JP2019500043A5 - - Google Patents
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Description
均等物
当業者は、本明細書に記載される本発明の具体的な実施形態の多くの均等物を認識し、またはルーチンに過ぎない実験を用いて確認することができるであろう。本発明は具体的な態様を参照して開示されているが、本発明の他の態様および変形形態が当業者によって本発明の真の趣旨および範囲から逸脱することなく考案され得ることは明らかである。添付の特許請求の範囲は、かかる態様および均等な変形形態の全てを含むものと解釈されることが意図される。
また、本発明は以下を提供する。
［１］
ｔｒａｃｒとｃｒＲＮＡとを含むｇＲＮＡ分子であって、前記ｃｒＲＮＡは、ＢＣＬ１１Ａ遺伝子（例えば、ヒトＢＣＬ１１ａ遺伝子）、ＢＣＬ１１ａエンハンサー（例えば、ヒトＢＣＬ１１ａエンハンサー）、またはＨＦＰＨ領域（例えば、ヒトＨＰＦＨ領域）の標的配列に相補的な標的化ドメインを含む、ｇＲＮＡ分子。
［２］
前記標的配列は、前記ＢＣＬ１１Ａ遺伝子のものであり、かつ前記標的化ドメインは、配列番号１〜配列番号８５または配列番号４００〜配列番号１２３１のいずれか１つを含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［３］
前記標的配列は、ＢＣＬ１１ａエンハンサーのものであり、かつ前記標的化ドメインは、配列番号１２３２〜配列番号１４９９のいずれか１つを含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［４］
前記標的配列は、ＢＣＬ１１ａエンハンサーのものであり、かつ前記標的化ドメインは、配列番号１８２〜配列番号２７７または配列番号３３４〜配列番号３４１のいずれか１つを含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［５］
前記標的化ドメインは、配列番号３４１、配列番号２４６、配列番号２４８、配列番号２４７、配列番号２４５、配列番号２４９、配列番号２４４、配列番号１９９、配列番号２５１、配列番号２５０、配列番号３３４、配列番号１８５、配列番号１８６、配列番号３３６、または配列番号３３７のいずれか１つを含む、例えばそれからなる、［４］に記載のｇＲＮＡ分子。
［６］
前記標的化ドメインは、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号３３５、配列番号３３６、配列番号３３７、または配列番号３３８のいずれか１つを含む、例えばそれからなる、［４］に記載のｇＲＮＡ分子。
［７］
前記標的化ドメインは、配列番号２４８または配列番号３３８のいずれか１つを含む、例えばそれからなる、［４］に記載のｇＲＮＡ分子。
［８］
前記標的化ドメインは、配列番号２４８を含む、例えばそれからなる、［４］に記載のｇＲＮＡ分子。
［９］
前記標的化ドメインは、配列番号３３８を含む、例えばそれからなる、［４］に記載のｇＲＮＡ分子。
［１０］
前記標的配列は、ＢＣＬ１１ａエンハンサーのものであり、かつ標的化ドメインは、配列番号２７８〜配列番号３３３のいずれか１つを含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［１１］
前記標的化ドメインは、配列番号３１８、配列番号３１２、配列番号３１３、配列番号２９４、配列番号３１０、配列番号３１９、配列番号２９８、配列番号３２２、配列番号３１１、配列番号３１５、配列番号２９０、配列番号３１７、配列番号３０９、配列番号２８９、または配列番号２８１のいずれか１つを含む、例えばそれからなる、［１０］に記載のｇＲＮＡ分子。
［１２］
前記標的化ドメインは、配列番号３１８を含む、例えばそれからなる、［１０］に記載のｇＲＮＡ分子。
［１３］
前記標的配列は、ＢＣＬ１１ａエンハンサーのものであり、かつ前記標的化ドメインは、配列番号１５９６〜配列番号１６９１のいずれか１つを含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［１４］
前記標的化ドメインは、配列番号１６８３、配列番号１６３８、配列番号１６４７、配列番号１６０９、配列番号１６２１、配列番号１６１７、配列番号１６５４、配列番号１６３１、配列番号１６２０、配列番号１６３７、配列番号１６１２、配列番号１６５６、配列番号１６１９、配列番号１６７５、配列番号１６４５、配列番号１５９８、配列番号１５９９、配列番号１６６３、配列番号１６７７、または配列番号１６２６のいずれか１つを含む、例えばそれからなる、［１３］に記載のｇＲＮＡ分子。
［１５］
前記標的配列は、ＨＦＰＨ領域（例えば、フランス型ＨＰＦＨ領域）のものであり、かつ前記標的化ドメインは、配列番号８６〜配列番号１８１、配列番号１５００〜配列番号１５９５、または配列番号１６９２〜配列番号１７６１のいずれか１つを含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［１６］
前記標的化ドメインは、配列番号１００、配列番号１６５、配列番号１１３、配列番号９９、配列番号１１２、配列番号９８、配列番号１５８０、配列番号１０６、配列番号１５０３、配列番号１５８９、配列番号１６０、配列番号１５３７、配列番号１５９、配列番号１０１、配列番号１６２、配列番号１０４、配列番号１３８、配列番号１５３６、配列番号１５３９、配列番号１５８５のいずれか１つを含む、例えばそれからなる、［１５］に記載のｇＲＮＡ分子。
［１７］
前記標的化ドメインは、配列番号９８、配列番号１００、配列番号１５０５、配列番号１５８９、配列番号１７００、または配列番号１７５０のいずれか１つを含む、例えばそれからなる、［１５］に記載のｇＲＮＡ分子。
［１８］
前記標的化ドメインは、配列番号１００、配列番号１６５、または配列番号１１３のいずれか１つを含む、例えばそれからなる、［１５］に記載のｇＲＮＡ分子。
［１９］
前記標的化ドメインは、前記記載される標的化ドメイン配列のいずれか１つの１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４個の連続する核酸を含む、例えばそれからなる、［２］〜［１８］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［２０］
前記記載される標的化ドメイン配列のいずれか１つの１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４個の連続する核酸は、前記記載される標的化ドメイン配列の３’末端に配置された１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４個の連続する核酸である、［１６］に記載のｇＲＮＡ分子。
［２１］
前記記載される標的化ドメイン配列のいずれか１つの１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４個の連続する核酸は、前記記載される標的化ドメイン配列の５’末端に配置された１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４個の連続する核酸である、［１６］に記載のｇＲＮＡ分子。
［２２］
前記記載される標的化ドメイン配列のいずれか１つの１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４個の連続する核酸は、前記記載される標的化ドメイン配列の５’核酸または３’核酸のいずれも含まない、［１６］に記載のｇＲＮＡ分子。
［２３］
前記標的化ドメインは、前記記載される標的化ドメイン配列からなる、［２］〜［２２］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［２４］
前記ｃｒＲＮＡの一部分と前記ｔｒａｃｒの一部分とは、ハイブリダイズして、配列番号６５８４または６５８５を含むフラッグポールを形成する、［１］〜［２３］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［２５］
前記フラッグポールは、前記フラッグポールの前記ｃｒＲＮＡ部分の３’側に位置する第１のフラッグポール伸長部をさらに含み、前記第１のフラッグポール伸長部は、配列番号６５８６を含む、［２４］に記載のｇＲＮＡ分子。
［２６］
前記フラッグポールは、前記フラッグポールの前記ｃｒＲＮＡ部分の３’側に位置する第２のフラッグポール伸長部および存在する場合には前記第１のフラッグポール伸長部をさらに含み、前記第２のフラッグポール伸長部は、配列番号６５８７を含む、［２４］または［２５］に記載のｇＲＮＡ分子。
［２７］
前記ｔｒａｃｒは、配列番号６６６０または配列番号６６６１を含む、［１］〜［２６］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［２８］
前記ｔｒａｃｒは、配列番号７８１２を含み、任意選択で３’末端に追加の１、２、３、４、５、６、または７個のウラシル（Ｕ）ヌクレオチドをさらに含む、［１］〜［２６］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［２９］
前記ｃｒＲＮＡは、５’から３’に、［標的化ドメイン］−：
ａ）配列番号６５８４；
ｂ）配列番号６５８５；
ｃ）配列番号６６０５；
ｄ）配列番号６６０６；
ｅ）配列番号６６０７；
ｆ）配列番号６６０８；または
ｇ）配列番号７８０６
を含む、［１］〜［２８］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［３０］
前記ｔｒａｃｒは、５’から３’に、
ａ）配列番号６５８９；
ｂ）配列番号６５９０；
ｃ）配列番号６６０９；
ｄ）配列番号６６１０；
ｅ）配列番号６６６０；
ｆ）配列番号６６６１；
ｇ）配列番号７８１２；
ｈ）配列番号７８０７；
ｉ）（配列番号７８０８；
ｊ）配列番号７８０９；
ｋ）３’末端に少なくとも１、２、３、４、５、６または７個のウラシル（Ｕ）ヌクレオチド、例えば１、２、３、４、５、６、または７個のウラシル（Ｕ）ヌクレオチドをさらに含む前記ａ）〜ｊ）のいずれか；
ｌ）３’末端に少なくとも１、２、３、４、５、６または７個のアデニン（Ａ）ヌクレオチド、例えば１、２、３、４、５、６、または７個のアデニン（Ａ）ヌクレオチドをさらに含む前記ａ）〜ｋ）のいずれか；または
ｍ）５’末端に（例えば、５’側端に）少なくとも１、２、３、４、５、６または７個のアデニン（Ａ）ヌクレオチド、例えば１、２、３、４、５、６、または７個のアデニン（Ａ）ヌクレオチドをさらに含む前記ａ）〜ｌ）のいずれか
を含む、［１］〜［２３］または［２９］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［３１］
前記標的化ドメインと前記ｔｒａｃｒとは、別個の核酸分子に配置され、前記標的化ドメインを含む前記核酸分子は配列番号６６０７を含み、配列番号６６０７は任意選択で前記標的化ドメインのすぐ３’側に配置され、および前記ｔｒａｃｒを含む前記核酸分子は、配列番号６６６０を含む、例えばそれからなる、［１］〜［２３］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［３２］
前記フラッグポールの前記ｃｒＲＮＡ部分は、配列番号６６０７または配列番号６６０８を含む、［２７］または［２８］に記載のｇＲＮＡ分子。
［３３］
前記ｔｒａｃｒは、配列番号６５８９または６５９０と、任意選択で、第１のフラッグポール伸長部が存在する場合、配列番号６５８９または６５９０の５’側に配置された第１のｔｒａｃｒ伸長部とを含み、前記第１のｔｒａｃｒ伸長部は、配列番号６５９１を含む、［１］〜［２６］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［３４］
前記標的化ドメインと前記ｔｒａｃｒとは、別個の核酸分子に配置される、［１］〜［３３］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［３５］
前記標的化ドメインと前記ｔｒａｃｒとは、単一の核酸分子に配置され、前記ｔｒａｃｒは、前記標的化ドメインの３’側に配置される、［１］〜［３３］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［３６］
前記標的化ドメインの３’側かつ前記ｔｒａｃｒの５’側に配置されたループをさらに含む、［３５］に記載のｇＲＮＡ分子。
［３７］
前記ループは、配列番号６５８８を含む、［３６］に記載のｇＲＮＡ分子。
［３８］
５’から３’に、［標的化ドメイン］−：
（ａ）配列番号６６０１；
（ｂ）配列番号６６０２；
（ｃ）配列番号６６０３；
（ｄ）配列番号６６０４；
（ｅ）配列番号７８１１；または
（ｆ）３’末端に１、２、３、４、５、６または７個のウラシル（Ｕ）ヌクレオチドをさらに含む前記（ａ）〜（ｅ）のいずれか
を含む、［１］〜［２３］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［３９］
前記標的化ドメインと前記ｔｒａｃｒとは、単一の核酸分子に配置され、前記核酸分子は、前記標的化ドメインと配列番号７８１１とを含み、例えばそれからなり、配列番号７８１１は任意選択で前記標的化ドメインのすぐ３’側に配置される、［１］〜［４０］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［４０］
前記ｇＲＮＡ分子を含む前記核酸分子の１つまたは任意選択で２つ以上は、
ａ）前記１つまたは複数の核酸分子の３’末端における１つ以上、例えば３つのホスホロチオエート修飾；
ｂ）前記１つまたは複数の核酸分子の５’末端における１つ以上、例えば３つのホスホロチオエート修飾；
ｃ）前記１つまたは複数の核酸分子の前記３’末端における１つ以上、例えば３つの２’−Ｏ−メチル修飾；
ｄ）前記１つまたは複数の核酸分子の前記５’末端における１つ以上、例えば３つの２’−Ｏ−メチル修飾；
ｅ）前記１つまたは複数の核酸分子の末端から４番目、末端から３番目、および末端から２番目の３’残基の各々における２’Ｏ−メチル修飾；
ｆ）前記１つまたは複数の核酸分子の末端から４番目、末端から３番目、および末端から２番目の５’残基の各々における２’Ｏ−メチル修飾；または
ｆ）これらの任意の組み合わせ
を含む、［１］〜［３９］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［４１］
配列：
（ａ）配列番号３４２；
（ｂ）配列番号３４３；または
（ｃ）配列番号１７６２
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［４２］
（ａ）配列番号３４４を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｂ）配列番号３４４を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｃ）配列番号３４５を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；または
（ｄ）配列番号３４５を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［４３］
配列：
（ａ）配列番号３４７；
（ｂ）配列番号３４８；または
（ｃ）配列番号１７６３
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［４４］
（ａ）配列番号３４９を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｂ）配列番号３４９を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｃ）配列番号３５０を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；または
（ｄ）配列番号３５０を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［４５］
配列：
（ａ）配列番号３５１；
（ｂ）配列番号３５２；または
（ｃ）配列番号１７６４
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［４６］
（ａ）配列番号３５３を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｂ）配列番号３５３を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｃ）配列番号３５４を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；または
（ｄ）配列番号３５４を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［４７］
配列：
（ａ）配列番号３５５；
（ｂ）配列番号３５６；または
（ｃ）配列番号１７６５
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［４８］
（ａ）配列番号３５７を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｂ）配列番号３５７を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｃ）配列番号３５８を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；または
（ｄ）配列番号３５８を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［４９］
配列：
（ａ）配列番号３５９；
（ｂ）配列番号３６０；または
（ｃ）配列番号１７６６
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［５０］
（ａ）配列番号３６１を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｂ）配列番号３６１を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｃ）配列番号３６２を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；または
（ｄ）配列番号３６２を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［５１］
配列：
（ａ）配列番号３６３；
（ｂ）配列番号３６４；または
（ｃ）配列番号１７６７
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［５２］
（ａ）配列番号３６５を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｂ）配列番号３６５を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｃ）配列番号３６６を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；または
（ｄ）配列番号３６６を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［５３］
配列：
（ａ）配列番号３６７；
（ｂ）配列番号３６８；または
（ｃ）配列番号１７６８
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［５４］
（ａ）配列番号３６９を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｂ）配列番号３６９を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｃ）配列番号３７０を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；または
（ｄ）配列番号３７０を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［５５］
配列：
（ａ）配列番号３７１；
（ｂ）配列番号３７２；または
（ｃ）配列番号１７６９
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［５６］
（ａ）配列番号３７３を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｂ）配列番号３７３を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｃ）配列番号３７４を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；または
（ｄ）配列番号３７４を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［５７］
配列：
（ａ）配列番号３７５；
（ｂ）配列番号３７６；または
（ｃ）配列番号１７７０
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［５８］
