JP2019094357A - Clock gene expression promoting composition - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、特定の有効成分を含有する、時計遺伝子発現促進用組成物、概日リズム調整用組成物及び睡眠改善用組成物に関する。 The present invention relates to a composition for promoting clock gene expression, a composition for adjusting circadian rhythm, and a composition for improving sleep, containing a specific active ingredient.
概日リズムは生物体が持つ約24時間周期のリズムであり、生物体自身が持つ体内時計(circadian clock)によって制御されている。体内時計は、生物学的な日周変動を引き起こし、睡眠及び覚醒をはじめ、摂食行動、体温、ホルモン分泌、血圧、代謝、心身活動などの様々な生体機能を制御している。また、不規則な生活による体内時計の乱れによって、睡眠異常;皮膚疾患;うつ病などの精神神経疾患;肥満、糖尿病、メタボリックシンドロームなどの生活習慣病;癌;老化などの様々な肉体的及び精神的な異常リスクが上昇することが明らかになっている。 The circadian rhythm is a rhythm with an approximately 24-hour cycle that an organism has, and is controlled by the circadian clock that the organism itself has. The biological clock causes biological diurnal fluctuation, and controls various biological functions such as eating behavior, body temperature, hormone secretion, blood pressure, metabolism, mind-body activity, as well as sleep and awakening. In addition, disorder of the biological clock due to irregular life, sleep disorders; skin diseases; psychoneurotic diseases such as depression; lifestyle-related diseases such as obesity, diabetes, metabolic syndrome; cancer; various physical and mental such as aging Abnormal risk has been shown to increase.
体内時計は、時計遺伝子(clock gene)と呼ばれる遺伝子群を含む体内時計系(circadian clock system)により制御されている。時計遺伝子としては、Per、Cry、Bmal、Clock、Dec、Rev−Erb、ROR、DBP、E4BP4などが知られている。哺乳類では、これらのうち、Per、Cry、Bmal及びClockによってコードされるタンパク質が体内時計系において重要な役割を担い、これらの遺伝子の転写の促進及び抑制により形成されるフィードバックループが体内時計の分子機構の中核をなす。 The biological clock is controlled by a circadian clock system including a gene group called a clock gene. As clock genes, Per, Cry, Bmal, Clock, Dec, Rev-Erb, ROR, DBP, E4BP4 and the like are known. In mammals, among these, proteins encoded by Per, Cry, Bmal and Clock play an important role in the biological clock system, and the feedback loop formed by the promotion and repression of transcription of these genes is a molecular of the biological clock. At the core of the organization.
すなわち、正の転写因子であるClockタンパク質及びBmalタンパク質は複合体を形成し、これがPer及びCryの上流にあるE−Box配列に結合して、Per及びCryの転写が促進される。一方で、Perタンパク質及びCryタンパク質は負の転写因子であり、これらが複合体を形成して核に移行することにより、Clock/Bmal複合体の形成が抑制されてPer及びCryの転写が減少する。 That is, the positive transcription factors Clock protein and Bmal protein form a complex, which binds to E-Box sequences upstream of Per and Cry to promote Per and Cry transcription. On the other hand, Per protein and Cry protein are negative transcription factors, and their formation into a complex and transfer to the nucleus suppresses the formation of Clock / Bmal complex and reduces Per and Cry transcription. .
このように、Per、Cry、Bmal、Clockといった時計遺伝子がうまく発現しないことにより、体内時計に乱れが生じ、結果として上記したような生体異常が引き起こされる。 As described above, the failure to express the clock genes such as Per, Cry, Bmal and Clock causes disturbance of the biological clock, resulting in the above-mentioned biological abnormalities.
また、体内時計には、脳の視床下部視交叉上核にある中枢時計と、肝臓、肺、腎臓、心臓、筋肉などの種々の組織に存在する末梢時計とがあり、中枢時計は光によって調整されるのに対し、末梢時計は主に食事によって調整されることが知られている。これらの両方に体内時計系、すなわち、時計遺伝子の発現がみられる。例えば、皮膚でも時計遺伝子は発現しており、他の臓器と同様に、脳内の中枢時計と同調して時計遺伝子がリズムを刻むことにより、生体恒常性が維持されている。 The biological clock includes a central clock located in the hypothalamic suprachiasmatic nucleus of the brain and peripheral clocks present in various tissues such as the liver, lungs, kidneys, heart, and muscles, and the central clock is adjusted by light On the other hand, peripheral clocks are known to be mainly adjusted by diet. Both of these show the expression of the internal clock system, ie, the clock gene. For example, the clock gene is expressed in the skin, and as with other organs, homeostasis is maintained by the rhythm of the clock gene being in synchronization with the central clock in the brain.
体内時計を正常に維持するためには、体内時計系に関与する時計遺伝子の発現を促進するものが有効である。このようなものとして、例えば、特許文献1には、ラベンダーオイル又はユーカリオイルとアルキレンオキシド誘導体とを含有する時計遺伝子発現促進剤が知られている。また、特許文献2には、特定の乳酸菌の菌体処理物を有効成分として含有する概日リズム改善剤が知られている。 In order to maintain the biological clock normally, one that promotes expression of a clock gene involved in the biological clock system is effective. As such, for example, Patent Document 1 discloses a clock gene expression promoter containing lavender oil or eucalyptus oil and an alkylene oxide derivative. In addition, Patent Document 2 discloses a circadian rhythm improving agent which contains, as an active ingredient, a bacterial cell-treated product of a specific lactic acid bacterium.
特許文献1に記載の時計遺伝子発現促進剤は合成化合物を含有するものであり、安全性の観点から日常的に摂取できるものではない。また、特許文献2に記載の概日リズム改善剤は、特定の乳酸菌の菌体処理物を有効成分とするところ、このような乳酸菌を入手する手段が限られており、さらに乳酸菌を大量培養し、かつ、培養物を処理しなければならないことから、工業的規模で製造及び利用することが困難なものである。 The clock gene expression promoter described in Patent Document 1 contains a synthetic compound and can not be taken on a daily basis from the viewpoint of safety. In addition, the circadian rhythm improving agent described in Patent Document 2 uses a treated product of a specific lactic acid bacteria as an active ingredient, but the means for obtaining such lactic acid bacteria is limited, and a large amount of lactic acid bacteria is cultured. And, since the culture has to be processed, it is difficult to manufacture and utilize on an industrial scale.
そこで、本発明は、上記従来技術に比して、安全性に問題がなく、かつ、工業的規模で製造及び利用が可能である体内時計系を調節し得る組成物を提供することを、発明が解決しようとする課題とする。 Therefore, the present invention is to provide a composition capable of controlling a biological clock system which has no problem in safety and can be manufactured and used on an industrial scale as compared with the above-mentioned prior art. Is an issue to be solved.
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討したところ、驚くべきことに、黒生姜が体内時計系におけるフィードバックループを構成する時計遺伝子であるPer2、Cry1、Bmal1及びClockの発現を促進し得ることを見出した。そして、時計遺伝子発現促進用組成物、概日リズム調整用組成物及び睡眠改善用組成物として、黒生姜を含有する組成物の創作に成功した。本発明は、かかる知見や成功例に基づいて完成された発明である。 The present inventors have intensively studied to solve the above-mentioned problems, and surprisingly, the expression of the persimmon gene, Per2, Cry1, Bmal1 and Clock, which are clock genes that make up the feedback loop in the circadian clock system, is enhanced. I found that I could do it. Then, as a composition for promoting clock gene expression, a composition for adjusting circadian rhythm, and a composition for improving sleep, a composition containing black ginger has succeeded. The present invention is an invention completed based on such findings and successful examples.
したがって、本発明によれば、黒生姜(Kaempferia parviflora)を含有する、時計遺伝子発現促進用組成物が提供される。 Therefore, according to the present invention, there is provided a composition for promoting clock gene expression, which comprises black ginger ( Kaempferia parviflora ).
本発明の別の側面によれば、黒生姜を含有する、概日リズム調整用組成物が提供される。 According to another aspect of the present invention, there is provided a composition for adjusting circadian rhythm comprising black ginger.
本発明の別の側面によれば、黒生姜を含有する、睡眠改善用組成物が提供される。 According to another aspect of the present invention, there is provided a composition for improving sleep comprising black ginger.
