JP2021505187A - 遺伝子編集のためのcpf1関連方法及び組成物 - Google Patents
遺伝子編集のためのcpf1関連方法及び組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2021505187A JP2021505187A JP2020531964A JP2020531964A JP2021505187A JP 2021505187 A JP2021505187 A JP 2021505187A JP 2020531964 A JP2020531964 A JP 2020531964A JP 2020531964 A JP2020531964 A JP 2020531964A JP 2021505187 A JP2021505187 A JP 2021505187A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- certain embodiments
- sequence
- cpf1
- cells
- crispr
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 144
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 54
- 238000010362 genome editing Methods 0.000 title claims description 117
- 101150005393 CBF1 gene Proteins 0.000 title 1
- 101100329224 Coprinopsis cinerea (strain Okayama-7 / 130 / ATCC MYA-4618 / FGSC 9003) cpf1 gene Proteins 0.000 title 1
- 101150059443 cas12a gene Proteins 0.000 title 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims abstract description 333
- 108091033409 CRISPR Proteins 0.000 claims abstract description 318
- 238000010354 CRISPR gene editing Methods 0.000 claims abstract description 254
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims abstract description 135
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 121
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 claims abstract description 27
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 393
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 389
- 108020005004 Guide RNA Proteins 0.000 claims description 310
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 197
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 192
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 192
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 191
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 190
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 claims description 179
- 230000008685 targeting Effects 0.000 claims description 130
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 112
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 107
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 107
- 101100382122 Homo sapiens CIITA gene Proteins 0.000 claims description 104
- 101710153660 Nuclear receptor corepressor 2 Proteins 0.000 claims description 104
- 101000937544 Homo sapiens Beta-2-microglobulin Proteins 0.000 claims description 76
- 102100029452 T cell receptor alpha chain constant Human genes 0.000 claims description 76
- 108700002010 MHC class II transactivator Proteins 0.000 claims description 75
- 108010081734 Ribonucleoproteins Proteins 0.000 claims description 75
- 102000004389 Ribonucleoproteins Human genes 0.000 claims description 75
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 75
- 102100027314 Beta-2-microglobulin Human genes 0.000 claims description 74
- 102100026371 MHC class II transactivator Human genes 0.000 claims description 72
- 108010077850 Nuclear Localization Signals Proteins 0.000 claims description 67
- 101150086355 HBG gene Proteins 0.000 claims description 63
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 58
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 claims description 57
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 claims description 41
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 claims description 41
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 41
- 101000617285 Homo sapiens Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 6 Proteins 0.000 claims description 35
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 34
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 34
- 101150076800 B2M gene Proteins 0.000 claims description 33
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 claims description 32
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 28
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 26
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims description 25
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 24
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims description 24
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims description 21
- 108010044495 Fetal Hemoglobin Proteins 0.000 claims description 19
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 18
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 18
- 241000605861 Prevotella Species 0.000 claims description 16
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 claims description 15
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims description 14
- FVFVNNKYKYZTJU-UHFFFAOYSA-N 6-chloro-1,3,5-triazine-2,4-diamine Chemical compound NC1=NC(N)=NC(Cl)=N1 FVFVNNKYKYZTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- -1 TRBC Proteins 0.000 claims description 13
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 13
- 241000589601 Francisella Species 0.000 claims description 12
- 102100038614 Hemoglobin subunit gamma-1 Human genes 0.000 claims description 12
- 101001031977 Homo sapiens Hemoglobin subunit gamma-1 Proteins 0.000 claims description 12
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 11
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 10
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 9
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 9
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 claims description 8
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 claims description 8
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 8
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 8
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000012636 effector Substances 0.000 claims description 8
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims description 7
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 claims description 6
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 6
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 6
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 5
- 101150056981 BID gene Proteins 0.000 claims description 5
- 101150064015 FAS gene Proteins 0.000 claims description 5
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 claims description 5
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 5
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 4
- 101150116845 Cblb gene Proteins 0.000 claims description 4
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 claims description 4
- 101150091887 Ctla4 gene Proteins 0.000 claims description 4
- 101100519206 Homo sapiens PDCD1 gene Proteins 0.000 claims description 4
- 102000002488 Nucleoplasmin Human genes 0.000 claims description 4
- 101150087384 PDCD1 gene Proteins 0.000 claims description 4
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000000581 natural killer T-cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 108060005597 nucleoplasmin Proteins 0.000 claims description 4
- 102100038617 Hemoglobin subunit gamma-2 Human genes 0.000 claims description 3
- 101001031961 Homo sapiens Hemoglobin subunit gamma-2 Proteins 0.000 claims description 3
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 claims description 3
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 claims description 3
- 108010044267 Abnormal Hemoglobins Proteins 0.000 claims description 2
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 102100027268 Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Human genes 0.000 claims 2
- 101000860090 Acidaminococcus sp. (strain BV3L6) CRISPR-associated endonuclease Cas12a Proteins 0.000 claims 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 claims 1
- 102200105259 rs587777638 Human genes 0.000 claims 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 abstract description 41
- 238000010586 diagram Methods 0.000 abstract 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 145
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 142
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 90
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 53
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 53
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 48
- 102100035102 E3 ubiquitin-protein ligase MYCBP2 Human genes 0.000 description 47
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 47
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 description 45
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 45
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 35
- 102100022089 Acyl-[acyl-carrier-protein] hydrolase Human genes 0.000 description 31
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 description 31
- 102100035273 E3 ubiquitin-protein ligase CBL-B Human genes 0.000 description 31
- 101000889276 Homo sapiens Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Proteins 0.000 description 31
- 101000737265 Homo sapiens E3 ubiquitin-protein ligase CBL-B Proteins 0.000 description 31
- 101000611936 Homo sapiens Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 31
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 description 31
- 101000824278 Homo sapiens Acyl-[acyl-carrier-protein] hydrolase Proteins 0.000 description 30
- 102100021657 Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 6 Human genes 0.000 description 30
