JP2019135262A

JP2019135262A - 免疫調節のための４−メチルウンベリフェロン処置

Info

Publication number: JP2019135262A
Application number: JP2019095974A
Authority: JP
Inventors: ボリーキーポール; Bollyky Paul; ナギーナディーン; Nagy Nadine; ワイトトーマス; Wight Thomas; エフ．カイパースヘドウィグ; F Kuipers Hedwich
Original assignee: Benaroya Research Institute at Virginia Mason BRI; Leland Stanford Junior University
Current assignee: Benaroya Research Institute at Virginia Mason BRI; Leland Stanford Junior University
Priority date: 2013-08-12
Filing date: 2019-05-22
Publication date: 2019-08-15
Also published as: JP2016530265A; US10285976B2; EP3033416A4; WO2015023691A2; EP3033416A2; CN105579578A; US20160184262A1; US20200101042A1; WO2015023691A3

Abstract

【課題】ヒアルロナン合成を阻害する化合物および薬学的に受容可能なキャリアを含む、自己免疫疾患、アレルギー疾患、もしくはアトピー性疾患を処置するための組成物を提供すること。【解決手段】いくつかの実施形態において、上記ヒアルロナン合成を阻害する化合物は、４−メチルウンベリフェロンもしくは４−メチルウンベリフェロンの代謝産物である。自己免疫性糖尿病、多発性硬化症および／もしくは自己免疫性脱髄を処置するための、哺乳動物被験体において、ヒアルロナン合成を阻害するために有効な量の化合物を有する組成物を、上記被験体に投与する工程を包含する方法もまた、記載される。【選択図】なし

Description

関連出願との相互参照
本出願は、参考として本明細書に援用される、２０１３年８月１２日に出願された米国仮特許出願第６１／８６５０８４号に対する利益を主張する。

（発明の分野）
本開示は、免疫調節性組成物および上記組成物を使用して、ヒアルロナン合成を阻害する方法に関する。本開示はまた、自己免疫疾患もしくは障害（例えば、糖尿病もしくは多発性硬化症）を処置するための組成物および方法に関する。

（政府の許諾権に関する陳述）
本発明は、アメリカ国立衛生研究所によって助成された契約ＡＩ１０１９８４およびＤＫ０９６０８７の下での政府支援とともに行われた。政府は、本発明において一定の権利を有する。

（背景）
自己免疫疾患もしくは障害は、身体の免疫系が健康な身体組織を誤って攻撃し破壊する場合に起こる。自己免疫疾患は、身体におけるほぼいかなる組織をも攻撃し得、全ての自己免疫疾患は、リンパ球といわれる免疫細胞による局所的炎症および浸潤によって特徴付けられる。

例として、自己免疫性糖尿病（１型糖尿病もしくはインスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）としても公知）は、身体の免疫系が、β細胞といわれるインスリンを生成する膵臓の細胞を誤って破壊する場合に起こる。β細胞への損傷は、身体によって生成されるインスリンの非存在もしくはその不十分な生成を生じる。自己免疫性糖尿病を含め、全ての自己免疫疾患において、リンパ球は、細胞外マトリクス（ＥＣＭ）との相互作用によって、血流から標的組織へと遊走する。自己免疫性糖尿病の場合、リンパ球は、膵島の毛細管と内分泌細胞との間にあるＥＣＭとの相互作用によって膵島を攻撃する。

３００人の米国の小児に１人が、自己免疫性糖尿病を発症する。これら個体の多くは、自己抗体と関連する自己免疫性糖尿病のスクリーニングによって、彼らが高血糖症を示す前に同定され得る。従って、自己免疫性糖尿病を防止するための知識および手段があれば、自己免疫性糖尿病が防止され得る治療可能時間域が存在する。本願は、リスクのある個体における自己免疫性糖尿病への進行を逆転および／もしくは防止するための新規な戦略を記載する。

別の例として、多発性硬化症（ＭＳ）も自己免疫疾患であるが、ＭＳでは、自己免疫活性は、中枢神経系（ＣＮＳ）抗原に対して指向される。上記疾患は、ＣＮＳの一部の炎症によって特徴付けられ、神経軸索の周りのミエリン鞘形成の喪失（脱髄）、軸索消失、および最終的にはニューロン、希突起神経膠細胞およびグリア細胞の死滅をもたらす。ＭＳおよび現時点での治療の包括的総説に関しては、例えば、Ｃｏｍｐｓｔｏｎ，Ａ．，ｅｔａｌ．，ＭｃＡｌｐｉｎｅ’ｓＭｕｌｔｉｐｌｅＳｃｌｅｒｏｓｉｓ４ｔｈ
ｅｄ．，ＣｈｕｒｃｈｉｌｌＬｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅＥｌｓｅｖｉｅｒ（２００６）を参照のこと。

ＭＳは、若年成人においてＣＮＳの最も一般的な疾患のうちの１つであり、推定２５０万人がＭＳに罹患している。ＭＳは、慢性の、進行性の身体障害性の疾患であり、一般には、青年期後のある時点にその犠牲者を襲い、一般には、２０〜４０歳齢の間に診断されるが、開始はより早期に起こり得る。上記疾患は、直接的に遺伝性ではないが、遺伝的感受性がその発生にある役割を果たす。ＭＳは、不均一な臨床的、病理学的および免疫学的な表現型を有する複雑な疾患である。

ＭＳには主に４つの臨床タイプがある：１）明確に定義された再発と、完全な回復もしくは回復の際に続発症および後遺症とによって特徴付けられる、再発寛解型ＭＳ（ＲＲＭＳ）；疾患再発の間の期間は、疾患進行がないことによって特徴付けられる；２）最初の再発寛解の経過に続いて、ときおりの寛解、部分寛解、および安定期を伴ったり伴ったりせずに進行することによって特徴付けられる、二次進行型ＭＳ（ＳＰＭＳ）；３）開始時から疾患が進行し、ときおりの安定期および一時的なに部分的改善が認められることによって特徴付けられる、一次進行型ＭＳ（ＰＰＭＳ）；ならびに４）進行性の疾患開始が、明確な急性再発を伴い、完全回復を伴ったり伴わなかったりすることによって特徴付けられる、進行性再発型ＭＳ（ＰＲＭＳ）；再発の間の期間は、継続的な進行によって特徴付けられる。

臨床的には、この病気は、最も頻繁には、再発寛解型疾患として現れ、より低頻度に、神経学的障害の確実な進行として現れる。再発寛解型ＭＳは、病巣性もしくは多病巣性の神経学的機能障害の反復性の攻撃の形態で現れる。一見すると無作為に、長年にわたって、攻撃が起こり、寛解し、そして再発し得る。寛解はしばしば不完全であり、ある攻撃が別の攻撃に続くので、段階的な下方への進行が、結果として永久的な神経学的障害の増大とともに起こる。ＲＲＭＳの通常の経過は、患者の大部分に関しては、最終的な疾患進行の開始と関連した反復する再発によって特徴付けられる。上記疾患のその後の経過は、推定不能であるが、再発寛解型疾患を有する大部分の患者は、最終的には、二次進行型疾患を発症させる。再発寛解型の相では、再発と臨床的不活性の期間とが交互に現れ、エピソード間の神経学的障害の存在に依存して、後遺症が現れることもあるし、示されないこともある。再発寛解型の相の間の再発間の期間は、臨床的には安定している。他方で、進行性ＭＳを有する患者は、上記で定義されるとおりおよび始めからもしくはエピソード期間の後のいずれかで障害の確実な増大を示すが、この指定は、新たな再発のさらなる発生を除外しない。

健康な個体（すなわち、自己免疫疾患もしくは障害のない個体）において、免疫寛容は、調節性Ｔ細胞（ＦｏｘＰ３＋調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）が挙げられる）の集団によって維持される（Ｓａｋａｇｕｃｈｉ，Ｓ．，ｅｔａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０，４９０−５００（２０１０））。Ｔｒｅｇの非存在もしくは枯渇は、マウスおよびヒトにおいて多系統自己免疫をもたらす（Ｗｉｌｄｉｎ，Ｒ．Ｓ．，ｅｔａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．２７，１８−２０（２００１））が、Ｔｒｅｇの養子免疫伝達は、自己免疫を終わらせ得る。

ＭＳにおいて、ＣＮＳに存在するＴｒｅｇは、神経炎症の程度を制限し、多発性硬化症のマウスモデルである、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）の間に臨床的回復を促進することが公知である。その結果、自己免疫性脱髄を処置するための多数の調査研究治療ストラテジーが、Ｔｒｅｇの数および／もしくは機能を増進することに向けられている。しかし、既存の治療では、安定な機能的ＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇを誘発しようとしてこなかった。部分的な理由としては、インビボでのＴｒｅｇは、流動的な集団であることがある。ナチュラルＴｒｅｇ（ｎＴｒｅｇ）は、胸腺での選択によって継続的に出現するのに対して、誘導性Ｔｒｅｇ（ｉＴｒｅｇ）は、炎症刺激に応じて末梢組織において発生し、エフェクターＴ細胞へと戻り得る。炎症部位での局所的Ｔｒｅｇの数および機能のこの変動性は、末梢組織における免疫寛容の耐久性に影響を及ぼし得る。

炎症環境が免疫寛容に対して決定的な影響を有することは公知であるという事実にも拘わらず、組織の微小環境がどのようにしてＴｒｅｇの機能および数に影響を及ぼしているかについてはほとんど分かっていない。従って、自己免疫におけるリンパ球と局所的な細胞との間の境界におけるＥＣＭの役割への関心がますます高まっている（Ｂｏｌｌｙｋｙ，
Ｐ．Ｌ．，ｅｔａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｄｉａｂ．Ｒｅｐ．１２，４７１−４８０（２０１２）；Ｉｒｖｉｎｇ−Ｒｏｄｇｅｒｓ，Ｈ．Ｆ．，ｅｔａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ５１，１６８０−１６８８（２００８）；Ｈｕｌｌ，Ｒ．Ｌ．，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８７，３７１５４−３７１６４（２０１２）；Ｂｉｔａｎ，Ｍ．，ｅｔａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ．Ｍｅｔａｂ．Ｒｅｓ．Ｒｅｖ．２４，４１３−４２１（２００８）；Ｚｉｏｌｋｏｗｓｋｉ，Ａ．Ｆ．，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１２２，１３２−１４１（２０１２））。

炎症部位に豊富な１つの組織成分は、ヒアルロナン（ＨＡ）、すなわち細胞外マトリクス（ＥＣＭ）ポリサッカリドである。ＨＡは、多くの機能を有する（例えば、細胞の支持および固定を提供すること、組織を互いから分離すること、細胞間シグナル伝達、発生、遊走および機能を促進すること）（Ｂｏｌｌｙｋｙ，Ｐ．Ｌ．，ｅｔａｌ．（２０１２），前出）。ＨＡは、ヒアルロナンシンターゼといわれる内在性膜タンパク質のクラスによって合成され、細胞膜を通って細胞外空間へと押し出される（Ｌａｕｒｅｎｔ，Ｔ．Ｃ．，ｅｔａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．７４，Ａ１−７（１９９６））。

