JP2020517638A

JP2020517638A - Compositions and methods for treating lung inflammation

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Publication number: JP2020517638A
Application number: JP2019556875A
Authority: JP
Inventors: キャサリーンオギルビー，; ジョンディー．メンドレイン，
Original assignee: エータイアーファーマ，インコーポレイテッド
Priority date: 2017-04-20
Filing date: 2018-04-19
Publication date: 2020-06-18
Also published as: JP2023052761A; US11767520B2; WO2018195338A1; CN110536694A; EP3612215A1; AU2018256435A1; CA3060514A1; EP3612215A4; US20200377874A1

Abstract

単独でまたは少なくとも１つの免疫調節剤と組み合わせて、少なくとも１つのヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチド、または前記ＨＲＳポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチドの使用を含む、間質性肺疾患（ＩＬＤ）を含む、肺の炎症の治療のための併用療法を含む、療法が、提供される。本開示の実施形態は、単独でまたは少なくとも１つの免疫調節剤と組み合わせて、少なくとも１つのヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチド、または当該ＨＲＳポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチドの使用を含む、間質性肺疾患（ＩＬＤ）を含む、肺の炎症の治療のための併用療法を含む、療法に関する。【選択図】図３Interstitial lung disease comprising the use of at least one histidyl-tRNA synthetase (HRS) polypeptide, or an expressible polynucleotide encoding said HRS polypeptide, alone or in combination with at least one immunomodulatory agent ( Therapies are provided, including combination therapies for the treatment of lung inflammation, including ILD). Embodiments of the present disclosure include the use of at least one histidyl-tRNA synthetase (HRS) polypeptide, or an expressible polynucleotide encoding the HRS polypeptide, alone or in combination with at least one immunomodulatory agent. , Interstitial lung disease (ILD), including combination therapies for the treatment of lung inflammation. [Selection diagram] Fig. 3

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年４月２０日に出願された米国特許出願第６２／４８７，８１２号の３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）の下で優先権の利益を主張し、その開示が参照によりその全体が組み込まれる。 CROSS REFERENCE TO RELATED APPLICATIONS This application describes 35 U.S. Pat. No. 62/487,812 filed April 20, 2017. S. C. Claiming the benefit of priority under 119(e), the disclosure of which is incorporated by reference in its entirety.

配列表に関する陳述
本出願に関連する配列表は、紙コピーの代わりにテキスト形式で提供され、これによって参照により本明細書に組み込まれる。配列表を含むテキストファイルの名称はＡＴＹＲ＿１３１＿０１ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔである。テキストファイルは約２７６ＫＢであり、２０１８年４月１８日に作成され、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介して電子提出されている。
背景 STATEMENT REGARDING SEQUENCE LISTING The sequence listings associated with this application are provided in text form instead of in paper copy and are hereby incorporated by reference. The name of the text file containing the sequence listing is ATYR_131_01WO_ST25. txt. The text file is about 276 KB, created on April 18, 2018, and submitted electronically via EFS-Web.
background

本開示の実施形態は、単独でまたは少なくとも１つの免疫調節剤と組み合わせて、少なくとも１つのヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチド、または当該ＨＲＳポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチドの使用を含む、間質性肺疾患（ＩＬＤ）を含む、肺の炎症の治療のための併用療法を含む、療法に関する。 Embodiments of the disclosure include the use of at least one histidyl-tRNA synthetase (HRS) polypeptide, or an expressible polynucleotide encoding the HRS polypeptide, alone or in combination with at least one immunomodulatory agent. , Including interstitial lung disease (ILD), including combination therapies for the treatment of lung inflammation.

間質性肺疾患（ＩＬＤ）は、異種障害の炎症が主な発症機序である肺間質に影響を与える異種障害の群である。ＩＬＤ指定のうちで、概して、いくつかのレベルで発症機序の一因となる先天性および適応的免疫機構の両方を含む測定可能な炎症性要素を有すると認識される多くの線維性肺状態がある。 Interstitial lung disease (ILD) is a group of heterogeneous disorders that affects the pulmonary interstitium, where inflammation of the heterogeneous disorder is the main pathogenetic mechanism. Within the ILD designation, many fibrotic lung conditions are generally recognized as having measurable inflammatory components, including both innate and adaptive immune mechanisms that contribute to the pathogenesis at several levels. There is.

ＩＬＤに罹患している患者は、しばしば、進行性の消耗性呼吸器症状を患っており、一般集団と比較して、著しく高い死亡率および死亡率の増加が認められる。一群として、これらの状態は、高い満たされない医療ニーズとなり、それに対して、重大な望ましくない副作用を有しない効果的な治療がほとんどない。 Patients with ILD often suffer from progressive, debilitating respiratory symptoms, with markedly higher mortality and increased mortality compared to the general population. As a group, these conditions represent a high unmet medical need for which there are few effective treatments without significant unwanted side effects.

本開示の実施形態は、適切な部分において、治療用組成物であって、
（ａ）ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチド、またはＨＲＳポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチドと、
（ｂ）免疫調節剤と、を含む、治療用組成物に関する。 Embodiments of the present disclosure, in appropriate parts, are therapeutic compositions, comprising:
(A) a histidyl-tRNA synthetase (HRS) polypeptide, or an expressible polynucleotide encoding a HRS polypeptide;
(B) an immunomodulator, and a therapeutic composition.

いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、表Ｈ１、表Ｈ２、および表Ｈ４から選択される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。 In some embodiments, the HRS polypeptide is at least 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% against a sequence selected from Table H1, Table H2, and Table H4. Comprises, consists of, or consists essentially of an amino acid sequence that is 100%, 99%, or 100% identical.

いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、５００〜５０６アミノ酸長であり、配列番号８（ＨＲＳ（１〜５０６））または９（ＨＲＳ（２〜５０６））に対して少なくとも９０％同一であり、配列番号１の残基５０７〜５０９を欠いている。いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、配列番号８（ＨＲＳ（１〜５０６））を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、配列番号９（ＨＲＳ（２〜５０６））を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。 In some embodiments, the HRS polypeptide is 500-506 amino acids long and is at least 90% identical to SEQ ID NO: 8 (HRS(1-506)) or 9 (HRS(2-506)). , Lacking residues 507-509 of SEQ ID NO:1. In some embodiments, the HRS polypeptide comprises, consists of, or consists essentially of SEQ ID NO:8 (HRS(1-506)). In some embodiments, the HRS polypeptide comprises, consists of, or consists essentially of SEQ ID NO:9 (HRS(2-506)).

いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、異種ポリペプチドに縮合している。いくつかの実施形態では、異種ポリペプチドは、Ｆｃ領域を含み、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドを形成する。 In some embodiments, the HRS polypeptide is fused to a heterologous polypeptide. In some embodiments, the heterologous polypeptide comprises an Fc region, forming a HRS-Fc fusion polypeptide.

いくつかの実施形態では、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、表Ｈ８から選択される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、タンパク質ベースで少なくとも約８０％、８５％、９０％、または９５％純粋で、約５％未満凝集している。 In some embodiments, the HRS-Fc fusion polypeptide is at least 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, against a sequence selected from Table H8. Alternatively, it comprises, consists of, or consists essentially of an amino acid sequence that is 100% identical. In some embodiments, the HRS polypeptide is at least about 80%, 85%, 90%, or 95% pure on a protein basis and less than about 5% aggregated.

いくつかの実施形態では、（ａ）は、ＨＲＳポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチド、任意に、修飾ｍＲＮＡポリヌクレオチドであり、これは、任意に、１つ以上の非天然ベースおよび／または非天然ヌクレオチド間結合を含む。 In some embodiments, (a) is an expressible polynucleotide encoding a HRS polypeptide, optionally a modified mRNA polynucleotide, which optionally comprises one or more non-natural bases and/or Includes non-natural internucleotide linkages.

いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、非正準活性、任意に、抗炎症活性を有する。 In some embodiments, the HRS polypeptide has non-canonical activity, optionally anti-inflammatory activity.

いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、ピルフェニドン、ニンテダニブ、スフィンゴシン−１−ホスフェート（Ｓ１Ｐ）および／またはＳ１Ｐ受容体（Ｓ１ＰＲ）モジュレーター、ステロイド、任意にグルココルチコイド、カルシニューリン阻害剤、ラパマイシンの機構的標的（ｍＴＯＲ）阻害剤、インドールアミン−ピロール２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、イノシン−５’−モノホスフェートデヒドロゲナーゼ（ＩＭＰＤＨ）阻害剤、サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体阻害剤、Ｂ細胞受容体阻害剤、キナーゼ阻害剤、ならびに細胞増殖抑制剤、任意にメトトレキサートのうちの１つ以上から選択される。 In some embodiments, the immunomodulator is a mechanistic of pirfenidone, nintedanib, sphingosine-1-phosphate (S1P) and/or S1P receptor (S1PR) modulators, steroids, optionally glucocorticoids, calcineurin inhibitors, rapamycin. Target (mTOR) inhibitor, indoleamine-pyrrole 2,3-dioxygenase (IDO) inhibitor, inosine-5'-monophosphate dehydrogenase (IMPDH) inhibitor, cytokine and/or cytokine receptor inhibitor, B cell receptor Selected from one or more of body inhibitors, kinase inhibitors, as well as cytostatics, optionally methotrexate.

いくつかの実施形態では、Ｓ１Ｐおよび／またはＳ１ＰＲモジュレーターは、アミセリモド（Ｓ１ＰＲアンタゴニスト）、フィンゴリモド（Ｓ１ＰＲ_１機能的アンタゴニスト）、ソネプシズマブ（Ｓ１Ｐ特異的モノクローナル抗体）、ＫＲＰ２０３（Ｓ１ＰＲ_１アゴニスト）、ＳＥＷ２８７１（Ｓ１ＰＲ_１アゴニスト）、シポニモド（Ｓ１ＰＲ_１およびＳ１ＰＲ_５モジュレーター）、ＲＰＣ１０６３（Ｓ１ＰＲ_１モジュレーター）、ＯＮＯ−４６４１（Ｓ１ＰＲ_１およびＳ１ＰＲ_５アゴニスト）、ＪＴＥ−０１３（Ｓ１ＰＲ_２アンタゴニスト）、ＧＳＫ２０１８６８２（Ｓ１ＰＲ_１アゴニスト）、ポネシモド（Ｓ１ＰＲ_１アゴニスト）、スラミン（選択的Ｓ１ＰＲ_３およびＳ１ＰＲ_５アンタゴニスト）、ＶＰＣ２３０１９（アリール−アミド類似体；競合的Ｓ１ＰＲ_１およびＳ１ＰＲ_３アンタゴニスト）、ならびにＷ１４６（選択的Ｓ１ＰＲ_１アンタゴニスト）、Ｓ１ＰＲを標的とするアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤、ならびにＳ１Ｐおよび／またはＳ１ＰＲに特異的に結合する抗体または抗原結合断片もしくは小分子から選択され、任意に、アミセリモドは、約０．１ｍｇ〜約１０ｍｇの範囲である投与量単位で、あるいは約０．１、０．２、０．３、０．３３７、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０ｍｇ、約０．１、０．２、０．３、０．３３７、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０ｍｇ以下、または少なくとも約０．１、０．２、０．３、０．３３７、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０ｍｇの投与量単位であるか、または任意に、アミセリモドが、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲である投与量単位で、あるいは約０．１、０．２、０．３、０．３３７、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０ｍｇ、約０．１、０．２、０．３、０．３３７、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０ｍｇ以下、または少なくとも約０．１、０．２、０．３、０．３３７、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０ｍｇ／ｋｇである。 In some embodiments, the S1P and/or S1PR modulator is an amiserimod (S1PR antagonist), fingolimod (S1PR ₁ functional antagonist), sonepcizumab (S1P specific monoclonal antibody), KRP203 (S1PR ₁ agonist), SEW2871 (S1PR ₁ ). Agonist), siponimod (S1PR ₁ and S1PR ₅ modulator), RPC1063 (S1PR ₁ modulator), ONO-4641 (S1PR ₁ and S1PR ₅ agonist), JTE-013 (S1PR ₂ antagonist), GSK2012862 (S1PR ₁ agonist), ponesimod ( Targets S1PR ₁ agonists), suramin (selective S1PR ₃ and S1PR ₅ antagonists), VPC23019 (aryl-amide analogs; competitive S1PR ₁ and S1PR ₃ antagonists), and W146 (selective S1PR ₁ antagonists), S1PR. An antisense or RNAi agent, and an antibody or antigen-binding fragment or small molecule that specifically binds to S1P and/or S1PR, optionally the amicellimod is in a dosage unit ranging from about 0.1 mg to about 10 mg. Or about 0.1, 0.2, 0.3, 0.337, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 mg, about 0.1, 0.2, 0.3, 0.337, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8 , 0.9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 mg or less, or at least about 0.1, 0.2, 0.3, 0.337, 0.4, 0 Dose units of 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 mg, or optionally, Amiserimod is used in dosage units ranging from about 0.1 mg/kg to about 10 mg/kg, or about 0.1, 0.2, 0.3, 0.337, 0.4, 0.5, 0. .6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 mg, about 0.1, 0.2, 0.3, 0. 337, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 mg or less, or at least about 0.1, 0.2, 0.3, 0.337, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 mg/kg Is.

いくつかの実施形態では、ステロイドは、ベタメタゾン、ブデソニド、コルチゾール（ヒドロコルチゾン）、コルチゾン、デフラザコート、デオキシコルチコステロン、デキサメタゾン、フルドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、プレドニゾロン、およびトリアムシノロンから選択される。 In some embodiments, the steroid is selected from betamethasone, budesonide, cortisol (hydrocortisone), cortisone, deflazacort, deoxycorticosterone, dexamethasone, fludrocortisone, hydrocortisone, methylprednisolone, prednisone, prednisolone, and triamcinolone.

いくつかの実施形態では、カルシニューリン阻害剤は、シクロスポリン、ピメクロリムス、タクロリムス、カルシニューリンまたはそのサブユニットを標的とするアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤、ならびにカルシニューリンまたはそのサブユニットに特異的に結合する抗体または抗原結合断片もしくは小分子から選択される。 In some embodiments, the calcineurin inhibitor is an antisense or RNAi agent that targets cyclosporine, pimecrolimus, tacrolimus, calcineurin or a subunit thereof, and an antibody or antigen-binding fragment that specifically binds calcineurin or a subunit thereof. Alternatively, it is selected from small molecules.

いくつかの実施形態では、ｍＴＯＲ阻害剤は、ＡＴＰ競合的ｍＴＯＲキナーゼ阻害剤、ｍＴＯＲＣ１／ｍＴＯＲＣ２二重阻害剤、および／またはｍＴＯＲ／ＰＩ３Ｋ二重阻害剤であるか、あるいは、ｍＴＯＲ阻害剤は、エベロリムス、ラパマイシン、デフォロリムス、テムシロリムス、ダクトリシブ、ＢＧＴ２２６、ＳＦ１１２６、ＰＫＩ−５８７、ＮＶＰＢＥ２３５、サパニセルチブ、ＡＺＤ８０５５、ＡＺＤ２０１４、ｍＴＯＲを標的とするアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤、ならびにｍＴＯＲに特異的に結合する抗体または抗原結合断片もしくは小分子のうちの１つ以上から選択される。 In some embodiments, the mTOR inhibitor is an ATP-competitive mTOR kinase inhibitor, a mTORC1/mTORC2 dual inhibitor, and/or a mTOR/PI3K dual inhibitor, or the mTOR inhibitor is everolimus. , Rapamycin, deforolimus, temsirolimus, ductulisib, BGT226, SF1126, PKI-587, NVPBE235, sapanicertib, AZD8055, AZD2014, an antisense or RNAi agent that specifically binds to mTOR, or an antibody or an antigen-binding fragment that specifically binds to mTOR. Selected from one or more of the small molecules.

いくつかの実施形態では、ＩＤＯ阻害剤は、インドキシモド（ＮＬＧ−８１８９）、１−メチル−トリプトファン（１ＭＴ）、β−カルボリン（ノルハルマン；９Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール）、ロスマリン酸、およびエパカドスタット、ＩＤＯを標的とするアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤、ならびにＩＤＯに特異的に結合する抗体または抗原結合断片もしくは小分子から選択される。 In some embodiments, the IDO inhibitor is indoximodo (NLG-8189), 1-methyl-tryptophan (1MT), β-carboline (norharman; 9H-pyrido[3,4-b]indole), rosmarinic acid, And epacadostat, antisense or RNAi agents that target IDO, and antibodies or antigen-binding fragments or small molecules that specifically bind to IDO.

いくつかの実施形態では、ＩＭＰＤＨ阻害剤は、ミコフェノール酸（ミコフェノール酸モフェチル）、リバビリン、および６ＴＧＭＰ（６−チオグアニンモノホスフェート）、ＩＭＰＤＨを標的とするアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤、ならびにＩＭＰＤＨに特異的に結合する抗体または抗原結合断片もしくは小分子のうちの１つ以上から選択される。 In some embodiments, IMPDH inhibitors are specific to mycophenolic acid (mycophenolate mofetil), ribavirin, and 6TGMP (6-thioguanine monophosphate), antisense or RNAi agents that target IMPDH, and IMPDH. Selected from one or more of an antibody or antigen-binding fragment or small molecule that specifically binds.

いくつかの実施形態では、サイトカイン阻害剤は、ＩＬ−１αおよびＩＬ−１βを含むインターロイキン−１（ＩＬ−１）、インターロイキン−５（ＩＬ−５）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、インターロイキン−１１（ＩＬ−１１）、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）、インターロイキン−１７（ＩＬ−１７）、インターロイキン−１８（ＩＬ−１８）、インターロイキン−２０（ＩＬ−２０）、インターロイキン−３３（ＩＬ−３３）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−ガンマ）、形質転換成長因子−β（ＴＧＦ−β）、および顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、および／またはＩＬ−１Ｒ、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−８Ｒ、ＩＬ−１１Ｒ、ＩＬ−１２Ｒ、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−２０Ｒのうちの１つ以上から選択されるサイトカイン受容体、ＳＴ２（インターロイキン１受容体様１、ＩＬ１ＲＬ１）、ＴＮＦＲ１などのＴＮＦＲ、インターフェロン−ガンマ受容体（ＩＦＮＧＲ）、ならびにＴＧＦβＲ１（ＡＬＫ５）またはＴＧＦβＲ２などのＴＧＦ−β受容体のうちの１つ以上から選択されるサイトカインの阻害剤であり、さらに、サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体阻害剤は、サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体を標的とするアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤、ならびにサイトカインまたはサイトカイン受容体に特異的に結合する抗体または抗原結合断片もしくは小分子から選択される。 In some embodiments, the cytokine inhibitor is interleukin-1 (IL-1), including IL-1α and IL-1β, interleukin-5 (IL-5), interleukin-6 (IL-6). , Interleukin-8 (IL-8), interleukin-11 (IL-11), interleukin-12 (IL-12), interleukin-17 (IL-17), interleukin-18 (IL-18). , Interleukin-20 (IL-20), interleukin-33 (IL-33), tumor necrosis factor (TNF), interferon gamma (IFN-gamma), transforming growth factor-β (TGF-β), and granules. Sphere-macrophage colony stimulating factor (GM-CSF), and/or one of IL-1R, IL-6R, IL-8R, IL-11R, IL-12R, IL-17R, IL-18R, IL-20R. Cytokine receptor selected from one or more, ST2 (interleukin 1 receptor-like 1, IL1RL1), TNFR such as TNFR1, interferon-gamma receptor (IFNGR), and TGF-β receptor such as TGFβR1 (ALK5) or TGFβR2 An inhibitor of a cytokine selected from one or more of the body, wherein the cytokine and/or cytokine receptor inhibitor is an antisense or RNAi agent that targets a cytokine and/or cytokine receptor, and a cytokine Alternatively, it is selected from antibodies or antigen-binding fragments or small molecules that specifically bind to cytokine receptors.

いくつかの実施形態では、サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体阻害剤は、アダリムマブ、アナキンラ、バシリキシマブ、カナキヌマブ、セルトリズマブ、ダクリズマブ、エタネルセプト、ゴリムマブ、インフリキシマブ、イキセキズマブ、メポリズマブ、レスリズマブ、リロナセプト、セクキヌマブ、セリルマブ（ｓｅｒｉｌｕｍａｂ）、シルクマブ、トシリズマブ、およびウステキヌマブのうちの１つ以上から選択される。 In some embodiments, the cytokine and / or cytokine receptor inhibitors, adalimumab, anakinra, basiliximab, Kanakinumabu, certolizumab, daclizumab, etanercept, golimumab, infliximab, Ikisekizumabu, mepolizumab, Resurizumabu, rilonacept, secukinumab, Serirumabu (serilumab) , Cirucumab, tocilizumab, and ustekinumab.

いくつかの実施形態では、キナーゼ阻害剤は、ヤーヌスキナーゼ（ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、ＴＹＫ２を含むＪＡＫ）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、受容体チロシン−タンパク質キナーゼｅｒｂＢ−２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕまたはＥＲＢＢ２）、Ｂｃｒ−Ａｂｌ、ｃ−ＳＲＣ、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰ）キナーゼ、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）、脾臓チロシンキナーゼ（ＳＹＫ）、ブルトンチロシンキナーゼ（ＢＴＫ）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦＲ３を含むＶＥＧＦＲ）、線維芽細胞成長因子受容体（ＦＧＦＲ）、Ｂ−Ｒａｆ、ＲＥＴがん原遺伝子、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦ−Ｒ）、トロポミオシン受容体キナーゼ（ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、ＴｒｋＣを含むＴｒｋ）、およびｃ−Ｍｅｔのうちの１つ以上から選択されるキナーゼの阻害剤であり、さらに、キナーゼ阻害剤は、キナーゼを標的とするアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤、ならびにキナーゼに特異的に結合する抗体または抗原結合断片もしくは小分子から選択される。 In some embodiments, the kinase inhibitor is Janus kinase (JAK, including JAK1, JAK2, JAK3, TYK2), epidermal growth factor receptor (EGFR), receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 (Her2/neu or ERBB2), Bcr-Abl, c-SRC, mitogen activated protein kinase (MAP) kinase, anaplastic lymphoma kinase (ALK), spleen tyrosine kinase (SYK), Bruton tyrosine kinase (BTK), vascular endothelial growth factor (VEGF). , Vascular endothelial growth factor receptor (VEGFR1, VEGFR2, VEGFR including VEGFR3), fibroblast growth factor receptor (FGFR), B-Raf, RET protooncogene, platelet-derived growth factor receptor (PDGF-R) , A tropomyosin receptor kinase (Trk including TrkA, TrkB, TrkC), and c-Met, wherein the kinase inhibitor is an anti-kinase targeting the kinase. It is selected from sense or RNAi agents, as well as antibodies or antigen binding fragments or small molecules that specifically bind to the kinase.

いくつかの実施形態では、キナーゼ阻害剤は、ニンテダニブ、バリシチニブ、フェドラチニブ、フィルゴチニブ、ガンドチニブ、レスタウルチニブ、モメロチニブ、パクリチニブ、ペフィシチニブ、ルキソリチニブ、トファシチニブ、パダシチニブ、アファチニブ、アキシチニブ、ボスチニブ、セツキシマブ、コビメチニブ、クリゾチニブ、カボザンチニブ、ダサチニブ、エヌトレクチニブ（ｅｎｔｒｅｃｔｉｎｉｂ）、エルロチニブ、フォスタマチニブ、ゲフィチニブ、イブルチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レンバチニブ、ムブリチニブ、ネラチニブ、ニロチニブ、パゾパニブ、ペガプタニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、ＳＵ６６５６、トセラニブ、バンデタニブ、バタラニブ、およびベムラフェニブのうちの１つ以上から選択される。 In some embodiments, the kinase inhibitor is nintedanib, baricitinib, fedratinib, filgotinib, gandotinib, lestaurtinib, momerotinib, paclitinib, peficitinib, ruxolitinib, toxacib, afatinib, afatinib, afatinib, padacitinib, afatinib, afatinib. Dasatinib, enlectinib, erlotinib, fostamatinib, gefitinib, ibrutinib, imatinib, lapatinib, lenvatinib, mubritinib, nerabinib, 66, nibinib, nilotinib, pazopanib, pegaptanib, nilotinib, pazopanib, pegaptanib, nibutinib, pazopanib, pegaptanib, soup. It is selected from the above.

いくつかの実施形態では、Ｂ細胞受容体阻害剤は、ＣＤ２０を標的とするアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤、ならびにＣＤ２０に特異的に結合する抗体または抗原結合断片もしくは小分子から選択されるか、またはＢ細胞受容体阻害剤は、任意に、イブリツモマブ・チウキセタン、オビヌツズマブ、オカラツズマブ、オクレリズマブ、リツキシマブ、トシツモマブ、およびベルツズマブのうちの１つ以上から選択される。 In some embodiments, the B cell receptor inhibitor is selected from an antisense or RNAi agent that targets CD20, and an antibody or antigen-binding fragment or small molecule that specifically binds CD20, or B The cell receptor inhibitor is optionally selected from one or more of ibritumomab thiuxetane, obinutuzumab, ochalatuzumab, ocrelizumab, rituximab, tositumomab, and veltuzumab.

いくつかの実施形態では、アンチセンス剤は、約１０〜４０塩基長であり、任意に、モルホリノオリゴヌクレオチド（ＰＭＯ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、２’Ｏ−メチルホスホロチオエートオリゴヌクレオチド、トリシクロ−ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド、およびロックド核酸（ＬＮＡ）から選択される。 In some embodiments, the antisense agent is about 10-40 bases long and optionally contains morpholino oligonucleotides (PMO), peptide nucleic acids (PNA), 2'O-methyl phosphorothioate oligonucleotides, tricyclo-phosphorothioate oligos. Selected from nucleotides and locked nucleic acids (LNA).

いくつかの実施形態では、アンチセンス剤は、標的タンパク質をコードするプレｍＲＮＡまたはｍＲＮＡ標的配列内の標的領域に特異的にハイブリダイズし、標的領域は、ｍＲＮＡのＡＵＧ開始コドン、ＡＵＧ開始コドンの上流の領域、ＡＵＧコドンの下流の領域、予め処理したｍＲＮＡの３’または５’スプライス部位、分岐点、３’未翻訳領域（ＵＴＲ）、およびポリアデニル化シグナル配列のうちの１つ以上から選択される。 In some embodiments, the antisense agent specifically hybridizes to a target region within a pre-mRNA or mRNA target sequence encoding a target protein, the target region being the AUG start codon of the mRNA, upstream of the AUG start codon. One or more of the following: a region downstream of the AUG codon, a 3'or 5'splice site of pretreated mRNA, a branch point, a 3'untranslated region (UTR), and a polyadenylation signal sequence. ..

いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、標的タンパク質をコードするｍＲＮＡ標的配列と実質的に同一であるセンス鎖、および任意に、標的タンパク質をコードするｍＲＮＡ標的配列と相補的であるか、または実質的に相補的であるアンチセンス鎖を含み、任意に、ＲＮＡｉ剤は、二本鎖短干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）オリゴヌクレオチドであるか、または任意に、ＲＮＡｉ剤、任意に、ｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチドが、ウイルスベクターによってコードされる。 In some embodiments, the RNAi agent is a sense strand that is substantially identical to the mRNA target sequence encoding the target protein, and, optionally, is complementary or substantially to the mRNA target sequence encoding the target protein. Optionally, the RNAi agent is a double-stranded short interfering RNA (siRNA) oligonucleotide, or, optionally, the RNAi agent, optionally the siRNA oligonucleotide, is a viral Coded by the vector.

いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、任意に、ヒト化抗体、または任意に、Ｆｖ断片もしくは一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）ポリペプチドである。 In some embodiments, the antibody or antigen-binding fragment thereof is a monoclonal antibody, optionally a humanized antibody, or optionally an Fv fragment or single chain Fv (sFv) polypeptide.

いくつかの実施形態では、組成物は、タンパク質ベースまたは重量−重量ベースで少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％の純度を有し、実質的には、凝集体を含まない。 In some embodiments, the composition has a purity of at least about 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, or 99% on a protein or weight-to-weight basis, and substantially comprises: Does not contain aggregates.

いくつかの実施形態では、組成物は、実質的には、内毒素を含まない。 In some embodiments, the composition is substantially free of endotoxin.

ある特定の組成物は、脂質ナノ粒子を含む。 Certain compositions include lipid nanoparticles.

いくつかの実施形態では、組成物は、シリンジ、任意に、注射可能なシリンジ中にある。いくつかの実施形態では、組成物は、カプセル、例えば、経口カプセルである。 In some embodiments, the composition is in a syringe, optionally an injectable syringe. In some embodiments, the composition is a capsule, eg, an oral capsule.

治療を必要とする対象における肺の炎症を治療する方法であって、対象に、
（ａ）ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチド、またはＨＲＳポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチドと、
（ｂ）免疫調節剤と、を投与することを含む、方法もまた含まれる。 A method of treating lung inflammation in a subject in need thereof, the method comprising:
(A) a histidyl-tRNA synthetase (HRS) polypeptide, or an expressible polynucleotide encoding a HRS polypeptide;
Also included are methods that include administering (b) an immunomodulator.

いくつかの実施形態では、（ａ）および（ｂ）は、別々に投与され、任意に、本明細書に記載されるように定義される。いくつかの実施形態では、（ａ）および（ｂ）は、一緒に、任意に、本明細書に記載の治療用組成物として投与される。 In some embodiments, (a) and (b) are administered separately, optionally defined as described herein. In some embodiments, (a) and (b) are administered together, optionally as a therapeutic composition described herein.

いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、Ｆｃ領域を含み、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドを形成し、例えば、このＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、表Ｈ８から選択される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、配列番号１５７（Ｆｃ−ＨＲＳ（２〜６０）またはＨＲＳ^ＦＣ１）を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。 In some embodiments, the HRS polypeptide comprises an Fc region to form a HRS-Fc fusion polypeptide, eg, the HRS-Fc fusion polypeptide is at least 80 relative to a sequence selected from Table H8. %, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100% identical to, consisting of, or consisting essentially of an amino acid sequence. In some embodiments, HRS polypeptide comprises or SEQ ID NO: 157 (Fc-HRS (2~60) or ^{HRS FC1),} or consists of, or essentially consists.

いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、ＨＲＳポリペプチドのみと比較して、ＨＲＳポリペプチドの１つ以上の薬物動態学的特徴を変化させる。ある特定の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドの１つ以上の変化する薬物動態学的特徴は、血清濃度の増加、血清半減期の増加、バイオアベイラビリティの増加、曝露（ＡＵＣ）の増加、血清濃度の増加、および／またはクリアランスの減少である。 In some embodiments, the immunomodulatory agent alters one or more pharmacokinetic characteristics of the HRS polypeptide as compared to the HRS polypeptide alone. In certain embodiments, one or more altered pharmacokinetic characteristics of the HRS polypeptide are increased serum concentration, increased serum half-life, increased bioavailability, increased exposure (AUC), increased serum concentration. Increase and/or decrease clearance.

いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、ピルフェニドンまたはニンテダニブである。 In some embodiments, the immunomodulator is pirfenidone or nintedanib.

いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、配列番号１５７（Ｆｃ−ＨＲＳ（２〜６０）またはＨＲＳＦ^Ｃ１を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなり、免疫調節剤は、ピルフェニドンである。いくつかの実施形態では、ピルフェニドンは、ＨＲＳポリペプチドのみと比較して、対象におけるＨＲＳポリペプチドの血清濃度を少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、または２００％以上増加させる。 In some embodiments, the HRS polypeptide comprises, consists of, or consists essentially of SEQ ID NO:157 (Fc-HRS(2-60) or HRSF ^C1 and the immunomodulator is pirfenidone. In some embodiments, pirfenidone has a serum concentration of HRS polypeptide in the subject of at least about 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 compared to HRS polypeptide alone. , 150, or 200% or more.

いくつかの実施形態では、ピルフェニドンは、約５０〜約１０００ｍｇの範囲である個々の投与量単位、あるいは約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、もしくは１０００ｍｇ、約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、もしくは１０００ｍｇ以下、または少なくとも約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、もしくは１０００ｍｇの個々の投与量単位で、任意に、経口投与用の１つ、２つ、または３つのカプセルで投与される。 In some embodiments, pirfenidone is in individual dosage units ranging from about 50 to about 1000 mg, or about 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160. , 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410. , 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 10, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660. , 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910. , 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, or 1000 mg, about 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190. , 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440. , 450, 460, 470, 480, 490, 500, 10, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690. , 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940. , 950, 960, 970, 980, 990, or 1000 mg or less, or at least about 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470 480, 490, 500, 10, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720. , 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970. , 980, 990, or 1000 mg in individual dosage units, optionally in 1, 2, or 3 capsules for oral administration.

いくつかの実施形態では、ピルフェニドンの投与量は、約１００〜約４０００ｍｇ／日の範囲である１日投与量単位で、あるいは約１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００、３６００、３７００、３８００、３９００、もしくは４０００ｍｇ／日、約１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００、３６００、３７００、３８００、３９００、もしくは４０００ｍｇ／日以下、または少なくとも約１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００、３６００、３７００、３８００、３９００、もしくは４０００ｍｇ／日の１日投与量単位で、任意に、経口投与用の約１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つのカプセルで投与される。 In some embodiments, the dose of pirfenidone is in daily dosage units ranging from about 100 to about 4000 mg/day, or about 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180. , 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430. 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 10, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680. , 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930. , 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000, 1200, 1300, 1400, 1500, 1600, 1700, 1800, 2000, 2100, 2200, 2300, 2400, 2500, 2600, 2700, 2800, 2900, 3000. 3100, 3200, 3300, 3400, 3500, 3600, 3700, 3800, 3900, or 4000 mg/day, about 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220. , 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470. 480, 490, 500, 10, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720. , 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970. , 980, 990, 1000, 1200, 1300, 1400, 1500, 1600, 1700, 1800, 2000, 2100, 2200, 2300, 2400, 2500. 2600, 2700, 2800, 2900, 3000, 3100, 3200, 3300, 3400, 3500, 3600, 3700, 3800, 3900, or 4000 mg/day or less, or at least about 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 10, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000, 1200, 1300, 1400, 1500, 1600, 1700, 1800, 2000, 2100, 2200, 2300, 2400, 2500, 2600, 2700, 2800, 2900, 3000, 3100, 3200, 3300, 3400, 3500, 3600, 3700, 3800, 3900, or 4000 mg/day in daily dosage units, optionally about 1, 2 for oral administration, It is administered in 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 capsules.

いくつかの実施形態では、ピルフェニドンは、約８００ｍｇ（例えば８０１ｍｇ）の個々の投与量単位で、任意に、個々の投与量につき３つのカプセルとして服用される、経口投与用の３つの約２６７ｍｇのカプセルとして投与される。いくつかの実施形態では、ピルフェニドンは、約２４００ｍｇ／日（例えば２４０３ｍｇ／日）の１日投与量単位で、任意に、個々の投与量につき３つのカプセルとして服用される、１日３回の経口投与用の９つの約２６７ｍｇのカプセルとして投与される。 In some embodiments, pirfenidone is taken in individual dosage units of about 800 mg (eg, 801 mg), optionally in three capsules of about 267 mg for oral administration, optionally in three capsules per individual dose. Administered as. In some embodiments, pirfenidone is taken in a daily dosage unit of about 2400 mg/day (eg, 2403 mg/day), optionally as three capsules per individual dose, orally three times daily. It is administered as nine capsules of about 267 mg for administration.

いくつかの実施形態では、ニンテダニブは、約１０〜約５００ｍｇの範囲である個々の投与量単位で、あるいは約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、もしくは５００ｍｇ、約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、もしくは５００ｍｇ以下、または少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、もしくは５００ｍｇの個々の投与量単位で、任意に、約１つ、２つ、または３つのカプセルで投与される。 In some embodiments, nintedanib is in individual dosage units ranging from about 10 to about 500 mg, or alternatively about 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, or 500 mg, about 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, or 500 mg or less, or at least about 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80. , 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330. 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, or 500 mg in individual dosage units, optionally about one, It is administered in 2 or 3 capsules.

いくつかの実施形態では、ニンテダニブは、約２０〜約１０００ｍｇ／日の範囲である１日投与量単位で、あるいは約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００ｍｇ／日、約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００ｍｇ／日以下、または少なくとも約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００ｍｇ／日の１日投与量単位で、任意に、約１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのカプセルで投与される。 In some embodiments, nintedanib is in a daily dosage unit ranging from about 20 to about 1000 mg/day, or about 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000 mg/day, about 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110 , 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360. 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610. , 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860. , 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000 mg/day or less, or at least about 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90. , 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340. , 350, 360, 370, 380, 390, 400, 4 10, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000 mg/day in daily dosage units, optionally about 1, 2, 3, 4, 5, or 6 Administered in one capsule.

いくつかの実施形態では、ニンテダニブは、約１００〜１５０ｍｇの範囲である、または約２００〜３００ｍｇ／日の範囲である１日投与量単位で、任意に、１日１回または２回の投与量で投与される。いくつかの実施形態では、ニンテダニブは、約１００〜１５０ｍｇ、または約２００〜３００ｍｇ／日の１日投与量単位で、任意に、１日１回または２回の投与量で投与される。 In some embodiments, nintedanib is in a daily dosage unit in the range of about 100-150 mg, or about 200-300 mg/day, optionally once or twice daily. Administered in. In some embodiments, nintedanib is administered in a daily dosage unit of about 100-150 mg, or about 200-300 mg/day, optionally in one or two daily doses.

いくつかの実施形態では、対象は、間質性肺疾患（ＩＬＤ）に罹患しているか、または罹患するリスクがある。いくつかの実施形態では、ＩＬＤは、特発性であるか、または結合組織疾患、自己免疫疾患、吸入物質もしくは薬物への曝露、感染症、または悪性腫瘍に関連している。 In some embodiments, the subject has, or is at risk of having, interstitial lung disease (ILD). In some embodiments, the ILD is idiopathic or associated with connective tissue disease, autoimmune disease, exposure to inhalants or drugs, infections, or malignancies.

いくつかの実施形態では、ＩＬＤは、特発性間質性肺炎、特発性肺線維症、サルコイドーシス、ハンマンリッチ症候群、抗合成酵素症候群、特発性好酸球性肺炎、肺胞出血症候群、肺胞タンパク症、石綿肺症、珪肺症、ベリリウム症、リウマチ性関節炎、紅斑性狼瘡、肺障害を伴う慢性移植片対宿主病、硬化症（全身性）または強皮症、多発性筋炎、皮膚筋炎、慢性肺疾患、喘息、気管支炎（呼吸気管支炎）、肺炎、過敏性肺炎、慢性過敏性肺炎、呼吸窮迫症候群、スティル病、急性肺損傷、顕微鏡的多発血管炎、肺水腫、肺ランゲルハンス細胞組織球症、急性吸入曝露、薬物誘導性肺疾患、剥離性間質性肺炎、および／または嚢胞性線維症のうちの１つ以上から選択されるか、またはそれらと関連している。 In some embodiments, the ILD is idiopathic interstitial pneumonia, idiopathic pulmonary fibrosis, sarcoidosis, Hanman-Rich syndrome, antisynthetic enzyme syndrome, idiopathic eosinophilic pneumonia, alveolar hemorrhagic syndrome, alveolar Proteinosis, asbestosis, silicosis, beryllium disease, rheumatoid arthritis, lupus erythematosus, chronic graft-versus-host disease with lung injury, sclerosis (systemic) or scleroderma, polymyositis, dermatomyositis, Chronic lung disease, asthma, bronchitis (respiratory bronchitis), pneumonia, hypersensitivity pneumonia, chronic hypersensitivity pneumonia, respiratory distress syndrome, Still's disease, acute lung injury, microscopic polyangiitis, pulmonary edema, lung Langerhans cell histiocyte Disease, acute inhalation exposure, drug-induced lung disease, exfoliative interstitial pneumonia, and/or cystic fibrosis.

いくつかの実施形態では、ＩＬＤは、サーファクタントタンパク質Ｂ欠乏症（ＳＦＴＰＢにおける変異）、界面活性剤−プロテイン−Ｃ欠乏症（ＳＦＴＰＣにおける変異）、ＡＢＣＡ３−欠乏症（ＡＢＣＡ３における変異）、脳肺甲状腺症候群（ＴＴＦ１における変異）、または先天性肺胞タンパク症（ＣＳＦＲ２Ａ、ＣＳＦＲ２Ｂにおける変異）、肺胞毛細血管異形成（ＦｏｘＦ１における変異）、テロメラーゼ逆転写酵素（ＴＥＲＴ）における変異、テロメラーゼＲＮＡ成分（ＴＥＲＣ）における変異、テロメア伸長ヘリカーゼ１（ＲＴＥＬ１）の調節因子における変異、および／またはポリ（Ａ）特異的リボヌクレアーゼ（ＰＡＲＮ）における変異のうちの１つ以上と関連している。 In some embodiments, the ILD is a surfactant protein B deficiency (mutation in SFTPB), detergent-protein-C deficiency (mutation in SFTPC), ABCA3-deficiency (mutation in ABCA3), cerebral pulmonary thyroid syndrome (in TTF1). Mutation), or congenital alveolar proteinosis (mutation in CSFR2A, CSFR2B), alveolar capillary dysplasia (mutation in FoxF1), mutation in telomerase reverse transcriptase (TERT), mutation in telomerase RNA component (TERC), telomere It has been associated with one or more of mutations in the regulator of extended helicase 1 (RTEL1) and/or mutations in poly(A)-specific ribonuclease (PARN).

いくつかの実施形態では、薬物は、抗生物質、化学療法剤、抗不整脈剤、およびスタチン薬のうちの１つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、感染症は、ニューモシスチス肺炎（ＰＣＰ）、結核、クラミジアトラコマチス、および呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、特発性器質化肺炎のうちの１つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、悪性腫瘍は、がん性リンパ管症またはリンパ腫である。 In some embodiments, the drug is selected from one or more of antibiotics, chemotherapeutic agents, antiarrhythmic agents, and statin agents. In some embodiments, the infection is selected from one or more of Pneumocystis pneumonia (PCP), tuberculosis, Chlamydia trachomatis, and respiratory syncytial virus (RSV), idiopathic organizing pneumonia. In some embodiments, the malignancy is cancerous lymphangiopathy or lymphoma.

いくつかの実施形態では、それを必要とする対象は、アトピー性喘息、非アトピー性喘息、アレルギー性喘息、アトピー性気管支ＩｇＥ仲介性喘息、気管支喘息、本態性喘息、真正喘息、病態生理学的かく乱により引き起こされる内因性喘息、環境因子により引き起こされる外因性喘息、知られていないかまたは明らかでない原因の本態性喘息、非アトピー性喘息、気管支炎様喘息、気腫性喘息、運動誘発性喘息、アレルゲン誘発性喘息、冷気誘発性喘息、職業喘息、細菌、真菌、原虫、またはウイルス感染症により引き起こされる感染型喘息、非アレルギー性喘息、初発性喘息、喘鳴乳児症候群および細気管支炎、慢性または急性気管支収縮、慢性気管支炎、末梢気道閉塞、ならびに肺気腫のうちの１つ以上から選択される状態を有する。 In some embodiments, the subject in need thereof has atopic asthma, non-atopic asthma, allergic asthma, atopic bronchial IgE-mediated asthma, bronchial asthma, essential asthma, authentic asthma, pathophysiological perturbation. Endogenous asthma caused by, exogenous asthma caused by environmental factors, essential asthma of unknown or undetermined cause, non-atopic asthma, bronchitis-like asthma, emphysematous asthma, exercise-induced asthma, Allergen-induced asthma, cold-induced asthma, occupational asthma, infectious asthma caused by bacterial, fungal, protozoal, or viral infections, non-allergic asthma, primary asthma, wheezing infant syndrome and bronchiolitis, chronic or acute. Having a condition selected from one or more of bronchoconstriction, chronic bronchitis, peripheral airway obstruction, and emphysema.

いくつかの実施形態では、それを必要とする対象は、閉塞性または炎症性の気道疾患を有する。いくつかの実施形態では、閉塞性または炎症性の気道疾患は、慢性好酸球性肺炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性気管支炎を包含するＣＯＰＤ、不可逆性進行性気道閉塞を特徴とするＣＯＰＤ、肺気腫または呼吸困難、および急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）のうちの１つ以上から選択される。 In some embodiments, the subject in need thereof has obstructive or inflammatory airway disease. In some embodiments, the obstructive or inflammatory airway disease is characterized by chronic eosinophilic pneumonia, chronic obstructive pulmonary disease (COPD), COPD including chronic bronchitis, irreversible progressive airway obstruction. COPD, emphysema or dyspnea, and acute respiratory distress syndrome (ARDS).

いくつかの実施形態では、肺の炎症の治療を必要とする対象は、他の薬物療法の結果として生じる気道過敏性の悪化、肺高血圧症を伴う気道疾患、気管支炎または急性気管支炎、急性喉頭気管気管支炎、アラキン酸気管支炎、カタル性気管支炎、クループ性気管支炎、乾性気管支炎、感染性喘息性気管支炎、増殖性気管支炎（ｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ）、ブドウ球菌性もしくは連鎖球菌性の気管支炎、小胞性気管支炎、急性肺損傷、気管支拡張症、または円柱状気管支拡張症、嚢状気管支拡張症、紡錘状気管支拡張症、毛細管性気管支拡張症、嚢胞状気管支拡張症、乾性気管支拡張症、または濾胞性気管支拡張症に関連する状態を有する。 In some embodiments, a subject in need of treatment for lung inflammation has worse airway hyperresponsiveness as a result of other medications, respiratory tract disease with pulmonary hypertension, bronchitis or acute bronchitis, acute laryngeal. Tracheobronchitis, arachidic acid bronchitis, catarrhal bronchitis, croup bronchitis, dry bronchitis, infectious asthmatic bronchitis, proliferative bronchitis, staphylococcal or streptococcal bronchitis, Follicular bronchitis, acute lung injury, bronchiectasis, or cylindrical bronchiectasis, saccular bronchiectasis, fusiform bronchiectasis, capillary bronchiectasis, cystic bronchiectasis, dry bronchiectasis, or Having conditions associated with follicular bronchiectasis.

いくつかの実施形態では、それを必要とする対象は、１、２、３、４、５、６、７、または８のアッシュクロフトスコアを有する。 In some embodiments, the subject in need thereof has an Ashcroft score of 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, or 8.

ある特定の実施形態は、それを必要とする対象の平均余命、任意に、約または少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０年、もしくはそれ以上増加させる。 Certain embodiments provide a life expectancy of a subject in need thereof, optionally about or at least about 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60 years or more ..

ある特定の実施形態は、それを必要とする対象における肺の炎症の臨床症状またはパラメータのうちの１つ以上を改善する。 Certain embodiments improve one or more of the clinical symptoms or parameters of lung inflammation in a subject in need thereof.

いくつかの実施形態では、１つ以上の臨床症状またはパラメータは、肺線維症、肺における炎症細胞浸潤、呼吸機能、および体重のうちの１つ以上から選択される。 In some embodiments, the one or more clinical symptoms or parameters are selected from one or more of pulmonary fibrosis, inflammatory cell infiltration in the lung, respiratory function, and body weight.

ある特定の実施形態は、任意に、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、もしくは２４カ月間以上の期間にわたって測定されたときに、約または少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００％、もしくはそれ以上、それを必要とする対象において肺線維症を改善する。 Certain embodiments optionally include about 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20. , 21, 22, 23, or about or at least about 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400 when measured over a period of more than 21, 21, 23, or 24 months. , 500, 600, 700, 800, 900, 1000%, or more, ameliorating pulmonary fibrosis in a subject in need thereof.

ある特定の実施形態は、任意に、初期スコアと比較して、アッシュクロフトスコアが１、２、３、４、５、６、７、または８グレード低下する、アッシュクロフトスコアの低下によって測定されるように、それを必要とする対象における肺線維症を改善する。 Certain embodiments are optionally measured by a decrease in Ashcroft score that is a 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, or 8 grade decrease in Ashcroft score compared to the initial score. Thus, improving pulmonary fibrosis in a subject in need thereof.

ある特定の実施形態は、任意に、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、もしくは２４カ月間以上の期間にわたって測定されたときに、約または少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００％、もしくはそれ以上、肺における炎症細胞浸潤を減少させる。 Certain embodiments optionally include about 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20. , 21, 22, 23, or about or at least about 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400 when measured over a period of more than 21, 21, 23, or 24 months. , 500, 600, 700, 800, 900, 1000% or more, reducing inflammatory cell infiltration in the lung.

ある特定の実施形態は、任意に、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、もしくは２４カ月間以上の期間にわたって測定されたときに、約または少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００％、もしくはそれ以上、呼吸機能を改善する。いくつかの実施形態では、改善した呼吸機能は、呼気時間の増加、吸気時間の増加、最大呼気流量の減少、最大吸気流量の減少、毎分呼吸量（ＲＭＶ）の減少、および呼吸数の減少のうちの１つ以上から選択される。 Certain embodiments optionally include about 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20. , 21, 22, 23, or about or at least about 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400 when measured over a period of more than 21, 21, 23, or 24 months. , 500, 600, 700, 800, 900, 1000% or more to improve respiratory function. In some embodiments, improved respiratory function includes increased expiratory time, increased inspiratory time, decreased maximum expiratory flow, decreased maximum inspiratory flow, decreased respiratory rate per minute (RMV), and decreased respiratory rate. Selected from one or more of:

（ａ）ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチド、または前記ＨＲＳポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチドと、
（ｂ）免疫調節剤と、を投与することを含む、患者ケアキットもまた、含まれる。 (A) a histidyl-tRNA synthetase (HRS) polypeptide, or an expressible polynucleotide encoding the HRS polypeptide;
Also included is a patient care kit that comprises administering (b) an immunomodulator.

ある特定の患者ケアキットでは、（ａ）および（ｂ）は、別々の組成物中にあり、任意に、本明細書に記載されるように定義される。いくつかの患者ケアキットでは、（ａ）および（ｂ）は、同じ組成物中にあり、本明細書に記載されるように定義される。 In certain patient care kits, (a) and (b) are in separate compositions, optionally defined as described herein. In some patient care kits, (a) and (b) are in the same composition and are defined as described herein.

いくつかの実施形態では、ピルフェニドンは、（任意に、経口投与用の約１つ、２つ、または３つのカプセルにおいて）約５０〜約１０００ｍｇの範囲である個々の投与量単位で、あるいは（任意に、経口投与用の１つ、２つ、または３つのカプセルにおいて）約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、もしくは１０００ｍｇ、約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、もしくは１０００ｍｇ以下、または少なくとも約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、もしくは１０００ｍｇの個々の投与量単位である。 In some embodiments, pirfenidone is in individual dosage units ranging from about 50 to about 1000 mg (optionally in about 1, 2, or 3 capsules for oral administration), or (optionally About 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200) in one, two, or three capsules for oral administration. , 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450. 460, 470, 480, 490, 500, 10, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700. , 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950. , 960, 970, 980, 990, or 1000 mg, about 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230. , 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480. 490, 500, 10, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730. , 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980. , 990, or 1000 mg or less, or at least about 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 3 10, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 10, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, Individual dosage units of 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, or 1000 mg.

いくつかの実施形態では、ピルフェニドンは、（任意に、経口投与用の約３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、または９つのカプセルにおいて）約１００〜約４０００ｍｇ／日の範囲である１日投与量単位で、あるいは（任意に、経口投与用の約３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、または９つのカプセルで）約１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００、３６００、３７００、３８００、３９００、もしくは４０００ｍｇ／日、約１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００、３６００、３７００、３８００、３９００、もしくは４０００ｍｇ／日以下、または少なくとも約１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００、３６００、３７００、３８００、３９００、もしくは４０００ｍｇ／日の個々の投与量単位で、である。 In some embodiments, pirfenidone is from about 100 to about 4000 mg/day (optionally in about 3, 4, 5, 6, 7, 8, or 9 capsules for oral administration). Or about 100, 110 (optionally in about 3, 4, 5, 6, 7, 8, or 9 capsules for oral administration) in a daily dosage unit range of 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 10, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000, 1200, 1300, 1400, 1500, 1600, 1700, 1800, 2000, 2100, 2200, 2300, 2400, 2500, 2600, 2700, 2800, 2900, 3000, 3100, 3200, 3300, 3400, 3500, 3600, 3700, 3800, 3900, or 4000 mg/day, about 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 10, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 96 0, 970, 980, 990, 1000, 1200, 1300, 1400, 1500, 1600, 1700, 1800, 2000, 2100, 2200, 2300, 2400, 2500, 2600, 2700, 2800, 2900, 3000, 3100, 3200, 3300, 3400, 3500, 3600, 3700, 3800, 3900, or 4000 mg/day or less, or at least about 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230. , 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480. 490, 500, 10, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730. , 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980. , 990, 1000, 1200, 1300, 1400, 1500, 1600, 1700, 1800, 2000, 2100, 2200, 2300, 2400, 2500, 2600, 2700, 2800, 2900, 3000, 3100, 3200, 3300, 3400, 3500. In individual dosage units of 3,600, 3700, 3800, 3900, or 4000 mg/day.

特定の実施形態では、ピルフェニドンは、約８００ｍｇ（例えば８０１ｍｇ）の個々の投与量単位で、例えば、個々の投与量につき３つのカプセルとして服用される、経口投与用の３つの約２６７ｍｇのカプセルとして、である。特定の実施形態では、ピルフェニドンは、約２４００ｍｇ／日（例えば２４０３ｍｇ／日）の１日投与量単位で、例えば、個々の投与量につき３つのカプセルとして服用される、１日３回の経口投与用の９つの約２６７ｍｇのカプセルとして、である。 In certain embodiments, pirfenidone is taken in individual dosage units of about 800 mg (eg, 801 mg), eg, about three 267 mg capsules for oral administration, taken as three capsules per individual dose, Is. In certain embodiments, pirfenidone is taken in a daily dosage unit of about 2400 mg/day (eg, 2403 mg/day), eg, for oral administration three times daily, taken as three capsules per individual dose. 9 capsules of about 267 mg.

いくつかの実施形態では、ニンテダニブは、（任意に、経口投与用の約１つ、２つ、または３つのカプセルにおいて）約１０〜約５００ｍｇの範囲である個々の投与量単位で、あるいは（任意に、経口投与用の約１つ、２つ、または３つのカプセルにおいて）約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、もしくは５００ｍｇ、約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、もしくは５００ｍｇ以下、または少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、もしくは５００ｍｇの個々の投与量単位で、である。 In some embodiments, nintedanib is in individual dosage units ranging from about 10 to about 500 mg (optionally in about 1, 2, or 3 capsules for oral administration), or (optionally , About 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, in about 1, 2, or 3 capsules for oral administration. 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, or 500 mg, about 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, or 500 mg or less, or at least about 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120. , 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370. 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, or 500 mg in individual dosage units.

いくつかの実施形態では、ニンテダニブは、（任意に、約１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのカプセルにおいて）約２０〜約１０００ｍｇ／日の範囲である１日投与量単位で、あるいは（任意に、約１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのカプセルにおいて）約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００ｍｇ／日、約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００ｍｇ／日以下、または少なくとも約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００ｍｇ／日の１日投与量単位で、である。 In some embodiments, nintedanib is administered daily in a range of about 20 to about 1000 mg/day (optionally in about 1, 2, 3, 4, 5, or 6 capsules). In units of quantity, or (optionally in about 1, 2, 3, 4, 5, or 6 capsules) about 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000 mg/day, about 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 , 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350. 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600. , 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850. , 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000 mg/day or less, or at least about 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 , 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 2 30, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000 mg/day in daily dosage units.

いくつかの実施形態では、ニンテダニブは、約１００〜１５０ｍｇの範囲である、または約２００〜３００ｍｇ／日の範囲である１日投与量単位で、任意に、１日１回または２回の投与量である。いくつかの実施形態では、ニンテダニブは、約１００〜１５０ｍｇの範囲である、または約２００〜３００ｍｇ／日の範囲である投与量単位で、任意に、１日１回または２回の投与量である。 In some embodiments, nintedanib is in a daily dosage unit in the range of about 100-150 mg, or about 200-300 mg/day, optionally once or twice daily. Is. In some embodiments, nintedanib is in a dosage unit range of about 100-150 mg, or about 200-300 mg/day, optionally once or twice daily. ..

対象におけるＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドの１つ以上の薬物動態学的特徴を変化させる方法であって、対象に、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチド、またはピルフェニドンと組み合わせて、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチドを投与することを含む、方法もまた、含まれる。いくつかの実施形態では、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、表Ｈ８から選択される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、配列番号１５７（Ｆｃ−ＨＲＳ（２〜６０）もしくはＨＲＳ^ＦＣ１）を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。 A method of altering one or more pharmacokinetic characteristics of a HRS-Fc fusion polypeptide in a subject, the subject encoding the HRS-Fc fusion polypeptide in combination with a HRS-Fc fusion polypeptide, or pirfenidone. Also included is a method comprising administering an expressible polynucleotide that In some embodiments, the HRS-Fc fusion polypeptide is at least 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, for a sequence selected from Table H8. Alternatively, it comprises, consists of, or consists essentially of an amino acid sequence that is 100% identical. In some embodiments, HRS polypeptide comprises or SEQ ID NO: 157 (Fc-HRS (2~60) or ^{HRS FC1),} or consists of, or essentially consists.

（本明細書に記載される）肺の炎症の治療を必要とする対象においてそれを行う方法であって、対象に、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチド、またはＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチドを投与することを含む、方法もまた、含まれる。いくつかの実施形態では、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、表Ｈ８から選択される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、配列番号１５７（Ｆｃ−ＨＲＳ（２〜６０）もしくはＨＲＳ^ＦＣ１）を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。 A method of doing so in a subject in need of treatment of lung inflammation (as described herein), wherein the subject has an HRS-Fc fusion polypeptide or an expressible HRS-Fc fusion polypeptide encoding. Also included are methods that include administering a different polynucleotide. In some embodiments, the HRS-Fc fusion polypeptide is at least 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, for a sequence selected from Table H8. Alternatively, it comprises, consists of, or consists essentially of an amino acid sequence that is 100% identical. In some embodiments, HRS polypeptide comprises or SEQ ID NO: 157 (Fc-HRS (2~60) or ^{HRS FC1),} or consists of, or essentially consists.

ＢＡＬ流体細胞数を示す。個々の細胞数を、群平均を示す線を用いて示す：「ｎｏｔｘ」は、処置なしを示し、「Ｖｅｈ」は、ビヒクルによる処置を示し、「Ｄｅｘ．」は、デキサメタゾンによる処置を示し、「Ｎｉｎｔｅ．」は、ニンテダニブによる処置を示し、「ＴＡ」は、被験物質による処置を示す。統計比較を、ＰＯまたはＩＶ処置群内で一方向ＡＮＯＶＡ、続いて、Ｄｕｎｎｅｔｔのｐｏｓｔ−ｈｏｃ検定によって実施した。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１対ＩＶビヒクル。BAL fluid cell count is shown. Individual cell numbers are shown using a line showing the group means: "notx" indicates no treatment, "Veh" indicates vehicle treatment, "Dex." indicates dexamethasone treatment, “Nint.” indicates treatment with nintedanib, and “TA” indicates treatment with the test substance. Statistical comparisons were performed by one-way ANOVA within PO or IV treatment groups, followed by Dunnett's post-hoc test. *P<0.05, **p<0.01 vs IV vehicle. 組織学的線維症（アッシュクロフト）スコアを示す。各群内で採点された全ての分野からの平均データを示す（＋ＳＥＭ）：「ｎｏｔｘ」は、処置なしを示し、「Ｖｅｈ」は、ビヒクルによる処置を示し、「Ｄｅｘ．」は、デキサメタゾンによる処置を示し、「Ｎｉｎｔｅ．」は、ニンテダニブによる処置を示し、「ＴＡ」は、被験物質による処置を示す。統計比較を、ＰＯまたはＩＶ処置群内で一方向ＡＮＯＶＡ、続いて、Ｄｕｎｎｅｔｔのｐｏｓｔ−ｈｏｃ検定によって実施した。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１対それぞれのビヒクル。Histological fibrosis (Ashcroft) score is shown. Mean data from all fields scored within each group are shown (+SEM): "notx" indicates no treatment, "Veh" indicates vehicle treatment and "Dex." indicates dexamethasone. “Nint.” indicates treatment with nintedanib, and “TA” indicates treatment with a test substance. Statistical comparisons were performed by one-way ANOVA within PO or IV treatment groups, followed by Dunnett's post-hoc test. *P<0.05, **p<0.01 pair each vehicle. １５日目の毎分呼吸量（ＲＭＶ）を示す。個々のＲＭＶを、群平均を示す線を用いて示す：「Ｖｅｈ」は、ビヒクルによる処置を示し、「Ｎｉｎｔｅ．」は、ニンテダニブによる処置を示し、「ＴＡ」は、被験物質による処置を示す。被験物質の投与量を、括弧内に示す。ＩＶ群を、一方向ＡＮＯＶＡによって比較し、ＰＯ群をｔ検定によって比較した。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。The minute ventilation (RMV) on day 15 is shown. Individual RMVs are shown using a line showing the group means: “Veh” indicates vehicle treatment, “Nint.” indicates nintedanib treatment, and “TA” indicates test substance treatment. The dose of the test substance is shown in parentheses. IV groups were compared by one-way ANOVA and PO groups were compared by t-test. *P<0.05, **p<0.01, ***p<0.001. 組織学的線維症（アッシュクロフト）スコアを示す。各群内で採点された全ての分野からの平均データを示す（＋ＳＥＭ）：「Ｖｅｈ」は、ビヒクルによる処置を示し、「Ｎｉｎｔｅ．」は、ニンテダニブによる処置を示し、「ＴＡ」は、被験物質による処置を示す。被験物質の投与量を、括弧内に示す。統計比較を、ＰＯまたはＩＶ処置群内でｔ検定によって実施した。＊ｐ＜０．０５対ＩＶビヒクル。Histological fibrosis (Ashcroft) score is shown. Shows mean data from all fields scored within each group (+SEM): “Veh” indicates vehicle treatment, “Ninte.” indicates nintedanib treatment, and “TA” indicates test substance. Shows the treatment by. The dose of the test substance is shown in parentheses. Statistical comparisons were performed by t-test within PO or IV treatment groups. *P<0.05 vs. IV vehicle. 間質性／肺胞炎症細胞浸潤スコアを示す。各群内の個々の平均スコアを示す：「Ｖｅｈ」は、ビヒクルによる処置を示し、「Ｎｉｎｔｅ．」は、ニンテダニブによる処置を示し、「ＴＡ」は、被験物質による処置を示す。被験物質の投与量を、括弧内に示す。統計比較を、ＰＯまたはＩＶ処置群内でｔ検定によって実施した。＊ｐ＜０．０５対ＩＶビヒクル。Interstitial/alveolar inflammatory cell infiltration score is shown. Shown are individual mean scores within each group: “Veh” indicates vehicle treatment, “Nint.” indicates nintedanib treatment, and “TA” indicates test substance treatment. The dose of the test substance is shown in parentheses. Statistical comparisons were performed by t-test within PO or IV treatment groups. *P<0.05 vs. IV vehicle. ｐＭｏｌでの平均血清ＨＲＳ^ＦＣ１レベルを示す（＋ＳＥＭ）：研究の２２日目に終了した各群において：統計比較を、被験物質と組み合わせてビヒクル（Ｖｅｈ）、被験物質と組み合わせてニンテダニブで処置した群、または被験物質と組み合わせてピルフェニドンで処置した群間で、それぞれ、ｔ検定によって＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００５で実施した。shows the mean serum ^{HRS FC1} levels in pMol (+ SEM): in each group ended 22 study day: Statistical comparisons, vehicle (Veh) in combination with the test substance, the groups treated with nintedanib in combination with the test substance , Or between the groups treated with pirfenidone in combination with the test substance, by t-test at **p<0.01, ***p<0.001, ***p<0.0005, respectively.

本発明の実践では、特に反対のことが示されなければ、分子生物学の従来の方法および当技術分野の技術の範囲内の組換えＤＮＡ技法が用いられ、その多くが例示のために下に記載されている。そのような技法は、参考文献において十分に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔａｌ．，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ（３ｒｄＥｄｉｔｉｏｎ，２０００）、ＤＮＡＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ，ｖｏｌ．Ｉ＆ＩＩ（Ｄ．Ｇｌｏｖｅｒ，ｅｄ．）、ＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｎ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）、ＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ：ＭｅｔｈｏｄｓａｎｄＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（Ｐ．Ｈｅｒｄｅｗｉｊｎ，ｅｄ．，２００４）、ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄＨｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｈａｍｅｓ＆Ｓ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．，１９８５）、ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄＨｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ：ＭｏｄｅｒｎＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（ＢｕｚｄｉｎａｎｄＬｕｋｙａｎｏｖ，ｅｄｓ．，２００９）、ＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｎｄＴｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｈａｍｅｓ＆Ｓ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．，１９８４）、ＡｎｉｍａｌＣｅｌｌＣｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．，１９８６）、Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｒ．Ｉ．（２００５）ＣｕｌｔｕｒｅｏｆＡｎｉｍａｌＣｅｌｌｓ，ａＭａｎｕａｌｏｆＢａｓｉｃＴｅｃｈｎｉｑｕｅ，５ｔｈＥｄ．ＨｏｂｏｋｅｎＮＪ，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｂ．Ｐｅｒｂａｌ，ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＧｕｉｄｅｔｏＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ（３ｒｄＥｄｉｔｉｏｎ２０１０）、Ｆａｒｒｅｌｌ，Ｒ．，ＲＮＡＭｅｔｈｏｄｏｌｏｇｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＧｕｉｄｅｆｏｒＩｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ（３ｒｄＥｄｉｔｉｏｎ２００５）．Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ），ＣｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ＡＣＳ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，１９９７、Ｖｅｒｏｎｅｓｅ，Ｆ．，ａｎｄＪ．Ｍ．Ｈａｒｒｉｓ，Ｅｄｓ．，ＰｅｐｔｉｄｅａｎｄｐｒｏｔｅｉｎＰＥＧｙｌａｔｉｏｎ，ＡｄｖａｎｃｅｄＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙＲｅｖｉｅｗｓ，５４（４）４５３−６０９（２００２）、Ｚａｌｉｐｓｋｙ，Ｓ．，ｅｔａｌ．，“ＵｓｅｏｆｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄＰｏｌｙ（ＥｔｈｙｌｅｎｅＧｌｙｃｏｌｓ）ｆｏｒｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ”ｉｎＰｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅＧｌｙｃｏｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ：ＢｉｏｔｅｃｈｎｉｃａｌａｎｄＢｉｏｍｅｄｉｃａｌＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓを参照のこと。 In the practice of the invention, conventional methods of molecular biology and recombinant DNA techniques within the skill of the art are used, many of which are provided below for illustration, unless indicated to the contrary. Have been described. Such techniques are explained fully in the references. For example, Sambrook, et al. , Molecular Cloning: A Laboratory Manual (3rd Edition, 2000), DNA Cloning: A Practical Approach, vol. I&II (D. Glover, ed.), Oligonucleotide synthesis (N. Gait, ed., 1984), Oligonucleotide Synthesis: Methods and H. Az., H. eds., 1985), Nucleic Acid Hybridization: Modern Applications (Buzdin and Lukyanov, eds., 2009), Transcription and sell, R. H., 1981, Bran. 1986), Freshney, R.; I. (2005) Culture of Animal Cells, a Manual of Basic Technique, 5th Ed. Hoboken NJ, John Wiley & Sons, B.W. Perbal, A Practical Guide to Molecular Cloning (3rd Edition 2010), Farrell, R.; , RNA Methods: A Laboratory Guide for Isolation and Characterization (3rd Edition 2005). Poly (ethylene glycol), Chemistry and Biological Applications, ACS, Washington, 1997, Veronese, F.M. , And J. M. Harris, Eds. , Peptide and protein PEGylation, Advanced Drug Delivery Reviews, 54(4)453-609 (2002), Zalipsky, S.; , Et al. , "Use of functionalized Poly(Ethylene Glycols) for modification of polypeptides" in Polyethylene Glycol Chemistry: Biotechnical Biological Acrylic.

定義
別途の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されている意味と同じ意味を有する。任意の方法、材料、組成物、試薬、細胞、本明細書に説明されるものと類似または同等の類似または類似のものを、本開示の主題の実践または試験で使用することができるが、好ましい方法および材料が本明細書に説明される。本明細書で引用される特許文献および特許出願文献を含むが、これらに限定されない、全ての出版物および参考文献は、各個々の刊行物または参考文献が、完全に記載されたものとして本明細書中に参照により組み込まれるように具体的にかつ個々に示されるように、参照によりそれらの全体が本明細書中に組み込まれる。本出願が優先権を主張する任意の特許出願もまた、刊行物および参考文献のために上述の様式で参照によりそれらの全体が本明細書中に組み込まれる。 Definitions Unless defined otherwise, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art to which this disclosure belongs. Any method, material, composition, reagent, cell, similar or equivalent to those described herein can be used in the practice or testing of the presently disclosed subject matter, but is preferred. Methods and materials are described herein. All publications and references, including but not limited to patent documents and patent application references cited herein, are hereby incorporated by reference as if each individual publication or reference were fully set forth. References are hereby incorporated by reference in their entirety as specifically and individually indicated to be incorporated by reference. Any patent application to which this application claims priority is also hereby incorporated by reference in its entirety in the manner described above for publications and references.

本開示の目的のために、以下の用語は、以下に定義される。 For purposes of this disclosure, the following terms are defined below.

冠詞「ａ」および「ａｎ」は、冠詞の文法上の目的の１つまたは１つより多いこと（すなわち、少なくとも１つ）を指すために本明細書で使用される。例として、「構成要素」は、１つの構成要素または１つを超える構成要素を意味する。 The articles “a” and “an” are used herein to refer to one or to more than one (ie, to at least one) of the grammatical purpose of the article. By way of example, "component" means one component or more than one component.

「約」は、参照の数量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、大きさ、量、重量、または長さの３０、２５、２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１％まで変動する数量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、大きさ、量、重量、または長さを意味する。 “About” means 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, of reference quantity, level, value, number, frequency, percentage, dimension, size, quantity, weight, or length. A quantity, level, value, number, frequency, percentage, dimension, size, quantity, weight, or length that varies by 5, 4, 3, 2, or 1%.

「アンタゴニスト」または「阻害剤」は、別の薬剤または分子の生理作用を妨げるまたはそうでなければ軽減する、生物学的構造または化学剤を指す。場合によっては、アンタゴニストは、他の薬剤または分子に特異的に結合する。完全および部分的アンタゴニストが、含まれる。 “Antagonist” or “inhibitor” refers to a biological structure or chemical agent that interferes with or otherwise reduces the physiological effects of another drug or molecule. In some cases, the antagonist specifically binds to other agents or molecules. Full and partial antagonists are included.

「アゴニスト」は、別の薬剤または分子の生理作用を増加させるまたは増強する、生物学的構造または化学剤を指す。場合によっては、アゴニストは、他の薬剤または分子に特異的に結合する。完全および部分的アゴニストが、含まれる。 “Agonist” refers to a biological structure or chemical agent that increases or enhances the physiological effects of another drug or molecule. In some cases, agonists specifically bind to other agents or molecules. Full and partial agonists are included.

「アネルギー」という用語は、抗原による再刺激へのＴ細胞またはＢ細胞の応答の機能的不活性化を指す。 The term "anergy" refers to the functional inactivation of T or B cell responses to restimulation by an antigen.

本明細書で使用される、「アミノ酸」という用語は、天然に存在する、および天然に存在しないアミノ酸の両方、ならびにアミノ酸類似体および模倣体を意味するように意図されている。天然に存在するアミノ酸は、例えば、タンパク質生合成の間に利用される２０の（Ｌ）−アミノ酸、ならびにその他、例えば、４−ヒドロキシプロリン、ヒドロキシリジン、デスモシン、イソデスモシン、ホモシステイン、シトルリン、およびオルニチンなどを含む。天然に存在しないアミノ酸は、例えば、当業者に公知である、（Ｄ）−アミノ酸、ノルロイシン、ノルバリン、ｐ−フルオロフェニルアラニン、エチオニンなどを含む。アミノ酸類似体は、天然に存在する、および天然に存在しないアミノ酸の修飾体を含む。このような修飾は、例えば、アミノ酸上の化学基および部分の置換もしくは置き換え、またはアミノ酸の誘導体化によるものを含み得る。アミノ酸模倣体には、例えば、参照アミノ酸に特徴的な電荷および電荷間隔などの機能的に同様の特性を呈する有機構造体が含まれる。例えば、アルギニン（ＡｒｇまたはＲ）を模倣する有機構造体は、同様の分子空間内に位置した正電荷部分を有し、天然に存在するＡｒｇアミノ酸の側鎖のｅ−アミノ基と同程度の移動度を有し得る。模倣体は、アミノ酸またはアミノ酸官能基の最適な間隔および電荷相互作用を維持するように拘束された構造も含む。当業者は、何の構造が機能的に等価なアミノ酸類似体およびアミノ酸模倣体を構成するかを知っており、または求めることができる。 As used herein, the term "amino acid" is intended to mean both naturally occurring and non-naturally occurring amino acids, as well as amino acid analogs and mimetics. Naturally occurring amino acids include, for example, the 20 (L)-amino acids utilized during protein biosynthesis, as well as others such as 4-hydroxyproline, hydroxylysine, desmosine, isodesmosine, homocysteine, citrulline, and ornithine. Including etc. Non-naturally occurring amino acids include, for example, (D)-amino acids, norleucine, norvaline, p-fluorophenylalanine, ethionine, etc., which are known to those skilled in the art. Amino acid analogs include modifications of naturally occurring and non-naturally occurring amino acids. Such modifications may include, for example, by substituting or substituting chemical groups and moieties on amino acids, or by derivatizing amino acids. Amino acid mimetics include, for example, organic structures that exhibit functionally similar properties such as charge and charge spacing characteristic of a reference amino acid. For example, organic structures that mimic arginine (Arg or R) have positively charged moieties located in a similar molecular space, and transfer as much as the side chain e-amino group of naturally occurring Arg amino acids. Can have degrees. Mimetics also include constrained structures that maintain optimal spacing and charge interactions of amino acids or amino acid functional groups. One of ordinary skill in the art knows or can determine what structures constitute functionally equivalent amino acid analogs and amino acid mimetics.

本明細書で使用される、疾患または有害反応を生じさせる「リスクのある」対象は、検出可能な疾患または疾患の症状を有していても、有していなくてもよく、本明細書に記載の処置方法の前に検出可能な疾患または疾患の症状を示していても、示していなくてもよい。「リスクのある」は、対象が、本明細書に記載の、かつ当技術分野で公知の、疾患を生じさせることと相関する測定可能なパラメータである１つ以上のリスク要因を有することを表す。これらのリスク要因の１つ以上を有する対象は、これらのリスク要因の１つ以上を有さない対象よりも、疾患または有害反応を生じさせる確率が高い。 As used herein, a “at risk” subject that causes a disease or an adverse reaction may or may not have detectable disease or disease symptoms. It may or may not show detectable disease or symptoms of disease prior to the method of treatment described. "At risk" means that the subject has one or more risk factors that are measurable parameters described herein and known in the art that correlate with causing a disease. .. Subjects with one or more of these risk factors are more likely to develop a disease or adverse reaction than subjects without one or more of these risk factors.

「コード配列」とは、遺伝子のポリペプチド生成物のコードに寄与する任意の核酸配列を意味する。これに対し、「非コード配列」という用語は、遺伝子のポリペプチド生成物のコードに直接寄与しない任意の核酸配列を指す。 By "coding sequence" is meant any nucleic acid sequence that contributes to the code for the polypeptide product of a gene. In contrast, the term "non-coding sequence" refers to any nucleic acid sequence that does not contribute directly to the code for the polypeptide product of a gene.

「結合」という用語は、例えば、共有結合、静電気、疎水性、ならびにイオン性および／または水素結合の相互作用による、２つの分子間の直接会合を指し、塩架橋および水架橋などの相互作用を含む。 The term “bond” refers to a direct association between two molecules, for example by covalent, electrostatic, hydrophobic, and ionic and/or hydrogen bond interactions, such as salt and water bridges. Including.

「クローン除去」という用語は、自己反応性Ｔ細胞の除去（例えば、喪失または死）を指す。クローン除去は、胸腺内もしくは周辺内、または両方で主として実現され得る。 The term "clonal depletion" refers to the removal (eg, loss or death) of autoreactive T cells. Clonal removal can be achieved primarily within the thymus or within the periphery, or both.

本開示全体にわたって、文脈による別段の要求のない限り、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という単語は、述べたステップもしくは要素、またはステップもしくは要素の群を含めることを暗示するが、任意の他のステップもしくは要素、またはステップもしくは要素の群の除外を暗示しないと理解されよう。 Throughout this disclosure, the word "comprise", "comprises", and "comprising", unless stated otherwise by context, refers to the step or element mentioned, or to the step or element It is understood that the inclusion of a group is implied but not the exclusion of any other step or element or group of steps or elements.

「からなる」とは、「からなる」という語句に続くものを含み、それに限定されることを意味する。したがって、「からなる」という語句は、列挙された要素が要求され、または必須であり、他の要素はまったく存在し得ないことを示す。「本質的に〜からなる」とは、語句の後に列挙された任意の要素を含むことを意味し、列挙された要素についての開示で指定された活性または作用を妨げず、またはそれに寄与しない他の要素に限定される。したがって、「本質的に〜からなる」という語句は、列挙された要素が要求され、または必須であるが、他の要素は、必要に応じてであり、これらが列挙された要素の活性または作用に実質的に影響するか否かに応じて存在しても、または存在しなくてもよいことを示す。 By "consisting of" is meant including, but not limited to, what follows the phrase "consisting of." Thus, the phrase “consisting of” indicates that the listed element is required or required and that no other element can be present at all. By "consisting essentially of" is meant to include any element listed after the phrase and that does not interfere with or contribute to the activity or action specified in the disclosure for the listed element. Limited to the elements of. Thus, the phrase "consisting essentially of" means that the listed elements are required or required, while other elements are as necessary, and that these activities or actions of the listed elements are It may or may not be present depending on whether it substantially affects

「内毒素を含まない」または「内毒素を実質的に含まない」という用語は、概して、多くとも微量（例えば、対象に対して臨床的に有害な生理学的影響を有さない量）の内毒素、好ましくは検出不能な量の内毒素を含む、組成物、溶媒、および／または容器を指す。内毒素が、エンドトキシンは、リステリア・モノサイトゲネスなどのグラム陽性細菌においても見出され得るが、内毒素は、ある特定の微生物、例えば、細菌、典型的にはグラム陰性細菌と関連する毒素である。最も流行の内毒素は、種々のグラム陰性細菌の外膜において見出されるリポポリサッカリド（ＬＰＳ）またはリポ−オリゴ−サッカリド（ＬＯＳ）であり、これらの細菌が疾患を引き起こす能力において中心的な病原性特徴を示す。ヒトにおける少量の内毒素は、他の有害な生理学的影響の中でも、発熱、血圧の低下、ならびに炎症および凝固の活性化を生じ得る。 The term "endotoxin-free" or "substantially endotoxin-free" generally refers to at most traces (eg, an amount that has no clinically deleterious physiological effects on a subject). Refers to a composition, solvent, and/or container that comprises a toxin, preferably an undetectable amount of endotoxin. Endotoxins are endotoxins that are found in Gram-positive bacteria such as Listeria monocytogenes, but endotoxins are toxins associated with certain microorganisms, such as bacteria, typically Gram-negative bacteria. is there. The most prevalent endotoxins are the lipopolysaccharides (LPS) or lipo-oligo-saccharides (LOS) found in the outer membrane of various Gram-negative bacteria, which are central pathogens in their ability to cause disease. The characteristics are shown. Small amounts of endotoxin in humans can result in fever, decreased blood pressure, and activation of inflammation and coagulation, among other deleterious physiological effects.

したがって、薬学的生成物では、少量でさえも、ヒトにおいて有害な影響を引き起こし得るため、薬物製品および／または薬物容器から、内毒素のほとんどまたは全ての痕跡を除去することが望ましい場合が多い。３００℃を超える温度が、ほとんどの内毒素を分解するために典型的には必要とされるので、発熱物質除去（ｄｅｐｙｒｏｇｅｎａｔｉｏｎ）オーブンが、この目的のために使用され得る。例えば、シリンジまたはバイアルなどの主要な包装材料に基づいて、２５０℃のガラス温度と３０分間の保持時間との組み合わせが、内毒素レベルにおける３ｌｏｇの低減を達成するために十分である場合が多い。本明細書に記載され、当該技術分野で既知の、例えば、クロマトグラフィーおよび濾過方法を含む、内毒素を除去する他の方法が、企図される。 Therefore, it is often desirable to remove most or all traces of endotoxin from a drug product and/or drug container, as pharmaceutical products, even small amounts, can cause adverse effects in humans. A temperature above 300° C. is typically required to decompose most endotoxins, so a pyrogenation oven can be used for this purpose. For example, based on major packaging materials such as syringes or vials, a combination of a glass temperature of 250° C. and a hold time of 30 minutes is often sufficient to achieve a 3 log reduction in endotoxin levels. Other methods of endotoxin removal are contemplated, including those described herein and known in the art, including, for example, chromatography and filtration methods.

内毒素は、当該技術分野で既知の通常の技術を用いて検出され得る。例えば、カブトガニからの血液を利用する、リムルスアメボサイト溶解物アッセイは、内毒素の存在を検出するための非常に高感度のアッセイである。この試験では、非常に低いレベルのＬＰＳが、この反応を増幅する強力な酵素カスケードに起因して、リムルス溶解物の検出可能な凝固を引き起こし得る。内毒素はまた、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によっても定量され得る。内毒素を実質的に含まないように、内毒素レベルは、活性化合物の約０．００１、０．００５、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０８、０．０９、０．１、０．５、１．０、１．５、２、２．５、３、４、５、６、７、８、９、または１０ＥＵ／ｍｇ未満であり得る。典型的には、１ｎｇのリポポリサッカリド（ＬＰＳ）は、約１〜１０ＥＵに対応する。 Endotoxin can be detected using conventional techniques known in the art. For example, the Limulus amebocyte lysate assay, which utilizes blood from horseshoe crab, is a very sensitive assay for detecting the presence of endotoxin. In this test, very low levels of LPS can cause detectable coagulation of Limulus lysates due to the strong enzymatic cascade that amplifies this reaction. Endotoxin can also be quantified by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Endotoxin levels are about 0.001, 0.005, 0.01, 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0. 06, 0.08, 0.09, 0.1, 0.5, 1.0, 1.5, 2, 2.5, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 EU/mg Can be less than. Typically, 1 ng of lipopolysaccharide (LPS) corresponds to about 1-10 EU.

本明細書で使用される、「細胞を接触させること」、「導入すること」、または「送達すること」という用語は、当技術分野で慣例的な方法、例えば、トランスフェクション（例えば、リポソーム、リン酸カルシウム、ポリエチレンイミン）、エレクトロポレーション（例えば、ヌクレオフェクション）、マイクロインジェクション）、または対象への投与によって、細胞への本明細書に記載の薬剤（例えば、ポリペプチド剤、ポリヌクレオチド剤）の送達を含む。 As used herein, the term "contacting a cell", "introducing" or "delivering" refers to methods conventional in the art, such as transfection (eg liposomes, Calcium phosphate, polyethyleneimine), electroporation (eg, nucleofection), microinjection), or administration to a subject of a agent (eg, polypeptide agent, polynucleotide agent) described herein into cells. Including delivery.

「細胞透過性ペプチド」（ＣＰＰ）または「細胞取り込みを増強するペプチド部分」という用語は、互換的に使用され、「輸送ペプチド」、「担体ペプチド」、または「ペプチド導入ドメイン」ともまた呼ばれる、カチオン性細胞透過性ペプチドを指す。いくつかの実施形態では、ペプチドは、全身投与されると、所与の細胞培養集団の細胞のうちの約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくは１００％、または少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくは１００％の細胞内の細胞（例えば、筋肉細胞）透過を誘導し、またはインビボにおいて、他の投与形態において複数の組織（例えば、筋肉組織）内の高分子のトランスロケーションを可能とする能力を有する。いくつかの実施形態では、ＣＰＰは、式−［（Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ’ＮＨ）_ｍ］Ｒ’’（式中、Ｒ’は、天然に存在するアミノ酸またはその１−もしくは２−炭素類似体の側鎖であり、Ｒ’’は、水素またはアシルから選択され、ｍは、最大で５０の整数である）のＣＰＰである。さらなるＣＰＰは、当該技術分野で公知であり、例えば、米国特許出願第２０１０／００１６２１５号（参照によりその全体が組み込まれる）において開示されている。いくつかの実施形態では、ｍは、１〜５０から選択される整数であり、ｍが１であるとき、部分は、単一のアミノ酸またはその誘導体である。本明細書に記載のポリヌクレオチド剤（例えば、アンチセンス、ＲＮＡｉ剤）のいずれも、ＣＰＰにコンジュゲート化され、例えば、標的細胞、例えば、筋肉細胞への取り込みを改善することができる。 The term "cell penetrating peptide" (CPP) or "peptide moiety that enhances cellular uptake" is used interchangeably and is also referred to as "transport peptide", "carrier peptide", or "peptide transduction domain", a cation Refers to a cell-penetrating peptide. In some embodiments, the peptide, when administered systemically, is about 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, or 90% of the cells of a given cell culture population. Inducing 100%, or at least about 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, or 100% intracellular (eg, muscle cell) penetration, or in vivo, Other dosage forms have the ability to allow macromolecular translocation within multiple tissues (eg, muscle tissue). In some embodiments, CPP has the formula -[(C(O)CHR'NH) _m ]R", where R'is a naturally occurring amino acid or a 1- or 2-carbon analog thereof. Is a side chain of R, R″ is selected from hydrogen or acyl, and m is an integer up to 50). Additional CPPs are known in the art and are disclosed, for example, in US Patent Application No. 2010/0016215, which is incorporated by reference in its entirety. In some embodiments, m is an integer selected from 1-50 and when m is 1, the moiety is a single amino acid or derivative thereof. Any of the polynucleotide agents (eg, antisense, RNAi agents) described herein can be conjugated to CPP to improve uptake, eg, into target cells, eg muscle cells.

「半数効果濃度」または「ＥＣ５０」という用語は、いくらかの特定された曝露時間の後に、ベースラインと最大との間の中間の反応を誘導する、本明細書に記載される薬剤（例えば、ＨＲＳポリペプチドまたは他の薬剤）の濃度を指し、したがって、段階的用量反応曲線のＥＣ５０は、その最大効果の５０％が観察される化合物の濃度を表す。ＥＣ５０はまた、インビボで最大効果の５０％を得るために必要とされる血漿濃度も表す。同様に、「ＥＣ９０」は、その最大効果の９０％が観察される薬剤または組成物の濃度を指す。「ＥＣ９０」は、「ＥＣ５０」およびＨｉｌｌ勾配から計算することができるか、または当該技術分野における慣用的な知識を用いて、データから直接決定され得る。いくつかの実施形態では、薬剤のＥＣ５０は、約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、または５００ｎＭ未満である。いくつかの実施形態では、生物治療用組成物は、約１ｎＭ以下のＥＣ５０値を有することになる。 The term "half-effective concentration" or "EC50" refers to an agent described herein that induces an intermediate response between baseline and maximum after some specified exposure time (eg, HRS. Polypeptide or other drug) and thus the EC50 of the stepwise dose response curve represents the concentration of the compound at which 50% of its maximal effect is observed. The EC50 also represents the plasma concentration required to obtain 50% of the maximal effect in vivo. Similarly, "EC90" refers to the concentration of a drug or composition at which 90% of its maximum effect is observed. The "EC90" can be calculated from the "EC50" and the Hill slope, or can be determined directly from the data using routine knowledge in the art. In some embodiments, the EC50 of a drug is about 0.01, 0.05, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0. .8, 0.9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30 , 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, or less than 500 nM. In some embodiments, the biotherapeutic composition will have an EC50 value of about 1 nM or less.

「相同性」とは、同一であるか、または保存的置換を構成するアミノ酸の百分率数を指す。相同性は、ＧＡＰなどの配列比較プログラムを使用して決定され得る（Ｄｅｖｅｒａｕｘｅｔａｌ．，１９８４，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ１２，３８７−３９５）。このようにして、本明細書に引用される配列に対して類似または実質的に異なる長さの配列を、アラインメント中にギャップを挿入することによって比較することができ、このようなギャップは、例えば、ＧＡＰによって使用される比較アルゴリズムによって決定される。 “Homology” refers to the percentage of amino acids that are either identical or that make up conservative substitutions. Homology can be determined using sequence comparison programs such as GAP (Deveraux et al., 1984, Nucleic Acids Research 12, 387-395). In this way, sequences of similar or substantially different lengths to the sequences referred to herein can be compared by inserting gaps in the alignment, such gaps being e.g. , GAP, as determined by the comparison algorithm used.

「先天性免疫応答」という用語は、病原体によって感染から宿主を防御する、免疫細胞（マクロファージおよびナチュラルキラー細胞（ＮＫ）を含む）の応答、ならびにサイトカイン発現および放出（例えば、インターフェロンおよびインターフェロン−シグナル伝達）を調節し、細胞死を誘導し、タンパク質合成を阻害する関連機構を指す。 The term “innate immune response” refers to the response of immune cells, including macrophages and natural killer cells (NK), that protects the host from infection by pathogens, as well as cytokine expression and release (eg, interferon and interferon-signalling). ), induce cell death, and inhibit protein synthesis.

「単離された」とは、その天然状態においてそれに通常付随する成分を、実質的にまたは本質的に含まない材料を意味する。例えば、本明細書で使用される、「単離されたポリヌクレオチド」、「単離されたオリゴヌクレオチド」、または「単離されたオリゴヌクレオチド」は、天然に存在する状態においてポリヌクレオチドに隣接する配列から精製または取り出されたポリヌクレオチド、例えば、ゲノム中でその断片に隣接する配列から取り出されたＤＮＡ断片を指し得る。「単離する」という用語は、それが細胞に関するとき、供給源対象（例えば、ポリヌクレオチド反復疾患に罹患している対象）からの細胞（例えば、線維芽細胞、リンパ芽球）の精製を指す。ｍＲＮＡまたはタンパク質の文脈では、「単離する」は、供給源、例えば、細胞からのｍＲＮＡまたはタンパク質の回収を指す。 "Isolated" means material that is substantially or essentially free of the components that normally accompany it in its natural state. For example, as used herein, an "isolated polynucleotide," "isolated oligonucleotide," or "isolated oligonucleotide" is contiguous with the polynucleotide in its naturally occurring state. It may refer to a polynucleotide that has been purified or removed from a sequence, eg, a DNA fragment removed from the sequence that flanks that fragment in the genome. The term "isolate", as it relates to cells, refers to the purification of cells (eg, fibroblasts, lymphoblasts) from a source subject (eg, a subject suffering from a polynucleotide repeat disease). . In the context of mRNA or protein, "isolate" refers to the recovery of mRNA or protein from a source, eg, a cell.

「調節する」という用語には、任意に、定義されたおよび／または統計的に有意な量によって１つ以上の定量可能なパラメータを「増大させる」または「減少させる」ことが含まれる。「増大させる」もしくは「増大させること」、「増強する」もしくは「増強すること」、または「刺激する」もしくは「刺激すること」とは、概して、薬剤／化合物なしまたは対照化合物によって引き起こされる応答と比較して、細胞または対象においてより大きな生理学的応答（すなわち、下流の効果）を生じるまたは引き起こす１つ以上の薬剤または組成物の能力を指す。関連の生理学的または細胞応答（インビボまたはインビトロ）は、当業者には明らかであり、組織またはそれを必要とする対象において骨格筋量の増加を含み得る。「増大した」または「増強された」量は、典型的には、「統計的に有意な」量であり、薬剤／化合物なし（薬剤の不在）または対照化合物によって生じる量の１．１、１．２、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０、４０、５０倍、またはそれ以上（例えば、５００、１０００倍）、１との間のおよび１を上回るあらゆる整数および小数点を含む（例えば、１．５、１．６、１．７、１．８）である増加を含んでもよい。「減少する」または「阻害する」という用語は、概して、診断技術の日常技法によって測定されるとき、本明細書に記載される、標的遺伝子または疾患もしくは状態の症状の発現などの関連の生理学的または細胞応答を「低下させる」ための１つ以上の薬剤または組成物の能力に関し得る。関連の生理学的または細胞応答（インビボまたはインビトロ）は、当業者には明らかであり、本明細書に記載される、肺の炎症またはＩＬＤの症状または病理の減少または改善を含み得る。応答の「減少」は、薬剤もしくは組成物なし、または対照剤もしくは組成物によって生じさせる応答と比較して、「統計的に有意」であり得、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％の減少を含み得、中間の全ての整数を含む。 The term "modulate" optionally includes "increasing" or "decreasing" one or more quantifiable parameters by a defined and/or statistically significant amount. “Increasing” or “increasing”, “enhancing” or “enhancing”, or “stimulating” or “stimulating” generally refers to a response elicited by no drug/compound or by a control compound. By comparison, refers to the ability of one or more agents or compositions to produce or elicit a greater physiological response (ie, a downstream effect) in a cell or subject. Relevant physiological or cellular responses (in vivo or in vitro) will be apparent to those of skill in the art and may include an increase in skeletal muscle mass in the tissue or subject in need thereof. An "increased" or "enhanced" amount is typically a "statistically significant" amount that is 1.1, 1 of that produced by no drug/compound (absence of drug) or control compound. Between 2, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50 times or more (eg, 500, 1000 times), between 1 and It may include any integer greater than 1 and increments that include a decimal point (eg, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8). The term “reduce” or “inhibit” generally refers to a target gene or associated physiological condition, such as the manifestation of symptoms of a disease or condition, as described herein, as measured by routine techniques of diagnostic technology. Or it may relate to the ability of one or more agents or compositions to "reduce" a cellular response. Relevant physiological or cellular responses (in vivo or in vitro) will be apparent to those of skill in the art and may include reduction or amelioration of the symptoms or pathology of lung inflammation or ILD as described herein. A "decrease" in response can be "statistically significant" as compared to a response produced by no drug or composition, or a control agent or composition, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 25% , 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, or 100% reduction Get, including all intermediate integers.

ある特定の実施形態では、組成物中の任意の所与の薬剤の「純度」は、具体的に定義することができる。例えば、ある特定の組成物は、例えば、かつ決して限定的ではなく、化合物を分離、同定、および定量化するのに生化学および分析化学において頻繁に使用されるカラムクロマトグラフィーの周知の形態である高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定した場合、中間の全ての少数を含めて、少なくとも８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％の純度である薬剤を含み得る。 In certain embodiments, the "purity" of any given agent in the composition can be specifically defined. For example, certain compositions are, for example and by no means limiting, a well known form of column chromatography frequently used in biochemistry and analytical chemistry to separate, identify, and quantify compounds. At least 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, or 100%, including all intermediate minorities, as measured by high performance liquid chromatography (HPLC). It may include a drug that is pure.

「脂質ナノ粒子」または「固体脂質ナノ粒子」は、約１０〜約１０００ナノメートルの平均直径を有し、かつ脂溶性分子を可溶化することができる固体脂質コアマトリックスを含む１つ以上の球状ナノ粒子を指す。脂質コアは、界面活性剤（例えば、乳化剤）によって安定化され、トリグリセリド（例えば、トリステアリン）、ジグリセリド（例えば、ベヘン酸グリセロール）、モノグリセリド（例えば、グリセロールモノステアレート）、脂肪酸（例えば、ステアリン酸）、ステロイド（例えば、コレステロール）、およびワックス（例えば、パルミチン酸セチル）のうちの１つ以上を含み得、これらの組み合わせを含む。脂質ナノ粒子は、例えば、Ｐｅｔｒｉｌｌｉｅｔａｌ．，ＣｕｒｒＰｈａｒｍＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５：８４７−５５，２０１４、ならびに米国特許第６，２１７，９１２号、同第６，８８１，４２１号、同第７，４０２，５７３号、同第７，４０４，９６９号、同第７，５５０，４４１号、同第７，７２７，９６９号、同第８，００３，６２１号、同第８，６９１，７５０号、同第８，８７１，５０９号、同第９，０１７，７２６号、同第９，１７３，８５３号、同第９，２２０，７７９号、同第９，２２７，９１７号、および同第９，２７８，１３０号（これらは、参照によりそれらの全体が組み込まれる）において記載されている。 “Lipid nanoparticles” or “solid lipid nanoparticles” are one or more spheres having an average diameter of about 10 to about 1000 nanometers and comprising a solid lipid core matrix capable of solubilizing lipophilic molecules. Refers to nanoparticles. The lipid core is stabilized by a surfactant (eg, emulsifier), triglyceride (eg, tristearin), diglyceride (eg, glycerol behenate), monoglyceride (eg, glycerol monostearate), fatty acid (eg, stearic acid). ), steroids (eg, cholesterol), and waxes (eg, cetyl palmitate), and combinations thereof. Lipid nanoparticles are described, for example, in Petrilli et al. , Curr Pharm Biotechnol. 15:847-55,2014, and U.S. Pat. Nos. 6,217,912, 6,881,421, 7,402,573, 7,404,969, and 7, 550,441, 7,727,969, 8,003,621, 8,691,750, 8,871,509, 9,017,726, Nos. 9,173,853, 9,220,779, 9,227,917, and 9,278,130 (these are incorporated by reference in their entirety). Have been described.

本明細書で使用される、「核酸塩基」（Ｎｕ）、「塩基対合部分」または「塩基」は、互換的に使用され、天然ＤＮＡまたはＲＮＡにおいて見出されるプリンまたはピリミジン塩基（ウラシル、チミン、アデニン、シトシン、およびグアニン）、ならびに改善された特性、例えば、オリゴヌクレオチドへの結合親和性を付与する天然に存在するプリンおよびピリミジンの類似体を指す。例示的な類似体は、ヒポキサンチン（ヌクレオシドイノシンの塩基構成成分）、２，６−ジアミノプリン、５−メチルシトシン、Ｃ５−プロピニル修飾ピリミジン、９−（アミノエトキシ）フェノキサジン（Ｇ−クランプ）などを含む。 As used herein, "nucleobase" (Nu), "base pairing moiety" or "base" are used interchangeably and are purine or pyrimidine bases (uracil, thymine, found in natural DNA or RNA, Adenine, cytosine, and guanine), as well as naturally occurring purine and pyrimidine analogs that confer improved properties such as binding affinity for oligonucleotides. Exemplary analogs include hypoxanthine (base component of nucleoside inosine), 2,6-diaminopurine, 5-methylcytosine, C5-propynyl modified pyrimidine, 9-(aminoethoxy)phenoxazine (G-clamp), and the like. including.

塩基対合部分のさらなる例としては、それらのそれぞれのアミノ基を、アシル保護基で保護した、ウラシル、チミン、アデニン、シトシン、グアニン、およびヒポキサンチン、２−フルオロウラシル、２−フルオロシトシン、５−ブロモウラシル、５−ヨードウラシル、２，６−ジアミノプリン、アザシトシン、シュードイソシトシンおよびシュードウラシルなどのピリミジン類似体、ならびに８置換プリン、８置換キサンチン、または８置換ヒポキサンチン（後者の２つは、天然の分解産物である）などの他の修飾核酸塩基が挙げられるが、これらに限定されない。ＣｈｉｕａｎｄＲａｎａ，ＲＮＡ，２００３，９，１０３４−１０４８、Ｌｉｍｂａｃｈｅｔａｌ．ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ，１９９４，２２，２１８３−２１９６、およびＲｅｖａｎｋａｒａｎｄＲａｏ，ＣｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅＮａｔｕｒａｌＰｒｏｄｕｃｔｓＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｖｏｌ．７，３１３において開示されている修飾ヌクレオ塩基もまた企図される。 Further examples of base-pairing moieties are uracil, thymine, adenine, cytosine, guanine, and hypoxanthine, 2-fluorouracil, 2-fluorocytosine, 5-, each of which has its respective amino group protected with an acyl protecting group. Pyrimidine analogs such as bromouracil, 5-iodouracil, 2,6-diaminopurine, azacytosine, pseudoisocytosine and pseudouracil, and 8-substituted purines, 8-substituted xanthines, or 8-substituted hypoxanthines (the latter two are Natural modified products) and other modified nucleobases, such as, but not limited to. Chiu and Rana, RNA, 2003, 9, 1034-1048, Limbach et al. Nucleic Acids Research, 1994, 22, 2183-2196, and Revankar and Rao, Comprehensive Natural Products Chemistry, vol. Modified nucleobases disclosed in 7,313 are also contemplated.

塩基対合部分のさらなる例としては、１つ以上のベンゼン環を付加したサイズ拡大型核酸塩基が挙げられるが、これらに限定されない。ＧｌｅｎＲｅｓｅａｒｃｈのカタログ（ｗｗｗ．ｇｌｅｎｒｅｓｅａｒｃｈ．ｃｏｍ）、ＫｒｕｅｇｅｒＡＴｅｔａｌ，Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．，２００７，４０，１４１−１５０、Ｋｏｏｌ，ＥＴ，Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．，２００２，３５，９３６−９４３、ＢｅｎｎｅｒＳ．Ａ．，ｅｔａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．，２００５，６，５５３−５４３、Ｒｏｍｅｓｂｅｒｇ，Ｆ．Ｅ．，ｅｔａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，２００３，７，７２３−７３３、Ｈｉｒａｏ，Ｉ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，２００６，１０，６２２−６２７において記載されている核塩基置換は、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドの合成に有用であると企図される。サイズ拡大型核酸塩基の例を、下記に示す。
Further examples of base-pairing moieties include, but are not limited to, size-enhancing nucleobases with one or more benzene rings added. The Glen Research catalog (www.glenresearch.com), Kruger AT et al, Acc. Chem. Res. , 2007, 40, 141-150, Kool, ET, Acc. Chem. Res. , 2002, 35, 936-943, Benner S. et al. A. , Et al. , Nat. Rev. Genet. , 2005, 6, 553-543, Romesberg, F.; E. , Et al. Curr. Opin. Chem. Biol. , 2003, 7, 723-733, Hirao, I.; Curr. Opin. Chem. Biol. , 2006, 10, 622-627 are contemplated to be useful in the synthesis of the oligonucleotides described herein. Examples of size-expanding nucleobases are shown below.

リボース、糖類似体、またはモルホリノに共有結合的に連結された核酸塩基は、ヌクレオシドを含む。「ヌクレオチド」は、１つのリン酸基と一緒にヌクレオシドからなる。リン酸基は、互いに隣接するヌクレオチドに共有結合的に連結し、オリゴマーを形成する。 Nucleobases covalently linked to ribose, sugar analogs, or morpholinos include nucleosides. A "nucleotide" consists of a nucleoside with one phosphate group. The phosphate groups covalently link adjacent nucleotides to each other to form an oligomer.

