JP2019128371A - 倒立型顕微鏡および標本観察方法 - Google Patents
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Abstract
Description
これに対し、先端レンズ上の液滴の高さよりも高い位置に焦点位置を有する液浸対物レンズを利用する技術が知られている(例えば、特許文献5参照。)。
本発明の第1態様は、光学的に透明で平坦な平坦部材を支持して該平坦部材の上方に標本を保持可能な保持部と、該保持部により支持された前記平坦部材の下面に先端を対向させて鉛直上方に向けて配置される液浸対物レンズと、前記保持部および前記液浸対物レンズの少なくとも一方を該液浸対物レンズの光軸に沿う光軸方向に移動させる照準部と、前記平坦部材の前記下面と前記液浸対物レンズの前記先端との間に液体を注入する注液部と、前記平坦部材の前記下面と前記液浸対物レンズの前記先端とが該先端上に形成可能な液滴の高さよりも前記光軸方向に大きい間隔をあけて配置された状態で、前記先端上に前記液体を注入することにより前記液滴を形成することを目的として前記注液部を制御し、その後、前記平坦部材と前記液浸対物レンズとを相対的に前記光軸方向に近接させて、前記先端上の前記液滴を前記平坦部材の前記下面に接触させることにより、前記液体が前記先端および前記下面に接触した状態からなる液柱を形成した後、前記液柱を維持しながら前記保持部と前記液浸対物レンズとを相対的に前記光軸方向に移動させることを目的として、前記照準部を制御する制御部とを備える倒立型顕微鏡である。
この構成によって、注液部と排液部の駆動源が1つで済み、排液部を備える場合であっても構造が複雑になるのを抑えることができる。前記駆動源がペリスタルティックポンプであってもよい。
この構成によって、スフェロイドやオルガノイド等の大きな厚さを有する3次元培養細胞の全体を観察することができる。前記液浸対物レンズの前記先端から焦点位置までの距離が1.5mm以上であってもよい。
本発明の第1実施形態に係る倒立型顕微鏡および標本観察方法について、図面を参照して以下に説明する。
本実施形態に係る倒立型顕微鏡1は、マルチウエルプレート3を支持するXYステージ(保持部)5と、XYステージ5により支持されたマルチウエルプレート3の下方に配置される液浸対物レンズ7と、液浸対物レンズ7をその光軸に沿う方向(光軸方向)に移動させる照準部9と、マルチウエルプレート3と液浸対物レンズ7との間に液体を注入する注液装置(注液部)11と、XYステージ5、照準部9および注液装置11を制御する制御器(制御部)13とを備えている。以下、液浸対物レンズ7の光軸に沿う方向をZ方向とし、Z方向に直交しかつ互いに直交する方向をX方向およびY方向とする。
標本Sとしては、スフェロイドやオルガノイド等の任意の3次元培養細胞を採用することができる。
本実施形態に係る倒立型顕微鏡1および標本観察方法により標本Sを観察する場合は、まず、制御器13により照準部9が制御され、液浸対物レンズ7が光軸方向に移動して、図3に示すように、観察対象の標本Sが収容されているマルチウエルプレート3のウエル15の底部17と液浸対物レンズ7の先端レンズ19とが先端レンズ19上に形成する液滴Fの高さよりも大きい間隔をあけて配置される(ステップSA1)。
次に、本発明の第2実施形態に係る倒立型顕微鏡および標本観察方法について説明する。
本実施形態に係る倒立型顕微鏡1および標本観察方法は、図1に示すように第1実施形態と同様の構成であり、第1実施形態とは制御器13による照準部9および注液装置11の制御の仕方が異なる。
以下、第1実施形態に係る倒立型顕微鏡1および標本観察方法と構成を共通する箇所には、同一符号を付して説明を省略する。
