JP2021535752A - 複数の主要組織適合遺伝子複合体分子に制限したny−eso−1−特異的t細胞受容体の組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2018年9月5日に出願し、かつ、発明の名称が「複数の主要組織適合遺伝子複合体分子に制限したNY−ESO−1−特異的T細胞受容体の組成物」であり、本明細書の一部を構成するものとして、その内容を援用する、係属中で、かつ、同一出願人による米国仮特許出願第62/727,485号の35U.S.C.119(e)に基づいた利益を主張する。
本発明は、National Institute of Healthより、補助金交付番号第CA132681号、及び、第CA197633号の下で、合衆国政府の支援を受けて完成した。合衆国政府は、本発明について、一定の権利を有する。
本出願は、ASCII形式で電子的に提出した、本明細書の一部を構成するものとして、その全内容を援用する配列表を含む。2019年8月28日に作成した当該ASCIIコピーは、名称が30435_364−WO−U1_SL.txtであり、サイズが101,375バイトである。
本発明は、αβ T細胞受容体遺伝子治療において有用な方法と材料に関する。
NY−ESO−1 −CTAG1B遺伝子の産物− は、既存のTCR遺伝子治療での有力な標的である。一般的な癌精巣抗原として、NY−ESO−1は、正常な非生殖細胞組織では発現しないが、数多くの腫瘍では異常な発現をする(13)。異常な発現の頻度は、固形腫瘍では10〜50%、黒色腫では25〜50%、滑膜肉腫では最大80%の範囲であり(13〜18)、悪性度が大きな転移性腫瘍組織では、発現の高まりが認められる(14、15、19)。さらに、NY−ESO−1は、免疫原性が大きく、そして、様々なMHC対立遺伝子が提示する複数のエピトープに対する自発的、及び、ワクチン誘発性のT細胞免疫応答を促す(20〜23)。その結果、HLA−A*02:01が提示したエピトープNY−ESO−1157−165(SLLMWITQC、(配列番号36))は、遺伝子治療試験において、同種の1G4 TCRを標的とし、転移性黒色腫と滑膜肉腫の患者で、それぞれ、55%と61%の客観的反応率を示し、そして、標的化に関連する有害事象は認められなかった(24、25)。多発性骨髄腫の患者でのレンチウイルスを介したTCR遺伝子治療において、この同じA2に制限したエピトープを標的にすると、同様に、重大な安全上の懸念も無いままに、70%の完全な応答、または、概ね完全な応答を得た(26)。しかしながら、残念なことに、治療に応答した患者の大多数は、数ヶ月以内に再発するに至っており、そして、MHCI遺伝子座でのヘテロ接合性の喪失は、腫瘍が、HLA−A*02:01/NY−ESO−1157−165を標的とする養子T細胞治療から逃れるメカニズムとして報告されている(27)。したがって、NY−ESO−1は、様々な種類の腫瘍で発現して、クリニックで安全に標的化することができるが、単一のHLAサブタイプを介した標的化をしてしまうと容易に消失する腫瘍特異的な免疫原性パブリック抗原である。
以前に、我々は、転移性黒色腫の患者の血液に、様々なNY−ESO−1由来エピトープと反応するT細胞が存在していることを報告した(22)。これらの反応性T細胞を濃縮するために、我々は、完全なNY−ESO−1タンパク質配列を集合的に構成する28個の重複する18−マーのパネルで、患者の末梢血単核細胞(PBMC)の増殖を刺激した(図1A)。次いで、我々は、個々のペプチドで増殖細胞を再刺激し、IFN−γの細胞内染色を行って増殖を促したペプチドを決定し、そして、予測アルゴリズムを使用して刺激ペプチドを分析して、それぞれの患者のMHCハプロタイプに関連する最小エピトープを特定した(31)(図1B)。反応性T細胞を、免疫刺激性エピトープに対応する個々の9〜10−マーのペプチドの存在下で再増殖し(図1C)、そして、同種ペプチド−MHCテトラマーを使用して、蛍光活性化細胞選別装置(FACS)を介した選別を行った(図1D)。これらの単一細胞種から増殖した細胞株は、クローン性であり、そして、それらの同種エピトープに対して反応性を示した(図1E)。合計で、HLA−A*02:01/NY−ESO−1157−165と反応する4つの細胞株、及び、HLA−BとHLA−C対立遺伝子が提示するエピトープと反応する4つの細胞株を、さらなる研究のために選択した。
すべてのヒトTRAV及びTRBV遺伝子セグメントを標的とする所定の多重プライマーを備えた市販のRT−PCRキットを使用して、選別した単一細胞から対になったTCRα及びTCRβ遺伝子をクローニングした。得られたVα及びVβ cDNAを、ヒトまたはマウスのTCR定常領域を有するレトロウイルスベクター主鎖にサブクローニングした(図2A)。クローニングしたTCRの特異性を検証するために、我々は、CD3+ HEK293T細胞に、それぞれの完全ヒトTCRをトランスフェクトし、そして、トランスフェクトした細胞を、標的となるそれぞれのNY−ESO−1エピトープのペプチド−MHCデキストラマー試薬で染色した(図2B)。4つすべてのHLA−A2に制限したTCRは、予想していた反応性を示した(図2C)。分析した事象を、同様のトランスフェクションレベルでゲートしたが、新規のTCRは、非常に多様なデキストラマー結合を示した。9D2 TCRのデキストラマー結合は、バックグラウンドからほとんど識別できなかったが、3A1 TCRは、臨床的に使用されている1G4 TCRと比較して優れたデキストラマー結合を示した。4A2及び5G6 TCRのデキストラマー結合は、9D2と1G4の中間の程度のものであった。
TCRを形質導入したT細胞の感度は、その同種ペプチド−MHCに対するTCRの単量体親和性(Kd 約0.1〜400μM)(33)、ならびに、細胞表面のTCRの密度(12)に応じて変化する。形質導入したTCRは、T細胞表面に広範なレベルで発現しており、これは、当該TCRが、折り畳まれて、二量体化し、そして、制限を受けているCD3鎖を有する集合体に関して内因性TCRと競合する(TCR「強度」と呼ばれる特性)効率の変動に起因するものである(34、35)。したがって、TCRを形質導入したT細胞の最適な細胞傷害性機能は、TCR親和性と、表面発現に相関しており(3、12)、遺伝子治療のために、親和性が大きな、効率的に取り出したTCRを選択することの重要性を明示している(7)。
NY−ESO−1を標的とする大半の免疫療法は、A2に制限したNY−ESO−1157−165エピトープに注目している。NY−ESO−1を標的とした免疫療法の利用を広範囲に拡大するために、我々は、4つの非A2に制限したT細胞クローンからTCRをクローニングし、そして、トランスフェクトしたCD3+ 293Tで、これらの内の3つに対するNY−ESO−1反応性を検証した(図2D)。第4のTCR−Cw3/NY−ESO−192−100反応性T細胞からクローニングした9G2−は、CD8を共発現させても、形質導入したJurkat T細胞に関して、Cw3/NY−ESO−192−100に特異性を付与することはなく(図5A、5B)、そして、研究は、それ以上は続けなかった。Jurkat、または、CD8+ Jurkatで発現した、ヒトまたはマウスのTCRとして検証を行った3つのTCRがもたらすデキストラマー結合を比較することで、強度と親和性の差異が明確になった(図5A、5B、5C)。B7/NY−ESO−160−72−特異的1E4 TCRは、強度は大きいが、親和性が小さく、Jurkat細胞表面で、huTCRまたはmuTCRとして同等に発現はするが、CD8+だけの存在下では、デキストラマーに結合する。これらのCD8+、1E4を形質導入した細胞に対するデキストラマー結合は、発現したCD8のレベルに大きく依存していた。対照的に、B18/NY−ESO−188−96特異的2B8 TCRは、CD8+の非存在下で、デキストラマーに結合したが、結合は、マウス化したTCRの方が実質的に強かった。最後に、Cw3/NY−ESO−196−104特異的3C7 TCRは、2B8に匹敵する中程度の強度の表面発現と親和性指数を示した。
