スグリ、ハックルベリー、リンゴンベリー、ローガンベリー、桑の実、ピンチェリー、ラズベリー、サラベリー、サスカトゥーンベリー、シーバックソーンおよびワイルドラズベリー、ブラックベリーまたはラズベリー、ブドウ、ストロベリー、ファジーキウイフルーツ、ブロッコリー、チャイニーズブロッコリー、ブロッコリーラーブ、メキャベツ、キャベツ、カリフラワー、ブロッコリー、コラード、ケール、コールラビ、水菜、カラシナ、マスタードスピナッチおよび菜花、タマネギ、ニンニク、ニラ、エシャロットおよびチャイブ、セロリ、カンタループ、トウガン、キュウリ、食用ヒョウタン、メロン、マスクメロン、カボチャ（ｐｕｍｐｋｉｎ）、カボチャ（ｓｑｕａｓｈ）、スイカ、ナス、グランドチェリー、オクラ、コショウ、トマティロ、およびトマト、から選択される。

さらに他の実施形態では、植物は、コショウ、キュウリ、リンゴ、アスパラガス、バナナ、柑橘類、キウイ、メロン、モモ、ナシ、パイナップル、ナシ状果、ザクロ、セロリ、タマネギ、ニンニク、ブドウ、リーク、エシャロット、チャイブ、ブロッコリー、キャベツ、カリフラワー、ウリ科植物、トマト、ジャガイモ、コムギ、イネ、ダイズから選択される。

本発明の方法の少なくとも１つの実施形態では、組成物は、植物に、植物の一部に、および／または植物もしくは植物の一部が成育するもしくは植えられる予定の部位に、適用され、例えば、植物の葉、植物の樹皮、植物の果実、植物の花、植物の種子、植物の根、植物の挿し木、植物の接ぎ木、植物を囲む土壌もしくは生育培地；土壌もしくは生育培地に植物の種子を播く前の土壌もしくは生育培地；または土壌もしくは生育培地に植物、植物の挿し木もしくは植物の接ぎ木を植える前の土壌もしくは生育培地が挙げられる。

一変形例では、本発明は、植物上の真菌性植物病原菌および／または細菌性植物病原菌を防除する方法であって、ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ−１２２１６２として寄託されたバシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６を含む組成物を、植物の地上部分に適用することを含む方法、に関する。

本明細書で使用される場合、「植物の地上部分に［．．．］を適用する」などの表現は、植物の茎、葉、花および／または果実を狙って組成物を植物に適用することを表す。他の実施形態では、適用は、植物または植物の部分が成長するかまたは植えられる予定の部位、例えば、植物の根系または植物の根系の周りの土壌、または植物（もしくは植物の一部）が植えられる予定の土壌に向けられる；これを総称して「植物の周りの土壌に［．．．］を適用する」と表す。

バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６を含む組成物を、植物に、植物の一部に、および／または植物もしくは植物の一部が生育するもしくは植えられる予定の部位に適用することは、任意の従来の手段、例えば、噴霧適用、滴下、粉末化（粉末適用）、発泡体の適用（泡適用）などによって達成される場合がある。

植物の地上部分に適用する場合は、噴霧適用または粉末適用を使用すると特によい。

植物の周りの土壌に適用する場合は、噴霧適用、滴下適用、粉末適用、および泡適用を使用するとよい。一変形例では、植物の周囲の土壌への適用は、播種に関連して、滴下または泡適用による畝間適用によって行われる。

一部の実施形態では、病原菌感染は、以下の１つまたは組合せによって引き起こされる：
ダイズさび病菌（ファコプソラ・パキリジ、ファコプソラ・メイボミアエ）、植物はダイズである；
灰色かび病（灰色かび病菌）、植物はブドウ、ストロベリー、またはコショウである；
アルテルナリア種（例えばアルテルナリア・ソラニ）、植物はトマトまたはジャガイモである；
マメさび病（ウロマイセス・アペンディキュラタス）、植物は一般的なマメである；
ミクロスファエラ・ディフューザ（Ｍｉｃｒｏｓｐｈａｅｒａ ｄｉｆｆｕｓａ）（ダイズうどんこ病）、植物はダイズである；
ミコスファエレラ・フィジエンシス（ブラックシガトガ）またはフザリウム・オキシスポラムｆ種キューベンセ（パナマ病）、植物はバナナである；
キサントモナス種またはイネ白葉枯病菌病原型オリザエ、植物はイネである；
かいよう病菌、植物はキャッサバである；
キサントモナス・カンペストリス、植物はトマトである；
うどんこ病、植物はウリ科植物である；
南部白かび病、植物はピーナッツを含む；
斑点病（セルコスポラ／セルコスポリディウム）、植物はピーナッツである；
ムギノアカカビ病菌（コムギ赤かび病）、植物はコムギである；
ミコスファエレラ・グラミノコラ（コムギ葉枯病菌（Ｓｅｐｔｏｒｉａ ｔｒｉｔｉｃｉ）斑点）、植物はコムギである；
スタゴノスポラ・ノドラム（苞穎斑点、セプトリア・ノドラム（Ｓｅｐｔｏｒｉａ ｎｏｄｏｒｕｍ）斑点、植物はコムギである；
火傷病菌、植物はリンゴ、ナシ、その他のナシ状果から選択される；
ベンチュリア・イナエキュアリス、植物はリンゴ、ナシ、その他のナシ状果から選択される；
スクレロティニア・スクレロチオラム（白かび）、植物はスナップインゲンまたはジャガイモである；
スクレロティニア・ホメオカルパ（ダラースポット病）、植物は芝を含む；
または
リゾクトニア・ソラニ、植物は、コムギ、イネ、芝、ダイズ、トウモロコシ、マメ科植物、および野菜農作物から選択される。

上述の実施形態の一変形例では、植物の地上部分に組成物を適用することによって、植物病原菌が防除される。

本明細書の実施形態では、組成物は有効量で適用される。「有効量」という用語は、少なくとも１つの植物病原菌を防除するのに十分な組成物の量を表す。

実施形態では、バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６の割合が、４．０×１０^９ＣＦＵ／ｈａから４．０×１０^１７ＣＦＵ／ｈａ、例えば４．０×１０^１０ＣＦＵ／ｈａから４．０×１０^１６ＣＦＵ／ｈａの範囲になるように、組成物を適用する。一般的に、バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６は、栄養細胞ではなく、その胞子の形態で適用される。

本発明の方法の一部の実施形態では、組成物は液状であり、バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６は、組成物中に１．０×１０^６ＣＦＵ／ｍＬから１．０×１０^１２ＣＦＵ／ｍＬ、例えば１．０×１０^７ＣＦＵ／ｍＬから１．０×１０^１１ＣＦＵ／ｍＬの濃度で存在する。

適用される組成物が液状である実施形態では、組成物は、懸濁液、懸濁液濃縮物（ＳＣ）、油分散体（ＯＤ）および発泡体から選択される液剤の形態である場合がある。

本発明の方法の他の実施形態では、組成物は固体状であり、バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６が組成物中に１．０×１０^６ＣＦＵ／ｇから１．０×１０^１２ＣＦＵ／ｇ、例えば１．０×１０^７ＣＦＵ／ｇから１．０×１０^１１ＣＦＵ／ｇの濃度で存在する。

適用される組成物が固体状である実施形態では、組成物は、粉塵性粉末（ＤＰ）、穎粒水和剤（ＷＧ）、および水和剤（ＷＰ）から選択される製剤の形態である場合がある。

一部の実施形態では、適用される組成物は、１．３：１．０から３．０：１．０の範囲、例えば１．５：１．０から２．８：１．０の範囲、およびそのような範囲内のすべての測定値の相対的な重量比で、イツリンおよびフェンギシンを含む。

本発明の方法で利用されるバシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６を含む組成物の性質、実施形態および変形について、以下に「本発明の農業用組成物」という見出しでさらに説明する。

本発明の農業用組成物
本明細書に記載の組成物および以下でさらに詳述するその実施形態は、以上に記載の方法において特に有用であるが、そのような用途に限定されるものではない。本見出しで記載した組成物は、すぐに使用できる組成物であることを意図している。一部の実施形態では、例えば、輸送コストを削減するため、または保存可能期間を延長するためなどで、使用前に希釈してすぐに使用できる農業用組成物に到達するのに適した濃縮組成物を製造するのが便利である場合がある。そのような濃縮製剤は、「農業用組成物のための濃縮物」の見出しの下で後にさらに説明する。

したがって、本発明は、とりわけ、ａ）バシラス・アミロリクエファシエンス、およびｂ）農業的に適切な製剤媒体を含む農業用組成物に関する。

「農業的に適切な」という用語は、そのような製剤媒体（すなわち、さらなる活性成分を意図的に含まない）が、農業用組成物の適用を意図する植物に著しい有害作用を与えないことを意味することを意図している。その結果、「農業的に適切な製剤媒体」には、目的の植物部分に適用される有効量の輸送を容易にするためにバシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６を入れることができ、その他の点で農業用途に適している、そのような製剤媒体が含まれる。

製剤媒体には、液体または固体の担体のほか、界面活性剤、防腐剤、保水剤、乾燥剤、消泡剤、凍結防止剤、分散剤、結合剤、乳化剤、染料、紫外線保護剤、ドリフトコントロール剤、噴霧堆積助剤、流動剤、緩衝剤、増粘剤およびそれらの組合せから選択される１つまたはそれ以上の追加成分が含まれる場合がある。

液体担体の例としては、水、動物油およびその誘導体、鉱物油およびその誘導体、植物油およびその誘導体、アルコール、ポリオール、トリグリセリド、天然および合成ポリマー、およびそれらの非イオン性誘導体が挙げられる。固体担体の例としては、鉱物、粘土、シリカ、無機および有機塩、糖類、デンプン、ワックス、動物の殻を粉砕したもの、繊維、外皮殻、小麦粉を含む植物性材料などが挙げられる。