本実施形態に係る倒立型顕微鏡1および標本観察方法により標本Sを観察する場合は、まず、制御器13により照準部9が制御され、図7に示すように、液浸対物レンズ7が光軸方向に移動して、標本Sが収容されているマルチウエルプレート3のウエル15の底部17と液浸対物レンズ7とが先端レンズ19上に形成可能な液滴Fの高さよりも小さい間隔をあけて配置される(ステップSB1)。
第1変形例は、制御器13が、照準部9により、図10に示すように、先端レンズ19と下面17aとの間の液柱Fを維持しながら液浸対物レンズ7を光軸方向に移動させてマルチウエルプレート3の底部17と先端レンズ19とを近接させる場合は、制御器13が注液装置11を制御して吸引し、液浸対物レンズ7の光軸方向の位置に応じて先端レンズ19上の液柱Fを減量することとしてもよい。
5 XYステージ(保持部)
7 液浸対物レンズ
9 照準部
11 注液装置(注液部、排液部)
13 制御器
19 先端レンズ(先端)
SA1,SB1 間隔調整工程(液滴形成工程)
SA2 液体注水工程(液滴形成工程)
SA3、SB2 液柱形成工程
SA4、SB3 焦点位置調整工程
Claims (14)
- 光学的に透明で平坦な平坦部材を支持して該平坦部材の上方に標本を保持可能な保持部と、
該保持部により支持された前記平坦部材の下面に先端を対向させて鉛直上方に向けて配置される液浸対物レンズと、
前記保持部および前記液浸対物レンズの少なくとも一方を該液浸対物レンズの光軸に沿う光軸方向に移動させる照準部と、
前記平坦部材の前記下面と前記液浸対物レンズの前記先端との間に液体を注入する注液部と、
前記平坦部材の前記下面と前記液浸対物レンズの前記先端とが該先端上に形成可能な液滴の高さよりも前記光軸方向に大きい間隔をあけて配置された状態で、前記先端上に前記液体を注入することにより前記液滴を形成することを目的として前記注液部を制御し、その後、前記平坦部材と前記液浸対物レンズとを相対的に前記光軸方向に近接させて、前記先端上の前記液滴を前記平坦部材の前記下面に接触させることにより、前記液体が前記先端および前記下面に接触した状態からなる液柱を形成した後、該液柱を維持しながら前記保持部と前記液浸対物レンズとを相対的に前記光軸方向に移動させることを目的として、前記照準部を制御する制御部とを備える倒立型顕微鏡。 - 光学的に透明で平坦な平坦部材を支持して該平坦部材の上方に標本を保持可能な保持部と、
該保持部により支持された前記平坦部材の下面に先端を対向させて鉛直上方に向けて配置される液浸対物レンズと、
前記保持部および前記液浸対物レンズの少なくとも一方を該液浸対物レンズの光軸に沿う光軸方向に移動させる照準部と、
前記平坦部材の前記下面と前記液浸対物レンズの前記先端との間に液体を注入する注液部と、
前記平坦部材の前記下面と前記液浸対物レンズの前記先端とが該先端上に形成可能な液滴の高さよりも前記光軸方向に小さい間隔をあけて配置された状態で、前記先端上に前記液体を注入することにより該液体が前記先端および前記下面に接触した状態からなる液柱を形成することを目的として前記注液部を制御し、その後、前記液柱を維持しながら前記保持部と前記液浸対物レンズとを相対的に前記光軸方向に移動させることを目的として前記照準部を制御する制御部とを備える倒立型顕微鏡。 - 前記制御部が、前記照準部により、前記液柱を維持したまま前記保持部と前記液浸対物レンズとを相対的に前記光軸方向に移動させる前にまたは移動させながら、前記先端上に前記液体を補充することを目的として前記注液部を制御する請求項1または請求項2に記載の倒立型顕微鏡。
- 前記液浸対物レンズの前記先端と前記平坦部材の前記下面との間に貯留されている前記液体を排出する排液部を備え、
