JP2021191265A - T-cell receptor recognizing mhc class ii-restricted mage-a3 - Google Patents

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Abstract

To provide an isolated or purified T-cell receptor, a functional variant, an associated antibody or an antigen-binding portion thereof, a pharmaceutical composition containing the T-cell receptor-associated protein, and a method of using them.SOLUTION: Provided are an isolated or purified T-cell receptor having antigen specificity for MAGE-A3 and MAGE-A6, a functional variant of the T-cell receptor, an antibody associated with the T-cell receptor or an antigen-binding portion thereof, a pharmaceutical composition containing the T-cell receptor-associated protein, and a detection method of cancer and a treatment or a prevention method of cancer using the protein.SELECTED DRAWING: None

Description

関連出願の相互参照
本願は2012年9月14日出願の米国仮特許出願第61/701,056号（参照によりその全体の内
容が本明細書に組み込まれる）の利益を主張する。 Cross-reference to related applications This application claims the benefit of US Provisional Patent Application No. 61 / 701,056, filed September 14, 2012, the entire contents of which are incorporated herein by reference.

電子提出された物件の参照による組み込み
本明細書と同時提出され以下のとおり特定される、コンピューターで読み取り可能なヌクレオチド／アミノ酸配列表は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる：63,888バイトのASCII（テキスト）ファイル1件、名称「714146ST25.TXT」、2013年8月20日作成
。 Electronically Submitted Property Reference Incorporation A computer-readable nucleotide / amino acid sequence listing, co-submitted herein and specified as follows, is incorporated herein by reference in its entirety: 63,888 bytes. One ASCII (text) file, named "714146ST25.TXT", created on August 20, 2013.

発明の背景
養子細胞療法（ACT）は、腫瘍反応性T細胞を癌患者に移入することを含む、反応性T細
胞の患者への移入を伴う。ヒト白血球型抗原（HLA）-A*02拘束性T細胞エピトープを標的
とするT細胞を用いた養子細胞療法は、ある患者においては、腫瘍の退縮を首尾よくもた
らしている。しかしながら、HLA-A*02発現を欠く患者は、HLA-A*02拘束性T細胞エピトー
プを標的とするT細胞で治療することはできない。かかる制限が、養子細胞療法を広く適
用する上で障害となっている。従って、癌を治療するための免疫学的組成物及び方法の改善が必要とされている。 Background of the Invention Adoptive cell therapy (ACT) involves the transfer of reactive T cells into a patient, including the transfer of tumor-reactive T cells into a cancer patient. Adoptive cell therapy with T cells targeting the human leukocyte antigen (HLA) -A * 02 binding T cell epitope has successfully resulted in tumor regression in some patients. However, patients lacking HLA-A * 02 expression cannot be treated with T cells that target the HLA-A * 02 restrictive T cell epitope. Such restrictions are obstacles to the widespread application of adoptive cell therapy. Therefore, improvements in immunological compositions and methods for treating cancer are needed.

発明の簡単な要旨
本発明の実施態様は、MAGE-A3243-258及びMAGE-A6に対する抗原特異性を有する、単離
又は精製されたT細胞受容体（TCR）並びにその機能的部分及び機能的変異体（functional
variants）を提供する。 Brief Summary of the Invention Embodiments of the invention are isolated or purified T cell receptors (TCRs) with antigen specificity for MAGE-A3 243-258 and MAGE-A6 and their functional parts and functions. Variant (functional)
variants) is provided.

本発明の別の実施態様は、（a）配列番号3〜8若しくは（b）配列番号21〜22を含む単離若しくは精製されたTCR、又は（a）若しくは（b）の機能的変異体であって、ここで、該
機能的変異体が、（a）のいずれか1つ以上若しくは（b）のいずれか1つ以上において少なくとも1つのアミノ酸置換を有する（a）若しくは（b）を含み、かつ該機能的変異体が、HLA-DPβ1*04と関連してMAGE-A3に対する抗原特異性を有するもの、を提供する。 Another embodiment of the invention is an isolated or purified TCR comprising (a) SEQ ID NOs: 3-8 or (b) SEQ ID NOs: 21-22, or a functional variant of (a) or (b). Here, the functional variant comprises (a) or (b) having at least one amino acid substitution in any one or more of (a) or any one or more of (b). Moreover, the functional variant is provided which has antigen specificity for MAGE-A3 in association with HLA-DPβ1 * 04.

本発明はさらに、関連するポリペプチド及びタンパク質、並びに関連する核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞及び細胞集団を提供する。本発明はさらに、本発明のTCR（その
機能的部分及び機能的変異体を含む）と関連する、抗体又はその抗原結合部分、及び医薬組成物を提供する。 The invention further provides related polypeptides and proteins, as well as related nucleic acids, recombinant expression vectors, host cells and cell populations. The invention further provides an antibody or antigen binding moiety thereof, and a pharmaceutical composition associated with the TCR of the invention, including functional moieties and variants thereof.

本発明はさらに、哺乳動物において癌の存在を検出する方法、及び哺乳動物において癌を治療又は予防する方法を提供する。哺乳動物において癌の存在を検出する本発明の方法は、（i）本明細書に記載の本発明のTCR（その機能的部分及び機能的変異体を含む）、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞、宿主細胞集団、又は抗体若しくはその抗原結合部分のいずれかと、癌細胞を含むサンプルとを接触させ、それにより複合体を形成すること、及び（ii）該複合体を検出することを含み、ここで、該複合体の検出が、哺乳動物における癌の存在を示す。 The invention further provides a method of detecting the presence of cancer in a mammal and a method of treating or preventing cancer in a mammal. Methods of the invention for detecting the presence of cancer in mammals are as follows: (i) TCRs of the invention (including functional portions and variants thereof), polypeptides, proteins, nucleic acids, sets described herein. Contacting a sample containing a cancer cell with any of a replacement expression vector, host cell, host cell population, or antibody or antigen-binding portion thereof to form a complex, and (ii) detect the complex. Where the detection of the complex indicates the presence of cancer in the mammal.

哺乳動物において癌を治療又は予防する本発明の方法は、本明細書に記載のTCR（その
機能的部分及び機能的変異体を含む）、ポリペプチド若しくはタンパク質のいずれか、本明細書に記載のTCR（その機能的部分及び機能的変異体を含む）、ポリペプチド、タンパ
ク質のいずれかをコードするヌクレオチド配列を含む任意の核酸若しくは組換え発現ベクター、又は本明細書に記載のTCR（その機能的部分及び機能的変異体を含む）、ポリペプ
チド若しくはタンパク質のいずれかをコードする組換えベクターを含む任意の宿主細胞若しくは宿主細胞集団を、哺乳動物において癌を治療又は予防するのに有効な量で、哺乳動物に投与することを含む。 The methods of the invention for treating or preventing cancer in a mammal are described herein in any of the TCRs (including functional portions and functional variants thereof), polypeptides or proteins described herein. Any nucleic acid or recombinant expression vector containing a nucleotide sequence encoding any of a TCR (including its functional portion and functional variant), polypeptide, protein, or the TCR described herein (its functional). Any host cell or host cell population containing a recombinant vector encoding either a polypeptide or protein), including partials and functional variants, in an amount effective to treat or prevent cancer in mammals. , Including administration to mammals.

図面の各図の簡単な説明
図1A及び1Bは、トランスフェクトされていない293-CIITA標的細胞（292-CIITA）、又は全長NY-ESO-1タンパク質（293-CIITA-NY-ESO-1）、MAGE-A1タンパク質（293-CIITA-MAGE A1）、MAGE-A3タンパク質（293-CIITA-MAGE-A3）、MAGE-A6タンパク質（293-CIITA-MAGE-A6）若しくはMAGE A12タンパク質（293-CIITA-MAGE-A12）をトランスフェクトした293-CIITA標的細胞との共培養に反応した、第一（1A）及び第二（1B）のドナー由来CD4+ T細胞によるインターフェロン（IFN）-γ分泌（pg/ml）を示す棒グラフである。T細胞には、F5（抗MART-1）TCR、R12C9 TCR若しくは6F9 TCRを形質導入したか、又は形質導入しなかった（UT）。 図2Aは、抗MAGE-A3 siRNA若しくは抗MART-1 siRNAで処理したか又は未処理の526-CIITA細胞との共培養に反応した、6F9 TCR若しくはF5 TCRを形質導入したか又は形質導入していないヒトドナー由来T細胞によるIFN-γ分泌（pg/ml）を示す棒グラフである。図2Bは、抗MAGE-A3 siRNA若しくは抗MART-1 siRNAで処理したか又は未処理のH1299-CIITA細胞との共培養に反応した、6F9 TCRを形質導入したか又は形質導入していないヒトドナー由来CD4+ T細胞によるIFN-γ分泌（pg/ml）を示す棒グラフである。 図3は、単独で培養（T細胞のみ）、又は3071細胞、3071-CIITA細胞、397細胞、397-CIITA細胞、2630細胞、2630-CIITA細胞、2984細胞若しくは2984-CIITA細胞と共培養した、6F9を形質導入したPBLによるIFN-γ分泌（pg/ml）を示す棒グラフである。 図4は、単独での培養時（T細胞のみ）、又は非処理のH1299-CIITA細胞、抗HLA-DP若しくは抗HLA-DR siRNAをトランスフェクトしたH1299-CIITA、非処理の526-CIITA細胞、若しくは抗HLA-DP若しくは抗HLA-DR siRNAをトランスフェクトした526-CIITAとの共培養に反応した、6F9 TCRを形質導入したか又は形質導入していないCD4+ 濃縮（enriched）PBLによるIFN-γ分泌（pg/ml）を示す棒グラフである。 図5は、単独での培養時（T細胞のみ；陰影のない棒グラフ）、又は624-CIITA（格子柄の棒グラフ）、526-CIITA（右斜交平行線の棒グラフ）、1359-CIITA（横縞の棒グラフ）、H1299-CIITA（左斜交平行線の棒グラフ）若しくは1764-CIITA（縦縞の棒グラフ）との共培養時における、野生型（wt）6F9 TCR、若しくは以下の8つの置換型TCR（substituted TCRs）それぞれの1つ：a1（α鎖S116A）、a2（α鎖S117A）、a3（α鎖G118A）、a4（α鎖T119A）、b1（β鎖R115A）、b2（β鎖T116A）、b3（β鎖G117A）若しくはb4（β鎖P118A）、を形質導入したか又は形質導入していないPBLによるIFN-γ（pg/ml）分泌を示す棒グラフである。 図6は、単独での培養時（T細胞のみ；陰影のない棒グラフ）、又は624-CIITA（格子柄の棒グラフ）、526-CIITA（右斜交平行線の棒グラフ）、1359-CIITA（横縞の棒グラフ）、H1299-CIITA（左斜交平行線の棒グラフ）若しくは1764-CIITA（縦縞の棒グラフ）との共培養時における、野生型（wt）6F9 TCR、若しくは以下の3つの置換型TCRそれぞれの1つ：a1（α鎖S116A）、a2（α鎖S117A）若しくはb2（β鎖T116A）、を形質導入したか又は形質導入していないCD4+ 濃縮PBLによるIFN-γ（pg/ml）分泌を示す棒グラフである。 図7は、単独での培養時（T細胞のみ；陰影のない棒グラフ）、又は624-CIITA（右斜交平行線の棒グラフ）、526-CIITA（縦縞の棒グラフ）、1359-CIITA（横縞の棒グラフ）、H1299-CIITA（左斜交平行線の棒グラフ）若しくは1764-CIITA（黒色の棒グラフ）との共培養時における、野生型（wt）6F9 TCR、若しくは以下の10個の置換型TCRそれぞれの1つ：a1（α鎖S116A）、a2（α鎖S117A）、a1-1（α鎖S116L）、a1-2（α鎖S116I）、a1-3（α鎖S116V）、a1-4（α鎖S116M）、a2-1（α鎖S117L）、a2-2（α鎖S117I）、a2-3（α鎖S117V）若しくはa2-4（α鎖S117M）、を形質導入したか又は形質導入していないPBLによるIFN-γ（pg/ml）分泌を示す棒グラフである。 図8は、単独での培養時（T細胞のみ）、又は624-CIITA、1300-CIITA、526-CIITA、1359-CIITA、H1299-CIITA、397-CIITA、2630-CIITA、2984-CIITA、3071-CIITA若しくは1764-CIITA細胞との共培養時における、野生型（wt）6F9 TCR（横縞の棒グラフ）若しくは6F9mC TCR（配列番号27及び28）（左斜交平行線の棒グラフ）を形質導入したか又は形質導入していない（格子柄の棒グラフ）PBLによるIFN-γ（pg/ml）分泌を示す棒グラフである。 図9A及び9Bは、単独での培養時（T細胞のみ）、又は624-CIITA、SK37-CIITA、526-CIITA、1359-CIITA、H1299-CIITA、397-CIITA、2630-CIITA、2984-CIITA、3071-CIITA若しくは1764-CIITA細胞との共培養時における、野生型（wt）6F9 TCR（横縞の棒グラフ）若しくは6F9mC TCR（配列番号27及び28）（左斜交平行線の棒グラフ）を形質導入したか又は形質導入していない（格子柄の棒グラフ）CD4+（9A）又はCD8+（9B）濃縮PBLによるIFN-γ（pg/ml）分泌を示す棒グラフである。 図10Aは、単独での培養時（なし）、又は全長NY-ESO-1タンパク質、MAGE-A1タンパク質、MAGE-A3タンパク質、MAGE-A6タンパク質、MAGE-A12タンパク質をトランスフェクトした293-CIITAトランスフェクタント、若しくはMAGE-A3243-258ペプチド若しくはMAGE-A3タンパク質をパルスした293-CIITA細胞との共培養時における、R12C9 TCR（灰色の棒グラフ）若しくは6F9 TCR（黒色の棒グラフ）を形質導入したか又は形質導入していない（UT；陰影のない棒グラフ）PBLによるIFN-γ分泌を示す棒グラフである。図10Bは、単独での培養時（T細胞単独）、又は非小細胞肺癌（NSCLC）細胞株H11299若しくはメラノーマ細胞株526 mel、624 mel若しくは1359 melとの共培養時における、6F9 TCR（灰色の棒グラフ）を形質導入したか又は形質導入していない（UT；黒色の棒グラフ）PBLによるIFN-γ分泌を示す棒グラフである。 A brief description of each figure in the drawing
Figures 1A and 1B show untransfected 293-CIITA target cells (292-CIITA), or full-length NY-ESO-1 protein (293-CIITA-NY-ESO-1), MAGE-A1 protein (293-CIITA). -293 transfected with MAGE A1), MAGE-A3 protein (293-CIITA-MAGE-A3), MAGE-A6 protein (293-CIITA-MAGE-A6) or MAGE A12 protein (293-CIITA-MAGE-A12) -A bar graph showing interferon (IFN) -γ secretion (pg / ml) by first (1A) and second (1B) donor-derived CD4 + T cells in response to co-culture with CIITA target cells. T cells were or were not transduced with F5 (anti-MART-1) TCR, R12C9 TCR or 6F9 TCR (UT). FIG. 2A shows 6F9 TCR or F5 TCR transduced or transduced in response to co-culture with anti-MAGE-A3 siRNA or anti-MART-1 siRNA or co-cultured with untreated 526-CIITA cells. It is a bar graph showing IFN-γ secretion (pg / ml) by T cells derived from human donors. FIG. 2B is from a human donor transduced or untransduced with 6F9 TCR in response to co-culture with anti-MAGE-A3 siRNA or anti-MART-1 siRNA or untreated H1299-CIITA cells. It is a bar graph showing IFN-γ secretion (pg / ml) by CD4 + T cells. FIG. 3 shows single culture (T cells only) or co-cultured with 3071 cells, 3071-CIITA cells, 397 cells, 397-CIITA cells, 2630 cells, 2630-CIITA cells, 2984 cells or 2984-CIITA cells. It is a bar graph showing IFN-γ secretion (pg / ml) by PBL cultivated with 6F9. FIG. 4 shows H1299-CIITA cells alone (T cells only) or untreated H1299-CIITA cells, H1299-CIITA transfected with anti-HLA-DP or anti-HLA-DR siRNA, untreated 526-CIITA cells, Alternatively, IFN-γ secretion by CD4 + enriched PBL transfected or untransfected with 6F9 TCR in response to co-culture with anti-HLA-DP or anti-HLA-DR siRNA-transfected 526-CIITA. It is a bar graph showing (pg / ml). Figure 5 shows when cultured alone (T cells only; unshaded bar graph), or 624-CIITA (plaid bar graph), 526-CIITA (right diagonal parallel line bar graph), 1359-CIITA (horizontal striped). Wild type (wt) 6F9 TCR, or the following eight substituted TCRs (substituted TCRs) when co-cultured with H1299-CIITA (bar graph of left diagonal parallel lines) or 1746-CIITA (bar graph of vertical stripes). ) One of each: a1 (α chain S116A), a2 (α chain S117A), a3 (α chain G118A), a4 (α chain T119A), b1 (β chain R115A), b2 (β chain T116A), b3 ( FIG. 6 is a bar graph showing IFN-γ (pg / ml) secretion by PBL with or without β-chain G117A) or b4 (β-chain P118A). Figure 6 shows when cultured alone (T cells only; unshaded bar graph), or 624-CIITA (bar graph with a checkered pattern), 526-CIITA (bar graph with right diagonal parallel lines), 1359-CIITA (horizontal stripes). 1 of each of the wild type (wt) 6F9 TCR or the following three substitution type TCRs when co-cultured with H1299-CIITA (bar graph of left diagonal parallel lines) or 1746-CIITA (bar graph of vertical stripes). One: Bar graph showing IFN-γ (pg / ml) secretion by CD4 + enriched PBL transduced or untransduced with a1 (α chain S116A), a2 (α chain S117A) or b2 (β chain T116A). Is. FIG. 7 shows 624-CIITA (right diagonal parallel line bar graph), 526-CIITA (vertical striped bar graph), 1359-CIITA (horizontal striped bar graph) when cultured alone (T cells only; unshaded bar graph). ), H1299-CIITA (bar graph of left diagonal parallel lines) or 1746-CIITA (black bar graph), wild type (wt) 6F9 TCR, or 1 of each of the following 10 substitution type TCRs One: a1 (α chain S116A), a2 (α chain S117A), a1-1 (α chain S116L), a1-2 (α chain S116I), a1-3 (α chain S116V), a1-4 (α chain S116M) ), A2-1 (α chain S117L), a2-2 (α chain S117I), a2-3 (α chain S117V) or a2-4 (α chain S117M), PBL It is a bar graph showing IFN-γ (pg / ml) secretion by. Figure 8 shows when cultured alone (T cells only), or 624-CIITA, 1300-CIITA, 526-CIITA, 1359-CIITA, H1299-CIITA, 397-CIITA, 2630-CIITA, 2984-CIITA, 3071- Transduced wild-type (wt) 6F9 TCR (horizontal striped bar graph) or 6F9mC TCR (SEQ ID NOs: 27 and 28) (left diagonal parallel bar graph) in co-culture with CIITA or 1746-CIITA cells. It is a bar graph showing IFN-γ (pg / ml) secretion by PBL without transduction (bar graph of lattice pattern). Figures 9A and 9B show single culture (T cells only) or 624-CIITA, SK37-CIITA, 526-CIITA, 1359-CIITA, H1299-CIITA, 397-CIITA, 2630-CIITA, 2984-CIITA, Wild-type (wt) 6F9 TCR (horizontal striped bar graph) or 6F9mC TCR (SEQ ID NOs: 27 and 28) (left oblique parallel line bar graph) were transduced during co-culture with 3071-CIITA or 1746-CIITA cells. Or is not transduced (plaid bar graph) bar graph showing IFN-γ (pg / ml) secretion by CD4 + (9A) or CD8 + (9B) enriched PBL. FIG. 10A shows 293-CIITA transfections when cultured alone (without) or transfected with full-length NY-ESO-1 protein, MAGE-A1 protein, MAGE-A3 protein, MAGE-A6 protein, and MAGE-A12 protein. Was R12C9 TCR (gray bar graph) or 6F9 TCR (black bar graph) transfected during co-culture with Kutanto or MAGE-A3 243-258 peptide or MAGE-A3 protein pulsed 293-CIITA cells? Alternatively, it is a bar graph showing IFN-γ secretion by PBL without transfection (UT; unshaded bar graph). Figure 10B shows the 6F9 TCR (gray) when cultured alone (T cells alone) or when co-cultured with the non-small cell lung cancer (NSCLC) cell line H11299 or melanoma cell line 526 mel, 624 mel or 1359 mel. Bar graph) is a bar graph showing IFN-γ secretion by PBL with or without transculture (UT; black bar graph).

発明の詳細な説明
本発明は、MAGE-A3に対する抗原特異性を有する、単離又は精製されたT細胞受容体（TCR）並びにその機能的部分及び機能的変異体であって、ここで、該TCRが、HLA-DPβ1*04と関連してMAGE-A3を認識するものを提供する。本発明の一実施態様において、単離又は精
製されたTCRは、MAGE-A3243-258及びMAGE-A6に対する抗原特異性を有する。 Detailed Description of the Invention The present invention is an isolated or purified T cell receptor (TCR) with antigen specificity for MAGE-A3 and its functional parts and variants, wherein said. The TCR provides one that recognizes MAGE-A3 in association with HLA-DPβ1 * 04. In one embodiment of the invention, the isolated or purified TCR has antigen specificity for MAGE-A3 243-258 and MAGE-A6.

MAGE-A3及びMAGE-A6は、12の相同タンパク質のMAGE-Aファミリーのメンバーであり、該ファミリーには、MAGE-A1、MAGE-A2、MAGE-A4、MAGE-A5、MAGE-A7、MAGE-A8、MAGE-A9、MAGE-A10、MAGE-A11及びMAGE-A12も含まれる。MAGE-Aタンパク質は癌精巣抗原（CTA）であり、これは、腫瘍細胞、並びにMHCを発現しない精巣及び胎盤生殖細胞にのみ発現する。MAGE-Aタンパク質は、メラノーマ、乳癌、白血病、甲状腺癌、胃癌、膵臓癌、肝臓癌（例
、肝細胞癌）、肺癌（例、非小細胞肺癌）、卵巣癌、多発性骨髄種、食道癌、腎臓癌、頭部癌（例、扁平上皮細胞癌）、頸部癌（例、扁平上皮細胞癌）、前立腺癌、滑膜細胞肉腫及び尿路上皮癌を含む様々なヒト癌で発現するが、これらに限定されない。 MAGE-A3 and MAGE-A6 are members of the MAGE-A family of 12 homologous proteins, which include MAGE-A1, MAGE-A2, MAGE-A4, MAGE-A5, MAGE-A7, MAGE- Also included are A8, MAGE-A9, MAGE-A10, MAGE-A11 and MAGE-A12. The MAGE-A protein is a cancer testis antigen (CTA), which is expressed only in tumor cells, as well as testis and germ cells that do not express MHC. MAGE-A protein includes melanoma, breast cancer, leukemia, thyroid cancer, gastric cancer, pancreatic cancer, liver cancer (eg, hepatocellular carcinoma), lung cancer (eg, non-small cell lung cancer), ovarian cancer, multiple myeloid species, esophageal cancer. , Kidney cancer, head cancer (eg, squamous cell carcinoma), cervical cancer (eg, squamous cell carcinoma), prostate cancer, synovial cell sarcoma and urinary tract epithelial cancer. , Not limited to these.

本発明のTCR（その機能的部分及び機能的変異体を含む）は、養子細胞移入のために使
用される場合を含む、多くの利点を提供する。例えば、HLA-DPβ1*04と関連して提示されるMAGE-A3を標的とすることにより、本発明のTCR（その機能的部分及び機能的変異体を含む）は、他のHLA分子（例えば、HLA-A*02、HLA-A*01又はHLA-C*07）と関連して提示され
るMAGE抗原を標的とするTCRを用いて治療することが不可能な患者を治療することが可能
となる。HLA-DPβ1*04は、癌患者集団の約70％〜約80％で発現する、高頻度でみられる（highly prevalent）アレルである。従って、本発明のTCR（その機能的部分及び機能的変
異体を含む）は、有利には、治療され得る患者集団を大幅に拡大する。さらに、特定の理論に拘束されるものではないが、MAGE-A3及び／又はMAGE-A6は、複数（multiple）の癌種の細胞で発現することから、本発明のTCR（その機能的部分及び機能的変異体を含む）は
、複数の種類の癌細胞を破壊し、それゆえ複数の種類の癌を治療又は予防する能力を有利に提供すると考えられる。さらに、特定の理論に拘束されるものではないが、MAGE-Aタンパク質は癌精巣抗原であり、これは、腫瘍細胞、並びにMHCを発現しない精巣及び胎盤生
殖細胞にのみ発現することから、本発明のTCR（その機能的部分及び機能的変異体を含む
）は、正常な非癌性細胞の破壊を最小化又は排除し、それにより、毒性を低下させながら、例えば、最小化又は排除しながら、癌細胞の破壊を有利に標的化すると考えられる。 The TCRs of the invention, including their functional portions and functional variants, offer many advantages, including when used for adoptive cell transfer. For example, by targeting MAGE-A3 presented in association with HLA-DPβ1 * 04, the TCRs of the invention (including their functional parts and functional variants) can be other HLA molecules (eg, including functional variants thereof). It is possible to treat patients who cannot be treated with TCRs targeting the MAGE antigen presented in association with HLA-A * 02, HLA-A * 01 or HLA-C * 07). Become. HLA-DPβ1 * 04 is a highly prevalent allele that is expressed in about 70% to about 80% of the cancer patient population. Therefore, the TCR of the present invention, including its functional parts and functional variants, advantageously significantly expands the patient population that can be treated. Furthermore, without being bound by a particular theory, MAGE-A3 and / or MAGE-A6 are expressed in cells of multiple cancer types, and thus the TCR (the functional part thereof and its functional part) of the present invention. (Including functional variants) are thought to favorably provide the ability to destroy multiple types of cancer cells and thus treat or prevent multiple types of cancer. Furthermore, without being bound by a particular theory, the MAGE-A protein is a cancer testis antigen, which is expressed only in tumor cells, as well as testis and placen germ cells that do not express MHC, and thus the present invention. TCR (including its functional parts and functional variants) minimizes or eliminates the destruction of normal non-cancerous cells, thereby reducing toxicity, eg, minimizing or eliminating. It is thought to favorably target the destruction of cancer cells.

本明細書で使用する場合、語句「抗原特異性」とは、TCRが、高い結合活性（avidity）で、MAGE-A3及び／又はMAGE-A6と特異的に結合し、免疫学的に認識できることを意味する。例えば、TCRを発現するT細胞が、低濃度のMAGE-A3及び／又はMAGE-A6ペプチド（例えば、約0.05 ng/ml〜約5 ng/ml、0.05 ng/ml、0.1 ng/ml、0.5 ng/ml、1 ng/ml、又は5 ng/ml）をパルスした抗原陰性HLA-DPβ1*04+ 標的細胞との共培養時に、少なくとも約200 pg/ml以上（例えば、200 pg/ml以上、300 pg/ml以上、400 pg/ml以上、500 pg/ml以上、600 pg/ml以上、700 pg/ml以上、1000 pg/ml以上、5,000 pg/ml以上、7,000 pg/ml以上、10,000 pg/ml以上、又は20,000 pg/ml以上）のIFN-gを分泌する場合、TCRはMAGE-A3及び／又
はMAGE-A6に対して「抗原特異性」を有すると考えてよい。代替的又は追加的に、TCRを発現するT細胞が、低濃度のMAGE-A3及び／又はMAGE-A6ペプチドをパルスした抗原陰性HLA-DPβ1*04+ 標的細胞との共培養時に、形質導入されていないPBLのバックグラウンドレベルのIFN-γよりも少なくとも2倍多いIFN-γを分泌する場合、TCRはMAGE-A3及び／又はMAGE-A6に対して「抗原特異性」を有すると考えてよい。本発明のTCR（その機能的部分及び機
能的変異体を含む）はまた、より高濃度のMAGE-A3及び／又はMAGE-A6ペプチドをパルスした抗原陰性HLA-DPβ1*04+ 標的細胞との共培養時にIFN-γを分泌してもよい。 As used herein, the phrase "antigen specificity" means that the TCR specifically binds to MAGE-A3 and / or MAGE-A6 with high avidity and is immunologically recognizable. Means. For example, T cells expressing TCR have low concentrations of MAGE-A3 and / or MAGE-A6 peptides (eg, about 0.05 ng / ml to about 5 ng / ml, 0.05 ng / ml, 0.1 ng / ml, 0.5 ng). Antigen-negative HLA-DPβ1 * 04 + pulsed with / ml, 1 ng / ml, or 5 ng / ml) At least about 200 pg / ml or more (eg, 200 pg / ml or more, 300) when co-cultured with target cells pg / ml or more, 400 pg / ml or more, 500 pg / ml or more, 600 pg / ml or more, 700 pg / ml or more, 1000 pg / ml or more, 5,000 pg / ml or more, 7,000 pg / ml or more, 10,000 pg / ml When secreting IFN-g (more than ml, or more than 20,000 pg / ml), TCR may be considered to have "antigen specificity" for MAGE-A3 and / or MAGE-A6. Alternatively or additionally, TCR-expressing T cells are transfected during co-culture with antigen-negative HLA-DPβ1 * 04 + target cells pulsed with low concentrations of MAGE-A3 and / or MAGE-A6 peptides. A TCR may be considered to have "antigen specificity" for MAGE-A3 and / or MAGE-A6 if it secretes at least twice as much IFN-γ as background levels of non-PBL. .. The TCRs of the invention (including functional portions and functional variants thereof) are also co-cultured with antigen-negative HLA-DPβ1 * 04 + target cells pulsed with higher concentrations of MAGE-A3 and / or MAGE-A6 peptides. IFN-γ may be secreted during culturing.

本発明の一実施態様は、任意のMAGE-A3タンパク質、ポリペプチド又はペプチドに対す
る抗原特異性を有するTCR（その機能的部分及び変異体を含む）を提供する。本発明のTCR（その機能的部分及び機能的変異体を含む）は、配列番号1を含むか、配列番号1からなるか又は実質的に配列番号1からなるMAGE-A3タンパク質に対する抗原特異性を有してよい。本発明の好ましい実施態様において、TCR（その機能的部分及び変異体を含む）は、KKLLTQHFVQENYLEY（配列番号2）を含むか、該配列からなるか又は実質的に該配列からなるMAGE-A3243-258ペプチドに対する抗原特異性を有する。 One embodiment of the invention provides a TCR (including functional portions and variants thereof) having antigen specificity for any MAGE-A3 protein, polypeptide or peptide. The TCRs of the invention (including functional portions and variants thereof) have antigen specificity for the MAGE-A3 protein comprising SEQ ID NO: 1, consisting of SEQ ID NO: 1 or substantially consisting of SEQ ID NO: 1. May have. In a preferred embodiment of the invention, the TCR (including functional portions and variants thereof) comprises, consists of, or substantially consists of KKLLTQHFVQENYLEY (SEQ ID NO: 2) MAGE-A3 243-. 258 Has antigen specificity for peptides.