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 29
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 27
- 230000005782 double-strand break Effects 0.000 description 27
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 27
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 23
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 20
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 20
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 19
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 18
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 17
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 17
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 17
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 16
- 230000006870 function Effects 0.000 description 15
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 15
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 15
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 15
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 14
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 14
- 230000006780 non-homologous end joining Effects 0.000 description 14
- 241000894007 species Species 0.000 description 14
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 14
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 13
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 13
- 241000588621 Moraxella Species 0.000 description 12
- 101710126859 Single-stranded DNA-binding protein Proteins 0.000 description 12
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 12
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 12
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 12
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 12
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 12
- 235000019527 sweetened beverage Nutrition 0.000 description 12
- 108091079001 CRISPR RNA Proteins 0.000 description 11
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 11
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 11
- 102100031690 Erythroid transcription factor Human genes 0.000 description 10
- 101001066268 Homo sapiens Erythroid transcription factor Proteins 0.000 description 10
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 10
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 10
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 description 10
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 9
- 238000003197 gene knockdown Methods 0.000 description 9
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 9
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 9
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 9
- 230000004044 response Effects 0.000 description 9
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 9
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 9
- 108010008532 Deoxyribonuclease I Proteins 0.000 description 8
- 102000007260 Deoxyribonuclease I Human genes 0.000 description 8
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 8
- DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N Uridine Chemical class O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N 0.000 description 8
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 8
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 8
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 8
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 8
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 8
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 8
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 8
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 7
- 102100023171 Nuclear receptor subfamily 1 group D member 2 Human genes 0.000 description 7
- 241000193996 Streptococcus pyogenes Species 0.000 description 7
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- 210000003738 lymphoid progenitor cell Anatomy 0.000 description 7
- 210000003643 myeloid progenitor cell Anatomy 0.000 description 7
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 7
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 7
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 7
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 7
- 210000004986 primary T-cell Anatomy 0.000 description 7
- 208000007056 sickle cell anemia Diseases 0.000 description 7
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 7
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 6
- 241000904817 Lachnospiraceae bacterium Species 0.000 description 6
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 6
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 6
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 6
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108091092356 cellular DNA Proteins 0.000 description 6
- 238000013461 design Methods 0.000 description 6
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 6
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 6
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 6
- 230000030648 nucleus localization Effects 0.000 description 6
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 6
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 6
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 6
- 238000011158 quantitative evaluation Methods 0.000 description 6
- 230000005783 single-strand break Effects 0.000 description 6
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 5
- 101000910035 Streptococcus pyogenes serotype M1 CRISPR-associated endonuclease Cas9/Csn1 Proteins 0.000 description 5
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 5
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 5
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 5
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 5
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 5
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 5
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 5
- 241000604451 Acidaminococcus Species 0.000 description 4
- 241000605902 Butyrivibrio Species 0.000 description 4
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 4
- MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N Crotonoside Natural products C1=NC2=C(N)NC(=O)N=C2N1[C@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N 0.000 description 4
- NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N D-guanosine Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(CO)C(O)C1O NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 210000002361 Megakaryocyte Progenitor Cell Anatomy 0.000 description 4
- 241000542065 Moraxella bovoculi Species 0.000 description 4
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102220512240 Prostaglandin E synthase_C65S_mutation Human genes 0.000 description 4
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 4
- 108700009124 Transcription Initiation Site Proteins 0.000 description 4
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 208000005980 beta thalassemia Diseases 0.000 description 4
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 4
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 4
- 238000002716 delivery method Methods 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 210000002360 granulocyte-macrophage progenitor cell Anatomy 0.000 description 4
- 229940029575 guanosine Drugs 0.000 description 4
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 4
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 4
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 4
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 4
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 4
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 4
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 4
- 229940046166 oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 4
- 125000000548 ribosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 4
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 4
- 108091023043 Alu Element Proteins 0.000 description 3
- 230000033616 DNA repair Effects 0.000 description 3
- 101000800116 Homo sapiens Thy-1 membrane glycoprotein Proteins 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 208000018020 Sickle cell-beta-thalassemia disease syndrome Diseases 0.000 description 3
- 206010043391 Thalassaemia beta Diseases 0.000 description 3
- 102100033523 Thy-1 membrane glycoprotein Human genes 0.000 description 3
- 108700029229 Transcriptional Regulatory Elements Proteins 0.000 description 3
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 125000003282 alkyl amino group Chemical group 0.000 description 3
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 125000001769 aryl amino group Chemical group 0.000 description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N beta-L-uridine Natural products O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 3
- 125000004986 diarylamino group Chemical group 0.000 description 3
- 125000005240 diheteroarylamino group Chemical group 0.000 description 3
- 210000000267 erythroid cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 3
- 125000005241 heteroarylamino group Chemical group 0.000 description 3
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 3
