JP2021195345A - Hypoxia-inducible factor inhibitor - Google Patents

Abstract

To provide a new hypoxia-inducible factor inhibitor.SOLUTION: The hypoxia-inducible factor inhibitor comprises a compound selected from among the compound represented by the formula (5) in the figure and the like, or a salt thereof. A therapeutic or preventive agent for retinal degenerative disease, retinochoroidal pathological angiogenesis disease, cancer, neurodegenerative disease, or autoimmune disease comprises the hypoxia-inducible factor inhibitor.SELECTED DRAWING: None

Description

本発明は、低酸素誘導因子阻害剤に関し、より詳細には、きのこ由来物質を含む低酸素誘導因子阻害剤に関する。本発明は、低酸素誘導因子と関連する疾患、障害又は症状の治療又は予防剤にも関する。 The present invention relates to a hypoxia-inducing factor inhibitor, and more particularly to a hypoxia-inducing factor inhibitor containing a mushroom-derived substance. The present invention also relates to therapeutic or prophylactic agents for diseases, disorders or symptoms associated with hypoxia inducers.

低酸素誘導因子（ｈｙｐｏｘｉａ−ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｆａｃｔｏｒ：ＨＩＦ）は、細胞に対する酸素供給が不足状態に陥った際に誘導される転写因子であり、低酸素適応応答、幹細胞の維持、炎症の制御等の恒常性維持を含む多彩な生理活性を有している。その一方で、ＨＩＦが過剰発現することが、がんの発症・進展に大きく関わっていると考えられている。 Hypoxia-inducible factor (HIF) is a transcription factor that is induced when the oxygen supply to cells becomes insufficient, and is a constancy such as hypoxia adaptive response, maintenance of stem cells, and control of inflammation. It has various physiological activities including maintenance. On the other hand, overexpression of HIF is considered to be greatly involved in the onset and progression of cancer.

そのため、例えば、非特許文献１に開示されるように、ＨＩＦは、がん治療のターゲットとして研究されている。また、がんのみでなく、眼科領域における網膜変性疾患、網脈絡膜病的血管新生疾患等についても、近年、ＨＩＦが発生から病態生理にいたるまで重要な役割を担っていることが明らかになっている。非特許文献２に開示されるように、眼科領域におけるＨＩＦ阻害剤の治療的介入の可能性に関していくつかの報告がある。 Therefore, for example, as disclosed in Non-Patent Document 1, HIF has been studied as a target for cancer treatment. In recent years, it has become clear that HIF plays an important role from the outbreak to the pathophysiology of not only cancer but also retinal degenerative diseases and reticulochoroidal angiogenic diseases in the ophthalmic field. There is. As disclosed in Non-Patent Document 2, there are several reports on the possibility of therapeutic intervention of HIF inhibitors in the field of ophthalmology.

さらに、特許文献１に開示されるように、植物抽出物及び魚類抽出物を含むＨＩＦ阻害剤に関する報告もある。 Further, as disclosed in Patent Document 1, there is also a report on HIF inhibitors including plant extracts and fish extracts.

国際公開第２０１８／０８８５６６号International Publication No. 2018/0885666

Ｏｎｎｉｓ Ｂ，ｅｔ ａｌ．，“Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ＨＩＦ−１ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｔｈｅｒａｐｙ”，Ｊ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｍｅｄ，２００９，１３：２７８０−２７８６Onnis B, et al. , "Development of HIF-1 inhibitor for cancer therapy", J Cell Mol Med, 2009, 13: 2780-2786 Ｖａｄｌａｐａｔｌａ ＲＫ，ｅｔ ａｌ．，“Ｈｙｐｏｘｉａ−ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｆａｃｔｏｒ−１（ＨＩＦ−１）：ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｉｎ ｏｃｕｌａｒ ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅｓ”，Ｃｕｒｒ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ，２０１３，１４：９１９−９３５Vadrapatla RK, et al. , "Hypoxia-industrible factor-1 (HIF-1): a potential target for intervention in ocular neovascular disease", Curr Drag Targets, 2013, 14: 19

本発明は、新たなＨＩＦ阻害剤を提供することを目的とする。 An object of the present invention is to provide a new HIF inhibitor.

本発明者らは、きのこ由来物質に着目したところ、複数の物質でＨＩＦ阻害活性を示すことを見出し、本発明を完成するに至った。本発明は以下の［１］〜［６］を提供する。 When the present inventors focused on mushroom-derived substances, they found that a plurality of substances exhibited HIF inhibitory activity, and completed the present invention. The present invention provides the following [1] to [6].

［１］下記式（１）〜（６）で表される化合物から選択される一以上の化合物又はその塩を含む低酸素誘導因子阻害剤。

［２］ 上記［１］の低酸素誘導因子阻害剤を含む、網膜変性疾患、網脈絡膜病的血管新生疾患、がん、神経変性又は自己免疫疾患の治療又は予防剤。
［３］ 下記式（５）で表される化合物又はその塩。

［４］ 上記［１］の低酸素誘導因子阻害剤を、それを必要とする患者に投与することを含む、網膜変性疾患、網脈絡膜病的血管新生疾患、がん、神経変性又は自己免疫疾患の治療又は予防方法。
［５］ 網膜変性疾患、網脈絡膜病的血管新生疾患、がん、神経変性又は自己免疫疾患の治療又は予防に使用するための、上記［１］の低酸素誘導因子阻害剤。
［６］ 網膜変性疾患、網脈絡膜病的血管新生疾患、がん、神経変性又は自己免疫疾患の治療又は予防剤を製造するための、上記［１］の低酸素誘導因子阻害剤の使用。 [1] A hypoxia-inducing factor inhibitor containing one or more compounds selected from the compounds represented by the following formulas (1) to (6) or salts thereof.

[2] A therapeutic or prophylactic agent for retinal degenerative diseases, reticulochoroidal neovascularization diseases, cancer, neurodegenerative diseases or autoimmune diseases, which comprises the hypoxic inducer inhibitor of the above [1].
[3] A compound represented by the following formula (5) or a salt thereof.