ＨＡは、グルクロン酸およびＮ−アセチルグルコサミンから構成され、交互に現れるβ−１，４グリコシド結合およびβ−１，３グリコシド結合によって繋がれているジサッカリドのポリマーである。ＨＡは、長さ２５，０００個のジサッカリド反復であり得る。ＨＡのインビボでのポリマーは、５，０００〜２０，０００，０００Ｄａのサイズ範囲に及び得る。ＨＡは、ヒアルロナンシンターゼといわれる内在性膜タンパク質のクラスによって合成され、そのうち、脊椎動物は、３つのタイプを有する：ＨＡＳ１、ＨＡＳ２、およびＨＡＳ３。これら酵素は、細胞膜を通って細胞外空間へと押し出されるときに、グルクロン酸およびＮ−アセチルグルコサミンを発生中のポリサッカリドへと反復して付加することによって、ヒアルロナンを長くする。

ＨＡは、リンパ球トラフィッキング、増殖、および抗原提示において役割を有する、炎症の重要なメディエーターである（Ｌａｕｒｅｎｔ，Ｔ．Ｃ．，ａｎｄＦｒａｓｅｒ，Ｊ．Ｒ．，ＦＡＳＥＢＪ．６，２３９７−２４０４（１９９２）；Ｂｏｌｌｙｋｙ，Ｐ．Ｌ．，ｅｔａｌ．，ＣｅｌｌＭｏｌＩｍｍｕｎｏｌ．３，２１１−２２０（２０１０））。ＨＡは、ヒト自己免疫疾患（多発性硬化症、シェーグレン病、および自己免疫性甲状腺炎が挙げられる）と関連した病変において増大する（Ｂａｃｋ，Ｓ．Ａ．，ｅｔａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１１，９６６−９７２（２００５）；Ｅｎｇｓｔｒｏｅｍ−Ｌａｕｒｅｎｔ，Ａ．「Ｃｈａｎｇｅｓｉｎｈｙａｌｕｒｏｎａｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｉｎｔｉｓｓｕｅｓ
ａｎｄｂｏｄｙｆｌｕｉｄｓｉｎｄｉｓｅａｓｅｓｔａｔｅｓ．」Ｔｈｅ
ＢｉｏｌｏｇｙｏｆＨｙａｌｕｒｏｎａｎ，ＣＩＢＡＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＳｙｍｐｏｓｉｕｍ，１４３，．２３３−４７（１９８９）．；Ｇｉａｎｏｕｋａｋｉｓ，Ａ．，ｅｔａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ１４８，５４−６２（２００７）。ＨＡはまた、狼瘡、関節リウマチ、乾癬、および自己免疫性甲状腺炎を有する個体の血清中で増大する（Ｅｎｇｓｔｒｏｅｍ−Ｌａｕｒｅｎｔ，前出；Ｐｉｔｓｉｌｌｉｄｅｓｅｔａｌ．，Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．３３，５−１０（１９９４）；Ｈａｎｓｅｎ，Ｃ．，ｅｔａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．１４Ｓｕｐｐｌ．１５，Ｓ５９−６７（１９９６）；Ｔｏｒｓｔｅｉｎｓｄｏｔｔｉｒｅｔａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１５，５５４−５６０（１９９９）；Ｅｌｋａｙａｍ，Ｏ．，ｅｔａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．１９，４５５−４５７（２０００）；
Ｋｕｂｏ，Ｍ．，ｅｔａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｒｅｓ．２９０，５７９−５８１（１９９８）。

ＨＡは、慢性的に炎症を起こした組織（例えば、ＭＳ病変を含む）内で非常に豊富である（Ｂｏｌｌｙｋｙ，Ｐ．Ｌ．，ｅｔａｌ．（２０１２），前出；Ｂａｃｋ，Ｓ．Ａ．，ｅｔａｌ．，前出）。例えば、ある研究では、ＨＡは、ＭＳおよびＥＡＥの脱髄病変中に蓄積することが示された。慢性ＭＳ病変のＰＬＰの免疫染色は、病変の中心においてミエリンの完全な喪失を示した。ＣＤ４４染色から、病変における高レベルのＣＤ４４が明らかになり、ＧＦＡＰ発現反応性星状細胞における上昇したＣＤ４４発現もまた見出された。ＨＡ染色は、病変の脱髄した区域で高レベルのＨＡを示したが、病変縁部ではより低レベルであった（ＢａｃｋＳ．Ａ．，ｅｔａｌ．，前出）。

代表的には、慢性的に炎症を起こした組織内に存在するＨＡは、短く、非常に異化されたフラグメントの形態をとり（Ｂｏｌｌｙｋｙ，Ｐ．Ｌ．，ｅｔａｌ．（２０１２），前出で総説されるとおり）、上記フラグメントは、Ｔｏｌｌ様レセプターシグナル伝達の炎症促進性アゴニストであり（Ｌａｕｒｅｎｔ，Ｔ．Ｃ．，ｅｔａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．７４，Ａ１−７（１９９６）；Ｊｉａｎｇ，Ｄ．，ｅｔａｌ．，Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｖ．９１，２２１−２６４
（２０１１））、樹状細胞成熟を駆動し、ファゴサイトーシスを促進する（Ｊｉａｎｇ，Ｄ．，ｅｔａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１１，１１７３−１１７９（２００５）；Ｔｅｒｍｅｅｒ，Ｃ．，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９５，９９−１１１（２００２））。ＨＡ過剰発現は、おそらく増大したＨＡフラグメントの生成を通じて炎症を駆動する傾向にある（Ｏｌｓｓｏｎ，Ｍ．ｅｔａｌ．，ＰＬｏＳＧｅｎｅｔ．７，ｅ１００１３３２（２０１１））。その一方で、ＨＡ合成の阻害（４−メチルウンベリフェロン（４−ＭＵ、ヒメクロモン）での処置を含む）は、炎症を低減する傾向にある（Ｙｏｓｈｉｏｋａ，Ｙ．，ｅｔａｌ．，ＡｒｔｈｒｉｔｉｓＲｈｅｕｍ．６５，１１６０−１１７０（２０１３）；ＭｃＫａｌｌｉｐ，Ｒ．Ｊ．，ｅｔａｌ．，Ｔｏｘｉｎｓ（Ｂａｓｅｌ）５，
１８１４−１８２６（２０１３）；Ｃｏｌｏｍｂａｒｏ，Ｖ．ｅｔａｌ．，
Ｎｅｐｈｒｏｌ．Ｄｉａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ２８，２４８４−２４９３
（２０１３）；Ｓａｉｔｏ，Ｔ．，ｅｔａｌ．，Ｏｎｃｏｌ．Ｌｅｔｔ．
５，１０６８−１０７４（２０１３））。局所的な免疫調節におけるＨＡの役割に関しては、低分子量ＨＡ（ＬＭＷ−ＨＡ）フラグメントが、ＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇの機能を阻害することは公知である（Ｂｏｌｌｙｋｙ，Ｐ．Ｌ．，ｅｔａｌ．，Ｊ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７９，７４４−７４７（２００７）；Ｂｏｌｌｙｋｙ，Ｐ．Ｌ．，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８３，２２３２−２２４１
（２００９））。これら効果は、ＴＬＲシグナル伝達を通じて、かつＨＡレセプターＣＤ４４との相互作用を通じて、媒介される。

健康なＣＮＳでは、星状細胞は、低レベルのＨＡの主な生産者であり、ＨＡを有髄軸索の間および髄鞘と星状細胞突起との間の空間においてＥＣＭ複合体として沈着させる（Ａｓｈｅｒ，Ｒ．，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｒｅｓ．２８，４１０−４２１（１９９１））。しかし、傷害の際には、反応性星状細胞は、豊富な量のＨＡを生成し、これは損修した領域に蓄積する（Ｂａｃｋ，Ｓ．Ａ．，ｅｔａｌ．，前出；Ｓｔｒｕｖｅ，Ｊ．，ｅｔａｌ．，Ｇｌｉａ５２，１６−２４（２００５）；Ｂｕｇｉａｎｉ，Ｍ．，ｅｔａｌ．，Ｂｒａｉｎ１３６，２０９−２２２（２０１３））。このようにして、ＨＡは、ＭＳ患者およびＥＡＥを有するマウスにおける脱髄病変の中に高レベルで存在する（Ｂａｃｋ，Ｓ．Ａ．，ｅｔ
ａｌ．，前出）。

４−ＭＵは、ＨＡ合成の選択的インヒビターである。上記化合物は、１９９５年に、皮膚線維芽細胞におけるＨＡ合成を阻害するためにＮａｋａｍｕｒａｅｔａｌ．によって初めてインビトロで使用された。Ｎａｋａｍｕｒａ，Ｔ．，ｅｔａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２０８，４７０−４７５
（１９９５）。２００４年には、４−ＭＵの機構がＫａｋｉｚａｋｉｅｔａｌ．によって発見され、それ以来、４−ＭＵの影響を調査するために、主に癌研究において、（Ｋａｋｉｚａｋｉ，Ｉ．，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９，３３２８１−３３２８９（２００４）；例えば、Ｙｏｓｈｉｈａｒａ，Ｓ．，ｅｔａｌ．，ＦＥＢＳＬｅｔｔｅｒｓ５７９，２７２２−２７２６（２００５）；Ｌｏｋｅｓｈｗａｒ，Ｖ．Ｂ．，ｅｔａｌ．，ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．
７０，２６１３−２６２３（２０１０）もまた参照のこと）およびアテローム性動脈硬化症研究で（Ｎａｇｙ，Ｎ．，ｅｔａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ１２２，２３１３−２３２２（２０１０））、マウスおよびラットにおけるインビボ研究で４−ＭＵが使用されてきた。４−ＭＵは、既にヒトでも使用されている。それは、Ｈｅｐａｒｖｉｔ（がん患者のための栄養補助製品）として処方箋なしで入手できる。さらに、欧州およびアジアでは、名称ヒメクロモンの下で、胆道痙攣を処置するために処方箋があれば入手可能である。その状況では、上記薬物は、優れた安全性プロファイルを有し、数年間にわたって使用されている。
ＨＡ沈着は慢性的に炎症を起こした組織において豊富であり、４−ＭＵはＨＡ合成の選択的インヒビターであることが公知であるが、自己免疫病因論におけるＨＡの役割の揺るぎない理解を提供することによって、自己免疫疾患および障害（例えば、糖尿病およびＭＳ）の安全かつ有効な治療を開発する必要性は未だ残っている。