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 3
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 3
- 210000003924 normoblast Anatomy 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 3
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 102000005912 ran GTP Binding Protein Human genes 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 3
- 239000011669 selenium Substances 0.000 description 3
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 3
- DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N uracil arabinoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940045145 uridine Drugs 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 2
- 102100031585 ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Human genes 0.000 description 2
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 2
- 241000203069 Archaea Species 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 2
- 102000052609 BRCA2 Human genes 0.000 description 2
- 108700020462 BRCA2 Proteins 0.000 description 2
- 241000181825 Bacteroidetes oral taxon 274 Species 0.000 description 2
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 101150008921 Brca2 gene Proteins 0.000 description 2
- COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N Busulfan Chemical compound CS(=O)(=O)OCCCCOS(C)(=O)=O COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000605900 Butyrivibrio fibrisolvens Species 0.000 description 2
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000243205 Candidatus Parcubacteria Species 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091060290 Chromatid Proteins 0.000 description 2
- 241000222290 Cladosporium Species 0.000 description 2
- 235000003363 Cornus mas Nutrition 0.000 description 2
- 240000006766 Cornus mas Species 0.000 description 2
- 230000008265 DNA repair mechanism Effects 0.000 description 2
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical group OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000272190 Falco peregrinus Species 0.000 description 2
- 241000230562 Flavobacteriia Species 0.000 description 2
- 241000589565 Flavobacterium Species 0.000 description 2
- 241000588088 Francisella tularensis subsp. novicida U112 Species 0.000 description 2
- 108091093094 Glycol nucleic acid Proteins 0.000 description 2
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical compound OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000777636 Homo sapiens ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Proteins 0.000 description 2
- 108020004684 Internal Ribosome Entry Sites Proteins 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 2
- 102100025169 Max-binding protein MNT Human genes 0.000 description 2
- 241000588629 Moraxella lacunata Species 0.000 description 2
- OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N N-Acetyl-D-Galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N 0.000 description 2
- OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N N-acetyl-D-galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N 0.000 description 2
- 108091092724 Noncoding DNA Proteins 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 241001600434 Plectroglyphidodon lacrymatus Species 0.000 description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 2
- 102000001195 RAD51 Human genes 0.000 description 2
- 108010068097 Rad51 Recombinase Proteins 0.000 description 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 2
- 241001115883 Sneathia amnii Species 0.000 description 2
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 2
- 241000605261 Thiomicrospira Species 0.000 description 2
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 2
- 150000003838 adenosines Chemical class 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 2
- 210000004381 amniotic fluid Anatomy 0.000 description 2
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 238000002617 apheresis Methods 0.000 description 2
- 125000003710 aryl alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 229960002092 busulfan Drugs 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 210000004756 chromatid Anatomy 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 2
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000000596 cyclohexenyl group Chemical group C1(=CCCCC1)* 0.000 description 2
- 208000006602 delta-Thalassemia Diseases 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 125000004663 dialkyl amino group Chemical group 0.000 description 2
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 2
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000925 erythroid effect Effects 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 231100000221 frame shift mutation induction Toxicity 0.000 description 2
- 230000037433 frameshift Effects 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 2
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 2
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000033444 hydroxylation Effects 0.000 description 2
- 238000005805 hydroxylation reaction Methods 0.000 description 2
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 210000004263 induced pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000001400 myeloablative effect Effects 0.000 description 2
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 2
- 230000009437 off-target effect Effects 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- FWZLYKYJQSQEPN-UHFFFAOYSA-N peregrine Natural products OC1C2C3C4(C5C6OC(C)=O)C(OC)CCC5(C)CN(CC)C4C6C2(OC)CC(OC)C1C3 FWZLYKYJQSQEPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 2
- 210000000608 photoreceptor cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 description 2
- 229920001606 poly(lactic acid-co-glycolic acid) Polymers 0.000 description 2
- 229920000058 polyacrylate Polymers 0.000 description 2
- 210000001948 pro-b lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 2
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 2
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 238000012289 standard assay Methods 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 2
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 2
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 2
- 108091006107 transcriptional repressors Proteins 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- 125000002264 triphosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])O* 0.000 description 2
- 238000001195 ultra high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PUDXUJRJLRLJIU-QYVSTXNMSA-N (2r,3r,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)-4-(2-methoxyethoxy)oxolan-3-ol Chemical compound COCCO[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 PUDXUJRJLRLJIU-QYVSTXNMSA-N 0.000 description 1
- 125000003161 (C1-C6) alkylene group Chemical group 0.000 description 1
- 229920002818 (Hydroxyethyl)methacrylate Polymers 0.000 description 1
- NOIRDLRUNWIUMX-UHFFFAOYSA-N 2-amino-3,7-dihydropurin-6-one;6-amino-1h-pyrimidin-2-one Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1.O=C1NC(N)=NC2=C1NC=N2 NOIRDLRUNWIUMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FZIIBDOXPQOKBP-UHFFFAOYSA-N 2-methyloxetane Chemical compound CC1CCO1 FZIIBDOXPQOKBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005345 3' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- ZAYHVCMSTBRABG-UHFFFAOYSA-N 5-Methylcytidine Natural products O=C1N=C(N)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 ZAYHVCMSTBRABG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AGFIRQJZCNVMCW-UAKXSSHOSA-N 5-bromouridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 AGFIRQJZCNVMCW-UAKXSSHOSA-N 0.000 description 1
- ZAYHVCMSTBRABG-JXOAFFINSA-N 5-methylcytidine Chemical compound O=C1N=C(N)C(C)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 ZAYHVCMSTBRABG-JXOAFFINSA-N 0.000 description 1
- ASUCSHXLTWZYBA-UMMCILCDSA-N 8-Bromoguanosine Chemical compound C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=C(Br)N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O ASUCSHXLTWZYBA-UMMCILCDSA-N 0.000 description 1
- HDZZVAMISRMYHH-UHFFFAOYSA-N 9beta-Ribofuranosyl-7-deazaadenin Natural products C1=CC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(CO)C(O)C1O HDZZVAMISRMYHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012099 Alexa Fluor family Substances 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 1
- 241000180579 Arca Species 0.000 description 1
- 235000007627 Caesalpinia Nutrition 0.000 description 1
- 241000522234 Caesalpinia Species 0.000 description 1
- 108700004991 Cas12a Proteins 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 102100031437 Cell cycle checkpoint protein RAD1 Human genes 0.000 description 1
- 102100035673 Centrosomal protein of 290 kDa Human genes 0.000 description 1
- 101100148125 Chlamydomonas reinhardtii RSP2 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 241000938605 Crocodylia Species 0.000 description 1
- XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N Cyanide Chemical compound N#[C-] XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMPVIKIVABFJJI-UHFFFAOYSA-N Cyclobutane Chemical compound C1CCC1 PMPVIKIVABFJJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100026846 Cytidine deaminase Human genes 0.000 description 1