実施形態では、製剤媒体は、適切な担体、および界面活性剤を含む。その変形例では、製剤媒体は、緩衝剤をさらに含む。

一部の実施形態では、農業用組成物は、１．３：１．０から３．０：１．０の範囲、例えば１．５：１．０から２．８：１．０の範囲、そのような範囲内のすべての測定値を含む相対的な重量比で、イツリンおよびフェンギシンを含む。

一部の実施形態では、組成物は、懸濁液、懸濁液濃縮物（ＳＣ）、油分散体（ＯＤ）、発泡体、粉塵性粉末（ＤＰ）、穎粒水和剤（ＷＧ）および水和剤（ＷＰ）から選択される製剤の形態である場合がある。

一般的に、バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６は、栄養細胞の形態ではなくその胞子の形態で、適した製剤に含まれる。例えば、製剤は、ＦＣＣ１２５６の胞子を含む発酵ブロスのアリコート、またはＦＣＣ１２５６の胞子を含む加工発酵製品、例えば、発酵ブロスの濃縮物または噴霧乾燥した発酵ブロスを含むことができる。

一部の実施形態では、農業用組成物は液状であり、バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６は、組成物中に１．０×１０^６ＣＦＵ／ｍＬから１．０×１０^１２ＣＦＵ／ｍＬ、例えば１．０×１０^７ＣＦＵ／ｍＬから１．０×１０^１１ＣＦＵ／ｍＬの濃度で存在する。

農業用組成物が液状である実施形態では、組成物は、懸濁液、懸濁液濃縮物（ＳＣ）、油分散体（ＯＤ）および発泡体から選択される製剤の形態である場合がある。

他の実施形態では、農業用組成物は固体状であり、バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６は組成物中に１．０×１０^６ＣＦＵ／ｇから１．０×１０^１２ＣＦＵ／ｇ、例えば１．０×１０^７ＣＦＵ／ｇから１．０×１０^１１ＣＦＵ／ｇの濃度で存在する。

農業用組成物が固体状である実施形態では、組成物は、粉塵性粉末（ＤＰ）、穎粒水和剤（ＷＧ）、および水和剤（ＷＰ）から選択される製剤の形態である場合がある。

ＦＣＣ１２５６を、微生物、生物、または化学的な殺虫剤、殺真菌剤、殺線虫剤、殺菌剤もしくは植物成長調整剤と組み合わせて提供する方法では、組成物は、液体、油分散液、粉剤、乾燥した水和剤、散布可能な顆粒、または乾燥した水和顆粒の形態であり得る。

一部の実施形態では、農業用組成物は、製剤媒体に加えて、微生物または化学的殺虫剤、殺真菌剤、殺線虫剤、殺菌剤、植物成長調整剤もしくは植物成長促進剤の１つまたは組合せをさらに含む場合がある。例えば：

殺虫剤：Ａ０）アグリガタ（ａｇｒｉｇａｔａ）、リン化アルミニウム、アンブリセイウス（ａｍｂｌｙｓｅｉｕｓ）、アフェリヌス（ａｐｈｅｌｉｎｕｓ）、アフィディウス（ａｐｈｉｄｉｕｓ）、アフィドレテス（ａｐｈｉｄｏｌｅｔｅｓ）、アルテミシニン、オートグラファ・カリフォルニカＮＰＶ（ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ ＮＰＶ）、アゾシクロチン、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、バシラス・チューリンゲンシス種アイザワイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｓｐｐ．ａｉｚａｗａｉ）、バシラス・チューリンゲンシス種クルスタキ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｓｐｐ．ｋｕｒｓｔａｋｉ）、バシラス・チューリンゲンシス、ボーベリア・バシアーナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ ｂａｓｓｉａｎａ）、ベータシフルトリン、ビスルタップ、ブロフルトリネート、ブロモホスｅ、ブロモプロピレート、カプサイシン、カルタップ、セラストラス（ｃｅｌａｓｔｒｕｓ）抽出物、クロルベンズロン、クロルエトキシホス、クロルフルアズロン、シニジアジン（ｃｎｉｄｉａｄｉｎ）、クリオライト（ｃｒｙｏｌｉｔｅ）、シアノホス、シハロトリン、シヘキサチン、シペルメトリン、ダクヌサ（ｄａｃｎｕｓａ）、ＤＣＩＰ、ジクロロプロペン、ジコホル、ジグリファス（ｄｉｇｌｙｐｈｕｓ）、ジグリファス＋ダクヌサ、ジメタカルブ、エマメクチン、エンカルシア（ｅｎｃａｒｓｉａ）、ＥＰＮ、エレツモセルス（ｅｒｅｔｍｏｃｅｒｕｓ）、エチレンジブロミド、ユーカリプトール、フェナザキン、フェノブカルブ（ＢＰＭＣ）、フェンピロキシメート、フルブロシトリネート、フルフェンジン、ホルメタネート、ホルモチオン、フラチオカルブ、ガンマシハロトリン、ニンニクジュース、グラニュロシスウイルス、ハルモニア（ｈａｒｍｏｎｉａ）、オオタバコガ（ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ ａｒｍｉｇｅｒａ）ＮＰＶ、インドール−３−イル酪酸、ヨードメタン、鉄、イソカルボフォス（ｉｓｏｃａｒｂｏｆｏｓ）、イソフェンホス、イソフェンホスｍ、イソプロカルブ、イソチオエート、リンダン、リウヤンマイシン（ｌｉｕｙａｎｇｍｙｃｉｎ）、マトリン、メホスホラン、メタアルデヒド、メタリジウム−アニソプリエ、メタミドホス、メトルカルブ（ＭＴＭＣ）、マイレックス、ｍ−イソチオシアネート、モノスルタップ、ミロテシウム・ベルカリア（ｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ ｖｅｒｒｕｃａｒｉａ）、ナレド、ハモグリミドリヒメコバチ（ｎｅｏｃｈｒｙｓｏｃｈａｒｉｓ ｆｏｒｍｏｓａ）、ニコチン、ニコチノイド、オメトエート、オリウス（ｏｒｉｕｓ）、オキシマトリン、ペシロマイセス（ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ）、パラチオンｅ、パスツリア（ｐａｓｔｅｕｒｉａ）、フェロモン、リン酸、ホトラブダス（ｐｈｏｔｏｒｈａｂｄｕｓ）、ホキシム、フィトセイウルス（ｐｈｙｔｏｓｅｉｕｌｕｓ）、ピリミホスｅ、プルテラ・キシロステラ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）ＧＶ、多角体病（ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓ）ウイルス、ポリフェノール抽出物、オレイン酸カリウム、プロフェノホス、プロスレル（ｐｒｏｓｕｌｅｒ）、プロチオホス、ピラクロホス、ピレトリン、ピリダフェンチオン、ピリミジフェン、ピリプロキシフェン、キラヤ（ｑｕｉｌｌａｙ）抽出物、キノメチオネート、ロテノン、サポニン、サポノジット（ｓａｐｏｎｏｚｉｔ）、フルオロケイ酸ナトリウム、スルフルラミド、硫黄、テブピリムホス、テフルトリン、テメホス、テトラジホン、チオファノックス、チオメトン、トランスジェニック（例えば、Ｃｒｙ３Ｂｂ１）、トリアザメート、トリコデルマ（ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）、トリコグランマ（ｔｒｉｃｈｏｇｒａｍｍａ）、トリフルムロン、ベルチシリウム（ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ）、ベルトリン（ｖｅｒｔｒｉｎｅ）、カッパ−ビフェントリン、カッパ−テフルトリン、ジクロロメゾチアズ、ブロフラニリド、ピラジフルミド、を含む様々な殺虫剤；Ａ１）アルジカルブ、アラニカルブ、ベンフラカルブ、カルバリル、カルボフラン、カルボスルファン、メチオカルブ、メトミル、オキサミル、ピリミカルブ、プロポクスルおよびチオジカルブ、を含むカルバメートのクラス；Ａ２）アセフェート、アジンホスエチル、アジンホスメチル、クロルフェンビンホス、クロルピリホス、クロルピリホスメチル、デメトンＳ−メチル、ダイアジノン、ジクロルボス／ＤＤＶＰ、ジクロトホス、ジメトエート、ジスルホトン、エチオン、フェニトロチオン、フェンチオン、イソキサチオン、マラチオン、メタミダホス、メチダチオン、メビンホス、モノクロトホス、オキシメトエート（ｏｘｙｍｅｔｈｏａｔｅ）、オキシデメトンメチル、パラチオン、パラチオンメチル、フェントエート、ホレート、ホサロン、ホスメット、ホスファミドン、ピリミホスメチル、キナルホス、テルブフォス、テトラクロルビンホス、トリアゾホスおよびトリクロルホン、を含む有機リン酸のクラス；Ａ３）エンドスルファンなどのシクロジエン有機塩素化合物のクラス；Ａ４）エチプロール、フィプロニル、ピラフルプロールおよびピリプロール、を含むフィプロール（ｆｉｐｒｏｌｅ）のクラス；Ａ５）アセタミプリド、クロチアニジン（ｃｌｏｔｈｉａｎｉｄｉｎ）、ジノテフラン、イミダクロプリド、ニテンピラム、チアクロプリドおよびチアメトキサム、を含むネオニコチノイドのクラス；Ａ６）スピノサドおよびスピネトラムなどのスピノシンのクラス；Ａ７）アバメクチン、エマメクチン安息香酸塩、イベルメクチン、レピメクチンおよびミルベメクチン、を含むメクチンのクラス由来のクロリドチャネル活性化薬；Ａ８）ヒドロプレン、キノプレン、メトプレン、フェノキシカルブおよびピリプロキシフェンなどの幼若ホルモン模倣物；Ａ９）ピメトロジン、フロニカミドおよびピリフルキナゾンなどの選択的同翅類摂食遮断薬；Ａ１０）クロフェンテジン、ヘキシチアゾクスおよびエトキサゾールなどのダニ成長阻害物質；Ａ１１）ジアフェンチウロン、フェンブタチン酸化物およびプロパルギットなどのミトコンドリアＡＴＰシンターゼの阻害剤；クロルフェナピルなどの酸化的リン酸化の脱共役剤；Ａ１２）ベンスルタップ、カルタップ塩酸塩、チオシクラムおよびチオスルタップ（ｔｈｉｏｓｕｌｔａｐ）ナトリウムなどのニコチン性アセチルコリン受容体チャネル遮断薬；Ａ１３）ビストリフルロン、ジフルベンズロン、フルフェノクスロン、ヘキサフルムロン、ルフェヌロン、ノバルロンおよびテフルベンズロン、を含むベンゾイル尿素クラス由来のキチン生合成のタイプ０の阻害剤；Ａ１４）ブプロフェジンなどのキチン生合成のタイプ１の阻害剤；Ａ１５）シロマジンなどの脱皮撹乱剤（ｍｏｕｌｔｉｎｇ ｄｉｓｒｕｐｔｏｒ）；Ａ１６）メトキシフェノジド、テブフェノジド、ハロフェノジドおよびクロマフェノジド（ｃｈｒｏｍａｆｅｎｏｚｉｄｅ）などのエクジソン受容体アゴニスト；Ａ１７）アミトラズなどのオクトパミン受容体アゴニスト；Ａ１８）ミトコンドリア複合体の電子伝達阻害剤であるピリダベン、テブフェンピラド、トルフェンピラド、フルフェネリム（ｆｌｕｆｅｎｅｒｉｍ）、シエノピラフェン（ｃｙｅｎｏｐｙｒａｆｅｎ）、シフルメトフェン、ヒドラメチルノン、アセキノシルまたはフルアクリピリム；Ａ１９）インドキサカルブおよびメタフルミゾンなどの電位依存性ナトリウムチャネル遮断薬；Ａ２０）スピロジクロフェン、スピロメシフェンおよびスピロテトラマトなどの脂質合成の阻害剤；Ａ２１）フルベンジアミド、フタルアミド化合物（Ｒ）−３−クロル−Ｎ１−｛２−メチル−４−［１，２，２，２−テトラフルオロ−１−（トリフルオロメチル）エチル］フェニル｝−Ｎ２−（１−メチル−２−メチルスルホニルエチル）フタルアミド、および（Ｓ）−３−クロル−Ｎ１−｛２−メチル−４−［１，２，２，２−テトラフルオロ−１−（トリフルオロメチル）エチル］フェニル｝−Ｎ２−（１−メチル−２−メチルスルホニルエチル）フタルアミド、クロラントラニリプロール、およびシアントラニリプロール、を含むジアミドのクラス由来のリアノジン受容体モジュレータ；Ａ２２）アザジラクチン、アミドフルメト、ビフェナゼート、フルエンスルホン（ｆｌｕｅｎｓｕｌｆｏｎｅ）、ピペロニルブトキシド、ピリダリル、スルホキサフロル（ｓｕｌｆｏｘａｆｌｏｒ）などの作用機序の不明または不確かな化合物；またはＡ２３）アクリナトリン、アレトリン、ビフェントリン、シフルトリン、ラムダシハロトリン、シペルメトリン、アルファシペルメトリン、ベータシペルメトリン、ゼータシペルメトリン、デルタメトリン、エスフェンバレレート、エトフェンプロックス、フェンプロパトリン、フェンバレレート、フルシトリネート、タウ−フルバリネート、ペルメトリン、シラフルオフェン、およびトラロメトリン、を含むピレスロイドのクラス由来のナトリウムチャネルモジュレータ。