Ｃｏｍｐｓｔｏｎ，Ａ．，ｅｔａｌ．，ＭｃＡｌｐｉｎｅ’ｓＭｕｌｔｉｐｌｅＳｃｌｅｒｏｓｉｓ４ｔｈｅｄ．，ＣｈｕｒｃｈｉｌｌＬｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅＥｌｓｅｖｉｅｒ（２００６）Ｓａｋａｇｕｃｈｉ，Ｓ．，ｅｔａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０，４９０−５００（２０１０）Ｗｉｌｄｉｎ，Ｒ．Ｓ．，ｅｔａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．２７，１８−２０（２００１）Ｂｏｌｌｙｋｙ，Ｐ．Ｌ．，ｅｔａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｄｉａｂ．Ｒｅｐ．１２，４７１−４８０（２０１２）Ｉｒｖｉｎｇ−Ｒｏｄｇｅｒｓ，Ｈ．Ｆ．，ｅｔａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ５１，１６８０−１６８８（２００８）Ｈｕｌｌ，Ｒ．Ｌ．，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８７，３７１５４−３７１６４（２０１２）Ｂｉｔａｎ，Ｍ．，ｅｔａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ．Ｍｅｔａｂ．Ｒｅｓ．Ｒｅｖ．２４，４１３−４２１（２００８）Ｚｉｏｌｋｏｗｓｋｉ，Ａ．Ｆ．，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１２２，１３２−１４１（２０１２）Ｌａｕｒｅｎｔ，Ｔ．Ｃ．，ｅｔａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．７４，Ａ１−７（１９９６）Ｌａｕｒｅｎｔ，Ｔ．Ｃ．，ａｎｄＦｒａｓｅｒ，Ｊ．Ｒ．，ＦＡＳＥＢＪ．６，２３９７−２４０４（１９９２）Ｂｏｌｌｙｋｙ，Ｐ．Ｌ．，ｅｔａｌ．，ＣｅｌｌＭｏｌＩｍｍｕｎｏｌ．３，２１１−２２０（２０１０）Ｂａｃｋ，Ｓ．Ａ．，ｅｔａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１１，９６６−９７２（２００５）Ｅｎｇｓｔｒｏｅｍ−Ｌａｕｒｅｎｔ，Ａ．「Ｃｈａｎｇｅｓｉｎｈｙａｌｕｒｏｎａｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｉｎｔｉｓｓｕｅｓａｎｄｂｏｄｙｆｌｕｉｄｓｉｎｄｉｓｅａｓｅｓｔａｔｅｓ．」ＴｈｅＢｉｏｌｏｇｙｏｆＨｙａｌｕｒｏｎａｎ，ＣＩＢＡＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＳｙｍｐｏｓｉｕｍ，１４３，．２３３−４７（１９８９）Ｇｉａｎｏｕｋａｋｉｓ，Ａ．，ｅｔａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ１４８，５４−６２（２００７）Ｐｉｔｓｉｌｌｉｄｅｓｅｔａｌ．，Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．３３，５−１０（１９９４）Ｈａｎｓｅｎ，Ｃ．，ｅｔａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．１４Ｓｕｐｐｌ．１５，Ｓ５９−６７（１９９６）Ｔｏｒｓｔｅｉｎｓｄｏｔｔｉｒｅｔａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１５，５５４−５６０（１９９９）Ｅｌｋａｙａｍ，Ｏ．，ｅｔａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．１９，４５５−４５７（２０００）Ｋｕｂｏ，Ｍ．，ｅｔａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｒｅｓ．２９０，５７９−５８１（１９９８）Ｊｉａｎｇ，Ｄ．，ｅｔａｌ．，Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｖ．９１，２２１−２６４（２０１１）Ｊｉａｎｇ，Ｄ．，ｅｔａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１１，１１７３−１１７９（２００５）Ｔｅｒｍｅｅｒ，Ｃ．，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９５，９９−１１１（２００２）Ｏｌｓｓｏｎ，Ｍ．ｅｔａｌ．，ＰＬｏＳＧｅｎｅｔ．７，ｅ１００１３３２（２０１１）Ｙｏｓｈｉｏｋａ，Ｙ．，ｅｔａｌ．，ＡｒｔｈｒｉｔｉｓＲｈｅｕｍ．６５，１１６０−１１７０（２０１３）ＭｃＫａｌｌｉｐ，Ｒ．Ｊ．，ｅｔａｌ．，Ｔｏｘｉｎｓ（Ｂａｓｅｌ）５，１８１４−１８２６（２０１３）Ｃｏｌｏｍｂａｒｏ，Ｖ．ｅｔａｌ．，Ｎｅｐｈｒｏｌ．Ｄｉａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ２８，２４８４−２４９３（２０１３）Ｓａｉｔｏ，Ｔ．，ｅｔａｌ．，Ｏｎｃｏｌ．Ｌｅｔｔ．５，１０６８−１０７４（２０１３）Ｂｏｌｌｙｋｙ，Ｐ．Ｌ．，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７９，７４４−７４７（２００７）Ｂｏｌｌｙｋｙ，Ｐ．Ｌ．，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８３，２２３２−２２４１（２００９）Ａｓｈｅｒ，Ｒ．，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｒｅｓ．２８，４１０−４２１（１９９１）Ｓｔｒｕｖｅ，Ｊ．，ｅｔａｌ．，Ｇｌｉａ５２，１６−２４（２００５）Ｂｕｇｉａｎｉ，Ｍ．，ｅｔａｌ．，Ｂｒａｉｎ１３６，２０９−２２２（２０１３）Ｎａｋａｍｕｒａ，Ｔ．，ｅｔａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２０８，４７０−４７５（１９９５）Ｋａｋｉｚａｋｉ，Ｉ．，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９，３３２８１−３３２８９（２００４）Ｙｏｓｈｉｈａｒａ，Ｓ．，ｅｔａｌ．，ＦＥＢＳＬｅｔｔｅｒｓ５７９，２７２２−２７２６（２００５）Ｌｏｋｅｓｈｗａｒ，Ｖ．Ｂ．，ｅｔａｌ．，ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．７０，２６１３−２６２３（２０１０）Ｎａｇｙ，Ｎ．，ｅｔａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ１２２，２３１３−２３２２（２０１０）

（要旨）
一局面において、本開示は、（ｉ）ヒアルロナン合成を阻害する化合物、および（ｉｉ）薬学的に受容可能なキャリアを含む、自己免疫疾患、アレルギー疾患、もしくはアトピー性疾患を処置するための組成物を提供する。

一実施形態において、上記化合物は、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼインヒビターである。一実施形態において、上記化合物は、ＵＤＰ−グルクロニルトランスフェラーゼインヒビターである。

一実施形態において、上記化合物は、４−メチルウンベリフェロンである。一実施形態において、上記化合物は、４−メチルウンベリフェロンの代謝産物である。一実施形態において、上記化合物は、４−メチルウンベリフェロングルクロニドもしくは硫酸化４−メチルウンベリフェロンである。

一実施形態において、上記化合物は、調節性Ｔ細胞応答を誘発するために有効である。一実施形態において、上記化合物は、ＦｏｘＰ３＋調節性Ｔ細胞を増大させるために有効である。

一実施形態において、上記自己免疫疾患、アレルギー疾患、もしくはアトピー性疾患は、自己免疫性糖尿病、多発性硬化症、シェーグレン病、自己免疫性甲状腺炎、狼瘡、関節リウマチ、乾癬、大腸炎、および喘息からなる群より選択される。

一局面において、本開示は、必要性のある哺乳動物被験体において自己免疫疾患、アレルギー疾患、もしくはアトピー性疾患を処置するための方法を提供する。上記方法は、上記被験体に、上記哺乳動物被験体においてヒアルロナン合成を阻害するために有効な量の化合物を含む組成物を投与する工程を包含する。

一実施形態において、上記哺乳動物被験体は、ヒト被験体である。一実施形態において、上記ヒト被験体は、自己免疫性糖尿病、多発性硬化症、シェーグレン病、自己免疫性甲状腺炎、狼瘡、関節リウマチ、乾癬、大腸炎、および喘息からなる群より選択される、自己免疫疾患、アレルギー疾患、もしくはアトピー性疾患に罹患しているかまたは発症させるリスクがある。

一局面において、本開示は、自己免疫性糖尿病に罹患しているかもしくは発症させるリスクがある哺乳動物被験体において膵島炎を処置し、かつ／または自己免疫性糖尿病の進行を逆転させるための方法を提供する。上記方法は、上記哺乳動物被験体に、上記哺乳動物被験体においてヒアルロナン合成を阻害するために有効な量の化合物を含む組成物を投与する工程を包含する。

一実施形態において、上記化合物は、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼインヒビターもしくはＵＤＰ−グルクロニルトランスフェラーゼインヒビターである。一実施形態において、上記化合物は、４−メチルウンベリフェロンもしくは４−メチルウンベリフェロンの代謝産物である。一実施形態において、上記哺乳動物被験体は、ヒト被験体である。

一局面において、本開示は、必要性のある哺乳動物被験体において多発性硬化症を処置するための方法を提供する。上記方法は、上記被験体に、上記哺乳動物被験体においてヒアルロナン合成を阻害するために有効な量の化合物を含む組成物を投与する工程を包含する。

一実施形態において、上記化合物は、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼインヒビターもしくはＵＤＰ−グルクロニルトランスフェラーゼインヒビターである。一実施形態において、上記化合物は、４−メチルウンベリフェロンもしくは４−メチルウンベリフェロンの代謝産物である。

一実施形態において、上記哺乳動物被験体は、ヒト被験体である。一実施形態において、上記化合物は、調節性Ｔ細胞応答を誘発するために有効である。一実施形態において、上記化合物は、ＦｏｘＰ３＋調節性Ｔ細胞を増大させるために有効である。

一局面において、本開示は、多発性硬化症に罹患しているかもしくは発症させるリスクがある哺乳動物被験体において、多発性硬化症および／または自己免疫性脱髄を処置するための方法を提供する。上記方法は、上記哺乳動物被験体に、上記哺乳動物被験体においてヒアルロナン合成を阻害するために有効な量の化合物を含む組成物を投与する工程を包含する。

