JP2021510082A

JP2021510082A - 改変オルトポックスウイルスベクター

Info

Publication number: JP2021510082A
Application number: JP2020557368A
Authority: JP
Inventors: ベル，　ジョン　シー．; ジョンシー．ベル，; ブーフ，ファブリスレ; マイケルエス．ハ，; マシューワイ．タン，; エイドリアンペリン，; ブライアンアンドリューケラー，; キャロラインジェイ．ブレイトバッハ，; スティーヴンエイチ．バーンスタイン，; マイケルエフ．バーゲス，
Original assignee: Turnstone Biologics Corp
Current assignee: Turnstone Biologics Corp
Priority date: 2018-01-05
Filing date: 2019-01-04
Publication date: 2021-04-15
Anticipated expiration: 2039-01-04
Also published as: BR112020013769A2; KR20200121297A; JP2023126868A; CN113039277A; AU2019205036A1; EP3735466A4; EP3735466A1; JP7312412B2; WO2019134048A1; IL275813A; US20200392535A1; US11802292B2; US20240132913A1; CA3122431A1; MX2020007010A; SG11202006457YA

Abstract

本開示は、改変オルトポックスウイルスベクター、並びに多様ながんの処置のために、これを使用する方法に関する。本開示は、腫瘍溶解活性、感染の拡散、免疫回避、腫瘍における存続、外因性ＤＮＡ配列を組み込むための能力及び安全性の増強を含む、多様で有益な治療活性を呈する、改変オルトポックスウイルスベクターを提示する。本発明者らが発見したウイルスはまた、大スケールの製造プロトコールにも適する。【選択図】図８

Description

本発明は、例えば、がんなどの細胞増殖障害を処置するための免疫療法の分野に関する。特に、本発明は、遺伝子改変オルトポックスウイルス、並びにこれを作る方法及びこれを使用する方法に関する。

免疫系は、腫瘍細胞を同定し、それらを、破壊のためにターゲティングするように刺激されうる。腫瘍溶解性オルトポックスウイルスを援用する免疫療法は、がん研究の領域において、急速に進化しつつある。腫瘍溶解性ウイルスについて、効率及び安全性を最大化するために、腫瘍選択性を操作及び／又は増強する、新たな手法が必要とされている。この選択性は、潜在的に毒性の治療剤又は遺伝子が、ウイルスに付加される場合に、とりわけ、重要である。

オルトポックスウイルスの、臨床における腫瘍溶解性ベクターとしての使用は、がん処置のために有望なパラダイムであるが、患者におけるポックス病変及び免疫抑制性の副作用などの毒性に起因して、最新の臨床候補物質の大半は、慎ましい臨床的成功を示したに過ぎない。より頑健な、ウイルスの複製、がん細胞の殺滅、及び感染地点からの拡散を呈する、オルトポックスウイルスを操作する方法が必要とされている。本発明は、改変ワクシニアウイルスを援用することにより、この必要に取組み、選択性及び安全性の限界に対する解決策を提供する。

本開示は、がんを処置するためのオルトポックスウイルスの使用について記載する。特に、本開示は、オルトポックスウイルスが、以下の遺伝子：Ｃ２Ｌ、Ｃ１Ｌ、Ｎ１Ｌ、Ｎ２Ｌ、Ｍ１Ｌ、Ｍ２Ｌ、Ｋ１Ｌ、Ｋ２Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ｋ４Ｌ、Ｋ５Ｌ、Ｋ６Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｆ１Ｌ、Ｆ２Ｌ、Ｆ３Ｌ、Ｂ１４Ｒ、Ｂ１５Ｒ、Ｂ１６Ｒ、Ｂ１７Ｌ、Ｂ１８Ｒ、Ｂ１９Ｒ、Ｂ２０Ｒ、ＫＯＲＦＡ、ＫＯＲＦＢ、ＢＯＲＦＥ、ＢＯＲＦＦ、ＢＯＲＦＧ、Ｂ２１Ｒ、Ｂ２２Ｒ、Ｂ２３Ｒ、Ｂ２４Ｒ、Ｂ２５Ｒ、Ｂ２６Ｒ、Ｂ２７Ｒ、Ｂ２８Ｒ、及びＢ２９Ｒのうちの１つ若しくは複数又は全てにおいて、欠失を含有するように遺伝子改変された場合に認められる、腫瘍溶解活性、感染の拡散、及び安全性の結果の驚くべき増強に部分的に基づく。これらの遺伝子のうちの１つ若しくは複数又は全てにおいて変異を呈する、ワクシニアウイルス（例えば、ウイルス株である、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、ＷＲ（ＷｅｓｔｅｒｎＲｅｓｅｒｖｅ）、Ｗｙｅｔｈ、Ｌｉｓｔｅｒ、ＥＭ６３、ＡＣＡＭ２０００、ＬＣ１６ｍ８、ＣＶ−１、改変ワクシニアＡｎｋａｒａ（ＭＶＡ）、ＤａｉｒｅｎＩ、ＧＬＶ−１ｈ６８、ＩＨＤ−Ｊ、Ｌ−ＩＶＰ、ＬＣ１６ｍ８、ＬＣ１６ｍＯ、Ｔａｓｈｋｅｎｔ、ＴｉａｎＴａｎ、及びＷＡＵ８６／８８−１）などの遺伝子改変オルトポックスウイルスは、腫瘍溶解能、腫瘍における複製、感染性、免疫回避、腫瘍における存続、外因性ＤＮＡ配列を組み込むための能力、及び／又は大スケールの製造への適性の改善など、一連の有益な特徴を呈しうる。本開示は、Ｂ８Ｒ遺伝子において、欠失を含有するように、さらに遺伝子改変されたオルトポックスウイルスについて記載する。下記で開示される、多様な実施形態では、本発明は、Ｂ８Ｒ遺伝子の欠失を含む場合もあり、これを含まない場合もある。多様な実施形態では、改変オルトポックスウイルスは、３つのトランス遺伝子：ＩＬ−１２ＴＭ、ＦＬＴ３−Ｌ、及び抗ＣＬＴＡ−４抗体のうちの少なくとも１つを発現させる。

第１の態様では、本発明は、組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む核酸であって、組換えオルトポックスウイルスゲノムが、各々が、Ｃ２Ｌ、Ｃ１Ｌ、Ｎ１Ｌ、Ｎ２Ｌ、Ｍ１Ｌ、Ｍ２Ｌ、Ｋ１Ｌ、Ｋ２Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ｋ４Ｌ、Ｋ５Ｌ、Ｋ６Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｆ１Ｌ、Ｆ２Ｌ、Ｆ３Ｌ、Ｂ１４Ｒ、Ｂ１５Ｒ、Ｂ１６Ｒ、Ｂ１７Ｌ、Ｂ１８Ｒ、Ｂ１９Ｒ、Ｂ２０Ｒからなる群から独立的に選択される、少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、又は２２の遺伝子の欠失を有する、核酸を特徴とする。一部の実施形態では、欠失は、Ｃ２Ｌ、Ｃ１Ｌ、Ｎ１Ｌ、Ｎ２Ｌ、Ｍ１Ｌ、Ｍ２Ｌ、Ｋ１Ｌ、Ｋ２Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ｋ４Ｌ、Ｋ５Ｌ、Ｋ６Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｆ１Ｌ、Ｆ２Ｌ、Ｆ３Ｌ、Ｂ１４Ｒ、Ｂ１５Ｒ、Ｂ１６Ｒ、Ｂ１７Ｌ、Ｂ１８Ｒ、Ｂ１９Ｒ、Ｂ２０Ｒ遺伝子の各々を含む。本明細書で開示される実施形態のうちのいずれか１つでは、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、Ｂ８Ｒ遺伝子の欠失をさらに含みうる。

別の態様では、本発明は、組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む核酸であって、組換えオルトポックスウイルスゲノムが、Ｂ１４Ｒ、Ｂ１６Ｒ、Ｂ１７Ｌ、Ｂ１８Ｒ、Ｂ１９Ｒ、及びＢ２０Ｒからなる群から独立的に選択される、少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する、核酸を特徴とする。一部の実施形態では、欠失は、Ｂ１４Ｒ、Ｂ１６Ｒ、Ｂ１７Ｌ、Ｂ１８Ｒ、Ｂ１９Ｒ、及びＢ２０Ｒからなる群から独立的に選択される、少なくとも２つ、３つ、４つ、又は５つの遺伝子を含む。一部の実施形態では、欠失は、Ｂ１４Ｒ、Ｂ１６Ｒ、Ｂ１７Ｌ、Ｂ１８Ｒ、Ｂ１９Ｒ、及びＢ２０Ｒの各々を含む。本明細書で開示される実施形態のうちのいずれか１つでは、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、Ｂ８Ｒの欠失をさらに含みうる。

別の態様では、本発明は、組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む核酸であって、組換えオルトポックスウイルスゲノムが、Ｃ２Ｌ、Ｃ１Ｌ、Ｎ１Ｌ、Ｎ２Ｌ、Ｍ１Ｌ、Ｍ２Ｌ、Ｋ１Ｌ、Ｋ２Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ｋ４Ｌ、Ｋ５Ｌ、Ｋ６Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｆ１Ｌ、Ｆ２Ｌ、及びＦ３Ｌからなる群から選択される、少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する、核酸を特徴とする。一部の実施形態では、欠失は、各々が、Ｃ２Ｌ、Ｃ１Ｌ、Ｎ１Ｌ、Ｎ２Ｌ、Ｍ１Ｌ、Ｍ２Ｌ、Ｋ１Ｌ、Ｋ２Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ｋ４Ｌ、Ｋ５Ｌ、Ｋ６Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｆ１Ｌ、Ｆ２Ｌ、及びＦ３Ｌからなる群から独立的に選択される、少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５の遺伝子を含む。一部の実施形態では、欠失は、Ｃ２Ｌ、Ｃ１Ｌ、Ｎ１Ｌ、Ｎ２Ｌ、Ｍ１Ｌ、Ｍ２Ｌ、Ｋ１Ｌ、Ｋ２Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ｋ４Ｌ、Ｋ５Ｌ、Ｋ６Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｆ１Ｌ、Ｆ２Ｌ、及びＦ３Ｌの各々を含む。本明細書で開示される実施形態のうちのいずれか１つでは、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、Ｂ８Ｒの欠失をさらに含みうる。

別の態様では、本発明は、組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む核酸であって、組換えオルトポックスウイルスゲノムが、カスパーゼ９阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する、核酸を特徴とする。

一部の実施形態では、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、カスパーゼ９阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する。一部の実施形態では、カスパーゼ９阻害剤をコードする遺伝子は、Ｆ１Ｌである。

別の態様では、本発明は、組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む核酸であって、組換えオルトポックスウイルスゲノムが、ＢＣＬ−２阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する、核酸を特徴とする。

一部の実施形態では、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、ＢＣＬ−２阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する。一部の実施形態では、ＢＣＬ−２阻害剤をコードする遺伝子は、Ｎ１Ｌである。

別の態様では、本発明は、組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む核酸であって、組換えオルトポックスウイルスゲノムが、ｄＵＴＰアーゼをコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する、核酸を特徴とする。

一部の実施形態では、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、ｄＵＴＰアーゼをコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する。一部の実施形態では、ｄＵＴＰアーゼをコードする遺伝子は、Ｆ２Ｌである。

別の態様では、本発明は、組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む核酸であって、組換えオルトポックスウイルスゲノムが、ＩＦＮアルファ／ベータ受容体様分泌型糖タンパク質をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する、核酸を特徴とする。

一部の実施形態では、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、ＩＦＮアルファ／ベータ受容体様分泌型糖タンパク質をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する。一部の実施形態では、ＩＦＮアルファ／ベータ受容体様分泌型糖タンパク質をコードする遺伝子は、Ｂ１９Ｒである。

別の態様では、本発明は、組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む核酸であって、組換えオルトポックスウイルスゲノムが、ＩＬ−１ベータ阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する、核酸を特徴とする。

一部の実施形態では、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、ＩＬ−１ベータ阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する。一部の実施形態では、ＩＬ−１ベータ阻害剤をコードする遺伝子は、Ｂ１６Ｒである。

別の態様では、本発明は、組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む核酸であって、組換えオルトポックスウイルスゲノムが、ホスホリパーゼＤをコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する、核酸を特徴とする。

一部の実施形態では、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、ホスホリパーゼＤをコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する。一部の実施形態では、ホスホリパーゼＤをコードする遺伝子は、Ｋ４Ｌである。

別の態様では、本発明は、組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む核酸であって、組換えオルトポックスウイルスゲノムが、ＰＫＲ阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する、核酸を特徴とする。

一部の実施形態では、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、ＰＫＲ阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する。一部の実施形態では、ＰＫＲ阻害剤をコードする遺伝子は、Ｋ３Ｌである。

別の態様では、本発明は、組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む核酸であって、組換えオルトポックスウイルスゲノムが、セリンプロテアーゼ阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する、核酸を特徴とする。

一部の実施形態では、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、セリンプロテアーゼ阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する。一部の実施形態では、セリンプロテアーゼ阻害剤をコードする遺伝子は、Ｋ２Ｌである。

別の態様では、本発明は、組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む核酸であって、組換えオルトポックスウイルスゲノムが、ＴＬＲシグナル伝達阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する、核酸を特徴とする。一部の実施形態では、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、ＴＬＲシグナル伝達阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する。一部の実施形態では、ＴＬＲシグナル伝達阻害剤をコードする遺伝子は、Ｎ２Ｌである。

別の態様では、本発明は、組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む核酸であって、組換えオルトポックスウイルスゲノムが、ケルチ様タンパク質をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する、核酸を特徴とする。一部の実施形態では、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、ケルチ様タンパク質をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する。一部の実施形態では、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、各々が、ケルチ様タンパク質の欠失をコードする少なくとも２つの遺伝子を有する。一部の実施形態では、ケルチ様タンパク質をコードする遺伝子は、Ｆ３Ｌ及びＣ２Ｌからなる群から独立的に選択される。

別の態様では、本発明は、組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む核酸であって、組換えオルトポックスウイルスゲノムが、モノグリセリドリパーゼをコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する、核酸を特徴とする。

一部の実施形態では、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、モノグリセリドリパーゼをコードする少なくとも１つ又は２つの遺伝子の欠失を有する。一部の実施形態では、モノグリセリドリパーゼをコードする遺伝子は、Ｋ５Ｌ及びＫ６Ｌからなる群から独立的に選択される。

別の態様では、本発明は、組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む核酸であって、組換えオルトポックスウイルスゲノムが、ＮＦ−κＢ阻害剤をコードする少なくとも１つ、２つ、又は３つの遺伝子の欠失を有する、核酸を特徴とする。一部の実施形態では、ＮＦ−κＢ阻害剤をコードする遺伝子は、Ｋ７Ｒ、Ｋ１Ｌ、及びＭ２Ｌからなる群から独立的に選択される。

別の態様では、本発明は、組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む核酸であって、組換えオルトポックスウイルスゲノムが、アンキリンリピートタンパク質の欠失をコードする少なくとも１つ、２つ、又は３つの遺伝子を有する、核酸を特徴とする。一部の実施形態では、アンキリンリピートタンパク質をコードする遺伝子は、Ｂ１８Ｒ、Ｂ２０Ｒ、及びＭ１Ｌからなる群から独立的に選択される。

別の態様では、本発明は、組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む核酸であって、組換えオルトポックスウイルスゲノムが、各々が、Ｂ１５Ｒ、Ｂ１７Ｒ、及びＢ１４Ｒからなる群から独立的に選択される、少なくとも１つ、２つ、又は３つの遺伝子の欠失を有する、核酸を特徴とする。

別の態様では、本発明は、組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む核酸であって、組換えオルトポックスウイルスゲノムが、ＫＯＲＦＡ、ＫＯＲＦＢ、ＢＯＲＦＥ、ＢＯＲＦＦ、及びＢＯＲＦＧからなる群から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、又は４つの遺伝子の欠失を有する、核酸を特徴とする。本明細書で開示される実施形態のうちのいずれか１つでは、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、Ｂ８Ｒの欠失をさらに含む。

一部の実施形態では、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、Ｂ２１Ｒ、Ｂ２２Ｒ、Ｂ２３Ｒ、Ｂ２４Ｒ、Ｂ２５Ｒ、Ｂ２６Ｒ、Ｂ２７Ｒ、Ｂ２８Ｒ、及びＢ２９ＲからなるＩＴＲ（ｉｎｖｅｒｔｅｄｔｅｒｍｉｎａｌｒｅｐｅａｔ）遺伝子の群から独立的に選択される、少なくとも１つの遺伝子を有する。一部の実施形態では、欠失は、各々が、Ｂ２１Ｒ、Ｂ２２Ｒ、Ｂ２３Ｒ、Ｂ２４Ｒ、Ｂ２５Ｒ、Ｂ２６Ｒ、Ｂ２７Ｒ、Ｂ２８Ｒ、及びＢ２９ＲからなるＩＴＲ遺伝子の群から独立的に選択される、少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、又は８つの遺伝子を含む。一部の実施形態では、欠失は、Ｂ２１Ｒ、Ｂ２２Ｒ、Ｂ２３Ｒ、Ｂ２４Ｒ、Ｂ２５Ｒ、Ｂ２６Ｒ、Ｂ２７Ｒ、Ｂ２８Ｒ、及びＢ２９Ｒの各々を含む。本明細書で開示される実施形態のうちのいずれか１つでは、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、Ｂ８Ｒの欠失をさらに含みうる。

一部の実施形態では、ワクシニアウイルスは、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、ＷＲ（ＷｅｓｔｅｒｎＲｅｓｅｒｖｅ）、Ｗｙｅｔｈ、Ｌｉｓｔｅｒ、ＥＭ６３、ＡＣＡＭ２０００、ＬＣ１６ｍ８、ＣＶ−１、改変ワクシニアＡｎｋａｒａ（ＭＶＡ）、ＤａｉｒｅｎＩ、ＧＬＶ−１ｈ６８、ＩＨＤ−Ｊ、Ｌ−ＩＶＰ、ＬＣ１６ｍ８、ＬＣ１６ｍＯ、Ｔａｓｈｋｅｎｔ、ＴｉａｎＴａｎ、及びＷＡＵ８６／８８−１からなる群から選択される株である。一部の実施形態では、ワクシニアウイルスは、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、ＷＲ（ＷｅｓｔｅｒｎＲｅｓｅｒｖｅ）、ＴｉａｎＴａｎ、Ｗｙｅｔｈ、及びＬｉｓｔｅｒからなる群から選択される株である。一部の実施形態では、ワクシニアウイルスは、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ株のワクシニアウイルスである。

一部の実施形態では、欠失のうちの１つ若しくは複数又は全ては、対応する遺伝子をコードする全ポリヌクレオチドの欠失である。一部の実施形態では、欠失のうちの１つ若しくは複数又は全ては、欠失が、宿主細胞に導入されると遺伝子を非機能性とするのに十分であるように、対応する遺伝子をコードするポリヌクレオチドの一部の欠失である。

一部の実施形態では、核酸は、腫瘍関連抗原をコードするトランス遺伝子をさらに含む。一部の実施形態では、腫瘍関連抗原は、本明細書の表３〜３０のうちのいずれか１つに列挙された腫瘍関連抗原である。一部の実施形態では、腫瘍関連抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ３３、ＥｐＣＡＭ、ＣＥＡ、ＰＳＭＡ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ１３３、ＥＧＦＲ、ＣＤＨ１９、ＥＮＰＰ３、ＤＬＬ３、ＭＳＬＮ、ＲＯＲ１、ＨＥＲ２、ＨＬＡＡ２、ＥｐＨＡ２、ＥｐＨＡ３、ＭＣＳＰ、ＣＳＰＧ４、ＮＧ２、ＲＯＮ、ＦＬＴ３、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＦＡＰα、ＦＲα、ＣＡ−９、ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ、ＦＳＰ１、Ｓ１００Ａ４、ＡＤＡＭ１２ｍ、ＲＥＴ、ＭＥＴ、ＦＧＦＲ、ＩＮＳＲ、及びＮＴＲＫからなる群から選択される腫瘍関連抗原である。一部の実施形態では、腫瘍関連抗原は、ＭＡＧＥ−Ａ３、又は１つ若しくは複数のその断片を含む。一部の実施形態では、腫瘍関連抗原は、ＮＹ−ＥＳＯ−１、又は１つ若しくは複数のその断片を含む。一部の実施形態では、腫瘍関連抗原は、１つ若しくは複数のヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）タンパク質、又はそれらの断片を含む。一部の実施形態では、腫瘍関連抗原は、（ｉ）ＨＰＶ１６のＥ６タンパク質及びＥ７タンパク質、又はそれらの断片、並びに（ｉｉ）ＨＰＶ１８のＥ６タンパク質及びＥ７タンパク質、又はそれらの断片を含む。一部の実施形態では、腫瘍関連抗原は、ブラキウリ、又は１つ若しくは複数のその断片を含む。一部の実施形態では、腫瘍関連抗原は、前立腺酸性ホスファターゼ、又は１つ若しくは複数のその断片を含む。

一部の実施形態では、核酸は、免疫チェックポイント阻害剤をコードするトランス遺伝子をさらに含む。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＯＸ４０リガンド、ＩＣＯＳリガンド、抗ＣＤ４７抗体又はその抗原結合性断片、抗ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ抗体又はその抗原結合性断片、抗Ｌａｇ３抗体又はその抗原結合性断片、抗ＣＴＬＡ−４抗体又はその抗原結合性断片、抗ＰＤ−Ｌ１抗体又はその抗原結合性断片、抗ＰＤ１抗体又はその抗原結合性断片、及び抗Ｔｉｍ−３抗体又はその抗原結合性断片からなる群から選択される。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ１抗体若しくはその抗原結合性断片、又は抗ＣＴＬＡ−４抗体若しくはその抗原結合性断片である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ１抗体又はその抗原結合性断片である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＣＴＬＡ−４抗体又はその抗原結合性断片である。

本明細書で記載される抗体又はその抗原結合性断片は、モノクローナル抗体又はその抗原結合性断片、ポリクローナル抗体又はその抗原結合性断片、ヒト化抗体又はその抗原結合性断片、霊長動物化抗体又はその抗原結合性断片、二特異性抗体又はその抗原結合性断片、多特異性抗体又はその抗原結合性断片、二重可変性免疫グロブリンドメイン、一価抗体又はその抗原結合性断片、キメラ抗体又はその抗原結合性断片、単鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）、ダイアボディー、トリアボディー、ナノボディー、抗体様タンパク質足場、ドメイン抗体、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２分子、及びタンデムｓｃＦｖ（ｔａＦｖ）などの、全長抗体又は抗体断片でありうる。一部の実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は、例えば、アミド結合、チオエーテル結合、炭素間結合、若しくはジスルフィド架橋、又は本明細書で記載されるリンカーなどのリンカーにより、互いに共有結合的に結合している、２つ又はこれを超えるＣＤＲを含有する。一部の実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は、単鎖ポリペプチドである。一部の実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＥからなる群から選択されるアイソタイプを有する。

一部の実施形態では、核酸は、インターロイキンをコードするトランス遺伝子をさらに含む。一部の実施形態では、インターロイキン（ＩＬ）は、ＩＬ−１アルファ、ＩＬ−１ベータ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２ｐ３５、ＩＬ−１２ｐ４０、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、及びＩＬ−２３からなる群から選択される。一部の実施形態では、インターロイキンは、ＩＬ−１２ｐ３５、ＩＬ−１２ｐ４０、及びＩＬ−１２ｐ７０からなる群から選択される。一部の実施形態では、インターロイキンは、膜結合型である。

一部の実施形態では、核酸は、インターフェロンをコードするトランス遺伝子をさらに含む。一部の実施形態では、インターフェロンは、ＩＦＮアルファ、ＩＦＮ−ベータ、ＩＦＮデルタ、ＩＦＮイプシロン、ＩＦＮタウ、ＩＦＮオメガ、ＩＦＮゼータ、及びＩＦＮガンマからなる群から選択される。

一部の実施形態では、核酸は、ＴＮＦスーパーファミリーメンバータンパク質をコードするトランス遺伝子をさらに含む。一部の実施形態では、ＴＮＦスーパーファミリーメンバータンパク質は、ＴＲＡＩＬ、Ｆａｓリガンド、ＬＩＧＨＴ（ＴＮＦＳＦ−１４）、ＴＮＦアルファ、及び４−１ＢＢリガンドからなる群から選択される。

一部の実施形態では、核酸は、サイトカインをコードするトランス遺伝子をさらに含む。一部の実施形態では、サイトカインは、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ３リガンド）、ＣＤ４０リガンド、抗ＴＧＦベータ、抗ＶＥＧＦ−Ｒ２、及びグアニルアデニル酸シクラーゼ（ｃＧＡＳ）からなる群から選択される。一部の実施形態では、サイトカインは、Ｆｌｔ３リガンドである。

別の態様では、本発明は、各々が、Ｃ２Ｌ、Ｃ１Ｌ、Ｎ１Ｌ、Ｎ２Ｌ、Ｍ１Ｌ、Ｍ２Ｌ、Ｋ１Ｌ、Ｋ２Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ｋ４Ｌ、Ｋ５Ｌ、Ｋ６Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｆ１Ｌ、Ｆ２Ｌ、Ｆ３Ｌ、Ｂ１４Ｒ、Ｂ１５Ｒ、Ｂ１６Ｒ、Ｂ１７Ｌ、Ｂ１８Ｒ、Ｂ１９Ｒ、Ｂ２０Ｒからなる群から独立的に選択される、少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、又は２２の遺伝子の欠失を有する、組換えオルトポックスウイルスベクターを特徴とする。一部の実施形態では、欠失は、Ｃ２Ｌ、Ｃ１Ｌ、Ｎ１Ｌ、Ｎ２Ｌ、Ｍ１Ｌ、Ｍ２Ｌ、Ｋ１Ｌ、Ｋ２Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ｋ４Ｌ、Ｋ５Ｌ、Ｋ６Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｆ１Ｌ、Ｆ２Ｌ、Ｆ３Ｌ、Ｂ１４Ｒ、Ｂ１５Ｒ、Ｂ１６Ｒ、Ｂ１７Ｌ、Ｂ１８Ｒ、Ｂ１９Ｒ、及びＢ２０Ｒの各々を含む。本明細書で開示される実施形態のうちのいずれか１つでは、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、Ｂ８Ｒの欠失をさらに含みうる。

別の態様では、本発明は、組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む、組換えオルトポックスウイルスベクターであって、組換えオルトポックスウイルスゲノムが、Ｂ１４Ｒ、Ｂ１６Ｒ、Ｂ１７Ｌ、Ｂ１８Ｒ、Ｂ１９Ｒ、及びＢ２０Ｒからなる群から選択される、少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する、組換えオルトポックスウイルスベクターを特徴とする。一部の実施形態では、欠失は、Ｂ１４Ｒ、Ｂ１６Ｒ、Ｂ１７Ｌ、Ｂ１８Ｒ、Ｂ１９Ｒ、及びＢ２０Ｒからなる群から独立的に選択される、少なくとも２つ、３つ、４つ、又は５つの遺伝子を含む。一部の実施形態では、欠失は、Ｂ１４Ｒ、Ｂ１６Ｒ、Ｂ１７Ｌ、Ｂ１８Ｒ、Ｂ１９Ｒ、及びＢ２０Ｒの各々を含む。本明細書で開示される実施形態のうちのいずれか１つでは、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、Ｂ８Ｒの欠失をさらに含みうる。

別の態様では、本発明は、組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む、組換えオルトポックスウイルスベクターであって、組換えオルトポックスウイルスゲノムが、Ｃ２Ｌ、Ｃ１Ｌ、Ｎ１Ｌ、Ｎ２Ｌ、Ｍ１Ｌ、Ｍ２Ｌ、Ｋ１Ｌ、Ｋ２Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ｋ４Ｌ、Ｋ５Ｌ、Ｋ６Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｆ１Ｌ、Ｆ２Ｌ、及びＦ３Ｌからなる群から選択される、少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する、組換えオルトポックスウイルスベクターを特徴とする。本明細書で開示される実施形態のうちのいずれか１つでは、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、Ｂ８Ｒの欠失をさらに含みうる。

一部の実施形態では、組換えオルトポックスウイルスベクターは、Ｃ２Ｌ、Ｃ１Ｌ、Ｎ１Ｌ、Ｎ２Ｌ、Ｍ１Ｌ、Ｋ１Ｌ、Ｋ２Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ｋ４Ｌ、Ｋ７Ｒ、及びＦ２Ｌからなる群から選択される、少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する。一部の実施形態では、欠失は、各々が、Ｃ２Ｌ、Ｃ１Ｌ、Ｎ１Ｌ、Ｎ２Ｌ、Ｍ１Ｌ、Ｍ２Ｌ、Ｋ１Ｌ、Ｋ２Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ｋ４Ｌ、Ｋ５Ｌ、Ｋ６Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｆ１Ｌ、Ｆ２Ｌ、及びＦ３Ｌからなる群から独立的に選択される、少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、又は１６の遺伝子を含む。一部の実施形態では、欠失は、Ｃ２Ｌ、Ｃ１Ｌ、Ｎ１Ｌ、Ｎ２Ｌ、Ｍ１Ｌ、Ｍ２Ｌ、Ｋ１Ｌ、Ｋ２Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ｋ４Ｌ、Ｋ５Ｌ、Ｋ６Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｆ１Ｌ、Ｆ２Ｌ、及びＦ３の各々を含む。本明細書で開示される実施形態のうちのいずれか１つでは、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、Ｂ８Ｒの欠失をさらに含みうる。

別の態様では、本発明は、カスパーゼ９阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する、組換えオルトポックスウイルスベクターを特徴とする。

別の態様では、本発明は、ＢＣＬ−２阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する、組換えオルトポックスウイルスベクターを特徴とする。

別の態様では、本発明は、ｄＵＴＰアーゼをコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する、組換えオルトポックスウイルスベクターを特徴とする。

別の態様では、本発明は、ＩＦＮアルファ／ベータ受容体様分泌型糖タンパク質をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する、組換えオルトポックスウイルスベクターを特徴とする。

別の態様では、本発明は、ＩＬ−１ベータ阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する、組換えオルトポックスウイルスベクターを特徴とする。

別の態様では、本発明は、ホスホリパーゼＤをコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する、組換えオルトポックスウイルスベクターを特徴とする。

別の態様では、本発明は、ＰＫＲ阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する、組換えオルトポックスウイルスベクターを特徴とする。

別の態様では、本発明は、セリンプロテアーゼ阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する、組換えオルトポックスウイルスベクターを特徴とする。

別の態様では、本発明は、ＴＬＲシグナル伝達阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する、組換えオルトポックスウイルスベクターを特徴とする。

一部の実施形態では、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、ＴＬＲシグナル伝達阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する。一部の実施形態では、ＴＬＲシグナル伝達阻害剤をコードする遺伝子は、Ｎ２Ｌである。

別の態様では、本発明は、ケルチ様タンパク質をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する、組換えオルトポックスウイルスベクターを特徴とする。

一部の実施形態では、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、ケルチ様タンパク質をコードする少なくとも１つ又は２つの遺伝子の欠失を有する。一部の実施形態では、ケルチ様タンパク質をコードする遺伝子は、Ｆ３Ｌ及びＣ２Ｌからなる群から独立的に選択される。

別の態様では、本発明は、モノグリセリドリパーゼをコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する、組換えオルトポックスウイルスベクターを特徴とする。

一部の実施形態では、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、モノグリセリドリパーゼをコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する。一部の実施形態では、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、各々が、モノグリセリドリパーゼをコードする少なくとも２つの遺伝子の欠失を有する。一部の実施形態では、モノグリセリドリパーゼをコードする遺伝子は、Ｋ５Ｌ及びＫ６Ｌからなる群から独立的に選択される。

別の態様では、本発明は、ＮＦ−κＢ阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する、組換えオルトポックスウイルスベクターを特徴とする。

一部の実施形態では、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、ＮＦ−κＢ阻害剤をコードする少なくとも１つ、２つ、又は３つの遺伝子の欠失を有する。一部の実施形態では、ＮＦ−κＢ阻害剤をコードする遺伝子は、Ｋ７Ｒ、Ｋ１Ｌ、及びＭ２Ｌからなる群から独立的に選択される。

別の態様では、本発明は、アンキリンリピートタンパク質をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する、組換えオルトポックスウイルスベクターを特徴とする。

一部の実施形態では、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、アンキリンリピートタンパク質をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する。一部の実施形態では、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、各々が、アンキリンリピートタンパク質をコードする少なくとも２つの遺伝子の欠失を有する。一部の実施形態では、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、各々が、アンキリンリピートタンパク質をコードする少なくとも３つの遺伝子の欠失を有する。一部の実施形態では、アンキリンリピートタンパク質をコードする遺伝子は、Ｂ１８Ｒ、Ｂ２０Ｒ、及びＭ１Ｌからなる群から独立的に選択される。

別の態様では、本発明は、Ｂ１５Ｒ、Ｂ１７Ｒ、及びＢ１４Ｒからなる群から選択される、少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する、組換えオルトポックスウイルスベクターを特徴とする。

一部の実施形態では、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、Ｂ１５Ｒ、Ｂ１７Ｒ、及びＢ１４Ｒからなる群から選択される、少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する。一部の実施形態では、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、Ｂ１５Ｒ、Ｂ１７Ｒ、及びＢ１４Ｒからなる群から選択される、少なくとも２つの遺伝子の欠失を有する。一部の実施形態では、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、Ｂ１５Ｒ、Ｂ１７Ｒ、及びＢ１４Ｒからなる群から選択される、少なくとも３つの遺伝子の欠失を有する。本明細書で開示される実施形態のうちのいずれか１つでは、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、Ｂ８Ｒの欠失をさらに含みうる。

別の態様では、本発明は、組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む、組換えオルトポックスウイルスベクターであって、組換えオルトポックスウイルスゲノムが、ＫＯＲＦＡ、ＫＯＲＦＢ、ＢＯＲＦＥ、ＢＯＲＦＦ、及びＢＯＲＦＧからなる群から選択される、少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する、組換えオルトポックスウイルスベクターを特徴とする。

一部の実施形態では、組換えオルトポックスウイルスベクターは、ＫＯＲＦＡ、ＫＯＲＦＢ、ＢＯＲＦＥ、ＢＯＲＦＦ、及びＢＯＲＦＧからなる群から選択される、少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する。一部の実施形態では、ベクターは、ＫＯＲＦＡ、ＫＯＲＦＢ、ＢＯＲＦＥ、ＢＯＲＦＦ、及びＢＯＲＦＧからなる群から選択される、少なくとも２、３、又は４つの遺伝子の欠失を有する。一部の実施形態では、欠失は、ＫＯＲＦＡ、ＫＯＲＦＢ、ＢＯＲＦＥ、ＢＯＲＦＦ、及びＢＯＲＦＧの各々を含む。本明細書で開示される実施形態のうちのいずれか１つでは、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、Ｂ８Ｒの欠失をさらに含みうる。

一部の実施形態では、組換えオルトポックスウイルスベクターは、Ｂ２１Ｒ、Ｂ２２Ｒ、Ｂ２３Ｒ、Ｂ２４Ｒ、Ｂ２５Ｒ、Ｂ２６Ｒ、Ｂ２７Ｒ、Ｂ２８Ｒ、及びＢ２９ＲからなるＩＴＲ遺伝子の群から選択される、少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する。一部の実施形態では、欠失は、各々が、Ｂ２１Ｒ、Ｂ２２Ｒ、Ｂ２３Ｒ、Ｂ２４Ｒ、Ｂ２５Ｒ、Ｂ２６Ｒ、Ｂ２７Ｒ、Ｂ２８Ｒ、及びＢ２９ＲからなるＩＴＲ遺伝子の群から独立的に選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、又は８つの遺伝子を含む。一部の実施形態では、欠失は、Ｂ２１Ｒ、Ｂ２２Ｒ、Ｂ２３Ｒ、Ｂ２４Ｒ、Ｂ２５Ｒ、Ｂ２６Ｒ、Ｂ２７Ｒ、Ｂ２８Ｒ、及びＢ２９Ｒの各々を含む。本明細書で開示される実施形態のうちのいずれか１つでは、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、Ｂ８Ｒの欠失をさらに含みうる。

一部の実施形態では、オルトポックスウイルスは、ワクシニアウイルスである。

一部の実施形態では、ベクターは、腫瘍関連抗原をコードするトランス遺伝子をさらに含む。一部の実施形態では、腫瘍関連抗原は、本明細書の表３〜３０のうちのいずれか１つに列挙された腫瘍関連抗原である。一部の実施形態では、腫瘍関連抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ３３、ＥｐＣＡＭ、ＣＥＡ、ＰＳＭＡ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ１３３、ＥＧＦＲ、ＣＤＨ１９、ＥＮＰＰ３、ＤＬＬ３、ＭＳＬＮ、ＲＯＲ１、ＨＥＲ２、ＨＬＡＡ２、ＥｐＨＡ２、ＥｐＨＡ３、ＭＣＳＰ、ＣＳＰＧ４、ＮＧ２、ＲＯＮ、ＦＬＴ３、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＦＡＰα、ＦＲα、ＣＡ−９、ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ、ＦＳＰ１、Ｓ１００Ａ４、ＡＤＡＭ１２ｍ、ＲＥＴ、ＭＥＴ、ＦＧＦＲ、ＩＮＳＲ、及びＮＴＲＫからなる群から選択される腫瘍関連抗原である。一部の実施形態では、腫瘍関連抗原は、ＭＡＧＥ−Ａ３、又は１つ若しくは複数のその断片を含む。一部の実施形態では、腫瘍関連抗原は、ＮＹ−ＥＳＯ−１、又は１つ若しくは複数のその断片を含む。一部の実施形態では、腫瘍関連抗原は、１つ若しくは複数のヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）タンパク質、又はそれらの断片を含む。一部の実施形態では、腫瘍関連抗原は、（ｉ）ＨＰＶ１６のＥ６タンパク質及びＥ７タンパク質、又はそれらの断片、並びに（ｉｉ）ＨＰＶ１８のＥ６タンパク質及びＥ７タンパク質、又はそれらの断片を含む。一部の実施形態では、腫瘍関連抗原は、ブラキウリ、又は１つ若しくは複数のその断片を含む。一部の実施形態では、腫瘍関連抗原は、前立腺酸性ホスファターゼ、又は１つ若しくは複数のその断片を含む。

一部の実施形態では、ベクターは、免疫チェックポイント阻害剤をコードするトランス遺伝子をさらに含む。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＯＸ４０リガンド、ＩＣＯＳリガンド、抗ＣＤ４７抗体又はその抗原結合性断片、抗ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ抗体又はその抗原結合性断片、抗Ｌａｇ３抗体又はその抗原結合性断片、抗ＣＴＬＡ−４抗体又はその抗原結合性断片、抗ＰＤ−Ｌ１抗体又はその抗原結合性断片、抗ＰＤ１抗体又はその抗原結合性断片、及び抗Ｔｉｍ−３抗体又はその抗原結合性断片からなる群から選択される。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ１抗体若しくはその抗原結合性断片、又は抗ＣＴＬＡ−４抗体若しくはその抗原結合性断片である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ１抗体又はその抗原結合性断片である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＣＴＬＡ−４抗体又はその抗原結合性断片である。

上記で記載した通り、本明細書で記載される抗体又はその抗原結合性断片は、モノクローナル抗体又はその抗原結合性断片、ポリクローナル抗体又はその抗原結合性断片、ヒト化抗体又はその抗原結合性断片、霊長動物化抗体又はその抗原結合性断片、二特異性抗体又はその抗原結合性断片、多特異性抗体又はその抗原結合性断片、二重可変性免疫グロブリンドメイン、一価抗体又はその抗原結合性断片、キメラ抗体又はその抗原結合性断片、単鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）、ダイアボディー、トリアボディー、ナノボディー、抗体様タンパク質足場、ドメイン抗体、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２分子、及びタンデムｓｃＦｖ（ｔａＦｖ）などの、全長抗体又は抗体断片でありうる。一部の実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は、例えば、アミド結合、チオエーテル結合、炭素間結合、若しくはジスルフィド架橋、又は本明細書で記載されるリンカーなどのリンカーにより、互いに共有結合的に結合している、２つ又はこれを超えるＣＤＲを含有する。一部の実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は、単鎖ポリペプチドである。一部の実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＥからなる群から選択されるアイソタイプを有する。

一部の実施形態では、ベクターは、インターロイキンをコードするトランス遺伝子をさらに含む。一部の実施形態では、インターロイキン（ＩＬ）は、ＩＬ−１アルファ、ＩＬ−１ベータ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２ｐ３５、ＩＬ−１２ｐ４０、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、及びＩＬ−２３からなる群から選択される。一部の実施形態では、インターロイキンは、ＩＬ−１２ｐ３５、ＩＬ−１２ｐ４０、及びＩＬ−１２ｐ７０からなる群から選択される。一部の実施形態では、インターロイキンは、膜結合型である。

一部の実施形態では、ベクターは、インターフェロンをコードするトランス遺伝子をさらに含む。一部の実施形態では、インターフェロンは、ＩＦＮアルファ、ＩＦＮ−ベータ、ＩＦＮデルタ、ＩＦＮイプシロン、ＩＦＮタウ、ＩＦＮオメガ、ＩＦＮゼータ、及びＩＦＮガンマからなる群から選択される。

一部の実施形態では、ベクターは、ＴＮＦスーパーファミリーメンバータンパク質をコードするトランス遺伝子をさらに含む。一部の実施形態では、ＴＮＦスーパーファミリーメンバータンパク質は、ＴＲＡＩＬ、Ｆａｓリガンド、ＬＩＧＨＴ（ＴＮＦＳＦ−１４）、ＴＮＦアルファ、及び４−１ＢＢリガンドからなる群から選択される。

一部の実施形態では、ベクターは、サイトカインをコードするトランス遺伝子をさらに含む。一部の実施形態では、サイトカインは、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ３リガンド）、ＣＤ４０リガンド、抗ＴＧＦベータ、抗ＶＥＧＦ−Ｒ２、及びグアニルアデニル酸シクラーゼ（ｃＧＡＳ）からなる群から選択される。一部の実施形態では、サイトカインは、Ｆｌｔ３リガンドである。

一部の実施形態では、哺乳動物細胞の集団（例えば、ヒトがん細胞などのヒト細胞）を、核酸又はオルトポックスウイルスベクターと接触させると、細胞は、例えば、本明細書で記載されるか、又は当技術分野で公知の顕微鏡法を使用して、目視により評価される、欠失を含まない形態のオルトポックスウイルスベクターと接触した、同じ種類の哺乳動物細胞の集団と比べて、合胞体の形成の増大を呈する。

一部の実施形態では、哺乳動物細胞の集団（例えば、ヒトがん細胞などのヒト細胞）を、核酸又はオルトポックスウイルスベクターと接触させると、細胞は、例えば、本明細書で記載されるか、又は当技術分野で公知のプラーク形成アッセイを使用して評価される、欠失を含まない形態のオルトポックスウイルスベクターと接触した、同じ種類の哺乳動物細胞の集団と比べて、オルトポックスウイルスベクターの拡散の増大を呈する。