本発明のTCR（その機能的部分及び機能的変異体を含む）は、ヒト白血球型抗原（HLA）-DPβ1*04依存性の様式で、MAGE-A3を認識することができる。本明細書で使用する場合、「HLA-DPβ1*04依存性の様式」とは、TCRが、HLA-DPβ1*04分子との関連の中で、MAGE-A3タンパク質、ポリペプチド又はペプチドとの結合時に免疫応答を引き起こすことを意味する。本発明のTCR（その機能的部分及び機能的変異体を含む）は、HLA-DPβ1*04分子によ
り提示されるMAGE-A3を認識でき、MAGE-A3に加えてHLA-DPβ1*04分子と結合し得る。本発明のTCR（その機能的部分及び機能的変異体を含む）がMAGE-A3を認識することに関連する、例となるHLA-DPβ1*04分子には、HLA-DPβ1*0401及び／又はHLA-DPβ1*0402アレルによりコードされるものが含まれる。 The TCR of the invention (including its functional portion and functional variants) is capable of recognizing MAGE-A3 in a human leukocyte antigen (HLA) -DPβ1 * 04 dependent manner. As used herein, "HLA-DPβ1 * 04 dependent mode" means that the TCR binds to the MAGE-A3 protein, polypeptide or peptide in the context of the HLA-DPβ1 * 04 molecule. Sometimes it means to provoke an immune response. TCR of the present invention (including its functional part and functional variants) can recognize MAGE-A3 presented by HLA-DPβ1 * 04 molecule, bind to HLA-DPβ1 * 04 molecules in addition to MAGE-A3 Can be. HLA-DPβ1 * 0401 and / or HLA are examples of HLA-DPβ1 * 04 molecules associated with the recognition of MAGE-A3 by the TCRs of the invention (including their functional parts and variants). -DPβ1 * 0402 Includes those encoded by alleles.

本発明の一実施態様は、任意のMAGE-A6タンパク質、ポリペプチド又はペプチドに対す
る抗原特異性を有するTCR（その機能的部分及び変異体を含む）を提供する。本発明のTCR（その機能的部分及び機能的変異体を含む）は、配列番号45を含むか、配列番号45からなるか又は実質的に配列番号45からなるMAGE-A6タンパク質に対する抗原特異性を有してよ
い。本発明の好ましい実施態様において、TCR（その機能的部分及び機能的変異体を含む
）は、KKLLTQYFVQENYLEY（配列番号46）を含むか、該配列からなるか又は実質的に該配列からなるMAGE-A6243-258ペプチドに対する抗原特異性を有する。 One embodiment of the invention provides a TCR (including functional portions and variants thereof) having antigen specificity for any MAGE-A6 protein, polypeptide or peptide. The TCRs of the invention (including functional portions and variants thereof) have antigen specificity for the MAGE-A6 protein comprising SEQ ID NO: 45, consisting of SEQ ID NO: 45, or substantially consisting of SEQ ID NO: 45. May have. In a preferred embodiment of the invention, the TCR (including its functional portion and functional variant) comprises, consists of, or substantially consists of KKLLTQYFVQENYLEY (SEQ ID NO: 46) MAGE-A6. 243-258 Has antigen specificity for peptides.

本発明は、2つのポリペプチド（すなわち、ポリペプチド鎖）、例えば、TCRのアルファ（α）鎖、TCRのベータ（β）鎖、TCRのガンマ（γ）鎖、TCRのデルタ（δ）鎖、又はそ
れらの組み合わせなどを含むTCRを提供する。本発明のTCRのポリペプチドは、TCRがHLA-DPβ1*04と関連してMAGE-A3に対する抗原特異性を有するならば、任意のアミノ酸配列を含み得る。 The present invention relates to two polypeptides (ie, polypeptide chains), eg, the alpha (α) chain of the TCR, the beta (β) chain of the TCR, the gamma (γ) chain of the TCR, the delta (δ) chain of the TCR, Or provide a TCR including a combination thereof and the like. The TCR polypeptide of the invention may contain any amino acid sequence as long as the TCR has antigen specificity for MAGE-A3 in association with HLA-DPβ1 * 04.

本発明の一実施態様において、TCRは、2つのポリペプチド鎖であって、そのそれぞれがTCRの相補性決定領域（CDR）1、CDR2及びCDR3を含む可変領域を含む、鎖を含む。本発明
の一実施態様において、TCRは、配列番号3又は13のアミノ酸配列を含むCDR1（α鎖のCDR1）、配列番号4又は14のアミノ酸配列を含むCDR2（α鎖のCDR2）、及び配列番号5又は15のアミノ酸配列を含むCDR3（α鎖のCDR3）を含む第一のポリペプチド鎖と、配列番号6又は16のアミノ酸配列を含むCDR1（β鎖のCDR1）、配列番号7又は17のアミノ酸配列を含むCDR2（β鎖のCDR2）、及び配列番号8又は18のアミノ酸配列を含むCDR3（β鎖のCDR3）を含む
第二のポリペプチド鎖とを含む。この点について、本発明のTCRは、配列番号3〜5、6〜8
、13〜15及び16〜18のいずれか1つ以上からなる群から選択されるアミノ酸配列のいずれ
か1つ以上を含み得る。好ましくは、TCRは、配列番号3〜8又は13〜18のアミノ酸配列を含む。より好ましくは、TCRは、配列番号3〜8のアミノ酸配列を含む。 In one embodiment of the invention, the TCR comprises two polypeptide chains, each comprising a variable region comprising the complementarity determining regions (CDRs) 1, CDR2 and CDR3 of the TCR. In one embodiment of the invention, the TCR is CDR1 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3 or 13 (CDR1 of the α chain), CDR2 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4 or 14 (CDR2 of the α chain), and SEQ ID NO: The first polypeptide chain containing CDR3 (CDR3 of the α chain) containing the amino acid sequence of 5 or 15 and CDR1 (CDR1 of the β chain) containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6 or 16 and the amino acid of SEQ ID NO: 7 or 17. It contains a CDR2 containing a sequence (CDR2 of a β chain) and a second polypeptide chain containing a CDR3 containing an amino acid sequence of SEQ ID NO: 8 or 18 (CDR3 of a β chain). In this regard, the TCRs of the present invention have SEQ ID NOs: 3-5 and 6-8.
, 13-15 and 16-18 may contain any one or more of the amino acid sequences selected from the group consisting of any one or more. Preferably, the TCR comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3-8 or 13-18. More preferably, the TCR comprises the amino acid sequence of SEQ ID NOs: 3-8.

代替的又は追加的に、TCRは、上記CDRを含むTCRの可変領域のアミノ酸配列を含み得る
。この点について、TCRは、配列番号9若しくは19（α鎖の可変領域）、又は10若しくは20（β鎖の可変領域）、配列番号9及び10の両方、又は配列番号19及び20の両方のアミノ酸
配列を含み得る。好ましくは、本発明のTCRは、配列番号9及び10の両方のアミノ酸配列を含む。 Alternatively or additionally, the TCR may comprise the amino acid sequence of the variable region of the TCR, including the CDRs described above. In this regard, TCR is an amino acid of SEQ ID NO: 9 or 19 (variable region of α chain), or 10 or 20 (variable region of β chain), both of SEQ ID NOs: 9 and 10, or both of SEQ ID NOs: 19 and 20. May include an array. Preferably, the TCR of the invention comprises both amino acid sequences of SEQ ID NOs: 9 and 10.

代替的又は追加的に、TCRは、TCRのα鎖及びTCRのβ鎖を含み得る。本発明のTCRのα鎖及びβ鎖はそれぞれ、任意のアミノ酸配列を独立して含み得る。好ましくは、α鎖は、上記α鎖の可変領域を含む。この点について、本発明のTCRは、配列番号11又は21のアミノ
酸配列を含み得る。このタイプのα鎖は、TCRの任意のβ鎖とペアとなり得る。好ましく
は、本発明のTCRのβ鎖は、上記β鎖の可変領域を含む。この点について、本発明のTCRは、配列番号12又は22のアミノ酸配列を含み得る。従って、本発明のTCRは、配列番号11、12、21若しくは22、配列番号11及び12の両方、又は配列番号21及び22の両方のアミノ酸配
列を含み得る。好ましくは、本発明のTCRは、配列番号11及び12の両方のアミノ酸配列を
含む。 Alternatively or additionally, the TCR may include the α chain of the TCR and the β chain of the TCR. The α-chain and β-chain of the TCR of the present invention can each independently contain any amino acid sequence. Preferably, the α chain comprises the variable region of the α chain. In this regard, the TCR of the invention may include the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11 or 21. This type of α chain can be paired with any β chain of the TCR. Preferably, the β chain of the TCR of the present invention comprises the variable region of the β chain. In this regard, the TCR of the invention may include the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12 or 22. Thus, the TCR of the invention may comprise the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 11, 12, 21 or 22, both SEQ ID NOs: 11 and 12, or both SEQ ID NOs: 21 and 22. Preferably, the TCR of the invention comprises both amino acid sequences of SEQ ID NOs: 11 and 12.

本発明の範囲には、本明細書に記載の本発明のTCRの機能的変異体が含まれる。本明細
書で使用する場合、用語「機能的変異体（functional variant）」とは、親TCR、ポリペ
プチド又はタンパク質と実質的又は顕著な配列同一性又は類似性を有するTCR、ポリペプ
チド又はタンパク質であって、該機能的変異体がTCR、ポリペプチド又はタンパク質（該
機能的変異体はその変異体である）の生物学的活性を保持するものをいう。機能的変異体は、例えば、親TCR、ポリペプチド又はタンパク質と類似の程度に、同程度に、又はより
高い程度に、MAGE-A3及び／又はMAGE-A6（親TCRが抗原特異性を有するか、又は親ポリペ
プチド若しくはタンパク質が特異的に結合する）と特異的に結合する能力を保持する、本明細書に記載のTCR、ポリペプチド又はタンパク質（親TCR、ポリペプチド又はタンパク質）の変異体を包含する。親TCR、ポリペプチド又はタンパク質に関連して、機能的変異体
は、親TCR、ポリペプチド又はタンパク質に対して、アミノ酸配列において、例えば、少
なくとも約30％、50％、75％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％又はそれ以上
同一であり得る。 The scope of the invention includes functional variants of the TCR of the invention described herein. As used herein, the term "functional variant" is a TCR, polypeptide or protein that has substantial or significant sequence identity or similarity to the parent TCR, polypeptide or protein. The functional variant retains the biological activity of a TCR, polypeptide or protein (the functional variant is the variant thereof). Functional variants are, for example, MAGE-A3 and / or MAGE-A6 (whether the parent TCR has antigen specificity) to a similar degree, to the same extent, or to a higher degree as the parent TCR, polypeptide or protein. , Or variants of the TCR, polypeptide or protein (parent TCR, polypeptide or protein) described herein that retain the ability to specifically bind to the parent polypeptide or protein). Include. In relation to the parent TCR, polypeptide or protein, the functional variant relative to the parent TCR, polypeptide or protein in amino acid sequence, eg, at least about 30%, 50%, 75%, 80%, 90. %, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more can be identical.

機能的変異体は、例えば、少なくとも1つの保存的アミノ酸置換を有する親TCR、ポリペプチド又はタンパク質のアミノ酸配列を含み得る。保存的アミノ酸置換は、当分野で公知であり、特定の物理的及び／又は化学的特性を有する1つのアミノ酸が、同じ化学的又は
物理的特性を有する別のアミノ酸と交換されるアミノ酸置換を含む。例えば、保存的アミノ酸置換は、酸性アミノ酸の別の酸性アミノ酸での置換（例えば、Asp又はGlu）、非極性側鎖を有するアミノ酸の、非極性側鎖を有する別のアミノ酸での置換（例えば、Ala、Gly、Val、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Trp、Valなど）、塩基性アミノ酸の別の塩基性アミノ酸での置換（Lys、Argなど）、極性側鎖を有するアミノ酸の、極性側鎖を有する別のアミノ酸での置換（Asn、Cys、Gln、Ser、Thr、Tyrなど）などであり得る。 Functional variants may include, for example, the amino acid sequence of the parent TCR, polypeptide or protein with at least one conservative amino acid substitution. Conservative amino acid substitutions are known in the art and include amino acid substitutions in which one amino acid with a particular physical and / or chemical property is replaced with another amino acid with the same chemical or physical properties. .. For example, a conservative amino acid substitution is a substitution of an acidic amino acid with another acidic amino acid (eg, Asp or Glu), a substitution of an amino acid with a non-polar side chain with another amino acid having a non-polar side chain (eg, eg). Ala, Gly, Val, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Trp, Val, etc.), Substitution of a basic amino acid with another basic amino acid (Lys, Arg, etc.), Polarity of an amino acid with a polar side chain It can be a substitution with another amino acid having a side chain (Asn, Cys, Gln, Ser, Thr, Tyr, etc.).

代替的又は追加的に、機能的変異体は、少なくとも1つの非保存的アミノ酸置換を有す
る親TCR、ポリペプチド又はタンパク質のアミノ酸配列を含み得る。この場合、非保存的
アミノ酸置換が、機能的変異体の生物学的活性を妨害又は阻害しないことが好ましい。好ましくは、非保存的アミノ酸置換は、親TCR、ポリペプチド又はタンパク質と比較して機
能的変異体の生物学的活性が増加するように、機能的変異体の生物学的活性を増強する。 Alternatively or additionally, the functional variant may comprise the amino acid sequence of the parent TCR, polypeptide or protein with at least one non-conservative amino acid substitution. In this case, it is preferred that the non-conservative amino acid substitution does not interfere with or inhibit the biological activity of the functional variant. Preferably, the non-conservative amino acid substitution enhances the biological activity of the functional variant such that the biological activity of the functional variant is increased as compared to the parent TCR, polypeptide or protein.

この点について、本発明の実施態様は、（a）配列番号3〜8若しくは（b）配列番号21〜22を含む単離若しくは精製されたTCR、又は（a）若しくは（b）の機能的変異体であって
、ここで、該機能的変異体が、（a）のいずれか1つ以上若しくは（b）のいずれか1つ以上において少なくとも1つのアミノ酸置換を有する（a）若しくは（b）を含み、かつ該機能
的変異体が、HLA-DPβ1*04と関連してMAGE-A3に対する抗原特異性を有するもの、を提供
する。好ましくは、アミノ酸置換は、α又はβ鎖のCDR3領域、好ましくはα鎖のCDR3領域に位置する。いくつかの実施態様において、機能的変異体（又はその機能的部分）は、親TCRアミノ酸配列と比較して、MAGE-A3に対する反応性の増加を提供する。一般に、置換されたα鎖アミノ酸配列である配列番号29、31及び33は、天然の置換されていない配列番号11（TCR α鎖）の全部又は一部に対応し、配列番号29、31及び33は、配列番号11と比較した場合、少なくとも1つの置換を有する。好ましくは、天然のSer116、Ser117、Gly118及
びThr119の1つ以上が置換される。同様に、置換されたβ鎖アミノ酸配列である配列番号30、32及び34は、天然の置換されていない配列番号12（TCR β鎖）の全部又は一部に対応
し、配列番号30、32及び34は、配列番号12と比較した場合、少なくとも1つの置換を有す
る。好ましくは、天然のArg115、Thr116、Gly117及びPro118の1つ以上が置換される。 In this regard, embodiments of the invention are an isolated or purified TCR comprising (a) SEQ ID NOs: 3-8 or (b) SEQ ID NOs: 21-22, or functional variants of (a) or (b). A body, wherein the functional variant has at least one amino acid substitution in any one or more of (a) or any one or more of (b) (a) or (b). Provided are those in which the functional variant has antigen specificity for MAGE-A3 in association with HLA-DPβ1 * 04. Preferably, the amino acid substitution is located in the CDR3 region of the α or β chain, preferably in the CDR3 region of the α chain. In some embodiments, the functional variant (or functional portion thereof) provides increased reactivity to MAGE-A3 as compared to the parent TCR amino acid sequence. In general, the substituted α chain amino acid sequences, SEQ ID NOs: 29, 31 and 33, correspond to all or part of the naturally unsubstituted SEQ ID NO: 11 (TCR α chain), SEQ ID NOs: 29, 31 and 33. Has at least one substitution when compared to SEQ ID NO: 11. Preferably, one or more of the native Ser116, Ser117, Gly118 and Thr119 are replaced. Similarly, the substituted β-chain amino acid sequences SEQ ID NOs: 30, 32 and 34 correspond to all or part of the naturally unsubstituted SEQ ID NO: 12 (TCR β chain), SEQ ID NOs: 30, 32 and 34 has at least one substitution when compared to SEQ ID NO: 12. Preferably, one or more of the native Arg115, Thr116, Gly117 and Pro118 are replaced.

特に、本発明は、（i）配列番号29であって、Xaa4がSer、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；Xaa5がSer、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；Xaa6がGly、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；かつXaa7がThr、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであるも
の、及び／又は（ii）配列番号30であって、Xaa4がArg、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；Xaa5がThr、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；Xaa6がGly、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；かつXaa7がPro、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであるもの、を含むTCRの機能的変異体を提供する。配列番号29は、配列番号29においてSer4、Ser5、Gly6及びThr7の1つ以上が置換されていることを除いて、一般に、天然の置換されていない配列番号11の113〜123位に相当する。好ましくは、機能的変異体は、（a）配列番号29で
あって、Xaa4がAlaであり、Xaa5がSerであり、Xaa6がGlyであり、かつXaa7がThrであるもの、又は（b）配列番号29であって、Xaa4がSerであり、Xaa5がAlaであり、Xaa6がGlyであり、かつXaa7がThrであるものを含む。いくつかの実施態様において、配列番号29は野生
型CDR3αである配列番号5を含んでよいが、好ましくは、配列番号29は配列番号5を含まない。配列番号30は、配列番号30においてArg4、Thr5、Gly6及びPro7の1つ以上が置換され
ていることを除いて、一般に、天然の置換されていない配列番号12の112〜126位に相当する。いくつかの実施態様において、配列番号30は野生型CDR3βである配列番号8を含んで
よいが、好ましくは、配列番号30は配列番号8を含まない。 In particular, the present invention is (i) SEQ ID NO: 29, where Xaa4 is Ser, Ala, Leu, Ile, Val or Met; Xaa5 is Ser, Ala, Leu, Ile, Val or Met; Xaa6 is. Gly, Ala, Leu, Ile, Val or Met; and Xaa7 being Thr, Ala, Leu, Ile, Val or Met and / or (ii) SEQ ID NO: 30 and Xaa4 being Arg, Ala. , Leu, Ile, Val or Met; Xaa5 is Thr, Ala, Leu, Ile, Val or Met; Xaa6 is Gly, Ala, Leu, Ile, Val or Met; and Xaa7 is Pro, Ala, Provided are functional variants of TCR, including those that are Leu, Ile, Val or Met. SEQ ID NO: 29 generally corresponds to positions 113-123 of naturally unreplaced SEQ ID NO: 11, except that one or more of Ser4, Ser5, Gly6 and Thr7 are substituted in SEQ ID NO: 29. Preferably, the functional variant is (a) SEQ ID NO: 29, Xaa4 is Ala, Xaa5 is Ser, Xaa6 is Gly, and Xaa7 is Thr, or (b) sequence. Includes number 29, where Xaa4 is Ser, Xaa5 is Ala, Xaa6 is Gly, and Xaa7 is Thr. In some embodiments, SEQ ID NO: 29 may include SEQ ID NO: 5, which is wild-type CDR3α, but preferably SEQ ID NO: 29 does not include SEQ ID NO: 5. SEQ ID NO: 30 generally corresponds to positions 112-126 of the native unsubstituted SEQ ID NO: 12, except that one or more of Arg4, Thr5, Gly6 and Pro7 are substituted in SEQ ID NO: 30. In some embodiments, SEQ ID NO: 30 may include SEQ ID NO: 8, which is wild-type CDR3β, but preferably SEQ ID NO: 30 does not include SEQ ID NO: 8.

本発明はまた、（i）配列番号31であって、Xaa116がSer、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；Xaa117がSer、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；Xaa118がGly、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；かつXaa119がThr、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetで
あるもの；及び／又は（ii）配列番号32であって、Xaa115がArg、Ala、Leu、Ile、Val若
しくはMetであり；Xaa116がThr、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；Xaa117がGly、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；かつXaa118がPro、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであるもの、を含むTCRの機能的変異体を提供する。配列番号31は、配列番号31においてSer116、Ser117、Gly118及びThr119の1つ以上の1つ以上が置換されていることを除いて、一般に、天然の置換されていない配列番号11の1〜134位に相当する。好ましくは、機能的変異体は、（a）配列番号31であって、Xaa116がAlaであり、Xaa117がSerであり、Xaa118がGlyであり、かつXaa119がThrであるもの、又は（b）配列番号31であって、Xaa116がSerであり、Xaa117がAlaであり、Xaa118がGlyであり、かつXaa119がThrであるものを含む。いくつかの実施態様において、配列番号31は野生型CDR3αである配列番号5を含んでよい
が、好ましくは、配列番号31は配列番号5を含まない。配列番号32は、配列番号32におい
てArg115、Thr116、Gly117及びPro118の1つ以上の1つ以上が置換されていることを除いて、一般に、天然の置換されていない配列番号12の1〜137位に相当する。いくつかの実施態様において、配列番号32は野生型CDR3βである配列番号8を含んでよいが、好ましくは、
配列番号32は配列番号8を含まない。 The invention is also (i) SEQ ID NO: 31, where Xaa116 is Ser, Ala, Leu, Ile, Val or Met; Xaa117 is Ser, Ala, Leu, Ile, Val or Met; Xaa118 is Gly. , Ala, Leu, Ile, Val or Met; and Xaa119 is Thr, Ala, Leu, Ile, Val or Met; and / or (ii) SEQ ID NO: 32 and Xaa115 is Arg, Ala, Leu, Ile, Val or Met; Xaa116 is Thr, Ala, Leu, Ile, Val or Met; Xaa117 is Gly, Ala, Leu, Ile, Val or Met; and Xaa118 is Pro, Ala, Leu , Ile, Val or Met, providing functional variants of TCR. SEQ ID NO: 31 is generally located at positions 1-134 of the native unsubstituted SEQ ID NO: 11, except that one or more of Ser116, Ser117, Gly118 and Thr119 are substituted in SEQ ID NO: 31. Corresponds to. Preferably, the functional variant is (a) SEQ ID NO: 31, where Xaa116 is Ala, Xaa117 is Ser, Xaa118 is Gly, and Xaa119 is Thr, or (b) sequence. The number 31 includes those in which Xaa116 is Ser, Xaa117 is Ala, Xaa118 is Gly, and Xaa119 is Thr. In some embodiments, SEQ ID NO: 31 may include SEQ ID NO: 5, which is wild-type CDR3α, but preferably SEQ ID NO: 31 does not include SEQ ID NO: 5. SEQ ID NO: 32 is generally located at positions 1-137 of the native, unsubstituted SEQ ID NO: 12, except that one or more of Arg115, Thr116, Gly117 and Pro118 are substituted in SEQ ID NO: 32. Corresponds to. In some embodiments, SEQ ID NO: 32 may include SEQ ID NO: 8, which is wild-type CDR3β, but preferably.
SEQ ID NO: 32 does not include SEQ ID NO: 8.

本発明はまた、（i）配列番号33であって、Xaa116がSer、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；Xaa117がSer、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；Xaa118がGly、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；かつXaa119がThr、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetで
あるもの；及び／又は（ii）配列番号34であって、Xaa115がArg、Ala、Leu、Ile、Val若
しくはMetであり；Xaa116がThr、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；Xaa117がGly、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；かつXaa118がPro、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであるもの、を含むTCRの機能的変異体を提供する。配列番号33は、配列番号33においてSer116、Ser117、Gly118及びThr119の1つ以上の1つ以上が置換されていることを除いて、一般に、天然の置換されていない配列番号11の1〜275位に相当する。好ましくは、機能的変異体は、（a）配列番号33であって、Xaa116がAlaであり、Xaa117がSerであり、Xaa118がGlyであり、かつXaa119がThrであるもの、又は（b）配列番号33であって、Xaa116がSerであり、Xaa117がAlaであり、Xaa118がGlyであり、かつXaa119がThrであるものを含む。いくつかの実施態様において、配列番号33は野生型CDR3αである配列番号5を含んでよい
が、好ましくは、配列番号33は配列番号5を含まない。配列番号34は、配列番号34におい
てArg115、Thr116、Gly117及びPro118の1つ以上の1つ以上が置換されていることを除いて、一般に、天然の置換されていない配列番号12の1〜313位に相当する。いくつかの実施態様において、配列番号34は野生型CDR3βである配列番号8を含んでよいが、好ましくは、
配列番号34は配列番号8を含まない。 The invention is also (i) SEQ ID NO: 33, where Xaa116 is Ser, Ala, Leu, Ile, Val or Met; Xaa117 is Ser, Ala, Leu, Ile, Val or Met; Xaa118 is Gly. , Ala, Leu, Ile, Val or Met; and Xaa119 is Thr, Ala, Leu, Ile, Val or Met; and / or (ii) SEQ ID NO: 34 and Xaa115 is Arg, Ala, Leu, Ile, Val or Met; Xaa116 is Thr, Ala, Leu, Ile, Val or Met; Xaa117 is Gly, Ala, Leu, Ile, Val or Met; and Xaa118 is Pro, Ala, Leu , Ile, Val or Met, providing functional variants of TCR. SEQ ID NO: 33 is generally located at positions 1-275 of the native unsubstituted SEQ ID NO: 11, except that one or more of Ser116, Ser117, Gly118 and Thr119 are substituted in SEQ ID NO: 33. Corresponds to. Preferably, the functional variant is (a) SEQ ID NO: 33, where Xaa116 is Ala, Xaa117 is Ser, Xaa118 is Gly, and Xaa119 is Thr, or (b) sequence. The number 33 includes those in which Xaa116 is Ser, Xaa117 is Ala, Xaa118 is Gly, and Xaa119 is Thr. In some embodiments, SEQ ID NO: 33 may include SEQ ID NO: 5, which is wild-type CDR3α, but preferably SEQ ID NO: 33 does not include SEQ ID NO: 5. SEQ ID NO: 34 is generally located at positions 1-313 of naturally unsubstituted SEQ ID NO: 12, except that one or more of Arg115, Thr116, Gly117 and Pro118 are substituted in SEQ ID NO: 34. Corresponds to. In some embodiments, SEQ ID NO: 34 may include SEQ ID NO: 8, which is wild-type CDR3β, but preferably.
SEQ ID NO: 34 does not include SEQ ID NO: 8.

本発明のTCRと同様に、本明細書に記載の機能的変異体は、2つのポリペプチド鎖であって、そのそれぞれがTCRのCDR1、CDR2及びCDR3を含む可変領域を含む、鎖を含む。好まし
くは、第一のポリペプチド鎖は、配列番号3のアミノ酸配列を含むCDR1（α鎖のCDR1）、
配列番号4のアミノ酸配列を含むCDR2（α鎖のCDR2）、及び配列番号29のアミノ酸配列を
含む置換されたCDR3（α鎖の置換されたCDR3）を含み、かつ第二のポリペプチド鎖は、配列番号6のアミノ酸配列を含むCDR1（β鎖のCDR1）、配列番号7のアミノ酸配列を含むCDR2（β鎖のCDR2）、及び配列番号8のアミノ酸配列を含むCDR3（β鎖のCDR3）を含む。別の
実施態様において、第一のポリペプチド鎖は、配列番号3のアミノ酸配列を含むCDR1（α
鎖のCDR1）、配列番号4のアミノ酸配列を含むCDR2（α鎖のCDR2）、及び配列番号5のアミノ酸配列を含むCDR3（α鎖のCDR3）を含み、かつ第二のポリペプチド鎖は、配列番号6の
アミノ酸配列を含むCDR1（β鎖のCDR1）、配列番号7のアミノ酸配列を含むCDR2（β鎖のCDR2）、及び配列番号30のアミノ酸配列を含む置換されたCDR3（β鎖の置換されたCDR3）
を含む。この点について、本発明のTCRの機能的変異体は、配列番号3〜5；配列番号3〜4
及び29；配列番号6〜8；並びに配列番号6〜7及び30、からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み得る。好ましくは、TCRの機能的変異体は、配列番号3〜4、29及び6〜8；配列
番号3〜7及び30；又は配列番号3〜4、29、6〜7及び30のアミノ酸配列を含む。より好ましくは、TCRの機能的変異体は、配列番号3〜4、29及び6〜8のアミノ酸配列を含む。 Similar to the TCR of the invention, the functional variants described herein comprise a chain of two polypeptide chains, each containing a variable region containing CDR1, CDR2 and CDR3 of the TCR. Preferably, the first polypeptide chain is CDR1 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3 (CDR1 of the α chain),
The second polypeptide chain comprises a CDR2 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4 (CDR2 of the α chain) and a substituted CDR3 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 29 (the substituted CDR3 of the α chain). Includes CDR1 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6 (CDR1 of the β chain), CDR2 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7 (CDR2 of the β chain), and CDR3 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8 (CDR3 of the β chain). .. In another embodiment, the first polypeptide chain comprises CDR1 (α) comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3.
The chain CDR1), CDR2 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4 (CDR2 of the α chain), and CDR3 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5 (CDR3 of the α chain), and the second polypeptide chain is a sequence. CDR1 containing the amino acid sequence of No. 6 (CDR1 of the β chain), CDR2 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7 (CDR2 of the β chain), and substituted CDR3 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 30 (replaced β chain). CDR3)
including. In this regard, the functional variants of TCR of the present invention are SEQ ID NOs: 3-5; SEQ ID NOs: 3-4.
And 29; SEQ ID NOs: 6-8; and may include amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 6-7 and 30. Preferably, the functional variant of the TCR comprises the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 3-4, 29 and 6-8; SEQ ID NOs: 3-7 and 30; or SEQ ID NOs: 3-4, 29, 6-7 and 30. .. More preferably, functional variants of the TCR include the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 3-4, 29 and 6-8.

