JP2021524255A - 単一特異性及び二重特異性抗体抗−tmeff2抗体並びにそれらの使用 - Google Patents
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-
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Abstract
Description
本出願は、ASCIIフォーマットで電子的に提出済みであり、その全体が参照により本明細書に組み込まれている配列表を含む。当該ASCIIのコピーは、2019年1月31日に作成され、JBI5160WOPCT1_SL.txtの名称であり、144,156バイトのサイズである。
本明細書に提供される開示は、単一特異性及び多重特異性抗TMEFF2抗体、並びに記載の抗体を産生及び使用する方法に関する。
それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び22のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3、
配列番号25のVH及び配列番号28のVL、並びに/又は
配列番号32のHC及び配列番号35のLC、を含む、単離された抗TMEFF2抗体又はその抗原結合断片を提供する。
それぞれ配列番号11、13、16、19、21、及び23のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3、
配列番号26のVH及び配列番号29のVL、並びに/又は
配列番号33のHC及び配列番号36のLC、を含む、単離された抗TMEFF2抗体又はその抗原結合断片を提供する。
それぞれ配列番号10、14、17、18、20、及び24のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3、
配列番号27のVH及び配列番号30のVL、並びに/又は
配列番号34のHC及び配列番号37のLC、を含む、単離された抗TMEFF2抗体又はその抗原結合断片を提供する。
それぞれ配列番号11、13、16、18、20、及び22のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3、
配列番号26のVH及び配列番号31のVL、並びに/又は
配列番号33のHC及び配列番号38のLC、を含む、単離された抗TMEFF2抗体又はその抗原結合断片を提供する。
それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び86のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3、
配列番号87のVH及び配列番号88のVL、並びに/又は
配列番号91のHC及び配列番号92のLC、を含む、単離された抗TMEFF2抗体又はその抗原結合断片を提供する。
それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び86のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3、
配列番号89のVH及び配列番号90のVL、並びに/又は
配列番号93のHC及び配列番号94のLC、を含む、単離された抗TMEFF2抗体又はその抗原結合断片を提供する。
第1のドメインが、それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び22のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、第2のドメインが、それぞれ配列番号60、61、62、63、64、及び65のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
第1のドメインが、配列番号25のVH及び配列番号28のVLを含み、第2のドメインが、配列番号66のVH及び配列番号67のVLを含み、かつ/又は
二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片が、配列番号32の第1の重鎖(first heavy chain、HC1)、配列番号35の第1の軽鎖(first light chain、LC1)、配列番号76の第2の重鎖(second heavy chain、HC2)、及び配列番号77の第2の軽鎖(second light chain、LC2)を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
第1のドメインが、それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び22のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、第2のドメインが、それぞれ配列番号68、69、70、71、72、及び73のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
第1のドメインが、配列番号25のVH及び配列番号28のVLを含み、第2のドメインが、配列番号74のVH及び配列番号75のVLを含み、かつ/又は
二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片が、配列番号32のHC1、配列番号35のLC1、配列番号78のHC2、及び配列番号79のLC2を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
第1のドメインが、それぞれ配列番号11、13、16、19、21、及び23のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、第2のドメインが、それぞれ配列番号60、61、62、63、64、及び65のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
第1のドメインが、配列番号26のVH及び配列番号29のVLを含み、第2のドメインが、配列番号66のVH及び配列番号67のVLを含み、かつ/又は
二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片が、配列番号33のHC1、配列番号36のLC1、配列番号76のHC2、及び配列番号77のLC2を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
第1のドメインが、それぞれ配列番号11、13、16、19、21、及び23のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、第2のドメインが、それぞれ配列番号68、69、70、71、72、及び73のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
第1のドメインが、配列番号26のVH及び配列番号29のVLを含み、第2のドメインが、配列番号74のVH及び配列番号75のVLを含み、かつ/又は
二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片が、配列番号33のHC1、配列番号36のLC1、配列番号78のHC2、及び配列番号79のLC2を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
第1のドメインが、それぞれ配列番号10、14、17、18、20、及び24のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、第2のドメインが、それぞれ配列番号60、61、62、63、64、及び65のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
第1のドメインが、配列番号27のVH及び配列番号30のVLを含み、第2のドメインが、配列番号66のVH及び配列番号67のVLを含み、かつ/又は
二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片が、配列番号34のHC1、配列番号37のLC1、配列番号76のHC2、及び配列番号77のLC2を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
第1のドメインが、それぞれ配列番号10、14、17、18、20、及び24のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、第2のドメインが、それぞれ配列番号68、69、70、71、72、及び73のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
第1のドメインが、配列番号27のVH及び配列番号30のVLを含み、第2のドメインが、配列番号74のVH及び配列番号75のVLを含み、かつ/又は
二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片が、配列番号34のHC1、配列番号37のLC1、配列番号78のHC2、及び配列番号79のLC2を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
第1のドメインが、それぞれ配列番号11、13、16、18、20、及び22のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、第2のドメインが、それぞれ配列番号60、61、62、63、64、及び65のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
第1のドメインが、配列番号26のVH及び配列番号31のVLを含み、第2のドメインが、配列番号66のVH及び配列番号67のVLを含み、かつ/又は
二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片が、配列番号33のHC1、配列番号38のLC1、配列番号76のHC2、及び配列番号77のLC2を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
第1のドメインが、それぞれ配列番号11、13、16、18、20、及び22のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、第2のドメインが、それぞれ配列番号68、69、70、71、72、及び73のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
第1のドメインが、配列番号26のVH及び配列番号31のVLを含み、第2のドメインが、配列番号74のVH及び配列番号75のVLを含み、かつ/又は
二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片が、配列番号33のHC1、配列番号38のLC1、配列番号78のHC2、及び配列番号79のLC2を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
第1のドメインが、それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び86のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、第2のドメインが、それぞれ配列番号60、61、62、63、64、及び65のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
第1のドメインが、配列番号87のVH及び配列番号88のVLを含み、第2のドメインが、配列番号66のVH及び配列番号67のVLを含み、かつ/又は
二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片が、配列番号91のHC1、配列番号92のLC1、配列番号76のHC2、及び配列番号77のLC2を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
第1のドメインが、それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び86のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、第2のドメインが、それぞれ配列番号68、69、70、71、72、及び73のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
第1のドメインが、配列番号87のVH及び配列番号88のVLを含み、第2のドメインが、配列番号74のVH及び配列番号75のVLを含み、かつ/又は
二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片が、配列番号91のHC1、配列番号92のLC1、配列番号78のHC2、及び配列番号79のLC2を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
第1のドメインが、それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び86のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、第2のドメインが、それぞれ配列番号60、61、62、63、64、及び65のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
第1のドメインが、配列番号89のVH及び配列番号90のVLを含み、第2のドメインが、配列番号66のVH及び配列番号67のVLを含み、かつ/又は
二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片が、配列番号93のHC1、配列番号94のLC1、配列番号76のHC2、及び配列番号77のLC2を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
第1のドメインが、それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び86のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、第2のドメインが、それぞれ配列番号68、69、70、71、72、及び73のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