「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、本明細書で互換的に使用され、アミノ酸残基のポリマーならびにそのバリアントおよび合成類似体を指す。したがって、これらの用語は、１つ以上のアミノ酸残基が、対応する天然に存在するアミノ酸の化学的類似体などの合成の天然に存在しないアミノ酸であるアミノ酸ポリマーに、ならびに天然に存在するアミノ酸ポリマーであるアミノ酸ポリマーに適用する。 The terms "polypeptide" and "protein" are used interchangeably herein and refer to polymers of amino acid residues and variants and synthetic analogs thereof. Thus, these terms refer to amino acid polymers in which one or more amino acid residues are synthetic, non-naturally occurring amino acids, such as chemical analogs of the corresponding naturally occurring amino acids, as well as naturally occurring amino acid polymers. Is applicable to amino acid polymers.

「ポリヌクレオチド」および「核酸」という用語は、ｍＲＮＡ、ＲＮＡ、ｃＲＮＡ、ｃＤＮＡ、およびＤＮＡを含む。この用語は、典型的には、少なくとも１０塩基長のポリマー形態のヌクレオチド、リボヌクレオチドまたはデオキシヌクレオチドのいずれか、あるいはいずれかの型のヌクレオチドの修飾形態を指す。この用語は、ＤＮＡの一本鎖および二本鎖形態を含む。「単離されたＤＮＡ」および「単離されたポリヌクレオチド」、および「単離された核酸」という用語は、特定の種の全ゲノムＤＮＡを含まない単離された分子を指す。したがって、ポリペプチドをコードする単離されたＤＮＡセグメントは、１つ以上のコード配列を含むが、ＤＮＡセグメントが得られる種の全ゲノムＤＮＡから実質的には離れて単離されるか、またはそれが存在しないように精製されているＤＮＡセグメントを指す。ポリペプチドをコードしない、非コードポリヌクレオチド（例えば、プライマー、プローブ、オリゴヌクレオチド）も含まれる。例えば、発現ベクター、ウイルスベクター、プラスミド、コスミド、ファージミド、ファージ、ウイルスなどを含む、組換えベクターも含まれる。 The terms "polynucleotide" and "nucleic acid" include mRNA, RNA, cRNA, cDNA, and DNA. The term typically refers to polymeric forms of nucleotides of at least 10 bases in length, either ribonucleotides or deoxynucleotides, or modified forms of either type of nucleotide. The term includes single and double stranded forms of DNA. The terms "isolated DNA" and "isolated polynucleotide" and "isolated nucleic acid" refer to an isolated molecule that is free of total genomic DNA of a particular species. Thus, an isolated DNA segment encoding a polypeptide comprises one or more coding sequences, but is isolated substantially away from the total genomic DNA of the species from which the DNA segment is obtained, or Refers to a DNA segment that has been purified to be absent. Non-coding polynucleotides that do not encode a polypeptide (eg, primers, probes, oligonucleotides) are also included. Also included are recombinant vectors, including, for example, expression vectors, viral vectors, plasmids, cosmids, phagemids, phages, viruses and the like.

さらなるコードまたは非コード配列は、本明細書に記載されるポリヌクレオチド内に存在してもよいが、存在している必要はなく、またポリヌクレオチドは、他の分子および／または支持体材料と結合していてもよいが、結合している必要はない。したがって、ポリヌクレオチドまたは発現可能なポリヌクレオチドは、コード配列自体の長さに関係なく、他の配列、例えば、発現対照配列と組み合わせてもよい。 Additional coding or non-coding sequences may, but need not, be present in the polynucleotides described herein, and the polynucleotides will be associated with other molecules and/or support materials. It may, but need not be bound. Thus, a polynucleotide or expressible polynucleotide may be combined with other sequences, such as expression control sequences, regardless of the length of the coding sequence itself.

「発現対照配列」は、核酸、または対応するアミノ酸の調節配列を含み、例えば、転写または翻訳に影響を及ぼす能力を有する、プロモーター、リーダー、エンハンサー、イントロン、ＲＮＡのための認識モチーフ、またはＤＮＡ結合タンパク質、ポリアデニル化シグナル、ターミネーター、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、分泌シグナル、細胞内局在性シグナルなど、または宿主細胞中のコード配列の細胞内もしくは細胞部位が含まれる。例示的な発現対照配列は、Ｇｏｅｄｄｅｌ；ＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ１８５，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，ＳａｎＤｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．（１９９０）において記載されている。 An "expression control sequence" comprises a nucleic acid, or a regulatory sequence of the corresponding amino acid, and is, for example, a promoter, leader, enhancer, intron, recognition motif for RNA, or DNA binding that has the ability to affect transcription or translation. Included are proteins, polyadenylation signals, terminators, internal ribosome entry sites (IRES), secretory signals, intracellular localization signals, etc., or intracellular or cellular sites of coding sequences in host cells. An exemplary expression control sequence is Goeddel; Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, Calif. (1990).

「プロモーター」は、細胞中のＲＮＡポリメラーゼを結合し、下流（３’方向）コード配列の転写を開始することができる、ＤＮＡ調節領域である。本明細書で使用される、プロモーター配列は、その３’末端で転写開始部位によって結合されており、上流（５’方向）に伸長し、バックグラウンドを超えて検出可能なレベルで転写を開始させるに必要な最小数の塩基またはエレメントを含む。プロモーター配列内には、（ヌクレアーゼＳ１でのマッピングによって便宜上規定される）転写開始部位、ならびにＲＮＡポリメラーゼの結合を担うタンパク質結合ドメイン（コンセンサス配列）が見られ得る。真核性プロモーターは、必ずしも「ＴＡＴＡ」ボックスおよび「ＣＡＴ」ボックスを含むわけではないが、しばしば、含むことができる。原核生物プロモーターは、−１０および−３５コンセンサス配列に加えて、Ｓｈｉｎｅ−Ｄａｌｇａｒｎｏ配列を含む。 A "promoter" is a DNA regulatory region capable of binding RNA polymerase in a cell and initiating transcription of a downstream (3' direction) coding sequence. As used herein, a promoter sequence is bound at its 3'end by a transcription start site, extends upstream (5' direction), and initiates transcription at a detectable level above background. Contains the minimum number of bases or elements required for Within the promoter sequence will be found a transcription initiation site (conveniently defined by mapping with nuclease S1), as well as protein binding domains (consensus sequences) responsible for the binding of RNA polymerase. Eukaryotic promoters often, but not necessarily, include "TATA" and "CAT" boxes. Prokaryotic promoters contain Shine-Dalgarno sequences in addition to the -10 and -35 consensus sequences.

様々な異なる源から構造性、誘導性、および抑制性プロモーターを含む、多数のプロモーターは、当該技術分野でよく知られている。代表的な源には、例えば、ウイルス性、哺乳動物、昆虫、植物、酵母菌、および細菌性細胞型）が含まれ、これらの供給源からの好適なプロモーターは、容易に入手可能であるか、またはオンラインで、もしくは、例えば、ＡＴＣＣなどの寄託機関、ならびに他の商業的または個々の供給源から公に入手可能な配列に基づいて合成的に作製することができる。プロモーターは、一方向性（すなわち、１つの方向で転写を開始する）または二方向性（すなわち、３’または５’方向のいずれかで転写を開始する）であり得る。プロモーターの非限定的な例には、例えば、Ｔ７細菌性発現システム、ｐＢＡＤ（ａｒａＡ）細菌性発現システム、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＲＳＶプロモーターが含まれる。誘導性プロモーターには、Ｔｅｔシステム（米国特許第５，４６４，７５８号および同第５，８１４，６１８号）、エクジソン誘導性システム（Ｎｏｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（１９９６）９３（８）：３３４６−３３５１、Ｔ−ＲＥｘＴＭシステム（ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎＣａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）、ＬａｃＳｗｉｔｃｈ（登録商標）（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，（ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣＡ）、およびＣｒｅ−ＥＲＴタモキシフェン誘導性リコンビナーゼシステム（Ｉｎｄｒａｅｔａｌ．Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．（１９９９）２７（２２）：４３２４−４３２７、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．（２０００）２８（２３）：ｅ９９、米国特許第７，１１２，７１５号、ならびにＫｒａｍｅｒ＆Ｆｕｓｓｅｎｅｇｇｅｒ，ＭｅｔｈｏｄｓＭｏｌ．Ｂｉｏｌ．（２００５）３０８：１２３−１４４）または所望の細胞内での発現に好適な、当該技術分野で知られている任意のプロモーターが含まれる。 Many promoters are well known in the art, including constitutive, inducible, and repressible promoters from a variety of different sources. Representative sources include, for example, viral, mammalian, insect, plant, yeast, and bacterial cell types, and suitable promoters from these sources are readily available. , Or online, or synthetically based on publicly available sequences, for example, from depository institutions such as the ATCC, as well as other commercial or individual sources. A promoter can be unidirectional (ie, initiate transcription in one direction) or bidirectional (ie, initiate transcription in either the 3'or 5'directions). Non-limiting examples of promoters include, for example, the T7 bacterial expression system, pBAD(araA) bacterial expression system, cytomegalovirus (CMV) promoter, SV40 promoter, RSV promoter. Inducible promoters include the Tet system (US Pat. Nos. 5,464,758 and 5,814,618), the ecdysone inducible system (No et al., Proc. Natl. Acad. Sci. (1996). 93(8):3346-3351, T-RExTM system (Invitrogen Carlsbad, CA), LacSwitch(R) (Stratagene, (San Diego, CA), and Cre-ERT tamoxifen inducible recombinase system (Indra et al. Nuc. .Ac. (2005) 308:123-144) or any promoter known in the art suitable for expression in the desired cell.

「発現可能なポリヌクレオチドは、少なくとも１つのコード配列、および任意に、少なくとも１つの発現対照配列、例えば、転写および／または翻訳調節エレメントを含む、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、または他のポリヌクレオチドを含み、細胞、例えば、対象における細胞への導入時に、コードしたポリペプチド（例えば、ＨＲＳポリペプチド）を発現することができる。 “Expressable polynucleotides include cDNA, RNA, mRNA, or other polynucleotides that include at least one coding sequence, and optionally at least one expression control sequence, eg, transcriptional and/or translational regulatory elements. , The encoded polypeptide (eg, HRS polypeptide) can be expressed upon introduction into a cell, eg, a cell in a subject.

いくつかの実施形態では、発現可能なポリヌクレオチドは、修飾されたＲＮＡまたは修飾されたｍＲＮＡポリヌクレオチド、例えば、天然に存在しないＲＮＡ類似体である。ある特定の実施形態では、修飾されたＲＮＡまたはｍＲＮＡポリペプチドは、１つ以上の修飾されたまたは非天然塩基、例えば、アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）、チミン（Ｔ）、および／またはウラシル（Ｕ）以外のヌクレオチド塩基を含む。いくつかの実施形態では、修飾されたｍＲＮＡは、１つ以上の修飾されたまたは非天然のヌクレオチド間連結を含む。コードされた治療用ポリペプチドを送達するための発現可能なＲＮＡポリヌクレオチドは、例えば、Ｋｏｒｍａｎｎｅｔａｌ．，ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２９：１５４−７，２０１１、および米国特許出願第２０１５／０１１１２４８号、同第２０１４／０２４３３９９号、同第２０１４／０１４７４５４号、および同第２０１３／０２４５１０４号において記載されており、これらは、参照によりそれらの全体が組み込まれる。 In some embodiments, the expressible polynucleotide is a modified RNA or modified mRNA polynucleotide, eg, a non-naturally occurring RNA analog. In certain embodiments, the modified RNA or mRNA polypeptides have one or more modified or unnatural bases, such as adenine (A), guanine (G), cytosine (C), thymine (T). , And/or a nucleotide base other than uracil (U). In some embodiments, the modified mRNA comprises one or more modified or non-natural internucleotide linkages. Expressible RNA polynucleotides for delivering the encoded therapeutic polypeptides are described, for example, in Kormann et al. , Nat Biotechnol. 29:154-7, 2011, and U.S. Patent Applications Nos. 2015/0111248, 2014/0243399, 2014/0147454, and 2013/0245104, which are incorporated by reference. The whole of them is incorporated.

いくつかの実施形態では、発現可能なポリヌクレオチドを送達するために使用することができる様々なウイルスベクターは、アデノウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、およびレトロウイルスベクターを含む。場合によっては、レトロウイルスベクターは、マウスまたはトリ類レトロウイルスベクターの誘導体であるか、またはレンチウイルスベクターである。単一の外来遺伝子が挿入され得るレトロウイルスベクターの例としては、Ｍｏｌｏｎｅｙマウス白血病ウイルス（ＭｏＭｕＬＶ）、Ｈａｒｖｅｙマウス肉腫ウイルス（ＨａＭｕＳＶ）、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭｕＭＴＶ）、ＳＩＶ、ＢＩＶ、ＨＩＶ、およびラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）が挙げられるが、これらに限定されない。多くのさらなるレトロウイルスベクターは、複数の遺伝子を組み込むことができる。これらのベクターの全ては、形質導入細胞が特定され、生成することができるように、選択可能なマーカーのための遺伝子を移動させるか、またはそれを組み込むことができる。特定の標的細胞上の受容体のためにリガンドをコードする別の遺伝子と一緒に、対象となるポリペプチド配列をウイルスベクターに挿入することによって、例えば、ベクターは、標的特異性を行い得る。レトロウイルスベクターは、例えば、タンパク質をコードするポリヌクレオチドを挿入することによって標的特異性を行い得る。例示的な標的化は、レトロウイルスベクターを標的とする抗体を用いることによって達成され得る。当業者は、過度な実験を行うことなく、レトロウイルスベクターの標的特異的送達を可能にするレトロウイルスゲノムに送達され得る特定のポリヌクレオチド配列について知っているか、または容易に確認することができる。 In some embodiments, various viral vectors that can be used to deliver the expressible polynucleotide include adenovirus vectors, herpesvirus vectors, vaccinia virus vectors, adeno-associated virus (AAV) vectors, and retroviruses. Contains viral vectors. In some cases, the retroviral vector is a derivative of a murine or avian retroviral vector, or is a lentiviral vector. Examples of retroviral vectors into which a single foreign gene can be inserted include Moloney murine leukemia virus (MoMuLV), Harvey murine sarcoma virus (HaMuSV), mouse mammary tumor virus (MuMTV), SIV, BIV, HIV, and Rous sarcoma. Examples include, but are not limited to viruses (RSV). Many additional retroviral vectors can incorporate multiple genes. All of these vectors are capable of migrating or incorporating a gene for a selectable marker so that transduced cells can be identified and generated. By inserting the polypeptide sequence of interest into a viral vector along with another gene that encodes a ligand for a receptor on a particular target cell, for example, the vector can achieve target specificity. Retroviral vectors can achieve target specificity by, for example, inserting a polynucleotide encoding a protein. Exemplary targeting can be achieved by using antibodies that target the retroviral vector. One of ordinary skill in the art would know, or can readily ascertain, particular polynucleotide sequences that could be delivered to the retroviral genome that would allow for target-specific delivery of retroviral vectors without undue experimentation.

ある特定の場合によっては、本明細書に記載される発現可能なポリヌクレオチドは、細胞内、潜在的には、核などの特定の区画内に局在化すべく工学操作されるか、または細胞から分泌すべくもしくは細胞の形質膜に転位すべく工学操作される。例示的な実施形態では、発現可能なポリヌクレオチドは、核の局在化のために工学操作される。 In certain cases, the expressible polynucleotides described herein are engineered to localize intracellularly, potentially within specific compartments such as the nucleus, or from cells. Engineered to secrete or translocate to the plasma membrane of cells. In an exemplary embodiment, the expressible polynucleotide is engineered for nuclear localization.

本明細書に記載される、ポリペプチドの生物学的に活性な「バリアント」および「断片」、ならびにそれをコードするポリヌクレオチドもまた含まれる。「バリアント」は、参照ポリペプチドまたはポリヌクレオチドと比較して、１つ以上の置換、付加、欠失、および／または挿入を含有する（例えば、表および配列表を参照のこと）。バリアントポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、本明細書に記載される、参照配列に対して少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の配列同一性または類似性または相同性を有するアミノ酸またはポリヌクレオチド配列を含み、その参照配列の活性を実質的に保持する。１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０またはそれ以上のアミノ酸またはヌクレオチドの付加、欠失、挿入、または置換によって参照配列からなるか、またはそれとは異なり、その参照配列の活性を実質的に保持する、配列もまた含まれる。ある特定の実施形態では、付加または欠失は、Ｃ末端および／またはＮ末端の付加および／または欠失を含む。 Also included are biologically active "variants" and "fragments" of the polypeptides, and polynucleotides that encode them, as described herein. A "variant" contains one or more substitutions, additions, deletions, and/or insertions as compared to a reference polypeptide or polynucleotide (see, eg, Tables and Sequence Listings). Variant polypeptides or polynucleotides described herein are at least about 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, relative to a reference sequence. 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more amino acid or polynucleotide sequences having sequence identity or similarity or homology, Substantially retain the activity of the reference sequence. 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150 or more amino acid or nucleotide additions, deletions, insertions, or substitutions, which consist of or differ from the reference sequence, Sequences that are substantially retained are also included. In certain embodiments, the additions or deletions include C-terminal and/or N-terminal additions and/or deletions.

「配列同一性」という用語または例えば、「に対して配列５０％の同一性」を含むとは、本明細書で使用される場合、比較のウインドウにわたってヌクレオチド毎を基礎にしてまたはアミノ酸毎を基礎にして、それらの配列が同一である程度を指す。したがって、「配列同一性の百分率」は、比較のウインドウにわたって２つの最適にアラインされた配列を比較し、同一の核酸塩基（例えば、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｉ）または同一のアミノ酸残基（例えば、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｃｙｓ、およびＭｅｔ）が両方の配列において存在する位置の数を決定して、一致した位置の数を得、比較のウインドウ中の位置の総数（すなわち、ウインドウサイズ）によってこの一致した位置の数を除算し、その結果に１００を乗じて配列同一性の百分率を得ることによって、計算され得る。比較ウインドウをアラインするための配列の最適なアラインメントは、アルゴリズム（ＷｉｓｃｏｎｓｉｎＧｅｎｅｔｉｃｓＳｏｆｔｗａｒｅＰａｃｋａｇｅＲｅｌｅａｓｅ７．０、ＧｅｎｅｔｉｃｓＣｏｍｐｕｔｅｒＧｒｏｕｐ，５７５ＳｃｉｅｎｃｅＤｒｉｖｅＭａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．，ＵＳＡにおけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ）のコンピューター化実行によって、または検査および選択された種々の方法のいずれかによって生成された最良のアラインメント（すなわち、比較ウインドウにわたって最も高い百分率の相同性を生じる）によって実施され得る。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌｅｔａｌ．，Ｎｕｃｌ．ＡｃｉｄｓＲｅｓ．２５：３３８９，１９９７によって開示されるような、ＢＬＡＳＴファミリーのプログラムに対しても参照がなされ得る。 The term “sequence identity” or including, for example, “50% sequence identity to”, as used herein, is on a nucleotide-by-nucleotide or amino acid-by-amino acid basis over the window of comparison. And to the extent that their sequences are identical. Thus, "percentage of sequence identity" refers to the comparison of two optimally aligned sequences over the window of comparison, and is the same nucleobase (eg, A, T, C, G, I) or the same amino acid residue. (Eg, Ala, Pro, Ser, Thr, Gly, Val, Leu, Ile, Phe, Tyr, Trp, Lys, Arg, His, Asp, Glu, Asn, Gln, Cys, and Met) are present in both sequences. Determine the number of matching positions, obtain the number of matching positions, divide this number of matching positions by the total number of positions (ie, window size) in the window of comparison, and multiply the result by 100 It can be calculated by obtaining the percent identity. Optimal alignment of sequences for aligning comparison windows can be found in algorithms (Wisconsin Genetics Software Package Release 7.0, Genetics Computer Group, 575 Science Science Madison, F. A., ST, FA, USA, WI., USA, WI, USA). It can be carried out by an optimization run or by the best alignment (ie, yielding the highest percentage of homology over the comparison window) produced by any of the various methods examined and selected. For example, Altschul et al. , Nucl. Acids Res. Reference may also be made to the BLAST family of programs, such as those disclosed by 25:3389, 1997.

「統計的に有意な」とは、その結果が偶然起こる可能性が低いことを意味する。統計的有意性は、当該技術分野で既知の任意の方法によって決定され得る。有意性の一般に使用される尺度には、帰無仮説が真であるとした場合に、観察された事象が発生する頻度または確率であるｐ値が含まれる。得られたｐ値が有意性レベルよりも小さい場合、この帰無仮説は棄却される。単純な例では、この有意性レベルは、０．０５またはそれ未満のｐ値において規定される。 "Statistically significant" means that the outcome is unlikely to occur by chance. Statistical significance can be determined by any method known in the art. Commonly used measures of significance include the p-value, which is the frequency or probability that an observed event occurs, given that the null hypothesis is true. This null hypothesis is rejected if the obtained p-value is less than the significance level. In a simple example, this level of significance is defined at a p-value of 0.05 or less.

「溶解度」という用語は、液体溶媒中で溶解し、均質溶液を形成する、本明細書で提供される薬剤の特性を指す。溶解度は典型的に、単位体積の溶媒当たりの溶質の質量（溶媒１ｋｇ当たりの溶質のｇ、ｇ／ｄＬ（１００ｍＬ）、ｍｇ／ｍｌなど）、モル濃度、重量モル濃度、モル分率、または濃度の他の類似の記述のいずれかによって、濃度として表される。溶媒の量当たり溶解し得る溶質の最大平衡量は、温度、圧力、ｐＨ、および溶媒の性質を含む特定の条件下での、その溶媒におけるその溶質の溶解度である。ある特定の実施形態では、溶解度は、生理学的ｐＨまたは他のｐＨ、例えば、ｐＨ５．０、ｐＨ６．０、ｐＨ７．０、またはｐＨ７．４で測定される。ある特定の実施形態では、溶解度は、水または生理学的緩衝液、例えば、ＰＢＳもしくはＮａＣｌ（ＮａＰありまたはなし）中で測定される。特定の実施形態では、溶解度は、比較的低いｐＨ（例えば、ｐＨ６．０）および比較的高い塩（例えば、５００ｍＭＮａＣｌおよび１０ｍＭＮａＰ）において測定される。ある特定の実施形態では、溶解度は、生体液（溶媒）、例えば、血液または血清中で測定される。ある特定の実施形態では、温度は、約室温（例えば、約２０、２１、２２、２３、２４、２５℃）または約体温（３７℃）であり得る。ある特定の実施形態では、薬剤は、室温または３７℃で、少なくとも約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または１００ｍｇ／ｍｌの溶解度を有する。 The term "solubility" refers to the property of agents provided herein to dissolve in a liquid solvent to form a homogeneous solution. Solubility is typically the mass of solute per unit volume of solvent (g of solute per kg of solvent, g/dL (100 mL), mg/ml, etc.), molar concentration, molar concentration, molar fraction, or concentration. Expressed as a concentration by any of the other similar descriptions in. The maximum equilibrium amount of a solute that can be dissolved per amount of solvent is the solubility of that solute in that solvent under certain conditions, including temperature, pressure, pH, and the nature of the solvent. In certain embodiments, solubility is measured at physiological pH or other pH, such as pH 5.0, pH 6.0, pH 7.0, or pH 7.4. In certain embodiments, solubility is measured in water or physiological buffer, such as PBS or NaCl (with or without NaP). In certain embodiments, solubility is measured at relatively low pH (eg, pH 6.0) and relatively high salts (eg, 500 mM NaCl and 10 mM NaP). In certain embodiments, solubility is measured in a biological fluid (solvent), such as blood or serum. In certain embodiments, the temperature can be about room temperature (eg, about 20, 21, 22, 23, 24, 25°C) or about body temperature (37°C). In certain embodiments, the agent is at least about 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, at room temperature or 37°C. 0.9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 40, It has a solubility of 50, 60, 70, 80, 90, or 100 mg/ml.

「対象」または「それを必要とする対象」は、ヒト対象などの哺乳動物対象を含む。 "Subject" or "subject in need thereof" includes mammalian subjects such as human subjects.

「実質的に」または「本質的に」とは、ほぼ全体的にまたは完全に、例えば、ある所与の量のうちの９５％またはそれ以上を意味する。 “Substantially” or “essentially” means almost wholly or wholly, for example, 95% or more of a given quantity.

「治療反応」は、治療反応の投与に基づいた症状の改善（持続するかどうかにかかわらず）を指す。 "Therapeutic response" refers to the improvement (whether or not sustained) of symptoms based on the administration of the therapeutic response.

本明細書で使用される、「標的」という用語は、ＲＮＡ領域、具体的には、本明細書に記載される標的遺伝子のＲＮＡ領域を指す。標的は、コードおよび非コード配列、５’上流配列、３’下流配列、および本明細書に記載される他のＲＮＡ配列を含み得る。 As used herein, the term "target" refers to an RNA region, specifically an RNA region of a target gene described herein. Targets can include coding and non-coding sequences, 5'upstream sequences, 3'downstream sequences, and other RNA sequences described herein.

「標的配列」という用語は、アンチセンスまたはＲＮＡｉ剤が向けられた標的ＲＮＡの一部、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドが相補配列のワトソンクリック塩基対合によってハイブリダイズする配列、またはＲＮＡｉ剤のセンス鎖に対応する配列を指す。 The term "target sequence" refers to a portion of a target RNA to which an antisense or RNAi agent is directed, eg, a sequence to which an antisense oligonucleotide hybridizes by Watson-Crick base pairing of complementary sequences, or the sense strand of an RNAi agent. Refers to the array corresponding to.

本明細書で使用される、「定量化する」、「定量化」、または他の関連する語は、核酸、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質の単位体積中の量、質量、または濃度を決定することを指す。 As used herein, “quantifying,” “quantifying,” or other related terms refers to the amount, mass, mass of nucleic acid, polynucleotide, oligonucleotide, peptide, polypeptide, or protein in a unit volume. , Or to determine the concentration.

本明細書で使用される、「治療有効量」、「治療用量」、「予防上有効な量」、または「診断上有効な量」という用語は、投与後、所望の生物学的反応を生じるために必要とされる薬剤の量である。同様に、「アンチセンス療法」または「ＲＮＡｉ療法」という用語は、最低限有効な治療レベルの上に患者の血漿または他の組織区画（例えば筋肉組織）中のアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤の平均定常状態濃度を維持する療法を含む。 As used herein, the term "therapeutically effective amount," "therapeutic dose," "prophylactically effective amount," or "diagnostically effective amount" results in the desired biological response after administration. This is the amount of drug needed to do so. Similarly, the term "antisense therapy" or "RNAi therapy" refers to the mean steady state of an antisense or RNAi agent in a patient's plasma or other tissue compartment (eg, muscle tissue) above a minimally effective therapeutic level. Includes therapy to maintain concentration.

本明細書で使用される、対象（例えば、哺乳動物、例えばヒト）または細胞の「処置」は、個体または細胞の自然経過を変更する試みに用いられる任意のタイプの介入である。処置としては、薬学的組成物の投与が含まれるが、これに限定されず、予防的にまたは病理学的事象の開始もしくは病原体との接触の後のいずれかに実施されてもよい。「予防的」処置もまた含まれ、これは、処置されている疾患または状態の進行速度を低下させること、疾患または状態の発症を遅らせること、あるいはその発症の重篤度を軽減することに向けることができる。「処置」または「予防」は、必ずしも疾患または状態あるいはその関連症状の完全な根絶、治癒または防止を示すわけではない。 As used herein, “treatment” of a subject (eg, mammal, eg, human) or cell is any type of intervention used in an attempt to alter the natural course of an individual or cell. Treatment includes, but is not limited to, administration of a pharmaceutical composition, which may be performed either prophylactically or after initiation of a pathological event or contact with a pathogen. "Prophylactic" treatment is also included, which is directed to slowing the rate of progression of the disease or condition being treated, delaying the onset of the disease or condition, or reducing the severity of its onset. be able to. "Treatment" or "prevention" does not necessarily indicate complete eradication, cure or prevention of the disease or condition or its related symptoms.

「野生型」という用語は、集団において最も頻繁に観察されるものであり、したがって、遺伝子の「正常」または「野生型」の形態を適宜設計されている、遺伝子または遺伝子産物（例えば、ポリペプチド）を指す。 The term "wild-type" is that which is most often observed in a population, and thus is a gene or gene product (eg, a polypeptide) that is appropriately designed for the "normal" or "wild-type" form of the gene. ).

ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチドおよびポリヌクレオチド
ある特定の実施形態は、コンジュゲート（例えば、Ｆｃコンジュゲート）、バリアント、およびその断片、ならびにＨＲＳポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチドを含む、ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼポリペプチド（「ＨＲＳ」または「ＨｉｓＲＳ」ポリペプチド）を含む。ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼは、３つの高度に保存された配列モチーフを有する、クラスＩＩｔＲＮＡシンテターゼファミリーに属する。クラスＩおよびＩＩｔＲＮＡシンテターゼは、２ステップ反応においてその同族ｔＲＮＡへのアミノ酸の特異的結合を担うと広く認識されている：アミノ酸（ＡＡ）は、ＡＴＰによって最初に活性化されてＡＡ−ＡＭＰを形成し、次いで、ｔＲＮＡの受容体末端に転移される。完全長ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼは、典型的に、サイトゾルホモダイマーまたは選択的スプライシングされたミトコンドリア形態のいずれかとして存在する。 Histidyl-tRNA Synthetase (HRS) Polypeptides and Polynucleotides Certain embodiments include conjugates (eg, Fc conjugates), variants, and fragments thereof, and expressible polynucleotides encoding HRS polypeptides, Histidyl-tRNA synthetase polypeptides ("HRS" or "HisRS" polypeptides). Histidyl-tRNA synthetases belong to the class II tRNA synthetase family, which has three highly conserved sequence motifs. Class I and II tRNA synthetases are widely recognized to be responsible for the specific binding of amino acids to their cognate tRNAs in a two-step reaction: amino acids (AA) are first activated by ATP to form AA-AMP. And then transferred to the receptor end of the tRNA. Full-length histidyl-tRNA synthetase typically exists as either a cytosolic homodimer or an alternatively spliced mitochondrial form.

真核性ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼのある特定の生物学的断片もしくは選択的スプライシングされたアイソフォーム、または一部の文脈では無傷な完全長シンテターゼが、ある特定の治療的に関連する細胞シグナル伝達経路を調節し、および／または抗炎症特性を有する。タンパク質合成におけるｔＲＮＡシンテターゼの古典的役割とは異なるこれらの活性は、本明細書で「非正準活性」と称される。例えば、本明細書で提供される、ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼのＮ末端断片（例えば、ＨＲＳ１〜４８、ＨＲＳ１〜６０）などのＨＲＳポリペプチドは、とりわけ、活動性炎症の部位と関連する炎症性細胞（例えば、単球、マクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、樹枝状細胞）の遊走、活性化、または分化をインビボで遮断することによって、抗炎症性シグナルを働かせることが可能である。加えて、完全長ＨＲＳポリペプチド配列と比較して、ある特定の変異または欠失（例えば、ＨＲＳ１〜５０６、ＨＲＳ１〜６０）は、増加した活性および／または改善された薬理学的特性を付与する。ある特定の例示的なＨＲＳポリペプチドの配列を、以下の表Ｈ１中に提供する。
Certain biological fragments or alternatively spliced isoforms of eukaryotic histidyl-tRNA synthetase, or intact full-length synthetase in some contexts, impose certain therapeutically relevant cellular signaling pathways. Has regulatory and/or anti-inflammatory properties. These activities that differ from the classical role of tRNA synthetase in protein synthesis are referred to herein as "non-canonical activities." For example, HRS polypeptides, such as the N-terminal fragments of histidyl-tRNA synthetase (eg, HRS1-48, HRS1-60) provided herein, among others, are inflammatory cells associated with sites of active inflammation ( It is possible to activate anti-inflammatory signals by blocking migration, activation or differentiation of monocytes, macrophages, T cells, B cells, NK cells, dendritic cells) in vivo. In addition, certain mutations or deletions (eg, HRS1-506, HRS1-60) confer increased activity and/or improved pharmacological properties as compared to the full length HRS polypeptide sequence. .. The sequences of certain exemplary HRS polypeptides are provided in Table H1 below.

したがって、ある特定の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、表Ｈ１中の哺乳動物ＨＲＳアミノ酸配列（例えば、配列番号１〜１１７）またはそれらの活性バリアントもしくは断片を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、表Ｈ１中のヒトＨＲＳアミノ酸配列（例えば、配列番号１〜１０９）またはそれらの活性バリアントもしくは断片を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。いくつかの実施形態では、発現可能なポリヌクレオチドは、表Ｈ１中のアミノ酸配列（例えば、配列番号１〜１１７）、例えば、表Ｈ１中のヒトＨＲＳ配列（配列番号１〜１０９）またはそれらの活性バリアントもしくは断片を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなるＨＲＳポリペプチドをコードする。 Thus, in certain embodiments, the HRS polypeptide comprises, consists of, or consists essentially of the mammalian HRS amino acid sequences in Table H1 (eg, SEQ ID NOs: 1-117) or active variants or fragments thereof. To consist of them. In some embodiments, the HRS polypeptide comprises, consists of, or consists essentially of the human HRS amino acid sequences in Table H1 (eg, SEQ ID NOs: 1-109) or active variants or fragments thereof. Consists of. In some embodiments, the expressible polynucleotides have amino acid sequences in Table H1 (eg, SEQ ID NOs: 1-117), such as human HRS sequences in Table H1 (SEQ ID NOs: 1-109) or their activities. Encode a HRS polypeptide that includes, consists of, or consists essentially of variants or fragments.

上述のように、ＨＲＳポリペプチドは、アミノ酸置換、欠失、短縮、付加、および挿入を含む、種々の方法で変更され得る。かかる操作のための方法は、一般に、当該技術分野で周知である。例えば、ＨＲＳ参照ポリペプチドのアミノ酸配列バリアントは、ＤＮＡ中の変異によって調製され得る。変異誘発およびヌクレオチド配列変更のための方法は、当該技術分野で周知である。例えば、Ｋｕｎｋｅｌ（１９８５，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８２：４８８−４９２）、Ｋｕｎｋｅｌら（１９８７，ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌ，１５４：３６７−３８２）、米国特許第４，８７３，１９２号、Ｗａｔｓｏｎ，Ｊ．Ｄ．ら（“ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙｏｆｔｈｅＧｅｎｅ”，ＦｏｕｒｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ，ＭｅｎｌｏＰａｒｋ，Ｃａｌｉｆ．，１９８７）、およびこれらの中で引用される参考文献を参照のこと。対象となるタンパク質の生物学的活性に影響を与えないアミノ酸置換を充当するためのガイダンスは、Ｄａｙｈｏｆｆら（１９７８）ＡｔｌａｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎＳｅｑｕｅｎｃｅａｎｄＳｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）のモデルにおいて見出され得る。 As mentioned above, HRS polypeptides can be altered in a variety of ways, including amino acid substitutions, deletions, truncations, additions, and insertions. Methods for such manipulations are generally well known in the art. For example, amino acid sequence variants of the HRS reference polypeptide can be prepared by mutations in DNA. Methods for mutagenesis and nucleotide sequence alteration are well known in the art. For example, Kunkel (1985, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 82:488-492), Kunkel et al. (1987, Methods in Enzymol, 154:367-382), U.S. Patent No. 4,873,192, Watson. , J. D. ("Molecular Biology of the Gene", Fourth Edition, Benjamin/Cummings, Menlo Park, Calif., 1987), and references cited therein. Guidance for applying amino acid substitutions that do not affect the biological activity of the protein of interest is provided by Dayhoff et al. (1978) Atlas of Protein Sequence and Structure (Natl. Biomed. Res. Found., Washington, D. .) model.

生物学的に活性な短縮型および／またはバリアントＨＲＳポリペプチドは、参照ＨＲＳアミノ酸残基と比較して、それらの配列に沿った種々の位置において保存的アミノ酸置換を含み得る。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられる置換である。以下のように一般に下位分類され得る、類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーが、当該技術分野において規定されている：
酸性：この残基は、生理学的ｐＨにおけるＨイオンの喪失に起因して負の電荷を有し、この残基は、ペプチドが生理学的ｐＨにおいて水性媒体中に存在する場合に、この残基が含まれるペプチドのコンフォメーションにおける表面位置を求めるように、水性溶液によって引きつけられる。酸性側鎖を有するアミノ酸は、グルタミン酸およびアスパラギン酸を含む。 Biologically active truncated and/or variant HRS polypeptides may contain conservative amino acid substitutions at various positions along their sequence as compared to a reference HRS amino acid residue. A "conservative amino acid substitution" is a substitution in which an amino acid residue is replaced with an amino acid residue having a similar side chain. A family of amino acid residues having similar side chains has been defined in the art, which can be generally subclassified as follows:
Acidic: This residue has a negative charge due to the loss of H-ions at physiological pH, and this residue has a negative charge when the peptide is present in an aqueous medium at physiological pH. It is attracted by the aqueous solution so as to determine the surface position in the conformation of the contained peptide. Amino acids with acidic side chains include glutamic acid and aspartic acid.

塩基性：この残基は、生理学的ｐＨにおけるまたはその１もしくは２のｐＨ単位内でのＨイオンとの会合に起因して正の電荷を有し（例えば、ヒスチジン）、この残基は、ペプチドが生理学的ｐＨにおいて水性媒体中に存在する場合に、この残基が含まれるペプチドのコンフォメーションにおける表面位置を求めるように、水性溶液によって引きつけられる。塩基性側鎖を有するアミノ酸は、アルギニン、リジン、およびヒスチジンを含む。 Basic: This residue has a positive charge due to its association with H ions at physiological pH or within its 1 or 2 pH units (eg histidine), this residue is a peptide When present in an aqueous medium at physiological pH, this residue is attracted by the aqueous solution so as to determine the surface position in the conformation of the peptide containing this residue. Amino acids with basic side chains include arginine, lysine, and histidine.

荷電：これらの残基は、生理学的ｐＨにおいて荷電し、したがって、これには酸性側鎖または塩基性側鎖を有するアミノ酸（すなわち、グルタミン酸、アスパラギン酸、アルギニン、リジン、およびヒスチジン）が含まれる。 Charge: These residues are charged at physiological pH and thus include amino acids with acidic or basic side chains (ie glutamic acid, aspartic acid, arginine, lysine, and histidine).

疎水性：これらの残基は、生理学的ｐＨにおいて荷電せず、この残基は、ペプチドが水性媒体中に存在する場合に、この残基が含まれるペプチドのコンフォメーションにおける内部位置を求めるように、水性溶液によって反発される。疎水性側鎖を有するアミノ酸は、チロシン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、およびトリプトファンを含む。 Hydrophobicity: these residues are uncharged at physiological pH, so that when the peptide is present in an aqueous medium it seeks an internal position in the conformation of the peptide in which it is contained. , Repelled by aqueous solution. Amino acids with hydrophobic side chains include tyrosine, valine, isoleucine, leucine, methionine, phenylalanine, and tryptophan.

中性／極性：これらの残基は、生理学的ｐＨにおいて荷電せず、この残基は、ペプチドが水性媒体中に存在する場合に、この残基が含まれるペプチドのコンフォメーションにおける内部位置を求めるように、水性溶液によって十分には反発されない。中性／極性側鎖を有するアミノ酸は、アスパラギン、グルタミン、システイン、ヒスチジン、セリン、およびスレオニンを含む。 Neutral/Polarity: These residues are uncharged at physiological pH, and when the peptide is present in an aqueous medium, it seeks an internal position in the conformation of the peptide in which it is contained. As such, it is not sufficiently repelled by aqueous solutions. Amino acids with neutral/polar side chains include asparagine, glutamine, cysteine, histidine, serine, and threonine.

この説明はまた、ある特定のアミノ酸を「小さい」として特徴付けているが、これは、ある特定のアミノ酸の側鎖が、極性基を欠いていても、疎水性を付与するのに十分には大きくないからである。プロリンを除いて、「小さい」アミノ酸は、少なくとも１つの極性基が側鎖上に存在する場合、４つ以下の炭素を有するアミノ酸であり、存在しない場合には、３つ以下の炭素を有するアミノ酸である。小さい側鎖を有するアミノ酸は、グリシン、セリン、アラニン、およびスレオニンを含む。遺伝子にコードされる二次アミノ酸プロリンは、ペプチド鎖の二次コンフォメーションに対するその公知の効果に起因して、特別の場合である。プロリンの構造は、その側鎖が、α−アミノ基の窒素ならびにα−炭素に結合しているという点で、他の全ての天然に存在するアミノ酸とは異なる。いくつかのアミノ酸類似性マトリックスが、当該技術分野で周知である（例えば、Ｄａｙｈｏｆｆｅｔａｌ．，１９７８，Ａｍｏｄｅｌｏｆｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙｃｈａｎｇｅｉｎｐｒｏｔｅｉｎｓによって例えば開示される、例えば、ＰＡＭ１２０マトリックスおよびＰＡＭ２５０マトリックスを参照のこと）。しかしながら、Ｍ．Ｏ．Ｄａｙｈｏｆｆ，（ｅｄ．），Ａｔｌａｓｏｆｐｒｏｔｅｉｎｓｅｑｕｅｎｃｅａｎｄｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｖｏｌ．５，ｐｐ．３４５−３５８、ＮａｔｉｏｎａｌＢｉｏｍｅｄｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈＦｏｕｎｄａｔｉｏｎ，ＷａｓｈｉｎｇｔｏｎＤＣ、およびＧｏｎｎｅｔら（Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５６：１４４３０−１４４５，１９９２）による距離の関係性を決定するためのマトリックスは、グリシン、セリン、アラニン、およびスレオニンと同じ群中にプロリンを含む。したがって、プロリンは、「小さい」アミノ酸として分類される。 This description also characterizes certain amino acids as "small," which is sufficient to confer hydrophobicity on the side chains of certain amino acids, even if they lack a polar group. Because it is not big. Except for proline, a "small" amino acid is an amino acid having 4 or less carbons when at least one polar group is present on the side chain, and otherwise an amino acid having 3 or less carbons. Is. Amino acids with small side chains include glycine, serine, alanine, and threonine. The gene-encoded secondary amino acid proline is a special case due to its known effect on the secondary conformation of peptide chains. The structure of proline differs from all other naturally occurring amino acids in that its side chain is attached to the nitrogen of the α-amino group as well as to the α-carbon. Several amino acid similarity matrices are well known in the art (see, eg, PAM120 matrix and PAM250 matrix, eg, disclosed by Dayhoff et al., 1978, A model of evolutionary change in proteins). ). However, M. O. Dayhoff, (ed.), Atlas of protein sequence and structure, Vol. 5, pp. 345-358, National Biomedical Research Foundation, Washington DC, and Gonnet et al. (Science, 256: 14430-1445, 1992) matrices for determining distance relationships are in the same group as glycine, serine, alanine, and threonine. Contains proline. Therefore, proline is classified as a "small" amino acid.

極性または非極性としての分類のために必要とされる引きつけまたは反発の程度は、任意であり、したがって、本発明によって具体的に企図されるアミノ酸は、一方または他方として分類されている。具体的に命名されていないほとんどのアミノ酸は、既知の挙動に基づいて分類され得る。 The degree of attraction or repulsion required for classification as polar or non-polar is arbitrary and thus amino acids specifically contemplated by the present invention are classified as one or the other. Most amino acids not specifically named can be classified based on their known behaviour.

アミノ酸残基は、環式または非環式、および芳香族または非芳香族、残基の側鎖置換基に関して自明の分類、および小型または大型として、さらに下位分類され得る。残基は、さらなる極性置換基が存在することを条件として、カルボキシル炭素を含めて、合計４つまたはそれ以下の炭素原子を含む場合に小さいと見なされ、そうでない場合には、３つ以下を含む場合に小さいと見なされる。小さい残基は、当然、常に非芳香族である。それらの構造特性に依存して、アミノ酸残基は、２つ以上のクラスに入り得る。天然に存在するタンパク質アミノ酸について、このスキームに従う下位分類は、表Ａ中に提示される。
Amino acid residues can be further subclassified as cyclic or acyclic, and aromatic or nonaromatic, a trivial classification with respect to the side chain substituents of the residue, and small or large. Residues are considered small if they contain a total of 4 or fewer carbon atoms, including the carboxyl carbon, provided that additional polar substituents are present, otherwise less than 3 If included, it is considered small. Small residues are, of course, always non-aromatic. Depending on their structural properties, amino acid residues can fall into more than one class. Subclasses according to this scheme for naturally occurring protein amino acids are presented in Table A.

保存的アミノ酸置換はまた、側鎖に基づいた分類も含む。例えば、脂肪族側鎖を有するアミノ酸の群は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシンであり、脂肪族−ヒドロキシル側鎖を有するアミノ酸の群は、セリンおよびスレオニンであり、アミド含有側鎖を有するアミノ酸の群は、アスパラギンおよびグルタミンであり、芳香族側鎖を有するアミノ酸の群は、フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファンであり、塩基性側鎖を有するアミノ酸の群は、リジン、アルギニン、およびヒスチジンであり、硫黄含有側鎖を有するアミノ酸の群は、システインおよびメチオニンである。例えば、ロイシンとイソロイシンまたはバリン、アスパルテートとグルタメート、スレオニンとセリンとの置換、またはアミノ酸と構造的に関連したアミノ酸との類似の置換は、得られたバリアントポリペプチドの特性における大きな影響を与えないであろう。アミノ酸変化が機能的な短縮型および／またはバリアントＨＲＳポリペプチドを生じるかどうかは、本明細書に記載されるように、その非正準活性をアッセイすることによって、容易に決定され得る。保存的置換は、例示的な置換の見出しの下に、表Ｂ中に示される。本発明の範囲内に入るアミノ酸置換は、一般に、（ａ）置換の領域におけるペプチド骨格の構造、（ｂ）標的部位における分子の電荷もしくは疎水性、（ｃ）側鎖の嵩高さ、または（ｄ）生物学的機能を維持することに対するその影響が顕著には異ならない置換を選択することによって達成される。置換が導入された後、これらのバリアントは、生物学的活性についてスクリーニングされる。
Conservative amino acid substitutions also include classification based on side chains. For example, the group of amino acids having aliphatic side chains is glycine, alanine, valine, leucine, and isoleucine, the group of amino acids having aliphatic-hydroxyl side chains is serine and threonine, and amide containing side chains. The group of amino acids having is asparagine and glutamine, the group of amino acids having an aromatic side chain is phenylalanine, tyrosine, and tryptophan, and the group of amino acids having a basic side chain is lysine, arginine, and histidine. And the group of amino acids with sulfur-containing side chains is cysteine and methionine. For example, substitutions of leucine with isoleucine or valine, aspartate with glutamate, threonine with serine, or similar substitutions of amino acids with structurally related amino acids do not significantly affect the properties of the resulting variant polypeptide. Will. Whether an amino acid change results in a functional truncated and/or variant HRS polypeptide can be readily determined by assaying its non-canonical activity, as described herein. Conservative substitutions are shown in Table B under the heading Exemplary substitutions. Amino acid substitutions that fall within the scope of the invention generally include (a) the structure of the peptide backbone in the region of substitution, (b) the charge or hydrophobicity of the molecule at the target site, (c) the bulk of the side chains, or (d). 3.) By selecting substitutions whose effects on maintaining biological function are not significantly different. After the substitutions are introduced, these variants are screened for biological activity.

あるいは、保存的置換を行うための類似のアミノ酸は、側鎖の正体に基づいて３つのカテゴリーに群分けされ得る。Ｚｕｂａｙ，Ｇ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｔｈｉｒｄｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｍ．Ｃ．ＢｒｏｗｎＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９９３）に記載されるように、第１の群は、グルタミン酸、アスパラギン酸、アルギニン、リジン、ヒスチジンを含み、その全てが荷電側鎖を有し、第２の群は、グリシン、セリン、スレオニン、システイン、チロシン、グルタミン、アスパラギンを含み、第３の群は、ロイシン、イソロイシン、バリン、アラニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、メチオニンを含む。 Alternatively, similar amino acids for making conservative substitutions can be grouped into three categories based on the identity of the side chains. Zubay, G.; , Biochemistry, third edition, Wm. C. The first group comprises glutamic acid, aspartic acid, arginine, lysine, histidine, all of which have charged side chains, and the second group is glycine, serine, as described in Brown Publishers (1993). , Threonine, cysteine, tyrosine, glutamine, asparagine, and the third group includes leucine, isoleucine, valine, alanine, proline, phenylalanine, tryptophan, methionine.

いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、１つ以上のシステインの挿入または置換を有し、例えば、１つ以上の非システイン残基が、（例えば、安定性を変更するために、Ｆｃ断片のチオールベースのコンジュゲート化を促進するために、ＰＥＧまたは他の分子のチオールベースの結合を促進するために）システイン残基で置換されている。いくつかの実施形態では、１つ以上のシステイン置換は、ＨＲＳポリペプチドのＮ末端および／もしくはＣ末端、またはＨＲＳポリペプチドの他の表面曝露された領域の近傍である。特定の実施形態は、ＨＲＳポリペプチドのＮ末端および／もしくはＣ末端に対して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５アミノ酸内の残基のうちの１つ以上がシステイン残基で置換される場合を含む。いくつかの実施形態では、システイン残基は、Ｎ末端またはＣ末端融合タンパク質の創出を介して、ＨＲＳポリペプチドに付加され得る。かかる融合タンパク質は、任意の長さのものであり得るが、典型的には約１〜５、または約５〜１０、約１０〜２０、または約２０〜３０アミノ酸長である。 In some embodiments, the HRS polypeptide has one or more cysteine insertions or substitutions, eg, one or more non-cysteine residues (eg, to alter stability, an Fc fragment). To promote thiol-based conjugation of PEG or other molecules) to facilitate thiol-based conjugation of PEG or other molecules). In some embodiments, the one or more cysteine substitutions are near the N-terminus and/or C-terminus of the HRS polypeptide, or other surface-exposed regions of the HRS polypeptide. Certain embodiments are 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15 with respect to the N-terminus and/or C-terminus of the HRS polypeptide. Includes cases where one or more of the residues within 16, 17, 18, 19, 20, 21, 21, 22, 23, 24, or 25 amino acids are replaced with cysteine residues. In some embodiments, cysteine residues can be added to the HRS polypeptide via the creation of N-terminal or C-terminal fusion proteins. Such fusion proteins can be of any length, but are typically about 1-5, or about 5-10, about 10-20, or about 20-30 amino acids long.

ＨＲＳポリペプチドＨＲＳ（１〜６０）に基づく、システイン改変タンパク質の具体的な例を、表Ｈ２中に示す。このアプローチは、表Ｈ１のＨＲＳポリペプチドおよび本明細書に記載される他のＨＲＳポリペプチドに、適用することができる。
Specific examples of cysteine modified proteins based on the HRS polypeptide HRS(1-60) are shown in Table H2. This approach can be applied to the HRS polypeptides of Table H1 and other HRS polypeptides described herein.

したがって、ある特定の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、表Ｈ２中のアミノ酸配列（配列番号１１８〜１２０）またはそれらの活性バリアントもしくは断片を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。いくつかの実施形態では、発現可能なポリヌクレオチドは、表Ｈ２中のアミノ酸配列（例えば、配列番号１１８〜１２０）またはそれらの活性バリアントもしくは断片を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなるＨＲＳポリペプチドをコードする。 Thus, in certain embodiments, the HRS polypeptide comprises, consists of, or consists essentially of the amino acid sequences in Table H2 (SEQ ID NOs: 118-120) or active variants or fragments thereof. .. In some embodiments, the expressible polynucleotide comprises, consists of, or consists essentially of the amino acid sequences in Table H2 (eg, SEQ ID NOs: 118-120) or active variants or fragments thereof. HRS polypeptide consisting of:

いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、内因性または天然に存在するシステイン残基が代替的アミノ酸に変異しているか、または欠失している変異体を有し得る。いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチド中へのシステイン残基の挿入または置換は、他の表面曝露された反応性システイン残基の排除と組み合わされる。したがって、いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、例えば、天然に存在するシステイン残基を除去するために、Ｃｙｓ８３、Ｃｙｓ１７４、Ｃｙｓ１９１、Ｃｙｓ１９６、Ｃｙｓ２２４、Ｃｙｓ２３５、Ｃｙｓ３７９、Ｃｙｓ４５５、Ｃｙｓ５０７、および／またはＣｙｓ５０９（配列番号１によって規定される）のうちの任意の１つ以上において、１つ以上の置換および／または欠失を含み、それには、これらの組み合わせが含まれる。 In some embodiments, HRS polypeptides may have variants in which an endogenous or naturally occurring cysteine residue is mutated or deleted with an alternative amino acid. In some embodiments, insertion or substitution of cysteine residues in the HRS polypeptide is combined with elimination of other surface exposed reactive cysteine residues. Thus, in some embodiments, the HRS polypeptide has, for example, Cys83, Cys174, Cys191, Cys196, Cys224, Cys235, Cys379, Cys455, Cys507, and/or to remove naturally occurring cysteine residues. In any one or more of Cys509 (defined by SEQ ID NO: 1), one or more substitutions and/or deletions are included, including combinations thereof.

特定の実施形態は、Ｃｙｓ８３、Ｃｙｓ１７４、Ｃｙｓ１９１、Ｃｙｓ１９６、Ｃｙｓ２２４、Ｃｙｓ２３５、Ｃｙｓ３７９、Ｃｙｓ４５５のうちの任意の１つ以上の変異もしくは欠失、または例えば、Ｃ末端の３アミノ酸（Δ５０７〜５０９）の欠失によるＣｙｓ５０７およびＣｙｓ５０９の欠失を有する、表Ｈ１のＨＲＳポリペプチドを含む。これらの位置における例示的な変異には、例えば、システインからセリン、アラニン、ロイシン、バリンまたはグリシンへの変異が含まれる。ある特定の実施形態では、特異的システイン置換のためのアミノ酸残基は、他の種および生物からのＨＲＳオルソログにおいて見出される天然に存在する置換から選択され得る。この型の例示的な置換は、
表Ｈ３中に示される。
Particular embodiments include mutations or deletions of any one or more of Cys83, Cys174, Cys191, Cys196, Cys224, Cys235, Cys379, Cys455, or, for example, deletion of the C-terminal three amino acids (Δ507-509). Includes the HRS polypeptides of Table H1 with loss of Cys507 and Cys509. Exemplary mutations at these positions include, for example, cysteine to serine, alanine, leucine, valine or glycine. In certain embodiments, amino acid residues for a specific cysteine substitution may be selected from naturally occurring substitutions found in HRS orthologs from other species and organisms. An exemplary permutation of this type is
Shown in Table H3.

いくつかの実施形態では、変異誘発のために選択された天然に存在するシステインは、それらの表面曝露に基づいて選択される。したがって、一態様では、置換のために選択されたシステイン残基は、Ｃｙｓ２２４、Ｃｙｓ２３５、Ｃｙｓ５０７、およびＣｙｓ５０９から選択される。いくつかの実施形態では、配列番号１の最後の３つ（Ｃ末端）の残基は、残基５０７〜５０９を欠失するように欠失している。いくつかの実施形態では、これらのシステインは、分子内システイン対、例えばＣｙｓ１７４およびＣｙｓ１９１を排除するように、変異または欠失のために選択される。 In some embodiments, the naturally occurring cysteines selected for mutagenesis are selected based on their surface exposure. Thus, in one aspect, the cysteine residues selected for substitution are selected from Cys224, Cys235, Cys507, and Cys509. In some embodiments, the last 3 (C-terminal) residues of SEQ ID NO: 1 are deleted such that residues 507-509 are deleted. In some embodiments, these cysteines are selected for mutation or deletion so as to eliminate intramolecular cysteine pairs, such as Cys174 and Cys191.

表面曝露されたシステイン残基を低減させるためのシステイン変異／置換（太字下線で示される）の具体的な例には、表Ｈ４中に以下に列挙されるものが含まれる。
Specific examples of cysteine mutations/substitutions (shown in bold underline) to reduce surface exposed cysteine residues include those listed below in Table H4.

したがって、ある特定の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、表Ｈ４中のアミノ酸配列（配列番号１２１〜１２７）またはそれらの活性バリアントもしくは断片を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。いくつかの実施形態では、発現可能なポリヌクレオチドは、表Ｈ４中のアミノ酸配列（例えば、配列番号１２１〜１２７）またはそれらの活性バリアントもしくは断片を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなるＨＲＳポリペプチドをコードする。 Thus, in certain embodiments, the HRS polypeptide comprises, consists of, or consists essentially of the amino acid sequences in Table H4 (SEQ ID NOs:121-127) or active variants or fragments thereof. . In some embodiments, the expressible polynucleotide comprises, consists of, or consists essentially of the amino acid sequences in Table H4 (eg, SEQ ID NOS:121-127) or active variants or fragments thereof. Consisting of the HRS polypeptide.

いくつかの実施形態では、かかるシステイン置換変異体は、規定された表面曝露された位置において新たな表面曝露されたシステイン残基を操作して入れ込む、挿入する、またはそうでなければ導入するために改変され、ここで、導入された残基は、ＨＲＳポリペプチドの非正準活性を実質的に妨害しない。具体的な例には、例えば、上記の低減したシステインのＨＲＳポリペプチドのいずれかのＮ末端またはＣ末端における、さらなるシステイン残基の挿入（または再挿入戻し）が含まれる。いくつかの実施形態では、かかるＮ末端またはＣ末端の表面曝露されたシステインの挿入は、ＨＲＳポリペプチドの低減したシステインバリアントへの、完全長ヒトＨＲＳの最後の１つ、最後の２つ、または最後の３つの天然に存在するＣ末端アミノ酸の再挿入、例えば、配列ＣＩＣ（ＣｙｓＩｌｅＣｙｓ）の全てまたは一部の再挿入を含む。例示的な低減したシステイン変異体には、例えば、表Ｈ１のＨＲＳポリペプチドのうちのいずれかにおける、残基Ｃｙｓ１７４、Ｃｙｓ１９１、Ｃｙｓ２２４、およびＣｙｓ２３５における変異（またはそれらの欠失）の任意の組み合わせ、ならびにまたはＣｙｓ５０７およびＣｙｓ５０９の欠失もしくは置換（完全長ヒト細胞質ＨＲＳ（配列番号１）の番号付けに基づく）が含まれる。 In some embodiments, such cysteine substitution variants are engineered to insert, insert, or otherwise introduce a new surface-exposed cysteine residue at a defined surface-exposed position. Where the introduced residue does not substantially interfere with the non-canonical activity of the HRS polypeptide. Specific examples include, for example, insertion (or reinsertion back) of additional cysteine residues at the N-terminus or C-terminus of any of the reduced cysteine HRS polypeptides described above. In some embodiments, such insertion of an N-terminal or C-terminal surface-exposed cysteine results in the last one, the last two, or the last two full-length human HRS into the reduced cysteine variant of the HRS polypeptide. It includes reinsertions of the last three naturally occurring C-terminal amino acids, eg, all or part of the sequence CIC (Cys Ile Cys). Exemplary reduced cysteine variants include, for example, any combination of mutations at residues Cys174, Cys191, Cys224, and Cys235 (or their deletions) in any of the HRS polypeptides of Table H1, And/or deletions or substitutions of Cys507 and Cys509 (based on the numbering of full length human cytoplasmic HRS (SEQ ID NO: 1)).

Ｆｃ領域またはＰＥＧまたは他の異種分子などの異種分子への部位特異的なコンジュゲート化または結合のいくつかの型について、ＨＲＳポリペプチドは、１つ以上のグルタミン置換を有し得、１つ以上の天然に存在する（非グルタミン）残基は、例えば、グルタミンのアミド基への分子のトランスグルタミナーゼ触媒性の結合を促進するために、グルタミンで置換される。いくつかの実施形態では、グルタミン置換は、ＨＲＳポリペプチドのＮ末端および／またはＣ末端の近傍に導入される。特定の実施形態は、ＨＲＳポリペプチドのＮ末端および／またはＣ末端に対して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５アミノ酸内の残基のうちの１つ以上がグルタミン残基で置換される場合を含む。これらおよび関連のＨＲＳポリペプチドはまた、任意の天然に存在するグルタミン残基を除去し、所望の場合、それによって部位特異的なコンジュゲート化または結合の程度を調節するために、置換（例えば、保存的置換）も含み得る。 For some types of site-specific conjugation or conjugation to a heterologous molecule, such as the Fc region or PEG or other heterologous molecule, the HRS polypeptide may have one or more glutamine substitutions. Naturally occurring (non-glutamine) residues of, for example, are substituted with glutamine to facilitate transglutaminase-catalyzed binding of the molecule to the amide group of glutamine. In some embodiments, the glutamine substitution is introduced near the N-terminus and/or C-terminus of the HRS polypeptide. Certain embodiments are 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15 with respect to the N-terminus and/or C-terminus of the HRS polypeptide. Including cases where one or more of the residues within 16, 17, 18, 19, 20, 21, 21, 22, 23, 24, or 25 amino acids are replaced with a glutamine residue. These and related HRS polypeptides also have substitutions (eg, substitutions) to remove any naturally occurring glutamine residue and thereby regulate the degree of site-specific conjugation or binding, if desired. Conservative substitutions) may also be included.

Ｆｃ領域またはＰＥＧまたは他の異種分子などの異種分子への部位特異的なコンジュゲート化または結合のいくつかの型について、ＨＲＳポリペプチドは、１つ以上のリジン置換を有し得、１つ以上の天然に存在する（非リジン）残基は、例えば、リジンのアミド基への分子のアシル化またはアルキル化に基づく結合を促進するために、リジンで置換される。これらの方法はまた、典型的には、Ｎ末端残基への分子の結合を生じる。いくつかの実施形態では、リジン置換は、ＨＲＳポリペプチドのＮ末端および／またはＣ末端の近傍である。特定の実施形態は、ＨＲＳポリペプチドのＮ末端および／またはＣ末端に対して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５アミノ酸内の残基のうちの１つ以上がリジン残基で置換される場合を含む。これらおよび関連のＨＲＳポリペプチドはまた、任意の天然に存在するリジン残基を除去し、所望の場合、それによって部位特異的なコンジュゲート化または結合の程度を調節するために、置換（例えば、保存的置換）も含み得る。 For some types of site-specific conjugation or conjugation to a heterologous molecule, such as the Fc region or PEG or other heterologous molecule, the HRS polypeptide may have one or more lysine substitutions. The naturally occurring (non-lysine) residue of is substituted with lysine, for example, to facilitate acylation- or alkylation-based attachment of the molecule to the amide group of lysine. These methods also typically result in the attachment of the molecule to the N-terminal residue. In some embodiments, the lysine substitution is near the N-terminus and/or C-terminus of the HRS polypeptide. Certain embodiments are 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15 with respect to the N- and/or C-terminus of the HRS polypeptide. Including cases where one or more of the residues within 16, 17, 18, 19, 19, 21, 21, 22, 23, 24, or 25 amino acids are replaced with lysine residues. These and related HRS polypeptides also have substitutions (eg, to remove any naturally occurring lysine residue and, thereby, regulate the degree of site-specific conjugation or binding, if desired. Conservative substitutions) may also be included.

ＨＲＳポリペプチドへの部位特異的なコンジュゲート化は、ＨＲＳポリペプチドの１つ以上の溶媒アクセス可能な表面アミノ酸を置換することによっても、実施され得る。例えば、好適な溶媒アクセス可能なアミノ酸は、例示的なＨＲＳポリペプチドの公開された結晶構造を使用し、ＳＰＩＤＤＥＲサーバー（ｈｔｔｐ：／／ｓｐｐｉｄｅｒ．ｃｃｈｍｃ．ｏｒｇ／）を使用して予測された溶媒アクセス可能性に基づいて決定され得る（Ｘｕｅｔａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ．２０：１４７０−７，２０１２および米国特許出願第６１／６７４，６３９号を参照のこと）。この分析に基づいて、表面上のいくつかのアミノ酸は、コンジュゲート化または結合に適切な官能基を導入するための変異部位として潜在的に使用され得る。結晶構造に基づくアミノ酸の表面アクセス可能性スコアが計算され得、ここで、より高いスコアは、より良いアクセス可能性を示す。特定の実施形態では、より高いスコア（例えば、＞４０）が好ましい。したがって、いくつかの実施形態では、４０よりも大きい表面アクセス可能性スコアを有するアミノ酸位置が、システイン、リジン、グルタミン、または他の天然に存在しないアミノ酸を導入するために使用され得る。 Site-specific conjugation to HRS polypeptides can also be performed by substituting one or more solvent accessible surface amino acids of the HRS polypeptide. For example, a suitable solvent accessible amino acid uses the published crystal structure of an exemplary HRS polypeptide and predicts solvent access using the SPIDDER server (http://spider.ccmc.org/). It can be determined on the basis of likelihood (see Xu et al., Structure. 20: 1470-7, 2012 and US Patent Application No. 61/674,639). Based on this analysis, some amino acids on the surface could potentially be used as mutation sites to introduce functional groups suitable for conjugation or attachment. Surface accessibility scores for amino acids based on the crystal structure can be calculated, where higher scores indicate better accessibility. In certain embodiments, higher scores (eg >40) are preferred. Thus, in some embodiments, amino acid positions with surface accessibility scores greater than 40 can be used to introduce cysteine, lysine, glutamine, or other non-naturally occurring amino acids.

特定の実施形態では、溶媒アクセス可能な表面アミノ酸は、アラニン、グリシン、およびセリンからなる群から選択され、システイン、グルタミン、もしくはリジンが含まれるが、これらに限定されない、天然に存在するアミノ酸、または部位特異的なコンジュゲート化もしくは結合のために最適化された天然に存在しないアミノ酸で置換され得る。 In certain embodiments, the solvent accessible surface amino acids are naturally occurring amino acids selected from the group consisting of alanine, glycine, and serine, including but not limited to cysteine, glutamine, or lysine, or Substitutions can be made with non-naturally occurring amino acids optimized for site-specific conjugation or conjugation.

ある特定の実施形態は、Ｆｃ領域またはＰＥＧまたは他の異種分子などの異種分子に結合した官能基と共有結合を形成する官能基を含む天然に存在しないアミノ酸を置換することによる、任意のアミノ酸位置におけるＨＲＳポリペプチドへの部位特異的なコンジュゲート化または結合を含む。天然に存在しないアミノ酸は、例えば、本明細書に記載される、ＨＲＳポリペプチドのＮ末端および／またはＣ末端に対して、Ｎ末端および／またはＣ末端で、あるいは溶媒アクセス可能な表面アミノ酸残基において、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５アミノ酸内の残基のうちの１つ以上で、挿入または置換され得る。 Certain embodiments include any amino acid position by substituting a non-naturally occurring amino acid containing a functional group that forms a covalent bond with a functional group attached to a heterologous molecule such as the Fc region or PEG or other heterologous molecule. Site-specific conjugation or binding to the HRS polypeptide in. Non-naturally occurring amino acids are surface amino acid residues that are, for example, N-terminal and/or C-terminal to the N-terminal and/or C-terminal of the HRS polypeptide described herein, or solvent accessible. , 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, Or it may be inserted or substituted at one or more of the residues within 25 amino acids.

特定の実施形態では、天然に存在しないアミノ酸としては、任意のアミノ酸、改変アミノ酸、またはセレノシステイン以外のアミノ酸アナログ、および以下の２０種の遺伝子にコードされるアルファ−アミノ酸：アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリンが挙げられるが、これらに限定されない。アルファ−アミノ酸の一般構造は、以下の式によって例示される：
In certain embodiments, non-naturally occurring amino acids include any amino acid, modified amino acid, or amino acid analog other than selenocysteine, and alpha-amino acids encoded by the following 20 genes: alanine, arginine, asparagine, Examples include, but are not limited to, aspartic acid, cysteine, glutamine, glutamic acid, glycine, histidine, isoleucine, leucine, lysine, methionine, phenylalanine, proline, serine, threonine, tryptophan, tyrosine, valine. The general structure of alpha-amino acids is exemplified by the formula:

非天然アミノ酸は、典型的には、上述の式を有する任意の構造であり、式中、Ｒ基は、２０種の天然アミノ酸において使用される置換基以外の任意の置換基である。２０種の天然アミノ酸の構造については、例えば、Ｌ．Ｓｔｒｙｅｒ，３ｒｄｅｄ．１９８８，ＦｒｅｅｍａｎａｎｄＣｏｍｐａｎｙ，ＮｅｗＹｏｒｋによるＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙなどの生物化学の教科書を参照のこと。本明細書に開示される非天然アミノ酸は、上記の２０種のアルファ−アミノ酸以外の天然に存在する化合物であり得ることに留意されたい。本明細書に開示される非天然アミノ酸は、典型的には、側鎖のみが天然アミノ酸と異なるので、これらの非天然アミノ酸は、天然に存在するタンパク質において形成されるのと同じ様式で、例えば天然または非天然の他のアミノ酸とアミド結合を形成する。しかしながら、これらの非天然アミノ酸は、天然アミノ酸からそれらを識別する側鎖基を有する。例えば、上述の式中のＲは、任意に、アルキル−、アリール−、アリールハライド、ビニルハライド、アルキルハライド、アセチル、ケトン、アジリジン、ニトリル、ニトロ、ハライド、アシル−、ケト−、アジド−、ヒドロキシル−、ヒドラジン、シアノ−、ハロ−、ヒドラジド、アルケニル、アルキニル、エーテル、チオエーテル、エポキシド、スルホン、ボロン酸、ボロン酸エステル、ボラン、フェニルボロン酸、チオール、セレノ−、スルホニル−、ボレート、ボロネート、ホスホ、ホスホノ、ホスフィン、複素環式−、ピリジル、ナフチル、ベンゾフェノン、シクロオクチンなどの束縛された環、チオエステル、エノン、イミン、アルデヒド、エステル、チオ酸、ヒドロキシルアミン、アミノ、カルボン酸、アルファ−ケトカルボン酸、アルファもしくはベータ不飽和酸およびアミド、グリオキシルアミド、またはオルガノシラン基など、あるいはそれらの任意の組み合わせを含む。 Unnatural amino acids are typically any structure having the above formula, where the R group is any substituent other than the substituents used in the twenty natural amino acids. For the structures of 20 natural amino acids, see, for example, L. et al. Stryer, 3rd ed. 1988, Freeman and Company, New Chemistry, Biochemistry textbooks, such as Biochemistry. It should be noted that the unnatural amino acids disclosed herein may be naturally occurring compounds other than the above 20 alpha-amino acids. Since the unnatural amino acids disclosed herein typically differ from the naturally occurring amino acids only in their side chains, these unnatural amino acids are formed in the same manner as they are formed in naturally occurring proteins, eg, It forms an amide bond with other natural or unnatural amino acids. However, these unnatural amino acids have side chain groups that distinguish them from the natural amino acids. For example, R in the above formula is optionally alkyl-, aryl-, aryl halide, vinyl halide, alkyl halide, acetyl, ketone, aziridine, nitrile, nitro, halide, acyl-, keto-, azido-, hydroxyl. -, hydrazine, cyano-, halo-, hydrazide, alkenyl, alkynyl, ether, thioether, epoxide, sulfone, boronic acid, boronate ester, borane, phenylboronic acid, thiol, seleno-, sulfonyl-, borate, boronate, phospho. , Phosphono, phosphine, heterocyclic-, constrained rings such as pyridyl, naphthyl, benzophenone, cyclooctyne, thioester, enone, imine, aldehyde, ester, thioacid, hydroxylamine, amino, carboxylic acid, alpha-ketocarboxylic acid , Alpha or beta unsaturated acids and amides, glyoxylamide, or organosilane groups, and the like, or any combination thereof.

非天然アミノ酸の具体的な例としては、ｐ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン、Ｌ−３−（２−ナフチル）アラニン、３−メチル−フェニルアラニン、Ｏ−４−アリル−Ｌ−チロシン、４−プロピル−Ｌ−チロシン、トリ−Ｏ−アセチル−ＧｌｃＮＡｃβ−セリン、β−Ｏ−ＧｌｃＮＡｃ−Ｌ−セリン、トリ−Ｏ−アセチル−ＧａｌＮＡｃ−α−スレオニン、α−ＧａｌＮＡｃ−Ｌ−スレオニン、Ｌ−Ｄｏｐａ、フッ素化フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジド−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アシル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ベンゾイル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−ホスホセリン、ホスホノセリン、ホスホノチロシン、ｐ−ヨード−フェニルアラニン、ｐ−ブロモフェニルアラニン、ｐ−アミノ−Ｌ−フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、以下に列挙されるもの、または本発明の他の箇所に列挙されるものなどが挙げられるが、これらに限定されない。 Specific examples of unnatural amino acids include p-acetyl-L-phenylalanine, O-methyl-L-tyrosine, L-3-(2-naphthyl)alanine, 3-methyl-phenylalanine, O-4-allyl-. L-tyrosine, 4-propyl-L-tyrosine, tri-O-acetyl-GlcNAcβ-serine, β-O-GlcNAc-L-serine, tri-O-acetyl-GalNAc-α-threonine, α-GalNAc-L-. Threonine, L-Dopa, fluorinated phenylalanine, isopropyl-L-phenylalanine, p-azido-L-phenylalanine, p-acyl-L-phenylalanine, p-benzoyl-L-phenylalanine, L-phosphoserine, phosphonoserine, phosphonotyrosine, p-iodo-phenylalanine, p-bromophenylalanine, p-amino-L-phenylalanine, isopropyl-L-phenylalanine, those listed below, or those listed elsewhere in the invention, and the like, It is not limited to these.

したがって、所望の分子（例えば、Ｆｃ領域、ＰＥＧ）の任意の好ましい官能基と共有結合を形成する官能基を含む天然に存在しないアミノ酸を選択することができる。非天然アミノ酸は、一旦選択されると、供給業者から購入され得るか、または化学的に合成され得るかのいずれかである。任意の数の非天然アミノ酸が、標的分子中に取り込まれ得、これは、結合される所望の分子の数に従って変動し得る。これらの分子は、非天然アミノ酸の全てまたは一部のみに結合され得る。さらに、同じまたは異なる非天然アミノ酸が、所望の成果に依存して、ＨＲＳポリペプチド中に取り込まれ得る。ある特定の実施形態では、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上の非天然アミノ酸が、ＨＲＳポリペプチド中に取り込まれ、そのうちのいずれかまたは全てが、所望の官能基を含む分子にコンジュゲート化され得る。 Thus, non-naturally occurring amino acids containing functional groups that form covalent bonds with any of the preferred functional groups of the desired molecule (eg, Fc region, PEG) can be selected. Unnatural amino acids, once selected, can either be purchased from a supplier or chemically synthesized. Any number of unnatural amino acids can be incorporated into the target molecule, which can vary according to the number of desired molecules attached. These molecules may be attached to all or only part of the unnatural amino acid. Furthermore, the same or different unnatural amino acids can be incorporated into the HRS polypeptide depending on the desired outcome. In certain embodiments, about 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 or more unnatural amino acids are incorporated into the HRS polypeptide, any or all of which are Can be conjugated to a molecule containing the desired functional group.

ある特定の態様では、非天然アミノ酸の使用は、ＨＲＳポリペプチドの選択された非正準活性を改変する（例えば、増加させる）ために、またはタンパク質のインビボもしくはインビトロ半減期を変更するために、利用され得る。非天然アミノ酸は、本明細書に記載されるように、ＨＲＳタンパク質の（選択的）化学的改変（例えば、ペグ化）を促進するためにも使用され得る。例えば、ある特定の非天然アミノ酸は、所与のタンパク質へのＦｃ領域またはＰＥＧなどのポリマーの選択的結合を可能にし、それによって、その薬物動態学的特性を改善する。 In certain aspects, the use of unnatural amino acids, to alter (eg, increase) a selected non-canonical activity of the HRS polypeptide, or to alter the in vivo or in vitro half-life of the protein, Can be used. Unnatural amino acids can also be used to facilitate (selective) chemical modification (eg, pegylation) of HRS proteins, as described herein. For example, certain unnatural amino acids allow the selective attachment of polymers such as Fc regions or PEG to a given protein, thereby improving its pharmacokinetic properties.

アミノ酸類似体および模倣体の具体的な例は、例えば、ＲｏｂｅｒｔｓａｎｄＶｅｌｌａｃｃｉｏ，ＴｈｅＰｅｐｔｉｄｅｓ：Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｅｄｓ．ＧｒｏｓｓａｎｄＭｅｉｎｈｏｆｅｒ，Ｖｏｌ．５，ｐ．３４１，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，ＮｅｗＹｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９８３）に記載されることが見出され得、この全内容が参照により本明細書に組み込まれる。他の例には、過アルキル化アミノ酸、特に過メチル化アミノ酸が含まれる。例えば、ＣｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｅｄｓ．ＷｉｌｓｏｎａｎｄＣｚａｒｎｉｋ，Ｃｈ．１１，ｐ．２３５，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆ＳｏｎｓＩｎｃ．，ＮｅｗＹｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９７）を参照されたく、この全内容が参照により本明細書に組み込まれる。なお他の例には、そのアミド部分（およびしたがって、得られたペプチドのアミド骨格）が、例えば、糖環、ステロイド、ベンゾジアゼピン、またはカルボサイクル（ｃａｒｂｏｃｙｃｌｅ）によって置き換えられたアミノ酸が含まれる。例えば、Ｂｕｒｇｅｒ’ｓＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖｅｒｙ，Ｅｄ．ＭａｎｆｒｅｄＥ．Ｗｏｌｆｆ，Ｃｈ．１５，ｐｐ．６１９−６２０，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆ＳｏｎｓＩｎｃ．，ＮｅｗＹｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９５）を参照されたく、この全内容が参照により本明細書に組み込まれる。ペプチド、ポリペプチド、ペプチド模倣体、およびタンパク質を合成するための方法は、当該技術分野で周知である（例えば、米国特許第５，４２０，１０９号；Ｍ．Ｂｏｄａｎｚｓｋｙ，ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓｏｆＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ（１ｓｔｅｄ．＆２ｄｒｅｖ．ｅｄ．）、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，ＮｅｗＹｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９８４＆１９９３）、７章を参照のこと；ＳｔｅｗａｒｔａｎｄＹｏｕｎｇ，ＳｏｌｉｄＰｈａｓｅＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ，（２ｄｅｄ．），ＰｉｅｒｃｅＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．（１９８４）を参照されたく、これらの各々は、参照により本明細書に組み込まれる）。したがって、ＨＲＳポリペプチドは、天然に存在するアミノ酸および天然に存在しないアミノ酸ならびにアミノ酸類似体および模倣体から構成され得る。 Specific examples of amino acid analogs and mimetics are described in, for example, Roberts and Vellaccio, The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, Eds. Gross and Meinhofer, Vol. 5, p. 341, Academic Press, Inc. , New York, N.; Y. (1983), the entire contents of which are incorporated herein by reference. Other examples include peralkylated amino acids, especially permethylated amino acids. For example, Combinatorial Chemistry, Eds. Wilson and Czarnik, Ch. 11, p. 235, John Wiley & Sons Inc. , New York, N.; Y. See (1997), the entire contents of which are incorporated herein by reference. Still other examples include amino acids whose amide moieties (and thus the amide backbone of the resulting peptide) have been replaced by, for example, a sugar ring, a steroid, a benzodiazepine, or a carbo cycle. For example, Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery, Ed. Manfred E. Wolff, Ch. 15, pp. 619-620, John Wiley & Sons Inc. , New York, N.; Y. See (1995), the entire contents of which are incorporated herein by reference. Methods for synthesizing peptides, polypeptides, peptidomimetics, and proteins are well known in the art (eg, US Pat. No. 5,420,109; M. Bodanzsky, Principles of Peptide Synthesis (1st ed). & 2d rev.ed.), Springer-Verlag, New York, NY (1984 & 1993), Chapter 7, Stewart and Young, Solid Phase Peptide Synthesis, (2d ed. Rockford, Ill. (1984), each of which is incorporated herein by reference). Thus, HRS polypeptides may be composed of naturally occurring and non-naturally occurring amino acids as well as amino acid analogs and mimetics.

ある特定の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、インビボで抗炎症活性を調節するか、または抗体もしくは自己反応性Ｔ細胞を遮断する活性を有することができる完全長ＨＲＳポリペプチドの最小活性断片を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。いくつかの実施形態では、そのような最小活性断片は、ＷＨＥＰドメイン（例えば、配列番号１の約アミノ酸１〜４３）またはその活性バリアントもしくは断片を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。いくつかの態様では、この最小活性断片は、アミノアシル化ドメイン（例えば、配列番号１の約アミノ酸５４〜３９８）またはその活性バリアントもしくは断片を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。いくつかの態様では、この最小活性断片は、アンチコドン結合ドメイン（すなわち、配列番号１の約アミノ酸４０６〜５０１）またはその活性バリアントもしくは断片を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。 In certain embodiments, the HRS polypeptide comprises a minimally active fragment of a full-length HRS polypeptide that can have activity in vivo to modulate anti-inflammatory activity or block antibodies or autoreactive T cells. Or consist of them or consist essentially of them. In some embodiments, such minimally active fragments comprise, consist of, or consist essentially of a WHEP domain (eg, about amino acids 1-43 of SEQ ID NO:1) or active variants or fragments thereof. Consists of. In some embodiments, the minimal active fragment comprises, consists of, or consists essentially of an aminoacylation domain (eg, about amino acids 54-398 of SEQ ID NO:1) or an active variant or fragment thereof. . In some embodiments, the minimally active fragment comprises, consists of, or consists essentially of an anticodon binding domain (ie, about amino acids 406-501 of SEQ ID NO:1) or an active variant or fragment thereof. .

ある特定の実施形態では、このＨＲＳポリペプチドは、約２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５０１、５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、５０８、もしくは５０９アミノ酸長、少なくとも約２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５０１、５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、５０８、もしくは５０９アミノ酸長、およびまたは最大約２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５０１、５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、５０８、もしくは５０９アミノ酸長であり、その間の範囲にある全ての整数を含み、表Ｈ１、表Ｈ２、もしくは表Ｈ４中のアミノ酸配列を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。 In certain embodiments, the HRS polypeptide is about 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 501, 502, 503, 504, 505, 506, 507, 508, or 509 amino acids long, at least about 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30. , 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55. , 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80. , 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 110, 120, 130, 140, 150. , 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400. , 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 501, 502, 503, 504, 505, 506, 507, 508, or 509 amino acids long, and/or up to about 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 4 0, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 501, 502, 503, 504, 505, 506, 507, 508, or 509 amino acids in length, including all integers in the range, the amino acid sequence in Table H1, Table H2, or Table H4 Include, consist of, or consist essentially of.

ある特定の実施形態では、このＨＲＳポリペプチドは、少なくとも１つの非正準活性、例えば、抗炎症活性、またはヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼに対する自己抗体（例えば、Ｊｏ−１抗体）と関連する疾患を有する対象からの自己抗体もしくまたは自己反応性Ｔ細胞との交差反応を有する。インビトロ細胞からのサイトカイン放出の慣用的な測定ベースの、および動物研究を含む、抗炎症活性を決定するためのアッセイは、当該技術分野で十分確立されており（例えば、Ｗｉｔｔｍａｎｎｅｔａｌ．，ＪＶｉｓＥｘｐ．（６５）：ｅ４２０３．ｄｏｉ：１０．３７９１／４２０３，２０１２、Ｆｅｌｄｍａｎｅｔａｌ．，ＭｏｌＣｅｌｌ．４７：５８５−９５，２０１２、Ｃｌｕｔｔｅｒｂｕｃｋｅｔａｌ．，ＪＰｒｏｔｅｏｍｉｃｓ．７４：７０４−１５，２０１１，ＧｉｄｄｉｎｇｓａｎｄＭａｉｔｒａ，ＪＢｉｏｍｏｌＳｃｒｅｅｎ．１５：１２０４−１０，２０１０、Ｗｉｊｎｈｏｖｅｎｅｔａｌ．，ＧｌｙｃｏｃｏｎｊＪ．２５：１７７−８５，２００８、およびＦｒｏｗｅｔａｌ．，ＭｅｄＲｅｓＲｅｖ．２４：２７６−９８，２００４を参照のこと）、抗炎症活性をプロファイリングおよび最適化するために、容易に使用され得る。例示的なインビボ実験系もまた、添付の実施例中に記載されている。 In certain embodiments, the HRS polypeptide is a subject having at least one non-canonical activity, such as anti-inflammatory activity, or a disease associated with autoantibodies to histidyl-tRNA synthetase (eg, Jo-1 antibody). Have cross-reactivity with autoantibodies or autoreactive T cells. Assays for determining anti-inflammatory activity, including routine measurement-based and animal studies of cytokine release from cells in vitro, are well established in the art (eg, Wittmann et al., J Vis. Exp.(65):e4203.doi:10.3791/4203,2012, Feldman et al., Mol Cell. 47:585-95,2012, Clutterbuck et al., J Proteomics.74:704-15, 2011,. 15: 1204-10, 2010, Wijnhoven et al., Glycoconj J. 25:177-85, 2008, and Flow et al., Med Res Rev. 24:276-98, 2004. ,) and can easily be used to profile and optimize anti-inflammatory activity. An exemplary in vivo experimental system is also described in the accompanying examples.

いくつかの実施形態では、このＨＲＳポリペプチドは、最大約１〜５×１０−７Ｍまたはそれ以上の濃度まで、競合的ＥＬＩＳＡにおいて、野生型ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼに対する疾患関連の自己抗体の結合（例えば、Ｊｏ−１抗体）について顕著には競合しない。したがって、いくつかの実施形態では、このＨＲＳポリペプチドは、競合的ＥＬＩＳＡにおいて測定した場合、野生型ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（配列番号１）よりも、疾患関連の自己抗体に対する低い親和性を有する。いくつかの実施形態では、このＨＲＳポリペプチドは、野生型ヒト（配列番号１）に対する疾患関連の自己抗体の親和性よりも、少なくとも約１０倍少ない、または少なくとも約２０倍少ない、または少なくとも約５０倍少ない、または少なくとも約１００倍少ない、疾患関連の自己抗体（例えば、Ｊｏ−１抗体）に対する見かけの親和性を有する。 In some embodiments, the HRS polypeptide binds a disease-related autoantibody to wild-type histidyl-tRNA synthetase (eg, in a competitive ELISA) up to a concentration of about 1-5×10 −7 M or higher (eg, , Jo-1 antibody). Thus, in some embodiments, the HRS polypeptide has a lower affinity for disease-associated autoantibodies than wild-type histidyl-tRNA synthetase (SEQ ID NO: 1) as measured in a competitive ELISA. In some embodiments, the HRS polypeptide is at least about 10-fold less, or at least about 20-fold less, or at least about 50-fold less than the affinity of the disease-associated autoantibody for wild-type human (SEQ ID NO: 1). It has less than, or at least about 100 times less, an apparent affinity for disease-associated autoantibodies (eg, Jo-1 antibody).

ＨＲＳポリペプチドのいずれかにおいて、ＨＲＳポリペプチドのＮ末端酸（例えば、Ｎ末端Ｍｅｔ）が欠失され得ることを理解されよう。 It will be appreciated that in any of the HRS polypeptides the N-terminal acid of the HRS polypeptide (eg N-terminal Met) may be deleted.

他の実施形態では、他の（非ＨＡＲＳ）タンパク質（例えば、異種タンパク質またはポリペプチド）へのＨＲＳポリペプチドの融合タンパク質もまた、含まれ、これらの融合タンパク質は、ＨＲＳポリペプチドの生物学的活性、分泌、抗原性、ターゲティング、生物学的寿命、細胞膜もしくは血液脳関門を貫通する能力、または薬物動態学的性質を調節することができる。薬物動態学的性質を改善する融合タンパク質（「ＰＫモディファイヤー」）の例としては、限定することなく、ヒトアルブミン（Ｏｓｂｏｒｎｅｔａｌ．：Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４５６（１−３）：１４９−１５８，（２００２））、抗体Ｆｃドメイン、ポリＧｌｕまたはポリＡｓｐ配列、およびトランスフェリンへの融合物がある。さらに、アミノ酸Ｐｒｏ、Ａｌａ、およびＳｅｒからなる（「ＰＡＳ化」）コンフォメーション的に無秩序なポリペプチド配列、またはヒドロキシエチルデンプン（商標ＨＥＳＹＬＡＴＩＯＮ（登録商標）の下で販売されている）との融合物は、ＨＲＳポリペプチドの流体力学的体積を増大させる単純な方法を提供する。この追加の伸長は、嵩高いランダムな構造をとり、それは、得られる融合タンパク質のサイズを著しく増大させる。この手段によって、腎臓濾過を介したより小さいＨＲＳポリペプチドの一般に急速なクリアランスが数桁遅延される。さらに、ＩｇＧ融合タンパク質を使用すると、いくつかの融合タンパク質が血液脳関門を貫通することが可能になることも示された（Ｆｕｅｔａｌ．，（２０１０）ＢｒａｉｎＲｅｓ．１３５２：２０８−１３）。 In other embodiments, fusion proteins of the HRS polypeptide to other (non-HARS) proteins (eg, heterologous proteins or polypeptides) are also included, the fusion proteins comprising the biological activity of the HRS polypeptide. , Secretion, antigenicity, targeting, biological longevity, ability to penetrate cell membranes or the blood-brain barrier, or pharmacokinetic properties. An example of a fusion protein (“PK modifier”) that improves pharmacokinetic properties includes, without limitation, human albumin (Osborn et al.: Eur. J. Pharmacol. 456(1-3):149- 158, (2002)), antibody Fc domains, poly-Glu or poly-Asp sequences, and fusions to transferrin. Furthermore, a conformationally disordered polypeptide sequence consisting of the amino acids Pro, Ala, and Ser ("PASylated"), or a fusion with hydroxyethyl starch (sold under the trademark HESYLATION®). Provides a simple way to increase the hydrodynamic volume of HRS polypeptides. This additional extension takes on a bulky random structure, which significantly increases the size of the resulting fusion protein. By this means, the generally rapid clearance of smaller HRS polypeptides via renal filtration is delayed by several orders of magnitude. Furthermore, the use of IgG fusion proteins has also been shown to allow some fusion proteins to penetrate the blood-brain barrier (Fu et al., (2010) Brain Res. 1352:208-13). ..

ＨＲＳポリペプチドの抗原性または免疫調節性を調節する融合タンパク質の例としては、例えば、ＭＨＣクラスＩおよびＩＩタンパク質、ｂ−２ミクログロブリン、ＬＦＡ−３の部分、重鎖のＦｃ領域の部分、ならびにこれらのコンジュゲートおよび誘導体を含めたＴ細胞結合リガンドへの融合物があり、このような融合タンパク質の例は、例えば、ＥＰ１９６４８５４、米国特許第５，４６８，４８１号、同第５，１３０，２９７号、同第５，６３５，３６３号、同第６，４５１，３１４号、およびＵＳ２００９／０２８０１３５に記載されている。 Examples of fusion proteins that modulate the antigenicity or immunoregulatory properties of HRS polypeptides include, for example, MHC class I and II proteins, b-2 microglobulin, a portion of LFA-3, a portion of the Fc region of the heavy chain, and There are fusions to T cell binding ligands, including these conjugates and derivatives, and examples of such fusion proteins are described in, for example, EP1964854, US Pat. Nos. 5,468,481, 5,130,297. No. 5,635,363, No. 6,451,314, and US 2009/0280135.

さらに、いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、他の十分に特徴付けられた分泌タンパク質に由来する合成の、または天然に存在する分泌シグナル配列を含み得る。いくつかの実施形態では、かかるタンパク質は、原位置でＨＲＳポリペプチドを形成するために、タンパク質分解的切断によって加工することができる。いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、細胞内または細胞外の位置でＨＲＳポリペプチドの原位置発現および産生を可能にするための異種タンパク質分解的切断部位を含み得る。他の融合タンパク質は、例えば、新しいＮ末端アミノ酸を提供するためのユビキチンへのＨＲＳポリペプチドの融合、または細胞外媒体中へのＨＲＳポリペプチドの高レベル分泌を媒介するための分泌シグナルの使用、または精製もしくは検出を改善するためのＮ末端もしくはＣ末端エピトープタグ、および細胞透過性ペプチドへの融合も含み得る。 Further, in some embodiments, the HRS polypeptide may include synthetic or naturally occurring secretory signal sequences derived from other well-characterized secretory proteins. In some embodiments, such proteins can be processed by proteolytic cleavage to form the HRS polypeptide in situ. In some embodiments, the HRS polypeptide may include a heterologous proteolytic cleavage site to allow in situ expression and production of the HRS polypeptide at an intracellular or extracellular location. Other fusion proteins include, for example, fusion of the HRS polypeptide to ubiquitin to provide a new N-terminal amino acid, or use of a secretory signal to mediate high level secretion of the HRS polypeptide into the extracellular medium, Alternatively, it may also include an N-terminal or C-terminal epitope tag to improve purification or detection, and a fusion to a cell penetrating peptide.

ある特定の態様では、非天然アミノ酸の使用は、ＨＲＳポリペプチドの選択された非正準活性を改変する（例えば、増加させる）ために、またはタンパク質のインビボもしくはインビトロ半減期を変更するために、利用され得る。非天然アミノ酸はまた、本明細書の他の箇所に記載されるように、ＨＲＳタンパク質の（選択的）化学的改変（例えば、ペグ化）を促進するためにも使用され得る。例えば、ある特定の非天然アミノ酸は、所与のタンパク質へのＰＥＧなどのポリマーの選択的結合を可能にし、それによって、その薬物動態学的特性を改善する。 In certain aspects, the use of unnatural amino acids, to alter (eg, increase) a selected non-canonical activity of the HRS polypeptide, or to alter the in vivo or in vitro half-life of the protein, Can be used. Unnatural amino acids can also be used to facilitate (selective) chemical modification (eg, pegylation) of HRS proteins, as described elsewhere herein. For example, certain unnatural amino acids allow the selective attachment of polymers such as PEG to a given protein, thereby improving its pharmacokinetic properties.

ある特定の実施形態は、１つ以上のＨＲＳポリペプチドと共有結合している少なくとも１つのＦｃ領域を含むＨＲＳ−Ｆｃコンジュゲートを含む。ＨＲＳ−Ｆｃコンジュゲートの例には、融合タンパク質および種々の形態の化学的に架橋されたタンパク質が含まれる。任意の数の種からの野生型配列、ならびにそれらのバリアント、断片、ハイブリッド、および化学的に改変された形態を含む、ＨＲＳ−Ｆｃコンジュゲートにおいて使用され得る。ＨＲＳ−Ｆｃポリペプチドはまた、本明細書に記載され、当該技術分野で公知のように、ペプチドリンカーおよび化学的リンカーを含む、Ｆｃ領域をＨＲＳポリペプチドから典型的には分離する１つ以上のリンカーもまた、（任意に）含み得る。これらのＨＲＳ−Ｆｃコンジュゲートのいずれかにおいて、ＨＲＳポリペプチドのネイティブのＮもしくはＣ末端アミノ酸、またはＦｃドメイン中のネイティブのＮもしくはＣ末端アミノ酸が、例えば、発現およびもしくはクローニングを促進するため、または２つのタンパク質間のリンカー配列として機能するために、欠失し得、および／または非ネイティブアミノ酸で置き換えられ得ることが理解されよう。 Certain embodiments include HRS-Fc conjugates that include at least one Fc region covalently linked to one or more HRS polypeptides. Examples of HRS-Fc conjugates include fusion proteins and various forms of chemically crosslinked proteins. It can be used in HRS-Fc conjugates, including wild-type sequences from any number of species, and variants, fragments, hybrids, and chemically modified forms thereof. The HRS-Fc polypeptide is also one or more of those that separate the Fc region typically from the HRS polypeptide, including peptide linkers and chemical linkers, as described herein and known in the art. A linker may also (optionally) be included. In any of these HRS-Fc conjugates, the native N- or C-terminal amino acids of the HRS polypeptide, or the native N- or C-terminal amino acids in the Fc domain, for example, to facilitate expression and/or cloning, or It will be appreciated that it may be deleted and/or replaced with a non-native amino acid to serve as a linker sequence between the two proteins.

ＨＲＳ−Ｆｃコンジュゲートポリペプチドは、非コンジュゲート化または未改変ＨＲＳポリペプチド、例えば、それに結合されたＦｃ領域を有さない同じまたは類似の配列の対応するＨＲＳポリペプチドと比較して、種々の利点を提供し得る。単なる例示として、１つ以上のＦｃ領域の共有結合は、同じまたは類似の配列を有する未改変ＨＲＳポリペプチドと比較して、例えば、Ｆｃ領域関連エフェクター機能（例えば、古典的補体カスケードの活性化、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を介した免疫エフェクター細胞との相互作用、免疫グロブリンの区画化）、細胞取り込み、細胞内輸送、組織分布、および／またはバイオアベイラビリティを提供することによって、ＨＲＳポリペプチドの溶解度、半減期（例えば、血清中、選択された組織中、保存条件下での試験管中、例えば、室温でまたは冷蔵下で）、ダイマー化またはマルチマー化特性、生物学的活性（単数または複数）を変更（例えば、増加、減少）させ得る。ある特定の態様では、Ｆｃ領域は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、および／または抗体依存性細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）に関するエフェクター機能を付与でき、これらは、腫瘍細胞および感染細胞などの特定の標的細胞を一掃するにあたり、役割を果たすと考えられている。 The HRS-Fc conjugated polypeptide may be compared to a non-conjugated or unmodified HRS polypeptide, eg, a corresponding HRS polypeptide of the same or similar sequence that does not have an Fc region attached to it. Can provide benefits. Merely by way of example, covalent attachment of one or more Fc regions can be compared to, eg, an Fc region-related effector function (eg, activation of the classical complement cascade) as compared to an unmodified HRS polypeptide having the same or similar sequences. , Interaction with immune effector cells via Fc receptors (FcR), compartmentalization of immunoglobulins), cellular uptake, intracellular trafficking, tissue distribution, and/or bioavailability of HRS polypeptides. Solubility, half-life (eg in serum, in selected tissues, in vitro under storage conditions, eg at room temperature or under refrigeration), dimerization or multimerization properties, biological activity (single or multiple) ) Can be changed (eg, increased, decreased). In certain aspects, the Fc region has effector functions for complement-dependent cytotoxicity (CDC), antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC), and/or antibody-dependent cell-mediated phagocytosis (ADCP). Can be donated and are believed to play a role in clearing certain target cells such as tumor cells and infected cells.

ある特定の実施形態は、ＨＲＳ−Ｆｃ融合タンパク質を使用する。「融合タンパク質」は、融合タンパク質を作製する方法と同様、本明細書の他の場所に定義され、当該技術分野で周知である（例えば、Ｆｃ融合タンパク質に関する一般的な開示および方法については、米国特許第５，１１６，９６４号、同第５，４２８，１３０号、同第５，４５５，１６５号、同第５，５１４，５８２号、同第６，４０６，６９７号、同第６，２９１，２１２号、および同第６，３００，０９９号を参照のこと）。ＨＲＳ−Ｆｃ融合タンパク質では、Ｆｃ領域は、ＨＲＳポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端、または両方に融合され得る。いくつかの実施形態では、１つ以上のＦｃ領域は、例えば、第１のＨＲＳ配列（例えば、ドメイン）と第２のＨＲＳ配列（例えば、ドメイン）との間にＦｃ領域を配置することによって、ＨＲＳ配列に対して内部に融合され得、第１のＨＲＳ配列は、Ｆｃ領域のＮ末端に融合され、第２のＨＲＳ配列は、Ｆｃ領域のＣ末端に融合される。特定の実施形態では、第１および第２のＨＲＳ配列は、同一である。他の実施形態では、第１および第２のＨＲＳ配列は、異なる（例えば、これらは、ＨＲＳポリペプチドの異なる機能的ドメインを含む）。ある特定のＨＲＳ−Ｆｃ融合タンパク質はまた、さらなる異種タンパク質配列、すなわち、非Ｆｃ領域および非ＨＲＳポリペプチド配列もまた含み得る。 Certain embodiments use a HRS-Fc fusion protein. “Fusion protein” is defined elsewhere herein and is well known in the art, as are methods for making fusion proteins (eg, see US for general disclosure and methods regarding Fc fusion proteins). Patent Nos. 5,116,964, 5,428,130, 5,455,165, 5,514,582, 6,406,697, 6,291. , 212, and 6,300,099). In the HRS-Fc fusion protein, the Fc region can be fused to the N-terminus, C-terminus, or both of the HRS polypeptide. In some embodiments, the one or more Fc regions are, for example, by placing the Fc region between a first HRS sequence (eg, domain) and a second HRS sequence (eg, domain). It may be fused internally to the HRS sequence, with the first HRS sequence fused to the N-terminus of the Fc region and the second HRS sequence fused to the C-terminus of the Fc region. In certain embodiments, the first and second HRS sequences are the same. In other embodiments, the first and second HRS sequences are different (eg, they contain different functional domains of the HRS polypeptide). Certain HRS-Fc fusion proteins may also include additional heterologous protein sequences, ie, non-Fc regions and non-HRS polypeptide sequences.

「ＨＲＳ−Ｆｃ」という用語は、ＨＲＳポリペプチドへのＦｃ領域のＮ末端またはＣ末端結合を示し得るが、必ずしも示すわけではない。例えば、ある特定の場合によっては、「Ｆｃ−ＨＲＳ」という用語は、ＨＲＳポリペプチドのＮ末端へのＦｃ領域の融合を示し、「ＨＲＳ−Ｆｃ」という用語は、ＨＲＳポリペプチドのＣ末端へのＦｃ領域の融合を示す。しかしながら、いずれの用語も、Ｆｃ領域およびＨＲＳポリペプチドの任意の融合タンパク質またはコンジュゲートをより一般に指すために使用され得る。 The term "HRS-Fc" may, but does not necessarily, indicate N-terminal or C-terminal binding of the Fc region to a HRS polypeptide. For example, in certain cases, the term "Fc-HRS" refers to the fusion of the Fc region to the N-terminus of the HRS polypeptide, and the term "HRS-Fc" refers to the C-terminus of the HRS polypeptide. The fusion of the Fc region is shown. However, either term may be used more generally to refer to any fusion protein or conjugate of an Fc region and HRS polypeptide.

いくつかの実施形態では、ＨＲＳ−Ｆｃ融合タンパク質は、任意に、リンカーペプチドによって分離された、単一のＦｃドメインにカップリングされたＨＲＳポリペプチドのタンデム反復コピーを含み得る。例示的なタンデム反復ＨＲＳ−Ｆｃ融合タンパク質は、表Ｈ５中に提供される。特定のタンデム反復ＨＲＳ−Ｆｃコンジュゲートの調製および配列は、実施例に例示される。
In some embodiments, the HRS-Fc fusion protein can optionally include tandem repeat copies of the HRS polypeptide coupled to a single Fc domain, separated by a linker peptide. Exemplary tandem repeat HRS-Fc fusion proteins are provided in Table H5. Preparation and sequences of specific tandem repeat HRS-Fc conjugates are exemplified in the examples.

