JP2019500345A

JP2019500345A - Compositions and methods for the treatment of liver disease

Info

Publication number: JP2019500345A
Application number: JP2018529229A
Authority: JP
Inventors: アズナレズ，イザベル; エム．ナッシュ，ヒュー; ダブリュ．ホール，サミュエル; ジン，エンシュアン
Original assignee: コールドスプリングハーバーラボラトリー; ストークセラピューティクス，インク．
Priority date: 2015-12-14
Filing date: 2016-12-14
Publication date: 2019-01-10
Also published as: CA3005090A1; WO2017106283A1; EP3389672A4; EP3389672A1

Abstract

本明細書には、タンパク質の発現を増加するための、および、被験体、例えばタンパク質発現が不足している被験体または肝臓病の被験体を処置するための、方法と組成物が提供される。
【選択図】図１Provided herein are methods and compositions for increasing protein expression and for treating a subject, eg, a subject that is deficient in protein expression or a subject with liver disease. .
[Selection] Figure 1

Description

相互参照
本出願は、２０１５年１２月１４日出願の米国仮特許出願第６１／２６７，２３８号、および２０１６年４月６日出願の米国仮特許出願第６２／３１９，０１５号の利益を主張するものであり、該出願は参照によって本明細書に組み込まれる。配列リストへの言及 This application claims the benefit of US Provisional Patent Application 61 / 267,238, filed December 14, 2015, and US Provisional Patent Application 62 / 319,015, filed April 6, 2016. Which application is hereby incorporated by reference. Reference to sequence list

本出願は配列表を包含しており、これは、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介してＡＳＣＩＩフォーマットで提出され、その全体が引用により本明細書に組み込まれる。２０１６年１２月１２日に作成されたＡＳＣＩＩのコピーは、４７９９１−７１４＿６０１＿ＳＬ．ｔｘｔのファイル名であり、２４，３８５，３１４バイトのサイズである。前述のファイルは２０１６年１２月１２日に作成され、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。 This application includes a sequence listing, which is submitted in ASCII format via EFS-Web, which is incorporated herein by reference in its entirety. A copy of ASCII created on December 12, 2016 is 47991-714_601_SL. The file name is txt and has a size of 24,385,314 bytes. The aforementioned file was created on December 12, 2016, and is incorporated herein by reference in its entirety.

肝臓病は、推定死亡率が８０％の衰弱性で多くの場合致命的な疾病群である。肝臓は、限定されないが、血液から有害な毒素を取り除くこと、グルコースを放出すること、胆汁の生成、鉄分の貯蔵、および感染に対する抵抗を助けることを含む、身体の多くの機能にとって重要である。肝臓の機能不全は他の主要な器官の機能不全を引き起こし、最終的には死に至る。肝臓移植はしばしば死亡率を防ぐ一方で、ドナーの肝臓を受け取る見込みは一般に低い。 Liver disease is a debilitating and often fatal disease group with an estimated mortality rate of 80%. The liver is important for many functions of the body including, but not limited to, removing harmful toxins from the blood, releasing glucose, producing bile, storing iron, and helping to resist infection. Liver dysfunction causes dysfunction of other major organs and ultimately death. While liver transplantation often prevents mortality, the chances of receiving a donor's liver are generally low.

肝臓に関連する多くの疾患や疾病があるが、肝臓病の一部は、遺伝子の発現における欠失と同様に遺伝子産物における欠失によって進行することが分かっている。発現の増加により肝臓の疾患または疾病が恩恵を受けることができる遺伝子産物の例としては、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、およびＮＣＯＡ５が挙げられる。 Although there are many diseases and illnesses associated with the liver, some liver diseases are known to progress by deletions in gene products as well as deletions in gene expression. Examples of gene products that can benefit from liver disease or disease due to increased expression include AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1 , PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, and NCOA5.

１つの態様において、本明細書では、被験体の細胞により標的タンパク質または機能的ＲＮＡの発現を増加させることによって被験体の肝臓病を処置する方法が開示され、ここで、該細胞は、保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体）を有し、該ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体は、保持されたイントロン、５’スプライス部位に隣接しているエクソン、および３’スプライス部位に隣接しているエクソンを含み、ここで、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体は、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードし、該方法は、被験体の細胞を、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的なアンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）と接触させる工程を含み、それによって、保持されたイントロンは、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするＲＩＣｍＲＮＡ前駆体から構成的にスプライシングされ、それにより、被験体の細胞内で、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡのレベルを増加させ、標的タンパク質または機能的ＲＮＡの発現を増加させる。 In one aspect, disclosed herein is a method of treating liver disease in a subject by increasing the expression of a target protein or functional RNA by the subject's cells, wherein the cells are retained. An intron-containing mRNA precursor (RIC mRNA precursor), wherein the RIC mRNA precursor is a retained intron, an exon adjacent to the 5 ′ splice site, and an exon adjacent to the 3 ′ splice site. Wherein the RIC mRNA precursor encodes a target protein or functional RNA and the method complements the subject's cells with the target portion of the RIC mRNA precursor encoding the target protein or functional RNA. Contact with a typical antisense oligomer (ASO), whereby a retained intro Is constitutively spliced from a RIC mRNA precursor that encodes a target protein or functional RNA, thereby increasing the level of mRNA encoding the target protein or functional RNA in the cell of the subject, Or increase the expression of functional RNA.

いくつかの実施形態において、肝臓病は、グリシン脳症、ツェルヴェーガー症候群、ハイムラー（Ｈｅｉｍｌｅｒ）症候群、アデノシンデアミナーゼ欠損症、異型ポルフィリン症、晩発性皮膚ポルフィリン症、急性間欠性ポルフィリン症、超長鎖アシルＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損、ピルビン酸カルボキシラーゼ欠損症、イソ吉草酸血症、高カイロミクロン血症、高トリグリセリド血症、ガラクトース血症、高コレステロール血症、若年発症成人型１型糖尿病、若年発症成人型２型糖尿病、若年発症成人型３型糖尿病、非インスリン依存型糖尿病、インスリン依存性糖尿病１、インスリン依存性糖尿病２０、若年発症成人型糖尿病を伴うファンコーニ尿細管症候群４（Ｆａｌｃｏｎｉｒｅｎｏｔｕｂｕｌａｒｓｙｍｄｒｏｍｅ）、家族性高インスリン低血糖症３、永続的な新生児糖尿病、肝腺腫、ダウリング・デゴス病４、ＳＨＯＲＴ症候群、免疫不全症３６、無ガンマグロブリン血症７、脂質代謝欠失、肝臓炎症、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、血小板減少症、非アルコール性脂肪肝疾患、ウィルソン病、チロシン血症１型、アルギニノコハク酸リアーゼ欠損症、ヘモクロマトーシスＩ型、アルストレーム症候群、先天性の胆汁酸合成欠損症１、脂肪性肝炎、インシュリン抵抗性、耐糖能障害、ＩＩ型糖尿病、あるいは肝臓癌である。 In some embodiments, the liver disease is glycine encephalopathy, Zerveger syndrome, Heimler syndrome, adenosine deaminase deficiency, atypical porphyria, late cutaneous porphyria, acute intermittent porphyria, very long chain Acyl CoA dehydrogenase deficiency, pyruvate carboxylase deficiency, isovaleric acidemia, hyperchylomicronemia, hypertriglyceridemia, galactosemia, hypercholesterolemia, early-onset adult type 1 diabetes, early-onset adult type 2 Type diabetes mellitus, juvenile-onset adult type 3 diabetes mellitus, non-insulin-dependent diabetes mellitus, insulin-dependent diabetes mellitus 1, insulin-dependent diabetes mellitus 20, Fanconi tubular syndrome 4 with juvenile-onset adult type diabetes mellitus (Falconi renotubular syndrome), familial High Insulin hypoglycemia 3, persistent neonatal diabetes, hepatic adenoma, Dowling-Degos disease 4, SHORT syndrome, immunodeficiency 36, agammaglobulinemia 7, lipid metabolism deficiency, liver inflammation, hemochromatosis type 2B, Thrombocytopenia, non-alcoholic fatty liver disease, Wilson's disease, tyrosinemia type 1, argininosuccinate lyase deficiency, hemochromatosis type I, alstrom syndrome, congenital bile acid synthesis deficiency 1, steatohepatitis, Insulin resistance, impaired glucose tolerance, type II diabetes, or liver cancer.

１つの態様において、保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体）を有している細胞によって、標的タンパク質の発現を増加させる方法が本明細書で提供され、該ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体は、保持されたイントロン、保持されたイントロンの５’スプライス部位に隣接しているエクソン、および保持されたイントロンの３’スプライス部位に隣接しているエクソンを含み、ここで、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体は標的タンパク質をコードし、該方法は、細胞を、標的タンパク質をコードするＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的なアンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）と接触させる工程を含み、それによって、保持されたイントロンは、標的タンパク質をコードするＲＩＣｍＲＮＡ前駆体から構成的にスプライシングされ、それにより、細胞内で標的タンパク質をコードするｍＲＮＡのレベルを増加させ、標的タンパク質の発現を増加させ、ここで、標的タンパク質は、アミノメチルトランスフェラーゼ、アデノシンデアミナーゼ、プロトポルフィリノーゲン・オキシダーゼ、ウロポルフィリノーゲンデカルボキシラーゼ、ヒドロキシメチルビランシンターゼ、超長鎖アシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、ピルビン酸カルボキシラーゼイソバレリルCoA脱水素酵素、アポリポタンパク質Ａ−Ｖ、ガラクトース−１−リン酸ウリジリルトランスフェラーゼ、低密度リポタンパク質受容体アダプタータンパク質１、肝細胞核因子４−アルファ、グルコキナーゼ、肝性核因子−１−アルファアルブミン近位因子、Ｏグルコシルトランスフェラーゼ１、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ調節サブユニット１、Ｔｒｉｂｂｌｅｓ−１、形質転換増殖因子ベータ−１、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、トロンボポイエチン、パタチン様ホスホリパーゼドメイン含有タンパク質３、銅輸送ＡＴＰアーゼ２、フマリルアセトアセターゼ、アルギニノコハク酸リアーゼ、遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質、アルストレーム症候群タンパク質１，３−β−ヒドロキシステロイド脱水素酵素７型、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体デルタ、インターロイキン６、セラミド合成酵素２、あるいは核受容体コアクチベーター５である。 In one aspect, provided herein is a method for increasing expression of a target protein by a cell having a retained intron-containing mRNA precursor (RIC mRNA precursor), wherein the RIC mRNA precursor comprises: A retained intron, an exon adjacent to the 5 'splice site of the retained intron, and an exon adjacent to the 3' splice site of the retained intron, wherein the RIC mRNA precursor is a target protein Wherein the method comprises contacting the cell with an antisense oligomer (ASO) complementary to the target portion of the RIC mRNA precursor encoding the target protein, whereby the retained intron is the target Constitutive splicing from RIC mRNA precursors encoding proteins Thereby increasing the level of mRNA encoding the target protein in the cell and increasing the expression of the target protein, wherein the target protein comprises aminomethyltransferase, adenosine deaminase, protoporphyrinogen oxidase, uro Porphyrinogen decarboxylase, hydroxymethyl bilan synthase, ultra long chain acyl-CoA dehydrogenase, pyruvate carboxylase isovaleryl CoA dehydrogenase, apolipoprotein AV, galactose-1-phosphate uridylyltransferase, low density lipo Protein receptor adapter protein 1, hepatocyte nuclear factor 4-alpha, glucokinase, hepatic nuclear factor-1-alpha albumin proximal factor, O-glucosyltransferase 1, phosphatidyl Cytol 3-kinase regulatory subunit 1, Tribles-1, transforming growth factor beta-1, hemochromatosis type 2B, thrombopoietin, patatin-like phospholipase domain-containing protein 3, copper transport ATPase 2, fumaryl acetoacetase Argininosuccinate lyase, hereditary hemochromatosis protein, alstrem syndrome protein 1,3-β-hydroxysteroid dehydrogenase type 7, peroxisome proliferator-activated receptor delta, interleukin 6, ceramide synthase 2, or nucleus Receptor coactivator 5.

いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、アミノメチルトランスフェラーゼ、アデノシンデアミナーゼ、プロトポルフィリノーゲン・オキシダーゼ、ウロポルフィリノーゲンデカルボキシラーゼ、ヒドロキシメチルビランシンターゼ、超長鎖アシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、ピルビン酸カルボキシラーゼイソバレリルＣｏＡ脱水素酵素、アポリポタンパク質Ａ−Ｖ、ガラクトース−１−リン酸ウリジリルトランスフェラーゼ、低密度リポタンパク質受容体アダプタータンパク質１、肝細胞核因子４−アルファ、グルコキナーゼ、肝性核因子−１−アルファアルブミン近位因子、タンパク質Ｏグルコシルトランスフェラーゼ１、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ調節サブユニット１、Ｔｒｉｂｂｌｅｓ−１、形質転換増殖因子ベータ−１、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、トロンボポイエチン、パタチン様ホスホリパーゼドメイン含有タンパク質３、銅輸送ＡＴＰアーゼ２、フマリルアセトアセターゼ、アルギニノコハク酸リアーゼ、遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質、アルストレーム症候群タンパク質１，３−β−ヒドロキシステロイド脱水素酵素７型、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体デルタ、インターロイキン６、セラミド合成酵素２、あるいは核受容体コアクチベーター５である。 In some embodiments, the target protein is an aminomethyltransferase, adenosine deaminase, protoporphyrinogen oxidase, uroporphyrinogen decarboxylase, hydroxymethyl bilane synthase, very long chain acyl-CoA dehydrogenase, pyruvate carboxylase isovale. Ril CoA dehydrogenase, apolipoprotein AV, galactose-1-phosphate uridylyltransferase, low density lipoprotein receptor adapter protein 1, hepatocyte nuclear factor 4-alpha, glucokinase, hepatic nuclear factor-1- Alpha albumin proximal factor, protein O glucosyltransferase 1, phosphatidylinositol 3-kinase regulatory subunit 1, Tribles-1, transforming growth factor vector TA-1, hemochromatosis type 2B, thrombopoietin, patatin-like phospholipase domain-containing protein 3, copper transport ATPase 2, fumaryl acetoacetase, argininosuccinate lyase, hereditary hemochromatosis protein, alstrem syndrome protein 1 , 3-β-hydroxysteroid dehydrogenase type 7, peroxisome proliferator-activated receptor delta, interleukin 6, ceramide synthase 2, or nuclear receptor coactivator 5.

いくつかの実施形態において、標的タンパク質または機能的ＲＮＡは、被験体において量あるいは活性が不足している標的タンパク質あるいは機能的ＲＮＡを機能的に増大させるか、これに取って代わる、補償タンパク質あるいは補償機能的ＲＮＡである。 In some embodiments, the target protein or functional RNA is a compensation protein or compensation that functionally increases or replaces a target protein or functional RNA that is deficient in amount or activity in the subject. Functional RNA.

いくつかの実施形態では、細胞は、標的タンパク質の量または活性の不足によって引き起こされた疾病を有する被験体内にあるか、または被験体に由来する。 In some embodiments, the cell is in or derived from a subject having a disease caused by a lack of target protein amount or activity.

いくつかの実施形態では、標的タンパク質の量の不足は、標的タンパク質のハプロ不全によって引き起こされ、ここで被験体は、機能的な標的タンパク質をコードする第１の対立遺伝子、標的タンパク質が産生されない第２の対立遺伝子、または非機能的な標的タンパク質をコードする第２の対立遺伝子を有し、アンチセンスオリゴマーは、第１の対立遺伝子から転写されたＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分に結合する。 In some embodiments, the deficiency in the amount of the target protein is caused by a haploinsufficiency of the target protein, wherein the subject is the first allele that encodes a functional target protein, the target protein is not produced. Having two alleles or a second allele encoding a non-functional target protein, the antisense oligomer binds to the target portion of the RIC mRNA precursor transcribed from the first allele.

いくつかの実施形態において、被験体は、標的タンパク質の量または機能の不足に起因する障害により引き起こされた疾病を抱えており、ここで、被験体は、標的タンパク質が野生型対立遺伝子からの生成と比較して、減少したレベルで生成され、標的タンパク質が同等の野性型タンパク質と比較して機能が低下した形態で生成され、あるいは、標的タンパク質が生成されない、第１の変異対立遺伝子と、および、標的タンパク質が野生型対立遺伝子からの生成と比較して、減少したレベルで生成され、標的タンパク質が同等の野性型タンパク質と比較して、機能が低下した形態で生成され、あるいは、標的タンパク質が生成されない、第２の変異対立遺伝子とを有し、ここで、被験体が第１の変異対立遺伝子（ａ）（ｉｉｉ）を有するとき、第２の変異対立遺伝子は（ｂ）（ｉ）あるいは（ｂ）（ｉｉ）であり、ここで、被験体が第２の変異対立遺伝子（ｂ）（ｉｉｉ）を有するとき、第１の変異対立遺伝子は（ａ）（ｉ）あるいは（ａ）（ｉｉ）であり、ここで、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体は、（ａ）（ｉ）あるいは（ａ）（ｉｉ）である第１の変異対立遺伝子、および／または、（ｂ）（ｉ）あるいは（ｂ）（ｉｉ）である第２の変異対立遺伝子から転写される。 In some embodiments, the subject has a disease caused by a disorder caused by a lack of target protein amount or function, wherein the subject generates the target protein from a wild-type allele. A first mutant allele that is produced at a reduced level as compared to the target protein, wherein the target protein is produced in a reduced function compared to an equivalent wild type protein, or no target protein is produced, and The target protein is produced at a reduced level compared to the production from the wild type allele, the target protein is produced in a reduced function compared to the equivalent wild type protein, or the target protein is A second mutant allele that is not generated, wherein the subject has the first mutant allele (a) (iii) The second mutant allele is (b) (i) or (b) (ii), where the first mutant allele when the subject has the second mutant allele (b) (iii) The gene is (a) (i) or (a) (ii), wherein the RIC mRNA precursor is (a) (i) or (a) (ii) the first mutant allele, and Transcribed from the second mutant allele that is (b) (i) or (b) (ii).

いくつかの実施形態において、標的タンパク質は、同等の野性型タンパク質と比較して、機能が低下した形態で生成される。 In some embodiments, the target protein is produced in a reduced function compared to an equivalent wild type protein.

いくつかの実施形態において、標的タンパク質は、同等の野性型タンパク質と比較して、十分に機能的な形態で生成される。 In some embodiments, the target protein is produced in a fully functional form as compared to an equivalent wild type protein.

いくつかの実施形態において、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対して＋６〜保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して−１６までの領域内の保持されたイントロンにある。 In some embodiments, the target portion of the RIC mRNA precursor is retained within a region from +6 to the retained intron 5 ′ splice site to −16 to the retained intron 3 ′ splice site. Is in the intron.

いくつかの実施形態において、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対して＋６９〜保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して−７９までの領域内の保持されたイントロンにある。 In some embodiments, the target portion of the RIC mRNA precursor is retained within the region from +69 to the retained intron 5 'splice site to -79 to the retained intron 3' splice site. Is in the intron.

いくつかの実施形態において、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、以下の内部の保持されたイントロンにある：保持されたイントロンの５’スプライス部位に対する、＋６から＋１００の領域；あるいは、保持されたイントロンの３’スプライス部位に対する、−１６から−１００の領域。 In some embodiments, the target portion of the RIC mRNA precursor is in the following internal retained intron: the +6 to +100 region to the retained intron 5 ′ splice site; or the retained intron -16 to -100 region relative to the 3 'splice site.

いくつかの実施形態において、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、以下の内部にある：保持されたイントロンの５’スプライス部位に隣接するエクソン中の＋２ｅ〜−４ｅの領域；あるいは、保持されたイントロンの３’スプライス部位に隣接するエクソン中の＋２ｅ〜−４ｅの領域。 In some embodiments, the target portion of the RIC mRNA precursor is within: a region from + 2e to −4e in the exon adjacent to the 5 ′ splice site of the retained intron; or the retained intron The region from + 2e to -4e in the exon adjacent to the 3 'splice site.

いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーは、少なくとも１つの保持されたイントロンの５’スプライス部位の約５００ヌクレオチド下流から、少なくとも１つの保持されたイントロンの３’スプライス部位の約５００ヌクレオチド上流までの領域内にあるＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の一部を標的とする。 In some embodiments, the antisense oligomer is from about 500 nucleotides downstream of the 5 ′ splice site of at least one retained intron to about 500 nucleotides upstream of the 3 ′ splice site of at least one retained intron. Targets a portion of the RIC mRNA precursor within the region.

いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーは、少なくとも１つの保持されたイントロンの５’スプライス部位の約１００ヌクレオチド下流から、少なくとも１つの保持されたイントロンの３’スプライス部位の約１００ヌクレオチド上流までの領域内にあるＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の一部を標的とする。 In some embodiments, the antisense oligomers are from about 100 nucleotides downstream of the 5 ′ splice site of at least one retained intron to about 100 nucleotides upstream of the 3 ′ splice site of at least one retained intron. Targets a portion of the RIC mRNA precursor within the region.

いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、（ａ）ＡＭＴ、（ｂ）ＡＤＡ、（ｃ）ＰＰＯＸ、（ｄ）ＵＲＯＤ、（ｅ）ＨＭＢＳ、（ｆ）ＡＣＡＤＶＬ、（ｇ）ＰＣ、（ｈ）ＩＶＤ、（ｉ）ＡＰＯＡ５、（ｊ）ＧＡＬＴ、（ｋ）ＬＤＬＲＡＰ１、（ｌ）ＨＮＦ４Ａ、（ｍ）ＧＣＫ、（ｎ）ＰＯＧＬＵＴ１、（ｏ）ＰＩＫ３Ｒ１、（ｐ）ＨＮＦ１Ａ、（ｑ）ＴＲＩＢ１、（ｒ）ＴＧＦＢ１、（ｓ）ＨＡＭＰ、（ｔ）ＴＨＰＯ、（ｕ）ＰＮＰＬＡ３、（ｖ）ＡＴＰ７Ｂ、（ｗ）ＦＡＨ、（ｘ）ＡＳＬ、（ｙ）ＨＦＥ、（ｚ）ＡＬＭＳ１、（ａａ）ＰＰＡＲＤ、（ｂｂ）ＩＬ６、（ｃｃ）ＨＳＤ３Ｂ７、（ｄｄ）ＣＥＲＳ２、または（ｅｅ）ＮＣＯＡ５である。 In some embodiments, the target protein is (a) AMT, (b) ADA, (c) PPOX, (d) UROD, (e) HMBS, (f) ACADVL, (g) PC, (h) IVD (I) APOA5, (j) GALT, (k) LDLRAP1, (l) HNF4A, (m) GCK, (n) POGLUT1, (o) PIK3R1, (p) HNF1A, (q) TRIB1, (r) TGFB1 (S) HAMP, (t) THPO, (u) PNPLA3, (v) ATP7B, (w) FAH, (x) ASL, (y) HFE, (z) ALMS1, (aa) PPARD, (bb) IL6 , (Cc) HSD3B7, (dd) CERS2, or (ee) NCOA5.

いくつかの実施形態では、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ２８１３−３９１０のいずれか１つ、（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ６５８４７−６７２８１のいずれか１つ、（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ１９００−２５９９のいずれか１つ、（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ９２６−１７７９のいずれか１つ、（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ３７４８３−３８０４４のいずれか１つ、（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ４９４２３−４９９６９のいずれか１つ、（ｇ）ＳＥＱＩＤＮＯ３５９００−３６２９２のいずれか１つ、（ｈ）ＳＥＱＩＤＮＯ４４６２６−４７０１３のいずれか１つ、（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ３６２９３−３７４８２のいずれか１つ、（ｊ）ＳＥＱＩＤＮＯ３４５２１−３５８９９のいずれか１つ、（ｋ）ＳＥＱＩＤＮＯ１３１−９２５のいずれか１つ、（ｌ）ＳＥＱＩＤＮＯ５８９５８−６５８４６、あるいは６７５３２−７７３７４のいずれか１つ、（ｍ）ＳＥＱＩＤＮＯ２５０５８−３０９７６のいずれか１つ、（ｎ）ＳＥＱＩＤＮＯ３９１１−５２６４のいずれか１つ、（ｏ）ＳＥＱＩＤＮＯ１４４７３−１４８７６のいずれか１つ、（ｐ）ＳＥＱＩＤＮＯ３８０４５−４２１０５のいずれか１つ、（ｑ）ＳＥＱＩＤＮＯ３２４６９−３４５２０のいずれか１つ、（ｒ）ＳＥＱＩＤＮＯ５１９７２−５２０２５のいずれか１つ、（ｓ）ＳＥＱＩＤＮＯ５１６７０−５１９７１のいずれか１つ、（ｔ）ＳＥＱＩＤＮＯ５２６５−１４４７２のいずれか１つ、（ｕ）ＳＥＱＩＤＮＯ７７３７５−７８３４８のいずれか１つ、（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ４２１０６−４４３７０のいずれか１つ、（ｗ）ＳＥＱＩＤＮＯ４４３７１−４４６２５のいずれか１つ、（ｘ）ＳＥＱＩＤＮＯ３０９７７−３２４６８のいずれか１つ、（ｙ）ＳＥＱＩＤＮＯ２１８１０−２３４８５のいずれか１つ、（ｚ）ＳＥＱＩＤＮＯ２６００−２８１２のいずれか１つ、（ａａ）ＳＥＱＩＤＮＯ１４８７７−２１８０９のいずれか１つ、（ｂｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ２３４８６−２５０５７のいずれか１つ、（ｃｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ４７０１４−４９４２２のいずれか１つ、（ｄｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ１７８０−１８９９のいずれか１つ、またはＳＥＱＩＤＮＯ６７２８２−６７５３１のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または１００％相補的な配列を含む。 In some embodiments, the target portion of the RIC mRNA precursor is (a) any one of SEQ ID NO 2813-3910, (b) any one of SEQ ID NO 65847-67281, (c) the SEQ ID. Any one of NO 1900-2599, (d) any one of SEQ ID NO 926-1779, (e) any one of SEQ ID NO 37483-38044, (f) SEQ ID NO 49423-49969 Any one, (g) any one of SEQ ID NO 35900-36292, (h) any one of SEQ ID NO 44626-47013, (i) any one of SEQ ID NO 36293-37482, (J) any one of SEQ ID NOs 34521-35899, ( ) Any one of SEQ ID NO 131-925, (l) any one of SEQ ID NO 58958-65846, or 67532-77374, (m) any one of SEQ ID NO 25058-30976, (n ) Any one of SEQ ID NO 3911-5264, (o) any one of SEQ ID NO 14473-14876, (p) any one of SEQ ID NO 38045-42105, (q) SEQ ID NO 32469 Any one of -34520, (r) any one of SEQ ID NO 51972-52025, (s) any one of SEQ ID NO 51670-51971, (t) any of SEQ ID NO 5265-14472 One, (u) SEQ ID NO 773 Any one of 5-78348, (v) any one of SEQ ID NO 42106-44370, (w) any one of SEQ ID NO 44371-44625, (x) any of SEQ ID NO 30977-32468 Or (y) any one of SEQ ID NO 21810-23485, (z) any one of SEQ ID NO 2600-2812, (aa) any one of SEQ ID NO 14877-21809, ( bb) any one of SEQ ID NO 23486-25057, (cc) any one of SEQ ID NO 47014-49422, (dd) any one of SEQ ID NO 1780-1899, or SEQ ID NO 67282 At least for any one of 67531 Also include sequences that are approximately 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, or 100% complementary.

いくつかの実施形態では、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４８３、７８４６５、または７８４３４；（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３８５、７８４８２、または７８３６９；（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４６１、７８４７３、７８４８０、または７８４２１；（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４１０、７８３８６、７８４１１、７８４６０、または７８４６３；（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３５５、７８４６７、または７８４５４；（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３６７、７８３７６、７８４４０、７８４４８、７８４７７、７８４８５、７８４９６、７８４２２、または７８４１２；（ｇ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４９５、（ｈ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４６４、７８３７５、または７８３８０；（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４０７、７８４９９、７８４２０、７８３７２、または７８３９７；（ｊ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４８９、７８４１６、７８４７６、７８３５２、７８４３５、７８４９３、７８４２３、７８４３７、または７８４４９；（ｋ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３５４、または７８４５９；（ｌ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４４１、７８３９２、７８４５６、７８４２８、７８４９１、７８５０１、７８３６０、７８４２９、７８３５８、７８３６４、７８４７５、７８３９１、７８４７９、７８４０１、７８３７３、または７８４５０；（ｍ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４４５、７８４８１、７８３７９、７８４３１、７８４６９、７８４０８、７８３７７、７８４１７、７８３８７、７８４５５、７８４８４、または７８３７０；（ｎ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３６８、７８３５０、７８４３２、７８４３９、または７８３８９；（ｏ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３９０、またはＳＥＱＩＤＮＯ７８４１８、（ｐ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４６２、７８４６８、７８４５３、７８３６１、７８３６３、７８４３３、７８４３８、７８４３０、７８４８８、７８４０５、７８４９２、または７８４２７；（ｑ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４８７、７８４８６、または７８４７４；（ｒ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４５８、（ｓ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４９７、または７８４２６；（ｔ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４２５、７８４００、７８３９３、７８３５１、７８３８１、７８３６６、７８４５７、７８４４３、７８３６２、または７８４４６；（ｕ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３８８、７８４０２、７８４７１、または７８３５６；（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４２７、７８３８３、７８４４４、または７８３９４；（ｗ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３８２；（ｘ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４９４、７８４０４、７８３７１、７８３６５、または７８３５３；（ｙ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４１９、７８３８４、７８５００、７８４２４、または７８４６６；（ｚ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３９９、（ａａ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４１４、７８４７８、７８４７２、７８３５９、７８３９５、７８３５７、７８３７４、または７８４９０；（ｂｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４３６、７８４１３、７８４１５、７８３９８、または７８４０３；（ｃｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３４９、７８４７０、７８４９８、７８４０６、７８４４２、７８４５１、７８３９６、７８４０９、または７８３７８；（ｄｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４４７；またはＳＥＱＩＤＮＯ７８４５２の少なくとも８つの隣接する核酸を含む領域に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または１００％の配列同一性を備えた配列を含む。 In some embodiments, the target portion of the RIC mRNA precursor is (a) SEQ ID NO 78483, 78465, or 78434; (b) SEQ ID NO 78385, 78482, or 78369; (c) SEQ ID NO 78461, 78d, 78480, or 78421; (d) SEQ ID NO 78410, 78386, 78411, 78460, or 78463; (e) SEQ ID NO 78355, 78467, or 78454; (f) SEQ ID NO 78367, 78376, 78440, 78448 78477, 78485, 78496, 78422, or 78412; (g) SEQ ID NO 78495, (h) SEQ ID NO 78464, 78375, or 78380; i) SEQ ID NO 78407, 78499, 78420, 78372, or 78397; (j) SEQ ID NO 78489, 78416, 78476, 78352, 78435, 78493, 78423, 78437, or 78449; (k) SEQ ID NO 78354, or (L) SEQ ID NO 78441, 78392, 78456, 78428, 78491, 78501, 78360, 78429, 78358, 78364, 78475, 78391, 78479, 78401, 78373, or 78450; (m) SEQ ID NO 78445, 78481 78379, 78431, 78469, 78408, 78377, 78417, 78387, 78455, 78484, or 7 8370; (n) SEQ ID NO 78368, 78350, 78432, 78439, or 78389; (o) SEQ ID NO 78390, or SEQ ID NO 78418, (p) SEQ ID NO 78462, 78468, 78453, 78361, 78363, 78433 , 78438, 78430, 78488, 78405, 78492, or 78427; (q) SEQ ID NO 78487, 78486, or 78474; (r) SEQ ID NO 78458, (s) SEQ ID NO 78497, or 78426; (t) SEQ ID NO 78425, 78400, 78393, 78351, 78381, 78366, 78457, 78443, 78362, or 78446; (u) SEQ D NO 78388, 78402, 78471, or 78356; (v) SEQ ID NO 78427, 78383, 78444, or 78394; (w) SEQ ID NO 78382; (x) SEQ ID NO 78494, 78404, 78371, 78365, or 78353 (Y) SEQ ID NO 78419, 78384, 78500, 78424, or 78466; (z) SEQ ID NO 78399, (aa) SEQ ID NO 78414, 78478, 78472, 78359, 78395, 78357, 78374, or 78490; bb) SEQ ID NO 78436, 78413, 78415, 78398, or 78403; (cc) SEQ ID NO 78349, 78470, 7 498, 78406, 78442, 78451, 78396, 78409, or 78378; (dd) SEQ ID NO 78447; or SEQ ID NO 78452 to at least 80%, 85%, 90% of the region containing adjacent nucleic acids. Includes sequences with%, 95%, 97%, or 100% sequence identity.

いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ２８１３−３９１０のいずれか１つ、（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ６５８４７−６７２８１のいずれか１つ、（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ１９００−２５９９のいずれか１つ、（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ９２６−１７７９のいずれか１つ、（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ３７４８３−３８０４４のいずれか１つ、（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ４９４２３−４９９６９のいずれか１つ、（ｇ）ＳＥＱＩＤＮＯ３５９００−３６２９２のいずれか１つ、（ｈ）ＳＥＱＩＤＮＯ４４６２６−４７０１３のいずれか１つ、（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ３６２９３−３７４８２のいずれか１つ、（ｊ）ＳＥＱＩＤＮＯ３４５２１−３５８９９のいずれか１つ、（ｋ）ＳＥＱＩＤＮＯ１３１−９２５のいずれか１つ、（ｌ）ＳＥＱＩＤＮＯ５８９５８−６５８４６、あるいは６７５３２−７７３７４のいずれか１つ、（ｍ）ＳＥＱＩＤＮＯ２５０５８−３０９７６のいずれか１つ、（ｎ）ＳＥＱＩＤＮＯ３９１１−５２６４のいずれか１つ、（ｏ）ＳＥＱＩＤＮＯ１４４７３−１４８７６のいずれか１つ、（ｐ）ＳＥＱＩＤＮＯ３８０４５−４２１０５のいずれか１つ、（ｑ）ＳＥＱＩＤＮＯ３２４６９−３４５２０のいずれか１つ、（ｒ）ＳＥＱＩＤＮＯ５１９７２−５２０２５のいずれか１つ、（ｓ）ＳＥＱＩＤＮＯ５１６７０−５１９７１のいずれか１つ、（ｔ）ＳＥＱＩＤＮＯ５２６５−１４４７２のいずれか１つ、（ｕ）ＳＥＱＩＤＮＯ７７３７５−７８３４８のいずれか１つ、（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ４２１０６−４４３７０のいずれか１つ、（ｗ）ＳＥＱＩＤＮＯ４４３７１−４４６２５のいずれか１つ、（ｘ）ＳＥＱＩＤＮＯ３０９７７−３２４６８のいずれか１つ、（ｙ）ＳＥＱＩＤＮＯ２１８１０−２３４８５のいずれか１つ、（ｚ）ＳＥＱＩＤＮＯ２６００−２８１２のいずれか１つ、（ａａ）ＳＥＱＩＤＮＯ１４８７７−２１８０９のいずれか１つ、（ｂｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ２３４８６−２５０５７のいずれか１つ、（ｃｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ４７０１４−４９４２２のいずれか１つ、（ｄｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ１７８０−１８９９のいずれか１つ、またはＳＥＱＩＤＮＯ６７２８２−６７５３１のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または１００％の配列同一性を備えた配列を含む。 In some embodiments, the ASO is either (a) any one of SEQ ID NO 2813-3910, (b) any one of SEQ ID NO 65847-67281, (c) any of SEQ ID NO 1900-2599. (D) any one of SEQ ID NO 926-1779, (e) any one of SEQ ID NO 37483-38044, (f) any one of SEQ ID NO 49423-49969, ( g) any one of SEQ ID NO 35900-36292, (h) any one of SEQ ID NO 44626-47013, (i) any one of SEQ ID NO 36293-37482, (j) SEQ ID NO Any one of 34521-35899, (k) SEQ ID NO 13 Any one of 1-925, (l) any one of SEQ ID NO 58958-65846, or 67532-77374, (m) any one of SEQ ID NO 25058-30976, (n) SEQ ID NO Any one of 3911-5264, (o) any one of SEQ ID NO 14473-14476, (p) any one of SEQ ID NO 384045-42105, (q) any of SEQ ID NO 32469-34520 Any one of (r) SEQ ID NO 51972-52025, (s) any one of SEQ ID NO 51670-5197, (t) any one of SEQ ID NO 5265-14472, ( u) Any of SEQ ID NO 77775-78348 (V) any one of SEQ ID NO 42106-44370, (w) any one of SEQ ID NO 44371-44625, (x) any one of SEQ ID NO 30977-32468, (y) Any one of SEQ ID NO 21810-23485, (z) any one of SEQ ID NO 2600-2812, (aa) any one of SEQ ID NO 14877-21809, (bb) SEQ ID NO 23486- Any one of 25057, (cc) any one of SEQ ID NOs 47014-49422, (dd) any one of SEQ ID NOs 1780-1899, or any one of SEQ ID NOs 67282-67531 In contrast, at least about 80%, 85%, 90 Comprises a sequence having 95%, 97%, or 100% sequence identity.

いくつかの実施形態では、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体は、（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ４１−４４、（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ２８１２１−１２４、（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ３７または３８、（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ３３または３４、（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ９２−９５、（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ１０９−１１２、（ｇ）ＳＥＱＩＤＮＯ８７−８９、（ｈ）ＳＥＱＩＤＮＯ１０４または１０５、（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ９０または９１、（ｊ）ＳＥＱＩＤＮＯ８５または８６、（ｋ）ＳＥＱＩＤＮＯ３２、（ｌ）ＳＥＱＩＤＮＯ１１５−１２０、あるいは１２６−１２９、（ｍ）ＳＥＱＩＤＮＯ７６−７８、（ｎ）ＳＥＱＩＤＮＯ４５または４６、（ｏ）ＳＥＱＩＤＮＯ５７−６０、（ｐ）ＳＥＱＩＤＮＯ９６または９７、（ｑ）ＳＥＱＩＤＮＯ８３または８４、（ｒ）ＳＥＱＩＤＮＯ１１４、（ｓ）ＳＥＱＩＤＮＯ２２３、（ｔ）ＳＥＱＩＤＮＯ４７−５６、（ｕ）ＳＥＱＩＤＮＯ１３０、（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ９８−１０２、（ｗ）ＳＥＱＩＤＮＯ１０３、（ｘ）ＳＥＱＩＤＮＯ８０−８２、（ｙ）ＳＥＱＩＤＮＯ６６−７３、（ｚ）ＳＥＱＩＤＮＯ３９、（ａａ）ＳＥＱＩＤＮＯ６１−６５、（ｂｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ７４または７５、（ｃｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ１０６−１０８、（ｄｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ３５または３６、あるいはＳＥＱＩＤＮＯ１２５のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を備えた配列を含む。 In some embodiments, the RIC mRNA precursor is (a) SEQ ID NO 41-44, (b) SEQ ID NO 28 121-124, (c) SEQ ID NO 37 or 38, (d) SEQ ID NO 33 or 34, (e) SEQ ID NO 92-95, (f) SEQ ID NO 109-112, (g) SEQ ID NO 87-89, (h) SEQ ID NO 104 or 105, (i) SEQ ID NO 90 or 91, (j) SEQ ID NO 85 or 86, (k) SEQ ID NO 32, (l) SEQ ID NO 115-120, or 126-129, (m) SEQ ID NO 76-78, (n) SEQ ID NO 45 or 46, (o) SEQ ID NO 57-60, (p) SEQ I NO 96 or 97, (q) SEQ ID NO 83 or 84, (r) SEQ ID NO 114, (s) SEQ ID NO 223, (t) SEQ ID NO 47-56, (u) SEQ ID NO 130, ( v) SEQ ID NO 98-102, (w) SEQ ID NO 103, (x) SEQ ID NO 80-82, (y) SEQ ID NO 66-73, (z) SEQ ID NO 39, (aa) SEQ ID At least for any one of NO 61-65, (bb) SEQ ID NO 74 or 75, (cc) SEQ ID NO 106-108, (dd) SEQ ID NO 35 or 36, or SEQ ID NO 125 About 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, Comprises a sequence having 100% sequence identity.

いくつかの実施形態では、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体は、（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ６、（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ２８、（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ４、（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ２、（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ１９、（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ２５、（ｇ）ＳＥＱＩＤＮＯ１７、（ｈ）ＳＥＱＩＤＮＯ２３、（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ１８、（ｊ）ＳＥＱＩＤＮＯ１６、（ｋ）ＳＥＱＩＤＮＯ１、（ｌ）ＳＥＱＩＤＮＯ３０、（ｍ）ＳＥＱＩＤＮＯ１３、（ｎ）ＳＥＱＩＤＮＯ７、（ｏ）ＳＥＱＩＤＮＯ９、（ｐ）ＳＥＱＩＤＮＯ２０、（ｑ）ＳＥＱＩＤＮＯ１５、（ｒ）ＳＥＱＩＤＮＯ２７、（ｓ）ＳＥＱＩＤＮＯ２６、（ｔ）ＳＥＱＩＤＮＯ８、（ｕ）ＳＥＱＩＤＮＯ３１、（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ２１、（ｗ）ＳＥＱＩＤＮＯ２２、（ｘ）ＳＥＱＩＤＮＯ１４、（ｙ）ＳＥＱＩＤＮＯ１１、（ｚ）ＳＥＱＩＤＮＯ５、（ａａ）ＳＥＱＩＤＮＯ１０、（ｂｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ１２、（ｃｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ２４、（ｄｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ３、または（ｅｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ２９に対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を備えた遺伝子配列によってコードされる。 In some embodiments, the RIC mRNA precursor is (a) SEQ ID NO 6, (b) SEQ ID NO 28, (c) SEQ ID NO 4, (d) SEQ ID NO 2, (e) SEQ ID. NO 19, (f) SEQ ID NO 25, (g) SEQ ID NO 17, (h) SEQ ID NO 23, (i) SEQ ID NO 18, (j) SEQ ID NO 16, (k) SEQ ID NO 1 (L) SEQ ID NO 30, (m) SEQ ID NO 13, (n) SEQ ID NO 7, (o) SEQ ID NO 9, (p) SEQ ID NO 20, (q) SEQ ID NO 15, ( r) SEQ ID NO 27, (s) SEQ ID NO 26, (t) SEQ ID NO 8, (u) SEQ ID NO 31, v) SEQ ID NO 21, (w) SEQ ID NO 22, (x) SEQ ID NO 14, (y) SEQ ID NO 11, (z) SEQ ID NO 5, (aa) SEQ ID NO 10, (bb) For SEQ ID NO 12, (cc) SEQ ID NO 24, (dd) SEQ ID NO 3, or (ee) SEQ ID NO 29, at least about 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, It is encoded by a gene sequence with 97%, 98%, 99%, or 100% sequence identity.

いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーは、機能的ＲＮＡまたは標的タンパク質をコードする遺伝子から転写されたｍＲＮＡ前駆体の選択的スプライシングを調節することにより、標的タンパク質または機能的ＲＮＡの量を増加させない。 In some embodiments, the antisense oligomer does not increase the amount of the target protein or functional RNA by modulating alternative splicing of the mRNA precursor transcribed from the gene encoding the functional RNA or target protein. .

いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーは、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードする遺伝子の突然変異に起因する異常なスプライシングを調節することにより、標的タンパク質または機能的ＲＮＡの量を増加させない。 In some embodiments, the antisense oligomer does not increase the amount of target protein or functional RNA by modulating aberrant splicing due to mutations in the gene encoding the target protein or functional RNA.

いくつかの実施形態において、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体は、全長のｍＲＮＡ前駆体の部分的なスプライシング、または野生型のｍＲＮＡ前駆体の部分的なスプライシングによって生成された。 In some embodiments, RIC mRNA precursors were generated by partial splicing of full-length mRNA precursors or partial splicing of wild-type mRNA precursors.

いくつかの実施形態において、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡは、全長の成熟ｍＲＮＡ、あるいは野生型の成熟ｍＲＮＡである。 In some embodiments, the mRNA encoding the target protein or functional RNA is a full length mature mRNA or a wild type mature mRNA.

いくつかの実施形態において、生成された標的タンパク質は全長のタンパク質あるいは野生型のタンパク質である。 In some embodiments, the generated target protein is a full-length protein or a wild-type protein.

いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーと接触させた細胞において生成された標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡの総量は、対照細胞において生成された標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡの総量と比較して、約１．１〜約１０倍、約１．５〜約１０倍、約２〜約１０倍、約３〜約１０倍、約４〜約１０倍、約１．１〜約５倍、約１．１〜約６倍、約１．１〜約７倍、約１．１〜約８倍、約１．１〜約９倍、約２〜約５倍、約２〜約６倍、約２〜約７倍、約２〜約８倍、約２〜約９倍、約３〜約６倍、約３〜約７倍、約３〜約８倍、約３〜約９倍、約４〜約７倍、約４〜約８倍、約４〜約９倍、少なくとも約１．１倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、あるいは少なくとも約１０倍増加する。 In some embodiments, the total amount of mRNA encoding the target protein or functional RNA produced in the cell contacted with the antisense oligomer is the amount of mRNA encoding the target protein or functional RNA produced in the control cell. About 1.1 to about 10 times, about 1.5 to about 10 times, about 2 to about 10 times, about 3 to about 10 times, about 4 to about 10 times, about 1.1 to about the total amount About 5 times, about 1.1 to about 6 times, about 1.1 to about 7 times, about 1.1 to about 8 times, about 1.1 to about 9 times, about 2 to about 5 times, about 2 to about About 6 times, about 2 to about 7 times, about 2 to about 8 times, about 2 to about 9 times, about 3 to about 6 times, about 3 to about 7 times, about 3 to about 8 times, about 3 to about 9 times, about 4 to about 7 times, about 4 to about 8 times, about 4 to about 9 times, at least about 1.1 times, at least about 1.5 times, at least about 2 times, at least about 2. Fold, at least about 3-fold, at least about 3.5 fold, at least about 4-fold, at least about 5-fold, or increased by at least about 10-fold.

いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーと接触させた細胞によって生成された標的タンパク質の総量は、対照細胞によって生成された標的タンパク質の総量と比較して、約１．１〜約１０倍、約１．５〜約１０倍、約２〜約１０倍、約３〜約１０倍、約４〜約１０倍、約１．１〜約５倍、約１．１〜約６倍、約１．１〜約７倍、約１．１〜約８倍、約１．１〜約９倍、約２〜約５倍、約２〜約６倍、約２〜約７倍、約２〜約８倍、約２〜約９倍、約３〜約６倍、約３〜約７倍、約３〜約８倍、約３〜約９倍、約４〜約７倍、約４〜約８倍、約４〜約９倍、少なくとも約１．１倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、あるいは少なくとも約１０倍増加する。 In some embodiments, the total amount of target protein produced by the cells contacted with the antisense oligomer is about 1.1 to about 10 times, about 1.1 to about 10 times the total amount of target protein produced by the control cells. 1.5 to about 10 times, about 2 to about 10 times, about 3 to about 10 times, about 4 to about 10 times, about 1.1 to about 5 times, about 1.1 to about 6 times, about 1. 1 to about 7 times, about 1.1 to about 8 times, about 1.1 to about 9 times, about 2 to about 5 times, about 2 to about 6 times, about 2 to about 7 times, about 2 to about 8 Times, about 2 to about 9 times, about 3 to about 6 times, about 3 to about 7 times, about 3 to about 8 times, about 3 to about 9 times, about 4 to about 7 times, about 4 to about 8 times About 4 to about 9 times, at least about 1.1 times, at least about 1.5 times, at least about 2 times, at least about 2.5 times, at least about 3 times, at least about 3.5 times, at least about 4 times At least about Times, or increased by at least about 10-fold.

いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーは、ホスホロチオエート結合またはホスホロジアミデート結合を含む骨格修飾を含む。 In some embodiments, the antisense oligomer comprises a backbone modification that includes a phosphorothioate linkage or a phosphorodiamidate linkage.

いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーはホスホロジアミデートモルホリノ、ロックド核酸、ペプチド核酸、２’−Ｏ−メチル、２’−フルオロ、あるいは２’−Ｏ−メトキシエチル部分を含む。 In some embodiments, the antisense oligomer comprises a phosphorodiamidate morpholino, locked nucleic acid, peptide nucleic acid, 2'-O-methyl, 2'-fluoro, or 2'-O-methoxyethyl moiety.

いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーは少なくとも１つの修飾された糖部を含む。 In some embodiments, the antisense oligomer comprises at least one modified sugar moiety.

いくつかの実施形態において、それぞれの糖部は修飾された糖部である。 In some embodiments, each sugar moiety is a modified sugar moiety.

いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーは、８〜５０の核酸塩基、８〜４０の核酸塩基、８〜３５の核酸塩基、８〜３０の核酸塩基、８〜２５の核酸塩基、８〜２０の核酸塩基、８〜１５の核酸塩基、９〜５０の核酸塩基、９〜４０の核酸塩基、９〜３５の核酸塩基、９〜３０の核酸塩基、９〜２５の核酸塩基、９〜２０の核酸塩基、９〜１５の核酸塩基、１０〜５０の核酸塩基、１０〜４０の核酸塩基、１０〜３５の核酸塩基、１０〜３０の核酸塩基、１０〜２５の核酸塩基、１０〜２０の核酸塩基、１０〜１５の核酸塩基、１１〜５０の核酸塩基、１１〜４０の核酸塩基、１１〜３５の核酸塩基、１１〜３０の核酸塩基、１１〜２５の核酸塩基、１１〜２０の核酸塩基、１１〜１５の核酸塩基、１２〜５０の核酸塩基、１２〜４０の核酸塩基、１２〜３５の核酸塩基、１２〜３０の核酸塩基、１２〜２５の核酸塩基、１２〜２０の核酸塩基、あるいは１２〜１５の核酸塩基からなる。 In some embodiments, the antisense oligomer comprises 8-50 nucleobases, 8-40 nucleobases, 8-35 nucleobases, 8-30 nucleobases, 8-25 nucleobases, 8-20 Nucleobases, 8-15 nucleobases, 9-50 nucleobases, 9-40 nucleobases, 9-35 nucleobases, 9-30 nucleobases, 9-25 nucleobases, 9-20 Nucleobase, 9-15 nucleobase, 10-50 nucleobase, 10-40 nucleobase, 10-35 nucleobase, 10-30 nucleobase, 10-25 nucleobase, 10-20 nucleic acid Bases, 10-15 nucleobases, 11-50 nucleobases, 11-40 nucleobases, 11-35 nucleobases, 11-30 nucleobases, 11-25 nucleobases, 11-20 nucleobases 11-15 nucleobases, 12-50 nucleobases, 40 nucleobases, nucleobase of 12 to 35, nucleic acid bases 12-30 consist of nucleobases 12-25, 12-20 nucleobases or 12-15 nucleobases.

いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーは、タンパク質をコードするＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、あるいは１００％相補的である。 In some embodiments, the antisense oligomer is at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, at least 99%, or 100 at the target portion of the protein-encoding RIC mRNA precursor. % Complementary.

いくつかの実施形態において、細胞は、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードする遺伝子から転写されたＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の集団を含み、ここで、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の集団は２つ以上の保持されたイントロンを含み、および、ここで、アンチセンスオリゴマーは、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の集団で最も豊富な保持されたイントロンに結合する。 In some embodiments, the cell comprises a population of RIC mRNA precursors transcribed from a gene encoding a target protein or functional RNA, wherein the populations of RIC mRNA precursors are retained in two or more. Introns, where antisense oligomers bind to the most abundant retained introns in the population of RIC mRNA precursors.

いくつかの実施形態において、最も豊富な保持されたイントロンに対するアンチセンスオリゴマーの結合は、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡを生成するＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の集団からの２つ以上の保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘発する。 In some embodiments, the binding of the antisense oligomer to the most abundant retained intron is retained by two or more from a population of RIC mRNA precursors that generate mRNA encoding the target protein or functional RNA. Induces intron splicing out.

いくつかの実施形態において、細胞は、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードする遺伝子から転写されたＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の集団を含み、ここで、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の集団は２つ以上の保持されたイントロンを含み、および、ここで、アンチセンスオリゴマーは、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の集団で２番目に豊富な保持されたイントロンに結合する。 In some embodiments, the cell comprises a population of RIC mRNA precursors transcribed from a gene encoding a target protein or functional RNA, wherein the populations of RIC mRNA precursors are retained in two or more. Introns, where antisense oligomers bind to the second most abundant retained intron in the population of RIC mRNA precursors.

いくつかの実施形態において、２番目に豊富な保持されたイントロンに対するアンチセンスオリゴマーの結合は、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡを生成するＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の集団からの２つ以上の保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘発する。 In some embodiments, the binding of the antisense oligomer to the second most abundant retained intron is the retention of two or more from a population of RIC mRNA precursors that generate mRNA encoding the target protein or functional RNA. Induces splicing out of introns.

いくつかの実施形態では、疾病は疾患または障害である。 In some embodiments, the disease is a disease or disorder.

いくつかの実施形態において、疾患または障害は肝臓病である。 In some embodiments, the disease or disorder is liver disease.

いくつかの実施形態では、標的タンパク質およびＲＩＣｍＲＮＡ前駆体は遺伝子によってコードされ、遺伝子は、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５が挙げられる。 In some embodiments, the target protein and RIC mRNA precursor are encoded by a gene that is AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1 , PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5.

いくつかの実施形態において、当該方法はタンパク質発現を評価する工程をさらに含む。 In some embodiments, the method further comprises assessing protein expression.

いくつかの実施形態では、被験体はヒトである。 In some embodiments, the subject is a human.

いくつかの実施形態では、被験体はヒト以外の動物である。 In some embodiments, the subject is a non-human animal.

いくつかの実施形態において、被験体は胎児、胚、あるいは子供である。 In some embodiments, the subject is a fetus, embryo, or child.

いくつかの実施形態では、細胞はエクスビボである。 In some embodiments, the cell is ex vivo.

いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーは、被験体の腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射、あるいは静脈内注射によって投与される。 In some embodiments, the antisense oligomer is administered by intraperitoneal injection, intramuscular injection, subcutaneous injection, or intravenous injection of the subject.

いくつかの実施形態において、５’スプライス部位に隣接するエクソンの−３ｅ〜−１ｅと、保持されたイントロンの＋１〜＋６にある９つのヌクレオチドは、対応する野性型配列と同一である。 In some embodiments, the nine nucleotides in the exons −3e to −1e and the retained introns +1 to +6 adjacent to the 5 ′ splice site are identical to the corresponding wild type sequence.

いくつかの実施形態において、保持されたイントロンの−１５〜−１と３’スプライス部位に隣接するエクソンの＋１ｅにある１６のヌクレオチドは、対応する野性型配列と同一である。 In some embodiments, the 16 nucleotides in + 1e of the exon adjacent to the -15 to -1 and 3 'splice sites of the retained intron are identical to the corresponding wild type sequence.

１つの態様では、本明細書に記載された方法で使用されるようなアンチセンスオリゴマーが本明細書で提供される。 In one aspect, provided herein are antisense oligomers as used in the methods described herein.

１つの態様では、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３１−７８３４８のいずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一性を備えた配列を含むアンチセンスオリゴマーが本明細書で提供される。 In one aspect, at least about 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100% of any one of SEQ ID NOs: 131-78348 Provided herein are antisense oligomers comprising sequences with sequence identity.

１つの態様では、本明細書に記載されたアンチセンスオリゴマーと賦形剤を含む医薬組成物が本明細書に提供される。 In one aspect, provided herein is a pharmaceutical composition comprising an antisense oligomer described herein and an excipient.

１つの態様では、腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射、あるいは静脈内注射によって本明細書に記載された医薬組成物を投与することにより、被験体を処置する方法が本明細書に提供される。 In one aspect, provided herein is a method of treating a subject by administering a pharmaceutical composition described herein by intraperitoneal injection, intramuscular injection, subcutaneous injection, or intravenous injection. The

１つの態様において、本明細書には、不足しているタンパク質または不足している機能的ＲＮＡに関連付けられる被験体の肝臓病を処置するために細胞によって標的タンパク質または機能的ＲＮＡの発現を増加させる方法で使用するためのアンチセンスオリゴマーを含む組成物が開示され、ここで、不足しているタンパク質または機能的ＲＮＡは、被験体において量あるいは活性が不足しており、ここで、アンチセンスオリゴマーは、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードする、保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体）の構成的のスプライシングを増強し、ここで、標的タンパク質は：不足しているタンパク質；あるいは、被験体において不足しているタンパク質を機能的に増大させるか、これに取って代わる、補償タンパク質であり、ここで、機能的ＲＮＡは：不足しているＲＮＡ；あるいは、被験体の不足している機能的ＲＮＡを機能的に増大させるか、これに取って代わる、補償機能的ＲＮＡであり、ここでＲＩＣｍＲＮＡ前駆体は、保持されたイントロン、５’スプライス部位に隣接しているエクソン、および３’スプライス部位に隣接しているエクソンを含み、保持されたイントロンは、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするＲＩＣｍＲＮＡ前駆体からスプライシングされ、それによって、被験体において標的タンパク質または機能的ＲＮＡの産生または活性を増加させる。 In one embodiment, the present specification increases the expression of a target protein or functional RNA by a cell to treat liver disease in a subject associated with the deficient protein or deficient functional RNA. Disclosed are compositions comprising an antisense oligomer for use in a method, wherein the deficient protein or functional RNA is deficient in amount or activity in the subject, wherein the antisense oligomer is Enhance constitutive splicing of retained intron-containing mRNA precursors (RIC mRNA precursors) that encode target proteins or functional RNAs, where the target protein is: a deficient protein; or a test Functionally increase or take up protein deficiencies in the body Compensating protein, where functional RNA is: deficient RNA; or functionally augmenting or replacing the deficient functional RNA of the subject RNA, where the RIC mRNA precursor comprises a retained intron, an exon adjacent to the 5 ′ splice site, and an exon adjacent to the 3 ′ splice site, wherein the retained intron is a target protein Or spliced from a RIC mRNA precursor encoding a functional RNA, thereby increasing the production or activity of the target protein or functional RNA in the subject.

１つの態様において、被験体において標的タンパク質に関係する疾病を処置する方法に使用するためのアンチセンスオリゴマーを含む組成物が本明細書で提供され、該方法は、被験体の細胞によって標的タンパク質の発現を増加させる工程を含み、ここで、細胞は、保持されたイントロン、保持されたイントロンの５’スプライス部位に隣接しているエクソン、および保持されたイントロンの３’スプライス部位に隣接しているエクソンを含む、保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体）を有し、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体は、標的タンパク質をコードし、該方法は、細胞をアンチセンスオリゴマーと接触させる工程を含み、それによって、保持されたイントロンは、標的タンパク質をコードするＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の転写産物から構成的にスプライシングされ、それにより、被験体の細胞内で、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡのレベルを増加させ、標的タンパク質の発現を増加させる。 In one embodiment, provided herein is a composition comprising an antisense oligomer for use in a method of treating a disease associated with a target protein in a subject, the method comprising: Increasing expression, wherein the cell is adjacent to the retained intron, the exon adjacent to the retained intron 5 'splice site, and the retained intron 3' splice site. Having a retained intron-containing mRNA precursor (RIC mRNA precursor) comprising an exon, wherein the RIC mRNA precursor encodes a target protein, the method comprising contacting the cell with an antisense oligomer; Thereby, the retained intron is in front of the RIC mRNA encoding the target protein. Constitutively spliced from transcripts of the body, whereby, in cells of a subject, increasing the level of mRNA encoding a target protein or functional RNA, increasing the expression of the target protein.

いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーは、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対して＋６から、保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して−１６までの領域内の保持されたイントロンにあるＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の一部を標的とする。 In some embodiments, the antisense oligomer is a retained intron in a region from +6 to the retained intron 5 ′ splice site to −16 to the retained intron 3 ′ splice site. Targets a portion of the RIC mRNA precursor in

いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーはＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の一部を標的とし、これは、以下の内部の保持されたイントロンにある：保持されたイントロンの５’スプライス部位に対する、＋６から＋１００の領域；あるいは、保持されたイントロンの３’スプライス部位に対する−１６から−１００の領域。 In some embodiments, the antisense oligomer targets a portion of the RIC mRNA precursor, which is in the internal retained intron: +6 to +100 to the 5 ′ splice site of the retained intron. Or a region from -16 to -100 relative to the 3 'splice site of the retained intron.

いくつかの実施形態において、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ２８１３−３９１０のいずれか１つ、（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ６５８４７−６７２８１のいずれか１つ、（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ１９００−２５９９のいずれか１つ、（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ９２６−１７７９のいずれか１つ、（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ３７４８３−３８０４４のいずれか１つ、（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ４９４２３−４９９６９のいずれか１つ、（ｇ）ＳＥＱＩＤＮＯ３５９００−３６２９２のいずれか１つ、（ｈ）ＳＥＱＩＤＮＯ４４６２６−４７０１３のいずれか１つ、（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ３６２９３−３７４８２のいずれか１つ、（ｊ）ＳＥＱＩＤＮＯ３４５２１−３５８９９のいずれか１つ、（ｋ）ＳＥＱＩＤＮＯ１３１−９２５のいずれか１つ、（ｌ）ＳＥＱＩＤＮＯ５８９５８−６５８４６、あるいは６７５３２−７７３７４のいずれか１つ、（ｍ）ＳＥＱＩＤＮＯ２５０５８−３０９７６のいずれか１つ、（ｎ）ＳＥＱＩＤＮＯ３９１１−５２６４のいずれか１つ、（ｏ）ＳＥＱＩＤＮＯ１４４７３−１４８７６のいずれか１つ、（ｐ）ＳＥＱＩＤＮＯ３８０４５−４２１０５のいずれか１つ、（ｑ）ＳＥＱＩＤＮＯ３２４６９−３４５２０のいずれか１つ、（ｒ）ＳＥＱＩＤＮＯ５１９７２−５２０２５のいずれか１つ、（ｓ）ＳＥＱＩＤＮＯ５１６７０−５１９７１のいずれか１つ、（ｔ）ＳＥＱＩＤＮＯ５２６５−１４４７２のいずれか１つ、（ｕ）ＳＥＱＩＤＮＯ７７３７５−７８３４８のいずれか１つ、（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ４２１０６−４４３７０のいずれか１つ、（ｗ）ＳＥＱＩＤＮＯ４４３７１−４４６２５のいずれか１つ、（ｘ）ＳＥＱＩＤＮＯ３０９７７−３２４６８のいずれか１つ、（ｙ）ＳＥＱＩＤＮＯ２１８１０−２３４８５のいずれか１つ、（ｚ）ＳＥＱＩＤＮＯ２６００−２８１２のいずれか１つ、（ａａ）ＳＥＱＩＤＮＯ１４８７７−２１８０９のいずれか１つ、（ｂｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ２３４８６−２５０５７のいずれか１つ、（ｃｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ４７０１４−４９４２２のいずれか１つ、（ｄｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ１７８０−１８９９のいずれか１つ、またはＳＥＱＩＤＮＯ６７２８２−６７５３１のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％相補的な配列を含む。 In some embodiments, the target portion of the RIC mRNA precursor is (a) any one of SEQ ID NO 2813-3910, (b) any one of SEQ ID NO 65847-67281, (c) the SEQ ID. Any one of NO 1900-2599, (d) any one of SEQ ID NO 926-1779, (e) any one of SEQ ID NO 37483-38044, (f) SEQ ID NO 49423-49969 Any one, (g) any one of SEQ ID NO 35900-36292, (h) any one of SEQ ID NO 44626-47013, (i) any one of SEQ ID NO 36293-37482, (J) Any one of SEQ ID NOs 34521-35899 (K) any one of SEQ ID NO 131-925, (l) any one of SEQ ID NO 58958-65846, or 67532-77374, (m) any one of SEQ ID NO 25058-30976, (N) any one of SEQ ID NO 3911-5264, (o) any one of SEQ ID NO 14473-14476, (p) any one of SEQ ID NO 38045-42105, (q) SEQ ID Any one of NO 32469-34520, (r) any one of SEQ ID NO 51972-52025, (s) any one of SEQ ID NO 51670-5197, (t) SEQ ID NO 5265-14472 Any one, (u) SEQ ID NO 7 Any one of 375-78348, (v) any one of SEQ ID NO 42106-44370, (w) any one of SEQ ID NO 44371-44625, (x) any of SEQ ID NO 30977-32468 Or (y) any one of SEQ ID NO 21810-23485, (z) any one of SEQ ID NO 2600-2812, (aa) any one of SEQ ID NO 14877-21809, ( bb) any one of SEQ ID NO 23486-25057, (cc) any one of SEQ ID NO 47014-49422, (dd) any one of SEQ ID NO 1780-1899, or SEQ ID NO 67282 Less than any one of 67531 It contains at least about 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100% complementary sequences.

いくつかの実施形態では、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４８３、７８４６５、または７８４３４；（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３８５、７８４８２、または７８３６９；（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４６１、７８４７３、７８４８０、または７８４２１；（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４１０、７８３８６、７８４１１、７８４６０、または７８４６３；（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３５５、７８４６７、または７８４５４；（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３６７、７８３７６、７８４４０、７８４４８、７８４７７、７８４８５、７８４９６、７８４２２、または７８４１２；（ｇ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４９５、（ｈ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４６４、７８３７５、または７８３８０；（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４０７、７８４９９、７８４２０、７８３７２、または７８３９７；（ｊ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４８９、７８４１６、７８４７６、７８３５２、７８４３５、７８４９３、７８４２３、７８４３７、または７８４４９；（ｋ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３５４、または７８４５９；（ｌ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４４１、７８３９２、７８４５６、７８４２８、７８４９１、７８５０１、７８３６０、７８４２９、７８３５８、７８３６４、７８４７５、７８３９１、７８４７９、７８４０１、７８３７３、または７８４５０；（ｍ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４４５、７８４８１、７８３７９、７８４３１、７８４６９、７８４０８、７８３７７、７８４１７、７８３８７、７８４５５、７８４８４、または７８３７０；（ｎ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３６８、７８３５０、７８４３２、７８４３９、または７８３８９；（ｏ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３９０、またはＳＥＱＩＤＮＯ７８４１８、（ｐ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４６２、７８４６８、７８４５３、７８３６１、７８３６３、７８４３３、７８４３８、７８４３０、７８４８８、７８４０５、７８４９２、または７８４２７；（ｑ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４８７、７８４８６、または７８４７４；（ｒ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４５８、（ｓ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４９７、または７８４２６；（ｔ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４２５、７８４００、７８３９３、７８３５１、７８３８１、７８３６６、７８４５７、７８４４３、７８３６２、または７８４４６；（ｕ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３８８、７８４０２、７８４７１、または７８３５６；（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４２７、７８３８３、７８４４４、または７８３９４；（ｗ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３８２；（ｘ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４９４、７８４０４、７８３７１、７８３６５、または７８３５３；（ｙ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４１９、７８３８４、７８５００、７８４２４、または７８４６６；（ｚ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３９９、（ａａ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４１４、７８４７８、７８４７２、７８３５９、７８３９５、７８３５７、７８３７４、または７８４９０；（ｂｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４３６、７８４１３、７８４１５、７８３９８、または７８４０３；（ｃｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３４９、７８４７０、７８４９８、７８４０６、７８４４２、７８４５１、７８３９６、７８４０９、または７８３７８；（ｄｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４４７；またはＳＥＱＩＤＮＯ７８４５２の少なくとも８つの隣接する核酸を含む領域に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を備えた配列を含む。 In some embodiments, the target portion of the RIC mRNA precursor is (a) SEQ ID NO 78483, 78465, or 78434; (b) SEQ ID NO 78385, 78482, or 78369; (c) SEQ ID NO 78461, 78d, 78480, or 78421; (d) SEQ ID NO 78410, 78386, 78411, 78460, or 78463; (e) SEQ ID NO 78355, 78467, or 78454; (f) SEQ ID NO 78367, 78376, 78440, 78448 78477, 78485, 78496, 78422, or 78412; (g) SEQ ID NO 78495, (h) SEQ ID NO 78464, 78375, or 78380; i) SEQ ID NO 78407, 78499, 78420, 78372, or 78397; (j) SEQ ID NO 78489, 78416, 78476, 78352, 78435, 78493, 78423, 78437, or 78449; (k) SEQ ID NO 78354, or (L) SEQ ID NO 78441, 78392, 78456, 78428, 78491, 78501, 78360, 78429, 78358, 78364, 78475, 78391, 78479, 78401, 78373, or 78450; (m) SEQ ID NO 78445, 78481 78379, 78431, 78469, 78408, 78377, 78417, 78387, 78455, 78484, or 7 8370; (n) SEQ ID NO 78368, 78350, 78432, 78439, or 78389; (o) SEQ ID NO 78390, or SEQ ID NO 78418, (p) SEQ ID NO 78462, 78468, 78453, 78361, 78363, 78433 , 78438, 78430, 78488, 78405, 78492, or 78427; (q) SEQ ID NO 78487, 78486, or 78474; (r) SEQ ID NO 78458, (s) SEQ ID NO 78497, or 78426; (t) SEQ ID NO 78425, 78400, 78393, 78351, 78381, 78366, 78457, 78443, 78362, or 78446; (u) SEQ D NO 78388, 78402, 78471, or 78356; (v) SEQ ID NO 78427, 78383, 78444, or 78394; (w) SEQ ID NO 78382; (x) SEQ ID NO 78494, 78404, 78371, 78365, or 78353 (Y) SEQ ID NO 78419, 78384, 78500, 78424, or 78466; (z) SEQ ID NO 78399, (aa) SEQ ID NO 78414, 78478, 78472, 78359, 78395, 78357, 78374, or 78490; bb) SEQ ID NO 78436, 78413, 78415, 78398, or 78403; (cc) SEQ ID NO 78349, 78470, 7 498, 78406, 78442, 78451, 78396, 78409, or 78378; (dd) SEQ ID NO 78447; or SEQ ID NO 78452 to at least 80%, 85%, 90% of the region containing adjacent nucleic acids. Includes sequences with%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100% sequence identity.