- 108010031325 Cytidine deaminase Proteins 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 230000005778 DNA damage Effects 0.000 description 1
- 231100000277 DNA damage Toxicity 0.000 description 1
- 238000010442 DNA editing Methods 0.000 description 1
- 102100033934 DNA repair protein RAD51 homolog 2 Human genes 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035240 Disease Resistance Diseases 0.000 description 1
- 206010052804 Drug tolerance Diseases 0.000 description 1
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- 241000483002 Euproctis similis Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 241000589599 Francisella tularensis subsp. novicida Species 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 101150083167 HBG1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101100005863 Homo sapiens CEP290 gene Proteins 0.000 description 1
- 101001130384 Homo sapiens Cell cycle checkpoint protein RAD1 Proteins 0.000 description 1
- 101000715664 Homo sapiens Centrosomal protein of 290 kDa Proteins 0.000 description 1
- 101001132307 Homo sapiens DNA repair protein RAD51 homolog 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000994365 Homo sapiens Integrin alpha-6 Proteins 0.000 description 1
- 101000634853 Homo sapiens T cell receptor alpha chain constant Proteins 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- WOBHKFSMXKNTIM-UHFFFAOYSA-N Hydroxyethyl methacrylate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCCO WOBHKFSMXKNTIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VSNHCAURESNICA-UHFFFAOYSA-N Hydroxyurea Chemical compound NC(=O)NO VSNHCAURESNICA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010091358 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 102100029098 Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase Human genes 0.000 description 1
- IMQLKJBTEOYOSI-GPIVLXJGSA-N Inositol-hexakisphosphate Chemical compound OP(O)(=O)O[C@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H]1OP(O)(O)=O IMQLKJBTEOYOSI-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 102100032816 Integrin alpha-6 Human genes 0.000 description 1
- 102100024319 Intestinal-type alkaline phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 101710184243 Intestinal-type alkaline phosphatase Proteins 0.000 description 1
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N Methacrylic acid Chemical compound CC(=C)C(O)=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101001092200 Mus musculus RNA binding protein fox-1 homolog 3 Proteins 0.000 description 1
- VQAYFKKCNSOZKM-IOSLPCCCSA-N N(6)-methyladenosine Chemical compound C1=NC=2C(NC)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O VQAYFKKCNSOZKM-IOSLPCCCSA-N 0.000 description 1
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VQAYFKKCNSOZKM-UHFFFAOYSA-N NSC 29409 Natural products C1=NC=2C(NC)=NC=NC=2N1C1OC(CO)C(O)C1O VQAYFKKCNSOZKM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000009869 Neu-Laxova syndrome Diseases 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108091081548 Palindromic sequence Proteins 0.000 description 1
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 102100024616 Platelet endothelial cell adhesion molecule Human genes 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 101710124239 Poly(A) polymerase Proteins 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 1
- 229920001710 Polyorthoester Polymers 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 102220554418 Protein dispatched homolog 1_D10A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 241000589615 Pseudomonas syringae Species 0.000 description 1
- 229930185560 Pseudouridine Natural products 0.000 description 1
- PTJWIQPHWPFNBW-UHFFFAOYSA-N Pseudouridine C Natural products OC1C(O)C(CO)OC1C1=CNC(=O)NC1=O PTJWIQPHWPFNBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N Selenium Chemical compound [Se] BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001963 Synthetic biodegradable polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000033540 T cell apoptotic process Effects 0.000 description 1
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000002903 Thalassemia Diseases 0.000 description 1
- 108091046915 Threose nucleic acid Proteins 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 101800005109 Triakontatetraneuropeptide Proteins 0.000 description 1
- XTXRWKRVRITETP-UHFFFAOYSA-N Vinyl acetate Chemical compound CC(=O)OC=C XTXRWKRVRITETP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- FJWGYAHXMCUOOM-QHOUIDNNSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-2-[(2r,3r,4s,5r,6s)-4,5-dinitrooxy-2-(nitrooxymethyl)-6-[(2r,3r,4s,5r,6s)-4,5,6-trinitrooxy-2-(nitrooxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxan-3-yl]oxy-3,5-dinitrooxy-6-(nitrooxymethyl)oxan-4-yl] nitrate Chemical compound O([C@@H]1O[C@@H]([C@H]([C@H](O[N+]([O-])=O)[C@H]1O[N+]([O-])=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[N+]([O-])=O)[C@H](O[N+]([O-])=O)[C@@H](CO[N+]([O-])=O)O1)O[N+]([O-])=O)CO[N+](=O)[O-])[C@@H]1[C@@H](CO[N+]([O-])=O)O[C@@H](O[N+]([O-])=O)[C@H](O[N+]([O-])=O)[C@H]1O[N+]([O-])=O FJWGYAHXMCUOOM-QHOUIDNNSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N acrylic acid group Chemical group C(C=C)(=O)O NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005006 adaptive immune system Anatomy 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 description 1
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 description 1
- 210000002821 alveolar epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000002431 aminoalkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002266 amputation Methods 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 210000003030 auditory receptor cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000270 basal cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 108010051210 beta-Fructofuranosidase Proteins 0.000 description 1
- WGDUUQDYDIIBKT-UHFFFAOYSA-N beta-Pseudouridine Natural products OC1OC(CN2C=CC(=O)NC2=O)C(O)C1O WGDUUQDYDIIBKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002459 blastocyst Anatomy 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004271 bone marrow stromal cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000621 bronchi Anatomy 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 229920006317 cationic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000007248 cellular mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 1
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 1
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002433 cyclopentenyl group Chemical group C1(=CCCC1)* 0.000 description 1
- 150000001945 cysteines Chemical class 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 229920006237 degradable polymer Polymers 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000368 destabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000000113 differential scanning calorimetry Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 230000012361 double-strand break repair Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 210000002308 embryonic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008393 encapsulating agent Substances 0.000 description 1
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000004129 fatty acid metabolism Effects 0.000 description 1
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 238000003500 gene array Methods 0.000 description 1
- 238000003209 gene knockout Methods 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 102000018146 globin Human genes 0.000 description 1
- 108060003196 globin Proteins 0.000 description 1
- 230000026781 habituation Effects 0.000 description 1
- 210000002768 hair cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002363 herbicidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 description 1
- 208000020451 hereditary persistence of fetal hemoglobin Diseases 0.000 description 1
- 125000004474 heteroalkylene group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002768 hydroxyalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229960001330 hydroxycarbamide Drugs 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 210000000067 inner hair cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008011 inorganic excipient Substances 0.000 description 1
- 210000004966 intestinal stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 210000004153 islets of langerhan Anatomy 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000001806 memory b lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 230000025608 mitochondrion localization Effects 0.000 description 1
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001483 mobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 125000004573 morpholin-4-yl group Chemical group N1(CCOCC1)* 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 239000008012 organic excipient Substances 0.000 description 1
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 1