ある特定の実施形態は、ＨＲＳ−Ｆｃコンジュゲートに関し、例えば、１つ以上のＦｃ領域が、ＨＲＳポリペプチドに化学的にコンジュゲート化されるか、または架橋された、ＨＲＳ−Ｆｃコンジュゲートに関する。これらおよび関連の態様では、Ｆｃ領域は、Ｎ末端領域（例えば、最初の１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００などのアミノ酸）、内部領域（Ｎ末端領域とＣ末端領域との間）、および／またはＣ末端領域（例えば、最後の１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００などのアミノ酸内）において、ＨＲＳポリペプチドにコンジュゲート化され得る。ポリペプチドは、当該技術分野の種々の慣用的な技術に従って、他のポリペプチドにコンジュゲート化されるか、または架橋され得る。例えば、ある特定の技術は、Ｄ、Ｅ、およびＣ末端カルボキシル基を介して共有結合するカルボキシル−反応性カルボジイミド架橋剤ＥＤＣ（またはＥＤＡＣ）を使用する。他の技術は、ＫおよびＮ末端アミノ基を介して共有結合する活性化ＥＤＣを使用する）。なお他の技術は、システイン残基のチオール基を介して共有結合するｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）またはスルホ−ＭＢＳを使用する（チオールコンジュゲート化に使用され得るシステイン操作されたＩｇ領域については、米国特許出願第２００７／００９２９４０号もまた参照のこと）。かかる架橋されたタンパク質はまた、切断可能なまたはそうでなければ放出可能なリンカー（例えば、酵素的に切断可能なリンカー、加水分解可能なリンカー）、および切断不能なリンカー（すなわち、生理学的に安定なリンカー）を含むリンカーもまた含み得る。ある特定の実施形態は、例えば、米国特許出願第２００６／０２６９５５３号に記載されるように、Ｆｃ領域とＨＲＳポリペプチドとの間の架橋剤として、非ペプチドポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー；ＨＲＳ−Ｎ−ＰＥＧ−Ｎ−Ｆｃコンジュゲート）を使用し得る。Ｆｃ領域コンジュゲート化部位の例示的な記載については、米国特許出願第２００７／０２６９３６９号もまた参照のこと。 Certain embodiments relate to HRS-Fc conjugates, eg, HRS-Fc conjugates, wherein one or more Fc regions are chemically conjugated to the HRS polypeptide or cross-linked. In these and related aspects, the Fc region comprises an N-terminal region (eg, the first 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, etc. amino acids), an internal region (N-terminal region and Between the C-terminal region) and/or the C-terminal region (eg, within the last 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, etc. amino acids) to the HRS polypeptide. It can be gated. Polypeptides can be conjugated or cross-linked to other polypeptides according to various conventional techniques in the art. For example, one particular technique uses the carboxyl-reactive carbodiimide crosslinker EDC (or EDAC) covalently attached through the D, E, and C-terminal carboxyl groups. Other techniques use activated EDC covalently linked via the K and N-terminal amino groups). Yet another technique uses m-maleimidobenzoyl-N-hydroxysuccinimide ester (MBS) or sulfo-MBS covalently linked through the thiol group of cysteine residues (cysteine engineered that can be used for thiol conjugation. See also U.S. Patent Application No. 2007/0092940 for additional Ig regions). Such cross-linked proteins also include cleavable or otherwise releasable linkers (eg, enzymatically cleavable linkers, hydrolysable linkers), and non-cleavable linkers (ie, physiologically stable Linkers) which may also include: Certain embodiments include non-peptide polymers (eg, PEG polymers; HRS-N as crosslinkers between Fc regions and HRS polypeptides, eg, as described in US Patent Application 2006/0269553). -PEG-N-Fc conjugate) may be used. See also US patent application 2007/0269369 for an exemplary description of Fc region conjugation sites.

ある特定の実施形態では、以下により詳細に議論されるように、野生型Ｆｃ領域と比較して変更された特性または生物学的活性を有するものを含む、バリアントまたはそうでなければ改変されたＦｃ領域が使用され得る。改変されたＦｃ領域の例には、例えば、野生型配と比較して１つも以上のアミノ酸の置換、挿入、欠失、もしくは短縮によって変異した配列を有するもの、異なる免疫グロブリンクラス／サブクラス由来のドメインからなるハイブリッドＦｃポリペプチド、変更されたグリコシル化／シアル酸付加パターンを有するＦｃポリペプチド、ならびに例えばビオチン化（例えば、米国特許出願第２０１０／０２０９４２４号を参照のこと）、リン酸化、硫酸化などによって改変されたもしくは誘導体化されたＦｃポリペプチド、または上述の任意の組み合わせが含まれる。かかる修飾は、対応する野生型Ｆｃ配列と比較して、本明細書に記載される他の特性の中で、１つ以上の特定のＦｃＲ（例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩｂ、ＦｃＲｎ）へのＦｃ領域の結合特性、その薬物動態学的特性（例えば、安定性または半減期、バイオアベイラビリティ、組織分布、分布容積、濃度、排出速度定数、排出速度、曲線下面積（ＡＵＣ）、クリアランス、Ｃ_ｍａｘ、ｔ_ｍａｘ、Ｃ_ｍｉｎ、変動）、その免疫原性、その補体結合（ｆｉｘａｔｉｏｎ）もしくは活性化、および／またはＦｃ領域のＣＤＣ／ＡＤＣＣ／ＡＤＣＰ関連活性を変更（例えば、増加、減少）させるために使用され得る。 In certain embodiments, as discussed in more detail below, a variant or otherwise modified Fc, including those with altered properties or biological activity as compared to the wild-type Fc region. Areas can be used. Examples of modified Fc regions include, for example, those having a sequence that is mutated by one or more amino acid substitutions, insertions, deletions, or truncations as compared to the wild type configuration, from different immunoglobulin classes/subclasses Hybrid Fc polypeptides consisting of domains, Fc polypeptides with altered glycosylation/sialylation patterns, as well as eg biotinylation (see, eg, US Patent Application 2010/0209424), phosphorylation, sulfation Fc polypeptides modified or derivatized by such as, or any combination of the above. Such modifications may include one or more specific FcRs (eg, FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb, FcγRIIc, FcγRIIIa, FcγRIIIb, among other properties described herein, relative to the corresponding wild-type Fc sequence. , FcRn) binding properties of the Fc region, its pharmacokinetic properties (eg stability or half-life, bioavailability, tissue distribution, volume of distribution, concentration, elimination rate constant, elimination rate, area under the curve (AUC)). , Clearance, C _max , t _max , C _min , fluctuations), its immunogenicity, its complementation or activation, and/or its CDC/ADCC/ADCP-related activity in the Fc region (eg, increased). , Reduction).

本明細書に提供されるＨＲＳ−Ｆｃコンジュゲートの「Ｆｃ領域」は、免疫グロブリン（Ｉｇ）分子の重鎖から通常誘導される。典型的なＩｇ分子は、２つの重鎖および２つの軽鎖からなる。重鎖は、少なくとも３つの機能的領域：Ｆｄ領域、Ｆｃ領域（断片結晶化可能な領域）、およびヒンジ領域へと分割され得、後者は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＤ免疫グロブリンにおいてのみ見出される。Ｆｄ領域は、重鎖の可変（Ｖ_Ｈ）および定常（ＣＨ_１）ドメインを含み、軽鎖の可変（Ｖ_Ｌ）および定常（Ｃ_Ｌ）ドメインと一緒になって、抗原結合性断片またはＦａｂ領域を形成する。 The "Fc region" of the HRS-Fc conjugates provided herein is usually derived from the heavy chain of immunoglobulin (Ig) molecules. A typical Ig molecule consists of two heavy chains and two light chains. The heavy chain can be divided into at least three functional regions: the Fd region, the Fc region (fragment crystallizable region), and the hinge region, the latter found only in IgG, IgA, and IgD immunoglobulins. Fd region comprises the heavy chain variable _{(V H)} and constant (CH ₁₎ domains, together with a variable _{(V L)} and a constant _{(C L)} domain of the light chain, antigen-binding fragments or Fab region To form.

ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＤ免疫グロブリンのＦｃ領域は、ＣＨ_２およびＣＨ_３領域としてそれぞれ指定される重鎖定常ドメイン２および３を含み、ＩｇＥおよびＩｇＭ免疫グロブリンのＦｃ領域は、ＣＨ_２、ＣＨ_３、およびＣＨ_４領域としてそれぞれ指定される重鎖定常ドメイン２、３、および４を含む。Ｆｃ領域は、主として、例えば、補体結合およびエフェクター細胞の同族Ｆｃ受容体との結合を含む免疫グロブリンエフェクター機能を担う。 IgG, IgA, and IgD immunoglobulin Fc region comprises CH ₂ and CH ₃ heavy chain constant domain 2, and 3 are designated respectively as a region, the Fc region of IgE and IgM _{immunoglobulins,} CH 2, _CH 3, And the heavy chain constant domains 2, 3 and 4 designated as the CH ₄ region, respectively. The Fc region is primarily responsible for immunoglobulin effector functions, including, for example, complement fixation and binding of effector cells to their cognate Fc receptors.

ヒンジ領域（ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＤにおいて見出される）は、Ｆａｂ部分がＦｃ領域に対して空間的に自由に動くように、可撓性スペーサーとして作用する。定常領域とは対照的に、ヒンジ領域は、免疫グロブリンクラスおよびサブクラスの中で、配列および長さの両方において変動して、構造的に多様である。ヒンジ領域はまた、炭水化物結合のためのいくつかの構造的に別個の型の部位を含む、１つ以上のグリコシル化部位も含み得る。例えば、ＩｇＡ１は、ヒンジ領域の１７アミノ酸のセグメント内に５つのグリコシル化部位を含み、腸プロテアーゼに対するヒンジ領域ポリペプチドの顕著な抵抗性を付与する。ＣＨ_２ドメインのヒンジ近位領域中の残基は、免疫グロブリンとそのそれぞれのＦｃ受容体との間の相互作用の特異性にも影響し得る（例えば、Ｓｈｉｎｅｔａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０：１７７−１８６，１９９３を参照のこと）。 The hinge region (found in IgG, IgA, and IgD) acts as a flexible spacer so that the Fab portion is free to move spatially relative to the Fc region. In contrast to the constant region, the hinge region is structurally diverse within the immunoglobulin class and subclass, varying in both sequence and length. The hinge region may also include one or more glycosylation sites, including several structurally distinct types of sites for carbohydrate binding. For example, IgA1 contains five glycosylation sites within a 17 amino acid segment of the hinge region, conferring a significant resistance of the hinge region polypeptide to intestinal proteases. Residues of CH ₂ domain of the hinge proximal in the region may also affect the specificity of the interaction between immunoglobulins and their respective Fc receptors (e.g., Shin et al., Intern.Rev.Immunol 10:177-186, 1993).

したがって、「Ｆｃ領域」または「Ｆｃ断片」または「Ｆｃ」という用語は、本明細書で使用される場合、それらの断片およびバリアントおよび組み合わせを含む、１つ以上の選択された免疫グロブリン由来のＣＨ_２領域、ＣＨ_３領域、および／またはＣＨ_４領域のうちの１つ以上を含むタンパク質を指す。「Ｆｃ領域」はまた、免疫グロブリンの重鎖定常領域のうちの１つ以上のヒンジ領域も含み得る。ある特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、免疫グロブリンのＣＨ_１、Ｃ_Ｌ、Ｖ_Ｌ、および／またはＶ_Ｈ領域のうちの１つ以上を含まない。 Thus, the term "Fc region" or "Fc fragment" or "Fc" as used herein includes CH from one or more selected immunoglobulins, including fragments and variants and combinations thereof. ₂ regions, refers to a protein comprising one or more of the CH ₃ region, and / or CH ₄ region. The "Fc region" may also include the hinge region of one or more of the immunoglobulin heavy chain constant regions. In certain embodiments, Fc region does not comprise one or more of the _CH _1, C L, _{V L,} and / or _{V H} region of an immunoglobulin.

このＦｃ領域は、それらのサブクラスおよび組み合わせを含む、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭが含まれるが、これらに限定されない、任意の１つ以上の免疫グロブリンクラスのＣＨ_２領域、ＣＨ_３領域、ＣＨ_４領域、および／またはヒンジ領域から誘導され得る。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、サブクラスＩｇＡ１および／またはＩｇＡ２を含む、ＩｇＡ免疫グロブリンから誘導される。ある特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＤ免疫グロブリンから誘導される。特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＥ免疫グロブリンから誘導される。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、および／またはＩｇＧ４を含む、ＩｇＧ免疫グロブリンから誘導される。ある特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＭ免疫グロブリンから誘導される。 The Fc region comprises the subclasses thereof, and combinations, IgA, IgD, IgE, IgG, including but IgM, but not limited to, any one or more of the CH ₂ region of an immunoglobulin classes, CH ₃ region, CH ₄ region can be derived, and / or from the hinge region. In some embodiments, the Fc region is derived from an IgA immunoglobulin, including subclass IgA1 and/or IgA2. In certain embodiments, the Fc region is derived from IgD immunoglobulin. In certain embodiments, the Fc region is derived from IgE immunoglobulin. In some embodiments, the Fc region is derived from an IgG immunoglobulin, including subclass IgG1, IgG2, IgG2, IgG3, and/or IgG4. In certain embodiments, the Fc region is derived from IgM immunoglobulin.

ある特定のＦｃ領域は、１つ以上のＦｃ−受容体（ＦｃＲ）に対する特異的結合を実証する。Ｆｃ受容体のクラスの例には、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）、Ｆｃα受容体（ＦｃαＲ）、Ｆｃε受容体（ＦｃεＲ）、および新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）が含まれる。例えば、ある特定のＦｃ領域は、ＦｃαＲ、ＦｃεＲ、および／またはＦｃＲｎと比較して、１つ以上のＦｃγＲへの結合（またはそれに対する親和性）を増加させる。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上のＦｃγＲ、ＦｃεＲ、および／またはＦｃＲｎと比較して、ＦｃαＲへの結合を増加させる。他の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上のＦｃγＲ、ＦｃαＲ、および／またはＦｃＲｎと比較して、ＦｃαＲ（例えば、ＦｃαＲＩ）への結合を増加させる。特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上のＦｃγＲ、ＦｃαＲ、および／またはＦｃεＲと比較して、ＦｃＲｎへの結合を増加させる。ある特定の実施形態では、１つ以上の選択されたＦｃＲへのＦｃ領域の結合（または親和性）は、１つ以上の異なるＦｃＲに対するその結合（またはそれに対する親和性）と比較して、典型的には、約１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、２００倍、３００倍、４００倍、５００倍、６００倍、７００倍、８００倍、９００倍、１０００倍またはそれ以上（その間の全ての整数を含む）増加する。 Certain Fc regions demonstrate specific binding to one or more Fc-receptors (FcRs). Examples of classes of Fc receptors include Fcγ receptors (FcγR), Fcα receptors (FcαR), Fcε receptors (FcεR), and neonatal Fc receptors (FcRn). For example, a particular Fc region has increased binding (or affinity) to one or more FcγRs as compared to FcαR, FcεR, and/or FcRn. In some embodiments, the Fc region has increased binding to FcαR as compared to one or more FcγR, FcεR, and/or FcRn. In other embodiments, the Fc region has increased binding to FcαR (eg, FcαRI) compared to one or more FcγR, FcαR, and/or FcRn. In certain embodiments, the Fc region has increased binding to FcRn compared to one or more FcγR, FcαR, and/or FcεR. In certain embodiments, the binding (or affinity) of an Fc region to one or more selected FcRs is typically compared to its binding (or affinity) to one or more different FcRs. Specifically, about 1.5 times, 2 times, 2.5 times, 3 times, 3.5 times, 4 times, 4.5 times, 5 times, 6 times, 7 times, 8 times, 9 times, 10 times. 20x, 20x, 25x, 30x, 40x, 50x, 60x, 70x, 80x, 90x, 100x, 200x, 300x, 400x, 500x, 600x, Increase by 700 times, 800 times, 900 times, 1000 times or more (including all integers in between).

ＦｃγＲの例には、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ、およびＦｃγＲＩＩＩｂが含まれる。ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）は、マクロファージおよび樹状細胞上で発現され、食作用、呼吸性バースト、サイトカイン刺激、および樹状細胞エンドサイトーシス輸送において役割を果たす。ＦｃγＲＩの発現は、ＧＭ−ＣＳＦおよびγ−インターフェロン（γ−ＩＦＮ）の両方によって上方調節され、インターロイキン−４（ＩＬ−４）によって下方調節される。ＦｃγＲＩＩａは、多形核白血球（ＰＭＮ）、マクロファージ、樹状細胞、および肥満細胞上で発現される。ＦｃγＲＩＩａは、食作用、呼吸性バースト、およびサイトカイン刺激において役割を果たす。ＦｃγＲＩＩａの発現は、ＧＭ−ＣＳＦおよびγ−ＩＦＮによって上方調節され、ＩＬ−４によって減少される。ＦｃγＩＩｂは、Ｂ細胞、ＰＭＮ、マクロファージ、および肥満細胞上で発現される。ＦｃγＩＩｂは、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）媒介性の応答を阻害し、したがって、阻害受容体である。ＦｃγＲＩＩｃの発現は、静脈内免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）およびＩＬ−４によって上方調節され、γ−ＩＦＮによって減少される。ＦｃγＲＩＩｃは、ＮＫ細胞上で発現される。ＦｃγＲＩＩＩａは、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、肥満細胞、および血小板上で発現される。この受容体は、食作用、呼吸性バースト、サイトカイン刺激、血小板凝集および脱顆粒、ならびにＮＫ媒介性ＡＤＣＣに関与する。ＦｃγＲＩＩＩの発現は、Ｃ５ａ、ＴＧＦ−β、およびγ−ＩＦＮによって上方調節され、ＩＬ−４によって下方調節される。ＦｃγＲＩＩＩｂは、ＰＭＮ上で発現されるＧＰＩ結合型受容体である。 Examples of FcγR include FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb, FcγRIIc, FcγRIIIa, and FcγRIIIb. FcγRI (CD64) is expressed on macrophages and dendritic cells and plays a role in phagocytosis, respiratory burst, cytokine stimulation, and dendritic cell endocytic transport. FcγRI expression is upregulated by both GM-CSF and γ-interferon (γ-IFN) and downregulated by interleukin-4 (IL-4). FcγRIIa is expressed on polymorphonuclear leukocytes (PMNs), macrophages, dendritic cells, and mast cells. FcγRIIa plays a role in phagocytosis, respiratory burst, and cytokine stimulation. FcγRIIa expression is upregulated by GM-CSF and γ-IFN and reduced by IL-4. FcγIIb is expressed on B cells, PMNs, macrophages, and mast cells. FcγIIb inhibits immunoreceptor tyrosine-based activation motif (ITAM)-mediated responses and is therefore an inhibitory receptor. FcγRIIc expression is upregulated by intravenous immunoglobulin (IVIG) and IL-4 and reduced by γ-IFN. FcγRIIc is expressed on NK cells. FcγRIIIa is expressed on natural killer (NK) cells, macrophages, mast cells, and platelets. This receptor is involved in phagocytosis, respiratory burst, cytokine stimulation, platelet aggregation and degranulation, and NK-mediated ADCC. FcγRIII expression is upregulated by C5a, TGF-β, and γ-IFN and downregulated by IL-4. FcγRIIIb is a GPI-coupled receptor expressed on PMN.

ある特定のＦｃ領域は、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ、および／またはＦｃγＲＩＩＩｂと比較して、ＦｃγＲＩへの結合を増加させる。いくつかの実施形態は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ、および／またはＦｃγＲＩＩＩｂと比較して、ＦｃγＲＩＩａへの結合を増加させる。特定のＦｃ領域は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ、および／またはＦｃγＲＩＩＩｂと比較して、ＦｃγＲＩＩｂへの結合を増加させる。ある特定のＦｃ領域は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、および／またはＦｃγＲＩＩＩｂと比較して、ＦｃγＲＩＩｃへの結合を増加させる。いくつかのＦｃ領域は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩｃ、および／またはＦｃγＲＩＩＩｂと比較して、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合を増加させる。特定のＦｃ領域は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩｃ、および／またはＦｃγＲＩＩＩａと比較して、ＦｃγＲＩＩＩｂへの結合を増加させる。 Certain Fc regions have increased binding to FcγRI compared to FcγRIIa, FcγRIIb, FcγRIIc, FcγRIIIa, and/or FcγRIIIb. Some embodiments increase binding to FcγRIIa as compared to FcγRI, FcγRIIb, FcγRIIc, FcγRIIIa, and/or FcγRIIIb. Certain Fc regions have increased binding to FcγRIIb relative to FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIc, FcγRIIIa, and/or FcγRIIIb. Certain Fc regions have increased binding to FcγRIIc as compared to FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb, FcγRIIIa, and/or FcγRIIIb. Some Fc regions have increased binding to FcγRIIIa compared to FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb, FcγRIIc, and/or FcγRIIIb. Certain Fc regions have increased binding to FcγRIIIb relative to FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb, FcγRIIc, and/or FcγRIIIa.

ＦｃαＲは、ＦｃαＲＩ（ＣＤ８９）を含む。ＦｃαＲＩは、好中球、好酸球、単球、ある特定のマクロファージ（例えば、クッパー細胞）、およびある特定の樹状細胞の表面上に見出される。ＦｃαＲＩは、２つの細胞外Ｉｇ様ドメインからなり、免疫グロブリンスーパーファミリーおよび多重鎖免疫認識受容体（ＭＩＲＲ）ファミリーの両方のメンバーであり、２つのＦｃＲγシグナル伝達鎖と会合することによってシグナル伝達する。 FcαR includes FcαRI (CD89). FcαRI is found on the surface of neutrophils, eosinophils, monocytes, certain macrophages (eg Kupffer cells), and certain dendritic cells. FcαRI consists of two extracellular Ig-like domains, is a member of both the immunoglobulin superfamily and the multichain immune recognition receptor (MIRR) family, and signals by associating with two FcRγ signaling chains.

ＦｃεＲは、ＦｃεＲＩおよびＦｃεＲＩＩを含む。高親和性受容体ＦｃεＲＩは、免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーであり、上皮ランゲルハンス細胞、好酸球、肥満細胞、および好塩基球上で発現され、アレルギー性応答の制御において主要な役割を果たす。ＦｃεＲＩはまた、抗原提示細胞上でも発現され、炎症促進性サイトカインの産生を調節する。低親和性受容体ＦｃεＲＩＩ（ＣＤ２３）は、膜結合型または可溶性受容体として機能し得るＣ型レクチンである。ＦｃεＲＩＩは、Ｂ細胞の増殖および分化を調節し、好酸球、単球、および好塩基球のＩｇＥ結合を遮断する。ある特定のＦｃ領域は、ＦｃεＲＩＩと比較して、ＦｃεＲＩへの結合を増加させる。他のＦｃ領域は、ＦｃεＲＩと比較して、ＦｃεＲＩＩへの結合を増加させる。
以下の表Ｈ６は、ある特定のＦｃＲの特徴付けを要約する。
FcεR includes FcεRI and FcεRII. The high-affinity receptor FcεRI, a member of the immunoglobulin superfamily, is expressed on epithelial Langerhans cells, eosinophils, mast cells, and basophils and plays a major role in controlling allergic responses. FcεRI is also expressed on antigen presenting cells and regulates the production of proinflammatory cytokines. The low affinity receptor FcεRII (CD23) is a C-type lectin that can function as a membrane bound or soluble receptor. FcεRII regulates B cell proliferation and differentiation and blocks IgE binding of eosinophils, monocytes, and basophils. Certain Fc regions have increased binding to FcεRI compared to FcεRII. Other Fc regions have increased binding to FcεRII compared to FcεRI.
Table H6, below, summarizes the characterization of certain FcRs.

Ｆｃ領域は、ウシ、ヤギ、ブタ、イヌ、マウス、ウサギ、ハムスター、ラット、モルモット、非ヒト霊長類、およびヒトなどの哺乳動物などの脊椎動物を含む、任意の動物の免疫グロブリン分子から誘導され得る。例示的な野生型ヒトＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、およびＩｇＭ免疫グロブリンからのＣＨ_２、ＣＨ_３、ＣＨ_４、およびヒンジ領域のアミノ酸配列を、表Ｈ７中に示す。
The Fc region is derived from an immunoglobulin molecule of any animal, including vertebrates such as mammals such as cows, goats, pigs, dogs, mice, rabbits, hamsters, rats, guinea pigs, non-human primates, and humans. obtain. Exemplary wild-type human IgA1, IgA2, IgD, IgE, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, and _CH 2 from IgM _{immunoglobulin,} CH 3, CH _4, and the amino acid sequence of the hinge region, shown in Table H7 ..

したがって、ＨＲＳ−ＦｃコンジュゲートのＦｃ領域は、それらのバリアント、断片、ホモログ、オルソログ、パラログ、および組み合わせを含む、表Ｈ７のヒトＦｃ領域アミノ酸配列のうちの１つ以上を含み得るか、それらからなり得るか、または本質的にそれらからなり得る。ある特定の例示的な実施形態は、大きさが約２０〜５０、２０〜１００、２０〜１５０、２０〜２００、２０〜２５０、２０〜３００、２０〜４００、５０〜１００、５０〜１５０、５０〜２００、５０〜２５０、５０〜３００、５０〜４００、１００〜１５０、１００〜２００、１００〜２５０、１００〜３００、１００〜３５０、１００〜４００、２００〜２５０、２００〜３００、２００〜３５０、または２００〜４００アミノ酸長の範囲であるＦｃ領域を含み、任意に、表Ｈ７中の配列のうちの任意の１つ以上を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。ある特定の実施形態は、最大約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、３００、３５０、４００またはそれ以上のアミノ酸のＦｃ領域を含み、任意に、表Ｈ７中の配列のうちの任意の１つ以上を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。 Therefore, the Fc region of a HRS-Fc conjugate may comprise, or consist of, one or more of the human Fc region amino acid sequences of Table H7, including variants, fragments, homologs, orthologs, paralogs, and combinations thereof. Can consist of, or consist essentially of. Certain exemplary embodiments have a size of about 20-50, 20-100, 20-150, 20-200, 20-250, 20-300, 20-400, 50-100, 50-150. 50-200, 50-250, 50-300, 50-400, 100-150, 100-200, 100-250, 100-300, 100-350, 100-400, 200-250, 200-300, 200-. It comprises an Fc region that ranges from 350, or 200 to 400 amino acids in length, and optionally comprises, consists of, or consists essentially of any one or more of the sequences in Table H7. Certain embodiments have a maximum of about 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250. , Fc region of 300, 350, 400 or more amino acids, and optionally comprises, consists of, or consists essentially of any one or more of the sequences in Table H7.

ある特定のＦｃ領域は、それらの組み合わせ、ならびにそれらのバリアントおよび断片を含む、Ｎ末端からＣ末端へと読む任意の順序で、表Ｈ７のヒトＩｇＡ１配列を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。ある特定のＦｃ領域は、表Ｈ７のヒトＩｇＡ１配列を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。ある特定のＦｃ領域は、表Ｈ７のヒトＩｇＡ１配列を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。ある特定のＦｃ領域は、表Ｈ７のヒトＩｇＡ１配列を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。 Certain Fc regions comprise, consist of, or consist essentially of the human IgA1 sequences of Table H7, in any order read from N-terminus to C-terminus, including combinations thereof, and variants and fragments thereof. To consist of them. Certain Fc regions comprise, consist of, or consist essentially of the human IgA1 sequences of Table H7. Certain Fc regions comprise, consist of, or consist essentially of the human IgA1 sequences of Table H7. Certain Fc regions comprise, consist of, or consist essentially of the human IgA1 sequences of Table H7.

いくつかのＦｃ領域は、それらの組み合わせ、ならびにそれらのバリアントおよび断片を含む、Ｎ末端からＣ末端へと読む任意の順序で、表Ｈ７のヒトＩｇＡ２配列を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。ある特定のＦｃ領域は、表Ｈ７のヒトＩｇＡ２配列を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。ある特定のＦｃ領域は、表Ｈ７のヒトＩｇＡ２配列を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。ある特定のＦｃ領域は、表Ｈ７のヒトＩｇＡ２配列を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。 Some Fc regions comprise, consist of, or consist essentially of the human IgA2 sequences of Table H7, in any order read from N-terminus to C-terminus, including combinations thereof, and variants and fragments thereof. To consist of them. Certain Fc regions comprise, consist of, or consist essentially of the human IgA2 sequences of Table H7. Certain Fc regions comprise, consist of, or consist essentially of the human IgA2 sequences of Table H7. Certain Fc regions comprise, consist of, or consist essentially of the human IgA2 sequences of Table H7.

ある特定のＦｃ領域は、それらの組み合わせ、ならびにこれらの配列および組み合わせのバリアントおよび断片を含む、Ｎ末端からＣ末端へと読む任意の順序で、表Ｈ７のヒトＩｇＤ配列を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。ある特定のＦｃ領域は、それらの組み合わせ、ならびにこれらの配列および組み合わせのバリアントおよび断片を含む、Ｎ末端からＣ末端へと読む任意の順序で、表Ｈ７のヒトＩｇＥ配列を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。ある特定のＦｃ領域は、それらの組み合わせ、ならびにこれらの配列および組み合わせのバリアントおよび断片を含む、Ｎ末端からＣ末端へと読む任意の順序で、表Ｈ７のヒトＩｇＧ１配列を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。ある特定のＦｃ領域は、それらの組み合わせを含む、Ｎ末端からＣ末端へと読む任意の順序で、表Ｈ７のヒトＩｇＧ２配列を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。ある特定のＦｃ領域は、それらの組み合わせを含む、Ｎ末端からＣ末端へと読む任意の順序で、表Ｈ７のヒトＩｇＧ３配列を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。ある特定のＦｃ領域は、それらの組み合わせを含む、Ｎ末端からＣ末端へと読む任意の順序で、表Ｈ７のヒトＩｇＧ４配列を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。ある特定のＦｃ領域は、それらの組み合わせ、ならびにこれらの配列および組み合わせのバリアントおよび断片を含む、Ｎ末端からＣ末端へと読む任意の順序で、表Ｈ７のヒトＩｇＭ配列を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。 Certain Fc regions comprise or consist of the human IgD sequences of Table H7 in any order read N- to C-terminally, including combinations thereof, and variants and fragments of these sequences and combinations. Or consist essentially of them. Certain Fc regions comprise or consist of the human IgE sequences of Table H7 in any order read from N-terminus to C-terminus, including combinations thereof, and variants and fragments of these sequences and combinations. Or consist essentially of them. Certain Fc regions comprise or consist of human IgG1 sequences of Table H7 in any order read N-terminal to C-terminal, including combinations thereof, and variants and fragments of these sequences and combinations. Or consist essentially of them. Certain Fc regions comprise, consist of, or consist essentially of the human IgG2 sequences of Table H7, in any order reading from N-terminus to C-terminus, including combinations thereof. Certain Fc regions comprise, consist of, or consist essentially of the human IgG3 sequences of Table H7, in any order reading from N-terminus to C-terminus, including combinations thereof. Certain Fc regions comprise, consist of, or consist essentially of the human IgG4 sequences of Table H7, in any order reading from N-terminus to C-terminus, including combinations thereof. Certain Fc regions comprise or consist of the human IgM sequences of Table H7 in any order read from N-terminus to C-terminus, including combinations thereof, and variants and fragments of these sequences and combinations. Or consist essentially of them.

例示的なＨＲＳ−Ｆｃ融合コンジュゲートを、以下の表Ｈ８中に提供する。
Exemplary HRS-Fc fusion conjugates are provided in Table H8 below.

したがって、ある特定の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、融合しているか、またはそうでなければＦｃ領域にコンジュゲート化されているか、または表Ｈ８中のアミノ酸配列（配列番号１５７〜１７２）またはそれらの活性バリアントもしくは断片を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。いくつかの実施形態では、発現可能なポリヌクレオチドは、表Ｈ８中のアミノ酸配列（例えば、配列番号１５７〜１７２）またはそれらの活性バリアントもしくは断片を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなるＨＲＳポリペプチドをコードする。 Thus, in certain embodiments, the HRS polypeptides are fused or otherwise conjugated to the Fc region, or the amino acid sequences in Table H8 (SEQ ID NOs:157-172) or those Of active variants or fragments of, consisting of, or consisting essentially of. In some embodiments, the expressible polynucleotide comprises, consists of, or consists essentially of the amino acid sequences in Table H8 (eg, SEQ ID NOs:157-172) or active variants or fragments thereof. HRS polypeptide consisting of:

上述のように、ある特定の実施形態は、本明細書に記載され、当該技術分野で公知のＦｃ領域の、バリアント、断片、ハイブリッド、および／またはそうでなければ改変された形態を使用する。表Ｈ７または表Ｈ８の参照配列のうちの任意の１つ以上などの参照配列と比較して、１つ以上のアミノ酸の置換、挿入、欠失、および／または短縮を有するバリアントが含まれる。ポリペプチドおよびポリヌクレオチドバリアントは、本明細書の他の箇所に記載されている。 As mentioned above, certain embodiments use variants, fragments, hybrids, and/or otherwise modified forms of the Fc region described herein and known in the art. Variants having one or more amino acid substitutions, insertions, deletions and/or truncations as compared to a reference sequence such as any one or more of the reference sequences in Table H7 or Table H8 are included. Polypeptides and polynucleotide variants are described elsewhere herein.

ハイブリッドＦｃ領域、例えば、異なる種、異なるＩｇクラス、および／または異なるＩｇサブクラスの免疫グロブリンからのＦｃドメイン（例えば、ヒンジ、ＣＨ_２、ＣＨ_３、ＣＨ_４）の組み合わせを含むＦｃ領域である。一般の例には、ＣＨ_２／ＣＨ_３ドメインの以下の組み合わせ：ＩｇＡ１／ＩｇＡ１、ＩｇＡ１／ＩｇＡ２、ＩｇＡ１／ＩｇＤ、ＩｇＡ１／ＩｇＥ、ＩｇＡ１／ＩｇＧ１、ＩｇＡ１／ＩｇＧ２、ＩｇＡ１／ＩｇＧ３、ＩｇＡ１／ＩｇＧ４、ＩｇＡ１／ＩｇＭ、ＩｇＡ２／ＩｇＡ１、ＩｇＡ２／ＩｇＡ２、ＩｇＡ２／ＩｇＤ、ＩｇＡ２／ＩｇＥ、ＩｇＡ２／ＩｇＧ１、ＩｇＡ２／ＩｇＧ２、ＩｇＡ２／ＩｇＧ３、ＩｇＡ２／ＩｇＧ４、ＩｇＡ２／ＩｇＭ、ＩｇＤ／ＩｇＡ１、ＩｇＤ／ＩｇＡ２、ＩｇＤ／ＩｇＤ、ＩｇＤ／ＩｇＥ、ＩｇＤ／ＩｇＧ１、ＩｇＤ／ＩｇＧ２、ＩｇＤ／ＩｇＧ３、ＩｇＤ／ＩｇＧ４、ＩｇＤ／ＩｇＭ、ＩｇＥ／ＩｇＡ１、ＩｇＥ／ＩｇＡ２、ＩｇＥ／ＩｇＤ、ＩｇＥ／ＩｇＥ、ＩｇＥ／ＩｇＧ１、ＩｇＥ／ＩｇＧ２、ＩｇＥ／ＩｇＧ３、ＩｇＥ／ＩｇＧ４、ＩｇＥ／ＩｇＭ、ＩｇＧ１／ＩｇＡ１、ＩｇＧ１／ＩｇＡ２、ＩｇＧ１／ＩｇＤ、ＩｇＧ１／ＩｇＥ、ＩｇＧ１／ＩｇＧ１、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、ＩｇＧ１／ＩｇＧ３、ＩｇＧ１／ＩｇＧ４、ＩｇＧ１／ＩｇＭ、ＩｇＧ２／ＩｇＡ１、ＩｇＧ２／ＩｇＡ２、ＩｇＧ２／ＩｇＤ、ＩｇＧ２／ＩｇＥ、ＩｇＧ２／ＩｇＧ１、ＩｇＧ２／ＩｇＧ２、ＩｇＧ２／ＩｇＧ３、ＩｇＧ２／ＩｇＧ４、ＩｇＧ２／ＩｇＭ、ＩｇＧ３／ＩｇＡ１、ＩｇＧ３／ＩｇＡ２、ＩｇＧ３／ＩｇＤ、ＩｇＧ３／ＩｇＥ、ＩｇＧ３／ＩｇＧ１、ＩｇＧ３／ＩｇＧ２、ＩｇＧ３／ＩｇＧ３、ＩｇＧ３／ＩｇＧ４、ＩｇＧ３／ＩｇＭ、ＩｇＧ４／ＩｇＡ１、ＩｇＧ４／ＩｇＡ２、ＩｇＧ４／ＩｇＤ、ＩｇＧ４／ＩｇＥ、ＩｇＧ４／ＩｇＧ１、ＩｇＧ４／ＩｇＧ２、ＩｇＧ４／ＩｇＧ３、ＩｇＧ４／ＩｇＧ４、ＩｇＧ４／ＩｇＭ、ＩｇＭ／ＩｇＡ１、ＩｇＭ／ＩｇＡ２、ＩｇＭ／ＩｇＤ、ＩｇＭ／ＩｇＥ、ＩｇＭ／ＩｇＧ１、ＩｇＭ／ＩｇＧ２、ＩｇＭ／ＩｇＧ３、ＩｇＭ／ＩｇＧ４、ＩｇＭ／ＩｇＭ（またはそれらの断片もしくはバリアント）を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなり、任意に、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４のうちの１つ以上からのヒンジ、ならびに／またはＩｇＥおよび／またはＩｇＭからのＣＨ_４ドメインを含む、ハイブリッドＦｃ領域が含まれる。特定の実施形態では、このヒンジ、ＣＨ_２、ＣＨ_３、およびＣＨ_４ドメインは、ヒトＩｇからのものである。 A hybrid Fc region, eg, an Fc region comprising a combination of Fc domains (eg, hinge, CH ₂ , CH ₃ , CH ₄ ) from immunoglobulins of different species, different Ig classes, and/or different Ig subclasses. Examples of _common, CH 2 / CH ₃ following combinations of domains: IgA1 / IgA1, IgA1 / IgA2 , IgA1 / IgD, IgA1 / IgE, IgA1 / IgG1, IgA1 / IgG2, IgA1 / IgG3, IgA1 / IgG4, IgA1 /IgM, IgA2/IgA1, IgA2/IgA2, IgA2/IgD, IgA2/IgE, IgA2/IgG1, IgA2/IgG2, IgA2/IgG3, IgA2/IgG4, IgA2/IgM, IgD/IgA1, IgD1, IgD1, IgD1, IgD1, IgD1, IgD1, IgD1, IgD1, IgD1, IgD1, IgD1, IgD1, IgD1, IgD2, IgA2, IgA2 , IgD/IgE, IgD/IgG1, IgD/IgG2, IgD/IgG3, IgD/IgG4, IgD/IgM, IgE/IgA1, IgE/IgA2, IgE/IgD, IgE/IgE, IgE/IgG1, IgE/IgG2, IgE /IgG3, IgE/IgG4, IgE/IgM, IgG1/IgA1, IgG1/IgA2, IgG1/IgD, IgG1/IgE, IgG1/IgG1, IgG1/IgG2, IgG1/IgG3, IgG1/IgG4, IgG1/IgM, IgG2/IgA1 , IgG2/IgA2, IgG2/IgD, IgG2/IgE, IgG2/IgG1, IgG2/IgG2, IgG2/IgG3, IgG2/IgG4, IgG2/IgM, IgG3/IgA1, IgG3/IgA2, IgG3/IgD, IgG3/IgE, IgG3 /IgG1, IgG3/IgG2, IgG3/IgG3, IgG3/IgG4, IgG3/IgM, IgG4/IgA1, IgG4/IgA2, IgG4/IgD, IgG4/IgE, IgG4/IgG1, IgG4/IgG2, IgG4/IgG3, IgG4/IgG4 , IgG4/IgM, IgM/IgA1, IgM/IgA2, IgM/IgD, IgM/IgE, IgM/IgG1, IgM/IgG2, IgM/IgG3, IgM/IgG4, IgM/IgM (or fragments or variants thereof). Or consisting of, or consisting essentially of, optionally a hinge from one or more of IgA1, IgA2, IgD, IgG1, IgG2, IgG3, or IgG4, and/or IgE and/or IgM. A hybrid Fc region is included, which comprises the CH ₄ domain from In certain embodiments, the _hinge, CH 2, CH _3, and CH ₄ domains is from a human Ig.

さらなる例には、ＣＨ_２／ＣＨ_４ドメインの以下の組み合わせ：ＩｇＡ１／ＩｇＥ、ＩｇＡ２／ＩｇＥ、ＩｇＤ／ＩｇＥ、ＩｇＥ／ＩｇＥ、ＩｇＧ１／ＩｇＥ、ＩｇＧ２／ＩｇＥ、ＩｇＧ３／ＩｇＥ、ＩｇＧ４／ＩｇＥ、ＩｇＭ／ＩｇＥ、ＩｇＡ１／ＩｇＭ、ＩｇＡ２／ＩｇＭ、ＩｇＤ／ＩｇＭ、ＩｇＥ／ＩｇＭ、ＩｇＧ１／ＩｇＭ、ＩｇＧ２／ＩｇＭ、ＩｇＧ３／ＩｇＭ、ＩｇＧ４／ＩｇＭ、ＩｇＭ／ＩｇＭ（またはそれらの断片もしくはバリアント）を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなり、任意に、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４のうちの１つ以上からのヒンジ、および／またはＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、もしくはＩｇＭのうちの１つ以上からのＣＨ_３ドメインを含む、ハイブリッドＦｃ領域が含まれる。特定の実施形態では、ヒンジ、ＣＨ_２、ＣＨ_３、およびＣＨ_４ドメインは、ヒトＩｇからのものである。 Further _examples, the following combinations of CH 2 / CH ₄ domains: IgA1 / IgE, IgA2 / IgE , IgD / IgE, IgE / IgE, IgG1 / IgE, IgG2 / IgE, IgG3 / IgE, IgG4 / IgE, IgM / Contains or contains IgE, IgA1/IgM, IgA2/IgM, IgD/IgM, IgE/IgM, IgG1/IgM, IgG2/IgM, IgG3/IgM, IgG4/IgM, IgM/IgM (or fragments or variants thereof) Consisting of or consisting essentially of, optionally, a hinge from one or more of IgA1, IgA2, IgD, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, and/or IgA1, IgA2, IgD, IgE, IgG1. A hybrid Fc region comprising a CH ₃ domain from one or more of IgG2, IgG3, IgG4, or IgM is included. In certain embodiments, _hinge, CH 2, CH _3, and CH ₄ domains is from a human Ig.

ある特定の例には、ＣＨ_３／ＣＨ_４ドメインの以下の組み合わせ：ＩｇＡ１／ＩｇＥ、ＩｇＡ２／ＩｇＥ、ＩｇＤ／ＩｇＥ、ＩｇＥ／ＩｇＥ、ＩｇＧ１／ＩｇＥ、ＩｇＧ２／ＩｇＥ、ＩｇＧ３／ＩｇＥ、ＩｇＧ４／ＩｇＥ、ＩｇＭ／ＩｇＥ、ＩｇＡ１／ＩｇＭ、ＩｇＡ２／ＩｇＭ、ＩｇＤ／ＩｇＭ、ＩｇＥ／ＩｇＭ、ＩｇＧ１／ＩｇＭ、ＩｇＧ２／ＩｇＭ、ＩｇＧ３／ＩｇＭ、ＩｇＧ４／ＩｇＭ、ＩｇＭ／ＩｇＭ（またはそれらの断片もしくはバリアント）を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなり、任意に、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４のうちの１つ以上からのヒンジ、および／またはＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、もしくはＩｇＭのうちの１つ以上からのＣＨ_２ドメインを含む、ハイブリッドＦｃ領域が含まれる。特定の実施形態では、ヒンジ、ＣＨ_２、ＣＨ_３、およびＣＨ_４ドメインは、ヒトＩｇからのものである。 In certain examples, the following combinations of CH ₃ /CH ₄ domains: IgA1/IgE, IgA2/IgE, IgD/IgE, IgE/IgE, IgG1/IgE, IgG2/IgE, IgG3/IgE, IgG4/IgE, Includes IgM/IgE, IgA1/IgM, IgA2/IgM, IgD/IgM, IgE/IgM, IgG1/IgM, IgG2/IgM, IgG3/IgM, IgG4/IgM, IgM/IgM (or fragments or variants thereof) , Consisting of, or consisting essentially of, optionally a hinge from one or more of IgA1, IgA2, IgD, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, and/or IgA1, IgA2, IgD, IgE. , IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 , or containing CH ₂ domain from one or more of the IgM, include hybrid Fc region. In certain embodiments, _hinge, CH 2, CH _3, and CH ₄ domains is from a human Ig.

特定の例は、ヒンジ／ＣＨ_２ドメインの以下の組み合わせ：ＩｇＡ１／ＩｇＡ１、ＩｇＡ１／ＩｇＡ２、ＩｇＡ１／ＩｇＤ、ＩｇＡ１／ＩｇＥ、ＩｇＡ１／ＩｇＧ１、ＩｇＡ１／ＩｇＧ２、ＩｇＡ１／ＩｇＧ３、ＩｇＡ１／ＩｇＧ４、ＩｇＡ１／ＩｇＭ、ＩｇＡ２／ＩｇＡ１、ＩｇＡ２／ＩｇＡ２、ＩｇＡ２／ＩｇＤ、ＩｇＡ２／ＩｇＥ、ＩｇＡ２／ＩｇＧ１、ＩｇＡ２／ＩｇＧ２、ＩｇＡ２／ＩｇＧ３、ＩｇＡ２／ＩｇＧ４、ＩｇＡ２／ＩｇＭ、ＩｇＤ／ＩｇＡ１、ＩｇＤ／ＩｇＡ２、ＩｇＤ／ＩｇＤ、ＩｇＤ／ＩｇＥ、ＩｇＤ／ＩｇＧ１、ＩｇＤ／ＩｇＧ２、ＩｇＤ／ＩｇＧ３、ＩｇＤ／ＩｇＧ４、ＩｇＤ／ＩｇＭ、ＩｇＧ１／ＩｇＡ１、ＩｇＧ１／ＩｇＡ２、ＩｇＧ１／ＩｇＤ、ＩｇＧ１／ＩｇＥ、ＩｇＧ１／ＩｇＧ１、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、ＩｇＧ１／ＩｇＧ３、ＩｇＧ１／ＩｇＧ４、ＩｇＧ１／ＩｇＭ、ＩｇＧ２／ＩｇＡ１、ＩｇＧ２／ＩｇＡ２、ＩｇＧ２／ＩｇＤ、ＩｇＧ２／ＩｇＥ、ＩｇＧ２／ＩｇＧ１、ＩｇＧ２／ＩｇＧ２、ＩｇＧ２／ＩｇＧ３、ＩｇＧ２／ＩｇＧ４、ＩｇＧ２／ＩｇＭ、ＩｇＧ３／ＩｇＡ１、ＩｇＧ３／ＩｇＡ２、ＩｇＧ３／ＩｇＤ、ＩｇＧ３／ＩｇＥ、ＩｇＧ３／ＩｇＧ１、ＩｇＧ３／ＩｇＧ２、ＩｇＧ３／ＩｇＧ３、ＩｇＧ３／ＩｇＧ４、ＩｇＧ３／ＩｇＭ、ＩｇＧ４／ＩｇＡ１、ＩｇＧ４／ＩｇＡ２、ＩｇＧ４／ＩｇＤ、ＩｇＧ４／ＩｇＥ、ＩｇＧ４／ＩｇＧ１、ＩｇＧ４／ＩｇＧ２、ＩｇＧ４／ＩｇＧ３、ＩｇＧ４／ＩｇＧ４、ＩｇＧ４／ＩｇＭ（またはそれらの断片もしくはバリアント）を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなり、任意に、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、もしくはＩｇＭのうちの１つ以上からのＣＨ_３ドメイン、ならびに／またはＩｇＥおよび／もしくはＩｇＭからのＣＨ_４ドメインを含む、ハイブリッドＦｃ領域が含まれる。特定の実施形態では、ヒンジ、ＣＨ_２、ＣＨ_３、およびＣＨ_４ドメインは、ヒトＩｇからのものである。 Specific examples are the following combinations of hinge/CH ₂ domains: IgA1/IgA1, IgA1/IgA2, IgA1/IgD, IgA1/IgE, IgA1/IgG1, IgA1/IgG2, IgA1/IgG3, IgA1/IgG4, IgA1/IgM. , IgA2 / IgA1, IgA2 / IgA2, IgA2 / IgD, IgA2 / IgE, IgA2 / IgG1, IgA2 / IgG2, IgA2 / IgG3, IgA2 / IgG4, IgA2 / IgM, IgD / IgA1, IgD / IgA2, IgD / IgD, IgD /IgE, IgD/IgG1, IgD/IgG2, IgD/IgG3, IgD/IgG4, IgD/IgM, IgG1/IgA1, IgG1/IgA2, IgG1/IgD, IgG1/IgE, IgG1/IgG1, IgG1/IgG2, IgG1/IgG3 , IgG1/IgG4, IgG1/IgM, IgG2/IgA1, IgG2/IgA2, IgG2/IgD, IgG2/IgE, IgG2/IgG1, IgG2/IgG2, IgG2/IgG3, IgG2/IgG4, IgG2/IgM, IgG3/IgA1, IgG3 /IgA2, IgG3/IgD, IgG3/IgE, IgG3/IgG1, IgG3/IgG2, IgG3/IgG3, IgG3/IgG4, IgG3/IgM, IgG4/IgA1, IgG4/IgA2, IgG4/IgD, IgG4/IgE, IgG4/IgG1 , IgG4/IgG2, IgG4/IgG3, IgG4/IgG4, IgG4/IgM (or fragments or variants thereof), or consisting essentially of them, optionally IgA1, IgA2, IgD, A hybrid Fc region is included that includes a CH ₃ domain from one or more of IgE, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, or IgM, and/or a CH ₄ domain from IgE and/or IgM. In certain embodiments, _hinge, CH 2, CH _3, and CH ₄ domains is from a human Ig.

ある特定の例には、ヒンジ／ＣＨ_３ドメインの以下の組み合わせ：ＩｇＡ１／ＩｇＡ１、ＩｇＡ１／ＩｇＡ２、ＩｇＡ１／ＩｇＤ、ＩｇＡ１／ＩｇＥ、ＩｇＡ１／ＩｇＧ１、ＩｇＡ１／ＩｇＧ２、ＩｇＡ１／ＩｇＧ３、ＩｇＡ１／ＩｇＧ４、ＩｇＡ１／ＩｇＭ、ＩｇＡ２／ＩｇＡ１、ＩｇＡ２／ＩｇＡ２、ＩｇＡ２／ＩｇＤ、ＩｇＡ２／ＩｇＥ、ＩｇＡ２／ＩｇＧ１、ＩｇＡ２／ＩｇＧ２、ＩｇＡ２／ＩｇＧ３、ＩｇＡ２／ＩｇＧ４、ＩｇＡ２／ＩｇＭ、ＩｇＤ／ＩｇＡ１、ＩｇＤ／ＩｇＡ２、ＩｇＤ／ＩｇＤ、ＩｇＤ／ＩｇＥ、ＩｇＤ／ＩｇＧ１、ＩｇＤ／ＩｇＧ２、ＩｇＤ／ＩｇＧ３、ＩｇＤ／ＩｇＧ４、ＩｇＤ／ＩｇＭ、ＩｇＧ１／ＩｇＡ１、ＩｇＧ１／ＩｇＡ２、ＩｇＧ１／ＩｇＤ、ＩｇＧ１／ＩｇＥ、ＩｇＧ１／ＩｇＧ１、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、ＩｇＧ１／ＩｇＧ３、ＩｇＧ１／ＩｇＧ４、ＩｇＧ１／ＩｇＭ、ＩｇＧ２／ＩｇＡ１、ＩｇＧ２／ＩｇＡ２、ＩｇＧ２／ＩｇＤ、ＩｇＧ２／ＩｇＥ、ＩｇＧ２／ＩｇＧ１、ＩｇＧ２／ＩｇＧ２、ＩｇＧ２／ＩｇＧ３、ＩｇＧ２／ＩｇＧ４、ＩｇＧ２／ＩｇＭ、ＩｇＧ３／ＩｇＡ１、ＩｇＧ３／ＩｇＡ２、ＩｇＧ３／ＩｇＤ、ＩｇＧ３／ＩｇＥ、ＩｇＧ３／ＩｇＧ１、ＩｇＧ３／ＩｇＧ２、ＩｇＧ３／ＩｇＧ３、ＩｇＧ３／ＩｇＧ４、ＩｇＧ３／ＩｇＭ、ＩｇＧ４／ＩｇＡ１、ＩｇＧ４／ＩｇＡ２、ＩｇＧ４／ＩｇＤ、ＩｇＧ４／ＩｇＥ、ＩｇＧ４／ＩｇＧ１、ＩｇＧ４／ＩｇＧ２、ＩｇＧ４／ＩｇＧ３、ＩｇＧ４／ＩｇＧ４、ＩｇＧ４／ＩｇＭ（またはそれらの断片もしくはバリアント）を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなり、任意に、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、もしくはＩｇＭのうちの１つ以上からのＣＨ_２ドメイン、ならびに／またはＩｇＥおよび／もしくはＩｇＭからのＣＨ_４ドメインを含む、ハイブリッドＦｃ領域が含まれる。特定の実施形態では、ヒンジ、ＣＨ_２、ＣＨ_３、およびＣＨ_４ドメインは、ヒトＩｇからのものである。 In a particular example, the hinge / CH ₃ following combinations of domains: IgA1 / IgA1, IgA1 / IgA2 , IgA1 / IgD, IgA1 / IgE, IgA1 / IgG1, IgA1 / IgG2, IgA1 / IgG3, IgA1 / IgG4, IgA1 /IgM, IgA2/IgA1, IgA2/IgA2, IgA2/IgD, IgA2/IgE, IgA2/IgG1, IgA2/IgG2, IgA2/IgG3, IgA2/IgG4, IgA2/IgM, IgD/IgA1, IgD1, IgD1, IgD1, IgD1, IgD1, IgD1, IgD1, IgD1, IgD1, IgD1, IgD1, IgD1, IgD1, IgD2, IgA2, IgA2 , IgD/IgE, IgD/IgG1, IgD/IgG2, IgD/IgG3, IgD/IgG4, IgD/IgM, IgG1/IgA1, IgG1/IgA2, IgG1/IgD, IgG1/IgE, IgG1/IgG1, IgG1/IgG2, IgG1 /IgG3, IgG1/IgG4, IgG1/IgM, IgG2/IgA1, IgG2/IgA2, IgG2/IgD, IgG2/IgE, IgG2/IgG1, IgG2/IgG2, IgG2/IgG3, IgG2/IgG4, IgG2/IgM, IgG3/IgA1 , IgG3/IgA2, IgG3/IgD, IgG3/IgE, IgG3/IgG1, IgG3/IgG2, IgG3/IgG3, IgG3/IgG4, IgG3/IgM, IgG4/IgA1, IgG4/IgA2, IgG4/IgD, IgG4/IgE, IgG4 /IgG1, IgG4/IgG2, IgG4/IgG3, IgG4/IgG4, IgG4/IgM (or a fragment or variant thereof), or consisting essentially thereof, optionally IgA1, IgA2, Hybrid Fc regions are included that include a CH ₂ domain from one or more of IgD, IgE, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, or IgM, and/or a CH ₄ domain from IgE and/or IgM. In certain embodiments, _hinge, CH 2, CH _3, and CH ₄ domains is from a human Ig.

いくつかの例には、ヒンジ／ＣＨ_４ドメインの以下の組み合わせ：ＩｇＡ１／ＩｇＥ、ＩｇＡ１／ＩｇＭ、ＩｇＡ２／ＩｇＥ、ＩｇＡ２／ＩｇＭ、ＩｇＤ／ＩｇＥ、ＩｇＤ／ＩｇＭ、ＩｇＧ１／ＩｇＥ、ＩｇＧ１／ＩｇＭ、ＩｇＧ２／ＩｇＥ、ＩｇＧ２／ＩｇＭ、ＩｇＧ３／ＩｇＥ、ＩｇＧ３／ＩｇＭ、ＩｇＧ４／ＩｇＥ、ＩｇＧ４／ＩｇＭ（またはそれらの断片もしくはバリアント）を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなり、任意に、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、もしくはＩｇＭのうちの１つ以上からのＣＨ_２ドメイン、ならびに／またはＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、もしくはＩｇＭのうちの１つ以上からのＣＨ_３ドメインを含む、ハイブリッドＦｃ領域が含まれる。 Some examples include the following combinations of hinge/CH ₄ domains: IgA1/IgE, IgA1/IgM, IgA2/IgE, IgA2/IgM, IgD/IgE, IgD/IgM, IgG1/IgE, IgG1/IgM, IgG2. /IgE, IgG2/IgM, IgG3/IgE, IgG3/IgM, IgG4/IgE, IgG4/IgM (or a fragment or variant thereof), or consisting essentially thereof, optionally, A CH ₂ domain from one or more of IgA1, IgA2, IgD, IgE, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, or IgM, and/or IgA1, IgA2, IgD, IgE, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, or including CH ₃ domains from one or more of the IgM, include hybrid Fc region.

ＩｇＧサブクラスの組み合わせまたはヒトＩｇＤおよびＩｇＧの組み合わせから誘導される、ハイブリッドＦｃ領域の特定の例は、例えば、ＷＯ２００８／１４７１４３において見出され得る。 Specific examples of hybrid Fc regions derived from a combination of IgG subclasses or a combination of human IgD and IgG can be found in, for example, WO2008/147143.

誘導体化またはそうでなければ改変されたＦｃ領域もまた、含まれる。ある特定の態様では、Ｆｃ領域は、例えば、野生型または天然に存在するＦｃ領域と比較して、リン酸化、硫酸化、アクリル化、グリコシル化、メチル化、ファルネシル化、アセチル化、アミド化などによって修飾され得る。ある特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、野生型もしくは天然のグリコシル化パターンを含み得るか、またはあるいは、天然形態と比較して増加したグリコシル化、天然形態と比較して減少したグリコシル化を含み得るか、または完全に脱グリコシル化され得る。改変されたＦｃグリコフォームの一例として、Ｆｃ領域の減少したグリコシル化は、第１の補体成分Ｃ１のＣ１ｑ領域への結合、ＡＤＣＣ関連活性における減少、および／またはＣＤＣ関連活性における減少を低減させる。したがって、ある特定の実施形態は、脱グリコシル化されたまたは非グリコシル化されたＦｃ領域を使用する。例示的な非グリコシル化されたＦｃ領域の生成については、例えば、ＷＯ２００５／０４７３３７を参照のこと。Ｆｃ領域グリコフォームの別の例は、Ｋａｂａｔらの番号付け系に従って、Ｑ２９５位をシステイン残基で置換することによって（例えば、米国特許出願第２０１０／００８０７９４号を参照のこと）生成され得る。ある特定の実施形態は、Ｆｃ領域中の糖タンパク質の約８０〜１００％がフルクトースを欠く成熟コア炭水化物構造を含む、Ｆｃ領域を含み得る（例えば、米国特許出願第２０１０／０２５５０１３号を参照のこと）。いくつかの実施形態は、例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩａ、もしくはＦｃγＲＩＩＩａに対する親和性を増加させるためおよび／またはＦｃγＲＩＩａ発現細胞による食作用を改善するために、フコシル化のレベルを低減させるために置換または欠失によって最適化されたＦｃ領域を含み得る（米国特許出願第２０１０／０２４９３８２号および米国特許出願第２００７／０１４８１７０号を参照のこと）。 Derivatized or otherwise modified Fc regions are also included. In certain aspects, the Fc region is, for example, phosphorylated, sulfated, acrylated, glycosylated, methylated, farnesylated, acetylated, amidated, etc., as compared to a wild-type or naturally occurring Fc region. Can be modified by In certain embodiments, the Fc region can comprise a wild-type or native glycosylation pattern, or alternatively can comprise increased glycosylation relative to the native form, reduced glycosylation relative to the native form. Can be obtained or completely deglycosylated. As an example of a modified Fc glycoform, reduced glycosylation of the Fc region reduces binding of the first complement component C1 to the C1q region, a decrease in ADCC-related activity, and/or a decrease in CDC-related activity. .. Thus, certain embodiments use deglycosylated or non-glycosylated Fc regions. For generation of exemplary non-glycosylated Fc regions, see, for example, WO2005/047337. Another example of an Fc region glycoform can be generated by substituting the Q295 position with a cysteine residue according to the Kabat et al. numbering system (see, eg, US Patent Application No. 2010/0080794). Certain embodiments may include the Fc region, wherein about 80-100% of the glycoproteins in the Fc region comprise a mature core carbohydrate structure that lacks fructose (see, eg, US Patent Application 2010/0255013). ). Some embodiments have substitutions or deletions to reduce the level of fucosylation, eg, to increase affinity for FcγRI, FcγRIa, or FcγRIIIa and/or to improve phagocytosis by FcγRIIa expressing cells. Fc region optimized by (see US Patent Application No. 2010/0249382 and US Patent Application No. 2007/0148170).

改変されたＦｃグリコフォームの別の例として、Ｆｃ領域は、オリゴマンノース型Ｎ−グリカンを含み得、任意に、以下のうちの１つ以上を有する：複合型Ｎ−グリカンを含む対応するＦｃ領域またはＨＲＳ−Ｆｃコンジュゲートと比較して、増加したＡＤＣＣ活性、ＦｃγＲＩＩＩＡ（およびある特定の他のＦｃＲ）に対する増加した結合親和性、ＨＲＳポリペプチドの標的に対する類似のもしくは増加した結合特異性、ＨＲＳポリペプチドの標的に対する類似のもしくはより高い結合親和性、および／またはマンノース受容体に対する類似のもしくはより低い結合親和性（例えば、米国特許出願第２００７／００９２５２１号および米国特許第７，７００，３２１号を参照のこと）。別の例として、ＦｃγＲに対するＦｃ領域の増強された親和性は、操作されたまたはバリアント細胞株における抗体の発現によって生成される操作されたグリコフォームを使用して達成されている（例えば、Ｕｍａｎａｅｔａｌ．，ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：１７６−１８０、１９９９、Ｄａｖｉｅｓｅｔａｌ．，ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌＢｉｏｅｎｇ．７４：２８８−２９４，２００１、Ｓｈｉｅｌｄｓｅｔａｌ．，ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ．２７７：２６７３３−２６７４０，２００２、Ｓｈｉｎｋａｗａｅｔａｌ．，２００３，ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ．２７８：３４６６−３４７３，２００３、および米国特許出願第２００７／０１１１２８１号を参照のこと）。ある特定のＦｃ領域グリコフォームは、糖鎖の還元末端においてＮ−アセチルグルコサミンの６位に結合したフコースの１位を有さない、Ｎ−グリコシド結合型複合糖鎖の増加した割合を含む（例えば、米国特許出願第２０１０／００９２９９７号を参照のこと）。特定の実施形態は、α−２，６結合によってそれぞれの末端シアル酸部分に接続された少なくとも１つのガラクトース部分によってグリコシル化されたＩｇＧのＦｃ領域を含み得、任意に、このＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ領域と比較して、より高い抗炎症活性を有する（米国特許出願第２００８／０２０６２４６号を参照のこと）。これらおよび関連の変更されたグリコシル化アプローチのある特定のものは、本明細書に記載するように、Ｆｃ領域がＦｃγＲＩＩＩなどのＦｃＲに選択的に結合する能力、ＡＤＣＣを媒介する能力、およびＦｃ領域の他の特性を変更する能力の、実質的な増強を生じている。 As another example of a modified Fc glycoform, the Fc region may comprise oligomannose N-glycans, optionally having one or more of the following: Corresponding Fc region comprising complex N-glycans. Or increased ADCC activity, increased binding affinity for FcγRIIIA (and certain other FcRs), similar or increased binding specificity of the HRS polypeptide to its target, or HRS poly compared to the HRS-Fc conjugate. Similar or higher binding affinity for the target of the peptide, and/or similar or lower binding affinity for the mannose receptor (see, eg, US Patent Application No. 2007/0092521 and US Pat. No. 7,700,321). See). As another example, enhanced affinity of the Fc region for FcγR has been achieved using engineered glycoforms produced by the expression of antibodies in engineered or variant cell lines (eg, Umana et al. al., Nat Biotechnol. 17:176-180, 1999, Davies et al., Biotechnol Bioeng. 74: 288-294, 2001, Shields et al., J Biol Chem. , 2003, J Biol Chem. 278:3466-3473, 2003, and U.S. Patent Application No. 2007/0111281). Certain Fc region glycoforms contain an increased proportion of N-glycoside-linked complex sugar chains that do not have the 1-position of fucose attached to the 6-position of N-acetylglucosamine at the reducing end of the sugar chain (eg, , U.S. Patent Application No. 2010/0092997). Particular embodiments may include an IgG Fc region glycosylated by at least one galactose moiety connected to each terminal sialic acid moiety by an α-2,6 bond, optionally the Fc region corresponding It has a higher anti-inflammatory activity compared to wild type Fc region (see US patent application 2008/0206246). Certain of these and related altered glycosylation approaches include the ability of the Fc region to selectively bind FcRs such as FcγRIII, mediate ADCC, and the Fc region, as described herein. Resulting in a substantial increase in the ability to alter other properties of the.

ある特定のバリアント、断片、ハイブリッド、またはそうでなければ改変されたＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列（例えば、同じ種、同じＩｇクラス、同じＩｇサブクラス）と比較して、１つ以上のＦｃＲに対する変更された結合を有し得る。例えば、かかるＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比較して、Ｆｃγ受容体、Ｆｃα受容体、Ｆｃε受容体、および／または新生児Ｆｃ受容体のうちの１つ以上に対する増加した結合を有し得る。他の実施形態では、バリアント、断片、ハイブリッド、または改変されたＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比較して、Ｆｃγ受容体、Ｆｃα受容体、Ｆｃε受容体、および／または新生児Ｆｃ受容体のうちの１つ以上に対する減少した結合を有し得る。特異的ＦｃＲは、本明細書の他の箇所に記載されている。 A particular variant, fragment, hybrid, or otherwise modified Fc region is compared to one or more of the corresponding wild-type Fc sequences (eg, same species, same Ig class, same Ig subclass). It may have altered binding to FcR. For example, such an Fc region has increased binding to one or more of the Fcγ receptor, Fcα receptor, Fcε receptor, and/or neonatal Fc receptor as compared to the corresponding wild type Fc sequence. obtain. In other embodiments, the variant, fragment, hybrid, or modified Fc region has an Fcγ receptor, Fcα receptor, Fcε receptor, and/or neonatal Fc receptor as compared to the corresponding wild-type Fc sequence. May have reduced binding to one or more of Specific FcRs are described elsewhere in this specification.

変更された（例えば、増加した、減少した）ＦｃＲ結合を有するＦｃバリアントの具体的な例は、例えば、米国特許第５，６２４，８２１号および同第７，４２５，６１９号、米国特許出願第２００９／００１７０２３号、同第２００９／００１０９２１号、および同第２０１０／０２０３０４６号、ならびにＷＯ２０００／４２０７２およびＷＯ２００４／０１６７５０に見出され得る。ある特定の例は、活性化受容体ＦｃγＲＩＩＩａに対する結合を増加させることおよび阻害受容体ＦｃγＲＩＩｂに対する結合を低減させることが示されている、２９８位、３３３位、および／または３３４位における１つ以上の置換、例えば、Ｓ２９８Ａ、Ｅ３３３Ａ、および／またはＫ３３４Ａ（ＫａｂａｔらのＥＵ指標の番号付けに基づく）を有するヒトＦｃ領域が含まれる。これらの変異は、ＦｃＲに対する結合におけるさらなる改善を有する二重変異および三重変異バリアントを得るために、組み合わされ得る。ある特定の実施形態は、ＦｃγＲＩＩＩａに対する増加した結合、ＦｃγＲＩＩｂに対する減少した結合、および増加したＡＤＣＣを有する、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ三重変異体を含む（例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓｅｔａｌ．，ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ．２７６：６５９１−６６０４，２００１およびＰｒｅｓｔａｅｔａｌ．，ＢｉｏｃｈｅｍＳｏｃＴｒａｎｓ．３０：４８７−４９０，２００２を参照のこと）。Ｕｍａｎａら、上記；および米国特許第７，６６２，９２５号に開示されるような、ＦｃＲに対する増加した結合を有する操作されたＦｃグリコフォームもまた参照のこと。いくつかの実施形態は、ＫａｂａｔらのＥＵ指標の番号付けに基づく、４３４Ｓ、２５２Ｙ／４２８Ｌ、２５２Ｙ／４３４Ｓ、および４２８Ｌ／４３４Ｓ（米国特許出願第２００９／０１６３６９９号および同第２００６／０１７３１７０号を参照のこと）から選択される１つ以上の置換を含むＦｃ領域を含む。 Specific examples of Fc variants with altered (eg, increased or decreased) FcR binding are described, for example, in US Pat. Nos. 5,624,821 and 7,425,619, US Pat. 2009/0017023, 2009/0010921, and 2010/0203046, and WO 2000/42072 and WO 2004/016750. Certain examples include one or more at positions 298, 333, and/or 334, which have been shown to increase binding to activating receptor FcγRIIIa and reduce binding to inhibitory receptor FcγRIIb. Human Fc regions with substitutions, eg, S298A, E333A, and/or K334A (based on the EU index numbering of Kabat et al.) are included. These mutations can be combined to obtain double and triple mutant variants with further improvement in binding to FcR. Certain embodiments include S298A/E333A/K334A triple mutants having increased binding to FcγRIIIa, decreased binding to FcγRIIb, and increased ADCC (eg, Shields et al., J BiolChem.276: 6591). -6604, 2001 and Presta et al., Biochem Soc Trans. 30:487-490, 2002). See also Umana et al., supra; and engineered Fc glycoforms with increased binding to FcR, as disclosed in US Pat. No. 7,662,925. Some embodiments include 434S, 252Y/428L, 252Y/434S, and 428L/434S based on the EU index numbering of Kabat et al. Fc region containing one or more substitutions selected from

ある特定のバリアント、断片、ハイブリッド、または改変されたＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比較して、変更されたエフェクター機能を有し得る。例えば、かかるＦｃ領域は、増加した補体結合もしくは活性化、増加したＣｌｑ結合親和性、増加したＣＤＣ関連活性、増加したＡＤＣＣ関連活性および／または増加したＡＤＣＰ関連活性を有し得る。他の実施形態では、かかるＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比較して、減少した補体結合もしくは活性化、減少したＣｌｑ結合親和性、減少したＣＤＣ関連活性、減少したＡＤＣＣ関連活性および／または減少したＡＤＣＰ関連活性を有し得る。単なる例示的な一例として、Ｆｃ領域は、Ｃ１ｑ結合部位などの補体結合部位における欠失もしくは置換および／またはＡＤＣＣ部位における欠失もしくは置換を含み得る。かかる欠失／置換の例は、例えば、米国特許第７，０３０，２２６号に記載されている。ＡＤＣＣなどの多くのＦｃエフェクター機能は、当該技術分野における慣用的な技術に従ってアッセイされ得る（例えば、Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｅｔａｌ．，ＣＲＣＣｒｉｔＲｅｖＭｉｃｒｏｂｉｏｌ．７：１−２６，１９７８を参照のこと）。かかるアッセイのために有用なエフェクター細胞としては、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、および他の末梢血単核球細胞（ＰＢＭＣ）が挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、またはさらに、ある特定のＦｃエフェクター機能は、例えば、Ｃｌｙｎｅｓｅｔａｌ．ＰＮＡＳ．９５：６５２−６５６，１９９８に記載される動物モデルを使用することによって、インビボで評価され得る。 Certain variants, fragments, hybrids, or modified Fc regions may have altered effector function as compared to the corresponding wild type Fc sequence. For example, such an Fc region may have increased complement binding or activation, increased Clq binding affinity, increased CDC-related activity, increased ADCC-related activity and/or increased ADCP-related activity. In other embodiments, the Fc region has reduced complement binding or activation, reduced Clq binding affinity, reduced CDC-related activity, reduced ADCC-related activity and reduced Fc region relative to the corresponding wild-type Fc sequence. And/or may have reduced ADCP-related activity. As merely one illustrative example, the Fc region may include a deletion or substitution at a complement binding site such as the C1q binding site and/or a deletion or substitution at an ADCC site. Examples of such deletions/substitutions are described, for example, in US Pat. No. 7,030,226. Many Fc effector functions such as ADCC can be assayed according to routine techniques in the art (see, eg, Zuckerman et al., CRC Crit Rev Microbiol. 7:1-26, 1978). Effector cells useful for such assays include, but are not limited to, natural killer (NK) cells, macrophages, and other peripheral blood mononuclear cells (PBMC). Alternatively, or additionally, certain Fc effector functions have been described, for example, by Clynes et al. PNAS. 95:652-656, 1998 by using the animal model described in vivo.

ある特定のバリアントハイブリッドまたは改変されたＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比較して、変更された安定性または半減期を有し得る。ある特定の実施形態では、かかるＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比較して、増加した半減期を有し得る。他の実施形態では、バリアントハイブリッドまたは改変されたＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比較して、減少した半減期を有し得る。半減期は、放射標識、ＥＬＩＳＡ、または他の方法などの、当該技術分野における慣用的な技術に従って、インビトロ（例えば、生理学的条件下）またはインビボで測定され得る。安定性または半減期のインビボ測定は、血液、血清、血漿、尿、もしくは脳脊髄液を含む１つ以上の体液、または所与の組織、例えば、肝臓、腎臓、筋肉、中枢神経系組織、骨などにおいて測定され得る。一例として、ＦｃＲｎに結合するその能力を変更するＦｃ領域への改変は、その半減期をインビボで変更し得る。インビボ薬物動態学的特性（例えば、インビボ平均排出半減期）を測定するためのアッセイ、およびＦｃＲｎに対するその結合を変更するＦｃ改変の非限定的な例は、例えば、米国特許第７，２１７，７９７号および同第７，７３２，５７０号；ならびに米国特許出願第２０１０／０１４３２５４号および同第２０１０／０１４３２５４号に記載されている。 Certain variant hybrid or modified Fc regions may have altered stability or half-life as compared to the corresponding wild type Fc sequence. In certain embodiments, such Fc regions may have an increased half-life as compared to the corresponding wild type Fc sequence. In other embodiments, the variant hybrid or modified Fc region may have a reduced half-life as compared to the corresponding wild type Fc sequence. Half-life can be measured in vitro (eg under physiological conditions) or in vivo according to conventional techniques in the art, such as radiolabeling, ELISA, or other methods. In vivo measurement of stability or half-life is performed by measuring one or more body fluids, including blood, serum, plasma, urine, or cerebrospinal fluid, or a given tissue, such as liver, kidney, muscle, central nervous system tissue, bone. Etc. can be measured. As an example, modifications to the Fc region that alter its ability to bind FcRn can alter its half-life in vivo. Assays for measuring in vivo pharmacokinetic properties (eg, in vivo mean elimination half-life) and non-limiting examples of Fc modifications that alter its binding to FcRn are described, for example, in US Pat. No. 7,217,797. And U.S. Pat. Nos. 7,732,570; and U.S. Patent Applications 2010/0143254 and 2010/0143254.

安定性または半減期を変更するための改変のさらなる非限定的な例には、Ｋａｂａｔらの番号付け系に従って、ＣＨ_２ドメイン中の２５１〜２５６、２８５〜２９０、および３０８〜３１４、ならびにＣＨ_３ドメイン中の３８５〜３８９および４２８〜４３６から選択されるアミノ酸残基のうちの１つ以上における、置換／欠失が含まれる。米国特許出願第２００３／０１９０３１１号を参照のこと。具体的な例には、任意のそれらの組み合わせを含め、２５１位におけるロイシンによる置換、２５２位におけるチロシン、トリプトファン、もしくはフェニルアラニンによる置換、２５４位におけるスレオニンもしくはセリンによる置換、２５５位におけるアルギニンによる置換、２５６位におけるグルタミン、アルギニン、セリン、スレオニン、もしくはグルタミン酸塩による置換、３０８位におけるスレオニンによる置換、３０９位におけるプロリンによる置換、３１１位におけるセリンによる置換、３１２位におけるアスパラギン酸塩による置換、３１４位におけるロイシンによる置換、３８５位におけるアルギニン、アスパラギン酸塩、もしくはセリンによる置換、３８６位におけるスレオニンもしくはプロリンによる置換、３８７位におけるアルギニンもしくはプロリンによる置換、３８９位におけるプロリン、アスパラギン、もしくはセリンによる置換、４２８位におけるメチオニンもしくはスレオニンによる置換、４３４位におけるチロシンもしくはフェニルアラニンによる置換、４３３位におけるヒスチジン、アルギニン、リジン、もしくはセリンによる置換、および／または４３６位におけるヒスチジン、チロシン、アルギニン、もしくはスレオニンによる置換、が含まれる。かかる改変は、任意に、対応する野生型Ｆｃ領域と比較して、ＦｃＲｎに対するＦｃ領域の親和性を増加させ、それによって半減期を増加させる。 Additional non-limiting examples of modification to modify the stability or half-life, according to the numbering system of Kabat et al., 251～256,285～290 in CH ₂ domain, and 308-314, and CH ₃ Substitutions/deletions at one or more of the amino acid residues selected from 385-389 and 428-436 in the domain are included. See U.S. Patent Application 2003/0190311. Specific examples, including any combination thereof, substitution with leucine at position 251, substitution with tyrosine, tryptophan, or phenylalanine at position 252, substitution with threonine or serine at position 254, substitution with arginine at position 255, Substitution at position 256 with glutamine, arginine, serine, threonine, or glutamate, at position 308 with threonine, at position 309 with proline, at position 311 with serine, at position 312 with aspartate, at position 314 Substitution with leucine, substitution with arginine, aspartate, or serine at position 385, substitution with threonine or proline at position 386, substitution with arginine or proline at position 387, substitution with proline, asparagine, or serine at position 389, position 428 Substitution with methionine or threonine at position 434, substitution with tyrosine or phenylalanine at position 434, substitution with histidine, arginine, lysine, or serine at position 433 and/or substitution with histidine, tyrosine, arginine, or threonine at position 436. .. Such modifications optionally increase the affinity of the Fc region for FcRn relative to the corresponding wild-type Fc region, thereby increasing half-life.

ある特定のバリアントハイブリッドまたは改変されたＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比較して、変更された溶解度を有し得る。ある特定の実施形態では、かかるＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比較して、増加した溶解度を有し得る。他の実施形態では、バリアントハイブリッドまたは改変されたＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比較して、減少した溶解度を有し得る。溶解度は、当該技術分野における慣用的な技術に従って、例えば、インビトロ（例えば、生理学的条件下）で測定され得る。例示的な溶解度測定は、本明細書の他の箇所に記載されている。 Certain variant hybrids or modified Fc regions may have altered solubility compared to the corresponding wild type Fc sequence. In certain embodiments, such Fc regions may have increased solubility compared to the corresponding wild type Fc sequence. In other embodiments, the variant hybrid or modified Fc region may have reduced solubility compared to the corresponding wild type Fc sequence. Solubility can be measured according to routine techniques in the art, eg in vitro (eg under physiological conditions). Exemplary solubility measurements are described elsewhere in this specification.

バリアントのさらなる例には、重鎖の２５０位、３１４位、もしくは４２８位のうちの１つ以上またはそれらの任意の組み合わせ、例えば、２５０位および４２８位、もしくは２５０位および３１４位、または３１４位および４２８位、または２５０位、３１４位、および４２８位において、保存的または非保存的置換（本明細書の他の箇所に記載されている）を有するＩｇＧのＦｃ領域が含まれる（例えば、米国特許出願第２０１１／０１８３４１２号を参照のこと）。特定の実施形態では、２５０位における残基は、グルタミン酸もしくはグルタミンで置換され、および／または４２８位における残基は、ロイシンもしくはフェニルアラニンで置換される。ＩｇＧのＦｃバリアントの別の例示的な例として、２１４〜２３８位、２９７〜２９９位、３１８〜３２２位、および／または３２７〜３３１位におけるアミノ酸残基のうちの任意の１つ以上は、改変（例えば、保存的または非保存的置換、欠失）のための適切な標的として使用され得る。特定の実施形態では、ＩｇＧのＦｃバリアントのＣＨ_２ドメインは、Ｆｃ領域のエフェクター機能を減弱させるために、２２８、２３４、２３５、および／または３３１位においてアミノ酸置換を含む（例えば、Ｓｅｒ２２８ＰｒｏおよびＬｅｕ２３５Ａｌａ変異を有するヒトＩｇＧ４）（米国特許第７，０３０，２２６号を参照のこと）。ここで、重鎖中の残基の番号付けは、ＥＵ指標の番号付けである（Ｋａｂａｔｅｔａｌ．，“ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，”５^ｔｈＥｄ．，ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）を参照のこと）。これらおよび関連の実施形態のうちのある特定のものは、任意に、ＡＤＣＣ関連活性またはＣＤＣ関連活性などのエフェクター機能の低減を伴わずに、ＦｃＲｎ結合および／または血清半減を変更（例えば、増加、減少）させている。 Further examples of variants include one or more of positions 250, 314, or 428 of the heavy chain or any combination thereof, eg positions 250 and 428, or positions 250 and 314, or position 314. And the Fc region of IgG with conservative or non-conservative substitutions at positions 428, or 250, 314, and 428 (described elsewhere herein) (eg, US See Patent Application No. 2011/0183412). In certain embodiments, the residue at position 250 is replaced with glutamic acid or glutamine and/or the residue at position 428 is replaced with leucine or phenylalanine. As another illustrative example of an Fc variant of IgG, any one or more of the amino acid residues at positions 214-238, 297-299, 318-322, and/or 327-331 are modified. It can be used as a suitable target for (eg, conservative or non-conservative substitutions, deletions). In certain embodiments, the CH ₂ domain of an IgG Fc variant comprises amino acid substitutions at positions 228, 234, 235, and/or 331 to reduce Fc region effector function (eg, Ser228Pro and Leu235Ala mutations. Human IgG4) (see US Pat. No. 7,030,226). Here, the numbering of the residues in the heavy chain is the numbering of the EU index (Kabat et al., "Sequences of Proteins of Immunological Interest," 5 th Ed., National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)). Certain of these and related embodiments optionally alter (eg, increase, FcRn binding and/or serum half-life without a reduction in effector functions such as ADCC-related activity or CDC-related activity. Decrease).

さらなる例には、野生型Ｆｃ領域の２７９位、３４１位、３４３位、もしくは３７３位またはそれらの任意の組み合わせにおいて、１つ以上のアミノ酸置換を含むバリアントＦｃ領域が含まれる（例えば、米国特許出願２００７／０２２４１８８号を参照のこと）。ヒトＩｇＧについてこれらの位置における野生型アミノ酸残基は、バリン（２７９）、グリシン（３４１）、プロリン（３４３）、およびチロシン（３７３）である。置換は、保存的もしくは非保存的であり得るか、または本明細書に記載される、天然に存在しないアミノ酸もしくは模倣体を含み得る。単独でまたはこれらの置換と組み合わせて、ある特定の実施形態は、以下から選択される少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上のアミノ酸置換を含むバリアントＦｃ領域もまた使用し得る：２３５Ｇ、２３５Ｒ、２３６Ｆ、２３６Ｒ、２３６Ｙ、２３７Ｋ、２３７Ｎ、２３７Ｒ、２３８Ｅ、２３８Ｇ、２３８Ｈ、２３８Ｉ、２３８Ｌ、２３８Ｖ、２３８Ｗ、２３８Ｙ、２４４Ｌ、２４５Ｒ、２４７Ａ、２４７Ｄ、２４７Ｅ、２４７Ｆ、２４７Ｍ、２４７Ｎ、２４７Ｑ、２４７Ｒ、２４７Ｓ、２４７Ｔ、２４７Ｗ、２４７Ｙ、２４８Ｆ、２４８Ｐ、２４８Ｑ、２４８Ｗ、２４９Ｌ、２４９Ｍ、２４９Ｎ、２４９Ｐ、２４９Ｙ、２５１Ｈ、２５１Ｉ、２５１Ｗ、２５４Ｄ、２５４Ｅ、２５４Ｆ、２５４Ｇ、２５４Ｈ、２５４Ｉ、２５４Ｋ、２５４Ｌ、２５４Ｍ、２５４Ｎ、２５４Ｐ、２５４Ｑ、２５４Ｒ、２５４Ｖ、２５４Ｗ、２５４Ｙ、２５５Ｋ、２５５Ｎ、２５６Ｈ、２５６Ｉ、２５６Ｋ、２５６Ｌ、２５６Ｖ、２５６Ｗ、２５６Ｙ、２５７Ａ、２５７Ｉ、２５７Ｍ、２５７Ｎ、２５７Ｓ、２５８Ｄ、２６０Ｓ、２６２Ｌ、２６４Ｓ、２６５Ｋ、２６５Ｓ、２６７Ｈ、２６７Ｉ、２６７Ｋ、２６８Ｋ、２６９Ｎ、２６９Ｑ、２７１Ｔ、２７２Ｈ、２７２Ｋ、２７２Ｌ、２７２Ｒ、２７９Ａ、２７９Ｄ、２７９Ｆ、２７９Ｇ、２７９Ｈ、２７９Ｉ、２７９Ｋ、２７９Ｌ、２７９Ｍ、２７９Ｎ、２７９Ｑ、２７９Ｒ、２７９Ｓ、２７９Ｔ、２７９Ｗ、２７９Ｙ、２８０Ｔ、２８３Ｆ、２８３Ｇ、２８３Ｈ、２８３Ｉ、２８３Ｋ、２８３Ｌ、２８３Ｍ、２８３Ｐ、２８３Ｒ、２８３Ｔ、２８３Ｗ、２８３Ｙ、２８５Ｎ、２８６Ｆ、２８８Ｎ、２８８Ｐ、２９２Ｅ、２９２Ｆ、２９２Ｇ、２９２Ｉ、２９２Ｌ、２９３Ｓ、２９３Ｖ、３０１Ｗ、３０４Ｅ、３０７Ｅ、３０７Ｍ、３１２Ｐ、３１５Ｆ、３１５Ｋ、３１５Ｌ、３１５Ｐ、３１５Ｒ、３１６Ｆ、３１６Ｋ、３１７Ｐ、３１７Ｔ、３１８Ｎ、３１８Ｐ、３１８Ｔ、３３２Ｆ、３３２Ｇ、３３２Ｌ、３３２Ｍ、３３２Ｓ、３３２Ｖ、３３２Ｗ、３３９Ｄ、３３９Ｅ、３３９Ｆ、３３９Ｇ、３３９Ｈ、３３９Ｉ、３３９Ｋ、３３９Ｌ、３３９Ｍ、３３９Ｎ、３３９Ｑ、３３９Ｒ、３３９Ｓ、３３９Ｗ、３３９Ｙ、３４１Ｄ、３４１Ｅ、３４１Ｆ、３４１Ｈ、３４１Ｉ、３４１Ｋ、３４１Ｌ、３４１Ｍ、３４１Ｎ、３４１Ｐ、３４１Ｑ、３４１Ｒ、３４１Ｓ、３４１Ｔ、３４１Ｖ、３４１Ｗ、３４１Ｙ、３４３Ａ、３４３Ｄ、３４３Ｅ、３４３Ｆ、３４３Ｇ、３４３Ｈ、３４３Ｉ、３４３Ｋ、３４３Ｌ、３４３Ｍ、３４３Ｎ、３４３Ｑ、３４３Ｒ、３４３Ｓ、３４３Ｔ、３４３Ｖ、３４３Ｗ、３４３Ｙ、３７３Ｄ、３７３Ｅ、３７３Ｆ、３７３Ｇ、３７３Ｈ、３７３Ｉ、３７３Ｋ、３７３Ｌ、３７３Ｍ、３７３Ｎ、３７３Ｑ、３７３Ｒ、３７３Ｓ、３７３Ｔ、３７３Ｖ、３７３Ｗ、３７５Ｒ、３７６Ｅ、３７６Ｆ、３７６Ｇ、３７６Ｈ、３７６Ｉ、３７６Ｌ、３７６Ｍ、３７６Ｎ、３７６Ｐ、３７６Ｑ、３７６Ｒ、３７６Ｓ、３７６Ｔ、３７６Ｖ、３７６Ｗ、３７６Ｙ、３７７Ｇ、３７７Ｋ、３７７Ｐ、３７８Ｎ、３７９Ｎ、３７９Ｑ、３７９Ｓ、３７９Ｔ、３８０Ｄ、３８０Ｎ、３８０Ｓ、３８０Ｔ、３８２Ｄ、３８２Ｆ、３８２Ｈ、３８２Ｉ、３８２Ｋ、３８２Ｌ、３８２Ｍ、３８２Ｎ、３８２Ｐ、３８２Ｑ、３８２Ｒ、３８２Ｓ、３８２Ｔ、３８２Ｖ、３８２Ｗ、３８２Ｙ、３８５Ｅ、３８５Ｐ、３８６Ｋ、４２３Ｎ、４２４Ｈ、４２４Ｍ、４２４Ｖ、４２６Ｄ、４２６Ｌ、４２７Ｎ、４２９Ａ、４２９Ｆ、４２９Ｍ、４３０Ａ、４３０Ｄ、４３０Ｆ、４３０Ｇ、４３０Ｈ、４３０Ｉ、４３０Ｋ、４３０Ｌ、４３０Ｍ、４３０Ｎ、４３０Ｐ、４３０Ｑ、４３０Ｒ、４３０Ｓ、４３０Ｔ、４３０Ｖ、４３０Ｗ、４３０Ｙ、４３１Ｈ、４３１Ｋ、４３１Ｐ、４３２Ｒ、４３２Ｓ、４３８Ｇ、４３８Ｋ、４３８Ｌ、４３８Ｔ、４３８Ｗ、４３９Ｅ、４３９Ｈ、４３９Ｑ、４４０Ｄ、４４０Ｅ、４４０Ｆ、４４０Ｇ、４４０Ｈ、４４０Ｉ、４４０Ｋ、４４０Ｌ、４４０Ｍ、４４０Ｑ、４４０Ｔ、４４０Ｖ、または４４２Ｋ。上記のように、重鎖中の残基の番号付けは、ＥＵ指標の番号付けである（Ｋａｂａｔら、上記を参照のこと）。かかるバリアントＦｃ領域は、典型的には、バリアントＦｃ領域が作動可能に結合されるＨＲＳポリペプチドに、変更されたエフェクター機能または変更された血清半減期を付与する。好ましくは、変更されたエフェクター機能は、かかるアミノ酸置換を欠く対応するＦｃ領域と比較した、ＡＤＣＣにおける増加、ＡＤＣＣにおける減少、ＣＤＣにおける増加、ＣＤＣにおける減少、Ｃｌｑ結合親和性における増加、Ｃｌｑ結合親和性における減少、ＦｃＲ（好ましくはＦｃＲｎ）結合親和性における増加またはＦｃＲ（好ましくはＦｃＲｎ）結合親和性における減少である。 Further examples include variant Fc regions that include one or more amino acid substitutions at positions 279, 341, 343, or 373 of the wild-type Fc region, or any combination thereof (eg, US patent applications). 2007/0224188). Wild-type amino acid residues at these positions for human IgG are valine (279), glycine (341), proline (343), and tyrosine (373). Substitutions can be conservative or non-conservative, or can include non-naturally occurring amino acids or mimetics described herein. Certain embodiments, alone or in combination with these substitutions, include at least 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 or more amino acid substitutions selected from: Variant Fc regions may also be used: 235G, 235R, 236F, 236R, 236Y, 237K, 237N, 237R, 238E, 238G, 238H, 238I, 238L, 238V, 238W, 238Y, 244L, 245R, 247A, 247D, 247E. , 247F, 247M, 247N, 247Q, 247R, 247S, 247T, 247W, 247Y, 248F, 248P, 248Q, 248W, 249L, 249M, 249N, 249P, 249Y, 251H, 251I, 251W, 254D, 254E, 254F, 254G. , 254H, 254I, 254K, 254L, 254M, 254N, 254P, 254Q, 254R, 254V, 254W, 254Y, 255K, 255N, 256H, 256I, 256K, 256L, 256V, 256W, 256Y, 257A, 257I, 257M, 257N. , 257S, 258D, 260S, 262L, 264S, 265K, 265S, 267H, 267I, 267K, 268K, 269N, 269Q, 271T, 272H, 272K, 272L, 272R, 279A, 279D, 279F, 279G, 279H, 279I, 279K. 279L, 279M, 279N, 279Q, 279R, 279S, 279T, 279W, 279Y, 280T, 283F, 283G, 283H, 283I, 283K, 283L, 283M, 283P, 283R, 283T, 283W, 283Y, 285N, 286F, 288N. 288P, 292E, 292F, 292G, 292I, 292L, 293S, 293V, 301W, 304E, 307E, 307M, 312P, 315F, 315K, 315L, 315P, 315R, 316F, 316K, 317P, 317T, 318N, 318P, 318T. , 332F, 332G, 332L, 332M, 332S, 332V, 332W, 339D, 339E, 339F, 339G, 339H, 339I, 339K, 339L, 339M, 339N, 339Q, 339R, 339S, 339W, 339Y, 341D, 341E, 341F. , 341H, 341I, 341K, 341L, 341M, 341N, 341P, 341Q, 341R, 341S, 341T, 341V, 341W, 341Y, 343A, 343D, 343E, 343F, 343G, 343H, 343I, 343K, 343L, 343M, 343N, 343Q, 343R, 343S, 343T, 343V, 343W, 343Y, 373D, 373E,. 373F, 373G, 373H, 373I, 373K, 373L, 373M, 373N, 373Q, 373R, 373S, 373T, 373V, 373W, 375R, 376E, 376F, 376G, 376H, 376I, 376L, 376M, 376N, 376P, 376Q, 376R, 376S, 376T, 376V, 376W, 376Y, 377G, 377K, 377P, 378N, 379N, 379Q, 379S, 379T, 380D, 380N, 380S, 380T, 382D, 382F, 382H, 382I, 382K, 382L, 382M, 382N, 382P, 382Q, 382R, 382S, 382T, 382V, 382W, 382Y, 385E, 385P, 386K, 423N, 424H, 424M, 424V, 426D, 426L, 427N, 429A, 429F, 429M, 430A, 430D, 430F, 430G, 430H, 430I, 430K, 430L, 430M, 430N, 430P, 430Q, 430R, 430S, 430T, 430V, 430W, 430Y, 431H, 431K, 431P, 432R, 432S, 438G, 438K, 438L, 438T, 438W, 439E, 439H, 439Q, 440D, 440E, 440F, 440G, 440H, 440I, 440K, 440L, 440M, 440Q, 440T, 440V, or 442K. As mentioned above, the numbering of residues in the heavy chain is that of the EU index (see Kabat et al., supra). Such variant Fc regions typically confer altered effector function or altered serum half-life on the HRS polypeptide to which the variant Fc region is operably linked. Preferably, the altered effector function is an increase in ADCC, a decrease in ADCC, an increase in CDC, a decrease in CDC, an increase in Clq binding affinity, an increase in Clq binding affinity compared to the corresponding Fc region lacking such amino acid substitutions. In, an increase in FcR (preferably FcRn) binding affinity or a decrease in FcR (preferably FcRn) binding affinity.

さらなる例には、２２１位、２２２位、２２４位、２２７位、２２８位、２３０位、２３１位、２２３位、２３３位、２３４位、２３５位、２３６位、２３７位、２３８位、２３９位、２４０位、２４１位、２４３位、２４４位、２４５位、２４６位、２４７位、２４９位、２５０位、２５８位、２６２位、２６３位、２６４位、２６５位、２６６位、２６７位、２６８位、２６９位、２７０位、２７１位、２７２位、２７３位、２７４位、２７５位、２７６位、２７８位、２８０位、２８１位、２８３位、２８５位、２８６位、２８８位、２９０位、２９１位、２９３位、２９４位、２９５位、２９６位、２９７位、２９８位、２９９位、３００位、３０２位、３１３位、３１７位、３１８位、３２０位、３２２位、３２３位、３２４位、３２５位、３２６位、３２７位、３２８位、３２９位、３３０位、３３１位、３３２位、３３３位、３３４位、３３５位３３６位、および／または４２８位のうちの１つ以上においてアミノ酸置換を含むバリアントＦｃ領域が含まれる（例えば、米国特許第７，６６２，９２５号を参照のこと）。特定の実施形態では、バリアントＦｃ領域は、Ｐ２３０Ａ、Ｅ２３３Ｄ、Ｌ２３４Ｅ、Ｌ２３４Ｙ、Ｌ２３４Ｉ、Ｌ２３５Ｄ、Ｌ２３５Ｓ、Ｌ２３５Ｙ、Ｌ２３５Ｉ、Ｓ２３９Ｄ、Ｓ２３９Ｅ、Ｓ２３９Ｎ、Ｓ２３９Ｑ、Ｓ２３９Ｔ、Ｖ２４０Ｉ、Ｖ２４０Ｍ、Ｆ２４３Ｌ、Ｖ２６４Ｉ、Ｖ２６４Ｔ、Ｖ２６４Ｙ、Ｖ２６６Ｉ、Ｅ２７２Ｙ、Ｋ２７４Ｔ、Ｋ２７４Ｅ、Ｋ２７４Ｒ、Ｋ２７４Ｌ、Ｋ２７４Ｙ、Ｆ２７５Ｗ、Ｎ２７６Ｌ、Ｙ２７８Ｔ、Ｖ３０２Ｉ、Ｅ３１８Ｒ、Ｓ３２４Ｄ、Ｓ３２４Ｉ、Ｓ３２４Ｖ、Ｎ３２５Ｔ、Ｋ３２６Ｉ、Ｋ３２６Ｔ、Ｌ３２８Ｍ、Ｌ３２８Ｉ、Ｌ３２８Ｑ、Ｌ３２８Ｄ、Ｌ３２８Ｖ、Ｌ３２８Ｔ、Ａ３３０Ｙ、Ａ３３０Ｌ、Ａ３３０Ｉ、Ｉ３３２Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、Ｉ３３２Ｎ、Ｉ３３２Ｑ、Ｔ３３５Ｄ、Ｔ３３５Ｒ、およびＴ３３５Ｙからなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。他の特定の実施形態では、バリアントＦｃ領域は、Ｖ２６４Ｉ、Ｆ２４３Ｌ／Ｖ２６４Ｉ、Ｌ３２８Ｍ、Ｉ３３２Ｅ、Ｌ３２８Ｍ／Ｉ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２９８Ａ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｅ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｑ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｅ、Ａ３３０Ｙ、Ｉ３３２Ｄ、Ｌ３２８Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ３２８Ｑ／Ｉ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｔ、Ｖ２４０Ｉ、Ｖ２６６Ｉ、Ｓ２３９Ｄ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｄ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｎ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｑ、Ｓ２３９Ｅ／Ｉ３３２Ｄ、Ｓ２３９Ｅ／Ｉ３３２Ｎ、Ｓ２３９Ｅ／Ｉ３３２Ｑ、Ｓ２３９Ｎ／Ｉ３３２Ｄ、Ｓ２３９Ｎ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｑ／Ｉ３３２Ｄ、Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｉ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ、Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｉ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ２３４Ｅ、Ｌ２３４Ｙ、Ｌ２３４Ｉ、Ｌ２３５Ｄ、Ｌ２３５Ｓ、Ｌ２３５Ｙ、Ｌ２３５Ｉ、Ｓ２３９Ｔ、Ｖ２４０Ｍ、Ｖ２６４Ｙ、Ａ３３０Ｉ、Ｎ３２５Ｔ、Ｌ３２８Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ３２８Ｖ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ３２８Ｔ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ３２８Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｅ／Ｖ２６４Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｑ／Ｖ２６４Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｅ／Ｖ２６４Ｉ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｎ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｎ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｉ／Ｓ２９８Ａ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｓ２９８Ａ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｎ／Ｓ２９８Ａ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｖ２６４Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｖ２６４Ｉ／Ｓ２９８Ａ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｖ２６４Ｉ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｉ、Ｐ２３０Ａ、Ｐ２３０Ａ／Ｅ２３３Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｅ２７２Ｙ、Ｋ２７４Ｔ、Ｋ２７４Ｅ、Ｋ２７４Ｒ、Ｋ２７４Ｌ、Ｋ２７４Ｙ、Ｆ２７５Ｗ、Ｎ２７６Ｌ、Ｙ２７８Ｔ、Ｖ３０２Ｉ、Ｅ３１８Ｒ、Ｓ３２４Ｄ、Ｓ３２４Ｉ、Ｓ３２４Ｖ、Ｋ３２６Ｉ、Ｋ３２６Ｔ、Ｔ３３５Ｄ、Ｔ３３５Ｒ、Ｔ３３５Ｙ、Ｖ２４０Ｉ／Ｖ２６６Ｉ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ／Ｌ２３４Ｉ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ／Ｌ２３５Ｄ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ／Ｖ２４０Ｉ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ／Ｖ２６４Ｔ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ／Ｋ３２６Ｅ、およびＳ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ／Ｋ３２６Ｔからなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。さらに特定の実施形態では、このバリアントＦｃ領域は、Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｆ２４１Ｙ／Ｆ２４３Ｙ／Ｖ２６２Ｔ／Ｖ２６４Ｔ／Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｅ／Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｄ２６５Ｙ／Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｄ２６５Ｈ／Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｅ／Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｙ２９６Ｎ／Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｎ２９７Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｄ２６５Ｖ／Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｄ２６５Ｉ／Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、およびＮ２９７Ｄ／Ｓ２９８Ａ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅからなる群から選択される一連の置換を含む。特定の実施形態では、このバリアントＦｃ領域は、３３２位においてアミノ酸置換を含む（ＥＵ指標、Ｋａｂａｔら、上記の番号付けを用いて）。置換の例は、３３２Ａ、３３２Ｄ、３３２Ｅ、３３２Ｆ、３３２Ｇ、３３２Ｈ、３３２Ｋ、３３２Ｌ、３３２Ｍ、３３２Ｎ、３３２Ｐ、３３２Ｑ、３３２Ｒ、３３２Ｓ、３３２Ｔ、３３２Ｖ、３３２Ｗ、および３３２Ｙを含む。Ｆｃ領域中の残基の番号付けは、ＫａｂａｔらのＥＵ指標の番号付けである。本明細書に記載される他の特性のうちで、かかるバリアントＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ領域と比較して、ＦｃγＲに対する増加した親和性、増加した安定性、および／または増加した溶解度を有し得る。 Further examples include 221, 222, 224, 227, 228, 230, 231, 223, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239. 240th, 241, 243nd, 244th, 245th, 246th, 247th, 249th, 250th, 258th, 262th, 263th, 264th, 265th, 266th, 267th, 268th 269, 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 278, 280, 281, 283, 285, 286, 288, 290, 291 No. 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 300, 302, 313, 317, 318, 320, 322, 323, 324, Amino acid substitutions at one or more of positions 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 336, and/or 428. Included are variant Fc regions (see, eg, US Pat. No. 7,662,925). In certain embodiments, the variant Fc region is P230A, E233D, L234E, L234Y, L234I, L235D, L235S, L235Y, L235I, S239D, S239E, S239N, S239Q, S239T, V240I, V240M, F243V426V, 426V4264V4264. , V266I, E272Y, K274T, K274E, K274R, K274L, K274Y, F275W, N276L, Y278T, V302I, E318R, S324D, S324I, S324V, N325T, K326I, K326T328L3L, 2832L, L328L, L328M, L327M , A330L, A330I, I332D, I332E, I332N, I332Q, T335D, T335R, and T335Y, comprising at least one amino acid substitution. In another specific embodiment, the variant Fc region is V264I, F243L/V264I, L328M, I332E, L328M/I332E, V264I/I332E, S298A/I332E, S239E/I332E, S239Q/I332E, S239I, D330Y, A330Y, A330Y, A330Y. /I332E, L328Q/I332E, V264T, V240I, V266I, S239D, S239D/I332D, S239D/I332E, S239D/I332N, S239D/I332Q, S239E/N332, S239E/N2S, S239E2/S332E/I332N, S239E/S232E/I332N, S233E/S332E/I332N, S239E2/S332E/I332N, S239E/S332E/I332N , S239Q/I332D, A330Y/I332E, V264I/A330Y/I332E, A330L/I332E, V264I/A330L/I332E, L234E, L234Y, L234I, L235D, L235V, M235T, L235V, S235T, S235L, S235Q / I332E, L328V / I332E, L328T / I332E, L328I / I332E, S239E / V264I / I332E, S239Q / V264I / I332E, S239E / V264I / A330Y / I332E, S239D / A330Y / I332E, S239N / A330Y / I332E, S239D / A330L /I332E, S239N/A330L/I332E, V264I/S298A/I332E, S239D/S298A/I332E, S239N/S298A/I332E, S239D/V264I/I332E, S239D/V264I/33E2D/S3239D/S3239A/S332A, /I332E/A330I, P230A, P230A/E233D/I332E, E272Y, K274T, K274E, K274R, K274L, K274Y, F275W, N276L, Y278T, V302I, E318R, S324D, S335T, 324K, 324K, S324I, S324I, S324I, S324I, S324I, S324I, S324K. , V240I/V266I, S239D/A330Y/I332E/L234I, S239D/A330Y/I332E/L235D, S239D/A330Y/I332E/V240I, S239D/A330Y/I332E/V264T, S239D /A330Y/I332E/K326E and at least one amino acid substitution selected from the group consisting of S239D/A330Y/I332E/K326T. In a more specific embodiment, the variant Fc region is N297D/I332E, F241Y/F243Y/V262T/V264T/N297D/I332E, S239D/N297D/I332E, S239E/N297D/I332E, S239D/D265Y/N297D, /D265H/N297D/I332E, V264E/N297D/I332E, Y296N/N297D/I332E, N297D/A330Y/I332E, S239D/D265V/N297D/I332E and S239D/D265I2/N3E2/N297D/N3D/I332E/N332D Including a series of substitutions selected from the group consisting of: In a particular embodiment, the variant Fc region comprises an amino acid substitution at position 332 (using the EU index, Kabat et al., numbering above). Examples of permutations include 332A, 332D, 332E, 332F, 332G, 332H, 332K, 332L, 332M, 332N, 332P, 332Q, 332R, 332S, 332T, 332V, 332W, and 332Y. The numbering of residues in the Fc region is that of the EU index of Kabat et al. Among other properties described herein, such variant Fc regions have increased affinity for FcγR, increased stability, and/or increased solubility compared to the corresponding wild-type Fc region. Can have.