T細胞を介した免疫療法は、かつては難治性であったがんに対して臨床的に浸透している。最も成功した2つの免疫療法は、チェックポイント阻害と、がん特異的T細胞の養子移入である。チェックポイント阻害は、腫瘍の突然変異の発生の高まりに応じて良好な臨床反応を引き出しており(39〜41)、患者のMHC分子の補体が提示するネオエピトープを偶然にも生成しない限り、非同義の突然変異を免疫系が検出しない、ことを示唆している。この解釈は、チェックポイント阻害が、HLA−A、HLA−B、及び、HLA−C遺伝子座にヘテロ接合がある黒色腫患者全体の生存率を高め、したがって、これらのMHCI遺伝子座の1つ以上にホモ接合がある患者よりも、ずっと多様なエピトープの配列を提示する、という最近の発見によって裏付けられている(42)。多様に標的化した抗腫瘍免疫応答の重要性は、養子T細胞療法の結果によって同様に裏付けられており、このことは、ヘテロ接合性の喪失が、その他の免疫原性抗原の発現を続けながら、腫瘍の単一特異性免疫認識を回避できるメカニズムである、ことを示している(43)。したがって、これらの研究で明らかになった事項は、複数のMHC対立遺伝子が提示する複数のエピトープの多様な標的化が、免疫療法を首尾良く進める上で望ましい、ということである。2つ目のポイントは、腫瘍特異的なパブリック抗原に由来する複数のエピトープを標的にすることは、突然変異の発生が少ないがんのネオエピトープを標的としており、有望な代替手段になり得るということである。
材料
ペプチドは、Anaspec(Fremont,CA)、Thermo Fisher Scientific(Waltham,MA)、及び、Mimotopes(Victoria,Australia)から購入した。フローサイトメトリーに使用する蛍光抗体、及び、7−AADは、BD Biosciences(San Jose,CA)、BioLegend(San Diego,CA)、または、eBioscience(San Diego,CA)から購入した。蛍光ペプチド−MHCマルチマーは、TCMetrix(Epalinges、Switzerland)から購入する、あるいは、(50)に記載されているようにしてビオチン化モノマーから自前で調製した(NIH Tetramer Core,Atlanta,GAから入手する、あるいは、(51)に記載されているようにして、自前で、E.coli.で異種発現させ、リフォールディングし、そして、ビオチン化をした)。プライマーは、Integrated DNA Technologies(Coralville,IA)から購入した。KODポリメラーゼマスターミックスと、ポリブレンは、EMD Millipore(Darmstadt,Germany)から購入した。配列決定は、Retrogen Inc(San Diego,CA)で行った。抗CD3(OKT3)、及び、抗CD28(CD28.2)活性化抗体は、eBioscienceから購入した。サイトカインは、Peprotech,Inc.(Rocky Hill,NJ)から購入した。BioTトランスフェクション試薬は、Bioland Scientific(Paramount,CA)から購入した。細胞培養培地、抗生物質、及び、ウシ胎児血清は、Corning(Corning,NY)から購入した。ヒトAB血清は、Omega Scientific(Tarzana,CA)から購入した。ポリ−L−リジン、及び、PHA−L(フィトヘマグルチニン−L)は、Sigma(St.Louis,MO)から購入した。
細胞株(293T/17,Jurkat E6−1、及び、K562)は、American Type Culture Collection(Manassas,VΑ)から購入した。293T細胞は、抗生物質(ペニシリン/ストレプトマイシン)と、10%(v/v)ウシ胎児血清(FBS)を補充したDulbecco’s Modified Eagle Medium(DMEM)で培養した。Jurkat、及び、K562細胞は、抗生物質、10%(v/v)FBS、10mM HEPES、50μM β−メルカプトエタノール、1×MEM NEAA、及び、1mMピルビン酸ナトリウムを補充したRPMI 1640培地で培養した。細胞を、2〜3日ごとに分けて、付着細胞を、サブコンフルエントに維持するか、あるいは、非付着細胞を、<106個の細胞/mLの密度に維持した。Jurkat、及び、K562細胞に、非複製ウイルスベクターを形質導入し、フローサイトメトリーで分析し、そして、細胞アッセイで直接に使用する、あるいは、FACSで選別して、そこに示したような誘導細胞株を確立した。機能アッセイで使用する初代ヒトPBMCは、UCLA AIDS InstituteのCFAR Virology CoreLabから購入し、そして、前掲のようにして、刺激、形質導入、そして、培養をした(52)。T細胞は、新たにサイトカインを添加したT細胞培地(5%熱不活化ヒトAB血清、55μM β−メルカプトエタノール、及び、4mM L−グルタミンを補充したAIM−V培地)で、PBMCから増殖させた。すべての細胞を増殖させ、そして、37℃、5%大気CO2でアッセイした。
様々なHLA制限を有するNY−ESO−1のエピトープに特異的なCD8+ Tリンパ球クローン(157−165/HLA−A*02:01(53)、60−72/HLA−B*07:02(21)、88−96/HLA−B*18:01(23)、92−100/HLA−C*03:04(54)、96−104/HLA−C*03:04(22)、124−133/HLA−C*03:04(22))を、HLA型の黒色腫患者から生成した。選択した全患者は、Grade III/IVの転移性黒色腫を有しており、エクスビボで、関連するTリンパ球エピトープに対するNY−ESO−1応答を予め記録した(55)。患者のPBMCに、12個のアミノ酸が重複する28×18−マーを含み、NY−ESO−1タンパク質配列に集団で貫通する、プールした1μMのペプチド(Mimotopes)の存在下で刺激を与え、次いで、25IU/ml IL−2(Peprotech)の存在下で、10日間培養した。
