JP2019154331A - 人工血島 - Google Patents
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Abstract
Description
前記人工血島は、血管内皮細胞を含み、
前記血管内皮細胞は、前記塊状混合物の表面に接着していることを特徴とする、
人工血島に関する。
治療により抜去された智歯から歯髄を取り出し、細切後、コラーゲナーゼ・ディスパーゼ溶液を添加し、37℃で30分間処理した。細胞をシャーレに播種し同種の細胞が集まる性質を利用して、colonial cloning法を用いて血管内皮細胞を分離し、培養液にて静置培養を行った。
コラーゲン溶液I−PC 5mg/mL(高研社製) 0.9mLに、10倍濃度に調製した培養液(DMEM/F12 10%FBS)を0.1mLとVEGFを500ng添加して室温にて混合した。別途血液から分離した血球成分を前述のコラーゲン溶液に入れ、混合した。60mmシャーレに3mLのミネラルオイル(シグマアルドリッチ社製)を入れ、37℃に暖めたヒートブロック上に置き、ピペットを用いてコラーゲン溶液をミネラルオイル中に1μLずつ滴下し、ビーズを作製した。ビーズが固まった後に、パスツールピペットを用いて回収し、Hanks’溶液に添加し、撹拌してビーズからオイルを取り除いた。ビーズをパスツールピペットにて回収し、培養液のはいった細胞非接着性のシャーレに添加した。そのシャーレに前記分離された血管内皮細胞を添加し、CO2インキュベータ内に設置した回転撹拌装置でシャーレを一晩撹拌培養した。翌日、ビーズの表面に血管内皮細胞が接着した人工血島(模擬血島)を回収した。
抜去歯から取り出した歯髄を細切して培養を行い、歯髄幹細胞を得た。その歯髄幹細胞を0.1mM アスコルビン酸、10mM β−グリセロホスフェイト、10nM デキサメサゾンが含まれる培養液で1ヶ月間培養して、分化誘導骨芽細胞を得た。
誘導骨芽細胞を培養液のはいった細胞接着性のシャーレに添加し、培養する。数日間培養して、細胞がコンフルエントになった時にシャーレの縁からピンセット等を用いて細胞をはがすと、細胞がシート状にはがれるので、これを骨芽細胞シートとした。なお、細胞接着性のシャーレは温度感受性シャーレを用いてもよい。
コラーゲン溶液I−PC 5mg/mL(高研社製) 0.9mLに、10倍濃度に調製した培養液0.1mLを室温にて混合した。60mmシャーレに3mLのミネラルオイルを入れ、37℃に暖めたヒートブロック上に置き、ピペットを用いてコラーゲン溶液をミネラルオイル中に1μLずつ滴下し、ビーズを作製した。ビーズが固まった後に、パスツールピペットを用いて回収し、Hanks’溶液に添加し、撹拌してビーズからオイルを取り除いた。ビーズをパスツールピペットにて回収し、培養液のはいった細胞非接着性のシャーレに添加した。そのシャーレに誘導骨芽細胞を添加し、CO2インキュベータ内に設置した回転撹拌装置でシャーレを一晩撹拌培養した。翌日、誘導骨芽細胞が接着した骨芽細胞ビーズが作製された。その後、撹拌を止めて、そのまま3時間静置培養を行うと、細胞ビーズ同士が結合した骨芽細胞シートが得られた。
骨芽細胞シートの上に、本発明の人工血島を播種し、CO2インキュベータ内で静置培養を行うことによって、16時間後に骨芽細胞シート上に微細血管網を観察することができた(図2)。骨芽細胞シート上に形成された血管網の組織像を図3に示す。
Claims (21)
- 足場材料を含む塊状混合物を含む、人工血島であって、
前記人工血島は、血管内皮細胞を含み、
前記血管内皮細胞は、前記塊状混合物の表面に接着していることを特徴とする、
人工血島。 - 請求項1に記載の人工血島であって、
前記人工血島は、組織の血管形成において使用されることを特徴とする、
人工血島。 - 請求項1または2に記載の人工血島であって、
前記塊状混合物は、血球成分をさらに含むことを特徴とする、
人工血島。 - 請求項3に記載の人工血島であって、
前記血球成分は、赤血球であることを特徴とする、
人工血島。 - 請求項1〜4のいずれか1項に記載の人工血島であって、
前記塊状混合物は、血管内皮細胞増殖因子(VEGF)を含むことを特徴とする、
人工血島。 - 請求項5に記載の人工血島であって、
前記血管内皮細胞増殖因子は、VEGF−A、VEGF−B、VEGF−C、VEGF−D、VEGF−E、PlGF−1、および、PlGF−2からなる群から選択される1または2以上の因子であることを特徴とする、
人工血島。 - 請求項5または6に記載の人工血島であって、
前記塊状混合物は、上皮成長因子(EGF)、および/または、肝細胞増殖因子(HGF)をさらに含むことを特徴とする、
人工血島。 - 請求項1〜7のいずれか1項に記載の人工血島であって、
前記足場材料が、コラーゲン、プロテオグリカン、グリコサミノグリカン、ヒアルロン酸、および、ゼラチンからなる群から選択される1または2以上の材料を含むことを特徴とする、
人工血島。 - 1または2以上の種類の細胞を含む細胞シートであって、
前記細胞シート上に、請求項1〜8のいずれか1項に記載の複数の人工血島が適用されていることを特徴とする、
細胞シート。 - 複数の細胞シートの積層体であって、
積層された前記細胞シートの1層または2以上の層が、請求項9に記載の人工血島が適用された細胞シートであることを特徴とする、
積層体。 - 人工細胞ビーズと、請求項1〜7のいずれか1項に記載の人工血島とを含む組成物であって、
前記人工細胞ビーズは、足場材料を含む塊状混合物、および、1または2以上の種類の細胞を含み、
前記1または2以上の種類の細胞は、前記塊状混合物の表面に接着していることを特徴とする、