第1のドメインが、配列番号89のVH及び配列番号90のVLを含み、第2のドメインが、配列番号74のVH及び配列番号75のVLを含み、かつ/又は
二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片が、配列番号93のHC1、配列番号94のLC1、配列番号78のHC2、及び配列番号79のLC2を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
2つの同一のHC1及び2つの同一のLC1を有する単一特異性二価TMEFF2抗体、並びに2つの同一のHC2及び2つの同一のLC2を有する単一特異性二価CD3抗体を約1:1の混合物のモル比で組み合わせることと、
混合物に還元剤を導入することと、
混合物を約90分〜約6時間インキュベートすることと、
還元剤を除去することと、
HC1、LC1、HC2、及びLC2を含む二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を精製することと、を含む、方法を提供する。
MVLWESPRQCSSWTLCEGFCWLLLLPVMLLIVARPVKLAAFPTSLSDCQTPTGWNCSGYD
DRENDLFLCDTNTCKFDGECLRIGDTVTCVCQFKCNNDYVPVCGSNGESYQNECYLRQAA
CKQQSEILVVSEGSCATDAGSGSGDGVHEGSGETSQKETSTCDICQFGAECDEDAEDVWC
VCNIDCSQTNFNPLCASDGKSYDNACQIKEASCQKQEKIEVMSLGRCQDNTTTTTKSEDG
HYARTDYAENANKLEESAREHHIPCPEHYNGFCMHGKCEHSINMQEPSCRCDAGYTGQHC
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FPTSLSDCQTPTGWNCSGYDDRENDLFLCDTNTCKFDGECLRIGDTVTCVCQFKCNNDYV
PVCGSNGESYQNECYLRQAACKQQSEILVVSEGSCATDAGSGSGDGVHEGSGETSQKETS
TCDICQFGAECDEDAEDVWCVCNIDCSQTNFNPLCASDGKSYDNACQIKEASCQKQEKIE
VMSLGRCQDNTTTTTKSEDGHYARTDYAENANKLEESAREHHIPCPEHYNGFCM HGKCEHSINMQEPSCRCDAGYTGQHCEKKDYSVLYVVPGPVRFQYVLIAAVIGTIQIAVICVVVLCITRKCPRSNRIHRQKQNTGHYSSDNTTRASTRLI
HHIPCPEHYNGFCMHGKCEHSINMQEPSCRCDAGYTGQHCE
NTTTTTKSEDGHYARTDYAENANKLEESAREHHIPCPEHYNGFCMHGKCEHSINMQEPSCRCDAGYTGQHCEKKDYSVLYVVPGPVRFQYV
MQSGTHWRVLGLCLLSVGVWGQDGNEEMGGITQTPYKVSISGTTVILTCPQYPGSEILWQ
HNDKNIGGDEDDKNIGSDEDHLSLKEFSELEQSGYYVCYPRGSKPEDANFYLYLRARVCE
NCMEMDVMSVATIVIVDICITGGLLLLVYYWSKNRKAKAKPVTRGAGAGGRQRGQNKERP
PPVPNPDYEPIRKGQRDLYSGLNQRRI
DGNEEMGGITQTPYKVSISGTTVILTCPQYPGSEILWQHNDKNIGGDEDDKNIGSDEDHL
SLKEFSELEQSGYYVCYPRGSKPEDANFYLYLRARVCENCMEMD
本発明は、抗TMEFF2抗体又はその抗原結合断片、本発明の抗TMEFF2抗体の抗原結合断片を含む多重特異性抗体、及び二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。本発明は、本発明の抗体をコードするポリペプチド及びポリヌクレオチド、又はそれらの相補的核酸、ベクター、宿主細胞、並びにそれらを作製及び使用する方法を提供する。
TMEFF2発現は、他の正常組織と比較して、前立腺組織及び前立腺腺癌に著しく豊富である。膜状TMEFF2は、疾患進行全体を通じて保持され、抗腫瘍療法の可能な標的として機能する。TMEFF2は、プロテアーゼにより切断され、抗原の可溶性形態を生じることが既知である。本発明では、TMEFF2の膜近位領域に導かれる抗体を生成して、膜TMEFF2への抗体結合を最大化し、得られた抗体の可溶性TMEFF2形態への結合を生じる可能性を最小限にした。
それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び22、
それぞれ配列番号11、13、16、19、21、及び23、
それぞれ配列番号10、14、17、18、20、及び24、
それぞれ配列番号11、13、16、18、20、及び22、又は
それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び86、の重鎖相補性決定領域(heavy chain complementarity determining region 1、HCDR1)、HCDR2、HCDR3、軽鎖相補性決定領域(light chain complementarity determining region 1、LCDR1)、LCDR2、及びLCDR3を含む、単離された抗TMEFF2抗体又はその抗原結合断片を提供する。
表9に示されるVH又はVLアミノ酸配列を含む本発明の抗TMEFF2抗体又はその抗原結合断片の変異体は、本発明の範囲内である。例えば、変異体は、親抗体と比較すると、相同抗体が、TMEFF2への匹敵する結合又は改善された安定性などの機能特性を保持しているか又は改善された機能特性を有する限り、VH及び/又はVLに1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、又は15個のアミノ酸置換を含み得る。いくつかの実施形態では、配列同一性は、本発明のVH又はVLアミノ酸配列に対して、約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%又は99%であり得る。
本発明はまた、HCDR1、HCDR2、及びHCDR3配列を含むVHと、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3配列を含むVLとを含む、単離された抗TMEFF2抗体又はその抗原結合断片であって、CDR配列のうちの1つ又は2つ以上が、本明細書に記載の抗体(例えば、表5〜12に示される抗体)に基づく特定のアミノ酸配列、又はその保存的修飾を含み、抗体が、親抗体の所望の機能特性を保持している、単離された抗TMEFF2抗体又はその抗原結合断片を提供する。
「免疫コンジュゲート」は、1つ又は2つ以上の異種分子(複数可)とコンジュゲートさせた本発明の抗体を指す。
本発明はまた、TMEFF2に結合する第1のドメインと、CD3に結合する第2のドメインと、を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び22、
それぞれ配列番号11、13、16、19、21、及び23、
それぞれ配列番号10、14、17、18、20、及び24、o
それぞれ配列番号11、13、16、18、20、及び22、又は
それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び86、のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2抗体又はその抗原結合断片を提供する。
それぞれ配列番号60、61、62、63、64、及び65、又は
それぞれ配列番号68、69、70、71、72、及び73、のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
配列番号25のVH及び配列番号28のVL、
配列番号26のVH及び配列番号29のVL、
配列番号27のVH及び配列番号30のVL、
配列番号26のVH及び配列番号31のVL、
配列番号87のVH及び配列番号88のVL、又は
配列番号89のVH及び配列番号90のVL、を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
配列番号66のVH及び配列番号67のVL、又は
配列番号74のVH及び配列番号75のVL、を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
第1のドメインが、それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び22のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、第2のドメインが、それぞれ配列番号60、61、62、63、64、及び65のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
第1のドメインが、配列番号25のVH及び配列番号28のVLを含み、第2のドメインが、配列番号66のVH及び配列番号67のVLを含み、かつ/又は
二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片が、配列番号32の第1の重鎖(HC1)、配列番号35の第1の軽鎖(LC1)、配列番号76の第2の重鎖(HC2)、及び配列番号77の第2の軽鎖(LC2)を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
第1のドメインが、それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び22のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、第2のドメインが、それぞれ配列番号68、69、70、71、72、及び73のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
第1のドメインが、配列番号25のVH及び配列番号28のVLを含み、第2のドメインが、配列番号74のVH及び配列番号75のVLを含み、かつ/又は
二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片が、配列番号32のHC1、配列番号35のLC1、配列番号78のHC2、及び配列番号79のLC2を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
第1のドメインが、それぞれ配列番号11、13、16、19、21、及び23のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、第2のドメインが、それぞれ配列番号60、61、62、63、64、及び65のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
第1のドメインが、配列番号26のVH及び配列番号29のVLを含み、第2のドメインが、配列番号66のVH及び配列番号67のVLを含み、かつ/又は
二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片が、配列番号33のHC1、配列番号36のLC1、配列番号76のHC2、及び配列番号77のLC2を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
第1のドメインが、それぞれ配列番号11、13、16、19、21、及び23のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、第2のドメインが、それぞれ配列番号68、69、70、71、72、及び73のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
第1のドメインが、配列番号26のVH及び配列番号29のVLを含み、第2のドメインが、配列番号74のVH及び配列番号75のVLを含み、かつ/又は
二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片が、配列番号33のHC1、配列番号36のLC1、配列番号78のHC2、及び配列番号79のLC2を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
第1のドメインが、それぞれ配列番号10、14、17、18、20、及び24のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、第2のドメインが、それぞれ配列番号60、61、62、63、64、及び65のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
第1のドメインが、配列番号27のVH及び配列番号30のVLを含み、第2のドメインが、配列番号66のVH及び配列番号67のVLを含み、かつ/又は
二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片が、配列番号34のHC1、配列番号37のLC1、配列番号76のHC2、及び配列番号77のLC2を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
第1のドメインが、それぞれ配列番号10、14、17、18、20、及び24のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、第2のドメインが、それぞれ配列番号68、69、70、71、72、及び73のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
第1のドメインが、配列番号27のVH及び配列番号30のVLを含み、第2のドメインが、配列番号74のVH及び配列番号75のVLを含み、かつ/又は
二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片が、配列番号34のHC1、配列番号37のLC1、配列番号78のHC2、及び配列番号79のLC2を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