好ましくは、本発明の組成物において、前記時計遺伝子が、Per2、Cry1、Bmal1及びClockからなる群から選ばれる少なくとも1種の時計遺伝子である。 Preferably, in the composition of the present invention, the clock gene is at least one clock gene selected from the group consisting of Per2, Cry1, Bmal1 and Clock.
好ましくは、本発明の組成物において、前記黒生姜が黒生姜抽出物である。 Preferably, in the composition of the present invention, the black ginger is a black ginger extract.
好ましくは、本発明の組成物において、前記黒生姜抽出物が3,5,7,3’,4’−ペンタメトキシフラボン、5,7,4’−トリメトキシフラボン、5,7−ジメトキシフラボン、3,5,7−トリメトキシフラボン及び3,5,7,4’−テトラメトキシフラボンからなる群から選ばれる少なくとも1種のポリメトキシフラボンを含有する黒生姜抽出物である。 Preferably, in the composition of the present invention, said black ginger extract is 3,5,7,3 ', 4'-pentamethoxyflavone, 5,7,4'-trimethoxyflavone, 5,7-dimethoxyflavone, It is a black ginger extract containing at least one polymethoxyflavone selected from the group consisting of 3,5,7-trimethoxyflavone and 3,5,7,4'-tetramethoxyflavone.
本発明の組成物は、黒生姜を含有することにより、時計遺伝子発現促進作用、概日リズム調整作用及び/又は睡眠改善作用を有し、さらにこれらの作用に関連して、皮膚疾患改善作用、精神疾患改善作用、生活習慣病改善作用、抗癌作用、抗老化作用などを示すことが期待できる。 The composition of the present invention has a clock gene expression promoting action, a circadian rhythm regulating action and / or a sleep improving action by containing black ginger, and further, in relation to these actions, a skin disease improving action, It can be expected to exhibit a mental disease ameliorating action, a lifestyle-related disease ameliorating action, an anticancer action, an anti-aging action and the like.
本発明の組成物で用いられる黒生姜は、化粧品などでの使用実績のあるものであることから、本発明の組成物は安全性が高いものである。また、黒生姜は市販されているものであることから、本発明の組成物は容易に工業的規模で製造及び利用ができるものである。したがって、本発明の組成物は、上記作用を期待して、非経口的又は経口的な形態で利用することができるものである。 Since the black ginger used in the composition of the present invention has a history of use in cosmetics and the like, the composition of the present invention is highly safe. In addition, since black ginger is commercially available, the composition of the present invention can be easily manufactured and used on an industrial scale. Therefore, the composition of the present invention can be used in parenteral or oral form in expectation of the above-mentioned action.
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明の組成物は、時計遺伝子発現促進作用を奏する有効成分として黒生姜(Kaempferia parviflora)を少なくとも含有する。
Hereinafter, the present invention will be described in detail.
The composition of the present invention at least contains black ginger ( Kaempferia parviflora ) as an active ingredient exerting a clock gene expression promoting action.
本発明の組成物は、時計遺伝子発現促進作用の他に、概日リズム調整作用及び睡眠改善作用を示し得る。また、これらの作用に関連して、本発明の組成物は、皮膚疾患改善作用、精神疾患改善作用、生活習慣病改善作用、抗癌作用、抗老化作用などを示し得る。 The composition of the present invention can exhibit a circadian rhythm regulating action and a sleep improving action in addition to a clock gene expression promoting action. In addition, in relation to these effects, the composition of the present invention may exhibit a skin disease improving action, a psychiatric disease improving action, a lifestyle-related disease improving action, an anticancer action, an anti-aging action and the like.
本発明の組成物は、上記した作用を有することにより、少なくとも、時計遺伝子発現促進用組成物、概日リズム調整用組成物及び睡眠改善用組成物という態様をとり得る。 The composition of the present invention can have at least the aspect of a clock gene expression promoting composition, a circadian rhythm adjusting composition and a sleep improving composition by having the above-described action.
黒生姜(Kaempferia parviflora)は、東南アジアなどに自生することで知られているショウガ科バンウコン属の植物である。黒生姜は、精力増進、滋養強壮、血糖値の低下、体力回復、消化器系の改善、膣帯下、痔核、痔疾、むかつき、口内炎、関節痛、胃痛の改善などの作用があることが知られている。黒生姜は、長期にわたりヒトに摂取されてきた実績のある天然植物であって安全性が高いことから、本発明の組成物は、実用性が高く、そのままで、又は加工することにより、非経口的又は経口的な形態で種々の用途に適用可能である。 The black ginger ( Kaempferia parviflora ) is a plant of the ginger family Banturus spp. Which is known to grow naturally in Southeast Asia and the like. It is known that black ginger has effects such as enhancement of energy, nourishment, blood sugar reduction, strength recovery, improvement of digestive system, improvement of vaginal bandage, hemorrhoids, gonorrhea, gonorrhea, stomatitis, arthralgia and stomach pain etc. It is done. Since black ginger is a proven natural plant that has been ingested by humans for a long time and is highly safe, the composition of the present invention is highly practical and can be used parenterally as it is or by processing. It is applicable to various uses in the form of oral or oral.
黒生姜の使用部位は、所望の薬理作用に寄与する成分を含む部位であれば特に限定されず、例えば、根、茎、葉、花、枝などが挙げられるが、好ましくは3,5,7,3’,4’−ペンタメトキシフラボン、5,7,4’−トリメトキシフラボン、5,7−ジメトキシフラボン、3,5,7−トリメトキシフラボン、3,5,7,4’−テトラメトキシフラボンなどのポリメトキシフラボノイド(PMF)を多く含む根茎である。 The site of use of the black ginger is not particularly limited as long as it is a site containing a component contributing to the desired pharmacological action, and examples thereof include roots, stems, leaves, flowers, branches and the like, preferably 3, 5, 7 , 3 ', 4'-pentamethoxyflavone, 5,7,4'-trimethoxyflavone, 5,7-dimethoxyflavone, 3,5,7-trimethoxyflavone, 3,5,7,4'-tetramethoxy It is a rhizome which is rich in polymethoxyflavonoids (PMFs) such as flavone.
黒生姜は、採取した状態の未加工のものに加えて、例えば、処理物(乾燥物、裁断物など)又は黒生姜や黒生姜処理物の粉末、搾汁、抽出物などの黒生姜の加工物を包含する。ここで、抽出物とは、黒生姜における成分が抽出された物であれば特に限定されないが、例えば、黒生姜やその処理物を溶媒で抽出して得られる抽出液、その希釈液や濃縮液、又はそれらの乾燥物やその粉末が挙げられる。本発明において用いられる黒生姜は、皮膚外用組成物などの非経口用組成物や、経口用組成物などへの適用容易性を考慮すれば、黒生姜の抽出物又は搾汁などのエキスや該エキスの乾燥物であることが好ましい。 The black ginger is, in addition to the raw ones in the collected state, for example, the processing of black ginger such as treated (dried, cut, etc.) or powder of black ginger or treated black ginger, squeezed extract, etc. Include things. Here, the extract is not particularly limited as long as it is a substance from which a component in black ginger is extracted, but, for example, an extract obtained by extracting black ginger or a treated product thereof with a solvent, a dilution liquid or a concentrate thereof Or their dried products and their powders. The black ginger used in the present invention is an extract of black ginger or an extract such as squeezed juice, considering the ease of application to a composition for parenteral use such as a composition for external use on the skin or a composition for oral use etc. It is preferred that the extract is a dried product.
黒生姜粉末は、例えば、洗浄後にスライスした黒生姜を天日又は乾燥機を用いて乾燥後、そのままで、又は適当な形状や大きさに裁断して得た処理物を、粉砕装置を用いて粉砕することで得ることができる。粉砕装置としては通常使用されるものが広く使用できるが、例えば、原料ホッパー、粉砕機、分級機、製品ホルダーなどから構成される粉砕機を用いることができる。 The black ginger powder is obtained by, for example, drying the sliced black ginger after washing with the sun or a dryer and then cutting it as it is or by cutting it into an appropriate shape or size using a grinder. It can be obtained by crushing. As the grinding apparatus, those generally used can be widely used. For example, a grinding machine composed of a raw material hopper, a grinding machine, a classifier, a product holder and the like can be used.