一部の実施形態では、核酸又は組換えオルトポックスウイルスベクターは、例えば、本明細書で記載されるか、又は当技術分野で公知の細胞死アッセイを使用して評価される通り、哺乳動物細胞（例えば、ヒトがん細胞などのヒト細胞）の集団に対する細胞傷害効果を、欠失を含まない形態のオルトポックスウイルスベクターの細胞傷害効果と比べて増大させる。

一部の実施形態では、哺乳動物細胞は、Ｕ２ＯＳ、２９３、２９３Ｔ、Ｖｅｒｏ、ＨｅＬａ、Ａ５４９、ＢＨＫ、ＢＳＣ４０、ＣＨＯ、ＯＶＣＡＲ−８、７８６−０、ＮＣＩ−Ｈ２３、Ｕ２５１、ＳＦ−２９５、Ｔ−４７Ｄ、ＳＫＭＥＬ２、ＢＴ−５４９、ＳＫ−ＭＥＬ−２８、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＳＫ−ＯＶ−３、ＭＣＦ７、Ｍ１４、ＳＦ−２６８、ＣＡＫＩ−１、ＨＰＡＶ、ＯＶＣＡＲ−４、ＨＣＴ１５、Ｋ−５６２、及びＨＣＴ−１１６からなる群から選択される細胞株に由来する。

別の態様では、本発明は、本明細書で記載される態様又は実施形態のうちのいずれか１つによる、核酸又は組換えオルトポックスウイルスベクターを含有すパッケージング細胞株を特徴とする。

別の態様では、本発明は、治療有効量の核酸又は組換えオルトポックスウイルスベクターを、患者に投与することにより、哺乳動物患者におけるがんを処置する方法を特徴とする。

一部の実施形態では、哺乳動物患者は、ヒト患者である。

一部の実施形態では、がんは、白血病、リンパ腫、肝臓がん、骨がん、肺がん、脳がん、膀胱がん、消化器がん、乳がん、心臓がん、子宮頸がん、子宮がん、頭頸部がん、胆嚢がん、喉頭がん、***口腔がん、眼がん、黒色腫、膵臓がん、前立腺がん、結腸直腸がん、精巣がん、及び咽頭がんからなる群から選択される。

一部の実施形態では、がんは、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性（ｍｙｅｌｏｉｄ）白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性（ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ）白血病（ＣＭＬ）、副腎皮質癌腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、肛門がん、虫垂がん、星状細胞腫、非定型奇形腫様／ラブドイド腫瘍、基底細胞癌、胆管がん、肝外がん、ユーイング肉腫ファミリー、骨肉腫及び悪性線維性組織球腫、中枢神経系胎児性腫瘍、中枢神経系胚細胞腫瘍、頭蓋咽頭腫、上衣腫、気管支腫瘍、バーキットリンパ腫、カルチノイド腫瘍、原発性リンパ腫、脊索種、慢性骨髄増殖性新生物、結腸がん、肝外胆管がん、非浸潤性乳管癌（ＤＣＩＳ）、子宮内膜がん、上衣腫、食道がん、嗅神経芽腫、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、卵管がん、骨の線維性組織球腫、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間葉系腫瘍（ＧＩＳＴ）、精巣胚細胞腫瘍、妊娠性絨毛性疾患、神経膠腫、小児性脳幹神経膠腫、有毛細胞白血病、肝細胞がん、ランゲルハンス細胞組織球増殖症、ホジキンリンパ腫、下咽頭がん、膵島細胞腫瘍、膵内分泌腫瘍、ウィルムス腫瘍及び他の小児腎臓腫瘍、ランゲルハンス細胞組織球増殖症、小細胞肺がん、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、眼内黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、転移性頸部扁平上皮がん、正中線癌、多発性内分泌腫瘍症候群、多発性骨髄腫／形質細胞細胞腫、骨髄異形成症候群、鼻腔副鼻腔がん、鼻咽頭がん、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、上皮卵巣がん、胚細胞卵巣がん、低悪性度卵巣がん、膵神経内分泌腫瘍、乳頭腫症、傍神経節腫、副鼻腔鼻腔がん、副甲状腺がん、陰茎がん、咽頭がん、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、胸膜肺芽腫、原発性腹膜がん、直腸がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺がん、カポジ肉腫、横紋筋肉腫、セザリー症候群、小腸がん、軟部組織肉腫、咽頭がん、胸腺腫及び胸腺癌、甲状腺がん、腎盂及び尿管の移行上皮がん、尿道がん、子宮内膜がん、子宮肉腫、膣がん、外陰がん、並びにワルデンシュトロームマクログロブリン血症からなる群から選択される。

一部の実施形態では、方法は、患者に、免疫チェックポイント阻害剤を投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＯＸ４０リガンド、ＩＣＯＳリガンド、抗ＣＤ４７抗体又はその抗原結合性断片、抗ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ抗体又はその抗原結合性断片、抗Ｌａｇ３抗体又はその抗原結合性断片、抗ＣＴＬＡ−４抗体又はその抗原結合性断片、抗ＰＤ−Ｌ１抗体又はその抗原結合性断片、抗ＰＤ１抗体又はその抗原結合性断片、及び抗Ｔｉｍ−３抗体又はその抗原結合性断片からなる群から選択される。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ１抗体若しくはその抗原結合性断片、又は抗ＣＴＬＡ−４抗体若しくはその抗原結合性断片である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ１抗体又はその抗原結合性断片である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＣＴＬＡ−４抗体又はその抗原結合性断片である。

一部の実施形態では、方法は、患者に、インターロイキンを投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、インターロイキンは、ＩＬ−１アルファ、ＩＬ−１ベータ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２ｐ３５、ＩＬ−１２ｐ４０、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、及びＩＬ−２３からなる群から選択される。一部の実施形態では、インターロイキンは、ＩＬ−１２ｐ３５、ＩＬ−１２ｐ４０、及びＩＬ−１２ｐ７０からなる群から選択される。一部の実施形態では、インターロイキンは、膜結合型である。

一部の実施形態では、方法は、患者に、インターフェロンを投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、インターフェロンは、ＩＦＮアルファ、ＩＦＮ−ベータ、ＩＦＮデルタ、ＩＦＮイプシロン、ＩＦＮタウ、ＩＦＮオメガ、ＩＦＮゼータ、及びＩＦＮガンマからなる群から選択される。

一部の実施形態では、方法は、患者に、ＴＮＦスーパーファミリーメンバータンパク質を投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、ＴＮＦスーパーファミリーメンバータンパク質は、ＴＲＡＩＬ、Ｆａｓリガンド、ＬＩＧＨＴ（ＴＮＦＳＦ−１４）、ＴＮＦアルファ、及び４−１ＢＢリガンドからなる群から選択される。

一部の実施形態では、方法は、患者に、サイトカインを投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、サイトカインは、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｆｌｔ３リガンド、ＣＤ４０リガンド、抗ＴＧＦベータ、抗ＶＥＧＦ−Ｒ２、及びｃＧＡＳ（グアニルアデニル酸シクラーゼ）からなる群から選択される。

別の態様では、本発明は、本明細書で記載される態様又は実施形態のうちのいずれかによる核酸又はベクターと、キットの使用者に、核酸又はベクターを宿主細胞において発現させるように指示するパッケージ添付文書とを含有するキットを特徴とする。

別の態様では、本発明は、本明細書で記載される態様又は実施形態のうちのいずれかによる核酸又はオルトポックスウイルスベクターと、使用者に、治療有効量の核酸又は組換えオルトポックスウイルスベクターを、がんを有する哺乳動物患者（例えば、ヒト患者）に投与し、これにより、がんを処置するように指示するパッケージ添付文書とを含有するキットを特徴とする。

定義
本明細書で使用される、「約」という用語は、記載される値を、１０％以内上回るか、又は下回る値を指す。例えば、「約５ｎＭ」という用語は、４．５ｎＭ〜５．５ｎＭの範囲を指し示す。

本明細書で使用される、「抗体」（Ａｂ）という用語は、特定の抗原に特異的に結合するか、又はこれと免疫学的に反応性である免疫グロブリン分子を指し、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、遺伝子操作抗体、並びにキメラ抗体、ヒト化抗体、ヘテロコンジュゲート抗体（例えば、二特異性抗体、三特異性抗体、四特異性抗体、ダイアボディー、トリアボディー、及びテトラボディー）、並びに、例えば、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆａｂ断片、Ｆｖ断片、ｒｌｇＧ断片、及びｓｃＦｖ断片を含む、抗体の抗原結合性断片を含むがこれらに限定されない、他の形で改変された抗体の形態を含む。さらに、そうでないことが指し示されない限りにおいて、「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）という用語は、インタクト分子、並びに標的タンパク質に特異的に結合することが可能な抗体断片（例えば、Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片など）の両方を含むことが意図される。Ｆａｂ断片及びＦ（ａｂ’）２断片は、インタクトの抗体のＦｃ断片を欠き、動物の循環から、より急速にクリアランスされ、インタクト抗体より、非特異的組織への結合が少ない（参照により本明細書に組み込まれる、Ｗａｈｌら、Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．、２４：３１６、１９８３を参照されたい）。

本明細書で使用される、「抗原結合性断片」という用語は、標的抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の、１つ又は複数の断片を指す。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体の断片によって果たされうる。抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、ＳＭＩＰ、ダイアボディー、トリアボディー、アフィボディー、ナノボディー、アプタマー、又はドメイン抗体でありうる。抗体の「抗原結合性断片」という用語に包摂される、結合性断片の例は、（ｉ）ＶＬドメイン、ＶＨドメイン、ＣＬドメイン、及びＣＨ１ドメインからなる一価断片である、Ｆａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ領域におけるジスルフィド架橋により連結された、２つのＦａｂ断片を含む二価断片である、Ｆ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）ＶＨドメイン及びＣＨ１ドメインからなる、Ｆｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一のアームのＶＬドメイン及びＶＨドメインからなる、Ｆｖ断片；（ｖ）ＶＨドメイン及びＶＬドメインを含む、ｄＡｂ；（ｖｉ）ＶＨドメインからなる、ｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら、Ｎａｔｕｒｅ、３４１：５４４〜５４６、１９８９）；（ｖｉｉ）ＶＨドメイン又はＶＬドメインからなるｄＡｂ；（ｖｉｉｉ）単離相補性決定領域（ＣＤＲ）；並びに（ｉｘ）任意選択で、合成リンカーにより接続されうる、２つ又はこれを超える単離ＣＤＲの組合せを含むがこれらに限定されない。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインである、ＶＬと、ＶＨとは、個別の遺伝子によりコードされるが、組換え法を使用して、それらを単一のタンパク質鎖として作製することを可能とするリンカーを介して接続することにより、接続される場合があり、この場合、ＶＬ領域と、ＶＨ領域とは、対合して一価分子を形成する（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として公知であり、例えば、Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４２：４２３〜４２６、１９８８；及びＨｕｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８５：５８７９〜５８８３、１９８８を参照されたい）。これらの抗体断片は、当業者に公知の従来の技法を使用して得られる場合があり、断片も、インタクトの抗体と同じ形で、有用性についてスクリーニングされうる。抗原結合性断片は、組換えＤＮＡ法により作製される場合もあり、インタクトの免疫グロブリンの酵素的切断又は化学的切断により作製される場合もあり、一部の実施形態では、当技術分野で公知の、化学的ペプチド合成手順により作製される場合もある。

本明細書で使用される、「二特異性抗体」という用語は、少なくとも２つの異なる抗原に対する結合特異性を有する、ヒト抗体又はヒト化抗体であることが多い、モノクローナル抗体を指す。

本明細書で使用される、「細胞」、「細胞株」、及び「細胞培養物」という用語は、互換的に使用されうる。これらの用語の全てはまた、任意の後続世代及び全ての後続世代である、それらの後代も含む。全ての後代は、意図的な変異又は偶発的な変異に起因して、同一ではない場合があることが理解される。

本明細書で使用される、「キメラ」抗体という用語は、ラット又はマウスなど、１つの供給源生物の免疫グロブリンに由来する可変配列と、異なる生物（例えば、ヒト）の免疫グロブリンに由来する定常領域とを有する抗体を指す。当技術分野では、キメラ抗体を作製するための方法が公知である。例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、１９８５、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２９（４７１９）：１２０２〜７；Ｏｉら、１９８６、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、４：２１４〜２２１；Ｇｉｌｌｉｅｓら、１９８５、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、１２５：１９１〜２０２；米国特許第５，８０７，７１５号；同第４，８１６，５６７号；及び同第４，８１６，３９７号を参照されたい。

本明細書で使用される、「相補性決定領域」（ＣＤＲ）という用語は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインの両方において見出される超可変領域を指す。可変ドメインのうちの、より高度に保存的な部分は、フレームワーク（ＦＲ）と呼ばれる。当技術分野において察知される通り、抗体の超可変領域を画定するアミノ酸位置は、文脈及び当技術分野において公知の多様な定義に応じて変動しうる。可変ドメイン内の一部の位置は、これらの位置が、１つの基準セット下では、超可変領域内にあると解釈される一方、異なる基準セット下では、超可変領域外にあると解釈されるという点において、ハイブリッドの超可変位置として考えられうる。これらの位置のうちの１つ又は複数はまた、拡張型の超可変領域にも見出されうる。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは各々、βシート構造をつなぎ合わせ、場合によって、βシート構造の一部も形成する、ループを形成する、３つのＣＤＲによりつなぎ合われた、主に、βシートの立体構成を採用することにより、４つずつのＦＲ領域を含む。各鎖におけるＣＤＲは、ＦＲ領域により、ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４の順序で、近接して一体に保持され、他の抗体鎖に由来するＣＤＲと共に、抗体の標的結合性部位の形成に寄与する（参照により本明細書に組み込まれる、Ｋａｂａｔら、「ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ」（ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＨｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．、１９８７を参照されたい）。

本明細書で使用される、免疫グロブリンアミノ酸残基の番号付けは、そうでないことが指し示されない限りにおいて、Ｋａｂａｔらによる免疫グロブリンアミノ酸残基の番号付けシステムに従いなされている。

本明細書で使用される、「保存的変異」、「保存的置換」、又は「保存的アミノ酸置換」という用語は、１つ又は複数のアミノ酸の、極性、静電電荷、及び立体としての体積など、類似の物理化学的特性を呈する、１つ又は複数の異なるアミノ酸による置換を指す。これらの特性は、下記の表１において、２０の自然発生のアミノ酸の各々についてまとめられている。この表から、保存的アミノ酸ファミリーは、（ｉ）Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、及びＩ；（ｉｉ）Ｄ及びＥ；（ｉｉｉ）Ｃ、Ｓ、及びＴ；（ｉｖ）Ｈ、Ｋ、及びＲ；（ｖ）Ｎ及びＱ；並びに（ｖｉ）Ｆ、Ｙ、及びＷを含むことが察知される。したがって、保存的変異又は保存的置換とは、１つのアミノ酸を、同じアミノ酸ファミリーのメンバーにより置換する置換（例えば、Ｓｅｒの、Ｔｈｒによる置換、又はＬｙｓの、Ａｒｇによる置換）である。

本明細書で使用される、「欠失させる」、「欠失」などの用語は、遺伝子、又はこれと関連するか、若しくはこれに作動的に連結された調節エレメント（例えば、プロモーターエレメント又はエンハンサーエレメントなどの転写因子結合性部位）への改変であって、遺伝子を除去するか、又は他の形で、遺伝子を非機能性とする改変を指す。本明細書で記載される、例示的な欠失は、標的遺伝子の、開始コドンから、終止コドンまで、目的の遺伝子をコードする核酸の全体の除去を含む。本明細書で記載される、欠失の他の例は、部分的に欠失した標的遺伝子が発現させると、産物が、非機能性となるか、又は標的遺伝子の野生型形態より低機能的となるような、標的遺伝子をコードする核酸の一部の除去（例えば、単一のヌクレオチド欠失など、１つ又は複数のコドン、又はそれらの一部の除去）を含む。本明細書で記載される、例示的な欠失は、標的遺伝子の発現を調節する、プロモーター及び／又はエンハンサーの核酸の全部又は一部など、目的の遺伝子と関連する、調節的エレメント（複数可）の全部又は一部の除去を含む。

本明細書で使用される、「誘導体化抗体」という用語は、残基を切断するか、又は天然ではない化学的部分を、単離抗体に付加するように、化学反応により改変された抗体を指す。誘導体化抗体は、グリコシル化、アセチル化、ＰＥＧ化、リン酸化、アミド化、公知の化学的保護（ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ／ｂｌｏｃｋｉｎｇ）基の付加による誘導体化、タンパク質分解性切断、細胞のリガンド又は他のタンパク質への連結により得られうる。様々な化学的改変のうちのいずれかは、限定せずに述べると、確立された手順を使用する、特異的化学的切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝合成などを含む、公知の技法により実行されうる。加えて、誘導体は、例えば、アンバーサプレッション技術を使用して、１つ又は複数の非天然アミノ酸を含有しうる（例えば、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第６，９６４，８５９号を参照されたい）。

本明細書で使用される、「ダイアボディー」という用語は、各ポリペプチド鎖が、同じペプチド鎖における、ＶＨドメインと、ＶＬドメインとの分子内会合を可能とするには短すぎるリンカー（例えば、５アミノ酸から構成されたリンカー）により接続された、ＶＨドメイン及びＶＬドメインを含む、２つのポリペプチド鎖を含む二価抗体を指す。この立体構成は、各ドメインに、ホモ二量体構造を形成するように、別のポリペプチド鎖における相補的なドメインと対合することを強いる。したがって、「トリアボディー」という用語は、各ポリペプチド鎖が、同じペプチド鎖内の、ＶＨドメインと、ＶＬドメインとの分子内会合を可能とするには短すぎるリンカー（例えば、１〜２アミノ酸から構成されたリンカー）により接続された、１つのＶＨドメイン及び１つのＶＬドメインを含む、３つのポリペプチド鎖を含む三価抗体を指す。それらの天然構造にフォールディングするために、この形で構成されたペプチドは、典型的に、近傍のペプチド鎖のＶＨドメイン及びＶＬドメインを、互いに対して空間的に近接して配置して、適正なフォールディングを可能とするように、三量体化する（参照により本明細書に組み込まれる、Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：６４４４〜４８、１９９３を参照されたい）。

本明細書で使用される、「二重可変ドメイン免疫グロブリン」（「ＤＶＤ−ｌｇ」）とは、２つのモノクローナル抗体の、標的結合性可変ドメインを、リンカーを介して組み合わせて、単一の、四価二重ターゲティング剤を創出する抗体を指す（参照により本明細書に組み込まれる、Ｇｕら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．、５０２：２５〜４１、２０１２）。

本明細書で使用される、「内因性」という用語は、特定の生物（例えば、ヒト）又は生物内の特定の場所（例えば、臓器、組織、又はヒト細胞などの細胞）において、天然で見出される分子（例えば、ポリペプチド、核酸、又は補因子）について記載する。

本明細書で使用される、「外因性」という用語は、特定の生物（例えば、ヒト）又は生物内の特定の場所（例えば、臓器、組織、又はヒト細胞などの細胞）において、天然で見出されない分子（例えば、ポリペプチド、核酸、又は補因子）について記載する。外因性素材は、外部供給源から、生物又は生物から抽出された培養物にもたらされた素材を含む。

本明細書で使用される、「フレームワーク領域」又は「ＦＷ領域」という用語は、ＣＤＲと隣接するアミノ酸残基を含む。ＦＷ領域残基は、例えば、とりわけ、ヒト抗体、齧歯動物由来抗体（例えば、マウス抗体）、ヒト化抗体、霊長動物化抗体、キメラ抗体、抗体断片（例えば、Ｆａｂ断片）、単鎖抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ断片）、抗体ドメイン、及び二特異性抗体に存在しうる。

本明細書で使用される、「異種特異性抗体」という用語は、少なくとも２つの異なる抗原に対する結合特異性を有する、モノクローナル抗体、好ましくは、ヒト抗体又はヒト化抗体を指す。従来、異種特異性抗体の組換えによる作製は、２つの重鎖が、異なる特異性を有する、２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の共発現に基づく（Ｍｉｌｓｔｅｉｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３０５：５３７、１９８３）。同様の手順は、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第９３／０８８２９号、米国特許第６，２１０，６６８号；同第６，１９３，９６７号；同第６，１３２，９９２号；同第６，１０６，８３３号；同第６，０６０，２８５号；同第６，０３７，４５３号；同第６，０１０，９０２号；同第５，９８９，５３０号；同第５，９５９，０８４号；同第５，９５９，０８３号；同第５，９３２，４４８号；同第５，８３３，９８５号；同第５，８２１，３３３号；同第５，８０７，７０６号；同第５，６４３，７５９号；同第５，６０１，８１９号；同第５，５８２，９９６号；同第５，４９６，５４９号；同第４，６７６，９８０号、国際公開第９１／００３６０号、国際公開第９２／００３７３号、欧州特許第０３０８９号、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、ＥＭＢＯＪ．、１０：３６５５（１９９１）、Ｓｕｒｅｓｈら、ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１２１：２１０（１９８６）において開示されている。異種特異性抗体は、参照により本明細書に組み込まれる、Ｋｌｅｉｎｅら、ｍＡｂｓ、４（６）：６５３〜６６３、２０１２により記載されている通り、多特異性抗体における、鎖の適正な会合を強いる、Ｆｃ変異を含みうる。

本明細書で使用される、「ヒト抗体」という用語は、タンパク質（例えば、ＣＤＲ、フレームワーク、Ｃ_Ｌ、Ｃ_Ｈドメイン（例えば、Ｃ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２、Ｃ_Ｈ３）、ヒンジ（Ｖ_Ｌ、Ｖ_Ｈ））の、実質的にあらゆる部分が、ヒトにおいて、実質的に非免疫原性であり、わずかな配列の変化又は変動だけを伴う抗体を指す。ヒト抗体は、ヒト細胞（例えば、組換え発現により）において作製することもでき、機能的に再配列されたヒト免疫グロブリン（例えば、重鎖及び／又は軽鎖）遺伝子を発現させることが可能な、非ヒト動物又は原核細胞若しくは真核細胞により作製することもできる。さらに、ヒト抗体が、単鎖抗体である場合、ヒト抗体は、天然ヒト抗体において見出されない、リンカーペプチドを含みうる。例えば、Ｆｖは、重鎖の可変領域と、軽鎖の可変領域とをつなぐ、２つ〜約８つのグリシン残基又は他のアミノ酸残基などのリンカーペプチドを含みうる。このようなリンカーペプチドは、ヒト由来であると考えられる。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体ライブラリーを使用する、ファージディスプレイ法を含む、当技術分野で公知の様々な方法により作ることができる。参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第４，４４４，８８７号及び同第４，７１６，１１１号；並びにＰＣＴ国際公開第１９９８／４６６４５号；国際公開第１９９８／５０４３３号；国際公開第１９９８／２４８９３号；国際公開第１９９８／１６６５４号；国際公開第１９９６／３４０９６号；国際公開第１９９６／３３７３５号；及び国際公開第１９９１／１０７４１号を参照されたい。ヒト抗体はまた、機能的な内因性免疫グロブリンを発現させることが不可能であるが、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現させうる、トランスジェニックマウスを使用しても作製することができる。例えば、参照により本明細書に組み込まれる、ＰＣＴ国際公開第９８／２４８９３号；国際公開第９２／０１０４７号；国際公開第９６／３４０９６号；国際公開第９６／３３７３５号；米国特許第５，４１３，９２３号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６６１，０１６号；同第５，５４５，８０６号；同第５，８１４，３１８号；同第５，８８５，７９３号；同第５，９１６，７７１号；及び同第５，９３９，５９８号を参照されたい。

本明細書で使用される、「ヒト化」抗体という用語は、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、又はそれらの断片（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２又は抗体の他の標的結合性サブドメイン）である、非ヒト（例えば、マウス）抗体の形態であって、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含有する、非ヒト抗体の形態を指す。一般に、ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域の全て又は実質的に全てが、非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に対応する、少なくとも１つであり、典型的に２つである、可変ドメインの実質的に全てを含むであろう。また、ＦＲ領域の、全て又は実質的に全ては、ヒト免疫グロブリン配列のＦＲ領域でありうる。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）のうちの少なくとも一部、典型的に、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のうちの少なくとも一部も含みうる。当技術分野では、抗体をヒト化する方法が公知である。例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３３２：３２３〜７、１９８８；Ｑｕｅｅｎらによる、米国特許第５，５３０，１０１号；同第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６１号；同第５，６９３，７６２号；及び同第６，１８０，３７０号；欧州特許第２３９４００号；ＰＣＴ国際公開第９１／０９９６７号；米国特許第５，２２５，５３９号；欧州特許第５９２１０６号；及び欧州特許第５１９５９６号を参照されたい。

本明細書で使用される、「モノクローナル抗体」という用語は、任意の真核クローン、原核クローン、又はファージクローンを含む、単一のクローンに由来する抗体を指し、それを作製する方法を指すわけではない。

本明細書で使用される、「多特異性抗体」という用語は、１つを超える標的抗原に対して、アフィニティーを呈する抗体を指す。多特異性抗体は、完全免疫グロブリン分子と同様の構造を有することが可能であり、Ｆｃ領域、例えば、ＩｇＧＦｃ領域を含む。このような構造は、ＩｇＧ−Ｆｖ、ｌｇＧ−（ｓｃＦｖ）２、ＤＶＤ−ｌｇ、（ｓｃＦｖ）２−（ｓｃＦｖ）２−Ｆｃ、及び（ｓｃＦｖ）２−Ｆｃ−（ｓｃＦｖ）２を含みうるがこれらに限定されない。ｌｇＧ−（ｓｃＦｖ）２の場合、ｓｃＦｖは、重鎖又は軽鎖の、Ｎ末端又はＣ末端に接合させることができる。例示的な多特異性分子については、参照により本明細書に組み込まれる、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ、２０１２、ｍＡｂｓ、４（２）：１８２〜１９７；Ｙａｚａｋｉら、２０１３、ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｄｅｓｉｇｎ＆Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ、２６（３）：１８７〜１９３；及びＧｒｏｔｅら、２０１２、Ｐｒｏｅｔｚｅｌ及びＥｂｅｒｓｂａｃｈ（編）、「ＡｎｔｉｂｏｄｙＭｅｔｈｏｄｓａｎｄＰｒｏｔｏｃｏｌｓ」、「ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ」、９０１巻、１６章：２４７〜２６３により総説されている。Ｆｃ領域を欠き、抗体又は抗体断片を組み込みうる、例示的な多特異性分子は、ｓｃＦｖの二量体（ダイアボディー）、三量体（トリアボディー）、及び四量体（テトラボディー）、Ｆａｂ二量体（接着性のポリペプチドドメイン又はタンパク質ドメインによるコンジュゲート）及びＦａｂ三量体（化学的にコンジュゲートしている）を含み、参照により本明細書に組み込まれる、Ｈｕｄｓｏｎ及びＳｏｕｒｉａｕ、２００３、ＮａｔｕｒｅＤｒｕｇ、９：１２９〜１３４により記載されている。

本明細書で使用される、「配列同一性パーセント（％）」という用語は、配列をアライメントし、必要な場合、ギャップを導入して、最大の配列同一性パーセントを達成した（例えば、ギャップは、最適のアライメントのために、候補配列及び参照配列の一方又は両方に導入される場合があり、比較を目的として、非相同配列は、無視されうる）後において、参照配列のアミノ酸（又は核酸）残基と同一な、候補配列のアミノ酸（又は核酸）残基の百分率を指す。配列同一性パーセントを決定することを目的とするアライメントは、当技術分野における技術の範囲内にある、多様な方式で、例えば、ＢＬＡＳＴ（ブラスト）ソフトウェア、ＡＬＩＧＮ（アライン）ソフトウェア、又はＭｅｇａｌｉｇｎ（メガライン）（ＯＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなど、市販のコンピュータソフトウェアを使用して達成されうる。当業者は、比較される配列の全長にわたり、最大のアライメントを達成するのに必要とされる、任意のアルゴリズムを含む、アライメントを測定するための、適切なパラメータを決定することができる。例えば、候補配列との比較のためにアライメントされる参照配列は、候補配列が、候補配列の全長、又は候補配列の連続アミノ酸（又は核酸）残基の、選択された一部にわたり、５０％〜１００％の配列同一性を呈することを示しうる。比較を目的としてアライメントされる候補配列の長さは、例えば、参照配列の長さの、少なくとも３０％（例えば、３０％、４０、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％）でありうる。候補配列における５つの位置が、参照配列における対応する位置と同じアミノ酸残基により占有される場合、分子は、この位置において同一である。

本明細書で使用される、「霊長動物化抗体」という用語は、霊長動物由来の抗体に由来するフレームワーク領域と、非霊長動物供給源の抗体に由来する、ＣＤＲ及び定常領域など、他の領域とを含む抗体を指す。当技術分野では、霊長動物化抗体を作製するための方法が公知である。例えば、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，６５８，５７０号；同第５，６８１，７２２号；及び同第５，６９３，７８０号を参照されたい。

本明細書の、ポリヌクレオチド断片の文脈で使用される、「作動的に連結された」という用語は、２つのポリヌクレオチド断片によりコードされるアミノ酸配列が、インフレームを維持するように、２つのポリヌクレオチド断片が接続されることを意味するように意図される。

本明細書で使用される、「調節エレメント」などという用語は、抗体鎖遺伝子の転写又は翻訳を制御する、プロモーター、エンハンサー、及び他の発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）を指す。このような調節配列については、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｇｏｅｄｄｅｌ、「ＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ」、「ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ」、１８５（ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ、ＳａｎＤｉｅｇｏ、ＣＡ、１９９０）において記載されている。

本明細書で使用される、「対象」及び「患者」という用語は、本明細書で記載される、特定の疾患又は状態（がん又は感染性疾患など）のための処置を施される生物を指す。対象及び患者の例は、疾患又は状態、例えば、がんなどの細胞増殖障害のための処置を施される、ヒトなどの哺乳動物を含む。

本明細書で使用される、「ｓｃＦｖ」という用語は、抗体に由来する重鎖の可変ドメインと、軽鎖の可変ドメインとが、１つの鎖を形成するように接続された、単鎖Ｆｖ抗体を指す。ｓｃＦｖ断片は、リンカーにより隔てられた、抗体軽鎖（ＶＬ）（例えば、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及び／又はＣＤＲ−Ｌ３）の可変領域と、抗体重鎖（ＶＨ）（例えば、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及び／又はＣＤＲ−Ｈ３）の可変領域とを含む、単一のポリペプチド鎖を含有する。ｓｃＦｖ断片のＶＬ領域とＶＨ領域とを接続するリンカーは、タンパク質形成性アミノ酸から構成されたペプチドリンカーでありうる。ｓｃＦｖ断片の、タンパク質分解性分解に対する耐性を増大させるように（例えば、Ｄ−アミノ酸を含有するリンカー）、ｓｃＦｖ断片の可溶性を増強するために（例えば、ポリエチレングリコール含有リンカー、又はグリシン残基及びセリン残基の反復を含有するポリペプチドなどの親水性リンカー）、分子の生物物理的安定性を改善するように（例えば、分子内又は分子間のジスルフィド結合を形成するシステイン残基を含有するリンカー）、又はｓｃＦｖ断片の免疫原性を弱めるように（例えば、グリコシル化部位を含有するリンカー）、代替的リンカーも使用されうる。当技術分野では、ｓｃＦｖ分子が公知であり、例えば、米国特許第５，８９２，０１９号、Ｆｌｏら（Ｇｅｎｅ、７７：５１、１９８９）；Ｂｉｒｄら（Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４２：４２３、１９８８）；Ｐａｎｔｏｌｉａｎｏら（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、３０：１０１１７、１９９１）；Ｍｉｌｅｎｉｃら（ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ、５１：６３６３、１９９１）；及びＴａｋｋｉｎｅｎら（ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、４：８３７、１９９１）において記載されている。ｓｃＦｖ分子のＶＬドメイン及びＶＨドメインは、１つ又は複数の抗体分子から導出されうる。当業者によりまた、本発明のｓｃＦｖ分子の可変領域は、それらのアミノ酸配列が、導出された抗体分子から変動するように修飾されうることも理解されるであろう。例えば、一部の実施形態では、アミノ酸残基における（例えば、ＣＤＲ残基及び／又はフレームワーク残基における）、保存的置換又は保存的変化をもたらす、ヌクレオチド置換又はアミノ酸置換がなされうる。代替的に、又は加えて、当技術分野において認知された技法を使用して、抗原への結合を最適化するように、ＣＤＲアミノ酸残基に対して、変異が施される。ｓｃＦｖ断片については、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１１／０８４７１４号において記載されている。

本明細書で使用される、「〜に特異的に結合する」という語句は、タンパク質及び他の生物学的分子の不均質集団における、抗原の存在を決定する、結合反応であって、例えば、抗体又はその抗原結合性断片により、特定的に認識される結合反応を指す。抗原に特異的に結合する抗体又はその抗原結合性断片は、抗原に、１００ｎＭ未満のＫ_Ｄで結合しうる。例えば、抗原に特異的に結合する抗体又はその抗原結合性断片は、抗原に、最大１００ｎＭ（例えば、１ｐＭ〜１００ｎＭの間）のＫ_Ｄで結合しうる。特定の抗原又はそのエピトープへの特異的結合を呈さない、抗体又はその抗原結合性断片は、この特定の抗原又はそのエピトープに対する、１００ｎＭより大きな（例えば、５００ｎＭ、１μＭ、１００μＭ、５００μＭ、又は１ｍＭより大きな）Ｋ_Ｄを呈しうる。特定のタンパク質又は炭水化物と、特異的に免疫反応性である抗体を選択するのに、様々なイムノアッセイフォーマットが使用されうる。例えば、タンパク質又は炭水化物と、特異的に免疫反応性である抗体を選択するのに、固相ＥＬＩＳＡイムノアッセイが、日常的に使用される。特異的免疫反応性を決定するのに使用されうる、イムノアッセイのフォーマット及び条件の記載については、Ｈａｒｌｏｗ及びＬａｎｅ、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ，ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ」、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｒｅｓｓ、ＮｅｗＹｏｒｋ（１９８８）；並びにＨａｒｌｏｗ及びＬａｎｅ、「ＵｓｉｎｇＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ」、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｒｅｓｓ、ＮｅｗＹｏｒｋ（１９９９）を参照されたい。

本明細書で使用される、「トランスフェクション」という用語は、外因性ＤＮＡを、原核宿主細胞又は真核宿主細胞に導入するために、一般に使用される、多種多様な技法、例えば、電気穿孔、リポフェクション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクションなどのうちのいずれかを指す。

本明細書で使用される、「〜を処置する」又は「処置」という用語は、目標が、がんなどの細胞増殖障害の進行など、所望されない生理学的変化又は障害を防止又は緩徐化する（軽減する）ことである、治療的処置を指す。有益な臨床結果又は所望される臨床結果は、検出可能であれ、検出不能であれ、症状の緩和、疾患の広がりの消失、疾患状態の安定化（すなわち、非増悪）、疾患進行の遅延又は緩徐化、疾患状態の改善又は軽減、及び寛解（部分寛解であれ、完全寛解であれ）を含むがこれらに限定されない。処置を必要とする者は、状態又は障害を既に伴う者、並びに状態若しくは障害を有しやすい者、又は状態若しくは障害が阻止されるべき者を含む。

本明細書で使用される、「ベクター」という用語は、核酸ベクター、例えば、プラスミドなどのＤＮＡベクター、ＲＮＡベクター、ウイルス、又は他の適切なレプリコン（例えば、ウイルスベクター）を指す。外因性タンパク質をコードするポリヌクレオチドを、原核細胞又は真核細胞に送達するために、様々なベクターが開発されている。このような発現ベクターの例は、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第１９９４／１１０２６号において開示されている。本発明の発現ベクターは、タンパク質の発現及び／又はこれらのポリヌクレオチド配列の、哺乳動物細胞（例えば、ヒト細胞）など、宿主細胞のゲノムへの組込みのために使用される、１つ又は複数のさらなる配列エレメントを含有しうる。本明細書で記載される抗体及び抗体断片の発現のために使用されうる、例示的なベクターは、遺伝子の転写を方向付ける、プロモーター領域及びエンハンサー領域などの調節配列を含有するプラスミドを含む。ベクターは、標的遺伝子の翻訳の速度をモジュレートするか、又は遺伝子の転写から生じるｍＲＮＡの安定性若しくは核からの移出を改善する核酸を含有しうる。これらの配列エレメントは、発現ベクターに保有される遺伝子の効率的な転写を方向付けるために、例えば、５’及び３’の非翻訳領域、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、並びにポリアデニル化シグナル部位を含みうる。本明細書で記載されるベクターはまた、このようなベクターを含有する細胞を選択するためのマーカーをコードするポリヌクレオチドも含有しうる。適切なマーカーの例は、アンピシリン、クロラムフェニコール、カナマイシン、又はノーセオスリシンなどの抗生剤に対する耐性をコードする遺伝子を含む。

本明細書で使用される、「ＶＨ」という用語は、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、又はＦａｂの重鎖を含む、抗体の免疫グロブリン重鎖の可変領域を指す。「ＶＬ」に対する言及は、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ又はＦａｂの軽鎖を含む、免疫グロブリン軽鎖の可変領域を指す。抗体（Ａｂ）及び免疫グロブリン（Ｉｇ）とは、同じ構造特徴を有する糖タンパク質である。抗体が、特異的標的に対する結合特異性を呈するのに対し、免疫グロブリンは、抗体及び標的特異性を欠く他の抗体様分子の両方を含む。天然の抗体及び免疫グロブリンは、通例、２つの同一な軽（Ｌ）鎖と、２つの同一な重（Ｈ）鎖とから構成される、約１５０，０００ドルトンの、四量体の糖タンパク質である。天然抗体の各重鎖は、アミノ末端において、可変ドメイン（ＶＨ）に続き、複数の定常ドメインを有する。天然抗体の各軽鎖は、アミノ末端（ＶＬ）における可変ドメインと、カルボキシ末端における定常ドメインとを有する。

遺伝子の定義
本明細書で使用される「Ｃ２Ｌ」とは、ケルチ様タンパク質をコードする遺伝子などのオルトポックスウイルス遺伝子を指す。Ｃ２Ｌ遺伝子をコードするタンパク質配列の非限定例は、下記の表３１〜３５に列挙される。「Ｃ２Ｌ」という用語はまた、下記の表に列挙されるタンパク質の断片若しくはバリアント、又は別のオルトポックスウイルス株に由来する、相同な遺伝子も含みうる。

本明細書で使用される「Ｃ１Ｌ」とは、オルトポックスウイルス遺伝子を指す。Ｃ１Ｌ遺伝子をコードするタンパク質配列の非限定例は、下記の表３１〜３５に列挙される。「Ｃ１Ｌ」という用語はまた、下記の表に列挙されるタンパク質の断片若しくはバリアント、又は別のオルトポックスウイルス株に由来する、相同な遺伝子も含みうる。

本明細書で使用される「Ｎ１Ｌ」とは、ＢＣＬ−２阻害剤をコードする遺伝子などのオルトポックスウイルス遺伝子を指す。Ｎ１Ｌ遺伝子をコードするタンパク質配列の非限定例は、下記の表３１〜３５に列挙される。「Ｎ１Ｌ」という用語はまた、下記の表に列挙されるタンパク質の断片若しくはバリアント、又は別のオルトポックスウイルス株に由来する、相同な遺伝子も含みうる。

本明細書で使用される「Ｎ２Ｌ」とは、ＴＬＲシグナル伝達阻害剤をコードする遺伝子などのオルトポックスウイルス遺伝子を指す。Ｎ２Ｌ遺伝子をコードするタンパク質配列の非限定例は、下記の表３１〜３５に列挙される。「Ｎ２Ｌ」という用語はまた、下記の表に列挙されるタンパク質の断片若しくはバリアント、又は別のオルトポックスウイルス株に由来する、相同な遺伝子も含みうる。

本明細書で使用される「Ｍ１Ｌ」とは、アンキリンリピートタンパク質をコードする遺伝子などのオルトポックスウイルス遺伝子を指す。Ｍ１Ｌ遺伝子をコードするタンパク質配列の非限定例は、下記の表３１〜３５に列挙される。「Ｍ１Ｌ」という用語はまた、下記の表に列挙されるタンパク質の断片若しくはバリアント、又は別のオルトポックスウイルス株に由来する、相同な遺伝子も含みうる。

本明細書で使用される「Ｍ２Ｌ」とは、ＮＦ−κＢ阻害剤をコードする遺伝子などのオルトポックスウイルス遺伝子を指す。Ｍ２Ｌ遺伝子をコードするタンパク質配列の非限定例は、下記の表３１〜３５に列挙される。「Ｍ２Ｌ」という用語はまた、下記の表に列挙されるタンパク質の断片若しくはバリアント、又は別のオルトポックスウイルス株に由来する、相同な遺伝子も含みうる。

本明細書で使用される「Ｋ１Ｌ」とは、ＮＦ−κＢ阻害剤をコードする遺伝子などのオルトポックスウイルス遺伝子を指す。Ｋ１Ｌ遺伝子をコードするタンパク質配列の非限定例は、下記の表３１〜３５に列挙される。「Ｋ１Ｌ」という用語はまた、下記の表に列挙されるタンパク質の断片若しくはバリアント、又は別のオルトポックスウイルス株に由来する、相同な遺伝子も含みうる。

本明細書で使用される「Ｋ２Ｌ」とは、アンキリンリピートタンパク質をコードする遺伝子などのオルトポックスウイルス遺伝子を指す。Ｋ２Ｌ遺伝子をコードするタンパク質配列の非限定例は、下記の表３１〜３５に列挙される。「Ｋ２Ｌ」という用語はまた、下記の表に列挙されるタンパク質の断片若しくはバリアント、又は別のオルトポックスウイルス株に由来する、相同な遺伝子も含みうる。

本明細書で使用される「Ｋ３Ｌ」とは、ＰＫＲ阻害剤をコードする遺伝子などのオルトポックスウイルス遺伝子を指す。Ｋ３Ｌ遺伝子をコードするタンパク質配列の非限定例は、下記の表３１〜３５に列挙される。「Ｋ３Ｌ」という用語はまた、下記の表に列挙されるタンパク質の断片若しくはバリアント、又は別のオルトポックスウイルス株に由来する、相同な遺伝子も含みうる。

本明細書で使用される「Ｋ４Ｌ」とは、ホスホリパーゼＤをコードする遺伝子などのオルトポックスウイルス遺伝子を指す。Ｋ４Ｌ遺伝子をコードするタンパク質配列の非限定例は、下記の表３１〜３５に列挙される。「Ｋ４Ｌ」という用語はまた、下記の表に列挙されるタンパク質の断片若しくはバリアント、又は別のオルトポックスウイルス株に由来する、相同な遺伝子も含みうる。

本明細書で使用される「Ｋ５Ｌ」とは、モノグリセリドリパーゼをコードする遺伝子などのオルトポックスウイルス遺伝子を指す。Ｋ５Ｌ遺伝子をコードするタンパク質配列の非限定例は、下記の表３１〜３５に列挙される。「Ｋ５Ｌ」という用語はまた、下記の表に列挙されるタンパク質の断片若しくはバリアント、又は別のオルトポックスウイルス株に由来する、相同な遺伝子も含みうる。

