JP2019501149A - チアメトキサムおよび共力剤を含む殺虫剤組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
−ネオニコチノイドファミリー由来の合成殺虫剤分子としてのチアメトキサムと、
−N,N−ジエチル−3−メチルベンズアミド(DEET)、3−[N−ブチル−N−アセチル]−アミノプロピオン酸、エチルエステル(IR3535(登録商標))およびそれらの混合物の中から選択される少なくとも1種の共力剤であって、チアメトキサムに対する前記共力剤のモル比が、0.001から0.2の間となって前記組成物中に存在する共力剤との組合せを含む殺虫剤組成物に関する。
昆虫ニューロンモデル
ゴキブリ背側不対正中(DUM)ニューロンで実験を実施した。ゴキブリニューロン調製物は、脊椎動物および無脊椎動物の生物医学的モデルとしてよく使用され、DUMニューロンはさらに、その自発活動電位の根底にある、それを調節するイオン電流および受容体の生物物理学的および薬理学的特性のほとんどが、周知のパッチクランプ技術を使用することによって確立されているので、電気生理学的におよび薬理学的に十分に特性決定されている。
ガラスカバースリップを備えたファルコン1006ペトリ皿を、ポリ−D−リジンヒドロブロミド(分子量70,000〜150,000)を用いてコーティングし、単離したDUMニューロン細胞体をプレーティングする。外部記録溶液は、(mMで):200NaCl、3.1KCl、5CaCl2、4MgCl2および10HEPESバッファーを含有し、pHは、NaOHを用いて7.4に調整する。細胞を、暗所で、10μMのフラ−2ペンタキス(pentakis)(アセトキシ−メチル)エステルとともに、37℃で60分間インキュベートする。ローディング後、細胞を生理食塩水中で3回洗浄する。次いで、ガラスカバースリップを、薬物適用を可能にする重力灌流システムに接続された記録チャンバー(Warner Instruments, Hamden, CT)中にマウントする。落射蛍光を備えた倒立顕微鏡(Nikon)を用いて画像処理実験を実施する。励起光は、75−W一体キセノンランプによって提供される。励起波長(340nmおよび380nm)は、デジタル電荷結合素子(CCD)カメラ(Hamamatsu Orca R2)を備えたコンピュータによって駆動されるモノクロメーター(Sutter Instruments Company, Lambda DG4)を使用して適用し、それらは、カルシウム画像処理ソフトウェア(Imaging Workbench 6, lndec BioSystem)を用いてコンピュータに記録される。340nmおよび380nmでの曝露時間は、通常、150msであり、画像を種々の周波数で集める。データは、発光蛍光の比(340nm/380nm)として表される。10−9M〜10−5Mの範囲の種々の濃度の昆虫忌避物質IR3535(登録商標)を試験した。
電気活性およびネオニコチノイド誘導性内向き電流を、それぞれ、電流固定および電位固定様式下で全細胞記録配置でパッチクランプ技術を使用して記録する。パッチクランプ電極を、P−97モデルプラーを使用してホウケイ酸ガラスキャピラリーチューブ(GC150T−10)から引く。パッチピペットは、内部ピペット溶液で充填された場合に1〜1.2MΩの範囲の抵抗を有する。細胞外および細胞内溶液間の液体接合部電位は、ギガオームシール(>3GΩ)の形成前に常に補正する。シグナルをAxopatch 200A増幅器を用いて記録する。チアメトキサムによって誘導されるイオン電流は、digidata獲得システム(digidata 1320A)に接続されたソフトウェア制御pClampを用いてコンピュータ上にディスプレイされる。単独で、およびIR3535(登録商標)(10−8M)を用いる前処理後に適用されたチアメトキサムの効果を測定するために、電位固定条件下で、DUMニューロン細胞体を、−50mVの電位を保持する定常状態で電位固定する。実験は室温で実施する。
1.1−昆虫ニューロンに対する昆虫忌避物質IR3535(登録商標)の用量依存効果
カルシウム画像処理を使用して、DUMニューロンにおける細胞内カルシウム濃度に対する昆虫忌避物質IR3535(登録商標)の効果を研究することが可能であった。IR3535(登録商標)のバス適用は、細胞内カルシウム濃度に対して複雑な多相用量依存効果を誘導する(図2を参照のこと)。