さらなる例には、以下のアミノ酸置換：２２４Ｎ／Ｙ、２２５Ａ、２２８Ｌ、２３０Ｓ、２３９Ｐ、２４０Ａ、２４１Ｌ、２４３Ｓ／Ｌ／Ｇ／Ｈ／Ｉ、２４４Ｌ、２４６Ｅ、２４７Ｌ／Ａ、２５２Ｔ、２５４Ｔ／Ｐ、２５８Ｋ、２６１Ｙ、２６５Ｖ、２６６Ａ、２６７Ｇ／Ｎ、２６８Ｎ、２６９Ｋ／Ｇ、２７３Ａ、２７６Ｄ、２７８Ｈ、２７９Ｍ、２８０Ｎ、２８３Ｇ、２８５Ｒ、２８８Ｒ、２８９Ａ、２９０Ｅ、２９１Ｌ、２９２Ｑ、２９７Ｄ、２９９Ａ、３００Ｈ、３０１Ｃ、３０４Ｇ、３０５Ａ、３０６Ｉ／Ｆ、３１１Ｒ、３１２Ｎ、３１５Ｄ／Ｋ／Ｓ、３２０Ｒ、３２２Ｅ、３２３Ａ、３２４Ｔ、３２５Ｓ、３２６Ｅ／Ｒ、３３２Ｔ、３３３Ｄ／Ｇ、３３５Ｉ、３３８Ｒ、３３９Ｔ、３４０Ｑ、３４１Ｅ、３４２Ｒ、３４４Ｑ、３４７Ｒ、３５１Ｓ、３５２Ａ、３５４Ａ、３５５Ｗ、３５６Ｇ、３５８Ｔ、３６１Ｄ／Ｙ、３６２Ｌ、３６４Ｃ、３６５Ｑ／Ｐ、３７０Ｒ、３７２Ｌ、３７７Ｖ、３７８Ｔ、３８３Ｎ、３８９Ｓ、３９０Ｄ、３９１Ｃ、３９３Ａ、３９４Ａ、３９９Ｇ、４０４Ｓ、４０８Ｇ、４０９Ｒ、４１１Ｉ、４１２Ａ、４１４Ｍ、４２１Ｓ、４２２Ｉ、４２６Ｆ／Ｐ、４２８Ｔ、４３０Ｋ、４３１Ｓ、４３２Ｐ、４３３Ｐ、４３８Ｌ、４３９Ｅ／Ｒ、４４０Ｇ、４４１Ｆ、４４２Ｔ、４４５Ｒ、４４６Ａ、４４７Ｅのうちの１つ以上を含むバリアントＦｃ領域が含まれ、ここで、任意に、このバリアントは、親Ｆｃポリペプチドと比較して、Ｆｃリガンドの変更された認識および／または変更されたエフェクター機能を有し、残基の番号付けは、ＫａｂａｔらのＥＵ指標の番号付けである。これらおよび関連の実施形態の具体的な例には、以下の置換のセット：（１）Ｎ２７６Ｄ、Ｒ２９２Ｑ、Ｖ３０５Ａ、Ｉ３７７Ｖ、Ｔ３９４Ａ、Ｖ４１２Ａ、およびＫ４３９Ｅ、（２）Ｐ２４４Ｌ、Ｋ２４６Ｅ、Ｄ３９９Ｇ、およびＫ４０９Ｒ、（３）Ｓ３０４Ｇ、Ｋ３２０Ｒ、Ｓ３２４Ｔ、Ｋ３２６Ｅ、およびＭ３５８Ｔ、（４）Ｆ２４３Ｓ、Ｐ２４７Ｌ、Ｄ２６５Ｖ、Ｖ２６６Ａ、Ｓ３８３Ｎ、およびＴ４１１Ｉ、（５）Ｈ２２４Ｎ、Ｆ２４３Ｌ、Ｔ３９３Ａ、およびＨ４３３Ｐ、（６）Ｖ２４０Ａ、Ｓ２６７Ｇ、Ｇ３４１Ｅ、およびＥ３５６Ｇ、（７）Ｍ２５２Ｔ、Ｐ２９１Ｌ、Ｐ３５２Ａ、Ｒ３５５Ｗ、Ｎ３９０Ｄ、Ｓ４０８Ｇ、Ｓ４２６Ｆ、およびＡ４３１Ｓ、（８）Ｐ２２８Ｌ、Ｔ２８９Ａ、Ｌ３６５Ｑ、Ｎ３８９Ｓ、および５４４０Ｇ、（９）Ｆ２４１Ｌ、Ｖ２７３Ａ、Ｋ３４０Ｑ、およびＬ４４１Ｆ、（１０）Ｆ２４１Ｌ、Ｔ２９９Ａ、Ｉ３３２Ｔ、およびＭ４２８Ｔ、（１１）Ｅ２６９Ｋ、Ｙ３００Ｈ、Ｑ３４２Ｒ、Ｖ４２２Ｉ、およびＧ４４６Ａ、（１２）Ｔ２２５Ａ、Ｒ３０１ｃ、Ｓ３０４Ｇ、Ｄ３１２Ｎ、Ｎ３１５Ｄ、Ｌ３５１Ｓ、およびＮ４２１Ｓ、（１３）Ｓ２５４Ｔ、Ｌ３０６Ｉ、Ｋ３２６Ｒ、およびＱ３６２Ｌ、（１４）Ｈ２２４Ｙ、Ｐ２３０Ｓ、Ｖ３２３Ａ、Ｅ３３３Ｄ、Ｋ３３８Ｒ、およびＳ３６４Ｃ、（１５）Ｔ３３５Ｉ、Ｋ４１４Ｍ、およびＰ４４５Ｒ、（１６）Ｔ３３５ＩおよびＫ４１４Ｍ、（１７）Ｐ２４７Ａ、Ｅ２５８Ｋ、Ｄ２８０Ｎ、Ｋ２８８Ｒ、Ｎ２９７Ｄ、Ｔ２９９Ａ、Ｋ３２２Ｅ、Ｑ３４２Ｒ、Ｓ３５４Ａ、およびＬ３６５Ｐ、（１８）Ｈ２６８Ｎ、Ｖ２７９Ｍ、Ａ３３９Ｔ、Ｎ３６１Ｄ、およびＳ４２６Ｐ、（１９）Ｃ２６１Ｙ、Ｋ２９０Ｅ、Ｌ３０６Ｆ、Ｑ３１１Ｒ、Ｅ３３３Ｇ、およびＱ４３８Ｌ、（２０）Ｅ２８３Ｇ、Ｎ３１５Ｋ、Ｅ３３３Ｇ、Ｒ３４４Ｑ、Ｌ３６５Ｐ、およびＳ４４２Ｔ、（２１）Ｑ３４７Ｒ、Ｎ３６１Ｙ、およびＫ４３９Ｒ、（２２）Ｓ２３９Ｐ、Ｓ２５４Ｐ、Ｓ２６７Ｎ、Ｈ２８５Ｒ、Ｎ３１５Ｓ、Ｆ３７２Ｌ、Ａ３７８Ｔ、Ｎ３９０Ｄ、Ｙ３９１Ｃ、Ｆ４０４Ｓ、Ｅ４３０Ｋ、Ｌ４３２Ｐ、およびＫ４４７Ｅ、ならびに（２３）Ｅ２６９Ｇ、Ｙ２７８Ｈ、Ｎ３２５Ｓ、およびＫ３７０Ｒを含むか、またはそれらからなるバリアントＦｃ領域が含まれ、ここで、残基の番号付けは、ＫａｂａｔらのＥＵ指標の番号付けである（例えば、米国特許出願第２０１０／０１８４９５９号を参照のこと）。 Further examples include the following amino acid substitutions: 224N/Y, 225A, 228L, 230S, 239P, 240A, 241L, 243S/L/G/H/I, 244L, 246E, 247L/A, 252T, 254T/P, 258K, 261Y, 265V, 266A, 267G/N, 268N, 269K/G, 273A, 276D, 278H, 279M, 280N, 283G, 285R, 288R, 289A, 290E, 291L, 292Q, 297D, 299A, 300H, 301C, 304G, 305A, 306I/F, 311R, 312N, 315D/K/S, 320R, 322E, 323A, 324T, 325S, 326E/R, 332T, 333D/G, 335I, 338R, 339T, 340Q, 341E, 342R, 344Q, 347R, 351S, 352A, 354A, 355W, 356G, 358T, 361D/Y, 362L, 364C, 365Q/P, 370R, 372L, 377V, 378T, 383N, 389S, 390D, 391C, 393A, 394A, 399G, Of 404S, 408G, 409R, 411I, 412A, 414M, 421S, 422I, 426F/P, 428T, 430K, 431S, 432P, 433P, 438L, 439E/R, 440G, 441F, 442T, 445R, 446A, 447E. A variant Fc region comprising one or more is included, wherein the variant optionally has altered recognition of Fc ligand and/or altered effector function as compared to a parent Fc polypeptide, Residue numbering is that of the EU index of Kabat et al. Specific examples of these and related embodiments include the following set of substitutions: (1) N276D, R292Q, V305A, I377V, T394A, V412A, and K439E, (2) P244L, K246E, D399G, and K409R, (3) S304G, K320R, S324T, K326E, and M358T, (4) F243S, P247L, D265V, V266A, S383N, and T411I, (5) H224N, F243L, T393A, and H433P, (6)V240A, S267G, S267G, S267G. , And E356G, (7)M252T, P291L, P352A, R355W, N390D, S408G, S426F, and A431S, (8)P228L, T289A, L365Q, N389S, and 5440G, (9)F241L, V273A, K340Q. (10) F241L, T299A, I332T, and M428T, (11) E269K, Y300H, Q342R, V422I, and G446A, (12) T225A, R301c, S304G, D312N, N315D, L351S, and N421S, (13)S254T. , K326R, and Q362L, (14)H224Y, P230S, V323A, E333D, K338R, and S364C, (15)T335I, K414M, and P445R, (16)T335I and K414M, (17)P247A, E258K, D280N, D280N, D280N, D280N. N297D, T299A, K322E, Q342R, S354A, and L365P, (18)H268N, V279M, A339T, N361D, and S426P, (19)C261Y, K290E, L306F, Q311R, E333G, and Q438L, (20E), and N438E, (N). E333G, R344Q, L365P, and S442T, (21)Q347R, N361Y, and K439R, (22) S239P, S254P, S267N, H285R, N315S, F372L, A378T, N390D, Y391C, F404S, 44O4, P430S, E430K, and E391G. (23) Variant Fc regions comprising or consisting of E269G, Y278H, N325S, and K370R are included, where residue numbering is that of the Kabat et al. EU index (eg, See, for example, U.S. Patent Application No. 2010/0184959).

Ｆｃバリアントの別の特定の例は、表Ｈ７のＦｃ配列を含み、式中、１位におけるＸａａは、Ａｌａであるかもしくは存在せず、１６位におけるＸａａは、ＰｒｏもしくはＧｌｕであり、１７位におけるＸａａは、Ｐｈｅ、Ｖａｌ、もしくはＡｌａであり、１８位におけるＸａａは、Ｌｅｕ、Ｇｌｕ、もしくはＡｌａであり、８０位におけるＸａａは、ＡｓｎもしくはＡｌａであり、および／または２３０位におけるＸａａは、Ｌｙｓであるかもしくは存在しない（例えば、米国特許出願第２００７／０２５３９６６号を参照のこと）。これらのＦｃ領域のある特定のものおよび関連のＨＲＳ−Ｆｃコンジュゲートは、増加した半減期、低減したエフェクター活性を有し、および／または野生型Ｆｃ配列よりも免疫原性が顕著に低い。 Another specific example of an Fc variant includes the Fc sequences of Table H7, wherein Xaa at position 1 is Ala or absent, Xaa at position 16 is Pro or Glu, and position 17 Xaa at is Phe, Val, or Ala, Xaa at position 18 is Leu, Glu, or Ala, Xaa at position 80 is Asn or Ala, and/or Xaa at position 230 is Lys. Or does not exist (see, eg, US Patent Application 2007/0253966). Certain of these Fc regions and related HRS-Fc conjugates have increased half-life, reduced effector activity, and/or are significantly less immunogenic than wild-type Fc sequences.

バリアントＦｃ領域は、例えば、米国特許出願第２００３／０１１８５９２号に記載されるように、１つ以上の変異したヒンジ領域もまた有し得る。例えば、ヒンジ領域中の１つ以上のシステインは、欠失し得るか、または異なるアミノ酸で置換され得る。変異したヒンジ領域は、システイン残基を含み得ないか、または対応する野生型ヒンジ領域よりも１つ、２つ、または３つ少ないシステイン残基を含み得る。いくつかの実施形態では、この型の変異したヒンジ領域を有するＦｃ領域は、野生型Ｉｇヒンジ領域と比較して、低減したダイマー化する能力を示す。 The variant Fc region may also have one or more mutated hinge regions, eg, as described in US Patent Application 2003/0118592. For example, one or more cysteines in the hinge region can be deleted or replaced with different amino acids. The mutated hinge region may not contain cysteine residues or may contain one, two, or three fewer cysteine residues than the corresponding wild type hinge region. In some embodiments, the Fc region with this type of mutated hinge region exhibits a reduced ability to dimerize as compared to the wild-type Ig hinge region.

上述のように、ＨＲＳ−Ｆｃコンジュゲート、例えばＨＲＳ−Ｆｃ融合タンパク質は、典型的に、対応するＨＲＳポリペプチドと比較して、変更された（例えば、改善された、増加した、減少した）薬物動態学的特性を有する。薬物動態学的特性の例には、安定性もしくは半減期、バイオアベイラビリティ（吸収される薬物の分率）、組織分布、分布容積（薬物が静脈内注射された直後に分布し、血漿と周辺組織との間で平衡に達する、見かけの容積）、濃度（血漿中の薬物の初期または定常状態濃度）、排出速度定数（薬物が身体から除去される速度）、排出速度（排出のバランスをとるために必要とされる注入の速度）、曲線下面積（ＡＵＣまたは曝露；単一の用量後の、または定常状態における、濃度−時間曲線の積分）、クリアランス（単位時間当たりの薬物が一掃される血漿の体積）、Ｃ_ｍａｘ（経口投与後の薬物のピーク血漿濃度）、ｔ_ｍａｘ（Ｃ_ｍａｘに達するまでの時間）、Ｃ_ｍｉｎ（次の用量が投与される前に薬物が到達する最も低い濃度）、および変動（定常状態における１回の投薬間隔内のピークトラフ変動）が含まれる。いくつかの態様では、これらの改善された特性は、二次構造を顕著に変更することおよび／またはＨＲＳポリペプチドの非正準生物学的活性を低減させることなしに、達成される。実際、一部のＨＲＳ−Ｆｃコンジュゲートは、増加した非正準生物学的活性を有する。 As mentioned above, the HRS-Fc conjugate, eg, HRS-Fc fusion protein, typically has an altered (eg, improved, increased, decreased) drug compared to the corresponding HRS polypeptide. Has kinetic properties. Examples of pharmacokinetic properties include stability or half-life, bioavailability (fraction of drug absorbed), tissue distribution, volume of distribution (distribution immediately after the drug is injected intravenously, plasma and surrounding tissues). To reach equilibrium between, apparent concentration), concentration (initial or steady state concentration of drug in plasma), elimination rate constant (rate of elimination of drug from body), elimination rate (to balance elimination) Required rate of infusion, area under the curve (AUC or exposure; integration of concentration-time curve after a single dose or at steady state), clearance (plasma cleared of drug per unit time) Volume), C _max (peak plasma concentration of drug after oral administration), t _max (time to reach C _max ), C _min (the lowest concentration the drug reaches before the next dose is administered). , And variability (peak trough variability within a single dosing interval at steady state). In some aspects, these improved properties are achieved without significantly altering secondary structure and/or reducing non-canonical biological activity of the HRS polypeptide. In fact, some HRS-Fc conjugates have increased non-canonical biological activity.

したがって、いくつかの実施形態では、ＨＲＳ−ＦｃコンジュゲートまたはＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、同じまたは匹敵する条件下で哺乳動物に投与した場合、対応する未改変または異なって改変されたＨＲＳポリペプチドよりも、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、５０、１００、２００、３００、４００、または５００倍大きい、血漿または血清薬物動態学的ＡＵＣプロファイルを有する。ある特定の実施形態では、ＨＲＳ−ＦｃコンジュゲートまたはＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、室温における類似の条件下、例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４日間、または１、２、３、４週間などにわたりｐＨ７．４のＰＢＳ中と比較した場合、対応する未改変または異なって改変されたＨＲＳポリペプチドよりも、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２００％、３００％、４００％、または５００％大きい安定性（例えば、半減期によって測定される）を有する。 Accordingly, in some embodiments, the HRS-Fc conjugate or HRS-Fc fusion polypeptide is a corresponding unmodified or differently modified HRS polypeptide when administered to a mammal under the same or comparable conditions. Than at least 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 50, 100, 200, 300, It has a plasma or serum pharmacokinetic AUC profile that is 400 or 500 times greater. In certain embodiments, the HRS-Fc conjugate or HRS-Fc fusion polypeptide is under similar conditions at room temperature, eg, about 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10. , 11, 12, 13, 14 days, or at least 10 more than the corresponding unmodified or differently modified HRS polypeptide when compared in PBS at pH 7.4 for 1, 2, 3, 4 weeks, etc. %, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, or 500% greater stability (eg, depending on half-life Measured).

特定の実施形態では、ＨＲＳ−ＦｃコンジュゲートまたはＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、約３０分間、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約１２時間、約１８時間、約２０時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４０時間、約４８時間、約５０時間、約６０時間、約７０時間、約７２時間、約８０時間、約８４時間、約９０時間、約９６時間、約１２０時間、もしくは約１４４時間またはそれ以上の、あるいは少なくとも約３０分間、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約１２時間、約１８時間、約２０時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４０時間、約４８時間、約５０時間、約６０時間、約７０時間、約７２時間、約８０時間、約８４時間、約９０時間、約９６時間、約１２０時間もしくは約１４４時間またはそれ以上の、ｐＨ７．４、２５℃、例えば、生理学的ｐＨ、ヒト体温（例えば、インビボ、血清中、所与の組織中、ラット、マウス、サル、またはヒトなどの所与の種中）における生物学的半減期、あるいは任意の介在する半減期を有する。 In certain embodiments, the HRS-Fc conjugate or HRS-Fc fusion polypeptide is about 30 minutes, about 1 hour, about 2 hours, about 3 hours, about 4 hours, about 5 hours, about 6 hours, about 12 hours. Time, about 18 hours, about 20 hours, about 24 hours, about 30 hours, about 36 hours, about 40 hours, about 48 hours, about 50 hours, about 60 hours, about 70 hours, about 72 hours, about 80 hours, About 84 hours, about 90 hours, about 96 hours, about 120 hours, or about 144 hours or more, or at least about 30 minutes, about 1 hour, about 2 hours, about 3 hours, about 4 hours, about 5 hours. , About 6 hours, about 12 hours, about 18 hours, about 20 hours, about 24 hours, about 30 hours, about 36 hours, about 40 hours, about 48 hours, about 50 hours, about 60 hours, about 70 hours, about 72 hours, about 80 hours, about 84 hours, about 90 hours, about 96 hours, about 120 hours or about 144 hours or more, pH 7.4, 25° C., eg physiological pH, human body temperature (eg in vivo. , Serum, in a given tissue, in a given species such as rat, mouse, monkey, or human), or any intervening half-life.

ある特定の実施形態では、ＨＲＳ−ＦｃコンジュゲートまたはＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、対応する未改変ＨＲＳポリペプチドと比較して、皮下（ＳＣ）投与後により大きいバイオアベイラビリティを有する。ある特定の実施形態では、ＨＲＳ−ＦｃコンジュゲートまたはＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、対応する未改変ＨＲＳポリペプチドと比較して、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、もしくは少なくとも約１００％以上のバイオアベイラビリティを有する。 In certain embodiments, the HRS-Fc conjugate or HRS-Fc fusion polypeptide has greater bioavailability following subcutaneous (SC) administration as compared to the corresponding unmodified HRS polypeptide. In certain embodiments, the HRS-Fc conjugate or HRS-Fc fusion polypeptide is at least about 20%, at least about 30%, at least about 40%, at least about at least 20% compared to the corresponding unmodified HRS polypeptide. It has a bioavailability of 50%, at least about 60%, at least about 70%, at least about 80%, at least about 90%, or at least about 100% or more.

ある特定の実施形態では、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、ＵＶ円偏光二色性分析を介して決定されるとおり、対応する未改変または異なって改変されたＨＲＳポリペプチドと実質的に同じ二次構造を有する。ある特定の実施形態では、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、抗炎症活性のアッセイにおいて、対応する未改変または異なって改変されたＨＲＳポリペプチドと実質的に同じ活性を有する。他の実施形態では、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、抗炎症活性のアッセイにおいて、対応する未改変または異なって改変されたＨＲＳポリペプチドの活性の、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０倍超の活性を有する。 In certain embodiments, the HRS-Fc fusion polypeptide has substantially the same secondary second order as the corresponding unmodified or differently modified HRS polypeptide, as determined via UV circular dichroism analysis. Have a structure. In certain embodiments, the HRS-Fc fusion polypeptide has substantially the same activity in the assay for anti-inflammatory activity as the corresponding unmodified or differently modified HRS polypeptide. In other embodiments, the HRS-Fc fusion polypeptide has 2,3,4,5,6,7, of the activity of the corresponding unmodified or differently modified HRS polypeptide in an assay for anti-inflammatory activity. It has over 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, or 20-fold more activity.

ある特定の実施形態では、ペプチドリンカー配列は、各ポリペプチドがその所望の二次構造および三次構造へと折り畳まるのを確実にするのに十分な距離によって、ＨＲＳポリペプチドとＦｃ領域またはＰＥＧとを分離するために使用され得る。かかるペプチドリンカー配列は、当該技術分野で周知の標準的な技術を用いて、コンジュゲートまたは融合タンパク質中に組み込まれ得る。 In certain embodiments, the peptide linker sequence separates the HRS polypeptide from the Fc region or PEG by a distance sufficient to ensure that each polypeptide folds into its desired secondary and tertiary structure. Can be used to separate Such peptide linker sequences can be incorporated into the conjugate or fusion protein using standard techniques well known in the art.

ある特定のペプチドリンカー配列は、以下の例示的な因子に基づいて選択され得る：（１）可撓性の伸展されたコンフォメーションをとる能力、（２）第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチド上の機能的エピトープと相互作用し得る二次構造をとることができないこと、（３）生理学的安定性、ならびに（４）ポリペプチドの機能的エピトープと反応し得る疎水性残基または荷電残基の欠如、または他の特徴。例えば、ＧｅｏｒｇｅａｎｄＨｅｒｉｎｇａ，ＪＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇ．１５：８７１−８７９，２００２を参照のこと。 Certain peptide linker sequences can be selected based on the following exemplary factors: (1) the ability to adopt a flexible, extended conformation, (2) the first polypeptide and the second polypeptide. Inability to adopt a secondary structure capable of interacting with a functional epitope on the peptide, (3) physiological stability, and (4) hydrophobic residues or charged residues capable of reacting with the functional epitope of the polypeptide Lack of groups, or other features. For example, George and Heringa, J Protein Eng. 15:871-879, 2002.

リンカー配列は、概して、１〜約２００アミノ酸長であり得る。特定のリンカーは、約１〜２００アミノ酸、１〜１５０アミノ酸、１〜１００アミノ酸、１〜９０アミノ酸、１〜８０アミノ酸、１〜７０アミノ酸、１〜６０アミノ酸、１〜５０アミノ酸、１〜４０アミノ酸、１〜３０アミノ酸、１〜２０アミノ酸、１〜１０アミノ酸、１〜５アミノ酸、１〜４アミノ酸、１〜３アミノ酸、または約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０、９０、１００もしくはそれ以上のアミノ酸の、全体的アミノ酸長を有し得る。 Linker sequences can generally be 1 to about 200 amino acids in length. The specific linker is about 1 to 200 amino acids, 1 to 150 amino acids, 1 to 100 amino acids, 1 to 90 amino acids, 1 to 80 amino acids, 1 to 70 amino acids, 1 to 60 amino acids, 1 to 50 amino acids, 1 to 40 amino acids. , 1 to 30 amino acids, 1 to 20 amino acids, 1 to 10 amino acids, 1 to 5 amino acids, 1 to 4 amino acids, 1 to 3 amino acids, or about 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 , 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 60, 70, 80, 90, 100 or more amino acids as a whole Can have a specific amino acid length.

ペプチドリンカーは、本明細書の他の箇所に記載され、当該技術分野で公知の、任意の１つ以上の天然に存在するアミノ酸、天然に存在しないアミノ酸、アミノ酸類似体、および／またはアミノ酸模倣体を使用し得る。リンカーとして有用に使用され得るある特定のアミノ酸配列には、Ｍａｒａｔｅａｅｔａｌ．，Ｇｅｎｅ４０：３９−４６，１９８５、Ｍｕｒｐｈｙｅｔａｌ．，ＰＮＡＳＵＳＡ．８３：８２５８−８２６２，１９８６、米国特許第４，９３５，２３３号および米国特許第４，７５１，１８０号に開示されるものが含まれる。特定のペプチドリンカー配列は、Ｇｌｙ残基、Ｓｅｒ残基、および／またはＡｓｎ残基を含む。ＴｈｒおよびＡｌａなどの他の近中性のアミノ酸もまた、所望の場合、ペプチドリンカー配列中で使用され得る。 Peptide linkers are described elsewhere herein and known in the art to any one or more naturally occurring amino acids, non-naturally occurring amino acids, amino acid analogs, and/or amino acid mimetics. Can be used. Certain amino acid sequences that can be usefully used as linkers are described in Maratea et al. , Gene 40:39-46, 1985, Murphy et al. , PNAS USA. 83:8258-8262, 1986, U.S. Pat. No. 4,935,233 and U.S. Pat. No. 4,751,180. Specific peptide linker sequences include Gly, Ser, and/or Asn residues. Other near neutral amino acids such as Thr and Ala can also be used in the peptide linker sequence, if desired.

ある特定の例示的なリンカーには、以下のような、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、および／またはＡｓｎ含有リンカー：［Ｇ］_ｘ、［Ｓ］_ｘ、［Ｎ］_ｘ、［ＧＳ］_ｘ、［ＧＧＳ］_ｘ、［ＧＳＳ］_ｘ、［ＧＳＧＳ］_ｘ（配列番号１７３）、［ＧＧＳＧ］_ｘ（配列番号１７４）、［ＧＧＧＳ］_ｘ（配列番号１７５）、［ＧＧＧＧＳ］_ｘ（配列番号１７６）、［ＧＮ］_ｘ、［ＧＧＮ］_ｘ、［ＧＮＮ］_ｘ、［ＧＮＧＮ］_ｘ（配列番号１７７）、［ＧＧＮＧ］_ｘ（配列番号１７８）、［ＧＧＧＮ］_ｘ（配列番号１７９）、［ＧＧＧＧＮ］_ｘ（配列番号１８０）リンカーが含まれ、式中、_ｘは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０またはそれ以上である。これらおよび関連のアミノ酸の他の組み合わせは、当業者に明らかである。 Certain exemplary linkers include Gly, Ser, and/or Asn-containing linkers such as: [G] _x , [S] _x , [N] _x , [GS] _x , [GGS] _x. , [GSS] _x , [GSGS] _x (SEQ ID NO: 173), [GGSG] _x (SEQ ID NO: 174), [GGGS] _x (SEQ ID NO: 175), [GGGGS] _x (SEQ ID NO: 176), [GN] _x. , [GGN] _x , [GNN] _x , [GNGN] _x (SEQ ID NO: 177), [GGNG] _x (SEQ ID NO: 178), [GGGN] _x (SEQ ID NO: 179), [GGGGN] _x (SEQ ID NO: 180). A linker is included, wherein _x is 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, or 20 or more. Other combinations of these and related amino acids will be apparent to those of skill in the art.

リンカーペプチドのさらなる例には、以下のアミノ酸配列が含まれるが、これらに限定されない：Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−（配列番号１８１）、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−（配列番号１８２）、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−（配列番号１８３）、Ａｓｐ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−（配列番号１８４）、およびＡｓｎ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−（配列番号１８５）。 Further examples of linker peptides include, but are not limited to, the following amino acid sequences: Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-. Ser- (SEQ ID NO:181), Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-. Ser- (SEQ ID NO: 182), Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-. Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser- (SEQ ID NO:183), Asp-Ala-Ala-Ala-Lys-Glu-Ala-Ala-Ala-Lys-Asp-Ala-Ala-. Ala-Arg-Glu-Ala-Ala-Ala-Arg-Asp-Ala-Ala-Ala-Lys- (SEQ ID NO:184), and Asn-Val-Asp-His-Lys-Pro-Ser-Asn-Thr-Lys. -Val-Asp-Lys-Arg- (SEQ ID NO:185).

リンカーペプチドのさらなる非限定的な例には、ＤＧＧＧＳ（配列番号１８６）、ＴＧＥＫＰ（配列番号１８７）（例えば、Ｌｉｕｅｔａｌ．，ＰＮＡＳ．９４：５５２５−５５３０，１９９７を参照のこと）、ＧＧＲＲ（配列番号１８８）（Ｐｏｍｅｒａｎｔｚｅｔａｌ．１９９５）、（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１７６）（Ｋｉｍｅｔａｌ．，ＰＮＡＳ．９３：１１５６−１１６０，１９９６）、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＶＤ（配列番号１８９）（Ｃｈａｕｄｈａｒｙｅｔａｌ．，ＰＮＡＳ．８７：１０６６−１０７０，１９９０）、ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号１９０）（Ｂｉｒｄｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２４２：４２３−４２６，１９８８）、ＧＧＲＲＧＧＧＳ（配列番号１９１）、ＬＲＱＲＤＧＥＲＰ（配列番号１９２）、ＬＲＱＫＤＧＧＧＳＥＲＰ（配列番号１９３）、ＬＲＱＫｄ（ＧＧＧＳ）_２ＥＲＰ（配列番号１９４）が含まれる。特定の実施形態では、このリンカー配列は、３つのグリシン残基を含む、Ｇｌｙ３リンカー配列を含む。特定の実施形態では、可撓性のリンカーは、ＤＮＡ結合部位およびペプチド自体の両方をモデル化することが可能なコンピュータープログラムを使用して（Ｄｅｓｊａｒｌａｉｓ＆Ｂｅｒｇ，ＰＮＡＳ．９０：２２５６−２２６０，１９９３およびＰＮＡＳ．９１：１１０９９−１１１０３，１９９４）、またはファージディスプレイ法によって、合理的に設計され得る。 Further non-limiting examples of linker peptides include DGGGS (SEQ ID NO:186), TGEKP (SEQ ID NO:187) (see, eg, Liu et al., PNAS.94:5525-5530, 1997), GGRR( SEQ ID NO: 188) (Pomerantz et al. 1995), (GGGGS) _n (SEQ ID NO: 176) (Kim et al., PNAS. 93: 1156-1160, 1996), EGKSSGSGSSESKVD (SEQ ID NO: 189) (Chaudhary et al., PNAS.87:1066-1070, 1990), KESGSVSSEQLAQFRSLD (SEQ ID NO: 190) (Bird et al., Science. 242:423-426, 1988), GGRRGGGS (SEQ ID NO: 191), LRQRDGERP (SEQ ID NO: 192G), LRQSEG. SEQ ID NO: 193), LRQKd(GGGS) ₂ ERP (SEQ ID NO: 194). In certain embodiments, the linker sequence comprises the Gly3 linker sequence, which comprises 3 glycine residues. In certain embodiments, the flexible linkers use computer programs capable of modeling both the DNA binding site and the peptide itself (Desjarlais & Berg, PNAS. 90:2256-2260, 1993 and PNAS. 91: 11099-11103, 1994), or by the phage display method.

このペプチドリンカーは、生理学的に安定であり得るか、または放出可能なリンカー、例えば、生理学的に分解可能なリンカーまたは酵素的に切断可能なリンカー（例えば、タンパク質分解的に切断可能なリンカー）を含み得る。ある特定の実施形態では、１つ以上の放出可能なリンカーは、コンジュゲートのより短い半減期およびより迅速なクリアランスを生じ得る。これらおよび関連の実施形態は、例えば、血流中でのＨＲＳポリペプチドの溶解度および血液循環寿命を増強するために使用され得、一方でまた、リンカー分解に引き続いて、血流中にＦｃ領域を実質的に含まないＨＲＳポリペプチドを送達する。これらの態様は、ＨＲＳポリペプチドが、Ｆｃ領域へと永久的にコンジュゲート化された場合に、低減した活性を実証する場合に、特に有用である。本明細書に提供されるリンカーを使用することによって、かかるＨＲＳポリペプチドは、コンジュゲート化形態にあるとき、その治療活性を維持し得る。別の例として、大きい、比較的不活性なＨＲＳ−Ｆｃコンジュゲートポリペプチドが投与され得、次いで、これは、Ｆｃ領域の一部分を所有するまたはＦｃ領域を全体的に欠く生理活性ＨＲＳポリペプチドを生成するために、インビボで（分解可能なリンカーを介して）分解される。これらおよび他の方法において、ＨＲＳ−Ｆｃコンジュゲートポリペプチドの特性は、ＨＲＳポリペプチドの生理活性および循環半減期のバランスを経時的にとるために、より効率的に個別化され得る。 The peptide linker may be a physiologically stable or releasable linker, such as a physiologically degradable linker or an enzymatically cleavable linker (eg, a proteolytically cleavable linker). May be included. In certain embodiments, one or more releasable linkers may result in a shorter half-life and faster clearance of the conjugate. These and related embodiments can be used, for example, to enhance solubility and blood circulation life of HRS polypeptides in the bloodstream, while also following Fc region in the bloodstream following linker degradation. Delivering a substantially free HRS polypeptide. These aspects are particularly useful when the HRS polypeptide demonstrates reduced activity when it is permanently conjugated to the Fc region. By using the linkers provided herein, such HRS polypeptides may retain their therapeutic activity when in conjugated form. As another example, a large, relatively inactive, HRS-Fc conjugated polypeptide may be administered which then comprises a bioactive HRS polypeptide that possesses a portion of the Fc region or is entirely devoid of the Fc region. It is degraded in vivo (via a degradable linker) to generate. In these and other methods, the properties of the HRS-Fc conjugate polypeptide can be more efficiently personalized to balance the bioactivity and circulating half-life of the HRS polypeptide over time.

特定の実施形態では、このリンカーペプチドは、自己触媒的または自己切断性ペプチド切断部位を含む。特定の一実施形態では、自己切断性ペプチドは、ポティウイルスおよびカルジオウイルス２Ａペプチド、ＦＭＤＶ（***ウイルス）、ウマ鼻炎Ａウイルス、Ｔｈｏｓｅａａｓｉｇｎａウイルス、ならびにブタテッショウウイルスから得られるポリペプチド配列が含まれる。ある特定の実施形態では、自己切断性ポリペプチド部位は、２Ａまたは２Ａ様部位、配列またはドメインを含む（Ｄｏｎｎｅｌｌｙｅｔａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．８２：１０２７−１０４１，２００１）。例示的な２Ａ部位には、以下の配列が含まれる：ＬＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号１９５）、ＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号１９６）、ＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号１９７）、ＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号１９８）、ＱＬＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号１９９）、ＡＰＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号２００）、ＶＴＥＬＬＹＲＭＫＲＡＥＴＹＣＰＲＰＬＬＡＩＨＰＴＥＡＲＨＫＱＫＩＶＡＰＶＫＱＴ（配列番号２０１）、ＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号２０２）、ＬＬＡＩＨＰＴＥＡＲＨＫＱＫＩＶＡＰＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号２０３）、およびＥＡＲＨＫＱＫＩＶＡＰＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号２０４）。いくつかの実施形態では、この自己触媒的ペプチド切断部位は、例えば、１８アミノ酸の配列であるアフトウイルス***ウイルス（ＦＭＤＶ）ポリタンパク質の２Ａ領域などの、翻訳２Ａシグナル配列を含む。使用され得る２Ａ様配列のさらなる例には、例えば、Ｄｏｎｎｅｌｌｙｅｔａｌ．，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＧｅｎｅｒａｌＶｉｒｏｌｏｇｙ．８２：１０２７−１０４１，２００１に記載されるような、昆虫ウイルスポリタンパク質、Ｃ型ロタウイルスのＮＳ３４タンパク質、およびＴｒｙｐａｎｏｓｏｍａｓｐｐ．中の反復配列が含まれる。 In certain embodiments, the linker peptide comprises an autocatalytic or self-cleaving peptide cleavage site. In one particular embodiment, the self-cleaving peptide comprises a polypeptide sequence derived from potyvirus and cardiovirus 2A peptide, FMDV (foot and mouth disease virus), equine rhinitis A virus, Thosea asigna virus, and swine tussow virus. Be done. In certain embodiments, the self-cleaving polypeptide site comprises a 2A or 2A-like site, sequence or domain (Donnelly et al., J. Gen. Virol. 82:1027-1041, 2001). Exemplary 2A sites include the following sequences: LLNFDLLKLGAGDVESNPGP (SEQ ID NO: 195), TLNFDLLKLGAGDVESNPGP (SEQ ID NO: 196), LLKLLAGDVESNPGP (SEQ ID NO: 197), NFDLLKLGAGDVESNPGL (SEQ ID NO: 198), NLDLLKLGDGDESNPGL (LN 198), NLDLLKLGDGDESNPGL (LN 198F). APVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP (SEQ ID NO: 200), VTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPTEARHKQKIVAPVKQT (SEQ ID NO: 201), LNFDLLKLAGDVESNPGP (SEQ ID NO: 202), LLAIHPTEARHKQKIVAPVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP (SEQ ID NO: 203), and IeiarueichikeikyukeiaiVAPVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP (SEQ ID NO: 204). In some embodiments, the autocatalytic peptide cleavage site comprises a translated 2A signal sequence, such as the 2A region of the Aphtovirus foot and mouth disease virus (FMDV) polyprotein, which is a sequence of 18 amino acids. Further examples of 2A-like sequences that can be used are described, for example, in Donnelly et al. , Journal of General Virology. 82:1027-1041, 2001, insect virus polyproteins, NS34 protein of rotavirus type C, and Trypanosoma spp. The repetitive sequence inside is included.

適切なプロテアーゼ切断部位および自己切断性ペプチドは、当業者に公知である（例えば、Ｒｙａｎｅｔａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎｅｒ．Ｖｉｒｏｌ．７８：６９９−７２２，１９９７およびＳｃｙｍｃｚａｋｅｔａｌ．，ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈ．５：５８９−５９４，２００４を参照のこと）。例示的なプロテアーゼ切断部位としては、ポティウイルスＮＩａプロテアーゼ（例えば、タバコエッチ病ウイルスプロテアーゼ）、ポティウイルスＨＣプロテアーゼ、ポティウイルスＰ１（Ｐ３５）プロテアーゼ、ビオウイルス（ｂｙｏｖｉｒｕｓ）ＮＩａプロテアーゼ、ビオウイルスＲＮＡ−２コード化プロテアーゼ、アフトウイルスＬプロテアーゼ、エンテロウイルス２Ａプロテアーゼ、ライノウイルス２Ａプロテアーゼ、ピコルナ３Ｃプロテアーゼ、コモウイルス２４Ｋプロテアーゼ、ネポウイルス２４Ｋプロテアーゼ、ＲＴＳＶ（ライスツングロスフェリカルウイルス（ｒｉｃｅｔｕｎｇｒｏｓｐｈｅｒｉｃａｌｖｉｒｕｓ））３Ｃ様プロテアーゼ、ＰＹＶＦ（パースニップ黄斑ウイルス）３Ｃ様プロテアーゼ、ヘパリン、トロンビン、第Ｘａ因子およびエンテロキナーゼの切断部位が挙げられるが、これらに限定されない。その高い切断ストリンジェンシーに起因して、いくつかの実施形態では、ＥＸＸＹＸＱ（Ｇ／Ｓ）（配列番号２０５）、例えば、ＥＮＬＹＦＱＧ（配列番号２０６）およびＥＮＬＹＦＱＳ（配列番号２０７）などのＴＥＶ（タバコエッチ病ウイルス）プロテアーゼ切断部位が含まれ、式中、Ｘは、任意のアミノ酸を表す（ＴＥＶによる切断は、ＱとＧとの間またはＱとＳとの間で起きる）。 Suitable protease cleavage sites and self-cleaving peptides are known to those of skill in the art (eg, Ryan et al., J. Gener. Virol. 78:699-722, 1997 and Scymczak et al., Nature Biotech. 5: 589-594, 2004). Exemplary protease cleavage sites include potyvirus NIa protease (eg, tobacco etch disease virus protease), potyvirus HC protease, potyvirus P1 (P35) protease, biovirus NIa protease, biovirus RNA-2 code. Protease, aphtovirus L protease, enterovirus 2A protease, rhinovirus 2A protease, picorna 3C protease, comovirus 24K protease, nepovirus 24K protease, RTSV (rice tungrosperial virus) 3C-like protease, PYVF (PYVF) Parsnip macular virus) 3C-like proteases, heparin, thrombin, factor Xa and enterokinase cleavage sites, but are not limited thereto. Due to its high cleavage stringency, in some embodiments, EXXYXQ (G/S) (SEQ ID NO:205), for example TEV (tobacco etch) such as ENLYFQG (SEQ ID NO:206) and ENLYFQS (SEQ ID NO:207). Disease virus) protease cleavage sites are included, where X represents any amino acid (cleavage by TEV occurs between Q and G or between Q and S).

特定の実施形態における使用のために適している酵素的に分解可能なリンカーのさらなる例としては、トロンビン、キモトリプシン、トリプシン、エラスターゼ、カリクレイン、またはスブチリシン（ｓｕｂｓｔｉｌｉｓｉｎ）などのセリンプロテアーゼによって切断されるアミノ酸配列が挙げられるが、これらに限定されない。トロンビン切断可能なアミノ酸配列の例示的な例としては、−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−（配列番号２０８）、−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−、−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−（配列番号２０９）、−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−（配列番号２１０）、−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−（配列番号２１１）、−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−、−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−、および−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−が挙げられるが、これらに限定されない。エラスターゼ切断可能なアミノ酸配列の例示的な例としては、−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−、−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−（配列番号２１２）、−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−（配列番号２１３）、−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−（配列番号２１４）、−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−（配列番号２１５）、および−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−（配列番号２１６）が挙げられるが、これらに限定されない。 Further examples of enzymatically degradable linkers suitable for use in certain embodiments include amino acid sequences cleaved by a serine protease such as thrombin, chymotrypsin, trypsin, elastase, kallikrein, or subtilisin. But is not limited to these. Examples of thrombin-cleavable amino acid sequences include -Gly-Arg-Gly-Asp- (SEQ ID NO: 208), -Gly-Gly-Arg-, -Gly-Arg-Gly-Asp-Asn-Pro-. (SEQ ID NO:209), -Gly-Arg-Gly-Asp-Ser- (SEQ ID NO:210), -Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro-Lys- (SEQ ID NO:211), -Gly-Pro-Arg. -, -Val-Pro-Arg-, and -Phe-Val-Arg-, but are not limited thereto. Examples of amino acid sequences capable of cleaving elastase include -Ala-Ala-Ala-, -Ala-Ala-Pro-Val- (SEQ ID NO: 212), -Ala-Ala-Pro-Leu- (SEQ ID NO: 213). ), -Ala-Ala-Pro-Phe- (SEQ ID NO: 214), -Ala-Ala-Pro-Ala- (SEQ ID NO: 215), and -Ala-Tyr-Leu-Val- (SEQ ID NO: 216). However, it is not limited to these.

酵素的に分解可能なリンカーには、コラゲナーゼ、ストロメライシン、およびゼラチナーゼなどのマトリックスメタロプロテイナーゼによって切断され得るアミノ酸配列もまた含まれる。マトリックスメタロプロテイナーゼ切断可能なアミノ酸配列の例示的な例としては、−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｚ−（配列番号２１７）、−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｚ−（配列番号２１８）、−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｚ−（配列番号２１９）、および−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｚ−（配列番号２２０）が挙げられるが、これらに限定されず、式中、Ｚはアミノ酸である。コラゲナーゼ切断可能なアミノ酸配列の例示的な例としては、−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｚ−（配列番号２２１）、−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｚ−（配列番号２２２）、−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−（配列番号２２３）、−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｍｅ）−Ｈｉｓ−（配列番号２２４）、−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−（配列番号２２５）、−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ａｒｇ−（配列番号２２６）、および−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ａｒｇ−（配列番号２２７）が挙げられるが、これらに限定されず、式中、Ｚはアミノ酸である。ストロメライシン切断可能なアミノ酸配列の１つの例示的な例は、−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ａｒｇ−（配列番号２２８）であり、ゼラチナーゼ切断可能なアミノ酸配列の一例は、−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｍｅｔ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−（配列番号２２９）である。 Enzymatically degradable linkers also include amino acid sequences that can be cleaved by matrix metalloproteinases such as collagenase, stromelysin, and gelatinase. Examples of the matrix metalloproteinase cleavable amino acid sequence include -Gly-Pro-Y-Gly-Pro-Z- (SEQ ID NO: 217), -Gly-Pro-, Leu-Gly-Pro-Z-(. SEQ ID NO:218), -Gly-Pro-Ile-Gly-Pro-Z- (SEQ ID NO:219), and -Ala-Pro-Gly-Leu-Z- (SEQ ID NO:220), but are not limited thereto. In the formula, Z is an amino acid. Examples of the amino acid sequence capable of cleaving collagenase include -Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg-Z- (SEQ ID NO: 221), -Pro-Leu-Gly-Leu-Leu-Gly-Z-. (SEQ ID NO:222), -Pro-Gln-Gly-Ile-Ala-Gly-Trp- (SEQ ID NO:223), -Pro-Leu-Gly-Cys(Me)-His- (SEQ ID NO:224), -Pro-. Leu-Gly-Leu-Tyr-Ala- (SEQ ID NO:225), -Pro-Leu-Ala-Leu-Trp-Ala-Arg- (SEQ ID NO:226), and -Pro-Leu-Ala-Tyr-Trp-Ala. -Arg- (SEQ ID NO: 227), but is not limited thereto, wherein Z is an amino acid. One illustrative example of a stromelysin cleavable amino acid sequence is -Pro-Tyr-Ala-Tyr-Tyr-Met-Arg- (SEQ ID NO:228), and an example of a gelatinase cleavable amino acid sequence is: -Pro-Leu-Gly-Met-Tyr-Ser-Arg- (SEQ ID NO:229).

特定の実施形態における使用のために適している酵素的に分解可能なリンカーには、アンギオテンシン変換酵素によって切断され得るアミノ酸配列、例えば、−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−、−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−（配列番号２３０）および−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−（配列番号２３１）などもまた含まれる。 Enzymatically degradable linkers suitable for use in certain embodiments include amino acid sequences that can be cleaved by angiotensin converting enzyme, such as -Asp-Lys-Pro-, -Gly-Asp-Lys-Pro. Also included are-(SEQ ID NO:230) and-Gly-Ser-Asp-Lys-Pro-(SEQ ID NO:231) and the like.

特定の実施形態における使用のために適している酵素的に分解可能なリンカーには、カテプシンＢによって分解され得るアミノ酸配列、例えば、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−（配列番号２３２）、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−（配列番号２３３）、およびＰｈｅ−Ｌｙｓなどもまた含まれる。 Enzymatically degradable linkers suitable for use in certain embodiments include amino acid sequences that can be degraded by cathepsin B, such as Val-Cit, Ala-Leu-Ala-Leu- (SEQ ID NO:232). , Gly-Phe-Leu-Gly- (SEQ ID NO:233), and Phe-Lys are also included.

特定の実施形態では、放出可能なリンカーは、ｐＨ７．４、２５℃、例えば、生理学的ｐＨ、ヒト体温（例えば、インビボ、血清中、所与の組織中）において、約３０分間、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約１２時間、約１８時間、約２４時間、約３６時間、約４８時間、約７２時間、もしくは約９６時間またはそれ以上の半減期、あるいは任意の介在する半減期を有する。当業者は、ＨＲＳ−Ｆｃコンジュゲートポリペプチドの半減期が、特定の放出可能なリンカーを使用することによって精密に個別化され得ることを理解し得る。 In certain embodiments, the releasable linker is at pH 7.4, 25° C., eg, physiological pH, human body temperature (eg, in vivo, in serum, in a given tissue) for about 30 minutes, about 1 hour. , About 2 hours, about 3 hours, about 4 hours, about 5 hours, about 6 hours, about 12 hours, about 18 hours, about 24 hours, about 36 hours, about 48 hours, about 72 hours, or about 96 hours or It has a longer half-life, or any intervening half-life. One of skill in the art will understand that the half-life of HRS-Fc conjugated polypeptides can be precisely individualized by using specific releasable linkers.

しかしながら、ある特定の実施形態では、ペプチドリンカーのうちの任意の１つ以上は、任意選択である。例えば、第１および第２のポリペプチドが、機能的ドメインを分離し、立体的障害を防止するために使用され得る非必須のＮ末端および／またはＣ末端アミノ酸領域を有する場合には、リンカー配列は、必要とされない可能性がある。 However, in certain embodiments, any one or more of the peptide linkers is optional. For example, a linker sequence where the first and second polypeptides have non-essential N-terminal and/or C-terminal amino acid regions that can be used to separate functional domains and prevent steric hindrance. May not be needed.

ＨＲＳポリペプチドおよびポリヌクレオチド、例えば、発現可能なポリヌクレオチドは、本明細書に記載される、組成物、方法、および／またはキットのいずれかにおいて使用され得る。 HRS polypeptides and polynucleotides, eg, expressible polynucleotides, can be used in any of the compositions, methods, and/or kits described herein.

免疫調節剤
ある特定の実施形態は、１つ以上の免疫調節剤を使用する。例示的な免疫調節剤は、小分子、ポリペプチド、例えば、抗体およびその抗原結合断片、リガンド、少量のペプチド、アンチセンス剤、ＲＮＡｉ剤、ならびにこれらの混合物を含む。 Immunomodulators Certain embodiments use one or more immunomodulators. Exemplary immunomodulatory agents include small molecules, polypeptides such as antibodies and antigen binding fragments thereof, ligands, small amounts of peptides, antisense agents, RNAi agents, and mixtures thereof.

いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、スフィンゴシン−１−ホスフェート（Ｓ１Ｐ）および／またはＳ１Ｐ受容体（Ｓ１ＰＲ）モジュレーター、ステロイド、カルシニューリン阻害剤、ラパマイシンの機構的標的（ｍＴＯＲ）阻害剤、インドールアミン−ピロール２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、イノシン−５’−モノホスフェートデヒドロゲナーゼ（ＩＭＰＤＨ）阻害剤、サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体阻害剤、Ｂ細胞受容体阻害剤、キナーゼ阻害剤、ならびにメトトレキサートなどの細胞増殖抑制剤のうちの１つ以上から選択される。 In some embodiments, the immunomodulator is a sphingosine-1-phosphate (S1P) and/or S1P receptor (S1PR) modulator, a steroid, a calcineurin inhibitor, a mechanistic targeting of rapamycin (mTOR) inhibitor, indoleamine. -Pyrrole 2,3-dioxygenase (IDO) inhibitors, inosine-5'-monophosphate dehydrogenase (IMPDH) inhibitors, cytokines and/or cytokine receptor inhibitors, B cell receptor inhibitors, kinase inhibitors, and It is selected from one or more of cytostatics such as methotrexate.

いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、ピルフェニドンであり、これは、しばしば、特発性肺線維症（ＩＰＦ）の治療用に使用される。ピルフェニドンは、様々なインビトロ系および線維症の動物モデルにおいて、抗線維性および抗炎症特性を有する。例えば、細胞ベースの研究は、ピルフェニドンが、線維芽細胞増殖を減少させ、ＴＧＦ−β刺激コラーゲン産生を阻害し、ＴＧＦ−βなどの維形成メディエーターの産生を減少させることを示している。ピルフェニドンは、培養細胞および単離されたヒト末梢血単核細胞の両方において、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−１βなどの炎症性メディエーターの産生を減少させることも示している。米国では、ピルフェニドンは、２４０３ｍｇ／日の全経口投与用に、１日３回の経口で服用される、８０１ｍｇの経口用量単位（３つの２６７ｍｇのカプセル）としてＩＰＦの治療用に承認されている。ピルフェニドンのさらなる例示的な投与量は、本明細書に記載されている。 In some embodiments, the immunomodulator is pirfenidone, which is often used for the treatment of idiopathic pulmonary fibrosis (IPF). Pirfenidone has anti-fibrotic and anti-inflammatory properties in various in vitro systems and animal models of fibrosis. For example, cell-based studies have shown that pirfenidone reduces fibroblast proliferation, inhibits TGF-β stimulated collagen production, and reduces the production of fibrogenic mediators such as TGF-β. Pirfenidone has also been shown to reduce the production of inflammatory mediators such as TNF-α and IL-1β in both cultured cells and isolated human peripheral blood mononuclear cells. In the United States, pirfenidone is approved for the treatment of IPF as an 801 mg oral dose unit (three 267 mg capsules) taken orally three times daily for a total oral dose of 2403 mg/day. Further exemplary dosages of pirfenidone are described herein.

いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、ニンテダニブであり、これもまた、ＩＰＦの治療用に使用される。ニンテダニブは、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）、線維芽細胞成長因子受容体（ＦＧＦＲ）、および血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ）を含む、肺線維症に関与する特定の成長因子受容体を阻害する。ニンテダニブが、ＩＰＦの疾患の進行を減速させ、線維化プロセスに関わるシグナル伝達経路を遮断することによって肺の機能の低下を遅らせると考えられている。ニンテダニブは、エタンスルホン酸を含む塩として製剤化される。米国では、ニンテダニブは、合計３００ｍｇ／日に対して１日２回服用される１５０ｍｇの経口用量単位としてのＩＰＦの治療用に承認されており、これは、合計２００ｍｇ／日に対して１日２回服用される約１００ｍｇの投与量に対する副作用を軽減させることができる。ニンテダニブのさらなる例示的な投与量は、本明細書に記載されている。 In some embodiments, the immunomodulator is nintedanib, which is also used for the treatment of IPF. Nintedanib targets specific growth factor receptors involved in pulmonary fibrosis, including platelet-derived growth factor receptor (PDGFR), fibroblast growth factor receptor (FGFR), and vascular endothelial growth factor receptor (VEGFR). Inhibit. Nintedanib is believed to slow the progression of IPF disease and slow down lung function by blocking signaling pathways involved in the fibrotic process. Nintedanib is formulated as a salt containing ethanesulfonic acid. In the United States, nintedanib is approved for the treatment of IPF as an oral dose unit of 150 mg taken twice daily for a total of 300 mg/day, which is 2 mg/day for a total of 200 mg/day. The side effects for the dose of about 100 mg to be taken can be reduced. Further exemplary dosages of nintedanib are described herein.

いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、スフィンゴシン−１−ホスフェート（Ｓ１Ｐ）および／またはＳ１Ｐ受容体（Ｓ１ＰＲ）モジュレーターである。モジュレーターの一般的な例は、Ｓ１Ｐおよび／もしくはＳ１ＰＲアンタゴニストまたは阻害剤、あるいはＳ１Ｐおよび／もしくはＳ１ＰＲアゴニストまたは活性剤を含む。Ｓ１Ｐは、細胞増殖、分化、血管新生、走化性、および移送を含む、種々の生物学的機能を有する生物活性脂質である。Ｓ１Ｐの多くの活性は、スフィンゴ脂質代謝に重要な役割を担う、スフィンゴシン−１−リン酸受容体ファミリー（Ｓ１ＰＲ）の５つの密接に関連したＧタンパク質共役型受容体を介して作用する。Ｓ１ＰＲは、Ｓ１ＰＲ_１、Ｓ１ＰＲ_２、Ｓ１ＰＲ_３、Ｓ１ＰＲ_４、およびＳ１ＰＲ_５を含む。これらの受容体の発現は、以下のように異なる：Ｓ１ＰＲ_１、Ｓ１ＰＲ_２、およびＳ１ＰＲ_３は、多種多様な細胞型において発現するが、主に、白血球上に大量に発現し、Ｓ１ＰＲ_４は、主に、リンパ球および造血組織において発現し、Ｓ１ＰＲ_５は、主に、脾臓および中枢神経系（ＣＮＳ）の白質に発現する。 In some embodiments, the immunomodulatory agent is a sphingosine-1-phosphate (S1P) and/or S1P receptor (S1PR) modulator. Common examples of modulators include S1P and/or S1PR antagonists or inhibitors, or S1P and/or S1PR agonists or activators. S1P is a bioactive lipid that has various biological functions, including cell proliferation, differentiation, angiogenesis, chemotaxis, and transport. Many activities of S1P act through five closely related G protein-coupled receptors of the sphingosine-1-phosphate receptor family (S1PR), which play important roles in sphingolipid metabolism. S1PR includes S1PR ₁ , S1PR ₂ , S1PR ₃ , S1PR ₄ and S1PR ₅ . The expression of these receptors differs as follows: S1PR ₁ , S1PR ₂ and S1PR ₃ are expressed in a wide variety of cell types, but predominantly on leukocytes in abundance and S1PR ₄ Predominantly expressed in lymphocytes and hematopoietic tissues, S1PR ₅ is predominantly expressed in the spleen and white matter of the central nervous system (CNS).

Ｓ１ＰまたはＳ１ＰＲモジュレーターの特定の非限定的な例は、アミセリモド（別名ＭＴ−１３０３；Ｓ１ＰＲアンタゴニスト；Ｋａｐｐｏｓｅｔａｌ．，ＬａｎｃｅｔＮｅｕｒｏｌ２０１６；１５：１１４８−５９，２０１６を参照のこと）、フィンゴリモド（Ｓ１ＰＲ_１機能的アンタゴニスト）、ソネプシズマブ（Ｓ１Ｐ特異的モノクローナル抗体）、ＫＲＰ２０３（Ｓ１ＰＲ_１アゴニスト）、ＳＥＷ２８７１（Ｓ１ＰＲ_１アゴニスト）、シポニモド（Ｓ１ＰＲ_１およびＳ１ＰＲ_５モジュレーター）、ＲＰＣ１０６３（Ｓ１ＰＲ_１モジュレーター）、ＯＮＯ−４６４１（Ｓ１ＰＲ_１およびＳ１ＰＲ_５アゴニスト）、ＪＴＥ−０１３（Ｓ１ＰＲ_２アンタゴニスト）、ＧＳＫ２０１８６８２（Ｓ１ＰＲ_１アゴニスト）、ポネシモド（Ｓ１ＰＲ_１アゴニスト）、スラミン（選択的Ｓ１ＰＲ_３およびＳ１ＰＲ_５アンタゴニスト）、ＶＰＣ２３０１９（アリール−アミド類似体；競合的Ｓ１ＰＲ_１およびＳ１ＰＲ_３アンタゴニスト）；ならびにＷ１４６（選択的Ｓ１ＰＲ_１アンタゴニスト）を含む。特定の実施形態では、Ｓ１ＰまたはＳ１ＰＲモジュレーターは、アミセリモドである。 Specific, non-limiting examples of S1P or S1PR modulators include amiserimod (also known as MT-1303; S1PR antagonist; Kappos et al., Lancet Neurol 2016; 15:1148-59, 2016), fingolimod (S1PR ₁ ). Functional antagonist), sonepsizumab (S1P specific monoclonal antibody), KRP203 (S1PR ₁ agonist), SEW2871 (S1PR ₁ agonist), siponimod (S1PR ₁ and S1PR ₅ modulators), RPC1063 (S1PR ₁ modulator), ONO-4461 (S1PR). ₁ and S1PR ₅ agonists), JTE-013 (S1PR ₂ antagonists), GSK2018682 (S1PR ₁ agonists), ponesimod (S1PR ₁ agonists), suramin (selective S1PR ₃ and S1PR ₅ antagonists), VPC23019 (aryl-amide analogues); Competitive S1PR ₁ and S1PR ₃ antagonists); and W146 (selective S1PR ₁ antagonists). In certain embodiments, the S1P or S1PR modulator is amiserimodo.

ある特定のＳ１ＰまたはＳ１ＰＲモジュレーターは、Ｓ１ＰまたはＳ１ＰＲに特異的に結合する、抗体または抗原結合断片または小分子を含む（例えば、Ｓ１Ｐに結合するソネプシズマブを参照のこと）。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｓ１Ｐおよび／またはＳ１ＰＲアンタゴニストである。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｓ１Ｐおよび／またはＳ１ＰＲアゴニストである。 Certain S1P or S1PR modulators include antibodies or antigen-binding fragments or small molecules that specifically bind S1P or S1PR (see, eg, sonepsizumab, which binds S1P). In some embodiments, the antibody or antigen-binding fragment thereof is a S1P and/or S1PR antagonist. In certain embodiments, the antibody or antigen-binding fragment thereof is a S1P and/or S1PR agonist.

ある特定のＳ１ＰＲアンタゴニストまたは阻害剤は、Ｓ１ＰＲコード配列に対するアンチセンス剤およびＲＮＡｉ剤を含む（例えば、受入番号ＮＭ＿００１４００．４；ＮＭ＿００４２３０．３を参照のこと）。ある特定のアンチセンス剤は、Ｓ１ＰＲをコードするプレｍＲＮＡまたはｍＲＮＡ標的配列内の標的領域に特異的にハイブリダイズし、標的領域は、ｍＲＮＡのＡＵＧ開始コドン、ＡＵＧ開始コドンの上流の領域、ＡＵＧコドンの下流の領域、予め処理したｍＲＮＡの３’または５’スプライス部位、分岐点、３’未翻訳領域（ＵＴＲ）、およびポリアデニル化シグナル配列のうちの１つ以上から選択される。ある特定のＲＮＡｉ剤は、Ｓ１ＰＲをコードするｍＲＮＡ標的配列と実質的に同一であるセンス鎖、および任意に、Ｓ１ＰＲをコードするｍＲＮＡ標的配列に対して相補的であるか、または実質的に相補的であるアンチセンス鎖を含む。 Certain S1PR antagonists or inhibitors include antisense agents and RNAi agents directed against the S1PR coding sequence (see, eg, accession number NM_001400.4; NM_004230.3). Certain antisense agents specifically hybridize to a target region within a pre-mRNA or mRNA target sequence that encodes S1PR, the target region being the AUG start codon of the mRNA, the region upstream of the AUG start codon, the AUG codon. Is selected from one or more of the region downstream of, the 3'or 5'splice site of pretreated mRNA, the branch point, the 3'untranslated region (UTR), and the polyadenylation signal sequence. A particular RNAi agent is complementary or substantially complementary to a sense strand that is substantially identical to the mRNA target sequence encoding S1PR, and, optionally, to the mRNA target sequence encoding S1PR. Containing an antisense strand that is

いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、ステロイドまたはコルチコステロイド、例えば、グルココルチコイドである。特定の実施形態では、ステロイドは、抗炎症性ステロイドである。ステロイドの例には、とりわけ、ベタメタゾン、ブデソニド、コルチゾール（ヒドロコルチゾン）、コルチゾン、デフラザコート、デオキシコルチコステロン、デキサメタゾン、フルドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、プレドニゾロン、およびトリアムシノロンが含まれる。 In some embodiments, the immunomodulatory agent is a steroid or corticosteroid, eg, a glucocorticoid. In certain embodiments, the steroid is an anti-inflammatory steroid. Examples of steroids include betamethasone, budesonide, cortisol (hydrocortisone), cortisone, deflazacort, deoxycorticosterone, dexamethasone, fludrocortisone, hydrocortisone, methylprednisolone, prednisone, prednisolone, and triamcinolone, among others.

いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、カルシニューリンアンタゴニストまたは阻害剤である。カルシニューリンは、Ｔ細胞を活性化する、カルシウムおよびカルモジュリン依存性セリン／スレオニンタンパク質ホスファターゼである。具体的には、カルシニューリンは、核に移行し、インターロイキン２（ＩＬ−２）の発現を上方調節し、次いで、Ｔ細胞応答の成長および分化を刺激する、活性化したＴ細胞の核因子（ＮＦＡＴｃ）を活性化する。カルシニューリンアンタゴニストまたは阻害剤の特定の例は、シクロスポリン、ピメクロリムス、およびタクロリムスを含む。 In some embodiments, the immunomodulatory agent is a calcineurin antagonist or inhibitor. Calcineurin is a calcium- and calmodulin-dependent serine/threonine protein phosphatase that activates T cells. Specifically, calcineurin translocates to the nucleus, upregulates interleukin 2 (IL-2) expression, and then stimulates the growth and differentiation of T cell responses to activated T cell nuclear factors ( NFATc) is activated. Specific examples of calcineurin antagonists or inhibitors include cyclosporine, pimecrolimus, and tacrolimus.

ある特定のカルシニューリンアンタゴニストまたは阻害剤は、カルシニューリンに特異的に結合する、抗体または抗原結合断片または小分子を含む。カルシニューリンコード配列またはそのサブユニットに対するアンチセンス剤およびＲＮＡｉ剤もまた含まれる（例えば、受入番号ＮＭ＿０００９４４；ＮＭ＿０２１１３２；ＮＭ＿００５６０５；ＮＭ＿０００９４５；ＮＭ＿１４７１８０を参照のこと）。ある特定のアンチセンス剤は、カルシニューリンまたはそのサブユニットをコードするプレｍＲＮＡまたはｍＲＮＡ標的配列内の標的領域に特異的にハイブリダイズし、例えば、標的領域は、ｍＲＮＡのＡＵＧ開始コドン、ＡＵＧ開始コドンの上流の領域、ＡＵＧコドンの下流の領域、予め処理したｍＲＮＡの３’または５’スプライス部位、分岐点、３’未翻訳領域（ＵＴＲ）、およびポリアデニル化シグナル配列のうちの１つ以上から選択される。ある特定のＲＮＡｉ剤は、カルシニューリンまたはそのサブユニットをコードするｍＲＮＡ標的配列と実質的に同一であるセンス鎖、および任意に、カルシニューリンまたはそのサブユニットをコードするｍＲＮＡ標的配列に対して相補的であるか、または実質的に相補的であるアンチセンス鎖を含む。 Certain calcineurin antagonists or inhibitors include antibodies or antigen-binding fragments or small molecules that specifically bind calcineurin. Also included are antisense agents and RNAi agents directed against the calcineurin coding sequence or subunits thereof (see, for example, accession numbers NM_000944; NM_021132; NM_005605; NM_000945; NM_147180). Certain antisense agents specifically hybridize to a target region within a pre-mRNA or mRNA target sequence that encodes calcineurin or a subunit thereof, eg, the target region is the AUG start codon of the mRNA, of the AUG start codon. Selected from one or more of an upstream region, a region downstream of the AUG codon, a 3'or 5'splice site of pretreated mRNA, a branch point, a 3'untranslated region (UTR), and a polyadenylation signal sequence. It A particular RNAi agent is complementary to a sense strand that is substantially identical to an mRNA target sequence encoding calcineurin or a subunit thereof, and, optionally, an mRNA target sequence encoding calcineurin or a subunit thereof. Or includes an antisense strand that is substantially complementary.

いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、ラパマイシンの機構的標的（ｍＴＯＲ）アンタゴニストまたは阻害剤である。ｍＴＯＲは、タンパク質キナーゼのホスファチジルイノシトール３−キナーゼ関連キナーゼファミリーのメンバーであり、異なる細胞内区画に局在し、そのため、特にそれらの活性化および機能に影響を及ぼす、２つの構造的に異なる複合体：ｍＴＯＲＣ１およびｍＴＯＲＣ２の触媒サブユニットである。両方の複合体のコア成分として、ｍＴＯＲは、細胞成長、細胞増殖、細胞の運動性、細胞生存、タンパク質合成、自食作用、および転写を調節する、セリン／スレオニンタンパク質キナーゼとして作用する。ｍＴＯＲＣ２のコア成分として、ｍＴＯＲはまた、インスリン受容体およびインスリン様成長因子１受容体の活性化を促進するチロシンタンパク質キナーゼとしても作用する。ｍＴＯＲＣ２はまた、アクチン細胞骨格の制御および維持にも関与している。ｍＴＯＲは、線維症および自己免疫の役割を果たし、ｍＴＯＲＣ経路の封鎖は、かかる疾患に対する治療として研究中である。 In some embodiments, the immunomodulator is a mechanistic targeting (mTOR) antagonist or inhibitor of rapamycin. mTOR is a member of the phosphatidylinositol 3-kinase-related kinase family of protein kinases and is localized to different subcellular compartments, and therefore two structurally distinct complexes that specifically affect their activation and function. : MTORC1 and mTORC2 catalytic subunits. As a core component of both complexes, mTOR acts as a serine/threonine protein kinase that regulates cell growth, cell proliferation, cell motility, cell survival, protein synthesis, autophagy, and transcription. As a core component of mTORC2, mTOR also acts as a tyrosine protein kinase that promotes activation of insulin receptor and insulin-like growth factor 1 receptor. mTORC2 is also involved in the regulation and maintenance of the actin cytoskeleton. mTOR plays a role in fibrosis and autoimmunity, and blockade of the mTORC pathway is under investigation as a treatment for such diseases.

ｍＴＯＲ阻害剤の特定の例は、エベロリムス、ラパマイシン、デフォロリムス、およびテムシロリムスを含む。ｍＴＯＲ阻害剤の一般的な例は、ｍＴＯＲＣ１／ｍＴＯＲＣ２二重阻害剤を含む、ＡＴＰ競合ｍＴＯＲキナーゼ阻害剤、ならびにｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２、およびＰＩ３Ｋの触媒アイソフォームを阻害するｍＴＯＲ／ＰＩ３Ｋ二重阻害剤を含む。特定の例は、ダクトリシブ、ＢＧＴ２２６、ＳＦ１１２６、ＰＫＩ−５８７、ＮＶＰＢＥ２３５、サパニセルチブ、ＡＺＤ８０５５、およびＡＺＤ２０１４を含む。 Specific examples of mTOR inhibitors include everolimus, rapamycin, deforolimus, and temsirolimus. Common examples of mTOR inhibitors include ATP-competitive mTOR kinase inhibitors, including mTORC1/mTORC2 dual inhibitors, and mTOR/PI3K dual inhibitors that inhibit the catalytic isoforms of mTORC1, mTORC2, and PI3K. .. Specific examples include ductile, BGT226, SF1126, PKI-587, NVPBE235, sapaniseltive, AZD8055, and AZD2014.

ある特定のｍＴＯＲアンタゴニストまたは阻害剤は、ｍＴＯＲまたはｍＴＯＲ複合体のメンバーに特異的に結合する、抗体または抗原結合断片または小分子を含む。ｍＴＯＲのコード配列またはｍＴＯＲ複合体のメンバーに対するアンチセンス剤およびＲＮＡｉ剤もまた含まれる（例えば、Ｒａｖｉｃｈａｎｄｒａｎｅｔａｌ．，ＨｕｍＭｏｌＧｅｎｅｔ．２３：４９１９−３１，２０１４を参照のこと）。ある特定のアンチセンス剤は、ｍＴＯＲまたはｍＴＯＲ複合体のメンバーをコードするプレｍＲＮＡまたはｍＲＮＡ標的配列内の標的領域に特異的にハイブリダイズし、例えば、標的領域は、ｍＲＮＡのＡＵＧ開始コドン、ＡＵＧ開始コドンの上流の領域、ＡＵＧコドンの下流の領域、予め処理したｍＲＮＡの３’または５’スプライス部位、分岐点、３’未翻訳領域（ＵＴＲ）、およびポリアデニル化シグナル配列のうちの１つ以上から選択される。ある特定のＲＮＡｉ剤は、ｍＴＯＲまたはｍＴＯＲ複合体のメンバーをコードするｍＲＮＡ標的配列と実質的に同一であるセンス鎖、および任意に、ｍＴＯＲまたはｍＴＯＲ複合体のメンバーをコードするｍＲＮＡ標的配列に対して相補的であるか、または実質的に相補的であるアンチセンス鎖を含む。 Certain mTOR antagonists or inhibitors include antibodies or antigen binding fragments or small molecules that specifically bind to mTOR or a member of the mTOR complex. Also included are antisense agents and RNAi agents directed against the coding sequence of mTOR or members of the mTOR complex (see, eg, Ravichandran et al., Hum Mol Genet. 23:4919-31, 2014). Certain antisense agents specifically hybridize to a target region within a pre-mRNA or mRNA target sequence that encodes a member of the mTOR or mTOR complex, eg, the target region is the AUG start codon of the mRNA, the AUG start From one or more of the region upstream of the codon, the region downstream of the AUG codon, the 3'or 5'splice site of pretreated mRNA, the branch point, the 3'untranslated region (UTR), and the polyadenylation signal sequence. To be selected. A particular RNAi agent is directed against a sense strand that is substantially identical to an mRNA target sequence encoding a mTOR or a member of the mTOR complex, and, optionally, an mRNA target sequence encoding a mTOR or a member of the mTOR complex. It includes antisense strands that are complementary or substantially complementary.

いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、ＩＤＯアンタゴニストまたは阻害剤である。ＩＤＯは、免疫阻害特性を有するトリプトファン異化酵素である。例えば、ＩＤＯは、Ｔ細胞およびＮＫ細胞を抑制し、Ｔｒｅｇおよび骨髄由来サプレッサー細胞を生成させて活性化し、腫瘍血管新生を促進することが公知である。ＩＤＯアンタゴニストまたは阻害剤の特定の例は、インドキシモド（ＮＬＧ−８１８９）、１−メチル−トリプトファン（１ＭＴ）、β−カルボリン（ノルハルマン；９Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール）、ロスマリン酸、およびエプカドスタットを含む（例えば、Ｓｈｅｒｉｄａｎ，ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．３３：３２１−３２２，２０１５を参照のこと）。ある特定のＩＤＯアンタゴニストまたは阻害剤は、ＩＤＯに特異的に結合する、抗体または抗原結合断片または小分子を含む（例えば、Ｐｌａｔｔｅｎｅｔａｌ．，ＦｒｏｎｔＩｍｍｕｎｏｌ．５：６７３，２０１４を参照のこと）。ＩＤＯコード配列に対するアンチセンス剤およびＲＮＡｉ剤もまた含まれる（例えば、受入番号ＡＨ００２８２８．２を参照のこと）。ある特定のアンチセンス剤は、ＩＤＯをコードするプレｍＲＮＡまたはｍＲＮＡ標的配列内の標的領域に特異的にハイブリダイズし、例えば、標的領域は、ｍＲＮＡのＡＵＧ開始コドン、ＡＵＧ開始コドンの上流の領域、ＡＵＧコドンの下流の領域、予め処理したｍＲＮＡの３’または５’スプライス部位、分岐点、３’未翻訳領域（ＵＴＲ）、およびポリアデニル化シグナル配列のうちの１つ以上から選択される。ある特定のＲＮＡｉ剤は、ＩＤＯをコードするｍＲＮＡ標的配列と実質的に同一であるセンス鎖、および任意に、ＩＤＯをコードするｍＲＮＡ標的配列に対して相補的であるか、または実質的に相補的であるアンチセンス鎖を含む。 In some embodiments, the immunomodulatory agent is an IDO antagonist or inhibitor. IDO is a tryptophan catabolic enzyme with immunosuppressive properties. For example, IDO is known to suppress T cells and NK cells, generate and activate Treg and bone marrow-derived suppressor cells, and promote tumor angiogenesis. Specific examples of IDO antagonists or inhibitors include indoximod (NLG-8189), 1-methyl-tryptophan (1MT), β-carboline (norharman; 9H-pyrido[3,4-b]indole), rosmarinic acid, and Includes epcadstat (see, eg, Sheridan, Nature Biotechnology. 33:321-322, 2015). Certain IDO antagonists or inhibitors include antibodies or antigen-binding fragments or small molecules that specifically bind to IDO (see, eg, Platten et al., Front Immunol. 5:673, 2014). Also included are antisense agents and RNAi agents directed against the IDO coding sequence (see, eg, accession number AH002828.2). Certain antisense agents specifically hybridize to a target region within a pre-mRNA or mRNA target sequence encoding IDO, eg, the target region is the AUG start codon of mRNA, a region upstream of the AUG start codon, It is selected from one or more of a region downstream of the AUG codon, a 3'or 5'splice site of pretreated mRNA, a branch point, a 3'untranslated region (UTR), and a polyadenylation signal sequence. A particular RNAi agent is complementary or substantially complementary to a sense strand that is substantially identical to the mRNA target sequence encoding IDO, and, optionally, to the mRNA target sequence encoding IDO. Containing an antisense strand that is

いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、イノシン−５’−モノホスフェートデヒドロゲナーゼ（ＩＭＰＤＨ）アンタゴニストまたは阻害剤である。ＩＭＰＤＨは、イノシン一リン酸（ＩＭＰ）のキサントシン一リン酸（ＸＭＰ）へのニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ＋）−依存酸化を触媒するプリン生合成酵素であり、ＩＭＰからのグアニンヌクレオチドのデノボ合成に対して初めて認定された、律速段階である。グアニンヌクレオチド合成は、正常な細胞機能および成長を維持するのに不可欠であり、細胞増殖および免疫応答の維持にも重要である。特に、ＢおよびＴ細胞は、正常な活性化および機能においてＩＭＰＤＨへの依存を示し、上方調節したＩＭＰＤＨの発現を示している。 In some embodiments, the immunomodulatory agent is an inosine-5'-monophosphate dehydrogenase (IMPDH) antagonist or inhibitor. IMPDH is a purine biosynthetic enzyme that catalyzes the nicotinamide adenine dinucleotide (NAD+)-dependent oxidation of inosine monophosphate (IMP) to xanthosine monophosphate (XMP) and is involved in de novo synthesis of guanine nucleotides from IMP. For the first time, it is the rate-determining step. Guanine nucleotide synthesis is essential for maintaining normal cell function and growth and is also important for maintaining cell proliferation and immune response. In particular, B and T cells show dependence on IMPDH in normal activation and function, indicating upregulated IMPDH expression.

ＩＭＰＤＨ阻害剤野特定の例は、ミコフェノール酸（ミコフェノール酸モフェチル）、リバビリン、および６ＴＧＭＰ（６−チオグアニンモノホスフェート）を含む。ある特定のＩＭＰＤＨアンタゴニストまたは阻害剤は、ＩＭＰＤＨに特異的に結合する、抗体または抗原結合断片または小分子を含む。ＩＭＰＤＨコード配列に対するアンチセンス剤およびＲＮＡｉ剤もまた含まれる。ある特定のアンチセンス剤は、ＩＭＰＤＨをコードするプレｍＲＮＡまたはｍＲＮＡ標的配列内の標的領域に特異的にハイブリダイズし、例えば、標的領域は、ｍＲＮＡのＡＵＧ開始コドン、ＡＵＧ開始コドンの上流の領域、ＡＵＧコドンの下流の領域、予め処理したｍＲＮＡの３’または５’スプライス部位、分岐点、３’未翻訳領域（ＵＴＲ）、およびポリアデニル化シグナル配列のうちの１つ以上から選択される。ある特定のＲＮＡｉ剤は、ＩＭＰＤＨをコードするｍＲＮＡ標的配列と実質的に同一であるセンス鎖、および任意に、ＩＭＰＤＨをコードするｍＲＮＡ標的配列に対して相補的であるか、または実質的に相補的であるアンチセンス鎖を含む。 Specific examples of IMPDH inhibitors include mycophenolic acid (mycophenolate mofetil), ribavirin, and 6TGMP (6-thioguanine monophosphate). Certain IMPDH antagonists or inhibitors include antibodies or antigen-binding fragments or small molecules that specifically bind IMPDH. Also included are antisense and RNAi agents for the IMPDH coding sequence. Certain antisense agents specifically hybridize to a target region within a pre-mRNA or mRNA target sequence encoding IMPDH, eg, the target region is the AUG start codon of mRNA, a region upstream of the AUG start codon, It is selected from one or more of a region downstream of the AUG codon, a 3'or 5'splice site of pretreated mRNA, a branch point, a 3'untranslated region (UTR), and a polyadenylation signal sequence. A particular RNAi agent is complementary or substantially complementary to a sense strand that is substantially identical to an IMPDH-encoding mRNA target sequence and, optionally, an IMPDH-encoding mRNA target sequence. Containing an antisense strand that is

いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体アンタゴニストまたは阻害剤である。サイトカインは、造血、免疫応答、および炎症に影響する、小（糖）タンパク質（８〜７５ｋＤａの分子量を有する）である。ある特定の例示的なサイトカイン阻害剤は、サイトカインの合成を減少させ、自由な活性型においてサイトカインの濃度を減少させ、サイトカインとそれらの同種の受容体との間の相互作用を遮断し、かつ／またはサイトカイン受容体のシグナル伝達を妨げる。 In some embodiments, the immunomodulatory agent is a cytokine and/or cytokine receptor antagonist or inhibitor. Cytokines are small (glyco)proteins (having a molecular weight of 8-75 kDa) that influence hematopoiesis, immune response, and inflammation. Certain exemplary cytokine inhibitors reduce cytokine synthesis, reduce the concentration of cytokines in their free active form, block the interaction between cytokines and their cognate receptors, and/or Or it interferes with cytokine receptor signaling.

いくつかの実施形態では、標的サイトカインまたはサイトカイン受容体は、炎症性またはプロ炎症性サイトカインまたはサイトカイン受容体である。標的サイトカインの例としては、ＩＬ−１αおよびＩＬ−１βを含むインターロイキン−１（ＩＬ−１）、インターロイキン−５（ＩＬ−５）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、インターロイキン−１１（ＩＬ−１１）、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）、インターロイキン−１７（ＩＬ−１７）、インターロイキン−１８（ＩＬ−１８）、インターロイキン−２０（ＩＬ−２０）、インターロイキン−３３（ＩＬ−３３）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−ガンマ）、形質転換成長因子−β（ＴＧＦ−β）、および顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、ならびにそれらの同種サイトカイン受容体、例えば、ＩＬ−１Ｒ、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−８Ｒ、ＩＬ−１１Ｒ、ＩＬ−１２Ｒ、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−２０Ｒ、ＳＴ２（インターロイキン１受容体様１、ＩＬ１ＲＬ１）、ＴＮＦＲ１などのＴＮＦＲ、インターフェロン−ガンマ受容体（ＩＦＮＧＲ）、ＴＧＦβＲ１（ＡＬＫ５）またはＴＧＦβＲ２などのＴＧＦ−β受容体が挙げられるが、これらに限定されない。 In some embodiments, the target cytokine or cytokine receptor is an inflammatory or proinflammatory cytokine or cytokine receptor. Examples of target cytokines include interleukin-1 (IL-1) containing IL-1α and IL-1β, interleukin-5 (IL-5), interleukin-6 (IL-6), interleukin-8. (IL-8), interleukin-11 (IL-11), interleukin-12 (IL-12), interleukin-17 (IL-17), interleukin-18 (IL-18), interleukin-20. (IL-20), interleukin-33 (IL-33), tumor necrosis factor (TNF), interferon gamma (IFN-gamma), transforming growth factor-β (TGF-β), and granulocyte-macrophage colony stimulation. Factor (GM-CSF), as well as their cognate cytokine receptors, such as IL-1R, IL-6R, IL-8R, IL-11R, IL-12R, IL-17R, IL-18R, IL-20R, ST2. (Interleukin 1 receptor-like 1, IL1RL1), TNFR such as TNFR1, interferon-gamma receptor (IFNGR), TGF-β receptor such as TGFβR1 (ALK5) or TGFβR2, but are not limited thereto.

サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体阻害剤の特定の例には、ヒトＩｇＧ１骨格上の可溶性ＩＩ型ＴＮＦ受容体の組換え融合タンパク質であるエタネルセプト、ならびにマウスＴＮＦ−アルファ結合領域およびヒトＩｇＧ１骨格を含むキメラ抗ＴＮＦ−アルファモノクローナル抗体であるインフリキシマブなどのＴＮＦ−アルファ阻害剤を含む。アダリムマブ、セルトリズマブ、およびゴリムマブは、ＴＮＦ阻害剤としても含まれる。 Specific examples of cytokines and/or cytokine receptor inhibitors include etanercept, a recombinant fusion protein of the soluble type II TNF receptor on the human IgG1 scaffold, and a chimera comprising a mouse TNF-alpha binding region and a human IgG1 scaffold. Includes TNF-alpha inhibitors such as infliximab, an anti-TNF-alpha monoclonal antibody. Adalimumab, certolizumab, and golimumab are also included as TNF inhibitors.

インターロイキン阻害剤の特定の例には、例えば、アナキンラなどのＩＬ−１Ｒアンタゴニスト、リロナセプト（ＩＬ−１Ｒ１成分の細胞外部分のリガンド結合ドメインと、ＩＬ−１に結合し、中和するヒトＩｇＧ１の断片−結晶化部分（Ｆｃ領域）にインラインで連結されたＩＬ−１受容体アクセサリタンパク質（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）とからなる二量体融合タンパク質）などのＩＬ−１阻害剤、バシリキシマブ（Ｔ細胞のＩＬ−２受容体のα鎖（ＣＤ２５）に対するキメラマウス−ヒトモノクローナル抗体）およびダクリズマブ（ＣＤ２５に結合するヒト化モノクローナル抗体）などのＩＬ−２競合的阻害剤、カナキヌマブ（ヒトモノクローナル抗体）などのＩＬ−１β特異的阻害剤、イキセキズマブ（ＩＬ−１７に結合するヒト化モノクローナル抗体）およびセクキヌマブ（タンパク質インターロイキン（ＩＬ）−１７Ａに結合するヒトＩｇＧ１κモノクローナル抗体）などのＩＬ−１７アンタゴニスト、メポリズマブ（ＩＬ−５に結合し、ＩＬ−５受容体のアルファサブユニットへの結合を妨げるヒト化モノクローナル抗体）およびレスリズマブなどのＩＬ−５阻害剤、シルツキシマブ（ＩＬ−６に結合する抗体）、シルクマブ（ＩＬ−６に結合する抗体）、セリルマブ（ＩＬ−６受容体に結合する抗体）、トシリズマブ（ＩＬ−６受容体に結合する抗体）などのＩＬ−６阻害剤、ならびにウステキヌマブ（ＩＬ−１２およびＩＬ−２３の両方のｐ−４０サブユニットに結合する抗体）などのＩＬ−１２／ＩＬ−２３シグナル伝達阻害剤が含まれる。 Specific examples of interleukin inhibitors include, for example, IL-1R antagonists such as anakinra, rilonacept (a ligand binding domain for the extracellular portion of the IL-1R1 component, and human IgG1 that binds and neutralizes IL-1). An IL-1 inhibitor such as a dimer fusion protein consisting of an IL-1 receptor accessory protein (IL-1RAcP) linked in-line to a fragment-crystallization part (Fc region), basiliximab (T cell IL Mouse-human monoclonal antibody against the α chain (CD25) of the -2 receptor) and IL-2 competitive inhibitors such as daclizumab (humanized monoclonal antibody that binds CD25), IL- such as canakinumab (human monoclonal antibody) IL-17 antagonists such as 1β-specific inhibitors, ixekizumab (humanized monoclonal antibody that binds IL-17) and secukinumab (human IgG1κ monoclonal antibody that binds protein interleukin (IL)-17A), mepolizumab (IL-5 IL-5 inhibitors, such as humanized monoclonal antibodies that bind to and block the binding of the IL-5 receptor to the alpha subunit) and resulizumab, siltuximab (an antibody that binds IL-6), cirumab (IL-6 Binding antibodies), cerilumab (antibody binding to IL-6 receptor), tocilizumab (antibody binding to IL-6 receptor) and other IL-6 inhibitors, and ustekinumab (IL-12 and IL-23 both IL-12/IL-23 signaling inhibitors, such as antibodies that bind to the p-40 subunit of E. coli.

ある特定のサイトカインおよび／またはサイトカイン受容体アンタゴニストまたは阻害剤には、サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体、例えば、前述のサイトカインおよび／またはサイトカイン受容体のうちの１つ以上に特異的に結合する抗体または抗原結合断片または小分子が含まれる。サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体コード配列、例えば、前述のサイトカインおよび／またはサイトカイン受容体のうちの１つ以上に対するアンチセンス剤およびＲＮＡｉ剤もまた含まれる。ある特定のアンチセンス剤は、サイトカインまたはサイトカイン受容体をコードするプレｍＲＮＡまたはｍＲＮＡ標的配列内の標的領域に特異的にハイブリダイズし、例えば、標的領域は、ｍＲＮＡのＡＵＧ開始コドン、ＡＵＧ開始コドンの上流の領域、ＡＵＧコドンの下流の領域、予め処理したｍＲＮＡの３’または５’スプライス部位、分岐点、３’未翻訳領域（ＵＴＲ）、およびポリアデニル化シグナル配列のうちの１つ以上から選択される。ある特定のＲＮＡｉ剤は、サイトカインまたはサイトカイン受容体をコードするｍＲＮＡ標的配列と実質的に同一であるセンス鎖、および任意に、サイトカインまたはサイトカイン受容体をコードするｍＲＮＡ標的配列に対して相補的であるか、または実質的に相補的であるアンチセンス鎖を含む。 Certain cytokines and/or cytokine receptor antagonists or inhibitors include antibodies that specifically bind to cytokines and/or cytokine receptors, such as one or more of the aforementioned cytokines and/or cytokine receptors. Antigen binding fragments or small molecules are included. Also included are antisense agents and RNAi agents for cytokines and/or cytokine receptor coding sequences, eg, one or more of the aforementioned cytokines and/or cytokine receptors. Certain antisense agents specifically hybridize to a target region within a pre-mRNA or mRNA target sequence that encodes a cytokine or cytokine receptor, eg, the target region is the AUG start codon of the mRNA, of the AUG start codon. Selected from one or more of an upstream region, a region downstream of the AUG codon, a 3'or 5'splice site of pretreated mRNA, a branch point, a 3'untranslated region (UTR), and a polyadenylation signal sequence. It A particular RNAi agent is complementary to a sense strand that is substantially identical to an mRNA target sequence encoding a cytokine or cytokine receptor and, optionally, an mRNA target sequence encoding a cytokine or cytokine receptor. Or includes an antisense strand that is substantially complementary.

いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、キナーゼアンタゴニストまたは阻害剤、つまり、１つ以上のキナーゼを標的とするか、またはそれに対して標的される阻害剤である。一般的な例は、チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）を含む。標的キナーゼの例としては、とりわけ、ヤーヌスキナーゼ（ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、ＴＹＫ２を含むＪＡＫ）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、受容体チロシン−タンパク質キナーゼｅｒｂＢ−２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕまたはＥＲＢＢ２）、Ｂｃｒ−Ａｂｌ、ｃ−ＳＲＣ、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰ）キナーゼ、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）、脾臓チロシンキナーゼ（ＳＹＫ）、ブルトンチロシンキナーゼ（ＢＴＫ）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦＲ３を含むＶＥＧＦＲ）、線維芽細胞成長因子受容体（ＦＧＦＲ）、Ｂ−Ｒａｆ、ＲＥＴがん原遺伝子、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦ−Ｒ）、トロポミオシン受容体キナーゼ（ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、ＴｒｋＣを含むＴｒｋ）、およびｃ−Ｍｅｔが挙げられるが、これらに限定されない。したがって、ある特定の実施形態では、キナーゼ阻害剤は、前述のキナーゼのうちの１つ以上の阻害剤またはアンタゴニストである。 In some embodiments, the immunomodulatory agent is a kinase antagonist or inhibitor, ie, an inhibitor that targets or is targeted to one or more kinases. Common examples include tyrosine kinase inhibitors (TKIs). Examples of target kinases include, among others, Janus kinases (JAK including JAK1, JAK2, JAK3, TYK2), epidermal growth factor receptor (EGFR), receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 (Her2/neu or ERBB2), Bcr-Abl, c-SRC, mitogen activated protein kinase (MAP) kinase, anaplastic lymphoma kinase (ALK), spleen tyrosine kinase (SYK), Bruton tyrosine kinase (BTK), vascular endothelial growth factor (VEGF), vascular endothelium Growth factor receptor (VEGFR1, VEGFR2, VEGFR including VEGFR3), fibroblast growth factor receptor (FGFR), B-Raf, RET protooncogene, platelet-derived growth factor receptor (PDGF-R), tropomyosin receptor Somatic kinases (Trk including TrkA, TrkB, TrkC), and c-Met are included, but are not limited to. Thus, in certain embodiments, the kinase inhibitor is an inhibitor or antagonist of one or more of the aforementioned kinases.

キナーゼ阻害剤の特定の例には、バリシチニブ、フェドラチニブ、フィルゴチニブ、ガンドチニブ、レスタウルチニブ、モメロチニブ、パクリチニブ、ペフィシチニブ、ルキソリチニブ、トファシチニブ、およびパダシチニブなどのＪＡＫ阻害剤が含まれる。キナーゼ阻害剤のさらなる例としては、ニンテダニブ、アファチニブ、アキシチニブ、ボスチニブ、セツキシマブ、コビメチニブ、クリゾチニブ、カボザンチニブ、ダサチニブ、エヌトレクチニブ（ｅｎｔｒｅｃｔｉｎｉｂ）、エルロチニブ、フォスタマチニブ、ゲフィチニブ、イブルチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レンバチニブ、ムブリチニブ、ネラチニブ、ニロチニブ、パゾパニブ、ペガプタニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、ＳＵ６６５６、トセラニブ、バンデタニブ、バタラニブ、およびベムラフェニブが挙げられるが、これらに限定されない。 Specific examples of kinase inhibitors include JAK inhibitors such as baricitinib, fedratinib, filgotinib, gandotinib, lestaurtinib, momerotinib, paclitinib, pefitinib, ruxolitinib, tofacitinib, and padadatinib. Further examples of kinase inhibitors include nintedanib, afatinib, axitinib, bosutinib, cetuximab, cobimetinib, crizotinib, cabozantinib, dasatinib, entrectinib (entrectinib, nibulinib, patinib, eflotinib, fobratinib, gefitinib, gefitinib, efatinib, efatinib. Examples include, but are not limited to, nilotinib, pazopanib, pegaptanib, sorafenib, sunitinib, SU6656, toceranib, vandetanib, batalanib, and vemurafenib.

ある特定のキナーゼアンタゴニストまたは阻害剤は、キナーゼ、例えば、前述のキナーゼのうちの１つ以上に特異的に結合する、抗体または抗原結合断片または小分子を含む。キナーゼコード配列、例えば、前述のキナーゼのうちの１つ以上に対するアンチセンス剤およびＲＮＡｉ剤もまた含まれる。ある特定のアンチセンス剤は、キナーゼをコードするプレｍＲＮＡまたはｍＲＮＡ標的配列内の標的領域に特異的にハイブリダイズし、例えば、標的領域は、ｍＲＮＡのＡＵＧ開始コドン、ＡＵＧ開始コドンの上流の領域、ＡＵＧコドンの下流の領域、予め処理したｍＲＮＡの３’または５’スプライス部位、分岐点、３’未翻訳領域（ＵＴＲ）、およびポリアデニル化シグナル配列のうちの１つ以上から選択される。ある特定のＲＮＡｉ剤は、キナーゼをコードするｍＲＮＡ標的配列と実質的に同一であるセンス鎖、および任意に、キナーゼをコードするｍＲＮＡ標的配列に対して相補的であるか、または実質的に相補的であるアンチセンス鎖を含む。 Certain kinase antagonists or inhibitors include antibodies or antigen-binding fragments or small molecules that specifically bind to a kinase, eg, one or more of the aforementioned kinases. Also included are kinase coding sequences, eg, antisense agents and RNAi agents for one or more of the aforementioned kinases. Certain antisense agents specifically hybridize to a target region within a pre-mRNA or mRNA target sequence that encodes a kinase, eg, the target region is the AUG start codon of the mRNA, a region upstream of the AUG start codon, It is selected from one or more of a region downstream of the AUG codon, a 3'or 5'splice site of pretreated mRNA, a branch point, a 3'untranslated region (UTR), and a polyadenylation signal sequence. A particular RNAi agent is complementary or substantially complementary to a sense strand that is substantially identical to an mRNA target sequence encoding a kinase, and, optionally, to an mRNA target sequence encoding a kinase. Containing an antisense strand that is

いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、Ｂ細胞受容体阻害剤、例えば、ＣＤ２０を標的とする薬剤である。Ｂリンパ球抗原ＣＤ２０またはＣＤ２０は、プロＢ期から始まる全てのＢ細胞の表面上に発現する活性化−グリコシル化されたリンタンパク質（ＣＤ４５Ｒ＋、ＣＤ１１７＋）であり、成熟するまで濃度が漸増する。タンパク質は、既知の天然リガンドを有さず、その機能は、具体的には、Ｔ非依存性抗原に対して最適なＢ細胞の免疫応答を可能にすることである。ＣＤ２０に対する例示的な免疫調節剤は、モノクローナル抗体イブリツモマブ・チウキセタン、オビヌツズマブ、オカラツズマブ、オクレリズマブ、リツキシマブ、トシツモマブ、およびベルツズマブを含む。 In some embodiments, the immunomodulatory agent is a B cell receptor inhibitor, eg, an agent that targets CD20. The B lymphocyte antigen CD20 or CD20 is an activated-glycosylated phosphoprotein (CD45R+, CD117+) expressed on the surface of all B cells starting from the pro-B phase, with increasing concentrations until maturity. The protein has no known natural ligands, its function is specifically to enable an optimal B cell immune response to T-independent antigens. Exemplary immunomodulatory agents for CD20 include the monoclonal antibodies ibritumomab tiuxetan, obinutuzumab, ochalatuzumab, ocrelizumab, rituximab, tositumomab, and veltuzumab.

いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、細胞増殖抑制剤または細胞毒性剤である。細胞増殖抑制剤または細胞毒性剤の例は、とりわけ、アザチオプリン、クロラムブシル、シクロホスファミド、シクロスポリンＡ、メトトレキサート、およびナイトロジェンマスタードを含む。 In some embodiments, the immunomodulatory agent is a cytostatic or cytotoxic agent. Examples of cytostatic or cytotoxic agents include azathioprine, chlorambucil, cyclophosphamide, cyclosporin A, methotrexate, and nitrogen mustard, among others.

いくつかの実施形態では、上述のように、免疫調節剤は、合成または生物学的起源（生体分子）であるが、典型的にはポリマーではない有機化合物を指す「小分子」である。有機化合物は、その分子が炭素を含む化合物の大きなクラスを指し、典型的には、炭酸塩のみを含むもの、単純な炭素の酸化物、またはシアン化物が除外される。「生体分子」は、一般に、ペプチド、ポリサッカリド、および核酸などの大きなポリマー分子（バイオポリマー）、ならびに主要な二次代謝産物、脂質、リン脂質、糖脂質、ステロール、グリセロ脂質、ビタミン、およびホルモンなどの小分子を含む、生物によって産生される有機分子を指す。「ポリマー」は、一般に、反復構造単位からなる大分子または高分子を指し、反復構造単位は通常、共有化学結合に連結されている。 In some embodiments, as described above, an immunomodulatory agent is a "small molecule" that refers to organic compounds of synthetic or biological origin (biomolecules) but typically not polymers. Organic compounds refer to a large class of compounds whose molecule contains carbon, typically excluding those containing only carbonates, simple carbon oxides, or cyanides. "Biomolecule" generally refers to large polymeric molecules (biopolymers) such as peptides, polysaccharides, and nucleic acids, as well as major secondary metabolites, lipids, phospholipids, glycolipids, sterols, glycerolipids, vitamins, and hormones. Refers to organic molecules produced by an organism, including small molecules such as. "Polymer" generally refers to large molecules or macromolecules composed of repeating structural units, which are usually linked by covalent chemical bonds.