殺真菌剤／殺菌剤：Ｂ０）ベンゾビンジフルピル、アンチペロノスポリック（ａｎｉｔｉｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒｉｃ）、アメトクトラジン、アミスルブロム、銅塩（例えば、水酸化銅、酸塩化銅、硫酸銅、過硫酸銅）、ボスカリド、チフルザミド、フルチアニル、フララキシル、チアベンダゾール、ベノダニル、メプロニル、イソフェタミド、フェンフラム、ビキサフェン（ｂｉｘａｆｅｎ）、フルキサピロキサド、ペンフルフェン、セダキサン、クモキシストロビン、エノキサストロビン、フルフェノキシストロビン、ピラオキシストロビン、ピラメトストロビン、トリクロピリカルブ（ｔｒｉｃｌｏｐｙｒｉｃａｒｂ）、フェナミンストロビン、メトミノストロビン、ピリベンカルブ、メプチルジノカップ（ｍｅｐｔｙｌｄｉｎｏｃａｐ）、酢酸フェンチン、塩化フェンチン、水酸化フェンチン、オキシテトラシクリン、クロゾリネート（ｃｈｌｏｚｏｌｉｎａｔｅ）、クロロネブ、テクナゼン、エトリジアゾール、ヨードカルブ、プロチオカルブ、枯草菌、メラレウカ・アルテルニフォリア（Ｍｅｌａｌｅｕｃａ ａｌｔｅｒｎｉｆｏｌｉａ）抽出物、ルピナス・アルブス・ドーセ（Ｌｕｐｉｎｕｓ ａｌｂｕｓ ｄｏｃｅ）抽出物、ＢＬＡＤポリペプチド、ピリソキサゾール（ｐｙｒｉｓｏｘａｚｏｌｅ）、オキスポコナゾール、エタコナゾール（ｅｔａｃｏｎａｚｏｌｅ）、フェンピラザミン、ナフチフィン、テルビナフィン、バリダマイシン、ピリモルフ、バリフェナレート、フタリド、プロベナゾール、イソチアニル、ラミナリン、レイノウトリア・サチャリネンシス（Ｒｅｙｎｏｕｔｒｉａ ｓａｃｈａｌｉｎｅｎｓｉｓ）抽出物、亜リン酸およびその塩、テクロフタラム（ｔｅｃｌｏｆｔｈａｌａｍ）、トリアゾキシド（ｔｒｉａｚｏｘｉｄｅ）、ピリオフェノン、有機油、炭酸水素カリウム、クロロタロニル、フルオロイミド；Ｂ１）ビテルタノール、ブロムコナゾール、シプロコナゾール、ジフェノコナゾール、ジニコナゾール（ｄｉｎｉｃｏｎａｚｏｌｅ）、エニルコナゾール、エポキシコナゾール、フルキンコナゾール、フェンブコナゾール、フルシラゾール、フルトリアホル、ヘキサコナゾール、イミベンコナゾール（ｉｍｉｂｅｎｃｏｎａｚｏｌｅ）、イプコナゾール、メトコナゾール、ミクロブタニル、ペンコナゾール、プロピコナゾール、プロチオコナゾール、シメコナゾール、トリアジメホン、トリアジメノール、テブコナゾール、テトラコナゾール、トリチコナゾール、プロクロラズ、ペフラゾエート（ｐｅｆｕｒａｚｏａｔｅ）、イマザリル、トリフルミゾール、シアゾファミド、ベノミル、カルベンダジム、チアベンダゾール、フベリダゾール、エタボキサム、エトリジアゾールおよびヒメキサゾール、アザコナゾール、ジニコナゾールＭ（ｄｉｎｉｃｏｎａｚｏｌｅ−Ｍ）、オキスポコナゾール（ｏｘｐｏｃｏｎａｚｏｌ）、パクロブトラゾール、ウニコナゾール、１−（４−クロロ−フェニル）−２−（［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−シクロヘプタノールならびにイマザリルスルフェート（ｉｍａｚａｌｉｌｓｕｌｆｐｈａｔｅ）、を含むアゾール；Ｂ２）アゾキシストロビン、ジモキシストロビン、エネストロブリン（ｅｎｅｓｔｒｏｂｕｒｉｎ）、フルオキサストロビン、クレソキシムメチル、メトミノストロビン、オリサストロビン、ピコキシストロビン、ピラクロストロビン、トリフロキシストロビン、エネストロブリン、メチル（２−クロロ−５−［１−（３−メチルベンジルオキシイミノ）エチル］ベンジル）カルバメート、メチル（２−クロロ−５−［１−（６−メチルピリジン−２−イルメトキシイミノ）エチル］ベンジル）カルバメートおよびメチル２−（オルト−（２，５−ジメチルフェニルオキシメチレン）−フェニル）−３−メトキシアクリレート、２−（２−（６−（３−クロロ−２−メチル−フェノキシ）−５−フルオロ−ピリミジン−４−イルオキシ）−フェニル）−２−メトキシイミノ−Ｎ−メチル−アセトアミドおよび３−メトキシ−２−（２−（Ｎ−（４−メトキシ−フェニル）−シクロプロパンカルボキシイミドイルスルファニルメチル）−フェニル）−アクリル酸メチルエステル、を含むストロビルリン；Ｂ３）カルボキシン、ベナラキシル、ベナラキシルＭ、フェンヘキサミド、フルトラニル、フラメトピル、メプロニル、メタラキシル、メフェノキサム、オフレース（ｏｆｕｒａｃｅ）、オキサジキシル、オキシカルボキシン、ペンチオピラド、イソピラザム、チフルザミド、チアジニル、３，４−ジクロロ−Ｎ−（２−シアノフェニル）イソチアゾール−５−カルボキサミド、ジメトモルフ、フルモルフ、フルメトベル、フルオピコリド（ピコベンズアミド）、ゾキサミド、カルプロパミド、ジクロシメット、マンジプロパミド、Ｎ−（２−（４−［３−（４−クロロフェニル）プロパ−２−インイルオキシ］−３−メトキシフェニル）エチル）−２−メタンスルホニル−アミノ−３−メチルブチルアミド、Ｎ−（２−（４−［３−（４−クロロ−フェニル）プロパ−２−インイルオキシ］−３−メトキシ−フェニル）エチル）−２−エタンスルホニルアミノ−３−メチルブチルアミド、メチル３−（４−クロロフェニル）−３−（２−イソプロポキシカルボニル−アミノ−３−メチル−ブチリルアミノ）プロピオネート、Ｎ−（４’−ブロモビフェニル−２−イル）−４−ジフルオロメチル−メチルチアゾール−δ−カルボキサミド、Ｎ−（４’−トリフルオロメチル−ビフェニル−２−イル）−４−ジフルオロメチル−２−メチルチアゾール−５−カルボキサミド、Ｎ−（４’−クロロ−３’−フルオロビフェニル−２−イル）−４−ジフルオロメチル−２−メチル−チアゾール−５−カルボキサミド、Ｎ−（３＼４’−ジクロロ−４−フルオロビフェニル−２−イル）−３−ジフルオロ−メチル−１−メチル−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−（３’，４’−ジクロロ−５−フルオロビフェニル−２−イル）−３−ジフルオロメチル−１−メチルピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−（２−シアノ−フェニル）−３，４−ジクロロイソチアゾール−５−カルボキサミド、２−アミノ−４−メチル−チアゾール−５−カルボキシアニリド、２−クロロ−Ｎ−（１，１，３−トリメチル−インダン−４−イル）−ニコチンアミド、Ｎ−（２−（１，３−ジメチルブチル）−フェニル）−１，３−ジメチル−５−フルオロ−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−（４’−クロロ−３’，５−ジフルオロ−ビフェニル−２−イル）−３−ジフルオロメチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