JP2019180373A - 植物ゲノム編集方法 - Google Patents
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Abstract
Description
(B)工程Aで得られた花粉を用いて次世代植物を得る工程、
を含む、ゲノム編集された植物を製造する方法。
(b)前記変異の効率を、前記レポーターのシグナルを指標として評価する工程、
を含む、植物ゲノム編集効率の評価方法。
(b1)工程a後、前記レポーター遺伝子を発現可能な状態で細胞に導入する工程、及び
(b2)工程b1で得られた細胞集団におけるレポーターシグナルを指標として、ゲノム編集効率を評価する工程
を含む、項8に記載の評価方法。
本発明は、その一態様として、(1)植物体及びその一部からなる群より選択される少なくとも1種の対象物に対して、標的特異的ヌクレアーゼ発現カセットを含む導入物を、パーティクルボンバードメント法により導入する工程を含む、植物ゲノム編集方法(本明細書において、「本発明のゲノム編集方法」と示すこともある。)に関する。以下に、これについて説明する。
本発明は、その一態様において、(a)レポーター発現カセットを含む植物体及びその一部からなる群より選択される少なくとも1種の対象物に対して、前記レポーター特異的ヌクレアーゼ発現カセットを含む導入物を、パーティクルボンバードメント法により導入し、前記レポーター発現カセット中のレポーター遺伝子を変異させる工程、並びに(b)前記変異の効率を、前記レポーターのシグナルを指標として評価する工程、を含む、植物ゲノム編集効率の評価方法(本明細書において、「本発明の評価方法」と示すこともある。)に関する。以下に、これについて説明する。
ベンサミアナタバコ(Nicotiana benthamiana)またはタバコ(Nicotiana tabacum)の葉に対して、内在性遺伝子特異的に機能するCasタンパク質発現カセット及びガイドRNA発現カセットの組み合わせ、並びに蛍光タンパク質発現カセットを、パーティクルボンバードメント法により導入した。本実施例の概要を図1に示す。具体的には以下のようにして行った。
ベンサミアナタバコの成熟花粉に対して、内在性遺伝子特異的に機能するCasタンパク質発現カセット及びガイドRNA発現カセットの組み合わせ、並びに蛍光タンパク質発現カセットを、パーティクルボンバードメント法により導入した。本実施例の概要を図3に示す。具体的には以下のようにして行った。
レポーター発現カセットを含むシロイヌナズナの葉に対して、該レポーター特異的に機能するCasタンパク質発現カセット及びガイドRNA発現カセットの組み合わせを、パーティクルボンバードメント法により導入し、レポーター活性を指標として変異効率を評価した。本実施例の概要を図5に示す。具体的には以下のようにして行った。
Claims (10)
- (1)植物体及びその一部からなる群より選択される少なくとも1種の対象物に対して、標的特異的ヌクレアーゼ発現カセットを含む導入物を、パーティクルボンバードメント法により導入する工程を含む、植物ゲノム編集方法。
- 前記対象物が、葉、及び花粉からなる群より選択される少なくとも1種であり、請求項1に記載の植物ゲノム編集方法。
- 前記対象物が花粉である、請求項1又は2に記載の植物ゲノム編集方法。
- 前記標的特異的ヌクレアーゼ発現カセットがCasタンパク質発現カセットであり、且つ前記導入物がさらにガイドRNA及びガイドRNA発現カセットからなる群より選択される少なくとも1種を含む、請求項1〜3のいずれかに記載の植物ゲノム編集方法。
- 前記導入物がレポーター発現カセットをさらに含む、請求項1〜4のいずれかに記載の植物ゲノム編集方法。
- 前記レポーター発現カセットが蛍光タンパク質発現カセットである、請求項5に記載の植物ゲノム編集方法。
- (A)花粉に対して、標的特異的ヌクレアーゼ発現カセットを含む導入物を、パーティクルボンバードメント法により導入する工程、並びに
(B)工程Aで得られた花粉を用いて次世代植物を得る工程、
を含む、ゲノム編集された植物を製造する方法。 - (a)レポーター発現カセットを含む植物体及びその一部からなる群より選択される少なくとも1種の対象物に対して、前記レポーター特異的ヌクレアーゼ発現カセットを含む導入物を、パーティクルボンバードメント法により導入し、前記レポーター発現カセット中のレポーター遺伝子を変異させる工程、並びに
(b)前記変異の効率を、前記レポーターのシグナルを指標として評価する工程、
を含む、植物ゲノム編集効率の評価方法。 - 前記工程bが、
(b1)工程a後、前記レポーター遺伝子を発現可能な状態で細胞に導入する工程、及び
(b2)工程b1で得られた細胞集団におけるレポーターシグナルを指標として、ゲノム編集効率を評価する工程
を含む、請求項8に記載の評価方法。 - 前記対象物が葉である、請求項8又は9に記載の評価方法。
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