本明細書で使用される「Ｋ６Ｌ」とは、モノグリセリドリパーゼをコードする遺伝子などのオルトポックスウイルス遺伝子を指す。Ｋ６Ｌ遺伝子をコードするタンパク質配列の非限定例は、下記の表３１〜３５に列挙される。「Ｋ６Ｌ」という用語はまた、下記の表に列挙されるタンパク質の断片若しくはバリアント、又は別のオルトポックスウイルス株に由来する、相同な遺伝子も含みうる。

本明細書で使用される「Ｋ７Ｒ」とは、ＮＦ−κＢ阻害剤をコードする遺伝子などのオルトポックスウイルス遺伝子を指す。Ｋ７Ｒ遺伝子をコードするタンパク質配列の非限定例は、下記の表３１〜３５に列挙される。「Ｋ７Ｒ」という用語はまた、下記の表に列挙されるタンパク質の断片若しくはバリアント、又は別のオルトポックスウイルス株に由来する、相同な遺伝子も含みうる。

本明細書で使用される「Ｆ１Ｌ」とは、カスパーゼ９阻害剤をコードする遺伝子などのオルトポックスウイルス遺伝子を指す。Ｆ１Ｌ遺伝子をコードするタンパク質配列の非限定例は、下記の表３１〜３５に列挙される。「Ｆ１Ｌ」という用語はまた、下記の表に列挙されるタンパク質の断片若しくはバリアント、又は別のオルトポックスウイルス株に由来する、相同な遺伝子も含みうる。

本明細書で使用される「Ｆ２Ｌ」とは、ｄＵＴＰアーゼをコードする遺伝子などのオルトポックスウイルス遺伝子を指す。Ｆ２Ｌ遺伝子をコードするタンパク質配列の非限定例は、下記の表３１〜３５に列挙される。「Ｆ２Ｌ」という用語はまた、下記の表に列挙されるタンパク質の断片若しくはバリアント、又は別のオルトポックスウイルス株に由来する、相同な遺伝子も含みうる。

本明細書で使用される「Ｆ３Ｌ」とは、ケルチ様タンパク質をコードする遺伝子などのオルトポックスウイルス遺伝子を指す。Ｆ３Ｌ遺伝子をコードするタンパク質配列の非限定例は、下記の表３１〜３５に列挙される。「Ｆ１Ｌ」という用語はまた、下記の表に列挙されるタンパク質の断片若しくはバリアント、又は別のオルトポックスウイルス株に由来する、相同な遺伝子も含みうる。

本明細書で使用される「Ｂ１４Ｒ」とは、オルトポックスウイルス遺伝子を指す。Ｂ１４Ｒ遺伝子をコードするタンパク質配列の非限定例は、下記の表３６〜４０に列挙される。「Ｂ１４Ｒ」という用語はまた、下記の表に列挙されるタンパク質の断片若しくはバリアント、又は別のオルトポックスウイルス株に由来する、相同な遺伝子も含みうる。

本明細書で使用される「Ｂ１５Ｒ」とは、オルトポックスウイルス遺伝子を指す。Ｂ１５Ｒ遺伝子をコードするタンパク質配列の非限定例は、下記の表３６〜４０に列挙される。「Ｂ１５Ｒ」という用語はまた、下記の表に列挙されるタンパク質の断片若しくはバリアント、又は別のオルトポックスウイルス株に由来する、相同な遺伝子も含みうる。

本明細書で使用される「Ｂ１６Ｒ」とは、ＩＬ−１ベータ阻害剤をコードする遺伝子などのオルトポックスウイルス遺伝子を指す。Ｂ１６Ｒ遺伝子をコードするタンパク質配列の非限定例は、下記の表３１〜３５に列挙される。「Ｂ１６Ｒ」という用語はまた、下記の表に列挙されるタンパク質の断片若しくはバリアント、又は別のオルトポックスウイルス株に由来する、相同な遺伝子も含みうる。

本明細書で使用される「Ｂ１７Ｌ」とは、オルトポックスウイルス遺伝子を指す。Ｂ１７Ｌ遺伝子をコードするタンパク質配列の非限定例は、下記の表３６〜４０に列挙される。「Ｂ１７Ｌ」という用語はまた、下記の表に列挙されるタンパク質の断片若しくはバリアント、又は別のオルトポックスウイルス株に由来する、相同な遺伝子も含みうる。

本明細書で使用される「Ｂ１８Ｒ」とは、アンキリンリピートタンパク質をコードする遺伝子などのオルトポックスウイルス遺伝子を指す。Ｂ１８Ｒ遺伝子をコードするタンパク質配列の非限定例は、下記の表３６〜４０に列挙される。「Ｂ１８Ｒ」という用語はまた、下記の表に列挙されるタンパク質の断片若しくはバリアント、又は別のオルトポックスウイルス株に由来する、相同な遺伝子も含みうる。

本明細書で使用される「Ｂ１９Ｒ」とは、ＩＦＮアルファベータ受容体様分泌型糖タンパク質をコードする遺伝子などのオルトポックスウイルス遺伝子を指す。Ｂ１９Ｒ遺伝子をコードするタンパク質配列の非限定例は、下記の表３６〜４０に列挙される。「Ｂ１９Ｒ」という用語はまた、下記の表に列挙されるタンパク質の断片若しくはバリアント、又は別のオルトポックスウイルス株に由来する、相同な遺伝子も含みうる。

本明細書で使用される「Ｂ２０Ｒ」とは、アンキリンリピートタンパク質をコードする遺伝子などのオルトポックスウイルス遺伝子を指す。Ｂ２０Ｒ遺伝子をコードするタンパク質配列の非限定例は、下記の表３６〜４０に列挙される。「Ｂ２０Ｒ」という用語はまた、下記の表に列挙されるタンパク質の断片若しくはバリアント、又は別のオルトポックスウイルス株に由来する、相同な遺伝子も含みうる。

本明細書で使用される「Ｂ８Ｒ」とは、ガンマインターフェロン（ＩＦＮ−γ）に対して相同性を有する分泌型タンパク質をコードする遺伝子などのオルトポックスウイルス遺伝子を指す。ワクシニアウイルスのＣｏｐｅｎｈａｇｅｎ株における、例示的なＢ８Ｒ遺伝子によりコードされるタンパク質配列の非限定例は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢデータベース登録番号Ｐ２１００４に与えられており、下記にも再掲される：

MRYIIILAVLFINSIHAKITSYKFESVNFDSKIEWTGDGLYNISLKNYGIKTWQTMYTNVPEGTYDISAFPKNDFVSFWVKFEQGDYKVEEYCTGLCVEVKIGPPTVTLTEYDDHINLYIEHPYATRGSKKIPIYKRGDMCDIYLLYTANFTFGDSEEPVTYDIDDYDCTSTGCSIDFATTEKVCVTAQGATEGFLEKITPWSSEVCLTPKKNVYTCAIRKEDVPNFKDKMARVIKRKFNKQSQSYLTKFLGSTSNDVTTFLSMLNLTKYS

「Ｂ８Ｒ」という用語はまた、上記に列挙されたタンパク質の断片若しくはバリアント、又は別のオルトポックスウイルス株に由来する、相同な遺伝子も含みうる。バリアントは、限定せずに述べると、本明細書で開示される配列に対して、８５パーセント又はこれを超える同一性を有する配列を含む。

オルトポックスウイルスのウイルス株を含む、５９のポックスウイルス株についての系統発生解析を示す図である。異なる腫瘍型における、５つのワクシニアウイルスの継代後の、異なるウイルス株の存在度を示す図である。ワクシニア野生型株が、多様で異なる患者腫瘍コアにおいて複製される能力を示す図である。異なるワクシニア野生型株の、プラークサイズの測定を示す図である。図５Ａは、ワクシニアＣｏｐｅｎｈａｇｅｎゲノムにおける、１ｋｂの領域にわたる、ＴＴＡＡ部位の数を示す図である。図５Ｂは、ワクシニアＣｏｐｅｎｈａｇｅｎゲノムにわたる、トランスポゾン挿入の頻度を示す図である。各ドットは、トランスポゾンによる、特定の遺伝子のノックアウトを表す。ｙ軸におけるドットの位置は、ノックアウトの頻度により決定される。図５Ｃは、５９のウイルスにおける、ポックスウイルス遺伝子の保存を示す図である。高度の保存は、遺伝子が、大半の種において存在することを指し示す。許容状態のがん細胞における継代後の、多様なトランスポゾンノックアウトの頻度を示す図である。精製されたトランスポゾンの、プラークサイズの測定を示す図である。５ｐ欠失（ＣｏｐＭＤ５ｐ）及び３ｐ欠失（ＣｏｐＭＤ３ｐ）のゲノム構造を示す図である。ＣｏｐＭＤ５ｐと、ＣｏｐＭＤ３ｐとをかけ合わせて、ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐを作出した。多様な用量の、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ又はＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐの感染後における、がん細胞死を示すヒートマップである。４つの異なるがん細胞株における、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ及びＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐの複製の増殖曲線を示す図である。滴定により示される、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ及びＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐが、患者のｅｘｖｉｖｏ試料において複製される能力を示す図である。改変ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐウイルスが、親ウイルスと異なるプラークを形成することを示す図である。中央図において、ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐプラークの方がはるかに鮮明であり、合胞体（細胞融合）を見ることができる。ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐが、７８６−Ｏ細胞において、合胞体（細胞融合）を誘導することを示す図である。ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐが、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ野生型と同様に腫瘍の増殖を制御することが可能であるが、体重の減少を引き起こさないことを示す図である。ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐが、チミジンキナーゼの腫瘍溶解性ノックアウトを保有する、他の２つのワクシニア株（Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ及びＷｙｅｔｈ）と比較した場合に、ポックス病変の形成を引き起こさないことを示す図である。ヌードＣＤ−１マウスにおける、全身投与後の、アイビス（ＩＶＩＳ）によるワクシニアの生体分布を示す図である。ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐ（ＴＫＫＯ）をコードするルシフェラーゼは、腫瘍特異的であり、オフターゲット組織において複製されない。全身投与後の、ワクシニアの生体分布を示す図である。ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐは、腫瘍では、他の腫瘍溶解性ワクシニアと同様に複製されるが、オフターゲットの組織／臓器では、それほど複製されない。ヒトＰＢＭＣにおける、ワクシニアの免疫原性を示す図である。ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐが、ヒト自然免疫細胞の活性化を誘導する能力は、野生型Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎの能力より強力である。データは、フローサイトメトリー解析を介して収集した。マウス脾臓細胞における、ワクシニアの免疫原性を示す図である。ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐが、マウス自然免疫細胞の活性化を誘導する能力は、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎの能力より強力である。データは、フローサイトメトリー解析を介して収集した。ヒト細胞における、ワクシニアの免疫原性を示す図である。ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐが、ＮＦ−ｋＢ免疫転写因子を活性化させる能力は、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ又はＶＶｄｄの能力より強力であるが、ＭＧ−１の能力と同等である。示されるデータは、ウェスタンブロットである。侵襲性黒色腫モデル（Ｂ１６−Ｆ１０）における、免疫チェックポイント阻害剤である、抗ＣＴＬＡ−４（１００μｇ）との相乗作用を示す図である。ワクシニアと、免疫チェックポイント阻害剤である、抗ＣＴＬＡ４とで処置された免疫コンピテントマウスモデルにおける生存により測定された、ｉｎｖｉｖｏにおける効能である。免疫チェックポイント阻害剤である、抗ＣＴＬＡ４（１００μｇ）との相乗作用を示す図である。ワクシニアと、免疫チェックポイント阻害剤である、抗ＣＴＬＡ４とで処置された免疫コンピテントマウスモデルにおける腫瘍増殖（上行）及び生存（下行）により測定された、ｉｎｖｉｖｏにおける効能である。ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐ（左列）を、腫瘍溶解性ＣｏｐｅｎｈａｇｅｎＴＫＫＯ（右列）と比較した。免疫チェックポイント阻害剤である、抗ＰＤ１（１００μｇ）との相乗作用を示す図である。ワクシニアと、免疫チェックポイント阻害剤である、抗ＰＤ１とで処置された免疫コンピテントマウスモデルにおける腫瘍増殖（上行）及び生存（下行）により測定された、ｉｎｖｉｖｏにおける効能である。ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐ（左列）を、腫瘍溶解性ＣｏｐｅｎｈａｇｅｎＴＫＫＯ（右列）と比較した。免疫チェックポイント阻害剤である、抗ＰＤ１（２５μｇ）及び抗ＣＴＬＡ−４（２５μｇ）との相乗作用を示す図である。ワクシニアと、免疫チェックポイント阻害剤である、抗ＰＤ１及び抗ＣＴＬＡ４とで処置された免疫コンピテントマウスモデルにおける腫瘍増殖（上行）及び生存（下行）により測定された、ｉｎｖｉｖｏにおける効能である。ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐ（左列）を、腫瘍溶解性ＣｏｐｅｎｈａｇｅｎＴＫＫＯ（右列）と比較した。多様なワクシニア株において、５ｐメジャー欠失（左）及び３ｐメジャー欠失（右）を、デノボで作出するのに援用される、相同組換えターゲティング戦略についての概略表示である。野生型Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎワクシニアウイルス、及びいくつかの改変Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎワクシニアビリオンが、多様な細胞株において増殖する能力を示す図である。クーマシーブルー（ＣｏｏｍａｓｓｉｅＢｌｕｅ）アッセイ（上パネル）及びアラマーブルー（ＡｌａｍａｒＢｌｕｅ）アッセイ（下パネル）により評価される、多様な細胞株における、野生型Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎワクシニアウイルス、及びいくつかの改変Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎワクシニアビリオンの細胞傷害効果を示す図である。下パネルに示されるグラフのｘ軸に沿って、各細胞株について列挙された株の順序は、以下：左から右に、ＣｏｐＭＤ５ｐ、ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐ、ＣｏｐＭＤ３ｐ、及びＣｏｐＷＴの通りである。マウスへの投与時における、野生型Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎワクシニアウイルス、及びいくつかの改変Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎワクシニアビリオンの分布を示す図である。野生型Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎワクシニアウイルス、及びいくつかの改変Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎワクシニアビリオンが、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化させ、免疫応答を刺激する能力を示す図である。野生型Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎワクシニアウイルス、及びいくつかの改変Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎワクシニアビリオンが、ＮＫ細胞活性の尺度である、ＨＴ２９細胞に対する、ＮＫ細胞媒介性脱顆粒を増強し、免疫応答を刺激する能力を示す図である。野生型Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎワクシニアウイルス、及びいくつかの改変Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎワクシニアビリオンが、Ｔ細胞をプライミングして、抗腫瘍免疫応答を誘発する能力を示す図である。野生型Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎワクシニアウイルス、及びいくつかの改変Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎワクシニアビリオンが、初期の感染点から、遠隔の場所に拡散する能力を示す図である。野生型Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎワクシニアウイルス、及びいくつかの改変Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎワクシニアビリオンが、ウイルス増殖の尺度である、プラークを形成する能力を示す図である。野生型Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎワクシニアウイルス、及びいくつかの改変Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎワクシニアビリオンが、７８６−Ｏ細胞において、プラークを形成する能力を示す図である。ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐにおいて欠失した遺伝子の、多様なポックスウイルスゲノム中の百分率を示す図である。がん細胞株と対比した、正常細胞株への、ＳＫＶ−Ｂ８Ｒ＋ウイルスの感染を示す図である。ＳＫＶ−Ｂ８Ｒ＋が、インターフェロンによるシグナル伝達を損なわないことを示す図である。ＳＫＶ（ＣｏｐＭＤ５ｐ３−Ｂ８Ｒ−）が、腫瘍のコントロールにおいて、ＳＫＶ−Ｂ８Ｒ＋と比較して、同等の効能を及ぼすことを示す図である。２つの免疫療法用のトランス遺伝子及び抗体を発現させるように操作されたＳＫＶを示す図である。膜結合型マウスＩＬ−１２ｐ３５を発現させるＳＫＶが、マウス腫瘍のコントロールにおいて、大きな効能を及ぼすことを示す図である。多様なワクシニア株において操作された、二重メジャー欠失が、ｉｎｖｉｔｒｏにおける、がん細胞の殺滅を増強することを示す図である。多様なワクシニア株を感染させたＨｅＬａ細胞についての、表現型の特徴付けを示す図である。５ｐ３ｐワクシニア株が、野生型株と比較して、体重の減少を誘導しないことを示す図である。５ｐ３ｐワクシニア株が、野生型株と比較して、ポックス病変を誘導しないことを示す図である。

本発明は、ワクシニアウイルス（例えば、ウイルス株である、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、ＷＲ（ＷｅｓｔｅｒｎＲｅｓｅｒｖｅ）、Ｗｙｅｔｈ、Ｌｉｓｔｅｒ、ＥＭ６３、ＡＣＡＭ２０００、ＬＣ１６ｍ８、ＣＶ−１、改変ワクシニアＡｎｋａｒａ（ＭＶＡ）、ＤａｉｒｅｎＩ、ＧＬＶ−１ｈ６８、ＩＨＤ−Ｊ、Ｌ−ＩＶＰ、ＬＣ１６ｍ８、ＬＣ１６ｍＯ、Ｔａｓｈｋｅｎｔ、ＴｉａｎＴａｎ、及びＷＡＵ８６／８８−１）などの遺伝子改変オルトポックスウイルス、並びに多様ながんを処置するためのこれらの使用を特徴とする。本発明は、ウイルス株である、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、ＷＲ（ＷｅｓｔｅｒｎＲｅｓｅｒｖｅ）、Ｗｙｅｔｈ、Ｌｉｓｔｅｒ、ＥＭ６３、ＡＣＡＭ２０００、ＬＣ１６ｍ８、ＣＶ−１、改変ワクシニアＡｎｋａｒａ（ＭＶＡ）、ＤａｉｒｅｎＩ、ＧＬＶ−１ｈ６８、ＩＨＤ−Ｊ、Ｌ−ＩＶＰ、ＬＣ１６ｍ８、ＬＣ１６ｍＯ、Ｔａｓｈｋｅｎｔ、ＴｉａｎＴａｎ、及びＷＡＵ８６／８８−１などのオルトポックスウイルスが、Ｃ２Ｌ、Ｃ１Ｌ、Ｎ１Ｌ、Ｎ２Ｌ、Ｍ１Ｌ、Ｍ２Ｌ、Ｋ１Ｌ、Ｋ２Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ｋ４Ｌ、Ｋ５Ｌ、Ｋ６Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｆ１Ｌ、Ｆ２Ｌ、Ｆ３Ｌ、Ｂ１４Ｒ、Ｂ１５Ｒ、Ｂ１６Ｒ、Ｂ１７Ｌ、Ｂ１８Ｒ、Ｂ１９Ｒ、Ｂ２０Ｒ、ＫＯＲＦＡ、ＫＯＲＦＢ、ＢＯＲＦＥ、ＢＯＲＦＦ、ＢＯＲＦＧ、Ｂ２１Ｒ、Ｂ２２Ｒ、Ｂ２３Ｒ、Ｂ２４Ｒ、Ｂ２５Ｒ、Ｂ２６Ｒ、Ｂ２７Ｒ、Ｂ２８Ｒ、及びＢ２９Ｒ遺伝子のうちの１つ若しくは複数又は全てにおいて、欠失を含有するように遺伝子操作された場合に、腫瘍溶解活性、腫瘍における複製、感染性、免疫回避、腫瘍における存続、外因性ＤＮＡ配列を組み込むための能力、及び大スケールの製造への適性の顕著な改善を呈するという、驚くべき発見に、部分的に基づく。本発明の多様な実施形態では、改変オルトポックスウイルスは、Ｂ８Ｒ遺伝子の欠失を含有する。マウスでは不活性であるが、Ｂ８Ｒ遺伝子は、ヒトＩＦＮ−γの抗ウイルス活性を中和する。多様な実施形態では、その後、少なくとも１つのトランス遺伝子が、相同組換えターゲティング戦略を介して、Ｂ８Ｒ遺伝子の遺伝子座（今は欠失した）に挿入される。多様な実施形態では、改変オルトポックスウイルスは、３つのトランス遺伝子：ＩＬ−１２ＴＭ、ＦＬＴ３−Ｌ、及び抗ＣＬＴＡ−４抗体のうちの少なくとも１つを発現させる。

本明細書で記載されるオルトポックスウイルスは、広範にわたるがんを含む、様々な細胞増殖障害を処置するように、哺乳動物患者（例えば、ヒト患者）などの患者に投与されうる。以下の節は、オルトポックスウイルス及びこれに対する遺伝子改変、並びに遺伝子改変オルトポックスウイルスを作製し、繁殖させる方法と、これを、患者に投与するための技法とについて記載する。

ポックスウイルス
一般に、ポックスウイルスのウイルス粒子は、卵形又はブロック形であり、２００〜４００ｎｍほどの長さである。外部表面は、平行列状に***し、場合によって、らせん状に配置されている。このような粒子は、極度に複雑であり、１００を超える顕著に異なるタンパク質を含有する。細胞外形態が、２つの膜を含有する（ＥＥＶ：細胞外エンベロープビリオン）のに対し、細胞内粒子は、内膜だけを有する（ＩＭＶ：細胞内成熟ビリオン）。外面は、緊密に圧縮されたヌクレオタンパク質から構成されるコアを取り囲む、脂質及びタンパク質から構成されている。ポックスウイルスはまた、抗原的にも極めて複雑であり、特異性抗体及び交差反応性抗体の両方を誘導する。粒子には、大半が、核酸の代謝／ゲノムの複製に関与する、少なくとも１０の酵素が存在する。

野生型ポックスウイルスのゲノムは、１３０〜３００Ｋｂｐである、直鎖状の二本鎖ＤＮＡである。ゲノムの末端は、いくつかのタンデムリピート配列を伴う、末端のヘアピンループを有する。いくつかのポックスウイルスゲノムは、シーケンシングされており、不可欠の遺伝子の大半が、ゲノムの中央部に配置される一方、不可欠でない遺伝子は、末端に配置されている。ポックスウイルスゲノムには、約２５０の遺伝子が存在する。ウイルスは、ゲノムの複製に必要な、全ての機能を集約するのに十分に複雑であるので、複製は、細胞質においてなされる。細胞による寄与もなされるが、この寄与の性格は、明らかではない。ポックスウイルスの遺伝子発現及びゲノムの複製は、除核細胞においても生じるが、にもかかわらず、成熟は遮断されることから、細胞による何らかの役割が指し示される。

細胞質に至ると、コアと会合したウイルス酵素により、遺伝子の発現が実行される。発現は、２つの段階：ゲノムのうちの約５０％を占め、ゲノム複製の前に発現される早期遺伝子と、ゲノム複製の後で発現される後期遺伝子とに分けられる。発現の時間制御は、活性のために、ＤＮＡの複製に依存する、後期プロモーターによりもたらされる。ゲノムの複製は、高分子量のコンカタマーの形成をもたらす、自己プライミングを伴い、その後、コンカタマーが切断及び修復されて、ウイルスゲノムをもたらすと考えられる。ウイルスのアセンブリーは、細胞骨格において生じ、おそらく、細胞骨格タンパク質（例えば、アクチン結合性タンパク質）との相互作用を伴う。細胞質では、ウイルス粒子に成熟する封入体が形成される。細胞間の拡散は、感染拡散のための代替的機構をもたらしうる。全体として、この大型で、複雑なウイルスの複製は、かなり迅速であり、平均で、わずか１２時間しか要さない。少なくとも９つの異なるポックスウイルスが、ヒトにおいて、疾患を引き起こすが、天然痘ウイルス及びワクシニアウイルスが、最も良く知られている。天然痘株は、大痘瘡（２５〜３０％の致死率）及び小痘瘡（同じ症状であるが、死亡率は１％未満である）に分けられる。いずれのウイルスの感染も、呼吸器経路により、天然で発生し、全身性の感染であり、様々な症状をもたらすが、とりわけ、天然痘に特徴的な、皮膚の嚢胞及び瘢痕形成を伴う。

オルトポックスウイルスの種としてのワクシニアウイルス
ワクシニアウイルスは、約１９０Ｋｂｐである、直鎖状の二本鎖ＤＮＡゲノムを有し、約２５０の遺伝子をコードする、大型で複雑なエンベロープウイルスである。ワクシニアは、天然痘を根絶したワクチンとしての、その役割について周知である。天然痘の根絶後、研究者らは、遺伝子を、生物学的組織に送達するためのツールとしてのワクシニアの使用（遺伝子治療及び遺伝子工学）について探索している。ワクシニアウイルスは、宿主細胞の細胞質だけにおいて複製されるので、ＤＮＡウイルスの間で固有である。したがって、ウイルスＤＮＡの複製に必要とされる、多様な酵素及びタンパク質をコードするのに、大型のゲノムが要求される。複製時に、ワクシニアは、それらの外膜が異なる、いくつかの感染性形態：細胞内成熟ビリオン（ＩＭＶ）、細胞内エンベロープビリオン（ＩＥＶ）、細胞関連エンベロープビリオン（ＣＥＶ）、及び細胞外エンベロープビリオン（ＥＥＶ）をもたらす。ＩＭＶは、最も夥多な感染性形態であり、宿主間の拡散の一因となると考えられる。他方、ＣＥＶは、細胞間の拡散において、役割を果たすと考えられ、ＥＥＶは、宿主生物内の、長射程の播種に重要であると考えられる。

ワクシニアウイルスは、牛痘を引き起こすウイルスと近縁である。ワクシニアの正確な由来は、未知であるが、最も一般的な見方は、ワクシニアウイルス、牛痘ウイルス、及び天然痘ウイルス（天然痘の原因作用物質）が、全て、共通の先祖ウイルスに由来したという見方である。ワクシニアウイルスは、元来、ウマから単離されたという推測もまたなされている。ワクシニアウイルス感染は、軽度であり、典型的に、健常個体では、無症状であり、軽度の発赤及び発熱を引き起こす場合はあるが、致死率は極めて小さい。ワクシニアウイルス感染に対して発生した免疫応答は、感染者を、致死性の天然痘感染に対して保護する。この理由で、ワクシニアウイルスは、天然痘に対する、生ウイルスワクチンとして使用された。ワクシニアウイルスワクチンは、天然痘ウイルスを含有しないため、安全であるが、時に、とりわけ、ワクチンが、免疫障害個体に投与される場合、ある特定の合併症及び／又はワクチンの有害作用が生じうる。

ワクシニアウイルスの例示的な株は、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、ＷＲ（ＷｅｓｔｅｒｎＲｅｓｅｒｖｅ）、Ｗｙｅｔｈ、Ｌｉｓｔｅｒ、ＥＭ６３、ＡＣＡＭ２０００、ＬＣ１６ｍ８、ＣＶ−１、改変ワクシニアＡｎｋａｒａ（ＭＶＡ）、ＤａｉｒｅｎＩ、ＧＬＶ−１ｈ６８、ＩＨＤ−Ｊ、Ｌ−ＩＶＰ、ＬＣ１６ｍ８、ＬＣ１６ｍＯ、Ｔａｓｈｋｅｎｔ、ＴｉａｎＴａｎ、及びＷＡＵ８６／８８−１を含むがこれらに限定されない。

チミジンキナーゼ変異体
ワクシニアウイルスを、腫瘍溶解性ウイルスとして調べる、いくつかの進行中の臨床研究は、ウイルスのチミジンキナーゼ（ＴＫ）遺伝子に、欠失を施す。この欠失は、ウイルスを弱毒化し、ウイルスを、ＤＮＡの複製のために、したがって、ウイルスの繁殖のために、細胞のチミジンキナーゼの活性に依存的にする。細胞のチミジンキナーゼは、大半の正常組織では、低レベルで発現されるが、多くのがん細胞では、高レベルで発現される。代謝ターゲティングを介して、ＴＫ−ウイルスは、代謝速度が大きな細胞（例えば、健常細胞又は腫瘍細胞）では、増殖しうるが、チミジンキナーゼが低レベルの細胞では、十分に増殖しないであろう。休眠腫瘍細胞（例えば、がん幹細胞）が存在するので、ＴＫ−ウイルスは、化学療法が、大部分、無効であるのと全く同様に、このがん細胞集団を死滅させる、それらの能力が損なわれている可能性が高い。本開示で記載される改変ウイルスベクターは、ウイルス合成機構（ＴＫを含む）を保持し、休眠がん細胞においても繁殖しうる。本開示のウイルス改変であれば、ウイルスが、ＴＫ又は他のＤＮＡ代謝酵素（例えば、リボヌクレオチドレダクターゼ）を欠失させずに、高度に選択的であることを可能とし、代謝速度が小さい腫瘍においても有効でありうるであろう。

ウイルスの繁殖
本発明は、ウイルスが、がん細胞に対する使用に所望される特性を呈しながら、非がん細胞に対して、低毒性又は非毒性であるように、野生型と比較して、１つ又は複数の遺伝子欠失を伴って構築されたポックスウイルスを含むポックスウイルスを特徴とする。本節は、例を目的として、組換えＤＮＡ技術の使用を介して、変異ウイルスを発生させるための方法など、本明細書で記載される、組換えポックスウイルスを作製するための、多様なプロトコールをまとめる。

例えば、ポックスウイルスゲノムにおいて、変異を作出するために、天然ポリペプチド及び修飾ポリペプチドは、ベクターに含まれる核酸分子によりコードされうる。ベクターは、プラスミド、コスミド、ウイルス（バクテリオファージ、動物ウイルス、及び植物ウイルス）、及び人工染色体（例えば、ＹＡＣ）を含む。当業者は、いずれもが、参照により本明細書に組み込まれる、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）及びＡｕｓｕｂｅｌら、１９９４において記載されている、標準的な組換え技法を介して、ベクターを構築するのに、十分な素養があるであろう。修飾ゲロニンなどの修飾ポリペプチドをコードすることに加えて、ベクターは、タグ又はターゲティング分子などの非修飾ポリペプチド配列もコードしうる。

宿主細胞において、ベクターを繁殖させるために、ベクターは、複製が開始される、特異的核酸配列である、１つ又は複数の複製起点部位（「ｏｒｉ」と称することが多い）を含有しうる。代替的に、宿主細胞が酵母である場合、自立複製型配列（ＡＲＳ）も援用されうる。

異種核酸配列を発現させる文脈では、「宿主細胞」とは、原核細胞又は真核細胞を指し、ベクターを複製すること、及び／又はベクターによりコードされる異種遺伝子を発現させることが可能な、任意の形質転換可能な生物を含む。宿主細胞は、ベクター又はウイルス（外因性ポリペプチドを発現させない場合、ベクターとして適格ではない）のレシピエントとして使用される場合があり、レシピエントとして使用されている。宿主細胞は、「トランスフェクト」又は「形質転換」される場合があり、これは、修飾タンパク質をコードする配列などの外因性核酸が、宿主細胞に、移入又は導入される工程を指す。形質転換細胞は、初代対象細胞及びその後代を含む。宿主細胞は、所望される結果が、ベクターの複製であるのか、ベクターによりコードされる核酸配列の一部又は全部の発現であるのかに応じて、原核生物から導出される場合もあり、酵母細胞、昆虫細胞、及び哺乳動物細胞を含む、真核生物から導出される場合もある。多数の細胞株及び培養物が、宿主細胞としての使用のために利用可能であり、生物の培養物及び遺伝子素材のためのアーカイブとして用いられる機構である、ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）（ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ）を介して得られうる。適切な宿主は、ベクター骨格及び所望される結果に基づき、当業者により決定されうる。プラスミド又はコスミドは、例えば、多くのベクターの複製のために、原核宿主細胞に導入されうる。ベクターの複製及び／又は発現のための宿主細胞として使用される細菌細胞は、ＤＨ５α、ＪＭ１０９、及びＫＣＢ、並びにシュア（ＳＵＲＥ）（登録商標）コンピテント細胞及びソロパック（ＳＯＬＯＰＡＣＫ）（商標）ゴールドセル（ＧｏｌｄＣｅｌｌ）（ストラタジーン（ＳＴＲＡＴＡＧＥＮＥ）（登録商標）、ＬａＪｏｌｌａ、Ｃａｌｉｆ．）など、多数の市販の細菌宿主を含む。代替的に、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＬＥ３９２などの細菌細胞も、ファージウイルスのための宿主細胞として使用されうるであろう。適切な酵母細胞は、出芽酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、***酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｐｏｍｂｅ）、及びメタノール資化酵母（Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ）を含む。ベクターの複製及び／又は発現のための真核宿主細胞の例は、ＨｅＬａ、ＮＩＨ３Ｔ３、Ｊｕｒｋａｔ、２９３、Ｃｏｓ、ＣＨＯ、Ｓａｏｓ、及びＰＣ１２を含む。多様な細胞型及び生物に由来する、多くの宿主細胞が利用可能であり、当業者にも公知であろう。同様に、ウイルスベクターは、真核宿主細胞又は原核宿主細胞、特に、ベクターの複製又は発現に対して、許容状態にある真核宿主細胞又は原核宿主細胞と共に使用されうる。一部のベクターは、それが、原核細胞及び真核細胞のいずれにおいても、複製されること、及び／又は発現されることを可能とする制御配列を援用しうる。当業者は、上記の宿主細胞の全てを、それらを維持し、ベクターの複製を許容するようにインキュベートするための条件を、さらに理解するであろう。大スケールにおけるベクターの作製、並びにベクターによりコードされる核酸及びそれらのコグネイトポリペプチド、タンパク質、又はペプチドの作製を可能とする技法及び条件もまた、理解されており、公知である。

オルトポックスウイルスゲノムに対する遺伝子改変
遺伝子改変の方法
標的ゲノムへの核酸の挿入又は標的ゲノムからの核酸の欠失の方法は、本明細書で記載され、当技術分野で公知の方法を含む。標的遺伝子をコードするポリヌクレオチドを、標的ゲノムに組み込むために使用されうる、１つのこのような方法は、トランスポゾンの使用を伴う。トランスポゾンとは、トランスポザーゼ酵素をコードするポリヌクレオチドであり、５’切出し部位と、３’切出し部位とに挟まれた、目的のポリヌクレオチド配列又は遺伝子を含有する。トランスポゾンが、標的核酸（例えば、宿主細胞における）に送達されると、トランスポザーゼ遺伝子の発現が始まり、目的の遺伝子を、トランスポゾンから切断する活性酵素を結果としてもたらす。この活性は、トランスポザーゼによる、トランスポゾン切出し部位の、部位特異的認識により媒介される。ある特定の場合には、これらの切出し部位は、末端反復又はＩＴＲ（ｉｎｖｅｒｔｅｄｔｅｒｍｉｎａｌｒｅｐｅａｔ）でありうる。トランスポゾンから切り出されると、目的の遺伝子は、細胞の核ゲノム内に存在する、同様の切出し部位の、トランスポザーゼ触媒性切断により、標的ゲノムに組み込まれうる。これは、目的の遺伝子が、切断された核ＤＮＡに、相補的な切出し部位において挿入されることを可能とし、その後における、目的の遺伝子を、標的ゲノムのＤＮＡに接続する、ホスホジエステル結合の、共有結合的ライゲーションが、組込み過程を完結させる。ある特定の場合には、トランスポゾンは、標的遺伝子をコードする遺伝子が、哺乳動物細胞ゲノムへの組込みの前に、まず、ＲＮＡ産物に転写され、次いで、ＤＮＡに逆転写されるように、レトロトランスポゾンでありうる。トランスポゾン系は、各々の開示が、参照により本明細書に組み込まれる、ピギーバックトランスポゾン（例えば、国際公開第２０１０／０８５６９９号において、詳細に記載されている）及びスリーピングビューティートランスポゾン（例えば、米国特許出願公開第２００５／０１１２７６４号において、詳細に記載されている）を含む。

本発明の組成物の発現をもたらす、核酸送達のためのさらなる方法は、本明細書で記載されるか、又は当業者に公知である、核酸（例えば、ウイルスベクター及び非ウイルスベクターを含むＤＮＡ）が、細胞小器官、細胞、組織、又は生物に導入されうる、事実上任意の方法を含むと考えられる。このような方法は、マイクロインジェクション（参照により本明細書に組み込まれる、Ｈａｒｌａｎｄ及びＷｅｉｎｔｒａｕｂ、１９８５；米国特許第５，７８９，２１５号）を含む、注射（各々が、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，９９４，６２４号、同第５，９８１，２７４号、同第５，９４５，１００号、同第５，７８０，４４８号、同第５，７３６，５２４号、同第５，７０２，９３２号、同第５，６５６，６１０号、同第５，５８９，４６６号、及び同第５，５８０，８５９号）；電気穿孔（参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，３８４，２５３号）；リン酸カルシウム沈殿（Ｇｒａｈａｍ及びＶａｎＤｅｒＥｂ、１９７３；Ｃｈｅｎ及びＯｋａｙａｍａ、１９８７；Ｒｉｐｐｅら、１９９０）；ＤＥＡＥ−デキストランに続く、ポリエチレングリコールの使用（Ｇｏｐａｌ、１９８５）；直接的超音波ローディング（Ｆｅｃｈｈｅｉｍｅｒら、１９８７）；リポソーム媒介型トランスフェクション（Ｎｉｃｏｌａｕ及びＳｅｎｅ、１９８２；Ｆｒａｌｅｙら、１９７９；Ｎｉｃｏｌａｕら、１９８７；Ｗｏｎｇら、１９８０；Ｋａｎｅｄａら、１９８９；Ｋａｔｏら、１９９１）；微粒子銃（各々が、参照により本明細書に組み込まれる、ＰＣＴ出願国際公開第９４／０９６９９号及び同第９５／０６１２８号；米国特許第５，６１０，０４２号；同第５，３２２，７８３号、同第５，５６３，０５５号、同第５，５５０，３１８号、同第５，５３８，８７７号及び同第５，５３８，８８０号）；炭化ケイ素繊維による攪拌（各々が、参照により本明細書に組み込まれる、Ｋａｅｐｐｌｅｒら、１９９０；米国特許第５，３０２，５２３号及び同第５，４６４，７６５号）；アグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属媒介性形質転換（各々が、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，５９１，６１６号及び同第５，５６３，０５５号）；又はプロトプラストによる、ＰＥＧ媒介性形質転換（各々が、参照により本明細書に組み込まれる、Ｏｍｉｒｕｌｌｅｈら、１９９３；米国特許第４，６８４，６１１号及び同第４，９５２，５００号）；乾燥／阻害媒介性ＤＮＡ取込み（Ｐｏｔｒｙｋｕｓら、１９８５）によるＤＮＡの直接的送達などのＤＮＡの直接的送達を含むがこれらに限定されない。これらの技法などの技法の適用を介して、細胞小器官（複数可）、細胞（複数可）、組織（複数可）又は生物（複数可）が、安定的に形質転換される場合もあり、一過性に形質転換される場合もある。

ＣｏｐＭＤ５ｐ、ＣｏｐＭＤ３ｐ、及びＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐの欠失
多様な実施形態では、オルトポックスウイルスの腫瘍溶解活性を増強するように、多様な遺伝子が欠失している。本明細書で記載される欠失の大半は、ウイルス感染に対する宿主応答の遮断に関与するか、又は他の形における未知の機能を有する。多様な実施形態では、表２に描示された遺伝子のうちの少なくとも１つが、組換えオルトポックスウイルスゲノムから欠失している。多様な実施形態では、表２に描示された遺伝子のうちの、少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、又は３１が、組換えオルトポックスウイルスゲノムから欠失している。多様な実施形態では、表２に描示された遺伝子の全てが、組換えオルトポックスウイルスゲノムから欠失している。本明細書では、本発明の３つの例示的な実施形態である、ＣｏｐＭＤ５ｐ、ＣｏｐＭＤ３ｐ、及びＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐについて記載される。下記の表２では、欠失した遺伝子のクラスター、並びにＣｏｐＭＤ５ｐウイルス、ＣｏｐＭＤ３ｐウイルス、及びＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐウイルスにおけるそれらの機能が描示される。ＩＴＲの２つのコピーが存在する、多様な実施形態では、ゲノムの右側のＩＴＲが欠失し、左側のＩＴＲは、インタクトのままである。欠失は、全ゲノムシーケンシングにより確認される。

Ｂ８Ｒ遺伝子の欠失
多様な実施形態では、オルトポックスウイルスは、Ｂ８Ｒ遺伝子における欠失を含有するように、さらに遺伝子改変される。ワクシニアウイルスＢ８Ｒ遺伝子は、ガンマインターフェロン受容体（ＩＦＮ−γ）に対する相同性を伴う分泌型タンパク質をコードする。ｉｎｖｉｔｒｏにおいて、Ｂ８Ｒタンパク質は、ヒト及びラットのガンマインターフェロンを含む、ガンマインターフェロンのいくつかの分子種に結合し、これらの抗ウイルス活性を中和するが、マウスＩＦＮ−γへの結合が著明である。Ｂ８Ｒ遺伝子を欠失させることは、ヒトにおけるＩＦＮ−γの機能不全を阻止する。Ｂ８Ｒ遺伝子の欠失は、免疫原性の、共時的な低減を伴わずに、安全性の増強を結果としてもたらす。

トランス遺伝子の挿入
多様な実施形態では、さらなるトランス遺伝子が、ベクターに挿入されうる。多様な実施形態では、１つ、２つ、又は３つのトランス遺伝子が、欠失したＢ８Ｒ遺伝子の遺伝子座に挿入されている。一部の株では、Ｂ８Ｒの欠失部位に存在するトランス遺伝子（複数可）に加えて、株はまた、少なくとも１つのトランス遺伝子も、欠失したＢ８Ｒ遺伝子の遺伝子座ではない、オルトポックスウイルスのさらなる遺伝子座に挿入されている。多様な実施形態では、少なくとも１つのトランス遺伝子は、５ｐ欠失の境界に挿入され、少なくとも１つのトランス遺伝子は、３ｐ欠失の境界又はこれらの両方に挿入されている。多様な実施形態では、少なくとも３つ、４つ、５つ、又はこれを超えるトランス遺伝子が、改変オルトポックスウイルスゲノムに挿入されている。

多様な実施形態では、組換えオルトポックスウイルスベクターは、少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤をコードするトランス遺伝子を含みうる。本発明の組成物及び方法のオルトポックスウイルスにより発現させるための、例示的な免疫チェックポイント阻害剤は、ＯＸ４０リガンド、ＩＣＯＳリガンド、抗ＣＤ４７抗体又はその抗原結合性断片、抗ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ抗体又はその抗原結合性断片、抗Ｌａｇ３抗体又はその抗原結合性断片、抗ＣＴＬＡ−４抗体又はその抗原結合性断片、抗ＰＤ−Ｌ１抗体又はその抗原結合性断片、抗ＰＤ１抗体又はその抗原結合性断片、及び抗Ｔｉｍ−３抗体又はその抗原結合性断片を含むがこれらに限定されない。

多様な実施形態では、組換えオルトポックスウイルスベクターは、少なくとも１つのインターロイキンタンパク質をコードする少なくとも１つのトランス遺伝子を含みうる。本発明の組成物及び方法のオルトポックスウイルスにより発現させるための、例示的なインターロイキンタンパク質は、ＩＬ−１アルファ、ＩＬ−１ベータ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２ｐ３５、ＩＬ−１２ｐ４０、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、及びＩＬ−２３を含むがこれらに限定されない。