−（４’−クロロ−３’，５−ジフルオロ−ビフェニル−２−イル）−３−トリフルオロメチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−（３’，４’−ジクロロ−５−フルオロ−ビフェニル−２−イル）−３−トリフルオロメチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−（３’，５−ジフルオロ−４’−メチル−ビフェニル−２−イル）−３−ジフルオロメチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−（３’，５−ジフルオロ−４’−メチル−ビフェニル−２−イル）−３−トリフルオロメチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−（シス−２−ビシクロプロピル−２−イル−フェニル）−３−ジフルオロメチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、Ｎ−（トランス−２−ビシクロプロピル−２−イル−フェニル）−３−ジフルオロ−メチル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド、フルオピラム、Ｎ−（３−エチル−３，５−５−トリメチル−シクロヘキシル）−３−ホルミルアミノ−２−ヒドロキシ−ベンズアミド、オキシテトラサイクリン、シルチオファム、Ｎ−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）シクロプロパン−カルボキサミド、２−ヨード−Ｎ−フェニル−ベンズアミド、Ｎ−（２−ビシクロ−プロピル−２−イル−フェニル）−３−ジフルオロメチル−１−メチルピラゾール−４−イルカルボキサミド、を含むカルボキサミド；Ｂ４）フルアジナム、ピリフェノックス（ｐｙｒｉｆｅｎｏｘ）、ブピリメート、シプロジニル、フェナリモル、フェリムゾン、メパニピリム、ヌアリモル、ピリメタニル、トリホリン、フェンピクロニル、フルジオキソニル、アルジモルフ、ドデモルフ、フェンプロピモルフ、トリデモルフ、フェンプロピジン、イプロジオン、プロシミドン、ビンクロゾリン、ファモキサドン、フェンアミドン、オクチリノン（ｏｃｔｈｉｌｉｎｏｎｅ）、プロベナゾール（ｐｒｏｂｅｎａｚｏｌｅ）、５−クロロ−７−（４−メチル−ピペリジン−１−イル）−６−（２，４，６−トリフルオロフェニル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン、アニラジン、ジクロメジン、ピロキロン、プロキナジド（ｐｒｏｑｕｉｎａｚｉｄ）、トリシクラゾール、２−ブトキシ−６−ヨード−３−プロピルクロメン−４−オン、アシベンゾラルＳ−メチル、カプタホール、キャプタン、ダゾメット、ホルペット、フェノキサニル、キノキシフェン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（３−ブロモ−６−フルオロ−２−メチルインドール−１−スルホニル）−［１，２，４］トリアゾール−１−スルホンアミド、５−エチル−６−オクチル−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２，７−ジアミン、２，３，５，６−テトラクロロ−４−メタンスルホニル−ピリジン、３，４，５−トリクロロ−ピリジン−２，６−ジカルボニトリル、Ｎ−（１−（５−ブロモ−３−クロロ−ピリジン−２−イル）−エチル）−２，４−ジクロロ−ニコチンアミド、Ｎ−（（５−ブロモ−３−クロロピリジン−２−イル）−メチル）−２，４−ジクロロ−ニコチンアミド、ジフルメトリム、ニトラピリン、ドデモルフアセテート（ｄｏｄｅｍｏｒｐｈａｃｅｔａｔｅ）、フルオロイミド、ブラストサイジンＳ、キノメチオネート、デバカルブ、ジフェンゾクワット、ジフェンゾクワット−メチルスルフェート、オキソリン酸およびピペラリン、を含む複素環式化合物；Ｂ５）マンコゼブ、マネブ、メタム、メタスルホカルブ（ｍｅｔｈａｓｕｌｐｈｏｃａｒｂ）、メチラム、フェルバム、プロピネブ、チラム、ジネブ、ジラム、ジエトフェンカルブ、イプロバリカルブ、ベンチアバリカルブ、プロパモカルブ、プロパモカルブ塩酸塩、４−フルオロフェニル−Ｎ−（１−（１−（４−シアノフェニル）−エタンスルホニル）ブタ−２−イル）カルバメート、メチル３−（４−クロロ−フェニル）−３−（２−イソプロキシカルボニルアミノ−３−メチル−ブチリルアミノ）プロパノエート、を含むカルバメート；またはＢ６）グアニジン、ドジン、ドジン遊離塩基、イミノクタジン、グアザチン、カスガマイシン、オキシテトラサイクリンおよびその塩、ストレプトマイシン、ポリオキシン、バリダマイシンＡ、ビナパクリル、ジノカップ、ジノブトン、ジチアノン、イソプロチオラン、フェンチン塩、エジフェンホス、イプロベンホス、ホセチル、ホセチルアルミニウム、亜リン酸およびその塩、
ピラゾホス、トルクロホスメチル、ジクロフルアニド、フルスルファミド、ヘキサクロロベンゼン、フタリド、ペンシクロン、キントゼン、チオファネート、チオファネートメチル、トリルフルアニド、シフルフェナミド、シモキサニル、ジメチリモール、エチリモール、フララキシル、メトラフェノンおよびスピロキサミン、グアザチン酢酸塩、イミノクタジン三酢酸塩、イミノクタジントリス（アルベシレート（ａｌｂｅｓｉｌａｔｅ））、カスガマイシン塩酸塩水和物、ジクロロフェン、ペンタクロロフェノールおよびその塩、Ｎ−（４−クロロ−２−ニトロ−フェニル）−Ｎ−エチル−４−メチル−ベンゼンスルホンアミド、ジクロラン、ニトロタールイソプロピル、テクナゼン、ビフェニル、ブロノポール、ジフェニルアミン、ミルジオマイシン、オキシン銅、プロヘキサジオンカルシウム、Ｎ−（シクロプロピルメトキシイミノ−（６−ジフルオロメトキシ−２，３−ジフルオロ−フェニル）−メチル）−２−フェニルアセトアミド、Ｎ’−（４−（４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェノキシ）−２，５−ジメチル−フェニル）−Ｎ−エチル−Ｎ−メチルホルムアミジン、Ｎ’−（４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェノキシ）−２，５−ジメチル−フェニル）−Ｎ−エチル−Ｎ−メチルホルムアミジン、Ｎ’−（２−メチル−５−トリフルオロメチル−４−（３−トリメチルシラニル−プロポキシ）−フェニル）−Ｎ−エチル−Ｎ−メチルホルムアミジン、Ｎ’−（５−ジフルオロメチル−２−メチル−４−（３−トリメチルシラニル−プロポキシ）−フェニル）−Ｎ−エチル−Ｎ−メチルホルムアミジン、およびフルインダピル、を含む他の殺真菌剤。

