JP2018538331A - Polymorphic crystal form of obeticholic acid - Google Patents

Polymorphic crystal form of obeticholic acid Download PDF

Info

Publication number
JP2018538331A
JP2018538331A JP2018532396A JP2018532396A JP2018538331A JP 2018538331 A JP2018538331 A JP 2018538331A JP 2018532396 A JP2018532396 A JP 2018532396A JP 2018532396 A JP2018532396 A JP 2018532396A JP 2018538331 A JP2018538331 A JP 2018538331A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
acid
obeticholic acid
crystalline
degrees
cholan
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2018532396A
Other languages
Japanese (ja)
Other versions
JP2018538331A5 (en
Inventor
アンドレ シュタイナー，
アンドレ シュタイナー，
ポールセン， ハイディ ヴェネルルント
ポールセン， ハイディ ヴェネルルント
エミリー ジョリボア，
エミリー ジョリボア，
メリッサ リーウォーリンスキ，
メリッサ リーウォーリンスキ，
ラルフ グロス，
ラルフ グロス，
エマ シャープ，
エマ シャープ，
フィオナ ドバス−フィッシャー，
フィオナ ドバス−フィッシャー，
アレックス エーベルリーン，
アレックス エーベルリーン，
Original Assignee
インターセプト ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド
インターセプト ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=55650649&utm_source=***_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=JP2018538331(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from US14/979,005 external-priority patent/US9982008B2/en
Application filed by インターセプト ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド, インターセプト ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド filed Critical インターセプト ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド
Publication of JP2018538331A publication Critical patent/JP2018538331A/en
Publication of JP2018538331A5 publication Critical patent/JP2018538331A5/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J9/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of more than two carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, coprostane
    • C07J9/005—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of more than two carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, coprostane containing a carboxylic function directly attached or attached by a chain containing only carbon atoms to the cyclopenta[a]hydrophenanthrene skeleton
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J17/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, having an oxygen-containing hetero ring not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/13—Crystalline forms, e.g. polymorphs
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J51/00—Normal steroids with unmodified cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton not provided for in groups C07J1/00 - C07J43/00

Abstract

【化１】

本願は、オベチコール酸の結晶形態Ａ、Ｄ、Ｆ、ＧおよびＩに関する。これらの結晶形態は、ＦＸＲ媒介疾患もしくは症状、心血管系疾患または胆汁うっ滞性肝疾患の治療もしく予防に、また、ＨＤＬコレステロールの低下、哺乳動物におけるトリグリセリドの低減、または繊維症の抑制に有用な薬物である、オベチコール酸の製造に（特に、その精製に）有用である。
[Chemical 1]

The present application relates to crystalline forms A, D, F, G and I of obeticholic acid. These crystalline forms are useful for the treatment or prevention of FXR-mediated diseases or symptoms, cardiovascular disease or cholestatic liver disease, and for reducing HDL cholesterol, reducing triglycerides in mammals, or suppressing fibrosis. It is useful for the manufacture of a useful drug, obeticholic acid (particularly for its purification)

Description

本発明は、オベチコール酸、ＦＸＲのアゴニスト、オベチコール酸の調製方法、オベチコール酸を含む医薬製剤、およびその治療的使用に関する。
The present invention relates to obeticholic acid, an agonist of FXR, a method for preparing obeticholic acid, a pharmaceutical preparation containing obeticholic acid, and therapeutic use thereof.

本発明は、合成中間体として結晶性オベチコール酸を用いてオベチコール酸を調製する方法に関する。結晶性オベチコール酸は、形態Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｆ、ＧおよびＩからなる群から選択される。本発明は、さらに、結晶性オベチコール酸を選択的に調製する方法に関する。   The present invention relates to a method for preparing obeticholic acid using crystalline obeticholic acid as a synthetic intermediate. The crystalline oveticholic acid is selected from the group consisting of Forms A, C, D, F, G and I. The present invention further relates to a method for selectively preparing crystalline obeticholic acid.

本発明は、２θが約５．０度および約５．３度に特徴的なピークを含むＸ線回折パターンによって特徴付けられる結晶性オベチコール酸形態Ａに関する。結晶性オベチコール酸形態Ａは、図４１に示したものと実質的に類似したＸ線回折パターンによって特徴付けられる。   The present invention relates to crystalline obeticholic acid form A characterized by an X-ray diffraction pattern with 2θ containing peaks characteristic at about 5.0 degrees and about 5.3 degrees. Crystalline obeticholic acid form A is characterized by an X-ray diffraction pattern substantially similar to that shown in FIG.

本発明は、２θが約４．２度、約６．４度、約９．５度、約１２．５度および約１６．７度に特徴的なピークを含むＸ線回折パターンによって特徴付けられる結晶性オベチコール酸形態Ｃに関する。結晶性オベチコール酸形態Ｃは、図５に示したものと実質的に類似したＸ線回折パターンによって特徴付けられ、さらに、約９８±２℃に吸熱値を有する示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムによって特徴付けられる。   The present invention is characterized by an X-ray diffraction pattern comprising peaks characteristic of 2θ of about 4.2 degrees, about 6.4 degrees, about 9.5 degrees, about 12.5 degrees, and about 16.7 degrees. Relates to crystalline Obeticholic Acid Form C. Crystalline Obeticholic Acid Form C is characterized by an X-ray diffraction pattern substantially similar to that shown in FIG. 5 and further has a differential scanning calorimetry (DSC) thermogram having an endothermic value of about 98 ± 2 ° C. Is characterized by

本発明は、２θが約４．４度、約５．２度、および約７．５度に特徴的なピークを含むＸ線回折パターンによって特徴付けられる結晶性オベチコール酸形態Ｄに関する。結晶性オベチコール酸形態Ｄは、図４５に示したものと実質的に類似したＸ線回折パターンによって特徴付けられる。   The present invention relates to crystalline obeticholic acid Form D characterized by an X-ray diffraction pattern comprising peaks characteristic of 2θ of about 4.4 degrees, about 5.2 degrees, and about 7.5 degrees. Crystalline obeticholic acid form D is characterized by an X-ray diffraction pattern substantially similar to that shown in FIG.

本発明は、２θが約８．０度、約１３．２度および約１３．８度に特徴的なピークを含むＸ線回折パターンによって特徴付けられる結晶性オベチコール酸形態Ｆに関する。結晶性オベチコール酸形態Ｆは、図４９に示したものと実質的に類似したＸ線回折パターンによって特徴付けられる。   The present invention relates to crystalline obeticholic acid Form F characterized by an X-ray diffraction pattern comprising peaks characteristic of 2θ at about 8.0 degrees, about 13.2 degrees and about 13.8 degrees. Crystalline obeticholic acid form F is characterized by an X-ray diffraction pattern substantially similar to that shown in FIG.

本発明は、２θが約１２．９度および約１３．４度に特徴的なピークを含むＸ線回折パターンによって特徴付けられる結晶性オベチコール酸形態Ｇに関する。結晶性オベチコール酸形態Ｇは、図５３に示したものと実質的に類似したＸ線回折パターンによって特徴付けられる。   The present invention relates to crystalline oveticolic acid Form G characterized by an X-ray diffraction pattern that includes peaks characteristic of 2θ at about 12.9 degrees and about 13.4 degrees. Crystalline obeticholic acid form G is characterized by an X-ray diffraction pattern substantially similar to that shown in FIG.

本発明は、２θが約７．２度に特徴的なピークを含むＸ線回折パターンによって特徴付けられる結晶性オベチコール酸形態Ｉに関する。結晶性オベチコール酸形態Ｉは、図５７に示したものと実質的に類似したＸ線回折パターンによって特徴付けられる。   The present invention relates to crystalline obeticholic acid Form I characterized by an X-ray diffraction pattern with 2θ containing a characteristic peak at about 7.2 degrees. Crystalline obeticholic acid form I is characterized by an X-ray diffraction pattern substantially similar to that shown in FIG.

本発明は、結晶性オベチコール酸をオベチコール酸形態１に変換する工程を含む、オベチコール酸形態１を調製する方法に関する。   The present invention relates to a method of preparing obeticholic acid form 1 comprising the step of converting crystalline oveticholic acid to obeticholic acid form 1.

本発明は、３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸をＮａＢＨ４と反応させて結晶性オベチコール酸を形成する工程と、結晶性オベチコール酸をオベチコール酸形態１に変換する工程とを含むオベチコール酸形態１の調製方法に関する。 The present invention relates to a process of reacting 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β-cholan-24-acid with NaBH 4 to form crystalline oveticholic acid, and converting crystalline oveticholic acid to oveticholic acid form 1. A process for the preparation of obeticholic acid form 1 comprising the step of converting.

本発明は、Ｅ−またはＥ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸をＰｄ／Ｃおよび水素ガスと反応させて３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸を形成する工程と；３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸をＮａＢＨ４と反応させて結晶性オベチコール酸を形成する工程と；結晶性オベチコール酸をオベチコール酸形態１に変換する工程とを含むオベチコール酸形態１の調製方法に関する。 The present invention relates to 3α-hydroxy-6α-ethyl-7 by reacting E- or E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid with Pd / C and hydrogen gas. Forming keto-5β-cholan-24-acid; reacting 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β-cholan-24-acid with NaBH 4 to form crystalline oveticholic acid And a method of preparing obeticholic acid form 1 comprising converting crystalline oveticholic acid to obeticholic acid form 1.

本発明は、Ｅ−またはＥ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステルをＮａＯＨと反応させてＥ−またはＥ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸を形成する工程と；Ｅ−またはＥ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸をＰｄ／Ｃおよび水素ガスと反応させて３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸を形成する工程と；３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸をＮａＢＨ４と反応させて結晶性オベチコール酸を形成する工程と；結晶性オベチコール酸をオベチコール酸形態１に変換する工程とを含むオベチコール酸形態１の調製方法に関する。 The present invention relates to the reaction of E- or E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester with NaOH to produce E- or E / Z-3α-hydroxy-6. Forming ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid; E- or E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid with Pd / C And reacting with hydrogen gas to form 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β-cholan-24-acid; 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β-chorane-24- The present invention relates to a method of preparing obeticholic acid form 1 comprising reacting an acid with NaBH 4 to form crystalline oveticholic acid; and converting crystalline oveticholic acid to obeticholic acid form 1.

本発明は、３α，７−ジトリメチルシリルオキシ−５β−コル−６−エン−２４−酸メチルエステルをＣＨ３ＣＨＯと反応させてＥ−またはＥ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステルを形成する工程と；Ｅ−またはＥ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステルをＮａＯＨと反応させてＥ−またはＥ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸を形成する工程と；Ｅ−またはＥ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸をＰｄ／Ｃおよび水素ガスと反応させて３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸を形成する工程と；３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸をＮａＢＨ４と反応させて結晶性オベチコール酸を形成する工程と；結晶性オベチコール酸をオベチコール酸形態１に変換する工程とを含むオベチコール酸形態１の調製方法に関する。 In the present invention, 3α, 7-ditrimethylsilyloxy-5β-col-6-ene-24-acid methyl ester is reacted with CH 3 CHO to produce E- or E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-. Forming keto-5β-cholan-24-acid methyl ester; reacting E- or E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester with NaOH; Forming E- or E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid; and E- or E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7- Reacting keto-5β-cholan-24-acid with Pd / C and hydrogen gas to form 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β-cholan-24-acid; 3α-hydroxy-; obeticholic acid and a step of converting the crystalline obeticholic acid to obeticholic acid form 1; forming a α- ethyl-7-keto -5β--24 acid crystalline obeticholic acid is reacted with NaBH 4 The present invention relates to a preparation method of Form 1.

本発明は、３α−ヒドロキシ−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステルをＬｉ［Ｎ（ＣＨ（ＣＨ３）２）２］およびＳｉ（ＣＨ３）３Ｃｌと反応させて３α，７−ジトリメチルシリルオキシ−５β−コル−６−エン−２４−酸メチルエステルを形成する工程と；３α，７−ジトリメチルシリルオキシ−５β−コル−６−エン−２４−酸メチルエステルをＣＨ３ＣＨＯと反応させてＥ−またはＥ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステルを形成する工程と；Ｅ−またはＥ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステルをＮａＯＨと反応させてＥ−またはＥ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸を形成する工程と；Ｅ−またはＥ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸をＰｄ／Ｃおよび水素ガスと反応させて３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸を形成する工程と；３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸をＮａＢＨ４と反応させて結晶性オベチコール酸を形成する工程と；結晶性オベチコール酸をオベチコール酸形態１に変換する工程とを含むオベチコール酸形態１の調製方法に関する。 The present invention reacts 3α-hydroxy-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester with Li [N (CH (CH 3 ) 2 ) 2 ] and Si (CH 3 ) 3 Cl to produce 3α, 7 Forming dimethyltrimethylsilyloxy-5β-col-6-ene-24-acid methyl ester; 3α, 7-ditrimethylsilyloxy-5β-col-6-ene-24-acid methyl ester with CH 3 CHO; Reacting to form E- or E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester; E- or E / Z-3α-hydroxy-6- Ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester is reacted with NaOH to give E- or E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-chorane-24 Forming an acid; reacting E- or E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid with Pd / C and hydrogen gas to produce 3α-hydroxy-6α- Forming ethyl-7-keto-5β-cholan-24-acid; reacting 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β-cholan-24-acid with NaBH 4 to form crystalline oveticholic acid And a method of preparing obeticholic acid form 1 comprising the steps of: converting crystalline oveticholic acid to obeticholic acid form 1.

本発明は、３α−ヒドロキシ−７−ケト−５β−コラン−２４−酸をＣＨ３ＯＨおよびＨ２ＳＯ４と反応させて３α−ヒドロキシ−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステルを形成する工程と；３α−ヒドロキシ−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステルをＬｉ［Ｎ（ＣＨ（ＣＨ３）２）２］およびＳｉ（ＣＨ３）３Ｃｌと反応させて３α，７−ジトリメチルシリルオキシ−５β−コル−６−エン−２４−酸メチルエステルを形成する工程と；３α，７−ジトリメチルシリルオキシ−５β−コル−６−エン−２４−酸メチルエステルをＣＨ３ＣＨＯと反応させてＥ−またはＥ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステルを形成する工程と；Ｅ−またはＥ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステルをＮａＯＨと反応させてＥ−またはＥ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸を形成する工程と；Ｅ−またはＥ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸をＰｄ／Ｃおよび水素ガスと反応させて３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸を形成する工程と；３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸とＮａＢＨ４と反応させて結晶性オベチコール酸を形成する工程と；結晶性オベチコール酸をオベチコール酸形態１に変換する工程とを含むオベチコール酸形態１の調製方法に関する。 The present invention involves reacting 3α-hydroxy-7-keto-5β-cholan-24-acid with CH 3 OH and H 2 SO 4 to produce 3α-hydroxy-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester. Reacting 3α-hydroxy-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester with Li [N (CH (CH 3 ) 2 ) 2 ] and Si (CH 3 ) 3 Cl to produce 3α, Forming 7-ditrimethylsilyloxy-5β-col-6-ene-24-acid methyl ester; 3α, 7-ditrimethylsilyloxy-5β-col-6-ene-24-acid methyl ester with CH 3 CHO Reacting to form E- or E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester; E- or E / Z-3α-H Droxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester is reacted with NaOH to give E- or E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-chorane-24- Forming an acid; reacting E- or E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid with Pd / C and hydrogen gas to produce 3α-hydroxy-6α- Forming ethyl-7-keto-5β-cholan-24-acid; reacting 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β-cholan-24-acid with NaBH 4 to form crystalline oveticholic acid And a method of preparing obeticholic acid form 1 comprising the steps of: converting crystalline oveticholic acid to obeticholic acid form 1.

本発明は、オベチコール酸形態１の調製方法であって、結晶性オベチコール酸形態Ａのオベチコール酸形態１への変換は、結晶性オベチコール酸形態ＡをＮａＯＨ水溶液に溶解しＨＣｌを添加する工程を含む方法に関する。   The present invention is a method for preparing obeticholic acid form 1, wherein the conversion of crystalline oveticholic acid form A to oveticholic acid form 1 comprises the steps of dissolving crystalline oveticholic acid form A in aqueous NaOH and adding HCl. Regarding the method.

本発明は、オベチコール酸形態１の調製方法であって、結晶性オベチコール酸形態Ｃのオベチコール酸形態１への変換は結晶性オベチコール酸形態ＣをＮａＯＨ水溶液に溶解しＨＣｌを添加する工程を含む方法に関する。   The present invention is a method for preparing obeticholic acid form 1, wherein the conversion of crystalline oveticholic acid form C to oveticholic acid form 1 comprises dissolving crystalline oveticholic acid form C in aqueous NaOH and adding HCl About.

本発明は、オベチコール酸形態１の調製方法であって、結晶性オベチコール酸形態Ｄのオベチコール酸形態１への変換は、結晶性オベチコール酸形態ＤをＮａＯＨ水溶液に溶解しＨＣｌを添加する工程を含む方法に関する。   The present invention is a method for the preparation of obeticholic acid form 1, wherein the conversion of crystalline oveticholic acid form D to oveticholic acid form 1 comprises dissolving crystalline oveticholic acid form D in aqueous NaOH and adding HCl. Regarding the method.

本発明は、オベチコール酸形態１の調製方法であって、結晶性オベチコール酸形態Ｆのオベチコール酸形態１への変換は、結晶性オベチコール酸形態ＦをＮａＯＨ水溶液に溶解しＨＣｌを添加する工程を含む方法に関する。   The present invention is a method for preparing obeticholic acid form 1, wherein the conversion of crystalline oveticholic acid form F to oveticholic acid form 1 comprises the steps of dissolving crystalline obeticholic acid form F in aqueous NaOH and adding HCl. Regarding the method.

本発明は、オベチコール酸形態１の調製方法であって、結晶性オベチコール酸形態Ｇのオベチコール酸形態１への変換は、結晶性オベチコール酸形態ＧをＮａＯＨ水溶液に溶解しＨＣｌを添加する工程を含む方法に関する。   The present invention is a method for preparing obeticholic acid form 1, wherein the conversion of crystalline oveticholic acid form G to oveticholic acid form 1 comprises the steps of dissolving crystalline oveticholic acid form G in aqueous NaOH and adding HCl. Regarding the method.

本発明は、オベチコール酸形態１の調製方法であって、結晶性オベチコール酸形態Ｉのオベチコール酸形態１への変換は、結晶性オベチコール酸形態ＩをＮａＯＨ水溶液に溶解しＨＣｌを添加する工程を含む方法に関する。   The present invention is a method for preparing obeticholic acid form 1, wherein the conversion of crystalline oveticholic acid form I to oveticholic acid form 1 comprises dissolving crystalline oveticholic acid form I in aqueous NaOH and adding HCl. Regarding the method.

本発明は、オベチコール酸形態１の調製方法であって、３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸をＮａＢＨ４を反応させて結晶性オベチコール酸を形成する工程は、塩基性水溶液中、約８５℃〜約１１０℃で行われる方法に関する。 The present invention is a method for preparing obeticholic acid form 1, wherein the step of reacting 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β-cholan-24 acid with NaBH 4 to form crystalline oveticholic acid Relates to a process carried out in a basic aqueous solution at about 85 ° C. to about 110 ° C.

本発明は、オベチコール酸形態１の調製方法であって、Ｅ−またはＥ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸をＰｄ／Ｃおよび水素ガスと反応させて３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸を形成する工程は、約２０℃〜約１０５℃の温度、および約０．５ｂａｒ〜約５ｂａｒの圧力で行われる方法に関する。別の実施形態において、水素化は、約２０℃〜約１０５℃の温度範囲、例えば、３０℃、４０℃、５０℃、６０℃、７０℃、８０℃、９０℃および１００℃、ならびにその間の任意の温度で行われる。他の実施形態において、水素化は、約０．５ｂａｒ〜約５．５ｂａｒの圧力、例えば、０．６ｂａｒ、０．７ｂａｒ、０．８ｂａｒ、０．９ｂａｒ、１．０ｂａｒ、１．２ｂａｒ、１．４ｂａｒ、１．６ｂａｒ、１．８ｂａｒ、２．０ｂａｒ、２．２ｂａｒ、２．４ｂａｒ、２．６ｂａｒ、２．８ｂａｒ、３．０ｂａｒ、３．２ｂａｒ、３．４ｂａｒ、３．６ｂａｒ、３．８ｂａｒ、４．０ｂａｒ、４．２ｂａｒ、４．４ｂａｒ、５．０ｂａｒ、５．２ｂａｒ、５．３ｂａｒおよび５．４ｂａｒ、ならびにその間の任意の圧力で行われる。本発明は、オベチコール酸形態１の調製方法であって、Ｅ−またはＥ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステルをＮａＯＨと反応させてＥ−またはＥ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸を形成する工程は、約２０℃〜約６０℃の温度で行われる方法に関する。   The present invention is a process for the preparation of obeticholic acid form 1, which comprises reacting E- or E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid with Pd / C and hydrogen gas Forming 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β-cholan-24-acid at a temperature of about 20 ° C. to about 105 ° C. and a pressure of about 0.5 bar to about 5 bar. Regarding the method. In another embodiment, the hydrogenation is in a temperature range of about 20 ° C. to about 105 ° C., such as 30 ° C., 40 ° C., 50 ° C., 60 ° C., 70 ° C., 80 ° C., 90 ° C. and 100 ° C. Performed at any temperature. In other embodiments, the hydrogenation is performed at a pressure of about 0.5 bar to about 5.5 bar, eg, 0.6 bar, 0.7 bar, 0.8 bar, 0.9 bar, 1.0 bar, 1.2 bar, 1. 4 bar, 1.6 bar, 1.8 bar, 2.0 bar, 2.2 bar, 2.4 bar, 2.6 bar, 2.8 bar, 3.0 bar, 3.2 bar, 3.4 bar, 3.6 bar, 3.8 bar, It is carried out at 4.0 bar, 4.2 bar, 4.4 bar, 5.0 bar, 5.2 bar, 5.3 bar and 5.4 bar and any pressure in between. The present invention is a process for the preparation of obeticholic acid form 1, which comprises reacting E- or E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester with NaOH The step of forming-or E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid relates to a process performed at a temperature of about 20 ° C to about 60 ° C.

本発明は、オベチコール酸形態１の調製方法であって、３α，７−ジトリメチルシリルオキシ−５β−コル−６−エン−２４−酸メチルエステルをＣＨ３ＣＨＯと反応させてＥ−またはＥ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステルを形成する工程は、極性非プロトン性溶媒中、ＢＦ３の存在下に、約−５０℃〜約−７０℃の温度で行われる方法に関する。一実施形態において、反応は、ＢＦ３の存在下に、−６０℃未満〜約−７０℃の温度範囲で行われる。一実施形態において、反応は、ＢＦ３の存在下、約−６０℃の上限温度で行われる。 The present invention is a process for the preparation of obeticholic acid form 1 comprising reacting 3α, 7-ditrimethylsilyloxy-5β-col-6-ene-24-acid methyl ester with CH 3 CHO to produce E- or E / Z The step of forming -3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester in a polar aprotic solvent in the presence of BF 3 at about −50 ° C. to about −70 Relates to a process carried out at a temperature of ° C. In one embodiment, the reaction is performed in the presence of BF 3 at a temperature range of less than −60 ° C. to about −70 ° C. In one embodiment, the reaction is performed at a maximum temperature of about −60 ° C. in the presence of BF 3 .

本発明は、オベチコール酸形態１の調製方法であって、３α−ヒドロキシ−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステルをＬｉ［Ｎ（ＣＨ（ＣＨ３）２）２］およびＳｉ（ＣＨ３）３Ｃｌと反応させて３α，７−ジトリメチルシリルオキシ−５β−コル−６−エン−２４−酸メチルエステルを形成する工程は、極性非プロトン性溶媒中、約−１０℃〜約−３０℃で行われる方法に関する。 The present invention is a process for the preparation of obeticholic acid form 1, wherein 3α-hydroxy-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester is converted to Li [N (CH (CH 3 ) 2 ) 2 ] and Si (CH 3 ) The step of reacting with 3 Cl to form 3α, 7-ditrimethylsilyloxy-5β-col-6-ene-24-acid methyl ester is carried out in a polar aprotic solvent at about −10 ° C. to about −30. Relates to the process carried out at ° C.

本発明は、オベチコール酸形態１に調製方法であって、３α−ヒドロキシ−７−ケト−５β−コラン−２４−酸をＣＨ３ＯＨおよびＨ２ＳＯ４と反応させて３α−ヒドロキシ−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステルを形成する工程は、３時間の加熱が行われ、反応混合物のｐＨが塩基性水溶液で約９．５〜約１０のｐＨ範囲に調節される方法に関する。 The present invention is a process for preparing obeticholic acid form 1 comprising reacting 3α-hydroxy-7-keto-5β-cholan-24-acid with CH 3 OH and H 2 SO 4 to produce 3α-hydroxy-7-keto. The step of forming -5β-cholan-24-acid methyl ester relates to a process in which heating for 3 hours is performed and the pH of the reaction mixture is adjusted to a pH range of about 9.5 to about 10 with a basic aqueous solution.

本発明は、オベチコール酸、または、約９８％超、約９８．５％超、約９９．０％超または約９９．５％超の効力を有する、薬学的に許容されるその塩、溶媒和物またはアミノ酸抱合体に関する。本発明は、本発明の方法により製造されたオベチコール酸形態１、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物に関する。   The present invention relates to obeticholic acid, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate thereof having a potency of greater than about 98%, greater than about 98.5%, greater than about 99.0% or greater than about 99.5%. Product or amino acid conjugates. The present invention relates to a pharmaceutical composition comprising obeticholic acid form 1 produced by the method of the present invention and a pharmaceutically acceptable carrier.

本発明は、有効量のオベチコール酸形態１を投与することを含む、患者のＦＸＲ介在性疾患または病態を治療または予防する方法に関する。疾患または病態は、胆道閉鎖、胆汁うっ滞性肝疾患、慢性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、Ｃ型肝炎感染、アルコール性肝疾患、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、進行性の線維症による肝損傷、肝線維症、ならびにアテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、高コレステロール血症および高脂血症を含む心血管系疾患から選択される。本発明は、有効量のオベチコール酸形態１を投与することを含む、患者のトリグリセリドを減少させる方法に関する。   The present invention relates to a method of treating or preventing a FXR-mediated disease or condition in a patient comprising administering an effective amount of obeticholic acid form 1. Diseases or conditions include biliary atresia, cholestatic liver disease, chronic liver disease, nonalcoholic steatohepatitis (NASH), hepatitis C infection, alcoholic liver disease, primary biliary cirrhosis (PBC), progressive Selected from fibrosis of the liver, liver fibrosis, and cardiovascular diseases including atherosclerosis, arteriosclerosis, hypercholesterolemia and hyperlipidemia. The present invention relates to a method for reducing triglycerides in a patient comprising administering an effective amount of obeticholic acid form 1.

図１は、１ｍｇ／ｍＬで注入した（注入体積３μｌ）、実施例１の工程４の粗化合物５のＨＰＬＣ−ＵＶ／ＭＳクロマトグラムである。クロマトグラムは実施例２に記載の方法により得る。FIG. 1 is an HPLC-UV / MS chromatogram of crude compound 5 from Step 4 of Example 1 injected at 1 mg / mL (injection volume 3 μl). The chromatogram is obtained by the method described in Example 2. 図２は、１ｍｇ／ｍＬで注入した（注入量２０μＬ）、実施例１の工程４の化合物５、精製リファレンスのＨＰＬＣ−ＵＶ／ＭＳクロマトグラムである。クロマトグラムは実施例２に記載の方法により得る。FIG. 2 is a HPLC-UV / MS chromatogram of Compound 5, purification reference, Step 4 of Example 1, injected at 1 mg / mL (injection volume 20 μL). The chromatogram is obtained by the method described in Example 2. 図３は、ＨＰＬＣ法による、実施例１の工程４の粗化合物５のＵＶクロマトグラムである。クロマトグラムは実施例２に記載の方法により得る。FIG. 3 is a UV chromatogram of the crude compound 5 of Step 4 of Example 1 by HPLC method. The chromatogram is obtained by the method described in Example 2. 図４Ａは、ＨＰＬＣ法で完全単離した、実施例１の工程４の化合物５のメインピークフラクション（ＲＴ ２９．０分）からのｍ／ｚ８５０．６１９１４±３ｐｐｍの正確なイオントレースである（実施例２を参照）。FIG. 4A is an accurate ion trace of m / z 850.61914 ± 3 ppm from the main peak fraction (RT 29.0 min) of compound 5 of step 4 of Example 1, completely isolated by HPLC method. (See Example 2). 図４Ｂは、ＨＰＬＣ法で完全単離した、実施例１の工程４の化合物５のマイナーピークフラクション（ＲＴ ２９．９分）からのｍ／ｚ８５０．６１９１４±３ｐｐｍの正確なイオントレースである（実施例２を参照）。FIG. 4B is an accurate ion trace of m / z 850.61914 ± 3 ppm from the minor peak fraction (RT 29.9 min) of compound 5 of step 4 of Example 1, completely isolated by HPLC method. (See Example 2). 図４Ｃは、実施例１の工程４の粗化合物５からのｍ／ｚ８５０．６１９１４±３ｐｐｍの正確なイオントレースである（実施例２を参照）。FIG. 4C is an accurate ion trace of m / z 850.61914 ± 3 ppm from crude compound 5 from Step 4 of Example 1 (see Example 2). 図４Ｄは、実施例１の工程４の化合物５、精製リファレンスからのｍ／ｚ８５０．６１９１４±３ｐｐｍの正確なイオントレースである（実施例２を参照）。FIG. 4D is an accurate ion trace of m / z 850.61914 ± 3 ppm from Step 5 of Example 1, Compound 5, purified reference (see Example 2). 図５は、結晶性オベチコール酸形態ＣのＸＲＰＤディフラクトグラムである（実施例３を参照）。FIG. 5 is an XRPD diffractogram of crystalline obeticholic acid form C (see Example 3). 図６は、結晶性オベチコール酸形態ＣのＴＧＡおよびＤＳＣのサーモグラムを示す。（実施例３を参照）。FIG. 6 shows TGA and DSC thermograms of crystalline obeticholic acid form C. (See Example 3). 図７は、２５℃、１１０℃および１２０℃での結晶性オベチコール酸のＶＴ−ＸＲＰＤディフラクトグラムを示す（実施例３を参照）。FIG. 7 shows VT-XRPD diffractograms of crystalline obeticholic acid at 25 ° C., 110 ° C. and 120 ° C. (see Example 3). 図８Ａは、結晶性オベチコール酸形態ＣのＧＶＳ等温プロットである（実施例３を参照）。FIG. 8A is a GVS isotherm plot of crystalline obeticholic acid form C (see Example 3). 図８Ｂは、結晶性オベチコール酸形態ＣのＧＶＳ動的プロット（ｋｉｎｅｔｉｃ ｐｌｏｔ）である（実施例３を参照）。FIG. 8B is a GVS kinetic plot of crystalline obeticholic acid form C (see Example 3). 図８Ｃは、ＧＶＳ解析前および後の結晶性オベチコール酸形態ＣのＸＲＰＤディフラクトグラムを示す（実施例３を参照）。FIG. 8C shows an XRPD diffractogram of crystalline obeticholic acid form C before and after GVS analysis (see Example 3). 図９は、４０℃／７５％ＲＨで貯蔵する前および後の結晶性オベチコール酸形態ＣのＸＲＰＤディフラクトグラムを示す（実施例３を参照）。FIG. 9 shows XRPD diffractograms of crystalline obeticholic acid form C before and after storage at 40 ° C./75% RH (see Example 3). 図１０は、オベチコール酸形態１のバッチ１のＸＲＰＤディフラクトグラムである（実施例５を参照）。FIG. 10 is an XRPD diffractogram of batch 1 of obeticholic acid form 1 (see Example 5). 図１１は、オベチコール酸形態１のバッチ１、２、３、４、５および６のＸＲＰＤディフラクトグラフ（ｄｉｆｆｒａｃｔｏｒｇｒａｐｈ）を示す（実施例５を参照）。FIG. 11 shows XRPD diffractograms of batches 1, 2, 3, 4, 5 and 6 of obeticholic acid form 1 (see Example 5). 図１２は、ｄ６−ＤＭＳＯ中でのオベチコール酸形態１のバッチ１のＮＭＲスペクトルである（実施例５を参照）。FIG. 12 is an NMR spectrum of batch 1 of obeticholic acid form 1 in d 6 -DMSO (see Example 5). 図１３は、オベチコール酸形態１のバッチ１、２、３、４、５および６の１Ｈ ＮＭＲスペクトルを示す（実施例５を参照）。FIG. 13 shows the 1 H NMR spectra of obeticholic acid form 1 batches 1, 2, 3, 4, 5 and 6 (see Example 5). 図１４は、オベチコール酸形態１の１３Ｃ ＤＥＰＴＱ ＮＭＲスペクトルの１０〜７５ｐｐｍ領域の拡大図である（実施例５を参照）。FIG. 14 is an enlarged view of the 10 C-75 ppm region of the 13 C DEPTQ NMR spectrum of obeticholic acid form 1 (see Example 5). 図１５は、四級炭素を抑制したオベチコール酸形態１の１３Ｃ ＤＥＰＴ１３５ ＮＭＲスペクトルの０〜７５ｐｐｍ領域の拡大図である（実施例５を参照）。FIG. 15 is an enlarged view of the 0-75 ppm region of the 13 C DEPT135 NMR spectrum of obeticholic acid form 1 with quaternary carbon suppression (see Example 5). 図１６は、オベチコール酸形態１の１３Ｃ定量ＮＭＲである（実施例５を参照）。FIG. 16 is a 13 C quantitative NMR of obeticholic acid form 1 (see Example 5). 図１７は、図１６の３２．３ｐｐｍにおけるピークの拡大図である（実施例５を参照）。FIG. 17 is an enlarged view of the peak at 32.3 ppm in FIG. 16 (see Example 5). 図１８は、オベチコール酸形態１のバッチ１のＦＴ−ＩＲスペクトルである（実施例５を参照）。FIG. 18 is an FT-IR spectrum for batch 1 of obeticholic acid form 1 (see Example 5). 図１９は、オベチコール酸形態１のバッチ１のＴＧＡおよびＤＳＣのサーモグラムを示す（実施例５を参照）。FIG. 19 shows the TGA and DSC thermograms of batch 1 of obeticholic acid form 1 (see Example 5). 図２０は、オベチコール酸形態１のバッチ１の変調ＤＳＣサーモグラムを示す（実施例５を参照）。FIG. 20 shows a modulated DSC thermogram for Obeticholic Acid Form 1 Batch 1 (see Example 5). 図２１は、オベチコール酸形態１のバッチ１、２、３、４、５および６のＴＧＡトレースを示す（実施例５を参照）。FIG. 21 shows TGA traces for batches 1, 2, 3, 4, 5 and 6 of obeticholic acid form 1 (see Example 5). 図２２は、オベチコール酸形態１のバッチ１、２、３、４、５および６のＤＳＣトレースを示す（実施例５を参照）。FIG. 22 shows DSC traces for batches 1, 2, 3, 4, 5 and 6 of obeticholic acid form 1 (see Example 5). 図２３Ａは、オベチコール酸形態１のバッチ１の偏向顕微鏡写真である。図２３Ｂは、オベチコール酸形態１のバッチ２の偏向顕微鏡写真である。図２３Ｃは、オベチコール酸形態１のバッチ３の偏向顕微鏡写真である。図２３Ｄは、オベチコール酸形態１のバッチ４の偏向顕微鏡写真である。図２３Ｅは、オベチコール酸形態１のバッチ５の偏向顕微鏡写真である。図２３Ｆは、オベチコール酸形態１のバッチ６の偏向顕微鏡写真である。FIG. 23A is a deflection micrograph of batch 1 of obeticholic acid form 1. FIG. 23B is a deflection micrograph of batch 2 of obeticholic acid form 1. FIG. 23C is a deflection micrograph of batch 3 of obeticholic acid form 1. FIG. 23D is a deflection micrograph of batch 4 of obeticholic acid form 1. FIG. 23E is a deflection micrograph of batch 5 of obeticholic acid form 1. FIG. 23F is a deflection micrograph of batch 6 of obeticholic acid form 1. 図２４は、オベチコール酸形態１のバッチ１のＧＶＳ等温プロットを示す（実施例５を参照）。FIG. 24 shows a GVS isotherm plot for batch 1 of obeticholic acid form 1 (see Example 5). 図２５は、オベチコール酸形態１のバッチ１のＧＶＳ動態プロットを示す（実施例５を参照）。FIG. 25 shows a GVS kinetic plot of batch 1 of obeticholic acid form 1 (see Example 5). 図２６は、ＧＶＳ前および後のオベチコール酸形態１のバッチ１のＸＲＰＤディフラクトグラムを示す（実施例５を参照）。FIG. 26 shows XRPD diffractograms of batch 1 of obeticholic acid form 1 before and after GVS (see Example 5). 図２７は、オベチコール酸形態１の３種のメタノール／水比におけるｐＫａを測定したグラフである（実施例５を参照）。FIG. 27 is a graph of pKa measured at three methanol / water ratios of obeticholic acid form 1 (see Example 5). 図２８は、オベチコール酸形態１のＹａｓｕｄａ−Ｓｈｅｄｌｏｖｓｋｙプロットである（実施例５を参照）。FIG. 28 is a Yasuda-Shedlovsky plot of obeticholic acid form 1 (see Example 5). 図２９は、オベチコール酸形態１のｐＨに依る種類の分布を示すグラフである（実施例５を参照）。FIG. 29 is a graph showing the type distribution depending on the pH of obeticholic acid form 1 (see Example 5). 図３０は、オベチコール酸形態１の電位差測定により得られた電位差曲線を示すグラフである。（実施例５を参照）。FIG. 30 is a graph showing a potential difference curve obtained by the potential difference measurement of obeticholic acid form 1. (See Example 5). 図３１は、オベチコール酸形態１の脂溶性プロファイルを示す（実施例５を参照）。FIG. 31 shows the fat solubility profile of obeticholic acid form 1 (see Example 5). 図３２は、４０℃／７５％ＲＨで貯蔵後のオベチコール酸形態１のバッチ１のＸＲＰＤディフラクトグラムを示す（実施例５を参照）。FIG. 32 shows the XRPD diffractogram of Obeticholic Acid Form 1 Batch 1 after storage at 40 ° C./75% RH (see Example 5). 図３３は、２５℃／９７％ＲＨで貯蔵後のオベチコール酸形態１のバッチ１のＸＲＰＤディフラクトグラムを示す（実施例５を参照）。FIG. 33 shows the XRPD diffractogram of Obeticholic Acid Form 1 Batch 1 after storage at 25 ° C./97% RH (see Example 5). 図３４は、５０％の確立水準で、オベチコール酸形態Ｇの分子を結晶構造からみた図で、非水素原子を異方性原子転位楕円体で示している（実施例６を参照）。FIG. 34 is a view of the molecule of obeticholic acid form G from the crystal structure at an established level of 50%, showing non-hydrogen atoms in anisotropic dislocation ellipsoids (see Example 6). 図３５は、オベチコール酸形態Ｇの結晶構造の分子間水素結合を示す図で、水素結合は一点鎖線で示している（実施例６を参照）。FIG. 35 is a diagram showing intermolecular hydrogen bonds in the crystal structure of obeticholic acid form G, and the hydrogen bonds are indicated by alternate long and short dash lines (see Example 6). 図３６は、シミュレートした粉末パターン、集めた結晶の実験パターンおよびオベチコール酸形態ＧのＸＲＰＤオーバーレイを示す（実施例６を参照）。FIG. 36 shows a simulated powder pattern, an experimental pattern of collected crystals and an XRPD overlay of obeticholic acid form G (see Example 6). 図３７は、オベチコール酸形態１および結晶形態Ｆを２０ｍｇ／ｋｇ経口投与した後の、時間に対する血漿オベチコール酸プロファイルのグラフを示す（実施例７を参照）。FIG. 37 shows a graph of plasma obeticholic acid profile versus time after oral administration of 20 mg / kg of obeticholic acid form 1 and crystalline form F (see Example 7). 図３８は、投与後の異なる時間間隔におけるオベチコール酸形態１と結晶形態Ｆのタウロ抱合体の血漿中濃度を示すグラフである（実施例７を参照）。FIG. 38 is a graph showing plasma concentrations of obeticholic acid Form 1 and crystalline Form F Tauro conjugate at different time intervals after administration (see Example 7). 図３９は、形態１のＤＳＣ曲線を示す（実施例７を参照）。FIG. 39 shows the DSC curve of Form 1 (see Example 7). 図４０は、形態ＦのＤＳＣ曲線を示す（実施例７を参照）。FIG. 40 shows a DSC curve for Form F (see Example 7). 図４１は、結晶性オベチコール酸形態ＡのＸＲＰＤディフラクトグラムである（実施例３を参照）。FIG. 41 is an XRPD diffractogram of crystalline obeticholic acid form A (see Example 3). 図４２は、結晶性オベチコール酸形態ＡのＴＧＡサーモグラムおよびＤＳＣサーモグラムのオーバーレイである（実施例３を参照）。FIG. 42 is an overlay of crystalline obeticholic acid form A TGA and DSC thermograms (see Example 3). 図４３は、形態ＡによるＧＶＳ実験の等温プロットである（実施例３を参照）。FIG. 43 is an isothermal plot of a GVS experiment according to Form A (see Example 3). 図４４は、形態ＡによるＧＶＳ実験の動態プロットである（実施例３を参照）。FIG. 44 is a kinetic plot of a GVS experiment according to Form A (see Example 3). 図４５は、結晶性オベチコール酸形態ＤのＸＲＰＤディフラクトグラムである（実施例９を参照）。FIG. 45 is an XRPD diffractogram of crystalline obeticholic acid form D (see Example 9). 図４６は、結晶性オベチコール酸形態ＤのＴＧＡサーモグラムおよびＤＳＣサーモグラムのオーバーレイである（実施例９を参照）。FIG. 46 is an overlay of crystalline obeticholic acid form D TGA and DSC thermograms (see Example 9). 図４７は、形態ＤによるＧＶＳ実験の等温プロットである（実施例９を参照）。FIG. 47 is an isothermal plot of a GVS experiment according to Form D (see Example 9). 図４８は、形態ＤによるＧＶＳ実験の動態プロットである（実施例９を参照）。FIG. 48 is a kinetic plot of a GVS experiment according to Form D (see Example 9). 図４９は、結晶性オベチコール酸形態ＦのＸＲＰＤディフラクトグラムである（実施例９を参照）。FIG. 49 is an XRPD diffractogram of crystalline obeticholic acid form F (see Example 9). 図５０は、結晶性オベチコール酸形態ＦのＴＧＡサーモグラムおよびＤＳＣサーモグラムのオーバーレイである（実施例９を参照）。FIG. 50 is an overlay of crystalline obeticholic acid form F TGA and DSC thermograms (see Example 9). 図５１は、形態ＦによるＧＶＳ実験の等温プロットである（実施例９を参照）。FIG. 51 is an isothermal plot of a GVS experiment according to Form F (see Example 9). 図５２は、形態ＦによるＧＶＳ実験の動態プロットである（実施例９を参照）。FIG. 52 is a kinetic plot of a GVS experiment according to Form F (see Example 9). 図５３は、結晶性オベチコール酸形態ＧのＸＲＰＤディフラクトグラムである（実施例９を参照）。FIG. 53 is an XRPD diffractogram of crystalline obeticholic acid form G (see Example 9). 図５４は、結晶性オベチコール酸形態ＧのＴＧＡサーモグラムおよびＤＳＣサーモグラムのオーバーレイである（実施例９を参照）。FIG. 54 is an overlay of the TGA and DSC thermograms of crystalline obeticholic acid form G (see Example 9). 図５５は、形態ＧによるＧＶＳ実験の等温プロットである（実施例９を参照）。FIG. 55 is an isothermal plot of a GVS experiment with Form G (see Example 9). 図５６は、形態ＧによるＧＶＳ実験の動態プロットである（実施例９を参照）。FIG. 56 is a kinetic plot of a GVS experiment with Form G (see Example 9). 図５７は、結晶性オベチコール酸形態ＩのＸＲＰＤディフラクトグラムである（実施例９を参照）。FIG. 57 is an XRPD diffractogram of crystalline obeticholic acid form I (see Example 9). 図５８は、結晶性オベチコール酸形態ＩのＴＧＡサーモグラムおよびＤＳＣサーモグラムのオーバーレイである（実施例９を参照）。FIG. 58 is an overlay of crystalline obeticholic acid form I TGA and DSC thermograms (see Example 9). 図５９は、結晶性オベチコール酸形態ＩによるＧＶＳ実験の等温プロットである（実施例９を参照）。FIG. 59 is an isothermal plot of a GVS experiment with crystalline obeticholic acid form I (see Example 9). 図６０は、結晶性オベチコール酸形態ＩによるＧＶＳ実験の動態プロットである（実施例９を参照）。FIG. 60 is a kinetic plot of a GVS experiment with crystalline obeticholic acid form I (see Example 9).

本願は、オベチコール酸、実質的に純粋なオベチコール酸を含む、化学構造：

を有する薬学的に活性な成分（ＩＮＴ−７４７としても知られる）、合成中間体として結晶性オベチコール酸を含むオベチコール酸の調製方法、およびオベチコール酸の調製方法において、オベチコール酸および合成中間体の存在および純度を確認する分析方法を対象とする。本願はまた、医薬組成物およびオベチコール酸製剤、ならびにそのような組成物の使用を記載する。 The present application includes oveticholic acid, a substantially pure oveticholic acid, chemical structure:

In the preparation of oveticholic acid comprising crystalline oveticholic acid as a synthetic intermediate, and in the preparation of obeticholic acid, the presence of oveticholic acid and synthetic intermediate And analytical methods for confirming purity. The present application also describes pharmaceutical compositions and obeticholic acid formulations, and the use of such compositions.

オベチコール酸の調製方法
本願は、高純度のオベチコール酸を調製する方法を対象とする。本願の方法をスキーム１に示す。本方法は、６工程の合成と、それに続く１精製工程で、高純度のオベチコール酸を生成する。
Method for Preparing Obeticholic Acid The present application is directed to a method for preparing high purity obeticholic acid. The method of the present application is shown in Scheme 1. This method produces high purity obeticholic acid in 6 steps of synthesis followed by 1 purification step.

本発明の方法はまた、化合物４および５がそれぞれ下記の化合物４Ａおよび５Ａの構造で示すＥおよびＺ異性体の混合物からなる、スキーム１に記載の方法を含む。
The method of the present invention also includes the method of Scheme 1 wherein compounds 4 and 5 consist of a mixture of E and Z isomers, respectively, shown in the structures of compounds 4A and 5A below.

一実施形態において、Ｅ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（４Ａ）のＥ／Ｚ異性体比は、約５０％、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約８３％超、約８５％超、約９０％超、約９３％超、約９５％超または約９９％超である。一実施形態において、Ｅ／Ｚ比はＨＰＬＣにより決定される。一実施形態において、比は、約８０％超である。一実施形態において、比は、約８３％超である。一実施形態において、比は、約８５％超である。一実施形態において、比は、約９０％超である。一実施形態において、比は、約９３％超である。一実施形態において、比は、約９５％超である。一実施形態において、比は、約９９％超である。   In one embodiment, the E / Z isomer ratio of E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester (4A) is about 50%, greater than about 60%. Greater than about 70%, greater than about 80%, greater than about 83%, greater than about 85%, greater than about 90%, greater than about 93%, greater than about 95%, or greater than about 99%. In one embodiment, the E / Z ratio is determined by HPLC. In one embodiment, the ratio is greater than about 80%. In one embodiment, the ratio is greater than about 83%. In one embodiment, the ratio is greater than about 85%. In one embodiment, the ratio is greater than about 90%. In one embodiment, the ratio is greater than about 93%. In one embodiment, the ratio is greater than about 95%. In one embodiment, the ratio is greater than about 99%.

一実施形態において、Ｅ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（５Ａ）のＥ／Ｚ異性体比は、約５０％、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約８３％超、約８５％超、約９０％超、約９３％超、約９５％超または約９９％超である。一実施形態において、Ｅ／Ｚ比はＨＰＬＣにより決定される。一実施形態において、比は、約８０％超である。一実施形態において、比は、約８３％超である。一実施形態において、比は、約８５％超である。一実施形態において、比は、約９０％超である。一実施形態において、比は、約９３％超である。一実施形態において、比は、約９５％超である。一実施形態において、比は、約９９％超である。   In one embodiment, the E / Z isomer ratio of E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid (5A) is about 50%, greater than about 60%, about > 70%,> 80%,> 83%,> 85%,> 90%,> 93%,> 95% or> 99%. In one embodiment, the E / Z ratio is determined by HPLC. In one embodiment, the ratio is greater than about 80%. In one embodiment, the ratio is greater than about 83%. In one embodiment, the ratio is greater than about 85%. In one embodiment, the ratio is greater than about 90%. In one embodiment, the ratio is greater than about 93%. In one embodiment, the ratio is greater than about 95%. In one embodiment, the ratio is greater than about 99%.

本願の方法は、当該技術分野でこれまで報告されていない。本方法は、６工程の合成と、それに続く１精製工程である。工程１は、酸触媒の存在下に加熱して、７−ケトリトコール酸（ＫＬＣＡ）のＣ−２４カルボン酸をメタノールでエステル化してメチルエステル化合物１を生成する工程である。工程２は、強塩基の存在下にクロロシランを用いて化合物１からシリルエノールエーテルを形成して化合物３を生成する工程である。工程３は、酸の存在下、シリルエノールエーテル化合物３とアセトアルデヒドの酸を介したアルドール縮合反応により化合物４（または化合物４Ａ）を生成する工程である。工程４は、化合物４（または化合物４Ａ）のＣ−２４メチルエステルのエステル加水分解、すなわち鹸化により、カルボン酸化合物５（または化合物５Ａ）を生成する工程である。工程５は、化合物５（または化合物５Ａ）の６−エチリデン部分に水素を付加し、続いて最初に形成された６−βエチル基を異性化して化合物６を形成する工程である。工程６は、化合物６の７−ケト基を７α−ヒドロキシ基に選択的に還元して結晶性オベチコール酸を生成する工程である。工程７は、結晶性オベチコール酸のオベチコール酸形態１への変換である。   The method of the present application has not been reported so far in the art. This method is a six-step synthesis followed by one purification step. Step 1 is a step in which methyl ester compound 1 is produced by esterifying C-24 carboxylic acid of 7-ketritocholic acid (KLCA) with methanol by heating in the presence of an acid catalyst. Step 2 is a step of forming compound 3 by forming silyl enol ether from compound 1 using chlorosilane in the presence of a strong base. Step 3 is a step in which compound 4 (or compound 4A) is produced by an aldol condensation reaction of silyl enol ether compound 3 and acetaldehyde via an acid in the presence of an acid. Step 4 is a step of producing carboxylic acid compound 5 (or compound 5A) by ester hydrolysis of C-24 methyl ester of compound 4 (or compound 4A), that is, saponification. Step 5 is a step in which hydrogen is added to the 6-ethylidene moiety of compound 5 (or compound 5A), followed by isomerization of the initially formed 6-β ethyl group to form compound 6. Step 6 is a step of selectively reducing the 7-keto group of compound 6 to a 7α-hydroxy group to produce crystalline obeticholic acid. Step 7 is the conversion of crystalline obeticholic acid to obeticholic acid form 1.

本発明の方法は、オベチコール酸形態１の調製方法であって、結晶形態のオベチコール酸を合成中間体として利用する方法に関する。   The method of the present invention relates to a method for the preparation of obeticholic acid form 1, which utilizes a crystalline form of obeticholic acid as a synthetic intermediate.

一実施形態において、本発明は、結晶性オベチコール酸をオベチコール酸形態１に変換する工程を含むオベチコール酸形態１の調製方法に関する。   In one embodiment, the present invention relates to a method of preparing obeticholic acid form 1 comprising converting crystalline oveticholic acid to obeticholic acid form 1.

一実施形態において、本発明は、オベチコール酸形態１の調製方法であって、
３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（６）をＮａＢＨ４と反応させて結晶性オベチコール酸を形成する工程と、
結晶性オベチコール酸をオベチコール酸形態１に変換する工程とを含む方法に関する。 In one embodiment, the present invention is a process for preparing obeticholic acid form 1, comprising
Reacting 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β-cholan-24-acid (6) with NaBH 4 to form crystalline obeticholic acid;
Converting crystalline oveticholic acid to oveticholic acid form 1.

一実施形態において、本発明は、オベチコール酸形態１の調製方法であって、
Ｅ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（５Ａ）をＰｄ／Ｃおよび水素ガスと反応させて３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（６）を形成する工程と、
３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（６）をＮａＢＨ４と反応させて結晶性オベチコール酸を形成する工程と、
結晶性オベチコール酸をオベチコール酸形態１に変換する工程とを含む方法に関する。 In one embodiment, the present invention is a process for preparing obeticholic acid form 1, comprising
E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid (5A) is reacted with Pd / C and hydrogen gas to give 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β -Forming the cholan-24-acid (6);
Reacting 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β-cholan-24-acid (6) with NaBH 4 to form crystalline obeticholic acid;
Converting crystalline oveticholic acid to oveticholic acid form 1.

一実施形態において、本発明は、オベチコール酸形態１の調製方法であって、
Ｅ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（５）をＰｄ／Ｃおよび水素ガスと反応させて３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（６）を形成する工程と、
３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（６）をＮａＢＨ４と反応させて結晶性オベチコール酸を形成する工程と、
結晶性オベチコール酸をオベチコール酸形態１に変換する工程とを含む方法に関する。 In one embodiment, the present invention is a process for preparing obeticholic acid form 1, comprising
E-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid (5) is reacted with Pd / C and hydrogen gas to give 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β-chorane Forming the -24-acid (6);
Reacting 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β-cholan-24-acid (6) with NaBH 4 to form crystalline obeticholic acid;
Converting crystalline oveticholic acid to oveticholic acid form 1.