ある特定の実施形態では、小分子は、約５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、５００、６５０、６００、７５０、７００、８５０、８００、９５０、１０００、もしくは２０００ダルトン、または約５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、５００、６５０、６００、７５０、７００、８５０、８００、９５０、１０００、もしくは２０００ダルトン未満を含む、約１０００〜２０００ダルトンまたは約１０００〜２０００ダルトン未満、典型的には、約３００〜７００ダルトンの分子量を有する。 In certain embodiments, a small molecule is about 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 500, 650, 600, 750, 700, 850, 800, 950, 1000 or 2000 Daltons, or about 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 500, 650, 600, 750, 700, 850, 800, 950, 1000, or 2000. It has a molecular weight of less than about 1000-2000 daltons, or less than about 1000-2000 daltons, typically less than about 300-700 daltons, including less than daltons.

ある特定の小分子は、本明細書に記載される、「特異的結合」の特徴を有し得る。例えば、いくつかの実施形態では、小分子は、約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、もしくは５０ｎＭ、少なくとも約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、もしくは５０ｎＭ、または約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、もしくは５０ｎＭ未満の結合親和性（Ｋｄ）を有する、標的（例えば、Ｓ１Ｐ、Ｓ１ＰＲ、カルシニューリン、ｍＴＯＲ、ＩＤＯ、ＩＭＰＤＨ、サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体、Ｂ細胞受容体、キナーゼ）に特異的に結合する。 Certain small molecules may have the characteristics of "specific binding" as described herein. For example, in some embodiments, a small molecule is about 0.01, 0.05, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, or 50 nM, at least about 0.01, 0.05, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0. .5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16. , 17, 18, 19, 20, 21, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, or 50 nM, or about 0.01, 0.05, 0.1, 0. 2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, Binding affinities of less than 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, or 50 nM ( Kd) specifically binds to a target (eg, S1P, S1PR, calcineurin, mTOR, IDO, IMPDH, cytokines and/or cytokine receptors, B cell receptors, kinases).

特定の実施形態では、免疫調節剤は、ポリペプチドまたはペプチドである。「ペプチド」および「ポリペプチド」という用語は、本明細書で互換的に使用されるが、ある特定の場合によっては、「ペプチド」は、より短いポリペプチド、例えば、間にある全ての整数および範囲（例えば、５〜１０、８〜１２、１０〜１５）を含む、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０個のアミノ酸からなるポリペプチドを指し得る。ポリペプチドおよびペプチドは、本明細書に記載されるように、天然に存在するアミノ酸および／または天然に存在しないアミノ酸からなり得る。抗体はまた、ポリペプチドとしても含まれる。 In certain embodiments, the immunomodulatory agent is a polypeptide or peptide. Although the terms "peptide" and "polypeptide" are used interchangeably herein, in certain cases, "peptide" refers to shorter polypeptides, such as all integers and About 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, including ranges (eg, 5-10, 8-12, 10-15). It may refer to a polypeptide consisting of 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45 or 50 amino acids. Polypeptides and peptides can consist of naturally occurring and/or non-naturally occurring amino acids, as described herein. Antibodies are also included as polypeptides.

ポリペプチドの結合特性は、当該技術分野で周知の方法を用いて定量化され得る（Ｄａｖｉｅｓｅｔａｌ．，ＡｎｎｕａｌＲｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５９：４３９−４７３，１９９０を参照のこと）。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、約１０−７〜約１０−８Ｍの範囲に及ぶ平衡解離定数を有する標的分子（例えば、Ｓ１Ｐ、Ｓ１ＰＲ、カルシニューリン、ｍＴＯＲ、ＩＤＯ、ＩＭＰＤＨ、サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体、Ｂ細胞受容体、キナーゼ、またはそのエピトープ）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、平衡解離定数は、約１０−９Ｍ以下〜約１０−１０Ｍの範囲に及ぶ。ある特定の例示的な実施形態では、ポリペプチドは、本明細書に記載される標的（特異的に結合するもの、例えば、Ｓ１Ｐ、Ｓ１ＰＲ、カルシニューリン、ｍＴＯＲ、ＩＤＯ、ＩＭＰＤＨ、サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体、Ｂ細胞受容体、またはキナーゼを含む）に対して約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、もしくは５０ｎＭ、少なくとも約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、もしくは５０ｎＭ、または約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、もしくは５０ｎＭ未満の親和性（Ｋｄ）を有する。 The binding properties of polypeptides can be quantified using methods well known in the art (see Davies et al., Annual Rev. Biochem. 59:439-473, 1990). In some embodiments, the polypeptide has a target molecule (eg, S1P, S1PR, calcineurin, mTOR, IDO, IMPDH, a cytokine and/or a target molecule having an equilibrium dissociation constant ranging from about 10 −7 to about 10 −8 M. Specific binding to cytokine receptors, B cell receptors, kinases, or epitopes thereof). In some embodiments, the equilibrium dissociation constant ranges from about 10-9M or less to about 10-10M. In certain exemplary embodiments, the polypeptide can be any of the targets (specifically, those that specifically bind, eg, S1P, S1PR, calcineurin, mTOR, IDO, IMPDH, cytokines and/or cytokine receptors described herein. Body, B cell receptor, or kinase)), about 0.01, 0.05, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0. 7, 0.8, 0.9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, or 50 nM, at least about 0.01, 0.05, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4 , 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 , 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, or 50 nM, or about 0.01, 0.05, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, Affinity less than 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, or 50 nM. (Kd).

いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、本明細書に記載される標的に特異的に結合する、抗体または「その抗原結合断片」である。抗体または抗原結合断片は、本質的にあらゆるタイプの抗体または抗原結合断片であり得る。当該技術分野で周知であるように、抗体は、免疫グロブリン分子の可変領域内に位置する少なくとも１つのエピトープ認識部位を介して、標的（例えば、Ｓ１Ｐ、Ｓ１ＰＲ、カルシニューリン、ｍＴＯＲ、ＩＤＯ、ＩＭＰＤＨ、サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体、Ｂ細胞受容体、キナーゼ）に特異的に結合することができる免疫グロブリン分子である。 In some embodiments, the immunomodulatory agent is an antibody or "antigen-binding fragment thereof" that specifically binds to the targets described herein. The antibody or antigen-binding fragment can be essentially any type of antibody or antigen-binding fragment. As is well known in the art, antibodies are targeted to targets (eg, S1P, S1PR, calcineurin, mTOR, IDO, IMPDH, cytokines) via at least one epitope recognition site located within the variable region of an immunoglobulin molecule. And/or an immunoglobulin molecule capable of specifically binding to a cytokine receptor, a B cell receptor, a kinase).

本明細書で使用される、「抗体」という用語は、無傷ポリクローナルまたはモノクローナル抗体だけでなく、それらの断片（ｄＡｂ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖなど）、一本鎖（ＳｃＦｖ）、その合成バリアント、天然に存在するバリアント、必要とされる特異性の抗原結合断片を有する抗体部分を含む融合タンパク質、ヒト化抗体、キメラ抗体、および必要とされる特異性の抗原結合部位または断片（エピトープ認識部位）を含む任意の他の修飾形態の免疫グロブリン分子も包含する。抗体（およびその抗原結合断片）のある特定の特性および特徴付けは、本明細書でより詳細に記載されている。 As used herein, the term "antibody" refers to intact polyclonal or monoclonal antibodies, as well as fragments thereof (dAb, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, etc.), single chain ( ScFv), its synthetic variants, naturally-occurring variants, fusion proteins comprising antibody portions with antigen-binding fragments of the required specificity, humanized antibodies, chimeric antibodies, and antigen-binding sites of the required specificity. Alternatively, it also includes any other modified form of immunoglobulin molecule containing a fragment (epitope recognition site). Certain specific properties and characterizations of antibodies (and antigen binding fragments thereof) are described in more detail herein.

本明細書で使用される、「抗原結合断片」という用語は、対象となる抗原に結合する免疫グロブリン重鎖および／または軽鎖の少なくとも１つのＣＤＲを含有するポリペプチド断片を指す。この点で、本明細書に記載される抗体の抗原結合断片は、標的分子に結合する抗体からＶＨおよびＶＬ配列の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ全てのＣＤＲを含み得る。 As used herein, the term "antigen-binding fragment" refers to a polypeptide fragment that contains at least one CDR of an immunoglobulin heavy and/or light chain that binds an antigen of interest. In this regard, antigen-binding fragments of the antibodies described herein include those that bind to the target molecule from one, two, three, four, five, or all six of the VH and VL sequences. It may include CDRs.

「抗原」という用語は、抗体などの選択的結合剤によって結合することができ、さらに動物において、その抗原のエピトープに結合することができる抗体を産生するように使用することができる、分子または分子の一部分である。抗原は、１つ以上のエピトープを有し得る。 The term "antigen" is a molecule or molecule that can be bound by a selective binding agent such as an antibody and further used in an animal to produce an antibody capable of binding an epitope of that antigen. Is part of. An antigen can have one or more epitopes.

「エピトープ」という用語は、任意の決定基、例えば、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体に特異的に結合することができる、ポリペプチド決定基を含む。エピトープは、抗体によって結合する、抗原または標的タンパク質の領域である。ある特定の実施形態では、エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル、またはスルホニルなどの分子の化学的に活性な表面分類を含み、ある特定の実施形態では、特異的な三次元構造の特徴および／または特異的な電荷的特徴を有することができる。エピトープは、抗原の一次構造に関して連続または非連続であり得る。 The term “epitope” includes any determinant, eg, a polypeptide determinant capable of specific binding to an immunoglobulin or T cell receptor. An epitope is a region of an antigen or target protein that is bound by an antibody. In certain embodiments, the epitopic determinant comprises a chemically active surface grouping of molecules such as amino acids, sugar side chains, phosphoryls, or sulfonyls, and in certain embodiments, a specific three-dimensional structure. It may have characteristics and/or specific charge characteristics. Epitopes can be continuous or discontinuous with respect to the primary structure of the antigen.

ポリペプチドまたは抗体などの分子は、特定の細胞または物質と、それが代替の細胞または物質と反応または会合するよりも、頻繁に、急速に、長い持続時間、および／または大きい親和性で、反応または会合する場合、「特異的結合」または「選択的結合」を呈すると言われている。抗体は、標的に、それが、例えば、統計的に有意な量で、他の物質に結合するより大きい親和性、結合活性で、より容易に、かつ／またはより長い持続時間で結合する場合、「特異的に結合する」または「選択的に結合する」。例えば、特定のエピトープに特異的または選択的に結合する抗体は、それが他のエピトープに結合するよりもより大きな親和性、結合活性で、より容易に、かつ／またはより長い持続時間でその特異的エピトープを結合させる、抗体である。この定義を読むことによって、例えば、第１の標的に特異的または選択的に結合する抗体（または部分またはエピトープ）は、第２の標的に特異的または選択的に結合しても、結合しなくてもよいことも理解される。したがって、「特異的結合」または「選択的結合」は、排他的結合を必ずしも要求しない（しかし、それは、排他的結合を含むことができる）。一般に、しかし必ずしもではないが、結合への言及は、優先的結合を意味する。 Molecules, such as polypeptides or antibodies, react with a particular cell or substance more frequently, rapidly, with a longer duration, and/or with greater affinity than it reacts or associates with an alternative cell or substance. Or, when associated, is said to exhibit "specific binding" or "selective binding". An antibody binds to a target when it binds, eg, in a statistically significant amount, with greater affinity, avidity for binding to other substances, more easily and/or for a longer duration, "Specifically binds" or "selectively binds". For example, an antibody that specifically or selectively binds to a particular epitope is one that has greater affinity, avidity, easier and/or longer duration than its binding to other epitopes. Is an antibody that binds a specific epitope. By reading this definition, for example, an antibody (or portion or epitope) that specifically or selectively binds to a first target does not bind, even if it specifically or selectively binds to a second target. It is also understood that it may be. Thus, "specific binding" or "selective binding" does not necessarily require exclusive binding (but it can include exclusive binding). Generally, but not necessarily, reference to binding means preferential binding.

免疫学的結合は、免疫グロブリン分子と免疫グロブリンが特異的である抗原との間で、例えば、実例としておよび限定ではなく、静電気、イオン性、親水性、および／または疎水性引力もしくは反発力、立体障害力、水素結合、ファンデルワールス力、ならびに他の相互作用の結果として起こるタイプの非共有結合性相互作用を指す。免疫学的結合相互作用の強度または親和性を、その相互作用の解離定数（Ｋｄ）によって表現することができ、より小さいＫｄがより大きい親和性を表す。選択されたポリペプチドの免疫学的結合特性を、当該技術分野で周知の方法を用いて定量化され得る。１つのかかる方法は、抗原結合部位／抗原複合体形成および解離の速度の測定を必要とし、それらの速度は、複合体パートナーの濃度、相互作用の親和性、および両方向の速度に等しく影響を及ぼす幾何学的パラメータに依存する。したがって、「オン速度定数」（Ｋ_ｏｎ）および「オフ速度定数」（Ｋ_ｏｆｆ）の両方を、濃度ならびに実際の会合および解離速度の計算によって決定することができる。Ｋ_ｏｆｆ／Ｋ_ｏｎの比は、親和性に関係しない全てのパラメータの相殺を可能にし、したがって解離定数Ｋｄに等しい。 Immunological binding may occur between an immunoglobulin molecule and an antigen for which the immunoglobulin is specific, for example and without limitation, electrostatic, ionic, hydrophilic, and/or hydrophobic attraction or repulsion, Refers to types of non-covalent interactions that occur as a result of steric hindrance, hydrogen bonding, van der Waals forces, and other interactions. The strength or affinity of an immunological binding interaction can be expressed by the dissociation constant (Kd) of that interaction, with a smaller Kd representing greater affinity. The immunological binding properties of selected polypeptides can be quantified using methods well known in the art. One such method requires measurement of the rates of antigen binding site/antigen complex formation and dissociation, which rates affect the concentration of complex partners, the affinity of interaction, and the rate in both directions equally. Depends on geometric parameters. Therefore, both the "on rate constant" (K _on ) and the "off rate constant" (K _off ) can be determined by calculating the concentration and the actual association and dissociation rates. The ratio K _off /K _on allows the cancellation of all parameters unrelated to affinity and is therefore equal to the dissociation constant Kd.

抗体は、当業者に既知の様々な技術のいずれかによって調製され得る。例えば、ＨａｒｌｏｗａｎｄＬａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８８を参照のこと。対象となるポリペプチドに特異的なモノクローナル抗体は、例えば、ＫｏｈｌｅｒａｎｄＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：５１１−５１９，１９７６の技術およびそれを改良したものを用いて調製され得る。マウスなどのトランスジェニック動物を用いて、ヒト抗体を発現する方法もまた含まれる。例えば、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒｅｔａｌ．，ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１４：８２６，１９９６、Ｌｏｎｂｅｒｇｅｔａｌ．，ＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ１１３：４９−１０１，１９９４、およびＬｏｎｂｅｒｇｅｔａｌ．，ＩｎｔｅｒｎａｌＲｅｖｉｅｗｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１３：６５−９３，１９９５を参照のこと。特定の例には、ＲＥＧＥＮＥＲＥＸ（登録商標）によるＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）プラットフォームが含まれる（例えば、米国特許第６，５９６，５４１号を参照のこと）。 Antibodies can be prepared by any of a variety of techniques known to those of skill in the art. See, for example, Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1988. Monoclonal antibodies specific for the subject polypeptides are described, for example, in Kohler and Milstein, Eur. J. Immunol. 6:511-519, 1976 and modifications thereof. Also included are methods of expressing human antibodies using transgenic animals such as mice. For example, Neuberger et al. , Nature Biotechnology 14:826, 1996, Lonberg et al. , Handbook of Experimental Pharmacology 113:49-101, 1994, and Lonberg et al. , Internal Review of Immunology 13:65-93, 1995. Specific examples include the VELOCIMMUNE® platform by REGENEREX® (see, eg, US Pat. No. 6,596,541).

抗体はまた、ファージディスプレイまたは酵母ディスプレイライブラリの使用により抗体を作製または同定することもできる（例えば、米国特許第７，２４４，５９２号、Ｃｈａｏｅｔａｌ．，ＮａｔｕｒｅＰｒｏｔｏｃｏｌｓ．１：７５５−７６８，２００６を参照のこと）。利用可能なライブラリの非限定的な例には、ヒト抗体レパートリーの構造的多様性が７つの重鎖および７つの軽鎖可変領域遺伝子により表されるヒトコンビナトリアル抗体ライブラリ（ＨｕＣＡＬ）のような、クローンライブラリまたは合成ライブラリが含まれる。これらの遺伝子の組み合わせにより、マスターライブラリ内に４９のフレームワークが生じる。これらのフレームワークに可変性の高い遺伝子カセット（ＣＤＲ＝相補性決定領域）を重ね合わせることにより、膨大なヒト抗体レパートリーを再現することができる。また、軽鎖可変領域、重鎖ＣＤＲ−３をコードするヒトドナー起源の断片と、重鎖ＣＤＲ−１の多様性をコードする合成ＤＮＡと、重鎖ＣＤＲ−２の多様性をコードする合成ＤＮＡとを用いて設計されたヒトライブラリもまた含まれる。使用に適した他のライブラリは、当業者に明らかであろう。 Antibodies can also be generated or identified by use of phage display or yeast display libraries (eg, US Pat. No. 7,244,592, Chao et al., Nature Protocols. 1:755-768, 2006. checking). Non-limiting examples of libraries available include clones such as the human combinatorial antibody library (HuCAL) in which the structural diversity of the human antibody repertoire is represented by seven heavy and seven light chain variable region genes. Includes libraries or synthetic libraries. The combination of these genes results in 49 frameworks within the master library. By superimposing highly variable gene cassettes (CDR=complementarity determining regions) on these frameworks, a vast human antibody repertoire can be reproduced. Also, a human donor-derived fragment encoding a light chain variable region and heavy chain CDR-3, a synthetic DNA encoding diversity of heavy chain CDR-1, and a synthetic DNA encoding diversity of heavy chain CDR-2. Also included are human libraries designed with. Other libraries suitable for use will be apparent to those of skill in the art.

ある特定の実施形態では、本明細書に記載される、抗体およびその抗原結合断片には、重鎖および軽鎖フレームワーク領域（ＦＲ）セット間にそれぞれ挿入された重鎖および軽鎖ＣＤＲセットを含み、ＣＤＲへの支持を提供し、ＣＤＲの互いに対する空間的関係を規定する。本明細書で使用される、「ＣＤＲセット」という用語は、重または軽鎖Ｖ領域の３つの超可変領域を指す。重または軽鎖のＮ末端から進んで、これらの領域を、それぞれ、「ＣＤＲ１」、「ＣＤＲ２」、および「ＣＤＲ３」として表される。したがって、抗原結合部位は、重または軽鎖Ｖ領域のそれぞれからＣＤＲセットを含む、６つのＣＤＲを含む。単一のＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３）を含むポリペプチドは、本明細書では「分子認識単位」と称される。多数の抗原−抗体複合体の結晶解析により、ＣＤＲのアミノ酸残基が、結合抗原との広範な接触を形成し、その最も広範な抗原接触が重鎖ＣＤＲ３とのものであることは実証されている。したがって、分子認識部位は、主として抗原結合部位の特異性を担っている。 In certain embodiments, the antibodies and antigen-binding fragments thereof described herein include heavy and light chain CDR sets inserted between heavy and light chain framework region (FR) sets, respectively. It provides support for the CDRs and defines the spatial relationship of the CDRs to each other. As used herein, the term "CDR set" refers to the three hypervariable regions of heavy or light chain V regions. Proceeding from the N-terminus of the heavy or light chain, these regions are designated as "CDR1", "CDR2", and "CDR3", respectively. Thus, the antigen binding site comprises 6 CDRs, including CDR sets from each of the heavy or light chain V regions. A polypeptide that comprises a single CDR (eg, CDR1, CDR2, or CDR3) is referred to herein as a "molecular recognition unit." Crystallographic analysis of multiple antigen-antibody complexes has demonstrated that the amino acid residues of the CDRs make extensive contacts with the bound antigen, the most extensive antigen contacts being with the heavy chain CDR3. There is. Therefore, the molecular recognition site is mainly responsible for the specificity of the antigen binding site.

本明細書で使用される、「ＦＲセット」という用語は、重または軽鎖Ｖ領域のＣＤＲセットのＣＤＲを枠組みする４つの隣接アミノ酸配列を指す。いくつかのＦＲ残基は、結合抗原と接触し得るが、ＦＲ、特にＣＤＲに直接隣接するＦＲ残基は、主として、抗原結合部位へのＶ領域のフォールディングを担う。ＦＲ内では、ある特定のアミノ酸残基およびある特定の構造特徴が非常に高度に保存される。この点に関して、全てのＶ領域配列は、約９０アミノ酸残基の内部ジスルフィドループを含有する。Ｖ領域が結合部位へとフォールディングすると、ＣＤＲは、抗原結合面を形成する突出ループモチーフとして提示される。その正確なＣＤＲアミノ酸配列に関係なく、ある特定の「正準」構造にフォールディングされたＣＤＲループ形状に影響を及ぼすＦＲの保存構造領域があることは、一般に認知されている。さらに、ある特定のＦＲ残基は、抗体重鎖および軽鎖の相互作用を安定させる非共有結合性ドメイン間接触に関与することは公知である。 As used herein, the term "FR set" refers to the four contiguous amino acid sequences that frame the CDRs of a CDR set of heavy or light chain V regions. Although some FR residues may contact the binding antigen, FRs, especially the FR residues immediately adjacent to the CDRs, are primarily responsible for folding the V region into the antigen binding site. Within the FR, certain amino acid residues and certain structural features are very highly conserved. In this regard, all V region sequences contain an internal disulfide loop of approximately 90 amino acid residues. When the V region folds into the binding site, the CDRs are presented as a protruding loop motif that forms the antigen binding surface. It is generally accepted that there are conserved structural regions of the FR that affect the CDR loop shape folded into a particular "canonical" structure, regardless of its exact CDR amino acid sequence. Furthermore, certain FR residues are known to be involved in noncovalent interdomain contacts that stabilize antibody heavy and light chain interactions.

免疫グロブリン可変ドメインの構造および位置は、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ｅｔａｌ．，ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ．４ｔｈＥｄｉｔｉｏｎ．ＵＳＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓ．１９８７への言及およびその最新版によって決定され得る。 The structure and location of immunoglobulin variable domains is described in Kabat, E.; A. et al. , Sequences of Proteins of Immunological Interest. 4th Edition. US Department of Health and Human Services. 1987 and its latest version.

「モノクローナル」抗体もまた含まれ、同種抗体集団を指し、該モノクローナル抗体は、エピトープの選択的結合に関与する（天然に存在するまたは天然に存在しない）アミノ酸からなる。モノクローナル抗体は、単一のエピトープに対する、高度に特異的である。「モノクローナル抗体」という用語は、無傷モノクローナル抗体および完全長モノクローナル抗体だけでなく、それらの断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２，Ｆｖ）、一本鎖（ＳｃＦｖ）、そのバリアント、抗原結合部分を含む融合タンパク質、ヒト化モノクローナル抗体、キメラモノクローナル抗体、ならびに必要とされる特異性およびエピトープに結合する能力の抗原結合断片（エピトープ認識部位）を含む任意の他の修飾形態の免疫グロブリン分子も包含する。それは、抗体源または抗体を作製する手法（例えば、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、トランスジェニック動物による）に関して限定することを意図したものではない。この用語は、全免疫グロブリン、ならびに「抗体」の定義の下で上述の断片などを含む。 "Monoclonal" antibodies are also included and refer to a cognate antibody population in which the monoclonal antibodies consist of amino acids (naturally occurring or non-naturally occurring) involved in the selective binding of epitopes. Monoclonal antibodies are highly specific for a single epitope. The term "monoclonal antibody" refers to intact and full-length monoclonal antibodies, as well as fragments thereof (Fab, Fab', F(ab')2, Fv), single chain (ScFv), variants thereof, antigens. Fusion proteins containing a binding moiety, humanized monoclonal antibodies, chimeric monoclonal antibodies, and any other modified form of immunoglobulin molecule containing an antigen binding fragment (epitope recognition site) with the required specificity and ability to bind an epitope. Also includes. It is not intended to be limiting with respect to the source of the antibody or the technique by which the antibody is made (eg, by hybridoma, phage selection, recombinant expression, transgenic animals). The term includes whole immunoglobulins as well as the fragments described above under the definition of "antibody".

タンパク質分解酵素パパインは、ＩｇＧ分子を選択的に切断して、いくつかの断片を生じさせ、そのうちの２つ（Ｆ（ａｂ）断片）はそれぞれ、無傷抗原結合部位を含む共有結合性ヘテロ二量体を含む。酵素ペプシンは、ＩｇＧ分子を切断して、両方の抗原結合部位を含むＦ（ａｂ’）２断片を含む、いくつかの断片を生じさせることができる。本発明のある特定の実施形態に従って使用するためのＦｖ断片は、ＩｇＭのおよび稀にＩｇＧまたはＩｇＡ免疫グロブリン分子の選択的タンパク質分解的切断によって生成することができる。しかしながら、Ｆｖ断片は、より一般的には、当該技術分野で既知の組換え技術を用いて得られる。Ｆｖ断片は、天然抗体分子の抗原認識および結合能力の大部分を保持する抗原結合部位を含む非共有結合性ＶＨ：：ＶＬヘテロ二量体を含む。Ｉｎｂａｒｅｔａｌ．，ＰＮＡＳＵＳＡ．６９：２６５９−２６６２，１９７２、Ｈｏｃｈｍａｎｅｔａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．１５：２７０６−２７１０，１９７６、およびＥｈｒｌｉｃｈｅｔａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９：４０９１−４０９６，１９８０を参照のこと。 The proteolytic enzyme papain selectively cleaves IgG molecules to yield several fragments, two of which (F(ab) fragments) are each a covalent heterodimer containing an intact antigen binding site. Including the body. The enzyme pepsin can cleave IgG molecules to yield several fragments, including F(ab')2 fragments that contain both antigen binding sites. Fv fragments for use in accordance with certain embodiments of the invention can be generated by selective proteolytic cleavage of IgM and rarely IgG or IgA immunoglobulin molecules. However, Fv fragments are more commonly obtained using recombinant techniques known in the art. Fv fragments include non-covalent VH::VL heterodimers that contain an antigen binding site that retains most of the antigen recognition and binding ability of the natural antibody molecule. Inbar et al. , PNAS USA. 69:2659-2662,1972, Hochman et al. , Biochem. 15:2706-2710, 1976, and Ehrlich et al. , Biochem. 19:4091-4096, 1980.

ある特定の実施形態では、一本鎖ＦｖまたはｓｃＦＶ抗体が企図される。例えば、Ｋａｐｐａ体（Ｉｌｌｅｔａｌ．，Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．１０：９４９−５７，１９９７）、ミニボディ（Ｍａｒｔｉｎｅｔａｌ．，ＥＭＢＯＪ１３：５３０５−９，１９９４）、ダイアボディ（Ｈｏｌｌｉｇｅｒｅｔａｌ．，ＰＮＡＳ９０：６４４４−８，１９９３）、またはＪａｎｕｓｉｎｓ（Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒｅｔａｌ．，ＥＭＢＯＪ１０：３６５５−５９，１９９１およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒｅｔａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．ＣａｎｃｅｒＳｕｐｐｌ．７：５１−５２，１９９２）は、標準的な分子生物学技術を用い、所望の特異性を有する抗体の選択に関しては本出願の教示に従って、調製することができる。 In certain embodiments, single chain Fv or scFV antibodies are contemplated. For example, Kappa body (Ill et al., Prot. Eng. 10:949-57, 1997), minibody (Martin et al., EMBO J 13:5305-9, 1994), diabody (Holliger et al.,). PNAS 90:6444-8, 1993), or Janusins (Traunecker et al., EMBO J 10:3655-59, 1991 and Traunecker et al., Int. J. Cancer Supl. 7:51-52, 1992). Standard molecular biology techniques can be used to prepare antibodies according to the teachings of this application for selection of antibodies with the desired specificity.

一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）ポリペプチドは、ペプチドをコードするリンカーによって連結されたＶＨをコードする遺伝子およびＶＬをコードする遺伝子を含む遺伝子融合体から発現される共有結合で連結されたＶＨ：：ＶＬヘテロ二量体である。Ｈｕｓｔｏｎｅｔａｌ．（ＰＮＡＳＵＳＡ．８５（１６）：５８７９−５８８３，１９８８）。自然に凝集しているが、化学的に分離されている軽および重ポリペプチド鎖を、抗体Ｖ領域から、抗原結合部位の構造と実質的に同様の三次元構造にフォールディングすることとなるｓＦｖ分子に変換するための化学構造を識別する多数の方法が記載されている。例えば、Ｈｕｓｔｏｎらによる米国特許第５，０９１，５１３号および同第５，１３２，４０５号、ならびにＬａｄｎｅｒらによる米国特許第４，９４６，７７８号を参照のこと。 Single chain Fv (sFv) polypeptides are covalently linked VH::VL expressed from a gene fusion comprising a VH-encoding gene and a VL-encoding gene linked by a peptide-encoding linker. It is a heterodimer. Huston et al. (PNAS USA. 85(16):5879-5883, 1988). A sFv molecule that will fold naturally aggregated but chemically separated light and heavy polypeptide chains from the antibody V region into a three-dimensional structure that is substantially similar to the structure of the antigen binding site. A number of methods have been described to identify the chemical structure for conversion to. See, for example, US Pat. Nos. 5,091,513 and 5,132,405 by Huston et al. and US Pat. No. 4,946,778 by Ladner et al.

ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、「ダイアボディ」の形態である。ダイアボディは、ポリペプチドの多量体であって、各ポリペプチドが、免疫グロブリン軽鎖の結合領域を含む第１のドメインと、免疫グロブリン重鎖の結合領域を含む第２のドメインとを含み、この２つのドメインが（例えば、ペプチドリンカーによって）連結されているが、互いに会合して抗原結合部位を形成することはできない多量体である：抗原結合部位は、多量体内の１つのポリペプチドの第１のドメインと多量体内の別のポリペプチドの第２のドメインとの会合によって形成される（ＷＯ９４／１３８０４）。抗体のｄＡｂ断片は、ＶＨドメインからなる（Ｗａｒｄｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３４１：５４４−５４６，１９８９）。ダイアボディおよび他の多価または多重特異性の断片は、例えば、遺伝子融合によって構築され得る（ＷＯ９４／１３８０４、およびＨｏｌｌｉｇｅｒｅｔａｌ．，ＰＮＡＳＵＳＡ．９０：６４４４−６４４８，１９９３）を参照のこと）。 In certain embodiments, the antibodies described herein are in the form of "diabodies." A diabody is a multimer of polypeptides, each polypeptide comprising a first domain comprising a binding region of an immunoglobulin light chain and a second domain comprising a binding region of an immunoglobulin heavy chain, The two domains are multimers that are linked (eg, by a peptide linker) but are unable to associate with each other to form an antigen-binding site: An antigen-binding site is the first polypeptide of a polypeptide in a multimer. It is formed by the association of one domain with the second domain of another polypeptide in a multimer (WO94/13804). The dAb fragment of the antibody consists of a VH domain (Ward et al., Nature 341:544-546, 1989). Diabodies and other multivalent or multispecific fragments can be constructed, for example, by gene fusion (see WO94/13804, and Holliger et al., PNAS USA. 90:6444-6448, 1993). .

ＣＨ３ドメインに結合したｓｃＦｖを含むミニボディもまた含まれる（Ｈｕｅｔａｌ．，ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．５６：３０５５−３０６１，１９９６を参照のこと）。Ｗａｒｄｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．３４１：５４４−５４６，１９８９、Ｂｉｒｄｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２４２：４２３−４２６，１９８８、Ｈｕｓｔｏｎｅｔａｌ．，ＰＮＡＳＵＳＡ．８５：５８７９−５８８３，１９８８）、ＰＣＴ／ＵＳ９２／０９９６５、ＷＯ９４／１３８０４、およびＲｅｉｔｅｒｅｔａｌ．，ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈ．１４：１２３９−１２４５，１９９６も参照のこと。 Also included are minibodies that include the scFv bound to the CH3 domain (see Hu et al., Cancer Res. 56:3055-3061, 1996). Ward et al. , Nature. 341:544-546, 1989, Bird et al. , Science. 242:423-426, 1988, Huston et al. , PNAS USA. 85:5879-5883, 1988), PCT/US92/09965, WO94/13804, and Reiter et al. , Nature Biotech. 14:1239-1245, 1996.

二重特異性抗体を用いようとする場合、これらは、従来の二重特異性抗体であってよく、様々な方法（ＨｏｌｌｉｇｅｒａｎｄＷｉｎｔｅｒ，ＣｕｒｒｅｎｔＯｐｉｎｉｏｎＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．４：４４６−４４９，１９９３）で製造することができ、例えば、化学的にもしくはハイブリッドハイブリドーマから調製してもよいか、または上述の二重特異性抗体断片のいずれであってもよい。ダイアボディおよびｓｃＦｖは、可変ドメインのみを用いて、潜在的に抗イディオタイプ反応の効果を低減して、Ｆｃ領域なしで構築することができる。 If bispecific antibodies are to be used, they may be conventional bispecific antibodies and are prepared by a variety of methods (Holliger and Winter, Current Opinion Biotechnol. 4:446-449, 1993). It may be prepared, for example, chemically or from a hybrid hybridoma, or may be any of the bispecific antibody fragments described above. Diabodies and scFvs can be constructed without the Fc region, using only variable domains, potentially reducing the effects of anti-idiotypic responses.

二重特異性全抗体とは反対に、二重特異性ダイアボディは、容易に構築することができ、かつ大腸菌に発現させることができるため、特に有用であり得る。適切な結合特異性のダイアボディ（および抗体断片などの多くの他のポリペプチド）は、ライブラリからのファージディスプレイ（ＷＯ９４／１３８０４）を用いて、容易に選択することができる。ダイアボディの一方のアームを、例えば、抗原Ｘに対して特異性を有するように定常的に維持する場合には、他方のアームを多様化したライブラリを作製して、適切な特異性を有する抗体を選択することができる。二重特異性全抗体は、「ノブ・イントゥ・ホール（ｋｎｏｂｓ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅｓ）」操作によって作製され得る（Ｒｉｄｇｅｗａｙｅｔａｌ．，ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇ．，９：６１６−６２１，１９９６）。 Bispecific diabodies, as opposed to bispecific whole antibodies, can be particularly useful because they can be easily constructed and expressed in E. coli. Diabodies of appropriate binding specificity (and many other polypeptides such as antibody fragments) can be readily selected using phage display from libraries (WO94/13804). For example, when one arm of the diabody is constantly maintained so as to have specificity for the antigen X, a library in which the other arm is diversified is prepared to prepare an antibody having an appropriate specificity. Can be selected. Bispecific whole antibodies can be made by the "knobs-into-holes" procedure (Ridgeway et al., Protein Eng., 9:616-621, 1996).

ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）の形態で提供され得る。ＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）は、ヒンジ領域が除去されたＩｇＧ４抗体である（ＧｅｎＭａｂＵｔｒｅｃｈｔ，ＴｈｅＮｅｔｈｅｒｌａｎｄｓを参照のこと、例えば、ＵＳ２００９／０２２６４２１も参照のこと）。この抗体技術は、現行の小さい抗体形式（ａｎｔｉｂｏｄｙｆｏｒｍａｔ）よりも長い治療域（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｗｉｎｄｏｗ）を有すると予期される安定的なより小さい抗体形式を作り出す。ＩｇＧ４抗体は、不活性であると考えられるので、免疫系と相互作用しない。完全ヒトＩｇＧ４抗体は、その抗体のヒンジ領域を除去することによって改変され、それにより、対応する無傷ＩｇＧ４（ＧｅｎＭａｂ、Ｕｔｒｅｃｈｔ）と比較して異なる安定性特性を有する半分子断片が得られ得る。ＩｇＧ４分子を半分にすることにより、同族抗原（例えば、疾患標的）に結合し得る１つの領域だけがＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）に残され、したがって、そのＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）は、標的細胞上のただ１つの部位に一価で結合する。 In certain embodiments, the antibodies described herein may be provided in the form of UniBody®. UniBody® is an IgG4 antibody with the hinge region removed (see GenMab Utrecht, The Netherlands, see also US 2009/0226421). This antibody technology produces stable, smaller antibody formats that are expected to have longer therapeutic windows than the current smaller antibody formats. IgG4 antibodies appear to be inactive and therefore do not interact with the immune system. A fully human IgG4 antibody can be modified by removing the hinge region of the antibody, resulting in a half-molecular fragment with different stability properties compared to the corresponding intact IgG4 (GenMab, Utrecht). By halving the IgG4 molecule, only one region that can bind to cognate antigens (eg, disease targets) is left in UniBody®, and therefore the UniBody® is only available on target cells. Monovalently binds to one site.

ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ナノボディの形態をとり得る。ミニボディは、単一の遺伝子によってコードされ、ほとんど全ての原核生物および真核生物の宿主、例えば、大腸菌（米国特許第６，７６５，０８７号を参照のこと）、カビ（例えば、ＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓまたはＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）および酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｋｌｕｙｖｅｒｍｙｃｅｓ、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ、またはＰｉｃｈｉａ（例えば、米国特許第６，８３８，２５４号を参照のこと）において効率的に産生される。その産生プロセスは、拡大でき、数キログラムの量のナノボディが産生されている。ナノボディは、長い有効期間を有する使用準備済みの溶液として製剤化され得る。ナノクローン（Ｎａｎｏｃｌｏｎｅ）法（例えば、ＷＯ０６／０７９３７２を参照のこと）は、Ｂ細胞の自動化されたハイスループット選択に基づいて、所望の標的に対するナノボディを作製するための専有の方法である。 In certain embodiments, the antibodies described herein may be in the form of Nanobodies. Minibodies are encoded by a single gene and are used in almost all prokaryotic and eukaryotic hosts such as E. coli (see US Pat. No. 6,765,087), mold (eg Aspergillus or Trichoderma). ) And yeast (eg, Saccharomyces, Kluyvermyces, Hansenula, or Pichia (see, eg, US Pat. No. 6,838,254).) The production process can be scaled up to several kilograms. Amounts of Nanobodies have been produced.The Nanobodies can be formulated as ready-to-use solutions with long shelf life.The Nanoclone method (see, eg, WO06/079372) uses B cell It is a proprietary method for making Nanobodies to desired targets based on automated high-throughput selection.

ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ヒト化されている。これらの実施形態は、通常、組換え技法を用いて調製される、非ヒト種の免疫グロブリンに由来する抗原結合部位、ならびにヒト免疫グロブリンの構造および／または配列に基づくその分子の残りの免疫グロブリン構造を有する、キメラ分子を指す。抗原結合部位は、定常ドメイン上に融合した完全な可変ドメインまたは可変ドメインの適切なフレームワーク領域に移植したＣＤＲだけのいずれかを含み得る。エピトープ結合部位は、野生型であってもよいし、１つ以上のアミノ酸置換によって改変されてもよい。これにより、ヒト個体における免疫原としての定常領域は排除されるが、外来可変領域に対する免疫応答の可能性は残る（ＬｏＢｕｇｌｉｏｅｔａｌ．，ＰＮＡＳＵＳＡ８６：４２２０−４２２４，１９８９、Ｑｕｅｅｎｅｔａｌ．，ＰＮＡＳＵＳＡ．８６：１００２９−１００３３，１９８８、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．３３２：３２３−３２７，１９８８）。抗体をヒト化するための例示的な方法としては、米国特許第７，４６２，６９７号に記載されている方法が挙げられる。 In certain embodiments, the antibody or antigen binding fragment thereof is humanized. These embodiments generally include antigen binding sites derived from immunoglobulins of non-human species, and the remaining immunoglobulins of the molecule based on the structure and/or sequence of human immunoglobulins, which are typically prepared using recombinant techniques. Refers to a chimeric molecule that has a structure. The antigen binding site may comprise either the complete variable domain fused onto the constant domain or only the CDRs grafted into the appropriate framework regions of the variable domain. The epitope binding site may be wild type or modified by one or more amino acid substitutions. This eliminates the constant region as an immunogen in human individuals, but leaves the possibility of an immune response to the foreign variable region (LoBuglio et al., PNAS USA 86:4220-4224,1989, Queen et al.,). PNAS USA.86:10029-10033, 1988, Riechmann et al., Nature. 332:323-327, 1988). Exemplary methods for humanizing antibodies include those described in US Pat. No. 7,462,697.

別のアプローチは、ヒト由来の定常領域を提供することだけでなく、可変領域をできるだけヒトの形態に近く再形成するように可変領域を改変することにも注目している。重鎖と軽鎖の両方の可変領域が、所与の種において比較的保存されており、推定的にはＣＤＲに対して足場を提供する、４つのフレームワーク領域（ＦＲ）に隣接した３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）（それは、問題となっているエピトープに応じて異なり、結合能を決定する）を含むことが知られている。非ヒト抗体が、特定のエピトープに対して調製されるとき、可変領域は、非ヒト抗体に由来するＣＤＲを、改変するべきヒト抗体に存在するＦＲに移植することによって、「再形成」または「ヒト化」され得る。このアプローチの様々な抗体への適用は、Ｓａｔｏｅｔａｌ．，ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．５３：８５１−８５６，１９９３、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３−３２７，１９８８、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２３９：１５３４−１５３６，１９８８、Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈｅｔａｌ．，ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．４：７７３−３７８３，１９９１、Ｍａｅｄａｅｔａｌ．，ＨｕｍａｎＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓＨｙｂｒｉｄｏｍａ２：１２４−１３４，１９９１、Ｇｏｒｍａｎｅｔａｌ．，ＰＮＡＳＵＳＡ．８８：４１８１−４１８５，１９９１、Ｔｅｍｐｅｓｔｅｔａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ９：２６６−２７１，１９９１、Ｃｏｅｔａｌ．，ＰＮＡＳＵＳＡ．８８：２８６９−２８７３，１９９１、Ｃａｒｔｅｒｅｔａｌ．，ＰＮＡＳＵＳＡ．８９：４２８５−４２８９，１９９２、およびＣｏｅｔａｌ．，ＪＩｍｍｕｎｏｌ．１４８：１１４９−１１５４，１９９２によって報告されている。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、全てのＣＤＲ配列を保存している（例えば、マウス抗体からの６つ全てのＣＤＲを含むヒト化マウス抗体）。他の実施形態では、ヒト化抗体は、元の抗体の１つ以上のＣＤＲ「に由来する」１つ以上のＣＤＲとも称される、元の抗体に対して変更された１つ以上のＣＤＲ（１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ）を有する。 Another approach focuses not only on providing human-derived constant regions, but also on modifying the variable regions to reshape them as closely as possible to the human form. The variable regions of both the heavy and light chains are relatively conserved in a given species and putatively into three framework regions (FR) flanking three framework regions that provide the scaffold for the CDRs. It is known to contain a complementarity determining region (CDR), which depends on the epitope in question and determines binding capacity. When a non-human antibody is prepared for a particular epitope, the variable regions are "reformed" or "by re-forming" by grafting the CDRs from the non-human antibody onto the FRs present in the human antibody to be modified. Can be “humanized”. Application of this approach to various antibodies is described in Sato et al. , Cancer Res. 53:851-856, 1993, Riechmann et al. , Nature 332:323-327, 1988, Verhoeyen et al. , Science 239: 1534-1536, 1988, Kettleborough et al. , Protein Engineering. 4:773-3783, 1991, Maeda et al. , Human Antibodies Hybridoma 2:124-134, 1991, Gorman et al. , PNAS USA. 88: 4181-4185, 1991, Tempest et al. , Bio/Technology 9:266-271, 1991, Co et al. , PNAS USA. 88:2869-2873, 1991, Carter et al. , PNAS USA. 89:4285-4289, 1992, and Co et al. , J Immunol. 148: 1149-1154, 1992. In some embodiments, a humanized antibody has all CDR sequences conserved (eg, a humanized mouse antibody that comprises all six CDRs from a mouse antibody). In other embodiments, a humanized antibody is one or more CDR(s) modified from the original antibody, also referred to as one or more CDRs "derived from" one or more CDRs of the original antibody. One, two, three, four, five, six).

ある特定の実施形態では、抗体は、キメラ抗体であり得る。この点において、キメラ抗体は、異なる抗体の異種Ｆｃ部分に作動可能に連結したまたはそうでなければ融合した抗体の抗原結合断片からなる。ある特定の実施形態では、異種Ｆｃドメインは、ヒト起源である。他の実施形態では、異種Ｆｃドメインは、ＩｇＡ（サブクラスＩｇＡ１およびＩｇＡ２を含む）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ（サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含む）、ならびにＩｇＭを含む、親抗体とは異なるＩｇクラスからのものであり得る。さらなる実施形態では、異種Ｆｃドメインは、異なるＩｇクラスのうちの１つ以上からのＣＨ２およびＣＨ３ドメインからなり得る。ヒト化抗体に関して上述のように、キメラ抗体の抗原結合断片は、本明細書に記載される抗体のＣＤＲのうちの１つ以上（例えば、本明細書に記載される抗体のＣＤＲの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つのＣＤＲ）のみを含み得るか、または可変ドメイン全体（ＶＬ、ＶＨ、または両方）を含み得る。 In certain embodiments, the antibody may be a chimeric antibody. In this regard, a chimeric antibody consists of an antigen-binding fragment of an antibody operably linked or otherwise fused to the heterologous Fc portion of a different antibody. In certain embodiments, the heterologous Fc domain is of human origin. In other embodiments, the heterologous Fc domain differs from a parent antibody that comprises IgA (including subclasses IgA1 and IgA2), IgD, IgE, IgG (including subclasses IgG1, IgG2, IgG3, and IgG4), and IgM. It can be from the Ig class. In a further embodiment, the heterologous Fc domain may consist of CH2 and CH3 domains from one or more of the different Ig classes. As described above for humanized antibodies, the antigen-binding fragment of a chimeric antibody is one or more of the CDRs of an antibody described herein (eg, one of the CDRs of an antibody described herein, Only two, three, four, five, six CDRs) may be included, or the entire variable domain (VL, VH, or both) may be included.

いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、標的分子の、「リガンド」、例えば、天然リガンドであるか、またはそれを含む。「リガンド」とは、一般に、生物学的目的を果たすために標的分子（例えば、生体分子）との複合体を形成する物質または分子を指し、一般に、標的分子または標的タンパク質上の部位に結合することによってシグナルを生成する、「タンパク質リガンド」を含む。したがって、ある特定の薬剤は、実際には、標的分子に結合し、シグナルを生成するタンパク質リガンドである。「修飾リガンド」、例えば、薬物動態修飾因子、例えば、免疫グロブリン由来のＦｃ領域に融合しているタンパク質リガンドもまた含まれる。 In some embodiments, the immunomodulatory agent is or comprises a "ligand", eg, natural ligand, of a target molecule. “Ligand” generally refers to a substance or molecule that forms a complex with a target molecule (eg, a biomolecule) to serve a biological purpose and generally binds to a site on the target molecule or target protein. A "protein ligand" is included, which in turn produces a signal. Thus, a particular drug is actually a protein ligand that binds to a target molecule and produces a signal. Also included are "modified ligands", eg, pharmacokinetic modifiers, eg, protein ligands fused to Fc regions from immunoglobulins.

いくつかの実施形態では、免疫調節剤または阻害剤は、アンチセンス剤である。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載される、標的タンパク質、標的配列、および／または標的遺伝子（例えば、Ｓ１ＰＲ、カルシニューリン、ｍＴＯＲ、ＩＤＯ、ＩＭＰＤＨ、サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体、Ｂ細胞受容体、キナーゼ）は、オリゴヌクレオチドベースの薬剤または方法を含む、任意の様々なアンチセンス剤によって標的化する。アンチセンス剤またはオリゴヌクレオチドは、典型的には、標的配列内の領域を標的化する（例えば、領域に対して十分に補完的であるか、または領域に特異的にハイブリダイズする）塩基配列を含み、任意に、以下のうちの１つ以上を含む：ｍＲＮＡのＡＵＧ開始コドンを含むか、または取り囲む領域（例えば、開始コドンの上流の領域、開始コドンの下流の領域、開始コドンを含む領域）、予め処理したｍＲＮＡの３’または５’スプライス部位、スプライス受容体部位の上流のピリミジンリッチなまたはポリピリミジントラクト、エクソン−イントロン境界、イントロン−エクソン境界、分岐部位、エクソンスプライシングエンハンサー構成要素、５’および３’未翻訳領域、ならびにポリアデニル化シグナル配列。 In some embodiments, the immunomodulator or inhibitor is an antisense agent. Thus, in some embodiments, a target protein, target sequence, and/or target gene (eg, S1PR, calcineurin, mTOR, IDO, IMPDH, cytokine and/or cytokine receptor, B, B as described herein, Cellular receptors, kinases) are targeted by any of a variety of antisense agents, including oligonucleotide-based agents or methods. Antisense agents or oligonucleotides typically base sequences that target (eg, are sufficiently complementary to, or specifically hybridize to) a region within the target sequence. Including and optionally including one or more of the following: regions containing or surrounding the AUG start codon of an mRNA (eg, regions upstream of the start codon, regions downstream of the start codon, regions containing the start codon). 3'or 5'splice site of pre-treated mRNA, pyrimidine-rich or polypyrimidine tract upstream of splice acceptor site, exon-intron boundary, intron-exon boundary, branch site, exon splicing enhancer component, 5' And 3'untranslated region, and polyadenylation signal sequence.

ある特定の実施形態では、アンチセンス剤は、投与を必要とする対象への投与時、または細胞、例えば、筋肉細胞との接触時に、標的遺伝子の発現を有効に修飾する（例えば、発現を減少させる、スプライシングを変更させる）ことができる。アンチセンス剤が、（ａ）哺乳動物細胞（例えば、筋肉細胞）によって能動的に取り込まれる能力を有し、（ｂ）取り込まれると、標的ＲＮＡと約４５℃超のＴｍで二重鎖を形成するときに、この必要条件は、典型的には、満たされる。 In certain embodiments, the antisense agent effectively modifies (eg, reduces expression of) the target gene upon administration to a subject in need thereof, or upon contact with a cell, eg, muscle cell. Splicing can be changed). The antisense agent has (a) the ability to be actively taken up by mammalian cells (eg, muscle cells), and (b) when taken up, forms a duplex with the target RNA and a Tm above about 45°C. When doing so, this requirement is typically met.

ある特定の「アンチセンス剤」は、「アンチセンスオリゴヌクレオチド」、「アンチセンスオリゴマー」、および「オリゴヌクレオチド」を含み、ヌクレオチドの直鎖配列またはヌクレオチド類似体を指し、核酸塩基が、ワトソンクリック塩基対によってＲＮＡ中の標的配列にハイブリダイズして、標的配列内のオリゴヌクレオチド：ＲＮＡのヘテロ二重鎖を形成することができる。「アンチセンスオリゴヌクレオチド」、「アンチセンスオリゴマー」、「オリゴマー」、および「化合物」という用語は、互換的に使用され、オリゴヌクレオチドを指し得る。環状サブユニットは、リボースまたは別のペントース糖、またはある特定の実施形態では、モルホリノ基（以下のモルホリノオリゴヌクレオチドの記載を参照のこと）に基づき得る。当該技術分野で周知の他のアンチセンス剤の中に、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）、トリシクロ−ＤＮＡオリゴマー、トリシクロ−ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド、および２’−Ｏ−メチルオリゴヌクレオチドもまた、企図される。 Certain "antisense agents" include "antisense oligonucleotides," "antisense oligomers," and "oligonucleotides," which refer to linear sequences or nucleotide analogs of nucleotides, where the nucleobase is a Watson-Crick base. The pair can hybridize to the target sequence in the RNA to form an oligonucleotide:RNA heteroduplex within the target sequence. The terms "antisense oligonucleotide," "antisense oligomer," "oligomer," and "compound" are used interchangeably and may refer to an oligonucleotide. The cyclic subunit may be based on ribose or another pentose sugar, or in certain embodiments, a morpholino group (see description of morpholino oligonucleotides below). Peptide nucleic acid (PNA), locked nucleic acid (LNA), tricyclo-DNA oligomers, tricyclo-phosphorothioate oligonucleotides, and 2'-O-methyl oligonucleotides are also among other antisense agents known in the art. Intended.

ある特定の実施形態では、「標的配列」は、ｍＲＮＡのＡＵＧ開始コドンを含むか、または取り囲む領域（例えば、開始コドンの上流の領域、開始コドンの下流の領域、開始コドンを含む領域）、予め処理したｍＲＮＡの３’または５’スプライス部位、分岐点、または３’−ＵＴＲもしくはポリアデニル化シグナルなどの３’非コードｍＲＮＡ領域を含む。標的配列は、エクソン内またはイントロン内であり得る。スプライス部位のための標的配列は、予め処理したｍＲＮＡ（プレｍＲＮＡ）中の通常のスプライス受容体ジャンクションの１〜約２５塩基対の下流にその５’末端を有するｍＲＮＡ配列を含み得る。スプライス領域のための例示的な標的配列は、スプライス部位を含む予め処理したｍＲＮＡの任意の領域であるか、またはエキソンコード配列内に完全に含有され、またはスプライス受容体部位もしくはドナー部位にまたがる。アンチセンス剤は、より一般的には、本明細書に記載され、当該技術分野で周知の様式で標的の核酸を標的としている、例えば、それに特異的にハイブリダイズされるか、またはそれに対して相補的であるとき、生物学的に関連する標的を「標的としている」と言われている。標的領域または標的配列の他の例は、本明細書に記載されている。 In certain embodiments, a "target sequence" comprises a region that includes or surrounds the AUG start codon of an mRNA (eg, a region upstream of the start codon, a region downstream of the start codon, a region containing the start codon), Includes 3'or 5'splice sites, branch points, or 3'non-coding mRNA regions such as 3'-UTR or polyadenylation signals of processed mRNA. The target sequence can be within exons or within introns. Target sequences for splice sites may include mRNA sequences having their 5'ends 1 to about 25 base pairs downstream of the normal splice receptor junction in pre-processed mRNA (pre-mRNA). An exemplary target sequence for the splice region is any region of the preprocessed mRNA that contains the splice site, or is completely contained within the exon coding sequence, or spans the splice acceptor or donor sites. Antisense agents are more generally described herein and are targeted to, eg, specifically hybridized to, or against, a target nucleic acid in a manner well known in the art. When complementary, they are said to be "targeting" biologically relevant targets. Other examples of target regions or target sequences are described herein.

「標的化配列」という用語は、ＲＮＡ中の「標的配列」に対して相補的である（さらに、実質的に相補的であることを意味する）オリゴヌクレオチドにおける配列である。アンチセンス剤の全配列または一部のみが、標的配列に対して相補的であり得る。例えば、２０〜３０の塩基を有するアンチセンス剤において、約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、または２９は、標的領域に対して相補的である標的化配列であり得る。典型的には、標的配列は、オリゴヌクレオチドにおいて連続的な塩基で形成されるが、代替として、例えば、オリゴヌクレオチドの反対の末端から一緒に置かれたときに、標的配列をまたがる配列を構成する、非連続的な配列で形成されてもよい。 The term "targeting sequence" is a sequence in an oligonucleotide that is complementary to (also meant to be substantially complementary to) a "target sequence" in RNA. All or only part of the antisense agent can be complementary to the target sequence. For example, in an antisense agent having 20 to 30 bases, about 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23. , 24, 25, 26, 27, 28, or 29 can be targeting sequences that are complementary to the target region. Typically, the target sequence is formed of contiguous bases in the oligonucleotide, but alternatively constitutes a sequence that spans the target sequence when placed together, eg, from opposite ends of the oligonucleotide. , May be formed in a non-continuous array.

標的配列は、標的化配列に対して「概ねの」または「実質的な」相補性を有し得、まだ本開示の目的のために機能し得、すなわち、標的化配列は、依然として「相補的」であり得る。好ましくは、本開示で使用されるオリゴヌクレオチドは、１０ヌクレオチド中、標的配列と最大で１つのミスマッチ、好ましくは２０ヌクレオチド中、最大で１つのミスマッチを有する。あるいは、使用されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、例示的なアンチセンス標的化配列と、少なくとも９０％の配列相同性もしくは同一性、少なくとも９５％の配列相同性もしくは同一性、または少なくとも９８％の配列相同性もしくは同一性を有する。 The target sequence may have "general" or "substantial" complementarity to the targeting sequence and still function for the purposes of the present disclosure, ie the targeting sequence is still "complementary". Can be. Preferably, the oligonucleotides used in the disclosure have at most 1 mismatch with the target sequence in 10 nucleotides, preferably at most 1 mismatch in 20 nucleotides. Alternatively, the antisense oligonucleotide used has at least 90% sequence homology or identity, at least 95% sequence homology or identity, or at least 98% sequence homology with an exemplary antisense targeting sequence. Having sex or identity.

（ｉ）修飾された骨格構造、例えば、天然に存在するオリゴヌクレオチドおよびポリヌクレオチドにおいて見出される標準的なホスホジエステル連結以外の骨格、ならびに／または（ｉｉ）修飾された糖部分、例えば、リボースもしくはデオキシリボース部分よりもむしろモルホリノ部分を有するオリゴヌクレオチドを含む、天然に存在しないオリゴヌクレオチドまたは「オリゴヌクレオチド類似体」が含まれる。オリゴヌクレオチド類似体は、ワトソンクリック塩基対合によって標準的なポリヌクレオチド塩基に水素結合をすることができる塩基を支持し、類似体骨格は、オリゴヌクレオチド類似体分子と、標準的なポリヌクレオチド（例えば、一本鎖ＲＮＡまたは一本鎖ＤＮＡ）中の塩基との間のこのような水素結合を配列特異的様態で可能にする様式で塩基を提示する。類似体の特定の例は、実質的に荷電していない、リン含有骨格を有するものを含む。 (I) a modified backbone structure, eg a backbone other than the standard phosphodiester linkages found in naturally occurring oligonucleotides and polynucleotides, and/or (ii) a modified sugar moiety, eg ribose or deoxy. Included are non-naturally occurring oligonucleotides or "oligonucleotide analogs" that include oligonucleotides that have a morpholino moiety rather than a ribose moiety. Oligonucleotide analogs support bases that can hydrogen bond to standard polynucleotide bases by Watson-Crick base pairing, and the analog backbone includes oligonucleotide analog molecules and standard polynucleotide (eg, , Single-stranded RNA or single-stranded DNA) presents bases in a manner that allows such hydrogen bonding with bases in a sequence-specific manner. Specific examples of analogs include those that have a phosphorus-containing backbone that is substantially uncharged.

「ヌクレアーゼ耐性」オリゴヌクレオチドは、非ハイブリダイズ形態またはハイブリダイズ形態において、その骨格が、（例えば、３’−エキソヌクレアーゼ、エンドヌクレアーゼ、ＲＮａｓｅＨなどのエキソヌクレアーゼによって）体内の通常の細胞外および細胞内ヌクレアーゼによるヌクレアーゼ切断に対して実質的に耐性であるものを指す。すなわち、オリゴヌクレオチドが曝される体内で通常のヌクレアーゼ条件下で、そのオリゴヌクレオチドがヌクレアーゼ切断をほとんどまたはまったく示さない。「ヌクレアーゼ耐性ヘテロ二重鎖」は、二本鎖のＲＮＡ／ＲＮＡまたはＲＮＡ／ＤＮＡ複合体を切断することができる、細胞内および細胞外ヌクレアーゼによるインビボ分解に対してヘテロ二重鎖が実質的に耐性となるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドがその相補的な標的と結合することによって形成されたヘテロ二重鎖を指す。「ヘテロ二重鎖」は、アンチセンスオリゴヌクレオチドと、標的ＲＮＡの相補的部分との間の二重鎖を指す。 "Nuclease-resistant" oligonucleotides, in their non-hybridized or hybridized form, have their backbones (eg, by 3'-exonucleases, endonucleases, exonucleases such as RNase H) normal extracellular and cellular in the body. Refers to those that are substantially resistant to nuclease cleavage by internal nucleases. That is, under normal nuclease conditions in the body to which it is exposed, the oligonucleotide exhibits little or no nuclease cleavage. A "nuclease-resistant heteroduplex" is a heteroduplex that is capable of cleaving a double-stranded RNA/RNA or RNA/DNA complex, such that the heteroduplex is substantially free of in vivo degradation by intracellular and extracellular nucleases. Refers to a heteroduplex formed by the binding of an antisense oligonucleotide to its complementary target so that it becomes resistant. "Heteroduplex" refers to the duplex between the antisense oligonucleotide and the complementary portion of the target RNA.

ある特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、細胞膜、例えば、筋肉細胞膜を横切る能動または促進輸送のための基質として認識される。標的ＲＮＡと安定的な二本鎖を形成するオリゴヌクレオチドの能力はまた、標的に関するアンチセンスオリゴヌクレオチドの長さおよび相補性の程度、Ｇ：Ｃ塩基マッチとＡ：Ｔ塩基マッチとの比、ならびに任意のミスマッチの塩基の位置を含む、オリゴヌクレオチド骨格の他の特性に関し得る。細胞ヌクレアーゼに抵抗するアンチセンスオリゴヌクレオチドの能力は、生存、および細胞の細胞質への薬剤の最終的な送達を促進し得る。したがって、ある特定の実施形態は、ヌクレアーゼ耐性であるかまたは実質的にヌクレアーゼ耐性である天然に存在しないアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。 In certain embodiments, antisense oligonucleotides are recognized as substrates for active or facilitated transport across cell membranes, eg, muscle cell membranes. The ability of the oligonucleotide to form a stable duplex with the target RNA also includes the length and degree of complementarity of the antisense oligonucleotide with respect to the target, the ratio of G:C base match to A:T base match, and It may relate to other properties of the oligonucleotide backbone, including the position of any mismatched bases. The ability of antisense oligonucleotides to resist cellular nucleases can facilitate survival and eventual delivery of the drug to the cytoplasm of cells. Thus, certain embodiments include non-naturally occurring antisense oligonucleotides that are nuclease resistant or substantially nuclease resistant.

ある特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ホスホロアミデートまたはホスホロジアミデートモルホリノオリゴヌクレオチド（ＰＭＯ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）、ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド、トリシクロ−ＤＮＡオリゴヌクレオチド、トリシクロ−ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド、２’Ｏ−Ｍｅ−修飾オリゴヌクレオチド（例えば、２’Ｏ−メチルホスホロチオエートオリゴヌクレオチド）、または前述の任意の組み合わせから選択される非天然の化学的骨格を含む。 In certain embodiments, the antisense oligonucleotide is a phosphoramidate or phosphorodiamidate morpholino oligonucleotide (PMO), peptide nucleic acid (PNA), locked nucleic acid (LNA), phosphorothioate oligonucleotide, tricyclo-DNA oligonucleotide. , Tricyclo-phosphorothioate oligonucleotides, 2'O-Me-modified oligonucleotides (eg 2'O-methyl phosphorothioate oligonucleotides), or non-natural chemical backbones selected from any combination of the foregoing.

オリゴヌクレオチドが生理学的条件下で標的にハイブリダイズする場合、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、実質的に４０℃または４５℃超、好ましくは少なくとも５０℃、典型的には６０℃〜８０℃またはより高いＴｍを伴い、標的配列またはポリヌクレオチド（例えば、プレｍＲＮＡ、ｍＲＮＡ）に「特異的にハイブリダイズする」。かかるハイブリダイゼーションは、好ましくは、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件に相当する。所与のイオン強度およびｐＨで、Ｔｍは、標的配列の５０％が相補的ポリヌクレオチドにハイブリダイズする温度である。かかるハイブリダイゼーションは、標的配列に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドの「概ねの」または「実質的な」相補性によって、ならびに正確な相補性によって起こり得る。 When the oligonucleotide hybridizes to the target under physiological conditions, the antisense oligonucleotide is substantially above 40°C or 45°C, preferably at least 50°C, typically 60°C to 80°C or higher Tm. "Specifically hybridize" to a target sequence or polynucleotide (eg, pre-mRNA, mRNA). Such hybridization preferably corresponds to stringent hybridization conditions. At a given ionic strength and pH, the Tm is the temperature at which 50% of the target sequence hybridizes to the complementary polynucleotide. Such hybridization can occur by "general" or "substantial" complementarity of the antisense oligonucleotide to the target sequence, as well as by exact complementarity.

本明細書で使用される、「十分な長さ」は、本明細書に記載される標的配列または遺伝子において、少なくとも８、より典型的には、８〜４０、連続的な核酸塩基に対して相補的であるアンチセンスオリゴヌクレオチドを指す。十分な長さのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的配列または遺伝子の領域にハイブリダイズすることができるように少なくとも最小数のヌクレオチドを有する。好ましくは、十分な長さのオリゴヌクレオチドは、８〜３０個のヌクレオチド長さである。より好ましくは、十分な長さのオリゴヌクレオチドは、９〜２７個のヌクレオチド長さである。 As used herein, "sufficient length" means at least 8, more typically 8-40 contiguous nucleobases in a target sequence or gene described herein. Refers to antisense oligonucleotides that are complementary. Antisense oligonucleotides of sufficient length have at least the minimum number of nucleotides so that they can hybridize to a region of the target sequence or gene. Preferably, the full length oligonucleotide is 8-30 nucleotides in length. More preferably, the full length oligonucleotide is 9 to 27 nucleotides in length.

アンチセンスオリゴヌクレオチドは、一般に、複数のヌクレオチドサブユニットを含み、それぞれ、総合すれば、標的化配列を形成するまたはそれを含む核酸塩基を有する。したがって、いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、約１０〜約４０個のサブユニット、または約１０〜３０個のサブユニット、および典型的には、１５〜２５個のサブユニットの長さの範囲に及ぶ。例えば、いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０個のサブユニットの長さであるか、または約１０〜４０個のサブユニット、１０〜３０個のサブユニット、１４〜２５個のサブユニット、１５〜３０個のサブユニット、１７〜３０個のサブユニット、１７〜２７個のサブユニット、１０〜２７個のサブユニット、１０〜２５個のサブユニット、および１０〜２０個の範囲に及ぶ。ある特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、約１０〜約４０個または約５〜約３０個のヌクレオチド長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、約１４〜約２５個または約１７〜約２７個のヌクレオチド長さである。 Antisense oligonucleotides generally include multiple nucleotide subunits, each having a nucleobase that, when taken together, forms or contains the targeting sequence. Thus, in some embodiments, antisense oligonucleotides have a length of about 10 to about 40 subunits, or about 10 to 30 subunits, and typically 15 to 25 subunits. Range. For example, in some embodiments, the antisense oligonucleotide is about 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 or 40 subunits in length, or about 10-40 subunits, 10 30 subunits, 14 to 25 subunits, 15 to 30 subunits, 17 to 30 subunits, 17 to 27 subunits, 10 to 27 subunits, 10 to 25 subunits Subunits, and range from 10 to 20. In certain embodiments, antisense oligonucleotides are about 10 to about 40 or about 5 to about 30 nucleotides in length. In some embodiments, antisense oligonucleotides are about 14 to about 25 or about 17 to about 27 nucleotides in length.

いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドの骨格は、実質的に荷電しておらず、任意に、細胞膜を横切る能動または促進輸送のための基質として認識される。いくつかの実施形態では、全てのヌクレオチド間結合は、荷電していない。標的ＲＮＡと安定的な二重鎖を形成するオリゴヌクレオチドの能力はまた、標的に関するアンチセンスオリゴヌクレオチドの長さおよび相補性の程度、Ｇ：Ｃ塩基マッチとＡ：Ｔ塩基マッチとの比、ならびに任意のミスマッチの塩基の位置を含む、その骨格の他の特性に関し得る。細胞ヌクレアーゼに抵抗するアンチセンスオリゴヌクレオチドの能力は、生存、および細胞の細胞質への薬剤の最終的な送達を促進し得る。 In some embodiments, the backbone of the antisense oligonucleotide is substantially uncharged and is optionally recognized as a substrate for active or facilitated transport across cell membranes. In some embodiments, all internucleotide bonds are uncharged. The ability of the oligonucleotide to form a stable duplex with the target RNA also includes the length and degree of complementarity of the antisense oligonucleotide with respect to the target, the ratio of G:C to A:T base matches, and It may relate to other properties of the backbone, including the position of any mismatched bases. The ability of antisense oligonucleotides to resist cellular nucleases can facilitate survival and eventual delivery of the drug to the cytoplasm of cells.

ある特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、生理学的ｐＨで、正に荷電するか、または陽イオンである少なくとも１つのヌクレオチド間結合を有する。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、約５．５〜約１２のｐＫａを示す少なくとも１つのヌクレオチド間結合を有する。任意に、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、塩基性窒素とアルキル、アリール、またはアラルキル基との両方を含有する少なくとも１つのヌクレオシド間結合を有する。特定の実施形態では、陽イオン性ヌクレオシド間結合は、４−アミノピペルジン−１−イル（ＡＰＮ）基またはその誘導体を含む。あらゆる特定の理論によって拘束されることなく、オリゴヌクレオチドにおいて陽イオン性連結（例えば、ＡＰＮ基またはＡＰＮ誘導体）の存在が、標的ヌクレオチド内の負に荷電したホスファートへの結合を促進すると考えられている。したがって、変異ＲＮＡと陽イオン性連結含有オリゴヌクレオチドとの間のヘテロ二重鎖の形成は、イオン引力およびワトソンクリック塩基対合の両方によって一緒に保持されてもよい。 In certain embodiments, antisense oligonucleotides have at least one internucleotide linkage that is positively charged or a cation at physiological pH. In some embodiments, the antisense oligonucleotides have at least one internucleotide linkage with a pKa of about 5.5 to about 12. Optionally, the antisense oligonucleotide has at least one internucleoside linkage containing both a basic nitrogen and an alkyl, aryl, or aralkyl group. In certain embodiments, the cationic internucleoside linkage comprises a 4-aminopiperidin-1-yl (APN) group or derivative thereof. Without being bound by any particular theory, it is believed that the presence of a cationic linkage (eg, APN group or APN derivative) in the oligonucleotide facilitates binding to the negatively charged phosphate within the target nucleotide. . Thus, the formation of heteroduplexes between mutant RNAs and oligonucleotides containing cationic linkages may be held together by both ionic attraction and Watson-Crick base pairing.

いくつかの実施形態では、陽イオン性連結の数は、少なくとも２および約半分以下の全ヌクレオチド間結合、例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個の陽イオン性連結、または約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個以下の陽イオン性連結である。いくつかの実施形態では、しかしながら、最大全てのヌクレオチド間結合は、陽イオン性連結であり、例えば、全てのヌクレオチド間結合の約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、もしくは４０個、または少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、もしくは４０個が、陽イオン性連結である。特定の実施形態では、約１９〜２０のサブユニットのオリゴヌクレオチドは、２〜１０、例えば、４〜８個の陽イオン性連結を有し、残りが無電荷結合であってもよい。他の特定の実施形態では、１４〜１５のサブユニットのオリゴヌクレオチドは、２〜７、例えば、２、３、４、５、６、または７個の陽イオン性連結を有し、残りが無電荷結合であってもよい。したがって、オリゴヌクレオチド内の陽イオン性連結の総数は、約１〜１０〜１５〜２０〜３０またはそれ以上（その間の全ての整数を含む）変動し得、オリゴヌクレオチド全体に散在され得る。 In some embodiments, the number of cationic linkages is at least 2 and no more than about half the total internucleotide linkages, eg, about 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 cationic linkages, or about 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, No more than 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 cationic linkages. In some embodiments, however, at most all internucleotide linkages are cationic linkages, eg, about 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 of all internucleotide linkages. 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 , 35, 36, 37, 38, 39, or 40, or at least about 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, or 40 , Cationically linked. In certain embodiments, oligonucleotides of about 19-20 subunits may have 2-10, eg, 4-8, cationic linkages with the rest being uncharged bonds. In other particular embodiments, the 14-15 subunit oligonucleotides have 2-7, for example 2, 3, 4, 5, 6, or 7 cationic linkages with the remainder being absent. It may be charge coupled. Thus, the total number of cationic linkages within an oligonucleotide can vary from about 1-10 to 15-20-30 or more (including all integers in between) and can be scattered throughout the oligonucleotide.

いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、全ての２〜５、または２、３、４、もしくは５個の荷電していない結合につき約１個または最大約１個の陽イオン性連結、例えば、全ての１０個の荷電していない結合につき約４〜５または４または５個有し得る。 In some embodiments, the antisense oligonucleotide has about 1 or up to about 1 cationic linkage for every 2-5, or 2, 3, 4, or 5 uncharged linkages, For example, it may have about 4-5 or 4 or 5 for every 10 uncharged bonds.

ある特定の実施形態は、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％の陽イオン性連結を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、アンチセンス活性の最適な改善は、骨格結合のうちの約２５％が陽イオン性である場合、見られ得る。ある特定の実施形態では、増強は、少数、例えば、１０〜２０％の陽イオン性連結で、または陽イオン性連結の数が、５０〜８０％の範囲、例えば、約６０％である場合に見られ得る。 Certain embodiments include 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80. Antisense oligonucleotides containing%, 85%, 90%, 95%, or 100% cationic linkages are included. In certain embodiments, optimal improvement in antisense activity may be seen when about 25% of the scaffolds are cationic. In certain embodiments, the enhancement is in a small number, eg, 10-20%, of cationic linkages, or when the number of cationic linkages is in the range of 50-80%, eg, about 60%. Can be seen.

いくつかの実施形態では、陽イオン性連結は、骨格に沿って散在している。かかるオリゴヌクレオチドは、任意に、少なくとも２つの連続的な荷電していない結合を含有する、すなわち、オリゴヌクレオチドは、任意に、その全体の長さに沿って厳密に交互になっているパターンを有さない。特定の例では、それぞれの１個または２個の陽イオン性連結は、骨格に沿って少なくとも１、２、３、４、または５個の荷電していない結合によって分離されている。 In some embodiments, the cationic linkages are interspersed along the scaffold. Such an oligonucleotide optionally contains at least two consecutive uncharged bonds, ie, the oligonucleotide optionally has a pattern that is strictly alternating along its entire length. I don't. In particular examples, each one or two cationic linkages are separated by at least 1, 2, 3, 4, or 5 uncharged bonds along the backbone.

陽イオン性連結のブロックおよび荷電していない結合のブロックを有するオリゴヌクレオチドもまた含まれる。例えば、荷電していない結合の中央ブロックは、陽イオン性連結のブロックが隣接してもよく、または逆もまた同じである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ほぼ等しい長さの５’，３’および中央領域を有し、中央領域における陽イオン性連結の百分率は、陽イオン性連結の全数の約５０％、６０％、７０％、または８０％超である。 Also included are oligonucleotides with blocks of cationic linkage and blocks of uncharged binding. For example, the central block of uncharged bonds may be flanked by blocks of cationic linkage, or vice versa. In some embodiments, the oligonucleotides have approximately equal lengths of 5', 3'and a central region, wherein the percentage of cationic linkages in the central region is about 50% of the total number of cationic linkages, It is more than 60%, 70%, or 80%.

ある特定のアンチセンスオリゴヌクレオチドでは、大量の陽イオン性連結（例えば、陽イオン性連結の７０、７５％、８０％、９０％）は、「中央領域」骨格結合近くに、例えば、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５の真ん中の結合において分配している。例えば、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４−マーのオリゴヌクレオチドは、８、９、１０、１１、または１２個の真ん中の連結において局在化している全ての陽イオン性連結の少なくとも５０％、６０％、７０％、または８０％を有し得る。 In certain antisense oligonucleotides, large amounts of cationic linkages (eg, 70,75%, 80%, 90% of the cationic linkages) are found near the “central region” backbone bond, eg 6,7. , 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, or 15 in the middle bond. For example, a 16,17,18,19,20,21,22,23, or 24-mer oligonucleotide is localized in all 8, 9, 10, 11, or 12 middle ligations. It may have at least 50%, 60%, 70%, or 80% of the cationic linkages.

上述のように、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、様々なアンチセンス化学物質を使用し得る。オリゴヌクレオチド化学物質の例としては、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）、ホスホロチオエート、２’Ｏ−Ｍｅ−修飾オリゴヌクレオチド、モルホリノ、ＰＭＯ、ＰＰＭＯ、ＰＭＯｐｌｕｓ、およびＰＭＯ−Ｘ化学物質が挙げられるが、これらに限定されず、前述のいずれかの組み合わせを含む。一般に、ＰＮＡおよびＬＮＡ化学物質は、ＰＭＯおよび２’Ｏ−Ｍｅオリゴヌクレオチドと比較してこれらの相対的に高い標的結合強度によって、より短い標的化配列を利用し得る。ホスホロチオエートおよび２’Ｏ−Ｍｅ−修飾化学物質は、しばしば、組み合わせて、２’Ｏ−Ｍｅ−ホスホロチオエート骨格を生成する。例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ／２０１３／１１２０５３号および同第ＷＯ／２００９／００８７２５号を参照されたく、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。 As mentioned above, antisense oligonucleotides can use a variety of antisense chemistries. Examples of oligonucleotide chemistries include peptide nucleic acid (PNA), locked nucleic acid (LNA), phosphorothioate, 2'O-Me-modified oligonucleotides, morpholino, PMO, PPMO, PMOplus, and PMO-X chemistries. However, the present invention is not limited to these, and includes any combination of the above. In general, PNA and LNA chemistries may utilize shorter targeting sequences due to their relatively high target binding strength compared to PMO and 2'O-Me oligonucleotides. Phosphorothioate and 2'O-Me-modified chemistries often combine to produce a 2'O-Me-phosphorothioate backbone. See, for example, PCT Publication Nos. WO/2013/112053 and WO/2009/008725, which are incorporated herein by reference in their entirety.

ペプチド核酸（ＰＮＡ）は、ピリミジンまたはプリン塩基が付着しているＮ−（２−アミノエチル）グリシン単位からなるデオキシリボース骨格と構造的に同形である、ＤＮＡの類似体である。天然ピリミジンおよびプリン塩基を含有するＰＮＡは、ワトソン−クリック塩基対合則に従って相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズし、塩基対認識に関してＤＮＡを模倣する（Ｅｇｈｏｌｍ，Ｂｕｃｈａｒｄｔｅｔａｌ．１９９３）。ＰＮＡの骨格は、ホスホジエステル結合よりむしろペプチド結合によって形成され、ＰＮＡをアンチセンス用途に良好に適しているものとする（以下の構造を参照のこと）。骨格は荷電しておらず、通常の熱安定性を超えるものを示すＰＮＡ／ＤＮＡまたはＰＮＡ／ＲＮＡ二重鎖がもたらされる。ＰＮＡは、ヌクレアーゼまたはプロテアーゼによって認識されない。 Peptide nucleic acid (PNA) is an analogue of DNA that is structurally isomorphic to the deoxyribose backbone consisting of N-(2-aminoethyl)glycine units with attached pyrimidine or purine bases. PNAs containing natural pyrimidine and purine bases hybridize to complementary oligonucleotides according to Watson-Crick base pairing rules and mimic DNA for base pair recognition (Egholm, Buchardt et al. 1993). The backbone of PNA is formed by peptide bonds rather than phosphodiester bonds, making PNA well suited for antisense applications (see structure below). The backbone is uncharged, resulting in PNA/DNA or PNA/RNA duplexes that exhibit more than normal thermostability. PNA is not recognized by nucleases or proteases.

天然構造へのラジカル構造変化にかかわらず、ＰＮＡは、らせん形態で、ＤＮＡまたはＲＮＡへの配列特異的結合が可能である。ＰＮＡの特徴は、相補的ＤＮＡまたはＲＮＡへの高い結合親和性、一塩基ミスマッチによってもたらされる不安定化効果、ヌクレアーゼおよびプロテアーゼへの耐性、塩濃度およびホモプリンＤＮＡとの三重鎖形成と無関係であるＤＮＡまたはＲＮＡとのハイブリダイゼーションを含む。ＰＡＮＡＧＥＮＥ（商標）は、ＢｔｓＰＮＡモノマー（Ｂｔｓ；ベンゾチアゾール−２−スルホニル基）およびオリゴマー化工程を開発してきた。ＢｔｓＰＮＡモノマーを用いたＰＮＡオリゴマー化は、脱保護、カップリングおよびキャッピングの反復的サイクルからなる。ＰＮＡは、当該技術分野で既知の任意の技術を用いて合成的に生成され得る。例えば、米国特許第６，９６９，７６６号、同第７，２１１，６６８号、同第７，０２２，８５１号、同第７，１２５，９９４号、同第７，１４５，００６号、および同第７，１７９，８９６号を参照のこと。ＰＮＡの調製のために米国特許第５，５３９，０８２号、同第５，７１４，３３１号、および同第５，７１９，２６２号も参照のこと。ＰＮＡ化合物のさらなる教示は、Ｎｉｅｌｓｅｎｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５４：１４９７−１５００，１９９１において見出され得る。前述のそれぞれは、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。 Despite the radical structural changes to the native structure, PNAs are capable of sequence-specific binding to DNA or RNA in a helical form. PNAs are characterized by high binding affinity for complementary DNA or RNA, destabilizing effects caused by single base mismatches, resistance to nucleases and proteases, salt concentration and triplex formation with homopurine DNA. Alternatively, it includes hybridization with RNA. PANAGENE™ has developed a Bts PNA monomer (Bts; benzothiazole-2-sulfonyl group) and an oligomerization process. PNA oligomerization with Bts PNA monomer consists of repeated cycles of deprotection, coupling and capping. PNAs can be synthetically produced using any technique known in the art. For example, US Pat. Nos. 6,969,766, 7,211,668, 7,022,851, 7,125,994, 7,145,006, and US Pat. See No. 7,179,896. See also US Pat. Nos. 5,539,082, 5,714,331, and 5,719,262 for the preparation of PNAs. Further teachings of PNA compounds can be found in Nielsen et al. , Science, 254:1497-1500, 1991. Each of the foregoing is incorporated herein by reference in its entirety.

アンチセンスオリゴヌクレオチドはまた、「ロックド核酸」サブユニット（ＬＮＡ）も含有し得る。「ＬＮＡ」は、架橋核酸（ＢＮＡ）と呼ばれる修飾のクラスのメンバーである。ＢＮＡは、Ｃ３０−エンド（ノーザン）糖パッカーのリボース環のコンフォメーションをロックする共有結合を特徴とする。ＬＮＡでは、架橋が２’−Ｏ位と４’−Ｃ位との間のメチレンからなる。ＬＮＡは、骨格のプレオーガナイゼーションおよび塩基スタッキングを増強し、ハイブリダイゼーションおよび熱安定性を増大させる。ＬＮＡの構造は、例えば、Ｗｅｎｇｅｌ，ｅｔａｌ．，ＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ（１９９８）４５５、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ（１９９８）５４：３６０７、およびＡｃｃｏｕｎｔｓｏｆＣｈｅｍ．Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９９）３２：３０１）、Ｏｂｉｋａ，ｅｔａｌ．，ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔｅｒｓ（１９９７）３８：８７３５；（１９９８）３９：５４０１、およびＢｉｏｏｒｇａｎｉｃＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００８）１６：９２３０において見出され得る。 Antisense oligonucleotides may also contain "locked nucleic acid" subunits (LNA). "LNA" is a member of a class of modifications called bridging nucleic acids (BNA). BNA is characterized by a covalent bond that locks the ribose ring conformation of the C30-endo (northern) sugar packer. In LNA, the bridge consists of methylene between the 2'-O and 4'-C positions. LNA enhances backbone pre-organization and base stacking, increasing hybridization and thermostability. The structure of LNA is described in, for example, Wengel, et al. , Chemical Communications (1998) 455, Tetrahedron (1998) 54:3607, and Accounts of Chem. Research (1999) 32:301), Obika, et al. , Tetrahedron Letters (1997) 38: 8735; (1998) 39: 5401, and Bioorganic Medicinal Chemistry (2008) 16: 9230.

本開示の化合物は、１つ以上のＬＮＡを組み込み得、場合によっては、化合物は、全体的にＬＮＡからなり得る。個々のＬＮＡヌクレオシドサブユニットの合成、およびオリゴヌクレオチド中へのこれらの組み込みのための方法は、例えば、米国特許第７，５７２，５８２号、同第７，５６９，５７５号、同第７，０８４，１２５号、同第７，０６０，８０９号、同第７，０５３，２０７号、同第７，０３４，１３３号、同第６，７９４，４９９号、および同第６，６７０，４６１号において記載されており、これらのそれぞれは、それらの全体が参照により組み込まれる。典型的なサブユニット間リンカーは、ホスホジエステルおよびホスホロチオエート部分を含み、代替として、非リン含有リンカーを用い得る。一実施形態は、ＬＮＡ含有化合物であり、各ＬＮＡサブユニットは、ＤＮＡサブユニットによって分離されている。ある特定の化合物は、サブユニット間リンカーが、ホスホロチオエートである場合の交互になっているＬＮＡおよびＤＮＡサブユニットからなる。 The compounds of the present disclosure may incorporate one or more LNAs, and in some cases the compounds may consist entirely of LNAs. Methods for the synthesis of individual LNA nucleoside subunits and their incorporation into oligonucleotides are described, for example, in US Pat. Nos. 7,572,582, 7,569,575 and 7,084. No. 125, No. 7,060,809, No. 7,053,207, No. 7,034,133, No. 6,794,499, and No. 6,670,461. , Each of which is incorporated by reference in its entirety. Typical intersubunit linkers include phosphodiester and phosphorothioate moieties, and non-phosphorus containing linkers may alternatively be used. One embodiment is a LNA containing compound, wherein each LNA subunit is separated by a DNA subunit. Certain compounds consist of alternating LNA and DNA subunits when the intersubunit linker is a phosphorothioate.

「ホスホロチオエート」（またはＳ−オリゴ）は、非架橋酸素の１つが硫黄によって置き換えられる、正常なＤＮＡのバリアントである。ヌクレオチド間結合の硫化は、５’から３’および３’から５’のＤＮＡＰＯＬ１エキソヌクレアーゼ、ヌクレアーゼＳ１およびＰ１、ＲＮａｓｅｓ、血清ヌクレアーゼならびにヘビ毒ホスホジエステラーゼを含む、エンドヌクレアーゼおよびエキソヌクレアーゼの作用を低減する。ホスホロチオエートは、２つの主要な経路によって：ホスホン酸水素に対する、二硫化炭素中の元素状態の硫黄の溶液の作用によって、またはテトラエチルチウラムジスルフィド（ＴＥＴＤ）または３Ｈ−１，２−ベンゾジチオール（ｂｅｎｓｏｄｉｔｈｉｏｌ）−３−オン１，１−ジオキシド（ＢＤＴＤ）のいずれかで亜リン酸トリエステルを硫化する方法によって作製される（例えば、Ｉｙｅｒｅｔａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５５，４６９３−４６９９，１９９０を参照のこと）。後者の方法は、大部分の有機溶媒中で元素状態の硫黄が不溶性であること、および二硫化炭素の毒性という問題を回避する。ＴＥＴＤ法およびＢＤＴＤ法はまた、より高い純度のホスホロチオエートが得られる。 "Phosphorothioate" (or S-oligo) is a variant of normal DNA in which one of the non-bridging oxygens is replaced by sulfur. Sulfidation of internucleotide bonds reduces the action of endonucleases and exonucleases, including 5'to 3'and 3'to 5'DNA POL 1 exonucleases, nucleases S1 and P1, RNases, serum nucleases and snake venom phosphodiesterases. To do. Phosphorothioates are by two main routes: by the action of a solution of elemental sulfur in carbon disulfide on hydrogen phosphonate, or by tetraethylthiuram disulfide (TETD) or 3H-1,2-benzodithiol-. It is made by the method of sulfiding a phosphite triester with either 3-one 1,1-dioxide (BDTD) (see, for example, Iyer et al., J. Org. Chem. 55, 4693-4699, 1990. See). The latter method avoids the problems of elemental sulfur being insoluble in most organic solvents and the toxicity of carbon disulfide. The TETD and BDTD methods also give higher purity phosphorothioates.

トリシクロ−ＤＮＡ（ｔｃ−ＤＮＡ）は、各ヌクレオチドが、シクロプロパン環の導入により修飾され、骨格の配座柔軟性を制限するため、およびねじれ角γの骨格配置が最適化された、拘束されたＤＮＡ類似体のクラスである。ホモベーシック（ｈｏｍｏｂａｓｉｃ）アデニンおよびチミン含有ｔｃ−ＤＮＡは、相補的ＲＮＡと非常に安定したＡ−Ｔ塩基対を形成する。トリシクロ−ＤＮＡおよびそれらの合成は、国際特許出願公開第ＷＯ２０１０／１１５９９３号に記載されている。本開示の化合物は、１つ以上のトリシクリル−ＤＮＡヌクレオチドを組み込み得、場合によっては、化合物は、全体的にトリシクリル−ＤＮＡヌクレオチドからなり得る。 Tricyclo-DNA (tc-DNA) was constrained in which each nucleotide was modified by the introduction of a cyclopropane ring to limit the conformational flexibility of the backbone and to optimize the backbone configuration of the twist angle γ. It is a class of DNA analogs. Homobasic adenine and thymine-containing tc-DNA form very stable AT base pairs with complementary RNA. Tricyclo-DNA and their synthesis are described in International Patent Application Publication No. WO 2010/115993. The compounds of the present disclosure may incorporate one or more tricyclyl-DNA nucleotides, and in some cases, the compound may consist entirely of tricyclyl-DNA nucleotides.

トリシクロ−ホスホロチオエートヌクレオチドは、ホスホロチオエートサブユニット間連結を有するトリシクロ−ＤＮＡヌクレオチドである。トリシクロ−ホスホロチオエートヌクレオチドおよびそれらの合成は、国際特許出願公開第ＷＯ２０１３／０５３９２８号に記載されている。本開示の化合物は、１つ以上のトリシクリル−ＤＮＡヌクレオチドを組み込み得、場合によっては、化合物は、全体的にトリシクリル−ＤＮＡヌクレオチドからなり得る。 Tricyclo-phosphorothioate nucleotides are tricyclo-DNA nucleotides with phosphorothioate intersubunit linkages. Tricyclo-phosphorothioate nucleotides and their synthesis are described in International Patent Application Publication No. WO 2013/053928. The compounds of the present disclosure may incorporate one or more tricyclyl-DNA nucleotides, and in some cases, the compound may consist entirely of tricyclyl-DNA nucleotides.

「２’Ｏ−Ｍｅオリゴヌクレオチド」分子は、リボース分子の２’−ＯＨ残基でメチル基を担持する。２’−Ｏ−Ｍｅ−ＲＮＡは、ＤＮＡと同じ（または類似した）挙動を示すが、ヌクレアーゼ分解から保護されている。２’−Ｏ−Ｍｅ−ＲＮＡはまた、さらに安定化させるために、ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド（ＰＴＯ）と組み合わせることもできる。２’Ｏ−Ｍｅオリゴヌクレオチド（ホスホジエステルまたはホスホチオエート）を、当該技術分野で日常的な技術に従って合成することができる（例えば、Ｙｏｏｅｔａｌ．，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．３２：２００８−１６，２００４を参照のこと）。場合によっては、２’Ｏ−Ｍｅオリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエート連結（２’Ｏ−Ｍｅホスホロチオエートオリゴヌクレオチド）を含む。 The "2'O-Me oligonucleotide" molecule carries a methyl group at the 2'-OH residue of the ribose molecule. 2'-O-Me-RNA behaves the same (or similar) as DNA, but is protected from nuclease degradation. 2'-O-Me-RNA can also be combined with phosphorothioate oligonucleotides (PTO) for further stabilization. 2'O-Me oligonucleotides (phosphodiesters or phosphothioates) can be synthesized according to routine techniques in the art (see, eg, Yoo et al., Nucleic Acids Res. 32:2008-16, 2004). That). In some cases, the 2'O-Me oligonucleotide comprises a phosphorothioate linkage (2'O-Me phosphorothioate oligonucleotide).

「モルホリノオリゴヌクレオチド」または「ＰＭＯ」は、典型的なポリヌクレオチドに水素結合することができる核酸塩基を支持する骨格を有するオリゴヌクレオチドを指し、ポリマーは、ペントース糖骨格部分を欠くが、代わりにモルホリノ環を含有する。したがって、ＰＭＯにおいて、モルホリノ環構造は、塩基対合部分を支持して、典型的には、細胞または治療される対象において選択されたアンチセンス標的にハイブリダイズするように設計された塩基対合部分の配列を形成する。例示的な「モルホリノ」オリゴヌクレオチドは、１つのサブユニットのモルホリノ窒素を隣接するサブユニットの４’の環外炭素に結合させるホスホラミデートまたはホスホロジアミデート連結によって一緒に連結されたモルホリノサブユニット構造を含み、各サブユニットは、塩基特異的水素結合によってポリヌクレオチド中の塩基に結合するのに有効なプリンまたはピリミジン核酸塩基を含む。モルホリノオリゴヌクレオチド（アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む）は、例えば、米国特許第５，６９８，６８５号、同第５，２１７，８６６号、同第５，１４２，０４７号、同第５，０３４，５０６号、同第５，１６６，３１５号、同第５，１８５，４４４号、同第５，５２１，０６３号、同第５，５０６，３３７号、および係属中の米国特許出願第１２／２７１，０３６号、同第１２／２７１，０４０号、ならびにＰＣＴ公開ＷＯ／２００９／０６４４７１およびＷＯ／２０１２／０４３７３０に記載されており、これらの全ては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。 A "morpholino oligonucleotide" or "PMO" refers to an oligonucleotide having a backbone that supports a nucleobase that can hydrogen bond to a typical polynucleotide, where the polymer lacks a pentose sugar backbone moiety, but instead is morpholino. Contains a ring. Thus, in PMO, the morpholino ring structure supports the base-pairing moiety and is typically designed to hybridize to a selected antisense target in the cell or subject to be treated. Form an array of. An exemplary "morpholino" oligonucleotide is a morpholino subunit linked together by a phosphoramidate or phosphorodiamidate linkage that connects the morpholino nitrogen of one subunit to the 4'exocyclic carbon of an adjacent subunit. Containing a structure, each subunit comprises a purine or pyrimidine nucleobase effective to bind to a base in a polynucleotide by base-specific hydrogen bonding. Morpholino oligonucleotides (including antisense oligonucleotides) are described in, for example, US Pat. Nos. 5,698,685, 5,217,866, 5,142,047, and 5,034,506. Nos. 5,166,315, 5,185,444, 5,521,063, 5,506,337, and pending US patent application Ser. No. 12/271, 036, 12/271,040, and PCT Publications WO/2009/064471 and WO/2012/043730, all of which are incorporated herein by reference in their entireties.

オリゴヌクレオチド構造内では、リン酸基は、一般に、オリゴヌクレオチドの「ヌクレオシド間連結」を形成すると称されている。ＲＮＡおよびＤＮＡの天然に存在するヌクレオシド間連結は、３’から５’のホスホジエステル連結である。「ホスホロアミデート」基は、３個の付着した酸素原子および１個の付着した窒素原子を有するリンを含み、一方、「ホスホロジアミデート」基は、２個の付着した酸素原子および２個の付着した窒素原子を有するリンを含む。本明細書に記載される、ＰＭＯおよび／またはＰＭＯ−Ｘオリゴヌクレオチドの荷電していないまたは陽イオン性サブユニット間連結において、１個の窒素は、常に、骨格鎖に対してペンダントである。ホスホロジアミデート連結における第２の窒素は、典型的には、モルホリノ環構造における環窒素である。 Within the oligonucleotide structure, the phosphate groups are commonly referred to as forming the "internucleoside linkage" of the oligonucleotide. The naturally occurring internucleoside linkages of RNA and DNA are 3'to 5'phosphodiester linkages. A "phosphoroamidate" group comprises a phosphorus with 3 attached oxygen atoms and 1 attached nitrogen atom, while a "phosphorodiamidate" group contains 2 attached oxygen atoms and 2 attached phosphorus atoms. Included is phosphorus with 4 attached nitrogen atoms. In the uncharged or cationic intersubunit linkages of PMO and/or PMO-X oligonucleotides described herein, one nitrogen is always pendant to the backbone. The second nitrogen in the phosphorodiamidate linkage is typically the ring nitrogen in the morpholino ring structure.

「ＰＭＯ−Ｘ」は、（ｉ）モルホリノ環の窒素原子との共有結合、および（ｉｉ）４−アミノピペルジン−１−イル（すなわち、ＡＰＮ）の環窒素または４−アミノピペルジン−１−イルの誘導体との第２の共有結合を有するリン原子を有する、ホスホロジアミデートモルホリノオリゴヌクレオチド（ＰＭＯ）を指す。例示的なＰＭＯ−Ｘオリゴヌクレオチドは、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／３８４５９号およびＰＣＴ公開第ＷＯ／２０１３／０７４８３４号に開示されており、これらのそれぞれは、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。「ＰＭＯ−ａｐｎ」または「ＡＰＮ」は、リン原子が、モルホリノ基および４−アミノピペルジン−１−イル（すなわち、ＡＰＮ）の環窒素に連結している、少なくとも１つのヌクレオチド間連結を含むＰＭＯ−Ｘオリゴヌクレオチドを指す。特定の実施形態では、本明細書に記載される標的化配列を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのＡＰＮ含有連結またはＡＰＮ誘導体含有連結を含む。特定の実施形態は、約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％のＡＰＮ／ＡＰＮ誘導体含有連結を有するＰＭＯを含み、残りの連結（１００％未満の場合）は、荷電していない連結であり、例えば、全てのヌクレオチド間結合の約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、もしくは４０個、または少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、もしくは４０個が、ＡＰＮ／ＡＰＮ誘導体含有連結である。 “PMO-X” refers to (i) a covalent bond to a nitrogen atom of a morpholino ring, and (ii) a ring nitrogen of 4-aminopiperidin-1-yl (ie, APN) or a derivative of 4-aminopiperidin-1-yl. Of phosphorodiamidate morpholino oligonucleotides (PMO) having a phosphorus atom with a second covalent bond of Exemplary PMO-X oligonucleotides are disclosed in PCT Application No. PCT/US2011/38459 and PCT Publication No. WO/2013/074834, each of which is herein incorporated by reference in its entirety. Incorporated. "PMO-apn" or "APN" means PMO-X containing at least one internucleotide linkage in which the phosphorus atom is linked to the morpholino group and the ring nitrogen of 4-aminopiperidin-1-yl (ie, APN). Refers to an oligonucleotide. In certain embodiments, antisense oligonucleotides comprising targeting sequences described herein comprise at least one APN-containing linkage or APN derivative-containing linkage. Particular embodiments are about 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80. %, 85%, 90%, 95%, or 100% of PMO with APN/APN derivative containing linkages, the remaining linkages (if less than 100%) are uncharged linkages, eg, all About 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, or 40, or at least about 1, 2, 3, 4, 5, , 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30. , 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, or 40 are APN/APN derivative-containing linkages.

本明細書に提供される本方法および組成物に従って使用され得るさらなるアンチセンスオリゴヌクレオチド／化学物質は、以下の特許および特許出願において記載されているものを含み、これらの内容は、参照により本明細書に組み込まれる：ＰＣＴ公開第ＷＯ／２００７／００２３９０号、同第ＷＯ／２０１０／１２０８２０号、および同第ＷＯ／２０１０／１４８２４９号、米国特許第７，８３８，６５７号および米国特許出願第２０１１／０２６９８２０号。 Additional antisense oligonucleotides/chemicals that can be used in accordance with the methods and compositions provided herein include those described in the following patents and patent applications, the contents of which are incorporated herein by reference. PCT Publication Nos. WO/2007/002390, WO/2010/120820, and WO/2010/148249, US Pat. No. 7,838,657 and US Patent Application No. 2011/. No. 0269820.

いくつかの実施形態では、免疫調節剤または阻害剤は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）剤である。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載される、標的タンパク質、標的配列、および／または標的遺伝子（例えば、Ｓ１ＰＲ、カルシニューリン、ｍＴＯＲ、ＩＤＯ、ＩＭＰＤＨ、サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体、Ｂ細胞受容体、キナーゼ）は、任意の様々なＲＮＡベースの薬剤または方法によって標的化される。ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、元々、ｔｈｅｎｅｍａｔｏｄｅＣａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓｅｌｅｇａｎｓの研究において発見された、進化的に保存された遺伝子サイレンシング機構である（Ｌｅｅｅｔａｌ，Ｃｅｌｌ７５：８４３，１９９３、Ｒｅｉｎｈａｒｔｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ４０３：９０１，２０００）。ＲＮＡ干渉は適切な分子機構を発現する細胞内に、ｄｓＲＮＡを導入することが引き金になり、対応する内因性ｍＲＮＡを分解する。この機構には、ｄｓＲＮＡの短いＲＮＡへの転換が含まれるが、これらの短いＲＮＡは、リボヌクレアーゼを相同なｍＲＮＡ標的に向かわせる（Ｒｕｖｋｕｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ２２９４：７９７，２００１を参照のこと）。 In some embodiments, the immunomodulator or inhibitor is an RNA interference (RNAi) agent. Thus, in some embodiments, a target protein, target sequence, and/or target gene (eg, S1PR, calcineurin, mTOR, IDO, IMPDH, cytokine and/or cytokine receptor, B, B as described herein, Cellular receptors, kinases) are targeted by any of a variety of RNA-based agents or methods. RNA interference (RNAi) is an evolutionarily conserved gene silencing mechanism originally discovered in the study of the nematode Caenorhabditis elegans (Lee et al, Cell 75:843, 1993, Reinhart et al., Nature). 403:901, 2000). RNA interference is triggered by the introduction of dsRNA into cells that express the appropriate molecular machinery and degrades the corresponding endogenous mRNA. This mechanism involves the conversion of dsRNA into short RNAs that direct ribonucleases to homologous mRNA targets (see Ruvkun, Science 2294:797, 2001).

ある特定の実施形態では、ＲＮＡ剤は、より一般には、本明細書に記載され、当該技術分野で周知の方法で、標的遺伝子の「標的配列」に対応するセンス鎖を含むとき、生物学的に関連のある標的（遺伝子）「を標的とする」と言われている。 In certain embodiments, RNA agents are more generally biologically described when they include a sense strand corresponding to the "target sequence" of the target gene, in a manner described herein and well known in the art. It is said that the target (gene) related to is "targets".

ＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡｉ核酸分子およびＲＮＡｉ核酸類似体分子、例えば、低分子干渉核酸および低分子干渉核酸類似体（ｓｉＮＡ）を含み、これには、低分子干渉ＲＮＡおよび低分子干渉ＲＮＡ核酸類似体（ｓｉＲＮＡ）を含み、例えば、二本鎖ＲＮＡおよび二本鎖ＲＮＡ類似体（ｄｓＲＮＡ）、マイクロ−ＲＮＡおよびマイクロ−ＲＮＡ類似体（ｍｉＲＮＡ）、ならびに低分子ヘアピンＲＮＡおよび低分子ヘアピンＲＮＡ類似体（ｓｈＲＮＡ）を含む。 RNAi agents include RNAi nucleic acid molecules and RNAi nucleic acid analog molecules, such as small interfering nucleic acids and small interfering nucleic acid analogs (siNA), which include small interfering RNA and small interfering RNA nucleic acid analogs ( siRNA), for example double-stranded RNA and double-stranded RNA analogues (dsRNA), micro-RNA and micro-RNA analogues (miRNA), and short hairpin RNAs and short hairpin RNA analogues (shRNAs). including.

ある特定の実施形態は、ＲＮＡｉ剤として二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）分子を使用する。ｄｓＲＮＡは、概して、２つの一本鎖を含む。ｄｓＲＮＡの一方の鎖（「センス」鎖）は、標的遺伝子または標的配列の一部と実質的に同一であるヌクレオチド配列を含み、もう一方の鎖（「相補的な」または「アンチセンス」鎖）は、標的領域の一部に対して相補的であるか、または実質的に相補的である配列を含む。実質的に同一の配列は、標的配列に対して少なくとも約８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９％同一であるものを含む。これらの鎖は、ハイブリダイズするのに十分相補的であり、二重構造を形成する。ある特定の実施形態では、相補的なＲＮＡ鎖は、３０個未満のヌクレオチド、２５個未満のヌクレオチド長さ、またはさらに１９〜２４個のヌクレオチド長さであり得る。ある特定の態様では、相補的なヌクレオチド配列は、２０〜２３個のヌクレオチド長さ、または２２個のヌクレオチド長さであり得る。ある特定の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、本明細書に記載される標的配列の一部と実質的に同一である。いくつかの実施形態では、このアンチセンス鎖は、本明細書に記載される標的配列の一部に対して相補的であるか、または実質的に相補的である。ある特定の実施形態では、当該一部は、本明細書に記載される標的配列の約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、もしくは２５、少なくとも約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、もしくは２５、または約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、もしくは２５以下の隣接するヌクレオチドを含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。 Certain embodiments use double-stranded ribonucleic acid (dsRNA) molecules as RNAi agents. dsRNA generally comprises two single strands. One strand of the dsRNA (the "sense" strand) contains a nucleotide sequence that is substantially identical to a portion of the target gene or target sequence and the other strand (the "complementary" or "antisense" strand). Include sequences that are complementary or substantially complementary to a portion of the target region. Substantially identical sequences include those that are at least about 80,85,90,95,97,98,99% identical to the target sequence. These strands are sufficiently complementary to hybridize, forming a double structure. In certain embodiments, complementary RNA strands can be less than 30 nucleotides, less than 25 nucleotides in length, or even 19-24 nucleotides in length. In certain aspects, complementary nucleotide sequences can be 20 to 23 nucleotides in length, or 22 nucleotides in length. In certain embodiments, the sense strand of the RNAi agent is substantially identical to a portion of the target sequence described herein. In some embodiments, the antisense strand is complementary to, or substantially complementary to, a portion of the target sequences described herein. In certain embodiments, the portion is about 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 16, 17, 18, 19 of the target sequence described herein. , 20, 21, 22, 23, 24, or 25, at least about 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, or 25, or about 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, or 25 or less Of, consisting of, or consisting essentially of adjacent nucleotides of.

好適なｓｉＲＮＡ配列は、当該技術分野で既知の任意の手段を用いて特定され得る。場合によっては、本明細書に記載される例示的な標的配列を用いて、Ｅｌｂａｓｈｉｒｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，４１１：４９４−４９８（２００１）およびＥｌｂａｓｈｉｒｅｔａｌ．，ＥＭＢＯＪ．，２０：６８７７−６８８８（２００１）に記載される方法は、Ｒｅｙｎｏｌｄｓｅｔａｌ．，ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈ．，２２：３２６−３３０（２００４）に記述されている合理的な設計ルールと組み合わされる。 Suitable siRNA sequences can be identified using any means known in the art. In some cases, using the exemplary target sequences described herein, Elbashir et al. , Nature, 411:494-498 (2001) and Elbashir et al. , EMBO J.; , 20:6877-6888 (2001) are described in Reynolds et al. , Nature Biotech. , 22:326-330 (2004).

概して、対象となる標的遺伝子からの転写物のＡＵＧ開始コドンのヌクレオチド配列３’を、ジヌクレオチド配列（例えば、ＡＡ、ＮＡ、ＣＣ、ＧＧ、またはＵＵ、ここで、Ｎは、Ｃ、Ｇ、またはＵである）について走査することができる（例えば、Ｅｌｂａｓｈｉｒｅｔａｌ．，ＥＭＢＯＪ．，２０：６８７７−６８８８（２００１）を参照のこと）。ジヌクレオチド配列のすぐ３’側のヌクレオチドは、潜在的ｓｉＲＮＡ配列（すなわち、標的配列またはセンス鎖配列）として特定される。場合によっては、ジヌクレオチド配列のすぐ３’側の１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５個またはそれ以上のヌクレオチドは、潜在的ｓｉＲＮＡ配列として特定される。いくつかの実施形態では、ジヌクレオチド配列は、ＡＡまたはＮＡ配列であり、ＡＡまたはＮＡジヌクレオチドのすぐ３’側の１９個のヌクレオチドは、潜在的ｓｉＲＮＡ配列として特定される。ｓｉＲＮＡ配列は、通常、標的遺伝子の長さに沿って異なる位置で間隔があけられている。ｓｉＲＮＡ配列のサイレンシング効率をさらに増進させるために、潜在的ｓｉＲＮＡ配列を分析して、例えば、標的細胞または生物体中に、他のコード配列と相同性の領域を含まない部位を特定することができる。例えば、約２１個の塩基対の好適なｓｉＲＮＡ配列は、典型的には、標的細胞または生物体中のコード配列と相同性の１６〜１７個超の隣接する塩基対は有しないことになる。ｓｉＲＮＡ配列がＲＮＡＰｏｌＩＩＩプロモーターから発現されることになる場合、４個超の隣接するＡ’またはＴ’が欠けたｓｉＲＮＡ配列が選択される。 Generally, the nucleotide sequence 3′ of the AUG start codon of the transcript from the target gene of interest is replaced by a dinucleotide sequence (eg, AA, NA, CC, GG, or UU, where N is C, G, or Is U) (see, eg, Elbashir et al., EMBO J., 20:6877-6888 (2001)). The nucleotide immediately 3'to the dinucleotide sequence is identified as a potential siRNA sequence (ie, target sequence or sense strand sequence). In some cases, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35 or more nucleotides immediately 3'to the dinucleotide sequence are identified as potential siRNA sequences. In some embodiments, the dinucleotide sequence is an AA or NA sequence and the 19 nucleotides immediately 3'to the AA or NA dinucleotide are identified as potential siRNA sequences. siRNA sequences are typically spaced at different positions along the length of the target gene. In order to further enhance the silencing efficiency of siRNA sequences, potential siRNA sequences can be analyzed to identify sites in the target cell or organism that do not contain regions of homology with other coding sequences, for example. it can. For example, a suitable siRNA sequence of about 21 base pairs will typically have no more than 16-17 contiguous base pairs of homology to the coding sequence in the target cell or organism. If the siRNA sequence is to be expressed from the RNA Pol III promoter, siRNA sequences lacking more than 4 contiguous A'or T'are selected.

潜在的ｓｉＲＮＡ配列が特定されたら、配列は、当該技術分野で既知の様々な基準を用いて分析することができる。例えば、それらのサイレンシング効率を増進させるために、合理的設計アルゴリズムによってｓｉＲＮＡ配列を分析して、以下の特性：（１）約２５％〜約６０％のＧ／ＣのＧ／Ｃ含量、（２）センス鎖の１５〜１９位で少なくとも３つのＡ／Ｕ、（３）内部反復はなし、（４）センス鎖の１９位にＡ、（５）センス鎖の３位にＡ、（６）センス鎖の１０位にＵ、（７）センス鎖の１９位にＧ／Ｃなし、および（８）センス鎖の１３位にＧなしのうちの１つ以上を有する配列を特定することができる。これらの特性のそれぞれの適切な値を指定するものであり、ｓｉＲＮＡの選択に有用であるアルゴリズムを組み込んでいるｓｉＲＮＡ設計ツールは、既知である。当業者は、前述の特徴のうちの１つ以上を有する配列が、さらなる分析および試験のために、潜在的ｓｉＲＮＡ配列として選択できることを理解されよう。 Once the potential siRNA sequences have been identified, the sequences can be analyzed using various criteria known in the art. For example, in order to enhance their silencing efficiency, siRNA sequences were analyzed by rational design algorithms to find the following properties: (1) G/C content of about 25% to about 60% G/C, ( 2) at least 3 A/Us at positions 15-19 of the sense strand, (3) no internal repeats, (4) A at position 19 of the sense strand, (5) A at position 3 of the sense strand, (6) sense Sequences can be identified that have one or more of U at position 10 of the strand, (7) no G/C at position 19 of the sense strand, and (8) no G at position 13 of the sense strand. SiRNA design tools that specify appropriate values for each of these properties and that incorporate algorithms that are useful in siRNA selection are known. Those skilled in the art will appreciate that sequences having one or more of the above characteristics can be selected as potential siRNA sequences for further analysis and testing.

さらに、以下の基準のうちの１つ以上を有する潜在的ｓｉＲＮＡ標的配列は、ｓｉＲＮＡとしてしばしば排除することができる：（１）列の中に４つ以上の同じ塩基のストレッチを含む配列、（２）Ｇのホモポリマーを含む配列（すなわち、これらのポリマーの構造的特徴に起因する非特異的効果の可能性を低減させるため、（３）三重塩基モチーフ（例えば、ＧＧＧ、ＣＣＣ、ＡＡＡ、またはＴＴＴ）を含む配列、（４）列の中に７つ以上のＧ／Ｃのストレッチを含む配列、および（５）内部折り返し構造をもたらす候補中の４つ以上の塩基の直列反復を含む配列。しかしながら、当業者は、前述の特徴のうちの１つ以上を有する配列が、依然として、潜在的ｓｉＲＮＡ配列としてさらに分析および試験するために選択することができることを理解されよう。 In addition, potential siRNA target sequences that have one or more of the following criteria can often be excluded as siRNAs: (1) sequences containing 4 or more stretches of the same base in a row, (2 ) G homopolymer-containing sequences (ie, to reduce the possibility of non-specific effects due to structural features of these polymers, (3) triple base motifs (eg, GGG, CCC, AAA, or TTT). ), (4) a sequence containing a stretch of 7 or more G/Cs in a column, and (5) a sequence containing a tandem repeat of 4 or more bases in the candidate resulting in an internal fold structure. It will be appreciated by those skilled in the art that sequences having one or more of the aforementioned characteristics can still be selected for further analysis and testing as potential siRNA sequences.

いくつかの実施形態では、潜在的ｓｉＲＮＡ標的配列は、例えば、Ｋｈｖｏｒｏｖａｅｔａｌ．，Ｃｅｌｌ，１１５：２０９−２１６（２００３）、およびＳｃｈｗａｒｚｅｔａｌ．，Ｃｅｌｌ，１１５：１９９−２０８（２００３）に記載されている、ｓｉＲＮＡ二重鎖非対称に基づいてさらに分析することができる。ある特定の実施形態では、潜在的ｓｉＲＮＡ標的配列は、例えば、Ｌｕｏｅｔａｌ．，Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，３１８：３０３−３１０（２００４）に記載されている、ｍＲＮＡ標的部位での二次構造に基づいてさらに分析することができる。例えば、ｍＲＮＡでの二次構造を、Ｍｆｏｌｄアルゴリズムを用いてモデル化して、塩基対合およびステム−ループの形態でより少ない二次構造が存在するｍＲＮＡ標的部位でのアクセス性に好都合なｓｉＲＮＡ配列を選択することができる。 In some embodiments, potential siRNA target sequences are described in, for example, Khvorova et al. , Cell, 115:209-216 (2003), and Schwarz et al. , Cell, 115:199-208 (2003), which can be further analyzed based on siRNA duplex asymmetry. In certain embodiments, potential siRNA target sequences are described in, for example, Luo et al. , Biophys. Res. Commun. , 318:303-310 (2004), based on the secondary structure at the mRNA target site. For example, secondary structure in mRNA is modeled using the Mfold algorithm to identify siRNA sequences that favor accessibility at the mRNA target site where there are fewer secondary structures in the form of base pairing and stem-loop. You can choose.

潜在的ｓｉＲＮＡ配列はまた、例えば、インビトロサイトカインアッセイまたはインビボ動物モデルを用いて、任意の免疫賦活特性の存在について分析することができる。ＧＵ−リッチモチーフなど（例えば、５’−ＧＵ−３’、５’−ＵＧＵ−３’、５’−ＧＵＧＵ−３’、５’−ＵＧＵＧＵ−３’など）のｓｉＲＮＡ配列のセンスおよび／またはアンチセンス鎖中のモチーフは、その配列が免疫賦活性であるかどうかの目安も提供することができる。ｓｉＲＮＡ分子が免疫賦活性であることが分かったら、次いで、これを修飾して、本明細書に記載されるようなその免疫賦活特性を減少させることができる。非限定的な例として、細胞が検出可能な免疫応答をもたらすような条件下で、ｓｉＲＮＡ配列を哺乳動物のレスポンダー細胞と接触させ、ｓｉＲＮＡが免疫賦活性であるか非免疫賦活性ｓｉＲＮＡであるか判定することができる。哺乳動物のレスポンダー細胞は、ナイーブ哺乳動物（すなわち、以前にｓｉＲＮＡ配列の遺伝子産生物と接触したことがない哺乳動物）からのものであってよい。哺乳動物のレスポンダー細胞は、例えば、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、マクロファージなどであり得る。検出可能な免疫応答には、例えば、ＴＮＦ−アルファ、ＩＦＮ−アルファ、ＩＦＮ−ベータ、ＩＦＮ−ガンマ、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、またはそれらの組み合わせのようなサイトカインまたは成長因子の産生が含まれ得る。次いで、免疫賦活性であることが同定されたｓｉＲＮＡ分子は、センス鎖および／またはアンチセンス鎖のヌクレオチドのうちの少なくとも１個を修飾ヌクレオチドに交換することによって、免疫賦活特性を減少させるために修飾され得る。例えば、ｓｉＲＮＡ二重鎖の二重鎖領域内のヌクレオチドのうちの約３０％未満（例えば、約３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、または５％未満）が、２’ＯＭｅヌクレオチドなどの修飾ヌクレオチドに交換され得る。次いで、修飾ｓｉＲＮＡは、免疫賦活特性が低下したかまたは抑止されたことを確認するため、上記のような哺乳動物のレスポンダー細胞と接触させられ得る。 Potential siRNA sequences can also be analyzed for the presence of any immunostimulatory properties using, for example, an in vitro cytokine assay or an in vivo animal model. Sense and/or anti of siRNA sequence such as GU-rich motif (eg, 5'-GU-3', 5'-UGU-3', 5'-GUGU-3', 5'-UGUGU-3') Motif in the sense strand can also provide an indication of whether the sequence is immunostimulatory. Once the siRNA molecule is found to be immunostimulatory, it can then be modified to reduce its immunostimulatory properties as described herein. As a non-limiting example, the siRNA sequences are contacted with a mammalian responder cell under conditions such that the cell produces a detectable immune response, and the siRNA is an immunostimulatory or non-immunostimulatory siRNA. Can be determined. The mammalian responder cell may be from a naive mammal (ie, a mammal that has not previously been contacted with the gene product of the siRNA sequence). The mammalian responder cells can be, for example, peripheral blood mononuclear cells (PBMC), macrophages and the like. Detectable immune responses include, for example, the production of cytokines or growth factors such as TNF-alpha, IFN-alpha, IFN-beta, IFN-gamma, IL-6, IL-12, or combinations thereof. obtain. The siRNA molecule identified as immunostimulatory is then modified to reduce its immunostimulatory properties by replacing at least one of the nucleotides of the sense and/or antisense strand with a modified nucleotide. Can be done. For example, less than about 30% (eg, less than about 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, or 5%) of the nucleotides within the duplex region of a siRNA duplex have a 2'OMe. It may be exchanged for modified nucleotides such as nucleotides. The modified siRNA can then be contacted with a mammalian responder cell as described above to confirm that the immunostimulatory properties have been reduced or abrogated.

ＲＮＡｉ剤は、典型的には、サイレンシングが、所望であり、それ故に、当該ＲＮＡｉ剤によって標的化される、ｍＲＮＡと同一であるか、またはほとんど同一である（例えば、と９０％またはそれ以上、例えば、少なくとも９５％の配列同一性を示す、または最大２つおよび任意に１つのみのミスマッチを示す）、少なくとも１６個の塩基、任意に、少なくとも１７個の塩基、より任意に、少なくとも１８個の塩基、さらにより任意に、少なくとも１９個の塩基、および通常、１８〜３５個の塩基、任意に、１９〜３０個の塩基、より任意に、２０〜２５個の塩基、およびさらにより任意に、２１〜２３個の塩基を含む、二本鎖部分（任意の一本鎖オーバーハンドの任意のおよび潜在的に好ましい存在にもかかわらず）を含む。 The RNAi agent is typically identical or nearly identical to the mRNA for which silencing is desired and therefore targeted by the RNAi agent (eg, 90% or more and , At least 95% sequence identity, or at most 2 and optionally only 1 mismatch), at least 16 bases, optionally at least 17 bases, and more optionally at least 18 Bases, even more optionally at least 19 bases, and usually 18 to 35 bases, optionally 19 to 30 bases, more optionally 20 to 25 bases, and even more optional. Contains a double-stranded portion (despite any and potentially preferred presence of any single-stranded overhand) containing 21 to 23 bases.

ある特定の実施形態では、ＲＮＡ鎖の少なくとも１つは、１〜４個のヌクレオチド長さのヌクレオチドオーバーハングを含む。いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡは、少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオチドを含む。ある特定の態様では、１〜４個のヌクレオチドの一本鎖オーバーハングを含むｄｓＲＮＡは、末端ヌクレオチド対に直接隣接する一本鎖オーバーハングの不対ヌクレオチドがプリン塩基を含む、分子を含み得る。いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡの両端上の最後の相補的ヌクレオチド対は、Ｇ−Ｃ対であるか、または最後の４つの末端ヌクレオチド対の少なくとも２つは、Ｇ−Ｃ対である。 In certain embodiments, at least one of the RNA strands comprises a nucleotide overhang 1 to 4 nucleotides in length. In some embodiments, the dsRNA comprises at least one chemically modified nucleotide. In certain aspects, a dsRNA comprising a single-stranded overhang of 1-4 nucleotides may include a molecule in which the unpaired nucleotide of the single-stranded overhang immediately adjacent to the terminal nucleotide pair comprises a purine base. In some embodiments, the last complementary nucleotide pair on each end of the dsRNA is a GC pair, or at least two of the last four terminal nucleotide pairs are a GC pair.

ある特定の実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、マイクロＲＮＡを含む。マイクロＲＮＡは、生物において天然に産生される低分子ＲＮＡの大きな群を表し、これらの一部は、標的遺伝子の発現を調節する。マイクロＲＮＡは、ダイサーによって約７０ヌクレオチドの一本鎖ヘアピン前駆体転写物から形成される。（Ｖ．Ａｍｂｒｏｓｅｔａｌ．，ＣｕｒｒｅｎｔＢｉｏｌｏｇｙ１３：８０７，２００３を参照のこと）。マイクロＲＮＡは、タンパク質へ翻訳されず、しかしそれどころか特定のメッセンジャーＲＮＡと結合し、それによって翻訳を遮断する。マイクロＲＮＡは標的と不正確に塩基対形成して、翻訳を阻害すると考えられている。ある特定のマイクロＲＮＡは、ヘアピンＲＮＡ前駆体として転写され得、ダイサー酵素によって成熟形態へプロセシングされる。 In certain embodiments, RNAi agents comprise microRNA. MicroRNAs represent a large group of small RNAs naturally produced in living organisms, some of which regulate the expression of target genes. MicroRNAs are formed by Dicer from single-stranded hairpin precursor transcripts of approximately 70 nucleotides. (See V. Ambros et al., Current Biology 13:807, 2003). MicroRNAs are not translated into proteins, but rather bind to specific messenger RNAs, thereby blocking translation. MicroRNAs are believed to incorrectly base pair with the target and inhibit translation. Certain microRNAs can be transcribed as hairpin RNA precursors and processed by the Dicer enzyme into the mature form.

ある特定の実施形態では、ＲＮＡｉ剤またはオリゴヌクレオチドは、一本鎖である。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤またはオリゴヌクレオチドは、二本鎖である。ある特定の実施形態は、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を含む。ある特定の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドの第１の鎖は、第２の鎖よりも２つ以上のヌクレオシド残基を含有する。他の実施形態では、第１の鎖および第２の鎖は、同じ数のヌクレオシドを有するが、第１および第２の鎖は、第１の鎖および第２の鎖上の２つの末端ヌクレオシドが、相補的鎖上の残基と対合しないように相殺される。ある特定の場合によっては、対合されない２つのヌクレオシドは、チミジン残基である。 In certain embodiments, RNAi agents or oligonucleotides are single-stranded. In some embodiments, the RNAi agent or oligonucleotide is double stranded. Certain embodiments include small interfering RNA (siRNA). In certain embodiments, the first strand of the double-stranded oligonucleotide contains more than one nucleoside residue than the second strand. In other embodiments, the first and second strands have the same number of nucleosides, but the first and second strands have two terminal nucleosides on the first and second strands. , Offset to prevent pairing with residues on the complementary strand. In one particular case, the two unpaired nucleosides are thymidine residues.

調節剤がｓｉＲＮＡを含む場合によっては、この薬剤は、ｓｉＲＮＡ剤またはその断片が、標的遺伝子またはＲＮＡの下方調節を媒介することができるように、標的領域に対して十分な相同性の領域を含み、ヌクレオチドに関して十分な長さのものである。「リボヌクレオチド」または「ヌクレオチド」という用語は、修飾ＲＮＡまたはヌクレオチドサロゲートの場合、１つ以上の位置における修飾ヌクレオチドまたはサロゲート置換部分を指し得ることも理解されよう。したがって、ｓｉＲＮＡ剤は、標的配列に対して少なくとも部分的に相補的である領域であるか、またはそれを含む。ｓｉＲＮＡ剤と標的配列との間に完全な相補性が存在する必要はないが、対応関係は、例えば、ｓｉＲＮＡ剤またはその開裂産物が、例えば、標的ＲＮＡのＲＮＡｉ開裂によって配列特異的サイレンシングを導くことを可能にするほどに十分でなければならない。標的鎖との相補性または相同性度は、アンチセンス鎖において最も重要である。完全な相補性は、特に、アンチセンス鎖において、しばしば所望されているが、いくつかの実施形態は、１つ以上、但し好ましくは１０、８、６、５、４、３、２個またはそれ未満のミスマッチを標的配列に対して含む。ミスマッチは、末端領域で最も寛容され、存在する場合には、好ましくは、末端領域内、例えば、５’および／または３’末端の６、５、４、または３個のヌクレオチド内の末端領域内にある。センス鎖は、分子の全体的二本鎖特性を維持するためにアンチセンス鎖と十分に相補的であることしか必要でない。 In some cases, where the modulator comprises a siRNA, the agent comprises a region of sufficient homology to the target region so that the siRNA agent or fragment thereof can mediate downregulation of the target gene or RNA. , Of sufficient length in terms of nucleotides. It will also be appreciated that the term "ribonucleotide" or "nucleotide" in the case of modified RNA or nucleotide surrogates may refer to modified nucleotides or surrogate replacement moieties at one or more positions. Thus, a siRNA agent is or comprises a region that is at least partially complementary to a target sequence. While there is no requirement for perfect complementarity between the siRNA agent and the target sequence, the correspondence is such that the siRNA agent or its cleavage product leads to sequence-specific silencing, for example by RNAi cleavage of the target RNA. It should be enough to allow that. The degree of complementarity or homology with the target strand is most important in the antisense strand. Perfect complementarity is often desired, especially in the antisense strand, but some embodiments include one or more, but preferably 10, 8, 6, 5, 4, 3, 2, or 2 or more thereof. Contains less than mismatches to the target sequence. The mismatch is most tolerated in the terminal region and, if present, is preferably within the terminal region, for example within the terminal region within 6, 5, 4, or 3 nucleotides of the 5'and/or 3'ends. It is in. The sense strand need only be sufficiently complementary with the antisense strand to maintain the overall double-stranded character of the molecule.

いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤またはオリゴヌクレオチド、例えば、ｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチドは、修飾されるか、またはヌクレオシドサロゲートを含む。ｓｉＲＮＡ剤の一本鎖領域は、修飾されるか、またはヌクレオシドサロゲートを含み得、例えば、ヘアピン構造の不対領域、例えば、２つの相補的な領域を連結する領域は、修飾またはヌクレオシドサロゲートを有し得る。例えば、エキソヌクレアーゼに対して、ｓｉＲＮＡ剤の１つ以上の３’もしくは５’末端を安定化するための、またはアンチセンスｓｉＲＮＡ剤がＲＩＳＣに入ることを助長するための修飾もまた、含まれる。例示的な修飾は、Ｃ３（またはＣ６、Ｃ７、Ｃ１２）アミノリンカー、チオールリンカー、カルボキシルリンカー、非ヌクレオチドスペーサー（Ｃ３、Ｃ６、Ｃ９、Ｃ１２、脱塩基、トリエチレングリコール、ヘキサエチレングリコール）、ならびにホスホラミダイトとして生じ、かつＲＮＡ合成中に複数のカップリングを可能にするように、別のＤＭＴ保護ヒドロキシル基を有する、特別なビオチンまたはフルオレセイン試薬を含むことができる。 In some embodiments, the RNAi agent or oligonucleotide, eg, siRNA oligonucleotide, is modified or comprises a nucleoside surrogate. The single-stranded region of the siRNA agent can be modified or comprise a nucleoside surrogate, eg, the unpaired region of the hairpin structure, eg, the region connecting the two complementary regions, has the modified or nucleoside surrogate. You can Modifications are also included, for example to exonucleases, to stabilize one or more 3'or 5'ends of the siRNA agent, or to help antisense siRNA agents enter RISC. Exemplary modifications include C3 (or C6, C7, C12) amino linkers, thiol linkers, carboxyl linkers, non-nucleotide spacers (C3, C6, C9, C12, abasic, triethylene glycol, hexaethylene glycol), as well as phosphoramidite. And having a separate DMT-protected hydroxyl group to allow multiple couplings during RNA synthesis.

ある特定のｓｉＲＮＡ剤は、例えば、インターフェロン応答を引き起こすのに十分長い分子（Ｄｉｃｅｒ（Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎｅｔａｌ．２００１．Ｎａｔｕｒｅ，４０９：３６３−３６６）によって切断され、ＲＩＳＣ（ＲＮＡｉ誘発サイレンシング複合体）に入ることができる）を含む。インターフェロン応答を引き起こさないくらい十分長い分子（この分子はまた、Ｄｉｃｅｒによって開裂され、および／またはＲＩＳＣに入ることができる）、例えば、ＲＩＳＣへ入ることを可能にするサイズの分子、例えば、Ｄｉｃｅｒ開裂産物に類似する分子もまた、含まれる。インターフェロン応答を引き起こさないくらい十分短い分子は、本明細書において、ｓｉＲＮＡ剤またはより短いＲＮＡｉ剤と呼ばれる。使用する、「ｓｉＲＮＡ剤またはより短いＲＮＡｉ剤」は、ヒト細胞内で有害なインターフェロン応答を誘発しないくらい十分短い、ｓｉＲＮＡ剤を指し、例えば、それは、６０未満であるが、好ましくは、５０、４０、または３０未満のヌクレオチド対の二重鎖領域を有する。ｓｉＲＮＡ調節剤またはその開裂産物は、例えば、標的ＲＮＡに対してＲＮＡｉを誘発することによって、標的遺伝子を下方制御することができる。 Certain siRNA agents are cleaved by, for example, a molecule long enough to trigger an interferon response (Dicer (Bernstein et al. 2001. Nature, 409:363-366) and enter the RISC (RNAi-induced silencing complex). Can be included). A molecule that is long enough not to provoke an interferon response (this molecule can also be cleaved by Dicer and/or enter RISC), eg, a molecule of a size that allows entry into RISC, eg, Dicer cleavage products. Molecules similar to are also included. Molecules that are short enough not to provoke an interferon response are referred to herein as siRNA agents or shorter RNAi agents. As used, "siRNA agent or shorter RNAi agent" refers to an siRNA agent that is short enough not to elicit a deleterious interferon response in human cells, eg, it is less than 60, but preferably 50, 40. , Or having a duplex region of less than 30 nucleotide pairs. The siRNA modulator or its cleavage product can downregulate the target gene, for example, by inducing RNAi against the target RNA.

場合によっては、ｓｉＲＮＡ剤の各鎖は、約３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、もしくは１５個または約３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、もしくは１５個未満のヌクレオチド長さである。例えば、各鎖は、約２１〜２５個のヌクレオチド長さであり得る。特定のｓｉＲＮＡ剤は、約１７、１８、１９、２９、２１、２２、２３、２４、または２５個のヌクレオチ対の二重鎖領域、および１つ以上のオーバーハング、例えば、１〜３個のヌクレオチドの１つまたは２つの３’オーバーハングを有する。 In some cases, each strand of the siRNA agent comprises about 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 17, 16, or 15 or about 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, or 15 Is less than the nucleotide length. For example, each strand can be about 21-25 nucleotides in length. A particular siRNA agent has about 17, 18, 19, 29, 21, 21, 22, 23, 24, or 25 nucleoti pair duplex regions and one or more overhangs, eg, 1 to 3 It has one or two 3'overhangs of nucleotides.

標的ＲＮＡに対する相同性および標的遺伝子を下方調節する能力に加えて、ｓｉＲＮＡ剤は、以下の特性のうちの１つ以上を有してもよい：それは、極めて多数のまたは全てのヌクレオシドに対してさえ修飾がなされているにもかかわらず、正確な塩基対の形成、および例えば、標的ＲＮＡの切断によって、標的の下方調節を可能にするのに十分な、相同な標的ＲＮＡとの二重鎖構造の形成が可能であるように適切な３次元フレームワークで塩基（または修飾塩基）を提示することができるアンチセンス鎖を有し得、極めて多数のまたは全てのヌクレオシドに対してさえ修飾がなされているにもかかわらず、「ＲＮＡ様」特性をなお有し得、すなわち、リボヌクレオチドベースの内容物だけに限られないか、またはリボヌクレオチドベースの内容物が一部ですらあるとしても、ＲＮＡ分子の全体的な構造的、化学的、および物理的特性を有し得る。例えば、ｓｉＲＮＡ剤は、例えば、全てのヌクレオチド糖が、例えば、２’ヒドロキシルの代わりに２’フルオロを含有するセンスおよび／またはアンチセンス鎖を含有することができる。このデオキシリボヌクレオチド含有剤はなお、ＲＮＡ様特性を示すことが期待され得る。理論に拘束されることを望まないが、電気陰性のフッ素は、リボースのＣ２’位に結合する場合、軸配向を好む。フッ素のこの空間的選好は、同様に、糖にＣ３’エンドパッカーを取ることを強制することできる。これは、ＲＮＡ分子に観察されるのと同じパッカリング様式であり、ＲＮＡに特徴的なＡファミリー型ヘリックスを生じる。さらに、フッ素は、良好な水素結合受容体であるため、ＲＮＡ構造を安定化することが知られている水分子と同じ水素結合相互作用に参与することができる。概して、２’糖位置の修飾部分は、デオキシリボヌクレオチドのＨ部分よりもリボヌクレオチドのＯＨ部分にさらに特徴的であるＨ結合に入ることが可能である。 In addition to the homology to the target RNA and the ability to down-regulate the target gene, siRNA agents may have one or more of the following properties: it is even for a large number or even all nucleosides. Despite the modifications, the formation of a correct base pair and, for example, cleavage of the target RNA, of sufficient duplex structure with the homologous target RNA to allow down-regulation of the target. It may have an antisense strand capable of presenting a base (or modified base) in a suitable three-dimensional framework so that it can be formed, with modifications being made to a very large number or even all nucleosides Nevertheless, it may still have "RNA-like" properties, that is to say that it is not limited to ribonucleotide-based content alone, or even if there is even some ribonucleotide-based content, It may have overall structural, chemical, and physical properties. For example, siRNA agents can contain sense and/or antisense strands where, for example, all nucleotide sugars contain, for example, 2'fluoro instead of 2'hydroxyl. This deoxyribonucleotide-containing agent can still be expected to exhibit RNA-like properties. Without wishing to be bound by theory, electronegative fluorine prefers axial orientation when attached to the C2' position of ribose. This spatial preference for fluorine can also force sugars to take C3' endpackers. This is the same puckering mode observed for RNA molecules, giving rise to RNA-characteristic A-family type helices. In addition, since fluorine is a good hydrogen bond acceptor, it can participate in the same hydrogen bond interactions as water molecules known to stabilize RNA structure. In general, modifying moieties at the 2'sugar position are capable of entering H-bonds that are more characteristic of OH moieties of ribonucleotides than H moieties of deoxyribonucleotides.

本明細書で使用される、「一本鎖ＲＮＡｉ剤」は、単一分子から構成されたＲＮＡｉ剤である。一本鎖ＲＮＡｉ剤は、鎖内対によって形成される二重鎖領域を含んでもよく、例えば、一本鎖ＲＮＡｉ剤は、ヘアピン構造もしくはパンハンドル（ｐａｎ−ｈａｎｄｌｅ）構造であり得るか、またはそれを含み得る。一本鎖ＲＮＡｉを調節する薬剤は、好ましくは、標的分子に関してアンチセンスである。一本鎖ＲＮＡｉ剤は、ＲＩＳＣに入り、ＲＩＳＣを介した標的ｍＲＮＡの切断に関与することができるぐらい十分に長くてもよい。一本鎖ＲＮＡｉ剤は、少なくとも１４個、より好ましくは、少なくとも１５、２０、２５、２９、３５、４０、または５０個のヌクレオチド長さである。それは、好ましくは、２００、１００、または６０個未満のヌクレオチド長さである。 As used herein, a "single-stranded RNAi agent" is an RNAi agent composed of a single molecule. The single-stranded RNAi agent may comprise a double-stranded region formed by an intrastrand pair, eg, the single-stranded RNAi agent may have a hairpin structure or a pan-handle structure, or Can be included. Agents that modulate single-stranded RNAi are preferably antisense with respect to the target molecule. The single-stranded RNAi agent may be long enough to enter RISC and participate in RISC-mediated cleavage of the target mRNA. Single-stranded RNAi agents are at least 14, more preferably at least 15, 20, 25, 29, 35, 40, or 50 nucleotides in length. It is preferably less than 200, 100, or 60 nucleotides in length.

ヘアピンＲＮＡｉ剤は、１７、１８、１９、２９、２１、２２、２３、２４、もしくは２５個のヌクレオチド対に等しいか、または少なくとも１７、１８、１９、２９、２１、２２、２３、２４、もしくは２５個のヌクレオチド対の二重鎖領域を有し得る。二重鎖領域は、好ましくは、２００、１００、もしくは５０個の長さに等しいか、または２００、１００、もしくは５０個未満の長さであり得る。二重鎖領域のある特定の範囲は、１５〜３０、１７〜２３、１９〜２３、および１９〜２１個のヌクレオチド対である。ヘアピンは、好ましくは、３’に、および好ましくは、ヘアピンのアンチセンス側に、一本鎖オーバーハングまたは末端不対領域を有し得る。ある特定の実施形態では、オーバーハングは、２〜３個のヌクレオチ長さである。 The hairpin RNAi agent is equivalent to 17, 18, 19, 29, 21, 22, 23, 24, or 25 nucleotide pairs, or is at least 17, 18, 19, 29, 21, 21, 22, 23, 24, or It may have a duplex region of 25 nucleotide pairs. The double-stranded region is preferably equal to a length of 200, 100 or 50 or less than 200, 100 or 50 in length. Certain ranges of double-stranded regions are 15-30, 17-23, 19-23, and 19-21 nucleotide pairs. The hairpin may preferably have a single-stranded overhang or terminal unpaired region at the 3'and preferably on the antisense side of the hairpin. In certain embodiments, the overhang is 2-3 nucleoti lengths.

本明細書に提供される方法に従って使用されるある特定の調節剤は、キメラオリゴヌクレオチドまたは「キメラ」が、２つ以上の化学的に異なる領域を含有するなどのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを含み、このような領域は、それぞれ、少なくとも１つのモノマー単位、すなわち、オリゴヌクレオチド化合物の場合はヌクレオチドからなっている。これらのオリゴヌクレオチドは、典型的には、少なくとも１つの領域を含み、このオリゴヌクレオチドは、ヌクレアーゼ分解に対する耐性を強化する、細胞取り込みを増強させる、および／または標的核酸に対する結合親和性を増強させるように修飾されている。その結果、キメラオリゴヌクレオチドを使用する場合には、ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドと比較して、より短いオリゴヌクレオチドを用いていられた結果と類似した結果がしばしば得られ得る。キメラオリゴヌクレオチドは、上述のように、２つ以上のオリゴヌクレオチド、修飾オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、および／またはオリゴヌクレオチド模倣体からなる複合構造として形成され得る。このようなオリゴヌクレオチドはまた、当該技術分野において、ハイブリッドまたはギャップマーとも称される。このようなハイブリッド構造の調製を教示する代表的な米国特許としては、米国特許第５，０１３，８３０号、同第５，１４９，７９７号、同第５，２２０，００７号、同第５，２５６，７７５号、同第５，３６６，８７８号、同第５，４０３，７１１号、同第５，４９１，１３３号、同第５，５６５，３５０号、同第５，６２３，０６５号、同第５，６５２，３５５号、同第５，６５２，３５６号、同第５，７００，９２２号、および同第５，９５５，５８９号が挙げられるが、これらに限定されず、これらのそれぞれは、参照により本明細書に組み込まれる。ある特定の実施形態では、キメラオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡ−ＤＮＡ、ＤＮＡ−ＲＮＡ、ＲＮＡ−ＤＮＡ−ＲＮＡ、ＤＮＡ−ＲＮＡ−ＤＮＡ、またはＲＮＡ−ＤＮＡ−ＲＮＡ−ＤＮＡであり、ここで、オリゴヌクレオチドは、５〜６０個のヌクレオチド長さである。 Certain modulators used according to the methods provided herein include RNAi oligonucleotides, such as chimeric oligonucleotides or "chimeras" that contain two or more chemically distinct regions, Each of the regions consists of at least one monomer unit, ie a nucleotide in the case of oligonucleotide compounds. These oligonucleotides typically include at least one region to enhance resistance to nuclease degradation, enhance cellular uptake, and/or enhance binding affinity for a target nucleic acid. Is qualified. As a result, when using chimeric oligonucleotides, results similar to those used with shorter oligonucleotides can often be obtained when compared to phosphorothioate oligonucleotides. Chimeric oligonucleotides can be formed as a composite structure composed of two or more oligonucleotides, modified oligonucleotides, oligonucleotides, and/or oligonucleotide mimetics, as described above. Such oligonucleotides are also referred to in the art as hybrids or gapmers. Representative US patents that teach the preparation of such hybrid structures include US Pat. Nos. 5,013,830, 5,149,797, 5,220,007 and 5,5. 256,775, 5,366,878, 5,403,711, 5,491,133, 5,565,350, 5,623,065, No. 5,652,355, No. 5,652,356, No. 5,700,922, and No. 5,955,589. Are incorporated herein by reference. In certain embodiments, the chimeric oligonucleotide is RNA-DNA, DNA-RNA, RNA-DNA-RNA, DNA-RNA-DNA, or RNA-DNA-RNA-DNA, wherein the oligonucleotide is It is 5 to 60 nucleotides long.

いくつかの態様では、ＲＮＡｉ剤には、変更されたまたは非天然の核酸塩基につながれた少なくとも１つのリガンドを含むオリゴヌクレオチドが含まれる。多数の化合物が、変更された塩基として機能し得る。変更された塩基の構造は、変更された塩基が、その標的、例えば、ｍＲＮＡに対するオリゴヌクレオチドの結合を実質的に妨げることがないはずである程度に重要である。ある特定の実施形態では、変更された塩基は、ジフルオロトリル、ニトロピロリル、ニトロイミダゾリル、ニトロインドリル、ナフタレニル、アントラセニル、ピリジニル、キノリニル、ピレニル、または本明細書に記載される非天然の核酸塩基のいずれか１つの２価のラジカルである。ある特定の実施形態では、非天然の核酸塩基は、ジフルオロトリル、ニトロピロリル、またはニトロイミダゾリルである。ある特定の実施形態では、非天然の核酸塩基は、ジフルオロトリルである。多種多様なリガンドが、当該技術分野で周知である。例えば、リガンドは、ステロイド、胆汁酸、脂質、葉酸、ピリドキサール、Ｂ１２、リボフラビン、ビオチン、芳香族化合物、多環式化合物、クラウンエーテル、干渉物質、切断剤分子、タンパク質結合剤、または炭水化物であり得る。ある特定の実施形態では、リガンドは、ステロイドまたは芳香族化合物である。ある特定の場合によっては、リガンドは、コレステリルである。 In some aspects, the RNAi agent includes an oligonucleotide that includes at least one ligand tethered to an altered or unnatural nucleobase. Many compounds can function as modified bases. The structure of the modified base is important to the extent that the modified base should not substantially interfere with the binding of the oligonucleotide to its target, eg, mRNA. In certain embodiments, the modified base is difluorotolyl, nitropyrrolyl, nitroimidazolyl, nitroindolyl, naphthalenyl, anthracenyl, pyridinyl, quinolinyl, pyrenyl, or any of the non-natural nucleobases described herein. It is one divalent radical. In certain embodiments, the non-natural nucleobase is difluorotolyl, nitropyrrolyl, or nitroimidazolyl. In certain embodiments, the non-natural nucleobase is difluorotolyl. A wide variety of ligands are well known in the art. For example, the ligand can be a steroid, bile acid, lipid, folic acid, pyridoxal, B12, riboflavin, biotin, aromatic compound, polycyclic compound, crown ether, interfering substance, cleaving molecule, protein binder, or carbohydrate. . In certain embodiments, the ligand is a steroid or an aromatic compound. In one particular case, the ligand is cholesteryl.

いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、細胞の標的化および取り込みを改善する目的のためにリガンドにつながれるオリゴヌクレオチドである。例えば、ＲＮＡｉ剤は、抗体またはその抗原結合断片につながれ得る。さらなる例として、ＲＮＡｉ剤は、特定の細胞表面受容体に特異的に結合する、ポリペプチドまたはポリペプチド断片などの特異的なリガンド結合分子につながれ得る。 In some embodiments, the RNAi agent is an oligonucleotide tethered to the ligand for the purpose of improving cell targeting and uptake. For example, the RNAi agent can be linked to an antibody or antigen binding fragment thereof. As a further example, an RNAi agent can be tethered to a specific ligand binding molecule, such as a polypeptide or polypeptide fragment, that specifically binds to a particular cell surface receptor.

ある特定の実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、非天然の核酸塩基を含む。いくつかの実施形態では、非天然の核酸塩基は、ジフルオロトリル、ニトロイミダゾリル、ニトロインドリル、またはニトロピロリルである。ある特定の実施形態では、芳香族化合物に提供される調節剤は、二本鎖オリゴヌクレオチド配列に関し、二本鎖の一本のみが、非天然の核酸塩基を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で使用される調節剤は、二本鎖オリゴヌクレオチド配列に関し、これらの鎖の両方が独立して、少なくとも１つの非天然の核酸塩基を含む。 In certain embodiments, RNAi agents include non-natural nucleobases. In some embodiments, the non-natural nucleobase is difluorotolyl, nitroimidazolyl, nitroindolyl, or nitropyrrolyl. In certain embodiments, modulators provided in aromatic compounds relate to double-stranded oligonucleotide sequences, wherein only one of the duplexes comprises a non-natural nucleobase. In certain embodiments, the modulators used herein relate to double-stranded oligonucleotide sequences, both of which strands independently comprise at least one unnatural nucleobase.

ある特定の場合によっては、ヌクレオシドに天然に存在するリボース糖部分は、ヘキソース糖で置き換えられる。ある特定の態様では、ヘキソース糖は、アロース、アルトロース、グルコース、マンノース、グロース、イドース、ガラクトース、タロース、またはそれらの誘導体である。好ましい実施形態では、ヘキソースは、Ｄ−ヘキソースである。ある特定の場合によっては、ヌクレオシドに天然に存在するリボース糖部分は、多環式ヘテロアルキル環またはシクロヘキセニル基で置き換えられる。ある特定の場合によっては、多環式ヘテロアルキル基は、環内に１個の酸素原子を含む二環式環である。ある特定の場合によっては、多環式ヘテロアルキル基は、ビシクロ［２．２．１］ヘプタン、ビシクロ［３．２．１］オクタン、またはビシクロ［３．３．１］ノナンである。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドの骨格を修飾して、オリゴヌクレオチド化合物の治療用または診断用特性を向上させる。ある特定の実施形態では、塩基の少なくとも１つまたはオリゴヌクレオチドの糖の少なくとも１つを修飾して、オリゴヌクレオチド化合物の治療用または診断用特性を向上させる。オリゴヌクレオチドが二本鎖であるときの場合によっては、二本の鎖は、相補的、部分的に相補的、またはキメラオリゴヌクレオチドである。 In one particular case, the ribose sugar moiety naturally present in the nucleoside is replaced with a hexose sugar. In certain embodiments, the hexose sugar is allose, altrose, glucose, mannose, gulose, idose, galactose, talose, or derivatives thereof. In a preferred embodiment, the hexose is D-hexose. In certain cases, the ribose sugar moiety naturally occurring on a nucleoside is replaced with a polycyclic heteroalkyl ring or a cyclohexenyl group. In certain cases, the polycyclic heteroalkyl group is a bicyclic ring containing one oxygen atom within the ring. In certain cases, the polycyclic heteroalkyl group is bicyclo[2.2.1]heptane, bicyclo[3.2.1]octane, or bicyclo[3.3.1]nonane. In certain embodiments, the backbone of the oligonucleotide is modified to improve the therapeutic or diagnostic properties of the oligonucleotide compound. In certain embodiments, at least one of the bases or at least one of the sugars of the oligonucleotide is modified to enhance the therapeutic or diagnostic properties of the oligonucleotide compound. In some cases when the oligonucleotide is double stranded, the two strands are complementary, partially complementary, or chimeric oligonucleotides.

修飾されたＲＮＡｉ剤の例には、修飾された骨格または非天然のヌクレオチド間連結を含むオリゴヌクレオチドが含まれる。本明細書に定義されるように、修飾された骨格または非天然のヌクレオチド間連結を有するオリゴヌクレオチドには、骨格内にリン原子を保持しているものおよび骨格内にリン原子を保持していないものが含まれる。それらの糖間骨格内にリン原子を有しない修飾されたオリゴヌクレオチドはまた、オリゴヌクレオチドであると考えることができる。特定のオリゴヌクレオチド化学的修飾を、以下に記載する。与えられた化合物中の全ての位置において均一に修飾されている必要はなく、実際、以下の修飾のうちの１つ以上が、単一のオリゴヌクレオチド化合物、またはそれらの単一のヌクレオチドにおいてでさえ組み込まれ得る。 Examples of modified RNAi agents include oligonucleotides containing modified backbones or non-natural internucleotide linkages. Oligonucleotides with modified backbones or non-natural internucleotide linkages, as defined herein, include those that have a phosphorus atom in their backbone and those that do not have a phosphorus atom in their backbone. Things are included. Modified oligonucleotides that do not have a phosphorus atom in their intersugar backbone can also be considered to be oligonucleotides. Specific oligonucleotide chemical modifications are described below. It need not be uniformly modified at all positions in a given compound, in fact one or more of the following modifications can occur in a single oligonucleotide compound, or even in those single nucleotides. Can be incorporated.

修飾されたヌクレオチド間連結または骨格の例には、例えば、ホスホロチオエート、キラルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、メチルおよびその他のアルキルホスホナート（３’−アルキレンホスホナートおよびキラルホスホナートを含む）、ホスフィナート、ホスホロアミダート（３’−アミノホスホロアミダートおよびアミノアルキルホスホロアミダート類を含む）、チオノホスホロアミダート、チオノアルキルホスホナート、チオノアルキルホスホトリエステル、およびボラノホスフェート（正常な３’−５’連結を有するもの、これらの２’−５’連結された類似体、ならびに、極性が逆であるもの、このとき、隣接するヌクレオシドユニット対は、３’−５’から５’−３’に、２’−５’から５’−２’に連結している）などが含まれる。様々な塩、混合塩、および遊離酸型もまた含まれる。 Examples of modified internucleotide linkages or backbones include, for example, phosphorothioates, chiral phosphorothioates, phosphorodithioates, phosphotriesters, aminoalkylphosphotriesters, methyl and other alkylphosphonates (3'-alkylenephosphonates and Chiral phosphonates), phosphinates, phosphoramidates (including 3'-aminophosphoramidates and aminoalkylphosphoramidates), thionophosphoramidates, thionoalkylphosphonates, thionoalkyls Phosphotriesters and boranophosphates (those with normal 3'-5' linkages, their 2'-5' linked analogues, and those with opposite polarities, in which adjacent nucleoside units are present. A pair includes 3'-5' to 5'-3', 2'-5' to 5'-2') and the like. Various salts, mixed salts, and free acid forms are also included.

上記のリン原子含有連結の調製を教示する代表的な米国特許としては、米国特許第３，６８７，８０８号、同第４，４６９，８６３号、同第４，４７６，３０１号、同第５，０２３，２４３号、同第５，１７７，１９６号、同第５，１８８，８９７号、同第５，２６４，４２３号、同第５，２７６，０１９号、同第５，２７８，３０２号、同第５，２８６，７１７号、同第５，３２１，１３１号、同第５，３９９，６７６号、同第５，４０５，９３９号、同第５，４５３，４９６号、同第５，４５５，２３３号、同第５，４６６，６７７号、同第５，４７６，９２５号、同第５，５１９，１２６号、同第５，５３６，８２１号、同第５，５４１，３０６号、同第５，５５０，１１１号、同第５，５６３，２５３号、同第５，５７１，７９９号、同第５，５８７，３６１号、同第５，６２５，０５０号、および同第５，６９７，２４８号が挙げられるが、これらに限定されず、これらのそれぞれは、参照により本明細書に組み込まれる。 Representative U.S. Patents that teach the preparation of the above phosphorus atom-containing linkages include U.S. Patent Nos. 3,687,808, 4,469,863, 4,476,301, and 5 No. 023,243, No. 5,177,196, No. 5,188,897, No. 5,264,423, No. 5,276,019, No. 5,278,302. No. 5,286,717, No. 5,321,131, No. 5,399,676, No. 5,405,939, No. 5,453,496, No. 5, 455, 233, 5, 466, 677, 5, 476, 925, 5, 519, 126, 5, 536, 821, 5, 541, 306, No. 5,550,111, No. 5,563,253, No. 5,571,799, No. 5,587,361, No. 5,625,050, and No. 5,. 697,248, but is not limited thereto, each of which is incorporated herein by reference.

その中にリン原子を含まない、修飾されたヌクレオチド間連結または骨格（すなわち、オリゴヌクレオチド）の例は、短鎖アルキルまたはシクロアルキル糖間連結、ヘテロ原子とアルキルもしくはシクロアルキルが混じった糖間連結、あるいは、１つ以上の短鎖ヘテロ原子もしくは複素環式糖間連結によって形成された骨格を有する。これらには、モルホリノ連結（ヌクレオシドの糖部分からその一部が形成されている）；シロキサン骨格；スルフィド、スルホキシドおよびスルホン骨格；ホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格；メチレンホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格；アルケン含有骨格；スルファメート骨格、メチレンイミノおよびメチレンヒドラジノ骨格；スルホナートおよびスルホンアミド骨格；アミド骨格；ならびに、Ｎ、Ｏ、Ｓ、およびＣＨ_２の構成部分が混じったその他の骨格などが含まれる。 Examples of modified internucleotide linkages or backbones (ie, oligonucleotides) that do not contain a phosphorus atom are short chain alkyl or cycloalkyl sugar interlinks, heteroatom and alkyl or cycloalkyl intersugar linkages. Alternatively, it has a skeleton formed by one or more short chain heteroatoms or heterocyclic sugar interlinkages. These include morpholino linkages (part of which is formed from the sugar portion of the nucleoside); siloxane skeletons; sulfide, sulfoxide and sulfone skeletons; formacetyl and thioform acetyl skeletons; methylene formacetyl and thioform acetyl skeletons; alkenes. Containing skeletons; sulfamate skeletons, methyleneimino and methylenehydrazino skeletons; sulfonate and sulfonamide skeletons; amide skeletons; and other skeletons mixed with N, O, S, and CH ₂ constituents.

上記のオリゴヌクレオチドの調製を教示する代表的な米国特許としては、米国特許第５，０３４，５０６号、同第５，１６６，３１５号、同第５，１８５，４４４号、同第５，２１４，１３４号、同第５，２１６，１４１号、同第５，２３５，０３３号、同第５，２６４，５６２号、同第５，２６４，５６４号、同第５，４０５，９３８号、同第５，４３４，２５７号、同第５，４６６，６７７号、同第５，４７０，９６７号、同第５，４８９，６７７号、同第５，５４１，３０７号、同第５，５６１，２２５号、同第５，５９６，０８６号、同第５，６０２，２４０号、同第５，６１０，２８９号、同第５，６０２，２４０号、同第５，６０８，０４６号、同第５，６１０，２８９号、同第５，６１８，７０４号、同第５，６２３，０７０号、同第５，６６３，３１２号、同第５，６３３，３６０号、同第５，６７７，４３７号、および同第５，６７７，４３９号が挙げられるが、これらに限定されず、これらのそれぞれは、参照により本明細書に組み込まれる。 Representative US patents that teach the preparation of the above oligonucleotides include US Pat. Nos. 5,034,506, 5,166,315, 5,185,444 and 5,214. , 134, 5,216,141, 5,235,033, 5,264,562, 5,264,564, 5,405,938, No. 5,434,257, No. 5,466,677, No. 5,470,967, No. 5,489,677, No. 5,541,307, No. 5,561, No. 225, No. 5,596,086, No. 5,602,240, No. 5,610,289, No. 5,602,240, No. 5,608,046, No. 5 5,610,289, 5,618,704, 5,623,070, 5,663,312, 5,633,360, 5,677,437. And No. 5,677,439, each of which is hereby incorporated by reference, without limitation.

オリゴヌクレオチド模倣体の他の例では、糖およびヌクレオシド間連結の両方、すなわち、ヌクレオシド単位の骨格が他の基で置換され得る。ヌクレオシド単位は、適切な核酸標的化合物とのハイブリダイゼーションのために維持されている。卓越したハイブリダイゼーション特性を有することが示されている、１つのそのようなオリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオチド模倣体は、ペプチド核酸（ＰＮＡ）と称されている。ＰＮＡ化合物においては、オリゴヌクレオチドの糖骨格は、アミド含有骨格、特に、アミノエチルグリシン骨格に置換されている。核酸塩基は、保持されており、骨格のアミド部分の原子に直接または間接的に結合している。ＰＮＡ化合物の調製を教示する代表的な米国特許としては、米国特許第５，５３９，０８２号、同第５，７１４，３３１号、および同第５，７１９，２６２号が挙げられるが、これらに限定されず、これらのそれぞれは、参照により本明細書に組み込まれる。ＰＮＡ化合物のさらなる教示は、Ｎｉｅｌｓｅｎｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９１，２５４，１４９７において見出され得る。 In other examples of oligonucleotide mimetics, both sugar and internucleoside linkages, ie, the backbone of the nucleoside units, may be replaced with other groups. The nucleoside unit is maintained for hybridization with the appropriate nucleic acid target compound. One such oligonucleotide, an oligonucleotide mimetic, which has been shown to have excellent hybridization properties, is referred to as a peptide nucleic acid (PNA). In PNA compounds, the sugar skeleton of the oligonucleotide is replaced with an amide-containing skeleton, in particular an aminoethylglycine skeleton. The nucleobase is retained and is directly or indirectly attached to an atom of the backbone amide moiety. Representative US patents teaching the preparation of PNA compounds include US Pat. Nos. 5,539,082, 5,714,331, and 5,719,262, which include Without limitation, each of these is incorporated herein by reference. Further teachings of PNA compounds can be found in Nielsen et al. , Science, 1991, 254, 1497.

リボザイムを使用するオリゴヌクレオチドもまた含まれる。高度に特異的なエンドリボヌクレアーゼ活性を触媒する、合成ＲＮＡ分子およびそれらの誘導体は、リボザイムとして知られている。（一般的には、Ｈａｓｅｌｏｆｆらによる米国特許第５，５４３，５０８号およびＧｏｏｄｃｈｉｌｄらによる米国特許第５，５４５，７２９号を参照のこと）。切断反応は、ＲＮＡ分子自身によって触媒される。天然に存在するＲＮＡ分子においては、自己触媒切断部位は、ＲＮＡの二次構造の高度に保存された領域内に存在している（Ｂｕｚａｙａｎｅｔａｌ．，ＰＮＡＳＵＳＡ．８３：８８５９，１９８６）。天然に存在する自己触媒性ＲＮＡ分子を修飾し、特定の細胞性または病原性ＲＮＡ分子を高い特異度を有する標的化することができるリボザイムを生成する。したがって、リボザイムは、アンチセンスオリゴヌクレオチドと同じ一般的目的（すなわち、特定の遺伝子の発現制御）に役立ち、オリゴヌクレオチドと同様に、一本鎖の鎖状態のかなりの部分を有する核酸である。すなわち、リボザイムは、オリゴヌクレオチドと実質的な化学的および機能的同一性を有しており、したがって、本明細書に記載される目的に対しては等価物であると考えられる。 Also included are oligonucleotides that use ribozymes. Synthetic RNA molecules and their derivatives that catalyze highly specific endoribonuclease activity are known as ribozymes. (See generally, US Pat. No. 5,543,508 by Haseloff et al. and US Pat. No. 5,545,729 by Goodchild et al.). The cleavage reaction is catalyzed by the RNA molecule itself. In naturally-occurring RNA molecules, the autocatalytic cleavage site is located within a highly conserved region of RNA secondary structure (Buzayan et al., PNAS USA. 83:8859, 1986). Naturally occurring autocatalytic RNA molecules are modified to produce ribozymes that can target specific cellular or pathogenic RNA molecules with high specificity. Ribozymes, therefore, serve the same general purpose as antisense oligonucleotides (ie, control of expression of specific genes) and, like oligonucleotides, are nucleic acids that have a significant portion of the single-stranded chain state. That is, ribozymes have substantial chemical and functional identity with oligonucleotides and are therefore considered equivalent for the purposes described herein.

ある特定の場合によっては、ＲＮＡｉ剤は、非リガンド基によって修飾され得る。多数の非リガンド分子は、オリゴヌクレオチドの活性、細胞性分布、細胞標的化、または細胞取り込みを増強させるためにコンジュゲートされており、そのようなコンジュゲーションを行うための手順は、参考文献から入手可能である。非リガンド部分の例には、脂質部分、例えば、コレステロール（Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８９，８６：６５５３）、コール酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎｅｔａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９４，４：１０５３）、チオエーテル、例えば、ヘキシル−５−トリチルチオール（Ｍａｎｏｈａｒａｎｅｔａｌ．，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１９９２，６６０：３０６、Ｍａｎｏｈａｒａｎｅｔａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔ．，１９９３，３：２７６５）、チオコレステロール（Ｏｂｅｒｈａｕｓｅｒｅｔａｌ．，Ｎｕｃｌ．ＡｃｉｄｓＲｅｓ．，１９９２，２０：５３３）、脂肪族鎖、例えば、ドデカンジオールもしくはウンデシル残基（Ｓａｉｓｏｎ−Ｂｅｈｍｏａｒａｓｅｔａｌ．，ＥＭＢＯＪ．，１９９１，１０：１１１、Ｋａｂａｎｏｖｅｔａｌ．，ＦＥＢＳＬｅｔｔ．，１９９０，２５９：３２７、Ｓｖｉｎａｒｃｈｕｋｅｔａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ，１９９３，７５：４９）、リン脂質、例えば、ジ−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロールもしくはトリエチルアンモニウム１，２−ジ−Ｏ−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロ−３−Ｈ−ホスホナート（Ｍａｎｏｈａｒａｎｅｔａｌ．，ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔ．，１９９５，３６：３６５１、Ｓｈｅａｅｔａｌ．，Ｎｕｃｌ．ＡｃｉｄｓＲｅｓ．，１９９０，１８：３７７７）、ポリアミンもしくはポリエチレングリコール鎖（Ｍａｎｏｈａｒａｎｅｔａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ＆Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１９９５，１４：９６９）、あるいはアダマンタン酢酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎｅｔａｌ．，ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔ．，１９９５，３６：３６５１）、パルミチル部分（Ｍｉｓｈｒａｅｔａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１９９５，１２６４：２２９）、あるいはオクタデシルアミンもしくはヘキシルアミノ−カルボニル−オキシコレステロール部分（Ｃｒｏｏｋｅｅｔａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，１９９６，２７７：９２３）が含まれる。典型的なコンジュゲーションプロトコルは、配列の１つ以上の位置においてアミノリンカーを有するオリゴヌクレオチドを合成することを含む。次いで、アミノ基に、適切なカップリングまたは活性化試薬を用い、コンジュゲートされた分子を反応させる。コンジュゲーション反応は、オリゴヌクレオチドが固体支持体に結合したままの状態で、または、オリゴヌクレオチドを液相中に切断した後のいずれでも行うことができる。ＨＰＬＣによるオリゴヌクレオチドコンジュゲートの精製することにより、典型的には、純粋なコンジュゲートが得られる。 In certain cases, RNAi agents may be modified with non-ligand groups. Many non-ligand molecules have been conjugated to enhance oligonucleotide activity, cellular distribution, cell targeting, or cellular uptake, and procedures for performing such conjugation are available from references. It is possible. Examples of non-ligand moieties include lipid moieties such as cholesterol (Letsinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86:6553), cholic acid (Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1994, 4: 1053), thioethers, such as hexyl-5-tritylthiol (Manoharan et al., Ann. NY Acad. Sci., 1992, 660: 306, Manoharan et al., Bioorg. Chem. Let., 1993, 3:2765), thiocholesterol (Oberhauser et al., Nucl. Acids Res., 1992, 20:533), aliphatic chains such as dodecanediol or undecyl residues (Saison). -Behmoaras et al., EMBO J., 1991, 10:111, Kabanov et al., FEBS Lett., 1990, 259:327, Svinarchuk et al., Biochimie, 1993, 75:49), phospholipids, e.g. Di-hexadecyl-rac-glycerol or triethylammonium 1,2-di-O-hexadecyl-rac-glycero-3-H-phosphonate (Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651, Shea et al.,. Nucl. Acids Res., 1990, 18:3777), polyamines or polyethylene glycol chains (Manoharan et al., Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14:969), or adamantane acetic acid (Manoharan et al., Tetrahedron, Tetrahedron. 3651), a palmityl moiety (Mishra et al., Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264:229), or an octadecylamine or hexylamino-carbonyl-oxycholesterol moiety (Crooke et al., J. Pharmacol. Exp. Ther. , 1996, 277:923). A typical conjugation protocol involves synthesizing an oligonucleotide with an amino linker at one or more positions in the sequence. The amino group is then reacted with the conjugated molecule using an appropriate coupling or activating reagent. The conjugation reaction can be performed either while the oligonucleotide remains bound to the solid support or after the oligonucleotide has been cleaved into the liquid phase. Purification of the oligonucleotide conjugate by HPLC typically affords the pure conjugate.

ある特定の例示的なＲＮＡｉ剤は、ベクターにおける送達を提供する。「ベクター」という用語は、概して、核酸分子、典型的には、ＤＮＡを指し、核酸セグメントは、挿入され、クローン化、すなわち、伝播され得る。したがって、ベクターは、典型的には、１つ以上の独自の制限酵素認識部位を含み、クローン化した配列が再生可能であるため、定義された宿主またはビヒクル生物における自己複製が可能であり得る。ベクターとしては、プラスミド、ファージミド、バクテリオファージ、バクテリオファージ由来ベクター、ＰＡＣ、ＢＡＣ、直鎖状核酸、例えば、直鎖状ＤＮＡ、ウイルスベクターなどを含み得る。発現ベクターは、そこに導入された核酸もしくはＯＲＦの発現を所望の発現系、例えばインビトロで、宿主細胞、宿主器官および／もしくは宿主生物において可能にし、かつ／または実行するように一般的に構成される。例えば、発現ベクターは、好適な調節配列を有利に含んでよい。 Certain exemplary RNAi agents provide for delivery in a vector. The term "vector" generally refers to nucleic acid molecules, typically DNA, into which nucleic acid segments can be inserted, cloned, or propagated. Thus, the vector typically contains one or more unique restriction enzyme recognition sites, and the cloned sequence is reproducible, allowing for self-replication in a defined host or vehicle organism. Vectors may include plasmids, phagemids, bacteriophages, bacteriophage-derived vectors, PACs, BACs, linear nucleic acids such as linear DNA, viral vectors and the like. The expression vector is generally configured to allow and/or carry out the expression of the nucleic acid or ORF introduced therein in the desired expression system, eg, in vitro, in the host cell, host organ and/or host organism. It For example, the expression vector may advantageously include suitable regulatory sequences.

本明細書で使用するための例示的なベクターは、ウイルスベクターを含み、これは、公知であり、例えば、限定されず、レトロウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）由来のベクターを含む。このようなウイルスベクターは、本明細書に開示されるアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤のうちのいずれか１つをコードする核酸配列をここに導入するように、それ自体知られる組換え技術によって操作され得る。 Exemplary vectors for use herein include viral vectors, which are known and are, for example and without limitation, retroviruses, vaccinia viruses, poxviruses, adenoviruses, adeno-associated viruses (AAV). Includes the vector of origin. Such viral vectors can be engineered by recombinant techniques known per se to introduce therein a nucleic acid sequence encoding any one of the antisense or RNAi agents disclosed herein. ..

例えば、レトロウイルスベクターは、ＲＮＡｉ剤を送達するために本明細書で使用され得る。概して、レトロウイルスベクターは、対象となる宿主細胞ゲノムおよび核酸配列、例えば、特に、本明細書に開示されているアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤のうちの１つをコードする核酸配列への組換えウイルスゲノム（ランダムに）の統合に必要な構成要素をコードするレトロウイルスゲノム配列を含み得る。このようなレトロウイルスベクターは、標準的な組換え技術を用いて、例えば、Ｂ、Ｃ、およびＤ型レトロウイルス、ならびにスプマウイルスおよびレンチウイルスを含む様々なレトロウイルスから容易に構築され得る（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，２ｄｅｄ．，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ，１９８９）（ＲＮＡＴｕｍｏｒＶｉｒｕｓｅｓ，ＳｅｃｏｎｄＥｄｉｔｉｏｎ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８５を参照のこと）。 For example, a retroviral vector can be used herein to deliver an RNAi agent. In general, a retroviral vector is a recombinant viral genome into a host cell genomic and nucleic acid sequence of interest, eg, a nucleic acid sequence encoding one of the antisense or RNAi agents disclosed herein, among others. It may include a retroviral genomic sequence encoding the components required for (random) integration. Such retroviral vectors can be readily constructed using standard recombinant techniques from a variety of retroviruses, including, for example, B, C, and D retroviruses, and spumaviruses and lentiviruses (eg, See Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989) (RNA Tumor Viruses, Secourd, Lord, Cour., Ed.

組換えアデノウイルスベクターはまた、宿主細胞において本明細書に開示されているように、ＲＮＡｉ剤の送達および発現のために企図され得る。アデノウイルスに基づいたウイルスベクターは、非***宿主細胞を感染させることができるという利点があるが、組換えウイルスゲノムは、宿主細胞ゲノムに統合されない。例えば、好適なアデノウイルスベクター、その組換えアデノウイルスベクターを構築するための方法、および宿主細胞に組換えベクターを送達するための方法は、ＸｉａＨｅｔａｌ．（２００２）において記載されている（Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２０：１００６−１０１０）。組換えＡＡＶ（ＲＡＡＶ）ベクターの使用はまた、本明細書に企図される。ＲＡＡＶベクターは、***および非***細胞の両方に感染させることができ、その組換えウイルスゲノムを宿主の組換えウイルスゲノムに組み込んでもよい。ＲＡＡＶベクターは、例えば、血清型１〜６を含む、様々なアデノ随伴ウイルスから生成され得る。概して、ＲＡＡＶベクターは、順に、５’アデノ随伴ウイルス逆方向末端反復（ＩＴＲ）、対象となる核酸、例えば、特に、宿主細胞または宿主生物においてその発現を調節する配列に作動可能に連結される、本明細書に開示されているアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤のいずれか１つをコードする核酸配列、および３’アデノ随伴ウイルスのＩＴＲを含み得る。加えて、ｒＡＡＶベクターは、好ましくは、ポリアデニル化シグナルを有し得る。好適なＲＡＡＶベクターは、とりわけ、ＷＯ１９９４／１３７８８、ＷＯ１９９３／２４６４１、Ｇｏｙｅｎｖａｌｌｅｅｔａｌ．２００４（Ｓｃｉｅｎｃｅ３０６：１７９６−１７９９）に記載されており、アンチセンス配列は、修飾されたＵ７小型核ＲＮＡに連結されている。 Recombinant adenovirus vectors may also be contemplated for delivery and expression of RNAi agents as disclosed herein in host cells. Adenovirus-based viral vectors have the advantage of being able to infect non-dividing host cells, but the recombinant viral genome is not integrated into the host cell genome. For example, suitable adenovirus vectors, methods for constructing the recombinant adenovirus vectors, and methods for delivering the recombinant vectors to host cells are described in Xia H et al. (2002) (Nat. Biotech. 20: 1006-1010). The use of recombinant AAV (RAAV) vectors is also contemplated herein. RAAV vectors are capable of infecting both dividing and non-dividing cells and may integrate their recombinant viral genome into the recombinant viral genome of the host. RAAV vectors can be generated from various adeno-associated viruses, including, for example, serotypes 1-6. In general, a RAAV vector is in turn operatively linked to a 5'adeno-associated virus inverted terminal repeat (ITR), a nucleic acid of interest, eg, a sequence that regulates its expression, particularly in a host cell or host organism, A nucleic acid sequence encoding any one of the antisense or RNAi agents disclosed herein, and a 3′ adeno-associated virus ITR may be included. In addition, the rAAV vector may preferably have a polyadenylation signal. Suitable RAAV vectors are described, inter alia, in WO1994/13788, WO1993/24641, Goyenvalle et al. 2004 (Science 306:1796-1799), the antisense sequence is linked to a modified U7 small nuclear RNA.

本明細書に使用するための他の例示的なウイルスベクターは、ワクシニアウイルスなどのポックスウイルス、例えば、弱毒化したワクシニアウイルス、例えば、修飾ウイルスアンカラ（ＭＶＡ）またはＮＹＶＡＣ、アビポックスウイルス、例えば、家禽ジフテリアウイルスまたはカナリア痘ウイルスから由来するベクターである。 Other exemplary viral vectors for use herein are poxviruses such as vaccinia virus, eg attenuated vaccinia virus, eg modified virus Ankara (MVA) or NYVAC, avipoxvirus, eg poultry. It is a vector derived from diphtheria virus or canarypox virus.

ｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチドを含むＲＮＡｉオリゴヌクレオチドなどの調節剤のさらなる例は、米国特許出願公開第２００９／０３１２５３１号、同第２００９／０３１８６７６号、同第２０１１／０１１７１２５号、同第２０１１／０２６９８１４号、同第２００７／０２７５４６５号、同第２００７／００５４２７９号、同第２００６／０２８７２６０号、同第２００６／００３５２５４号、および同第２００６／０００８８２２号において見出され得、これらは、参照により組み込まれる。 Further examples of modulators such as RNAi oligonucleotides, including siRNA oligonucleotides, are disclosed in US Patent Application Publication Nos. 2009/0312531, 2009/0318676, 2011/0117125, 2011/0269814, and 2007/0275465, 2007/0054279, 2006/0287260, 2006/0035254, and 2006/0008822, which are incorporated by reference.

使用方法
ある特定の実施形態は、免疫療法剤のみまたは免疫療法剤と組み合わせて肺の炎症を治療するために本明細書に記載される、ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび組成物の使用を含む。間質性肺疾患（ＩＬＤ）および関連障害の治療も含まれる。いくつかの実施形態では、ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび組成物、方法、および／または併用療法は、肺の炎症の治療を必要とする対象における肺の炎症を減少させる、１つ以上のＩＬＤを治療する、および／または疾患の臨床症状もしくはパラメータを改善するために使用される。 Methods of Use Certain embodiments use the HRS polypeptides/expressible polynucleotides and compositions described herein to treat pulmonary inflammation alone or in combination with immunotherapeutic agents. including. Treatment of interstitial lung disease (ILD) and related disorders is also included. In some embodiments, the HRS polypeptides/expressible polynucleotides and compositions, methods, and/or combination therapies reduce lung inflammation in a subject in need of treatment for lung inflammation, one or more. Used to treat ILD and/or ameliorate the clinical symptoms or parameters of the disease.

したがって、いくつかの実施形態は、肺の炎症の治療を必要とする対象においてそれを行う方法であって、対象に、ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチド（例えば、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチド）、またはＨＲＳポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチドを投与することを含む、方法を含む。 Accordingly, some embodiments are methods of doing so in a subject in need of treatment of lung inflammation, wherein the subject is a histidyl-tRNA synthetase (HRS) polypeptide (eg, HRS-Fc fusion polypeptide). , Or administering an expressible polynucleotide encoding a HRS polypeptide.

ある特定の実施形態は、肺の炎症の治療を必要とする対象においてそれを行う方法であって、対象に、（ａ）ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチドまたはＨＲＳポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチドと、（ｂ）例えば、本明細書に記載される、免疫調節剤とを投与することを含む、方法を含む。いくつかの実施形態では、（ａ）および（ｂ）は、別々に投与され、任意に、本明細書に記載されるように定義される。ある特定の実施形態では、（ａ）および（ｂ）は、一緒に、任意に、本明細書に記載の治療用組成物として投与される。 Certain embodiments are methods of doing so in a subject in need of treatment of lung inflammation, wherein the subject comprises (a) a histidyl-tRNA synthetase (HRS) polypeptide or an expressible HRS polypeptide-encoding polypeptide. Of the polynucleotide and (b) an immunomodulator, eg, as described herein, are included. In some embodiments, (a) and (b) are administered separately, optionally defined as described herein. In certain embodiments, (a) and (b) are administered together, optionally as a therapeutic composition described herein.

特定の実施形態では、免疫調節剤は、ピルフェニドンまたはニンテダニブである。いくつかの方法または組成物では、ピルフェニドンは、約５０〜約１０００ｍｇの範囲である個々の投与量単位、あるいは約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、もしくは１０００ｍｇ、約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、もしくは１０００ｍｇ以下、または少なくとも約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、もしくは１０００ｍｇの個々の投与量単位で、例えば、経口投与用の約１つ、２つ、または３つのカプセルで投与される。 In certain embodiments, the immunomodulator is pirfenidone or nintedanib. In some methods or compositions, the pirfenidone is in individual dosage units ranging from about 50 to about 1000 mg, or about 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150. , 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400. , 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 10, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650. , 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900. , 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, or 1000 mg, about 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180. , 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430. 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 10, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680. , 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930. , 940, 950, 960, 970, 980, 990, or 1000 mg or less, or at least about 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450,460 470, 480, 490, 500, 10, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710. , 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960. , 970, 980, 990, or 1000 mg in individual dosage units, eg, about 1, 2, or 3 capsules for oral administration.

いくつかの実施形態では、ピルフェニドンは、約１００〜約４０００ｍｇ／日の範囲である１日投与量単位で、あるいは約１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００、３６００、３７００、３８００、３９００、もしくは４０００ｍｇ／日、約１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００、３６００、３７００、３８００、３９００、もしくは４０００ｍｇ／日以下、または少なくとも約１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００、３６００、３７００、３８００、３９００、もしくは４０００ｍｇ／日の１日投与量単位で、例えば、経口投与用の約１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つのカプセルで投与される。 In some embodiments, the pirfenidone is in a daily dosage unit ranging from about 100 to about 4000 mg/day, or about 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 10, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000, 1200, 1300, 1400, 1500, 1600, 1700, 1800, 2000, 2100, 2200, 2300, 2400, 2500, 2600, 2700, 2800, 2900, 3000, 3100, 3200, 3300, 3400, 3500, 3600, 3700, 3800, 3900, or 4000 mg/day, about 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 10, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000, 1200, 1300, 1400, 1500, 1600, 1700, 1800, 2000, 2100, 2200, 2300, 2400, 2500, 260 0, 2700, 2800, 2900, 3000, 3100, 3200, 3300, 3400, 3500, 3600, 3700, 3800, 3900, or 4000 mg/day or less, or at least about 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160. , 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410. , 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 10, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660. , 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910. , 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000, 1200, 1300, 1400, 1500, 1600, 1700, 1800, 2000, 2100, 2200, 2300, 2400, 2500, 2600, 2700, 2800. 2,900, 3000, 3100, 3200, 3300, 3400, 3500, 3600, 3700, 3800, 3900, or 4000 mg/day in daily dosage units, eg, about 1, 2, 3 for oral administration It is administered in 4, 5, 6, 7, 8, 9 capsules.

特定の実施形態では、ピルフェニドンは、約８００ｍｇ（例えば８０１ｍｇ）、例えば、個々の投与量につき３つのカプセルとして服用される、経口投与用の３つの約２６７ｍｇのカプセルとして投与されるか、またはピルフェニドンは、約２４００ｍｇ／日（例えば２４０３ｍｇ／日）の１日投与量単位で、例えば、個々の投与量につき３つのカプセルとして服用される、１日３回の経口投与用の９つの約２６７ｍｇのカプセルとして投与される。 In certain embodiments, pirfenidone is administered as about 800 mg (eg, 801 mg), eg, as three capsules per individual dose, three about 267 mg capsules for oral administration, or pirfenidone is , In a daily dose unit of about 2400 mg/day (eg 2403 mg/day), eg as nine capsules of about 267 mg for oral administration three times daily, taken as three capsules per individual dose Is administered.

いくつかの方法または組成物では、ニンテダニブは、約１０〜約５００ｍｇの範囲である個々の投与量単位、あるいは約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、もしくは５００ｍｇ、約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、もしくは５００ｍｇ以下、または少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、もしくは５００ｍｇの個々の投与量単位で、例えば、約１つ、２つ、または３つのカプセルで投与される。 In some methods or compositions, nintedanib is in individual dosage units ranging from about 10 to about 500 mg, or about 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110. , 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360. 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, or 500 mg, about 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100. , 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350. 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, or 500 mg or less, or at least about 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, or 500 mg in individual dosage units, eg, about 1, It is given in 2 or 3 capsules.

いくつかの実施形態では、ニンテダニブは、約２０〜約１０００ｍｇ／日の範囲である１日投与量単位で、あるいは約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００ｍｇ／日、約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００ｍｇ／日以下、または少なくとも約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００ｍｇ／日の１日投与量単位で、例えば、約１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのカプセルで投与される。 In some embodiments, nintedanib is in a daily dosage unit ranging from about 20 to about 1000 mg/day, or about 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000 mg/day, about 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110 , 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360. 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610. , 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860. , 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000 mg/day or less, or at least about 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90. , 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340. , 350, 360, 370, 380, 390, 400, 4 10, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000 mg/day in daily dosage units, eg, about 1, 2, 3, 4, 5, or 6 It is administered in capsules.

特定の実施形態では、ニンテダニブは、約１００〜１５０ｍｇの範囲である、または約２００〜３００ｍｇ／日の範囲である１日投与量単位で、例えば、１日１回または２回の投与量で投与されるか、あるいはニンテダニブは、約１００〜１５０ｍｇの１日投与量単位、または約２００〜３００ｍｇ／日で、例えば、１日１回または２回の投与量で投与される。 In certain embodiments, nintedanib is administered in a daily dosage unit that is in the range of about 100-150 mg, or in the range of about 200-300 mg/day, eg, once or twice daily. Alternatively, nintedanib is administered in a daily dosage unit of about 100-150 mg, or about 200-300 mg/day, eg, once or twice daily.

いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、ＨＲＳポリペプチドのみと比較して、ＨＲＳポリペプチドの１つ以上の薬物動態学的特徴を変化させるか、または改善する。薬物動態学的特徴の例には、安定性もしくは半減期、バイオアベイラビリティ（吸収される薬物の分率）、組織分布、分布容積（薬物が静脈内注射された直後に分布し、血漿と周辺組織との間で平衡に達する、見かけの容積）、濃度（血漿中の薬物の初期または定常状態濃度）、排出速度定数（薬物が身体から除去される速度）、排出速度（排出のバランスをとるために必要とされる注入の速度）、濃度−時間グラフの曲線下面積（ＡＵＣまたは曝露；単一の用量後の、または定常状態における、濃度−時間曲線の積分）、クリアランス（単位時間当たりの薬物が一掃される血漿の体積）、Ｃ_ｍａｘ（経口投与後の薬物のピーク血漿濃度）、ｔ_ｍａｘ（Ｃ_ｍａｘに達するまでの時間）、Ｃ_ｍｉｎ（次の用量が投与される前に薬物が到達する最も低い濃度）、および変動（定常状態における１回の投薬間隔内のピークトラフ変動）が含まれる。特定の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドの１つ以上の変化する薬物動態学的特徴は、血清濃度の増加、血清半減期の増加、バイオアベイラビリティの増加、曝露（ＡＵＣ）の増加、血清濃度の増加、および／またはクリアランスの減少である。 In some embodiments, the immunomodulatory agent alters or ameliorates one or more pharmacokinetic characteristics of the HRS polypeptide as compared to the HRS polypeptide alone. Examples of pharmacokinetic features include stability or half-life, bioavailability (fraction of drug absorbed), tissue distribution, volume of distribution (distributed immediately after the drug is injected intravenously, plasma and surrounding tissues). To reach equilibrium between, apparent concentration), concentration (initial or steady state concentration of drug in plasma), elimination rate constant (rate of elimination of drug from body), elimination rate (to balance elimination) Required rate of infusion), area under the curve of the concentration-time graph (AUC or exposure; integration of the concentration-time curve after a single dose or at steady state), clearance (drug per unit time) Volume of plasma cleared), C _max (peak plasma concentration of drug after oral administration), t _max (time to reach C _max ), C _min (drug reached before the next dose was administered) Lowest concentration) and variability (peak trough variability within a single dosing interval at steady state). In certain embodiments, one or more altered pharmacokinetic characteristics of the HRS polypeptide is increased serum concentration, increased serum half-life, increased bioavailability, increased exposure (AUC), increased serum concentration. , And/or reduced clearance.

いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、ＨＲＳポリペプチドのみと比較して、対象におけるＨＲＳポリペプチドの半減期または血清半減期を少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、または２００％以上増加させる。いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、ＨＲＳポリペプチドのみと比較して、対象におけるＨＲＳポリペプチドのバイオアベイラビリティを少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、または２００％以上増加させる。いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、ＨＲＳポリペプチドのみと比較して、対象におけるＨＲＳポリペプチドの曝露（ＡＵＣ）を少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、または２００％以上増加させる。いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、ＨＲＳポリペプチドのみと比較して、対象におけるＨＲＳポリペプチドの血清濃度を少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、または２００％以上増加させる。いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、ＨＲＳポリペプチドのみと比較して、対象におけるＨＲＳポリペプチドのクリアランスを少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、または２００％以上減少させる。特定の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、配列番号１５７（Ｆｃ−ＨＲＳ（２〜６０）またはＨＲＳ^ＦＣ１）を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなり、免疫調節剤は、ピルフェニドンである。特定の実施形態では、ピルフェニドンは、ＨＲＳポリペプチドのみと比較して、対象におけるＨＲＳポリペプチド（例えば、ＨＲＳ^ＦＣ１）の血清濃度を少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、または２００％以上増加させる。 In some embodiments, the immunomodulatory agent has a half-life or serum half-life of the HRS polypeptide in the subject of at least about 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, compared to the HRS polypeptide alone. Increase by 80, 90, 100, 150, or 200% or more. In some embodiments, the immunomodulatory agent increases the bioavailability of the HRS polypeptide in the subject by at least about 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, compared to the HRS polypeptide alone. Increase by 100, 150, or 200% or more. In some embodiments, the immunomodulatory agent has an exposure (AUC) of HRS polypeptide in the subject of at least about 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, compared to HRS polypeptide alone. Increase by 90, 100, 150, or 200% or more. In some embodiments, the immunomodulatory agent has a serum concentration of HRS polypeptide in the subject of at least about 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, compared to the HRS polypeptide alone. Increase by 100, 150, or 200% or more. In some embodiments, the immunomodulatory agent has a clearance of HRS polypeptide in the subject of at least about 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 as compared to the HRS polypeptide alone. , 150, or 200% or more. In certain embodiments, HRS polypeptide comprises or SEQ ID NO: 157 (Fc-HRS (2~60) or ^{HRS FC1),} or consist of, or consist essentially of, immunomodulators is a pirfenidone .. In certain embodiments, pirfenidone has a serum concentration of HRS polypeptide (eg, HRS ^FC1 ) in a subject of at least about 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 compared to HRS polypeptide alone. , 90, 100, 150, or 200% or more.

したがって、ある特定の実施形態は、対象におけるＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドの１つ以上の薬物動態学的特徴を変化させる方法であって、対象に、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチド、またはピルフェニドンと組み合わせて、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチドを投与することを含む、方法を含む。特定の実施形態では、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、表Ｈ８から選択される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。特定の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、配列番号１５７（Ｆｃ−ＨＲＳ（２〜６０）またはＨＲＳ^ＦＣ１）を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。 Accordingly, certain embodiments are methods of altering one or more pharmacokinetic characteristics of a HRS-Fc fusion polypeptide in a subject, the method comprising combining the subject with a HRS-Fc fusion polypeptide, or pirfenidone. , Administering an expressible polynucleotide encoding a HRS-Fc fusion polypeptide. In certain embodiments, the HRS-Fc fusion polypeptide is at least 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or at least for sequences selected from Table H8. It comprises, consists of, or consists essentially of an amino acid sequence that is 100% identical. In certain embodiments, HRS polypeptide comprises or SEQ ID NO: 157 (Fc-HRS (2~60) or ^{HRS FC1),} or consist of, or essentially consists.

ある特定の実施形態では、それを必要とする対象は、炎症性肺疾患または間質性肺疾患に罹患しているか、または罹患するリスクがある。間質性肺疾患（ＩＬＤ）は、瘢痕（すなわち、「線維症」）および／または肺の炎症を特徴とする１３０超の障害を含む広義のカテゴリーの肺疾患を指す。ＩＬＤは、呼吸器科医によって見られる症例の１５％を占める。場合によっては、ＩＬＤは、特発性である。しかしながら、場合によっては、ＩＬＤは、他の疾患から環境要因に及ぶ様々な源または状態から生じ得るか、またはそれと関連し得る。ＩＬＤの原因またはそれとの関連性のいくつかには、例えば、強皮症／進行性全身性硬化症、ループス（全身性エリテマトーデス）、関節リウマチ、および多発性筋炎／皮膚筋炎を含む、結合組織疾患、自己免疫疾患が含まれる。例えば、粉塵、ガス、アレルゲン、または毒素／毒物などの吸入物質への曝露；抗生物質、化学療法剤、抗不整脈剤、およびスタチンなどの薬物への曝露；肺炎（例えば、非定型肺炎）、ニューモシスチス肺炎（ＰＣＰ）、結核、クラミジアトラコマチス、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、および特発性器質化肺炎などの感染症への曝露；放射線療法への曝露；ならびにがん性リンパ管症およびリンパ腫などの悪性腫瘍を含む、職業性のおよび環境的な曝露もまた含まれる。ある特定の実施形態では、肺の炎症の治療を必要とする対象は、急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）を有する。 In certain embodiments, a subject in need thereof has or is at risk of having inflammatory lung disease or interstitial lung disease. Interstitial lung disease (ILD) refers to a broad category of lung diseases that includes more than 130 disorders characterized by scarring (ie, "fibrosis") and/or lung inflammation. ILD accounts for 15% of cases seen by pulmonologists. In some cases, ILD is idiopathic. However, in some cases, ILD can result from or be associated with a variety of sources or conditions ranging from other diseases to environmental factors. Some of the causes of ILD or its association are, for example, connective tissue disorders, including scleroderma/progressive systemic sclerosis, lupus (systemic lupus erythematosus), rheumatoid arthritis, and polymyositis/dermatomyositis. , Including autoimmune diseases. For example, exposure to inhalants such as dust, gas, allergens, or toxins/toxins; exposure to drugs such as antibiotics, chemotherapeutic agents, antiarrhythmics, and statins; pneumonia (eg, atypical pneumonia), Pneumocystis Exposure to infections such as pneumonia (PCP), tuberculosis, chlamydia trachomatis, respiratory syncytial virus (RSV), and idiopathic organizing pneumonia; exposure to radiation therapy; and cancerous lymphangiopathy and lymphoma Occupational and environmental exposures, including malignancy, are also included. In certain embodiments, the subject in need of treatment for lung inflammation has acute respiratory distress syndrome (ARDS).

ＩＬＤでは、肺内の組織は、炎症性かつ／または瘢痕化の状態になる。肺の間質は、酸素と二酸化炭素の交換が行われる小血管および肺胞（空気袋）の中および周囲の範囲を含む。間質の炎症および瘢痕は、この組織を破壊し、肺が空気から酸素を抽出する能力を減少させる。 With ILD, tissues in the lung become inflammatory and/or scarred. The interstitium of the lungs includes the area within and around the small blood vessels and alveoli (air bladders) where the exchange of oxygen and carbon dioxide occurs. Interstitial inflammation and scars destroy this tissue, reducing the ability of the lungs to extract oxygen from the air.

ＩＬＤの進行は、疾患によって、かつ人によって異なる。間質性肺疾患は、肺内の酸素および二酸化炭素の移動を混乱させるので、その症状は典型的には、呼吸の問題として顕在化する。ＩＬＤの２つの最も一般的な症状は、運動での息切れ、および非生産的な咳である。 The progression of ILD depends on the disease and from person to person. Interstitial lung disease disrupts the movement of oxygen and carbon dioxide in the lungs, so the symptoms typically manifest as respiratory problems. The two most common symptoms of ILD are shortness of breath on exercise and an unproductive cough.

ある特定の実施形態では、ＩＬＤは、特発性間質性肺炎、特発性肺線維症、サルコイドーシス、ハンマンリッチ症候群、抗合成酵素症候群、特発性好酸球性肺炎、肺胞出血症候群、肺胞タンパク症、石綿肺症、珪肺症、ベリリウム症、リウマチ性関節炎、紅斑性狼瘡、肺障害を伴う慢性移植片対宿主病、硬化症（全身性）または強皮症、多発性筋炎、皮膚筋炎、慢性肺疾患、喘息、気管支炎（呼吸気管支炎）、肺炎、過敏性肺炎、慢性過敏性肺炎、呼吸窮迫症候群、スティル病、急性肺損傷、顕微鏡的多発血管炎、肺水腫、肺ランゲルハンス細胞組織球症、急性吸入曝露、薬物誘導性肺疾患、剥離性間質性肺炎、および／または嚢胞性線維症のうちの１つ以上から選択されるか、またはそれらと関連している。 In certain embodiments, the ILD comprises idiopathic interstitial pneumonia, idiopathic pulmonary fibrosis, sarcoidosis, Hunmann-Rich syndrome, antisynthetic enzyme syndrome, idiopathic eosinophilic pneumonia, alveolar hemorrhagic syndrome, alveoli Proteinosis, asbestosis, silicosis, beryllium disease, rheumatoid arthritis, lupus erythematosus, chronic graft-versus-host disease with lung injury, sclerosis (systemic) or scleroderma, polymyositis, dermatomyositis, Chronic lung disease, asthma, bronchitis (respiratory bronchitis), pneumonia, hypersensitivity pneumonia, chronic hypersensitivity pneumonia, respiratory distress syndrome, Still's disease, acute lung injury, microscopic polyangiitis, pulmonary edema, lung Langerhans cell histiocyte Disease, acute inhalation exposure, drug-induced lung disease, exfoliative interstitial pneumonia, and/or cystic fibrosis.

ある特定の遺伝的欠損または変異もまた、ＩＬＤに関連している。例えば、ある特定の実施形態では、ＩＬＤは、サーファクタントタンパク質Ｂ欠乏症（ＳＦＴＰＢにおける変異）、界面活性剤−プロテイン−Ｃ欠乏症（ＳＦＴＰＣにおける変異）、ＡＢＣＡ３−欠乏症（ＡＢＣＡ３における変異）、脳肺甲状腺症候群（ＴＴＦ１における変異）、または先天性肺胞タンパク症（ＣＳＦＲ２Ａ、ＣＳＦＲ２Ｂにおける変異）、肺胞毛細血管異形成（ＦｏｘＦ１における変異）、テロメラーゼ逆転写酵素（ＴＥＲＴ）における変異、テロメラーゼＲＮＡ成分（ＴＥＲＣ）における変異、テロメア伸長ヘリカーゼ１（ＲＴＥＬ１）の調節因子における変異、および／またはポリ（Ａ）特異的リボヌクレアーゼ（ＰＡＲＮ）における変異のうちの１つ以上と関連している。 Certain genetic defects or mutations are also associated with ILD. For example, in certain embodiments, the ILD is a surfactant protein B deficiency (mutation in SFTPB), surfactant-protein-C deficiency (mutation in SFTPC), ABCA3-deficiency (mutation in ABCA3), cerebral pulmonary thyroid syndrome (mutation). Mutation in TTF1), or congenital alveolar proteinosis (mutation in CSFR2A, CSFR2B), alveolar capillary dysplasia (mutation in FoxF1), mutation in telomerase reverse transcriptase (TERT), mutation in telomerase RNA component (TERC). , Mutations in the regulator of telomere extension helicase 1 (RTEL1), and/or mutations in poly(A)-specific ribonuclease (PARN).

いくつかの実施形態では、それを必要とする対象は、閉塞性または炎症性の気道疾患を有する。例には、慢性好酸球性肺炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性気管支炎を包含するＣＯＰＤ、不可逆性進行性気道閉塞を特徴とするＣＯＰＤ、肺気腫または呼吸困難、および急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）が含まれる。いくつかの実施形態では、肺の炎症の治療を必要とする対象は、他の薬物療法の結果として生じる気道過敏性の悪化、肺高血圧症を伴う気道疾患、気管支炎または急性気管支炎、急性喉頭気管気管支炎、アラキン酸気管支炎、カタル性気管支炎、クループ性気管支炎、乾性気管支炎、感染性喘息性気管支炎、増殖性気管支炎（ｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ）、ブドウ球菌性もしくは連鎖球菌性の気管支炎、小胞性気管支炎、急性肺損傷、気管支拡張症、または円柱状気管支拡張症、嚢状気管支拡張症、紡錘状気管支拡張症、毛細管性気管支拡張症、嚢胞状気管支拡張症、乾性気管支拡張症、または濾胞性気管支拡張症に関連する状態を有する。 In some embodiments, the subject in need thereof has obstructive or inflammatory airway disease. Examples include chronic eosinophilic pneumonia, chronic obstructive pulmonary disease (COPD), COPD including chronic bronchitis, COPD characterized by irreversible progressive airway obstruction, emphysema or dyspnea, and acute respiratory distress syndrome. (ARDS) is included. In some embodiments, a subject in need of treatment for lung inflammation has worse airway hyperresponsiveness as a result of other medications, respiratory tract disease with pulmonary hypertension, bronchitis or acute bronchitis, acute laryngeal. Tracheobronchitis, arachidic acid bronchitis, catarrhal bronchitis, croup bronchitis, dry bronchitis, infectious asthmatic bronchitis, proliferative bronchitis, staphylococcal or streptococcal bronchitis, Follicular bronchitis, acute lung injury, bronchiectasis, or cylindrical bronchiectasis, saccular bronchiectasis, fusiform bronchiectasis, capillary bronchiectasis, cystic bronchiectasis, dry bronchiectasis, or Having conditions associated with follicular bronchiectasis.

ある特定の実施形態では、上述のように、肺の炎症の治療を必要とする対象は、線維症または肺線維症に罹患している。肺線維症の重篤度は、アッシュクロフトスコアと称される、数値的尺度において測定することができる（例えば、Ａｓｈｃｒｏｆｔｅｔａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐａｔｈ．４１：４６７−４７０，１９８８を参照のこと）。アッシュクロフトスコアは、肺胞または細気管支肺の壁の最小の線維性肥厚、肺構造に対して明らかではない壁の中等度の肥厚、肺構造に対する明確な損傷および線維帯または小線維塊の形成を伴う線維症の増加、構造のひどい歪みおよび広い繊維状領域（「蜂巣肺」を含む）、ならびに分野の総繊維状の閉塞の範囲に及び得る。アッシュクロフトスコアの０は、正常肺を指す。いくつかの実施形態では、例えば、治療前に、肺の炎症の治療を必要とする対象は、１、２、３、４、５、６、７、または８のアッシュクロフトスコア（この尺度では、１が最高であり、８が最低スコアである）を有する。 In certain embodiments, as described above, the subject in need of treatment for lung inflammation has fibrosis or pulmonary fibrosis. Pulmonary fibrosis severity can be measured in a numerical scale called the Ashcroft score (see, eg, Ashcroft et al., J. Clin. Path. 41:467-470, 1988). thing). Ashcroft score is minimal fibrous thickening of the walls of the alveoli or bronchioles, moderate thickening of the wall not apparent to lung structures, clear damage to lung structures and formation of fibrous bands or fibrils. Increased fibrosis, severe distortion of structure and large fibrous areas (including “honeycomb lung”), as well as areas of total fibrous occlusion in the field. An Ashcroft score of 0 refers to normal lung. In some embodiments, for example, a subject in need of treatment for lung inflammation prior to treatment has an Ashcroft score of 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, or 8 (on this scale: 1 is the highest and 8 is the lowest score).

ある特定の実施形態では、肺の炎症は、自己免疫成分を有する。例えば、重度の肺気腫を有する患者における肺および末梢血Ｔ細胞は、インビトロで、エラスチンペプチドで刺激されたとき、Ｔｈｌサイトカインおよびケモカインを分泌し、これらの患者は、対照と比較して、抗エラスチン抗体が増大している（Ｇｏｓｗａｍｉｅｔａｌ，ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．１７８：１３０．４１，２００７を参照のこと）。また、肺上皮に対する結合活性を有するＩｇＧ自己抗体、および細胞傷害性を媒介する潜在性が、ＣＯＰＤを有する患者において蔓延している（Ｆｅｇｈａｌｉ−Ｂｏｓｔｗｉｃｋｅｔａｌ．，ＡｍＪＲｅｓｐｉｒＣｒｉｔＣａｒｅＭｅｄ．１７７：１５６−６３，２００８を参照のこと）。例えば、エラスチンなどの自己抗原に対する自己反応性応答を含む自己反応性免疫応答は、この疾患の病因において重要であり得、ＣＯＰＤにおいて役割を果たし得るので、本明細書に記載される併用療法は、これらの抗原に対する免疫細胞を脱感作するために使用し、これによって、肺の炎症を低減することができる。 In certain embodiments, lung inflammation has an autoimmune component. For example, lung and peripheral blood T cells in patients with severe emphysema secrete Thl cytokines and chemokines when stimulated with elastin peptides in vitro, and these patients have anti-elastin antibody compared to controls. (See Goswami et al, The Journal of Immunology. 178: 130.41, 2007). In addition, IgG autoantibodies with binding activity to lung epithelium and the potential to mediate cytotoxicity are prevalent in patients with COPD (Feghali-Boswick et al., Am J Respir Crit Care Med. 177: 156-63, 2008). For example, the combination therapies described herein, because autoreactive immune responses, including autoreactive responses to self-antigens such as elastin, may be important in the etiology of this disease and may play a role in COPD. It can be used to desensitize immune cells to these antigens, which can reduce lung inflammation.

いくつかの実施形態では、本方法および組成物は、肺の炎症の治療を必要とする対象の平均余命を、例えば、約または少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０年、もしくはそれ以上増加させる。 In some embodiments, the methods and compositions provide a life expectancy for a subject in need of treatment for inflammation of the lung, such as about or at least about 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8. , 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33. , 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58. , 59, 60 years, or more.

いくつかの実施形態では、本方法および組成物は、肺の炎症の治療を必要とする対象における肺の炎症の臨床症状またはパラメータのうちの１つ以上を改善する。例示的な臨床症状またはパラメータは、肺線維症、肺における炎症細胞浸潤、呼吸機能、および体重を含む。 In some embodiments, the methods and compositions improve one or more of the clinical symptoms or parameters of lung inflammation in a subject in need of treatment for lung inflammation. Exemplary clinical symptoms or parameters include pulmonary fibrosis, inflammatory cell infiltration in the lung, respiratory function, and body weight.

したがって、いくつかの実施形態では、本方法および組成物は、例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、もしくは２４カ月間以上の期間にわたって測定されたときに、約または少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００％、もしくはそれ以上、肺の炎症の治療を必要とする対象において肺線維症を改善する。特定の実施形態は、初期スコアと比較して、アッシュクロフトスコアが１、２、３、４、５、６、７、または８グレード低下する、アッシュクロフトスコアの低下によって測定されるように、肺の炎症の治療を必要とする対象における肺線維症を改善する。いくつかの実施形態では、本方法および組成物は、０、１、２、または３以下のアッシュクロフトスコアをもたらす。 Thus, in some embodiments, the methods and compositions are, for example, about 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16. , 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, or about or at least about 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 when measured over a period of more than 24 months. , 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000%, or more, ameliorating pulmonary fibrosis in a subject in need of treatment of lung inflammation. Certain embodiments have lungs that have a 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, or 8 grade reduction in Ashcroft score, as measured by a decrease in Ashcroft score, as compared to an initial score. Ameliorate pulmonary fibrosis in a subject in need of treatment for inflammation. In some embodiments, the methods and compositions provide an Ashcroft score of 0, 1, 2, or 3 or less.

いくつかの実施形態では、本方法および組成物は、例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、もしくは２４カ月間以上の期間にわたって測定されたときに、約または少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００％、もしくはそれ以上、肺における炎症細胞浸潤を減少させる。 In some embodiments, the methods and compositions are, for example, about 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17. , 18, 19, 20, 21, 22, 23, or about or at least about 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 when measured over a period of more than 24 months. , 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000% or more, reducing inflammatory cell infiltration in the lung.