（ａ）配列番号３７７を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｂ）配列番号３７７を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｃ）配列番号３７８を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；または
（ｄ）配列番号３７８を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［５９］
配列：
（ａ）配列番号３７９；
（ｂ）配列番号３８０；または
（ｃ）配列番号１７７１
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［６０］
（ａ）配列番号３８１を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｂ）配列番号３８１を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｃ）配列番号３８２を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；または
（ｄ）配列番号３８２を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［６１］
配列：
（ａ）配列番号３８３；
（ｂ）配列番号３８４；または
（ｃ）配列番号１７７２
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［６２］
（ａ）配列番号３８５を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｂ）配列番号３８５を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｃ）配列番号３８６を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；または
（ｄ）配列番号３８６を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［６３］
配列：
（ａ）配列番号３８７；
（ｂ）配列番号３８８；または
（ｃ）配列番号１７７３
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［６４］
（ａ）配列番号３８９を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｂ）配列番号３８９を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｃ）配列番号３９０を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；または
（ｄ）配列番号３９０を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［６５］
配列：
（ａ）配列番号３９１；
（ｂ）配列番号３９２；または
（ｃ）配列番号１７７４
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［６６］
（ａ）配列番号３９３を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｂ）配列番号３９３を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｃ）配列番号３９４を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；または
（ｄ）配列番号３９４を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［６７］
配列：
（ａ）配列番号３９５；
（ｂ）配列番号３９６；または
（ｃ）配列番号１７７５
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［６８］
（ａ）配列番号３９７を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｂ）配列番号３９７を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｃ）配列番号３９８を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；または
（ｄ）配列番号３９８を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［６９］
前記ｇＲＮＡ分子を含むＣＲＩＳＰＲシステム（例えば、本明細書に記載されるとおりのＲＮＰ）が細胞に導入されると、インデルは、前記ｇＲＮＡ分子の前記標的化ドメインと相補的な前記標的配列にまたはその近傍に形成される、［１］〜［６８］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［７０］
前記インデルは、ＧＡＴＡ−１またはＴＡＬ−１結合部位のヌクレオチドを含まない、［６９］に記載のｇＲＮＡ分子。
［７１］
前記ｇＲＮＡ分子を含むＣＲＩＳＰＲシステム（例えば、本明細書に記載されるとおりのＲＮＰ）が細胞の集団に導入されると、インデルは、前記集団の細胞の少なくとも約４０％、例えば少なくとも約５０％、例えば少なくとも約６０％、例えば少なくとも約７０％、例えば少なくとも約８０％、例えば少なくとも約９０％、例えば少なくとも約９５％、例えば少なくとも約９６％、例えば少なくとも約９７％、例えば少なくとも約９８％、例えば少なくとも約９９％において、前記ｇＲＮＡ分子の前記標的化ドメインと相補的な前記標的配列にまたはその近傍に形成される、［１］〜［７０］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［７２］
前記ｇＲＮＡ分子を含むＣＲＩＳＰＲシステム（例えば、本明細書に記載されるとおりのＲＮＰ）が細胞の集団に導入されると、ＧＡＴＡ−１またはＴＡＬ−１結合部位のヌクレオチドを含まないインデルは、前記集団の細胞の少なくとも約２０％、例えば少なくとも約３０％、例えば少なくとも約３５％、例えば少なくとも約４０％、例えば少なくとも約４５％、例えば少なくとも約５０％、例えば少なくとも約５５％、例えば少なくとも約６０％、例えば少なくとも約６５％、例えば少なくとも約７０％、例えば少なくとも約７５％、例えば少なくとも約８０％、例えば少なくとも約８５％、例えば少なくとも約９０％、例えば少なくとも約９５％、例えば少なくとも約９９％において、前記ｇＲＮＡ分子の前記標的化ドメインと相補的な前記標的配列にまたはその近傍に形成される、［１］〜［６８］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［７３］
前記インデルは、前記集団の細胞の少なくとも約３０％、例えば少なくとも約４０％、例えば少なくとも約５０％、例えば少なくとも約６０％、例えば少なくとも約７０％、例えば少なくとも約８０％、例えば少なくとも約９０％、例えば少なくとも約９５％、例えば少なくとも約９６％、例えば少なくとも約９７％、例えば少なくとも約９８％、例えば少なくとも約９９％において、図２５、表１５、表２６、表２７または表３７のいずれかに挙げられるインデルである、［７１］または［７２］に記載のｇＲＮＡ分子。
［７４］
前記細胞の集団中において最も高頻度で検出される３つのインデルは、図２５、表１５、表２６、表２７または表３７のいずれかに挙げられる任意のｇＲＮＡ分子に関連するインデルを含む、［７１］〜［７３］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［７５］
前記インデルは、次世代シーケンシング（ＮＧＳ）によって計測されるとおりである、［６９］〜［７４］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［７６］
前記ｇＲＮＡ分子を含むＣＲＩＳＰＲシステム（例えば、本明細書に記載されるとおりのＲＮＰ）が細胞に導入されると、胎児ヘモグロビンの発現は、前記細胞またはその子孫、例えばその赤血球系子孫、例えばその赤血球細胞子孫において増加する、［１］〜［７５］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［７７］
胎児ヘモグロビンの発現は、前記細胞またはその子孫、例えばその赤血球系子孫、例えばその赤血球細胞子孫において少なくとも約２０％、例えば少なくとも約３０％、例えば少なくとも約４０％、例えば少なくとも約５０％、例えば少なくとも約６０％、例えば少なくとも約７０％、例えば少なくとも約８０％、例えば少なくとも約９０％、例えば少なくとも約９５％、例えば少なくとも約９６％、例えば少なくとも約９７％、例えば少なくとも約９８％、例えば少なくとも約９９％増加する、［７６］に記載のｇＲＮＡ分子。
［７８］
前記細胞またはその子孫、例えばその赤血球系子孫、例えばその赤血球細胞子孫は、１細胞当たり少なくとも約６ピコグラム（例えば、少なくとも約７ピコグラム、少なくとも約８ピコグラム、少なくとも約９ピコグラム、少なくとも約１０ピコグラム、または約８〜約９ピコグラム、または約９〜約１０ピコグラム）の胎児ヘモグロビンを産生する、［７６］または［７７］に記載のｇＲＮＡ分子。
［７９］
前記ｇＲＮＡ分子を含むＣＲＩＳＰＲシステム（例えば、本明細書に記載されるとおりのＲＮＰ）が細胞に導入されると、オフターゲットインデル、例えば次世代シーケンシングおよび／またはヌクレオチド挿入アッセイによって検出可能なとおりのオフターゲットインデルは、前記細胞において形成されない、［１］〜［７８］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［８０］
前記ｇＲＮＡ分子を含むＣＲＩＳＰＲシステム（例えば、本明細書に記載されるとおりのＲＮＰ）が細胞の集団に導入されると、オフターゲットインデル、例えば次世代シーケンシングおよび／またはヌクレオチド挿入アッセイによって検出可能なとおりのオフターゲットインデルは、前記細胞の集団の細胞の約５％超、例えば約１％超、例えば約０．１％超、例えば約０．０１％超において検出されない、［１］〜［７８］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［８１］
前記細胞は、哺乳動物細胞、霊長類細胞またはヒト細胞であり、例えばヒト細胞である（または細胞の集団はそれを含む）、［６９］〜［８０］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［８２］
前記細胞は、ＨＳＰＣである（または細胞の集団はそれを含む）、［８１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［８３］
前記ＨＳＰＣは、ＣＤ３４＋である、［８２］に記載のｇＲＮＡ分子。
［８４］
前記ＨＳＰＣは、ＣＤ３４＋ＣＤ９０＋である、［８３］に記載のｇＲＮＡ分子。
［８５］
前記細胞は、前記細胞が投与される患者にとって自己由来である、［６９］〜［８４］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［８６］
前記細胞は、前記細胞が投与される患者にとって同種異系由来である、［６９］〜［８４］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［８７］
１）［１］〜［８６］のいずれか一項に記載の１つ以上のｇＲＮＡ分子（第１のｇＲＮＡ分子を含む）、およびＣａｓ９分子；
２）［１］〜［８６］のいずれか一項に記載の１つ以上のｇＲＮＡ分子（第１のｇＲＮＡ分子を含む）、およびＣａｓ９分子をコードする核酸；
３）［１］〜［８６］のいずれか一項に記載の１つ以上のｇＲＮＡ分子（第１のｇＲＮＡ分子を含む）をコードする核酸、およびＣａｓ９分子；
４）［１］〜［８６］のいずれか一項に記載の１つ以上のｇＲＮＡ分子（第１のｇＲＮＡ分子を含む）をコードする核酸、およびＣａｓ９分子をコードする核酸；または
５）前記１）〜４）のいずれか、および鋳型核酸；または
６）前記１）〜４）のいずれか、および鋳型核酸をコードする配列を含む核酸
を含む組成物。
［８８］
Ｃａｓ９分子をさらに含む、［１］〜［８６］のいずれか一項に記載の第１のｇＲＮＡ分子を含む組成物。
［８９］
前記Ｃａｓ９分子は、活性または不活性化膿レンサ球菌（ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）Ｃａｓ９である、［８７］または［８８］に記載の組成物。
［９０］
前記Ｃａｓ９分子は、配列番号６６１１を含む、［８７］〜［８９］のいずれか一項に記載の組成物。
［９１］
前記Ｃａｓ９分子は、
（ａ）配列番号７８２１；
（ｂ）配列番号７８２２；
（ｃ）配列番号７８２３；
（ｄ）配列番号７８２４；
（ｅ）配列番号７８２５；
（ｆ）配列番号７８２６；
（ｇ）配列番号７８２７；
（ｈ）配列番号７８２８；
（ｉ）配列番号７８２９；
（ｊ）配列番号７８３０；または
（ｋ）配列番号７８３１
を含む、例えばそれからなる、［８７］〜［８９］のいずれか一項に記載の組成物。
［９２］
前記第１のｇＲＮＡ分子およびＣａｓ９分子は、リボ核タンパク質複合体（ＲＮＰ）に存在する、［８８］〜［９１］のいずれか一項に記載の組成物。
［９３］
第２のｇＲＮＡ分子；第２のｇＲＮＡ分子および第３のｇＲＮＡ分子；または第２のｇＲＮＡ分子、任意選択で第３のｇＲＮＡ分子、および任意選択で第４のｇＲＮＡ分子をさらに含み、前記第２のｇＲＮＡ分子、前記任意選択の第３のｇＲＮＡ分子、および前記任意選択の第４のｇＲＮＡ分子は、［１］〜［６８］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子であり、前記組成物の各ｇＲＮＡ分子は、異なる標的配列と相補的である、［８７］〜［９２］のいずれか一項に記載の組成物。
［９４］
前記第１のｇＲＮＡ分子、前記第２のｇＲＮＡ分子、前記任意選択の第３のｇＲＮＡ分子、および前記任意選択の第４のｇＲＮＡ分子の２つ以上は、同じ遺伝子または領域内の標的配列と相補的である、［９３］に記載の組成物。
［９５］
前記第１のｇＲＮＡ分子、前記第２のｇＲＮＡ分子、前記任意選択の第３のｇＲＮＡ分子、および前記任意選択の第４のｇＲＮＡ分子は、２００００ヌクレオチド以下、１００００ヌクレオチド以下、６０００以下、５０００ヌクレオチド以下、４０００以下、１０００ヌクレオチド以下、５００ヌクレオチド以下、４００ヌクレオチド以下、３００ヌクレオチド以下、２００ヌクレオチド以下、１００ヌクレオチド以下、９０ヌクレオチド以下、８０ヌクレオチド以下、７０ヌクレオチド以下、６０ヌクレオチド以下、５０ヌクレオチド以下、４０ヌクレオチド以下、３０ヌクレオチド以下、２０ヌクレオチド以下または１０ヌクレオチド以下離れた標的配列と相補的である、［９３］または［９４］に記載の組成物。
［９６］
前記第１のｇＲＮＡ分子、前記第２のｇＲＮＡ分子、前記任意選択の第３のｇＲＮＡ分子、および前記任意選択の第４のｇＲＮＡ分子の２つ以上は、異なる遺伝子または領域内の標的配列と相補的である、［９３］に記載の組成物。
［９７］
第１のｇＲＮＡ分子と第２のｇＲＮＡ分子とを含み、前記第１のｇＲＮＡ分子および第２のｇＲＮＡ分子は、
（ａ）［４］に記載のｇＲＮＡ分子から独立して選択され、かつ異なる標的配列に相補的であるか；
（ｂ）［５］に記載のｇＲＮＡ分子から独立して選択され、かつ異なる標的配列に相補的であるか；
ｃ）［６］に記載のｇＲＮＡ分子から独立して選択され、かつ異なる標的配列に相補的であるか；または
（ｄ）［７］に記載のｇＲＮＡ分子から独立して選択され、かつ異なる標的配列に相補的であるか；または
（ｅ）［４１］〜［５６］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子から独立して選択され、かつ異なる標的配列に相補的である、［９４］または［９５］に記載の組成物。
［９８］
第１のｇＲＮＡ分子と第２のｇＲＮＡ分子とを含み、前記第１のｇＲＮＡ分子および第２のｇＲＮＡ分子は、
（ａ）［１０］に記載のｇＲＮＡ分子から独立して選択され、かつ異なる標的配列に相補的であるか；または
（ｂ）［１１］に記載のｇＲＮＡ分子から独立して選択され、かつ異なる標的配列に相補的である、［９４］または［９５］に記載の組成物。
［９９］
第１のｇＲＮＡ分子と第２のｇＲＮＡ分子とを含み、前記第１のｇＲＮＡ分子および第２のｇＲＮＡ分子は、
（ａ）［１３］に記載のｇＲＮＡ分子から独立して選択され、かつ異なる標的配列に相補的であるか；または
（ｂ）［１４］に記載のｇＲＮＡ分子から独立して選択され、かつ異なる標的配列に相補的である、［９４］または［９５］に記載の組成物。
［１００］
第１のｇＲＮＡ分子と第２のｇＲＮＡ分子とを含み、前記第１のｇＲＮＡ分子および第２のｇＲＮＡ分子は、
（ａ）［１６］に記載のｇＲＮＡ分子から独立して選択され、かつ異なる標的配列に相補的であるか；
（ｂ）［１７］に記載のｇＲＮＡ分子から独立して選択され、かつ異なる標的配列に相補的であるか；
（ｃ）［１８］に記載のｇＲＮＡ分子から独立して選択され、かつ異なる標的配列に相補的であるか；または
（ｄ）［５７］〜［６８］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子から独立して選択され、かつ異なる標的配列に相補的である、［９４］〜［９６］のいずれか一項に記載の組成物。
［１０１］
第１のｇＲＮＡ分子と第２のｇＲＮＡ分子とを含み、
（１）前記第１のｇＲＮＡ分子は、（ａ）［４］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｂ）［５］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｃ）［６］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｄ）［７］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、または（ｅ）［４１］〜［５６］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子から選択され；および
（２）前記第２のｇＲＮＡ分子は、（ａ）［１０］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、または（ｂ）［１１］に記載のｇＲＮＡ分子から選択される、［９４］〜［９６］のいずれか一項に記載の組成物。
［１０２］
第１のｇＲＮＡ分子と第２のｇＲＮＡ分子とを含み、
（１）前記第１のｇＲＮＡ分子は、（ａ）［４］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｂ）［５］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｃ）［６］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｄ）［７］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、または（ｅ）［４１］〜［５６］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子から選択され；および
（２）前記第２のｇＲＮＡ分子は、（ａ）［１３］に記載のｇＲＮＡ分子から選択され、（ｂ）［１４］に記載のｇＲＮＡ分子から選択される、［９４］〜［９６］のいずれか一項に記載の組成物。
［１０３］
第１のｇＲＮＡ分子と第２のｇＲＮＡ分子とを含み、
（１）前記第１のｇＲＮＡ分子は、（ａ）［４］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｂ）［５］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｃ）［６］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｄ）［７］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、または（ｅ）［４１］〜［５６］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子から選択され；および
（２）前記第２のｇＲＮＡ分子は、（ａ）［１６］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｂ）［１７］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｃ）［１８］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、または（ｄ）［５７］〜［６８］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子から選択される、［９４］〜［９６］のいずれか一項に記載の組成物。
［１０４］
第１のｇＲＮＡ分子と第２のｇＲＮＡ分子とを含み、
（１）前記第１のｇＲＮＡ分子は、（ａ）［１０］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、または（ｂ）［１１］に記載のｇＲＮＡ分子から選択され；および
（２）前記第２のｇＲＮＡ分子は、（ａ）［１３］に記載のｇＲＮＡ分子から選択され、（ｂ）［１４］に記載のｇＲＮＡ分子から選択される、［９４］〜［９６］のいずれか一項に記載の組成物。