一実施形態において、本発明は、オベチコール酸形態１の調製方法であって、
Ｅ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（４Ａ）をＮａＯＨと反応させてＥ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（５Ａ）を形成する工程と、
Ｅ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（５Ａ）をＰｄ／Ｃおよび水素ガスと反応させて３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（６）を形成する工程と、
３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（６）をＮａＢＨ４と反応させて結晶性オベチコール酸を形成する工程と、
結晶性オベチコール酸形態１に変換する工程とを含む方法に関する。 In one embodiment, the present invention is a process for preparing obeticholic acid form 1, comprising
E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester (4A) is reacted with NaOH to give E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto- Forming 5β-cholan-24-acid (5A);
E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid (5A) is reacted with Pd / C and hydrogen gas to give 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β -Forming the cholan-24-acid (6);
Reacting 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β-cholan-24-acid (6) with NaBH 4 to form crystalline obeticholic acid;
Converting to crystalline obeticholic acid form 1.

一実施形態において、本発明は、オベチコール酸形態１の調製方法であって、
Ｅ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（４）をＮａＯＨと反応させてＥ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（５）を形成する工程と、
Ｅ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（５）をＰｄ／Ｃおよび水素ガスと反応させて３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（６）を形成する工程と、
３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（６）をＮａＢＨ４と反応させて結晶性オベチコール酸を形成する工程と、
結晶性オベチコール酸をオベチコール酸形態１に変換する工程とを含む方法に関する。 In one embodiment, the present invention is a process for preparing obeticholic acid form 1, comprising
E-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester (4) is reacted with NaOH to give E-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-chorane- Forming a 24-acid (5);
E-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid (5) is reacted with Pd / C and hydrogen gas to give 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β-chorane Forming the -24-acid (6);
Reacting 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β-cholan-24-acid (6) with NaBH 4 to form crystalline obeticholic acid;
Converting crystalline oveticholic acid to oveticholic acid form 1.

一実施形態において、本発明は、オベチコール酸形態１の調製方法であって、
３α，７−ジトリメチルシリルオキシ−５β−コル−６−エン−２４−酸メチルエステル（３）をＣＨ３ＣＨＯと反応させてＥ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（４Ａ）を形成する工程と、
Ｅ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（４Ａ）をＮａＯＨと反応させてＥ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（５Ａ）を形成する工程と、
Ｅ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（５Ａ）をＰｄ／Ｃおよび水素ガスと反応させて３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（６）を形成する工程と、
３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（６）をＮａＢＨ４と反応させて結晶性オベチコール酸を形成する工程と、
結晶性オベチコール酸をオベチコール酸形態１に変換する工程とを含む方法に関する。 In one embodiment, the present invention is a process for preparing obeticholic acid form 1, comprising
3α, 7-ditrimethylsilyloxy-5β-col-6-ene-24-acid methyl ester (3) is reacted with CH 3 CHO to give E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β- Forming cholan-24-acid methyl ester (4A);
E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester (4A) is reacted with NaOH to give E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto- Forming 5β-cholan-24-acid (5A);
E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid (5A) is reacted with Pd / C and hydrogen gas to give 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β -Forming the cholan-24-acid (6);
Reacting 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β-cholan-24-acid (6) with NaBH 4 to form crystalline obeticholic acid;
Converting crystalline oveticholic acid to oveticholic acid form 1.

一実施形態において、本発明は、オベチコール酸形態１の調製方法であって、
３α，７−ジトリメチルシリルオキシ−５β−コル−６−エン−２４−酸メチルエステル（３）をＣＨ３ＣＨＯと反応させてＥ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（４）を形成する工程と、
Ｅ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（４）をＮａＯＨと反応させてＥ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（５）を形成する工程と、
Ｅ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（５）をＰｄ／Ｃおよび水素ガスと反応させて３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（６）を形成する工程と、
３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（６）をＮａＢＨ４と反応させて結晶性オベチコール酸を形成する工程と、
結晶性オベチコール酸をオベチコール酸形態１に変換する工程とを含む方法に関する。 In one embodiment, the present invention is a process for preparing obeticholic acid form 1, comprising
3α, 7-ditrimethylsilyloxy-5β-col-6-ene-24-acid methyl ester (3) is reacted with CH 3 CHO to give E-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-chorane- Forming 24-acid methyl ester (4);
E-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester (4) is reacted with NaOH to give E-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-chorane- Forming a 24-acid (5);
E-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid (5) is reacted with Pd / C and hydrogen gas to give 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β-chorane Forming the -24-acid (6);
Reacting 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β-cholan-24-acid (6) with NaBH 4 to form crystalline obeticholic acid;
Converting crystalline oveticholic acid to oveticholic acid form 1.

一実施形態において、本発明は、オベチコール酸形態１の調製方法であって、
３α−ヒドロキシ−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（１）をＬｉ［Ｎ（ＣＨ（ＣＨ３）２）２］およびＳｉ（ＣＨ３）３Ｃｌと反応させて３α，７−ジトリメチルシリルオキシ−５β−コル−６−エン−２４−酸メチルエステル（３）を形成する工程と、
３α，７−ジトリメチルシリルオキシ−５β−コル−６−エン−２４−酸メチルエステル（３）をＣＨ３ＣＨＯと反応させてＥ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（４Ａ）を形成する工程と、
Ｅ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（４Ａ）をＮａＯＨと反応させてＥ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（５Ａ）を形成する工程と、
Ｅ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（５Ａ）をＰｄ／Ｃおよび水素ガスと反応させて３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（６）を形成する工程と、
３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（６）をＮａＢＨ４と反応させて結晶性オベチコール酸を形成する工程と、
結晶性オベチコール酸をオベチコール酸形態１に変換する工程とを含む方法に関する。 In one embodiment, the present invention is a process for preparing obeticholic acid form 1, comprising
3α-Hydroxy-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester (1) is reacted with Li [N (CH (CH 3 ) 2 ) 2 ] and Si (CH 3 ) 3 Cl to give 3α, 7- Forming ditrimethylsilyloxy-5β-col-6-ene-24-acid methyl ester (3);
3α, 7-ditrimethylsilyloxy-5β-col-6-ene-24-acid methyl ester (3) is reacted with CH 3 CHO to give E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β- Forming cholan-24-acid methyl ester (4A);
E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester (4A) is reacted with NaOH to give E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto- Forming 5β-cholan-24-acid (5A);
E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid (5A) is reacted with Pd / C and hydrogen gas to give 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β -Forming the cholan-24-acid (6);
Reacting 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β-cholan-24-acid (6) with NaBH 4 to form crystalline obeticholic acid;
Converting crystalline oveticholic acid to oveticholic acid form 1.

一実施形態において、本発明は、オベチコール酸形態１の調製方法であって、
３α−ヒドロキシ−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（１）をＬｉ［Ｎ（ＣＨ（ＣＨ３）２）２］およびＳｉ（ＣＨ３）３Ｃｌと反応させて３α，７−ジトリメチルシリルオキシ−５β−コル−６−エン−２４−酸メチルエステル（３）を形成する工程と、
３α，７−ジトリメチルシリルオキシ−５β−コル−６−エン−２４−酸メチルエステル（３）をＣＨ３ＣＨＯと反応させてＥ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（４）を形成する工程と、
Ｅ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（４）をＮａＯＨと反応させてＥ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（５）を形成する工程と、
Ｅ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（５）をＰｄ／Ｃおよび水素ガスと反応させて３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（６）を形成する工程と、
３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（６）をＮａＢＨ４と反応させて結晶性オベチコール酸を形成する工程と、
結晶性オベチコール酸をオベチコール酸形態１に変換する工程とを含む方法に関する。 In one embodiment, the present invention is a process for preparing obeticholic acid form 1, comprising
3α-Hydroxy-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester (1) is reacted with Li [N (CH (CH 3 ) 2 ) 2 ] and Si (CH 3 ) 3 Cl to give 3α, 7- Forming ditrimethylsilyloxy-5β-col-6-ene-24-acid methyl ester (3);
3α, 7-ditrimethylsilyloxy-5β-col-6-ene-24-acid methyl ester (3) is reacted with CH 3 CHO to give E-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-chorane- Forming 24-acid methyl ester (4);
E-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester (4) is reacted with NaOH to give E-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-chorane- Forming a 24-acid (5);
E-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid (5) is reacted with Pd / C and hydrogen gas to give 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β-chorane Forming the -24-acid (6);
Reacting 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β-cholan-24-acid (6) with NaBH 4 to form crystalline obeticholic acid;
Converting crystalline oveticholic acid to oveticholic acid form 1.

一実施形態において、本発明は、オベチコール酸形態１の調製方法であって、
３α−ヒドロキシ−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（ＫＬＣＡ）をＣＨ３ＯＨおよびＨ２ＳＯ４と反応させて３α−ヒドロキシ−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（１）を形成する工程と、
３α−ヒドロキシ−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（１）をＬｉ［Ｎ（ＣＨ（ＣＨ３）２）２］およびＳｉ（ＣＨ３）３Ｃｌと反応させて３α，７−ジトリメチルシリルオキシ−５β−コル−６−エン−２４−酸メチルエステル（３）を形成する工程と、
３α，７−ジトリメチルシリルオキシ−５β−コル−６−エン−２４−酸メチルエステル（３）をＣＨ３ＣＨＯと反応させてＥ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（４Ａ）を形成する工程と、
Ｅ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（４Ａ）をＮａＯＨと反応させてＥ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（５Ａ）を形成する工程と、
Ｅ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（５Ａ）をＰｄ／Ｃおよび水素ガスと反応させて３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（６）を形成する工程と、
３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（６）をＮａＢＨ４と反応させて結晶性オベチコール酸を形成する工程と、
結晶性オベチコール酸をオベチコール酸形態１に変換する工程とを含む方法に関する。 In one embodiment, the present invention is a process for preparing obeticholic acid form 1, comprising
3α-Hydroxy-7-keto-5β-cholan-24-acid (KLCA) is reacted with CH 3 OH and H 2 SO 4 to give 3α-hydroxy-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester (1 )
3α-Hydroxy-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester (1) is reacted with Li [N (CH (CH 3 ) 2 ) 2 ] and Si (CH 3 ) 3 Cl to give 3α, 7- Forming ditrimethylsilyloxy-5β-col-6-ene-24-acid methyl ester (3);
3α, 7-ditrimethylsilyloxy-5β-col-6-ene-24-acid methyl ester (3) is reacted with CH 3 CHO to give E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β- Forming cholan-24-acid methyl ester (4A);
E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester (4A) is reacted with NaOH to give E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto- Forming 5β-cholan-24-acid (5A);
E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid (5A) is reacted with Pd / C and hydrogen gas to give 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β -Forming the cholan-24-acid (6);
Reacting 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β-cholan-24-acid (6) with NaBH 4 to form crystalline obeticholic acid;
Converting crystalline oveticholic acid to oveticholic acid form 1.

一実施形態において、本発明は、オベチコール酸形態１の調製方法であって、
３α−ヒドロキシ−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（ＫＬＣＡ）をＣＨ３ＯＨおよびＨ２ＳＯ４と反応させて３α−ヒドロキシ−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（１）を形成する工程と、
３α−ヒドロキシ−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（１）をＬｉ［Ｎ（ＣＨ（ＣＨ３）２）２］およびＳｉ（ＣＨ３）３Ｃｌと反応させて３α，７−ジトリメチルシリルオキシ−５β−コル−６−エン−２４−酸メチルエステル（３）を形成する工程と、
３α，７−ジトリメチルシリルオキシ−５β−コル−６−エン−２４−酸メチルエステル（３）をＣＨ３ＣＨＯと反応させてＥ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（４）を形成する工程と、
Ｅ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（４）をＮａＯＨと反応させてＥ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（５）を形成する工程と、
Ｅ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（５）をＰｄ／Ｃおよび水素ガスと反応させて３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（６）を形成する工程と、
３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（６）をＮａＢＨ４と反応させて結晶性オベチコール酸を形成する工程と、
結晶性オベチコール酸をオベチコール酸形態１に変換する工程とを含む方法に関する。 In one embodiment, the present invention is a process for preparing obeticholic acid form 1, comprising
3α-Hydroxy-7-keto-5β-cholan-24-acid (KLCA) is reacted with CH 3 OH and H 2 SO 4 to give 3α-hydroxy-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester (1 )
3α-Hydroxy-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester (1) is reacted with Li [N (CH (CH 3 ) 2 ) 2 ] and Si (CH 3 ) 3 Cl to give 3α, 7- Forming ditrimethylsilyloxy-5β-col-6-ene-24-acid methyl ester (3);
3α, 7-ditrimethylsilyloxy-5β-col-6-ene-24-acid methyl ester (3) is reacted with CH 3 CHO to give E-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-chorane- Forming 24-acid methyl ester (4);
E-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester (4) is reacted with NaOH to give E-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-chorane- Forming a 24-acid (5);
E-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid (5) is reacted with Pd / C and hydrogen gas to give 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β-chorane Forming the -24-acid (6);
Reacting 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β-cholan-24-acid (6) with NaBH 4 to form crystalline obeticholic acid;
Converting crystalline oveticholic acid to oveticholic acid form 1.

本発明は、結晶性オベチコール酸を合成中間体として使用してオベチコール酸形態１を調製する方法に関する。一実施形態において、結晶性オベチコール酸は形態Ａである。一実施形態において、結晶性オベチコール酸形態Ａは図４１に示したものと類似したＸ線回折パターンによって特徴付けられる。一実施形態において、結晶性オベチコール酸形態Ａは酢酸ｎ−ブチルから結晶化し、かつ再結晶化する。   The present invention relates to a method of preparing obeticholic acid form 1 using crystalline oveticholic acid as a synthetic intermediate. In one embodiment, the crystalline obeticholic acid is Form A. In one embodiment, crystalline obeticholic acid form A is characterized by an X-ray diffraction pattern similar to that shown in FIG. In one embodiment, crystalline obeticholic acid form A is crystallized from n-butyl acetate and recrystallized.

他の実施形態において、結晶性オベチコール酸は形態Ｃである。一実施形態において、結晶性オベチコール酸形態Ｃは図５に示したものと類似したＸ線回折パターンによって特徴付けられる。他の実施形態において、結晶性オベチコール酸は形態Ｄである。一実施形態において、結晶性オベチコール酸形態Ｄは図４５に示したものと類似したＸ線回折パターンによって特徴付けられる。他の実施形態において、結晶性オベチコール酸は形態Ｆである。一実施形態において、結晶性オベチコール酸形態Ｆは図４９に示したものと類似したＸ線回折パターンによって特徴付けられる。他の実施形態において、結晶性オベチコール酸は形態Ｇである。一実施形態において、結晶性オベチコール酸形態Ｇは図５３に示したものと類似したＸ線回折パターンによって特徴付けられる。他の実施形態において、結晶性オベチコール酸は形態Ｉである。一実施形態において、結晶性オベチコール酸形態Ｉは図５７に示したものと類似したＸ線回折パターンによって特徴付けられる。   In other embodiments, the crystalline obeticholic acid is Form C. In one embodiment, crystalline obeticholic acid form C is characterized by an X-ray diffraction pattern similar to that shown in FIG. In other embodiments, the crystalline obeticholic acid is Form D. In one embodiment, crystalline obeticholic acid form D is characterized by an X-ray diffraction pattern similar to that shown in FIG. In other embodiments, the crystalline obeticholic acid is Form F. In one embodiment, crystalline obeticholic acid form F is characterized by an X-ray diffraction pattern similar to that shown in FIG. In other embodiments, the crystalline obeticholic acid is Form G. In one embodiment, crystalline obeticholic acid form G is characterized by an X-ray diffraction pattern similar to that shown in FIG. In other embodiments, the crystalline obeticholic acid is Form I. In one embodiment, crystalline obeticholic acid form I is characterized by an X-ray diffraction pattern similar to that shown in FIG.

工程１
工程１は、３α−ヒドロキシ−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（ＫＬＣＡ）をＣＨ３ＯＨおよびＨ２ＳＯ４と反応させて３α−ヒドロキシ−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（１）を形成する工程である。工程１の一実施形態において、反応混合物を約３時間加熱し、反応混合物のｐＨを塩基性水溶液で約９．５〜約１０のｐＨ値に調節する。一実施形態において、３α−ヒドロキシ−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（１）の単離は、活性炭による処理をさらに含む。一実施形態において、３α−ヒドロキシ−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（１）の単離は、活性炭による処理をさらに含まない。一実施形態において、活性炭による処理を行わずに３α−ヒドロキシ−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（１）を単離することにより、収率をより高くすることができる。一実施形態において、３α−ヒドロキシ−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（１）のＣＨ３ＯＨおよびＨ２ＳＯ４との反応は、メタノール中で行われる。一実施形態において、塩基性溶液はＮａＯＨ水溶液である。一実施形態において、ｐＨ値は約９．５〜約１０である。 Process 1
Step 1 comprises reacting 3α-hydroxy-7-keto-5β-cholan-24-acid (KLCA) with CH 3 OH and H 2 SO 4 to produce 3α-hydroxy-7-keto-5β-cholan-24-acid. This is a step of forming methyl ester (1). In one embodiment of Step 1, the reaction mixture is heated for about 3 hours and the pH of the reaction mixture is adjusted to a pH value of about 9.5 to about 10 with a basic aqueous solution. In one embodiment, the isolation of 3α-hydroxy-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester (1) further comprises treatment with activated carbon. In one embodiment, the isolation of 3α-hydroxy-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester (1) does not further comprise treatment with activated carbon. In one embodiment, the yield can be increased by isolating 3α-hydroxy-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester (1) without treatment with activated carbon. In one embodiment, the reaction of 3α-hydroxy-7-keto-5β-cholan-24-acid (1) with CH 3 OH and H 2 SO 4 is performed in methanol. In one embodiment, the basic solution is an aqueous NaOH solution. In one embodiment, the pH value is about 9.5 to about 10.

一実施形態において、メチルアルコールはメチル化試薬および反応溶媒として働く。一実施形態において、生成物を含有する溶液を活性炭で３０分間処理し、濾過して炭素固体を除く。一実施形態において、生成物を含有する溶液を活性炭で処理しない。生成物の沈澱させるため、約５℃〜約２０℃の水および晶結剤を添加する。他の実施形態において、水は約１０℃〜約１５℃である。一実施形態において、生成物を遠心分離で単離し、メタノールと水の混合液で洗浄する。一実施形態において、この濡れた物質の水分含有量をカール・フィッシャー（ＫＦ）法で定量する。一実施形態において、この物質を次工程で使用する前に回転式乾燥機で乾燥させる。一実施形態において、この物質を次工程で使用する前に乾燥させない。一実施形態において、濡れた物質をヘプタンで洗浄して、乾燥を改善する。   In one embodiment, methyl alcohol serves as a methylating reagent and reaction solvent. In one embodiment, the product containing solution is treated with activated carbon for 30 minutes and filtered to remove carbon solids. In one embodiment, the solution containing the product is not treated with activated carbon. To precipitate the product, water at about 5 ° C to about 20 ° C and a crystallizing agent are added. In other embodiments, the water is between about 10 ° C and about 15 ° C. In one embodiment, the product is isolated by centrifugation and washed with a mixture of methanol and water. In one embodiment, the moisture content of the wet material is quantified by the Karl Fischer (KF) method. In one embodiment, the material is dried on a tumble dryer before use in the next step. In one embodiment, the material is not dried prior to use in the next step. In one embodiment, the wet material is washed with heptane to improve drying.

工程２
工程２は、３α−ヒドロキシ−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（１）をＬｉ［Ｎ（ＣＨ（ＣＨ３）２）２］およびＳｉ（ＣＨ３）３Ｃｌと反応させて３α，７−ジトリメチルシリルオキシ−５β−コル−６−エン−２４−酸メチルエステル（３）を形成する工程である。一実施形態において、工程２は、約−１０℃〜約−３０℃の極性非プロトン性溶媒中で行われる。一実施形態において、極性非プロトン性溶媒はテトラヒドロフランである。一実施形態において、温度は約−２０℃〜約−２５℃である。一実施形態において、３α−ヒドロキシ−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（１）のＬｉ［Ｎ（ＣＨ（ＣＨ３）２）２］およびＳｉ（ＣＨ３）３Ｃｌとの反応は、約２時間撹拌する。 Process 2
Step 2 involves reacting 3α-hydroxy-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester (1) with Li [N (CH (CH 3 ) 2 ) 2 ] and Si (CH 3 ) 3 Cl. This is a step of forming 3α, 7-ditrimethylsilyloxy-5β-col-6-ene-24-acid methyl ester (3). In one embodiment, Step 2 is performed in a polar aprotic solvent at about −10 ° C. to about −30 ° C. In one embodiment, the polar aprotic solvent is tetrahydrofuran. In one embodiment, the temperature is about −20 ° C. to about −25 ° C. In one embodiment, the reaction of 3α-hydroxy-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester (1) with Li [N (CH (CH 3 ) 2 ) 2 ] and Si (CH 3 ) 3 Cl Is stirred for about 2 hours.

一実施形態において、不活性条件下で化合物１を反応器に投入する。他の実施形態において、この工程の後半に添加するクロロトリメチルシランの加水分解を回避するため、残留水およびメタノールを、約６５℃および周囲圧力での共沸蒸留を繰り返すことによって除去する。他の実施形態において、必要に応じて残留物にＴＨＦを加え、蒸留を約４回繰り返す。他の実施形態において、蒸留を約３回、約２回または約１回行われる。一実施形態において、生成物を含有する残留溶液の最終含水量は≦０．０５％未満である（カール・フィッシャー滴定）。一実施形態において、生成物の溶液を約−１０℃〜約−３０℃に予冷し、その後、クロロトリメチルシランを添加する。他の実施形態において、溶液は約−２０℃〜約−２５℃に予冷する。一実施形態において、強塩基およびＴＨＦを別々の反応器に投入し、約−１０℃〜約−３０℃に冷却する。一実施形態において、強塩基はリチウムジイソプロピルアミドである。他の実施形態において、反応器は不活性、例えば、窒素雰囲気下またはアルゴン雰囲気下にある。他の実施形態において、塩基およびＴＨＦの溶液を約−２０℃〜約−２５℃に冷却する。一実施形態において、３α−ヒドロキシ−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル、ＴＨＦ、およびクロロトリメチルシランからなる乾燥し冷却した溶液を、約−１０℃〜約−３０℃の塩基性溶液に投入した。他の実施形態において、温度は約−２０℃〜約−２５℃である。一実施形態において、反応混合物を約２時間撹拌する。一実施形態において、後処理のために、反応混合物を予め冷却した酸性溶液に添加する。他の実施形態において、酸性溶液はクエン酸水溶液である。一実施形態において、添加後、水相を分離し、廃棄する。一実施形態において、約５０℃で真空蒸留することによって溶媒を有機層から除去する。一実施形態において、単離された残留物は、３α，７α−ジトリメチルシリルオキシ−５β−コル−６−エン−２４−酸メチルエステル（３）であり、次工程で「そのまま」使用される。あるいは、化合物３は、工程３の前に精製することができる。   In one embodiment, Compound 1 is charged to the reactor under inert conditions. In other embodiments, residual water and methanol are removed by repeated azeotropic distillation at about 65 ° C. and ambient pressure to avoid hydrolysis of the chlorotrimethylsilane added later in the process. In other embodiments, THF is added to the residue as needed and the distillation is repeated about 4 times. In other embodiments, the distillation is performed about 3 times, about 2 times, or about 1 time. In one embodiment, the final water content of the residual solution containing the product is ≦ 0.05% (Karl Fisher titration). In one embodiment, the product solution is pre-cooled to about −10 ° C. to about −30 ° C., after which chlorotrimethylsilane is added. In other embodiments, the solution is pre-cooled to about −20 ° C. to about −25 ° C. In one embodiment, the strong base and THF are charged to separate reactors and cooled to about −10 ° C. to about −30 ° C. In one embodiment, the strong base is lithium diisopropylamide. In other embodiments, the reactor is inert, eg, under a nitrogen or argon atmosphere. In other embodiments, the base and THF solution is cooled to about −20 ° C. to about −25 ° C. In one embodiment, a dried and cooled solution consisting of 3α-hydroxy-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester, THF, and chlorotrimethylsilane is basified at about −10 ° C. to about −30 ° C. It was poured into the solution. In other embodiments, the temperature is from about −20 ° C. to about −25 ° C. In one embodiment, the reaction mixture is stirred for about 2 hours. In one embodiment, the reaction mixture is added to a pre-cooled acidic solution for workup. In other embodiments, the acidic solution is an aqueous citric acid solution. In one embodiment, after the addition, the aqueous phase is separated and discarded. In one embodiment, the solvent is removed from the organic layer by vacuum distillation at about 50 ° C. In one embodiment, the isolated residue is 3α, 7α-ditrimethylsilyloxy-5β-col-6-ene-24-acid methyl ester (3) and is used “as is” in the next step. Alternatively, compound 3 can be purified prior to step 3.

工程３
工程３は、３α，７−ジトリメチルシリルオキシ−５β−コル−６−エン−２４−酸メチルエステル（３）をＣＨ３ＣＨＯと反応させて３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（４）を形成する工程である。一実施形態において、工程３は、極性非プロトン性溶媒中、ＢＦ３の存在下、約−５０℃〜約−７０℃で行われる。一実施形態において、極性非プロトン性溶媒はジクロロメタンである。一実施形態において、ＢＦ３は、アセトニトリル中の１６重量％溶液である。他の実施形態において、反応はＢＦ３ジエチルエーテルの存在下で行われる。一実施形態において、温度は約−６０℃〜約−６５℃である。 Process 3
Step 3 comprises reacting 3α, 7-ditrimethylsilyloxy-5β-col-6-ene-24-acid methyl ester (3) with CH 3 CHO to produce 3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β- This is a step of forming cholan-24-acid methyl ester (4). In one embodiment, Step 3 is performed at about −50 ° C. to about −70 ° C. in the presence of BF 3 in a polar aprotic solvent. In one embodiment, the polar aprotic solvent is dichloromethane. In one embodiment, BF 3 is a 16 wt% solution in acetonitrile. In other embodiments, the reaction is performed in the presence of BF 3 diethyl ether. In one embodiment, the temperature is about −60 ° C. to about −65 ° C.

一実施形態において、極性非プロトン性溶媒中の化合物３を不活性反応器に投入する。他の実施形態において、極性非プロトン性溶媒は前の工程からの残留溶媒（例えば、ＴＨＦ）である。一実施形態において、ＴＨＦを添加して、残留水およびジイソプロピルアミンを留去するのを助ける。約５０℃の最高温度で、残留量の極性非プロトン性溶媒を真空下で留去する。化合物３を含有する残留物中の含水量は、≦０．５％（カール・フィッシャー滴定）に制限される。次いで、化合物３を含有する残留物を極性非プロトン性溶媒に溶解し、約−５０℃〜約−７０℃に予備冷却する。極性非プロトン性溶媒はジクロロメタンである。他の実施形態において、極性非プロトン性溶媒中に化合物３を含有する残留物を、約−６０℃〜約−６５℃に予備冷却する。アセトアルデヒド（ＣＨ３ＣＨＯ）を添加する。極性非プロトン性溶媒と三フッ化ホウ素（ＢＦ３）溶媒和複合体を別々の反応器に投入し、その後、約−５０℃〜約−７０℃に冷却する。他の実施形態において、極性非プロトン性溶媒はジクロロメタンである。他の実施形態において、三フッ化ホウ素溶媒和複合体は、三フッ化ホウ素アセトニトリル複合体である。ＢＦ３溶液の温度は約−６０℃〜約−６５℃である。化合物３およびアセトアルデヒドを含有する溶液を、ＢＦ３溶液に約−６０℃〜約−６５℃で添加する。他の実施形態において、化合物３およびアセトアルデヒドを含有する溶液は乾燥している。一実施形態において、反応混合物を約−６０℃〜約−６５℃で約２時間撹拌し、約２３℃〜約２８℃にまで加熱し、さらに約２時間撹拌し、加水分解／後処理のために約２℃〜約１０℃にまで冷却する。一実施形態において、添加および撹拌の合計時間は約４時間である。一実施形態において、後処理のために、反応器からの冷却された溶液を、予め冷却した塩基性水溶液に添加する。他の実施形態において、塩基性水溶液は約５０重量％の水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ；苛性ソーダ）である。一実施形態において、相を分離し、（下）有機層を別の反応器に移す。一実施形態において、溶媒を可能な限り５０℃以下（ＮＭＴ）で蒸留することによって有機層から除去する。一実施形態において、残留物は、３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（４）と、いくらか残りのアセトニトリルおよびジクロロメタンを含む。工程４はＥ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（４Ａ）を形成し得ると理解される。工程３の生成物は、工程４に直接使用される。 In one embodiment, Compound 3 in a polar aprotic solvent is charged to an inert reactor. In other embodiments, the polar aprotic solvent is the residual solvent from the previous step (eg, THF). In one embodiment, THF is added to help distill off residual water and diisopropylamine. At a maximum temperature of about 50 ° C., the residual amount of polar aprotic solvent is distilled off under vacuum. The water content in the residue containing compound 3 is limited to ≦ 0.5% (Karl Fischer titration). The residue containing compound 3 is then dissolved in a polar aprotic solvent and precooled to about -50 ° C to about -70 ° C. The polar aprotic solvent is dichloromethane. In other embodiments, the residue containing Compound 3 in a polar aprotic solvent is pre-cooled to about −60 ° C. to about −65 ° C. Acetaldehyde (CH 3 CHO) is added. The polar aprotic solvent and boron trifluoride (BF 3 ) solvate complex are charged to separate reactors and then cooled to about −50 ° C. to about −70 ° C. In other embodiments, the polar aprotic solvent is dichloromethane. In other embodiments, the boron trifluoride solvate complex is a boron trifluoride acetonitrile complex. The temperature of the BF 3 solution is about −60 ° C. to about −65 ° C. A solution containing compound 3 and acetaldehyde is added to the BF 3 solution at about −60 ° C. to about −65 ° C. In other embodiments, the solution containing Compound 3 and acetaldehyde is dry. In one embodiment, the reaction mixture is stirred at about −60 ° C. to about −65 ° C. for about 2 hours, heated to about 23 ° C. to about 28 ° C. and stirred for about 2 hours further for hydrolysis / workup. Cool to about 2 ° C to about 10 ° C. In one embodiment, the total time for addition and stirring is about 4 hours. In one embodiment, the cooled solution from the reactor is added to the pre-cooled basic aqueous solution for workup. In another embodiment, the basic aqueous solution is about 50% by weight sodium hydroxide (NaOH; caustic soda). In one embodiment, the phases are separated and the (bottom) organic layer is transferred to another reactor. In one embodiment, the solvent is removed from the organic layer by distilling as little as possible at 50 ° C. (NMT). In one embodiment, the residue comprises 3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester (4) and some remaining acetonitrile and dichloromethane. It is understood that step 4 may form E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester (4A). The product of step 3 is used directly in step 4.

工程４
工程４は、３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（４）をＮａＯＨと反応させてＥ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（５）を形成する工程である。一実施形態において、工程４に先立って、工程３からの残留物を約４５℃〜約６０℃に加熱して、残留量の溶媒を除去する。一実施形態において、温度は約４９℃〜約５５℃である。一実施形態において、３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（４）をＮａＯＨと反応させるエステル加水分解反応は、メタノール、水、およびＮａＯＨ溶液中、約２０℃〜約２５℃で行われる。 Process 4
Step 4 comprises reacting 3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester (4) with NaOH to give E-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β- This is a step of forming cholan-24-acid (5). In one embodiment, prior to step 4, the residue from step 3 is heated to about 45 ° C. to about 60 ° C. to remove residual amounts of solvent. In one embodiment, the temperature is from about 49 ° C to about 55 ° C. In one embodiment, the ester hydrolysis reaction of reacting 3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester (4) with NaOH is carried out in methanol, water, and NaOH solution in about Performed at 20 ° C. to about 25 ° C.

一実施形態において、反応する３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（４）を反応器に投入する。他の実施形態において、反応器は不活性、例えば、窒素雰囲気下またはアルゴン雰囲気下にある。５０℃ＮＭＴの温度で、残留量の溶媒を真空下で留去する。一実施形態において、残留物を約４５℃〜約６０℃にまで加熱する。他の実施形態において、残留物を約４９℃〜約５５℃にまで加熱する。他の実施形態において、工程３（化合物４）からの残留物を、メタノール、水および塩基性水溶液に溶解する。他の実施形態において、塩基性水溶液は約５０重量％の水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ；苛性ソーダ）である。工程４のエステル加水分解反応は、約２０℃〜約６０℃で行い、加水分解反応が完了するまで撹拌する。一実施形態において、エステル加水分解は約２０℃〜約２５℃で行われる。反応混合物のｐＨが＞１２であるかを確認する。ｐＨが＜１２であるなら、追加のＮａＯＨを添加する。反応混合物を水で希釈し、温度を約２０℃〜約３５℃に調整する。他の態様において、反応混合物を水で希釈し、温度を約２５℃〜約３５℃に調節する。一実施形態において、後処理のために、相を分離し、下層の生成物に富む水層を別の反応器に移し、有機層を廃棄する。一実施形態において、生成物に富む水相のｐＨを酢酸エチルの存在下に酸水溶液で調節する。他の実施形態において、酸はクエン酸水溶液である。一実施形態において、相を分離し、上部の生成物に富む有機層を残し、下部の水層を廃棄する。一実施形態において、酢酸エチルを有機層から留去し、酢酸エチルに置き換える。一実施形態において、蒸留物の含水量が１％ＮＭＴになるまで、または一定の沸点に到達するまで、蒸留を繰り返す。一実施形態において、得られた生成物懸濁液を約１０℃〜約３０℃に冷却し、単離し、酢酸エチルで洗浄する。一実施形態において、得られた生成物を濾過（例えば、フィルターヌッチェ（ｆｉｌｔｅｒ ｎｕｔｃｈｅ）、遠心分離など）によって単離する。他の実施形態において、化合物５を含有する得られた生成物懸濁液を約２０℃〜約２５℃に冷却する。一実施形態において、得られた生成物を真空下（例えば、コーンドライヤー、パドルドライヤー、トレイドライヤーなど）、約６０℃で乾燥させる。   In one embodiment, the reacting 3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester (4) is charged to the reactor. In other embodiments, the reactor is inert, eg, under a nitrogen or argon atmosphere. The residual amount of solvent is distilled off under vacuum at a temperature of 50 ° C. NMT. In one embodiment, the residue is heated to about 45 ° C to about 60 ° C. In other embodiments, the residue is heated to about 49 ° C to about 55 ° C. In other embodiments, the residue from Step 3 (Compound 4) is dissolved in methanol, water and a basic aqueous solution. In another embodiment, the basic aqueous solution is about 50% by weight sodium hydroxide (NaOH; caustic soda). The ester hydrolysis reaction in step 4 is performed at about 20 ° C. to about 60 ° C., and stirred until the hydrolysis reaction is completed. In one embodiment, the ester hydrolysis is performed at about 20 ° C to about 25 ° C. Check if the pH of the reaction mixture is> 12. If the pH is <12, add additional NaOH. The reaction mixture is diluted with water and the temperature is adjusted to about 20 ° C to about 35 ° C. In other embodiments, the reaction mixture is diluted with water and the temperature is adjusted to about 25 ° C to about 35 ° C. In one embodiment, for workup, the phases are separated, the lower product-rich aqueous layer is transferred to another reactor, and the organic layer is discarded. In one embodiment, the pH of the product rich aqueous phase is adjusted with aqueous acid in the presence of ethyl acetate. In other embodiments, the acid is an aqueous citric acid solution. In one embodiment, the phases are separated, leaving the upper product-rich organic layer and discarding the lower aqueous layer. In one embodiment, ethyl acetate is distilled off from the organic layer and replaced with ethyl acetate. In one embodiment, the distillation is repeated until the water content of the distillate is 1% NMT or until a constant boiling point is reached. In one embodiment, the resulting product suspension is cooled to about 10 ° C. to about 30 ° C., isolated and washed with ethyl acetate. In one embodiment, the resulting product is isolated by filtration (eg, filter nutche, centrifugation, etc.). In other embodiments, the resulting product suspension containing Compound 5 is cooled to about 20 ° C to about 25 ° C. In one embodiment, the resulting product is dried at about 60 ° C. under vacuum (eg, corn dryer, paddle dryer, tray dryer, etc.).

一実施形態において、粗Ｅ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（５）をエタノールを使用して結晶化する。一実施形態において、エタノールおよび粗化合物５を反応器に投入する。他の実施形態において、反応器は不活性である。一実施形態において、粗化合物５を溶解するために、混合物を加熱還流する。一実施形態において、混合物を制御された冷却ランプで約１５℃〜約２０℃に冷却する。一実施形態において、結晶性化合物５を遠心分離機を用いて単離し、次いで、酢酸エチルで洗浄する。一実施形態において、結晶性化合物５を真空下（例えば、コーンドライヤー、パドルドライヤー、トレイドライヤーなど）、約６０℃で乾燥させる。試料を採取して、精製化合物５のアッセイ、純度、および水分を測定することができる。一実施形態において、精製化合物５は、３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸のＥ異性体およびＺ異性体の両方を含有する。一実施形態において、比Ｅ：Ｚは、約９９：１、約９８：２、約９５：５、約９０：１０、約８５：１５、約８０：２０、約７５：２５、約７０：３０、約６５：３５、約６０：４０、約５５：４５または約５０：５０である。精製化合物５の同定および特徴付けに関する詳細については実施例２を参照されたい。   In one embodiment, the crude E-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid (5) is crystallized using ethanol. In one embodiment, ethanol and crude compound 5 are charged to the reactor. In other embodiments, the reactor is inert. In one embodiment, the mixture is heated to reflux to dissolve the crude compound 5. In one embodiment, the mixture is cooled to about 15 ° C. to about 20 ° C. with a controlled cooling ramp. In one embodiment, crystalline compound 5 is isolated using a centrifuge and then washed with ethyl acetate. In one embodiment, the crystalline compound 5 is dried at about 60 ° C. under vacuum (eg, corn dryer, paddle dryer, tray dryer, etc.). Samples can be taken to determine the assay, purity, and moisture of purified compound 5. In one embodiment, purified compound 5 contains both the E and Z isomers of 3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid. In one embodiment, the ratio E: Z is about 99: 1, about 98: 2, about 95: 5, about 90:10, about 85:15, about 80:20, about 75:25, about 70:30. About 65:35, about 60:40, about 55:45 or about 50:50. See Example 2 for details regarding the identification and characterization of purified compound 5.

工程４はまた、Ｅ／Ｚ異性体の混合物である化合物から出発して行うこともできる。例えば、工程４は、Ｅ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（４Ａ）をＮａＯＨと反応させてＥ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（５Ａ）を形成する工程である。一実施形態において、工程４に先立って、工程３からの残留物を約４５℃〜約６０℃に加熱して、残留量の溶媒を除去する。一実施形態において、温度は約４９℃〜約５５℃である。一実施形態において、Ｅ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（４Ａ）をＮａＯＨと反応させるエステル加水分解反応は、メタノール、水、およびＮａＯＨ溶液中、約２０℃〜約２５℃で行われる。一実施形態において、ＮａＯＨ溶液は５０重量％水溶液である。   Step 4 can also be performed starting from a compound that is a mixture of E / Z isomers. For example, in Step 4, E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester (4A) is reacted with NaOH to give E / Z-3α-hydroxy-6- This is a step for forming ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid (5A). In one embodiment, prior to step 4, the residue from step 3 is heated to about 45 ° C. to about 60 ° C. to remove residual amounts of solvent. In one embodiment, the temperature is from about 49 ° C to about 55 ° C. In one embodiment, the ester hydrolysis reaction in which E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester (4A) is reacted with NaOH comprises methanol, water, and NaOH. It is carried out in solution at about 20 ° C to about 25 ° C. In one embodiment, the NaOH solution is a 50 wt% aqueous solution.

一実施形態において、反応するＥ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（４Ａ）を反応器に投入する。他の実施形態において、反応器は不活性、例えば、窒素雰囲気下またはアルゴン雰囲気下にある。５０℃ＮＭＴの温度で、残留量の溶媒を真空下で留去する。一実施形態において、残留物を約４５℃〜約６０℃にまで加熱する。一実施形態において、温度は約４９℃〜約５５℃である。一実施形態において、工程３からの残留物（化合物４Ａ）をメタノール、水および塩基性水溶液に溶解する。他の実施形態において、塩基性水溶液は約５０重量％の水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ；苛性ソーダ）である。工程４のエステル加水分解反応は、約２０℃〜約６０℃で行い、加水分解反応が完了するまで撹拌する。一実施形態において、エステル加水分解は約２０℃〜約２５℃で行われる。反応混合物のｐＨが＞１２であるかを確認する。ｐＨが＜１２であるなら、追加のＮａＯＨを添加する。反応混合物を水で希釈し、温度を約２５℃〜約３５℃に調節する。一実施形態において、後処理のために、相を分離し、下層の生成物に富む水層を別の反応器に移し、有機層を廃棄する。一実施形態において、生成物に富む水相のｐＨを酢酸エチルの存在下に酸水溶液で調節する。他の実施形態において、酸はクエン酸水溶液である。一実施形態において、相を分離し、上部の生成物に富む有機層を残し、下部の水層を廃棄する。一実施形態において、酢酸エチルを有機層から留去し、酢酸エチルに置き換える。一実施形態において、蒸留物の含水量が１％ＮＭＴになるまで、または一定の沸点に到達するまで、蒸留を繰り返す。一実施形態において、得られた生成物懸濁液を約１０℃〜約３０℃に冷却し、単離し、酢酸エチルで洗浄する。一実施形態において、得られた生成物を濾過（例えば、フィルターヌッチェ（ｆｉｌｔｅｒ ｎｕｔｃｈｅ）、遠心分離など）によって単離する。他の実施形態において、得られた、化合物５Ａを含有する生成物懸濁液を約２０℃〜約２５℃に冷却する。一実施形態において、得られた生成物を真空下（例えば、コーンドライヤー、パドルドライヤー、トレイドライヤーなど）、約６０℃で乾燥させる。化合物５Ａは、精製せずに工程５へ続けることができる。   In one embodiment, the reacted E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester (4A) is charged to the reactor. In other embodiments, the reactor is inert, eg, under a nitrogen or argon atmosphere. The residual amount of solvent is distilled off under vacuum at a temperature of 50 ° C. NMT. In one embodiment, the residue is heated to about 45 ° C to about 60 ° C. In one embodiment, the temperature is from about 49 ° C to about 55 ° C. In one embodiment, the residue from Step 3 (Compound 4A) is dissolved in methanol, water and a basic aqueous solution. In another embodiment, the basic aqueous solution is about 50% by weight sodium hydroxide (NaOH; caustic soda). The ester hydrolysis reaction in step 4 is performed at about 20 ° C. to about 60 ° C., and stirred until the hydrolysis reaction is completed. In one embodiment, the ester hydrolysis is performed at about 20 ° C to about 25 ° C. Check if the pH of the reaction mixture is> 12. If the pH is <12, add additional NaOH. The reaction mixture is diluted with water and the temperature is adjusted to about 25 ° C to about 35 ° C. In one embodiment, for workup, the phases are separated, the lower product-rich aqueous layer is transferred to another reactor, and the organic layer is discarded. In one embodiment, the pH of the product rich aqueous phase is adjusted with aqueous acid in the presence of ethyl acetate. In other embodiments, the acid is an aqueous citric acid solution. In one embodiment, the phases are separated, leaving the upper product-rich organic layer and discarding the lower aqueous layer. In one embodiment, ethyl acetate is distilled off from the organic layer and replaced with ethyl acetate. In one embodiment, the distillation is repeated until the water content of the distillate is 1% NMT or until a constant boiling point is reached. In one embodiment, the resulting product suspension is cooled to about 10 ° C. to about 30 ° C., isolated and washed with ethyl acetate. In one embodiment, the resulting product is isolated by filtration (eg, filter nutche, centrifugation, etc.). In other embodiments, the resulting product suspension containing Compound 5A is cooled to about 20 ° C to about 25 ° C. In one embodiment, the resulting product is dried at about 60 ° C. under vacuum (eg, corn dryer, paddle dryer, tray dryer, etc.). Compound 5A can continue to step 5 without purification.

一実施形態において、粗Ｅ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（５Ａ）をエタノールを使用して結晶化する。一実施形態において、エタノールおよび粗化合物５Ａを反応器に投入する。他の実施形態において、反応器は不活性である。一実施形態において、粗化合物５Ａを溶解するために、混合物を加熱還流する。一実施形態において、混合物を制御された冷却ランプで約１５℃〜約２０℃に冷却する。一実施形態において、結晶性化合物５Ａを遠心分離機を用いて単離し、次いで、酢酸エチルで洗浄する。一実施形態において、結晶性化合物５Ａを真空下（例えば、コーンドライヤー、パドルドライヤー、トレイドライヤーなど）、約６０℃で乾燥させる。一実施形態において、工程４の単離された結晶性生成物は化合物５である。   In one embodiment, the crude E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24 acid (5A) is crystallized using ethanol. In one embodiment, ethanol and crude compound 5A are charged to the reactor. In other embodiments, the reactor is inert. In one embodiment, the mixture is heated to reflux to dissolve the crude compound 5A. In one embodiment, the mixture is cooled to about 15 ° C. to about 20 ° C. with a controlled cooling ramp. In one embodiment, crystalline compound 5A is isolated using a centrifuge and then washed with ethyl acetate. In one embodiment, the crystalline compound 5A is dried at about 60 ° C. under vacuum (eg, corn dryer, paddle dryer, tray dryer, etc.). In one embodiment, the isolated crystalline product of Step 4 is Compound 5.

代替の工程４
化合物５は、代替の方法に従って調製することができる。一実施形態において、不活性反応器に化合物４を投入する。約５０℃（最高）で、溶媒（例えば、アセトニトリル、ジクロロメタン）の残留量を真空下で留去することができる。残留物をメタノールに溶解し、冷却する。水および苛性ソーダ（５０重量％ＮａＯＨ）を添加する。一実施形態において、反応混合物を約２０℃〜約２５℃で約４時間撹拌する。溶液を水で希釈し、トルエンを添加する。撹拌後、相を分離し、下層の生成物に富む水層を不活性反応器に移す。有機層を廃棄する。生成物に富む水層のｐＨを、酢酸エチルの存在下、クエン酸水溶液で調節する。相を分離し、下層の水層を廃棄する。有機層を不活性反応器に移す。酢酸エチルを有機層から留去し、酢酸エチルに置き換える。一実施形態において、この操作を、蒸留物の含水量が１％以下になるまで、または一定の沸点に到達するまで繰り返す。得られた生成物懸濁液を約２０℃〜約２５℃に冷却し、化合物５を単離し、不活性遠心分離機中、酢酸エチルで洗浄する。真空下、約６０℃でタンブル乾燥機中で乾燥を行う。 Alternative process 4
Compound 5 can be prepared according to alternative methods. In one embodiment, Compound 4 is charged to an inert reactor. At about 50 ° C. (maximum), residual amounts of solvent (eg acetonitrile, dichloromethane) can be distilled off under vacuum. The residue is dissolved in methanol and cooled. Add water and caustic soda (50 wt% NaOH). In one embodiment, the reaction mixture is stirred at about 20 ° C. to about 25 ° C. for about 4 hours. The solution is diluted with water and toluene is added. After stirring, the phases are separated and the lower product-rich aqueous layer is transferred to an inert reactor. Discard the organic layer. The pH of the product-rich aqueous layer is adjusted with aqueous citric acid in the presence of ethyl acetate. The phases are separated and the lower aqueous layer is discarded. Transfer the organic layer to an inert reactor. Ethyl acetate is distilled off from the organic layer and replaced with ethyl acetate. In one embodiment, this operation is repeated until the water content of the distillate is 1% or less or until a constant boiling point is reached. The resulting product suspension is cooled to about 20 ° C. to about 25 ° C. and compound 5 is isolated and washed with ethyl acetate in an inert centrifuge. Dry in a tumble dryer at about 60 ° C. under vacuum.

この代替の工程４はまた、Ｅ／Ｚ異性体の混合物である化合物から出発して行うこともできる。一実施形態において、化合物４Ａを不活性反応器に投入する。約５０℃（最高）で、溶媒（例えば、アセトニトリル、ジクロロメタン）の残留量を真空下で留去することができる。残留物をメタノールに溶解し、冷却する。水および苛性ソーダ（５０重量％、ＮａＯＨ）を添加する。一実施形態において、反応混合物を約２０℃〜約２５℃で約４時間撹拌する。溶液を水で希釈し、トルエンを添加する。撹拌後、相を分離し、下層の生成物に富む水層を不活性反応器に移す。有機層を廃棄する。生成物に富む水層のｐＨを、酢酸エチルの存在下、クエン酸水溶液で調節する。相を分離し、下の水層を廃棄する。生成物に富む有機層を不活性反応器に移す。酢酸エチルを有機層から留去し、酢酸エチルに置き換える。一実施形態において、この操作を、蒸留物の含水量が１％以下になるまで、または一定の沸点に到達するまで繰り返す。得られた生成物懸濁液を約２０℃〜約２５℃に冷却し、化合物５Ａを単離し、不活性遠心分離機中、酢酸エチルで洗浄する。真空下、約６０℃でタンブル乾燥機中で乾燥を行う。   This alternative step 4 can also be carried out starting from a compound that is a mixture of E / Z isomers. In one embodiment, Compound 4A is charged to an inert reactor. At about 50 ° C. (maximum), residual amounts of solvent (eg acetonitrile, dichloromethane) can be distilled off under vacuum. The residue is dissolved in methanol and cooled. Add water and caustic soda (50 wt%, NaOH). In one embodiment, the reaction mixture is stirred at about 20 ° C. to about 25 ° C. for about 4 hours. The solution is diluted with water and toluene is added. After stirring, the phases are separated and the lower product-rich aqueous layer is transferred to an inert reactor. Discard the organic layer. The pH of the product-rich aqueous layer is adjusted with aqueous citric acid in the presence of ethyl acetate. Separate the phases and discard the lower aqueous layer. The product rich organic layer is transferred to an inert reactor. Ethyl acetate is distilled off from the organic layer and replaced with ethyl acetate. In one embodiment, this operation is repeated until the water content of the distillate is 1% or less or until a constant boiling point is reached. The resulting product suspension is cooled to about 20 ° C. to about 25 ° C. and compound 5A is isolated and washed with ethyl acetate in an inert centrifuge. Dry in a tumble dryer at about 60 ° C. under vacuum.

工程５
工程５は、Ｅ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（５）をＰｄ／Ｃおよび水素ガスと反応させてまず３α−ヒドロキシ−６β−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸を形成し、これに塩基を介在させた異性化を行って３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（６）を形成する工程である。工程５は、１つの相（水素化および異性化を一緒に）または２つの別々の相（水素化に続いて異性化）で実施することができる。一実施形態において、工程５は、約９０℃〜約１１０℃の温度、および約０．５ｂａｒ〜約５ｂａｒの圧力で行われる。一実施形態において、後処理の間に、反応混合物の有機相を活性炭で処理する。一実施形態において、圧力は約０．５ｂａｒ〜約５．５ｂａｒである。他の実施形態において、圧力は約５ｂａｒである。他の実施形態において、水素化は、約０．５ｂａｒ〜約５．５ｂａｒの圧力、例えば、０．６ｂａｒ、０．７ｂａｒ、０．８ｂａｒ、０．９ｂａｒ、１．０ｂａｒ、１．２ｂａｒ、１．４ｂａｒ、１．６ｂａｒ、１．８ｂａｒ、２．０ｂａｒ、２．２ｂａｒ、２．４ｂａｒ、２．６ｂａｒ、２．８ｂａｒ、３．０ｂａｒ、３．２ｂａｒ、３．４ｂａｒ、３．６ｂａｒ、３．８ｂａｒ、４．０ｂａｒ、４．２ｂａｒ、４．４ｂａｒ、５．０ｂａｒ、５．２ｂａｒ、およびその間の任意の圧力で行われる。一実施形態において、水素化反応混合物を約１時間撹拌する。一実施形態において、Ｅ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（５）をＰｄ／Ｃおよび水素ガスの存在下で約１００℃に加熱し、約２時間〜約５時間撹拌する。一実施形態において、Ｅ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（５）をＰｄ／Ｃおよび水素ガスの存在下で約１００℃に加熱し、約３時間撹拌する。 Process 5
In step 5, E-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid (5) is reacted with Pd / C and hydrogen gas to obtain 3α-hydroxy-6β-ethyl-7- Keto-5β-cholan-24-acid is formed, followed by base-mediated isomerization to form 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β-cholan-24-acid (6) It is a process. Step 5 can be carried out in one phase (hydrogenation and isomerization together) or in two separate phases (hydrogenation followed by isomerization). In one embodiment, step 5 is performed at a temperature of about 90 ° C. to about 110 ° C. and a pressure of about 0.5 bar to about 5 bar. In one embodiment, during the workup, the organic phase of the reaction mixture is treated with activated carbon. In one embodiment, the pressure is from about 0.5 bar to about 5.5 bar. In other embodiments, the pressure is about 5 bar. In other embodiments, the hydrogenation is performed at a pressure of about 0.5 bar to about 5.5 bar, eg, 0.6 bar, 0.7 bar, 0.8 bar, 0.9 bar, 1.0 bar, 1.2 bar, 1. 4 bar, 1.6 bar, 1.8 bar, 2.0 bar, 2.2 bar, 2.4 bar, 2.6 bar, 2.8 bar, 3.0 bar, 3.2 bar, 3.4 bar, 3.6 bar, 3.8 bar, It is carried out at 4.0 bar, 4.2 bar, 4.4 bar, 5.0 bar, 5.2 bar and any pressure in between. In one embodiment, the hydrogenation reaction mixture is stirred for about 1 hour. In one embodiment, E-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid (5) is heated to about 100 ° C. in the presence of Pd / C and hydrogen gas for about 2 hours. Stir for ~ 5 hours. In one embodiment, E-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid (5) is heated to about 100 ° C. in the presence of Pd / C and hydrogen gas for about 3 hours. Stir.