第1のドメインが、それぞれ配列番号11、13、16、18、20、及び22のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、第2のドメインが、それぞれ配列番号60、61、62、63、64、及び65のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
第1のドメインが、配列番号26のVH及び配列番号31のVLを含み、第2のドメインが、配列番号66のVH及び配列番号67のVLを含み、かつ/又は
二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片が、配列番号33のHC1、配列番号38のLC1、配列番号76のHC2、及び配列番号77のLC2を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
第1のドメインが、それぞれ配列番号11、13、16、18、20、及び22のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、第2のドメインが、それぞれ配列番号68、69、70、71、72、及び73のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
第1のドメインが、配列番号26のVH及び配列番号31のVLを含み、第2のドメインが、配列番号74のVH及び配列番号75のVLを含み、かつ/又は
二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片が、配列番号33のHC1、配列番号38のLC1、配列番号78のHC2、及び配列番号79のLC2を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
第1のドメインが、それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び86のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、第2のドメインが、それぞれ配列番号60、61、62、63、64、及び65のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
第1のドメインが、配列番号87のVH及び配列番号88のVLを含み、第2のドメインが、配列番号66のVH及び配列番号67のVLを含み、かつ/又は
二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片が、配列番号91の第1の重鎖(HC1)、配列番号92の第1の軽鎖(LC1)、配列番号76の第2の重鎖(HC2)、及び配列番号77の第2の軽鎖(LC2)を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
第1のドメインが、それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び86のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、第2のドメインが、それぞれ配列番号68、69、70、71、72、及び73のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
第1のドメインが、配列番号87のVH及び配列番号88のVLを含み、第2のドメインが、配列番号74のVH及び配列番号75のVLを含み、かつ/又は
二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片が、配列番号91のHC1、配列番号92のLC1、配列番号78のHC2、及び配列番号79のLC2を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
第1のドメインが、それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び86のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、第2のドメインが、それぞれ配列番号60、61、62、63、64、及び65のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
第1のドメインが、配列番号89のVH及び配列番号90のVLを含み、第2のドメインが、配列番号66のVH及び配列番号67のVLを含み、かつ/又は
二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片が、配列番号93の第1の重鎖(HC1)、配列番号94の第1の軽鎖(LC1)、配列番号76の第2の重鎖(HC2)、及び配列番号77の第2の軽鎖(LC2)を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
第1のドメインが、それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び86のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、第2のドメインが、それぞれ配列番号68、69、70、71、72、及び73のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
第1のドメインが、配列番号89のVH及び配列番号90のVLを含み、第2のドメインが、配列番号74のVH及び配列番号75のVLを含み、かつ/又は
二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片が、配列番号93のHC1、配列番号94のLC1、配列番号78のHC2、及び配列番号79のLC2を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
本発明の抗体又はその抗原結合断片を更に操作して、親抗体と比較すると類似の又は変化した特性を有する修飾抗体を生成することができる。本発明の抗体では、VH、VL、VH及びVL、定常領域、重鎖フレームワーク、軽鎖フレームワーク、又は6つのCDRのうちのいずれか若しくは全てが操作されてもよい。
親抗体と比較してアミノ酸配列が変化している本発明の抗体は、標準的なクローニング及び発現技術を使用して生成され得る。例えば、部位特異的変異導入又はPCRを介在させることによる変異導入を実施して変異を導入することができ、抗体結合又は他の所望の特性に対する影響を、周知の方法及び本明細書において実施例に記載されている方法を使用して評価することができる。
本発明の抗TMEFF2抗体又は二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体は、IgG1、IgG2、IgG3、又はIgG4アイソタイプであり得る。
本発明はまた、本発明の抗TMEFF2抗体又は二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体を提供する。
いくつかの実施形態では、抗TMEFF2抗体は、ヒトである。
本発明の二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体は、本明細書の単離されたTMEFF2結合VH/VLドメインを、本明細書に記載のもの及び公に入手可能なものを含む任意のCD3結合VH/VLドメインと、組み合わせることによって生成することができる。使用され得る例示的なCD3結合VH/VLドメインは、本明細書に記載の抗体CD3B219及びCD3B376のものである。使用され得る例示的なTMEFF2結合VH/VLドメインは、抗体TMEB675、TMEB570、TMEB674、TMEB565、TMEB762、及びTMEB757の抗体である。生成された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体は、TMEFF2及びCD3への結合について、並びにTMEFF2発現細胞(例えば、LNCaP)のT細胞媒介性殺傷などの所望の機能特性について試験することができる。
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GLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG
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GLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG
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STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDE
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本発明はまた、本発明の抗TMEFF2抗体又はその抗原結合断片をコードする、単離されたポリヌクレオチドを提供する。本発明はまた、本発明の二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片をコードする、単離されたポリヌクレオチドを提供する。本明細書で提供された可変ドメインセグメントをコード可能な単離されたポリヌクレオチドは、抗体又は抗原結合断片を産生する同一の又は異なるベクターに含まれてもよい。ポリヌクレオチドは、相補的デオキシ核酸(complementary deoxynucleic acid、cDNA)であってもよく、好適な宿主において発現するためにコドン最適化されていてもよい。コドン最適化は、周知の技術である。
当該抗体のVHをコードしている第1のポリヌクレオチド及び当該抗体のVLをコードしている第2のポリヌクレオチドを発現ベクターに組み込むことと、
宿主細胞を当該発現ベクターで形質転換することと、
当該VL及び当該VHが発現し、抗体を形成する条件下で、培養培地中で当該宿主細胞を培養することと、
当該宿主細胞又は当該培養培地から抗体を回収することと、
を含む、方法もまた提供する。
本発明は、本発明の抗体及び医薬的許容される担体を含む医薬組成物もまた提供する。治療用途では、本発明の抗体は、医薬的に許容される担体中に活性成分として有効な量の抗体を含む医薬組成物として調製することができる。「担体」は、本発明の抗体と一緒に投与される希釈剤、補助剤、賦形剤、又はビヒクルを指す。そのようなビヒクルは、水、及び石油、動物、植物、又は合成物由来のものを含む油、例えば、落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油などの液体であってもよい。例えば、0.4%生理食塩水及び0.3%グリシンを使用してもよい。これらの溶液は滅菌され、一般には粒子状物質を含まない。これらは、従来周知の滅菌技術(例えば、濾過)によって滅菌することができる。組成物は、生理学的条件に近づけるために必要とされる医薬的に許容される補助物質、例えば、pH調節剤及び緩衝剤、安定剤、増粘剤、潤滑剤及び着色剤などを含み得る。そのような医薬製剤中の本発明の抗体の濃度は、約0.5重量%未満から通常少なくとも約1重量%まで、最大で15又は20重量%まで変動し得、また、選択される投与方法に従って、必要とされる用量、流体体積、粘度などに主に基づいて選択され得る。好適なビヒクル及び製剤(ヒトタンパク質、例えばヒト血清アルブミンを含む)は、例えば、Remington:The Science and Practice of Pharmacy,21st Edition,Troy,D.B.ed.,Lipincott Williams and Wilkins,Philadelphia,PA 2006,Part 5,Pharmaceutical Manufacturing pp691−1092に記載され、特にpp.958−989を参照されたい。
本発明はまた、TMEFF2陽性癌の治療を必要とする対象においてTMEFF2陽性癌を治療する方法であって、治療に有効な量の二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を対象に投与して、TMEFF2陽性癌を治療することを含む、方法を提供する。
第1のドメインが、それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び22のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、第2のドメインが、それぞれ配列番号60、61、62、63、64、及び65のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
第1のドメインが、配列番号25のVH及び配列番号28のVLを含み、第2のドメインが、配列番号66のVH及び配列番号67のVLを含み、かつ/又は
二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片が、配列番号32の第1の重鎖(HC1)、配列番号35の第1の軽鎖(LC1)、配列番号76の第2の重鎖(HC2)、及び配列番号77の第2の軽鎖(LC2)を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
第1のドメインが、それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び22のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、第2のドメインが、それぞれ配列番号68、69、70、71、72、及び73のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
第1のドメインが、配列番号25のVH及び配列番号28のVLを含み、第2のドメインが、配列番号74のVH及び配列番号75のVLを含み、かつ/又は
二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片が、配列番号32のHC1、配列番号35のLC1、配列番号78のHC2、及び配列番号79のLC2を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
第1のドメインが、それぞれ配列番号11、13、16、19、21、及び23のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、第2のドメインが、それぞれ配列番号60、61、62、63、64、及び65のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