[4] Retinal degenerative disease, reticulochoroidal neovascularization disease, cancer, neurodegenerative disease or autoimmune disease, which comprises administering the hypoxic inducer inhibitor of the above [1] to a patient in need thereof. Treatment or prevention method.
[5] The hypoxic inducer inhibitor according to the above [1] for use in the treatment or prevention of retinal degenerative diseases, reticulochoroidal neovascularization diseases, cancer, neurodegenerative diseases or autoimmune diseases.
[6] Use of the hypoxic inducer inhibitor according to the above [1] for producing a therapeutic or prophylactic agent for retinal degenerative diseases, reticulochoroidal neovascularization diseases, cancer, neurodegenerative diseases or autoimmune diseases.

本発明に係るきのこ由来物質はＨＩＦ阻害活性を示し、ＨＩＦと関連する疾患、障害又は症状の治療又は予防剤として有用である。 The mushroom-derived substance according to the present invention exhibits HIF inhibitory activity and is useful as a therapeutic or prophylactic agent for diseases, disorders or symptoms related to HIF.

ＲＨ−３Ｔ３を用いたアッセイの結果を示すグラフである。It is a graph which shows the result of the assay using RH-3T3. ＲＨ−６６１Ｗを用いたアッセイの結果を示すグラフである。It is a graph which shows the result of the assay using RH-661W. ＲＨ−ＡＲＰＥ１９を用いたアッセイの結果を示すグラフである。It is a graph which shows the result of the assay using RH-ARPE19. ＲＨ−３Ｔ３を用いたアッセイの結果を示すグラフである。It is a graph which shows the result of the assay using RH-3T3. ＲＨ−６６１Ｗを用いたアッセイの結果を示すグラフである。It is a graph which shows the result of the assay using RH-661W. ＲＨ−ＡＲＰＥ１９を用いたアッセイの結果を示すグラフである。It is a graph which shows the result of the assay using RH-ARPE19. 酸素誘導網膜症（ＯＩＲ）モデルマウスによるアッセイの結果を示すグラフである。It is a graph which shows the result of the assay by the oxygen-induced retinopathy (OIR) model mouse. ＫｉｎａＴ−８の^１Ｈ−ＮＭＲ及び^１３Ｃ−ＮＭＲを示す。 ¹ H-NMR and ¹³ C-NMR of KinaT-8 are shown.

＜定義＞
本明細書において、「ＨＩＦ」とは、細胞に対する酸素供給が不足状態に陥った際に誘導されるタンパク質であり、転写因子として機能するものである。ＨＩＦは数種類存在するが、特に言及しない限り、本明細書ではそれらをまとめてＨＩＦとして取り扱う。ＨＩＦ−αにはＨＩＦ−１α、ＨＩＦ−２α及びＨＩＦ−３αが存在するが、これらはいずれも細胞内に構成的に発現しているＨＩＦ−１βとヘテロ二量体と結合する能力を持つ。ＨＩＦ−１αは正常酸素圧下でも産生はされるが、タンパク質分解酵素複合体である２６Ｓプロテアソームにより分解されるため機能しないとされている。ＨＩＦは任意の動物のものであり得るが、好ましくは哺乳動物のものであり得、より好ましくは霊長類（ヒトであり得る）のものであり得る。 <Definition>
As used herein, the term "HIF" is a protein that is induced when the oxygen supply to cells becomes insufficient and functions as a transcription factor. There are several types of HIF, but unless otherwise specified, they are collectively referred to as HIF in the present specification. HIF-α contains HIF-1α, HIF-2α and HIF-3α, all of which have the ability to bind to HIF-1β constitutively expressed in cells and heterodimers. Although HIF-1α is produced under normal oxygen pressure, it is said that it does not function because it is degraded by the 26S proteasome, which is a proteolytic enzyme complex. The HIF can be of any animal, but preferably of a mammal, more preferably of a primate (which can be human).

本明細書において、「ＨＩＦ阻害」とは、ＨＩＦによる転写制御を阻害することを指す。 As used herein, "HIF inhibition" refers to inhibiting transcriptional regulation by HIF.

本明細書において、「ＨＩＦ阻害剤」とは、ＨＩＦを阻害し得る任意の因子を指す。 As used herein, the term "HIF inhibitor" refers to any factor that can inhibit HIF.

本明細書において、「ＨＩＦと関連する疾患、障害又は症状」とは、ＨＩＦと関連する任意の疾患、障害又は症状をいい、具体的には、網膜変性疾患、網脈絡膜病的血管新生疾患、がん、神経変性、自己免疫疾患、糖尿病、慢性心疾患等を挙げることができる。 As used herein, the term "HIF-related disease, disorder or symptom" refers to any disease, disorder or symptom related to HIF, specifically, retinal degenerative disease, reticulochopathic neovascularization disease, etc. Cancer, neurodegeneration, autoimmune disease, diabetes, chronic heart disease and the like can be mentioned.

本明細書において、「有効成分」とは、ＨＩＦと関連する疾患、障害又は症状の治療又は予防効果を得るために必要な量で含有される成分を指し、効果が所望のレベル未満にまで損なわれない限りにおいて、他の成分も含有されてよい。また、本明細書における治療又は予防剤は、本明細書に記載される特定の物質そのものを治療又は予防剤としてもよいが、製剤化されたものであってもよい。また、治療又は予防剤の投与経路は、経口又は非経口のいずれであってもよく、治療又は予防剤の形態等に応じて適宜設定することができる。 As used herein, the term "active ingredient" refers to an ingredient contained in an amount necessary to obtain a therapeutic or preventive effect on a disease, disorder or symptom associated with HIF, and the effect is impaired to less than a desired level. As long as it is not, other components may be contained. Further, as the therapeutic or prophylactic agent in the present specification, the specific substance itself described in the present specification may be used as the therapeutic or prophylactic agent, but it may be a pharmaceutical product. The route of administration of the therapeutic or prophylactic agent may be oral or parenteral, and may be appropriately set according to the form of the therapeutic or prophylactic agent.

「患者」または「被験体」は、ヒト又はヒトを除く哺乳動物（例えば、マウス、モルモット、ハムスター、ラット、ネズミ、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、マーモセット、サル又はチンパンジー等の１種以上）を含む。 A "patient" or "subject" is a human or non-human mammal (eg, mouse, guinea pig, hamster, rat, rat, rabbit, pig, sheep, goat, cow, horse, cat, dog, marmoset, monkey or One or more species such as chimpanzees) is included.