一実施形態において、Ｐｄ／Ｃおよび水素ガスの存在下でのＥ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（５）は、塩基性溶液の存在下で行われる。一実施形態において、塩基性溶液は５０重量％の水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ；苛性ソーダ）溶液を含有する水である。水素化反応後、反応混合物を約１００℃にまで加熱し（ベータ立体配置からアルファ立体配置へのＣ−６位の異性化を行うために）、次いで約４０℃〜約５０℃に冷却する。後処理のために、Ｐｄ／Ｃを濾別する。一実施形態において、濾液に酢酸ｎ−ブチルおよび酸を添加する。他の実施形態において、酸は塩酸（ＨＣｌ）である。水層を分離し、ｐＨ値を調べて酸性であることを確認した後、廃棄する。生成物に富む有機相を活性炭で処理する。一実施形態において、活性炭を濾別し、得られた生成物に富む濾液を蒸留によって濃縮し、得られた生成物懸濁液を約１０℃〜約３０℃に冷却する。他の実施形態において、生成物懸濁液を約１５℃〜約２０℃に冷却する。化合物６を含有する懸濁液を単離し、酢酸ｎ−ブチルで洗浄する。化合物６を加圧フィルターを用いて濾過する。一実施形態において、真空下、約８０℃で、加圧フィルター中で乾燥を行う。   In one embodiment, E-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid (5) in the presence of Pd / C and hydrogen gas is run in the presence of a basic solution. Is called. In one embodiment, the basic solution is water containing 50% by weight sodium hydroxide (NaOH; caustic soda) solution. After the hydrogenation reaction, the reaction mixture is heated to about 100 ° C. (to effect isomerization of the C-6 position from the beta configuration to the alpha configuration) and then cooled to about 40 ° C. to about 50 ° C. Pd / C is filtered off for workup. In one embodiment, n-butyl acetate and acid are added to the filtrate. In other embodiments, the acid is hydrochloric acid (HCl). The aqueous layer is separated and the pH is checked to confirm that it is acidic and then discarded. The product-rich organic phase is treated with activated carbon. In one embodiment, the activated carbon is filtered off, the resulting product-rich filtrate is concentrated by distillation, and the resulting product suspension is cooled to about 10 ° C to about 30 ° C. In other embodiments, the product suspension is cooled to about 15 ° C to about 20 ° C. The suspension containing compound 6 is isolated and washed with n-butyl acetate. Compound 6 is filtered using a pressure filter. In one embodiment, drying is performed in a pressure filter at about 80 ° C. under vacuum.

工程５の一実施形態において、Ｅ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（５）、水、ＮａＯＨ溶液（例えば、５０重量％）、およびＰｄ／Ｃを、約５ｂａｒのＨ２ガスと約１００℃〜約１０５℃の温度で、Ｈ２の取り込みが終わるまで混合する。反応混合物を約４０℃〜約５０℃に冷却し、Ｐｄ／Ｃを濾別する。次いで、酢酸ｎ−ブチルおよびＨＣｌを、化合物６を含有する溶液に添加する。一実施形態において、水相を分離し、廃棄する。化合物６を含む有機相を活性炭で処理する。活性炭を濾別し、濾液を別の反応器に移し、そこで蒸留により濃縮し、次いで懸濁液を約５℃〜約２０℃に冷却する。一実施形態において、化合物６を濾過によって単離し、濾液を、真空下、約８０℃で、加圧フィルター上で乾燥させる。 In one embodiment of Step 5, E-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid (5), water, NaOH solution (eg, 50 wt%), and Pd / C Mix with about 5 bar of H 2 gas at a temperature of about 100 ° C. to about 105 ° C. until the uptake of H 2 is complete. The reaction mixture is cooled to about 40 ° C. to about 50 ° C. and Pd / C is filtered off. Then n-butyl acetate and HCl are added to the solution containing compound 6. In one embodiment, the aqueous phase is separated and discarded. The organic phase containing compound 6 is treated with activated carbon. The activated carbon is filtered off and the filtrate is transferred to another reactor where it is concentrated by distillation and the suspension is then cooled to about 5 ° C to about 20 ° C. In one embodiment, compound 6 is isolated by filtration and the filtrate is dried on a pressure filter at about 80 ° C. under vacuum.

工程５はまた、Ｅ／Ｚ異性体の混合物である化合物から出発して行うこともできる。例えば、工程５は、Ｅ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（５Ａ）をＰｄ／Ｃおよび水素ガスと反応させ加熱して３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（６）を形成する工程である。工程５は、１つの相（水素化および異性化を一緒に）または２つの別々の相（水素化に続いて異性化）で実施することができる。一態様では、工程５は、約９０℃〜約１１０℃の温度、および約４ｂａｒ〜約５ｂａｒの圧力で行われる。一実施形態において、後処理の間に、反応混合物の有機相を活性炭で処理する。一実施形態において、圧力は約４．５ｂａｒ〜約５．５ｂａｒである。他の実施形態において、圧力は約５ｂａｒである。一実施形態において、水素化反応混合物を約１時間撹拌する。一実施形態において、Ｅ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（５Ａ）のＰｄ／Ｃおよび水素ガスとの反応は、約１００℃に加熱され、約２時間〜約５時間撹拌される。一実施形態において、Ｅ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（５Ａ）のＰｄ／Ｃおよび水素ガスとの反応は、約１００℃に加熱され、約３時間撹拌される。   Step 5 can also be performed starting from a compound that is a mixture of E / Z isomers. For example, in step 5, E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid (5A) is reacted with Pd / C and hydrogen gas and heated to 3α-hydroxy-6α. This is a step of forming ethyl-7-keto-5β-cholan-24-acid (6). Step 5 can be carried out in one phase (hydrogenation and isomerization together) or in two separate phases (hydrogenation followed by isomerization). In one aspect, step 5 is performed at a temperature of about 90 ° C. to about 110 ° C. and a pressure of about 4 bar to about 5 bar. In one embodiment, during the workup, the organic phase of the reaction mixture is treated with activated carbon. In one embodiment, the pressure is from about 4.5 bar to about 5.5 bar. In other embodiments, the pressure is about 5 bar. In one embodiment, the hydrogenation reaction mixture is stirred for about 1 hour. In one embodiment, the reaction of E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid (5A) with Pd / C and hydrogen gas is heated to about 100 ° C. Stir for about 2 hours to about 5 hours. In one embodiment, the reaction of E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid (5A) with Pd / C and hydrogen gas is heated to about 100 ° C. Stir for about 3 hours.

一実施形態において、Ｅ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（５Ａ）のＰｄ／Ｃおよび水素ガスとの反応は、塩基性溶液の存在下で行われる。一実施形態において、塩基性溶液は、水および約５０重量％の水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ；苛性ソーダ）溶液である。水素化反応後、反応混合物を約１００℃にまで加熱し（ベータ立体配置からアルファ立体配置へのＣ−６位の異性化を行うために）、次いで約４０℃〜約５０℃に冷却する。後処理のために、Ｐｄ／Ｃを濾別する。一実施形態において、濾液に酢酸ｎ−ブチルおよび酸を添加する。他の実施形態において、酸は塩酸（ＨＣｌ）である。水層を分離し、ｐＨ値を調べて酸性であることを確認した後、廃棄する。生成物に富む有機相を活性炭で処理する。一実施形態において、活性炭を濾別し、得られた生成物に富む濾液を蒸留によって濃縮し、得られた生成物懸濁液を約１０℃〜約３０℃に冷却する。他の実施形態において、生成物懸濁液を約１５℃〜約２０℃に冷却する。化合物６を含有する懸濁液を単離し、酢酸ｎ−ブチルで洗浄する。化合物６を加圧フィルターを用いて濾過する。一実施形態において、真空下、約８０℃で、加圧フィルター中で乾燥を行う。   In one embodiment, the reaction of E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid (5A) with Pd / C and hydrogen gas is carried out in the presence of a basic solution. Done. In one embodiment, the basic solution is water and about 50 wt% sodium hydroxide (NaOH; caustic soda) solution. After the hydrogenation reaction, the reaction mixture is heated to about 100 ° C. (to effect isomerization of the C-6 position from the beta configuration to the alpha configuration) and then cooled to about 40 ° C. to about 50 ° C. Pd / C is filtered off for workup. In one embodiment, n-butyl acetate and acid are added to the filtrate. In other embodiments, the acid is hydrochloric acid (HCl). The aqueous layer is separated and the pH is checked to confirm that it is acidic and then discarded. The product-rich organic phase is treated with activated carbon. In one embodiment, the activated carbon is filtered off, the resulting product-rich filtrate is concentrated by distillation, and the resulting product suspension is cooled to about 10 ° C to about 30 ° C. In other embodiments, the product suspension is cooled to about 15 ° C to about 20 ° C. The suspension containing compound 6 is isolated and washed with n-butyl acetate. Compound 6 is filtered using a pressure filter. In one embodiment, drying is performed in a pressure filter at about 80 ° C. under vacuum.

工程５の一実施形態において、Ｅ／Ｚ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（５Ａ）、水、ＮａＯＨ溶液（例えば、５０重量％）、およびＰｄ／Ｃを、約５ｂａｒのＨ２ガスと約１００℃〜約１０５℃の温度で、Ｈ２の取り込みが終わるまで混合する。反応混合物を約４０℃〜約５０℃に冷却し、Ｐｄ／Ｃを濾別する。酢酸ｎ−ブチルおよびＨＣｌを、化合物６を含有する溶液に添加する。一実施形態において、水相を分離し、廃棄する。生成物に富む有機相を活性炭で処理する。活性炭を濾別し、濾液を別の反応器に移し、そこで蒸留により濃縮し、次いで生成物懸濁液を約５℃〜約２０℃に冷却する。一実施形態において、化合物６を濾過によって単離し、濾液を、真空下、約８０℃で、加圧フィルター上で乾燥させる。 In one embodiment of Step 5, E / Z-3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid (5A), water, NaOH solution (eg, 50% by weight), and Pd / C is mixed with about 5 bar of H 2 gas at a temperature of about 100 ° C. to about 105 ° C. until the uptake of H 2 is complete. The reaction mixture is cooled to about 40 ° C. to about 50 ° C. and Pd / C is filtered off. N-Butyl acetate and HCl are added to the solution containing compound 6. In one embodiment, the aqueous phase is separated and discarded. The product-rich organic phase is treated with activated carbon. The activated carbon is filtered off and the filtrate is transferred to another reactor where it is concentrated by distillation and the product suspension is then cooled to about 5 ° C to about 20 ° C. In one embodiment, compound 6 is isolated by filtration and the filtrate is dried on a pressure filter at about 80 ° C. under vacuum.

他の実施形態において、化合物６を調製するための上記の水素化／異性化反応は、２相（化合物５または化合物５Ａから出発）で行われる。まず、水素化を約４〜５ｂａｒ、約２０℃〜約４０℃で行い、次に、反応混合物を約９５℃〜約１０５℃に加熱する。反応混合物を加熱すると、６位のエチル基が、最初に形成された６ベータ立体配置から所望の６アルファ立体配置に異性化される。反応混合物は、異性化が完了するまで加熱する。   In other embodiments, the hydrogenation / isomerization reaction described above to prepare compound 6 is performed in two phases (starting from compound 5 or compound 5A). First, the hydrogenation is carried out at about 4-5 bar, about 20 ° C. to about 40 ° C., and then the reaction mixture is heated to about 95 ° C. to about 105 ° C. When the reaction mixture is heated, the ethyl group at the 6-position is isomerized from the initially formed 6beta configuration to the desired 6alpha configuration. The reaction mixture is heated until isomerization is complete.

工程６
工程６は３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（６）をＮａＢＨ４と反応させて結晶性オベチコール酸を形成する工程である。一実施形態において、工程６は、塩基性水溶液中、約８５℃〜約１１０℃の温度で実施される。一実施形態において、温度は約９０℃〜約９５℃である。一実施形態において、塩基性溶液はＮａＯＨ水溶液である。一実施形態において、塩基性溶液は、５０重量％のＮａＯＨ溶液と水との混合物である。一実施形態において、化合物６およびＮａＢＨ４の反応混合物を約３時間〜約５時間撹拌した。他の実施形態において、反応混合物を約４時間撹拌した。 Step 6
Step 6 is a step of reacting 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β-cholan-24-acid (6) with NaBH 4 to form crystalline obeticholic acid. In one embodiment, Step 6 is performed in a basic aqueous solution at a temperature of about 85 ° C to about 110 ° C. In one embodiment, the temperature is from about 90 ° C to about 95 ° C. In one embodiment, the basic solution is an aqueous NaOH solution. In one embodiment, the basic solution is a mixture of 50 wt% NaOH solution and water. In one embodiment, the reaction mixture of compound 6 and NaBH 4 was stirred for about 3 hours to about 5 hours. In other embodiments, the reaction mixture was stirred for about 4 hours.

後処理のために、反応が完了した後、混合物を約８０℃に冷却し、冷却された反応器に移す。一実施形態において、約２０℃〜約６０℃で、酢酸ｎ−ブチルおよび酸を添加する。一実施形態において、温度は約４０℃〜約４５℃である。他の実施形態において、酸はクエン酸である。水層を分離し、ｐＨ値を調べて酸性であることを確認した後、廃棄する。生成物に富む有機相を蒸留により濃縮する。一実施形態において、酢酸ｎ−ブチルを残留物に加え、再び留去する。一実施形態において、酢酸ｎ−ブチルを残留物に再び加え、次いで、ゆっくりと冷却する。他の実施形態において、残留物に約５０℃で種を入れる。他の実施形態において、結晶化が起こった後、混合物を５２℃に加熱し、その後、約１５℃〜約２０℃にゆっくりと冷却する。他の実施形態において、残留物を１５℃〜約２０℃に冷却する。一実施形態において、得られたオベチコール酸を酢酸ｎ−ブチルで洗浄する。一実施形態において、オベチコール酸を単離し、酢酸ｎ−ブチルで洗浄する（例えば、加圧フィルター中で）。他の実施形態において、加圧フィルターは不活性である。結晶性生成物が真空下、約６０℃で乾燥され、２θが約５．０度および約５．３度に特徴的なピークを含む、図４１に示したものと実質的に類似したＸ線回折パターンによって特徴付けられる形態Ａと同定される。一実施形態において、生成される結晶性オベチコール酸は有機溶媒（例えば、ヘプタン）から単離され、２θが約５．０度および約５．３度に特徴的なピークを含むＸ線回折パターンによって特徴付けられる。一実施形態において、結晶性オベチコール酸形態Ａは、図４１に示したものと実質的に類似したＸ線回折パターンによって特徴付けられる。結晶性オベチコール酸形態Ａの同定および特徴付けに関する詳細については実施例３を参照されたい。 For workup, after the reaction is complete, the mixture is cooled to about 80 ° C. and transferred to a cooled reactor. In one embodiment, at about 20 ° C. to about 60 ° C., n-butyl acetate and acid are added. In one embodiment, the temperature is from about 40 ° C to about 45 ° C. In other embodiments, the acid is citric acid. The aqueous layer is separated and the pH is checked to confirm that it is acidic and then discarded. The product rich organic phase is concentrated by distillation. In one embodiment, n-butyl acetate is added to the residue and distilled off again. In one embodiment, n-butyl acetate is added again to the residue and then slowly cooled. In other embodiments, the residue is seeded at about 50 ° C. In other embodiments, after crystallization has occurred, the mixture is heated to 52 ° C. and then slowly cooled to about 15 ° C. to about 20 ° C. In other embodiments, the residue is cooled to 15 ° C to about 20 ° C. In one embodiment, the resulting obeticholic acid is washed with n-butyl acetate. In one embodiment, oveticholic acid is isolated and washed with n-butyl acetate (eg, in a pressure filter). In other embodiments, the pressure filter is inert. X-ray substantially similar to that shown in FIG. 41 where the crystalline product is dried under vacuum at about 60 ° C. and 2θ contains peaks characteristic at about 5.0 degrees and about 5.3 degrees Identified as Form A characterized by a diffraction pattern. In one embodiment, the crystalline obeticholic acid produced is isolated from an organic solvent (eg, heptane) and is analyzed by an X-ray diffraction pattern with 2θ including characteristic peaks at about 5.0 degrees and about 5.3 degrees. Characterized. In one embodiment, crystalline obeticholic acid form A is characterized by an X-ray diffraction pattern substantially similar to that shown in FIG. See Example 3 for details regarding the identification and characterization of crystalline obeticholic acid Form A.

工程７
工程７は、結晶性オベチコール酸形態Ａをオベチコール酸形態１に変換する工程である。一実施形態において、工程７は、結晶性オベチコール酸形態ＡをＮａＯＨ水溶液に溶解し、ＨＣｌを添加する工程を含む。 Step 7
Step 7 is a step of converting crystalline oveticholic acid form A to oveticholic acid form 1. In one embodiment, Step 7 comprises dissolving crystalline oveticholic acid Form A in aqueous NaOH and adding HCl.

一実施形態において、結晶性オベチコール酸を水および苛性ソーダ溶液（５０重量％）に約２０℃〜約５０℃で溶解する。一実施形態において、温度は３０℃〜約４０℃である。一実施形態において、結晶性オベチコール酸は形態Ａである。一実施形態において、得られる結晶性オベチコール酸形態Ａの溶液を約２０℃〜約５０℃で希釈酸に添加する。他の実施形態において、温度は約３０℃〜約４０℃である。他の実施形態において、酸は塩酸（例えば、３７％）である。一実施形態において、３７％塩酸溶液を水で約１体積％未満に希釈する。一実施形態において、３７％塩酸溶液を水で約０．７体積％に希釈する。一実施形態において、生成物の希釈酸懸濁液を、約２０℃〜約５０℃で約３０分間撹拌する。他の実施形態において、温度は約３０℃〜約４０℃である。一実施形態において、オベチコール酸形態１を単離し、約２０℃ＮＭＴの水で（例えば、加圧フィルター中で）洗浄する。一実施形態において、オベチコール酸形態１オベチコール酸形態１を単離し、約２０℃ＮＭＴの水で（例えば、加圧フィルター中で）洗浄する。他の実施形態において、加圧フィルターは不活性である。生成物を、真空下、約５０℃ＮＭＴの温度で、加圧フィルターで乾燥させる。   In one embodiment, crystalline obeticholic acid is dissolved in water and caustic soda solution (50 wt%) at about 20 ° C. to about 50 ° C. In one embodiment, the temperature is from 30 ° C to about 40 ° C. In one embodiment, the crystalline obeticholic acid is Form A. In one embodiment, the resulting crystalline obeticholic acid Form A solution is added to the dilute acid at about 20 ° C to about 50 ° C. In other embodiments, the temperature is from about 30 ° C to about 40 ° C. In other embodiments, the acid is hydrochloric acid (eg, 37%). In one embodiment, the 37% hydrochloric acid solution is diluted with water to less than about 1% by volume. In one embodiment, the 37% hydrochloric acid solution is diluted with water to about 0.7% by volume. In one embodiment, the diluted acid suspension of the product is stirred at about 20 ° C. to about 50 ° C. for about 30 minutes. In other embodiments, the temperature is from about 30 ° C to about 40 ° C. In one embodiment, obeticholic acid form 1 is isolated and washed with about 20 ° C. NMT water (eg, in a pressure filter). In one embodiment, obeticholic acid form 1 obeticholic acid form 1 is isolated and washed with water at about 20 ° C. NMT (eg, in a pressure filter). In other embodiments, the pressure filter is inert. The product is dried on a pressure filter under vacuum at a temperature of about 50 ° C. NMT.

本願の方法は、オベチコール酸形態１の調製において結晶性中間体を利用するが、これは、予期しなかったことに、最終生成物の調製全体および純度において有意な改善をもたらした。特に、合成の工程６は新規な結晶形態のオベチコール酸を生成する。この結晶形態の生成は、実質的に純粋なオベチコール酸形態１をもたらす。   The present method utilized a crystalline intermediate in the preparation of obeticholic acid form 1, which unexpectedly resulted in a significant improvement in the overall preparation and purity of the final product. In particular, step 6 of synthesis produces a novel crystalline form of obeticholic acid. Formation of this crystalline form results in substantially pure obeticholic acid form 1.

本願の方法は、従来技術で開示された方法を改善するものである。オベチコール酸の調製は、米国特許出願公開第２００９／００６２５２６Ａ１号明細書（本明細書では「‘５２６刊行物」と呼ぶ）、米国特許第７，１３８，３９０号明細書（本明細書では「‘３９０特許」と呼ぶ）、および国際公開第２００６／１２２９７７号パンフレット（本明細書では「‘９７７出願」と呼ぶ）に開示されている。 The method of the present application is an improvement over the method disclosed in the prior art. The preparation of obeticholic acid is described in U.S. Patent Application Publication No. 2009/0062526 A1 (referred to herein as the '526 publication), U.S. Patent No. 7,138,390 (referred to herein as'' 390 patent), and WO 2006/122977 (referred to herein as the “'977 application”).

‘３９０特許におけるオベチコール酸の調製方法（本明細書では「‘３９０方法」と呼ぶ）を、スキーム３（Ｒはエチル基である）に示す：
The method for preparing obeticholic acid in the '390 patent (referred to herein as the “' 390 method”) is shown in Scheme 3 (R is an ethyl group):

この方法は数工程を含むが、一連の欠点を提示する。全ての工程で、反応生成物がクロマトグラフィーカラム、すなわち、工業規模では使用することができない非常に高価な分離方法で精製される。さらに、工程２における反応収率は非常に低く（１２〜１３％）、全体的な収率はかなり低下し、それは３．５％より低い。この方法はまた、発癌剤として知られるヘキサメチレンホスホンアミドを反応体として使用する。   Although this method involves several steps, it presents a series of drawbacks. In all steps, the reaction products are purified by chromatography columns, ie very expensive separation methods that cannot be used on an industrial scale. Furthermore, the reaction yield in step 2 is very low (12-13%) and the overall yield is considerably reduced, which is lower than 3.5%. This method also uses hexamethylenephosphonamide, known as a carcinogen, as the reactant.

‘９７７出願におけるオベチコール酸の調製方法をスキーム４に示す。
The method for preparing obeticholic acid in the '977 application is shown in Scheme 4.

オベチコール酸を調製するための‘９７７方法は、１つの精製工程（工程７）と、それに続く２つのさらなる精製工程とを含む８工程の合成プロセスである。‘９７７方法と本願の方法との間には、かなりの数の相違がある。以下の表Ａは、２つの方法間の相違点の少なくともいくつかを記載する：   The '977 method for preparing obeticholic acid is an eight step synthetic process that includes one purification step (step 7) followed by two further purification steps. There are a considerable number of differences between the '977 method and the present method. Table A below lists at least some of the differences between the two methods:

‘９７７方法と比較した本願の方法における差異は、規模拡大の最適化、安全性、ならびに純度および方法全体の改善に関連する改善など、本方法に顕著な改善をもたらす。本願の方法によって製造されるオベチコール酸の純度は、実質的に純粋である。特に、本願の方法によって製造されるオベチコール酸は、‘３９０方法および‘９７７方法を含む従来技術の方法によって製造されるオベチコール酸よりも実質的に純粋である。例えば、本願の方法によって製造されたオベチコール酸と‘９７７方法によって製造されたオベチコール酸の分析証明書に示された結果の比較を、以下の表Ｂに示す。不純物のパーセンテージは、ＨＰＬＣ法を用いて測定した。   Differences in the method of the present application compared to the '977 method result in significant improvements to the method, such as scale-up optimization, safety, and improvements related to purity and overall method improvements. The purity of obeticholic acid produced by the process of the present application is substantially pure. In particular, obeticholic acid produced by the present process is substantially more pure than obeticholic acid produced by prior art processes, including the '390 and' 977 processes. For example, a comparison of the results shown in the certificate of analysis of obeticholic acid produced by the present method and obeticholic acid produced by the '977 method is shown in Table B below. The percentage of impurities was measured using the HPLC method.

合成中間体としての結晶性オベチコール酸
オベチコール酸は、現在、非結晶性固体としての医薬品有効成分として開発されている。オベチコール酸の開発を促進するために、初期結晶化および多形性研究を行って、結晶形態が入手可能であるか否か、そしてもし入手可能であるなら、それらが開発に好適であるか否かを決定した。種々の溶媒中での材料の挙動をより良く理解するように設計された予備溶解度スクリーニングの後、その材料にはゲルを形成する傾向があり、おそらく結晶化可能であると思われた。次いで、広範な多形体スクリーニングを実施し、材料を広範囲の溶媒および結晶化条件に曝露して、可能な限り多くの関連する多形体を同定し、特徴を明らかにした。このスクリーニングにおいて、５つの異なる固体形態が見出された。 Crystalline Obeticholic Acid as a Synthetic Intermediate Obeticholic acid is currently being developed as an active pharmaceutical ingredient as an amorphous solid. To facilitate the development of obeticholic acid, initial crystallization and polymorphism studies are conducted to determine whether crystalline forms are available and, if available, whether they are suitable for development. I decided. After a pre-solubility screen designed to better understand the behavior of the material in various solvents, the material tended to form a gel and was probably crystallizable. Extensive polymorph screening was then performed and the material was exposed to a wide range of solvents and crystallization conditions to identify and characterize as many related polymorphs as possible. In this screening, five different solid forms were found.

オベチコール酸の３つの形態（Ａ、ＣおよびＤ）は、０．２５モル当量の水および様々な量の広範な有機溶媒を含む混合水和物／溶媒和物であった。加熱すると、これらの固体は結晶性および溶媒を同時に失い、残念ながら、これらの溶媒和形態はそれらの低い融解温度および高い溶媒含有量のために、医薬成分としてのさらなる開発には適さなかった。また、このタイプに類似した「不適切な」形態が存在することにも留意されたい。例えば、低融点溶媒和形態、ならびにＳＣＸＲＤ（単結晶Ｘ線回折）によって一水和物／アニソール溶媒和物であることが示された別の形態の単結晶が、後の実験で見出された。   The three forms of obeticholic acid (A, C, and D) were mixed hydrate / solvates containing 0.25 molar equivalents of water and various amounts of a wide range of organic solvents. Upon heating, these solids lost crystallinity and solvent simultaneously, unfortunately, these solvated forms were not suitable for further development as pharmaceutical ingredients because of their low melting temperature and high solvent content. It should also be noted that there are “unsuitable” forms similar to this type. For example, low melting solvated forms, as well as other forms of single crystals that were shown to be monohydrate / anisole solvates by SCXRD (single crystal X-ray diffraction) were found in later experiments. .

残りの２つの形態は融解温度がより高く、潜在的により有望であったが、それらのうちの１つ（形態Ｇ）は大規模では再現することができず、多くの試みにもかかわらず繰り返すことができなかった。この形態を単独で製造することが困難であるため、開発には不適当である。残りの非溶媒和形態Ｆは再現可能な方法で調製されたが、多くの再結晶手順、および有毒な溶媒であって、アミン、アルカリ、強酸、または高温もしくは断熱圧縮によって増感された場合、爆発することがあるニトロメタンの使用を必要とした。ニトロメタンの残留レベルに関する懸念により、形態Ｆもまた開発に適さないと判断した。結晶性オベチコール酸形態Ｉもまた同定された。   The remaining two forms had higher melting temperatures and were potentially more promising, but one of them (Form G) could not be reproduced on a large scale and repeated despite many attempts I couldn't. This form is unsuitable for development because it is difficult to produce alone. The remaining unsolvated Form F was prepared in a reproducible manner, but was sensitized by a number of recrystallization procedures and toxic solvents, such as amines, alkalis, strong acids, or high temperature or adiabatic compression, Requires the use of nitromethane, which can explode. Due to concerns about residual levels of nitromethane, Form F was also judged unsuitable for development. Crystalline obeticholic acid form I has also been identified.

初期結晶化および多形体研究の全体的な結果により、材料は様々な形態の結晶性材料を形成し得るが、結晶性材料または形態はどれも開発に適切であるとは考えられないことが明らかになった。   The overall results of initial crystallization and polymorph studies reveal that the material can form various forms of crystalline material, but none of the crystalline material or form is considered suitable for development Became.

本願の方法の最後から２番目の工程の中間体として結晶性オベチコール酸を製造することの重要性が発見されたのはずっと後のことであった。結晶性オベチコール酸は、本願の方法を用いて大規模で容易に単離することができた。この結晶性オベチコール酸は、初期の結晶化および多形体研究からの形態Ａと一致すると決定された。本願の方法の工程７において合成中間体として製造される形成、単離の容易さ、および高い純度の結晶性オベチコール酸は、実際、実質的に純粋なオベチコール酸の調製に重要である。   It was long after that the importance of producing crystalline obeticholic acid as an intermediate in the penultimate step of the process of the present application was discovered. Crystalline obeticholic acid could be easily isolated on a large scale using the method of the present application. This crystalline oveticholic acid was determined to be consistent with Form A from early crystallization and polymorph studies. The formation, ease of isolation, and high purity crystalline obeticholic acid produced as a synthetic intermediate in step 7 of the present method are in fact important for the preparation of substantially pure obeticholic acid.

一実施形態において、本発明は、２θが約５．０度および約５．３度に特徴的なピークを含むＸ線回折パターンによって特徴付けられる結晶性オベチコール酸形態Ａに関する。一実施形態において、Ｘ線回折パターンは、２θが約５．０度、約５．３度および約７．７度に特徴的なピークを含む。一実施形態において、Ｘ線回折パターンは、２θが約５．０度、約５．３度、約７．７度および約１０．０度に特徴的なピークを含む。一実施形態において、Ｘ線回折パターンは、２θが約５．０度、約５．３度、約７．７度、約１０．０度および約１１．０度に特徴的なピークを含む。一実施形態において、Ｘ線回折パターンは、２θが約５．０度、約５．３度、約７．７度、約１０．０度、約１１．０度および約１２．４度に特徴的なピークを含む。一実施形態において、Ｘ線回折パターンは、２θが約５．０度、約５．３度、約７．７度、約１０．０度、約１１．０度、約１２．４度および約１４．９度に特徴的なピークを含む。一実施形態において、本発明は、図４１に示したものと実質的に類似したＸ線回折パターンによって特徴付けられる結晶性オベチコール酸形態Ａに関する。一実施形態において、Ｘ線回折パターンは、ＣｕＫα線を用いる回折計（４０ｋＶ、４０ｍＡ）で集められる。   In one embodiment, the present invention relates to crystalline obeticholic acid Form A characterized by an X-ray diffraction pattern with 2θ comprising peaks characteristic at about 5.0 degrees and about 5.3 degrees. In one embodiment, the X-ray diffraction pattern includes peaks characteristic of 2θ at about 5.0 degrees, about 5.3 degrees, and about 7.7 degrees. In one embodiment, the X-ray diffraction pattern includes peaks characteristic of 2θ at about 5.0 degrees, about 5.3 degrees, about 7.7 degrees, and about 10.0 degrees. In one embodiment, the X-ray diffraction pattern includes peaks characteristic of 2θ at about 5.0 degrees, about 5.3 degrees, about 7.7 degrees, about 10.0 degrees, and about 11.0 degrees. In one embodiment, the X-ray diffraction pattern is characterized by 2θ of about 5.0 degrees, about 5.3 degrees, about 7.7 degrees, about 10.0 degrees, about 11.0 degrees, and about 12.4 degrees. Including typical peaks. In one embodiment, the X-ray diffraction pattern has a 2θ of about 5.0 degrees, about 5.3 degrees, about 7.7 degrees, about 10.0 degrees, about 11.0 degrees, about 12.4 degrees, and about It includes a characteristic peak at 14.9 degrees. In one embodiment, the invention relates to crystalline obeticholic acid form A characterized by an X-ray diffraction pattern substantially similar to that shown in FIG. In one embodiment, X-ray diffraction patterns are collected with a diffractometer (40 kV, 40 mA) using CuKα rays.

一実施形態において、本発明は、結晶性オベチコール酸であって、前記結晶性オベチコール酸は形態Ａであり、かつ約９０％超の純度を有するオベチコール酸に関する。一実施形態において、前記結晶性オベチコール酸形態Ａの純度は、ＨＰＬＣによって測定される。一実施形態において、本発明は、結晶性オベチコール酸形態Ａ、または薬学的に許容されるその塩、溶媒和物もしくはアミノ酸抱合体に関する。一実施形態において、溶媒和物はｎ−ブチル溶媒和物である。一実施形態において、純度は約９２％超である。一実施形態において、純度は約９４％超である。一実施形態において、純度は約９６％超である。一実施形態において、純度は約９８％超である。一実施形態において、純度は約９９％超である。   In one embodiment, the present invention relates to crystalline oveticholic acid, wherein said crystalline oveticholic acid is Form A and has a purity of greater than about 90%. In one embodiment, the purity of the crystalline obeticholic acid form A is measured by HPLC. In one embodiment, the invention relates to crystalline obeticholic acid form A, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate or amino acid conjugate thereof. In one embodiment, the solvate is an n-butyl solvate. In one embodiment, the purity is greater than about 92%. In one embodiment, the purity is greater than about 94%. In one embodiment, the purity is greater than about 96%. In one embodiment, the purity is greater than about 98%. In one embodiment, the purity is greater than about 99%.

一実施形態において、本発明は、結晶性オベチコール酸であって、前記結晶性オベチコール酸は形態Ａであり、かつ約９０％超の力価を有するオベチコール酸に関する。一実施形態において、前記結晶性オベチコール酸形態Ａの純度は、ＨＰＬＣおよび／または当該技術分野で知られる他の分析手順によって決定される。一実施形態において、本発明は、結晶性オベチコール酸形態Ａ、または薬学的に許容されるその塩、溶媒和物もしくはアミノ酸抱合体に関する。一実施形態において、溶媒和物は水和物である。一実施形態において、力価は約９２％超である。一実施形態において、力価は約９４％超である。一実施形態において、力価は約９６％超である。一実施形態において、力価は約９８超である。一実施形態において、力価は約９９％超である。   In one embodiment, the present invention relates to crystalline oveticholic acid, wherein said crystalline oveticholic acid is Form A and has a titer greater than about 90%. In one embodiment, the purity of the crystalline obeticholic acid form A is determined by HPLC and / or other analytical procedures known in the art. In one embodiment, the invention relates to crystalline obeticholic acid form A, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate or amino acid conjugate thereof. In one embodiment, the solvate is a hydrate. In one embodiment, the titer is greater than about 92%. In one embodiment, the titer is greater than about 94%. In one embodiment, the titer is greater than about 96%. In one embodiment, the titer is greater than about 98. In one embodiment, the titer is greater than about 99%.

一実施形態において、本発明は、６−エチルウルソデオキシコール酸、３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸、６β−エチルケノデオキシコール酸、３α，７α−ジヒドロキシ−６−エチリデン−５β−コラン−２４−酸、ケノデオキシコール酸、および３α（３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オイルオキシ）−７α−ヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−酸から選択される１種以上の不純物を合計で約４％未満含有する結晶性オベチコール酸形態Ａに関する。一実施形態において、不純物の合計は約３．８％未満である。一実施形態において、不純物の合計は約３．６％未満である。   In one embodiment, the invention provides 6-ethylursodeoxycholic acid, 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β-cholan-24-acid, 6β-ethylchenodeoxycholic acid, 3α, 7α-dihydroxy-6. Ethylidene-5β-cholan-24-acid, chenodeoxycholic acid, and 3α (3α, 7α-dihydroxy-6α-ethyl-5β-cholan-24-oiloxy) -7α-hydroxy-6α-ethyl-5β-chorane-24 -Relates to crystalline obeticholic acid Form A containing a total of less than about 4% of one or more impurities selected from acids. In one embodiment, the total impurity is less than about 3.8%. In one embodiment, the total impurities is less than about 3.6%.

一実施形態において、本発明は、２θが約４．２度、約６．４度、約９．５度、約１２．５度および約１６．７度に特徴的なピークを含むＸ線回折パターンによって特徴付けられる結晶性オベチコール酸形態Ｃに関する。一実施形態において、Ｘ線回折パターンは、２θが約４．２度、約６．４度、約９．５度、約１２．５度、約１２．６度、約１５．５度、約１５．８度、約１６．０度、約１６．７度および約１９．０度に特徴的なピークを含む。一実施形態において、Ｘ線回折パターンは、２θが約４．２度、約６．４度、約８．３度、約９．５度、約１１．１度、約１２．２度、約１２．５度、約１２．６度、約１５．５度、約１５．８度、約１６．０度、約１６．３度、約１６．７度、約１８．６度および約１９．０度に特徴的なピークを含む。一実施形態において、Ｘ線回折パターンは、２θが約４．２度、約６．４度、約８．３度、約９．５度、約１１．１度、約１２．２度、約１２．５度、約１２．６度、約１５．５度、約１５．８度、約１６．０度、約１６．３度、約１６．７度、約１７．０度、約１７．８度、約１８．６度、約１８．８度、約１９．０度、約２０．５度および約２０．９度に特徴的なピークを含む。一実施形態において、本発明は、図５に示したものと実質的に類似したＸ線回折パターンによって特徴付けられる結晶性オベチコール酸形態Ｃに関する。一実施形態において、Ｘ線回折パターンは、ＣｕＫα線を用いる回折計（４０ｋＶ、４０ｍＡ）で集められる。一実施形態において、Ｘ線回折パターンは、約１２．０〜約１２．８および約１５．４〜約２１．０に特徴的なピークを含む。   In one embodiment, the present invention provides X-ray diffraction comprising peaks characteristic of 2θ at about 4.2 degrees, about 6.4 degrees, about 9.5 degrees, about 12.5 degrees, and about 16.7 degrees. Relates to crystalline obeticholic acid form C characterized by a pattern. In one embodiment, the X-ray diffraction pattern has a 2θ of about 4.2 degrees, about 6.4 degrees, about 9.5 degrees, about 12.5 degrees, about 12.6 degrees, about 15.5 degrees, about Includes characteristic peaks at 15.8 degrees, about 16.0 degrees, about 16.7 degrees and about 19.0 degrees. In one embodiment, the X-ray diffraction pattern has a 2θ of about 4.2 degrees, about 6.4 degrees, about 8.3 degrees, about 9.5 degrees, about 11.1 degrees, about 12.2 degrees, about 12.5 degrees, about 12.6 degrees, about 15.5 degrees, about 15.8 degrees, about 16.0 degrees, about 16.3 degrees, about 16.7 degrees, about 18.6 degrees, and about 19. Includes a characteristic peak at 0 degrees. In one embodiment, the X-ray diffraction pattern has a 2θ of about 4.2 degrees, about 6.4 degrees, about 8.3 degrees, about 9.5 degrees, about 11.1 degrees, about 12.2 degrees, about 12.5 degrees, approximately 12.6 degrees, approximately 15.5 degrees, approximately 15.8 degrees, approximately 16.0 degrees, approximately 16.3 degrees, approximately 16.7 degrees, approximately 17.0 degrees, approximately 17. It includes characteristic peaks at 8 degrees, about 18.6 degrees, about 18.8 degrees, about 19.0 degrees, about 20.5 degrees, and about 20.9 degrees. In one embodiment, the present invention relates to crystalline obeticholic acid form C characterized by an X-ray diffraction pattern substantially similar to that shown in FIG. In one embodiment, X-ray diffraction patterns are collected with a diffractometer (40 kV, 40 mA) using CuKα rays. In one embodiment, the X-ray diffraction pattern includes peaks characteristic of about 12.0 to about 12.8 and about 15.4 to about 21.0.

一実施形態において、本発明は、Ｍｅｔｔｌｅｒ ＤＳＣ ８２３ｅ装置による測定で、約９８±２℃に吸熱値を有する示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムにより特徴付けられる結晶性オベチコール酸形態Ｃに関する。一実施形態において、Ｍｅｔｔｌｅｒ ＤＳＣ ８２３ｅ装置により測定される示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムは約９８±２℃に吸熱値を有する。   In one embodiment, the present invention relates to crystalline obeticholic acid Form C characterized by a differential scanning calorimetry (DSC) thermogram having an endotherm value of about 98 ± 2 ° C. as measured by a Mettler DSC 823e instrument. In one embodiment, a differential scanning calorimetry (DSC) thermogram measured by a Mettler DSC 823e instrument has an endotherm value of about 98 ± 2 ° C.

一実施形態において、本発明は、結晶性オベチコール酸であって、前記結晶性オベチコール酸は形態Ｃであり、かつ約９０％超の純度を有する結晶性オベチコール酸に関する。一実施形態において、前記結晶性オベチコール酸形態Ｃの純度は、ＨＰＬＣによって決定される。一実施形態において、本発明は、結晶性オベチコール酸形態Ｃ、または薬学的に許容されるその塩、溶媒和物もしくはアミノ酸抱合体に関する。一実施形態において、溶媒和物は水和物である。一実施形態において、純度は約９２％超である。一実施形態において、純度は約９４％超である。一実施形態において、純度は約９６％超である。一実施形態において、純度は約９８％超である。一実施形態において、純度は約９９％超である。   In one embodiment, the present invention relates to crystalline oveticholic acid, wherein said crystalline oveticholic acid is Form C and has a purity of greater than about 90%. In one embodiment, the purity of the crystalline obeticholic acid form C is determined by HPLC. In one embodiment, the invention relates to crystalline obeticholic acid form C, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate or amino acid conjugate thereof. In one embodiment, the solvate is a hydrate. In one embodiment, the purity is greater than about 92%. In one embodiment, the purity is greater than about 94%. In one embodiment, the purity is greater than about 96%. In one embodiment, the purity is greater than about 98%. In one embodiment, the purity is greater than about 99%.

一実施形態において、本発明は、結晶性オベチコール酸であって、前記結晶性オベチコール酸は形態Ｃであり、かつ約９０％超の力価を有する結晶性オベチコール酸に関する。
一実施形態において、前記結晶性オベチコール酸形態Ｃの純度は、ＨＰＬＣおよび／または当該技術分野で知られる他の分析手順によって決定される。一実施形態において、本発明は、結晶性オベチコール酸形態Ｃ、または薬学的に許容されるその塩、溶媒和物もしくはアミノ酸抱合体に関する。一実施形態において、
溶媒和物は水和物である。一実施形態において、力価は約９２％超である。一実施形態において、力価は約９４％超である。一実施形態において、力価は約９６％超である。一実施形態において、力価は約９８％超である。一実施形態において、力価は約９９％超である。 In one embodiment, the present invention relates to crystalline oveticholic acid, wherein said crystalline oveticholic acid is Form C and has a titer greater than about 90%.
In one embodiment, the purity of the crystalline obeticholic acid form C is determined by HPLC and / or other analytical procedures known in the art. In one embodiment, the invention relates to crystalline obeticholic acid form C, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate or amino acid conjugate thereof. In one embodiment,
Solvates are hydrates. In one embodiment, the titer is greater than about 92%. In one embodiment, the titer is greater than about 94%. In one embodiment, the titer is greater than about 96%. In one embodiment, the titer is greater than about 98%. In one embodiment, the titer is greater than about 99%.

一実施形態において、本発明は、６−エチルウルソデオキシコール酸、３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸、６β−エチルケノデオキシコール酸、３α，７α−ジヒドロキシ−６−エチリデン−５β−コラン−２４−酸、ケノデオキシコール酸、および３α（３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オイルオキシ）−７α−ヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−酸から選択される１種以上の不純物を合計で約４％未満含有する結晶性オベチコール酸形態Ｃに関する。一実施形態において、不純物の合計は約３．８％未満である。一実施形態において、不純物の合計は約３．６％未満である。   In one embodiment, the invention provides 6-ethylursodeoxycholic acid, 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β-cholan-24-acid, 6β-ethylchenodeoxycholic acid, 3α, 7α-dihydroxy-6. Ethylidene-5β-cholan-24-acid, chenodeoxycholic acid, and 3α (3α, 7α-dihydroxy-6α-ethyl-5β-cholan-24-oiloxy) -7α-hydroxy-6α-ethyl-5β-chorane-24 -Relates to crystalline obeticholic acid Form C containing a total of less than about 4% of one or more impurities selected from acids. In one embodiment, the total impurity is less than about 3.8%. In one embodiment, the total impurities is less than about 3.6%.

本願の実施例３は、これらの結晶形態のオベチコール酸の完全な特徴付けを提供する。   Example 3 of the present application provides a complete characterization of these crystalline forms of obeticholic acid.

オベチコール酸の単結晶Ｘ線構造を得て、絶対立体化学を割り当てた。例えば、結晶性オベチコール酸形態Ｇの単結晶Ｘ線構造を、０．１℃／ｍｉｎで５℃に冷却し、続いてＲＴ／５０℃、８時間のサイクルで１週間行って熟成させた後のアセトニトリル溶液からオベチコール酸を再結晶させて得た結晶から決定した。   A single crystal X-ray structure of obeticholic acid was obtained and assigned absolute stereochemistry. For example, after the single crystal X-ray structure of crystalline oveticholic acid form G is cooled to 5 ° C. at 0.1 ° C./min, and then aged at RT / 50 ° C. for 8 hours in one week It was determined from crystals obtained by recrystallizing obeticholic acid from acetonitrile solution.

構造は斜方晶系であり、空間群はＰ２１２１２１であり、非対称単位の中にオベチコール酸１分子を含有する。最終のＲ１［Ｉ＞２σ（Ｉ）］＝３．２２％である。フラックパラメータ＝−０．０１（１３）を用いて、以下に示すように分子の絶対立体化学を決定した。構造は無秩序であった。
The structure is orthorhombic, the space group is P2 1 2 1 2 1 and contains one molecule of obeticholic acid in an asymmetric unit. Final R1 [I> 2σ (I)] = 3.22%. Using the Flack parameter = −0.01 (13), the absolute stereochemistry of the molecule was determined as shown below. The structure was disordered.

オベチコール酸形態１（非結晶性）対結晶性オベチコール酸形態Ｆのバイオアベイラビリティ研究を行った（実施例７）。研究の結果は、固体オベチコール酸の物理状態が、対象に経口投与したときの分子のバイオアベイラビリティに一定の役割を果たし得ること示している。固体オベチコール酸形態１（非結晶性）および結晶性形態Ｆの、経口投与後の血漿中動態および腸内吸収効率ならびに薬物動態を、当該技術分野で知られた方法により評価した。本発明の実施例８は、オベチコール酸の形態１または形態Ｆの投与後の、オベチコール酸血漿中濃度対時間、ｔｍａｘ、ＣｍａｘおよびＡＵＣのプロファイルを示す（図３７〜３８を参照）。結晶性形態Ｆは、オベチコール酸形態１（非結晶性）よりも高いバイオアベイラビリティを有する。血漿プロファイルは、形態Ｆがより効率的に吸収され（より高いＡＵＣ）、かつこの薬物が腸内の内容物中に最適に分布していることを反映して、動態もより安定していることを示している。 A bioavailability study of obeticholic acid form 1 (non-crystalline) versus crystalline obeticholic acid form F was performed (Example 7). The results of the study show that the physical state of solid obeticholic acid can play a role in the bioavailability of the molecule when administered orally to a subject. The plasma kinetics and intestinal absorption efficiencies and pharmacokinetics of solid obeticholic acid form 1 (non-crystalline) and crystalline form F after oral administration were evaluated by methods known in the art. Example 8 of the present invention shows the profile of obeticholic acid plasma concentration versus time, t max, C max and AUC following administration of form 1 or form F of obeticholic acid (see FIGS. 37-38). Crystalline Form F has a higher bioavailability than Obeticholic Acid Form 1 (non-crystalline). The plasma profile is more stable in kinetics, reflecting that Form F is more efficiently absorbed (higher AUC) and that this drug is optimally distributed in the intestinal contents Is shown.

オベチコール酸形態１（非結晶性）の水への溶解度は、形態Ｆのそれよりも僅かに高い。形態Ｆは、熱重量分析（ＴＧＡ）が試験した温度範囲で重量減少を全く示さなかったことから、安定であると思われる。   The solubility of obeticholic acid form 1 (non-crystalline) in water is slightly higher than that of form F. Form F appears to be stable because thermogravimetric analysis (TGA) showed no weight loss over the temperature range tested.

実質的に純粋なオベチコール酸
本願は、実質的に純粋なオベチコール酸、および薬学的に許容されるその塩、溶媒和物またはアミノ酸抱合体を提供する。

薬学的に活性な成分のオベチコール酸に対する他の名称は、ＩＮＴ−７４７、３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−酸、６α−エチル−ケノデオキシコール酸、６−エチル−ＣＤＣＡ、６ＥＣＤＣＡ、およびコラン−２４−酸、６−エチル−３，７−ジヒドロキシ−，（３α，５β，６α，７α）−である。 Substantially pure obeticholic acid The present application provides substantially pure obeticholic acid, and pharmaceutically acceptable salts, solvates or amino acid conjugates thereof.

Other names for the pharmaceutically active ingredient obeticholic acid are: INT-747, 3α, 7α-dihydroxy-6α-ethyl-5β-cholan-24-acid, 6α-ethyl-chenodeoxycholic acid, 6-ethyl-CDCA, 6ECDCA, and cholan-24-acid, 6-ethyl-3,7-dihydroxy-, (3α, 5β, 6α, 7α)-.

本願は、オベチコール酸形態１を含む組成物、および安全で、かつ大規模にオベチコール酸を生成する高純度オベチコール酸形態１の合成方法を提供する。一態様では、オベチコール酸形態１は、商業規模の方法で製造される。「商業規模の方法」という用語は、少なくとも約１００グラムの単一バッチとして実行される方法を指す。一態様では、本願の方法は、高収率（＞８０％）で、かつ少ない不純物で、オベチコール酸形態１を製造する。   The present application provides a composition comprising obeticholic acid form 1 and a method for synthesizing high purity obeticholic acid form 1 that is safe and produces obeticholic acid on a large scale. In one aspect, obeticholic acid form 1 is produced by a commercial scale process. The term “commercial scale method” refers to a method performed as a single batch of at least about 100 grams. In one aspect, the process of the present application produces obeticholic acid form 1 with high yield (> 80%) and low impurities.

本明細書で使用する「純度」という用語は、ＨＰＬＣに基づくオベチコール酸の量を指す。純度は、化合物の「有機」純度に基づく。純度は、水、溶媒、金属、無機塩などのいかなる量の尺度も含まない。一態様では、オベチコール酸の純度は、ピーク下の面積を比較することによって、参照基準の純度と比較される。他の態様では、純度についての既知の基準は、オブチコール酸参照基準である。一態様では、オベチコール酸は、約９６％超の純度を有する。一態様では、オベチコール酸は、約９８％超の純度を有する。例えば、オベチコール酸形態１の純度は、９６．０％、９６．１％、９６．２％、９６．３％、９６．４％、９６．５％、９６．６％、９６．７％、９６．８％、９６．９％、９７．０％、９７．１％、９７．２％、９７．３％、９７．４％、９７．５％、９７．６％、９７．７％、９７．８％、９７．９％、９８．０％、９８．１％、９８．２％、９８．３％、９８．４％、９８．５％、９８．６％、９８．７％、９８．８％、９８．９％、９９．０％、９９．１％、９９．２％、９９．３％、９９．４％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％または９９．９％である。例えば、オベチコール酸形態１の純度は、９８．０％、９８．１％、９８．２％、９８．３％、９８．４％、９８．５％、９８．６％、９８．７％、９８．８％、９８．９％、９９．０％、９９．１％、９９．２％、９９．３％、９９．４％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％または９９．９％である。例えば、オベチコール酸の純度は、９８．０％、９８．５％、９９．０％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％または９９．９％である。例えば、オベチコール酸の純度は、９８．５％、９９．０％または９９．５％である。一実施形態において、オベチコール酸は、オベチコール酸形態１である。   The term “purity” as used herein refers to the amount of obeticholic acid based on HPLC. Purity is based on the “organic” purity of the compound. Purity does not include any measure of quantity such as water, solvents, metals, inorganic salts. In one aspect, the purity of obeticholic acid is compared to the purity of the reference standard by comparing the area under the peak. In other embodiments, the known standard for purity is the obticholic acid reference standard. In one aspect, oveticholic acid has a purity greater than about 96%. In one aspect, oveticholic acid has a purity greater than about 98%. For example, the purity of obeticholic acid form 1 is 96.0%, 96.1%, 96.2%, 96.3%, 96.4%, 96.5%, 96.6%, 96.7%, 96.8%, 96.9%, 97.0%, 97.1%, 97.2%, 97.3%, 97.4%, 97.5%, 97.6%, 97.7%, 97.8%, 97.9%, 98.0%, 98.1%, 98.2%, 98.3%, 98.4%, 98.5%, 98.6%, 98.7%, 98.8%, 98.9%, 99.0%, 99.1%, 99.2%, 99.3%, 99.4%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8% or 99.9%. For example, the purity of obeticholic acid form 1 is 98.0%, 98.1%, 98.2%, 98.3%, 98.4%, 98.5%, 98.6%, 98.7%, 98.8%, 98.9%, 99.0%, 99.1%, 99.2%, 99.3%, 99.4%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8% or 99.9%. For example, the purity of obeticholic acid is 98.0%, 98.5%, 99.0%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8% or 99.9%. For example, the purity of obeticholic acid is 98.5%, 99.0% or 99.5%. In one embodiment, the oveticholic acid is obeticholic acid form 1.