- AHHWIHXENZJRFG-UHFFFAOYSA-N oxetane Chemical compound C1COC1 AHHWIHXENZJRFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004738 parenchymal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L phosphoramidate Chemical group NP([O-])([O-])=O PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000002949 phytic acid Nutrition 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 229920001308 poly(aminoacid) Polymers 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001610 polycaprolactone Polymers 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 229920000570 polyether Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000193 polymethacrylate Polymers 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 229920002635 polyurethane Polymers 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 210000003240 portal vein Anatomy 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000004845 protein aggregation Effects 0.000 description 1
- 230000009145 protein modification Effects 0.000 description 1
- PTJWIQPHWPFNBW-GBNDHIKLSA-N pseudouridine Chemical group O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1C1=CNC(=O)NC1=O PTJWIQPHWPFNBW-GBNDHIKLSA-N 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 1
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 description 1
- 210000000844 retinal pigment epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000006049 ring expansion reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007142 ring opening reaction Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 238000007480 sanger sequencing Methods 0.000 description 1
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 1
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000001057 smooth muscle myoblast Anatomy 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002325 somatostatin-secreting cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 108010031092 starch-branching enzyme II Proteins 0.000 description 1
- 210000004500 stellate cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011476 stem cell transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 210000001585 trabecular meshwork Anatomy 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- NMEHNETUFHBYEG-IHKSMFQHSA-N tttn Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 NMEHNETUFHBYEG-IHKSMFQHSA-N 0.000 description 1
- HDZZVAMISRMYHH-KCGFPETGSA-N tubercidin Chemical compound C1=CC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O HDZZVAMISRMYHH-KCGFPETGSA-N 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001644 umbilical artery Anatomy 0.000 description 1
- 210000003606 umbilical vein Anatomy 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- A61K39/464411—Immunoglobulin superfamily
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
- C12N5/0637—Immunosuppressive T lymphocytes, e.g. regulatory T cells or Treg
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0647—Haematopoietic stem cells; Uncommitted or multipotent progenitors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
- C12N9/22—Ribonucleases RNAses, DNAses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/44—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving esterase
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K2035/124—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells the cells being hematopoietic, bone marrow derived or blood cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/20—Type of nucleic acid involving clustered regularly interspaced short palindromic repeats [CRISPRs]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2800/00—Nucleic acids vectors
- C12N2800/80—Vectors containing sites for inducing double-stranded breaks, e.g. meganuclease restriction sites
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Virology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
本出願は、それぞれの優先権が主張され、そのそれぞれの内容が全体として本明細書に援用される、2017年12月11日に出願された米国仮特許出願第62/597,118号、2018年1月29日に出願された米国仮特許出願第62/623,501号、2018年4月30日に出願された米国仮特許出願第62/664,905号及び2018年10月16日に出願された米国仮特許出願第62/746,494号に対する優先権を主張する。
本明細書には、2018年12月11日にEFSを介して提出された配列リストが参照によりさらに組み込まれる。37C.F.R.§1.52(e)(5)に従い、0841770210SL.txtとして同定される配列リストのテキストファイルは、444,032バイトであり、2018年12月11日に作成された。配列表の内容全体は、本明細書に参照により援用される。配列リストは、本明細書の範囲を超えて拡張されず、したがって新しい事項は含まない。
別段の指定がない限り、以下の各用語は、このセクションでそれに関連した意味を有する。
一態様では、本開示は、修飾Cpf1タンパク質と、標的核酸配列を編集し、且つ/又は標的核酸配列の発現を調整するためのCRISPR/Cpf1関連方法におけるそれらの使用とに関する。
特定の実施形態では、修飾Cpf1タンパク質は、核局在化シグナル(NLS)(本明細書では「Cpf1NLS変異型」とも称される)を含む。例えば、限定されるものではないが、本明細書で開示される方法及び組成物に関連して有用なNLS配列は、細胞核へのタンパク質移入を促進できるアミノ酸配列を含むであろう。本明細書で開示される方法及び組成物に関連して有用なNLS配列は、当該技術分野で公知である。このようなNLS配列の非限定的例としては、アミノ酸配列:KRPAATKKAGQAKKKK(配列番号1)を有するヌクレオプラスミンNLS及びアミノ酸配列PKKKRKV(配列番号2)を有するシミアンウイルス40「SV40」NLSが挙げられる。
ジスルフィド結合形成は、タンパク質凝集を促進することが知られている。したがって、このようなジスルフィド結合形成の可能性を低減するために改変させ得るシステインを同定する努力の一環として、Cpf1結晶構造及び既知のCpf1一次アミノ酸配列が分析された(図13)。
本開示は、例えば、βサラセミア及び鎌状赤血球症などの異常ヘモグロビン症治療するために標的核酸配列を編集するためのCRISPR/Cpf1関連方法をさらに提供する。例えば、限定されるものではないが、CRISPR/Cpf1関連方法は、胎児型ヘモグロビン(HbF)の発現を調節するCD34+細胞における1つ又は複数の遺伝子の破壊をもたらす。
がんを治療するために提案された1つの治療ストラテジーは、養子T細胞移入を伴う。遺伝子改変されたT細胞のがん治療薬としての有効性を制限する要因としては、(1)例えば、養子免疫伝達に続くT細胞の限定的増殖などのT細胞増殖;(2)例えば、腫瘍環境内因子によるT細胞アポトーシス誘導などのT細胞生存;及び(3)例えば、宿主免疫細胞及びがん細胞によって分泌される阻害因子による、細胞毒性T細胞機能の阻害などのT細胞機能が挙げられる。有効性を高める1つのストラテジーは、遺伝子編集を用いて、T細胞の増殖、生存及び/又は機能に関連するT細胞遺伝子を修飾又は破壊することである。例えば、限定されるものではないが、例えば、Cpf1 RNA誘導ヌクレアーゼなどのRNA誘導ヌクレアーゼは、T細胞遺伝子の発現に影響を与える特定の配列を標的とし得る。
標的核酸配列のCRISPR/Cpf1媒介編集及び/又は標的核酸配列の発現の調整は、例えば、「一致部位」標的核酸配列などの標的核酸配列に関して、対照CRISPR/RNA誘導ヌクレアーゼ編集システムと、試験CRISPR/Cpf1編集システムの活性とを比較することによって評価され得る。
本開示は、標的部位におけるより高度な編集をもたらす電気穿孔パルスコードをさらに提供する。実施例に示されるように、電気穿孔パルスコードのスクリーニングは、本開示のCpf1 RNA誘導ヌクレアーゼによる、より高度な効率編集をもたらすコードの同定を可能にする。例えば、限定されるものではないが、図18は、一連の特定のパルスコード及び溶液を用いた、HUDEPにおけるAsCpf1のヌクレオフェクションスクリーニングを示す。同様に、図19は、HSCにおけるAsCpf1の例示的ヌクレオフェクションスクリーニングを示す。特定の実施形態では、パルスコードCA−137及びCA−138を使用して、Cpf1 RNA誘導ヌクレアーゼによるより高効率の編集が促進され得る。例えば、限定されるものではないが、図20及び図23Cは、CA−137パルスコードの効率の向上を立証する。
本開示は、開示されたゲノム編集方法使用して編集されている細胞を投与することにより、疾患及び/又は障害を治療する方法をさらに提供する。特定の実施形態では、本開示は、対象の1つ又は複数の細胞を修飾することにより、対象を治療する方法に関する。特定の実施形態では、1つ又は複数の細胞がエクスビボで修飾され、次に対象に投与される。例えば、限定されるものではないが、対象を治療するための方法は、対象からの細胞を、例えばエクスビボで、(a)標的核酸の標的配列に相補的なgRNA分子;及び(b)本明細書で開示されるCpf1 RNA誘導ヌクレアーゼに接触させることを含み得る。特定の実施形態では、本開示は、本開示のCRISPR/Cpf1システムによって修飾された1つ又は複数の細胞を対象に投与することを含む、対象を治療するための方法を提供する。特定の実施形態では、1つ又は複数の細胞がドナーから得られ、本開示のCRISPR/Cpf1システムを使用して遺伝子改変され、次に対象に投与される。
「ゲノム編集システム」又は「遺伝子編集システム」という用語は、RNA誘導DNA編集活性を有する任意のシステムを指す。本開示のゲノム編集システムは、天然に存在するCRISPRシステムから適合された、ガイドRNA(gRNA)及びRNA誘導ヌクレアーゼの少なくとも2つの構成要素を含む。これらの2つの構成要素は、特定の核酸配列と結合して、例えば1つ又は複数の一本鎖切断(SSB又はニック)、二重鎖切断(DSC)及び/又は点変異を生成することにより、核酸配列中又はその周囲のDNAを編集できる複合体を形成する。
「ガイドRNA」及び「gRNA」という用語は、細胞内のゲノム又はエピソーム配列などの標的配列に対する、Cpf1などのRNA誘導ヌクレアーゼの特定の結合(又は「標的化」)を促進する、任意の核酸を指す。gRNAは、単分子(単一のRNA分子を含むか又はキメラとも称される)又はモジュール型(例えば、二重化によって通常互いに結合する、crRNA及びtracrRNAなどの2つ以上、典型的には2つの別々のRNA分子を含む)であり得る。gRNA及びそれらの構成部分は、例えば、Briner et al.(Molecular Cell56(2),333−339,October 23,2014(Briner)、参照により援用される)及びCotta−Ramusinoなどの文献にわたり記載される。
標的配列の選択及び検証並びにオフターゲット分析の方法は、例えば、Mali;Hsu;Fu et al.,2014 Nat biotechnol 32(3):279−84,Heigwer etal.,2014 Nat methods 11(2):122−3;Bae et al.(2014)Bioinformatics 30(10):1473−5;及びXiao A et al.(2014)Bioinformatics 30(8):1180−1182に以前記載されている。これらの参考文献のそれぞれは、参照により本明細書に援用される。非限定的例として、gRNA設計は、例えば、ゲノム全体にわたる総オフターゲット活性を最小化するために、使用者の標的配列に対応する潜在的な標的配列の選択を最適化するためのソフトウェアツールの使用を伴い得る。オフターゲット活性は切断に限定されないものの、各オフターゲット配列における切断効率は、例えば、実験的に導出された重み付けスキームを用いて予測され得る。これらの及び他のガイド選択方法は、Maeder及びCotta−Ramusinoらに詳細に記載されている。
gRNAの活性、安定性又は他の特徴は、特定の修飾を組み込むことによって改変され得る。一例として、一過性に発現又は送達された核酸は、例えば、細胞ヌクレアーゼによる分解を起こし易くあり得る。したがって、本明細書に記載のgRNAは、ヌクレアーゼに対して安定性を導入する、1つ又は複数の修飾されたヌクレオシド又はヌクレオチドを含み得る。理論による拘束は望まないが、本明細書に記載の特定の修飾gRNAは、細胞に導入された際に、先天性免疫応答の低下を示し得るとも考えられている。当業者は、外因性核酸、特にウイルス又は細菌起源のものに応答して、例えば哺乳類細胞などの細胞において一般的に観察される特定の細胞応答を承知している。サイトカインの発現及び放出の誘導並びに細胞死を含み得るそのような応答は、本明細書に提示される修飾によって低下し又は完全に排除され得る。
式中、「U」は、未修飾又は修飾ウリジンであり得る。
本開示によるRNA誘導ヌクレアーゼとしては、Cpf1などの天然に存在するクラス2CRISPRヌクレアーゼ並びに例えば変異型などのそれから誘導されるか又はそれから得られる他のヌクレアーゼが挙げられるが、これらに限定されない。RNA誘導ヌクレアーゼは、機能的にも定義され得る。例えば、RNA誘導ヌクレアーゼは、(a)gRNAと相互作用し(例えば、複合体形成し);及び(b)gRNAと一緒に、(i)gRNAの標的化ドメインに相補的な配列、及び任意選択的に(ii)下でより詳細に記載される、「プロトスペーサー隣接モチーフ」又は「PAM」と称される追加的な配列を含むDNAの標的領域と結合し、任意選択的に切断又は修飾するヌクレアーゼとして定義される。以下の実施例が例証するように、たとえ同一PAM特異性又は切断活性を共有する個々のRNA誘導ヌクレアーゼ間に変動が存在し得るとしても、RNA誘導ヌクレアーゼは、広い意味で、それらのPAM特異性及び切断活性によって定義され得る。当業者は、本開示のいくつかの態様が、特定のPAM特異性及び/又は切断活性を有する任意の適切なRNA誘導ヌクレアーゼを使用して実装され得るシステム、方法及び組成物に関することを理解するであろう。この理由から、別段の指定がない限り、RNA誘導ヌクレアーゼという用語は総称として理解されるべきであり、RNA誘導ヌクレアーゼのいかなる特定の型(例えば、Cas9と対比したCpf1)、種(例えば、S.ピオゲネス(S.pyogenes)と対比したS.アウレウス(S.aureus))又はバリエーション(例えば、完全長と対比した短縮型又は分割;天然PAM特異性と対比した操作されたPAM特異性など)にも限定されない。
crRNAと、TTTN PAM配列などの二本鎖(ds)DNA標的と複合体形成したアシダミノコッカス属(Acidaminococcus)種Cpf1の結晶構造が、Yamano et al.(Cell.2016 May 5;165(4):949−962(Yamano)、参照により本明細書に援用される)によって解析されている。Cas9と同様に、Cpf1には、REC(認識)ローブとNUC(ヌクレアーゼ)ローブの2つのローブがある。RECローブはREC1及びREC2ドメインを含み、これらはいかなる既知のタンパク質構造とも類似性がない。その一方で、NUCローブは、3つのRuvCドメイン(RuvC−I、−II及び−III)と1つのBHドメインとを含む。しかし、Cas9とは対照的に、Cpf1 RECローブはHNHドメインを欠いており、既知のタンパク質構造との類似性を欠く他のドメイである、構造的にユニークなPIドメインと、3つのウェッジ(WED)ドメイン(WED−I、−II及び−III)と、ヌクレアーゼ(Nuc)ドメインとを含む。
上述したRNA誘導ヌクレアーゼは、様々な用途に有用であり得る活性及び特性を有するが、当業者は、RNA誘導ヌクレアーゼも場合により修飾されて、切断活性、PAM特異性又は他の構造的若しくは機能的特徴が改変され得ることを認識するであろう。
例えば、Cpf1又はその機能性断片などのRNA誘導ヌクレアーゼをコードする核酸が、本明細書で提供される。RNA誘導ヌクレアーゼをコードする例示的な核酸が、以前記載されている(例えば、Cong 2013;Wang 2013;Mali 2013;Jinek 2012を参照されたい)。