第1のドメインが、配列番号26のVH及び配列番号29のVLを含み、第2のドメインが、配列番号66のVH及び配列番号67のVLを含み、かつ/又は
二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片が、配列番号33のHC1、配列番号36のLC1、配列番号76のHC2、及び配列番号77のLC2を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
第1のドメインが、それぞれ配列番号11、13、16、19、21、及び23のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、第2のドメインが、それぞれ配列番号68、69、70、71、72、及び73のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
第1のドメインが、配列番号26のVH及び配列番号29のVLを含み、第2のドメインが、配列番号74のVH及び配列番号75のVLを含み、かつ/又は
二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片が、配列番号33のHC1、配列番号36のLC1、配列番号78のHC2、及び配列番号79のLC2を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
第1のドメインが、それぞれ配列番号10、14、17、18、20、及び24のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、第2のドメインが、それぞれ配列番号60、61、62、63、64、及び65のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
第1のドメインが、配列番号27のVH及び配列番号30のVLを含み、第2のドメインが、配列番号66のVH及び配列番号67のVLを含み、かつ/又は
二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片が、配列番号34のHC1、配列番号37のLC1、配列番号76のHC2、及び配列番号77のLC2を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
第1のドメインが、それぞれ配列番号10、14、17、18、20、及び24のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、第2のドメインが、それぞれ配列番号68、69、70、71、72、及び73のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
第1のドメインが、配列番号27のVH及び配列番号30のVLを含み、第2のドメインが、配列番号74のVH及び配列番号75のVLを含み、かつ/又は
二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片が、配列番号34のHC1、配列番号37のLC1、配列番号78のHC2、及び配列番号79のLC2を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
第1のドメインが、それぞれ配列番号11、13、16、18、20、及び22のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、第2のドメインが、それぞれ配列番号60、61、62、63、64、及び65のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
第1のドメインが、配列番号26のVH及び配列番号31のVLを含み、第2のドメインが、配列番号66のVH及び配列番号67のVLを含み、かつ/又は
二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片が、配列番号33のHC1、配列番号38のLC1、配列番号76のHC2、及び配列番号77のLC2を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
第1のドメインが、それぞれ配列番号11、13、16、18、20、及び22のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、第2のドメインが、それぞれ配列番号68、69、70、71、72、及び73のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
第1のドメインが、配列番号26のVH及び配列番号31のVLを含み、第2のドメインが、配列番号74のVH及び配列番号75のVLを含み、かつ/又は
二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片が、配列番号33のHC1、配列番号38のLC1、配列番号78のHC2、及び配列番号79のLC2を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
第1のドメインが、それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び86のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、第2のドメインが、それぞれ配列番号60、61、62、63、64、及び65のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
第1のドメインが、配列番号87のVH及び配列番号88のVLを含み、第2のドメインが、配列番号66のVH及び配列番号67のVLを含み、かつ/又は
二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片が、配列番号91のHC1、配列番号92のLC1、配列番号76のHC2、及び配列番号77のLC2を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
第1のドメインが、それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び86のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、第2のドメインが、それぞれ配列番号68、69、70、71、72、及び73のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
第1のドメインが、配列番号87のVH及び配列番号88のVLを含み、第2のドメインが、配列番号74のVH及び配列番号75のVLを含み、かつ/又は
二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片が、配列番号91のHC1、配列番号92のLC1、配列番号78のHC2、及び配列番号79のLC2を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
第1のドメインが、それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び86のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、第2のドメインが、それぞれ配列番号60、61、62、63、64、及び65のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
第1のドメインが、配列番号89のVH及び配列番号90のVLを含み、第2のドメインが、配列番号66のVH及び配列番号67のVLを含み、かつ/又は
二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片が、配列番号93のHC1、配列番号94のLC1、配列番号76のHC2、及び配列番号77のLC2を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
第1のドメインが、それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び86のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、第2のドメインが、それぞれ配列番号68、69、70、71、72、及び73のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
第1のドメインが、配列番号89のVH及び配列番号90のVLを含み、第2のドメインが、配列番号74のVH及び配列番号75のVLを含み、かつ/又は
二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片が、配列番号93のHC1、配列番号94のLC1、配列番号78のHC2、及び配列番号79のLC2を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を提供する。
本発明はまた、本発明の抗TMEFF2抗体又は二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体を含む、キットを提供する。キットは、治療的使用のために、又は診断キットとして使用することができる。キットを使用して、サンプル中でのTMEFF2、CD3、又はTMEFF2及びCD3の存在を検出することができる。
本発明はまた、サンプル中のTMEFF2を検出する方法であって、サンプルを得ることと、サンプルを本発明の抗TMEFF2抗体と接触させることと、サンプル中のTMEFF2に結合した抗体を検出することと、を含む、方法を提供する。
ヒト細胞外ドメイン(extracellular domain、ECD)TMEFF2は、UniProt受諾#Q9UIK5配列に基づいて産生された。ECD構築物は、C末端に6X Hisタグ及びAviタグ配列を有するように設計した(構築物TMEW1、配列番号6)。FS2及びEGFドメイン(アミノ酸151〜320を含む構築物は、6X His−tag及びavitag配列を有するヒト血清アルブミン(HSA)融合体として設計した(構築物TMEW7、配列番号7)。TMEFF2膜近位ドメイン(残基230〜320)を含む構築物は、6xHisタグを有する(構築物TMEW19、配列番号8)か、又はHis−tagを有するラットIgG1 Fcに融合させて(構築物TMEW20、配列番号9)設計した。TMEFF2の残基230〜320は、TMEFF2の残基261〜301に及ぶEGFドメインを含む。ヒトTMEFF2 ECD発現構築物を、製造業者のプロトコルに従ってExpifectamineを使用して、HEK293由来細胞、Expi293(Gibco/Thermo Fisher Scientific)に一過的にトランスフェクトした。採取前にオービタルシェーカーで、8%のCO2を用いて37℃で5日間細胞をインキュベートした。発現した細胞を遠心分離により除去し、hisタグを有する可溶性TMEFF2タンパク質を、Ni Sepharose 6 Fast Flow樹脂(GE Healthcare)を使用する固定化金属親和性クロマトグラフィー、続いてDubelccoのリン酸塩緩衝液pH7.2(1xDPBS)中でのSuperdex200分取サイズ排除クロマトグラフィー(size exclusion chromatography、SEC)(GE Healthcare)を使用して、培地から精製した。生成した抗原のアミノ酸配列を、表3に示す。
ヒト免疫グロブリン遺伝子座を発現するトランスジェニックラット(OmniRat(登録商用))を使用する、抗体の生成OmniRat(登録商標)は、完全なヒトIgL座(Jκ−Cκに連結された12個のVκ及びJλ−Cλに連結された16個のVλ)を一緒に有する、キメラヒト/ラットIgH遺伝子座(ラットCH遺伝子座に連結した、天然形態の22個のヒトVH、全てのヒトD及びJHセグメントを含む)を含む。(例えば、Osborn,et al.(2013)J Immunol 190(4):1481−1490を参照されたい)。したがって、ラットは、ラット免疫グロブリンの低減した発現を呈し、導入されたヒト重鎖及び軽鎖の導入遺伝子は、免疫化に応答して、クラススイッチ及び体細胞変異を受けて、完全長ヒト可変領域を有する高親和性キメラヒト/ラットIgGモノクローナル抗体を生成した。OmniRat(登録商標)の調製及び使用、並びにそのようなラットによって担持されるゲノム修飾は、WO14/093908に記載されている。
標準的な方法を使用して、Shi et al.,J Mol Biol 397:385−96,2010、及びWO2009/085462)に記載の2セットの新たなpIXファージディスプレイライブラリから、TMEFF2に結合するFabを選択した。簡潔に言えば、V3.0及びV5.0と呼ばれる2セットのライブラリは、ヒトスカフォールドを多様化させることによって生成されたものであり、生殖系列VH遺伝子IGHV1−69*01、IGHV3−23*01及びIGHV5−51*01を、H3ループを介してヒトIGHJ−4ミニ遺伝子で組み換え(V5.0ではIGHJ−6ミニ遺伝子も使用した)、そして、ヒト生殖系列VLカッパ遺伝子O12(IGKV1−39*01)、L6(IGKV3−11*01)、A27(IGKV3−20*01)及びB3(IGKV4−1*01)をIGKJ−1ミニ遺伝子で組み換えて、完全なVH及びVLドメインを構築した。多様化のために、タンパク質及びペプチド抗原と頻繁に接触する、H1、H2、L1、L2、及びL3ループ周辺の重鎖及び軽鎖可変領域における位置を選択した。選択した位置における配列多様性は、それぞれのIGHV又はIGLV遺伝子のIGHV又はIGLV生殖系列遺伝子ファミリーにおいてそれぞれの位置に存在する残基に制限した。H3ループにおける多様性は、V3.0ライブラリについては7〜14アミノ酸長、V5.0ライブラリについては6〜19アミノ酸長の短鎖〜中鎖の合成ループを使用して生成した。H3におけるアミノ酸分布は、ヒト抗体において観察されるアミノ酸の変動を模倣するよう設計された。ライブラリを生成するために利用したスカフォールドは、そのヒトVH及びVL生殖系列遺伝子の由来に従って命名した。V3.0及びV5.0のセットの両方では、3つの重鎖ライブラリの各々を、4つの生殖系列軽鎖又は生殖系列軽鎖ライブラリと組み合わせて、選択実験に使用されるライブラリの各セットとして、12とおりの固有のVH:VLの組み合わせを生成した。