多様な実施形態では、組換えオルトポックスウイルスベクターは、インターフェロンをコードするトランス遺伝子を含みうる。本発明の組成物及び方法のオルトポックスウイルスにより発現させるための、例示的なインターフェロンは、ＩＦＮアルファ、ＩＦＮ−ベータ、ＩＦＮデルタ、ＩＦＮイプシロン、ＩＦＮタウ、ＩＦＮオメガ、ＩＦＮゼータ、及びＩＦＮガンマを含むがこれらに限定されない。

多様な実施形態では、組換えオルトポックスウイルスベクターは、ＴＮＦスーパーファミリーメンバータンパク質をコードするトランス遺伝子を含みうる。本発明の組成物及び方法のオルトポックスウイルスにより発現させるための、例示的なＴＮＦスーパーファミリーメンバータンパク質は、ＴＲＡＩＬ、Ｆａｓリガンド、ＬＩＧＨＴ（ＴＮＦＳＦ−１４）、ＴＮＦアルファ、及び４−１ＢＢリガンドを含むがこれらに限定されない。

多様な実施形態では、組換えオルトポックスウイルスベクターは、サイトカインをコードするトランス遺伝子を含みうる。本発明の組成物及び方法のオルトポックスウイルスにより発現させるための、例示的なサイトカインは、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｆｌｔ３リガンド、ＣＤ４０リガンド、抗ＴＧＦベータ、抗ＶＥＧＦ−Ｒ２、及びｃＧＡＳ（グアニルアデニル酸シクラーゼ）を含むがこれらに限定されない。

多様な実施形態では、組換えオルトポックスウイルスベクターは、腫瘍関連抗原をコードするトランス遺伝子を含みうる。本発明の組成物及び方法のオルトポックスウイルスにより発現させるための、例示的な腫瘍関連抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ３３、ＥｐＣＡＭ、ＣＥＡ、ＰＳＭＡ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ１３３、ＥＧＦＲ、ＣＤＨ１９、ＥＮＰＰ３、ＤＬＬ３、ＭＳＬＮ、ＲＯＲ１、ＨＥＲ２、ＨＬＡＡ２、ＥｐＨＡ２、ＥｐＨＡ３、ＭＣＳＰ、ＣＳＰＧ４、ＮＧ２、ＲＯＮ、ＦＬＴ３、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＦＡＰα、ＦＲα、ＣＡ−９、ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ、ＦＳＰ１、Ｓ１００Ａ４、ＡＤＡＭ１２ｍ、ＲＥＴ、ＭＥＴ、ＦＧＦＲ、ＩＮＳＲ、ＮＴＲＫ、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＮＹ−ＥＳＯ−１、１つ若しくは複数のヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）タンパク質、ＨＰＶ１６のＥ６タンパク質及びＥ７タンパク質、ＨＰＶ１８のＥ６タンパク質及びＥ７タンパク質、ブラキウリ、又は前立腺酸性ホスファターゼ、或いは１つ又は複数のそれらの断片を含むがこれらに限定されない。本明細書で記載される組成物及び方法を伴う使用のための、腫瘍関連抗原のさらなる例は、表３〜３０に列挙された例を含むがこれらに限定されない。

処置法
医薬組成物、投与、及び用量
本発明の組換えオルトポックスウイルスベクターを含有する治療用組成物は、当技術分野で公知の方法を使用して調製されうる。例えば、このような組成物は、例えば、生理学的に許容される担体、賦形剤、又は安定化剤（参照により本明細書に組み込まれる、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ」、１６版、Ｏｓｏｌ，Ａ．編（１９８０））を使用し、所望の形態、例えば、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態において調製されうる。

本発明の方法及び組成物を使用して、腫瘍溶解を誘導し、細胞を死滅させ、増殖を阻害し、転移を阻害し、腫瘍サイズを減少させ、腫瘍細胞の悪性表現型を、他の形で抑制又は軽減するために、例えば、オルトポックスウイルスの、がんを有する患者への、例えば、本明細書で記載される投与経路のうちの１又は複数を介する投与により、腫瘍を、改変オルトポックスウイルスと接触させることができる。投与経路は、がんの場所及び性格により変動する場合があり、例えば、皮内投与及び皮内製剤、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）投与及び経皮製剤、非経口投与及び非経口製剤、静脈内投与及び静脈内製剤、筋内投与及び筋内製剤、鼻腔内投与及び鼻腔内製剤、皮下投与及び皮下製剤、局所（例えば、特に、腫瘍の血管系又は腫瘍に隣接する血管系を伴う、腫瘍の近傍における）投与及び局所製剤、経皮（ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ）投与及び経皮製剤、髄腔内投与及び髄腔内製剤、腹腔内投与及び腹腔内製剤、動脈内投与及び動脈内製剤、小胞内投与及び小胞内製剤、腫瘍内投与及び腫瘍内製剤、吸入投与及び吸入製剤、灌流投与及び灌流製剤、洗浄投与及び洗浄製剤、並びに経口投与及び経口製剤を含みうる。

「血管内」という用語は、患者の血管系への送達を指すように理解され、患者の１つ若しくは複数の血管への送達、これらの中の送達、又はこれらにおける送達を意味する。ある特定の実施形態では、投与は、静脈であると考えられる血管への投与（静脈内投与）であるのに対し、他の実施形態では、投与は、動脈であると考えられる血管への投与である。静脈は、内頸静脈、末梢静脈、冠状静脈、肝静脈、門脈脈、大伏在静脈、肺静脈、上大静脈、下大静脈、胃静脈、脾静脈、下腸間膜静脈、上腸間膜静脈、橈側皮静脈、及び／又は大腿静脈を含むがこれらに限定されない。動脈は、冠状動脈、肺動脈、上腕動脈、内頸動脈、大動脈弓、大腿動脈、末梢動脈、及び／又は毛様体動脈を含むがこれらに限定されない。送達は、細動脈又は毛細血管を介する送達の場合もあり、これらへの送達の場合もあることが想定される。

腫瘍内注射、又は腫瘍血管系への直接の注射は、詳細には、孤発性腫瘍、充実性腫瘍、アクセス可能な腫瘍のために想定される。局所投与、領域内投与、又は全身投与もまた、適切でありうる。ウイルス粒子は、例えば、約１ｃｍ間隔で隔てられた、腫瘍への複数回の注射を投与することにより接触させると有利でありうる。手術による介入の場合、本発明は、手術不可能な腫瘍対象を、切除にかけられるようにするためなど、手術前に使用されうる。適切な場合、例えば、カテーテルを、腫瘍又は腫瘍血管系に植え込むことにより、連続投与もまた適用されうる。このような連続灌流は、例えば、処置の開始後、約１〜２時間、約２〜６時間、約６〜１２時間、又は約１２〜２４時間にわたり行われうる。一般に、治療用組成物の、連続灌流を介する用量は、単回又は複数回の注射により施される用量と同等であることが可能であり、灌流が生じる期間にわたり調整されうる。特に、黒色腫及び肉腫の処置において、本発明の治療用組成物を投与するのに、四肢灌流が使用されうることもさらに想定される。

処置レジメンは、変動する場合があり、腫瘍型、腫瘍の場所、疾患の進行、並びに患者の健康状態及び年齢に依存することが多い。ある特定の種類の腫瘍は、より侵襲性の処置を要求するが、同時に、ある特定の患者は、負荷の大きなプロトコールを忍容できない。医師は、治療用製剤の、既知の効能及び毒性（存在する場合）に基づき、このような決定を下すのに最も適する。ある特定の実施形態では、処置される腫瘍は、少なくとも初期に切除可能とは限らない場合がある。本開示の治療剤による処置は、辺縁部における退縮のために、又はある特定の部分、特に、浸潤部分の消失により、腫瘍の切除可能性を増大させうる。処置後、切除は、可能でありうる。切除に後続するさらなる処置は、腫瘍部位における、顕微鏡的遺残病変を消失させるのに用いられるであろう。

処置は、多様な「単位用量」を含みうる。単位用量は、所定数量の治療用組成物を含有するものとして規定される。投与される数量、並びに特定の経路及び製剤は、臨床技術分野の技術の範囲内にある。単位用量は、単回注射として投与される必要はなく、設定期間にわたる連続注入を含みうる。本発明の単位用量は、ウイルス構築物についてのプラーク形成単位（ｐｆｕ）との関係で記載されると好都合でありうる。単位用量は、１０^３、１０^４、１０^５、１０^６、１０^７、１０^８、１０^９、１０^１０、１０^１１、１０^１２〜１０^１３ｐｆｕ及びこれを超える範囲でありうる。加えて、又は代替的に、ウイルスの種類及び達成可能な力価に応じて、１〜１００、１０〜５０、１００〜１０００ｐｆｕ、或いは最大で約１×１０^４、１×１０^５、１×１０^６、１×１０^７、１×１０^８、１×１０^９、１×１０^１０、１×１０^１１、１×１０^１２、１×１０^１３、１×１０^１４、若しくは１×１０^１５ｐｆｕ、又はこれを超える感染性ウイルス粒子（ｖｐ）、或いは少なくともこれらの量のｖｐであって、これらの間の全ての値及び範囲を含む数のｖｐを、腫瘍又は腫瘍部位に送達することができる。

本明細書で開示される組換えオルトポックスウイルスゲノムを、がん細胞又は腫瘍細胞に送達する、別の方法は、腫瘍内注射を介しうる。しかし、本明細書で開示される医薬組成物は、代替的に、米国特許第５，５４３，１５８号；米国特許第５，６４１，５１５号、及び米国特許第５，３９９，３６３号（各々が、参照によりその全体において本明細書に詳細に組み込まれる）において記載されている通り、非経口投与、静脈内投与、皮内投与、筋内投与、経皮投与、なお又は腹腔内投与されうる。核酸構築物の注射は、シリンジにより送達される場合もあり、発現構築物が、注射に要求される、特定ゲージの注射針を通過しうる限りにおいて、溶液の注射のために使用される、他の任意の方法により送達される場合もある。本明細書で記載される組換えオルトポックスウイルスを投与するために使用されうる、例示的な無針注射システムは、米国特許第５，８４６，２３３号において例示されている。このシステムは、溶液を保持するためのアンプルチャンバーを規定するノズルと、溶液を、ノズルから、送達部位に押し出すためのエネルギーデバイスとを特徴とする。別の例示的なシリンジシステムは、所定数量の溶液の、任意の正確な深度における、複数回の注射を可能とするシリンジシステムである（米国特許第５，８４６，２２５号）。

本明細書で記載されるウイルス粒子又は核酸の混合物は、１つ又は複数の賦形剤、担体、又は希釈剤と、適切に混合された水において調製されうる。グリセロール、液体ポリエチレングリコール、及びこれらの混合物、並びに油における分散液もまた調製されうる。通常の保存及び使用の条件下において、これらの調製物は、微生物の増殖を防止する保存剤を含有しうる。注射のための使用に適する医薬剤形は、滅菌注射用溶液又は滅菌注射用分散液の即席の調製のための、滅菌水溶液又は滅菌分散液、及び滅菌粉末を含む（参照によりその全体において詳細に本明細書に組み込まれる、米国特許第５，４６６，４６８号）。全ての場合に、剤形は、滅菌剤形であることが可能であり、容易な注射可能性が存在する程度において、流体でありうる。剤形は、製造条件下及び保存条件かで安定であることが可能であり、細菌及び真菌などの微生物の汚染作用に対して保存されうる。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、これらの適切な混合物、及び／又は植物油を含有する、溶媒又は分散媒でありうる。適正な流体性は、例えば、レシチンなどのコーティングを使用することにより維持することができ、分散液の場合には、要求される粒子サイズを維持し、界面活性剤を使用することにより維持することができる。微生物作用の防止は、多様な抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどによりもたらされうる。多くの場合、等張剤、例えば、糖又は塩化ナトリウムを含むことが好ましいであろう。注射用組成物の長時間吸収は、組成物中の、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンの使用によりもたらされうる。

水溶液による非経口投与のために、例えば、溶液は、必要であれば適切に緩衝処理される場合があり、液体の希釈剤は、十分な生理食塩液又はグルコースにより、まず等張とされうる。これらの特定の水溶液は、とりわけ、静脈内投与、筋内投与、皮下投与、腫瘍内投与、及び腹腔内投与に適する。これに関して、本開示に照らして、援用されうる滅菌水性媒質は、当業者に公知であろう。例えば、単回投与のための用量は、１ｍｌの等張ＮａＣｌ溶液中に溶解し、１０００ｍｌの皮下注入用流体に添加される場合もあり、提起された注入部位に注射される場合もある。処置される対象の状態に応じて、投与量の何らかの変動が必然的に生じるであろう。いずれにせよ、投与の責任者が、個々の対象に適切な用量を決定することになる。さらに、ヒト投与では、調製物は、ＦＤＡのＯｆｆｉｃｅｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃｓ基準により要請される、滅菌性、発熱物質性、一般的な安全性、及び純度についての基準を満たすものとする。

本明細書で使用される、「担体」は、任意及び全ての溶媒、分散媒、媒体、コーティング、希釈剤、抗菌剤、及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤、緩衝液、担体溶液、懸濁液、コロイドなどを含む。当技術分野では、医薬活性物質のためのこのような媒質及び薬剤の使用が周知である。任意の従来の媒質又は薬剤が有効成分と不適合性である場合を除き、治療用組成物におけるその使用が想定される。また、有効成分補助物質も、組成物に組み込まれうる。「薬学的に許容される」又は「薬理学的に許容される」という語句は、ヒトに投与される場合に、アレルギー性の有害反応又は類似の有害反応をもたらさない分子実体及び組成物を指す。当技術分野では、タンパク質を有効成分として含有する、水性組成物の調製が十分に理解されている。典型的に、このような組成物は、溶液又は懸濁液としての注射用剤として調製されるが、また、注射前に液体に溶解又は懸濁させるのに適する固体形態も、調製されうる。

がん
本明細書で開示される、組換えオルトポックスウイルスは、例えば、腫瘍溶解により、直接がん細胞を死滅させること、及び／又は標的がん細胞に対する獲得免疫応答の有効性を増強することのために、がんなどの細胞増殖障害を患う、ヒトなどの哺乳動物対象に投与されうる。一部の実施形態では、細胞増殖障害は、白血病、リンパ腫、肝臓がん、骨がん、肺がん、脳がん、膀胱がん、消化器がん、乳がん、心臓がん、子宮頸がん、子宮がん、頭頸部がん、胆嚢がん、喉頭がん、***口腔がん、眼がん、黒色腫、膵臓がん、前立腺がん、結腸直腸がん、精巣がん、又は咽頭がんなどのがんである。特定の症例では、細胞増殖障害は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性（ｍｙｅｌｏｉｄ）白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性（ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ）白血病（ＣＭＬ）、副腎皮質癌腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、肛門がん、虫垂がん、星状細胞腫、非定型奇形腫様／ラブドイド腫瘍、基底細胞癌、胆管がん、肝外がん、ユーイング肉腫ファミリー、骨肉腫及び悪性線維性組織球腫、中枢神経系胎児性腫瘍、中枢神経系胚細胞腫瘍、頭蓋咽頭腫、上衣腫、気管支腫瘍、バーキットリンパ腫、カルチノイド腫瘍、原発性リンパ腫、脊索種、慢性骨髄増殖性新生物、結腸がん、肝外胆管がん、非浸潤性乳管癌（ＤＣＩＳ）、子宮内膜がん、上衣腫、食道がん、嗅神経芽腫、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、卵管がん、骨の線維性組織球腫、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間葉系腫瘍（ＧＩＳＴ）、精巣胚細胞腫瘍、妊娠性絨毛性疾患、神経膠腫、小児性脳幹神経膠腫、有毛細胞白血病、肝細胞がん、ランゲルハンス細胞組織球増殖症、ホジキンリンパ腫、下咽頭がん、膵島細胞腫瘍、膵内分泌腫瘍、ウィルムス腫瘍及び他の小児腎臓腫瘍、ランゲルハンス細胞組織球増殖症、小細胞肺がん、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、眼内黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、転移性頸部扁平上皮がん、正中線癌、多発性内分泌腫瘍症候群、多発性骨髄腫／形質細胞細胞腫、骨髄異形成症候群、鼻腔副鼻腔がん、鼻咽頭がん、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、上皮卵巣がん、胚細胞卵巣がん、低悪性度卵巣がん、膵神経内分泌腫瘍、乳頭腫症、傍神経節腫、副鼻腔鼻腔がん、副甲状腺がん、陰茎がん、咽頭がん、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、胸膜肺芽腫、原発性腹膜がん、直腸がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺がん、カポジ肉腫、横紋筋肉腫、セザリー症候群、小腸がん、軟部組織肉腫、咽頭がん、胸腺腫及び胸腺癌、甲状腺がん、腎盂及び尿管の移行上皮がん、尿道がん、子宮内膜がん、子宮肉腫、膣がん、外陰がん、並びにワルデンシュトロームマクログロブリン血症からなる群から選択されるがんでありうる。

当技術分野における技術を有する医師は、それを必要とする哺乳動物対象（例えば、ヒト）への投与のための、組換えオルトポックスウイルスベクターの有効量を、たやすく決定することができる。例えば、医師は、まず、組換えオルトポックスウイルスベクターの用量を、所望される治療効果を達成するために要求されるレベルより低レベルで処方し、投与量を、所望される効果が達成されるまで、徐々に増大させることができる。代替的に、医師は、用量の組換えオルトポックスウイルスベクターを投与することにより、処置レジメンを開始し、その後、治療効果（例えば、１つ又は複数の腫瘍の体積の低減）が達成されるまで、漸進的に、低用量を投与することもできる。一般に、本発明の組換えオルトポックスウイルスベクターの、適切な毎日の用量は、治療効果をもたらすのに有効な最低用量である、組換えオルトポックスウイルスベクターの量であろう。本発明の組換えオルトポックスウイルスベクターの治療用組成物の毎日の用量は、任意選択で、単位剤形により、単回投与として投与される場合もあり、１日間、１週間、１カ月間、又は１年間を通して、適切な間隔で隔てて投与される、２、３、４、５、６回、又はこれを超える回数の投与として投与される場合もある。本発明の組換えオルトポックスウイルスベクターは、単独で投与される可能性もあるが、また、賦形剤、担体と組み合わせた医薬製剤として、任意選択で、さらなる治療剤と組み合わせた医薬製剤としても投与されうる。

本発明の組換えオルトポックスウイルスベクターは、がんなどの細胞増殖疾患の進行を和らげる、それらの能力について、当技術分野で公知の様々な方法のうちのいずれかによりモニタリングされうる。例えば、医師は、患者における、１つ又は複数の腫瘍の体積を解析することにより、本発明の組換えオルトポックスウイルスベクターによる処置に対する、哺乳動物対象（例えば、ヒト）の応答をモニタリングしうる。代替的に、医師は、特定の対象のリンパ中のＴ−ｒｅｇ細胞集団を解析することにより、本発明の組換えオルトポックスウイルスベクターによる処置に対する、対象（例えば、ヒト）の応答性をモニタリングしうる。例えば、医師は、哺乳動物対象（例えば、ヒト）から、試料を採取し、蛍光活性化細胞分取など、確立された手順を使用して、がん細胞の数量又は密度を決定することができる。試料中のがん細胞の数量が、組換えオルトポックスウイルスを投与する前に、対象から得られた試料中の、がん細胞の数量と比べて減少した（例えば、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はこれを超えて）という知見は、オルトポックスウイルスの投与が、がんを、有効に処置しつつあることの指標でありうる。

組合せ療法
多様な実施形態では、組換えオルトポックスウイルスは、他のがん治療と共に、共投与されうる。さらに、多様な実施形態では、本明細書で記載される組換えオルトポックスウイルスは、他のがん処置療法、例えば、放射線療法、化学療法、手術、及び／又は免疫療法と共に投与される。本発明の一部の態様では、本明細書で記載される組換えオルトポックスウイルスは、チェックポイント阻害剤と共に投与される。多様な実施形態では、組換えオルトポックスウイルスは、別の免疫腫瘍学生成物による処置と共に投与されうる。本発明の組換えオルトポックスウイルス及び他の療法又は治療剤は、同じ投与経路又は異なる投与経路により、同時に投与される場合もあり、逐次的に投与される場合もある。本発明の方法における使用のための治療剤（複数可）の識別及び量の決定は、当技術分野で公知の標準的な技法を使用して、医療分野の当業者によりたやすくなされうる。

本明細書で記載される、組換えオルトポックスウイルスベクターは、免疫チェックポイント阻害剤など、１つ又は複数のさらなる薬剤と共に投与されうる。例えば、組換えオルトポックスウイルスベクターは、免疫チェックポイント阻害剤と同時に投与される場合もあり、これと混合される場合もあり、これと別個に投与される場合もある。本発明の組成物及び方法を伴う使用のための、例示的な免疫チェックポイント阻害剤は、ＯＸ４０リガンド、ＩＣＯＳリガンド、抗ＣＤ４７抗体又はその抗原結合性断片、抗ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ抗体又はその抗原結合性断片、抗Ｌａｇ３抗体又はその抗原結合性断片、抗ＣＴＬＡ−４抗体又はその抗原結合性断片、抗ＰＤ−Ｌ１抗体又はその抗原結合性断片、抗ＰＤ１抗体又はその抗原結合性断片、及び抗Ｔｉｍ−３抗体又はその抗原結合性断片を含むがこれらに限定されない。

加えて、又は代替的に、本発明のベクターは、インターロイキン（ＩＬ）と同時に投与される場合もあり、これと混合される場合もあり、これと別個に投与される場合もある。例えば、組換えオルトポックスウイルスベクターは、インターロイキンと同時に投与される場合もあり、これと混合される場合もあり、これと別個に投与される場合もある。本発明の組成物及び方法を伴う使用のための、例示的なインターロイキンは、ＩＬ−１アルファ、ＩＬ−１ベータ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２ｐ３５、ＩＬ−１２ｐ４０、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、及びＩＬ−２３を含むがこれらに限定されない。

加えて、又は代替的に、本発明のベクターは、インターフェロンと同時に投与される場合もあり、これと混合される場合もあり、これと別個に投与される場合もある。例えば、組換えオルトポックスウイルスベクターは、インターフェロンと同時に投与される場合もあり、これと混合される場合もあり、これと別個に投与される場合もある。本発明の組成物及び方法を伴う使用のための、例示的なインターフェロンは、ＩＦＮアルファ、ＩＦＮ−ベータ、ＩＦＮデルタ、ＩＦＮイプシロン、ＩＦＮタウ、ＩＦＮオメガ、ＩＦＮゼータ、及びＩＦＮガンマを含むがこれらに限定されない。

加えて、又は代替的に、本発明のベクターは、ＴＮＦスーパーファミリーメンバータンパク質と同時に投与される場合もあり、これと混合される場合もあり、これと別個に投与される場合もある。例えば、組換えオルトポックスウイルスベクターは、ＴＮＦスーパーファミリーメンバータンパク質と同時に投与される場合もあり、これと混合される場合もあり、これと別個に投与される場合もある。本発明の組成物及び方法を伴う使用のための、例示的なＴＮＦスーパーファミリーメンバータンパク質は、ＴＲＡＩＬ、Ｆａｓリガンド、ＬＩＧＨＴ（ＴＮＦＳＦ−１４）、ＴＮＦアルファ、及び４−１ＢＢリガンドを含むがこれらに限定されない。

加えて、又は代替的に、本発明のベクターは、サイトカインと同時に投与される場合もあり、これと混合される場合もあり、これと別個に投与される場合もある。例えば、組換えオルトポックスウイルスベクターは、サイトカインと同時に投与される場合もあり、これと混合される場合もあり、これと別個に投与される場合もある。本発明の組成物及び方法を伴う使用のための、例示的なサイトカインは、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｆｌｔ３リガンド、ＣＤ４０リガンド、抗ＴＧＦベータ、抗ＶＥＧＦ−Ｒ２、及びｃＧＡＳ（グアニルアデニル酸シクラーゼ）を含むがこれらに限定されない。

遺伝子のアライメント
えり抜きのオルトポックスウイルス遺伝子についての、例示的なアライメントを、下記に示す。５つのワクシニアウイルス株である、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ（「ｃｏｐ」）、ＷＲ（ＷｅｓｔｅｒｎＲｅｓｅｒｖｅ）（「ＷＲ」）、ＴｉａｎＴａｎ（「Ｔｉａｎ」）、Ｗｙｅｔｈ、及びＬｉｓｔｅｒの多様な遺伝子は、以下の通りにアライメントされる：

C2L

ＣＬＵＳＴＡＬＯ（１．２．４）による多重配列アライメント

cop MESVIFSINGEIIQVNKEIITASPYNFFKRIQDHHLKDEAIILNGINYHAFESLLDYIRW 60
WR MESVIFSINGEIIQVNKEIITASPYNFFKRIQDHHLKDEAIILNGINYHAFESLLDYIRW 60
Tian MESVIFSINGEIIQVNKEIITASPYNFFKRIQDHHLKDEAIILNGINYHAFESLLDYIRW60
Wyeth MESVTFSINGEIIQVNKEIITASPYNFFKRIQEHHINDEVIILNGINYHAFESLLDYMRW 60
ListerMESVIFSINGEIIQVNKEIITASPYNFFKRIQDHHLKDEAIILNGINYHAFESLLDYMRW 60
*******************************:**::**.*****************:**

cop KKINITINNVEMILVAAIIIDVPPVVDLCVKTMIHNINSTNCIRMFNFSKRYGIKKLYNA 120
WR KKINITINNVEMILVAAIIIDVPPVVDLCVKTMIHNINSTNCIRMFNFSKRYGIKKLYNA 120
Tian KKINITINNVEMILVAAIIIDVPPVVDLCVKTMIHNINSTNCIRMFNFSKQYGIKKLYNA 120
Wyeth KKINITINNVEMILVAAVIIDVTPVVDLCVKTMIHNINSTNCIRMFNFSKRYGIKKLYNA 120
ListerKKINITINNVEMILVAAIIIDVPPVVDLCVKTMIHNINFTNCIRMFNFSKRYGIKKLYNA 120
*****************:******************* ***********:*********

cop SMSEIINNITAVTSDPEFGKLSKDELTTILSHENVNVNHEDVTAMILLKWIHKNPNDVDI180
WR SMSEIINNITAVTSDPEFGKLSKDELTTILSHENVNVNHEDVTAMILLKWIHKNPNDVDI 180
Tian SMSEIINNITAVTSDPEFGKLSKDELTTILSHEDVNVNHEDVTAMILLKWIHKNPNDVDI 180
Wyeth SMSEIINNITAVTSDPEFGKLSKDELTTILSHEDVNVNHEDVTAMILLKWIHKNPNDVDI 180
ListerSMSEIINNITAVTSDPEFGKLSKDELTTILSHEDVNVNHEDVTAMILLKWIHKNPNDVDI 180
*********************************:**************************

cop INILHPKFMTNTMRNAISLLGLTISKSTKPVTRNGIKHNIVVIKNSDYISTITHYSPRTE 240
WR INILHPKFMTNTMRNAISLLGLTISKSTKPVTRNGIKHNIVVIKNSDYISTITHYSPRTE240
Tian INILHPKFMTNTMRNAISLLGLTISKSTKPVTRNGIKHNIVVIKNSDYISTITHYSPRTE 240
Wyeth INILHPKFMTNTMRNAISLLGLTISKSTKPVTRNGIKHNIVVIKNSDYISTITHYSPRTE 240
ListerINILHPKFMTNTMRNAISLLGLTISKSTKPVTRNGIKHNIVVIKNSDYISTITHYSPRTE 240
************************************************************

cop YWTIVGNTDRQFYNANVLHNCLYIIGGMINNRHVYSVSRVDLETKKWKTVTNMSSLKSEV 300
WR YWTIVGNTDRQFYNANVLHNCLYIIGGMINNRHVYSVSRVDLETKKWKTVTNMSSLKSEV 300
Tian YWTIVGNTDRQFYNANVLHNCLYIIGGMINNRHVYSVSRVDLETKKWKTVTNMSSLKSEV300
Wyeth YWTIVGNTDRQFYNANVLHNCLYIIGGMINNRHVYSVSRVDLETKKWKTVTNMSSLKSEV 300
ListerYWTIVGNTDRQFYNANVLHNCLYIIGGMINNRHVYSVSRVDLKTKKWKTVTNMSSLKSEV 300
******************************************:*****************

cop STCVNDGKLYVIGGLEFSISTGVAEYLKHGTSKWIRLPNLITPRYSGASVFVNDDIYVMG 360
WR STCVNDGKLYVIGGLEFSISTGVAEYLKHGTSKWIRLPNLITPRYSGASVFVNDDIYVMG 360
Tian STCVNNGKLYVIGGLEFSISTGVAEYLKHGTSKWIRLPNLITPRYSGASVFVNDDIYVMG 360
Wyeth STCVNNGKLYVIGGLEFSISTGVAEYLKHGTSKWIRLPNLITPRYSGASVFVNDDIYVMG360
ListerSTCVNDGKLYVIGGLEFSISTGVAEYLKHGTSKWIRLPNLITPRYSGASVFVNDDIYVMG 360
*****:******************************************************

cop GVYTTYEKYVVLNDVECFTKNRWIKKSPMPRHHSIVYAVEYDGDIYVITGITHETRNYLY 420
WR GVYTTYEKYVVLNDVECFTKNRWIKKSPMPRHHSIVYAVEYDGDIYVITGITHETRNYLY 420
Tian GVYTTYEKYVVLNDVECFTKNRWIKKSPMPRHHSIVYAVEYDGDIYVITGITHETRNYLY 420
Wyeth GVYTTYEKYVVLNDVECFTKNRWIKKSPMPRHHSIVYAVEYDGDIYAITGITHETRNYLY 420
Lister GVYTTYEKYVVLNDVECFTKNRWIKKSPMPRHHSIVYAVEYDGDIYVITGITHETRNYLY420
**********************************************.*************

cop KYIVKEDKWIELYMYFNHVGKMFVCSCGDYILIIADAKYEYYPKSNTWNLFDMSTRNIEY 480
WR KYIVKEDKWIELYMYFNHVGKMFVCSCGDYILIIADAKYEYYPKSNTWNLFDMSTRNIEY 480
Tian KYIVKEDKWIELYMYFNHVGKMFVCSCGDYILIIADAKYEYYPKSNTWNLFDMSTRNIEY 480
Wyeth KYIVKEDKWIELYMYFNHVGKMFVCSCGDYILIIADAKYEYYPKSNTWNLFDMSTRNIEY 480
ListerKYIVKEDKWIELYMYFNHVGKMFVCSCGDYILIIADAKYEYYPKSNTWNLFDMSTRNIEY 480
************************************************************

cop YDMFTKDETPKCNVTHKSLPSFLSNCEKQFLQ 512
WR YDMFTKDETPKCNVTHKSLPSFLSNCEKQFLQ 512
Tian YDMFTKDETPKCNVTHKSLPSFLSNCEKQFLQ 512
Wyeth YDMFTKDET------HKSLPSFLSNCEKQFLQ 506
Lister YDMFTKDETPKCNVTHKSLPSFLSNCEKQFLQ 512
********* *****************

C1L

Cop MVKNNKI-----SNSCRMIMSTNPNNILMRHLKNLTDDEFKCIIHRSSDFLYLSDSDYTS 55
WR MVKNNKIQKNKISNSCRMIMSTDPNNILMRHLKNLTDDEFKCIIHRSSDFLYLSDSDYTS 60
Tian MVKNNKI-----SNSCRMIMSTDPNNILMRHLKNLTDDEFKCIIHRSSDFLYLSDSDYTS 55
Wyeth MVKNNKI-----SNSCRMIMSTNPNNILMRHLKNLTDDEFKCIIHRSSDFLYLSDRDYTS 55
ListerMVKNNKI-----SNSCRMIMSTNPNNILMRHLKNLTDDEFKCIIHRSSDFLYLSDSDYTS 55
******* **********:************************************

Cop ITKETLVSEIVEEYPDDCNKILAIIFLVLDKDIDVDIETKLKPKPAVRFAILDKMTEDIK 115
WR ITKETLVSEIVEEYPDDCNKILAIIFLVLDKDIDVDIKTKLKPKPAVRFAILDKMTEDIK 120
Tian ITKETLVSEIVEEYPDDCNKILAIIFLVLDKDIDVDIKTKLKPKPAVRFAILDKMTEDIK 115
Wyeth ITKETLVSEIVEEYPDDCNKILAIIFLVLDKDIDVDIKTKLKPKPAVRFAILDKMTEDIK 115
ListerITKETLVSEIVEEYPDDCNKILAIIFLVLDKDIDVDIETKLKPKPAVRFAILDKMTADIK 115
*************************************:****************** ***

Cop LTDLVRHYFRYIEQDIPLGPLFKKIDSYRTRAINKYSKELGLATEYFNKYGHLMFYTLPI 175
WR LTDLVRHYFRYIEQDIPLGPLFKKIDSYRTRAINKYSKELGLATEYFNKYGHLMFYTLPI 180
Tian LTDLVRHYFRYIEQDIPLGPLFKKIDSYRTRAINKYSKELGLATEYFNKYGHLMFYTLPI 175
Wyeth LTDLVRHYFRYIEQDIPLGPLFKKIDSYRTRAINKYSKELGLATEYFNKYGHLMFYTLPI 175
ListerLTDLVRHYFRYIEQDIPLGPLFKKIDSYRTRAINKYSKELGLATEYFNKYGHLMFYTLPI 175
************************************************************

Cop PYNRFFCRNSIGFLAVLSPTIGHVKAFYKFIEYVSIDDRRKFKKELMSK 224
WR PYNRFFCRNSIGFLAVLSPTIGHVKAFYKFIEYVSIDDRRKFKKELMSK 229
Tian PYNRFFCRNSIGFLAVLSPTIGHVKAFYKFIEYVSIDDRRKFKKELMSK 224
Wyeth PYNRFFCRNSIGFLAVLSPTIGHVKAFYKFIEYVSIDDRRKFKKELMSK 224
ListerPYNRFFCRNSIGFLAVLSPTIGHVKAFYKFIEYVSIDDRRKFKKELMSK 224
*************************************************

N1L

Cop MRTLLIRYILWRNDNDQTYYNDDFKKLMLLDELVDDGDVCTLIKNMRMTLSDGPLLDRLN 60
WR MRTLLIRYILWRNDNDQTYYNDNFKKLMLLDELVDDGDVCTLIKNMRMTLSDGPLLDRLN 60
Tian MRTLLIRYILWRNDNDQTYYNDDFKKLMLLDELVDDGDVCTLIKNMRMTLSDGPLLDRLN 60
Wyeth MRTLLIRYILWRNDNDQTYYNDDFKKLMLLDELVDDGDVCTLIKNMRMTLSDGPLLDRLN 60
ListerMRTLLIRYILWRNDNDQTYYNDDFKKLMLLDELVDDGDVCTLIKNMRMTLSDGPLLDRLN 60
**********************:*************************************

Cop QPVNNIEDAKRMIAISAKVARDIGERSEIRWEESFTILFRMIETYFDDLMIDLYGEK 117
WR QPVNNIEDAKRMIAISAKVARDIGERSEIRWEESFTILFRMIETYFDDLMIDLYGEK 117
Tian QPVNNIEDAKRMIAISAKVARDIGERSEIRWEESFTILFRMIETYFDDLMIDLYGEK 117
Wyeth QPVNNIEDAKRMIAISAKVARDIGERSEIRWEESFTILFRMIETYFDDLMIDLYGEK 117
Lister QPVNNIEDAKRMIAISAKVARDIGERSEIRWEESFTILFRMIETYFDDLMIDLYGEK117
*********************************************************

N2L

Cop MTSSAMDNNEPKVLEMVYDATILPEGSSMDPNIMDCINRHINMCIQRTYSSSIIAILNRF 60
WR MTSSAMDNNEPKVLEMVYDATILPEGSSMDPNIMDCINRHINMCIQRTYSSSIIAILDRF60
Tian MTSSAMDNNEPKVLEMVYDATILPEGSSMDPYIMDCINRHINMCIQRTYSSSIIAILDRF 60
Wyeth MTSSAMDNNEPKVLEMVYDATILPEGSSMDPNIIDCINRHINMCIQRTYSSSIIAILDRF 60
ListerMTSSAMDNNEPKVLEMVYDATILPEGSSMDPNIMDCINRHINMCIQRTYSSSIIAILDRF 60
******************************* *:***********************:**

Cop LTMNKDELNNTQCHIIKEFMTYEQMAIDHYGEYVNAILYQIRKRPNQHHTIDLFKKIKRT 120
WR LMMNKDELNNTQCHIIKEFMTYEQMAIDHYGGYVNAILYQIRKRPNQHHTIDLFKRIKRT 120
Tian LMMNKDELNNTQCHIIKNL-----------------------------------------79
Wyeth LTMNKDELNNTQCHIIKEFMTYEQMAIDHYGGYVNAILYQIRKRPNQHHTIDLFKKIKRT 120
ListerLTMNKDELNNTQCHIIKEFMTYEQMAIDHYGEYVNAILYQIRKRPNQHHTIDLFKKIKRT 120
****************::

Cop PYDTFKVDPVEFVKKVIGFVSILNKYKPVYSYVLYENVLYDEFKCFINYVETKYF 175
WR RYDTFKVDPVEFVKKVIGFVSILNKYKPVYSYVLYENVLYDEFKCFINYVETKYF 175
Tian -------------------------------------------------------
Wyeth RYDTFKVDPVEFVKKVIGFVSILNKYKPVYSYVLYENVLYDEFKCFIDYVETKYF175
ListerRYDTFKVDPVEFVKKVIGFVSILNKYKPVYSYVLYENVLYDEFKCFIDYVETKYF 175

M1L

Cop MIFVIESKLLQIYRNRNRNINFYTTMDNIMSAEYYLSLYAKYNSKNLDVFRNMLQAIEPS 60
WR MIFVIESKLLQIYRNRNRNINFYTTMDNIMSAEYYLSLYAKYNSKNLDVFRNMLQAIEPS60
Tian MIFVIESKLLQIYRNRNRNINFYTTMDNIMSAEYYLSLYAKYNSKNLDVFRNMLQAIEPS 60
Wyeth MIFVIESKLLQIYRNRNRNINFYTTMDNIMSAEYYLSLYAKYNSKNLDVFRNMLQAIEPS 60
ListerMIFVIESKLLQIYRN--RNINFYTTMDNIMSAEYYLSLYAKYNSKNLDVFRNMLQAIEPS 58
*************** *******************************************

Cop GNNYHILHAYCGIKGLDERFVEELLHRGYSPNETDDDGNYPLHIASKINNNRIVAMLLTH 120
WR GNNYHILHAYCGIKGLDERFVEELLHRGYSPNETDDDGNYPLHIASKINNNRIVAMLLTH 120
Tian GNNYHILHAYCGIKGLDERFVEELLHRGYSPNETDDDGNYPLHIASKINNNRIVAMLLTH120
Wyeth GNNYHILHAYCGIKGLDERFVEELLHRGYSPNETDDDGNYPLHIASKINNNRIVAMLLTH 120
ListerGNNYHILHAYCGIKGLDERFVEELLHRGYSPNETDDDGNYPLHIASKINNNRIVAMLLTH 118
************************************************************

Cop GADPNACDKHNKTPLYYLSGTDDEVIERINLLVQYGAKINNSVDEEGCGPLLACTDPSER 180
WR GADPNACDKHNKTPLYYLSGTDDEVIERINLLVQYGAKINNSVDEEGCGPLLACTDPSER 180
Tian GADPNACDKHNKTPLYYLSGTDDEVIERINLLVQYGAKINNSVDEEGCGPLLACTDPSER 180
Wyeth GADPNACDKHNKTPLYYLSGTDDEVIERINLLVQYGAKINN-------------------161
ListerGADPNACDKQHKTPLYYLSGTDDEVIERINLLVQYGAKINNSVDEEGCGPLLACTDPSER 178
*********::******************************

Cop VFKKIMSIGFEARIVDKFGKNHIHRHLMSDNPKASTISWMMKLGISPSKPDHDGNTPLHI240
WR VFKKIMSIGFEARIVDKFGKNHIHRHLMSDNPKASTISWMMKLGISPSKPDHDGNTPLHI 240
Tian VFKKIMSIGFEARIVDKFGKNHIHRHLMSDNPKASTISWMMKLGISPSKPDHDGNTPLHI 240
Wyeth ------------------------------------------------------------
ListerVFKKIMSIGFEARIVDKFGKNHIHRHLMSDNPKASTISWMMKLGISPSKPDHDGNTPLHI 238

Cop VCSKTVKNVDIIDLLLPSTDVNKQNKFGDSPLTLLIKTLSPAHLINKLLSTSNVITDQTV 300
WR VCSKTVKNVDIIDLLLPSTDVNKQNKFGDSPLTLLIKTLSPAHLINKLLSTSNVITDQTV 300
Tian VCSKTVKNVDIIDLLLPSTDVNKQNKFGDSPLTLLIKTLSPAHLINKLLSTSNVITDQTV300
Wyeth ------------------------------------------------------------
ListerVCSKTVKNVDIIDLLLPSTDVNKQNKFGDSPLTLLIKTLSPAHLINKLLSTSNVITDQTV 298

Cop NICIFYDRDDVLEIINDKGKQYDSTDFKMAVEVGSIRCVKYLLDNDIICEDAMYYAVLSE 360
WR NICIFYDRDDVLEIINDKGKQYDSTDFKMAVEVGSIRCVKYLLDNDIICEDAMYYAVLSE 360
Tian NICIFYDRDDVLEIINDKGKQYDSTDFKMAVEVGSIRCVKYLLDNDIICEDAMYYAVLSE 360
Wyeth ------------------------------------------------------------
Lister NICIFYDRDDVLEIINDKGKQYDSTDFKMAVEVGSIRCVKYLLDNDIICEDAMYYAVLSE358

Cop YETMVDYLLFNHFSVDSVVNGHTCMSECVRLNNPVILSKLMLHNPTSETMYLTMKAIEKD 420
WR YETMVDYLLFNHFSVDFVVNGHTCMSECVRLNNPVILSKLMLHNPTSETMYLTMKAIEKD 420
Tian YETMVDYLLFNHFSVDFVVNGHTCMSECVRLNNPVILSKLMLHNLTSETMYLTMKAIEKD 420
Wyeth ------------------------------------------------------------
ListerYETMVDYLLFNHFSVDSVVNGHTCMSECVRLNNPVILSKLMLHNPTSETMYLTMKAIEKD 418

Cop KLDKSIIIPFIAYFVLMHPDFCKNRRYFTSYKRFVTDYVHEGVSYEVFDDYF 472
WR RLDKSIIIPFIAYFVLMHPDFCKNRRYFTSYKRFVTDYVHEGVSYEVFDDYF472
Tian RLDKSIIIPFIAYFVLMHPDFCKNRRYFTSYKRFVTDYVHEGVSYEVFDDYF 472
Wyeth ----------------------------------------------------
ListerRLDKSIIIPFIAYFVLMHPDFCKNRRYFTSYKRFVTDYVHEGVSYEVFDDYF 470