代替的又は追加的に、TCRの機能的変異体は、上記CDRを含むTCRの可変領域の置換され
たアミノ酸配列を含み得る。この点について、TCRは、配列番号31の置換されたアミノ酸
配列（α鎖の置換された可変領域）、10（β鎖の可変領域）、配列番号31及び10の両方、配列番号32の置換されたアミノ酸配列（β鎖の置換された可変領域）、9（α鎖の可変領
域）、配列番号9及び32の両方、又は配列番号31及び32の両方を含み得る。好ましくは、
本発明のTCRの機能的変異体は、配列番号31及び10、又は配列番号32及び9のアミノ酸配列を含む。より好ましくは、本発明のTCRの機能的変異体は、配列番号31及び10のアミノ酸
配列を含む。 Alternatively or additionally, the functional variant of the TCR may comprise a substituted amino acid sequence of the variable region of the TCR containing the CDRs described above. In this regard, the TCR is substituted of SEQ ID NO: 31, substituted amino acid sequence (alpha chain substituted variable region), 10 (β chain variable region), both SEQ ID NOs: 31 and 10, and SEQ ID NO: 32. It can contain the amino acid sequences (replaced variable regions of the β chain), 9 (variable regions of the α chain), both SEQ ID NOs: 9 and 32, or both SEQ ID NOs: 31 and 32. Preferably,
Functional variants of the TCR of the invention include the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 31 and 10 or SEQ ID NOs: 32 and 9. More preferably, the functional variant of TCR of the present invention comprises the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 31 and 10.

代替的又は追加的に、TCRの機能的変異体は、TCRの置換されたα鎖、及びTCRのβ鎖を
含み得る。本発明のTCRのα鎖及びβ鎖はそれぞれ、任意のアミノ酸配列を独立して含み
得る。好ましくは、置換されたα鎖は、上記α鎖の置換された可変領域を含む。この点について、本発明のTCRの置換されたα鎖は、配列番号33のアミノ酸配列を含み得る。この
タイプの本発明の置換されたα鎖は、TCRの任意のβ鎖とペアとなり得る。好ましくは、
本発明のTCRのβ鎖は、上記β鎖の可変領域を含む。この点について、本発明のTCRは、配列番号12のアミノ酸配列、又は置換されたアミノ酸配列である配列番号34を含み得る。このタイプの本発明の置換されたβ鎖は、TCRの任意のα鎖とペアとなり得る。この点につ
いて、本発明のTCRは、配列番号11又は33のアミノ酸配列を含み得る。従って、本発明のTCRの機能的変異体は、配列番号11、12、33、34、配列番号33及び34の両方；配列番号11及び34の両方；又は配列番号12及び33の両方のアミノ酸配列を含み得る。好ましくは、本発明のTCRの機能的変異体は、配列番号11及び34、又は配列番号12及び33のアミノ酸配列を
含む。より好ましくは、TCRの機能的変異体は、配列番号12及び33のアミノ酸配列を含む
。 Alternatively or additionally, functional variants of the TCR may include a substituted α chain of the TCR and a β chain of the TCR. The α-chain and β-chain of the TCR of the present invention can each independently contain any amino acid sequence. Preferably, the substituted α chain comprises the substituted variable region of the α chain. In this regard, the substituted α chain of the TCR of the present invention may comprise the amino acid sequence of SEQ ID NO: 33. This type of substituted α chain of the invention can be paired with any β chain of the TCR. Preferably,
The β chain of the TCR of the present invention contains the variable region of the β chain. In this regard, the TCR of the invention may include the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, or the substituted amino acid sequence, SEQ ID NO: 34. This type of substituted β chain of the invention can be paired with any α chain of the TCR. In this regard, the TCR of the invention may include the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11 or 33. Thus, functional variants of the TCR of the invention are SEQ ID NOs: 11, 12, 33, 34, both SEQ ID NOs: 33 and 34; both SEQ ID NOs: 11 and 34; or both amino acid sequences of SEQ ID NOs: 12 and 33. May include. Preferably, the functional variant of the TCR of the invention comprises the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 11 and 34, or SEQ ID NOs: 12 and 33. More preferably, the functional variant of TCR comprises the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 12 and 33.

本発明の一実施態様において、TCR（又はその機能的変異体）は、ヒト定常領域を含ん
でよい。この点について、TCR（又はその機能的変異体）は、配列番号23若しくは35（ヒ
トα鎖定常領域）、配列番号24若しくは36（ヒトβ鎖定常領域）、配列番号23及び24の両方、又は配列番号35及び36の両方を含むヒト定常領域を含み得る。好ましくは、TCR（又
はその機能的変異体）は、配列番号23及び24の両方を含む。 In one embodiment of the invention, the TCR (or functional variant thereof) may comprise a human constant region. In this regard, the TCR (or functional variant thereof) may be SEQ ID NO: 23 or 35 (human α chain constant region), SEQ ID NO: 24 or 36 (human β chain constant region), both SEQ ID NOs: 23 and 24, or It may contain a human constant region containing both SEQ ID NOs: 35 and 36. Preferably, the TCR (or functional variant thereof) comprises both SEQ ID NOs: 23 and 24.

本発明の別の実施態様において、TCR（又はその機能的変異体）は、ヒト／マウスキメ
ラTCR（又はその機能的変異体）を含み得る。この点について、TCR（又はその機能的変異体）は、配列番号25（マウスα鎖定常領域）、配列番号26（マウスβ鎖定常領域）、又は配列番号25及び26の両方を含むマウス定常領域を含み得る。好ましくは、TCR（又はその
機能的変異体）は、配列番号25及び26の両方を含む。 In another embodiment of the invention, the TCR (or functional variant thereof) may comprise a human / mouse chimeric TCR (or functional variant thereof). In this regard, the TCR (or functional variant thereof) is a mouse constant region comprising both SEQ ID NO: 25 (mouse α-chain constant region), SEQ ID NO: 26 (mouse β-chain constant region), or SEQ ID NOs: 25 and 26. May include. Preferably, the TCR (or functional variant thereof) comprises both SEQ ID NOs: 25 and 26.

本発明のヒト／マウスキメラTCR（又はその機能的変異体若しくは機能的部分）は、上
記CDRのいずれかを含み得る。この点について、本発明のヒト／マウスキメラTCR（又はその機能的変異体若しくは機能的部分）は、配列番号3〜5；配列番号13〜15；配列番号16〜18；配列番号3〜4及び29；配列番号6〜8；並びに配列番号6〜7及び30、からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み得る。好ましくは、ヒト／マウスキメラTCR（又はその機能
的変異体若しくは機能的部分）は、配列番号3〜8；配列番号13〜18；配列番号3〜4、29及
び6〜8；配列番号3〜7及び30；又は配列番号3〜4、29、6〜7及び30のアミノ酸配列を含む。より好ましくは、ヒト／マウスキメラTCR（又はその機能的変異体若しくは機能的部分
は、配列番号3〜4、29及び6〜8、又は配列番号3〜8のアミノ酸配列を含む。 The human / mouse chimeric TCR (or functional variant or functional portion thereof) of the present invention may contain any of the above CDRs. In this regard, the human / mouse chimeric TCR (or functional variant or functional portion thereof) of the present invention comprises SEQ ID NOs: 3-5; SEQ ID NOs: 13-15; SEQ ID NOs: 16-18; SEQ ID NOs: 3-4 and 29; may include an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 6-8; and SEQ ID NOs: 6-7 and 30. Preferably, the human / mouse chimeric TCR (or functional variant or functional portion thereof) has SEQ ID NOs: 3-8; SEQ ID NOs: 13-18; SEQ ID NOs: 3-4, 29 and 6-8; SEQ ID NOs: 3-8. 7 and 30; or comprises the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 3-4, 29, 6-7 and 30. More preferably, the human / mouse chimeric TCR (or its functional variant or functional moiety comprises the amino acid sequence of SEQ ID NOs: 3-4, 29 and 6-8, or SEQ ID NOs: 3-8.

代替的又は追加的に、ヒト／マウスキメラTCR（又はその機能的変異体若しくは機能的
部分）は、上記可変領域のいずれかを含み得る。この点について、本発明のヒト／マウスキメラTCR（又はその機能的変異体若しくは機能的部分）は、配列番号31の置換されたア
ミノ酸配列（α鎖の置換された可変領域）、配列番号10若しくは20（β鎖の可変領域）、配列番号32の置換されたアミノ酸配列（β鎖の置換された可変領域）、配列番号9若しく
は19（α鎖の可変領域）、配列番号9及び32の両方、配列番号31及び32の両方、配列番号31及び10の両方、配列番号9及び10の両方、又は配列番号19及び20の両方を含み得る。好ましくは、本発明のヒト／マウスキメラTCR（又はその機能的変異体若しくは機能的部分）
は、配列番号31及び10、配列番号9及び10、又は配列番号32及び9のアミノ酸配列を含む。より好ましくは、本発明のTCRの機能的変異体又は機能的部分は、配列番号31及び10、又
は配列番号9及び10のアミノ酸配列を含む。 Alternatively or additionally, the human / mouse chimeric TCR (or functional variant or functional portion thereof) may comprise any of the above variable regions. In this regard, the human / mouse chimeric TCR (or functional variant or functional portion thereof) of the present invention is the substituted amino acid sequence of SEQ ID NO: 31 (substituted variable region of α chain), SEQ ID NO: 10 or 20 (variable region of β chain), substituted amino acid sequence of SEQ ID NO: 32 (variable region of β chain), SEQ ID NO: 9 or 19 (variable region of α chain), both SEQ ID NOs: 9 and 32, It may include both SEQ ID NOs: 31 and 32, both SEQ ID NOs: 31 and 10, both SEQ ID NOs: 9 and 10, or both SEQ ID NOs: 19 and 20. Preferably, the human / mouse chimeric TCR of the invention (or a functional variant or portion thereof).
Contains the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 31 and 10, SEQ ID NOs: 9 and 10, or SEQ ID NOs: 32 and 9. More preferably, the functional variant or functional portion of the TCR of the present invention comprises the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 31 and 10 or SEQ ID NOs: 9 and 10.

代替的又は追加的に、ヒト／マウスキメラTCR（又はその機能的変異体若しくは機能的
部分）は、TCR（又はその機能的変異体若しくは機能的部分）のα鎖、及びTCR（又はその機能的変異体若しくは機能的部分）のβ鎖を含み得る。本発明のヒト／マウスキメラTCR
（又はその機能的変異体若しくは機能的部分）のα鎖及びβ鎖はそれぞれ、任意のアミノ酸配列を独立して含み得る。好ましくは、α鎖は、上記α鎖の可変領域を含む。この点について、本発明のヒト／マウスキメラTCR（又はその機能的変異体若しくは機能的部分）
は、配列番号27のアミノ酸配列を含み得る。このタイプの本発明のヒト／マウスキメラTCR（又はその機能的変異体若しくは機能的部分）は、TCR（又はその機能的変異体若しくは機能的部分）の任意のβ鎖とペアとなり得る。好ましくは、本発明のヒト／マウスキメラTCR（又はその機能的変異体若しくは機能的部分）のβ鎖は、上記β鎖の可変領域を含む
。この点について、本発明のヒト／マウスキメラTCR（又はその機能的変異体若しくは機
能的部分）は、配列番号28のアミノ酸配列を含み得る。従って、本発明のヒト／マウスキメラTCR（又はその機能的変異体若しくは機能的部分）は、配列番号27若しくは28、又は
配列番号27及び28の両方のアミノ酸配列を含み得る。好ましくは、本発明のTCRは、配列
番号27及び28のアミノ酸配列を含む。 Alternatively or additionally, the human / mouse chimeric TCR (or its functional variant or functional portion) is the α chain of the TCR (or its functional variant or functional portion), and the TCR (or its functional portion). It may contain the β chain of a variant or functional part). Human / mouse chimera TCR of the present invention
The α-chain and β-chain of (or its functional variant or functional portion thereof) may each independently contain any amino acid sequence. Preferably, the α chain comprises the variable region of the α chain. In this regard, the human / mouse chimeric TCR of the invention (or a functional variant or portion thereof).
May include the amino acid sequence of SEQ ID NO: 27. This type of human / mouse chimeric TCR (or functional variant or functional portion thereof) of the present invention can be paired with any β chain of the TCR (or functional variant or functional portion thereof). Preferably, the β chain of the human / mouse chimeric TCR (or functional variant or functional portion thereof) of the present invention comprises a variable region of the β chain. In this regard, the human / mouse chimeric TCR (or functional variant or functional portion thereof) of the invention may comprise the amino acid sequence of SEQ ID NO: 28. Thus, the human / mouse chimeric TCR (or functional variant or functional portion thereof) of the invention may comprise the amino acid sequence of SEQ ID NO: 27 or 28, or both SEQ ID NOs: 27 and 28. Preferably, the TCR of the invention comprises the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 27 and 28.

本発明はまた、本明細書に記載のTCR又は機能的変異体のいずれかの機能的部分を含む
ポリペプチドを提供する。本明細書で使用する場合、用語「ポリペプチド」は、オリゴペプチドを含み、1以上のペプチド結合により結合されたアミノ酸の単一鎖をいう。 The invention also provides a polypeptide comprising any functional portion of any of the TCRs or functional variants described herein. As used herein, the term "polypeptide" refers to a single chain of amino acids that comprises an oligopeptide and is linked by one or more peptide bonds.

本発明のポリペプチドに関して、機能的部分は、該機能的部分がMAGE-A3及び／又はMAGE-A6と特異的に結合するならば、TCR（又はその機能的変異体）（機能的部分はその一部
である）の連続アミノ酸を含む任意の部分であり得る。用語「機能的部分（functional portion）」とは、TCR（又はその機能的変異体）に関して用いられる場合、本発明のTCR（又はその機能的変異体）の任意の部分又は断片であって、その部分又は断片がTCR（又は
その機能的変異体）（その部分又は断片はその一部である）（親TCR又はその親機能的変
異体）の生物学的活性を保持するものをいう。機能的部分は、例えば、親TCR（又はその
機能的変異体）と類似の程度に、同程度に、又はより高い程度に、MAGE-A3（例えば、HLA-DPβ1*04依存性の様式で）若しくはMAGE-A6と特異的に結合する能力、又は癌を検出、治療若しくは予防する能力を保持する、TCR（又はその機能的変異体）の部分を包含する。
親TCR（又はその機能的変異体）に関連して、機能的部分は、例えば、親TCR（又はその機能的変異体）の約10％、25％、30％、50％、68％、80％、90％、95％又はそれ以上を含み得る。 For the polypeptides of the invention, the functional moiety is TCR (or a functional variant thereof) (the functional moiety thereof if the functional moiety specifically binds to MAGE-A3 and / or MAGE-A6). It can be any moiety that contains a continuous amino acid (which is part). The term "functional portion", when used with respect to TCR (or a functional variant thereof), is any portion or fragment of the TCR (or functional variant thereof) of the invention. A portion or fragment that retains the biological activity of a TCR (or its functional variant) (the portion or fragment thereof is a portion thereof) (parent TCR or its parental functional variant). The functional portion is, for example, MAGE-A3 (eg, in a HLA-DPβ1 * 04 dependent manner) to a degree similar to, to the same extent as, or to a higher degree than the parent TCR (or its functional variant). Alternatively, it includes a portion of TCR (or a functional variant thereof) that retains the ability to specifically bind to MAGE-A6 or to detect, treat or prevent cancer.
In relation to the parent TCR (or its functional variant), the functional portion is, for example, about 10%, 25%, 30%, 50%, 68%, 80 of the parent TCR (or its functional variant). May include%, 90%, 95% or more.

機能的部分は、該部分のアミノ末端若しくはカルボキシ末端又は両端に、更なるアミノ酸であって、親TCR又はその機能的変異体のアミノ酸配列には見られないものを含み得る
。望ましくは、更なるアミノ酸は、機能的部分の生物学的機能（例えば、MAGE-A3及び／
若しくはMAGE-A6と特異的に結合する；並びに／又は癌を検出、癌を治療若しくは予防す
る能力を有するなど）を妨害しない。さらに望ましくは、更なるアミノ酸は、親TCR又は
その機能的変異体の生物学的活性と比較して、その生物学的活性を増強する。 The functional moiety may include additional amino acids at the amino or carboxy terminus or both ends of the moiety that are not found in the amino acid sequence of the parent TCR or its functional variant. Desirably, the additional amino acids are the biological function of the functional part (eg, MAGE-A3 and /
Or specifically bind to MAGE-A6; and / or have the ability to detect, treat or prevent cancer, etc.). More preferably, additional amino acids enhance the biological activity of the parent TCR or its functional variant as compared to the biological activity.

ポリペプチドは、本発明のTCR又はその機能的変異体のα及びβ鎖のいずれか又は両方
の機能的部分、例えば、本発明のTCR又はその機能的変異体のα鎖及び／又はβ鎖の可変
領域のCDR1、CDR2及びCDR3の1つ以上（one of more）を含む機能的部分などを含み得る。この点について、ポリペプチドは、配列番号3若しくは13（α鎖のCDR1）、4若しくは14（α鎖のCDR2）、5、15若しくは29（α鎖のCDR3）、6若しくは16（β鎖のCDR1）、7若しく
は17（β鎖のCDR2）、8、18若しくは30（β鎖のCDR3）、又はそれらの組み合わせのアミ
ノ酸配列を含む機能的部分を含み得る。好ましくは、本発明のポリペプチドは、配列番号3〜5；3〜4及び29；6〜8；6〜7及び30；13〜15；16〜18；配列番号3〜8の全て；配列番号13〜18の全て；配列番号3〜4、29及び6〜8の全て；配列番号3〜7及び30の全て；又は配列番号3〜4、29、6〜7及び30の全てを含む機能的部分を含む。より好ましくは、ポリペプチドは、配列番号3〜8の全て、又は配列番号3〜4、29及び6〜8の全てのアミノ酸配列を含む機能的部分を含む。 Polypeptides are functional portions of either or both of the α and β chains of the TCR of the invention or its functional variants, eg, the α and / or β chains of the TCR of the invention or its functional variants. It may include functional parts including one or more of CDR1, CDR2 and CDR3 of the variable region. In this regard, the polypeptides are SEQ ID NO: 3 or 13 (α-chain CDR1), 4 or 14 (α-chain CDR2), 5, 15 or 29 (α-chain CDR3), 6 or 16 (β-chain CDR1). ), 7 or 17 (CDR2 of the β chain), 8, 18 or 30 (CDR3 of the β chain), or a functional portion containing the amino acid sequence of a combination thereof. Preferably, the polypeptides of the invention are SEQ ID NOs: 3-5; 3-4 and 29; 6-8; 6-7 and 30; 13-15; 16-18; all of SEQ ID NOs: 3-8; SEQ ID NOs: All of 13-18; All of SEQ ID NOs: 3-4, 29 and 6-8; All of SEQ ID NOs: 3-7 and 30; Or Functional including all of SEQ ID NOs: 3-4, 29, 6-7 and 30 Including the part. More preferably, the polypeptide comprises a functional moiety comprising all of SEQ ID NOs: 3-8, or all amino acid sequences of SEQ ID NOs: 3-4, 29 and 6-8.

代替的又は追加的に、本発明のポリペプチドは、例えば、上記CDR領域の組み合わせを
含む本発明のTCR又はその機能的変異体の可変領域を含み得る。この点について、ポリペ
プチドは、配列番号9、19若しくは31（α鎖の可変領域）、配列番号10、20若しくは32（
β鎖の可変領域）、配列番号9及び10の両方、配列番号19及び20の両方；配列番号31及び32の両方；配列番号9及び32の両方；又は配列番号10及び31の両方のアミノ酸配列を含み得る。好ましくは、ポリペプチドは、配列番号9及び10の両方、又は配列番号10及び31の両
方のアミノ酸配列を含む。 Alternatively or additionally, the polypeptides of the invention may include variable regions of the TCRs of the invention or functional variants thereof, including, for example, combinations of the CDR regions described above. In this regard, the polypeptide is SEQ ID NO: 9, 19 or 31 (variable region of the α chain), SEQ ID NO: 10, 20 or 32 (Variable region of α chain).
(Variable region of β chain), both SEQ ID NOs: 9 and 10, both SEQ ID NOs: 19 and 20; both SEQ ID NOs: 31 and 32; both SEQ ID NOs: 9 and 32; or both amino acid sequences of SEQ ID NOs: 10 and 31. May include. Preferably, the polypeptide comprises both the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 9 and 10 or both of SEQ ID NOs: 10 and 31.

代替的又は追加的に、本発明のポリペプチドは、本明細書に記載のTCR又はその機能的
変異体の1つのα又はβ鎖の全長を含み得る。この点について、本発明のポリペプチドは
、配列番号11、12、21、22、27、28、33又は34のアミノ酸配列を含み得る。或いは、本発明のポリペプチドは、本明細書に記載のTCR又はその機能的変異体のα及びβ鎖を含み得
る。例えば、本発明のポリペプチドは、配列番号11及び12の両方、配列番号21及び22の両方、配列番号33及び34の両方、配列番号11及び34の両方、配列番号12及び33の両方、又は配列番号27及び28の両方のアミノ酸配列を含み得る。好ましくは、ポリペプチドは、配列番号11及び12の両方、配列番号33及び12の両方、又は配列番号27及び28の両方のアミノ酸配列を含む。 Alternatively or additionally, the polypeptides of the invention may comprise the full length of the α or β chain of one of the TCRs or functional variants thereof described herein. In this regard, the polypeptides of the invention may comprise the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11, 12, 21, 22, 27, 28, 33 or 34. Alternatively, the polypeptides of the invention may comprise the α and β chains of the TCR or functional variants thereof described herein. For example, the polypeptides of the invention are both SEQ ID NOs: 11 and 12, both SEQ ID NOs: 21 and 22, both SEQ ID NOs: 33 and 34, both SEQ ID NOs: 11 and 34, both SEQ ID NOs: 12 and 33, or It may contain both amino acid sequences of SEQ ID NOs: 27 and 28. Preferably, the polypeptide comprises the amino acid sequences of both SEQ ID NOs: 11 and 12, both SEQ ID NOs: 33 and 12, or both SEQ ID NOs: 27 and 28.

本発明はさらに、本明細書に記載のポリペプチドの少なくとも1つを含むタンパク質を
提供する。「タンパク質」とは、1つ以上のポリペプチド鎖を含む分子を意味する。 The invention further provides a protein comprising at least one of the polypeptides described herein. "Protein" means a molecule containing one or more polypeptide chains.

一実施態様において、本発明のタンパク質は、配列番号3〜5、配列番号13〜15、又は配列番号3〜4及び29のアミノ酸配列を含む第一のポリペプチド鎖、並びに配列番号6〜8、配列番号16〜18、又は配列番号6〜7及び30のアミノ酸配列を含む第二のポリペプチド鎖を含み得る。代替的又は追加的に、本発明のタンパク質は、配列番号9、19又は31のアミノ酸
配列を含む第一のポリペプチド鎖、及び配列番号10、20又は32のアミノ酸配列を含む第二のポリペプチド鎖を含み得る。本発明のタンパク質は、例えば、配列番号11、21、27又は33のアミノ酸配列を含む第一のポリペプチド鎖、及び配列番号12、22、28又は34のアミノ酸配列を含む第二のポリペプチド鎖を含み得る。この場合、本発明のタンパク質はTCRで
あり得る。或いは、例えば、タンパク質が配列番号11、21、27若しくは33、及び配列番号
12、22、28若しくは34を含む単一のポリペプチド鎖を含むか、又はタンパク質の第一及び／若しくは第二のポリペプチド鎖が他のアミノ酸配列（例えば、免疫グロブリンをコードするアミノ酸配列又はその部分）をさらに含む場合には、本発明のタンパク質は融合タンパク質であり得る。この点について、本発明はまた、本明細書に記載の本発明のポリペプチドの少なくとも1つを、少なくとも1つの他のポリペプチドとともに含む融合タンパク質を提供する。他のポリペプチドは、融合タンパク質の別個（separate）のポリペプチドとして存在し得、或いは本明細書に記載の本発明のポリペプチドの1つとインフレーム（タ
ンデムに）で発現するポリペプチドとして存在し得る。他のポリペプチドは、限定されないが、免疫グロブリン、CD3、CD4、CD8、MHC分子、CD1分子（例えば、CD1a、CD1b、CD1c
、CD1dなど）を含む、任意のペプチド性若しくはタンパク質性分子、又はその部分をコードし得る。 In one embodiment, the proteins of the invention are a first polypeptide chain comprising the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 3-5, SEQ ID NOs: 13-15, or SEQ ID NOs: 3-4 and 29, as well as SEQ ID NOs: 6-8, It may comprise a second polypeptide chain comprising the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 16-18, or SEQ ID NOs: 6-7 and 30. Alternatively or additionally, the protein of the invention comprises a first polypeptide chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9, 19 or 31 and a second polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, 20 or 32. May contain chains. The protein of the invention is, for example, a first polypeptide chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11, 21, 27 or 33 and a second polypeptide chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, 22, 28 or 34. May include. In this case, the protein of the invention can be TCR. Alternatively, for example, the proteins are SEQ ID NO: 11, 21, 27 or 33, and SEQ ID NO:
Contains a single polypeptide chain comprising 12, 22, 28 or 34, or the first and / or second polypeptide chain of a protein has another amino acid sequence (eg, an amino acid sequence encoding an immunoglobulin or a sequence thereof). The protein of the invention can be a fusion protein if it further comprises. In this regard, the invention also provides a fusion protein comprising at least one of the polypeptides of the invention described herein, along with at least one other polypeptide. Other polypeptides may exist as separate polypeptides of the fusion protein, or as polypeptides expressed in-frame (in tandem) with one of the polypeptides of the invention described herein. obtain. Other polypeptides include, but are not limited to, immunoglobulins, CD3, CD4, CD8, MHC molecules, CD1 molecules (eg, CD1a, CD1b, CD1c).
, CD1d, etc.), any peptidic or proteinaceous molecule, or a portion thereof.

融合タンパク質は、本発明のポリペプチドの1以上のコピー、及び／又は他のポリペプ
チドの1以上のコピーを含み得る。例えば、融合タンパク質は、本発明のポリペプチドの
及び／又は他のポリペプチドの1、2、3、4、5又はそれ以上のコピーを含み得る。融合タ
ンパク質を作製するのに適した方法は当分野で公知であり、例えば、組換え方法が含まれる。例えば、Choi et al., Mol. Biotechnol. 31：193-202（2005）を参照。 The fusion protein may include one or more copies of the polypeptide of the invention and / or one or more copies of the other polypeptide. For example, the fusion protein may include 1, 2, 3, 4, 5 or more copies of the polypeptide of the invention and / or other polypeptides. Suitable methods for making fusion proteins are known in the art and include, for example, recombinant methods. See, for example, Choi et al., Mol. Biotechnol. 31: 193-202 (2005).

本発明のいくつかの実施態様において、本発明のTCR（並びにその機能的部分及び機能
的変異体）、ポリペプチド及びタンパク質は、α鎖及びβ鎖を連結するリンカーペプチドを含む単一のタンパク質として発現してよい。この点について、配列番号11、21、27又は33、及び配列番号12、22、28又は34を含む、本発明のTCR（並びにその機能的変異体及び
機能的部分）、ポリペプチド及びタンパク質は、リンカーペプチドをさらに含んでよい。リンカーペプチドは、宿主細胞における、組換えTCR（その機能的部分及び機能的変異体
を含む）、ポリペプチド及び／又はタンパク質の発現を有利に促進してよい。リンカーペプチドを含む構築物の宿主細胞による発現に際し、リンカーペプチドを切断し、分離したα及びβ鎖をもたらしてよい。 In some embodiments of the invention, the TCRs (and functional parts and variants thereof), polypeptides and proteins of the invention are as a single protein comprising a linker peptide linking an α chain and a β chain. It may be expressed. In this regard, the TCRs (and their functional variants and parts thereof), polypeptides and proteins of the invention, comprising SEQ ID NOs: 11, 21, 27 or 33, and SEQ ID NOs: 12, 22, 28 or 34, are: It may further contain a linker peptide. Linker peptides may advantageously promote the expression of recombinant TCRs (including functional portions and variants thereof), polypeptides and / or proteins in host cells. Upon expression of the linker peptide-containing construct by the host cell, the linker peptide may be cleaved to yield the separated α and β chains.

本発明のタンパク質は、本明細書に記載の本発明のポリペプチドの少なくとも1つを含
む組換え抗体であり得る。本明細書で使用する場合、「組換え抗体」とは、本発明のポリペプチドの少なくとも1つ、及び抗体のポリペプチド鎖又はその部分を含む組換え（例え
ば、遺伝子操作された）タンパク質をいう。抗体のポリペプチド又はその部分は、重鎖、軽鎖、重鎖若しくは軽鎖の可変若しくは定常領域、一本鎖可変断片（scFv）、又は抗体のFc、Fab若しくはF（ab）2’断片などであり得る。抗体のポリペプチド鎖又はその部分は
、組換え抗体の別個のポリペプチドとして存在し得る。或いは、抗体のポリペプチド鎖又はその部分は、本発明のポリペプチドとインフレーム（タンデムに）で発現するポリペプチドとして存在し得る。抗体のポリペプチド又はその部分は、任意の抗体又は任意の抗体断片（本明細書に記載の抗体及び抗体断片のいずれかを含む）のポリペプチドであり得る。 The protein of the invention can be a recombinant antibody comprising at least one of the polypeptides of the invention described herein. As used herein, "recombinant antibody" refers to a recombinant (eg, genetically engineered) protein comprising at least one of the polypeptides of the invention and a polypeptide chain or portion thereof of the antibody. .. Polypeptide, or a portion thereof of an antibody, heavy chain, light chain, variable or constant region of the heavy or light chain, a single chain variable fragment (scFv), or Fc antibody, Fab or F (ab) 2 'fragments, etc. Can be. The polypeptide chain of an antibody or a portion thereof can exist as a separate polypeptide of a recombinant antibody. Alternatively, the polypeptide chain or portion thereof of an antibody may exist as a polypeptide expressed in frame (in tandem) with the polypeptide of the invention. A polypeptide or portion thereof of an antibody can be a polypeptide of any antibody or any antibody fragment, including any of the antibodies and antibody fragments described herein.