一実施形態において、本発明は、約９８％超の純度を有するオベチコール酸に関する。一実施形態において、純度はＨＰＬＣにより決定される。他の実施形態において、本発明は、オベチコール酸、または薬学的に許容されるその塩、溶媒和物もしくはアミノ酸抱合体に関する。一実施形態において、純度は約９８．５％超である。一実施形態において、純度は約９９．０％超である。一実施形態において、純度は約９９．５％超である。一実施形態において、オベチコール酸は、オベチコール酸形態１である。   In one embodiment, the present invention relates to obeticholic acid having a purity greater than about 98%. In one embodiment, the purity is determined by HPLC. In other embodiments, the invention relates to obeticholic acid, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate or amino acid conjugate thereof. In one embodiment, the purity is greater than about 98.5%. In one embodiment, the purity is greater than about 99.0%. In one embodiment, the purity is greater than about 99.5%. In one embodiment, the oveticholic acid is obeticholic acid form 1.

本明細書で使用する「力価」という用語は、既知の基準（例えば、約９５％〜約１０２％の許容基準）の量に基づくオベチコール酸の量の尺度である。力価は、水、溶媒、有機不純物および無機不純物を含む全ての可能な不純物を考慮する。一態様では、既知の基準はオベチコール酸である。一態様では、オベチコール酸は、約９６％超の力価を有する。一態様では、オベチコール酸は、約９８％超の力価を有する。一態様では、既知の基準はオベチコール酸である。他の態様では、力価は、１００％から、水、硫酸塩灰分、残留溶媒、ならびに他の不純物内容物、例えば６−エチルウルソデオキシコール酸、３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸、６β−エチルケノデオキシコール酸、３α，７α−ジヒドロキシ−６−エチリデン−５β−コラン−２４−酸、ケノデオキシコール酸、および３α（３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オイルオキシ）−７α−ヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−酸の量を差し引いたものである。他の実施形態において、力価は、水、溶媒、金属、無機塩、および他の無機または有機不純物による不純物を説明する。例えば、オベチコール酸形態１の力価は、９６．０％、９６．１％、９６．２％、９６．３％、９６．４％、９６．５％、９６．６％、９６．７％、９６．８％、９６．９％、９７．０％、９７．１％、９７．２％、９７．３％、９７．４％、９７．５％、９７．６％、９７．７％、９７．８％、９７．９％、９８．０％、９８．１％、９８．２％、９８．３％、９８．４％、９８．５％、９８．６％、９８．７％、９８．８％、９８．９％、９９．０％、９９．１％、９９．２％、９９．３％、９９．４％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％または９９．９％である。一態様では、オベチコール酸形態１の力価は、９８．０％、９８．１％、９８．２％、９８．３％、９８．４％、９８．５％、９８．６％、９８．７％、９８．８％、９８．９％、９９．０％、９９．１％、９９．２％、９９．３％、９９．４％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％または９９．９％である。例えば、オベチコール酸の力価は、９８．０％、９８．５％、９９．０％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％または９９．９％である。例えば、オベチコール酸の力価は、９８．５％、９９．０％または９９．５％である。一実施形態において、オベチコール酸は、オベチコール酸形態１である。   As used herein, the term “titer” is a measure of the amount of obeticholic acid based on the amount of a known standard (eg, an acceptable standard of about 95% to about 102%). The titer considers all possible impurities including water, solvents, organic impurities and inorganic impurities. In one aspect, the known standard is obeticholic acid. In one aspect, obeticholic acid has a titer greater than about 96%. In one aspect, obeticholic acid has a titer greater than about 98%. In one aspect, the known standard is obeticholic acid. In other embodiments, the titer ranges from 100% to water, sulfate ash, residual solvent, and other impurity contents such as 6-ethylursodeoxycholic acid, 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto- 5β-cholan-24-acid, 6β-ethyl chenodeoxycholic acid, 3α, 7α-dihydroxy-6-ethylidene-5β-cholan-24-acid, chenodeoxycholic acid, and 3α (3α, 7α-dihydroxy-6α-ethyl-5β- The amount of cholan-24-oiloxy) -7α-hydroxy-6α-ethyl-5β-cholan-24-acid is subtracted. In other embodiments, the titer accounts for impurities due to water, solvents, metals, inorganic salts, and other inorganic or organic impurities. For example, the titers of obeticholic acid form 1 are 96.0%, 96.1%, 96.2%, 96.3%, 96.4%, 96.5%, 96.6%, 96.7% 96.8%, 96.9%, 97.0%, 97.1%, 97.2%, 97.3%, 97.4%, 97.5%, 97.6%, 97.7% 97.8%, 97.9%, 98.0%, 98.1%, 98.2%, 98.3%, 98.4%, 98.5%, 98.6%, 98.7% 98.8%, 98.9%, 99.0%, 99.1%, 99.2%, 99.3%, 99.4%, 99.5%, 99.6%, 99.7% 99.8% or 99.9%. In one aspect, the titer of obeticholic acid form 1 is 98.0%, 98.1%, 98.2%, 98.3%, 98.4%, 98.5%, 98.6%, 98. 7%, 98.8%, 98.9%, 99.0%, 99.1%, 99.2%, 99.3%, 99.4%, 99.5%, 99.6%, 99. 7%, 99.8% or 99.9%. For example, the titer of obeticholic acid is 98.0%, 98.5%, 99.0%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8% or 99.9% . For example, the titer of obeticholic acid is 98.5%, 99.0% or 99.5%. In one embodiment, the oveticholic acid is obeticholic acid form 1.

一実施形態において、本発明は、６−エチルウルソデオキシコール酸、３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸、６β−エチルケノデオキシコール酸、３α，７α−ジヒドロキシ−６−エチリデン−５β−コラン−２４−酸、ケノデオキシコール酸、および３α（３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オイルオキシ）−７α−ヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−酸から選択される１種以上の不純物を合計で約２％未満含有するオベチコール酸に関する。一実施形態において、不純物の合計は約１．５％未満である。一実施形態において、不純物の合計は約１．４％未満である。一実施形態において、オベチコール酸は、オベチコール酸形態１である。   In one embodiment, the invention provides 6-ethylursodeoxycholic acid, 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β-cholan-24-acid, 6β-ethylchenodeoxycholic acid, 3α, 7α-dihydroxy-6. Ethylidene-5β-cholan-24-acid, chenodeoxycholic acid, and 3α (3α, 7α-dihydroxy-6α-ethyl-5β-cholan-24-oiloxy) -7α-hydroxy-6α-ethyl-5β-chorane-24 -Relates to obeticholic acid containing a total of less than about 2% of one or more impurities selected from acids. In one embodiment, the total impurities is less than about 1.5%. In one embodiment, the total impurities is less than about 1.4%. In one embodiment, the oveticholic acid is obeticholic acid form 1.

一実施形態において、オベチコール酸は、約１０％未満の水、約９％未満の水、約８％未満の水、約７％未満の水、約６％未満の水、約５％未満の水、約４％未満の水、約３％未満の水、約２％未満の水または約１％未満の水を含有する。一実施形態において、オベチコール酸は約１．２％未満の水を含有する。一実施形態において、オベチコール酸は約１．０％未満の水を含有する。一実施形態において、オベチコール酸は、オベチコール酸形態１である。   In one embodiment, the obeticholic acid is less than about 10% water, less than about 9% water, less than about 8% water, less than about 7% water, less than about 6% water, less than about 5% water. Less than about 4% water, less than about 3% water, less than about 2% water, or less than about 1% water. In one embodiment, the oveticholic acid contains less than about 1.2% water. In one embodiment, oveticholic acid contains less than about 1.0% water. In one embodiment, the oveticholic acid is obeticholic acid form 1.

他の実施形態において、オベチコール酸は、６−エチルウルソデオキシコール酸および３α，７α−ジヒドロキシ−６−エチリデン−５β−コラン−２４−酸を０．１５％以下（ＮＭＴ）含有する。他の実施形態において、オベチコール酸は、６−エチルウルソデオキシコール酸および３α，７α−ジヒドロキシ−６−エチリデン−５β−コラン−２４−酸を合計で約０．０７％未満含有する。一実施形態において、オベチコール酸は、６−エチルウルソデオキシコール酸および３α，７α−ジヒドロキシ−６−エチリデン−５β−コラン−２４−酸を合計で約０．０６％未満含有する。一実施形態において、オベチコール酸は、６−エチルウルソデオキシコール酸および３α，７α−ジヒドロキシ−６−エチリデン−５β−コラン−２４−酸を合計で約０．０５％未満含有する。一実施形態において、オベチコール酸は、オベチコール酸形態１である。   In another embodiment, the oveticholic acid contains no more than 0.15% (NMT) of 6-ethylursodeoxycholic acid and 3α, 7α-dihydroxy-6-ethylidene-5β-cholan-24-acid. In other embodiments, the oveticholic acid contains less than about 0.07% total 6-ethylursodeoxycholic acid and 3α, 7α-dihydroxy-6-ethylidene-5β-cholan-24-acid. In one embodiment, the oveticholic acid contains less than about 0.06% total 6-ethylursodeoxycholic acid and 3α, 7α-dihydroxy-6-ethylidene-5β-cholan-24-acid. In one embodiment, the oveticholic acid contains less than about 0.05% total of 6-ethylursodeoxycholic acid and 3α, 7α-dihydroxy-6-ethylidene-5β-cholan-24-acid. In one embodiment, the oveticholic acid is obeticholic acid form 1.

一実施形態において、オベチコール酸は、０．１５％以下（ＮＭＴ）の３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸を含有する。一実施形態において、オベチコール酸は、約０．０７％未満の３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸を含有する。一実施形態において、オベチコール酸は、約０．０６％未満の３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸を含有する。一実施形態において、オベチコール酸は、約０．０５％未満の３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸を含有する。一実施形態において、オベチコール酸は、オベチコール酸形態１である。   In one embodiment, the oveticholic acid contains 0.15% or less (NMT) of 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β-cholan-24-acid. In one embodiment, the oveticholic acid contains less than about 0.07% 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β-cholan-24-acid. In one embodiment, the obeticholic acid contains less than about 0.06% 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β-cholan-24-acid. In one embodiment, the oveticholic acid contains less than about 0.05% 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β-cholan-24-acid. In one embodiment, the oveticholic acid is obeticholic acid form 1.

一実施形態において、オベチコール酸は、０．１５％以下（ＮＭＴ）の６β−エチルケノデオキシコール酸を含有する。一実施形態において、オベチコール酸は、約０．０７％未満の６β−エチルケノデオキシコール酸を含有する。一実施形態において、オベチコール酸は、約０．０６％未満の６β−エチルケノデオキシコール酸を含有する。一実施形態において、オベチコール酸は、約０．０５％未満の６β−エチルケノデオキシコール酸を含有する。一実施形態において、オベチコール酸は、オベチコール酸形態１である。   In one embodiment, obeticholic acid contains 0.15% or less (NMT) of 6β-ethyl chenodeoxycholic acid. In one embodiment, the obeticholic acid contains less than about 0.07% 6β-ethyl chenodeoxycholic acid. In one embodiment, the oveticholic acid contains less than about 0.06% 6β-ethyl chenodeoxycholic acid. In one embodiment, the obeticholic acid contains less than about 0.05% 6β-ethyl chenodeoxycholic acid. In one embodiment, the oveticholic acid is obeticholic acid form 1.

一実施形態において、オベチコール酸は、３％以下（ＮＭＴ）のケノデオキシコール酸（ＣＤＣＡ）を含有する。一実施形態において、オベチコール酸は、約１％未満のＣＤＣＡを含有する。一実施形態において、オベチコール酸は、約０．５％未満のＣＤＣＡを含有する。一実施形態において、オベチコール酸は、約０．３％未満のＣＤＣＡを含有する。一実施形態において、オベチコール酸は、約０．２％未満のＣＤＣＡを含有する。一実施形態において、オベチコール酸は、オベチコール酸形態１である。   In one embodiment, obeticholic acid contains no more than 3% (NMT) chenodeoxycholic acid (CDCA). In one embodiment, obeticholic acid contains less than about 1% CDCA. In one embodiment, oveticholic acid contains less than about 0.5% CDCA. In one embodiment, obeticholic acid contains less than about 0.3% CDCA. In one embodiment, oveticholic acid contains less than about 0.2% CDCA. In one embodiment, the oveticholic acid is obeticholic acid form 1.

一実施形態において、オベチコール酸は、ＣＤＣＡおよび６−エチルウルソデオキシコール酸を４％以下（ＮＭＴ）含有する。   In one embodiment, obeticholic acid contains no more than 4% (NMT) of CDCA and 6-ethylursodeoxycholic acid.

一実施形態において、オベチコール酸は、１．５％以下（ＮＭＴ）の３α（３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オイルオキシ）−７α−ヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−酸を含有する。一実施形態において、オベチコール酸は、約１％未満の３α（３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オイルオキシ）−７α−ヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−酸を含有する。一実施形態において、オベチコール酸は、約０．０７％未満の３α（３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オイルオキシ）−７α−ヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−酸を含有する。一実施形態において、オベチコール酸は、約０．０６％未満の３α（３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オイルオキシ）−７α−ヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−酸を含有する。一実施形態において、オベチコール酸は、約０．０５％未満の３α（３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オイルオキシ）−７α−ヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−酸を含有する。一実施形態において、オベチコール酸は、オベチコール酸形態１である。   In one embodiment, obeticholic acid is 1.5% or less (NMT) of 3α (3α, 7α-dihydroxy-6α-ethyl-5β-cholan-24-oiloxy) -7α-hydroxy-6α-ethyl-5β- Contains cholan-24-acid. In one embodiment, the oveticholic acid is less than about 1% 3α (3α, 7α-dihydroxy-6α-ethyl-5β-cholan-24-oiloxy) -7α-hydroxy-6α-ethyl-5β-chorane-24 Contains acid. In one embodiment, the oveticholic acid comprises less than about 0.07% 3α (3α, 7α-dihydroxy-6α-ethyl-5β-cholan-24-oiloxy) -7α-hydroxy-6α-ethyl-5β-chorane- Contains 24-acid. In one embodiment, the obeticholic acid comprises less than about 0.06% 3α (3α, 7α-dihydroxy-6α-ethyl-5β-cholan-24-oiloxy) -7α-hydroxy-6α-ethyl-5β-chorane- Contains 24-acid. In one embodiment, the oveticholic acid is less than about 0.05% 3α (3α, 7α-dihydroxy-6α-ethyl-5β-cholan-24-oiloxy) -7α-hydroxy-6α-ethyl-5β-chorane- Contains 24-acid. In one embodiment, the oveticholic acid is obeticholic acid form 1.

経口製剤および投与
オベチコール酸は経口投与用である。一実施形態において、本製剤は、ＦＸＲ介在性疾患および病態の予防および治療のための経口投与である。一実施形態において、本製剤はオベチコール酸形態１を含む。他の実施形態において、本製剤は実質的に純粋なオベチコール酸を含む。 Oral formulation and administration Obeticholic acid is for oral administration. In one embodiment, the formulation is oral administration for the prevention and treatment of FXR-mediated diseases and conditions. In one embodiment, the formulation comprises obeticholic acid form 1. In other embodiments, the formulation comprises substantially pure obeticholic acid.

経口投与に適切な製剤は、それぞれ所定量のオベチコール酸を含有する、錠剤、カプセル、カシェー（薬物を与えるために薬剤師により使用されるウェハカプセル）、トローチ剤などの個別の単位として；粉剤もしくは顆粒剤として；水性または非水性の液剤または懸濁剤として；または水中油もしくは油中水エマルションとして提供され得る。   Formulations suitable for oral administration include discrete units such as tablets, capsules, cachets (wafer capsules used by pharmacists to give drugs), lozenges, etc. each containing a predetermined amount of obeticholic acid; powders or granules As an agent; as an aqueous or non-aqueous solution or suspension; or as an oil-in-water or water-in-oil emulsion.

本発明の製剤は、任意の好適な方法によって、一般的には、オベチコール酸を、液体もしくは微粉化固体担体またはその両方と、必要な割合で均一かつ均質に混合し、次いで必要に応じて、得られた混合物を所望の形状に成形することによって、調製することができる。   Formulations of the present invention may be prepared by any suitable method, generally mixing obeticholic acid with the liquid or finely divided solid carrier or both in the required proportions uniformly and homogeneously, and then if necessary, It can be prepared by shaping the resulting mixture into the desired shape.

例えば、錠剤は、粉末または顆粒のオベチコール酸と、１種以上の任意選択の成分、例えば、結合剤、滑沢剤、不活性希釈剤もしくは界面活性分散剤などとを含む均質混合物を圧縮することによって、または粉末化した活性成分と不活性液体希釈剤との均質混合物を成型することによって、調製することができる。   For example, a tablet may be a compressed mixture of powder or granules of obeticholic acid and one or more optional ingredients, such as a binder, lubricant, inert diluent or surfactant dispersant. Or by molding a homogeneous mixture of the powdered active ingredient and an inert liquid diluent.

例えば、対象の体重、例えば約３０ｋｇ〜約７０ｋｇのヒト、に基づき目標用量レベルに到達するために、１錠以上の錠剤を投与し得る。   For example, one or more tablets may be administered to reach a target dose level based on the subject's body weight, eg, about 30 kg to about 70 kg human.

一実施形態において、対象は小児であり、製剤は胆道閉鎖を治療するために使用される。「肝外性胆管減少症」および「進行性閉塞性胆管症」としても知られる胆道閉鎖は先天性または後天性の肝疾患であり、移植された肝臓同種移植片の慢性拒絶の主要な形態の１つである。先天性型では、肝臓と小腸の間の総胆管が閉塞しているか、または存在しない。後天性型は自己免疫疾患の状況において最も頻繁に起こり、移植された肝臓同種移植片の慢性拒絶の主要な形態の１つである。   In one embodiment, the subject is a child and the formulation is used to treat biliary atresia. Biliary atresia, also known as “extrahepatic cholangiopenia” and “progressive obstructive cholangiopathies”, is a congenital or acquired liver disease and is a major form of chronic rejection of transplanted liver allografts One. In the congenital form, the common bile duct between the liver and the small intestine is occluded or absent. Acquired forms occur most frequently in the context of autoimmune disease and are one of the major forms of chronic rejection of transplanted liver allografts.

胆道閉鎖症の乳児および小児は、進行性胆汁うっ滞を呈し、次のような通常付随する全ての特徴を持つ：黄疸、掻痒、成長遅延を伴う吸収不良、脂溶性ビタミン欠乏症、高脂血症、および最終的には門脈圧亢進を伴う肝硬変。認識されなければ、肝臓は依然としてビリルビンを抱合することができ、抱合したビリルビンは血液脳関門を通過することができないので、この病態は肝不全をもたらす（しかし、核黄疸は引き起こさない）。この病態の原因は不明である。唯一有効な治療法は、葛西手術または肝移植などの特定の手術である。   Infants and children with biliary atresia have progressive cholestasis and have all the commonly associated features: jaundice, pruritus, malabsorption with growth retardation, fat-soluble vitamin deficiency, hyperlipidemia , And eventually cirrhosis with increased portal pressure. If not recognized, the condition still results in liver failure (but does not cause nuclear jaundice) because the liver can still conjugate bilirubin and the conjugated bilirubin cannot cross the blood brain barrier. The cause of this condition is unknown. The only effective treatment is specific surgery such as Kasai surgery or liver transplantation.

一実施形態において、ヒト小児は葛西手術を受けており、出生時に胆管がないか、または出生時に完全に遮断されている場合、葛西手術によってそれらに効果的に胆管機能がもたらされる。   In one embodiment, human children have undergone Kasai surgery and if they have no bile duct at birth or are completely blocked at birth, Kasai surgery effectively provides them with bile duct function.

上記で具体的に述べた成分に加えて、本発明の経口製剤は、問題にしている製剤のタイプに配慮した上で、薬学分野の当業者に知られている他の薬剤を含んでもよい。好適には、経口製剤は香味剤を含み得る。   In addition to the ingredients specifically mentioned above, the oral formulations of the present invention may contain other agents known to those skilled in the pharmaceutical arts, taking into account the type of formulation in question. Suitably the oral formulation may comprise a flavoring agent.

一実施形態において、本発明は、オベチコール酸、または薬学的に許容されるその塩、溶媒和物もしくはアミノ酸抱合体の医薬製剤に関し、ここで、オベチコール酸は本発明の方法によって製造される（オベチコール酸形態１）。他の実施形態において、本製剤は経口投与される。   In one embodiment, the present invention relates to a pharmaceutical formulation of obeticholic acid, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate or amino acid conjugate thereof, wherein obeticholic acid is produced by the method of the present invention (obeticol). Acid form 1). In other embodiments, the formulation is administered orally.

一実施形態において、本製剤は錠剤の形態である。他の実施形態において、本製剤は、オベチコール酸、および微結晶セルロース、デンプングリコール酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、コーティング材料またはコロイド状二酸化ケイ素から選択される１種以上の成分を含む。一実施形態において、コーティング材料は、Ｏｐａｄｒｙ（登録商標）コーティング材料である。   In one embodiment, the formulation is in the form of a tablet. In other embodiments, the formulation comprises obeticholic acid and one or more ingredients selected from microcrystalline cellulose, sodium starch glycolate, magnesium stearate, coating materials or colloidal silicon dioxide. In one embodiment, the coating material is an Opadry® coating material.

他の実施形態において、本製剤は、１錠当たり約０．１ｍｇ〜約１５００ｍｇのオベチコール酸を含む。他の実施形態において、本製剤は、約１ｍｇ〜約１００ｍｇ含む。他の実施形態において、本製剤は、約１ｍｇ〜約５０ｍｇ含む。他の実施形態において、本製剤は、約１ｍｇ〜約３０ｍｇ含む。他の実施形態において、本製剤は、約４ｍｇ〜約２６ｍｇ含む。他の実施形態において、本製剤は、約５ｍｇ〜約２５ｍｇ含む。一実施形態において、本製剤は、約１ｍｇ〜約２ｍｇ含む。一実施形態において、本製剤は、約１．２ｍｇ〜約１．８ｍｇ含む。一実施形態において、本製剤は、約１．３ｍｇ〜約１．７ｍｇ含む。一実施形態において、本製剤は、約１．５ｍｇ含む。   In other embodiments, the formulation comprises from about 0.1 mg to about 1500 mg of obeticholic acid per tablet. In other embodiments, the formulation comprises from about 1 mg to about 100 mg. In other embodiments, the formulation comprises from about 1 mg to about 50 mg. In other embodiments, the formulation comprises from about 1 mg to about 30 mg. In other embodiments, the formulation comprises from about 4 mg to about 26 mg. In other embodiments, the formulation comprises from about 5 mg to about 25 mg. In one embodiment, the formulation comprises from about 1 mg to about 2 mg. In one embodiment, the formulation comprises from about 1.2 mg to about 1.8 mg. In one embodiment, the formulation comprises from about 1.3 mg to about 1.7 mg. In one embodiment, the formulation comprises about 1.5 mg.

一実施形態において、本製剤は、１錠当たり約１ｍｇ〜約２５ｍｇのオベチコール酸を含む。一実施形態において、本製剤は、約１ｍｇのオベチコール酸、約１８０〜約１９０ｍｇの微結晶セルロース、約１０〜約１５ｍｇのデンプングリコール酸ナトリウム、約１〜約３ｍｇのステアリン酸マグネシウム、および約５ｍｇ〜約１０ｍｇのコーティング材料を含む。一実施形態において、コーティング材料は、Ｏｐａｄｒｙ（登録商標）コーティング材料である。   In one embodiment, the formulation comprises from about 1 mg to about 25 mg of obeticholic acid per tablet. In one embodiment, the formulation comprises about 1 mg of obeticholic acid, about 180 to about 190 mg microcrystalline cellulose, about 10 to about 15 mg sodium starch glycolate, about 1 to about 3 mg magnesium stearate, and about 5 mg to Contains about 10 mg of coating material. In one embodiment, the coating material is an Opadry® coating material.

一実施形態において、本製剤は、１錠当たり約１ｍｇ〜約２５ｍｇのオベチコール酸を含む。一実施形態において、本製剤は、約１ｍｇのオベチコール酸、約１８５．０ｍｇの微結晶セルロース、約１２．０ｍｇのデンプングリコール酸ナトリウム、約２．０ｍｇのステアリン酸マグネシウム、および約８．０ｍｇのコーティング材料を含む。一実施形態において、コーティング材料は、Ｏｐａｄｒｙ（登録商標）コーティング材料である。   In one embodiment, the formulation comprises from about 1 mg to about 25 mg of obeticholic acid per tablet. In one embodiment, the formulation comprises about 1 mg obeticholic acid, about 185.0 mg microcrystalline cellulose, about 12.0 mg sodium starch glycolate, about 2.0 mg magnesium stearate, and about 8.0 mg coating. Contains materials. In one embodiment, the coating material is an Opadry® coating material.

一実施形態において、本製剤は、１錠当たり約１ｍｇ〜約２５ｍｇのオベチコール酸を含む。一実施形態において、本製剤は、約５ｍｇのオベチコール酸、約１７５〜約１９０ｍｇの微結晶セルロース、約１０〜約１５ｍｇのデンプングリコール酸ナトリウム、約１〜約３ｍｇのステアリン酸マグネシウム、および約５ｍｇ〜約１０ｍｇのコーティング材料を含む。一実施形態において、コーティング材料は、Ｏｐａｄｒｙ（登録商標）コーティング材料である。   In one embodiment, the formulation comprises from about 1 mg to about 25 mg of obeticholic acid per tablet. In one embodiment, the formulation comprises about 5 mg obeticholic acid, about 175 to about 190 mg microcrystalline cellulose, about 10 to about 15 mg sodium starch glycolate, about 1 to about 3 mg magnesium stearate, and about 5 mg to Contains about 10 mg of coating material. In one embodiment, the coating material is an Opadry® coating material.

一実施形態において、本製剤は、１錠当たり約１ｍｇ〜約２５ｍｇのオベチコール酸を含む。一実施形態において、本製剤は、約５ｍｇのオベチコール酸、約１８１．０ｍｇの微結晶セルロース、約１２．０ｍｇのデンプングリコール酸ナトリウム、約２．０ｍｇのステアリン酸マグネシウム、および約８．０ｍｇのコーティング材料を含む。一実施形態において、コーティング材料は、Ｏｐａｄｒｙ（登録商標）コーティング材料である。   In one embodiment, the formulation comprises from about 1 mg to about 25 mg of obeticholic acid per tablet. In one embodiment, the formulation comprises about 5 mg obeticholic acid, about 181.0 mg microcrystalline cellulose, about 12.0 mg sodium starch glycolate, about 2.0 mg magnesium stearate, and about 8.0 mg coating. Contains materials. In one embodiment, the coating material is an Opadry® coating material.

一実施形態において、本製剤は、１錠当たり約１ｍｇ〜約２５ｍｇのオベチコール酸を含む。一実施形態において、本製剤は、約１０ｍｇのオベチコール酸、約１７０ｍｇ〜約１８０ｍｇの微結晶セルロース、約１０〜約１５ｍｇのデンプングリコール酸ナトリウム、約１ｍｇ〜約３ｍｇのステアリン酸マグネシウム、および約５ｍｇ〜約１０ｍｇのコーティング材料を含む。一実施形態において、コーティング材料はＯｐａｄｒｙ（登録商標）コーティング材料である。   In one embodiment, the formulation comprises from about 1 mg to about 25 mg of obeticholic acid per tablet. In one embodiment, the formulation comprises about 10 mg obeticholic acid, about 170 mg to about 180 mg microcrystalline cellulose, about 10 to about 15 mg sodium starch glycolate, about 1 mg to about 3 mg magnesium stearate, and about 5 mg to Contains about 10 mg of coating material. In one embodiment, the coating material is an Opadry® coating material.

一実施形態において、本製剤は、１錠当たり約１ｍｇ〜約２５ｍｇのオベチコール酸を含む。一実施形態において、本製剤は、約１０ｍｇのオベチコール酸、約１７６．０ｍｇの微結晶セルロース、約１２．０ｍｇのデンプングリコール酸ナトリウム、約２．０のステアリン酸マグネシウム、および約８．０ｍｇのコーティング材料を含む。一実施形態において、コーティング材料は、Ｏｐａｄｒｙ（登録商標）コーティング材料である。   In one embodiment, the formulation comprises from about 1 mg to about 25 mg of obeticholic acid per tablet. In one embodiment, the formulation comprises about 10 mg obeticholic acid, about 176.0 mg microcrystalline cellulose, about 12.0 mg sodium starch glycolate, about 2.0 magnesium stearate, and about 8.0 mg coating. Contains materials. In one embodiment, the coating material is an Opadry® coating material.

一実施形態において、本製剤は、１錠当たり約１ｍｇ〜約２５ｍｇのオベチコール酸を含む。一実施形態において、本製剤は、約２５ｍｇのオベチコール酸、約１５０ｍｇ〜約１６０ｍｇの微結晶セルロース、約１０ｍｇ〜約１５ｍｇのデンプングリコール酸ナトリウム、約１ｍｇ〜約３ｍｇのステアリン酸マグネシウム、約５〜約１０ｍｇのコーティング材料、および約１〜１０ｍｇのコロイド状二酸化ケイ素を含む。一実施形態において、コーティング材料は、Ｏｐａｄｒｙ（登録商標）コーティング材料である。   In one embodiment, the formulation comprises from about 1 mg to about 25 mg of obeticholic acid per tablet. In one embodiment, the formulation comprises about 25 mg obeticholic acid, about 150 mg to about 160 mg microcrystalline cellulose, about 10 mg to about 15 mg sodium starch glycolate, about 1 mg to about 3 mg magnesium stearate, about 5 to about 10 mg of coating material and about 1-10 mg of colloidal silicon dioxide. In one embodiment, the coating material is an Opadry® coating material.

一実施形態において、本製剤は、１錠当たり約１ｍｇ〜約２５ｍｇのオベチコール酸を含む。一実施形態において、本製剤は、約２５ｍｇのオベチコール酸、約１５７．０ｍｇの微結晶セルロース、約１２．０ｍｇのデンプングリコール酸ナトリウム、約２．０ｍｇのステアリン酸マグネシウム、約８．０ｍｇのコーティング材料、および約４．０ｍｇのコロイド状二酸化ケイ素を含む。一実施形態において、コーティング材料は、Ｏｐａｄｒｙ（登録商標）コーティング材料である。   In one embodiment, the formulation comprises from about 1 mg to about 25 mg of obeticholic acid per tablet. In one embodiment, the formulation comprises about 25 mg obeticholic acid, about 157.0 mg microcrystalline cellulose, about 12.0 mg sodium starch glycolate, about 2.0 mg magnesium stearate, about 8.0 mg coating material. And about 4.0 mg of colloidal silicon dioxide. In one embodiment, the coating material is an Opadry® coating material.

本明細書で使用する全てのパーセンテージおよび比は、別段の指示がない限り、重量に基づく。パーセント二量体不純物は、一般的に分析的ＨＰＬＣにより定量される場合、面積パーセントに基づく。   All percentages and ratios used herein are on a weight basis unless otherwise indicated. Percent dimer impurities are generally based on area percent as quantified by analytical HPLC.

組成物が特定の成分を有する、含む、または含有すると記載される記載を通じて、組成物はまた、列挙した成分から実質的に構成される、または列挙した成分から構成されるとも考えられる。同様に、方法またはプロセスが、特定のプロセス工程を有する、含む、または含有すると記載される場合、プロセスはまた、列挙したプロセスから実質的に構成される、または列挙したプロセスから構成される。さらに、工程の順序、またはある一定の動作を行う順序が、本発明が操作可能である限り重要ではないことを理解すべきである。さらに、２つ以上の段階または動作を同時に行い得る。   Throughout the description that the composition has, includes, or is described as containing a particular component, the composition is also considered to consist essentially of, or consist of, the listed components. Similarly, where a method or process is described as having, including, or containing a particular process step, the process also consists essentially of, or consists of, an enumerated process. Further, it should be understood that the order of steps or order in which certain actions are performed is not critical as long as the invention is operable. Furthermore, two or more stages or operations can be performed simultaneously.

一実施形態において、錠剤は黄色のＯｐａｄｒｙ（登録商標）を含む。他の実施形態において、錠剤は白色のＯｐａｄｒｙ（登録商標）を含む。他の実施形態において、錠剤は緑色のＯｐａｄｒｙ（登録商標）を含む。   In one embodiment, the tablet comprises yellow Opadry®. In other embodiments, the tablet comprises white Opadry®. In other embodiments, the tablet comprises green Opadry®.

医薬組成物
オベチコール酸、例えば、オベチコール酸形態１、実質的に純粋な形態のオベチコール酸、および結晶性形態のオベチコール酸、または薬学的に許容されるその塩、溶媒和物もしくはアミノ酸抱合体は、種々の医薬目的に有用である。オベチコール酸は、ＦＸＲ介在性疾患および病態の予防または治療のための方法において使用され得る。一実施形態において、疾患または病態は、胆道閉鎖、胆汁うっ滞性肝疾患、慢性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、Ｃ型肝炎感染、アルコール性肝疾患、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、進行性の線維症による肝損傷、肝線維症、ならびにアテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、高コレステロール血症および高脂血症を含む心血管系疾患から選択される。一実施形態において、オベチコール酸形態１は、トリグリセリドを低下させるための方法において使用され得る。一実施形態において、結晶性オベチコール酸は、トリグリセリドを低下させるための方法において使用され得る。オベチコール酸形態１または結晶性オベチコール酸は、ＨＤＬを増加させ得る。オベチコール酸形態１または結晶性オベチコール酸の他の効果としては、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、ビリルビン、ＡＬＴ、ＡＳＴ、およびＧＧＴの低下が挙げられる。 Pharmaceutical compositions Obeticholic acid, such as obeticholic acid form 1, substantially pure form of obeticholic acid, and crystalline form of obeticholic acid, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate or amino acid conjugate thereof, Useful for various pharmaceutical purposes. Obeticholic acid can be used in methods for the prevention or treatment of FXR-mediated diseases and conditions. In one embodiment, the disease or condition is biliary atresia, cholestatic liver disease, chronic liver disease, nonalcoholic steatohepatitis (NASH), hepatitis C infection, alcoholic liver disease, primary biliary cirrhosis ( PBC), liver damage due to progressive fibrosis, liver fibrosis, and cardiovascular diseases including atherosclerosis, arteriosclerosis, hypercholesterolemia and hyperlipidemia. In one embodiment, obeticholic acid form 1 can be used in a method for lowering triglycerides. In one embodiment, crystalline obeticholic acid can be used in a method for reducing triglycerides. Obeticholic acid form 1 or crystalline oveticholic acid can increase HDL. Other effects of obeticholic acid form 1 or crystalline obeticholic acid include reduction of alkaline phosphatase (ALP), bilirubin, ALT, AST, and GGT.

一実施形態において、本発明は、オベチコール酸および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物に関し、ここで、オベチコール酸は本発明の方法によって製造される、例えばオベチコール酸形態１である。一実施形態において、医薬組成物は、実質的に純粋なオベチコール酸および薬学的に許容される担体を含む。他の実施形態において、医薬組成物は、結晶性オベチコール酸および薬学的に許容される担体を含む。他の実施形態において、結晶性オベチコール酸は形態Ａである。他の実施形態において、結晶性オベチコール酸は形態Ｃである。一実施形態において、結晶性オベチコール酸は形態Ｄである。一実施形態において、結晶性オベチコール酸は形態Ｆである。一実施形態において、結晶性オベチコール酸は形態Ｇである。一実施形態において、結晶性オベチコール酸は形態Ｉである。   In one embodiment, the present invention relates to a pharmaceutical composition comprising obeticholic acid and a pharmaceutically acceptable carrier, wherein obeticholic acid is manufactured by the method of the present invention, for example obeticholic acid form 1. In one embodiment, the pharmaceutical composition comprises substantially pure obeticholic acid and a pharmaceutically acceptable carrier. In other embodiments, the pharmaceutical composition comprises crystalline obeticholic acid and a pharmaceutically acceptable carrier. In other embodiments, the crystalline obeticholic acid is Form A. In other embodiments, the crystalline obeticholic acid is Form C. In one embodiment, the crystalline obeticholic acid is Form D. In one embodiment, the crystalline obeticholic acid is Form F. In one embodiment, the crystalline obeticholic acid is Form G. In one embodiment, the crystalline obeticholic acid is Form I.

一実施形態において、本発明は、本発明の方法によって製造されるオベチコール酸形態１またはその医薬組成物を有効量投与することを含む、対象のＦＸＲ介在性疾患または病態を治療または予防する方法に関する。一実施形態において、本発明は、本発明の方法によって製造される実質的に純粋なオベチコール酸またはその医薬組成物を有効量投与することを含む、対象のＦＸＲ介在性疾患または病態を治療または予防する方法に関する。一実施形態において、本発明は、結晶性オベチコール酸またはその医薬組成物を有効量投与することを含む、対象のＦＸＲ介在性疾患または病態を治療または予防する方法に関する。他の実施形態において、結晶性オベチコール酸は形態Ｃである。一実施形態において、結晶性オベチコール酸は形態Ａである。一実施形態において、結晶性オベチコール酸は形態Ｃである。一実施形態において、結晶性オベチコール酸は形態Ｄである。一実施形態において、結晶性オベチコール酸は形態Ｆである。一実施形態において、結晶性オベチコール酸は形態Ｇである。一実施形態において、結晶性オベチコール酸は形態Ｉである。   In one embodiment, the present invention relates to a method for treating or preventing an FXR-mediated disease or condition in a subject comprising administering an effective amount of obeticholic acid form 1 produced by the method of the present invention or a pharmaceutical composition thereof. . In one embodiment, the present invention treats or prevents a subject's FXR-mediated disease or condition comprising administering an effective amount of a substantially pure obeticholic acid produced by the method of the present invention or a pharmaceutical composition thereof. On how to do. In one embodiment, the present invention relates to a method for treating or preventing a FXR-mediated disease or condition in a subject comprising administering an effective amount of crystalline obeticholic acid or a pharmaceutical composition thereof. In other embodiments, the crystalline obeticholic acid is Form C. In one embodiment, the crystalline obeticholic acid is Form A. In one embodiment, the crystalline obeticholic acid is Form C. In one embodiment, the crystalline obeticholic acid is Form D. In one embodiment, the crystalline obeticholic acid is Form F. In one embodiment, the crystalline obeticholic acid is Form G. In one embodiment, the crystalline obeticholic acid is Form I.

他の実施形態において、疾患または病態は、心血管系疾患または胆汁うっ滞性肝疾患であり、トリグリセリドを低下させるためのものである。他の実施形態において、心血管系疾患は、アテローム性動脈硬化症または高コレステロール血症である。他の実施形態において、本対象は哺乳動物である。他の実施形態において、哺乳動物はヒトである。   In other embodiments, the disease or condition is a cardiovascular disease or cholestatic liver disease for reducing triglycerides. In other embodiments, the cardiovascular disease is atherosclerosis or hypercholesterolemia. In other embodiments, the subject is a mammal. In other embodiments, the mammal is a human.

一実施形態において、本化合物または医薬組成物は、経口、非経口または局所投与される。一実施形態において、本化合物または医薬組成物は経口投与される。   In one embodiment, the compound or pharmaceutical composition is administered orally, parenterally or topically. In one embodiment, the compound or pharmaceutical composition is administered orally.

一実施形態において、本発明は、胆汁うっ滞性疾患に罹患している対象の線維症を抑制する方法であって、有効量のオベチコール酸またはその医薬組成物を対象に投与する工程を含む方法に関し、ここでオベチコール酸は本発明の方法によって製造される。一実施形態において、本発明は、胆汁うっ滞性疾患に罹患していない対象の線維症を抑制する方法であって、有効量のオベチコール酸またはその医薬組成物を対象に投与する工程を含む方法に関し、ここでオベチコール酸は本発明の方法によって製造される。実施形態において、抑制する線維症は、ＦＸＲが発現する器官で発症する。   In one embodiment, the present invention relates to a method for inhibiting fibrosis in a subject suffering from cholestatic disease, comprising the step of administering to the subject an effective amount of obeticholic acid or a pharmaceutical composition thereof. Where obeticholic acid is produced by the process of the present invention. In one embodiment, the present invention relates to a method of suppressing fibrosis in a subject not suffering from cholestatic disease, comprising the step of administering to the subject an effective amount of obeticholic acid or a pharmaceutical composition thereof. Where obeticholic acid is produced by the process of the present invention. In embodiments, suppressing fibrosis occurs in organs that express FXR.

一実施形態において、胆汁うっ滞性疾患は、アルカリホスファターゼ、７−グルタミルトランスペプチダーゼ（ＧＧＴ）、および５’ヌクレオチダーゼの血清中濃度の異常な上昇を有するものと定義される。他の実施形態において、胆汁うっ滞性疾患はさらに、少なくとも１つの臨床症状とともに現れるものと定義される。他の実施形態において、症状はかゆみ（掻痒）である。他の実施形態において、線維症は、肝線維症、腎臓線維症、および腸線維症からなる群から選択される。他の実施形態において、胆汁うっ滞性疾患は、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、薬物誘導性胆汁うっ滞、遺伝性胆汁うっ滞、および妊娠の肝内胆汁うっ滞からなる群から選択される。他の実施形態において、対象は、原発性肝臓および胆道癌、転移性癌、敗血症、長期にわたる完全静脈栄養、嚢胞性線維症、および肉芽腫性肝疾患からなる群から選択される疾患または病態を伴う胆汁うっ滞性疾患に罹患していない。   In one embodiment, cholestatic disease is defined as having an abnormal increase in serum levels of alkaline phosphatase, 7-glutamyl transpeptidase (GGT), and 5 'nucleotidase. In other embodiments, cholestatic disease is further defined as manifesting with at least one clinical symptom. In other embodiments, the symptom is itching (pruritus). In other embodiments, the fibrosis is selected from the group consisting of liver fibrosis, kidney fibrosis, and intestinal fibrosis. In other embodiments, the cholestatic disease is a group consisting of primary biliary cirrhosis, primary sclerosing cholangitis, drug-induced cholestasis, hereditary cholestasis, and intrahepatic cholestasis of pregnancy. Selected from. In other embodiments, the subject has a disease or condition selected from the group consisting of primary liver and biliary tract cancer, metastatic cancer, sepsis, long-term complete parenteral nutrition, cystic fibrosis, and granulomatous liver disease. Not suffering from accompanying cholestatic disease.

一実施形態において、対象は、Ｂ型肝炎；Ｃ型肝炎；肝寄生虫症；移植後細菌、ウイルスおよび真菌感染；アルコール性肝疾患（ＡＬＤ）；非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）；非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）；メトトレキサート、イソニアジド、オキシフェニスタチン、メチルドパ、クロルプロマジン、トルブタミドまたはアミオダロンにより誘発される肝疾患；自己免疫肝炎；サルコイドーシス；ウィルソン病；ヘモクロマトーシス；ゴーシェ病；ＩＩＩ、ＩＶ、ＶＩ、ＩＸおよびＸ型糖原病；α１−アンチトリプシン欠乏；ツェルウェーガー症候群；チロシン血症；フルクトース血症；ガラクトース血症；バッド・キアリ症候群、静脈閉塞性疾患または門脈血栓症を伴う血管撹乱；および先天性肝線維症からなる群から選択される疾患を伴う肝線維症を有する。 In one embodiment, the subject is hepatitis B; hepatitis C; hepatic parasitic disease; post-transplant bacterial, viral and fungal infections; alcoholic liver disease (ALD); nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD); nonalcohol Hepatic steatohepatitis (NASH); liver disease induced by methotrexate, isoniazid, oxyphenistatin, methyldopa, chlorpromazine, tolbutamide or amiodarone; autoimmune hepatitis; sarcoidosis; Wilson's disease; hemochromatosis; Α 1 -antitrypsin deficiency; Zellweger syndrome; tyrosineemia; fructoseemia; galactosemia; with Budd-Chiari syndrome, vein occlusive disease or portal vein thrombosis From the group consisting of vascular disruption; and congenital liver fibrosis Have liver fibrosis with the disease of choice.

他の実施形態において、対象は、クローン病、潰瘍性大腸炎、放射線照射後の大腸炎、および顕微鏡的大腸炎からなる群から選択される疾患を伴う腸管線維症を有する。   In other embodiments, the subject has intestinal fibrosis with a disease selected from the group consisting of Crohn's disease, ulcerative colitis, post-irradiation colitis, and microscopic colitis.

他の実施形態において、対象は、糖尿病性腎症、高血圧性腎硬化症、慢性糸球体腎炎、慢性移植糸球体症、慢性間質性腎炎、および多発性嚢胞腎からなる群から選択される疾患を伴う腎臓線維症を有する。   In other embodiments, the subject is a disease selected from the group consisting of diabetic nephropathy, hypertensive nephrosclerosis, chronic glomerulonephritis, chronic graft glomerulopathy, chronic interstitial nephritis, and polycystic kidney disease. Have kidney fibrosis with.

定義
便宜上、明細書、実施例、および添付の特許請求の範囲において用いられる特定の用語が、ここに集められている。 Definitions For convenience, certain terms employed in the specification, examples, and appended claims are collected here.

本明細書で使用する用語「オベチコール酸」または「ＯＣＡ」は、以下の化学構造を有する化合物を指す。

オベチコール酸の他の化学名には、以下が含まれる：３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−酸、６α−エチル−ケノデオキシコール酸、６−エチル−ＣＤＣＡ、６ＥＣＤＣＡ、コラン−２４−酸、６−エチル−３，７−ジヒドロキシ−，（３α，５β，６α，７α）−およびＩＮＴ−７４７。オベチコール酸のＣＡＳ登録番号は、４５９７８９−９９−２である。この用語は、オベチコール酸のすべての形態、例えば、非結晶性、結晶性、および実質的に純粋を指す。 The term “obeticholic acid” or “OCA” as used herein refers to a compound having the following chemical structure:

Other chemical names for oveticholic acid include: 3α, 7α-dihydroxy-6α-ethyl-5β-cholan-24-acid, 6α-ethyl-chenodeoxycholic acid, 6-ethyl-CDCA, 6ECDCA, cholan- 24-acid, 6-ethyl-3,7-dihydroxy-, (3α, 5β, 6α, 7α)-and INT-747. The CAS registration number for obeticholic acid is 459789-99-2. The term refers to all forms of obeticholic acid, such as non-crystalline, crystalline, and substantially pure.

本明細書で使用する用語「結晶性オベチコール酸」は、以下の化学構造を有する化合物の結晶性形態を指す。

結晶性オベチコール酸は、化合物が三空間次元における特定の結晶充填配置に結晶化されるか、または化合物が外表面（ｅｘｔｅｒｎａｌ ｆａｃｅ ｐｌａｎｅ）を有することを意味する。オベチコール酸（または、薬学的に許容されるその塩、アミノ酸抱合体もしくは溶媒和物）の結晶形態は、様々な結晶充填配置に結晶化し得、それらの全てが、オベチコール酸の同じ元素組成を有する。様々な結晶形態は通常、Ｘ線回折パターン、赤外線スペクトル、融点、密度、硬度、結晶形状、光学的特性および電気的特性、安定性、ならびに溶解度が異なる。再結晶溶媒、結晶化速度、保存温度、および他の要因により、一結晶形態が優位を占め得る。オベチコール酸の結晶は、様々な条件下、例えば、様々な溶媒、温度その他の下での結晶化によって、調製され得る。 The term “crystalline oveticholic acid” as used herein refers to a crystalline form of a compound having the following chemical structure:

Crystalline oveticholic acid means that the compound is crystallized in a specific crystal packing configuration in three spatial dimensions, or that the compound has an external face plane. The crystalline form of obeticholic acid (or a pharmaceutically acceptable salt, amino acid conjugate or solvate thereof) can crystallize in various crystal packing arrangements, all of which have the same elemental composition of obeticholic acid . Various crystal forms usually differ in X-ray diffraction pattern, infrared spectrum, melting point, density, hardness, crystal shape, optical and electrical properties, stability, and solubility. Depending on the recrystallization solvent, crystallization rate, storage temperature, and other factors, a single crystal form may dominate. Obeticholic acid crystals can be prepared by crystallization under various conditions, for example, under various solvents, temperatures, and the like.

本明細書で使用する「結晶性オベチコール酸形態Ａ」という用語は、図４１に示したものと実質的に類似するＸ線回折パターンを有するオベチコール酸の結晶形態、例えば、実施例３で特徴付けられる結晶形態の１つを指す。   As used herein, the term “crystalline oveticholic acid form A” is characterized in the crystalline form of oveticholic acid having an X-ray diffraction pattern substantially similar to that shown in FIG. 41, eg, Example 3. Refers to one of the crystalline forms obtained.

本明細書で使用する「結晶性オベチコール酸形態Ｃ」という用語は、図５に示したものと実質的に類似するＸ線回折パターンを有するオベチコール酸の結晶形態、例えば、実施例３で特徴付けられる結晶形態の１つを指す。   As used herein, the term “crystalline oveticolic acid form C” is characterized by a crystalline form of oveticholic acid having an X-ray diffraction pattern substantially similar to that shown in FIG. 5, eg, Example 3. Refers to one of the crystalline forms obtained.

本明細書で使用する「実質的に純粋なオベチコール酸」という用語は、約９５％超の力価を有するオベチコール酸を指す。オベチコール酸の力価は、例えば、水、溶媒、ならびにオベチコール酸の試料中に存在する他の有機および無機不純物を含む不純物を考慮する。他の実施形態において、力価の既知の基準は１００％オベチコール酸であり、力価は既知の標準の１００％から、溶媒、水、ならびに他の有機および無機不純物などの不純物のパーセンテージを差し引くことによって決定される。一態様では、無機不純物は、例えば、無機塩および硫酸塩灰分を含む。一態様では、有機不純物は、６−エチルウルソデオキシコール酸、３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸、６β−エチルケノデオキシコール酸、３α，７α−ジヒドロキシ−６−エチリデン−５β−コラン−２４−酸、ケノデオキシコール酸、および３α（３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オイルオキシ）−７α−ヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−酸を含む。不純物の量は、当該分野で知られる手順、例えば、ＨＰＬＣ、ＮＭＲ、またはＵＳ ＰｈａｒｍａｃｏｐｅｉａもしくはＥｕｒｏｐｅａｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａによる方法、あるいはこれらの方法の２つ以上の組み合わせによって決定することができる。   As used herein, the term “substantially pure obeticholic acid” refers to obeticholic acid having a titer greater than about 95%. The titer of oveticholic acid takes into account impurities including, for example, water, solvents, and other organic and inorganic impurities present in the oveticholic acid sample. In other embodiments, the known criterion for titer is 100% obeticholic acid and the titer is subtracted from 100% of the known standard to the percentage of impurities such as solvent, water, and other organic and inorganic impurities. Determined by. In one aspect, inorganic impurities include, for example, inorganic salts and sulfate ash. In one aspect, the organic impurity is 6-ethylursodeoxycholic acid, 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β-cholan-24-acid, 6β-ethylchenodeoxycholic acid, 3α, 7α-dihydroxy-6- Ethylidene-5β-cholan-24-acid, chenodeoxycholic acid, and 3α (3α, 7α-dihydroxy-6α-ethyl-5β-cholan-24-oiloxy) -7α-hydroxy-6α-ethyl-5β-chorane-24 Contains acid. The amount of impurities can be determined by procedures known in the art, for example, HPLC, NMR, or methods by US Pharmacopia or European Pharmacopia, or a combination of two or more of these methods.

本明細書で使用する「純度」という用語は、例えばＨＰＬＣから得られる化合物の化学分析を指す。一実施形態において、化合物の純度は、比較のためのそのそれぞれのピーク下の面積により、参照基準、例えば、オベチコール酸の純度と比較される。一実施形態において、純度は、試料中の有機不純物を説明する。   The term “purity” as used herein refers to chemical analysis of a compound obtained, for example, from HPLC. In one embodiment, the purity of the compound is compared to a reference standard, eg, the purity of obeticholic acid, by the area under its respective peak for comparison. In one embodiment, purity accounts for organic impurities in the sample.

本明細書で使用する「反応混合物」という用語は、一緒に組み合わされた１つ以上の物質の混合物を指す。一実施形態において、物質を混合または組み合わせることにより、元の物質の１つ以上に化学的変換または変化が引き起こされる。   As used herein, the term “reaction mixture” refers to a mixture of one or more substances combined together. In one embodiment, mixing or combining materials causes a chemical transformation or change in one or more of the original materials.

本明細書で使用する「オベチコール酸形態１」という用語は、非結晶性オベチコール酸を指す。一実施形態において、この形態のオベチコール酸は、合成中間体としての結晶性オベチコール酸を経て製造される。例えば、この形態のオベチコール酸は、本願の方法により、合成中間体としての結晶性オベチコール酸形態Ａを経て製造される。一実施形態において、オベチコール酸形態１は、薬学的に活性な成分として使用される形態である。より詳しくは、実施例５を参照されたい。   As used herein, the term “obeticholic acid form 1” refers to amorphous oveticholic acid. In one embodiment, this form of oveticholic acid is produced via crystalline oveticholic acid as a synthetic intermediate. For example, this form of oveticholic acid is produced via crystalline oveticholic acid Form A as a synthetic intermediate by the method of the present application. In one embodiment, obeticholic acid form 1 is the form used as a pharmaceutically active ingredient. See Example 5 for more details.

「治療する」は、病態、疾患、障害などの改善をもたらすあらゆる効果、例えば、緩和、軽減、調節、または消失を含む。疾患状態を「治療する」または「治療」は、以下を含む：病態を抑制すること、すなわち、疾患状態もしくはその臨床症状の進行を阻止すること；または疾患状態を軽減すること、すなわち、疾患状態もしくはその臨床症状の一次的もしくは永続的な後退を引き起こすこと。   “Treating” includes any effect that results in amelioration of a condition, disease, disorder, etc., eg, alleviation, reduction, modulation, or elimination. “Treat” or “treatment” of a disease state includes: inhibiting the disease state, ie, preventing progression of the disease state or its clinical symptoms; or reducing the disease state, ie, the disease state. Or cause a primary or permanent regression of the clinical symptoms.

