JP2019138919A - 免疫分析方法及び試薬 - Google Patents
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Abstract
Description
1)アルキル基の炭素原子数が8〜14個であるポリオキシエチレンアルキルエーテル界面活性剤の存在下で抗原抗体反応及び/又は測定を行う免疫分析方法。
2)前記ポリオキシエチレンアルキルエーテル界面活性剤のHLBが15〜19の非イオン界面活性剤である1)の方法。
3)前記ポリオキシエチレンアルキルエーテル界面活性剤が存在する反応系及び/又は測定系における該ポリオキシエチレンアルキルエーテル界面活性剤の濃度が0.0001%〜1%である1)又は2)の方法。
4)抗原抗体反応の開始から測定完了までを前記ポリオキシエチレンアルキルエーテル界面活性剤の存在下で行う1)〜3)のいずれかの方法。
5)免疫分析方法が、免疫凝集法である1)〜4)のいずれかの方法。
6)免疫凝集法がラテックス凝集法である5)の方法。
7)1)の方法に使用される免疫分析試薬であって、アルキル基の炭素原子数が8〜14個であるポリオキシエチレンアルキルエーテル界面活性剤を含むことを特徴とする免疫分析試薬。
8)前記ポリオキシエチレンアルキルエーテル界面活性剤のHLBが15〜19の非イオン性界面活性剤である7)の試薬。
9)免疫凝集法のための試薬をさらに含む、免疫凝集用試薬である請求項7)又は8)の試薬。
10)ラテックス凝集法のための試薬をさらに含む、ラテックス凝集用試薬である9)の試薬。
(1)試薬の調製
フェリチンに対する抗体を用いて、以下の通りに免疫凝集法による測定試薬を調製した。
i)抗フェリチン抗体を平均粒径300nmのポリスチレンラテックス浮遊液1mLに対し0.03mg担持させてなる感作粒子を、緩衝液(トリス、pH8.0)に0.04%となるように懸濁し、ラテックス浮遊液を調製した。
ii)緩衝液(トリス、pH8.5)に、アルキル基の炭素原子数が8〜14個であるポリオキシエチレンアルキルエーテル界面活性剤(「エマルゲン1118S−70」(商品名、花王株式会社から市販)、HLB16.4)を添加し、下記の試薬A〜Fを調製した(実施例1〜6)。比較例1として、何も添加しない試薬Gを調製した。
自動分析装置は日立社7180型自動分析装置によりエンドポイント法で自動測定を行った。
前述の試薬A〜Gを用いて、非特異反応を起こすことで知られている偽陽性2検体及び正常1検体の測定を行った。検体溶液15.0μLに試薬A〜Gの上記で調製した緩衝液100μLを添加し、この混合液を37℃で撹拌混合した。5分間放置後、ラテックス浮遊液100μLを添加し、更に37℃で撹拌混合した。約5分間の凝集反応を吸光度変化量として測定し、検量線より各検体のフェリチン濃度を算出した。
上記実施例1〜6及び比較例1の測定感度と、非特異反応が抑制されていることがわかっている既存の市販ラテックス試薬であるFER−ラテックスX2「生研」CN(デンカ生研)(以下、「既存試薬」)との感度の比較を行った。結果を図1示す。
上記実施例1〜6と比較例1の測定結果を比較した。結果を表2に示す。
(1)試薬の調製
フェリチンに対する抗体を用いて、以下の通りに免疫凝集法による測定試薬を調製した。
i)抗フェリチン抗体を平均粒径300nmのポリスチレンラテックス浮遊液1mLに対し0.03mg担持させてなる感作粒子を、緩衝液(トリス、pH8.0)に0.04%となるように懸濁し、ラテックス浮遊液を調製した。
ii)緩衝液(トリス、pH8.5)に、アルキル基の炭素原子数が8〜14個であるポリオキシエチレンアルキルエーテル界面活性剤(「エマルゲン1118S−70」(商品名、花王株式会社から市販)、HLB16.4)及びヒトIgM自然抗体を添加し、下記の試薬H(実施例7)、試薬I(実施例8)を調製した。比較例2として何も添加しない試薬J、ヒトIgM自然抗体のみを添加した試薬Kを調製した。
前述の試薬H〜Kを用いて、非特異反応を起こすことで知られている偽陽性2検体の測定を行った。検体溶液15.0μLに試薬H〜Kの上記で調製した緩衝液100μLを添加し、この混合液を37℃で撹拌混合した。5分間放置後、ラテックス浮遊液100μLを添加し、更に37℃で撹拌混合した。約5分間の凝集反応を吸光度変化量として測定し、検量線より各検体のフェリチン濃度を算出した。
上記実施例7、8と比較例2、3の測定結果を比較した。結果を表4に示す。
Claims (10)
- アルキル基の炭素原子数が8〜14個であるポリオキシエチレンアルキルエーテル界面活性剤の存在下で抗原抗体反応及び/又は測定を行う免疫分析方法。
- 前記ポリオキシエチレンアルキルエーテル界面活性剤のHLBが15〜19の非イオン性界面活性剤である請求項1記載の方法。
- 前記ポリオキシエチレンアルキルエーテル界面活性剤が存在する反応系及び/又は測定系における該ポリオキシエチレンアルキルエーテル界面活性剤の濃度が0.0001〜1%である請求項1又は2記載の方法。
- 抗原抗体反応の開始から測定完了までを前記ポリオキシエチレン界面活性剤の存在下で行う請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
- 免疫分析方法が、免疫凝集法である請求項1〜4のいずれか1項に記載の方法。
- 免疫凝集法がラテックス凝集法である請求項5に記載の方法。
- 請求項1記載の方法に使用される免疫分析試薬であって、アルキル基の炭素原子数が8〜14個であるポリオキシエチレンアルキルエーテル界面活性剤を含むことを特徴とする免疫分析試薬。
- 前記ポリオキシエチレンアルキルエーテル界面活性剤のHLBが15〜19である請求項7記載の試薬。
- 免疫凝集法のための試薬をさらに含む、免疫凝集用試薬である請求項7又は8記載の試薬。
- ラテックス凝集法のために試薬をさらに含む、ラテックス凝集用試薬である請求項9記載の試薬。
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