TCR（又はその機能的変異体）、ポリペプチド又はタンパク質は、TCR（又はその機能的変異体）、ポリペプチド又はタンパク質の他の構成要素（例えば、他のアミノ酸）がTCR
（又はその機能的変異体）、ポリペプチド又はタンパク質の生物学的活性を物質的に変化しないように、実質的に、本明細書に記載の特定のアミノ酸配列（単数又は複数）からなり得る。この点について、本発明のTCR（又はその機能的変異体）、ポリペプチド又はタ
ンパク質は、例えば、実質的に、配列番号11、12、21、22、27、28、33及び34、配列番号11及び12の両方、配列番号21及び22の両方、配列番号27及び28の両方、配列番号33及び34の両方、配列番号11及び34の両方、又は配列番号12及び33の両方のアミノ酸配列からなり得る。また、例えば、本発明のTCR（その機能的変異体を含む）、ポリペプチド又はタン
パク質は、実質的に、配列番号9、10、19、20、31、32、配列番号9及び10の両方、配列番
号19及び20の両方、配列番号31及び32の両方、配列番号9及び32の両方、配列番号10及び31の両方のアミノ酸配列からなり得る。さらに、本発明のTCR（その機能的変異体を含む）、ポリペプチド又はタンパク質は、実質的に、配列番号3若しくは13（α鎖のCDR1）、配
列番号4若しくは14（α鎖のCDR2）、配列番号5、15若しくは29（α鎖のCDR3）、配列番号6若しくは16（β鎖のCDR1）、配列番号7若しくは17（β鎖のCDR2）、配列番号8、18若し
くは30（β鎖のCDR3）、又はそれらの任意の組み合わせ、例えば、配列番号3〜5；6〜8；3〜8；13〜15；16〜18；13〜18；3〜4及び29；6〜7及び30；3〜4、29及び6〜8；3〜7及び30；又は3〜4、29、6〜7及び30などのアミノ酸配列からなり得る。 A TCR (or functional variant thereof), polypeptide or protein is a TCR (or functional variant thereof), and other components of the polypeptide or protein (eg, other amino acids) are TCRs.
It may consist substantially of the particular amino acid sequence (s) described herein (or its functional variant), without materially altering the biological activity of the polypeptide or protein. In this regard, the TCR (or functional variant thereof), polypeptide or protein of the invention is, for example, substantially, SEQ ID NO: 11, 12, 21, 22, 27, 28, 33 and 34, SEQ ID NO: 11. And 12 both, both SEQ ID NOs: 21 and 22, both SEQ ID NOs: 27 and 28, both SEQ ID NOs: 33 and 34, both SEQ ID NOs: 11 and 34, or both of the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 12 and 33. obtain. Also, for example, the TCRs (including functional variants thereof), polypeptides or proteins of the invention are essentially both SEQ ID NOs: 9, 10, 19, 20, 31, 32, SEQ ID NOs: 9 and 10. It can consist of both the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 19 and 20, both of SEQ ID NOs: 31 and 32, both of SEQ ID NOs: 9 and 32, and both of SEQ ID NOs: 10 and 31. In addition, the TCRs (including functional variants thereof), polypeptides or proteins of the invention are essentially SEQ ID NO: 3 or 13 (CDR1 of the α chain), SEQ ID NO: 4 or 14 (CDR2 of the α chain), SEQ ID NO: 5, 15 or 29 (α-chain CDR3), SEQ ID NO: 6 or 16 (β-chain CDR1), SEQ ID NO: 7 or 17 (β-chain CDR2), SEQ ID NO: 8, 18 or 30 (β-chain CDR3) ), Or any combination thereof, eg, SEQ ID NOs: 3-5; 6-8; 3-8; 13-15; 16-18; 13-18; 3-4 and 29; 6-7 and 30; 3 It can consist of amino acid sequences such as ~ 4, 29 and 6-8; 3-7 and 30; or 3-4, 29, 6-7 and 30.

本発明のTCR、ポリペプチド及びタンパク質（その機能的変異体を含む）は、TCR、ポリペプチド又はタンパク質（又はその機能的変異体）がそれらの生物学的活性（例えば、MAGE-A3及び／若しくはMAGE-A6と特異的に結合する能力；哺乳動物において癌を検出する能力；又は哺乳動物において癌を治療若しくは予防する能力など）を保持するならば、任意の長さのものであり得、すなわち、任意の数のアミノ酸を含み得る。例えば、ポリペプチドは、50、70、75、100、125、150、175、200、300、400、500、600、700、800、900、1000又はそれ以上のアミノ酸長など、約50〜約5000のアミノ酸長の範囲であり得る。この点について、本発明のポリペプチドはまた、オリゴペプチドも含む。 The TCRs, polypeptides and proteins of the invention (including their functional variants) are such that the TCRs, polypeptides or proteins (or their functional variants) have their biological activity (eg, MAGE-A3 and / or). It can be of any length, as long as it retains the ability to specifically bind to MAGE-A6; the ability to detect cancer in mammals; or the ability to treat or prevent cancer in mammals, etc.). , May contain any number of amino acids. For example, polypeptides are about 50 to about 5000, including amino acid lengths of 50, 70, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000 or more. Can be in the range of amino acid lengths of. In this regard, the polypeptides of the invention also include oligopeptides.

本発明のTCR、ポリペプチド及びタンパク質（その機能的変異体を含む）は、1つ以上の天然に存在するアミノ酸の代わりに合成アミノ酸を含み得る。かかる合成アミノ酸は、当分野で公知であり、例えば、アミノシクロヘキサンカルボン酸、ノルロイシン、α-アミ
ノn-デカン酸、ホモセリン、S-アセチルアミノメチル-システイン、トランス-3-及びトランス-4-ヒドロキシプロリン、4-アミノフェニルアラニン、4-ニトロフェニルアラニン、4-クロロフェニルアラニン、4-カルボキシフェニルアラニン、β-フェニルセリン β-ヒドロキシフェニルアラニン、フェニルグリシン、α-ナフチルアラニン、シクロヘキシルア
ラニン、シクロヘキシルグリシン、インドリン-2-カルボン酸、1,2,3,4-テトラヒドロイ
ソキノリン-3-カルボン酸、アミノマロン酸、アミノマロン酸モノアミド、N’-ベンジル-N’-メチル-リジン、N’,N’-ジベンジル-リジン、6-ヒドロキシリジン、オルニチン、α-アミノシクロペンタンカルボン酸、α-アミノシクロヘキサンカルボン酸、α-アミノシ
クロヘプタンカルボン酸、α-（2-アミノ-2-ノルボルナン）-カルボン酸、α,γ-ジアミ
ノ酪酸、α,β-ジアミノプロピオン酸、ホモフェニルアラニン及びα-tert-ブチルグリシンが挙げられる。 The TCRs, polypeptides and proteins of the invention, including their functional variants, may contain synthetic amino acids in place of one or more naturally occurring amino acids. Such synthetic amino acids are known in the art and are, for example, aminocyclohexanecarboxylic acid, norleucine, α-aminon-decanoic acid, homoserine, S-acetylaminomethyl-cysteine, trans-3- and trans-4-hydroxyproline. , 4-Aminophenylalanine, 4-Nitrophenylalanine, 4-Chlorophenylalanine, 4-carboxyphenylalanine, β-phenylserine β-hydroxyphenylalanine, phenylglycine, α-naphthylalanine, cyclohexylalanine, cyclohexylglycine, indolin-2-carboxylic acid , 1,2,3,4-Tetrahydroisoquinoline-3-carboxylic acid, aminomalonic acid, aminomalonic acid monoamide, N'-benzyl-N'-methyl-lysine, N', N'-dibenzyl-lysine, 6- Hydroxylysine, ornithine, α-aminocyclopentanecarboxylic acid, α-aminocyclohexanecarboxylic acid, α-aminocycloheptanecarboxylic acid, α- (2-amino-2-norbornan) -carboxylic acid, α, γ-diaminobutyric acid, Included are α, β-diaminopropionic acid, homophenylalanine and α-tert-butylglycine.

本発明のTCR、ポリペプチド及びタンパク質（その機能的変異体を含む）は、グリコシ
ル化、アミド化、カルボキシル化、リン酸化、エステル化、N-アシル化、環化（例えばジスルフィド架橋を介して）、又は酸付加塩に変換され、且つ／或いは任意選択で二量体化若しくは重合化、又はコンジュゲート化され得る。 The TCRs, polypeptides and proteins of the invention (including their functional variants) are glycosylated, amidated, carboxylated, phosphorylated, esterified, N-acylated, cyclized (eg via disulfide bridges). , Or can be converted to an acid addition salt and / or optionally dimerized, polymerized, or conjugated.

本発明のTCR、ポリペプチド及び／又はタンパク質（その機能的変異体を含む）は、当
分野で公知の方法により得ることができる。ポリペプチド及びタンパク質をde novo合成
する適した方法は、例えば以下の参考文献に記載されている：Chan et al., Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis, Oxford University Press, Oxford, United Kingdom, 2005；Peptide and Protein Drug Analysis, ed. Reid, R., Marcel Dekker, Inc., 2000；Epitope Mapping, ed. Westwoood et al., Oxford University Press, Oxford, United Kingdom, 2000；及び米国特許第5,449,752号。また、ポリペプチド及びタンパク質は、標準的
な組換え方法を用いて、本明細書に記載の核酸を使用して組換え産生され得る。例えば、Sambrook et al., Molecular Cloning：A Laboratory Manual, 3rd ed., Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY 2001；及びAusubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and John Wiley & Sons, NY, 1994を参照。さらに、本発明のTCR、ポリペプチド及びタンパク質（その機能的変異体を含む
）のいくつかは、植物、細菌、昆虫、哺乳動物（例えば、ラット、ヒトなど）などの供給源から単離及び／又は精製され得る。単離及び精製の方法は当分野で周知である。或いは、本明細書に記載のTCR、ポリペプチド及び／又はタンパク質（その機能的変異体を含む
）は、Synpep（Dublin, CA）、Peptide Technologies Corp.（Gaithersburg, MD）及びMultiple Peptide Systems（San Diego, CA）などの企業によって商業的に合成され得る。
これに関して、本発明のTCR（その機能的変異体を含む）、ポリペプチド及びタンパク質
は、合成、組換え、単離及び／又は精製され得る。 The TCRs, polypeptides and / or proteins of the invention (including functional variants thereof) can be obtained by methods known in the art. Suitable methods for de novo synthesis of polypeptides and proteins are described, for example, in the following references: Chan et al., Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis , Oxford University Press, Oxford, United Kingdom, 2005; Peptide and Protein. Drug Analysis , ed. Reid, R., Marcel Dekker, Inc., 2000; Epitope Mapping , ed. Westwoood et al., Oxford University Press, Oxford, United Kingdom, 2000; and US Pat. No. 5,449,752. Also, polypeptides and proteins can be recombinantly produced using the nucleic acids described herein using standard recombinant methods. For example, Sambrook et al, Molecular Cloning: ... A Laboratory Manual, 3 rd ed, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY 2001; and Ausubel et al, Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and John Wiley & See Sons, NY, 1994. In addition, some of the TCRs, polypeptides and proteins of the invention (including functional variants thereof) have been isolated and / / from sources such as plants, bacteria, insects, mammals (eg, rats, humans, etc.). Or it can be purified. Isolation and purification methods are well known in the art. Alternatively, the TCRs, polypeptides and / or proteins described herein (including their functional variants) are Synpep (Dublin, CA), Peptide Technologies Corp. (Gaithersburg, MD) and Multiple Peptide Systems (San Diego). , CA) can be commercially synthesized by companies such as.
In this regard, the TCRs (including functional variants thereof), polypeptides and proteins of the invention can be synthesized, recombined, isolated and / or purified.

本発明の範囲内には、本発明のTCR、ポリペプチド若しくはタンパク質（その機能的変
異体のいずれかを含む）、核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞、宿主細胞集団、又は抗体若しくはその抗原結合部分のいずれかを含むコンジュゲート（例えば、バイオコンジュゲート）が含まれる。コンジュゲート、及び通常のコンジュゲートの合成方法は、当分野で公知である（例えば、Hudecz, F., Methods Mol. Biol. 298：209-223 (2005)及びKirin et al., Inorg Chem. 44(15)：5405-5415 (2005) を参照）。 Within the scope of the invention are TCRs, polypeptides or proteins of the invention (including any of their functional variants), nucleic acids, recombinant expression vectors, host cells, host cell populations, or antibodies or antigen binding thereof. Conjugates containing any of the moieties (eg, bioconjugates) are included. Conjugates, and conventional methods of synthesizing conjugates, are known in the art (eg, Hudecz, F., Methods Mol. Biol. 298: 209-223 (2005) and Kirin et al., Inorg Chem. 44. (15): See 5405-5415 (2005)).

本明細書で使用する場合、「核酸」とは、「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」及び「核酸分子」を含み、一般にDNA又はRNAの重合体を意味し、これは一本鎖の又は二本鎖の、合成された又は天然の供給源から得た（例えば、単離及び／又は精製された）ものであり得、天然、非天然又は変更された（altered）ヌクレオチドを含み得、修飾さ
れていないオリゴヌクレオチドのヌクレオチド間に見いだされるホスホジエステル結合の代わりに、天然、非天然又は変更されたヌクレオチド間結合（例えば、ホスホロアミデート（phosphoroamidate）結合又はホスホロチオエート結合など）を含み得る。一般に、核酸は、挿入、欠失、逆位及び／又は置換を何れも含まないことが好ましい。しかし、本明細書で論じるように、ある場合には、核酸が1つ以上の挿入、欠失、逆位及び／又は置換
を含むことが適切であるかもしれない。 As used herein, "nucleic acid" includes "polynucleotides", "oligonucleotides" and "nucleic acid molecules" and generally means polymers of DNA or RNA, which may be single-stranded or double-stranded. The strand can be from a synthesized or natural source (eg, isolated and / or purified) and can contain, modified, natural, unnatural or altered nucleotides. Instead of the phosphodiester bond found between the nucleotides of the unnucleic acid oligonucleotide, it may include a natural, unnatural or modified internucleotide bond (eg, a phosphoroamidate bond or a phosphorothioate bond). In general, nucleic acids preferably do not contain any insertions, deletions, inversions and / or substitutions. However, as discussed herein, in some cases it may be appropriate for the nucleic acid to contain one or more insertions, deletions, inversions and / or substitutions.

好ましくは、本発明の核酸は組換え体である。本明細書で使用する場合、用語「組換え体（recombinant）」とは、（i）天然若しくは合成の核酸セグメントを、生きた細胞中で複製できる核酸分子と連結することにより、生きた細胞の外側で構築された分子、又は（ii）上記（i）に記載した分子の複製から生じる分子をいう。本明細書の目的のために、
複製は、in vitro複製又はin vivo複製であり得る。 Preferably, the nucleic acid of the invention is a recombinant. As used herein, the term "recombinant" refers to (i) a living cell by linking a natural or synthetic nucleic acid segment with a nucleic acid molecule capable of replicating in the living cell. A molecule constructed on the outside, or (ii) a molecule resulting from the replication of the molecule described in (i) above. For the purposes of this specification,
The replication can be in vitro replication or in vivo replication.

核酸は、当分野で公知の手順を使用して、化学合成及び／又は酵素ライゲーション反応に基づいて構築され得る。例えば、Sambrook et al.（上記）及びAusubel et al.（上記
）を参照。例えば、核酸は、天然に存在するヌクレオチド、又は分子の生物学的安定性を増加させるように若しくはハイブリダイゼーションの際に形成される二重鎖の物理的安定性を増加させるように設計された多様な修飾ヌクレオチド（例えば、ホスホロチオエート誘導体及びアクリジン置換ヌクレオチド）を使用して、化学的に合成され得る。核酸を生成するために使用され得る修飾ヌクレオチドの例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：5-フルオロウラシル、5-ブロモウラシル、5-クロロウラシル、5-ヨードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、4-アセチルシトシン、5-（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシル、5-カルボキシメチルアミノメチル-2-チオウリジン、5-カルボキシ
メチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、β-D-ガラクトシルキューオシン（beta-D-galactosylqueosine）、イノシン、N6-イソペンテニルアデニン、1-メチルグアニン
、1-メチルイノシン、2,2-ジメチルグアニン、2-メチルアデニン、2-メチルグアニン、3-メチルシトシン、5-メチルシトシン、N6-置換アデニン、7-メチルグアニン、5-メチルア
ミノメチルウラシル、5-メトキシアミノメチル-2-チオウラシル、β-D-マンノシルキューオシン（beta-D-mannosylqueosine）、5’-メトキシカルボキシメチルウラシル、5-メト
キシウラシル、2-メチルチオ-N6-イソペンテニルアデニン、ウラシル-5-オキシ酢酸（v）、ワイブトキソシン（wybutoxosine）、シュードウラシル（pseudouracil）、キューオシ
ン（queosine）、2-チオシトシン、5-メチル-2-チオウラシル、2-チオウラシル、4-チオ
ウラシル、5-メチルウラシル、ウラシル-5-オキシ酢酸メチルエステル、3-（3-アミノ-3-N-2-カルボキシプロピル）ウラシル及び2,6-ジアミノプリン。或いは、本発明の核酸の1
つ以上は、Macromolecular Resources（Fort Collins, CO）及びSynthegen（Houston, TX）などの企業から購入できる。 Nucleic acids can be constructed on the basis of chemical synthesis and / or enzyme ligation reactions using procedures known in the art. See, for example, Sambrook et al. (above) and Ausubel et al. (Above). For example, nucleic acids are a variety designed to increase the biological stability of naturally occurring nucleotides or molecules or to increase the physical stability of duplexes formed during hybridization. Various modified nucleotides (eg, phosphorothioate derivatives and acylidin-substituted nucleotides) can be used to be chemically synthesized. Examples of modified nucleotides that can be used to generate nucleic acids include, but are not limited to: 5-fluorouracil, 5-bromouracil, 5-chlorouracil, 5-iodouracil, hypoxanthin, xanthin. , 4-Acetylcytocin, 5- (carboxyhydroxymethyl) uracil, 5-carboxymethylaminomethyl-2-thiouridine, 5-carboxymethylaminomethyluracil, dihydrouracil, β-D-galactosylqueosine ), Inosin, N 6- isopentenyladenine, 1-methylguanine, 1-methylinosin, 2,2-dimethylguanine, 2-methyladenine, 2-methylguanine, 3-methylcytosine, 5-methylcitosin, N 6 -Substituted adenine, 7-methylguanine, 5-methylaminomethyluracil, 5-methoxyaminomethyl-2-thiouracil, β-D-mannosylqueosine, 5'-methoxycarboxymethyluracil, 5 -Methoxyuracil, 2-methylthio-N 6- isopentenyladenine, uracil-5-oxyacetic acid (v), wybutoxosine, pseudouracil, queosine, 2-thiocitosine, 5-methyl-2 -Uracil, 2-thiouracil, 4-thiouracil, 5-methyluracil, uracil-5-oxyacetic acid methyl ester, 3- (3-amino-3-N-2-carboxypropyl) uracil and 2,6-diaminopurine. Alternatively, one of the nucleic acids of the present invention
More than one can be purchased from companies such as Macromolecular Resources (Fort Collins, CO) and Synthegen (Houston, TX).

核酸は、本明細書に記載のTCR、ポリペプチド、タンパク質、又はその機能的な機能的
変異体のいずれかをコードする、任意のヌクレオチド配列を含み得る。例えば、核酸は、配列番号37〜44のヌクレオチド配列のいずれか1つ以上を含むか、該配列からなるか、又
は実質的に該配列からなり得る。 The nucleic acid may comprise any nucleotide sequence encoding any of the TCRs, polypeptides, proteins, or functional variants thereof described herein. For example, the nucleic acid may contain, consist of, or substantially consist of any one or more of the nucleotide sequences of SEQ ID NOs: 37-44.

本発明はまた、本明細書に記載のいずれかの核酸のヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオチド配列、又は本明細書に記載のいずれかの核酸のヌクレオチド配列に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む、核酸も提供する。 The present invention also has a nucleotide sequence complementary to the nucleotide sequence of any of the nucleic acids described herein, or under stringent conditions to the nucleotide sequence of any of the nucleic acids described herein. Nucleic acids are also provided that contain the nucleotide sequences to be hybridized.

ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列は、好ましくは、高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズする。「高ストリンジェンシー条件」とは、ヌクレオチド配列が、非特異的ハイブリダイゼーションよりも検出可能に強い量でターゲット配列（本明細書に記載のいずれかの核酸のヌクレオチド配列）に特異的にハイブリダイズすることを意味する。高ストリンジェンシー条件には、正確に相補的な配列を有するポリヌクレオチド、又は数個の散らばったミスマッチのみを含むポリヌクレオチドを、ヌクレオチド配列にマッチした数個の小領域（例えば、3〜10塩基）を偶然有するランダム
配列から識別し得る条件が含まれる。かかる相補的な小領域は、14〜17又はそれ以上の塩基の全長相補体よりも容易に融解され、高ストリンジェンシーのハイブリダイゼーションにより、それらを容易に識別できる。比較的高ストリンジェンシーの条件には、例えば、低塩及び／又は高温条件（例えば、約0.02〜0.1 MのNaCl又は等価物、約50〜70℃の温度
により提供される）が含まれ得る。かかる高ストリンジェンシー条件は、存在したとしても、ヌクレオチド配列とテンプレート鎖又はターゲット鎖との間のミスマッチをほとんど許容せず、本発明のTCR（その機能的部分及び機能的変異体を含む）のいずれかの発現を
検出するのに特に適している。条件は、増加量のホルムアミドの添加によって、よりストリンジェントになり得ることが一般に理解される。 Nucleotide sequences that hybridize under stringent conditions preferably hybridize under high stringency conditions. A "high stringency condition" is one in which a nucleotide sequence specifically hybridizes to a target sequence (the nucleotide sequence of any nucleic acid described herein) in a detectably stronger amount than non-specific hybridization. Means that. High stringency conditions include polynucleotides with exactly complementary sequences, or polynucleotides containing only a few scattered mismatches, with a few small regions (eg, 3-10 bases) matching the nucleotide sequence. Includes conditions that can be identified from random sequences that happen to have. Such complementary subregions are more easily melted than full-length complements of 14-17 or more bases and are easily distinguishable by high stringency hybridization. Conditions with relatively high stringency may include, for example, low salt and / or high temperature conditions (eg, provided by NaCl or equivalent of about 0.02-0.1 M, at a temperature of about 50-70 ° C.). Such high stringency conditions, if present, tolerate little mismatch between the nucleotide sequence and the template or target strand and are any of the TCRs of the invention (including functional portions and variants thereof). It is particularly suitable for detecting its expression. It is generally understood that the conditions can be made more stringent by the addition of an increased amount of formamide.

本発明はまた、本明細書に記載の核酸のいずれかと少なくとも約70％又はそれ以上、例えば、約80％、約90％、約91％、約92％、約93％、約94％、約95％、約96％、約97％、約98％、又は約99％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸も提供する。 The invention also comprises at least about 70% or more of any of the nucleic acids described herein, eg, about 80%, about 90%, about 91%, about 92%, about 93%, about 94%, about. Nucleic acids containing nucleotide sequences that are 95%, about 96%, about 97%, about 98%, or about 99% identical are also provided.

本発明の核酸は、組換え発現ベクター中に組み込まれ得る。この点について、本発明は、本発明の核酸のいずれかを含む組換え発現ベクターを提供する。本明細書の目的のために、用語「組換え発現ベクター」とは、宿主細胞によるmRNA、タンパク質、ポリペプチド又はペプチドの発現を可能にする遺伝子改変オリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチド構築物を意味し、この場合、構築物は、mRNA、タンパク質、ポリペプチド又はペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、ベクターは、細胞内でmRNA、タンパク質、ポリペプチド又はペプチドを発現させるのに十分な条件下で細胞と接触させられる。本発明のベクターは、全体としては天然に存在するものではない。しかし、ベクターの一部は天然に存在するものであり得る。本発明の組換え発現ベクターは、DNA及びRNA（一本鎖又は二本鎖であり得、合成されるか、又は一部を天然供給源から得ることができ、天然、非天然又は変更されたヌクレオチドを含み得る）を含む（これらに限定されない）、任意のタイプのヌクレオチドを含み得る。組換え発現ベクターは、天然に存在するヌクレオチド間結合若しくは天然に存在しないヌクレオチド間結合、又は両方のタイプの結合を含み得る。好まし
くは、天然に存在しない又は変更されたヌクレオチド又はヌクレオチド間結合は、ベクターの転写も複製も妨害しない。 The nucleic acids of the invention can be integrated into recombinant expression vectors. In this regard, the invention provides a recombinant expression vector containing any of the nucleic acids of the invention. For purposes herein, the term "recombinant expression vector" means a genetically modified oligonucleotide or polynucleotide construct that allows the expression of an mRNA, protein, polypeptide or peptide by a host cell, in this case. The construct comprises a nucleotide sequence encoding an mRNA, protein, polypeptide or peptide, and the vector is contacted with the cell under conditions sufficient to express the mRNA, protein, polypeptide or peptide in the cell. The vector of the present invention is not naturally occurring as a whole. However, some of the vectors can be naturally occurring. The recombinant expression vectors of the invention can be DNA and RNA (single-stranded or double-stranded, synthesized or partially obtained from natural sources, natural, unnatural or modified. It may contain any type of nucleotide, including, but not limited to, nucleotides. Recombinant expression vectors can include naturally occurring internucleotide linkages, non-naturally occurring internucleotide linkages, or both types of linkages. Preferably, non-naturally occurring or altered nucleotides or internucleotide linkages do not interfere with the transcription or replication of the vector.

本発明の組換え発現ベクターは、任意の適した組換え発現ベクターであり得、任意の適した宿主細胞を形質転換又はトランスフェクトするために使用され得る。適したベクターとしては、増殖（propagation）及び増大（expansion）のため、若しくは発現のため、又はそれら両方のために設計されたベクター（例えば、プラスミド及びウイルス）が挙げられる。ベクターは、以下からなる群から選択され得る：pUCシリーズ（Fermentas Life Sciences）、pBluescriptシリーズ（Stratagene, LaJolla, CA）、pETシリーズ（Novagen, Madison, WI）、pGEXシリーズ（Pharmacia Biotech, Uppsala, Sweden）及びpEXシリーズ（Clontech, Palo Alto, CA）。バクテリオファージベクター（例えば、λGT10、λGT11
、λZapII（Stratagene）、λEMBL4及びλNM1149）もまた使用され得る。植物発現ベクターの例としては、pBI01、pBI101.2、pBI101.3、pBI121及びpBIN19（Clontech）が挙げら
れる。動物発現ベクターの例としては、pEUK-Cl、pMAM及びpMAMneo（Clontech）が挙げられる。好ましくは、組換え発現ベクターは、ウイルスベクター（例えば、レトロウイルスベクター）である。 The recombinant expression vector of the present invention can be any suitable recombinant expression vector and can be used to transform or transfect any suitable host cell. Suitable vectors include vectors designed for propagation and expansion, and / or for expression (eg, plasmids and viruses). Vectors can be selected from the group consisting of: pUC series (Fermentas Life Sciences), pBluescript series (Stratagene, LaJolla, CA), pET series (Novagen, Madison, WI), pGEX series (Pharmacia Biotech, Uppsala, Sweden). And pEX series (Clontech, Palo Alto, CA). Bacteriophage vector (eg λGT10, λGT11)
, ΛZapII (Stratagene), λEMBL4 and λNM1149) can also be used. Examples of plant expression vectors include pBI01, pBI101.2, pBI101.3, pBI121 and pBIN19 (Clontech). Examples of animal expression vectors include pEUK-Cl, pMAM and pMAMneo (Clontech). Preferably, the recombinant expression vector is a viral vector (eg, a retroviral vector).

本発明の組換え発現ベクターは、例えば、Sambrook et al.（上記）及びAusubel et al.（上記）に記載された標準的な組換えDNA技術を使用して調製できる。環状又は線状の発現ベクターの構築物は、原核生物又は真核生物の宿主細胞において機能的な複製系を含むように調製され得る。複製系は、例えば、ColEl、2μプラスミド、λ、SV40、ウシパピローマウイルスなどに由来し得る。 The recombinant expression vectors of the invention can be prepared using, for example, the standard recombinant DNA techniques described in Sambrook et al. (Supra) and Ausubel et al. (Supra). Constructs of circular or linear expression vectors can be prepared to contain a functional replication system in a prokaryotic or eukaryotic host cell. The replication system can be derived from, for example, ColEl, 2μ plasmid, λ, SV40, bovine papillomavirus and the like.

望ましくは、組換え発現ベクターは、必要に応じて、そのベクターがDNAベースである
かRNAベースであるかを考慮して、ベクターが導入される宿主細胞タイプ（例えば、細菌
、真菌、植物又は動物）に特異的な調節配列（例えば、転写及び翻訳の開始及び終止コドンなど）を含む。 Desirably, the recombinant expression vector is the host cell type into which the vector is introduced (eg, bacteria, fungi, plants or animals, depending on whether the vector is DNA-based or RNA-based, as appropriate. ) Includes regulatory sequences specific to (eg, transcription and translation initiation and termination codons, etc.).

組換え発現ベクターは、形質転換又はトランスフェクトされた宿主細胞の選択を可能にする1つ以上のマーカー遺伝子を含み得る。マーカー遺伝子としては、殺生物剤耐性（例
えば、抗生物質、重金属などに対する耐性）、栄養要求性宿主細胞における原栄養を提供する補完などが挙げられる。本発明の発現ベクターに適したマーカー遺伝子としては、例えば、ネオマイシン／G418耐性遺伝子、ハイグロマイシン耐性遺伝子、ヒスチジノール耐性遺伝子、テトラサイクリン耐性遺伝子及びアンピシリン耐性遺伝子が挙げられる。 Recombinant expression vectors may contain one or more marker genes that allow selection of transformed or transfected host cells. Marker genes include biocide resistance (eg, resistance to antibiotics, heavy metals, etc.), complementation to provide proto-nutrient in nutrient-requiring host cells, and the like. Examples of the marker gene suitable for the expression vector of the present invention include a neomycin / G418 resistance gene, a hyglomycin resistance gene, a histidinol resistance gene, a tetracycline resistance gene and an ampicillin resistance gene.

組換え発現ベクターは、TCR、ポリペプチド若しくはタンパク質（その機能的変異体を
含む）をコードするヌクレオチド配列、又はTCR、ポリペプチド若しくはタンパク質（そ
の機能的変異体を含む）をコードするヌクレオチド配列と相補的であるか若しくはそれにハイブリダイズするヌクレオチド配列に作動可能に連結された、天然又は非天然のプロモーターを含み得る。プロモーターの選択（例えば、強い、弱い、誘導性、組織特異的及び発生特異的）は、当業者の技術範囲内である。同様に、ヌクレオチド配列とプロモーターとの組み合わせ（combining）もまた、当業者の技術範囲内である。プロモーターは、非
ウイルスプロモーター又はウイルスプロモーター（例えば、サイトメガロウイルス（CMV
）プロモーター、SV40プロモーター、RSVプロモーター、及びマウス幹細胞ウイルスの長
い末端反復配列中に見出されるプロモーター）であり得る。 The recombinant expression vector is complementary to a nucleotide sequence encoding a TCR, polypeptide or protein (including its functional variant) or a nucleotide sequence encoding a TCR, polypeptide or protein (including its functional variant). It may include a natural or non-natural promoter operably linked to a nucleotide sequence that is targeted or hybridizes to it. The choice of promoter (eg, strong, weak, inducible, tissue-specific and development-specific) is within the skill of one of ordinary skill in the art. Similarly, combining a nucleotide sequence with a promoter is also within the skill of one of ordinary skill in the art. The promoter may be a non-viral promoter or a viral promoter (eg, cytomegalovirus (CMV)).
) Promoters, SV40 promoters, RSV promoters, and promoters found in long terminal repeat sequences of mouse stem cell viruses).