いくつかの実施形態では、本方法および組成物は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、もしくは２４カ月間以上の期間にわたって測定されたときに、約または少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００％、もしくはそれ以上、呼吸機能を改善する。いくつかの実施形態では、呼吸機能は、呼気時間の増加、吸気時間の増加、最大呼気流量の減少、最大吸気流量の減少、毎分呼吸量（ＲＭＶ）の減少、および呼吸数の減少のうちの１つ以上から選択される。かかる症状またはパラメータを測定するための例示的な方法は、当該技術分野で周知であるか、または本明細書に記載されている（実施例を参照のこと）。 In some embodiments, the methods and compositions include about 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18. , 19, 20, 21, 22, 23, or about or at least about 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200 when measured over a period of more than 24 months. , 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000% or more to improve respiratory function. In some embodiments, the respiratory function is of increased expiratory time, increased inspiratory time, decreased maximal expiratory flow, decreased maximal inspiratory flow, decreased respiratory rate per minute (RMV), and decreased respiratory rate. Selected from one or more of Exemplary methods for measuring such symptoms or parameters are well known in the art or described herein (see Examples).

薬学的組成物およびキット
ある特定の実施形態は、本明細書に記載される、ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび免疫調節剤の治療用送達に適している、薬学的組成物、治療用組成物、および製剤を含む。いくつかの実施形態は、したがって、１つ以上の薬学的に許容される担体および／または希釈剤と一緒に製剤化される、治療上有効な量の、本明細書に記載される、ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび免疫調節剤のうちの１つ以上を含む、薬学的に許容される組成物を含む。 Pharmaceutical Compositions and Kits Certain embodiments are suitable for therapeutic delivery of HRS polypeptides/expressible polynucleotides and immunomodulatory agents described herein, pharmaceutical compositions, therapeutics. Includes compositions and formulations. Some embodiments therefore provide a therapeutically effective amount of the HRS poly-formulas described herein formulated with one or more pharmaceutically acceptable carriers and/or diluents. Included are pharmaceutically acceptable compositions comprising one or more of a peptide/expressible polynucleotide and an immunomodulatory agent.

本組成物は、以下に適合するものを含む、固体または液体形態で投与のために特異的に製剤化することができる：（１）経口投与、例えばドレンチ（水性もしくは非水性溶液または懸濁液）、錠剤、例えば、口腔、舌下、および全身吸収、ボーラス、散剤、顆粒、舌への塗布用ペーストを目的とするもの、（２）非経口投与、例えば、皮下、筋肉内、静脈内、または硬膜外注射による、例えば、滅菌溶液または懸濁液または徐放製剤として、（３）局所適用、例えば、クリーム、軟膏、もしくは制御放出パッチまたは肌に適用するスプレーとして、（４）膣内または直腸内、例えば、ペッサリー、クリーム、または泡状物として、（５）舌下、（６）眼内、（７）経皮、あるいは（８）鼻腔。 The composition may be specifically formulated for administration in solid or liquid form, including: (1) oral administration, eg drench (aqueous or non-aqueous solutions or suspensions). ), tablets, eg for oral, sublingual and systemic absorption, boluses, powders, granules, pastes for application to the tongue, (2) parenteral administration, eg subcutaneous, intramuscular, intravenous, Or by epidural injection, eg, as a sterile solution or suspension or sustained release formulation, (3) topically applied, eg, as a cream, ointment, or controlled release patch or spray applied to the skin, (4) intravaginally. Or intrarectally, for example, as a pessary, cream, or foam (5) sublingual, (6) intraocular, (7) transdermal, or (8) nasal cavity.

「薬学的に許容される」という語句は、妥当な医学的判断の範囲内で過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を伴わないヒトおよび動物の組織との接触における使用に適し、相応な便益／リスク比に釣り合う化合物、物質、組成物、および／または剤形を指すものとして本明細書で用いられる。 The term "pharmaceutically acceptable" is used within the scope of sound medical judgment in use in contact with human and animal tissues without excessive toxicity, irritation, allergic reactions, or other problems or complications. Is used herein to refer to compounds, substances, compositions, and/or dosage forms that are suitable for, and have a corresponding benefit/risk ratio.

本明細書で使用される、「薬学的に許容される担体」という語句は、ある臓器または身体の一部から別の臓器または身体の一部への対象化合物の輸送または運搬に関与する、液体または固体充填剤、希釈剤、賦形剤、製造補助剤（例えば、滑沢剤、タルク、ステアリン酸マグネシウム、カルシウムもしくは亜鉛、またはステアリン酸）、または溶媒カプセル化物質などの薬学的に許容される材料、組成物、またはビヒクルを意味する。各担体は、製剤の他の成分に適合可能であるが、患者に無害であるという意味で「許容され」なければならない。 As used herein, the phrase "pharmaceutically acceptable carrier" refers to a liquid that participates in the transport or delivery of a compound of interest from one organ or part of the body to another organ or part of the body. Or a pharmaceutically acceptable solid filler, diluent, excipient, manufacturing aid (eg, lubricant, talc, magnesium stearate, calcium or zinc, or stearic acid), or a solvent encapsulating material. A material, composition, or vehicle. Each carrier must be "acceptable" in the sense of being compatible with the other ingredients of the formulation but not injurious to the patient.

薬学的に許容される担体として供し得る材料のいくつかの例としては、（１）ラクトース、グルコース、およびスクロースなどの糖、（２）トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプンなどのデンプン、（３）ナトリウムカルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、および酢酸セルロースなどのセルロースおよびその誘導体、（４）粉末化トラガカント、（５）麦芽、（６）ゼラチン、（７）タルク、（８）ココアバターおよび坐剤用ワックスなどの賦形剤、（９）ピーナッツ油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油、および大豆油などのオイル、（１０）プロピレングリコールなどのグリコール、（１１）グリセリン、ソルビトール、マンニトール、およびポリエチレングリコールなどのポリオール、（１２）オレイン酸エチルおよびラウリル酸エチルなどのエステル、（１３）寒天、（１４）水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムなどの緩衝剤、（１５）アルギン酸、（１６）ピロゲン不含水、（１７）等張性食塩水、（１８）リンゲル溶液、（１９）エチルアルコール、（２０）ｐＨ緩衝溶液、（２１）ポリエステル、ポリカーボネート、および／またはポリアンヒドリド、ならびに（２２）薬学的製剤に用いられる他の無毒性の適合可能な物質が挙げられる。 Some examples of materials that can serve as pharmaceutically acceptable carriers include (1) sugars such as lactose, glucose, and sucrose, (2) starches such as corn starch and potato starch, (3) sodium carboxymethyl cellulose. , Cellulose and its derivatives such as ethyl acetate and cellulose acetate, (4) powdered tragacanth, (5) malt, (6) gelatin, (7) talc, (8) excipients such as cocoa butter and suppository wax. (9) oils such as peanut oil, cottonseed oil, safflower oil, sesame oil, olive oil, corn oil, and soybean oil, (10) glycols such as propylene glycol, (11) glycerin, sorbitol, mannitol, and polyethylene glycol. Polyols, (12) esters such as ethyl oleate and ethyl laurate, (13) agar, (14) buffering agents such as magnesium hydroxide and aluminum hydroxide, (15) alginic acid, (16) pyrogen-free water, (17) ) Isotonic saline, (18) Ringer's solution, (19) Ethyl alcohol, (20) pH buffer solution, (21) Polyester, polycarbonate and/or polyanhydride, and (22) Others used in pharmaceutical formulations And non-toxic compatible substances.

ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび免疫調節剤との製剤化に適している薬剤のさらなる非限定的な例には、ＰＥＧ結合核酸、リン脂質結合核酸、親油性部分を含有する核酸、ホスホロチオエート、様々な組織への薬物の侵入を増強し得るＰ−糖タンパク質阻害剤（ＰｌｕｒｏｎｉｃＰ８５など）、移植後の持続放出送達のためのポリ（ＤＬ−ラクチド−コグリコリド）マイクロスフェア（Ｅｍｅｒｉｃｈ，ＤＦｅｔａｌ．，１９９９，ＣｅｌｌＴｒａｎｓｐｌａｎｔ，８，４７−５８）Ａｌｋｅｒｍｅｓ，Ｉｎｃ．Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓ．などの生体分解性ポリマー、ならびに血液脳関門を越えて薬物を送達することができ、ニューロンの取り込み機構を変更することができる、ポリブチルシアノアクリレートから作製されたナノ粒子などの充填ナノ粒子（ＰｒｏｇＮｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌＢｉｏｌＰｓｙｃｈｉａｔｒｙ，２３，９４１−９４９，１９９９）が含まれる。 Further non-limiting examples of agents suitable for formulation with HRS polypeptides/expressible polynucleotides and immunomodulators include PEG-linked nucleic acids, phospholipid-linked nucleic acids, nucleic acids containing lipophilic moieties, phosphorothioates. , P-glycoprotein inhibitors that may enhance drug entry into various tissues (such as Pluronic P85), poly(DL-lactide-coglycolide) microspheres for sustained release delivery after implantation (Emerich, DF et. al., 1999, Cell Transplant, 8, 47-58) Alkermes, Inc. Cambridge, Mass. Biodegradable polymers such as, as well as loaded nanoparticles (Prog, such as nanoparticles made from polybutyl cyanoacrylate) capable of delivering drugs across the blood-brain barrier and modifying the uptake mechanism of neurons. Neurosychopharmacol Biol Psychiatry, 23, 941-949, 1999).

ポリ（エチレングリコール）脂質を含有する表面改変リポソーム（ＰＥＧ改変リポソーム、分枝リポソーム、および非分枝リポソームもしくはこれらの組み合わせ、または長時間循環型リポソームもしくはステルスリポソーム）を含む組成物もまた含まれる。ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤はまた、様々な分子量の共有結合しているＰＥＧ分子も含むことができる。これらの製剤により、標的組織内における薬剤の蓄積を増加させる方法が与えられる。長時間循環型リポソームはまた、その肝臓および脾臓などの代謝的に侵襲性のＭＰＳ組織における蓄積を回避する能力に基づき、陽イオンリポソームと比較して、より大幅に薬物をヌクレアーゼ分解から防御する可能性も高い。 Also included are compositions comprising surface-modified liposomes containing poly(ethylene glycol) lipids (PEG-modified liposomes, branched liposomes, and unbranched liposomes or combinations thereof, or long-circulating liposomes or stealth liposomes). The HRS polypeptide/expressible polynucleotide and/or immunomodulatory agent can also include covalently attached PEG molecules of various molecular weights. These formulations provide a way to increase drug accumulation in the target tissue. Long-circulating liposomes can also protect drugs from nuclease degradation to a greater extent compared to cationic liposomes, based on their ability to avoid accumulation in metabolically invasive MPS tissues such as liver and spleen. It is also very popular.

米国特許第６，６９２，９１１号、同第７，１６３，６９５号、および同第７，０７０，８０７号に記載されるように、送達のために調製された組成物もまた含まれる。この点において、ある特定の実施形態は、単独でまたはＰＥＧ（例えば、分枝または非分枝ＰＥＧまたは両方の混合物）と組み合わせて、ＰＥＧおよび標的化部分または架橋剤と組み合わせた前述のいずれかと組み合わせて、米国特許第７，１６３，６９５号、同第７，０７０，８０７号、および同第６，６９２，９１１号に記載されるように、リジンおよびヒスチジン（ＨＫ）のコポリマーを含む組成物を含む。いくつかの実施形態は、グルコン酸修飾ポリヒスチジンまたはグルコニル化ポリヒスチジン／トランスフェリン−ポリリジンを含む組成物中のＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤を提供する。当業者はまた、ＨｉｓおよびＬｙｓに類似の特性を有するアミノ酸が組成物中で置換されてもよいこともまた認識している。 Also included are compositions prepared for delivery as described in US Pat. Nos. 6,692,911, 7,163,695, and 7,070,807. In this regard, certain embodiments, alone or in combination with PEG (eg, branched or unbranched PEG or a mixture of both), are combined with PEG and any of the foregoing in combination with a targeting moiety or crosslinker. And a composition comprising a copolymer of lysine and histidine (HK), as described in US Pat. Nos. 7,163,695, 7,070,807, and 6,692,911. Including. Some embodiments provide HRS polypeptides/expressible polynucleotides and/or immunomodulators in compositions comprising gluconate modified polyhistidine or gluconylated polyhistidine/transferrin-polylysine. Those skilled in the art will also recognize that amino acids with similar properties to His and Lys may be substituted in the composition.

本明細書に記載されるある特定の薬剤は、アミノまたはアルキルアミノなどの塩基性官能基を含んでもよく、これは、薬学的に許容される酸とともに薬学的に許容される塩を形成することが可能である。「薬学的に許容される塩」という用語は、この点に関して、比較的非毒性である、薬剤の無機および有機酸付加塩を指す。これらの塩は、投与ビヒクルもしくは剤形製造プロセスで、原位置で調製することができ、またはその遊離塩基型の精製した薬剤を適切な有機酸もしくは無機酸と別々に反応させること、および引き続く精製の間にこのように形成した塩を単離することによって調製できる。代表的な塩には、臭化水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、トシル酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフチル酸塩（ｎａｐｔｈｙｌａｔｅ）、メシル酸塩、グルコヘプトン酸塩、ラクトビオン酸塩、およびラウリルスルホン酸塩などが含まれる。 Certain of the agents described herein may include a basic functional group such as amino or alkylamino which is capable of forming a pharmaceutically acceptable salt with a pharmaceutically acceptable acid. Is possible. The term "pharmaceutically acceptable salt" in this respect, refers to the relatively non-toxic, inorganic and organic acid addition salts of drugs. These salts can be prepared in situ in the administration vehicle or dosage form manufacturing process, or by reacting the free base form of the purified drug separately with a suitable organic or inorganic acid, and subsequent purification. It can be prepared by isolating the salt thus formed during. Representative salts include hydrobromide, hydrochloride, sulfate, bisulfate, phosphate, nitrate, acetate, valerate, oleate, palmitate, stearate, lauric acid. Salt, benzoate, lactate, phosphate, tosylate, citrate, maleate, fumarate, succinate, tartrate, naphthylate, mesylate, glucoheptonate , Lactobionate, lauryl sulfonate, and the like.

本明細書に記載される薬剤の薬学的に許容される塩には、例えば、非毒性有機または無機酸からの、化合物の従来の非毒性塩または第四級アンモニウム塩が含まれる。例えば、このような従来的な非毒性塩には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸などの無機塩から誘導されたもの；および酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パルミチン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、２−アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イソチオン酸などの有機酸から調製された塩が含まれる。 Pharmaceutically acceptable salts of the agents described herein include conventional non-toxic salts or quaternary ammonium salts of the compounds, eg, from non-toxic organic or inorganic acids. For example, such conventional non-toxic salts are derived from inorganic salts such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, sulfamic acid, phosphoric acid, nitric acid; and acetic acid, propionic acid, succinic acid, glycol. Acid, stearic acid, lactic acid, malic acid, tartaric acid, citric acid, ascorbic acid, palmitic acid, maleic acid, hydroxymaleic acid, phenylacetic acid, glutamic acid, benzoic acid, salicylic acid, sulfanilic acid, 2-acetoxybenzoic acid, fumaric acid, Included are salts prepared from organic acids such as toluene sulfonic acid, methane sulfonic acid, ethanedisulfonic acid, oxalic acid, isothionic acid.

ある特定の実施形態では、本明細書に記載される薬剤は、１つ以上の酸性官能基を含んでもよく、したがって、薬学的に許容される塩基と薬学的に許容される塩を形成することが可能である。これらの例において「薬学的に許容される塩」という用語は、薬剤の比較的非毒性である、無機塩基付加塩および有機塩基付加塩を指す。これらの塩は、同様に、投与ビヒクルもしくは剤形製造プロセスで、原位置で調製することができ、またはその遊離酸型の精製した化合物を、適切な塩基、例えば、薬学的に許容される金属カチオンの水酸化物、炭酸塩、もしくは炭酸水素塩と、アンモニアと、または薬学的に許容される有機一級、二級、もしくは三級アミンと別々に反応させることによって調製することができる。代表的なアルカリ塩またはアルカリ土類塩には、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、およびアルミニウム塩などが含まれる。塩基付加塩の形成のために有用である代表的な有機アミンには、エチルアミン、ジエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジンなどが含まれる。 In certain embodiments, the agents described herein may include one or more acidic functional groups, thus forming a pharmaceutically acceptable salt with a pharmaceutically acceptable base. Is possible. In these examples, the term "pharmaceutically acceptable salt" refers to the relatively non-toxic, inorganic and organic base addition salts of drugs. These salts can also be prepared in situ in the administration vehicle or the process of making the dosage form, or the purified compound in its free acid form can be prepared with a suitable base, eg, a pharmaceutically acceptable metal. It can be prepared by separately reacting the hydroxide, carbonate or hydrogen carbonate of a cation with ammonia or a pharmaceutically acceptable organic primary, secondary or tertiary amine. Representative alkali or alkaline earth salts include lithium, sodium, potassium, calcium, magnesium, aluminum salts, and the like. Representative organic amines useful for the formation of base addition salts include ethylamine, diethylamine, ethylenediamine, ethanolamine, diethanolamine, piperazine and the like.

ラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウムなどの湿潤剤、乳化剤、および潤滑剤、ならびに着色剤、離型剤、コート剤、甘味料、香料および芳香剤、保存料、ならびに抗酸化剤もまた、組成物中に存在することができる。 Wetting agents, emulsifiers, and lubricants such as sodium lauryl sulfate and magnesium stearate, as well as colorants, mold release agents, coating agents, sweeteners, flavors and fragrances, preservatives, and antioxidants are also in the composition. Can exist in.

薬学的に許容される抗酸化剤の例には、（１）水溶性抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなど、（２）脂溶性抗酸化剤、例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、αトコフェロールなど、ならびに（３）金属キレート剤、例えば、クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸など。 Examples of pharmaceutically acceptable antioxidants include (1) water-soluble antioxidants such as ascorbic acid, cysteine hydrochloride, sodium bisulfate, sodium metabisulfite, and sodium sulfite, and (2) fat-soluble antioxidants. Oxidizing agents such as ascorbyl palmitate, butylated hydroxyanisole (BHA), butylated hydroxytoluene (BHT), lecithin, propyl gallate, α-tocopherol, and (3) metal chelating agents such as citric acid and ethylenediamine tetra Acetic acid (EDTA), sorbitol, tartaric acid, phosphoric acid, etc.

製剤は、静脈内、筋肉内、経口、鼻、局所（口腔および舌下を含む）、直腸、膣、および／または非経口投与のために適切なものが含まれる。これらの製剤は、単位剤形で便利に存在してもよく、薬学分野において周知である任意の方法によって調製されてもよい。単一の剤形を生じるために担体材料と合わせることができる活性成分の量は、治療される宿主、投与の特定の様式に依存して変化する。単一の剤形を生じるために担体材料と合わせることができる活性成分の量は、一般的には、治療効果を生じる化合物の量である。一般的には、１００パーセントの中から、この量は、約０．１パーセントから約９９パーセント、好ましくは、約５パーセントから約７０パーセント、最も好ましくは、約１０パーセントから約３０パーセントの活性成分の範囲である。 Formulations include those suitable for intravenous, intramuscular, oral, nasal, topical (including buccal and sublingual), rectal, vaginal, and/or parenteral administration. These formulations may conveniently be presented in unit dosage form and may be prepared by any methods well known in the art of pharmacy. The amount of active ingredient that may be combined with the carrier materials to produce a single dosage form will vary depending upon the host treated, the particular mode of administration. The amount of active ingredient that can be combined with the carrier materials to produce a single dosage form will generally be that amount of the compound which produces a therapeutic effect. Generally, out of 100 percent, this amount is from about 0.1 percent to about 99 percent, preferably from about 5 percent to about 70 percent, and most preferably from about 10 percent to about 30 percent active ingredient. Is the range.

ある特定の実施形態では、組成物または製剤は、シクロデキストリン、セルロース、リポソーム、ミセル形成剤、例えば、胆汁酸、およびポリマー性担体、例えば、ポリエステルおよびポリ無水物から選択される賦形剤、ならびにＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび免疫調節剤を含む。 In certain embodiments, the composition or formulation comprises a cyclodextrin, cellulose, liposomes, micelle forming agents such as bile acids, and polymeric carriers such as excipients selected from polyesters and polyanhydrides, and HRS polypeptides/expressible polynucleotides and immunomodulators.

経口投与のために適切な本発明の製剤は、カプセル、カシェ剤、丸薬、錠剤、ロゼンジ（香料ベース、通常、スクロースおよびアカシアまたはトラガカントを使用）、散剤、顆粒剤、または水性もしくは非水性液体中の溶液もしくは懸濁液として、または水中油もしくは油中水の液体エマルジョン、またはエリキシルもしくはシロップとして、または香錠（不活性ベース、例えば、ゼラチンおよびグリセリン、またはスクロースおよびアカシアを使用）、ならびに／またはマウスウォッシュとしてなどの型であってもよく、各々が活性成分として所定量のＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤を含む。組成物または薬剤はまた、ボーラス、舐剤、またはペーストとして投与されてもよい。 Formulations of the invention suitable for oral administration include capsules, cachets, pills, tablets, lozenges (flavor bases, usually using sucrose and acacia or tragacanth), powders, granules, or in aqueous or non-aqueous liquids. Or a liquid emulsion of oil-in-water or water-in-oil, or elixirs or syrups, or pastilles (using an inert base such as gelatin and glycerin, or sucrose and acacia), and/or It may be in a form such as a mouthwash, each containing as active ingredient a certain amount of HRS polypeptide/expressible polynucleotide and/or immunomodulator. The composition or medicament may also be administered as a bolus, electuary or paste.

経口投与用の固体剤形（カプセル、錠剤、丸薬、糖衣錠、散剤、顆粒剤、トローチなど）において、活性成分は、１種以上の薬学的に許容される担体と混合されてもよく、この担体は、例えば、クエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウム、および／または以下のいずれかである：（１）充填剤または増量剤、例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、および／もしくはケイ酸、（２）結合剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、および／またはアカシアなど、（３）保湿剤、例えば、グリセロール、（４）崩壊剤、例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、ある特定のケイ酸、およびカルボン酸ナトリウム、（５）溶液遅延剤、例えば、パラフィン、（６）吸収加速剤、例えば、第四級アンモニウム化合物および界面活性剤、例えば、ポロキサマーおよびラウリル硫酸ナトリウム、（７）湿潤剤、例えば、セチルアルコール、モノステアリン酸グリセロール、および非イオン性界面活性剤など、（８）吸着剤、例えば、カオリンおよびベントナイトクレイ、（９）潤滑剤、例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸、およびこれらの混合物、（１０）着色剤、ならびに（１１）制御放出剤、例えば、クロスポビドンまたはエチルセルロース。カプセル、錠剤、および丸薬の場合において、本組成物はまた、緩衝剤も含んでもよい。同様の型の固体組成物はまた、ラクトースまたは乳糖、ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどのような賦形剤を使用して、ソフトおよびハード殻のゼラチンカプセル中の充填剤としても利用されてもよい。 In solid dosage forms for oral administration (capsules, tablets, pills, dragees, powders, granules, troches, etc.), the active ingredient may be mixed with one or more pharmaceutically acceptable carriers. Is, for example, sodium citrate or dicalcium phosphate, and/or any of the following: (1) fillers or bulking agents such as starch, lactose, sucrose, glucose, mannitol, and/or silicic acid, (2) binders such as carboxymethylcellulose, alginates, gelatin, polyvinylpyrrolidone, sucrose, and/or acacia; and (3) moisturizers such as glycerol, (4) disintegrants such as agar, calcium carbonate, Potato or tapioca starch, alginic acid, certain silicic acids and sodium carboxylates, (5) solution retarders such as paraffin, (6) absorption accelerators such as quaternary ammonium compounds and surfactants such as Poloxamers and sodium lauryl sulphate, (7) wetting agents such as cetyl alcohol, glycerol monostearate, and nonionic surfactants, etc. (8) adsorbents such as kaolin and bentonite clay, (9) lubricants, For example, talc, calcium stearate, magnesium stearate, solid polyethylene glycol, sodium lauryl sulfate, zinc stearate, sodium stearate, stearic acid, and mixtures thereof, (10) colorants, and (11) controlled release agents such as , Crospovidone or ethyl cellulose. In the case of capsules, tablets, and pills, the composition may also include buffering agents. Similar types of solid compositions may also be utilized as fillers in soft and hard shell gelatin capsules, using excipients such as lactose or lactose, and high molecular weight polyethylene glycols and the like.

錠剤は、任意に１つ以上の付属成分とともに、圧縮または成型によって作製されてもよい。圧縮錠剤は、結合剤（例えば、ゼラチンもしくはヒドロキシプロピルメチルセルロース）、潤滑剤、不活性希釈剤、保存剤、崩壊剤（例えば、デンプングリコール酸ナトリウムもしくは架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、界面活性剤、または分散剤を使用して調製されてもよい。成型された錠剤は、不活性液体希釈剤を用いて湿らされた粉末化合物の混合物を、適切な機械の中で成型することによって作製されてもよい。 A tablet may be made by compression or molding, optionally with one or more accessory ingredients. Compressed tablets are binders (eg gelatin or hydroxypropylmethylcellulose), lubricants, inert diluents, preservatives, disintegrating agents (eg sodium starch glycolate or crosslinked sodium carboxymethylcellulose), surfactants or dispersants. May be prepared using. Molded tablets may be made by molding in a suitable machine a mixture of the powdered compound moistened with an inert liquid diluent.

錠剤および他の剤形、例えば、糖衣錠、カプセル、丸薬、および顆粒剤は、腸溶コーティングおよび製薬分野で周知の他のコーティングなどのコーティングおよびシェルを用いて、任意に入手および調製されてもよい。これらはまた、例えば、所望の放出プロファイルを提供するために様々な比率のヒドロキシプロピルメチルセルロース、他のポリマーマトリックス、リポソーム、および／またはミクロスフェアを使用して、その中の活性成分の遅延または制御放出を提供するように製剤化されてもよい。これらは、迅速な放出のために製剤化、例えば、凍結乾燥されてもよい。これらは、例えば、細菌保持フィルターによって、または使用直前に滅菌水もしくはいくつかの他の注射可能な媒体に溶解することができる滅菌固体組成物の型で滅菌薬剤を取り込むことによって、滅菌されてもよい。これらの組成物はまた、任意に、乳白剤を含んでもよく、胃腸管のある特定の部分のみにおいて、または選択的に胃腸管の特定の部分で優先的に、任意に遅延様式で、活性成分を放出する組成物であってもよい。使用され得る包埋組成物の例には、ポリマー性物質およびワックスが含まれる。活性成分はまた、適切な場合、上記の賦形剤のうちの１種以上とともに、マイクロカプセル化型であり得る。 Tablets and other dosage forms, such as dragees, capsules, pills, and granules, may optionally be obtained and prepared with coatings and shells such as enteric coatings and other coatings well known in the pharmaceutical arts. .. They also use, for example, various ratios of hydroxypropylmethylcellulose, other polymeric matrices, liposomes, and/or microspheres to provide the desired release profile, and delayed or controlled release of the active ingredient therein. May be formulated to provide These may be formulated, for example lyophilized, for rapid release. They may also be sterilized by, for example, a bacterial retention filter or by incorporating the sterile agent in the form of a sterile solid composition which may be dissolved in sterile water, or some other injectable medium immediately before use. Good. These compositions may also optionally include an opacifying agent, and only in certain parts of the gastrointestinal tract, or preferentially in certain parts of the gastrointestinal tract, optionally in a delayed manner, the active ingredient. May be a composition that releases Examples of embedding compositions that can be used include polymeric substances and waxes. The active ingredient may also be in micro-encapsulated form, if appropriate, with one or more of the above-mentioned excipients.

ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび免疫調節剤の経口投与用の液体剤形には、薬学的に許容されるエマルジョン、マイクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ、およびエリキシルが含まれる。活性成分に加えて、液体剤形は、例えば、水または他の溶媒などの当該技術分野で共通して使用される不活性希釈剤、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、油類（特に、綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコール、およびソルビタンの脂肪酸エステル、およびこれらの混合物などの溶解剤および乳化剤を含んでもよい。 Liquid dosage forms for oral administration of HRS polypeptides/expressible polynucleotides and immunomodulators include pharmaceutically acceptable emulsions, microemulsions, solutions, suspensions, syrups and elixirs. In addition to the active ingredient, liquid dosage forms include inert diluents commonly used in the art, such as, for example, water or other solvents, ethyl alcohol, isopropyl alcohol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, Benzyl benzoate, propylene glycol, 1,3-butylene glycol, oils (especially cottonseed oil, peanut oil, corn oil, germ oil, olive oil, castor oil, and sesame oil), glycerol, tetrahydrofuryl alcohol, polyethylene glycol, and sorbitan. May also include solubilizers and emulsifiers such as fatty acid esters of, and mixtures thereof.

不活性希釈剤に加えて、経口組成物はまた、湿潤剤、乳化剤、および懸濁剤、甘味料、香料、着色料、芳香剤、ならびに保存剤などのアジュバントも含むことができる。 In addition to inert diluents, oral compositions can also include adjuvants such as wetting, emulsifying, and suspending agents, sweetening, flavoring, coloring, perfuming agents, and preservatives.

懸濁液は、活性化合物に加えて、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール、およびソルビタンエステル、微結晶セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天、およびトラガカント、ならびにこれらの混合物としての懸濁剤を含んでもよい。 Suspensions may contain, in addition to the active compound, for example ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol and sorbitan esters, microcrystalline cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar and tragacanth, and mixtures thereof. Suspending agents may be included.

ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび免疫調節剤の局所的または経皮投与用の製剤または剤形には、散剤、スプレー、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ジェル、溶液、パッチ、および吸入剤が含まれる。活性ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤は、滅菌条件下で、薬学的に許容される担体とともに、および必要とされ得る、任意の保存剤、緩衝剤、または噴霧剤とともに混合されてもよい。軟膏、ペースト、クリーム、およびジェルは、ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤に加えて、賦形剤、例えば、動物性および植物性脂肪、油、ワックス、パラフィン、デンプン、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、タルクおよび酸化亜鉛、またはこれらの混合物を含んでもよい。 Formulations or dosage forms for topical or transdermal administration of HRS polypeptides/expressible polynucleotides and immunomodulators include powders, sprays, ointments, pastes, creams, lotions, gels, solutions, patches, and inhalants. Is included. Active HRS polypeptides/expressible polynucleotides and/or immunomodulators under sterile conditions with a pharmaceutically acceptable carrier, and with any preservatives, buffers, or propellants that may be required. It may be mixed. Ointments, pastes, creams, and gels include HRS polypeptides/expressible polynucleotides and/or immunomodulators as well as excipients such as animal and vegetable fats, oils, waxes, paraffins, starches, It may include tragacanth, cellulose derivatives, polyethylene glycol, silicones, bentonite, silicic acid, talc and zinc oxide, or mixtures thereof.

散剤およびスプレーは、賦形剤、例えば、ラクトース、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウム、およびポリアミド粉末、またはこれら物質の混合物を含むことができる。スプレーは、慣例的な噴霧剤、例えば、クロロフルオロハイドロカーボンおよび揮発性非置換炭化水素、例えば、ブタンおよびプロパンをさらに含むことができる。 Powders and sprays can contain excipients such as lactose, talc, silicic acid, aluminum hydroxide, calcium silicates and polyamide powder, or mixtures of these substances. Sprays can additionally contain customary propellants, such as chlorofluorohydrocarbons and volatile unsubstituted hydrocarbons, such as butane and propane.

経皮パッチは、ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤の身体への制御送達を提供するさらなる利点を有する。このような剤形は、適切な媒体中に薬剤を溶解または分散させることによって作製することができる。吸収増強剤もまた、皮膚を横切って薬剤の流入を増加させるために使用することができる。このような流入の速度は、当該技術分野で公知である他の方法の中でも、速度制御膜を提供すること、またはポリマーマトリックスもしくはゲル中で薬剤を分散させることのいずれかによって制御することができる。 Transdermal patches have the added advantage of providing controlled delivery of an HRS polypeptide/expressible polynucleotide and/or immunomodulatory agent to the body. Such dosage forms can be made by dissolving or dispensing the agent in the proper medium. Absorption enhancers can also be used to increase the flux of the drug across the skin. The rate of such influx can be controlled by either providing a rate controlling membrane or dispersing the drug in a polymer matrix or gel, among other methods known in the art. ..

非経口投与用に適切な薬学的組成物は、１つ以上のＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤を、１つ以上の薬学的に許容される滅菌等張水性または非水性溶液、分散液、懸濁液、またはエマルジョン、あるいは、使用直前に滅菌注射用溶液または分散液に再構築されてもよい滅菌粉末と組み合わせて含んでもよく、これらは、糖、アルコール、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、製剤を意図されるレシピエントの血液と等張性にする溶質、または懸濁剤もしくは濃厚剤を含んでもよい。薬学的組成物において利用されてもよい適切な水性および非水性担体の例には、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、およびこれらの適切な混合物、植物油、例えば、オリーブ油、ならびに注射可能な有機エステル、例えば、オレイン酸エチルが含まれる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用によって、分散の場合には必要とされる粒子サイズの維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持することができる。 Pharmaceutical compositions suitable for parenteral administration include one or more HRS polypeptides/expressible polynucleotides and/or immunomodulators in one or more pharmaceutically acceptable sterile isotonic aqueous or non-aqueous solutions. Aqueous solutions, dispersions, suspensions or emulsions, or may be included in combination with sterile powders which may be reconstituted into sterile injectable solutions or dispersions immediately before use, which include sugars, alcohols, antioxidants. Agents, buffers, bacteriostats, solutes that render the formulation isotonic with the blood of the intended recipient, or suspensions or thickeners may be included. Examples of suitable aqueous and non-aqueous carriers that may be utilized in pharmaceutical compositions include water, ethanol, polyols (eg glycerol, propylene glycol, polyethylene glycol, etc.), and suitable mixtures thereof, vegetable oils, such as , Olive oil, and injectable organic esters such as ethyl oleate. The proper fluidity can be maintained, for example, by the use of a coating material such as lecithin, by the maintenance of the required particle size in the case of dispersion and by the use of surfactants.

これらの組成物はまた、保存剤、湿潤剤、乳化剤、および分散剤などのアジュバントも含んでもよい。対象に対する微生物の作用の予防は、種々の抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などを含めることによって保証されてもよい。組成物に、糖、塩化ナトリウムなどの等張剤を含めることもまた望ましくあり得る。加えて、注射可能な薬剤型の吸収の延長は、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの吸収を遅延させる薬剤を含めることによってもたらされてもよい。 These compositions may also contain adjuvants such as preservatives, wetting agents, emulsifying agents and dispersing agents. Prevention of the action of microorganisms on a subject may be ensured by the inclusion of various antibacterial and antifungal agents such as parabens, chlorobutanol, phenol sorbic acid and the like. It may also be desirable to include isotonic agents, such as sugars, sodium chloride in the composition. In addition, prolonged absorption of the injectable drug form may be brought about by the inclusion of agents which delay absorption such as aluminum monostearate and gelatin.

場合によっては、薬物の効果を延長させるために、皮下または筋肉内注射からの薬物の吸収を遅延させることが望ましい。これは、当該技術分野で公知の他の方法の中でも、乏しい水溶性を有する結晶性またはアモルファス性材料の液体懸濁液の使用によって達成されてもよい。次いで、薬物の吸収の速度は、その溶解の速度に依存し、次には、結晶サイズおよび結晶型に依存するかもしれない。あるいは、非経口投与された薬物型の吸収の遅延は、油性ビヒクル中で薬物を溶解または懸濁することによって達成される。 In some cases, in order to prolong the effect of the drug, it is desirable to delay the absorption of the drug from subcutaneous or intramuscular injection. This may be accomplished by the use of a liquid suspension of crystalline or amorphous material with poor water solubility, among other methods known in the art. The rate of absorption of the drug then depends on its rate of dissolution, which in turn may depend on crystal size and crystal form. Alternatively, delayed absorption of a parenterally-administered drug form is accomplished by dissolving or suspending the drug in an oil vehicle.

注射用デポー型は、ポリラクチド−ポリグリコリドなどの生物分解可能なポリマー中で対象のＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤のマイクロカプセル化マトリックスを形成することによって作製されてもよい。薬剤対ポリマーの比率、および利用される特定のポリマーの性質に応じて、放出の速度は制御することができる。他の生物分解可能なポリマーの例には、ポリ（オルトエステル）およびポリ（無水物）が含まれる。デポー注射用製剤はまた、身体組織と適合可能であるリポソームまたはマイクロエマルジョン中に薬物をトラップすることによって調製されてもよい。 Injectable depot forms may also be made by forming a microencapsulation matrix of the subject HRS polypeptide/expressible polynucleotide and/or immunomodulatory agent in a biodegradable polymer such as polylactide-polyglycolide. Good. Depending on the drug to polymer ratio and the nature of the particular polymer utilized, the rate of release can be controlled. Examples of other biodegradable polymers include poly(orthoesters) and poly(anhydrides). Depot injectable formulations may also be prepared by entrapping the drug in liposomes or microemulsions that are compatible with body tissues.

ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤がヒトおよび動物に医薬品として投与されるとき、これらは、それ自体で、または薬学的に許容される担体と組み合わせて、例えば、活性成分の０．１〜９９％（より好ましくは、１０〜３０％）を含む薬学的組成物として与えられ得る。 When the HRS polypeptides/expressible polynucleotides and/or immunomodulators are administered as pharmaceuticals to humans and animals, they may be used by themselves or in combination with pharmaceutically acceptable carriers, eg active ingredients. 0.1 to 99% (more preferably 10 to 30%) of the pharmaceutical composition.

「非経口投与」および「非経口的に投与される」という語句は、本明細書で使用される場合、通常は注射による、腸内および局所的投与以外の投与の様式を意味し、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、および胸骨内の注射および注入を含むが、これらに限定されない。 The terms “parenteral administration” and “parenterally administered” as used herein refer to modes of administration other than enteral and topical administration, usually by injection, and intravenous , Intramuscular, intraarterial, intrathecal, intracapsular, intraorbital, intracardiac, intradermal, intraperitoneal, transtracheal, subcutaneous, subepidermal, intraarticular, subcapsular, subarachnoid, intraspinal, and intrasternal Including but not limited to injections and infusions.

「全身投与」、「全身的に投与される」、「末梢投与」、および「末梢的に投与される」という語句は、本明細書で使用される場合、中枢神経系に直接的である以外の、化合物、薬物、または他の物質の投与であって、その結果、これは、患者の系に入り、したがって、代謝および他の同様のプロセスに供されることを意味し、これは、例えば、皮下投与である。 The terms “systemic administration”, “systemically administered”, “peripheral administration”, and “peripherally administered”, as used herein, are other than directly to the central nervous system. Administration of a compound, drug, or other substance, as a result of which it enters the patient's system and is thus subject to metabolism and other similar processes, such as , Subcutaneous administration.

選択される投与経路にかかわらず、ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤は、当業者に公知である従来的な方法によって、薬学的に許容される剤形に製剤化されてもよい。薬学的組成物における活性成分の実際の投薬量レベルは、患者に対して受容可能でない毒性を伴うことなく、特定の患者についての所望の治療反応、組成物、および投与の様式を達成するために有効である活性成分の量を得るために変動されてもよい。 Regardless of the route of administration chosen, the HRS polypeptide/expressible polynucleotide and/or immunomodulatory agent is formulated into a pharmaceutically acceptable dosage form by conventional methods known to those of skill in the art. You may. The actual dosage level of the active ingredient in the pharmaceutical composition will be in order to achieve the desired therapeutic response, composition and mode of administration for a particular patient without unacceptable toxicity to the patient. It may be varied to obtain the amount of active ingredient that is effective.

選択された投薬量レベルは、利用される特定のＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤、またはそのエステル、塩、またはアミドの活性、投与の経路、投与の時間、利用される特定の薬剤の排出または代謝の速度、吸収の速度または程度、治療の期間、利用される特定の薬剤と組み合わせて使用される他の薬物、化合物、および／または物質、治療される患者の年齢、性別、体重、状態、一般的健康、および以前の医学的履歴、ならびに医学分野で周知である同様の要因を含む種々の要因に応じて異なる。 The selected dosage level will depend on the particular HRS polypeptide/expressible polynucleotide and/or immunomodulator utilized, or its ester, salt, or amide activity, route of administration, time of administration, utilization. Rate of excretion or metabolism of a particular drug, rate or extent of absorption, duration of treatment, other drugs, compounds and/or substances used in combination with the particular drug utilized, age of the patient being treated , Gender, weight, condition, general health, and previous medical history, as well as a variety of factors, including similar factors well known in the medical arts.

当該技術分野で通常の技能を有する医師は、必要とされる薬学的組成物の有効量を容易に決定および処方することができる。例えば、医師は、所望の治療効果を達成するために、薬学的組成物中で利用されるＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤の用量を、必要とされるレベルよりも低いレベルで開始し、所望の効果が達成されるまで、投与量を徐々に増加させ得る。一般的に、ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤の適切な１日の用量は、治療効果を生じるために有効である最低の用量である化合物の量である。このような有効用量は、一般的には、本明細書に記載される要因に応じて異なる。一般的には、対象または患者のためのＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤の経口、静脈内、筋肉内、脳室内、および皮下用量は、示される効果のために使用されるとき、約０．０００１〜約１００ｍｇ／用量、または約約０．０００１〜約１００ｍｇ／体重キログラム／用量の範囲である。 A physician of ordinary skill in the art can readily determine and prescribe the effective amount of the pharmaceutical composition required. For example, a physician may adjust the dose of HRS polypeptide/expressible polynucleotide and/or immunomodulatory agent utilized in a pharmaceutical composition to achieve the desired therapeutic effect above the level required. Dosage may be increased gradually, starting at lower levels and until the desired effect is achieved. In general, a suitable daily dose of HRS polypeptide/expressible polynucleotide and/or immunomodulator will be that amount of the compound which is the lowest dose effective to produce a therapeutic effect. Such an effective dose generally depends on the factors described herein. Generally, oral, intravenous, intramuscular, intracerebroventricular, and subcutaneous doses of HRS polypeptides/expressible polynucleotides and/or immunomodulators for a subject or patient are used for the indicated effect. When applied, it is in the range of about 0.0001 to about 100 mg/dose, or about 0.0001 to about 100 mg/kg body weight/dose.

所望される場合、活性薬剤の有効１日用量は、１日または１週間を通して適切な間隔で別々に投与される１回、２回、３回、４回、５回、６回、またはそれ以上のサブ用量として、例えば、単位剤形で投与され得る。ある特定の状況において、投薬は、１日当たり１回の投与である。ある特定の状況において、投薬は、１週間当たり１回、２回、または３回の投与である。ある特定の実施形態では、投薬は、所望の状態を治療するために、必要に応じて、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４日毎、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２週間毎、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２カ月毎当たりに１回以上の投与である。 If desired, an effective daily dose of the active agent is one, two, three, four, five, six, or more, administered separately at appropriate intervals throughout the day or week. Can be administered as a sub-dose of, for example, in unit dosage form. In certain circumstances, dosing is one administration per day. In certain circumstances, dosing is once, twice, or three times a week. In certain embodiments, dosing is every 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 13, 14 days as needed to treat the desired condition. , Or 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 weeks, or 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 , Once or more every 12 months.

ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤は、当業者に公知である種々の方法によって細胞に投与することができ、これらには、本明細書に記載され、当該技術分野で周知である、リポソーム中のカプセル化、イオントフォレシス、または、ヒドロゲル、シクロデキストリン、生物分解性ナノカプセル、および生体接着性ミクロスフェアなどの他のビヒクルへの取り込みによる方法が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、マイクロエマルジョン化技術は、親油性（水不溶性）薬学的製剤のバイオアベイラビリティを改善するために利用されてもよい。例には、トリメトリン（Ｄｏｒｄｕｎｏｏ，Ｓ．Ｋ．，ｅｔａｌ．，ＤｒｕｇＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄＩｎｄｕｓｔｒｉａｌＰｈａｒｍａｃｙ，１７（１２），１６８５−１７１３，１９９１およびＲＥＶ５９０１（Ｓｈｅｅｎ，Ｐ．Ｃ．，ｅｔａｌ．，ＪＰｈａｒｍＳｃｉ８０（７），７１２−７１４，１９９１）が含まれる。他の利点の中でも、マイクロエマルジョン化は、循環系の代わりに、リンパ系への吸収を優先的に指向することによって、バイオアベイラビリティの増強を提供し、それによって、肝臓をバイパスし、肝胆汁性循環における化合物の破壊を防止する。 HRS polypeptides/expressible polynucleotides and/or immunomodulators can be administered to cells by a variety of methods known to those of skill in the art, as described herein and in the art. Well known methods include encapsulation in liposomes, iontophoresis, or incorporation into other vehicles such as hydrogels, cyclodextrins, biodegradable nanocapsules, and bioadhesive microspheres. Not limited. In certain embodiments, microemulsification techniques may be utilized to improve the bioavailability of lipophilic (water insoluble) pharmaceutical formulations. Examples include trimethrin (Dorduno, SK, et al., Drug Development and Industrial Pharmacy, 17(12), 1685-1713, 1991 and REV 5901 (Sheen, PC, et al., J Pharm. Sci 80(7), 712-714, 1991. Among other advantages, microemulsification promotes bioavailability by preferentially directing absorption into the lymphatic system instead of the circulatory system. It provides potentiation, thereby bypassing the liver and preventing destruction of compounds in the hepatobiliary circulation.

いくつかの実施形態では、組成物または製剤は、ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤ならびに少なくとも１つの両親媒性担体から形成されるミセルを含み、ここでは、このミセルは、約１００ｎｍ未満の平均直径を有する。例示的な実施形態は、約５０ｎｍ未満の平均直径を有するミセルを提供し、さらにある特定の実施形態は、約３０ｎｍ未満、またはさらに約２０ｎｍ未満の平均直径を有するミセルを提供する。全ての適切な両親媒性担体が企図されるが、現在好ましい担体は、一般的には、一般的に安全であると認められている（Ｇｅｎｅｒａｌｌｙ−Ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ−ａｓ−Ｓａｆｅ）（ＧＲＡＳ）状態であり、溶液が複雑な水相と接触されるときの後期段階において（例えば、ヒトの胃腸管で見出されるもの）、活性成分を可溶化することと、それをマイクロエマルジョン化することの両方ができるものである。通常、これらの要件を満たす両親媒性成分は、２〜２０のＨＬＢ（親水性対親油性バランス）値を有し、それらの構造はＣ−６〜Ｃ−２０の範囲の直鎖脂肪族基を含む。例は、ポリエチレン−グリコール化脂肪グリセリドおよびポリエチレングリコールである。 In some embodiments, the composition or formulation comprises a micelle formed from a HRS polypeptide/expressible polynucleotide and/or an immunomodulator and at least one amphipathic carrier, wherein the micelle is , Having an average diameter of less than about 100 nm. Exemplary embodiments provide micelles having an average diameter of less than about 50 nm, and certain other embodiments provide micelles having an average diameter of less than about 30 nm, or even less than about 20 nm. While all suitable amphipathic carriers are contemplated, presently preferred carriers are generally in the generally accepted to be generally safe (Generally-Recognized-as-Safe) (GRAS) state. , Capable of both solubilizing the active ingredient and microemulsifying it at a later stage when the solution is contacted with a complex aqueous phase (eg, those found in the human gastrointestinal tract) Is. Generally, amphipathic components that meet these requirements have HLB (hydrophilic to lipophilic balance) values of 2-20 and their structures are straight chain aliphatic groups in the range of C-6 to C-20. including. Examples are polyethylene-glycolized fatty glycerides and polyethylene glycols.

両親媒性担体の例には、完全にまたは部分的に水素化された種々の植物油から得られるものなどの、飽和およびモノ不飽和ポリエチレングリコール化脂肪酸グリセリドが含まれる。このような油は、トリ−、ジ−、およびモノ−脂肪酸グリセリドならびに対応する脂肪酸のジ−およびモノ−ポリエチレングリコールエステルから有利になってもよく、特に好ましい脂肪酸組成は、カプリン酸４〜１０、カプリン酸３〜９、ラウリン酸４０〜５０、ミリスチン酸１４〜２４、パルミチン酸４〜１４、およびステアリン酸５〜１５％を含む。別の有用なクラスの両親媒性担体には、飽和またはモノ不飽和脂肪酸（ＳＰＡＮシリーズ）または対応するエトキシ化アナログ（ＴＷＥＥＮシリーズ）を有する、部分的にエステル化されたソルビタンおよび／またはソルビトールが含まれる。 Examples of amphipathic carriers include saturated and monounsaturated polyethylene glycolated fatty acid glycerides, such as those obtained from various fully or partially hydrogenated vegetable oils. Such oils may advantageously consist of tri-, di-, and mono-fatty acid glycerides and the corresponding di- and mono-polyethylene glycol esters of fatty acids, a particularly preferred fatty acid composition being 4-10 capric acid. Includes 3-9 capric acid, 40-50 lauric acid, 14-24 myristic acid, 4-14 palmitic acid, and 5-15% stearic acid. Another useful class of amphipathic carriers includes partially esterified sorbitan and/or sorbitol with saturated or monounsaturated fatty acids (SPAN series) or the corresponding ethoxylated analogs (TWEEN series). Be done.

市販の両親媒性担体は、特に有用であり得、これらには、Ｇｅｌｕｃｉｒｅシリーズ、Ｌａｂｒａｆｉｌ，Ｌａｂｒａｓｏｌ、またはＬａｕｒｏｇｌｙｃｏｌ（全て、ＧａｔｔｅｆｏｓｓｅＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，ＳａｉｎｔＰｒｉｅｓｔ，Ｆｒａｎｃｅにより製造および販売）、ＰＥＧ−モノ−オレエート、ＰＥＧ−ジ−オレエート、ＰＥＧ−モノ−ラウレートおよびジ−ラウレート、レシチン、ポリソルベート８０など（米国および世界中の多くの企業によって製造および販売されている）が含まれる。 Commercially available amphipathic carriers may be particularly useful and include the Gelucire series, Labrafil, Labrasol, or Lauroglycol (all manufactured and sold by Gattefosse Corporation, Saint Priest, France), PEG-mono-oleate, PEG. -Di-oleate, PEG-mono-laurate and di-laurate, lecithin, polysorbate 80 and the like (manufactured and sold by many companies in the United States and around the world).

ある特定の実施形態では、送達は、適切な宿主細胞へのＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤の導入のために、リポソーム、ナノカプセル、微粒子、ミクロスフェア、脂質粒子、ベシクルなどの使用によって行われてもよい。特に、本組成物は、送達のために、脂質粒子、リポソーム、ベシクル、ナノスフェア、ナノ粒子などのいずれかにカプセル化されて製剤化されてもよい。このような送達ベシクルの製剤および使用は、公知であり、かつ従来の技術を使用して実行することができる。 In certain embodiments, delivery includes liposomes, nanocapsules, microparticles, microspheres, lipid particles, for the introduction of HRS polypeptides/expressible polynucleotides and/or immunomodulatory agents into suitable host cells. It may be performed by using vesicles or the like. In particular, the composition may be formulated for delivery in any of lipid particles, liposomes, vesicles, nanospheres, nanoparticles, and the like. The formulation and use of such delivery vesicles is known and can be carried out using conventional techniques.

使用に適している親水性ポリマーは、容易に水に溶解し、ベシクル形成脂質に共有結合することができ、毒性効果を伴わずにインビボで耐性を示す（すなわち、生体適合性がある）ものである。適切なポリマーには、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ乳酸（ポリラクチドとも呼ばれる）、ポリグリコール酸（ポリグリコリドとも呼ばれる）、ポリ乳酸−ポリグリコール酸コポリマー、およびポリビニルアルコールが含まれる。ある特定の実施形態では、ポリマーは、約１００もしくは１２０ダルトンから約５，０００もしくは１０，０００ダルトンまで、または約３００ダルトンから約５，０００ダルトンまでの分子量を有する。他の実施形態では、ポリマーは、約１００から約５，０００ダルトンまでの分子量を有するか、または約３００から約５，０００ダルトンまでの分子量を有するポリエチレングリコールである。ある特定の実施形態では、ポリマーは、７５０ダルトンのポリエチレングリコール（ＰＥＧ（７５０））である。ポリマーはまた、その中のモノマーの数によって規定されてもよい。 Hydrophilic polymers suitable for use are those that are readily soluble in water, covalently attached to vesicle-forming lipids, and that are resistant (ie, biocompatible) in vivo without toxic effects. is there. Suitable polymers include polyethylene glycol (PEG), polylactic acid (also called polylactide), polyglycolic acid (also called polyglycolide), polylactic acid-polyglycolic acid copolymer, and polyvinyl alcohol. In certain embodiments, the polymer has a molecular weight of about 100 or 120 Daltons to about 5,000 or 10,000 Daltons, or about 300 Daltons to about 5,000 Daltons. In other embodiments, the polymer is polyethylene glycol having a molecular weight of about 100 to about 5,000 daltons, or a molecular weight of about 300 to about 5,000 daltons. In certain embodiments, the polymer is 750 Daltons polyethylene glycol (PEG(750)). The polymer may also be defined by the number of monomers in it.

適切であり得る他の親水性ポリマーには、ポリビニルピロリドン、ポリメトキサゾリン、ポリエチルオキサゾリン、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリジメチルアクリルアミド、およびヒドロキシメチルセルロースまたはヒドロキシエチルセルロースなどの誘導体化セルロースが含まれる。 Other hydrophilic polymers that may be suitable include polyvinylpyrrolidone, polymethoxazoline, polyethyloxazoline, polyhydroxypropylmethacrylamide, polymethacrylamide, polydimethylacrylamide, and derivatized cellulose such as hydroxymethyl cellulose or hydroxyethyl cellulose. Be done.

ある特定の実施形態では、組成物または製剤は、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリアルキレン、アクリルおよびメタクリルエステルのポリマー、ポリビニルポリマー、ポリグリコリド、ポリシロキサン、ポリウレタンおよびそのコポリマー、セルロース、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリスチレン、乳酸およびグリコール酸のポリマー、ポリ無水物、ポリ（オルト）エステル、ポリ（ブチック（ｂｕｔｉｃ）酸）、ポリ（吉草酸）、ポリ（ラクチド−コ−カプロラクトン）、ポリサッカリド、タンパク質、ポリヒアルロン酸、ポリシアノアクリレート、およびこれらのブレンド、混合物、またはコポリマーを含む。 In certain embodiments, the composition or formulation comprises polyamides, polycarbonates, polyalkylenes, polymers of acrylic and methacrylic esters, polyvinyl polymers, polyglycolides, polysiloxanes, polyurethanes and copolymers thereof, cellulose, polypropylene, polyethylene, polystyrene, lactic acid. And polymers of glycolic acid, polyanhydrides, poly(ortho)esters, poly(butic acid), poly(valeric acid), poly(lactide-co-caprolactone), polysaccharides, proteins, polyhyaluronic acid, poly Includes cyanoacrylates, and blends, mixtures, or copolymers thereof.

シクロデキストリンは、環状オリゴサッカリドであり、ギリシャ文字α、β、またはγによってそれぞれ示される、６、７、または８個のグルコース単位からなる。これらのグルコース単位は、α−１，４−グルコシド結合によって連結されている。糖単位のイス型コンフォメーションの結果として、全ての二次ヒドロキシル基（Ｃ−２、Ｃ−３における）は、環の一方の側に位置するのに対して、Ｃ−６における全ての一次ヒドロキシル基は、他の側に配置されている。結果として、外部表面は親水性であり、シクロデキストリンを水溶性にする。対照的に、シクロデキストリンの空洞は疎水性であり、そのため、これらは、Ｃ−３およびＣ−５の水素原子によって、およびエーテル様酸素によって並べられている。これらのマトリックスは、例えば、１７α−エストラジオールなどのステロイド化合物を含む、種々の比較的疎水的な化合物との複合体形成を可能にする（例えば、ｖａｎＵｄｅｎｅｔａｌ．ＰｌａｎｔＣｅｌｌＴｉｓｓ．Ｏｒｇ．Ｃｕｌｔ．３８：１−３−１１３（１９９４）を参照のこと）。この複合体形成は、ＶａｎｄｅｒＷａａｌｓ相互作用によって、および水素結合形成によって起こる。シクロデキストリン誘導体の物理化学的特性は、置換の種類および程度に応じて異なる。例えば、これらの水溶性は、不溶性（例えば、トリアセチル−β−シクロデキストリン）から１４７％の可溶性（ｗ／ｖ）（Ｇ−２−β−シクロデキストリン）までの範囲である。加えて、これらは、多くの有機溶媒中で可溶性である。シクロデキストリンの特性は、それらの溶解度を増加または減少させることによって、種々の製剤成分の溶解度に対する制御を可能にする。 Cyclodextrins are cyclic oligosaccharides, consisting of 6, 7, or 8 glucose units, indicated by the Greek letters α, β, or γ, respectively. These glucose units are linked by α-1,4-glucosidic bonds. As a result of the chair conformation of the sugar unit, all secondary hydroxyl groups (at C-2, C-3) are located on one side of the ring, whereas all primary hydroxyl groups at C-6 are located. The group is located on the other side. As a result, the outer surface is hydrophilic, making the cyclodextrin water soluble. In contrast, the cavities of cyclodextrins are hydrophobic, so they are lined by the C-3 and C-5 hydrogen atoms and by the ether-like oxygen. These matrices allow complexation with a variety of relatively hydrophobic compounds, including, for example, steroid compounds such as 17α-estradiol (see, for example, van Uden et al. Plant Cell Tiss. Org. Cult. 38:1-3-113 (1994)). This complex formation occurs by Van der Waals interactions and by hydrogen bond formation. The physicochemical properties of cyclodextrin derivatives depend on the type and degree of substitution. For example, their water solubility ranges from insoluble (eg, triacetyl-β-cyclodextrin) to 147% soluble (w/v) (G-2-β-cyclodextrin). In addition, they are soluble in many organic solvents. The properties of cyclodextrins allow control over the solubility of various formulation components by increasing or decreasing their solubility.

多数のシクロデキストリンおよびそれらの調製のための方法が記載されている。例えば、Ｐａｒｍｅｔｅｒ（Ｉ）ら（米国特許第３，４５３，２５９号）およびＧｒａｍｅｒａら米国特許第３，４５９，７３１号）は電気的中性シクロデキストリンを記載している。他の誘導体には、カチオン性特性を有するシクロデキストリン［Ｐａｒｍｅｔｅｒ（ＩＩ）、米国特許第３，４５３，２５７号］、不溶性架橋シクロデキストリン（Ｓｏｌｍｓ、米国特許第３，４２０，７８８号）、およびアニオン性特性を有するシクロデキストリン［Ｐａｒｍｅｔｅｒ（ＩＩＩ）、米国特許第３，４２６，０１１号］が含まれる。アニオン性特性を有するシクロデキストリン誘導体の中では、カルボン酸、亜リン酸、亜ホスフィン酸、ホスホン酸、リン酸、チオホスホン酸、チオスルフィン酸、およびスルホン酸が、親シクロデキストリンに付加されている［Ｐａｒｍｅｔｅｒ（ＩＩＩ）、上記を参照のこと］。さらに、スルホアルキルエーテルシクロデキストリン誘導体が、Ｓｔｅｌｌａら（米国特許第５，１３４，１２７号）によって記載されている。 A number of cyclodextrins and methods for their preparation have been described. For example, Parmeter (I) et al. (US Pat. No. 3,453,259) and Gramera et al. US Pat. No. 3,459,731) describe electrically neutral cyclodextrins. Other derivatives include cyclodextrins with cationic properties [Parmeter (II), US Pat. No. 3,453,257], insoluble cross-linked cyclodextrins (Solms, US Pat. No. 3,420,788), and anions. Included are cyclodextrins that have sexual properties [Parmeter (III), US Pat. No. 3,426,011]. Among cyclodextrin derivatives with anionic properties, carboxylic acids, phosphorous acids, phosphinic acids, phosphonic acids, phosphoric acids, thiophosphonic acids, thiosulfinic acids, and sulfonic acids are attached to the parent cyclodextrin [ Parmeter (III), supra]. In addition, sulfoalkyl ether cyclodextrin derivatives are described by Stella et al. (US Pat. No. 5,134,127).

いくつかの実施形態は、ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤を含むリポソームを含む製剤に関し、リポソーム膜は、輸送能力が増加したリポソームを提供するように製剤化される。あるいは、または加えて、活性成分は、リポソームのリポソーム二重層に含まれてもよく、またはそこに吸着されてもよい。ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤は、脂質界面活性剤で凝集されてもよく、リポソームの内部空間に輸送されてもよく、これらの場合、リポソーム膜は、活性薬剤−界面活性剤凝集体の破壊的効果に抵抗するように製剤化される。 Some embodiments relate to formulations that include liposomes that include HRS polypeptides/expressible polynucleotides and/or immunomodulators, wherein the liposomal membrane is formulated to provide liposomes with increased transport capacity. Alternatively, or in addition, the active ingredient may be contained in or adsorbed to the liposome bilayer of the liposome. The HRS polypeptide/expressible polynucleotide and/or immunomodulatory agent may be aggregated with a lipid detergent and may be transported into the interior space of the liposome, in which case the liposome membrane will contain the active agent- Formulated to resist the destructive effects of surfactant aggregates.

リポソームは、水性内部区画を囲む少なくとも１つの脂質二重層膜からなる。リポソームは、膜の型およびサイズによって特徴付けられ得る。小さな単層ベシクル（ＳＵＶ）は、単一の膜を有し、典型的には、直径が０．０２〜０．０５μｍの範囲であり、大きな単層ベシクル（ＬＵＶ）は、典型的には、０．０５μｍよりも大きい。オリゴ層の大きなベシクルおよび多層ベシクルは、複数の、通常は同心性の膜の層を有し、典型的には、０．１μｍよりも大きい。いくつかの非同心性膜を有するリポソーム、すなわち、より大きなベシクル内に含まれるいくつかのより小さなベシクルは、多ベシクル性ベシクルと称する。 Liposomes consist of at least one lipid bilayer membrane surrounding an aqueous inner compartment. Liposomes can be characterized by membrane type and size. Small unilamellar vesicles (SUV) have a single membrane, typically in the range of 0.02-0.05 μm in diameter, and large unilamellar vesicles (LUV) typically It is larger than 0.05 μm. Large and multilayer vesicles of oligo layers have multiple, usually concentric, layers of membranes, typically greater than 0.1 μm. Liposomes with some non-concentric membranes, ie some smaller vesicles contained within larger vesicles, are referred to as multivesicular vesicles.

いくつかの実施形態では、リポソームの脂質二重層は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖が脂質二重層の内部表面からリポソームによってカプセル化された内部空間にまで伸び、脂質二重層の外部から周囲環境にまで伸びるように、ＰＥＧで誘導体化された脂質を含む。 In some embodiments, the lipid bilayer of the liposome extends from the interior surface of the lipid bilayer to the interior space where the polyethylene glycol (PEG) chains extend from the exterior of the lipid bilayer to the surrounding environment. Contains a PEG-derivatized lipid for elongation.

リポソームは、当該技術分野で周知の様々な技術のいずれかによって調製され得る。例えば、米国特許第４，２３５，８７１号、ＰＣＴ出願公開ＷＯ９６／１４０５７、ＮｅｗＲＲＣ，Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ：Ａｐｒａｃｔｉｃａｌａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬＰｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ（１９９０），ｐａｇｅｓ３３−１０４、ＬａｓｉｃＤＤ，Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓｆｒｏｍｐｈｙｓｉｃｓｔｏａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ＥｌｓｅｖｉｅｒＳｃｉｅｎｃｅＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓＢＶ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，１９９３を参照のこと。例えば、リポソームは、予め形成されたリポソームに、親水性ポリマーで誘導体化した脂質を分散させることによって、例えば、リポソーム中で所望される誘導体化脂質の最終モルパーセントに対応する脂質濃度で、脂質グラフト結合ポリマーから構成されるミセルに、予め形成されたリポソームを露出させることによって調製されてもよい。親水性ポリマーを含むリポソームはまた、当該技術分野で周知であるように、均質化、脂質フィールド水和、または押し出し技術によって形成することができる。 Liposomes can be prepared by any of a variety of techniques well known in the art. For example, U.S. Pat. No. 4,235,871, PCT application publication WO 96/14057, New RRC, Liposomes: A practical approach, IRL Press, Oxford (1990), pages 33-104, Lasic DD, Liposposomes from. See Elsevier Science Publishers BV, Amsterdam, 1993. For example, liposomes can be prepared by dispersing lipids derivatized with hydrophilic polymers in preformed liposomes, eg, at a lipid concentration that corresponds to the final mole percent of derivatized lipid desired in the liposome. It may be prepared by exposing the preformed liposomes to micelles composed of the attached polymer. Liposomes containing hydrophilic polymers can also be formed by homogenization, lipid field hydration, or extrusion techniques, as is well known in the art.

別の例示的な製剤手順において、ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤は、容易に疎水性分子を溶解する、リゾホスファチジルコリンまたは他の低ＣＭＣ界面活性剤（ポリマーグラフト結合脂質を含む）中での超音波処理によって最初に分散される。次いで、得られた活性薬剤のミセル懸濁液は、適切なモルパーセントのポリマーグラフト結合脂質またはコレステロールを含む乾燥脂質サンプルを再水和するために使用される。次いで、脂質および活性薬剤懸濁液が、当該技術分野で周知であるように、押し出し技術を使用してリポソームに形成され、得られたリポソームは、標準的なカラム分離によって非カプセル化溶液から分離される。 In another exemplary formulation procedure, the HRS polypeptide/expressible polynucleotide and/or immunomodulatory agent is a lysophosphatidylcholine or other low CMC surfactant (polymer grafted lipid) that readily dissolves hydrophobic molecules. First) by sonication. The resulting micellar suspension of active agent is then used to rehydrate a dried lipid sample containing the appropriate mole percent of polymer grafted lipid or cholesterol. The lipid and active agent suspension is then formed into liposomes using extrusion techniques, as is well known in the art, and the resulting liposomes are separated from the unencapsulated solution by standard column separations. To be done.

一態様では、リボソームは、選択されたサイズ範囲において実質的に均一なサイズを有するように調製される。１つの有効なサイズ決定方法は、選択された均一なポアサイズを有する一連のポリカーボネート膜を通してリポソームの水性懸濁液を押し出しする工程を包含し、この膜のポアサイズは、その膜を通した押し出しによって産生されるリポソームの最大サイズとおおまかに一致する。例えば、米国特許第４，７３７，３２３号（Ａｐｒ．１２，１９８８）を参照のこと。ある特定の実施形態では、ＤｈａｒｍａＦＥＣＴ（商標）およびＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）などの試薬が、ポリヌクレオチドまたはタンパク質を細胞に導入するために利用されてもよい。 In one aspect, ribosomes are prepared to have a substantially uniform size in a selected size range. One effective sizing method involves extruding an aqueous suspension of liposomes through a series of polycarbonate membranes with a selected uniform pore size, the pore size of the membrane being produced by extrusion through the membrane. It roughly corresponds to the maximum size of the liposomes. See, for example, U.S. Pat. No. 4,737,323 (Apr. 12,1988). In certain embodiments, reagents such as DharmaFECT™ and Lipofectamine™ may be utilized to introduce the polynucleotide or protein into the cell.

製剤の放出特性は、カプセル化材料、カプセル化された薬物の濃度、および放出修飾剤の存在に応じて異なる。例えば、放出は、例えば、胃の中のような低ｐＨにおいてのみ、または腸の中のようなより高いｐＨにおいてのみ放出するｐＨ感受性コーティングを使用して、ｐＨ依存性に操作することができる。腸溶コーティングは、胃を通った通路の後まで放出が起こることを防止するために使用することができる。異なる材料中にカプセル化されたシアナミドの複数のコーティングまたはその混合物は、胃の中で初期の放出を得、続いて、腸の中でより後期の放出を得るために使用することができる。放出はまた、塩またはポア形成薬剤を含めることによって操作することができ、カプセルからの分散により、水の取り込みまたは薬物の放出を増加することができる。薬物の溶解度を修飾する賦形剤もまた、放出速度を制御するために使用することができる。マトリックスの分解またはマトリックスからの放出を増強する薬剤もまた、組み込むことができる。これらは、薬物に加えることができ、別々の相として（すなわち、微粒子として）加えることができるか、または化合物に応じてポリマー相に共溶解することができる。多くの場合において、その量は、０．１から３０パーセント（ｗ／ｗポリマー）の間であるべきである。分解促進剤の型には、無機塩、例えば、硫酸アンモニウムおよび塩化アンモニウム、有機酸、例えば、クエン酸、安息香酸、およびアスコルビン酸、無機塩基、例えば、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸カルシウム、炭酸亜鉛、および水酸化亜鉛、ならびに有機塩基、例えば、硫酸プロタミン、スペルミン、コリン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、およびトリエタノールアミン、ならびに界面活性剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ（商標）およびＰｌｕｒｏｎｉｃ（商標）が含まれる。マトリックスに微細構造を加えるポア形成剤（すなわち、無機塩および糖などの水溶性化合物）は、微粒子として加えられる。その範囲は、典型的には、１〜３０％（ｗ／ｗポリマー）である。 The release characteristics of the formulation will depend on the encapsulating material, the concentration of drug encapsulated, and the presence of the release modifier. For example, release can be pH-dependently engineered using a pH-sensitive coating that releases only at low pH, such as in the stomach, or at higher pH, such as in the intestine. Enteric coatings can be used to prevent release until after passage through the stomach. Multiple coatings of cyanamide or mixtures thereof encapsulated in different materials can be used to obtain an early release in the stomach and subsequently a later release in the intestine. Release can also be manipulated by inclusion of salts or pore-forming agents and dispersion from capsules can increase water uptake or drug release. Excipients that modify the solubility of the drug can also be used to control the rate of release. Agents that enhance the degradation or release of the matrix can also be incorporated. They can be added to the drug, added as separate phases (ie, as microparticles), or can be co-dissolved in the polymer phase depending on the compound. In most cases, the amount should be between 0.1 and 30 percent (w/w polymer). Types of degradation accelerators include inorganic salts such as ammonium sulfate and ammonium chloride, organic acids such as citric acid, benzoic acid, and ascorbic acid, inorganic bases such as sodium carbonate, potassium carbonate, calcium carbonate, zinc carbonate, And zinc hydroxide, and organic bases such as protamine sulfate, spermine, choline, ethanolamine, diethanolamine, and triethanolamine, and surfactants such as Tween™ and Pluronic™. Pore formers that add microstructure to the matrix (ie, water-soluble compounds such as inorganic salts and sugars) are added as microparticles. The range is typically 1-30% (w/w polymer).

取り込みはまた、腸における粒子の滞留時間を変化させることによって操作することができる。これは、例えば、粘膜接着ポリマーで粒子をコーティングすること、またはカプセル化材料として粘膜接着ポリマーを選択することによって達成することができる。例としては、遊離のカルボキシル基を有する最も多くのポリマー、例えば、キトサン、セルロース、および特に、ポリアクリレート（本明細書で使用される場合、ポリアクリレートは、アクリレート基および修飾アクリレート基、例えば、シアノアクリレートおよびメタクリレートを含むポリマーを指す）が含まれる。 Uptake can also be manipulated by changing the residence time of the particles in the intestine. This can be achieved, for example, by coating the particles with a mucoadhesive polymer or choosing a mucoadhesive polymer as the encapsulating material. By way of example, most polymers having free carboxyl groups, such as chitosan, cellulose, and especially polyacrylates (as used herein, polyacrylates include acrylate groups and modified acrylate groups such as cyano groups). Refers to polymers including acrylates and methacrylates).

ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤は、外科的または医学的デバイスもしくは移植物の中に含まれるように製剤化されても、これらによって放出されるように適合されてもよい。ある特定の態様では、移植物は、薬剤でコーティングされるか、またはそうでなければ薬剤で処理されてもよい。例えば、ヒドロゲルまたは他のポリマー、例えば、生体適合性および／または生物分解性ポリマーが、ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤で移植物をコーティングするために使用されてもよい（すなわち、組成物は、ヒドロゲルまたは他のポリマーを使用することによって、医学的デバイスを伴う使用のために適合されてもよい）。薬剤で医学的デバイスをコーティングするためのポリマーおよびコポリマーは、当該技術分野で周知である。移植物の例としては、ステント、薬物溶出ステント、縫合糸、プロテーゼ、血管カテーテル、透析カテーテル、血管移植片、人工心臓弁、心臓ペースメーカー、植え込み型除細動器、静脈針、骨の設定および形成のためのデバイス、例えば、ピン、スクリュー、プレート、およびその他のデバイス、ならびに創傷治癒のための人工組織マトリックスが挙げられるが、これらに限定されない。 The HRS polypeptide/expressible polynucleotide and/or immunomodulatory agent may be formulated for release by or adapted to be included in a surgical or medical device or implant. Good. In certain embodiments, implants may be drug-coated or otherwise drug-treated. For example, hydrogels or other polymers such as biocompatible and/or biodegradable polymers may be used to coat implants with HRS polypeptides/expressible polynucleotides and/or immunomodulatory agents. (Ie, the composition may be adapted for use with medical devices by using hydrogels or other polymers). Polymers and copolymers for coating medical devices with drugs are well known in the art. Examples of implants include stents, drug eluting stents, sutures, prostheses, vascular catheters, dialysis catheters, vascular grafts, prosthetic heart valves, cardiac pacemakers, implantable defibrillators, venous needles, bone setting and formation. Devices such as, but not limited to, pins, screws, plates, and other devices, and artificial tissue matrices for wound healing.

ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤は、生理学的に許容される任意の便利なビヒクル中で投与されてもよい。このような組成物は、当業者によって利用される、様々な標準的な薬学的に許容される担体のうちのいずれかを含んでもよい。例としては、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、水、水性エタノール、エマルジョン、例えば、油／水エマルジョンまたはトリグリセリドエマルジョン、錠剤およびカプセル剤が挙げられるが、これらに限定されない。適切な生理学的に許容される担体の選択は、選択される投与様式に応じて異なるであろう。 The HRS polypeptide/expressible polynucleotide and/or immunomodulatory agent may be administered in any convenient physiologically acceptable vehicle. Such compositions may include any of a variety of standard pharmaceutically acceptable carriers utilized by those of skill in the art. Examples include, but are not limited to, saline, phosphate buffered saline (PBS), water, aqueous ethanol, emulsions such as oil/water emulsions or triglyceride emulsions, tablets and capsules. The choice of suitable physiologically acceptable carrier will depend on the mode of administration chosen.

キット、例えば、本明細書に記載される、治療用組成物、ＨＲＳポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または免疫調節剤のうちの１つ以上で充填した１つ以上の容器を含む、患者ケアキットもまた含まれる。いくつかの実施形態では、キットは、例えば、１つ以上の疾患の治療でのかかる組成物の使用法についての書面での取扱説明書を含む。 A patient, including a kit, eg, one or more containers filled with one or more of the therapeutic compositions, HRS polypeptides/expressible polynucleotides, and/or immunomodulators described herein. Care kits are also included. In some embodiments, the kits include written instructions on how to use such compositions, eg, in the treatment of one or more diseases.

したがって、ある特定の実施形態は、（ａ）ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチド、またはＨＲＳポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチドと、（ｂ）免疫調節剤と、を含む、患者ケアキットを含む。いくつかのキットでは、（ａ）および（ｂ）は、別々の組成物中にあり、任意に、本明細書に記載されるように定義される。いくつかのキットでは、（ａ）および（ｂ）は、同じ組成物中にあり、任意に、本明細書に記載の治療用組成物として、である。 Accordingly, certain embodiments include a patient care kit comprising (a) a histidyl-tRNA synthetase (HRS) polypeptide, or an expressible polynucleotide encoding a HRS polypeptide, and (b) an immunomodulatory agent. including. In some kits, (a) and (b) are in separate compositions, optionally defined as described herein. In some kits, (a) and (b) are in the same composition, optionally as a therapeutic composition described herein.

特定の実施形態では、治療用組成物および／または患者ケアキット中の免疫調節剤は、ピルフェニドンまたはニンテダニブである。 In certain embodiments, the immunomodulator in the therapeutic composition and/or patient care kit is pirfenidone or nintedanib.

本明細書に記載のキットおよび組成物はまた、治療される適応症に適しているまたは所望される１つ以上のさらなる治療剤または他の構成要素を含んでもよい。さらなる治療剤は、所望の場合、第２の容器中に含有してもよい。さらなる治療剤の例としては、抗炎症剤、抗がん剤、抗菌剤、抗ウイルス剤が挙げられるが、これらに限定されない。 The kits and compositions described herein may also include one or more additional therapeutic agents or other components suitable or desired for the indication being treated. Additional therapeutic agents may be included in the second container if desired. Examples of additional therapeutic agents include, but are not limited to, anti-inflammatory agents, anti-cancer agents, anti-bacterial agents, anti-viral agents.

本明細書でのキットはまた、送達の意図した様式（例えば、ステント、移植可能なデポーなど）を促進するために必要なまたは所望される１つ以上のシリンジ（例えば、注射シリンジ）または他の構成要素も含むことができる。 The kits herein also include one or more syringes (eg, injection syringes) or other necessary or desired to facilitate the intended mode of delivery (eg, stent, implantable depot, etc.). It can also include components.

ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチドは、マウスまたはラットでのブレオマイシン誘導性肺線維症モデルにおける活性のために試験した。ブレオマイシン（ＢＬＭ）の気管内投与は、例えば、ヒトにおける様々なＩＬＤに見出される肺の炎症および線維症を含む、ある特定のＩＬＤの変化と同様に、肺の連続変化を誘導し、ＩＬＤ、肺の損傷、炎症、および線維症の治療用の治療剤の評価のために検査における一般モデルとして使用され得ることを示唆している（例えば、ＡｄａｍｓｏｎａｎｄＢｏｗｄｅｎ．ＴｈｅＡｍｅｒｉｃａｎＪ．Ｐａｔｈ．７７：１８５−１９７，１９７４、Ｗｙｎｎ，ＪＥｘｐＭｅｄ．２０８：１３３９−１３５０，２０１１、Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎｅｔａｌ．，Ｅｘｐ．ＬｕｎｇＲｅｓ．４１：５７−７３，２０１５を参照のこと）。 Histidyl-tRNA synthetase (HRS) polypeptides were tested for activity in the bleomycin-induced pulmonary fibrosis model in mice or rats. Intratracheal administration of bleomycin (BLM) induces serial changes in the lung, as well as certain ILD changes including, for example, lung inflammation and fibrosis found in various ILDs in humans. It can be used as a general model in testing for the evaluation of therapeutic agents for the treatment of wounds, inflammation, and fibrosis (eg, Adamson and Bowden. The American J. Path. 77:185-197). , 1974, Wynn, J Exp Med. 208:1339-1350, 2011, Williamson et al., Exp. Lung Res. 41:57-73, 2015).

実施例１
ブレオマイシン誘導性間質性肺疾患の治療用のＨＲＳポリペプチドの評価
研究は、例示的なＨＲＳポリペプチド（ＨｉｓＲＳ１^Ｎ８）がブレオマイシン誘導性肺線維症のマウスモデルにおける呼吸障害および／または肺線維症を減少するかどうかを判定するために行われた。炎症性および線維性プロセスにおけるＨＲＳポリペプチドの効果は、気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）の細胞内含有量、組織学的線維症スコア、および肺コラーゲン含有量を測定することによって判定した。 Example 1
Evaluation of HRS Polypeptides for the Treatment of Bleomycin-Induced Interstitial Lung Disease Studies show that an exemplary HRS polypeptide (HisRS1 ^N8 ) induces respiratory disorders and/or lung fibrosis in a mouse model of bleomycin-induced pulmonary fibrosis. It was done to determine if it would decrease. The effect of HRS polypeptides on inflammatory and fibrotic processes was determined by measuring the intracellular content of bronchoalveolar lavage (BAL), histological fibrosis score, and lung collagen content.

プロトコルおよび方法。肺の炎症および線維症は、ＢＬＭの口腔咽頭投与によって雄Ｃ５７Ｂｌ／６Ｊマウスにおいて誘導された。馴化段階後、マウスを、異なる群にわたって体重に基づいてランダム化した。イソフルラン麻酔下、５０μｌのＰＢＳまたはＢＬＭを、声帯上に液滴し、吸引を促進した。マウスを、イソフルラン麻酔下で、末梢血流を用いて２１日目に殺処分した。動物を、以下の表Ｅ１に示されるように処置した。
Protocols and methods. Pulmonary inflammation and fibrosis were induced in male C57BI/6J mice by oropharyngeal administration of BLM. After the acclimation stage, mice were randomized based on body weight across different groups. Under isoflurane anesthesia, 50 μl of PBS or BLM was dropped on the vocal cords to facilitate aspiration. Mice were sacrificed on day 21 using peripheral blood flow under isoflurane anesthesia. Animals were treated as shown in Table E1 below.

非疾患対照としての役割を果たす０日目にＰＢＳを受容している動物。０日目に口腔咽頭でＢＬＭを受容している動物は、治療用治療なし、経口ビヒクル（０．５％のナトロソル）、経口ニンテダニブ（ナトロソル中６０ｍｇ／ｋｇ）、経口デキサメタゾン（水中０．２５ｍｇ／ｋｇ）、静脈内（ＩＶ）ビヒクル（５０ｍＭＨｉｓ、１４０ｍＭＮａＣｌ、０．０５％ポリソルベート２０、ｐＨ７．３）、または１、３、または１０ｍｇ／ｋｇで静脈内ビヒクル中に希釈された被験物質（ＨｉｓＲＳ１^Ｎ８；ロット番号Ｓ０６１３０４３）のいずれかで受容した。毎日の経口処置は、０日目に開始したが、毎日の静脈内処置は、８日目に開始した。投与は、終了日（２１日目）まで継続する予定であったが、静脈内処置群における高い死亡率のため（結果を参照のこと）、１９日目および２０日目の静脈内投与をスキップした。新規のコラーゲン形成を決定するために、マウスに、７日目、被験物質による処置を開始する１日前に、１００％重水素化（Ｄ２Ｏ）水／０．９％ＮａＣｌ（３５μｌ／体重ｇ）の静脈内ボーラス注射を施した。続いて、マウスに、新規に形成されたコラーゲンの標識化を維持するために殺処分するまで、８％Ｄ２Ｏ（Ｋｉｎｅｍｅｄ，Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ）飲料水を与えた。体重は、週３回モニタリングした。 Animals receiving PBS on day 0, which serve as non-disease controls. Animals receiving BLM in the oropharynx on day 0 received no therapeutic treatment, oral vehicle (0.5% natrosol), oral nintedanib (60 mg/kg in natrosol), oral dexamethasone (0.25 mg/water in water). kg), intravenous (IV) vehicle (50 mM His, 140 mM NaCl, 0.05% polysorbate 20, pH 7.3), or the test substance (HisRS1) diluted at 1, 3, or 10 mg/kg in the intravenous vehicle. ^N8 ; received as lot number S0613043). Daily oral treatment started on day 0, while daily intravenous treatment started on day 8. Administration was planned to continue until the end date (21st day), but due to high mortality in the intravenous treatment group (see results) skip intravenous administration on days 19 and 20 did. To determine de novo collagen formation, mice were treated with 100% deuterated (D2O) water/0.9% NaCl (35 μl/g body weight) on day 7, 1 day prior to treatment with the test substance. An intravenous bolus injection was given. Mice were subsequently given 8% D2O (Kinemed, Emeryville) drinking water until sacrificed to maintain labeling of the newly formed collagen. Body weight was monitored 3 times a week.

終了時、マウスは、被験物質の最終投与から１日後（非疾患対照、デキサメタゾン、およびビヒクル群）または被験物質の最終静脈内投与から２時間後、イソフルランを用いて殺処分し、心臓穿刺を介して放血した。血液試料は、血漿（新規のコラーゲンアッセイ）または血清に処理し、冷凍保存した（−７０℃未満）。 At termination, the mice were sacrificed with isoflurane 1 day after the final dose of test substance (non-disease control, dexamethasone, and vehicle group) or 2 hours after the final intravenous dose of test substance, via cardiac puncture. I bled. Blood samples were processed into plasma (novel collagen assay) or serum and stored frozen (<-70°C).

肺を、７５０μｌのＰＢＳで２回洗い流し、気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）試料と組み合わせ、遠心分離するまで氷上で保存した。上清を収集し、冷凍保存した（−７０℃未満）。細胞ペレット中の赤血球を溶解し、残りの細胞を、１００μｌのＰＢＳ中に再懸濁した。２０μｌを、トリパンブルー溶液中に希釈し、血球計を用いて生細胞を計数するために使用した。 Lungs were washed twice with 750 μl PBS, combined with bronchoalveolar lavage (BAL) samples and stored on ice until centrifugation. The supernatant was collected and stored frozen (<-70°C). Red blood cells in the cell pellet were lysed and the remaining cells were resuspended in 100 μl PBS. 20 μl was diluted in trypan blue solution and used to count viable cells using a hemocytometer.

５つの肺葉を収集し、単離した。中葉および副肺葉の湿質量を記録した。次いで、この葉を、急速凍結し、ヒドロキシプロリン分析用に使用するまで、−７０℃未満で保存した。左肺葉を、膨張させ、４％ホルムアルデヒド中で４８時間固定し、組織学的分析のためにパラフィン中に包埋した。頭蓋肺葉を、急速凍結し、新規のコラーゲン形成の決定のためにＫｉｎｅｍｅｄへの出荷まで、−８０℃で保存した。 Five lung lobes were collected and isolated. Wet mass of the middle lobe and accessory lung lobe was recorded. The leaves were then snap frozen and stored below -70°C until used for hydroxyproline analysis. Left lung lobes were expanded, fixed in 4% formaldehyde for 48 hours and embedded in paraffin for histological analysis. Cranial lung lobes were snap frozen and stored at −80° C. until shipment to Kinemed for determination of new collagen formation.

左肺葉の切片を、マッソンのトリクロムを用いて染色し、修飾されたアッシュクロフトスコアを用いて盲目様式でスコア化した（Ｈｕｂｎｅｒｅｔａｌ．，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．４４：５０７−５１１，５１４−５０７，２００８）。ヒドロキシプロリン含有量を、酸加水分解を用い、発色アッセイを用いて、中葉および副肺葉において決定した（ＱｕｉｃｋＺｙｍｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｌｅｉｄｅｎ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）。新規に形成されたコラーゲンを、正規化のために２Ｈ中で濃縮した体内の水画分を用いて、ＫｉｎｅｍｅｄＩｎｃ．，Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，ＵＳＡによって頭蓋肺葉中で測定した。 Left lung lobe sections were stained with Masson's trichrome and scored in a blind fashion using a modified Ashcroft score (Hubner et al., BioTechniques. 44:507-511, 514-507, 2008). . Hydroxyproline content was determined in middle and accessory lung lobes using acid hydrolysis and a chromogenic assay (QuickZime Biosciences, Leiden, Netherlands). The newly formed collagen was purified using Kineded Inc. with the body water fraction concentrated in 2H for normalization. , Emeryville, USA in the cranial lung lobes.

全ての統計分析を、Ｗｉｎｄｏｗｓ統計ソフトウェアパッケージ用のＳＰＳＳ２２（ＳＰＰＳＩｎｃ．，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ，ＵＳＡ）を用いて実施した。第１に、誤差分散の平等は、Ｌｅｖｅｎｅ検定を用いて試験し、ｐ＞０．０１で等分散性が仮定された。誤差分散の平等の場合、群を、一方向ＡＮＯＶＡ検定を用いて、続いて、適切な場合、ＢＬＭ＋適切なビヒクル群に対して、ｐｏｓｔ−ｈｏｃＤｕｎｎｅｔｔ検定によって比較した。誤差分散の平等の場合、群を、Ｋｒｕｓｋａｌｌ−Ｗａｌｌｉｓ検定、続いて、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ検定を用いて比較した。 All statistical analyzes were performed using SPSS22 (SPPS Inc., Chicago, IL, USA) for the Windows statistical software package. First, the equality of error variances was tested using the Levene test and assumed equal variances with p>0.01. In the case of equality of error variances, groups were compared using the one-way ANOVA test followed by BLM+appropriate vehicle groups, where appropriate, by the post-hoc Dunnett test. In the case of equality of error variances, groups were compared using the Kruskall-Wallis test followed by the Mann-Whitney test.

結果−生存。この研究は、非疾患対照群の７匹の動物、およびＢＬＭ誘導性基の１２匹の動物で開始した。生存を、以下の表Ｅ２に示す。
Results-survival. The study started with 7 animals in the non-diseased control group and 12 animals with BLM-inducible groups. Survival is shown in Table E2 below.

未処置対照（生理食塩水ＩＴ）群およびＢＬＭでＰＯ処置したビヒクル群における全ての動物は、実験期間生存した。ＢＬＭ未処置群における生存率は、８３％であった。経口処置群では、デキサメタゾン処置後、生存率は、７５％であり、ニンテダニブ処置群では、９２％であった。生存率は、ＩＶビヒクルにおいて５８％まで低下し、被験物質処置群において類似の範囲まで低下した（表Ｅ２を参照のこと）。 All animals in the untreated control (saline IT) group and the BLM PO-treated vehicle group survived the experimental period. The survival rate in the BLM untreated group was 83%. Survival was 75% after dexamethasone treatment in the oral treatment group and 92% in the nintedanib treatment group. Survival was reduced to 58% in the IV vehicle and to a similar range in the test article treated groups (see Table E2).

結果−体重。予定された剖検まで生存した動物からのデータに基づいて、肺内でのＢＬＭの投与は、このモデルの特徴付けである実験の初期段階（初めの８〜１０日）中、マウスの体重の減少をもたらした。この段階後、ＢＬＭ誘導性マウスの体重は、安定し、残りの実験期間にわたって徐々に増加し始めた。ＰＢＳ誘導性未処置群では、体重は、安定した状態であり、実験期間全体にわたって徐々に増加した（合計６％）。動物を、ビヒクル、デキサメタゾン、またはニンテダニブで毎日のベースで経口処置するとき、体重は、未処置ＢＬＭ誘導性動物と同等であり、初期体重の約９０％にとどまった。ＩＶ処置を開始するまで、体重は、全てのＩＶ処置において同等であった。８日目に被験物質によるＩＶ処置を開始した後、１および３ｍｇ／ｋｇで処置した体重は、ＢＬＭ未処置群の傾向線より下に落ちるか、またはその線に従った。１０ｍｇ／ｋｇで被験物質による毎日のＩＶ処置は、より低い投与群と比較したとき、ＢＷに対して陽性効果があった。 Results-weight. Based on data from animals that survived to scheduled necropsy, intrapulmonary administration of BLM reduced the body weight of mice during the early stages of the experiment (first 8-10 days), which is the characterization of this model. Brought in. After this stage, BLM-induced mouse body weight stabilized and began to gradually increase over the remaining experimental period. In the PBS-induced untreated group, body weight remained stable and gradually increased over the duration of the experiment (6% total). When animals were orally treated with vehicle, dexamethasone, or nintedanib on a daily basis, body weight was comparable to untreated BLM-induced animals and remained at approximately 90% of initial body weight. By the beginning of IV treatment, body weight was comparable in all IV treatments. Body weights treated with 1 and 3 mg/kg fell below or followed the trend line of the BLM untreated group after IV treatment with the test substance was initiated on day 8. Daily IV treatment with test article at 10 mg/kg had a positive effect on BW when compared to the lower dose group.

結果−ＢＡＬ流体中の細胞数。試料毎のＢＡＬ中の細胞の総数は、ＢＬＭによる肺線維症の誘導後、１９．８倍高かった（図１を参照のこと）。デキサメタゾンまたはニンテダニブによる経口処置は、終了時にＢＡＬ流体中で計数した生細胞に著しく影響を及ぼさなかった。被験物質処置群では、ＩＶ−ビヒクル処置群と比較したＢＡＬ流体中の細胞数は、１、３、または１０ｍｇ／ｋｇで被験物質によるＩＶ処置後、それぞれ、約４６％、３８％、および４５％減少した。 Results-Number of cells in BAL fluid. The total number of cells in BAL per sample was 19.8 fold higher after induction of lung fibrosis by BLM (see Figure 1). Oral treatment with dexamethasone or nintedanib had no significant effect on viable cells counted in BAL fluid at termination. In the test article treated group, the number of cells in BAL fluid compared to the IV-vehicle treated group was approximately 46%, 38%, and 45% after IV treatment with the test article at 1, 3 or 10 mg/kg, respectively. Diminished.

結果−肺質量、コラーゲン含有量、および新規のコラーゲン含有量。ＢＬＭ誘導は、ＰＢＳ誘導性マウスと比較して、湿重量において１．８倍の増加、および肺乾燥重量において２．１倍の増加をもたらしたＢＬＭ誘導性未処置マウスの肺湿重量および乾燥重量に有意に影響を及ぼした。ＰＯビヒクル処置群と比較したとき、デキサメタゾンは、１５．６％の肺湿重量を減少した。肺湿重量または乾燥重量の著しい変化は、他の処置で観察されなかった。 Results-lung mass, collagen content, and new collagen content. BLM induction led to a 1.8-fold increase in wet weight and a 2.1-fold increase in lung dry weight compared to PBS-induced mice, lung wet and dry weight of BLM-induced naive mice. Had a significant effect on Dexamethasone reduced lung wet weight by 15.6% when compared to the PO vehicle treated group. No significant changes in lung wet weight or dry weight were observed with other treatments.

ＢＬＭによる誘導は、ＰＢＳ誘導性マウスと比較して、中葉および副肺葉中のコラーゲン含有量の１．９７倍の著しい増加をもたらした。中葉および副肺葉中のコラーゲン含有量の著しい変化は、いかなる処置でも観察されなかった。 Induction with BLM resulted in a significant 1.97-fold increase in collagen content in middle and accessory lung lobes compared to PBS-induced mice. No significant changes in collagen content in the middle and accessory lung lobes were observed with any treatment.

ＢＬＭ投与後、新規のコラーゲン合成の５．４倍の著しい増加は、ＰＢＳＩＴを受容するマウスと比較して観察された。新規のコラーゲン合成の著しい増加は、いかなる処置でも観察されなかった。 After BLM administration, a significant 5.4-fold increase in de novo collagen synthesis was observed as compared to mice receiving PBS IT. No significant increase in de novo collagen synthesis was observed with any treatment.

結果−組織学的線維症（アッシュクロフト）スコア。肺線維症の程度は、マッソンのトリクロムを用いて染色した左肺葉のパラフィン切片のアッシュクロフトスコアリングによって判定した。ＢＬＭ誘導は、ＰＢＳ誘導性動物と比較して、左肺葉中の線維症スコアの８．３倍の著しい増加をもたらした。デキサメタゾンまたはニンテダニブによる経口処置は、ＰＯビヒクル群と比較して、群平均組織学的スコアの著しい減少をもたらさなかったが、デキサメタゾン処置は、１１．７％の組織学的スコアの減少を示した。同様に、被験物質による処置は、ＩＶビヒクル群と比較して、組織学的スコアの著しい減少をもたらさなかったが、被験物質１０ｍｇ／ｋｇの用量は、１２．３％の組織学的スコアの減少を示した。 Results-Histological fibrosis (Ashcroft) score. The degree of pulmonary fibrosis was determined by Ashcroft scoring of paraffin sections of left lung lobes stained with Masson's trichrome. BLM induction resulted in a significant 8.3-fold increase in fibrosis score in the left lung lobe compared to PBS-induced animals. Oral treatment with dexamethasone or nintedanib did not result in a significant decrease in group mean histological score compared to the PO vehicle group, whereas dexamethasone treatment showed a 11.7% decrease in histological score. Similarly, treatment with the test article did not result in a significant decrease in histological score as compared to the IV vehicle group, whereas the 10 mg/kg dose of test article reduced the histological score by 12.3%. showed that.

モデルの局所的性質により、群内の平均アッシュクロフト指数スコアおよび各個人内の肺病理学における高い変動性を示すため、全ての分野からスコア化した（１動物当たり１３〜２０）アッシュクロフトスコアを分析し、ＢＬＭ誘導性群において観察数を８４〜１８２まで増加した。この総合的分析を用いて、０．２５ｍｇ／ｋｇのデキサメタゾンおよび１０ｍｇ／ｋｇの被験物質による処置は、ビヒクル処置群と比較して、肺線維症を著しく減少させた（図２を参照のこと）。 The Ashcroft scores scored from all disciplines (13-20 per animal) were analyzed to show high variability in mean Ashcroft index scores within groups and lung pathology within each individual due to the local nature of the model. However, the number of observations was increased from 84 to 182 in the BLM-inducible group. Using this comprehensive analysis, treatment with 0.25 mg/kg dexamethasone and 10 mg/kg test substance significantly reduced pulmonary fibrosis compared to the vehicle treated group (see Figure 2). .

要約。この研究の目標は、ＢＬＭの口腔咽頭投与によって誘導されたマウスの肺線維症における被験物質による処置の治療用用量反応効果を研究することであった。肺線維症は、雄Ｃ５７Ｂｌ／６Ｊマウスの肺へのＢＬＭの単一の口腔咽頭の点滴によって誘導された。ＢＬＭの代わりにＰＢＳを受容している動物を、対照として使用した。肺の線維症プロセスの誘導は、左肺葉におけるＢＡＬ細胞数の１９．８倍の増加および線維症スコアの８．３倍の増加によって示された。全コラーゲンの１．９７倍の増加が観察された。加えて、肺湿重量または乾燥重量の著しい変化も観察された。総合すると、これらのデータは、線維症が肺において著しく誘導されたという結論を支持する。 wrap up. The goal of this study was to study the therapeutic dose-response effect of test substance treatment on pulmonary fibrosis in mice induced by oropharyngeal administration of BLM. Pulmonary fibrosis was induced by a single oropharyngeal instillation of BLM into the lungs of male C57B1/6J mice. Animals receiving PBS instead of BLM were used as controls. Induction of the pulmonary fibrotic process was shown by a 19.8-fold increase in BAL cell counts and a 8.3-fold increase in fibrosis score in the left lung lobe. A 1.97-fold increase in total collagen was observed. In addition, significant changes in lung wet or dry weight were also observed. Taken together, these data support the conclusion that fibrosis was significantly induced in the lung.

ＢＬＭと組み合わされた静脈内注射の組み合わせは、全てのＩＶ注射群の動物の著しい死をもたらした。生存におけるこの死の正確な理由は、決定することができなかったが、ＩＶ注射を容易にするために加温パッド上に動物を置くことによって引き起こされる体温の増加は、ＢＬＭによる肺の損傷と相まって一因となると推測する。 The combination of intravenous injection combined with BLM resulted in significant death of animals in all IV injection groups. The exact reason for this death in survival could not be determined, but the increase in body temperature caused by placing the animal on a heating pad to facilitate IV injection was associated with lung damage by BLM. It is speculated that they will contribute to each other.

被験物質による処置は、ＢＡＬ流体中の細胞全体の著しい減少をもたらした（すなわち、１、３、および１０ｍｇ／ｋｇについては、それぞれ、４６％、３８％、および４５％）。肺へのＢＬＭの点滴から８日後に開始する被験物質による処置はまた、用量関連様式でアッシュクロフト線維症スコアも向上して（すなわち、１、３、および１０ｍｇ／ｋｇについては、それぞれ、４．９％、８．６％、および１３．１％）、１０ｍｇ／ｋｇの被験物質で処置した動物において統計的有意性に達した。 Treatment with the test article resulted in a significant reduction in total cells in BAL fluid (ie 46%, 38%, and 45% for 1, 3, and 10 mg/kg, respectively). Treatment with the test substance starting 8 days after instillation of BLM into the lung also improved the Ashcroft fibrosis score in a dose-related manner (ie for 1, 3, and 10 mg/kg, respectively, 4. 9%, 8.6%, and 13.1%), statistical significance was reached in animals treated with 10 mg/kg of test substance.

肺へのＢＬＭの点滴日に開始するデキサメタゾン（０．２５ｍｇ／ｋｇ／用量）による処置は、肺湿重量の著しい減少およびアッシュクロフト線維症スコアの著しい向上（１１．３％）をもたらした。 Treatment with dexamethasone (0.25 mg/kg/dose) starting on the day of BLM infusion into the lungs resulted in a significant decrease in lung wet weight and a significant improvement in Ashcroft fibrosis score (11.3%).

肺へのＢＬＭの点滴日に開始するニンテダニブ（６０ｍｇ／ｋｇ／用量）による処置は、この実験において著しい効果を示さなかった。効果の欠如は、この実験の条件下で、線維症を改善することが困難である表れと見られる。このモデルの誘導は、実験的再現の間およびその間で異なることが知られており、ニンテダニブは、参考文献中で同様の用量レベルおよび投与パラダイムで線維症を改善することが示されている（Ｗｏｌｌｉｎｅｔａｌ．，ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙａｎｄＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ３４９：２０９−２２０，２０１４を参照のこと）。 Treatment with nintedanib (60 mg/kg/dose) starting on the day of instillation of BLM into the lungs showed no significant effect in this experiment. The lack of efficacy appears to be a sign of difficulty in improving fibrosis under the conditions of this experiment. The induction of this model is known to differ during and during experimental reproduction, and nintedanib has been shown in the literature to improve fibrosis at similar dose levels and dosing paradigms (Wollin). et al., The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics 349:209-220, 2014).

結論。概して、被験物質は、ＢＬＭの点滴から８日後に開始する、治療的に投与したときに、ＢＬＭ誘導性肺の炎症および線維症モデルにおいて強力な疾患を改善する活性を示した。ＢＡＬ流体において得られた細胞数は、肺の免疫細胞湿潤の度合いに反映すると考えられる。被験物質は、これらの細胞が著しく減少し、このことは、肺の免疫細胞湿潤が減少したことを強く示唆している。対照的に、抗線維性のニンテダニブも免疫抑制剤のデキサメタゾンも、予防投与にもかかわらず、いかなる効果も得られなかった。 Conclusion. In general, the test substances showed potent ameliorating activity in a BLM-induced pulmonary inflammation and fibrosis model when administered therapeutically, starting 8 days after the infusion of BLM. The cell numbers obtained in BAL fluid are believed to reflect the degree of lung immune cell infiltration. The test substance significantly reduced these cells, strongly suggesting a reduction in immune cell infiltration in the lung. In contrast, neither the anti-fibrotic nintedanib nor the immunosuppressant dexamethasone had any effect despite prophylactic administration.

被験物質による治療的介入もまた、ＢＬＭの点滴から２１日後、組織学的線維症を改善し（減少させ）、分子の抗線維性の可能性を実証した。デキサメタゾンは、このエンドポイントで同様の効果を得たが、ニンテダニブは、効果を得られたかった。この研究において、被験物質は、ニンテダニブをしのいでおり、特発性肺線維症の治療用に市販されている。これらの結果は、被験物質などのＨＲＳポリペプチドが広範囲のＩＬＤにおいて肺の炎症および線維症の治療のために著しい治療的有用性を示すことを示唆している。 Therapeutic intervention with the test substance also improved (reduced) histological fibrosis 21 days after BLM infusion, demonstrating the anti-fibrotic potential of the molecule. Dexamethasone had a similar effect at this endpoint, but nintedanib wanted to get a similar effect. In this study, the test substance outperforms nintedanib and is marketed for the treatment of idiopathic pulmonary fibrosis. These results suggest that HRS polypeptides, such as test substances, show significant therapeutic utility for the treatment of lung inflammation and fibrosis in a wide range of ILDs.