一実施形態において、上記哺乳動物被験体は、ヒト被験体である。一実施形態において、上記化合物は、調節性Ｔ細胞応答を誘発するために有効である。一実施形態において、上記化合物は、ＦｏｘＰ３＋調節性Ｔ細胞を増大させるために有効である。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
自己免疫疾患、アレルギー疾患、もしくはアトピー性疾患を処置するための組成物であって、（ｉ）ヒアルロナン合成を阻害する化合物、および（ｉｉ）薬学的に受容可能なキャリアを含む、組成物。
（項目２）
前記化合物が、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼインヒビターである、項目１に記載の組成物。
（項目３）
前記化合物が、ＵＤＰ−グルクロニルトランスフェラーゼインヒビターである、項目２に記載の組成物。
（項目４）
前記化合物が、４−メチルウンベリフェロンである、項目３に記載の組成物。
（項目５）
前記化合物が、４−メチルウンベリフェロンの代謝産物である、項目４に記載の組成物。（項目６）
前記化合物が、４−メチルウンベリフェロン−グルクロニドもしくは硫酸化４−メチルウンベリフェロンである、項目５に記載の組成物。
（項目７）
前記化合物が、調節性Ｔ細胞応答を誘発するために有効である、項目１に記載の組成物。（項目８）
前記化合物が、ＦｏｘＰ３＋調節性Ｔ細胞を増大させるために有効である、項目７に記載の組成物。
（項目９）
前記自己免疫疾患、アレルギー疾患、もしくはアトピー性疾患が、自己免疫性糖尿病、多発性硬化症、シェーグレン病、自己免疫性甲状腺炎、狼瘡、関節リウマチ、乾癬、大腸炎、および喘息からなる群より選択される、項目１に記載の組成物。
（項目１０）
自己免疫疾患、アレルギー疾患、もしくはアトピー性疾患を処置する必要性のある哺乳動物被験体において自己免疫疾患、アレルギー疾患、もしくはアトピー性疾患を処置するための方法であって、該方法は、該被験体に、該哺乳動物被験体においてヒアルロナン合成を阻害するために有効な量の化合物を含む組成物を投与する工程を包含する、方法。
（項目１１）
前記化合物が、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼインヒビターである、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
前記化合物が、ＵＤＰ−グルクロニルトランスフェラーゼインヒビターである、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記化合物が、４−メチルウンベリフェロンである、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
前記化合物が、４−メチルウンベリフェロンの代謝産物である、項目１３に記載の方法。（項目１５）
前記化合物が、４−メチルウンベリフェロン−グルクロニドもしくは硫酸化４−メチルウンベリフェロンである、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記化合物が、調節性Ｔ細胞応答を誘発するために有効である、項目１０に記載の方法。（項目１７）
前記化合物が、ＦｏｘＰ３＋調節性Ｔ細胞を増大させるために有効である、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
前記哺乳動物被験体が、ヒト被験体である、項目１０に記載の方法。
（項目１９）
前記ヒト被験体が、自己免疫性糖尿病、多発性硬化症、シェーグレン病、自己免疫性甲状腺炎、狼瘡、関節リウマチ、乾癬、大腸炎、および喘息からなる群より選択される自己免疫疾患、アレルギー疾患、もしくはアトピー性疾患に罹患しているかまたはこれらを発症するリスクがある、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
自己免疫性糖尿病に罹患しているかもしくは発症するリスクがある哺乳動物被験体において、膵島炎を処置する、かつ／または自己免疫性糖尿病の進行を逆転するための方法であって、該方法は、
該哺乳動物被験体に、該哺乳動物被験体においてヒアルロナン合成を阻害するために有効な量の化合物を含む組成物を投与する工程、
を包含する、方法。
（項目２１）
前記化合物が、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼインヒビターもしくはＵＤＰ−グルクロニルトランスフェラーゼインヒビターである、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
前記化合物が、４−メチルウンベリフェロンもしくは４−メチルウンベリフェロンの代謝産物である、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
前記哺乳動物被験体が、ヒト被験体である、項目２０に記載の方法。
（項目２４）
多発性硬化症を処置する必要性のある哺乳動物被験体において多発性硬化症を処置するための方法であって、該方法は、該被験体に、該哺乳動物被験体においてヒアルロナン合成を阻害するために有効な量の化合物を含む組成物を投与する工程を包含する、方法。
（項目２５）
前記化合物が、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼインヒビターもしくはＵＤＰ−グルクロニルトランスフェラーゼインヒビターである、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
前記化合物が、４−メチルウンベリフェロンもしくは４−メチルウンベリフェロンの代謝産物である、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
前記哺乳動物被験体が、ヒト被験体である、項目２４に記載の方法。
（項目２８）
前記化合物が、調節性Ｔ細胞応答を誘発するために有効である、項目２４に記載の方法。（項目２９）
前記化合物が、ＦｏｘＰ３＋調節性Ｔ細胞を増大させるために有効である、項目２８に記載の方法。
（項目３０）
多発性硬化症に罹患しているかもしくは発症するリスクがある哺乳動物被験体において、多発性硬化症および／または自己免疫性脱髄を処置するための方法であって、該方法は、
該哺乳動物被験体に、該哺乳動物被験体においてヒアルロナン合成を阻害するために有効な量の化合物を含む組成物を投与する工程、
を包含する、方法。
（項目３１）
前記化合物が、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼインヒビターもしくはＵＤＰ−グルクロニルトランスフェラーゼインヒビターである、項目３０に記載の方法。
（項目３２）
前記化合物が、４−メチルウンベリフェロンもしくは４−メチルウンベリフェロンの代謝産物である、項目３１に記載の方法。
（項目３３）
前記哺乳動物被験体が、ヒト被験体である、項目３０に記載の方法。
（項目３４）
前記化合物が、調節性Ｔ細胞応答を誘発するために有効である、項目３０に記載の方法。（項目３５）
前記化合物が、ＦｏｘＰ３＋調節性Ｔ細胞を増大させるために有効である、項目３４に記載の方法。

前述の局面および本発明に付随する利点のうちの多くは、添付の図面とともに考慮すれば、以下の詳細な説明を参照することによってよりよく理解されるようになるので、より容易に理解される。

図１Ａは、ＨＡ合成の機構を図示する。

図１Ｂは、４−ＭＵ干渉の機構を図示し、ＵＤＰの代わりにグルクロン酸へ結合する４−ＭＵを示す。

図２Ａは、自己免疫性糖尿病なしのヒトドナーに由来する膵島の代表的ＨＡ染色を示す。

図２Ｂは、自己免疫性糖尿病を有するヒトドナーに由来する膵島の代表的ＨＡ染色を示す。

図２Ｃは、自己免疫性糖尿病なしのヒトドナーに由来する膵島内ＨＡ蓄積の代表的なより高倍率の拡大を示す。

図２Ｄは、自己免疫性糖尿病を有するヒトドナーに由来する膵島内ＨＡ蓄積の代表的なより高倍率の拡大を示す。

図３は、自己免疫性糖尿病進行の間の３つの異なる時点での、対照およびＤＯＲｍＯマウスに由来する膵島におけるインスリンおよびＨＡ染色を示す。最も左の列は、１０週齢、１６週齢および３６週齢での対照マウスに由来する膵島の代表的インスリン染色を示す。左から２番目の列は、これら同じ年齢でのＤＯＲｍＯマウスに由来する膵島の代表的インスリン染色を示す。左から３番目の列は、対照マウスに由来する膵島の代表的ＨＡ染色を示す。最も右の列は、同様に１０週齢、１６週齢および３６週齢でのＤＯＲｍＯマウスに由来する膵島の代表的ＨＡ染色を示す。

図４は、自己免疫性糖尿病の進行の間の、対照およびＤＯＲｍＯマウスの血中グルコースレベルを示す。白抜きの棒は、対照マウスを示し、黒塗りの棒は、ＤＯＲｍＯマウスを示す。「糖尿病」と表示された水平の実線は、この研究においてマウスを高血糖とみなす血中グルコースの量を示す。上記マウスの血中グルコースを、２週齢〜２０週齢の間でモニターした。

図５は、５週齢で４−ＭＵ処置を開始したかもしくは開始しなかった場合の、対照マウスおよびＤＯＲｍＯマウスの血中グルコースデータを示す。「糖尿病」と表示された水平の実線は、マウスを高血糖であるとみなす血中グルコースの量を示す。

図６は、４−ＭＵ処置を８週齢で開始したかもしくは開始しなかった場合の、対照マウスおよびＤＯＲｍＯマウスの血中グルコースデータを示す。「糖尿病」と表示された水平の実線は、マウスを高血糖であるとみなす血中グルコースの量を示す。

図７は、４−ＭＵ処置を１２週齢で開始した場合の、対照マウスおよびＤＯＲｍＯマウスの血中グルコースデータを示す。「糖尿病」と表示された水平の実線は、マウスが高血糖であるとみなす血中グルコースの量を示す。

図８は、４−ＭＵ処置ありもしくはなしでの、対照マウスおよびＤＯＲｍＯマウスの膵島におけるＨＡの免疫染色を示す。上段の写真は、通常飼料で処置した（左列）か、もしくは４−ＭＵで処置した（右列）対照動物の膵島におけるＨＡ染色の代表的画像を示す。下段は、ＨＡに関して染色したＤＯＲｍＯの膵島の代表的画像を示し、ここでは動物を、対照飼料で処置した（左列）か、もしくは４−ＭＵで処置した（右列）。

図９は、異なる処置群の間での膵島のＨＡ染色の評価を示す。＊＜０．０５を有意とみなした。

図１０は、４−ＭＵありおよびなしでの対照およびＤＯＲｍＯマウスの膵島におけるインスリンの免疫染色を示す。上段の写真は、通常飼料で処置した（左列）かもしくは４−ＭＵで処置した（右列）対照動物の膵島におけるインスリン染色の代表的画像を示す。下段は、インスリンに関して染色したＤＯＲｍＯ膵島の代表的画像を示し、ここでは動物を、通常飼料で処置した（左列）か、もしくは４−ＭＵで処置した（右列）。

図１１Ａは、一連の時間を決めた採血についての血漿４−ＭＵ−グルクロニド（４−ＭＵＧ）の濃度を示すグラフ表示である。

図１１Ｂは、一連の時間を決めた採血についての血漿硫酸化４−ＭＵ（４−ＭＵＳ）の濃度を示すグラフ表示である。

図１１Ｃは、一連の時間を決めた採血についての血漿４−ＭＵの濃度を示すグラフ表示である。

図１２Ａは、疾患誘発前に４−ＭＵで処置した（事前処置プロトコル）被験体における誘発後日数の関数として、平均ＥＡＥスコアを示すグラフ表示である。

図１２Ｂは、疾患誘発後であるが症状開始前に４−ＭＵで処置した（処置プロトコル）被験体における誘発後日数の関数として、平均ＥＡＥスコアを示す代表表示である。

図１２Ｃは、疾患開始後に４−ＭＵで処置した（介入プロトコル）被験体における誘発後日数の関数として、平均ＥＡＥスコアを示す代表表示である。

図１３Ａは、健康な対照、対照、事前処置プロトコル、処置プロトコル、および介入プロトコルの被験体における、ＣＤ８＋リンパ球およびＣＤ４＋リンパ球、ならびにマクロファージの数を示す浸潤細胞タイプの代表表示である。

図１３Ｂは、健康な対照、対照、事前処置プロトコル、処置プロトコル、および介入プロトコルの被験体における、ＣＤ４＋集団内のＩＬ４＋、ＩＦＮ−γ＋およびＩＬ１７＋細胞の数を示す代表表示である。

図１３Ｃは、健康な対照、対照、事前処置プロトコル、処置プロトコル、および介入プロトコルの被験体の脾臓およびリンパ節における、ＣＤ４＋Ｔ細胞のうちのＣＤ２５＋のパーセンテージを示す代表表示である。

図１３Ｄは、対照および４−ＭＵ処置被験体の脾臓、鼠径部リンパ節（ＩＬＮ）、腸間膜リンパ節（ＭＬＮ）、および膵リンパ節（ＰＬＮ）におけるＦｏｘＰ３＋ＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージのグラフ表示である。

図１４Ａは、プレートに結合した高分子量ＨＡ（ＨＭＷ−ＨＡ）もしくはａＣＤ４４抗体ありまたはなしで、ＴＧＦβおよびＩＬ−２の存在下で７２時間にわたって活性化したＣＤ４＋ＧＦＰ／ＦｏｘＰ３− Ｔ細胞によるＣＤ２５およびＦｏｘＰ３発現のグラフ表示である。

図１４Ｂは、３匹のＲＡＧ^−／−レシピエント被験体に関してＣＤ４４^−／−（ＣＤ４５．１）対ＣＤ４４＋／＋（ＣＤ４５．２）Ｔ細胞の比を示す代表的プロットである。

図１４Ｃは、３匹のＲＡＧ^−／−レシピエント被験体に関して、総ＣＤ３＋ＧＦＰ／ＦｏｘＰ３＋Ｔ細胞のパーセントを示すグラフ表示である。

（詳細な説明）
本開示は、自己免疫疾患および障害における細胞外マトリクス分子ＨＡの重要な役割の同定ならびにＨＡ合成を阻害する化合物、特に、４−ＭＵの同定を記載する。本開示は、自己免疫を終わらせる新規治療剤としての４−ＭＵの使用および自己免疫疾患もしくは障害、例えば、自己免疫性糖尿病もしくは多発性硬化症を処置するための４−ＭＵの使用を記載する。