ファージのハイブリドーマ細胞溶解物からの全RNAを、製造業者のプロトコルに従ってRNeasy 96キット(Qiagen)を使用して精製した。得られたRNAを、Drop Senseを使用して定量化し、−80℃で保存したか、又はRT−PCRによるInvitrogen SuperScript III First−Strand Synthesis System(Invitrogen)を使用してcDNA合成に使用した。第1の鎖cDNA合成は、それぞれ重鎖、カッパ鎖、及びラムダ鎖の定常領域にアニーリングされた遺伝子特異的プライマーを使用して実行した。最大3μgの精製したRNA、遺伝子特異性プライマー、dNTPミックス、反応緩衝液、25mMのMgCl2、DTT、RNaseOUT(商標)(40U/μl、Invitrogen)、及びSuperScript(商標)III RT(200U/μl、Invitrogenカタログ#18080−051)で構成されるRT−PCR反応混合物を50℃で50分間、及び85℃で5分間インキュベートした。得られた一本鎖cDNAを−20℃で保存するか、又はPCR増幅に直接使用した。Platinum Pfxポリメラーゼ(Invitrogen)を使用してPCR反応を実行した。v領域断片を、最適化したPCR条件を使用して、リーダー配列、並びに重鎖、カッパ及びラムダ鎖の定常領域に順方向及び逆方向のプライマーアニーリングによって増幅させた。得られたPCR断片を配列決定し、回収したv領域のアミノ酸配列をコドン最適化し、S228P、F234A、及びL235A変異を有するIgG4定常領域を担持するpUnder系発現ベクター(IgG4PAAアイソタイプ)にクローニングした。
免疫化キャンペーン又はファージディスプレイから同定した選択抗体をクローニングし、IgG1PAAとして発現させ、小さい2mlスケールを介して精製した。Expi293(商標)細胞(ThermoFisher Scientific)を、Expi293(商標)発現培地中1.25×105〜2.25×105個の生存細胞/mL密度で播種し、37℃、7% CO2の125mL〜2L振盪フラスコ内で培養した。密度が3×106〜5×106個の生存細胞/mLで生存率が98〜99%に対数増殖に達したときに、細胞を継代培養した。
抗TMEFF2抗体は高親和性でTMEFF2に結合する
TMEFF2 ECD(TMEW1:TMEFF2−FL ECD−His−Avitag)及び/又は膜近位領域(TMEW19:spTMEFF2(230−320)G3S−H6)への選択IgG4PAA抗TMEFF2抗体の結合は、タンパク質(TMEB674、TMEB675、TMEB565、及びTMEB570)又はBiacore SPR(TMEB762及びTMEB757)を使用して評価した。選択された抗体の結合の動態パラメータを、表4に示す。抗TMEFF2抗体は、ピコモル親和性でTMEFF2 ECD及びTMEFF2膜近位領域の両方に結合することが見出された。
抗TMEFF2 mAbのECD及びヒトTMEFF2の膜近位領域への結合は、ProteOn SPR(Bio−Rad)によって測定した。(PBST中1μg/mLの最終濃度まで希釈した)精製mAbをアッセイのリガンドとして使用し、Fc捕捉を通じてヤギ抗ヒト(GAH)IgG Fcに固定化した。GAH IgG Fcのアミンカップリングのために、EDC(40mM)及びNHS(10mM)の1:1混合物を注入直前に混合して、チップ表面を活性化し、垂直方向に注入した。次いで、酢酸緩衝液(pH5.0)中のGAH−Fc(30μg/ml)抗体を、30μl/分で300秒間表面上に垂直方向に流した。その後、1Mエタノールアミン(pH8.5)を同じ方向に注入することによって、表面の任意の残りの反応性カルボキシル基を失活させた。固定化のために1μg/mlの濃度で抗体を使用した。抗体は、表面上を水平方向に流した。3倍連続希釈した5つの濃度(最高濃度範囲100〜600nM)のヒトTMEFF2 ECD又は膜近位領域を、検体として垂直方向に流して、捕捉された分子に結合させた。また、垂直方向の6番目のチャネルに緩衝液サンプルを注入して、ベースラインシグナルの動向を監視した。全ての濃度での会合及び解離相を、それぞれ100μL/分の流速で3分間及び30(又は15)分間にわたり監視した。次の相互作用サイクルのために、18秒パルスの0.8%リン酸を使用して、結合した抗原を除去するために結合表面を再生した。応答データから2つのセットの参照データ:1)抗原と空のチップ表面との間での非特異的相互作用を補正するためのスポット間シグナル、2)(チップ上にPBSTのみが流された場合)非特異的ベースラインドリフトを補正するための、空のチャネル信号、を減算することによって未処理データを処理した。
ヒトTMEFF2 ECDへの抗TMEFF2 mAbの結合は、Biacore 8K SPRによって測定した。アッセイのフォーマットは、高密度抗ヒトFc表面を使用してmAbを捕捉し、次いで単一サイクル動態方法を使用してヒトTMEFF2濃度滴定を注入するためのものである。ヤギ抗ヒトFc IgG(Jackson Immunoresearch、カタログ#109−005−098)を、10mM酢酸緩衝液中30μg/mLのアミンカップリング、フローセル1及び2上、CM5センサ−チップ(GE)上pH4.5、HBSP(GE)緩衝液中30μL/分の流量を介して直接固定化した。フローセル2上0.5μg/mL(約200〜300RU)で、mAbを抗ヒトFc IgG表面上に捕捉した。次いで、泳動用緩衝液をHBSP+100μg/ml BSAに変更した。単一サイクル動態方法を使用して、3倍連続希釈した30nM濃度のTMEFF2 ECDを、低濃度から高濃度で注入した。最後又は最高濃度の注入30分後にオフレートを監視し、次いで0.8%リン酸(Bio−Rad)を使用して表面を再生した。緩衝液ブランク試験、同じmAbの捕捉、及び同じサンプル実験条件の使用も完了した。未処理データは、応答データから2セットの参照データ:1)サンプルフローセル2から減算した参照フローセル1、及び2)実験的試験からの緩衝液ブランク試験、を減算することによって処理した。各mAbの全濃度での処理したデータを1:1の単純なラングミュア結合モデルに全体的に適合させて、およその動態性(kon、koff)及び親和性(KD)定数を抽出した。
DSC(示差走査熱量測定)による、アンフォールディング開始Tm=52℃、及び第1の熱転移(Tm1)=60.4℃によって、TMEB675は、通常の熱安定性プロファイルよりも低いことを示した。TMEB675の配列のより詳しい検査(実施例4を参照されたい)は、重鎖及び軽鎖のフレームワーク領域内の体細胞超変異(Somatic HyperMutation、SHM)の存在を示した。いくつかの再操作された変異体をサブクローニングし、発現させ、精製し、DSCによりプロファイルした。得られたmAb TMEB762及びTMEFB757は、望ましい熱安定性プロファイル(それぞれ、Tm1=69.4℃、及びTm1=69.7℃)を示した。TMEB675と比較して、TMEB762は、重鎖にR14P、P20L、及びH81Qのアミノ酸修飾を有し、一方TMEFB757は、重鎖にR14P及びP20Lのアミノ酸修飾を有した。TMEB675と比較して、TMEB762は、軽鎖にA1D及びA91Pのアミノ酸修飾を有し、一方TMEFB757は、軽鎖にA91Pの修飾を有した。残基の付番は、Kabatに従う。TMEB675、TMEB762のTMEFF2 ECDへの結合の動態パラメータを、表4に示す。
標準的な技術を使用して、抗体のcDNA配列及びアミノ酸翻訳物を得た。ポリペプチド配列の決定後、発現をスケールアップするための標準的な方法を使用して、可変領域又は完全長抗体をコードするいくつかの抗体cDNAを、コドン最適化した。
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H/D交換を使用して、TMEB570及びTMEB675のエピトープマッピングを行った。TMEW1(配列番号6)を、これらのアッセイでのTMEFF2の供給源として使用した。
抗CD3抗体CD3B219は、US9850310に記載されている。
方法:使用まで、ヒトpan T細胞を窒素タンク内に低温保存した。T細胞を解凍し、PBSで洗浄し、FACS染色緩衝液に再懸濁し、計数し(生存率に留意して)、0.5×106個の細胞/mLで再懸濁した。Far Red Live/Dead染色(Life Technologies,AKA Invitrogen#L34974)(バイアル中50μLのDMSOを)を1×106個の細胞当たり1μLで添加し、FcRブロッカー(Miltenyi Biotec#130−059−901)(0.5×106個の細胞当たり1:20希釈の1mL)を各々細胞に10分間添加した。細胞を50,000個の細胞/ウェルで播種し、洗浄した。AlexaFluor488 SP−34抗CD3の濃度を増加させて、4℃で2時間、T細胞に添加した。細胞を洗浄して非結合抗体を除去し、15分間固定し、洗浄し、1mMのEDTAを含むFACS染色緩衝液中に再懸濁した。
CD3B376及びCD3B450を使用して競合結合研究を実施した。ヒトパンT細胞を使用して、mAbの結合親和性を決定した。使用したトレーサーは、市販のAlexaFluor488 SP−34抗CD3(BioScience#557705)であり、このトレーサーの飽和結合定数は上記されている。
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選択単一特異性抗TMEFF2及び抗CD3抗体をIgG4/κとして表した。抗TMEFF2抗体が野生型IgG4を有したままで、抗CD3抗体にF405L及びR409K置換(EU付番)を行った。位置405及び409置換に加えて、S228P、F234A、及びL235A置換を有するように、IgG4 mAbを操作した。
分析用超遠心分離(Analytical Ultra Centrifugation、AUC)による純度分析
分析用超遠心分離(AUC)は、溶液中の巨大分子のサイズ、形状、凝集状態、及び可逆的相互作用の決定を可能にする。沈降速度(Sedimentation velocity、SV)は、遠心分離スピンの際に、濃度勾配をサンプルホルダー(セル)の外半径に移動させる、AUC技術である。これにより、分子のサイズ及び形状の因子である沈降係数の決定が可能になり、これは各分子に固有である。この目的に、Beckman Optima AUC装置を使用した。サンプルを、1.2cmのBeckmanセンターピース(定格50K rpm)及び石英窓を装備した遠心セルに充填した。細胞をアセンブルし、130lbsにトルクをかける。遠心セルを、An−50(8穴)又はAn−60(4穴)ローターに置き、AUCチャンバ内に置いた。運転を開始する前に、AUCの温度を、チャンバ内のローターで少なくとも1時間、20.5°に平衡化した。スキャンカウント(250スキャン)、スキャン収集の頻度(90秒)、データ解像度(10μM)、280nmの波長、40K rpmで、mAbサンプルについて実験を実施した。データは、直接境界適合ソフトウェアSEDANALを使用して分析した。二重特異性抗体TMCB150及びその親mAbの純度を測定した。TMCB150は、97.1%モノマー、2.8%二量体モノマーを示し、更なる生物物理的特性評価のために一過性に発現させた研究材料が許容可能な基準を満たすAUCによって決定される、凝集を示さなかった。TMEB762は、95.5%モノマー、4.5%二量体を示し、凝集は示さなかったが、CD3B376は、凝集を示さずに97.7%モノマー及び2.2%二量体を示した。最小2工程精製分子の>5%の凝集体濃度は、生物活性、溶解性、安定性、及び貯蔵寿命に著しい影響を及ぼし得る。
TMCB150熱的アンフォールディングは、DSC(示差走査熱量測定)によって決定し、これは、アンフォールディング開始Tm=52.6℃、61.8℃での第1の熱転移(Tm1)、67.6℃での第2の熱転移(Tm2)、及び75.5℃での第3の熱転移(Tm3)を示した。前述のDSCによって評価した親抗体(抗TMEFF2、TMEB762、及び抗CD3、CD3B376)熱転移プロファイルに基づいて、TMCB150のTm1は、CD3B376 FABのアンフォールディングに対応し、TMCB150のTm3は、TMEB762 Fabのアンフォールディング転移に対応する。
血清安定性アッセイは、ヒト血清成分に対する非特異的又はオフ標的結合のためのリード候補の特性を評価するために開発されている。これにより、不十分な薬物動態及び生物分布特性を予測することができる。TMCB150の結合及び安定性は、蛍光系クロマトグラフィー法を使用して、緩衝液及びヒト血清の両方で評価する。二重特異性抗体は、Alexa Fluor 488コンジュゲート(製造業者の指示に従ったInvitrogenキット)で標識し、Hepes緩衝液及びヒト血清(Sigma、カタログ番号H4522)中4℃及び37℃で2日間インキュベートし、次いで蛍光検出器を備えたAgilent HPLCシステムを使用するSEC−HPLCにより分析した。凝集率は、各ピークの曲線下面積の積分から計算する。TMCB150は、時間0でHepes緩衝液中2.4%の凝集を示し、それぞれ摂氏4°及び37°で2日後に2.0%及び1.3%の凝集を示した。ヒト血清において、TMCB150は、摂氏4°及び37°の両方で、時間0で1,7%の凝集及び2日後に1.1%の凝集を示した。
無関係な表面へのリード分子の非特異的結合は、バイオセンサー技術(Biacore 8K)によって決定する。抗体を、無関係なタンパク質でコーティングしたSPR表面上に通過させる。抗体が、これらの無関係な表面への著しい結合を示す場合、不十分なインビボ特性を有し、製造上問題を呈すると予測される。最終濃度1μMでリード分子を試験する。無関係な表面としては、負に帯電したタンパク質(Soy Trypsin Inhibitor)、正に帯電したタンパク質(リゾチーム及びβ−ディフェンシン)、疎水性(Rh−integrin a4b7)、ヒトIgG粘着性タンパク質(Rh−CD19)が挙げられる。この実験では、適切な対照を使用する。一方はブランクであり、他方は直接固定化された分子を有する2つの表面上に、リードを流す。応答単位(response unit、RU)レベルは、試験表面RUからブランクRUを減算することによって決定する。TMCB150のRU及び親mAbを、以下の表に示す。製造中に問題を生じ、かつ不十分なPK特性を意味する応答単位≧100では、帯電/疎水性/IgG表面への非特異的結合の高いリスクが予測される。抗体のうちのいずれも、無関係な表面への非特異的結合を示さない場合、製造及びインビボ挙動でのリスクが、低いか全くないことが予測される。