疾患状態を「予防する」は、疾患状態に曝露され得るかまたは罹患し易いが疾患状態の症状をまだ経験していないかまたは呈していない対象において、疾患状態の臨床症状を発現させないようにすることを含む。   “Preventing” a disease state prevents clinical manifestations of the disease state from appearing in subjects who may be exposed to or susceptible to the disease state but have not yet experienced or present symptoms of the disease state Including that.

「疾患状態」は、何らかの疾患、障害、病態、症状または兆候を意味する。   “Disease state” means any disease, disorder, condition, symptom, or indication.

本明細書で使用する「有効量」という用語は、適切な用量投与時に急性または慢性的な治療効果をもたらす、オベチコール酸（例えば、ＦＸＲ活性化リガンド）の量を指す。このような効果としては、疾患／病態（例えば、肝臓、腎臓、または腸の線維症）、および関連する合併症の症状、徴候、および根底にある病状の、何らかの検出可能な程度までの予防、矯正、阻害、または反転が挙げられる。   The term “effective amount” as used herein refers to the amount of obeticholic acid (eg, FXR activating ligand) that provides an acute or chronic therapeutic effect upon administration of an appropriate dose. Such effects include prevention to some detectable extent of the symptoms / signs of the disease / condition (e.g., liver, kidney, or intestinal fibrosis) and associated complications, and the underlying medical condition, Correction, inhibition, or inversion can be mentioned.

「治療有効量」は、疾患を治療するために哺乳類に投与された場合に、その疾患のこうした治療効果をもたらすのに十分であるオベチコール酸の量を意味する。「治療有効量」は、オベチコール酸、疾患およびその重症度、ならびに治療される哺乳類の年齢、体重などに応じて変動する。   “Therapeutically effective amount” means the amount of obeticholic acid that, when administered to a mammal to treat a disease, is sufficient to effect such therapeutic effects for the disease. The “therapeutically effective amount” will vary depending on the obeticholic acid, the disease and its severity, and the age, weight, etc., of the mammal to be treated.

治療有効量のオベチコール酸を、ヒトまたは動物への投与のために薬学的に許容される担体と共に製剤化することができる。したがって、オベチコール酸またはその製剤は、有効量の化合物を提供するため、例えば、経口、非経口、または局所経路を介して投与することができる。代替の実施形態において、本開示に従って調製されたオベチコール酸を使用して医療装置、例えばステントにコーティングまたは含浸させることができる。   A therapeutically effective amount of obeticholic acid can be formulated with a pharmaceutically acceptable carrier for administration to humans or animals. Thus, obeticholic acid or a formulation thereof can be administered, for example, via the oral, parenteral, or topical route to provide an effective amount of the compound. In an alternative embodiment, obeticholic acid prepared according to the present disclosure can be used to coat or impregnate medical devices such as stents.

本明細書で使用する「薬理学的効果」は、療法の意図される目的を達成する、対象においてもたらされる効果を包含する。一実施形態において、薬理学的効果は、治療される対象の主要な適応症が予防、緩和、または軽減されることを意味する。例えば、薬理学的効果は、治療される対象における主要な適応症の予防、緩和、または軽減をもたらすものであろう。他の実施形態において、薬理学的効果は、治療される対象の主要な適応症の障害または症状が予防、緩和、または軽減されることを意味する。例えば、薬理学的効果は、治療される対象における主要な適応症の予防または軽減をもたらすものであろう。   As used herein, “pharmacological effect” encompasses effects produced in a subject that achieve the intended purpose of therapy. In one embodiment, a pharmacological effect means that the primary indication of the subject being treated is prevented, alleviated, or reduced. For example, a pharmacological effect will result in prevention, alleviation, or reduction of the primary indication in the subject being treated. In other embodiments, a pharmacological effect means that the primary indication disorder or symptom of the subject being treated is prevented, alleviated, or alleviated. For example, a pharmacological effect will result in the prevention or reduction of the main indication in the subject being treated.

本開示はまた、１つ以上の原子が、自然界に最も一般的に見られる原子質量または質量数と異なる原子質量または質量数を有する原子に置き換えられているという点以外、本開示の式および以下において列挙したものと同一である、同位体標識されたオベチコール酸、または薬学的に許容されるその塩、溶媒和物もしくはアミノ酸抱合体を包含する。オベチコール酸、または薬学的に許容されるその塩、溶媒和物もしくはアミノ酸抱合体に組み込むことができる同位体の例としては、３Ｈ、１１Ｃ、１４Ｃ、および１８Ｆなどの、水素、炭素、窒素、フッ素の同位体が挙げられる。 The present disclosure also includes the formula of the present disclosure and the following, except that one or more atoms have been replaced with an atom having an atomic mass or mass number different from the atomic mass or mass number most commonly found in nature: Including isotopically labeled obeticholic acid, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate or amino acid conjugate thereof, identical to those listed in Examples of isotopes that can be incorporated into obeticholic acid, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate or amino acid conjugate thereof include hydrogen, carbon, such as 3 H, 11 C, 14 C, and 18 F , Nitrogen and fluorine isotopes.

前述の同位体および／または他の原子の他の同位体を含有する、オベチコール酸、または薬学的に許容されるその塩、溶媒和物もしくはアミノ酸抱合体は、本開示の範囲内である。同位体標識されたオベチコール酸、または薬学的に許容されるその塩、溶媒和物もしくはアミノ酸抱合体、例えば、３Ｈ、１４Ｃなどの放射性同位体が組み込まれたものは、薬物および／または基質組織分布分析において有用である。トリチウム標識、すなわち３Ｈ、および炭素−１４、すなわち１４Ｃ同位体は、調製および検出の容易さから特に好ましい。さらに、重水素、すなわち２Ｈなどのより重い同位体での置換は、より大きい代謝安定性に起因する特定の治療的利点、例えばインビボ半減期の延長または投薬量の必要性の低下をもたらすことができ、それ故、状況により好ましい可能性があり、同位体標識されたオベチコール酸、または薬学的に許容されるその塩、溶媒和物もしくはアミノ酸抱合体は、一般に、同位体標識されていない試薬を、容易に利用可能な同位体標識された試薬で置換することにより、本開示のスキーム中および／または実施例中に開示した手順を実行することによって調製することができる。一実施形態において、オベチコール酸、または薬学的に許容されるその塩、溶媒和物もしくはアミノ酸抱合体は、同位体標識されていない。一実施形態において、重水素化されたオベチコール酸は、生化学分析アッセイに有用である。他の実施形態において、オベチコール酸、または薬学的に許容されるその塩、溶媒和物もしくはアミノ酸抱合体は、放射性同位体で標識されている。 Obeticholic acid, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate or amino acid conjugate thereof, containing the aforementioned isotopes and / or other isotopes of other atoms is within the scope of this disclosure. Isotopically labeled obeticholic acid, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate or amino acid conjugate thereof, for example, a radioactive isotope such as 3 H, 14 C, etc., is incorporated into the drug and / or substrate Useful in tissue distribution analysis. Tritium labels, ie 3 H, and carbon-14, ie 14 C isotopes, are particularly preferred due to their ease of preparation and detection. Furthermore, replacement with deuterium, a heavier isotope such as 2 H, results in certain therapeutic advantages due to greater metabolic stability, such as increased in vivo half-life or reduced dosage requirements And therefore may be preferred in some circumstances and isotope-labeled oveticholic acid, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate or amino acid conjugate thereof is generally a non-isotopically labeled reagent. Can be prepared by performing the procedures disclosed in the schemes of this disclosure and / or in the examples by substituting with readily available isotope-labeled reagents. In one embodiment, the obeticholic acid, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate or amino acid conjugate thereof is not isotopically labeled. In one embodiment, deuterated obeticholic acid is useful in biochemical analytical assays. In other embodiments, the obeticholic acid, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate or amino acid conjugate thereof is labeled with a radioisotope.

「幾何異性体」は、その存在が二重結合を軸とする束縛回転によるものである、ジアステレオマーを意味する。これらの立体配置は、接頭辞シスおよびトランス、またはＺおよびＥによってそれらの名称において異なり、それらは、その基が、Ｃａｈｎ−Ｉｎｇｏｌｄ−Ｐｒｅｌｏｇ則に従い、分子において二重結合と同側または逆側にあることを示す。   “Geometric isomer” means a diastereomer whose presence is by constrained rotation about a double bond. These configurations differ in their names by the prefix cis and trans, or Z and E, which groups are either on the same side or on the opposite side of the double bond in the molecule according to the Cahn-Ingold-Prelog rule. Indicates that there is.

「溶媒和物」は、溶媒の化学量論的な量または非化学量論的な量を含有する溶媒付加形態を意味する。オベチコール酸は、結晶性固体状態で一定のモル比の溶媒分子を捕捉する傾向を有し、したがって溶媒和物を形成する可能性がある。溶媒が水である場合、形成される溶媒和物は水和物であり、溶媒がアルコールである場合、形成される溶媒和物はアルコラートである。水和物は、水の１つ以上の分子と、中で水がそのＨ２Ｏとしての分子状態を保持している物質のうちの１つとの組み合わせによって形成され、このような組合せにより、１種以上の水和物を形成することが可能となる。さらに、本発明の化合物、例えば本化合物の塩は、水和もしくは非水和（無水）形態で、または他の溶媒分子との溶媒和物として存在し得る。水和物の非限定的な例としては、一水和物、二水和物などが挙げられる。溶媒和物の非限定的な例としては、エタノール溶媒和物、アセトン溶媒和物などが挙げられる。 “Solvate” means solvent addition forms that contain either stoichiometric or non-stoichiometric amounts of solvent. Obeticholic acid has a tendency to trap a fixed molar ratio of solvent molecules in the crystalline solid state, thus forming a solvate. When the solvent is water, the solvate formed is a hydrate, and when the solvent is an alcohol, the solvate formed is an alcoholate. Hydrates are formed by the combination of one or more molecules of water and one of the substances in which the water retains its molecular state as H 2 O. It becomes possible to form hydrates of seeds or more. Furthermore, the compounds of the present invention, eg, salts of the present compounds, can exist in hydrated or non-hydrated (anhydrous) forms or as solvates with other solvent molecules. Non-limiting examples of hydrates include monohydrate, dihydrate and the like. Non-limiting examples of solvates include ethanol solvates, acetone solvates and the like.

「互変異性体」は、その構造が原子の配置において著しく異なるが、容易かつ急速な平衡状態で存在する化合物を指す。オベチコール酸は、異なる互変異性体として表し得ることが理解されるであろう。また、本発明のオベチコール酸および合成中間体が互変異性形態を有する場合、全ての互変異性形態が本発明の範囲内にあることが意図され、そしてオベチコール酸の命名が、いかなる互変異性形態も排除しないことも理解されるべきである。本発明のオベチコール酸および合成中間体は、ケト−エノールを含むいくつかの互変異性形態で存在し得る。例えば、ケト−エノール互変異性では、電子と水素原子との同時移動が起こる。互変異性体は、溶液中で互変異性セットの混合物として存在する。固体形態では、通常、１つの互変異性体が優位である。たとえ１つの互変異性体が記載されている可能性があるとしても、本発明は、本化合物のすべての互変異性体を含む。   “Tautomers” refer to compounds whose structures differ significantly in the arrangement of the atoms, but which exist in an easy and rapid equilibrium state. It will be appreciated that obeticholic acid may be represented as different tautomers. Also, where the obeticholic acid and synthetic intermediates of the present invention have tautomeric forms, all tautomeric forms are intended to be within the scope of the present invention, and the obeticholic acid nomenclature is any tautomeric It should also be understood that no form is excluded. The obeticholic acid and synthetic intermediates of the present invention can exist in several tautomeric forms including keto-enol. For example, keto-enol tautomerism involves simultaneous movement of electrons and hydrogen atoms. Tautomers exist as a mixture of tautomeric sets in solution. In the solid form, usually one tautomer is dominant. The present invention includes all tautomers of the present compound, even though one tautomer may have been described.

特に明記しない限り、不斉炭素原子から生じる異性体（例えば、全てのエナンチオマーおよびジアステレオマー）が、本発明の範囲内に含まれることは理解されるべきである。このような異性体は、古典的な分離技術により、また立体化学的に調節される合成により、実質的に純粋な形態で得ることができる。さらに、本願で論じる構造および他の化合物および部分にも、そのすべての互変異性体が含まれる。アルケンは、適切な場合、Ｅ−またはＺ−配置を含む可能性がある。オベチコール酸および合成中間体は、立体異性形態で存在することができ、このため、個々の立体異性体として、または混合物として製造することができる。   It is to be understood that isomers arising from asymmetric carbon atoms (eg, all enantiomers and diastereomers) are included within the scope of the invention, unless indicated otherwise. Such isomers can be obtained in substantially pure form by classical separation techniques and by stereochemically controlled synthesis. Furthermore, the structures and other compounds and moieties discussed in this application also include all their tautomers. Alkenes may contain an E- or Z-configuration where appropriate. Obeticholic acid and synthetic intermediates can exist in stereoisomeric forms and can therefore be prepared as individual stereoisomers or as mixtures.

「医薬組成物」は、対象への投与に適した形態のオベチコール酸を含有する製剤である。一実施形態において、医薬組成物は、バルクまたは単位剤形である。投与を容易にし、かつ投与量を均一にするために、単位剤形で組成物を処方することが有利であり得る。本明細書で使用する単位剤形とは、治療する対象に対する単位投与量として適した、物理的に個別の単位を指し、各単位は、必要な医薬担体と組み合わせて所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性な試薬を含有する。本発明の単位剤形に対する仕様は、活性試薬の特有の特徴および達成しようとする特定の治療効果、ならびに個体の治療のための活性剤などの配合の技術分野における固有の制限により決定され、これらに直接依存する。   A “pharmaceutical composition” is a formulation containing obeticholic acid in a form suitable for administration to a subject. In one embodiment, the pharmaceutical composition is in bulk or unit dosage form. It may be advantageous to formulate the composition in unit dosage form for ease of administration and uniformity of dosage. As used herein, a unit dosage form refers to physically discrete units suitable as unit dosages for a subject to be treated, each unit being combined with a necessary pharmaceutical carrier to produce a desired therapeutic effect. Contains a predetermined amount of active reagent calculated in The specifications for the unit dosage forms of the present invention are determined by the unique characteristics of the active reagent and the specific therapeutic effect to be achieved, as well as the inherent limitations in the art of formulating active agents for the treatment of individuals, Depends directly on.

単位剤形は、例えば、カプセル剤、ＩＶバッグ、錠剤、エアゾール吸入器の単一ポンプ、またはバイアルを含む種々の形態のいずれかである。組成物の単位用量中のオベチコール酸（例えば、オベチコール酸、または薬学的に許容されるその塩、溶媒和物もしくはアミノ酸抱合体からなる製剤）の量は、有効量であり、関係する特定の治療によって変わる。当業者は、患者の年齢および状態に応じて、投薬量に対する日常的な変更を行うことが時として必要であることを理解するであろう。投与量は投与経路にも依存するであろう。経口、肺、直腸、非経口、経皮、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、吸入、頬側、舌下、胸膜内、クモ膜下腔内、鼻腔内などの様々な経路が企図される。本発明の化合物の局所投与または経皮投与のための剤型として、粉末、スプレー、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、溶液、パッチ、および吸入薬が挙げられる。一実施形態において、オベチコール酸は、薬学的に許容される担体、および必要とされる任意の保存剤、緩衝液、または噴射剤と無菌条件下で混合される。   The unit dosage form is any of a variety of forms including, for example, a capsule, an IV bag, a tablet, a single pump of an aerosol inhaler, or a vial. The amount of obeticholic acid (eg, a preparation consisting of obeticholic acid, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate or amino acid conjugate thereof) in a unit dose of the composition is an effective amount and the particular treatment involved It depends on. One skilled in the art will understand that it is sometimes necessary to make routine changes to the dosage, depending on the age and condition of the patient. The dosage will also depend on the route of administration. Various routes are contemplated, including oral, pulmonary, rectal, parenteral, transdermal, subcutaneous, intravenous, intramuscular, intraperitoneal, inhalation, buccal, sublingual, intrapleural, intrathecal and intranasal. The Dosage forms for topical or transdermal administration of the compounds of this invention include powders, sprays, ointments, pastes, creams, lotions, gels, solutions, patches, and inhalants. In one embodiment, obeticholic acid is mixed under sterile conditions with a pharmaceutically acceptable carrier and any needed preservatives, buffers, or propellants.

用語「フラッシュ用量」は、急速に分散する剤形であるオベチコール酸製剤を指す。   The term “flash dose” refers to an obeticholic acid formulation that is a rapidly dispersing dosage form.

用語「即時放出」は、比較的短い期間、一般に最大約６０分での剤形からのオベチコール酸の放出と定義される。用語「調節放出」は、遅延放出、徐放、およびパルス化放出を含むと定義される。用語「パルス化放出」は、剤形からの薬物の一連の放出と定義される。用語「持続放出」または「徐放」は、長期にわたる剤形からのオベチコール酸の持続的な放出と定義される。   The term “immediate release” is defined as the release of obeticholic acid from the dosage form over a relatively short period of time, generally up to about 60 minutes. The term “controlled release” is defined to include delayed release, sustained release, and pulsed release. The term “pulsed release” is defined as a series of releases of drug from a dosage form. The term “sustained release” or “sustained release” is defined as a sustained release of obeticholic acid from a long-term dosage form.

「対象」としては、哺乳類、例えば、ヒト、ペット（例えば、イヌ、ネコ、鳥類など）、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ、家禽など）、および実験動物（例えば、ラット、マウス、モルモット、鳥類など）が挙げられる。一実施形態において、対象はヒトである。一実施形態において、対象はヒト小児（例えば、約３０ｋｇ〜約７０ｋｇ）である。一実施形態において、ヒト小児は葛西手術を受けており、出生時に胆管がないか、または出生時に完全に遮断されている場合、葛西手術によってそれらに効果的に胆管機能がもたらされる。   “Subject” includes mammals such as humans, pets (eg, dogs, cats, birds, etc.), livestock (eg, cows, sheep, pigs, horses, poultry, etc.), and laboratory animals (eg, rats, mice, Guinea pigs and birds). In one embodiment, the subject is a human. In one embodiment, the subject is a human child (eg, about 30 kg to about 70 kg). In one embodiment, human children have undergone Kasai surgery and if they have no bile duct at birth or are completely blocked at birth, Kasai surgery effectively provides them with bile duct function.

本明細書で使用する「薬学的に許容される」という句は、健全な医学的判断の範囲内で、合理的なベネフィット／リスク比と釣り合った、過剰な毒性、刺激、アレルギー性反応または他の問題もしくは合併症がなく、ヒトおよび動物の組織と接触させる使用に適切である、化合物、材料、組成物、担体および／または剤形を指す。   As used herein, the phrase “pharmaceutically acceptable” refers to an excess of toxicity, irritation, allergic reaction or other, within reasonable medical judgment, commensurate with a reasonable benefit / risk ratio. Refers to compounds, materials, compositions, carriers and / or dosage forms suitable for use in contact with human and animal tissues.

「薬学的に許容される賦形剤」は、一般に安全で、無毒性であり、生物学的にも他の点でも不快ではない医薬組成物を調製することにおいて有用である賦形剤を意味し、獣医学での使用ならびにヒトの薬学的使用に許容可能な賦形剤を含む。本明細書および特許請求の範囲において用いられる「薬学的に許容される賦形剤」は、１つのそのような賦形剤および複数のそのような賦形剤の双方を含む。   “Pharmaceutically acceptable excipient” means an excipient that is generally safe, non-toxic, and useful in preparing a pharmaceutical composition that is not biologically or otherwise uncomfortable. And excipients acceptable for veterinary use as well as human pharmaceutical use. A “pharmaceutically acceptable excipient” as used herein and in the claims includes both one such excipient and a plurality of such excipients.

オベチコール酸は、いかなる製剤も伴わずに直接投与することも可能であるが、通常、薬学的に許容される賦形剤とオベチコール酸とを含む医薬製剤の形態で投与される。これらの製剤は、経口、頬側、直腸、鼻腔内、経皮、皮下、静脈内、筋肉内および鼻腔内を含む様々な経路により投与し得る。オベチコール酸の経口製剤は、本明細書の「経口製剤および投与」というタイトルのセクション下でさらに記載されている。   Obeticholic acid can be administered directly without any formulation, but is usually administered in the form of a pharmaceutical formulation comprising a pharmaceutically acceptable excipient and obeticholic acid. These formulations may be administered by a variety of routes including oral, buccal, rectal, intranasal, transdermal, subcutaneous, intravenous, intramuscular and intranasal. An oral formulation of obeticholic acid is further described herein under the section entitled “Oral Formulation and Administration”.

一実施形態において、オベチコール酸は、経皮的に投与することができる。経皮投与するためには、経皮送達装置（「パッチ」）が必要である。そのような経皮パッチは、量を制御して本発明の化合物を連続的または非連続的に注入するのに用いられ得る。医薬品の送達のための経皮パッチの構築および使用は当該技術分野ではよく知られている。例えば、米国特許第５，０２３，２５２号明細書を参照されたい。このようなパッチは、医薬品を連続的に、パルス状に、または要求に応じた送達のために構築され得る。   In one embodiment, obeticholic acid can be administered transdermally. For transdermal administration, a transdermal delivery device (“patch”) is required. Such transdermal patches can be used to control the amount and infuse the compound of the invention continuously or discontinuously. The construction and use of transdermal patches for the delivery of pharmaceuticals is well known in the art. See, for example, US Pat. No. 5,023,252. Such patches can be constructed for continuous, pulsed, or on demand delivery of pharmaceutical products.

本発明の一実施形態において、頬側および／もしくは舌下、または経鼻投与に適合した製剤中に、上に記載した通りのオベチコール酸を少なくとも含む医薬製剤が提供される。この実施形態は、胃系統によるおよび／または肝臓を通した初回通過代謝などの胃の合併症を避ける方式でのオベチコール酸の投与を提供する。この投与経路はまた、吸着時間を短縮し、より迅速な治療効果の開始を提供することができる。本開示の化合物は、舌下／頬側製剤を促進するために特に好都合な溶解度プロファイルを提供することができる。こうした製剤は、一般的に、活性成分を吸収させるため、製剤が表面領域と接触する比較的短い時間に、舌下／頬側粘膜の限られた表面領域に十分な量の活性成分を送達するかなり高濃度の活性成分を必要とする。したがって、その高い溶解度と組み合わせた非常に高い活性のオベチコール酸は、その舌下／頬側製剤に対する適合性を高める。   In one embodiment of the present invention there is provided a pharmaceutical formulation comprising at least obeticholic acid as described above in a formulation adapted for buccal and / or sublingual or nasal administration. This embodiment provides for the administration of obeticholic acid in a manner that avoids gastric complications such as first pass metabolism by the gastric lineage and / or through the liver. This route of administration can also reduce the adsorption time and provide a faster onset of therapeutic effect. The compounds of the present disclosure can provide a particularly advantageous solubility profile for promoting sublingual / buccal formulations. Such formulations typically absorb sufficient amount of the active ingredient to a limited surface area of the sublingual / buccal mucosa in a relatively short time when the preparation contacts the surface area to absorb the active ingredient. A fairly high concentration of active ingredient is required. Thus, the very high activity obeticholic acid combined with its high solubility enhances its suitability for sublingual / buccal formulations.

オベチコール酸は、それぞれが約０．１ｍｇ〜約１５００ｍｇを含有する単位剤形に製剤化することが好ましい。他の実施形態において、製剤は約１ｍｇ〜約１００ｍｇを含む。他の実施形態において、製剤は約１ｍｇ〜約５０ｍｇを含む。他の実施形態において、製剤は約１ｍｇ〜約３０ｍｇを含む。他の実施形態において、製剤は約４ｍｇ〜約２６ｍｇを含む。他の実施形態において、製剤は約５ｍｇ〜約２５ｍｇを含む。一実施形態において、製剤は約１ｍｇ〜約２ｍｇを含む。一実施形態において、製剤は約１．２ｍｇ〜約１．８ｍｇを含む。一実施形態において、製剤は約１．３ｍｇ〜約１．７ｍｇを含む。一実施形態において、製剤は約１．５ｍｇを含む。用語「単位剤形」はヒト対象および他の哺乳動物の単位投薬量として適した、物理的に個別の単位を指し、各単位は、上記のような適切な医薬賦形剤と組み合わせて所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性物質を含有する。   Obeticholic acid is preferably formulated into unit dosage forms each containing from about 0.1 mg to about 1500 mg. In other embodiments, the formulation comprises from about 1 mg to about 100 mg. In other embodiments, the formulation comprises from about 1 mg to about 50 mg. In other embodiments, the formulation comprises from about 1 mg to about 30 mg. In other embodiments, the formulation comprises from about 4 mg to about 26 mg. In other embodiments, the formulation comprises from about 5 mg to about 25 mg. In one embodiment, the formulation comprises from about 1 mg to about 2 mg. In one embodiment, the formulation comprises from about 1.2 mg to about 1.8 mg. In one embodiment, the formulation comprises from about 1.3 mg to about 1.7 mg. In one embodiment, the formulation comprises about 1.5 mg. The term “unit dosage form” refers to physically discrete units suitable as unit dosages for human subjects and other mammals, each unit combined with a suitable pharmaceutical excipient as described above as desired. Contains a predetermined amount of active substance calculated to produce a therapeutic effect.

オベチコール酸は、一般に、広い投薬量範囲にわたって有効である。例えば、１日当たりの投薬量は、通常、約０．０００１〜約３０ｍｇ／ｋｇ（体重）の範囲内にある。成人のヒトの治療では、単一用量または分割用量で約０．１〜約１５ｍｇ／ｋｇ／日の範囲が特に好ましい。実施形態において、製剤は約０．１ｍｇ〜約１５００ｍｇを含む。他の実施形態において、製剤は約１ｍｇ〜約１００ｍｇを含む。他の実施形態において、製剤は約１ｍｇ〜約５０ｍｇを含む。他の実施形態において、製剤は約１ｍｇ〜約３０ｍｇを含む。他の実施形態において、製剤は約４ｍｇ〜約２６ｍｇを含む。他の実施形態において、製剤は約５ｍｇ〜約２５ｍｇを含む。一実施形態において、製剤は約１ｍｇ〜約２ｍｇを含む。一実施形態において、製剤は約１．２ｍｇ〜約１．８ｍｇを含む。一実施形態において、製剤は約１．３ｍｇ〜約１．７ｍｇを含む。一実施形態において、製剤は約１．５ｍｇを含む。しかしながら、実際に投与するオベチコール酸の量は、治療する病態、選択した投与経路、投与するオベチコール酸の形態、個々の患者の年齢、体重および応答、ならびに患者の症状の重症度を含む関連する状況に照らして、医師によって決定され、したがって、上記の投与量範囲が本発明の範囲を決して限定するものではないことは理解されよう。いくつかの場合、前述の範囲の下限未満の投薬量レベルが十分過ぎる可能性があり、一方、他の場合に、さらに大きい用量を、こうしたより大きい用量が１日全体を通した投与のためにいくつかのより小さい用量に最初に分割することを条件として、いかなる有害な副作用も引き起こさずに使用することができる。   Obeticholic acid is generally effective over a wide dosage range. For example, the daily dosage is usually in the range of about 0.0001 to about 30 mg / kg body weight. For the treatment of adult humans, a range of about 0.1 to about 15 mg / kg / day in single or divided doses is particularly preferred. In embodiments, the formulation comprises from about 0.1 mg to about 1500 mg. In other embodiments, the formulation comprises from about 1 mg to about 100 mg. In other embodiments, the formulation comprises from about 1 mg to about 50 mg. In other embodiments, the formulation comprises from about 1 mg to about 30 mg. In other embodiments, the formulation comprises from about 4 mg to about 26 mg. In other embodiments, the formulation comprises from about 5 mg to about 25 mg. In one embodiment, the formulation comprises from about 1 mg to about 2 mg. In one embodiment, the formulation comprises from about 1.2 mg to about 1.8 mg. In one embodiment, the formulation comprises from about 1.3 mg to about 1.7 mg. In one embodiment, the formulation comprises about 1.5 mg. However, the amount of obeticholic acid actually administered will depend on the pathology being treated, the route of administration chosen, the form of obeticholic acid administered, the age, weight and response of the individual patient, and the severity of the patient's symptoms. In light of this, it will be appreciated that the dosage range is determined by the physician, and thus the above dosage ranges are in no way intended to limit the scope of the invention. In some cases, dosage levels below the lower limit of the aforementioned range may be sufficient, while in other cases, larger doses may be used for administration of these larger doses throughout the day. It can be used without causing any harmful side effects, provided that it is first divided into several smaller doses.

「本発明の方法」は、本明細書に記載するオベチコール酸の調製方法を指し、ここで、この方法は、結晶性オベチコール酸を調製することを含む。   “Method of the Invention” refers to a method of preparing obeticholic acid as described herein, wherein the method comprises preparing crystalline oveticholic acid.

「線維症」は、組織または器官における、過剰な線維性結合組織、例えば瘢痕組織の発達を包含する病態を指す。このような瘢痕組織の生成は、疾患、外傷、化学的毒性などによる器官の感染、炎症または損傷に反応して起こり得る。線維症は、肝臓、腎臓、腸、肺、心臓などを含む種々の異なる組織および器官において発症し得る。   “Fibrosis” refers to a condition involving the development of excess fibrous connective tissue, such as scar tissue, in a tissue or organ. Such scar tissue generation can occur in response to organ infection, inflammation or damage due to disease, trauma, chemical toxicity, and the like. Fibrosis can occur in a variety of different tissues and organs including the liver, kidneys, intestines, lungs, heart, and the like.

本明細書で使用する「阻害する」または「阻害」という用語は、疾患または病態の発生または進行における何らかの検出可能な正の効果を指す。このような正の効果としては、疾患または病態の少なくとも１つの症状または徴候の開始の遅延または予防、症状または徴候の緩和または逆転、および症状または徴候のさらなる悪化の遅延または防止を挙げることができる。   The term “inhibit” or “inhibition” as used herein refers to any detectable positive effect in the development or progression of a disease or condition. Such positive effects can include delaying or preventing the onset of at least one symptom or sign of the disease or condition, alleviating or reversing the symptom or sign, and delaying or preventing further deterioration of the symptom or sign. .

本明細書で使用する「胆汁うっ滞性疾患」は、肝臓からの胆汁排出に障害があるかまたはそれが遮断される何らかの疾患または病態を指し、これは肝臓または胆管で起こり得る。肝内胆汁うっ滞および肝外胆汁うっ滞は、胆汁うっ滞疾患の２つのタイプである。（肝臓内で起こる）肝内胆汁うっ滞は、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、敗血症（全身感染）、急性アルコール性肝炎、薬物毒性、（静脈内供給される）完全静脈栄養、悪性腫瘍、嚢胞性線維症および妊娠で最もよく見られる。（肝臓の外側で起こる）肝外胆汁うっ滞は、胆管腫瘍、狭窄、嚢胞、憩室、総胆管での結石、膵炎、膵臓腫瘍または仮性嚢胞、および近くの器官における腫瘤または腫瘍による圧迫により引き起こされ得る。   As used herein, “cholestatic disease” refers to any disease or condition in which bile drainage from the liver is impaired or blocked, which can occur in the liver or bile ducts. Intrahepatic cholestasis and extrahepatic cholestasis are two types of cholestatic diseases. Intrahepatic cholestasis (occurring in the liver) includes primary biliary cirrhosis, primary sclerosing cholangitis, sepsis (systemic infection), acute alcoholic hepatitis, drug toxicity, and complete intravenous nutrition (supplied intravenously) Most commonly seen in malignant tumors, cystic fibrosis and pregnancy. Extrahepatic cholestasis (which occurs outside the liver) is caused by cholangiocarcinoma, stenosis, cyst, diverticulum, stones in the common bile duct, pancreatitis, pancreatic tumor or pseudocyst, and compression by a mass or tumor in nearby organs obtain.

胆汁うっ滞性疾患の臨床症状および徴候としては、かゆみ（掻痒）、疲労、皮膚または眼の黄疸、ある種の食物の消化不能、吐き気、嘔吐、白色便、暗色尿および右上腹部痛が挙げられる。胆汁うっ滞性疾患の患者は、患者の血清中のアルカリホスファターゼ、γ−グルタミルトランスペプチダーゼ（ＧＧＴ）、５’ヌクレオチダーゼ、ビリルビン、胆汁酸、およびコレステロールのレベルの測定を含む一連の標準的な臨床検査に基づいて臨床的に診断され追跡され得る。一般に患者は、診断マーカーであるアルカリホスファターゼ、ＧＧＴ、および５’ヌクレオチダーゼの３つ全ての血清レベルが異常に高いとみなされたなら、胆汁うっ滞性疾患を有すると診断される。これらのマーカーの正常な血清レベルは、試験プロトコールに依り、検査室間および手順間である程度、変動し得る。したがって、医師は、特定の検査室および試験手順に基づいて、各マーカーに対して何が異常に上昇した血液レベルであるかを決定することができよう。例えば、胆汁うっ滞性疾患に罹患した患者は一般に、血中のアルカリホスファターゼが約１２５ＩＵ／Ｌ超、ＧＧＴが約６５ＩＵ／Ｌ超、そして５’ヌクレオチダーゼが約１７ＮＩＬ超である。血清マーカーレベルの可変性ゆえに、胆汁うっ滞性疾患は、かゆみ（掻痒）などの上記症状の少なくとも１つに加えて、これらの３種類のマーカーの異常なレベルに基づいて診断され得る。   Clinical symptoms and signs of cholestatic disease include itching (itching), fatigue, skin or eye jaundice, indigestion of certain foods, nausea, vomiting, white stool, dark urine, and right upper abdominal pain . Patients with cholestatic disease have a series of standard clinical trials that include measuring levels of alkaline phosphatase, γ-glutamyl transpeptidase (GGT), 5 ′ nucleotidase, bilirubin, bile acids, and cholesterol in the patient's serum. It can be clinically diagnosed and followed based on the test. In general, a patient is diagnosed as having cholestatic disease if all three serum levels of diagnostic markers alkaline phosphatase, GGT, and 5 'nucleotidase are considered abnormally high. Normal serum levels of these markers can vary to some extent between laboratories and procedures, depending on the test protocol. Thus, the physician will be able to determine what is the abnormally elevated blood level for each marker based on the particular laboratory and test procedure. For example, patients suffering from cholestatic disease generally have blood alkaline phosphatase greater than about 125 IU / L, GGT greater than about 65 IU / L, and 5 'nucleotidase greater than about 17 NIL. Due to variability in serum marker levels, cholestatic disease can be diagnosed based on abnormal levels of these three markers in addition to at least one of the above symptoms such as itching (pruritus).

用語「器官」は、細胞および組織からなり、かつ生体において一部の特定の機能を実行する、分化した構造体（心臓、肺、腎臓、肝臓などにみられる）を指す。この用語はまた、機能を実行し、または活動に協力する身体部分（例えば、眼、および視覚的な器官を構成する関連した構造体）を包含する。用語「器官」はさらに、完全な構造体に潜在的に発達することができる分化した細胞および組織のあらゆる部分的構造体（例えば、肝臓の葉または切片）を包含する。   The term “organ” refers to a differentiated structure (found in the heart, lung, kidney, liver, etc.) that consists of cells and tissues and performs some specific function in the body. The term also encompasses body parts that perform functions or cooperate in activities (eg, the eyes and related structures that make up visual organs). The term “organ” further encompasses any partial structure of differentiated cells and tissues that can potentially develop into a complete structure (eg, a liver leaf or section).

本明細書で引用される全ての刊行物および特許文献は、このような刊行物または文献のそれぞれが具体的かつ個別に、参照により本明細書中に組み込まれるように指示されているかのように、参照により本明細書中に組み込まれる。刊行物および特許文献の引用は、何れも関連先行技術であると認めることを意図するものではなく、また、その内容または日付に関しても何ら受け入れを構成するものではない。本発明をここで書面により記載しているが、当業者は、本発明が様々な実施形態で実施され得、前述の説明および以下の実施例が、例示目的のものであり、続く特許請求の範囲を限定するものではないことを認識しているであろう。   All publications and patent documents cited herein are as if each such publication or document was specifically and individually indicated to be incorporated herein by reference. , Incorporated herein by reference. Citation of publications and patent literature is not intended as an admission that any is related to the prior art, nor constitutes acceptance as to its content or date. While the invention has been described herein in writing, those skilled in the art will recognize that the invention can be practiced in various embodiments, and that the foregoing description and the following examples are for illustrative purposes and are It will be appreciated that the scope is not limited.

本明細書において、文脈上明らかに他の意味に解すべき場合を除き、単数形は複数も含む。別段の定めがない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾がある場合は、本明細書が優先する。   In this specification, the singular includes the plural unless the context clearly dictates otherwise. Unless defined otherwise, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art to which this invention belongs. In case of conflict, the present specification will prevail.

本明細書で使用する全てのパーセンテージおよび比は、別段の指示がない限り、重量に基づく。   All percentages and ratios used herein are on a weight basis unless otherwise indicated.

実施例１：オベチコール酸の合成
この合成手順で参照する化合物番号は、スキーム１および各工程に対応する反応で使われている番号である。 Example 1: Synthesis of obeticholic acid The compound numbers referenced in this synthetic procedure are those used in the reactions corresponding to Scheme 1 and each step.

工程１−３α−ヒドロキシ−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（１）の調製：

反応１：Ｃ−２４カルボン酸である７−ケトリトコール酸（ＫＬＣＡ）のエステル化
酸触媒（硫酸、１．０ｍＬ）の存在下、メチルアルコール（２５００ｍＬ）を用いて３α−ヒドロキシ−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（ＫＬＣＡ；５００．０ｇ、１．２８ｍｏｌ）をエステル化し、６２℃〜６４℃にまで約３時間加熱して、３α−ヒドロキシ−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（１）を得た。この反応では、メチルアルコールはメチル化試薬および反応溶媒として働く。後処理のために、水酸化ナトリウム溶液（２Ｎ）でｐＨ値をｐＨ９．５〜１０に調節した。溶液を活性炭（２５ｇ）で約３０分間処理し、濾過して炭素固体を除去した。あるいは、溶液の活性炭処理は行わなかった。生成物を沈殿させるために、１０℃〜１５℃の水（６２５ｍＬ）を１５分かけて加え、種となる物質を加えた。１０℃〜１５℃で１時間、反応混合物を撹拌する。約２０〜２５分かけて追加の水（１８７５ｍＬ）を加えた。１０℃〜１５℃で３０分間、生成物懸濁液を撹拌した。生成物を遠心分離により単離し、メタノールと水の混合物（１：１、３５０ｍＬ）で洗浄した。カール・フィッシャー（ＫＦ）法により、この濡れた材料の水分含有量を定量した。回転式乾燥機により、７０℃ＮＭＴで、この物質を真空乾燥した。この物質は、乾燥させずに次の工程で使用することもできる。収量（乾燥生成物基準で計算）は５０１．４ｇ（１．２４ｍｏｌ、９６．８％）である。 Step 1-3 Preparation of α-hydroxy-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester (1):

Reaction 1: 3α-hydroxy-7-keto-5β using methyl alcohol (2500 mL) in the presence of an esterification acid catalyst (sulfuric acid, 1.0 mL) of 7-ketritocholic acid (KLCA), which is a C-24 carboxylic acid. -Cholan-24-acid (KLCA; 500.0 g, 1.28 mol) was esterified and heated to 62-64 ° C for about 3 hours to give 3α-hydroxy-7-keto-5β-cholan-24-acid The methyl ester (1) was obtained. In this reaction, methyl alcohol serves as a methylating reagent and reaction solvent. For workup, the pH value was adjusted to pH 9.5-10 with sodium hydroxide solution (2N). The solution was treated with activated carbon (25 g) for about 30 minutes and filtered to remove carbon solids. Alternatively, the solution was not treated with activated carbon. To precipitate the product, 10 ° C. to 15 ° C. water (625 mL) was added over 15 minutes and the seeding material was added. Stir the reaction mixture at 10 ° C. to 15 ° C. for 1 hour. Additional water (1875 mL) was added over about 20-25 minutes. The product suspension was stirred at 10-15 ° C for 30 minutes. The product was isolated by centrifugation and washed with a mixture of methanol and water (1: 1, 350 mL). The moisture content of this wet material was quantified by the Karl Fischer (KF) method. This material was vacuum dried at 70 ° C. NMT in a tumble dryer. This material can also be used in the next step without drying. Yield (calculated on dry product basis) is 501.4 g (1.24 mol, 96.8%).

工程２−３α，７α−ジトリメチルシリルオキシ−５β−コル−６−エン−２４−酸メチルエステル（３）の調製：

反応２：７−ケトリトコールメチルエステルからのシリルエノールエーテルの生成
不活性条件下で、残留水分およびメタノールを含有する化合物１（６０．６９ｇ、１５０ｍｍｏｌ、乾燥物質として計算）を反応器に投入し、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ、３６３ｍＬ）に溶解した。大気圧下、約６５℃で共沸蒸留を繰り返すことにより、水とメタノールを除去した。必要に応じて残留物にＴＨＦを加え、蒸留を約４回繰り返した。残留溶液の最終水分含有量は≦０．０５％（カール・フィッシャー滴定）でなければならない。この溶液を−２０℃〜−２５℃に予め冷却し、その後、約３０〜４５分以内にクロロトリメチルシラン（７３．３３ｇ、６７５ｍｍｏｌ、４．５当量）を加えた。窒素雰囲気下で、リチウムジイソプロピルアミド（２８％ＬＤＡ溶液、９００ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（５０４ｍＬ）を別の不活性反応器に投入し、−２０℃〜−２５℃に冷却した。脱水し冷却した化合物１、ＴＨＦ（８４ｍＬ）およびクロロトリメチルシランの溶液を−２０℃〜−２５℃のＬＤＡ溶液に加えた。その後、約２時間、反応混合物を撹拌した。後処理のために、２℃〜８℃に予備冷却したクエン酸水溶液（３００ｍＬに３４．６ｇ）に反応混合物を加えた。添加後、水相を分離して廃棄した。最高５０℃の真空蒸留により、有機相から液体分を除去した。分離した残留物は、化合物３およびいくらかの残留溶媒を含んでいたが、そのまま次の工程で使用した。 Step 2-3 Preparation of α, 7α-ditrimethylsilyloxy-5β-col-6-ene-24-acid methyl ester (3):

Reaction 2: Generation of silyl enol ether from 7-ketritocol methyl ester Under inert conditions, Compound 1 (60.69 g, 150 mmol, calculated as dry matter) containing residual moisture and methanol was charged to the reactor, Dissolved in tetrahydrofuran (THF, 363 mL). Water and methanol were removed by repeating azeotropic distillation at about 65 ° C. under atmospheric pressure. If necessary, THF was added to the residue, and distillation was repeated about 4 times. The final water content of the residual solution should be ≦ 0.05% (Karl Fischer titration). The solution was pre-cooled to −20 ° C. to −25 ° C., after which chlorotrimethylsilane (73.33 g, 675 mmol, 4.5 eq) was added within about 30-45 minutes. Under a nitrogen atmosphere, lithium diisopropylamide (28% LDA solution, 900 mmol) and THF (504 mL) were charged into another inert reactor and cooled to −20 ° C. to −25 ° C. Dehydrated and cooled Compound 1, THF (84 mL) and chlorotrimethylsilane solution was added to the -20 ° C to -25 ° C LDA solution. The reaction mixture was then stirred for about 2 hours. For workup, the reaction mixture was added to an aqueous citric acid solution (34.6 g in 300 mL) precooled to 2-8 ° C. After the addition, the aqueous phase was separated and discarded. The liquid component was removed from the organic phase by vacuum distillation at a maximum of 50 ° C. The separated residue contained compound 3 and some residual solvent, but was used as such in the next step.

工程３−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸メチルエステル（４）の調製：

反応３：シリルエノールエーテルとアセトアルデヒドのアルドール縮合
化合物３（１６４．６８ｇ、３００ｍｍｏｌ、乾燥物質として計算）のＴＨＦ溶液を不活性反応器に投入した。最高温度５０℃でＴＨＦの残留量を真空下で留去した。次に進むには、残留物中の水分含有量は≦０．５％（カール・フィッシャー滴定）に制限された。その後、残留物をジクロロメタン（２００ｍＬ）に溶解させ、−６０℃〜−６５℃に予備冷却した。その後、アセトアルデヒド（３３．８ｍＬ、６００ｍｍｏｌ）を加えた。窒素雰囲気下で、ジクロロメタン（７００ｍＬ）および三フッ化ホウ素（１６重量％アセトニトリル溶液、３１８ｇ、７５０ｍｍｏｌ）アセトニトリル複合体を別の反応器に投入し、その後、−６０℃〜−６５℃に冷却した。−６０℃〜−６５℃で、脱水した化合物３溶液を加えた。反応混合物を−６０℃〜−６５℃で約２時間撹拌し、２３℃〜２８℃にまで加熱し、さらに約３時間撹拌し、加水分解／後処理のために約２℃〜１０℃に冷却した。後処理のために、反応器からの冷却した溶液を、予め冷却した５０重量％の苛性ソーダの水溶液（４０ｍＬ）と６６０ｍＬの水に加えた。約１０分間強く撹拌した後、相を分離し、（下層の）有機層を別の反応器に移した。５０℃ＮＭＴで蒸留し、有機層から溶媒をできるだけ除去した。化合物４と、いくらか残留しているアセトニトリルおよびジクロロメタンとからなる残留物をドラム缶に排出した。Ｅ／Ｚ異性体の混合物である化合物４Ａも、上記工程３に記載の手順で調製することができる。 Step 3-3 Preparation of α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid methyl ester (4):

Reaction 3: THF solution of aldol condensation compound 3 of silyl enol ether and acetaldehyde 3 (164.68 g, 300 mmol, calculated as dry substance) was charged into an inert reactor. The residual amount of THF was distilled off under vacuum at a maximum temperature of 50 ° C. To proceed, the moisture content in the residue was limited to ≦ 0.5% (Karl Fisher titration). The residue was then dissolved in dichloromethane (200 mL) and precooled to −60 ° C. to −65 ° C. Acetaldehyde (33.8 mL, 600 mmol) was then added. Under a nitrogen atmosphere, dichloromethane (700 mL) and boron trifluoride (16 wt% acetonitrile solution, 318 g, 750 mmol) acetonitrile complex were charged to another reactor and then cooled to −60 ° C. to −65 ° C. The dehydrated compound 3 solution was added at −60 ° C. to −65 ° C. The reaction mixture is stirred at −60 ° C. to −65 ° C. for about 2 hours, heated to 23 ° C. to 28 ° C., further stirred for about 3 hours, and cooled to about 2 ° C. to 10 ° C. for hydrolysis / workup. did. For workup, the cooled solution from the reactor was added to a precooled 50 wt% aqueous solution of caustic soda (40 mL) and 660 mL of water. After stirring vigorously for about 10 minutes, the phases were separated and the (lower) organic layer was transferred to another reactor. Distillation was performed at 50 ° C. NMT to remove as much solvent as possible from the organic layer. The residue consisting of compound 4 and some residual acetonitrile and dichloromethane was discharged into a drum. Compound 4A, which is a mixture of E / Z isomers, can also be prepared by the procedure described in Step 3 above.

工程４−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（５）の調製：

反応４：Ｃ−２４エステルの鹸化
化合物４（２５８．３７ｇ、６００ｍｍｏｌ、乾燥物質として計算）を不活性反応器に投入した。５０℃ＮＭＴの温度で、残留量の溶媒を真空下で留去した。残留物をメタノール（３６０ｍＬ）に溶解し、水（５４ｍＬ）および５０重量％の苛性ソーダ（５４ｍＬ）を加えた。反応混合物を４９℃〜５３℃にまで加熱し、この温度で少なくとも２時間撹拌した。反応混合物のｐＨが＞１２であるかを確認する。ｐＨが＜１２であるなら、追加のＮａＯＨを加え、２時間の反応を繰り返す。溶液を水（１０００ｍＬ）で希釈し、温度を２５℃〜３５℃に調節した。後処理のために、反応混合物を少なくとも３０分間静置させた。相を分離し、下層の水層を別の反応器に移し、有機層を廃棄した。酢酸エチル（１４００ｍＬ）とクエン酸水溶液（４８０ｍＬ中２４４ｇ）を強く撹拌しながら水層に加えた。反応混合物を２５℃〜３５℃で１０分間撹拌した。相を分離し、下層の水層を廃棄した。酢酸エチルを有機層から留去し、酢酸エチル（８００ｍＬ）で置換した。蒸留物の水分含有量が１％ＮＭＴになるまで、または沸点が一定値に達するまでこの操作を繰り返した。この懸濁液を２０℃〜２５℃に冷却し、３０分間撹拌し、その後、生成物を分離して酢酸エチル（１００ｍＬ、３〜４回）で洗浄した。乾燥を、約６０℃、真空下で回転式乾燥機により行った。粗化合物５の収量は１１８．７１ｇ（ＫＬＣＡから４７．５％）である。Ｅ／Ｚ異性体の混合物である化合物４Ａは、Ｅ／Ｚ異性体の混合物である化合物５Ａを生成する出発物質としても使用することができる。 Step 4-3 Preparation of α-Hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid (5):

Reaction 4: Saponification of C-24 ester Compound 4 (258.37 g, 600 mmol, calculated as dry matter) was charged to an inert reactor. The residual amount of solvent was distilled off under vacuum at a temperature of 50 ° C. NMT. The residue was dissolved in methanol (360 mL) and water (54 mL) and 50 wt% sodium hydroxide (54 mL) were added. The reaction mixture was heated to 49-53 ° C. and stirred at this temperature for at least 2 hours. Check if the pH of the reaction mixture is> 12. If the pH is <12, add additional NaOH and repeat the reaction for 2 hours. The solution was diluted with water (1000 mL) and the temperature was adjusted to 25 ° C to 35 ° C. The reaction mixture was allowed to stand for at least 30 minutes for workup. The phases were separated, the lower aqueous layer was transferred to another reactor, and the organic layer was discarded. Ethyl acetate (1400 mL) and aqueous citric acid solution (244 g in 480 mL) were added to the aqueous layer with vigorous stirring. The reaction mixture was stirred at 25 ° C. to 35 ° C. for 10 minutes. The phases were separated and the lower aqueous layer was discarded. Ethyl acetate was distilled off from the organic layer and replaced with ethyl acetate (800 mL). This operation was repeated until the water content of the distillate reached 1% NMT or until the boiling point reached a constant value. The suspension was cooled to 20 ° C.-25 ° C. and stirred for 30 minutes, after which the product was separated and washed with ethyl acetate (100 mL, 3-4 times). Drying was performed with a rotary drier at about 60 ° C. under vacuum. The yield of crude compound 5 is 118.71 g (47.5% from KLCA). Compound 4A, which is a mixture of E / Z isomers, can also be used as a starting material to produce compound 5A, which is a mixture of E / Z isomers.

その後、エタノールを用いて粗化合物５を結晶化した。結晶化のための粗化合物もまた、Ｅ／Ｚ異性体の混合物である化合物５Ａとすることができる。エタノール（３９０〜５２０ｍＬ）と粗化合物５（１３０ｇ）を不活性反応器に投入した。粗化合物５を溶解するために、反応混合物を加熱還流した。その後、反応混合物を制御された直線的冷却勾配で、３〜５時間以内に１５℃〜２０℃に冷却した。遠心分離により結晶化合物５Ａを分離し、その後、酢酸エチル（５０〜１００ｍＬ、２回）で洗浄した。回転式乾燥機により約６０℃で真空乾燥を行った。これにより８５．８ｇ（６６％）の収量を得た。精製した化合物５の化学分析、純度および水分を測定するために試料を採取した。精製した化合物５は３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸のＥ異性体である。精製化合物５の同定および特徴付けに関する詳細については実施例２を参照されたい。精製した化合物５、すなわちＥ異性体の単離は、任意選択とすることができる。Ｅ異性体とＺ異性体の溶解度は異なる。Ｅ異性体の溶解性は低いので、Ｚ異性体を洗い流すようにして結晶化する。   Thereafter, crude compound 5 was crystallized using ethanol. The crude compound for crystallization can also be compound 5A, which is a mixture of E / Z isomers. Ethanol (390-520 mL) and crude compound 5 (130 g) were charged to an inert reactor. The reaction mixture was heated to reflux to dissolve the crude compound 5. The reaction mixture was then cooled to 15-20 ° C. within 3-5 hours with a controlled linear cooling gradient. Crystalline compound 5A was separated by centrifugation, and then washed with ethyl acetate (50 to 100 mL, twice). Vacuum drying was performed at about 60 ° C. using a rotary dryer. This gave a yield of 85.8 g (66%). Samples were taken to measure the chemical analysis, purity and moisture of the purified compound 5. Purified compound 5 is the E isomer of 3α-hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid. See Example 2 for details regarding the identification and characterization of purified compound 5. The isolation of purified compound 5, ie, the E isomer, can be optional. The solubility of E isomer and Z isomer is different. Since the solubility of the E isomer is low, the Z isomer is washed away and crystallized.