［１０５］
第１のｇＲＮＡ分子と第２のｇＲＮＡ分子とを含み、
（１）前記第１のｇＲＮＡ分子は、（ａ）［１０］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、または（ｂ）［１１］に記載のｇＲＮＡ分子から選択され；および
（２）前記第２のｇＲＮＡ分子は、（ａ）［１６］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｂ）［１７］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｃ）［１８］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、または（ｄ）［５７］〜［６８］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子から選択される、［９４］〜［９６］のいずれか一項に記載の組成物。
［１０６］
第１のｇＲＮＡ分子と第２のｇＲＮＡ分子とを含み、
（１）前記第１のｇＲＮＡ分子は、（ａ）［１３］に記載のｇＲＮＡ分子から選択され、（ｂ）［１４］に記載のｇＲＮＡ分子から選択され；および
（２）前記第２のｇＲＮＡ分子は、（ａ）［１６］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｂ）［１７］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｃ）［１８］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、または（ｄ）［５７］〜［６８］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子から選択される、［９４］〜［９６］のいずれか一項に記載の組成物。
［１０７］
第１のｇＲＮＡ分子と第２のｇＲＮＡ分子とを含み、
（１）前記第１のｇＲＮＡ分子は、（ａ）［１６］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｂ）［１７］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｃ）［１８］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、または（ｄ）［５７］〜［６８］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子から選択され；および（２）前記第２のｇＲＮＡ分子は、βグロビン遺伝子の標的配列に相補的な標的化ドメインを含むか、または
（１）前記第１のｇＲＮＡ分子は、（ａ）［４］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｂ）［５］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｃ）［６］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｄ）［７］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｅ）［４１］〜［５６］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｆ）［１０］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｇ）［１１］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｈ）［１３］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、または（ｉ）［１４］に記載のｇＲＮＡ分子から選択され；および（２）前記第２のｇＲＮＡ分子は、βグロビン遺伝子の標的配列に相補的な標的化ドメインを含む、［９６］に記載の組成物。
［１０８］
前記第１のｇＲＮＡ分子および前記第２のｇＲＮＡ分子は、［４１］〜［６８］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子から独立して選択される、［９４］〜［９６］のいずれか一項に記載の組成物。
［１０９］
前記組成物の前記ｇＲＮＡ分子成分に関して、第１のｇＲＮＡ分子と第２のｇＲＮＡ分子とからなる、［８７］〜［１０８］のいずれか一項に記載の組成物。
［１１０］
前記ｇＲＮＡ分子の各々は、本明細書に記載されるＣａｓ９分子、例えば［９０］または［９１］に記載のＣａｓ９分子と共にリボ核タンパク質複合体（ＲＮＰ）中にある、［８７］〜［１０９］のいずれか一項に記載の組成物。
［１１１］
鋳型核酸を含み、前記鋳型核酸は、前記第１のｇＲＮＡ分子の前記標的配列にまたはその近傍にあるヌクレオチドに対応するヌクレオチドを含む、［８７］〜［１１０］のいずれか一項に記載の組成物。
［１１２］
前記鋳型核酸は、
（ａ）ヒトβグロビン、例えば突然変異Ｇ１６Ｄ、Ｅ２２ＡおよびＴ８７Ｑの１つ以上を含むヒトβグロビン、もしくはその断片；または
（ｂ）ヒトγグロビン、もしくはその断片
をコードする核酸を含む、［１１１］に記載の組成物。
［１１３］
エレクトロポレーションに好適な媒体中に製剤化される、［８７］〜［１１２］のいずれか一項に記載の組成物。
［１１４］
前記ｇＲＮＡ分子の各々は、本明細書に記載されるＣａｓ９分子と共にＲＮＰ中にあり、前記ＲＮＰの各々は、約１０μＭ未満、例えば約３μＭ未満、例えば約１μＭ未満、例えば約０．５μＭ未満、例えば約０．３μＭ未満、例えば約０．１μＭ未満の濃度である、［８７］〜［１１３］のいずれか一項に記載の組成物。
［１１５］
［１］〜［６８］のいずれか一項に記載の１つ以上のｇＲＮＡ分子をコードする核酸配列。
［１１６］
前記核酸は、前記１つ以上のｇＲＮＡ分子をコードする前記配列に作動可能に連結されたプロモーターを含む、［１１５］に記載の核酸配列。
［１１７］
前記プロモーターは、ＲＮＡポリメラーゼＩＩまたはＲＮＡポリメラーゼＩＩＩによって認識されるプロモーターである、［１１６］に記載の核酸配列。
［１１８］
前記プロモーターは、Ｕ６プロモーターまたはＨＩプロモーターである、［１１７］に記載の核酸配列。
［１１９］
前記核酸は、Ｃａｓ９分子をさらにコードする、［１１５］〜［１１８］のいずれか一項に記載の核酸配列。
［１２０］
前記Ｃａｓ９分子は、配列番号６６１１、配列番号７８２１、配列番号７８２２、配列番号７８２３、配列番号７８２４、配列番号７８２５、配列番号７８２６、配列番号７８２７、配列番号７８２８、配列番号７８２９、配列番号７８３０、または配列番号７８３１のいずれかを含む、［１１９］に記載の核酸配列。
［１２１］
前記核酸は、Ｃａｓ９分子をコードする前記配列に作動可能に連結されたプロモーターを含む、［１１９］または［１２０］に記載の核酸配列。
［１２２］
前記プロモーターは、ＥＦ−１プロモーター、ＣＭＶ ＩＥ遺伝子プロモーター、ＥＦ−１αプロモーター、ユビキチンＣプロモーター、またはホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）プロモーターである、［１２１］に記載の核酸配列。
［１２３］
［１１５］〜［１２２］のいずれか一項に記載の核酸を含むベクター。
［１２４］
前記ベクターは、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ベクター、プラスミド、ミニサークル、ナノプラスミド、およびＲＮＡベクターからなる群から選択される、［１２３］に記載のベクター。
［１２５］
細胞（例えば、細胞の集団）を前記細胞内の標的配列でまたはその近傍で改変する（例えば、核酸の構造（例えば、配列）を改変する）方法であって、前記細胞（例えば、細胞の集団）を、
１）［１］〜［６８］のいずれか一項に記載の１つ以上のｇＲＮＡ分子、およびＣａｓ９分子；
２）［１］〜［６８］のいずれか一項に記載の１つ以上のｇＲＮＡ分子、およびＣａｓ９分子をコードする核酸；
３）［１］〜［６８］のいずれか一項に記載の１つ以上のｇＲＮＡ分子をコードする核酸、およびＣａｓ９分子；
４）［１］〜［６８］のいずれか一項に記載の１つ以上のｇＲＮＡ分子をコードする核酸、およびＣａｓ９分子をコードする核酸；
５）前記１）〜４）のいずれか、および鋳型核酸；
６）前記１）〜４）のいずれか、および鋳型核酸をコードする配列を含む核酸；
７）［８７］〜［１１４］のいずれか一項に記載の組成物；または
８）［１２３］または［１２４］に記載のベクター
と接触させる（例えば、それに導入する）ステップを含む方法。
［１２６］
前記ｇＲＮＡ分子または前記ｇＲＮＡ分子をコードする核酸と、前記Ｃａｓ９分子または前記Ｃａｓ９分子をコードする核酸とは、単一の組成物に製剤化される、［１２５］に記載の方法。
［１２７］
前記ｇＲＮＡ分子または前記ｇＲＮＡ分子をコードする核酸と、前記Ｃａｓ９分子または前記Ｃａｓ９分子をコードする核酸とは、２つ以上の組成物に製剤化される、［１２５］に記載の方法。
［１２８］
前記２つ以上の組成物は、同時にまたは逐次的に送達される、［１２７］に記載の方法。
［１２９］
前記細胞は、動物細胞である、［１２５］〜［１２８］のいずれか一項に記載の方法。
［１３０］
前記細胞は、哺乳動物細胞、霊長類細胞またはヒト細胞である、［１２５］〜［１２８］のいずれか一項に記載の方法。
［１３１］
前記細胞は、造血幹細胞・前駆細胞（ＨＳＰＣ）（例えば、ＨＳＰＣの集団）である、［１３０］に記載の方法。
［１３２］
前記細胞は、ＣＤ３４＋細胞である、［１２５］〜［１３１］のいずれか一項に記載の方法。
［１３３］
前記細胞は、ＣＤ３４＋ＣＤ９０＋細胞である、［１２５］〜［１３２］のいずれか一項に記載の方法。
［１３４］
前記細胞は、ＣＤ３４＋細胞に関して富化された細胞の集団を含む組成物中に配置される、［１２５］〜［１３３］のいずれか一項に記載の方法。
［１３５］
前記細胞（例えば、細胞の集団）は、骨髄、動員末梢血または臍帯血から単離されている、［１２５］〜［１３４］のいずれか一項に記載の方法。
［１３６］
前記細胞は、前記細胞が投与される患者にとって自己由来または同種異系由来である、［１２５］〜［１３５］のいずれか一項に記載の方法。
［１３７］
前記改変は、前記１つ以上のｇＲＮＡ分子の前記標的化ドメインと相補的なゲノムＤＮＡ配列にまたはその近傍にインデルをもたらす、［１２５］〜［１３６］のいずれか一項に記載の方法。
［１３８］
前記インデルは、図２５、表１５、表２６、表２７または表３７に示されるインデルである、［１３７］に記載の方法。
［１３９］
前記インデルは、約４０ヌクレオチド未満、例えば３０ヌクレオチド未満、例えば２０ヌクレオチド未満、例えば１０ヌクレオチド未満の挿入または欠失である、［１３７］または［１３８］に記載の方法。
［１４０］
前記インデルは、単一のヌクレオチド欠失である、［１３９］に記載の方法。
［１４１］
細胞の集団をもたらし、前記集団の細胞の少なくとも約５０％、例えば少なくとも約６０％、例えば少なくとも約７０％、例えば少なくとも約８０％、例えば少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％）は、改変されている、例えばインデルを含む、［１３７］〜［１４０］のいずれか一項に記載の方法。
［１４２］
前記改変は、赤血球系統の分化細胞（例えば、赤血球細胞）への分化能を有する細胞（例えば、細胞の集団）をもたらし、前記分化細胞は、胎児ヘモグロビンの増加したレベル、例えば非改変細胞（例えば、細胞の集団）と比べて胎児ヘモグロビンの増加したレベルを呈する、［１２５］〜［１４１］のいずれか一項に記載の方法。
［１４３］
前記改変は、分化細胞の集団、例えば赤血球系統の細胞の集団（例えば、赤血球細胞の集団）への分化能を有する細胞の集団をもたらし、前記分化細胞の集団は、Ｆ細胞の増加した割合、例えば非改変細胞の集団と比べてＦ細胞の増加した割合（例えば、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、または少なくとも約４０％高い）を有する、［１２５］〜［１４２］のいずれか一項に記載の方法。
［１４４］
前記改変は、分化細胞、例えば赤血球系統の細胞（例えば、赤血球細胞）への分化能を有する細胞をもたらし、前記分化細胞は、１細胞当たり少なくとも約６ピコグラム（例えば、少なくとも約７ピコグラム、少なくとも約８ピコグラム、少なくとも約９ピコグラム、少なくとも約１０ピコグラム、または約８〜約９ピコグラム、または約９〜約１０ピコグラム）の胎児ヘモグロビンを産生する、［１２５］〜［１４２］のいずれか一項に記載の方法。
［１４５］
［１２５］〜［１４４］のいずれか一項に記載の方法によって改変された細胞。
［１４６］
［１２５］〜［１４４］のいずれか一項に記載の方法によって得ることが可能な細胞。
［１４７］
［１］〜［６８］のいずれか一項に記載の第１のｇＲＮＡ分子、または［８７］〜［１１４］のいずれか一項に記載の組成物、［１１５］〜［１２２］のいずれか一項に記載の核酸、または［１２３］もしくは［１２４］に記載のベクターを含む細胞。
［１４８］
Ｃａｓ９分子を含む、［１４７］に記載の細胞。
［１４９］
前記Ｃａｓ９分子は、配列番号６６１１、配列番号７８２１、配列番号７８２２、配列番号７８２３、配列番号７８２４、配列番号７８２５、配列番号７８２６、配列番号７８２７、配列番号７８２８、配列番号７８２９、配列番号７８３０、または配列番号７８３１のいずれかを含む、［１４８］に記載の細胞。
［１５０］
［１］〜［６８］のいずれか一項に記載の第２のｇＲＮＡ分子、または［１］〜［６８］のいずれか一項に記載の第２のｇＲＮＡ分子をコードする核酸を含むか、それを含んでいたか、またはそれを含むことになり、前記第１のｇＲＮＡ分子および第２のｇＲＮＡ分子は、同一でない標的化ドメインを含む、［１４５］〜［１４９］のいずれか一項に記載の細胞。
［１５１］
胎児ヘモグロビンの発現は、ｇＲＮＡ分子を含むように修飾されていない同じ細胞型の細胞またはその子孫と比べて前記細胞またはその子孫（例えば、その赤血球系子孫、例えばその赤血球細胞子孫）において増加する、［１４５］〜［１５０］のいずれか一項に記載の細胞。
［１５２］
分化細胞、例えば赤血球系統の細胞（例えば、赤血球細胞）への分化能を有し、前記分化細胞は、胎児ヘモグロの増加したレベル、例えばｇＲＮＡ分子を含むように修飾されていない同じタイプの細胞と比べて胎児ヘモグロの増加したレベルを呈する、［１４５］〜［１５０］のいずれか一項に記載の細胞。
［１５３］
前記分化細胞（例えば、赤血球系統の細胞、例えば赤血球細胞）は、少なくとも約６ピコグラム（例えば、少なくとも約７ピコグラム、少なくとも約８ピコグラム、少なくとも約９ピコグラム、少なくとも約１０ピコグラム、または約８〜約９ピコグラム、または約９〜約１０ピコグラム）の胎児ヘモグロビンを、例えばｇＲＮＡ分子を含むように修飾されていない同じタイプの細胞と比べて、産生する、［１５２］に記載の細胞。
［１５４］
幹細胞増殖剤と接触されていた、［１４５］〜［１５３］のいずれか一項に記載の細胞。
［１５５］
前記幹細胞増殖剤は、化合物１、化合物２、化合物３、化合物４、またはこれらの組み合わせ（例えば、化合物１および化合物４）である、［１５４］に記載の細胞。
［１５６］
前記幹細胞増殖剤は、化合物４である、［１５５］に記載の細胞。
［１５７］
［１］〜［６８］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子の前記標的化ドメインと相補的なゲノムＤＮＡ配列にまたはその近傍にインデルを含む細胞、例えば［１４５］〜［１５６］のいずれか一項に記載の細胞。
［１５８］
前記インデルは、図２５、表１５、表２６、表２７または表３７に示されるインデルである、［１５７］に記載の細胞。
［１５９］
前記インデルは、約４０ヌクレオチド未満、例えば３０ヌクレオチド未満、例えば２０ヌクレオチド未満、例えば１０ヌクレオチド未満の挿入または欠失である、［１５７］または［１５８］に記載の細胞。
［１６０］
前記インデルは、単一のヌクレオチド欠失である、［１５７］〜［１５９］のいずれか一項に記載の細胞。
［１６１］
動物細胞である、［１４５］〜［１６０］のいずれか一項に記載の細胞。
［１６２］
哺乳動物細胞、霊長類細胞またはヒト細胞である、［１６１］に記載の細胞。
［１６３］
造血幹細胞・前駆細胞（ＨＳＰＣ）（例えば、ＨＳＰＣの集団）である、［１４５］〜［１６２］のいずれか一項に記載の細胞。
［１６４］
ＣＤ３４＋細胞である、［１４５］〜［１６３］のいずれか一項に記載の細胞。
［１６５］
ＣＤ３４＋ＣＤ９０＋細胞である、［１６４］に記載の細胞。
［１６６］
前記細胞（例えば、細胞の集団）は、骨髄、動員末梢血または臍帯血から単離されている、［１４５］〜［１６５］のいずれか一項に記載の細胞。
［１６７］
前記細胞が投与される患者にとって自己由来である、［１４５］〜［１６６］のいずれか一項に記載の細胞。
［１６８］
前記細胞が投与される患者にとって同種異系由来である、［１４５］〜［１６６］のいずれか一項に記載の細胞。
［１６９］
［１４５］〜［１６８］のいずれか一項に記載の細胞を含む細胞の集団。
［１７０］
前記集団の細胞の少なくとも約５０％、例えば少なくとも約６０％、例えば少なくとも約７０％、例えば少なくとも約８０％、例えば少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％）は、［１４５］〜［１６８］のいずれか一項に記載の細胞である、［１６９］に記載の細胞の集団。
［１７１］
分化細胞の集団、例えば赤血球系統の細胞の集団（例えば、赤血球細胞の集団）への分化能を有し、前記分化細胞の集団は、Ｆ細胞の増加した割合、例えば同じタイプの修飾されていない細胞の集団と比べてＦ細胞の増加した割合（例えば、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、または少なくとも約４０％高い）を有する、［１６９］または［１７０］に記載の細胞の集団。
［１７２］
前記分化細胞の集団のＦ細胞は、１細胞当たり平均で少なくとも約６ピコグラム（例えば、少なくとも約７ピコグラム、少なくとも約８ピコグラム、少なくとも約９ピコグラム、少なくとも約１０ピコグラム、または約８〜約９ピコグラム、または約９〜約１０ピコグラム）の胎児ヘモグロビンを産生する、［１７１］に記載の細胞の集団。
［１７３］
１）少なくとも１ｅ６のＣＤ３４＋細胞／前記細胞が投与される前記患者の体重ｋｇ、
２）少なくとも２ｅ６のＣＤ３４＋細胞／前記細胞が投与される前記患者の体重ｋｇ、
３）少なくとも３ｅ６のＣＤ３４＋細胞／前記細胞が投与される前記患者の体重ｋｇ、
４）少なくとも４ｅ６のＣＤ３４＋細胞／前記細胞が投与される前記患者の体重ｋｇ、または
５）２ｅ６〜１０ｅ６のＣＤ３４＋細胞／前記細胞が投与される前記患者の体重ｋｇ
を含む、［１６９］〜［１７２］のいずれか一項に記載の細胞の集団。
［１７４］
前記集団の細胞の少なくとも約４０％、例えば少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％）は、ＣＤ３４＋細胞である、［１６９］〜［１７３］のいずれか一項に記載の細胞の集団。
［１７５］
前記集団の細胞の少なくとも約１０％、例えば少なくとも約１５％、例えば少なくとも約２０％、例えば少なくとも約３０％は、ＣＤ３４＋ＣＤ９０＋細胞である、［１７４］に記載の細胞の集団。
［１７６］
骨髄に由来する、［１６９］〜［１７５］のいずれか一項に記載の細胞の集団。
［１７７］
哺乳動物細胞、例えばヒト細胞を含む、例えばそれからなる、［１６９］〜［１７６］のいずれか一項に記載の細胞の集団。
［１７８］
前記細胞の集団が投与される患者に対して自己由来である、［１６９］〜［１７７］のいずれか一項に記載の細胞の集団。
［１７９］
前記細胞の集団が投与される患者に対して同種異系由来である、［１６９］〜［１７７］のいずれか一項に記載の細胞の集団。
［１８０］
［１４５］〜［１６８］のいずれか一項に記載の細胞または［１６９］〜［１７９］のいずれか一項に記載の細胞の集団を含む組成物。
［１８１］
薬学的に許容可能な媒体、例えば凍結保存に好適である薬学的に許容可能な媒体を含む、［１８０］に記載の組成物。
［１８２］
異常ヘモグロビン症を治療する方法であって、［１４５］〜［１６８］のいずれか一項に記載の細胞、［１６９］〜［１７９］のいずれか一項に記載の細胞の集団、または［１８０］もしくは［１８１］に記載の組成物を患者に投与するステップを含む方法。
［１８３］
哺乳動物における胎児ヘモグロビン発現を増加させる方法であって、［１４５］〜［１６８］のいずれか一項に記載の細胞、［１６９］〜［１７９］のいずれか一項に記載の細胞の集団、または［１８０］もしくは［１８１］に記載の組成物を患者に投与するステップを含む方法。
［１８４］
前記異常ヘモグロビン症は、β−サラセミアまたは鎌状赤血球症である、［１８２］に記載の方法。
［１８５］
細胞（例えば、細胞の集団）を調製する方法であって、
（ａ）細胞（例えば、細胞の集団）（例えば、ＨＳＰＣ（例えば、ＨＳＰＣの集団））を提供するステップ；
（ｂ）幹細胞増殖剤を含む細胞培養培地中で前記細胞（例えば、前記細胞の集団）をエキソビボで培養するステップ；および