組成物。 - 血管網を有する人工組織の製造方法であって、
請求項9に記載の細胞シート、請求項10に記載の積層体、または、請求項11に記載の組成物を培養し、前記細胞シート上または前記組成物中に血管網を形成させる工程、を含むことを特徴とする、
方法。 - 請求項12に記載の方法であって、
前記人工組織が人工骨組織であり、
前記細胞シートが、骨芽細胞を含む1または2以上の種類の細胞を含む、骨芽細胞シートである、および/または、前記人工細胞ビーズが、骨芽細胞を含む1または2以上の種類の細胞を含む、骨芽細胞ビーズであることを特徴とする、
方法。 - 請求項12に記載の方法であって、
前記人工組織が人工神経組織であり、
前記細胞シートが、神経細胞を含む1または2以上の種類の細胞を含む、神経細胞シートである、および/または、前記人工細胞ビーズが、神経細胞を含む1または2以上の種類の細胞を含む、神経細胞ビーズであることを特徴とする、
方法。 - 請求項12〜14のいずれか1項に記載の方法で製造される、血管網を有する人工組織。
- 血管網を有する人工骨組織であることを特徴とする、請求項15に記載の人工組織。
- 骨疾患の治療における使用のための、請求項16に記載の人工組織。
- 請求項17に記載の人工組織であって、
前記骨疾患が、骨欠損または骨変性であることを特徴とする、
人工組織。 - 血管網を有する人工神経組織であることを特徴とする、請求項15に記載の人工組織。
- 神経疾患の治療における使用のための、請求項19に記載の人工組織。
- 請求項20に記載の人工組織であって、
前記神経疾患が、脳梗塞、脳軟化症、脳挫傷、脊髄損傷、外傷性の神経損傷、手術による神経損傷、神経の壊死、および、パーキンソン病からなる群から選択されることを特徴とする、
人工組織。
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JP (1) | JP2019154331A (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2021206055A1 (ja) * | 2020-04-08 | 2021-10-14 | 一丸ファルコス株式会社 | 血管新生促進及び/又は神経再生用ユニット |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2017079704A (ja) * | 2015-10-30 | 2017-05-18 | 国立大学法人横浜国立大学 | 血管網被包細胞包埋ビーズ及びその製造方法、並びに前記血管網被包細胞包埋ビーズを用いた集積体及びその製造方法 |
-
2018
- 2018-03-14 JP JP2018046519A patent/JP2019154331A/ja active Pending
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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JP2017079704A (ja) * | 2015-10-30 | 2017-05-18 | 国立大学法人横浜国立大学 | 血管網被包細胞包埋ビーズ及びその製造方法、並びに前記血管網被包細胞包埋ビーズを用いた集積体及びその製造方法 |
Non-Patent Citations (5)
Title |
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"O-39-2新しい骨移植材料および実験モデルとしての血管網含有再生骨組織", 第17回日本再生医療学会総会プログラム抄録(WEB版), JPN6021043203, 23 February 2018 (2018-02-23), pages 467頁, ISSN: 0004757953 * |
"Osteoblast-derived VEGF regulates osteoblast differentiation and bone formation during bone repair", THE JOURNAL OF CLINICAL INVESTIGATION, vol. Volume 126, Number 2, JPN6021043208, 2016, pages 509 - 526, ISSN: 0004757950 * |
"P-01-083顎顔面領域から採取したヒト外胚葉性間葉系幹細胞を細胞源とした下歯槽神経切断に対する細胞移植療", 第17回日本再生医療学会総会プログラム抄録(WEB版), JPN6021043202, 23 February 2018 (2018-02-23), pages 319頁, ISSN: 0004628538 * |
"P-02-082ヒト歯髄細胞を用いた神経および微細血管網を含む3次元骨組織形成", 日本再生医療学会雑誌, vol. 16, JPN6021043204, 2017, pages 414頁, ISSN: 0004757952 * |
"間葉系幹細胞の新しい機能−免疫調節細胞としての間葉系幹細胞−", 日本補綴歯科学会誌, vol. 8巻, 4号, JPN6021043206, 2016, pages 346 - 353, ISSN: 0004757951 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2021206055A1 (ja) * | 2020-04-08 | 2021-10-14 | 一丸ファルコス株式会社 | 血管新生促進及び/又は神経再生用ユニット |
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