黒生姜抽出物は、黒生姜やその処理物を溶媒で抽出することによって得られる。抽出に使用される溶媒としては、例えば、エタノール、メタノール、イソプロパノール、ブタノールなどの低級アルコール;酢酸エチル、酢酸メチルなどの低級エステル;アセトン;これらと水との混合溶媒などが挙げられる。水もまた抽出溶媒として挙げられ、熱水や温水などであってもよい。本発明の組成物は、ヒトが経口的に摂取する可能性があるものであることから、原料である黒生姜の抽出物は、水単独、エタノール単独又は水とエタノールとの混合溶媒(いわゆる含水エタノール)によって抽出されたものであることが好ましい。例えば、20〜95vol%の濃度の含水エタノールを溶媒として使用することがより好ましい。 The black ginger extract is obtained by extracting black ginger and its processed product with a solvent. Examples of the solvent used for the extraction include lower alcohols such as ethanol, methanol, isopropanol and butanol; lower esters such as ethyl acetate and methyl acetate; acetone; a mixed solvent of these with water and the like. Water is also mentioned as an extraction solvent, and may be hot water, warm water or the like. Since the composition of the present invention has the possibility of being orally ingested by humans, the extract of black ginger as a raw material is water alone, ethanol alone or a mixed solvent of water and ethanol It is preferable that it is extracted by ethanol). For example, it is more preferable to use water-containing ethanol at a concentration of 20 to 95 vol% as a solvent.
溶媒として混合溶媒を使用する場合は、例えば、アセトン/水(2/8〜8/2、体積比)混合物、エタノール/水(2/8〜8/2、体積比)混合物などを用いることができる。エタノール/水の場合、例えば、黒生姜の乾燥根茎に対して、その質量の1〜40倍質量、好ましくは2〜20倍質量の溶媒を加え、室温又は加熱下で、連続的又は非連続的な撹拌により、数分間〜数日間、好ましくは5分間〜10日間程度抽出することが好ましい。 When a mixed solvent is used as the solvent, for example, an acetone / water (2/8 to 8/2, volume ratio) mixture, an ethanol / water (2/8 to 8/2, volume ratio) mixture, etc. may be used. it can. In the case of ethanol / water, for example, 1 to 40 times, preferably 2 to 20 times the weight of the solvent is added to the dried rhizome of black ginger, continuously or discontinuously at room temperature or under heating It is preferable to extract for several minutes to several days, preferably for about 5 minutes to 10 days, by such stirring.
抽出方法は特に限定されないが、例えば、安全性、利便性及び工業化の観点から、可能な限り緩やかな条件で抽出操作を行うことが好ましい。例えば、黒生姜の部位やその乾燥物を、粉砕、破砕、細断などして、これに2〜20倍質量の溶媒を加え、0℃〜溶媒の還流温度の範囲で5分間〜10日間、静置、振盪、攪拌、還流などの任意の条件下にて抽出を行う。抽出作業後、ろ過、遠心分離などの固液分離操作を行い、不溶な固形物を除去する。これに、必要に応じて希釈、濃縮などの操作を行うことにより、抽出液を得る。さらに、不溶物についても同じ操作を繰り返して抽出し、その抽出液を先の抽出液と合わせて用いてもよい。これらの抽出液は、当業者が通常用いる精製方法により、さらに精製して使用してもよい。 Although the extraction method is not particularly limited, for example, it is preferable to perform the extraction operation under as mild conditions as possible, from the viewpoint of safety, convenience and industrialization. For example, a portion of black ginger or its dried substance is crushed, crushed, shredded etc., 2 to 20 times the mass of solvent is added to this, and 5 minutes to 10 days in the range of 0 ° C. to the reflux temperature of the solvent Extraction is performed under any conditions such as standing, shaking, stirring, reflux and the like. After the extraction operation, solid-liquid separation operation such as filtration and centrifugation is performed to remove insoluble solids. An extract is obtained by performing operations such as dilution and concentration as necessary. Furthermore, the same procedure may be repeated to extract insolubles, and the extract may be used in combination with the previous extract. These extracts may be further purified and used according to the purification method commonly used by those skilled in the art.
得られた抽出液は、そのままで、又は濃縮するなどして、例えば、液状物、濃縮物、さらにこれらを乾燥した乾燥物などの形態で用いることができる。乾燥方法は特に限定されず、例えば、噴霧乾燥、凍結乾燥、減圧乾燥、流動乾燥などの当業者が通常用いる方法により行い得る。さらに、以上の方法で得られた乾燥物を、当業者に知られる方法を用いて粉末化して使用することが可能である。また、後述する実施例に記載があるとおり、抽出液やその乾燥物などを得た後に、特定の成分を高濃度で含有する画分を得るために分画処理を実施してもよい。 The obtained extract can be used as it is or, for example, in the form of a liquid, a concentrate, or a dried product obtained by drying these, by concentration or the like. The drying method is not particularly limited, and may be carried out by methods commonly used by those skilled in the art, such as spray drying, lyophilization, reduced pressure drying, fluid drying and the like. Furthermore, it is possible to use the dried product obtained by the above method as a powder using methods known to those skilled in the art. In addition, as described in Examples described later, after obtaining an extract and a dried product thereof, fractionation processing may be performed to obtain a fraction containing a specific component at a high concentration.
本発明の組成物において用いられる黒生姜抽出物は特に限定されないが、例えば、3,5,7,3’,4’−ペンタメトキシフラボン、5,7,4’−トリメトキシフラボン、5,7−ジメトキシフラボン、3,5,7−トリメトキシフラボン及び3,5,7,4’−テトラメトキシフラボンなどのPMFを含有する黒生姜抽出物が挙げられ、好ましくは3,5,7,3’,4’−ペンタメトキシフラボン、5,7,4’−トリメトキシフラボン、5,7−ジメトキシフラボン、3,5,7−トリメトキシフラボン及び3,5,7,4’−テトラメトキシフラボンのいずれか1種以上を含有する黒生姜抽出物であり、より好ましくはこれらの2種以上を含有する黒生姜抽出物であり、さらに好ましくはこれらの全てを含有する黒生姜抽出物である。 The black ginger extract used in the composition of the present invention is not particularly limited, and, for example, 3,5,7,3 ', 4'-pentamethoxyflavone, 5,7,4'-trimethoxyflavone, 5,7,5 -Black flea extract containing PMF such as dimethoxyflavone, 3,5,7-trimethoxyflavone and 3,5,7,4'-tetramethoxyflavone, preferably 3,5,7,3 ' , 4'-pentamethoxyflavone, 5,7,4'-trimethoxyflavone, 5,7-dimethoxyflavone, 3,5,7-trimethoxyflavone and 3,5,7,4'-tetramethoxyflavone It is a black ginger extract containing one or more kinds, more preferably a black ginger extract containing two or more of them, still more preferably a black ginger extract containing all of these That.
黒生姜抽出物におけるPMFの含有量は特に限定されないが、例えば、抽出物全量に対するPMF量の割合(PMF含量)が0.1wt%以上であり、好ましくは1〜99wt%であり、より好ましくは5〜90wt%である。 Although the content of PMF in the black ginger extract is not particularly limited, for example, the ratio of PMF amount to the total amount of extract (PMF content) is 0.1 wt% or more, preferably 1 to 99 wt%, more preferably It is 5 to 90 wt%.
黒生姜抽出物における3,5,7,3’,4’−ペンタメトキシフラボンの含有量は特に限定されないが、例えば、抽出物全量に対する3,5,7,3’,4’−ペンタメトキシフラボン量の割合(3,5,7,3’,4’−ペンタメトキシフラボン含量)は、例えば、0.01wt%以上であり、好ましくは0.1wt%以上であり、より好ましくは1wt%以上であり、より好ましくは10〜70wt%である。 Although the content of 3,5,7,3 ′, 4′-pentamethoxyflavone in the black ginger extract is not particularly limited, for example, 3,5,7,3 ′, 4′-pentamethoxyflavone relative to the total amount of extract The proportion of the amount (3,5,7,3 ′, 4′-pentamethoxyflavone content) is, for example, 0.01 wt% or more, preferably 0.1 wt% or more, more preferably 1 wt% or more. More preferably 10 to 70 wt%.
黒生姜抽出物における5,7,4’−トリメトキシフラボンの含有量は特に限定されないが、例えば、抽出物全量に対する5,7,4’−トリメトキシフラボン量の割合(5,7,4’−トリメトキシフラボン含量)は、例えば、0.01wt%以上であり、好ましくは0.1wt%以上であり、より好ましくは1wt%以上であり、より好ましくは10〜70wt%である。 Although the content of 5,7,4'-trimethoxyflavone in the black ginger extract is not particularly limited, for example, the ratio of the amount of 5,7,4'-trimethoxyflavone to the total amount of extract (5,7,4 ' The trimethoxyflavone content) is, for example, 0.01 wt% or more, preferably 0.1 wt% or more, more preferably 1 wt% or more, and more preferably 10 to 70 wt%.