M2L

Cop MVYKLVLLFCIASLGYSVEYKNTICPPRQDYRYWYFAAELTIGVNYDINSTIIGECHMSE 60
WR MVYKLVLLFCIASLGYSVEYKNTICPPRQDYRYWYFAAELTIGVNYDINSTIIGECHMSE 60
Tian ------------------------MSSSTRLPVLVLAAELTIGVNYDINSTIIGECHMSE 36
Wyeth MVYKLVLLFCIASLGYSVEYKNTICPPRQDYRYWYFAAELTIGVNYDINSTIIGECHMSE60
ListerMVYKLVLLFCIASLGYSVEYKNTICPPRQDYRYWYFAAELTIGVNYDINSTIIGECHMSE 60
:************************

Cop SYIDRNANIVLTGYGLEINMTIMDTDQRFVAAAEGVGKDNKLSVLLFTTQRLDKVHHNIS 120
WR SYIDRNANIVLTGYGLEINMTIMDTDQRFVAAAEGVGKDNKLSVLLFTTQRLDKVHHNIS 120
Tian SYIDRNANIVLTGYGLEINMTIMDTDQRFVAAAEGVGKDNKLSVLLFTTQRLDKVHHNIS 96
Wyeth SYIDRNANIVLTGYGLEINMTIMDTDQRFVAAAEGVGKDNKLSVLLFTTQRLDKVHHNIS 120
Lister SYIDRNANIVLTGYGLEINMTIMDTDQRFVAAAEGVGKDNKLSVLLFTTQRLDKVHHNIS120
************************************************************

Cop VTITCMEMNCGTTKYDSDLPESIHKSSSCDITINGSCVTCVNLETDPTKINPHYLHPKDK 180
WR VTITCMEMNCGTTKYDSDLPESIHKSSSCDITINGSCVTCVNLETDPTKINPHYLHPKDK 180
Tian VTITCMEMNCGTTKYDSDLPESIHKSSSCDITINGSCVTCVNLETDPTKINPHYLHPKDK 156
Wyeth VTITCMEMNCGTTKYDSDLPESIHKSSSCDITINGSCVTCVNLETDPTKINPHYLHPKDK 180
ListerVTITCMEMNCGTTKYDSDLPESIHKSSSCDITINGSCVTCVNLETDPTKINPHYLHPKDK 180
************************************************************

Cop YLYHNSEYGMRGSYGVTFIDELNQCLLDIKELSYDICYRE 220
WR YLYHNSEYSMRGSYGVTFIDELNQCLLDIKELSYDICYRE 220
Tian YLYHNSEYGMRGSYGVTFIDELNQCLLDIKELSYDICYRE 196
Wyeth YLYHNSEYGMRGSYGVTFIDELNQCLLDIKELSYDICYRE 220
Lister YLYHNSEYGMRGSYGVTFIDELNQCLLDIKELSYDICYRE220
********.*******************************

K1L

Cop MDLSRINTWKSKQLKSFLSSKDTFKADVHGHSALYYAIADNNVRLVCTLLNAGALKNLLE 60
WR MDLSRINTWKSKQLKSFLSSKDAFKADVHGHSALYYAIADNNVRLVCTLLNAGALKNLLE60
Tian MDLSRINTWKSKQLKSFLSSKDTFKADVHGHSALYYAIADNNVRLVCTLLNSGALKNLLE 60
Wyeth MDLSRINTWKSKQLKSFLSSKDTFKADVHGHSALYYAIADNNVRLVCTLLNAGALKNLLE 60
ListerMDLSRINTWKSKQLKSFLSSKDAFKADINGHSALYYAIADNNVRLVCTLLNAGALKNLLE 60
**********************:****::**********************:********

Cop NEFPLHQAATLEDTKIVKILLFSGMDDSQFDDKGNTALYYAVDSGNMQTVKLFVKKNWRL 120
WR NEFPLHQAATLEDTKIVKILLFSGLDDSQFDDKGNTALYYAVDSGNMQTVKLFVKKNWRL 120
Tian NEFPLHQAATLEDTKIVKILLFSGLDDSQFDDKGNTALYYAVDSGNMQTVKLFVKKNWRL120
Wyeth NEFPLHQAATLEDTKIVKILLFSGLDDSQFDDKGNTALYYAVDSGNMQTVKLFVKKNWRL 120
ListerNEFPLHQAATLEDTKIVKILLFSGLDDSQFDDKGNTALYYAVDSGNMQTVKLFVKKNWRL 120
************************:***********************************

Cop MFYGKTGWKTSFYHAVMLNDVSIVSYFLSEIPSTFDLAILLSCIHTTIKNGHVDMMILLL 180
WR MFYGKTGWKTSFYHAVMLNDVSIVSYFLSEIPSTFDLAILLSCIHITIKNGHVDMMILLL 180
Tian MFYGKTGWKTSFYHAVMLNDVSIVSYFLSEIPSTFDLAILLSCIHITIKNGHVDMMILLL 180
Wyeth MFYGKTGWKTSFYHAVMLNDVSIVSYFLSEIPSTFDLAILLSCIHITIKNGHVDMMILLL180
ListerMFYGKTGWKTSFYHAVMLNDVSIVSYFLSEIPSTFDLAILLSCIHITIKNGHVDMMILLL 180
********************************************* **************

Cop DYMTSTNTNNSLLFIPDIKLAIDNKDIEMLQALFKYDINIYSVNLENVLLDDAEITKMII 240
WR DYMTSTNTNNSLLFIPDIKLAIDNKDIEMLQALFKYDINIYSANLENVLLDDAEIAKMII 240
Tian DYMTVDKHQ--------------------------------------------------- 189
Wyeth DYMTSTNTNNSLLFIPDIKLAIDNKDIEMLQALFKYDINIYSANLENVLLDDAEIAKMII 240
Lister DYMTSTNTNNSLLFIPDIKLAIDNKDIEMLQALFKYDINIYSANLENVLLDDAEIAKMII240
**** ::

Cop EKHVEYKSDSYTKDLDIVKNNKLDEIISKNKELRLMYVNCVKKN 284
WR EKHVEYKSDSYTKDLDIVKNNKLDEIISKNKELRLMYVNCVKKN 284
Tian --------------------------------------------
Wyeth EKHVEYKSDSYTKDLDIVKNNKLDEIISKNKELRLMYVNCVKKN 284
ListerEKHVEYKSDSYTKDLDIVKNNKLDEIISKNKELKLMYVNCVKKN 284

K2L

Cop MIALLILSLTCSVSTYRLQGFTNAGIVAYKNIQDDNIVFSPFGYSFSMFMSLLPASGNTR 60
WR MIALLILSLTCSVSTYRLQGFTNAGIVAYKNIQDDNIVFSPFGYSFSMFMSLLPASGNTR 60
Tian MIALLILSLACSASAYRLQGFTNAGIVAYKNIQDDNIVFSPFGYSFSMFMSLLPASGNTR 60
Wyeth MIALLILSLTCSVSTYRLQGFTNAGIVAYKNIQDDNIVFSPFGYSFSMFMSLLPASGNTR 60
Lister ------------------------------------------------------------

Cop IELLKTMDLRKRDLGPAFTELISGLAKLKTSKYTYTDLTYQSFVDNTVCIKPLYYQQYHR 120
WR IELLKTMDLRKRDLGPAFTELISGLAKLKTSKYTYTDLTYQSFVDNTVCIKPSYYQQYHR 120
Tian IELLKTMDLRKRDLGPAFTELISGLAKLKTSKYTYTDLTYQSFVDNTVCIKPSYYQQYHR 120
Wyeth IELLKTMDLRKRDLGPAFTELISGLAKLKTSKYTYTDLTYQSFVDNTVCIKPSYYQQYHR 120
ListerIELLKTMDLRKRDLGPAFTELISGLAKLKTSKYTYTDLTYQSFVDNTVCIKPSYYQQYHR 60
**************************************************** *******

Cop FGLYRLNFRRDAVNKINSIVERRSGMSNVVDSNMLDNNTLWAIINTIYFKGTWQYPFDIT180
WR FGLYRLNFRRDAVNKINSIVERRSGMSNVVDSNMLDNNTLWAIINTIYFKGIWQYPFDIT 180
Tian FGLYRLNFRRDAVNKINSIVERRSGMSNVVDSNMLDNNTLWAIINTIYFKGTWQYPFDIT 180
Wyeth -----LNFRRDAVNKINSIVERRSGMSNVVDSNMLDNNTLWAIINTIYFKGIWQYPFDIT175
ListerFGLYRLNFRRDAVNKINSIVERRSGMSNVVDSNMLDNNTLWAIINTIYFKGIWQYPFDIT 120
********************************************** ********

Cop KTRNASFTNKYGTKTVPMMNVVTKLQGNTITIDDEEYDMVRLPYKDANISMYLAIGDNMT 240
WR KTRNASFTNKYGTKTVPMMNVVTKLQGNTITIDDEEYDMVRLPYKDANISMYLAIGDNMT 240
Tian KTRNASFTNKYGTKTVPMMNVVTKLQGNTITIDDEEYDMVRLPYKDANISMYLAIGDNMT 240
Wyeth KTRNASFTNKYGTKTVPMMNVVTKLQGNTITIDDKEYDMVRLPYKDANISMYLAIGDNMT 235
Lister KTRNASFTNKYGTKTVPMMNVVTKLQGNTITIDDEEYDMVRLPYKDANISMYLAIGDNMT180
**********************************:*************************

Cop HFTDSITAAKLDYWSFQLGNKVYNLKLPKFSIENKRDIKSIAEMMAPSMFNPDNASFKHM 300
WR HFTDSITAAKLDYWSFQLGNKVYNLKLPKFSIENKRDIKSIAEMMAPSMFNPDNASFKHM 300
Tian HFTDSITAA-KDYWSFQLGNKVYNLKLPKFSIENKRDIKSIAEMMAPSMFNPDNASFKHM 299
Wyeth HFTDSITAAKLDYWSFQLGNKVYNLKLPKFSIENKRDIKSIAEMMAPSMFNPDNASFKHM 295
ListerHFTDSITAAKLDYWSSQLGNKVYNLKLPKFSIENKRDIKSIAEMMAPSMFNPDNASFKHM 240
********* ************************************************

Cop TRDPLYIYKMFQNAKIDVDEQGTVAEASTIMVATARSSPEKLEFNTPFVFIIRHDITGFI 360
WR TRDPLYIYKMFQNAKIDVDEQGTVAEASTIMVATARSSPEKLEFNTPFVFIIRHDITGFI 360
Tian TRDPLYIYKMFQNAKIDVDEQGTVAEASTIMVATARSSPEELEFNTPFVFIIRHDITGFI 359
Wyeth TRDPLYIYKMFQNAKIDVDEQGTVAEASTIMVATARSSPEKLEFNTPFVFIIRHDITGFI 355
ListerTRDPLYIYKMFQNAKIDVDEQGTVAEASTIMVATARSSPEKLEFNTPFVFIIRHDITGFI 300
****************************************:*******************

Cop LFMGKVESP 369
WR LFMGKVESP 369
Tian LFMGKVESP 368
Wyeth LFMGKVESP 364
Lister LFMGKVESP 309
*********

K ORF A

Cop MGHIITYCQVHTNISILIRKAHHIIFFVIDCDCISLQFSNYVHHGNRFRTVLISKTSIAC 60
Tian MGHIITYCQVHTNISILIRKAYHIIFFVIDCDCISLQFSNYVHHGNRFRTVLISKTSIAC60
*********************:**************************************

Cop FSDIKRILPCTFKIYSINDCP 81
Tian FSDIKRILPCTFKIYSINDCP 81
*********************

K3L

Cop MLAFCYSLPNAGDVIKGRVYEKDYALYIYLFDYPHSEAILAESVKMHMDRYVEYRDKLVG 60
WR MLAFCYSLPNAGDVIKGRVYEKDYALYIYLFDYPHFEAILAESVKMHMDRYVEYRDKLVG 60
Tian MLAFCYSLPNAGDVIKGRVYEKDYALYIYLFDYPHSEAILAESVKMHMDRYVEYRDKLVG 60
Wyeth MLAFCYSLPNAGDVIKGRVYENDYALYIYLFDYPHFEAILAESVKMHMDRYVEYRDKLVG60
ListerMLAFCYSLPNAGDVIKGRVYENDYALYIYLFDYPHSEAILAESVKMHMDRYVEYRDKLVG 60
*********************:************* ************************

Cop KTVKVKVIRVDYTKGYIDVNYKRMCRHQ 88
WR KTVKVKVIRVDYTKGYIDVNYKRMCRHQ88
Tian KTVKVKVIRVDYTKGYIDVNYKRMCRHQ 88
Wyeth KTVKVKVIRVDYTKGYIDVNYKRMCRHQ 88
Lister KTVKVKVIRVDYTKGYIDVNYKRMCRHQ 88
****************************

K4L

Cop MNPDNTIAVITETIPIGMQFDKVYLSTFNMWREILSNTTKTLDISSFYWSLSDEVGTNFG60
WR MNPDNTIAVITETIPIGMQFDKVYLSTFNMWREILSNTTKTLDISSFYWSLSDEVGTNFG 60
Wyeth MNPDNTIAVITETIPIGMQFDKVYLSTFNMWREILSNTTKTLDISSFYWSLSDEVGTNFG 60
ListerMNPDNTIAVITETIPIGMQFDKVYLSTFNMWREILSNTTKTLDISSFYWSLSDEVGTNFG 60
************************************************************

Cop TIILNEIVQLPKRGVRVRVAVNKSNKPLKDVERLQMAGVEVRYIDITNILGGVLHTKFWI 120
WR TIILNKIVQLPKRGVRVRVAVNKSNKPLKDVERLQMAGVEVRYIDITNILGGVLHTKFWI 120
Wyeth TIILNEIVQLPKRGVRVRVAVNKSNKPLKDVERLQMAGVEVRYIDITNILGGVLHTKFWI120
ListerTIILNEIVQLPKRGVRVRVAVNKSNKPLKDVERLQMAGVEVRYIDITNILGGVLHTKFWI 120
*****:******************************************************

Cop SDNTHIYLGSANMDWRSLTQVKELGIAIFNNRNLAADLTQIFEVYWYLGVNNLPYNWKNF180
WR SDNTHIYLGSANMDWRSLTQVKELGIAIFNNRNLAADLTQIFEVYWYLGVNNLPYNWKNF 180
Wyeth SDNTHIYLGSANMDWRSLTQVKELGIAIFNNRNLAADLTQIFEVYWYLGVNNLPYNWKNF 180
Lister SDNTHIYLGSANMDWRSLTQVKELGIAIFNNRNLAADLTQIFEVYWYLGVNNLPYNWKNF180
************************************************************

Cop YPSYYNTDHPLSINVSGVPHSVFIASAPQQLCTMERTNDLTALLSCIRNASKFVYVSVMN 240
WR YPSYYNTDHPLSINVSGVPHSVFIASAPQQLCTMERTNDLTALLSCIRNASKFVYVSVMN 240
Wyeth YPSYYNTDHPLSINVSGVPHSVFIASAPQQLCTMERTNDLTALLSCIRNASKFVYVSVMN 240
ListerYPSYYNTDHPLSINVSGVPHSVFIASAPQQLCTMERTNDLTALLSCIRNASKFVYVSVMN 240
************************************************************

Cop FIPIIYSKAGKILFWPYIEDELRRSAIDRQVSVKLLISCWQRSSFIMRNFLRSIAMLKSK300
WR FIPIIYSKAGNILFWPYIEDELRRAAIDRQVSVKLLISCWQRSSFIMRNFLRSIAMLKSK 300
Wyeth FIPIIYSKAGKILFWPYIEDELRRSAIDRQVSVKLLISCWQRSSFIMRNFLRSIAMLKSK 300
ListerFIPIIYSKAGKILFWPYIEDELRRSAIDRQVSVKLLISCWQRSSFIMRNFLRSIAMLKSK 300
**********:*************:***********************************

Cop NIDIEVKLFIVPDADPPIPYSRVNHAKYMVTDKTAYIGTSNWTGNYFTDTCGASINITPD 360
WR NINIEVKLFIVPDADPPIPYSRVNHAKYMVTDKTAYIGTSNWTGNYFTDTCGASINITPD 360
Wyeth NINIEVKLFIVPDADPPIPYSRVNHAKYMVTDKTAYIGTSNWTGNYFTDTCGASINITPD360
ListerNINIEVKLFIVPDADPPIPYSRVNHAKYMVTDKTAYIGTSNWTGNYFTDTCGASINITPD 360
**:*********************************************************

Cop DGLGLRQQLEDIFMRDWNSKYSYELYDTSPTKRCKLLKNMKQCTNDIYCDEIQPEKEIPE 420
WR DGLGLRQQLEDIFMRDWNSKYSYELYDTSPTKRCRLLKNMKQCTNDIYCDEIQPEKEIPE 420
Wyeth DGLGLRQQLEDIFMRDWNSKYSYELYDTSPTKRCKLLKNMKQCTNDIYCDEIQPEKEIPE 420
ListerDGLGLRQQLEDIFMRDWNSKYSYELYDTSPTKRCKLLKNMKQCTNDIYCDEIQPEKEIPE 420
**********************************:*************************

Cop YSLE 424
WR YSLE 424
Wyeth YSLE 424
Lister YSLE 424
****

K5L

Cop -------------MGATISILASYDNPNLFTAMILMSPLVNADAVSRLNLLAAKLMGTIT 47
WR MTLVQHVVTIKSTYWVIPWELASYDNPNLFTAMILMSPLVNADAVSKLNLLAAKLMGTIT60
Tian MTLVQHVVTIKSTYWVIPWELASYDNPNLFTAMILMSPLVNADAVSKLNLLAAKLMGTIT 60
Wyeth -------------MGATISILASYDNPNLFTAMILMSPLVNADAVSKLNLLAAKLMGTIT 47
Lister---------MGHSMGATISILASYDNPNLFTAMILMSPLVNADAVSRLNLLAAKLMGTIT 51
. **************************:*************

Cop PNAPVGKLCPESVSRDMDKVYKYQYDPLINHEKIKAGFASQVLKATNKVRKIISKINTPR 107
WR LNAPVGKLCPESVSRDMDKVYKYQYDPLINHEKIKAGFASQVLKATNKVRKIISKINTPR 120
Tian LNAPVGKLCPESVSRDMDKVYKYQYDPLINHEKIKAGFASQVLKATNKVRKIISKINTPR120
Wyeth PNAPVGKLCPESVSRDMDKVYKYQYDPLINHEKIKAGFASQVLKATNKVRKIISKINTPP 107
ListerPNAPVGKLCPESVSRDMDKVYKYQYDPLINHEKIKAGFASQVLKATNKVRKIISKINTPP 111
**********************************************************

Cop LSYSREQTMRL-----VMFQVHIISCNMQIVIE--------------------------- 135
WR LSYSREQTIRL-----AMF----------------------------------------- 134
Tian LSYSREQTIRL-----AMF----------------------------------------- 134
Wyeth TLILQGTNNEISDVLGAYYFMQHANCNREIKIYEGAKHHLHKETDEVKKSVMKEIETWIF167
ListerTLILQGTNNKISDVLGAYYFMQHANCNREIKIYEGAKHHLHKETDEVKKSVMKEIETWIF 171
: . .: .:

Cop ----
WR ----
Tian ----
Wyeth NRVK 171
Lister NRVK 175

K6L

Cop MSANCMFNLDNDYIYWKPITYPKALVFISHGAGKHSGRYDELAENISSLGILVFSHDHIG 60
WR MSANCMFNLDNDYIYWKPITYPKALVFISHGAGKHSGRYDELAENISSLGILVFSHDHIG 60
Wyeth MSANCMFNLDNDYIYWKPITYPKALVFISHGAGKHSGRYDELAENISSLGILVFSHDHIG 60
ListerMSANCMFNLDNDYIYWKPITYPKALVFISHGAGKHSGRYDELAENISSLGILVFSHDHIG 60
************************************************************

Cop HGRSNGEKMMIDDFGTARGNY81
WR HGRSNGEKMMIDDFGTARGNY 81
Wyeth HGRSNGEKMMIDDFGTARGNY 81
Lister HGRSNGEKMMIDDFGTARGNY 81
*********************

K7R

Cop MATKLDYEDAVFYFVDDDKICSRDSIIDLIDEYITWRNHVIVFNKDITSCGRLYKELMKF 60
WR MATKLDYEDAVFYFVDDDKICSRDSIIDLIDEYITWRNHVIVFNKDITSCGRLYKELMKF 60
Tian MATKLDYEDAVFYFVDDDKICSRDSIIDLIDEYITWRNHVIVFNKDITSCGRLYKELMKF 60
Wyeth MATKLDYEDAVFYFVDDDKICSRDSIIDLIDEYITWRNHVIVFNKDITSCGRLYKELMKF 60
ListerMATKLDYEDAVFYFVDDDKICSRDSIIDLIDEYITWRNHVIVFNKDITSCGRLYKELMKF 60
************************************************************

Cop DDVAIRYYGIDKINEIVEAMSEGDHYINFTKVHDQESLFATIGICAKITEHWGYKKISES 120
WR DDVAIRYYGIDKINEIVEAMSEGDHYINFTKVHDQESLFATIGICAKITEHWGYKKISES 120
Tian DDVAIRYYGIDKINEIVEAMSEGDHYINFTKVHDQESLFATIGICAKITEHWGYKKISES 120
Wyeth DDVAIRYYGIDKINEIVEAMSEGDHYINFTKVHDQESLFATIGICAKITEHWGYKKISES120
ListerDDVAIRYYGIDKINEIVEAMSEGDHYINFTKVHDQESLFATIGICAKITEHWGYKKISES 120
************************************************************

Cop RFQSLGNITDLMTDDNINILILFLEKKLN 149
WR RFQSLGNITDLMTDDNINILILFLEKKLN149
Tian RFQSLGNITDLMTDDNINILILFLEKKLN 149
Wyeth RFQSLGNITDLMTDDNINILILFLEKKLN149
Lister RFQSLGNITDLMTDDNINILILFLEKKLN 149
*****************************

F1L

Cop MLSMFMCNNIVDYVDDIDNGIVQDIEDEASNNVDHDYVYPLPENMVYRFDKSTNILDYLS60
WR MLSMFMCNNIVDYVDDIDNGIVQDIEDEASNNVDHDYVYPLPENMVYRFDKSTNILDYLS 60
Tian MLSMFMCNNIVDYVDDIDNGIVQDIEDEASNNVDRDYVYPLPENMVYRFDKSTNILDYLS 60
Wyeth MLSMFMCNNIVDYVDDIDNGIVQDIEDEASNNVDHDYVYPLPENMVYRFDKSTNILDYLS60
ListerMLSMFMCNNIVDYVDDIDNGIVQDIEDEASNNVDHDYVYPLPENMVYRFDKSTNILDYLS 60
**********************************:*************************

Cop TERDHVMMAVRYYMSKQRLDDLYRQLPTKTRSYIDIINIYCDKVSNDYNRDMNIMYDMAS 120
WR TERDHVMMAVRYYMSKQRLDDLYRQLPTKTRSYIDIINIYCDKVSNDYNRDMNIMYDMAS 120
Tian TERDHVMMAVRYYMSKQRLDDLYRQLPTKTRSYIDIINIYCDKVSNDYNRDMNIMYDMAS 120
Wyeth TERDHVMMAVRYYMSKQRLDDLYRQLPTKTRSYIDIINIYCDKVSNDYNRDMNIMYDMAS 120
Lister TERDHVMMAVRYYMSKQRLDDLYRQLPTKTRSYIDIINIYCDKVSNDYNRDMNIMYDMAS120
************************************************************

Cop TKSFTVYDINNEVNTILMDNKGLGVRLATISFITELGRRCMNPVKTIKMFTLLSHTICDD 180
WR TKSFTVYDINNEVNTILMDNKGLGVRLATISFITELGRRCMNPVETIKMFTLLSHTICDD 180
Tian TKSFTVYDINNEVNTILMDNKGLGVRLATISFITELGRRCMNPVKTIKMFTLLSHTICDD 180
Wyeth TKSFTVYDINNEVNTILMDNKGLGVRLATISFITKLGRRCMNPVKTIKMFTLLSHTICDD 180
ListerTKSFTVYDINNEVNTILMDNKGLGVRLATISFITELGRRCMNPVKTIKMFTLLSHTICDD 180
**********************************:*********:***************

Cop CFVDYITDISPPDNTIPNTSTREYLKLIGITAIMFATYKTLKYMIG 226
WR YFVDYITDISPPDNTIPNTSTREYLKLIGITAIMFATYKTLKYMIG 226
Tian CFVDYITDISPPDNTIPNTSTREYLKLIGITAIMFATYKTLKYMIG 226
Wyeth CFVDYITDISPPDNTIPNTSTREYLKLIGITAIMFATYKTLKYMIG226
ListerCFVDYITDISPPDNTIPNTSTREYLKLIGITAIMFATYKTLKYMIG 226
*********************************************

F2L

Cop MFNMNINSPVRFVKETNRAKSPTRQSPGAAGYDLYSAYDYTIPPGERQLIKTDISMSMPK60
WR MFNMNINSPVRFVKETNRAKSPTRQSPYAAGYDLYSAYDYTIPPGERQLIKTDISMSMPK 60
Tian MFNMNINSPVRFVKETNRAKSPTRQSPGAAGYDLYSAYDYTIPPGERQLIKTDISMSMPK 60
Wyeth MFNMNINSPVRFVKETNRAKSPTRQSPGAAGYDLYSAYDYTIPPGERQLIKTDISMSMPK 60
ListerMFNMNINSPVRFVKETNRAKSPTRQSPGAAGYDLYSAYDYTIPPGERQLIKTDISMSMPK 60
*************************** ********************************

Cop ICYGRIAPRSGLSLKGIDIGGGVIDEDYRGNIGVILINNGKCTFNVNTGDRIAQLIYQRI 120
WR FCYGRIAPRSGLSLKGIDIGGGVIDEDYRGNIGVILINNGKCTFNVNTGDRIAQLIYQRI120
Tian ICYGRIAPRSGLSLKGIDIGGGVIDEDYRGNIGVILINNGKCTFNVNTGDRIAQLIYQRI 120
Wyeth ICYGRIAPRSGLSLKGIDIGGGVIDEDYRGNIGVILINNGKCTFNVNTGDRIAQLIYQRI 120
Lister FCYGRIAPRSGLSLKGIDIGGGVIDEDYRGNIGVILINNGKCTFNVNTGDRIAQLIYQRI120
:***********************************************************

Cop YYPELEEVQSLDSTNRGDQGFGSTGLR 147
WR YYPELEEVQSLDSTNRGDQGFGSTGLR 147
Tian YYPELEEVQSLDSTDRGDQGFGSTGLR 147
Wyeth YYPELEEVQSLDSTNRGDQGFGSTGLR 147
Lister YYPELEEVQSLDSTNRGDQGFGSTGLR 147
**************:************

F3L

Cop MPIFVNTVYCKNILALSMTKKFKTIIDAIGGNIIVNSTILKKLSPYFRTHLRQKYTKNKD 60
WR MPIFVNTVYCKNILALSMTKKFKTIIDAIGGNIIVNSTILKKLSPYFRTHLRQKYTKNKD60
Tian MPIFVNTVYCKNILALSMTKKFKTIIDAIGGNIIVNSTILKKLSPYFRTHLRQKYTKNKD 60
Wyeth MPIFVNTVYCKNILALSMTKKFKTIIDAIGGNIIVNSTILKKLSPYFRTHLRQKYTKNKD 60
Lister MPIFVNTVYCKNILALSMTKKFKTIIDAIGGNIIVNSTILKKLSPYFRTHLRQKYTKNKD60
************************************************************

Cop PVTRVCLDLDIHSLTSIVIYSYTGKVYIDSHNVVNLLRASILTSVEFIIYTCINFILRDF 120
WR PVTWVCLDLDIHSLTSIVIYSYTGKVYIDSHNVVNLLRASILTSVEFIIYTCINFILRDF 120
Tian PVTRVCLDLDIHSLTSIVIYSYTGKVYIDSHNVVNLLRASILTSVEFIIYTCINFILRDF 120
Wyeth PVTRVCLDLDIHSLTSIVIYSYTGKVYIDSHNVVNLLRASILTSVEFIIYTCINFILRDF 120
ListerPVTRVCLDLDIHSLTSIVIYSYTGKVYIDSHNVVNLLRASILTSVEFIIYTCINFILRDF 120
*** ********************************************************

Cop RKEYCVECYMMGIEYGLSNLLCHTKNFIAKHFLELEDDIIDNFDYLSMKLILESDELNVP 180
WR RKEYCVECYMMGIEYGLSNLLCHTKNFIAKHFLELEDDIIDNFDYLSMKLILESDELNVP 180
Tian RKEYCVECYMMGIEYGLSNLLCHTKNFIAKHFLELEDDIIDNFDYLSMKLILESDELNVP 180
Wyeth RKEYCVECYMMGIEYGLSNLLCHTKNFIAKHFLELEDDIIDNFDYLSMKLILESDELNVP 180
ListerRKEYCVECYMMGIEYGLSNLLCHTKNFIAKHFLELEDDIIDNFDYLSIKLILESDELNVP 180
***********************************************:************

Cop DEDYVVDFVIKWYIKRRNKLGNLLLLIKNVIRSNYLSPRGINNVKWILDCTKIFHCDKQP240
WR DEDYVVDFVIKWYIKRRNKLGNLLLLIKNVIRSNYLSPRGINNVKWILDCTKIFHCDKQP 240
Tian DEDYVVDFVIKWYIKRRNKLGNLLLLIKNVIRSNYLSPRGINNVKWILDCTKIFHCDKQP 240
Wyeth DEDYVVDFVIKWYIKRRNKLGNLLLLIKNVIRSNYLSPRGINNVKWILDCTKIFHCDKQP 240
ListerDEDYVVDFVIKWYIKRRNKLGNLLLLIKNVIRSNYLSPRGINNVKWILDCTKIFHCDKQP 240
************************************************************

Cop RKSYKYPFIEYPMNMDQIIDIFHMCTSTHVGEVVYLIGGWMNNEIHNNAIAVNYISNNWI 300
WR RKSYKYPFIEYPMNMDQIIDIFHMCTSTHVGEVVYLIGGWMNNEIHNNAIAVNYISNNWI300
Tian RKSYKYPFIEYPMNMDQIIDIFHMCTSTHVGEVVYLIGGWMNNEIHNNAIAVNYISNNWI 300
Wyeth RKSYKYPFIEYPMNMDQIIDIFHMCTSTHVGEVVYLIGGWMNNEIHNNAIAVNYISNNWI 300
Lister RKSYKYPFIEYPMNMDQIIDIFHMCTSTHVGEVVYLIGGWMNNEIHNNAIAVNYISNNWI300
************************************************************

Cop PIPPMNSPRLYATGIPANNKLYVVGGLPNPTSVERWFHGDAAWVNMPSLLKPRCNPAVAS 360
WR PIPPMNSPRLYASGIPANNKLYVVGGLPNPTSVERWFHGDAAWVNMPSLLKPRCNPAVAS 360
Tian PIPPMNSPRLYASGIPANNKLYVVGGLPNPTSVERWFHGDAAWVNMPSLLKPRCNPAVAS 360
Wyeth PIPPMNSPRLYASGIPANNKLYVVGGLPNPTSVERWFHGDAAWVNMPSLLKPRCNPAVAS 360
ListerPIPPMNSPRLYASGIPANNKLYVVGGLPNPTSVERWFHGDAAWVNMPSLLKPRCNPAVAS 360
************:***********************************************

Cop INNVIYVMGGHSETDTTTEYLLPNHDQWQFGPSTYYPHYKSCALVFGRRLFLVGRNAEFY 420
WR INNVIYVMGGHSETDTTTEYLLPNHDQWQFGPSTYYPHYKSCALVFGRRLFLVGRNAEFY 420
Tian INNVIYVMGGHSETDTTTEYLLPNHDQWQFGPSTYYPHYKSCALVFGRRLFLVGRNAEFY 420
Wyeth INNVIYVMGGHSETDTTTEYLLPNHDQWQFGPSTYYPHYKSCALVFGRRLFLVGRNAEFY 420
ListerINNVIYVMGGHSETDTTTEYLLPNHDQWQFGPSTYYPHYKSCALVFGRRLFLVGRNAEFY 420
************************************************************

Cop CESSNTWTLIDDPIYPRDNPELIIVDNKLLLIGGFYRGSYIDTIEVYNHHTYSWNIWDGK480
WR CESSNTWTLIDDPIYPRDNPELIIVDNKLLLIGGFYRESYIDTIEVYNHHTYSWNIWDGK 480
Tian CESSNTWTLIDDPIYPRDNPELIIVDNKLLLIGGFYRESYIDTIEVYNHHTYSWNIWDGK 480
Wyeth CESSNTWTLIDDPIYPRDNPELIIVDNKLLLIGGFYRESYIDTIEVYNHHTYSWNIWDGK 480
ListerCESSNTWTLIDDPIYPRDNPELIIVDNKLLLIGGFYRESYIDTIEVYNHHTYSWNIWDGK 480
************************************* **********************

B14R

Cop ------------------------------------------------------------
WR MDIFREIASSMKGENVFISPASISSVLTILYYGANGSTAEQLSKYVEKEENMDKVSAQNI 60
Tian ------------------------------------------------------------
Wyeth------------------------------------------------------------

Cop ------------------------------------------------------------
WR SFKSINKVYGRYSAVFKDSFLRKIGDKFQTVDFTDCRTIDAINKCVDIFTEGKINPLLDE 120
Tian ------------------------------------------------------------
Wyeth ------------------------------------------------------------

Cop ---MNHCLLAISAVYFKAKWLTPFEKEFTSDYPFYVSPTEMVDVSMMSMYGELFNHASVK 57
WR PLSPDTCLLAISAVYFKAKWLTPFEKEFTSDYPFYVSPTEMVDVSMMSMYGKAFNHASVK 180
Tian ---MNHCLLAISAVYFKAKWLTPFEKEFTSDYPFYVSPTEMVDVSMMSMYGKAFNHASVK 57
Wyeth---MNHCLLAISAVYFKAKWLTPFEKEFTSDYPFYVSPTEMVDVSMMSMYGKAFNHASVK 57
:*********************************************: *******

Cop ESFGNFSIIELPYVGDTSMMVILPDKIDGLESIEQNLTDTNFKKWCNSLDAMFIDVHIPK 117
WR ESFGNFSIIELPYVGDTSMMVILPDKIDGLESIEQNLTDTNFKKWCNSLEATFIDVHIPK240
Tian ESFGNFSIIELPYVGDTSMMVILPDKIDGLESIEQNLTDTNFKKWCDFMDAMFIDVHIPK 117
WyethESFGNFSIIELPYVGDTSMMVILPDKIDGLESIEQNLTDTNFKKWCDFMDAMFIDVHIPK 117
**********************************************: ::* ********

Cop FKVTGSYNLVDTLVKSGLTEVFGSTGDYSNMCNLDVSVDAMIHKTYIDVNEEYTEAAAAT 177
WR FKVTGSYNLVDTLVKSGLTEVFGSTGDYSNMCNSDVSVDAMIHKTYIDVNEEYTEAAAAT 300
Tian FKVTGSYNLVDTLVKSGLTEVFGSTGDYSNMCNLDVSVDAMIHKTYIDVNEEYTEAAAAT 177
Wyeth FKVTGSYNLVDTLVKSGLTEVFGSTGDYSNMCNLDVSVDAMIHKTYIDVNEEYTEAAAAT177
********************************* **************************

Cop CALVSDCASTITNEFCVDHPFIYVIRHVDGKILFVGRYCSPTTNC 222
WR CALVSDCASTITNEFCVDHPFIYVIRHVDGKILFVGRYCSPTTNC 345
Tian CALVSDCASTITNEFCVDHPFIYVIRHVDGKILFVGRYCSPTTNC222
WyethCALVSDCASTVTNEFCADHPFIYVIRHVDGKILFVGRYCSPTTNC 222
**********:*****.****************************

B15R

Cop MTANFSTHVFSPQHCGCDRLTSIDDVKQCLTEYIYWSSYAYRNRQCAGQLYSTLLSFRDD 60
WR MTANFSTHVFSPQHCGCDRLTSIDDVRQCLTEYIYWSSYAYRNRQCAGQLYSTLLSFRDD 60
Tian MTANFSTHVFSPQHCGCDRLTSIDDVKQCLTEYIYWSSYAYRNRQCAGQLYSTLLSFRDD 60
Wyeth MTANFSTHVFSPQHCGCDRLTSIDDVKQCLTEYIYWSSYAYRNRQCAGQLYSTLLSFRDD 60
Lister MTANFSTHVFSPQHCGCDRLTSIDDVKQCLTEYIYWSSYAYRNRQCAGQLYSTLLSFRDD60
**************************:*********************************

Cop AELVFIDIRELVKNMPWDDVKDCTEIIRCYIPDEQKTIREISAIIGLCAYAATYWGGEDH 120
WR AELVFIDIRELVKNMPWDDVKDCAEIIRCYIPDEQKTIREISAIIGLCAYAATYWGGEDH120
Tian AELVFIDIRELVKNMPWDDVKDCTEIIRCYIPDEQKTIREISAIIGLCAYAATYWGGEDH 120
Wyeth AELVFIDIRELVKHMPWDDVKDCAEIIRCYIPDEQKTIREISAIIGLCAYAATYWGGEDH 120
ListerAELVFIDIRELVKNMPWDDVKDCTEIIRCYIPDEQKTIREISAIIGLCAYAATYWGGEDH 120
*************:*********:************************************

Cop PTSNSLNALFVMLEMLNYVDYNIIFRRMN 149
WR PTSNSLNALFVMLEMLNYVDYNIIFRRMN 149
Tian PTSNSLNALFVMLEMLNYVDYNIIFRRMN 149
Wyeth PTSNSLNALFVMLEMLNYVDYNIIFRRMN149
Lister PTSNSLNALFVMLEMLNYVDYNIIFRRMN 149
*****************************

B ORF E

Cop MYNSSIHTPEYDVIIHVIEHLKHHKQCVQTVTSGMVFTSPVSSSICTKSDDGRNLSDGFL 60
Tian MYNSSIHTPEYDVIIHVIEHLKHHKQCVQTVTSGMVFTSPVSSSICTKSDDGRNLSDGFL60
************************************************************

Cop LIRYITTDDFCTIFDIIPRHIFYQLANVDEH91
Tian LIRYITTDDFCTIFDIIPRHIFYQLANVDEH 91
*******************************

B16R

Cop MSILPVIFLPIFFYSSFVQTFNASECIDKGXYFASFMELENEPVILPCPQINTLSSGYNI 60
WR MSILPVIFLSIFFYSSFVQTFNAPECIDKGQYFASFMELENEPVILPCPQINTLSSGYNI 60
Tian ------------------------------------MELENEPVILPCPQINTLSSGYNI 24
Wyeth MSILPVIFLSIFFYSSFVQTFNASECIDKGQYFASFMELENEPVILPCPQINTLSSGYNI 60
ListerMSILPVIFLPIFFYSSFVQTFNAPECIDKGQYFASFMELENEPVILPCPQINTLSSGYNI 60
************************

Cop LDILWEKRGADNDRIIPIDNGSNMLILNPTQSDSGIYICITTNETYCDMMSLNLTIVSVS120
WR LDILWEKRGADNDRIIPIDNGSNMLILNPTQSDSGIYICITTNETYCDMMSLNLTIVSVS 120
Tian LDILWEKRGADNDRIIPIDNGSNMLILNPTQSDSGIYICITTNETYCDMMSLNLTIVSVL 84
Wyeth LDILWEKRGADNDRIIPIDNGSNMLILNPTQSDSGIYICITTNETYCDMMSLNLTIVSVS 120
ListerLDILWEKRGADNDRIIPIDNGSNMLILNPTQSDSGIYICITTNETYCDMMSLNLTIVSVS 120
***********************************************************

Cop ESNIDFISYPQIVNERSTGEMVCPNINAFIASNVNADIIWSGHRRLRNKRLKQRTPGIIT 180
WR ESNIDLISYPQIVNERSTGEMVCPNINAFIASNVNADIIWSGHRRLRNKRLKQRTPGIIT180
Tian ESNIDLISYPQIVNERSTGEMVCPNINAFIASNVNADIIWSGHRRLRNKRLKQRTPGIIT 144
Wyeth ESNIDLISYPQIVNERSTGEMVCPNINAFIASNVNADIIWSGHRRLRNKRLKQRTPGIIT 180
ListerESNIDLISYPQIVNERSTGEMVCPNINAFIASNVNADIIWSGHRRLRNKRLKQRTPGIIT 180
*****:******************************************************

Cop IEDVRKNDAGYYTCVLEYIYGGKTYNVTRIVKLEVRDKIIHPTMQLPEGVVTSIGSNLTI 240
WR IEDVRKNDAGYYTCVLEYIYGGKTYNVTRIVKLEVRDKIIPSTMQLPDGIVTSIGSNLTI 240
Tian IEDVRKNDAGYYTCVLEYIYRGKTYNVTRIVKLEVRDKIIPSTMQLPDGIVTSIGSNLTI204
Wyeth IEDVRKNDAGYYTCVLEYIYGGKTYNVTRIVKLEVRDKIIPSTMQLPDGIVTSIGSNLTI 240
ListerIEDVRKNDAGYYTCVLEYIYRGKTYNVTRIVKLEVRDKIIPSTMQLPDGIVTSIGSNLTI 240
*************************************** *****:*:**********

Cop ACRVSLRPPTTDADVFWISNGMYYEEDDGDGDGRISVANKIYMTDKRRVITSRLNINPVK 300
WR ACRVSLRPPTTDADVFWISNGMYYEEDDGDGNGRISVANKIYMTDKRRVITSRLNINPVK 300
Tian ACRVSLRPPTTDADVFWISNGMYYEEDDGDGNGRISVANKIYMTDKRRVITSRLNINPVK 264
Wyeth ACRVSLRPPTTDTDVFWISNGMYYEEDDGDGDGRISVANKIYMTDKRRVITSRLNINPVK300
ListerACRVSLRPPTTDADVFWISNGMYYEEDDGDGNGRISVANKIYMTDKRRVITSRLNINPVK 300
************:******************:****************************

Cop EEDATTFTCMAFTIPSISKTVTVSIT 326
WR EEDATTFTCMAFTIPSISKTVTVSIT326
Tian EEDATTFTCMAFTIPSISKTVTVSI-289
Wyeth EEDATTFTCMAFTIPSISKTVTVSIT 326
Lister EEDATTFTCMAFTIPSISKTVTVSIT 326
*************************

B ORF F

Cop MVIIPGVRCLSLLFLRRRCPLHIISAFTLLAINALILGHTISPVDLSFTICGYEIKSIFD60
TianMVIIPGVRCLSLLFLRRRCPLHIISAFTLLAINALILGHTISPVDLSFTICGYEIRSIFD 60
*******************************************************:****