殺線虫剤：Ｃ１）ベノミル、クロエトカルブ、アルドキシカルブ、チルパート、ジアミダホス、フェナミホス、カズサホス、ジクロフェンチオン、エトプロホス、フェンスルホチオン、フォスチアゼート、ヘテロホス、イサミドホス、イサゾフォス、ホスホカルブ、チオナジン、イミシアホス、メカルホン、アセトプロール、ベンクロチアズ、クロロピクリン、ダゾメット、フルエンスルホン、１，３−ジクロロプロペン（ｔｅｌｏｎｅ）、ジメチルジスルフィド、メタムナトリウム、メタムカリウム、メタム塩（すべてＭＩＴＣ生成剤）、臭化メチル、生物学的土壌改良材（例えば、マスタード種子、マスタード種子抽出物）、土壌の蒸気燻蒸、アリルイソチオシアネート（ＡＩＴＣ）、硫酸ジメチル、フルフラル（アルデヒド）。

植物成長調整剤：Ｄ１）クロフィブリン酸、２，３，５−トリ−ヨード安息香酸などのアンチオーキシン；Ｄ２）４−ＣＰＡ、２，４−Ｄ、２，４−ＤＢ、２，４−ＤＥＰ、ジクロルプロップ、フェノプロップ、ＩＡＡ、ＩＢＡ、ナフタレンアセトアミド、α−ナフタレン酢酸、１−ナフトール、ナフトキシ酢酸、ナフテン酸カリウム、ナフテン酸ナトリウム、２，４，５−Ｔなどのオーキシン；Ｄ３）２ｉＰ、ベンジルアデニン、４−ヒドロキシフェンエチルアルコール、カイネチン、ゼアチンなどのサイトカイニン；Ｄ４）カルシウムシアナミド、ジメチピン、エンドタール、エテホン、メルホス、メトクスロン、ペンタクロロフェノール、チジアズロン、トリブホスなどの枯葉剤；Ｄ５）アビグリシン、１−メチルシクロプロペンなどのエチレン阻害剤；Ｄ６）ＡＣＣ、エタセラシル、エテホン、グリオキシムなどのエチレン放出剤；Ｄ７）フェンリダゾン、マレイン酸ヒドラジドなどのガメトシド；Ｄ８）ジベレリン、ジベレリン酸などのジベレリン；Ｄ９）アブシジン酸、アンシミドール、ブトラリン、カルバリル、クロルホニウム、クロルプロファム、ジケグラック、フルメトラリン、フルオリダミド、ホサミン、グリホシン、イソピリモル、ジャスモン酸、マレイン酸ヒドラジド、メピコート、ピプロクタニル、プロヒドロジャスモン、プロファム、チアオジアン（ｔｉａｏｊｉｅａｎ）、２，３，５−トリ−ヨード安息香酸などの成長阻害物質；Ｄ１０）クロルフルレン、クロルフレノール、ジクロルフルレノール、フルレノールなどのモルファクチン；Ｄ１１）クレルメコート、ダミノジド、フルルプリミドール、メフルイジド、パクロブトラゾール、テトシクラシス、ウニコナゾールなどの成長抑制剤；Ｄ１２）ブラシノライド、ブラシノライドエチル、ＤＣＰＴＡ、ホルクロルフェヌロン、ヒメキサゾール、プロスレル（ｐｒｏｓｕｌｅｒ）、トリアコンタノールなどの成長刺激剤；Ｄ１３）バクメデシュ（ｂａｃｈｍｅｄｅｓｈ）、ベンゾフルオル、ブミナホス、カルボン、塩化コリン、シオブチド、クロフェンセット、シアナミド、シクラニリド、シクロヘキシミド、シプロスルファミド、エポコレオン、エチクロゼート、エチレン、フフェンチオウレア（ｆｕｐｈｅｎｔｈｉｏｕｒｅａ）、フララン（ｆｕｒａｌａｎｅ）、ヘプトパルギル、ホロスルフ、イナベンフィド、カレタザン、ヒ酸鉛、メタスルホカルブ、プロヘキサジオン、ピダノン、シントフェン、トリアペンテノール、トリネキサパックなどの分類されていない植物成長調整剤。

植物成長促進剤：Ｅ１）。

農業用組成物の濃縮物
本発明は、農業用組成物の濃縮物であって：ａ）バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６、ならびにｂ）適切な担体、界面活性剤および場合により緩衝剤を含む農業的に適切な製剤媒体を含む濃縮物にも関する。

農業用製剤は、農業用組成物に関してさらに上に明示したような適切な液体担体、特に水性担体で、濃縮物を適切に希釈することによって得られる。「水性担体」という用語は、主に水をベースとし、最大５重量％の非水性成分を含む液体担体を意味することを意図している。一部の実施形態では、希釈は水のみを使用することによって行われる。

一般的に、希釈は、濃縮物と担体の重量比が１：１０〜１：５０００、例えば１：２０〜１：１０００である。

実施形態では、濃縮物は、懸濁液濃縮物（ＳＣまたはＳＤ）、超低容量懸濁液（ＳＵ）、種子処理用懸濁液（ＦＳ）、油分散体（ＯＤ）、ペースト（ＰＡ）、ゲル（ＧＤ）、穎粒水和剤（ＷＧ）、粉塵性粉末（ＤＰ）、水分散性錠剤（ＷＴ）、スラリー処理用水分散性粉末（ＷＳ）、および水和剤（ＷＰ）から選択される製剤である。

一般的に、バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６は、栄養細胞の形態ではなくその胞子の形態で、適した製剤に含まれる。例えば、製剤は、ＦＣＣ１２５６の胞子を含む発酵ブロスのアリコート、またはＦＣＣ１２５６の胞子を含む加工発酵製品、例えば、発酵ブロスの濃縮物または噴霧乾燥した発酵ブロスを含むことができる。

一部の実施形態では、濃縮物は液状であり、バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６は濃縮物中に１．０×１０^８ＣＦＵ／ｍＬから１．０×１０^１４ＣＦＵ／ｍＬ、例えば１．０×１０^９ＣＦＵ／ｍＬから１．０×１０^１３ＣＦＵ／ｍＬの濃度で存在する。

濃縮物が液状である実施形態では、濃縮物は、懸濁液濃縮物（ＳＣまたはＳＤ）、超低容量懸濁液（ＳＵ）、種子処理用懸濁液（ＦＳ）、油分散体（ＯＤ）、ペースト（ＰＡ）、ゲル（ＧＤ）、特に懸濁液濃縮物（ＳＣ）および油分散体（ＯＤ）から選択される製剤の形態である場合がある。

他の実施形態では、濃縮物は固体状であり、バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６は濃縮物中に１．０×１０^８ＣＦＵ／ｇから１．０×１０^１４ＣＦＵ／ｇ、例えば１．０×１０^９ＣＦＵ／ｇから１．０×１０^１３ＣＦＵ／ｇの濃度で存在する。

濃縮物が固体状である実施形態では、濃縮物は、穎粒水和剤（ＷＧ）、粉塵性粉末（ＤＰ）、水分散性錠剤（ＷＴ）、スラリー処理用水分散性粉末（ＷＳ）、および水和剤（ＷＰ）、特に水和剤（ＷＰ）および穎粒水和剤（ＷＧ）から選択される製剤の形態である場合がある。

一部の実施形態では、濃縮物は、１．３：１．０から３．０：１．０の範囲、例えば１．５：１．０から２．８：１．０の範囲、そのような範囲内のすべての測定値を含む相対的な重量比で、イツリンおよびフェンギシンを含む。

以下の実施例は、現在開示されている主題の代表的な実施形態を実践するための指針を、当業者に提供するために含まれる。本発明および当業者の一般的なレベルを考慮すると、当業者は、以下の実施例が例示的なものにすぎないことを意図しており、現在開示されている主題の範囲から逸脱することなく、多数の変更、修正および改変が採用され得ることを十分理解することができる。

方法
イツリン、フェンギシン、サーファクチンの同定
Ｃ１８カラムの逆相ＬＣ−ＤＡＤで、すべての３つのリポペプチドファミリーを同時に検出できるスクリーニンググラジエントを用いて、サンプルを分析した。移動相は，水とアセトニトリルに０．１％のギ酸を加えたものを使用した。化合物の同定は，基準の標準物質と比較した保持時間とＵＶスペクトルに基づいて行った。

コロニー形成単位（ＣＦＵ）の測定
サンプルのＣＦＵ（液体サンプルの場合はＣＦＵ／ｍＬ、固体サンプルの場合はＣＦＵ／ｇで表示）は、ＢＳ ＥＮ １５７８４：２００９（「Ａｎｉｍａｌ ｆｅｅｄｉｎｇ ｓｔｕｆｆｓ． Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｎｕｍｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｅｓｕｍｐｔｉｖｅ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．」）にしたがって測定した。

配列解析による単離細菌のバシラス・アミロリクエファシエンスとしての同定
本明細書でバシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６と指定された植物関連細菌株は、Ａｕｔｒｙｖｉｌｌｅ、ＮＣ、ＵＳＡのイチゴ栽培土壌から分離した。バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６の菌株は、２０１５年５月１２日に、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖｉｒｇｉｎｉａ、ＵＳＡにあるＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）に、「特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に関するブタペスト条約（Ｂｕｄａｐｅｓｔ Ｔｒｅａｔｙ ｏｎ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｄｅｐｏｓｉｔ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｕｒｐｏｓｅｓ ｏｆ Ｐａｔｅｎｔ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ）」の条件に基づいて寄託され、特許登録番号ＰＴＡ−１２２１６２を有している。

まず、バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６の全ゲノム配列データを解析し、系統発生の割り当てに日常的に使用されるコア表現型マーカー遺伝子を特定した。この分析に選ばれた遺伝子は、シングルコピーであり、ゲノム内に１つしかない遺伝子のコピーで、細胞にとって中核的なハウスキーピング機能を持つものである。ＲＡＳＴのアノテーションファイルから選ばれたのは、ＤＮＡ指向性ＲＮＡポリメラーゼβサブユニット（ｒｐｏＢ）、ＤＮＡ修復リコンビナーゼＡ（ｒｅｃＡ２）、ＤＮＡミスマッチ修復タンパク質Ｓ（ｍｕｔＳ）、グリセリン取り込み促進タンパク質（ｇｌｐＦ）、ＤＮＡジャイレースサブユニットＢ（ｇｙｒＢ）、およびＤＮＡシャペロンＫ（ｄｎａＫ）の６つの遺伝子であった。選抜した各遺伝子について、バシラス属の代表的な株のゲノム（枯草菌クラスターおよびセレウス菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）クラスター）を比較対象とした。そのために、ＦＣＣ１２５６は、保存性の高い１６ＳｒＲＮＡとｒｐｏＢ遺伝子の配列解析により、バシラス・アミロリクエファシエンスの新菌株として同定された。

また、各遺伝子にはアウトグループ配列が含まれている。これらのアウトグループ配列は、系統的に分岐した細菌のゲノムから抽出したもので、系統計算の堅牢性を示すものである。