化合物５を調製する代替法は以下のようである。化合物４（１１１．９６ｇ）を不活性反応器に投入した。最高５０℃で、残留量の溶媒（例えば、アセトニトリル、ジクロロメタン）を真空下で留去した。残留物をメタノール（１５６ｍＬ）に溶解し、約１０℃に冷却した。水道水（２３．４ｍＬ）と５０％の苛性ソーダ（２３．４ｍＬ）を加えた。反応混合物を約２０℃〜約２５℃で約４時間撹拌した。溶液を水道水（４３３ｍＬ）で希釈し、トルエン（１４４ｍＬ）を加えた。撹拌後、相を分離し、下層の水層を不活性反応器に移した。有機層を廃棄した。酢酸エチル（６０７ｍＬ）とクエン酸溶液（２０８ｍＬの水に１０５．７ｇ）を強く撹拌しながら水層に加えた。相を分離し、下層の水層を廃棄した。有機層を不活性反応器に移した。酢酸エチルを有機層から留去し、酢酸エチル（３４７ｍＬ）で置換した。一実施例では、蒸留物の水分含有量が約１％以下になるまで、または沸点が一定値に達するまで、この操作を酢酸エチル（１７３ｍＬ）で繰り返した。この懸濁液を２０℃〜２５℃に冷却した。化合物５を単離し、不活性遠心分離を伴った酢酸エチルによる洗浄（各回４３ｍＬで３〜４回）を行った。約６０℃の真空下、回転式乾燥機で乾燥を行った（化合物１基準で６４．８％の収率）。化合物４Ａ（Ｅ／Ｚ異性体の混合物）もまた、化合物５Ａ（Ｅ／Ｚ異性体の混合物）を生成する工程４の出発物質として使用することができる。   An alternative method for preparing compound 5 is as follows. Compound 4 (111.96 g) was charged to the inert reactor. At a maximum of 50 ° C., residual amounts of solvent (eg acetonitrile, dichloromethane) were distilled off under vacuum. The residue was dissolved in methanol (156 mL) and cooled to about 10 ° C. Tap water (23.4 mL) and 50% sodium hydroxide (23.4 mL) were added. The reaction mixture was stirred at about 20 ° C. to about 25 ° C. for about 4 hours. The solution was diluted with tap water (433 mL) and toluene (144 mL) was added. After stirring, the phases were separated and the lower aqueous layer was transferred to an inert reactor. The organic layer was discarded. Ethyl acetate (607 mL) and citric acid solution (105.7 g in 208 mL water) were added to the aqueous layer with vigorous stirring. The phases were separated and the lower aqueous layer was discarded. The organic layer was transferred to an inert reactor. Ethyl acetate was distilled off from the organic layer and replaced with ethyl acetate (347 mL). In one example, this procedure was repeated with ethyl acetate (173 mL) until the water content of the distillate was below about 1% or until the boiling point reached a constant value. The suspension was cooled to 20-25 ° C. Compound 5 was isolated and washed with ethyl acetate with inert centrifugation (3-4 times with 43 mL each time). Drying was carried out in a rotary drier under a vacuum of about 60 ° C. (64.8% yield based on Compound 1). Compound 4A (mixture of E / Z isomers) can also be used as a starting material in step 4 to produce compound 5A (mixture of E / Z isomers).

工程５−３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（６）の調製：

反応５：６−エチリデン部分の水素化
精製した化合物５（１１０ｇ、２６４ｍｍｏｌ）、水（１１００ｍＬ）、５０％苛性ソーダ溶液（３５．８ｍＬ、６８２ｍｍｏｌ）およびパラジウム触媒（Ｐｄ／Ｃ、１１ｇ）の混合物を水素化反応器に投入した。温度を２５℃〜３５℃に調節し、窒素（２ｂａｒ）で３回、水素（１ｂａｒ）で３回、反応器をフラッシュした。これらの圧力値は、周囲圧力（＝０ｂａｒ）に対する相対値として与えられる。５ｂａｒの水素圧を印加し、反応混合物を１００℃にまで１．５時間加熱し（アルファ位の異性化のために）、その後、水素圧を４．５〜５ｂａｒに維持しながら３時間撹拌した。その後、反応混合物を４０℃〜５０℃に冷却した。後処理のために、Ｐｄ／Ｃを濾別する。濾液に酢酸ｎ−ブチル（１３２０ｍＬ）および塩酸（６７．８ｍＬ、８１５ｍｍｏｌ、３７％）を加えた。水相は分離して廃棄した。４０〜５０℃で約１０分間、有機相を活性炭（５．５ｇ）で処理した。活性炭を濾別し、蒸留により濾液を濃縮し、得られた懸濁液を２〜３時間以内に１５℃〜２０℃に冷却した。沈殿した化合物６を単離し、酢酸ｎ−ブチル（１６０ｍＬ）で洗浄した。生成物を加圧濾過器を使用して濾過した。加圧濾過器内において、約６０℃で真空乾燥を行った。これにより８９．８ｇ（８１．２％）の化合物６を得た。化合物６を調製するために、工程５でＥ／Ｚ異性体の混合物である化合物５Ａを使用することができる。 Step 5-3 Preparation of α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β-cholan-24-acid (6):

Reaction 5: Hydrogenation of the 6-ethylidene moiety Hydrogenated a mixture of purified compound 5 (110 g, 264 mmol), water (1100 mL), 50% sodium hydroxide solution (35.8 mL, 682 mmol) and palladium catalyst (Pd / C, 11 g). The reactor was charged. The temperature was adjusted to 25-35 ° C. and the reactor was flushed 3 times with nitrogen (2 bar) and 3 times with hydrogen (1 bar). These pressure values are given as relative values to the ambient pressure (= 0 bar). A hydrogen pressure of 5 bar was applied and the reaction mixture was heated to 100 ° C. for 1.5 hours (for alpha isomerization) and then stirred for 3 hours while maintaining the hydrogen pressure at 4.5-5 bar. . The reaction mixture was then cooled to 40-50 ° C. Pd / C is filtered off for workup. To the filtrate was added n-butyl acetate (1320 mL) and hydrochloric acid (67.8 mL, 815 mmol, 37%). The aqueous phase was separated and discarded. The organic phase was treated with activated carbon (5.5 g) at 40-50 ° C. for about 10 minutes. The activated carbon was filtered off, the filtrate was concentrated by distillation, and the resulting suspension was cooled to 15-20 ° C. within 2-3 hours. The precipitated compound 6 was isolated and washed with n-butyl acetate (160 mL). The product was filtered using a pressure filter. Vacuum drying was performed at about 60 ° C. in a pressure filter. This gave 89.8 g (81.2%) of compound 6. To prepare compound 6, compound 5A, which is a mixture of E / Z isomers in step 5, can be used.

工程６−３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−酸（オベチコール酸）の調製：

反応６：７α−ヒドロキシ基への７−ケト基の選択的還元
化合物６（８６ｇ、２０５．４ｍｍｏｌ）、水（６８８ｍＬ）および５０％水酸化ナトリウム溶液（５６．４ｍＬ）の混合物を、５０重量％水酸化ナトリウム溶液（１．５ｍＬ）および水（２０ｍＬ）の混合物中、９０℃〜１０５℃で、水素化ホウ素ナトリウム（７．７７ｇ、２０５．４ｍｍｏｌ）と反応させた。反応混合物を加熱還流し、少なくとも３時間撹拌した。後処理のために、反応完了後、混合物を約８０℃に冷却し、冷却した反応器に移した。３０℃〜５０℃で、酢酸ｎ−ブチル（８６０ｍＬ）と、クエン酸（３２０．２ｇ、無水物）を水（４９１ｍＬ）に溶解した溶液とを加えた。水相を分離し、ｐＨ値が酸性であることを確認した後、廃棄した。有機相を移動させて、蒸留した。残留物を酢酸ｎ−ブチルで希釈し、１５℃〜２０℃に徐冷し、遠心分離により粗オベチコール酸を濾過した。濡れた生成物を酢酸ｎ−ブチルから結晶化した。生成物のオベチコール酸を単離し、酢酸ｎ−ブチル（４３ｍＬ、４回）により不活性の加圧濾過器内で洗浄した。加圧濾過器内において、約８０℃で真空乾燥を行った。これにより、２θが約５．０度および５．３度に特徴的なピークを含む、Ｘ線回折パターンにより特徴付けられた結晶性オベチコール酸６７．３４ｇ（７７．９％）を得た。結晶性オベチコール酸形態Ａは、図４１に示すものと実質的に類似のＸ線回折パターンにより特徴付けられる。結晶性オベチコール酸の同定および特徴付けに関する詳細については実施例３を参照されたい。 Step 6-3 Preparation of α, 7α-dihydroxy-6α-ethyl-5β-cholan-24-acid (obeticholic acid):

Reaction 6: Selective Reduction of 7-Keto Group to 7α-Hydroxy Group A mixture of compound 6 (86 g, 205.4 mmol), water (688 mL) and 50% sodium hydroxide solution (56.4 mL) was added at 50 wt%. Reaction with sodium borohydride (7.77 g, 205.4 mmol) in a mixture of sodium hydroxide solution (1.5 mL) and water (20 mL) at 90-105 ° C. The reaction mixture was heated to reflux and stirred for at least 3 hours. For workup, after completion of the reaction, the mixture was cooled to about 80 ° C. and transferred to a cooled reactor. At 30 ° C. to 50 ° C., n-butyl acetate (860 mL) and a solution of citric acid (320.2 g, anhydride) dissolved in water (491 mL) were added. The aqueous phase was separated and discarded after confirming that the pH value was acidic. The organic phase was transferred and distilled. The residue was diluted with n-butyl acetate, slowly cooled to 15 ° C. to 20 ° C., and crude obeticholic acid was filtered by centrifugation. The wet product was crystallized from n-butyl acetate. The product obeticholic acid was isolated and washed with n-butyl acetate (43 mL, 4 times) in an inert pressure filter. Vacuum drying was performed at about 80 ° C. in a pressure filter. This gave 67.34 g (77.9%) of crystalline oveticholic acid characterized by an X-ray diffraction pattern with peaks characterized by 2θ of about 5.0 and 5.3 degrees. Crystalline obeticholic acid form A is characterized by an X-ray diffraction pattern substantially similar to that shown in FIG. See Example 3 for details regarding the identification and characterization of crystalline obeticholic acid.

工程７−オベチコール酸形態１の調製：

反応７：結晶性オベチコール酸形態Ａからのオベチコール酸形態１の調製
２θが約５．０度および５．３度に特徴的なピークを含む、Ｘ線回折パターンにより特徴付けられた結晶性オベチコール酸形態Ａ（５８ｇ）を、３０℃〜４０℃で、水（８７０ｍＬ）および苛性ソーダ溶液（５０％、８．７ｍＬ、１６６ｍｍｏｌ）に溶解した。すべての固形分が溶解するまでこの混合物を撹拌した。以下の後処理により、生成物を沈殿させた。３０℃〜４０℃でオベチコール酸溶液を、水（８７０ｍＬ）で希釈した塩化水素酸（３７％、１６．０５ｍＬ、１９３ｍｍｏｌ）に、フィルターを介して徐々に加えた。３０℃〜４０℃で懸濁液を約３０分間撹拌し、その後、２０℃以下（ＮＭＴ）に冷却した。生成物を単離し、不活性の加圧濾過器内で水（４６５ｍＬ、６回）により洗浄した。加圧濾過器内において、５０℃ＮＭＴの温度で真空乾燥を行った。これにより、５３．２ｇ（９１．７％）のオベチコール酸形態１を得た。 Step 7—Preparation of Obeticholic Acid Form 1:

Reaction 7: Preparation of Obeticholic Acid Form 1 from Crystalline Obeticholic Acid Form A Crystalline Obeticholic Acid Characterized by an X-ray Diffraction Pattern with 2θ Containing Peaks Characteristic at about 5.0 and 5.3 Degrees Form A (58 g) was dissolved in water (870 mL) and caustic soda solution (50%, 8.7 mL, 166 mmol) at 30 ° C. to 40 ° C. The mixture was stirred until all solids were dissolved. The product was precipitated by the following workup. The obeticholic acid solution at 30-40 ° C. was slowly added through a filter to hydrochloric acid (37%, 16.05 mL, 193 mmol) diluted with water (870 mL). The suspension was stirred at 30-40 ° C. for about 30 minutes and then cooled to below 20 ° C. (NMT). The product was isolated and washed with water (465 mL, 6 times) in an inert pressure filter. Vacuum drying was performed at a temperature of 50 ° C. NMT in a pressure filter. This gave 53.2 g (91.7%) of obeticholic acid form 1.

実施例２：Ｅ−３α−ヒドロキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−酸（５）の特徴付け
化合物５は、本願の方法のキーとなる中間体である。この化合物を酢酸エチルから単離し、その後、エタノールから結晶化した。高純度の化合物５は、化合物６ならびに、その後の、２θが約５．０度および５．３度に特徴的なピークを含む、Ｘ線回折パターンにより特徴付けられる結晶性オベチコール酸形態Ａ、および、実質的に純粋なオベチコール酸を含む、オベチコール酸形態１の効率的で高収率の生成を可能にする。 Example 2: Characterization of E-3α-Hydroxy-6-ethylidene-7-keto-5β-cholan-24-acid (5) Compound 5 is a key intermediate in the present method. This compound was isolated from ethyl acetate and then crystallized from ethanol. High purity compound 5 comprises compound 6 and subsequent crystalline obeticholic acid form A characterized by an X-ray diffraction pattern comprising peaks characteristic of 2θ at about 5.0 and 5.3 degrees, and Enables efficient and high yield production of obeticholic acid form 1, including substantially pure obeticholic acid.

実施例１の工程４で生成する化合物５の構造を、１Ｈ ＮＭＲ、１３Ｃ ＮＭＲおよび質量分析計を使用して確認した。工程４からの粗生成物は、ＬＣ／ＭＳカップリングのクォリティ・コントロール法１により作成されたＵＶクロマトグラムで、保持時間（ＲＴ）２７．４５７分に主生成物を、ＲＴ２８．０７８分に副生成物を与えた。２種の生成物は化合物５のＥ／Ｚ異性体である：

これらの２種の異性体は、ＭＳ／ＭＳスペクトルで同一の精密質量および同一のフラグメンテーションを示す。それらは、質量分析データでは区別することができない。 The structure of Compound 5 produced in Step 4 of Example 1 was confirmed using 1 H NMR, 13 C NMR and a mass spectrometer. The crude product from Step 4 is a UV chromatogram made by LC / MS coupling quality control method 1 with the main product at retention time (RT) 27.457 minutes and the minor product at RT 28.078 minutes. The product was given. The two products are the E / Z isomers of compound 5:

These two isomers show the same exact mass and the same fragmentation in the MS / MS spectrum. They cannot be distinguished by mass spectrometry data.

Ｅ／Ｚ異性体ピークを分離するためにセミ分取法を使用し、２段アプローチによりＥ／Ｚ異性体の構造を確認した。ＨＰＬＣクォリティ・コントロール法１では不揮発性のリン酸緩衝液を使用しており、したがって不揮発性緩衝液を使用して直接ＬＣ／ＭＳを連結することは不可能であった。この方法の適合性に対する予備試験から、ＵＰＬＣ法のみが、Ｅ／Ｚ異性体を十分に分離するための非常に高い段数を与えることが示された。２段アプローチは次のようである：工程Ａは、新たに開発したＵＰＬＣ／ＭＳ法による２つの試料中のＥ／Ｚ異性体の同定であり、工程Ｂは、ＨＰＬＣ法２によるＥ／Ｚ異性体ピーク画分の分離およびその後のＵＰＬＣ／ＭＳ法１による同定である。この方法の実験上の詳細は次のようである：   A semi-preparative method was used to separate the E / Z isomer peaks, and the structure of the E / Z isomer was confirmed by a two-step approach. In HPLC quality control method 1, a non-volatile phosphate buffer was used, and therefore it was impossible to connect LC / MS directly using a non-volatile buffer. Preliminary tests for the suitability of this method showed that only the UPLC method gives a very high number of plates to fully separate the E / Z isomers. The two-step approach is as follows: Step A is the identification of E / Z isomers in two samples by the newly developed UPLC / MS method, and Step B is the E / Z isomerism by HPLC method 2. Separation of body peak fractions and subsequent identification by UPLC / MS method 1. The experimental details of this method are as follows:

結果を図１および図２に示す。図１および２は、高性能ＵＰＬＣカラムで得た、「粗化合物５」（図１）および化合物５の「精製した参照」（図２）のＵＰＬＣ ＵＶ／ＭＳクロマトグラムである。図１では、試料をＡＣＮ／Ｈ２Ｏ １：１中に１ｍｇ／ｍＬで溶解した；２００×２ｍｍ Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＧＯＬＤ Ｒ１２２；ＬＭＡ：Ｈ２Ｏ＋１０ｍＭ ＡＦ＋０．１％ＨＦｏ；ＬＭＢ：ＡＣＮ；４５％−２０−６０％（１０）；０．４ｍＬ／ｍｉｎ；４０℃；ＵＶＡ＝２００ｎｍ；注入体積３μＬ。図２では、試料をＡＣＮ／Ｈ２Ｏ中に１ｍｇ／ｍｌで溶解した；２００×２ｍｍ Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＧＯＬＤ Ｒ１２２；Ａ：１０ｍＭ ＡＦ＋０．１％ＨＦｏ；Ｂ：ＡＣＮ；４５％−２０−６０％Ｂ（１０）；０．４ｍＬ／ｍｉｎ；注入体積２０μＬ。両試料で、主成分（ＲＴ ９．９２分）と副成分（ＲＴ １０．７７分）の分子量は予想通り同一であり、２つの化合物の精密質量は、以下の正イオンおよび負イオンの測定データである表Ｄおよび表Ｅに示すように、提供された構造と一致した。 The results are shown in FIG. 1 and FIG. 1 and 2 are UPLC UV / MS chromatograms of “crude compound 5” (FIG. 1) and “purified reference” (FIG. 2) of compound 5 obtained on a high performance UPLC column. In FIG. 1, the sample was dissolved at 1 mg / mL in ACN / H 2 O 1: 1; 200 × 2 mm Hypersil GOLD R122; LMA: H 2 O + 10 mM AF + 0.1% HFo; LMB: ACN; 45% -20− 60% (10); 0.4 mL / min; 40 ° C .; UVA = 200 nm; injection volume 3 μL. In FIG. 2, the sample was dissolved in ACN / H 2 O at 1 mg / ml; 200 × 2 mm Hypersil GOLD R122; A: 10 mM AF + 0.1% HFo; B: ACN; 45% -20-60% B (10 0.4 mL / min; injection volume 20 μL. In both samples, the molecular weights of the main component (RT 9.92 min) and subcomponent (RT 10.77 min) are the same as expected, and the exact masses of the two compounds are the following positive ion and negative ion measurement data: As shown in Table D and Table E, which were consistent with the provided structure.

クォリティ・コントロールＨＰＬＣ法２のポータビリティを確実にするために、正確に指定された条件下で元の分離を繰り返した。主ピークと副ピークはセミ分取として分離された。得られたＵＶクロマトグラムに、トラップされた画分の位置をマークして図３に示す。図３は、ＨＰＬＣ法２を使用した粗化合物５のＵＶクロマトグラムである；１２５×４ｍｍ Ｐｕｒｏｓｐｈｅｒ ＳＴＡＲ Ｃ１８ ５μｍ ＡＧ；ＬＭＡ：Ｈ２Ｏ Ｈ３ＰＯ４でｐＨ２．６；ＬＭＢ：ＡＣＮ；３０％Ｂ−１０−３５％−３０−６０％−１−９０％（９）；１ｍＬ／ｍｉｎ；３５℃；ＵＶＡ＝２００ｎｍ；ｏｈｎｅ ＭＳ；２５ｍＬ。その後、新たに開発したＵＰＬＣ／ＭＳ法により、単離した画分を別々に分析した。イオンを正確に評価するために、８５０．６１９１４±３ｐｐｍのトレース量の準分子イオン［２Ｍ＋ＮＨ４］を使用した。主ピーク画分、副ピーク画分および２つの試料について得られたクロマトグラムを図４（Ａ〜Ｄ）に示す。ＭＳの研究で、クォリティ・コントロール法２により、ＲＴ２７．４５７分およびＲＴ２８．０７８分に生じた２つのピークは、化学式Ｃ２６Ｈ４０Ｏ４を有する２つの異性体であることが示された。この化学式は、提案されたＥ／Ｚ異性体の構造と一致する。このように、ＵＰＬＣ−ＭＳ法の開発により、３α−ヒドロキシ−エチリデン−７−ケト−５β−コリン−２４酸のＥ／Ｚ異性体は、クロマトグラフィーにより高分解能で分離できることが示された。ＦＲ−ＩＣＲ質量分析計からの正確なＭＳデータは、提案されたＥ／Ｚ異性体の構造と一致する。両異性体で同一の化学式Ｃ２６Ｈ４０Ｏ４が得られた。 To ensure the portability of Quality Control HPLC Method 2, the original separation was repeated under precisely specified conditions. The main and minor peaks were separated as semi-preparative. The position of the trapped fraction is marked on the obtained UV chromatogram and shown in FIG. FIG. 3 is a UV chromatogram of crude compound 5 using HPLC method 2; 125 × 4 mm Purosphere STAR C18 5 μm AG; LMA: pH 2.6 with H 2 O H 3 PO 4 ; LMB: ACN; 30% B −10−35% −30−60% −1−90% (9); 1 mL / min; 35 ° C .; UVA = 200 nm; ohne MS; Thereafter, the isolated fractions were analyzed separately by the newly developed UPLC / MS method. A quasimolecular ion [2M + NH 4 ] with a trace amount of 850.61914 ± 3 ppm was used to accurately evaluate the ions. The chromatograms obtained for the main peak fraction, the minor peak fraction and the two samples are shown in FIGS. MS studies showed that the two peaks generated at RT 27.457 min and RT 28.078 min by the quality control method 2 are two isomers having the chemical formula C 26 H 40 O 4 . This chemical formula is consistent with the structure of the proposed E / Z isomer. Thus, the development of the UPLC-MS method showed that the E / Z isomer of 3α-hydroxy-ethylidene-7-keto-5β-choline-24 acid can be separated with high resolution by chromatography. The exact MS data from the FR-ICR mass spectrometer is consistent with the structure of the proposed E / Z isomer. The same chemical formula C 26 H 40 O 4 was obtained for both isomers.

セミ分取ＨＰＬＣ法２によるＥ／Ｚ異性体ピークの分離、およびその後のＵＰＬＣ−ＭＳ法による同定によって、我々はクォリティ・コントロール法２により描かれた２つのピーク（ＲＴ２７．４５７分およびＲＴ２８．０７８分、図１を参照されたい）が、化学式Ｃ２６Ｈ４０Ｏ４を有する２つの異性体であることを示すことができる。この化学式は、提案したＥ／Ｚ−異性体の構造と一致する。下記のＮＭＲの結果と併せて、次の割り当てが得られた：ＲＴ２７．４５７分は、Ｅ異性体に、ＲＴ２８．０７８分は、Ｚ異性体に属する。 By separation of the E / Z isomer peak by semi-preparative HPLC method 2 and subsequent identification by UPLC-MS method, we identified two peaks drawn by quality control method 2 (RT27.457 min and RT28.078). Can be shown to be two isomers having the chemical formula C 26 H 40 O 4 . This chemical formula is consistent with the proposed E / Z-isomer structure. In conjunction with the NMR results below, the following assignments were obtained: RT 27.457 minutes belonged to the E isomer and RT 28.078 minutes belonged to the Z isomer.

３α−ヒドロキシ−エチリデン−７−ケト−５β−コリン−２４酸のＥ異性体に対する１Ｈおよび１３Ｃシフトの割り当てを下に示す。「Ｌ．Ｂｅｔｔａｒｅｌｌｏ ｅｔ ａｌ．，ＩＩ Ｆａｒｍａｃｏ ５５（２０００），５１−５５（物質 ３α−ヒドロキシ−７−ケト−５β−コラン−２４−酸）にしたがって、シフトを推定した。
Assignment of the 1 H and 13 C shifts to the E isomer of 3α-hydroxy-ethylidene-7-keto-5β-choline-24 acid is shown below. The shift was estimated according to “L. Bettaroello et al., II Farmaco 55 (2000), 51-55 (substance 3α-hydroxy-7-keto-5β-cholan-24-acid).

実施例３：結晶性オベチコール酸の特徴付け
Ｉ．スキーム１の工程６および実施例１からの生成物の固体状態の特徴付けにより、オベチコール酸は結晶であることが示された。この結晶形態は形態Ａと名付けられ、実質的に図４１のＸ線ディフラクトグラムに類似しており、２θが約５．０度および５．３度のピークにより特徴付けられる。形態ＡのＸ線回折に対応するデータを下記表４に示す。 Example 3: Characterization of crystalline obeticholic acid Characterization of the solid state of the product from Step 1 of Scheme 1 and Example 1 showed that oveticholic acid is crystalline. This crystalline form is named Form A and is substantially similar to the X-ray diffractogram of FIG. 41, characterized by peaks at 2θ of about 5.0 degrees and 5.3 degrees. Data corresponding to X-ray diffraction of Form A is shown in Table 4 below.

結晶性オベチコール酸形態Ａの小規模合成
非晶質オベチコール酸（約３０ｍｇ）を秤量してガラス製バイアルに入れ、５０℃に温めた。ｎ−酢酸ブチル（６０μＬ）を加え、観察した。試料を５０℃で１時間撹拌し、０．１℃／ｍｉｎの直線的冷却速度で５℃まで冷却した。試料を５℃で２日間撹拌した。固形分を濾過し、空気乾燥し、ＸＲＰＤにより分析した。溶液を冷凍庫に約４８時間保管し、その後、形態Ａを提供するために周囲条件で放置して蒸発させた。形態Ａのさらなる調製方法を実施例９に示す。 Small Scale Synthesis of Crystalline Obeticholic Acid Form A Amorphous obeticholic acid (approximately 30 mg) was weighed into a glass vial and warmed to 50 ° C. n-Butyl acetate (60 μL) was added and observed. The sample was stirred at 50 ° C. for 1 hour and cooled to 5 ° C. at a linear cooling rate of 0.1 ° C./min. The sample was stirred at 5 ° C. for 2 days. The solid was filtered, air dried and analyzed by XRPD. The solution was stored in the freezer for about 48 hours, after which it was allowed to evaporate at ambient conditions to provide Form A. A further preparation method for Form A is shown in Example 9.

結晶性オベチコール酸形態Ａの大規模合成
非晶質オベチコール酸（約１ｇ）を秤量し、大型のガラス製バイアルに入れ、５０℃に温めた。酢酸エチル（１．５ｍｌ、１．５体積）を５０℃で加え、透明溶液を調製した。逆溶媒（ヘプタン、２．０ｍｌ、２体積）を加え、最初、濁った沈殿物を生成し、撹拌してこれをオイルに転化した。５０℃で１時間撹拌後、オイルはそのままであったので０．５ｍｌ（０．５体積）の酢酸エチルを加えてオイルを溶解し、濁った液体を生成した。すぐ上の小規模実験からの試料約１ｍｇを、種として試料に加えた。試料を５０℃でさらに１時間撹拌し、その後、０．１℃／ｍｉｎの直線的冷却速度で−２０℃まで冷却した。試料を−２０℃で終夜撹拌し、その後、少量の固形分を濾過し、空気乾燥し、ＸＲＰＤにより分析した。残りの試料を０．４５μｍのＰＴＦＥフィルターに通して濾過し、２ｍｌのヘプタンで２回洗浄した。試料を約３０分間空気乾燥し、その後、真空オーブン中、室温で終夜乾燥した。得られた白色固体（８９８．９ｍｇ）は、図４１のものに実質的に類似したＸ線ディフラクトグラムを有する形態Ａとして特徴付けられた。図４２は、結晶性オベチコール酸形態ＡのＴＧＡおよびＤＧＣサーモグラムのオーバーレイである。図４３は形態Ａを用いたＧＶＳ実験の等温プロットである。図４４は、形態Ａを用いたＧＶＳ実験の動態プロットである。 Large Scale Synthesis of Crystalline Obeticholic Acid Form A Amorphous obeticholic acid (about 1 g) was weighed and placed in a large glass vial and warmed to 50 ° C. Ethyl acetate (1.5 ml, 1.5 volume) was added at 50 ° C. to prepare a clear solution. Antisolvent (heptane, 2.0 ml, 2 volumes) was added and initially a cloudy precipitate was formed and stirred to convert it to an oil. After stirring at 50 ° C. for 1 hour, the oil remained as it was, so 0.5 ml (0.5 volume) of ethyl acetate was added to dissolve the oil to produce a cloudy liquid. About 1 mg of sample from the small experiment just above was added to the sample as a seed. The sample was stirred for an additional hour at 50 ° C. and then cooled to −20 ° C. at a linear cooling rate of 0.1 ° C./min. The sample was stirred at −20 ° C. overnight, after which a small amount of solid was filtered, air dried and analyzed by XRPD. The remaining sample was filtered through a 0.45 μm PTFE filter and washed twice with 2 ml heptane. The sample was air dried for about 30 minutes and then dried overnight at room temperature in a vacuum oven. The resulting white solid (898.9 mg) was characterized as Form A having an X-ray diffractogram substantially similar to that of FIG. FIG. 42 is an overlay of crystalline obeticholic acid form A TGA and DGC thermograms. FIG. 43 is an isothermal plot of a GVS experiment using Form A. FIG. 44 is a kinetic plot of a GVS experiment using Form A.

ＩＩ．以下は、結晶性オベチコール酸形態Ｃの特徴付けを要約した表である。   II. The following is a table summarizing the characterization of crystalline obeticholic acid form C:

熱分析
３４ポジションのオートサンプラーを備えたＭｅｔｔｌｅｒ ＤＳＣ ８２３ｅにより、ＤＳＣ（示差走査熱量測定）データを収集した。認定インジウムを使用し、エネルギーおよび温度について計器をキャリブレーションした。通常、０．５〜１ｍｇの各試料を、ピンホールを有するアルミニウムパンに入れ、２５℃から３５０℃へ１０℃・ｍｉｎ−１で加熱した。試料上方の窒素パージは５０ｍｌ・ｍｉｎ−１を維持した。計器の制御およびデータ解析ソフトウェアとして、ＳＴＡＲｅ ｖ９．２０を使用した。 Thermal Analysis DSC (Differential Scanning Calorimetry) data was collected on a Mettler DSC 823e equipped with a 34 position autosampler. The instrument was calibrated for energy and temperature using certified indium. Usually, 0.5 to 1 mg of each sample was put in an aluminum pan having a pinhole and heated from 25 ° C. to 350 ° C. at 10 ° C. · min −1 . The nitrogen purge above the sample was maintained at 50 ml · min −1 . STARe v9.20 was used as instrument control and data analysis software.

３４ポジションのオートサンプラーを備えたＭｅｔｔｌｅｒ ＴＧＡ／ＳＤＴＡ ８５１ｅにより、ＴＧＡ（熱重量分析）データを収集した。認定インジウムを使用し、温度について計器をキャリブレーションした。通常、５〜１０ｍｇの各試料を、予め秤量したアルミニウム製ルツボに入れ、周囲温度から３００℃へ１０℃・ｍｉｎ−１で加熱した。試料上方の窒素パージは５０ｍｌ・ｍｉｎ−１を維持した。計器の制御およびデータ解析ソフトウェアとして、ＳＴＡＲｅ ｖ９．２０を使用した。 TGA (thermogravimetric analysis) data was collected on a Mettler TGA / SDTA 851e equipped with a 34 position autosampler. The instrument was calibrated for temperature using certified indium. Usually, 5 to 10 mg of each sample was placed in a pre-weighed aluminum crucible and heated from ambient temperature to 300 ° C. at 10 ° C. · min −1 . The nitrogen purge above the sample was maintained at 50 ml · min −1 . STARe v9.20 was used as instrument control and data analysis software.

結晶性オベチコール酸形態ＣのＴＧＡにより、２つの重量減少ステップが観察された。最初は室温（ｒ．ｔ．）と８５℃（０．４１％）との間で起こり、２番目は８５℃〜１１５℃（４．１０％）の間で起こった。最初の重量減少ステップは、水分の減少に帰すことができ、二番目のステップは残留水分の減少（１．２％前後の重量減少を伴う水分）および結合ヘプタンの減少（約３．４％の重量減少）に帰すことができる。結晶性オベチコール酸形態Ｃは、０．１５〜０．２モルの間の溶媒（ヘプタン）および約１．５％（重量／重量）（０．３モル）を含有した。結晶性オベチコール酸形態ＣのＤＳＣサーモグラムは１ヵ所で吸熱を示した。これは、かなりシャープであり、開始は９８℃前後であった。図６を参照されたい。異なる溶媒は異なる沸点を有するであろうから、ＤＳＣおよびＴＧＡ実験において異なる温度で蒸発するであろう。   Two weight loss steps were observed with TGA of crystalline obeticholic acid form C. The first occurred between room temperature (rt) and 85 ° C. (0.41%), and the second occurred between 85 ° C. and 115 ° C. (4.10%). The first weight loss step can be attributed to moisture loss, and the second step is to reduce residual moisture (water with a weight loss around 1.2%) and bound heptane (approximately 3.4%). (Weight reduction). Crystalline obeticholic acid Form C contained between 0.15 and 0.2 moles of solvent (heptane) and about 1.5% (w / w) (0.3 moles). The DSC thermogram of crystalline obeticholic acid form C showed an endotherm at one location. This was fairly sharp and the start was around 98 ° C. See FIG. Since different solvents will have different boiling points, they will evaporate at different temperatures in DSC and TGA experiments.

粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）分析
Ｂｒｕｋｅｒ ＡＸＳ Ｃ２ ＧＡＤＤＳ
ＣｕＫα線（４０ｋＶ、４０ｍＡ）、自動化ＸＹＺステージ、自動試料ポジショニング用のレーザービデオ顕微鏡およびＨｉＳｔａｒ ２次元領域検出器を使用して、Ｂｒｕｋｅｒ ＡＸＳ Ｃ２ ＧＡＤＤＳ回折計により粉末Ｘ線回折パターンを収集した。Ｘ線光学系は、０．３ｍｍのピンホールコリメータと結合したシングルＧｏｅｂｅｌ多層膜ミラーから構成された。認定コランダム標準（ＮＩＳＴ１９７６）（平板）により、毎週、性能チェックを行った。 X-ray powder diffraction (XRPD) analysis Bruker AXS C2 GADDS
Powder X-ray diffraction patterns were collected with a Bruker AXS C2 GADDS diffractometer using a CuKα line (40 kV, 40 mA), an automated XYZ stage, a laser video microscope for automatic sample positioning and a HiStar two-dimensional area detector. The X-ray optical system consisted of a single Goebel multilayer mirror coupled with a 0.3 mm pinhole collimator. A weekly performance check was performed according to a certified corundum standard (NIST 1976) (flat plate).

ビームの発散、すなわち試料上のＸ線ビームの有効径は、約４ｍｍであった。試料−検出器間の距離を２０ｃｍとすることで、２θの有効範囲として３．２°〜２９．７°を得、θ−θ連続スキャンモードを採用した。通常、試料はＸ線ビームに１２０秒間露光された。データ収集にはソフトウェアＧＡＤＤＳ ｆｏｒ ＷＮＴ ４．１．１６を使用し、データはＤｉｆｆｒａｃ Ｐｌｕｓ ＥＶＡ ｖ９．０．０．２またはｖ１３．０．０．２を使用して分析し、提示した。   The beam divergence, ie the effective diameter of the X-ray beam on the sample, was about 4 mm. By setting the distance between the sample and the detector to 20 cm, the effective range of 2θ was 3.2 ° to 29.7 °, and the θ-θ continuous scan mode was adopted. Typically, samples were exposed to an X-ray beam for 120 seconds. Data was collected using the software GADDS for WNT 4.1.16 and data was analyzed and presented using Diffrac Plus EVA v9.0.0.2 or v13.0.0.2.

周囲条件：周囲条件で分析する試料を、粉末を粉砕せずにそのまま平板試料として調製した。約１〜２ｍｇの試料をガラススライドの上で軽く圧縮し、平らな表面を得た。   Ambient conditions: Samples to be analyzed under ambient conditions were prepared as flat samples without pulverizing the powder. About 1-2 mg of sample was lightly compressed on a glass slide to obtain a flat surface.

非周囲条件：非周囲条件で分析する試料を、熱伝導性化合物を含むシリコンウエハ上にセットした。その後、試料を約１０℃・ｍｉｎ−１で適切な温度にまで加熱し、その後、約１分間等温状態を保った後、データ収集を開始した。 Non-ambient conditions: A sample to be analyzed under non-ambient conditions was set on a silicon wafer containing a thermally conductive compound. Thereafter, the sample was heated to an appropriate temperature at about 10 ° C. · min −1 , and thereafter, after being kept isothermal for about 1 minute, data collection was started.

Ｂｒｕｋｅｒ ＡＸＳ／Ｓｉｅｍｅｎｓ Ｄ５０００
ＣｕＫα線（４０ｋＶ、４０ｍＡ）、θ−θゴニオメーター、Ｖ２０発散および受光スリット、グラファイト製第２モノクロメーターならびにシンチレーションカウンターを使用し、Ｓｉｅｍｅｎｓ Ｄ５０００回折計により、粉末Ｘ線回折パターンを収集した。計器の性能チェックは、認定コランダム標準（ＮＩＳＴ １９７６）を使用して行う。データ収集にはソフトウェアＤｉｆｆｒａｃ Ｐｌｕｓ ＸＲＤ Ｃｏｍｍａｎｄｅｒ ｖ２．３．１を使用し、データはＤｉｆｆｒａｃ Ｐｌｕｓ ＥＶＡ ｖ１１，０．０．２またはｖ１３．０．０．２を使用して分析し、提示した。 Bruker AXS / Siemens D5000
Powder X-ray diffraction patterns were collected on a Siemens D5000 diffractometer using CuKα rays (40 kV, 40 mA), θ-θ goniometer, V20 divergence and light receiving slit, second graphite monochromator and scintillation counter. Instrument performance checks are performed using a certified corundum standard (NIST 1976). Data collection was performed using the software Diffrac Plus XRD Commander v2.3.1, and data was analyzed and presented using Diffrac Plus EVA v11, 0.0.2 or v13.0.0.2.

試料は、受け取ったままの粉末を使用した平板試料として、周囲条件で分析した。研磨したゼロ−バックグラウンド（５１０）のシリコンウエハを切削した窪みに、約２０ｍの試料を、静かに充填した。分析中、試料をそれ自身の面内で回転させた。データ収集の詳細は以下の通りである：
・角度範囲：２θで２〜４２°
・ステップサイズ：２θで０．０５°
・収集時間：４ｓ・ステップ−１ Samples were analyzed at ambient conditions as flat plate samples using as received powder. An approximately 20 m sample was gently filled into a recess cut from a polished zero-background (510) silicon wafer. During the analysis, the sample was rotated in its own plane. Details of data collection are as follows:
・ Angle range: 2-42 ° at 2θ
-Step size: 0.05 ° at 2θ
-Collection time: 4s-Step- 1

Ｂｒｕｋｅｒ ＡＸＳ Ｄ８ Ａｄｖａｎｃｅ
ＣｕＫα線（４０ｋＶ、４０ｍＡ）、θ−２θゴニオメーター、Ｖ４発散および受光スリット、Ｇｅ製モノクロメーターならびにＬｙｎｘｅｙｅ検出器を使用し、Ｂｒｕｋｅｒ Ｄ８回折計により、粉末Ｘ線回折パターンを収集した。計器の性能チェックは、認定コランダム標準（ＮＩＳＴ １９７６）を使用して行う。データ収集にはソフトウェアＤｉｆｆｒａｃ Ｐｌｕｓ ＸＲＤ Ｃｏｍｍａｎｄｅｒ ｖ２．５．０を使用し、データはＤｉｆｆｒａｃ Ｐｌｕｓ ＥＶＡ ｖ１１．０．０．２またはｖ１３．０．０．２を使用して分析し、提示した。 Bruker AXS D8 Advance
Powder X-ray diffraction patterns were collected with a Bruker D8 diffractometer using CuKα rays (40 kV, 40 mA), θ-2θ goniometer, V4 divergence and receiving slit, Ge monochromator and Lynxey detector. Instrument performance checks are performed using a certified corundum standard (NIST 1976). Data collection was performed using the software Diffrac Plus XRD Commander v2.5.0 and data was analyzed and presented using Diffrac Plus EVA v11.0.0.2 or v13.0.0.2.

試料は、粉末をそのまま使用して平板試料とし、周囲条件で分析した。研磨したゼロ−バックグラウンド（５１０）のシリコンウエハを切削した窪みに、約５ｍの試料を、静かに充填した。分析中、試料をそれ自身の面内で回転させた。データ収集の詳細は以下の通りである：
・角度範囲：２θで２〜４２°
・ステップサイズ：２θで０．０５°
・収集時間：０．５ｓ・ステップ−１ The sample was used as it was as a flat plate sample and analyzed at ambient conditions. An approximately 5 m sample was gently filled into a recess cut from a polished zero-background (510) silicon wafer. During the analysis, the sample was rotated in its own plane. Details of data collection are as follows:
・ Angle range: 2-42 ° at 2θ
-Step size: 0.05 ° at 2θ
-Collection time: 0.5 s-Step- 1

Ｘ線ディフラクトグラムに対応するデータを下記の表に示す。データ収集にはソフトウェアＤｉｆｆｒａｃ Ｐｌｕｓ ＸＲＤ Ｃｏｍｍａｎｄｅｒ ｖ２．６．１を使用し、データはＤｉｆｆｒａｃ ＰｌｕｓＥＶＡ ｖ１３．０．０．２またはｖ１５．０．０．０を使用して分析し、提示した。試料は、粉末をそのまま使用して平板試料とし、周囲条件で分析した。研磨したゼロ−バックグラウンド（５１０）のシリコンウエハを切削した窪みに、試料を、静かに充填した。分析中、試料をそれ自身の面内で回転させた。データ収集の詳細は以下の通りである：
・角度範囲：２θで２〜４２°
・ステップサイズ：２θで０．０５°
・収集時間：０．５ｓ・ステップ−１ The data corresponding to the X-ray diffractogram is shown in the table below. Data collection was performed using the software Diffrac Plus XRD Commander v2.6.1, and the data was analyzed and presented using Diffrac PlusEVA v13.0.0.2 or v15.0.0.0. The sample was used as it was as a flat plate sample and analyzed at ambient conditions. The sample was gently filled into a cut in a polished zero-background (510) silicon wafer. During the analysis, the sample was rotated in its own plane. Details of data collection are as follows:
・ Angle range: 2-42 ° at 2θ
-Step size: 0.05 ° at 2θ
-Collection time: 0.5 s-Step- 1

ＶＴ−ＸＲＰＤ（可変温度Ｘ線回折）により、ＤＳＣサーモグラムに見られる吸熱は、加熱時に形態の変化が観察されないものの、試料の脱溶媒和に対応するものであることが明らかになった。ＶＴ−ＸＲＰＤ実験は、大きい空間で試料を露出させて行ったのに対し、ＤＳＣ実験は制限された閉じた空間で行ったので、ＤＳＣとＶＴ−ＸＲＰＤデータとの間には温度差が存在する。この差は２０℃前後あり、ＤＳＣ実験ではるかに低い温度で試料が溶融し、ＶＴ−ＸＲＰＤ実験では１１０℃で試料が依然結晶に見える理由の説明になる。ＶＴ−ＸＲＰＤは、この物質から溶媒を乾燥させると、溶媒和した形態の物質と一致している結晶度を低下させることを示している。図７を参照されたい。   VT-XRPD (variable temperature X-ray diffraction) revealed that the endotherm seen in the DSC thermogram corresponds to the desolvation of the sample, although no change in morphology was observed upon heating. Since the VT-XRPD experiment was performed with the sample exposed in a large space, the DSC experiment was performed in a limited closed space, so there is a temperature difference between the DSC and the VT-XRPD data. . This difference is around 20 ° C., which explains why the sample melts at a much lower temperature in the DSC experiment and the sample still appears crystalline at 110 ° C. in the VT-XRPD experiment. VT-XRPD shows that drying the solvent from this material reduces the crystallinity consistent with the solvated form of the material. Please refer to FIG.

重量式蒸気吸着（ＧＶＳ）
ＤＶＳＩｎｔｒｉｎｓｉｃ Ｃｏｎｔｒｏｌソフトウェアｖ１．０．０．３０により制御された、ＳＭＳ ＤＶＳ Ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ水蒸気吸着測定装置を使用して吸着等温線を得た。試料温度は、装置の制御により２５℃に維持した。湿度は、全流量が２００ｍｌ・ｍｉｎ−１の割合の乾燥および湿潤窒素流を混合することにより制御した。相対湿度は、試料の近くに設置した較正済みＲｏｔｒｏｎｉｃプローブ（ダイナミックレンジは１．０〜１００％ＲＨ）により測定した。％ＲＨ（相対湿度）の関数としての試料の重量変化（マスリラクゼーション）を、微量天秤（精度は±０．００５ｍｇ）により絶えずモニターした。 Gravimetric vapor adsorption (GVS)
Adsorption isotherms were obtained using an SMS DVS Intrinsic water vapor adsorption instrument controlled by DVS Intrinsic Control software v1.0.30. The sample temperature was maintained at 25 ° C. by controlling the apparatus. The humidity was controlled by mixing dry and wet nitrogen streams with a total flow rate of 200 ml · min −1 . Relative humidity was measured with a calibrated Rotronic probe (dynamic range 1.0-100% RH) placed near the sample. The weight change (mass relaxation) of the sample as a function of% RH (relative humidity) was constantly monitored by a microbalance (accuracy ± 0.005 mg).

周囲条件で、風袋を秤量したステンレス製メッシュバスケットに５〜２０ｍｇの試料を入れた。試料の着脱は４０％ＲＨ、２５℃（通常の室内条件）で行った。下記概要のように水蒸気吸着等温線を測定した（２回のスキャンで完全な１サイクル）。標準の等温線は、０．５〜９０％ＲＨの範囲で間隔を１０％ＲＨとし、２５℃で測定した。データ解析は、ＤＶＳ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｕｉｔｅ ｖ６．０．０．７．を使用して、マイクロソフトのエクセルで行った。ＳＭＳ ＤＶＳ Ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓの方法のパラメータは、以下のようである：   Under ambient conditions, a 5-20 mg sample was placed in a stainless steel mesh basket that was weighed. The sample was attached and detached at 40% RH and 25 ° C. (normal room conditions). The water vapor adsorption isotherm was measured as outlined below (complete one cycle with two scans). Standard isotherms were measured at 25 ° C. with an interval of 10% RH in the range of 0.5-90% RH. Data analysis was performed using DVS Analysis Suite v6.0.0.7. Using Microsoft Excel. The parameters of the SMS DVS Intrinsic Experiments method are as follows:

等温線の完了後、試料を回収し、ＸＲＰＤで再度分析した。   After completion of the isotherm, a sample was collected and analyzed again by XRPD.

結晶性オベチコール酸形態Ｃの分析で、０〜９０％ＲＨにおいて１．１８％の質量増加が認められ、試料はやや吸湿性であることが示された。この水分の取り込みは、分析を通して定常状態時のものであり、全工程で平衡であった。曲線のヒステリシスは小さく、試料は取り込んだ水分を容易に失うことを示している。ＧＶＳ分析後のＸＲＰＤ分析で、試料に変化がなかったことが示された。図８Ａ、図８Ｂおよび図８Ｃを参照されたい。   Analysis of crystalline obeticholic acid form C showed a 1.18% mass increase at 0-90% RH, indicating that the sample was somewhat hygroscopic. This water uptake was at steady state throughout the analysis and was in equilibrium throughout the process. The hysteresis of the curve is small, indicating that the sample easily loses the incorporated moisture. XRPD analysis after GVS analysis showed no change in the sample. See FIGS. 8A, 8B and 8C.

カール・フィッシャー滴定（ＫＦ）による水分測定
ハイドラナールクーロマットＡＧ試薬およびアルゴンパージを使用し、Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ ＤＬ３９ Ｃｏｕｌｏｍｅｔｅｒにより、各試料の水分含有率を測定した。秤量した固体試料を、水分の侵入を防ぐためにＳｕｂａｓｅａｌに接続した白金製ＴＧＡパン上の容器に入れた。１回の滴定に約１０ｍｇの試料を使用し、２回の測定を行った。 Moisture measurement by Karl Fischer titration (KF) The moisture content of each sample was measured with a Mettler Toledo DL39 Coulometer using Hydranal Coulomat AG reagent and an argon purge. The weighed solid sample was placed in a container on a platinum TGA pan connected to Subaseal to prevent moisture ingress. About 10 mg of sample was used for one titration, and two measurements were performed.

カール・フィッシャー分析により、結晶性オベチコール酸形態Ｃは、約０．３モルの水分に相当する１．５％の水分を含有することが示された。   Karl Fischer analysis showed that crystalline obeticholic acid Form C contained 1.5% water, corresponding to about 0.3 moles of water.

４０℃、７５％ＲＨにおける１週間安定性
４０℃、７５％ＲＨ（相対湿度）におけるオベチコール酸の安定性を次のように決定した。４０℃／７５％ＲＨの湿潤室に１週間、オベチコール酸の試料を保管した。試料を再度ＸＲＰＤにより分析し、変化していないことがわかった。 One week stability at 40 ° C. and 75% RH The stability of obeticholic acid at 40 ° C. and 75% RH (relative humidity) was determined as follows. A sample of obeticholic acid was stored in a humid chamber at 40 ° C./75% RH for 1 week. The sample was again analyzed by XRPD and found to be unchanged.

固相の研究により、オベチコール酸形態Ｃの結晶化には、比較的大量の有機溶媒の存在が必要であることが示された。オベチコール酸形態１が保管中に自然に結晶化して結晶性オベチコール酸形態Ｃを形成することは殆どあり得ない。   Solid phase studies have shown that the crystallization of obeticholic acid form C requires the presence of a relatively large amount of organic solvent. It is unlikely that obeticholic acid form 1 will spontaneously crystallize during storage to form crystalline obeticholic acid form C.

実施例４：オベチコール酸錠剤の処方
下記の表は、オベチコール酸錠剤の定量的組成を示す。５ｍｇ、１０ｍｇおよび２５ｍｇ製剤が、フェーズ３の臨床試験物質として用いられた。 Example 4: Formulation of Obeticholic Acid Tablets The table below shows the quantitative composition of obeticholic acid tablets. The 5 mg, 10 mg and 25 mg formulations were used as Phase 3 clinical test substances.

実施例５：オベチコール酸形態１の特徴付け
オベチコール酸形態１は、オベチコール酸の非結晶性形態を指す。この形態のオベチコール酸は、合成中間体としての結晶性オベチコール酸を経て製造することができる。オベチコール酸形態１は、薬学的に活性な成分として使用することができる。オベチコール酸形態１を以下のように特徴付けし分析した。 Example 5: Characterization of Obeticholic Acid Form 1 Obeticholic acid form 1 refers to an amorphous form of obeticholic acid. This form of obeticholic acid can be produced via crystalline obeticholic acid as a synthetic intermediate. Obeticholic acid form 1 can be used as a pharmaceutically active ingredient. Obeticholic acid form 1 was characterized and analyzed as follows.

以下の手法を用いて、オベチコール酸形態１のバッチ１を特徴付けした：粉末Ｘ線回折法（ＸＰＲＤ）による結晶度の評価、１Ｈおよび１３Ｃ核磁気共鳴法（ＮＭＲ）、フーリエ変換赤外分光法（ＦＴ−ＩＲ）、視覚的評価（例えば、粒子の形／大きさ）、熱特性（例えば、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）および熱重量分析（ＴＧＡ））、カール・フィッシャー（ＫＦ）法による水分測定、４０℃かつ７５％ＲＨでの保管および２週間後のＸＲＰＤによる再分析、電位差測定法によるｐＫａ、電位差測定法によるＬｏｇ Ｐ／Ｄ（オクタノール／水）、ならびに重量式蒸気吸着（ＧＶＳ；例えば、採取した固体のＸＲＰＤ分析を伴う完全な吸脱着サイクル）を用いた湿度に対する安定性。オベチコール酸形態１の、別の５個のバッチ（例えば、バッチ２、３、４、５および６）も次の手法を使用して特徴付けし、比較した：ＸＲＰＤによる評価およびメインのバッチ１のパターンとの比較、１Ｈおよび１３Ｃ ＮＭＲ、ＦＴ−ＩＲ、視覚的評価（例えば、粒子の形／大きさ）、熱特性（例えば、ＤＳＣ、ＴＧＡおよび高温顕微鏡）ならびにＫＦ法による水分測定。 The following techniques were used to characterize batch 1 of obeticholic acid form 1: crystallinity assessment by powder X-ray diffraction (XPRD), 1 H and 13 C nuclear magnetic resonance (NMR), Fourier transform infrared Spectroscopy (FT-IR), visual assessment (eg, particle shape / size), thermal properties (eg, differential scanning calorimetry (DSC) and thermogravimetric analysis (TGA)), Karl Fischer (KF) method Moisture measurement at 40 ° C. and 75% RH and reanalysis by XRPD after 2 weeks, pKa by potentiometric method, Log P / D (octanol / water) by potentiometric method, and gravimetric vapor adsorption (GVS) Stability to humidity using, for example, a complete adsorption / desorption cycle with XRPD analysis of the collected solids. Another five batches of obeticholic acid form 1 (eg, batches 2, 3, 4, 5 and 6) were also characterized and compared using the following approach: evaluation by XRPD and main batch 1 Comparison with patterns, 1 H and 13 C NMR, FT-IR, visual evaluation (eg, particle shape / size), thermal properties (eg, DSC, TGA and high temperature microscope) and moisture measurement by KF method.

粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）分析
ＣｕＫα線（４０ｋＶ、４０ｍＡ）、自動化ＸＹＺステージ、自動試料ポジショニング用のレーザービデオ顕微鏡およびＨｉＳｔａｒ ２次元領域検出器を使用して、Ｂｒｕｋｅｒ ＡＸＳ Ｃ２ ＧＡＤＤＳ回折計により粉末Ｘ線回折パターンを収集した。Ｘ線光学系は、０．３ｍｍのピンホールコリメータと結合したシングルＧｏｅｂｅｌ多層膜ミラーから構成される。ビームの発散、すなわち試料上のＸ線ビームの有効径は、約４ｍｍであった。試料−検出器間の距離を２０ｃｍとすることで、２θの有効範囲として３．２°〜２９．７°を得、θ−θ連続スキャンモードを採用した。通常、試料はＸ線ビームに１２０秒間露光された。データ収集にはソフトウェアＧＡＤＤＳ ｆｏｒ ＷＮＴ ４．１．１６を使用し、データはＤｉｆｆｒａｃＰｌｕｓ ＥＶＡ ｖ９．０．０．２またはｖ１３．０．０．２を使用して分析し、提示した。 Powder X-ray diffraction (XRPD) analysis Powder X-rays on a Bruker AXS C2 GADDS diffractometer using a CuKα ray (40 kV, 40 mA), an automated XYZ stage, a laser video microscope for automated sample positioning and a HiStar two-dimensional area detector The diffraction pattern was collected. The X-ray optical system consists of a single Goebel multilayer mirror coupled with a 0.3 mm pinhole collimator. The beam divergence, ie the effective diameter of the X-ray beam on the sample, was about 4 mm. By setting the distance between the sample and the detector to 20 cm, the effective range of 2θ was 3.2 ° to 29.7 °, and the θ-θ continuous scan mode was adopted. Typically, samples were exposed to an X-ray beam for 120 seconds. Data was collected using software GADDS for WNT 4.1.16 and data was analyzed and presented using DiffracPlus EVA v9.0.0.2 or v13.0.0.2.

周囲条件で分析する試料は、粉末を粉砕せずにそのまま平板試料として調製した。約１〜２ｍｇの試料をシリコンウエハ上で軽く押し付けて、フラットな表面を得た。ディフラクトグラムは、オベチコール酸形態１が非結晶性であることを示している（図１０および図１１を参照されたい）。   Samples to be analyzed at ambient conditions were prepared directly as flat samples without grinding the powder. About 1 to 2 mg of sample was lightly pressed on a silicon wafer to obtain a flat surface. The diffractogram shows that obeticholic acid form 1 is amorphous (see FIGS. 10 and 11).

ＮＭＲによる特徴付け
オートサンプラーを備え、ＤＲＸ４００コンソールにより制御されるＢｒｕｋｅｒ製４００ＭＨｚの装置により、ＮＭＲスペクトルを収集した。標準のＢｒｕｋｅｒをロードした実験を使用し、Ｔｏｐｓｐｉｎ ｖ１．３（パッチレベル８）と共に実行するＩＣＯＮＮＭＲ ｖ４．０．４（ビルド１）を使用して自動化実験を行った。ルーチンでない分光法では、Ｔｏｐｓｐｉｎのみの使用によりデータを得た。特段の断りがない限り、試料はｄ６−ＤＭＳＯ中で調製した。ＡＣＤ ＳｐｅｃＭａｎａｇｅｒ ｖ９．０９（ビルド７７０３）を使用してオフライン解析を行った。 NMR Characterization NMR spectra were collected on a Bruker 400 MHz instrument equipped with an autosampler and controlled by a DRX400 console. Automated experiments were performed using ICONNMR v4.0.4 (build 1) running with Topspin v1.3 (patch level 8) using a standard Bruker loaded experiment. For non-routine spectroscopy, data were obtained using only Topspin. Samples were prepared in d6-DMSO unless otherwise noted. Offline analysis was performed using ACD SpecManager v9.09 (build 7703).

図１２は、バッチ１の１Ｈ ＮＭＲスペクトルである。バッチ２〜６の１Ｈ ＮＭＲスペクトルも記録し、バッチ１のスペクトルと比較した。図１３を参照されたい。スペクトルは全て類似しているが、水分量は異なっている。プロトンの大きなグループの積分において、ピークが重なって別々に積分できない０．７５ｐｐｍ〜２ｐｐｍの間で、いくらか差があるのが確認される。０．７５〜２ｐｐｍの領域の変動を考慮に入れて、バッチ１〜６のスペクトルで積分したトータルのプロトン数を表Ｊに示す。 FIG. 12 is a 1 H NMR spectrum of Batch 1. The 1 H NMR spectra of batches 2-6 were also recorded and compared to the batch 1 spectra. See FIG. The spectra are all similar, but the water content is different. In the integration of a large group of protons, it can be seen that there is some difference between 0.75 ppm and 2 ppm where the peaks overlap and cannot be integrated separately. Table J shows the total number of protons integrated in the spectra of batches 1-6, taking into account variations in the 0.75-2 ppm region.

カルボン酸のプロトンは除いており、それでプロトンの数は、４３となるはずであるが、実際には６つのスペクトルで４０から４３の間で変動している。しかしながら、変動が生じている領域（０．７５〜２ｐｐｍ）は非常に広く、ベースラインの品質のためにこの積分を信頼することはできない。   Carboxylic acid protons are excluded, so the number of protons should be 43, but actually varies between 40 and 43 in 6 spectra. However, the region of variation (0.75-2 ppm) is very wide and this integration cannot be relied upon for baseline quality.

スペクトルに十分な割り当てを行うことができず、積分も変動したために、バッチ２の１３Ｃ ＮＭＲを記録した。ＣＨ２および四級炭素のピークは上向きに示し、ＣＨ３およびＣＨ基は下向きに示すＤＥＰＴＱスペクトルを図１４に示す。下向きのピークが１３個あり、これらは９個のＣＨおよび４個のＣＨ３基に対応する。これはその構造と一致する。カルボン酸の炭素のピークは１７５ｐｐｍに見られた。目的領域を鮮明にするために、それをこの拡大された図面から除いてある。しかしながら、上向きのピークは１１個のみであるが、分子（カルボニルを除く）には１０個のＣＨ２基および２個の四級炭素があるので１２個存在すべきである。１個の炭素が他の信号と重なり合っているようである。したがって、重なり合っている信号が四級かどうかを示すことができる、四級炭素の信号を抑制するＤＥＰＴ１３５スペクトルを収集した。図１５を参照されたい。ＤＥＰＴ１３５スペクトルとＤＥＰＴＱスペクトルの比較により、１個のピーク（４２．５ｐｐｍの）が消失していることがわかる。この分子には、消失した２個のピークに対応する２個の四級炭素が存在する。したがって、重なり合った炭素信号は四級のものである。 The 13 C NMR of batch 2 was recorded because the spectrum could not be fully assigned and the integration also fluctuated. FIG. 14 shows a DEPTQ spectrum in which CH 2 and quaternary carbon peaks are shown upward, and CH 3 and CH groups are shown downward. There are 13 downward peaks, which correspond to 9 CH and 4 CH 3 groups. This is consistent with the structure. The carbon peak of carboxylic acid was observed at 175 ppm. It has been removed from this enlarged drawing in order to clarify the target area. However, there are only 11 upward peaks, but there should be 12 because the molecule (excluding carbonyl) has 10 CH 2 groups and 2 quaternary carbons. One carbon appears to overlap other signals. Therefore, a DEPT135 spectrum was collected that suppresses quaternary carbon signals that can indicate whether the overlapping signals are quaternary. See FIG. Comparison of the DEPT135 spectrum and the DEPTQ spectrum shows that one peak (42.5 ppm) has disappeared. In this molecule there are two quaternary carbons corresponding to the two missing peaks. Therefore, the overlapping carbon signals are quaternary.

さらに、炭素の緩和時間を決定する実験を行い、消失した四級炭素信号が別の炭素信号とどこで重なり合っているのかを決定した。図１６を参照されたい。この１３Ｃスペクトルは、統合されたピークを含む。これにより、３２．３ｐｐｍのピークは２個の炭素からなることが示された。３２．３ｐｐｍのピークの拡大図を図１７で参照されたい。このように、統合を考慮することで今や２６個の炭素が説明され（カルボン酸を含む）、これはその構造と一致する。 In addition, experiments were conducted to determine the relaxation time of the carbon and to determine where the missing quaternary carbon signal overlapped with another carbon signal. See FIG. This 13 C spectrum contains an integrated peak. This showed that the 32.3 ppm peak consists of two carbons. See the enlarged view of the 32.3 ppm peak in FIG. Thus, by considering integration, 26 carbons are now accounted for (including carboxylic acids), which is consistent with its structure.

ＡＴＲによるＦＴ−ＩＲ
Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＡＴＲサンプリングアクセサリーを装着した、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｏｎｅによりデータを収集した。Ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｖ５．０．１ソフトウェアを用いてデータを収集し、分析した。図１８を参照されたい。 FT-IR by ATR
Data were collected on a Perkin-Elmer Spectrum One equipped with a Universal ATR sampling accessory. Data was collected and analyzed using Spectrum v5.0.1 software. See FIG.

示差走査熱量測定（ＤＳＣ）および熱重量分析（ＴＧＡ）による熱分析
５０ポジションのオートサンプラーを備えたＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｑ２０００により、ＤＳＣデータを収集した。認定インジウムを使用し、エネルギーおよび温度について計器をキャリブレーションした。通常、０．５〜３ｍｇの各試料を、ピンホールを有するアルミニウムパンに入れ、２５℃から３００℃へ１０℃・ｍｉｎ−１で加熱した。試料上方の窒素パージは５０ｍｌ・ｍｉｎ−１を維持した。機器制御にはソフトウェアＡｄｖａｎｔａｇｅ ｆｏｒ Ｑ Ｓｅｒｉｅｓ ｖ２．８．０．３９２およびＴｈｅｒｍａｌ Ａｄｖａｎｔａｇｅ ｖ４．８．３を使用し、データはＵｎｉｖｅｒｓａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｖ４．３Ａを使用して分析した。変調ＤＳＣでは、以前の通り試料を調製し、パンを２５℃から２００℃まで２℃・ｍｉｎ−１で加熱した。変調器の条件は、振幅を０．２０℃、周期を４０ｓとした。サンプリング間隔は１ｓｅｃ／ｐｔとした。 Thermal Analysis by Differential Scanning Calorimetry (DSC) and Thermogravimetric Analysis (TGA) DSC data was collected on a TA Instruments Q2000 equipped with a 50 position autosampler. The instrument was calibrated for energy and temperature using certified indium. Usually, 0.5 to 3 mg of each sample was put in an aluminum pan having a pinhole and heated from 25 ° C. to 300 ° C. at 10 ° C. · min −1 . The nitrogen purge above the sample was maintained at 50 ml · min −1 . For instrument control, software Advantage for Q Series v2.8.392 and Thermal Advantage v4.8.3 were used, and data was analyzed using Universal Analysis v4.3A. For modulated DSC, samples were prepared as before and the pan was heated from 25 ° C. to 200 ° C. at 2 ° C. min −1 . The modulator conditions were an amplitude of 0.20 ° C. and a period of 40 s. The sampling interval was 1 sec / pt.

１６ポジションのオートサンプラーを備えたＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｑ５００ＴＧＡにより、ＴＧＡデータを収集した。認定アルメルを使用し、温度について計器をキャリブレーションした。通常、５〜１０ｍｇの各試料を、予め秤量した白金ルツボおよびアルミニウムＤＳＣパンに入れ、周囲温度から３５０℃へ１０℃・ｍｉｎ−１で加熱した。試料上方の窒素パージは６０ｍｌ・ｍｉｎ−１を維持した。機器制御にはソフトウェアＡｄｖａｎｔａｇｅ ｆｏｒ Ｑ Ｓｅｒｉｅｓ ｖ２．８．０．３９２およびＴｈｅｒｍａｌ Ａｄｖａｎｔａｇｅ ｖ４．８．３を使用した。 TGA data was collected on a TA Instruments Q500 TGA equipped with a 16 position autosampler. The instrument was calibrated for temperature using certified alumel. Typically, 5-10 mg of each sample was placed in a pre-weighed platinum crucible and aluminum DSC pan and heated from ambient temperature to 350 ° C. at 10 ° C./min −1 . The nitrogen purge above the sample was maintained at 60 ml · min −1 . For the instrument control, software Advantage for Q Series v2.8.392 and Thermal Advantage v4.8.3 were used.

バッチ１の熱分析を、ＤＳＣおよびＴＧＡにより行った。ＴＧＡの出力形状（図１９を参照されたい）は、周囲温度〜１２１℃の間で１．７％の重量減少を示すが、これはおそらく水分の減少である。ＤＳＣの出力形状（図１９を参照されたい）は、おそらく水分の減少に対応するブロードな低温の吸熱と、その後の９４℃から始まる小さな吸熱を示す。   Thermal analysis of batch 1 was performed by DSC and TGA. The output shape of TGA (see FIG. 19) shows a 1.7% weight loss between ambient temperature and 121 ° C., which is probably a reduction in moisture. The output shape of the DSC (see FIG. 19) shows a broad low-temperature endotherm that probably corresponds to a decrease in moisture followed by a small endotherm starting at 94 ° C.

この第２の吸熱はガラス転移を意味するかもしれず、変調ＤＳＣによりさらに詳しく調べた（図２０を参照されたい）。この手法は、ガラス転移などの可逆的な出来事を、溶媒の減少または結晶形態の融解などの不可逆的なものから分離することができる。変調ＤＳＣの可逆的な熱流の出力形状は、９５℃に変曲点（Ｔｇ）を有するステップとしてガラス転移を示す。これはガラス転移にしては高く、形態１が安定であることを示唆している。非可逆的な熱流の出力形状で８９℃から始まる小さな吸熱は、ガラス転移点におけるバルクの物質の分子緩和に対応する。   This second endotherm may imply a glass transition and was examined in more detail by modulated DSC (see FIG. 20). This approach can separate reversible events such as glass transitions from irreversible ones such as solvent loss or crystal form melting. The output shape of the reversible heat flow of the modulated DSC exhibits a glass transition as a step with an inflection point (Tg) at 95 ° C. This is high for the glass transition, suggesting that Form 1 is stable. A small endotherm starting at 89 ° C. with an irreversible heat flow output shape corresponds to the molecular relaxation of the bulk material at the glass transition point.

ＤＳＣの出力形状（図１９を参照されたい）は、分解が２２０℃前後で始まることを示しており、これはまた、ＴＧＡの出力形状で曲線が下を向く温度に対応する。   The DSC output shape (see FIG. 19) shows that the decomposition begins around 220 ° C., which also corresponds to the temperature at which the curve goes down in the TGA output shape.

バッチ１、２、３、４、５および６のＴＧＡの出力形状は類似の形である（図２１）。周囲温度〜１２０℃の間で測定された重量減少を表Ｋに示す。これらは、ＮＭＲで観察された変動する水分量と一致する。これらの量を、カール・フィッシャー（ＫＦ）水分滴定によりさらに定量した。ＫＦによる水分の測定を参照されたい。   The output shapes of TGA for batches 1, 2, 3, 4, 5 and 6 are similar (FIG. 21). The weight loss measured between ambient temperature and 120 ° C. is shown in Table K. These are consistent with the varying amounts of water observed by NMR. These amounts were further quantified by Karl Fischer (KF) moisture titration. See the measurement of moisture by KF.

比較のために、６個のバッチのＤＳＣの出力形状を図２２に示す。出力形状は類似しており、ＤＳＣおよびＴＧＡの節でみられるような、様々な水分量と一致する、大きさが様々でブロードな低温の吸熱、および、その後のガラス転移点前後の小さい吸熱がある。結果を表Ｌに要約する。   For comparison, the output shape of 6 batches of DSC is shown in FIG. The output shapes are similar, with broad, low-temperature endotherms of varying sizes, consistent with various moisture levels, as seen in the DSC and TGA sections, and subsequent small endotherms around the glass transition point. is there. The results are summarized in Table L.

偏光顕微鏡（ＰＬＭ）
画像取り込みのためにデジタルビデオカメラを備えた、Ｌｅｉｃａ ＬＭ／ＤＭ偏光顕微鏡で試料を研究した。少量の各試料をシリコンオイル中のスライドグラス上に置き、カバーグラスで覆って、個々の粒子ができるだけ分離するようにした。試料を、適切な倍率で、またλ着色フィルターと連結した部分偏光で観察した。 Polarized light microscope (PLM)
Samples were studied with a Leica LM / DM polarizing microscope equipped with a digital video camera for image capture. A small amount of each sample was placed on a glass slide in silicone oil and covered with a cover glass to separate the individual particles as much as possible. Samples were observed at the appropriate magnification and with partially polarized light coupled to a λ colored filter.

図２３Ａ〜２３Ｆは、バッチ１、２、３、４、５および６が、小さい不規則な粒子の大きな硬い凝集物から構成された材料であることを示す。バッチ１、２、３、４、５および６は全て同じように見える。平面偏光下では複屈折は観察されなかったが、これは材料が非結晶性であることと一致する。粒子径は１μｍ未満〜３μｍの範囲である。これらの粒子のサイズが小さいことは、それらが極めて急速に沈殿したことを示唆する。   Figures 23A-23F show that batches 1, 2, 3, 4, 5 and 6 are materials composed of large hard agglomerates of small irregular particles. Batches 1, 2, 3, 4, 5 and 6 all look the same. No birefringence was observed under plane polarization, which is consistent with the material being amorphous. The particle diameter is in the range of less than 1 μm to 3 μm. The small size of these particles suggests that they settled very rapidly.

重量式蒸気吸着（ＧＶＳ）
ＳＭＳ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｕｉｔソフトウェアにより制御された、ＳＭＳ ＤＶＳ Ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ水蒸気吸着測定装置を使用して吸着等温線を得た。試料温度は計器の制御により２５℃に維持した。湿度は、全流量が２００ｍｌ・ｍｉｎ−１の乾燥および湿潤窒素流を混合することにより制御した。相対湿度は、試料の近くに設置した較正済Ｒｏｔｒｏｎｉｃプローブ（ダイナミックレンジは１．０〜１００％ＲＨ）により測定した。％ＲＨの関数としての試料の重量変化（マスリラクゼーション）を、微量天秤（精度は±０．００５ｍｇ）により絶えずモニターした。 Gravimetric vapor adsorption (GVS)
Adsorption isotherms were obtained using an SMS DVS Intrinsic water vapor adsorption instrument controlled by SMS Analysis Suite software. The sample temperature was maintained at 25 ° C. by instrument control. The humidity was controlled by mixing dry and wet nitrogen streams with a total flow rate of 200 ml · min −1 . Relative humidity was measured with a calibrated Rotronic probe (dynamic range 1.0-100% RH) placed near the sample. The weight change (mass relaxation) of the sample as a function of% RH was continuously monitored by a microbalance (accuracy ± 0.005 mg).

通常、５〜２０ｍｇの試料を、風袋を秤量したステンレス製メッシュバスケットに周囲条件で入れた。試料の着脱は４０％ＲＨ、２５℃（通常の室内条件）で行った。下記概要のように水蒸気吸着等温線を測定した（２回のスキャンで完全な１サイクル）。標準の等温線は、０．５〜９０％ＲＨの範囲で間隔を１０％ＲＨとし、２５℃で測定した。   Typically, 5-20 mg of sample was placed in a stainless steel mesh basket weighed in a tare at ambient conditions. The sample was attached and detached at 40% RH and 25 ° C. (normal room conditions). The water vapor adsorption isotherm was measured as outlined below (complete one cycle with two scans). Standard isotherms were measured at 25 ° C. with an interval of 10% RH in the range of 0.5-90% RH.

２５℃でバッチ１の重量式蒸気吸着（ＧＶＳ）等温線を得、図２４に示した。試料は適度な吸湿性を有しているようであり、０から９０％までの相対湿度（ＲＨ）で３．８％の全重量変化を示す。ヒステリシス（吸脱着曲線の間の領域）は小さく、試料は吸着した水分を容易に放出することを示している。水和物の生成は観察されない。全実験の終了後、顕著な重量変化はなかった（０．３％）。   The gravimetric vapor adsorption (GVS) isotherm of batch 1 was obtained at 25 ° C. and is shown in FIG. The sample appears to have moderate hygroscopicity and exhibits a total weight change of 3.8% at 0 to 90% relative humidity (RH). Hysteresis (region between adsorption and desorption curves) is small, indicating that the sample readily releases adsorbed moisture. Hydrate formation is not observed. There was no significant weight change (0.3%) after the end of all experiments.

ＧＶＳの動態プロット（図２５）から、水分の吸着は主に非常な高湿度で生じ、脱着は非常な低湿度で生じたことが示される。吸着フェーズでは、８０％ＲＨまで試料は極めて急速に平衡に達するが、９０％ＲＨでは平衡までに比較的長い時間を要した。脱着では、集合体は全ステップで安定であった。   The GVS kinetic plot (FIG. 25) shows that moisture adsorption occurred mainly at very high humidity and desorption occurred at very low humidity. In the adsorption phase, the sample reached equilibrium very rapidly up to 80% RH, but it took a relatively long time to equilibrate at 90% RH. On desorption, the assembly was stable at all steps.

ＧＶＳの終了後、試料を回収し、ＸＲＰＤにより再分析を行ったところ、この物質は依然非結晶性であることが示された（図２６）。   After GVS was completed, a sample was collected and reanalyzed by XRPD, indicating that this material was still amorphous (FIG. 26).

カール・フィッシャー滴定（ＫＦ）による水分測定
ハイドラナールクーロマットＡＧ試薬およびアルゴンパージを使用し、Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ ＤＬ３９ Ｃｏｕｌｏｍｅｔｅｒにより、各試料の水分含有率を測定した。秤量した固体試料を、水分の侵入を防ぐためにＳｕｂａｓｅａｌに結合された、白金製ＴＧＡパン上の容器に入れた。１回の滴定に約１０ｍｇの試料を使用し、２回の測定を行った。 Moisture measurement by Karl Fischer titration (KF) The moisture content of each sample was measured with a Mettler Toledo DL39 Coulometer using Hydranal Coulomat AG reagent and an argon purge. The weighed solid sample was placed in a container on a platinum TGA pan coupled to Subaseal to prevent moisture ingress. About 10 mg of sample was used for one titration, and two measurements were performed.

カール・フィッシャー電量測定による水分の滴定により、水分２．４重量％の結果を得た。これは、ＴＧＡで観察された重量減少より少し大きい。これは、水分のいくらかは加熱時にこの物質から放出されないが、これら２つの手法の、異なる実験手順によっては放出されやすくなることを意味するものと考えられる。   A water titration by Karl Fischer coulometry gave a result of 2.4 wt% moisture. This is slightly greater than the weight loss observed with TGA. This is thought to mean that some of the moisture is not released from this material upon heating, but is likely to be released by the different experimental procedures of these two approaches.

カール・フィッシャー電量測定により、各バッチの水分含有量を決定した。表Ｎに、これらの結果ならびに、これらと先に得られたカール・フィッシャーの結果およびＴＧＡで観察された重量減少との比較を示す。３種の分析全てにおいて傾向が同じであるように、データは一貫性を有している。先に得たカール・フィッシャーデータは、ここで得た結果より少ない水分量を示している。このことは、いくつかの試料は他のものより多くの水分を取り込んでいるが、この物質が吸湿性であることと一致している。ＴＧＡの重量減少は一貫して、カール・フィッシャー滴定で得た結果より少ないが、これはいくらかの水分がこの物質中に捕捉されていて加熱では放出されないが、実験手順によっては放出され得ることを意味しているものと考えられる。   The water content of each batch was determined by Karl Fischer coulometric measurements. Table N shows these results and a comparison of these with the previously obtained Karl Fischer results and the weight loss observed with TGA. The data is consistent so that the trend is the same in all three analyses. The Karl Fischer data obtained earlier shows a lower moisture content than the results obtained here. This is consistent with the fact that some samples have taken up more moisture than others, but this material is hygroscopic. The weight loss of TGA is consistently less than the results obtained by Karl Fischer titration, but this indicates that some moisture is trapped in this material and is not released by heating, but may be released by some experimental procedures. It is thought to mean.

ｐＫａの測定および推定
Ｄ−ＰＡＳアタッチメントを備えたＳｉｒｉｕｓ ＧｌｐＫａ装置でｐＫａの測定データを収集した。測定は、水溶液中、２５℃でＵＶにより、またメタノール−水混合物中、電位差測定法により行った。滴定溶媒のイオン強度調整（ＩＳＡ）を０．１５Ｍ ＫＣｌ（水溶液）で行った。メタノール−水混合物中で得られた値は、Ｙａｓｕｄａ−Ｓｈｅｄｌｏｖｓｋｙの外挿により、共溶媒０％に補正した。Ｒｅｆｉｎｅｍｅｎｔ Ｐｒｏソフトウェアｖ１．０を使用してデータを精密化した。ＡＣＤ ｐＫａ推定ソフトウェアｖ９を使用して、ｐＫａ値の推定を行った。
pKa Measurement and Estimation pKa measurement data was collected with a Sirius GlpKa instrument equipped with a D-PAS attachment. The measurement was performed by UV at 25 ° C. in an aqueous solution and by a potentiometric method in a methanol-water mixture. The ionic strength adjustment (ISA) of the titration solvent was performed with 0.15 M KCl (aqueous solution). The value obtained in the methanol-water mixture was corrected to 0% co-solvent by extrapolation of Yasuda-Shedlovsky. Refinement Pro software v1.0 was used to refine the data. PKa values were estimated using ACD pKa estimation software v9.

共溶媒としてメタノールを使用して、電位差測定法によりオベチコール酸のｐＫａを測定し（図２７）、Ｙａｓｕｄａ−Ｓｈｅｄｌｏｖｓｋｙの外挿により共溶媒０％に外挿した（図２８）。ｐＫａは所与のｐＨで、この化合物の中性およびイオン化した形態の割合を決めることができる。図２９にｐＨに依存する種の分布を示す。   The pKa of obeticholic acid was measured by potentiometric method using methanol as a co-solvent (FIG. 27) and extrapolated to 0% by co-solvent by extrapolation of Yasuda-Shedlovsky (FIG. 28). The pKa can determine the proportion of the neutral and ionized form of this compound at a given pH. FIG. 29 shows the distribution of species depending on pH.

ＬｏｇＰの決定
ＬｏｇＰ、ＬｏｇＰｉｏｎおよびＬｏｇＤ値を得るためにオクタノール：イオン強度調整（ＩＳＡ）した水の３種の比を使用して、Ｓｉｒｉｕｓ ＧｌｐＫａ装置による電位差滴定法によりデータを収集した。Ｒｅｆｉｎｅｍｅｎｔ Ｐｒｏソフトウェアｖ１．０を使用してデータを精密化した。ＡＣＤ ｖ９およびＳｙｒａｃｕｓｅ ＫＯＷＷＩＮ ｖ１．６７ソフトウェアを使用してＬｏｇ Ｐ値を推定した。 Determination of LogP LogP, octanol in order to obtain a LogP ion and LogD value: Using three kinds of specific ionic strength adjustment (ISA) water, and collecting data by potentiometric titration by Sirius GLpKa device. Refinement Pro software v1.0 was used to refine the data. Log P values were estimated using ACD v9 and Syracuse KOWWIN v1.67 software.

ＬｏｇＰをＡＣＤソフトウェアで推定後、電位差測定法により測定した。オクタノール／ＩＳＡ水の３種の異なる比で、３回の滴定を行ない、図３０にプロットした異なる曲線を得た。黒色の曲線は、純粋な水溶液のｐＫａ滴定であり、３色の曲線はオクタノール／ＩＳＡ水の３種の比に対応する。ｐＫａのシフトによりＬｏｇＰの決定が可能になる。   LogP was estimated by ACD software and then measured by potentiometry. Three titrations were performed with three different ratios of octanol / ISA water to obtain different curves plotted in FIG. The black curve is the pKa titration of a pure aqueous solution, and the three color curves correspond to the three ratios of octanol / ISA water. LogP can be determined by shifting pKa.

親油性曲線（ｐＨの関数としてのｌｏｇＤ）を図３１に示す。ＬｏｇＤは分配計数であり、特定のｐＨで存在する全ての種の統合親油性を意味する。ＬｏｇＰは、純粋な中性種の分配係数に対応する化合物の定数であり、ＬｏｇＰｉｏｎは、純粋なイオン化種のそれである。ＬｏｇＰおよびＬｏｇＰｉｏｎは、それぞれＹ軸と、ｐＨ目盛りの始点での接線（分子が純粋に中性形態であるとき）およびｐＨ目盛りの終点での接線（分子が完全にイオン化しているとき）との交点として、親油性曲線から決定することができる。   The lipophilic curve (log D as a function of pH) is shown in FIG. Log D is a partition count and refers to the integrated lipophilicity of all species present at a particular pH. LogP is the constant of the compound corresponding to the partition coefficient of pure neutral species, and LogPion is that of pure ionized species. LogP and LogPion are the Y axis and the tangent at the start of the pH scale (when the molecule is in a pure neutral form) and the tangent at the end of the pH scale (when the molecule is fully ionized), respectively. The point of intersection can be determined from the lipophilic curve.

４０℃、７５％ＲＨおよび２５℃、９７％ＲＨにおける２週間安定性
固体形態の加速安定性試験において、バッチ１の試料を４０℃、７５％相対湿度（ＲＨ）で保管した。非常な高湿度の影響をチェックするために、別の試料を２５℃、９７％相対湿度で保管した。両試料とも、５日後および２週間後にＸＲＰＤにより再分析した。両試料とも、２種の保管条件で２週間まで、非結晶性のままであり、形態１がこれらの条件に対して安定であることが示された。図３２および図３３を参照されたい。 Two week stability at 40 ° C., 75% RH and 25 ° C., 97% RH In a solid form accelerated stability test, samples of Batch 1 were stored at 40 ° C., 75% relative humidity (RH). To check the effects of very high humidity, another sample was stored at 25 ° C. and 97% relative humidity. Both samples were reanalyzed by XRPD after 5 days and 2 weeks. Both samples remained amorphous for up to 2 weeks under two storage conditions, indicating that Form 1 is stable to these conditions. See FIGS. 32 and 33.

分析した６個のバッチは全て非結晶性であった。変調ＤＳＣ実験により、９５℃でガラス転移点を測定した。使用した全ての分析手法で、６個のバッチは非常に類似しているように見え、それらの唯一の違いはカール・フィッシャー滴定により１．９％から２．８％まで変動する水分含有量であった。熱分析からは、変動する水分量が示され、１７５〜２２０℃前後で分解が始まることが示された。ｐＫａの測定値は４．８２であり、ＬｏｇＰは５．５４であった。顕微鏡による評価では、非常に小さい不定形粒子の大きな硬質の凝集体が示された。   All 6 batches analyzed were non-crystalline. The glass transition point was measured at 95 ° C. by a modulated DSC experiment. For all analytical methods used, the six batches seem very similar, the only difference between them being the moisture content that varies from 1.9% to 2.8% by Karl Fischer titration. there were. Thermal analysis showed varying amounts of water, indicating that decomposition began around 175-220 ° C. The measured value of pKa was 4.82 and LogP was 5.54. Microscopic evaluation showed large hard aggregates of very small amorphous particles.

安定性試験では、この物質は加速条件（４０℃／７５％ＲＨ）下または高湿度条件（２５℃／９７％ＲＨ）下で２週間経過後も、依然非結晶性であることが示された。重量式蒸気吸着（ＧＶＳ）分析では、この物質は適度に吸湿性であり、全重量増加は０〜９０％相対湿度（ＲＨ）で３．８％であることが示された。ＧＶＳで水和物は観察されなかった。ＧＶＳの後でＸＲＰＤにより再分析した試料は、依然非結晶性であった。高いガラス転移点および安定性の試験結果からは、非結晶性形態が安定であることが示唆される。   Stability testing showed that the material was still non-crystalline after 2 weeks under accelerated conditions (40 ° C./75% RH) or high humidity conditions (25 ° C./97% RH). . Gravimetric vapor adsorption (GVS) analysis showed that this material was reasonably hygroscopic with a total weight gain of 3.8% at 0-90% relative humidity (RH). No hydrates were observed with GVS. Samples reanalyzed by XRPD after GVS were still amorphous. High glass transition and stability test results suggest that the amorphous form is stable.

実施例６：単結晶Ｘ線構造および絶対立体化学
０．１℃／ｍｉｎで５℃に冷却し、続いてＲＴ／５０℃、８時間のサイクルを１週間行って熟成させた後のアセトニトリル溶液からオベチコール酸を再結晶させて得た結晶から、オベチコール酸の単結晶Ｘ線構造を決定した（図３４を参照されたい）。構造は形態Ｇと一致しており、この物質の参照パターンとして、シミュレートしたＸＲＰＤパターンを作製した。形態Ｇは例えばオベチコール酸のアセトニトリル溶液を冷却することにより調製することができる。 Example 6: Single crystal X-ray structure and absolute stereochemistry From an acetonitrile solution after aging by cooling to 5 ° C. at 0.1 ° C./min followed by RT / 50 ° C., 8 hour cycle for 1 week From the crystals obtained by recrystallizing obeticholic acid, the single crystal X-ray structure of obeticholic acid was determined (see FIG. 34). The structure is consistent with Form G, and a simulated XRPD pattern was created as a reference pattern for this material. Form G can be prepared, for example, by cooling a solution of obeticholic acid in acetonitrile.

構造は斜方晶系であり、空間群はＰ２１２１２１であり、非対称単位の中にオベチコール酸１分子を含有する。最終のＲ１［Ｉ＞２σ（Ｉ）］＝３．２２％である。結晶は、寸法約０．４×０．４×０．３ｍｍのプリズム形態を示した。この分子の絶対立体化学として、フラックパラメータ＝−０．０１（１３）を有し、キラル中心がＣ５、Ｃ９、Ｃ１０およびＣ１４にあるＳ、およびキラル中心がＣ３、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ１３、Ｃ１７およびＣ２２にあるＲと決定された。Ｒ構造でキラル中心Ｃ５、Ｃ９、Ｃ１０およびＣ１４を有する反転構造およびＳ構造でキラル中心Ｃ３、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ１３、Ｃ１７およびＣ２２を有する反転構造では、フラックパラメータ＝１．０１（１３）であり、上述の割り当てが確認された。 The structure is orthorhombic, the space group is P2 1 2 1 2 1 and contains one molecule of obeticholic acid in an asymmetric unit. Final R1 [I> 2σ (I)] = 3.22%. The crystals exhibited a prismatic form with dimensions of about 0.4 × 0.4 × 0.3 mm. As the absolute stereochemistry of this molecule, S has the Flack parameter = −0.01 (13), the chiral centers are C5, C9, C10 and C14, and the chiral centers are C3, C6, C7, C8, C13, R in C17 and C22 was determined. For an inverted structure with chiral centers C5, C9, C10 and C14 in the R structure and an inverted structure with chiral centers C3, C6, C7, C8, C13, C17 and C22 in the S structure, Flack parameter = 1.01 (13) The above-mentioned assignment was confirmed.

全体として、この構造は強力なデータセットを有し、欠陥を有しない。
Overall, this structure has a powerful data set and no defects.

立体化学の割り当てに使用したソフトウェア（ＰＬＡＴＯＮ）はキラル中心（Ｃ８）をＲの立体中心と決定するが、ＡＣＤソフトウェア（およびＣａｈｎ−Ｉｎｇｏｌｄ−Ｐｒｅｌｏｇ）による（Ｃ８）の割り当てはＳである。しかしながら、Ｂ／Ｃリングシステムへのトランスリング接合の割り当ては結晶構造により絶対的に決められる。   The software used for stereochemistry assignment (PLATON) determines the chiral center (C8) as the stereocenter of R, but the assignment of (C8) by the ACD software (and Cahn-Ingold-Prelog) is S. However, the assignment of the trans-ring junction to the B / C ring system is absolutely determined by the crystal structure.

Ｂｉｊｖｏｅｔ差に対してベイズ統計学を用いて絶対構造の決定を行う（Ｈｏｏｆｔｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔ．，（２００８），４１，９６−１０３）と、提示した絶対構造が正しいことの確立は１．０００であり、絶対構造がラセミ双晶または偽構造である確率はそれぞれ０．０００および０．０００であることがわかる。フラック等価およびその不確かさをこのプログラムで計算すると−０．０１９（１７）である。   When the absolute structure is determined using Bayesian statistics for the Bijvoet difference (Hoofet al., J. Appl. Cryst., (2008), 41, 96-103), establishment of the presented absolute structure is correct. Is 1.000, and the probability that the absolute structure is a racemic twin or pseudo structure is 0.000 and 0.000, respectively. The Flack equivalent and its uncertainty are calculated by this program and are -0.019 (17).

オベチコール酸の構造は、互いに融合した１個の５員環および３個の６員環を含有する。５員環（Ｃ１３、Ｃ１４、Ｃ１５、Ｃ１６およびＣ１７）の配座解析を行うと、この環に対する最も近いパッカリング記述子は半いす型であることがわかる。３個の６員環（Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５およびＣ１０）；（Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９およびＣ１０）ならびに（Ｃ８、Ｃ９、Ｃ１１、Ｃ１２Ｃ１３およびＣ１４）の配座解析を行うと、これらの環に対する最も近いパッカリング記述子はいす型であることがわかる。   The structure of obeticholic acid contains one 5-membered ring and three 6-membered rings fused together. A conformational analysis of the five-membered ring (C13, C14, C15, C16 and C17) shows that the closest puckering descriptor for this ring is a half-chair type. Conformational analysis of three 6-membered rings (C1, C2, C3, C4, C5 and C10); (C5, C6, C7, C8, C9 and C10) and (C8, C9, C11, C12 C13 and C14) When done, it turns out that the closest puckering descriptor for these rings is a chair type.

結晶構造に２つの固有の分子間水素結合が観察される。オベチコール酸の各分子は、Ｏ１およびＯ４の酸素は、それぞれレセプターとして働くＯ３およびＯ１の酸素へのドナーとして働き、Ｏ１−Ｈ１Ｃ−−−Ｏ３［Ｄ・・・Ａ＝２．７４１９（１２）Å］およびＯ４−Ｈ４Ｃ−−−Ｏ１［Ｄ・・・Ａ＝２．６０５３（１３）Å］として、オベチコール酸の対称性に関連する２つの異なる分子に対して水素結合を形成する（図３５を参照されたい）。これらの相互作用は、複雑な３次元水素結合ネットワークを構築することになる。最終の差フーリエマップからは、それぞれ０．４０２および−０．１７６ｅÅ−３の最大および最小電子密度が示される。 Two intrinsic intermolecular hydrogen bonds are observed in the crystal structure. In each molecule of obeticholic acid, O1 and O4 oxygens act as donors to O3 and O1 oxygen, respectively, acting as receptors, O1-H1C --- O3 [D ... A = 2.7419 (12) Å ] And O4-H4C --- O1 [D ... A = 2.6053 (13) １３] form hydrogen bonds to two different molecules related to the symmetry of obeticholic acid (see FIG. 35). See). These interactions create a complex three-dimensional hydrogen bond network. The final difference Fourier map shows maximum and minimum electron densities of 0.402 and -0.176eÅ- 3 , respectively.

この構造について計算したＸＲＰＤパターンに、実験したバッチでオーバーレイすると、この結晶はそのバルクに一致し、オベチコール酸形態Ｇであることが示される（図３６を参照されたい）。   Overlaying the XRPD pattern calculated for this structure with the experimental batches indicates that this crystal is consistent with its bulk and is obeticholic acid form G (see FIG. 36).

構造精密化の概要は以下の通りである。   The outline of the structural refinement is as follows.

実施例７：オベチコール酸形態１（非結晶性）と結晶（形態Ｆ）形態との間のバイオアベイラビリティの違い
固体オベチコール酸の物理状態は、対象（例えばラット）に経口投与したときの分子のバイオアベイラビリティに役割を果たし得る。オベチコール酸の固体非結晶性形態および結晶形態の、１回の経口投与後の血漿中動態および腸内吸収効率ならびに薬物動態を評価するために、下記の研究を行った。オベチコール酸形態１（非結晶性）または形態Ｆの投与後、オベチコール酸の結晶中濃度対時間のプロファイル、ｔｍａｘ、ＣｍａｘおよびＡＵＣを比較した（図３７〜３８を参照されたい）。 Example 7: Bioavailability Differences Between Obeticholic Acid Form 1 (Non-crystalline) and Crystalline (Form F) Form The physical state of solid oveticholic acid is determined by molecular biochemistry when administered orally to a subject (eg, a rat). Can play a role in availability. The following studies were conducted to evaluate the plasma kinetics and intestinal absorption efficiency and pharmacokinetics of a solid amorphous and crystalline form of obeticholic acid after a single oral administration. Following administration of obeticholic acid form 1 (non-crystalline) or form F, the concentration of obeticholic acid in the crystal versus time profile, t max, C max and AUC were compared (see FIGS. 37-38).

オベチコール酸形態１（非結晶性）および形態Ｆをラットに投与し、各動物で少なくとも３時間、異なる時間に血液を採取した。オベチコール酸の各形態について、６匹の動物で研究した。   Obeticholic acid form 1 (non-crystalline) and form F were administered to rats and blood was collected at different times for each animal for at least 3 hours. Each form of obeticholic acid was studied in 6 animals.

実験プロトコール：
オベチコール酸形態１（非結晶性）および結晶形態Ｆを試験物質として使用した。形態Ｆは、アセトニトリルまたはニトロメタンから熟成により調製することができる。製剤を、ｐＨ４の懸濁水として調製した。研究用モデルは、約２２５〜約２５０ｇのオスの成獣Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットである（Ｈａｒｌａｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）。投与経路ごとに６匹の動物を使用した。投与量は経口で２０ｍｇ／ｋｇ／５ｍＬである。動物を、オベチコール酸処方による処置の前に、一晩絶食させた。経口投与は胃への強制投与により行った。 Experimental protocol:
Obeticholic acid form 1 (non-crystalline) and crystalline form F were used as test substances. Form F can be prepared by aging from acetonitrile or nitromethane. The formulation was prepared as a pH 4 suspension. The model for the study is about 225 to about 250 g of adult male Sprague Dawley rats (Harlan Laboratories). Six animals were used for each route of administration. The dose is 20 mg / kg / 5 mL orally. The animals were fasted overnight prior to treatment with the obeticholic acid formulation. Oral administration was performed by gavage.

１日目、左頸静脈（ＳＯＰ ＶＩＶＯ／ＳＡＦ６）にカニューレを埋め込む予定の動物に、イソフルランにより麻酔を施した。実験は、外科手術から回復した１日後から開始した。約５００μＬの血液（２５０μＬの血漿）をカニューレを通してヘパリン化シリンジ（ヘパリンナトリウム）に採取し、直ちに氷／水浴中のマイクロチューブに集めた。１時間以内に、４℃、１００００ｘｇで５分間、試料を遠心分離した。血漿を直ちにマイクロチューブに移し、−２０℃で保管した。血液試料は、投与後、３０分、１時間、１．３時間、２時間および３時間後に採取した。血漿試料を、ＨＰＬＣ−ＥＳ／ＭＳ／ＭＳ定量法を使用して分析した。薬物動態の研究を、ノンコンパートメント法を使用して行った。   On day 1, animals that were to be cannulated in the left jugular vein (SOP VIVO / SAF6) were anesthetized with isoflurane. The experiment started 1 day after recovery from surgery. Approximately 500 μL of blood (250 μL of plasma) was collected via a cannula into a heparinized syringe (heparin sodium) and immediately collected in a microtube in an ice / water bath. Within one hour, the sample was centrifuged at 10,000 xg for 5 minutes at 4 ° C. Plasma was immediately transferred to a microtube and stored at -20 ° C. Blood samples were collected 30 minutes, 1 hour, 1.3 hours, 2 hours and 3 hours after administration. Plasma samples were analyzed using HPLC-ES / MS / MS quantification. Pharmacokinetic studies were performed using a non-compartmental method.

結果：
２種の固体形態の一回分、２０ｍｇ／Ｋｇ−体重を経口投与後、オベチコールの平均血漿中濃度を図３７に示す。値は、各製剤について、６セットの実験の平均である。標準偏差をグラフ中に記す。 result:
The average plasma concentration of obeticol is shown in FIG. 37 after oral administration of 20 mg / Kg-body weight of one dose of two solid forms. Values are the average of 6 sets of experiments for each formulation. The standard deviation is noted in the graph.

結晶形態を投与後、Ｃｍａｘは１．５時間後に達成され、血漿中オベチコール酸濃度は、通常の速度論に従って１つの最大値をとり、３時間後に投与量がＣｍａｘのほぼ半分になる。   After administration of the crystalline form, Cmax is achieved after 1.5 hours and the plasma oveticholic acid concentration takes one maximum according to normal kinetics, and after 3 hours the dose is approximately half of Cmax.

オベチコール酸形態１（非結晶性）形態１投与後の動態プロファイルは、結晶形態Ｆのものとは異なる。３０分後に、初期の血漿中濃度のピークが得られ、２時間後に第２のピークが得られる。６匹のラットからのデータの変動は極めて低く、この挙動は結晶形態のものとは統計的に異なる。研究した３時間のＡＵＣは結晶形態の方が大きい。速度論からは、オベチコール酸は３時間後にも依然血漿中に存在することが示唆される。オベチコール酸が肝臓を通過すると、肝臓代謝物のタウロ抱合体が生成され、これが胆汁中に分泌され、腸肝循環に蓄積することは以前に示されている。したがって、タウロ抱合体の測定は、肝臓を通るオベチコール酸の通過量の決定に使用することができる。タウロ抱合体の生成を図３８に示すが、これにより、結晶形態を投与した後の方が、タウロ抱合体の生成はより迅速であり、より高濃度であることが示される。   The kinetic profile after administration of obeticholic acid form 1 (non-crystalline) form 1 is different from that of crystalline form F. After 30 minutes, an initial plasma concentration peak is obtained and after 2 hours a second peak is obtained. The variation in data from 6 rats is very low and this behavior is statistically different from that of the crystalline form. The 3 hour AUC studied has a larger crystal form. The kinetics suggest that obeticholic acid is still present in plasma after 3 hours. It has been previously shown that when obeticholic acid passes through the liver, a liver metabolite, Tauro conjugate, is secreted into the bile and accumulates in the enterohepatic circulation. Thus, measurement of tauroconjugate can be used to determine the amount of obeticholic acid passing through the liver. The production of Tauro conjugate is shown in FIG. 38, which indicates that Tauro conjugate production is faster and at a higher concentration after administration of the crystalline form.

融点およびガラス転移
オベチコール酸形態１（非結晶性）形態１および結晶形態Ｆの融点を従来法により測定した。参照用化合物として、ケノデオキシコール酸およびウルソデオキシコール酸の融点を測定した。測定は３回行った。結晶形態では、固体から液体状態への転移を融点（Ｔｍ）と定義するが、非結晶性形態ではガラス転移温度（Ｔｇ）と定義する。測定値を摂氏℃およびケルビン°Ｋの両方で次の表に示す。 Melting point and glass transition The melting points of obeticholic acid form 1 (non-crystalline) form 1 and crystalline form F were measured by conventional methods. As reference compounds, the melting points of chenodeoxycholic acid and ursodeoxycholic acid were measured. The measurement was performed 3 times. In the crystalline form, the transition from the solid to the liquid state is defined as the melting point (T m ), whereas in the amorphous form, it is defined as the glass transition temperature (T g ). The measurements are shown in the following table in both Celsius and Kelvin.

結果：
ＣＤＣＡおよびＵＤＣＡについて得た値は、ＵＤＣＡの融点はＣＤＶＡのそれより高いという先の報告と一致している。形態１のガラス転移温度Ｔｇ（１０２〜１１２℃）は、形態Ｆの融点Ｔｍ（１２０〜１２４℃）より低い。２つの固体状態の形態を比較するとき、この観察されたパターンは先に報告されたデータと一致する。形態Ｆは、より高い温度（２３５〜２３７℃）に別の転移を有する。 result:
The values obtained for CDCA and UDCA are consistent with previous reports that the melting point of UDCA is higher than that of CDVA. The glass transition temperature Tg (102 to 112 ° C.) of Form 1 is lower than the melting point Tm (120 to 124 ° C.) of Form F. When comparing the two solid state forms, this observed pattern is consistent with previously reported data. Form F has another transition at higher temperatures (235-237 ° C).

ケルビン度で表した最も高い融点とガラス転移点との比は、他の薬物および他の胆汁酸と極めて類似している。（Ｊ．Ｋｅｒｃ ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅｒｍｏｃｈｉｍ．Ａｃｔａ，１９９５（２４８）８１−９５）。   The ratio between the highest melting point expressed in Kelvin and the glass transition point is very similar to other drugs and other bile acids. (J. Kerc et al. Thermochim. Acta, 1995 (248) 81-95).

示差走査熱量分析
オベチコール酸の結晶性および非結晶性形態の融点および物理的状態をより良く定義するために、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）による分析を行った。使用した装置は、Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ ＤＳＣ８２１ｅ型であった。約４〜５ｍｇの各形態１および形態Ｆを分析に供した。１０℃／ｍｉｎの加熱速度で、３０〜３００℃の温度範囲に化合物を曝露した。 Differential Scanning Calorimetry Analysis by differential scanning calorimetry (DSC) was performed to better define the melting point and physical state of the crystalline and amorphous forms of obeticholic acid. The equipment used was a Mettler Toledo DSC821e type. Approximately 4-5 mg of each Form 1 and Form F was subjected to analysis. The compound was exposed to a temperature range of 30-300 ° C. at a heating rate of 10 ° C./min.

図３９にオベチコール酸の結晶形態Ｆで得たＤＳＣ曲線を示す。１２０．０４℃に、この化合物の融点に対応する１つの吸熱転移が検出された。この結果は、高温顕微鏡（ＨＳＭ）によっても確かめられた；３０℃〜２４０℃の温度範囲で観察された固体−液体転移は、１２２〜１２４℃であった。ＤＳＣの出力形状において、形態Ｆで得られたピークの形状および強度は、結晶形態が示す典型的な挙動と一致する。しかしながら、ピークの幅は幾分ブロードである；これは均質な結晶でないことが原因であると考えられる。３０〜３００℃の温度範囲で、熱重量分析（ＴＧＡ）はいかなる重量減少も示さなかった。   FIG. 39 shows a DSC curve obtained with crystal form F of obeticholic acid. At 120.04 ° C., one endothermic transition corresponding to the melting point of this compound was detected. This result was also confirmed by a high temperature microscope (HSM); the solid-liquid transition observed in the temperature range of 30-240 ° C was 122-124 ° C. In the output shape of the DSC, the shape and intensity of the peak obtained with Form F is consistent with the typical behavior exhibited by the crystalline form. However, the peak width is somewhat broad; this is believed to be due to non-homogeneous crystals. In the temperature range of 30-300 ° C., thermogravimetric analysis (TGA) did not show any weight loss.

図４０にオベチコール酸の非結晶性形態１で得たＤＳＣ曲線を示す。７９．９５℃に１つの吸熱転移を観察した。ピークの形状および強度は、非結晶性化合物に期待される挙動と一致する。これらの物質では、固体−液体転移（ガラス転移）に要するエネルギーは、結晶性化合物より少ない。３０〜３００℃の温度範囲で、サーモグラムはいかなる重量減少も示さなかった。   FIG. 40 shows the DSC curve obtained with non-crystalline form 1 of obeticholic acid. One endothermic transition was observed at 79.95 ° C. The shape and intensity of the peak is consistent with the behavior expected for an amorphous compound. These materials require less energy for solid-liquid transition (glass transition) than crystalline compounds. In the temperature range of 30-300 ° C., the thermogram did not show any weight loss.

水溶性
オベチコール酸形態１（非結晶性）および結晶性形態Ｆの水への溶解度を、当該技術分野で知られている手順により測定した。要約していえば、低ｐＨ（ＨＣｌ ０．１ｍｏｌ／Ｌ）で固体を水に懸濁させ、僅かに撹拌しながら２５℃で１週間、放置して平衡化させた。飽和溶液を濾過し、溶液中の化合物の濃度をＨＰＬＣ−ＥＳ−ＭＳ／ＭＳにより測定した。 Water solubility The solubility of obeticholic acid form 1 (non-crystalline) and crystalline form F in water was measured by procedures known in the art. In summary, the solid was suspended in water at low pH (HCl 0.1 mol / L) and allowed to equilibrate for 1 week at 25 ° C. with slight stirring. The saturated solution was filtered and the concentration of the compound in the solution was measured by HPLC-ES-MS / MS.

形態１は、形態Ｆの９．１μｍｏｌ／Ｌより高い溶解度１７．９μｍｏｌ／Ｌを示した。   Form 1 showed a solubility of 17.9 μmol / L higher than that of Form F, 9.1 μmol / L.

オベチコール酸のバイオアベイラビリティのデータによれば、結晶性形態Ｆの方がオベチコール酸形態１（非結晶性）より高い。形態１の投与後に早期の血漿濃度ピークが認められるものの、血漿プロファイルは、形態Ｆがより効率的に吸収され（より高いＡＵＣ）、かつこの薬物が腸内の内容物中に最適に分布していることを反映して、動態もより安定していることを示している。形態１は、Ｃｍａｘが形態Ｆより低い、この早期のピーク、その後の後期の第２のピークを示す。   According to the bioavailability data of obeticholic acid, crystalline form F is higher than obeticholic acid form 1 (non-crystalline). Although an early plasma concentration peak is observed after administration of Form 1, the plasma profile shows that Form F is more efficiently absorbed (higher AUC) and that this drug is optimally distributed in the intestinal contents. This reflects that the dynamics are more stable. Form 1 shows this early peak with a lower Cmax than Form F, followed by a second peak later.

形態１の水への溶解度は、形態Ｆよりも高い。形態Ｆは、熱重量分析（ＴＧＡ）が試験した温度範囲で重量減少を全く示さなかったことから、安定であると思われる。   The solubility of Form 1 in water is higher than that of Form F. Form F appears to be stable because thermogravimetric analysis (TGA) showed no weight loss over the temperature range tested.

これらの結果によれば、形態Ｆは、経口投与の場合に、より効率的に腸に吸収され、肝臓に取り込まれるようである。主たる肝臓の代謝物タウロ抱合体の生成速度は、形態１と比較すると形態Ｆでほぼ２倍であり、腸肝循環および３時間後の血漿中濃度においてより効率的に移動し、かつ蓄積されることを示唆している。   According to these results, Form F appears to be more efficiently absorbed into the intestine and taken up by the liver when administered orally. The production rate of the main liver metabolite Tauro conjugate is almost doubled in Form F compared to Form 1, and migrates and accumulates more efficiently in enterohepatic circulation and plasma concentrations after 3 hours Suggests that.