＜ＨＩＦ阻害剤＞
本開示では、ＨＩＦ阻害剤が提供される。本開示のＨＩＦ阻害剤は、きのこ由来物質を含む。ＨＩＦは、核内へ移行した後にＨＩＦ−１βとのヘテロ二量体を形成したり、ＣＢＰ／ｐ３００等のヒストンアセチル化酵素と結合し、これらの複合体がＤＮＡ上の低酸素応答性領域（Ｈｙｐｏｘｉａ Ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ Ｅｌｅｍｅｎｔ、ＨＲＥ）と呼ばれる応答エレメント（５’−ＡＣＧＴＧ−３’）に結合することにより、転写因子として作用したりする。本明細書において、「ＨＩＦ阻害」は、ＨＩＦによる転写制御を阻害することにより測定することができる。かかる転写制御の阻害は、ＨＩＦ自体の阻害に加えて、ＨＩＦと複合体を形成する因子、または下流に存在する因子の阻害を含み得る。 <HIF inhibitor>
The present disclosure provides HIF inhibitors. The HIF inhibitors of the present disclosure include mushroom-derived substances. HIF forms a heterodimer with HIF-1β after translocation into the nucleus and binds to histone acetylating enzymes such as CBP / p300, and these complexes form hypoxia-responsive regions on DNA ( It acts as a transcription factor by binding to a response element (5'-ACGTG-3') called Hypoxia Responsive Element (HRE). As used herein, "HIF inhibition" can be measured by inhibiting transcriptional regulation by HIF. Such inhibition of transcriptional regulation may include inhibition of factors that form a complex with HIF, or downstream factors, in addition to inhibition of HIF itself.

ある化合物又は混合物がＨＩＦ阻害活性を有していることは、当業者は、本明細書の実施例に記載された方法により確認することが可能である。例えば、ＨＲＥの下流にルシフェラーゼを連結したコンストラクトを細胞に導入し、塩化コバルト又はＤＭＯＧ（ジメチルオキサロイルグリシン）等でＨＩＦを誘導し、被験試料を細胞に添加することで、ＨＩＦ阻害活性の確認が可能である。 One of ordinary skill in the art can confirm that a compound or mixture has HIF inhibitory activity by the method described in the examples of the present specification. For example, the HIF inhibitory activity can be confirmed by introducing a construct in which luciferase is linked downstream of HRE into cells, inducing HIF with cobalt chloride or DMOG (dimethyloxaloylglycine), and adding a test sample to the cells. It is possible.

本開示のＨＩＦ阻害剤とは、下記式（１）〜（６）で表される化合物から選択される一以上の化合物又はその塩を意味する。 The HIF inhibitor of the present disclosure means one or more compounds selected from the compounds represented by the following formulas (1) to (6) or salts thereof.

式（１）で表される化合物は、２−アザヒポキサンチン（ＡＨＸ）であり、植物成長調節作用を有することが知られている（特許第４５６５０１８号公報）。 The compound represented by the formula (1) is 2-azahypoxanthine (AHX) and is known to have a plant growth-regulating action (Patent No. 4565018).

式（２）で表される化合物は、ＡＨＸの代謝産物であり、ＡＨＸと同様に、植物成長調節作用を有することが知られている（特許第５９１５９８２号公報）。 The compound represented by the formula (2) is a metabolite of AHX and is known to have a plant growth-regulating action similar to AHX (Patent No. 5915982).

式（３）で表される化合物は、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ）−２，３，４，５−テトラヒドロキシペンチル ４−クロロ−３，５−ジメトキシベンゾエート（ＦＬＹ−５）であり、植物成長調節作用を有することが知られている（特開２０２０−０２９４２８号公報）。 The compound represented by the formula (3) is (2S, 3S, 4S) -2,3,4,5-tetrahydroxypentyl 4-chloro-3,5-dimethoxybenzoate (FLY-5), which grows plants. It is known to have a regulating action (Japanese Patent Laid-Open No. 2020-029428).

式（４）で表される化合物は、Ｎ−（４−シンナムアミドブチル）−３−フェニルオキシラン−２−カルボキサミド（ＫｉｎａＴ−６）である。本発明者らがキナメツムタケ子実体から抽出した化合物であり、抗癌剤耐性抑制作用を有することを既に見出している（特願２０１９−１５１５２９号）。キナメツムタケ子実体を破砕し、エタノール、次いでアセトンで抽出した後、減圧下で濃縮する。次いで、抽出液をｎ−ヘキサン及び水で液−液分配することにより、水可溶部及びヘキサン可溶部を取得する。得られた水可溶部を、次いで酢酸エチル及び水で液−液分配して、更なる水可溶部及び酢酸エチル可溶部を得る。得られた酢酸エチル可溶部をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６０Ｎ（関東化学株式会社），ジクロロメタン：アセトン＝９５：５，９０：１０，８０：２０，７０：３０，６０：４０，５０：５０；ジクロロメタン：酢酸エチル＝９：１，０：１０）により溶出させて分画して１０画分を取得する。画分５を更にフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６０Ｎ，ジクロロメタン：メタノール＝１００：０，９８：２，９５：５，９２：８，９０：１０，８０：２０，５０：５０，０：１００）、ＭＰＬＣ（シリカ）、Ｓｅｐ−ｐａｋクロマトグラフィー（ＯＤＳ）、逆相ＨＰＬＣ（フェニル）に供して分画することでＫｉｎａＴ−６を得られる。 The compound represented by the formula (4) is N- (4-cinnamamide butyl) -3-phenyloxylan-2-carboxamide (KinaT-6). The present inventors have already found that it is a compound extracted from fruiting bodies of Kinametsumutake and has an anticancer drug resistance inhibitory effect (Japanese Patent Application No. 2019-151529). The fruiting body of Kinametsumutake is crushed, extracted with ethanol and then with acetone, and then concentrated under reduced pressure. Then, the water-soluble part and the hexane-soluble part are obtained by liquid-liquid partitioning the extract with n-hexane and water. The obtained water-soluble portion is then liquid-liquid partitioned with ethyl acetate and water to further obtain a water-soluble portion and an ethyl acetate-soluble portion. The obtained ethyl acetate soluble part was subjected to flash column chromatography (silica dioxide 60N (Kanto Chemical Co., Ltd.), dichloromethane: acetone = 95: 5,90: 10, 80:20, 70:30, 60:40, 50:50. Dichloromethane: ethyl acetate = 9: 1, 0:10) and fractionate to obtain 10 fractions. Fraction 5 is further subjected to flash column chromatography (silica gel 60N, dichloromethane: methanol = 100: 0, 98: 2,95: 5,92: 8,90: 10,80: 20, 50:50, 0: 100). KinaT-6 can be obtained by subjecting to MPLC (silica gel), Sep-pak chromatography (ODS), and reverse phase HPLC (phenyl) and fractionating.