各参照ゲノムは、まずＮＣＢＩからダウンロードし、ＲＡＳＴアノテーションパイプラインでアノテーションを行った。その後、生成されたアノテーションテーブルを検索して、選択したハウスキーピング遺伝子を同定し、各遺伝子の配列をＭＥＧＡ５．２ソフトウェアプログラムの新しいヌクレオチドアラインメントにコピーアンドペーストした。各遺伝子の配列がアラインメントに読み込まれた後、ＣｌｕｓｔａｌＷアラインメントアルゴリズムを用いて特定の遺伝子配列をすべてアラインメントした。各遺伝子グループのアラインメントを行った後、各配列が同じ数のヌクレオチドを持つように配列をトリミングした。トリミングステップの後、アラインメントされた配列を用いて系統樹を作成した。

各系統樹を１０００回複製し、系統的なグループ化の堅牢性を評価した。各ツリーにおいて、ＦＣＣ１２５６はＤＳＭ７、ＲＴＩ３０１、ＲＴＩ４７２のような他のバシラス・アミロリクエファシエンス株と整列し、ツリーを形成した。これらの結果は、ＦＣＣ１２５６が確かにバシラス・アミロリクエファシエンスであることを高い信頼性で示している。

また、多数の病原菌に対するＦＣＣ１２５６の拮抗作用も決定した。以下の表１にその結果の概要を示す。

さらに、バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６の拮抗作用について、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよび様々な植物において、条件を変えて実験を行った。実験結果は、以下の実施例３、５、６および７に記載されている。

実験は、とりわけ、バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６が、バシラス・ヴェレゼンシスＱＳＴ７１３を有効成分として含む市販のＳｅｒｅｎａｄｅ（登録商標）（Ｂａｙｅｒ ＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．）と比較して、植物病原菌感染に対する保護を付与または防除する能力を示している。

バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６の発酵
バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６を、グリセリンストックから、８６９固体培地に最初に画線塗布し、固体培地は：トリプトン１０ｇ、酵母抽出物５ｇ、Ｄ−グルコース１ｇ、ＣａＣｌ_２ ０．３ｇ、粉末寒天１５ｇを含んでいた（１Ｌ中）。３０℃で一晩インキュベートした後、シングルコロニーを拾い上げ、２５０ｍＬの振盪フラスコの培地５０ｍＬに接種し、この培地は：ペプトン１０ｇ、酵母抽出物６ｇ、ＫＣｌ ２ｇ、ＭｇＳＯ_４・７Ｈ_２Ｏ ０．１ｇを含んでいた（１Ｌ中）。オートクレーブ滅菌後、次の液剤を培地に加えた：２０％グルコース ５ｍＬ、１Ｍ ＣａＣｌ_２ １ｍＬ、０．１Ｍ ＭｎＣｌ_２ １ｍＬおよび０．１Ｍ ＦｅＳＯ_４ １０μＬ。振盪フラスコを３０℃、２００ｒｐｍの振盪インキュベーターでＯＤ６００が１．０になるまで培養した。細胞ペレットを回収し、発酵槽（ワーキングボリューム１．５Ｌ、Ｂｉｏｆｌｏ ３２０、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）に接種した。発酵は３０℃で行い、撹拌速度は８００ｒｐｍ、空気供給量は２Ｌ／ｍｉｎとした。発酵中にサンプルを採取し、細胞の成長、細胞の胞子形成、代謝物の濃度をモニターした。１６８時間の発酵後、バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６のほとんどの細胞が胞子化したので、培養液全体を採取した。

バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６および参照株ＱＳＴ７１３（市販品Ｓｅｒｅｎａｄｅ（登録商標）から得られたバシラス・ヴェレゼンシス株）を上記の培養液で発酵させた。ＯＤ６００の測定値を用いて、発酵中のバイオマスレベルを測定した。バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６株とＱＳＴ７１３の代謝物プロファイルを比較したところ、同一条件下でＦＣＣ１２５６はＱＳＴ７１３よりも有意に高い割合でイツリンを生産した。

さらに、代謝物濃縮物の評価を行ったところ、ＦＣＣ１２５６はイツリン：フェンギシン：サーファクチンの重量比が約３．３：１．４：１であり、植物病原菌に対する本菌株の拮抗作用に寄与している可能性が明らかになった。

バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６の抗微生物特性
バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６、およびＱＳＴ７１３をＴＳＡプレートに播種し、３０℃で一晩（１６〜１８時間）培養した。続いて、シングルコロニーを培地に移した（成長培地 Ｈ_２Ｏ、９１４．３ｍＬ；ＮＨ_４ＮＯ_３、８ｇ；Ｎａ_２ＨＰＯ_４、７．１５ｇ；ＫＨ_２ＰＯ_４、６．８ｇ；酵母抽出物０．５ｇ；７．５に４Ｍ ＫＯＨ ４ｍＬで調整；成長培地４５ｍＬを２５０ｍＬのバッフル付きフラスコに移し、１２１℃で１５分間オートクレーブした）。オートクレーブ後、各フラスコに以下の液剤：０．１Ｍ ＣａＣｌ_２ ５μＬ、０．１Ｍ ＭｎＣｌ_２ ５μＬ、０．１Ｍ ＦｅＳＯ_４ ３５μＬ、０．１Ｍ ＺｎＣｌ_２ ５μＬ、１Ｍ ＭｇＳＯ_４ １００μＬ、グルコース５０％溶液（最終濃度４０ｇ／Ｌ）４ｍＬ）を加え、３０℃、連続攪拌（２２０ｒｐｍ）下で１６８時間インキュベートした。菌株は、ＧＬ ４５スレッド（Ｄｕｒａｎ（登録商標）、Ｇｅｒｍａｎｙ）を備えた２５０ｍＬのバッフル付きフラスコで培養し、最終ワーキングボリュームは５０ｍＬであった。

本研究では、合計１４種類の葉面植物病原菌（１２種類の真菌と２種類の細菌）を使用した。使用した病原菌の規格、生育条件、および培地を表２に示す。本実験で使用したすべての葉面病原菌は、ポテトデキストロース寒天（ＰＤＡ）固体培地で試験したが、シュードモナス・シリンガエとかいよう病菌はトリプチカーゼソイ寒天（ＴＳＡ）固体培地で試験した。各病原菌の処理前のインキュベーション時間は、３日から５日であった。試験のために菌叢プレートを使用したシュードモナス・シリンガエとかいよう病菌の場合は、８６９培地で一晩培養し、コムギ葉枯病菌はポテトデキストロースブロスで５日間培養してから菌叢プレートを製造した。

活性は、２０μＬの細胞を適用することで評価した。すべての適用はすべての病原菌について、発酵物を濾過せずに使用して３連で実施した。真菌性病原菌の評価タイミングは種によって異なる。タイミングは、対照スポットプレート上でコロニーの端が半径約２５ｍｍに達することに相当する必要がある。評価には、半定量的な方法が用いられ、以下の４スケールシステム（０〜３）が用いられた。０：抗菌効果が見られない；１：わずかな効果が生じたが、明らかなクリアゾーンがない；２：クリアゾーンが明らかである；３：大きなクリアゾーンが存在する。結果を表２に示す。

バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６の表現型の特色
拮抗特性に加えて、バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６について様々な表現型の特色も測定し、そのデータを以下の表３に示す。アッセイは、表３の下の本文に記載されている手法にしたがって行った。

アセトイン試験。培地中の開始培養物２０μＬを１ｍＬのメチルレッド・フォーゲス・プロスカウエル培地（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ ３９４８４）に移した。培養物を３０℃、２００ｒｐｍで２日間インキュベートした。０．５ｍＬの培養物を０．３ｍＬの５％α−ナフトール（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ Ｎ１０００）と混合し、続いて０．１ｍＬの４０％ＫＯＨを加えた。インキュベーションの３０分後にサンプルを分析した。赤色の発色はアセトインの生成を示した。陰性対照として、接種していない培地を用いた（Ｓｏｋｏｌら、１９７９年、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ９：５３８〜５４０頁）。

キチナーゼ活性。改良ＰＶＫ寒天培地（１リットルあたりグルコース１０ｇ、塩化カリウム０．２ｇ、硫酸アンモニウム０．５ｇ、塩化ナトリウム０．２ｇ、硫酸マグネシウム七水和物０．１ｇ、酵母抽出物０．５ｇ、硫酸マンガン２ｍｇ、硫酸鉄２ｍｇ、寒天１５ｇ、ｐＨ７、オートクレーブ処理）に１０％湿重量のコロイド状キチンを添加した。これらのキチンプレートに細菌を播種した；クリアなゾーンはキチナーゼ活性を示した（Ｎ．Ｋ．Ｓ．Ｍｕｒｔｈｙ＆Ｂｌｅａｋｌｅｙ、２０１２年、「Ｓｉｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ Ｐｒｅｐａｒｉｎｇ Ｃｏｌｌｏｉｄａｌ Ｃｈｉｔｉｎ Ｕｓｅｄ ｆｏｒ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ Ｃｈｉｔｉｎａｓｅ Ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ」、Ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎｅｔ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、１０（２））。

インドール−３−酢酸。培地中の開始培養物２０μＬを、０．５ｇ／Ｌトリプトファン（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ Ｔ０２５４）を添加した１／１０ ８６９培地１ｍＬに移した。培養物を３０℃、２００ｒｐｍで４〜５日間、暗所でインキュベートした。サンプルを遠心分離し、０．１ｍＬの上清を０．２ｍＬのサルコウスキ試薬（Ｓａｌｋｏｗｓｋｉ’ｓ Ｒｅａｇｅｎｔ）（３５％過塩素酸、１０ｍＭ ＦｅＣｌ_３）と混合した。暗所で３０分間インキュベートした後、ピンク色に発色したサンプルをＩＡＡ合成の陽性と記録した。ＩＡＡ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ Ｉ５１４８）の希釈液を陽性対照として用いた；接種していない培地を陰性対照として用いた（Ｔａｇｈａｖｉら、２００９年、Ａｐｐｌｉｅｄ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ７５：７４８〜７５７頁）。