いくつかの実施形態において、ＡＳＯは、（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ２８１３−３９１０のいずれか１つ、（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ６５８４７−６７２８１のいずれか１つ、（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ１９００−２５９９のいずれか１つ、（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ９２６−１７７９のいずれか１つ、（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ３７４８３−３８０４４のいずれか１つ、（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ４９４２３−４９９６９のいずれか１つ、（ｇ）ＳＥＱＩＤＮＯ３５９００−３６２９２のいずれか１つ、（ｈ）ＳＥＱＩＤＮＯ４４６２６−４７０１３のいずれか１つ、（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ３６２９３−３７４８２のいずれか１つ、（ｊ）ＳＥＱＩＤＮＯ３４５２１−３５８９９のいずれか１つ、（ｋ）ＳＥＱＩＤＮＯ１３１−９２５のいずれか１つ、（ｌ）ＳＥＱＩＤＮＯ５８９５８−６５８４６、あるいは６７５３２−７７３７４のいずれか１つ、（ｍ）ＳＥＱＩＤＮＯ２５０５８−３０９７６のいずれか１つ、（ｎ）ＳＥＱＩＤＮＯ３９１１−５２６４のいずれか１つ、（ｏ）ＳＥＱＩＤＮＯ１４４７３−１４８７６のいずれか１つ、（ｐ）ＳＥＱＩＤＮＯ３８０４５−４２１０５のいずれか１つ、（ｑ）ＳＥＱＩＤＮＯ３２４６９−３４５２０のいずれか１つ、（ｒ）ＳＥＱＩＤＮＯ５１９７２−５２０２５のいずれか１つ、（ｓ）ＳＥＱＩＤＮＯ５１６７０−５１９７１のいずれか１つ、（ｔ）ＳＥＱＩＤＮＯ５２６５−１４４７２のいずれか１つ、（ｕ）ＳＥＱＩＤＮＯ７７３７５−７８３４８のいずれか１つ、（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ４２１０６−４４３７０のいずれか１つ、（ｗ）ＳＥＱＩＤＮＯ４４３７１−４４６２５のいずれか１つ、（ｘ）ＳＥＱＩＤＮＯ３０９７７−３２４６８のいずれか１つ、（ｙ）ＳＥＱＩＤＮＯ２１８１０−２３４８５のいずれか１つ、（ｚ）ＳＥＱＩＤＮＯ２６００−２８１２のいずれか１つ、（ａａ）ＳＥＱＩＤＮＯ１４８７７−２１８０９のいずれか１つ、（ｂｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ２３４８６−２５０５７のいずれか１つ、（ｃｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ４７０１４−４９４２２のいずれか１つ、（ｄｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ１７８０−１８９９のいずれか１つ、またはＳＥＱＩＤＮＯ６７２８２−６７５３１のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を備えた配列を含む。 In some embodiments, the ASO is any one of (a) any of SEQ ID NO 2813-3910, (b) any one of SEQ ID NO 65847-67281, (c) any of SEQ ID NO 1900-2599. (D) any one of SEQ ID NO 926-1779, (e) any one of SEQ ID NO 37483-38044, (f) any one of SEQ ID NO 49423-49969, ( g) any one of SEQ ID NO 35900-36292, (h) any one of SEQ ID NO 44626-47013, (i) any one of SEQ ID NO 36293-37482, (j) SEQ ID NO Any one of 34521-35899, (k) SEQ ID NO Any one of 131-925, (l) any one of SEQ ID NO 58958-65846, or 67532-77374, (m) any one of SEQ ID NO 25058-30976, (n) SEQ ID NO Any one of 3911-5264, (o) any one of SEQ ID NO 14473-14476, (p) any one of SEQ ID NO 384045-42105, (q) any of SEQ ID NO 32469-34520 Any one of (r) SEQ ID NO 51972-52025, (s) any one of SEQ ID NO 51670-5197, (t) any one of SEQ ID NO 5265-14472, ( u) Any of SEQ ID NO 77375-78348 (V) any one of SEQ ID NO 42106-44370, (w) any one of SEQ ID NO 44371-44625, (x) any one of SEQ ID NO 30977-32468, ( y) any one of SEQ ID NO 21810-23485, (z) any one of SEQ ID NO 2600-2812, (aa) any one of SEQ ID NO 14877-21809, (bb) SEQ ID NO Any one of 23486-25057, any one of (cc) SEQ ID NO 47014-49422, (dd) any one of SEQ ID NO 1780-1899, or any one of SEQ ID NO 67282-67531 At least about 80%, 85%, 0%, 95%, 96%, 97%, 98%, comprising a sequence having 99% or 100% sequence identity.

いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードする遺伝子から転写されたｍＲＮＡ前駆体の選択的スプライシングを調節することにより標的タンパク質または機能的ＲＮＡの量を増加させない。 In some embodiments, the antisense oligomer does not increase the amount of target protein or functional RNA by modulating alternative splicing of the mRNA precursor transcribed from the gene encoding the target protein or functional RNA.

いくつかの実施形態において、アンチセンスオリゴマーは、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードする遺伝子の突然変異に起因する異常なスプライシングを調節することにより、機能的ＲＮＡまたは機能的タンパク質の量を増加させない。 In some embodiments, antisense oligomers do not increase the amount of functional RNA or functional protein by modulating aberrant splicing due to mutations in the gene encoding the target protein or functional RNA.

いくつかの実施形態において、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体は、全長のｍＲＮＡ前駆体、または野生型のｍＲＮＡ前駆体の部分的なスプライシングによって生成された。 In some embodiments, RIC mRNA precursors were generated by partial splicing of full-length mRNA precursors or wild-type mRNA precursors.

いくつかの実施形態において、保持されたイントロンは律速イントロンである。 In some embodiments, the retained intron is a rate limiting intron.

いくつかの実施形態において、前記保持されたイントロンは前記ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体で最も豊富な保持されたイントロンである。 In some embodiments, the retained intron is the most abundant retained intron of the RIC mRNA precursor.

いくつかの実施形態において、保持されたイントロンは前記ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体で２番目に豊富な保持されたイントロンである。 In some embodiments, the retained intron is the second most abundant retained intron in the RIC mRNA precursor.

いくつかの実施形態では、前記アンチセンスオリゴマーはアンチセンスオリゴヌクレオチドである。 In some embodiments, the antisense oligomer is an antisense oligonucleotide.

１つの態様では、本明細書に記載された組成物のいずれかのアンチセンスオリゴマーと賦形剤を含む医薬組成物が本明細書に提供される。 In one aspect, provided herein is a pharmaceutical composition comprising an antisense oligomer and an excipient of any of the compositions described herein.

１つの態様において、以下を含む医薬組成物が本明細書で提供される：不足しているＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡ転写産物の標的配列にハイブリダイズするアンチセンスオリゴマーであって、不足しているＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５ｍＲＮＡ転写産物が、保持されたイントロンを含み、アンチセンスオリゴマーが、不足しているＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５転写産物から保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘発する、アンチセンスオリゴマーと、薬学的に許容可能な賦形剤。 In one aspect, provided herein is a pharmaceutical composition comprising: a deficient AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, Antisense oligomers that hybridize to the target sequence of POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5 AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3 1, an HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5 mRNA transcript contains a retained intron, and an antisense oligomer, Missing AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, TP Intron splicing out from ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5 transcripts The induced, the antisense oligomer, a pharmaceutically acceptable excipient.

いくつかの実施形態において、不足しているＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡ転写産物は、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のＲＩＣｍＲＮＡ前駆体転写産物である。 In some embodiments, the missing AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO , PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5 mRNA transcripts are AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1 , HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, H E, it is a ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or RIC mRNA precursor transcripts NCOA5,.

いくつかの実施形態において、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のＲＩＣｍＲＮＡ前駆体転写産物の標的部分は、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対して＋５００〜保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して−５００の領域内で保持されたイントロン中にある。 In some embodiments, AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, TPLB3 , FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5 RIC mRNA precursor transcript target portion is +500 to the retained intron of the retained intron. It is in an intron retained within the region of -500 relative to the 3 'splice site.

幾つかの実施形態では、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の転写産物は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１−３１のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する遺伝子配列によってコードされる。 In some embodiments, AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO3, TPLB3, , FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or NCOA5 RIC mRNA precursor transcript is at least about 80% relative to any one of SEQ ID NOs: 1-31; 85 Encoded by a gene sequence having%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or 100% sequence identity.

幾つかの実施形態では、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の転写産物は、ＳＥＱＩＤＮＯ：３２−１３０のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する配列を含む。 In some embodiments, AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO3, TPLB3, , FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or NCOA5 RIC mRNA precursor transcript is at least about 80% for any one of SEQ ID NOs: 32-130, 85 Includes sequences having%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or 100% sequence identity.

幾つかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、ホスホロチオエート結合またはホスホロジアミデート結合を含む骨格修飾を含む。 In some embodiments, the antisense oligomer comprises a backbone modification that includes a phosphorothioate linkage or a phosphorodiamidate linkage.

幾つかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。 In some embodiments, the antisense oligomer is an antisense oligonucleotide.

幾つかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、ホスホロジアミデートモルホリノ、ロックド核酸、ペプチド核酸、２’−Ｏ−メチル、２’−フルオロ、または２’−Ｏ−メトキシエチル部分を含む。 In some embodiments, the antisense oligomer comprises a phosphorodiamidate morpholino, locked nucleic acid, peptide nucleic acid, 2'-O-methyl, 2'-fluoro, or 2'-O-methoxyethyl moiety.

幾つかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、少なくとも１つの修飾された糖部を含む。 In some embodiments, the antisense oligomer comprises at least one modified sugar moiety.

幾つかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、８〜５０の核酸塩基、８〜４０の核酸塩基、８〜３５の核酸塩基、８〜３０の核酸塩基、８〜２５の核酸塩基、８〜２０の核酸塩基、８〜１５の核酸塩基、９〜５０の核酸塩基、９〜４０の核酸塩基、９〜３５の核酸塩基、９〜３０の核酸塩基、９〜２５の核酸塩基、９〜２０の核酸塩基、９〜１５の核酸塩基、１０〜５０の核酸塩基、１０〜４０の核酸塩基、１０〜３５の核酸塩基、１０〜３０の核酸塩基、１０〜２５の核酸塩基、１０〜２０の核酸塩基、１０〜１５の核酸塩基、１１〜５０の核酸塩基、１１〜４０の核酸塩基、１１〜３５の核酸塩基、１１〜３０の核酸塩基、１１〜２５の核酸塩基、１１〜２０の核酸塩基、１１〜１５の核酸塩基、１２〜５０の核酸塩基、１２〜４０の核酸塩基、１２〜３５核酸塩基、１２〜３０核酸塩基、１２〜２５の核酸塩基、１２〜２０の核酸塩基、または１２〜１５の核酸塩基を含む。 In some embodiments, the antisense oligomer comprises 8-50 nucleobases, 8-40 nucleobases, 8-35 nucleobases, 8-30 nucleobases, 8-25 nucleobases, 8-20 Nucleobases, 8-15 nucleobases, 9-50 nucleobases, 9-40 nucleobases, 9-35 nucleobases, 9-30 nucleobases, 9-25 nucleobases, 9-20 Nucleobase, 9-15 nucleobase, 10-50 nucleobase, 10-40 nucleobase, 10-35 nucleobase, 10-30 nucleobase, 10-25 nucleobase, 10-20 nucleic acid Bases, 10-15 nucleobases, 11-50 nucleobases, 11-40 nucleobases, 11-35 nucleobases, 11-30 nucleobases, 11-25 nucleobases, 11-20 nucleobases 11-15 nucleobases, 12-50 nucleobases, 12-4 Nucleobases, including 12 to 35 nucleobases, 12 to 30 nucleobases, nucleobase of 12 to 25, 12 to 20 nucleic acid base or 12-15 nucleobases.

幾つかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の転写産物の標的部分に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％か、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％相補的である。 In some embodiments, the antisense oligomer is AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3RAP1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, At least 80%, at least 85%, at least 90%, relative to the target portion of the RIC mRNA precursor transcript of THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or NCOA5, It is at least 95%, at least 98%, at least 99%, or 100% complementary.

幾つかの実施形態では、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の転写産物の標的部分は、ＳＥＱＩＤＮＯ：７８３４９−７８５０１から選択される配列内にある。 In some embodiments, AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO3, TPLB3, The target portion of the transcript of FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or NCOA5 RIC mRNA precursor is within a sequence selected from SEQ ID NO: 78349-78501.

幾つかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３１−７８３４８のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。 In some embodiments, the antisense oligomer is at least about 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94% relative to any one of SEQ ID NOs: 131-78348. , 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% nucleotide sequences with sequence identity.

幾つかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３１−７８３４８から選択されるヌクレオチド配列を含む。 In some embodiments, the antisense oligomer comprises a nucleotide sequence selected from SEQ ID NO: 131-78348.

幾つかの実施形態では、医薬組成物は、髄腔内注射、脳室内注射、腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射、または静脈内注射のために製剤される。 In some embodiments, the pharmaceutical composition is formulated for intrathecal injection, intraventricular injection, intraperitoneal injection, intramuscular injection, subcutaneous injection, or intravenous injection.

一態様において、本明細書には、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のタンパク質の機能形態をコードする、十分に処理されたＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡの転写産物を産生するために、保持されたイントロンの除去を促進する、不足したＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡの転写産物の処理を誘発する方法が提供され、該方法は、アンチセンスオリゴマーを被験体の標的細胞に接触させる工程；アンチセンスオリゴマーを、不足したＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡの転写産物にハイブリダイズさせる工程であって、不足したＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡの転写産物が、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のタンパク質の機能形態をコードすることができ、少なくとも１つの保持されたイントロンを含む、工程；ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のタンパク質の機能形態をコードする、十分に処理されたＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡの転写産物を産生するために、不足したＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡの転写産物から少なくとも１つの保持されたイントロンを除去する工程；および十分に処理されたＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡの転写産物から、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のタンパク質の機能形態を翻訳する工程を含む。 In one aspect, the specification includes AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, Fully processed AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD encoding functional forms of PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or NCOA5 proteins , APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, A deficient AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, which facilitates removal of retained introns to produce transcripts of AH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or NCOA5 mRNA. ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE3, ILMS1, PPARS, ILMS1, PPARS A method of inducing processing of an NCOA5 mRNA transcript is provided, the method comprising contacting an antisense oligomer with a target cell of a subject; AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, BLPLA3, ATP Hybridizing to HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or NCOA5 mRNA transcripts, deficient AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1 , HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, AS L, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or NCOA5 mRNA transcripts are AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1 PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or NCOA5 protein functional forms can be encoded and retained at least one AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or NCOA5 are well processed and encoded functional forms AMT, ADA, PPOX, UROD, HMDS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B AMT, A deficient to produce transcripts of ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or NCOA5 mRNA A, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, AH7 Removing at least one retained intron from the transcription product of PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or NCOA5; and fully processed AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5 , GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7 B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or NCOA5 mRNA transcripts, AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, Including translating the functional form of GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or NCOA5.

幾つかの実施形態では、保持されたイントロンは、保持されたイントロン全体である。 In some embodiments, the retained intron is the entire retained intron.

幾つかの実施形態では、不足したＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡの転写産物は、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の転写産物である。 In some embodiments, the missing AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PLN , ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or NCOA5 mRNA transcripts are AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4 , GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, AL S1, a transcript of PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or RIC mRNA precursor NCOA5.

一態様において、本明細書には、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のタンパク質の量のまたは活性の不足によって引き起こされた疾病を有する被験体を処置する方法が提供され、該方法は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３１−７８３４８のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むアンチセンスオリゴマーを被験体に投与する工程を含む。 In one aspect, the specification includes AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, A method of treating a subject having a disease caused by a deficiency in the amount or activity of a protein amount of PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or NCOA5, the method comprising: , SEQ ID NO: 131-78348, at least about 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98 % Or 99% sequence identity Antisense oligomer containing a nucleotide sequence comprising the step of administering to a subject.

＜引用による組み込み＞
本明細書で言及されるすべての公報、特許、および特許出願は、個々の公報、特許、特許出願が引用によって組み込まれるように具体的且つ個々に示される程度まで、引用によって本明細書に組み込まれる。 <Incorporation by quotation>
All publications, patents, and patent applications mentioned herein are hereby incorporated by reference to the extent that each individual publication, patent, patent application is specifically and individually indicated to be incorporated by reference. It is.

本発明の新規な特徴は、特に添付の請求項に明記されている。本発明の原則が利用される例示の実施形態について説明する以下の詳細な記載と、添付の図面を参照することで、本発明の特徴および利点についてのよりよい理解が得られるであろう。 The novel features of the invention are set forth with particularity in the appended claims. A better understanding of the features and advantages of the present invention will be obtained by reference to the following detailed description that sets forth illustrative embodiments, in which the principles of the invention are utilized, and the accompanying drawings of which:

図１は、典型的な保持されたイントロン含有（ＲＩＣ）ｍＲＮＡ前駆体の転写産物の概略図を示す。５’スプライス部位コンセンサス配列は、−３ｅから−１ｅおよび＋１から＋６（「ｅ」と標識された数字はエクソンであり、標識されていない数字はイントロンである）まで下線を引かれた文字（文字はヌクレオチドである；大文字：エクソン部分、および小文字：イントロン部分）で示されている。３’スプライス部位コンセンサス配列は、−１５から−１および＋１ｅ（「ｅ」と標識された数字はエクソンであり、標識されていない数字はイントロンである）まで下線を引かれた文字（文字はヌクレオチドである；大文字：エクソン部分、および小文字：イントロン部分）で示されている。ＡＳＯスクリ−ニングのためのイントロン標的領域は、保持されたイントロンの５’スプライス部位（左の矢印）に対するヌクレオチド＋６から、保持されたイントロンの３’スプライス部位（右の矢印）に対するヌクレオチド−１６までを含む。実施形態では、ＡＳＯスクリ−ニングのためのイントロン標的領域は、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対するヌクレオチド＋６から＋１００、および保持されたイントロンの３’スプライス部位に対するヌクレオチド−１６から−１００を含む。エクソン標的部位は、保持されたイントロンの５’スプライス部位に隣接しているエクソンにおける＋２ｅから−４ｅ、および保持されたイントロンの３’スプライス部位に隣接しているエクソンにおける＋２ｅから−４ｅのヌクレオチドを含む。「ｎ」または「Ｎ」はヌクレオチドを表し、「ｙ」はピリミジンを表す。図示された配列は、哺乳動物のスプライス部位に対するコンセンサス配列を表わし、個々のイントロンおよびエクソンは、すべての位置でコンセンサス配列に一致する必要はなない。FIG. 1 shows a schematic representation of a typical retained intron-containing (RIC) mRNA precursor transcript. The 5 'splice site consensus sequence is the letters (letters) underlined to -3e to -1e and +1 to +6 (numbers labeled "e" are exons and numbers not labeled are introns). Are nucleotides; upper case: exon part, and lower case: intron part). The 3 'splice site consensus sequence is a letter underlined from -15 to -1 and + 1e (numbers labeled "e" are exons and unlabeled numbers are introns) (letters are nucleotides Upper case: exon part, and lower case: intron part). The intron target region for ASO screening ranges from nucleotide +6 for the retained intron 5 'splice site (left arrow) to nucleotide -16 for the retained intron 3' splice site (right arrow). including. In embodiments, the intron target region for ASO screening comprises nucleotides +6 to +100 to the retained intron 5 'splice site and nucleotides -16 to -100 to the retained intron 3' splice site. . Exon target sites include nucleotides from + 2e to -4e in the exon adjacent to the 5 'splice site of the retained intron and + 2e to -4e in the exon adjacent to the 3' splice site of the retained intron. Including. “N” or “N” represents a nucleotide and “y” represents a pyrimidine. The depicted sequence represents a consensus sequence for the mammalian splice site, and individual introns and exons need not match the consensus sequence at every position. 図２Ａは、核内遺伝子出力の標的とされた増強（ＴＡＮＧＯ）の典型的な概略図を示す。図２Ａは、核と細胞質の区画に分割された細胞を示す。核内では、エクソン（長方形）およびイントロン（接続線）から成る標的遺伝子のｍＲＮＡ前駆体の転写産物が、ｍＲＮＡを産生するためにスプライシングを受け、このｍＲＮＡは、細胞質に輸送され、標的タンパク質に翻訳される。この標的遺伝子に関して、イントロン１のスプライシングは非効率的であり、保持されたイントロン含有（ＲＩＣ）ｍＲＮＡ前駆体は、主として核内に蓄積し、細胞質に輸送された場合は劣化し、標的タンパク質の産生にはつながらない。FIG. 2A shows an exemplary schematic of targeted enhancement of nuclear gene output (TANGO). FIG. 2A shows a cell divided into a nucleus and a cytoplasmic compartment. In the nucleus, transcripts of target gene mRNA precursors consisting of exons (rectangles) and introns (connection lines) are spliced to produce mRNA, which is transported to the cytoplasm and translated into the target protein Is done. For this target gene, intron 1 splicing is inefficient and retained intron-containing (RIC) mRNA precursors accumulate primarily in the nucleus and degrade when transported to the cytoplasm, producing target protein It does not lead to. 図２Ｂは、核内遺伝子出力の標的とされた増強（ＴＡＮＧＯ）の典型的な概略図を示す。図２Ｂは、核と細胞質の区画に分割された図２Ａと同じ細胞の一例を示す。アンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）での処置は、イントロン１のスプライシングを促進し、結果としてｍＲＮＡの増加をもたらし、これは順に、高レベルの標的タンパク質に翻訳される。FIG. 2B shows a typical schematic of targeted enhancement of nuclear gene output (TANGO). FIG. 2B shows an example of the same cell as in FIG. 2A divided into a nucleus and a cytoplasmic compartment. Treatment with antisense oligomers (ASO) promotes intron 1 splicing, resulting in increased mRNA, which in turn is translated into high levels of the target protein. 図３Ａは、ＮＭ＿００１１６４７１０、ＮＭ＿００１１６４７１．１、ＮＭ＿００１１６４７１２、ＮＭ＿０００４８１およびＮＲ＿０２８４３５に対応するＡＭＴに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲まれたイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される。FIG. 3A shows an overview of the RefSeq gene for AMT corresponding to NM_001164710, NM_00116471.1, NM_001164712, NM_000481 and NR_028435. Intron retention (PIR) of introns circled is shown. 図３Ｂは、偽処理した細胞と比較した、（エクソン４−エクソン５のスプライスジャンクションに及ぶ）８０ｎＭの示されたＡＳＯで２４時間処置されたＡＲＰＥ−１９細胞におけるイントロン４なしでのＡＭＴｍＲＮＡの発現レベルの平均（ｎ＝３）倍率変化を示す典型的なグラフを示す。データはＲＰＬ３２発現に正規化される。FIG. 3B shows expression of AMT mRNA without intron 4 in ARPE-19 cells treated with 80 nM of the indicated ASO for 24 hours (spanning the splice junction of exon 4 to exon 5) compared to sham treated cells. 2 shows a typical graph showing the average (n = 3) magnification change of the level. Data are normalized to RPL32 expression. 図３Ｃは、ＮＭ＿００１１６４７１０、ＮＭ＿００１１６４７１．１、ＮＭ＿００１１６４７１２、ＮＭ＿０００４８１およびＮＲ＿０２８４３５に対応するＡＭＴに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲まれたイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される。FIG. 3C shows an overview of the RefSeq gene for AMT corresponding to NM_001164710, NM_00116471.1, NM_001164712, NM_000481 and NR_028435. Intron retention (PIR) of introns circled is shown. 図４Ａは、ＧＡＬＴ：ＮＭ＿０００１５５およびＮＭ＿００１２５８３３２に対応するＧＡＬＴに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＧＡＬＴイントロン２、ＮＭ＿０００１５５）。FIG. 4A shows a schematic of the RefSeq gene for GALT corresponding to GALT: NM — 000155 and NM — 001258332. The intron retention rate (PIR) of the circled intron is shown (GALT intron 2, NM_000155). 図４Ｂは、ＧＡＬＴ：ＮＭ＿０００１５５およびＮＭ＿００１２５８３３２に対応するＧＡＬＴに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＧＡＬＴイントロン３、ＮＭ＿０００１５５）。FIG. 4B shows an overview of the RefSeq gene for GALT corresponding to GALT: NM — 000155 and NM — 001258332. The intron retention (PIR) of a circled intron is shown (GALT intron 3, NM_000155). 図４Ｃは、ＧＡＬＴ：ＮＭ＿０００１５５およびＮＭ＿００１２５８３３２に対応するＧＡＬＴに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＧＡＬＴイントロン４、ＮＭ＿０００１５５）。FIG. 4C shows an overview of the RefSeq gene for GALT corresponding to GALT: NM — 000155 and NM — 001258332. The intron retention (PIR) of the circled intron is shown (GALT intron 4, NM_000155). 図４Ｄは、偽処理した細胞と比較した、（エクソン４−エクソン５のスプライスジャンクションに及ぶ）８０ｎＭの示されたＡＳＯで２４時間処置されたＡＲＰＥ−１９細胞におけるイントロン４なしでのＧＡＬＴｍＲＮＡの発現レベルの平均（ｎ＝３）倍率変化を示す典型的なグラフを示す。データはＲＰＬ３２発現に正規化される。FIG. 4D shows expression of GALT mRNA without intron 4 in ARPE-19 cells treated with 80 nM of the indicated ASO for 24 hours (spanning the splice junction of exon 4 to exon 5) compared to mock-treated cells. 2 shows a typical graph showing the average (n = 3) magnification change of the level. Data are normalized to RPL32 expression. 図４Ｅは、ＧＡＬＴ：ＮＭ＿０００１５５およびＮＭ＿００１２５８３３２に対応するＧＡＬＴに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＧＡＬＴイントロン５、ＮＭ＿０００１５５）。FIG. 4E shows a schematic of the RefSeq gene for GALT corresponding to GALT: NM — 000155 and NM — 001258332. The intron retention (PIR) of the circled intron is shown (GALT intron 5, NM_000155). 図４Ｆは、ＧＡＬＴ：ＮＭ＿０００１５５およびＮＭ＿００１２５８３３２に対応するＧＡＬＴに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＧＡＬＴイントロン７、ＮＭ＿０００１５５）。FIG. 4F shows an overview of the RefSeq gene for GALT corresponding to GALT: NM — 000155 and NM — 001258332. The intron retention (PIR) of the circled intron is shown (GALT intron 7, NM_000155). 図４Ｇは、ＧＡＬＴ：ＮＭ＿０００１５５およびＮＭ＿００１２５８３３２に対応するＧＡＬＴに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＧＡＬＴイントロン８、ＮＭ＿０００１５５）。FIG. 4G shows an overview of the RefSeq gene for GALT corresponding to GALT: NM — 000155 and NM — 001258332. The intron retention (PIR) of the circled intron is shown (GALT intron 8, NM_000155). 図４Ｈは、偽処理した細胞と比較した、（エクソン８−エクソン９のスプライスジャンクションに及ぶ）８０ｎＭの示されたＡＳＯで２４時間処置されたＡＲＰＥ−１９細胞におけるイントロン８なしでのＧＡＬＴｍＲＮＡの発現レベルの平均（ｎ＝３）倍率変化を示す典型的なグラフを示す。データはＲＰＬ３２発現に正規化される。FIG. 4H shows expression of GALT mRNA without intron 8 in ARPE-19 cells treated with 80 nM of the indicated ASO (spanning exon 8-exon 9 splice junction) for 24 hours compared to mock-treated cells. 2 shows a typical graph showing the average (n = 3) magnification change of the level. Data are normalized to RPL32 expression. 図４Ｉは、ＧＡＬＴ：ＮＭ＿０００１５５およびＮＭ＿００１２５８３３２に対応するＧＡＬＴに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＧＡＬＴイントロン９、ＮＭ＿０００１５５）。FIG. 4I shows a schematic of the RefSeq gene for GALT corresponding to GALT: NM_000155 and NM_001258332. The intron retention (PIR) of the circled intron is shown (GALT intron 9, NM_000155). 図４Ｊは、ＧＡＬＴ：ＮＭ＿０００１５５およびＮＭ＿００１２５８３３２に対応するＧＡＬＴに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＧＡＬＴイントロン１０、ＮＭ＿０００１５５）。FIG. 4J shows a schematic of the RefSeq gene for GALT corresponding to GALT: NM_000155 and NM_001258332. The intron retention (PIR) of the circled intron is shown (GALT intron 10, NM_000155). 図５Ａは、ＰＣ：ＮＭ＿０００９２０、ＮＭ＿０２２１７２およびＮＭ＿００１０４０７１６に対応するＰＣに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＰＣイントロン１６、ＮＭ＿０２２１７２）。FIG. 5A shows a schematic of the RefSeq gene for PCs corresponding to PC: NM_000920, NM_022172, and NM_001040716. The intron retention (PIR) of a circled intron is shown (PC intron 16, NM_022172). 図５Ｂは、偽処理した細胞と比較した、（エクソン１６−エクソン１７のスプライスジャンクションに及ぶ）８０ｎＭの示されたＡＳＯで２４時間処置されたＡＲＰＥ−１９細胞におけるイントロン１６なしでのＰＣｍＲＮＡの発現レベルの平均（ｎ＝３）倍率変化を示す典型的なグラフを示す。データはＲＰＬ３２発現に正規化される。FIG. 5B shows the expression of PC mRNA without intron 16 in ARPE-19 cells treated with 80 nM of the indicated ASO (spanning exon 16-exon 17 splice junction) for 24 hours compared to mock-treated cells. 2 shows a typical graph showing the average (n = 3) magnification change of the level. Data are normalized to RPL32 expression. 図６Ａは、ＦＡＨ：ＮＭ＿０００１３７に対応するＦＡＨに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＦＡＨイントロン１、ＮＭ＿０００１３７）。FIG. 6A shows an overview of the RefSeq gene for FAH corresponding to FAH: NM — 000137. The intron retention (PIR) of the circled intron is shown (FAH intron 1, NM_000137). 図６Ｂは、偽処理した細胞と比較した、（エクソン１−エクソン２のスプライスジャンクションに及ぶ）８０ｎＭの示されたＡＳＯで２４時間処置されたＡＲＰＥ−１９細胞におけるイントロン１なしでのＦＡＨｍＲＮＡの発現レベルの平均（ｎ＝３）倍率変化を示す典型的なグラフを示す。データはＲＰＬ３２発現に正規化される。FIG. 6B shows the expression of FAH mRNA without intron 1 in ARPE-19 cells treated with 80 nM of the indicated ASO (spanning exon 1-exon 2 splice junction) for 24 hours compared to mock-treated cells. 2 shows a typical graph showing the average (n = 3) magnification change of the level. Data are normalized to RPL32 expression. 図７Ａは、ＰＰＡＲＤ：ＮＭ＿００６２３８、ＮＭ＿１７７４３５、ＮＭ＿００１１７１８１８、ＮＭ＿００１１７１８１９およびＮＭ＿００１１７１８２０に対応するＰＰＡＲＤに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＰＰＡＲＤイントロン３、ＮＭ＿００６２３８）。FIG. 7A shows an overview of the RefSeq gene for PPARDs corresponding to PPARD: NM_006238, NM_177435, NM_001171818, NM_001171819 and NM_001171820. The intron retention (PIR) of the circled intron is shown (PPARD intron 3, NM_006238). 図７Ｂは、偽処理した細胞と比較した、８０ｎＭの示されたＡＳＯで２４時間処置されたＡＲＰＥ−１９細胞におけるイントロン３なしでのＰＰＡＲＤｍＲＮＡの発現レベルの平均（ｎ＝３）倍率変化を示す典型的なグラフを示す。データはＲＰＬ３２発現に正規化される。FIG. 7B shows the mean (n = 3) fold change in expression level of PPARD mRNA without intron 3 in ARPE-19 cells treated with 80 nM of the indicated ASO for 24 hours compared to mock-treated cells. A typical graph is shown. Data are normalized to RPL32 expression. 図７Ｃは、ＰＰＡＲＤ：ＮＭ＿００６２３８、ＮＭ＿１７７４３５、ＮＭ＿００１１７１８１８、ＮＭ＿００１１７１８１９およびＮＭ＿００１１７１８２０に対応するＰＰＡＲＤに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＰＰＡＲＤイントロン４、ＮＭ＿００６２３８）。FIG. 7C shows an overview of the RefSeq gene for PPARDs corresponding to PPARD: NM_006238, NM_177435, NM_001171818, NM_001171819 and NM_001171820. The intron retention (PIR) of the circled intron is shown (PPARD intron 4, NM_006238). 図７Ｄは、ＰＰＡＲＤ：ＮＭ＿００６２３８、ＮＭ＿１７７４３５、ＮＭ＿００１１７１８１８、ＮＭ＿００１１７１８１９およびＮＭ＿００１１７１８２０に対応するＰＰＡＲＤに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＰＰＡＲＤイントロン５、ＮＭ＿００６２３８）。FIG. 7D shows an overview of the RefSeq gene for PPARD corresponding to PPARD: NM_006238, NM_177435, NM_001171818, NM_001171819 and NM_001171820. The intron retention (PIR) of the circled intron is shown (PPARD intron 5, NM_006238). 図７Ｅは、ＰＰＡＲＤ：ＮＭ＿００６２３８、ＮＭ＿１７７４３５、ＮＭ＿００１１７１８１８、ＮＭ＿００１１７１８１９およびＮＭ＿００１１７１８２０に対応するＰＰＡＲＤに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＰＰＡＲＤイントロン６、ＮＭ＿００６２３８）。FIG. 7E shows an overview of the RefSeq gene for PPARD corresponding to PPARD: NM_006238, NM_177435, NM_001171818, NM_001171819 and NM_001171820. The intron retention (PIR) of the circled intron is shown (PPARD intron 6, NM_006238). 図７Ｆは、偽処理した細胞と比較した、８０ｎＭの示されたＡＳＯで２４時間処置されたＡＲＰＥ−１９細胞におけるイントロン６なしでのＰＰＡＲＤｍＲＮＡの発現レベルの平均（ｎ＝３）倍率変化を示す典型的なグラフを示す。データはＲＰＬ３２発現に正規化される。FIG. 7F shows the mean (n = 3) fold change in expression level of PPARD mRNA without intron 6 in ARPE-19 cells treated with 80 nM of the indicated ASO for 24 hours compared to mock-treated cells. A typical graph is shown. Data are normalized to RPL32 expression. 図７Ｇは、ＰＰＡＲＤ：ＮＭ＿００６２３８、ＮＭ＿１７７４３５、ＮＭ＿００１１７１８１８、ＮＭ＿００１１７１８１９およびＮＭ＿００１１７１８２０に対応するＰＰＡＲＤに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＰＰＡＲＤイントロン７、ＮＭ＿００６２３８）。FIG. 7G shows an overview of the RefSeq gene for PPARD corresponding to PPARD: NM_006238, NM_177435, NM_001171818, NM_001171819, and NM_001171820. The intron retention (PIR) of the circled intron is shown (PPARD intron 7, NM_006238). 図８Ａは、ＡＣＡＤＶＬ：ＮＭ＿００１２７０４４８、ＮＭ＿００１２７０４４７、ＮＭ＿００００１８およびＮＭ＿００１０３３８５９に対応するＡＣＡＤＶＬに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＡＣＡＤＶＬイントロン３、ＮＭ＿００００１８）。FIG. 8A shows a schematic of the RefSeq gene for ACADVL corresponding to ACADVL: NM_001270448, NM_001270447, NM_000018 and NM_001033859. The intron retention (PIR) of the circled intron is shown (ACADVL intron 3, NM — 000018). 図８Ｂは、ＡＣＡＤＶＬ：ＮＭ＿００１２７０４４８、ＮＭ＿００１２７０４４７、ＮＭ＿００００１８およびＮＭ＿００１０３３８５９に対応するＡＣＡＤＶＬに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＡＣＡＤＶＬイントロン５、ＮＭ＿００００１８）。FIG. 8B shows a schematic of the RefSeq gene for ACADVL corresponding to ACADVL: NM_001270448, NM_001270447, NM_000018 and NM_001033859. The intron retention (PIR) of the circled intron is shown (ACADVL intron 5, NM — 000018). 図８Ｃは、ＡＣＡＤＶＬ：ＮＭ＿００１２７０４４８、ＮＭ＿００１２７０４４７、ＮＭ＿００００１８およびＮＭ＿００１０３３８５９に対応するＡＣＡＤＶＬに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＡＣＡＤＶＬイントロン８、ＮＭ＿００００１８）。FIG. 8C shows a schematic of the RefSeq gene for ACADVL corresponding to ACADVL: NM_001270448, NM_001270447, NM_000018 and NM_001033859. The intron retention (PIR) of the circled intron is shown (ACADVL intron 8, NM — 000018). 図８Ｄは、ＡＣＡＤＶＬ：ＮＭ＿００１２７０４４８、ＮＭ＿００１２７０４４７、ＮＭ＿００００１８およびＮＭ＿００１０３３８５９に対応するＡＣＡＤＶＬに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＡＣＡＤＶＬイントロン９、ＮＭ＿００００１８）。FIG. 8D shows a schematic of the RefSeq gene for ACADVL corresponding to ACADVL: NM_001270448, NM_001270447, NM_000018 and NM_001033859. The intron retention (PIR) of the circled intron is shown (ACADVL intron 9, NM_000018). 図８Ｅは、ＡＣＡＤＶＬ：ＮＭ＿００１２７０４４８、ＮＭ＿００１２７０４４７、ＮＭ＿００００１８およびＮＭ＿００１０３３８５９に対応するＡＣＡＤＶＬに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＡＣＡＤＶＬイントロン１０、ＮＭ＿００００１８）。FIG. 8E shows a schematic of the RefSeq gene for ACADVL corresponding to ACADVL: NM_001270448, NM_001270447, NM_000018 and NM_001033859. The intron retention rate (PIR) of the circled intron is shown (ACADVL intron 10, NM — 000018). 図８Ｆは、ＡＣＡＤＶＬ：ＮＭ＿００１２７０４４８、ＮＭ＿００１２７０４４７、ＮＭ＿００００１８およびＮＭ＿００１０３３８５９に対応するＡＣＡＤＶＬに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＡＣＡＤＶＬイントロン１３、ＮＭ＿００００１８）。FIG. 8F shows an overview of the RefSeq gene for ACADVL corresponding to ACADVL: NM_001270448, NM_001270447, NM_000018 and NM_001033859. The intron retention rate (PIR) of the circled intron is shown (ACADVL intron 13, NM — 000018). 図８Ｇは、ＡＣＡＤＶＬ：ＮＭ＿００１２７０４４８、ＮＭ＿００１２７０４４７、ＮＭ＿００００１８およびＮＭ＿００１０３３８５９に対応するＡＣＡＤＶＬに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＡＣＡＤＶＬイントロン１８、ＮＭ＿００００１８）。FIG. 8G shows a schematic of the RefSeq gene for ACADVL corresponding to ACADVL: NM_001270448, NM_001270447, NM_000018 and NM_001033859. The intron retention rate (PIR) of the circled intron is shown (ACADVL intron 18, NM — 000018). 図８Ｈは、ＡＣＡＤＶＬ：ＮＭ＿００１２７０４４８、ＮＭ＿００１２７０４４７、ＮＭ＿００００１８およびＮＭ＿００１０３３８５９に対応するＡＣＡＤＶＬに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＡＣＡＤＶＬイントロン１９、ＮＭ＿００００１８）。FIG. 8H shows a schematic of the RefSeq gene for ACADVL corresponding to ACADVL: NM_001270448, NM_001270447, NM_000018 and NM_001033859. The intron retention (PIR) of the circled intron is shown (ACADVL intron 19, NM — 000018). 図９Ａは、ＨＭＢＳ：ＮＭ＿０００１９０、ＮＭ＿００１２５８２０８、ＮＭ＿００１０２４３８２およびＮＭ＿００１２５８２０９に対応するＨＭＢＳに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＨＭＢＳイントロン１０、ＮＭ＿０００１９０）。FIG. 9A shows a schematic of the RefSeq gene for HMBS corresponding to HMBS: NM_000190, NM_001258208, NM_001024382 and NM_001258209. The intron retention (PIR) of the circled intron is shown (HMBS intron 10, NM_000190). 図９Ｂは、偽処理した細胞と比較した、（エクソン１０−エクソン１１のスプライスジャンクションに及ぶ）８０ｎＭの示されたＡＳＯで２４時間処置されたＡＲＰＥ−１９細胞におけるイントロン１０なしでのＨＭＢＳｍＲＮＡの発現レベルの平均（ｎ＝３）倍率変化を示す典型的なグラフを示す。データはＲＰＬ３２発現に正規化される。FIG. 9B shows expression of HMBS mRNA without intron 10 in ARPE-19 cells treated with 80 nM of the indicated ASO for 24 hours (spanning the splice junction of exon 10-exon 11) compared to mock-treated cells. 2 shows a typical graph showing the average (n = 3) magnification change of the level. Data are normalized to RPL32 expression. 図９Ｃは、ＨＭＢＳ：ＮＭ＿０００１９０、ＮＭ＿００１２５８２０８、ＮＭ＿００１０２４３８２およびＮＭ＿００１２５８２０９に対応するＨＭＢＳに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＨＭＢＳイントロン１１、ＮＭ＿０００１９０）。FIG. 9C shows an overview of the RefSeq gene for HMBS corresponding to HMBS: NM_000190, NM_001258208, NM_001024382 and NM_001258209. The intron retention (PIR) of the intron surrounded by a circle is shown (HMBS intron 11, NM_000190). 図１０Ａは、ＵＲＯＤ：ＮＭ＿０００３７４およびＮＲ＿０３６５１０に対応するＵＲＯＤに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＵＲＯＤイントロン３、ＮＭ＿０００３７４）。FIG. 10A shows a schematic of the RefSeq gene for UROD corresponding to UROD: NM_000374 and NR_036510. The intron retention (PIR) of a circled intron is shown (UROD intron 3, NM_000374). 図１０Ｂは、ＵＲＯＤ：ＮＭ＿０００３７４およびＮＲ＿０３６５１０に対応するＵＲＯＤに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＵＲＯＤイントロン４、ＮＭ＿０００３７４）。FIG. 10B shows a schematic of the RefSeq gene for UROD corresponding to UROD: NM_000374 and NR_036510. The intron retention (PIR) of the circled intron is shown (UROD intron 4, NM_000374). 図１０Ｃは、ＵＲＯＤ：ＮＭ＿０００３７４およびＮＲ＿０３６５１０に対応するＵＲＯＤに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＵＲＯＤイントロン５、ＮＭ＿０００３７４）。FIG. 10C shows a schematic of the RefSeq gene for UROD corresponding to UROD: NM_000374 and NR_036510. The intron retention (PIR) of a circled intron is shown (UROD intron 5, NM_000374). 図１０Ｄは、ＵＲＯＤ：ＮＭ＿０００３７４およびＮＲ＿０３６５１０に対応するＵＲＯＤに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＵＲＯＤイントロン６、ＮＭ＿０００３７４）。FIG. 10D shows a schematic of the RefSeq gene for UROD corresponding to UROD: NM_000374 and NR_036510. The intron retention (PIR) of a circled intron is shown (UROD intron 6, NM_000374). 図１０Ｅは、ＵＲＯＤ：ＮＭ＿０００３７４およびＮＲ＿０３６５１０に対応するＵＲＯＤに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＵＲＯＤイントロン７、ＮＭ＿０００３７４）。FIG. 10E shows a schematic of the RefSeq gene for UROD corresponding to UROD: NM_000374 and NR_036510. The intron retention (PIR) of the circled intron is shown (UROD intron 7, NM_000374). 図１１Ａは、ＡＬＭＳ１：ＮＭ＿０１５１２０に対応するＡＬＭＳ１に対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＡＬＭＳ１イントロン２１、ＮＭ＿０１５１２０）。FIG. 11A shows a schematic of the RefSeq gene for ALMS1 corresponding to ALMS1: NM_015120. The intron retention (PIR) of the circled intron is shown (ALMS1 intron 21, NM — 015120). 図１１Ｂは、偽処理した細胞と比較した、（エクソン２１−エクソン２２のスプライスジャンクションに及ぶ）８０ｎＭの示されたＡＳＯで２４時間処置されたＨｕｈ７細胞におけるイントロン２１なしでのＡＬＭＳ１ｍＲＮＡの発現レベルの平均（ｎ＝３）倍率変化を示す典型的なグラフを示す。データはＲＰＬ３２発現に正規化される。FIG. 11B shows ALMS1 mRNA expression levels without intron 21 in Huh7 cells treated with 80 nM of the indicated ASO (spanning exon 21-exon 22 splice junction) for 24 hours compared to mock-treated cells. 2 shows a typical graph showing average (n = 3) magnification change. Data are normalized to RPL32 expression. 図１２Ａは、ＡＳＬ：ＮＭ＿００００４８、ＮＭ＿００１０２４９４３、ＮＭ＿００１０２４９４４およびＮＭ＿００１０２４９４６に対応するＡＳＬに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＡＳＬイントロン７、ＮＭ＿００００４８）。FIG. 12A shows a schematic of the RefSeq gene for ASL corresponding to ASL: NM_000048, NM_001024943, NM_001024944 and NM_001024946. The intron retention (PIR) of the circled intron is shown (ASL intron 7, NM — 000048). 図１２Ｂは、偽処理した細胞と比較した、（エクソン７−エクソン８のスプライスジャンクションに及ぶ）８０ｎＭの示されたＡＳＯで２４時間処置されたＡＲＰＥ−１９細胞におけるイントロン７なしでのＡＳＬｍＲＮＡの発現レベルの平均（ｎ＝３）倍率変化を示す典型的なグラフを示す。データはＲＰＬ３２発現に正規化される。FIG. 12B shows the expression of ASL mRNA without intron 7 in ARPE-19 cells treated with 80 nM of the indicated ASO (spanning exon 7-exon 8 splice junction) for 24 hours compared to mock-treated cells. 2 shows a typical graph showing the average (n = 3) magnification change of the level. Data are normalized to RPL32 expression. 図１２Ｃは、ＡＳＬ：ＮＭ＿００００４８、ＮＭ＿００１０２４９４３、ＮＭ＿００１０２４９４４およびＮＭ＿００１０２４９４６に対応するＡＳＬに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＡＳＬイントロン８、ＮＭ＿００００４８）。FIG. 12C shows a schematic of the RefSeq gene for ASL corresponding to ASL: NM_000048, NM_001024943, NM_001024944 and NM_001024946. The intron retention (PIR) of the circled intron is shown (ASL intron 8, NM — 000048). 図１２Ｄは、偽処理した細胞と比較した、（エクソン８−エクソン９のスプライスジャンクションに及ぶ）８０ｎＭの示されたＡＳＯで２４時間処置されたＡＲＰＥ−１９細胞におけるイントロン８なしでのＡＳＬｍＲＮＡの発現レベルの平均（ｎ＝３）倍率変化を示す典型的なグラフを示す。データはＲＰＬ３２発現に正規化される。FIG. 12D shows the expression of ASL mRNA without intron 8 in ARPE-19 cells treated with 80 nM of the indicated ASO for 24 hours (spanning the splice junction of exon 8-exon 9) compared to mock-treated cells. 2 shows a typical graph showing the average (n = 3) magnification change of the level. Data are normalized to RPL32 expression. 図１２Ｅは、ＡＳＬ：ＮＭ＿００００４８、ＮＭ＿００１０２４９４３、ＮＭ＿００１０２４９４４およびＮＭ＿００１０２４９４６に対応するＡＳＬに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＡＳＬイントロン９、ＮＭ＿００００４８）。FIG. 12E shows a schematic of the RefSeq gene for ASL corresponding to ASL: NM_000048, NM_001024943, NM_001024944 and NM_001024946. The intron retention (PIR) of the circled intron is shown (ASL intron 9, NM — 000048). 図１２Ｆは、偽処理した細胞と比較した、（エクソン９−エクソン１０のスプライスジャンクションに及ぶ）８０ｎＭの示されたＡＳＯで２４時間処置されたＡＲＰＥ−１９細胞におけるイントロン７なしでのＡＳＬｍＲＮＡの発現レベルの平均（ｎ＝３）倍率変化を示す典型的なグラフを示す。データはＲＰＬ３２発現に正規化される。FIG. 12F shows expression of ASL mRNA without intron 7 in ARPE-19 cells treated with 80 nM of the indicated ASO for 24 hours (spanning the splice junction of exon 9-exon 10) compared to mock-treated cells. 2 shows a typical graph showing the average (n = 3) magnification change of the level. Data are normalized to RPL32 expression. 図１２Ｇは、ＡＳＬ：ＮＭ＿００００４８、ＮＭ＿００１０２４９４３、ＮＭ＿００１０２４９４４およびＮＭ＿００１０２４９４６に対応するＡＳＬに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＡＳＬイントロン１６、ＮＭ＿００００４８）。FIG. 12G shows a schematic of the RefSeq gene for ASL corresponding to ASL: NM_000048, NM_001024943, NM_001024944 and NM_001024946. The intron retention (PIR) of the circled intron is shown (ASL intron 16, NM — 000048). 図１３Ａは、ＡＴＰ７Ｂ１：ＮＭ＿００１２４３１８２、ＮＭ＿００００５３、ＮＭ＿００１００５９１８、ＮＭ＿００１３３０５７９およびＮＭ＿００１３３０５７８に対応するＡＴＰ７Ｂ１に対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＡＴＰ７Ｂ１イントロン７、ＮＭ＿００００５３）。FIG. 13A shows a schematic of the RefSeq gene for ATP7B1: corresponding to ATP7B1: NM_001243182, NM_00000053, NM_001005918, NM_001330579 and NM_001330578. The intron retention (PIR) of the intron circled is shown (ATP7B1 intron 7, NM — 000053). 図１３Ｂは、ＡＴＰ７Ｂ１：ＮＭ＿００１２４３１８２、ＮＭ＿００００５３、ＮＭ＿００１００５９１８、ＮＭ＿００１３３０５７９およびＮＭ＿００１３３０５７８に対応するＡＴＰ７Ｂ１に対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＡＴＰ７Ｂ１イントロン１３、ＮＭ＿００００５３）。FIG. 13B shows a schematic of the RefSeq gene for ATP7B1 corresponding to ATP7B1: NM_001243182, NM_00000053, NM_001005918, NM_001330579 and NM_001330578. The intron retention (PIR) of the intron circled is shown (ATP7B1 intron 13, NM — 000053). 図１３Ｃは、偽処理した細胞と比較した、（エクソン１３−エクソン１４のスプライスジャンクションに及ぶ）８０ｎＭの示されたＡＳＯで２４時間処置されたＡＲＰＥ−１９細胞におけるイントロン１３なしでのＡＴＰ７Ｂ１ｍＲＮＡの発現レベルの平均（ｎ＝３）倍率変化を示す典型的なグラフを示す。データはＲＰＬ３２発現に正規化される。FIG. 13C shows the expression of ATP7B1 mRNA without intron 13 in ARPE-19 cells treated with 80 nM of the indicated ASO for 24 hours (spanning the splice junction of exon 13-exon 14) compared to mock-treated cells. 2 shows a typical graph showing the average (n = 3) magnification change of the level. Data are normalized to RPL32 expression. 図１４は、ＨＦＥ：ＮＭ＿１３９００７、ＮＭ＿１３９００６、ＮＭ＿１３９００４、ＮＭ＿１３９００３、ＮＭ＿００１３００７４９、ＮＭ＿１３９００９、ＮＭ＿１３９００８およびＮＭ＿０００４１０に対応するＨＦＥに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略図を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＨＦＥイントロン２、ＮＭ＿０００４１０）。FIG. 14 shows a schematic diagram of the RefSeq gene for HFE corresponding to HFE: NM — 139007, NM — 139006, NM — 139004, NM — 139003, NM — 001300749, NM — 139909, NM — 139008 and NM — 000410. The intron retention (PIR) of a circled intron is shown (HFE intron 2, NM_000410). 図１５Ａは、ＨＳＤ３Ｂ７：ＮＭ＿００１１４２７７７、ＮＭ＿００１１４２７７８およびＮＭ＿０２５１９３に対応するＨＳＤ３Ｂ７に対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＨＳＤ３Ｂ７イントロン１、ＮＭ＿００１１４２７７７）。FIG. 15A shows a schematic of the RefSeq gene for HSD3B7 corresponding to HSD3B7: NM_001142777, NM_001142778 and NM_025193. The intron retention (PIR) of a circled intron is shown (HSD3B7 intron 1, NM_001142777). 図１５Ｂは、ＨＳＤ３Ｂ７：ＮＭ＿００１１４２７７７、ＮＭ＿００１１４２７７８およびＮＭ＿０２５１９３に対応するＨＳＤ３Ｂ７に対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＨＳＤ３Ｂ７イントロン１、ＮＭ＿００１１４２７７７）。FIG. 15B shows a schematic of the RefSeq gene for HSD3B7 corresponding to HSD3B7: NM_001142777, NM_001142778 and NM_025193. The intron retention (PIR) of a circled intron is shown (HSD3B7 intron 1, NM_001142777). 図１５Ｃは、偽処理した細胞と比較した、（エクソン２−エクソン３のスプライスジャンクションに及ぶ）８０ｎＭの示されたＡＳＯで２４時間処置されたＡＲＰＥ−１９細胞におけるイントロン２なしでのＨＳＤ３Ｂ７ｍＲＮＡの発現レベルの平均（ｎ＝３）倍率変化を示す典型的なグラフを示す。データはＲＰＬ３２発現に正規化される。FIG. 15C shows the expression of HSD3B7 mRNA without intron 2 in ARPE-19 cells treated with 80 nM of the indicated ASO (spanning exon 2 to exon 3 splice junction) for 24 hours compared to sham treated cells. 2 shows a typical graph showing the average (n = 3) magnification change in level. Data are normalized to RPL32 expression. 図１５Ｄは、ＨＳＤ３Ｂ７：ＮＭ＿００１１４２７７７、ＮＭ＿００１１４２７７８およびＮＭ＿０２５１９３に対応するＨＳＤ３Ｂ７に対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＨＳＤ３Ｂ７イントロン３、ＮＭ＿００１１４２７７７）。FIG. 15D shows a schematic of the RefSeq gene for HSD3B7 corresponding to HSD3B7: NM_001142777, NM_001142778 and NM_025193. The intron retention (PIR) of the circled intron is shown (HSD3B7 intron 3, NM_001142777). 図１５Ｅは、ＨＳＤ３Ｂ７：ＮＭ＿００１１４２７７７、ＮＭ＿００１１４２７７８およびＮＭ＿０２５１９３に対応するＨＳＤ３Ｂ７に対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＨＳＤ３Ｂ７イントロン４、ＮＭ＿００１１４２７７７）。FIG. 15E shows an overview of the RefSeq gene for HSD3B7 corresponding to HSD3B7: NM_001142777, NM_001142778 and NM_025193. The intron retention (PIR) of the circled intron is shown (HSD3B7 intron 4, NM_001142777). 図１５Ｆは、偽処理した細胞と比較した（エクソン４−エクソン５のスプライスジャンクションに及ぶ）８０ｎＭの示されたＡＳＯで２４時間処置されたＡＲＰＥ−１９細胞におけるイントロン４なしでのＨＳＤ３Ｂ７ｍＲＮＡの発現レベルの平均（ｎ＝３）倍率変化を示す典型的なグラフを示す。データはＲＰＬ３２発現に正規化される。FIG. 15F shows the expression level of HSD3B7 mRNA without intron 4 in ARPE-19 cells treated with 80 nM of the indicated ASO for 24 hours (spanning the splice junction of exon 4 to exon 5) compared to mock-treated cells. 2 shows a typical graph showing the average (n = 3) magnification change of. Data are normalized to RPL32 expression. 図１５Ｇは、ＨＳＤ３Ｂ７：ＮＭ＿００１１４２７７７、ＮＭ＿００１１４２７７８およびＮＭ＿０２５１９３に対応するＨＳＤ３Ｂ７に対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＨＳＤ３Ｂ７イントロン５、ＮＭ＿０２５１９３）。FIG. 15G shows an overview of the RefSeq gene for HSD3B7 corresponding to HSD3B7: NM_001142777, NM_001142778 and NM_025193. The intron retention (PIR) of the circled intron is shown (HSD3B7 intron 5, NM — 025193). 図１５Ｈは、ＨＳＤ３Ｂ７：ＮＭ＿００１１４２７７７、ＮＭ＿００１１４２７７８およびＮＭ＿０２５１９３に対応するＨＳＤ３Ｂ７に対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＨＳＤ３Ｂ７イントロン６、ＮＭ＿０２５１９３）。FIG. 15H shows an overview of the RefSeq gene for HSD3B7 corresponding to HSD3B7: NM_001142777, NM_001142778 and NM_025193. The intron retention rate (PIR) of the circled intron is shown (HSD3B7 intron 6, NM — 025193). 図１６は、ＮＣＯＡ５：ＮＭ＿０２０９６７に対応するＮＣＯＡ５に対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略図を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＮＣＯＡ５イントロン２、ＮＭ＿０２０９６７）。FIG. 16 shows a schematic diagram of the RefSeq gene for NCOA5 corresponding to NCOA5: NM — 020967. The intron retention rate (PIR) of the circled intron is shown (NCOA5 intron 2, NM_020967). 図１７Ａは、ＰＰＯＸ：ＮＭ＿０００３０９およびＮＭ＿００１１２２７６４に対応するＰＰＯＸに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＰＰＯＸイントロン３、ＮＭ＿０００３０９）。FIG. 17A shows a schematic of the RefSeq gene for PPOX corresponding to PPOX: NM — 000309 and NM — 001122764. The intron retention (PIR) of the circled intron is shown (PPOX intron 3, NM_000309). 図１７Ｂは、ＰＰＯＸ：ＮＭ＿０００３０９およびＮＭ＿００１１２２７６４に対応するＰＰＯＸに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＰＰＯＸイントロン４、ＮＭ＿０００３０９）。FIG. 17B shows a schematic of the RefSeq gene for PPOX corresponding to PPOX: NM — 000309 and NM — 001122764. The intron retention (PIR) of the circled intron is shown (PPOX intron 4, NM_000309). 図１７Ｃは、ＰＰＯＸ：ＮＭ＿０００３０９およびＮＭ＿００１１２２７６４に対応するＰＰＯＸに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＰＰＯＸイントロン５、ＮＭ＿０００３０９）。FIG. 17C shows a schematic of the RefSeq gene for PPOX corresponding to PPOX: NM — 000309 and NM — 001122764. The intron retention (PIR) of the circled intron is shown (PPOX intron 5, NM_000309). 図１７Ｄは、ＰＰＯＸ：ＮＭ＿０００３０９およびＮＭ＿００１１２２７６４に対応するＰＰＯＸに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＰＰＯＸイントロン７、ＮＭ＿０００３０９）。FIG. 17D shows a schematic of the RefSeq gene for PPOX corresponding to PPOX: NM — 000309 and NM — 001122764. The intron retention (PIR) of a circled intron is shown (PPOX intron 7, NM_000309). 図１７Ｅは、ＰＰＯＸ：ＮＭ＿０００３０９およびＮＭ＿００１１２２７６４に対応するＰＰＯＸに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＰＰＯＸイントロン８、ＮＭ＿０００３０９）。FIG. 17E shows a schematic of the RefSeq gene for PPOX corresponding to PPOX: NM — 000309 and NM — 001122764. The intron retention (PIR) of the circled intron is shown (PPOX intron 8, NM_000309). 図１７Ｆは、ＰＰＯＸ：ＮＭ＿０００３０９およびＮＭ＿００１１２２７６４に対応するＰＰＯＸに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＰＰＯＸイントロン１０、ＮＭ＿０００３０９）。FIG. 17F shows a schematic of the RefSeq gene for PPOX corresponding to PPOX: NM — 000309 and NM — 001122764. The intron retention (PIR) of a circled intron is shown (PPOX intron 10, NM_000309). 図１７Ｇは、ＰＰＯＸ：ＮＭ＿０００３０９およびＮＭ＿００１１２２７６４に対応するＰＰＯＸに対するＲｅｆＳｅｑ遺伝子の概略を示す。円で囲んだイントロンのイントロン保持率（ＰＩＲ）が示される（ＰＰＯＸイントロン１２、ＮＭ＿０００３０９）。FIG. 17G shows a schematic of the RefSeq gene for PPOX corresponding to PPOX: NM — 000309 and NM — 001122764. The intron retention (PIR) of the circled intron is shown (PPOX intron 12, NM_000309).

肝臓疾患は、米国だけで１年当たり概算で６０，０００人の死亡を結果的にもたらす、衰弱した疾病である。多くの場合では、肝不全を患う人にとって唯一の望みは、肝臓移植であるが、ドナープールは、およそ４，０００のみであると推測される。それ故、移植を受ける確率は低く、移植を受けることができない人の状態を改善することができる処置はほとんどない。それ故、肝臓疾患を処置するための組成物および方法が必要とされている。 Liver disease is a debilitating disease that results in an estimated 60,000 deaths per year in the United States alone. In many cases, the only hope for a person with liver failure is a liver transplant, but it is estimated that the donor pool is only about 4,000. Therefore, the probability of receiving a transplant is low and there are few treatments that can improve the condition of a person who cannot receive a transplant. Therefore, there is a need for compositions and methods for treating liver disease.

１つまたは１つを超えるイントロンを有するタンパク質コード遺伝子の一次転写産物における個々のイントロンは、異なる効率性を有する一次転写産物からスプライシングされる。ほとんどの場合、完全にスプライシングされたｍＲＮＡだけが、続く細胞質での翻訳のために核膜孔を通って輸送される。スプライシングされていない及び部分的にスプライシングされた転写産物は、核内で検出可能である。完全にスプライシングされていない転写産物の核内蓄積が、タンパク質に翻訳され得る細胞質中の有害である可能性のあるｍＲＮＡの蓄積を防ぐメカニズムであると一般的に考えられる。幾つかの遺伝子に関して、最も効率性の低いイントロンのスプライシングは、細胞質中での翻訳に先立つ、遺伝子発現における転写後の律速の工程である。 Individual introns in the primary transcript of a protein-encoding gene having one or more introns are spliced from primary transcripts having different efficiencies. In most cases, only fully spliced mRNA is transported through the nuclear pore for subsequent cytoplasmic translation. Unspliced and partially spliced transcripts can be detected in the nucleus. It is generally thought that nuclear accumulation of transcripts that are not completely spliced is a mechanism that prevents the accumulation of potentially harmful mRNA in the cytoplasm that can be translated into protein. For some genes, the least efficient intron splicing is a post-transcriptional rate-limiting step in gene expression prior to translation in the cytoplasm.

肝臓疾患のサブセットにおいて不足しているタンパク質をコードする、かなりのレベルの遺伝子の部分的にスプライシングされた転写産物が、ヒト細胞の核内で発見されてきた。これらのｍＲＮＡ前駆体の種は、少なくとも１つの保持されたイントロンを含む。本発明は、完全にスプライシングされた成熟ｍＲＮＡの安定した状態の産生を増加させる、およびそれ故、翻訳されたタンパク質レベルを増加させるために、遺伝子発現の核段階に対して律速的である１つ以上の保持されたイントロンのスプライシングをアップレギュレートするための組成物および方法を提供する。これらの組成物および方法は、核内に蓄積する保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体のイントロンスプライス部位で構成的スプライシングを促進するアンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）を活用する。したがって、実施形態では、タンパク質不足によって引き起こされた疾病を処置するために本発明の方法を使用して、タンパク質が増加される。 Significant levels of partially spliced transcripts of genes encoding proteins that are missing in a subset of liver diseases have been found in the nucleus of human cells. These mRNA precursor species contain at least one retained intron. The present invention is one that is rate-limiting to the nuclear stage of gene expression in order to increase the steady state production of fully spliced mature mRNA and therefore increase translated protein levels. Compositions and methods are provided for upregulating splicing of these retained introns. These compositions and methods utilize antisense oligomers (ASOs) that promote constitutive splicing at the intron splice sites of retained intron-containing mRNA precursors that accumulate in the nucleus. Thus, in embodiments, the protein is increased using the methods of the invention to treat a disease caused by protein deficiency.

本明細書に記載される本発明によって処置することができる肝臓疾患は、被験体において遺伝子産物が不足している疾患であり、ここで遺伝子産物の不足は肝臓疾患を引き起こす。 A liver disease that can be treated according to the invention described herein is a disease that is deficient in a gene product in a subject, where the deficiency in gene product causes liver disease.

これらのＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２およびＮＣＯＡ５のｍＲＮＡ前駆体の種は、少なくとも１つの保持されたイントロンを含む。本発明は、完全にスプライシングされた成熟ｍＲＮＡの安定した状態の産生を増加させる、およびそれ故、翻訳されたアミノメチルトランスフェラーゼ、アデノシンデアミナーゼ、プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ、ウロポルフィリノーゲンデカルボキシラーゼ、ヒドロキシメチルビランシンターゼ、超長鎖アシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、ピルビン酸カルボキシラーゼイソヴァレリル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、アポリポタンパク質Ａ−Ｖ、ガラクトース−１−リン酸ウリジルトランスフェラーゼ、低密度リポタンパク質受容体アダプタータンパク質１、肝細胞核因子４−アルファ、グルコキナーゼ、肝核因子１−αアルブミン近接因子、タンパク質Ｏ−グルコシルトランスフェラーゼ１、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ調節サブユニット１、Ｔｒｉｂｂｌｅｓ−１、形質転換増殖因子β−１、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、トロンボポイエチン、パタチン様ホスホリパーゼドメイン含有タンパク質３、銅輸送ＡＴＰアーゼ２、フマリルアセトアセターゼ、アルギニノコハク酸リアーゼ、遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質、アルストレーム症候群タンパク質１、３−β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ７型、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δ、インターロイキン６、セラミドシンターゼ２または核内受容体コアクチベーター５タンパク質のレベルを増加させるために、遺伝子発現の核段階に対して律速的である１つ以上の保持されたＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２およびＮＣＯＡ５のイントロンのスプライシングをアップレギュレートするための組成物および方法を提供する。これらの組成物および方法は、核内に蓄積する保持されたイントロン含有ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２およびＮＣＯＡ５のｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体）のイントロンスプライス部位での構成的スプライシングを促進するアンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）を利用することができる。したがって、実施形態では、アミノメチルトランスフェラーゼ、アデノシンデアミナーゼ、プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ、ウロポルフィリノーゲンデカルボキシラーゼ、ヒドロキシメチルビランシンターゼ、超長鎖アシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、ピルビン酸カルボキシラーゼイソヴァレリル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、アポリポタンパク質Ａ−Ｖ、ガラクトース−１−リン酸ウリジルトランスフェラーゼ、低密度リポタンパク質受容体アダプタータンパク質１、肝細胞核因子４−アルファ、グルコキナーゼ、肝核因子１−αアルブミン近接因子、タンパク質Ｏ−グルコシルトランスフェラーゼ１、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ調節サブユニット１、Ｔｒｉｂｂｌｅｓ−１、形質転換増殖因子β−１、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、トロンボポイエチン、パタチン様ホスホリパーゼドメイン含有タンパク質３、銅輸送ＡＴＰアーゼ２、フマリルアセトアセターゼ、アルギニノコハク酸リアーゼ、遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質、アルストレーム症候群タンパク質１、３−β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ７型、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δ、インターロイキン６、セラミドシンターゼ２または核内受容体コアクチベーター５タンパク質は、アミノメチルトランスフェラーゼ、アデノシンデアミナーゼ、プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ、ウロポルフィリノーゲンデカルボキシラーゼ、ヒドロキシメチルビランシンターゼ、超長鎖アシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、ピルビン酸カルボキシラーゼイソヴァレリル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、アポリポタンパク質Ａ−Ｖ、ガラクトース−１−リン酸ウリジルトランスフェラーゼ、低密度リポタンパク質受容体アダプタータンパク質１、肝細胞核因子４−アルファ、グルコキナーゼ、肝核因子１−αアルブミン近接因子、タンパク質Ｏ−グルコシルトランスフェラーゼ１、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ調節サブユニット１、Ｔｒｉｂｂｌｅｓ−１、形質転換増殖因子β−１、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、トロンボポイエチン、パタチン様ホスホリパーゼドメイン含有タンパク質３、銅輸送ＡＴＰアーゼ２、フマリルアセトアセターゼ、アルギニノコハク酸リアーゼ、遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質、アルストレーム症候群タンパク質１、３−β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ７型、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δ、インターロイキン６、セラミドシンターゼ２または核内受容体コアクチベーター５の不足によって引き起こされた疾病を処置するために本発明の方法を使用して増加され得る。 These AMT, ADA, PPOX, UROD, HMDS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7, SLPB3, ATP7 The HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 and NCOA5 mRNA precursor species contain at least one retained intron. The present invention increases the steady state production of fully spliced mature mRNA and, therefore, translated aminomethyltransferase, adenosine deaminase, protoporphyrinogen oxidase, uroporphyrinogen decarboxylase, hydroxymethyl Bilan synthase, very long chain acyl-CoA dehydrogenase, pyruvate carboxylase isovaleryl-CoA dehydrogenase, apolipoprotein AV, galactose-1-phosphate uridyltransferase, low density lipoprotein receptor adapter protein 1, hepatocyte nuclear factor 4-alpha, glucokinase, hepatic nuclear factor 1-alpha albumin proximity factor, protein O-glucosyltransferase 1, phosphatidylinositol 3-kiner Regulatory subunit 1, Tribles-1, transforming growth factor β-1, hemochromatosis type 2B, thrombopoietin, patatin-like phospholipase domain-containing protein 3, copper transport ATPase 2, fumarylacetoacetase, argininosuccinate lyase , Hereditary hemochromatosis protein, Alstrem syndrome protein 1, 3-β-hydroxysteroid dehydrogenase type 7, peroxisome proliferator-activated receptor δ, interleukin 6, ceramide synthase 2 or nuclear receptor coactivator 5 protein One or more retained AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LD that are rate limiting to the nuclear stage of gene expression LRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 and NCOA5 Compositions and methods are provided. These compositions and methods include retained intron-containing AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, which accumulate in the nucleus. Promotes constitutive splicing at intron splice sites of TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 and NCOA5 mRNA precursors (RIC mRNA precursor) Antisense oligomers (ASO) can be used. Thus, in embodiments, aminomethyltransferase, adenosine deaminase, protoporphyrinogen oxidase, uroporphyrinogen decarboxylase, hydroxymethyl bilan synthase, ultralong chain acyl-CoA dehydrogenase, pyruvate carboxylase isovaleryl-CoA dehydrogenase, apolipo Protein AV, Galactose-1-phosphate uridyltransferase, low density lipoprotein receptor adapter protein 1, hepatocyte nuclear factor 4-alpha, glucokinase, hepatic nuclear factor 1-α albumin proximity factor, protein O-glucosyltransferase 1, phosphatidylinositol 3-kinase regulatory subunit 1, Tribles-1, transforming growth factor β-1, hemochromatography Cis 2B type, thrombopoietin, patatin-like phospholipase domain-containing protein 3, copper transport ATPase 2, fumaryl acetoacetase, argininosuccinate lyase, hereditary hemochromatosis protein, alstrem syndrome protein 1, 3-β-hydroxy Steroid dehydrogenase type 7, peroxisome proliferator activated receptor δ, interleukin 6, ceramide synthase 2 or nuclear receptor coactivator 5 protein is aminomethyltransferase, adenosine deaminase, protoporphyrinogen oxidase, uroporphyrinogen Decarboxylase, hydroxymethylbilane synthase, very long chain acyl-CoA dehydrogenase, pyruvate carboxylase isovaleryl-CoA dehydrase Logenase, apolipoprotein AV, galactose-1-phosphate uridyltransferase, low density lipoprotein receptor adapter protein 1, hepatocyte nuclear factor 4-alpha, glucokinase, hepatic nuclear factor 1-α albumin proximity factor, protein O -Glucosyltransferase 1, phosphatidylinositol 3-kinase regulatory subunit 1, Tribles-1, transforming growth factor β-1, hemochromatosis type 2B, thrombopoietin, patatin-like phospholipase domain-containing protein 3, copper transport ATPase 2 , Fumaryl acetoacetase, argininosuccinate lyase, hereditary hemochromatosis protein, alstrom syndrome protein 1, 3-β-hydroxysteroid dehydrogenase type 7, peroxy Over proliferator activated receptor [delta], interleukin 6, it can be increased using the methods of the present invention to treat diseases caused by a lack of synthase 2 or nuclear receptor coactivator 5.

幾つかの実施形態では、本明細書には、完全にスプライシングされた成熟ｍＲＮＡの安定した状態の産生を増加させる、およびそれ故、翻訳されたＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のタンパク質レベルを増加させるために、遺伝子発現の核段階に対して律速的である１つ以上の保持されたＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のイントロンのスプライシングをアップレギュレートするための組成物および方法が開示される。これらの組成物および方法は、核内に蓄積する保持されたイントロン含有ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体）のイントロンスプライス部位での構成的スプライシングを促進するアンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）を利用することができる。したがって、実施形態では、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のタンパク質は、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５の不足によって引き起こされた疾病を処置するために本発明の方法を使用して増加され得る。 In some embodiments, the present specification increases steady state production of fully spliced mature mRNA and, therefore, translated AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC , IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPAR2, IL6, CERS One or more retained AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, which are rate limiting to the nuclear stage of gene expression, to increase NF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or NCOA5 splicing up Compositions and methods are disclosed. These compositions and methods include retained intron-containing AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, which accumulate in the nucleus. Promotes constitutive splicing at the intron splice site of TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or NCOA5 mRNA precursor (RIC mRNA precursor) Antisense oligomers (ASO) can be used. Therefore, in the embodiment, AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, TPPL3, THPO, TPPL3 The proteins of FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or NCOA5 are AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, , HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PP RD, IL6, HSD3B7, may be increased using the methods of the present invention to treat diseases caused by a lack of CERS2 or NCOA5.

他の実施形態では、本発明の方法は、必要としている被験体内の疾病を処置するために、アミノメチルトランスフェラーゼ、アデノシンデアミナーゼ、プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ、ウロポルフィリノーゲンデカルボキシラーゼ、ヒドロキシメチルビランシンターゼ、超長鎖アシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、ピルビン酸カルボキシラーゼイソヴァレリル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、アポリポタンパク質Ａ−Ｖ、ガラクトース−１−リン酸ウリジルトランスフェラーゼ、低密度リポタンパク質受容体アダプタータンパク質１、肝細胞核因子４−アルファ、グルコキナーゼ、肝核因子１−αアルブミン近接因子、タンパク質Ｏ−グルコシルトランスフェラーゼ１、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ調節サブユニット１、Ｔｒｉｂｂｌｅｓ−１、形質転換増殖因子β−１、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、トロンボポイエチン、パタチン様ホスホリパーゼドメイン含有タンパク質３、銅輸送ＡＴＰアーゼ２、フマリルアセトアセターゼ、アルギニノコハク酸リアーゼ、遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質、アルストレーム症候群タンパク質１、３−β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ７型、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δ、インターロイキン６、セラミドシンターゼ２または核内受容体コアクチベーター５の産生を増加させるために使用され得る。実施形態では、被験体は、アミノメチルトランスフェラーゼ、アデノシンデアミナーゼ、プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ、ウロポルフィリノーゲンデカルボキシラーゼ、ヒドロキシメチルビランシンターゼ、超長鎖アシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、ピルビン酸カルボキシラーゼイソヴァレリル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、アポリポタンパク質Ａ−Ｖ、ガラクトース−１−リン酸ウリジルトランスフェラーゼ、低密度リポタンパク質受容体アダプタータンパク質１、肝細胞核因子４−アルファ、グルコキナーゼ、肝核因子１−αアルブミン近接因子、タンパク質Ｏ−グルコシルトランスフェラーゼ１、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ調節サブユニット１、Ｔｒｉｂｂｌｅｓ−１、形質転換増殖因子β−１、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、トロンボポイエチン、パタチン様ホスホリパーゼドメイン含有タンパク質３、銅輸送ＡＴＰアーゼ２、フマリルアセトアセターゼ、アルギニノコハク酸リアーゼ、遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質、アルストレーム症候群タンパク質１、３−β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ７型、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δ、インターロイキン６、セラミドシンターゼ２または核内受容体コアクチベーター５が、野生型と比較して必ずしも不足していないが、アミノメチルトランスフェラーゼ、アデノシンデアミナーゼ、プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ、ウロポルフィリノーゲンデカルボキシラーゼ、ヒドロキシメチルビランシンターゼ、超長鎖アシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、ピルビン酸カルボキシラーゼイソヴァレリル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、アポリポタンパク質Ａ−Ｖ、ガラクトース−１−リン酸ウリジルトランスフェラーゼ、低密度リポタンパク質受容体アダプタータンパク質１、肝細胞核因子４−アルファ、グルコキナーゼ、肝核因子１−αアルブミン近接因子、タンパク質Ｏ−グルコシルトランスフェラーゼ１、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ調節サブユニット１、Ｔｒｉｂｂｌｅｓ−１、形質転換増殖因子β−１、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、トロンボポイエチン、パタチン様ホスホリパーゼドメイン含有タンパク質３、銅輸送ＡＴＰアーゼ２、フマリルアセトアセターゼ、アルギニノコハク酸リアーゼ、遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質、アルストレーム症候群タンパク質１、３−β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ７型、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体δ、インターロイキン６、セラミドシンターゼ２または核内受容体コアクチベーター５の増加が、それにもかかわらず疾病を軽減する、疾病を有する。実施形態では、疾病は、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２およびＮＣＯＡ５のハプロ不全によって引き起こされ得る。 In other embodiments, the methods of the present invention include aminomethyltransferase, adenosine deaminase, protoporphyrinogen oxidase, uroporphyrinogen decarboxylase, hydroxymethyl bilan synthase, to treat a disease in a subject in need thereof. Ultra long chain acyl-CoA dehydrogenase, pyruvate carboxylase isovaleryl-CoA dehydrogenase, apolipoprotein AV, galactose-1-phosphate uridyltransferase, low density lipoprotein receptor adapter protein 1, hepatocyte nuclear factor 4-alpha , Glucokinase, hepatic nuclear factor 1-alpha albumin proximity factor, protein O-glucosyltransferase 1, phosphatidylinositol 3-kinase regulatory subunit 1, Tr bbles-1, transforming growth factor β-1, hemochromatosis type 2B, thrombopoietin, patatin-like phospholipase domain-containing protein 3, copper transport ATPase 2, fumarylacetoacetase, argininosuccinate lyase, hereditary hemochroma To increase production of tosis protein, Alstrem syndrome protein 1, 3-β-hydroxysteroid dehydrogenase type 7, peroxisome proliferator activated receptor δ, interleukin 6, ceramide synthase 2 or nuclear receptor coactivator 5 Can be used. In embodiments, the subject is an aminomethyltransferase, adenosine deaminase, protoporphyrinogen oxidase, uroporphyrinogen decarboxylase, hydroxymethyl bilane synthase, very long chain acyl-CoA dehydrogenase, pyruvate carboxylase isovaleryl-CoA dehydrogenase , Apolipoprotein AV, galactose-1-phosphate uridyltransferase, low density lipoprotein receptor adapter protein 1, hepatocyte nuclear factor 4-alpha, glucokinase, hepatic nuclear factor 1-α albumin proximity factor, protein O- Glucosyltransferase 1, phosphatidylinositol 3-kinase regulatory subunit 1, Tribles-1, transforming growth factor β-1, hemochromatosis Type 2B, thrombopoietin, patatin-like phospholipase domain-containing protein 3, copper transport ATPase 2, fumaryl acetoacetase, argininosuccinate lyase, hereditary hemochromatosis protein, alstrem syndrome protein 1, 3-β-hydroxy Steroid dehydrogenase type 7, peroxisome proliferator activated receptor δ, interleukin 6, ceramide synthase 2 or nuclear receptor coactivator 5 are not necessarily deficient compared to wild type, but aminomethyltransferase, adenosine Deaminase, protoporphyrinogen oxidase, uroporphyrinogen decarboxylase, hydroxymethyl bilan synthase, ultralong chain acyl-CoA dehydrogenase, pyruvate carboxyler Zeisovaleryl-CoA dehydrogenase, apolipoprotein AV, galactose-1-phosphate uridyltransferase, low density lipoprotein receptor adapter protein 1, hepatocyte nuclear factor 4-alpha, glucokinase, hepatic nuclear factor 1-alpha albumin proximity factor , Protein O-glucosyltransferase 1, phosphatidylinositol 3-kinase regulatory subunit 1, Tribles-1, transforming growth factor β-1, hemochromatosis type 2B, thrombopoietin, patatin-like phospholipase domain-containing protein 3, copper transport ATPase 2, fumaryl acetoacetase, argininosuccinate lyase, hereditary hemochromatosis protein, alstrem syndrome protein 1, 3-β-hydroxysteroid Dehydrogenase type 7, peroxisome proliferator-activated receptor [delta], interleukin 6, an increase in ceramide synthase 2 or nuclear receptor coactivator 5, to reduce nonetheless disease having a disease. In embodiments, the disease is AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP3, THB, TP7, TP7, PN7 , FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 and NCOA5 haploinsufficiency.

実施形態では、記載される組成物および方法は、標的タンパク質の不足によって引き起こされる肝疾患を有する被験体または患者を処置するために使用される。実施形態では、記載される組成物および方法は、標的タンパク質の不足によって引き起こされない肝疾患を有する被験体または患者を処置するために使用される。実施形態では、肝疾患を有する被験体または患者は、標的タンパク質の正常な産生を補足することによって標的タンパク質の産生の増加から恩恵を得ることができる。関連する実施形態では、肝疾患を有する被験体または患者は、成熟ｍＲＮＡ産生を増加させる及び／又は標的タンパク質の正常な産生を補足することによって、標的タンパク質の産生の増加から恩恵を得ることができる。特定の実施形態では、必ずしも標的タンパク質の不足によって引き起こされないが、それにもかかわらず、本発明の方法を使用して標的タンパク質の産生を増加することによって処置される疾病において、標的タンパク質は、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５である。実施形態では、標的タンパク質は、被験体の肝疾患を改善または処置するために、二次標的に作用する。実施形態では、被験体において二次標的タンパク質が不足している。実施形態では、被験体において二次標的タンパク質は不足していない。 In embodiments, the described compositions and methods are used to treat a subject or patient having a liver disease caused by a lack of target protein. In embodiments, the described compositions and methods are used to treat a subject or patient having a liver disease that is not caused by a lack of target protein. In embodiments, a subject or patient with liver disease can benefit from increased production of the target protein by supplementing normal production of the target protein. In related embodiments, a subject or patient with liver disease can benefit from increased production of the target protein by increasing mature mRNA production and / or supplementing normal production of the target protein. . In certain embodiments, in a disease that is not necessarily caused by target protein deficiency, but nevertheless is treated by increasing production of the target protein using the methods of the invention, the target protein is TRIB1. , TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, PPARD, IL6, CERS2 or NCOA5. In embodiments, the target protein acts on a secondary target to ameliorate or treat a subject's liver disease. In embodiments, the subject is deficient in secondary target protein. In embodiments, the subject is not deficient in secondary target protein.

＜グリシン脳症＞
幾つかの実施形態では、本明細書に記載される本発明は、常染色体劣性肝臓障害であるグリシン脳症（ＧＣＥ）を処置するために使用され得る。ＧＣＥの優位な表現型は、生涯の早期に現われる、新生児表現型である。この表現型の症状は、嗜眠、筋緊張低下、ミオクローヌス発作、発作、精神遅滞、無呼吸およびしばしば死亡を含む。他の事例では、ＧＣＥは、軽度精神遅滞、せん妄、舞踏病、および垂直注視麻痺を含む症状とともに、小児期に現われる。ＧＣＥの遅発型は、痙攣性両側麻痺および視神経萎縮を結果としてもたらすが、典型的には精神遅滞または発作にはつながらない。 <Glycine encephalopathy>
In some embodiments, the invention described herein can be used to treat glycine encephalopathy (GCE), an autosomal recessive liver disorder. The dominant phenotype of GCE is the neonatal phenotype that appears early in life. Symptoms of this phenotype include lethargy, hypotonia, myoclonic seizures, seizures, mental retardation, apnea and often death. In other cases, GCE appears in childhood with symptoms including mild mental retardation, delirium, chorea, and vertical gaze paralysis. The late form of GCE results in spastic bilateral paralysis and optic atrophy, but typically does not lead to mental retardation or seizures.

ＧＣＥは、肝臓におけるグリシン切断系における欠乏症の結果明示することができる。
タンパク質アミノメチルトランスフェラーゼ（ＡＭＴ）の不足はＧＣＥの進行に関係する。また、試験はＡＭＴ欠乏症およびＧＣＥの進行をリンクした。ＡＭＴは、肝細胞のミトコンドリア内のグリシン切断系の構成要素である。ＡＭＴタンパク質をコードするＡＭＴ遺伝子は、３ｐ２１．２に位置する９つのエクソンに及ぶ６ｋｂ遺伝子である。ＡＭＴ遺伝子の突然変異は、ＧＣＥに関係する臨床表現型を引き起こすと示された。１つの試験では、患者はＧ２６９Ｄ突然変異に対してヘテロ接合性である。他の試験は、ＧＣＥの進行を結果としてもたらすＡＭＴの他のミスセンス変異を検査し、それによって、ＡＭＴ不足とＧＣＥの進行との間の明確な関係（ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｉｎｋ）を確立する。 GCE can manifest as a result of a deficiency in the glycine cleavage system in the liver.
The deficiency of protein aminomethyltransferase (AMT) is related to the progression of GCE. The trial also linked AMT deficiency and GCE progression. AMT is a component of the glycine cleavage system in the mitochondria of hepatocytes. The AMT gene encoding the AMT protein is a 6 kb gene spanning nine exons located at 3p21.2. Mutations in the AMT gene have been shown to cause clinical phenotypes related to GCE. In one study, the patient is heterozygous for the G269D mutation. Other tests examine other missense mutations in AMT that result in GCE progression, thereby establishing a positive link between AMT deficiency and GCE progression.

＜ツェルヴェーガー症候群／ハイムラー症候群＞
幾つかの実施形態では、本明細書に記載される本発明は、常染色体劣性肝臓障害のツェルヴェーガー症候群を処置するために使用され得る。ツェルヴェーガー症候群は、重度の神経機能障害、頭蓋顔面奇形、および肝機能障害を特徴とする、重度のペルオキシソーム形成異常症である。標準的なツェルヴェーガー症候群の表現型に罹患した患者は、典型的に１年以内に死亡する。 <Zerweger syndrome / Heimler syndrome>
In some embodiments, the invention described herein can be used to treat Zerweger syndrome of autosomal recessive liver disorders. Zerweger syndrome is a severe peroxisome dysplasia characterized by severe neurological dysfunction, craniofacial malformation, and liver dysfunction. Patients with the standard Zerweger syndrome phenotype typically die within a year.

幾つかの実施形態では、本明細書に記載される本発明は、常染色体劣性肝臓障害のハイムラー症候群を処置するために使用され得る。ハイムラー症候群は、感音性聴力損失、第二生歯のエナメル質形成不全および爪異常を特徴とするペルオキシソーム形成異常症の最も軽度な形態である。 In some embodiments, the invention described herein can be used to treat Heimler syndrome of autosomal recessive liver disorders. Heimler Syndrome is the mildest form of peroxisome dysplasia characterized by sensory hearing loss, second denture enamel hypoplasia and nail abnormalities.

＜アデノシンデアミナーゼ欠損症＞
いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、常染色体劣性肝疾患のアデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）欠損症を処置するために使用されうる。ＡＤＡ欠損症は一般的には幼児期に現われ、かつ一般的には命取りになるが、患者の小さなサブセット、一般的には乳児型よりも軽度なその病気の遅発型を示す。ＡＤＡ欠損症の遅発型に悩む患者は、典型的には、緩やかに免疫学的劣化を示し、それは多数の二次感染を導く。 <Adenosine deaminase deficiency>
In some embodiments, the invention described herein can be used to treat adenosine deaminase (ADA) deficiency of autosomal recessive liver disease. ADA deficiency is commonly manifested in infancy and is generally fatal, but represents a small subset of patients, generally a late form of the disease that is milder than the infant type. Patients suffering from the late form of ADA deficiency typically show mildly immunological deterioration, which leads to numerous secondary infections.

ＡＤＡタンパク質の欠損症はＡＤＡ欠損症において示される臨床症状を結果として生じる。２０ｑ１３に位置し、１０エクソンに及ぶＡＤＡ遺伝子は、ＡＤＡタンパク質をコードする。不十分な量のＡＤＡタンパク質を結果としてもたらすＡＤＡ遺伝子の変異が、ＡＤＡ欠損症の進行の原因であることが示されてきた。ある研究では、ＡＤＡ欠損症と診断された１組の子供たちが調査された。両方の親が中レベルのＡＤＡタンパク質を持つと分かっていたが、両方の子供はＡＤＡタンパク質の濃度が減少したことが分かった。この発見は、その病気のために提案された遺伝の劣性パターンを立証し、減少したＡＤＡタンパク質とＡＤＡ欠損症の臨床症状との間の明確な関係を提供する。 ADA protein deficiency results in the clinical symptoms shown in ADA deficiency. The ADA gene, located at 20q13 and spans 10 exons, encodes the ADA protein. It has been shown that mutations in the ADA gene that result in insufficient amounts of ADA protein are responsible for the progression of ADA deficiency. One study investigated a set of children diagnosed with ADA deficiency. Both parents were known to have medium levels of ADA protein, but both children were found to have reduced levels of ADA protein. This discovery establishes the inherited recessive pattern proposed for the disease and provides a clear relationship between the reduced ADA protein and the clinical symptoms of ADA deficiency.

＜異型ポルフィリン症＞
いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、異型ポルフィリン症（ｐｏｒｐｈｙｒｉａｖａｒｉｅｇａｔｅ）（ＶＰ）を処置するために使用されうる。ＶＰは、増加した光線過敏症、水疱形成、皮膚脆弱性および炎症後色素沈着などの皮膚症状によって特徴づけられる。更なる病状は、急性の肝性ポルフィリン症を特徴づける腹痛症、暗色尿、および精神神経症状を含む。 <Atypical porphyria>
In some embodiments, the invention described herein can be used to treat a variant porphyria (VP). VP is characterized by skin symptoms such as increased photosensitivity, blistering, skin fragility and post-inflammatory pigmentation. Further medical conditions include abdominal pain, dark urine, and neuropsychiatric symptoms that characterize acute hepatic porphyria.

プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ（ＰＰＯＸ）タンパク質の欠損症は、ＶＰにおいて示される臨床症状を結果として生じる。１ｑ２３．３に位置し、１３エクソンに及ぶＰＰＯＸ遺伝子は、ＰＰＯＸタンパク質をコードする。不十分な量のＰＰＯＸタンパク質を結果としてもたらすＰＰＯＸ遺伝子の変異が、ＶＰの進行の原因であることが示されてきた。ＶＰのホモ接合型もまれに存在しているが、「古典的な」ＶＰは、ＰＰＯＸ遺伝子の単一の対立遺伝子における突然変異によって特徴づけられ、したがって、ハプロ不全の機構によって進行する。いくつかの研究では、ＰＰＯＸにおけるヘテロ接合変異がＶＰの進行に関連付けられてきており、この進行は、ＶＰに悩む患者において発見されたＰＰＯＸタンパク質の減少したレベルの結果である。 Protoporphyrinogen oxidase (PPOX) protein deficiency results in clinical symptoms shown in VP. The PPOX gene, located at 1q23.3 and spanning 13 exons, encodes the PPOX protein. It has been shown that mutations in the PPOX gene that result in insufficient amounts of PPOX protein are responsible for VP progression. Although rarely homozygous forms of VP exist, the “classical” VP is characterized by mutations in a single allele of the PPOX gene and thus proceeds by a mechanism of haploinsufficiency. In some studies, heterozygous mutations in PPOX have been associated with VP progression, which is the result of decreased levels of PPOX protein found in patients suffering from VP.

＜晩発性皮膚ポルフィリン症＞
いくつかの実施形態では、本明細書に記載された本発明は常染色体優性肝疾患の晩発性皮膚ポルフィリン症（ＰＣＴ）を処置するために使用することができる。ＰＣＴは、尿中のウロポルフィリンの排出および感光性皮膚炎によって特徴づけられる。 <Late cutaneous porphyria>
In some embodiments, the invention described herein can be used to treat autosomal dominant liver disease late cutaneous porphyria (PCT). PCT is characterized by excretion of uroporphyrin in the urine and photosensitive dermatitis.

ウロポルフィリノーゲンデカルボキシラーゼ（ＵＲＯＤ）タンパク質の欠損症は、ＰＣＴにおいて示される臨床症状を結果として生じる。１ｐ３４．１に位置し、１０エクソンに及ぶＵＲＯＤ遺伝子は、ＵＲＯＤタンパク質をコードする。不十分な量のＵＲＯＤタンパク質を結果としてもたらすＵＲＯＤ遺伝子の変異が、ＰＣＴの進行の原因であることが示されてきた。ある研究では、ＵＲＯＤ遺伝子におけるＧ３８１Ｖ突然変異は、ＰＣＴの家族性バージョン（ｆａｍｉｌｉａｌｖｅｒｓｉｏｎｏｆＰＣＴ）を持つ患者において示され、これがＵＲＯＤタンパク質の減少したレベルを結果としてもたらした。他の研究では、減少したＵＲＯＤタンパク質のレベルとＰＣＴの進行との間の相互関係も示されてきた。 Uroporphyrinogen decarboxylase (UROD) protein deficiency results in the clinical symptoms shown in PCT. The UROD gene, located at 1p34.1 and spans 10 exons, encodes the UROD protein. It has been shown that mutations in the UROD gene resulting in insufficient amounts of UROD protein are responsible for PCT progression. In one study, a G381V mutation in the UROD gene was shown in patients with a familial version of PCT, which resulted in decreased levels of UROD protein. Other studies have also shown a correlation between decreased UROD protein levels and PCT progression.

＜急性間欠性ポルフィリン症＞
いくつかの実施形態では、本明細書に記載された本発明は常染色体優性肝疾患の急性間欠性ポルフィリン症（ＡＩＰ）を処置するために使用することができる。ＡＩＰは、ヘム生合成の欠損によって特徴づけられる。ＡＩＰの臨床症状は、腹痛症、消化管障害、および死に至る精神異常を含む。 <Acute intermittent porphyria>
In some embodiments, the invention described herein can be used to treat autosomal dominant liver disease acute intermittent porphyria (AIP). AIP is characterized by a defect in heme biosynthesis. Clinical symptoms of AIP include abdominal pain, gastrointestinal disorders, and mental abnormalities leading to death.

ポルフォビリノーゲンデアミナーゼ（ＨＭＢＳ）タンパク質（非赤血球、あるいは赤血球および非赤血球の両方）の欠損症は、ＡＩＰにおいて示される臨床症状を結果としてもたらす。１ｑ２３．３に位置し、１５エクソンに及ぶＨＭＢＳ遺伝子は、ＨＭＢＳタンパク質をコードする。ＨＭＢＳはポルフォビリノーゲンデアミナーゼ（ＰＢＧＤ）とも呼ばれる。不十分な量のＨＭＢＳタンパク質を結果としてもたらすＨＭＢＳ遺伝子の変異が、ＡＩＰの進行の原因であることが示されてきた。ある研究では、ＨＭＢＳにおける１９の独立した突然変異がＡＩＰを示す２８組の家族で発見され、ＨＭＢＳ欠損症とＡＩＰとの間の関係をさらに提供した。 A deficiency in porphobilinogen deaminase (HMBS) protein (non-erythrocytes, or both erythrocytes and non-erythrocytes) results in clinical symptoms shown in AIP. The HMBS gene, located at 1q23.3 and spanning 15 exons, encodes the HMBS protein. HMBS is also called porphobilinogen deaminase (PBGD). It has been shown that mutations in the HMBS gene that result in insufficient amounts of HMBS protein are responsible for the progression of AIP. In one study, 19 independent mutations in HMBS were found in 28 families showing AIP, further providing a relationship between HMBS deficiency and AIP.

＜超長鎖アシルＣｏＡ脱水素酵素欠損症＞
いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、常染色体劣性肝疾患の超長鎖アシルＣｏＡ脱水素酵素（ＶＬＣＡＤ）欠損症を処置するために使用されうる。ＶＬＣＡＤは、ミトコンドリアの脂肪酸酸化の欠損に起因する病状であると考えられる非ケトン性低血糖症、心肺停止、肝腫大、心臓肥大、および低血圧症に特徴づけられる。 <Ultra long chain acyl-CoA dehydrogenase deficiency>
In some embodiments, the invention described herein can be used to treat very long chain acyl CoA dehydrogenase (VLCAD) deficiency in autosomal recessive liver disease. VLCAD is characterized by non-ketotic hypoglycemia, cardiopulmonary arrest, hepatomegaly, cardiac hypertrophy, and hypotension that are thought to be due to a deficiency in mitochondrial fatty acid oxidation.

ＶＬＣＡＤタンパク質の欠損症はＶＬＣＡＤ欠損症において示される臨床症状を結果として生じる。１７ｐ１３．１に位置し、２０エクソンに及ぶＡＣＡＤＶＬ遺伝子は、ＶＬＣＡＤタンパク質をコードする。不十分な量のＶＬＣＡＤタンパク質を結果としてもたらすＡＣＡＤＶＬ遺伝子の変異が、ＶＬＣＡＤ欠損症の進行の原因であることが示されてきた。ある研究では、ＶＬＣＡＤ欠損症を示す２人の患者が、ＡＣＡＤＶＬ遺伝子中の１０５ｂｐの欠損部分を有することが分かった。別の研究では、２１つの様々なミスセンス変異が、ＶＬＣＡＤ欠損症を示す１８人の子供で見つかった。全体として、これらのような研究は、ＶＬＣＡＤの不足と、ＶＬＣＡＤ欠損症を示す患者で見られる臨床症状との間の明確な関係を示してきた。 VLCAD protein deficiency results in the clinical symptoms shown in VLCAD deficiency. The ACADVL gene, located at 17p13.1 and spans 20 exons, encodes the VLCAD protein. It has been shown that mutations in the ACADVL gene resulting in insufficient amounts of VLCAD protein are responsible for the progression of VLCAD deficiency. In one study, two patients with VLCAD deficiency were found to have a 105 bp deletion in the ACADVL gene. In another study, 21 different missense mutations were found in 18 children with VLCAD deficiency. Overall, studies such as these have shown a clear relationship between VLCAD deficiency and the clinical symptoms seen in patients with VLCAD deficiency.

＜ピルビン酸カルボキシラーゼ欠損症＞
いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、常染色体劣性肝疾患のピルビン酸カルボキシラーゼ（ＰＣ）欠損症を処置するために使用されうる。ＰＣ欠損症は３つの表現型のサブタイプへと分類される。北アメリカにおいてより流行しているタイプＡの患者は、乳酸血症（ｌａｃｔｉｃａｃａｄｅｍｉａ）および精神運動発達遅滞を示す。タイプＡよりも重症で、フランスと英国においてより流行しているタイプＢの患者は、増加した血清乳酸、アンモニア、シトルリン、およびリジン、ならびに死の確率がより高い細胞内酸化還元の障害を示す。タイプＣは、より軽度のＰＣ欠損症であり、一般的には良性である。 <Pyruvate carboxylase deficiency>
In some embodiments, the invention described herein can be used to treat pyruvate carboxylase (PC) deficiency of autosomal recessive liver disease. PC deficiency is classified into three phenotypic subtypes. Type A patients, which are more prevalent in North America, show lacticemia and psychomotor developmental delay. Type B patients who are more severe than type A and more prevalent in France and the UK show increased serum lactic acid, ammonia, citrulline, and lysine, and an intracellular redox disorder with a higher probability of death. Type C is a milder PC deficiency and is generally benign.

ピルビン酸カルボキシラーゼ（ＰＣ）タンパク質の不足は、ＰＣ欠損症において示される臨床症状を結果として生じる。１１ｑ１３．２に位置し、１９エクソンに及ぶＰＣ遺伝子は、ＰＣタンパク質をコードする。家族性の遺伝は常染色体劣性の機構を介して進行すると考えられ、かつ保因頻度は、特定の家族中１０人に１人と同じくらい高いと推測される。不十分な量のＰＣタンパク質を結果としてもたらすＰＣ遺伝子の変異が、ＰＣ欠損症の進行の原因であることが示されてきた。ある研究では、タイプＡＰＣ欠損症に苦しむ患者のＰＣ遺伝子においてミスセンス変異が発見され、それによってＰＣタンパク質レベルの不足と、ＰＣ欠損症に関係する臨床症状との間の関係が提供される。 The deficiency of pyruvate carboxylase (PC) protein results in the clinical symptoms shown in PC deficiency. A PC gene located at 11q13.2 and spans 19 exons encodes a PC protein. Familial inheritance is thought to proceed through an autosomal recessive mechanism, and the carrier frequency is estimated to be as high as 1 in 10 in a particular family. It has been shown that mutations in the PC gene that result in insufficient amounts of PC protein are responsible for the progression of PC deficiency. In one study, a missense mutation was discovered in the PC gene of a patient suffering from type A PC deficiency, thereby providing a relationship between a deficiency in PC protein levels and clinical symptoms associated with PC deficiency.

＜イソ吉草酸血症＞
いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、常染色体劣性肝疾患のイソ吉草酸血症（ｉｓｏｖａｌｅｒｉｃａｃａｄｅｍｉａ）（ＩＶＡ）を処置するために使用されうる。ＩＶＡは２つの表現型のサブタイプへと分類される：急性・慢性のサブタイプ。急性のサブタイプは、大規模な代謝性アシドーシスを引き起こし、最終的に死に至る。慢性のサブタイプは、無症状の期間の後に、重症のケトアシドーシスの発作の期間を結果としてもたらす。ＩＶＡの臨床症状は、特異臭、食物タンパク質に対する嫌悪感、および嘔吐を含む。 <Isovaleric acidemia>
In some embodiments, the invention described herein can be used to treat autosomal recessive liver disease, isovaleric acidemia (IVA). IVA is divided into two phenotypic subtypes: acute and chronic subtypes. Acute subtypes cause massive metabolic acidosis and eventually death. Chronic subtypes result in a period of severe ketoacidosis attacks after an asymptomatic period. Clinical symptoms of IVA include a specific odor, aversion to food proteins, and vomiting.

イソバレリルＣｏＡデヒドロゲナーゼ（ＩＶＤ）タンパク質の不足は、ＩＶＡにおいて示される臨床症状を結果として生じる。１５ｑ１３に位置し、１２エクソンに及ぶＩＶＤ遺伝子は、ＩＶＤタンパク質をコードする。不十分な量のＩＶＤタンパク質を結果としてもたらすＩＶＤ遺伝子の変異が、ＩＶＡ欠損症の進行の原因であることが示されてきた。いくつかの研究では、ＩＶＤ欠損症を結果としてもたらすＩＶＤの多数の様々な突然変異が調査され、突然変異がＩＶＡで見られる臨床症状を引き起こすＩＶＤタンパク質の量の欠失を結果としてもたらすことを示してきた。 Lack of isovaleryl CoA dehydrogenase (IVD) protein results in the clinical symptoms shown in IVA. The IVD gene located at 15q13 and spans 12 exons encodes an IVD protein. It has been shown that mutations in the IVD gene that result in insufficient amounts of IVD protein are responsible for the progression of IVA deficiency. Several studies have investigated a number of different mutations in IVD that result in IVD deficiency and show that the mutation results in a deletion of the amount of IVD protein that causes the clinical symptoms seen in IVA. I came.

＜高カイロミクロン血症／高トリグリセリド血症＞
いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、常染色体優性肝疾患の高カイロミクロン血症を処置するために使用されうる。高カイロミクロン血症は、血漿中の、カイロミクロンおよび超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）の量の増加、並びにＬＤＬおよび高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）の低下によって特徴づけられる。 <High chylomicronemia / hypertriglyceridemia>
In some embodiments, the invention described herein can be used to treat hyperchylomicronemia of autosomal dominant liver disease. Hyper chylomicronemia is characterized by increased amounts of chylomicron and very low density lipoprotein (VLDL) and decreased LDL and high density lipoprotein (HDL) in plasma.

いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、常染色体優性肝疾患の高トリグリセリド血症を処置するために使用されうる。高トリグリセリド血症に苦しむ患者は、一般的には、コレステロールのレベルが正常であるが、トリグリセリドのレベルの上昇を示す。トリグリセリドの上昇以外は、患者は一般的には無症状である。 In some embodiments, the invention described herein can be used to treat hypertriglyceridemia of autosomal dominant liver disease. Patients suffering from hypertriglyceridemia generally have elevated levels of triglycerides, although cholesterol levels are normal. Except for elevated triglycerides, patients are generally asymptomatic.

アポリポタンパク質Ａ−Ｖ（ＡＰＯＡ５）タンパク質の不足は、高カイロミクロン血症と高トリグリセリド血症との両方において示される臨床症状を結果として生じる。１１ｑ２３．３に位置し、４エクソンに及ぶＡＰＯＡ５遺伝子は、ＡＰＯＡ５タンパク質をコードする。不十分な量のＡＰＯＡ５タンパク質を結果としてもたらすＡＰＯＡ５遺伝子の変異が、高カイロミクロン血症および高トリグリセリド血症の両方の進行の原因であることが示されてきた。いくつかの研究では、高カイロミクロン血症および高トリグリセリド血症の両方を結果としてもたらすＡＰＯＡ５の多数の様々な突然変異が調査されてきた。例えば、ある研究では、ＡＰＯＡ５におけるＳ１９Ｗの突然変異は、ＡＰＯＡ５のタンパク質の量の欠損を結果としてもたらすことが示され、これは患者の家族において高カイロミクロン血症として現われた。 A lack of apolipoprotein AV (APOA5) protein results in clinical symptoms that are shown in both hyperchylomicronemia and hypertriglyceridemia. The APOA5 gene, located at 11q23.3 and spanning 4 exons, encodes the APOA5 protein. It has been shown that mutations in the APOA5 gene that result in insufficient amounts of APOA5 protein are responsible for the progression of both hyperchylomicronemia and hypertriglyceridemia. Several studies have investigated a number of different mutations in APOA5 that result in both hyperchylomicronemia and hypertriglyceridemia. For example, one study has shown that a mutation of S19W in APOA5 results in a deficiency in the amount of protein in APOA5, which has manifested as hyperchylomicronemia in the patient's family.

＜ガラクトース血症＞
いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、常染色体劣性肝疾患のガラクトース血症を処置するために使用されうる。ガラクトース血症は一般的には新生児の発達中に現われ、黄疸、肝脾腫、肝細胞機能不全、食物不耐性、低血糖症、腎尿細管機能障害、筋緊張低下、敗血症、および白内障によって特徴づけられる。経時的に、ガラクトース血症に悩む患者は、精神遅滞、言語協調障害、運動異常、および高ゴナドトロピン性性腺機能低下症を経験する。 <Galactosemia>
In some embodiments, the invention described herein can be used to treat galactosemia of autosomal recessive liver disease. Galactosemia commonly appears during neonatal development and is characterized by jaundice, hepatosplenomegaly, hepatocyte dysfunction, food intolerance, hypoglycemia, renal tubular dysfunction, hypotonia, sepsis, and cataract It is done. Over time, patients suffering from galactosemia experience mental retardation, impaired language coordination, motor abnormalities, and hypergonadotropic hypogonadism.

ガラクトース−１−リン酸ウリジルトランスフェラーゼ（ＧＡＬＴ）タンパク質の不足は、ガラクトース血症において示される臨床症状を結果として生じる。１５ｑ１１．２に位置し、１１エクソンに及ぶＧＡＬＴ遺伝子は、ＧＡＬＴタンパク質をコードする。不十分な量のＧＡＬＴタンパク質を結果としてもたらすＧＡＬＴ遺伝子の変異が、ガラクトース血症の進行の原因であることが示されてきた。いくつかの研究では、ガラクトース血症を結果としてもたらすＧＡＬＴの多数の様々な突然変異が調査され、突然変異がガラクトース血症で見られる臨床症状を引き起こすＧＡＬＴタンパク質の量の欠失を結果としてもたらすことを示してきた。ある研究では、Ｍ１４２Ｋ突然変異が、正常なレベルのおよそ４％までＧＡＬＴタンパク質の量を低下させることが分かり、これによって、ＧＡＬＴタンパク質の量の不足と、ガラクトース血症の臨床的進行との間の明確な関係が提供される。 Lack of galactose-1-phosphate uridyltransferase (GALT) protein results in the clinical symptoms shown in galactosemia. The GALT gene, located at 15q11.2 and spanning 11 exons, encodes the GALT protein. It has been shown that mutations in the GALT gene that result in insufficient amounts of GALT protein are responsible for the progression of galactosemia. In some studies, many different mutations in GALT that result in galactosemia have been investigated and the mutation results in a loss of the amount of GALT protein that causes the clinical symptoms seen in galactosemia. Has been shown. In one study, the M142K mutation was found to reduce the amount of GALT protein to approximately 4% of normal levels, thereby reducing the amount of GALT protein and the clinical progression of galactosemia. A clear relationship is provided.

＜高コレステロール血症＞
いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、常染色体劣性肝疾患の高コレステロール血症（ＡＲＨ）を処置するために使用されうる。ＡＲＨは、ひどく上昇した血漿低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）のコレステロール、結節状のおよび腱の黄色腫、ならびに早発性アテローム動脈硬化症によって特徴づけられる。 <Hypercholesterolemia>
In some embodiments, the invention described herein can be used to treat autosomal recessive liver disease hypercholesterolemia (ARH). ARH is characterized by severely elevated plasma low density lipoprotein (LDL) cholesterol, nodular and tendon xanthomas, and premature atherosclerosis.

低密度リポタンパク質受容体アダプタータンパク質１（ＬＤＬＲＡＰ１）であるタンパク質の不足は、ＡＲＨにおいて示される臨床症状を結果として生じる。１ｐ３６．１１に位置し、９エクソンに及ぶＬＤＬＲＡＰ１遺伝子は、ＬＤＬＲＡＰ１タンパク質をコードする。不十分な量のＬＤＬＲＡＰ１タンパク質を結果としてもたらすＬＤＬＲＡＰ１遺伝子の変異が、ＡＲＨの進行の原因であることが示されてきた。いくつかの研究では、ＡＲＨを結果としてもたらすＬＤＬＲＡＰ１の多数の様々な突然変異が調査され、ＬＤＬＲＡＰ１タンパク質の量の欠失を結果としてもたらす突然変異が、ＡＲＨで見られる臨床症状を引き起こすことを示してきた。多くの研究で、ＬＤＬＲＡＰ１タンパク質の量の実質的な減少を結果としてもたらすＬＤＬＲＡＰ１遺伝子における保存されたナンセンス変異を検査する、すなわちＡＲＨに関係する臨床症状が検査された。 The lack of a protein that is low density lipoprotein receptor adapter protein 1 (LDLRAP1) results in clinical symptoms shown in ARH. The LDLRAP1 gene, located at 1p36.11 and spanning 9 exons, encodes the LDLRAP1 protein. It has been shown that mutations in the LDLRAP1 gene that result in insufficient amounts of LDLRAP1 protein are responsible for the progression of ARH. Several studies have investigated a number of different mutations in LDLRAP1 that result in ARH and have shown that mutations that result in a loss of the amount of LDLRAP1 protein cause the clinical symptoms seen in ARH. It was. Many studies have examined conserved nonsense mutations in the LDLRAP1 gene that result in a substantial reduction in the amount of LDLRAP1 protein, ie, clinical symptoms related to ARH.

＜糖尿病＞
いくつかの実施形態では、本明細書に記載された発明は、若年発症成人型糖尿病タイプ１（ＭＯＤＹ１）を処置するために使用することができる．他の実施形態では、本明細書に記載された発明は、若年発症成人型糖尿病タイプ２（ＭＯＤＹ２）を処置するために使用することができる．他の実施形態では、本明細書に記載された発明は、若年発症成人型糖尿病タイプ３（ＭＯＤＹ３）を処置するために使用することができる．他の実施形態では、本明細書に記載された発明は、インスリン非依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）を処置するために使用することができる．他の実施形態では、本明細書に記載された発明は、インスリン依存性糖尿病１（ＩＤＤＭ１）を処置するために使用することができる．他の実施形態では、本明細書に記載された発明は、インスリン依存性糖尿病２０（ＩＤＤＭ２０）を処置するために使用することができる．他の実施形態では、本明細書に記載された発明は、若年発症成人型糖尿病と共にファルコーニ腎尿細管症候群４（Ｆａｌｃｏｎｉｒｅｎｏｔｕｂｕｌａｒｓｙｎｄｒｏｍｅ４）（ＦＲＴＳ４）を処置するために使用することができる．他の実施形態では、本明細書に記載された発明は、家族性高インスリン性低血糖症３（ＨＨＦ３）を処置するために使用することができる．他の実施形態では、本明細書に記載された発明は、永続型新生児糖尿病（ＰＮＤＭ）を処置するために使用することができる．糖尿病は、頻尿症、多渇症、空腹の増長、糖尿病性ケトアシドーシス、循環器疾患、脳卒中、慢性腎不全、足潰瘍、目への損傷を含む症状と共に、高血糖によって特徴づけられる代謝疾患のグループである。 <Diabetes>
In some embodiments, the invention described herein can be used to treat juvenile onset adult diabetes type 1 (MODY1). In other embodiments, the invention described herein can be used to treat juvenile onset adult type 2 diabetes (MODY2). In other embodiments, the invention described herein can be used to treat juvenile onset adult diabetes type 3 (MODY3). In other embodiments, the invention described herein can be used to treat non-insulin dependent diabetes mellitus (NIDDM). In other embodiments, the invention described herein can be used to treat insulin dependent diabetes 1 (IDDM1). In other embodiments, the invention described herein can be used to treat insulin dependent diabetes 20 (IDDM20). In other embodiments, the invention described herein can be used to treat Falconi renotubular syndrome 4 (FRTS4) with juvenile-onset adult type diabetes. In other embodiments, the invention described herein can be used to treat familial hyperinsulinic hypoglycemia 3 (HHF3). In other embodiments, the invention described herein can be used to treat permanent neonatal diabetes (PNDM). Diabetes is a metabolic disorder characterized by hyperglycemia, with symptoms including frequent urination, polyposis, increased hunger, diabetic ketoacidosis, cardiovascular disease, stroke, chronic renal failure, foot ulcers, and eye damage It is a group.

糖尿病の進行の一因となりうる多数の因子が存在する一方、タンパク質である肝細胞核因子４アルファ（ＨＮＦ４Ａ）の不足は、ＭＯＤＹ１、ＮＩＤＤＭ、およびＦＲＴＳ４の発生率に相互に関連することが示されてきた。２０ｑ１３．１２に位置し、１２エクソンに及ぶＨＮＦ４Ａ遺伝子は、ＨＮＦ４Ａタンパク質をコードする。不十分な量のＨＮＦ４Ａタンパク質を結果としてもたらすＨＮＦ４Ａ遺伝子の変異が、ＭＯＤＹ１、ＮＩＤＤＭ、およびＦＲＴＳ４の進行の原因であることが示されてきた。いくつかの研究では、ＭＯＤＹ１、ＮＩＤＤＭ、およびＦＲＴＳ４を結果としてもたらすＨＮＦ４Ａの多数の様々な突然変異が調査され、ＨＮＦ４Ａタンパク質の量の欠失を結果としてもたらす突然変異が、糖尿病で見られる臨床症状を引き起こすことを示してきた。例えば、１つの研究はそれを実証した。Ｑ２６８におけるナンセンス変異は、ＭＯＤＹ１に悩む大規模な患者の集団において存在した。別の研究では、著者は、ＨＮＦ４Ａにおける突然変異が増大した出生時体重および巨人症に関連し、その突然変異は、最終的には糖尿病で悩む患者において見られる高インスリン血症へと発展すると、結論を下した。このような研究およびその他の研究は、発現したＨＮＦ４Ａタンパク質の量の不足と、糖尿病の進行との相互関係を明確に示した。 While there are many factors that can contribute to the progression of diabetes, deficiency of the protein hepatocyte nuclear factor 4 alpha (HNF4A) has been shown to correlate with the incidence of MODY1, NIDDM, and FRTS4. It was. The HNF4A gene, located at 20q13.12 and spanning 12 exons, encodes the HNF4A protein. It has been shown that mutations in the HNF4A gene that result in insufficient amounts of HNF4A protein are responsible for the progression of MODY1, NIDDM, and FRTS4. Several studies have investigated a number of different mutations in HNF4A that result in MODY1, NIDDM, and FRTS4, and mutations that result in a loss of the amount of HNF4A protein are associated with clinical symptoms seen in diabetes. It has been shown to cause. For example, one study demonstrated it. A nonsense mutation in Q268 was present in a large population of patients suffering from MODY1. In another study, the authors found that mutations in HNF4A are associated with increased birth weight and giantism, which eventually develops into hyperinsulinemia seen in patients suffering from diabetes, Conclusion was made. These and other studies clearly showed a correlation between the lack of expressed HNF4A protein and the progression of diabetes.

タンパク質であるグルコキナーゼ（ＧＣＫ）の不足は、ＮＩＤＤＭ、ＭＯＤＹ２、ＨＨＦ３、およびＰＮＤＭの発生率に相互に関連することが示されてきた。７ｐ１３に位置し、１２エクソンに及ぶＧＣＫ遺伝子は、ＧＣＫタンパク質をコードする。不十分な量のＧＣＫＡタンパク質を結果としてもたらすＧＣＫ遺伝子の変異が、ＮＩＤＤＭ、ＭＯＤＹ２、ＨＨＦ３、およびＰＮＤＭの進行の原因であることが示されてきた。いくつかの研究では、ＮＩＤＤＭ、ＭＯＤＹ２、ＨＨＦ３、およびＰＮＤＭを結果としてもたらすＧＣＫの多数の様々な突然変異が調査され、発現したＧＣＫタンパク質の量の不足と、糖尿病の進行との相互関係が明確に示されてきた。 The deficiency of the protein glucokinase (GCK) has been shown to correlate with the incidence of NIDDM, MODY2, HHF3, and PNDM. The GCK gene, located at 7p13 and spanning 12 exons, encodes the GCK protein. It has been shown that mutations in the GCK gene that result in insufficient amounts of GCKA protein are responsible for the progression of NIDDM, MODY2, HHF3, and PNDM. Several studies have investigated a number of different mutations in GCK that result in NIDDM, MODY2, HHF3, and PNDM, and have shown a clear correlation between the lack of expressed GCK protein and the progression of diabetes Has been shown.

タンパク質である、肝核因子−１−アルファアルブミン近位因子（ａｌｂｕｌｉｍｐｒｏｘｉｍａｌｆａｃｔｏｒ）（ＨＮＦ１Ａ）の不足は、ＭＯＤＹ３、ＩＤＤＭ２０、ＩＤＤＭ１、およびＮＩＤＤＭの発生率に相互に関連すると示されてきた。１２ｑ２４．３１に位置し、１０エクソンに及ぶＨＮＦ１Ａ遺伝子は、ＨＮＦ１Ａタンパク質をコードする。不十分な量のＨＮＦ１Ａタンパク質を結果としてもたらすＨＮＦ１Ａ遺伝子の変異が、ＭＯＤＹ３、ＩＤＤＭ２０、ＩＤＤＭ１、およびＮＩＤＤＭの進行の原因であることが示されてきた。いくつかの研究では、ＭＯＤＹ３、ＩＤＤＭ２０、ＩＤＤＭ１、およびＮＩＤＤＭを結果としてもたらすＨＮＦ１Ａの多数の様々な突然変異が調査され、発現したＨＮＦ１Ａタンパク質の量の不足と、糖尿病の進行との相互関係が明確に示されてきた。 The deficiency of the protein, hepatic nuclear factor-1-alpha albumin proximal factor (HNF1A), has been shown to correlate with the incidence of MODY3, IDDM20, IDDM1, and NIDDM. The HNF1A gene, located at 12q24.31 and spans 10 exons, encodes the HNF1A protein. It has been shown that mutations in the HNF1A gene that result in insufficient amounts of HNF1A protein are responsible for the progression of MODY3, IDDM20, IDDM1, and NIDDM. Several studies have investigated a number of different mutations in HNF1A that result in MODY3, IDDM20, IDDM1, and NIDDM, and clearly correlate the lack of expressed HNF1A protein with the progression of diabetes Has been shown.

タンパク質である核受容体コアクチベーター５（ＮＣＯＡ５）の不足は、タイプＩＩ糖尿病、耐糖能障害、および最終的には肝臓癌の発生率に相互に関連すると示されてきた。２０ｑ１３．１２に位置し、８エクソンに及ぶＮＣＯＡ５遺伝子は、ＮＣＯＡ５タンパク質をコードする。不十分な量のＮＣＯＡ５タンパク質を結果としてもたらすＮＣＯＡ５遺伝子の変異が、糖尿病の進行の原因であることが示されてきた。いくつかの研究では、糖尿病を結果としてもたらす糖尿病の多数の様々な突然変異が調査され、発現した糖尿病タンパク質の量の不足と、糖尿病の進行との相互関係が明確に示されてきた。 The deficiency of the protein nuclear receptor coactivator 5 (NCOA5) has been shown to correlate with the incidence of type II diabetes, impaired glucose tolerance, and ultimately liver cancer. The NCOA5 gene, located at 20q13.12 and spanning 8 exons, encodes the NCOA5 protein. It has been shown that mutations in the NCOA5 gene that result in insufficient amounts of NCOA5 protein are responsible for the progression of diabetes. Several studies have investigated a number of different mutations in diabetes that result in diabetes and have clearly shown a correlation between the lack of expressed amount of diabetes protein and the progression of diabetes.

＜肝腺腫＞
いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、常染色体優性肝疾患の肝腺腫を処置するために使用されうる。肝腺腫は、悪性転換のリスクが非常に低い珍しい良性の肝腫瘍である。肝腺腫に悩む患者は、腫瘍が出血し始めなければ一般的には無症状であるが、出血すれば、低血圧症、頻脈症、および発汗を引き起こす可能性がある。 <Liver adenoma>
In some embodiments, the invention described herein can be used to treat hepatic adenoma of autosomal dominant liver disease. Liver adenoma is a rare benign liver tumor with a very low risk of malignant transformation. Patients suffering from hepatic adenoma are generally asymptomatic unless the tumor begins to bleed, but bleeding can cause hypotension, tachycardia, and sweating.

ＨＮＦ１Ａタンパク質中の不足は、肝腺腫の進行を結果としてもたらしうる。不十分な量のＨＮＦ１Ａタンパク質を結果としてもたらすＨＮＦ１Ａ遺伝子の変異が、肝腺腫の進行の原因であることが示されてきた。 A deficiency in the HNF1A protein can result in hepatic adenoma progression. It has been shown that mutations in the HNF1A gene that result in insufficient amounts of HNF1A protein are responsible for the progression of hepatic adenoma.

＜ダウリング−デゴス病４＞
いくつかの実施形態では、本明細書に記載された発明は常染色体優性肝疾患のダウリング−デゴス病４（ＤＤＤ４）を処置するために使用することができる。ＤＤＤ４は、成人期に、特に皮膚のひだに現れる網様色素沈着（ｒｅｔｒｉｃｕｌａｒｐｉｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ）によって特徴づけられる。病状が体細胞に影響を与えている一方、色素沈着は肝臓の機能不全に起因する。 <Dowling-Degos disease 4>
In some embodiments, the invention described herein can be used to treat the autosomal dominant liver disease Dowling-Degos Disease 4 (DDD4). DDD4 is characterized by reticulated pigmentation that appears in adulthood, especially in the skin folds. While the pathology affects somatic cells, pigmentation results from liver dysfunction.

タンパク質であるＯ−グルコシルトランスフェラーゼ１（ＬＤＬＲＡＰ１）の不足は、ＤＤＤ４において示される臨床症状を結果として生じる。３ｑ１３．３３に位置し、１１エクソンに及ぶＰＯＧＬＵＴ１遺伝子は、ＰＯＧＬＵＴ１タンパク質をコードする。不十分な量のＰＯＧＬＵＴ１タンパク質を結果としてもたらすＰＯＧＬＵＴ１遺伝子の変異が、ＤＤＤ４の進行の原因であることが示されてきた。いくつかの研究では、ＤＤＤ４を結果としてもたらすＰＯＧＬＵＴ１の多数の様々な突然変異が調査され、ＰＯＧＬＵＴ１タンパク質の量の欠失を結果としてもたらす突然変異が、ＤＤＤ４で見られる臨床症状を引き起こすことを示してきた。 The deficiency of the protein O-glucosyltransferase 1 (LDLRAP1) results in the clinical symptoms shown in DDD4. The POGLUT1 gene, located at 3q13.33 and spanning 11 exons, encodes the POGLUT1 protein. It has been shown that mutations in the POGLUT1 gene that result in insufficient amounts of POGLUT1 protein are responsible for the progression of DDD4. Several studies have investigated a number of different mutations in POGLUT1 that result in DDD4 and have shown that mutations that result in a loss of the amount of POGLUT1 protein cause the clinical symptoms seen in DDD4. It was.

＜ＳＨＯＲＴ症候群／免疫不全３６／無ガンマグロブリン血症７＞
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される発明は、ＳＨＯＲＴ症候群を治療するために使用される。ＳＨＯＲＴ症候群は、低身長、関節の過伸展および／または鼡径ヘルニア、眼球陥凹、リーガー異常、および歯生遅延を含む疾病に関係する臨床症状のアクロニムである。ＳＨＯＲＴ症候群に特有な他の症状は、三角形の顔、くぼみのある小さなあご、皮下脂肪の欠損、耳の異常な位置、聴力損失、および言語障害を含む。 <SHORT syndrome / Immunodeficiency 36 / Agammaglobulinemia 7>
In some embodiments, the invention described herein is used to treat SHORT syndrome. SHORT syndrome is an acronym of clinical symptoms related to diseases including short stature, joint hyperextension and / or inguinal hernia, ocular depression, Leger abnormalities, and delayed dentition. Other symptoms characteristic of SHORT syndrome include a triangular face, a small chin with a depression, a loss of subcutaneous fat, an abnormal position of the ear, hearing loss, and speech impairment.

いくつかの実施形態では、本明細書に記載された発明は、常染色体優性の疾患である免疫不全３６（ＩＭＤ３６）を処置するために使用することができる。ＩＭＤ３６は、損なわれたＢ細胞の機能、低ガンマグロブリン血症、および反復感染によって特徴づけられる。 In some embodiments, the invention described herein can be used to treat immunodeficiency 36 (IMD36), an autosomal dominant disease. IMD36 is characterized by impaired B cell function, hypogammaglobulinemia, and recurrent infection.

いくつかの実施形態では、本明細書に記載された発明は、常染色体劣性の疾患である無ガンマグロブリン血症７（ＡＧＭ７）を処置するために使用することができる。ＡＧＭ７は、損なわれたＢ細胞の機能、低ガンマグロブリン血症、および反復感染によって特徴づけられる。ＡＧＭ７は、低血清抗体および低循環のＢ細胞によって特徴づけられる免疫不全疾患であり、反復感染を結果としてもたらす。 In some embodiments, the invention described herein can be used to treat agammaglobulinemia 7 (AGM7), an autosomal recessive disease. AGM7 is characterized by impaired B cell function, hypogammaglobulinemia, and recurrent infection. AGM7 is an immunodeficiency disease characterized by low serum antibodies and low circulating B cells, resulting in recurrent infection.

タンパク質であるホスファチジルイノシトール３−キナーゼ調節サブユニット１（ＰＩＫ３Ｒ１）の不足は、ＳＨＯＲＴ症候群、ＩＭＤ３６、およびＡＧＭ７において示される臨床症状を結果として生じる。５ｑ１３．１に位置し、１６エクソンに及ぶＰＩＫ３Ｒ１遺伝子は、ＰＩＫ３Ｒ１タンパク質をコードする。不十分な量のＰＩＫ３Ｒ１タンパク質を結果としてもたらすＰＩＫ３Ｒ１遺伝子の変異がＳＨＯＲＴ症候群、ＩＭＤ３６、およびＡＧＭ７の進行の原因であることが示されてきた。いくつかの研究ではＳＨＯＲＴ症候群、ＩＭＤ３６、およびＡＧＭ７を結果としてもたらすＰＩＫ３Ｒ１の多数の様々な突然変異が調査されてきた。ある研究では、ＰＩＫ３Ｒ１におけるＲ６４９Ｗの突然変異は、ＳＨＯＲＴ症候群と診断された無関係な個体の集団において発見された。同じ突然変異が感染していた母および彼女の２人の息子において見つかり、これにより、ＳＨＯＲＴ症候群の遺伝の常染色体優性パターンの証拠がもたらされた。 The deficiency of the protein phosphatidylinositol 3-kinase regulatory subunit 1 (PIK3R1) results in clinical symptoms shown in SHORT syndrome, IMD36, and AGM7. The PIK3R1 gene, located at 5q13.1 and spanning 16 exons, encodes the PIK3R1 protein. Mutations in the PIK3R1 gene that result in insufficient amounts of PIK3R1 protein have been shown to be responsible for the progression of SHORT syndrome, IMD36, and AGM7. Several studies have investigated a number of different mutations of PIK3R1 that result in SHORT syndrome, IMD36, and AGM7. In one study, a mutation of R649W in PIK3R1 was found in a population of unrelated individuals diagnosed with SHORT syndrome. The same mutation was found in an infected mother and her two sons, which provided evidence of an autosomal dominant pattern of SHORT syndrome inheritance.

＜脂質代謝障害＞
いくつかの実施形態では、本明細書に記載された発明は、タンパク質であるＴｒｉｂｂｌｅｓ−１（ＴＲＩＢ１）の不足によって引き起こされる脂質代謝欠損症を処置するために使用することができる。８ｑ２４．１３に位置し、３エクソンに及ぶＴＲＩＢ１遺伝子によりコードされるＴＲＩＢ１タンパク質の量の欠失は、アテローム動脈硬化症の増大したリスクに関連づけられることが示されてきた。ＴＲＩＢ１が欠如したマウスは、脂肪分解の増加に伴って脂肪組織量を減少させることが示され、これにより、ＴＲＩＢ１の減少したレベルと、脂質代謝の機能不全とが明確に関連付けられた。 <Lipid metabolism disorder>
In some embodiments, the invention described herein can be used to treat lipid metabolism deficiency caused by a deficiency of the protein Tribles-1 (TRIB1). Deletion of the amount of TRIB1 protein located at 8q24.13 and encoded by the TRIB1 gene spanning 3 exons has been shown to be associated with an increased risk of atherosclerosis. Mice lacking TRIB1 have been shown to decrease adipose tissue mass with increased lipolysis, which clearly associated with reduced levels of TRIB1 and dysfunction of lipid metabolism.

いくつかの実施形態では、本明細書に記載された発明は、タンパク質であるペルオキシソーム増殖因子活性化受容体デルタ（ＰＰＡＲＤ）の不足によって引き起こされる脂質代謝欠損症を処置するために使用することができる。染色体６に位置し、８エクソンに及ぶＰＰＡＲＤ遺伝子によりコードされるＰＰＡＲＤタンパク質の量の欠失は、増大した脂質代謝の機能障害に関連づけられることが示されてきた。 In some embodiments, the invention described herein can be used to treat lipid metabolism deficiency caused by a deficiency of the protein peroxisome proliferator activated receptor delta (PPARD). . Deletions in the amount of PPARD protein located on chromosome 6 and encoded by the PPARD gene spanning 8 exons have been shown to be associated with increased dysfunction of lipid metabolism.

＜肝臓炎＞
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される発明は、タンパク質である形質転換増殖因子ベータ−１（ＴＧＦＢ１）の不足によって引き起こされる肝臓炎を処置するために使用することができる。１９ｑ１３．２に位置し、７エクソンに及ぶＴＧＢＦ１遺伝子によりコードされるＴＧＢＦ１タンパク質の量の欠失は、アテローム動脈硬化症の増大したリスクに関連づけられることが示されてきた。ＴＧＢＦ１（−／−）遺伝子型を示すノックアウトマウスは、ＣＤ４（＋）Ｔ細胞媒介性炎症により重度の肝臓炎を発現させることが示された。そのような研究によって、ＴＧＢＦ１タンパク質の量の不足と、肝臓炎の増加した発生率との間の正相関が提供された。 <Hepatitis>
In some embodiments, the invention described herein can be used to treat hepatitis caused by a deficiency of the protein transforming growth factor beta-1 (TGFB1). Deletion of the amount of TGBF1 protein located by 19q13.2 and spanning 7 exons encoded by the TGBF1 gene has been shown to be associated with an increased risk of atherosclerosis. Knockout mice exhibiting a TGBF1 (− / −) genotype were shown to develop severe hepatitis due to CD4 (+) T cell mediated inflammation. Such studies provided a positive correlation between the lack of TGBF1 protein amount and the increased incidence of hepatitis.