本発明の組換え発現ベクターは、一過性の発現のため、安定な発現のため、又はその両方のために設計され得る。また、組換え発現ベクターは、構成的発現又は誘導性発現のために製造され得る。さらに、組換え発現ベクターは、自殺遺伝子を含むように製造され得る。 The recombinant expression vectors of the invention can be designed for transient expression, stable expression, or both. Recombinant expression vectors can also be produced for constitutive or inducible expression. In addition, recombinant expression vectors can be made to contain the suicide gene.

本明細書で使用する場合、用語「自殺遺伝子」とは、その自殺遺伝子を発現する細胞を死に至らしめる遺伝子をいう。自殺遺伝子は、その遺伝子が発現される細胞に対し薬剤（例えば、薬物）に対する感受性を付与し、細胞がその薬剤と接触したとき又はその薬剤に曝露されたときに細胞を死に至らしめる遺伝子であり得る。自殺遺伝子は当分野で公知であり（例えば、Suicide Gene Therapy：Methods and Reviews, Springer, Caroline J. (Cancer Research UK Centre for Cancer Therapeutics at the Institute of Cancer Research, Sutton, Surrey, UK), Humana Press, 2004を参照）、例えば、単純ヘルペスウイルス（HSV）チミジンキナーゼ（TK）遺伝子、シトシンデアミナーゼ（daminase）、プリ
ンヌクレオシドホスホリラーゼ及びニトロレダクターゼが挙げられる。 As used herein, the term "suicide gene" refers to a gene that causes the cell expressing the suicide gene to die. A suicide gene is a gene that sensitizes a cell in which the gene is expressed to a drug (eg, a drug) and causes the cell to die when it comes into contact with or is exposed to the drug. obtain. Suicide genes are known in the art (eg, Suicide Gene Therapy: Methods and Reviews , Springer, Caroline J. (Cancer Research UK Center for Cancer Therapeutics at the Institute of Cancer Research, Sutton, Surrey, UK), Humana Press, See 2004), such as the simple herpesvirus (HSV) thymidine kinase (TK) gene, cytosine deaminase (daminase), purinucleoside phosphorylase and nitroreductase.

本発明の別の実施態様はさらに、本明細書に記載の組換え発現ベクターのいずれかを含む宿主細胞を提供する。本明細書で使用する場合、用語「宿主細胞」とは、本発明の組換え発現ベクターを含み得る任意のタイプの細胞をいう。宿主細胞は、真核生物細胞（例えば、植物、動物、真菌又は藻類）であり得、或いは原核生物細胞（例えば、細菌又は原生生物）であり得る。宿主細胞は、培養細胞又は初代細胞（すなわち、ヒトなどの生物から直接単離されたもの）であり得る。宿主細胞は、接着細胞又は浮遊細胞（すなわち、懸濁物中で増殖する細胞）であり得る。適した宿主細胞は当分野で公知であり、例えば、DH5
α E. coli細胞、チャイニーズハムスター卵巣細胞、サルVERO細胞、COS細胞、HEK293細
胞などが挙げられる。組換え発現ベクターを増幅又は複製する目的のために、宿主細胞は、好ましくは、原核生物細胞（例えば、DH5α細胞など）である。組換えTCR、ポリペプチド又はタンパク質を産生する目的のために、宿主細胞は好ましくは哺乳動物細胞である。最も好ましくは、宿主細胞はヒト細胞である。宿主細胞は任意の細胞タイプのものであり得、任意の組織タイプに由来し得、任意の発生段階のものであり得るが、宿主細胞は、好ましくは、末梢血リンパ球（PBL）又は末梢血単核細胞（PMBC）である。より好ましくは
、宿主細胞はT細胞である。 Another embodiment of the invention further provides a host cell comprising any of the recombinant expression vectors described herein. As used herein, the term "host cell" refers to any type of cell that may contain the recombinant expression vector of the invention. The host cell can be a eukaryotic cell (eg, a plant, animal, fungus or algae) or a prokaryotic cell (eg, a bacterium or a prokaryote). The host cell can be a cultured cell or a primary cell (ie, one directly isolated from an organism such as a human). The host cell can be an adherent cell or a floating cell (ie, a cell that proliferates in a suspension). Suitable host cells are known in the art and, for example, DH5
Examples include α E. coli cells, Chinese hamster ovary cells, monkey VERO cells, COS cells, HEK293 cells and the like. For the purpose of amplifying or replicating the recombinant expression vector, the host cell is preferably a prokaryotic cell (eg, DH5α cell). Host cells are preferably mammalian cells for the purpose of producing recombinant TCRs, polypeptides or proteins. Most preferably, the host cell is a human cell. The host cell can be of any cell type, can be derived from any tissue type, can be of any developmental stage, but the host cell is preferably peripheral blood lymphocyte (PBL) or peripheral blood. It is a mononuclear cell (PMBC). More preferably, the host cell is a T cell.

本明細書の目的のために、T細胞は、例えば、培養T細胞（例えば初代T細胞）、又は培
養T細胞株（例えば、Jurkat、SupT1など）由来のT細胞、又は哺乳動物から得られたT細胞など、任意のT細胞であり得る。哺乳動物から得られる場合、T細胞は、多数の供給源（血液、骨髄、リンパ節、胸腺、又は他の組織若しくは体液を含むが、これらに限定されない）から得ることができる。T細胞はまた、濃縮（enriched）又は精製され得る。好ましく
は、T細胞はヒトT細胞である。より好ましくは、T細胞は、ヒトから単離されたT細胞である。T細胞は、任意のタイプのT細胞であり得、任意の発生段階のものであり得、これには、CD4＋／CD8＋ダブルポジティブT細胞、CD4＋ヘルパーT細胞（例えば、Th1及びTh2細胞
）、CD4+ T細胞、CD8＋T細胞（例えば、細胞傷害性T細胞）、腫瘍浸潤リンパ球（TILs）
、メモリーT細胞（例えば、セントラルメモリーT細胞及びエフェクターメモリーT細胞）
、ナイーブT細胞などが含まれるが、これらに限定されない。 For the purposes herein, T cells were obtained, for example, from cultured T cells (eg, primary T cells), or from cultured T cell lines (eg, Jurkat, SupT1, etc.), or from mammals. It can be any T cell, such as a T cell. When obtained from mammals, T cells can be obtained from a number of sources, including but not limited to blood, bone marrow, lymph nodes, thymus, or other tissues or body fluids. T cells can also be enriched or purified. Preferably, the T cells are human T cells. More preferably, the T cells are T cells isolated from humans. T cells can be of any type of T cell and can be of any developmental stage, including CD4 + / CD8 + double positive T cells, CD4 + helper T cells (eg, Th 1 and Th). 2 cells), CD4 + T cells, CD8 + T cells (eg, cytotoxic T cells), tumor-infiltrating lymphocytes (TILs)
, Memory T cells (eg, central memory T cells and effector memory T cells)
, Naive T cells, etc., but not limited to these.

本発明はまた、本明細書に記載の少なくとも1つの宿主細胞を含む細胞集団も提供する
。細胞集団は、少なくとも1つの他の細胞（例えば、組換え発現ベクターをいずれも含ま
ない宿主細胞（例えばT細胞）、又はT細胞以外の細胞（例えば、B細胞、マクロファージ
、好中球、赤血球、肝細胞、内皮細胞、上皮細胞、筋細胞、脳細胞など））に加えて、記載の組換え発現ベクターのいずれかを含む宿主細胞を含む、不均質な集団であり得る。或いは、細胞集団は、実質的に均質な集団であり得、この場合、該集団は、組換え発現ベクターを含む宿主細胞を主に含む（例えば、実質的に該宿主細胞からなる）。集団はまた、細胞のクローン集団でもあり得、この場合、集団の全ての細胞は、組換え発現ベクターを含む単一の宿主細胞のクローンであり、その結果、集団の全ての細胞が組換え発現ベクターを含む。本発明の一実施態様において、細胞集団は、本明細書に記載されるような組換え発現ベクターを含む宿主細胞を含むクローン集団である。 The invention also provides a cell population comprising at least one host cell described herein. The cell population includes at least one other cell (eg, a host cell that does not contain any recombinant expression vector (eg, T cell), or a cell other than T cell (eg, B cell, macrophage, neutrophil, erythrocyte, etc.). Hepatic cells, endothelial cells, epithelial cells, muscle cells, brain cells, etc.)) as well as host cells containing any of the recombinant expression vectors described can be an heterogeneous population. Alternatively, the cell population can be a substantially homogeneous population, in which case the population predominantly comprises a host cell comprising a recombinant expression vector (eg, substantially consisting of the host cell). The population can also be a cloned population of cells, in which case all cells of the population are clones of a single host cell containing a recombinant expression vector, so that all cells of the population are recombinantly expressed. Includes vectors. In one embodiment of the invention, the cell population is a clonal population comprising a host cell comprising a recombinant expression vector as described herein.

本発明はさらに、本明細書に記載のTCR（又はその機能的変異体）のいずれかの機能的
部分と特異的に結合する、抗体又はその抗原結合部分を提供する。好ましくは、機能的部分は癌抗原と特異的に結合し、例えば、機能的部分は、配列番号3若しくは13（α鎖のCDR1）、4若しくは14（α鎖のCDR2）、5、15若しくは29（α鎖のCDR3）、6若しくは16（β鎖のCDR1）、7若しくは17（β鎖のCDR2）、8、18若しくは30（β鎖のCDR3）、配列番号9、19若しくは31（α鎖の可変領域）、配列番号10、20若しくは32（β鎖の可変領域）、又は
それらの組み合わせ（例えば、3〜5；6〜8；3〜8；13〜15；16〜18；13〜18；3〜4及び29；6〜7及び30；3〜4、29及び6〜8；又は3〜7及び30；3〜4、29、6〜7及び30）のアミノ酸配列を含む。より好ましくは、機能的部分は、配列番号3〜8、又は配列番号3〜4、29及び6〜8のアミノ酸配列を含む。好ましい実施態様において、抗体又はその抗原結合部分は、エピトープと結合し、これは6つのCDR（α鎖のCDR1〜3、及びβ鎖のCDR1〜3）全てにより形成される。抗体は、当分野で公知の任意のタイプの免疫グロブリンであり得る。例えば、抗体は、任意のアイソタイプ（例えば、IgA、IgD、IgE、IgG、IgMなど）のものであり
得る。抗体は、モノクローナル又はポリクローナルであり得る。抗体は、天然に存在する抗体、例えば、哺乳動物（例えば、マウス、ウサギ、ヤギ、ウマ、ニワトリ、ハムスター、ヒトなど）から単離及び／又は精製された抗体であり得る。或いは、抗体は、遺伝子操作された抗体、例えば、ヒト化抗体又はキメラ抗体であり得る。抗体は、モノマー又はポリマー形態であり得る。また、抗体は、本発明のTCR（又はその機能的変異体）の機能的
部分に対し、任意のレベルの親和性又は結合活性を有し得る。望ましくは、抗体は、他のペプチド又はタンパク質と最小限の交差反応性であるように、本発明のTCR（又はその機
能的変異体）の機能的部分に対し特異的である。 The invention further provides an antibody or antigen-binding portion thereof that specifically binds to any functional portion of the TCR (or functional variant thereof) described herein. Preferably, the functional moiety specifically binds to the cancer antigen, eg, the functional moiety is SEQ ID NO: 3 or 13 (CDR1 of the α chain), 4 or 14 (CDR2 of the α chain), 5, 15 or 29. (CDR3 of the α chain), 6 or 16 (CDR1 of the β chain), 7 or 17 (CDR2 of the β chain), 8, 18 or 30 (CDR3 of the β chain), SEQ ID NO: 9, 19 or 31 (CDR3 of the β chain) Variable region), SEQ ID NO: 10, 20 or 32 (variable region of β chain), or a combination thereof (eg, 3-5; 6-8; 3-8; 13-15; 16-18; 13-18; 3-4 and 29; 6-7 and 30; 3-4, 29 and 6-8; or 3-7 and 30; 3-4, 29, 6-7 and 30). More preferably, the functional moiety comprises the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 3-8, or SEQ ID NOs: 3-4, 29 and 6-8. In a preferred embodiment, the antibody or antigen-binding portion thereof binds to an epitope, which is formed by all six CDRs (CDR1-3 of the α chain and CDR1-3 of the β chain). The antibody can be any type of immunoglobulin known in the art. For example, the antibody can be of any isotype (eg, IgA, IgD, IgE, IgG, IgM, etc.). The antibody can be monoclonal or polyclonal. The antibody can be a naturally occurring antibody, eg, an antibody isolated and / or purified from a mammal (eg, mouse, rabbit, goat, horse, chicken, hamster, human, etc.). Alternatively, the antibody can be a genetically engineered antibody, such as a humanized antibody or a chimeric antibody. The antibody can be in monomeric or polymer form. Antibodies may also have any level of affinity or binding activity for the functional portion of the TCR (or functional variant thereof) of the invention. Desirably, the antibody is specific for a functional portion of the TCR (or functional variant thereof) of the invention such that it is minimally cross-reactive with other peptides or proteins.

本発明のTCRの任意の機能的部分又は機能的変異体と結合する能力について抗体を試験
する方法は、当分野で公知であり、任意の抗体-抗原結合アッセイ、例えば、ラジオイム
ノアッセイ（RIA）、ELISA、ウエスタンブロット、免疫沈降及び競合阻害アッセイなどを含む（例えば、Janeway et al.（下記）及び米国特許出願公開公報第2002/0197266 A1号
を参照）。 Methods of testing an antibody for its ability to bind to any functional portion or variant of the TCR of the invention are known in the art and are known in the art and are available in any antibody-antigen binding assay such as radioimmunoassay (RIA). Includes ELISA, Western blots, immunoprecipitation and competition inhibition assays (see, eg, Janeway et al. (below) and US Patent Application Publication No. 2002/0197266 A1).

抗体を製造するのに適した方法は、当分野で公知である。例えば、標準的なハイブリドーマ法は、例えば、Kohler and Milstein, Eur. J. Immunol., 5, 511-519 (1976), Harlow and Lane (eds.), Antibodies：A Laboratory Manual, CSH Press (1988)、及びC.A. Janeway et al. (eds.), Immunobiology, 5th Ed., Garland Publishing, New York, NY (2001))に記載されている。或いは、他の方法、例えば、EBV-ハイブリドーマ法（Haskard
and Archer, J. Immunol. Methods, 74(2), 361-67 (1984)、及びRoder et al., Methods Enzymol., 121, 140-67 (1986)）、及びバクテリオファージベクター発現系（例えば、Huse et al., Science, 246, 1275-81 (1989) を参照）などが当分野で公知である。さらに、非ヒト動物において抗体を産生する方法が、例えば、米国特許第5,545,806号、同第5,569,825号及び同第5,714,352号、並びに米国特許出願公開公報第2002/0197266 A1号に記載されている。 Suitable methods for producing antibodies are known in the art. For example, the standard hybridoma method is, for example, Kohler and Milstein, Eur. J. Immunol., 5, 511-519 (1976), Harlow and Lane (eds.), Antibodies: A Laboratory Manual, CSH Press (1988). and CA Janeway et al. (eds. ), Immunobiology, 5 th Ed., Garland Publishing, New York, is described in NY (2001)). Alternatively, another method, such as the EBV-hybridoma method (Haskard).
and Archer, J. Immunol. Methods, 74 (2), 361-67 (1984), and Roder et al., Methods Enzymol., 121, 140-67 (1986)), and bacteriophage vector expression systems (eg, Huse et al., Science, 246, 1275-81 (1989)) are known in the art. Further, methods of producing antibodies in non-human animals are described, for example, in US Pat. Nos. 5,545,806, 5,569,825 and 5,714,352, and US Patent Application Publication No. 2002/0197266 A1.

さらにファージディスプレイが、本発明の抗体を産生するために使用され得る。この点について、抗体の抗原結合可変（V）ドメインをコードするファージライブラリーが、標
準的な分子生物学及び組換えDNA技術を使用して作製され得る（例えば、Sambrook et al.
(eds.), Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 3rdEdition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York (2001) を参照）。所望の特異性を有する可変領域をコー
ドするファージが、所望の抗原への特異的結合について選択され、選択された可変ドメインを含む完全又は部分抗体が再構成される。再構成された抗体をコードする核酸配列は、適した細胞株（例えば、ハイブリドーマ産生に使用されるミエローマ細胞）中に導入され、その結果、モノクローナル抗体の特徴を有する抗体がこの細胞によって分泌される（例
えば、Janeway et al.（上記）、Huse et al.（上記）及び米国特許第6,265,150号を参照）。 In addition, phage displays can be used to produce the antibodies of the invention. In this regard, phage libraries encoding the antigen-binding variable (V) domain of an antibody can be generated using standard molecular biology and recombinant DNA techniques (eg, Sambrook et al.
(eds.), see Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 3 rd Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, the New York (2001)). Phage encoding a variable region with the desired specificity is selected for specific binding to the desired antigen and a complete or partial antibody containing the selected variable domain is reconstituted. The nucleic acid sequence encoding the reconstituted antibody is introduced into a suitable cell line (eg, myeloma cells used for hybridoma production), resulting in the secretion of antibodies characteristic of monoclonal antibodies. (See, for example, Janeway et al. (above), Huse et al. (above) and US Pat. No. 6,265,150).

抗体は、特定の重鎖及び軽鎖免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックであるトランスジェニックマウスにより産生され得る。かかる方法は当分野で公知であり、例えば、米国特許第5,545,806号及び同第5,569,825号、並びにJaneway et al.（上記）に記載されている。 Antibodies can be produced by transgenic mice that are transgenic for specific heavy and light chain immunoglobulin genes. Such methods are known in the art and are described, for example, in US Pat. Nos. 5,545,806 and 5,569,825, and Janeway et al. (Supra).

ヒト化抗体を産生する方法は当分野で周知であり、例えば、Janeway et al.（上記）、米国特許第5,225,539号、同第5,585,089号及び同第5,693,761号、欧州特許第0239400 B1
号、並びに英国特許第2188638号に詳細に記載されている。ヒト化抗体はまた、例えば、
米国特許第5,639,641号及びPedersen et al., J. Mol. Biol., 235, 959-973（1994）に
記載された抗体リサーフェシング（resurfacing）技術を使用して生成され得る。 Methods of producing humanized antibodies are well known in the art, for example, Janeway et al. (Supra), US Pat. Nos. 5,225,539, 5,585,089 and 5,693,761, European Patents 0239400 B1.
It is described in detail in No. 2188638 and UK Pat. No. 2188638. Humanized antibodies also include, for example,
It can be produced using the antibody resurfacing technique described in US Pat. No. 5,639,641 and Pedersen et al., J. Mol. Biol., 235, 959-973 (1994).

本発明はまた、本明細書に記載の抗体のいずれかの抗原結合部分を提供する。抗原結合部分は、少なくとも1つの抗原結合部位を有する任意の部分（例えば、Fab、F（ab’）2、dsFv、sFv、ダイアボディ（diabodies）及びトリアボディ（triabodies））であり得る。 The invention also provides an antigen binding portion of any of the antibodies described herein. The antigen binding moiety can be any moiety having at least one antigen binding site (eg, Fab, F (ab') 2 , dsFv, sFv, diabodies and triabodies).

一本鎖可変領域断片（sFv）抗体断片（これは、合成ペプチドを介して抗体軽鎖の可変
（V）ドメインに連結された抗体重鎖のVドメインを含む、切断型Fab断片からなる）は、
慣用的な組換えDNAテクノロジー技術を使用して生成され得る（例えば、Janeway et al.
（上記）を参照）。同様に、ジスルフィド安定化可変領域断片（dsFv）は、組換えDNA技
術によって調製され得る（例えば、Reiter et al., Protein Engineering, 7, 697-704（1994）を参照）。しかし、本発明の抗体断片は、これらの例示的な抗体断片タイプに限定されない。 Single-stranded variable region fragment (sFv) antibody fragment (which consists of a truncated Fab fragment containing the V domain of the antibody heavy chain linked to the variable (V) domain of the antibody light chain via a synthetic peptide). ,
It can be produced using conventional recombinant DNA technology technology (eg, Janeway et al.
(See above). Similarly, disulfide-stabilized variable region fragments (dsFv) can be prepared by recombinant DNA technology (see, eg, Reiter et al., Protein Engineering, 7, 697-704 (1994)). However, the antibody fragments of the invention are not limited to these exemplary antibody fragment types.

また、抗体又はその抗原結合部分は、検出可能な標識（例えば、放射性同位体、フルオロフォア（例えば、フルオレセインイソチオシアネート（FITC）、フィコエリトリン（PE））、酵素（例えば、アルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ）及び元素粒子（例えば、金粒子）など）を含むように改変され得る。 Also, the antibody or its antigen-binding portion may be a detectable label (eg, radioisotope, fluorophore (eg, fluorescein isothiocyanate (FITC), phycoerythrin (PE)), enzyme (eg, alkaline phosphatase, horseradish peroxidase)). And can be modified to include elemental particles (eg, gold particles).

本発明のTCR、ポリペプチド、タンパク質（その機能的変異体を含む）、核酸、組換え
発現ベクター、宿主細胞（その集団を含む）、及び抗体（その抗原結合部分を含む）は、単離及び／又は精製され得る。本明細書で使用する場合、用語「単離され」とは、その天然の環境から取り出されていることを意味する。本明細書で使用する場合、用語「精製され」とは、純度が増加していることを意味し、ここで、「純度」とは相対的な用語であって、必ずしも絶対的純度と解釈されない。例えば、純度は、少なくとも約50％であり得、60％、70％、80％、90％、95％より高くてもあり得、又は100％であり得る。 The TCRs, polypeptides, proteins (including their functional variants), nucleic acids, recombinant expression vectors, host cells (including their populations), and antibodies (including their antigen binding moieties) of the invention are isolated and isolated. / Or can be purified. As used herein, the term "isolated" means derived from its natural environment. As used herein, the term "purified" means increased purity, where "purity" is a relative term and is not necessarily construed as absolute purity. .. For example, the purity can be at least about 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, higher than 95%, or 100%.

本発明のTCR、ポリペプチド、タンパク質（その機能的変異体を含む）、核酸、組換え
発現ベクター、宿主細胞（その集団を含む）、及び抗体（その抗原結合部分を含む）（これらは全て、本明細書中以下、集合的に「本発明のTCR材料」と称す）は、医薬組成物な
どの組成物へと製剤化され得る。この点について、本発明は、TCR、ポリペプチド、タン
パク質、機能的部分、機能的変異体、核酸、発現ベクター、宿主細胞（その集団を含む）、及び抗体（その抗原結合部分を含む）のいずれかと、医薬上許容される担体とを含む、医薬組成物を提供する。本発明のTCR材料のいずれかを含む本発明の医薬組成物は、1種より多い本発明のTCR材料（例えば、ポリペプチド及び核酸）又は2種以上の異なるTCR（そ
の機能的部分及び機能的変異体を含む）を含み得る。或いは、医薬組成物は、他の医薬上活性な薬剤又は薬物（例えば、化学療法剤、例えば、アスパラギナーゼ、ブスルファン、カルボプラチン、シスプラチン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、フルオロウラシル、
ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、メトトレキサート、パクリタキセル、リツキシマブ、ビンブラスチン、ビンクリスチンなど）と組み合わせて、本発明のTCR材料を含み得る。 TCRs, polypeptides, proteins (including their functional variants), nucleic acids, recombinant expression vectors, host cells (including their populations), and antibodies (including their antigen-binding moieties) of the invention (all of which). Hereinafter referred to collectively as "the TCR material of the present invention" in the present specification) can be formulated into a composition such as a pharmaceutical composition. In this regard, the invention is any of a TCR, polypeptide, protein, functional moiety, functional variant, nucleic acid, expression vector, host cell (including its population), and antibody (including its antigen binding moiety). Provided is a pharmaceutical composition comprising a heel and a pharmaceutically acceptable carrier. The pharmaceutical composition of the invention comprising any of the TCR materials of the invention may be more than one TCR material of the invention (eg, polypeptides and nucleic acids) or two or more different TCRs (functional parts and functional portions thereof). Includes variants). Alternatively, the pharmaceutical composition may be another pharmaceutically active agent or drug (eg, a chemotherapeutic agent such as asparaginase, busulfan, carboplatin, cisplatin, daunorubicin, doxorubicin, fluorouracil, etc.
The TCR material of the present invention may be included in combination with gemcitabine, hydroxyurea, methotrexate, paclitaxel, rituximab, vinblastine, vincristine, etc.).

好ましくは、担体は医薬上許容される担体である。医薬組成物に関して、担体は、考慮中の特定の本発明のTCR材料について従来使用される担体のいずれかであり得る。かかる
医薬上許容される担体は、当業者に周知であり、公に容易に入手可能である。医薬上許容される担体は、使用条件下で有害な副作用も毒性もない担体であることが好ましい。 Preferably, the carrier is a pharmaceutically acceptable carrier. For pharmaceutical compositions, the carrier can be any of the carriers conventionally used for the particular TCR material of the invention under consideration. Such pharmaceutically acceptable carriers are well known to those of skill in the art and are readily available to the public. The pharmaceutically acceptable carrier is preferably a carrier that has no adverse side effects or toxicity under conditions of use.

担体の選択は、本発明の特定のTCR材料によって、及び本発明のTCR材料を投与するために使用される特定の方法によって、一部決定されよう。従って、本発明の医薬組成物の適した製剤は多様である。適した製剤には、経口、エアロゾル、非経口、皮下、静脈内、筋内、動脈内、髄腔内、又は腹腔内（interperitoneal）投与のためのもののいずれかが含
まれてよい。本発明のTCR材料を投与するために2以上の経路が使用され得、ある場合には、特定の経路が、別の経路よりも迅速且つ有効な応答を提供し得る。 The choice of carrier will be determined in part by the particular TCR material of the invention and by the particular method used to administer the TCR material of the invention. Therefore, suitable formulations of the pharmaceutical composition of the present invention are diverse. Suitable formulations may include either oral, aerosol, parenteral, subcutaneous, intravenous, intramuscular, intraarterial, intrathecal, or interperitoneal administration. Two or more routes may be used to administer the TCR material of the invention, and in some cases, one route may provide a faster and more effective response than another.

好ましくは、本発明のTCR材料は、注射により、例えば静脈内に投与される。本発明のTCR材料が、本発明のTCR（又はその機能的変異体）を発現する宿主細胞である場合には、
注射用の細胞のための医薬上許容される担体は、任意の等張性の担体、例えば、生理食塩水（水中約0.90％ w/vのNaCl、水中約300 mOsm/LのNaCl、又は水1リットル当たり約9.0 gのNaCl）、NORMOSOL R電解質溶液（Abbott, Chicago, IL）、PLASMA-LYTE A（Baxter, Deerfield, IL）、水中約5％のデキストロース、又は乳酸リンゲル液などを含んでよい。一実施態様において、医薬上許容される担体には、ヒト血清アルブメン（albumen）が補充
される。 Preferably, the TCR material of the invention is administered by injection, eg, intravenously. When the TCR material of the present invention is a host cell expressing the TCR of the present invention (or a functional variant thereof),
The pharmaceutically acceptable carrier for cells for injection is any isotonic carrier, such as saline (about 0.90% w / v NaCl in water, about 300 mOsm / L NaCl in water, or water. It may contain about 9.0 g of NaCl per liter), NORMOSOL R electrolyte solution (Abbott, Chicago, IL), PLASMA-LYTE A (Baxter, Deerfield, IL), about 5% dextrose in water, or Ringer's lactate solution. In one embodiment, the pharmaceutically acceptable carrier is supplemented with human serum albumen.

本発明の一実施態様において、医薬組成物はさらに、MHCクラスI拘束性TCR、若しくは
ポリペプチド、タンパク質、核酸、又はMHCクラスI拘束性TCRをコードする組換え発現ベ
クター、又はMHCクラスI拘束性TCRを発現する宿主細胞若しくは細胞集団を含んでよい。
特定の理論に拘束されるものではないが、MHCクラスI拘束性CD8+ T細胞は、MHCクラスII
拘束性CD4+ T細胞の反応性を増強し、MHCクラスII拘束性CD4+ T細胞が癌を治療又は予防
する能力を高めると考えられる。 In one embodiment of the invention, the pharmaceutical composition further comprises an MHC class I-restricted TCR, or a recombinant expression vector encoding a polypeptide, protein, nucleic acid, or MHC class I-restricted TCR, or MHC class I-restricted. It may include host cells or cell populations expressing the TCR.
Although not bound by any particular theory, MHC class I restrictive CD8 + T cells are MHC class II.
It is thought to enhance the reactivity of restrictive CD4 + T cells and enhance the ability of MHC class II restrictive CD4 + T cells to treat or prevent cancer.

本発明の目的のために、投与される本発明のTCR材料の量又は用量（例えば、本発明のTCR材料が1以上の細胞である場合には、細胞数）は、合理的な時間枠にわたって対象又は
動物において、例えば治療応答又は予防応答などをもたらすのに十分でなければならない。例えば、本発明のTCR材料の用量は、投与時点から約2時間又はそれ以上、例えば、12〜24又はそれ以上の時間の期間において、癌抗原と結合するため、又は癌を検出、治療若しくは予防するために、十分でなければならない。特定の実施態様において、この期間はさらに長くてもよい。用量は、本発明の特定のTCR材料の効力、及び動物（例えば、ヒト）
の状態、並びに治療されるべき動物（例えば、ヒト）の体重によって決定されるだろう。 For the purposes of the invention, the amount or dose of the TCR material of the invention administered (eg, the number of cells if the TCR material of the invention is one or more cells) is over a reasonable time frame. It must be sufficient to provide, for example, a therapeutic or prophylactic response in the subject or animal. For example, the dose of the TCR material of the present invention is to bind to a cancer antigen or to detect, treat or prevent cancer for a period of about 2 hours or more, for example, 12 to 24 or more hours from the time of administration. Must be sufficient to do. In certain embodiments, this period may be even longer. Dosages are the potency of the particular TCR material of the invention, and animals (eg, humans).
Will be determined by the condition of the animal as well as the weight of the animal to be treated (eg, human).

投与される用量を決定するための多くのアッセイが当分野で公知である。本発明の目的のために、本発明のTCR（又はその機能的変異体若しくは機能的部分）、ポリペプチド又
はタンパク質を発現するT細胞の所与の用量を哺乳動物に投与した際に、かかるT細胞によってターゲット細胞が溶解される又はIFN-γが分泌される程度を、種々の用量のT細胞を
それぞれ与えた哺乳動物のセット間で比較することを含むアッセイが、哺乳動物に投与されるべき出発用量を決定するために使用され得る。特定の用量の投与の際にターゲット細胞が溶解される又はIFN-γが分泌される程度は、当分野で公知の方法によってアッセイできる。 Many assays are known in the art for determining the dose to be administered. For the purposes of the invention, such T when given to a mammal a given dose of T cells expressing the TCR (or functional variant or functional portion thereof), polypeptide or protein of the invention. Assays should be administered to mammals that include comparing the extent to which cells lyse or secrete IFN-γ between sets of mammals individually fed different doses of T cells. It can be used to determine the starting dose. The extent to which target cells are lysed or IFN-γ is secreted upon administration of a particular dose can be assayed by methods known in the art.