プロテアーゼ活性。１０％のミルクを添加した８６９培地に細菌を播種した。クリアゾーンは、プロテアーゼ活性を示唆するタンパク質を分解する能力を示した（Ｓｏｋｏｌら、１９７９年、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ９：５３８〜５４０頁）。

リン酸塩可溶化試験。１リットルあたりグルコース１０ｇ、三リン酸カルシウム５ｇ、塩化カリウム０．２ｇ、硫酸アンモニウム０．５ｇ、塩化ナトリウム０．２ｇ、硫酸マグネシウム七水和物０．１ｇ、酵母抽出物０．５ｇ、硫酸マンガン２ｍｇ、硫酸鉄２ｍｇ、寒天１５ｇからなり、ｐＨ７であり、オートクレーブで滅菌した、ピコフスカヤ（Ｐｉｋｏｖｓｋａｙａ）（ＰＶＫ）寒天培地に、細菌を播種した。クリアなゾーンは、リン酸塩可溶化細菌を示していた（Ｓｈａｒｍａら、２０１１年、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ１：９０〜９５頁）。

バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６のコショウ灰色かび病（灰色かび病菌）に対する拮抗作用
植物病原菌であるコショウ灰色かび病（灰色かび病菌）の影響をＦＣＣ１２５６が予防および／または改善する能力を調べるために、温室でコショウを使った研究を行った。

製剤：
単離したＦＣＣ１２５６の胞子を、１×１０^８ＣＦＵ／ｍＬの濃度で１００％使用済み発酵ブロス（ＳＦＢ）に配合した（すなわち、再構成された発酵ブロス濃縮物）。同様のＦＣＣ１２５６製剤を、栄養成分を添加して製造した（１リットルあたりショ糖２ｇ＋酵母抽出物１．５ｇ＋ＭｇＳＯ_４・７Ｈ_２Ｏ ０．２ｇ）。

単離したバシラス・アミロリクエファシエンスＲＴＩ４７２の胞子を、同様に１×１０^８ＣＦＵ／ｍＬの濃度で１００％使用済み発酵ブロス（ＳＦＢ）に配合した。同様のＲＴＩ４７２製剤を、栄養成分を添加して製造した（ＦＣＣ１２５６の場合と同様）。

Ｓｅｒｅｎａｄｅ（登録商標）Ｏｐｔｉｍｕｍ（Ｂａｙｅｒ ＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．）を１×１０^８ＣＦＵ／ｍＬの胞子濃度で適用した。

Ｈｏｒｉｚｏｎ（Ｈｏｒｉｚｏｎ ＡＧ−Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）を５０ｇ有効成分／ｈａの割合で適用した（テブコナゾール）。

処理適用方法：
トラック噴霧器を用いて、温室内の２８日齢のコショウに上記の各製剤を接種した。トラック噴霧器には、２７６ｋＰａ（４０ｐｓｉ）の圧力のオーバーヘッドノズル（ＴｅｅＪｅｔ ＳＳ８００１Ｅ Ｆｌａｔ Ｆａｎ）が１つ付いていた。ノズルの高さは、コショウの葉から３６ｃｍ（１４インチ）の高さであった。適用量は２００Ｌ／ｈａで、実験の繰り返し回数は６回とした。処理された植物は、何も処理されていない対照植物とともに、１回接種された。

感染率：
処理適用の１日後に、試験植物を灰色かび病菌に５００，０００分生子／ｍＬの感染率で感染させた。

コショウ灰色かび病（灰色かび病菌）に感染してから３日後に、上記の各製剤について病害防除率（平均値）を評価した。

実験の結果は以下の表４に示すとおりで、ＲＴＩ４７２とＳｅｒｅｎａｄｅ（登録商標）Ｏｐｔｉｍｕｍを同一の割合で適用した場合と比較して、灰色かび病（灰色かび病菌）の防除効果が優れていることが示されている。

バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６のコショウフィトフトラ胴枯れ病に対する拮抗作用
植物病原菌であるコショウフィトフトラ胴枯れ病（フィトフトラ・カプシシ）の影響をＦＣＣ１２５６が予防および／または改善する能力を調べるために、温室でコショウを使った研究を行った。

製剤：
単離したＦＣＣ１２５６の胞子を、１×１０^８ＣＦＵ／ｍＬの濃度で１００％使用済み発酵ブロス（ＳＦＢ）に配合した（すなわち、再構成された発酵ブロス濃縮物）。同様のＦＣＣ１２５６製剤を、栄養成分を添加して製造した（１リットルあたりショ糖２ｇ＋酵母抽出物１．５ｇ＋ＭｇＳＯ_４・７Ｈ_２Ｏ ０．２ｇ）。

単離したバシラス・アミロリクエファシエンスＲＴＩ４７２の胞子を、同様に１×１０^８ＣＦＵ／ｍＬの濃度で１００％使用済み発酵ブロス（ＳＦＢ）に配合した。同様のＲＴＩ４７２製剤を、栄養成分を添加して製造した（ＦＣＣ１２５６の場合と同様）。

Ｓｅｒｅｎａｄｅ（登録商標）Ｓｏｉｌ（Ｂａｙｅｒ ＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．）を１×１０^８ＣＦＵ／ｍＬの胞子濃度で適用した。

Ｒｉｄｏｍｉｌ Ｇｏｌｄ（Ｓｙｎｇｅｎｔａ，Ｉｎｃ．）を０．５ポンド有効成分／エーカーの割合で適用した（メフェノキサム）。

処理適用方法：
２８日齢のコショウ植物の土壌に、上述の各製剤を含む水１０ｍＬを浸み込ませた。各実験の繰り返し回数は６回とした。処理された植物は、何も処理されていない対照植物とともに、１回接種された。

感染率：
各試験において、処理適用と同日に、試験植物をフィトフトラ・カプシシＦＦ１５７に１，０００遊走子／ｍＬの割合で１ｍＬ感染させた。

植物がコショウフィトフトラ胴枯れ病（フィトフトラ・カプシシ）に感染してから８日後に、各処理区の病害防除率を評価した。感染後８日目の病害重症度スコアは９．８（０＝健全、１０＝枯死）であった。

その結果、ＦＣＣ１２５６によるコショウフィトフトラ胴枯れ病の防除は、同一の割合で適用した場合のＳｅｒｅｎａｄｅ（登録商標）Ｓｏｉｌと比較して統計的に優れていた。

切断コショウリーフディスク（Ｄｅｔａｃｈｅｄ Ｐｅｐｐｅｒ Ｌｅａｆ Ｄｉｓｋ）アッセイにおける、バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６の活性と、無処理の対照および市販のＳｅｒｅｎａｄｅ（登録商標）Ｏｐｔｉｍｕｍとの比較。
コショウ（ピペル・カプシカム（Ｐｉｐｅｒ ｃａｐｓｉｃｕｍ））植物を、２０〜２５℃、日照時間１４〜１６時間の温室で６〜７週間育てた。各株の中央部から完全に展開した葉を４枚採取し、湿らせたろ紙を敷いたペトリ皿に入れた。葉に、水（無処理対照）、Ｓｅｒｅｎａｄｅ（登録商標）Ｏｐｔｉｍｕｍの懸濁液（陽性対照）またはＦＣＣ１２５６発酵物（２つの異なるバッチ）を噴霧した。その後、ペトリ皿に蓋をして、インキュベーションのために温室とほぼ同じ生育条件に設定したグロースチャンバー内に置いた。

翌日、５００，０００胞子／ｍＬに調整した灰色かび病菌の胞子懸濁液を噴霧して葉に接種した。その後、ペトリ皿をグロースチャンバーに戻し、４日後、６日後、９日後に病状の進行状況を評価した。

結果を図１に示す。列１はＳｅｒｅｎａｄｅ（登録商標）Ｏｐｔｉｍｕｍ参照（２．８ｋｇ／ｈａ相当の適用）を示す；列２は無処理の接種対照を示す；列３は無処理の未接種対照を示す；列４および５は２つの異なる発酵バッチのバシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６を示す。行１および２は接種後４日目の結果を示す。行５および６は同じ葉で接種後６日目、行３および４は再び同じ葉で接種後９日目の結果を示す。

視覚的検査では、無処理の接種済み対照（列２）の葉は４日後でも大きく損傷を受けており、無処理の未接種対照（列３）の葉は９日間の実験を通して新鮮さを維持していたことがはっきりとわかる。Ｓｅｒｅｎａｄｅ（登録商標）Ｏｐｔｉｍｕｍ参照では、３日後には病原菌の防除効果が見られたものの、６日後と９日後には葉の損傷が大きくなった。一方、ＦＣＣ１２５６発酵物は、４日後と６日後に非常に良好な病原菌防除効果を示し、９日後には許容範囲内の防除効果を示した。

（ａ）バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６の濃縮物
ＦＣＣ１２５６の濃縮物を以下のように製造した：２０％ ＦＣＣ１２５６発酵物濃縮物、４５％ 水、３０％ グリセリン（８６．５％）、５％ Ｍａｒａｓｐｅｒｓｅ ＡＧ（リグノスルホン酸ナトリウム；陰イオン性分散剤）を混合し、ＨＫ_２ＰＯ_４・Ｈ_２Ｏ／ＫＨ_２ＰＯ_４緩衝液を用いてｐＨを６．０〜７．５に調整した。最終組成物の胞子含有量（ＦＣＣ１２５６）は、一般的には１．０×１０^１０ＣＦＵ／ｍＬから１．０×１０^１２ＣＦＵ／ｍＬの範囲であった。