単一のNY−ESO−1−反応性T細胞を、FACS Aria IIで抗原特異性について選別し、そして、RNase阻害剤の存在下で、凍結融解して溶解した。Qiagen OneStep RT−PCRキット(Redwood City,CA)を使用したヒトTCR可変領域特異的プライマーのカスタムパネルを使用して、選別した単一のT細胞から新規TCR可変遺伝子をクローニングし、続いて、ネスティッドPCR増幅ステップを行った。増幅した可変遺伝子を、ヒトまたはマウスTCR定常ドメインのいずれかと、アルファ遺伝子とベータ遺伝子とを連結する2Aリボソームスキップペプチドとを含むTCR発現カセットに、アセンブリPCRと制限酵素とを利用したクローニングを介して組み込んだ。低親和性神経成長因子受容体(LNGFR)の短縮型をコードするP2A結合遺伝子も、独立したトランスフェクション/形質導入マーカーとして、カセットに含めた。クローニングしたTCRの抗原特異性、及び、MHC制限は、(52)に記載されているようにして、TCR及びCD3遺伝子で共トランスフェクションした293T細胞で評価した。
Jurkat T細胞を、LNGFRΔ−P2A−TCRα−F2A−TCRβの形式で、それぞれの新規TCRをコードするMSGVをベースとしたレトロウイルスを用いて形質導入した。(52)に記載されているようにして、ウイルスを、293T細胞で生産した。形質導入のために、Jurkat T細胞を、5μg/mLのポリブレンを補充した未濃縮のウイルス上清を用いて、遠心分離した(1350×g、30℃で、90分間)。TCRを形質導入したJurkat細胞を、同種のpMHCデキストラマーで、室温で、15分間染色した後に、LNGFR及びCD8αに対する抗体で、4℃で、15分間、共染色した。染色した細胞を、FACSCanto分析機を使用して、フローサイトメトリーで分析した。ここで示したデータは、LNGFR+(形質導入した)細胞でゲートしている。形質導入効率は、>95%であった。
初代ヒトPBMCは、UCLA AIDS InstituteのCFAR Virology Core Labから購入した。報告した全実験で、同じPBMCドナーを使用した。初代ヒトPBMCを、(52)に記載されたようにして、新規TCRをコードするレトロウイルスで形質導入した。簡潔に説明すると、ウイルス形質導入の2日前に、抗CD3(クローンOKT3)、1μg/mLの可溶性抗CD28を含むT細胞培地(クローンCD28.2)、及び、300U/ml IL−2をプレートにコーティングを施した24ウェルプレートで、ウェルごとに、合計で1〜2×106個の解凍したPBMCを活性化した。活性化の48時間後に、培地の大部分を、10μg/mLのポリブレンを補充した未濃縮のレトロウイルス上清と交換し、そして、細胞を、1350×gで、30℃で、90分間、遠心分離した。スピンフェクションした後に、レトロウイルス上清の大部分を、300U/mL IL−2と、1mg/mL抗CD28を含む新たな培地と交換した。形質導入を24時間繰り返した後に、細胞を、1×PBSで洗浄し、次いで、最後の300U/mL IL−2を含む新たな培地に戻し、さらに3〜4日間培養した後に、抗原刺激アッセイで使用した。共インキュベーションの前日または当日に、LNGFR、TCR、及び/または、pMHC多量体結合の発現レベルを評価するために、PBMCをFACSで分析した。
Jurkat T細胞をエフェクターとして使用した場合、10%FBS、100IU/mlペニシリン、100μg/mlストレプトマイシン、及び、4mM L−グルタミンを補充したRPMIで、共培養を行った。エフェクター細胞(50,000個のTCRを形質導入したJurat T細胞)を、96ウェル平底プレートで、標的細胞(同種またはコントロールの一本鎖三量体で形質導入した50,000個のK562細胞)と共インキュベーションした。複製ウェル由来の上清を共培養の44〜48時間後に収集し、そして、後述するようにして、酵素結合免疫吸着測定法(ELISA)で分析した。
IncuCyte死滅アッセイでの共培養の前に、96ウェル平底プレートを、0.001%ポリ−L−リジンを含むPBSの100μlで、37℃で、1時間、コーティングし、それぞれ200μl PBSで、2回の洗浄を行い、そして、手短に風乾した。エフェクター細胞を加える前に、標的細胞を加え、そして、室温で、3時間沈降させた。共培養では、通常、96ウェルプレートに、ウェルあたり、25,000個のPBMCと、25,000個の標的細胞を使用した。複数の(異なるTCRを有する)エフェクター集団、または、複数の(異なるMHCを有する)標的を混合したアッセイでは、それぞれの細胞タイプの25,000個を使用して、ウェルあたり、(それぞれ、単一/混合、または、混合/混合について)合計で75,000個、または、100,000個の細胞を生成した。すべてのウェルの総量を、200μLに調整した。緑色オブジェクトの総面積(μm2/ウェル)を定量し、その減少分を、GFP+標的細胞の死滅として解釈した。細胞を、2時間ごとに、ウェルごとに、2つの位置で画像化し、そして、これら2つの画像を、1つのデータポイントで一緒に合わせた。それぞれのエフェクター/標的の組み合わせに関して、4〜8回の反復共培養から得たデータポイントを使用して、グラフ曲線をプロットし、標準偏差を計算した。
NOD.Cg−PrkdcSCIDIL−2rgtm1Wjl/SzJ(NOD/SCID/IL−2Rg−/−、NSG)マウスを、Jackson Laboratoryから購入し、そして、Univercity of California,Los Angeles(UCLA)の動物施設で飼育した。成体(16週齢)の雄マウスを、インビボ腫瘍接種実験に使用した。すべての動物実験は、UCLAのInstitutional Animal Care and Use Committeeの承認を受けたものである。
異種移植腫瘍移植に関して、10×106個のPC−3/HLA−A2細胞(HLA−A2を過剰発現するPC−3細胞株)を、それぞれのマウスの脇腹の一方に皮下注射し、そして、10×106個のPC−3/HLA−A2/NY−ESO−1細胞(HLA−A2とNYESOを過剰発現するPC−3細胞株)を、脇腹の他方に皮下注射した。マウスについては、1週間の期間にわたって、固形腫瘍の成長を許容した。腫瘍を注射して8日後に、マウスに放射線(100ラド)を照射し、続いて、LNGFRだけを発現する、または、NY−ESO−1−特異的TCR(1G4、3A1、または、9D2)を一緒に発現するようにデザインした8×106個の精製T細胞を、後眼窩叢に静脈注射した。フローサイトメトリー分析のために、3、7、10、及び、14日目に、マウスから採血した。14日目に、マウスを安楽死させ、免疫組織学分析のために腫瘍を収集した。
実験マウスから解剖して得た固形腫瘍を、10%中性緩衝ホルマリンで固定し、そして、切片化のためにパラフィンに包埋し(厚さ4mm)、続いて、標準手順(UCLA Translational Pathology Core Laboratory)を使用して、ヘマトキシリン及びエオシン(H/E)染色、または、抗体染色(ヒトCD3εの場合)を行った。これらの切片を、Optronics Macrofire CCDカメラ(AU Optronics)を備えたOlympus BX51直立顕微鏡を使用して、4倍及び40倍の倍率で画像化した。これらの画像を、Optronics Picture Frameソフトウェア(AU Optronics)、及び、Image Jソフトウェア(バージョン 1.51J8)を使用して分析した。Image JヒトCD3抗体を使用して、色の閾値の設定を済ませてから、染色したスライドのCD3+面積を測定して定量した。使用するパラメーターは次の通りである。閾値処理方法:デフォルト;閾値の色:赤;色空間:HSB;明るさ:168〜215。