本明細書で具体的に定義されなければ、本明細書で使用される全ての用語は、本開示の分野の当業者にとってのもの同じ意味を有する。以下の定義は、、特許請求された主題を記載するために本明細書および特許請求の範囲で使用される場合の用語に関して明瞭さを提供するために提供される。

本明細書で使用される場合、用語「調節性Ｔ細胞」もしくは「Ｔｒｅｇ」細胞とは、細胞表面マーカーＣＤ４＋およびＣＤ２５＋を発現し、ウェスタンブロットおよび／もしくはＦｏｘＰ３ｍＲＮＡ転写物によって測定されるときにＦｏｘＰ３タンパク質を発現するＴ細胞をいう。

本明細書で使用される場合、用語「抗原特異的調節性Ｔ細胞」もしくは「抗原特異的Ｔｒｅｇ」とは、抗原の存在下で誘発されて、細胞表面マーカーＣＤ４＋およびＣＤ２５＋を発現し、ウェスタンブロットおよび／もしくはＦｏｘＰ３ｍＲＮＡ転写物によって測定されるときにＦｏｘＰ３タンパク質を発現するＴｒｅｇ細胞をいう。

本明細書で使用される場合、ペプチドもしくはポリペプチド配列の文脈において用語「〜由来の、〜に由来する」もしくは「その誘導体）」とは、上記ペプチドもしくはポリペプチドがその特定の記載される配列に限定されず、その配列におけるバリエーション（これは、挙げられた配列中のバリエーションが、免疫応答を調節する能力を保持する程度までアミノ酸付加、欠失、置換、もしくは改変を含み得る）をも含むことを意味する。

本明細書で使用される場合、用語「ペプチド」もしくは「ポリペプチド」とは、アミノ酸の連結された配列であり、天然、組換え、合成、または天然、合成、および組換えの改変もしくは組み合わせであり得る。

本明細書で使用される場合、表現「有効（な）量」もしくは「治療上有効な量」とは、所望の治療結果（例えば、自己免疫疾患もしくは炎症状態の防止、改善、もしくは予防）を達成するために有効である本開示の化合物の量を指す。本開示の化合物は、治療上有効な量の上記化合物と一緒に薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物として投与され得る。本開示の文脈において、「治療上有効な量」は、所望の効果（この具体的な場合においては、自己免疫疾患もしくは障害、特に、多発性硬化症を処置すること）を達成するために必要な同定されたＨＡポリマーの合成、発現、および／または活性を阻害する化合物の量として理解される。一般に、投与される本開示に従う化合物の治療上有効な量は、他の要因の中でも、処置される個体、上記個体が罹患している疾患の重症度、選択される投与形態などに依存する。これが理由で、本開示で言及される用量は、当業者にとっての指標とみなされるだけでなければならず、当業者は、既に言及された変数に従って上記用量を調節しなければならない。それでもなお、本開示に従う化合物は、１日に１回もしくはそれより多く、例えば、１日に１回、２回、３回もしくは４回、０．１μｇ〜１０，０００ｍｇ／日、代表的には、１００〜１，５００ｍｇ／日の間に含まれる代表的な総１日量において投与され得る。

上記被験体は、ヒトもしくは非ヒト動物、脊椎動物であり得、代表的には、ウシ、ブタ、ウマ、ニワトリ、ネコ、イヌなどが挙げられるが、これらに限定されない動物である。より代表的には、上記被験体は、哺乳動物であり、特定の実施形態では、ヒトである。

本明細書で使用される場合、「自己免疫疾患」は、個体自体の組織から生じ、これらに対して指向される疾患もしくは障害である。自己免疫疾患もしくは障害の例としては、多発性硬化症、関節炎（関節リウマチ、若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎）、Ｔ細胞の浸潤および慢性炎症応答が関わる状態、自己免疫性心筋炎、天疱瘡、１型糖尿病（自己免疫性糖尿病もしくはインスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）ともいわれる）、自己免疫性肺疾患などが挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書で使用される場合、用語「自己免疫性糖尿病に罹患している哺乳動物被験体」とは、心臓、眼、腎臓、神経、ならびに歯肉および歯に重篤な問題をもたらし得る高い血中グルコースレベルを生じる自己免疫疾患に罹患している被験体をいう。自己免疫性糖尿病の症状としては、例えば、口渇が甚だしいこと、頻尿、強い空腹感もしくは疲労感、意図せずに体重が減少すること、ゆっくりと回復する痛みを有すること、乾燥していること、皮膚の痒み、足の感覚がなくなるもしくは足にヒリヒリ感があること、および／または視界がぼんやりしていること、が挙げられる。

本明細書で使用される場合、用語「多発性硬化症に罹患している哺乳動物被験体」とは、脳および脊髄の神経細胞の絶縁カバーに対する損傷もしくは脱髄を生じる自己免疫疾患に罹患している被験体をいう。ＭＳの症状としては、とりわけ、１もしくはそれより多くの四肢における麻痺もしくは虚弱、中心視界の部分的もしくは完全な喪失（通常は、一方の眼に起こり、しばしば、眼球運動の間の疼痛を伴う（視神経炎））、二重視界もしくは視界のかすみ、身体の一部のヒリヒリ感もしくは疼痛、特定の頭部の動きで発生する電気ショックのような感じ、振戦、協調の欠如もしくは不安定な歩行、呂律が回らない、疲労、目眩、および／または熱感覚過敏が挙げられる。

本明細書で使用される場合、用語「処置する、処理する」もしくは「処置、処理」とは、ＭＳと関連した少なくとも１つの症状を有効に防止、抑制、もしくは除去するために、本開示に従う化合物を投与することを意味する。ＭＳと関連した少なくとも１つの症状を防止することは、臨床上の疾患と関連した症状の開始前に、被験体に処置を施すことを包含する。ＭＳと関連した少なくとも１つの症状を抑制することは、上記疾患の臨床上の出現後に、被験体に処置を施すことを包含する。

上記のように、ＨＡは、グルクロン酸およびＮ−アセチルグルコサミンから構成され、交互に出現するβ−１，４グリコシド結合およびβ−１，３グリコシド結合によって連結されたジサッカリドのポリマーである。４−ＭＵは、ＵＧＴ（ＨＡおよび胆汁の合成に関与する酵素）の競合的基質として機能する（Ｋａｋｉｚａｋｉ，Ｉ．，ｅｔａｌ．，
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９，３３２８１−３３２８９（２００４））。４−ＭＵは、胆石を防止するために、欧州およびアジア中で使用されている。４−ＭＵは小児および成人の両方において３０年超にわたって使用されてきており、優れた安全性プロファイルを有する。これは本来は黄疸に罹患している人々において使用するために市販される食事補助品として、米国では処方箋なしで入手可能である。

図１Ａおよび図１Ｂは、それぞれ、ＨＡ合成および４−ＭＵ干渉の機構を示す。具体的には、図１Ａは、ＨＡが合成される通常の過程を示す。化合物４−ＭＵは、グルクロン酸に結合することが公知であり、図１Ｂは、４−ＭＵがどのようにしてＵＤＰの代わりにグルクロン酸に結合するかを示す。重要なＨＡ前駆体への４−ＭＵの結合が原因で、ＨＡを生成する酵素であるＨＡ−シンターゼ（ＨＡＳ）は、ＨＡを合成できない。

以下で記載されるように、４−ＭＵが自己免疫性の炎症を逆転させるという驚くべき特性を有することが予測外にも発見された。この知見は、自己免疫性糖尿病およびＭＳのマウスモデルにおいて行われた。４−ＭＵはまた、ＨＡ合成のインヒビターであり、そのデータによれば、この特性は、胆汁代謝に対するその効果よりむしろ、４−ＭＵの抗炎症特性を担うことが示唆される。この作用機構は、炎症メディエーターとしてのＨＡの中心的な役割と一致する。

本明細書で記載されるデータは、４−ＭＵがＨＡ合成を標的とする新規で第１級の抗炎症薬として適用可能性を有することを示す。さらに、これらデータは、自己免疫疾患、アレルギー疾患、およびアトピー性疾患を停止させるための４−ＭＵの使用を裏付ける。４−ＭＵは、既知の毒性を有さないので、自己免疫性糖尿病、多発性硬化症、シェーグレン病、自己免疫性甲状腺炎、狼瘡、関節リウマチ、乾癬、大腸炎、喘息、アレルギーなどが挙げられるが、これらに限定されない自己免疫疾患を処置および防止するにあたって大きな可能性を有する。

近年の報告（Ｂｏｌｌｙｋｙ，Ｐ．Ｌ．，ｅｔａｌ．（２０１２），前出；Ｈｕｌｌ，Ｒ．Ｌ．，ｅｔａｌ．，前出）は、膵島炎の媒介および自己免疫性糖尿病への進行におけるＨＡの重要な役割を同定している。それら研究において、大きなＨＡの沈着が、自己免疫性糖尿病を有するマウスを特徴付けるが、ストレプトゾシン（β細胞（Ｂｏｌｌｙｋｙｅｔａｌ．（２０１２），前出）にもしくは健康な非糖尿病マウス（Ｈｕｌｌｅｔａｌ．，前出）に対して毒性である治療）で処置したマウスではそうではないことが示された。以降、ヒト糖尿病は、同様に膵島炎を有する膵島におけるＨＡ沈着と関連しているが、このような沈着は非糖尿病では認められないことが見出された。図２Ａ、図２Ｂ、図２Ｃ、および図２Ｄは、自己免疫性糖尿病ヒト死体ドナーからの膵島におけるＨＡ染色に関する。図２Ａは、自己免疫性糖尿病がないヒトドナーの膵島の代表的ＨＡ染色を示す。図２Ｂは、自己免疫性糖尿病を有するヒトドナーからの膵島の代表的ＨＡ染色を示す。図２Ｃは、自己免疫性糖尿病がないヒトドナーからの膵島内ＨＡ蓄積の代表的なより高倍率拡大を示す。図２Ｄは、自己免疫性糖尿病を有するヒトドナーからの膵島内ＨＡ蓄積の代表的なより高倍率拡大を示す。

自己免疫性糖尿病におけるＨＡの役割を同定するために、膵島におけるＨＡの量および分布を同定した。さらに、Ｔ１Ｄマウスモデルにおける自己免疫性膵島破壊に付随するＨＡの変化を特徴付けた。本発明者らは、ＨＡが膵島に蓄積し、自己免疫性糖尿病疾患が進行する間に自己免疫性の攻撃を許容する環境を作り出すと決定した。