式（５）で表される化合物は、Ｎ−（４−（２，３−ジヒドロキシ−３−フェニルプロパノイド）ブチル）シンナムアミド（ＫｉｎａＴ−８）である。本発明者らがキナメツムタケ子実体から抽出した化合物である。 The compound represented by the formula (5) is N- (4- (2,3-dihydroxy-3-phenylpropanoid) butyl) cinnamamide (KinaT-8). It is a compound extracted from the fruiting body of Kinametsumutake by the present inventors.

式（６）で表される化合物は、（３Ｒ，６Ｓ）−３−ベンジル−３−ヒドロキシ−６−イソブチル−６−メチルピペラジン−２，５−ジオン（ＫＯＭ−Ｓ−１）であり、抗マラリア作用を有することが知られている。コムラサキシメジ菌糸体から抽出可能な化合物である。コムラサキシメジ菌糸体培養濾液酢酸エチル可溶部を各種クロマトグラフィーに供することによって、単離することができる。 The compound represented by the formula (6) is (3R, 6S) -3-benzyl-3-hydroxy-6-isobutyl-6-methylpiperazine-2,5-dione (KOM-S-1) and is anti-antimalarial. It is known to have a malaria effect. It is a compound that can be extracted from the mycelium of Lepista sordidae. Lepista sordida mycelium culture filtrate Ethyl acetate soluble part can be isolated by subjecting it to various chromatographies.

上記化合物は、塩の形態であってもよい。塩は薬剤学的に許容される塩であればよく、例えば、塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸等の無機酸との塩；ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、フタル酸、フマル酸、シュウ酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等の有機酸との塩；ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属との塩；カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属との塩；アルミニウム塩；アンモニウム塩；トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミン［トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミン］、ｔｅｒｔ−ブチルアミン、シクロヘキシルアミン、ベンジルアミン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ−ジベンジルエチレンジアミン等の有機塩基との塩；アスパラギン酸、グルタミン酸等の酸性アミノ酸との塩；アルギニン、リジン、オルニチン等の塩基性アミノ酸との塩等が挙げられる。 The compound may be in the form of a salt. The salt may be any pharmaceutically acceptable salt, for example, a salt with an inorganic acid such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, nitrate, sulfuric acid, phosphoric acid; formic acid, acetic acid, trifluoroacetic acid, phthalic acid, fumal. Salts with organic acids such as acids, oxalic acid, tartaric acid, maleic acid, citric acid, succinic acid, malic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid; with alkali metals such as sodium salt and potassium salt. Salts; salts with alkaline earth metals such as calcium and magnesium; aluminum salts; ammonium salts; trimethylamine, triethylamine, pyridine, picolin, ethanolamine, diethanolamine, triethanolamine, tromethamine [tris (hydroxymethyl) methylamine], Salts with organic bases such as tert-butylamine, cyclohexylamine, benzylamine, dicyclohexylamine, N, N-dibenzylethylenediamine; salts with acidic amino acids such as aspartic acid and glutamate; basic amino acids such as arginine, lysine and ornithine. And salt etc.

＜治療又は予防剤＞
本開示のＨＩＦ阻害剤は、ＨＩＦと関連する疾患、障害又は症状の治療又は予防剤として利用可能であることが期待される。したがって、本開示によれば、例えば、上記ＨＩＦ阻害剤を含む、網膜変性疾患、網脈絡膜病的血管新生疾患、がん、神経変性又は自己免疫疾患の治療又は予防剤が提供され得る。本開示によれば、例えば、上記ＨＩＦ阻害剤を、それを必要とする患者に投与することを含む、網膜変性疾患、網脈絡膜病的血管新生疾患、がん、神経変性又は自己免疫疾患の治療又は予防方法が提供され得る。本開示によれば、例えば、網膜変性疾患、網脈絡膜病的血管新生疾患、がん、神経変性又は自己免疫疾患の治療又は予防に使用するための、上記ＨＩＦ阻害剤が提供され得る。本開示によれば、例えば、網膜変性疾患、網脈絡膜病的血管新生疾患、がん、神経変性又は自己免疫疾患の治療又は予防剤を製造するための、上記ＨＩＦ阻害剤の使用が提供され得る。 <Treatment or preventive agent>
The HIF inhibitors of the present disclosure are expected to be available as therapeutic or prophylactic agents for diseases, disorders or symptoms associated with HIF. Accordingly, according to the present disclosure, therapeutic or prophylactic agents for retinal degenerative diseases, reticulochoroidal neovascularization diseases, cancers, neurodegenerative diseases or autoimmune diseases, including, for example, the above HIF inhibitors, can be provided. According to the present disclosure, for example, treatment of retinal degenerative disease, reticulochoroidal neovascularization disease, cancer, neurodegenerative disease or autoimmune disease, which comprises administering the above HIF inhibitor to a patient in need thereof. Alternatively, preventive measures may be provided. According to the present disclosure, the above HIF inhibitors may be provided for use, for example, in the treatment or prevention of retinal degenerative diseases, reticulochoroidal neovascularization diseases, cancers, neurodegenerative diseases or autoimmune diseases. According to the present disclosure, the use of the HIF inhibitor for producing, for example, a therapeutic or prophylactic agent for retinal degenerative diseases, reticulochoroidal neovascularization diseases, cancer, neurodegenerative diseases or autoimmune diseases may be provided. ..