図2Aは、試験される種々の濃度のIR3535(登録商標)に左右される細胞内カルシウム濃度の変化を例示する用量反応曲線を示す。細胞内カルシウム濃度変動(340/380の比として提示される)は、試験された各IR3535(登録商標)濃度について得られた平均値から算出されている(n=5)。図2B〜Dは、それぞれ、10−8M、3.10−6Mおよび10−5Mで試験されたIR3535(登録商標)によって誘導される細胞内カルシウム濃度上昇のスペクトラムを表す。
細胞内カルシウム濃度上昇の起点(すなわち、細胞内および/または細胞外起点)を調べるために、カルシウムチャネルおよび膜受容体の種々の特異的遮断薬および/またはアンタゴニストを試験した。図3のヒストグラムは、カフェイン、ωコノトキシン(ω−ctx)およびピレンゼピン(PZP)などの種々の薬理学的物質の存在下での細胞内カルシウム濃度に対する、10−8M(図3A)および10−5M(図3B)で使用されたIR3535(登録商標)の比較効果を示す。
直前に提示されたデータから、10−8Mは、DUMニューロンにおける細胞内カルシウム濃度の有意な上昇をもたらすIR3535(登録商標)のより低い濃度であると思われる。結果として、10−8M IR3535(登録商標)を使用して以下の実験を実施した。全細胞記録配置においてパッチクランプ技術を使用して、IR3535(登録商標)(10−8M)が、自発活動電位放電周波数の増大と関連する有意な膜脱分極を誘導することを示すことが可能であった(図4A)。対応する図4Bは、自発活動電位放電周波数に対するIR3535(登録商標)(10−8M)の効果の比較ヒストグラムを例示する。
昆虫ニューロンに対する昆虫忌避物質DEETの用量依存効果
種々の濃度のDEETを用いて、実施例1と同様の実験を行った。
IR3535(登録商標)/チアメトキサム間に生じる共力作用
ネオニコチノイド殺虫剤チアメトキサムを、電位固定条件下で、パッチクランプ技術を使用して、DUMニューロンに対して、単独で、およびIR3535(登録商標)(10−8M)を用いる前処理後に試験した(図5)。
アセチルコリンを用いる前処理
10−3Mの濃度のアセチルコリンを1秒間DUMニューロンに適用し、3分後、実施例3と同一プロトコール下でDUMニューロンに対して10−7M、10−6Mおよび10−5Mのチアメトキサムを試験した。
Claims (12)
- 有効成分が、
−合成殺虫性分子としてのチアメトキサムと
−N,N−ジエチル−3−メチルベンズアミド(DEET)、3−[N−ブチル−N−アセチル]−アミノプロピオン酸、エチルエステル(IR3535(登録商標))およびそれらの混合物の中から選択される少なくとも1種の共力剤であって、チアメトキサムに対する前記共力剤のモル比が0.001から0.2の間となって組成物中に存在する共力剤との組合せを含む、殺虫剤組成物。 - 組成物中のチアメトキサムに対する前記共力剤のモル比が、0.005から0.1の間、好ましくは、0.01から0.1の間、より好ましくは、0.01から0.05の間に含まれる、請求項1に記載の殺虫剤組成物。
- チアメトキサムが、組成物中に10−7Mから3.10−6Mの間に含まれる濃度で存在する、請求項1または2に記載の殺虫剤組成物。
- N,N−ジエチル−3−メチルベンズアミド(DEET)が、組成物中に3.10−8Mから3.10−7Mの間に含まれる濃度で存在する、請求項1〜3のいずれか一項に記載の殺虫剤組成物。
- 3−[N−ブチル−N−アセチル]−アミノプロピオン酸、エチルエステル(IR3535(登録商標))が、組成物中に3.10−9Mから3.10−8Mの間に含まれる濃度で存在する、請求項1〜4のいずれか一項に記載の殺虫剤組成物。
- 液体形態であり、有効成分が、有機相に可溶化される、および/またはナノ−もしくはマイクロ−カプセル中にカプセル封入される、請求項1〜5のいずれか一項に記載の殺虫剤組成物。
- 前記組成物が、網、織物、布またはテントなどの支持体に散布される、または沈着される、または含浸する、請求項1〜6のいずれか一項に記載の殺虫剤組成物の使用。
- ヒトにとって、動物にとって、および/または作物にとって有害である昆虫、特に、群:双翅目、網翅目、鱗翅目、直翅目および半翅目から選択される昆虫に対する、請求項1から6のいずれかに記載の組成物の使用。
- ピレスロイド耐性蚊に対する、請求項8に記載の使用。
- カーバメートおよび/または有機リン酸殺虫剤に対して耐性である蚊に対する、請求項8に記載の使用。
- ネッタイシマカ(Aedes aegypti)またはガンビアハマダラカ(Anopheles gambiae)に対する、請求項8〜10のいずれか一項に記載の使用。
- 蚊媒介性疾患のコントロールにおける、請求項8〜11のいずれか一項に記載の使用。
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