黒生姜抽出物における5,7−ジメトキシフラボンの含有量は特に限定されないが、例えば、抽出物全量に対する5,7−ジメトキシフラボン量の割合(5,7−ジメトキシフラボン含量)は、例えば、0.01wt%以上であり、好ましくは0.1wt%以上であり、より好ましくは1wt%以上であり、より好ましくは10〜70wt%である。 Although the content of 5,7-dimethoxyflavone in the black ginger extract is not particularly limited, for example, the ratio of 5,7-dimethoxyflavone amount to the total amount of extract (5,7-dimethoxyflavone content) is, for example, 0. It is 01 wt% or more, preferably 0.1 wt% or more, more preferably 1 wt% or more, and more preferably 10 to 70 wt%.
黒生姜抽出物における3,5,7−トリメトキシフラボンの含有量は特に限定されないが、例えば、抽出物全量に対する3,5,7−トリメトキシフラボン量の割合(3,5,7−トリメトキシフラボン含量)は、例えば、0.01wt%以上であり、好ましくは0.1wt%以上であり、より好ましくは1wt%以上であり、より好ましくは10〜70wt%である。 Although the content of 3,5,7-trimethoxyflavone in the black ginger extract is not particularly limited, for example, the ratio of the amount of 3,5,7-trimethoxyflavone to the total amount of extract (3,5,7-trimethoxy) The flavone content) is, for example, 0.01 wt% or more, preferably 0.1 wt% or more, more preferably 1 wt% or more, and more preferably 10 to 70 wt%.
黒生姜抽出物における3,5,7,4’−テトラメトキシフラボンの含有量は特に限定されないが、例えば、抽出物全量に対する5,7−ジメトキシフラボン量の割合(5,7−ジメトキシフラボン含量)は、例えば、0.01wt%以上であり、好ましくは0.1wt%以上であり、より好ましくは1wt%以上であり、より好ましくは10〜70wt%である。 Although the content of 3,5,7,4'-tetramethoxyflavone in the black ginger extract is not particularly limited, for example, the ratio of the amount of 5,7-dimethoxyflavone to the total amount of extract (5,7-dimethoxyflavone content) For example, it is 0.01 wt% or more, preferably 0.1 wt% or more, more preferably 1 wt% or more, and more preferably 10 to 70 wt%.
黒生姜抽出物を含む黒生姜の処理物及び加工物の製造方法は特に限定されない。黒生姜の処理物及び加工物は、例えば、上記した記載や後述する実施例の記載を参照して製造したものでもよいし、その他の当業者により通常知られている方法によって製造したものでもよいし、市場に流通しているものでもよい。 There are no particular limitations on the method of producing the processed and processed black ginger containing the black ginger extract. The processed and processed products of black ginger may be manufactured, for example, by referring to the above description and the description of the examples described later, or may be manufactured by methods commonly known by those skilled in the art. And may be distributed in the market.
後述する実施例に記載されているとおり、黒生姜は、黒豆、マッシュルーム、シログワイ、ブロッコリー、サツマイモ、ゴボウ、トマトといった他の天然物素材と比べて、より強い時計遺伝子発現促進作用を示す。 As described in Examples described later, black ginger has a stronger clock gene expression promoting action as compared with other natural products such as black beans, mushrooms, shirogwai, broccoli, sweet potato, burdock and tomato.
時計遺伝子にはPer、Cry、Bmal、Clock、Dec、Rev−Erb、ROR、DBP、E4BP4などが知られているところ、本発明の組成物によって発現が促進される時計遺伝子は特に限定されないが、後述する実施例に記載があるとおり、本発明の組成物は、Per2、Cry1、Bmal1又はClockに対して発現促進作用を示し得る。例えば、本発明の組成物が、3,5,7,3’,4’−ペンタメトキシフラボン、5,7,4’−トリメトキシフラボン、5,7−ジメトキシフラボン、3,5,7−トリメトキシフラボン及び3,5,7,4’−テトラメトキシフラボンの中の少なくとも1種を含有する黒生姜、黒生姜処理物又は黒生姜抽出物を含有する組成物である場合、Per2発現促進作用を示し;5,7,4’−トリメトキシフラボン及び5,7−ジメトキシフラボンの中の少なくとも1種を含有する黒生姜、黒生姜処理物又は黒生姜抽出物を含有する組成物である場合、Bmal1発現促進作用を示し得る。 Where the clock gene is known as Per, Cry, Bmal, Clock, Dec, Rev-Erb, ROR, DBP, E4BP4 etc., the clock gene whose expression is promoted by the composition of the present invention is not particularly limited. As described in the examples below, the composition of the present invention can exhibit an expression promoting action on Per2, Cry1, Bmal1 or Clock. For example, the composition of the present invention may be 3,5,7,3 ', 4'-pentamethoxyflavone, 5,7,4'-trimethoxyflavone, 5,7-dimethoxyflavone, 3,5,7-trif When it is a composition containing a black ginger, a black ginger treated product or a black ginger extract containing at least one of methoxyflavone and 3,5,7,4′-tetramethoxyflavone, the Per2 expression promoting action is Bmal 1 when it is a composition containing black ginger, a black ginger treated product or a black ginger extract containing at least one of 5,7,4′-trimethoxyflavone and 5,7-dimethoxyflavone It can exhibit an expression promoting effect.
本明細書における「時計遺伝子発現促進作用」とは、例えば、被験体における時計遺伝子の発現量を促進すること、時計遺伝子がコードするタンパク質の翻訳量を増大すること及び該タンパク質を活性化することのうち少なくともいずれか1つの作用をいう。また、概日リズム調整作用とは、生物体が本来有する約24時間周期の概日リズムを異常のあるリズムから正常なリズムへ回復すること及び正常なリズムを維持することのうち少なくともいずれか1つの作用をいう。睡眠改善作用とは、被験体における現在又は将来の睡眠異常若しくは睡眠異常であるとされる状態になることを抑制若しくは遅滞又はその状態を改善することをいう。本発明の組成物は、上記した作用を有するものとして、時計遺伝子発現促進剤、概日リズム調整剤及び睡眠改善剤という態様をとり得る。 The term "clock gene expression promoting action" as used herein refers to, for example, promoting the expression level of a clock gene in a subject, increasing the translation amount of a protein encoded by the clock gene, and activating the protein. At least one action of In addition, the circadian rhythm adjusting action is at least one of the recovery from the abnormal rhythm to the normal rhythm and the maintenance of the normal rhythm of the circadian rhythm of about 24 hours which the organism originally has. Say one action. The sleep improving action means suppressing or delaying becoming a current or future sleep abnormality or a state considered to be sleep abnormality in a subject, or improving the state thereof. The composition of the present invention can take the form of a clock gene expression promoter, a circadian rhythm regulator and a sleep improving agent as having the above-mentioned action.
本発明の組成物は、賦形剤、増量剤、結合剤、増粘剤、乳化剤、着色料、香料、香油などの通常の加工に使用される添加物をさらに含有することができる。添加物の使用量は、本発明の課題の解決を妨げない限り特に限定されず、適宜調整される。 The composition of the present invention may further contain additives used in ordinary processing such as excipients, fillers, binders, thickeners, emulsifiers, colorants, flavors, perfume oils and the like. The amount of the additive used is not particularly limited as long as it does not prevent the solution of the problem of the present invention, and is appropriately adjusted.
本発明の組成物は、通常用いられる形態であれば特に制限されず、例えば、液状、ローション状、ムース状、ゲル状、乳液状、懸濁液状、クリーム状、軟膏状、シート状、エアゾール状、スプレー状、スティック状、粉状、粒状、顆粒状、錠状、棒状、板状、ブロック状、固形状、ペースト状、カプセル状、カプレット状などの各形態をとり得る。 The composition of the present invention is not particularly limited as long as it is a form usually used, and for example, liquid, lotion, mousse, gel, emulsion, suspension, cream, ointment, sheet, aerosol It can take various forms such as spray, stick, powder, granular, granular, tablet, rod, plate, block, solid, paste, capsule, caplet and the like.