（ｂ）バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６の濃縮物
ＦＣＣ１２５６の組成物を以下のように製造した：５０％ ＦＣＣ１２５６発酵物濃縮物、４．８％ 水、４０％ グリセリン（８６．５％）、５％ Ｍａｒａｓｐｅｒｓｅ ＡＧ（リグノスルホン酸ナトリウム；陰イオン性分散剤）、０．１％消泡剤および０．１％Ｋｅｌｚａｎ（増粘剤）を混合し、ＨＫ_２ＰＯ_４・Ｈ_２Ｏ／ＫＨ_２ＰＯ_４緩衝液を用いてｐＨを６．０〜７．５に調整した。最終組成物の胞子含有量（ＦＣＣ１２５６）は、一般的には１．０×１０^１０ＣＦＵ／ｍＬから１．０×１０^１２ＣＦＵ／ｍＬの範囲であった。

（ｃ）バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６の農業用組成物
上記の（ａ）または（ｂ）の濃縮物を、１：１２の割合で水で希釈して農業用組成物を生成した。この組成物は、例えば２００〜６００Ｌ／ｈａの割合で適用することができる。

バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６のコショウ灰色かび病（灰色かび病菌）に対する抗真菌活性を、無処理の対照および他のバシラス・アミロリクエファシエンス株と比較するコショウ植物体アッセイ
ＦＣＣ１２５６、ＤＳＭ７、ＲＴＩ４７２、およびＲＴＩ３０１の４種類の異なるバシラス・アミロリクエファシエンス株を、６０ｍＬの培養液を入れた５００ｍＬの振盪フラスコを用いて小規模に発酵させたこと以外は、同様の条件で発酵させた（実施例２参照）。培養温度は２８℃で、撹拌は２００ｒｐｍ、インキュベーション時間は１４４時間であった。この発酵では、それぞれおよそ１×１０^７ＣＦＵ／ｍＬの胞子濃度が得られた。

コショウ植物（ピペル・カプシカム、品種Ｌａｍｕｙｏ Ｆ１）を７×７×７ｃｍのプラスチックポットに入れ、Ａｇｒｏｆｉｎｏ ２０１の土壌基材を用いて生育させた。植物は試験時には６週齢であった。植物の水やりは２日に１回、Ｎ：Ｐ：Ｋ＝２０：２０：２０の１６０ｐｐｍの肥料を用いて行った。試験様式ごとに６つの複製を使用し、各複製は１植物（１ポット）で構成された。

各植物を、３つのノズルブームを使用した実験用噴霧器の中で、１０００Ｌ／ｈａの推定量で処理した。ＦＣＣ１２５６、ＤＳＭ７、ＲＴＩ４７２、ＲＴＩ３０１の４種類の異なるバシラス・アミロリクエファシエンス株は、それぞれ発酵ブロス２０ｍＬの容量を脱塩水１００ｍＬで希釈し、アジュバント混合液０．２％ｖｏｌ／ｖｏｌと混合して使用した。また、アジュバント混合物０．２％ｖｏｌ／ｖｏｌを添加しバシラス株を添加していない発酵培地を、参照として評価した。

適用後、植物は２０℃、７０％ＲＨ、１６時間の光周期でグロースチャンバー内に保管した。接種は、殺真菌剤適用の２４時間後に、灰色かび病菌の接種液を、処理した植物上に流出するまで手動で噴霧することにより行った。接種濃度は、ＰＤＢ培地（灰色かび病菌ＦＦ２４８の株）内に５０，０００胞子／ｍＬであった。接種後、植物を結露チャンバー（ｄｅｗ ｃｈａｍｂｅｒ）（暗黒）に２０℃で４８時間保管し、感染を促した。その後、植物を２０℃、７０％ＲＨ、１６時間の光周期のグロースチャンバー内で、発病評価まで置いた。

病害の評価は、接種から３日後に、１株あたり完全に展開した４枚の葉で重症度を評価した。その後、ポットごとの平均重症度を算出し（表６に報告）、Ａｂｏｔｔ式：
％対照Ａ＝１００＊（（％重症度Ａ−％重症度無処理）／％重症度無処理）
を用いて試験菌株の効能を算出した。

参考文献
本明細書中で言及されているすべての出版物、特許出願、特許、およびその他の参考文献は、その全体が参照によって組み入れられる。

前述の主題は、理解を明確にする目的で、説明および例を用いてある程度詳細に説明してきたが、添付の特許請求の範囲内である特定の変更および修正を実施できることは、当業者には理解される。

Claims (17)

1. 植物上の植物病原菌を防除する方法であって、ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ−１２２１６２として寄託されたバシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６を含む組成物を、植物に、植物の一部に、および／または植物もしくは植物の一部が生育するもしくは植えられる予定の部位に、適用する工程を含む前記方法。
2. 植物上の真菌性植物病原菌および／または細菌性植物病原菌を防除する方法であって、ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ−１２２１６２として寄託されたバシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６を含む組成物を、植物の地上部分に適用する工程を含む前記方法。
3. 組成物は液状であり、バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６が組成物中に１．０×１０^６ＣＦＵ／ｍＬから１．０×１０^１２ＣＦＵ／ｍＬの濃度で存在する、請求項１または２のいずれか１項に記載の方法。
4. 組成物は、懸濁液、懸濁液濃縮物（ＳＣ）、油分散体（ＯＤ）および発泡体から選択される液剤の形態である、請求項１から３のいずれか１項に記載の方法。
5. 組成物は固体状であり、バシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６が組成物中に１．０×１０^６ＣＦＵ／ｇから１．０×１０^１２ＣＦＵ／ｇの濃度で存在する、請求項１または２に記載の方法。
6. 組成物は、粉塵性粉末（ＤＰ）、穎粒水和剤（ＷＧ）および水和剤（ＷＰ）から選択される固体製剤の形態である、請求項１、２および５のいずれか１項に記載の方法。
7. 組成物は４．０×１０^９ＣＦＵ／ｈａから４．０×１０^１７ＣＦＵ／ｈａの割合で適用される、請求項１から６のいずれか１項に記載の方法。
8. 植物病原菌は、灰色かび病菌、ボトリチス・スクアモサ、ムギノアカカビ病菌、フザリウム・オキシスポラム、フザリウム・ヴィグリフォルメ、ジャガイモ疫病菌、フィトフトラ・パラシティカ、フィトフトラ・ソジャエ、フィトフトラ・カプシシ、フィトフトラ・シナモン、フィトフトラ・フラガリアエ、フィトフトラ・ラモラム、フィトフトラ・パルミヴォラ、フィトフトラ・ニコチアナエ、スクレロティニア・スクレロチオラム、スクレロティニア・ミノール、スクレロティニア・ホメオカルパ、黄色コウジ菌、シュードモナス・シリンガエ病原型トマト、火傷病菌、リゾクトニア・ソラニ、キサントモナス・ユーベシカトリア、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項１から７のいずれか１項に記載の方法。
9. 植物は、コショウ、キュウリ、リンゴ、アスパラガス、ベリー類、バナナ、柑橘類、キウイ、メロン、モモ、ナシ、パイナップル、ナシ状果、ザクロ、セロリ、タマネギ、ニンニク、ブドウ、リーク、エシャロット、チャイブ、ブロッコリー、キャベツ、カリフラワー、ウリ科植物、トマト、ジャガイモ、コムギ、コメ、およびダイズから選択される、請求項１から８のいずれか１項に記載の方法。
10. 組成物は、１．３：１．０から３．０：１．０の範囲の相対質量比でイツリンとフェンギシンを含む、請求項１から９のいずれか１項に記載の方法。
11. 組成物は、適切な担体、界面活性剤および場合により緩衝剤を含む農業的に適切な製剤媒体をさらに含む、請求項１から１０のいずれか１項に記載の方法。
12. 農業用組成物であって、
    ａ）ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ−１２２１６２として寄託されたバシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６、ならびに
    ｂ）適切な担体、界面活性剤および場合により緩衝剤を含む農業的に適切な製剤媒体、
    を含む前記農業用組成物。
13. 組成物は、１．３：１．０から３．０：１．０の範囲の相対質量比でイツリンとフェンギシンを含む、請求項１２に記載の組成物。
14. 組成物は、懸濁液、懸濁液濃縮物（ＳＣ）、油分散体（ＯＤ）および発泡体、粉塵性粉末（ＤＰ）、穎粒水和剤（ＷＧ）および水和剤（ＷＰ）から選択される製剤である、請求項１２または１３のいずれか１項に記載の組成物。
15. 農業用組成物の濃縮物であって、
    ａ）ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ−１２２１６２として寄託されたバシラス・アミロリクエファシエンスＦＣＣ１２５６、ならびに
    ｂ）適切な担体、界面活性剤および場合により緩衝剤を含む農業的に適切な製剤媒体、
    を含む前記農業用組成物の濃縮物。
16. 濃縮物は、懸濁液濃縮物（ＳＣまたはＳＤ）、超低容量懸濁液（ＳＵ）、種子処理用懸濁液（ＦＳ）、油分散体（ＯＤ）、ペースト（ＰＡ）、ゲル（ＧＤ）、穎粒水和剤（ＷＧ）、粉塵性粉末（ＤＰ）、水分散性錠剤（ＷＴ）、スラリー処理用水分散性粉末（ＷＳ）、および水和剤（ＷＰ）から選択される製剤の形態である、請求項１５に記載の濃縮物。
17. 濃縮物は、１．３：１．０から３．０：１．０の範囲の相対質量比でイツリンとフェンギシンを含む、請求項１５または１６に記載の濃縮物。

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