（ｃ）［１］〜［６８］のいずれか一項に記載の第１のｇＲＮＡ分子、［１］〜［６８］のいずれか一項に記載の第１のｇＲＮＡ分子をコードする核酸分子、［８７］〜［１１４］のいずれか一項に記載の組成物、［１１５］〜［１２２］のいずれか一項に記載の核酸、または［１２３］もしくは［１２４］に記載のベクターを前記細胞に導入するステップ
を含む方法。
［１８６］
前記ステップ（ｃ）の導入の後、前記細胞（例えば、細胞の集団）は、分化細胞（例えば、分化細胞の集団）、例えば赤血球系統の細胞（例えば、赤血球系統の細胞の集団）、例えば赤血球細胞（例えば、赤血球細胞の集団）への分化能を有し、前記分化細胞（例えば、分化細胞の集団）は、増加した胎児ヘモグロビン、例えばステップ（ｃ）に供されていない同じ細胞と比べて増加した胎児ヘモグロビンを産生する、［１８５］に記載の方法。
［１８７］
前記幹細胞増殖剤は、化合物１、化合物２、化合物３、化合物４またはこれらの組み合わせ（例えば、化合物１および化合物４）である、［１８５］または［１８６］に記載の方法。
［１８８］
前記幹細胞増殖剤は、化合物４である、［１８７］に記載の方法。
［１８９］
前記細胞培養培地は、トロンボポエチン（Ｔｐｏ）、Ｆｌｔ３リガンド（Ｆｌｔ−３Ｌ）、およびヒト幹細胞因子（ＳＣＦ）を含む、［１８５］〜［１８８］のいずれか一項に記載の方法。
［１９０］
前記細胞培養培地は、ヒトインターロイキン−６（ＩＬ−６）をさらに含む、［１８９］に記載の方法。
［１９１］
前記細胞培養培地は、トロンボポエチン（Ｔｐｏ）、Ｆｌｔ３リガンド（Ｆｌｔ−３Ｌ）、およびヒト幹細胞因子（ＳＣＦ）をそれぞれ約１０ｎｇ／ｍＬ〜約１０００ｎｇ／ｍＬの範囲の濃度で含む、［１８９］または［１９０］に記載の方法。
［１９２］
前記細胞培養培地は、トロンボポエチン（Ｔｐｏ）、Ｆｌｔ３リガンド（Ｆｌｔ−３Ｌ）、およびヒト幹細胞因子（ＳＣＦ）をそれぞれ約５０ｎｇ／ｍＬの濃度、例えば５０ｎｇ／ｍＬの濃度で含む、［１９１］に記載の方法。
［１９３］
前記細胞培養培地は、ヒトインターロイキン−６（ＩＬ−６）を約１０ｎｇ／ｍＬ〜約１０００ｎｇ／ｍＬの範囲の濃度で含む、［１９０］〜［１９２］のいずれか一項に記載の方法。
［１９４］
前記細胞培養培地は、ヒトインターロイキン−６（ＩＬ−６）を約５０ｎｇ／ｍＬの濃度、例えば５０ｎｇ／ｍＬの濃度で含む、［１９３］に記載の方法。
［１９５］
前記細胞培養培地は、幹細胞増殖剤を約１ｎＭ〜約１ｍＭの範囲の濃度で含む、［１８５］〜［１９４］のいずれか一項に記載の方法。
［１９６］
前記細胞培養培地は、幹細胞増殖剤を約１μＭ〜約１００μＭの範囲の濃度で含む、［１９５］に記載の方法。
［１９７］
前記細胞培養培地は、幹細胞増殖剤を約５０μＭ〜約７５μＭの範囲の濃度で含む、［１９６］に記載の方法。
［１９８］
前記細胞培養培地は、幹細胞増殖剤を約５０μＭの濃度、例えば５０μＭの濃度で含む、［１９７］に記載の方法。
［１９９］
前記細胞培養培地は、幹細胞増殖剤を約７５μＭの濃度、例えば７５μＭの濃度で含む、［１９７］に記載の方法。
［２００］
前記ステップ（ｂ）の培養は、前記ステップ（ｃ）の導入の前の培養期間を含む、［１８５］〜［１９９］のいずれか一項に記載の方法。
［２０１］
前記ステップ（ｃ）の導入の前の前記培養期間は、少なくとも１２時間、例えば約１日〜約３日の期間であり、例えば約１日〜約２日の期間であり、例えば約２日の期間である、［２００］に記載の方法。
［２０２］
前記ステップ（ｂ）の培養は、前記ステップ（ｃ）の導入の後の培養期間を含む、［１８５］〜［２０１］のいずれか一項に記載の方法。
［２０３］
前記ステップ（ｃ）の導入の後の前記培養期間は、少なくとも１２時間、例えば約１日〜約１０日の期間であり、例えば約１日〜約５日の期間であり、例えば約２日〜約４日の期間であり、例えば約２日の期間であり、または約３日の期間であり、または約４日の期間である、［２０２］に記載の方法。
［２０４］
前記細胞の集団は、少なくとも４倍、例えば少なくとも５倍、例えば少なくとも１０倍、例えばステップ（ｂ）によって培養されていない細胞と比べて、増殖する、［１８５］〜［２０３］のいずれか一項に記載の方法。
［２０５］
前記ステップ（ｃ）の導入は、エレクトロポレーションを含む、［１８５］〜［２０４］のいずれか一項に記載の方法。
［２０６］
前記エレクトロポレーションは、１〜５パルス、例えば１パルスを含み、各パルスは、７００ボルト〜２０００ボルトの範囲のパルス電圧であり、かつ１０ｍｓ〜１００ｍｓの範囲のパルス持続時間を有する、［２０５］に記載の方法。
［２０７］
前記エレクトロポレーションは、１パルスを含む、［２０６］に記載の方法。
［２０８］
前記パルス電圧は、１５００〜１９００ボルトの範囲、例えば１７００ボルトである、［２０６］または［２０７］に記載の方法。
［２０９］
前記パルス持続時間は、１０ｍｓ〜４０ｍｓの範囲、例えば２０ｍｓである、［２０６］〜［２０８］のいずれか一項に記載の方法。
［２１０］
ステップ（ａ）で提供される前記細胞（例えば、細胞の集団）は、ヒト細胞（例えば、ヒト細胞の集団）である、［１８５］〜［２０９］のいずれか一項に記載の方法。
［２１１］
ステップ（ａ）で提供される前記細胞（例えば、細胞の集団）は、骨髄、末梢血（例えば、動員末梢血）または臍帯血から単離されたものである、［２１０］に記載の方法。
［２１２］
ステップ（ａ）で提供される前記細胞（例えば、細胞の集団）は、骨髄から単離されたものである、例えば異常ヘモグロビン症に罹患している患者の骨髄から単離されたものである、［２１１］に記載の方法。
［２１３］
ステップ（ａ）で提供される前記細胞の集団は、ＣＤ３４＋細胞に関して富化されたものである、［１８５］〜［２１２］のいずれか一項に記載の方法。
［２１４］
前記ステップ（ｃ）の導入の後、前記細胞（例えば、細胞の集団）は、凍結保存される、［１８５］〜［２１３］のいずれか一項に記載の方法。
［２１５］
前記ステップ（ｃ）の導入の後、前記細胞（例えば、細胞の集団）は、前記第１のｇＲＮＡ分子の前記標的化ドメインと相補的なゲノムＤＮＡ配列にまたはその近傍にインデルを含む、［１８５］〜［２１４］のいずれか一項に記載の方法。
［２１６］
前記インデルは、図２５、表１５、表２６、表２７または表３７に示されるインデルである、［１３２］に記載の方法。
［２１７］
前記ステップ（ｃ）の導入の後、前記細胞の集団の細胞の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％は、前記第１のｇＲＮＡ分子の前記標的化ドメインと相補的なゲノムＤＮＡ配列にまたはその近傍にインデルを含む、［１８５］〜［２１６］のいずれか一項に記載の方法。
［２１８］
前記細胞の集団の細胞の各々における前記インデルは、図２５、表１５、表２６、表２７または表３７に示されるインデルである、［２１７］に記載の方法。
［２１９］
［１８５］〜［２１８］のいずれか一項に記載の方法によって得ることが可能な細胞（例えば、細胞の集団）。
［２２０］
異常ヘモグロビン症を治療する方法であって、［２１９］に記載の細胞（例えば、細胞の集団）を含む組成物をヒト患者に投与するステップを含む方法。
［２２１］
ヒト患者における胎児ヘモグロビン発現を増加させる方法であって、［２１９］に記載の細胞（例えば、細胞の集団）を含む組成物を前記ヒト患者に投与するステップを含む方法。
［２２２］
前記異常ヘモグロビン症は、β−サラセミアまたは鎌状赤血球症である、［２２０］に記載の方法。
［２２３］
前記ヒト患者は、前記ヒト患者の体重１ｋｇ当たり少なくとも約１ｅ６個の［２１９］に記載の細胞、例えば前記ヒト患者の体重１ｋｇ当たり少なくとも約１ｅ６個の［２１９］に記載のＣＤ３４＋細胞を含む組成物を投与される、［２２０］〜［２２２］のいずれか一項に記載の方法。
［２２４］
前記ヒト患者は、前記ヒト患者の体重１ｋｇ当たり少なくとも約２ｅ６個の［２１９］に記載の細胞、例えば前記ヒト患者の体重１ｋｇ当たり少なくとも約２ｅ６個の［２１９］に記載のＣＤ３４＋細胞を含む組成物を投与される、［２２３］に記載の方法。
［２２５］
前記ヒト患者は、前記ヒト患者の体重１ｋｇ当たり約２ｅ６〜約１０ｅ６個の［２１９］に記載の細胞、例えば前記ヒト患者の体重１ｋｇ当たり少なくとも約２ｅ６〜約１０ｅ６個の［２１９］に記載のＣＤ３４＋細胞を含む組成物を投与される、［２２３］に記載の方法。
［２２６］
薬剤として用いられる、［１］〜［８６］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子、［８７］〜［１１４］または［１８０］もしくは［１８１］のいずれか一項に記載の組成物、［１１５］〜［１２２］のいずれか一項に記載の核酸、［１２３］または［１２４］に記載のベクター、［１４５］〜［１６８］または［２１９］のいずれか一項に記載の細胞、あるいは［１６９］〜［１７９］のいずれか一項に記載の細胞の集団。
［２２７］
薬剤の製造に用いられる、［１］〜［８６］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子、［８７］〜［１１４］または［１８０］もしくは［１８１］のいずれか一項に記載の組成物、［１１５］〜［１２２］のいずれか一項に記載の核酸、［１２３］または［１２４］に記載のベクター、［１４５］〜［１６８］または［２１９］のいずれか一項に記載の細胞、あるいは［１６９］〜［１７９］のいずれか一項に記載の細胞の集団。
［２２８］
疾患の治療に用いられる、［１］〜［８６］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子、［８７］〜［１１４］または［１８０］もしくは［１８１］のいずれか一項に記載の組成物、［１１５］〜［１２２］のいずれか一項に記載の核酸、［１２３］または［１２４］に記載のベクター、［１４５］〜［１６８］または［２１９］のいずれか一項に記載の細胞、あるいは［１６９］〜［１７９］のいずれか一項に記載の細胞の集団。
［２２９］
疾患の治療に用いられ、前記疾患は、異常ヘモグロビン症である、［１］〜［８６］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子、［８７］〜［１１４］または［１８０］もしくは［１８１］のいずれか一項に記載の組成物、［１１５］〜［１２２］のいずれか一項に記載の核酸、［１２３］または［１２４］に記載のベクター、［１４５］〜［１６８］または［２１９］のいずれか一項に記載の細胞、あるいは［１６９］〜［１７９］のいずれか一項に記載の細胞の集団。
［２３０］
疾患の治療に用いられ、前記異常ヘモグロビン症は、β−サラセミアまたは鎌状赤血球症である、［１］〜［８６］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子、［８７］〜［１１４］または［１８０］もしくは［１８１］のいずれか一項に記載の組成物、［１１５］〜［１２２］のいずれか一項に記載の核酸、［１２３］または［１２４］に記載のベクター、［１４５］〜［１６８］または［２１９］のいずれか一項に記載の細胞、または［１６９］〜［１７９］のいずれか一項に記載の細胞の集団。
当業者は、本明細書に記載される本発明の具体的な実施形態の多くの均等物を認識し、またはルーチンに過ぎない実験を用いて確認することができるであろう。本発明は具体的な態様を参照して開示されているが、本発明の他の態様および変形形態が当業者によって本発明の真の趣旨および範囲から逸脱することなく考案され得ることは明らかである。添付の特許請求の範囲は、かかる態様および均等な変形形態の全てを含むものと解釈されることが意図される。
また、本発明は以下を提供する。
［１］
ｔｒａｃｒとｃｒＲＮＡとを含むｇＲＮＡ分子であって、前記ｃｒＲＮＡは、ＢＣＬ１１Ａ遺伝子（例えば、ヒトＢＣＬ１１ａ遺伝子）、ＢＣＬ１１ａエンハンサー（例えば、ヒトＢＣＬ１１ａエンハンサー）、またはＨＦＰＨ領域（例えば、ヒトＨＰＦＨ領域）の標的配列に相補的な標的化ドメインを含む、ｇＲＮＡ分子。
［２］
前記標的配列は、前記ＢＣＬ１１Ａ遺伝子のものであり、かつ前記標的化ドメインは、配列番号１〜配列番号８５または配列番号４００〜配列番号１２３１のいずれか１つを含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［３］
前記標的配列は、ＢＣＬ１１ａエンハンサーのものであり、かつ前記標的化ドメインは、配列番号１２３２〜配列番号１４９９のいずれか１つを含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［４］
前記標的配列は、ＢＣＬ１１ａエンハンサーのものであり、かつ前記標的化ドメインは、配列番号１８２〜配列番号２７７または配列番号３３４〜配列番号３４１のいずれか１つを含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［５］
前記標的化ドメインは、配列番号３４１、配列番号２４６、配列番号２４８、配列番号２４７、配列番号２４５、配列番号２４９、配列番号２４４、配列番号１９９、配列番号２５１、配列番号２５０、配列番号３３４、配列番号１８５、配列番号１８６、配列番号３３６、または配列番号３３７のいずれか１つを含む、例えばそれからなる、［４］に記載のｇＲＮＡ分子。
［６］
前記標的化ドメインは、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号３３５、配列番号３３６、配列番号３３７、または配列番号３３８のいずれか１つを含む、例えばそれからなる、［４］に記載のｇＲＮＡ分子。
［７］
前記標的化ドメインは、配列番号２４８または配列番号３３８のいずれか１つを含む、例えばそれからなる、［４］に記載のｇＲＮＡ分子。
［８］
前記標的化ドメインは、配列番号２４８を含む、例えばそれからなる、［４］に記載のｇＲＮＡ分子。
［９］
前記標的化ドメインは、配列番号３３８を含む、例えばそれからなる、［４］に記載のｇＲＮＡ分子。
［１０］
前記標的配列は、ＢＣＬ１１ａエンハンサーのものであり、かつ標的化ドメインは、配列番号２７８〜配列番号３３３のいずれか１つを含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［１１］
前記標的化ドメインは、配列番号３１８、配列番号３１２、配列番号３１３、配列番号２９４、配列番号３１０、配列番号３１９、配列番号２９８、配列番号３２２、配列番号３１１、配列番号３１５、配列番号２９０、配列番号３１７、配列番号３０９、配列番号２８９、または配列番号２８１のいずれか１つを含む、例えばそれからなる、［１０］に記載のｇＲＮＡ分子。
［１２］
前記標的化ドメインは、配列番号３１８を含む、例えばそれからなる、［１０］に記載のｇＲＮＡ分子。
［１３］
前記標的配列は、ＢＣＬ１１ａエンハンサーのものであり、かつ前記標的化ドメインは、配列番号１５９６〜配列番号１６９１のいずれか１つを含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［１４］
前記標的化ドメインは、配列番号１６８３、配列番号１６３８、配列番号１６４７、配列番号１６０９、配列番号１６２１、配列番号１６１７、配列番号１６５４、配列番号１６３１、配列番号１６２０、配列番号１６３７、配列番号１６１２、配列番号１６５６、配列番号１６１９、配列番号１６７５、配列番号１６４５、配列番号１５９８、配列番号１５９９、配列番号１６６３、配列番号１６７７、または配列番号１６２６のいずれか１つを含む、例えばそれからなる、［１３］に記載のｇＲＮＡ分子。
［１５］
前記標的配列は、ＨＦＰＨ領域（例えば、フランス型ＨＰＦＨ領域）のものであり、かつ前記標的化ドメインは、配列番号８６〜配列番号１８１、配列番号１５００〜配列番号１５９５、または配列番号１６９２〜配列番号１７６１のいずれか１つを含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［１６］
前記標的化ドメインは、配列番号１００、配列番号１６５、配列番号１１３、配列番号９９、配列番号１１２、配列番号９８、配列番号１５８０、配列番号１０６、配列番号１５０３、配列番号１５８９、配列番号１６０、配列番号１５３７、配列番号１５９、配列番号１０１、配列番号１６２、配列番号１０４、配列番号１３８、配列番号１５３６、配列番号１５３９、配列番号１５８５のいずれか１つを含む、例えばそれからなる、［１５］に記載のｇＲＮＡ分子。
［１７］
前記標的化ドメインは、配列番号９８、配列番号１００、配列番号１５０５、配列番号１５８９、配列番号１７００、または配列番号１７５０のいずれか１つを含む、例えばそれからなる、［１５］に記載のｇＲＮＡ分子。
［１８］
前記標的化ドメインは、配列番号１００、配列番号１６５、または配列番号１１３のいずれか１つを含む、例えばそれからなる、［１５］に記載のｇＲＮＡ分子。
［１９］
前記標的化ドメインは、前記記載される標的化ドメイン配列のいずれか１つの１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４個の連続する核酸を含む、例えばそれからなる、［２］〜［１８］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［２０］
前記記載される標的化ドメイン配列のいずれか１つの１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４個の連続する核酸は、前記記載される標的化ドメイン配列の３’末端に配置された１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４個の連続する核酸である、［１６］に記載のｇＲＮＡ分子。
［２１］
前記記載される標的化ドメイン配列のいずれか１つの１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４個の連続する核酸は、前記記載される標的化ドメイン配列の５’末端に配置された１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４個の連続する核酸である、［１６］に記載のｇＲＮＡ分子。
［２２］
前記記載される標的化ドメイン配列のいずれか１つの１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４個の連続する核酸は、前記記載される標的化ドメイン配列の５’核酸または３’核酸のいずれも含まない、［１６］に記載のｇＲＮＡ分子。
［２３］
前記標的化ドメインは、前記記載される標的化ドメイン配列からなる、［２］〜［２２］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［２４］
前記ｃｒＲＮＡの一部分と前記ｔｒａｃｒの一部分とは、ハイブリダイズして、配列番号６５８４または６５８５を含むフラッグポールを形成する、［１］〜［２３］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［２５］
前記フラッグポールは、前記フラッグポールの前記ｃｒＲＮＡ部分の３’側に位置する第１のフラッグポール伸長部をさらに含み、前記第１のフラッグポール伸長部は、配列番号６５８６を含む、［２４］に記載のｇＲＮＡ分子。
［２６］
前記フラッグポールは、前記フラッグポールの前記ｃｒＲＮＡ部分の３’側に位置する第２のフラッグポール伸長部および存在する場合には前記第１のフラッグポール伸長部をさらに含み、前記第２のフラッグポール伸長部は、配列番号６５８７を含む、［２４］または［２５］に記載のｇＲＮＡ分子。
［２７］
前記ｔｒａｃｒは、配列番号６６６０または配列番号６６６１を含む、［１］〜［２６］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［２８］
前記ｔｒａｃｒは、配列番号７８１２を含み、任意選択で３’末端に追加の１、２、３、４、５、６、または７個のウラシル（Ｕ）ヌクレオチドをさらに含む、［１］〜［２６］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［２９］
前記ｃｒＲＮＡは、５’から３’に、［標的化ドメイン］−：
ａ）配列番号６５８４；
ｂ）配列番号６５８５；
ｃ）配列番号６６０５；
ｄ）配列番号６６０６；
ｅ）配列番号６６０７；
ｆ）配列番号６６０８；または
ｇ）配列番号７８０６
を含む、［１］〜［２８］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［３０］
前記ｔｒａｃｒは、５’から３’に、
ａ）配列番号６５８９；
ｂ）配列番号６５９０；
ｃ）配列番号６６０９；
ｄ）配列番号６６１０；
ｅ）配列番号６６６０；
ｆ）配列番号６６６１；
ｇ）配列番号７８１２；
ｈ）配列番号７８０７；
ｉ）（配列番号７８０８；
ｊ）配列番号７８０９；
ｋ）３’末端に少なくとも１、２、３、４、５、６または７個のウラシル（Ｕ）ヌクレオチド、例えば１、２、３、４、５、６、または７個のウラシル（Ｕ）ヌクレオチドをさらに含む前記ａ）〜ｊ）のいずれか；
ｌ）３’末端に少なくとも１、２、３、４、５、６または７個のアデニン（Ａ）ヌクレオチド、例えば１、２、３、４、５、６、または７個のアデニン（Ａ）ヌクレオチドをさらに含む前記ａ）〜ｋ）のいずれか；または
ｍ）５’末端に（例えば、５’側端に）少なくとも１、２、３、４、５、６または７個のアデニン（Ａ）ヌクレオチド、例えば１、２、３、４、５、６、または７個のアデニン（Ａ）ヌクレオチドをさらに含む前記ａ）〜ｌ）のいずれか
を含む、［１］〜［２３］または［２９］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［３１］