いくつかの実施形態では、本明細書に記載された発明は、タンパク質であるインターロイキン６（ＩＬ６）の不足によって引き起こされる脂質炎症を処置するために使用することができる。７ｐ１５．３に位置し、５エクソンに及ぶＩＬ６遺伝子によりコードされるＩＬ６タンパク質の量の欠失は、した脂質炎症に関連づけられることが示されてきた。 In some embodiments, the invention described herein can be used to treat lipid inflammation caused by a deficiency of the protein interleukin 6 (IL6). Deletion in the amount of IL6 protein located at 7p15.3 and encoded by the IL6 gene spanning 5 exons has been shown to be associated with impaired lipid inflammation.

いくつかの実施形態では、本明細書に記載された発明は、セラミドシンターゼ２（ＣＥＲＳ２）タンパク質の不足によって引き起こされる脂質代謝または脂肪性肝炎を処置するために使用することができる。１ｑ２１．３に位置し、１１エクソンに及ぶＣＥＲＳ２遺伝子によりコードされるＣＥＲＳ２タンパク質の量の欠失は、脂肪性肝炎およびインスリン抵抗性に関連づけられることが示されてきた。 In some embodiments, the invention described herein can be used to treat lipid metabolism or steatohepatitis caused by a deficiency of ceramide synthase 2 (CERS2) protein. Deletion of the amount of CERS2 protein located at 1q21.3 and encoded by the CERS2 gene spanning 11 exons has been shown to be associated with steatohepatitis and insulin resistance.

＜ヘモクロマトーシス２Ｂ型＞
いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、常染色体劣性肝疾患のヘモクロマトーシス２Ｂ型（ＨＦＥ２Ｂ）を処置するために使用されうる。ＨＦＥ２Ｂ（そうでなければ鉄過剰として知られる）は、関節痛、疲労および脱力感によって特徴づけられ、最終的に器官障害を結果としてもたらす。 <Hemochromatosis type 2B>
In some embodiments, the invention described herein can be used to treat hemochromatosis type 2B (HFE2B) of autosomal recessive liver disease. HFE2B (otherwise known as iron overload) is characterized by joint pain, fatigue and weakness, ultimately resulting in organ damage.

タンパク質であるヘプシジン抗菌ペプチド（ＨＡＭＰ）の不足は、ＨＦＥ２Ｂにおいて示される臨床症状を結果として生じる。１９ｑ１３．１２に位置し、３エクソンに及ぶＨＡＭＰ遺伝子は、ＨＡＭＰタンパク質をコードする。不十分な量のＨＡＭＰタンパク質を結果としてもたらすＨＡＭＰ遺伝子の変異が、ＨＦＥ２Ｂの進行の原因であることが示されてきた。ＨＦＥ２Ｂに悩む患者のＧ９３およびＲ５６のナンセンス変異が報告されてきたが、Ｇ７１Ｄなどのミスセンス変異も発見されてきた。減少した量のＨＡＭＰタンパク質を結果としてもたらすこれらの突然変異がＨＦＥ２Ｂの直接的な原因であることが提唱され、それによってＨＡＭＰのレベルの減少と、ＨＦＥ２Ｂの発生率との間の直接的な相関が提供された。 The deficiency of the protein hepcidin antimicrobial peptide (HAMP) results in the clinical symptoms shown in HFE2B. The HAMP gene, located at 19q13.12 and spanning 3 exons, encodes the HAMP protein. It has been shown that mutations in the HAMP gene that result in insufficient amounts of HAMP protein are responsible for the progression of HFE2B. Nonsense mutations in G93 and R56 in patients suffering from HFE2B have been reported, but missense mutations such as G71D have also been discovered. These mutations that result in reduced amounts of HAMP protein have been proposed to be a direct cause of HFE2B, thereby providing a direct correlation between decreased levels of HAMP and the incidence of HFE2B. offered.

＜血小板減少症＞
いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、常染色体優性の血小板減少症を処置するために使用されうる。血小板減少症は、血液中の血小板の量の減少によって特徴づけられる。血小板減少症の多くの場合が無症状であるが、いくらかの患者は鼻出血などの外出血、倦怠感、疲労および一般的な脱力感を経験する。 <Thrombocytopenia>
In some embodiments, the invention described herein can be used to treat autosomal dominant thrombocytopenia. Thrombocytopenia is characterized by a decrease in the amount of platelets in the blood. Although many cases of thrombocytopenia are asymptomatic, some patients experience external bleeding such as nasal bleeding, fatigue, fatigue, and general weakness.

タンパク質であるトロンボポイエチン（ＴＨＰＯ）の不足は、血小板減少症の発生率に関連づけられると示されてきた。３ｑ２７．１に位置し、６エクソンに及ぶＴＨＰＯ遺伝子は、ＴＨＰＯタンパク質をコードする。不十分な量のＴＨＰＯタンパク質を結果としてもたらすＴＨＰＯ遺伝子の変異が、血小板減少症の進行の原因であることが示されてきた。ある研究では、単一のヌクレオチド欠失が、血小板減少症に悩む家族の３世代で見られた。この研究によって、欠損の結果としてのＴＨＰＯタンパク質レベルの不足と、血小板減少症の発生率とは関連づけられた。 Deficiency of the protein thrombopoietin (THPO) has been shown to be associated with the incidence of thrombocytopenia. The THPO gene, located at 3q27.1 and spans 6 exons, encodes the THPO protein. Mutations in the THPO gene that result in insufficient amounts of THPO protein have been shown to be responsible for the progression of thrombocytopenia. In one study, a single nucleotide deletion was seen in three generations of families suffering from thrombocytopenia. This study linked the lack of THPO protein levels as a result of the deficiency with the incidence of thrombocytopenia.

＜非アルコール性脂肪性肝疾患＞
いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を処置するために使用されうる。ＮＡＦＬＤは、肝臓における過剰なトリグリセリドの蓄積によって特徴づけられ、インスリン抵抗性および脂質異常症などの有害な代謝結果と関係しうる。ＮＡＦＬＤの進行に影響を与えうる因子は、肥満症、糖尿病、およびインスリン抵抗性を含む。いくつかの例では、肝臓に凝集した脂肪性沈着物よって炎症反応が促進される可能性があり、硬変または肝臓癌に進行しうる。 <Non-alcoholic fatty liver disease>
In some embodiments, the invention described herein can be used to treat nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD). NAFLD is characterized by excessive triglyceride accumulation in the liver and may be associated with adverse metabolic consequences such as insulin resistance and dyslipidemia. Factors that can affect the progression of NAFLD include obesity, diabetes, and insulin resistance. In some instances, fatty deposits aggregated in the liver can promote an inflammatory response and can progress to cirrhosis or liver cancer.

タンパク質であるパタチン様ホスホリパーゼドメイン含有タンパク質３（ＰＮＰＬＡ３）の不足は、ＮＡＦＬＤの発生率に関連づけられることが示された。２２ｑ１３に位置し、９エクソンに及ぶＰＮＰＬＡ３遺伝子は、ＰＮＰＬＡ３タンパク質をコードする。不十分な量のＰＮＰＬＡ３タンパク質を結果としてもたらすＰＮＰＬＡ３遺伝子の変異が、ＮＡＦＬＤの進行の原因であることが示されてきた。Ｃ９９Ｇ、Ｇ１１５Ｃ、Ｉ１４８Ｍ、Ｔ２１６Ｐ、およびＫ４３４Ｅなどの多型は、ＮＡＦＬＤの症状を表わす集団で発見された。これらのミスセンス変異はＰＮＰＬＡ３のレベルの減少を結果としてもたらすと示され、これにより、ＰＮＰＬＡ３タンパク質の不足とＮＡＦＬＤの進行との間の相関が提供される。 The deficiency of the protein patatin-like phospholipase domain-containing protein 3 (PNPLA3) has been shown to be related to the incidence of NAFLD. The PNPLA3 gene, located at 22q13 and spanning 9 exons, encodes the PNPLA3 protein. Mutations in the PNPLA3 gene that result in insufficient amounts of PNPLA3 protein have been shown to be responsible for the progression of NAFLD. Polymorphisms such as C99G, G115C, I148M, T216P, and K434E have been found in populations exhibiting symptoms of NAFLD. These missense mutations have been shown to result in decreased levels of PNPLA3, which provides a correlation between PNPLA3 protein deficiency and NAFLD progression.

＜ウィルソン病＞
いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、常染色体劣性障害のウィルソン病を処置するために使用されうる。ウィルソン病は、細胞内の肝銅の劇的な蓄積と、続いて起こる肝臓異常および神経異常によって特徴づけられる。ウィルソン病はそれ自体で、患者において、疲労、出血傾向もしくは錯乱の増加（肝性脳症による）、および門脈圧亢進症を示すこともある。 <Wilson's disease>
In some embodiments, the invention described herein can be used to treat autosomal recessive disorder Wilson disease. Wilson disease is characterized by a dramatic accumulation of intracellular liver copper and subsequent liver and neurological abnormalities. Wilson disease by itself may show fatigue, increased bleeding tendency or confusion (due to hepatic encephalopathy), and portal hypertension in the patient.

タンパク質である銅輸送ＡＴＰアーゼ２（ＡＴＰ７Ｂ）の不足は、ウィルソン病の発生率に関連づけられることが示されてきた。１３ｑ１４．３に位置し、２１エクソンに及ぶＡＴＰ７Ｂ遺伝子は、ＡＴＰ７Ｂタンパク質をコードする。不十分な量のＡＴＰ７Ｂタンパク質を結果としてもたらすＡＴＰ７Ｂ遺伝子の変異が、ウィルソン病の進行の原因であることが示されてきた。Ｌ４９２Ｓ、Ｙ５３２Ｈ、Ｇ５９１Ｄ、Ｒ６１６Ｑ、およびＧ６２６ＡなどのＡＴＰ７Ｂの突然変異は、ウィルソン病の症状を表わす集団で発見された。これらのミスセンス変異はＡＴＰ７Ｂのレベルの減少を結果としてもたらすと示され、これにより、ＡＴＰ７Ｂタンパク質の不足とウィルソン病の進行との間の相関が提供される。 A deficiency in the protein copper transport ATPase 2 (ATP7B) has been shown to be associated with the incidence of Wilson disease. The ATP7B gene, located at 13q14.3 and spanning 21 exons, encodes the ATP7B protein. Mutations in the ATP7B gene that result in insufficient amounts of ATP7B protein have been shown to be responsible for Wilson's disease progression. Mutations in ATP7B, such as L492S, Y532H, G591D, R616Q, and G626A, were found in a population exhibiting symptoms of Wilson disease. These missense mutations have been shown to result in decreased levels of ATP7B, providing a correlation between ATP7B protein deficiency and Wilson disease progression.

＜チロシン血症＞
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される発明は、チロシン血症を治療するために使用される。チロシン血症は、進行性の肝疾患、および低リン血症性くる病を引き起こす続発性の腎尿細管機能障害によって特徴づけられる。発現は幼時から青年期までと様々である。最も急性な型において、患者は出生後に数週間以内にひどい肝不全を示す一方で、くる病が慢性のチロシン血症における主要症状でありうる。未処置の場合、患者は硬変または肝細胞癌によって若くして死亡する。 <Tyrosineemia>
In some embodiments, the invention described herein is used to treat tyrosinemia. Tyrosineemia is characterized by progressive liver disease and secondary renal tubular dysfunction causing hypophosphatemic rickets. Expression varies from childhood to adolescence. In the most acute form, patients show severe liver failure within a few weeks after birth, while rickets can be a major symptom in chronic tyrosineemia. If untreated, the patient dies young from cirrhosis or hepatocellular carcinoma.

タンパク質であるフマリルアセトアセターゼ（ＦＡＨ）の不足は、チロシン血症の発生率に関連づけられると示されてきた。１５ｑ２５．１に位置し、１４エクソンに及ぶＦＡＨ遺伝子は、ＦＡＨタンパク質をコードする。不十分な量のＦＡＨタンパク質を結果としてもたらすＦＡＨ遺伝子の変異が、ＦＡＨの進行の原因であることが示されてきた。Ｎ１６Ｉ、Ａ１３４Ｄ、Ｃ１９３Ｒ、Ｄ２３３Ｖ、およびＱ２７９Ｒなどの多型は、ＦＡＨの症状を表わす集団で発見された。これらのミスセンス変異はＦＡＨのレベルの減少を結果としてもたらすと示され、これにより、チロシン血症タンパク質の不足とＦＡＨの進行との間の相関が提供される。 A deficiency in the protein fumaryl acetoacetase (FAH) has been shown to be associated with the incidence of tyrosinemia. The FAH gene, located at 15q25.1 and spanning 14 exons, encodes the FAH protein. Mutations in the FAH gene resulting in insufficient amounts of FAH protein have been shown to be responsible for FAH progression. Polymorphisms such as N16I, A134D, C193R, D233V, and Q279R have been found in a population that exhibits symptoms of FAH. These missense mutations have been shown to result in decreased levels of FAH, providing a correlation between deficiency of tyrosine protein and progression of FAH.

＜アルギニノコハク酸分解酵素欠損症＞
いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、常染色体劣性障害のアルギニノコハク酸分解酵素欠損症を処置するために使用されうる。アルギニノコハク酸分解酵素欠損症は、精神遅滞および発育障害、肝腫大、皮膚病変、結節性裂毛症を微視的に示しかつ赤色蛍光を発するぱさつく毛、痙攣、ならびに一時的な意識消失によって特徴づけられる。 <Argininosuccinate-degrading enzyme deficiency>
In some embodiments, the invention described herein can be used to treat an autosomal recessive disorder argininosuccinate degrading enzyme deficiency. Argininosuccinate-degrading enzyme deficiency is characterized by mental retardation and stunting, hepatomegaly, skin lesions, nodular fibrosis and red-fluorescent clumping hair, convulsions, and temporary loss of consciousness It is attached.

タンパク質であるフマリルアセトアセターゼ（ＡＳＬ）の不足は、アルギニノコハク酸分解酵素欠損症の発生率に関連づけられると示されてきた。７ｑ１１．２１に位置し、１７エクソンに及ぶＡＳＬ遺伝子は、ＡＳＬタンパク質をコードする。不十分な量のＡＳＬタンパク質を結果としてもたらすＡＳＬ遺伝子の変異が、アルギニノコハク酸分解酵素欠損症の進行の原因であることが示されてきた。Ｒ１１３Ｑ、Ｖ１７８Ｍ、Ｒ１８２Ｑ、Ｒ２３６Ｗ、Ｑ２８６Ｒ、およびＲ４５６Ｗなどの多型は、アルギニノコハク酸分解酵素欠損症の症状を表わす集団で発見された。これらのミスセンス変異はＡＳＬのレベルの減少を結果としてもたらすと示され、これにより、ＡＳＬタンパク質の不足とアルギニノコハク酸分解酵素欠損症の進行との間の相関が提供される。 A deficiency in the protein fumaryl acetoacetase (ASL) has been shown to be associated with the incidence of argininosuccinate degrading enzyme deficiency. The ASL gene, located at 7q11.21, spanning 17 exons, encodes the ASL protein. Mutations in the ASL gene that result in insufficient amounts of ASL protein have been shown to be responsible for the progression of argininosuccinic acidase deficiency. Polymorphisms such as R113Q, V178M, R182Q, R236W, Q286R, and R456W have been found in a population exhibiting symptoms of argininosuccinic acidase deficiency. These missense mutations have been shown to result in a decrease in the level of ASL, which provides a correlation between the deficiency of ASL protein and the progression of argininosuccinate degrading enzyme deficiency.

＜ヘモクロマトーシス１型＞
いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、常染色体劣性障害のヘモクロマトーシス１型を処置するために使用されうる。ヘモクロマトーシス１型は鉄過剰によって特徴づけられる。過剰な鉄分は、様々な器官に蓄積しそれらの機能不全を引き起こし、かつ硬変、肝細胞癌、糖尿病、心筋症、関節炎、および低ゴナドトロピン性性腺機能低下症を含む深刻な病気を結果としてもたらす。進行性の鉄分蓄積の数十年間後まで、通常その病気の重大な影響は現われない。 <Hemochromatosis type 1>
In some embodiments, the invention described herein can be used to treat hemochromatosis type 1 of autosomal recessive disorders. Hemochromatosis type 1 is characterized by iron overload. Excess iron accumulates in various organs and causes their dysfunction and results in serious illnesses including cirrhosis, hepatocellular carcinoma, diabetes, cardiomyopathy, arthritis, and hypogonadotropic hypogonadism . Until several decades after the progressive iron accumulation, the serious effects of the disease usually do not appear.

遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質の不足は、ヘモクロマトーシス１型の発生率に関連づけられると示されてきた。６ｐ２２．２に位置し、６エクソンに及ぶＨＦＥ遺伝子は、遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質をコードする。不十分な量の遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質を結果としてもたらすＡＳＬ遺伝子の変異が、ヘモクロマトーシス１型欠損症の進行の原因であることが示されてきた。Ｓ６５Ｃ、Ｑ１２７Ｈ、Ａ１７６Ｖ、Ｃ２８２Ｙ、Ｑ２８３Ｐ、およびＶ２９５Ａなどの多型は、ヘモクロマトーシス１型の症状を表わす集団で発見された。これらのミスセンス変異は遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質のレベルの減少を結果としてもたらすと示され、これにより、遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質の不足とヘモクロマトーシス１型の進行との間の相関が提供される。 Hereditary hemochromatosis protein deficiency has been shown to be associated with the incidence of hemochromatosis type 1. The HFE gene, located at 6p22.2 and spanning 6 exons, encodes a hereditary hemochromatosis protein. Mutations in the ASL gene that result in insufficient amounts of hereditary hemochromatosis protein have been shown to be responsible for the progression of hemochromatosis type 1 deficiency. Polymorphisms such as S65C, Q127H, A176V, C282Y, Q283P, and V295A have been found in a population exhibiting hemochromatosis type 1 symptoms. These missense mutations have been shown to result in reduced levels of hereditary hemochromatosis protein, which provides a correlation between the lack of hereditary hemochromatosis protein and the progression of hemochromatosis type 1 The

＜アルストレーム症候群＞
いくつかの実施形態では、本明細書において記載された本発明は、常染色体劣性障害のアルストレーム症候群を処置するために使用されうる。アルストレーム症候群は、進行性の錐体杆体網膜ジストロフィー、感音難聴、幼児期の肥満症、および２型糖尿病によって特徴づけられる。拡張型心筋症、黒色表皮腫、男性性腺機能低下症、甲状腺機能低下症、発育遅延、および肝機能障害はまた、その症候群に関連付けられうる。 <Alstrem syndrome>
In some embodiments, the invention described herein can be used to treat autologous recessive disorder, Alstrem syndrome. Alstrem syndrome is characterized by progressive pyramidal retinal dystrophy, sensorineural hearing loss, childhood obesity, and type 2 diabetes. Dilated cardiomyopathy, black epidermoma, male hypogonadism, hypothyroidism, developmental delay, and liver dysfunction can also be associated with the syndrome.

タンパク質であるアルストレーム症候群タンパク質１の不足は、アルストレーム症候群の発生率に関連づけられると示されてきた。２ｐ１３．１に位置し、２３エクソンに及ぶＡＬＭＳ１遺伝子は、アルストレーム症候群タンパク質をコードする。不十分な量のアルストレーム症候群タンパク質１を結果としてもたらすＡＬＭＳ１遺伝子の変異が、アルストレーム症候群の進行の原因であることが示されてきた。Ｖ６７１Ｇ、Ｇ１４１２Ａ、Ｉ１８７５Ｖ、Ｓ２１１１Ｒ、Ｄ２６７２Ｈ、およびＫ３４３４Ｅなどの多型は、アルストレーム症候群の症状を表わす集団で発見された。これらのミスセンス変異はアルストレーム症候群タンパク質１のレベルの減少を結果としてもたらすと示され、これにより、アルストレーム症候群タンパク質１の不足とアルストレーム症候群の進行との間の相関が提供される。 A deficiency in the protein Alstrem syndrome protein 1 has been shown to be associated with the incidence of Alstrem syndrome. The ALMS1 gene, located at 2p13.1 and spanning 23 exons, encodes the Alstrem syndrome protein. It has been shown that mutations in the ALMS1 gene that result in insufficient amounts of Alstrom syndrome protein 1 are responsible for the progression of Alstrom syndrome. Polymorphisms such as V671G, G1412A, I1875V, S2111R, D2672H, and K3434E have been found in a population exhibiting symptoms of Alstrem syndrome. These missense mutations have been shown to result in reduced levels of Alstrem syndrome protein 1, which provides a correlation between Alstrem syndrome protein 1 deficiency and Alstrem syndrome progression.

＜先天性胆汁酸合成障害１＞
いくつかの実施形態では、本明細書において記述される発明は、常染色体劣性障害の先天性胆汁酸合成障害１（ＣＢＡＳ１）を処置するために使用することができる。ＣＢＡＳ１は、進行性の肝疾患を引き起こす胆汁合成の一次欠陥である。臨床的特徴は、新生児黄疸、重度の肝内胆汁うっ滞、硬変を含む。 <Congenital bile acid synthesis disorder 1>
In some embodiments, the invention described herein can be used to treat autosomal recessive disorder congenital bile acid synthesis disorder 1 (CBAS1). CBAS1 is a primary defect in bile synthesis that causes progressive liver disease. Clinical features include neonatal jaundice, severe intrahepatic cholestasis, and cirrhosis.

タンパク質である３β−水酸化ステロイド脱水素酵素７型（３ＢＨＳ７）の不足は、ＣＢＡＳ１の発生率に関連づけられると示されてきた。１６ｐ１１．２に位置し、６エクソンに及ぶＨＳＤ３Ｂ７遺伝子は、３ＢＨＳ７タンパク質をコードする。不十分な量の３ＢＨＳ７タンパク質を結果としてもたらすＨＳＤ３Ｂ７遺伝子の変異が、ＣＢＡＳ１の進行の原因であることが示されてきた。Ｇ１９Ｓ、Ｅ１４７Ｋ、Ｔ２５０Ａ、およびＬ３４７Ｐなどの多型はＣＢＡＳ１の症状を表わす集団で発見された。これらのミスセンス変異は３ＢＨＳ７のレベルの減少を結果としてもたらすと示され、これにより、３ＢＨＳ７タンパク質の不足とＣＢＡＳ１の進行との間の相関が提供される。 The deficiency of the protein 3β-hydroxysteroid dehydrogenase type 7 (3BHS7) has been shown to be related to the incidence of CBAS1. The HSD3B7 gene, located at 16p11.2 and spanning 6 exons, encodes the 3BHS7 protein. It has been shown that mutations in the HSD3B7 gene that result in insufficient amounts of 3BHS7 protein are responsible for the progression of CBAS1. Polymorphisms such as G19S, E147K, T250A, and L347P have been found in populations that exhibit symptoms of CBAS1. These missense mutations have been shown to result in decreased levels of 3BHS7, providing a correlation between deficiency of 3BHS7 protein and progression of CBAS1.

＜保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体）＞
実施形態では、本明細書の方法は、細胞核において、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５の遺伝子から転写され、かつアミノメチルトランスフェラーゼ、アデノシンデアミナーゼ、プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ、ウロポルフィリノーゲンデカルボキシラーゼ、ヒドロキシメチルビランシンターゼ、超長鎖アシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、ピルビン酸カルボキシラーゼイソバレリル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、アポリポタンパク質Ａ−Ｖ、ガラクトース−１−リン酸ウリジルトランスフェラーゼ、低密度リポタンパク質受容体アダプタータンパク質１、肝細胞核因子４−アルファ、グルコキナーゼ、肝核因子１−αアルブミン近接因子、タンパク質であるＯ−グルコシルトランスフェラーゼ１、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ調節サブユニット１、Ｔｒｉｂｂｌｅｓ−１、形質転換増殖因子ベータ−１、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、トロンボポイエチン、パタチン様ホスホリパーゼドメイン含有タンパク質３、銅輸送ＡＴＰアーゼ２、フマリルアセトアセターゼ、アルギニノコハク酸分解酵素、遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質、アルストレーム症候群タンパク質１、３β−水酸化ステロイド脱水素酵素７型、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体デルタ、インターロイキン６、セラミドシンターゼ２、または核受容体コアクチベーター５タンパク質をコードする、保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体）の存在を活用しうる。成熟し、完全にスプライスされたＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡを産生するための、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のＲＩＣｍＲＮＡ前駆体種のスプライシングは、保持されたイントロンのスプライシングアウトを刺激するＡＳＯを使用して誘発させることができる。結果としてもたらされる成熟したＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡは、細胞質に輸送され、翻訳され、それによって、患者の細胞中で、アミノメチルトランスフェラーゼ、アデノシンデアミナーゼ、プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ、ウロポルフィリノーゲンデカルボキシラーゼ、ポルフォビリノーゲンデアミナーゼ、超長鎖アシルＣｏＡ脱水素酵素、ピルビン酸カルボキシラーゼイソバレリルＣｏＡデヒドロゲナーゼ、アポリポタンパク質Ａ−Ｖ、ガラクトース−１−リン酸ウリジルトランスフェラーゼ、低密度リポタンパク質受容体アダプタータンパク質１、肝細胞核因子４アルファ、グルコキナーゼ、肝核因子−１−αアルブミン近位因子、タンパク質であるＯ−グルコシルトランスフェラーゼ１、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ調節サブユニット１、Ｔｒｉｂｂｌｅｓ−１、形質転換増殖因子ベータ−１、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、トロンボポイエチン、パタチン様ホスホリパーゼドメイン含有タンパク質３、タンパク質銅輸送ＡＴＰアーゼ２、フマリルアセトアセターゼ、アルギノコハク酸分解酵素、遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質、アルストレーム症候群タンパク質１、３β−水酸化ステロイド脱水素酵素７型、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体デルタ、インターロイキン６、セラミドシンターゼ２、または核受容体コアクチベーター５タンパク質の量を増大させ、各タンパク質の不足により引き起こされた、ＣＮＳの疾患または疾病の症状を緩和することができる。この方法は、以下で更に説明され、核内遺伝子出力の標的化増大（ＴＡＮＧＯ）として知られる。 <Retained intron-containing mRNA precursor (RIC mRNA precursor)>
In an embodiment, the method herein comprises AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, Transcribed from HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or NCOA5 genes, and aminomethyltransferase, adenosine deaminase, protoporphyrinogen oxidase, uroporphyrinogen de Carboxylase, hydroxymethylbilane synthase, very long chain acyl-CoA dehydrogenase, pyruvate carboxylase isovaleryl-Co Dehydrogenase, apolipoprotein AV, galactose-1-phosphate uridyltransferase, low density lipoprotein receptor adapter protein 1, hepatocyte nuclear factor 4-alpha, glucokinase, hepatic nuclear factor 1-α albumin proximity factor, protein O-glucosyltransferase 1, phosphatidylinositol 3-kinase regulatory subunit 1, Tribles-1, transforming growth factor beta-1, hemochromatosis type 2B, thrombopoietin, patatin-like phospholipase domain-containing protein 3, copper transport ATP Ase 2, fumaryl acetoacetase, argininosuccinate degrading enzyme, hereditary hemochromatosis protein, alstrem syndrome protein 1, 3β-hydroxysteroid dehydrogenase type 7, perle May exploit the presence of retained intron-containing mRNA precursors (RIC mRNA precursors) that encode xysome growth factor activated receptor delta, interleukin 6, ceramide synthase 2 or nuclear receptor coactivator 5 proteins . Mature, fully spliced AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PAMP, THPO, AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, to produce ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5 mRNA HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or RIC mRNA precursor species splicing NCOA5 can be induced using the ASO to stimulate splicing out of the retained intron. Resulting mature AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, TPPLA3, THPO, TPPLA3, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5 mRNA is transported to the cytoplasm and translated, thereby causing aminomethyltransferase, adenosine deaminase, protoporphyrinogen in the patient's cells. Oxidase, uroporphyrinogen decarboxylase, porphobilinogen deaminase, very long chain acyl CoA dehydrogenase, pyruvate carboxyla Zeisovaleryl CoA dehydrogenase, apolipoprotein AV, galactose-1-phosphate uridyltransferase, low density lipoprotein receptor adapter protein 1, hepatocyte nuclear factor 4 alpha, glucokinase, hepatic nuclear factor-1-α albumin proximal factor O-glucosyltransferase 1 which is protein, phosphatidylinositol 3-kinase regulatory subunit 1, Tribles-1, transforming growth factor beta-1, hemochromatosis type 2B, thrombopoietin, patatin-like phospholipase domain-containing protein 3, Protein copper transport ATPase 2, fumaryl acetoacetase, arginosuccinate degrading enzyme, hereditary hemochromatosis protein, arström syndrome protein 1, 3β-hydroxylase Increased amounts of Lloyd dehydrogenase type 7, peroxisome proliferator-activated receptor delta, interleukin 6, ceramide synthase 2, or nuclear receptor coactivator 5 proteins, caused by the lack of each protein, The symptoms of the disease or illness can be alleviated. This method is further described below and is known as targeted increase in nuclear gene output (TANGO).

ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５の遺伝子によって、イントロン保持事象を分析することができる。場合によっては、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５の遺伝子によって、イントロン保持事象を分析することができる。ＲＮＡ配列決定（ＲＮＡｓｅｑ）は、ＵＣＳＣゲノムブラウザにおいて視覚化することができる、ヒト肝細胞中で発現し、細胞質または核分画のいずれかにおいて局在する、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５の転写産物を示しうる。いくつかの実施形態では、保持されたイントロンを含有するｍＲＮＡ前駆体転写産物は、核中に保持され、細胞質に輸送されない。 AMT, ADA, PPOX, UROD, HMDS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7SL Intron retention events can be analyzed by ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5 genes. In some cases, AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, TPPLA3, HTP, PNPLB3, Intron retention events can be analyzed by ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, CERS2, or NCOA5 genes. RNA sequencing (RNAseq) can be visualized in the UCSC genome browser, expressed in human hepatocytes and localized in either the cytoplasm or nuclear fraction, AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPAR, ILMS1, PPAR, ILMS1, PPAR Can be shown. In some embodiments, mRNA precursor transcripts containing retained introns are retained in the nucleus and not transported to the cytoplasm.

実施形態では、保持されたイントロンは、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％あるいは少なくとも約５０％の保定の保持率に基づき、保持されたイントロンとして特定されたイントロンである。実施形態では、保持されたイントロンはすなわち、約５％から約１００％、約５％から約９５％、約５％から約９０％、約５％から約８５％、約５％から約８０％、約５％から約７５％、約５％から約７０％、約５％から約６５％、約５％から約６０％、約５％から約６５％、約５％から約６０％、約５％から約５５％、約５％から約５０％、約５％から約４５％、約５％から約４０％、約５％から約３５％、約５％から約３０％、約５％から約２５％、約５％から約２０％、約５％から約１５％、約１０％から約１００％、約１０％から約９５％、約１０％から約９０％、約１０％から約８５％、約１０％から約８０％、約１０％から約７５％、約１０％から約７０％、約１０％から約６５％、約１０％から約６０％、約１０％から約６５％、約１０％から約６０％、約１０％から約５５％、約１０％から約５０％、約１０％から約４５％、約１０％から約４０％、約１０％から約３５％、約１０％から約３０％、約１０％から約２５％、約１０％から約２０％、約１５％から約１００％、約１５％から約９５％、約１５％から約９０％、約１５％から約８５％、約１５％から約８０％、約１５％から約７５％、約１５％から約７０％、約１５％から約６５％、約１５％から約６０％、約１５％から約６５％、約１５％から約６０％、約１５％から約５５％、約１５％から約５０％、約１５％から約４５％、約１５％から約４０％、約１５％から約３５％、約１５％から約３０％、約１５％から約２５％、約２０％から約１００％、約２０％から約９５％、約２０％から約９０％、約２０％から約８５％、約２０％から約８０％、約２０％から約７５％、約２０％から約７０％、約２０％から約６５％、約２０％から約６０％、約２０％から約６５％、約２０％から約６０％、約２０％から約５５％、約２０％から約５０％、約２０％から約４５％、約２０％から約４０％、約２０％から約３５％、約２０％から約３０％、約２５％から約１００％、約２５％から約９５％、約２５％から約９０％、約２５％から約８５％、約２５％から約８０％、約２５％から約７５％、約２５％から約７０％、約２５％から約６５％、約２５％から約６０％、約２５％から約６５％、約２５％から約６０％、約２５％から約５５％、約２５％から約５０％、約２５％から約４５％、約２５％から約４０％、あるいは約２５％から約３５％の保定の保持率に基づき、保持されたイントロンとして特定されたイントロンである。複数の実施形態では、この目的に有用な他のＡＳＯは、例えば、本明細書に記載の方法を用いて特定される。 In embodiments, the retained intron is at least about 5%, at least about 10%, at least about 15%, at least about 20%, at least about 25%, at least about 30%, at least about 35%, at least about 40%, An intron identified as a retained intron based on a retention rate of at least about 45% or at least about 50%. In embodiments, retained introns are about 5% to about 100%, about 5% to about 95%, about 5% to about 90%, about 5% to about 85%, about 5% to about 80%. About 5% to about 75%, about 5% to about 70%, about 5% to about 65%, about 5% to about 60%, about 5% to about 65%, about 5% to about 60%, about 5% to about 55%, about 5% to about 50%, about 5% to about 45%, about 5% to about 40%, about 5% to about 35%, about 5% to about 30%, about 5% About 25%, about 5% to about 20%, about 5% to about 15%, about 10% to about 100%, about 10% to about 95%, about 10% to about 90%, about 10% to about 85%, about 10% to about 80%, about 10% to about 75%, about 10% to about 70%, about 10% to about 65%, about 10% to about 60%, about 10% to about 65 About 10% to about 60%, about 10% to about 55%, about 10% to about 50%, about 10% to about 45%, about 10% to about 40%, about 10% to about 35%, about 10% to about 30%, about 10% to about 25%, about 10% to about 20%, about 15% to about 100%, about 15% to about 95%, about 15% to about 90%, about 15% From about 85%, from about 15% to about 80%, from about 15% to about 75%, from about 15% to about 70%, from about 15% to about 65%, from about 15% to about 60%, from about 15% to about 65%, about 15% to about 60%, about 15% to about 55%, about 15% to about 50%, about 15% to about 45%, about 15% to about 40%, about 15% to about 35% About 15% to about 30%, about 15% to about 25%, about 20% to about 100%, about 20% to about 95%, about 20% to about 90% About 20% to about 85%, about 20% to about 80%, about 20% to about 75%, about 20% to about 70%, about 20% to about 65%, about 20% to about 60%, about 20 % To about 65%, about 20% to about 60%, about 20% to about 55%, about 20% to about 50%, about 20% to about 45%, about 20% to about 40%, about 20% About 35%, about 20% to about 30%, about 25% to about 100%, about 25% to about 95%, about 25% to about 90%, about 25% to about 85%, about 25% to about 80 %, About 25% to about 75%, about 25% to about 70%, about 25% to about 65%, about 25% to about 60%, about 25% to about 65%, about 25% to about 60%, About 25% to about 55%, about 25% to about 50%, about 25% to about 45%, about 25% to about 40%, or about 25% to about 35 It is an intron identified as a retained intron based on the retention rate of% retention. In embodiments, other ASOs useful for this purpose are identified using, for example, the methods described herein.

実施形態では、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のイントロンの番号付けは、表１または表２に示される１以上のｍＲＮＡ配列に対応する。実施形態では、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、表１または表２に示されるような１以上のイントロン中にある。実施形態では、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分に対するＡＳＯのハイブリダイゼーションは、表１または表２に示されるような１以上の保持されたイントロンのスプライス部位（５’スプライス部位または３’スプライス部位）のスプライシングの増強を結果としてもたらし、その後、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のタンパク質産生を増大させる。イントロンの番号付けは、様々なＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のアイソフォーム配列を参照して変化することが理解される。当業者は、本明細書で提供されるイントロン配列に基づき、あるいは表１または表２において示される１以上のｍＲＮＡ配列を参照して得られる番号を使用することで、任意のアイソフォームにおける対応するイントロン番号を判定することができる。当業者は、本発明の方法を使用して、本明細書において提供されるイントロン配列に基づいて、または表１または表２に示される１以上のｍＲＮＡ配列を参照して得られるイントロンの番号を使用して、標的とするためのＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のアイソフォームに隣接するエクソンの配列を判定することができる。 In the embodiment, AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLB3H The intron numbering of ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5 corresponds to one or more mRNA sequences shown in Table 1 or Table 2. In the embodiment, AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLB3H The target portion of the RIC mRNA precursor of ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5 is in one or more introns as shown in Table 1 or Table 2. In embodiments, the hybridization of ASO to the target portion of the RIC mRNA precursor comprises one or more retained intron splice sites (5 ′ splice sites or 3 ′ splice sites) as shown in Table 1 or Table 2. Resulting in enhanced splicing, then AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3RAP1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, THAMP, THAMP, THAMP, THAMP, Increases protein production of PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5. Intron numbering is AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP3, THPN, PN It is understood that it varies with reference to the isoform sequence of ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5. Those skilled in the art will be able to correspond in any isoform by using numbers based on the intron sequences provided herein or by reference to one or more mRNA sequences shown in Table 1 or Table 2. An intron number can be determined. One skilled in the art can use the methods of the present invention to determine the intron number obtained based on the intron sequences provided herein or with reference to one or more mRNA sequences shown in Table 1 or Table 2. AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP3, THPO, PNPL, PL , ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5 isoforms can be sequenced.

いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＯは、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のゲノム配列から転写されるＲＩＣｍＲＮＡ前駆体を標的とする。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＯは、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の配列を標的とする。 In some embodiments, the ASO disclosed herein is AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1 Targets RIC mRNA precursors that are transcribed from genomic sequences of TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5. In some embodiments, the ASO disclosed herein is AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1 , TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5 RIC mRNA precursor sequences.

いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＯは、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のゲノム配列によってコードされるＲＩＣｍＲＮＡ前駆体転写産物の配列を標的とする。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＯは、表１または表２に示されるような保持されたイントロンを含む、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のゲノム配列によってコードされるＲＩＣｍＲＮＡ前駆体転写産物を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、ＳＥＱＩＤＮＯ：１−３１よってコードされたＲＩＣｍＲＮＡ前駆体を標的とする。 In some embodiments, the ASO disclosed herein is AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1 Target the sequence of the RIC mRNA precursor transcript encoded by the genomic sequence of TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5. In some embodiments, the ASO disclosed herein comprises AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, including retained introns as shown in Table 1 or Table 2. APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, C Targets the encoded RIC mRNA precursor transcript. In some embodiments, ASO targets the RIC mRNA precursor encoded by SEQ ID NO: 1-31.

幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、ＳＥＱＩＤＮＯ：３２−１３０のＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の転写産物を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、表１または表２に示されるような保持されたイントロンを含む、ＳＥＱＩＤＮＯ：３２−１３０のＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の転写産物を標的とする。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＡＳＯは、ＳＥＱＩＤＮＯ：７８３４９−７８５０１を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３１−７８３４８のうちいずれか１つの配列を含む。 In some embodiments, the ASO targets the transcript of the RIC mRNA precursor of SEQ ID NO: 32-130. In some embodiments, the ASO targets a transcript of the RIC mRNA precursor of SEQ ID NO: 32-130 that contains a retained intron as shown in Table 1 or Table 2. In some embodiments, the ASO disclosed herein targets SEQ ID NO: 78349-78501. In some embodiments, the ASO comprises a sequence of any one of SEQ ID NOs: 131-78348.

いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、表１または表２に示される保持されたイントロンを含むＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の、表１または表２に示される保持されたイントロン上流のエクソン配列を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、表１または表２に示される保持されたイントロンを含むＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の、表１または表２に示される保持されたイントロンの５’スプライス部位から上流（あるいは５’）のエクソン配列を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、表１または表２に示される保持されたイントロンを含むＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の、５’スプライス部位から約４から約１０００のヌクレオチド上流（あるいは５’）のエクソン配列を標的とする。 In some embodiments, the ASO is AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, including the retained introns shown in Table 1 or Table 2. Table 1 or Table 2 of POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5 RIC mRNA precursors Target the retained intron upstream exon sequence. In some embodiments, the ASO is AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, including the retained introns shown in Table 1 or Table 2. Table 1 or Table 2 of POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5 RIC mRNA precursors Target an exon sequence upstream (or 5 ') from the 5' splice site of the retained intron. In some embodiments, the ASO is AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, including the retained introns shown in Table 1 or Table 2. POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5 from RIC mRNA precursor, approximately 4 'from the 5' splice site Targets about 1000 nucleotides upstream (or 5 ') of exon sequences.

いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、表１または表２に示される保持されたイントロンを含むＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の、表１または表２に示される保持されたイントロン上流のイントロン配列を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、表１または表２に示される保持されたイントロンを含むＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の、表１または表２に示される保持されたイントロンの５’スプライス部位から下流（あるいは３’）のイントロン配列を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、表１または表２に示される保持されたイントロンを含むＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の、５’スプライス部位よりも約６から約５００のヌクレオチド下流（あるいは３’）のエクソン配列を標的とする。 In some embodiments, the ASO is AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, including the retained introns shown in Table 1 or Table 2. Table 1 or Table 2 of POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5 RIC mRNA precursors Target the intron sequence upstream of the retained intron. In some embodiments, the ASO is AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, including the retained introns shown in Table 1 or Table 2. Table 1 or Table 2 of POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5 RIC mRNA precursors Target intron sequences downstream (or 3 ') from the 5' splice site of the retained intron. In some embodiments, the ASO is AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, including the retained introns shown in Table 1 or Table 2. POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5 RIC mRNA precursor from about 5 'splice site Target an exon sequence from 6 to about 500 nucleotides downstream (or 3 ').

いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、表１または表２に示される保持されたイントロンを含むＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の、表１または表２に示される保持されたイントロン下流のエクソン配列を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、表１または表２に示される保持されたイントロンを含むＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の、表１または表２に示される保持されたイントロンの３’スプライス部位から下流（あるいは３’）のエクソン配列を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、表１または表２に示される保持されたイントロンを含むＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の、３’スプライス部位よりも約２から約１０００のヌクレオチド下流（あるいは３’）のエクソン配列を標的とする。
タンパク質発現 In some embodiments, the ASO is AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, including the retained introns shown in Table 1 or Table 2. Table 1 or Table 2 of POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5 RIC mRNA precursors Target the retained intron downstream exon sequence. In some embodiments, the ASO is AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, including the retained introns shown in Table 1 or Table 2. Table 1 or Table 2 of POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5 RIC mRNA precursors Target the exon sequence downstream (or 3 ') from the 3' splice site of the retained intron. In some embodiments, the ASO is AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, including the retained introns shown in Table 1 or Table 2. POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5 from RIC mRNA precursor also about 2 'splice site Target exon sequences about 1000 nucleotides downstream (or 3 ') from
Protein expression

実施形態では、本明細書に記載される方法は、機能的タンパク質産生を増加させるために使用される。本明細書において使用されるように、用語「機能的」は、処置される疾病の１つ以上の症状を除去するのに必要なタンパク質の活性または機能の量を指す。実施形態では、部分的機能的タンパク質の産生を増加させるために、前記方法は使用される。本明細書において使用されるように、用語「部分的機能的」は、疾患または疾病の１つ以上の症状を除去あるいは予防するために必要な活性または機能の量未満の、タンパク質の活性または機能の量を指す。いくつかの実施形態では、部分的機能的タンパク質またはＲＮＡは、完全な機能的タンパク質またはＲＮＡに比して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％少ない活性を持つだろう。 In embodiments, the methods described herein are used to increase functional protein production. As used herein, the term “functional” refers to the amount of protein activity or function required to eliminate one or more symptoms of the disease being treated. In an embodiment, the method is used to increase the production of partially functional protein. As used herein, the term “partially functional” refers to the activity or function of a protein that is less than the amount of activity or function required to eliminate or prevent one or more symptoms of a disease or condition. Refers to the amount. In some embodiments, the partially functional protein or RNA is at least 10%, at least 20%, at least 30%, at least 40%, at least 50%, at least 60 relative to the fully functional protein or RNA. %, At least 70%, at least 75%, at least 80%, 85%, at least 90%, or at least 95% less active.

実施形態では、該方法は、タンパク質をコードするＲＩＣｍＲＮＡ前駆体を有する被験体の細胞によって、タンパク質の発現を増加させる方法であり、該被験体は、本明細書に記載されたタンパク質の活性量の不足に起因する、本明細書に記載の疾病を有する。いくつかの実施形態では、タンパク質量の不足は、タンパク質のハプロ不全に起因する。そのような実施形態では、被験体は、機能的タンパク質をコードする第１の対立遺伝子と、タンパク質が産生されない第２の対立遺伝子とを有する。別のそのような実施形態では、被験体は、機能的タンパク質をコードする第１の対立遺伝子と、非機能的タンパク質をコードする第２の対立遺伝子を有する。別のそのような実施形態では、被験体は、機能的タンパク質をコードする第１の対立遺伝子と、部分的機能的タンパク質をコードする第２の対立遺伝子を有する。これらの実施形態のいずれの場合でも、アンチセンスオリゴマーは、第１の対立遺伝子（機能的タンパク質をコードする）から転写されたＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分に結合し、それによって、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体からの保持されたイントロンの構成的スプライシングを誘発し、機能的タンパク質をコードする成熟ｍＲＮＡレベルの増加と、被験体の細胞中のタンパク質発現の増加をもたらす。 In an embodiment, the method is a method of increasing protein expression by a cell of a subject having a RIC mRNA precursor encoding the protein, wherein the subject has an active amount of the protein described herein. Having the diseases described herein due to a lack of. In some embodiments, the lack of protein amount is due to haploinsufficiency of the protein. In such embodiments, the subject has a first allele that encodes a functional protein and a second allele that produces no protein. In another such embodiment, the subject has a first allele that encodes a functional protein and a second allele that encodes a non-functional protein. In another such embodiment, the subject has a first allele that encodes a functional protein and a second allele that encodes a partially functional protein. In any of these embodiments, the antisense oligomer binds to the target portion of the RIC mRNA precursor transcribed from the first allele (encoding a functional protein), thereby causing the RIC mRNA precursor. Induces constitutive splicing of retained introns from, resulting in increased levels of mature mRNA encoding functional proteins and increased protein expression in the cells of the subject.

実施形態では、被験体は、機能的タンパク質をコードする第１の対立遺伝子と、部分的機能的タンパク質をコードする第２の対立遺伝子を有し、アンチセンスオリゴマーは、第１の対立遺伝子から転写されたＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分、あるいは第２の対立遺伝子（部分的機能的タンパク質をコードする）から転写されたＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分に結合し、それによって、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体からの保持されたイントロンの構成的スプライシングを誘発し、タンパク質をコードする成熟ｍＲＮＡレベルの増加と、被験体の細胞中の機能的あるいは部分的機能的タンパク質発現の増加をもたらす。 In embodiments, the subject has a first allele that encodes a functional protein and a second allele that encodes a partially functional protein, and the antisense oligomer is transcribed from the first allele. Binds to the target portion of the RIC mRNA precursor, or the target portion of the RIC mRNA precursor transcribed from the second allele (which encodes a partially functional protein), and thus from the RIC mRNA precursor Induces constitutive splicing of retained introns, resulting in increased levels of mature mRNA encoding the protein and increased functional or partially functional protein expression in the subject's cells.

関連する実施形態では、前記方法は、タンパク質あるいは機能的ＲＮＡの発現を増加させるためにＡＳＯを用いる方法である。実施形態では、ＡＳＯは、タンパク質をコードするＲＩＣｍＲＮＡ前駆体を有する被験体の細胞における、本明細書に記載のタンパク質の発現を増加させるために使用され、該被験体は、タンパク質の量または機能の不足を有する。 In a related embodiment, the method is a method that uses ASO to increase the expression of a protein or functional RNA. In embodiments, ASO is used to increase expression of a protein described herein in a cell of a subject having a RIC mRNA precursor encoding the protein, wherein the subject is the amount or function of the protein. Have a shortage of.

実施形態では、疾患または疾病の原因となる、タンパク質をコードするＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の転写産物は、本明細書に記載されるＡＳＯによって標的化される。いくつかの実施形態では、疾患の原因ではない、タンパク質をコードするＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の転写産物は、ＡＳＯによって標的化される。例えば、特定の経路における第１のタンパク質の突然変異または不足の結果として生じる疾患は、第２のタンパク質をコードするＲＩＣｍＲＮＡ前駆体を標的とすることによって改善され得、それによって第２のタンパク質産生は増加する。いくつかの実施形態では、第２のタンパク質の機能は、（疾患または疾病の原因である）第１のタンパク質の突然変異または不足を補うことができる。 In embodiments, a transcript of a RIC mRNA precursor encoding a protein that is responsible for a disease or condition is targeted by ASO as described herein. In some embodiments, transcripts of RIC mRNA precursors encoding proteins that are not causative of the disease are targeted by ASO. For example, a disease resulting from mutation or deficiency of a first protein in a particular pathway can be ameliorated by targeting a RIC mRNA precursor that encodes a second protein, thereby producing second protein production. Will increase. In some embodiments, the function of the second protein can compensate for a mutation or deficiency in the first protein (which is responsible for the disease or condition).

実施形態では、被験体は：
ａ）
ｉ）タンパク質が、野生型対立遺伝子からの産生と比較して、減少したレベルで産生され、
ｉｉ）タンパク質が、同等の野生型タンパク質と比較して機能が低下した形態で産生され、あるいは
ｉｉｉ）タンパク質または機能的ＲＮＡが産生されない、第１の変異対立遺伝子；および
ｂ）
ｉ）タンパク質が、野生型対立遺伝子からの産生と比較して、減少したレベルで産生され、
ｉｉ）タンパク質が、同等の野生型タンパク質と比較して機能が低下した形態で産生され、あるいは
ｉｉｉ）タンパク質が産生されない、第２の変異対立遺伝子を有し；
ここでＲＩＣｍＲＮＡ前駆体は、第１の対立遺伝子および／または第２の対立遺伝子から転写される。これらの実施形態では、ＡＳＯは、第１の対立遺伝子または第２の対立遺伝子から転写されたＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分に結合することで、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体からの保持されたイントロンの構成的スプライシングを誘発し、タンパク質をコードするｍＲＮＡレベルの増加を引き起こし、被験体の細胞中の標的タンパク質または機能的ＲＮＡの発現の増加をもたらす。これらの実施形態では、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体からの保持されたイントロンの構成的スプライシングの結果として生じる、発現レベルの増加を有する標的タンパク質あるいは機能的ＲＮＡは、同等の野性型タンパク質と比較して機能性の低い形態（部分的機能的）、あるいは同等の野性型タンパク質と比較して完全な機能性を有する（完全機能的）、のいずれかで有り得る。 In embodiments, the subject:
a)
i) the protein is produced at a reduced level compared to production from the wild type allele;
ii) the protein is produced in a reduced function compared to an equivalent wild-type protein, or iii) a first mutant allele in which no protein or functional RNA is produced; and b)
i) the protein is produced at a reduced level compared to production from the wild type allele;
ii) the protein is produced in a reduced function compared to an equivalent wild type protein, or iii) has a second mutant allele that does not produce a protein;
Here, the RIC mRNA precursor is transcribed from the first allele and / or the second allele. In these embodiments, the ASO binds to the target portion of the RIC mRNA precursor transcribed from the first or second allele, thereby constructing a retained intron from the RIC mRNA precursor. Splicing is induced, causing an increase in the level of mRNA encoding the protein, resulting in increased expression of the target protein or functional RNA in the subject's cells. In these embodiments, target proteins or functional RNAs with increased expression levels resulting from constitutive splicing of retained introns from RIC mRNA precursors are functional compared to equivalent wild-type proteins. Can be either of a low form (partially functional) or fully functional (fully functional) compared to an equivalent wild type protein.

実施形態では、本明細書に記載のタンパク質をコードするｍＲＮＡのレベルは、例えば、アンチセンスオリゴマーで処置されない、あるいはＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分と結合しないアンチセンスオリゴマーで処置された対照細胞内で産生されたタンパク質をコードするｍＲＮＡの量と比較した場合、１．１倍から１０倍に増加する。 In embodiments, the level of mRNA encoding a protein described herein is, for example, within a control cell that is not treated with an antisense oligomer or treated with an antisense oligomer that does not bind to the target portion of a RIC mRNA precursor. When compared to the amount of mRNA encoding the protein produced, it increases from 1.1 to 10 times.

実施形態では、タンパク質の量あるいは活性の不足に起因する疾病は、ＡＳＯが標的とされる保持されたイントロンの選択的スプライシングあるいは異常スプライシングに起因する疾病ではない。実施形態では、タンパク質の量あるいは活性の不足に起因する疾病は、タンパク質をコードするＲＩＣｍＲＮＡ前駆体内の保持されたイントロンの選択的スプライシングあるいは異常スプライシングに起因する疾病ではない。実施形態では、選択的スプライシングあるいは異常スプライシングが、遺伝子から転写されたｍＲＮＡ前駆体に生じ得る。しかしながら、本発明の組成物および方法は、ｍＲＮＡ前駆体内の選択的スプライシングあるいは異常スプライシングを予防しないし、修正しない。 In an embodiment, the disease resulting from a lack of protein amount or activity is not a disease resulting from alternative splicing or aberrant splicing of the retained intron to which ASO is targeted. In an embodiment, the disease resulting from a lack of protein amount or activity is not a disease resulting from alternative splicing or aberrant splicing of a retained intron within the RIC mRNA precursor encoding the protein. In embodiments, alternative splicing or aberrant splicing can occur in an mRNA precursor transcribed from a gene. However, the compositions and methods of the present invention do not prevent or correct alternative or abnormal splicing within the mRNA precursor.

実施形態では、本発明の方法を使用して処置された被験体は、１つの対立遺伝子から部分的機能的タンパク質を発現し、その部分的機能的タンパク質は、フレームシフト変異、ナンセンス変異、ミスセンス変異、あるいは部分的な遺伝子欠失に起因する。実施形態では、本発明の方法を使用して処置された被験体は、１つの対立遺伝子から非機能的タンパク質を発現し、その非機能的タンパク質は、１つの対立遺伝子におけるフレームシフト変異、ナンセンス変異、ミスセンス変異、部分的な遺伝子欠失に起因する。実施形態では、本発明の方法を用いて処置された被験体は、１つの対立遺伝子に全遺伝子欠失を有する。
タンパク質発現を増加させるためのＴＡＮＧＯの使用 In an embodiment, a subject treated using the methods of the invention expresses a partially functional protein from one allele, the partially functional protein comprising a frameshift mutation, a nonsense mutation, a missense mutation. Or due to partial gene deletion. In an embodiment, a subject treated using the methods of the invention expresses a non-functional protein from one allele, the non-functional protein comprising a frameshift mutation, a nonsense mutation in one allele Due to missense mutations and partial gene deletions. In embodiments, a subject treated using the methods of the invention has a whole gene deletion in one allele.
Use of TANGO to increase protein expression

前述したように、実施形態では、核内遺伝子出力の標的とされた増強（ＴＡＮＧＯ）は、タンパク質の発現を増加させるために、本発明の方法において使用される。これらの実施形態では、タンパク質をコードする保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体）は、細胞の核内にある。タンパク質をコードする、保持されたイントロン、５’スプライス部位に隣接するエクソン、および３’スプライス部位に隣接するエクソンを含むＲＩＣｍＲＮＡ前駆体を有する細胞を、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分に対して相補的なアンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）と接触させる。ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分へのＡＳＯのハイブリダイゼーションは、保持されたイントロンのスプライス部位（５’スプライス部位あるいは３’スプライス部位）のスプライシングを増強し、その後の標的タンパク質産生を増加させる。 As described above, in embodiments, targeted enhancement of nuclear gene output (TANGO) is used in the methods of the invention to increase protein expression. In these embodiments, the retained intron-containing mRNA precursor (RIC mRNA precursor) encoding the protein is in the nucleus of the cell. Complementing a cell with a RIC mRNA precursor containing a retained intron encoding a protein, an exon adjacent to the 5 ′ splice site, and an exon adjacent to the 3 ′ splice site to the target portion of the RIC mRNA precursor Contact with a typical antisense oligomer (ASO). Hybridization of ASO to the target portion of the RIC mRNA precursor enhances splicing of the retained intron splice site (5 'splice site or 3' splice site) and increases subsequent target protein production.

用語「ｍＲＮＡ前駆体」および「ｍＲＮＡ前駆体の転写産物」は、交換可能に使用され、少なくとも１つのイントロンを含むｍＲＮＡ前駆体種を指す。実施形態では、ｍＲＮＡ前駆体またはｍＲＮＡ前駆体の転写産物は、５’−７−メチルグアノシンキャップ、および／またはポリＡ末端を含む。実施形態では、ｍＲＮＡ前駆体またはｍＲＮＡ前駆体の転写産物は、５’−７−メチルグアノシンキャップおよびポリＡ末端の両方を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡ前駆体の転写産物は、５’−７−メチルグアノシンキャップ、および／またはポリＡ末端を含まない。タンパク質に翻訳されない場合（あるいは核から細胞質へと輸送された場合）、ｍＲＮＡ前駆体の転写産物は非生産的メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）分子である。 The terms “mRNA precursor” and “mRNA precursor transcript” are used interchangeably and refer to an mRNA precursor species comprising at least one intron. In embodiments, the mRNA precursor or mRNA precursor transcript comprises a 5'-7-methylguanosine cap, and / or a poly A terminus. In embodiments, the mRNA precursor or transcript of the mRNA precursor comprises both a 5'-7-methylguanosine cap and a poly A terminus. In some embodiments, the transcript of the mRNA precursor does not include a 5'-7-methylguanosine cap and / or a poly A terminus. When not translated into protein (or transported from the nucleus into the cytoplasm), the mRNA precursor transcript is a non-productive messenger RNA (mRNA) molecule.

本明細書において使用されるように、「保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体」（「ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体」）は、少なくとも１つの保持されたイントロンを含むｍＲＮＡ前駆体の転写産物である。ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体は、保持されたイントロン、保持されたイントロンの５’スプライス部位に隣接するエクソン、保持されたイントロンの３’スプライス部位に隣接するエクソンを含み、標的タンパク質をコードする。「標的タンパク質をコードするＲＩＣｍＲＮＡ前駆体」は、完全にスプライシングされた場合に、標的タンパク質をコードすると解される。「保持されたイントロン」は、同じ遺伝子によってコードされた、隣接するイントロン等の１つ以上の他のイントロンが、同じｍＲＮＡ前駆体の転写産物からスプライシングアウトされた場合に、ｍＲＮＡ前駆体の転写産物に存在するイントロンである。いくつかの実施形態では、保持されたイントロンは、標的タンパク質をコードするＲＩＣｍＲＮＡ前駆体において最も豊富なイントロンである。実施形態では、保持されたイントロンは、細胞内の標的タンパク質をコードする遺伝子から転写されたＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の集団において最も豊富なイントロンであり、当該ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の集団は２つ以上の保持されたイントロンを含む。実施形態では、標的タンパク質をコードするＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の集団において最も豊富なイントロンに標的とされたアンチセンスオリゴマーは、アンチセンスオリゴマーが標的とされた、あるいは結合する保持されたイントロンを含む集団内の、２つ以上の保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘発する。実施形態では、標的タンパク質をコードする成熟ｍＲＮＡは、それによって産生される。「成熟ｍＲＮＡ」および「完全にスプライシングされたｍＲＮＡ」の用語は、標的タンパク質をコードする完全に処理されたｍＲＮＡ（例えば、核から細胞質へと輸送され、標的タンパク質に翻訳されたｍＲＮＡ）、あるいは完全に処理された機能的ＲＮＡを記載するように、本明細書において交換可能に使用される。用語「生産的ｍＲＮＡ」もまた、標的タンパク質をコードする完全に処理されたｍＲＮＡについて記載するように使用することができる。実施形態では、標的領域は、タンパク質をコードするＲＩＣｍＲＮＡ前駆体に最も豊富に存在する保持されたイントロンにある。 As used herein, a “retained intron-containing mRNA precursor” (“RIC mRNA precursor”) is a transcript of an mRNA precursor that contains at least one retained intron. The RIC mRNA precursor contains a retained intron, an exon adjacent to the 5 'splice site of the retained intron, an exon adjacent to the 3' splice site of the retained intron, and encodes the target protein. A “RIC mRNA precursor encoding a target protein” is understood to encode a target protein when fully spliced. A “retained intron” is an mRNA precursor transcript that is encoded by the same gene when one or more other introns, such as adjacent introns, are spliced out of the transcript of the same mRNA precursor. Is an intron. In some embodiments, the retained intron is the most abundant intron in the RIC mRNA precursor that encodes the target protein. In embodiments, the retained intron is the most abundant intron in the population of RIC mRNA precursors transcribed from the gene encoding the target protein in the cell, and the population of RIC mRNA precursors is more than one retained. Containing introns. In embodiments, an antisense oligomer targeted to the most abundant intron in a population of RIC mRNA precursors encoding a target protein is within a population that contains a retained intron to which the antisense oligomer is targeted or bound. Inducing splicing out of two or more retained introns. In embodiments, mature mRNA encoding the target protein is thereby produced. The terms “mature mRNA” and “fully spliced mRNA” refer to fully processed mRNA that encodes a target protein (eg, mRNA that is transported from the nucleus to the cytoplasm and translated into the target protein), or completely Are used interchangeably herein to describe the functional RNA processed. The term “productive mRNA” can also be used as described for a fully processed mRNA encoding the target protein. In embodiments, the target region is in a retained intron that is most abundant in the RIC mRNA precursor encoding the protein.

本明細書において使用されるように、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、あるいは「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」等の変化形は、列挙された特徴（例えば、アンチセンスオリゴマーの場合、定義された核酸塩基配列）を含むが、他のいかなる特徴をも除外しないことを示すと解されるべきである。したがって、本明細書において使用されるように、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は包含的で、追加の列挙されていない特徴（例えば、アンチセンスオリゴマーの場合、追加の列挙されていない核酸塩基の存在）を除外しない。 As used herein, the term “comprise” or variations such as “comprises” or “comprising” are used to describe the listed features (eg, for antisense oligomers). The defined nucleobase sequence), but should not be construed as excluding any other features. Thus, as used herein, the term “comprising” is inclusive and refers to additional unlisted features (eg, the presence of additional unlisted nucleobases in the case of antisense oligomers). ) Is not excluded.

本明細書において提供される組成物および方法のいずれかの実施形態において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は「から本質的に成る（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ）」または「から成る（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇｏｆ）」と置換可能である。「から本質的に成る（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ）」という句は、特定された特徴（例えば核酸塩基配列）と共に、請求される本発明の性質または機能に実質的に影響しない特徴も必要とするために本明細書で使用される。本明細書で使用されるように、用語「成る（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」は、列挙された特徴（例えば核酸塩基配列）単独の存在を示すために使用される（その結果、特定された核酸塩基配列から成るアンチセンスオリゴマーの場合には、追加の列挙されていない核酸塩基の存在は除外される）。 In any embodiment of the compositions and methods provided herein, “comprising” can be replaced with “consisting essentially” or “consisting of”. is there. The phrase “consisting essentially” is intended to require a feature that does not substantially affect the nature or function of the claimed invention, as well as the specified feature (eg, nucleobase sequence). Used in the description. As used herein, the term “consisting” is used to indicate the presence of a listed feature (eg, a nucleobase sequence) alone (as a result, from a specified nucleobase sequence). In the case of antisense oligomers consisting of, the presence of additional unlisted nucleobases is excluded).

実施形態では、標的領域は、本明細書に記載のタンパク質をコードするＲＩＣｍＲＮＡ前駆体に２番目に豊富に存在するイントロンである保持されたイントロンにある。例えば、２番目に豊富な保持されたイントロンは、最も豊富な保持されたイントロンよりむしろ標的とされ得る。その要因は、２番目に豊富な保持されたイントロンのヌクレオチド配列の独自性、特定のヌクレオチド配列を標的とするＡＳＯ設計の容易さ、および／またはＡＳＯによりイントロンを標的とすることから生じるタンパク質産生量の増加である。実施形態では、保持されたイントロンは、細胞内の標的タンパク質をコードする遺伝子から転写されたＲＩＣｍＲＮＡ前駆体集団において２番目に豊富なイントロンであり、そのＲＩＣｍＲＮＡ前駆体集団は、２つ以上の保持されたイントロンを含む。実施形態では、標的タンパク質をコードするＲＩＣｍＲＮＡ前駆体集団における２番目に豊富なイントロンを標的とするアンチセンスオリゴマーは、アンチセンスオリゴマーが標的とする、または結合する保持されたイントロンを含む集団において、２つ以上の保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘発する。それによって、実施形態では、標的タンパク質をコードする完全にスプライシングされた（成熟）ＲＮＡが産生される。 In embodiments, the target region is in a retained intron that is the second most abundant intron in the RIC mRNA precursor encoding the proteins described herein. For example, the second most abundant retained intron can be targeted rather than the most abundant retained intron. The factors are the uniqueness of the nucleotide sequence of the second most abundant retained intron, the ease of ASO design targeting a specific nucleotide sequence, and / or the amount of protein produced from targeting the intron by ASO Is an increase. In embodiments, the retained intron is the second most abundant intron in the RIC mRNA precursor population transcribed from the gene encoding the target protein in the cell, and the RIC mRNA precursor population is more than one Contains retained introns. In embodiments, an antisense oligomer that targets the second most abundant intron in a RIC mRNA precursor population that encodes a target protein is in a population that contains retained introns that the antisense oligomer targets or binds to, Induces splicing out of two or more retained introns. Thereby, in an embodiment, a fully spliced (mature) RNA encoding the target protein is produced.

実施形態では、ＡＳＯは、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の保持されていないイントロン内にある標的領域に相補的である。実施形態では、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分は：保持されていないイントロンの５’スプライス部位に対する＋６から＋１００の領域；または保持されていないイントロンの３’スプライス部位に対する−１６から−１００の領域内にある。実施形態では、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されていないイントロンの５’スプライス部位に対する＋１００の領域から、保持されていないイントロンの３’スプライス部位に対する−１００の領域内にある。領域または配列の位置を特定するために使用されるように、「内（ｗｉｔｈｉｎ）」は、列挙される位置の残基を含むと理解される。例えば、＋６から＋１００の領域は、＋６および＋１００の位置の残基を含む。それによって、実施形態では、標的タンパク質をコードする完全にスプライシングされた（成熟）ＲＮＡが産生される。 In an embodiment, the ASO is complementary to a target region that is within the unretained intron of the RIC mRNA precursor. In embodiments, the target portion of the RIC mRNA precursor is: within the region from +6 to +100 to the unretained intron 5 ′ splice site; or from −16 to −100 to the unretained intron 3 ′ splice site It is in. In an embodiment, the target portion of the RIC mRNA precursor is in the region from +100 to the 5 'splice site of the unretained intron to -100 to the 3' splice site of the unretained intron. As used to identify a region or sequence position, “within” is understood to include the residues at the listed positions. For example, the region from +6 to +100 includes residues at positions +6 and +100. Thereby, in an embodiment, a fully spliced (mature) RNA encoding the target protein is produced.