候補RNA誘導ヌクレアーゼ、gRNA及びそれらの複合体は、当該技術分野で公知の標準法によって評価され得る。例えば、Cotta−Ramusinoらを参照されたい。RNP複合体の安定性は、下述される示差走査型蛍光定量法によって評価され得る。
gRNA及びRNA誘導ヌクレアーゼを含むリボ核タンパク質(RNP)複合体の熱安定性は、DSFによって測定され得る。DSF技術は、例えば、gRNAなどの結合RNA分子の添加などの好ましい条件下で増加し得る、タンパク質の熱安定性を測定する。
上述したゲノム編集システムを使用して、本開示の様々な実施形態において、細胞内で又は細胞から得られたDNAの標的領域内で編集する(すなわち修飾する)。特定の編集をするための様々なストラテジーが本明細書に記載され、これらのストラテジーは、一般に所望の修復結果、個々の編集(例えば、SSB又はDSB)の数と位置及びこのような編集の標的部位によって記述される。
上記の例示的なストラテジーは、単一のDSBによって媒介される修復結果に焦点を合わせている一方で、本開示によるゲノム編集システムを使用して、同一遺伝子座又は異なる遺伝子座のいずれかで2つ以上のDSBが生成され得る。複数のDSB又はSSBの形成を含む編集ストラテジーは、例えば、Cotta−Ramusinoらに記載される。本明細書に記載されるように、本開示に包含される方法及び組成物を使用して、例えば2つ以上、3つ以上、4つ以上、5つ以上、6つ以上、7つ以上、8つ以上、9つ以上又は10以上のFAS、BID、CTLA4、PDCD1、CBLB、PTPN6、B2M、TRAC、CIITA及びTRBC遺伝子などの2つ以上のT細胞発現遺伝子を修飾することにより、T細胞の増殖、生存、持続性及び/又は機能に影響を及ぼし得る。
ドナー鋳型設計は、例えば、Cotta−Ramusinoなどの文献に詳細に記載される。一本鎖(ssODN)又は二本鎖(dsODN)であり得るDNAオリゴマードナー鋳型(オリゴデオキシヌクレオチド又はODN)が、DSBのHDRに基づく修復を容易にするために使用され得、それは、標的DNA配列に修飾を導入し、新しい配列を標的配列に挿入するか、又は標的配列を完全に置換するのに特に有用である。
[5’相同性アーム]−−[置換配列]−−[3’相同性アーム]
本開示は、細胞内の標的核酸の切断部位における切断分離事象時に生じる遺伝子編集事象の定量的評価を可能にするように特別に設計されたドナー鋳型を含むゲノム編集システムをさらに提供する。本明細書に記載のゲノム編集システムのドナー鋳型は、DNAオリゴデオキシヌクレオチド(ODN)であり、それは、一本鎖(ssODN)又は二本鎖(dsODN)であり得、二本鎖破断のHDRベースの修復を促進するために使用され得る。ドナー鋳型は、特に、標的DNA配列に修飾を導入するか、標的配列に新規配列を挿入するか、又は標的配列全体を置換するのに有用である。本開示は、カーゴ、1つ又は2つの相同性アーム及び1つ又は複数のプライミング部位を含むドナー鋳型を提供する。ドナー鋳型のプライミング部位は、標的核酸へのドナー鋳型の一部の組み込み頻度が容易に評価及び定量化され得るような様式で空間的に配置される。
一本鎖又は二本鎖を問わず、ドナー鋳型は、一般に、例えば、例えば切断部位などの切断される標的配列内の又はその近傍の(例えば、それを挟むか又はそれに隣接している)標的核酸などのDNAの領域と相同的な1つ又は複数の領域を含む。これらの相同領域は、本明細書では「相同性アーム」と称され、下に概略的に示される。
[5’相同性アーム]−[置換配列]−[3’相同性アーム]
ここで、P1は、第1のプライミング部位であり;H1は、第1の相同性アームであり;Xは、切断部位であり;H2は、第2の相同性アームであり;P2は、第2のプライミング部位であり;ドナー鋳型は、5’から3’方向にA1−−P2’−−N−−A2又はA1−−N−−P1’−−A2を含み、
ここで、A1は、H1と実質的に同一の相同性アームであり;P2’は、P2と実質的に同一のプライミング部位であり;Nは、カーゴであり;P1’は、P1と実質的に同一のプライミング部位であり;A2は、H2と実質的に同一の相同性アームである。特定の実施形態では、標的核酸は、二本鎖である。特定の実施形態では、標的核酸は、第1の鎖及び第2の鎖を含む。別の実施形態では、標的核酸は、一本鎖である。特定の実施形態では、標的核酸は、第1の鎖を含む。
ここで、P1は、第1のプライミング部位であり;H1は、第1の相同性アームであり;Xは、切断部位であり;H2は、第2の相同性アームであり;P2は、第2のプライミング部位であり;ドナー鋳型の第1の鎖は、5’から3’方向にA1−−P2’−−N−−A2又はA1−−N−−P1’−−A2を含み、
ここで、A1は、H1と実質的に同一の相同性アームであり;P2’は、P2と実質的に同一のプライミング部位であり;Nは、カーゴであり;P1’は、P1と実質的に同一のプライミング部位であり;A2は、H2と実質的に同一の相同性アームである。
本明細書に記載のドナー鋳型は、標的核酸内のプライミング部位の配列と実質的に類似するか又はそれと同一であるが、ドナー鋳型内の相同性配列/相同性アームに対して異なる空間的順序又は配向にある配列を有する少なくとも1つのプライミング部位を含む。ドナー鋳型が標的核酸と相同的に組換えされる場合、プライミング部位は、有利には標的核酸に組み込まれ、その結果、組換え事象によって生じる修飾核酸配列の一部の増幅を可能にする。特定の実施形態では、ドナー鋳型は、少なくとも1つのプライミング部位を含む。特定の実施形態では、ドナー鋳型は、第1及び第2のプライミング部位を含む。特定の実施形態では、ドナー鋳型は、3つ以上のプライミング部位を含む。
本明細書に記載の遺伝子編集システムのドナー鋳型は、カーゴ(N)を含む。カーゴは、所望の結果を達成するために必要な任意の長さであり得る。例えば、カーゴ配列は、長さが2500塩基対未満又は2500ヌクレオチド未満であり得る。他の実施形態では、カーゴ配列は、12kb以下であり得る。他の実施形態では、カーゴ配列は、10kb以下であり得る。他の実施形態では、カーゴ配列は、7kb以下であり得る。他の実施形態では、カーゴ配列は、5kb以下であり得る。他の実施形態では、カーゴ配列は、4kb以下であり得る。他の実施形態では、カーゴ配列は、3kb以下であり得る。他の実施形態では、カーゴ配列は、2kb以下であり得る。他の実施形態では、カーゴ配列は、1kb以下であり得る。特定の実施形態では、カーゴは、長さが約5〜10kbであり得る。別の実施形態では、カーゴは、長さが約1〜5kbであり得る。別の実施形態では、カーゴは、長さが約0〜1kbであり得る。例えば、例示的な実施形態では、カーゴは、長さが約1000、900、800、700、600、500、400、300、200又は100塩基対又はヌクレオチドであり得る。他の例示的実施形態では、カーゴは、長さが約100、90、80、70、60、50、40、30、20、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1又は0塩基対又はヌクレオチドであり得る。当業者は、サイズ制限がある送達ビヒクル(例えば、アデノ随伴ウイルス(AAV)、アデノウイルス、レンチウイルス、組み込み欠損レンチウイルス(IDLV)又は単純ヘルペスウイルス(HSV)送達ビヒクルなどのウイルス送達ビヒクル)を使用してドナー鋳型を送達する際、カーゴを含めたドナー鋳型のサイズが送達システムのサイズ制限を超えてはならないことを容易に確認するであろう。
特定の実施形態では、ドナー鋳型は、任意選択的に1つ又は複数のスタッファー配列を含み得る。一般に、スタッファー配列は、(a)本開示のドナー鋳型の標的部位への標的化組み込み及び本開示の特定の方法によるスタッファー配列を含むアンプリコンの引き続く増幅を促進する(又は阻害しない)が、(b)ドナー鋳型の別の部位への組み込みを推進することを回避するように選択されている異種又はランダムな核酸配列である。スタッファー配列は、例えば、相同性アームA1とプライマー部位P2’との間に配置され、ドナー鋳型配列が標的部位に組み込まれたときに生成されるアンプリコンのサイズが調節され得る。このようなサイズ調節を用いて、一例として、組み込まれた標的及び組み込まれていない標的部位によって生成されるアンプリコンのサイズの平衡が保たれ、その結果、各アンプリコンが単一のPCR反応で生成される効率の平衡が保たれ;続いて、これは、反応混合物中の2つのアンプリコンの相対存在量に基づいて、標的化組み込みの定量的評価を容易にし得る。
ここで、S1は、第1のスタッファー配列であり、S2は、第2のスタッファー配列である。
ここで、S1は、第1のスタッファー配列であり、S2は、第2のスタッファー配列である。
本開示によるゲノム編集システムを使用して、細胞が操作又は修飾され、例えば標的核酸が編集又は修飾され得る。操作は、様々な実施形態において、インビボ又はエクスビボで行われ得る。
上で考察されるように、本開示のゲノム編集システムは、任意の適切な方法で実装され得、これは、限定されるものではないが、RNA誘導ヌクレアーゼ、gRNA、任意のドナー鋳型核酸をはじめとするシステムの構成要素が、ゲノム編集システムの形質導入、発現又は導入をもたらすような、且つ/又は細胞、組織又は対象において所望の修復結果を引き起こすような、任意の適切な形態又は形態の組み合わせで、送達、配合又は投与され得ることを意味する。ゲノム編集システム実装のいくつかの非限定的例が、表10及び11に記載される。しかし、当業者は、これらの一覧が包括的でなく、他の実装が可能であることを理解するであろう。特に表10を参照すると、この表は、単一のgRNA及び任意のドナー鋳型を含むゲノム編集システムのいくつかの例示的実装を列挙する。しかし、本開示によるゲノム編集システムには、複数のgRNA、複数のRNA誘導ヌクレアーゼ及びタンパク質などの他の構成要素が組み込まれ得、当業者には、表に示された原理に基づいて様々な実装が明らかになるであろう。表中、[N/A]は、ゲノム編集システムが、示された構成要素を含まないことを示す。
本開示によるゲノム編集システムの様々な要素をコードする核酸は、当該技術分野で公知の方法によって又は本明細書に記載されるようにして、対象に投与され又は細胞内に送達され得る。例えば、RNA誘導ヌクレアーゼをコードするDNA及び/又はgRNAをコードするDNA並びにドナー鋳型核酸は、例えば、ベクター(例えば、ウイルスベクター又は非ウイルスベクター)、非ベクターベースの方法(例えば、裸のDNA又はDNA複合体を使用する)又はそれらの組み合わせによって送達され得る。
RNP(gRNA及びRNA誘導ヌクレアーゼの複合体)及び/又はRNA誘導ヌクレアーゼ及び/又はgRNAをコードするRNAは、そのいくつかがCotta−Ramusinoらに記載される当該技術分野で公知の方法により、細胞に送達されるか又は対象に投与され得る。インビトロでは、RNA誘導ヌクレアーゼをコードし及び/又はgRNAをコードするRNAが、例えば、マイクロインジェクション、電気穿孔、一過性細胞圧縮又は圧搾によって送達され得る(例えば、Lee 2012を参照されたい)。脂質媒介トランスフェクション、ペプチド媒介送達、GalNAc又は他のコンジュゲート媒介送達及びそれらの組み合わせもインビトロ及びインビボ送達のために使用され得る。
ゲノム編集システム又はそのようなシステムを用いて修飾又は操作された細胞は、局所的又は全身的を問わず、任意の適切な様式又は経路によって対象に投与され得る。全身性の投与法としては、経口及び非経口経路が挙げられる。非経口経路としては、例として、静脈内、骨髄内、動脈内、筋肉内、皮内、皮下、鼻腔内及び腹腔内経路が挙げられる。全身投与される構成要素は、例えば、HSC、造血幹/前駆細胞又は赤血球前駆体若しくは前駆細胞を標的化するように修飾又は配合され得る。
当業者は、本開示に鑑みて、本明細書で開示されるゲノム編集システムの異なる構成要素が、一緒に又は別々に且つ同時に又は非同時に送達され得ることを理解するであろう。ゲノム編集システム構成要素の別々の及び/又は非同期の送達は、ゲノム編集システムの機能に対する時間的又は空間的制御を提供し、それらの活性によって引き起こされる特定の効果を制限するために、特に望ましくあり得る。
A.特定の非限定的な実施形態では、本明細書で開示された主題は、核局在化シグナル(NLS)を含む、プレボテラ属(Prevotella)及びフランシセラ属(Francisella)1(Cpf1)RNA誘導ヌクレアーゼからの単離されたCRISPRを提供する。
ガイドRNA(gRNA);及び
A〜A8及びB〜B8のいずれかの前述のCpf1 RNA誘導ヌクレアーゼ又は前述のCの核酸によってコードされるCpf1 RNA誘導ヌクレアーゼ
を含むゲノム編集システムを提供する。
関心のある標的配列と相補的なgRNA;及び
A〜A8及びB〜B8のいずれかの前述のCpf1 RNA誘導ヌクレアーゼ又は前述のCの核酸によってコードされるCpf1 RNA誘導ヌクレアーゼ
に接触させることを含み、前記Cpf1 RNA誘導ヌクレアーゼは、関心のある標的配列を修飾する、方法を提供する。
標的核酸の標的配列に相補的なgRNA;及び
A〜A8及びB〜B8のいずれかの前述のCpf1 RNA誘導ヌクレアーゼ
に接触させることを含む方法を提供する。
(a)A〜A8及びB〜B8のいずれかの前述のCpf1 RNA誘導ヌクレアーゼ、
(b)標的核酸の標的配列に相補的なgRNA;及び
(c)標的核酸の1つ又は複数の修正から利益を得るであろう対象からの細胞
を含む反応液混合物を提供する。
(a)A〜A8及びB〜B8のいずれか1つの前述のCpf1 RNA誘導ヌクレアーゼ又はCpf1 RNA誘導ヌクレアーゼをコードする核酸組成物、及び
(b)標的核酸の標的配列又はgRNAの核酸組成物に相補的なgRNA
を含むキットを提供する。
(a)一致部位標的核酸配列を含む標的核酸配列の編集及び/又は発現の調整に関して、試験Cpf1 RNA誘導ヌクレアーゼの活性を判定すること;
(b)一致部位標的核酸配列を含む標的核酸配列の編集及び/又は発現の調整に関して、試験Cpf1 RNA誘導ヌクレアーゼの活性を対照RNA誘導ヌクレアーゼの活性と比較すること
を含む方法を提供する。
(a)同一アミノ酸配列を有し;
(b)異なる細胞型で活性についてアッセイされる、前述のJの方法。
(a)同一アミノ酸配列を有し;
(b)異なる調合物中の活性についてアッセイされる、前述のJの方法。
(a)同一アミノ酸配列を有し;
(b)異なる濃度における活性についてアッセイされる、前述のJの方法。
(a)同一アミノ酸配列を有し;
(b)異なるプロセスを介して製造された後に活性についてアッセイされる、前述のJの方法。
(a)同一アミノ酸配列を有し;
(b)異なるプロセスを介して細胞に送達された後に活性についてアッセイされる、前述のJの方法。
(a)一致部位標的核酸配列を含む標的核酸配列の編集及び/又は発現の調整に関して、試験Cpf1 RNA誘導ヌクレアーゼの活性を判定すること;
(b)一致部位標的核酸配列を含む標的核酸配列の編集及び/又は発現の調整に関して、試験Cpf1 RNA誘導ヌクレアーゼの活性を対照RNA誘導ヌクレアーゼの活性と比較すること
を含むアッセイを提供する。
(a)同一アミノ酸配列を有し;
(b)異なる細胞型で活性についてアッセイされる、前述のM1のアッセイ。
(a)同一アミノ酸配列を有し;
(b)異なる調合物中の活性についてアッセイされる、前述のM2のアッセイ。
(a)同一アミノ酸配列を有し;
(b)異なる濃度における活性についてアッセイされる、前述のMのアッセイ。
(a)同一アミノ酸配列を有し;
(b)異なるプロセスを介して製造された後に活性についてアッセイされる、前述のMのアッセイ。
(a)同一アミノ酸配列を有し;
(b)異なるプロセスを介して細胞に送達された後に活性についてアッセイされる、前述のMのアッセイ。
第1の遺伝子の標的配列に相補的な第1の標的化ドメインを含む第1のガイドRNA(gRNA);
第2の遺伝子の標的配列に相補的な第2の標的化ドメインを含む第2のgRNA分子;及び
A〜A8及びB〜B8のいずれかの前述のCpf1 RNA誘導ヌクレアーゼ又は前述のCの核酸によってコードされるCpf1 RNA誘導ヌクレアーゼ
を含む多重ゲノム編集システムを提供する。
第1の遺伝子の標的配列に相補的な第1の標的化ドメインを含む第1の(gRNA);
第2の遺伝子の標的配列に相補的な第2の標的化ドメインを含む第2のgRNA分子;及び
A〜A8及びB〜B8のいずれかの前述のCpf1 RNA誘導ヌクレアーゼ又は前述のCの核酸によってコードされるCpf1 RNA誘導ヌクレアーゼ
に接触させることを含み、前記Cpf1 RNA誘導ヌクレアーゼは、第1の遺伝子及び第2の遺伝子を修飾する、方法を提供する。
標的核酸配列のCRISPR/Cpf1媒介編集及び/又は標的核酸配列の発現の調整は、例えば、「一致部位」標的核酸配列などの標的核酸配列に関して、対照CRISPR/RNA誘導ヌクレアーゼ編集システムと、試験CRISPR/Cpf1編集システムの活性とを比較することによって評価され得る。
本開示のCpf1 RNA誘導ヌクレアーゼによるより高効率の編集可能にする電気穿孔パルスコードを同定するために、可能なパルスコードのスクリーニングを実施した。図18は、HUDEPにおけるAsCpf1のヌクレオフェクションスクリーニングを示す。用量は、2:1のガイド:タンパク質で一致部位5ガイドRNAを使用して2.2μM AsCpf1 RNPであった。AsCpf1 WTタンパク質は、<5EU/mLの内毒素レベルを有した。Lonza溶液SE、SF及びSGは、異なるパルスプログラムを使用して、1条件当たり5万個のHUDEPで試験した。溶液SEでのパルスコードCA−137及びCA−138は、最適な編集を実証した。
胎児型ヘモグロビン(HbF)の発現は、転写リプレッサー、BCL11Aの赤血球細胞特異的発現の標的化された破壊を通じて誘導される(Canvers et al.,Nature,527(12):192−197)。遺伝子編集ストラテジーを通じてHbF発現を増加させる1つの潜在的なストラテジーは、Cpf1が、BCL11A遺伝子のイントロン2の+58DHS領域にあるBCL11A遺伝子の赤血球特異的エンハンサーのGATA1結合モチーフを破壊するように誘導することである。この例では、BCL11A遺伝子のイントロン2の+58DHS領域にある標的部位のAsCpf1媒介編集を評価した。
ジスルフィド結合形成は、タンパク質凝集を促進することが知られていることから、改変されて、ジスルフィド結合形成の可能性を減少させ得るシステインを同定する努力の一環として、Cpf1結晶構造及び既知のCpf1一次アミノ酸配列を分析した(図13)。Cpf1に存在する8つのシステインのいくつかは、溶媒に曝露されているようであった一方、他のものは、埋没され、他の分子間システインから隔絶されているようであり、したがってジスルフィド結合形成のリスクは、高くなかった(図13)。AlexaFluor 488 C5マレイミド(パーツ番号A10254、ThermoFisher Scientific)によるシステイン標識アッセイを使用して、48時間のインキュベーション後における、野生型及び残基C379がセリンに変異していない変異型と比較した、AsCpf1 C334S C379S C674S中のシステイン残基の有意に低下したアクセス性を実証した(図14)。「AsCpf1システインなし」サンプルは、マレイミド試薬による標識を示さない。C379で変異していない変異型であるAsCpf1 C334S C674Sサンプルは、野生型とほぼ同等の標識を示し、結晶構造内で部分的に曝露しているようであるC379がAlexaFluor 488 C5マレイミド試薬に容易にアクセス可能であることが示唆された。全ての標識反応は、製造業者の推奨事項に従って実施した。簡潔に述べると、これは、H150緩衝液及び10%DMSO中で最低24時間にわたり4°Cでインキュベートされる、10μMのタンパク質を有するAlexaFluor 488 C5マレイミド染料の20倍のモル過剰量を必要とする。
序論
CRISPR−Cpf1(Cas12a)システムは、エクスビボゲノム編集治療において、他のヌクレアーゼに比べて、容易に合成され得るより小さい単一crRNA、野生型タンパク質及び操作されたPAM変異型によってT及びCに富むPAMを標的とする能力及び異なる修復結果をもたらし得る5’ねじれ型カットをはじめとする、いくつかの潜在的な利点を提供し得る。