前記標的化ドメインと前記ｔｒａｃｒとは、別個の核酸分子に配置され、前記標的化ドメインを含む前記核酸分子は配列番号６６０７を含み、配列番号６６０７は任意選択で前記標的化ドメインのすぐ３’側に配置され、および前記ｔｒａｃｒを含む前記核酸分子は、配列番号６６６０を含む、例えばそれからなる、［１］〜［２３］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［３２］
前記フラッグポールの前記ｃｒＲＮＡ部分は、配列番号６６０７または配列番号６６０８を含む、［２７］または［２８］に記載のｇＲＮＡ分子。
［３３］
前記ｔｒａｃｒは、配列番号６５８９または６５９０と、任意選択で、第１のフラッグポール伸長部が存在する場合、配列番号６５８９または６５９０の５’側に配置された第１のｔｒａｃｒ伸長部とを含み、前記第１のｔｒａｃｒ伸長部は、配列番号６５９１を含む、［１］〜［２６］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［３４］
前記標的化ドメインと前記ｔｒａｃｒとは、別個の核酸分子に配置される、［１］〜［３３］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［３５］
前記標的化ドメインと前記ｔｒａｃｒとは、単一の核酸分子に配置され、前記ｔｒａｃｒは、前記標的化ドメインの３’側に配置される、［１］〜［３３］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［３６］
前記標的化ドメインの３’側かつ前記ｔｒａｃｒの５’側に配置されたループをさらに含む、［３５］に記載のｇＲＮＡ分子。
［３７］
前記ループは、配列番号６５８８を含む、［３６］に記載のｇＲＮＡ分子。
［３８］
５’から３’に、［標的化ドメイン］−：
（ａ）配列番号６６０１；
（ｂ）配列番号６６０２；
（ｃ）配列番号６６０３；
（ｄ）配列番号６６０４；
（ｅ）配列番号７８１１；または
（ｆ）３’末端に１、２、３、４、５、６または７個のウラシル（Ｕ）ヌクレオチドをさらに含む前記（ａ）〜（ｅ）のいずれか
を含む、［１］〜［２３］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［３９］
前記標的化ドメインと前記ｔｒａｃｒとは、単一の核酸分子に配置され、前記核酸分子は、前記標的化ドメインと配列番号７８１１とを含み、例えばそれからなり、配列番号７８１１は任意選択で前記標的化ドメインのすぐ３’側に配置される、［１］〜［４０］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［４０］
前記ｇＲＮＡ分子を含む前記核酸分子の１つまたは任意選択で２つ以上は、
ａ）前記１つまたは複数の核酸分子の３’末端における１つ以上、例えば３つのホスホロチオエート修飾；
ｂ）前記１つまたは複数の核酸分子の５’末端における１つ以上、例えば３つのホスホロチオエート修飾；
ｃ）前記１つまたは複数の核酸分子の前記３’末端における１つ以上、例えば３つの２’−Ｏ−メチル修飾；
ｄ）前記１つまたは複数の核酸分子の前記５’末端における１つ以上、例えば３つの２’−Ｏ−メチル修飾；
ｅ）前記１つまたは複数の核酸分子の末端から４番目、末端から３番目、および末端から２番目の３’残基の各々における２’Ｏ−メチル修飾；
ｆ）前記１つまたは複数の核酸分子の末端から４番目、末端から３番目、および末端から２番目の５’残基の各々における２’Ｏ−メチル修飾；または
ｆ）これらの任意の組み合わせ
を含む、［１］〜［３９］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［４１］
配列：
（ａ）配列番号３４２；
（ｂ）配列番号３４３；または
（ｃ）配列番号１７６２
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［４２］
（ａ）配列番号３４４を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｂ）配列番号３４４を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｃ）配列番号３４５を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；または
（ｄ）配列番号３４５を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［４３］
配列：
（ａ）配列番号３４７；
（ｂ）配列番号３４８；または
（ｃ）配列番号１７６３
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［４４］
（ａ）配列番号３４９を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｂ）配列番号３４９を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｃ）配列番号３５０を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；または
（ｄ）配列番号３５０を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［４５］
配列：
（ａ）配列番号３５１；
（ｂ）配列番号３５２；または
（ｃ）配列番号１７６４
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［４６］
（ａ）配列番号３５３を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｂ）配列番号３５３を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｃ）配列番号３５４を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；または
（ｄ）配列番号３５４を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［４７］
配列：
（ａ）配列番号３５５；
（ｂ）配列番号３５６；または
（ｃ）配列番号１７６５
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［４８］
（ａ）配列番号３５７を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｂ）配列番号３５７を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｃ）配列番号３５８を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；または
（ｄ）配列番号３５８を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［４９］
配列：
（ａ）配列番号３５９；
（ｂ）配列番号３６０；または
（ｃ）配列番号１７６６
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［５０］
（ａ）配列番号３６１を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｂ）配列番号３６１を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｃ）配列番号３６２を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；または
（ｄ）配列番号３６２を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［５１］
配列：
（ａ）配列番号３６３；
（ｂ）配列番号３６４；または
（ｃ）配列番号１７６７
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［５２］
（ａ）配列番号３６５を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｂ）配列番号３６５を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｃ）配列番号３６６を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；または
（ｄ）配列番号３６６を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［５３］
配列：
（ａ）配列番号３６７；
（ｂ）配列番号３６８；または
（ｃ）配列番号１７６８
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［５４］
（ａ）配列番号３６９を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｂ）配列番号３６９を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｃ）配列番号３７０を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；または
（ｄ）配列番号３７０を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［５５］
配列：
（ａ）配列番号３７１；
（ｂ）配列番号３７２；または
（ｃ）配列番号１７６９
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［５６］
（ａ）配列番号３７３を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｂ）配列番号３７３を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｃ）配列番号３７４を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；または
（ｄ）配列番号３７４を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［５７］
配列：
（ａ）配列番号３７５；
（ｂ）配列番号３７６；または
（ｃ）配列番号１７７０
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［５８］
（ａ）配列番号３７７を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｂ）配列番号３７７を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｃ）配列番号３７８を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；または
（ｄ）配列番号３７８を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［５９］
配列：
（ａ）配列番号３７９；
（ｂ）配列番号３８０；または
（ｃ）配列番号１７７１
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［６０］
（ａ）配列番号３８１を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｂ）配列番号３８１を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｃ）配列番号３８２を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；または
（ｄ）配列番号３８２を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［６１］
配列：
（ａ）配列番号３８３；
（ｂ）配列番号３８４；または
（ｃ）配列番号１７７２
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［６２］
（ａ）配列番号３８５を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｂ）配列番号３８５を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｃ）配列番号３８６を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；または
（ｄ）配列番号３８６を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［６３］
配列：
（ａ）配列番号３８７；
（ｂ）配列番号３８８；または
（ｃ）配列番号１７７３
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［６４］
（ａ）配列番号３８９を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｂ）配列番号３８９を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｃ）配列番号３９０を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；または
（ｄ）配列番号３９０を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［６５］
配列：
（ａ）配列番号３９１；
（ｂ）配列番号３９２；または
（ｃ）配列番号１７７４
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［６６］
（ａ）配列番号３９３を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｂ）配列番号３９３を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｃ）配列番号３９４を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；または
（ｄ）配列番号３９４を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［６７］
配列：
（ａ）配列番号３９５；
（ｂ）配列番号３９６；または
（ｃ）配列番号１７７５
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［６８］
（ａ）配列番号３９７を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｂ）配列番号３９７を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；
（ｃ）配列番号３９８を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ；または
（ｄ）配列番号３９８を含む、例えばそれからなるｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含む、例えばそれからなるｔｒａｃｒ
を含む、例えばそれからなる、［１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［６９］
前記ｇＲＮＡ分子を含むＣＲＩＳＰＲシステム（例えば、本明細書に記載されるとおりのＲＮＰ）が細胞に導入されると、インデルは、前記ｇＲＮＡ分子の前記標的化ドメインと相補的な前記標的配列にまたはその近傍に形成される、［１］〜［６８］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［７０］
前記インデルは、ＧＡＴＡ−１またはＴＡＬ−１結合部位のヌクレオチドを含まない、［６９］に記載のｇＲＮＡ分子。
［７１］
前記ｇＲＮＡ分子を含むＣＲＩＳＰＲシステム（例えば、本明細書に記載されるとおりのＲＮＰ）が細胞の集団に導入されると、インデルは、前記集団の細胞の少なくとも約４０％、例えば少なくとも約５０％、例えば少なくとも約６０％、例えば少なくとも約７０％、例えば少なくとも約８０％、例えば少なくとも約９０％、例えば少なくとも約９５％、例えば少なくとも約９６％、例えば少なくとも約９７％、例えば少なくとも約９８％、例えば少なくとも約９９％において、前記ｇＲＮＡ分子の前記標的化ドメインと相補的な前記標的配列にまたはその近傍に形成される、［１］〜［７０］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［７２］
前記ｇＲＮＡ分子を含むＣＲＩＳＰＲシステム（例えば、本明細書に記載されるとおりのＲＮＰ）が細胞の集団に導入されると、ＧＡＴＡ−１またはＴＡＬ−１結合部位のヌクレオチドを含まないインデルは、前記集団の細胞の少なくとも約２０％、例えば少なくとも約３０％、例えば少なくとも約３５％、例えば少なくとも約４０％、例えば少なくとも約４５％、例えば少なくとも約５０％、例えば少なくとも約５５％、例えば少なくとも約６０％、例えば少なくとも約６５％、例えば少なくとも約７０％、例えば少なくとも約７５％、例えば少なくとも約８０％、例えば少なくとも約８５％、例えば少なくとも約９０％、例えば少なくとも約９５％、例えば少なくとも約９９％において、前記ｇＲＮＡ分子の前記標的化ドメインと相補的な前記標的配列にまたはその近傍に形成される、［１］〜［６８］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［７３］
前記インデルは、前記集団の細胞の少なくとも約３０％、例えば少なくとも約４０％、例えば少なくとも約５０％、例えば少なくとも約６０％、例えば少なくとも約７０％、例えば少なくとも約８０％、例えば少なくとも約９０％、例えば少なくとも約９５％、例えば少なくとも約９６％、例えば少なくとも約９７％、例えば少なくとも約９８％、例えば少なくとも約９９％において、図２５、表１５、表２６、表２７または表３７のいずれかに挙げられるインデルである、［７１］または［７２］に記載のｇＲＮＡ分子。
［７４］
前記細胞の集団中において最も高頻度で検出される３つのインデルは、図２５、表１５、表２６、表２７または表３７のいずれかに挙げられる任意のｇＲＮＡ分子に関連するインデルを含む、［７１］〜［７３］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［７５］
前記インデルは、次世代シーケンシング（ＮＧＳ）によって計測されるとおりである、［６９］〜［７４］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［７６］
前記ｇＲＮＡ分子を含むＣＲＩＳＰＲシステム（例えば、本明細書に記載されるとおりのＲＮＰ）が細胞に導入されると、胎児ヘモグロビンの発現は、前記細胞またはその子孫、例えばその赤血球系子孫、例えばその赤血球細胞子孫において増加する、［１］〜［７５］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［７７］
胎児ヘモグロビンの発現は、前記細胞またはその子孫、例えばその赤血球系子孫、例えばその赤血球細胞子孫において少なくとも約２０％、例えば少なくとも約３０％、例えば少なくとも約４０％、例えば少なくとも約５０％、例えば少なくとも約６０％、例えば少なくとも約７０％、例えば少なくとも約８０％、例えば少なくとも約９０％、例えば少なくとも約９５％、例えば少なくとも約９６％、例えば少なくとも約９７％、例えば少なくとも約９８％、例えば少なくとも約９９％増加する、［７６］に記載のｇＲＮＡ分子。
［７８］
前記細胞またはその子孫、例えばその赤血球系子孫、例えばその赤血球細胞子孫は、１細胞当たり少なくとも約６ピコグラム（例えば、少なくとも約７ピコグラム、少なくとも約８ピコグラム、少なくとも約９ピコグラム、少なくとも約１０ピコグラム、または約８〜約９ピコグラム、または約９〜約１０ピコグラム）の胎児ヘモグロビンを産生する、［７６］または［７７］に記載のｇＲＮＡ分子。
［７９］
前記ｇＲＮＡ分子を含むＣＲＩＳＰＲシステム（例えば、本明細書に記載されるとおりのＲＮＰ）が細胞に導入されると、オフターゲットインデル、例えば次世代シーケンシングおよび／またはヌクレオチド挿入アッセイによって検出可能なとおりのオフターゲットインデルは、前記細胞において形成されない、［１］〜［７８］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［８０］
前記ｇＲＮＡ分子を含むＣＲＩＳＰＲシステム（例えば、本明細書に記載されるとおりのＲＮＰ）が細胞の集団に導入されると、オフターゲットインデル、例えば次世代シーケンシングおよび／またはヌクレオチド挿入アッセイによって検出可能なとおりのオフターゲットインデルは、前記細胞の集団の細胞の約５％超、例えば約１％超、例えば約０．１％超、例えば約０．０１％超において検出されない、［１］〜［７８］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［８１］
前記細胞は、哺乳動物細胞、霊長類細胞またはヒト細胞であり、例えばヒト細胞である（または細胞の集団はそれを含む）、［６９］〜［８０］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［８２］