実施形態では、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の保持されたイントロンは、非効率的にスプライシングされたイントロンである。本明細書で使用されるように、「非効率的にスプライシングされた」は、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体における別のスプライス部位でのスプライシングの頻度と比較して、保持されたイントロンに隣接するスプライス部位（５’スプライス部位または３’スプライス部位）でのスプライシングの頻度が比較的低いことを指し得る。用語「非効率的にスプライシングされた」はまた、スプライス部位でのスプライシングの相対速度または動態（ｋｉｎｅｔｉｃｓ）を指し得る。この「非効率的にスプライシングされた」イントロンは、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体における別のイントロンと比較して、より遅い速度でスプライシングあるいは除去され得る。 In embodiments, the retained intron of the RIC mRNA precursor is an inefficiently spliced intron. As used herein, “inefficiently spliced” refers to a splice site adjacent to a retained intron (as compared to the frequency of splicing at another splice site in the RIC mRNA precursor. It may refer to a relatively low frequency of splicing at the 5 ′ splice site or 3 ′ splice site). The term “inefficiently spliced” can also refer to the relative rate or kinetics of splicing at the splice site. This “inefficiently spliced” intron can be spliced or removed at a slower rate compared to another intron in the RIC mRNA precursor.

実施形態では、５’スプライス部位に隣接するエクソンの−３ｅから−１ｅ、および保持されたイントロンの＋１から＋６の９−ヌクレオチド配列は、対応する野生型配列と同一である。実施形態では、保持されたイントロンの−１５から−１および３’スプライス部位に隣接するエクソンの＋１ｅの１６ヌクレオチド配列は、対応する野生型配列と同一である。本明細書で使用される「野生型配列」は、生体および科学の情報のＮＣＢＩリポジトリ（ＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｆｏｒＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，ＮａｔｉｏｎａｌＬｉｂｒａｒｙｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，８６００ＲｏｃｋｖｉｌｌｅＰｉｋｅ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤＵＳＡ２０８９４によって運営される）に寄託された公開された参照ゲノムにおける標的遺伝子に対するヌクレオチド配列を指す。さらに本明細書で使用されるように、「ｅ」で示されたヌクレオチド位置は、ヌクレオチドがエクソン（例えば、５’スプライス部位に隣接するエクソン、または３’スプライス部位に隣接するエクソン）の配列中に存在することを示す。 In an embodiment, the exon -3e to -1e adjacent to the 5 'splice site, and the +1 to +6 9-nucleotide sequence of the retained intron are identical to the corresponding wild-type sequence. In an embodiment, the 16 nucleotide sequence of exon + 1e adjacent to the -15 to -1 and 3 'splice sites of the retained intron is identical to the corresponding wild type sequence. “Wild-type sequences” as used herein are deposited by the NCBI repository of biological and scientific information (National Center for Biotechnology Information, National Library of Medicine, 8600 Rockville Pinke, Bethesda, MD USA). Refers to the nucleotide sequence for the target gene in the published reference genome. As further used herein, the nucleotide position indicated by “e” is a sequence in which the nucleotide is an exon (eg, an exon adjacent to a 5 ′ splice site, or an exon adjacent to a 3 ′ splice site). Is present.

該方法では、細胞を、本明細書に記載のタンパク質をコードするｍＲＮＡ前駆体の一部に相補的であるＡＳＯと接触させる工程であって、結果としてタンパク質発現が増加する工程を含む。本明細書で使用されるように、細胞に「接触させる」または投与することは、ＡＳＯと細胞が相互作用するように、ＡＳＯを細胞に即座に近接させる方法を指す。ＡＳＯと接触させられる細胞は、ＡＳＯを細胞へと取り込む又は輸送する。該方法は、疾病または疾患に関係する、あるいは疾病または疾患に関連する細胞を、ＡＳＯと接触させる工程を含む。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、ＡＳＯを細胞型に対して標的とする、ＡＳＯと疾病または疾患に関係する又は疾病または疾患に関連する細胞との間の接触を増強する、またはＡＳＯの取り込みを増強するために、さらに修飾され得るかまたは別の分子に結合され得る（例えば、共有結合される）。 The method includes contacting a cell with an ASO that is complementary to a portion of an mRNA precursor encoding a protein described herein, resulting in increased protein expression. As used herein, “contacting” or administering a cell refers to a method of bringing ASO into immediate proximity to the cell so that the cell interacts with ASO. Cells that are contacted with ASO take up or transport ASO into the cell. The method includes contacting a cell associated with or associated with a disease or disorder with ASO. In some embodiments, ASO targets ASO to a cell type, enhances contact between ASO and a cell associated with or associated with a disease or disorder, or uptake of ASO Can be further modified or conjugated to another molecule (eg, covalently linked).

本明細書で使用されるように、用語「タンパク質産生を増加させる」または「標的タンパク質の発現を増加させる」は、細胞中のｍＲＮＡから翻訳されるタンパク質の量を増加させることを意味する。「標的タンパク質」は、発現／産生の増加が望まれるタンパク質で有り得る。 As used herein, the term “increasing protein production” or “increasing target protein expression” means increasing the amount of protein translated from mRNA in a cell. A “target protein” can be a protein for which increased expression / production is desired.

実施形態では、例えば、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体を発現する細胞を、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の転写産物の標的部分に相補的であるＡＳＯと接触させる工程は、結果として、ｍＲＮＡ前駆体によってコードされるタンパク質（例えば標的タンパク質）の量の測定可能な増加をもたらす。タンパク質の産生を測定または検出する方法は、当業者に明白となり、あらゆる既知の方法、例えば、ウェスタンブロッティング、フローサイトメトリー、免疫蛍光顕微鏡検査法、およびＥＬＩＳＡを含む。 In embodiments, for example, contacting a cell expressing a RIC mRNA precursor with ASO that is complementary to the target portion of the RIC mRNA precursor transcript results in a protein encoded by the mRNA precursor ( For example, a measurable increase in the amount of target protein). Methods for measuring or detecting protein production will be apparent to those of skill in the art and include any known method such as Western blotting, flow cytometry, immunofluorescence microscopy, and ELISA.

実施形態では、細胞を、ＲＩＣｍＲＮＡの転写産物の標的部分に相補的であるＡＳＯに接触させる工程は、結果として、ＡＳＯの欠如／処置の欠如下における細胞によって産生されたタンパク質の量と比較して、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、８０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、または１０００％の、産生されたタンパク質の量の増加をもたらす。実施形態では、アンチセンスオリゴマーが接触させられた細胞によって産生されたタンパク質の合計量は、対照化合物により産生された標的タンパク質の量と比較して、約１．１倍から約１０倍、約１．５倍から約１０倍、約２倍から約１０倍、約３倍から約１０倍、約４倍から約１０倍、約１．１倍から約５倍、約１．１倍から約６倍、約１．１倍から約７倍、約１．１倍から約８倍、約１．１倍から約９倍、約２倍から約５倍、約２倍から約６倍、約２倍から約７倍、約２倍から約８倍、約２倍から約９倍、約３倍から約６倍、約３倍から約７倍、約３倍から約８倍、約３倍から約９倍、約４倍から約７倍、約４倍から約８倍、約４倍から約９倍、少なくとも約１．１倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも４倍、少なくとも約５倍、または少なくとも約１０倍に増加する。対照化合物は、例えば、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的でないオリゴヌクレオチドで有り得る。 In embodiments, contacting the cell with ASO that is complementary to the target portion of the RIC mRNA transcript results in comparison to the amount of protein produced by the cell in the absence of ASO / lack of treatment. Resulting in an increase in the amount of protein produced of at least 10, 20, 30, 40, 50, 60, 80, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, or 1000% . In an embodiment, the total amount of protein produced by the cells contacted with the antisense oligomer is about 1.1 to about 10 times, about 1 compared to the amount of target protein produced by the control compound. .5 times to about 10 times, about 2 times to about 10 times, about 3 times to about 10 times, about 4 times to about 10 times, about 1.1 times to about 5 times, about 1.1 times to about 6 times About 1.1 times to about 7 times, about 1.1 times to about 8 times, about 1.1 times to about 9 times, about 2 times to about 5 times, about 2 times to about 6 times, about 2 times About 7 times, about 2 times to about 8 times, about 2 times to about 9 times, about 3 times to about 6 times, about 3 times to about 7 times, about 3 times to about 8 times, about 3 times About 9 times, about 4 times to about 7 times, about 4 times to about 8 times, about 4 times to about 9 times, at least about 1.1 times, at least about 1.5 times, at least about 2 times, at least about 2 times . 5 times, at least about 3 times, at least about 3.5 times, at least 4 times, at least about 5 times, or at least about 10 times. The control compound can be, for example, an oligonucleotide that is not complementary to the target portion of the RIC mRNA precursor.

いくつかの実施形態では、細胞を、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の転写産物の標的部分に相補的であるＡＳＯと接触させる工程は、結果として、標的タンパク質をコードする成熟ｍＲＮＡを含む、タンパク質をコードするｍＲＮＡ量の増加をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質をコードするｍＲＮＡ、またはタンパク質をコードする成熟ｍＲＮＡの量はＡＳＯの欠如／処置の欠如下における細胞によって産生されたタンパク質の量と比較して、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、８０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、または１０００％増加する。いくつかの実施形態では、タンパク質をコードするｍＲＮＡ、アンチセンスオリゴマーが接触させられた細胞において産生されたタンパク質をコードする成熟ｍＲＮＡの合計量は、例えば、処置されていない細胞または対照化合物で処置された細胞などの、処置されていない細胞で産生された成熟ＲＮＡ量と比較して、約１．１倍から約１０倍、約１．５倍から約１０倍、約２倍から約１０倍、約３倍から約１０倍、約４倍から約１０倍、約１．１倍から約５倍、約１．１倍から約６倍、約１．１倍から約７倍、約１．１倍から約８倍、約１．１倍から約９倍、約２倍から約５倍、約２倍から約６倍、約２倍から約７倍、約２倍から約８倍、約２倍から約９倍、約３倍から約６倍、約３倍から約７倍、約３倍から約８倍、約３倍から約９倍、約４倍から約７倍、約４倍から約８倍、約４倍から約９倍、少なくとも約１．１倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、または少なくとも約１０倍に増加する。対照化合物は、例えば、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的でないオリゴヌクレオチドでもよい。
ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体からの保持されたイントロンの構成的スプライシング In some embodiments, contacting the cell with an ASO that is complementary to the target portion of the RIC mRNA precursor transcript results in a mRNA encoding the protein, including a mature mRNA encoding the target protein. Bring about an increase in quantity. In some embodiments, the amount of mRNA encoding the protein, or mature mRNA encoding the protein is at least 10, 20, compared to the amount of protein produced by the cell in the absence of ASO / lack of treatment. Increase by 30, 40, 50, 60, 80, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, or 1000%. In some embodiments, the total amount of mRNA encoding the protein, mature mRNA encoding the protein produced in the cell contacted with the antisense oligomer is treated with, for example, untreated cells or a control compound. About 1.1 times to about 10 times, about 1.5 times to about 10 times, about 2 times to about 10 times, compared to the amount of mature RNA produced in untreated cells, such as About 3 times to about 10 times, about 4 times to about 10 times, about 1.1 times to about 5 times, about 1.1 times to about 6 times, about 1.1 times to about 7 times, about 1.1 times About 2 times to about 8 times, about 1.1 times to about 9 times, about 2 times to about 5 times, about 2 times to about 6 times, about 2 times to about 7 times, about 2 times to about 8 times, about 2 times About 9 times, about 3 times to about 6 times, about 3 times to about 7 times, about 3 times to about 8 times, about 3 times to about 9 times, 4 times to about 7 times, about 4 times to about 8 times, about 4 times to about 9 times, at least about 1.1 times, at least about 1.5 times, at least about 2 times, at least about 2.5 times, at least Increase by about 3 times, at least about 3.5 times, at least about 4 times, at least about 5 times, or at least about 10 times. The control compound may be, for example, an oligonucleotide that is not complementary to the target portion of the RIC mRNA precursor.
Constitutive splicing of retained introns from RIC mRNA precursors

本明細書で提供される方法およびアンチセンスオリゴヌクレオチド組成物は、タンパク質をコードするｍＲＮＡ、またはタンパク質をコードする成熟ｍＲＮＡのレベルを増加させることによって、例えば、本明細書に記載のタンパク質の量または活性の不足がもたらす本明細書に記載の疾病を有する被験体において、細胞内のタンパク質の発現を増加させることに有用である。特に、本明細書に記載される方法および組成物は、タンパク質をコードするＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の転写産物からの保持されたイントロンの構成的スプライシングを誘発し、それによって、タンパク質をコードするｍＲＮＡ、またはタンパク質をコードする成熟ｍＲＮＡのレベルが増加し、タンパク質の発現が増加する。 The methods and antisense oligonucleotide compositions provided herein increase the level of mRNA encoding a protein, or mature mRNA encoding a protein, for example, by increasing the level of a protein described herein or Useful in increasing intracellular protein expression in a subject having a disease described herein resulting from a lack of activity. In particular, the methods and compositions described herein induce constitutive splicing of retained introns from transcripts of protein-encoding RIC mRNA precursors, thereby producing protein-encoding mRNA, or The level of mature mRNA encoding the protein is increased and the expression of the protein is increased.

ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体からの保持されたイントロンの構成的スプライシングは、保持されたイントロンをＲＩＣｍＲＮＡ前駆体から正しく除去し、ここで保持されたイントロンは、野生型スプライス配列を有する。構成的スプライシングは、本明細書で使用されるように、遺伝子または対立遺伝子から転写されたｍＲＮＡ前駆体の選択的スプライシングまたは異常スプライシングを引き起こす突然変異を有する遺伝子または対立遺伝子から転写されたＲＩＣｍＲＮＡ前駆体からの保持されたイントロンのスプライシングを包含しない。例えば、本明細書で提供される方法およびアンチセンスオリゴヌクレオチドを使用して誘発された、保持されたイントロンの構成的スプライシングは、ｍＲＮＡ前駆体における異常スプライシングを訂正しない、またはｍＲＮＡ前駆体の選択的スプライシングに影響せず、結果的に標的タンパク質または機能的ＲＮＡの発現が増加する。 Constitutive splicing of the retained intron from the RIC mRNA precursor correctly removes the retained intron from the RIC mRNA precursor, where the retained intron has a wild type splice sequence. Constitutive splicing, as used herein, is a RIC mRNA precursor transcribed from a gene or allele having a mutation that causes alternative or aberrant splicing of the mRNA precursor transcribed from the gene or allele. Does not include splicing of retained introns from the body. For example, constitutive splicing of retained introns induced using the methods and antisense oligonucleotides provided herein does not correct aberrant splicing in mRNA precursors, or selective for mRNA precursors Splicing is not affected, resulting in increased expression of the target protein or functional RNA.

実施形態では、構成的スプライシングは、保持されたイントロンをＲＩＣｍＲＮＡ前駆体から正しく除去し、ここでＲＩＣｍＲＮＡ前駆体は、野生型の遺伝子または対立遺伝子、あるいは多形性の遺伝子または対立遺伝子から転写され、完全に機能的な標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードし、遺伝子または対立遺伝子は、保持されたイントロンの選択的スプライシングまたは異常スプライシングを引き起こす突然変異を有さない。 In embodiments, constitutive splicing correctly removes retained introns from the RIC mRNA precursor, where the RIC mRNA precursor is transcribed from a wild-type gene or allele, or a polymorphic gene or allele. And encodes a fully functional target protein or functional RNA, the gene or allele has no mutation that causes alternative or aberrant splicing of the retained intron.

いくつかの実施形態では、タンパク質をコードするＲＩＣｍＲＮＡ前駆体からの保持されたイントロンの構成的スプライシングは、タンパク質をコードするＲＩＣｍＲＮＡ前駆体から、保持されたイントロンを正しく除去し、ここでＲＩＣｍＲＮＡ前駆体は、野生型対立遺伝子からの産生と比較して減少したレベルで標的遺伝子あるいは機能的ＲＮＡを産生する遺伝子または対立遺伝子から転写され、および遺伝子または対立遺伝子は、保持されたイントロンの選択的スプライシングまたは異常スプライシングを引き起こす突然変異を有さない。これらの実施形態では、構成的スプライシングをされた保持されたイントロンの正しい除去は、結果として、同等の野生型タンパク質または機能的ＲＮＡと比較したときに機能的である標的タンパク質または機能的ＲＮＡの産生をもたらす。 In some embodiments, constitutive splicing of the retained intron from the RIC mRNA precursor encoding the protein correctly removes the retained intron from the RIC mRNA precursor encoding the protein, wherein the RIC mRNA is The precursor is transcribed from a gene or allele that produces the target gene or functional RNA at a reduced level compared to production from the wild-type allele, and the gene or allele is selective for the retained intron. There are no mutations that cause splicing or aberrant splicing. In these embodiments, correct removal of the constitutively spliced retained intron results in production of a target protein or functional RNA that is functional when compared to an equivalent wild type protein or functional RNA. Bring.

他の実施形態では、構成的スプライシングは、保持されたイントロンをＲＩＣｍＲＮＡ前駆体から正しく除去し、ここでＲＩＣｍＲＮＡ前駆体は、同等の野生型タンパク質または機能的ＲＮＡと比較して、機能の低下した形態で産生された標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードする遺伝子または対立遺伝子から転写され、遺伝子または対立遺伝子は、保持されたイントロンの選択的スプライシングまたは異常スプライシングを引き起こす突然変異を有さない。これらの実施形態では、構成的にスプライシングされた保持されたイントロンの正しい除去は、結果として、部分的に機能的な標的タンパク質、または同等の野生型タンパク質または機能的ＲＮＡと比較したときに部分的に機能的である機能的ＲＮＡの産生をもたらす。 In other embodiments, constitutive splicing correctly removes retained introns from the RIC mRNA precursor, where the RIC mRNA precursor is reduced in function compared to an equivalent wild-type protein or functional RNA. The gene or allele is transcribed from a gene or allele encoding a target protein or functional RNA produced in such a form, and the gene or allele does not have a mutation that causes alternative or abnormal splicing of the retained intron. In these embodiments, the correct removal of the constitutively spliced retained intron results in a partial response when compared to a partially functional target protein or equivalent wild type protein or functional RNA. Resulting in the production of functional RNA that is functional.

構成的スプライシングによる保持されたイントロンの「正しい除去」は、エクソンのいかなる部分も除去することのない、全イントロンの除去を指す。 “Correct removal” of retained introns by constitutive splicing refers to removal of all introns without removing any part of the exon.

実施形態では、本明細書に記載されるような、または本明細書に記載される方法に使用されるアンチセンスオリゴマーは、遺伝子から転写されたｍＲＮＡ前駆体の選択的スプライシングまたは異常スプライシングを調節することによって、タンパク質をコードするｍＲＮＡの量、またはタンパク質の量を増加させない。選択的スプライシングまたは異常スプライシングの調節は、ＲＮＡ種の配列および長さを解析する既知の方法を使用して、例えば、ＲＴ−ＰＣＲによって、および本明細書および文献中で別記される方法を使用して測定することができる。実施形態では、選択的スプライシングまたは異常スプライシングの調節は、対象となるスプライシングされた種の量の、少なくとも１０％または１．１倍の増加または減少に基づいて判定される。実施形態では、調節は、本発明の方法においてタンパク質をコードするｍＲＮＡの増加の判定に関して本明細書に記載されるように、少なくとも１０％から１００％または１．１倍から１０倍のレベルでの増加または減少に基づいて判定される。 In embodiments, an antisense oligomer as described herein or used in the methods described herein modulates alternative splicing or aberrant splicing of an mRNA precursor transcribed from a gene. Thus, the amount of mRNA encoding the protein or the amount of protein is not increased. Alternative splicing or aberrant splicing modulation uses known methods of analyzing the sequence and length of RNA species, for example, by RT-PCR and using methods described elsewhere in this specification and literature. Can be measured. In embodiments, alternative splicing or aberrant splicing modulation is determined based on an increase or decrease of at least 10% or 1.1 fold in the amount of spliced species of interest. In embodiments, the modulation is at a level of at least 10% to 100% or 1.1 fold to 10 fold as described herein for determining the increase in mRNA encoding a protein in the methods of the invention. Determined based on increase or decrease.

実施形態では、該方法は、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体が、野生型ｍＲＮＡ前駆体の部分的スプライシングによって産生された方法である。実施形態では、該方法は、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体が、全長の野生型ｍＲＮＡ前駆体の部分的スプライシングによって産生された方法である。実施形態では、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体は、全長のｍＲＮＡ前駆体の部分的スプライシングによって産生された。これらの実施形態では、全長のｍＲＮＡ前駆体は、野生型スプライス部位配列を有する保持されたイントロンのスプライシングと比較して、保持されたイントロンの正しいスプライシングを損なわない保持されたイントロンのスプライス部位に多型を有し得る。 In an embodiment, the method is a method wherein the RIC mRNA precursor was produced by partial splicing of the wild type mRNA precursor. In an embodiment, the method is a method wherein the RIC mRNA precursor was produced by partial splicing of the full length wild type mRNA precursor. In embodiments, the RIC mRNA precursor was produced by partial splicing of the full length mRNA precursor. In these embodiments, the full-length mRNA precursor has multiple polymorphisms in the retained intron splice sites that do not impair the correct splicing of the retained intron as compared to the splicing of the retained intron with the wild-type splice site sequence. Can have a mold.

実施形態では、タンパク質をコードするｍＲＮＡは、全長の成熟ｍＲＮＡまたは野生型成熟ｍＲＮＡである。これらの実施形態では、全長の成熟ｍＲＮＡは、野生型成熟ｍＲＮＡによってコードされたタンパク質の活性と比較して、成熟ｍＲＮＡによってコードされた標的タンパク質または機能的ＲＮＡの活性に影響しない多型を有し得る。
アンチセンスオリゴマー In embodiments, the mRNA encoding the protein is a full length mature mRNA or a wild type mature mRNA. In these embodiments, the full length mature mRNA has a polymorphism that does not affect the activity of the target protein or functional RNA encoded by the mature mRNA as compared to the activity of the protein encoded by the wild type mature mRNA. obtain.
Antisense oligomer

本開示の一態様は、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分に結合することによってスプライシングを増強するアンチセンスオリゴマーを含む組成物である。本明細書で使用されるように、用語「ＡＳＯ」および「アンチセンスオリゴマー」は交換可能に使用され、ワトソン・クリック塩基対またはゆらぎ塩基対（Ｇ−Ｕ）によって標的核酸（例えば、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体）配列にハイブリダイズする、核酸塩基を含む、ポリヌクレオチドなどのオリゴマーを指す。ＡＳＯは、標的配列に相補的な、またはほぼ相補的（例えば、標的配列に結合し、スプライス部位でスプライシングを増強させるのに十分な相補性）である正確な配列を有し得る。ＡＳＯは、標的核酸（例えば、ｍＲＮＡ前駆体の転写産物の標的とされた部分）に結合し（ハイブリダイズし）、生理学的条件下でハイブリダイズされたままであるように設計されている。典型的に、ＡＳＯは、意図した（標的とされた）核酸配列以外の部位にハイブリダイズする場合、標的核酸でない限られた数の配列に（標的核酸以外の少数の部位に）ハイブリダイズする。ＡＳＯの設計は、ｍＲＮＡ前駆体の転写産物の標的とされた部分の核酸配列、あるいはゲノムまたは細胞のｍＲＮＡ前駆体またはトランスクリプトームにおける他の場所での十分に類似した核酸配列の発生を考慮に入れることができ、その結果、ＡＳＯが他の部位に結合し「オフターゲット」効果を引き起こす可能性は限定される。例えば、発明の名称「ＲｅｄｕｃｉｎｇＮｏｎｓｅｎｓｅ−ＭｅｄｉａｔｅｄｍＲＮＡＤｅｃａｙ」のＷＯ２０１５／０３５０９１として公開されたＰＣＴ国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０５４１５１におけるものなどの、当業者に既知のアンチセンスオリゴマーは、本明細書に記載される方法を実施するために使用され得る。 One aspect of the present disclosure is a composition comprising an antisense oligomer that enhances splicing by binding to a target portion of a RIC mRNA precursor. As used herein, the terms “ASO” and “antisense oligomer” are used interchangeably and refer to target nucleic acids (eg, RIC mRNA precursors) by Watson-Crick base pairs or wobble base pairs (GU). Body) refers to an oligomer, such as a polynucleotide, containing a nucleobase that hybridizes to a sequence. The ASO can have a precise sequence that is complementary or nearly complementary to the target sequence (eg, sufficient complementarity to bind to the target sequence and enhance splicing at the splice site). ASOs are designed to bind (hybridize) to a target nucleic acid (eg, a targeted portion of a transcript of an mRNA precursor) and remain hybridized under physiological conditions. Typically, ASO hybridizes to a limited number of sequences that are not the target nucleic acid (in a few sites other than the target nucleic acid) when hybridizing to sites other than the intended (targeted) nucleic acid sequence. The design of the ASO allows for the generation of a nucleic acid sequence of the targeted portion of the mRNA precursor transcript, or a sufficiently similar nucleic acid sequence elsewhere in the genomic or cellular mRNA precursor or transcriptome. As a result, the potential for ASO to bind to other sites and cause “off-target” effects is limited. Antisense oligomers known to those skilled in the art are described herein, such as, for example, in PCT International Application No. PCT / US2014 / 054151 published as WO2015 / 035091 of the title “Reducing Nonsense-Mediated mRNA Decay”. Can be used to implement the method.

いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、標的核酸またはＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的とされた部分に「特異的にハイブリダイズする」または「特異的である」。典型的に、そのようなハイブリダイゼーションは、３７℃より実質的に高い融解温度（Ｔｍ）で、好ましくは少なくとも５０℃で、および典型的に６０℃からおよそ９０℃の間で生じる。そのようなハイブリダイゼーションは、好ましくは、厳しいハイブリダイゼーション条件に対応している。与えられたイオン強度およびｐＨで、Ｔｍは、標的配列の５０％が相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズする温度である。 In some embodiments, the ASO “specifically hybridizes” or “specific” to the targeted portion of the target nucleic acid or RIC mRNA precursor. Typically, such hybridization occurs at a melting temperature (Tm) substantially higher than 37 ° C, preferably at least 50 ° C, and typically between 60 ° C and approximately 90 ° C. Such hybridization preferably corresponds to stringent hybridization conditions. For a given ionic strength and pH, Tm is the temperature at which 50% of the target sequence hybridizes to a complementary oligonucleotide.

オリゴヌクレオチドなどのオリゴマーは、ハイブリダイゼーションが２つの一本鎖ポリヌクレオチド間の逆平行構成で生じるときに、互いに「相補的」である。二本鎖ポリヌクレオチドは、ハイブリダイゼーションが第１のポリヌクレオチドの鎖の１つと第２のポリヌクレオチドの鎖の１つとの間に生じる場合に、別のポリヌクレオチドに「相補的」であり得る。相補性（１つのポリヌクレオチドが別のポリヌクレオチドと相補的である程度）は、一般に容認された塩基対合則に従って、互いに水素結合を形成すると予期される対向する鎖における塩基の割合（例えばパーセンテージ）の点から数量化できる。アンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）の配列は、ハイブリダイズするその標的核酸の配列に１００％相補的である必要はない。特定の実施形態では、ＡＳＯは、標的とされる標的核酸配列内の標的部分に対する、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列相補性を含み得る。例えば、オリゴマー化合物の２０の核酸塩基のうちの１８が標的領域に相補的であり、それゆえに特異的にハイブリダイズするＡＳＯは、９０パーセントの相補性を表わす。この例において、残りの相補的でない核酸塩基は、ともにクラスター化され得るか、または相補的な核酸塩基と分散され（ｉｎｔｅｒｓｐｅｒｓｅｄ）、互いに又は相補的な核酸塩基に隣接している必要はない。ＡＳＯの標的核酸の領域とのパーセント相補性は、ＢＬＡＳＴプログラム（基礎的なローカルアライメント検索ツール）および当該技術分野で既知のＰｏｗｅｒＢＬＡＳＴプログラム（Ａｌｔｓｃｈｕｌｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９０，２１５，４０３−４１０；ＺｈａｎｇａｎｄＭａｄｄｅｎ，ＧｅｎｏｍｅＲｅｓ．，１９９７，７，６４９−６５６）を慣例的に使用して判定され得る。 Oligomers, such as oligonucleotides, are “complementary” to each other when hybridization occurs in an antiparallel configuration between two single stranded polynucleotides. A double-stranded polynucleotide can be “complementary” to another polynucleotide when hybridization occurs between one of the strands of the first polynucleotide and one of the strands of the second polynucleotide. Complementarity (the degree to which one polynucleotide is complementary to another polynucleotide) is the proportion of bases in opposing strands (eg, percentages) that are expected to form hydrogen bonds with each other according to generally accepted base-pairing rules. It can be quantified from the point of. The sequence of the antisense oligomer (ASO) need not be 100% complementary to the sequence of its target nucleic acid to hybridize. In certain embodiments, the ASO is at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, relative to the target portion within the targeted target nucleic acid sequence. It may comprise at least 97%, at least 98%, or at least 99% sequence complementarity. For example, 18 of the 20 nucleobases of an oligomeric compound are complementary to the target region, and thus specifically hybridize ASO represents 90 percent complementarity. In this example, the remaining non-complementary nucleobases can be clustered together or interspersed with complementary nucleobases and need not be adjacent to each other or to complementary nucleobases. The percent complementarity of the target nucleic acid region of ASO is determined by the BLAST program (basic local alignment search tool) and the PowerBLAST program known in the art (Altschul et al., J. Mol. Biol., 1990, 215, 403-410; Zhang and Madden, Genome Res., 1997, 7, 649-656).

ＡＳＯは、標的配列におけるすべての核酸塩基にハイブリダイズする必要はなく、それがハイブリダイズする核酸塩基は、隣接しているか又は隣接していないこともある。ＡＳＯは、ｍＲＮＡ前駆体の転写産物の１つ以上のセグメントにわたってハイブリダイズし得、その結果、介在する又は隣接するセグメントは、ハイブリダイゼーション事象に関係しない（例えば、ループ構造またはヘアピン構造が形成され得る）。特定の実施形態では、ＡＳＯは、標的ｍＲＮＡ前駆体の転写産物において隣接していない核酸塩基にハイブリダイズする。例えば、ＡＳＯは、ＡＳＯがハイブリダイズしない１つ以上の核酸塩基によって分離される、ｍＲＮＡ前駆体の転写産物における核酸塩基にハイブリダイズすることができる。 ASO need not hybridize to all nucleobases in the target sequence, and the nucleobase to which it hybridizes may or may not be contiguous. The ASO may hybridize over one or more segments of the mRNA precursor transcript so that intervening or adjacent segments are not involved in the hybridization event (eg, a loop structure or hairpin structure may be formed). ). In certain embodiments, the ASO hybridizes to non-contiguous nucleobases in the target mRNA precursor transcript. For example, ASO can hybridize to a nucleobase in a transcript of an mRNA precursor that is separated by one or more nucleobases to which ASO does not hybridize.

本明細書に記載されるＡＳＯは、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分に存在する核酸塩基に相補的である核酸塩基を含む。用語「ＡＳＯ」は、オリゴヌクレオチド、および標的ｍＲＮＡ上の相補的な核酸塩基にハイブリダイズすることができる核酸塩基を含むが、ペプチド核酸（ＰＮＡ）などの糖部を含まない、他のオリゴマー分子を具体化する。ＡＳＯは、自然発生のヌクレオチド、ヌクレオチドアナログ、修飾されたヌクレオチド、またはそれらの２つ又は３つの任意の組み合わせを含み得る。用語「自然発生のヌクレオチド」は、デオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドを含む。用語「修飾されたヌクレオチド」は、修飾された又は置換された糖類及び／又は修飾された骨格を有するヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ＡＳＯのヌクレオチドのすべてが、修飾されたヌクレオチドである。本明細書に記載される方法および組成物と適合性のあるＡＳＯの化学修飾およびＡＳＯの成分は、当業者に明白となり、例えば、米国特許第８，２５８，１０９号Ｂ２、米国特許第５，６５６，６１２号、米国特許公開番号２０１２／０１９０７２８、およびＤｉａｓａｎｄＳｔｅｉｎ，Ｍｏｌ．ＣａｎｃｅｒＴｈｅｒ．２００２，３４７−３５５に見出すことができ、それら全体が引用によって本明細書に組み込まれる。 The ASO described herein includes nucleobases that are complementary to nucleobases present in the target portion of the RIC mRNA precursor. The term “ASO” refers to oligonucleotides and other oligomeric molecules that contain nucleobases that can hybridize to complementary nucleobases on the target mRNA, but do not include sugar moieties such as peptide nucleic acids (PNA). Make it concrete. ASOs can include naturally occurring nucleotides, nucleotide analogs, modified nucleotides, or any combination of two or three thereof. The term “naturally occurring nucleotides” includes deoxyribonucleotides and ribonucleotides. The term “modified nucleotide” includes a nucleotide having a modified or substituted saccharide and / or a modified backbone. In some embodiments, all of the ASO nucleotides are modified nucleotides. Chemical modifications of ASO and components of ASO that are compatible with the methods and compositions described herein will be apparent to those skilled in the art, for example, US Pat. No. 8,258,109 B2, US Pat. 656,612, US Patent Publication No. 2012/0190728, and Diaz and Stein, Mol. Cancer Ther. 2002, 347-355, which are incorporated herein by reference in their entirety.

ＡＳＯの核酸塩基は、アデニン、グアニン、シトシン、チミンおよびウラシルなどの自然発生の未修飾の核酸塩基、または標的ｍＲＮＡ前駆体上に存在する核酸塩基との水素結合が可能であるように未修飾の核酸塩基に十分に類似している合成または修飾された核酸塩基であり得る。修飾された核酸塩基の例としては、限定されないが、ヒポキサンチン、キサンチン、７−メチルグアニン、５，６−ジヒドロウラシル、５−メチルシトシン、および５−ヒドロキシメチルシトシンが挙げられる。 The nucleobases of ASO are unmodified so that they can hydrogen bond with naturally occurring unmodified nucleobases such as adenine, guanine, cytosine, thymine and uracil, or with nucleobases present on the target mRNA precursor. It can be a synthetic or modified nucleobase that is sufficiently similar to the nucleobase. Examples of modified nucleobases include, but are not limited to, hypoxanthine, xanthine, 7-methylguanine, 5,6-dihydrouracil, 5-methylcytosine, and 5-hydroxymethylcytosine.

本明細書に記載されるＡＳＯはまた、オリゴマーの成分に結合する骨格構造を含む。用語「骨格構造」および「オリゴマー結合」は、交換可能に使用され、ＡＳＯの単量体間の結合を指し得る。自然発生のオリゴヌクレオチドでは、骨格は、オリゴマーの糖部を結合する３’−５’ホスホジエステル結合を含む。本明細書に記載されるＡＳＯの骨格構造またはオリゴマー結合は、（限定されないが）ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレノエート、ホスホロジセレノエート、ホスホロアニロチオエート、ホスホラニラデート（ｐｈｏｓｐｈｏｒａｎｉｌａｄａｔｅ）、ホスホラミデート（ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄａｔｅ）などを含む。例えば、ＬａＰｌａｎｃｈｅｅｔａｌ．，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．１４：９０８１（１９８６）；Ｓｔｅｃｅｔａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０６：６０７７（１９８４），Ｓｔｅｉｎｅｔａｌ．，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．１６：３２０９（１９８８），Ｚｏｎｅｔａｌ．，ＡｎｔｉＣａｎｃｅｒＤｒｕｇＤｅｓｉｇｎ６：５３９（１９９１）；Ｚｏｎｅｔａｌ．，ＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓａｎｄＡｎａｌｏｇｕｅｓ：ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ，ｐｐ．８７−１０８（Ｆ．Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，Ｅｄ．，ＯｘｆｏｒｄＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＰｒｅｓｓ，ＯｘｆｏｒｄＥｎｇｌａｎｄ（１９９１））；Ｓｔｅｃｅｔａｌ．，米国特許第５，１５１，５１０号；ＵｈｌｍａｎｎａｎｄＰｅｙｍａｎ，ＣｈｅｍｉｃａｌＲｅｖｉｅｗｓ９０：５４３（１９９０）を参照されたい。幾つかの実施形態では、ＡＳＯの骨格構造は、亜リン酸を含有していないが、例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、またはカルバミン酸塩、アミド、および直鎖および環式の炭化水素基を含む連結基において、ペプチド結合を含有している。幾つかの実施形態では、骨格修飾は、ホスホロチオエート結合である。幾つかの実施形態では、骨格修飾は、ホスホラミデート結合である。 The ASO described herein also includes a backbone structure that binds to the components of the oligomer. The terms “backbone structure” and “oligomer linkage” are used interchangeably and may refer to the linkage between monomers of ASO. In naturally occurring oligonucleotides, the backbone contains a 3'-5 'phosphodiester linkage that connects the sugar moieties of the oligomer. The backbone structures or oligomeric linkages of ASO described herein include (but are not limited to) phosphorothioate, phosphorodithioate, phosphoroselenoate, phosphorodiselenoate, phosphoroanilothioate, phosphoranilate. ), Phosphoramidate and the like. See, for example, LaPlanche et al. , Nucleic Acids Res. 14: 9081 (1986); Spec et al. , J .; Am. Chem. Soc. 106: 6077 (1984), Stein et al. , Nucleic Acids Res. 16: 3209 (1988), Zon et al. , Anti Cancer Drug Design 6: 539 (1991); Zon et al. , Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, pp. 87-108 (F. Eckstein, Ed., Oxford University Press, Oxford England (1991)); Stec et al. U.S. Pat. No. 5,151,510; Uhlmann and Peyman, Chemical Reviews 90: 543 (1990). In some embodiments, the backbone structure of ASO does not contain phosphorous acid, but includes, for example, peptide nucleic acids (PNA), or carbamates, amides, and linear and cyclic hydrocarbon groups. The linking group contains a peptide bond. In some embodiments, the backbone modification is a phosphorothioate linkage. In some embodiments, the backbone modification is a phosphoramidate linkage.

実施形態では、ＡＳＯ骨格のリンヌクレオチド間の結合の各々での立体化学は、ランダムである。実施形態では、ＡＳＯ骨格のリンヌクレオチド間の結合の各々での立体化学は、制御され、ランダムではない。例えば、引用によって本明細書に組み込まれた米国特許公開番号２０１４／０１９４６１０、「ＭｅｔｈｏｄｓｆｏｒｔｈｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆＦｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓ」は、核酸オリゴマーにおいて各リン原子でキラリティーの利き手（ｈａｎｄｅｄｎｅｓｓ）を独立して選択する方法について記載している。実施形態では、本発明の方法において使用されるＡＳＯは、ランダムではないリンヌクレオチド間の結合を有するＡＳＯを含む。実施形態では、本発明の方法に使用される組成物は、純粋なジアステレオマーＡＳＯを含む。実施形態では、本発明の方法に使用される組成物は、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、約１００％、約９０％から約１００％、約９１％から約１００％、約９２％から約１００％、約９３％から約１００％、約９４％から約１００％、約９５％から約１００％、約９６％から約１００％、約９７％から約１００％、約９８％から約１００％、または約９９％から約１００％のジアステレオマー純度を有するＡＳＯを含む。 In embodiments, the stereochemistry at each of the linkages between the phosphonucleotides of the ASO backbone is random. In embodiments, the stereochemistry at each of the bonds between the phosphonucleotides of the ASO backbone is controlled and not random. For example, US Patent Publication No. 2014/0194610, “Methods for the Synthesis of Functionalized Nucleic Acids”, incorporated herein by reference, independently selects the handedness of chirality at each phosphorus atom in a nucleic acid oligomer. Describes how to do this. In an embodiment, the ASO used in the methods of the invention comprises ASO with non-random phosphonucleotide linkages. In an embodiment, the composition used in the method of the invention comprises pure diastereomeric ASO. In embodiments, the composition used in the methods of the invention comprises at least about 90%, at least about 91%, at least about 92%, at least about 93%, at least about 94%, at least about 95%, at least about 96%. , At least about 97%, at least about 98%, at least about 99%, about 100%, about 90% to about 100%, about 91% to about 100%, about 92% to about 100%, about 93% to about 100 %, About 94% to about 100%, about 95% to about 100%, about 96% to about 100%, about 97% to about 100%, about 98% to about 100%, or about 99% to about 100% ASO having a diastereomeric purity of

実施形態では、ＡＳＯは、そのリンヌクレオチド間の連鎖でＲｐおよびＳｐの構成のランダムでない混合物を有している。例えば、ＲｐとＳｐの混合物が、アンチセンスオリゴヌクレオチドにおいて、優れた活性とヌクレアーゼ安定性との間のバランスを達成するために必要であることが示唆されてきた（Ｗａｎ，ｅｔａｌ．，２０１４，「Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓａｎｄｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｓｅｃｏｎｄｇｅｎｅｒａｔｉｏｎａｎｔｉｓｅｎｓｅｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｃｈｉｒａｌｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅｌｉｎｋａｇｅｓ」ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ４２（２２）：１３４５６−１３４６８、引用によって本明細書に組み込まれる）。実施形態では、本発明の方法において使用されるＡＳＯは、約５〜１００％のＲｐ、少なくとも約５％のＲｐ、少なくとも約１０％のＲｐ、少なくとも約１５％のＲｐ、少なくとも約２０％のＲｐ、少なくとも約２５％のＲｐ、少なくとも約３０％のＲｐ、少なくとも約３５％のＲｐ、少なくとも約４０％のＲｐ、少なくとも約４５％のＲｐ、少なくとも約５０％のＲｐ、少なくとも約５５％のＲｐ、少なくとも約６０％のＲｐ、少なくとも約６５％のＲｐ、少なくとも約７０％のＲｐ、少なくとも約７５％のＲｐ、少なくとも約８０％のＲｐ、少なくとも約８５％のＲｐ、少なくとも約９０％のＲｐ、または少なくとも約９５％のＲｐと、残りのＳｐ、あるいは約１００％のＲｐを含む。実施形態では、本発明の方法で使用されるＡＳＯは、約１０％から約１００％のＲｐ、約１５％から約１００％のＲｐ、約２０％から約１００％のＲｐ、約２５％から約１００％のＲｐ、約３０％から約１００％のＲｐ、約３５％から約１００％のＲｐ、約４０％から約１００％のＲｐ、約４５％から約１００％のＲｐ、約５０％から約１００％のＲｐ、約５５％から約１００％のＲｐ、約６０％から約１００％のＲｐ、約６５％から約１００％のＲｐ、約７０％から約１００％のＲｐ、約７５％から約１００％のＲｐ、約８０％から約１００％のＲｐ、約８５％から約１００％のＲｐ、約９０％から約１００％のＲｐ、約９５％から約１００％のＲｐ、約２０％から約８０％のＲｐ、約２５％から約７５％のＲｐ、約３０％から約７０％のＲｐ、約４０％から約６０％のＲｐ、または約４５％から約５５％のＲｐと、残りのＳｐを含む。 In embodiments, the ASO has a non-random mixture of Rp and Sp configurations with linkages between its phosphonucleotides. For example, it has been suggested that a mixture of Rp and Sp is necessary in antisense oligonucleotides to achieve a balance between excellent activity and nuclease stability (Wan, et al., 2014, “Synthesis, biophysical properties and biologic activity of second generation of second generation anti-oligonucleotides conjugation, which is incorporated in the book. In embodiments, the ASO used in the methods of the present invention comprises about 5-100% Rp, at least about 5% Rp, at least about 10% Rp, at least about 15% Rp, at least about 20% Rp. At least about 25% Rp, at least about 30% Rp, at least about 35% Rp, at least about 40% Rp, at least about 45% Rp, at least about 50% Rp, at least about 55% Rp, At least about 60% Rp, at least about 65% Rp, at least about 70% Rp, at least about 75% Rp, at least about 80% Rp, at least about 85% Rp, at least about 90% Rp, or It contains at least about 95% Rp and the remaining Sp, or about 100% Rp. In embodiments, the ASO used in the methods of the present invention comprises about 10% to about 100% Rp, about 15% to about 100% Rp, about 20% to about 100% Rp, about 25% to about 100% Rp, about 30% to about 100% Rp, about 35% to about 100% Rp, about 40% to about 100% Rp, about 45% to about 100% Rp, about 50% to about 100% Rp, about 55% to about 100% Rp, about 60% to about 100% Rp, about 65% to about 100% Rp, about 70% to about 100% Rp, about 75% to about 100% Rp, about 80% to about 100% Rp, about 85% to about 100% Rp, about 90% to about 100% Rp, about 95% to about 100% Rp, about 20% to about 80% Rp, about 25% to about 75% Rp, about 30% to about 70% p, including Rp from about 40% to about 60% or about 45%, about 55% of the Rp, the remaining Sp.

実施形態では、本発明の方法で使用されるＡＳＯは、約５〜１００％のＳｐ、少なくとも約５％のＳｐ、少なくとも約１０％のＳｐ、少なくとも約１５％のＳｐ、少なくとも約２０％のＳｐ、少なくとも約２５％のＳｐ、少なくとも約３０％のＳｐ、少なくとも約３５％のＳｐ、少なくとも約４０％のＳｐ、少なくとも約４５％のＳｐ、少なくとも約５０％のＳｐ、少なくとも約５５％のＳｐ、少なくとも約６０％のＳｐ、少なくとも約６５％のＳｐ、少なくとも約７０％のＳｐ、少なくとも約７５％のＳｐ、少なくとも約８０％のＳｐ、少なくとも約８５％のＳｐ、少なくとも約９０％のＳｐ、または少なくとも約９５％のＳｐと、残りのＲｐ、あるいは約１００％のＳｐを含む。実施形態では、本発明の方法で使用されるＡＳＯは、約１０％から約１００％のＳｐ、約１５％から約１００％のＳｐ、約２０％から約１００％のＳｐ、約２５％から約１００％のＳｐ、約３０％から約１００％のＳｐ、約３５％から約１００％のＳｐ、約４０％から約１００％のＳｐ、約４５％から約１００％のＳｐ、約５０％から約１００％のＳｐ、約５５％から約１００％のＳｐ、約６０％から約１００％のＳｐ、約６５％から約１００％のＳｐ、約７０％から約１００％のＳｐ、約７５％から約１００％のＳｐ、約８０％から約１００％のＳｐ、約８５％から約１００％のＳｐ、約９０％から約１００％のＳｐ、または約９５％から約１００％のＳｐ、約２０％から約８０％のＳｐ、約２５％から約７５％のＳｐ、約３０％から約７０％のＳｐ、約４０％から約６０％のＳｐ、または約４５％から約５５％のＳｐと、残りのＲｐを含む。 In an embodiment, the ASO used in the method of the present invention comprises about 5-100% Sp, at least about 5% Sp, at least about 10% Sp, at least about 15% Sp, at least about 20% Sp. At least about 25% Sp, at least about 30% Sp, at least about 35% Sp, at least about 40% Sp, at least about 45% Sp, at least about 50% Sp, at least about 55% Sp, At least about 60% Sp, at least about 65% Sp, at least about 70% Sp, at least about 75% Sp, at least about 80% Sp, at least about 85% Sp, at least about 90% Sp, or It contains at least about 95% Sp and the remaining Rp, or about 100% Sp. In embodiments, the ASO used in the methods of the present invention comprises about 10% to about 100% Sp, about 15% to about 100% Sp, about 20% to about 100% Sp, about 25% to about 100% Sp, about 30% to about 100% Sp, about 35% to about 100% Sp, about 40% to about 100% Sp, about 45% to about 100% Sp, about 50% to about 100% Sp, about 55% to about 100% Sp, about 60% to about 100% Sp, about 65% to about 100% Sp, about 70% to about 100% Sp, about 75% to about 100% Sp, about 80% to about 100% Sp, about 85% to about 100% Sp, about 90% to about 100% Sp, or about 95% to about 100% Sp, about 20% About 80% Sp, about 25% to about 75% Sp, about 30% to about 7 % Of Sp, including from about 40% to about 60% Sp or about 45%, about 55% of the Sp, the remaining Rp.

本明細書に記載されるＡＳＯのいずれかは、自然発生のヌクレオチド中に存在するような、リボースまたはデオキシリボースを含む糖部、あるいはモルホリン環を含む、修飾された糖部または糖アナログを含有し得る。修飾された糖部の限定しない例は、２’−Ｏ−メチル（２’−Ｏ−Ｍｅ）、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’ＭＯＥ）、２’−Ｏ−アミノエチル、２’Ｆ；Ｎ３’−＞Ｐ５’ホスホラミデート、２’ジメチルアミノオキシエトキシ、２’ジメチルアミノエトキシエトキシ、２’−グアニジニウム（ｇｕａｎｉｄｉｎｉｄｉｕｍ）、２’−Ｏ−グアニジニウムエチル、カルバミン酸塩修飾した糖、および二環式修飾した糖などの、２’置換基を含む。幾つかの実施形態では、糖部修飾は、２’−Ｏ−Ｍｅ、２’Ｆ、および２’ＭＯＥから選択される。幾つかの実施形態では、糖部修飾は、ロックド核酸（ＬＮＡ）におけるような追加の架橋結合である。幾つかの実施形態では、糖アナログは、ホスホロジアミデートモルホリノ（ＰＭＯ）などのモルホリン環を含有している。幾つかの実施形態では、糖部は、リボフラノシルまたは２’デオキシリボフラノシルの修飾を含む。幾つかの実施形態では、糖部は、２’４’抑制された（ｃｏｎｓｔｒａｉｎｅｄ）２’Ｏ−メチルオキシエチル（ｃＭＯＥ）修飾を含む。幾つかの実施形態では、糖部は、ｃＥｔ２’，４抑制された２’−ＯエチルＢＮＡ修飾を含む。幾つかの実施形態では、糖部は、トリシクロＤＮＡ（ｔｃＤＮＡ）修飾を含む。幾つかの実施形態では、糖部は、エチレン核酸（ＥＮＡ）修飾を含む。幾つかの実施形態では、糖部は、ＭＣＥ修飾を含む。修飾は当該技術分野では既知であり、例えば、この目的のための参照によって本明細書に組み込まれた文献、Ｊａｒｖｅｒ，ｅｔａｌ．，２０１４，「ＡＣｈｅｍｉｃａｌＶｉｅｗｏｆＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓｆｏｒＥｘｏｎＳｋｉｐｐｉｎｇａｎｄＲｅｌａｔｅｄＤｒｕｇＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ２４（１）：３７−４７に記載されている。 Any of the ASOs described herein contain modified sugar moieties or sugar analogs that contain ribose or deoxyribose, or a morpholine ring, such as those present in naturally occurring nucleotides. obtain. Non-limiting examples of modified sugar moieties are 2'-O-methyl (2'-O-Me), 2'-O-methoxyethyl (2'MOE), 2'-O-aminoethyl, 2'F N3 ′-> P5 ′ phosphoramidate, 2′dimethylaminooxyethoxy, 2′dimethylaminoethoxyethoxy, 2′-guanidinium, 2′-O-guanidinium ethyl, carbamate modified sugars; And 2 'substituents, such as bicyclic modified sugars. In some embodiments, the sugar moiety modification is selected from 2'-O-Me, 2'F, and 2'MOE. In some embodiments, the sugar modification is an additional crosslink as in locked nucleic acids (LNA). In some embodiments, the sugar analog contains a morpholine ring such as phosphorodiamidate morpholino (PMO). In some embodiments, the sugar moiety comprises a modification of ribofuranosyl or 2'deoxyribofuranosyl. In some embodiments, the sugar moiety comprises a 2'4 'constrained 2'O-methyloxyethyl (cMOE) modification. In some embodiments, the sugar moiety comprises a cEt 2 ', 4 suppressed 2'-O ethyl BNA modification. In some embodiments, the sugar moiety comprises a tricyclo DNA (tcDNA) modification. In some embodiments, the sugar moiety comprises an ethylene nucleic acid (ENA) modification. In some embodiments, the sugar moiety comprises an MCE modification. Modifications are known in the art and are described, for example, in the literature, Jarver, et al., Incorporated herein by reference for this purpose. , 2014, “A Chemical View of Oligonucleotides for Exon Skipping and Related Drug Applications” Nucleic Acid Therapeutics 24 (1): 37-47.

幾つかの例では、ＡＳＯの各単量体は、同じ方法で修飾され、例えば、ＡＳＯの骨格の各結合はホスホロチオエート結合を含み、または各リボース糖部は２’Ｏ−メチル修飾を含む。ＡＳＯの単量体成分の各々の上に存在する、そのような修飾は、「均一な修飾」と呼ばれる。幾つかの例では、異なる修飾の組み合わせが望まれ得、例えば、ＡＳＯは、ホスホロジアミデート結合とモルホリン環を含む糖部（モルホリノ）との組み合わせを含み得る。ＡＳＯへの異なる修飾の組み合わせは、「混合修飾」または「混合化学作用」と呼ばれる。 In some examples, each monomer of ASO is modified in the same manner, for example, each bond of the ASO backbone includes a phosphorothioate bond, or each ribose sugar moiety includes a 2'O-methyl modification. Such modifications that are present on each of the monomeric components of ASO are referred to as “homogeneous modifications”. In some examples, combinations of different modifications may be desired, for example, ASO may include a combination of a phosphorodiamidate linkage and a sugar moiety (morpholino) that contains a morpholine ring. The combination of different modifications to ASO is called “mixed modification” or “mixed chemistry”.

幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、１つ以上の骨格修飾を含む。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、１つ以上の糖部修飾を含む。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、１つ以上の骨格修飾および１つ以上の糖部修飾を含む。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、２’ＭＯＥ修飾およびホスホロチオエート骨格を含む。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、ホスホロジアミデートモルホリノ（ＰＭＯ）を含む。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、ペプチド核酸（ＰＮＡ）を含む。本明細書に記載されるＡＳＯのいずれか又はＡＳＯの成分（例えば、核酸塩基、糖部、骨格）は、ＡＳＯの望ましい特性または活性を達成するために、あるいはＡＳＯの望ましくない特性または活性を減少させるために修飾されてもよい。例えば、ＡＳＯまたはＡＳＯの１つ以上の成分は、ｍＲＮＡ前駆体の転写産物上の標的配列への結合親和性を増強する；非標的配列への結合を減少させる；細胞のヌクレアーゼ（つまり、ＲＮａｓｅＨ）による分解を減少させる；細胞および／または細胞の核へのＡＳＯの取り込みを改善する；ＡＳＯの薬物動態（ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ）または薬力（ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓ）を変更する；およびＡＳＯの半減期を調節するために修飾され得る。 In some embodiments, the ASO includes one or more backbone modifications. In some embodiments, the ASO includes one or more sugar modification. In some embodiments, the ASO includes one or more backbone modifications and one or more sugar moiety modifications. In some embodiments, the ASO comprises a 2'MOE modification and a phosphorothioate backbone. In some embodiments, the ASO comprises phosphorodiamidate morpholino (PMO). In some embodiments, the ASO comprises a peptide nucleic acid (PNA). Any of the ASOs or components of ASO described herein (eg, nucleobases, sugar moieties, backbones) to achieve the desired properties or activities of ASO or to reduce the undesirable properties or activities of ASO It may be modified to For example, ASO or one or more components of ASO enhances the binding affinity of the mRNA precursor to the target sequence on the transcript; reduces binding to non-target sequences; cellular nucleases (ie, RNase H To improve ASO uptake into cells and / or cell nuclei; alter the pharmacokinetics or pharmacodynamics of ASO; and to regulate the half-life of ASO Can be modified.

いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）（ＭＯＥ）ホスホロチオエート修飾されたヌクレオチドで構成される。そのようなヌクレオチドで構成されたＡＳＯは、特に、本明細書で開示される方法によく適しており、そのような修飾を有するオリゴマーは、ヌクレアーゼ分解に対する著しく増強された耐性および増加したバイオアベイラビリティを有すると示されており、これによって、例えば、本明細書に記載される幾つかの実施形態における経口送達に適するようになる。例えば、Ｇｅａｒｙｅｔａｌ．，ＪＰｈａｒｍａｃｏｌＥｘｐＴｈｅｒ．２００１；２９６（３）：８９０−７；Ｇｅａｒｙｅｔａｌ．，ＪＰｈａｒｍａｃｏｌＥｘｐＴｈｅｒ．２００１；２９６（３）：８９８−９０４を参照。 In some embodiments, the ASO is composed of 2'-O- (2-methoxyethyl) (MOE) phosphorothioate modified nucleotides. ASOs composed of such nucleotides are particularly well suited for the methods disclosed herein, and oligomers having such modifications have significantly enhanced resistance to nuclease degradation and increased bioavailability. This makes it suitable for oral delivery in some embodiments described herein, for example. For example, Gary et al. , J Pharmacol Exp Ther. 2001; 296 (3): 890-7; Geary et al. , J Pharmacol Exp Ther. 2001; 296 (3): 898-904.

ＡＳＯを合成する方法は当業者に既知である。代替的に又は加えて、ＡＳＯは商用源から得てもよい。 Methods for synthesizing ASO are known to those skilled in the art. Alternatively or additionally, ASO may be obtained from commercial sources.

他に明記されない限り、一本鎖核酸（例えば、ｍＲＮＡ前駆体の転写産物、オリゴヌクレオチド、ＡＳＯなど）配列の左端は、５’末端であり、一本鎖または二本鎖の核酸配列の左方向は、５’方向と呼ばれる。同様に、核酸配列（一本鎖または二本鎖）の右端または右方向は、３’末端または３’方向である。一般に、核酸中の基準点に対する５’にある領域または配列は、「上流」として言及され、核酸中の基準点に対する３’にある領域または配列は、「下流」として言及される。一般に、ｍＲＮＡの５’方向または５’末端は、開始コドン（ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎｏｒｓｔａｒｔｃｏｄｏｎ）が位置する場所であり、一方で、３’末端または３’方向は、終止コドンが位置する場所である。幾つかの態様では、核酸中の基準点の上流にあるヌクレオチドは、負の数によって指定され、基準点の下流にあるヌクレオチドは、正の数によって指定され得る。例えば、基準点（例えば、ｍＲＮＡ中のエクソン−エクソン連結）は「ゼロ」部位として指定され得、基準点に直接隣接し且つその上流にあるヌクレオチドは、「マイナス１」、例えば「−１」と指定され、一方で、基準点に直接隣接し且つその下流にあるヌクレオチドは、「プラス１」、例えば「＋１」と指定される。 Unless specified otherwise, the left-hand end of single-stranded nucleic acid (eg, mRNA precursor transcripts, oligonucleotides, ASO, etc.) sequences is the 5 ′ end, and the left-hand direction of single- or double-stranded nucleic acid sequences Is called the 5 ′ direction. Similarly, the right end or right direction of a nucleic acid sequence (single stranded or double stranded) is the 3 'end or 3' direction. In general, a region or sequence that is 5 'to a reference point in a nucleic acid is referred to as "upstream", and a region or sequence that is 3' to a reference point in a nucleic acid is referred to as "downstream". In general, the 5 'direction or 5' end of an mRNA is where the initiation or start codon is located, while the 3 'end or 3' direction is where the stop codon is located. In some aspects, nucleotides upstream of the reference point in the nucleic acid can be designated by negative numbers and nucleotides downstream of the reference point can be designated by positive numbers. For example, a reference point (eg, exon-exon linkage in an mRNA) can be designated as a “zero” site, and nucleotides immediately adjacent to and upstream from the reference point are “minus 1”, eg, “−1”. A nucleotide that is designated, while immediately adjacent to and downstream of the reference point is designated “plus 1”, eg, “+1”.

いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体内に保持されたイントロンの５’スプライス部位の下流（３’方向）である、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ５Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ３ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分（例えば、５’スプライ部位に対して、正の数で示された方向）に対して相補的である（および結合する）（図１）。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対して＋１６から＋１００の領域内にある、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、あるいはＮＣＯＡ５ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分に対して相補的である。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、５’スプライス部位に対して、＋１から＋５までのヌクレオチド（５’スプライス部位の下流に位置付けられた最初の５つのヌクレオチド）に対して相補的ではない。いくつかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対して、＋６から＋５０までのヌクレオチドの領域内にある、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分に対して相補的であり得る。いくつかの態様では、ＡＳＯは、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対して＋６から＋５００、＋６から＋４００、＋６から＋３００、＋６から＋２００、あるいは＋６から＋９０、＋６から＋８０、＋６から＋７０、＋６から＋６０、＋６から＋５０、＋６から＋４０、＋６から＋３０、あるいは＋６から＋２０の領域内にある、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体標的部分に対して相補的である。 In some embodiments, ASO is AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3RAP1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, THAMP, THAMP, PMTLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5 downstream of the 5 ′ splice site of the RIC mRNA precursor (3 ′ direction), AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, Target portion of HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD5B7, CERS2, or NCOA3 RIC mRNA precursors (eg, shown as a positive number relative to the 5 ′ splice site) (And bind) (FIG. 1). In some embodiments, the ASO is within the region of +16 to +100 relative to the retained intron 5 ′ splice site, AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT , LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, ICRS5, or CERS5 Is complementary to In some embodiments, the ASO is not complementary to the 5 'splice site from +1 to +5 nucleotides (the first 5 nucleotides located downstream of the 5' splice site). In some embodiments, the ASO is AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, within the region of +6 to +50 nucleotides relative to the retained intron 5 ′ splice site. , APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, IL6, HSD3B7 It can be complementary to a target portion of the body. In some embodiments, the ASO is +6 to +500, +6 to +400, +6 to +300, +6 to +200, or +6 to +90, +6 to +80, +6 to +70, relative to the retained intron 5 ′ splice site, +6 to +60, +6 to +50, +6 to +40, +6 to +30, or +6 to +20, AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5 RIC mRNA It is complementary to the precursor target portion.

幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のＲＩＣｍＲＮＡ前駆体における保持されたイントロンの３’スプライス部位の上流（５’の方向（ｒｅｌａｔｉｖｅ））である、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的領域（例えば、負の数により示された方向）に相補的である（図１）。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して領域−１６〜−５００、−１６〜−４００、−１６〜−３００、−６〜−２００、または−１６〜−１００の内にある、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的である。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、３’スプライス部位に対して、−１〜−１５までのヌクレオチド（３’スプライス部位の上流に位置付けられた最初の１５のヌクレオチド）には相補的ではない。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して−１６〜−５０の領域内にある、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的である。幾つかの態様では、ＡＳＯは、保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して−１６〜−９０、−１６〜−８０、−１６〜−７０、−１６〜−６０、−１６〜−５０、−１６〜−４０、または−１６〜−３０の領域内にある、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的である。 In some embodiments, ASO is AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3RAP1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, THAMP, THAMP, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or upstream of the retained intron 3 'splice site in NCOA5 RIC mRNA precursor (5' direction) , AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A Target region of RIC mRNA precursor of TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5 (eg, the direction indicated by the negative number) (FIG. 1). In some embodiments, the ASO is a region −16 to −500, −16 to −400, −16 to −300, −6 to −200, or −16 to the retained intron 3 ′ splice site. ~ -100, AMT, ADA, PPOX, UROD, HMDS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP3, THPN, PN It is complementary to the target portion of the RIC mRNA precursor of ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5. In some embodiments, the ASO is not complementary to the 3 'splice site from -1 to -15 nucleotides (the first 15 nucleotides located upstream of the 3' splice site). In some embodiments, the ASO is within the region of −16 to −50 relative to the retained intron 3 ′ splice site, AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5. , GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS Is complementary to the target portion of In some embodiments, the ASO is −16 to −90, −16 to −80, −16 to −70, −16 to −60, −16 to −50 relative to the retained intron 3 ′ splice site. , -16 to -40, or -16 to -30, AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A , TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5 RIC mRNA precursors are complementary to the target portion.

幾つかの実施形態では、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対して＋１００の領域から、保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して−１００までの領域内にある。 In some embodiments, AMT, ADA, PPOX, UROD, HMDS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, TPPLB, THPO, TPPLB The target portion of the RIC mRNA precursor of FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5 is a retained intron from a region +100 to the 5 ′ splice site of the retained intron. Within the region of -100 to the 3 'splice site.

幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロンの５’スプライス部位（上流）に隣接するエクソン内にある、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的である。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロンの５’スプライス部位に隣接するエクソンの＋２ｅ〜−４ｅの領域内にある、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的である。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対するヌクレオチド−１ｅ〜−３ｅに相補的ではない。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対して−４ｅ〜−１００ｅ、−４ｅ〜−９０ｅ、−４ｅ〜−８０ｅ、−４ｅ〜−７０ｅ、−４ｅ〜−６０ｅ、−４ｅ〜−５０ｅ、−４ｅ〜−４０ｅ、−４ｅ〜−３０ｅ、または−４ｅ〜−２０ｅの領域内にある、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的である。 In some embodiments, the ASO is in an exon adjacent to the 5 ′ splice site (upstream) of the retained intron, AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, ICRS2 Complementary to In some embodiments, the ASO is AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, within the region of + 2e to -4e of the exon adjacent to the 5 ′ splice site of the retained intron. APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, ERS3B7 Complementary to the target part of the body. In some embodiments, the ASO is not complementary to nucleotides 1e-3e for the retained intron 5 'splice site. In some embodiments, the ASO is −4e to −100e, −4e to −90e, −4e to −80e, −4e to −70e, −4e to −− with respect to the 5 ′ splice site of the retained intron. 60e, -4e to -50e, -4e to -40e, -4e to -30e, or -4e to -20e, AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, CERS2 Complementary to the target moiety.

幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロンの３’スプライス部位に隣接するエクソン内（下流）にあるＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的である（図１）。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロンの３’スプライス部位に隣接するエクソンの＋２ｅ〜−４ｅの領域内にある、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的である。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロンの３’スプライス部位に対するヌクレオチド＋１ｅに相補的ではない。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して＋２ｅ〜＋１００ｅ、＋２ｅ〜＋９０ｅ、＋２ｅ〜＋８０ｅ、＋２ｅ〜＋７０ｅ、＋２ｅ〜＋６０ｅ、＋２ｅ〜＋５０ｅ、＋２ｅ〜＋４０ｅ、の＋２ｅ〜＋３０ｅ、または＋２ｅ〜＋２０ｅの領域内にある、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的である。ＡＳＯは、スプライシングの特異的結合および効果的な増強作用に適する任意の長さでもよい。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは８から５０の核酸塩基から成る。例えば、ＡＳＯは、長さが、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、４５または５０の核酸塩基でもよい。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは５０より多くの核酸塩基から成る。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは、長さが８〜５０の核酸塩基、８〜４０の核酸塩基、８〜３５の核酸塩基、８〜３０の核酸塩基、８〜２５の核酸塩基、８〜２０の核酸塩基、８〜１５の核酸塩基、９〜５０の核酸塩基、９〜４０の核酸塩基、９〜３５の核酸塩基、９〜３０の核酸塩基、９〜２５の核酸塩基、９〜２０の核酸塩基、９〜１５の核酸塩基、１０〜５０の核酸塩基、１０〜４０の核酸塩基、１０〜３５の核酸塩基、１０〜３０の核酸塩基、１０〜２５の核酸塩基、１０〜２０の核酸塩基、１０〜１５の核酸塩基、１１〜５０の核酸塩基、１１〜４０の核酸塩基、１１〜３５の核酸塩基、１１〜３０の核酸塩基、１１〜２５の核酸塩基、１１〜２０の核酸塩基、１１〜１５の核酸塩基、１２〜５０の核酸塩基、１２〜４０の核酸塩基、１２〜３５の核酸塩基、１２〜３０の核酸塩基、１２〜２５の核酸塩基、１２〜２０の核酸塩基、１２〜１５の核酸塩基、１３〜５０の核酸塩基、１３〜４０の核酸塩基、１３〜３５の核酸塩基、１３〜３０の核酸塩基、１３〜２５の核酸塩基、１３〜２０の核酸塩基、１４〜５０の核酸塩基、１４〜４０の核酸塩基、１４〜３５の核酸塩基、１４〜３０の核酸塩基、１４〜２５の核酸塩基、１４〜２０の核酸塩基、１５〜５０の核酸塩基、１５〜４０の核酸塩基、１５〜３５の核酸塩基、１５〜３０の核酸塩基、１５〜２５の核酸塩基、１５〜２０の核酸塩基、２０〜５０の核酸塩基、２０〜４０の核酸塩基、２０〜３５の核酸塩基、２０〜３０の核酸塩基、２０〜２５の核酸塩基、２５〜５０の核酸塩基、２５〜４０の核酸塩基、２５〜３５の核酸塩基、または２５〜３０の核酸塩基である。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが３０のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが２９のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが２８のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが２７のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが２６のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが２５のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが２４のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが２３のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが２２のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが２１のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが２０のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが１９のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが１８のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが１７のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが１６のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが１５のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが１４のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが１３のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが１２のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが１１のヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、ＡＳＯは長さが１０のヌクレオチドである。 In some embodiments, the ASO is complementary to the target portion of the RIC mRNA precursor within the exon (downstream) adjacent to the retained intron 3 'splice site (Figure 1). In some embodiments, the ASO is AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, within the region of + 2e to −4e of the exon adjacent to the retained intron 3 ′ splice site. APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, ERS3B7 Complementary to the target part of the body. In some embodiments, the ASO is not complementary to nucleotide + 1e to the retained intron 3 'splice site. In some embodiments, the ASO is + 2e to + 100e, + 2e to + 90e, + 2e to + 80e, + 2e to + 70e, + 2e to + 60e, + 2e to + 50e, + 2e to + 40e, relative to the retained intron 3 ′ splice site, AMT, ADA, PPOX, UROD, HMDS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, GNF1T, GFB1T , HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5, complementary to the target portion of the RIC mRNA precursor. The ASO may be of any length suitable for splicing specific binding and effective potentiation. In some embodiments, the ASO consists of 8 to 50 nucleobases. For example, ASO has a length of 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28. 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 45 or 50 nucleobases. In some embodiments, the ASO consists of more than 50 nucleobases. In some embodiments, the ASO is 8 to 50 nucleobases in length, 8 to 40 nucleobases, 8 to 35 nucleobases, 8 to 30 nucleobases, 8 to 25 nucleobases, 8 to 20 nucleobases, 8-15 nucleobases, 9-50 nucleobases, 9-40 nucleobases, 9-35 nucleobases, 9-30 nucleobases, 9-25 nucleobases, 9-20 Nucleobases, 9-15 nucleobases, 10-50 nucleobases, 10-40 nucleobases, 10-35 nucleobases, 10-30 nucleobases, 10-25 nucleobases, 10-20 Nucleobase, 10-15 nucleobase, 11-50 nucleobase, 11-40 nucleobase, 11-35 nucleobase, 11-30 nucleobase, 11-25 nucleobase, 11-20 nucleobase Base, 11-15 nucleobase, 12-50 nucleobase, 12-40 nucleoside salt , 12-35 nucleobases, 12-30 nucleobases, 12-25 nucleobases, 12-20 nucleobases, 12-15 nucleobases, 13-50 nucleobases, 13-40 nucleobases, 13-35 nucleobases, 13-30 nucleobases, 13-25 nucleobases, 13-20 nucleobases, 14-50 nucleobases, 14-40 nucleobases, 14-35 nucleobases, 14 -30 nucleobases, 14-25 nucleobases, 14-20 nucleobases, 15-50 nucleobases, 15-40 nucleobases, 15-35 nucleobases, 15-30 nucleobases, 15-15 25 nucleobases, 15-20 nucleobases, 20-50 nucleobases, 20-40 nucleobases, 20-35 nucleobases, 20-30 nucleobases, 20-25 nucleobases, 25-50 Nucleobases, 25-40 nucleobases, 2 35 nucleobases, or 25 to 30 nucleobases. In some embodiments, the ASO is 30 nucleotides in length. In some embodiments, the ASO is 29 nucleotides in length. In some embodiments, the ASO is 28 nucleotides in length. In some embodiments, the ASO is 27 nucleotides in length. In some embodiments, the ASO is 26 nucleotides in length. In some embodiments, ASO is 25 nucleotides in length. In some embodiments, the ASO is 24 nucleotides in length. In some embodiments, the ASO is 23 nucleotides in length. In some embodiments, the ASO is 22 nucleotides in length. In some embodiments, the ASO is 21 nucleotides in length. In some embodiments, the ASO is 20 nucleotides in length. In some embodiments, the ASO is 19 nucleotides in length. In some embodiments, the ASO is 18 nucleotides in length. In some embodiments, the ASO is 17 nucleotides in length. In some embodiments, the ASO is 16 nucleotides in length. In some embodiments, the ASO is 15 nucleotides in length. In some embodiments, the ASO is 14 nucleotides in length. In some embodiments, the ASO is 13 nucleotides in length. In some embodiments, the ASO is 12 nucleotides in length. In some embodiments, the ASO is 11 nucleotides in length. In some embodiments, ASO is 10 nucleotides in length.

幾つかの実施形態では、異なる化学的性質を有するが、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の同じ標的部分に対して相補的である２つ以上のＡＳＯが使用される。幾つかの実施形態では、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の異なる標的部分に対して相補的である２つ以上のＡＳＯが使用される。 In some embodiments, two or more ASOs are used that have different chemistries but are complementary to the same target portion of the RIC mRNA precursor. In some embodiments, two or more ASOs that are complementary to different target portions of the RIC mRNA precursor are used.

実施形態では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、１つ以上の部分または抱合体、例えば、オリゴヌクレオチドの活性または細胞取り込みを増強する標的部分または他の抱合体に化学的に連結される。そのような部分には、限定されないが、例えば、コレステロール部分、コレステリル部分、例えばドデカンジオールまたはウンデシル残基などの脂肪族鎖、ポリアミンまたはポリエチレングリコール鎖、または、アダマンタン酢酸として、脂質部分が含まれる。親油性部分を含むオリゴヌクレオチドおよび調製方法は、公開された文献に記載されている。実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、限定されないが、脱塩基ヌクレオチド、ポリエーテル、ポリアミン、ポリアミド、ペプチド、炭水化物、例えばＮ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、Ｎ−Ａｃ−グルコサミン（ＧｌｕＮＡｃ）、またはマンノース（例えばマンノース６−リン酸）、脂質、またはポリ炭化水素化合物を含む部分と結合する。当該技術分野で理解され且つ文献に記載されるように、例えばリンカーを用いて、抱合体は、糖、塩基またはリン酸基上のいくつかの位置のうちのいずれかでアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む任意のヌクレオチドの１つ以上に連結することができる。リンカーは二価または三価の分枝リンカーを含み得る。実施形態では、抱合体はアンチセンスオリゴヌクレオチドの３’末端に付けられている。オリゴヌクレオチド抱合体を調製する方法は、例えば、米国特許第８，４５０，４６７号「Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｃｏｎｊｕｇａｔｅｓａｓｄｅｌｉｖｅｒｙａｇｅｎｔｓｆｏｒｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ」に記載され、これは参照により本明細書に組み込まれる。 In embodiments, the antisense oligonucleotides of the invention are chemically linked to one or more moieties or conjugates, eg, targeting moieties or other conjugates that enhance the activity or cellular uptake of the oligonucleotide. Such moieties include, but are not limited to, lipid moieties such as, for example, cholesterol moieties, cholesteryl moieties, aliphatic chains such as dodecanediol or undecyl residues, polyamine or polyethylene glycol chains, or adamantane acetic acid. Oligonucleotides containing lipophilic moieties and methods of preparation are described in the published literature. In embodiments, antisense oligonucleotides include, but are not limited to, abasic nucleotides, polyethers, polyamines, polyamides, peptides, carbohydrates such as N-acetylgalactosamine (GalNAc), N-Ac-glucosamine (GluNAc), or mannose ( For example, it binds to moieties containing mannose 6-phosphate), lipids, or polyhydrocarbon compounds. As understood in the art and described in the literature, for example, using a linker, the conjugate comprises an antisense oligonucleotide at any of several positions on the sugar, base or phosphate group. It can be linked to one or more of any nucleotide. The linker may comprise a divalent or trivalent branched linker. In embodiments, the conjugate is attached to the 3 'end of the antisense oligonucleotide. Methods for preparing oligonucleotide conjugates are described, for example, in US Pat. No. 8,450,467 “Carbohydrate conjugates as delivery agents for oligonucleotides”, which is incorporated herein by reference.

幾つかの実施形態では、ＡＳＯによって標的とされる核酸は、真核細胞などの細胞内に発現したＲＩＣｍＲＮＡ前駆体である。幾つかの実施形態では、用語「細胞」は、細胞の集団を指すこともある。幾つかの実施形態では、細胞は被験体内に存在する。幾つかの実施形態では、細胞は被験体から単離されている。幾つかの実施形態では、細胞はエクスビボである。幾つかの実施形態では、細胞は疾病関連細胞もしくは疾患関連の細胞、または細胞株である。幾つかの実施形態では、細胞はインビトロである（例えば細胞培養液中にある）。 In some embodiments, the nucleic acid targeted by ASO is a RIC mRNA precursor expressed in a cell, such as a eukaryotic cell. In some embodiments, the term “cell” may refer to a population of cells. In some embodiments, the cell is present in the subject. In some embodiments, the cell is isolated from the subject. In some embodiments, the cell is ex vivo. In some embodiments, the cell is a disease-related cell or disease-related cell, or cell line. In some embodiments, the cell is in vitro (eg, in cell culture).

＜医薬組成物＞
記載された組成物のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含み、上記方法のいずれかにおいて使用するための医薬組成物または製剤は、医薬品産業において周知の従来技術に従って調製することができ、且つ公開文献においても記載されている。実施形態において、被験体を処置するための医薬組成物または医薬製剤は、上記のような任意のアンチセンスオリゴマー、またはその薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、水和物、またはエステルの有効量、および薬学的に許容可能な希釈剤を含む。医薬製剤のアンチセンスオリゴマーはさらに、薬学的に許容可能な賦形剤、希釈剤または担体を含み得る。 <Pharmaceutical composition>
Pharmaceutical compositions or formulations for use in any of the above methods comprising antisense oligonucleotides of the described compositions can be prepared according to conventional techniques well known in the pharmaceutical industry and are also described in the published literature. Has been. In embodiments, a pharmaceutical composition or pharmaceutical formulation for treating a subject comprises any antisense oligomer as described above, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, or ester thereof. An effective amount, and a pharmaceutically acceptable diluent. The antisense oligomer of the pharmaceutical formulation can further comprise a pharmaceutically acceptable excipient, diluent or carrier.

薬学的に許容可能な塩は、過度の毒性反応、刺激反応、アレルギー反応等を持たないヒトおよび下等動物の組織に接する使用に適しており、かつ適切なベネフィット・リスク比に相応している（例えば、この目的のための参照によって本明細書に組み込まれる、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅ，ｅｔａｌ．，Ｊ．ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，６６：１−１９（１９７７）を参照）。塩は、化合物の最終的な分離および精製中にインサイチュで、または遊離基機能を適切な有機酸と反応させることによって別々に調製され得る。薬学的に許容可能で無毒な酸付加塩の例は、塩化水素、臭化水素酸、リン酸、硫酸、および過塩素酸などの無機酸か、酢酸、シュウ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸もしくはマロン酸などの有機酸か、またはイオン交換などの他の文書で立証された方法を用いることによって形成されたアミノ基の塩である。他の薬学的に許容可能な塩は、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、グルコン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸、チオシアン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などを含む。代表的なアルカリまたはアルカリ土類金属の塩は、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどを含む。更に薬学的に許容可能な塩は、適切な場合、ハロゲン化物、水酸化物、カルボン酸塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、低級アルキルスルホン酸塩、およびアリールスルホン酸塩などの対イオンを使用して形成された、無毒なアンモニウム、第四級アンモニウム、およびアミンのカチオンを含む。 Pharmaceutically acceptable salts are suitable for use in contact with human and lower animal tissues that do not have excessive toxic, irritant, allergic reactions, etc. and correspond to an appropriate benefit / risk ratio (See, eg, SM Berge, et al., J. Pharmaceutical Sciences, 66: 1-19 (1977), incorporated herein by reference for this purpose). The salts can be prepared in situ during the final separation and purification of the compounds or separately by reacting the free radical function with a suitable organic acid. Examples of pharmaceutically acceptable non-toxic acid addition salts are inorganic acids such as hydrogen chloride, hydrobromic acid, phosphoric acid, sulfuric acid and perchloric acid, or acetic acid, oxalic acid, maleic acid, tartaric acid, citric acid An organic acid such as succinic acid or malonic acid, or a salt of an amino group formed by using other documented methods such as ion exchange. Other pharmaceutically acceptable salts are adipate, alginate, ascorbate, aspartate, benzenesulfonate, benzoate, bisulfate, borate, butyrate, camphorate, Camphor sulfonate, citrate, cyclopentanepropionate, digluconate, dodecyl sulfate, ethane sulfonate, formate, fumarate, glucoheptonate, glycerophosphate, gluconate, hemisulfate , Heptanoate, hexanoate, hydroiodide, 2-hydroxy-ethanesulfonate, lactobionate, lactate, laurate, lauryl sulfate, malate, maleate, malonate , Methanesulfonate, 2-naphthalenesulfonate, nicotinate, nitrate, oleate, oxalate, palmitate, pamoate, pectinic acid , Persulfate, 3-phenylpropionate, phosphate, picrate, pivalate, propionate, stearate, succinate, sulfate, tartaric acid, thiocyanate, p-toluenesulfonic acid Salt, undecanoate, valerate, etc. Typical alkali or alkaline earth metal salts include sodium, lithium, potassium, calcium, magnesium, and the like. In addition, pharmaceutically acceptable salts may have counterions such as halides, hydroxides, carboxylates, sulfates, phosphates, nitrates, lower alkyl sulfonates, and aryl sulfonates where appropriate. Includes non-toxic ammonium, quaternary ammonium, and amine cations formed using.

実施形態において、組成物は、限定されないが、錠剤、カプセル剤、ゲルカプセル剤、液体シロップ剤、ソフトゲル剤、坐薬および浣腸剤などの多くの可能な剤形いずれかへと製剤される。実施形態において、組成物は、水性媒体、非水性媒体、または混合媒体状の懸濁液として製剤される。水性懸濁液は、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、および／またはデキストランを含む、懸濁液の粘度を増加させる物質をさらに含むこともある。その懸濁液は、安定化剤も含むこともある。実施形態において、本発明の医薬製剤または組成物は、限定されないが、溶液、エマルジョン、マイクロエマルジョン、発泡体またはリポソーム含有製剤（例えばカチオンリポソームまたは非カチオンリポソーム）を含む。 In embodiments, the composition is formulated into any of a number of possible dosage forms such as, but not limited to, tablets, capsules, gel capsules, liquid syrups, soft gels, suppositories and enemas. In embodiments, the composition is formulated as a suspension in an aqueous, non-aqueous, or mixed medium. Aqueous suspensions may further comprise substances that increase the viscosity of the suspension, including, for example, sodium carboxymethylcellulose, sorbitol, and / or dextran. The suspension may also contain stabilizers. In embodiments, the pharmaceutical formulation or composition of the present invention includes, but is not limited to, a solution, emulsion, microemulsion, foam or liposome-containing formulation (eg, cationic liposomes or non-cationic liposomes).

本発明の医薬組成物または製剤は、適切で且つ当業者に周知なように、または公開文献において記載されているように、１つ以上の透過促進剤、担体、賦形剤、または他の有効成分もしくは非有効成分を含むこともある。実施形態において、リポソームは立体的に安定したリポソーム、例えば１つ以上の特定の脂質を含むリポソームも含む。これらの特定の脂質は、循環寿命が増強されたリポソームを結果としてもたらす。実施形態において、立体的に安定したリポソームは、１つ以上の糖脂質を含むか、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分などの１つ以上の親油性高分子を用いて誘導される。実施形態において、界面活性剤は医薬製剤または医薬組成物中に含まれる。薬物製品、製剤およびエマルジョンにおける界面活性剤の使用は、当技術分野で周知である。実施形態では、本発明は、アンチセンスオリゴヌクレオチドの効率的な送達を達成する、例えば、細胞膜にわたる拡散を助ける及び／又は脂溶性薬物の浸透性を増強するために、浸透促進剤を利用する。実施形態では、浸透促進剤は、界面活性剤、脂肪酸、胆汁酸塩、キレート剤、または非キレート性の非界面活性剤である。 The pharmaceutical composition or formulation of the present invention may be suitable and well known to those skilled in the art or as described in the published literature by one or more permeation enhancers, carriers, excipients, or other effective It may contain ingredients or inactive ingredients. In embodiments, liposomes also include sterically stable liposomes, eg, liposomes that include one or more specific lipids. These particular lipids result in liposomes with enhanced circulation lifetime. In embodiments, sterically stable liposomes contain one or more glycolipids or are derived using one or more lipophilic polymers such as polyethylene glycol (PEG) moieties. In embodiments, the surfactant is included in a pharmaceutical formulation or pharmaceutical composition. The use of surfactants in drug products, formulations and emulsions is well known in the art. In embodiments, the present invention utilizes penetration enhancers to achieve efficient delivery of antisense oligonucleotides, eg, to aid diffusion across cell membranes and / or enhance the permeability of lipophilic drugs. In embodiments, the penetration enhancer is a surfactant, fatty acid, bile salt, chelator, or non-chelating non-surfactant.

実施形態において、医薬製剤は複数のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは他の薬物または治療剤と組み合わせて投与される。実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、当技術分野において知られている任意の方法によって、血液脳関門を介する主題のアンチセンスオリゴヌクレオチドの浸透を促進することができる１つ以上の薬剤と共に投与される。例えば、筋組織内の運動ニューロンへアデノウイルスベクターを投与することによる薬剤の送達は、引用によって本明細書に組み込まれる米国特許第６，６３２，４２７号「Ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ−ｖｅｃｔｏｒ−ｍｅｄｉａｔｅｄｇｅｎｅｔｒａｎｓｆｅｒｉｎｔｏｍｅｄｕｌｌａｒｙｍｏｔｏｒｎｅｕｒｏｎｓ」に記載されている。脳、例えば、線条体、視床、海馬、または黒質への直接のベクターの送達は、例えば、引用によって本明細書に組み込まれる米国特許第６，７５６，５２３号「Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｖｅｃｔｏｒｓｆｏｒｔｈｅｔｒａｎｓｆｅｒｏｆｆｏｒｅｉｇｎｇｅｎｅｓｉｎｔｏｃｅｌｌｓｏｆｔｈｅｃｅｎｔｒａｌｎｅｒｖｏｕｓｓｙｓｔｅｍｐａｒｔｉｃｕｌａｒｌｙｉｎｂｒａｉｎ」に記載される。 In embodiments, the pharmaceutical formulation comprises a plurality of antisense oligonucleotides. In embodiments, the antisense oligonucleotide is administered in combination with other drugs or therapeutic agents. In embodiments, the antisense oligonucleotide is administered with one or more agents that can facilitate penetration of the subject antisense oligonucleotide across the blood brain barrier by any method known in the art. The For example, the delivery of drugs by administering an adenoviral vector to motor neurons in muscle tissue is described in US Pat. neurons ". Delivery of the vector directly to the brain, eg, striatum, thalamus, hippocampus, or substantia nigra, is described, for example, in US Pat. "Foreign genes into cells of the central nervous system partly in brain".

実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、望ましい薬理学的性質または薬力学的性質を提供する薬剤に結合されるか抱合される。実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、血液脳関門を介する浸透または輸送を促進すると当技術分野において知られている物質、例えばトランスフェリン受容体の抗体に結合される。実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、例えば、アンチセンス化合物をより効果的にするために、または血液脳関門を介する輸送を増加させるためにウイルスベクターに結合される。実施形態において、浸透性の血液脳関門の崩壊は、砂糖、例えばメソエリスリトール、キシリトール、Ｄ（＋）ガラクトース、Ｄ（＋）ラクトース、Ｄ（＋）キシロース、ズルシトール、ミオ−イノシトール、Ｌ（−）フルクトース、Ｄ（−）マンニトール、Ｄ（＋）グルコース、Ｄ（＋）アラビノース、Ｄ（−）アラビノース、セロビオース、Ｄ（＋）マルトース、Ｄ（＋）ラフィノース、Ｌ（＋）ラムノース、Ｄ（＋）メリビオース、Ｄ（−）リボース、アドニトール、Ｄ（＋）アラビトール、Ｌ（−）アラビトール、Ｄ（＋）フコース、Ｌ（−）フコース、Ｄ（−）リキソース、Ｌ（＋）リキソース、およびＬ（−）リキソース、またはアミノ酸、例えばグルタミン、リジン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、チロシン、バリン、およびタウリンを注入することにより促進される。血液脳関門浸透を増強する方法及び材料は、例えば、各々が参照により本明細書に組み込まれている、米国特許第４８６６０４２号「Ｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｄｅｌｉｖｅｒｙｏｆｇｅｎｅｔｉｃｍａｔｅｒｉａｌａｃｒｏｓｓｔｈｅｂｌｏｏｄｂｒａｉｎｂａｒｒｉｅｒ」、第６，２９４，５２０号「Ｍａｔｅｒｉａｌｆｏｒｐａｓｓａｇｅｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅｂｌｏｏｄ−ｂｒａｉｎｂａｒｒｉｅｒ」、及び第６，９３６，５８９「Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌｄｅｌｉｖｅｒｙｓｙｓｔｅｍｓ」に記載される。 In embodiments, the antisense oligonucleotide is conjugated or conjugated to an agent that provides the desired pharmacological or pharmacodynamic properties. In embodiments, the antisense oligonucleotides are conjugated to substances known in the art to promote penetration or transport across the blood brain barrier, such as antibodies to transferrin receptors. In embodiments, antisense oligonucleotides are conjugated to viral vectors, for example, to make antisense compounds more effective or to increase transport across the blood brain barrier. In embodiments, the disruption of the permeable blood brain barrier is sugar, eg, mesoerythritol, xylitol, D (+) galactose, D (+) lactose, D (+) xylose, dulcitol, myo-inositol, L (−). Fructose, D (-) mannitol, D (+) glucose, D (+) arabinose, D (-) arabinose, cellobiose, D (+) maltose, D (+) raffinose, L (+) rhamnose, D (+) Melibiose, D (-) ribose, adonitol, D (+) arabitol, L (-) arabitol, D (+) fucose, L (-) fucose, D (-) lyxose, L (+) lyxose, and L (- ) Lyxose, or amino acids such as glutamine, lysine, arginine, asparagine, aspartic acid, cysteine It is promoted glutamic acid, glycine, histidine, leucine, methionine, phenylalanine, proline, serine, by injecting threonine, tyrosine, valine, and taurine. Methods and materials for enhancing blood-brain barrier penetration are described, for example, in US Pat. No. 294,520 “Material for passage through the blood-brain barrier”, and 6,936,589 “Parental delivery systems”.

実施形態では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、１つ以上の部分または抱合体、例えば、オリゴヌクレオチドの活性または細胞取り込みを増強する標的部分または他の抱合体に化学的に連結される。そのような部分には、限定されないが、例えば、コレステロール部分、コレステリル部分、例えばドデカンジオールまたはウンデシル残基などの脂肪族鎖、ポリアミンまたはポリエチレングリコール鎖、または、アダマンタン酢酸として、脂質部分が含まれる。親油性部分を含むオリゴヌクレオチドおよび調製方法は、公開された文献に記載されている。実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、限定されないが、脱塩基ヌクレオチド、ポリエーテル、ポリアミン、ポリアミド、ペプチド、炭水化物、例えばＮ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、Ｎ−Ａｃ−グルコサミン（ＧｌｕＮＡｃ）、またはマンノース（例えばマンノース６−リン酸）、脂質、またはポリ炭化水素化合物を含む部分と結合する。抱合体は、例えばリンカーを使用して、当技術分野において理解され且つ文献中に記載されるように、砂糖、塩基またはリン酸基上のいかなるいくつかの位置においても、アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む任意のヌクレオチドの１つ以上に連結され得る。リンカーは二価または三価の分枝したリンカーを含むことができる。実施形態において、抱合体はアンチセンスオリゴヌクレオチドの３’末端に結合している。オリゴヌクレオチド抱合体を調製する方法は、例えば、引用により本明細書に組み込まれる米国特許第８，４５０，４６７号の「Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｃｏｎｊｕｇａｔｅｓａｓｄｅｌｉｖｅｒｙａｇｅｎｔｓｆｏｒｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ」に記載されている。 In embodiments, the antisense oligonucleotides of the invention are chemically linked to one or more moieties or conjugates, eg, targeting moieties or other conjugates that enhance the activity or cellular uptake of the oligonucleotide. Such moieties include, but are not limited to, lipid moieties such as, for example, cholesterol moieties, cholesteryl moieties, aliphatic chains such as dodecanediol or undecyl residues, polyamine or polyethylene glycol chains, or adamantane acetic acid. Oligonucleotides containing lipophilic moieties and methods of preparation are described in the published literature. In embodiments, antisense oligonucleotides include, but are not limited to, abasic nucleotides, polyethers, polyamines, polyamides, peptides, carbohydrates such as N-acetylgalactosamine (GalNAc), N-Ac-glucosamine (GluNAc), or mannose ( For example, it binds to moieties containing mannose 6-phosphate), lipids, or polyhydrocarbon compounds. The conjugate comprises an antisense oligonucleotide at any of several positions on the sugar, base or phosphate group, as understood in the art and described in the literature, for example using a linker. It can be linked to one or more of any nucleotide. The linker can comprise a divalent or trivalent branched linker. In embodiments, the conjugate is attached to the 3 'end of the antisense oligonucleotide. Methods for preparing oligonucleotide conjugates are described, for example, in US Patent No. 8,450,467, “Carbohydrate conjugates as delivery agents for oligonucleotides,” which is incorporated herein by reference.

被験体の処置
本明細書に提供される組成物のうちのいずれかが個体に投与されうる。「個体」は、「被験体」または「患者」と互換的に使用されてもよい。個体は、哺乳動物、例えば、ヒト、またはヒト以外の霊長類、げっ歯類、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ロバ、ヤギ、ネコ、イヌ、ウシ、ブタ、またはヒツジなどの動物であってもよい。実施形態では、個体はヒトである。実施形態では、個体は胎児、多型、または小児である。他の実施形態では、個体は植物などの別の真核生物かもしれない。幾つかの実施形態では、本明細書で提供される化合物は細胞にエクスビボで投与される。 Treatment of Subjects Any of the compositions provided herein can be administered to an individual. “Individual” may be used interchangeably with “subject” or “patient”. The individual may be a mammal such as a human or non-human primate, rodent, rabbit, rat, mouse, horse, donkey, goat, cat, dog, cow, pig, or sheep. Good. In embodiments, the individual is a human. In embodiments, the individual is a fetus, polymorphism, or child. In other embodiments, the individual may be another eukaryote such as a plant. In some embodiments, the compounds provided herein are administered to cells ex vivo.

幾つかの実施形態では、本明細書に提供される組成物は、疾患または障害を処置する方法として個体に投与される。幾つかの実施形態では、個体は、本明細書に記載された疾患のいずれかなどの遺伝病を有する。幾つかの実施形態では、個体は、本明細書に記載された疾患のいずれかなどの疾患を有するリスクがある。幾つかの実施形態では、個体は、不十分な量のタンパク質または不十分な活性のタンパク質により引き起こされる疾患または障害を有するリスクが増加している。個体が、不十分な量のタンパク質または不十分な活性のタンパク質により引き起こされる疾患または障害を有するリスクが増加している場合、方法は防止的または予防的な処置を含む。例えば、個体は、その疾患の家族歴のために、そのような疾患または障害を有するリスクが増加している場合がある。典型的には、そのような疾患または障害を有するリスクが増加している個体は、予防的処置（例えば、疾患または障害の発症または悪化を予防するかまたは遅らせることによる）から利益を受ける。 In some embodiments, the compositions provided herein are administered to an individual as a method of treating a disease or disorder. In some embodiments, the individual has a genetic disease, such as any of the diseases described herein. In some embodiments, the individual is at risk of having a disease, such as any of the diseases described herein. In some embodiments, the individual has an increased risk of having a disease or disorder caused by an insufficient amount of protein or an insufficiently active protein. Where an individual has an increased risk of having a disease or disorder caused by an insufficient amount of protein or an insufficiently active protein, the method includes preventive or prophylactic treatment. For example, an individual may have an increased risk of having such a disease or disorder due to a family history of the disease. Typically, individuals with an increased risk of having such a disease or disorder benefit from prophylactic treatment (eg, by preventing or delaying the onset or worsening of the disease or disorder).

本発明のＡＳＯの投与に適切な経路は、ＡＳＯの送達が所望される細胞型に応じて変わり得る。多数の組織および器官は本明細書に記載される疾病にて影響を受け、肝臓が最も著しく影響を受ける組織である。本発明のＡＳＯは、例えば、腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射または静脈内注射によって、患者に非経口的に投与されてもよい。実施形態では、送達は心臓または肝臓に対して行なわれる。実施形態では、胎児は、例えばＡＳＯ組成物を胎児に対して直接または間接的（例えば母体を介して）に投与することにより、子宮内で処置される。 The appropriate route for administration of the ASO of the present invention may vary depending on the cell type for which delivery of ASO is desired. Many tissues and organs are affected by the diseases described herein, with the liver being the most severely affected tissue. The ASO of the present invention may be administered parenterally to a patient, for example, by intraperitoneal injection, intramuscular injection, subcutaneous injection or intravenous injection. In embodiments, delivery is to the heart or liver. In embodiments, the fetus is treated in utero, eg, by administering the ASO composition to the fetus directly or indirectly (eg, via the mother's body).

スプライシングを増強する追加のＡＳＯを識別する方法
本発明の範囲内にはまた、特に標的イントロンにおけるＲＩＣｍＲＮＡ前駆体のスプライシングを増強する追加のＡＳＯを識別する（判定する）方法がある。ｍＲＮＡ前駆体の標的領域内で様々なヌクレオチドを特異的にハイブリダイズさせるＡＳＯは、標的イントロンのスプライシングの速度および／または程度を改善するＡＳＯを識別する（判定する）ためにスクリーニングされてもよい。幾つかの実施形態では、ＡＳＯはスプライシング抑制因子／サイレンサーの結合部位で遮断または妨害することもある。当該技術分野において既知の任意の方法は、イントロンの標的領域にハイブリダイズされた時に所望の効果（例えばスプライシング、タンパク質または機能的ＲＮＡの生産の向上）をもたらすＡＳＯを識別する（判定する）ために使用されてもよい。これらの方法はまた、保持されたイントロンに隣接するエクソン中、または保持されていないイントロン中の標的領域へ結合することにより、保持されたイントロンのスプライシングを増強するＡＳＯを識別するために使用することができる。使用され得る方法の一例が下記に提供される。 Methods for identifying additional ASOs that enhance splicing Within the scope of the present invention are also methods for identifying (determining) additional ASOs that enhance splicing of RIC mRNA precursors, particularly in the target intron. ASOs that specifically hybridize various nucleotides within the target region of the mRNA precursor may be screened to identify (determine) ASOs that improve the rate and / or extent of splicing of the target intron. In some embodiments, the ASO may block or block at the splicing inhibitor / silencer binding site. Any method known in the art can be used to identify (determine) an ASO that produces a desired effect (eg, splicing, improved production of protein or functional RNA) when hybridized to a target region of an intron. May be used. These methods can also be used to identify ASOs that enhance splicing of retained introns by binding to target regions in exons adjacent to retained introns or in unretained introns. Can do. An example of a method that can be used is provided below.

ｍＲＮＡ前駆体の標的領域にハイブリダイズするように設計されたＡＳＯを用いて、ＡＳＯ「ｗａｌｋ」と呼ばれる１ラウンドのスクリーニングを行うこともある。例えば、ＡＳＯｗａｌｋに使用されるＡＳＯは、保持されたイントロンの５’スプライス部位のおよそ１００のヌクレオチド上流（例えば、標的とされた／保持されたイントロンの上流に位置するエクソンの配列の一部）から標的とされた／保持されたイントロンの５’スプライス部位のおよそ１００のヌクレオチド下流まで、および／または、保持されたイントロンの３’スプライス部位のおよそ１００のヌクレオチド上流から標的とされた／保持されたイントロンの３’スプライス部位のおよそ１００のヌクレオチド下流（例えば、標的とされた／保持されたイントロンの下流に位置するエクソンの配列の一部）まで、５つのヌクレオチドごとに敷き詰められ得る。例えば、１５のヌクレオチドの長さの第１のＡＳＯは、標的とされた／保持されたイントロンの５’スプライス部位に対するヌクレオチド＋６〜＋２０まで特異的にハイブリダイズするように設計され得る。第２のＡＳＯは、標的とされた／保持されたイントロンの５’スプライス部位に対するヌクレオチド＋１１〜＋２５まで特異的にハイブリダイズするように設計されている。ＡＳＯは、ｍＲＮＡ前駆体の標的領域に及ぶように設計されている。実施形態では、ＡＳＯは、より密に、例えば、１、２、３、または４つのヌクレオチドごとに敷き詰められ得る。さらに、ＡＳＯは、５’スプライス部位の下流の１００のヌクレオチドから３’スプライス部位の上流の１００のヌクレオチドまで敷き詰められ得る。 One round of screening called ASO “walk” may be performed using ASO designed to hybridize to the target region of the mRNA precursor. For example, the ASO used for the ASO walk is approximately 100 nucleotides upstream of the 5 'splice site of the retained intron (eg, part of the sequence of the exon located upstream of the targeted / retained intron). To / from approximately 100 nucleotides downstream of the 5 'splice site of the targeted / retained intron and / or from approximately 100 nucleotides upstream of the 3' splice site of the retained intron. Every five nucleotides can be laid down to approximately 100 nucleotides downstream of the 3 ′ splice site of the intron (eg, part of the sequence of the exon located downstream of the targeted / retained intron). For example, a first ASO of 15 nucleotides in length can be designed to specifically hybridize from nucleotide +6 to +20 to the 5 'splice site of the targeted / retained intron. The second ASO is designed to specifically hybridize from nucleotides +11 to +25 to the 5 'splice site of the targeted / retained intron. ASO is designed to span the target region of the mRNA precursor. In embodiments, ASO can be more densely laid down, eg, every 1, 2, 3, or 4 nucleotides. In addition, ASO can be spread from 100 nucleotides downstream of the 5 'splice site to 100 nucleotides upstream of the 3' splice site.

１つ以上のＡＳＯ、または１つの対照ＡＳＯ（標的領域にハイブリダイズするとは予期されていない配列である、スクランブル配列を有するＡＳＯ）は、例えばトランスフェクションによって、標的ｍＲＮＡ前駆体（例えば、本明細書で別記されるＲＩＣｍＲＮＡ前駆体）を発現する疾患関連の細胞株へと送達される。ＡＳＯの各々のスプライシングを誘発する効果は、本明細書で記載されるように、当該技術分野で既知の方法、例えば、スプライスジャンクションに及ぶプライマーを使用する逆転写酵素（ＲＴ）−ＰＣＲによって評価され得る（「イントロン保持事象の特定」を参照）。対照ＡＳＯで処理された細胞と比較して、ＡＳＯで処理された細胞におけるスプライスジャンクションに及ぶプライマーを使用して生成されたＲＴ−ＰＣＲ産物が減少または欠如することは、標的イントロンのスプライシングが増強されたことを示している。幾つかの実施形態では、スプライシング効率、スプライシングされていないｍＲＮＡ前駆体に対するスプライシングされたｍＲＮＡ前駆体の比率、スプライシングの速度、またはスプライシングの程度は、本明細書に記載されるＡＳＯを使用して改善され得る。標的ｍＲＮＡ前駆体によってコードされるタンパク質または機能的ＲＮＡの量も、各ＡＳＯが所望の効果（例えば、タンパク質生成の増強）を達成したかどうかを判定するために評価され得る。ウェスタンブロッティング、フローサイトメトリー、免疫蛍光顕微鏡検査法、およびＥＬＩＳＡなどの、タンパク質生成を評価し及び／又は定量するための、当該技術分野で既知の方法も使用することができる。 One or more ASOs, or one control ASO (an ASO with a scrambled sequence, which is a sequence not expected to hybridize to the target region) is a target mRNA precursor (eg, as described herein), eg, by transfection. To a disease-related cell line that expresses a RIC mRNA precursor as described elsewhere in (1). The effect of each ASO on splicing is assessed by methods known in the art, eg, reverse transcriptase (RT) -PCR using primers spanning splice junctions, as described herein. (See “Identifying Intron Retention Events”). Reduced or lack of RT-PCR products generated using primers spanning splice junctions in cells treated with ASO compared to cells treated with control ASO enhances splicing of the target intron. It shows that. In some embodiments, splicing efficiency, ratio of spliced mRNA precursor to unspliced mRNA precursor, rate of splicing, or degree of splicing is improved using ASO as described herein. Can be done. The amount of protein or functional RNA encoded by the target mRNA precursor can also be evaluated to determine whether each ASO has achieved the desired effect (eg, enhanced protein production). Methods known in the art for assessing and / or quantifying protein production, such as Western blotting, flow cytometry, immunofluorescence microscopy, and ELISA can also be used.

ＡＳＯ「ミクロウォーク」（ｍｉｃｒｏ−ｗａｌｋ）と呼ばれる第２ラウンドのスクリーニングは、ｍＲＮＡ前駆体の標的領域にハイブリダイズするように設計されたＡＳＯを使用して実行され得る。ＡＳＯマイクロウォークに使用されるＡＳＯは、ＡＳＯでハイブリダイズされたときに結果的にスプライシングを増強させるｍＲＮＡ前駆体のヌクレオチド酸配列をさらに改良する（ｒｅｆｉｎｅ）ために、１つのヌクレオチドごとに敷き詰められる。 A second round of screening called ASO “micro-walk” can be performed using ASO designed to hybridize to the target region of the mRNA precursor. The ASO used in the ASO microwalk is laid out one nucleotide at a time to further refine the nucleotide acid sequence of the mRNA precursor that, when hybridized with ASO, results in enhanced splicing.

標的イントロンのスプライシングを促進するＡＳＯによって定義される領域は、１−ｎｔステップ（１−ｎｔｓｔｅｐｓ）で配置されたＡＳＯ、ならびに、典型的には１８−２５ｎｔである、より長いＡＳＯを含む、ＡＳＯ「ミクロウォーク」によって、より詳細に調査される。 The region defined by ASO that promotes splicing of the target intron is ASO, including ASO placed in 1-nt steps, and longer ASO, typically 18-25 nt. It is investigated in more detail by “Microwalk”.

上記でＡＳＯｗａｌｋに関して記載されたように、１つ以上のＡＳＯ、または対照ＡＳＯ（標的領域にハイブリダイズすると予期されていない配列である、スクランブル配列を有するＡＳＯ）を、例えばトランスフェクションによって、標的ｍＲＮＡ前駆体を発現する疾患関連細胞株へと送達することにより、ＡＳＯミクロウォークが実行される。ＡＳＯの各々のスプライシングを誘発する効果は、本明細書で記載されるように、当該技術分野で既知の方法、例えば、スプライスジャンクションに及ぶプライマーを使用する逆転写酵素（ＲＴ）−ＰＣＲによって評価され得る（「イントロン保持事象の特定」を参照）。対照ＡＳＯで処理された細胞と比較して、ＡＳＯで処理された細胞におけるスプライスジャンクションに及ぶプライマーを使用して生成されたＲＴ−ＰＣＲ産物が減少または欠如することは、標的イントロンのスプライシングが増強されたことを示している。幾つかの実施形態では、スプライシング効率、スプライシングされていないｍＲＮＡ前駆体に対するスプライシングされたｍＲＮＡ前駆体の比率、スプライシングの速度、またはスプライシングの程度は、本明細書に記載されるＡＳＯを使用して改善され得る。標的ｍＲＮＡ前駆体によってコードされるタンパク質または機能的ＲＮＡの量も、各ＡＳＯが所望の効果（例えば、タンパク質生成の増強）を達成したかどうかを判定するために評価され得る。ウェスタンブロッティング、フローサイトメトリー、免疫蛍光顕微鏡検査法、およびＥＬＩＳＡなどの、タンパク質生成を評価し及び／又は定量するための、当該技術分野で既知の方法も使用することができる。 As described above for the ASO walk, one or more ASOs, or a control ASO (an ASO with a scrambled sequence, which is a sequence not expected to hybridize to the target region) can be transformed into the target mRNA, eg, by transfection. An ASO microwalk is performed by delivering to a disease-associated cell line that expresses the precursor. The effect of each ASO on splicing is assessed by methods known in the art, eg, reverse transcriptase (RT) -PCR using primers spanning splice junctions, as described herein. (See “Identifying Intron Retention Events”). Reduced or lack of RT-PCR products generated using primers spanning splice junctions in cells treated with ASO compared to cells treated with control ASO enhances splicing of the target intron. It shows that. In some embodiments, splicing efficiency, ratio of spliced mRNA precursor to unspliced mRNA precursor, rate of splicing, or degree of splicing is improved using ASO as described herein. Can be done. The amount of protein or functional RNA encoded by the target mRNA precursor can also be evaluated to determine whether each ASO has achieved the desired effect (eg, enhanced protein production). Methods known in the art for assessing and / or quantifying protein production, such as Western blotting, flow cytometry, immunofluorescence microscopy, and ELISA can also be used.

ｍＲＮＡ前駆体の領域にハイブリダイズされたときに、結果的にスプライシングを増強させ、タンパク質生成を増加させるＡＳＯは、動物モデル、例えば、全長ヒト遺伝子がノックインされたトランスジェニックマウスモデルまたは疾患のヒト化マウスモデルを使用して、インビボで試験され得る。ＡＳＯの投与に適した経路は、ＡＳＯの送達が望まれる疾患及び／又は細胞型に応じて変化し得る。ＡＳＯは、例えば、腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射または静脈内注射によって投与されてもよい。投与後に、モデル動物の細胞、組織、及び／又は臓器は、当該技術分野に既知の方法および本明細書に記載される方法によって、例えば、スプライシング（効率、速度、程度）およびタンパク質生成を評価することにより、ＡＳＯ処置の効果を判定するために評価され得る。動物モデルはまた、疾患または疾患重症度の表現型または行動的徴候であり得る。本発明の好ましい実施形態が本明細書中で示され且つ記載されてきたが、このような実施形態はほんの一例として提供されるものであることは、当業者に明らかであろう。多数の変形、変更、及び置き換えは、本発明から逸脱することなく、当業者によって現在想到されるものである。本明細書に記載される本発明の実施形態の様々な代案が、本発明の実施において利用されるかもしれないことを理解されたい。以下の特許請求の範囲は本発明の範囲を定義するものであり、この特許請求の範囲及びその同等物の範囲内の方法及び構造は、それにより包含されることが、意図されている。 ASO, which when hybridized to a region of the mRNA precursor, results in enhanced splicing and increased protein production, is an animal model, eg, a transgenic mouse model in which a full-length human gene is knocked in or humanized disease It can be tested in vivo using a mouse model. Suitable routes for administration of ASO may vary depending on the disease and / or cell type for which delivery of ASO is desired. ASO may be administered, for example, by intraperitoneal injection, intramuscular injection, subcutaneous injection or intravenous injection. After administration, model animal cells, tissues, and / or organs are evaluated, for example, for splicing (efficiency, rate, extent) and protein production by methods known in the art and described herein. And can be evaluated to determine the effects of ASO treatment. An animal model can also be a phenotype or behavioral sign of disease or disease severity. While preferred embodiments of the present invention have been shown and described herein, it will be apparent to those skilled in the art that such embodiments are provided by way of example only. Numerous variations, changes, and substitutions are now contemplated by those skilled in the art without departing from the invention. It should be understood that various alternatives to the embodiments of the invention described herein may be utilized in the practice of the invention. The following claims are intended to define the scope of the invention, and methods and structures within the scope of this claim and its equivalents are intended to be encompassed thereby.

本発明は、以下の実施例によってより具体的に例証されるだろう。しかしながら、本発明がいかなる方法においてもこれらの実施例によって限定されないことが理解されるべきである。 The invention will be more specifically illustrated by the following examples. However, it should be understood that the invention is not limited in any way by these examples.

実施例１：次世代配列決定を使用するＲＮＡｓｅｑによる、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、およびＮＣＯＡ５の転写産物のイントロン保持事象の特定
全体のトランスクリプトームショットガン配列決定は、イントロン保持事象を特定するために、本明細書に記載されるＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、およびＮＣＯＡ５の遺伝子により生成された転写産物のスナップショットを明らかにするための次世代配列決定を使用して実行された。この目的のために、ポリＡ＋ＲＮＡをＴＨＬＥ−３（ヒトの肝臓上皮）細胞の核および細胞質の分画から分離し、Ｉｌｌｕｍｉｎａ’ｓＴｒｕＳｅｑＳｔｒａｎｄｅｄｍＲＮＡｌｉｂｒａｒｙＰｒｅｐＫｉｔを使用して、ｃＤＮＡライブラリを構築した。ライブラリに対してペア−エンド配列決定（ｐａｉｒ−ｅｎｄｓｅｑｕｅｎｃｅ）を行い、結果として、ヒトゲノム（２００９年２月、ＧＲＣｈ３７／ｈｇ１９アセンブリ）にマッピングされた１００のヌクレオチドの読み取りをもたらした。マッピングされた読み取りは、（ＵＣＳＣＧｅｎｏｍｅＩｎｆｏｒｍａｔｉｃｓＧｒｏｕｐ（ＣｅｎｔｅｒｆｏｒＢｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒＳｃｉｅｎｃｅ＆Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＳａｎｔａＣｒｕｚ，１１５６ＨｉｇｈＳｔｒｅｅｔ，ＳａｎｔａＣｒｕｚ，ＣＡ９５０６４）によって操作され、且つ、例えばＲｏｓｅｎｂｌｏｏｍ，ｅｔａｌ．，２０１５，“ＴｈｅＵＣＳＣＧｅｎｏｍｅＢｒｏｗｓｅｒｄａｔａｂａｓｅ：２０１５ｕｐｄａｔｅ，”ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ４３，ＤａｔａｂａｓｅＩｓｓｕｅ（ｄｏｉ：１０．１０９３／ｎａｒ／ｇｋｕ１１７７）に記載された）ＵＣＳＣのゲノムブラウザを使用して視覚化され、読み取りの範囲および数はピーク信号によって推論された。ピークの高さは、特定の領域における読み取り密度によって与えられた発現のレベルを示している。ピークがエクソンおよびイントロンの領域に一致することができるように、遺伝子の概略図をＵＣＳＣゲノムブラウザにより提供した。このディスプレイに基づいて、イントロンは、ＴＨＬＥ−３細胞の核分画に高度な読み取り密度を持つと特定されたが、これら細胞の細胞質分画には非常に低い読み取り〜読み取りなしであったことが特定された（得られたパーセントイントロン保持（ＰＩＲ）データについては表１および２、そして図面を参照）。このことは、これらのイントロンが保持されること、およびイントロン含有転写産物が細胞核中に残存していることを示し、且つ、それらが細胞質へと運び出されないため、これらの保持されたＲＩＣｍＲＮＡ前駆体は非生産的であることを示唆している。 Example 1: AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, GALT, LDLRAP1, POGLUT1, PIK3R1, TRIB1, TGFB1, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, by RNAseq using next generation sequencing Identification of intron retention events for transcripts of HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, and NCOA5 Whole transcriptome shotgun sequencing is described herein to identify intron retention events AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, GALT, LDLRAP1, POGLUT1, PIK3R1, TRIB1, TGFB1, PNPLA3, ATP7B, FAH, AS This was performed using next generation sequencing to reveal a snapshot of the transcripts generated by the L, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 and NCOA5 genes. To this end, poly A + RNA was isolated from the nuclear and cytoplasmic fractions of THLE-3 (human liver epithelium) cells and a cDNA library was constructed using Illumina's TruSeq Stranded mRNA library Prep Kit. Pair-end sequencing was performed on the library, resulting in a reading of 100 nucleotides mapped to the human genome (February 2009, GRCh37 / hg19 assembly). Mapped readings are (UCSC Genome Informatics Group (Center for Biomolecular Science, Engineering, CA, and the University of California, Sr. , “The UCSC Genome Browser database: 2015 update,” Nucleic Acids Research 43, Database Issue (as described in Doi: 10.1093 / nar / gku1177). Rino range and number deduced by the peak signal. The peak height indicates the level of expression given by the reading density in a particular area. A schematic of the gene was provided by the UCSC genome browser so that the peaks could match the exon and intron regions. Based on this display, introns were identified as having a high reading density in the nuclear fraction of THLE-3 cells, but the cytoplasmic fraction of these cells was very low reading-no reading. (See Tables 1 and 2 for the percent intron retention (PIR) data obtained and the drawing). This indicates that these introns are retained, and that intron-containing transcripts remain in the cell nucleus, and that they are not transported to the cytoplasm, so these retained RIC mRNA precursors Suggests that the body is unproductive.

実施例２：次世代配列決定を使用したＲＮＡｓｅｑによるＡＰＯＡ５、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＨＮＦ１Ａ、ＨＡＭＰ、およびＴＨＰＯの転写産物のイントロン保持事象の特定
全体のトランスクリプトームショットガン配列は、イントロン保持事象を特定するために、転写産物、例えば、本明細書に記載されるＡＰＯＡ５、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＨＮＦ１Ａ、ＨＡＭＰ、およびＴＨＰＯの遺伝子により生成されるもののスナップショットを明らかにするための次世代配列決定を使用して実行された。この目的のために、ポリＡ＋ＲＮＡをＴＨＬＥ−３（ヒトの肝臓上皮）細胞の核および細胞質の分画から分離し、Ｉｌｌｕｍｉｎａ’ｓＴｒｕＳｅｑＳｔｒａｎｄｅｄｍＲＮＡｌｉｂｒａｒｙＰｒｅｐＫｉｔを使用して、ｃＤＮＡライブラリを構築した。ライブラリに対してペア−エンド配列決定（ｐａｉｒ−ｅｎｄｓｅｑｕｅｎｃｅ）を行い、結果として、ヒトゲノム（２００９年２月、ＧＲＣｈ３７／ｈｇ１９アセンブリ）にマッピングされた１００のヌクレオチドの読み取りをもたらした。マッピングされた読み取りは、（ＵＣＳＣＧｅｎｏｍｅＩｎｆｏｒｍａｔｉｃｓＧｒｏｕｐ（ＣｅｎｔｅｒｆｏｒＢｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒＳｃｉｅｎｃｅ＆Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＳａｎｔａＣｒｕｚ，１１５６ＨｉｇｈＳｔｒｅｅｔ，ＳａｎｔａＣｒｕｚ，ＣＡ９５０６４）によって操作され、且つ、例えばＲｏｓｅｎｂｌｏｏｍ，ｅｔａｌ．，２０１５，“ＴｈｅＵＣＳＣＧｅｎｏｍｅＢｒｏｗｓｅｒｄａｔａｂａｓｅ：２０１５ｕｐｄａｔｅ，”ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ４３，ＤａｔａｂａｓｅＩｓｓｕｅ（ｄｏｉ：１０．１０９３／ｎａｒ／ｇｋｕ１１７７）に記載された）ＵＣＳＣのゲノムブラウザを使用して視覚化され、読み取りの範囲および数はピーク信号によって推論された。ピークの高さは、特定の領域における読み取り密度によって与えられた発現のレベルを示している。ピークがエクソンおよびイントロンの領域に一致することができるように、遺伝子の概略図をＵＣＳＣゲノムブラウザにより提供した。このディスプレイに基づいて、イントロンは、ＴＨＬＥ−３細胞の核分画に高度な読み取り密度を持つと特定されたが、これら細胞の細胞質分画には非常に低い読み取り〜読み取りなしであったことが特定された（得られたパーセントイントロン保持（ＰＩＲ）データについては表１および２、そして図面を参照）。このことは、これらのイントロンが保持されること、およびイントロン含有転写産物が細胞核中に残存したことを示し、且つ、それらが細胞質へと運び出されないため、これらの保持されたＲＩＣｍＲＮＡ前駆体は非生産的であったことを示唆している。 Example 2: Identification of intron retention events of APOA5, HNF4A, GCK, HNF1A, HAMP, and THPO transcripts by RNAseq using next generation sequencing The entire transcriptome shotgun sequence identifies intron retention events In order to use next generation sequencing to reveal snapshots of transcripts, such as those generated by the APOA5, HNF4A, GCK, HNF1A, HAMP, and THPO genes described herein It has been executed. To this end, poly A + RNA was isolated from the nuclear and cytoplasmic fractions of THLE-3 (human liver epithelium) cells and a cDNA library was constructed using Illumina's TruSeq Stranded mRNA library Prep Kit. Pair-end sequencing was performed on the library, resulting in a reading of 100 nucleotides mapped to the human genome (February 2009, GRCh37 / hg19 assembly). Mapped readings are (UCSC Genome Informatics Group (Center for Biomolecular Science, Engineering, CA, and the University of California, Sr. , “The UCSC Genome Browser database: 2015 update,” Nucleic Acids Research 43, Database Issue (as described in Doi: 10.1093 / nar / gku1177). Rino range and number deduced by the peak signal. The peak height indicates the level of expression given by the reading density in a particular area. A schematic of the gene was provided by the UCSC genome browser so that the peaks could match the exon and intron regions. Based on this display, introns were identified as having a high reading density in the nuclear fraction of THLE-3 cells, but the cytoplasmic fraction of these cells was very low reading-no reading. (See Tables 1 and 2 for the percent intron retention (PIR) data obtained and the drawing). This indicates that these introns are retained, and that intron-containing transcripts remain in the cell nucleus, and because they are not exported to the cytoplasm, these retained RIC mRNA precursors are This suggests that it was unproductive.

実施例３：保持されたイントロンを標的とするＡＳＯｗａｌｋの設計
ＡＳＯｗａｌｋは、本明細書に記載される方法を使用して、保持されたイントロンを標的とするように設計された。イントロン５’スプライス部位の直ぐ下流、例えばヌクレオチド＋６〜＋６９に及ぶ領域、及び、イントロン３’スプライス部位の直ぐ上流、例えばヌクレオチド−１６〜−７９に及ぶ領域を、２’−Ｏ−ＭｅＲＮＡ、ＰＳ骨格、５のヌクレオチド間隔でシフトされた１８−ｍｅｒＡＳＯを用いて標的とした。表１は、ＴＨＬＥ−３細胞中の対象の遺伝子において保持されたイントロンを列挙する。表２は、設計された例示的なＡＳＯおよびそれらの標的配列を列挙する。 Example 3: Design of an ASO walk targeting a retained intron An ASO walk was designed to target a retained intron using the methods described herein. The region immediately downstream of the intron 5 ′ splice site, eg, spanning nucleotides +6 to +69, and the region immediately upstream of the intron 3 ′ splice site, eg, spanning nucleotides −16 to −79, is represented by 2′-O-Me RNA, PS Targeted with an 18-mer ASO shifted at the backbone, 5 nucleotide intervals. Table 1 lists the introns retained in the gene of interest in THLE-3 cells. Table 2 lists exemplary ASOs designed and their target sequences.

実施例４：保持されたイントロンのＡＳＯ標的化により改善したスプライシング効率はＡＭＴ転写レベルを増大させる
ＡＳＯを使用して保持されたイントロンのスプライシング効率を改善することにより、ＡＭＴの発現の増加を達成しうるかどうかを判定するために、本明細書に記述された方法が使用された。ＡＲＰＥ−１９細胞は、独立してＲＮＡｉＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）送達試薬を使用し、偽トランスフェクト（ｍｏｃｋ−ｔｒａｎｓｆｅｃｔ）され、または、ＡＭＴ標的化ＡＳＯまたは非標的化ＡＳＯ対照でトランスフェクトされた。実験は８０ｎＭＡＳＯを使用して２４時間行なわれた（図３Ａおよび図３Ｂ）。ＴａｑｍａｎｑＰＣＲの結果は、いくつかの標的化ＡＳＯが、偽トランスフェクトされたものと比較してＡＭＴ遺伝子転写レベルを増大させることを示した。ＡＭＴを標的とするＡＳＯトランスフェクトされた細胞からのＣｔ値はＲＰＬ３２に対し正規化され、偽処理細胞からの正規化されたｑＰＣＲ産物に対してプロットされる。この分析の結果は、いくつかのＡＭＴ標的化ＡＳＯが遺伝子転写レベルを増大させることを示した。これらの結果は、ＡＳＯを用いる遺伝子中の保持されたイントロンのスプライシングの誘発が、遺伝子発現の増加をもたらすことを示す。全体的に、これらの結果は、ＡＳＯを用いてＡＭＴ遺伝子中の律速のイントロンのスプライシング効率を改善すると、ＡＭＴ遺伝子発現が増加することを示している。 Example 4: Improved Splicing Efficiency by ASO Targeting of Retained Introns Increases AMT Transcriptional Levels Increased expression of AMT was achieved by improving the splicing efficiency of retained introns using ASO. The method described herein was used to determine whether it was possible. ARPE-19 cells were independently mock-transfected using RNAiMAX (Invitrogen) delivery reagent, or transfected with AMT targeted ASO or non-targeted ASO control. The experiment was performed using 80 nM ASO for 24 hours (FIGS. 3A and 3B). Taqman qPCR results showed that some targeted ASOs increased AMT gene transcription levels compared to those mock-transfected. Ct values from ASO-transfected cells targeting AMT are normalized to RPL32 and plotted against normalized qPCR products from mock-treated cells. The results of this analysis showed that some AMT targeted ASOs increased gene transcription levels. These results show that induction of splicing of retained introns in genes using ASO results in increased gene expression. Overall, these results show that AMT gene expression increases when ASO is used to improve the splicing efficiency of rate-limiting introns in the AMT gene.

実施例５：保持されたイントロンのＡＳＯ標的化による改善したスプライシング効率はＧＡＬＴ転写レベルを増大させる
ＡＳＯを使用して保持されたイントロンのスプライシング効率を改善することにより、ＧＡＬＴの発現の増加を達成しうるかどうかを判定するために、本明細書に記述された方法が使用される。ＡＲＰＥ−１９細胞は、独立してＲＮＡｉＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）送達試薬を使用し、偽トランスフェクト（ｍｏｃｋ−ｔｒａｎｓｆｅｃｔ）され、または、ＧＡＬＴ標的化ＡＳＯまたは非標的化ＡＳＯ対照でトランスフェクトされた。実験は８０ｎＭＡＳＯを使用して２４時間行なわれた（図４ＣおよびＤ、図４Ｇおよび４Ｈ）。ＴａｑｍａｎｑＰＣＲの結果は、いくつかの標的化ＡＳＯが、偽トランスフェクトされたものと比較してＧＡＬＴ遺伝子転写レベルを増大させることを示した。ＧＡＬＴ標的化ＡＳＯトランスフェクト細胞からのＣｔ値をＲＰＬ３２に対して正規化し、偽処理細胞からの正規化ｑＰＣＲ産物と比較してプロットする。この分析の結果は、いくつかのＧＡＬＴ標的化ＡＳＯが遺伝子転写レベルを増大させることを示した。これらの結果は、ＡＳＯを用いる遺伝子中の保持されたイントロンのスプライシングの誘発が、遺伝子発現の増加をもたらすことを示す。全体的に、これらの結果は、ＡＳＯを用いてＧＡＬＴ遺伝子中の律速イントロンのスプライシング効率を改善すると、ＧＡＬＴ遺伝子発現が増加することを示している。 Example 5: Improved splicing efficiency due to ASO targeting of retained introns increases GALT transcription levels ATL has achieved increased expression of GALT by improving splicing efficiency of retained introns using ASO The method described herein is used to determine whether it is possible. ARPE-19 cells were independently mock-transfected using RNAiMAX (Invitrogen) delivery reagent, or transfected with GALT targeted ASO or non-targeted ASO control. The experiment was performed for 24 hours using 80 nM ASO (FIGS. 4C and D, FIGS. 4G and 4H). Taqman qPCR results showed that some targeted ASOs increased GALT gene transcription levels compared to mock-transfected ones. Ct values from GALT targeted ASO transfected cells are normalized to RPL32 and plotted against normalized qPCR products from mock treated cells. The results of this analysis showed that some GALT targeted ASOs increased gene transcription levels. These results show that induction of splicing of retained introns in genes using ASO results in increased gene expression. Overall, these results indicate that using ASO to improve the splicing efficiency of the rate-limiting intron in the GALT gene increases GALT gene expression.

実施例６：保持されたイントロンのＡＳＯ標的化による改善したスプライシング効率はＰＣ転写レベルを増大させる
ＡＳＯを使用して保持されたイントロンのスプライシング効率を改善することにより、ＰＣの発現の増加を達成しうるかどうかを判定するために、本明細書に記述された方法が使用される。ＡＲＰＥ−１９細胞は、独立してＲＮＡｉＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）送達試薬を使用し、偽トランスフェクト（ｍｏｃｋ−ｔｒａｎｓｆｅｃｔ）され、または、ＰＣ標的化ＡＳＯまたは非標的化ＡＳＯ対照でトランスフェクトされた。実験は８０ｎＭＡＳＯを使用して２４時間行なわれた（図５ＡおよびＢ）。ＴａｑｍａｎｑＰＣＲの結果は、いくつかの標的化ＡＳＯが、偽トランスフェクトされたものと比較してＰＣ遺伝子転写レベルを増大させることを示した。ＰＣ標的化ＡＳＯトランスフェクト細胞からのＣｔ値をＲＰＬ３２に対して正規化し、偽処理細胞からの正規化ｑＰＣＲ産物と比較してプロットする。この分析の結果は、いくつかのＰＣ標的化ＡＳＯが遺伝子転写レベルを増大させることを示した。これらの結果は、ＡＳＯを用いる遺伝子中の保持されたイントロンのスプライシングの誘発が、遺伝子発現の増加をもたらすことを示す。全体的に、これらの結果は、ＡＳＯを用いでＰＣ遺伝子中の律速イントロンのスプライシング効率を改善すると、ＰＣ遺伝子発現が増加することを示している。 Example 6: Improved splicing efficiency by ASO targeting of retained introns increases PC transcription levels Achieved increased PC expression by improving splicing efficiency of retained introns using ASO The method described herein is used to determine whether it is possible. ARPE-19 cells were independently mock-transfected using RNAiMAX (Invitrogen) delivery reagent or transfected with PC-targeted ASO or non-targeted ASO control. The experiment was performed using 80 nM ASO for 24 hours (FIGS. 5A and B). Taqman qPCR results showed that some targeted ASOs increased PC gene transcription levels compared to mock-transfected ones. Ct values from PC-targeted ASO-transfected cells are normalized to RPL32 and plotted relative to normalized qPCR products from mock-treated cells. The results of this analysis showed that some PC-targeted ASO increased gene transcription levels. These results show that induction of splicing of retained introns in genes using ASO results in increased gene expression. Overall, these results show that PC gene expression increases when ASO is used to improve the splicing efficiency of the rate-limiting intron in the PC gene.

実施例７：保持されたイントロンのＡＳＯ標的化による改善したスプライシング効率はＦＡＨ転写レベルを増大させる
ＡＳＯを使用して保持されたイントロンのスプライシング効率を改善することにより、ＦＡＨの発現の増加を達成しうるかどうかを判定するために、本明細書に記述された方法が使用される。ＡＲＰＥ−１９細胞は、独立してＲＮＡｉＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）送達試薬を使用し、偽トランスフェクト（ｍｏｃｋ−ｔｒａｎｓｆｅｃｔ）され、または、ＦＡＨ標的化ＡＳＯまたは非標的化ＡＳＯ対照でトランスフェクトされた。実験は８０ｎＭＡＳＯを使用して２４時間行なわれた（図６ＡおよびＢ）。ＴａｑｍａｎｑＰＣＲの結果は、いくつかの標的化ＡＳＯが、偽トランスフェクトされたものと比較してＦＡＨ遺伝子転写レベルを増大させることを示した。ＦＡＨ標的化ＡＳＯトランスフェクト細胞からのＣｔ値をＲＰＬ３２に対して正規化し、偽処理細胞からの正規化ｑＰＣＲ産物と比較してプロットする。この分析の結果は、いくつかのＦＡＨ標的化ＡＳＯが遺伝子転写レベルを増大させることを示した。これらの結果は、ＡＳＯを用いる遺伝子中の保持されたイントロンのスプライシングの誘発が、遺伝子発現の増加をもたらすことを示す。全体的に、これらの結果は、ＡＳＯを用いてＦＡＨ遺伝子中の律速イントロンのスプライシング効率を改善すると、ＦＡＨ遺伝子発現が増加することを示している。 Example 7: Improved splicing efficiency by ASO targeting of retained introns increases FAH transcription levels Achieved increased FAH expression by improving splicing efficiency of retained introns using ASO The method described herein is used to determine whether it is possible. ARPE-19 cells were independently mock-transfected using RNAiMAX (Invitrogen) delivery reagent or transfected with FAH targeted ASO or non-targeted ASO control. The experiment was performed using 80 nM ASO for 24 hours (FIGS. 6A and B). Taqman qPCR results showed that some targeted ASOs increased FAH gene transcription levels compared to mock-transfected ones. Ct values from FAH targeted ASO transfected cells are normalized to RPL32 and plotted relative to normalized qPCR products from mock treated cells. The results of this analysis showed that some FAH targeted ASOs increased gene transcription levels. These results show that induction of splicing of retained introns in genes using ASO results in increased gene expression. Overall, these results show that FAH gene expression increases when ASO is used to improve the splicing efficiency of the rate-limiting intron in the FAH gene.

実施例８：保持されたイントロンのＡＳＯ標的化による改善したスプライシング効率はＰＰＡＲＤ転写レベルを増大させる
ＡＳＯを使用して保持されたイントロンのスプライシング効率を改善することにより、ＰＰＡＲＤの発現の増加を達成しうるかどうかを判定するために、本明細書に記述された方法が使用される。ＡＲＰＥ−１９細胞は、独立してＲＮＡｉＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）送達試薬を使用し、偽トランスフェクト（ｍｏｃｋ−ｔｒａｎｓｆｅｃｔ）され、または、ＰＰＡＲＤ標的化ＡＳＯまたは非標的化ＡＳＯ対照でトランスフェクトされた。実験は８０ｎＭＡＳＯを使用して２４時間行なわれた（図７ＡおよびＢ、図７ＥおよびＦ）。ＴａｑｍａｎｑＰＣＲの結果は、いくつかの標的化ＡＳＯが、偽トランスフェクトされたものと比較してＰＰＡＲＤ遺伝子転写レベルを増大させることを示した。ＰＰＡＲＤ標的化ＡＳＯトランスフェクト細胞からのＣｔ値をＲＰＬ３２に対して正規化し、偽処理細胞からの正規化ｑＰＣＲ産物と比較してプロットする。この分析の結果は、いくつかのＰＰＡＲＤ標的化ＡＳＯが遺伝子転写レベルを増大させることを示した。これらの結果は、ＡＳＯを用いる遺伝子中の保持されたイントロンのスプライシングの誘発が、遺伝子発現の増加をもたらすことを示す。全体的に、これらの結果は、ＡＳＯを用いてＰＰＡＲＤ遺伝子中の律速イントロンのスプライシング効率を改善すると、ＰＰＡＲＤ遺伝子発現が増加することを示している。 Example 8: Improved splicing efficiency by ASO targeting of retained introns increases PPARD transcription levels Achieved increased PPARD expression by improving splicing efficiency of retained introns using ASO The method described herein is used to determine whether it is possible. ARPE-19 cells were independently mock-transfected using RNAiMAX (Invitrogen) delivery reagent or transfected with PPARD targeted ASO or non-targeted ASO control. The experiment was performed using 80 nM ASO for 24 hours (FIGS. 7A and B, FIGS. 7E and F). Taqman qPCR results indicated that some targeted ASOs increased PPARD gene transcription levels compared to mock-transfected ones. Ct values from PPARD targeted ASO transfected cells are normalized to RPL32 and plotted relative to normalized qPCR products from mock treated cells. The results of this analysis showed that some PPARD targeted ASOs increased gene transcription levels. These results show that induction of splicing of retained introns in genes using ASO results in increased gene expression. Overall, these results show that PPARD gene expression increases when ASO is used to improve the splicing efficiency of the rate-limiting intron in the PPARD gene.