注入量を低減して皮下投与を容易にするために、多くのモノクローナル抗体は、高濃度(≧100mg/ml)で配合される。加えて、全てのモノクローナル抗体は、精製プロセス中に一過的に高濃度(≧50mg/ml)に曝露される。したがって、高濃度安定性は、これらの分子の重要な品質属性である。30kDa MWCO膜を備える遠心限外濾過デバイスを使用して濃縮を実施する。5.1〜5.3mgの各タンパク質を最初に同じ開始濃度に希釈し、15分間隔に4000xgで遠心分離した。各15分の遠心分離工程の終了時に、濃縮器を遠心分離器から取り出し、残りのサンプル体積の視覚的推定値を記録する。濃度は、SoloVPE装置によって測定する。濃縮したサンプルを4C及び40Cで2週間インキュベートし、一定時間間隔でアリコートを引いて、分析SECによって一体性を確認した。TMCB150及び親mAb(CD3B376及びTMEB762)を通常どおり濃縮した。TMCB150の最終濃度は99.4mg/mLであり、親mAbの濃度は52.2mg/mL(TMEB762)及び52.6mg/mL(CD3B376)であった。濃度は4C及び40Cで2週間同じままであり、これは、分子が、凝集又はエッペンドルフチューブへの吸着の可能性がない、良好な固有特性を有することを示唆している。SECピーク積分から測定した種%(A:凝集、M:モノマー、F:断片)を以下の表に提供する。高濃度では、分子は、40Cで2週間保存した後、4〜5%の凝集及び≦0.3%の断片で無傷であり、良好な貯蔵寿命が予測される。
KinExA3200装置(Sapidyne Instruments,Inc.)を使用して、二重特異性mAb TMCB150及びその2価TMEFF2親TMEB762mAbの、ヒトTMEFF2細胞外ドメイン(ECD)への溶液平衡親和性KDを測定した。ヒトTMEFF2細胞外ドメイン(ECD)の連続希釈を、10mMのHEPES、150mMのNaCL、0.05%界面活性剤P20、pH7.4、0.1%のBSA、及び0.02%のNaN3中で一定濃度の抗TMEFF2mAbを用いて調製した。結合相互作用が平衡に達するまで、反応混合物を室温でインキュベートした。インキュベーションの継続時間は、KinExAソフトウェアシミュレーションを使用して決定された。ビス−アクリルアミド/アズラクトンコポリマー(Pierce Biotechnology,Inc.)で構成される活性化前ビーズ上でのアミン結合による、TMEFF2−ECDの直接的共有結合固定によってビーズを調製した。インキュベーション後、サンプルをKinExA装置にかけて、TMEFF2修飾ビーズに混合物を通過させ、蛍光標識された二次抗体を使用して捕捉抗体を検出することによって、混合物中の遊離抗体を評価した。データは、KinExA Proソフトウェアを使用して、1:1結合モデルと適合させた。
Biacore 8K(GE Healthcare)及び抗ヒトFcバイオセンサー表面を使用して実施したSPRによって、動態速度定数を測定した。抗ヒト免疫グロブリン抗体は、CM4センサーチップ(GE Healthcare)の表面に共有結合させた。対象の抗体を抗ヒト免疫グロブリンセンサーチップ上に捕捉し、続いて0.05%界面活性剤P20(Tween(商標)20)及び100ug/mLのBSAを含むHEPES緩衝生理食塩水中様々な濃度でN末端CD3εペプチドを注入した。表面を、100μL/分で30μLの0.8%リン酸の2パルス注入で再生した。データは、捕捉抗体を含む流動細胞と、捕捉抗体を含まない参照細胞との間のSPRシグナルの差異を報告した。基準−除算シグナル(reference-subtracted signal)からブランク注入のデータを除算することによって、シグナルに対する追加的な装置の寄与を除去した。Biaevaluationソフトウェア(Biacore,Inc.)を使用して、1:1結合モデルにおける全ての濃度(グローバルフィット)での会合及び解離段階を適合することにより、データを分析した。データは、反復数の95% CI*標準偏差/平方根のt値によって計算される平均+95% CI(信頼区間)として報告する。
In vitroにおける前立腺癌細胞のT細胞媒介性殺傷。
活性カスパーゼ3/7による蛍光基質の切断を介した細胞殺傷を間接的に測定するカスパーゼ細胞障害アッセイを使用して、TMEFF2xCD3二重特異性抗体のT細胞媒介性殺傷を測定した。基質の開裂により、蛍光DNA染色が生じ、蛍光は細胞核に制限される。同じ座標でウェル(複数可)を正確に撮像することができる電動式10X対物レンズを使用して、アッセイの過程を通して、各ウェルで複数回蛍光測定を行う。標的細胞集団は、定義されたサイズ制限に基づいて、及び/又は二次標識の使用を通じて同定する。
選択二重特異性抗体を、雄NSGマウスにおけるエクスビボLnCaP前立腺癌モデルで試験した。研究のために、50% Cultrex中106個のLnCaP細胞を0.2mL/動物で、0日目に右脇腹に皮下注射により投与した。腫瘍がおよそ約100〜150mm3の体積に達したときに動物を無作為化し、15日目に206個のT細胞/マウスを腹腔内に注入した。各群に10匹の動物を使用した。抗体を用いる処置は、T細胞注入の1〜3日後に開始した。抗体を週に2回腹腔内投与した。投与前に、全ての動物は、IVIG+Fc遮断を受けた。腫瘍が約1200mm3に達するまで、腫瘍体積及び体重を週2回評価した。治療群を表24に示す。これらのアッセイにおいてCD3B219 CD3結合アーム及びnullアーム結合HIV gp120を有する陰性対照として、CD3xNull抗体を使用した。
LnCaP前立腺癌細胞におけるT細胞活性化を、フローサイトメトリーによって、具体的には、TMCB132治療の72時間後に6つの別個の正常な健康ドナー(9642、9672、9762、9772、9832、9852)におけるCD3+/CD8+T細胞のCD25陽性を評価することによって測定した(図7)。3:1のエフェクター標的比で添加したCD3+pan−T細胞の活性化は、LnCaP前立腺癌細胞におけるTMCB132の投与に応答して観察された。
T細胞媒介性細胞障害アッセイを使用して、Incucyteプラットフォーム上でライブタイムラスプイメージングを使用して、インビトロでのTMCB132の細胞障害性の可能性を評価した。健康なドナーから単離したpanヒトCD3+T細胞の存在下で、TMEFF2陽性細胞株LnCaPでのTMCB132を3:1の(エフェクター:標的)エフェクター:標的比(E:T比)で試験した。96時間の期間にわたって活性カスパーゼ3/7の蛍光シグナルを測定することによって、アポトーシスによる細胞死を監視した。TMCB132は、時間の増加とともに、生存LnCaP細胞の用量依存的な低減を促進した。カスパーゼ3/7活性又は蛍光シグナルの用量依存的増加は、T細胞の存在下でLnCaP細胞における細胞死を示した(図8)。データは、TMCB132が、LnCaP腫瘍細胞においてT細胞媒介性死を誘導するのに有効であることを示唆している。
TMCB132の抗腫瘍有効性を、20e6T細胞でヒト化した雄Cg−Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ(NSG,The Jackson Laboratory(Bar Harbor,ME))マウスで確立された皮下(subcutaneous、SC)ヒト前立腺LNCaP異種移植片において評価した。NSG雄。腫瘍移植13日後に平均腫瘍体積によって、動物を、各10匹の動物群に無作為化した。0.5、0.1、及び0.05mg/kgのTMCB132、又は0.5mg/kgのnullxCD3B219抗体対照を、4週間の間週2回IP投与した。腫瘍移植45日後に群当たり少なくとも7匹の動物が残存した場合、腫瘍体積によって決定された腫瘍成長阻害(TGI%)を計算した。統計的に著しい腫瘍成長阻害は、nullxCD3対照と比較して、0.5及び0.1mg/kg、並びに0.05mg/kgのTMCB132で観察された(図9、p≦0.0001)。nullxCD3処置対照と比較して、0.5、0.1、及び0.05mg/kgでのTMCB132では、それぞれ102%、109%、及び47%の腫瘍成長阻害が誘導された。TMCB132治療は、それぞれ0.5、0.1、及び0.05mg/kgで3、2、及び1匹に完全応答を生じた。
Claims (79)
- TMEFF2の配列番号110の膜近位領域に結合する、単離された抗TMEFF2抗体又はその抗原結合断片。
- 前記抗体又は前記その抗原結合断片が、TMEFF2の前記膜近位領域への結合に関して、
a)配列番号25の重鎖可変領域(VH)及び配列番号28の軽鎖可変領域(VL)、又は
b)配列番号26のVH及び配列番号29のVL、
c)配列番号27のVH及び配列番号30のVL、
d)配列番号26のVH及び配列番号31のVL、
e)配列番号87のVH及び配列番号88のVL、又は
f)配列番号89のVH及び配列番号90のVL、
を含む参照抗体と競合する、請求項1に記載の単離された抗TMEFF2抗体又はその抗原結合断片。 - 前記抗体又は前記その抗原結合断片が、残基HGKCEHSINMQEPSC(配列番号57)又はDAGYTGQHCEKKDYSVL(配列番号58)内でTMEFF2の前記膜近位領域に結合する、請求項1又は2に記載の単離された抗TMEFF2抗体又はその抗原結合断片。
- a)それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び22、
b)それぞれ配列番号11、13、16、19、21、及び23、
c)それぞれ配列番号10、14、17、18、20、及び24、
d)それぞれ配列番号11、13、16、18、20、及び22、又は
e)それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び86、
の重鎖相補性決定領域1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、軽鎖相補性決定領域1(LCDR1)、LCDR2、及びLCDR3を含む、請求項1〜3のいずれか一項に記載の単離された抗TMEFF2抗体又はその抗原結合断片。 - 前記抗体又は前記その抗原結合断片が、約0.4×10−9M以下の平衡解離定数(KD)でTMEFF2の前記膜近位領域に結合し、前記KDが、室温でpH4.5〜5.0の酢酸緩衝液中の表面プラズモン共鳴を使用して測定される、請求項1〜4のいずれか一項に記載の単離された抗TMEFF2抗体又はその抗原結合断片。
- 前記抗体又は前記その抗原結合断片が、約0.1×10−10M〜約0.4×10−9Mの前記KDでTMEFF2の前記膜近位領域に結合する、請求項5に記載の単離された抗TMEFF2抗体又はその抗原結合断片。
- VH3_3−23(配列番号53)又はVH1_1−69(配列番号54)に由来する重鎖可変領域(VH)フレームワークを含む、請求項1〜6のいずれか一項に記載の単離された抗TMEFF2抗体又はその抗原結合断片。
- VKI_L11(配列番号55)又はVKIIII_A27(配列番号56)に由来する軽鎖可変領域(VL)フレームワークを含む、請求項7に記載の単離された抗TMEFF2抗体又はその抗原結合断片。
- a)それぞれ配列番号53のVH3_3−23及び配列番号55のVKI_L11、
b)それぞれ配列番号54のVH1_1−69及び配列番号56のVKIII_A27、又は
c)それぞれ配列番号54のVH1_1−69及び配列番号55のVKI_L11
に由来するVHフレームワーク及びVLフレームワークを含む、請求項8に記載の単離された抗TMEFF2抗体又はその抗原結合断片。 - a)配列番号25のVH及び配列番号28のVL、
b)配列番号26のVH及び配列番号29のVL、
c)配列番号27のVH及び配列番号30のVL、
d)配列番号26のVH及び配列番号31のVL、
e)配列番号87のVH及び配列番号88のVL、又は
f)配列番号89のVH及び配列番号90のVL、
を含む、請求項1〜9のいずれか一項に記載の単離された抗TMEFF2抗体又はその抗原結合断片。 - 前記抗体が、IgG1、IgG2、IgG3、又はIgG4アイソタイプである、請求項1〜10のいずれか一項に記載の単離された抗TMEFF2抗体又はその抗原結合断片。
- a)配列番号32の重鎖(HC)及び配列番号35の軽鎖(LC)、
b)配列番号33のHC及び配列番号36のLC、
c)配列番号34のHC及び配列番号37のLC、
d)配列番号33のHC及び配列番号38のLC、
e)配列番号91のHC及び配列番号92のLC、又は
f)配列番号93のHC及び配列番号94のLC、
を含む、請求項11に記載の単離された抗TMEFF2抗体又はその抗原結合断片。 - a)それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び22のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3、
b)配列番号25のVH及び配列番号28のVL、並びに/又は
c)配列番号32のHC及び配列番号35のLC、
を含む、単離された抗TMEFF2抗体又はその抗原結合断片。 - a)それぞれ配列番号11、13、16、19、21、及び23のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3、
b)配列番号26のVH及び配列番号29のVL、並びに/又は
c)配列番号33のHC及び配列番号36のLC、
を含む、単離された抗TMEFF2抗体又はその抗原結合断片。 - a)それぞれ配列番号10、14、17、18、20、及び24のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3、
b)配列番号27のVH及び配列番号30のVL、並びに/又は
c)配列番号34のHC及び配列番号37のLC、
を含む、単離された抗TMEFF2抗体又はその抗原結合断片。 - a)それぞれ配列番号11、13、16、18、20、及び22のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3、
b)配列番号26のVH及び配列番号31のVL、並びに/又は
c)配列番号33のHC及び配列番号38のLC、