ＨＡが膵島に蓄積し、自己免疫性糖尿病疾患が進行する間に自己免疫性の攻撃を許容する環境を作り出すと決定するために、自己免疫性糖尿病のＤＯＲｍＯ二重トランスジェニックマウスモデルを使用した。ＤＯＲｍＯマウスは、彼らのインスリン生産性β細胞上に標的抗原を有し、その抗原を特異的に認識する免疫系をも有するように交配されているので、予想可能に自己免疫性糖尿病を発症する。ＤＯＲｍＯマウスは、ＲＩＰｍＯＶＡマウス（自己抗原を模倣した、β細胞上でのみ発現される鶏卵オボアルブミン（ＯＶＡ）に対して特異的な遺伝子を有する系統）とＤＯ１１．１０マウス（自己反応性ＣＤ４＋Ｔ細胞を模倣した、ＯＶＡに対して特異的なＴ細胞レセプター導入遺伝子を有する系統）との交配の結果である。ＤＯＲｍＯマウスは、４週齢で始まる自己免疫性膵島炎を自発的に発症し、２０週齢までに全ての動物が糖尿病になる（高血糖＞２００ｍｇ／ｄｌ）（Ｗｅｓｌｅｙ，Ｊ．Ｄ．，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８５，４７６０−４７６８（２０１０）（例えば、以下の図４を参照のこと）。ＤＯＲｍＯマウスは、ヒトにおいて見出される炎症性β細胞破壊と非常に似た自発的自己免疫を有する。

ヒト解剖ドナーからの知見が、ＤＯＲｍＯマウスにおいて再現された。このモデルにおける膵島炎は、予測されたインスリンの低下とＨＡの劇的な増大とが付随することが見出された。上記膵島内部でのＨＡ分布は、主に侵襲している細胞および微小血管系の周りであった。図３は、自己免疫性糖尿病の進行の間の３つの異なる時点における、対照およびＤＯＲｍＯマウスの膵島におけるインスリン染色およびＨＡ染色を示す。最も左の列は、１０週齢、１６週齢および３６週齢での対照マウスからの膵島の代表的インスリン染色を示す。左から２番目の列は、これら同じ年齢でのＤＯＲｍＯマウスからの膵島の代表的インスリン染色を示す。左から３番目の列は、対照マウスからの膵島の代表的ＨＡ染色を示す。最も右の列は、同様に１０週齢、１６週齢および３６週齢におけるＤＯＲｍＯマウスからの膵島の代表的ＨＡ染色を示す。

図４は、自己免疫性糖尿病の進行の間の対照およびＤＯＲｍＯマウスの血中グルコースレベルを示す。白抜きの棒は対照マウスを示し、黒塗りの棒はＤＯＲｍＯマウスを示す。「糖尿病」と表示された水平の実線は、この研究においてマウスを高血糖とみなす血中グルコースの量を示す。上記マウスの血中グルコースを、２週齢〜２０週齢の間モニターした。

まとめると、これらデータは、ＨＡの変化は、Ｔ細胞による膵島組織の侵襲および破壊を伴い、自己免疫性の攻撃を許容する環境を作り出すことを示す。これらデータは、ＨＡ指向性の治療が、自己免疫性糖尿病を処置および防止するために使用され得ることを示す。

第１のＤＯＲｍＯ処置群を、上記マウスが正常な血中グルコースレベルを有するとき、５週齢において４−ＭＵを用いて開始した。４つの異なる処置群を確立した（通常飼料に基づく対照マウス、４−ＭＵに基づく対照マウス、通常飼料に基づくＤＯＲｍＯマウス、および４−ＭＵに基づくＤＯＲｍＯマウス）。対照マウスの群を、４−ＭＵがそれらマウスの血中グルコースレベルを変化させるか否かを調べるために、同様に４−ＭＵで処置した。
図５は、４−ＭＵ処置を５週齢で開始した場合およびしなかった場合の対照およびＤＯＲｍＯマウスの血中グルコースデータを示す。「糖尿病」と表示された水平の実線は、マウスを高血糖であるとみなす血中グルコースの量を示す。図５を参照すると、上記ＤＯＲｍＯ− ４−ＭＵの線は、「糖尿病」と表示された水平線を下回って見える。よって、上記４−ＭＵに基づくＤＯＲｍＯマウスは、糖尿病にならないことが示された。なぜならそれらの血中グルコースレベルは、対照レベル上にあるからである。さらに、４−ＭＵが対照動物の血中グルコースレベルを変化させないことが認められた。

この驚くべき知見に倣って、別の４−ＭＵ処置群をＤＯＲｍＯマウスが上記５週齢処置群開始に類似の結果とともに糖尿病になる年齢に近い８週齢で開始した。図６は４−ＭＵ処置を８週齢で開始した場合および開始しなかった場合のいずれかの対照およびＤＯＲｍＯマウスの血中グルコースデータを示す。「糖尿病」と表示された水平の実線は、マウスを高血糖であるとみなす血中グルコースの量を示す。上記４−ＭＵ処置に基づくＤＯＲｍＯマウスは２３週齢に達してなお、正常な血中グルコースレベルを有した。上記対照飼料に基づくＤＯＲｍＯマウスは、動物プロトコルに従って糖尿病になった後に屠殺しなければならなかった。

別の処置群を確立し、ここでは、上記ＤＯＲｍＯマウスが既に糖尿病であった１２週齢で４−ＭＵ処置を開始した。図７は、４−ＭＵ処置を１２週齢で開始した場合の対照およびＤＯＲｍＯマウスの血中グルコースデータを示す。「糖尿病」と表示された水平の実線は、マウスを高血糖であるとみなす血中グルコースの量を示す。上記４−ＭＵ処置したＤＯＲｍＯマウスの血中グルコースレベルの低下は、処置のわずか１週間後に認められた。このことは、確立された自己免疫性糖尿病すら４−ＭＵによって改善され得ることを示す。

膵島におけるＨＡ蓄積を、８週齢開始処置群の数匹のマウスにおいて４−ＭＵ処置の後に免疫染色することによって調査した。図８は、４−ＭＵ処置ありおよびなしの対照およびＤＯＲｍＯマウスの膵島におけるＨＡの免疫染色を示す。上段の写真は、通常飼料で処置した（左列）かもしくは４−ＭＵで処置した（右列）、対照動物の膵島におけるＨＡ染色の代表画像を示す。下段は、動物を対照飼料で処置した（左列）かもしくは４−ＭＵで処置した（右列）場合、ＨＡに関して染色したＤＯＲｍＯ膵島の代表画像を示す。対照飼料で処置したＤＯＲｍＯマウスとは対照的に、ＨＡ蓄積における有意な低下が４−ＭＵで処置したＤＯＲｍＯマウスにおいて見出された。図９は、異なる処置群の間での膵島におけるＨＡ染色の評価を示す。＊＜０．０５を有意とみなした。

ＨＡに関して染色した動物をまた、インスリンに関して染色した。図１０は、４−ＭＵありおよびなしの対照およびＤＯＲｍＯマウスの膵島におけるインスリンに関する免疫染色を示す。上段の写真は、通常飼料で処置した（左列）かもしくは４−ＭＵで処置した（右列）対照動物の膵島におけるインスリン染色の代表画像を示す。下段は、インスリンに関して染色したＤＯＲｍＯ膵島の代表画像を示し、ここでは動物を、対照飼料で処置した（左列）かもしくは４−ＭＵで処置した（右列）。４−ＭＵで処置したＤＯＲｍＯマウスは、血中グルコースを対照レベルで維持するために十分である、膵島において有意なインスリン量を依然として有した。さらに、４−ＭＵを飼料に添加した場合、４−ＭＵがＤＯＲｍＯマウスにおいて正常血糖を回復させることが示された。

従って、４−ＭＵは、自己免疫疾患および障害を、この具体例では、例えば、自己免疫性糖尿病を逆転させるという驚くべき特性を有することが発見された。

細胞外マトリクスポリサッカリドＨＡは、多発性硬化症において、同様に上記疾患のマウスモデルであるＥＡＥにおいても、脱髄病変で豊富であることが公知の重要な炎症メディエーターである。本明細書で記載されるように、ＨＡ合成の阻害は、ＥＡＥを防止し得る。そのデータは、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼインヒビター（例えば、ＵＤＰ−グルクロニルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）インヒビター、例えば、４−ＭＵもしくは４−ＭＵの代謝産物）での処置が、ＥＡＥの誘発をブロックするのみならず、既に確立されたＥＡＥにおける臨床上の障害をも実質的に低減する能力を有することを示す。予備研究では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼインヒビター（例えば、ＵＧＴインヒビター、例えば、４−ＭＵもしくは４−ＭＵの代謝産物）での処置が、免疫応答を、自己免疫を防止することが公知の重要な細胞集団であるＦｏｘＰ３＋調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の数の増大によって特徴付けられる抗炎症プロファイルに向かって方向を変えていくことが示唆されている。

ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＤＰ−糖の糖部分を広い範囲の代謝産物（例えば、ホルモンおよび二次代謝産物）へと転移させるのを触媒する酵素である。一般に、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、代謝産物の溶解度、安定性、貯蔵性、生体活性もしくは生物学的利用性を増大させるために、生合成経路の最終工程で作用する。ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼの１タイプは、ＵＧＴ（グルクロン酸抱合反応において、ＵＤＰ−グルクロン酸のグルクロン酸成分を低分子疎水性分子に転移させるのを触媒する酵素）である。

競合的阻害は、酵素上の活性部位へのインヒビターの結合が基質の結合を妨げる（逆もまた同様）酵素阻害の形態である。ある種のＵＧＴアイソフォームに対して特異的な基質は、薬物のグルクロン酸抱合を担うＵＧＴアイソフォームを同定するために、特異的インヒビターとして使用され得る。公知のＵＧＴインヒビターとしては、例えば、とりわけ、アタザナビル、ゲムフィブロジル、インジナビル、ケトコナゾール、ケトコナゾール、およびバルプロ酸が挙げられる。

４−ＭＵの代謝産物は、免疫応答を、ＦｏｘＰ３＋調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の数の増大によって特徴付けられる抗炎症プロファイルに向かって方向を変えていくために有効であり得る。４−ＭＵの代謝産物は、例えば、Ｋａｋｉｚａｋｉ，Ｉ．，ｅｔａｌ．，
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９，３３２８１−３３２８９（２００４）、およびＧａｒｒｅｔｔ，Ｅ．Ｒ．，ｅｔａｌ．，Ｂｉｏｐｈａｒｍ．Ｄｒｕｇ
Ｄｉｓｐｏｓ．１４，１３−３９（１９９４）（これらはともに、本明細書に参考として援用される）に記載される。

４−ＭＵの例示的代謝産物としては、４−ＭＵＧおよび４−ＭＵＳが挙げられる。食餌摂取から生じる４−ＭＵから、２４時間の期間にわたって血中の４−ＭＵの血清レベルを決定するために、Ｂａｌｂ／Ｃ雌性マウス（１２週齢をＴａｃｏｎｉｃＦａｒｍｓから購入）を、５％４−ＭＵ含有飼料（ｎ＝１８）もしくは非４−ＭＵ含有対照飼料（ｎ＝３）に置いた。マウスを実験開始時および２週間目のエンドポイントにおいて秤量した。２週間目に、ヘパリン処理シリンジで心臓穿刺によって採血し、氷上の収集チューブの中に入れ、遠心沈殿させ、血漿を−８０℃で凍結した。血漿サンプルをその後、４−ＭＵおよび２種の４−ＭＵ抱合体、４−ＭＵＧおよび４−ＭＵＳに関して、ガスクロマトグラフィー−質量分析（ＧＣＭＳ）によって分析した。