本発明の組成物は、非経口用組成物として、例えば、化粧品に適した形態として使用することができる。すなわち、本発明の組成物の一態様は、化粧用組成物である。例えば、本発明の組成物は、そのままで、又は通常化粧品の加工に使用される添加物と混合して、ローション剤、乳剤、ゲル剤、クリーム剤、軟膏剤などの種々の形態に加工され得る。具体的には、化粧水、化粧クリーム、乳液、クリーム、パック、ヘアトニック、ヘアクリーム、シャンプー、ヘアリンス、トリートメント、洗顔剤、ファンデーション、育毛剤、水性軟膏、スプレーなどとして利用できる。 The composition of the present invention can be used as a parenteral composition, for example, in a form suitable for cosmetics. That is, one aspect of the composition of the present invention is a cosmetic composition. For example, the composition of the present invention can be processed into various forms such as lotions, emulsions, gels, creams, ointments and the like, as it is or mixed with additives commonly used in cosmetic processing. . Specifically, it can be used as a lotion, cosmetic cream, milk, cream, pack, hair tonic, hair cream, shampoo, hair rinse, treatment, face wash, foundation, hair restorer, aqueous ointment, spray and the like.
本発明の組成物に含有される黒生姜の含有量は、時計遺伝子発現促進作用が認められる量であれば特に限定されないが、組成物全体に対して、乾燥質量で、例えば、非経口用組成物としては0.00001wt%以上、好ましくは0.0001wt%以上であり;経口用組成物としては0.0001wt%以上、好ましくは0.001wt%以上である。 The content of the black ginger contained in the composition of the present invention is not particularly limited as long as the clock gene expression promoting effect is observed, but it is a dry weight, for example, a parenteral composition with respect to the entire composition. The content is 0.00001 wt% or more, preferably 0.0001 wt% or more; the composition for oral use is 0.0001 wt% or more, preferably 0.001 wt% or more.
本発明の組成物の1日の使用量、1回の使用量、使用期間、使用間隔などの用法及び用量は特に限定されず、使用態様や使用者の体内時計系の状態などに応じて適宜設定され得る。ただし、使用期間や使用間隔については、後述する実施例に記載があるとおり、本発明の組成物を摂取した後、時計遺伝子であるPer2及びCry1については摂取後4〜12時間をピークとして比較的早期に発現が促進され、Bmal1及びClockについては摂取後16〜24時間をピークとして比較的緩やかに発現が促進されることから、本発明の組成物は、例えば、朝、昼及び夜のいずれか1回以上の頻度で、2日間以上にわたって使用することが好ましい。 The usage and dose of the daily usage amount, single use amount, usage period, usage interval and the like of the composition of the present invention are not particularly limited, and may be appropriately selected depending on the usage mode and the condition of the circadian clock system of the user. It can be set. However, regarding the use period and use interval, as described in the examples described later, after taking the composition of the present invention, the clock genes Per 2 and Cry 1 are relatively peaked at 4 to 12 hours after intake The composition of the present invention is, for example, any of morning, day or night, since expression is promoted early and expression is promoted relatively slowly with Bmal1 and Clock peaking at 16 to 24 hours after ingestion. It is preferable to use it for one or more times for 2 days or more.
本発明の組成物の製造方法は特に限定されず、例えば、室温又は加温下で、黒生姜及び添加物を混合することにより、固形状組成物とすることができる。または、この固形状組成物を、水などの溶媒に溶解させて液状組成物とすることができる。さらに、黒生姜を含有する液状物に、添加物を含む他の固形状成分を加えて混合することにより液状組成物とすることができる。なお、得られた液状組成物は、乾燥処理を経て、粉末化してもよい。この場合の乾燥処理の方法としては、上記の黒生姜を乾燥する際に用いる方法が適宜利用でき、特に限定されない。 The method for producing the composition of the present invention is not particularly limited, and a solid composition can be obtained, for example, by mixing black sugar and additives at room temperature or under heating. Alternatively, this solid composition can be dissolved in a solvent such as water to make a liquid composition. Furthermore, it can be made a liquid composition by adding and mixing the other solid-like component containing an additive to the liquid containing black ginger. The obtained liquid composition may be subjected to drying treatment and then powdered. As a method of the drying process in this case, the method used when drying said black ginger can be utilized suitably, and it does not specifically limit.
本発明の組成物は、用途に応じて、そのままで、又は他の成分、組成物若しくは製品と混合して使用することができる。このように、本発明の組成物は、黒生姜を含有するものであれば、本発明の目的を達成し得る限り、種々のものと混合又は併用し得る。 The composition of the present invention can be used as it is or mixed with other components, compositions or products, depending on the application. Thus, the composition of the present invention may be mixed or used in combination with various ones as long as the object of the present invention can be achieved, as long as the composition contains black thorn.
本発明の組成物の具体的な態様として、例えば、0.1〜50wt%の3,5,7,3’,4’−ペンタメトキシフラボン、0.1〜50wt%の5,7,4’−トリメトキシフラボン、0.1〜50wt%の5,7−ジメトキシフラボン、0.1〜50wt%の3,5,7−トリメトキシフラボン及び0.1〜50wt%の3,5,7,4’−テトラメトキシフラボンを含有する黒生姜抽出物を含有する組成物が挙げられる。 As a specific embodiment of the composition of the present invention, for example, 0.1 to 50 wt% 3,5,7,3 ′, 4′-pentamethoxyflavone, 0.1 to 50 wt% 5,7,4 ′ Trimethoxyflavone, 0.1 to 50 wt% of 5,7-dimethoxyflavone, 0.1 to 50 wt% of 3,5,7-trimethoxyflavone and 0.1 to 50 wt% of 3,5,7,4 A composition containing '-tetramethoxy-flavone-containing black ginger extract is mentioned.
本発明の組成物の別の具体的な態様として、例えば、1〜25wt%の3,5,7,3’,4’−ペンタメトキシフラボン、1〜25wt%の5,7,4’−トリメトキシフラボン、1〜25wt%の5,7−ジメトキシフラボン、1〜25wt%の3,5,7−トリメトキシフラボン及び1〜25wt%の3,5,7,4’−テトラメトキシフラボンを含有する黒生姜抽出物を含有する組成物が挙げられる。 As another specific embodiment of the composition of the present invention, for example, 1 to 25 wt% 3,5,7,3 ′, 4′-pentamethoxyflavone, 1 to 25 wt% 5,7,4′-tributyl Containing methoxyflavone, 1 to 25 wt% of 5,7-dimethoxyflavone, 1 to 25 wt% of 3,5,7-trimethoxyflavone and 1 to 25 wt% of 3,5,7,4'-tetramethoxyflavone A composition containing black ginger extract is mentioned.
上記した本発明の組成物の具体的な態様における各PMFの量は、黒生姜抽出物量に対する割合を示すものである。すなわち、上記の各PMFの割合は、添加物を除いた、黒生姜抽出物量に対する、各PMFのそれぞれの割合を示すものである。 The amount of each PMF in the specific embodiment of the composition of the present invention described above is a ratio to the amount of black ginger extract. That is, the ratio of each PMF described above indicates the ratio of each PMF to the amount of black ginger extract excluding the additive.
以下、本発明の組成物の具体的態様に係る配合例を示すが、本発明はこれら配合例に限定されるものではなく、本発明の課題を解決し得る限り、本発明は種々の態様をとることができる。 Hereinafter, although the example of a combination concerning the concrete mode of the composition of the present invention is shown, the present invention is not limited to these example of a combination, and the present invention takes various aspects as long as the subject of the present invention can be solved. It can be taken.
(配合例1:化粧水)
全体を100質量部として、黒生姜抽出物 0.01質量部、生姜抽出物 0.01質量部、ケツメイシ 0.01質量部、グリセリン 10質量部、ジグリセリン 3質量部、1,3−ブチレングリコール 12質量部、ペンチレングリコール 3質量部、ヒアルロン酸ナトリウム 0.1質量部、クエン酸 0.01質量部、クエン酸ナトリウム 0.02質量部、キサンタンガム 0.1質量部、メチルパラベン 0.15質量部、カルボマー 0.2質量部、水酸化ナトリウム 0.03質量部及び水 残部を混合して、化粧水の態様で本発明の組成物を調製した。
(Composition example 1: Lotion)
The whole is 100 parts by mass, 0.01 part by mass of black ginger extract, 0.01 part by mass of ginger extract 0.01 part by mass of Ketchmeishi, 10 parts by mass of glycerin, 3 parts by mass of diglycerin, 1,3-butylene glycol 12 parts by mass, pentylene glycol 3 parts by mass, sodium hyaluronate 0.1 parts by mass, citric acid 0.01 parts by mass, sodium citrate 0.02 parts by mass, xanthan gum 0.1 parts by mass, methyl paraben 0.15 parts by mass 0.2 parts by weight of carbomer, 0.03 parts by weight of sodium hydroxide and the balance of water were mixed to prepare a composition of the present invention in the form of a lotion.