前記細胞は、ＨＳＰＣである（または細胞の集団はそれを含む）、［８１］に記載のｇＲＮＡ分子。
［８３］
前記ＨＳＰＣは、ＣＤ３４＋である、［８２］に記載のｇＲＮＡ分子。
［８４］
前記ＨＳＰＣは、ＣＤ３４＋ＣＤ９０＋である、［８３］に記載のｇＲＮＡ分子。
［８５］
前記細胞は、前記細胞が投与される患者にとって自己由来である、［６９］〜［８４］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［８６］
前記細胞は、前記細胞が投与される患者にとって同種異系由来である、［６９］〜［８４］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。
［８７］
１）［１］〜［８６］のいずれか一項に記載の１つ以上のｇＲＮＡ分子（第１のｇＲＮＡ分子を含む）、およびＣａｓ９分子；
２）［１］〜［８６］のいずれか一項に記載の１つ以上のｇＲＮＡ分子（第１のｇＲＮＡ分子を含む）、およびＣａｓ９分子をコードする核酸；
３）［１］〜［８６］のいずれか一項に記載の１つ以上のｇＲＮＡ分子（第１のｇＲＮＡ分子を含む）をコードする核酸、およびＣａｓ９分子；
４）［１］〜［８６］のいずれか一項に記載の１つ以上のｇＲＮＡ分子（第１のｇＲＮＡ分子を含む）をコードする核酸、およびＣａｓ９分子をコードする核酸；または
５）前記１）〜４）のいずれか、および鋳型核酸；または
６）前記１）〜４）のいずれか、および鋳型核酸をコードする配列を含む核酸
を含む組成物。
［８８］
Ｃａｓ９分子をさらに含む、［１］〜［８６］のいずれか一項に記載の第１のｇＲＮＡ分子を含む組成物。
［８９］
前記Ｃａｓ９分子は、活性または不活性化膿レンサ球菌（ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）Ｃａｓ９である、［８７］または［８８］に記載の組成物。
［９０］
前記Ｃａｓ９分子は、配列番号６６１１を含む、［８７］〜［８９］のいずれか一項に記載の組成物。
［９１］
前記Ｃａｓ９分子は、
（ａ）配列番号７８２１；
（ｂ）配列番号７８２２；
（ｃ）配列番号７８２３；
（ｄ）配列番号７８２４；
（ｅ）配列番号７８２５；
（ｆ）配列番号７８２６；
（ｇ）配列番号７８２７；
（ｈ）配列番号７８２８；
（ｉ）配列番号７８２９；
（ｊ）配列番号７８３０；または
（ｋ）配列番号７８３１
を含む、例えばそれからなる、［８７］〜［８９］のいずれか一項に記載の組成物。
［９２］
前記第１のｇＲＮＡ分子およびＣａｓ９分子は、リボ核タンパク質複合体（ＲＮＰ）に存在する、［８８］〜［９１］のいずれか一項に記載の組成物。
［９３］
第２のｇＲＮＡ分子；第２のｇＲＮＡ分子および第３のｇＲＮＡ分子；または第２のｇＲＮＡ分子、任意選択で第３のｇＲＮＡ分子、および任意選択で第４のｇＲＮＡ分子をさらに含み、前記第２のｇＲＮＡ分子、前記任意選択の第３のｇＲＮＡ分子、および前記任意選択の第４のｇＲＮＡ分子は、［１］〜［６８］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子であり、前記組成物の各ｇＲＮＡ分子は、異なる標的配列と相補的である、［８７］〜［９２］のいずれか一項に記載の組成物。
［９４］
前記第１のｇＲＮＡ分子、前記第２のｇＲＮＡ分子、前記任意選択の第３のｇＲＮＡ分子、および前記任意選択の第４のｇＲＮＡ分子の２つ以上は、同じ遺伝子または領域内の標的配列と相補的である、［９３］に記載の組成物。
［９５］
前記第１のｇＲＮＡ分子、前記第２のｇＲＮＡ分子、前記任意選択の第３のｇＲＮＡ分子、および前記任意選択の第４のｇＲＮＡ分子は、２００００ヌクレオチド以下、１００００ヌクレオチド以下、６０００以下、５０００ヌクレオチド以下、４０００以下、１０００ヌクレオチド以下、５００ヌクレオチド以下、４００ヌクレオチド以下、３００ヌクレオチド以下、２００ヌクレオチド以下、１００ヌクレオチド以下、９０ヌクレオチド以下、８０ヌクレオチド以下、７０ヌクレオチド以下、６０ヌクレオチド以下、５０ヌクレオチド以下、４０ヌクレオチド以下、３０ヌクレオチド以下、２０ヌクレオチド以下または１０ヌクレオチド以下離れた標的配列と相補的である、［９３］または［９４］に記載の組成物。
［９６］
前記第１のｇＲＮＡ分子、前記第２のｇＲＮＡ分子、前記任意選択の第３のｇＲＮＡ分子、および前記任意選択の第４のｇＲＮＡ分子の２つ以上は、異なる遺伝子または領域内の標的配列と相補的である、［９３］に記載の組成物。
［９７］
第１のｇＲＮＡ分子と第２のｇＲＮＡ分子とを含み、前記第１のｇＲＮＡ分子および第２のｇＲＮＡ分子は、
（ａ）［４］に記載のｇＲＮＡ分子から独立して選択され、かつ異なる標的配列に相補的であるか；
（ｂ）［５］に記載のｇＲＮＡ分子から独立して選択され、かつ異なる標的配列に相補的であるか；
ｃ）［６］に記載のｇＲＮＡ分子から独立して選択され、かつ異なる標的配列に相補的であるか；または
（ｄ）［７］に記載のｇＲＮＡ分子から独立して選択され、かつ異なる標的配列に相補的であるか；または
（ｅ）［４１］〜［５６］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子から独立して選択され、かつ異なる標的配列に相補的である、［９４］または［９５］に記載の組成物。
［９８］
第１のｇＲＮＡ分子と第２のｇＲＮＡ分子とを含み、前記第１のｇＲＮＡ分子および第２のｇＲＮＡ分子は、
（ａ）［１０］に記載のｇＲＮＡ分子から独立して選択され、かつ異なる標的配列に相補的であるか；または
（ｂ）［１１］に記載のｇＲＮＡ分子から独立して選択され、かつ異なる標的配列に相補的である、［９４］または［９５］に記載の組成物。
［９９］
第１のｇＲＮＡ分子と第２のｇＲＮＡ分子とを含み、前記第１のｇＲＮＡ分子および第２のｇＲＮＡ分子は、
（ａ）［１３］に記載のｇＲＮＡ分子から独立して選択され、かつ異なる標的配列に相補的であるか；または
（ｂ）［１４］に記載のｇＲＮＡ分子から独立して選択され、かつ異なる標的配列に相補的である、［９４］または［９５］に記載の組成物。
［１００］
第１のｇＲＮＡ分子と第２のｇＲＮＡ分子とを含み、前記第１のｇＲＮＡ分子および第２のｇＲＮＡ分子は、
（ａ）［１６］に記載のｇＲＮＡ分子から独立して選択され、かつ異なる標的配列に相補的であるか；
（ｂ）［１７］に記載のｇＲＮＡ分子から独立して選択され、かつ異なる標的配列に相補的であるか；
（ｃ）［１８］に記載のｇＲＮＡ分子から独立して選択され、かつ異なる標的配列に相補的であるか；または
（ｄ）［５７］〜［６８］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子から独立して選択され、かつ異なる標的配列に相補的である、［９４］〜［９６］のいずれか一項に記載の組成物。
［１０１］
第１のｇＲＮＡ分子と第２のｇＲＮＡ分子とを含み、
（１）前記第１のｇＲＮＡ分子は、（ａ）［４］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｂ）［５］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｃ）［６］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｄ）［７］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、または（ｅ）［４１］〜［５６］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子から選択され；および
（２）前記第２のｇＲＮＡ分子は、（ａ）［１０］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、または（ｂ）［１１］に記載のｇＲＮＡ分子から選択される、［９４］〜［９６］のいずれか一項に記載の組成物。
［１０２］
第１のｇＲＮＡ分子と第２のｇＲＮＡ分子とを含み、
（１）前記第１のｇＲＮＡ分子は、（ａ）［４］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｂ）［５］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｃ）［６］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｄ）［７］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、または（ｅ）［４１］〜［５６］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子から選択され；および
（２）前記第２のｇＲＮＡ分子は、（ａ）［１３］に記載のｇＲＮＡ分子から選択され、（ｂ）［１４］に記載のｇＲＮＡ分子から選択される、［９４］〜［９６］のいずれか一項に記載の組成物。
［１０３］
第１のｇＲＮＡ分子と第２のｇＲＮＡ分子とを含み、
（１）前記第１のｇＲＮＡ分子は、（ａ）［４］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｂ）［５］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｃ）［６］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｄ）［７］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、または（ｅ）［４１］〜［５６］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子から選択され；および
（２）前記第２のｇＲＮＡ分子は、（ａ）［１６］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｂ）［１７］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｃ）［１８］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、または（ｄ）［５７］〜［６８］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子から選択される、［９４］〜［９６］のいずれか一項に記載の組成物。
［１０４］
第１のｇＲＮＡ分子と第２のｇＲＮＡ分子とを含み、
（１）前記第１のｇＲＮＡ分子は、（ａ）［１０］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、または（ｂ）［１１］に記載のｇＲＮＡ分子から選択され；および
（２）前記第２のｇＲＮＡ分子は、（ａ）［１３］に記載のｇＲＮＡ分子から選択され、（ｂ）［１４］に記載のｇＲＮＡ分子から選択される、［９４］〜［９６］のいずれか一項に記載の組成物。
［１０５］
第１のｇＲＮＡ分子と第２のｇＲＮＡ分子とを含み、
（１）前記第１のｇＲＮＡ分子は、（ａ）［１０］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、または（ｂ）［１１］に記載のｇＲＮＡ分子から選択され；および
（２）前記第２のｇＲＮＡ分子は、（ａ）［１６］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｂ）［１７］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｃ）［１８］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、または（ｄ）［５７］〜［６８］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子から選択される、［９４］〜［９６］のいずれか一項に記載の組成物。
［１０６］
第１のｇＲＮＡ分子と第２のｇＲＮＡ分子とを含み、
（１）前記第１のｇＲＮＡ分子は、（ａ）［１３］に記載のｇＲＮＡ分子から選択され、（ｂ）［１４］に記載のｇＲＮＡ分子から選択され；および
（２）前記第２のｇＲＮＡ分子は、（ａ）［１６］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｂ）［１７］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｃ）［１８］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、または（ｄ）［５７］〜［６８］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子から選択される、［９４］〜［９６］のいずれか一項に記載の組成物。
［１０７］
第１のｇＲＮＡ分子と第２のｇＲＮＡ分子とを含み、
（１）前記第１のｇＲＮＡ分子は、（ａ）［１６］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｂ）［１７］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｃ）［１８］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、または（ｄ）［５７］〜［６８］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子から選択され；および（２）前記第２のｇＲＮＡ分子は、βグロビン遺伝子の標的配列に相補的な標的化ドメインを含むか、または
（１）前記第１のｇＲＮＡ分子は、（ａ）［４］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｂ）［５］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｃ）［６］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｄ）［７］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｅ）［４１］〜［５６］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｆ）［１０］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｇ）［１１］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、（ｈ）［１３］に記載のｇＲＮＡ分子から選択されるか、または（ｉ）［１４］に記載のｇＲＮＡ分子から選択され；および（２）前記第２のｇＲＮＡ分子は、βグロビン遺伝子の標的配列に相補的な標的化ドメインを含む、［９６］に記載の組成物。
［１０８］
前記第１のｇＲＮＡ分子および前記第２のｇＲＮＡ分子は、［４１］〜［６８］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子から独立して選択される、［９４］〜［９６］のいずれか一項に記載の組成物。
［１０９］
前記組成物の前記ｇＲＮＡ分子成分に関して、第１のｇＲＮＡ分子と第２のｇＲＮＡ分子とからなる、［８７］〜［１０８］のいずれか一項に記載の組成物。
［１１０］
前記ｇＲＮＡ分子の各々は、本明細書に記載されるＣａｓ９分子、例えば［９０］または［９１］に記載のＣａｓ９分子と共にリボ核タンパク質複合体（ＲＮＰ）中にある、［８７］〜［１０９］のいずれか一項に記載の組成物。
［１１１］
鋳型核酸を含み、前記鋳型核酸は、前記第１のｇＲＮＡ分子の前記標的配列にまたはその近傍にあるヌクレオチドに対応するヌクレオチドを含む、［８７］〜［１１０］のいずれか一項に記載の組成物。
［１１２］
前記鋳型核酸は、
（ａ）ヒトβグロビン、例えば突然変異Ｇ１６Ｄ、Ｅ２２ＡおよびＴ８７Ｑの１つ以上を含むヒトβグロビン、もしくはその断片；または
（ｂ）ヒトγグロビン、もしくはその断片
をコードする核酸を含む、［１１１］に記載の組成物。
［１１３］
エレクトロポレーションに好適な媒体中に製剤化される、［８７］〜［１１２］のいずれか一項に記載の組成物。
［１１４］
前記ｇＲＮＡ分子の各々は、本明細書に記載されるＣａｓ９分子と共にＲＮＰ中にあり、前記ＲＮＰの各々は、約１０μＭ未満、例えば約３μＭ未満、例えば約１μＭ未満、例えば約０．５μＭ未満、例えば約０．３μＭ未満、例えば約０．１μＭ未満の濃度である、［８７］〜［１１３］のいずれか一項に記載の組成物。
［１１５］
［１］〜［６８］のいずれか一項に記載の１つ以上のｇＲＮＡ分子をコードする核酸配列。
［１１６］
前記核酸は、前記１つ以上のｇＲＮＡ分子をコードする前記配列に作動可能に連結されたプロモーターを含む、［１１５］に記載の核酸配列。
［１１７］
前記プロモーターは、ＲＮＡポリメラーゼＩＩまたはＲＮＡポリメラーゼＩＩＩによって認識されるプロモーターである、［１１６］に記載の核酸配列。
［１１８］
前記プロモーターは、Ｕ６プロモーターまたはＨＩプロモーターである、［１１７］に記載の核酸配列。
［１１９］
前記核酸は、Ｃａｓ９分子をさらにコードする、［１１５］〜［１１８］のいずれか一項に記載の核酸配列。
［１２０］
前記Ｃａｓ９分子は、配列番号６６１１、配列番号７８２１、配列番号７８２２、配列番号７８２３、配列番号７８２４、配列番号７８２５、配列番号７８２６、配列番号７８２７、配列番号７８２８、配列番号７８２９、配列番号７８３０、または配列番号７８３１のいずれかを含む、［１１９］に記載の核酸配列。
［１２１］
前記核酸は、Ｃａｓ９分子をコードする前記配列に作動可能に連結されたプロモーターを含む、［１１９］または［１２０］に記載の核酸配列。
［１２２］
前記プロモーターは、ＥＦ−１プロモーター、ＣＭＶ ＩＥ遺伝子プロモーター、ＥＦ−１αプロモーター、ユビキチンＣプロモーター、またはホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）プロモーターである、［１２１］に記載の核酸配列。
［１２３］
［１１５］〜［１２２］のいずれか一項に記載の核酸を含むベクター。
［１２４］
前記ベクターは、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ベクター、プラスミド、ミニサークル、ナノプラスミド、およびＲＮＡベクターからなる群から選択される、［１２３］に記載のベクター。
［１２５］
細胞（例えば、細胞の集団）を前記細胞内の標的配列でまたはその近傍で改変する（例えば、核酸の構造（例えば、配列）を改変する）方法であって、前記細胞（例えば、細胞の集団）を、
１）［１］〜［６８］のいずれか一項に記載の１つ以上のｇＲＮＡ分子、およびＣａｓ９分子；
２）［１］〜［６８］のいずれか一項に記載の１つ以上のｇＲＮＡ分子、およびＣａｓ９分子をコードする核酸；
３）［１］〜［６８］のいずれか一項に記載の１つ以上のｇＲＮＡ分子をコードする核酸、およびＣａｓ９分子；
４）［１］〜［６８］のいずれか一項に記載の１つ以上のｇＲＮＡ分子をコードする核酸、およびＣａｓ９分子をコードする核酸；
５）前記１）〜４）のいずれか、および鋳型核酸；
６）前記１）〜４）のいずれか、および鋳型核酸をコードする配列を含む核酸；
７）［８７］〜［１１４］のいずれか一項に記載の組成物；または
８）［１２３］または［１２４］に記載のベクター
と接触させる（例えば、それに導入する）ステップを含む方法。
［１２６］
前記ｇＲＮＡ分子または前記ｇＲＮＡ分子をコードする核酸と、前記Ｃａｓ９分子または前記Ｃａｓ９分子をコードする核酸とは、単一の組成物に製剤化される、［１２５］に記載の方法。
［１２７］
前記ｇＲＮＡ分子または前記ｇＲＮＡ分子をコードする核酸と、前記Ｃａｓ９分子または前記Ｃａｓ９分子をコードする核酸とは、２つ以上の組成物に製剤化される、［１２５］に記載の方法。
［１２８］
前記２つ以上の組成物は、同時にまたは逐次的に送達される、［１２７］に記載の方法。
［１２９］
前記細胞は、動物細胞である、［１２５］〜［１２８］のいずれか一項に記載の方法。
［１３０］
前記細胞は、哺乳動物細胞、霊長類細胞またはヒト細胞である、［１２５］〜［１２８］のいずれか一項に記載の方法。
［１３１］
前記細胞は、造血幹細胞・前駆細胞（ＨＳＰＣ）（例えば、ＨＳＰＣの集団）である、［１３０］に記載の方法。
［１３２］
前記細胞は、ＣＤ３４＋細胞である、［１２５］〜［１３１］のいずれか一項に記載の方法。
［１３３］
前記細胞は、ＣＤ３４＋ＣＤ９０＋細胞である、［１２５］〜［１３２］のいずれか一項に記載の方法。
［１３４］
前記細胞は、ＣＤ３４＋細胞に関して富化された細胞の集団を含む組成物中に配置される、［１２５］〜［１３３］のいずれか一項に記載の方法。
［１３５］
前記細胞（例えば、細胞の集団）は、骨髄、動員末梢血または臍帯血から単離されている、［１２５］〜［１３４］のいずれか一項に記載の方法。
［１３６］
前記細胞は、前記細胞が投与される患者にとって自己由来または同種異系由来である、［１２５］〜［１３５］のいずれか一項に記載の方法。
［１３７］
前記改変は、前記１つ以上のｇＲＮＡ分子の前記標的化ドメインと相補的なゲノムＤＮＡ配列にまたはその近傍にインデルをもたらす、［１２５］〜［１３６］のいずれか一項に記載の方法。
［１３８］
前記インデルは、図２５、表１５、表２６、表２７または表３７に示されるインデルである、［１３７］に記載の方法。
［１３９］