実施例２
ブレオマイシン誘導性間質性肺疾患の処置のためのＨＲＳポリペプチド−Ｆｃ融合タンパク質の評価
研究は、例示的なＨＲＳ−Ｆｃ融合タンパク質（ＨＲＳ^ＦＣ１）がブレオマイシン誘導性肺線維症のラットモデルにおける呼吸障害および／または肺線維症を減少するかどうかを判定するために行われた。炎症性および線維性プロセスにおけるＨＲＳ−Ｆｃ融合タンパク質の効果は、組織学的線維症スコアおよび炎症スコア、ならびに肺コラーゲン含有量を測定することによって判定した。 Example 2
Evaluation of HRS Polypeptide-Fc Fusion Proteins for the Treatment of Bleomycin-Induced Interstitial Lung Disease Studies show that an exemplary HRS-Fc fusion protein (HRS ^FC1 ) is a respiratory disorder in a rat model of bleomycin-induced pulmonary fibrosis. And/or to determine whether to reduce lung fibrosis. The effect of HRS-Fc fusion proteins on inflammatory and fibrotic processes was determined by measuring histological fibrosis and inflammation scores, and lung collagen content.

プロトコルおよび方法。肺の炎症および線維症は、１００μｌ中の約１ｍｇ／ｋｇの投与レベルでブレオマイシン（ＢＬＭ）の口腔咽頭投与によって雄ＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙ（Ｃｒｌ：ＣＤ（ＳＤ））ラットにおいて最長連続７日間誘導された。ＰＢＳまたはＢＬＭを、イソフルラン麻酔下で投与した。ＢＬＭ投与の初日を、１日目と定義した。ラットを、二酸化炭素投与後、末梢血流を用いて２２日目に殺処分した。動物を、以下の表Ｅ３に示されるように処置した。
Protocols and methods. Lung inflammation and fibrosis were induced in male Sprague Dawley (Crl:CD(SD)) rats for up to 7 consecutive days by oropharyngeal administration of bleomycin (BLM) at a dose level of approximately 1 mg/kg in 100 μl. PBS or BLM was administered under isoflurane anesthesia. The first day of BLM administration was defined as Day 1. Rats were sacrificed on day 22 using peripheral blood flow after carbon dioxide administration. Animals were treated as shown in Table E3 below.

ＢＬＭを受容している動物における大幅な体重減少のため、４日目および５日目の口腔咽頭投与をスキップした。１、２、３、６、および７日目にＰＢＳを受容している動物は、非疾患対照としての役割を果たした。１、２、３、６、および７日目に口腔咽頭でＢＬＭを受容している動物は、治療用治療なし、経口ビヒクル（水）、経口ニンテダニブ（水中６０ｍｇ／ｋｇ）、静脈内（ＩＶ）ビヒクル（２０ｍＭＨｉｓ、１５０ｍＭＮａＣｌ、ｐＨ６．９）、または０．１、０．３、１、または３ｍｇ／ｋｇで静脈内ビヒクル中に希釈された被験物質（ＨＲＳ^ＦＣ１；ロット番号Ｈ−Ｆｃｖ３−Ｎ４−９２１）のいずれかで受容した。毎日の経口処置は、１日目に開始したが、毎週の静脈内処置は、９日目（全ての用量レベル）または２日目（１ｍｇ／ｋｇ）に開始した。 Oropharyngeal administration on days 4 and 5 was skipped due to significant weight loss in animals receiving BLM. Animals receiving PBS on days 1, 2, 3, 6, and 7 served as non-disease controls. Animals receiving BLM in the oropharynx on days 1, 2, 3, 6, and 7 received no therapeutic treatment, oral vehicle (water), oral nintedanib (60 mg/kg in water), intravenous (IV). Vehicle (20 mM His, 150 mM NaCl, pH 6.9) or test substance (HRS ^FC1 ; lot number H-Fcv3-N4) diluted in intravenous vehicle at 0.1, 0.3, 1, or 3 mg/kg. -921). Daily oral treatment was started on day 1, whereas weekly intravenous treatment was started on day 9 (all dose levels) or day 2 (1 mg/kg).

生存中、体重を測定し、臨床的観察を毎日行った。８日目および１５日目に、動物を、ケージから取り出し、全身プレチスモグラフィチャンバに個々に入れた。２０分の順化段階後、呼吸パラメータを、１０分間記録した。 During life, body weight was measured and clinical observations were made daily. On days 8 and 15, animals were removed from their cages and individually placed in a whole body plethysmography chamber. After a 20 minute acclimation phase, respiratory parameters were recorded for 10 minutes.

終了時、ラットは、被験物質の最終経口投与から１日後（非疾患対照、ニンテダニブ、および経口ビヒクル群）または被験物質の最終静脈内投与から６日後、二酸化炭素を用いて殺処分し、心臓穿刺を介して放血した。 At termination, rats were sacrificed with carbon dioxide one day after the final oral administration of the test substance (non-disease control, nintedanib, and oral vehicle group) or 6 days after the final intravenous administration of the test substance, and cardiac puncture was performed. Bled through.

５つの肺葉を収集し、重量を量った。右肺葉を、膨張させ、１０％中性緩衝ホルマリン中で固定し、組織学的分析のためにパラフィン中に包埋した。左肺葉の約５０ｍｇの切片を、急速凍結し、潜在的なＲＮＡ分析用に−８０℃で保存した。この葉の残りもまた、コラーゲン含有量用に分析されるまで、急速凍結した。 Five lung lobes were collected and weighed. Right lung lobes were expanded, fixed in 10% neutral buffered formalin and embedded in paraffin for histological analysis. Approximately 50 mg sections of left lung lobes were snap frozen and stored at -80°C for potential RNA analysis. The rest of this leaf was also snap frozen until analyzed for collagen content.

組織学用の切片を、ピクロシリウスレッドを用いて染色し、修飾されたアッシュクロフトスコアを用いて獣医病理学者によって盲目様式でスコア化した（４つの葉のそれぞれに対して１スコア）（Ｈｕｂｎｅｒｅｔａｌ．，２００８）。ヒドロキシプロリン含有量は、質量分析法を用いて左肺葉において決定した。 Histological sections were stained with Picrosirius red and scored in a blind fashion by a veterinary pathologist using a modified Ashcroft score (1 score for each of 4 leaves) (Hubner). et al., 2008). Hydroxyproline content was determined in the left lung lobe using mass spectrometry.

全ての統計分析を、ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄＳｏｆｔｗａｒｅ，ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣＡ）を用いて実施した。群を、一方向ＡＮＯＶＡ検定を用いて、続いて、適切な場合、ＢＬＭ＋適切なビヒクル群に対して、ｐｏｓｔ−ｈｏｃＤｕｎｎｅｔｔ検定によって比較した。 All statistical analyzes were performed using GraphPad Prism (GraphPad Software, San Diego, CA). Groups were compared using a one-way ANOVA test followed by BLM+appropriate vehicle groups where appropriate by post-hoc Dunnett's test.

結果−生存。動物の中には、ＢＬＭ誘導性によって引き起こされた重篤な体重減少のため、人道的な理由のため殺処分を必要としたものがあった。群３および群８において、それぞれ、２匹の動物が存在した。殺処分のうちの３匹は、被験物質投与前に行われた。残りの殺処分は、１３日目に群８（３ｍｇ／ｋｇの被験物質）において行われた。この動物が処置開始前に体重の１１％を失ったため、殺処分は、被験物質の副作用に起因しなかった。 Results-survival. Some animals required sacrifice for humane reasons due to the severe weight loss caused by BLM induction. In groups 3 and 8 there were 2 animals each. Three of the sacrifices were performed prior to test substance administration. The remaining sacrifice was performed on day 13 in group 8 (3 mg/kg test substance). The sacrifice was not due to side effects of the test substance, as the animal lost 11% of its body weight before the start of treatment.

結果−体重。予定された剖検まで生存した動物からのデータに基づいて、肺内でのＢＬＭの投与は、このモデルの特徴付けである実験にわたって非疾患対照に対するラットの体重の減少をもたらした。ニンテダニブまたは被験物質により処置された群のいずれも、それらのそれぞれの対照とは有意に異なる体重曲線を有しなかった。 Results-weight. Based on data from animals that survived to scheduled necropsy, intrapulmonary administration of BLM resulted in a reduction in rat body weight over non-diseased controls over the experiments that characterize this model. None of the groups treated with nintedanib or the test substance had a weight curve that was significantly different from their respective controls.

結果−呼吸測定。呼吸測定を、８日目に行い、ＢＬＭによって引き起こされた明らかな障害を示した。これらの結果を、以下の表Ｅ４に示す。
Results-Respiratory measurement. Respiratory measurements were taken on day 8 and showed a clear impairment caused by BLM. The results are shown in Table E4 below.

呼気時間および吸気時間の著しい減少が観察され、一方、最大呼気流量、最大吸気流量、毎分呼吸量（ＲＭＶ）、および呼吸速度は、著しく増加した。１回の呼吸量は、８日目に、ＢＬＭ誘導性動物と非誘導性動物との間で同様であった。 A significant decrease in expiratory and inspiratory time was observed, while maximal expiratory flow, maximal inspiratory flow, respiratory rate per minute (RMV), and respiratory rate were significantly increased. Tidal volumes were similar on day 8 between BLM-induced and non-induced animals.

１５日目に行われた呼吸測定（表Ｅ４）は、ＢＬＭ誘導性ビヒクル処置群において継続した障害を示す。ニンテダニブによる処置は、呼吸パラメータにおけるＢＬＭ誘導性変化に著しく影響を及ぼさなかった。対照的に、被験物質は、ＢＬＭ誘導性により損なわれた全ての呼吸測定を著しく逆転させた（呼気時間および吸気時間は、非疾患対照に対して増加し、最大呼気流量、最大吸気流量、ＲＭＶ、および呼吸速度は、非疾患対照に対して減少した）。興味深いことには、ＢＬＭ曝露によって著しく上昇しなかった１回の呼吸量は、被験物質の処置によって減少した。 Respiratory measurements taken on day 15 (Table E4) show continued impairment in the BLM-induced vehicle treated group. Treatment with nintedanib did not significantly affect BLM-induced changes in respiratory parameters. In contrast, the test substance significantly reversed all BLM-induced impaired respiratory measurements (expiration and inspiration time increased relative to non-diseased controls, max expiratory flow, max inspiratory flow, RMV). , And respiratory rate was reduced relative to non-diseased controls). Interestingly, tidal volume that was not significantly elevated by BLM exposure was reduced by treatment with the test substance.

ＲＭＶのグラフ表示を、図３に示す。ＲＭＶは、毎分吸気または呼気されたガスの容積である。図３に示されるように、ＲＭＶは、ＢＬＭ誘導によって著しく上昇し（ビヒクル群と生理食塩水ＩＴを受容した群を比較）、肺胞腔と血液との間でガス交換障害に対する生理学的補償に反映すると思われる。ガス交換は、その他によるモデルに記載される、高いレベルの免疫細胞湿潤およびサイトカインの放出に続発する進行中の組織浮腫により悪いと思われる。ニンテダニブは、ＲＭＶ（または任意の他の呼吸測定）に影響を及ぼさない。対照的に、９日目または２日目に開始する被験物質は、全ての用量レベルでこのエンドポイントを著しく減少させ、実際には、ＲＭＶは、被験物質処置によって正規化する（すなわち、口腔咽頭生理食塩水とは異ならない）。 A graphical representation of RMV is shown in FIG. RMV is the volume of gas inhaled or exhaled every minute. As shown in FIG. 3, RMV was significantly elevated by BLM induction (comparing the vehicle group and the group that received saline IT), and was associated with physiological compensation for impaired gas exchange between the alveolar space and blood. It seems to reflect. Gas exchange appears to be worse due to the high levels of immune cell infiltration and ongoing tissue edema secondary to the release of cytokines described in the model by others. Nintedanib has no effect on RMV (or any other respiratory measure). In contrast, test substances starting on day 9 or 2 significantly reduced this endpoint at all dose levels, and in fact RMV is normalized by test substance treatment (ie, oropharynx). Not different from saline).

結果−肺質量およびコラーゲン含有量。２２日目に剖検で得られた肺質量（湿重量）およびコラーゲン含有量は、１、２、３、４、６、および７日目にＢＬＭ誘導によって著しく上昇した。処置群のいずれも、肺湿重量またはコラーゲン含有量を著しく変化させなかった。 Results-Lung mass and collagen content. Lung mass (wet weight) and collagen content obtained at necropsy on day 22 were significantly elevated by BLM induction on days 1, 2, 3, 4, 6, and 7. None of the treatment groups significantly changed lung wet weight or collagen content.

結果−組織学的スコア。スライドは、獣医病理学者によって読み込まれ、評価された４つの葉のそれぞれは、４つのスコア［線維症に対するアッシュクロフト（０〜８の範囲のスコア）、血管周囲／細気管支周囲の炎症細胞浸潤（０〜５の範囲のスコア）、間質性／肺胞炎症細胞浸潤（０〜５の範囲のスコア）、ＩＩ型肺細胞過形成（０〜５の範囲のスコア）］に割り当てた。 Results-histological score. Slides were read by a veterinary pathologist and evaluated for each of the four lobes with four scores [Ashcroft for fibrosis (score ranging from 0-8), perivascular/peribronchiolar inflammatory cell infiltration ( 0-5 range), interstitial/alveolar inflammatory cell infiltration (0-5 range score), type II pulmonary hyperplasia (0-5 range score)].

ＰＢＳ誘導性動物に割り当てられたアッシュクロフトスコアは、均一に、スコア０であったが、一方、ＢＬＭ誘導性ビヒクル処置動物は、８ポイントスケールで２〜６の範囲のスコアを有し、線維症が著しく誘導されたことを確認した。ニンテダニブによる経口処置は、ＰＯビヒクル群と比較して、群平均組織学的スコアを５％減少し、統計学的基準を満たさなかった。同様に、被験物質による処置は、ＩＶビヒクル群と比較して、組織学的スコアの著しい減少をもたらさなかったが、２、９、および１６日目に１ｍｇ／ｋｇの被験物質を受容している群は、１５．３％のアッシュクロフトスコアの減少を示した。 Ashcroft scores assigned to PBS-induced animals were, uniformly, a score of 0, whereas BLM-induced vehicle-treated animals had scores ranging from 2 to 6 on an 8-point scale with fibrosis. It was confirmed that was significantly induced. Oral treatment with nintedanib reduced the group mean histological score by 5% compared to the PO vehicle group and did not meet the statistical criteria. Similarly, treatment with the test article did not result in a significant reduction in histological scores as compared to the IV vehicle group, but received 1 mg/kg of the article at days 2, 9 and 16 The group showed a 15.3% reduction in Ashcroft score.

モデルの局所的性質により、群内の平均アッシュクロフト指数スコアおよび各個人内の肺病理学における高い変動性を示すため、全ての分野からスコア化した（１動物当たり４）アッシュクロフトスコアを分析し、ＢＬＭ誘導性群において観察数を２４〜３２まで増加した。この総合的分析を用いて、２、９、および１６日目に１ｍｇ／ｋｇの被験物質による処置は、ビヒクル処置群と比較して、肺線維症を著しく減少させた（図４を参照のこと）。 Due to the local nature of the model, the Ashcroft scores scored from all disciplines (4 per animal) were analyzed to show high variability in mean Ashcroft index scores within groups and lung pathology within each individual, The number of observations was increased from 24-32 in the BLM-inducible group. Using this comprehensive analysis, treatment with 1 mg/kg of the test article on days 2, 9, and 16 significantly reduced pulmonary fibrosis compared to the vehicle treated group (see Figure 4). ).

血管周囲／細気管支周囲の炎症細胞浸潤およびＩＩ型肺細胞過形成は、生理食塩水誘導性非疾患対照からの切片の全てにおいて存在しなかった。血管周囲／細気管支周囲の炎症細胞浸潤は、最小限から軽度（スコア＝１〜２）浸潤が観察された、ビヒクルＰＯを受容している２匹の動物およびビヒクルＩＶを受容している１匹の動物を除いて全てにおいて存在しなかった。ＢＬＭの効果がほとんどなかったため、統計学的評価は、このエンドポイントで行われなかった。同様に、最小限（スコア＝１）のＩＩ型肺細胞過形成は、ＢＬＭ誘導性動物からのいくつかの切片において観察されたが、処置の影響を受けなかった。 Perivascular/peribronchiolar inflammatory cell infiltrates and type II pneumocyte hyperplasia were absent in all of the sections from saline-induced non-diseased controls. Perivascular/peribronchiolar inflammatory cell infiltration was observed with minimal to mild (score = 1-2) infiltration, 2 animals receiving vehicle PO and 1 animal receiving vehicle IV It was absent in all but one of the animals. No statistical evaluation was performed at this endpoint as there was little effect of BLM. Similarly, minimal (score=1) type II pneumocyte hyperplasia was observed in some sections from BLM-induced animals, but was unaffected by treatment.

間質性／肺胞炎症細胞浸潤は、生理食塩水誘導性肺からの全ての切片において存在しなかった（スコア＝０）。ＢＬＭで誘導された動物において、最小限から軽度（スコア＝１〜３）の間質性炎症細胞浸潤は、図５に示されるように観察された。ニンテダニブによる経口処置は、間質性炎症細胞浸潤に影響を及ぼさなかったが、２、９、および１６日目に１ｍｇ／ｋｇの被験物質による処置は、ビヒクル処置群と比較して、間質性炎症細胞浸潤を著しく減少させた。 Interstitial/alveolar inflammatory cell infiltration was absent in all sections from saline-induced lungs (score=0). In BLM-induced animals, minimal to mild (score=1-3) interstitial inflammatory cell infiltration was observed as shown in FIG. Oral treatment with nintedanib had no effect on interstitial inflammatory cell infiltration, whereas treatment with 1 mg/kg of test article on days 2, 9 and 16 resulted in interstitial inflammation compared to vehicle treated groups. The inflammatory cell infiltration was significantly reduced.

要約。この研究の全体的な目的は、被験物質が、ブレオマイシン誘導性肺線維症のラットモデルにおける呼吸障害および／または肺線維症の程度を減少させるかどうかを判定することであった。肺線維症は、実験の初めの７日間、雄ＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙラットの肺へのＢＬＭの５つの口腔咽頭の点滴によって引き起こされた。ＢＬＭの代わりに生理食塩水を受容している動物を、対照として使用した。肺の炎症および線維症プロセスの誘導は、ＢＬＭ誘導性動物において、最小限から軽度の間質性／肺胞炎症細胞浸潤の組織学的観察および２〜６のアッシュクロフト線維症スコアによって実証された。８日目および１５日目に行われた呼吸測定は、ＢＬＭによって引き起こされた著しい変化を示し、ビヒクルを受容した動物において持続し、ガス交換が、恐らく炎症関連の肺水腫によって損なわれるという仮説を支持した。総合すると、これらのデータは、炎症および線維症が少なくとも８日目まで存在する病理学的変化とともに、肺において著しく誘導されたという結論を支持する。 wrap up. The overall purpose of this study was to determine if the test substance reduced the extent of respiratory disorders and/or pulmonary fibrosis in a rat model of bleomycin-induced pulmonary fibrosis. Pulmonary fibrosis was caused by five oropharyngeal instillations of BLM into the lungs of male Sprague Dawley rats for the first 7 days of the experiment. Animals receiving saline instead of BLM were used as controls. Induction of lung inflammatory and fibrotic processes was demonstrated in BLM-induced animals by histological observation of minimal to mild interstitial/alveolar inflammatory cell infiltration and Ashcroft fibrosis score of 2-6. . Respiration measurements taken on days 8 and 15 show significant changes caused by BLM, persisting in vehicle-received animals, and the hypothesis that gas exchange is impaired probably by inflammation-related pulmonary edema. Supported. Taken together, these data support the conclusion that inflammation and fibrosis were significantly induced in the lung, with pathological changes present until at least day 8.

被験物質による処置は、１５日目に行われた呼吸評価基準の著しい軽減をもたらした。ビヒクル処置動物が８日目〜１５日目に安定した値を有したが、一方、被験物質処置は、生理食塩水誘導性非疾患対照において得られた測定基準に対して（およびそれに一致する多くの場合において）著しい変化を生じた。被験物質の活性は、用量レベル（０．１〜３ｍｇ／ｋｇ）にわたって観察された。被験物質の処置はまた、アッシュクロフトスコア、ならびに２、９、および１６日目に１ｍｇ／ｋｇを受容したラットにおいて２２日目に測定した間質性炎症の著しい減少（改善）をもたらした。 Treatment with the test substance resulted in a significant reduction in respiratory criteria performed on day 15. Vehicle-treated animals had stable values on days 8-15, while test article treatment was against (and consistent with many of) the metrics obtained in saline-induced non-disease controls. (In the case of) a significant change occurred. The test substance activity was observed over dose levels (0.1-3 mg/kg). Test article treatment also resulted in Ashcroft scores and a significant reduction (improvement) in interstitial inflammation measured at day 22 in rats receiving 1 mg/kg at days 2, 9 and 16.

９日目に開始するニンテダニブ（５０ｍｇ／ｋｇ／用量）による処置は、この実験において著しい効果を示さなかった。効果の欠如は、この実験の条件下で、線維症を改善することが困難である表れと見られる。このモデルの誘導は、実験的再現の間およびその間で異なることが知られており、ニンテダニブは、参考文献中で同様の用量レベルで線維症を改善することが示されている（Ｃｈａｕｄｈａｒｙｅｔａｌ．，ＴｈｅＥｕｒｏｐｅａｎＲｅｓｐｉｒａｔｏｒｙＪｏｕｒｎａｌ：ＯｆｆｉｃｉａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆｔｈｅＥｕｒｏｐｅａｎＳｏｃｉｅｔｙｆｏｒＣｌｉｎｉｃａｌＲｅｓｐｉｒａｔｏｒｙＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ．２９：９７６−９８５，２００７を参照のこと）。 Treatment with nintedanib (50 mg/kg/dose) starting on day 9 showed no significant effect in this experiment. The lack of efficacy appears to be a sign of difficulty in improving fibrosis under the conditions of this experiment. It is known that the induction of this model is different during and during experimental reproduction, and nintedanib has been shown in the literature to improve fibrosis at similar dose levels (Caudharry et al. , The European Respiratory Journal: Official Journal of the European Society for Clinical Respiratory Physiology. 29:976-985, 2007).

結論。概して、被験物質は、ＢＬＭの点滴の開始から２または９日後に開始する、治療的に投与したときに、ＢＬＭ誘導性肺の炎症および線維症モデルにおいて強力な疾患を改善する活性を示した。呼吸評価基準は、この研究における最も影響を受けるエンドポイントであり、試験した全ての用量およびパラダイムで著しい効果を示した（毎週０．１〜３ｍｇ／ｋｇ投与）。対照的に、驚くべきことではなく、このモデルにおいて免疫主導の間質性浮腫における呼吸評価基準の見込まれる信頼性を考えると、抗線維性のニンテダニブは、効果がなかった。 Conclusion. In general, the test substances showed potent ameliorating activity in a BLM-induced pulmonary inflammation and fibrosis model when administered therapeutically starting 2 or 9 days after the start of infusion of BLM. Respiratory criteria were the most affected endpoint in this study, with significant effects at all doses and paradigms tested (weekly 0.1-3 mg/kg dose). In contrast, anti-fibrotic nintedanib was ineffective, not surprisingly, given the possible reliability of the respiratory criteria in immune-driven interstitial edema in this model.

被験物質による治療的介入もまた、２２日目に測定された組織学的線維症および間質性免疫細胞湿潤も改善し（減少させ）、免疫調節の可能性をさらに実証し、分子の抗線維性の可能性を示した。被験物質は、この研究では著しい効果を得られなかったが、ニンテダニブをしのいでおり、特発性肺線維症の治療用に市販されている。これらの結果は、被験物質などのＨＲＳポリペプチドが広範囲のＩＬＤにおいて肺の炎症および線維症の治療のために著しい治療的有用性を示すことを示唆している。 Therapeutic intervention with the test substance also improved (reduced) histological fibrosis and interstitial immune cell infiltration measured on day 22, further demonstrating the potential for immunomodulation, and molecular anti-fibrosis. There was a possibility of sex. The test substance, although not significantly effective in this study, outperforms nintedanib and is marketed for the treatment of idiopathic pulmonary fibrosis. These results suggest that HRS polypeptides, such as test substances, show significant therapeutic utility for the treatment of lung inflammation and fibrosis in a wide range of ILDs.

実施例３
ブレオマイシン誘導性間質性肺疾患の処置のためのニンテダニブまたはピルフェニドンと組み合わされたＨＲＳポリペプチド−Ｆｃ融合タンパク質の評価
研究は、ＩＰＦの治療用に市販されているニンテダニブまたはピルフェニドンと組み合わされた、例示的なＨＲＳ−Ｆｃ融合タンパク質（ＨＲＳ^ＦＣ１）がブレオマイシン誘導性肺線維症のラットモデルにおける呼吸障害および／または肺線維症を減少するかどうかを判定するために行われた。炎症性および線維性プロセスにおけるＨＲＳ−Ｆｃ融合タンパク質の効果は、呼吸測定基準、組織学的線維症スコアおよび炎症スコア、ならびに肺コラーゲン含有量を測定することによって判定した。ＨＲＳ^ＦＣ１の循環濃度もまた、判定された。 Example 3
Evaluation of HRS polypeptide-Fc fusion proteins in combination with nintedanib or pirfenidone for the treatment of bleomycin-induced interstitial lung disease. Was performed to determine if a conventional HRS-Fc fusion protein (HRS ^FC1 ) reduces respiratory distress and/or lung fibrosis in a rat model of bleomycin-induced pulmonary fibrosis. The effect of HRS-Fc fusion proteins on inflammatory and fibrotic processes was determined by measuring respiratory metrics, histological fibrosis and inflammation scores, and lung collagen content. The circulating concentration of HRS ^FC1 was also determined.

プロトコルおよび方法。実施例２に記載されるものと同一の方法を用いた同じ実験室では、肺の炎症および線維症は、１００μｌ中の約１ｍｇ／ｋｇの投与レベルでブレオマイシン（ＢＬＭ）の口腔咽頭投与によって雄ＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙ（Ｃｒｌ：ＣＤ（ＳＤ））ラットにおいて最長連続７日間誘導された。ＰＢＳまたはＢＬＭを、イソフルラン麻酔下で投与した。過剰なラットを、ＢＬＭで誘導し、過度な体重減少を有する任意の動物と置き換えるために使用した。ＢＬＭ投与の初日を、１日目と定義した。ラットを、二酸化炭素投与後、末梢血流を用いて１７日目または２２日目に殺処分した。動物を、以下の表Ｅ５−ＡおよびＥ５−Ｂに示されるように処置した。
Protocols and methods. In the same laboratory using the same method as described in Example 2, lung inflammation and fibrosis were determined by oropharyngeal administration of bleomycin (BLM) at the dose level of about 1 mg/kg in 100 μl of male Sprague. It was induced in Dawley (Crl:CD(SD)) rats for up to 7 consecutive days. PBS or BLM was administered under isoflurane anesthesia. Excessive rats were used to replace BLM-induced and any animals with excessive weight loss. The first day of BLM administration was defined as Day 1. Rats were sacrificed on day 17 or 22 using peripheral blood flow after carbon dioxide administration. Animals were treated as shown in Tables E5-A and E5-B below.

ＢＬＭを受容している動物における大幅な体重減少のため、４日目および７日目の口腔咽頭投与をスキップした。１、２、３、５、および６日目にＰＢＳを受容している動物は、非疾患対照（群１）としての役割を果たした。１、２、３、５、および６日目にＢＬＭを口腔咽頭に受容している動物は、経口ビヒクル（０．５％ＣＭＣおよび０．５％Ｔｗｅｅｎ−８０）を１日３回、ならびにＩＶビヒクル（２０ｍＭＨｉｓ、１２５ｍＭＮａＣｌ、１０ｍＭメチオニン、３％スクロース、０．０２％ＰＳ２０、ｐＨ６．９）を週１回（群２）、経口ニンテダニブ（６０ｍｇ／ｋｇ）を正午に１日１回、ならびに経口ビヒクルを午前および午後で１日２回ならびにＩＶビヒクルを週１回（群３）、経口ピルフェニドン（１用量当たり７０ｍｇ／ｋｇ）を１日３回ならびにＩＶビヒクルを週１回（群４）、経口ビヒクルを１日３回ならびに被験物質（ＨＲＳ^ＦＣ１；３ｍｇ／ｋｇ；ロット番号Ｈ−Ｆｃｖ３−Ｎ４−１００５）を週１回（群５）、経口ニンテダニブを正午に１日１回、経口ビヒクルを午前および午後で１日２回ならびにＩＶ被験物質を週１回（群６）、あるいは経口ピルフェニドンを１日３回およびＩＶ被験物質を週１回（群４）のいずれかで受容した。全ての処置は、９日目に開始した。 Oropharyngeal administration on days 4 and 7 was skipped due to significant weight loss in animals receiving BLM. Animals receiving PBS on days 1, 2, 3, 5, and 6 served as non-diseased controls (Group 1). Animals receiving BLM in the oropharynx on days 1, 2, 3, 5, and 6 received oral vehicle (0.5% CMC and 0.5% Tween-80) three times daily and IV. Vehicle (20 mM His, 125 mM NaCl, 10 mM methionine, 3% sucrose, 0.02% PS20, pH 6.9) once weekly (Group 2), oral nintedanib (60 mg/kg) once daily at noon, and Oral vehicle twice daily in the morning and afternoon and IV vehicle once weekly (group 3), oral pirfenidone (70 mg/kg per dose) three times daily and IV vehicle once weekly (group 4), Oral vehicle three times daily and test substance (HRS ^FC1 ; 3 mg/kg; lot number H-Fcv3-N4-1005) once weekly (group 5), oral nintedanib once daily at noon, oral vehicle. Receiving either twice daily in the morning and afternoon and IV test article once weekly (group 6) or oral pirfenidone three times daily and IV test article once weekly (group 4). All treatments started on day 9.

生存中、体重を測定し、臨床的観察を毎日行った。８日目、１５日目、および２１日目に、動物を、ケージから取り出し、全身プレチスモグラフィチャンバに個々に入れた。２０分の順化段階後、呼吸パラメータを、１０分間記録した。研究前および１０日目および１７日目に、全血を尾静脈から得、ＨＲＳ^ＦＣ１の測定のために血清に処理した。 During life, body weight was measured and clinical observations were made daily. On days 8, 15, and 21, animals were removed from their cages and individually placed in a whole body plethysmography chamber. After a 20 minute acclimation phase, respiratory parameters were recorded for 10 minutes. Pre-study and on days 10 and 17 whole blood was obtained from the tail vein and processed into serum for measurement of HRS ^FC1 .

１７日目（ｎ＝４）または２２日目（ｎ＝８）の終了時、ラットは、被験物質の最終経口投与から１日後（非疾患対照、ニンテダニブ、および経口ビヒクル群）または被験物質の最終静脈内投与から６日後、二酸化炭素を用いて殺処分し、心臓穿刺を介して放血した。 At the end of Day 17 (n=4) or Day 22 (n=8), rats were administered 1 day after the final oral administration of the test substance (non-disease control, nintedanib, and oral vehicle groups) or the final test substance. Six days after intravenous administration, the animals were sacrificed with carbon dioxide and exsanguinated via cardiac puncture.

５つの肺葉を収集し、重量を量った。１７日目に、右副葉を保持し、乾燥させて、乾燥重量を得た。残りの右肺葉を、膨張させ、１０％中性緩衝ホルマリン中で固定し、組織学的分析のためにパラフィン中に包埋した。左肺葉の約５０ｍｇの切片を、急速凍結し、潜在的なＲＮＡ分析用に−８０℃で保存した。この葉の残りもまた、コラーゲン含有量用に分析されるまで、急速凍結した。 Five lung lobes were collected and weighed. On day 17, the right accessory leaf was retained and dried to obtain dry weight. The remaining right lung lobe was expanded, fixed in 10% neutral buffered formalin and embedded in paraffin for histological analysis. Approximately 50 mg sections of left lung lobes were snap frozen and stored at -80°C for potential RNA analysis. The rest of this leaf was also snap frozen until analyzed for collagen content.

組織学用の切片を、ピクロシリウスレッドを用いて染色し、修飾されたアッシュクロフトスコアを用いて獣医病理学者によって盲目様式でスコア化した（３〜４つの葉のそれぞれに対して１スコア）（Ｈｕｂｎｅｒｅｔａｌ．，２００８）。ヒドロキシプロリン含有量は、質量分析法を用いて左肺葉において決定した。 Histological sections were stained with picrosirius red and scored in a blind fashion by a veterinary pathologist using a modified Ashcroft score (1 score for each of 3-4 leaves). (Hubner et al., 2008). Hydroxyproline content was determined in the left lung lobe using mass spectrometry.

ＨＲＳ^ＦＣ１により処置した動物からの血清試料を使用して、ＨＲＳ部分を捕捉し、融合タンパク質のＦｃ部分を検出する抗体を用いた標準的なサンドイッチＥＬＩＳＡ技術を用いて体循環におけるタンパク質のレベルを判定した。 Serum samples from animals treated with HRS ^FC1 were used to determine levels of proteins in systemic circulation using standard sandwich ELISA techniques with antibodies that capture the HRS portion and detect the Fc portion of the fusion protein. did.

全ての統計分析を、ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄＳｏｆｔｗａｒｅ，ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣＡ）を用いて実施した。群を、一方向ＡＮＯＶＡ検定（組織学、肺重量、コラーゲン含有量）をまたは二方向反復測定ＡＮＯＶＡ検定（ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ）用いて、続いて、適切な場合、ｐｏｓｔ−ｈｏｃＤｕｎｎｅｔｔ検定によって比較した。 All statistical analyzes were performed using GraphPad Prism (GraphPad Software, San Diego, CA). Groups were compared using one-way ANOVA test (histology, lung weight, collagen content) or two-way repeated measures ANOVA test (pharmacokinetics), followed by post-hoc Dunnett test where appropriate.

結果−生存。９日目に処置を開始した全ての動物は、予定した剖検まで生存した。 Results-survival. All animals that started treatment on day 9 survived to scheduled necropsy.

結果−体重。肺内でのＢＬＭの投与は、このモデルの特徴付けである実験にわたって非疾患対照に対するラットの体重の減少をもたらした。ニンテダニブ、ピルフェニドン、または被験物質により単独でまたは組み合わせて処置された群のいずれも、それらのそれぞれの対照とは有意に異なる体重曲線を有しなかった。 Results-weight. Intrapulmonary administration of BLM resulted in a loss of body weight of rats relative to non-diseased controls over the experiments characterizing this model. None of the groups treated with nintedanib, pirfenidone, or the test substance alone or in combination had a weight curve significantly different from their respective controls.

結果−呼吸測定。呼吸測定を、８日目に行い、ＢＬＭによって引き起こされた明らかな障害を示した（表Ｅ６）。
Results-Respiratory measurement. Respiratory measurements were taken on day 8 and showed a clear impairment caused by BLM (Table E6).

任意の処置前の８日目に、呼気時間および吸気時間の著しい減少が観察され、一方、最大呼気流量および呼吸速度は、著しく増加した。１回の呼吸量、最大吸気流量、および毎分呼吸量（ＲＭＶ）は、この実験では、ＢＬＭ誘導性動物と非誘導性動物との間で同様であった。 On day 8 prior to any treatment, a marked decrease in expiratory and inspiratory time was observed, while maximal expiratory flow and respiratory rate were significantly increased. Tidal volume, peak inspiratory flow, and respiratory volume per minute (RMV) were similar in this experiment between BLM-induced and non-induced animals.

１５日目および２１日目に行われた呼吸測定（表Ｅ６）は、ＢＬＭ誘導性ビヒクル処置群において障害の低下を示し、このことはブレオマイシンモデルにおいて報告されている急速な自然消散を示唆している。ニンテダニブ、ピルフェニドン、または被験物質による処置は、この研究において、呼吸パラメータにおけるＢＬＭ誘導性変化に著しく影響を及ぼさず、疾患のこの急速な自然消散によると思われる。 Respiratory measurements taken on Days 15 and 21 (Table E6) showed reduced impairment in the BLM-induced vehicle treated group, suggesting the rapid spontaneous resolution reported in the bleomycin model. There is. Treatment with nintedanib, pirfenidone, or the test substance did not significantly affect BLM-induced changes in respiratory parameters in this study, likely due to this rapid spontaneous resolution of the disease.

結果−肺質量およびコラーゲン含有量。１７日目または２２日目に剖検で得られた肺質量（湿重量）および２２日目に測定されたコラーゲン含有量は、１、２、３、５、および６日目にＢＬＭ誘導によって著しく上昇した。処置群のいずれも、肺湿重量またはコラーゲン含有量を著しく変化させなかった（データは示さず）。 Results-Lung mass and collagen content. Lung mass (wet weight) obtained at necropsy on day 17 or 22 and collagen content measured on day 22 were significantly elevated by BLM induction on days 1, 2, 3, 5 and 6. did. None of the treatment groups significantly changed lung wet weight or collagen content (data not shown).

結果−組織学的スコア。スライドは、獣医病理学者によって読み込まれ、評価された３つの葉のそれぞれは、４つのスコア型［線維症に対するアッシュクロフト（０〜８の範囲のスコア）、血管周囲／細気管支周囲の炎症細胞浸潤（０〜５の範囲のスコア）、間質性／肺胞炎症細胞浸潤（０〜５の範囲のスコア）、ＩＩ型肺細胞過形成（０〜５の範囲のスコア）］に割り当てた。 Results-histological score. Slides were read by a veterinary pathologist and evaluated for each of the three lobes with four scoring types [Ashcroft for fibrosis (score range 0-8), perivascular/peribronchiolar inflammatory cell infiltration. (Score ranging from 0 to 5), interstitial/alveolar inflammatory cell infiltration (score ranging from 0 to 5), type II pulmonary cell hyperplasia (score ranging from 0 to 5)].

ＰＢＳ誘導性動物に割り当てられたアッシュクロフトスコアは、均一に、スコア０であったが、一方、ＢＬＭ誘導性ビヒクル処置動物は、８ポイントスケールで１〜５の範囲のスコアを有し、より中等度ではあるが、実施例２において観察された、線維症が著しく誘導されたことを確認した。ニンテダニブ、ピルフェニドン、または被験物質による介入は、単独でまたは組み合わせて、ＰＯ＋ＩＶビヒクルを受容している対照と比較して、間質性炎症細胞浸潤への著しい効果を有しなかった（データを示さず）。 Ashcroft scores assigned to PBS-induced animals were, uniformly, a score of 0, whereas BLM-induced vehicle treated animals had scores ranging from 1-5 on an 8-point scale and were more moderate. It was confirmed that the fibrosis, which was observed in Example 2, was significantly induced although the degree was low. Nintedanib, pirfenidone, or test article intervention alone or in combination had no significant effect on interstitial inflammatory cell infiltration as compared to controls receiving PO+IV vehicle (data not shown). ).

間質性／肺胞炎症細胞浸潤は、生理食塩水誘導性肺からの全ての切片において存在しなかった（スコア＝０）。ＢＬＭで誘導された動物において、最小限から軽度（スコア＝１〜３）の間質性炎症細胞浸潤は、観察された。ニンテダニブ、ピルフェニドン、または被験物質による介入は、単独でまたは組み合わせて、ＰＯ＋ＩＶビヒクルを受容している対照と比較して、間質性炎症細胞浸潤への著しい効果を有しなかった（データを示さず）。 Interstitial/alveolar inflammatory cell infiltration was absent in all sections from saline-induced lungs (score=0). Minimal to mild (score=1-3) interstitial inflammatory cell infiltration was observed in BLM-induced animals. Nintedanib, pirfenidone, or test article intervention alone or in combination had no significant effect on interstitial inflammatory cell infiltration as compared to controls receiving PO+IV vehicle (data not shown). ).

結果：ＰＫ。ＨＲＳ^ＦＣ１の血清レベルは、９日目および１６日目に被験物質ＨＲＳ^ＦＣ１を受容している動物における１０日目、１７日目、および２２日目に検出可能であった。予期されるように、ＨＲＳ^ＦＣ１のレベルは、１７日目〜２２日目に減少し、経時的に、被験物質のクリアランスを示した。ＨＲＳ^ＦＣ１はまた、ニンテダニブまたはピルフェニドンも受容している動物において測定可能であった。しかしながら、驚いたことには、投与から約２４時間後に測定された、ＨＲＳ^ＦＣ１のレベルは、ＢＬＭの口腔咽頭投与によって引き起こされる肺の炎症および線維症のこの齧歯動物モデルにおけるＩＰＦの処置用に市販されている小分子による併用療法によって著しく増加した（図６）。 Results: PK. Serum levels of HRS ^FC1 is 10 days in animals receiving the test substance ^{HRS FC1} on day 9 and day 16, were detectable on day 17, and day 22. As expected, the levels of HRS ^FC1 decreased from day 17 to day 22, indicating test substance clearance over time. HRS ^FC1 was also measurable in animals receiving nintedanib or pirfenidone. Surprisingly, however, the levels of HRS ^FC1 , measured approximately 24 hours post-administration, indicate that IPF could be treated in this rodent model of lung inflammation and fibrosis caused by oropharyngeal administration of BLM. Significantly increased by combination therapy with commercially available small molecules (Figure 6).

要約。この研究の全体的な目的は、被験物質が、ブレオマイシン誘導性肺線維症のラットモデルにおける呼吸障害および／または肺線維症の程度を減少させるかどうかを判定することであった。肺線維症は、実験の初めの７日間、雄ＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙラットの肺へのＢＬＭの５つの口腔咽頭の点滴によって引き起こされた。ＢＬＭの代わりに生理食塩水を受容している動物を、対照として使用した。肺の炎症および線維症プロセスの誘導は、ＢＬＭ誘導性動物において、最小限から軽度の間質性／肺胞炎症細胞浸潤の組織学的観察および１〜５のアッシュクロフト線維症スコアによって実証された。８日目に行われた呼吸測定は、ビヒクルを受容した動物において減少したが、ＢＬＭによって引き起こされた著しい変化を示した。総合すると、これらのデータは、炎症が少なくとも８日目まで存在する病理学的変化とともに、肺において著しく誘導され、中等度の炎症および線維症が２２日目まで持続したという結論を支持する。 wrap up. The overall purpose of this study was to determine if the test substance reduced the extent of respiratory disorders and/or pulmonary fibrosis in a rat model of bleomycin-induced pulmonary fibrosis. Pulmonary fibrosis was caused by five oropharyngeal instillations of BLM into the lungs of male Sprague Dawley rats for the first 7 days of the experiment. Animals receiving saline instead of BLM were used as controls. Induction of lung inflammatory and fibrotic processes was demonstrated in BLM-induced animals by histological observation of minimal to mild interstitial/alveolar inflammatory cell infiltration and Ashcroft fibrosis score of 1-5. . Respiratory measurements taken on day 8 were reduced in animals receiving vehicle, but showed significant changes caused by BLM. Taken together, these data support the conclusion that inflammation was significantly induced in the lung with pathological changes present up to at least day 8 with moderate inflammation and fibrosis persisting up to day 22.

ニンテダニブ、ピルフェニドン、または被験物質による９日目に開始する介入は、実施例２において要約される実験と比較して、この実験における著しい効果を有さず、この研究における反応の急速な自然消失および一時的性質に関連すると思われた。 Intervention starting on day 9 with nintedanib, pirfenidone, or the test substance had no significant effect in this experiment compared to the experiment summarized in Example 2, with a rapid spontaneous disappearance of the response in this study and It seems to be related to the temporary nature.

結論。概して、試験された介入（ニンテダニブ、ピルフェニドン、または被験物質）のいずれも、単独でまたは組み合わせて、この実験における改善するための疾患測定において有効であった。ニンテダニブおよびピルフェニドンの両方がこのモデルに有効であると報告されているため、これらの結果は、潜在的に、この実験的コホートによって引き起こされるより軽度の表現型に続発する。 Conclusion. In general, any of the interventions tested (nintedanib, pirfenidone, or the test substance) alone or in combination were effective in measuring disease for improvement in this experiment. Since both nintedanib and pirfenidone have been reported to be effective in this model, these results are potentially secondary to the milder phenotype caused by this experimental cohort.

被験物質および小分子は、モデル有効性に影響を及ぼさなかったが、ＨＲＳ^ＦＣ１のデータは、遺伝子操作されたタンパク質である、被験物質の薬物動態学的特徴と相互作用することを明らかに示す。 The test substance and small molecules did not affect model efficacy, but the HRS ^FC1 data clearly show that they interact with the pharmacokinetic characteristics of the test substance, a genetically engineered protein.

ニンテダニブおよびピルフェニドンがＨＲＳ^ＦＣ１のＰＫを変化させたという観察を確認するために、実施例３に記載されるものと同一の方法を用いて同じ実験室において行われる第２の研究を評価した。驚くべきことには、ニンテダニブおよびピルフェニドンの同時投与は、初回の観察を確認するＩＶ注入から血清２４時間後に測定されたＨＲＳ^ＦＣ１（データを示さず）の量を増加させた。どちらにおいても、この効果は、２回目の注入後にさらに顕著であった。ＨＲＳ^ＦＣ１、遺伝子操作したＨＲＳポリペプチドの変化したＰＫのこの新規および予期しない観察は、作用の異なる機序を伴うＩＰＦのための２つの小分子療法の存在下で、これらの分子が炎症性および線維性疾患との関連において直接または共有経路と相互作用することを示唆している。 To confirm the observation that nintedanib and pirfenidone altered the PK of HRS ^FC1 a second study conducted in the same laboratory using the same method as described in Example 3 was evaluated. Surprisingly, coadministration of nintedanib and pirfenidone increased the amount of HRS ^FCl (data not shown) measured 24 hours after serum infusion confirming the first observation. In both cases, this effect was even more pronounced after the second injection. This novel and unexpected observation of the altered PK of HRS ^FC1 , a genetically engineered HRS polypeptide, suggests that in the presence of two small molecule therapies for IPF with different mechanisms of action, these molecules are inflammatory and It has been suggested to interact directly or with shared pathways in the context of fibrotic disorders.

Claims

（ａ）ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチド、または前記ＨＲＳポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチドと、
（ｂ）免疫調節剤と、を含む、治療用組成物。 (A) a histidyl-tRNA synthetase (HRS) polypeptide, or an expressible polynucleotide encoding the HRS polypeptide;
(B) An immunomodulator, and a therapeutic composition.

前記ＨＲＳポリペプチドが、表Ｈ１、表Ｈ２、および表Ｈ４から選択される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる、請求項１に記載の治療用組成物。 The HRS polypeptide is at least 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100 relative to a sequence selected from Table H1, Table H2, and Table H4. 2. The therapeutic composition of claim 1, comprising, consisting of, or consisting essentially of amino acid sequences that are% identical.

前記ＨＲＳポリペプチドが、５００〜５０６アミノ酸長であり、配列番号８（ＨＲＳ（１〜５０６））または９（ＨＲＳ（２〜５０６））に対して少なくとも９０％同一であり、配列番号１の残基５０７〜５０９を欠いている、請求項２に記載の治療用組成物。 The HRS polypeptide is 500-506 amino acids long and is at least 90% identical to SEQ ID NO:8 (HRS(1-506)) or 9(HRS(2-506)), with the remainder of SEQ ID NO:1. 3. The therapeutic composition according to claim 2, which lacks groups 507-509.

前記ＨＲＳポリペプチドが、配列番号８（ＨＲＳ（１〜５０６））を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる、請求項３に記載の治療用組成物。 4. The therapeutic composition of claim 3, wherein the HRS polypeptide comprises, consists of, or consists essentially of SEQ ID NO:8 (HRS(1-506)).

前記ＨＲＳポリペプチドが、配列番号９（ＨＲＳ（２〜５０６）またはＨｉｓＲＳ１^Ｎ８）を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる、請求項３に記載の治療用組成物。 The HRS polypeptide comprises or SEQ ID NO: 9 (HRS (2~506) or HisRS1 ^N8), or consist of consist or essentially, the therapeutic composition of claim 3.

前記ＨＲＳポリペプチドが、異種ポリペプチドと融合している、請求項１〜５のいずれか１項に記載の治療用組成物。 6. The therapeutic composition according to any one of claims 1-5, wherein the HRS polypeptide is fused to a heterologous polypeptide.

前記異種ポリペプチドが、Ｆｃ領域を含み、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドを形成し、任意に、前記ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドが、表Ｈ８から選択される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる、請求項６に記載の治療用組成物。 Said heterologous polypeptide comprises an Fc region to form a HRS-Fc fusion polypeptide, optionally wherein said HRS-Fc fusion polypeptide is at least 80%, 85% relative to a sequence selected from Table H8, 7. The therapeutic composition of claim 6, comprising, consisting of, or consisting essentially of an amino acid sequence that is 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100% identical. Stuff.

前記ＨＲＳポリペプチドが、配列番号１５７（Ｆｃ−ＨＲＳ（２〜６０）またはＨＲＳ^ＦＣ１）を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる、請求項７に記載の治療用組成物。 The HRS polypeptide comprises or SEQ ID NO: 157 (Fc-HRS (2~60) or ^{HRS FC1),} or consist of consist or essentially, the therapeutic composition of claim 7.

前記ＨＲＳポリペプチドが、タンパク質ベースで少なくとも約８０％、８５％、９０％、または９５％純粋であり、約５％未満凝集している、請求項１〜８のいずれか１項に記載の治療用組成物。 9. The treatment of any one of claims 1-8, wherein the HRS polypeptide is at least about 80%, 85%, 90%, or 95% pure on a protein basis and less than about 5% aggregated. Composition.

（ａ）が、前記ＨＲＳポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチド、任意に、修飾ｍＲＮＡポリヌクレオチドであり、前記修飾ｍＲＮＡポリヌクレオチドは、任意に、１つ以上の非天然ベースおよび／または非天然ヌクレオチド間結合を含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の治療用組成物。 (A) is an expressible polynucleotide encoding said HRS polypeptide, optionally a modified mRNA polynucleotide, said modified mRNA polynucleotide optionally comprising one or more non-natural bases and/or non-natural 10. The therapeutic composition according to any one of claims 1-9, which comprises an internucleotide linkage.

前記ＨＲＳポリペプチドが、非正準活性、任意に、抗炎症活性を有する、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の治療用組成物。 11. The therapeutic composition according to any one of claims 1-10, wherein the HRS polypeptide has non-canonical activity, optionally anti-inflammatory activity.

前記免疫調節剤が、ピルフェニドン、ニンテダニブ、スフィンゴシン−１−ホスフェート（Ｓ１Ｐ）および／またはＳ１Ｐ受容体（Ｓ１ＰＲ）モジュレーター、ステロイド、任意にグルココルチコイド、カルシニューリン阻害剤、ラパマイシンの機構的標的（ｍＴＯＲ）阻害剤、インドールアミン−ピロール２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、イノシン−５’−モノホスフェートデヒドロゲナーゼ（ＩＭＰＤＨ）阻害剤、サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体阻害剤、Ｂ細胞受容体阻害剤、キナーゼ阻害剤、ならびに細胞増殖抑制剤、任意にメトトレキサートのうちの１つ以上から選択される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の治療用組成物。 The immunomodulator is a pirfenidone, nintedanib, sphingosine-1-phosphate (S1P) and/or S1P receptor (S1PR) modulator, a steroid, optionally a glucocorticoid, a calcineurin inhibitor, a mechanistic target (mTOR) inhibitor of rapamycin , Indoleamine-pyrrole 2,3-dioxygenase (IDO) inhibitor, inosine-5'-monophosphate dehydrogenase (IMPDH) inhibitor, cytokine and/or cytokine receptor inhibitor, B cell receptor inhibitor, kinase inhibitor 12. The therapeutic composition according to any one of claims 1 to 11, selected from one or more of an agent, as well as a cytostatic agent, optionally methotrexate.

前記Ｓ１Ｐおよび／またはＳ１ＰＲモジュレーターが、アミセリモド（Ｓ１ＰＲアンタゴニスト）、フィンゴリモド（Ｓ１ＰＲ_１機能的アンタゴニスト）、ソネプシズマブ（Ｓ１Ｐ特異的モノクローナル抗体）、ＫＲＰ２０３（Ｓ１ＰＲ_１アゴニスト）、ＳＥＷ２８７１（Ｓ１ＰＲ_１アゴニスト）、シポニモド（Ｓ１ＰＲ_１およびＳ１ＰＲ_５モジュレーター）、ＲＰＣ１０６３（Ｓ１ＰＲ_１モジュレーター）、ＯＮＯ−４６４１（Ｓ１ＰＲ_１およびＳ１ＰＲ_５アゴニスト）、ＪＴＥ−０１３（Ｓ１ＰＲ_２アンタゴニスト）、ＧＳＫ２０１８６８２（Ｓ１ＰＲ_１アゴニスト）、ポネシモド（Ｓ１ＰＲ_１アゴニスト）、スラミン（選択的Ｓ１ＰＲ_３およびＳ１ＰＲ_５アンタゴニスト）、ＶＰＣ２３０１９（アリール−アミド類似体；競合的Ｓ１ＰＲ_１およびＳ１ＰＲ_３アンタゴニスト）、およびＷ１４６（選択的Ｓ１ＰＲ_１アンタゴニスト）、Ｓ１ＰＲを標的とするアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤、ならびにＳ１Ｐおよび／またはＳ１ＰＲに特異的に結合する抗体または抗原結合断片もしくは小分子から選択される、請求項１２に記載の治療用組成物。 The S1P and/or S1PR modulator is amicerimod (S1PR antagonist), fingolimod (S1PR ₁ functional antagonist), sonepcizumab (S1P specific monoclonal antibody), KRP203 (S1PR ₁ agonist), SEW2871 (S1PR ₁ agonist), siponimod (S1PR) ₁ and S1PR ₅ modulator), RPC1063 (S1PR ₁ modulator), ONO-4641 (S1PR ₁ and S1PR ₅ agonist), JTE-013 (S1PR ₂ antagonist), GSK2018682 (S1PR ₁ agonist), ponesimodo (S1PR ₁ agonist), suramin. (Selective S1PR ₃ and S1PR ₅ antagonists), VPC23019 (aryl-amide analogs; competitive S1PR ₁ and S1PR ₃ antagonists), and W146 (selective S1PR ₁ antagonists), antisense or RNAi agents targeting S1PR, And a therapeutic composition according to claim 12, selected from antibodies or antigen-binding fragments or small molecules that specifically bind to S1P and/or S1PR.

前記ステロイドが、ベタメタゾン、ブデソニド、コルチゾール（ヒドロコルチゾン）、コルチゾン、デフラザコート、デオキシコルチコステロン、デキサメタゾン、フルドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、プレドニゾロン、およびトリアムシノロンから選択される、請求項１２に記載の治療用組成物。 13. The steroid of claim 12, wherein the steroid is selected from betamethasone, budesonide, cortisol (hydrocortisone), cortisone, deflazacort, deoxycorticosterone, dexamethasone, fludrocortisone, hydrocortisone, methylprednisolone, prednisone, prednisolone, and triamcinolone. Therapeutic composition.

前記カルシニューリン阻害剤が、シクロスポリン、ピメクロリムス、タクロリムス、カルシニューリンまたはそのサブユニットを標的とするアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤、ならびにカルシニューリンまたはそのサブユニットに特異的に結合する抗体または抗原結合断片もしくは小分子から選択される、請求項１２に記載の治療用組成物。 The calcineurin inhibitor is selected from antisense or RNAi agents that target cyclosporine, pimecrolimus, tacrolimus, calcineurin or subunits thereof, and antibodies or antigen-binding fragments or small molecules that specifically bind calcineurin or subunits thereof. The therapeutic composition according to claim 12, which is

前記ｍＴＯＲ阻害剤が、ＡＴＰ競合的ｍＴＯＲキナーゼ阻害剤、ｍＴＯＲＣ１／ｍＴＯＲＣ２二重阻害剤、および／またはｍＴＯＲ／ＰＩ３Ｋ二重阻害剤であるか、あるいは、前記ｍＴＯＲ阻害剤が、エベロリムス、ラパマイシン、デフォロリムス、テムシロリムス、ダクトリシブ、ＢＧＴ２２６、ＳＦ１１２６、ＰＫＩ−５８７、ＮＶＰＢＥ２３５、サパニセルチブ、ＡＺＤ８０５５、ＡＺＤ２０１４、ｍＴＯＲを標的とするアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤、ならびにｍＴＯＲに特異的に結合する抗体または抗原結合断片もしくは小分子のうちの１つ以上から選択される、請求項１２に記載の治療用組成物。 The mTOR inhibitor is an ATP-competitive mTOR kinase inhibitor, mTORC1/mTORC2 dual inhibitor, and/or mTOR/PI3K dual inhibitor, or the mTOR inhibitor is everolimus, rapamycin, deforolimus, Of temsirolimus, ductulisib, BGT226, SF1126, PKI-587, NVPBE235, sapanicertib, AZD8055, AZD2014, antisense or RNAi agents that target mTOR, and antibodies or antigen-binding fragments or small molecules that specifically bind to mTOR. 13. The therapeutic composition according to claim 12, selected from one or more.

前記ＩＤＯ阻害剤が、インドキシモド（ＮＬＧ−８１８９）、１−メチル−トリプトファン（１ＭＴ）、β−カルボリン（ノルハルマン；９Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール）、ロスマリン酸、およびエパカドスタット、ＩＤＯを標的とするアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤、ならびにＩＤＯに特異的に結合する抗体または抗原結合断片もしくは小分子から選択される、請求項１２に記載の治療用組成物。 The IDO inhibitor targets indoximod (NLG-8189), 1-methyl-tryptophan (1MT), β-carboline (norharman; 9H-pyrido[3,4-b]indole), rosmarinic acid, and epacadostat, IDO 13. The therapeutic composition according to claim 12, which is selected from an antisense or RNAi agent, and an antibody or antigen-binding fragment or small molecule that specifically binds to IDO.

前記ＩＭＰＤＨ阻害剤が、ミコフェノール酸（ミコフェノール酸モフェチル）、リバビリン、および６ＴＧＭＰ（６−チオグアニンモノホスフェート）、ＩＭＰＤＨを標的とするアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤、ならびにＩＭＰＤＨに特異的に結合する抗体または抗原結合断片もしくは小分子のうちの１つ以上から選択される、請求項１２に記載の治療用組成物。 The IMPDH inhibitor is mycophenolic acid (mycophenolate mofetil), ribavirin, and 6TGMP (6-thioguanine monophosphate), an antisense or RNAi agent that targets IMPDH, and an antibody that specifically binds to IMPDH or 13. The therapeutic composition according to claim 12, selected from one or more of an antigen binding fragment or a small molecule.

前記サイトカイン阻害剤が、ＩＬ−１αおよびＩＬ−１βを含むインターロイキン−１（ＩＬ−１）、インターロイキン−５（ＩＬ−５）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、インターロイキン−１１（ＩＬ−１１）、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）、インターロイキン−１７（ＩＬ−１７）、インターロイキン−１８（ＩＬ−１８）、インターロイキン−２０（ＩＬ−２０）、インターロイキン−３３（ＩＬ−３３）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−ガンマ）、形質転換成長因子−β（ＴＧＦ−β）、および顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、および／またはＩＬ−１Ｒ、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−８Ｒ、ＩＬ−１１Ｒ、ＩＬ−１２Ｒ、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−２０Ｒのうちの１つ以上から選択されるサイトカイン受容体、ＳＴ２（インターロイキン１受容体様１、ＩＬ１ＲＬ１）、ＴＮＦＲ１などのＴＮＦＲ、インターフェロン−ガンマ受容体（ＩＦＮＧＲ）、ならびにＴＧＦβＲ１（ＡＬＫ５）またはＴＧＦβＲ２などのＴＧＦ−β受容体のうちの１つ以上から選択されるサイトカインの阻害剤であり、さらに、前記サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体阻害剤が、前記サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体を標的とするアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤、ならびに前記サイトカインまたはサイトカイン受容体に特異的に結合する抗体または抗原結合断片もしくは小分子から選択される、請求項１２に記載の治療用組成物。 The cytokine inhibitor includes interleukin-1 (IL-1) containing IL-1α and IL-1β, interleukin-5 (IL-5), interleukin-6 (IL-6), interleukin-8( IL-8), interleukin-11 (IL-11), interleukin-12 (IL-12), interleukin-17 (IL-17), interleukin-18 (IL-18), interleukin-20 ( IL-20), interleukin-33 (IL-33), tumor necrosis factor (TNF), interferon gamma (IFN-gamma), transforming growth factor-β (TGF-β), and granulocyte-macrophage colony stimulating factor. (GM-CSF) and/or is selected from one or more of IL-1R, IL-6R, IL-8R, IL-11R, IL-12R, IL-17R, IL-18R, IL-20R. One of a cytokine receptor, ST2 (interleukin 1 receptor-like 1, IL1RL1), TNFR such as TNFR1, interferon-gamma receptor (IFNGR), and TGF-β receptor such as TGFβR1 (ALK5) or TGFβR2 An cytokine inhibitor selected from the above, wherein the cytokine and/or cytokine receptor inhibitor is an antisense or RNAi agent targeting the cytokine and/or cytokine receptor, and the cytokine or cytokine receptor 13. The therapeutic composition according to claim 12, selected from antibodies or antigen-binding fragments or small molecules that specifically bind to the body.

前記サイトカインおよび／またはサイトカイン受容体阻害剤が、アダリムマブ、アナキンラ、バシリキシマブ、カナキヌマブ、セルトリズマブ、ダクリズマブ、エタネルセプト、ゴリムマブ、インフリキシマブ、イキセキズマブ、メポリズマブ、レスリズマブ、リロナセプト、セクキヌマブ、セリルマブ（ｓｅｒｉｌｕｍａｂ）、シルクマブ、トシリズマブ、およびウステキヌマブのうちの１つ以上から選択される、請求項１２または１９に記載の治療用組成物。 The cytokine and/or cytokine receptor inhibitor is adalimumab, anakinra, basiliximab, canakinumab, certolizumab, daclizumab, etanercept, golimumab, infliximab, ixekizumab, mepolizumab, lesurizumab, rilonacept, sericumumab, sericumumab, rilonacept, sericumumab, selikumab, sequinumab, sequinumab. 20. The therapeutic composition according to claim 12 or 19, selected from one or more of ustekinumab.

前記キナーゼ阻害剤が、ヤーヌスキナーゼ（ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、ＴＹＫ２を含むＪＡＫ）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、受容体チロシン−タンパク質キナーゼｅｒｂＢ−２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕまたはＥＲＢＢ２）、Ｂｃｒ−Ａｂｌ、ｃ−ＳＲＣ、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰ）キナーゼ、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）、脾臓チロシンキナーゼ（ＳＹＫ）、ブルトンチロシンキナーゼ（ＢＴＫ）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦＲ３を含むＶＥＧＦＲ）、線維芽細胞成長因子受容体（ＦＧＦＲ）、Ｂ−Ｒａｆ、ＲＥＴがん原遺伝子、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦ−Ｒ）、トロポミオシン受容体キナーゼ（ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、ＴｒｋＣを含むＴｒｋ）、およびｃ−Ｍｅｔのうちの１つ以上から選択されるキナーゼの阻害剤であり、さらに、前記キナーゼ阻害剤が、前記キナーゼを標的とするアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤、ならびに前記キナーゼに特異的に結合する抗体または抗原結合断片もしくは小分子から選択される、請求項１２に記載の治療用組成物。 The kinase inhibitor includes Janus kinase (JAK including JAK1, JAK2, JAK3, and TYK2), epidermal growth factor receptor (EGFR), receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 (Her2/neu or ERBB2), Bcr-Abl. , C-SRC, mitogen-activated protein kinase (MAP) kinase, anaplastic lymphoma kinase (ALK), spleen tyrosine kinase (SYK), Bruton tyrosine kinase (BTK), vascular endothelial growth factor (VEGF), vascular endothelial growth factor receptor Body (VEGFR1, VEGFR2, VEGFR including VEGFR3), fibroblast growth factor receptor (FGFR), B-Raf, RET protooncogene, platelet-derived growth factor receptor (PDGF-R), tropomyosin receptor kinase ( TrkA, TrkB, Trk including TrkC), and an inhibitor of a kinase selected from one or more of c-Met, wherein the kinase inhibitor is an antisense or RNAi agent targeting the kinase. And a therapeutic composition according to claim 12, which is selected from antibodies or antigen-binding fragments or small molecules that specifically bind to the kinase.

前記キナーゼ阻害剤が、ニンテダニブ、バリシチニブ、フェドラチニブ、フィルゴチニブ、ガンドチニブ、レスタウルチニブ、モメロチニブ、パクリチニブ、ペフィシチニブ、ルキソリチニブ、トファシチニブ、パダシチニブ、アファチニブ、アキシチニブ、ボスチニブ、セツキシマブ、コビメチニブ、クリゾチニブ、カボザンチニブ、ダサチニブ、エヌトレクチニブ（ｅｎｔｒｅｃｔｉｎｉｂ）、エルロチニブ、フォスタマチニブ、ゲフィチニブ、イブルチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レンバチニブ、ムブリチニブ、ネラチニブ、ニロチニブ、パゾパニブ、ペガプタニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、ＳＵ６６５６、トセラニブ、バンデタニブ、バタラニブ、およびベムラフェニブのうちの１つ以上から選択される、請求項１２または２１に記載の治療用組成物。 Said kinase inhibitor is nintedanib, baricitinib, fedratinib, filgotinib, gandotinib, lestaurtinib, momerotinib, paclitinib in peficitinib, ruxolitinib, tofacitinib, axitinib, axitinib, axitinib, axitinib, axitinib, axitinib, afatinib. , Erlotinib, fostamatinib, gefitinib, ibrutinib, imatinib, lapatinib, lenvatinib, mubritinib, neratinib, nilotinib, pazopanib, pegaptanib, sorafenib, sunitinib, SU6656, deuteranib, selected from pazopanib, pegaptanib, sorafenib, sunatinib. A therapeutic composition according to claim 12 or 21.

前記Ｂ細胞受容体阻害剤が、ＣＤ２０を標的とするアンチセンスまたはＲＮＡｉ剤、ならびにＣＤ２０に特異的に結合する抗体または抗原結合断片もしくは小分子から選択されるか、または前記Ｂ細胞受容体阻害剤が、任意に、イブリツモマブ・チウキセタン、オビヌツズマブ、オカラツズマブ、オクレリズマブ、リツキシマブ、トシツモマブ、およびベルツズマブのうちの１つ以上から選択される、請求項１２に記載の治療用組成物。 The B cell receptor inhibitor is selected from antisense or RNAi agents that target CD20, as well as antibodies or antigen binding fragments or small molecules that specifically bind to CD20, or said B cell receptor inhibitor 13. The therapeutic composition according to claim 12, wherein is optionally selected from one or more of ibritumomab thiuxetane, obinutuzumab, ochalatuzumab, ocrelizumab, rituximab, tositumomab, and veltuzumab.

前記アンチセンス剤が、約１０〜４０塩基長であり、任意に、モルホリノオリゴヌクレオチド（ＰＭＯ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、２’Ｏ−メチルホスホロチオエートオリゴヌクレオチド、トリシクロ−ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド、およびロックド核酸（ＬＮＡ）から選択される、請求項１３〜２３のいずれか１項に記載の治療用組成物。 The antisense agent is about 10 to 40 bases in length, and optionally morpholino oligonucleotide (PMO), peptide nucleic acid (PNA), 2'O-methyl phosphorothioate oligonucleotide, tricyclo-phosphorothioate oligonucleotide, and locked nucleic acid ( The therapeutic composition according to any one of claims 13 to 23, selected from LNA).

前記アンチセンス剤が、標的タンパク質をコードするプレｍＲＮＡまたはｍＲＮＡ標的配列内の標的領域に特異的にハイブリダイズし、前記標的領域が、前記ｍＲＮＡのＡＵＧ開始コドン、前記ＡＵＧ開始コドンの上流の領域、前記ＡＵＧコドンの下流の領域、予め処理したｍＲＮＡの３’または５’スプライス部位、分岐点、３’未翻訳領域（ＵＴＲ）、およびポリアデニル化シグナル配列のうちの１つ以上から選択される、請求項２４に記載の治療用組成物。 The antisense agent specifically hybridizes to a target region within a pre-mRNA or mRNA target sequence encoding a target protein, the target region being the AUG start codon of the mRNA, a region upstream of the AUG start codon, Selected from one or more of a region downstream of the AUG codon, a 3'or 5'splice site of pretreated mRNA, a branch point, a 3'untranslated region (UTR), and a polyadenylation signal sequence. Item 25. The therapeutic composition according to Item 24.

前記ＲＮＡｉ剤が、前記標的タンパク質をコードするｍＲＮＡ標的配列と実質的に同一であるセンス鎖、および任意に、前記標的タンパク質をコードする前記ｍＲＮＡ標的配列と相補的であるか、または実質的に相補的であるアンチセンス鎖を含み、任意に、前記ＲＮＡｉ剤が、二本鎖短干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）オリゴヌクレオチドであるか、または任意に、前記ＲＮＡｉ剤、任意に、ｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチドが、ウイルスベクターによってコードされる、請求項１３〜２３のいずれか１項に記載の治療用組成物。 The RNAi agent is a sense strand that is substantially identical to an mRNA target sequence encoding the target protein, and, optionally, is complementary or substantially complementary to the mRNA target sequence encoding the target protein. Optionally, said RNAi agent is a double-stranded short interfering RNA (siRNA) oligonucleotide, or optionally said RNAi agent, optionally a siRNA oligonucleotide, is a viral vector. The therapeutic composition according to any one of claims 13 to 23, encoded by:

前記抗体またはその抗原結合断片が、モノクローナル抗体、任意に、ヒト化抗体、または任意に、Ｆｖ断片もしくは一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）ポリペプチドである、請求項１３〜２３のいずれか１項に記載の治療用組成物。 24. The antibody or antigen binding fragment thereof is a monoclonal antibody, optionally a humanized antibody, or optionally an Fv fragment or a single chain Fv(sFv) polypeptide, according to any one of claims 13 to 23. Therapeutic composition.

前記組成物が、タンパク質ベースまたは重量−重量ベースで少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％の純度を有し、実質的には、凝集体を含まない、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の治療用組成物。 The composition has a purity of at least about 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, or 99% on a protein or weight-weight basis and is substantially free of aggregates, A therapeutic composition according to any one of claims 1-27.

実質的には、内毒素を含まない、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の治療用組成物。 29. The therapeutic composition of any one of claims 1-28, which is substantially free of endotoxin.

脂質ナノ粒子を含む、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の治療用組成物。 30. The therapeutic composition according to any one of claims 1-29, which comprises lipid nanoparticles.

前記組成物が、シリンジ、任意に、注射可能なシリンジ中にあるか、または前記組成物が、カプセル、任意に、経口カプセルである、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の治療用組成物。 31. The therapeutic according to any one of claims 1 to 30, wherein the composition is in a syringe, optionally in an injectable syringe, or the composition is a capsule, optionally an oral capsule. Composition.

肺の炎症の治療を必要とする対象においてそれを行う方法であって、前記対象に、
（ａ）ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチド、または前記ＨＲＳポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチドと、
（ｂ）免疫調節剤と、を投与することを含む、方法。 A method of doing so in a subject in need of treatment of lung inflammation, said subject comprising:
(A) a histidyl-tRNA synthetase (HRS) polypeptide, or an expressible polynucleotide encoding the HRS polypeptide;
(B) administering an immunomodulator.

（ａ）および（ｂ）が、別々に投与され、任意に、請求項１〜３１のいずれか１項に従って定義される、請求項３２に記載の方法。 33. The method of claim 32, wherein (a) and (b) are administered separately, optionally defined according to any one of claims 1-31.

（ａ）および（ｂ）が、一緒に、任意に、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の治療用組成物として投与される、請求項３２に記載の方法。 33. The method of claim 32, wherein (a) and (b) are optionally administered together as a therapeutic composition of any one of claims 1-31.

前記ＨＲＳポリペプチドが、Ｆｃ領域を含み、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドを形成し、任意に、前記ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドが、表Ｈ８から選択される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる、請求項３２〜３４のいずれか１項に記載の方法。 Said HRS polypeptide comprises an Fc region to form a HRS-Fc fusion polypeptide, optionally said HRS-Fc fusion polypeptide is at least 80%, 85% relative to a sequence selected from Table H8, 35. Any one of claims 32-34 comprising, consisting of, or consisting essentially of an amino acid sequence that is 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100% identical. The method described in the section.

前記ＨＲＳポリペプチドが、配列番号１５７（Ｆｃ−ＨＲＳ（２〜６０）またはＨＲＳ^ＦＣ１）を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる、請求項３５に記載の方法。 The HRS polypeptide comprises or SEQ ID NO: 157 (Fc-HRS (2~60) or ^{HRS FC1),} or consist of consist or essentially method of claim 35.

前記免疫調節剤が、前記ＨＲＳポリペプチドのみと比較して、前記ＨＲＳポリペプチドの１つ以上の薬物動態学的特徴を変化させる、請求項３２〜３６のいずれか１項に記載の方法。 37. The method of any one of claims 32-36, wherein the immunomodulatory agent alters one or more pharmacokinetic characteristics of the HRS polypeptide as compared to the HRS polypeptide alone.

前記ＨＲＳポリペプチドの前記１つ以上の変化する薬物動態学的特徴が、血清濃度の増加、血清半減期の増加、バイオアベイラビリティの増加、曝露（ＡＵＣ）の増加、および／またはクリアランスの減少である、請求項３７に記載の方法。 The one or more altered pharmacokinetic characteristics of the HRS polypeptide is increased serum concentration, increased serum half-life, increased bioavailability, increased exposure (AUC), and/or decreased clearance. 38. The method of claim 37.

前記免疫調節剤が、ピルフェニドンまたはニンテダニブである、請求項３２〜３８のいずれか１項に記載の方法。 39. The method of any one of claims 32-38, wherein the immunomodulator is pirfenidone or nintedanib.

前記ＨＲＳポリペプチドが、配列番号１５７（Ｆｃ−ＨＲＳ（２〜６０）またはＨＲＳ^ＦＣ１を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなり、前記免疫調節剤が、ピルフェニドンである、請求項３９に記載の方法。 40. The HRS polypeptide of claim 39, wherein the HRS polypeptide comprises, consists of, or consists essentially of SEQ ID NO:157 (Fc-HRS(2-60) or HRS ^FC1 and the immunomodulator is pirfenidone. The method described.

前記ピルフェニドンが、前記ＨＲＳポリペプチドのみと比較して、前記対象における前記ＨＲＳポリペプチドの前記血清濃度を少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、または２００％以上増加させる、請求項３９または４０に記載の方法。 Said pirfenidone increases said serum concentration of said HRS polypeptide in said subject by at least about 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, as compared to said HRS polypeptide alone. 41. The method according to claim 39 or 40, which is increased by 200% or more.

前記ピルフェニドンが、約５０〜約１０００ｍｇの範囲である個々の投与量単位で、あるいは約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、もしくは１０００ｍｇ、約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、もしくは１０００ｍｇ以下、または少なくとも約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、もしくは１０００ｍｇの個々の投与量単位で、任意に、経口投与用の１つ、２つ、または３つのカプセルで投与される、請求項３９または４０に記載の方法。 The pirfenidone is in individual dosage units ranging from about 50 to about 1000 mg, or about 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 10, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, or 1000 mg, about 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 10, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, or 1000 mg or less, or at least about 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230. , 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480. 490, 500, 10, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 41. The method of claim 39 or 40, or administered in individual dosage units of 1000 mg, optionally in 1, 2, or 3 capsules for oral administration.

前記ピルフェニドンが、約１００〜約４０００ｍｇ／日の範囲である１日投与量単位で、あるいは約１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００、３６００、３７００、３８００、３９００、もしくは４０００ｍｇ／日、約１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００、３６００、３７００、３８００、３９００、もしくは４０００ｍｇ／日以下、または少なくとも約１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００、３６００、３７００、３８００、３９００、もしくは４０００ｍｇ／日の１日投与量単位で、任意に、経口投与用の約１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つのカプセルで投与される、請求項３９〜４２のいずれか１項に記載の方法。 The pirfenidone is in a daily dosage unit ranging from about 100 to about 4000 mg/day, or about 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 10, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000, 1200, 1300, 1400, 1500, 1600, 1700, 1800, 2000, 2100, 2200, 2300, 2400, 2500, 2600, 2700, 2800, 2900, 3000, 3100, 3200, 3300, 3400, 3500, 3600, 3700, 3800, 3900, or 4000 mg/day, about 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 10, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000, 1200, 1300, 1400, 1500, 1600, 1700, 1800, 2000, 2100, 2200, 2300, 2400, 2500, 2600, 2700, 280 0, 2900, 3000, 3100, 3200, 3300, 3400, 3500, 3600, 3700, 3800, 3900, or 4000 mg/day or less, or at least about 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180. , 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430. 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 10, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680. , 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930. , 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000, 1200, 1300, 1400, 1500, 1600, 1700, 1800, 2000, 2100, 2200, 2300, 2400, 2500, 2600, 2700, 2800, 2900, 3000. Daily dose unit of 3100, 3200, 3300, 3400, 3500, 3600, 3700, 3800, 3900, or 4000 mg/day, optionally about 1, 2, 3, 4 for oral administration 43. The method of any one of claims 39-42, which is administered in 5, 6, 7, 8, 9 capsules.

前記ピルフェニドンが、約８００ｍｇ（例えば８０１ｍｇ）の個々の投与量単位で、任意に、個々の投与量につき３つのカプセルとして服用される、経口投与用の３つの約２６７ｍｇのカプセルとして投与される、請求項３９〜４３のいずれか１項に記載の方法。 The pirfenidone is administered in individual dosage units of about 800 mg (eg 801 mg), optionally as three capsules of about 267 mg for oral administration, optionally taken as three capsules for each individual dosage. Item 44. The method according to any one of Items 39 to 43.

前記ピルフェニドンが、約２４００ｍｇ／日（例えば２４０３ｍｇ／日）の１日投与量単位で、任意に、個々の投与量につき３つのカプセルとして服用される、１日３回の経口投与用の９つの約２６７ｍｇのカプセルとして投与される、請求項３９〜４４のいずれか１項に記載の方法。 The pirfenidone is taken in a daily dosage unit of about 2400 mg/day (eg 2403 mg/day), optionally in 9 capsules for oral administration three times daily, taken as 3 capsules per individual dose. 45. The method of any one of claims 39-44 administered as a 267 mg capsule.

前記ニンテダニブが、約１０〜約５００ｍｇの範囲である個々の投与量単位で、あるいは約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、もしくは５００ｍｇ、約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、もしくは５００ｍｇ以下、または少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、もしくは５００ｍｇの個々の投与量単位で、任意に、約１つ、２つ、または３つのカプセルで投与される、請求項３９に記載の方法。 The nintedanib is in individual dosage units ranging from about 10 to about 500 mg, or about 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, or 500 mg, about 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, or 500 mg or less, or at least about 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110. , 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360. 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, or 500 mg in individual dosage units, optionally about 1, 2, or 3 40. The method of claim 39 administered in a capsule.

前記ニンテダニブが、約２０〜約１０００ｍｇ／日の範囲である１日投与量単位で、あるいは約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００ｍｇ／日、約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００ｍｇ／日以下、または少なくとも約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００ｍｇ／日の１日投与量単位で、任意に、約１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのカプセルで投与される、請求項３９または４６に記載の方法。 The nintedanib is in a daily dosage unit ranging from about 20 to about 1000 mg/day, or about 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000 mg/day, about 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140 , 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390. , 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640. , 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890. , 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000 mg/day or less, or at least about 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120. , 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370. 380, 390, 400, 410, 420, 430 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680. , 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930. , 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000 mg/day in daily dosage units, optionally in about 1, 2, 3, 4, 5, or 6 capsules 47. The method of claim 39 or 46.

前記ニンテダニブが、約１００〜１５０ｍｇの範囲である、または約２００〜３００ｍｇ／日の範囲である１日投与量単位で、任意に、１日１回または２回の投与量で投与される、請求項３９または４６〜４７のいずれか１項に記載の方法。 The nintedanib is administered in a daily dosage unit in the range of about 100-150 mg, or in the range of about 200-300 mg/day, optionally in one or two daily doses. Item 39. The method according to any one of Items 39 to 46 to 47.

前記ニンテダニブが、約１００〜１５０ｍｇ、または約２００〜３００ｍｇ／日の１日投与量単位で、任意に、１日１回または２回の投与量で投与される、請求項３９または４６〜４８のいずれか１項に記載の方法。 49. The method of claim 39 or 46-48, wherein said nintedanib is administered in a daily dosage unit of about 100-150 mg, or about 200-300 mg/day, optionally in one or two daily doses. The method according to any one of items.

前記対象が、間質性肺疾患（ＩＬＤ）に罹患しているか、または罹患するリスクがある、請求項３２〜４９のいずれか１項に記載の方法。 50. The method of any one of claims 32-49, wherein the subject has, or is at risk of having, interstitial lung disease (ILD).

前記ＩＬＤが、特発性であるか、または結合組織疾患、自己免疫疾患、吸入物質もしくは薬物への曝露、感染症、または悪性腫瘍に関連している、請求項３２〜５０のいずれか１項に記載の方法。 51. Any one of claims 32-50, wherein the ILD is idiopathic or associated with connective tissue disease, autoimmune disease, exposure to inhalants or drugs, infections, or malignancy. The method described.

前記ＩＬＤが、特発性間質性肺炎、特発性肺線維症、サルコイドーシス、ハンマンリッチ症候群、抗合成酵素症候群、特発性好酸球性肺炎、肺胞出血症候群、肺胞タンパク症、石綿肺症、珪肺症、ベリリウム症、リウマチ性関節炎、紅斑性狼瘡、肺障害を伴う慢性移植片対宿主病、硬化症（全身性）または強皮症、多発性筋炎、皮膚筋炎、慢性肺疾患、喘息、気管支炎（呼吸気管支炎）、肺炎、過敏性肺炎、慢性過敏性肺炎、呼吸窮迫症候群、スティル病、急性肺損傷、顕微鏡的多発血管炎、肺水腫、肺ランゲルハンス細胞組織球症、急性吸入曝露、薬物誘導性肺疾患、剥離性間質性肺炎、および／または嚢胞性線維症のうちの１つ以上から選択されるか、またはそれらと関連している、請求項５１に記載の方法。 The ILD is idiopathic interstitial pneumonia, idiopathic pulmonary fibrosis, sarcoidosis, Hanman-rich syndrome, antisynthetic enzyme syndrome, idiopathic eosinophilic pneumonia, alveolar hemorrhagic syndrome, alveolar proteinosis, asbestosis , Silicosis, beryllium disease, rheumatoid arthritis, lupus erythematosus, chronic graft-versus-host disease with lung injury, sclerosis (systemic) or scleroderma, polymyositis, dermatomyositis, chronic lung disease, asthma, Bronchitis (respiratory bronchitis), pneumonia, hypersensitivity pneumonia, chronic hypersensitivity pneumonia, respiratory distress syndrome, Still's disease, acute lung injury, microscopic polyangiitis, pulmonary edema, lung Langerhans cell histiocytosis, acute inhalation exposure, 52. The method of claim 51, which is selected from or associated with one or more of drug-induced lung disease, exfoliative interstitial pneumonia, and/or cystic fibrosis.

前記ＩＬＤが、サーファクタントタンパク質Ｂ欠乏症（ＳＦＴＰＢにおける変異）、サーファクタントタンパク質Ｃ欠乏症（ＳＦＴＰＣにおける変異）、ＡＢＣＡ３欠乏症（ＡＢＣＡ３における変異）、脳肺甲状腺症候群（ＴＴＦ１における変異）、または先天性肺胞タンパク症（ＣＳＦＲ２Ａ、ＣＳＦＲ２Ｂにおける変異）、肺胞毛細血管異形成（ＦｏｘＦ１における変異）、テロメラーゼ逆転写酵素（ＴＥＲＴ）における変異、テロメラーゼＲＮＡ成分（ＴＥＲＣ）における変異、テロメア伸長ヘリカーゼ１の調節因子（ＲＴＥＬ１）における変異、および／またはポリ（Ａ）特異的リボヌクレアーゼ（ＰＡＲＮ）における変異のうちの１つ以上と関連している、請求項５１または５２に記載の方法。 The ILD is a surfactant protein B deficiency (mutation in SFTPB), surfactant protein C deficiency (mutation in SFTPC), ABCA3 deficiency (mutation in ABCA3), cerebral pulmonary thyroid syndrome (mutation in TTF1), or congenital alveolar proteinosis (mutation). Mutations in CSFR2A and CSFR2B), alveolar capillary dysplasia (mutation in FoxF1), mutations in telomerase reverse transcriptase (TERT), mutations in telomerase RNA component (TERC), mutations in telomere elongation helicase 1 regulator (RTEL1). And/or one or more of the mutations in poly(A)-specific ribonuclease (PARN).

前記薬物が、抗生物質、化学療法剤、抗不整脈剤、およびスタチン薬のうちの１つ以上から選択される、請求項５１に記載の方法。 52. The method of claim 51, wherein the drug is selected from one or more of antibiotics, chemotherapeutic agents, antiarrhythmic agents, and statin agents.

前記感染が、非定型肺炎、ニューモシスチス肺炎（ＰＣＰ）、結核、クラミジアトラコマチス、および呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、特発性器質化肺炎のうちの１つ以上から選択される、請求項５１に記載の方法。 52. The infection according to claim 51, wherein the infection is selected from one or more of atypical pneumonia, pneumocystis pneumonia (PCP), tuberculosis, chlamydia trachomatis, and respiratory syncytial virus (RSV), idiopathic organizing pneumonia. the method of.

前記悪性腫瘍が、がん性リンパ管症またはリンパ腫である、請求項５１に記載の方法。 52. The method of claim 51, wherein the malignant tumor is cancerous lymphangiopathy or lymphoma.

前記肺の炎症の治療を必要とする対象が、アトピー性喘息、非アトピー性喘息、アレルギー性喘息、アトピー性気管支ＩｇＥ仲介性喘息、気管支喘息、本態性喘息、真正喘息、病態生理学的かく乱により引き起こされる内因性喘息、環境因子により引き起こされる外因性喘息、知られていないかまたは明らかでない原因の本態性喘息、非アトピー性喘息、気管支炎様喘息、気腫性喘息、運動誘発性喘息、アレルゲン誘発性喘息、冷気誘発性喘息、職業喘息、細菌、真菌、原虫、またはウイルス感染症により引き起こされる感染型喘息、非アレルギー性喘息、初発性喘息、喘鳴乳児症候群および細気管支炎、慢性または急性気管支収縮、慢性気管支炎、末梢気道閉塞、ならびに肺気腫のうちの１つ以上から選択される状態を有する、請求項３２〜５６のいずれか１項に記載の方法。 The subject in need of treatment for inflammation of the lung is caused by atopic asthma, non-atopic asthma, allergic asthma, atopic bronchial IgE-mediated asthma, bronchial asthma, essential asthma, authentic asthma, pathophysiological disruption. Endogenous asthma, exogenous asthma caused by environmental factors, essential asthma of unknown or undetermined cause, non-atopic asthma, bronchitis-like asthma, emphysematous asthma, exercise-induced asthma, allergen induction Asthma, cold-induced asthma, occupational asthma, infectious asthma caused by bacterial, fungal, protozoal, or viral infections, nonallergic asthma, primary asthma, wheezing infant syndrome and bronchiolitis, chronic or acute bronchoconstriction 57. The method of any one of claims 32-56, having a condition selected from one or more of: chronic bronchitis, peripheral airway obstruction, and emphysema.

前記肺の炎症の治療を必要とする対象が、閉塞性または炎症性の気道疾患を有する、請求項３２〜５７のいずれか１項に記載の方法。 58. The method of any one of claims 32-57, wherein the subject in need of treatment for lung inflammation has an obstructive or inflammatory airway disease.

前記閉塞性または炎症性の気道疾患が、慢性好酸球性肺炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性気管支炎、肺気腫または呼吸困難を含むＣＯＰＤ、不可逆性進行性気道閉塞を特徴とするＣＯＰＤ、および急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）のうちの１つ以上から選択される、請求項５８に記載の方法。 COPD wherein the obstructive or inflammatory airway disease is characterized by chronic eosinophilic pneumonia, chronic obstructive pulmonary disease (COPD), chronic bronchitis, COPD including emphysema or dyspnea, irreversible progressive airway obstruction 59. The method of claim 58, wherein the method is selected from one or more of:, and acute respiratory distress syndrome (ARDS).

前記肺の炎症の治療を必要とする対象が、他の薬物療法の結果として生じる気道過敏性の悪化、肺高血圧症を伴う気道疾患、気管支炎または急性気管支炎、急性喉頭気管気管支炎、アラキン酸気管支炎、カタル性気管支炎、クループ性気管支炎、乾性気管支炎、感染性喘息性気管支炎、増殖性気管支炎（ｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ）、ブドウ球菌性もしくは連鎖球菌性の気管支炎、小胞性気管支炎、急性肺損傷、気管支拡張症、または円柱状気管支拡張症、嚢状気管支拡張症、紡錘状気管支拡張症、毛細管性気管支拡張症、嚢胞状気管支拡張症、乾性気管支拡張症、または濾胞性気管支拡張症に関連する状態を有する、請求項３２〜５９のいずれか１項に記載の方法。 The subject in need of treatment of the inflammation of the lung, exacerbated airway hyperresponsiveness as a result of other drug therapy, airway disease with pulmonary hypertension, bronchitis or acute bronchitis, acute laryngotracheobronchitis, arachidic acid. Bronchitis, catarrhal bronchitis, croup bronchitis, dry bronchitis, infectious asthmatic bronchitis, proliferative bronchitis, staphylococcal or streptococcal bronchitis, vesicular bronchitis, acute For lung injury, bronchiectasis, or cylindrical bronchiectasis, saccular bronchiectasis, fusiform bronchiectasis, capillary bronchiectasis, cystic bronchiectasis, dry bronchiectasis, or follicular bronchiectasis 60. The method according to any one of claims 32-59, having associated conditions.

前記肺の炎症の治療を必要とする対象が、１、２、３、４、５、６、７、または８のアッシュクロフトスコアを有する、請求項３２〜６０のいずれか１項に記載の方法。 61. The method of any one of claims 32-60, wherein the subject in need of treatment for lung inflammation has an Ashcroft score of 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, or 8. .

前記肺の炎症の治療を必要とする対象の平均余命を、任意に、約または少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０年、またはそれ以上増加させる、請求項３２〜６１のいずれか１項に記載の方法。 Optionally, the life expectancy of a subject in need of treatment for inflammation of the lung is about or at least about 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14. , 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 , 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60 years or more, 62. A method according to any one of claims 32-61.

前記肺の炎症の治療を必要とする対象における肺の炎症の臨床症状またはパラメータのうちの１つ以上を改善する、請求項３２〜６２のいずれか１項に記載の方法。 63. The method of any one of claims 32-62, which ameliorates one or more of the clinical symptoms or parameters of lung inflammation in a subject in need of treatment of said lung inflammation.

前記１つ以上の臨床症状またはパラメータが、肺線維症、肺における炎症細胞浸潤、呼吸機能、および体重のうちの１つ以上から選択される、請求項６３に記載の方法。 64. The method of claim 63, wherein the one or more clinical symptoms or parameters are selected from one or more of pulmonary fibrosis, inflammatory cell infiltration in the lung, respiratory function, and body weight.

任意に、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４カ月間以上の期間にわたって測定されたときに、約または少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００％、またはそれ以上、前記肺の炎症の治療を必要とする対象において肺線維症を改善する、請求項６４に記載の方法。 Optionally, about 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, Or about or at least about 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, when measured over a period of 24 months or more. 65. The method of claim 64, which improves pulmonary fibrosis in a subject in need of treatment of inflammation of the lungs by 800, 900, 1000%, or more.

任意に、初期スコアと比較して、アッシュクロフトスコアが１、２、３、４、５、６、７、または８グレード低下する、アッシュクロフトスコアの低下によって測定されるように、前記肺の炎症の治療を必要とする対象における肺線維症を改善する、請求項６５に記載の方法。 Optionally, the inflammation of the lung, as measured by a decrease in Ashcroft score, which is a 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, or 8 grade decrease in Ashcroft score compared to the initial score. 66. The method of claim 65, which ameliorates pulmonary fibrosis in a subject in need of treatment.

任意に、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４カ月間以上の期間にわたって測定されたときに、約または少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００％、またはそれ以上、前記肺における炎症細胞浸潤を減少させる、請求項６４に記載の方法。 Optionally, about 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, Or about or at least about 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, when measured over a period of 24 months or more. 65. The method of claim 64, which reduces inflammatory cell infiltration in the lung by 800, 900, 1000% or more.

任意に、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４カ月間以上の期間にわたって測定されたときに、約または少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００％、またはそれ以上、呼吸機能を改善する、請求項６４に記載の方法。 Optionally, about 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, Or about or at least about 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, when measured over a period of 24 months or more. 65. The method of claim 64, which improves respiratory function by 800, 900, 1000%, or more.

前記改善した呼吸機能が、呼気時間の増加、吸気時間の増加、最大呼気流量の減少、最大吸気流量の減少、毎分呼吸量（ＲＭＶ）の減少、および呼吸数の減少のうちの１つ以上から選択される、請求項６８に記載の方法。 The improved respiratory function is one or more of increased expiratory time, increased inspiratory time, decreased maximum expiratory flow, decreased maximal inspiratory flow, decreased respiratory rate per minute (RMV), and decreased respiratory rate. 69. The method of claim 68, selected from:

（ａ）ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチド、または前記ＨＲＳポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチドと、
（ｂ）免疫調節剤と、を含む、患者ケアキット。 (A) a histidyl-tRNA synthetase (HRS) polypeptide, or an expressible polynucleotide encoding the HRS polypeptide;
(B) An immunomodulator, and a patient care kit.

（ａ）および（ｂ）が、別々の組成物中にあり、任意に、請求項１〜３１のいずれか１項に従って定義される、請求項７０に記載の患者ケアキット。 71. The patient care kit of claim 70, wherein (a) and (b) are in separate compositions, optionally defined according to any one of claims 1-31.

（ａ）および（ｂ）が、任意に、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の治療用組成物と同じ組成物中に存在する、請求項７０に記載の患者ケアキット。 71. The patient care kit of claim 70, wherein (a) and (b) are optionally present in the same composition as the therapeutic composition of any one of claims 1-31.

前記免疫調節剤が、ピルフェニドンまたはニンテダニブである、請求項７０〜７２のいずれか１項に記載の患者ケアキット。 73. The patient care kit of any one of claims 70-72, wherein the immunomodulator is pirfenidone or nintedanib.

前記ピルフェニドンが、約５０〜約１０００ｍｇの範囲である個々の投与量単位で、あるいは約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、もしくは１０００ｍｇ、約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、もしくは１０００ｍｇ以下、または少なくとも約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、もしくは１０００ｍｇの個々の投与量単位で、任意に、経口投与用の１つ、２つ、または３つのカプセルで、である、請求項７３に記載の患者ケアキット。 The pirfenidone is in individual dosage units ranging from about 50 to about 1000 mg, or about 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 10, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, or 1000 mg, about 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 10, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, or 1000 mg or less, or at least about 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230. , 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480. 490, 500, 10, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 74. The patient care kit of claim 73, or in individual dosage units of 1000 mg, optionally in one, two, or three capsules for oral administration.

前記ピルフェニドンが、約１００〜約４０００ｍｇ／日の範囲である１日投与量単位で、あるいは約１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００、３６００、３７００、３８００、３９００、もしくは４０００ｍｇ／日、約１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００、３６００、３７００、３８００、３９００、または４０００ｍｇ／日以下、または少なくとも約１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３１００、３２００、３３００、３４００、３５００、３６００、３７００、３８００、３９００、もしくは４０００ｍｇ／日で、任意に、経口投与用の約１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つのカプセルにおいて、である、請求項７３または７４に記載の患者ケアキット。 The pirfenidone is in a daily dosage unit ranging from about 100 to about 4000 mg/day, or about 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 10, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000, 1200, 1300, 1400, 1500, 1600, 1700, 1800, 2000, 2100, 2200, 2300, 2400, 2500, 2600, 2700, 2800, 2900, 3000, 3100, 3200, 3300, 3400, 3500, 3600, 3700, 3800, 3900, or 4000 mg/day, about 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 10, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000, 1200, 1300, 1400, 1500, 1600, 1700, 1800, 2000, 2100, 2200, 2300, 2400, 2500, 2600, 2700, 280 0, 2900, 3000, 3100, 3200, 3300, 3400, 3500, 3600, 3700, 3800, 3900, or 4000 mg/day or less, or at least about 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180. , 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430. 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 10, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680. , 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930. , 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000, 1200, 1300, 1400, 1500, 1600, 1700, 1800, 2000, 2100, 2200, 2300, 2400, 2500, 2600, 2700, 2800, 2900, 3000. 3100, 3200, 3300, 3400, 3500, 3600, 3700, 3800, 3900, or 4000 mg/day, optionally about 1, 2, 3, 4, 5, 6 for oral administration 75. The patient care kit of claim 73 or 74, wherein, 7, 8 and 9 capsules.

前記ピルフェニドンが、約８００ｍｇ（例えば８０１ｍｇ）の個々の投与量単位で、任意に、個々の投与量につき３つのカプセルとして服用される、経口投与用の３つの約２６７ｍｇのカプセルとして、である、請求項７３〜７５のいずれか１項に記載の患者ケアキット。 The pirfenidone is in individual dosage units of about 800 mg (eg 801 mg), optionally as three capsules of about 267 mg for oral administration, taken as three capsules per individual dose. Item 73. A patient care kit according to any one of items 73 to 75.

前記ピルフェニドンが、約２４００ｍｇ／日（例えば２４０３ｍｇ／日）の１日投与量単位で、任意に、個々の投与量につき３つのカプセルとして服用される、１日３回の経口投与用の９つの約２６７ｍｇのカプセルとして、である、請求項７６に記載の患者ケアキット。 The pirfenidone is taken in a daily dosage unit of about 2400 mg/day (eg 2403 mg/day), optionally in 9 capsules for oral administration three times daily, given as 3 capsules per individual dose. 77. The patient care kit of claim 76, as a 267 mg capsule.

前記ニンテダニブが、約１０〜約５００ｍｇの範囲である個々の投与量単位で、あるいは約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、もしくは５００ｍｇ、約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、もしくは５００ｍｇ以下、または少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、もしくは５００ｍｇの個々の投与量単位で、任意に、約１つ、２つ、または３つのカプセルで、である、請求項７０に記載の患者ケアキット。 The nintedanib is in individual dosage units ranging from about 10 to about 500 mg, or about 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, or 500 mg, about 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, or 500 mg or less, or at least about 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110. , 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360. 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, or 500 mg in individual dosage units, optionally about 1, 2, or 3 71. The patient care kit of claim 70, which is a capsule.

前記ニンテダニブが、約２０〜約１０００ｍｇ／日の範囲である１日投与量単位で、あるいは約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００ｍｇ／日、約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００ｍｇ／日以下、または少なくとも約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００ｍｇ／日の１日投与量単位で、任意に、約１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのカプセルで、である、請求項７０または７８に記載の患者ケアキット。 The nintedanib is in a daily dosage unit ranging from about 20 to about 1000 mg/day, or about 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000 mg/day, about 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140 , 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390. , 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640. , 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890. , 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000 mg/day or less, or at least about 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120. , 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370. 380, 390, 400, 410, 420, 430 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680. , 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930. , 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000 mg/day in daily dosage units, optionally in about 1, 2, 3, 4, 5, or 6 capsules, 79. A patient care kit according to claim 70 or 78.

前記ニンテダニブが、約１００〜１５０ｍｇの範囲である、または約２００〜３００ｍｇ／日の範囲である１日投与量単位で、任意に、１日１回または２回の投与量である、請求項７０または７８〜７９のいずれか１項に記載の患者ケアキット。 71. The nintedanib is in a daily dosage unit in the range of about 100-150 mg, or in the range of about 200-300 mg/day, optionally once or twice daily. Alternatively, the patient care kit according to any one of 78 to 79.

前記ニンテダニブが、約１００または１５０ｍｇの１日投与量単位、または約２００〜３００ｍｇ／日で、任意に、１日１回または２回の投与量である、請求項８０に記載の患者ケアキット。 81. The patient care kit of claim 80, wherein said nintedanib is a daily dosage unit of about 100 or 150 mg, or about 200-300 mg/day, optionally in one or two daily doses.

対象におけるＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドの１つ以上の薬物動態学的特徴を変化させる方法であって、前記対象に、前記ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチド、またはピルフェニドンと組み合わせて、前記ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチドを投与することを含む、方法。 A method of altering one or more pharmacokinetic characteristics of a HRS-Fc fusion polypeptide in a subject, said subject being in combination with said HRS-Fc fusion polypeptide, or pirfenidone. A method comprising administering an expressible polynucleotide encoding a peptide.

前記ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドが、表Ｈ８から選択される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる、請求項８２に記載の方法。 The HRS-Fc fusion polypeptide is at least 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100% identical to a sequence selected from Table H8. 83. The method of claim 82, comprising, consisting of, or consisting essentially of an amino acid sequence.

前記ＨＲＳポリペプチドが、配列番号１５７（Ｆｃ−ＨＲＳ（２〜６０）またはＨＲＳ^ＦＣ１）を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる、請求項８３に記載の方法。 The HRS polypeptide comprises or SEQ ID NO: 157 (Fc-HRS (2~60) or ^{HRS FC1),} or consist of consist or essentially method of claim 83.

肺の炎症の治療を必要とする対象においてそれを行う方法であって、前記対象に、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチド、または前記ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチドを投与することを含む、方法。 A method of doing so in a subject in need of treatment of lung inflammation, wherein said subject is administered an HRS-Fc fusion polypeptide or an expressible polynucleotide encoding said HRS-Fc fusion polypeptide. Including the method.

前記ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドが、表Ｈ８から選択される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる、請求項８５に記載の方法。 The HRS-Fc fusion polypeptide is at least 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100% identical to a sequence selected from Table H8. 86. The method of claim 85, comprising, consisting of, or consisting essentially of an amino acid sequence.

前記ＨＲＳポリペプチドが、配列番号１５７（Ｆｃ−ＨＲＳ（２〜６０）またはＨＲＳ^ＦＣ１）を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる、請求項８６に記載の方法。 The HRS polypeptide comprises or SEQ ID NO: 157 (Fc-HRS (2~60) or ^{HRS FC1),} or consist of consist or essentially method of claim 86.