腫瘍異種移植実験の統計分析を、一元配置分散分析と、それに続くテューキーの多重比較検定を使用して行った。データを、平均±SEMとして表している。P<0.05は、有意であると見なした。ns、有意ではない。*、P<0.05;**、P<0.01;***、P<0.001;****P<0.0001。すべての統計分析は、GraphPad PRISMソフトウェア(バージョン6.0)を使用して行った。
以下の開示は、本発明の様々な実施形態でのポリヌクレオチド配列と、それらがコードする可変領域TCRタンパク質配列(例えば、配列番号1のポリヌクレオチド配列は、配列番号3の可変領域TCRタンパク質をコードする)を提供する。
GGTCAACAGCTGAATCAGAGTCCTCAATCTATGTTTATCCAGGAAGGAGAAGATGTCTCCATGAACTGCACTTCTTCAAGCATATTTAACACCTGGCTATGGTACAAGCAGGACCCTGGGGAAGGTCCTGTCCTCTTGATAGCCTTATATAAGGCTGGTGAATTGACCTCAAATGGAAGACTGACTGCTCAGTTTGGTATAACCAGAAAGGACAGCTTCCTGAATATCTCAGCATCCATACCTAGTGATGTAGGCATCTACTTCTGTGCTGGATTTCTGGATAGCAACTATCAGTTAATCTGGGGCGCTGGGACCAAGCTAATTATAAAGCCAGAT(配列番号1)
GAAGCCCAAGTGACCCAGAACCCAAGATACCTCATCACAGTGACTGGAAAGAAGTTAACAGTGACTTGTTCTCAGAATATGAACCATGAGTATATGTCCTGGTATCGACAAGACCCAGGGCTGGGCTTAAGGCAGATCTACTATTCAATGAATGTTGAGGTGACTGATAAGGGAGATGTTCCTGAAGGGTACAAAGTCTCTCGAAAAGAGAAGAGGAATTTCCCCCTGATCCTGGAGTCGCCCAGCCCCAACCAGACCTCTCTGTACTTCTGTGCCAGCGCTAGCGGGTACCGCACAGATACGCAGTATTTTGGCCCAGGCACCCGGCTGACAGTGCTCGAGGAC(配列番号2)
GQQLNQSPQSMFIQEGEDVSMNCTSSSIFNTWLWYKQDPGEGPVLLIALYKAGELTSNGRLTAQFGITRKDSFLNISASIPSDVGIYFCAGFLDSNYQLIWGAGTKLIIKPD(配列番号3)
EAQVTQNPRYLITVTGKKLTVTCSQNMNHEYMSWYRQDPGLGLRQIYYSMNVEVTDKGDVPEGYKVSRKEKRNFPLILESPSPNQTSLYFCASASGYRTDTQYFGPGTRLTVLED(配列番号4)
GCTCAGTCAGTGGCTCAGCCGGAAGATCAGGTCAACGTTGCTGAAGGGAATCCTCTGACTGTGAAATGCACCTATTCAGTCTCTGGAAACCCTTATCTTTTTTGGTATGTTCAATACCCCAACCGAGGCCTCCAGTTCCTTCTGAAATACATCACAGGGGATAACCTGGTTAAAGGCAGCTATGGCTTTGAAGCTGAATTTAACAAGAGCCAAACCTCCTTCCACCTGAAGAAACCATCTGCCCTTGTGAGCGACTCCGCTTTGTACTTCTGTGCTGTGAGAGACAGTCGGTCTGGGGCTGGGAGTTACCAACTCACTTTCGGGAAGGGGACCAAACTCTCGGTCATACCAAAT(配列番号5)
GGTGCTGTCGTCTCTCAACATCCGAGCTGGGTTATCTGTAAGAGTGGAACCTCTGTGAAGATCGAGTGCCGTTCCCTGGACTTTCAGGCCACAACTATGTTTTGGTATCGTCAGTTCCCGAAACAGAGTCTCATGCTGATGGCAACTTCCAATGAGGGCTCCAAGGCCACATACGAGCAAGGCGTCGAGAAGGACAAGTTTCTCATCAACCATGCAAGCCTGACCTTGTCCACTCTGACAGTGACCAGTGCCCATCCTGAAGACAGCAGCTTCTACATCTGCAGTGCTCCCCAAGGTTATGGGGGCACAGATACGCAGTATTTTGGCCCAGGCACCCGGCTGACAGTGCTCGAGGAC(配列番号6)
AQSVAQPEDQVNVAEGNPLTVKCTYSVSGNPYLFWYVQYPNRGLQFLLKYITGDNLVKGSYGFEAEFNKSQTSFHLKKPSALVSDSALYFCAVRDSRSGAGSYQLTFGKGTKLSVIPN(配列番号7)
GAVVSQHPSWVICKSGTSVKIECRSLDFQATTMFWYRQFPKQSLMLMATSNEGSKATYEQGVEKDKFLINHASLTLSTLTVTSAHPEDSSFYICSAPQGYGGTDTQYFGPGTRLTVLED(配列番号37)
GATGCTAAGACCACACAGCCAAATTCAATGGAGAGTAACGAAGAAGAGCCTGTTCACTTGCCTTGTAACCACTCCACAATCAGTGGAACTGATTACATACATTGGTATCGACAGCTTCCCTCCCAGGGTCCAGAGTACGTGATTCATGGTCTTACAAGCAATGTGAACAACAGAATGGCCTCTCTGGCAATCGCTGAAGACAGAAAGTCCAGTACCTTGATCCTGCACCGTGCTACCTTGAGAGATGCTGCTGTGTACTACTGCATCCTGAGAACCTCTGGGGCTGGGAGTTACCAACTCACTTTCGGGAAGGGGACCAAACTCTCGGTCATACCAAAT(配列番号8)
AGTGCTGTCATCTCTCAAAAGCCAAGCAGGGATATCTGTCAACGTGGAACCTCCCTGACGATCCAGTGTCAAGTCGATAGCCAAGTCACCATGATGTTCTGGTACCGTCAGCAACCTGGACAGAGCCTGACACTGATCGCAACTGCAAATCAGGGCTCTGAGGCCACATATGAGAGTGGATTTGTCATTGACAAGTTTCCCATCAGCCGCCCAAACCTAACATTCTCAACTCTGACTGTGAGCAACATGAGCCCTGAAGACAGCAGCATATATCTCTGCAGCGCGGGAGGAGCGGGAGCGTCAGATACGCAGTATTTTGGCCCAGGCACCCGGCTGACAGTGCTCGAGGAC(配列番号9)
DAKTTQPNSMESNEEEPVHLPCNHSTISGTDYIHWYRQLPSQGPEYVIHGLTSNVNNRMASLAIAEDRKSSTLILHRATLRDAAVYYCILRTSGAGSYQLTFGKGTKLSVIPN(配列番号10)
SAVISQKPSRDICQRGTSLTIQCQVDSQVTMMFWYRQQPGQSLTLIATANQGSEATYESGFVIDKFPISRPNLTFSTLTVSNMSPEDSSIYLCSAGGAGASDTQYFGPGTRLTVLED(配列番号11)