Cop SETDTIVKFNDIMSQ 75
Tian SKTDTIVKFNDIMSQ 75
*:*************

B17L

Cop MSRKFMQVYEYDREQYLDEFIEDRYNDSFITSPEYYSAEKYMCRYTTLNHNCVNVRRCAL 60
WR MSRKFMQVYEYDREQYLDEFIEDRYNDSFITSPEYYSAEKYMCRYTTLNHNCINVRRCAL 60
Tian MSRKFMQVYEYDREQYLDEFIEDRYNDSFITSPEYYSAEKYMCRYTTLNHNCVNVRRCAL 60
Wyeth MSRKFMQVYEYDREQYLDEFIEDRYNDSFITSPEYYSAEKYMCRYTTLNHNCVNVRRCAL 60
ListerMSRKFMQVYEYDREQYLDEFIEDRYNDSFITSPEYYSAEKYMCRYTTLNHNCINVRRCAL 60
****************************************************:*******

Cop DSKLLHDIITNCKIYNNIELVRATKFVYYLDLIKCNWVSKVGDSVLYPVIFITHTSTRNL120
WR DSKLLHDIITNCKIYNNIELVRATKFVYYLDLIKCNWVSKVGDSVLYPVIFITHTSTRNL 120
Tian DSKLLHDIITNCKIYNNIELVRATKFVYYLDLIKCNWVSKVGDSVLYPVIFITHTSTRNL 120
Wyeth DSKLLHDIITNCKIYNNIELVRATKFVYYLDLIKCNWVSKVGDSVLYPVIFITHTSTRNL 120
ListerDSKLLHDIITNCKIYNNIELVRATKFVYYLDLIKCNWVSKVGDSVLYPVIFITHTSTRNL 120
************************************************************

Cop DKVSVKTYKGVKVKKLNRCADHAIVINPFVKFKLTLPNKTSHAKVLVTFCKLRTDITPVE 180
WR DKVSVKTYKGVKVKKLNRCADHAIVINPFVKFKLTLPNKTSHAKVLVTFCKLKTDITPVE180
Tian DKVSVKTYKGVKVKKLNRCADHAIVINPFVKFKLTLPNKTSHAKVLVTFCKLRTDITQIE 180
Wyeth DKVSVKTYKGVKVKKLNRCADHAIVINPFVKFKLTLPNKTSHAKVLVTFCKLRTDITQIE 180
ListerDKVSVKTYKGVKVKKLNRCADHAIVINPFVKFKLTLPNKTSHAKVLVTFCKLRTDITQIE 180
****************************************************:**** :*

Cop APLPGNVLVYTFPDINKRIPGYIHVNIEGCIDGMIYINSSKFACVLKLHRSMYRIPPFPI 240
WR APLPGNVLVYTFPDINKRIPGYIHLNIEGCIDGMIYINSSKFACVLKLHRSMYRIPPFPI 240
Tian APLSGNVLVYTFPNINKRIPGYIHVNIEGCIDGMIYINSSKFACVLKLHRSMYRIPPFPI240
Wyeth APLSGNVLVYTFPDINKRIPGYIHVNIEGCIDGMIYINSSKFACVLKLHRSMYRIPPFPI 240
ListerAPLSGNVLVYTFPDINKRIPGYIHVNIEGCIDGMIYINSSKFACVLKLHRSMYRIPPFPI 240
************:**********:***********************************

Cop DICSCCSQYTNDDIEIPIHDLIKDVAIFKNKETVYYLKLNNKTIARFTYFNNIDTAITQE 300
WR DICSCCSQYINYDIEIPIHDLIKDVAIFKNKETVYYLKLNNKTIARFTYFNNIDTAITQE 300
Tian DICSCCSQYTNGDIEIPIHDLIKDVAIFKNKETVYYLKLNNKTIARFTYFNNIDTAITQE 300
Wyeth DICSCCSQYTNDDIEIPIHDLIKDVAIFKNKETVYYLKLNNKTIARFTYFNNIDTAITQE300
ListerDICSCCSQYTNDDIEIPIHDLIKDVAIFKNKETVYYLKLNNKTIARFTYFNNIDTAITQE 300
********* *************************************************

Cop HEYVKIALGIVCKLMINNMHSIVGVNHSNTFVNCLLEDNV340
WR HEYVKIALGIVCKLMINNMHSIVGVNHSNTFVNCLLEDNV 340
Tian HEYVKIALGIVCKLMINNMHSIVGVNHSNTFVNCLLEDNV 340
Wyeth HEYVKIALGIVCKLMINNMHSIVGVNHSNTFVNCLLEDNV 340
ListerHEYVKIALGIVCKLMINNMHSIVGVNHSNTFVNCLLEDNV 340
****************************************

B18R

Cop MSRRLIYVLNINRKSTHKIQENEIYTYFSHCNIDHTSTELDFVVKNYDLNRRQHVTGYTA 60
WR MSRRLIYVLNINRESTHKIQENEIYTYFSHCNIDHTSTELDFVVKNYDLNRRQPVTGYTA 60
Tian MSRRLIYVLNINRESTHKIQENEIYTYFSHCNIDHTSTELDFVVKNYDLNRRHPVTGYTA60
WyethMSRRLIYVLNINRESTHKIQENEIYTYFSHCNIDHTSTELDFVVKNYDLNRRQPVTGYTA 60
*************:**************************************: ******

Cop LHCYLYNNYFTNDVLKILLNHDVNVTMKTSSGRMPVYILLTRCCNISHDVVIDMIDKDKN 120
WR LHCYLYNNYFTNDVLKILLNHGVDVTMKTSSGRMPVYILLTRCCNISHDVVIDMIDKDKN 120
Tian LHCYLYNNYFTNDVLKILLNHGVDVTMKTSSGRMPVYILLTRCCNISHDVVIDMIDKDKN 120
WyethLHCYLYNNYFTNDVLKILLNHGVDVTMKTSSGRMPVYILLTRCCNISHDVVIDMIDKDKN 120
*********************.*:************************************

Cop HLSHRDYSNLLLEYIKSRYMLLKEEDIDENIVSTLLDKGIDPNFKQDGYTALHYYYLCLA 180
WR HLLHRDYSNLLLEYIKSRYMLLKEEDIDENIVSTLLDKGIDPNFKQDGYTALHYYYLCLA 180
Tian HLLHRDYSNLLLEYIKSRYMLLKEEDIDENIVSTLLDKGIDPNFKQDGYTALHYYYLCLA 180
WyethHLSHRDYSNLLLEYIKSRYMLLKEEDIDENIVSTLLDKGIDPNFKQDGYTALHYYYLCLA 180
***********************************************************

Cop HVYKPGECRKPITIKKAKRIISLFIQHGANLNALDNCGNTPFHLYLSIEMCNNIHMTKML 240
WR HVYKPGECRKPITIKKAKRIISLFIQHGANLNALDNCGNTPFHLYLSIEMCNNIHMTKML 240
Tian HVYKPGECRKPITIKKAKRIISLFIQHGANLNALDNCGNTPFHLYLSIEMCNNIHMTKML 240
WyethHVYKPGECRKPITIKKAKRIISLFIQHGANLNALDNCGNTPFHLYLSIEMCNNIHMTKML 240
************************************************************

Cop LTFNPNFKICNNHGLTPILCYITSDYIQHDILVMLIHHYETNVGEMPIDERRMIVFEFIK300
WR LTFNPNFEICNNHGLTPILCYITSDYIQHDILVMLIHHYETNVGEMPIDERRIIVFEFIK 300
Tian LTFNPNFKICNNHGLTPILCYITSDYIQHDILVMLIHHYETNVGEMPIDERRIIVFEFIK 300
WyethLTFNPNFKICNNHGLTPILCYITSDYIQHDILVMLIHHYETNVGEMPIDERRIIVFEFIK 300
*******:********************************************:*******

Cop TYSTRPADSITYLMNRFKNINIYTRYEGKTLLHVACEYNNTQVIDYLIRINGDINALTDN 360
WR TYSTRPADSITYLMNRFKNIDIYTRYEGKTLLHVACEYNNTHVIDYLIRINGDINALTDN 360
Tian TYSTRPADSITYLMNRFKNINIYTRYEGKTLLHVACEYNNTQVIDYLIRINGDINALTDN360
WyethTYSTRPADSITYLMNRFKNINIYTRYEGKTLLHVACEYNNTHVIDYLIRINGDINALTDN 360
********************:********************:******************

Cop NKHATQLIIDNKENSPYTINCLLYILRYIVDKNVIRSLVDQLPSLPIFDIKSFEKFISYC 420
WR NKHATQLIIDNKENSPYTINCLLYILRYIVDKNVIRSLVDQLPSLPIFDIKSFEKFISYC 420
Tian NKHATQLIIDNKENSPYTINCLLYILRYIVDKNVIRSLVDQLPSLPIFDIKSFEKFISYC 420
WyethNKHAIQLIIDNKENSPYTIDCLLYILRYIVDKNVIRSLVDQLPSLPIFDIKSFEKFISYC 420
**** **************:****************************************

Cop ILLDDTFYDRHVKNRDSKTYRYAFSKYMSFDKYDGIITKCHDETMLLKLSTVLDTTLYAV 480
WR ILLDDTFYNRHVRNRDSKTYRYAFSKYMSFDKYDGIITKCHKETILLKLSTVLDTTLYAV 480
Tian ILLDDTFYDRHVKNRNSKTYRYAFSKYMSFDKYDGIITKCHDETMLLKLSTVLDTTLYAV 480
Wyeth ILLDDTFYNRHVRNRNSKTYRYAFSKYMSFDKYDGIITKCHDETMLLKLSTVLDTTLYAV480
********:***:**:*************************.**:***************

Cop LRCHNSRKLRRYLTELKKYNNDKSFKIYSNIMNERYLNVYYKDMYVSKVYDKLFPVFTDK 540
WR LRCHNSKKLRRYLTELKKYNNDKSFKIYSNIMNERYLNVYYKDMYVSKVYDKLFPVFTDK 540
Tian LRCHNSRKLRRYLTELKKYNNDKSFKIYSNIMNERYLNVYYKDMYVSKVYDKLFPVFTDK 540
WyethLRCHNSKKLRRYLNELKKYNNDKSFKIYSNIMNERYLNVYYKDMYVSKVYDKLFPVFTDK 540
******:******.**********************************************

Cop NCLLTLLPSEIIYEILYMLTINDLYNISYPPTKV574
WR NCLLTLLPSEIIYEILYMLTINDLYNISYPPTKV 574
Tian NCLLTLLPSEIIYEILYMLTINDLYNISYPPTKV 574
Wyeth NCLLTLLPSEIIYEILYMLTINDLYNISYPPTKV574
**********************************

B19R

Cop MTMKMMVHIYFVSLSLLLLLFHSYAIDIENEITEFFNKMRDTLPAKDSKWLNPACMFGGT 60
WR MTMKMMVHIYFVSL--LLLLFHSYAIDIENEITEFFNKMRDTLPAKDSKWLNPACMFGGT 58
Tian MTMKMMVHIYFVSLSLLLLLFHSYAIDIENEITEFFNKMRDTLPAKDSKWLNPACMFGGT 60
WyethMTMKMMVHIYFVSLSLLLLLFHSYAIDIENEITEFFNKMRDTLPAKDSKWLNPACMFGGT 60
************** ********************************************

Cop MNDMATLGEPFSAKCPPIEDSLLSHRYKDYVVKWERLEKNRRRQVSNKRVKHGDLWIANY 120
WR MNDIAALGEPFSAKCPPIEDSLLSHRYKDYVVKWERLEKNRRRQVSNKRVKHGDLWIANY 118
Tian MNDIAALGEPFSAKCPPIEDSLLSHRYKDYVVKWERLEKNRRRQVSNKRVKHGDLWIANY120
WyethMNDIATLGEPFSAKCPPIEDSLLSHRYKDYVVKWERLEKNRRRQVSNKRVKHGDLWIANY 120
***:*:******************************************************

Cop TSKFSNRRYLCTVTTKNGDCVQGIVRSHIKKPPSCIPKTYELGTHDKYGIDLYCGILYAK 180
WR TSKFSNRRYLCTVTTKNGDCVQGIVRSHIRKPPSCIPKTYELGTHDKYGIDLYCGILYAK 178
Tian TSKFSNRRYLCTVTTKNGDCVQGIVRSHIKKPPSCIPKTYELGTHDKYGIDLYCGILYAK 180
WyethTSKFSNRRYLCTVTTKNGDCVQGIVRSHIRKPPSCIPKTYELGTHDKYGIDLYCGILYAK 180
*****************************:******************************

Cop HYNNITWYKDNKEINIDDIKYSQTGKELIIHNPELEDSGRYDCYVHYDDVRIKNDIVVSR 240
WR HYNNITWYKDNKEINIDDIKYSQTGKELIIHNPELEDSGRYDCYVHYDDVRIKNDIVVSR 238
Tian HYNNITWYKDNKEINIDDIKYSQTGKELIIHNPELEDSGRYDCYVHYDDVRIKNDIVVSR 240
WyethHYNNITWYKDNKEINIDDIKYSQTGKKLIIHNPELEDSGRYDCYVHYDDVRIKNDIVVSR 240
**************************:*********************************

Cop CKILTVIPSQDHRFKLILDPKINVTIGEPANITCTAVSTSLLIDDVLIEWENPSGWLIGF 300
WR CKILTVIPSQDHRFKLILDPKINVTIGEPANITCTAVSTSLLIDDVLIEWENPSGWLIGF 298
Tian CKILTVIPSQDHRFKLILDPKINVTIGEPANITCTAVSTSLLIDDVLIEWENPSGWLIGF 300
WyethCKILTVIPSQDHRFKLKRNCGYASN----------------------------------- 265
**************** : .

Cop DFDVYSVLTSRGGITEATLYFENVTEEYIGNTYKCRGHNYYFEKTLTTTVVLE353
WR DFDVYSVLTSRGGITEATLYFENVTEEYIGNTYKCRGHNYYFEKTLTTTVVLE 351
Tian DFDVYSVLTSRGGITEATLYFENVTEEYIGNTYKCRGHNYYFEKTLTTTVVLE 353
Wyeth-----------------------------------------------------

B21R

Cop MSLESFIITTFNNNSSTNIDNMCHLYVKVCPSSLLFRLFVECCDINKLVEGTTPLHCYLM 60
WyethMSLESFIITTFNNNSSTNIDNMCHLYVKVCPSSLLFRLFVECCDINKLVEGTTPLHCYLM 60
************************************************************

Cop NEGFESSVLKNLLKEYVMNTFNVHDIHYTNI 91
Wyeth NEGFESSVLKNLLKEYVMTSITQIFNS---- 87
******************.::.

B22R

Cop MISLSFLIHNPLKKWKLKPSISINGYRSTFTMAFPCAQFRPCHCHATKDSLNTVADVRHC 60
Wyeth MISLSFLIHNPLKKWKLKPSISINGYRSTFTMAFPCAQFRPCHCHATKDSLNTVADVRHC60
Lister-------------------------------MASPCAKFRPCHCHATKDSLNTVADVRHC 29
** ***:**********************

Cop LTEYILWVSHRWTHRESAGSLYRLLISFRTDATELFGGELKDSLPWDNIDNCVEIIKCFI 120
Wyeth LTEYILWVSHRWTHRETAGPLYRLLISFRTDATELFGGELKDSLPWDNIDNCVEIIKCFI 120
ListerLTEYILWVSHRWTHRESAGSLYRLLISFRTDATELFGGELKDSLPWD---NCVEIIKCFI 86
****************:***************************** **********

Cop RNDSMKTAEELRAIIGLCTQSAIVSGRVFNDKYIDILLMLRKILNENDYLTLLDHIRTAK 180
Wyeth RNDSMKTAEELRAIIGLCTQSAIVSGRVFNDKYIDILLMLRKILNENDYLTLLDHIRTAK 180
ListerRNDSMKTAEELRAIIGLCTQSAIVSGRVFNDKYIDILLMLRKILNENDYLTLLDHIRTAK 146
************************************************************

Cop Y 181
Wyeth Y 181
Lister Y 147
*

B23R

Cop MIAFIIFREIGIISTRIAMDYCGRECTILCRLLDEDVTYKKIKLEIETCHNLSKHIDRRG 60
WyethMIAFIIFREIGIISTRIAMDCT----CILCRLLDEDVTYKKIKLEIETCHNLSKHIDRRG 56
******************** *********************************

Cop NNALHCYVSNKCDTDIKIVRLLLSRGVERLCRNNEGLTPLGAYSKHRYVKSQIVHLLISS 120
WyethNNALHCYVFNKCDTDIKIVRLLLSRGVERLCRNNEGLTPLGVYSKHRYVKSQIVHLLISS 116
****************************************.******************

Cop YSNSSNELKSNINDFDLSSDNIDLRLLKYLIVDKRIRPSKNTNYAINGLGLVDIYVTTPN 180
WyethYSNSSNELKSNINDFDLSSDNIDLRLLKYLIVDKRIRPSKNTNYAINSLGLVDIYVTTPN 176
***********************************************.************

Cop PRPEVLLWLLKSECYSTGYVFRTCMYNSDMCKNSLHYYISSHRESQSLSKDVIKCLINNN240
WyethPRPEVLLWLLKSECYSTGYVFRTCMYNSDMCKNSLHYYISSHRESQSLSKDVIKCLINNN 236
************************************************************

Cop VSIHGRDEGGSLPIQYYWSFSTIDIEIVKLLLIKDVDTCRVYDVSPILEAYYLNKRFRVT300
WyethVSIHGRDEGGSLPIQYYWSFSTIDIEIVKLLLIKDVDTCRVYDVSPILEAYYLNKRFRVT 296
************************************************************

Cop PYNVDMEIVNLLIERRHTLVDVMRSITSYDSREYNHYIIDNILKRFRQQDESIVQAMLIN 360
WyethPYNVDMEIVNLLIERRHTLVDVMRSITSYDSREYNHYIIDNILKRFRQQDESIVQAMLIN 356
************************************************************

Cop YLHYGDMVVRCMLDNGQQLSSARLLC386
Wyeth YLHYGDMVVRCMLDNGQQLSSARLLC 382
**************************

B24R

Cop MYGLILSRFNNCGYHCYETILIDVFDILSKYMDDIDMIDNENKTLLYYAVDVNNIQFAKR 60
WyethMYGLILSRFNNCGYHCYETILIDVFDILSKYMDNIDMIDNENKTLLYYAVDVNNIQFAKR 60
*********************************:**************************

Cop LLEYGASVTTSRSIINTAIQKSSYQRENKTRIVDLLLSYHPTLETMIDAFNRDIRYLYPE 120
WyethLLEYGASVTTSRSIINTAIQKSSYRRENKTKLVDLLLSYHPTLETMIDAFNRDIRYLYPE 120
************************:*****::****************************

Cop PLFACIRYALILDDDFPSKVSMISPVIIRN------------------------------ 150
WyethPLFACIRYALILDDDFPSKVKYDISGRHKELKRYRVDINRMKNAYISGVSMFDILFKRSK 180
********************. ::

Cop ------------------
Wyeth RHRLRYAKNPTSNGTKKN 198

B25R

Cop MSRINITKKIYCSVFLFLFLFLSYISNYEKVNDEMYEMGEMDEIVSIVRDSMWYIPNVFM 60
WR ----------------------------------------MDEIVRIVRDSMWYIPNVFM 20
Wyeth MSRINITKKIYCSVFLF--LFLSYISNYEKVNDEMYEMGEMDEIVSIVRDSMWYIPNVFM58
***** **************

Cop DDGKNEGHVSVNNVCHMYFTFFDVDTSSHLFKLVIKHCDLNKRGNSPLHCYTMNTRFNPS 120
WR DDGKNEGHVSVNNVCHMYFTFFDVDTSSHLFKLVIKHCDLNKRGNSPLHCYTMNTRFNPS 80
Wyeth DDGKNEGHVSVNNVCHMYFTFFDVDTSSHLFKLVIKHCDLNKRGNSPLHCYTMNTRFNPS118
************************************************************

Cop VLKILLHHGMRNFDSKDEKGHHYLIHSLSIDNKIFDILTDTIDDFSKSSDLLLCYLRYKF 180
WR VLKILLHHGMRNFDSKDEKGHHYQSITRSLIY---------------------------- 112
WyethVLKILLHHGMRNFDSKD---DHYQSITRSLIY---------------------------- 147
***************** .** :*:

Cop NGSLNYYVLYKGSDPNCADEDELTSLHYYCKHISTFYKSNYYKLSHTKMRAEKRFIYAII 240
WR ------------------------------------------------------------
Wyeth------------------------------------------------------------

Cop DYGANINAVTHLPSTVYQT 259
WR -------------------
Wyeth -------------------

B26R

Cop MEQTLTRLHTYLQQYTKHSPRVVYALLSRGYVIILIVHPSWNDCATGHILIMLLNWHEQK 60
WR -------------------MLFYLEEPIRGYVIILIVHPSWNDCATGHILIMLLNWHEQK 41
Wyeth MEQTLTRLHTYLQQYTKHSPRVVYALLSRGYVIILIVHPSWNDCATGHILIMLLNWHEQK 60
ListerMEQTLTRLHTYLQQYTKHSPRVVYALLSRGYVIILIVHPSWNDCATGHILIMLLNWHEQK 60
. ********************************

Cop EEGQHLLYLFIKHNQGYTLNILRYLLDRFDIQKDEYIYRLSKL----------------- 103
WR EEGQHLLYLFIKHNQGYTLNILRYLLDRFDIQKDEYYNTAFQNCNNNVASYIGYDINLPT 101
Wyeth EEGQHLLYLFIKHNQGYTLNILRYLLDRFDIQKDEYYNTAFQNCNNNVASYIGYDINLPT 120
ListerEEGQHLLYLFIKHNQGYTLNILRYLLDRFDIQKDEYYNTAFQNCNNNVASYIGYDINLPT 120
************************************ :

Cop --------
WR KDGIRLGV 109
Wyeth KDGIRLGV 128
Lister KDGIRLGV 128

B27R

Cop MLPHTSDTTSTFRLKTVFDLVFENRNIIYKADVVNDIIHHRLKVSLPMIKSLFYKMSEFS 60
WR MLPHTSDTTSTFRLKTVFDLVFENRNIIYKADVVNDIIHHRLKVSLPMIKSLFYKMSLPT 60
Wyeth MLPHTSDTTSTFRLKTVFDLVFENRNIIYKADVVNDIIHHRLK--VPMIKSLFYKMSEFS 58
ListerMLPHTSDTTSTFRLKTVFDLVFENRNIIYKADVVNDIIHHRLKVSLPMIKSLFYKMSLPT 60
******************************************* :*********** :

Cop PYDDYYVKKILAYCLLRDESFAELHSKFCLNEDYKSVFMKNISFDKIDSIIVT113
WR TITT------------------------------------------------- 64
Wyeth PYDDYYVKKILAYCLLRDESFAELHSKFCLNEDYKSVFMKNISFDKIDSIIVT 111
ListerTITT------------------------------------------------- 64

B28R

Cop MKSVLYSYILFLSCIIINGRDIAPHAPSDGKCKDNEYKRHNLCPGTYASRLCDSKTNTQC 60
WR MKSVLYSYILFLSCIIINGRDIAPHAPSDGKCKDNEYKRHNLCPGTYASRLCDSKTNTQC 60
Wyeth-----------------------MHHPMESVKTTN--TNAIICV---REHTLPDYANTQC 32
* * :. . * .. :* .: .:****

Cop TPCGSGTFTSRNNHLPACLSCNGRRDRVTLLTIESVNALPDIIVFSKDHPDARHVFPKQN 120
WR TPCGSGTFTSRNNHLPACLSCNGRRDRVTRLTIESVNALPDIIVFSKDHPDARHVFPKQN 120
WyethTPCGSGTFTSRNNHLPACLSCNGRRDRVTLLTIESVNALPDIIVFSKDHPDARHVFPKQN 92
***********************************************************

Cop VE 122
WR VE 122
Wyeth V- 93
*

C23L/B29R

Cop --------------MHVPASLQQSSSSSSSCTEEENKHHMGIDVIIKVTKQDQTPTNDKI46
WR --------------MHVPASLQQSSSSSSSCTEEENKHHMGIDVIIKVTKQDQTPTNDKI 46
Tian --------------MHVPASLQQSSSSSSSCTEEENKHHMGIDVIIKVTKQDQTPTNDKI 46
Wyeth --------------MHVPASLQQ---SSSSCTEEENKHHMGIDVIIKVTKQDQTPTNDKI 43
ListerMKQYIVLACMCLAAAAMPASLQQSSSSSSSCTEEENKHHMGIDVIIKVTKQDQTPTNDKI 60
:****** **********************************

Cop CQSVTEITESESDPDPEVESEDDSTSVEDVDPPTTYYSIIGGGLRMNFGFTKCPQIKSIS 106
WR CQSVTEITESESDPDPEVESEDDSTSVEDVDPPTTYYSIIGGGLRMNFGFTKCPQIKSIS 106
Tian CQSVTEITESESDPDPEVESEDDSTSVEDVDPPTTYYSIIGGGLRMNFGFTKCPQIKSIS 106
Wyeth CQSVTEITESESDPDPEVESEDDSTSVEDVDLPTTYYSIIGGGLRMNFGFTKCPQIKSIS 103
ListerCQSVTEITESESDPDPEVESEDDSTSVEDVDPPTTYYSIIGGGLRMNFGFTKCPQIKSIS 120
******************************* ****************************

Cop ESADGNTVNARLSSVSPGQGKDSPAITREEALAMIKDCEVSIDIRCSEEEKDSDIKTHPV 166
WR ESADGNTVNARLSSVSPGQGKDSPAITHEEALAMIKDCEVSIDIRCSEEEKDSDIKTHPV 166
Tian ESADGNTVNARLSSVSPGQGKDSPAITHEEALAMIKDCEVSIDIRCSEEEKDSDIKTHPV 166
Wyeth ESADGNTVNARLSSVSPGQGKDSPAITHEEALAMIKDCEVSIDIRCSEEEKDSDIKTHPV 163
ListerESADGNTVNARLSSVSPGQGKDSPAITHEEALAMIKDCEVSIDIRCSEEEKDSDIKTHPV 180
***************************:********************************

Cop LGSNISHKKVSYEDIIGSTIVDTKCVKNLEFSVRIGDMCKESSELEVKDGFKYVDGSASE 226
WR LGSNISHKKVSYEDIIGSTIVDTKCVKNLEFSVRIGDMCKESSELEVKDGFKYVDGSASE 226
Tian LGSNISHKKVSYEDIIGSTIVDTKCVKNLEFSVRIGDMCKESSELEVKDGFKYVDGSASE 226
Wyeth LGSNISHKKVSYEDIIGSTIVDTKCVKNLEFSVRIGDMCKESSELEVKDGFKYVDGSASE223
ListerLGSNISHKKVSYEDIIGSTIVDTKCVKNLEFSVRIGDMCKESSELEVKDGFKYVDGSASE 240
************************************************************

Cop GATDDTSLIDSTKLKACV244
WR GATDDTSLIDSTKLKACV244
Tian GATDDTSLIDSTKLKACV 244
Wyeth GATDDTSLIDSTKLKACV 241
Lister GATDDTSLIDSTKLKACV 258
******************

ウイルスの特徴を測定するためのアッセイ
ウイルスの、腫瘍における拡散及び毒力を測定するための、当技術分野で公知のアッセイは、プラークサイズの測定、合胞体の形成の測定、及び／又はコメットアッセイ（ＥＥＶ）を含むがこれらに限定されない。ウイルスの免疫刺激活性を測定するための、当技術分野で公知のアッセイは、ＮＫ活性化（ＣＤ６９の発現％により測定される）、ＮＫ脱顆粒（ＣＤ１０７ａの増大倍数により測定される）、及び／又はＴ細胞プライミングアッセイを含むがこれらに限定されない。ウイルスの選択性を測定するための、当技術分野で公知のアッセイは、尾におけるポックス病変、生体分布、及び／又は体格指数の測定を含むがこれらに限定されない。

オルトポックスウイルス遺伝子によりコードされるタンパク質の例
本開示において記載されるオルトポックスウイルス遺伝子によりコードされる、例示的なタンパク質を、下記の表３１〜４０に再掲する。下記で使用される通り、「場所」という用語は、本明細書で記載される、例示的なオルトポックスウイルスベクターにおいて欠失している核酸に関して、遺伝子の場所を指す。多様な遺伝子について、アミノ酸配列情報及びタンパク質受託番号を提示する。

以下の実施例は、当業者に、本明細書で特許請求される組成物及び方法が、どのようにして実施され、作られ、査定されるのかについての記載をもたらすように明示されるものであり、本発明について、純粋に例示的あることが意図され、本発明者が、本発明と考えるものの範囲を限定することは意図されない。

実施例１−ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐ「ＳＫＶ−Ｂ８Ｒ＋」組換えオルトポックスウイルスの創出
５９のポックスウイルス株に由来するオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を、オーソログにクラスター化し、アミノ酸レベルでアライメントした（系統発生解析については、図１を参照されたい）。ベイズ解析を実施して、全ての株の類縁性を決定した。ポックスウイルスは、遺伝子内容及び宿主範囲において、極めて多様である。互いと異なる、いくつかの自然発生のワクシニア野生型株が存在する。

５つのワクシニア野生型株（Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、ＴｉａｎＴａｎ、Ｌｉｓｔｅｒ、Ｗｙｅｔｈ、及びＷＲ（ＷｅｓｔｅｒｎＲｅｓｅｒｖｅ））を、等しいプラーク形成単位カウントで混合し、ＮＧＳによりシーケンシングした（インプットプール）。結果として得られる混合物を、異なるがん細胞株（ＨｅＬａ、７８６−Ｏ、ＨＴ２９、ＭＣＦ７）において、３代にわたり継代培養した。最終的な集団を、ＮＧＳイルミナ（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）シーケンシングによりシーケンシングした。リード（短いＤＮＡ断片）を、配列同一性に基づき、多様な株に割り当て、各株の、最終集団中のパーセントを計算するのに使用した。次いで、異なるウイルス株の相対存在度を定量した。図２に示す通り、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ株が、３代にわたる継代の後に、４つのがん細胞株のうちのいずれにおいても、最も夥多なワクシニア株であったことから、この株が、他の株より大きな増殖が可能であり、したがって、急速な複製が可能であることが指し示される。

異なるワクシニア野生型株もまた、低ＰＦＵ（１×１０^４）で、多様な患者腫瘍コアに感染させるのに使用した。各株は、各々が、２×２ｍｍの腫瘍コア３つずつを含有する、平均４連で感染した。複製は、ウイルス滴定により評価したものであり、図３に示す通り、プラーク形成単位（ＰＦＵ）として表す。Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ株は、他の株より高力価まで増殖し、したがって、患者のｅｘｖｉｖｏ試料において、より急速に複製される。患者のｅｘｖｉｖｏコアは、患者の３Ｄ腫瘍の良好な模倣物である。

次いで、ワクシニア野生型株を、３％のＣＭＣオーバーレイを伴う、Ｕ２−ＯＳ細胞におけるプラークアッセイにかけた。感染の２日後、各株につき、２０〜３０ずつのプラークを、それらのサイズについて測定した。Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、ＷＲ（ＷｅｓｔｅｒｎＲｅｓｅｒｖｅ）、Ｗｙｅｔｈ、Ｌｉｓｔｅｒ、及びＴｉａｎＴａｎについての、プラークサイズの測定値を、図４に示す。プラークの形成は、ウイルスの複製、拡散、及び殺滅の能力の影響を受ける。Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ株について観察されたプラークサイズの大きさは、この株が、腫瘍溶解性ウイルスを開発するために重要である、これらの能力において優れていることを示唆する。

次いで、ワクシニアＣｏｐｅｎｈａｇｅｎゲノムにおける、１ｋｂの領域にわたる、ＴＴＡＡ部位の数をカウントした（図５Ａを参照されたい）。イルミナＮＧＳディープシーケンシングを組み合わせ、トランスポゾン挿入部位を同定する（Ｔｎ−Ｓｅｑ）のに使用した。インプットライブラリーを、ＨｅＬａ細胞又はＵ２−ＯＳ細胞において、３代にわたり継代培養し、その後、トランスポゾンノックアウトの頻度を決定した。ノックアウトの頻度は直接、イベントを裏付けるリードの量に対応する（図５Ｂ及び図６を参照されたい）。

最後に、図１による５９のポックスウイルスゲノムの全てを使用して、ＯＲＦを見出し、オーソログ群にクラスター化した。Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ遺伝子を含有する群を、遺伝子の、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎゲノム内の場所（ｘ軸）及び群のサイズ（ｙ軸）に基づき、プロットした。５９種全てが、同じ遺伝子を共有する場合、保存は、１００％であると考えられる。ＴＴＡＡモチーフが、トランスポゾンの挿入に要求され、このモチーフが、ゲノムに沿って遍在することは、トランスポゾンが、ゲノム内の任意の場所に挿入されうることを意味する。しかし、トランスポゾンは、ポックスウイルス遺伝子の保存が低度である領域に優先的に挿入されることが注目された。トランスポゾンによるノックアウトをシーケンシングすることから、主要な欠失を同定し、ＣｏｐＭＤ５ｐ及びＣｏｐＭＤ３ｐと命名した（図５Ｃ及び図６を参照されたい）。ゲノムの中央部に存在し、遺伝子保存が高度である遺伝子（図５Ｃ）は、ウイルスの複製に重要である。これは、これらの遺伝子を、トランスポゾンの挿入によりノックアウトすることは、適合性の低下（継代培養の後における頻度の低下）を引き起こすためである。メジャー欠失である、ＣｏｐＭＤ５ｐ及びＣｏｐＭＤ３ｐの一部である遺伝子は、それらの欠失が、適合性に影響を及ぼさないので、ウイルスの複製に、それほど重要ではないことが見出された。

イルミナＮＧＳディープシーケンシングは、プラーク精製工程における、メジャー欠失の存在を明らかにした。ＣｏｐＭＤ５ｐ及びＣｏｐＭＤ３ｐは、精製され、ゲノムのメジャー欠失を保有することが見出されるプラークであったクローンを表す。これらの２つのクローンを、ＨｅＬａ細胞の単層に、高ＭＯＩ（ＭＯＩ：１０）で共感染させて、組換えを誘導するのに使用した。ランダムのプラーク採取及びＰＣＲは、いずれのゲノム欠失も含有する二重欠失である、ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐの存在を明らかにした（図８を参照されたい）。これらの２つの欠失を組み合わせ、精製して、本明細書において、「ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐ」と称される複製型ウイルスであって、Ｃ２Ｌ、Ｃ１Ｌ、Ｎ１Ｌ、Ｎ２Ｌ、Ｍ１Ｌ、Ｍ２Ｌ、Ｋ１Ｌ、Ｋ２Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ｋ４Ｌ、Ｋ５Ｌ、Ｋ６Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｆ１Ｌ、Ｆ２Ｌ、Ｆ３Ｌ、Ｂ１４Ｒ、Ｂ１５Ｒ、Ｂ１６Ｒ、Ｂ１７Ｌ、Ｂ１８Ｒ、Ｂ１９Ｒ、及びＢ２０Ｒ遺伝子における欠失、並びにＩＴＲ遺伝子Ｂ２１Ｒ、Ｂ２２Ｒ、Ｂ２３Ｒ、Ｂ２４Ｒ、Ｂ２５Ｒ、Ｂ２６Ｒ、Ｂ２７Ｒ、Ｂ２８Ｒ、及びＢ２９Ｒの各々における、単一の欠失を呈する複製型ウイルスをもたらした。本明細書で使用される、「ＣｏｐＷＴ」とは、野生型Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎワクシニアウイルスを指し、「ＣｏｐＭＤ５ｐ」とは、代表的な５’遺伝子（Ｃ２Ｌ、Ｃ１Ｌ、Ｎ１Ｌ、Ｎ２Ｌ、Ｍ１Ｌ、Ｍ２Ｌ、Ｋ１Ｌ、Ｋ２Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ｋ４Ｌ、Ｋ５Ｌ、Ｋ６Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｆ１Ｌ、Ｆ２Ｌ、Ｆ３Ｌ）において、欠失を保有する、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎワクシニアウイルスを指し、「ＣｏｐＭＤ３ｐ」とは、代表的な３’遺伝子（Ｂ１４Ｒ、Ｂ１５Ｒ、Ｂ１６Ｒ、Ｂ１７Ｌ、Ｂ１８Ｒ、Ｂ１９Ｒ、及びＢ２０Ｒ）における欠失、並びにＩＴＲ遺伝子Ｂ２１Ｒ、Ｂ２２Ｒ、Ｂ２３Ｒ、Ｂ２４Ｒ、Ｂ２５Ｒ、Ｂ２６Ｒ、Ｂ２７Ｒ、Ｂ２８Ｒ、及びＢ２９Ｒの各々における、単一の欠失を保有する、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎワクシニアウイルスを指す。

次いで、５９のポックスウイルスゲノムを、ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐにおいて欠失した、これらの３１の遺伝子の存在について評価した。相同性の検索を使用して、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎゲノムによる、表２の遺伝子のアミノ酸配列を伴う、他のクレードに由来するポックスウイルスに問い合わせた。図３６に示される通り、多様なポックスウイルス株において存在する、これらの３２の遺伝子の百分率は、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ株からの分岐が増大するにつれて低下した（プロットにおける各ドットは、１つのポックスウイルスゲノムを表す）。しかし、オルトポックスファミリーのメンバーの大部分は、ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐ組換えベクターにおいて欠失した遺伝子のうちの、少なくとも８５％を含む。

実施例２−がん細胞死
がん細胞に、ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐを、ある範囲のＭＯＩ（１〜０．０１）において、２４ウェルプレートに、４連で感染させた。ウイルスを感染させた２日間後、プレートを、クリスタルバイオレット（ＣｒｙｓｔａｌＶｉｏｌｅｔ）により染色した。クリスタルバイオレット染料は、ＳＤＳに溶解させ、分光光度法により読み取った。データは、非感染細胞のパーセントとして表す（図９を参照されたい）。このデータは、がん細胞株の大部分が、ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐウイルスに曝露された場合に、急速に死滅することを示す。

野生型Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎワクシニアウイルス、及びいくつかの改変Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎワクシニアビリオンが、抗腫瘍免疫応答を誘導し、多様ながん細胞株において繁殖する能力はまた、図２６、２７、及び２９〜３５においても示される。

実施例３−がん細胞における増殖
４つのがん細胞株に、ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐを、２４ウェルプレートにおいて、低ＭＯＩ（０．００１）、３連で感染させ、異なる時点において、ウイルスを回収し、滴定した。０時間後の時点は、インプットを表す。ＨｅＬａ、７８６−Ｏ、ＨＴ−２９、及びＭＣＦ７についての増殖曲線を、図１０に示す。このデータは、改変ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐウイルスが、ｉｎｖｉｔｒｏにおいて増殖するその能力を損なわれていないことを示す。これは、ウイルスが、インターフェロン応答の存在下にあっても、なお、複製コンピテントであることを意味する。哺乳動物細胞株において複製される能力は、別の重要な利点をもたらす。こうして、ウイルスは、速度及び効率を増強して製造することができる。

実施例４−患者腫瘍試料における増殖
患者腫瘍試料を、手術の直後に得、２ｍｍ×２ｍｍのコアに切り刻んだ。３つのコアに、野生型Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ又はＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐの、少量のウイルス（１×１０^４ＰＦＵ）を感染させた。７２時間後に、プラークアッセイにより、ウイルスのアウトプットを評価し、最終的なウイルス力価を、ＰＦＵとして表した（図１１を参照されたい）。このデータは、改変ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐウイルスが、新鮮な患者腫瘍試料において複製されうることを示す。患者腫瘍試料における複製は、患者３Ｄ腫瘍における複製についての良好なモデルである。

実施例５−Ｕ２−ＯＳ細胞における合胞体
単層のＵ２−ＯＳ細胞に、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ野生型ウイルス又はＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐウイルスを感染させた。２時間後、培地を、プラークアッセイのためにするのと同様に、オーバーレイ培地に交換した。感染の４８時間後に、エボス（ＥＶＯＳ）により撮影して、プラーク表現型を評価した（図１２を参照されたい）。非感染細胞は、感染細胞と融合するので、合胞体としてもまた公知の細胞融合は、ウイルス拡散の一助となると考えられる。加えて、融合した細胞は、免疫原性であり、がん細胞の場合、抗腫瘍免疫応答を誘発する一助となりうることも示されている。例えば、ｈｔｔｐ：／／ｃａｎｃｅｒｒｅｓ．ａａｃｒｊｏｕｒｎａｌｓ．ｏｒｇ／ｃｏｎｔｅｎｔ／６２／２２／６５６６．ｌｏｎｇを参照されたい。

実施例６−７８６−Ｏ細胞における合胞体
単層の７８６−Ｏ細胞に、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ野生型ウイルス又はＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐウイルスを感染させた。２４時間後に、エボスにより、１０倍の拡大率で撮影した（図１３を参照されたい）。これは、合胞体の発生についての、さらなる証拠である。図１２に、プラークの表現型を示す。本実験では、単層の細胞に、オーバーレイを伴わずに感染させた。ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐウイルスを感染させた大半の細胞は、融合した。

実施例７−マウスモデルにおける、腫瘍のコントロール及び体重の減少
ヌードＣＤ−１（Ｃｒｌ：ＣＤ１−Ｆｏｘｎ１ｎｕ）マウスに、ＨＴ−２９ヒト結腸がん異種移植片（細胞５×１０^６個）を接種した。皮下腫瘍が、約５ｍｍ×５ｍｍのサイズを確立したら、マウスを、１×１０^７ＰＦＵの、いずれかのワクシニアウイルスにより、２４時間間隔で、３回（破線）にわたり、静脈内処置した。マウスを、ほぼ隔日で、腫瘍サイズ及び体重の減少について測定した（図１４を参照されたい）。この実験は、ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐが、免疫障害ヌードマウスにおいて、体重の減少又は他の疾病の徴候を引き起こさないため、はるかに安全なウイルスであることを示す。この実験はまた、ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐが、親Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ野生型ウイルと同様に、腫瘍の増殖をコントロールすることが可能なことも示す。

実施例８−ポックス病変の形成
群１つ当たりのヌードＣＤ−１マウス６匹ずつを、１×１０^７ＰＦＵの、いずれかのワクシニアウイルスにより、１回、静脈内処置した。処置の２週間後、マウスを屠殺し、尾の写真を撮影した。全てのマウス尾におけるポックス病変を、目視によりカウントした。代表的な写真を、図１５に示す。この実験は、ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐが、免疫障害ヌードマウスにおいて、ポックス病変を引き起こさないため、はるかに安全なウイルスであることを示す。かつてのＯｎｃｏｌｙｔｉｃＶａｃｃｉｎｉａ試験による臨床データが、処置時に、ポックス病変を発症する患者を示しているので、これは重要である。チミジンキナーゼ（ＴＫ）のノックアウトは、ＯＶ（腫瘍溶解性ウイルス）の安全性を増大させる一般的な方式であり、フェーズＩＩＩのＯｎｃｏｌｙｔｉｃＶａｃｃｉｎｉａ試験及びＦＤＡにより承認されているＯｎｃｏｌｙｔｉｃＴ−Ｖｅｃ試験においてなされている。データは、マウスが、ＴＫを欠失したウイルスにより抗原投与されると、ポックス病変を発症するが、インタクトのＴＫを有するＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐにより抗原投与されると、ポックス病変を発症しない、このアッセイでは、ＴＫの欠失が、決定的な役割を果たさないことを示す。