図１１Ａ、図１１Ｂ、および図１１Ｃは、１４日間の、５％４−ＭＵを含む固形飼料の後の、マウスにおける４−ＭＵＧ、４−ＭＵＳ、および非抱合体化４−ＭＵの血漿レベルを示す。２４時間の期間にわたって、４時間ごとに採血した（ｎ＝３マウス／時点）。最も優位な血漿産物は、４−ＭＵＧである。これは、対照飼料に基づいたマウスにおいて検出不能であった（データは示さず）。予想通り、４−ＭＵＧレベルは、マウスがより多く食べていることが公知である夜間（飼育器の中で７ＰＭ〜７ＡＭ）により高かった。遙かにより低いレベルであったが、４−ＭＵおよび４−ＭＵＳが存在した。４−ＭＵも４−ＭＵＳも、対照飼料を供給したマウスでは検出できなかった。４−ＭＵの２４時間平均レベル（０．９μｇ／ｍＬ）および硫酸化生成物４−ＭＵＳの２４時間平均レベル（３０．５μｇ／ｍＬ）は、４−ＭＵＧ（５１３μｇ／ｍＬ）に対して、それぞれ約１／６００倍および１／２０倍のレベルで存在した。この結果は、２週間の５％４−ＭＵ含有飼料に基づいたＢａｌｂ／Ｃマウスが、２４時間平均４−ＭＵＧ血漿レベル約５００μｇ／ｍＬと、遙かに低いレベルの４−ＭＵＳ抱合体および非抱合体化４−ＭＵとを示すことを実証し、４−ＭＵＧおよび４−ＭＵＳが４−ＭＵの代謝産物であることを確認する。

ＨＡ沈着がＣＮＳ病変に豊富であり、これが主にＬＭＷ−ＨＡであるという報告に鑑みて、ＨＡがこれら部位で免疫調節異常を駆動し得るという仮説を立てた。この仮説を検定するために、ＭＳのＥＡＥマウスモデルにおいてＨＡ合成の選択的インヒビター、４−ＭＵの効果を評価した。

ＭＳにおけるＨＡの病原性の役割を確認するために、ミエリン希突起神経膠細胞糖タンパク質ペプチドフラグメント３５〜５５（ＭＯＧ_{３５−５５}）で免疫化することによってＣ５７Ｂｌ／６マウスにおいてＥＡＥを誘発させた。上記マウスを、免疫化の４日前（事前処置プロトコル）、２日目の免疫化ブースト直後（処置プロトコル）もしくは動物が神経学的欠陥の兆候を示したとき（介入プロトコル）のいずれかで開始して、事前に確立した安全用量の飼料中の４−ＭＵで処置した。図１２Ａ、図１２Ｂ、および図１２Ｃは、それぞれ、事前処置プロトコル、処置プロトコル、もしくは介入プロトコルに従って、４−ＭＵで処置した被験体における誘導後日数の関数として、平均ＥＡＥスコアをグラフで示す。

図１２Ａおよび図１２Ｂに示されるように、疾患の誘発前の４−ＭＵ（飼料中５％ｗ／ｗ）での処置（事前処置プロトコル、図１２Ａ）もしくは疾患の誘発後であるが、症状の開始前の４−ＭＵ（飼料中５％ｗ／ｗ）での処置（処置プロトコル、図１２Ｂ）は、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスにおけるＭＯＧ_{３５−５５}ペプチド誘発性ＥＡＥの発生率および重症度を劇的に低減した（９／１０の対照処置動物に対して、それぞれ１／７および２／１０）。図１２Ｃに示されるように、神経学的症状の開始後の４−ＭＵでの処置（介入プロトコル）は、処置の開始３日後程度の早さで疾患を有意に改善し、ＥＡＥの重症度を低減した。図１２Ａ、図１２Ｂ、および図１２Ｃに関して、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１（Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ）。

上記データは、ＨＡ合成の阻害が、神経学的病状をもたらし、進行させる免疫活性化機構に干渉することを実証する。さらに、上記データは、４−ＭＵ処置が疾患進行を防止し、ＥＡＥ被験体において確立された疾患を低減することを実証する。

従って、一局面において、（ｉ）ヒアルロナン合成を阻害する化合物、および（ｉｉ）薬学的に受容可能なキャリアを含む、自己免疫疾患、アレルギー疾患、もしくはアトピー性疾患を処置するための組成物が記載される。

用語「薬学的に受容可能なキャリア」とは、本明細書で使用される場合、被験体への投与に適している、１種もしくはそれより多くの適合性の固体もしくは液体の充填剤、希釈剤もしくは被包物質を意味する。上記薬学的組成物の成分はまた、所望の薬学的有効性を実質的に損なう相互作用がない様式で互いに混じり合うことができる。このような調製物は、薬学的に受容可能な濃度の塩、緩衝化剤、保存剤、適合性のキャリア、アジュバントおよび必要に応じて他の治療成分を慣用的に含み得る。

適切な液体もしくは固体の薬学的調製物の形態は、例えば、吸入のための水性溶液もしくは生理食塩溶液であるか、微小カプセル化されているか、エンコクリエートされている（ｅｎｃｏｃｈｌｅａｔｅｄ）か、金微細粒子上に被覆されているか、リポソーム中に含まれているか（ｐＨ依存性放出製剤を含む）、リピドイド（ｌｉｐｉｄｏｉｄ）であるか、噴霧されるか、エアロゾルであるか、皮膚移植用のペレットであるか、もしくは皮膚に引っかき入れるように鋭利な物体上に乾燥させられている。上記薬学的組成物としてまた、粒剤、散剤、錠剤、被覆錠剤、（マイクロ）カプセル剤、坐剤、シロップ剤、エマルジョン、懸濁物、クリーム剤、滴剤、もしくは上記組成物の放出を長引かせた調製物が挙げられ、それらの調製において、賦形剤および添加剤ならびに／または補助剤（例えば、崩壊剤、結合剤、被覆剤、膨潤剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、甘味剤もしくは可溶化剤）が、上記のように慣例上使用される。上記薬学的組成物は、種々の薬物送達系における使用に適している。薬物送達法の簡潔な総説に関しては、Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ２４９，１５２７−１５３３（１９９０）およびＬａｎｇｅｒａｎｄＴｉｒｒｅｌｌ，
Ｎａｔｕｒｅ４２８，４８７−４９２（２００４）を参照のこと。さらに、本明細書で記載される組成物は、デポー調製物、時間放出、遅延放出、もしくは徐放性の送達系として製剤化され得る。

一実施形態において、上記化合物は、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼインヒビターである。一実施形態において、上記化合物は、ＵＤＰ−グルクロニルトランスフェラーゼインヒビターである。一実施形態において、上記化合物は、４−メチルウンベリフェロンもしくは４−メチルウンベリフェロンの代謝産物、例えば、４−メチルウンベリフェロン−グルクロニドもしくは硫酸化４−メチルウンベリフェロンである。

ＥＡＥ病因に対する４−ＭＵ処置の効果を、疾患のピーク（免疫化後２２日目）において脊髄に浸潤する細胞の免疫学的プロファイルを評価することによって分析した。浸潤物の総数は疾患スコアと相関し、主に、ＣＤ４＋Ｔ細胞からなった。ＣＤ４＋Ｔ細胞は、４−ＭＵでの事前処置および早期の処置によって実質的に低減したのに対して、介入処置は、ＣＤ４＋Ｔ細胞浸潤を中程度に低減した。図１３Ａは、浸潤する細胞タイプに関し、健康な対照、対照、事前処置プロトコル、処置プロトコル、および介入プロトコルの被験体におけるＣＤ８＋リンパ球およびＣＤ４＋リンパ球、ならびにマクロファージの数を示す。図１３Ａに示されるように、４−ＭＵ処置は、より低い総数の細胞浸潤物を生じ、ＣＤ８＋リンパ球およびＣＤ４＋リンパ球、ならびにマクロファージの浸潤を低下させた。驚くべきことに、４−ＭＵは、リンパ器官におけるリンパ球総数が変化しなかったという観察を考慮すれば、これら動物において全身性の免疫抑制もリンパ球増殖の全身性増加も引き起こさなかった。

図１３Ｂは、ＣＤ４＋集団内の、健康な対照、対照、事前処置プロトコル、処置プロトコル、および介入プロトコルの被験体におけるＩＬ４＋細胞、ＩＦＮ−γ＋細胞およびＩＬ１７＋細胞の数を示す。興味深いことに、４−ＭＵ処置後にＣＮＳに依然として存在したＣＤ４＋Ｔ細胞をさらに分析すると、４−ＭＵ処置は、疾患重症度の低下と相関するＩＦＮ−γ生成Ｔｈ１集団を主に低減したのに対して、ＩＬ−１７生成Ｔｈ１７集団は、あまり影響を受けなかった。この最後の観察は、４−ＭＵ処置が、局所的ＴｈバランスをＴｈ１応答から外れるように方向を変えることによって、ＣＮＳにおける浸潤リンパ球のＴ細胞プロファイルの方向を変えることを示す。さらに、Ｔｈ１細胞およびＴｈ１７細胞がＥＡＥにおいて有する差次的な病理的役割（Ａｘｔｅｌｌ，Ｒ．Ｃ．，ｅｔａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｒｅｖ．ＡｌｌｅｒｇｙＩｍｍｕｎｏｌ．４４，１１４−１２０（２０１３）；Ｌｏｗｔｈｅｒ，Ｄ．Ｅ．，ｅｔａｌ．，ＡｃｔａＮｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．１２６，５０１−５１５（２０１３））を考慮すると、局所的Ｔｈ細胞プロファイルにおけるこの変化は、ミエリンに対する自己免疫性の攻撃の防止に寄与し得る。

脊髄へのＴ細胞の浸潤の低下が、４−ＭＵによる調節機構の誘発に起因し得ることを考慮して、二次リンパ器官において可能性のある調節性細胞を誘発することにおける４−ＭＵ処置の役割を、ＣＤ２５＋Ｔ細胞の数を分析することによって評価した。図１３Ｃは、健康な対照、対照、事前処置プロトコル、処置プロトコル、および介入プロトコルの被験体の脾臓およびリンパ節における、ＣＤ４＋Ｔ細胞のうちのＣＤ２５＋のパーセンテージを示す。図１３Ｃに示されるように、免疫化前にＥＡＥ被験体において開始した４−ＭＵ処置（事前処置プロトコル）は、脾臓およびリンパ節においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞の数の増大を生じた。しかし、ＣＤ２５は一般に、活性化の際に誘発されるので、可能性のあるＴｒｅｇ集団の誘発に対する４−ＭＵの効果を、ＦｏｘＰ３＋Ｔ細胞の誘発を分析することによってさらに評価した。

第１に、健康なマウスを使用して、４−ＭＵ処置が、リンパ組織においてＦｏｘＰ３＋Ｔ細胞の数を有意に増大させることが観察された（データは示さず）。図１３Ｄは、対照被験体および４−ＭＵ処置被験体におけるＦｏｘＰ３＋ＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージを示す。図１３Ｄに示されるように、Ｄ０．１１マウスにおけるＯＶＡ免疫化後のＴｒｅｇ数を分析することによって、脾臓、腸間膜リンパ節（ＭＬＮ）、鼠径リンパ節（ＩＬＮ）、および膵リンパ節（ＰＬＮ）を含む多数の免疫学的区画におけるＦｏｘＰ３＋Ｔ細胞の増大が認められた。このことは、４−ＭＵがＴｒｅｇ応答を誘発することを実証する。ＥＡＥマウスのように、４−ＭＵ処置がこれらマウスにおいて全身性の免疫抑制を誘発しないことが確認された（データは示さず）。