特に、本開示のＨＩＦ阻害剤は、細胞毒性が低い点において有用であり得る。 In particular, the HIF inhibitors of the present disclosure may be useful in that they have low cytotoxicity.

また、本開示のＨＩＦ阻害剤は、例えば、眼科領域の疾患（眼のがん、網膜変性疾患、網脈絡膜病的血管新生疾患等）等の治療又は予防に用いられ得る。 Further, the HIF inhibitor of the present disclosure can be used, for example, for the treatment or prevention of diseases in the ophthalmic field (eye cancer, retinal degenerative diseases, reticulochoroidal neovascularization diseases, etc.).

本開示のＨＩＦ阻害剤は、網膜変性疾患の治療又は予防に用いられ得る。網膜変性疾患は、特に限定されないが、萎縮型加齢黄斑変性、網膜色素変性、遺伝性黄斑ジストロフィ等が挙げられる。 The HIF inhibitors of the present disclosure can be used for the treatment or prevention of retinal degenerative diseases. The retinal degenerative disease is not particularly limited, and examples thereof include atrophic age-related macular degeneration, retinitis pigmentosa, and hereditary macular dystrophy.

本開示のＨＩＦ阻害剤は、脈絡膜病的血管新生の治療又は予防に用いられ得る。本開示のＨＩＦ阻害剤は、血管新生抑制効果を有し、血管新生の抑制のために用いられ得る。本開示のＨＩＦ阻害剤は、線維性組織増殖の抑制効果を有し、線維性組織増殖（瘢痕形成）の抑制に用いられ得る。網脈絡膜病的血管新生疾患は、特に限定されないが、未熟児網膜症、糖尿病網膜症、増殖硝子体網膜症、加齢黄斑変性、ＶＨＬ（Ｖｏｎ Ｈｉｐｐｅｌ−Ｌｉｎｄａｕ）病等が挙げられる。 The HIF inhibitors of the present disclosure can be used for the treatment or prevention of choroidal angiogenesis. The HIF inhibitor of the present disclosure has an angiogenesis-suppressing effect and can be used for suppressing angiogenesis. The HIF inhibitor of the present disclosure has an inhibitory effect on fibrous tissue growth and can be used for suppressing fibrous tissue growth (scar formation). The retinochoroidal angiogenic disease is not particularly limited, and examples thereof include retinopathy of prematurity, diabetic retinopathy, proliferative vitreoretinopathy, age-related luteal degeneration, and VHL (Von Hippel-Lindau) disease.

本開示のＨＩＦ阻害剤は、がんの治療又は予防に用いられ得る。がんは、特に限定されないが、眼瞼悪性腫瘍、角・結膜悪性腫瘍、眼内悪性腫瘍、眼窩悪性腫瘍、肺がん、前立腺がん、乳がん、肝がん、胃がん、大腸がん、甲状腺がん、腎臓がん、子宮がん、卵巣がん、骨肉腫、軟骨肉腫、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、悪性リンパ腫、急性・慢性白血病、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性腫瘍等が挙げられる。 The HIF inhibitors of the present disclosure can be used for the treatment or prevention of cancer. Cancer is not particularly limited, but eyelid malignant tumor, keratin / conjunctival malignant tumor, intraocular malignant tumor, orbital malignant tumor, lung cancer, prostate cancer, breast cancer, liver cancer, stomach cancer, colon cancer, thyroid cancer, Kidney cancer, uterine cancer, ovarian cancer, osteosarcoma, chondrosarcoma, rhabdomyomyoma, smooth myoma, malignant lymphoma, acute / chronic leukemia, myelodystrophy syndrome (MDS), myeloid proliferative tumor, etc. Will be.

本開示のＨＩＦ阻害剤は、神経変性の治療又は予防に用いられ得る。神経変性は、特に限定されないが、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン症候群、アルツハイマー病、進行性核上性麻痺、ハンチントン病、多系統萎縮症、脊髄小脳変性等が挙げられる。 The HIF inhibitors of the present disclosure can be used for the treatment or prevention of neurodegenerative diseases. The neurodegenerative disease is not particularly limited, and examples thereof include amyotrophic lateral sclerosis, Parkinson's syndrome, Alzheimer's disease, progressive supranuclear palsy, Huntington's disease, multiple system atrophy, and spinocerebellar degeneration.

本開示のＨＩＦ阻害剤は、自己免疫疾患の治療又は予防に用いられ得る。自己免疫疾患は、特に限定されないが、ぶどう膜炎、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、抗リン脂質抗体症候群、多発性筋炎、皮膚筋炎、強皮症、シェーグレン症候群、ＩｇＧ４関連疾患、血管炎症候群、混合性結合組織病、臓器特異的自己免疫疾患等が挙げられる。 The HIF inhibitors of the present disclosure can be used for the treatment or prevention of autoimmune diseases. The autoimmune disease is not particularly limited, but is limited to villus membrane inflammation, rheumatoid arthritis, systemic lupus erythematosus, antiphospholipid antibody syndrome, polymyositis, dermatomyositis, scleroderma, Sjogren's syndrome, IgG4-related disease, vasculitis syndrome, mixed. Examples include sex connective tissue disease and organ-specific autoimmune disease.

＜製剤＞
本開示のＨＩＦ阻害剤、治療又は予防剤等の医薬又は組成物は、その適用に合わせた形態に製剤化されて提供され得る。製剤化は、日本薬局方記載の方法等の医薬製剤の製造法として自体公知の方法に従って行うことができる。例えば、本開示におけるＨＩＦ阻害剤、治療又は予防剤等の医薬又は組成物が眼科用組成物である場合は、眼注射液、眼軟膏、点眼剤又は眼灌流液として、経口投与用組成物である場合は、錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、カプセル剤として製剤化され得る。 <Formulation>
The pharmaceuticals or compositions such as HIF inhibitors, therapeutic or prophylactic agents of the present disclosure may be formulated and provided in a form suitable for the application thereof. The pharmaceutical product can be formulated according to a method known per se as a method for producing a pharmaceutical product such as the method described in the Japanese Pharmacopoeia. For example, when the pharmaceutical or composition of the HIF inhibitor, therapeutic or prophylactic agent, etc. in the present disclosure is an ophthalmic composition, the composition for oral administration is used as an ocular injection solution, an ophthalmic ointment, an eye drop or an ocular perfusate. In some cases, it can be formulated as tablets, granules, fine granules, powders, capsules.