本発明のTCR材料の用量はまた、本発明の特定のTCR材料の投与に伴い得る任意の有害な
副作用の存在、性質及び程度によっても決定されよう。典型的には、処方医師は、様々な因子（例えば、年齢、体重、全身健康状態、食事、性別、投与されるべき本発明のTCR材
料、投与経路、及び治療されるべき状態の重篤度）を考慮して、個々の患者それぞれを治療するための本発明のTCR材料の投与量を決定するだろう。本発明のTCR材料が細胞集団である一実施態様において、注入当たり投与される細胞数は、変動してよく、例えば、約1
×106〜約1×1011細胞又はそれ以上などであってよい。 The dose of the TCR material of the invention will also be determined by the presence, nature and extent of any adverse side effects that may be associated with administration of the particular TCR material of the invention. Typically, the prescribing physician will refer to various factors (eg, age, weight, general health, diet, gender, TCR material of the invention to be administered, route of administration, and severity of the condition to be treated. ) Will be taken into account to determine the dosage of the TCR material of the invention for treating each individual patient. In one embodiment in which the TCR material of the invention is a cell population, the number of cells administered per infusion may vary, eg, about 1.
× 10 6 to about 1 × 10 11 cells or more.

当業者は、本発明のTCR材料が、本発明のTCR材料の治療効力又は予防効力を改変によって増加させるように、任意の数の方法で改変され得ることを容易に理解するであろう。例えば、本発明のTCR材料は、直接的、又は架橋を介して間接的にかのいずれかで、標的化
部分（targeting moiety）にコンジュゲート化され得る。化合物（例えば、本発明のTCR
材料）を標的化部分にコンジュゲート化する実務は、当分野で公知である。例えば、Wadwa et al., J. Drug Targeting 3：111（1995）及び米国特許第5,087,616号を参照。本明
細書で使用する場合、用語「標的化部分」とは、細胞表面受容体を特異的に認識し、結合する任意の分子又は薬剤をいい、その結果、標的化部分によって、本発明のTCR材料のデ
リバリーが、受容体を表面に発現する細胞集団へと向けられる。標的化部分としては、抗体又はその断片、ペプチド、ホルモン、成長因子、サイトカイン、及び任意の他の天然又は非天然リガンドであって、細胞表面受容体（例えば、上皮成長因子受容体（EGFR）、T
細胞受容体（TCR）、B細胞受容体（BCR）、CD28、血小板由来成長因子受容体（PDGF）、
ニコチン性アセチルコリン受容体（nAChR）など）と結合するものなどが挙げられるが、
これらに限定されない。本明細書で使用する場合、用語「架橋（bridge）」とは、本発明のTCR材料を標的化部分と繋げる任意の薬剤又は分子をいう。架橋及び／又は標的化部分
が、本発明のTCR材料と結合した場合に、本発明のTCR材料の機能（すなわち、MAGE-A3若
しくはMAGE-A6と結合する能力；又は癌を検出、治療若しくは予防する能力）を妨げない
ことを条件として、本発明のTCR材料の機能に必要ではない、本発明のTCR材料における部位が、架橋及び／又は標的化部分を結合するための理想的部位であると当業者は理解する。 Those skilled in the art will readily appreciate that the TCR material of the invention can be modified in any number of ways such that the therapeutic or prophylactic efficacy of the TCR material of the invention is increased by modification. For example, the TCR materials of the invention can be conjugated to a targeting moiety, either directly or indirectly via cross-linking. Compounds (eg, TCR of the invention)
The practice of conjugating a material) to a targeted portion is known in the art. See, for example, Wadwa et al., J. Drug Targeting 3: 111 (1995) and US Pat. No. 5,087,616. As used herein, the term "targeted moiety" refers to any molecule or agent that specifically recognizes and binds to cell surface receptors, resulting in the TCR of the invention by the targeted moiety. Delivery of the material is directed to the cell population that expresses the receptor on the surface. Targeted moieties are antibodies or fragments thereof, peptides, hormones, growth factors, cytokines, and any other natural or unnatural ligands, such as cell surface receptors (eg, epidermal growth factor receptors (EGFRs),. T
Cell Receptor (TCR), B Cell Receptor (BCR), CD28, Platelet Derived Growth Factor Receptor (PDGF),
Those that bind to nicotinic acetylcholine receptors (nAChR), etc.) can be mentioned.
Not limited to these. As used herein, the term "bridge" refers to any agent or molecule that connects the TCR material of the invention to a targeted moiety. The function of the TCR material of the invention (ie, the ability to bind to MAGE-A3 or MAGE-A6; or the detection, treatment or prevention of cancer when the cross-linking and / or targeting moiety binds to the TCR material of the invention. The site in the TCR material of the present invention, which is not necessary for the function of the TCR material of the present invention, is an ideal site for binding the cross-linking and / or the targeting moiety, provided that it does not interfere with the ability to perform. Those skilled in the art understand.

本発明の医薬組成物、TCR（その機能的変異体を含む）、ポリペプチド、タンパク質、
核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞又は細胞集団は、癌を治療又は予防する方法で使用され得ることが企図される。特定の理論に拘束されるものではないが、本発明のTCR（及
びその機能的変異体）は、TCR（又は関連する本発明のポリペプチド若しくはタンパク質
、及びその機能的変異体）が、細胞により発現された場合に、MAGE-A3又はMAGE-A6を発現する標的細胞に対して免疫応答を媒介できるように、MAGE-A3及び／又はMAGE-A6と特異的に結合すると考えられる。この点について、本発明は、哺乳動物において癌を治療又は予防する方法であって、本明細書に記載の医薬組成物、TCR（及びその機能的変異体）、ポ
リペプチド若しくはタンパク質のいずれか、本明細書に記載のTCR（及びその機能的変異
体）、ポリペプチド、タンパク質のいずれかをコードするヌクレオチド配列を含む任意の核酸若しくは組換え発現ベクター、又は本明細書に記載のTCR（及びその機能的変異体）
、ポリペプチド若しくはタンパク質のいずれかをコードする組換えベクターを含む任意の宿主細胞若しくは細胞集団を、哺乳動物において癌を治療又は予防するのに有効な量で、哺乳動物に投与することを含む、方法を提供する。 Pharmaceutical compositions of the invention, TCRs (including functional variants thereof), polypeptides, proteins,
It is contemplated that nucleic acids, recombinant expression vectors, host cells or cell populations can be used in methods of treating or preventing cancer. Without being bound by any particular theory, the TCR (and its functional variants) of the invention are TCRs (or related polypeptides or proteins of the invention and their functional variants) by cells. When expressed, it is thought to specifically bind to MAGE-A3 and / or MAGE-A6 so that it can mediate an immune response against target cells expressing MAGE-A3 or MAGE-A6. In this regard, the invention is a method of treating or preventing cancer in a mammal, wherein any of the pharmaceutical compositions, TCRs (and functional variants thereof), polypeptides or proteins described herein. Any nucleic acid or recombinant expression vector containing a nucleotide sequence encoding any of the TCRs (and their functional variants), polypeptides, and proteins described herein, or the TCRs described herein (and the like thereof). Functional variant)
, Which comprises administering to a mammal any host cell or cell population comprising a recombinant vector encoding either a polypeptide or a protein in an amount effective to treat or prevent cancer in the mammal. Provide a method.

本発明の一実施態様において、本発明の癌を治療又は予防する方法はさらに、MHCクラ
スI拘束性TCR、若しくはポリペプチド、タンパク質、核酸、又はMHCクラスI拘束性TCRを
コードする組換え発現ベクター、又はMHCクラスI拘束性TCRを発現する宿主細胞若しくは
細胞集団を哺乳動物に共投与することを含んでよい。 In one embodiment of the invention, the method of treating or preventing the cancer of the invention further comprises an MHC class I-restricted TCR or a recombinant expression vector encoding a polypeptide, protein, nucleic acid, or MHC class I-restricted TCR. , Or host cells or cell populations expressing MHC class I-restricted TCR may be co-administered to mammals.

本明細書で使用する場合、用語「治療する」及び「予防する」並びにそれらの派生語は、100％又は完全な治療又は予防を必ずしも意味しない。むしろ、当業者が潜在的利益又
は治療効果を有すると認識する、様々な程度の治療又は予防が存在する。これに関して、本発明の方法は、哺乳動物における癌の任意のレベルの治療又は予防の任意の量を提供し得る。さらに、本発明の方法により提供される治療又は予防は、治療又は予防される疾患（例えば、癌）の1つ以上の状態又は症状の治療又は予防を含み得る。また、本明細書の
目的のために、「予防」は、疾患、又はその症状若しくは状態の発症を遅延させることを包含し得る。 As used herein, the terms "treat" and "prevent" and their derivatives do not necessarily mean 100% or complete treatment or prevention. Rather, there are varying degrees of treatment or prevention that one of ordinary skill in the art will recognize as having potential benefits or therapeutic effects. In this regard, the methods of the invention may provide any amount of treatment or prevention of any level of cancer in a mammal. Moreover, the treatment or prevention provided by the methods of the invention may include the treatment or prevention of one or more conditions or symptoms of the disease being treated or prevented (eg, cancer). Also, for the purposes of this specification, "prevention" may include delaying the onset of a disease, or a symptom or condition thereof.

また、哺乳動物において癌の存在を検出する方法も提供する。該方法は、（i）本明細
書に記載の本発明のTCR（及びその機能的変異体）、ポリペプチド、タンパク質、核酸、
組換え発現ベクター、宿主細胞、細胞集団、又は抗体若しくはその抗原結合部分のいずれかと、癌細胞を含むサンプルとを接触させ、それにより複合体を形成すること、及び該複合体を検出することを含み、ここで、該複合体の検出が、哺乳動物における癌の存在を示す。 It also provides a method for detecting the presence of cancer in mammals. The methods are as follows: (i) TCRs (and functional variants thereof), polypeptides, proteins, nucleic acids, of the invention described herein.
Contacting any of the recombinant expression vectors, host cells, cell populations, or antibodies or antigen-binding moieties thereof with a sample containing cancer cells to form a complex and detect the complex. Including, where the detection of the complex indicates the presence of cancer in the mammal.

哺乳動物において癌を検出する本発明の方法に関して、癌細胞のサンプルは、全細胞、その溶解物又は全細胞溶解物の画分（fraction）（例えば、核若しくは細胞質画分、全タンパク質画分又は核酸画分）を含むサンプルであり得る。 For the method of the invention to detect cancer in a mammal, a sample of cancer cells is a whole cell, its lysate or a fraction of the whole cell lysate (eg, nuclear or cytoplasmic fraction, total protein fraction or It can be a sample containing a nucleic acid fraction).

本発明の検出方法の目的のために、接触は、哺乳動物に関してin vitro又はin vivoで
行うことができる。好ましくは、接触はin vitroである。 For the purposes of the detection methods of the present invention, contact can be made in vitro or in vivo with respect to mammals. Preferably, the contact is in vitro.

また、複合体の検出は当分野で公知の、任意の数の方法を通して起こり得る。例えば、本明細書に記載の本発明のTCR（及びその機能的変異体）、ポリペプチド、タンパク質、
核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞、細胞集団、又は抗体若しくはその抗原結合部分は、例えば、放射性同位体、フルオロフォア（例えば、フルオレセインイソチオシアネート（FITC）、フィコエリトリン（PE））、酵素（例えば、アルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ）、及び元素粒子（例えば、金粒子）などの検出可能な標識で標識され得る。 Also, detection of the complex can occur through any number of methods known in the art. For example, the TCRs (and functional variants thereof), polypeptides, proteins, of the invention described herein.
Nucleic acids, recombinant expression vectors, host cells, cell populations, or antibodies or antigen-binding moieties thereof may be, for example, radioisotopes, fluorophores (eg, fluorescein isothiocyanate (FITC), phycoerythrin (PE)), enzymes (eg, eg. It can be labeled with a detectable label such as alkaline phosphatase, horseradish peroxidase), and elemental particles (eg, gold particles).

宿主細胞又は細胞集団が投与される本発明の方法の目的のために、細胞は、哺乳動物に対して同種又は自己の細胞であり得る。好ましくは、細胞は、哺乳動物に対して自家性（autologous）である。 For the purposes of the method of the invention to which a host cell or cell population is administered, the cell can be an allogeneic or autologous cell to a mammal. Preferably, the cells are autologous to the mammal.

本発明の方法に関して、癌は、以下のいずれかを含む、任意の癌であり得る：肉腫（例、滑膜肉腫、骨肉腫、子宮平滑筋肉腫（leiomyosarcoma uteri）及び胞巣状横紋筋肉腫）、リンパ腫（例、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫）、肝細胞癌、神経膠腫、頭部癌（例、扁平上皮細胞癌）、頸部癌（例、扁平上皮細胞癌）、急性リンパ球性癌（acute lymphocytic cancer）、白血病（例、急性骨髄性白血病及び慢性リンパ球性白血病）、骨癌、脳腫瘍、乳癌、肛門、肛門管又は肛門直腸の癌、眼の癌、肝内胆管の癌、関節の癌、頸部、胆嚢又は胸膜の癌、鼻、鼻腔又は中耳の癌、口腔の癌、外陰部の癌、慢性骨髄性癌（chronic myeloid cancer）、大腸癌（例、結腸癌）、食道癌、子宮頸癌、胃癌（gastric cancer）、消化管カルチノイド腫瘍、下咽頭癌、喉頭癌、肝臓癌（例、肝細胞癌）、肺癌（例、非小細胞肺癌）、悪性中皮腫、メラノーマ、多発性骨髄腫、鼻咽頭癌、卵巣癌、膵臓癌、腹膜、網及び腸間膜癌、咽頭癌、前立腺癌、直腸癌、腎臓癌（例、腎細胞癌）、小腸癌、軟組織癌、胃癌（stomach cancer）、精巣癌、甲状腺癌、並びに尿路上皮癌（例、尿管癌及び膀胱癌）。好ましくは、癌は、メラノーマ、乳癌、肺癌、前立腺癌、滑膜細胞肉腫、頭頸部癌、食道癌、又は卵巣癌である。 For the methods of the invention, the cancer can be any cancer, including any of the following: sarcoma (eg, synovial sarcoma, osteosarcoma, leiomyosarcoma uteri) and follicular rhizome myoma. ), Lymphoma (eg, Hodgkin's lymphoma and non-Hojikin's lymphoma), Hepatic cell carcinoma, Glioblastoma, Head cancer (eg, squamous cell carcinoma), Cervical cancer (eg, squamous cell carcinoma), Acute lymphocytic Cancer (acute lymphocytic cancer), leukemia (eg, acute myeloid leukemia and chronic lymphocytic leukemia), bone cancer, brain tumor, breast cancer, anal, anal duct or anal rectal cancer, eye cancer, intrahepatic bile duct cancer, Joint cancer, cervical, bile sac or thoracic cancer, nose, nasal cavity or middle ear cancer, oral cancer, genital cancer, chronic myeloid cancer, colon cancer (eg, colon cancer), Esophageal cancer, cervical cancer, gastric cancer, gastrointestinal cultinoid tumor, hypopharyngeal cancer, laryngeal cancer, liver cancer (eg, hepatocellular carcinoma), lung cancer (eg, non-small cell lung cancer), malignant mesotheloma, Melanoma, multiple myeloma, nasopharyngeal cancer, ovarian cancer, pancreatic cancer, peritoneum, reticulum and mesenteric cancer, pharyngeal cancer, prostate cancer, rectal cancer, kidney cancer (eg, renal cell carcinoma), small bowel cancer, soft tissue cancer , Gastric cancer (stomach cancer), testis cancer, thyroid cancer, and urinary tract epithelial cancer (eg, urinary tract cancer and bladder cancer). Preferably, the cancer is melanoma, breast cancer, lung cancer, prostate cancer, synovial cell sarcoma, head and neck cancer, esophageal cancer, or ovarian cancer.

本発明の方法で言及する哺乳動物は、任意の哺乳動物であり得る。本明細書で使用する場合、用語「哺乳動物」とは、任意の哺乳動物をいい、Rodentia目の哺乳動物（例えば、
マウス及びハムスター）、及びLogomorpha目の哺乳動物（例えばウサギ）を含むが、これらに限定されない。哺乳動物は、Carnivora目（Felines（ネコ）及びCanines（イヌ）を
含む）由来であることが好ましい。哺乳動物は、Artiodactyla目（Bovines（ウシ）及びSwines（ブタ）を含む）由来又はPerssodactyla目（Equines（ウマ）を含む）のものであ
ることがより好ましい。哺乳動物は、Primates目、Ceboids若しくはSimoids（サル）のもの、又はAnthropoids目（ヒト及び類人猿）のものであることが最も好ましい。特に好ま
しい哺乳動物はヒトである。 The mammal referred to in the method of the invention can be any mammal. As used herein, the term "mammal" refers to any mammal, such as a mammal of the order Rodentia (eg,).
Mice and hamsters), and mammals of the order Lagomorpha (eg, rabbits), but not limited to these. Mammals are preferably of the order Carnivora (including Felines and Canines). Mammals are more preferably of the order Artiodactyla (including Bovines (bovin) and Swines (pig)) or of the order Perssodactyla (including Equines (horse)). Mammals are most preferably of the order Primates, Ceboids or Simoids (monkeys), or Anthropoides (humans and apes). A particularly preferred mammal is human.

以下の実施例は、本発明をさらに説明するが、当然ながら、その範囲を限定するものとして決して解釈されるべきではない。 The following examples further illustrate the invention, but of course should never be construed as limiting its scope.

実施例1A
本実施例は、T細胞クローンからのTCRの単離を実証する。 Example 1A
This example demonstrates the isolation of TCR from T cell clones.

抗MAGE-A3243-258 CD4+ エフェクタークローンR12C9及び抗MAGE-A3243-258 Tregクローン6F9を、ペプチド（MAGE-A3243-258）をパルスしたEBV B細胞とともに培養した。サイトカイン分泌、抑制された指標細胞（indicator cells）のパーセンテージ、FOXP3+ Treg細胞のパーセンテージ、及び非メチル化FOXP3配列のパーセンテージを測定した。非メチル
化FOXP3イントロン1配列は、安定したTreg表現型に対するマーカーであると考えらえる。6F9及びR12C9クローンに関する結果を表1A及び1Bに示す。 Anti-MAGE-A3 243-258 CD4 + effector clone R12C9 and anti-MAGE-A3 243-258 Treg clone 6F9 were cultured with peptide (MAGE-A3 243-258 ) pulsed EBV B cells. Cytokine secretion, percentage of suppressed indicator cells, percentage of FOXP3 + Treg cells, and percentage of unmethylated FOXP3 sequences were measured. The unmethylated FOXP3 intron 1 sequence is considered to be a marker for the stable Treg phenotype. The results for the 6F9 and R12C9 clones are shown in Tables 1A and 1B.

Figure 2021191265
Figure 2021191265

Figure 2021191265
Figure 2021191265

Tregクローンは、適切なペプチドによる刺激後、指標細胞の増殖を阻害し得る。表1Aに示すように、クローン6F9はTregクローンである。 Treg clones can inhibit the growth of indicator cells after stimulation with the appropriate peptide. As shown in Table 1A, clone 6F9 is a Treg clone.

配列番号21及び22を含むTCRを抗MAGE-A3243-258 CD4+ エフェクタークローンR12C9からクローニングした（「R12C9 TCR」）。配列番号11及び12を含むTCRを抗MAGE-A3243-258 Tregクローン6F9からクローニングした（「6F9 TCR」）。 TCRs containing SEQ ID NOs: 21 and 22 were cloned from the anti-MAGE-A3 243-258 CD4 + effector clone R12C9 (“R12C9 TCR”). TCRs containing SEQ ID NOs: 11 and 12 were cloned from anti-MAGE-A3 243-258 Treg clone 6F9 (“6F9 TCR”).

実施例1B
本実施例は、実施例1の6F9 TCR又はR12C9 TCRをコードするヌクレオチド配列を形質導
入したPBMCの形質導入効率を実証する。 Example 1B
This example demonstrates the transduction efficiency of PBMCs transduced with a nucleotide sequence encoding the 6F9 TCR or R12C9 TCR of Example 1.

R12C9及び6F9のTCRα鎖及びβ鎖をコードする転写産物を、P2A自己切断ペプチドをコードする配列と連結し、MSGV1レトロウイルスベクターにクローニングした。3人の患者由来のPBMCをOKT3で刺激し、2日目に一過性のレトロウイルス上清で形質導入し、7日目にCD4+
T細胞を濃縮（enriched）した。6F9又はR12C9 TCRをそれぞれ検出する抗Vβ22又はVβ6.7で形質導入細胞を染色することによりTCR発現レベルを評価した。患者1由来のPBMCの分
析により、25〜35％のT細胞に個々のTCRが形質導入されたことが示され、患者2及び3由来のPBMCでも同様の形質導入レベルが得られた。 Transcripts encoding the TCR α and β chains of R12C9 and 6F9 were ligated to the sequences encoding the P2A self-cleaving peptides and cloned into the MSGV1 retroviral vector. PBMCs from 3 patients were stimulated with OKT3, transduced with a transient retroviral supernatant on day 2, and CD4 + on day 7.
T cells were enriched. TCR expression levels were assessed by staining transduced cells with anti-Vβ22 or Vβ6.7, which detect 6F9 or R12C9 TCR, respectively. Analysis of PBMCs from patient 1 showed that 25-35% of T cells were transduced with individual TCRs, with similar levels of transduction for PBMCs from patients 2 and 3.

実施例2
本実施例は、実施例1の抗MAGE-A3243-258 TCRをコードするヌクレオチド配列を形質導
入したT細胞が、MAGE-A3の293-クラスII主要組織適合遺伝子複合体トランスアクチベーター（CIITA）トランスフェクタント、及びペプチドパルスした標的を認識することを実証
する。本実施例はまた、6F9 TCRが、MAGE-A3及びMAGE-A6の293-CIITAトランスフェクタントを認識することも実証する。 Example 2
In this example, T cells transduced with the nucleotide sequence encoding the anti-MAGE-A3 243-258 TCR of Example 1 are MAGE-A3 293-class II major tissue-compatible gene complex transactivator (CIITA). Demonstrate recognition of transducant and peptide pulsed targets. This example also demonstrates that the 6F9 TCR recognizes the 293-CIITA transfectants of MAGE-A3 and MAGE-A6.

2人のヒトドナー由来のCD4+ 濃縮末梢血リンパ球（PBL）に、F5（抗MART-1）TCR、R12C9 TCR若しくは6F9 TCRを形質導入したか、又は形質導入しなかった（UT）。この細胞を、MAGE-A3243-258（配列番号2）ペプチドをパルスした293-CIITAトランスフェクト標的細胞ともに培養した。293-CIITA細胞は、クラスII主要組織適合遺伝子複合体トランスアクチ
ベータータンパク質をコードするヒト遺伝子であるCIITAを形質導入した293細胞である。6F9及びR12C9 TCRを形質導入した細胞を用いて得られた結果を表2及び図10Aに示す。R12C9 TCR又は6F9 TCRを形質導入したPBLは、MAGE-A3243-258ペプチドをパルスしたHLA-DP*0401+ 標的細胞を認識した。MAGE-A3243-258ペプチドのタイトレーションにより、6F9又はR12C9 TCRを形質導入したCD4+ T細胞が、最小で0.001と0.01 mg/mlの間のMAGE-A3:243-258ペプチドをパルスした標的に応答して、同程度のレベルのIFN-γを放出したことが示された。第3のヒトドナー由来のPBLを用いて実験を繰り返し、同様の結果を得た。 F5 (anti-MART-1) TCR, R12C9 TCR or 6F9 TCR were or were not transduced into CD4 + enriched peripheral blood lymphocytes (PBL) from two human donors (UT). These cells were cultured with MAGE-A3 243-258 (SEQ ID NO: 2) peptide pulsed 293-CIITA transfect target cells. 293-CIITA cells are 293 cells transduced with CIITA, a human gene encoding a class II major histocompatibility complex transactivator protein. The results obtained using cells transduced with 6F9 and R12C9 TCR are shown in Table 2 and FIG. 10A. PBL transduced with R12C9 TCR or 6F9 TCR recognized HLA-DP * 0401+ target cells pulsed with MAGE-A3 243-258 peptide. Titration of the MAGE-A3 243-258 peptide allows CD4 + T cells transduced with 6F9 or R12C9 TCR to target a pulse of MAGE-A3: 243-258 peptide between 0.001 and 0.01 mg / ml at a minimum. Responses were shown to release similar levels of IFN-γ. Experiments were repeated using PBL from a third human donor and similar results were obtained.

Figure 2021191265
Figure 2021191265

293-CIITA標的細胞に、全長MAGE-A3タンパク質若しくはMAGE-A6タンパク質（1つの位置（249）のみが異なる）、又は全長MAGE-A1タンパク質若しくはMAGE-A12タンパク質をコードするDNA構築物（pCDNA3ベクター）をトランスフェクトした。形質導入していないPBL及び形質導入したPBLを、トランフェクトされた293-CIITA細胞と共培養し、インターフェロン（IFN）ガンマ分泌を測定した。結果を図1A、1B及び10Aに示す。 A DNA construct (pCDNA3 vector) encoding a full-length MAGE-A3 protein or MAGE-A6 protein (only one position (249) is different) or a full-length MAGE-A1 protein or MAGE-A12 protein is added to the 293-CIITA target cells. Transfected. Untransduced PBL and transduced PBL were co-cultured with truncated 293-CIITA cells and interferon (IFN) gamma secretion was measured. The results are shown in Figures 1A, 1B and 10A.

図1A、1B及び10Aに示すように、R12C9 TCR又は6F9 TCRを形質導入したT細胞は、ペプチドパルスした標的を認識したものの、6F9 TCRを形質導入したPBLが、MAGE-A3及びMAGE-A6
293-CIITAトランスフェクタントのそれぞれに対して最も高い反応性であった。R12C9 TCRではなく6F9 TCRを形質導入したCD4+ T細胞は、MAGE-A3又はMAGE-A6をコードする遺伝子をトランスフェクトしたHLA DP*0401+ 293-CIITA細胞を認識し、MAGE-A1又はA12についてはしなかった。MAGEファミリーメンバーの対応する領域のアミノ酸配列を比較することにより、MAGE-A3及びMAGE-A6は、1つの位置（残基249）で異なるのみである一方、他のMAGEファミリーメンバーはMAGE-A3と2つの位置（MAGE-A12243-258（配列番号70））又は3つの位置（MAGE-A1243-258（配列番号71））で異なることが示された。さらに、R12C9 TCRで
はなく6F9 TCRを形質導入したCD4+ T細胞は、MAGE-A3+/HLA-DP*0401+ メラノーマ細胞株1359 mel-CIITAを認識し、MAGE-A3+/HLA-DP*0401-メラノーマ細胞株624 mel-CIITAを認識
できなかった。R12C9 TCRを形質導入したCD4+ T細胞は、試験したメラノーマ細胞株のど
ちらも認識できなかった。MART-1反応性TCR DMF5を形質導入した細胞は、トランスフェクトされた293-CIITA細胞又はMAGE-A3:243-258パルス標的細胞を認識できなかったが、HLA-A*0201+ 及びMART-1+ 細胞株624 mel-CIITAを認識した。第3のヒトドナー由来のPBLを用
いて実験を繰り返し、同様の結果を得た。6F9 TCRは、免疫活性の抑制に関与するTregク
ローンから得られたことから、6F9 TCRの反応性は驚きであり、予期できないものであっ
た。これらの結果から、6F9又はR12C9を形質導入したCD4+T細胞は、ペプチドパルスした
標的細胞を認識した一方、6F9 TCRを形質導入した細胞のみが、トランスフェクトされた
標的細胞、並びにMAGE-A3+ 及びHLA-DP*04+腫瘍細胞を認識したことが示された。 As shown in FIGS. 1A, 1B and 10A, T cells transduced with R12C9 TCR or 6F9 TCR recognized peptide-pulsed targets, but PBL transduced with 6F9 TCR produced MAGE-A3 and MAGE-A6.
It was the most reactive to each of the 293-CIITA transfectants. CD4 + T cells transduced with 6F9 TCR instead of R12C9 TCR recognize HLA DP * 0401 + 293-CIITA cells transfected with the gene encoding MAGE-A3 or MAGE-A6 and for MAGE-A1 or A12. I didn't do it. By comparing the amino acid sequences of the corresponding regions of the MAGE family members, MAGE-A3 and MAGE-A6 differ only at one position (residue 249), while the other MAGE family members are with MAGE-A3. It was shown to be different at two positions (MAGE-A12 243-258 (SEQ ID NO: 70)) or three positions (MAGE-A1 243-258 (SEQ ID NO: 71)). In addition, CD4 + T cells transfected with 6F9 TCR instead of R12C9 TCR recognized MAGE-A3 + / HLA-DP * 0401 + melanoma cell line 1359 mel-CIITA and MAGE-A3 + / HLA-DP * 0401. - it was not able to recognize the melanoma cell lines 624 mel-CIITA. CD4 + T cells transduced with R12C9 TCR could not recognize either of the melanoma cell lines tested. Cells transduced with MART-1 reactive TCR DMF5 could not recognize transfected 293-CIITA cells or MAGE-A3: 243-258 pulse target cells, but HLA-A * 0201 + and MART-1. + Cell line 624 mel-CIITA was recognized. Experiments were repeated using PBL from a third human donor and similar results were obtained. Since the 6F9 TCR was obtained from Treg clones involved in the suppression of immune activity, the reactivity of the 6F9 TCR was surprising and unexpected. From these results, CD4 + T cells transduced with 6F9 or R12C9 recognized peptide-pulsed target cells, whereas only cells transduced with 6F9 TCR were transfected target cells as well as MAGE-A3 +. And HLA-DP * 04 + were shown to recognize tumor cells.

実施例3
本実施例は、6F9を形質導入したPBLが、HLA-DP4+ B細胞によりプロセシングされ提示されるMAGE-A3全長タンパク質に対して高い反応性を示すことを実証する。 Example 3
This example demonstrates that 6F9 transduced PBL exhibits high reactivity to MAGE-A3 full-length protein processed and presented by HLA-DP4 + B cells.