実施例９：保持されたイントロンのＡＳＯ標的化による改善したスプライシング効率はＨＭＢＳ転写レベルを増大させる
ＡＳＯを使用して保持されたイントロンのスプライシング効率を改善することにより、ＨＭＢＳの発現の増加を達成しうるかどうかを判定するために、本明細書に記述された方法が使用される。ＡＲＰＥ−１９細胞は、独立してＲＮＡｉＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）送達試薬を使用し、偽トランスフェクト（ｍｏｃｋ−ｔｒａｎｓｆｅｃｔ）され、または、ＨＭＢＳ標的化ＡＳＯまたは非標的化ＡＳＯ対照でトランスフェクトされた。実験は８０ｎＭＡＳＯを使用して２４時間行なわれた（図９ＡおよびＢ）。ＴａｑｍａｎｑＰＣＲの結果は、いくつかの標的化ＡＳＯが、偽トランスフェクトされたものと比較してＨＭＢＳ遺伝子転写レベルを増大させることを示した。ＨＭＢＳ標的化ＡＳＯトランスフェクト細胞からのＣｔ値をＲＰＬ３２に対して正規化し、偽処理細胞からの正規化ｑＰＣＲ産物と比較してプロットする。この分析の結果は、いくつかのＨＭＢＳ標的化ＡＳＯが遺伝子転写レベルを増大させることを示した。これらの結果は、ＡＳＯを用いる遺伝子中の保持されたイントロンのスプライシングの誘発が、遺伝子発現の増加をもたらすことを示す。全体的に、これらの結果は、ＡＳＯを用いてＨＭＢＳ遺伝子中の律速イントロンのスプライシング効率を改善すると、ＨＭＢＳ遺伝子発現が増加することを示している。 Example 9: Improved splicing efficiency by ASO targeting of retained introns increases HMBS transcription levels Achieved increased expression of HMBS by improving splicing efficiency of retained introns using ASO The method described herein is used to determine whether it is possible. ARPE-19 cells were independently mock-transfected using RNAiMAX (Invitrogen) delivery reagent or transfected with HMBS targeted ASO or non-targeted ASO control. The experiment was performed using 80 nM ASO for 24 hours (FIGS. 9A and B). Taqman qPCR results showed that some targeted ASOs increased HMBS gene transcription levels compared to mock-transfected ones. Ct values from HMBS targeted ASO transfected cells are normalized to RPL32 and plotted relative to normalized qPCR products from sham treated cells. The results of this analysis showed that some HMBS targeted ASOs increased gene transcription levels. These results show that induction of splicing of retained introns in genes using ASO results in increased gene expression. Overall, these results show that HMBS gene expression increases when ASO is used to improve the splicing efficiency of the rate-limiting intron in the HMBS gene.

実施例１０：保持されたイントロンのＡＳＯ標的化による改善したスプライシング効率はＡＬＭＳ１転写レベルを増大させる
ＡＳＯを使用して保持されたイントロンのスプライシング効率を改善することにより、ＡＬＭＳ１の発現の増加を達成しうるかどうかを判定するために、本明細書に記述された方法が使用される。ＡＲＰＥ−１９細胞は、独立してＲＮＡｉＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）送達試薬を使用し、偽トランスフェクト（ｍｏｃｋ−ｔｒａｎｓｆｅｃｔ）され、または、ＡＬＭＳ１標的化ＡＳＯまたは非標的化ＡＳＯ対照でトランスフェクトされた。実験は８０ｎＭＡＳＯを使用して２４時間行なわれた（図１１ＡおよびＢ）。ＴａｑｍａｎｑＰＣＲの結果は、いくつかの標的化ＡＳＯが、偽トランスフェクトされたものと比較してＡＬＭＳ１遺伝子転写レベルを増大させることを示した。ＡＬＭＳ１標的化ＡＳＯトランスフェクト細胞からのＣｔ値をＲＰＬ３２に対して正規化し、偽処理細胞からの正規化ｑＰＣＲ産物と比較してプロットする。この分析の結果は、いくつかのＡＬＭＳ１標的化ＡＳＯが遺伝子転写レベルを増大させることを示した。これらの結果は、ＡＳＯを用いる遺伝子中の保持されたイントロンのスプライシングの誘発が、遺伝子発現の増加をもたらすことを示す。全体的に、これらの結果は、ＡＳＯを用いてＡＬＭＳ１遺伝子中の律速イントロンのスプライシング効率を改善すると、ＡＬＭＳ１遺伝子発現が増加することを示している。 Example 10: Improved splicing efficiency by ASO targeting of retained introns increases ALMS1 transcription levels Achieved increased expression of ALMS1 by improving splicing efficiency of retained introns using ASO The method described herein is used to determine whether it is possible. ARPE-19 cells were independently mock-transfected using RNAiMAX (Invitrogen) delivery reagent, or transfected with ALMS1 targeted ASO or non-targeted ASO control. The experiment was performed using 80 nM ASO for 24 hours (FIGS. 11A and B). Taqman qPCR results showed that some targeted ASOs increased ALMS1 gene transcription levels compared to those mock-transfected. Ct values from ALMS1 targeted ASO transfected cells are normalized to RPL32 and plotted relative to normalized qPCR products from mock treated cells. The results of this analysis indicated that some ALMS1 targeted ASOs increased gene transcription levels. These results show that induction of splicing of retained introns in genes using ASO results in increased gene expression. Overall, these results show that ALMS1 gene expression increases when ASO is used to improve the splicing efficiency of the rate-limiting intron in the ALMS1 gene.

実施例１１：保持されたイントロンのＡＳＯ標的化による改善したスプライシング効率はＡＳＬ転写レベルを増大させる
ＡＳＯを使用して保持されたイントロンのスプライシング効率を改善することにより、ＡＳＬの発現の増加を達成しうるかどうかを判定するために、本明細書に記述された方法が使用される。ＡＲＰＥ−１９細胞は、独立してＲＮＡｉＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）送達試薬を使用し、偽トランスフェクト（ｍｏｃｋ−ｔｒａｎｓｆｅｃｔ）され、または、ＡＳＬ標的化ＡＳＯまたは非標的化ＡＳＯ対照でトランスフェクトされた。実験は８０ｎＭＡＳＯを使用して２４時間行なわれた（図１２ＡおよびＢ、図１２ＣおよびＤ、図１２ＥおよびＦ）。ＴａｑｍａｎｑＰＣＲの結果は、いくつかの標的化ＡＳＯが、偽トランスフェクトされたものと比較してＡＳＬ遺伝子転写レベルを増大させることを示した。ＡＳＬ標的化ＡＳＯトランスフェクト細胞からのＣｔ値をＲＰＬ３２に対して正規化し、偽処理細胞からの正規化ｑＰＣＲ産物と比較してプロットする。この分析の結果は、いくつかのＡＳＬ標的化ＡＳＯが遺伝子転写レベルを増大させることを示した。これらの結果は、ＡＳＯを用いる遺伝子中の保持されたイントロンのスプライシングの誘発が、遺伝子発現の増加をもたらすことを示す。全体的に、これらの結果は、ＡＳＯを用いてＡＳＬ遺伝子中の律速イントロンのスプライシング効率を改善すると、ＡＳＬ遺伝子発現が増加することを示している。 Example 11: Improved Splicing Efficiency by ASO Targeting of Retained Introns Increases ASL Transcriptional Levels By increasing the splicing efficiency of retained introns using ASO, increased expression of ASL was achieved. The method described herein is used to determine whether it is possible. ARPE-19 cells were independently mock-transfected using RNAiMAX (Invitrogen) delivery reagent or transfected with ASL targeted ASO or non-targeted ASO control. The experiment was performed for 24 hours using 80 nM ASO (FIGS. 12A and B, FIGS. 12C and D, FIGS. 12E and F). Taqman qPCR results showed that some targeted ASOs increased ASL gene transcription levels compared to those mock-transfected. Ct values from ASL targeted ASO transfected cells are normalized to RPL32 and plotted relative to normalized qPCR products from mock treated cells. The results of this analysis showed that some ASL targeted ASOs increased gene transcription levels. These results show that induction of splicing of retained introns in genes using ASO results in increased gene expression. Overall, these results show that ASL gene expression increases when ASO is used to improve the splicing efficiency of rate-limiting introns in the ASL gene.

実施例１２：保持されたイントロンのＡＳＯ標的化による改善したスプライシング効率はＡＴＰ７Ｂ転写レベルを増大させる
ＡＳＯを使用して保持されたイントロンのスプライシング効率を改善することにより、ＡＴＰ７Ｂの発現の増加を達成しうるかどうかを判定するために、本明細書に記述された方法が使用される。ＡＲＰＥ−１９細胞は、独立してＲＮＡｉＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）送達試薬を使用し、偽トランスフェクト（ｍｏｃｋ−ｔｒａｎｓｆｅｃｔ）され、または、ＡＴＰ７Ｂ標的化ＡＳＯまたは非標的化ＡＳＯ対照でトランスフェクトされた。実験は８０ｎＭＡＳＯを使用して２４時間行なわれた（図１３ＢおよびＣ）。ＴａｑｍａｎｑＰＣＲの結果は、いくつかの標的化ＡＳＯが、偽トランスフェクトされたものと比較してＡＴＰ７Ｂ遺伝子転写レベルを増大させることを示した。ＡＴＰ７Ｂ標的化ＡＳＯトランスフェクト細胞からのＣｔ値をＲＰＬ３２に対して正規化し、偽処理細胞からの正規化ｑＰＣＲ産物と比較してプロットする。この分析の結果は、いくつかのＡＴＰ７Ｂ標的化ＡＳＯが遺伝子転写レベルを増大させることを示した。これらの結果は、ＡＳＯを用いる遺伝子中の保持されたイントロンのスプライシングの誘発が、遺伝子発現の増加をもたらすことを示す。全体的に、これらの結果は、ＡＳＯを用いてＡＴＰ７Ｂ遺伝子中の律速イントロンのスプライシング効率を改善すると、ＡＴＰ７Ｂ遺伝子発現が増加することを示している。 Example 12: Improved splicing efficiency by ASO targeting of retained introns increases ATP7B transcription levels ATP7B expression was increased by improving splicing efficiency of retained introns using ASO The method described herein is used to determine whether it is possible. ARPE-19 cells were independently mock-transfected using RNAiMAX (Invitrogen) delivery reagent or transfected with ATP7B targeted ASO or non-targeted ASO control. The experiment was performed using 80 nM ASO for 24 hours (FIGS. 13B and C). Taqman qPCR results showed that some targeted ASOs increased ATP7B gene transcription levels compared to those mock-transfected. Ct values from ATP7B targeted ASO transfected cells are normalized to RPL32 and plotted relative to normalized qPCR products from mock treated cells. The results of this analysis showed that some ATP7B targeted ASOs increased gene transcription levels. These results show that induction of splicing of retained introns in genes using ASO results in increased gene expression. Overall, these results show that ATP7B gene expression is increased when ASO is used to improve the splicing efficiency of the rate-limiting intron in the ATP7B gene.

実施例１３：保持されたイントロンのＡＳＯ標的化による改善したスプライシング効率はＨＳＤ３Ｂ７転写レベルを増大させる
ＡＳＯを使用して保持されたイントロンのスプライシング効率を改善することにより、ＨＳＤ３Ｂ７の発現の増加を達成しうるかどうかを判定するために、本明細書に記述された方法が使用される。ＡＲＰＥ−１９細胞は、独立してＲＮＡｉＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）送達試薬を使用し、偽トランスフェクト（ｍｏｃｋ−ｔｒａｎｓｆｅｃｔ）され、または、ＨＳＤ３Ｂ７標的化ＡＳＯまたは非標的化ＡＳＯ対照でトランスフェクトされた。実験は８０ｎＭＡＳＯを使用して２４時間行なわれた（図１５ＢおよびＣ、図１５ＥおよびＦ）。ＴａｑｍａｎｑＰＣＲの結果は、いくつかの標的化ＡＳＯが、偽トランスフェクトされたものと比較してＨＳＤ３Ｂ７遺伝子転写レベルを増大させることを示した。ＨＳＤ３Ｂ７標的化ＡＳＯトランスフェクト細胞からのＣｔ値をＲＰＬ３２に対して正規化し、偽処理細胞からの正規化ｑＰＣＲ産物と比較してプロットする。この分析の結果は、いくつかのＨＳＤ３Ｂ７標的化ＡＳＯが遺伝子転写レベルを増大させることを示した。これらの結果は、ＡＳＯを用いる遺伝子中の保持されたイントロンのスプライシングの誘発が、遺伝子発現の増加をもたらすことを示す。全体的に、これらの結果は、ＡＳＯを用いてＨＳＤ３Ｂ７遺伝子中の律速イントロンのスプライシング効率を改善すると、ＨＳＤ３Ｂ７遺伝子発現が増加することを示している。 Example 13: Improved Splicing Efficiency by ASO Targeting of Retained Introns Increases HSD3B7 Transcriptional Levels By increasing the splicing efficiency of retained introns using ASO, increased expression of HSD3B7 was achieved. The method described herein is used to determine whether it is possible. ARPE-19 cells were independently mock-transfected using RNAiMAX (Invitrogen) delivery reagent or transfected with HSD3B7 targeted ASO or non-targeted ASO control. The experiment was performed using 80 nM ASO for 24 hours (FIGS. 15B and C, FIGS. 15E and F). Taqman qPCR results showed that some targeted ASOs increased HSD3B7 gene transcription levels compared to mock-transfected ones. Ct values from HSD3B7 targeted ASO transfected cells are normalized to RPL32 and plotted relative to normalized qPCR products from mock treated cells. The results of this analysis showed that some HSD3B7 targeted ASOs increased gene transcription levels. These results show that induction of splicing of retained introns in genes using ASO results in increased gene expression. Overall, these results indicate that using ASO to improve the rate-limiting intron splicing efficiency in the HSD3B7 gene increases HSD3B7 gene expression.

実施例１４：保持されたイントロンのＡＳＯ標的化による改善したスプライシング効率は転写レベルを増大させる
ＡＳＯでのイントロンスプライシング効率の改善により標的遺伝子の発現の増加を達成しうるかどうかを判定するために、本明細書に記述された方法を使用した。ＡＲＰＥ−１９細胞、すなわちヒトの網膜の上皮細胞株（ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ），ＵＳＡ）、またはＨｕｈ−７、すなわちヒトの肝細胞腫細胞株（ＮＩＢＩＯＨＮ、Ｊａｐａｎ）、またはＳＫ−Ｎ−ＡＳ、すなわちヒトの神経芽細胞腫細胞株（ＡＴＣＣ）は、図３−１７、および表１および２に記載の標的化ＡＳＯで偽トランスフェクトされるか、またはトランスフェクトされる。細胞を、供給元の仕様書に従って、ＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅＲＮＡｉＭａｘトランスフェクション試薬（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を用いてトランスフェクトした。簡潔に述べると、ＡＳＯを９６ウェル組織培養プレートに播種し、Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ中に希釈したＲＮＡｉＭａｘと組み合わせた。トリプシンを用いて細胞を剥離し、完全培地に再懸濁し、約２５，０００個の細胞をＡＳＯトランスフェクション混合物に加えた。トランスフェクション実験は三通りのプレート複製において実行された。最終的なＡＳＯ濃度は８０ｎＭであった。供給元の仕様書に従って、培地をトランスフェクションの６時間後に交換し、細胞をＣｅｌｌｓ−ｔｏ−Ｃｔ溶解試薬を用い、ＤＮＡｓｅ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）で試薬を補充し、２４時間で採取した。供給元の仕様書に従い、ｃＤＮＡをＣｅｌｌｓ−ｔｏ−ＣｔＲＴ試薬（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）で生成した。対象のイントロンでのスプライシングの量を定量化するために、表１および２に列挙した、保持されたイントロンの対応するエクソン−エクソンジャンクションに及ぶプローブによるＴａｑｍａｎアッセイ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を用いて、定量ＰＣＲが実行される。Ｔａｑｍａｎアッセイは、ＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ７ＦｌｅｘＲｅａｌ−ＴｉｍｅＰＣＲシステム（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）上で、供給元の仕様書に従い実行される。標的遺伝子アッセイ値を、ＲＰＬ３２（ｄｅｌｔａＣｔ）およびプレート一致偽トランスフェクションサンプル（ｄｅｌｔａ−ｄｅｌｔａＣｔ）に対して正規化し、モック定量（２＾−（ｄｅｌｔａ−ｄｅｌｔａＣｔ）に対して倍率変化を生成する。３つのプレート複製のモックに対する平均倍率変化をプロットした。（図３Ｂ、図４Ｄ、図４Ｈ、図５Ｂ、図６Ｂ、図７Ｆ、図９Ｂ、図１１Ｂ、図１２Ｂ、図１２Ｄ、図１２Ｆ、図１３Ｃ、図１５Ｃおよび図１５Ｆ）。標的遺伝子発現を増加させるいくつかのＡＳＯが特定され、その標的イントロンでのスプライシングの増加が示唆された。標的イントロン（図３−１７）の保持を示す全トランスクリプトームデータと共に、これらの結果は、ＡＳＯが律速イントロンのスプライシング効率を改善し得ることを確認する。 Example 14: Improved splicing efficiency by ASO targeting of retained introns increases transcription levels To determine whether an increase in target gene expression can be achieved by improving intron splicing efficiency with ASO The method described in the specification was used. ARPE-19 cells, a human retinal epithelial cell line (American Type Culture Collection (ATCC), USA), or Huh-7, a human hepatoma cell line (NIBIOHN, Japan), or SK-N-AS That is, the human neuroblastoma cell line (ATCC) is mock-transfected or transfected with the targeted ASO described in FIGS. 3-17 and Tables 1 and 2. Cells were transfected with Lipofectamine RNAiMax transfection reagent (Thermo Fisher) according to the supplier's specifications. Briefly, ASO was seeded in 96 well tissue culture plates and combined with RNAiMax diluted in Opti-MEM. Cells were detached using trypsin, resuspended in complete medium, and approximately 25,000 cells were added to the ASO transfection mixture. Transfection experiments were performed in triplicate plate replications. The final ASO concentration was 80 nM. The medium was changed 6 hours after transfection according to the supplier's specifications, and the cells were supplemented with DNAse (Thermo Fisher) using Cells-to-Ct lysis reagent and harvested at 24 hours. CDNA was generated with Cells-to-Ct RT reagent (Thermo Fisher) according to the supplier's specifications. To quantify the amount of splicing at the intron of interest, quantitative PCR was performed using the Taqman assay (Thermo Fisher) with probes spanning the corresponding exons-exon junctions of the retained introns listed in Tables 1 and 2. Is executed. The Taqman assay is performed on a Quant Studio 7Flex Real-Time PCR system (Thermo Fisher) according to the supplier's specifications. Target gene assay values are normalized to RPL32 (deltaCt) and plate-matched mock transfection samples (delta-delta Ct) to produce fold changes for mock quantification (2 ^-(delta-delta Ct). The average magnification change versus mock for the three plate replicates was plotted (Figure 3B, Figure 4D, Figure 4H, Figure 5B, Figure 6B, Figure 7F, Figure 9B, Figure 11B, Figure 12B, Figure 12D, Figure 12F, Figure 13C). 15C and 15F) Several ASOs that increase target gene expression were identified, suggesting increased splicing at the target intron, all transcripts showing retention of the target intron (FIGS. 3-17) Together with tome data, these results show that ASO is the rate limiting intron splicing efficiency To make sure that it is possible to improve.

Claims

被験体の細胞により標的タンパク質または機能的ＲＮＡの発現を増加させることによって被験体の肝臓病を処置する方法であって、
ここで、前記細胞は、保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体）を有し、該ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体は、保持されたイントロン、５’スプライス部位に隣接しているエクソン、および３’スプライス部位に隣接しているエクソンを含み、
ここで、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体は、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードし、
前記方法は、
被験体の細胞を、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的なアンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）と接触させる工程を含み、それによって、保持されたイントロンは、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするＲＩＣｍＲＮＡ前駆体から構成的にスプライシングされ、それにより、被験体の細胞内で、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡのレベルを増加させ、標的タンパク質または機能的ＲＮＡの発現を増加させる、方法。 A method of treating liver disease in a subject by increasing the expression of a target protein or functional RNA by the subject's cells, comprising:
Wherein the cell has a retained intron-containing mRNA precursor (RIC mRNA precursor), the RIC mRNA precursor comprising a retained intron, an exon adjacent to the 5 ′ splice site, and 3 'Includes an exon adjacent to the splice site,
Where the RIC mRNA precursor encodes a target protein or functional RNA;
The method
Contacting the subject's cells with an antisense oligomer (ASO) complementary to the target portion of a RIC mRNA precursor encoding a target protein or functional RNA, whereby the retained intron is Or constitutively spliced from a RIC mRNA precursor encoding functional RNA, thereby increasing the level of mRNA encoding the target protein or functional RNA in the subject's cells, and the target protein or functional RNA A method of increasing the expression of

肝臓病は、グリシン脳症、ツェルヴェーガー症候群、ハイムラー症候群、アデノシンデアミナーゼ欠損症、異型ポルフィリン症、晩発性皮膚ポルフィリン症、急性間欠性ポルフィリン症、超長鎖アシルＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損、ピルビン酸カルボキシラーゼ欠損症、イソ吉草酸血症、高カイロミクロン血症、高トリグリセリド血症、ガラクトース血症、高コレステロール血症、若年発症成人型１型糖尿病、若年発症成人型２型糖尿病、若年発症成人型３型糖尿病、非インスリン依存型糖尿病、インスリン依存性糖尿病１、インスリン依存性糖尿病２０、若年発症成人型糖尿病を伴うファンコーニ尿細管症候群４、家族性高インスリン低血糖症３、永続的な新生児糖尿病、肝腺腫、ダウリング・デゴス病４、ＳＨＯＲＴ症候群、免疫不全症３６、無ガンマグロブリン血症７、脂質代謝欠失、肝臓炎症、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、血小板減少症、非アルコール性脂肪肝疾患、ウィルソン病、チロシン血症１型、アルギニノコハク酸リアーゼ欠損症、ヘモクロマトーシスＩ型、アルストレーム症候群、先天性の胆汁酸合成欠損症１、脂肪性肝炎、インシュリン抵抗性、耐糖能障害、ＩＩ型糖尿病、あるいは肝臓癌である、請求項１に記載の方法。 Liver disease is glycine encephalopathy, Zerweger syndrome, Heimler syndrome, adenosine deaminase deficiency, atypical porphyria, late cutaneous porphyria, acute intermittent porphyria, ultralong chain acyl CoA dehydrogenase deficiency, pyruvate carboxylase deficiency , Isovaleric acidemia, hyperchylomicronemia, hypertriglyceridemia, galactosemia, hypercholesterolemia, early-onset adult type 1 diabetes, early-onset adult type 2 diabetes, early-onset adult type 3 diabetes Non-insulin dependent diabetes mellitus, insulin dependent diabetes mellitus 1, insulin dependent diabetes mellitus 20, Fanconi tubular syndrome 4 with juvenile-onset adult type diabetes mellitus, familial hyperinsulin hypoglycemia 3, permanent neonatal diabetes mellitus, hepatic adenoma , Dowling-Degos disease 4, SHORT syndrome, immunodeficiency 6, agammaglobulinemia 7, lipid metabolism deficiency, liver inflammation, hemochromatosis type 2B, thrombocytopenia, nonalcoholic fatty liver disease, Wilson's disease, tyrosinemia type 1, argininosuccinate lyase deficiency, hemo The method according to claim 1, which is chromatosis type I, Alstrem syndrome, congenital bile acid synthesis deficiency 1, steatohepatitis, insulin resistance, impaired glucose tolerance, type II diabetes, or liver cancer.

保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体）を有している細胞によって、標的タンパク質の発現を増加させる方法であって、
該ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体は、保持されたイントロン、保持されたイントロンの５’スプライス部位に隣接しているエクソン、および保持されたイントロンの３’スプライス部位に隣接しているエクソンを含み、ここで、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体は標的タンパク質をコードし、
前記方法は、
細胞を、標的タンパク質をコードするＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分に相補的なアンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）と接触させる工程を含み、それによって、保持されたイントロンは、標的タンパク質をコードするＲＩＣｍＲＮＡ前駆体から構成的にスプライシングされ、それにより、細胞内で標的タンパク質をコードするｍＲＮＡのレベルを増加させ、標的タンパク質の発現を増加させ、
ここで、標的タンパク質は、アミノメチルトランスフェラーゼ、アデノシンデアミナーゼ、プロトポルフィリノーゲン・オキシダーゼ、ウロポルフィリノーゲンデカルボキシラーゼ、ヒドロキシメチルビランシンターゼ、超長鎖アシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、ピルビン酸カルボキシラーゼイソバレリルＣｏＡ脱水素酵素、アポリポタンパク質Ａ−Ｖ、ガラクトース−１−リン酸ウリジリルトランスフェラーゼ、低密度リポタンパク質受容体アダプタータンパク質１、肝細胞核因子４−アルファ、グルコキナーゼ、肝性核因子−１−アルファアルブミン近位因子、Ｏグルコシルトランスフェラーゼ１、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ調節サブユニット１、Ｔｒｉｂｂｌｅｓ−１、形質転換増殖因子ベータ−１、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、トロンボポイエチン、パタチン様ホスホリパーゼドメイン含有タンパク質３、銅輸送ＡＴＰアーゼ２、フマリルアセトアセターゼ、アルギニノコハク酸リアーゼ、遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質、アルストレーム症候群タンパク質１，３−β−ヒドロキシステロイド脱水素酵素７型、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体デルタ、インターロイキン６、セラミド合成酵素２、あるいは核受容体コアクチベーター５である、方法。 A method of increasing expression of a target protein by a cell having a retained intron-containing mRNA precursor (RIC mRNA precursor) comprising:
The RIC mRNA precursor comprises a retained intron, an exon adjacent to the retained intron 5 ′ splice site, and an exon adjacent to the retained intron 3 ′ splice site, wherein: The RIC mRNA precursor encodes the target protein,
The method
Contacting the cell with an antisense oligomer (ASO) complementary to the target portion of the RIC mRNA precursor encoding the target protein, whereby the retained intron is the RIC mRNA precursor encoding the target protein. Constitutively splicing, thereby increasing the level of mRNA encoding the target protein in the cell, increasing the expression of the target protein,
Here, the target proteins are aminomethyltransferase, adenosine deaminase, protoporphyrinogen oxidase, uroporphyrinogen decarboxylase, hydroxymethyl bilan synthase, ultralong chain acyl-CoA dehydrogenase, pyruvate carboxylase isovaleryl CoA dehydrogenation Enzyme, apolipoprotein AV, galactose-1-phosphate uridylyltransferase, low density lipoprotein receptor adapter protein 1, hepatocyte nuclear factor 4-alpha, glucokinase, hepatic nuclear factor-1-alpha albumin proximal Factor, O-glucosyltransferase 1, phosphatidylinositol 3-kinase regulatory subunit 1, Tribles-1, transforming growth factor beta-1, hemochromatosis Type 2B, thrombopoietin, patatin-like phospholipase domain-containing protein 3, copper transport ATPase 2, fumaryl acetoacetase, argininosuccinate lyase, hereditary hemochromatosis protein, alstrem syndrome protein 1,3-β-hydroxysteroid A method, which is dehydrogenase type 7, peroxisome proliferator activated receptor delta, interleukin 6, ceramide synthase 2, or nuclear receptor coactivator 5.

標的タンパク質は、アミノメチルトランスフェラーゼ、アデノシンデアミナーゼ、プロトポルフィリノーゲン・オキシダーゼ、ウロポルフィリノーゲンデカルボキシラーゼ、ヒドロキシメチルビランシンターゼ、超長鎖アシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、ピルビン酸カルボキシラーゼイソバレリルＣｏＡ脱水素酵素、アポリポタンパク質Ａ−Ｖ、ガラクトース−１−リン酸ウリジリルトランスフェラーゼ、低密度リポタンパク質受容体アダプタータンパク質１、肝細胞核因子４−アルファ、グルコキナーゼ、肝性核因子−１−アルファアルブミン近位因子、タンパク質Ｏグルコシルトランスフェラーゼ１、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ調節サブユニット１、Ｔｒｉｂｂｌｅｓ−１、形質転換増殖因子ベータ−１、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、トロンボポイエチン、パタチン様ホスホリパーゼドメイン含有タンパク質３、銅輸送ＡＴＰアーゼ２、フマリルアセトアセターゼ、アルギニノコハク酸リアーゼ、遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質、アルストレーム症候群タンパク質１，３−β−ヒドロキシステロイド脱水素酵素７型、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体デルタ、インターロイキン６、セラミド合成酵素２、あるいは核受容体コアクチベーター５である、請求項１又は２に記載の方法。 Target proteins include aminomethyltransferase, adenosine deaminase, protoporphyrinogen oxidase, uroporphyrinogen decarboxylase, hydroxymethyl bilan synthase, ultralong chain acyl-CoA dehydrogenase, pyruvate carboxylase isovaleryl CoA dehydrogenase, apolipo Protein AV, galactose-1-phosphate uridylyltransferase, low density lipoprotein receptor adapter protein 1, hepatocyte nuclear factor 4-alpha, glucokinase, hepatic nuclear factor-1-alpha albumin proximal factor, protein O-glucosyltransferase 1, phosphatidylinositol 3-kinase regulatory subunit 1, Tribles-1, transforming growth factor beta-1, hemochromatography Type 2B, thrombopoietin, patatin-like phospholipase domain-containing protein 3, copper transport ATPase 2, fumaryl acetoacetase, argininosuccinate lyase, hereditary hemochromatosis protein, arström syndrome protein 1,3-β-hydroxy The method according to claim 1 or 2, which is steroid dehydrogenase type 7, peroxisome proliferator activated receptor delta, interleukin 6, ceramide synthase 2, or nuclear receptor coactivator 5.

標的タンパク質または機能的ＲＮＡは、被験体において量あるいは活性が不足している標的タンパク質あるいは機能的ＲＮＡを機能的に増大させるか、これに取って代わる、補償タンパク質あるいは補償機能的ＲＮＡである、請求項１又は２に記載の方法。 The target protein or functional RNA is a compensation protein or functional compensation RNA that functionally increases or replaces a target protein or functional RNA that is deficient in amount or activity in a subject. Item 3. The method according to Item 1 or 2.

細胞は、標的タンパク質の量または活性の不足によって引き起こされた疾病を有する被験体内にあるか、または被験体に由来する、請求項３に記載の方法。 4. The method of claim 3, wherein the cell is in or derived from a subject having a disease caused by a lack of target protein amount or activity.

標的タンパク質の量の不足は、標的タンパク質のハプロ不全によって引き起こされ、ここで被験体は、機能的な標的タンパク質をコードする第１の対立遺伝子、標的タンパク質が生成されない第２の対立遺伝子、または非機能的な標的タンパク質をコードする第２の対立遺伝子を有し、アンチセンスオリゴマーは、第１の対立遺伝子から転写されたＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分に結合する、請求項１乃至６の何れか１つに記載の方法。 The deficiency in the amount of target protein is caused by haploinsufficiency of the target protein, where the subject has a first allele that encodes a functional target protein, a second allele that does not produce a target protein, or non- 7. Any of claims 1-6, having a second allele encoding a functional target protein, wherein the antisense oligomer binds to a target portion of a RIC mRNA precursor transcribed from the first allele. The method according to one.

被験体は、標的タンパク質の量または機能の不足に起因する障害により引き起こされた疾病を抱えており、ここで、被験体は、
（ａ）
（ｉ）標的タンパク質が野生型対立遺伝子からの生成と比較して、減少したレベルで生成され、
（ｉｉ）標的タンパク質が同等の野性型タンパク質と比較して機能が低下した形態で生成され、あるいは、
（ｉｉｉ）標的タンパク質が生成されない
第１の変異対立遺伝子と、
（ｂ）
（ｉ）標的タンパク質が野生型対立遺伝子からの生成と比較して、減少したレベルで生成され、
（ｉｉ）標的タンパク質が同等の野性型タンパク質と比較して、機能が低下した形態で生成され、あるいは、
（ｉｉｉ）標的タンパク質が生成されない
第２の変異対立遺伝子とを有し、
ここで、被験体が第１の変異対立遺伝子（ａ）（ｉｉｉ）を有するとき、第２の変異対立遺伝子は（ｂ）（ｉ）あるいは（ｂ）（ｉｉ）であり、ここで、被験体が第２の変異対立遺伝子（ｂ）（ｉｉｉ）を有するとき、第１の変異対立遺伝子は（ａ）（ｉ）あるいは（ａ）（ｉｉ）であり、ここで、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体は、（ａ）（ｉ）あるいは（ａ）（ｉｉ）である第１の変異対立遺伝子、および／または、（ｂ）（ｉ）あるいは（ｂ）（ｉｉ）である第２の変異対立遺伝子から転写される、請求項１乃至６の何れか１つに記載の方法。 The subject has a disease caused by a disorder resulting from a deficiency in the amount or function of the target protein, where the subject
(A)
(I) the target protein is produced at a reduced level compared to production from the wild type allele;
(Ii) the target protein is produced in a form with reduced function compared to an equivalent wild type protein, or
(Iii) a first mutant allele that does not produce a target protein;
(B)
(I) the target protein is produced at a reduced level compared to production from the wild type allele;
(Ii) the target protein is produced in a reduced function compared to the equivalent wild type protein, or
(Iii) having a second mutant allele that does not produce a target protein;
Here, when the subject has the first mutant allele (a) (iii), the second mutant allele is (b) (i) or (b) (ii), where the subject Has a second mutant allele (b) (iii), the first mutant allele is (a) (i) or (a) (ii), where the RIC mRNA precursor is ( a) transcribed from the first mutant allele that is (i) or (a) (ii) and / or from the second mutant allele that is (b) (i) or (b) (ii) The method according to any one of claims 1 to 6.

標的タンパク質は、同等の野性型タンパク質と比較して、機能が低下した形態で生成される、請求項８に記載の方法。 9. The method of claim 8, wherein the target protein is produced in a reduced function compared to an equivalent wild type protein.

標的タンパク質は、同等の野性型タンパク質と比較して、十分に機能的な形態で生成される、請求項８に記載の方法。 9. The method of claim 8, wherein the target protein is produced in a fully functional form compared to an equivalent wild type protein.

ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対して＋６〜保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して−１６までの領域内の保持されたイントロンにある、請求項１乃至１０の何れか１つに記載の方法。 The target portion of the RIC mRNA precursor is in a retained intron in the region from +6 to the retained intron 5 'splice site to -16 to the retained intron 3' splice site. Item 11. The method according to any one of Items 1 to 10.

ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対して＋６９〜保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して−７９までの領域内の保持されたイントロンにある、請求項１乃至１０の何れか１つに記載の方法。 The target portion of the RIC mRNA precursor is in a retained intron within the region from +69 to the retained intron 5 'splice site to -79 to the retained intron 3' splice site. Item 11. The method according to any one of Items 1 to 10.

ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、
（ａ）保持されたイントロンの５’スプライス部位に対する、＋６から＋１００の領域；あるいは
（ｂ）保持されたイントロンの３’スプライス部位に対する−１６から−１００の領域
の内部の保持されたイントロンにある、請求項１乃至１０の何れか１つに記載の方法。 The target portion of the RIC mRNA precursor is
(A) in the region of +6 to +100 to the 5 ′ splice site of the retained intron; or (b) in the retained intron within the region of −16 to −100 to the 3 ′ splice site of the retained intron. 11. A method according to any one of claims 1 to 10.

ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、
（ａ）保持されたイントロンの５’スプライス部位に隣接するエクソン中の＋２ｅ〜−４ｅの領域；あるいは
（ｂ）保持されたイントロンの３’スプライス部位に隣接するエクソン中の＋２ｅ〜−４ｅの領域
の内部にある、請求項１乃至１０の何れか１つに記載の方法。 The target portion of the RIC mRNA precursor is
(A) a region from + 2e to −4e in the exon adjacent to the 5 ′ splice site of the retained intron; or (b) a region from + 2e to −4e in the exon adjacent to the 3 ′ splice site of the retained intron. 11. The method according to any one of claims 1 to 10, wherein the method is in the interior.

アンチセンスオリゴマーは、少なくとも１つの保持されたイントロンの５’スプライス部位の約５００ヌクレオチド下流から、少なくとも１つの保持されたイントロンの３’スプライス部位の約５００ヌクレオチド上流までの領域内にあるＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の一部を標的とする、請求項１乃至１０の何れか１つに記載の方法。 Antisense oligomers are precursors of RIC mRNA that are in the region from about 500 nucleotides downstream of the 5 'splice site of at least one retained intron to about 500 nucleotides upstream of the 3' splice site of at least one retained intron. 11. A method according to any one of the preceding claims, wherein the method targets a body part.

アンチセンスオリゴマーは、少なくとも１つの保持されたイントロンの５’スプライス部位の約１００ヌクレオチド下流から、少なくとも１つの保持されたイントロンの３’スプライス部位の約１００ヌクレオチド上流までの領域内にあるＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の一部を標的とする、請求項１乃至１０の何れか１つに記載の方法。 Antisense oligomers are precursors of RIC mRNA that are in the region from about 100 nucleotides downstream of the 5 'splice site of at least one retained intron to about 100 nucleotides upstream of the 3' splice site of at least one retained intron. 11. A method according to any one of the preceding claims, wherein the method targets a body part.

標的タンパク質は、（ａ）ＡＭＴ、（ｂ）ＡＤＡ、（ｃ）ＰＰＯＸ、（ｄ）ＵＲＯＤ、（ｅ）ＨＭＢＳ、（ｆ）ＡＣＡＤＶＬ、（ｇ）ＰＣ、（ｈ）ＩＶＤ、（ｉ）ＡＰＯＡ５、（ｊ）ＧＡＬＴ、（ｋ）ＬＤＬＲＡＰ１、（ｌ）ＨＮＦ４Ａ、（ｍ）ＧＣＫ、（ｎ）ＰＯＧＬＵＴ１、（ｏ）ＰＩＫ３Ｒ１、（ｐ）ＨＮＦ１Ａ、（ｑ）ＴＲＩＢ１、（ｒ）ＴＧＦＢ１、（ｓ）ＨＡＭＰ、（ｔ）ＴＨＰＯ、（ｕ）ＰＮＰＬＡ３、（ｖ）ＡＴＰ７Ｂ、（ｗ）ＦＡＨ、（ｘ）ＡＳＬ、（ｙ）ＨＦＥ、（ｚ）ＡＬＭＳ１、（ａａ）ＰＰＡＲＤ、（ｂｂ）ＩＬ６、（ｃｃ）ＨＳＤ３Ｂ７、（ｄｄ）ＣＥＲＳ２、または（ｅｅ）ＮＣＯＡ５である、請求項１乃至１６の何れか１つに記載の方法。 Target proteins are (a) AMT, (b) ADA, (c) PPOX, (d) UROD, (e) HMBS, (f) ACADVL, (g) PC, (h) IVD, (i) APOA5, ( j) GALT, (k) LDLRAP1, (l) HNF4A, (m) GCK, (n) POGLUT1, (o) PIK3R1, (p) HNF1A, (q) TRIB1, (r) TGFB1, (s) HAMP, ( t) THPO, (u) PNPLA3, (v) ATP7B, (w) FAH, (x) ASL, (y) HFE, (z) ALMS1, (aa) PPARD, (bb) IL6, (cc) HSD3B7, ( 17. A method according to any one of the preceding claims, which is dd) CERS2 or (ee) NCOA5.

ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ２８１３−３９１０のいずれか１つ、（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ６５８４７−６７２８１のいずれか１つ、（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ１９００−２５９９のいずれか１つ、（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ９２６−１７７９のいずれか１つ、（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ３７４８３−３８０４４のいずれか１つ、（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ４９４２３−４９９６９のいずれか１つ、（ｇ）ＳＥＱＩＤＮＯ３５９００−３６２９２のいずれか１つ、（ｈ）ＳＥＱＩＤＮＯ４４６２６−４７０１３のいずれか１つ、（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ３６２９３−３７４８２のいずれか１つ、（ｊ）ＳＥＱＩＤＮＯ３４５２１−３５８９９のいずれか１つ、（ｋ）ＳＥＱＩＤＮＯ１３１−９２５のいずれか１つ、（ｌ）ＳＥＱＩＤＮＯ５８９５８−６５８４６、あるいは６７５３２−７７３７４のいずれか１つ、（ｍ）ＳＥＱＩＤＮＯ２５０５８−３０９７６のいずれか１つ、（ｎ）ＳＥＱＩＤＮＯ３９１１−５２６４のいずれか１つ、（ｏ）ＳＥＱＩＤＮＯ１４４７３−１４８７６のいずれか１つ、（ｐ）ＳＥＱＩＤＮＯ３８０４５−４２１０５のいずれか１つ、（ｑ）ＳＥＱＩＤＮＯ３２４６９−３４５２０のいずれか１つ、（ｒ）ＳＥＱＩＤＮＯ５１９７２−５２０２５のいずれか１つ、（ｓ）ＳＥＱＩＤＮＯ５１６７０−５１９７１のいずれか１つ、（ｔ）ＳＥＱＩＤＮＯ５２６５−１４４７２のいずれか１つ、（ｕ）ＳＥＱＩＤＮＯ７７３７５−７８３４８のいずれか１つ、（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ４２１０６−４４３７０のいずれか１つ、（ｗ）ＳＥＱＩＤＮＯ４４３７１−４４６２５のいずれか１つ、（ｘ）ＳＥＱＩＤＮＯ３０９７７−３２４６８のいずれか１つ、（ｙ）ＳＥＱＩＤＮＯ２１８１０−２３４８５のいずれか１つ、（ｚ）ＳＥＱＩＤＮＯ２６００−２８１２のいずれか１つ、（ａａ）ＳＥＱＩＤＮＯ１４８７７−２１８０９のいずれか１つ、（ｂｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ２３４８６−２５０５７のいずれか１つ、（ｃｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ４７０１４−４９４２２のいずれか１つ、（ｄｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ１７８０−１８９９のいずれか１つ、またはＳＥＱＩＤＮＯ６７２８２−６７５３１のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または１００％相補的な配列を含む、請求項１７に記載の方法。 The target portion of the RIC mRNA precursor is any one of (a) SEQ ID NO 2813-3910, (b) any one of SEQ ID NO 65847-67281, (c) any of SEQ ID NO 1900-2599 1, (d) any one of SEQ ID NOs 926-1779, (e) any one of SEQ ID NOs 37483-38044, (f) any one of SEQ ID NOs 49423-49969, (g ) Any one of SEQ ID NO 35900-36292, (h) any one of SEQ ID NO 44626-47013, (i) any one of SEQ ID NO 36293-37482, (j) SEQ ID NO 34521 -35899, (k) SEQ ID NO 1 Any one of 1-925, (l) any one of SEQ ID NO 58958-65846, or 67532-77374, (m) any one of SEQ ID NO 25058-30976, (n) SEQ ID NO Any one of 3911-5264, (o) any one of SEQ ID NO 14473-14476, (p) any one of SEQ ID NO 384045-42105, (q) any of SEQ ID NO 32469-34520 Any one of (r) SEQ ID NO 51972-52025, (s) any one of SEQ ID NO 51670-5197, (t) any one of SEQ ID NO 5265-14472, ( u) Any of SEQ ID NO 77775-78348 1, (v) any one of SEQ ID NO 42106-44370, (w) any one of SEQ ID NO 44371-44625, (x) any one of SEQ ID NO 30977-32468, (y ) Any one of SEQ ID NO 21810-23485, (z) any one of SEQ ID NO 2600-2812, (aa) any one of SEQ ID NO 14877-21809, (bb) SEQ ID NO 23486 Any one of -25057, (cc) any one of SEQ ID NOs 47014-49422, (dd) any one of SEQ ID NOs 1780-1899, or any one of SEQ ID NO 67282-67531 At least about 80%, 85%, 90% 18. The method of claim 17, comprising a sequence that is%, 95%, 97%, or 100% complementary.

ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４８３、７８４６５、または７８４３４；（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３８５、７８４８２、または７８３６９；（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４６１、７８４７３、７８４８０、または７８４２１；（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４１０、７８３８６、７８４１１、７８４６０、または７８４６３；（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３５５、７８４６７、または７８４５４；（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３６７、７８３７６、７８４４０、７８４４８、７８４７７、７８４８５、７８４９６、７８４２２、または７８４１２；（ｇ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４９５；（ｈ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４６４、７８３７５、または７８３８０；（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４０７、７８４９９、７８４２０、７８３７２、または７８３９７；（ｊ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４８９、７８４１６、７８４７６、７８３５２、７８４３５、７８４９３、７８４２３、７８４３７、または７８４４９；（ｋ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３５４、または７８４５９；（ｌ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４４１、７８３９２、７８４５６、７８４２８、７８４９１、７８５０１、７８３６０、７８４２９、７８３５８、７８３６４、７８４７５、７８３９１、７８４７９、７８４０１、７８３７３、または７８４５０；（ｍ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４４５、７８４８１、７８３７９、７８４３１、７８４６９、７８４０８、７８３７７、７８４１７、７８３８７、７８４５５、７８４８４、または７８３７０；（ｎ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３６８、７８３５０、７８４３２、７８４３９、または７８３８９；（ｏ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３９０、またはＳＥＱＩＤＮＯ７８４１８；（ｐ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４６２、７８４６８、７８４５３、７８３６１、７８３６３、７８４３３、７８４３８、７８４３０、７８４８８、７８４０５、７８４９２、または７８４２７；（ｑ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４８７、７８４８６、または７８４７４；（ｒ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４５８；（ｓ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４９７、または７８４２６；（ｔ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４２５、７８４００、７８３９３、７８３５１、７８３８１、７８３６６、７８４５７、７８４４３、７８３６２、または７８４４６；（ｕ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３８８、７８４０２、７８４７１、または７８３５６；（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４２７、７８３８３、７８４４４、または７８３９４；（ｗ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３８２；（ｘ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４９４、７８４０４、７８３７１、７８３６５、または７８３５３；（ｙ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４１９、７８３８４、７８５００、７８４２４、または７８４６６；（ｚ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３９９；（ａａ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４１４、７８４７８、７８４７２、７８３５９、７８３９５、７８３５７、７８３７４、または７８４９０；（ｂｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４３６、７８４１３、７８４１５、７８３９８、または７８４０３；（ｃｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３４９、７８４７０、７８４９８、７８４０６、７８４４２、７８４５１、７８３９６、７８４０９、または７８３７８；（ｄｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４４７；またはＳＥＱＩＤＮＯ７８４５２の少なくとも８つの隣接する核酸を含む領域に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または１００％の配列同一性を備えた配列を含む、請求項１７又は１８に記載の方法。 The target portion of the RIC mRNA precursor is (a) SEQ ID NO 78484, 78465, or 78434; (b) SEQ ID NO 78385, 78482, or 78369; (c) SEQ ID NO 78461, 78473, 78480, or 78421; (D) SEQ ID NO 78410, 78386, 78411, 78460, or 78463; (e) SEQ ID NO 78355, 78467, or 78454; (f) SEQ ID NO 78367, 78376, 78440, 78448, 78477, 78485, 78896, 78422, or 78412; (g) SEQ ID NO 78495; (h) SEQ ID NO 78464, 78375, or 78380; (i) SEQ ID NO. 8407, 78499, 78420, 78372, or 78397; (j) SEQ ID NO 78489, 78416, 78476, 78352, 78435, 78493, 78423, 78437, or 78449; (k) SEQ ID NO 78354, or 78459; (l) SEQ ID NO 78441, 78392, 78456, 78428, 78491, 78501, 78360, 78429, 78358, 78364, 78475, 78391, 78479, 78401, 78373, or 78450; (m) SEQ ID NO 78445, 78481, 78379, 78431 78469, 78408, 78377, 78417, 78387, 78455, 78484, or 78370; (n) SEQ D NO 78368, 78350, 78432, 78439, or 78389; (o) SEQ ID NO 78390, or SEQ ID NO 78418; (p) SEQ ID NO 78462, 78468, 78453, 78361, 78363, 78433, 78438, 78430, 78488 , 78405, 78492, or 78427; (q) SEQ ID NO 78487, 78486, or 78474; (r) SEQ ID NO 78458; (s) SEQ ID NO 78497, or 78426; (t) SEQ ID NO 78425, 78400, 78393, 78351, 78381, 78366, 78457, 78443, 78362, or 78446; (u) SEQ ID NO 78388, 7 402, 78471, or 78356; (v) SEQ ID NO 78427, 78383, 78444, or 78394; (w) SEQ ID NO 78382; (x) SEQ ID NO 78494, 78404, 78371, 78365, or 78353; (y) SEQ ID NO 78419, 78384, 78500, 78424, or 78466; (z) SEQ ID NO 78399; (aa) SEQ ID NO 78414, 78478, 78472, 78359, 78395, 78357, 78374, or 78490; (bb) SEQ ID NO 78436, 78413, 78415, 78398, or 78403; (cc) SEQ ID NO 78349, 78470, 78498, 78406, 7 442, 78451, 78396, 78409, or 78378; (dd) at least 80%, 85%, 90%, 95% to a region containing at least 8 contiguous nucleic acids of SEQ ID NO 78447; or SEQ ID NO 78452 19. A method according to claim 17 or 18, comprising a sequence with 97%, or 100% sequence identity.

ＡＳＯは、（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ２８１３−３９１０のいずれか１つ、（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ６５８４７−６７２８１のいずれか１つ、（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ１９００−２５９９のいずれか１つ、（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ９２６−１７７９のいずれか１つ、（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ３７４８３−３８０４４のいずれか１つ、（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ４９４２３−４９９６９のいずれか１つ、（ｇ）ＳＥＱＩＤＮＯ３５９００−３６２９２のいずれか１つ、（ｈ）ＳＥＱＩＤＮＯ４４６２６−４７０１３のいずれか１つ、（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ３６２９３−３７４８２のいずれか１つ、（ｊ）ＳＥＱＩＤＮＯ３４５２１−３５８９９のいずれか１つ、（ｋ）ＳＥＱＩＤＮＯ１３１−９２５のいずれか１つ、（ｌ）ＳＥＱＩＤＮＯ５８９５８−６５８４６、あるいは６７５３２−７７３７４のいずれか１つ、（ｍ）ＳＥＱＩＤＮＯ２５０５８−３０９７６のいずれか１つ、（ｎ）ＳＥＱＩＤＮＯ３９１１−５２６４のいずれか１つ、（ｏ）ＳＥＱＩＤＮＯ１４４７３−１４８７６のいずれか１つ、（ｐ）ＳＥＱＩＤＮＯ３８０４５−４２１０５のいずれか１つ、（ｑ）ＳＥＱＩＤＮＯ３２４６９−３４５２０のいずれか１つ、（ｒ）ＳＥＱＩＤＮＯ５１９７２−５２０２５のいずれか１つ、（ｓ）ＳＥＱＩＤＮＯ５１６７０−５１９７１のいずれか１つ、（ｔ）ＳＥＱＩＤＮＯ５２６５−１４４７２のいずれか１つ、（ｕ）ＳＥＱＩＤＮＯ７７３７５−７８３４８のいずれか１つ、（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ４２１０６−４４３７０のいずれか１つ、（ｗ）ＳＥＱＩＤＮＯ４４３７１−４４６２５のいずれか１つ、（ｘ）ＳＥＱＩＤＮＯ３０９７７−３２４６８のいずれか１つ、（ｙ）ＳＥＱＩＤＮＯ２１８１０−２３４８５のいずれか１つ、（ｚ）ＳＥＱＩＤＮＯ２６００−２８１２のいずれか１つ、（ａａ）ＳＥＱＩＤＮＯ１４８７７−２１８０９のいずれか１つ、（ｂｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ２３４８６−２５０５７のいずれか１つ、（ｃｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ４７０１４−４９４２２のいずれか１つ、（ｄｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ１７８０−１８９９のいずれか１つ、またはＳＥＱＩＤＮＯ６７２８２−６７５３１のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または１００％の配列同一性を備えた配列を含む、請求項１７乃至１９の何れか１つに記載の方法。 The ASO is (a) any one of SEQ ID NO 2813-3910, (b) any one of SEQ ID NO 65847-67281, (c) any one of SEQ ID NO 1900-2599, (d) Any one of SEQ ID NO 926-1779, (e) any one of SEQ ID NO 37483-38044, (f) any one of SEQ ID NO 49423-49969, (g) SEQ ID NO 35900- Any one of 36292, (h) any one of SEQ ID NO 44626-47013, (i) any one of SEQ ID NO 36293-37482, (j) any one of SEQ ID NO 34521-35899 (K) any one of SEQ ID NO 131-925 , (L) any one of SEQ ID NOs 58958-65846 or 67532-77374, (m) any one of SEQ ID NOs 25058-30976, (n) any one of SEQ ID NOs 3911-5264 (O) any one of SEQ ID NOs 14473-14476, (p) any one of SEQ ID NOs 38045-42105, (q) any one of SEQ ID NOs 32469-34520, (r) SEQ Any one of ID NO 51972-52025, (s) any one of SEQ ID NO 51670-51971, (t) any one of SEQ ID NO 5265-14472, (u) SEQ ID NO 77375-78348 (V) SEQ ID Any one of NO 42106-44370, (w) any one of SEQ ID NO 44371-44625, (x) any one of SEQ ID NO 30977-32468, (y) SEQ ID NO 21810-23485 Any one, (z) any one of SEQ ID NOs 2600-2812, (aa) any one of SEQ ID NOs 14877-21809, (bb) any one of SEQ ID NOs 23486-25057, At least about 80% with respect to any one of (cc) SEQ ID NO 47014-49422, (dd) any one of SEQ ID NO 1780-1899, or SEQ ID NO 67282-67531 85%, 90%, 95%, 97%, and Comprising a sequence having 100% sequence identity, The method according to any one of claims 17 to 19.

ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体は、（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ４１−４４、（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ２８１２１−１２４、（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ３７または３８、（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ３３または３４、（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ９２−９５、（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ１０９−１１２、（ｇ）ＳＥＱＩＤＮＯ８７−８９、（ｈ）ＳＥＱＩＤＮＯ１０４または１０５、（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ９０または９１、（ｊ）ＳＥＱＩＤＮＯ８５または８６、（ｋ）ＳＥＱＩＤＮＯ３２、（ｌ）ＳＥＱＩＤＮＯ１１５−１２０、あるいは１２６−１２９、（ｍ）ＳＥＱＩＤＮＯ７６−７８、（ｎ）ＳＥＱＩＤＮＯ４５または４６、（ｏ）ＳＥＱＩＤＮＯ５７−６０、（ｐ）ＳＥＱＩＤＮＯ９６または９７、（ｑ）ＳＥＱＩＤＮＯ８３または８４、（ｒ）ＳＥＱＩＤＮＯ１１４、（ｓ）ＳＥＱＩＤＮＯ２２３、（ｔ）ＳＥＱＩＤＮＯ４７−５６、（ｕ）ＳＥＱＩＤＮＯ１３０、（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ９８−１０２、（ｗ）ＳＥＱＩＤＮＯ１０３、（ｘ）ＳＥＱＩＤＮＯ８０−８２、（ｙ）ＳＥＱＩＤＮＯ６６−７３、（ｚ）ＳＥＱＩＤＮＯ３９、（ａａ）ＳＥＱＩＤＮＯ６１−６５、（ｂｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ７４または７５、（ｃｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ１０６−１０８、（ｄｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ３５または３６、あるいはＳＥＱＩＤＮＯ１２５のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を備えた配列を含む、請求項１７乃至２０の何れか１つに記載の方法。 RIC mRNA precursors are (a) SEQ ID NO 41-44, (b) SEQ ID NO 28 121-124, (c) SEQ ID NO 37 or 38, (d) SEQ ID NO 33 or 34, (e) SEQ ID. NO 92-95, (f) SEQ ID NO 109-112, (g) SEQ ID NO 87-89, (h) SEQ ID NO 104 or 105, (i) SEQ ID NO 90 or 91, (j) SEQ ID NO 85 or 86, (k) SEQ ID NO 32, (l) SEQ ID NO 115-120, or 126-129, (m) SEQ ID NO 76-78, (n) SEQ ID NO 45 or 46, (o) ) SEQ ID NO 57-60, (p) SEQ ID NO 96 or 97, q) SEQ ID NO 83 or 84, (r) SEQ ID NO 114, (s) SEQ ID NO 223, (t) SEQ ID NO 47-56, (u) SEQ ID NO 130, (v) SEQ ID NO 98 -102, (w) SEQ ID NO 103, (x) SEQ ID NO 80-82, (y) SEQ ID NO 66-73, (z) SEQ ID NO 39, (aa) SEQ ID NO 61-65, bb) at least about 80%, 85% for any one of SEQ ID NO 74 or 75, (cc) SEQ ID NO 106-108, (dd) SEQ ID NO 35 or 36, or SEQ ID NO 125 , 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100% sequence identity Comprising a sequence having A method according to any one of claims 17 to 20.

ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体は、（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ６、（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ２８、（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ４、（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ２、（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ１９、（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ２５、（ｇ）ＳＥＱＩＤＮＯ１７、（ｈ）ＳＥＱＩＤＮＯ２３、（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ１８、（ｊ）ＳＥＱＩＤＮＯ１６、（ｋ）ＳＥＱＩＤＮＯ１、（ｌ）ＳＥＱＩＤＮＯ３０、（ｍ）ＳＥＱＩＤＮＯ１３、（ｎ）ＳＥＱＩＤＮＯ７、（ｏ）ＳＥＱＩＤＮＯ９、（ｐ）ＳＥＱＩＤＮＯ２０、（ｑ）ＳＥＱＩＤＮＯ１５、（ｒ）ＳＥＱＩＤＮＯ２７、（ｓ）ＳＥＱＩＤＮＯ２６、（ｔ）ＳＥＱＩＤＮＯ８、（ｕ）ＳＥＱＩＤＮＯ３１、（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ２１、（ｗ）ＳＥＱＩＤＮＯ２２、（ｘ）ＳＥＱＩＤＮＯ１４、（ｙ）ＳＥＱＩＤＮＯ１１、（ｚ）ＳＥＱＩＤＮＯ５、（ａａ）ＳＥＱＩＤＮＯ１０、（ｂｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ１２、（ｃｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ２４、（ｄｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ３、または（ｅｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ２９に対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を備えた遺伝子配列によってコードされる、請求項１７乃至２１の何れか１つに記載の方法。 RIC mRNA precursors are: (a) SEQ ID NO 6, (b) SEQ ID NO 28, (c) SEQ ID NO 4, (d) SEQ ID NO 2, (e) SEQ ID NO 19, (f) SEQ ID NO 25, (g) SEQ ID NO 17, (h) SEQ ID NO 23, (i) SEQ ID NO 18, (j) SEQ ID NO 16, (k) SEQ ID NO 1, (l) SEQ ID NO 30, (m) SEQ ID NO 13, (n) SEQ ID NO 7, (o) SEQ ID NO 9, (p) SEQ ID NO 20, (q) SEQ ID NO 15, (r) SEQ ID NO 27, (S) SEQ ID NO 26, (t) SEQ ID NO 8, (u) SEQ ID NO 31, (v) SEQ ID NO 1, (w) SEQ ID NO 22, (x) SEQ ID NO 14, (y) SEQ ID NO 11, (z) SEQ ID NO 5, (aa) SEQ ID NO 10, (bb) SEQ ID NO 12, At least about 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% relative to (cc) SEQ ID NO 24, (dd) SEQ ID NO 3, or (ee) SEQ ID NO 29 22. A method according to any one of claims 17 to 21, encoded by a gene sequence with 99%, or 100% sequence identity.

アンチセンスオリゴマーは、機能的ＲＮＡまたは標的タンパク質をコードする遺伝子から転写されたｍＲＮＡ前駆体の選択的スプライシングを調節することにより、標的タンパク質または機能的ＲＮＡの量を増加させない、請求項１乃至２２の何れか１つに記載の方法。 The antisense oligomer does not increase the amount of target protein or functional RNA by modulating alternative splicing of mRNA precursors transcribed from a gene encoding functional RNA or target protein. The method according to any one of the above.

アンチセンスオリゴマーは、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードする遺伝子の突然変異に起因する異常なスプライシングを調節することにより、標的タンパク質または機能的ＲＮＡの量を増加させない、請求項１乃至２３の何れか１つに記載の方法。 The antisense oligomer does not increase the amount of target protein or functional RNA by regulating aberrant splicing due to mutation of a gene encoding the target protein or functional RNA. The method according to one.

ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体は、全長のｍＲＮＡ前駆体の部分的なスプライシング、または野生型のｍＲＮＡ前駆体の部分的なスプライシングによって生成された、請求項１乃至２４の何れか１つに記載の方法。 25. A method according to any one of claims 1 to 24, wherein the RIC mRNA precursor was generated by partial splicing of the full-length mRNA precursor or by partial splicing of the wild-type mRNA precursor.

標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡは、全長の成熟ｍＲＮＡ、あるいは野生型の成熟ｍＲＮＡである、請求項１乃至２５の何れか１つに記載の方法。 The method according to any one of claims 1 to 25, wherein the mRNA encoding the target protein or functional RNA is a full-length mature mRNA or a wild-type mature mRNA.

生成された標的タンパク質は全長のタンパク質あるいは野生型のタンパク質である、請求項１乃至２６の何れか１つに記載の方法。 The method according to any one of claims 1 to 26, wherein the generated target protein is a full-length protein or a wild-type protein.

アンチセンスオリゴマーと接触させた細胞において生成された標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡの総量は、対照細胞において生成された標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡの総量と比較して、約１．１〜約１０倍、約１．５〜約１０倍、約２〜約１０倍、約３〜約１０倍、約４〜約１０倍、約１．１〜約５倍、約１．１〜約６倍、約１．１〜約７倍、約１．１〜約８倍、約１．１〜約９倍、約２〜約５倍、約２〜約６倍、約２〜約７倍、約２〜約８倍、約２〜約９倍、約３〜約６倍、約３〜約７倍、約３〜約８倍、約３〜約９倍、約４〜約７倍、約４〜約８倍、約４〜約９倍、少なくとも約１．１倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、あるいは少なくとも約１０倍増加する、請求項１乃至２７の何れか１つに記載の方法。 The total amount of mRNA encoding the target protein or functional RNA produced in the cells contacted with the antisense oligomer is approximately compared to the total amount of mRNA encoding the target protein or functional RNA produced in the control cells. 1.1 to about 10 times, about 1.5 to about 10 times, about 2 to about 10 times, about 3 to about 10 times, about 4 to about 10 times, about 1.1 to about 5 times, about 1. 1 to about 6 times, about 1.1 to about 7 times, about 1.1 to about 8 times, about 1.1 to about 9 times, about 2 to about 5 times, about 2 to about 6 times, about 2 to about About 7 times, about 2 to about 8 times, about 2 to about 9 times, about 3 to about 6 times, about 3 to about 7 times, about 3 to about 8 times, about 3 to about 9 times, about 4 to about 7 times, about 4 to about 8 times, about 4 to about 9 times, at least about 1.1 times, at least about 1.5 times, at least about 2 times, at least about 2.5 times, at least about 3 times, less Least about 3.5 times, at least about 4-fold, at least about 5-fold, or increased by at least about 10-fold, The method according to any one of claims 1 to 27.

アンチセンスオリゴマーと接触させた細胞によって生成された標的タンパク質の総量は、対照細胞によって生成された標的タンパク質の総量と比較して、約１．１〜約１０倍、約１．５〜約１０倍、約２〜約１０倍、約３〜約１０倍、約４〜約１０倍、約１．１〜約５倍、約１．１〜約６倍、約１．１〜約７倍、約１．１〜約８倍、約１．１〜約９倍、約２〜約５倍、約２〜約６倍、約２〜約７倍、約２〜約８倍、約２〜約９倍、約３〜約６倍、約３〜約７倍、約３〜約８倍、約３〜約９倍、約４〜約７倍、約４〜約８倍、約４〜約９倍、少なくとも約１．１倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、あるいは少なくとも約１０倍増加する、請求項１乃至２８の何れか１つに記載の方法。 The total amount of target protein produced by the cells contacted with the antisense oligomer is about 1.1 to about 10 times, about 1.5 to about 10 times compared to the total amount of target protein produced by the control cells. About 2 to about 10 times, about 3 to about 10 times, about 4 to about 10 times, about 1.1 to about 5 times, about 1.1 to about 6 times, about 1.1 to about 7 times, about 1.1 to about 8 times, about 1.1 to about 9 times, about 2 to about 5 times, about 2 to about 6 times, about 2 to about 7 times, about 2 to about 8 times, about 2 to about 9 Times, about 3 to about 6 times, about 3 to about 7 times, about 3 to about 8 times, about 3 to about 9 times, about 4 to about 7 times, about 4 to about 8 times, about 4 to about 9 times At least about 1.1 times, at least about 1.5 times, at least about 2 times, at least about 2.5 times, at least about 3 times, at least about 3.5 times, at least about 4 times, at least about 5 times, or At least about 1 Fold increase Method according to any one of claims 1 to 28.

アンチセンスオリゴマーは、ホスホロチオエート結合またはホスホロジアミデート結合を含む骨格修飾を含む、請求項１乃至２９の何れか１つに記載の方法。 30. A method according to any one of claims 1 to 29, wherein the antisense oligomer comprises a backbone modification comprising a phosphorothioate bond or a phosphorodiamidate bond.

アンチセンスオリゴマーはホスホロジアミデートモルホリノ、ロックド核酸、ペプチド核酸、２’−Ｏ−メチル、２’−フルオロ、あるいは２’−Ｏ−メトキシエチル部分を含む、請求項１乃至３０の何れか１つに記載の方法。 31. Any one of claims 1-30, wherein the antisense oligomer comprises a phosphorodiamidate morpholino, locked nucleic acid, peptide nucleic acid, 2'-O-methyl, 2'-fluoro, or 2'-O-methoxyethyl moiety. The method described in 1.

アンチセンスオリゴマーは少なくとも１つの修飾された糖部を含む、請求項１乃至３１の何れか１つに記載の方法。 32. A method according to any one of claims 1 to 31 wherein the antisense oligomer comprises at least one modified sugar moiety.

それぞれの糖部は修飾された糖部である、請求項３２に記載の方法。 35. The method of claim 32, wherein each sugar moiety is a modified sugar moiety.