従って、一実施形態において、上記化合物は、調節性Ｔ細胞応答を誘発するために有効である。一実施形態において、上記化合物は、ＦｏｘＰ３＋調節性Ｔ細胞を増大させるために有効である。

一実施形態において、上記自己免疫疾患、アレルギー疾患、もしくはアトピー性疾患は、自己免疫性糖尿病、多発性硬化症、シェーグレン病、自己免疫性甲状腺炎、狼瘡、関節リウマチ、乾癬、大腸炎、および喘息からなる群より選択される。一実施形態において、上記自己免疫疾患、アレルギー疾患、もしくはアトピー性疾患は、自己免疫性糖尿病もしくは多発性硬化症である。

一局面において、必要性のある哺乳動物被験体において、自己免疫疾患、アレルギー疾患、もしくはアトピー性疾患を処置するための方法が提供される。上記方法は、上記被験体に、上記哺乳動物被験体においてヒアルロナン合成を阻害するために有効な量の化合物を含む組成物を投与する工程を包含する。一実施形態において、上記化合物は、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼインヒビターである。一実施形態において、上記化合物は、ＵＤＰグルクロニルトランスフェラーゼインヒビターである。一実施形態において、上記化合物は、４−メチルウンベリフェロンもしくは４−メチルウンベリフェロンの代謝産物、例えば、４−メチルウンベリフェロン−グルクロニドもしくは硫酸化４−メチルウンベリフェロンである。

上記方法の一実施形態において、上記化合物は、調節性Ｔ細胞応答を誘発するために有効である。一実施形態において、上記化合物は、ＦｏｘＰ３＋調節性Ｔ細胞を増大させるために有効である。

一実施形態において、上記哺乳動物被験体は、ヒト被験体である。一実施形態において、上記ヒト被験体は、自己免疫性糖尿病、多発性硬化症、シェーグレン病、自己免疫性甲状腺炎、狼瘡、関節リウマチ、乾癬、大腸炎、および喘息からなる群より選択される自己免疫疾患、アレルギー疾患、もしくはアトピー性疾患に罹患しているかまたは発症させるリスクがある。

一局面において、自己免疫性糖尿病に罹患しているかもしくは発症させるリスクがある哺乳動物被験体において、膵島炎を処置する、および／または自己免疫性糖尿病の進行を逆転させるための方法が記載される。上記方法は、上記哺乳動物被験体に、上記哺乳動物被験体においてヒアルロナン合成を阻害するために有効な量の化合物を含む組成物を投与する工程を包含する。

一実施形態において、上記化合物は、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼインヒビターもしくはＵＤＰグルクロニルトランスフェラーゼインヒビターである。一実施形態において、上記化合物は、４−メチルウンベリフェロンもしくは４−メチルウンベリフェロンの代謝産物である。一実施形態において、上記哺乳動物被験体は、ヒト被験体である。

投与様式は、経口投与、舌下投与、鼻内投与、気管内投与、吸入、眼投与、局所投与、経皮投与、皮内投与、直腸投与、膣投与、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、胸骨内投与、もしくは経粘膜投与を介するものを含む任意の医学的に受容可能な様式であり得る。さらに、投与様式は、体外デバイスおよび／もしくは組織穿通性の電磁デバイスを介するものであり得る。

選択される特定の様式は、選択される特定の化合物、所望の結果、処置される特定の状態および治療効力に必要とされる用量に依存する。本明細書で記載される方法は、一般的に、医学的に受容可能である任意の投与様式、例えば、臨床上受容不能な有害効果を引き起こすことなく、炎症応答変化の有効なレベルを生じる任意の様式を使用して実施され得る。

上記組成物は、障害および投与様式に依存して、異なる容器、ビヒクルもしくは製剤において提供され得る。例えば、経口適用に関しては、上記組成物は、舌下錠、ガム、マウスウォッシュ、歯磨き粉、キャンディー、ゲル、フィルムなどとして；眼適用に関しては、点眼びん中の点眼剤、眼用軟膏剤、眼用ゲル、眼用パックとして、コンタクトレンズもしくは眼内レンズ上の被覆として、コンタクトレンズ保存溶液もしくは洗浄液中などにおいて；局所適用に関しては、ローション剤、軟膏剤、ゲル、クリーム剤、スプレー、ティシュー、スワブ、ワイプなどとして；膣適用もしくは直腸適用に関しては、軟膏剤、タンポン、坐剤、粘膜接着製剤などとして、投与され得る。

上記組成物は、注射によって、例えば、ボーラス注射もしくは連続注入によって、静脈内経路、皮下経路、筋肉内経路、腹腔内経路、胸骨内経路を介して、投与され得る。注射用製剤は、単位投与形態で、例えば、アンプルもしくは複数用量容器において（保存剤を添加して）呈示され得る。上記組成物は、油性もしくは水性のビヒクル中で懸濁物、溶液もしくはエマルジョンのような形態をとり得、懸濁剤、安定化剤および／もしくは分散剤のような調合剤（ｆｏｒｍｕｌａｔｏｒｙａｇｅｎｔ）を含み得る。経口投与に関しては、上記組成物は、上記組成物と、当該分野で周知の薬学的に受容可能なキャリアとを合わせることによって、例えば、舌下錠、液体製剤、もしくは経口ゲルとして、容易に製剤化され得る。

吸入による投与に関しては、上記組成物は、加圧パックもしくはネブライザーからのエアロゾルスプレー呈示の形態で、適切なプロペラント、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素もしくは他の適切なガスとともに便利に送達され得る。加圧エアロゾルの場合には、投与単位は、バルブを提供して、計量された量を送達することによって決定され得る。例えば、ゼラチンのカプセル剤およびカートリッジは、吸入器もしくは吹き入れ器における使用のために、上記組成物および適切な粉末基剤（例えば、ラクトースもしくはデンプン）の粉末ミックスを含んで製剤化され得る。治療剤の吸入のための医療用デバイスは、当該分野で公知である。いくつかの実施形態において、上記医療用デバイスは、吸入器である。他の実施形態において、上記医療用デバイスは、計量容量吸入器である。

上記組成物はまた、直腸用組成物もしくは腟用組成物（例えば、坐剤もしくは停留浣腸（例えば、従来の坐剤基剤（例えば、カカオ脂もしくは他のグリセリド）を含む））において製剤化され得る。

ＵＤＰグリコシルトランスフェラーゼインヒビター、もしくはＵＧＴインヒビター、もしくは４−ＭＵ処置によるＨＡ合成の阻害は、ＦｏｘＰ３誘発を促進するので、ＦｏｘＰ３発現の調節におけるＨＡおよびそのレセプターＣＤ４４を通じたシグナル伝達の役割を調査した。図１４Ａは、プレートに結合したＨＭＷ−ＨＡもしくはＣＤ４４抗体ありもしくはなしで、ＴＧＦβおよびＩＬ−２の存在下で７２時間にわたって活性化されたＣＤ４＋ＧＦＰ／ＦｏｘＰ３−Ｔ細胞によるＣＤ２５およびＦｏｘＰ３発現を示す。図１４Ａに示されるように、ＧＦＰ／ＦｏｘＰ３レポーターマウスを使用して、プレートに被覆されたＨＡおよび抗ＣＤ４４抗体は、インビトロで、ＣＤ４＋ＧＦＰ／ＦｏｘＰ３前駆体からのＦｏｘＰ３誘発を強力に減少させることが観察された。さらに、ＣＤ４４^−／−マウスから単離されたＣＤ４＋ＧＦＰ／ＦｏｘＰ３−Ｔ細胞を使用するインビトロでのＴｒｅｇ誘発は、ＣＤ４４^＋／＋マウスもしくはＣＤ４４^−／＋マウスから単離された細胞より多数のＦｏｘＰ３発現Ｔｒｅｇを生じた。このことは、ＦｏｘＰ３誘発の低下が、発現されるＣＤ４４＋対立遺伝子の数に逆比例することを示す。

図１４Ｂは、等しい数のＧＦＰ／ＦｏｘＰ３−ＣＤ４＋−ＣＤ４４＋／＋−ＣＤ４５．１およびＧＦＰ／ＦｏｘＰ３−ＣＤ４＋ＣＤ４４−／−ＣＤ４５．２Ｔ細胞を、ＲＡＧ−／−宿主に共に移入した後の、ＦｏｘＰ３のインビボ誘発に関する。ＣＤ３＋ＧＦＰ／ＦｏｘＰ３＋Ｔ細胞の数を、移入の４日後に評価し、ＣＤ４４−／−（ＣＤ４５．１）対ＣＤ４４＋／＋（ＣＤ４５．２）Ｔ細胞の比を決定した。図１４Ｃは、３匹のＲＡＧ−／−レシピエント動物の累積データを示す。

図１４Ｂおよび図１４Ｃに示されるように、ＲＡＧ^−／−宿主への等しい数のＧＦＰ／ＦｏｘＰ３−ＣＤ４^＋ＣＤ４４^＋／＋ＣＤ４５．１およびＧＦＰ／ＦｏｘＰ３−ＣＤ４^＋ＣＤ４４^−／−ＣＤ４５．２Ｔ細胞の共移入は、ＣＤ４４^−／− ＣＤ４＋細胞（ＣＤ４５．１⁻）が、ＦｏｘＰ３＋細胞のより大きな集団を生じることを明らかにした。このことは、ＣＤ４４発現ＣＤ４Ｔ細胞がＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇへと発生する可能性の低下を示す。まとめると、これらデータは、ＨＭＷ−ＨＡおよびＣＤ４４が、ＦｏｘＰ３誘発をインビトロおよびインビボで抑制し、ＣＤ４４シグナル伝達が、Ｔｒｅｇ誘発における重要な阻害性シグナルであることを示す。

まとめると、上記データは、ＨＡのレベルの増大が、ＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇの誘発を阻害することによって、自己免疫を促進する環境を作り出し得ることを示す。さらに、上記データは、４−ＭＵ処置が、ＭＳにおいてミエリンに対する自己免疫性の攻撃をブロックし得ることを示す。

従って、一局面において、多発性硬化症に罹患しているかもしくは発症させるリスクがある哺乳動物被験体において、多発性硬化症および／もしくは自己免疫性脱髄を処置するための方法が提供される。上記方法は、上記哺乳動物被験体に、上記哺乳動物被験体においてヒアルロナン合成を阻害するために有効な量の化合物を含む組成物を投与する工程を包含する。一実施形態において、上記化合物は、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼインヒビターもしくはＵＤＰグルクロニルトランスフェラーゼインヒビターである。一実施形態において、上記化合物は、４−メチルウンベリフェロンもしくは４−メチルウンベリフェロンの代謝産物である。一実施形態において、上記哺乳動物被験体は、ヒト被験体である。

本明細書で記載される研究のうちのあるものは、プロジェクト番号ＮＡ９６５／２−１の下でドイツ研究振興協会（ＤＦＧ）によって一部支援された。

好ましい実施形態が例証および記載されてきたが、特許請求された主題の趣旨および範囲から逸脱することなく、種々の変更がそこで行われ得ることは認識される。
独占的所有もしくは権利が主張される本発明の実施形態は、以下のとおり定義される。

Claims

本明細書に記載の発明。