製剤化の際に、製剤中に一般に使用される結合剤、包含剤、賦形剤、滑沢剤、崩壊剤、湿潤剤等の添加剤を含有させてもよい。また、経口投与用組成物の場合は、内用水剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤等の液体状態として製剤化してもよく、使用時に再溶解される乾燥状態のものとして製剤化してもよい。 At the time of formulation, additives such as binders, inclusion agents, excipients, lubricants, disintegrants and wetting agents which are generally used may be contained in the formulation. Further, in the case of a composition for oral administration, it may be formulated as a liquid state such as an internal liquid agent, a suspension agent, an emulsion, a syrup agent, etc., or it may be formulated as a dry state which is redissolved at the time of use. ..

非経口投与用組成物の場合、有効成分が含まれるように単位投与量アンプルもしくは多投与量容器又はチューブ内に収容された状態に製剤化してもよく、また、安定剤、緩衝剤、保存剤、等張化剤等の添加剤も含有させてもよい。また、非経口投与用組成物の場合、使用時に、適当な担体（滅菌水等）で再溶解可能な粉体に製剤化されてもよい。非経口投与としては、硝子体内投与、結膜下投与、前房内投与、点眼投与、腹腔内投与等が挙げられる。患者の年齢、症状により適宜投与方法を選択することができる。その投与量は、年齢、投与経路、投与回数により異なり、当業者であれば適宜選択できる。 In the case of a composition for parenteral administration, it may be formulated in a unit-dose ampoule or a multi-dose container or tube so as to contain the active ingredient, and it may be a stabilizer, a buffer, or a preservative. , Additives such as isotonic agents may also be contained. Further, in the case of a composition for parenteral administration, it may be formulated into a powder that can be redissolved with an appropriate carrier (sterile water or the like) at the time of use. Parenteral administration includes intravitreal administration, subconjunctival administration, anterior chamber administration, eye drop administration, intraperitoneal administration and the like. The administration method can be appropriately selected according to the patient's age and symptoms. The dose varies depending on the age, route of administration, and frequency of administration, and can be appropriately selected by those skilled in the art.

製剤化の際に添加される添加剤としては、賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、溶剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、無痛化剤、防腐剤、抗酸化剤等が挙げられる。 賦形剤としては、例えば、乳糖、白糖、Ｄ−マンニトール、デンプン、コーンスターチ、結晶セルロース、軽質無水ケイ酸が挙げられる。滑沢剤としては、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、タルク、コロイドシリカが挙げられる。結合剤としては、例えば、結晶セルロース、白糖、Ｄ−マンニトール、デキストリン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、デンプン、ショ糖、ゼラチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムが挙げられる。崩壊剤としては、例えば、デンプン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、Ｌ−ヒドロキシプロピルセルロースが挙げられる。溶剤としては、例えば、注射用水、アルコール、プロピレングリコール、マクロゴール、ゴマ油、トウモロコシ油、オリーブ油が挙げられる。溶解補助剤としては、例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、Ｄ−マンニトール、安息香酸ベンジル、エタノール、トリスアミノメタン、コレステロール、トリエタノールアミン、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウムが挙げられる。懸濁化剤としては、例えば、ステアリルトリエタノールアミン、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルアミノプロピオン酸、レシチン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、モノステアリン酸グリセリン等の界面活性剤；例えば、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース等の親水性高分子が挙げられる。等張化剤としては、例えば、ブドウ糖、Ｄ−ソルビトール、塩化ナトリウム、グリセリン、Ｄ−マンニトールが挙げられる。緩衝剤としては、例えば、リン酸塩、酢酸塩、炭酸塩、クエン酸塩等の緩衝液が挙げられる。無痛化剤としては、例えば、ベンジルアルコールが挙げられる。防腐剤としては、例えば、パラオキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェニルエチルアルコール、デヒドロ酢酸、ソルビン酸が挙げられる。抗酸化剤としては、例えば、亜硫酸塩、アスコルビン酸、α−トコフェロールが挙げられる。 Additives added during formulation include excipients, lubricants, binders, disintegrants, solvents, solubilizers, suspending agents, tonicity agents, buffers, soothing agents, etc. Examples include preservatives and antioxidants. Excipients include, for example, lactose, sucrose, D-mannitol, starch, cornstarch, crystalline cellulose and light anhydrous silicic acid. Examples of the lubricant include magnesium stearate, calcium stearate, talc, and colloidal silica. Examples of the binder include crystalline cellulose, sucrose, D-mannitol, dextrin, hydroxypropyl cellulose, hydroxypropylmethyl cellulose, polyvinylpyrrolidone, starch, sucrose, gelatin, methyl cellulose and sodium carboxymethyl cellulose. Examples of the disintegrant include starch, carboxymethyl cellulose, calcium carboxymethyl cellulose, sodium carboxymethyl starch, and L-hydroxypropyl cellulose. Examples of the solvent include water for injection, alcohol, propylene glycol, macrogol, sesame oil, corn oil, and olive oil. Examples of the solubilizing agent include polyethylene glycol, propylene glycol, D-mannitol, benzyl benzoate, ethanol, trisaminomethane, cholesterol, triethanolamine, sodium carbonate, and sodium citrate. Examples of the suspending agent include surfactants such as stearyltriethanolamine, sodium lauryl sulfate, laurylaminopropionic acid, lecithin, benzalkonium chloride, benzethonium chloride, and glycerin monostearate; for example, polyvinyl alcohol and polyvinylpyrrolidone. , Hydrophilic polymers such as sodium carboxymethyl cellulose, methyl cellulose, hydroxymethyl cellulose, hydroxyethyl cellulose, hydroxypropyl cellulose and the like. Examples of the tonicity agent include glucose, D-sorbitol, sodium chloride, glycerin, and D-mannitol. Examples of the buffering agent include buffer solutions such as phosphates, acetates, carbonates and citrates. Examples of the soothing agent include benzyl alcohol. Examples of preservatives include paraoxybenzoic acid esters, chlorobutanol, benzyl alcohol, phenylethyl alcohol, dehydroacetic acid, and sorbic acid. Examples of the antioxidant include sulfites, ascorbic acid, and α-tocopherol.