実施例９−全身投与後における、アイビスによる、ワクシニアの生体分布
感染細胞への、ＴＫを、Ｆｌｕｃ及びＹＦＰで置きかえる、ｐＳＥＭ１プラスミドのトランスフェクションを介して、ワクシニアウイルスである、野生型Ｗｙｅｔｈ、野生型Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、及びＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐを操作して、ホタルルシフェラーゼ（Ｆｌｕｃ）及びＹＦＰを発現させた。ウイルスは、プラーク精製し、拡大した。全てのウイルスは、ＴＫノックアウトであり、それらのＴＫ遺伝子座において、機能的なＦｌｕｃをコードする。

次いで、ヌードＣＤ−１マウスに、ＨＴ−２９ヒト結腸がん異種移植片を接種した。皮下腫瘍が、約５ｍｍ×５ｍｍのサイズを確立したら、群１つ当たりのマウス４匹ずつを、１×１０^７ＰＦＵの、いずれかのワクシニアＦｌｕｃコードウイルスにより、１回、静脈内処置した。処置の４日後、マウスに、ルシフェリンを、ｉ．ｐ．（腹腔内）注射し、アイビスにより、ウイルスの存在についてイメージングした（図１６を参照されたい）。この実験は、ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐが、腫瘍に対する特異性が大きいため、はるかに安全なウイルスであることを示す。他のウイルスは、尾、筋肉、足、及び鼻腔内における、オフターゲット複製を示す。ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐは、腫瘍だけに局在化される。前出の図１５及び１６に示した通り、尾において検出可能なＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐは、他の株と比較して少ない。図１７は、ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐがまた、他の臓器においても、他の腫瘍溶解性ワクシニアと比較した場合に、低力価をもたらすことを示す。ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐは、腫瘍では、他のウイルスと同じレベルで複製されるが、オフターゲット組織では低レベルで複製されるので、ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐは、腫瘍溶解性ウイルスのプロファイルに良好に適合する。

野生型Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎワクシニアウイルス、及びいくつかの改変Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎワクシニアビリオンを含む、多様なワクシニアウイルスベクターの生体分布のさらなる例を、図２８に示す。

実施例１０−ヒトＰＢＭＣにおける、ワクシニアの免疫原性
ＰＢＭＣを、健常ヒトドナー（ｎ＝２）の血液から単離した。ＰＢＭＣを、いずれかのワクシニアと共に、２４時間にわたりインキュベートし、フローサイトメトリーを使用して、早期の活性化マーカーについて点検した（図１８を参照されたい）。この実験は、ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐの免疫原性が大きく、免疫細胞によりたやすく検出可能であることを示す。本発明者らは、腫瘍組織において複製されたＯＶは、抗腫瘍免疫応答を成功させるために、免疫細胞を活性化させる必要があるので、これが、所望の形質であると考える。

実施例１１−マウス脾臓細胞における、ワクシニアの免疫原性
免疫コンピテントＢａｌｂ／Ｃマウスに、１×１０^７ワクシニアＰＦＵのワクシニアウイルスを、静脈内注射した。１又は２日後、マウスを屠殺し、脾臓を摘出し、フローサイトメトリーを使用して、免疫活性化について解析した（図１９を参照されたい）。この実験は、ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐの免疫原性が大きく、マウス免疫細胞によりたやすく検出可能であることを示す。ｉｎｖｉｖｏにおける実験の大半は、マウスにおいてなされるので、このデータは、前出の図１８を補うのに好都合である。

実施例１２−ヒト細胞における、ワクシニアの免疫原性
ヒトがん細胞である７８６−Ｏに、０．０１のＭＯＩで、いずれかのウイルスを感染させた。翌日、細胞を採取し、核及び細胞質を、細胞分画により分離した。タンパク質を、各画分から抽出し、ＮＦ−ｋＢサブユニットである、ｐ６５及びｐ５０についてブロッティングした（図２０を参照されたい）。ＮＦ−ｋＢ免疫転写因子は、そのサブユニットである、ｐ６５及びｐ５０が、核に移行すると、免疫応答を誘発した。一部のウイルスは、免疫抑制性であり、この移行を遮断し、免疫応答を阻止する。ＮＦ−ｋＢの機能を抑制することは、腫瘍溶解性ウイルスを、免疫療法と組み合わせて使用することの目標に、直感的に反する。したがって、ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐは、ＭＧ−１と同様に振る舞うので、より有利なウイルスである。

実施例１３−侵襲性黒色腫モデルにおける、免疫チェックポイント阻害剤である、抗ＣＴＬＡ４との相乗作用
免疫コンピテントＣ５７ＢＬ／６マウスに、Ｂ１６−Ｆ１０黒色腫腫瘍（細胞５×１０^５個）を皮下接種した。皮下腫瘍が、約５ｍｍ×５ｍｍのサイズを確立したら、処置を開始した。ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐウイルスで処置されたマウスに、用量１×１０^７ＰＦＵの、３回の投与（腫瘍内）を、腫瘍に、１日間隔で施した。抗ＣＴＬＡ４で処置されたマウスに、用量１００μｇの抗体の、５回にわたるｉ．ｐ．投与を、１日間隔で施した。処置が始まったら、生存を、隔日で記録した（図２１を参照されたい）。この実験では、本発明者らは、本発明者らのＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐウイルスの腫瘍溶解効果が、周知の免疫チェックポイントであるＣＴＬＡ−４の遮断作用と相乗作用するのかどうかについて、極めて侵襲性である黒色腫マウスモデルにおいて調べた。驚くべきことに、ウイルス及びチェックポイント剤で処置されたマウスの中央値生存は、他のいずれの群よりも高値であった。これは、ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐが、チェックポイント遮断による免疫療法と相乗作用する、何らかの刺激特性を及ぼすことを示唆する。

実施例１４−免疫チェックポイント阻害剤である、抗ＣＴＬＡ４との相乗作用
免疫コンピテントＢａｌｂ／Ｃマウスに、ＣＴ２６−ＬａｃＺ腫瘍（細胞５×１０^５個）を皮下接種した。皮下腫瘍が、約５ｍｍ×５ｍｍのサイズを確立したら、処置を開始した。ワクシニアウイルスで処置されたマウスに、用量１×１０^７ＰＦＵの、３回（２４時間間隔、最初の３つの破線）の投与（腫瘍内）を、腫瘍に施した。抗ＣＴＬＡ４で処置されたマウスに、用量１００μｇの抗体の、５回（２４時間間隔、破線）にわたるｉ．ｐ．投与を施した。処置が始まったら、腫瘍サイズ及び生存を、隔日で記録した（図２２を参照されたい）。データは、ＴＫノックアウトワクシニアウイルスが、抗ＣＴＬＡ４と共に、ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐほど良好には作用しないことを示す。これは、ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐの免疫原性が大きく、抗腫瘍免疫応答を発生させる可能性が大きいことを示唆する。

実施例１５−免疫チェックポイント阻害剤である、抗ＰＤ１との相乗作用
免疫コンピテントＢａｌｂ／Ｃマウスに、ＣＴ２６−ＬａｃＺ腫瘍（細胞５×１０^５個）を皮下接種した。皮下腫瘍が、約５ｍｍ×５ｍｍのサイズを確立したら、処置を開始した。ワクシニアウイルスで処置されたマウスに、用量１×１０^７ＰＦＵの、３回（２４時間間隔、最初の３つの破線）の投与（腫瘍内）を、腫瘍に施した。抗ＰＤ１で処置されたマウスに、用量１００μｇの抗体の、５回（２４時間間隔、最後の５つの破線）にわたるｉ．ｐ．投与を、ワクシニアウイルスの最終回投与の２４時間後に施した。処置が始まったら、腫瘍サイズ及び生存を、隔日で記録した（図２３を参照されたい）。データは、ＴＫノックアウトワクシニアウイルスが、抗ＰＤ１と共に、ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐほど良好には作用しないことを示す。これは、ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐの免疫原性が大きく、抗腫瘍免疫応答を発生させる可能性が大きいことを示唆する。

実施例１６−免疫チェックポイント阻害剤である、抗ＰＤ１及び抗ＣＤＬＡ４との相乗作用
免疫コンピテントＢａｌｂ／Ｃマウスに、ＣＴ２６−ＬａｃＺ腫瘍（細胞５×１０^５個）を皮下接種した。皮下腫瘍が、約５ｍｍ×５ｍｍのサイズを確立したら、処置を開始した。ワクシニアウイルスで処置されたマウスに、用量１×１０^７ＰＦＵの、３回（２４時間間隔、最初の３つの破線）の投与（腫瘍内）を、腫瘍に施した。抗ＣＴＬＡ４で処置されたマウスに、用量１００μｇの抗体の、５回（２４時間間隔、最初の５つの破線）にわたるｉ．ｐ．投与を施した。抗ＰＤ１で処置されたマウスに、用量１００μｇの抗体の、５回（２４時間間隔、最後の５つの破線）にわたるｉ．ｐ．投与を、ワクシニアウイルスの最終回投与の２４時間後に施した。処置が始まったら、腫瘍サイズ及び生存を、隔日で記録した（図２４を参照されたい）。この実験では、本発明者らは、両方のチェックポイントを、同時に遮断した場合に、低用量（１００μｇではなくて、２５μｇ）のチェックポイント阻害剤抗体が作用しうるのかどうかについて調べた。ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐは、このマウスモデルにおいて、両方のチェックポイント阻害剤を低用量（合計５０μｇ）としてもなお、治癒を達成した。チェックポイント阻害剤は、用量依存的毒性を有するので、極めて低用量のチェックポイント遮断剤がなお、観察可能な表現型を達成しうることは有利である。他の実験の場合と同様に、ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐウイルスは、確立された腫瘍を治癒させるが、この効果は、ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐの対応する欠失を欠く、野生型ウイルスでは観察されない。

実施例１７−対象を処置するための投与
本明細書で記載される方法を使用して、当技術分野における技術を有する医師は、対象（例えば、患者）に、本明細書で記載される、組換えオルトポックスウイルスベクターを含有する医薬組成物を投与して、がん細胞又は腫瘍細胞を処置することができる。がんは、例えば、とりわけ、白血病、リンパ腫、肝臓がん、骨がん、肺がん、脳がん、膀胱がん、消化器がん、乳がん、心臓がん、子宮頸がん、子宮がん、頭頸部がん、胆嚢がん、喉頭がん、***口腔がん、眼がん、黒色腫、膵臓がん、前立腺がん、結腸直腸がん、精巣がん、又は咽頭がんでありうる。

例えば、当技術分野における技術を有する医師は、患者が、がん又は腫瘍を患っていることを評価し、患者に、治療有効量（例えば、腫瘍のサイズを減少させるのに十分な量）の、本明細書で開示される組換えオルトポックスウイルスベクターを含有する医薬組成物を投与することができる。医薬組成物は、対象に、指定された時間間隔ごと（例えば、毎週、毎日、又は毎時）の、１回又は複数回（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、又はこれを超える回数）の投与により投与されうる。治療の有効性をモニタリングし、患者の応答に基づき、投与量を増大又は減少させるために、投与の間に、患者を査定することができる。医薬組成物は、患者に経口投与、非経口（例えば、局所）投与、静脈内投与、筋内投与、皮下投与、又は鼻腔内投与されうる。処置は、医薬組成物の単回投与を伴いうる。処置は、医薬組成物の持続的投与（例えば、数日間、数週間、数カ月間、又は数年間にわたる）を伴いうる。処置は、別の治療剤（例えば、抗ＰＤ−１又は抗ＣＴＬＡ−４抗体又はその抗原結合性断片、ＩＬ−１２、ＦＬＴ３Ｌなどの免疫チェックポイント阻害剤）の使用をさらに伴いうる。

実施例１８−ＣｏｐＭＤ５ｐ及びＣｏｐＭＤ３ｐの、欠失のターゲティング
改変ワクシニアウイルスベクターを作製するための、以下のプロトコールは、例えば、開示が参照により本明細書に組み込まれる、Ｒｉｎｔｏｕｌら、ＰＬｏＳＯｎｅ．、６（９）：ｅ２４６４３（２０１１）において記載されている技法を利用する。

略述すると、ＣｏｐＭＤ５ｐ（５’遺伝子：Ｃ２Ｌ、Ｃ１Ｌ、Ｎ１Ｌ、Ｎ２Ｌ、Ｍ１Ｌ、Ｍ２Ｌ、Ｋ１Ｌ、Ｋ２Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ｋ４Ｌ、Ｋ５Ｌ、Ｋ６Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｆ１Ｌ、Ｆ２Ｌ、Ｆ３Ｌに欠失を保有する、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎワクシニアウイルス）ターゲティング組換え構築物、及びＣｏｐＭｄ３ｐ（３’遺伝子：Ｂ１４Ｒ、Ｂ１５Ｒ、Ｂ１６Ｒ、Ｂ１７Ｌ、Ｂ１８Ｒ、Ｂ１９Ｒ、及びＢ２０Ｒにおける欠失、並びにＩＴＲ遺伝子Ｂ２１Ｒ、Ｂ２２Ｒ、Ｂ２３Ｒ、Ｂ２４Ｒ、Ｂ２５Ｒ、Ｂ２６Ｒ、Ｂ２７Ｒ、Ｂ２８Ｒ、及びＢ２９Ｒの各々における単一の欠失を保有する、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎワクシニアウイルス）ターゲティング組換え構築物を、ジーブロック（ｇ−Ｂｌｏｃｋ）技術（ＩＤＴ、Ｃｏｒａｌｖｉｌｌｅ、Ｉｏｗａ）により合成した。Ｕ２ＯＳ細胞に、野生型ワクシニアウイルス（Ｗｙｅｔｈ、ＷＲ（ＷｅｓｔｅｒｎＲｅｓｅｒｖｅ）、ＴｉａｎＴａｎ、Ｌｉｓｔｅｒ）を、無血清ＤＭＥＭ中に０．０１のＭＯＩで、１．５時間にわたり感染させた。ウイルス上清を吸引し、オプチメム（ＯｐｔｉＭＥＭ）（Ｇｉｂｃｏ）において、リポフェクタミン２０００（Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）により、Ｕ２ＯＳ細胞に、ＰＣＲ増幅された、ＣｏｐＭＤ５ｐターゲティングジーブロック構築物又はＣｏｐＭｄ３ｐターゲティングジーブロック構築物をトランスフェクトした。トランスフェクションの３０分後に、１０％のＦＢＳを補充されたＤＭＥＭを、細胞に添加し、一晩にわたり放置した。翌日、トランスフェクション培地を吸引し、新鮮ＤＭＥＭ／１０％ＦＢＳ培地を、細胞に添加した。感染によるトランスフェクションの４８時間後、Ｕ２ＯＳ細胞を採取し、単回の凍結融解サイクルにより溶解させた。系列希釈された溶解物を、コンフルエント単層のＵ２ＯＳ細胞に播種し、ｅＧＦＰ陽性プラーク（ＣｏｐＭＤ５ｐターゲティング型）又はエムチェリー（ｍＣｈｅｒｒｙ）陽性プラーク（ＣｏｐＭｄ３ｐターゲティング型）を、５ラウンドにわたるプラーク精製を介して単離及び精製した。

二重メジャー欠失ワクシニアウイルスは、Ｕ２ＯＳ細胞において、各ウイルスについて、５のＭＯＩで、ＣｏｐＭＤ５ｐ欠失ワクシニアウイルス及びＣｏｐＭｄ３ｐ欠失ワクシニアウイルスの共感染により作出した。翌日、細胞を採取し、１ラウンドの凍結融解により溶解させた。溶解物を、系列希釈し、コンフルエント単層のＵ２ＯＳ細胞に播種し、二重陽性プラーク（ｅＧＦＰ＋エムチェリー）について選択した。プラークは、５ラウンドにわたるプラーク精製により精製した。

本開示の改変オルトポックスウイルスベクター（例えば、改変Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎワクシニアウイルスベクターなどの改変ワクシニアウイルスベクター）を作製するための、例示的なスキームを、図２５に示す。

実施例１９−ＳＫＶ−ＧＦＰ（ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐ−Ｂ８Ｒ−）は、腫瘍のコントロールにおいて、ＳＫＶ（ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐ−Ｂ８Ｒ＋）と比較して、同等の効能を及ぼす
ワクシニアウイルス（ＶＶ）Ｂ８Ｒ遺伝子は、ガンマインターフェロン受容体（ＩＦＮ−γ）に対する相同性を伴う分泌型タンパク質をコードする。ｉｎｖｉｔｒｏにおいて、Ｂ８Ｒタンパク質は、ヒト及びラットのガンマインターフェロンを含む、ガンマインターフェロンのいくつかの分子種に結合し、これらの抗ウイルス活性を中和するが、マウスＩＦＮ−γへの結合が著明である。本実施例では、本発明者らは、Ｂ８Ｒ遺伝子を欠く、組換えＶＶの構築及び特徴付けについて記載する。ターゲティング構築物と、Ｂ８Ｒ遺伝子座との間の相同組換えは、Ｂ８Ｒ遺伝子のうちの７５％の、２つのｌｏｘＰ部位に挟まれた、ＧＦＰトランス遺伝子（ＳＫＶ−ＧＦＰ）による置きかえを結果としてもたらした。

Ｂ８Ｒ−ウイルスは、Ｂ８Ｒ＋ウイルスと同様の効能を示した（図３９）。ＳＫＶ又はＳＫＶ−ＧＦＰで処置されたマウスの生存を評価した。ＣＴ２６−ＬａｃＺ細胞５×１０^６個を、０日目に皮下接種した。１４、１６、及び１８日目に、腫瘍を、１０^７ｐｆｕの用量の、ＳＫＶ又はＳＫＶ−ＧＦＰの腫瘍内注射により処置した。注射されたウイルスが、Ｂ８Ｒ遺伝子座の欠失を有しても、効能の著明な低下は見られなかった。

実施例２０−がん細胞株と対比した、正常細胞株への、ＳＫＶ（ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐ−Ｂ８Ｒ＋）ウイルスの感染
初代健常細胞の生存率を、がん細胞の生存率と比較した。コンフルエントの正常細胞又はがん細胞に、ある範囲のＭＯＩ（細胞１個当たりのｐｆｕ）で、４８時間にわたり感染させ、その後、生存率を定量した。図３７に指し示す通り、ＳＫＶ−Ｂ８Ｒ＋ウイルスは、がん細胞に、優先的に感染する。

実施例２１−ＳＫＶ（ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐ−Ｂ８Ｒ＋）は、インターフェロンによるシグナル伝達を損なわない
様々な正常細胞株及び１つのがん細胞株（７８６−Ｏ）において、上方調節（発現の誘導）又は下方調節（発現の抑制）されるインターフェロン経路の遺伝子の数を決定することにより、インターフェロンによるシグナル伝達について評価した（図３８）。コンフルエント単層の細胞１００万個に、ＴＫ遺伝子を失効させたＳＫＶ（ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐ−Ｂ８Ｒ＋）ウイルス株、又は親Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎウイルス株を、３のＭＯＩ（３×１０^６ＰＦＵ）で、１８時間にわたり感染させた。ＲＮＡ−ｓｅｑを使用して、ＲＮＡをシーケンシングし、発現正規化後のマッピングを読み取った後で、インターフェロン遺伝子の遺伝子発現を決定した。ＳＫＶ（ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐ−Ｂ８Ｒ＋）ウイルスは、インターフェロン経路における遺伝子の大半を誘導するが、親Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎウイルスは、遺伝子を抑制する。これは、ＳＫＶ（ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐ−Ｂ８Ｒ＋）が、正常細胞のウイルスクリアランスにおいて極めて重要な、Ｉ型インターフェロンによるシグナル伝達を誘導することが可能であることを示唆する。

実施例２２−Ｆｌｔ３Ｌ、ＩＬ−１２ＴＭ、及び抗ｈＣＴＬＡ−４を発現させるように操作された、Ｂ８Ｒ陰性ワクシニアウイルス
上記で記載した、ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐ及びＢ８Ｒの両方の欠失を含有する改変ワクシニアウイルスを、さらに操作して、免疫療法用のトランス遺伝子を発現させた。３つのトランス遺伝子を発現させる、ＳＫＶ−１２３ウイルス３（ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐ−Ｂ８Ｒ＋−ＩＬ１２ＴＭ−ＦＬＴ３−抗ＣＬＴＡ４）を、トランス遺伝子発現動態について査定した。コンフルエント単層の７８６−Ｏヒト腺がん細胞株に、ＳＫＶ−１２３ウイルスを、３のＭＯＩ（３×１０^６ｐｆｕ）で感染させた。ＲＮＡ−ｓｅｑを使用して、ＲＮＡをシーケンシングし、発現正規化後のマッピングを読み取ったで、挿入されたトランス遺伝子の遺伝子発現を決定した。トランス遺伝子の発現は、細胞感染の３〜４時間後に、ピークに達した。図４０を参照されたい。

実施例２３−膜結合型マウスＩＬ−１２ｐ３５を発現させるＳＫＶ（ＳＫＶ３）は、マウス腫瘍のコントロールにおいて、大きな効能を及ぼす
ＳＫＶ（ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐ−Ｂ８Ｒ＋）又はＳＫＶ−３（ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐ−Ｂ８Ｒ＋−ＩＬ１２ＴＭ）ウイルス（マウス膜結合型ｐ３５ＩＬ−１２を発現させる）で処置されたマウスの生存を評価した。ＣＴ２６−ＬａｃＺ細胞５×１０^６個を、０日目に皮下接種した。１４、１６、及び１８日目に、腫瘍を、１×１０^７ｐｆｕの用量の、ＳＫＶ又はＳＫＶ−３の腫瘍内注射により処置した。ＳＫＶウイルスは、ＣＴ２６結腸腫瘍を保有するマウスの生存を延長する。ＳＫＶ−３によるＩＬ−１２の発現は、恒久的な治癒をもたらす、寛解を誘導することが可能である。図４１を参照されたい。

実施例２４−多様なワクシニア株において操作された、二重メジャー欠失は、ｉｎｖｉｔｒｏにおける、がん細胞の殺滅を増強する
Ｈｅｌａ細胞に、以下の操作ワクシニアウイルス株：（１）親野生型ウイルス（ｗｔ）株；（２）５プライムメジャー欠失（５ｐ）株、（３）３プライムメジャー欠失（３ｐ）株、及び（４）組換え５プライム／３プライム二重メジャー欠失（５ｐ３ｐ）株を、０．１のＭＯＩで感染させた。細胞生存率は、感染の７２時間後に、アラマーブルーアッセイにより定量した。５ｐメジャー欠失ワクシニア株及び５ｐ３ｐ二重メジャー欠失ワクシニア株のいずれも、それらの親野生型株及び３ｐメジャー欠失株と比較した場合、ＨｅｌＬａ細胞において、より細胞傷害性である。図４２を参照されたい。図４３は、メジャー欠失ワクシニア株の概要、並びに５ｐ欠失、３ｐ欠失、及び５ｐ３ｐ欠失の、合胞体、細胞傷害作用、及び複製に対する効果について描示する。ＣＤ−１ヌードマウスを、１×１０^７ｐｆｕを伴う尾静脈注射を介して、静脈内処置し、表示の時点において測定した。５ｐ３ｐワクシニア株は、野生型株と比較して、体重の減少を誘導しなかった（図４４）。マウスはまた、注射後６日間にわたり、ポックス病変についても検査した。５ｐ３ｐワクシニア株は、野生型株と比較して、ポックス病変を誘導しない（図４５）。

一部の実施形態
本明細書で言及される、全ての刊行物、特許、及び特許出願は、各独立の刊行物又は特許出願が、参照により、詳細及び個別に組み込まれることが指し示された場合と同じ程度に、参照により本明細書に組み込まれる。

本発明は、その詳細な実施形態との関連で記載されたが、本発明は、さらなる改変も可能であり、本出願は、一般に、本発明の原理に従い、本発明が関する技術分野内の、公知又は通例の慣行内に収まるような、本発明からの逸脱を含む、本発明の任意の変動、使用、又は適応を対象とすることが意図され、本明細書の前出で明示され、特許請求の範囲で後出する、不可欠の特徴へも適用されうることが理解される。

一部の実施形態は、特許請求の範囲内にある。

本開示は、がんを処置するためのオルトポックスウイルスの使用について記載する。特に、本開示は、オルトポックスウイルスが、以下の遺伝子：Ｃ２Ｌ、Ｃ１Ｌ、Ｎ１Ｌ、Ｎ２Ｌ、Ｍ１Ｌ、Ｍ２Ｌ、Ｋ１Ｌ、Ｋ２Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ｋ４Ｌ、Ｋ５Ｌ、Ｋ６Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｆ１Ｌ、Ｆ２Ｌ、Ｆ３Ｌ、Ｂ１４Ｒ、Ｂ１５Ｒ、Ｂ１６Ｒ、Ｂ１７Ｌ、Ｂ１８Ｒ、Ｂ１９Ｒ、Ｂ２０Ｒ、ＫＯＲＦＡ、ＫＯＲＦＢ、ＢＯＲＦＥ、ＢＯＲＦＦ、ＢＯＲＦＧ、Ｂ２１Ｒ、Ｂ２２Ｒ、Ｂ２３Ｒ、Ｂ２４Ｒ、Ｂ２５Ｒ、Ｂ２６Ｒ、Ｂ２７Ｒ、Ｂ２８Ｒ、及びＢ２９Ｒのうちの１つ若しくは複数又は全てにおいて、欠失を含有するように遺伝子改変された場合に認められる、腫瘍溶解活性、感染の拡散、及び安全性の結果の驚くべき増強に部分的に基づく。これらの遺伝子のうちの１つ若しくは複数又は全てにおいて変異を呈する、ワクシニアウイルス（例えば、ウイルス株である、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、ＷＲ（ＷｅｓｔｅｒｎＲｅｓｅｒｖｅ）、Ｗｙｅｔｈ、Ｌｉｓｔｅｒ、ＥＭ６３、ＡＣＡＭ２０００、ＣＶ−１、改変ワクシニアＡｎｋａｒａ（ＭＶＡ）、ＤａｉｒｅｎＩ、ＧＬＶ−１ｈ６８、ＩＨＤ−Ｊ、Ｌ−ＩＶＰ、ＬＣ１６ｍ８、ＬＣ１６ｍＯ、Ｔａｓｈｋｅｎｔ、ＴｉａｎＴａｎ、及びＷＡＵ８６／８８−１）などの遺伝子改変オルトポックスウイルスは、腫瘍溶解能、腫瘍における複製、感染性、免疫回避、腫瘍における存続、外因性ＤＮＡ配列を組み込むための能力、及び／又は大スケールの製造への適性の改善など、一連の有益な特徴を呈しうる。本開示は、Ｂ８Ｒ遺伝子において、欠失を含有するように、さらに遺伝子改変されたオルトポックスウイルスについて記載する。下記で開示される、多様な実施形態では、本発明は、Ｂ８Ｒ遺伝子の欠失を含む場合もあり、これを含まない場合もある。多様な実施形態では、改変オルトポックスウイルスは、３つのトランス遺伝子：ＩＬ−１２ＴＭ、ＦＬＴ３−Ｌ、及び抗ＣＴＬＡ−４抗体のうちの少なくとも１つを発現させる。

別の態様では、本発明は、組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む核酸であって、組換えオルトポックスウイルスゲノムが、各々が、Ｂ１５Ｒ、Ｂ１７Ｌ、及びＢ１４Ｒからなる群から独立的に選択される、少なくとも１つ、２つ、又は３つの遺伝子の欠失を有する、核酸を特徴とする。

一部の実施形態では、ワクシニアウイルスは、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、ＷＲ（ＷｅｓｔｅｒｎＲｅｓｅｒｖｅ）、Ｗｙｅｔｈ、Ｌｉｓｔｅｒ、ＥＭ６３、ＡＣＡＭ２０００、ＣＶ−１、改変ワクシニアＡｎｋａｒａ（ＭＶＡ）、ＤａｉｒｅｎＩ、ＧＬＶ−１ｈ６８、ＩＨＤ−Ｊ、Ｌ−ＩＶＰ、ＬＣ１６ｍ８、ＬＣ１６ｍＯ、Ｔａｓｈｋｅｎｔ、ＴｉａｎＴａｎ、及びＷＡＵ８６／８８−１からなる群から選択される株である。一部の実施形態では、ワクシニアウイルスは、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、ＷＲ（ＷｅｓｔｅｒｎＲｅｓｅｒｖｅ）、ＴｉａｎＴａｎ、Ｗｙｅｔｈ、及びＬｉｓｔｅｒからなる群から選択される株である。一部の実施形態では、ワクシニアウイルスは、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ株のワクシニアウイルスである。

一部の実施形態では、組換えオルトポックスウイルスベクターは、Ｃ２Ｌ、Ｃ１Ｌ、Ｎ１Ｌ、Ｎ２Ｌ、Ｍ１Ｌ、Ｋ１Ｌ、Ｋ２Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ｋ４Ｌ、Ｋ７Ｒ、及びＦ２Ｌからなる群から選択される、少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する。一部の実施形態では、欠失は、各々が、Ｃ２Ｌ、Ｃ１Ｌ、Ｎ１Ｌ、Ｎ２Ｌ、Ｍ１Ｌ、Ｍ２Ｌ、Ｋ１Ｌ、Ｋ２Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ｋ４Ｌ、Ｋ５Ｌ、Ｋ６Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｆ１Ｌ、Ｆ２Ｌ、及びＦ３Ｌからなる群から独立的に選択される、少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、又は１６の遺伝子を含む。一部の実施形態では、欠失は、Ｃ２Ｌ、Ｃ１Ｌ、Ｎ１Ｌ、Ｎ２Ｌ、Ｍ１Ｌ、Ｍ２Ｌ、Ｋ１Ｌ、Ｋ２Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ｋ４Ｌ、Ｋ５Ｌ、Ｋ６Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｆ１Ｌ、Ｆ２Ｌ、及びＦ３Ｌの各々を含む。本明細書で開示される実施形態のうちのいずれか１つでは、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、Ｂ８Ｒの欠失をさらに含みうる。

別の態様では、本発明は、Ｂ１５Ｒ、Ｂ１７Ｌ、及びＢ１４Ｒからなる群から選択される、少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する、組換えオルトポックスウイルスベクターを特徴とする。

一部の実施形態では、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、Ｂ１５Ｒ、Ｂ１７Ｌ、及びＢ１４Ｒからなる群から選択される、少なくとも１つの遺伝子の欠失を有する。一部の実施形態では、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、Ｂ１５Ｒ、Ｂ１７Ｌ、及びＢ１４Ｒからなる群から選択される、少なくとも２つの遺伝子の欠失を有する。一部の実施形態では、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、Ｂ１５Ｒ、Ｂ１７Ｌ、及びＢ１４Ｒからなる群から選択される、少なくとも３つの遺伝子の欠失を有する。本明細書で開示される実施形態のうちのいずれか１つでは、組換えオルトポックスウイルスゲノムは、Ｂ８Ｒの欠失をさらに含みうる。

MRYIIILAVLFINSIHAKITSYKFESVNFDSKIEWTGDGLYNISLKNYGIKTWQTMYTNVPEGTYDISAFPKNDFVSFWVKFEQGDYKVEEYCTGLCVEVKIGPPTVTLTEYDDHINLYIEHPYATRGSKKIPIYKRGDMCDIYLLYTANFTFGDSEEPVTYDIDDYDCTSTGCSIDFATTEKVCVTAQGATEGFLEKITPWSSEVCLTPKKNVYTCAIRKEDVPNFKDKMARVIKRKFNKQSQSYLTKFLGSTSNDVTTFLSMLNLTKYS（配列番号２０９）

本発明は、ワクシニアウイルス（例えば、ウイルス株である、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、ＷＲ（ＷｅｓｔｅｒｎＲｅｓｅｒｖｅ）、Ｗｙｅｔｈ、Ｌｉｓｔｅｒ、ＥＭ６３、ＡＣＡＭ２０００、ＣＶ−１、改変ワクシニアＡｎｋａｒａ（ＭＶＡ）、ＤａｉｒｅｎＩ、ＧＬＶ−１ｈ６８、ＩＨＤ−Ｊ、Ｌ−ＩＶＰ、ＬＣ１６ｍ８、ＬＣ１６ｍＯ、Ｔａｓｈｋｅｎｔ、ＴｉａｎＴａｎ、及びＷＡＵ８６／８８−１）などの遺伝子改変オルトポックスウイルス、並びに多様ながんを処置するためのこれらの使用を特徴とする。本発明は、ウイルス株である、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、ＷＲ（ＷｅｓｔｅｒｎＲｅｓｅｒｖｅ）、Ｗｙｅｔｈ、Ｌｉｓｔｅｒ、ＥＭ６３、ＡＣＡＭ２０００、ＣＶ−１、改変ワクシニアＡｎｋａｒａ（ＭＶＡ）、ＤａｉｒｅｎＩ、ＧＬＶ−１ｈ６８、ＩＨＤ−Ｊ、Ｌ−ＩＶＰ、ＬＣ１６ｍ８、ＬＣ１６ｍＯ、Ｔａｓｈｋｅｎｔ、ＴｉａｎＴａｎ、及びＷＡＵ８６／８８−１などのオルトポックスウイルスが、Ｃ２Ｌ、Ｃ１Ｌ、Ｎ１Ｌ、Ｎ２Ｌ、Ｍ１Ｌ、Ｍ２Ｌ、Ｋ１Ｌ、Ｋ２Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ｋ４Ｌ、Ｋ５Ｌ、Ｋ６Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｆ１Ｌ、Ｆ２Ｌ、Ｆ３Ｌ、Ｂ１４Ｒ、Ｂ１５Ｒ、Ｂ１６Ｒ、Ｂ１７Ｌ、Ｂ１８Ｒ、Ｂ１９Ｒ、Ｂ２０Ｒ、ＫＯＲＦＡ、ＫＯＲＦＢ、ＢＯＲＦＥ、ＢＯＲＦＦ、ＢＯＲＦＧ、Ｂ２１Ｒ、Ｂ２２Ｒ、Ｂ２３Ｒ、Ｂ２４Ｒ、Ｂ２５Ｒ、Ｂ２６Ｒ、Ｂ２７Ｒ、Ｂ２８Ｒ、及びＢ２９Ｒ遺伝子のうちの１つ若しくは複数又は全てにおいて、欠失を含有するように遺伝子操作された場合に、腫瘍溶解活性、腫瘍における複製、感染性、免疫回避、腫瘍における存続、外因性ＤＮＡ配列を組み込むための能力、及び大スケールの製造への適性の顕著な改善を呈するという、驚くべき発見に、部分的に基づく。本発明の多様な実施形態では、改変オルトポックスウイルスは、Ｂ８Ｒ遺伝子の欠失を含有する。マウスでは不活性であるが、Ｂ８Ｒ遺伝子は、ヒトＩＦＮ−γの抗ウイルス活性を中和する。多様な実施形態では、その後、少なくとも１つのトランス遺伝子が、相同組換えターゲティング戦略を介して、Ｂ８Ｒ遺伝子の遺伝子座（今は欠失した）に挿入される。多様な実施形態では、改変オルトポックスウイルスは、３つのトランス遺伝子：ＩＬ−１２ＴＭ、ＦＬＴ３−Ｌ、及び抗ＣＴＬＡ−４抗体のうちの少なくとも１つを発現させる。

ワクシニアウイルスの例示的な株は、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、ＷＲ（ＷｅｓｔｅｒｎＲｅｓｅｒｖｅ）、Ｗｙｅｔｈ、Ｌｉｓｔｅｒ、ＥＭ６３、ＡＣＡＭ２０００、ＣＶ−１、改変ワクシニアＡｎｋａｒａ（ＭＶＡ）、ＤａｉｒｅｎＩ、ＧＬＶ−１ｈ６８、ＩＨＤ−Ｊ、Ｌ−ＩＶＰ、ＬＣ１６ｍ８、ＬＣ１６ｍＯ、Ｔａｓｈｋｅｎｔ、ＴｉａｎＴａｎ、及びＷＡＵ８６／８８−１を含むがこれらに限定されない。

次いで、５９のポックスウイルスゲノムを、ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐにおいて欠失した、これらの３２の遺伝子の存在について評価した。相同性の検索を使用して、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎゲノムによる、表２の遺伝子のアミノ酸配列を伴う、他のクレードに由来するポックスウイルスに問い合わせた。図３５に示される通り、多様なポックスウイルス株において存在する、これらの３２の遺伝子の百分率は、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ株からの分岐が増大するにつれて低下した（プロットにおける各ドットは、１つのポックスウイルスゲノムを表す）。しかし、オルトポックスファミリーのメンバーの大部分は、ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐ組換えベクターにおいて欠失した遺伝子のうちの、少なくとも８５％を含む。

野生型Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎワクシニアウイルス、及びいくつかの改変Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎワクシニアビリオンが、抗腫瘍免疫応答を誘導し、多様ながん細胞株において繁殖する能力はまた、図２６、２７、及び２９〜３４においても示される。

Ｂ８Ｒ−ウイルスは、Ｂ８Ｒ＋ウイルスと同様の効能を示した（図３８）。ＳＫＶ又はＳＫＶ−ＧＦＰで処置されたマウスの生存を評価した。ＣＴ２６−ＬａｃＺ細胞５×１０^６個を、０日目に皮下接種した。１４、１６、及び１８日目に、腫瘍を、１０^７ｐｆｕの用量の、ＳＫＶ又はＳＫＶ−ＧＦＰの腫瘍内注射により処置した。注射されたウイルスが、Ｂ８Ｒ遺伝子座の欠失を有しても、効能の著明な低下は見られなかった。

実施例２０−がん細胞株と対比した、正常細胞株への、ＳＫＶ（ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐ−Ｂ８Ｒ＋）ウイルスの感染
初代健常細胞の生存率を、がん細胞の生存率と比較した。コンフルエントの正常細胞又はがん細胞に、ある範囲のＭＯＩ（細胞１個当たりのｐｆｕ）で、４８時間にわたり感染させ、その後、生存率を定量した。図３６に指し示す通り、ＳＫＶ−Ｂ８Ｒ＋ウイルスは、がん細胞に、優先的に感染する。

実施例２１−ＳＫＶ（ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐ−Ｂ８Ｒ＋）は、インターフェロンによるシグナル伝達を損なわない
様々な正常細胞株及び１つのがん細胞株（７８６−Ｏ）において、上方調節（発現の誘導）又は下方調節（発現の抑制）されるインターフェロン経路の遺伝子の数を決定することにより、インターフェロンによるシグナル伝達について評価した（図３７）。コンフルエント単層の細胞１００万個に、ＴＫ遺伝子を失効させたＳＫＶ（ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐ−Ｂ８Ｒ＋）ウイルス株、又は親Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎウイルス株を、３のＭＯＩ（３×１０^６ＰＦＵ）で、１８時間にわたり感染させた。ＲＮＡ−ｓｅｑを使用して、ＲＮＡをシーケンシングし、発現正規化後のマッピングを読み取った後で、インターフェロン遺伝子の遺伝子発現を決定した。ＳＫＶ（ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐ−Ｂ８Ｒ＋）ウイルスは、インターフェロン経路における遺伝子の大半を誘導するが、親Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎウイルスは、遺伝子を抑制する。これは、ＳＫＶ（ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐ−Ｂ８Ｒ＋）が、正常細胞のウイルスクリアランスにおいて極めて重要な、Ｉ型インターフェロンによるシグナル伝達を誘導することが可能であることを示唆する。

実施例２２−Ｆｌｔ３Ｌ、ＩＬ−１２ＴＭ、及び抗ｈＣＴＬＡ−４を発現させるように操作された、Ｂ８Ｒ陰性ワクシニアウイルス
上記で記載した、ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐ及びＢ８Ｒの両方の欠失を含有する改変ワクシニアウイルスを、さらに操作して、免疫療法用のトランス遺伝子を発現させた。３つのトランス遺伝子を発現させる、ＳＫＶ−１２３ウイルス（ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐ−Ｂ８Ｒ＋−ＩＬ１２ＴＭ−ＦＬＴ３−抗ＣＴＬＡ４）を、トランス遺伝子発現動態について査定した。コンフルエント単層の７８６−Ｏヒト腺がん細胞株に、ＳＫＶ−１２３ウイルスを、３のＭＯＩ（３×１０^６ｐｆｕ）で感染させた。ＲＮＡ−ｓｅｑを使用して、ＲＮＡをシーケンシングし、発現正規化後のマッピングを読み取ったで、挿入されたトランス遺伝子の遺伝子発現を決定した。トランス遺伝子の発現は、細胞感染の３〜４時間後に、ピークに達した。図３９を参照されたい。

実施例２３−膜結合型マウスＩＬ−１２ｐ３５を発現させるＳＫＶ（ＳＫＶ３）は、マウス腫瘍のコントロールにおいて、大きな効能を及ぼす
ＳＫＶ（ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐ−Ｂ８Ｒ＋）又はＳＫＶｍ−３（ＣｏｐＭＤ５ｐ３ｐ−Ｂ８Ｒ＋−ＩＬ１２ＴＭ）ウイルス（マウス膜結合型ｐ３５ＩＬ−１２を発現させる）で処置されたマウスの生存を評価した。ＣＴ２６−ＬａｃＺ細胞５×１０^６個を、０日目に皮下接種した。１４、１６、及び１８日目に、腫瘍を、１×１０^７ｐｆｕの用量の、ＳＫＶ又はＳＫＶｍ−３の腫瘍内注射により処置した。ＳＫＶウイルスは、ＣＴ２６結腸腫瘍を保有するマウスの生存を延長する。ＳＫＶｍ−３によるＩＬ−１２の発現は、恒久的な治癒をもたらす、寛解を誘導することが可能である。図４０を参照されたい。

実施例２４−多様なワクシニア株において操作された、二重メジャー欠失は、ｉｎｖｉｔｒｏにおける、がん細胞の殺滅を増強する
Ｈｅｌａ細胞に、以下の操作ワクシニアウイルス株：（１）親野生型ウイルス（ｗｔ）株；（２）５プライムメジャー欠失（５ｐ）株、（３）３プライムメジャー欠失（３ｐ）株、及び（４）組換え５プライム／３プライム二重メジャー欠失（５ｐ３ｐ）株を、０．１のＭＯＩで感染させた。細胞生存率は、感染の７２時間後に、アラマーブルーアッセイにより定量した。５ｐメジャー欠失ワクシニア株及び５ｐ３ｐ二重メジャー欠失ワクシニア株のいずれも、それらの親野生型株及び３ｐメジャー欠失株と比較した場合、ＨｅｌＬａ細胞において、より細胞傷害性である。図４１を参照されたい。図４２は、メジャー欠失ワクシニア株の概要、並びに５ｐ欠失、３ｐ欠失、及び５ｐ３ｐ欠失の、合胞体、細胞傷害作用、及び複製に対する効果について描示する。ＣＤ−１ヌードマウスを、１×１０^７ｐｆｕを伴う尾静脈注射を介して、静脈内処置し、表示の時点において測定した。５ｐ３ｐワクシニア株は、野生型株と比較して、体重の減少を誘導しなかった（図４３）。マウスはまた、注射後６日間にわたり、ポックス病変についても検査した。５ｐ３ｐワクシニア株は、野生型株と比較して、ポックス病変を誘導しない（図４４）。