いくつかの試験Cpf1オルソログからAsCpf1を選択した。初代T細胞におけるAsCpf1スクリーニングは、いくつかの適切な標的部位を産生した。図21及び図25は、TRBC、TRAC及びB2M遺伝子座における、AsCpf1及びそのRR及びRVR PAM変異型によるT細胞治療標的のスクリーニングを示す。図21で試験されたガイドRNAの配列は、表4に提供される。各標的について、パルスコードCA−137及び緩衝液P2を用いてAmaxa nucleofector(Lonza)を使用して、2μLの50μM Cas9又はCpf1 TRACガイド(2:1のタンパク質:ガイド比率)の最終濃度4.4μMで50万個のT細胞を電気穿孔した。タンパク質のノックアウト百分率は、フローサイトメトリーによって測定した。予備スクリーニングで、約30%のgRNAが50%を超える編集を示し、これは、一般に観察されたSpCas9ヒット率と同レベルであり、Cpf1が、重要な治療遺伝子座又は複数の治療遺伝子座において遺患者のT細胞を遺伝子編集するために潜在的に使用され得ることが示された。図21、図25及び図28に概説された結果は、4つの同種異系T細胞標的(TRBC、TRAC、B2M及びCIITA)上のT細胞における、AsCpf1 WT、RR及びRVRの高い編集効率を示し、これは、図26に要約される。特に、37〜43%のガイドが>50%の編集を与え、ヒットに分類される。
T細胞におけるCIITAのノックアウトが主要組織適合性複合体クラスII(MHC II)受容体の発現に及ぼす影響を判定するために、CIITA遺伝子のエクソンを標的とするように操作されたRNPで細胞を形質移入した。この遺伝子は、MHC II受容体の表面発現に関与している。エクソン中のインデルは、CIITAを不活性化するトランケーションをもたらし、T細胞表面上のMHC II(HLA DR、DP、DQ)受容体の発現を妨げる。
ガイドRNAの標準プロトスペーサーは、20ヌクレオチド長であり、この配列は、標的DNA配列に相補的である。標的配列に相補的なヌクレオチドの数を増減することにより、ガイドRNAのその標的DNAへの結合エネルギーを変化させ得、形成されたインデルの百分率を変化させ得る。長さを18及び19に調節することで、ガイドB2M−12、B2M−29、TRAC−13(本明細書では「TRAC−13WT」及び「TRAC−1」とも称される)、CIITA−10及びCIITA−45のインデル形成が減少する(図41、図42及び図43)。さらに、図41、図42及び図43に示されるように、長さを20から21、22又は23ヌクレオチドに増やすことは、TRAC−140などのいくつかのガイドに対する最小限の影響を有し、TRAC−13、B2M−12、B2M−29、CIITA−10及びCIITA−45などの他のほとんどものの効力を向上させる。Lonza電気穿孔装置及びパルスコードCA−137を使用して、AsCpf1 WT又はAsCpf1 RRのいずれかにより、T細胞における用量反応の実験を実施した。
図45に示されるように、T細胞受容体α定常(TRAC)遺伝子座を標的とするgRNAのために、例示的なDNAドナー鋳型を設計した。各ドナーは、同一カーゴ(hPGK−GFP−polyA配列)を含有したが、5’及び3’オーバーハング領域をはじめとする異なる相同性アーム配列を有した(表14)。各ドナーの相同性アーム長及びアーム配列は、それぞれ表Y及びZに示される。ドナー1は、両方のドナーの長さを同様に保つためのスタッファー配列(表16)を有する。適切なgRNA及び関連するAAVドナー鋳型を有するAsCpf1RRリボ核タンパク質を用いて、2つのドナー濃度で初代CD4+T細胞を用いて標的化組み込み実験を実施した。実験後、細胞を7日目まで増殖させ、フローサイトメトリーを行って、GFP発現による標的化組み込み率を調べた。
単一RNPの構成要素として又は「ブースター要素」と組み合わせて、CD34+細胞におけるHBGプロモーター領域の編集を増加させ、修飾細胞の赤血球子孫における胎児型グロビン発現を誘導するために使用し得る他のAsCpf1 gRNAを同定するために、HBGプロモーターのいくつかのドメインを標的とするHis−AsCpf1−NLS−NLS(「AsCpf1」);AsCpf1 S542R/K607R(「AsCpf1 RR」);又はAsCpf1 S542R/K548V/N552R(「AsCpf1 RVR」)gRNA配列(表18)を設計した(表19及び図46に列挙される)。AsCpf1 RR及びAsCpf1 RVRは、それぞれTYCV/ACCC/CCCC及びTATV/RATR PAMを認識する操作されたAsCpf1変異型である(Gao 2017)。
全本明細書で言及される全ての文献、特許及び特許出願は、あたかも個々の出版物、特許又は特許出願が、具体的に且つ個別に、参照により援用されると示されるかのように、その内容全体を参照により本明細書に援用する。矛盾する場合、本明細書の任意の定義をはじめとして、本出願が優先される。
当業者は、日常的実験のみを用いて、本明細書に記載される特定の実施形態の多数の均等物を認識するか又は見極めることができるであろう。このような均等物は、以下の特許請求の範囲に包含されることが意図される。
Claims (36)
- プレボテラ属(Prevotella)及びフランシセラ属(Francisella)1(Cpf1)RNA誘導ヌクレアーゼからのCRISPRと、HBG遺伝子配列又はBCL11a遺伝子配列を標的とするgRNA分子とを含むRNP複合体の送達によって生成される、前記HBG遺伝子配列又は前記BCL11a遺伝子配列における修飾を含む単離された細胞。
- HBG遺伝子のシス調節領域の破壊を含む1つ又は複数の細胞を有するCD34+細胞又は造血幹細胞(HSC)集団であって、前記破壊は、CRISPR/Cpf1 RNA誘導ヌクレアーゼと、前記HBG遺伝子の前記シス調節領域を標的とするgRNAとを含むRNP複合体を使用して生成される、CD34+細胞又は造血幹細胞(HSC)集団。
- 前記シス調節領域は、HBG遺伝子プロモーターのCAATボックスを含む、請求項2に記載の細胞集団。
- 異常ヘモグロビン症の症状の治療又は緩和を、それを必要とする対象において行う方法であって、請求項2又は3に記載の細胞集団を前記対象に投与することを含む方法。
- 前記細胞集団は、未修飾細胞集団と比較して胎児型ヘモグロビン発現の発現の増加を有するか、又は投与に引き続いて胎児型ヘモグロビンの増加した発現をもたらし、前記胎児型ヘモグロビンの発現の前記増加は、前記異常ヘモグロビン症の症状を部分的に又は完全に緩和するのに適した量である、請求項4に記載の方法。
- プレボテラ属(Prevotella)及びフランシセラ属(Francisella)1(Cpf1)RNA誘導ヌクレアーゼからのCRISPRと、核酸配列を標的とするgRNA分子とを含む複合体の送達によって生成される、前記核酸配列における修飾を含む単離されたT細胞であって、前記核酸配列は、FAS遺伝子配列の一部、BID遺伝子配列の一部、CTLA4遺伝子配列の一部、PDCD1遺伝子配列の一部、CBLB遺伝子配列の一部、PTPN6遺伝子配列の一部、B2M遺伝子配列の一部、TRAC遺伝子配列の一部、CIITA遺伝子配列の一部、TRBC遺伝子配列の一部及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、単離されたT細胞。
- TRAC、TRBC、B2M及びCIITAからなる群から選択される1つ又は複数の遺伝子の破壊を含むT細胞集団であって、前記破壊は、CRISPR/Cpf1 RNA誘導ヌクレアーゼと、TRAC、TRBC、CIITA及びB2Mからなる群から選択される遺伝子を標的とするgRNAとを含む1つ又は複数のRNP複合体を使用して生成され、前記T細胞集団の少なくとも60%のT細胞は、前記T細胞の表面上において、検出可能なレベルのMHC II受容体、TCR又はB2Mを含まない、T細胞集団。
- 破壊されたTRAC遺伝子座に挿入されたキメラ抗原受容体(CAR)又は操作されたT細胞受容体(eTCR)をさらに含む、請求項7に記載のT細胞集団。
- 前記T細胞は、CD8+T細胞、CD8+ナイーブT細胞、CD4+中央記憶T細胞、CD8+中央記憶T細胞、CD4+エフェクター記憶T細胞、CD4+エフェクター記憶T細胞、CD4+T細胞、CD4+幹細胞記憶T細胞、CD8+幹細胞記憶T細胞、CD4+ヘルパーT細胞、制御性T細胞、細胞毒性T細胞、ナチュラルキラーT細胞、CD4+ナイーブT細胞、TH17CD4+T細胞、TH1CD4+T細胞、TH2CD4+T細胞、TH9CD4+T細胞、CD4+Foxp3+T細胞、CD4+CD25+CD127−T細胞又はCD4+CD25+CD127−Foxp3+T細胞である、請求項6〜8のいずれ一項に記載の単離されたT細胞又はT細胞集団。
- 核局在化シグナル(NLS)を含む、プレボテラ属(Prevotella)及びフランシセラ属(Francisella)1(Cpf1)RNA誘導ヌクレアーゼからの単離されたCRISPRであって、前記Cpf1 RNA誘導ヌクレアーゼは、前記ヌクレアーゼのN末端若しくはその近傍の1つ若しくは複数のNLS配列、前記ヌクレアーゼのC末端若しくはその近傍の1つ若しくは複数のNLS配列又は前記ヌクレアーゼのN末端及びC末端若しくはその近傍の1つ若しくは複数のNLS配列を含む、単離されたCRISPR。
- 前記NLS配列は、ヌクレオプラスミンNLS(nNLS)(配列番号1)及びシミアンウイルス40「SV40」NLS(sNLS)(配列番号2)からなる群から選択される、請求項10に記載の単離されたCpf1 RNA誘導ヌクレアーゼ。
- システインアミノ酸の欠失又は置換を含む、プレボテラ属(Prevotella)及びフランシセラ属(Francisella)1(Cpf1)RNA誘導ヌクレアーゼからの単離されたCRISPRであって、前記Cpf1 RNA誘導ヌクレアーゼは、野生型AsCpf1アミノ酸配列のC65、C205、C334、C379、C608、C674、C1025又はC1248に欠失又は置換を含み、前記置換は、C65S/A、C205S/A、C334S/A、C379S/A、C608S/A、C674S/A及びC1025S/Aからなる群から選択される、単離されたCRISPR。
- 請求項10〜12のいずれか一項に記載のCpf1 RNA誘導ヌクレアーゼをコードする単離された核酸。
- HSC又はT細胞の集団において、関心のある1つ又は複数の標的配列を修飾する方法であって、前記細胞集団を、
(a)前記関心のある標的配列に相補的なgRNA分子;及び
(b)請求項10〜12のいずれか一項に記載のCpf1 RNA誘導ヌクレアーゼ
を含む1つ又は複数のRNP複合体とエクスビボ又はインビトロで接触させることを含み、前記1つ又は複数のRNP複合体は、前記細胞集団内の前記1つ又は複数の関心のある標的配列を修飾する、方法。 - 前記細胞集団内の前記細胞の少なくとも約10%、少なくとも約20%、少なくとも約30%、少なくとも約40%、少なくとも約50%、少なくとも約60%、少なくとも約70%、少なくとも約80%又は少なくとも約90%は、生産的インデルを含む、請求項14に記載の方法。
- 前記標的核酸配列は、B2M遺伝子配列の一部、TRAC遺伝子配列の一部、CIITA遺伝子配列の一部、TRBC遺伝子配列の一部及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項14又は15に記載の方法。
- 細胞集団を対象に投与する方法であって、前記細胞集団は、プレボテラ属(Prevotella)及びフランシセラ属(Francisella)1(Cpf1)RNA誘導ヌクレアーゼからのCRISPRと、HBG遺伝子配列又はBCL11a遺伝子配列を標的とするgRNA分子とを含む複合体の送達によって生成される、前記HBG遺伝子配列又は前記BCL11a遺伝子配列における修飾を含む、方法。
- 前記対象は、異常ヘモグロビン症に罹患している、請求項17に記載の方法。
- 前記細胞集団は、造血幹細胞(HSC)又はヒト臍帯血誘導赤血球前駆(HUDEP)細胞を含む、請求項17又は18に記載の方法。
- T細胞の集団を対象に投与する方法であって、前記細胞集団は、プレボテラ属(Prevotella)及びフランシセラ属(Francisella)1(Cpf1)RNA誘導ヌクレアーゼと、遺伝子を標的とするgRNA分子とを含む複合体の送達によって生成される、TRAC、TRBC、CIITA及びB2Mからなる群から選択される前記遺伝子における修飾を含む、方法。
- 前記対象は、がん又は自己免疫障害に罹患している、請求項20に記載の方法。
- 前記細胞集団内の前記細胞の少なくとも約5%、少なくとも約10%、少なくとも約20%、少なくとも約30%、少なくとも約40%、少なくとも約50%、少なくとも約60%、少なくとも約70%、少なくとも約80%又は少なくとも約90%は、生産的インデルを含む、請求項17〜21のいずれか一項に記載の方法。
- 標的配列に相補的な第1の標的化ドメインを含む、プレボテラ属(Prevotella)及びフランシセラ属(Francisella)1(Cpf1)RNA誘導ヌクレアーゼからのCRISPRのgRNA分子であって、前記標的配列は、HBG遺伝子配列又はBCL11a遺伝子配列であり、前記gRNA分子は、図6、図7、図8、図46及び表19で提供される配列と同一であるか、又は3つ以下のヌクレオチドだけ異なる配列を含む、gRNA分子。
- (a)前記gRNA分子を含むCRISPR/Cpf1システムは、細胞に導入され、インデルは、前記gRNA分子の前記第1の標的化ドメインに相補的な前記標的配列又はその近傍に形成され;及び/又は(b)前記gRNA分子を含むCRISPR/Cpf1システムが細胞に導入されると、欠失は、HBG1プロモーター領域又はHBG2プロモーター領域内における、前記gRNAの第1の標的化ドメインに相補的な配列に生じる、請求項23に記載のgRNA分子。
- 前記gRNA分子を含むCRISPRシステムが細胞集団に導入されると、
(a)胎児型ヘモグロビンの発現は、前記gRNA分子が導入されなかった細胞集団又はその子孫集団における胎児型ヘモグロビンの発現のレベルと比較して前記細胞集団又はその子孫で増加し;及び/又は
(b)異常ヘモグロビン症の症状を部分的に又は完全に緩和するのに適した量で前記胎児型ヘモグロビンの発現の増加をもたらす、請求項23に記載のgRNA分子。 - 請求項23〜25のいずれか一項に記載のgRNA分子を含む組成物。
- プレボテラ属(Prevotella)及びフランシセラ属(Francisella)1(Cpf1)RNA誘導ヌクレアーゼからのCRISPRをさらに含む、請求項26に記載の組成物。
- 請求項27に記載の組成物を含むリボ核タンパク質(RNP)複合体を含む組成物。
- 異常ヘモグロビン症に罹患している対象の治療で使用するための、請求項23〜25のいずれか一項に記載のgRNA分子又は請求項26〜28のいずれか一項に記載の組成物。
- 標的配列に相補的な第1の標的化ドメインを含む、プレボテラ属(Prevotella)及びフランシセラ属(Francisella)1(Cpf1)RNA誘導ヌクレアーゼからのCRISPRのgRNA分子であって、前記標的配列は、B2M遺伝子配列の一部、TRAC遺伝子配列の一部、CIITA遺伝子配列の一部、TRBC遺伝子配列の一部及びそれらの組み合わせからなる群から選択され、前記gRNA分子は、表2〜9で提供される配列と同一であるか、又は3つ以下のヌクレオチドだけ異なる配列を含む、gRNA分子。
- (a)前記gRNA分子を含むCRISPR/Cpf1システムは、細胞に導入され、インデルは、前記gRNA分子の前記第1の標的化ドメインに相補的な前記標的配列又はその近傍に形成され;及び/又は(b)前記gRNA分子を含むCRISPR/Cpf1システムが細胞に導入されると、欠失は、前記B2M遺伝子配列、前記TRAC遺伝子配列、前記CIITA遺伝子配列又は前記TRBC遺伝子配列内における、前記gRNAの第1の標的化ドメインに相補的な配列に生じる、請求項30に記載のgRNA分子。
- 請求項30又は31に記載のgRNA分子を含む組成物。
- プレボテラ属(Prevotella)及びフランシセラ属(Francisella)1(Cpf1)RNA誘導ヌクレアーゼからのCRISPRをさらに含む、請求項32に記載の組成物。
- がんに罹患している対象の治療で使用するための、請求項30若しくは31に記載のgRNA分子又は請求項32若しくは34に記載の組成物。
- ゲノム編集システムであって、
(a)図6、図7、図8、図9、図10、図11、図12、図46並びに表2〜9及び19で提供される配列を含むgRNA分子;及び
(b)請求項10〜12のいずれか一項に記載のCpf1 RNA誘導ヌクレアーゼ
を含む1つ又は複数のRNP複合体を含むゲノム編集システム。 - 試験Cpf1 RNA誘導ヌクレアーゼによる標的核酸配列のCRISPR/Cpf1媒介編集及び/又は標的核酸配列の発現の調整を評価するためのアッセイであって、
(a)一致部位標的核酸配列を含む標的核酸配列の編集及び/又は発現の調整に関して、前記試験Cpf1 RNA誘導ヌクレアーゼの活性を判定すること;
(b)前記一致部位標的核酸配列を含む前記標的核酸配列の前記編集及び/又は発現の調整に関して、前記試験Cpf1 RNA誘導ヌクレアーゼの前記活性を対照RNA誘導ヌクレアーゼの活性と比較すること
を含むアッセイ。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2023193282A JP2024023294A (ja) | 2017-12-11 | 2023-11-13 | 遺伝子編集のためのcpf1関連方法及び組成物 |
Applications Claiming Priority (9)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201762597118P | 2017-12-11 | 2017-12-11 | |
US62/597,118 | 2017-12-11 | ||
US201862623501P | 2018-01-29 | 2018-01-29 | |
US62/623,501 | 2018-01-29 | ||
US201862664905P | 2018-04-30 | 2018-04-30 | |
US62/664,905 | 2018-04-30 | ||
US201862746494P | 2018-10-16 | 2018-10-16 | |
US62/746,494 | 2018-10-16 | ||
PCT/US2018/065032 WO2019118516A1 (en) | 2017-12-11 | 2018-12-11 | Cpf1-related methods and compositions for gene editing |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2023193282A Division JP2024023294A (ja) | 2017-12-11 | 2023-11-13 | 遺伝子編集のためのcpf1関連方法及び組成物 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2021505187A true JP2021505187A (ja) | 2021-02-18 |
Family
ID=65023985
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020531964A Pending JP2021505187A (ja) | 2017-12-11 | 2018-12-11 | 遺伝子編集のためのcpf1関連方法及び組成物 |
JP2023193282A Pending JP2024023294A (ja) | 2017-12-11 | 2023-11-13 | 遺伝子編集のためのcpf1関連方法及び組成物 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2023193282A Pending JP2024023294A (ja) | 2017-12-11 | 2023-11-13 | 遺伝子編集のためのcpf1関連方法及び組成物 |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20200299661A1 (ja) |
EP (1) | EP3724326A1 (ja) |
JP (2) | JP2021505187A (ja) |
KR (1) | KR20200097760A (ja) |
CN (1) | CN111712569A (ja) |
AU (1) | AU2018383712A1 (ja) |
CA (1) | CA3085338A1 (ja) |
MX (1) | MX2020006072A (ja) |
WO (1) | WO2019118516A1 (ja) |
Families Citing this family (35)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2018170184A1 (en) | 2017-03-14 | 2018-09-20 | Editas Medicine, Inc. | Systems and methods for the treatment of hemoglobinopathies |