を含む、単離された抗TMEFF2抗体又はその抗原結合断片。 - a)それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び86のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3、
b)配列番号87のVH及び配列番号88のVL、並びに/又は
c)配列番号91のHC及び配列番号92のLC、
を含む、単離された抗TMEFF2抗体又はその抗原結合断片。 - a)それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び86のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3、
b)配列番号89のVH及び配列番号90のVL、並びに/又は
c)配列番号93のHC及び配列番号94のLC、
を含む、単離された抗TMEFF2抗体又はその抗原結合断片。 - 前記抗体が、多重特異性抗体である、請求項1〜18のいずれか一項に記載の単離された抗TMEFF2抗体。
- 前記抗体が、二重特異性抗体である、請求項1〜19のいずれか一項に記載の単離された抗TMEFF2抗体。
- 前記抗体が、CD3、所望によりCD3イプシロンに結合する、請求項19又は20に記載の単離された抗TMEFF2抗体。
- 請求項1〜21のいずれか一項に記載の抗TMEFF2抗体又はその抗原結合断片と、医薬的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。
- 1つ又は2つ以上の異種分子にコンジュゲートした、請求項1〜20のいずれか一項に記載の単離された抗TMEFF2抗体又はその抗原結合断片。
- a)請求項13〜18のいずれか一項に記載の抗TMEFF2抗体又はその抗原結合断片をコードし、
b)配列番号25、26、27、87、若しくは89の前記抗TMEFF2抗体VH、及び/又は配列番号28、29、30、31、88、若しくは90のVLをコードし、
c)配列番号39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、95、96、97、98、99、100、101、又は102のポリヌクレオチド配列を含む、
単離されたポリヌクレオチド。 - 請求項24に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
- 請求項25に記載のベクターを含む、宿主細胞。
- 請求項13〜18のいずれか一項に記載の抗TMEFF2抗体又はその抗原結合断片を産生する方法であって、前記抗体が発現する条件下で請求項26に記載の宿主細胞を培養することと、前記宿主細胞によって産生された前記抗体を回収することとを含む、方法。
- TMEFF2陽性癌の治療を必要とする対象においてTMEFF2陽性癌を治療する方法であって、治療に有効な量の請求項1〜21のいずれか一項に記載の単離された抗TMEFF2抗体若しくはその抗原結合断片、又は請求項22に記載の医薬組成物を、前記対象に投与して、前記TMEFF2陽性癌を治療することを含む、方法。
- 前記TMEFF2陽性癌が、前立腺癌である、請求項28に記載の方法。
- 前記前立腺癌が、再発性、難治性、悪性、若しくは去勢抵抗性前立腺癌、又はそれらの任意の組み合わせである、請求項29に記載の方法。
- 前記抗TMEFF2抗体又はその抗原結合断片が、第2の治療剤と組み合わせて投与される、請求項28〜30のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第2の治療剤が、手術、化学療法、アンドロゲン遮断療法、若しくは放射線、又はそれらの任意の組み合わせである、請求項31に記載の方法。
- 請求項13〜18のいずれか一項に記載の抗体に結合する、抗イディオタイプ抗体。
- 請求項13〜18のいずれか一項に記載の抗体を含む、キット。
- TMEFF2に結合する第1のドメインと、CD3に結合する第2のドメインと、を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片。
- 前記抗体が、TMEFF2の配列番号110の前記膜近位領域に結合する、請求項35に記載の単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片。
- 前記抗体が、TMEFF2の前記膜近位領域への結合に関して、
a)配列番号25の重鎖可変領域(VH)及び配列番号28の軽鎖可変領域(VL)、又は
b)配列番号26のVH及び配列番号29のVL、
c)配列番号27のVH及び配列番号30のVL、
d)配列番号26のVH及び配列番号31のVL、
e)配列番号87のVH及び配列番号88のVL、又は
f)配列番号89のVH及び配列番号90のVL、
を含む、参照抗体と競合する、請求項35又は36に記載の単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片。 - 前記抗体が、残基HGKCEHSINMQEPSC(配列番号57)又はDAGYTGQHCEKKDYSVL(配列番号58)内でTMEFF2の前記膜近位領域に結合する、請求項35〜37のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片。
- 前記抗体が、約0.4×10−9M以下の解離定数(KD)でTMEFF2の前記膜近位領域に結合し、前記KDが、室温でpH4.5〜5.0の酢酸緩衝液中の表面プラズモン共鳴を使用して測定される、請求項35〜38のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片。
- 前記抗体が、約0.1×10−10M〜約0.4×10−9Mの前記KDでヒトTMEFF2の前記膜近位領域に結合する、請求項39に記載の単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片。
- 前記第1のドメインが、
a)それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び22、
b)それぞれ配列番号11、13、16、19、21、及び23、
c)それぞれ配列番号10、14、17、18、20、及び24、
d)それぞれ配列番号11、13、16、18、20、及び22、又は
e)それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び86、
のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含む、請求項35〜40のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片。 - 前記第2のドメインが、
a)それぞれ配列番号60、61、62、63、64、及び65、又は
b)それぞれ配列番号68、69、70、71、72、及び73、
のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含む、請求項41に記載の単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片。 - 前記第1のドメインが、
a)配列番号25のVH及び配列番号28のVL、
b)配列番号26のVH及び配列番号29のVL、
c)配列番号27のVH及び配列番号30のVL、
d)配列番号26のVH及び配列番号31のVL、
e)配列番号87のVH及び配列番号88のVL、又は
f)配列番号89のVH及び配列番号90のVL、
を含む、請求項35〜42のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片。 - 前記第2のドメインが、
a)配列番号66のVH及び配列番号67のVL、又は
b)配列番号74のVH及び配列番号75のVL、
を含む、請求項35〜43のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片。 - TMEFF2に結合する第1のドメインと、CD3に結合する第2のドメインと、を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片であって、
a)前記第1のドメインが、それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び22のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、前記第2のドメインが、それぞれ配列番号60、61、62、63、64、及び65のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
b)前記第1のドメインが、配列番号25のVH及び配列番号28のVLを含み、前記第2のドメインが、配列番号66のVH及び配列番号67のVLを含み、かつ/又は
c)前記二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくは前記その抗原結合断片が、配列番号32の第1の重鎖(HC1)、配列番号35の第1の軽鎖(LC1)、配列番号76の第2の重鎖(HC2)、及び配列番号77の第2の軽鎖(LC2)を含む、
単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片。 - TMEFF2に結合する第1のドメインと、CD3に結合する第2のドメインと、を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片であって、
a)前記第1のドメインが、それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び22のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、前記第2のドメインが、それぞれ配列番号68、69、70、71、72、及び73のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
b)前記第1のドメインが、配列番号25のVH及び配列番号28のVLを含み、前記第2のドメインが、配列番号74のVH及び配列番号75のVLを含み、かつ/又は
c)前記二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくは前記その抗原結合断片が、配列番号32のHC1、配列番号35のLC1、配列番号78のHC2、及び配列番号79のLC2を含む、
単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片。 - TMEFF2に結合する第1のドメインと、CD3に結合する第2のドメインと、を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片であって、
a)前記第1のドメインが、それぞれ配列番号11、13、16、19、21、及び23のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、前記第2のドメインが、それぞれ配列番号60、61、62、63、64、及び65のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
b)前記第1のドメインが、配列番号26のVH及び配列番号29のVLを含み、前記第2のドメインが、配列番号66のVH及び配列番号67のVLを含み、かつ/又は
c)前記二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくは前記その抗原結合断片が、配列番号33のHC1、配列番号36のLC1、配列番号76のHC2、及び配列番号77のLC2を含む、
単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片。 - TMEFF2に結合する第1のドメインと、CD3に結合する第2のドメインと、を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片であって、
a)前記第1のドメインが、それぞれ配列番号11、13、16、19、21、及び23のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、前記第2のドメインが、それぞれ配列番号68、69、70、71、72、及び73のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
b)前記第1のドメインが、配列番号26のVH及び配列番号29のVLを含み、前記第2のドメインが、配列番号74のVH及び配列番号75のVLを含み、かつ/又は
c)前記二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくは前記その抗原結合断片が、配列番号33のHC1、配列番号36のLC1、配列番号78のHC2、及び配列番号79のLC2を含む、
単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片。 - TMEFF2に結合する第1のドメインと、CD3に結合する第2のドメインと、を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片であって、
a)前記第1のドメインが、それぞれ配列番号10、14、17、18、20、及び24のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、前記第2のドメインが、それぞれ配列番号60、61、62、63、64、及び65のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
b)前記第1のドメインが、配列番号27のVH及び配列番号30のVLを含み、前記第2のドメインが、配列番号66のVH及び配列番号67のVLを含み、かつ/又は
c)前記二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくは前記その抗原結合断片が、配列番号34のHC1、配列番号37のLC1、配列番号76のHC2、及び配列番号77のLC2を含む、
単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片。 - TMEFF2に結合する第1のドメインと、CD3に結合する第2のドメインと、を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片であって、