アンチセンスオリゴマーは、８〜５０の核酸塩基、８〜４０の核酸塩基、８〜３５の核酸塩基、８〜３０の核酸塩基、８〜２５の核酸塩基、８〜２０の核酸塩基、８〜１５の核酸塩基、９〜５０の核酸塩基、９〜４０の核酸塩基、９〜３５の核酸塩基、９〜３０の核酸塩基、９〜２５の核酸塩基、９〜２０の核酸塩基、９〜１５の核酸塩基、１０〜５０の核酸塩基、１０〜４０の核酸塩基、１０〜３５の核酸塩基、１０〜３０の核酸塩基、１０〜２５の核酸塩基、１０〜２０の核酸塩基、１０〜１５の核酸塩基、１１〜５０の核酸塩基、１１〜４０の核酸塩基、１１〜３５の核酸塩基、１１〜３０の核酸塩基、１１〜２５の核酸塩基、１１〜２０の核酸塩基、１１〜１５の核酸塩基、１２〜５０の核酸塩基、１２〜４０の核酸塩基、１２〜３５核酸塩基、１２〜３０核酸塩基、１２〜２５の核酸塩基、１２〜２０の核酸塩基、あるいは１２〜１５の核酸塩基からなる、請求項１乃至３３の何れか１つに記載の方法。 Antisense oligomers are 8-50 nucleobases, 8-40 nucleobases, 8-35 nucleobases, 8-30 nucleobases, 8-25 nucleobases, 8-20 nucleobases, 8-15 Nucleobases, 9-50 nucleobases, 9-40 nucleobases, 9-35 nucleobases, 9-30 nucleobases, 9-25 nucleobases, 9-20 nucleobases, 9-15 Nucleobase, 10-50 nucleobase, 10-40 nucleobase, 10-35 nucleobase, 10-30 nucleobase, 10-25 nucleobase, 10-20 nucleobase, 10-15 nucleic acid Base, 11-50 nucleobase, 11-40 nucleobase, 11-35 nucleobase, 11-30 nucleobase, 11-25 nucleobase, 11-20 nucleobase, 11-15 nucleobase , 12-50 nucleobases, 12-40 nucleobases, 12-3 Nucleobases, 12 to 30 nucleobases, nucleobase of 12 to 25, consisting of a nucleic acid base or 12-15 nucleobases, 12 to 20, the method according to any one of claims 1 to 33.

アンチセンスオリゴマーは、タンパク質をコードするＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、あるいは１００％相補的である、請求項１乃至３４の何れか１つに記載の方法。 The antisense oligomer is at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, at least 99%, or 100% complementary to the target portion of the protein-encoding RIC mRNA precursor Item 35. The method according to any one of Items 1 to 34.

細胞は、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードする遺伝子から転写されたＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の集団を含み、ここで、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の集団は２つ以上の保持されたイントロンを含み、および、ここで、アンチセンスオリゴマーは、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の集団で最も豊富な保持されたイントロンに結合する、請求項１乃至３５の何れか１つに記載の方法。 The cell comprises a population of RIC mRNA precursors transcribed from a gene encoding a target protein or functional RNA, wherein the population of RIC mRNA precursors comprises two or more retained introns, and wherein 36. The method of any one of claims 1-35, wherein the antisense oligomer binds to the most abundant retained intron in the population of RIC mRNA precursors.

最も豊富な保持されたイントロンに対するアンチセンスオリゴマーの結合は、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡを生成するＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の集団からの２つ以上の保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘発する、請求項３６に記載の方法。 Binding of antisense oligomers to the most abundant retained introns triggers splicing out of two or more retained introns from a population of RIC mRNA precursors that generate mRNAs that encode target proteins or functional RNAs 38. The method of claim 36.

細胞は、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードする遺伝子から転写されたＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の集団を含み、ここで、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の集団は２つ以上の保持されたイントロンを含み、および、ここで、アンチセンスオリゴマーは、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の集団で２番目に豊富な保持されたイントロンに結合する、請求項１乃至３５の何れか１つに記載の方法。 The cell comprises a population of RIC mRNA precursors transcribed from a gene encoding a target protein or functional RNA, wherein the population of RIC mRNA precursors comprises two or more retained introns, and wherein 36. The method of any one of claims 1-35, wherein the antisense oligomer binds to the second most abundant retained intron in a population of RIC mRNA precursors.

２番目に豊富な保持されたイントロンに対するアンチセンスオリゴマーの結合は、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡを生成するＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の集団からの２つ以上の保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘発する、請求項３８に記載の方法。 Antisense oligomer binding to the second most abundant retained intron results in the splicing out of two or more retained introns from a population of RIC mRNA precursors that generate mRNA encoding the target protein or functional RNA. 40. The method of claim 38, wherein the method is triggered.

疾病は疾患または障害である、請求項６乃至３９の何れか１つに記載の方法。 40. A method according to any one of claims 6 to 39, wherein the disease is a disease or disorder.

疾患または障害は肝臓病である、請求項４０に記載の方法。 41. The method of claim 40, wherein the disease or disorder is liver disease.

肝臓病は、グリシン脳症、ツェルヴェーガー症候群、ハイムラー症候群、アデノシンデアミナーゼ欠損症、異型ポルフィリン症、晩発性皮膚ポルフィリン症、急性間欠性ポルフィリン症、超長鎖アシルＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損、ピルビン酸カルボキシラーゼ欠損症、イソ吉草酸血症、高カイロミクロン血症、高トリグリセリド血症、ガラクトース血症、高コレステロール血症、若年発症成人型１型糖尿病、若年発症成人型２型糖尿病、若年発症成人型３型糖尿病、非インスリン依存型糖尿病、インスリン依存性糖尿病１、インスリン依存性糖尿病２０、若年発症成人型糖尿病を伴うファンコーニ尿細管症候群４、家族性高インスリン低血糖症３、永続的な新生児糖尿病、肝腺腫、ダウリング・デゴス病４、ＳＨＯＲＴ症候群、免疫不全症３６、無ガンマグロブリン血症７、脂質代謝欠失、肝臓炎症、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、血小板減少症、非アルコール性脂肪肝疾患、ウィルソン病、チロシン血症１型、アルギニノコハク酸リアーゼ欠損症、ヘモクロマトーシスＩ型、アルストレーム症候群、先天性の胆汁酸合成欠損症１、脂肪性肝炎、インシュリン抵抗性、耐糖能障害、ＩＩ型糖尿病、あるいは肝臓癌である、請求項４１に記載の方法。 Liver disease is glycine encephalopathy, Zerweger syndrome, Heimler syndrome, adenosine deaminase deficiency, atypical porphyria, late cutaneous porphyria, acute intermittent porphyria, ultralong chain acyl CoA dehydrogenase deficiency, pyruvate carboxylase deficiency , Isovaleric acidemia, hyperchylomicronemia, hypertriglyceridemia, galactosemia, hypercholesterolemia, early-onset adult type 1 diabetes, early-onset adult type 2 diabetes, early-onset adult type 3 diabetes Non-insulin dependent diabetes mellitus, insulin dependent diabetes mellitus 1, insulin dependent diabetes mellitus 20, Fanconi tubular syndrome 4 with juvenile-onset adult type diabetes mellitus, familial hyperinsulin hypoglycemia 3, permanent neonatal diabetes mellitus, hepatic adenoma , Dowling-Degos disease 4, SHORT syndrome, immunodeficiency 6, agammaglobulinemia 7, lipid metabolism deficiency, liver inflammation, hemochromatosis type 2B, thrombocytopenia, nonalcoholic fatty liver disease, Wilson's disease, tyrosinemia type 1, argininosuccinate lyase deficiency, hemo 42. The method of claim 41, wherein the method is Chromatosis Type I, Alstrem Syndrome, Congenital Bile Acid Synthesis Deficiency 1, Steatohepatitis, Insulin Resistance, Glucose Tolerance, Type II Diabetes, or Liver Cancer.

標的タンパク質およびＲＩＣｍＲＮＡ前駆体は遺伝子によってコードされ、遺伝子は、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５である、請求項４２に記載の方法。 The target protein and RIC mRNA precursor are encoded by genes, which are AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3RAP1, HNF1A, TRIB1, 43. The method of claim 42, which is TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5.

前記方法はタンパク質発現を評価する工程をさらに含む、請求項１乃至４３の何れか１つに記載の方法。 44. The method of any one of claims 1-43, wherein the method further comprises assessing protein expression.

被験体はヒトである、請求項１乃至４４の何れか１つに記載の方法。 45. The method of any one of claims 1-44, wherein the subject is a human.

被験体はヒト以外の動物である、請求項１乃至４４の何れか１つに記載の方法。 45. The method according to any one of claims 1-44, wherein the subject is a non-human animal.

被験体は胎児、胚、あるいは子供である、請求項１乃至４５の何れか１つに記載の方法。 46. The method of any one of claims 1-45, wherein the subject is a fetus, embryo, or child.

細胞はエクスビボである、請求項１乃至４６の何れか１つに記載の方法。 47. The method of any one of claims 1-46, wherein the cell is ex vivo.

アンチセンスオリゴマーは、被験体の腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射、あるいは静脈内注射によって投与される、請求項１乃至４６の何れか１つに記載の方法。 47. The method of any one of claims 1-46, wherein the antisense oligomer is administered by intraperitoneal injection, intramuscular injection, subcutaneous injection, or intravenous injection of the subject.

５’スプライス部位に隣接するエクソンの−３ｅ〜−１ｅと、保持されたイントロンの＋１〜＋６にある９つのヌクレオチドは、対応する野性型配列と同一である、請求項１乃至４９の何れか１つに記載の方法。 50. The exon −3e to −1e adjacent to the 5 ′ splice site and the 9 nucleotides in the +1 to +6 of the retained intron are identical to the corresponding wild type sequence. The method described in one.

保持されたイントロンの−１５〜−１と３’スプライス部位に隣接するエクソンの＋１ｅにある１６のヌクレオチドは、対応する野性型配列と同一である、請求項１乃至５０の何れか１つに記載の方法。 51. The 16 nucleotides in the exon + 1e adjacent to the conserved intron -15 to -1 and 3 'splice sites are identical to the corresponding wild type sequence. the method of.

請求項１乃至５１の何れか１つに記載された方法で使用されるアンチセンスオリゴマー。 The antisense oligomer used by the method as described in any one of Claims 1 thru | or 51.

ＳＥＱＩＤＮＯ：１３１−７８３４８のいずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一性を備えた配列を含む、アンチセンスオリゴマー。 SEQ ID NO: with at least about 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100% sequence identity to any one of 131-78348 An antisense oligomer comprising a sequence.

請求項５２または５３に記載されたアンチセンスオリゴマーと賦形剤とを含む医薬組成物。 54. A pharmaceutical composition comprising the antisense oligomer according to claim 52 or 53 and an excipient.

腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射、あるいは静脈内注射によって請求項５４に記載された医薬組成物を投与することにより、被験体を処置する方法。 55. A method of treating a subject by administering the pharmaceutical composition of claim 54 by intraperitoneal injection, intramuscular injection, subcutaneous injection, or intravenous injection.

不足しているタンパク質または不足している機能的ＲＮＡに関連付けられる被験体の肝臓病を処置するために細胞によって標的タンパク質または機能的ＲＮＡの発現を増加させる方法で使用するためのアンチセンスオリゴマーを含む組成物であって、
ここで、不足しているタンパク質または不足している機能的ＲＮＡは、被験体において量あるいは活性が不足しており、ここで、アンチセンスオリゴマーは、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードする、保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体）の構成的スプライシングを増強し、
ここで、標的タンパク質は：
（ａ）不足しているタンパク質；あるいは
（ｂ）被験体において不足しているタンパク質を機能的に増大させるか、これに取って代わる、補償タンパク質
であり、
ここで、機能的ＲＮＡは：
（ａ）不足しているＲＮＡ；あるいは
（ｂ）被験体の不足している機能的ＲＮＡを機能的に増大させるか、これに取って代わる、補償機能的ＲＮＡ
であり、
ここでＲＩＣｍＲＮＡ前駆体は、保持されたイントロン、５’スプライス部位に隣接しているエクソン、および３’スプライス部位に隣接しているエクソンを含み、保持されたイントロンは、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするＲＩＣｍＲＮＡ前駆体からスプライシングされ、それによって、被験体において標的タンパク質または機能的ＲＮＡの産生または活性を増加させる、組成物。 Includes antisense oligomers for use in a method of increasing expression of a target protein or functional RNA by a cell to treat a liver disease in a subject associated with the missing protein or a lacking functional RNA A composition comprising:
Here, the deficient protein or deficient functional RNA is deficient in amount or activity in the subject, wherein the antisense oligomer is retained, encoding the target protein or functional RNA. Enhance constitutive splicing of intron-containing mRNA precursors (RIC mRNA precursors),
Where the target protein is:
(A) a deficient protein; or (b) a compensation protein that functionally increases or replaces a deficient protein in a subject,
Where functional RNA is:
Compensating functional RNA that functionally increases or replaces a subject's missing functional RNA (a) a deficient RNA; or (b) a subject's deficient functional RNA
And
Here, the RIC mRNA precursor comprises a retained intron, an exon adjacent to the 5 ′ splice site, and an exon adjacent to the 3 ′ splice site, the retained intron being a target protein or functional RNA. A composition that is spliced from a RIC mRNA precursor that encodes, thereby increasing production or activity of a target protein or functional RNA in a subject.

肝臓病は、グリシン脳症、ツェルヴェーガー症候群、ハイムラー症候群、アデノシンデアミナーゼ欠損症、異型ポルフィリン症、晩発性皮膚ポルフィリン症、急性間欠性ポルフィリン症、超長鎖アシルＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損、ピルビン酸カルボキシラーゼ欠損症、イソ吉草酸血症、高カイロミクロン血症、高トリグリセリド血症、ガラクトース血症、高コレステロール血症、若年発症成人型１型糖尿病、若年発症成人型２型糖尿病、若年発症成人型３型糖尿病、非インスリン依存型糖尿病、インスリン依存性糖尿病１、インスリン依存性糖尿病２０、若年発症成人型糖尿病を伴うファンコーニ尿細管症候群４、家族性高インスリン低血糖症３、永続的な新生児糖尿病、肝腺腫、ダウリング・デゴス病４、ＳＨＯＲＴ症候群、免疫不全症３６、無ガンマグロブリン血症７、脂質代謝欠失、肝臓炎症、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、血小板減少症、非アルコール性脂肪肝疾患、ウィルソン病、チロシン血症１型、アルギニノコハク酸リアーゼ欠損症、ヘモクロマトーシスＩ型、アルストレーム症候群、先天性の胆汁酸合成欠損症１、脂肪性肝炎、インシュリン抵抗性、耐糖能障害、ＩＩ型糖尿病、あるいは肝臓癌である、請求項５６に記載の組成物。 Liver disease is glycine encephalopathy, Zerweger syndrome, Heimler syndrome, adenosine deaminase deficiency, atypical porphyria, late cutaneous porphyria, acute intermittent porphyria, ultralong chain acyl CoA dehydrogenase deficiency, pyruvate carboxylase deficiency , Isovaleric acidemia, hyperchylomicronemia, hypertriglyceridemia, galactosemia, hypercholesterolemia, early-onset adult type 1 diabetes, early-onset adult type 2 diabetes, early-onset adult type 3 diabetes Non-insulin dependent diabetes mellitus, insulin dependent diabetes mellitus 1, insulin dependent diabetes mellitus 20, Fanconi tubular syndrome 4 with juvenile-onset adult type diabetes mellitus, familial hyperinsulin hypoglycemia 3, permanent neonatal diabetes mellitus, hepatic adenoma , Dowling-Degos disease 4, SHORT syndrome, immunodeficiency 6, agammaglobulinemia 7, lipid metabolism deficiency, liver inflammation, hemochromatosis type 2B, thrombocytopenia, nonalcoholic fatty liver disease, Wilson's disease, tyrosinemia type 1, argininosuccinate lyase deficiency, hemo 57. The composition of claim 56, wherein the composition is Chromatosis type I, Alstrem syndrome, congenital bile acid synthesis deficiency 1, steatohepatitis, insulin resistance, impaired glucose tolerance, type II diabetes, or liver cancer.

被験体において標的タンパク質に関係する疾病を処置する方法に使用するためのアンチセンスオリゴマーを含む組成物であって、
前記方法は、被験体の細胞によって標的タンパク質の発現を増加させる工程であって、ここで、細胞は、保持されたイントロン、保持されたイントロンの５’スプライス部位に隣接しているエクソン、および保持されたイントロンの３’スプライス部位に隣接しているエクソンを含む、保持されたイントロン含有ｍＲＮＡ前駆体（ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体）を有し、ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体は、標的タンパク質をコードする、工程と、細胞をアンチセンスオリゴマーと接触させる工程であって、それによって、保持されたイントロンは、標的タンパク質をコードするＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の転写産物から構成的にスプライシングされ、それにより、被験体の細胞内で、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡのレベルを増加させ、標的タンパク質の発現を増加させる、工程とを含む、組成物。 A composition comprising an antisense oligomer for use in a method of treating a disease associated with a target protein in a subject comprising:
The method includes increasing expression of a target protein by a subject cell, wherein the cell comprises a retained intron, an exon adjacent to the retained intron 5 ′ splice site, and a retained Having a retained intron-containing mRNA precursor (RIC mRNA precursor) comprising an exon adjacent to the 3 ′ splice site of the intron, wherein the RIC mRNA precursor encodes a target protein; Contacting the cell with an antisense oligomer, whereby the retained intron is constitutively spliced from the transcript of the RIC mRNA precursor encoding the target protein, thereby allowing the subject's cell to Increase the level of mRNA encoding the target protein or functional RNA Increasing the expression of the target protein, and a step, composition.

標的タンパク質は、アミノメチルトランスフェラーゼ、アデノシンデアミナーゼ、プロトポルフィリノーゲン・オキシダーゼ、ウロポルフィリノーゲンデカルボキシラーゼ、ヒドロキシメチルビランシンターゼ、超長鎖アシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ、ピルビン酸カルボキシラーゼイソバレリルＣｏＡ脱水素酵素、アポリポタンパク質Ａ−Ｖ、ガラクトース−１−リン酸ウリジリルトランスフェラーゼ、低密度リポタンパク質受容体アダプタータンパク質１、肝細胞核因子４−アルファ、グルコキナーゼ、肝性核因子−１−アルファアルブミン近位因子、タンパク質Ｏグルコシルトランスフェラーゼ１、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ調節サブユニット１、Ｔｒｉｂｂｌｅｓ−１、形質転換増殖因子ベータ−１、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、トロンボポイエチン、パタチン様ホスホリパーゼドメイン含有タンパク質３、銅輸送ＡＴＰアーゼ２、フマリルアセトアセターゼ、アルギニノコハク酸リアーゼ、遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質、アルストレーム症候群タンパク質１，３−β−ヒドロキシステロイド脱水素酵素７型、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体デルタ、インターロイキン６、セラミド合成酵素２、あるいは核受容体コアクチベーター５である、請求項５６乃至５８の何れか１つに記載の組成物。 Target proteins include aminomethyltransferase, adenosine deaminase, protoporphyrinogen oxidase, uroporphyrinogen decarboxylase, hydroxymethyl bilan synthase, ultralong chain acyl-CoA dehydrogenase, pyruvate carboxylase isovaleryl CoA dehydrogenase, apolipo Protein AV, galactose-1-phosphate uridylyltransferase, low density lipoprotein receptor adapter protein 1, hepatocyte nuclear factor 4-alpha, glucokinase, hepatic nuclear factor-1-alpha albumin proximal factor, protein O-glucosyltransferase 1, phosphatidylinositol 3-kinase regulatory subunit 1, Tribles-1, transforming growth factor beta-1, hemochromatography Type 2B, thrombopoietin, patatin-like phospholipase domain-containing protein 3, copper transport ATPase 2, fumaryl acetoacetase, argininosuccinate lyase, hereditary hemochromatosis protein, arström syndrome protein 1,3-β-hydroxy 59. Composition according to any one of claims 56 to 58, which is a steroid dehydrogenase type 7, peroxisome proliferator activated receptor delta, interleukin 6, ceramide synthase 2, or nuclear receptor coactivator 5. object.

疾病は疾患または障害である、請求項５８に記載の組成物。 59. The composition of claim 58, wherein the disease is a disease or disorder.

疾患または障害は肝臓病である、請求項６０に記載の組成物。 61. The composition of claim 60, wherein the disease or disorder is liver disease.

肝臓病は、グリシン脳症、ツェルヴェーガー症候群、ハイムラー症候群、アデノシンデアミナーゼ欠損症、異型ポルフィリン症、晩発性皮膚ポルフィリン症、急性間欠性ポルフィリン症、超長鎖アシルＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損、ピルビン酸カルボキシラーゼ欠損症、イソ吉草酸血症、高カイロミクロン血症、高トリグリセリド血症、ガラクトース血症、高コレステロール血症、若年発症成人型１型糖尿病、若年発症成人型２型糖尿病、若年発症成人型３型糖尿病、非インスリン依存型糖尿病、インスリン依存性糖尿病１、インスリン依存性糖尿病２０、若年発症成人型糖尿病を伴うファンコーニ尿細管症候群４、家族性高インスリン低血糖症３、永続的な新生児糖尿病、肝腺腫、ダウリング・デゴス病４、ＳＨＯＲＴ症候群、免疫不全症３６、無ガンマグロブリン血症７、脂質代謝欠失、肝臓炎症、ヘモクロマトーシス２Ｂ型、血小板減少症、非アルコール性脂肪肝疾患、ウィルソン病、チロシン血症１型、アルギニノコハク酸リアーゼ欠損症、ヘモクロマトーシスＩ型、アルストレーム症候群、先天性の胆汁酸合成欠損症１、脂肪性肝炎、インシュリン抵抗性、耐糖能障害、ＩＩ型糖尿病、あるいは肝臓癌である、請求項６１に記載の組成物。 Liver disease is glycine encephalopathy, Zerweger syndrome, Heimler syndrome, adenosine deaminase deficiency, atypical porphyria, late cutaneous porphyria, acute intermittent porphyria, ultralong chain acyl CoA dehydrogenase deficiency, pyruvate carboxylase deficiency , Isovaleric acidemia, hyperchylomicronemia, hypertriglyceridemia, galactosemia, hypercholesterolemia, early-onset adult type 1 diabetes, early-onset adult type 2 diabetes, early-onset adult type 3 diabetes Non-insulin dependent diabetes mellitus, insulin dependent diabetes mellitus 1, insulin dependent diabetes mellitus 20, Fanconi tubular syndrome 4 with juvenile-onset adult type diabetes mellitus, familial hyperinsulin hypoglycemia 3, permanent neonatal diabetes mellitus, hepatic adenoma , Dowling-Degos disease 4, SHORT syndrome, immunodeficiency 6, agammaglobulinemia 7, lipid metabolism deficiency, liver inflammation, hemochromatosis type 2B, thrombocytopenia, nonalcoholic fatty liver disease, Wilson's disease, tyrosinemia type 1, argininosuccinate lyase deficiency, hemo 62. The composition of claim 61, wherein the composition is Chromatosis Type I, Alstrem Syndrome, Congenital Bile Acid Synthesis Deficiency 1, Steatohepatitis, Insulin Resistance, Glucose Tolerance, Type II Diabetes, or Liver Cancer.

標的タンパク質およびＲＩＣｍＲＮＡ前駆体は遺伝子によってコードされ、遺伝子は、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５である、請求項６１又は６２に記載の組成物。 The target protein and RIC mRNA precursor are encoded by genes, which are AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3RAP1, HNF1A, TRIB1, 63. The composition of claim 61 or 62, wherein the composition is TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5.

アンチセンスオリゴマーは、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対して＋６から、保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して−１６までの領域内の保持されたイントロンにあるＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の一部を標的とする、請求項５６乃至６３の何れか１つに記載の組成物。 Antisense oligomers are those of the RIC mRNA precursor in the retained intron in the region from +6 to the retained intron 5 ′ splice site to −16 to the retained intron 3 ′ splice site. 64. A composition according to any one of claims 56 to 63, which targets a portion.

アンチセンスオリゴマーはＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の一部を標的とし、これは、
（ａ）保持されたイントロンの５’スプライス部位に対する、＋６から＋１００の領域；あるいは
（ｂ）保持されたイントロンの３’スプライス部位に対する−１６から−１００の領域
の内部の保持されたイントロンにある、請求項５６乃至６３の何れか１つに記載の組成物。 Antisense oligomers target a portion of the RIC mRNA precursor,
(A) in the region of +6 to +100 to the 5 ′ splice site of the retained intron; or (b) in the retained intron within the region of −16 to −100 to the 3 ′ splice site of the retained intron. 64. A composition according to any one of claims 56 to 63.

アンチセンスオリゴマーは、少なくとも１つの保持されたイントロンの５’スプライス部位の約５００ヌクレオチド下流から、少なくとも１つの保持されたイントロンの３’スプライス部位の約５００ヌクレオチド上流までの領域内にあるＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の一部を標的とする、請求項５６乃至６３の何れか１つに記載の組成物。 Antisense oligomers are precursors of RIC mRNA that are in the region from about 500 nucleotides downstream of the 5 'splice site of at least one retained intron to about 500 nucleotides upstream of the 3' splice site of at least one retained intron. 64. A composition according to any one of claims 56 to 63, which targets a body part.

アンチセンスオリゴマーは、少なくとも１つの保持されたイントロンの５’スプライス部位の約１００ヌクレオチド下流から、少なくとも１つの保持されたイントロンの３’スプライス部位の約１００ヌクレオチド上流までの領域内にあるＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の一部を標的とする、請求項５６乃至６３の何れか１つに記載の組成物。 Antisense oligomers are precursors of RIC mRNA that are in the region from about 100 nucleotides downstream of the 5 'splice site of at least one retained intron to about 100 nucleotides upstream of the 3' splice site of at least one retained intron. 64. A composition according to any one of claims 56 to 63, which targets a body part.

ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、
（ａ）保持されたイントロンの５’スプライス部位に隣接するエクソン中の＋２ｅ〜−４ｅの領域；あるいは
（ｂ）保持されたイントロンの３’スプライス部位に隣接するエクソン中の＋２ｅ〜−４ｅの領域
の内部にある、請求項５６乃至６３の何れか１つに記載の組成物。 The target portion of the RIC mRNA precursor is
(A) a region from + 2e to −4e in the exon adjacent to the 5 ′ splice site of the retained intron; or (b) a region from + 2e to −4e in the exon adjacent to the 3 ′ splice site of the retained intron. 64. The composition according to any one of claims 56 to 63, wherein the composition is in the interior.

標的タンパク質は、（ａ）ＡＭＴ、（ｂ）ＡＤＡ、（ｃ）ＰＰＯＸ、（ｄ）ＵＲＯＤ、（ｅ）ＨＭＢＳ、（ｆ）ＡＣＡＤＶＬ、（ｇ）ＰＣ、（ｈ）ＩＶＤ、（ｉ）ＡＰＯＡ５、（ｊ）ＧＡＬＴ、（ｋ）ＬＤＬＲＡＰ１、（ｌ）ＨＮＦ４Ａ、（ｍ）ＧＣＫ、（ｎ）ＰＯＧＬＵＴ１、（ｏ）ＰＩＫ３Ｒ１、（ｐ）ＨＮＦ１Ａ、（ｑ）ＴＲＩＢ１、（ｒ）ＴＧＦＢ１、（ｓ）ＨＡＭＰ、（ｔ）ＴＨＰＯ、（ｕ）ＰＮＰＬＡ３、（ｖ）ＡＴＰ７Ｂ、（ｗ）ＦＡＨ、（ｘ）ＡＳＬ、（ｙ）ＨＦＥ、（ｚ）ＡＬＭＳ１、（ａａ）ＰＰＡＲＤ、（ｂｂ）ＩＬ６、（ｃｃ）ＨＳＤ３Ｂ７、（ｄｄ）ＣＥＲＳ２、または（ｅｅ）ＮＣＯＡ５である、請求項５６乃至６８の何れか１つに記載の組成物。 Target proteins are (a) AMT, (b) ADA, (c) PPOX, (d) UROD, (e) HMBS, (f) ACADVL, (g) PC, (h) IVD, (i) APOA5, ( j) GALT, (k) LDLRAP1, (l) HNF4A, (m) GCK, (n) POGLUT1, (o) PIK3R1, (p) HNF1A, (q) TRIB1, (r) TGFB1, (s) HAMP, ( t) THPO, (u) PNPLA3, (v) ATP7B, (w) FAH, (x) ASL, (y) HFE, (z) ALMS1, (aa) PPARD, (bb) IL6, (cc) HSD3B7, ( 69. A composition according to any one of claims 56 to 68, which is dd) CERS2 or (ee) NCOA5.

ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ２８１３−３９１０のいずれか１つ、（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ６５８４７−６７２８１のいずれか１つ、（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ１９００−２５９９のいずれか１つ、（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ９２６−１７７９のいずれか１つ、（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ３７４８３−３８０４４のいずれか１つ、（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ４９４２３−４９９６９のいずれか１つ、（ｇ）ＳＥＱＩＤＮＯ３５９００−３６２９２のいずれか１つ、（ｈ）ＳＥＱＩＤＮＯ４４６２６−４７０１３のいずれか１つ、（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ３６２９３−３７４８２のいずれか１つ、（ｊ）ＳＥＱＩＤＮＯ３４５２１−３５８９９のいずれか１つ、（ｋ）ＳＥＱＩＤＮＯ１３１−９２５のいずれか１つ、（ｌ）ＳＥＱＩＤＮＯ５８９５８−６５８４６、あるいは６７５３２−７７３７４のいずれか１つ、（ｍ）ＳＥＱＩＤＮＯ２５０５８−３０９７６のいずれか１つ、（ｎ）ＳＥＱＩＤＮＯ３９１１−５２６４のいずれか１つ、（ｏ）ＳＥＱＩＤＮＯ１４４７３−１４８７６のいずれか１つ、（ｐ）ＳＥＱＩＤＮＯ３８０４５−４２１０５のいずれか１つ、（ｑ）ＳＥＱＩＤＮＯ３２４６９−３４５２０のいずれか１つ、（ｒ）ＳＥＱＩＤＮＯ５１９７２−５２０２５のいずれか１つ、（ｓ）ＳＥＱＩＤＮＯ５１６７０−５１９７１のいずれか１つ、（ｔ）ＳＥＱＩＤＮＯ５２６５−１４４７２のいずれか１つ、（ｕ）ＳＥＱＩＤＮＯ７７３７５−７８３４８のいずれか１つ、（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ４２１０６−４４３７０のいずれか１つ、（ｗ）ＳＥＱＩＤＮＯ４４３７１−４４６２５のいずれか１つ、（ｘ）ＳＥＱＩＤＮＯ３０９７７−３２４６８のいずれか１つ、（ｙ）ＳＥＱＩＤＮＯ２１８１０−２３４８５のいずれか１つ、（ｚ）ＳＥＱＩＤＮＯ２６００−２８１２のいずれか１つ、（ａａ）ＳＥＱＩＤＮＯ１４８７７−２１８０９のいずれか１つ、（ｂｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ２３４８６−２５０５７のいずれか１つ、（ｃｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ４７０１４−４９４２２のいずれか１つ、（ｄｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ１７８０−１８９９のいずれか１つ、またはＳＥＱＩＤＮＯ６７２８２−６７５３１のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％相補的な配列を含む、請求項６９に記載の組成物。 The target portion of the RIC mRNA precursor is any one of (a) SEQ ID NO 2813-3910, (b) any one of SEQ ID NO 65847-67281, (c) any of SEQ ID NO 1900-2599 1, (d) any one of SEQ ID NOs 926-1779, (e) any one of SEQ ID NOs 37483-38044, (f) any one of SEQ ID NOs 49423-49969, (g ) Any one of SEQ ID NO 35900-36292, (h) any one of SEQ ID NO 44626-47013, (i) any one of SEQ ID NO 36293-37482, (j) SEQ ID NO 34521 -35899, (k) SEQ ID NO 1 Any one of 1-925, (l) any one of SEQ ID NO 58958-65846, or 67532-77374, (m) any one of SEQ ID NO 25058-30976, (n) SEQ ID NO Any one of 3911-5264, (o) any one of SEQ ID NO 14473-14476, (p) any one of SEQ ID NO 384045-42105, (q) any of SEQ ID NO 32469-34520 Any one of (r) SEQ ID NO 51972-52025, (s) any one of SEQ ID NO 51670-5197, (t) any one of SEQ ID NO 5265-14472, ( u) Any of SEQ ID NO 77775-78348 1, (v) any one of SEQ ID NO 42106-44370, (w) any one of SEQ ID NO 44371-44625, (x) any one of SEQ ID NO 30977-32468, (y ) Any one of SEQ ID NO 21810-23485, (z) any one of SEQ ID NO 2600-2812, (aa) any one of SEQ ID NO 14877-21809, (bb) SEQ ID NO 23486 Any one of -25057, (cc) any one of SEQ ID NOs 47014-49422, (dd) any one of SEQ ID NOs 1780-1899, or any one of SEQ ID NO 67282-67531 At least about 80%, 85%, 90% 70. The composition of claim 69 comprising a sequence that is%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100% complementary.

ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分は、（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４８３、７８４６５、または７８４３４；（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３８５、７８４８２、または７８３６９；（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４６１、７８４７３、７８４８０、または７８４２１；（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４１０、７８３８６、７８４１１、７８４６０、または７８４６３；（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３５５、７８４６７、または７８４５４；（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３６７、７８３７６、７８４４０、７８４４８、７８４７７、７８４８５、７８４９６、７８４２２、または７８４１２；（ｇ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４９５；（ｈ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４６４、７８３７５、または７８３８０；（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４０７、７８４９９、７８４２０、７８３７２、または７８３９７；（ｊ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４８９、７８４１６、７８４７６、７８３５２、７８４３５、７８４９３、７８４２３、７８４３７、または７８４４９；（ｋ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３５４、または７８４５９；（ｌ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４４１、７８３９２、７８４５６、７８４２８、７８４９１、７８５０１、７８３６０、７８４２９、７８３５８、７８３６４、７８４７５、７８３９１、７８４７９、７８４０１、７８３７３、または７８４５０；（ｍ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４４５、７８４８１、７８３７９、７８４３１、７８４６９、７８４０８、７８３７７、７８４１７、７８３８７、７８４５５、７８４８４、または７８３７０；（ｎ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３６８、７８３５０、７８４３２、７８４３９、または７８３８９；（ｏ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３９０、またはＳＥＱＩＤＮＯ７８４１８；（ｐ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４６２、７８４６８、７８４５３、７８３６１、７８３６３、７８４３３、７８４３８、７８４３０、７８４８８、７８４０５、７８４９２、または７８４２７；（ｑ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４８７、７８４８６、または７８４７４；（ｒ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４５８、（ｓ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４９７、または７８４２６；（ｔ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４２５、７８４００、７８３９３、７８３５１、７８３８１、７８３６６、７８４５７、７８４４３、７８３６２、または７８４４６；（ｕ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３８８、７８４０２、７８４７１、または７８３５６；（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４２７、７８３８３、７８４４４、または７８３９４；（ｗ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３８２；（ｘ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４９４、７８４０４、７８３７１、７８３６５、または７８３５３；（ｙ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４１９、７８３８４、７８５００、７８４２４、または７８４６６；（ｚ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３９９；（ａａ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４１４、７８４７８、７８４７２、７８３５９、７８３９５、７８３５７、７８３７４、または７８４９０；（ｂｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４３６、７８４１３、７８４１５、７８３９８、または７８４０３；（ｃｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８３４９、７８４７０、７８４９８、７８４０６、７８４４２、７８４５１、７８３９６、７８４０９、または７８３７８；（ｄｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ７８４４７；またはＳＥＱＩＤＮＯ７８４５２の少なくとも８つの隣接する核酸を含む領域に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を備えた配列を含む、請求項６９又は７０に記載の組成物。 The target portion of the RIC mRNA precursor is (a) SEQ ID NO 78484, 78465, or 78434; (b) SEQ ID NO 78385, 78482, or 78369; (c) SEQ ID NO 78461, 78473, 78480, or 78421; (D) SEQ ID NO 78410, 78386, 78411, 78460, or 78463; (e) SEQ ID NO 78355, 78467, or 78454; (f) SEQ ID NO 78367, 78376, 78440, 78448, 78477, 78485, 78896, 78422, or 78412; (g) SEQ ID NO 78495; (h) SEQ ID NO 78464, 78375, or 78380; (i) SEQ ID NO. 8407, 78499, 78420, 78372, or 78397; (j) SEQ ID NO 78489, 78416, 78476, 78352, 78435, 78493, 78423, 78437, or 78449; (k) SEQ ID NO 78354, or 78459; (l) SEQ ID NO 78441, 78392, 78456, 78428, 78491, 78501, 78360, 78429, 78358, 78364, 78475, 78391, 78479, 78401, 78373, or 78450; (m) SEQ ID NO 78445, 78481, 78379, 78431 78469, 78408, 78377, 78417, 78387, 78455, 78484, or 78370; (n) SEQ D NO 78368, 78350, 78432, 78439, or 78389; (o) SEQ ID NO 78390, or SEQ ID NO 78418; (p) SEQ ID NO 78462, 78468, 78453, 78361, 78363, 78433, 78438, 78430, 78488 , 78405, 78492, or 78427; (q) SEQ ID NO 78487, 78486, or 78474; (r) SEQ ID NO 78458, (s) SEQ ID NO 78497, or 78426; (t) SEQ ID NO 78425, 78400, 78393, 78351, 78381, 78366, 78457, 78443, 78362, or 78446; (u) SEQ ID NO 78388, 7 402, 78471, or 78356; (v) SEQ ID NO 78427, 78383, 78444, or 78394; (w) SEQ ID NO 78382; (x) SEQ ID NO 78494, 78404, 78371, 78365, or 78353; (y) SEQ ID NO 78419, 78384, 78500, 78424, or 78466; (z) SEQ ID NO 78399; (aa) SEQ ID NO 78414, 78478, 78472, 78359, 78395, 78357, 78374, or 78490; (bb) SEQ ID NO 78436, 78413, 78415, 78398, or 78403; (cc) SEQ ID NO 78349, 78470, 78498, 78406, 7 442, 78451, 78396, 78409, or 78378; (dd) at least 80%, 85%, 90%, 95% relative to the region containing at least 8 contiguous nucleic acids of SEQ ID NO 78447; or SEQ ID NO 78452. 71. The composition of claim 69 or 70, comprising a sequence with 96, 97%, 98%, 99%, or 100% sequence identity.

ＡＳＯは、（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ２８１３−３９１０のいずれか１つ、（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ６５８４７−６７２８１のいずれか１つ、（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ１９００−２５９９のいずれか１つ、（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ９２６−１７７９のいずれか１つ、（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ３７４８３−３８０４４のいずれか１つ、（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ４９４２３−４９９６９のいずれか１つ、（ｇ）ＳＥＱＩＤＮＯ３５９００−３６２９２のいずれか１つ、（ｈ）ＳＥＱＩＤＮＯ４４６２６−４７０１３のいずれか１つ、（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ３６２９３−３７４８２のいずれか１つ、（ｊ）ＳＥＱＩＤＮＯ３４５２１−３５８９９のいずれか１つ、（ｋ）ＳＥＱＩＤＮＯ１３１−９２５のいずれか１つ、（ｌ）ＳＥＱＩＤＮＯ５８９５８−６５８４６、あるいは６７５３２−７７３７４のいずれか１つ、（ｍ）ＳＥＱＩＤＮＯ２５０５８−３０９７６のいずれか１つ、（ｎ）ＳＥＱＩＤＮＯ３９１１−５２６４のいずれか１つ、（ｏ）ＳＥＱＩＤＮＯ１４４７３−１４８７６のいずれか１つ、（ｐ）ＳＥＱＩＤＮＯ３８０４５−４２１０５のいずれか１つ、（ｑ）ＳＥＱＩＤＮＯ３２４６９−３４５２０のいずれか１つ、（ｒ）ＳＥＱＩＤＮＯ５１９７２−５２０２５のいずれか１つ、（ｓ）ＳＥＱＩＤＮＯ５１６７０−５１９７１のいずれか１つ、（ｔ）ＳＥＱＩＤＮＯ５２６５−１４４７２のいずれか１つ、（ｕ）ＳＥＱＩＤＮＯ７７３７５−７８３４８のいずれか１つ、（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ４２１０６−４４３７０のいずれか１つ、（ｗ）ＳＥＱＩＤＮＯ４４３７１−４４６２５のいずれか１つ、（ｘ）ＳＥＱＩＤＮＯ３０９７７−３２４６８のいずれか１つ、（ｙ）ＳＥＱＩＤＮＯ２１８１０−２３４８５のいずれか１つ、（ｚ）ＳＥＱＩＤＮＯ２６００−２８１２のいずれか１つ、（ａａ）ＳＥＱＩＤＮＯ１４８７７−２１８０９のいずれか１つ、（ｂｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ２３４８６−２５０５７のいずれか１つ、（ｃｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ４７０１４−４９４２２のいずれか１つ、（ｄｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ１７８０−１８９９のいずれか１つ、またはＳＥＱＩＤＮＯ６７２８２−６７５３１のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を備えた配列を含む、請求項６９乃至７１の何れか１つに記載の組成物。 The ASO is (a) any one of SEQ ID NO 2813-3910, (b) any one of SEQ ID NO 65847-67281, (c) any one of SEQ ID NO 1900-2599, (d) Any one of SEQ ID NO 926-1779, (e) any one of SEQ ID NO 37483-38044, (f) any one of SEQ ID NO 49423-49969, (g) SEQ ID NO 35900- Any one of 36292, (h) any one of SEQ ID NO 44626-47013, (i) any one of SEQ ID NO 36293-37482, (j) any one of SEQ ID NO 34521-35899 (K) any one of SEQ ID NO 131-925 , (L) any one of SEQ ID NOs 58958-65846 or 67532-77374, (m) any one of SEQ ID NOs 25058-30976, (n) any one of SEQ ID NOs 3911-5264 (O) any one of SEQ ID NOs 14473-14476, (p) any one of SEQ ID NOs 38045-42105, (q) any one of SEQ ID NOs 32469-34520, (r) SEQ Any one of ID NO 51972-52025, (s) any one of SEQ ID NO 51670-51971, (t) any one of SEQ ID NO 5265-14472, (u) SEQ ID NO 77375-78348 (V) SEQ ID Any one of NO 42106-44370, (w) any one of SEQ ID NO 44371-44625, (x) any one of SEQ ID NO 30977-32468, (y) SEQ ID NO 21810-23485 Any one, (z) any one of SEQ ID NOs 2600-2812, (aa) any one of SEQ ID NOs 14877-21809, (bb) any one of SEQ ID NOs 23486-25057, At least about 80% with respect to any one of (cc) SEQ ID NO 47014-49422, (dd) any one of SEQ ID NO 1780-1899, or SEQ ID NO 67282-67531 85%, 90%, 95%, 96%, 97 , 98%, 99%, or a sequence having 100% sequence identity, composition according to any one of claims 69 to 71.

ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体は、（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ４１−４４、（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ２８１２１−１２４、（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ３７または３８、（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ３３または３４、（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ９２−９５、（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ１０９−１１２、（ｇ）ＳＥＱＩＤＮＯ８７−８９、（ｈ）ＳＥＱＩＤＮＯ１０４または１０５、（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ９０または９１、（ｊ）ＳＥＱＩＤＮＯ８５または８６、（ｋ）ＳＥＱＩＤＮＯ３２、（ｌ）ＳＥＱＩＤＮＯ１１５−１２０、あるいは１２６−１２９、（ｍ）ＳＥＱＩＤＮＯ７６−７８、（ｎ）ＳＥＱＩＤＮＯ４５または４６、（ｏ）ＳＥＱＩＤＮＯ５７−６０、（ｐ）ＳＥＱＩＤＮＯ９６または９７、（ｑ）ＳＥＱＩＤＮＯ８３または８４、（ｒ）ＳＥＱＩＤＮＯ１１４、（ｓ）ＳＥＱＩＤＮＯ２２３、（ｔ）ＳＥＱＩＤＮＯ４７−５６、（ｕ）ＳＥＱＩＤＮＯ１３０、（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ９８−１０２、（ｗ）ＳＥＱＩＤＮＯ１０３、（ｘ）ＳＥＱＩＤＮＯ８０−８２、（ｙ）ＳＥＱＩＤＮＯ６６−７３、（ｚ）ＳＥＱＩＤＮＯ３９、（ａａ）ＳＥＱＩＤＮＯ６１−６５、（ｂｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ７４または７５、（ｃｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ１０６−１０８、（ｄｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ３５または３６、あるいはＳＥＱＩＤＮＯ１２５のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を備えた配列を含む、請求項６９乃至７２の何れか１つに記載の組成物。 RIC mRNA precursors are (a) SEQ ID NO 41-44, (b) SEQ ID NO 28 121-124, (c) SEQ ID NO 37 or 38, (d) SEQ ID NO 33 or 34, (e) SEQ ID. NO 92-95, (f) SEQ ID NO 109-112, (g) SEQ ID NO 87-89, (h) SEQ ID NO 104 or 105, (i) SEQ ID NO 90 or 91, (j) SEQ ID NO 85 or 86, (k) SEQ ID NO 32, (l) SEQ ID NO 115-120, or 126-129, (m) SEQ ID NO 76-78, (n) SEQ ID NO 45 or 46, (o) ) SEQ ID NO 57-60, (p) SEQ ID NO 96 or 97, q) SEQ ID NO 83 or 84, (r) SEQ ID NO 114, (s) SEQ ID NO 223, (t) SEQ ID NO 47-56, (u) SEQ ID NO 130, (v) SEQ ID NO 98 -102, (w) SEQ ID NO 103, (x) SEQ ID NO 80-82, (y) SEQ ID NO 66-73, (z) SEQ ID NO 39, (aa) SEQ ID NO 61-65, bb) at least about 80%, 85% for any one of SEQ ID NO 74 or 75, (cc) SEQ ID NO 106-108, (dd) SEQ ID NO 35 or 36, or SEQ ID NO 125 , 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or 100% sequence identity Comprising a sequence having composition according to any one of claims 69 to 72.

ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体は、（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ６、（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ２８、（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ４、（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ２、（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ１９、（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ２５、（ｇ）ＳＥＱＩＤＮＯ１７、（ｈ）ＳＥＱＩＤＮＯ２３、（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ１８、（ｊ）ＳＥＱＩＤＮＯ１６、（ｋ）ＳＥＱＩＤＮＯ１、（ｌ）ＳＥＱＩＤＮＯ３０、（ｍ）ＳＥＱＩＤＮＯ１３、（ｎ）ＳＥＱＩＤＮＯ７、（ｏ）ＳＥＱＩＤＮＯ９、（ｐ）ＳＥＱＩＤＮＯ２０、（ｑ）ＳＥＱＩＤＮＯ１５、（ｒ）ＳＥＱＩＤＮＯ２７、（ｓ）ＳＥＱＩＤＮＯ２６、（ｔ）ＳＥＱＩＤＮＯ８、（ｕ）ＳＥＱＩＤＮＯ３１、（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ２１、（ｗ）ＳＥＱＩＤＮＯ２２、（ｘ）ＳＥＱＩＤＮＯ１４、（ｙ）ＳＥＱＩＤＮＯ１１、（ｚ）ＳＥＱＩＤＮＯ５、（ａａ）ＳＥＱＩＤＮＯ１０、（ｂｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ１２、（ｃｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ２４、（ｄｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ３、または（ｅｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ２９に対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を備えた遺伝子配列によってコードされる、請求項６９乃至７３の何れか１つに記載の組成物。 RIC mRNA precursors are: (a) SEQ ID NO 6, (b) SEQ ID NO 28, (c) SEQ ID NO 4, (d) SEQ ID NO 2, (e) SEQ ID NO 19, (f) SEQ ID NO 25, (g) SEQ ID NO 17, (h) SEQ ID NO 23, (i) SEQ ID NO 18, (j) SEQ ID NO 16, (k) SEQ ID NO 1, (l) SEQ ID NO 30, (m) SEQ ID NO 13, (n) SEQ ID NO 7, (o) SEQ ID NO 9, (p) SEQ ID NO 20, (q) SEQ ID NO 15, (r) SEQ ID NO 27, (S) SEQ ID NO 26, (t) SEQ ID NO 8, (u) SEQ ID NO 31, (v) SEQ ID NO 1, (w) SEQ ID NO 22, (x) SEQ ID NO 14, (y) SEQ ID NO 11, (z) SEQ ID NO 5, (aa) SEQ ID NO 10, (bb) SEQ ID NO 12, At least about 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% relative to (cc) SEQ ID NO 24, (dd) SEQ ID NO 3, or (ee) SEQ ID NO 29 74. A composition according to any one of claims 69 to 73, encoded by a gene sequence with 99%, 99%, or 100% sequence identity.

アンチセンスオリゴマーは、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードする遺伝子から転写されたｍＲＮＡ前駆体の選択的スプライシングを調節することにより標的タンパク質または機能的ＲＮＡの量を増加させない、請求項５６乃至７４の何れか１つに記載の組成物。 75. The antisense oligomer does not increase the amount of target protein or functional RNA by modulating alternative splicing of an mRNA precursor transcribed from the gene encoding the target protein or functional RNA. The composition according to any one of the above.

アンチセンスオリゴマーは、標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードする遺伝子の突然変異に起因する異常なスプライシングを調節することにより、機能的ＲＮＡまたは機能的タンパク質の量を増加させない、請求項５６乃至７５の何れか１つに記載の組成物。 76. The antisense oligomer does not increase the amount of functional RNA or functional protein by modulating abnormal splicing due to mutations in a gene encoding the target protein or functional RNA. The composition according to any one of the above.

ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体は、全長のｍＲＮＡ前駆体、または野生型のｍＲＮＡ前駆体からの部分的なスプライシングによって生成された、請求項５６乃至７６の何れか１つに記載の組成物。 77. The composition of any one of claims 56 to 76, wherein the RIC mRNA precursor was generated by partial splicing from a full-length mRNA precursor or a wild-type mRNA precursor.

標的タンパク質または機能的ＲＮＡをコードするｍＲＮＡは、全長の成熟ｍＲＮＡ、あるいは野生型の成熟ｍＲＮＡである、請求項５６乃至７７の何れか１つに記載の組成物。 78. The composition according to any one of claims 56 to 77, wherein the mRNA encoding the target protein or functional RNA is a full-length mature mRNA or a wild-type mature mRNA.

生成された標的タンパク質は全長のタンパク質あるいは野生型のタンパク質である、請求項５６乃至７８の何れか１つに記載の組成物。 79. The composition according to any one of claims 56 to 78, wherein the generated target protein is a full-length protein or a wild-type protein.

保持されたイントロンは律速イントロンである、請求項５６乃至７９の何れか１つに記載の組成物。 80. A composition according to any one of claims 56 to 79, wherein the retained intron is a rate limiting intron.

前記保持されたイントロンは前記ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体で最も豊富な保持されたイントロンである、請求項５６乃至８０の何れか１つに記載の組成物。 81. The composition of any one of claims 56 to 80, wherein the retained intron is the most abundant retained intron of the RIC mRNA precursor.

保持されたイントロンは前記ＲＩＣｍＲＮＡ前駆体で２番目に豊富な保持されたイントロンである、請求項５６乃至８０の何れか１つに記載の組成物。 81. The composition of any one of claims 56-80, wherein a retained intron is a retained intron that is the second most abundant in the RIC mRNA precursor.

アンチセンスオリゴマーは、ホスホロチオエート結合またはホスホロジアミデート結合を含む骨格修飾を含む、請求項５６乃至８２の何れか１つに記載の組成物。 83. A composition according to any one of claims 56 to 82, wherein the antisense oligomer comprises a backbone modification comprising a phosphorothioate linkage or a phosphorodiamidate linkage.

前記アンチセンスオリゴマーはアンチセンスオリゴヌクレオチドである、請求項５６乃至８３の何れか１つに記載の組成物。 84. The composition according to any one of claims 56 to 83, wherein the antisense oligomer is an antisense oligonucleotide.

アンチセンスオリゴマーはホスホロジアミデートモルホリノ、ロックド核酸、ペプチド核酸、２’−Ｏ−メチル、２’−フルオロ、あるいは２’−Ｏ−メトキシエチル部分を含む、請求項５６乃至８４の何れか１つに記載の組成物。 85. Any one of claims 56 to 84, wherein the antisense oligomer comprises a phosphorodiamidate morpholino, locked nucleic acid, peptide nucleic acid, 2'-O-methyl, 2'-fluoro, or 2'-O-methoxyethyl moiety. A composition according to 1.

アンチセンスオリゴマーは少なくとも１つの修飾された糖部を含む、請求項５６乃至８５の何れか１つに記載の組成物。 86. A composition according to any one of claims 56 to 85, wherein the antisense oligomer comprises at least one modified sugar moiety.

それぞれの糖部は修飾された糖部である、請求項８６に記載の組成物。 90. The composition of claim 86, wherein each sugar moiety is a modified sugar moiety.

アンチセンスオリゴマーは、８〜５０の核酸塩基、８〜４０の核酸塩基、８〜３５の核酸塩基、８〜３０の核酸塩基、８〜２５の核酸塩基、８〜２０の核酸塩基、８〜１５の核酸塩基、９〜５０の核酸塩基、９〜４０の核酸塩基、９〜３５の核酸塩基、９〜３０の核酸塩基、９〜２５の核酸塩基、９〜２０の核酸塩基、９〜１５の核酸塩基、１０〜５０の核酸塩基、１０〜４０の核酸塩基、１０〜３５の核酸塩基、１０〜３０の核酸塩基、１０〜２５の核酸塩基、１０〜２０の核酸塩基、１０〜１５の核酸塩基、１１〜５０の核酸塩基、１１〜４０の核酸塩基、１１〜３５の核酸塩基、１１〜３０の核酸塩基、１１〜２５の核酸塩基、１１〜２０の核酸塩基、１１〜１５の核酸塩基、１２〜５０の核酸塩基、１２〜４０の核酸塩基、１２〜３５核酸塩基、１２〜３０核酸塩基、１２〜２５の核酸塩基、１２〜２０の核酸塩基、あるいは１２〜１５の核酸塩基からなる、請求項５６乃至８７の何れか１つに記載の組成物。 Antisense oligomers are 8-50 nucleobases, 8-40 nucleobases, 8-35 nucleobases, 8-30 nucleobases, 8-25 nucleobases, 8-20 nucleobases, 8-15 Nucleobases, 9-50 nucleobases, 9-40 nucleobases, 9-35 nucleobases, 9-30 nucleobases, 9-25 nucleobases, 9-20 nucleobases, 9-15 Nucleobase, 10-50 nucleobase, 10-40 nucleobase, 10-35 nucleobase, 10-30 nucleobase, 10-25 nucleobase, 10-20 nucleobase, 10-15 nucleic acid Base, 11-50 nucleobase, 11-40 nucleobase, 11-35 nucleobase, 11-30 nucleobase, 11-25 nucleobase, 11-20 nucleobase, 11-15 nucleobase , 12-50 nucleobases, 12-40 nucleobases, 12-3 Nucleobases, 12 to 30 nucleobases, nucleobase of 12 to 25, consisting of a nucleic acid base or 12-15 nucleobases, 12 to 20, the composition according to any one of claims 56 to 87.

アンチセンスオリゴマーは、タンパク質をコードするＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の標的部分に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、あるいは１００％相補的である、請求項５６乃至８８の何れか１つに記載の組成物。 The antisense oligomer is at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, at least 99%, or 100% complementary to the target portion of the protein-encoding RIC mRNA precursor Item 91. The composition according to any one of items 56 to 88.

請求項５６乃至８９に記載された組成物のいずれかのアンチセンスオリゴマーと賦形剤とを含む医薬組成物。 90. A pharmaceutical composition comprising the antisense oligomer of any of the compositions of claims 56 to 89 and an excipient.

腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射、あるいは静脈内注射によって請求項９０に記載された医薬組成物を投与することにより、被験体を処置する方法。 94. A method of treating a subject by administering a pharmaceutical composition according to claim 90 by intraperitoneal injection, intramuscular injection, subcutaneous injection, or intravenous injection.

医薬組成物であって、
不足しているＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡ転写産物の標的配列にハイブリダイズするアンチセンスオリゴマーであって、不足しているＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡ転写産物が、保持されたイントロンを含み、アンチセンスオリゴマーが、不足しているＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡ転写産物から保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘発する、アンチセンスオリゴマーと、
薬学的に許容可能な賦形剤と
を含む医薬組成物。 A pharmaceutical composition comprising:
Missing AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, TP Antisense oligomers that hybridize to target sequences of ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5 mRNA transcripts, and are missing AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, P PLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5 mRNA transcripts contain a retained intron and antisense oligomers are deficient in AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL1, HPP An antisense oligomer that induces splicing out of introns retained from HSD3B7, CERS2, or NCOA5 mRNA transcripts;
A pharmaceutical composition comprising a pharmaceutically acceptable excipient.

不足しているＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡ転写産物は、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の転写産物である、請求項９２に記載の医薬組成物。 Missing AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, TP ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5 mRNA transcripts are AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD IL6, HSD3B7, CERS2, or transcript of RIC mRNA precursor NCOA5, pharmaceutical composition according to claim 92.

ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２、またはＮＣＯＡ５のＲＩＣｍＲＮＡ転写産物の標的部分は、保持されたイントロンの５’スプライス部位に対して＋５００〜保持されたイントロンの３’スプライス部位に対して−５００の領域内で保持されたイントロン中にある、請求項９２又は９３に記載の医薬組成物。 AMT, ADA, PPOX, UROD, HMDS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7SL The target portion of the RIC mRNA transcript of ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2, or NCOA5 ranges from +500 to the retained intron 5 ′ splice site to −500 to the retained intron 3 ′ splice site. 94. The pharmaceutical composition of claim 92 or 93, which is in an intron retained within the region of

ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の転写産物は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１−３１のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する遺伝子配列によってコードされる、請求項９２又は９３に記載の医薬組成物。 AMT, ADA, PPOX, UROD, HMDS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7SL The transcript of ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or NCOA5 RIC mRNA precursor is at least about 80%, 85%, 90%, 95% for any one of SEQ ID NO: 1-31 94. The pharmaceutical composition of claim 92 or 93, encoded by a genetic sequence having a sequence identity of 96%, 97%, 98%, 99% or 100%.

ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の転写産物は、ＳＥＱＩＤＮＯ：３２−１３０のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する配列を含む、請求項９２又は９３に記載の医薬組成物。 AMT, ADA, PPOX, UROD, HMDS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7SL The transcript of the RIC mRNA precursor of ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or NCOA5 is at least about 80%, 85%, 90%, 95% for any one of SEQ ID NO: 32-130. 94. The pharmaceutical composition of claim 92 or 93, comprising a sequence having a sequence identity of 96%, 97%, 98%, 99% or 100%.

アンチセンスオリゴマーは、ホスホロチオエート結合またはホスホロジアミデート結合を含む骨格修飾を含む、請求項９２に記載の医薬組成物。 94. The pharmaceutical composition of claim 92, wherein the antisense oligomer comprises a backbone modification comprising a phosphorothioate linkage or a phosphorodiamidate linkage.

アンチセンスオリゴマーは、アンチセンスオリゴヌクレオチドである、請求項９２に記載の医薬組成物。 94. The pharmaceutical composition of claim 92, wherein the antisense oligomer is an antisense oligonucleotide.

アンチセンスオリゴマーは、ホスホロジアミデートモルホリノ、ロックド核酸、ペプチド核酸、２’−Ｏ−メチル、２’−フルオロ、または２’−Ｏ−メトキシエチル部分を含む、請求項９２に記載の医薬組成物。 94. The pharmaceutical composition of claim 92, wherein the antisense oligomer comprises a phosphorodiamidate morpholino, locked nucleic acid, peptide nucleic acid, 2'-O-methyl, 2'-fluoro, or 2'-O-methoxyethyl moiety. .

アンチセンスオリゴマーは、少なくとも１つの修飾された糖部を含む、請求項９２に記載の医薬組成物。 94. The pharmaceutical composition of claim 92, wherein the antisense oligomer comprises at least one modified sugar moiety.

アンチセンスオリゴマーは、８〜５０の核酸塩基、８〜４０の核酸塩基、８〜３５の核酸塩基、８〜３０の核酸塩基、８〜２５の核酸塩基、８〜２０の核酸塩基、８〜１５の核酸塩基、９〜５０の核酸塩基、９〜４０の核酸塩基、９〜３５の核酸塩基、９〜３０の核酸塩基、９〜２５の核酸塩基、９〜２０の核酸塩基、９〜１５の核酸塩基、１０〜５０の核酸塩基、１０〜４０の核酸塩基、１０〜３５の核酸塩基、１０〜３０の核酸塩基、１０〜２５の核酸塩基、１０〜２０の核酸塩基、１０〜１５の核酸塩基、１１〜５０の核酸塩基、１１〜４０の核酸塩基、１１〜３５の核酸塩基、１１〜３０の核酸塩基、１１〜２５の核酸塩基、１１〜２０の核酸塩基、１１〜１５の核酸塩基、１２〜５０の核酸塩基、１２〜４０の核酸塩基、１２〜３５核酸塩基、１２〜３０核酸塩基、１２〜２５の核酸塩基、１２〜２０の核酸塩基、または１２〜１５の核酸塩基を含む、請求項９２に記載の医薬組成物。 Antisense oligomers are 8-50 nucleobases, 8-40 nucleobases, 8-35 nucleobases, 8-30 nucleobases, 8-25 nucleobases, 8-20 nucleobases, 8-15 Nucleobases, 9-50 nucleobases, 9-40 nucleobases, 9-35 nucleobases, 9-30 nucleobases, 9-25 nucleobases, 9-20 nucleobases, 9-15 Nucleobase, 10-50 nucleobase, 10-40 nucleobase, 10-35 nucleobase, 10-30 nucleobase, 10-25 nucleobase, 10-20 nucleobase, 10-15 nucleic acid Base, 11-50 nucleobase, 11-40 nucleobase, 11-35 nucleobase, 11-30 nucleobase, 11-25 nucleobase, 11-20 nucleobase, 11-15 nucleobase , 12-50 nucleobases, 12-40 nucleobases, 12-3 Nucleobases, 12 to 30 nucleobases, nucleobase of 12 to 25, comprising the nucleic acid bases or 12-15 nucleobases, 12 to 20, the pharmaceutical composition according to claim 92.

アンチセンスオリゴマーは、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の転写産物の標的部分に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％か、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％相補的である、請求項９２又は９３に記載の医薬組成物。 Antisense oligomers are AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, TPPL3, THPO, TPPL3 , ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or NCOA5 RIC mRNA precursor transcript target portion of at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, or at least 98 94. The pharmaceutical composition of claim 92 or 93, which is%, at least 99%, or 100% complementary.

ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の転写産物の標的部分は、ＳＥＱＩＤＮＯ：７８３４９−７８５０１から選択される配列内にある、請求項９２又は９３に記載の医薬組成物。 AMT, ADA, PPOX, UROD, HMDS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7SL 94. The pharmaceutical composition of claim 92 or 93, wherein the target portion of the transcript of the RIC mRNA precursor of ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or NCOA5 is within a sequence selected from SEQ ID NO: 78349-78501. object.

アンチセンスオリゴマーは、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３１−７８３４８のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を備えたヌクレオチド配列を含む、請求項９２に記載の医薬組成物。 The antisense oligomer is at least about 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, any one of SEQ ID NOs: 131-78348, 94. The pharmaceutical composition of claim 92, comprising a nucleotide sequence with 97%, 98%, or 99% sequence identity.

アンチセンスオリゴマーは、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３１−７８３４８から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項９２に記載の医薬組成物。 94. The pharmaceutical composition of claim 92, wherein the antisense oligomer comprises a nucleotide sequence selected from SEQ ID NO: 131-78348.

医薬組成物は、髄腔内注射、脳室内注射、腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射、または静脈内注射のために製剤される、請求項９２乃至１０５の何れか１つに記載の医薬組成物。 106. The medicament according to any one of claims 92 to 105, wherein the pharmaceutical composition is formulated for intrathecal injection, intraventricular injection, intraperitoneal injection, intramuscular injection, subcutaneous injection, or intravenous injection. Composition.

ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のタンパク質の機能形態をコードする、十分に処理されたＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡの転写産物を生成するために、保持されたイントロンの除去を促進する、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡの転写産物の処理を誘発する方法であって、
該方法は、
（ａ）アンチセンスオリゴマーを被験体の標的細胞に接触させる工程；
（ｂ）アンチセンスオリゴマーを、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡの転写産物にハイブリダイズさせる工程であって、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡの転写産物が、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のタンパク質の機能形態をコードすることができ、少なくとも１つの保持されたイントロンを含む、工程；
（ｃ）ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のタンパク質の機能形態をコードする、十分に処理されたＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡの転写産物を産生するために、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡの転写産物から少なくとも１つの保持されたイントロンを除去する工程；および
（ｄ）十分に処理されたＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡの転写産物から、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のタンパク質の機能形態を翻訳する工程
を含む方法。 AMT, ADA, PPOX, UROD, HMDS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7SL Fully processed AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, encoding functional forms of ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or NCOA5 proteins , POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALM 1, promote the removal of retained introns to generate transcripts of PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or NCOA5 mRNA, AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2N, CERS2 A method of inducing
The method
(A) contacting an antisense oligomer with a target cell of a subject;
(B) Antisense oligomers were converted into AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PN ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or NCOA5 mRNA hybridizing step, AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5 , GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or NCOA5 mRNA transcripts are AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or NCOA5 can be encoded at least. Including one retained intron;
(C) AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, BLPLA3, ATP Fully processed AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, encoding functional forms of HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or NCOA5 proteins HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, to produce transcripts of LMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or NCOA5 mRNA Removing at least one retained intron from the transcript of PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or NCOA5 And (d) fully processed AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, NF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or NCOA5 MT AD, A PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, FHE, ASL Translating a functional form of a protein of IL6, HSD3B7, CERS2 or NCOA5.

保持されたイントロンは、保持されたイントロン全体である、請求項１０７に記載の方法。 108. The method of claim 107, wherein the retained intron is the entire retained intron.

ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のｍＲＮＡの転写産物は、ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のＲＩＣｍＲＮＡ前駆体の転写産物である、請求項１０７又は１０８に記載の方法。 AMT, ADA, PPOX, UROD, HMDS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7SL The transcripts of ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or NCOA5 mRNA are AMT, ADA, PPOX, UROD, HMBS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, HIK3R1, PIK3R1, PIK3R1, PIK3R TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7B, FAH, ASL, HFE, ALMS1, PPARD, IL6, H D3B7, CERS2 or transcript of RIC mRNA precursor NCOA5, The method of claim 107 or 108.

ＡＭＴ、ＡＤＡ、ＰＰＯＸ、ＵＲＯＤ、ＨＭＢＳ、ＡＣＡＤＶＬ、ＰＣ、ＩＶＤ、ＡＰＯＡ５、ＧＡＬＴ、ＬＤＬＲＡＰ１、ＨＮＦ４Ａ、ＧＣＫ、ＰＯＧＬＵＴ１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＨＮＦ１Ａ、ＴＲＩＢ１、ＴＧＦＢ１、ＨＡＭＰ、ＴＨＰＯ、ＰＮＰＬＡ３、ＡＴＰ７Ｂ、ＦＡＨ、ＡＳＬ、ＨＦＥ、ＡＬＭＳ１、ＰＰＡＲＤ、ＩＬ６、ＨＳＤ３Ｂ７、ＣＥＲＳ２またはＮＣＯＡ５のタンパク質の量または活性の不足によって引き起こされた疾病を有する被験体を処置する方法であって、該方法は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３１−７８３４８のいずれか１つに対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むアンチセンスオリゴマーを被験体に投与する工程を含む、方法。 AMT, ADA, PPOX, UROD, HMDS, ACADVL, PC, IVD, APOA5, GALT, LDLRAP1, HNF4A, GCK, POGLUT1, PIK3R1, HNF1A, TRIB1, TGFB1, HAMP, THPO, PNPLA3, ATP7SL A method of treating a subject having a disease caused by a deficiency in the amount or activity of a protein of ALMS1, PPARD, IL6, HSD3B7, CERS2 or NCOA5, comprising any of SEQ ID NOs: 131-78348 One has at least about 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% sequence identity Anti-containing nucleotide sequence Comprising administering an Nsu oligomer to a subject, the method.