CAGAAGGAGGTGGAGCAGAATTCTGGACCCCTCAGTGTTCCAGAGGGAGCCATTGCCTCTCTCAACTGCACTTACAGTGACCGAGGTTCCCAGTCCTTCTTCTGGTACAGACAATATTCTGGGAAAAGCCCTGAGTTGATAATGTTCATATACTCCAATGGTGACAAAGAAGATGGAAGGTTTACAGCACAGCTCAATAAAGCCAGCCAGTATGTTTCTCTGCTCATCAGAGACTCCCAGCCCAGTGATTCAGCCACCTACCTCTGTGCCGTAGATGACAAGATCATCTTTGGAAAAGGGACACGACTTCATATTCTCCCCAAT(配列番号12)
GATGCTGGAGTTATCCAGTCACCCCGGCACGAGGTGACAGAGATGGGACAAGAAGTGACTCTGAGATGTAAACCAATTTCAGGACACGACTACCTTTTCTGGTACAGACAGACCATGATGCGGGGACTGGAGTTGCTCATTTACTTTAACAACAACGTTCCGATAGATGATTCAGGGATGCCCGAGGATCGATTCTCAGCTAAGATGCCTAATGCATCATTCTCCACTCTGAAGATCCAGCCCTCAGAACCCAGGGACTCAGCTGTGTACTTCTGTGCCAGCAGTTTGGGACAGCCAAGCACAGATACGCAGTATTTTGGCCCAGGCACCCGGCTGACAGTGCTCGAGGAC(配列番号13)
QKEVEQNSGPLSVPEGAIASLNCTYSDRGSQSFFWYRQYSGKSPELIMFIYSNGDKEDGRFTAQLNKASQYVSLLIRDSQPSDSATYLCAVDDKIIFGKGTRLHILPN(配列番号14)
DAGVIQSPRHEVTEMGQEVTLRCKPISGHDYLFWYRQTMMRGLELLIYFNNNVPIDDSGMPEDRFSAKMPNASFSTLKIQPSEPRDSAVYFCASSLGQPSTDTQYFGPGTRLTVLED(配列番号15)
AAACAGGAGGTGACGCAGATTCCTGCAGCTCTGAGTGTCCCAGAAGGAGAAAACTTGGTTCTCAACTGCAGTTTCACTGATAGCGCTATTTACAACCTCCAGTGGTTTAGGCAGGACCCTGGGAAAGGTCTCACATCTCTGTTGCTTATTCAGTCAAGTCAGAGAGAGCAAACAAGTGGAAGACTTAATGCCTCGCTGGATAAATCATCAGGACGTAGTACTTTATACATTGCAGCTTCTCAGCCTGGTGACTCAGCCACCTACCTCTGTGCTGTGAGTACTGCGTATTCAGGAGGAGGTGCTGACGGACTCACCTTTGGCAAAGGGACTCATCTAATCATCCAGCCCTAT(配列番号16)
GATACTGGAGTCTCCCAGAACCCCAGACACAAGATCACAAAGAGGGGACAGAATGTAACTTTCAGGTGTGATCCAATTTCTGAACACAACCGCCTTTATTGGTACCGACAGACCCTGGGGCAGGGCCCAGAGTTTCTGACTTACTTCCAGAATGAAGCTCAACTAGAAAAATCAAGGCTGCTCAGTGATCGGTTCTCTGCAGAGAGGCCTAAGGGATCTTTCTCCACCTTGGAGATCCAGCGCACAGAGCAGGGGGACTCGGCCATGTATCTCTGTGCCAGCAGCCCCCCGACTGTTCGGGTCTATGGCTACACCTTCGGTTCGGGGACCAGGTTAACCGTTGTAGAGGAC(配列番号17)
KQEVTQIPAALSVPEGENLVLNCSFTDSAIYNLQWFRQDPGKGLTSLLLIQSSQREQTSGRLNASLDKSSGRSTLYIAASQPGDSATYLCAVSTAYSGGGADGLTFGKGTHLIIQPY(配列番号18)
DTGVSQNPRHKITKRGQNVTFRCDPISEHNRLYWYRQTLGQGPEFLTYFQNEAQLEKSRLLSDRFSAERPKGSFSTLEIQRTEQGDSAMYLCASSPPTVRVYGYTFGSGTRLTVVED(配列番号19)
GGACAACAGGTAATGCAAATTCCTCAGTACCAGCATGTACAAGAAGGAGAAGACTTCACCACGTACTGCAATTCCTCAACTACTTTAAGCAATATACAGTGGTATAAGCAAAGGCCTGGTGGACATCCCGTTTTTTTGATACAGTTAGTGAAGAGTGGAGAAGTGAAGAAGCAGAAAAGACTGACATTTCAGTTTGGAGAAGCAAAAAAGAACAGCTCCCTGCACATCACAGCCACCCAGACTACAGATGTAGGAACCTACTTCTGTGCGGACCCTAACTTTGGAAATGAGAAATTAACCTTTGGGACTGGAACAAGACTCACCATCATACCCAAT(配列番号20)
GAAGCCCAAGTGACCCAGAACCCAAGATACCTCATCACAGTGACTGGAAAGAAGTTAACAGTGACTTGTTCTCAGAATATGAACCATGAGTATATGTCCTGGTATCGACAAGACCCAGGGCTGGGCTTAAGGCAGATCTACTATTCAATGAATGTTGAGGTGACTGATAAGGGAGATGTTCCTGAAGGGTACAAAGTCTCTCGAAAAGAGAAGAGGAATTTCCCCCTGATCCTGGAGTCGCCCAGCCCCAACCAGACCTCTCTGTACTTCTGTGCCAGCAGTTTGAATCCCTTTGCAACTAATGAAAAACTGTTTTTTGGCAGTGGAACCCAGCTCTCTGTCTTGGAGGAC(配列番号21)
GQQVMQIPQYQHVQEGEDFTTYCNSSTTLSNIQWYKQRPGGHPVFLIQLVKSGEVKKQKRLTFQFGEAKKNSSLHITATQTTDVGTYFCADPNFGNEKLTFGTGTRLTIIPN(配列番号22)
EAQVTQNPRYLITVTGKKLTVTCSQNMNHEYMSWYRQDPGLGLRQIYYSMNVEVTDKGDVPEGYKVSRKEKRNFPLILESPSPNQTSLYFCASSLNPFATNEKLFFGSGTQLSVLED(配列番号23)
GGACAAAACATTGACCAGCCCACTGAGATGACAGCTACGGAAGGTGCCATTGTCCAGATCAACTGCACGTACCAGACATCTGGGTTCAACGGGCTGTTCTGGTACCAGCAACATGCTGGCGAAGCACCTACATTTCTGTCTTACAATGTTCTGGATGGTTTGGAGGAGAAAGGTCGTTTTTCTTCATTCCTTAGTCGGTCTAAAGGGTACAGTTACCTCCTTTTGAAGGAGCTCCAGATGAAAGACTCTGCCTCTTACCTCTGTGCTGTGAGAGGCGACTACAAGCTCAGCTTTGGAGCCGGAACCACAGTAACTGTAAGAGCAAAT(配列番号24)