2人のヒトドナー由来のPBLに、6F9 TCRをコードするヌクレオチド配列を形質導入した
か、又は形質導入しなかった。この細胞を、全長MAGE-A3タンパク質（配列番号1）をプロセシングし提示するHLA-DP4+ B細胞と共培養した。結果を表3及び図10Aに示す。表3及び
図10Aに示すように、6F9を形質導入したPBLは、HLA-DP4+ B細胞によりプロセシングされ
提示されるMAGE-A3全長タンパク質に対して高い反応性であった。 Nucleotide sequences encoding 6F9 TCR were or were not transduced into PBLs from two human donors. These cells were co-cultured with HLA-DP4 + B cells that processed and presented the full-length MAGE-A3 protein (SEQ ID NO: 1). The results are shown in Table 3 and FIG. 10A. As shown in Table 3 and FIG. 10A, 6F9 transduced PBL was highly reactive to the MAGE-A3 full length protein processed and presented by HLA-DP4 + B cells.

Figure 2021191265
Figure 2021191265

実施例4
本実施例は、6F9 TCRを形質導入したPBLが、MAGE-A3タンパク質の内在性クラスII提示
を有する腫瘍株に対して反応性であることを実証する。 Example 4
This example demonstrates that PBL transduced with 6F9 TCR is responsive to tumor strains with endogenous class II presentation of the MAGE-A3 protein.

2人のヒトドナー由来のPBLに、6F9 TCR若しくはF5 TCRをコードするヌクレオチド配列
を形質導入したか、又は形質導入しなかった。この細胞を、単独で培養するか（T細胞の
み）、又は624-CIITA細胞、526-CIITA細胞若しくはH1299-CIITA細胞（CIITAがトランスフェクトされた腫瘍細胞株）と共培養した。結果を表4に示す。表4に示すように、6F9 TCR
を形質導入したPBLは、MAGE-A3タンパク質の内在性クラスII提示を有する腫瘍株に対して反応性であった。 Nucleotide sequences encoding 6F9 TCR or F5 TCR were transduced or not transduced into PBLs from two human donors. The cells were either cultured alone (T cells only) or co-cultured with 624-CIITA cells, 526-CIITA cells or H1299-CIITA cells (CIITA-transfected tumor cell lines). The results are shown in Table 4. 6F9 TCR as shown in Table 4
The transduced PBL was reactive to tumor strains with endogenous class II presentation of the MAGE-A3 protein.

Figure 2021191265
Figure 2021191265

実施例5
本実施例は、6F9 TCRがMAGE-A3特異的であることを実証する。 Example 5
This example demonstrates that the 6F9 TCR is MAGE-A3 specific.

ヒトドナー由来のPBLをCD4+濃縮し、細胞数を急速に拡大した（27日目）。細胞に、F5 TCR若しくは6F9 TCRを形質導入するか、又は形質導入せず、526-CIITA細胞若しくはH1299-CIITA細胞のみ、又は抗MAGE-A3 siRNA若しくは抗MART-1 siRNAを有する526-CIITA細胞若しくはH1299-CIITA細胞と共培養した。IFN-γ分泌を測定した。結果を図2A及び2Bに示す
。 PBL derived from human donors was enriched with CD4 + and the cell number was rapidly expanded (day 27). F5 TCR or 6F9 TCR transduced or not transduced into cells, only 526-CIITA cells or H1299-CIITA cells, or 526-CIITA cells with anti-MAGE-A3 siRNA or anti-MART-1 siRNA or It was co-cultured with H1299-CIITA cells. IFN-γ secretion was measured. The results are shown in Figures 2A and 2B.

図2A及び2Bに示すように、抗MAGE-A3 siRNAは、6F9-TCR形質導入細胞の反応性を低下させた。従って、siRNAノックダウンアッセイにより、6F9 TCRがMAGE-A3特異的であること
が確認された。 As shown in FIGS. 2A and 2B, anti-MAGE-A3 siRNA reduced the reactivity of 6F9-TCR transduced cells. Therefore, siRNA knockdown assay confirmed that 6F9 TCR is MAGE-A3-specific.

実施例6
本実施例は、6F9 TCRが、HLA-DP拘束性の様式でMAGE-A3を認識することを実証する。 Example 6
This example demonstrates that the 6F9 TCR recognizes MAGE-A3 in an HLA-DP restrictive manner.

624、526、1359、H1299、1300、1764、3071、397、2630及び2984腫瘍細胞株に、CIITA
を形質導入し（624-CIITA、526-CIITA、1359-CIITA、H1299-CIITA、1300-CIITA、1764-CIITA、3071-CIITA、397-CIITA、2630-CIITA及び2984-CIITA）、HLA-DP発現をフローサイトメトリーにより測定した。DP4及びMAGE-A3発現を表5Aに示す。 CIITA in 624, 526, 1359, H1299, 1300, 1764, 3071, 397, 2630 and 2984 tumor cell lines
Transduced (624-CIITA, 526-CIITA, 1359-CIITA, H1299-CIITA, 1300-CIITA, 1746-CIITA, 3071-CIITA, 397-CIITA, 2630-CIITA and 2984-CIITA) and expressed HLA-DP. Was measured by flow cytometry. The expression of DP4 and MAGE-A3 is shown in Table 5A.

Figure 2021191265
Figure 2021191265

6F9を形質導入したPBLを、単独で培養するか（T細胞のみ）、又は3071細胞、3071-CIITA細胞、397細胞、397-CIITA細胞、2630細胞、2630-CIITA細胞、2984細胞及び2984-CIITA
細胞と共培養した。IFN-γ分泌を測定した。結果を図3に示す。図3に示すように、6F9を
形質導入したPBLは、CIITAを発現する腫瘍細胞株と反応性であった。 PBL transduced with 6F9 can be cultured alone (T cells only) or 3071 cells, 3071-CIITA cells, 397 cells, 397-CIITA cells, 2630 cells, 2630-CIITA cells, 2984 cells and 2984-CIITA cells.
Co-cultured with cells. IFN-γ secretion was measured. The results are shown in Figure 3. As shown in FIG. 3, 6F9 transduced PBL was reactive with CIITA-expressing tumor cell lines.

624-CIITA、526-CIITA、1359-CIITA、H1299-CIITA、SK37-CIITA、1764-CIITA、3071-CIITA、397-CIITA、2630-CIITA及び2984-CIITAを含む腫瘍細胞株のパネルに対する、2人の
患者PBMCから分離したCD4+ 及びCD8+ T細胞の反応性を測定することにより、6F9 TCRをさらに評価した。MAGE-A3及びHLA-DP*0401を発現する5つのメラノーマ細胞株（2630-CIITA
、397-CIITA、2984-CIITA、526-CIITA及び1359-CIITA）、並びに非小細胞肺癌細胞株H1299 NSCLC-CIITAは、形質導入されたCD4+ 及びCD8+ T細胞により認識されたが、とはいえ、CD4+T細胞は、腫瘍標的に応答して、形質導入されたCD8+ T細胞よりも多い量のサイトカ
インを分泌した。 Two for a panel of tumor cell lines including 624-CIITA, 526-CIITA, 1359-CIITA, H1299-CIITA, SK37-CIITA, 1746-CIITA, 3071-CIITA, 397-CIITA, 2630-CIITA and 2984-CIITA. 6F9 TCR was further evaluated by measuring the reactivity of CD4 + and CD8 + T cells isolated from the patient's PBMC. Five melanoma cell lines expressing MAGE-A3 and HLA-DP * 0401 (2630-CIITA)
, 397-CIITA, 2984-CIITA, 526-CIITA and 1359-CIITA), and the non-small cell lung cancer cell line H1299 NSCLC-CIITA were recognized by transfected CD4 + and CD8 + T cells. No, CD4 + T cells secreted higher amounts of cytokines in response to tumor targets than transfected CD8 + T cells.

H1299-CIITA及び526-CIITA細胞に抗HLA-DP又は抗HLA-DR siRNAをトランスフェクトして、HLA-DP又はHLA-DR発現をノックダウンした。3071-CIITA及び526-CIITA細胞に、抗HLA-DQ siRNAをトランスフェクトして、HLA-DQ発現をノックダウンした。HLA-DP、HLA-DR又はHLA-DQのノックアウトをフローサイトメトリーにより確認した。 H1299-CIITA and 526-CIITA cells were transfected with anti-HLA-DP or anti-HLA-DR siRNA to knock down HLA-DP or HLA-DR expression. Anti-HLA-DQ siRNA was transfected into 3071-CIITA and 526-CIITA cells to knock down HLA-DQ expression. HLA-DP, HLA-DR or HLA-DQ knockouts were confirmed by flow cytometry.

ヒトドナー由来のPBLをCD4+ について濃縮し、細胞数を急速に拡大した（30日目）。この細胞に6F9 TCRを形質導入したか、又は形質導入しなかった。細胞を、単独で培養する
か（T細胞のみ）、又は非処理のH1299-CIITA細胞、抗HLA-DP若しくは抗HLA-DR siRNAをトランスフェクトしたH1299-CIITA、非処理の526-CIITA細胞、若しくは抗HLA-DP若しくは抗HLA-DR siRNAをトランスフェクトした526-CIITAと共培養した。IFN-γ分泌を測定した。
結果を図4に示す。図4に示すように、抗HLA-DP siRNAは、6F9-TCRを形質導入した細胞の
反応性を低下させた。 PBL from human donors was enriched for CD4 + and the cell number expanded rapidly (day 30). The cells were or were not transduced with 6F9 TCR. Cells are cultured alone (T cells only) or untreated H1299-CIITA cells, anti-HLA-DP or anti-HLA-DR siRNA transfected H1299-CIITA, untreated 526-CIITA cells, or It was co-cultured with 526-CIITA transfected with anti-HLA-DP or anti-HLA-DR siRNA. IFN-γ secretion was measured.
The results are shown in Figure 4. As shown in FIG. 4, anti-HLA-DP siRNA reduced the reactivity of cells transduced with 6F9-TCR.

抗体を用いた更なる研究により、6F9 TCRが、HLAクラスII拘束性の様式でMAGE-A3を認
識することを確認した。6F9 TCRを形質導入したPBLを、表5Bに記載の細胞と共培養し、表5Bに記載の抗体でブロッキングした。IFN-γを測定し、結果を表5Bに記載する。 Further studies with antibodies confirmed that the 6F9 TCR recognizes MAGE-A3 in an HLA class II-restricted manner. PBL transduced with 6F9 TCR was co-cultured with the cells listed in Table 5B and blocked with the antibodies listed in Table 5B. IFN-γ is measured and the results are shown in Table 5B.

Figure 2021191265
Figure 2021191265

表5Bに示すように、抗体ブロッキング研究により、6F9 TCRは、HLAクラスII拘束性の様式でMAGE-A3を認識し、HLA-DR拘束性の様式又はHLAクラスI拘束性の様式ではないことが
示された。 As shown in Table 5B, antibody blocking studies indicate that 6F9 TCRs recognize MAGE-A3 in an HLA class II-restricted manner and not in an HLA-DR-restricted or HLA-class I-restricted manner. Shown.

実施例7
本実施例は、6F9 TCRのα鎖の116位又は117位でのアラニン置換が6F9 TCRの反応性を増加させることを実証する。 Example 7
This example demonstrates that alanine substitution at position 116 or 117 of the α chain of 6F9 TCR increases the reactivity of 6F9 TCR.

8つの異なる置換型（substituted）TCRであって、それぞれ6F9 TCRのCDR3領域の異なる位置に1つのアラニン置換を有するものを表6に記載するように調製した。 Eight substituted substituted TCRs, each with one alanine substitution at a different position in the CDR3 region of the 6F9 TCR, were prepared as shown in Table 6.

Figure 2021191265
Figure 2021191265

ヒトドナー由来のPBLに、野生型（wt）6F9 TCR、若しくは表6の8つの置換型TCRそれぞ
れの1つを形質導入するか、又は形質導入しなかった。細胞を、単独で培養するか（T細胞のみ）、又は624-CIITA、526-CIITA、1359-CIITA、H1299-CIITA若しくは1764-CIITAと共
培養した。IFN-γ分泌を測定した。結果を図5に記載する。図5に示すように、a1及びa2置換型TCRは、wt 6F9 TCRと比較して、増加した反応性を実証した。 Wild-type (wt) 6F9 TCR or one of each of the eight substituted TCRs in Table 6 was or was not transduced into PBL from human donors. Cells were cultured alone (T cells only) or co-cultured with 624-CIITA, 526-CIITA, 1359-CIITA, H1299-CIITA or 1764-CIITA. IFN-γ secretion was measured. The results are shown in Figure 5. As shown in FIG. 5, the a1 and a2 substituted TCRs demonstrated increased reactivity compared to the wt 6F9 TCR.

形質導入されたCD4+ 濃縮PBLを用いた別箇実験によっても、a1及びa2置換型TCRの優れ
た反応性が確認された（図6）。図6に示すように、a1及びa2置換型TCRは、wt 6F9 TCRと
比較して、およそ2倍高い抗腫瘍活性を示した。a1及びa2置換型TCRはまた、フローサイトメトリーにより測定されるように、wt 6F9 TCRと比較して良好なテトラマー（配列番号2
）結合性も示した。 Another experiment using transduced CD4 + enriched PBL also confirmed the excellent reactivity of a1 and a2 substituted TCRs (Fig. 6). As shown in FIG. 6, the a1 and a2 substituted TCRs showed approximately 2-fold higher antitumor activity compared to the wt 6F9 TCR. The a1 and a2 substituted TCRs are also better tetramers (SEQ ID NO: 2) compared to the wt 6F9 TCR, as measured by flow cytometry.
) It also showed connectivity.

実施例8
本実施例は、置換された6F9 TCRの反応性を実証する。 Example 8
This example demonstrates the reactivity of the substituted 6F9 TCR.

8つの異なる置換型TCRであって、それぞれ6F9 TCRのα鎖のCDR3領域の異なる位置に1つのアミノ酸置換を有するものを表7に記載するように調製した。 Eight different substituted TCRs, each with one amino acid substitution at a different position in the CDR3 region of the α chain of the 6F9 TCR, were prepared as shown in Table 7.

Figure 2021191265
Figure 2021191265

ヒトドナー由来のPBLに、野生型（wt）6F9 TCR、若しくは8つの置換型TCRそれぞれの1
つを形質導入するか、又は形質導入しなかった。細胞を、単独で培養するか（T細胞のみ
）、又は624-CIITA、526-CIITA、1359-CIITA、H1299-CIITA若しくは1764-CIITAと共培養
した。IFN-γ分泌を測定した。結果を図7に記載する。図7に示すように、a1、a2及びa1-3置換型TCRは、CIITA-腫瘍細胞株に対する反応性を実証した。 Wild-type (wt) 6F9 TCR or 1 of each of 8 substituted TCRs in PBL derived from human donors
One was transduced or not transduced. Cells were cultured alone (T cells only) or co-cultured with 624-CIITA, 526-CIITA, 1359-CIITA, H1299-CIITA or 1764-CIITA. IFN-γ secretion was measured. The results are shown in Figure 7. As shown in FIG. 7, a1, a2 and a1-3 substituted TCRs demonstrated reactivity to CIITA-tumor cell lines.

実施例9
本実施例は、6F9 TCRの天然の定常領域をマウス（murine）定常領域と置換することに
より、6F9 TCRの反応性が増加することを実証する。 Example 9
This example demonstrates that replacing the natural constant region of the 6F9 TCR with the murine constant region increases the reactivity of the 6F9 TCR.

wt 6F9 TCRのα及びβ鎖の可変領域、並びにマウス定常領域を含むTCRを調製した（6F9mC TCR）（配列番号27及び28）。 A TCR containing the variable regions of the α and β chains of the wt 6F9 TCR and the mouse constant region was prepared (6F9mC TCR) (SEQ ID NOs: 27 and 28).

6F9mC TCRは、フローサイトメトリーにより測定されるように、wt 6F9 TCRと比較して
、良好なMAGE-A3テトラマー及びVβ染色を実証した。特定の理論に拘束されるものではないが、6F9mC TCRが、TCRα及びβ鎖の対合の改善をもたらすと考えられる。 The 6F9mC TCR demonstrated good MAGE-A3 tetramer and Vβ staining compared to the wt 6F9 TCR, as measured by flow cytometry. Without being bound by any particular theory, 6F9mC TCR is thought to bring about improved pairing of TCRα and β chains.

ヒトドナー由来のPBLに、wt 6F9 TCR若しくは6F9mC TCRを形質導入するか、又は形質導入せず、これを単独で培養するか（T細胞のみ）、又は624-CIITA、1300-CIITA、526-CIITA、1359-CIITA、H1299-CIITA、397-CIITA、2630-CIITA、2984-CIITA、3071-CIITA若しく
は1764-CIITA細胞と共培養した。IFN-γ分泌を測定した。結果を図8に示す。図8に示すように、6F9mCを形質導入した細胞は、wt 6F9 TCRを形質導入した細胞と比較して、2〜5倍
高い抗腫瘍活性を示した。 PBL derived from human donors may be transduced with wt 6F9 TCR or 6F9mC TCR, or not transduced and cultured alone (T cells only), or 624-CIITA, 1300-CIITA, 526-CIITA, It was co-cultured with 1359-CIITA, H1299-CIITA, 397-CIITA, 2630-CIITA, 2984-CIITA, 3071-CIITA or 1764-CIITA cells. IFN-γ secretion was measured. The results are shown in Figure 8. As shown in FIG. 8, cells transduced with 6F9mC showed 2-5 times higher antitumor activity than cells transduced with wt 6F9 TCR.

形質導入されていない細胞、6F9 TCRを形質導入した細胞、又は6F9mC TCRを形質導入した細胞をCD8又はCD4について濃縮し、単独で培養するか（T細胞のみ）、又は624-CIITA、SK37-CIITA、526-CIITA、1359-CIITA、H1299-CIITA、397-CIITA、2630-CIITA、2984-CIITA、3071-CIITA若しくは1764-CIITA細胞と共培養した。インターフェロン-ガンマ分泌を測定した。結果を図9A及び9Bに示す。図9A及び9Bに示すように、CD8及びCD4濃縮した6F9mC
形質導入細胞は、複数の細胞株について、6F9 TCR形質導入細胞と比較して、より高い抗
腫瘍活性を維持し、これにより、コレセプターとは独立した6F9mC TCRの高い親和性が示
された。第2のヒトドナー由来のPBLを用いて実験を繰り返し、同様の結果を得た。野生型（Wt）6F9 TCRを形質導入したCD4+ T細胞の応答と、6F9mC TCRを形質導入した細胞の応答とを比較することにより、マウス定常領域が、評価した7つのMAGE-A3+及びHLA-DP*0401+ 標的に対する、形質導入されたT細胞の反応性において2〜5倍の増強をもたらすことが示
された。さらに、6F9mcを形質導入したCD8+ T細胞の応答は、wt 6F9 TCRを形質導入した
細胞で見られるものよりも2〜10倍高く増大した。6F9mcを形質導入したCD8+ T細胞の応答は、通常、このTCRを形質導入したCD4+ T細胞よりも低くなるが、とはいえ、いくつかの
腫瘍標的に応答して、同程度のサイトカイン応答が観察された。 Untransfected cells, cells transfected with 6F9 TCR, or cells transfected with 6F9mC TCR are concentrated for CD8 or CD4 and cultured alone (T cells only), or 624-CIITA, SK37-CIITA. , 526-CIITA, 1359-CIITA, H1299-CIITA, 397-CIITA, 2630-CIITA, 2984-CIITA, 3071-CIITA or 1746-CIITA cells. Interferon-gamma secretion was measured. The results are shown in Figures 9A and 9B. As shown in Figures 9A and 9B, CD8 and CD4 enriched 6F9mC
Transduced cells maintained higher antitumor activity for multiple cell lines compared to 6F9 TCR transduced cells, demonstrating a high affinity for co-receptor-independent 6F9mC TCR. The experiment was repeated using PBL derived from the second human donor, and similar results were obtained. By comparing the response of CD4 + T cells transduced with wild-type (Wt) 6F9 TCR to the response of cells transduced with 6F9mC TCR, the mouse constant region evaluated the seven MAGE-A3 + and HLA- It has been shown to result in a 2- to 5-fold enhancement in the responsiveness of transduced T cells to DP * 0401 + targets. In addition, the response of 6F9mc transduced CD8 + T cells was increased 2-10 fold higher than that seen in wt 6F9 TCR transduced cells. The response of 6F9mc transduced CD8 + T cells is usually lower than that of this TCR transduced CD4 + T cell, albeit with a comparable cytokine response in response to several tumor targets. Was observed.

実施例10
本実施例は、腫瘍刺激時に、6F9mC TCRを形質導入した細胞が、高レベルのIFN-γ及びTNF-αを産生し、高活性化された表現型を示す（4-1BB、CD25及びCD69発現の増加により測定されるように）ことを実証する。 Example 10
In this example, cells transduced with 6F9mC TCR during tumor stimulation produce high levels of IFN-γ and TNF-α and exhibit a highly activated phenotype (4-1BB, CD25 and CD69 expression). Demonstrate that (as measured by the increase in).

細胞をCD4又はCD8濃縮し、6F9mC TCRを形質導入した。形質導入された細胞を腫瘍株624-CIITA、2630-CIITA、2984-CIITA又はWhitington-CIITAと6時間共培養し、次いで細胞内IFN-γ、インターロイキン（IL）-2、又は腫瘍壊死因子（TNF）-αについて染色した。6F9mC TCRを形質導入した細胞は、腫瘍刺激時に、特異的な細胞内IFN-γ産生を示した。6F9mC TCRを形質導入した細胞は、CD4濃縮画分において、腫瘍刺激時に、検出可能なIL-2産生及び特異的な高TNF-α産生を示した。 Cells were enriched with CD4 or CD8 and transduced with 6F9mC TCR. Transfected cells were co-cultured with tumor strains 624-CIITA, 2630-CIITA, 2984-CIITA or Whitington-CIITA for 6 hours, followed by intracellular IFN-γ, interleukin (IL) -2, or tumor necrosis factor ( TNF) -α was stained. Cells transduced with 6F9mC TCR showed specific intracellular IFN-γ production upon tumor stimulation. Cells transduced with 6F9mC TCR showed detectable IL-2 production and specific high TNF-α production upon tumor stimulation in the CD4 enriched fraction.

細胞をCD4濃縮し、6F9mC TCRを形質導入した。形質導入された細胞を腫瘍株624-CIITA
、2630-CIITA、2984-CIITA又はWhitington-CIITAと一晩共培養し、次いで4-1BB、CD25及
びCD69について染色した。一晩腫瘍刺激後、6F9mC TCRを形質導入した細胞の大多数は、
高レベルの4-1BB（抗原特異的活性化を示す）、CD25及びCD69を発現した。 The cells were enriched with CD4 and transduced with 6F9mC TCR. Transduced cells into tumor strain 624-CIITA
, 2630-CIITA, 2984-CIITA or Whitington-CIITA overnight co-cultured, then stained for 4-1BB, CD25 and CD69. After overnight tumor stimulation, the majority of cells transduced with 6F9mC TCR
High levels of 4-1BB (indicating antigen-specific activation), CD25 and CD69 were expressed.

実施例11
本実施例は、6F9 TCRが腫瘍細胞認識を媒介することを実証する。 Example 11
This example demonstrates that 6F9 TCR mediates tumor cell recognition.

PBLに、野生型6F9 TCRを形質導入するか又は形質導入せず、これを単独で培養するか、又は非小細胞肺癌（NSCLC）細胞株H11299、若しくはメラノーマ細胞株526 mel、624 mel
若しくは1359 melと共培養した。MAGE-A3及びDP*04発現を表8に示す。 Wild-type 6F9 TCR is transduced or not transduced into PBL and cultured alone, or non-small cell lung cancer (NSCLC) cell line H11299, or melanoma cell line 526 mel, 624 mel.
Alternatively, it was co-cultured with 1359 mel. Table 8 shows the expression of MAGE-A3 and DP * 04.

Figure 2021191265
Figure 2021191265

IFN-γ発現を測定した。結果を図10Bに示す。図10Bに示すように、6F9 TCRは腫瘍細胞
認識を媒介する。 IFN-γ expression was measured. The results are shown in Figure 10B. As shown in Figure 10B, 6F9 TCR mediates tumor cell recognition.

実施例12
本実施例は、6F9及び6F9mc TCRが、MAGE-A3:248-258ペプチドに対して高度の特異性を
有することを実証する。 Example 12
This example demonstrates that 6F9 and 6F9mc TCR have a high degree of specificity for the MAGE-A3: 248-258 peptide.

6F9及び6F9mc TCRを形質導入した細胞により媒介される抗原認識の微細（fine）特異性を評価するために、HLA-DP*0401+標的細胞に、MAGE-A3:243-258ペプチド又はMAGEファミ
リーメンバーの関連ペプチドのトランケーションをパルスした。ネガティブセレクションにより、2人の患者のPBMC（PBMC-1又はPBMC-2）から単離したCD4+ T細胞に、6F9 TCR、6F9mc TCRのいずれかを形質導入するか、又は形質導入せず、表9に示すペプチド（10 mg/ml）をパルスした293-CIITA細胞に対するそれらの応答について、OKT3刺激から10日後にア
ッセイした。 To assess the fine specificity of antigen recognition mediated by cells transduced with 6F9 and 6F9mc TCR, HLA-DP * 0401 + target cells were given MAGE-A3: 243-258 peptide or MAGE family members. Pulsed truncations of related peptides. CD4 + T cells isolated from PBMCs (PBMC-1 or PBMC-2) in two patients by negative selection were transduced with or without transduction of either 6F9 TCR or 6F9mc TCR, Table 9 Their response to pulsed 293-CIITA cells with the peptide shown in (10 mg / ml) was assayed 10 days after OKT3 stimulation.

形質導入されたCD4+ PBMCの2つの培養物からの、切断型MAGE-A3ペプチドに対する応答
の分析により、MAGE-A3タンパク質のアミノ酸248〜258に対応する11-merペプチドQHFVQENYLEY（配列番号54）が、MAGE-A3:243-258ペプチドにより引き起こされる応答と同程度の
応答を引き起こす最小のペプチドを表すことが示された（表9）。MAGE-A3:243-258ペプチドは、エピトープ予測アルゴリズムを用いて、HLA-DP*0401に対して高親和性を有するこ
とが予測され、さらに、切断型MAGE-A3ぺプチドの認識は、T細胞認識と相関するように見えた（表9）。249位のヒスチジンのチロシンへの単一置換を含むMAGE-A6:248-258ペプチ
ドについては有意な認識が観察されたが、MAGE-A3:248-258ペプチドと2〜5個の差を有す
る遺伝子産物の、追加のMAGEファミリーメンバーに対しては最小の反応性が観察された。NCBIデータベースのBLASTサーチにより、最も密接に関連するペプチドは、タンパク質necdinに由来することが明らかとなった。このペプチドは、MAGE-A3:248-258ペプチドと5個
の差を有しており、これもまた、6F9又は6F9mc TCRを形質導入したT細胞により認識され
なかった。これらの発見は、6F9 TCRがMAGE-A3:248-258ペプチドに対して高度の特異性を有することを示しており、かつこのTCRを形質導入したT細胞は、追加のヒトタンパク質由来のペプチドとの交差反応性をほとんど又は全く有さない可能性があることを示唆する。 Analysis of the response to the truncated MAGE-A3 peptide from two transduced CD4 + PBMC cultures revealed the 11-mer peptide QHFVQENYLEY (SEQ ID NO: 54) corresponding to amino acids 248-258 of the MAGE-A3 protein. , MAGE-A3: 243-258 were shown to represent the smallest peptide that elicited a response comparable to that elicited by the peptide (Table 9). The MAGE-A3: 243-258 peptide is predicted to have a high affinity for HLA-DP * 0401 using an epitope prediction algorithm, and the recognition of truncated MAGE-A3 peptides is T cells. It appeared to correlate with perception (Table 9). Significant recognition was observed for the MAGE-A6: 248-258 peptide containing a single substitution of histidine at position 249 to tyrosine, but a gene with 2-5 differences from the MAGE-A3: 248-258 peptide. Minimal reactivity of the product was observed for additional MAGE family members. A BLAST search of the NCBI database revealed that the most closely related peptide was derived from the protein necdin. This peptide had 5 differences from the MAGE-A3: 248-258 peptide, which was also not recognized by T cells transduced with 6F9 or 6F9mc TCR. These findings indicate that the 6F9 TCR has a high degree of specificity for the MAGE-A3: 248-258 peptide, and T cells transduced with this TCR have peptides derived from additional human proteins. It suggests that they may have little or no cross-reactivity.

Figure 2021191265
Figure 2021191265

刊行物、特許出願及び特許を含む、本明細書に引用した全ての参考文献は、それぞれの参考文献が参照によって組み込まれることが個々に且つ具体的に示され、その全体が本明細書に記載されているのと同程度まで、参照によって本明細書に組み込まれる。 All references cited herein, including publications, patent applications and patents, are individually and specifically indicated that their respective references are incorporated by reference and are described herein in their entirety. To the same extent as is incorporated herein by reference.

本発明の説明に関して（特に、以下の特許請求の範囲に関して）、用語「a」及び「an
」及び「the」及び「少なくとも1つ（at least one）」並びに同様の指示対象の使用は、本明細書に特記がないか文脈と明らかに矛盾しない限り、単数形及び複数形の両方をカバーすると解釈すべきである。1つ以上の事項の列挙の後での用語「少なくとも1つ」の使用（例えば、「A及びBの少なくとも1つ」）は、本明細書に特記がないか文脈と明らかに矛
盾しない限り、列挙した事項から選択される1つの事項（A又はB）、又は列挙した事項の
うち2つ以上の任意の組み合わせ（A及びB）を意味すると解釈されるべきである。用語「
含む（comprising）」、「有する（having）」、「含む（including）」及び「含む（containing）」は、特記のない限り、オープンエンドの用語（すなわち、「〜を含むがそれ
らに限定されない」を意味する）と解釈すべきである。本明細書中の値の範囲の記述は、本明細書に特記のない限り、その範囲内に入る各個別の値に個々に言及する省略方法として働くことのみを意図しており、各個別の値は、それが本明細書に個々に記述されているかのように本明細書に組み込まれる。本明細書に記載される全ての方法は、本明細書に特記がないか文脈と明らかに矛盾しない限り、任意の適切な順序で実施できる。本明細書で提供される任意の及び全ての例又は例示的用語（例えば、「など（such as）」）の使用
は、本発明をよりよく説明することのみを意図しており、特段特許請求されない限り、本発明の範囲に限定を課すものではない。本明細書の全ての用語は、特許請求されていない任意の要素を本発明の実施に必須のものとして示していると解釈すべきではない。 With respect to the description of the invention (particularly in respect of the following claims), the terms "a" and "an"
And "the" and "at least one" and the use of similar referents cover both the singular and the plural, unless otherwise specified in the specification or clearly inconsistent with the context. Then it should be interpreted. The use of the term "at least one" after the enumeration of one or more matters (eg, "at least one of A and B") is not otherwise specified herein or inconsistent with the context. It should be construed to mean one matter selected from the listed items (A or B), or any combination of two or more of the listed items (A and B). the term"
"Comprising,""having,""including," and "containing" are open-ended terms (ie, including, but not limited to, "unless otherwise noted. Means). The description of a range of values herein is intended only to serve as an abbreviation for individual reference to each individual value within that range, unless otherwise noted herein. The value is incorporated herein as if it were individually described herein. All methods described herein can be performed in any suitable order, as long as there is no special mention in the specification or which is clearly inconsistent with the context. The use of any and all examples or exemplary terms provided herein (eg, "such as") is intended solely to better illustrate the invention and is specifically claimed. Unless it is done, it does not impose any limitation on the scope of the present invention. All terms herein should not be construed as indicating any unclaimed element as essential to the practice of the invention.