(配合例2:シャンプー)
全体を100質量部として、黒生姜抽出物 0.01質量部、ホップ抽出物 0.02質量部、カフェイン 0.01質量部、ラウレス硫酸ナトリウム 7.5質量部、コカミドプロピルベタイン 4.2質量部、コカミドDEA 3質量部、1,3−ブチレングリコール 0.1質量部、ポリクオタニウム−10 0.225質量部、クエン酸 0.15質量部、クエン酸ナトリウム 0.05質量部、フェノキシエタノール 0.9質量部及び水 残部を混合して、シャンプーの態様で本発明の組成物を調製した。
(Composition example 2: Shampoo)
The total amount is 100 parts by mass, 0.01 part by mass of black ginger extract, 0.02 parts by mass of hop extract, 0.01 parts by mass of caffeine, 7.5 parts by mass of sodium laureth sulfate, cocamidopropyl betaine 4.2 Parts by weight, 3 parts by weight of cocamide DEA, 0.1 parts by weight of 1,3-butylene glycol, 0.225 parts by weight of polyquaternium-10, 0.15 parts by weight of citric acid, 0.05 parts by weight of sodium citrate, phenoxyethanol 0. The composition of the present invention was prepared in the form of a shampoo by mixing 9 parts by weight and the balance of water.
(配合例3:石鹸)
全体を100質量部として、黒生姜粉砕物 0.5質量部、メリロート抽出物 0.2質量部、エラスチン 0.1質量部、グリセリン 2質量部、オリーブ油 1質量部、EDTA−4ナトリウム 0.1質量部、エチドロン酸4ナトリウム 0.2質量部及び石ケン素地 残部を混合及び固化することにより、石鹸の態様で本発明の組成物を調製した。
(Composition example 3: Soap)
The whole is 100 parts by mass, 0.5 parts by mass of ground product of black ginger, 0.2 parts by mass of Meriloto extract, 0.1 parts by mass of elastin, 2 parts by mass of glycerin, 1 part by mass of olive oil, 0.1 sodium EDTA-4 The composition of the invention was prepared in the form of a soap by mixing and solidifying parts by weight, 0.2 parts by weight of tetrasodium etidronate and the balance of the soap base.
(配合例4:乳液)
全体を100質量部として、黒生姜抽出物 0.1質量部、アラニン 0.1質量部、アルギニン 0.1質量部、ショ糖脂肪酸エステル 3質量部、グリセリン 12質量部、スクワラン 6質量部、ジメチルシリコーンオイル 24質量部、ポリプロピレングリコール 1質量部、増粘剤 0.06質量部、フェノキシエタノール 0.2質量部、エタノール 5質量部、水酸化ナトリウム 0.01質量部及び精製水 残部を混合して、乳液の態様で本発明の組成物を調製した。
(Composition example 4: Emulsion)
The whole is 100 parts by mass, 0.1 part by mass of black pepper extract, 0.1 parts by mass of alanine, 0.1 parts by mass of arginine, 3 parts by mass of sucrose fatty acid ester, 12 parts by mass of glycerin, 6 parts by mass of squalane, dimethyl Mix 24 parts by mass of silicone oil, 1 part by mass of polypropylene glycol, 0.06 parts by mass of thickener, 0.2 parts by mass of phenoxyethanol, 5 parts by mass of ethanol, 0.01 parts by mass of sodium hydroxide and the balance of purified water, The composition of the invention was prepared in the form of an emulsion.
(配合例5:化粧クリーム)
全体を100質量部として、黒生姜抽出物 0.1質量部、イソマルトオリゴ糖 0.1質量部、フラクトオリゴ糖 0.1質量部、スクワラン 15.0質量部、ミリスチン酸オクチルドデシル 4.0質量部、水素添加大豆リン脂質 0.2質量部、ブチルアルコール 2.4質量部、硬化油 1.5質量部、ステアリン酸 1.5質量部、親油型モノステアリン酸グリセリン 1.5質量部、モノステアリン酸ポリグリセリル 0.5質量部、ベヘニルアルコール 0.8質量部、モノミリスチン酸ポリグリセリル 0.7質量部、サラシミツロウ 0.3質量部、d−δ−トコフェロール 0.1質量部、メチルパラベン 0.3質量部、C10〜30アルキル変性カルボキシビニルポリマー 0.2質量部、カルボキシビニルポリマー 0.1質量部、1,3−ブタンジオール 18.0質量部、水酸化ナトリウム 0.1質量部及び精製水 残部を混合して、化粧クリームの態様で本発明の組成物を調製した。
(Composition example 5: cosmetic cream)
The whole is 100 parts by mass, 0.1 part by mass of black pepper extract, 0.1 part by mass of isomaltooligosaccharide, 0.1 part by mass of fructooligosaccharides, 15.0 parts by mass of squalane, 4.0 parts by mass of octyldodecyl myristate Hydrogenated soybean phospholipid 0.2 parts by mass, butyl alcohol 2.4 parts by mass, hardened oil 1.5 parts by mass, stearic acid 1.5 parts by mass, lipophilic lipophilic glycerin monostearate 1.5 parts by mass, mono 0.5 parts by mass of polyglyceryl stearate, 0.8 parts by mass of behenyl alcohol, 0.7 parts by mass of polyglyceryl monomyristate, 0.3 parts by mass of white beeswax, 0.1 parts by mass of d-δ-tocopherol, 0.3 parts by mass of methyl paraben Parts, C10 to C30 alkyl-modified carboxyvinyl polymer 0.2 parts by mass, carboxyvinyl polymer 0.1 parts by mass, 1, - 18.0 parts by weight butanediol, 0.1 parts by mass of sodium hydroxide and a mixture of purified water balance, the composition of the present invention was prepared in the manner of a cosmetic cream.
(配合例6:パック剤)
全体を100質量部として、黒生姜抽出物 0.1質量部、没食子酸 0.01質量部、ポリビニルアルコール 20.0質量部、グリセリン 5.0質量部、エタノール 20.0質量部、カオリン 6.0質量部、防腐剤 0.2質量部、香料 0.1質量部及び精製水 残部を混合して、パック剤の態様で本発明の組成物を調製した。
(Composition example 6: pack agent)
6. 100 parts by weight of the whole, 0.1 parts by weight of black ginger extract, 0.01 parts by weight of gallic acid, 20.0 parts by weight of polyvinyl alcohol, 5.0 parts by weight of glycerin, 20.0 parts by weight of ethanol, kaolin 6. The composition of the present invention was prepared in the form of a pack agent by mixing 0 parts by mass, 0.2 parts by mass of preservative, 0.1 parts by mass of perfume and the balance of purified water.
(配合例7:錠剤)
全体を100質量部として、黒生姜粉末 10質量部、ショウガ抽出物 8質量部、カフェイン5質量部、メリロート 5質量部、結晶性セルロース 20質量部、乳糖 50質量部、ステアリン酸マグネシウム 4質量部及びコーンスターチ 残部を混合及び打錠することにより、錠剤の態様で本発明の組成物を調製した。
(Composition example 7: Tablet)
100 parts by weight of the whole, 10 parts by weight of black ginger powder, 8 parts by weight of ginger extract, 5 parts by weight of caffeine, 5 parts by weight of melilote, 20 parts by weight of crystalline cellulose, 50 parts by weight of lactose, 4 parts by weight of magnesium stearate The composition of the present invention was prepared in the form of a tablet by mixing and compressing the remaining portion of corn starch and corn starch.
(配合例8:錠剤)
全体を100質量部として、黒生姜粉末 10質量部、ケツメイシ末 8質量部、メリロート 5質量部、イソマルトオリゴ糖 0.5質量部、フラクトオリゴ糖 0.5質量部、結晶性セルロース 20質量部、乳糖 50質量部、ステアリン酸マグネシウム 4質量部及びコーンスターチ 残部を混合及び打錠することにより、錠剤の態様で本発明の組成物を調製した。
(Composition Example 8: Tablet)
100 parts by weight of the whole, 10 parts by weight of a black-green potato powder, 8 parts by weight of ketsumeishi powder, 5 parts by weight of meriloto, 0.5 parts by weight of isomaltooligosaccharide, 0.5 parts by weight of fructooligosaccharide, 20 parts by weight of crystalline cellulose, lactose The composition of the present invention was prepared in the form of a tablet by mixing and compressing 50 parts by weight, 4 parts by weight of magnesium stearate and the balance of corn starch.