前記インデルは、約４０ヌクレオチド未満、例えば３０ヌクレオチド未満、例えば２０ヌクレオチド未満、例えば１０ヌクレオチド未満の挿入または欠失である、［１３７］または［１３８］に記載の方法。
［１４０］
前記インデルは、単一のヌクレオチド欠失である、［１３９］に記載の方法。
［１４１］
細胞の集団をもたらし、前記集団の細胞の少なくとも約５０％、例えば少なくとも約６０％、例えば少なくとも約７０％、例えば少なくとも約８０％、例えば少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％）は、改変されている、例えばインデルを含む、［１３７］〜［１４０］のいずれか一項に記載の方法。
［１４２］
前記改変は、赤血球系統の分化細胞（例えば、赤血球細胞）への分化能を有する細胞（例えば、細胞の集団）をもたらし、前記分化細胞は、胎児ヘモグロビンの増加したレベル、例えば非改変細胞（例えば、細胞の集団）と比べて胎児ヘモグロビンの増加したレベルを呈する、［１２５］〜［１４１］のいずれか一項に記載の方法。
［１４３］
前記改変は、分化細胞の集団、例えば赤血球系統の細胞の集団（例えば、赤血球細胞の集団）への分化能を有する細胞の集団をもたらし、前記分化細胞の集団は、Ｆ細胞の増加した割合、例えば非改変細胞の集団と比べてＦ細胞の増加した割合（例えば、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、または少なくとも約４０％高い）を有する、［１２５］〜［１４２］のいずれか一項に記載の方法。
［１４４］
前記改変は、分化細胞、例えば赤血球系統の細胞（例えば、赤血球細胞）への分化能を有する細胞をもたらし、前記分化細胞は、１細胞当たり少なくとも約６ピコグラム（例えば、少なくとも約７ピコグラム、少なくとも約８ピコグラム、少なくとも約９ピコグラム、少なくとも約１０ピコグラム、または約８〜約９ピコグラム、または約９〜約１０ピコグラム）の胎児ヘモグロビンを産生する、［１２５］〜［１４２］のいずれか一項に記載の方法。
［１４５］
［１２５］〜［１４４］のいずれか一項に記載の方法によって改変された細胞。
［１４６］
［１２５］〜［１４４］のいずれか一項に記載の方法によって得ることが可能な細胞。
［１４７］
［１］〜［６８］のいずれか一項に記載の第１のｇＲＮＡ分子、または［８７］〜［１１４］のいずれか一項に記載の組成物、［１１５］〜［１２２］のいずれか一項に記載の核酸、または［１２３］もしくは［１２４］に記載のベクターを含む細胞。
［１４８］
Ｃａｓ９分子を含む、［１４７］に記載の細胞。
［１４９］
前記Ｃａｓ９分子は、配列番号６６１１、配列番号７８２１、配列番号７８２２、配列番号７８２３、配列番号７８２４、配列番号７８２５、配列番号７８２６、配列番号７８２７、配列番号７８２８、配列番号７８２９、配列番号７８３０、または配列番号７８３１のいずれかを含む、［１４８］に記載の細胞。
［１５０］
［１］〜［６８］のいずれか一項に記載の第２のｇＲＮＡ分子、または［１］〜［６８］のいずれか一項に記載の第２のｇＲＮＡ分子をコードする核酸を含むか、それを含んでいたか、またはそれを含むことになり、前記第１のｇＲＮＡ分子および第２のｇＲＮＡ分子は、同一でない標的化ドメインを含む、［１４５］〜［１４９］のいずれか一項に記載の細胞。
［１５１］
胎児ヘモグロビンの発現は、ｇＲＮＡ分子を含むように修飾されていない同じ細胞型の細胞またはその子孫と比べて前記細胞またはその子孫（例えば、その赤血球系子孫、例えばその赤血球細胞子孫）において増加する、［１４５］〜［１５０］のいずれか一項に記載の細胞。
［１５２］
分化細胞、例えば赤血球系統の細胞（例えば、赤血球細胞）への分化能を有し、前記分化細胞は、胎児ヘモグロの増加したレベル、例えばｇＲＮＡ分子を含むように修飾されていない同じタイプの細胞と比べて胎児ヘモグロの増加したレベルを呈する、［１４５］〜［１５０］のいずれか一項に記載の細胞。
［１５３］
前記分化細胞（例えば、赤血球系統の細胞、例えば赤血球細胞）は、少なくとも約６ピコグラム（例えば、少なくとも約７ピコグラム、少なくとも約８ピコグラム、少なくとも約９ピコグラム、少なくとも約１０ピコグラム、または約８〜約９ピコグラム、または約９〜約１０ピコグラム）の胎児ヘモグロビンを、例えばｇＲＮＡ分子を含むように修飾されていない同じタイプの細胞と比べて、産生する、［１５２］に記載の細胞。
［１５４］
幹細胞増殖剤と接触されていた、［１４５］〜［１５３］のいずれか一項に記載の細胞。
［１５５］
前記幹細胞増殖剤は、化合物１、化合物２、化合物３、化合物４、またはこれらの組み合わせ（例えば、化合物１および化合物４）である、［１５４］に記載の細胞。
［１５６］
前記幹細胞増殖剤は、化合物４である、［１５５］に記載の細胞。
［１５７］
［１］〜［６８］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子の前記標的化ドメインと相補的なゲノムＤＮＡ配列にまたはその近傍にインデルを含む細胞、例えば［１４５］〜［１５６］のいずれか一項に記載の細胞。
［１５８］
前記インデルは、図２５、表１５、表２６、表２７または表３７に示されるインデルである、［１５７］に記載の細胞。
［１５９］
前記インデルは、約４０ヌクレオチド未満、例えば３０ヌクレオチド未満、例えば２０ヌクレオチド未満、例えば１０ヌクレオチド未満の挿入または欠失である、［１５７］または［１５８］に記載の細胞。
［１６０］
前記インデルは、単一のヌクレオチド欠失である、［１５７］〜［１５９］のいずれか一項に記載の細胞。
［１６１］
動物細胞である、［１４５］〜［１６０］のいずれか一項に記載の細胞。
［１６２］
哺乳動物細胞、霊長類細胞またはヒト細胞である、［１６１］に記載の細胞。
［１６３］
造血幹細胞・前駆細胞（ＨＳＰＣ）（例えば、ＨＳＰＣの集団）である、［１４５］〜［１６２］のいずれか一項に記載の細胞。
［１６４］
ＣＤ３４＋細胞である、［１４５］〜［１６３］のいずれか一項に記載の細胞。
［１６５］
ＣＤ３４＋ＣＤ９０＋細胞である、［１６４］に記載の細胞。
［１６６］
前記細胞（例えば、細胞の集団）は、骨髄、動員末梢血または臍帯血から単離されている、［１４５］〜［１６５］のいずれか一項に記載の細胞。
［１６７］
前記細胞が投与される患者にとって自己由来である、［１４５］〜［１６６］のいずれか一項に記載の細胞。
［１６８］
前記細胞が投与される患者にとって同種異系由来である、［１４５］〜［１６６］のいずれか一項に記載の細胞。
［１６９］
［１４５］〜［１６８］のいずれか一項に記載の細胞を含む細胞の集団。
［１７０］
前記集団の細胞の少なくとも約５０％、例えば少なくとも約６０％、例えば少なくとも約７０％、例えば少なくとも約８０％、例えば少なくとも約９０％（例えば、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％）は、［１４５］〜［１６８］のいずれか一項に記載の細胞である、［１６９］に記載の細胞の集団。
［１７１］
分化細胞の集団、例えば赤血球系統の細胞の集団（例えば、赤血球細胞の集団）への分化能を有し、前記分化細胞の集団は、Ｆ細胞の増加した割合、例えば同じタイプの修飾されていない細胞の集団と比べてＦ細胞の増加した割合（例えば、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、または少なくとも約４０％高い）を有する、［１６９］または［１７０］に記載の細胞の集団。
［１７２］
前記分化細胞の集団のＦ細胞は、１細胞当たり平均で少なくとも約６ピコグラム（例えば、少なくとも約７ピコグラム、少なくとも約８ピコグラム、少なくとも約９ピコグラム、少なくとも約１０ピコグラム、または約８〜約９ピコグラム、または約９〜約１０ピコグラム）の胎児ヘモグロビンを産生する、［１７１］に記載の細胞の集団。
［１７３］
１）少なくとも１ｅ６のＣＤ３４＋細胞／前記細胞が投与される前記患者の体重ｋｇ、
２）少なくとも２ｅ６のＣＤ３４＋細胞／前記細胞が投与される前記患者の体重ｋｇ、
３）少なくとも３ｅ６のＣＤ３４＋細胞／前記細胞が投与される前記患者の体重ｋｇ、
４）少なくとも４ｅ６のＣＤ３４＋細胞／前記細胞が投与される前記患者の体重ｋｇ、または
５）２ｅ６〜１０ｅ６のＣＤ３４＋細胞／前記細胞が投与される前記患者の体重ｋｇ
を含む、［１６９］〜［１７２］のいずれか一項に記載の細胞の集団。
［１７４］
前記集団の細胞の少なくとも約４０％、例えば少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％）は、ＣＤ３４＋細胞である、［１６９］〜［１７３］のいずれか一項に記載の細胞の集団。
［１７５］
前記集団の細胞の少なくとも約１０％、例えば少なくとも約１５％、例えば少なくとも約２０％、例えば少なくとも約３０％は、ＣＤ３４＋ＣＤ９０＋細胞である、［１７４］に記載の細胞の集団。
［１７６］
骨髄に由来する、［１６９］〜［１７５］のいずれか一項に記載の細胞の集団。
［１７７］
哺乳動物細胞、例えばヒト細胞を含む、例えばそれからなる、［１６９］〜［１７６］のいずれか一項に記載の細胞の集団。
［１７８］
前記細胞の集団が投与される患者に対して自己由来である、［１６９］〜［１７７］のいずれか一項に記載の細胞の集団。
［１７９］
前記細胞の集団が投与される患者に対して同種異系由来である、［１６９］〜［１７７］のいずれか一項に記載の細胞の集団。
［１８０］
［１４５］〜［１６８］のいずれか一項に記載の細胞または［１６９］〜［１７９］のいずれか一項に記載の細胞の集団を含む組成物。
［１８１］
薬学的に許容可能な媒体、例えば凍結保存に好適である薬学的に許容可能な媒体を含む、［１８０］に記載の組成物。
［１８２］
異常ヘモグロビン症を治療する方法であって、［１４５］〜［１６８］のいずれか一項に記載の細胞、［１６９］〜［１７９］のいずれか一項に記載の細胞の集団、または［１８０］もしくは［１８１］に記載の組成物を患者に投与するステップを含む方法。
［１８３］
哺乳動物における胎児ヘモグロビン発現を増加させる方法であって、［１４５］〜［１６８］のいずれか一項に記載の細胞、［１６９］〜［１７９］のいずれか一項に記載の細胞の集団、または［１８０］もしくは［１８１］に記載の組成物を患者に投与するステップを含む方法。
［１８４］
前記異常ヘモグロビン症は、β−サラセミアまたは鎌状赤血球症である、［１８２］に記載の方法。
［１８５］
細胞（例えば、細胞の集団）を調製する方法であって、
（ａ）細胞（例えば、細胞の集団）（例えば、ＨＳＰＣ（例えば、ＨＳＰＣの集団））を提供するステップ；
（ｂ）幹細胞増殖剤を含む細胞培養培地中で前記細胞（例えば、前記細胞の集団）をエキソビボで培養するステップ；および
（ｃ）［１］〜［６８］のいずれか一項に記載の第１のｇＲＮＡ分子、［１］〜［６８］のいずれか一項に記載の第１のｇＲＮＡ分子をコードする核酸分子、［８７］〜［１１４］のいずれか一項に記載の組成物、［１１５］〜［１２２］のいずれか一項に記載の核酸、または［１２３］もしくは［１２４］に記載のベクターを前記細胞に導入するステップ
を含む方法。
［１８６］
前記ステップ（ｃ）の導入の後、前記細胞（例えば、細胞の集団）は、分化細胞（例えば、分化細胞の集団）、例えば赤血球系統の細胞（例えば、赤血球系統の細胞の集団）、例えば赤血球細胞（例えば、赤血球細胞の集団）への分化能を有し、前記分化細胞（例えば、分化細胞の集団）は、増加した胎児ヘモグロビン、例えばステップ（ｃ）に供されていない同じ細胞と比べて増加した胎児ヘモグロビンを産生する、［１８５］に記載の方法。
［１８７］
前記幹細胞増殖剤は、化合物１、化合物２、化合物３、化合物４またはこれらの組み合わせ（例えば、化合物１および化合物４）である、［１８５］または［１８６］に記載の方法。
［１８８］
前記幹細胞増殖剤は、化合物４である、［１８７］に記載の方法。
［１８９］
前記細胞培養培地は、トロンボポエチン（Ｔｐｏ）、Ｆｌｔ３リガンド（Ｆｌｔ−３Ｌ）、およびヒト幹細胞因子（ＳＣＦ）を含む、［１８５］〜［１８８］のいずれか一項に記載の方法。
［１９０］
前記細胞培養培地は、ヒトインターロイキン−６（ＩＬ−６）をさらに含む、［１８９］に記載の方法。
［１９１］
前記細胞培養培地は、トロンボポエチン（Ｔｐｏ）、Ｆｌｔ３リガンド（Ｆｌｔ−３Ｌ）、およびヒト幹細胞因子（ＳＣＦ）をそれぞれ約１０ｎｇ／ｍＬ〜約１０００ｎｇ／ｍＬの範囲の濃度で含む、［１８９］または［１９０］に記載の方法。
［１９２］
前記細胞培養培地は、トロンボポエチン（Ｔｐｏ）、Ｆｌｔ３リガンド（Ｆｌｔ−３Ｌ）、およびヒト幹細胞因子（ＳＣＦ）をそれぞれ約５０ｎｇ／ｍＬの濃度、例えば５０ｎｇ／ｍＬの濃度で含む、［１９１］に記載の方法。
［１９３］
前記細胞培養培地は、ヒトインターロイキン−６（ＩＬ−６）を約１０ｎｇ／ｍＬ〜約１０００ｎｇ／ｍＬの範囲の濃度で含む、［１９０］〜［１９２］のいずれか一項に記載の方法。
［１９４］
前記細胞培養培地は、ヒトインターロイキン−６（ＩＬ−６）を約５０ｎｇ／ｍＬの濃度、例えば５０ｎｇ／ｍＬの濃度で含む、［１９３］に記載の方法。
［１９５］
前記細胞培養培地は、幹細胞増殖剤を約１ｎＭ〜約１ｍＭの範囲の濃度で含む、［１８５］〜［１９４］のいずれか一項に記載の方法。
［１９６］
前記細胞培養培地は、幹細胞増殖剤を約１μＭ〜約１００μＭの範囲の濃度で含む、［１９５］に記載の方法。
［１９７］
前記細胞培養培地は、幹細胞増殖剤を約５０μＭ〜約７５μＭの範囲の濃度で含む、［１９６］に記載の方法。
［１９８］
前記細胞培養培地は、幹細胞増殖剤を約５０μＭの濃度、例えば５０μＭの濃度で含む、［１９７］に記載の方法。
［１９９］
前記細胞培養培地は、幹細胞増殖剤を約７５μＭの濃度、例えば７５μＭの濃度で含む、［１９７］に記載の方法。
［２００］
前記ステップ（ｂ）の培養は、前記ステップ（ｃ）の導入の前の培養期間を含む、［１８５］〜［１９９］のいずれか一項に記載の方法。
［２０１］
前記ステップ（ｃ）の導入の前の前記培養期間は、少なくとも１２時間、例えば約１日〜約３日の期間であり、例えば約１日〜約２日の期間であり、例えば約２日の期間である、［２００］に記載の方法。
［２０２］
前記ステップ（ｂ）の培養は、前記ステップ（ｃ）の導入の後の培養期間を含む、［１８５］〜［２０１］のいずれか一項に記載の方法。
［２０３］
前記ステップ（ｃ）の導入の後の前記培養期間は、少なくとも１２時間、例えば約１日〜約１０日の期間であり、例えば約１日〜約５日の期間であり、例えば約２日〜約４日の期間であり、例えば約２日の期間であり、または約３日の期間であり、または約４日の期間である、［２０２］に記載の方法。
［２０４］
前記細胞の集団は、少なくとも４倍、例えば少なくとも５倍、例えば少なくとも１０倍、例えばステップ（ｂ）によって培養されていない細胞と比べて、増殖する、［１８５］〜［２０３］のいずれか一項に記載の方法。
［２０５］
前記ステップ（ｃ）の導入は、エレクトロポレーションを含む、［１８５］〜［２０４］のいずれか一項に記載の方法。
［２０６］
前記エレクトロポレーションは、１〜５パルス、例えば１パルスを含み、各パルスは、７００ボルト〜２０００ボルトの範囲のパルス電圧であり、かつ１０ｍｓ〜１００ｍｓの範囲のパルス持続時間を有する、［２０５］に記載の方法。
［２０７］
前記エレクトロポレーションは、１パルスを含む、［２０６］に記載の方法。
［２０８］
前記パルス電圧は、１５００〜１９００ボルトの範囲、例えば１７００ボルトである、［２０６］または［２０７］に記載の方法。
［２０９］
前記パルス持続時間は、１０ｍｓ〜４０ｍｓの範囲、例えば２０ｍｓである、［２０６］〜［２０８］のいずれか一項に記載の方法。
［２１０］
ステップ（ａ）で提供される前記細胞（例えば、細胞の集団）は、ヒト細胞（例えば、ヒト細胞の集団）である、［１８５］〜［２０９］のいずれか一項に記載の方法。
［２１１］
ステップ（ａ）で提供される前記細胞（例えば、細胞の集団）は、骨髄、末梢血（例えば、動員末梢血）または臍帯血から単離されたものである、［２１０］に記載の方法。
［２１２］
ステップ（ａ）で提供される前記細胞（例えば、細胞の集団）は、骨髄から単離されたものである、例えば異常ヘモグロビン症に罹患している患者の骨髄から単離されたものである、［２１１］に記載の方法。
［２１３］
ステップ（ａ）で提供される前記細胞の集団は、ＣＤ３４＋細胞に関して富化されたものである、［１８５］〜［２１２］のいずれか一項に記載の方法。
［２１４］
前記ステップ（ｃ）の導入の後、前記細胞（例えば、細胞の集団）は、凍結保存される、［１８５］〜［２１３］のいずれか一項に記載の方法。
［２１５］
前記ステップ（ｃ）の導入の後、前記細胞（例えば、細胞の集団）は、前記第１のｇＲＮＡ分子の前記標的化ドメインと相補的なゲノムＤＮＡ配列にまたはその近傍にインデルを含む、［１８５］〜［２１４］のいずれか一項に記載の方法。
［２１６］
前記インデルは、図２５、表１５、表２６、表２７または表３７に示されるインデルである、［１３２］に記載の方法。
［２１７］
前記ステップ（ｃ）の導入の後、前記細胞の集団の細胞の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％は、前記第１のｇＲＮＡ分子の前記標的化ドメインと相補的なゲノムＤＮＡ配列にまたはその近傍にインデルを含む、［１８５］〜［２１６］のいずれか一項に記載の方法。
［２１８］
前記細胞の集団の細胞の各々における前記インデルは、図２５、表１５、表２６、表２７または表３７に示されるインデルである、［２１７］に記載の方法。
［２１９］
［１８５］〜［２１８］のいずれか一項に記載の方法によって得ることが可能な細胞（例えば、細胞の集団）。
［２２０］
異常ヘモグロビン症を治療する方法であって、［２１９］に記載の細胞（例えば、細胞の集団）を含む組成物をヒト患者に投与するステップを含む方法。
［２２１］
ヒト患者における胎児ヘモグロビン発現を増加させる方法であって、［２１９］に記載の細胞（例えば、細胞の集団）を含む組成物を前記ヒト患者に投与するステップを含む方法。
［２２２］
前記異常ヘモグロビン症は、β−サラセミアまたは鎌状赤血球症である、［２２０］に記載の方法。
［２２３］
前記ヒト患者は、前記ヒト患者の体重１ｋｇ当たり少なくとも約１ｅ６個の［２１９］に記載の細胞、例えば前記ヒト患者の体重１ｋｇ当たり少なくとも約１ｅ６個の［２１９］に記載のＣＤ３４＋細胞を含む組成物を投与される、［２２０］〜［２２２］のいずれか一項に記載の方法。
［２２４］
前記ヒト患者は、前記ヒト患者の体重１ｋｇ当たり少なくとも約２ｅ６個の［２１９］に記載の細胞、例えば前記ヒト患者の体重１ｋｇ当たり少なくとも約２ｅ６個の［２１９］に記載のＣＤ３４＋細胞を含む組成物を投与される、［２２３］に記載の方法。
［２２５］
前記ヒト患者は、前記ヒト患者の体重１ｋｇ当たり約２ｅ６〜約１０ｅ６個の［２１９］に記載の細胞、例えば前記ヒト患者の体重１ｋｇ当たり少なくとも約２ｅ６〜約１０ｅ６個の［２１９］に記載のＣＤ３４＋細胞を含む組成物を投与される、［２２３］に記載の方法。
［２２６］
薬剤として用いられる、［１］〜［８６］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子、［８７］〜［１１４］または［１８０］もしくは［１８１］のいずれか一項に記載の組成物、［１１５］〜［１２２］のいずれか一項に記載の核酸、［１２３］または［１２４］に記載のベクター、［１４５］〜［１６８］または［２１９］のいずれか一項に記載の細胞、あるいは［１６９］〜［１７９］のいずれか一項に記載の細胞の集団。
［２２７］
薬剤の製造に用いられる、［１］〜［８６］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子、［８７］〜［１１４］または［１８０］もしくは［１８１］のいずれか一項に記載の組成物、［１１５］〜［１２２］のいずれか一項に記載の核酸、［１２３］または［１２４］に記載のベクター、［１４５］〜［１６８］または［２１９］のいずれか一項に記載の細胞、あるいは［１６９］〜［１７９］のいずれか一項に記載の細胞の集団。
［２２８］
疾患の治療に用いられる、［１］〜［８６］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子、［８７］〜［１１４］または［１８０］もしくは［１８１］のいずれか一項に記載の組成物、［１１５］〜［１２２］のいずれか一項に記載の核酸、［１２３］または［１２４］に記載のベクター、［１４５］〜［１６８］または［２１９］のいずれか一項に記載の細胞、あるいは［１６９］〜［１７９］のいずれか一項に記載の細胞の集団。
［２２９］
疾患の治療に用いられ、前記疾患は、異常ヘモグロビン症である、［１］〜［８６］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子、［８７］〜［１１４］または［１８０］もしくは［１８１］のいずれか一項に記載の組成物、［１１５］〜［１２２］のいずれか一項に記載の核酸、［１２３］または［１２４］に記載のベクター、［１４５］〜［１６８］または［２１９］のいずれか一項に記載の細胞、あるいは［１６９］〜［１７９］のいずれか一項に記載の細胞の集団。
［２３０］
疾患の治療に用いられ、前記異常ヘモグロビン症は、β−サラセミアまたは鎌状赤血球症である、［１］〜［８６］のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子、［８７］〜［１１４］または［１８０］もしくは［１８１］のいずれか一項に記載の組成物、［１１５］〜［１２２］のいずれか一項に記載の核酸、［１２３］または［１２４］に記載のベクター、［１４５］〜［１６８］または［２１９］のいずれか一項に記載の細胞、または［１６９］〜［１７９］のいずれか一項に記載の細胞の集団。