発明を実施するために発明者が知る最良の形態を含む、本発明の好ましい実施態様が本明細書に記載される。これらの好ましい実施態様のバリエーションは、上述の説明を読めば当業者に明らかとなり得る。本発明者らは、当業者がかかるバリエーションを適宜使用することを予期しており、本発明者らは、本明細書に具体的に記載されたのとは異なる方法で本発明が実施されることを意図している。従って、本発明は、適用法によって許容されるとおり、本明細書に添付した特許請求の範囲に記載される主題の全ての改変及び等価物を含む。さらに、その全ての可能なバリエーションでの上記要素の任意の組み合わせが、本明細書に特記がないか文脈と明らかに矛盾しない限り、本発明によって包含される。 Preferred embodiments of the invention are described herein, including the best embodiments known to the inventor to carry out the invention. Variations on these preferred embodiments may be apparent to those of skill in the art by reading the above description. We anticipate that those skilled in the art will use such variations as appropriate, and we will implement the invention in a manner different from that specifically described herein. Is intended to be. Accordingly, the invention includes, as permitted by applicable law, all modifications and equivalents of the subject matter described in the claims attached herein. Moreover, any combination of the above elements in all possible variations thereof is included by the present invention unless otherwise specified in the specification or which is clearly inconsistent with the context.

Claims (37)

MAGE-A3243-258及びMAGE-A6に対する抗原特異性を有する、単離又は精製されたT細胞受容体（TCR）。 An isolated or purified T cell receptor (TCR) with antigen specificity for MAGE-A3 243-258 and MAGE-A6. （a）配列番号3〜8若しくは（b）配列番号21〜22を含む単離若しくは精製されたTCR、
又は（a）若しくは（b）の機能的変異体であって、ここで、該機能的変異体が、（a）の
いずれか1つ以上若しくは（b）のいずれか1つ以上において少なくとも1つのアミノ酸置換を有する（a）若しくは（b）を含み、かつ該機能的変異体が、HLA-DPβ1*04と関連してMAGE-A3に対する抗原特異性を有する、機能的変異体。 An isolated or purified TCR comprising (a) SEQ ID NOs: 3-8 or (b) SEQ ID NOs: 21-22,
Or a functional variant of (a) or (b), wherein the functional variant is at least one in any one or more of (a) or any one or more of (b). A functional variant comprising (a) or (b) with an amino acid substitution and the functional variant having antigen specificity for MAGE-A3 in association with HLA-DPβ1 * 04. （i）配列番号29であって、
Xaa4が、Ser、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；
Xaa5が、Ser、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；
Xaa6が、Gly、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；かつ
Xaa7が、Thr、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであるもの；及び／又は
（ii）配列番号30であって、
Xaa4が、Arg、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；
Xaa5が、Thr、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；
Xaa6が、Gly、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；かつ
Xaa7が、Pro、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであるもの
を含む、請求項2に記載の単離若しくは精製されたTCR又は機能的変異体。 (I) SEQ ID NO: 29
Xaa4 is Ser, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa5 is Ser, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa6 is Gly, Ala, Leu, Ile, Val or Met; and
Xaa7 is Thr, Ala, Leu, Ile, Val or Met; and / or (ii) SEQ ID NO: 30.
Xaa4 is Arg, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa5 is Thr, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa6 is Gly, Ala, Leu, Ile, Val or Met; and
The isolated or purified TCR or functional variant according to claim 2, wherein Xaa7 is Pro, Ala, Leu, Ile, Val or Met. （a）配列番号29であって、Xaa4がAlaであり、Xaa5がSerであり、Xaa6がGlyであり、かつXaa7がThrであるもの、又は（b）配列番号29であって、Xaa4がSerであり、Xaa5がAlaであり、Xaa6がGlyであり、かつXaa7がThrであるものを含む、請求項3に記載の機能的変異
体。 (A) SEQ ID NO: 29, Xaa4 is Ala, Xaa5 is Ser, Xaa6 is Gly, and Xaa7 is Thr, or (b) SEQ ID NO: 29, Xaa4 is Ser. The functional variant of claim 3, wherein Xaa5 is Ala, Xaa6 is Gly, and Xaa7 is Thr. マウス定常領域を含む、請求項1〜4のいずれか一項に記載の単離若しくは精製されたTCR又は機能的変異体。 The isolated or purified TCR or functional variant according to any one of claims 1 to 4, which comprises a mouse constant region. 配列番号25及び／又は配列番号26を含むマウス定常領域を含む、請求項5に記載の単離
若しくは精製されたTCR又は機能的変異体。 The isolated or purified TCR or functional variant of claim 5, comprising a mouse constant region comprising SEQ ID NO: 25 and / or SEQ ID NO: 26. （i）配列番号31であって、
Xaa116が、Ser、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであり；
Xaa117が、Ser、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであり；
Xaa118が、Gly、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであり；かつ
Xaa119が、Thr、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであるもの；及び
（ii）配列番号9
からなる群から選択される第一のアミノ酸配列、並びに
（i）配列番号32であって、
Xaa115が、Arg、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであり；
Xaa116が、Thr、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであり；
Xaa117が、Gly、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであり；かつ
Xaa118が、Pro、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであるもの；及び
（ii）配列番号10
からなる群から選択される第二のアミノ酸配列
を含む、請求項1〜6のいずれか一項に記載の単離若しくは精製されたTCR又は機能的変異
体。 (I) SEQ ID NO: 31
Xaa116 is Ser, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa117 is Ser, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa118 is Gly, Ala, Leu, Ile, Val or Met; and
Xaa119 is Thr, Ala, Leu, Ile, Val or Met; and (ii) SEQ ID NO: 9
The first amino acid sequence selected from the group consisting of (i) SEQ ID NO: 32.
Xaa115 is Arg, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa116 is Thr, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa117 is Gly, Ala, Leu, Ile, Val or Met; and
Xaa118 is Pro, Ala, Leu, Ile, Val or Met; and (ii) SEQ ID NO: 10
The isolated or purified TCR or functional variant according to any one of claims 1 to 6, comprising a second amino acid sequence selected from the group consisting of. （a）配列番号31であって、Xaa116がAlaであり、Xaa117がSerであり、Xaa118がGlyであり、かつXaa119がThrであるもの、又は
（b）配列番号31であって、Xaa116がSerであり、Xaa117がAlaであり、Xaa118がGlyであり、かつXaa119がThrであるもの
を含む、請求項7に記載の機能的変異体。 (A) SEQ ID NO: 31, Xaa116 is Ala, Xaa117 is Ser, Xaa118 is Gly, and Xaa119 is Thr, or (b) SEQ ID NO: 31 and Xaa116 is Ser. The functional variant of claim 7, wherein Xaa117 is Ala, Xaa118 is Gly, and Xaa119 is Thr. （i）配列番号33であって、
Xaa116が、Ser、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであり；
Xaa117が、Ser、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであり；
Xaa118が、Gly、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであり；かつ
Xaa119が、Thr、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであるもの；
（ii）配列番号11；
（iii）配列番号21；及び
（iv）配列番号27
からなる群から選択される第一のアミノ酸配列、並びに
（i）配列番号34であって、
Xaa115が、Arg、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであり；
Xaa116が、Thr、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであり；
Xaa117が、Gly、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであり；かつ
Xaa118が、Pro、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであるもの；
（ii）配列番号12；
（iii）配列番号22；及び
（iv）配列番号28
からなる群から選択される第二のアミノ酸配列
を含む、請求項2〜8のいずれか一項に記載の単離若しくは精製されたTCR又は機能的変異
体。 (I) SEQ ID NO: 33
Xaa116 is Ser, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa117 is Ser, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa118 is Gly, Ala, Leu, Ile, Val or Met; and
Xaa119 is Thr, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
(Ii) SEQ ID NO: 11;
(Iii) SEQ ID NO: 21; and (iv) SEQ ID NO: 27
The first amino acid sequence selected from the group consisting of (i) SEQ ID NO: 34.
Xaa115 is Arg, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa116 is Thr, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa117 is Gly, Ala, Leu, Ile, Val or Met; and
Xaa118 is Pro, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
(Ii) SEQ ID NO: 12;
(Iii) SEQ ID NO: 22; and (iv) SEQ ID NO: 28
The isolated or purified TCR or functional variant of any one of claims 2-8, comprising a second amino acid sequence selected from the group consisting of. （a）配列番号33であって、Xaa116がAlaであり、Xaa117がSerであり、Xaa118がGlyであり、かつXaa119がThrであるもの、又は
（b）配列番号33であって、Xaa116がSerであり、Xaa117がAlaであり、Xaa118がGlyであり、かつXaa119がThrであるもの
を含む、請求項9に記載の機能的変異体。 (A) SEQ ID NO: 33, Xaa116 is Ala, Xaa117 is Ser, Xaa118 is Gly, and Xaa119 is Thr, or (b) SEQ ID NO: 33, Xaa116 is Ser. The functional variant of claim 9, wherein Xaa117 is Ala, Xaa118 is Gly, and Xaa119 is Thr. 請求項1〜10のいずれか一項に記載のTCR又は機能的変異体の機能的部分を含む、単離又は精製されたポリペプチドであって、該機能的部分が、
（a）配列番号3、4、6、7、
（i）配列番号29であって、
Xaa4が、Ser、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；
Xaa5が、Ser、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；
Xaa6が、Gly、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；かつ
Xaa7が、Thr、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであるもの；及び
（ii）配列番号30であって、
Xaa4が、Arg、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；
Xaa5が、Thr、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；
Xaa6が、Gly、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；かつ
Xaa7が、Pro、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであるもの；又は
（b）配列番号3〜8
を含む、単離又は精製されたポリペプチド。 An isolated or purified polypeptide comprising the functional portion of the TCR or functional variant according to any one of claims 1-10, wherein the functional portion is:
(A) SEQ ID NO: 3, 4, 6, 7,
(I) SEQ ID NO: 29
Xaa4 is Ser, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa5 is Ser, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa6 is Gly, Ala, Leu, Ile, Val or Met; and
Xaa7 is Thr, Ala, Leu, Ile, Val or Met; and (ii) SEQ ID NO: 30.
Xaa4 is Arg, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa5 is Thr, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa6 is Gly, Ala, Leu, Ile, Val or Met; and
Xaa7 is Pro, Ala, Leu, Ile, Val or Met; or (b) SEQ ID NOs: 3-8
An isolated or purified polypeptide comprising. 機能的部分が、
（a）配列番号29であって、Xaa4がAlaであり、Xaa5がSerであり、Xaa6がGlyであり、かつXaa7がThrであるもの、又は
（b）配列番号29であって、Xaa4がSerであり、Xaa5がAlaであり、Xaa6がGlyであり、かつXaa7がThrであるもの
を含む、請求項11に記載の単離又は精製されたポリペプチド。 The functional part is
(A) SEQ ID NO: 29, Xaa4 is Ala, Xaa5 is Ser, Xaa6 is Gly, and Xaa7 is Thr, or (b) SEQ ID NO: 29, Xaa4 is Ser. The isolated or purified polypeptide of claim 11, wherein Xaa5 is Ala, Xaa6 is Gly, and Xaa7 is Thr. 前記部分が、
（i）配列番号31であって、
Xaa116が、Ser、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであり；
Xaa117が、Ser、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであり；
Xaa118が、Gly、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであり；かつ
Xaa119が、Thr、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであるもの；及び
（ii）配列番号9
からなる群から選択される第一のアミノ酸配列、並びに
（i）配列番号32であって、
Xaa115が、Arg、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであり；
Xaa116が、Thr、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであり；
Xaa117が、Gly、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであり；かつ
Xaa118が、Pro、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであるもの；及び
（ii）配列番号10
からなる群から選択される第二のアミノ酸配列
を含む、請求項11又は12に記載の単離又は精製されたポリぺプチド。 The above part is
(I) SEQ ID NO: 31
Xaa116 is Ser, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa117 is Ser, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa118 is Gly, Ala, Leu, Ile, Val or Met; and
Xaa119 is Thr, Ala, Leu, Ile, Val or Met; and (ii) SEQ ID NO: 9
The first amino acid sequence selected from the group consisting of (i) SEQ ID NO: 32.
Xaa115 is Arg, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa116 is Thr, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa117 is Gly, Ala, Leu, Ile, Val or Met; and
Xaa118 is Pro, Ala, Leu, Ile, Val or Met; and (ii) SEQ ID NO: 10
The isolated or purified polypeptide according to claim 11 or 12, comprising a second amino acid sequence selected from the group consisting of. 前記部分が、
（a）配列番号31であって、Xaa116がAlaであり、Xaa117がSerであり、Xaa118がGlyであり、かつXaa119がThrであるもの、又は
（b）配列番号31であって、Xaa116がSerであり、Xaa117がAlaであり、Xaa118がGlyであり、かつXaa119がThrであるもの
を含む、請求項13に記載の単離又は精製されたポリペプチド。 The above part is
(A) SEQ ID NO: 31, Xaa116 is Ala, Xaa117 is Ser, Xaa118 is Gly, and Xaa119 is Thr, or (b) SEQ ID NO: 31 and Xaa116 is Ser. 13. The isolated or purified polypeptide of claim 13, wherein Xaa117 is Ala, Xaa118 is Gly, and Xaa119 is Thr. 請求項2〜10のいずれか一項に記載のTCR又は機能的変異体の機能的部分を含む、単離又は精製されたポリペプチドであって、該部分が、
（i）配列番号33であって、
Xaa116が、Ser、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであり；
Xaa117が、Ser、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであり；
Xaa118が、Gly、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであり；かつ
Xaa119が、Thr、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであるもの；
（ii）配列番号11；
（iii）配列番号21；及び
（iv）配列番号27
からなる群から選択される第一のアミノ酸配列、並びに
（i）配列番号34であって、
Xaa115が、Arg、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであり；
Xaa116が、Thr、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであり；
Xaa117が、Gly、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであり；かつ
Xaa118が、Pro、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであるもの；
（ii）配列番号12；
（iii）配列番号22；及び
（iv）配列番号28
からなる群から選択される第二のアミノ酸配列
を含む、単離又は精製されたポリペプチド。 An isolated or purified polypeptide comprising a functional portion of the TCR or functional variant according to any one of claims 2-10, wherein said moiety is:
(I) SEQ ID NO: 33
Xaa116 is Ser, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa117 is Ser, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa118 is Gly, Ala, Leu, Ile, Val or Met; and
Xaa119 is Thr, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
(Ii) SEQ ID NO: 11;
(Iii) SEQ ID NO: 21; and (iv) SEQ ID NO: 27
The first amino acid sequence selected from the group consisting of (i) SEQ ID NO: 34.
Xaa115 is Arg, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa116 is Thr, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa117 is Gly, Ala, Leu, Ile, Val or Met; and
Xaa118 is Pro, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
(Ii) SEQ ID NO: 12;
(Iii) SEQ ID NO: 22; and (iv) SEQ ID NO: 28
An isolated or purified polypeptide comprising a second amino acid sequence selected from the group consisting of. 前記部分が、
（a）配列番号33であって、Xaa116がAlaであり、Xaa117がSerであり、Xaa118がGlyであり、かつXaa119がThrであるもの、又は
（b）配列番号33であって、Xaa116がSerであり、Xaa117がAlaであり、Xaa118がGlyであり、かつXaa119がThrであるもの
を含む、請求項15に記載の単離又は精製されたポリペプチド。 The above part is
(A) SEQ ID NO: 33, Xaa116 is Ala, Xaa117 is Ser, Xaa118 is Gly, and Xaa119 is Thr, or (b) SEQ ID NO: 33, Xaa116 is Ser. 15. The isolated or purified polypeptide of claim 15, wherein Xaa117 is Ala, Xaa118 is Gly, and Xaa119 is Thr. 請求項11〜16のいずれか一項に記載のポリペプチドの少なくとも1つを含む、単離又は
精製されたタンパク質。 An isolated or purified protein comprising at least one of the polypeptides according to any one of claims 11-16. （a）配列番号3〜5；又は
（b）配列番号3、4、及び配列番号29であって、
Xaa4が、Ser、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；
Xaa5が、Ser、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；
Xaa6が、Gly、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；かつ
Xaa7が、Thr、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであるもの
を含む第一のポリぺプチド鎖、並びに
（a）配列番号6〜8；又は
（b）配列番号6、7、及び配列番号30であって、
Xaa4が、Arg、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；
Xaa5が、Thr、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；
Xaa6が、Gly、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；かつ
Xaa7が、Pro、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであるもの
を含む第二のポリペプチド鎖
を含む、請求項17に記載の単離又は精製されたタンパク質。 (A) SEQ ID NOs: 3-5; or (b) SEQ ID NOs: 3, 4 and 29.
Xaa4 is Ser, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa5 is Ser, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa6 is Gly, Ala, Leu, Ile, Val or Met; and
The first polypeptide chain, including those in which Xaa7 is Thr, Ala, Leu, Ile, Val or Met, and (a) SEQ ID NOs: 6-8; or (b) SEQ ID NOs: 6, 7, and SEQ ID NOs. 30 and
Xaa4 is Arg, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa5 is Thr, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa6 is Gly, Ala, Leu, Ile, Val or Met; and
17. The isolated or purified protein of claim 17, comprising a second polypeptide chain comprising one in which Xaa7 is Pro, Ala, Leu, Ile, Val or Met. 第一のポリペプチド鎖が、
（a）配列番号29であって、Xaa4がAlaであり、Xaa5がSerであり、Xaa6がGlyであり、かつXaa7がThrであるもの、又は
（b）配列番号29であって、Xaa4がSerであり、Xaa5がAlaであり、Xaa6がGlyであり、かつXaa7がThrであるもの
を含む、請求項18に記載のタンパク質。 The first polypeptide chain is
(A) SEQ ID NO: 29, Xaa4 is Ala, Xaa5 is Ser, Xaa6 is Gly, and Xaa7 is Thr, or (b) SEQ ID NO: 29, Xaa4 is Ser. The protein according to claim 18, wherein Xaa5 is Ala, Xaa6 is Gly, and Xaa7 is Thr. （i）配列番号31であって、
Xaa116が、Ser、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであり；
Xaa117が、Ser、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであり；
Xaa118が、Gly、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであり；かつ
Xaa119が、Thr、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであるもの；及び
（ii）配列番号9
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む第一のポリペプチド鎖、並びに
（i）配列番号32であって、
Xaa115が、Arg、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであり；
Xaa116が、Thr、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであり；
Xaa117が、Gly、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであり；かつ
Xaa118が、Pro、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであるもの；及び
（ii）配列番号10
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む第二のポリペプチド鎖
を含む、請求項17〜19のいずれか一項に記載の単離又は精製されたタンパク質。 (I) SEQ ID NO: 31
Xaa116 is Ser, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa117 is Ser, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa118 is Gly, Ala, Leu, Ile, Val or Met; and
Xaa119 is Thr, Ala, Leu, Ile, Val or Met; and (ii) SEQ ID NO: 9
A first polypeptide chain comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of (i) SEQ ID NO: 32.
Xaa115 is Arg, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa116 is Thr, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa117 is Gly, Ala, Leu, Ile, Val or Met; and
Xaa118 is Pro, Ala, Leu, Ile, Val or Met; and (ii) SEQ ID NO: 10
The isolated or purified protein according to any one of claims 17 to 19, comprising a second polypeptide chain comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of. 第一のポリペプチド鎖が、
（a）配列番号31であって、Xaa116がAlaであり、Xaa117がSerであり、Xaa118がGlyであり、かつXaa119がThrであるもの、又は
（b）配列番号31であって、Xaa116がSerであり、Xaa117がAlaであり、Xaa118がGlyであり、かつXaa119がThrであるもの
を含む、請求項20に記載のタンパク質。 The first polypeptide chain is
(A) SEQ ID NO: 31, Xaa116 is Ala, Xaa117 is Ser, Xaa118 is Gly, and Xaa119 is Thr, or (b) SEQ ID NO: 31 and Xaa116 is Ser. The protein according to claim 20, wherein Xaa117 is Ala, Xaa118 is Gly, and Xaa119 is Thr. （i）配列番号33であって、
Xaa116が、Ser、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであり；
Xaa117が、Ser、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであり；
Xaa118が、Gly、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであり；かつ
Xaa119が、Thr、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであるもの；
（ii）配列番号11；
（iii）配列番号21；及び
（iv）配列番号27
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む第一のポリペプチド鎖、並びに
（i）配列番号34であって、
Xaa115が、Arg、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであり；
Xaa116が、Thr、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであり；
Xaa117が、Gly、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであり；かつ
Xaa118が、Pro、Ala、Leu、Ile、Val又はMetであるもの；
（ii）配列番号12；
（iii）配列番号22；及び
（iv）配列番号28
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む第二のポリペプチド鎖
を含む、単離又は精製されたタンパク質。 (I) SEQ ID NO: 33
Xaa116 is Ser, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa117 is Ser, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa118 is Gly, Ala, Leu, Ile, Val or Met; and
Xaa119 is Thr, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
(Ii) SEQ ID NO: 11;
(Iii) SEQ ID NO: 21; and (iv) SEQ ID NO: 27
A first polypeptide chain comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of (i) SEQ ID NO: 34.
Xaa115 is Arg, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa116 is Thr, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa117 is Gly, Ala, Leu, Ile, Val or Met; and
Xaa118 is Pro, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
(Ii) SEQ ID NO: 12;
(Iii) SEQ ID NO: 22; and (iv) SEQ ID NO: 28
An isolated or purified protein comprising a second polypeptide chain comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of. 第一のポリペプチド鎖が、
（a）配列番号33であって、Xaa116がAlaであり、Xaa117がSerであり、Xaa118がGlyであり、かつXaa119がThrであるもの、又は
（b）配列番号33であって、Xaa116がSerであり、Xaa117がAlaであり、Xaa118がGlyであり、かつXaa119がThrであるもの
を含む、請求項22に記載のタンパク質。 The first polypeptide chain is
(A) SEQ ID NO: 33, Xaa116 is Ala, Xaa117 is Ser, Xaa118 is Gly, and Xaa119 is Thr, or (b) SEQ ID NO: 33, Xaa116 is Ser. 22. The protein of claim 22, wherein Xaa117 is Ala, Xaa118 is Gly, and Xaa119 is Thr. タンパク質が融合タンパク質である、請求項17〜23のいずれか一項に記載の単離又は精製されたタンパク質。 The isolated or purified protein according to any one of claims 17 to 23, wherein the protein is a fusion protein. タンパク質が組換え抗体である、請求項17〜24のいずれか一項に記載の単離又は精製されたタンパク質。 The isolated or purified protein according to any one of claims 17 to 24, wherein the protein is a recombinant antibody. 請求項1〜10のいずれか一項に記載のTCR若しくは機能的変異体、請求項11〜16のいずれか一項に記載のポリペプチド、又は請求項17〜25のいずれか一項に記載のタンパク質、をコードするヌクレオチド配列を含む単離又は精製された核酸。 The TCR or functional variant according to any one of claims 1 to 10, the polypeptide according to any one of claims 11 to 16, or the polypeptide according to any one of claims 17 to 25. An isolated or purified nucleic acid containing a nucleotide sequence encoding a protein. 前記ヌクレオチド配列が、a）配列番号37及び38、b）配列番号39及び40、c）配列番号41及び42、並びにd）配列番号43及び44からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項26に記載の単離又は精製された核酸。 The nucleotide sequence comprises a nucleotide sequence selected from the group consisting of a) SEQ ID NOs: 37 and 38, b) SEQ ID NOs: 39 and 40, c) SEQ ID NOs: 41 and 42, and d) SEQ ID NOs: 43 and 44. Item 26. The isolated or purified nucleic acid according to Item 26. 請求項26又は27に記載の核酸を含む、組換え発現ベクター。 A recombinant expression vector comprising the nucleic acid of claim 26 or 27. 請求項28に記載の組換え発現ベクターを含む、単離された宿主細胞。 An isolated host cell comprising the recombinant expression vector of claim 28. 細胞がヒト由来である、請求項29に記載の宿主細胞。 29. The host cell of claim 29, wherein the cell is of human origin. 請求項29又は30の宿主細胞を少なくとも1つ含む、細胞集団。 A cell population comprising at least one host cell according to claim 29 or 30. 請求項1〜10のいずれか一項に記載のTCR又は機能的変異体の機能的部分と特異的に結合する、抗体又はその抗原結合部分であって、ここで、該機能的部分が、
（a）配列番号3、4、6、7、
（i）配列番号29であって、
Xaa4が、Ser、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；
Xaa5が、Ser、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；
Xaa6が、Gly、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；かつ
Xaa7が、Thr、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであるもの；及び
（ii）配列番号30であって、
Xaa4が、Arg、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；
Xaa5が、Thr、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；
Xaa6が、Gly、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであり；かつ
Xaa7が、Pro、Ala、Leu、Ile、Val若しくはMetであるもの；又は
（b）配列番号3〜8
を含む、抗体又はその抗原結合部分。 An antibody or antigen-binding portion thereof that specifically binds to the functional portion of the TCR or functional variant according to any one of claims 1 to 10, wherein the functional portion is:
(A) SEQ ID NO: 3, 4, 6, 7,
(I) SEQ ID NO: 29
Xaa4 is Ser, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa5 is Ser, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa6 is Gly, Ala, Leu, Ile, Val or Met; and
Xaa7 is Thr, Ala, Leu, Ile, Val or Met; and (ii) SEQ ID NO: 30.
Xaa4 is Arg, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa5 is Thr, Ala, Leu, Ile, Val or Met;
Xaa6 is Gly, Ala, Leu, Ile, Val or Met; and
Xaa7 is Pro, Ala, Leu, Ile, Val or Met; or (b) SEQ ID NOs: 3-8
An antibody or antigen-binding portion thereof. 請求項1〜10のいずれか一項に記載のTCR若しくは機能的変異体、請求項11〜16のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項17〜25のいずれか一項に記載のタンパク質、請求項26若しくは27に記載の核酸、請求項28に記載の組換え発現ベクター、請求項29若しくは30に記載の宿主細胞、請求項31に記載の細胞集団、又は請求項32に記載の抗体若しくはその抗原結合部分と、医薬上許容される担体とを含む、医薬組成物。 The TCR or functional variant according to any one of claims 1 to 10, the polypeptide according to any one of claims 11 to 16, and the protein according to any one of claims 17 to 25. , The nucleic acid of claim 26 or 27, the recombinant expression vector of claim 28, the host cell of claim 29 or 30, the cell population of claim 31, or the antibody of claim 32. Alternatively, a pharmaceutical composition comprising an antigen-binding portion thereof and a pharmaceutically acceptable carrier. 哺乳動物において癌の存在を検出する方法であって、
（a）請求項1〜10のいずれか一項に記載のTCR若しくは機能的変異体、請求項11〜16のい
ずれか一項に記載のポリペプチド、請求項17〜25のいずれか一項に記載のタンパク質、請求項26若しくは27に記載の核酸、請求項28に記載の組換え発現ベクター、請求項29若しくは30に記載の宿主細胞、請求項31に記載の細胞集団、請求項32に記載の抗体若しくはその抗原結合部分、又は請求項33に記載の医薬組成物と、哺乳動物由来の1以上の細胞を含む
サンプルとを接触させ、それにより複合体を形成すること、及び
（b）該複合体を検出すること
を含み、ここで、該複合体の検出が、哺乳動物における癌の存在を示す、方法。 A method of detecting the presence of cancer in mammals
(A) The TCR or functional variant according to any one of claims 1 to 10, the polypeptide according to any one of claims 11 to 16, and any one of claims 17 to 25. The protein according to claim 26 or 27, the recombinant expression vector according to claim 28, the host cell according to claim 29 or 30, the cell population according to claim 31, according to claim 32. The nucleic acid-binding portion thereof, or the pharmaceutical composition according to claim 33, is brought into contact with a sample containing one or more cells derived from a mammal to form a complex, and (b) the said. A method comprising detecting a complex, wherein the detection of the complex indicates the presence of cancer in a mammal. 癌が、メラノーマ、乳癌、肺癌、前立腺癌、滑膜細胞肉腫、頭頸部癌、食道癌、又は卵巣癌である、請求項34に記載の方法。 34. The method of claim 34, wherein the cancer is melanoma, breast cancer, lung cancer, prostate cancer, synovial cell sarcoma, head and neck cancer, esophageal cancer, or ovarian cancer. 哺乳動物において癌の治療又は予防に使用するための、請求項1〜10のいずれか一項に
記載のTCR若しくは機能的変異体、請求項11〜16のいずれか一項に記載のポリペプチド、
請求項17〜25のいずれか一項に記載のタンパク質、請求項26若しくは27に記載の核酸、請求項28に記載の組換え発現ベクター、請求項29若しくは30に記載の宿主細胞、請求項31に記載の細胞集団、請求項32に記載の抗体若しくはその抗原結合部分、又は請求項33に記載の医薬組成物。 The TCR or functional variant according to any one of claims 1 to 10, the polypeptide according to any one of claims 11 to 16, for use in the treatment or prevention of cancer in a mammal.
The protein according to any one of claims 17 to 25, the nucleic acid according to claim 26 or 27, the recombinant expression vector according to claim 28, the host cell according to claim 29 or 30, claim 31. The cell population according to claim 32, the antibody according to claim 32 or an antigen-binding portion thereof, or the pharmaceutical composition according to claim 33. 癌が、メラノーマ、乳癌、肺癌、前立腺癌、滑膜細胞肉腫、頭頸部癌、食道癌、又は卵巣癌である、請求項36に記載の、前記使用のための、TCR若しくは機能的変異体、ポリペ
プチド、タンパク質、核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞、細胞集団、抗体若しくはその抗原結合部分、又は医薬組成物。 The TCR or functional variant of claim 36, wherein the cancer is melanoma, breast cancer, lung cancer, prostate cancer, synovial cell sarcoma, head and neck cancer, esophageal cancer, or ovarian cancer. Polypeptides, proteins, nucleic acids, recombinant expression vectors, host cells, cell populations, antibodies or antigen-binding moieties thereof, or pharmaceutical compositions.
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