実施例１：ＫｉｎａＴ−８の単離

キナメツムタケ子実体１７．０ｋｇを破砕し、エタノール、次いでアセトンで抽出した後、減圧下で濃縮した。次いで、抽出液をｎ−ヘキサン及び水で液−液分配することにより、水可溶部及びヘキサン可溶部を取得した。得られた水可溶部を、次いで酢酸エチル及び水で液−液分配して、更なる水可溶部及び酢酸エチル可溶部を得た。得られた酢酸エチル可溶部をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６０Ｎ（関東化学株式会社），ジクロロメタン：アセトン＝９５：５，９０：１０，８０：２０，７０：３０，６０：４０，５０：５０；ジクロロメタン：酢酸エチル＝９：１，０：１０）により溶出させて分画して１０画分を取得した。画分８を更にフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６０Ｎ，ジクロロメタン：メタノール＝１００：０，９８：２，９５：５，９２：８，９０：１０，８０：２０，５０：５０，０：１００）、ＭＰＬＣ（シリカ）、Ｓｅｐ−ｐａｋクロマトグラフィー（ＯＤＳ）、逆相ＨＰＬＣ（フェニル）に供して分画することで２４．６ｍｇのＫｉｎａＴ−８を得た。^１Ｈ−ＮＭＲ及び^１３Ｃ−ＮＭＲなどの物性データを図８に示す。 Example 1: Isolation of KinaT-8

17.0 kg of fruiting body of Kinametsumutake was crushed, extracted with ethanol and then with acetone, and then concentrated under reduced pressure. Then, the extract was liquid-liquid partitioned with n-hexane and water to obtain a water-soluble part and a hexane-soluble part. The obtained water-soluble part was then liquid-liquid partitioned with ethyl acetate and water to obtain further water-soluble parts and ethyl acetate-soluble parts. The obtained ethyl acetate soluble part was subjected to flash column chromatography (silica dioxide 60N (Kanto Chemical Co., Ltd.), dichloromethane: acetone = 95: 5,90: 10, 80:20, 70:30, 60:40, 50:50. Dichloromethane: ethyl acetate = 9: 1, 0:10) was eluted and fractionated to obtain 10 fractions. Fraction 8 is further subjected to flash column chromatography (silica gel 60N, dichloromethane: methanol = 100: 0, 98: 2,95: 5,92: 8,90: 10,80: 20, 50:50, 0: 100). It was subjected to MPLC (silica gel), Sep-pak chromatography (ODS), and reverse phase HPLC (phenyl) and fractionated to obtain 24.6 mg of KinaT-8. ^{Physical property data such as 1} H-NMR and ¹³ C-NMR are shown in FIG.

試験例１：レポーターアッセイ系の確立
国際公開第２０１８／０８８５６６号に記載された方法と同様の方法により、マウス繊維芽細胞株（ＮＩＨ−３Ｔ３）、マウス網膜錐体細胞株（６６１Ｗ）及びヒト網膜色素上皮細胞株（ＡＲＰＥ１９）対しレンチウイルスを用いてＨＩＦ活性依存的−Ｆｉｒｅｆｌｙ−Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅと内在性コントロールＣＭＶ−Ｒｅｎｉｌｌａ−Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅをともに遺伝子導入し安定発現株（ＲＨ−３Ｔ３、ＲＨ−６６１Ｗ及びＲＨ−ＡＲＰＥ１９）を作成した。 Test Example 1: Establishment of reporter assay system Mouse fibroblast cell line (NIH-3T3), mouse luciferase pyramidal cell line (661W) and human retina by the same method as described in International Publication No. 2018/088566. Stable expression strains (RH-3T3, RH-661W and RH-RAPE19) were introduced with both HIF activity-dependent-Firefly-Luciferase and endogenous control CMV-Renilla-Luciferase using lentivirus against the pigment epithelial cell line (ARPE19). )created.

これらの細胞に塩化コバルト（ＣｏＣｌ_２）を添加することによりＨＩＦが誘導され、さらにルシフェリンを加えることによりＨＩＦ活性と相関する発光シグナルを得ることができる。この細胞に対して種々の試料を添加し、ＨＩＦ阻害活性を有する物質の探索を行った。なお、ポジティブコントロールとして、既知のＨＩＦ阻害剤であるトポテカン（Ｔｏｐｏ）、ドキソルビシン（ＤＸＲ）、ケトミンを使用した。 HIF is induced by adding cobalt chloride (CoCl ₂ ) to these cells, and a luminescent signal that correlates with HIF activity can be obtained by further adding luciferin. Various samples were added to these cells to search for substances having HIF inhibitory activity. As positive controls, known HIF inhibitors such as topotecan (Topo), doxorubicin (DXR), and ketomin were used.

試験例２：ＨＩＦ阻害活性を有する物質のスクリーニング１
国際公開第２０１８／０８８５６６号に記載された方法と同様の方法により、ＡＨＸ、ＡＯＨ、ＩＣＡ（イミダゾール−４−カルボキシアミド）、エリナシンＡ、ヘリセノンＣ、ヘリセノンＤ、ヘリセノンＥ、ＦＬＹ−１、ＦＬＹ−４、ＦＬＹ−５、グリフォリン及びネグリフォリンのＨＩＦ阻害活性を調べた。なお、これらの化合物の濃度は１ｍｇ／ｍＬとした。 Test Example 2: Screening for substances having HIF inhibitory activity 1
AHX, AOH, ICA (imidazole-4-carboxamide), erinacin A, helicenone C, helicenone D, helicenone E, FLY-1, FLY- by the same method as described in WO 2018/08856. 4. The HIF inhibitory activity of FLY-5, glyphorin and neglifolin was investigated. The concentration of these compounds was 1 mg / mL.