Claims (77)
- ｔｒａｃｒとｃｒＲＮＡとを含むｇＲＮＡ分子であって、前記ｃｒＲＮＡは、ヒトＢＣＬ１１ａ遺伝子、ヒトＢＣＬ１１ａエンハンサー、またはヒトＨＰＦＨ領域の標的配列に相補的な標的化ドメインを含む、ｇＲＮＡ分子。
- （ａ）前記標的配列は、前記ヒトＢＣＬ１１Ａ遺伝子のものであり、かつ前記標的化ドメインは、配列番号１〜配列番号８５もしくは配列番号４００〜配列番号１２３１のいずれか１つまたはその断片を含むか；
（ｂ）前記標的配列は、前記ヒトＢＣＬ１１ａエンハンサーのものであり、かつ前記標的化ドメインは、配列番号１８２〜配列番号２７７、もしくは配列番号２７８〜配列番号３３３、もしくは配列番号３３４〜配列番号３４１、もしくは配列番号１２３２〜配列番号１４９９、もしくは配列番号１５９６〜配列番号１６９１のいずれか１つまたはその断片を含むか；または
（ｃ）前記標的配列は、前記ヒトＨＦＰＨ領域のものであり、かつ前記標的化ドメインは、配列番号８６〜配列番号１８１、配列番号１５００〜配列番号１５９５、もしくは配列番号１６９２〜配列番号１７６１のいずれか１つまたはその断片を含む、請求項１に記載のｇＲＮＡ分子。 - （ａ）前記標的化ドメインは、配列番号３３８、配列番号２４８、配列番号２５３、配列番号３４１、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４５、配列番号２４９、配列番号２４４、配列番号１９９、配列番号２５１、配列番号２５０、配列番号３３４、配列番号１８５、配列番号１８６、配列番号３３６、もしくは配列番号３３７のいずれか１つまたはその断片を含むか；
（ｂ）前記標的化ドメインは、配列番号３１８、配列番号３１２、配列番号３１３、配列番号２９４、配列番号３１０、配列番号３１９、配列番号２９８、配列番号３２２、配列番号３１１、配列番号３１５、配列番号２９０、配列番号３１７、配列番号３０９、配列番号２８９、もしくは配列番号２８１のいずれか１つまたはその断片を含むか；または
（ｃ）前記標的化ドメインは、配列番号１６８３、配列番号１６３８、配列番号１６４７、配列番号１６０９、配列番号１６２１、配列番号１６１７、配列番号１６５４、配列番号１６３１、配列番号１６２０、配列番号１６３７、配列番号１６１２、配列番号１６５６、配列番号１６１９、配列番号１６７５、配列番号１６４５、配列番号１５９８、配列番号１５９９、配列番号１６６３、配列番号１６７７、もしくは配列番号１６２６のいずれか１つまたはその断片を含むか；または
（ｄ）標的化ドメインは、配列番号１００、配列番号１６５、配列番号１１３、配列番号９９、配列番号１１２、配列番号９８、配列番号１５０５、配列番号１５８０、配列番号１０６、配列番号１５０３、配列番号１５８９、配列番号１６０、配列番号１５３７、配列番号１５９、配列番号１０１、配列番号１６２、配列番号１０４、配列番号１３８、配列番号１５３６、配列番号１５３９、配列番号１５８５、配列番号１７００、もしくは配列番号１７５０のいずれか１つまたはその断片を含む、請求項１に記載のｇＲＮＡ分子。 - ５’から３’に、［前記標的化ドメイン］−：
（ａ）配列番号６６０１；
（ｂ）配列番号６６０２；
（ｃ）配列番号６６０３；
（ｄ）配列番号６６０４；
（ｅ）配列番号７８１１；または
（ｆ）３’末端に１、２、３、４、５、６または７個のウラシル（Ｕ）ヌクレオチドをさらに含む前記（ａ）〜（ｅ）のいずれか
を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。 - 前記ｇＲＮＡ分子の前記核酸分子の１つ以上は、
（ａ）前記１つまたは複数の核酸分子の３’末端における１つ以上のホスホロチオエート修飾；
（ｂ）前記１つまたは複数の核酸分子の５’末端における１つ以上のホスホロチオエート修飾；
（ｃ）前記１つまたは複数の核酸分子の前記３’末端における１つ以上の２’−Ｏ−メチル修飾；
（ｄ）前記１つまたは複数の核酸分子の前記５’末端における１つ以上の２’−Ｏ−メチル修飾；
（ｅ）前記１つまたは複数の核酸分子の末端から４番目、末端から３番目、および末端から２番目の３’残基の各々における２’Ｏ−メチル修飾；
（ｆ）前記１つまたは複数の核酸分子の末端から４番目、末端から３番目、および末端から２番目の５’残基の各々における２’Ｏ−メチル修飾；または
（ｇ）これらの任意の組み合わせ
を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子。 - （ａ）配列番号３４２；
（ｂ）配列番号３４３；
（ｃ）配列番号１７６２；
（ｄ）配列番号３４４を含むｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含むｔｒａｃｒ；
（ｅ）配列番号３４４を含むｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含むｔｒａｃｒ；
（ｆ）配列番号３４５を含むｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含むｔｒａｃｒ；
（ｇ）配列番号３４５を含むｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含むｔｒａｃｒ；
（ｈ）配列番号３４７；
（ｉ）配列番号３４８；
（ｊ）配列番号１７６３；
（ｋ）配列番号３４９を含むｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含むｔｒａｃｒ；
（ｌ）配列番号３４９を含むｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含むｔｒａｃｒ；
（ｍ）配列番号３５０を含むｃｒＲＮＡ、および配列番号６６６０を含むｔｒａｃｒ；または
（ｎ）配列番号３５０を含むｃｒＲＮＡ、および配列番号３４６を含むｔｒａｃｒ
を含む、請求項１に記載のｇＲＮＡ分子。 - （ａ）請求項１〜６のいずれか一項に記載の１つ以上のｇＲＮＡ分子、およびＣａｓ９分子；
（ｂ）請求項１〜６のいずれか一項に記載の１つ以上のｇＲＮＡ分子、およびＣａｓ９分子をコードする核酸配列；
（ｃ）請求項１〜６のいずれか一項に記載の１つ以上のｇＲＮＡ分子をコードする核酸配列、およびＣａｓ９分子；
（ｄ）請求項１〜６のいずれか一項に記載の１つ以上のｇＲＮＡ分子をコードする核酸配列、およびＣａｓ９分子をコードする核酸配列；
（ｅ）前記ａ）〜ｄ）のいずれか、および鋳型核酸；または
（ｆ）前記ａ）〜ｄ）のいずれか、および鋳型核酸をコードする配列を含む核酸
を含む組成物。 - 前記Ｃａｓ９分子は、活性または不活性化膿レンサ球菌（ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）Ｃａｓ９である、請求項７に記載の組成物。
- 前記Ｃａｓ９分子は、配列番号６６１１またはそれと少なくとも９５％の配列相同性を有する配列を含む、請求項７に記載の組成物。
- 前記Ｃａｓ９分子は、
（ａ）配列番号７８２１；
（ｂ）配列番号７８２２；
（ｃ）配列番号７８２３；
（ｄ）配列番号７８２４；
（ｅ）配列番号７８２５；
（ｆ）配列番号７８２５の８８位にロイシン（Ｃ８８Ｌ）をさらに含み、かつ配列番号７８２５の５８２位にグルタミン酸（Ｃ５８２Ｅ）を含む配列番号７８２５；
（ｇ）配列番号７８２６；
（ｈ）配列番号７８２７；
（ｉ）配列番号７８２８；
（ｊ）配列番号７８２９；
（ｋ）配列番号７８３０；または
（ｌ）配列番号７８３１
を含む、請求項７に記載の組成物。 - 前記ｇＲＮＡ分子および前記Ｃａｓ９分子は、リボ核タンパク質複合体（ＲＮＰ）に存在する、請求項７〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
- 第２のｇＲＮＡ分子、または第２のｇＲＮＡ分子および第３のｇＲＮＡ分子をさらに含み、前記組成物の各ｇＲＮＡ分子は、異なる標的配列と相補的である、請求項７〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記ｇＲＮＡ分子の各々は、前記Ｃａｓ９分子と共にリボ核タンパク質複合体（ＲＮＰ）中にある、請求項１２に記載の組成物。
- 鋳型核酸を含み、前記鋳型核酸は、
（ａ）ヒトβグロビンもしくはその断片；または
（ｂ）ヒトγグロビンもしくはその断片
をコードする核酸配列を含む、請求項７〜１３のいずれか一項に記載の組成物。 - エレクトロポレーションに好適な媒体中に製剤化される、請求項７〜１４のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記ｇＲＮＡ分子の各々は、前記Ｃａｓ９分子と共にＲＮＰ中にあり、前記ＲＮＰの各々は、約１０μＭ未満の濃度である、請求項７〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
- 請求項１〜６のいずれか一項に記載の１つ以上のｇＲＮＡ分子をコードする核酸配列。
- 請求項１７に記載の核酸を含むベクター。
- 細胞内の１つ以上のｇＲＮＡ分子の標的配列でまたはその近傍で前記細胞を改変する方法であって、前記細胞を、
（ａ）請求項１〜６のいずれか一項に記載の１つ以上のｇＲＮＡ分子、およびＣａｓ９分子；
（ｂ）請求項１〜６のいずれか一項に記載の１つ以上のｇＲＮＡ分子、およびＣａｓ９分子をコードする核酸；
（ｃ）請求項１〜６のいずれか一項に記載の１つ以上のｇＲＮＡ分子をコードする核酸、およびＣａｓ９分子；
（ｄ）請求項１〜６のいずれか一項に記載の１つ以上のｇＲＮＡ分子をコードする核酸、およびＣａｓ９分子をコードする核酸；
（ｅ）前記（ａ）〜（ｄ）のいずれか、および鋳型核酸；
（ｆ）前記（ａ）〜（ｄ）のいずれか、および鋳型核酸をコードする配列を含む核酸；
（ｇ）請求項７〜１６のいずれか一項に記載の組成物；または
（ｈ）請求項１８に記載のベクター
と接触させるステップを含む方法。 - 前記細胞は、哺乳類細胞、霊長類細胞またはヒト細胞である、請求項１９に記載の方法。
- 前記細胞は、造血幹細胞・前駆細胞（ＨＳＰＣ）である、請求項２０に記載の方法。
- 前記細胞は、ＣＤ３４＋細胞である、請求項１９〜２１のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞は、ＣＤ３４＋ＣＤ９０＋細胞である、請求項１９〜２１のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞は、ＣＤ３４＋細胞に関してエンリッチされた細胞の集団を含む組成物中に配置される、請求項１９〜２３のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞は、骨髄、動員末梢血または臍帯血から単離されたものである、請求項１９〜２４のいずれか一項に記載の方法。
- 前記改変は、前記１つ以上のｇＲＮＡ分子の前記標的配列にまたはその近傍にインデルをもたらす、請求項１９〜２５のいずれか一項に記載の方法。
- 前記インデルは、図２５、表１５、表２６、表２７または表３７に示されるインデルである、請求項２６に記載の方法。
- 細胞の集団をもたらし、前記集団の前記細胞の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％が改変される、請求項１９〜２７のいずれか一項に記載の方法。
- 前記改変は、赤血球系統の分化細胞の集団への分化能を有する細胞の集団をもたらし、前記分化細胞の集団は、非改変細胞の集団と比べて胎児ヘモグロビンの増加したレベルを呈する、請求項１９〜２８のいずれか一項に記載の方法。
- 前記分化細胞の集団は、前記非改変細胞の集団と比べてＦ細胞の増加した割合を有する、請求項１９〜２９のいずれか一項に記載の方法。
- 前記分化細胞の集団は、１細胞当たり平均で少なくとも約６ピコグラム、少なくとも約７ピコグラム、少なくとも約８ピコグラム、少なくとも約９ピコグラム、少なくとも約１０ピコグラム、約８〜約９ピコグラム、または約９〜約１０ピコグラムの胎児ヘモグロビンを産生する、請求項２９または３０に記載の方法。
- 請求項１９〜３１のいずれか一項に記載の方法によって改変された細胞。
- 請求項１〜６のいずれか一項に記載の第１のｇＲＮＡ分子、または請求項７〜１６のいずれか一項に記載の組成物、請求項１７に記載の核酸、または請求項１８に記載のベクターを含む細胞。
- 前記細胞またはその子孫において、胎児ヘモグロビンの発現が、前記ｇＲＮＡ分子、または前記組成物、または前記核酸、または前記ベクターを含まない同じ細胞型の細胞またはその子孫と比べて増加している、請求項３３に記載の細胞。
- 前記細胞またはその子孫は、少なくとも約６ピコグラム、少なくとも約７ピコグラム、少なくとも約８ピコグラム、少なくとも約９ピコグラム、少なくとも約１０ピコグラム、約８〜約９ピコグラム、または約９〜約１０ピコグラムの胎児ヘモグロビンを産生する、請求項３４に記載の細胞。
- 幹細胞増殖剤と接触した、請求項３２〜３５のいずれか一項に記載の細胞。
- 前記幹細胞増殖剤は、化合物１、化合物２、化合物３、化合物４、またはこれらの組み合わせである、請求項３６に記載の細胞。
- 図２５、表１５、表２６、表２７または表３７に示されるインデルを含む細胞。
- 哺乳類細胞、霊長類細胞またはヒト細胞である、請求項３３〜３８のいずれか一項に記載の細胞。
- 造血幹細胞・前駆細胞（ＨＳＰＣ）である、請求項３３〜３９のいずれか一項に記載の細胞。
- ＣＤ３４＋細胞である、請求項３３〜４０のいずれか一項に記載の細胞。
- ＣＤ３４＋ＣＤ９０＋細胞である、請求項４１に記載の細胞。
- 前記細胞は、骨髄、動員末梢血または臍帯血から単離されたものである、請求項３３〜４２のいずれか一項に記載の細胞。
- 請求項３３〜４３のいずれか一項に記載の細胞を含む細胞の集団。
- 前記集団の前記細胞の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％は、請求項３３〜４３のいずれか一項に記載の細胞である、請求項４４に記載の細胞の集団。
- 分化細胞の集団への分化能を有し、前記分化細胞の集団は、同じタイプの修飾されていない細胞の集団と比べてＦ細胞の増加した割合を有する、請求項４４または４５に記載の細胞の集団。
- 前記分化細胞の集団の前記Ｆ細胞は、１細胞当たり平均で少なくとも約６ピコグラム、少なくとも約７ピコグラム、少なくとも約８ピコグラム、少なくとも約９ピコグラム、少なくとも約１０ピコグラム、約８〜約９ピコグラム、または約９〜約１０ピコグラムの胎児ヘモグロビンを産生する、請求項４６に記載の細胞の集団。
- （ａ）少なくとも１ｅ６のＣＤ３４＋細胞／前記細胞が投与される患者の体重ｋｇ、
（ｂ）少なくとも２ｅ６のＣＤ３４＋細胞／前記細胞が投与される患者の体重ｋｇ、
（ｃ）少なくとも３ｅ６のＣＤ３４＋細胞／前記細胞が投与される患者の体重ｋｇ、
（ｄ）少なくとも４ｅ６のＣＤ３４＋細胞／前記細胞が投与される患者の体重ｋｇ、または
（ｅ）２ｅ６〜１０ｅ６のＣＤ３４＋細胞／前記細胞が投与される患者の体重ｋｇ
を含む、請求項４４〜４７のいずれか一項に記載の細胞の集団。 - 前記集団の前記細胞の少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％は、ＣＤ３４＋細胞である、請求項４４〜４８のいずれか一項に記載の細胞の集団。
- 前記集団の前記細胞の少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、または少なくとも約３０％は、ＣＤ３４＋ＣＤ９０＋細胞である、請求項４９に記載の細胞の集団。
- 骨髄、動員末梢血または臍帯血から単離されたものである、請求項４４〜５０のいずれか一項に記載の細胞の集団。
- 異常ヘモグロビン症を有する患者から単離されたものである、請求項４４〜５１のいずれか一項に記載の細胞の集団。
- 請求項４４〜５２のいずれか一項に記載の細胞の集団を含む組成物。
- 凍結保存に好適である薬学的に許容可能な媒体を含む、請求項５３に記載の組成物。
- 異常ヘモグロビン症を治療するための、請求項３２〜４３のいずれか一項に記載の細胞、請求項４４〜５２のいずれか一項に記載の細胞の集団、または請求項５３もしくは５４に記載の組成物。
- 前記異常ヘモグロビン症は、β−サラセミアまたは鎌状赤血球症である、請求項５５に記載の細胞、細胞の集団または組成物。
- 細胞の集団を調製する方法であって、
（ａ）細胞の集団を提供するステップ；
（ｂ）幹細胞増殖剤を含む細胞培養培地中で前記細胞の集団をエキソビボで培養するステップ；および
（ｃ）請求項１〜６のいずれか一項に記載の第１のｇＲＮＡ分子、請求項１〜６のいずれか一項に記載の第１のｇＲＮＡ分子をコードする核酸分子、請求項７〜１６のいずれか一項に記載の組成物、請求項１７に記載の核酸、または請求項１８に記載のベクターを前記細胞の集団の細胞に導入するステップ
を含む方法。 - 前記幹細胞増殖剤は、化合物１、化合物２、化合物３、化合物４またはこれらの組み合わせである、請求項５７に記載の方法。
- 前記細胞培養培地は、前記幹細胞増殖剤を約１ｎＭ〜約１ｍＭの範囲の濃度で含む、請求項５７または５８に記載の方法。
- 前記ステップ（ｂ）の培養は、前記ステップ（ｃ）の導入前の培養期間を含む、請求項５７〜５９のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ステップ（ｃ）の導入前の前記培養期間は、少なくとも１２時間、約１日〜約３日の期間、約１日〜約２日の期間、または約２日の期間である、請求項６０に記載の方法。
- 前記ステップ（ｂ）の培養は、前記ステップ（ｃ）の導入後の培養期間を含む、請求項５７〜６１のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ステップ（ｃ）の導入後の前記培養期間は、少なくとも１２時間、約１日〜約１０日の期間、約１日〜約５日の期間、約２日〜約４日の期間、約２日の期間、約３日の期間、または約４日の期間である、請求項６２に記載の方法。
- 前記細胞の集団は、ステップ（ｂ）によって培養されていない細胞の集団と比べて少なくとも４倍、少なくとも５倍、または少なくとも１０倍増殖する、請求項５７〜６３のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ステップ（ｃ）の導入は、エレクトロポレーションを含む、請求項５７〜６４のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ（ａ）で提供される前記細胞の集団は、ヒト細胞の集団である、請求項５７〜６５のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ（ａ）で提供される前記細胞の集団は、骨髄、動員末梢血または臍帯血から単離されたものである、請求項６６に記載の方法。
- ステップ（ａ）で提供される前記細胞の集団は、異常ヘモグロビン症に罹患している患者から単離されたものである、請求項６７に記載の方法。
- ステップ（ａ）で提供される前記細胞の集団は、ＣＤ３４＋細胞に関してエンリッチされたものである、請求項５７〜６８のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ステップ（ｃ）の導入後、前記細胞の集団は凍結保存される、請求項５７〜６９のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ステップ（ｃ）の導入後、前記細胞の集団の前記細胞の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％は、前記組成物の前記第１のｇＲＮＡ分子の前記標的化ドメインと相補的なゲノムＤＮＡ配列にまたはその近傍にインデルを含み、任意選択で、前記インデルは、図２５、表１５、表２６、表２７または表３７に示されるインデルである、請求項５７〜７０のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項５７〜７１のいずれか一項に記載の方法によって得ることが可能な細胞の集団。
- ヒト患者において異常ヘモグロビン症を治療するための、請求項７２に記載の細胞の集団を含む組成物。
- 前記異常ヘモグロビン症は、β−サラセミアまたは鎌状赤血球症である、請求項７３に記載の組成物。
- 前記ヒト患者の体重１ｋｇ当たり少なくとも約１ｅ６個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項７３または７４に記載の組成物。
- 薬剤として用いられる、請求項１〜６のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子、請求項７〜１６または５３もしくは５４のいずれか一項に記載の組成物、請求項１７に記載の核酸、請求項１８に記載のベクター、請求項３２〜４３のいずれか一項に記載の細胞、あるいは請求項４４〜５２または７２のいずれか一項に記載の細胞の集団。
- 薬剤の製造に用いられる、請求項１〜６のいずれか一項に記載のｇＲＮＡ分子、請求項７〜１６または５３もしくは５４のいずれか一項に記載の組成物、請求項１７に記載の核酸、請求項１８に記載のベクター、請求項３２〜４３のいずれか一項に記載の細胞、あるいは請求項４４〜５２または７２のいずれか一項に記載の細胞の集団。
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