WO2018209158A2 (en) | 2017-05-10 | 2018-11-15 | Editas Medicine, Inc. | Crispr/rna-guided nuclease systems and methods |
US11866726B2 (en) | 2017-07-14 | 2024-01-09 | Editas Medicine, Inc. | Systems and methods for targeted integration and genome editing and detection thereof using integrated priming sites |
AU2019236209A1 (en) * | 2018-03-14 | 2020-10-01 | Editas Medicine, Inc. | Systems and methods for the treatment of hemoglobinopathies |
WO2020146297A1 (en) * | 2019-01-08 | 2020-07-16 | Integrated Dna Technologies, Inc. | Cas12a mutant genes and polypeptides encoded by same |
CA3128755C (en) | 2019-02-13 | 2024-06-04 | Beam Therapeutics Inc. | Compositions and methods for treating hemoglobinopathies |
EP4047087A4 (en) * | 2019-08-19 | 2023-08-23 | Southern Medical University | CONSTRUCTION AND APPLICATION OF HIGH-FIDELITY CRISPR/ASCPF1 MUTANTS |
US20230081117A1 (en) * | 2019-09-09 | 2023-03-16 | Scribe Therapeutics Inc. | Compositions and methods for use in immunotherapy |
CN114729315A (zh) * | 2019-11-20 | 2022-07-08 | 卡瑟里克斯私人有限公司 | 用于提供具有增强功能的免疫细胞的方法 |
CN111647618A (zh) * | 2020-01-15 | 2020-09-11 | 温州医科大学 | 一种新型基因组编辑工具(Lb2Cas12a-RVR)及其构建方法和应用方法 |
CN113355389B (zh) * | 2020-03-05 | 2022-11-15 | 广西扬翔股份有限公司 | 利用CRISPR/Cas12a***靶向富集核酸目标区域的方法及其应用 |
KR20220005208A (ko) * | 2020-07-06 | 2022-01-13 | 주식회사 지씨셀 | 면역원성이 감소된 신규한 이식용 세포 |
WO2022065867A1 (ko) * | 2020-09-22 | 2022-03-31 | (주)지플러스생명과학 | 변형된 cas12a 단백질 및 이의 용도 |
KR102497690B1 (ko) * | 2020-09-22 | 2023-02-10 | (주)지플러스생명과학 | 신규한 crispr 연관 단백질 및 이의 용도 |
WO2022094313A1 (en) * | 2020-10-30 | 2022-05-05 | Arbor Biotechnologies, Inc. | Compositions comprising an rna guide targeting trac and uses thereof |
AU2021369840A1 (en) * | 2020-10-30 | 2023-06-01 | Arbor Biotechnologies, Inc. | Compositions comprising an rna guide targeting b2m and uses thereof |
KR20230107595A (ko) * | 2020-10-30 | 2023-07-17 | 아버 바이오테크놀로지스, 인크. | Bcl11a를 표적화하는 rna 가이드를 포함하는 조성물 및 이의 용도 |
IL302879A (en) * | 2020-11-11 | 2023-07-01 | Univ Columbia | Multiplex epigenome editing |
US11591381B2 (en) | 2020-11-30 | 2023-02-28 | Crispr Therapeutics Ag | Gene-edited natural killer cells |
US11661459B2 (en) | 2020-12-03 | 2023-05-30 | Century Therapeutics, Inc. | Artificial cell death polypeptide for chimeric antigen receptor and uses thereof |
EP4259783A1 (en) * | 2020-12-11 | 2023-10-18 | Intellia Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for reducing mhc class ii in a cell |
EP4267723A1 (en) * | 2020-12-23 | 2023-11-01 | Intellia Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for genetically modifying ciita in a cell |
EP4271798A1 (en) | 2020-12-30 | 2023-11-08 | CRISPR Therapeutics AG | Compositions and methods for differentiating stem cells into nk cells |
CN112725487A (zh) * | 2021-02-03 | 2021-04-30 | 张国良 | 用于链霉素耐药结核分枝杆菌的核酸快速检测试剂盒及其检测方法 |
US20240200059A1 (en) | 2021-04-09 | 2024-06-20 | Vor Biopharma Inc. | Photocleavable guide rnas and methods of use thereof |
CA3218053A1 (en) * | 2021-05-06 | 2022-11-10 | Artisan Development Labs, Inc. | Modified nucleases |
US20230016422A1 (en) * | 2021-06-23 | 2023-01-19 | Crispr Therapeutics Ag | Engineered cells with improved protection from natural killer cell killing |
WO2023283585A2 (en) | 2021-07-06 | 2023-01-12 | Vor Biopharma Inc. | Inhibitor oligonucleotides and methods of use thereof |
WO2023004411A1 (en) * | 2021-07-23 | 2023-01-26 | Icahn School Of Medicine At Mount Sinai | A method for in vivo gene therapy to cure scd without myeloablative toxicity |
AU2022324093A1 (en) | 2021-08-02 | 2024-02-08 | Vor Biopharma Inc. | Compositions and methods for gene modification |
WO2023049926A2 (en) | 2021-09-27 | 2023-03-30 | Vor Biopharma Inc. | Fusion polypeptides for genetic editing and methods of use thereof |
WO2024073751A1 (en) | 2022-09-29 | 2024-04-04 | Vor Biopharma Inc. | Methods and compositions for gene modification and enrichment |
CN116144631B (zh) * | 2023-01-17 | 2023-09-15 | 华中农业大学 | 耐热型核酸内切酶及其介导的基因编辑*** |
CN116179511B (zh) * | 2023-03-10 | 2023-12-22 | 之江实验室 | Cpf1蛋白在制备用于核酸检测的试剂盒中的应用 |
CN116179513B (zh) * | 2023-03-10 | 2023-12-22 | 之江实验室 | 一种Cpf1蛋白及其在基因编辑中的应用 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2017106657A1 (en) * | 2015-12-18 | 2017-06-22 | The Broad Institute Inc. | Novel crispr enzymes and systems |
WO2017160890A1 (en) * | 2016-03-14 | 2017-09-21 | Editas Medicine, Inc. | Crispr/cas-related methods and compositions for treating beta hemoglobinopathies |
WO2017184768A1 (en) * | 2016-04-19 | 2017-10-26 | The Broad Institute Inc. | Novel crispr enzymes and systems |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5994627A (en) | 1995-03-31 | 1999-11-30 | Common Wealth Scientific And Industrial Research Organisation | Genetic sequences conferring nematode resistance in plants and uses therefor |
GB201013153D0 (en) | 2010-08-04 | 2010-09-22 | Touchlight Genetics Ltd | Primer for production of closed linear DNA |
EP2847338B1 (en) | 2012-05-07 | 2018-09-19 | Sangamo Therapeutics, Inc. | Methods and compositions for nuclease-mediated targeted integration of transgenes |
PT3066201T (pt) | 2013-11-07 | 2018-06-04 | Massachusetts Inst Technology | Métodos e composições relacionadas com crispr com arng reguladores |
EP3116997B1 (en) | 2014-03-10 | 2019-05-15 | Editas Medicine, Inc. | Crispr/cas-related methods and compositions for treating leber's congenital amaurosis 10 (lca10) |
EP3215617B1 (en) | 2014-11-07 | 2024-05-08 | Editas Medicine, Inc. | Systems for improving crispr/cas-mediated genome-editing |
MX2018010484A (es) * | 2016-03-04 | 2019-01-10 | Editas Medicine Inc | Métodos, composiciones y componentes relacionados con crispr-cpf1 para la inmunoterapia contra el cáncer. |
SG10202010261YA (en) * | 2016-04-18 | 2020-11-27 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for treatment of hemoglobinopathies |
WO2017189308A1 (en) * | 2016-04-19 | 2017-11-02 | The Broad Institute Inc. | Novel crispr enzymes and systems |
US11866726B2 (en) * | 2017-07-14 | 2024-01-09 | Editas Medicine, Inc. | Systems and methods for targeted integration and genome editing and detection thereof using integrated priming sites |
-
2018
- 2018-12-11 CN CN201880089010.3A patent/CN111712569A/zh active Pending
- 2018-12-11 AU AU2018383712A patent/AU2018383712A1/en active Pending
- 2018-12-11 KR KR1020207019710A patent/KR20200097760A/ko not_active Application Discontinuation
- 2018-12-11 JP JP2020531964A patent/JP2021505187A/ja active Pending
- 2018-12-11 WO PCT/US2018/065032 patent/WO2019118516A1/en unknown
- 2018-12-11 MX MX2020006072A patent/MX2020006072A/es unknown
- 2018-12-11 EP EP18834094.7A patent/EP3724326A1/en active Pending
- 2018-12-11 CA CA3085338A patent/CA3085338A1/en active Pending
-
2020
- 2020-06-11 US US16/899,302 patent/US20200299661A1/en active Pending
-
2023
- 2023-11-13 JP JP2023193282A patent/JP2024023294A/ja active Pending
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2017106657A1 (en) * | 2015-12-18 | 2017-06-22 | The Broad Institute Inc. | Novel crispr enzymes and systems |
WO2017160890A1 (en) * | 2016-03-14 | 2017-09-21 | Editas Medicine, Inc. | Crispr/cas-related methods and compositions for treating beta hemoglobinopathies |
WO2017184768A1 (en) * | 2016-04-19 | 2017-10-26 | The Broad Institute Inc. | Novel crispr enzymes and systems |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
NATURE MEDICINE (2016) VOL.22, NO.9, PP.987-990 (AUTHOR MANUSCRIPT PP.1-13), JPN6022049685, ISSN: 0004926007 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2024023294A (ja) | 2024-02-21 |
KR20200097760A (ko) | 2020-08-19 |
WO2019118516A1 (en) | 2019-06-20 |
CA3085338A1 (en) | 2019-06-20 |
CN111712569A (zh) | 2020-09-25 |
US20200299661A1 (en) | 2020-09-24 |
MX2020006072A (es) | 2020-08-24 |
EP3724326A1 (en) | 2020-10-21 |
AU2018383712A1 (en) | 2020-07-02 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20200299661A1 (en) | Cpf1-related methods and compositions for gene editing | |
JP7101419B2 (ja) | 内因性t細胞受容体の標的置換 | |
US20240167059A1 (en) | Systems and methods for targeted integration and genome editing and detection thereof using integrated priming sites | |
KR20180031671A (ko) | 이식의 개선을 위한 crispr/cas-관련 방법 및 조성물 | |
US11434505B2 (en) | Universal donor cells | |
US11116797B2 (en) | Universal donor cells | |
US20230127586A1 (en) | Universal donor cells | |
US20200338213A1 (en) | Systems and methods for treating hyper-igm syndrome | |
WO2018200597A1 (en) | Homology directed repair compositions for the treatment of hemoglobinopathies |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20211213 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20221122 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20230215 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20230419 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230522 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20230711 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20231113 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20240122 |
|
A912 | Re-examination (zenchi) completed and case transferred to appeal board |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A912 Effective date: 20240308 |