Claims

組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む核酸であって、前記組換えオルトポックスウイルスゲノムが、各々が、Ｃ２Ｌ、Ｃ１Ｌ、Ｎ１Ｌ、Ｎ２Ｌ、Ｍ１Ｌ、Ｍ２Ｌ、Ｋ１Ｌ、Ｋ２Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ｋ４Ｌ、Ｋ５Ｌ、Ｋ６Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｆ１Ｌ、Ｆ２Ｌ、Ｆ３Ｌ、Ｂ１４Ｒ、Ｂ１５Ｒ、Ｂ１６Ｒ、Ｂ１７Ｌ、Ｂ１８Ｒ、Ｂ１９Ｒ、Ｂ２０Ｒからなる群から独立的に選択される、少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、又は２２の遺伝子の欠失を含む、核酸。
前記欠失が、前記Ｃ２Ｌ、Ｃ１Ｌ、Ｎ１Ｌ、Ｎ２Ｌ、Ｍ１Ｌ、Ｍ２Ｌ、Ｋ１Ｌ、Ｋ２Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ｋ４Ｌ、Ｋ５Ｌ、Ｋ６Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｆ１Ｌ、Ｆ２Ｌ、Ｆ３Ｌ、Ｂ１４Ｒ、Ｂ１５Ｒ、Ｂ１６Ｒ、Ｂ１７Ｌ、Ｂ１８Ｒ、Ｂ１９Ｒ、Ｂ２０Ｒ遺伝子の各々の欠失を含む、請求項１に記載の核酸。
組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む核酸であって、前記組換えオルトポックスウイルスゲノムが、Ｂ１４Ｒ、Ｂ１６Ｒ、Ｂ１７Ｌ、Ｂ１８Ｒ、Ｂ１９Ｒ、及びＢ２０Ｒからなる群から独立的に選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、又は５つの遺伝子の欠失を含む、核酸。
前記欠失が、前記Ｂ１４Ｒ、Ｂ１６Ｒ、Ｂ１７Ｌ、Ｂ１８Ｒ、Ｂ１９Ｒ、及びＢ２０Ｒ遺伝子の各々を含む、請求項３に記載の核酸。
組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む核酸であって、前記組換えオルトポックスウイルスゲノムが、Ｃ２Ｌ、Ｃ１Ｌ、Ｎ１Ｌ、Ｎ２Ｌ、Ｍ１Ｌ、Ｍ２Ｌ、Ｋ１Ｌ、Ｋ２Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ｋ４Ｌ、Ｋ５Ｌ、Ｋ６Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｆ１Ｌ、Ｆ２Ｌ、及びＦ３Ｌからなる群から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５の遺伝子の欠失を含む、核酸。
前記欠失が、前記Ｃ２Ｌ、Ｃ１Ｌ、Ｎ１Ｌ、Ｎ２Ｌ、Ｍ１Ｌ、Ｍ２Ｌ、Ｋ１Ｌ、Ｋ２Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ｋ４Ｌ、Ｋ５Ｌ、Ｋ６Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｆ１Ｌ、Ｆ２Ｌ、及びＦ３Ｌ遺伝子の各々を含む、請求項５に記載の核酸。
組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む核酸であって、前記組換えオルトポックスウイルスゲノムが、カスパーゼ９阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を含む、核酸。
前記組換えオルトポックスウイルスゲノムが、カスパーゼ９阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の核酸。
カスパーゼ９阻害剤をコードする前記遺伝子が、Ｆ１Ｌである、請求項７又は８に記載の核酸。
組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む核酸であって、前記組換えオルトポックスウイルスゲノムが、ＢＣＬ−２阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を含む、核酸。
前記組換えオルトポックスウイルスゲノムが、ＢＣＬ−２阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の核酸。
ＢＣＬ−２阻害剤をコードする前記遺伝子が、Ｎ１Ｌである、請求項１０又は１１に記載の核酸。
組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む核酸であって、前記組換えオルトポックスウイルスゲノムが、ｄＵＴＰアーゼをコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を含む、核酸。
前記組換えオルトポックスウイルスゲノムが、ｄＵＴＰアーゼをコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の核酸。
ｄＵＴＰアーゼをコードする前記遺伝子が、Ｆ２Ｌである、請求項１３又は１４に記載の核酸。
組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む核酸であって、前記組換えオルトポックスウイルスゲノムが、ＩＦＮアルファ／ベータ受容体様分泌型糖タンパク質をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を含む、核酸。
前記組換えオルトポックスウイルスゲノムが、ＩＦＮアルファ／ベータ受容体様分泌型糖タンパク質をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の核酸。
ＩＦＮアルファ／ベータ受容体様分泌型糖タンパク質をコードする前記遺伝子が、Ｂ１９Ｒである、請求項１６又は１７に記載の核酸。
組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む核酸であって、前記組換えオルトポックスウイルスゲノムが、ＩＬ−１ベータ阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を含む、核酸。
前記組換えオルトポックスウイルスゲノムが、ＩＬ−１ベータ阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を含む、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の核酸。
ＩＬ−１ベータ阻害剤をコードする前記遺伝子が、Ｂ１６Ｒである、請求項１９又は２０に記載の核酸。
組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む核酸であって、前記組換えオルトポックスウイルスゲノムが、ホスホリパーゼＤをコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を含む、核酸。
前記組換えオルトポックスウイルスゲノムが、ホスホリパーゼＤをコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を含む、請求項１〜５６のいずれか一項に記載の核酸。
ホスホリパーゼＤをコードする前記遺伝子が、Ｋ４Ｌである、請求項２２又は２３に記載の核酸。
組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む核酸であって、前記組換えオルトポックスウイルスゲノムが、ＰＫＲ阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を含む、核酸。
前記組換えオルトポックスウイルスゲノムが、ＰＫＲ阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を含む、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の核酸。
ＰＫＲ阻害剤をコードする前記遺伝子が、Ｋ３Ｌである、請求項２５又は２６に記載の核酸。
組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む核酸であって、前記組換えオルトポックスウイルスゲノムが、セリンプロテアーゼ阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を含む、核酸。
前記組換えオルトポックスウイルスゲノムが、セリンプロテアーゼ阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を含む、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の核酸。
セリンプロテアーゼ阻害剤をコードする前記遺伝子が、Ｋ２Ｌである、請求項２８又は２９に記載の核酸。
組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む核酸であって、前記組換えオルトポックスウイルスゲノムが、ＴＬＲシグナル伝達阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を含む、核酸。
前記組換えオルトポックスウイルスゲノムが、ＴＬＲシグナル伝達阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を含む、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の核酸。
ＴＬＲシグナル伝達阻害剤をコードする前記遺伝子が、Ｎ２Ｌである、請求項３１又は３２に記載の核酸。
組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む核酸であって、前記組換えオルトポックスウイルスゲノムが、ケルチ様タンパク質をコードする少なくとも１つ又は２つの遺伝子の欠失を含む、核酸。
前記組換えオルトポックスウイルスゲノムが、ケルチ様タンパク質をコードする少なくとも１つ又は２つの遺伝子の欠失を含む、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の核酸。
ケルチ様タンパク質をコードする前記遺伝子が、Ｆ３Ｌ及びＣ２Ｌからなる群から独立的に選択される、請求項３４又は３５に記載の核酸。
組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む核酸であって、前記組換えオルトポックスウイルスゲノムが、モノグリセリドリパーゼをコードする少なくとも１つ又は２つの遺伝子の欠失を含む、核酸。
前記組換えオルトポックスウイルスゲノムが、モノグリセリドリパーゼをコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を含む、請求項１〜３６のいずれか一項に記載の核酸。
モノグリセリドリパーゼをコードする前記遺伝子が、Ｋ５Ｌ及びＫ６Ｌからなる群から独立的に選択される、請求項３７又は３８に記載の核酸。
組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む核酸であって、前記組換えオルトポックスウイルスゲノムが、ＮＦ−κＢ阻害剤をコードする少なくとも１つ、２つ、又は３つの遺伝子の欠失を含む、核酸。
前記組換えオルトポックスウイルスゲノムが、ＮＦ−κＢ阻害剤をコードする少なくとも１つ、２つ、又は３つの遺伝子の欠失を含む、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の核酸。
ＮＦ−κＢ阻害剤をコードする前記遺伝子が、Ｋ７Ｒ、Ｋ１Ｌ、及びＭ２Ｌからなる群から独立的に選択される、請求項４０又は４１に記載の核酸。
組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む核酸であって、前記組換えオルトポックスウイルスゲノムが、アンキリンリピートタンパク質をコードする少なくとも１つ、２つ、又は３つの遺伝子の欠失を含む、核酸。
前記組換えオルトポックスウイルスゲノムが、アンキリンリピートタンパク質をコードする少なくとも１つ、２つ、又は３つの遺伝子の欠失を含む、請求項１〜４２のいずれか一項に記載の核酸。
アンキリンリピートタンパク質をコードする前記遺伝子が、Ｂ１８Ｒ、Ｂ２０Ｒ、及びＭ１Ｌからなる群から独立的に選択される、請求項４３又は４４に記載の核酸。
組換えオルトポックスウイルスゲノムを含む核酸であって、前記組換えオルトポックスウイルスゲノムが、Ｂ１５Ｒ、Ｂ１７Ｒ、及びＢ１４Ｒからなる群から選択される、少なくとも１つ又は２つの遺伝子の欠失を含む、核酸。
前記組換えオルトポックスウイルスゲノムが、Ｂ１５Ｒ、Ｂ１７Ｒ、及びＢ１４Ｒからなる群から選択される、少なくとも１つ又は２つの遺伝子の欠失を含む、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の核酸。
前記欠失が、前記Ｂ１５Ｒ、Ｂ１７Ｒ、及びＢ１４Ｒ遺伝子の各々を含む、請求項４７に記載の核酸。
前記組換えオルトポックスウイルスゲノムが、Ｂ２１Ｒ、Ｂ２２Ｒ、Ｂ２３Ｒ、Ｂ２４Ｒ、Ｂ２５Ｒ、Ｂ２６Ｒ、Ｂ２７Ｒ、Ｂ２８Ｒ、及びＢ２９ＲからなるＩＴＲ遺伝子の群から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、又は８つの遺伝子の欠失を含む、請求項１〜４８のいずれか一項に記載の核酸。
前記欠失が、前記Ｂ２１Ｒ、Ｂ２２Ｒ、Ｂ２３Ｒ、Ｂ２４Ｒ、Ｂ２５Ｒ、Ｂ２６Ｒ、Ｂ２７Ｒ、Ｂ２８Ｒ、及びＢ２９Ｒ遺伝子の各々を含む、請求項４９に記載の核酸。
前記ワクシニアウイルスが、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、ＷＲ（ＷｅｓｔｅｒｎＲｅｓｅｒｖｅ）、Ｗｙｅｔｈ、Ｌｉｓｔｅｒ、ＥＭ６３、ＡＣＡＭ２０００、ＬＣ１６ｍ８、ＣＶ−１、改変ワクシニアＡｎｋａｒａ（ＭＶＡ）、ＤａｉｒｅｎＩ、ＧＬＶ−１ｈ６８、ＩＨＤ−Ｊ、Ｌ−ＩＶＰ、ＬＣ１６ｍ８、ＬＣ１６ｍＯ、Ｔａｓｈｋｅｎｔ、ＴｉａｎＴａｎ、及びＷＡＵ８６／８８−１からなる群から選択される株である、請求項１〜５０のいずれか一項に記載の核酸。
前記ワクシニアウイルスが、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、ＷＲ（ＷｅｓｔｅｒｎＲｅｓｅｒｖｅ）、ＴｉａｎＴａｎ、Ｗｙｅｔｈ、及びＬｉｓｔｅｒからなる群から選択される株である、請求項５１に記載の核酸。
前記ワクシニアウイルスが、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ株のワクシニアウイルスである、請求項５２に記載の核酸。
前記欠失の各々が、対応する遺伝子をコードする全ポリヌクレオチドの欠失である、請求項１〜５３のいずれか一項に記載の核酸。
前記欠失の各々が、対応する遺伝子をコードするポリヌクレオチドの一部の欠失であり、この場合、前記欠失が、宿主細胞に導入されると前記遺伝子を非機能性とするのに十分である、請求項１〜５３のいずれか一項に記載の核酸。
腫瘍関連抗原をコードするトランス遺伝子をさらに含む、請求項１〜５３のいずれか一項に記載の核酸。
前記腫瘍関連抗原が、表３〜３０のうちのいずれか１つに列挙された腫瘍関連抗原である、請求項５６に記載の核酸。
前記腫瘍関連抗原が、ＣＤ１９、ＣＤ３３、ＥｐＣＡＭ、ＣＥＡ、ＰＳＭＡ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ１３３、ＥＧＦＲ、ＣＤＨ１９、ＥＮＰＰ３、ＤＬＬ３、ＭＳＬＮ、ＲＯＲ１、ＨＥＲ２、ＨＬＡＡ２、ＥｐＨＡ２、ＥｐＨＡ３、ＭＣＳＰ、ＣＳＰＧ４、ＮＧ２、ＲＯＮ、ＦＬＴ３、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＦＡＰα、ＦＲα、ＣＡ−９、ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ、ＦＳＰ１、Ｓ１００Ａ４、ＡＤＡＭ１２ｍ、ＲＥＴ、ＭＥＴ、ＦＧＦＲ、ＩＮＳＲ、及びＮＴＲＫからなる群から選択される腫瘍関連抗原である、請求項５６に記載の核酸。
前記腫瘍関連抗原が、ＭＡＧＥ−Ａ３、又は１つ若しくは複数のその断片を含む、請求項５８に記載の核酸。
前記腫瘍関連抗原が、１つ若しくは複数のヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）タンパク質、又はそれらの断片を含む、請求項５９に記載の核酸。
前記腫瘍関連抗原が、（ｉ）ＨＰＶ１６のＥ６タンパク質及びＥ７タンパク質、又はそれらの断片、並びに（ｉｉ）ＨＰＶ１８のＥ６タンパク質及びＥ７タンパク質、又はそれらの断片を含む、請求項６０に記載の核酸。
前記腫瘍関連抗原が、ブラキウリ、又は１つ若しくは複数のその断片を含む、請求項６１に記載の核酸。
前記腫瘍関連抗原が、前立腺酸性ホスファターゼ、又は１つ若しくは複数のその断片を含む、請求項６２に記載の核酸。
免疫チェックポイント阻害剤をコードするトランス遺伝子をさらに含む、請求項１〜６３のいずれか一項に記載の核酸。
前記免疫チェックポイント阻害剤が、ＯＸ４０リガンド、ＩＣＯＳリガンド、抗ＣＤ４７抗体又はその抗原結合性断片、抗ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ抗体又はその抗原結合性断片、抗Ｌａｇ３抗体又はその抗原結合性断片、抗ＣＴＬＡ−４抗体又はその抗原結合性断片、抗ＰＤ−Ｌ１抗体又はその抗原結合性断片、抗ＰＤ１抗体又はその抗原結合性断片、及び抗Ｔｉｍ−３抗体又はその抗原結合性断片からなる群から選択される、請求項６４に記載の核酸。
前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ−Ｌ１抗体又はその抗原結合性断片又は抗ＣＴＬＡ−４抗体又はその抗原結合性断片である、請求項６４に記載の核酸。
前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ１抗体又はその抗原結合性断片である、請求項６４に記載の核酸。
前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＣＴＬＡ−４抗体又はその抗原結合性断片である、請求項６４に記載の核酸。
インターロイキン（ＩＬ）をコードするトランス遺伝子をさらに含む、請求項１〜６８のいずれか一項に記載の核酸。
前記インターロイキンが、ＩＬ−１アルファ、ＩＬ−１ベータ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２ｐ３５、ＩＬ−１２ｐ４０、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、及びＩＬ−２３からなる群から選択される、請求項６９に記載の核酸。
前記インターロイキンが、ＩＬ−１２ｐ３５、ＩＬ−１２ｐ４０、及びＩＬ−１２ｐ７０からなる群から選択される、請求項７０に記載の核酸。
前記インターロイキンが、膜結合型である、請求項７１に記載の核酸。
インターフェロン（ＩＦＮ）をコードするトランス遺伝子をさらに含む、請求項１〜７２のいずれか一項に記載の核酸。
前記インターフェロンが、ＩＦＮアルファ、ＩＦＮ−ベータ、ＩＦＮデルタ、ＩＦＮイプシロン、ＩＦＮタウ、ＩＦＮオメガ、ＩＦＮゼータ、及びＩＦＮガンマからなる群から選択される、請求項７３に記載の核酸。
ＴＮＦスーパーファミリーメンバータンパク質をコードするトランス遺伝子をさらに含む、請求項１〜７４のいずれか一項に記載の核酸。
前記ＴＮＦスーパーファミリーメンバータンパク質が、ＴＲＡＩＬ、Ｆａｓリガンド、ＬＩＧＨＴ（ＴＮＦＳＦ−１４）、ＴＮＦアルファ、及び４−１ＢＢリガンドからなる群から選択される、請求項７５に記載の核酸。
サイトカインをコードするトランス遺伝子をさらに含む、請求項１〜７６のいずれか一項に記載の核酸。
前記サイトカインが、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｆｌｔ３リガンド、ＣＤ４０リガンド、抗ＴＧＦベータ、抗ＶＥＧＦ−Ｒ２、及びｃＧＡＳ（グアニルアデニル酸シクラーゼ）からなる群から選択される、請求項７７に記載の核酸。
前記サイトカインが、Ｆｌｔ３リガンドである、請求項７８に記載の核酸。
各々が、Ｃ２Ｌ、Ｃ１Ｌ、Ｎ１Ｌ、Ｎ２Ｌ、Ｍ１Ｌ、Ｍ２Ｌ、Ｋ１Ｌ、Ｋ２Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ｋ４Ｌ、Ｋ５Ｌ、Ｋ６Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｆ１Ｌ、Ｆ２Ｌ、Ｆ３Ｌ、Ｂ１４Ｒ、Ｂ１５Ｒ、Ｂ１６Ｒ、Ｂ１７Ｌ、Ｂ１８Ｒ、Ｂ１９Ｒ、Ｂ２０Ｒからなる群から独立的に選択される、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、又は２２の遺伝子の欠失を含む組換えオルトポックスウイルスベクター。
Ｂ１４Ｒ、Ｂ１６Ｒ、Ｂ１７Ｌ、Ｂ１８Ｒ、Ｂ１９Ｒ、及びＢ２０Ｒからなる群から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つの遺伝子の欠失を含む組換えオルトポックスウイルスベクター。
Ｂ１４Ｒ、Ｂ１６Ｒ、Ｂ１７Ｌ、Ｂ１８Ｒ、Ｂ１９Ｒ、及びＢ２０Ｒからなる群から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つの遺伝子の欠失を含む、請求項８０又は８１に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
Ｃ２Ｌ、Ｃ１Ｌ、Ｎ１Ｌ、Ｎ２Ｌ、Ｍ１Ｌ、Ｍ２Ｌ、Ｋ１Ｌ、Ｋ２Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ｋ４Ｌ、Ｋ５Ｌ、Ｋ６Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｆ１Ｌ、Ｆ２Ｌ、及びＦ３Ｌからなる群から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、又は１６の遺伝子の欠失を含む組換えオルトポックスウイルスベクター。
Ｃ２Ｌ、Ｃ１Ｌ、Ｎ１Ｌ、Ｎ２Ｌ、Ｍ１Ｌ、Ｍ２Ｌ、Ｋ１Ｌ、Ｋ２Ｌ、Ｋ３Ｌ、Ｋ４Ｌ、Ｋ５Ｌ、Ｋ６Ｌ、Ｋ７Ｒ、Ｆ１Ｌ、Ｆ２Ｌ、及びＦ３Ｌからなる群から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、又は１６の遺伝子の欠失を含む、請求項８０〜８２のいずれか一項に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
カスパーゼ９阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を含む組換えオルトポックスウイルスベクター。
カスパーゼ９阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を含む、請求項８０〜８４のいずれか一項に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
カスパーゼ９阻害剤をコードする前記遺伝子が、Ｆ１Ｌである、請求項８５又は８６に記載のベクター。
ＢＣＬ−２阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を含む、組換えオルトポックスウイルスベクター。
ＢＣＬ−２阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を含む、請求項８０〜８７のいずれか一項に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
ＢＣＬ−２阻害剤をコードする前記遺伝子が、Ｎ１Ｌである、請求項８８又は８９に記載のベクター。
ｄＵＴＰアーゼをコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を含む、組換えオルトポックスウイルスベクター。
ｄＵＴＰアーゼをコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を含む、請求項８０〜９０のいずれか一項に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
ｄＵＴＰアーゼをコードする前記遺伝子が、Ｆ２Ｌである、請求項９１又は９２に記載のベクター。
ＩＦＮアルファ／ベータ受容体様分泌型糖タンパク質をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を含む、組換えオルトポックスウイルスベクター。
ＩＦＮアルファ／ベータ受容体様分泌型糖タンパク質をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を含む、請求項８０〜９３のいずれか一項に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
ＩＦＮアルファ／ベータ受容体様分泌型糖タンパク質をコードする前記遺伝子が、Ｂ１９Ｒである、請求項９４又は９５に記載のベクター。
ＩＬ−１ベータ阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を含む、組換えオルトポックスウイルスベクター。
ＩＬ−１ベータ阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を含む、請求項８０〜９６のいずれか一項に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
ＩＬ−１ベータ阻害剤をコードする前記遺伝子が、Ｂ１６Ｒである、請求項９７又は９８に記載のベクター。
ホスホリパーゼＤをコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を含む、組換えオルトポックスウイルスベクター。
ホスホリパーゼＤをコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を含む、請求項８０〜９９のいずれか一項に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
ホスホリパーゼＤをコードする前記遺伝子が、Ｋ４Ｌである、請求項１００又は１０１に記載のベクター。
ＰＫＲ阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を含む、組換えオルトポックスウイルスベクター。
ＰＫＲ阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を含む、請求項８０〜１０２のいずれか一項に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
ＰＫＲ阻害剤をコードする前記遺伝子が、Ｋ３Ｌである、請求項１０３又は１０４に記載のベクター。
セリンプロテアーゼ阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を含む、組換えオルトポックスウイルスベクター。
セリンプロテアーゼ阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を含む、請求項８０〜１０５のいずれか一項に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
セリンプロテアーゼ阻害剤をコードする前記遺伝子が、Ｋ２Ｌである、請求項１０６又は１０７に記載のベクター。
ＴＬＲシグナル伝達阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を含む、組換えオルトポックスウイルスベクター。
ＴＬＲシグナル伝達阻害剤をコードする少なくとも１つの遺伝子の欠失を含む、請求項８０〜１０８のいずれか一項に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
ＴＬＲシグナル伝達阻害剤をコードする前記遺伝子が、Ｎ２Ｌである、請求項１０９又は１１０に記載のベクター。
ケルチ様タンパク質をコードする少なくとも１つ又は２つの遺伝子の欠失を含む、組換えオルトポックスウイルスベクター。
ケルチ様タンパク質をコードする少なくとも１つ又は２つの遺伝子の欠失を含む、請求項８０〜１１１のいずれか一項に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
ケルチ様タンパク質をコードする前記遺伝子が、Ｆ３Ｌ及びＣ２Ｌからなる群から独立的に選択される、請求項１１２又は１１３に記載のベクター。
モノグリセリドリパーゼをコードする少なくとも１つ又は２つの遺伝子の欠失を含む、組換えオルトポックスウイルスベクター。
モノグリセリドリパーゼをコードする少なくとも１つ又は２つの遺伝子の欠失を含む、請求項８０〜１１４のいずれか一項に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
モノグリセリドリパーゼをコードする前記遺伝子が、Ｋ５Ｌ及びＫ６Ｌからなる群から独立的に選択される、請求項１１５又は１１６に記載のベクター。
ＮＦ−κＢ阻害剤をコードする少なくとも１つ、２つ、又は３つの遺伝子の欠失を含む、組換えオルトポックスウイルスベクター。
ＮＦ−κＢ阻害剤をコードする少なくとも１つ、２つ、又は３つの遺伝子の欠失を含む、請求項８０〜１１７のいずれか一項に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
ＮＦ−κＢ阻害剤をコードする前記遺伝子が、Ｋ７Ｒ、Ｋ１Ｌ、及びＭ２Ｌからなる群から独立的に選択される、請求項１１８又は１１９に記載のベクター。
アンキリンリピートタンパク質をコードする少なくとも１つ、２つ、又は３つの遺伝子の欠失を含む、組換えオルトポックスウイルスベクター。
アンキリンリピートタンパク質をコードする少なくとも１つ、２つ、又は３つの遺伝子の欠失を含む、請求項８０〜１２０のいずれか一項に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
アンキリンリピートタンパク質をコードする前記遺伝子が、Ｂ１８Ｒ、Ｂ２０Ｒ、及びＭ１Ｌからなる群から独立的に選択される、請求項１２１又は１２２に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
Ｂ１５Ｒ、Ｂ１７Ｒ、及びＢ１４Ｒからなる群から選択される、少なくとも１つ又は２つの遺伝子の欠失を含む、組換えオルトポックスウイルスベクター。
Ｂ１５Ｒ、Ｂ１７Ｒ、及びＢ１４Ｒからなる群から選択される、少なくとも１つ又は２つの遺伝子の欠失を含む、請求項８０〜１２３のいずれか一項に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
前記欠失が、前記Ｂ１５Ｒ、Ｂ１７Ｒ、及びＢ１４Ｒ遺伝子の各々を含む、請求項１２４又は１２５に記載のベクター。
Ｂ２１Ｒ、Ｂ２２Ｒ、Ｂ２３Ｒ、Ｂ２４Ｒ、Ｂ２５Ｒ、Ｂ２６Ｒ、Ｂ２７Ｒ、Ｂ２８Ｒ、及びＢ２９ＲからなるＩＴＲ遺伝子の群から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、又は９つの遺伝子の欠失を含む、請求項８０〜１２６のいずれか一項に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
前記ワクシニアウイルスが、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、ＷＲ（ＷｅｓｔｅｒｎＲｅｓｅｒｖｅ）、Ｗｙｅｔｈ、Ｌｉｓｔｅｒ、ＥＭ６３、ＡＣＡＭ２０００、ＬＣ１６ｍ８、ＣＶ−１、改変ワクシニアＡｎｋａｒａ（ＭＶＡ）、ＤａｉｒｅｎＩ、ＧＬＶ−１ｈ６８、ＩＨＤ−Ｊ、Ｌ−ＩＶＰ、ＬＣ１６ｍ８、ＬＣ１６ｍＯ、Ｔａｓｈｋｅｎｔ、ＴｉａｎＴａｎ、及びＷＡＵ８６／８８−１からなる群から選択される株である、請求項８０〜１２７のいずれか一項に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
前記ワクシニアウイルスが、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、ＷＲ（ＷｅｓｔｅｒｎＲｅｓｅｒｖｅ）、ＴｉａｎＴａｎ、Ｗｙｅｔｈ、及びＬｉｓｔｅｒからなる群から選択される株である、請求項１２８に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
前記ワクシニアウイルスが、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ株のワクシニアウイルスである、請求項１２９に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
前記欠失が、対応する遺伝子をコードする全ポリヌクレオチドの欠失である、請求項１２９に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
前記欠失の各々が、対応する遺伝子をコードするポリヌクレオチドの一部の欠失であり、この場合、前記欠失が、宿主細胞に導入されると前記遺伝子を非機能性とするのに十分である、請求項８０〜１３１のいずれか一項に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
腫瘍関連抗原をコードするトランス遺伝子をさらに含む、請求項８０〜１３２のいずれか一項に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
腫瘍関連抗原をコードするトランス遺伝子をさらに含む、請求項８０〜１３３のいずれか一項に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
前記腫瘍関連抗原が、表３〜３０のうちのいずれか１つに列挙された腫瘍関連抗原である、請求項１３４に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
前記腫瘍関連抗原が、ＣＤ１９、ＣＤ３３、ＥｐＣＡＭ、ＣＥＡ、ＰＳＭＡ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ２７４、ＥＧＦＲ、ＣＤＨ１９、ＥＮＰＰ３、ＤＬＬ３、ＭＳＬＮ、ＲＯＲ１、ＨＥＲ２、ＨＬＡＡ２、ＥｐＨＡ２、ＥｐＨＡ３、ＭＣＳＰ、ＣＳＰＧ４、ＮＧ２、ＲＯＮ、ＦＬＴ３、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＦＡＰα、ＦＲα、ＣＡ−９、ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ、ＦＳＰ１、Ｓ１００Ａ４、ＡＤＡＭ１２ｍ、ＲＥＴ、ＭＥＴ、ＦＧＦＲ、ＩＮＳＲ、及びＮＴＲＫからなる群から選択される腫瘍関連抗原である、請求項１３４に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
前記腫瘍関連抗原が、ＭＡＧＥ−Ａ３、又は１つ若しくは複数のその断片を含む、請求項１３４に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
前記腫瘍関連抗原が、１つ若しくは複数のヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）タンパク質、又はそれらの断片を含む、請求項１３４に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
前記腫瘍関連抗原が、（ｉ）ＨＰＶ１６のＥ６タンパク質及びＥ７タンパク質、又はそれらの断片、並びに（ｉｉ）ＨＰＶ１８のＥ６タンパク質及びＥ７タンパク質、又はそれらの断片を含む、請求項１３４に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
前記腫瘍関連抗原が、ブラキウリ、又は１つ若しくは複数のその断片を含む、請求項１３４に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
前記腫瘍関連抗原が、前立腺酸性ホスファターゼ、又は１つ若しくは複数のその断片を含む、請求項１３４に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
免疫チェックポイント阻害剤をコードするトランス遺伝子をさらに含む、請求項８０〜１４１のいずれか一項に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
前記免疫チェックポイント阻害剤が、ＯＸ４０リガンド、ＩＣＯＳリガンド、抗ＣＤ４７抗体又はその抗原結合性断片、抗ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ抗体又はその抗原結合性断片、抗Ｌａｇ３抗体又はその抗原結合性断片、抗ＣＴＬＡ−４抗体又はその抗原結合性断片、抗ＰＤ−Ｌ１抗体又はその抗原結合性断片、抗ＰＤ１抗体又はその抗原結合性断片、及び抗Ｔｉｍ−３抗体又はその抗原結合性断片からなる群から選択される、請求項１４２に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ−Ｌ１抗体又はその抗原結合性断片又は抗ＣＴＬＡ−４抗体又はその抗原結合性断片である、請求項１４３に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ１抗体又はその抗原結合性断片である、請求項１４３に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＣＴＬＡ−４抗体又はその抗原結合性断片である、請求項１４３に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
インターロイキン（ＩＬ）をコードするトランス遺伝子をさらに含む、請求項８０〜１４６のいずれか一項に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
前記インターロイキンが、ＩＬ−１アルファ、ＩＬ−１ベータ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２ｐ３５、ＩＬ−１２ｐ４０、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、及びＩＬ−２３からなる群から選択される、請求項１４７に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
前記インターロイキンが、ＩＬ−１２ｐ３５、ＩＬ−１２ｐ４０、及びＩＬ−１２ｐ７０からなる群から選択される、請求項１４７に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
前記インターロイキンが、膜結合型である、請求項１４７に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
インターフェロン（ＩＦＮ）をコードするトランス遺伝子をさらに含む、請求項８０〜１５０のいずれか一項に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
前記インターフェロンが、ＩＦＮアルファ、ＩＦＮ−ベータ、ＩＦＮデルタ、ＩＦＮイプシロン、ＩＦＮタウ、ＩＦＮオメガ、ＩＦＮゼータ、及びＩＦＮガンマからなる群から選択される、請求項１５１に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
ＴＮＦスーパーファミリーメンバータンパク質をコードするトランス遺伝子をさらに含む、請求項８０〜１５２のいずれか一項に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
前記ＴＮＦスーパーファミリーメンバータンパク質が、ＴＲＡＩＬ、Ｆａｓリガンド、ＬＩＧＨＴ（ＴＮＦＳＦ−１４）、ＴＮＦアルファ、及び４−１ＢＢリガンドからなる群から選択される、請求項１５３に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
サイトカインをコードするトランス遺伝子をさらに含む、請求項８０〜１５４のいずれか一項に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
前記サイトカインが、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｆｌｔ３リガンド、ＣＤ４０リガンド、抗ＴＧＦベータ、抗ＶＥＧＦ−Ｒ２、及びｃＧＡＳ（グアニルアデニル酸シクラーゼ）からなる群から選択される、請求項１５５に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
前記サイトカインが、Ｆｌｔ３リガンドである、請求項１５６に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
チミジンキナーゼ（ＴＫ）遺伝子を含む、請求項１〜７９のいずれか一項に記載の核酸、又は請求項８０〜１５７のいずれか一項に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
リボヌクレオチドレダクターゼ遺伝子を含む、請求項１〜７９のいずれか一項に記載の核酸、又は請求項８０〜１５７のいずれか一項に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
哺乳動物細胞の集団を、前記核酸又は前記組換えオルトポックスウイルスベクターと接触させると、前記細胞が、前記欠失を含まない形態のオルトポックスウイルスベクターと接触した、同じ種類の哺乳動物細胞の集団と比べて、合胞体の形成の増大を呈する、請求項１〜７９のいずれか一項に記載の核酸、又は請求項８０〜１５７のいずれか一項に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
哺乳動物細胞の集団を、前記核酸又は前記組換えオルトポックスウイルスベクターと接触させると、前記細胞が、前記欠失を含まない形態のオルトポックスウイルスベクターと接触した、同じ種類の哺乳動物細胞の集団と比べて、オルトポックスウイルスベクターの拡散の増大を呈する、請求項１〜７９のいずれか一項に記載の核酸、又は請求項８０〜１５７のいずれか一項に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
前記核酸又は前記組換えオルトポックスウイルスベクターが、哺乳動物細胞の集団に対する細胞傷害効果を、前記欠失を含まない形態のオルトポックスウイルスベクターの細胞傷害効果と比べて増大させる、請求項１〜７９のいずれか一項に記載の核酸、又は請求項８０〜１５７のいずれか一項に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
前記哺乳動物細胞が、ヒト細胞である、請求項１６２に記載の核酸又は組換えオルトポックスウイルス。
前記ヒト細胞が、がん細胞である、請求項１６３に記載の核酸又は組換えオルトポックスウイルス。
請求項１〜７９のいずれか一項に記載の核酸、又は請求項８０〜１５７のいずれか一項に記載の組換えオルトポックスウイルスベクターを含むパッケージング細胞株。
哺乳動物患者におけるがんを処置する方法であって、治療有効量の請求項１〜７９のいずれか一項に記載の核酸、又は請求項８０〜１５７のいずれか一項に記載の組換えオルトポックスウイルスベクターを、前記患者に投与するステップを含む方法。
前記哺乳動物患者が、ヒト患者である、請求項１６６に記載の方法。
前記がんが、白血病、リンパ腫、肝臓がん、骨がん、肺がん、脳がん、膀胱がん、消化器がん、乳がん、心臓がん、子宮頸がん、子宮がん、頭頸部がん、胆嚢がん、喉頭がん、***口腔がん、眼がん、黒色腫、膵臓がん、前立腺がん、結腸直腸がん、精巣がん、及び咽頭がんからなる群から選択される、請求項１６６又は１６７に記載の方法。
前記がんが、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性（ｍｙｅｌｏｉｄ）白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性（ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ）白血病（ＣＭＬ）、副腎皮質癌腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、肛門がん、虫垂がん、星状細胞腫、非定型奇形腫様／ラブドイド腫瘍、基底細胞癌、胆管がん、肝外がん、ユーイング肉腫ファミリー、骨肉腫及び悪性線維性組織球腫、中枢神経系胎児性腫瘍、中枢神経系胚細胞腫瘍、頭蓋咽頭腫、上衣腫、気管支腫瘍、バーキットリンパ腫、カルチノイド腫瘍、原発性リンパ腫、脊索種、慢性骨髄増殖性新生物、結腸がん、肝外胆管がん、非浸潤性乳管癌（ＤＣＩＳ）、子宮内膜がん、上衣腫、食道がん、嗅神経芽腫、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、卵管がん、骨の線維性組織球腫、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間葉系腫瘍（ＧＩＳＴ）、精巣胚細胞腫瘍、妊娠性絨毛性疾患、神経膠腫、小児性脳幹神経膠腫、有毛細胞白血病、肝細胞がん、ランゲルハンス細胞組織球増殖症、ホジキンリンパ腫、下咽頭がん、膵島細胞腫瘍、膵内分泌腫瘍、ウィルムス腫瘍及び他の小児腎臓腫瘍、ランゲルハンス細胞組織球増殖症、小細胞肺がん、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、眼内黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、転移性頸部扁平上皮がん、正中線癌、多発性内分泌腫瘍症候群、多発性骨髄腫／形質細胞細胞腫、骨髄異形成症候群、鼻腔副鼻腔がん、鼻咽頭がん、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、上皮卵巣がん、胚細胞卵巣がん、低悪性度卵巣がん、膵神経内分泌腫瘍、乳頭腫症、傍神経節腫、副鼻腔鼻腔がん、副甲状腺がん、陰茎がん、咽頭がん、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、胸膜肺芽腫、原発性腹膜がん、直腸がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺がん、カポジ肉腫、横紋筋肉腫、セザリー症候群、小腸がん、軟部組織肉腫、咽頭がん、胸腺腫及び胸腺癌、甲状腺がん、腎盂及び尿管の移行上皮がん、尿道がん、子宮内膜がん、子宮肉腫、膣がん、外陰がん、並びにワルデンシュトロームマクログロブリン血症からなる群から選択される、請求項１６６又は１６７に記載の方法。
前記患者に、免疫チェックポイント阻害剤を投与するステップをさらに含む、請求項１６６〜１６９のいずれか一項に記載の方法。
前記免疫チェックポイント阻害剤が、ＯＸ４０リガンド、ＩＣＯＳリガンド、抗ＣＤ４７抗体又はその抗原結合性断片、抗ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ抗体又はその抗原結合性断片、抗Ｌａｇ３抗体又はその抗原結合性断片、抗ＣＴＬＡ−４抗体又はその抗原結合性断片、抗ＰＤ−Ｌ１抗体又はその抗原結合性断片、抗ＰＤ１抗体又はその抗原結合性断片、及び抗Ｔｉｍ−３抗体又はその抗原結合性断片からなる群から選択される、請求項１７０に記載の方法。
前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ１抗体若しくはその抗原結合性断片、又は抗ＣＴＬＡ−４抗体若しくはその抗原結合性断片である、請求項１７０に記載の方法。
前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ１抗体又はその抗原結合性断片である、請求項１７０に記載の方法。
前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＣＴＬＡ−４抗体又はその抗原結合性断片である、請求項１７０に記載の方法。
前記患者に、インターロイキンを投与するステップをさらに含む、請求項１６６〜１７４のいずれか一項に記載の方法。
前記インターロイキンが、ＩＬ−１アルファ、ＩＬ−１ベータ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２ｐ３５、ＩＬ−１２ｐ４０、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、及びＩＬ−２３からなる群から選択される、請求項１７５に記載の方法。
前記インターロイキンが、ＩＬ−１２ｐ３５、ＩＬ−１２ｐ４０、及びＩＬ−１２ｐ７０からなる群から選択される、請求項１７５に記載の方法。
前記インターロイキンが、膜結合型である、請求項１７５〜１７７のいずれか一項に記載の方法。
前記患者に、インターフェロンを投与するステップをさらに含む、請求項１６６〜１７８のいずれか一項に記載の方法。
前記インターフェロンが、ＩＦＮアルファ、ＩＦＮ−ベータ、ＩＦＮデルタ、ＩＦＮイプシロン、ＩＦＮタウ、ＩＦＮオメガ、ＩＦＮゼータ、及びＩＦＮガンマからなる群から選択される、請求項１７９に記載の方法。
前記患者に、ＴＮＦスーパーファミリーメンバータンパク質を投与するステップをさらに含む、請求項１６５〜１８０のいずれか一項に記載の方法。
前記ＴＮＦスーパーファミリーメンバータンパク質が、ＴＲＡＩＬ、Ｆａｓリガンド、ＬＩＧＨＴ（ＴＮＦＳＦ−１４）、ＴＮＦアルファ、及び４−１ＢＢリガンドからなる群から選択される、請求項１８１に記載の方法。
前記患者に、サイトカインを投与するステップをさらに含む、請求項１６６〜１８２のいずれか一項に記載の方法。
前記サイトカインが、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｆｌｔ３リガンド、ＣＤ４０リガンド、抗ＴＧＦベータ、抗ＶＥＧＦ−Ｒ２、及びｃＧＡＳ（グアニルアデニル酸シクラーゼ）からなる群から選択される、請求項１８３に記載の方法。
前記サイトカインが、Ｆｌｔ３リガンドである、請求項１８４に記載の方法。
請求項１〜７９のいずれか一項に記載の核酸、又は請求項８０〜１５７のいずれか一項に記載の組換えオルトポックスウイルスベクターと、前記キットの使用者に、前記核酸又は前記ベクターを宿主細胞において発現させるように指示するパッケージ添付文書とを含むキット。
請求項１〜７９のいずれか一項に記載の核酸、又は請求項８０〜１５７のいずれか一項に記載の組換えオルトポックスウイルスベクターと、使用者に、治療有効量の前記核酸又は組換えオルトポックスウイルスベクターを、がんを有する哺乳動物患者に投与し、これにより、前記がんを処置するように指示するパッケージ添付文書とを含むキット。
前記哺乳動物患者が、ヒト患者である、請求項１８７に記載のキット。
Ｂ８Ｒ遺伝子が欠失している、請求項１〜７９のいずれか一項に記載の核酸又は請求項８０〜１５７のいずれか一項に記載の組換えオルトポックスウイルスベクター。
少なくとも１つのトランス遺伝子が、前記欠失したＢ８Ｒ遺伝子の遺伝子座に挿入されている、請求項１８９に記載の核酸又は組換えオルトポックスウイルス。
少なくとも２つのトランス遺伝子が、前記欠失したＢ８Ｒ遺伝子の遺伝子座に挿入されている、請求項１９０に記載の核酸又は組換えオルトポックスウイルス。
少なくとも３つのトランス遺伝子が、前記欠失したＢ８Ｒ遺伝子の遺伝子座に挿入されている、請求項１９１に記載の核酸又は組換えオルトポックスウイルス。
少なくとも１つのさらなるトランス遺伝子が、Ｂ８Ｒ遺伝子の遺伝子座ではない遺伝子座に挿入されている、請求項１８９〜１９２のいずれか一項に記載の核酸又は組換えオルトポックスウイルス。
前記遺伝子座が、５ｐ欠失の境界である、請求項１９３に記載の核酸又は組換えオルトポックスウイルス。
前記遺伝子座が、３ｐ欠失の境界である、請求項１９３に記載の核酸又は組換えオルトポックスウイルス。
以下のトランス遺伝子：ＩＬ−１２ＴＭ、ＦＬＴ３−Ｌ、又は抗ＣＬＴＡ−４抗体のうちの少なくとも１つが挿入されている、請求項１８９〜１９２のいずれか一項に記載の核酸又は組換えオルトポックスウイルス。