GATTCTGGAGTCACACAAACCCCAAAGCACCTGATCACAGCAACTGGACAGCGAGTGACGCTGAGATGCTCCCCTAGGTCTGGAGACCTCTCTGTGTACTGGTACCAACAGAGCCTGGACCAGGGCCTCCAGTTCCTCATTCAGTATTATAATGGAGAAGAGAGAGCAAAAGGAAACATTCTTGAACGATTCTCCGCACAACAGTTCCCTGACTTGCACTCTGAACTAAACCTGAGCTCTCTGGAGCTGGGGGACTCAGCTTTGTATTTCTGTGCCAGCAGCTCGATACACGGTGTCTCTGGGGCCAACGTCCTGACTTTCGGGGCCGGCAGCAGGCTGACCGTGCTGGAGGAC(配列番号25)
GQNIDQPTEMTATEGAIVQINCTYQTSGFNGLFWYQQHAGEAPTFLSYNVLDGLEEKGRFSSFLSRSKGYSYLLLKELQMKDSASYLCAVRGDYKLSFGAGTTVTVRAN(配列番号26)
DSGVTQTPKHLITATGQRVTLRCSPRSGDLSVYWYQQSLDQGLQFLIQYYNGEERAKGNILERFSAQQFPDLHSELNLSSLELGDSALYFCASSSIHGVSGANVLTFGAGSRLTVLED(配列番号27)
MQAEGRGTGGSTGDADGPGGPGIPDGPGGNAGGPGEAGATGGRGPRGAGAARASGPGGGAPRGPHGGAASGLNGCCRCGARGPESRLLEFYLAMPFATPMEAELARRSLAQDAPPLPVPGVLLKEFTVSGNILTIRLTAADHRQLQLSISSCLQQLSLLMWITQCFLPVFLAQPPSGQRR(配列番号28)
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本明細書に記載したすべての刊行物(例えば、本明細書において符号を付けて引用した文献)は、当該刊行物で引用している文献に関連する方法、及び/または、材料を開示、及び、説明するために、参照により、本明細書で援用する。本明細書で引用した刊行物は、本出願の出願日より先にされた開示を引用する。発明には最先の優先日、または、優先日があるので、本発明者らが、刊行物よりも先行している権利を有していないとの判断は、決して行うべきではない。さらに、実際の発行日は、表示されている日付と異なる場合があるので、独立した検証が必要である。以下の参考文献は、当該技術分野での方法と材料の説明を含む。
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これにて、本発明の例示的な実施形態の説明を終える。本発明の1つ以上の実施形態についての前出の説明は、例示及び説明の目的で提示している。包括的とすること、または、開示した正確な形態にまで本発明を限定することは意図していない。上記した教示に照らして、数多くの修正及び変更が可能である。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される:
(項目1)
ベクターに配置するポリヌクレオチドであって:
前記ポリヌクレオチドは、Vα T細胞受容体ポリペプチド、及び/または、Vβ T細胞受容体ポリペプチドをコードする;ならびに
前記Vα T細胞受容体ポリペプチド、及び/または、前記Vβ T細胞受容体ポリペプチドを含むVα/Vβ T細胞受容体をCD8 + T細胞で発現する場合、前記Vα/Vβ T細胞受容体は:
ヒト白血球抗原A2;
ヒト白血球抗原B07;
ヒト白血球抗原B18;または
ヒト白血球抗原C03、
と関連するNY−ESO−1ペプチドを認識する、前記ポリヌクレオチド。
(項目2)
前記T細胞受容体が:
3A1 T細胞受容体;
4A2 T細胞受容体;
5G6 T細胞受容体;
9D2 T細胞受容体;
1E4 T細胞受容体;
2B8 T細胞受容体;または
3C7 T細胞受容体を含む、項目1に記載のポリヌクレオチド。
(項目3)
前記ベクターが:
(a)3A1 Vαポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号3);
(b)3A1 Vβポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号4);
(c)4A2 Vαポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号7);
(d)4A2 Vβポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号37);
(e)5G6 Vαポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号10);
(f)5G6 Vβポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号11);
(g)9D2 Vαポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号14);
(h)9D2 Vβポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号15);
(i)1E4 Vαポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号18);
(j)1E4 Vβポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号19);
(k)2B8 Vαポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号22);
(l)2B8 Vβポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号23);
(m)3C7 Vαポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号26);または
(n)3C7 Vβポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号27)、の少なくとも1つを含む、項目2に記載のポリヌクレオチド。
(項目4)
前記ベクターが、CD8 + T細胞での前記ポリペプチドの発現を調節するポリヌクレオチド配列を含む、項目3に記載のポリヌクレオチド。
(項目5)
前記ベクターが、センダイウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、または、レンチウイルスベクターである、項目4に記載のポリヌクレオチド。
(項目6)
前記ベクターが、Vαポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、または、Vβポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、項目1に記載のポリヌクレオチド。
(項目7)
前記ベクターが、Vαポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを、前記ベクターに配置するVβポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと共に含み、その結果、Vα/Vβ T細胞受容体(TCR)が、CD8 + T細胞の表面で発現する、項目1に記載のポリヌクレオチド。