a)前記第1のドメインが、それぞれ配列番号10、14、17、18、20、及び24のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、前記第2のドメインが、それぞれ配列番号68、69、70、71、72、及び73のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
b)前記第1のドメインが、配列番号27のVH及び配列番号30のVLを含み、前記第2のドメインが、配列番号74のVH及び配列番号75のVLを含み、かつ/又は
c)前記二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくは前記その抗原結合断片が、配列番号34のHC1、配列番号37のLC1、配列番号78のHC2、及び配列番号79のLC2を含む、
単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片。 - TMEFF2に結合する第1のドメインと、CD3に結合する第2のドメインと、を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片であって、
a)前記第1のドメインが、それぞれ配列番号11、13、16、18、20、及び22のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、前記第2のドメインが、それぞれ配列番号60、61、62、63、64、及び65のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
b)前記第1のドメインが、配列番号26のVH及び配列番号31のVLを含み、前記第2のドメインが、配列番号66のVH及び配列番号67のVLを含み、かつ/又は
c)前記二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくは前記その抗原結合断片が、配列番号33のHC1、配列番号38のLC1、配列番号76のHC2、及び配列番号77のLC2を含む、
単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片。 - TMEFF2に結合する第1のドメインと、CD3に結合する第2のドメインと、を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片であって、
a)前記第1のドメインが、それぞれ配列番号11、13、16、18、20、及び22のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、前記第2のドメインが、それぞれ配列番号68、69、70、71、72、及び73のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
b)前記第1のドメインが、配列番号26のVH及び配列番号31のVLを含み、前記第2のドメインが、配列番号74のVH及び配列番号75のVLを含み、かつ/又は
c)前記二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくは前記その抗原結合断片が、配列番号33のHC1、配列番号38のLC1、配列番号78のHC2、及び配列番号79のLC2を含む、
単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片。 - TMEFF2に結合する第1のドメインと、CD3に結合する第2のドメインと、を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片であって、
a)前記第1のドメインが、それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び86のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、前記第2のドメインが、それぞれ配列番号60、61、62、63、64、及び65のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
b)前記第1のドメインが、配列番号87のVH及び配列番号88のVLを含み、前記第2のドメインが、配列番号66のVH及び配列番号67のVLを含み、かつ/又は
c)前記二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくは前記その抗原結合断片が、配列番号91のHC1、配列番号92のLC1、配列番号76のHC2、及び配列番号77のLC2を含む、
単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片。 - TMEFF2に結合する第1のドメインと、CD3に結合する第2のドメインと、を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片であって、
a)前記第1のドメインが、それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び86のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、前記第2のドメインが、それぞれ配列番号68、69、70、71、72、及び73のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
b)前記第1のドメインが、配列番号87のVH及び配列番号88のVLを含み、前記第2のドメインが、配列番号74のVH及び配列番号75のVLを含み、かつ/又は
c)前記二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片が、配列番号91のHC1、配列番号92のLC1、配列番号78のHC2、及び配列番号79のLC2を含む、
単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片。 - TMEFF2に結合する第1のドメインと、CD3に結合する第2のドメインと、を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片であって、
a)前記第1のドメインが、それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び86のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、前記第2のドメインが、それぞれ配列番号60、61、62、63、64、及び65のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
b)前記第1のドメインが、配列番号89のVH及び配列番号90のVLを含み、前記第2のドメインが、配列番号66のVH及び配列番号67のVLを含み、かつ/又は
c)前記二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくは前記その抗原結合断片が、配列番号93のHC1、配列番号94のLC1、配列番号76のHC2、及び配列番号77のLC2を含む、
単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片。 - TMEFF2に結合する第1のドメインと、CD3に結合する第2のドメインと、を含む、単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片であって、
a)前記第1のドメインが、それぞれ配列番号10、12、15、18、20、及び86のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、前記第2のドメインが、それぞれ配列番号68、69、70、71、72、及び73のHCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
b)前記第1のドメインが、配列番号89のVH及び配列番号90のVLを含み、前記第2のドメインが、配列番号74のVH及び配列番号75のVLを含み、かつ/又は
c)前記二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくは前記その抗原結合断片が、配列番号93のHC1、配列番号94のLC1、配列番号78のHC2、及び配列番号79のLC2を含む、
単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片。 - 前記抗体が、IgG1、IgG2、IgG3、又はIgG4アイソタイプである、請求項35〜56のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片。
- 前記抗体が、HC1、HC2、又はHC1及びHC2に、位置234でアラニン、位置235でアラニン、又は位置234でアラニン及び位置235でアラニンを含み、残基の付番が、EUインデックスに従う、請求項35〜57のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片。
- 前記抗体が、HC1及びHC2に、位置228でプロリンを含み、残基の付番が、EUインデックスに従う、請求項35〜58のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片。
- 前記抗体が、HC1に位置405でフェニルアラニン及び位置409でアルギニン、並びにHC2に位置405でロイシン及び位置409でリジンを含む、請求項35〜59のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗TMEFF2xCD3抗体又はその抗原結合断片。
- 請求項35〜60のいずれか一項に記載の二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片と、医薬的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。
- a)請求項45〜56のいずれか一項に記載の二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片をコードするか、又は
b)配列番号39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、80、81、82、83、95、96、97、98、99、100、101、及び102のポリヌクレオチド配列を含む、
ポリヌクレオチド。 - 請求項62に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
- 請求項63に記載のベクターを含む、宿主細胞。
- 二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を産生する方法であって、前記抗体が発現する条件下で請求項64に記載の宿主細胞を培養することと、前記宿主細胞によって産生された前記二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又は前記その抗原結合断片を回収及び精製することと、を含む、方法。
- 請求項45〜56のいずれか一項に記載の二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を産生する方法であって、
a)2つの同一のHC1及び2つの同一のLC1を有する単一特異性二価TMEFF2抗体、並びに2つの同一のHC2及び2つの同一のLC2を有する単一特異性二価CD3抗体を約1:1の混合物のモル比で組み合わせることと、
b)前記混合物に還元剤を導入することと、
c)前記混合物を約90分〜約6時間インキュベートすることと、
d)前記還元剤を除去することと、
e)HC1、LC1、HC2、及びLC2を含む前記二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片を精製することと、
を含む、方法。 - 前記還元剤が、2−メルカプトエタノールアミン(2−MEA)である、請求項66に記載の方法。
- 前記2−MEAが、約25mM〜約75mMの濃度で存在する、請求項67に記載の方法。
- 前記インキュベートする工程が、約25℃〜約37℃の温度で実施される、請求項66〜68のいずれか一項に記載の方法。
- TMEFF2陽性癌の治療を必要とする対象においてTMEFF2陽性癌を治療する方法であって、治療に有効な量の請求項45〜60のいずれか一項に記載の二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体若しくはその抗原結合断片、又は請求項61に記載の医薬組成物を、前記対象に投与して、前記TMEFF2陽性癌を治療することを含む、方法。
- 前記TMEFF2陽性癌が、前立腺癌である、請求項70に記載の方法。
- 前記前立腺癌が、再発性、難治性、悪性、若しくは去勢抵抗性前立腺癌、又はそれらの任意の組み合わせである、請求項71に記載の方法。
- 前記二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片が、第2の治療剤と組み合わせて投与される、請求項70〜72のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第2の治療剤が、手術、化学療法、アンドロゲン遮断療法、若しくは放射線、又はそれらの任意の組み合わせである、請求項73に記載の方法。
- 請求項45〜56のいずれか一項に記載の二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片に結合する、抗イディオタイプ抗体。
- 請求項45〜56のいずれか一項に記載の抗体を含む、キット。
- 療法に使用するための、請求項45〜56のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片。
- TMEFF2陽性癌の治療に使用するための、請求項45〜56のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片。
- TMEFF2陽性癌の治療用薬品の製造のための、請求項45〜60のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗TMEFF2/抗CD3抗体又はその抗原結合断片の使用。
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