(配合例9:顆粒剤)
全体を100質量部として、黒生姜粉末 10質量部、ホップ末 15質量部、ケツメイシ抽出物 5質量部、乳糖 10質量部、ステアリン酸カルシウム 1質量部及び結晶性セルロース 残部を混合及び顆粒化することにより、顆粒剤の態様で本発明の組成物を調製した。
(Composition example 9: Granules)
By mixing and granulating the whole into 100 parts by mass, 10 parts by mass of black sweet potato powder, 15 parts by mass of hop powder, 5 parts by mass of Ketchmeishi extract, 10 parts by mass of lactose, 1 part by mass of calcium stearate and crystalline cellulose The composition of the present invention was prepared in the form of granules.
(配合例10:カプセル剤)
全体を100質量部として、黒生姜抽出物 10質量部、生姜抽出物 20質量部、エラスチン5質量部、レシチン 8質量部及びオリーブ油 残部を混合して調製したものを内容液として、これをカプセル殻に内包することにより、カプセル剤の態様で本発明の組成物を調製した。
(Composition Example 10: Capsule)
The whole is 100 parts by mass, 10 parts by mass of black ginger extract, 20 parts by mass of ginger extract, 5 parts by mass of elastin, 8 parts by mass of lecithin and olive oil, and the mixture is used as a content liquid as a capsule shell. The composition of the present invention was prepared in the form of a capsule by encapsulating in
(配合例11:液剤)
全体を100質量部として、黒生姜エキス粉末 0.84質量部、アルギニン 1質量部、アラニン 1質量部、果糖ブドウ糖液糖 10質量部、クエン酸 1質量部、安息香酸ナトリウム 0.02質量部、香料製剤 2質量部、スクラロース 0.05質量部、アセスルファムカリウム 0.03質量部、及び精製水 残部を混合して、液剤の態様で本発明の組成物を調製した。
(Formulation example 11: Liquid agent)
The whole is 100 parts by mass, 0.84 parts by mass of black ginger extract powder, 1 part by mass of arginine, 1 part by mass of alanine, 10 parts by mass of fructose glucose liquid sugar, 1 part by mass of citric acid, 0.02 parts by mass of sodium benzoate, The composition of the present invention was prepared in the form of a liquid preparation by mixing 2 parts by mass of a perfume preparation, 0.05 parts by mass of sucralose, 0.03 parts by mass of acesulfame potassium, and the balance of purified water.
以下、本発明を実施例によりさらに詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではなく、本発明の課題を解決し得る限り、本発明は種々の態様をとることができる。 Hereinafter, the present invention will be described in more detail by way of examples, but the present invention is not limited to these examples, and the present invention can take various aspects as long as the problems of the present invention can be solved. .
1.方法
(1)被験試料群1の調製
黒生姜の乾燥根茎 0.5gを50%エタノール 10mLに加えたものを、30秒のヴォルテックス撹拌処理及び10秒の超音波処理に供し、次いで10分間の振盪処理に供し、次いで遠心分離処理に供した。遠心分離処理により得られた上清を黒生姜50%エタノール抽出物とした。同様に、黒生姜の代わりに黒豆、マッシュルーム、シログワイ、ブロッコリー、サツマイモ、ゴボウ又はトマトを用いた50%エタノール抽出物を調製した。これらの50%エタノール抽出物を被験試料群1とし、後述する遺伝子発現解析に用いた。
1. Method (1) Preparation of Test Sample Group 1 A mixture of 0.5 g of dried rhizome of black ginger added to 10 mL of 50% ethanol is subjected to 30 seconds of vortex treatment and 10 seconds of sonication, and then shaken for 10 minutes. It was subjected to treatment and then to centrifugation. The supernatant obtained by centrifugation was used as a 50% ethanol extract of black potato. Similarly, 50% ethanol extract was prepared using black beans, mushrooms, shrews, broccoli, sweet potato, burdock or tomatoes instead of black ginger. These 50% ethanol extracts were used as test sample group 1 and were used for gene expression analysis described later.
(2)被験試料群2の調製
黒生姜の乾燥根茎 100gを95%エタノール 1,000mLに加えたものを、6日間の非連続撹拌処理に供し、次いでろ過処理に供した。得られたろ液を蒸発乾燥することにより、黒生姜95%エタノール抽出物(6.8g)を得た。黒生姜95%エタノール抽出物は、後述する分画に用いた。
(2) Preparation of Test Sample Group 2 A mixture of 100 g of dried rhizomes of black ginger with 1,000 mL of 95% ethanol was subjected to discontinuous stirring for 6 days, and then subjected to filtration. The obtained filtrate was evaporated to dryness to obtain a blackened rice bran 95% ethanol extract (6.8 g). The black ginger 95% ethanol extract was used for the fraction mentioned later.
(3)遺伝子発現解析
マウス繊維芽細胞であるNIH−3T3細胞を3日培養したものに、100nM デキサメタゾンを用いて、2時間同調化させた後、被験試料群1を0.5mg/mLとなるようにNIH−3T3細胞に添加した。添加後、所定の時間でNIH−3T3細胞から全RNAを抽出した。時計遺伝子(Per2、Cry1、Bmal1、及びClock)の発現を定量的RT−PCRにより調べた。なお、被験試料群1の代わりに0.5%となるようにエタノールを加えたものをコントロールとした。
(3) Gene expression analysis After culturing NIH-3T3 cells which are mouse fibroblasts for 3 days, they are synchronized for 2 hours with 100 nM dexamethasone, and then the test sample group 1 becomes 0.5 mg / mL. As added to NIH-3T3 cells. After addition, total RNA was extracted from NIH-3T3 cells at predetermined times. The expression of clock genes (Per2, Cry1, Bmal1 and Clock) was examined by quantitative RT-PCR. In addition, what added ethanol so that it might become 0.5% instead of test sample group 1 was set as control.
(4)分画及び同定
黒生姜における時計遺伝子調節機能を有する成分を同定するために、黒生姜95%エタノール抽出物を用いて分取HPLCにより分画を行った。HPLC条件は以下のとおりとした。また、分画した画分のうち、時計遺伝子調節機能を有する成分を含有する画分の同定は、FT−MS及び1H−NMRを用いて行った。
(4) Fractionation and Identification In order to identify components having clock gene regulatory function in black ginger, fractionation was carried out by preparative HPLC using a 95% ethanol extract of black ginger. The HPLC conditions were as follows. In addition, among the fractionated fractions, identification of a fraction containing a component having a clock gene regulatory function was performed using FT-MS and 1 H-NMR.
[HPLC条件1]
Column:YMC−DispoPack AT ODS−25
Eluent:ACN/H2O(55/45)
Flow Rate:15mL/min
[HPLC条件2]
Column:Wakosil−II5C18 RS−Prep,5μm,20x250mm
Eluent:ACN/MeOH/H2O(20/30/35)
Flow Rate:13mL/min
[HPLC条件3]
Column:Wakosil−II 5C18 RS−Prep,5μm,20x250mm
Eluent:ACN/MeOH/H2O(20/30/30)
Flow Rate:13mL/min
[HPLC condition 1]
Column: YMC-DispoPack AT ODS-25
Eluent: ACN / H 2 O (55/45)
Flow Rate: 15mL / min
[HPLC condition 2]
Column: Wakosil-II 5 C 18 RS-Prep, 5 μm, 20 × 250 mm
Eluent: ACN / MeOH / H 2 O (20/30/35)
Flow Rate: 13 mL / min
[HPLC condition 3]
Column: Wakosil-II 5C18 RS-Prep, 5 μm, 20 × 250 mm
Eluent: ACN / MeOH / H 2 O (20/30/30)
Flow Rate: 13 mL / min
2.結果
(1)遺伝子発現解析
被験試料群1を添加した6時間後に、時計遺伝子の発現をコントロールに対する相対量として調べた結果を図1に示す。黒生姜を被験試料として用いた場合の4時間毎に経時的に相対的mRNA量を比較した結果を図2に示す。黒生姜の最終濃度を0.005、0.01、0.03及び0.05mg/mLに変化させて、黒生姜を添加した6時間後(Per2及びCry1)又は20時間後(Bmal1)に、時計遺伝子の発現をコントロールに対する相対量として調べた結果を図3に示す。
2. Results (1) Gene Expression Analysis Six hours after addition of the test sample group 1, the results of examining clock gene expression as a relative amount to the control are shown in FIG. The result of having compared relative mRNA quantity sequentially over time every 4 hours at the time of using a black ginger as a test sample is shown in FIG. The final concentrations of black-baked salmon are changed to 0.005, 0.01, 0.03 and 0.05 mg / mL, and 6 hours (Per2 and Cry1) or 20 hours (Bmal1) after the black-green glaze is added, The result of examining the expression of the clock gene as a relative amount to the control is shown in FIG.