(項目8)
項目1〜7のいずれか1項に記載のベクターで形質導入した宿主細胞を含む物質の組成物。
(項目9)
前記宿主細胞が、ヒトCD8 + T細胞である、項目8に記載の組成物。
(項目10)
前記組成物が、緩衝剤、抗菌剤、等張化剤、湿潤剤、洗剤、及び、pH調整剤からなる群から選択される1つ以上の医薬として許容可能な賦形剤を含む医薬組成物である、項目9に記載の組成物。
(項目11)
前記CD8 + T細胞を、NY−ESO−1抗原を発現する、がんの診断を受けた個人から得る;及び
前記CD8 + T細胞を、TCR Vαポリペプチドをコードするポリペプチドを、TCR Vβポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと共に含むベクターで形質導入し、その結果、異種TCRを、CD8 + T細胞の表面で発現させ、前記異種TCRは、前記がんの細胞の表面に発現するヒト白血球抗原に関連するNY−ESO−1ペプチドを認識する、項目10に記載の組成物。
(項目12)
前記ベクターが、レトロウイルスベクターである、項目11に記載の組成物。
(項目13)
NY−ESO−1抗原を発現するがん細胞を死滅させる方法であって、異種TCRを、前記CD8 + T細胞の表面で発現することを許容し、かつ、前記がんの細胞の表面に発現するヒト白血球抗原に関連するNY−ESO−1ペプチドを認識し、その結果、前記がん細胞を認識して死滅させる条件下で、前記がん細胞を、項目9に記載のCD8 + T細胞と組み合わせる、ことを含む前記方法。
(項目14)
前記方法を、前記CD8 + T細胞を注入した患者に、インビボで実施する、項目13に記載の方法。
(項目15)
前記がん細胞が、固形腫瘍を形成する、項目13に記載の方法。
(項目16)
前記がん細胞が、神経芽細胞腫細胞、骨髄腫細胞、転移性黒色腫細胞、滑膜肉腫細胞、膀胱癌細胞、食道癌細胞、肝細胞癌細胞、頭頸部癌細胞、非小細胞肺癌細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、または、乳癌細胞である、項目13に記載の方法。
(項目17)
前記方法が、第1のヒト白血球抗原に関連するNY−ESO−1ペプチドを標的とする第1の改変したCD8 + T細胞を、第2のヒト白血球抗原に関連するNY−ESO−1ペプチドを標的とする第2のCD8 + T細胞と組み合わせて投与することを含む、項目13に記載の方法。
(項目18)
がんの治療のための医薬の製造のための項目1に記載のポリヌクレオチド、または、項目7に記載のCD8 + T細胞の使用。
(項目19)
前記ポリヌクレオチドが:
(a)3A1 Vαポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号3);
(b)3A1 Vβポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号4);
(c)4A2 Vαポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号7);
(d)4A2 Vβポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号37);
(e)5G6 Vαポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号10);
(f)5G6 Vβポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号11);
(g)9D2 Vαポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号14);
(h)9D2 Vβポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号15);
(i)1E4 Vαポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号18);
(j)1E4 Vβポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号19);
(k)2B8 Vαポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号22);
(l)2B8 Vβポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号23);
(m)3C7 Vαポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号26);または
(n)3C7 Vβポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号27)、の少なくとも1つを含む、項目18に記載の使用。
(項目20)
前記がんが、黒色腫、神経芽細胞腫、骨髄腫、転移性黒色腫、滑膜肉腫、膀胱癌、食道癌、肝細胞癌、頭頸部癌、非小細胞肺癌、卵巣癌、前立腺癌、または、乳癌である、項目19に記載の使用。
Claims (20)
- ベクターに配置するポリヌクレオチドであって:
前記ポリヌクレオチドは、Vα T細胞受容体ポリペプチド、及び/または、Vβ T細胞受容体ポリペプチドをコードする;ならびに
前記Vα T細胞受容体ポリペプチド、及び/または、前記Vβ T細胞受容体ポリペプチドを含むVα/Vβ T細胞受容体をCD8+ T細胞で発現する場合、前記Vα/Vβ T細胞受容体は:
ヒト白血球抗原A2;
ヒト白血球抗原B07;
ヒト白血球抗原B18;または
ヒト白血球抗原C03、
と関連するNY−ESO−1ペプチドを認識する、前記ポリヌクレオチド。 - 前記T細胞受容体が:
3A1 T細胞受容体;
4A2 T細胞受容体;
5G6 T細胞受容体;
9D2 T細胞受容体;
1E4 T細胞受容体;
2B8 T細胞受容体;または
3C7 T細胞受容体を含む、請求項1に記載のポリヌクレオチド。 - 前記ベクターが:
(a)3A1 Vαポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号3);
(b)3A1 Vβポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号4);
(c)4A2 Vαポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号7);
(d)4A2 Vβポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号37);
(e)5G6 Vαポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号10);
(f)5G6 Vβポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号11);
(g)9D2 Vαポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号14);
(h)9D2 Vβポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号15);