実施例８：放射能標識したオベチコール酸の調製
以下のスキームにより、放射能標識したオベチコール酸を調製した。
Example 8: Preparation of Radiolabeled Obeticholic Acid Radiolabeled obeticholic acid was prepared according to the following scheme.

ＮＭＲスぺクトルは、外径５ｍｍの管（Ｎｏｒｅｌｌ、Ｉｎｃ．５０７−ＨＰ）に入れたＣＤＣ１３およびＭｅＯＤ−ｄ４の溶液中３０℃で記録し、Ｖａｒｉａｎ ＶＮＭＲＳ−４００により４００ＭＨｚで１Ｈについて収集した。ケミカルシフト（δ）はテトラメチルシラン（ＴＭＳ＝０．００ｐｐｍ）からの相対値であり、ｐｐｍで表した。ＥＳＴ（−）イオン化モードで作動させたＡｃｃｅｌａ−Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｎｎｉｇａｎ ＬＣＱ Ｆｌｅｅｔを用い、Ｉｏｎ−ｔｒａｐ Ｍａｓｓ ＳｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒによりＬＣ−ＭＳ／ＭＳ測定を行った。ＨＰＬＣは、β−Ｒａｍと直列に繋いだＡｇｉｌｅｎｔ １２００シリーズ（カラム：Ｘｔｅｒｒａ ＭＳ Ｃ８、２５０×４．６ｍｍ、５μｍ、４０℃）により測定した。比放射能は、ＬＳＡ（液体シンチレーション分析器、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、Ｔｒｉ−Ｃａｒｂ ２９００ＴＲ）により測定した。 NMR spectra were recorded at 30 ° C. in a solution of CDC1 3 and MeOD-d 4 in a 5 mm outer diameter tube (Norell, Inc. 507-HP) and collected for 1 H at 400 MHz by Varian VNMRS-400. did. The chemical shift (δ) is a relative value from tetramethylsilane (TMS = 0.00 ppm) and is expressed in ppm. LC-MS / MS measurement was performed by Ion-trap Mass Spectrometer using Accela-Thermo Finnigan LCQ Freet operated in EST (−) ionization mode. HPLC was measured with Agilent 1200 series (column: Xterra MS C8, 250 × 4.6 mm, 5 μm, 40 ° C.) connected in series with β-Ram. Specific radioactivity was measured by LSA (liquid scintillation analyzer, Perkin Elmer, Tri-Carb 2900TR).

化合物２Ｘの調製

ジイソプロピルアミン（１．５９ｇ、１５．８ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（６．０ｍＬ）溶液に、−２０℃でｎ−ＢｕＬｉ（６．３０ｍＬ、２．５Ｍ、１５．８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を−２０℃で１時間撹拌した後、−７８℃に冷却し、ＴＭＳＣ１（１．７２ｇ、１５．８ｍｍｏｌ）を加え、続いて乾燥ＴＨＦ（６．０ｍＬ）中の化合物１Ｘ（３．００ｇ、６．２９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を−７８℃で１時間撹拌し、ＮａＨＣＯ３を加えて反応を停止させ、室温で３０分間撹拌した。有機層を分離して真空濃縮し、化合物２Ｘ（３．２９ｇ、９５％）を得、さらなる精製を行わずに次の工程で使用した。 Preparation of Compound 2X

To a solution of diisopropylamine (1.59 g, 15.8 mmol) in dry THF (6.0 mL) was added n-BuLi (6.30 mL, 2.5 M, 15.8 mmol) at −20 ° C. The reaction mixture was stirred at −20 ° C. for 1 hour, then cooled to −78 ° C. and TMSC1 (1.72 g, 15.8 mmol) was added followed by compound 1X (3.00 g in dry THF (6.0 mL)). 6.29 mmol). The reaction mixture was stirred at −78 ° C. for 1 hour, quenched with NaHCO 3 and stirred at room temperature for 30 minutes. The organic layer was separated and concentrated in vacuo to give compound 2X (3.29 g, 95%), which was used in the next step without further purification.

化合物３Ｘの調製

トルエン（１．０ｍＬ）中の［１−１４Ｃ］アセトアルデヒド（３３０ｍＣｉ、５．６３ｍｉｎｏｌ）（［１４Ｃ］ＢａＣＯ３、ＳＡ＝５８．６ｍＣｉ／ｍｍｏｌから調製）と、ＤＣＭ（２．０ｍＬ）中のアセトアルデヒド（１３０ｍｇ、２．９５ｍｍｏｌ）とを−７８℃で混合し、その後、化合物２Ｘ（３．２９ｇ、６．００ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１３．０ｍＬ）溶液に移し、続いて−７８℃でＢＦ３・ＯＥｔ２（１．０５ｇ、７．４０ｍｍｏｌ）を加えた。−７８℃で１時間撹拌した後、反応混合物を３５℃まで加熱し、上記温度で１時間撹拌した。水（１０ｍＬ）を加えて反応を停止させ、ＤＣＭにより水層を抽出し、有機層を一緒にして無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、真空濃縮した。残留物をＳｉＯ２カラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝５：１〜３：１）で精製して、白色固体の化合物３Ｘ（１０２ｍＣｉ、３１％、ＳＡＷ３７．０ｍＣｉ／ｍｍｏｌ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣ１３，Ｖａｒｉａｎ，４００ＭＨｚ）：８ ０．６５（３Ｈ，ｓ）；０．９３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），１．０１（３Ｈ，ｓ），１．０６−１．４９（１２Ｈ，ｍ），１．６２−２．０４（７Ｈ，ｍ），１．６９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），２．１８−２．２８（２Ｈ，ｍ），２．３２−２．４３（２Ｈ，ｍ），２．５８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．８，４．０Ｈｚ），３．６２−３．７０（１Ｈ，ｍ），３．６７（３Ｈ，ｓ），６．１８（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）． Preparation of compound 3X

[1- 14 C] acetaldehyde (330 mCi, 5.63 minol) (prepared from [ 14 C] BaCO 3 , SA = 58.6 mCi / mmol) in toluene (1.0 mL) in DCM (2.0 mL) Acetaldehyde (130 mg, 2.95 mmol) was mixed at −78 ° C. and then transferred to a solution of compound 2X (3.29 g, 6.00 mmol) in DCM (13.0 mL) followed by BF 3 · at −78 ° C. OEt 2 (1.05 g, 7.40 mmol) was added. After stirring at −78 ° C. for 1 hour, the reaction mixture was heated to 35 ° C. and stirred at the above temperature for 1 hour. Water (10 mL) was added to quench the reaction, the aqueous layer was extracted with DCM, the combined organic layers were dried over anhydrous Na 2 SO 4 , filtered and concentrated in vacuo. The residue was purified by SiO 2 column chromatography (hexane: EtOAc = 5: 1 to 3: 1) to give compound 3X (102 mCi, 31%, SAW 37.0 mCi / mmol) as a white solid.
1 H-NMR (CDC1 3 , Varian, 400 MHz): 80.65 (3H, s); 0.93 (3H, d, J = 6.0 Hz), 1.01 (3H, s), 1.06 -1.49 (12H, m), 1.62-2.04 (7H, m), 1.69 (3H, d, J = 6.8 Hz), 2.18-2.28 (2H, m) , 2.32-2.43 (2H, m), 2.58 (1H, dd, J = 12.8, 4.0 Hz), 3.62-3.70 (1H, m), 3.67 ( 3H, s), 6.18 (1H, q, J = 6.8 Hz).

化合物４Ｘの調製

化合物３Ｘ（１０２ｍＣｉ、２．７５ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（６．０ｍＬ）溶液に、室温でＮａＯＨ（２２０ｍｇ、５．５０ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（３．０ｍＬ）溶液を加えた。４５℃で１時間反応混合物を撹拌した後、室温にまで冷却し、減圧下でＭｅＯＨを除去し、Ｈ２Ｏ（１２ｍＬ）で希釈した。水層をＨ３ＰＯ４により酸性化し、ＤＣＭにより抽出し、有機層を真空濃縮した。残留物をＥｔ２Ｏに懸濁させ、沈殿物を濾過により回収して、白色固体の化合物４Ｘ（８６．３ｍＣｉ、８５％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣＩ３，Ｖａｒｉａｎ，４００ＭＨｚ）；８ ０．６３（３Ｈ，ｓ），０．９２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），０．９９（３Ｈ，ｓ），１．０４−１．５０（１３Ｈ，ｍ），１．６１−２．０１（７Ｈ，ｍ），１．６７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．２１−２．２８（２Ｈ，ｍ），２．３５−２．４１（２Ｈ，ｍ），２．５６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．８，４．０Ｈｚ），３．５８−３．６９（１Ｈ，ｍ），６．１６（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）． Preparation of Compound 4X

To a solution of compound 3X (102 mCi, 2.75 mmol) in MeOH (6.0 mL) was added a solution of NaOH (220 mg, 5.50 mmol) in H 2 O (3.0 mL) at room temperature. The reaction mixture was stirred for 1 hour at 45 ° C., then cooled to room temperature, MeOH was removed under reduced pressure and diluted with H 2 O (12 mL). The aqueous layer was acidified with H 3 PO 4, extracted with DCM, and the organic layer was concentrated in vacuo. The residue was suspended in Et 2 O and the precipitate was collected by filtration to give white solid compound 4X (86.3 mCi, 85%).
1 H-NMR (CDCI 3 , Varian, 400 MHz); 8 0.63 (3H, s), 0.92 (3H, d, J = 6.0 Hz), 0.99 (3H, s), 1.04 -1.50 (13H, m), 1.61-2.01 (7H, m), 1.67 (3H, d, J = 7.2 Hz), 2.21-2.28 (2H, m) , 2.35-2.41 (2H, m), 2.56 (1H, dd, J = 12.8, 4.0 Hz), 3.58-3.69 (1H, m), 6.16 ( 1H, q, J = 7.2 Hz).

化合物５Ｘの調製

化合物４Ｘ（８６．３ｍＣｉ、２．３５ｍｍｏｌ）と、０．５ＭのＮａＯＨ（１０ｍＬ、５．０ｍｍｏｌ）水溶液中に５％のＰｄ／Ｃ（１００ｍｇ）を加えた混合物とをＨ２雰囲気（バルーン方式）下、室温で１０時間撹拌し、その後、１００℃で１４時間撹拌した。濾過により触媒を除去し、水で洗浄し、濾液をＨ３ＰＯ４により酸性化した。沈殿物を濾過により回収し、固形分をＥｔＯＡｃに溶解し、塩水で洗浄し、ＳｉＯ２ショートパッドを通して濾過し、真空濃縮した。残留固体をＥｔＯＡｃにより再結晶化して白色固体の化合物５Ｘ（６７．７ｍＣｉ、７８％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ４，Ｖａｒｉａｎ，４００ＭＨｚ）：８ ０．７１（３１１，ｓ），０．７５−０．８４（１Ｈ，ｍ），０．８１（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），０．９２１．０１（１Ｈ，ｍ），０．９６（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），１．０６−１．３８（７Ｈ，ｍ），１．２５（３Ｈ，ｓ），１．４１−１．９６（１２１１，ｍ），２．０１−２．０５（１Ｈ，ｍ），２．１１−２．２４（２Ｈ，ｍ），２．３０−２．３７（１Ｈ，ｍ），２．５０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ），２．８０−２．８５（１Ｈ，ｍ），３．４２−３．４９（１Ｈ，ｍ）． Preparation of compound 5X

Compound 4X (86.3 mCi, 2.35 mmol) and a mixture of 5% NaOH (10 mL, 5.0 mmol) in 5% Pd / C (100 mg) in H 2 atmosphere (balloon system) The mixture was stirred at room temperature for 10 hours, and then stirred at 100 ° C. for 14 hours. The catalyst was removed by filtration, washed with water, and the filtrate was acidified with H 3 PO 4 . The precipitate was collected by filtration and the solid was dissolved in EtOAc, washed with brine, filtered through a SiO 2 short pad and concentrated in vacuo. The residual solid was recrystallized from EtOAc to give compound 5X (67.7 mCi, 78%) as a white solid.
1 H-NMR (MeOD-d 4 , Varian, 400 MHz): 8 0.71 (311, s), 0.75-0.84 (1H, m), 0.81 (3H, t, J = 7. 4 Hz), 0.921.01 (1 H, m), 0.96 (3 H, d, J = 6.4 Hz), 1.06-1.38 (7 H, m), 1.25 (3 H, s) , 1.41-1.96 (1211, m), 2.01-2.05 (1H, m), 2.11-2.24 (2H, m), 2.30-2.37 (1H, m), 2.50 (1H, t, J = 11.4 Hz), 2.80-2.85 (1H, m), 3.42-3.49 (1H, m).

［エチル−１−１４Ｃ］オベチコール酸の調製

２ＭのＮａＯＨ（４．５０ｍＬ、９．００ｍｍｏｌ）水溶液に化合物５Ｘ（６７．７ｍＣｉ、１．８３ｍｍｏｌ）を加えた溶液に、ＮａＢＨ４（４１６ｍｇ、１１．０ｍｍｏｌ）の１１２０（２．０ｍｌ）溶液を８０℃で加えた。反応混合物を１００℃で２時間撹拌した後、水（６．０ｍＬ）を室温で加えＨ３ＰＯ４により酸性化した。水層をＤＣＭで抽出し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で脱水し、ＳｉＯ２ショートパッドを通して濾過し、真空濃縮した。残留物をＳｉＯ２カラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝１：１〜１：３）で精製し、白色固体生成物（４４．０ｍＣｉ、６５％）を得た。生成物（４４．０ｍＣｉ、１．１９ｍｍｏｌ）とオベチコール酸（１２０ｍｇ、０．２８５ｍｍｏｌ）をＥｔＯＡｃ（４ｍＬ）に溶解し、この溶液を５０℃で２時間撹拌し、その後、真空濃縮した。Ｅｔ２Ｏ中に懸濁した残留オイル、すなわち析出物を濾過して回収し、白色固体の［エチル−１−１４Ｃ］オベチコール酸（５６０ｍｇ、３８．５ｍＣｉ、ＳＡ＝２９ｍＣｉ／ｍｍｏｌ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，Ｖａｒｉａｎ，４００ＭＨｚ）：８ ０．６６（３Ｈ，ｓ），０．８８（３１１，ｓ），０．９３（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），０．９３（３Ｈ，ｄ，Ｉ＝６．４Ｈｚ），０．９６−１．０４（１Ｈ，ｍ），１．０８−１．５２（１４Ｈ，ｍ），１．５１−１．６０（１０１１，ｍ），２．２２−２．３０（１１１，ｍ），２．３６−２．４４（１Ｈ，ｍ），３．３８−３．４５（１１１，ｍ），３．７１（ＩＨ，ｓ）．
ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ（ＭＳ：ＬＣＱ Ｆｌｅｅｔ）：ＭＳ計算値：４２１．５６；ＭＳ測定値：４２１．０７［Ｍ−Ｈ］−。
ラジオＴＬＣ：シリカ６０Ｆ２５４のＴＬＣプレートおよび移動相はＥｔＯＡｃ。放射化学的純度９８．９０％、Ｒｆ＝０．６７５
ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ１２００シリーズ）：移動相；アセトニトリル：５ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝３）：ＭｅＯＨ＝４５０：４５０：１００。
放射化学的純度９８．１９％（β−ｒａｍ）、Ｒｔ＝２０．００分。
［エチル−１−１４Ｃ］オベチコール酸は分子式１４Ｃ１Ｃ２５Ｈ４４Ｏ４を有し、ＬＳＣ測定による比放射能２９ｍＣｉ／ｍｍｏｌにおいて分子量４２１．４６を有する。 Preparation of [Ethyl-1- 14 C] obeticholic acid

To a solution of compound 5X (67.7 mCi, 1.83 mmol) in 2M NaOH (4.50 mL, 9.00 mmol) in water was added a solution of NaBH 4 (416 mg, 11.0 mmol) in 1120 (2.0 ml). Added at ° C. After the reaction mixture was stirred at 100 ° C. for 2 hours, water (6.0 mL) was added at room temperature and acidified with H 3 PO 4 . The aqueous layer was extracted with DCM, dried over anhydrous Na 2 SO 4 , filtered through a SiO 2 short pad and concentrated in vacuo. The residue was purified by SiO 2 column chromatography (hexane: EtOAc = 1: 1 to 1: 3) to give a white solid product (44.0 mCi, 65%). The product (44.0 mCi, 1.19 mmol) and obeticholic acid (120 mg, 0.285 mmol) were dissolved in EtOAc (4 mL) and the solution was stirred at 50 ° C. for 2 h before concentrating in vacuo. Residual oil was suspended in Et 2 O, namely collected by filtration the precipitate to obtain [ethyl-1-14 C] obeticholic acid as a white solid (560mg, 38.5mCi, SA = 29mCi / mmol) .
1 H-NMR (CDCl 3 , Varian, 400 MHz): 80.66 (3H, s), 0.88 (311, s), 0.93 (3H, t, J = 7.2 Hz), 0.93 (3H, d, I = 6.4 Hz), 0.96-1.04 (1H, m), 1.08-1.52 (14H, m), 1.51-1.60 (1011, m) 2.22-2.30 (111, m), 2.36-2.44 (1H, m), 3.38-3.45 (111, m), 3.71 (IH, s).
LC-MS / MS (MS: LCQ Freeet): MS calculated: 421.56; MS measured: 421.07 [M−H] − .
Radio TLC: Silica 60F 254 TLC plate and mobile phase EtOAc. Radiochemical purity 98.90%, Rf = 0.675
HPLC (Agilent 1200 series): mobile phase; acetonitrile: 5 mM phosphate buffer (pH = 3): MeOH = 450: 450: 100.
Radiochemical purity 98.19% (β-ram), Rt = 20.00 min.
[Ethyl-1- 14 C] obeticholic acid has the molecular formula 14 C 1 C 25 H 44 O 4 and has a molecular weight of 421.46 at a specific activity of 29 mCi / mmol as measured by LSC.

実施例９．結晶性オベチコール酸の合成
形態Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｆ、Ｇ、およびＩの選択的合成手順を識別し、以下に示した。これらの実験結果を表５に示す。 Example 9 Synthesis of Crystalline Obeticholic Acid A selective synthesis procedure for Forms A, C, D, F, G, and I was identified and presented below. Table 5 shows the results of these experiments.

手順１：冷却、その後の熟成
非晶質オベチコール酸（約３０ｍｇ）を秤量し、ガラス製バイアルに入れ、５０℃に温めた。５０℃で、２体積（６０μｌ）のアセトニトリルを加えた。最初、試料はガムを形成したが、これは溶媒１４体積を加えた後は溶解した。撹拌すると、固体の薄片の沈殿が観察された。０．２５℃／ｍｉｎの直線的冷却速度で、試料を５℃に冷却した。得られた懸濁物をＸＲＰＤにより分析し、熟成させた（５０℃／ＲＴの８時間のサイクルで振盪した）。５日間の熟成後、試料を室温に戻し、ＸＲＰＤで再分析した。 Procedure 1: Cooling and subsequent aging Amorphous obeticholic acid (about 30 mg) was weighed and placed in a glass vial and warmed to 50 ° C. At 50 ° C., 2 volumes (60 μl) of acetonitrile were added. Initially, the sample formed a gum that dissolved after 14 volumes of solvent had been added. Upon stirring, solid flake precipitate was observed. The sample was cooled to 5 ° C. with a linear cooling rate of 0.25 ° C./min. The resulting suspension was analyzed by XRPD and aged (shaken with an 8 hour cycle at 50 ° C./RT). After aging for 5 days, the samples were returned to room temperature and reanalyzed by XRPD.

手順２：冷却
非晶質オベチコール酸（約３０ｍｇ）を秤量してガラス製バイアルに入れ、５０℃に温めた。溶媒を加え（表５の通り）、観察した。試料を５０℃で１時間撹拌し、その後、０．１℃／ｍｉｎの直線的冷却速度で５℃まで冷却した。試料を５℃で２日間撹拌した。固形分を濾過し、空気乾燥し、ＸＲＰＤにより分析した。溶液を冷凍庫で約４８時間保存し、その後、周囲条件に放置して蒸発させた。固体をＸＲＰＤにより分析した。 Procedure 2: Cooling Amorphous obeticholic acid (about 30 mg) was weighed into a glass vial and warmed to 50 ° C. A solvent was added (as shown in Table 5) and observed. The sample was stirred for 1 hour at 50 ° C. and then cooled to 5 ° C. at a linear cooling rate of 0.1 ° C./min. The sample was stirred at 5 ° C. for 2 days. The solid was filtered, air dried and analyzed by XRPD. The solution was stored in a freezer for about 48 hours and then allowed to evaporate by leaving it at ambient conditions. The solid was analyzed by XRPD.

手順３：逆溶媒の添加、その後の冷却
非晶質オベチコール酸（約３０ｍｇ）を秤量してガラス製バイアルに入れ、５０℃に温めた。溶媒を（表５の通り）加えて非晶質物質を溶解し、その後、逆溶媒（ヘプタン、体積は表５の通り）を加えて観察した。試料を５０℃で１時間撹拌し、その後、０．１℃／ｍｉｎの直線的冷却速度で５℃まで冷却した。試料を５℃で２日間撹拌した。固形分を濾過し、空気乾燥し、ＸＲＰＤにより分析した。 Procedure 3: Antisolvent addition followed by cooling Amorphous obeticholic acid (approximately 30 mg) was weighed into a glass vial and warmed to 50 ° C. Solvent was added (as in Table 5) to dissolve the amorphous material, and then an antisolvent (heptane, volume as in Table 5) was added and observed. The sample was stirred for 1 hour at 50 ° C. and then cooled to 5 ° C. at a linear cooling rate of 0.1 ° C./min. The sample was stirred at 5 ° C. for 2 days. The solid was filtered, air dried and analyzed by XRPD.

手順４：熟成
非晶質オベチコール酸（約３０ｍｇ）を秤量してガラス製バイアルに入れ、５０℃に温めた。溶媒を加え（表５の通り）非晶質物質を溶解した。試料を５０℃で１時間撹拌し、その後、熟成させた（５０℃／ＲＴの８時間のサイクルで振盪した）。３日後、固形分を含有する試料を濾過し、空気乾燥してＸＲＰＤで分析した。溶液状試料は、冷却器の上限温度で熟成させ（４０℃／ＲＴの４時間のサイクルで撹拌した、手順４ｂ）、１〜２日後に、生成した固体をＸＲＰＤにより分析した。 Procedure 4: Aging Amorphous obeticholic acid (about 30 mg) was weighed into a glass vial and warmed to 50 ° C. Solvent was added (as in Table 5) to dissolve the amorphous material. The sample was stirred for 1 hour at 50 ° C. and then aged (shaken with an 8 hour cycle at 50 ° C./RT). After 3 days, a sample containing solids was filtered, air dried and analyzed by XRPD. The solution sample was aged at the maximum temperature of the condenser (stirred with a 4 hour cycle at 40 ° C./RT, procedure 4b) and after 1-2 days, the resulting solid was analyzed by XRPD.

手順５：逆溶媒、その後の冷却
非晶質オベチコール酸（約３０ｍｇ）を秤量してガラス製バイアルに入れ、５０℃に温めた。ＭＴＢＥ（９０μｌ、３体積）を加えて非晶質物質を溶解し、その後、逆溶媒（ヘプタン９０μｌ、３体積）を加えて観察した。試料を５０℃で１時間撹拌し、その後、０．２℃／ｍｉｎの直線的冷却速度で２５℃まで冷却した。２５℃で約３０分後に、得られた固形分を濾過し、空気乾燥し、ＸＲＰＤにより分析した。 Procedure 5: Antisolvent followed by cooling Amorphous obeticholic acid (about 30 mg) was weighed into a glass vial and warmed to 50 ° C. MTBE (90 μl, 3 volumes) was added to dissolve the amorphous material, followed by the addition of antisolvent (heptane 90 μl, 3 volumes) and observation. The sample was stirred for 1 hour at 50 ° C. and then cooled to 25 ° C. at a linear cooling rate of 0.2 ° C./min. After about 30 minutes at 25 ° C., the resulting solid was filtered, air dried and analyzed by XRPD.

手順６：熟成
非晶質オベチコール酸（約３０ｍｇ）を秤量し、ガラス製バイアルに入れ、５０℃に温めた。非晶質物質を溶解するためにアニソール（９０μＬ、３体積）を加えた。試料を全部で１７日間熟成した（４０℃／ＲＴの４時間のサイクルで振盪した）。 Procedure 6: Aging Amorphous obeticholic acid (about 30 mg) was weighed and placed in a glass vial and warmed to 50 ° C. Anisole (90 μL, 3 volumes) was added to dissolve the amorphous material. Samples were aged for a total of 17 days (shaken with a 4 hour cycle at 40 ° C./RT).

手順７：冷スラリー
非晶質オベチコール酸（約３０ｍｇ）を秤量してガラス製バイアルに入れ、５℃に冷却した。アセトニトリル／水の混合物（同様に５℃に予冷）を加え、試料を５℃で終夜撹拌した。観察を行い、固形分を濾過し、空気乾燥してＸＲＰＤで分析した。いくつかの固体は大きな塊であり、これらはＸＲＰＤ分析の前に粉砕した。１つの試料は粘着性の固体であったので、５℃で合計１７日間撹拌して硬質の固体塊を生成し、これを粉砕してＸＲＰＤで分析した。 Procedure 7: Cold slurry Amorphous obeticholic acid (about 30 mg) was weighed and placed in a glass vial and cooled to 5 ° C. A mixture of acetonitrile / water (also pre-cooled to 5 ° C.) was added and the sample was stirred at 5 ° C. overnight. Observations were made and the solids were filtered, air dried and analyzed by XRPD. Some solids were large lumps and these were ground before XRPD analysis. Since one sample was a sticky solid, it was stirred at 5 ° C. for a total of 17 days to produce a hard solid mass, which was crushed and analyzed by XRPD.

手順８：冷却
非晶質オベチコール酸（約３０ｍｇ）を秤量し、ガラス製バイアルに入れ、５０℃に温めた。非晶質物質を溶解するために溶媒（表５を参照されたい）を加え、５０℃で１時間試料を撹拌した。０．１℃／ｍｉｎの直線的冷却速度で試料を−２０℃に冷却した。−２０℃で終夜撹拌した後、試料を室温に戻し、得られた固形分を濾過し、空気乾燥してＸＲＰＤにより分析した。 Procedure 8: Cooling Amorphous obeticholic acid (about 30 mg) was weighed and placed in a glass vial and warmed to 50 ° C. Solvent (see Table 5) was added to dissolve the amorphous material and the sample was stirred at 50 ° C. for 1 hour. The sample was cooled to −20 ° C. with a linear cooling rate of 0.1 ° C./min. After stirring at −20 ° C. overnight, the sample was returned to room temperature and the resulting solid was filtered, air dried and analyzed by XRPD.

Ａ．結晶性オベチコール酸形態Ｄの小規模合成
１つの方法では、非晶質オベチコール酸（約３０ｍｇ）を秤量してガラス製バイアルに入れ、５０℃に温めた。メチルイソブチルケトン（９０μＬ）を加え、観察した。試料を５０℃で１時間撹拌し、その後、０．１℃／ｍｉｎの直線的冷却速度で５℃まで冷却した。試料を５℃で２日間撹拌した。固形分を濾過し、空気乾燥しＸＲＰＤにより分析した。溶液を冷凍庫に約４８時間保存し、その後、周囲条件に放置して蒸発させた。固体をＸＲＰＤで分析し、ピークを表６に示す。 A. Small Scale Synthesis of Crystalline Obeticholic Acid Form D In one method, amorphous obeticholic acid (about 30 mg) was weighed into a glass vial and warmed to 50 ° C. Methyl isobutyl ketone (90 μL) was added and observed. The sample was stirred for 1 hour at 50 ° C. and then cooled to 5 ° C. at a linear cooling rate of 0.1 ° C./min. The sample was stirred at 5 ° C. for 2 days. The solid was filtered, air dried and analyzed by XRPD. The solution was stored in the freezer for about 48 hours and then allowed to evaporate upon standing at ambient conditions. The solid was analyzed by XRPD and the peaks are shown in Table 6.

Ｂ．結晶性オベチコール酸形態Ｄの大規模合成
１つの方法では、非晶質オベチコール酸（約１ｇ）を秤量し、大型のガラス製バイアルに入れ、５０℃に温めた。ＭＩＢＫ（２．０ｍｌ、２体積）を５０℃で加え、撹拌すると透明溶液が生成した。試料を５０℃で２時間撹拌し、その後、０．１℃／ｍｉｎの直線的冷却速度で−２０℃まで冷却した。試料を−２０℃で終夜撹拌し、その後、少量の固形分を濾過し、空気乾燥し、ＸＲＰＤにより分析した。残りの試料は、０．４５μｍのＰＴＦＥフィルターを通して濾過した。試料を約３０分間空気乾燥し、その後、真空オーブン中、室温で終夜乾燥した。得られた白色固体は形態Ｄとして特徴付けられた。図４５は結晶性オベチコール酸形態ＤのＸＲＰＤディフラクトグラムである。図４６は結晶性オベチコール酸形態ＤのＴＧＡとＤＳＣサーモグラムのオーバーレイである。図４７は結晶性オベチコール酸形態Ｄを用いたＧＶＳ実験の等温プロットである。図４８は結晶性オベチコール酸形態Ｄを用いたＧＶＳ実験の動態プロットである。 B. Large Scale Synthesis of Crystalline Obeticholic Acid Form D In one method, amorphous oveticholic acid (about 1 g) was weighed and placed in a large glass vial and warmed to 50 ° C. MIBK (2.0 ml, 2 volumes) was added at 50 ° C. and stirred to produce a clear solution. The sample was stirred at 50 ° C. for 2 hours and then cooled to −20 ° C. at a linear cooling rate of 0.1 ° C./min. The sample was stirred at −20 ° C. overnight, after which a small amount of solid was filtered, air dried and analyzed by XRPD. The remaining sample was filtered through a 0.45 μm PTFE filter. The sample was air dried for about 30 minutes and then dried overnight at room temperature in a vacuum oven. The resulting white solid was characterized as Form D. FIG. 45 is an XRPD diffractogram of crystalline obeticholic acid form D. FIG. 46 is an overlay of crystalline obeticholic acid form D TGA and DSC thermograms. FIG. 47 is an isothermal plot of a GVS experiment using crystalline obeticholic acid form D. FIG. 48 is a kinetic plot of a GVS experiment using crystalline obeticholic acid form D.

Ｃ．結晶性オベチコール酸形態Ｆの小規模合成
１つの方法では、非晶質オベチコール酸（約３０ｍｇ）を秤量し、ガラス製バイアルに入れ、５０℃に温めた。非晶質物質を溶解するためにニトロメタンを加えた。試料を５０℃で１時間撹拌し、その後、熟成させた（５０℃／ＲＴの８時間のサイクルで振盪した）。３日後、固形分を含有する試料を濾過し、空気乾燥してＸＲＰＤで分析した。固体をＸＲＰＤで分析し、ピークを表７に示す。 C. Small Scale Synthesis of Crystalline Obeticholic Acid Form F In one method, amorphous obeticholic acid (about 30 mg) was weighed, placed in a glass vial, and warmed to 50 ° C. Nitromethane was added to dissolve the amorphous material. The sample was stirred for 1 hour at 50 ° C. and then aged (shaken with an 8 hour cycle at 50 ° C./RT). After 3 days, a sample containing solids was filtered, air dried and analyzed by XRPD. The solid was analyzed by XRPD and the peaks are shown in Table 7.

Ｄ．結晶性オベチコール酸形態Ｆの大規模合成
１つの方法では、オベチコール酸（約１ｇ）を秤量し、大型のガラス製バイアルに入れ、５０℃に温めた。５０℃でニトロメタン（１５．０ｍｌ、１５体積）を加えると、試料からゴム状の固体ボールが生成した。試料を終夜熟成（５０℃／ＲＴの８時間のサイクルで振盪した）させると、試料は大きい硬質固体の塊と針状粒子の懸濁液になった。固体のいくらかを白色粉末に粉砕し、ＸＲＰＤにより分析した。固体の塊を手動で砕き、さらに２４時間熟成させた。得られた懸濁液の少量を濾過し、空気乾燥し、ＸＲＰＤにより分析した。試料の残りを０．４５μｍのＰＴＦＥフィルターを通して濾過した。試料を約４０分間空気乾燥し、その後、真空オーブン中４０℃で終夜乾燥した。得られた白色固体は形態Ｆとして特徴付けられた。図４９は結晶性オベチコール酸形態ＦのＸＲＰＤディフラクトグラムである。図５０は結晶性オベチコール酸形態ＦのＴＧＡとＤＳＣサーモグラムのオーバーレイである。図５１は形態Ｆを用いたＧＶＳ実験の等温プロットである。図５２は形態Ｆを用いたＧＶＳ実験の動態プロットである。 D. Large Scale Synthesis of Crystalline Obeticholic Acid Form F In one method, obeticholic acid (about 1 g) was weighed and placed in a large glass vial and warmed to 50 ° C. Addition of nitromethane (15.0 ml, 15 vol) at 50 ° C. produced a rubbery solid ball from the sample. When the sample was aged overnight (shaked with an 8 hour cycle at 50 ° C./RT), the sample became a large hard solid mass and a suspension of acicular particles. Some of the solid was ground into a white powder and analyzed by XRPD. The solid mass was crushed manually and aged for an additional 24 hours. A small portion of the resulting suspension was filtered, air dried and analyzed by XRPD. The remainder of the sample was filtered through a 0.45 μm PTFE filter. The sample was air dried for about 40 minutes and then dried overnight at 40 ° C. in a vacuum oven. The resulting white solid was characterized as Form F. FIG. 49 is an XRPD diffractogram of crystalline obeticholic acid form F. FIG. 50 is an overlay of TGA and DSC thermograms of crystalline obeticholic acid form F. FIG. 51 is an isothermal plot of a GVS experiment using Form F. FIG. 52 is a kinetic plot of a GVS experiment using Form F.

Ｅ．結晶性オベチコール酸形態Ｇの小規模合成
１つの方法では、非晶質オベチコール酸（約３０ｍｇ）を秤量し、ガラス製バイアルに入れ、５０℃に温めた。５０℃で、２体積（６０μｌ）のアセトニトリルを加えた。最初、試料はガムを生成したが、これは溶媒１４体積を加えた後は溶解した。撹拌すると、固体の薄片の沈殿が観察された。０．２５℃／ｍｉｎの直線的冷却速度で、試料を５℃に冷却した。得られた懸濁物をＸＲＰＤにより分析し、その後、熟成させた（５０℃／ＲＴの８時間のサイクルで振盪した）。５日間の熟成後、試料を室温に戻し、ＸＲＰＤで再分析した。ピーク群を表８に示す。 E. Small Scale Synthesis of Crystalline Obeticholic Acid Form G In one method, amorphous obeticholic acid (about 30 mg) was weighed, placed in a glass vial, and warmed to 50 ° C. At 50 ° C., 2 volumes (60 μl) of acetonitrile were added. Initially, the sample produced a gum that dissolved after 14 volumes of solvent had been added. Upon stirring, solid flake precipitate was observed. The sample was cooled to 5 ° C. with a linear cooling rate of 0.25 ° C./min. The resulting suspension was analyzed by XRPD and then aged (shaken with an 8 hour cycle at 50 ° C./RT). After aging for 5 days, the samples were returned to room temperature and reanalyzed by XRPD. The peak groups are shown in Table 8.

Ｆ．結晶性オベチコール酸形態Ｇの大規模合成
非晶質オベチコール酸（約１００ｍｇ）を秤量し、ガラス製バイアルに入れ、５０℃に温めた。１００ｍｇ規模の実験を１０件並行して行った。各試料にアセトニトリル（０．５ｍｌ、５体積、５０℃に予め加熱）を加えると、５０℃で放置することにより大部分が溶解する、無色のガムが生成した。各試料には、小規模実験の生成物約１ｍｇを、種として加え、３日間熟成した（５０℃／ＲＴの８時間のサイクルで振盪）。熟成後、試料はバイアルの壁面に結晶を含有し、バイアルの底には、掻き取ると白色粉末になる硬質の固体を含有した。各試料をＸＲＰＤにより分析し、その試料は全て０．４５μｍのＰＴＦＥフィルターを通して濾過し、一緒にした。試料を約３０分間空気乾燥し、その後、真空オーブン中、室温で終夜乾燥した。得られた白色固体（７９５．８ｍｇ）は形態Ｇとして特徴付けられ、同定された。図５３は結晶性オベチコール酸形態ＧのＸＲＰＤディフラクトグラムである。図５４は結晶性オベチコール酸形態ＧのＴＧＡとＤＳＣサーモグラムのオーバーレイである。図５５は形態Ｇを用いたＧＶＳ実験の等温プロットである。図５６は形態Ｇを用いたＧＶＳ実験の動態プロットである。 F. Large Scale Synthesis of Crystalline Obeticholic Acid Form G Amorphous obeticholic acid (about 100 mg) was weighed and placed in a glass vial and warmed to 50 ° C. Ten experiments on a 100 mg scale were conducted in parallel. Acetonitrile (0.5 ml, 5 volumes, preheated to 50 ° C.) was added to each sample to produce a colorless gum that was largely dissolved upon standing at 50 ° C. To each sample, about 1 mg of small scale product was added as a seed and aged for 3 days (shaking with an 8 hour cycle at 50 ° C./RT). After aging, the sample contained crystals on the wall of the vial and the bottom of the vial contained a hard solid that became a white powder upon scraping. Each sample was analyzed by XRPD and all the samples were filtered through a 0.45 μm PTFE filter and combined. The sample was air dried for about 30 minutes and then dried overnight at room temperature in a vacuum oven. The resulting white solid (795.8 mg) was characterized and identified as Form G. FIG. 53 is an XRPD diffractogram of crystalline obeticholic acid form G. FIG. 54 is an overlay of TGA and DSC thermograms of crystalline obeticholic acid form G. FIG. 55 is an isothermal plot of a GVS experiment using Form G. FIG. 56 is a kinetic plot of a GVS experiment using Form G.

Ｇ．結晶性オベチコール酸形態Ｉの小規模合成
１つの方法では、非晶質オベチコール酸（約３０ｍｇ）を秤量してガラス製バイアルに入れ、５℃に冷却した。アセトニトリル／水の混合物（５０／５０、６０μＬ）を加え、試料を５℃で終夜撹拌した。観察を行い、固形分を濾過し、空気乾燥してＸＲＰＤで分析した。いくつかの固体は大きな塊であり、これらはＸＲＰＤ分析の前に粉砕した。１つの試料は粘着性の固体であったので、５℃で合計１７日間撹拌して硬質固体塊を形成し、これを粉砕してＸＲＰＤで分析した。図９にそのピークを示す。 G. Small Scale Synthesis of Crystalline Obeticholic Acid Form I In one method, amorphous oveticholic acid (about 30 mg) was weighed into a glass vial and cooled to 5 ° C. A mixture of acetonitrile / water (50/50, 60 μL) was added and the sample was stirred at 5 ° C. overnight. Observations were made and the solids were filtered, air dried and analyzed by XRPD. Some solids were large lumps and these were ground before XRPD analysis. Since one sample was a sticky solid, it was stirred at 5 ° C. for a total of 17 days to form a hard solid mass, which was crushed and analyzed by XRPD. FIG. 9 shows the peak.

Ｈ．結晶性オベチコール酸形態Ｉの大規模合成
非晶質オベチコール酸（約１ｇ）を秤量し、大型のガラス製バイアルに入れ、５℃に冷却した。アセトニトリル／水混合物（２ｍｌ、５０／５０体積／体積の２体積予備混合物、５℃に予め冷却）を加えると、試料からオフホワイトでゴム状の大きな固体の塊が生成した。試料を５℃で終夜撹拌したところ、硬質白色固体の大きな塊となった。固体の塊を白色粉末に粉砕し、少量を濾過し、空気乾燥してＸＲＰＤにより分析した。試料を５℃でさらに４日間撹拌し、その後、生じた少量の懸濁物を濾過し、空気乾燥し、ＸＲＰＤにより分析した。残りの試料は、０．４５μｍのＰＴＦＥフィルターを通して濾過した。試料を約４０分間空気乾燥し、その後、真空オーブン中、室温で終夜乾燥した。得られた白色固体（９５５．４ｍｇ）を特徴付けした。図５７は結晶性オベチコール酸形態ＩのＸＲＰＤディフラクトグラムである。図５８は結晶性オベチコール酸形態ＩのＴＧＡとＤＳＣサーモグラムのオーバーレイである。図５９は形態Ｉを用いたＧＶＳ実験の等温プロットである。図６０は形態Ｉを用いたＧＶＳ実験の動態プロットである。

H. Large Scale Synthesis of Crystalline Obeticholic Acid Form I Amorphous obeticholic acid (about 1 g) was weighed and placed in a large glass vial and cooled to 5 ° C. Addition of acetonitrile / water mixture (2 ml, 2 volume premix of 50/50 volume / volume, precooled to 5 ° C.) produced a large off-white, gummy solid mass from the sample. The sample was stirred overnight at 5 ° C. and became a large mass of hard white solid. The solid mass was ground into a white powder, a small amount was filtered, air dried and analyzed by XRPD. The sample was stirred for an additional 4 days at 5 ° C., after which a small amount of the resulting suspension was filtered, air dried and analyzed by XRPD. The remaining sample was filtered through a 0.45 μm PTFE filter. The sample was air dried for about 40 minutes and then dried overnight at room temperature in a vacuum oven. The resulting white solid (955.4 mg) was characterized. FIG. 57 is an XRPD diffractogram of crystalline obeticholic acid form I. FIG. 58 is an overlay of crystalline obeticholic acid form I TGA and DSC thermograms. FIG. 59 is an isothermal plot of a GVS experiment using Form I. FIG. 60 is a kinetic plot of a GVS experiment using Form I.

Claims (22)

２θが約５．０度および約５．３度にピークを含む粉末Ｘ線回折パターンによって特徴付けられるオベチコール酸の結晶形態。   A crystalline form of obeticholic acid characterized by a powder X-ray diffraction pattern with peaks at 2θ of about 5.0 degrees and about 5.3 degrees. ２θが約５．０度、約５．３度および約７．７度にピークを含む粉末Ｘ線回折パターンによって特徴付けられる請求項１に記載の結晶形態。   The crystalline form of claim 1 characterized by a powder X-ray diffraction pattern comprising 2θ peaks at about 5.0 degrees, about 5.3 degrees, and about 7.7 degrees. ２θが約５．０度、約５．３度、約７．７度および約１０．０度にピークを含む粉末Ｘ線回折パターンによって特徴付けられる請求項２に記載の結晶形態。   The crystalline form of claim 2 characterized by a powder X-ray diffraction pattern comprising 2θ peaks at about 5.0 degrees, about 5.3 degrees, about 7.7 degrees, and about 10.0 degrees. ２θが約５．０度、約５．３度、約７．７度、約１０．０度および約１１．０度にピークを含む粉末Ｘ線回折パターンによって特徴付けられる請求項３に記載の結晶形態。   4. The powder X-ray diffraction pattern of claim 3, wherein 2θ is characterized by peaks at about 5.0 degrees, about 5.3 degrees, about 7.7 degrees, about 10.0 degrees, and about 11.0 degrees. Crystal form. ２θが約５．０度、約５．３度、約７．７度、約１０．０度、約１１．０度および約１２．４度にピークを含む粉末Ｘ線回折パターンによって特徴付けられる請求項４に記載の結晶形態。   Characterized by a powder X-ray diffraction pattern with peaks at 2θ of about 5.0 degrees, about 5.3 degrees, about 7.7 degrees, about 10.0 degrees, about 11.0 degrees, and about 12.4 degrees The crystal form according to claim 4. ２θが約５．０度、約５．３度、約７．７度、約１０．０度、約１１．０度、約１２．４度および約１４．９度にピークを含む粉末Ｘ線回折パターンによって特徴付けられる請求項５に記載の結晶形態。   Powder X-rays having peaks at 2θ of about 5.0 degrees, about 5.3 degrees, about 7.7 degrees, about 10.0 degrees, about 11.0 degrees, about 12.4 degrees, and about 14.9 degrees 6. Crystal form according to claim 5, characterized by a diffraction pattern. 図４１に実質的に類似した粉末Ｘ線回折パターンによって特徴付けられる請求項１に記載の結晶形態。   42. The crystalline form of claim 1 characterized by a powder X-ray diffraction pattern substantially similar to FIG. 粉末Ｘ線回折パターンは、ＣｕＫα線を用いる回折計で集められる請求項７に記載の結晶形態。   The crystal form according to claim 7, wherein the powder X-ray diffraction pattern is collected by a diffractometer using CuKα rays. 約９６％超の純度を有する請求項１に記載の結晶形態。   The crystalline form of claim 1 having a purity of greater than about 96%. 約９８％超の純度を有する請求項９に記載の結晶形態。   The crystalline form of claim 9 having a purity of greater than about 98%. ６−エチルウルソデオキシコール酸、３α−ヒドロキシ−６α−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−酸、６β−エチルケノデオキシコール酸、３α，７α−ジヒドロキシ−６−エチリデン−５β−コラン−２４−酸、ケノデオキシコール酸、および３α（３α，７α−ジヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−オイルオキシ）−７α−ヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−酸から選択される１種以上の不純物を合計で約４％未満有する請求項１に記載の結晶形態。   6-ethylursodeoxycholic acid, 3α-hydroxy-6α-ethyl-7-keto-5β-cholan-24-acid, 6β-ethylchenodeoxycholic acid, 3α, 7α-dihydroxy-6-ethylidene-5β-chorane-24 One or more selected from acids, chenodeoxycholic acid, and 3α (3α, 7α-dihydroxy-6α-ethyl-5β-cholan-24-oiloxy) -7α-hydroxy-6α-ethyl-5β-cholan-24-acid The crystalline form of claim 1 having a total of less than about 4% of impurities. 前記不純物全体の割合は、約３．８％未満である請求項１１に記載の結晶形態。   The crystalline form of claim 11, wherein the percentage of total impurities is less than about 3.8%. 前記不純物全体の割合は、約３．６％未満である請求項１１に記載の結晶形態。   The crystalline form of claim 11, wherein the percentage of total impurities is less than about 3.6%. Ｄ、Ｆ、ＧおよびＩからなる群から選択されるオベチコール酸の結晶形態。   A crystalline form of obeticholic acid selected from the group consisting of D, F, G and I. 形態Ｄであり、かつ２θが約４．４度、約５．２度および約７．５度にピークを含むＸ線回折パターンによって特徴付けられる請求項１４に記載の結晶形態。   15. The crystalline form of claim 14, wherein said crystalline form is Form D and is characterized by an X-ray diffraction pattern comprising 2θ peaks at about 4.4 degrees, about 5.2 degrees, and about 7.5 degrees. 図４５に示すものに実質的に類似したＸ線回折パターンによって特徴付けられる請求項１５に記載の結晶形態。   The crystal form of claim 15 characterized by an X-ray diffraction pattern substantially similar to that shown in FIG. 形態Ｆであり、かつ２θが約８．０度、約１３．２度および約１３．８度にピークを含むＸ線回折パターンによって特徴付けられる請求項１４に記載の結晶形態。   15. The crystalline form of claim 14, wherein said crystalline form is Form F and is characterized by an X-ray diffraction pattern comprising 2θ peaks at about 8.0 degrees, about 13.2 degrees, and about 13.8 degrees. 図４９に示すものに実質的に類似したＸ線回折パターンによって特徴付けられる請求項１７に記載の結晶形態。   The crystal form of claim 17 characterized by an X-ray diffraction pattern substantially similar to that shown in FIG. 形態Ｇであり、かつ２θが約１２．９度および約１３．４度にピークを含むＸ線回折パターンによって特徴付けられる請求項１４に記載の結晶形態。   15. The crystalline form of claim 14, wherein the crystalline form is characterized by Form G and 2 [theta] includes peaks at about 12.9 degrees and about 13.4 degrees. 図５３に示すものに実質的に類似したＸ線回折パターンによって特徴付けられる請求項１９に記載の結晶形態。   The crystalline form of claim 19 characterized by an X-ray diffraction pattern substantially similar to that shown in FIG. 形態Ｉであり、かつ２θが約７．２度にピークを含むＸ線回折パターンによって特徴付けられる請求項１４に記載の結晶形態。   15. The crystalline form of claim 14, wherein the crystalline form is characterized by an X-ray diffraction pattern that is Form I and that 2θ includes a peak at about 7.2 degrees. 図５７に示すものに実質的に類似したＸ線回折パターンによって特徴付けられる請求項２１に記載の結晶形態。

The crystalline form of claim 21 characterized by an X-ray diffraction pattern substantially similar to that shown in FIG.

JP2018532396A 2015-12-22 2016-01-08 Polymorphic crystal form of obeticholic acid Pending JP2018538331A (en)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US14/979,005 US9982008B2 (en) 2012-06-19 2015-12-22 Preparation and uses of obeticholic acid
US14/979,005 2015-12-22
PCT/US2016/012651 WO2017111979A1 (en) 2015-12-22 2016-01-08 Polymorphic crystalline forms of obeticholic acid

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2018538331A true JP2018538331A (en) 2018-12-27
JP2018538331A5 JP2018538331A5 (en) 2019-02-14

Family

ID=55650649

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2018532396A Pending JP2018538331A (en) 2015-12-22 2016-01-08 Polymorphic crystal form of obeticholic acid

Country Status (15)

Country Link
EP (1) EP3394081A1 (en)
JP (1) JP2018538331A (en)
KR (1) KR20180095070A (en)
CN (1) CN108495858A (en)
AU (1) AU2016375566A1 (en)
BR (1) BR112018012590A2 (en)
CA (1) CA3009149A1 (en)
CL (1) CL2018001720A1 (en)
CO (1) CO2018006701A2 (en)
EA (1) EA201891491A1 (en)
IL (1) IL259998A (en)
MX (1) MX2018007776A (en)
PH (1) PH12018501318A1 (en)
SG (1) SG11201805235XA (en)
WO (1) WO2017111979A1 (en)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105801653B (en) * 2014-12-30 2018-04-17 苏州晶云药物科技有限公司 Crystal form A of shellfish cholic acid difficult to understand and preparation method thereof
WO2018211413A1 (en) * 2017-05-15 2018-11-22 Dr. Reddy’S Laboratories Limited Solid forms of obeticholic acid and process for preparation
CN109280071A (en) * 2017-07-19 2019-01-29 东莞东阳光药物研发有限公司 The crystal form and preparation method thereof of shellfish cholic acid difficult to understand
CN107383139A (en) * 2017-08-09 2017-11-24 杭州和泽医药科技有限公司 The method that a kind of β cholanic acid new derivatives of 7 oxo of 3 α hydroxyls 5 prepare shellfish cholic acid difficult to understand
CZ31099U1 (en) * 2017-09-05 2017-10-17 Zentiva, K.S. The crystalline forms of (3α,5β,6α,7α)-6-ethyl-3,7-dihydroxycholan-24-oic acid
CN109485687A (en) * 2017-09-12 2019-03-19 成都弘达药业有限公司 The crystal form J and preparation method thereof of shellfish cholic acid difficult to understand
WO2019106043A1 (en) 2017-11-29 2019-06-06 Hexal Ag Pharmaceutical composition comprising obeticholic acid
GB201812382D0 (en) 2018-07-30 2018-09-12 Nzp Uk Ltd Compounds
CN113264972A (en) * 2020-02-14 2021-08-17 四川科伦药物研究院有限公司 Method for preparing obeticholic acid

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2015521621A (en) * 2012-06-19 2015-07-30 インターセプト ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド Preparation, use and solid form of obeticholic acid

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ITMI20050912A1 (en) * 2005-05-19 2006-11-20 Erregierre Spa PROCESS OF PREPARATION OF ACIDS 3-A-YA (B) -DIDROSSI-6-A (B) -ALCHIL-5B-COLANICI
WO2016045480A1 (en) * 2014-09-28 2016-03-31 上海源力生物技术有限公司 Method for preparing obeticholic acid
CA2968309A1 (en) * 2014-11-19 2016-05-26 NZP UK Limited 6-alkyl-7-hydroxy-4-en-3-one steroids as intermediates for the production of steroidal fxr modulators
WO2016079520A1 (en) * 2014-11-19 2016-05-26 Dextra Laboratories Limited 6.alpha.-alkyl-6,7-dione steroids as intermediates for the production of steroidal fxr modulators
CA2968301C (en) * 2014-11-19 2023-05-16 NZP UK Limited 5.beta.-6-alkyl-7-hydroxy-3-one steroids as intermediates for the production of steroidal fxr modulators
TWI686401B (en) * 2014-11-19 2020-03-01 英商Ｎｚｐ英國有限公司 Compounds

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2015521621A (en) * 2012-06-19 2015-07-30 インターセプト ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド Preparation, use and solid form of obeticholic acid

Also Published As

Publication number Publication date
WO2017111979A1 (en) 2017-06-29
BR112018012590A2 (en) 2018-12-04
SG11201805235XA (en) 2018-07-30
CA3009149A1 (en) 2017-06-29
IL259998A (en) 2018-07-31
KR20180095070A (en) 2018-08-24
PH12018501318A1 (en) 2019-02-18
CL2018001720A1 (en) 2018-08-10
AU2016375566A1 (en) 2018-07-05
CN108495858A (en) 2018-09-04
CO2018006701A2 (en) 2018-07-10
EP3394081A1 (en) 2018-10-31
EA201891491A1 (en) 2018-11-30
MX2018007776A (en) 2018-08-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6877389B2 (en) Preparation, use and solid form of obeticholic acid
JP2018538331A (en) Polymorphic crystal form of obeticholic acid
US9982008B2 (en) Preparation and uses of obeticholic acid

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20181226

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20181226

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20191018

A02 Decision of refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02

Effective date: 20200520