前記制御部が、前記照準部により、前記液柱を維持しながら、前記保持部と前記液浸対物レンズとを相対的に前記光軸方向に移動させて前記平坦部材と前記液浸対物レンズとを近接させる場合は、前記先端上の前記液体を減量させることを目的として前記排液部を制御し、前記照準部により、前記液柱を維持しながら、前記保持部と前記液浸対物レンズとを相対的に前記光軸方向に移動させて前記平坦部材と前記液浸対物レンズとを離間させる場合は、前記先端上に前記液体を補充することを目的として前記注液部を制御する請求項1から請求項3のいずれかに記載の倒立型顕微鏡。 - 前記注液部および前記排液部が、互いに共通の駆動源により駆動する請求項4に記載の倒立型顕微鏡。
- 前記駆動源がペリスタルティックポンプである請求項5に記載の倒立型顕微鏡。
- 前記保持部が、前記光軸方向に交差する交差方向に移動可能に設けられ、
前記制御部が、前記液柱が形成されている状態で、前記保持部を前記交差方向に移動させて前記平坦部材と前記液浸対物レンズとを相対的に前記交差方向にずらす場合に、前記先端上に前記液体を補充することを目的として前記注液部を制御する請求項1から請求項6のいずれかに記載の倒立型顕微鏡。 - 前記液浸対物レンズの前記先端から焦点位置までの距離が、前記先端上に形成可能な前記液滴の高さよりも長い請求項1から請求項7のいずれかに記載の倒立型顕微鏡。
- 前記液浸対物レンズの前記先端から焦点位置までの距離が1.5mm以上である請求項1から請求項8のいずれかに記載の倒立型顕微鏡。
- 上方に標本が保持された光学的に透明で平坦な平坦部材と該平坦部材の下面に先端を対向させて鉛直上方に向けて配置された液浸対物レンズとを該液浸対物レンズの前記先端上に形成可能な液滴の高さよりも大きい間隔をあけて配置した状態で、前記先端上に液体を注入して前記液滴を形成する液滴形成工程と、
前記平坦部材と前記液浸対物レンズとを相対的に該液浸対物レンズの光軸に沿う光軸方向に近接させて、前記先端上に形成された前記液滴を前記平坦部材の前記下面に接触させることにより、前記液体が前記先端および前記下面に接触した状態からなる液柱を形成する液柱形成工程と、
前記液柱を維持しながら前記平坦部材と前記液浸対物レンズとを相対的に前記光軸方向に移動させ、前記平坦部材の上方に保持されている前記標本上で前記液浸対物レンズの焦点位置を調整する焦点位置調整工程とを含む標本観察方法。 - 上方に標本が保持された光学的に透明で平坦な平坦部材と該平坦部材の下面に先端を対向させて鉛直上方に向けて配置された液浸対物レンズとを該液浸対物レンズの前記先端上に形成可能な液滴の高さよりも小さい間隔をあけて配置した状態で、前記先端上に液体を注入することにより、該液体が前記先端および前記平坦部材の前記下面に接触した状態からなる液柱を形成する液柱形成工程と、
前記液柱を維持しながら前記平坦部材と前記液浸対物レンズとを相対的に該液浸対物レンズの光軸に沿う光軸方向に移動させ、前記平坦部材の上方に保持されている前記標本上で前記液浸対物レンズの焦点位置を調整する焦点位置調整工程とを含む標本観察方法。 - 前記焦点位置調整工程により前記平坦部材と前記液浸対物レンズとを相対的に前記光軸方向に移動させる前にまたは移動させながら、前記液浸対物レンズの前記先端上に前記液体を補充する請求項10または請求項11に記載の標本観察方法。
- 前記液柱を維持しながら前記平坦部材と前記液浸対物レンズとを相対的に近接させる方向に移動させる場合に前記先端上の前記液体を減量し、前記液柱を維持しながら前記平坦部材と前記液浸対物レンズとを相対的に離間させる方向に移動させる場合に前記先端上に前記液体を補充する請求項10から請求項12のいずれかに記載の標本観察方法。
- 前記液柱が形成されている状態で、前記平坦部材と前記液浸対物レンズとを相対的に前記光軸方向に交差する交差方向にずらす場合に、前記平坦部材の前記先端上に前記液体を補充する請求項10から請求項13のいずれかに記載の標本観察方法。
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