図1が示すとおり、黒生姜を用いた被験試料は他の天然物素材を用いた被験試料に比べてPer2及びBmal1の発現量を促進させた。図2が示すとおり、Per2及びCry1の発現には黒生姜添加後4〜6時間でピークとなるリズムが確認された。一方、Bmal1及びClockの発現は添加後20〜24時間で促進されたことが確認された。図3が示すとおり、Per2、Cry1及びBmal1の発現量は、黒生姜の濃度に依存して促進されることが確認された。 As FIG. 1 shows, the test sample which used black ginger made the expression level of Per2 and Bmal1 promoted compared with the test sample which used the other natural-material raw material. As shown in FIG. 2, rhythms peaking at 4 to 6 hours after the addition of black potato were confirmed for the expression of Per2 and Cry1. On the other hand, it was confirmed that the expression of Bmal1 and Clock was promoted 20 to 24 hours after the addition. As shown in FIG. 3, it was confirmed that the expression levels of Per2, Cry1 and Bmal1 are promoted depending on the concentration of black ginger.
(2)分画及び同定
黒生姜95%エタノール抽出物について、HPLC条件1により分画を実施した。結果を図4に示す。図4に示すとおり、Fr−1〜Fr−5までの5つの画分が得られ、これらを乾燥させることにより、それぞれ0.154g、0.537g、0.012g、0.041g及び0.066gの乾燥物を得た。これらの合計回収率は81%であった。
(2) Fractionation and identification Fractionation was carried out under HPLC condition 1 on a 95% ethanol extract of Japanese black koji. The results are shown in FIG. As shown in FIG. 4, five fractions from Fr-1 to Fr-5 are obtained, and by drying these, 0.154 g, 0.537 g, 0.012 g, 0.041 g and 0.066 g, respectively. The dried product of The total recovery of these was 81%.
Fr−1〜Fr−5を25μg/mLになるように添加した6時間後(Per2及びCry1)又は20時間後(Bmal1)の時計遺伝子の発現を、コントロールに対する相対量として調べた結果を図5に示す。図5が示すとおり、Fr−2ではPer2、Cry1及びBmal1の発現量が促進され、Fr−4ではPer2及びCry1の発現量が促進された。 FIG. 5 shows the expression of the clock gene after 6 hours (Per 2 and Cry 1) or 20 hours (Bmal 1) of Fr-1 to Fr-5 added to 25 μg / mL as a relative amount with respect to the control. Shown in. As shown in FIG. 5, the expression levels of Per2, Cry1 and Bmal1 were promoted in Fr-2, and the expression levels of Per2 and Cry1 were promoted in Fr-4.
Fr−2について、HPLC条件2により分画を実施した。また、得られた6つの分画を乾燥させたものを25μg/mLになるように添加した6時間後(Per2)又は20時間後(Bmal1)の時計遺伝子の発現を、コントロールに対する相対量として調べた。これらの結果を図6に示す。図6が示すとおり、Fr−2−(3)及び(4)ではPer2及びBmal1の発現量が促進され、Fr−2−(2)、(5)及び(6)ではPer2の発現量が促進された。 Fractionation was carried out under HPLC condition 2 for Fr-2. Also, the expression of the clock gene after 6 hours (Per 2) or 20 hours (Bmal 1) after adding the resulting 6 fractions to dryness to 25 μg / mL was examined as a relative amount to the control The These results are shown in FIG. As shown in FIG. 6, the expression levels of Per2 and Bmal1 are promoted in Fr-2- (3) and (4), and the expression level of Per2 is promoted in Fr-2- (2), (5) and (6) It was done.
Fr−4について、HPLC条件3により分画を実施した。また、得られた2つの分画を乾燥させたものを12.5μg/mLになるように添加した6時間後(Per2)の時計遺伝子の発現を、コントロールに対する相対量として調べた。これらの結果を図7に示す。図7が示すとおり、Fr−4−(1)ではPer2の発現量が促進された。 Fractionation was carried out under HPLC condition 3 for Fr-4. In addition, the expression of the clock gene after 6 hours (Per 2) of adding the dried two fractions to 12.5 μg / mL was examined as a relative amount to the control. These results are shown in FIG. As shown in FIG. 7, the expression level of Per2 was promoted in Fr-4- (1).
分画した画分のうち、Fr−2−(1)〜(6)並びにFr−4−(1)及び(2)が含有する成分の同定を、FT−MS及び1H−NMRを用いて行った。同定された化合物及び黒生姜抽出物の含有量の測定結果を、図8に示す。以上の結果から、黒生姜の成分のうち、Per2遺伝子の発現調節に関与する成分は、3,5,7,3’,4’−ペンタメトキシフラボン、5,7,4’−トリメトキシフラボン、5,7−ジメトキシフラボン、3,5,7−トリメトキシフラボン及び3,5,7,4’−テトラメトキシフラボンであることが確認された。Bmal1遺伝子の発現調節には、5,7−ジメトキシフラボン及び5,7,4’−トリメトキシフラボンが関与していることが確認された。これらのことから、黒生姜のポリメトキシフラボンには、体内時計を調節し、乱れた概日リズムを改善する可能性があることが示唆された。 Identification of components contained in Fr-2- (1) to (6) and Fr-4- (1) and (2) among fractionated fractions using FT-MS and 1 H-NMR went. The measurement results of the content of the identified compound and the extract of black ginger are shown in FIG. From the above results, among the components of black ginger, the component involved in the regulation of expression of Per2 gene is 3,5,7,3 ′, 4′-pentamethoxyflavone, 5,7,4′-trimethoxyflavone, It was confirmed to be 5,7-dimethoxyflavone, 3,5,7-trimethoxyflavone and 3,5,7,4'-tetramethoxyflavone. It was confirmed that 5,7-dimethoxyflavone and 5,7,4'-trimethoxyflavone are involved in the regulation of Bmal1 gene expression. From these facts, it has been suggested that the black ginger polymethoxyflavone has the potential to adjust the circadian clock and improve the disturbed circadian rhythm.
なお、NIH−3T3細胞にレポータープラスミドとしてpSLG(PEST)−Per2(−376/+48)を導入し、ルミノメーターとしてKronos AB−2500(ATTO)を用いてリアルタイム・レポーター遺伝子アッセイを実施した結果を図9に示す。その結果、3,5,7,3’,4’−ペンタメトキシフラボン、5,7,4’−トリメトキシフラボン及び5,7−ジメトキシフラボンによって、Per2遺伝子の発現が、投与後12時間をピークに促進されることが確認された。 In addition, pSLG (PEST) -Per2 (-376 / + 48) was introduced into NIH-3T3 cells as a reporter plasmid, and the results of real-time reporter gene assay performed using Kronos AB-2500 (ATTO) as a luminometer are shown in FIG. 9 shows. As a result, expression of Per2 gene peaked 12 hours after administration by 3,5,7,3 ', 4'-pentamethoxyflavone, 5,7,4'-trimethoxyflavone and 5,7-dimethoxyflavone Was confirmed to be promoted.
本発明の組成物は、非経口的及び経口的のいずれの態様においても適用可能な黒生姜を含有するものであり、睡眠異常や時差ボケなどの体内時計系の異常に伴う症状に苦しむ被験体にとって有用なものであり、このような被験体の健康及び福祉に資するものである。 The composition of the present invention contains black ginger which is applicable in any of parenteral and oral aspects, and a subject who suffers from symptoms associated with abnormalities in the internal clock system such as sleep abnormality and jet lag. And contribute to the health and well-being of such subjects.
Claims (2)
A composition for improving sleep, comprising black ginger.
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