ＲＨ−３Ｔ３を用いたアッセイの結果を図１に、ＲＨ−６６１Ｗを用いたアッセイの結果を図２に、ＲＨ−ＡＲＰＥ１９を用いたアッセイの結果を図３に示す。図１〜３に示した結果から明らかなように、ＡＨＸ、ＡＯＨ及びＦＬＹ−５はＨＩＦ阻害活性を示し、特にＡＨＸ及びＦＬＹ−５は強いＨＩＦ阻害活性を示した。 The results of the assay using RH-3T3 are shown in FIG. 1, the results of the assay using RH-661W are shown in FIG. 2, and the results of the assay using RH-ARPE19 are shown in FIG. As is clear from the results shown in FIGS. 1 to 3, AHX, AOH and FLY-5 showed HIF inhibitory activity, and particularly AHX and FLY-5 showed strong HIF inhibitory activity.

試験例３：ＨＩＦ阻害活性を有する物質のスクリーニング２
試験例２と同様に、Ｏｓｈｉｒｏ Ｏ−１、Ｏｓｈｉｒｏ Ｏ−２、ＳｈｉｒｏｏｎｉＫ−３、ＳｈｉｒｏｏｎｉＫ−６、ＫｉｎａＴ−８、ＫｉｎａＴ−１０、ＫＯＭ−Ｓ−１、ヘリセンＢ、ＳｕｇｉＡ−１４及びＫｉｎａＴ−６のＨＩＦ阻害活性を調べた。なお、これらの化合物の濃度は１ｍｇ／ｍＬとした。 Test Example 3: Screening for substances having HIF inhibitory activity 2
Similar to Test Example 2, Oshiro O-1, Oshiro O-2, Shirooni K-3, Shirooni K-6, KinaT-8, KinaT-10, KOM-S-1, Helicene B, SugiA-14 and KinaT-6. The HIF inhibitory activity was investigated. The concentration of these compounds was 1 mg / mL.

ＲＨ−３Ｔ３を用いたアッセイの結果を図４に、ＲＨ−６６１Ｗを用いたアッセイの結果を図５に、ＲＨ−ＡＲＰＥ１９を用いたアッセイの結果を図６に示す。図４〜６に示した結果から明らかなように、ＫｉｎａＴ−６及びＫｉｎａＴ−８はＨＩＦ阻害活性を示した。 The results of the assay using RH-3T3 are shown in FIG. 4, the results of the assay using RH-661W are shown in FIG. 5, and the results of the assay using RH-ARPE19 are shown in FIG. As is clear from the results shown in FIGS. 4 to 6, KinaT-6 and KinaT-8 showed HIF inhibitory activity.

試験例４：酸素誘導網膜症（ＯＩＲ）モデルマウスによるアッセイ
以下の常法にしたがって、ＯＩＲモデルマウスを作製した。新生仔マウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ）を生後８日から１１日まで高酸素（８５％）下で飼育した。生後１１日から１７日まで通常酸素条件下で飼育した。生後１２日から１６日まで、ＡＨＸ３００ｍｇ／ｋｇ又はビークルを１日１回経口投与した。 Test Example 4: Assay using oxygen-induced retinopathy (OIR) model mice OIR model mice were prepared according to the following conventional method. Newborn mice (C57BL / 6J) were bred under high oxygen (85%) from 8 to 11 days after birth. They were bred under normal oxygen conditions from 11 to 17 days after birth. From 12 to 16 days after birth, AHX 300 mg / kg or vehicle was orally administered once daily.

生後１７日にマウスの眼球を摘出し、４％パラホルムアルデヒド溶液で１５分間固定した。網膜のホールマウントを４％パラホルムアルデヒド溶液で１時間、後固定した。洗浄後、Alexa Fluor 594が結合したGriffonia simplicifoliaのイソレクチンGS-IB4で、４℃にて３日間、組織を染色した。封入後、網膜血管を蛍光顕微鏡で観察した。 On the 17th day after birth, the eyeballs of the mice were removed and fixed with a 4% paraformaldehyde solution for 15 minutes. The whole mount of the retina was post-fixed with 4% paraformaldehyde solution for 1 hour. After washing, tissues were stained with Griffonia simplicifolia isolectin GS-IB4 bound to Alexa Fluor 594 at 4 ° C. for 3 days. After encapsulation, the retinal blood vessels were observed with a fluorescence microscope.

蛍光顕微鏡で観察した網膜画像をPhotoshop（登録商標）で読み込み、自動選択ツールを用いて病的血管新生（Tufts）と無血管領域（Vaso-obliteration）のピクセル数をカウントした。その結果を図７に示す。図７の上段は、病的血管新生と無血管領域のピクセル数を表すグラフであり、下段は病的血管新生と無血管領域のピクセル数を網膜全体のピクセル数で割った数値を表すグラフである。ＡＨＸ投与群では、病的血管新生の有意な抑制が認められた。また、ＡＨＸ投与群とビークル投与群では無血管領域に有意な変化が認められなかった。さらに、ＡＨＸ投与群とビークル投与群では体重変化に差は認めらなかった。 Retinal images observed with a fluorescence microscope were read by Photoshop® and the number of pixels in pathological angiogenesis (Tufts) and avascular region (Vaso-obliteration) was counted using an automatic selection tool. The results are shown in FIG. The upper part of FIG. 7 is a graph showing the number of pixels in the pathological angiogenesis and the avascular region, and the lower part is a graph showing the number of pixels in the pathological angiogenesis and the avascular region divided by the number of pixels of the entire retina. be. In the AHX-administered group, significant suppression of pathological angiogenesis was observed. In addition, no significant change was observed in the avascular region between the AHX-administered group and the vehicle-administered group. Furthermore, there was no difference in body weight change between the AHX-administered group and the vehicle-administered group.

Claims (3)

下記式（１）〜（６）で表される化合物から選択される一以上の化合物又はその塩を含む低酸素誘導因子阻害剤。

A hypoxia-inducing factor inhibitor containing one or more compounds selected from the compounds represented by the following formulas (1) to (6) or salts thereof.

請求項１の低酸素誘導因子阻害剤を含む、網膜変性疾患、網脈絡膜病的血管新生疾患、がん、神経変性又は自己免疫疾患の治療又は予防剤。 A therapeutic or prophylactic agent for retinal degenerative diseases, reticulochoroidal neovascularization diseases, cancers, neurodegenerative diseases or autoimmune diseases, which comprises the hypoxic inducer inhibitor according to claim 1. 下記式（５）で表される化合物又はその塩。

A compound represented by the following formula (5) or a salt thereof.

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