(i)1E4 Vαポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号18);
(j)1E4 Vβポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号19);
(k)2B8 Vαポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号22);
(l)2B8 Vβポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号23);
(m)3C7 Vαポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号26);または
(n)3C7 Vβポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号27)、の少なくとも1つを含む、請求項2に記載のポリヌクレオチド。 - 前記ベクターが、CD8+ T細胞での前記ポリペプチドの発現を調節するポリヌクレオチド配列を含む、請求項3に記載のポリヌクレオチド。
- 前記ベクターが、センダイウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、または、レンチウイルスベクターである、請求項4に記載のポリヌクレオチド。
- 前記ベクターが、Vαポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、または、Vβポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、請求項1に記載のポリヌクレオチド。
- 前記ベクターが、Vαポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを、前記ベクターに配置するVβポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと共に含み、その結果、Vα/Vβ T細胞受容体(TCR)が、CD8+ T細胞の表面で発現する、請求項1に記載のポリヌクレオチド。
- 請求項1〜7のいずれか1項に記載のベクターで形質導入した宿主細胞を含む物質の組成物。
- 前記宿主細胞が、ヒトCD8+ T細胞である、請求項8に記載の組成物。
- 前記組成物が、緩衝剤、抗菌剤、等張化剤、湿潤剤、洗剤、及び、pH調整剤からなる群から選択される1つ以上の医薬として許容可能な賦形剤を含む医薬組成物である、請求項9に記載の組成物。
- 前記CD8+ T細胞を、NY−ESO−1抗原を発現する、がんの診断を受けた個人から得る;及び
前記CD8+ T細胞を、TCR Vαポリペプチドをコードするポリペプチドを、TCR Vβポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと共に含むベクターで形質導入し、その結果、異種TCRを、CD8+ T細胞の表面で発現させ、前記異種TCRは、前記がんの細胞の表面に発現するヒト白血球抗原に関連するNY−ESO−1ペプチドを認識する、請求項10に記載の組成物。 - 前記ベクターが、レトロウイルスベクターである、請求項11に記載の組成物。
- NY−ESO−1抗原を発現するがん細胞を死滅させる方法であって、異種TCRを、前記CD8+ T細胞の表面で発現することを許容し、かつ、前記がんの細胞の表面に発現するヒト白血球抗原に関連するNY−ESO−1ペプチドを認識し、その結果、前記がん細胞を認識して死滅させる条件下で、前記がん細胞を、請求項9に記載のCD8+ T細胞と組み合わせる、ことを含む前記方法。
- 前記方法を、前記CD8+ T細胞を注入した患者に、インビボで実施する、請求項13に記載の方法。
- 前記がん細胞が、固形腫瘍を形成する、請求項13に記載の方法。
- 前記がん細胞が、神経芽細胞腫細胞、骨髄腫細胞、転移性黒色腫細胞、滑膜肉腫細胞、膀胱癌細胞、食道癌細胞、肝細胞癌細胞、頭頸部癌細胞、非小細胞肺癌細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、または、乳癌細胞である、請求項13に記載の方法。
- 前記方法が、第1のヒト白血球抗原に関連するNY−ESO−1ペプチドを標的とする第1の改変したCD8+ T細胞を、第2のヒト白血球抗原に関連するNY−ESO−1ペプチドを標的とする第2のCD8+ T細胞と組み合わせて投与することを含む、請求項13に記載の方法。
- がんの治療のための医薬の製造のための請求項1に記載のポリヌクレオチド、または、請求項7に記載のCD8+ T細胞の使用。
- 前記ポリヌクレオチドが:
(a)3A1 Vαポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号3);
(b)3A1 Vβポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号4);
(c)4A2 Vαポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号7);
(d)4A2 Vβポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号37);
(e)5G6 Vαポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号10);
(f)5G6 Vβポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号11);
(g)9D2 Vαポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号14);
(h)9D2 Vβポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号15);
(i)1E4 Vαポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号18);
(j)1E4 Vβポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号19);
(k)2B8 Vαポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号22);
(l)2B8 Vβポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号23);
(m)3C7 Vαポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号26);または
(n)3C7 Vβポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(配列番号27)、の少なくとも1つを含む、請求項18に記載の使用。 - 前記がんが、黒色腫、神経芽細胞腫、骨髄腫、転移性黒色腫、滑膜肉腫、膀胱癌、食道癌、肝細胞癌、頭頸部癌、非小細胞肺癌、卵巣癌、前立腺癌、または、乳癌である、請求項19に記載の使用。
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