JP2018504395A - 血小板の分離方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本願において、血小板の分離方法、例えば臍帯血から血小板を分離する方法が提供される。特定の実施形態において、本願により提示される方法には、多血小板血漿(PRP)の調製が含まれる。
血小板は、血液の正常な細胞成分である。血小板は、非常に小さいが、潜在的に有益な特性を有する多数の因子、例えば成長因子をもたらす様々なタイプの小胞を含むことが知られている。
一の態様において、血液から血小板を分離するための方法が本願により提供される。特定の実施形態において、臍帯血、例えばヒト臍帯血から血小板を分離する方法が本願により提示される。分離された血小板は、自家または同種異系の設定において、例えば、創傷治癒、臓器修復および/または臓器再生、および/または組織修復および/または組織再生の方法を含む様々な用途に使用することができる。
本願において、「約」という語は、記載された数値に言及する場合、言及された数値の上下10%以内の値を示す。
4.1 血小板および多血小板血漿を得る方法
一の態様において、血液から血小板を分離する方法が本願により提供される。特定の実施形態において、臍帯血、例えばヒト臍帯血、または胎盤、例えばヒト胎盤、例えば胎盤灌流液から血小板を分離するための方法が本願により提示される。
他の実施形態においては、PRP中の血小板を、例えば遠心分離によって血漿の残部から分離し、将来の使用のために凍結乾燥する前に緩衝液中に再懸濁する。凍結乾燥された血小板は、例えば、低温保存してもよい。別の例においては、凍結乾燥された血小板を真空下で室温保存してもよい。
特定の実施形態においては、PRPは保存前に緩衝される。別の実施形態においては、PRP中の血小板を、例えば遠心分離によって血漿の残部から分離し、貯蔵の前に凍結保存、例えば凍結保存に適した緩衝液中に再懸濁する。
特定の態様においては、本願に提示される方法によって得られた、分離されたPRPを含む組成物が、本願により提供される。いくつかの実施形態においては、本願により提供される組成物は、PRPを生成するために使用される全血、例えば未処理全血中の血小板の濃度よりも少なくとも1.1倍高い濃度の血小板細胞を有するPRPを含む。いくつかの実施形態において、本願により提供される組成物は、PRPを生成するために使用される全血、例えば未処理全血中の血小板の濃度よりも約1.1倍〜約10倍高い濃度の血小板細胞を有するPRPを含む。いくつかの実施形態において、本願により提供される組成物は、PRPを生成するために使用される全血、例えば未処理全血中の血小板の濃度よりも約1.5,2.0,2.5,3.0,3.5,4,4.5,5,5.5,6,6.5,7,7.5,8,8.5,9,9.5,10倍または10倍を超える濃度の血小板細胞を有するPRPを含む。
種々の実施形態において、多血小板血漿に対する胎盤幹細胞の容積比は、約10:1から1:10の間であればよい。
本願に記載のようにして得られたPRPまたは分離された血小板と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物も本願により提供される。さらに、PRPまたは分離された血小板と、選択的に幹細胞、例えば胎盤幹細胞と、本願に記載の組成物の組み合わせと、薬学的に許容される担体とを含む組成物の医薬組成物も本願により提示される。
一の実施形態において、例えば、本願に記載のようにして得られたPRPまたは分離された血小板は、薬学的に許容される担体を含む注射可能剤(例えば、その全体が参照により本願に組み入れられるWO96/39101号公報を参照)として配合してもよい。一の実施形態において、例えば、本願に記載のようにして得られたPRPまたは分離された血小板を含む本願により提示される組成物は、注射可能なものとして配合してもよい(例えば、WO96/39101号公報参照)。別の実施形態において、本願により提示される組成物は、例えば、米国特許第5,709,854号公報、米国特許第5,516,5324号公報、米国特許第5,654,381号公報に記載されているような重合性または架橋性ヒドロゲルと薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を用いて配合してもよい。
本願により提供される医薬組成物は、例えば、個体へTBF−αの活性を調節する化合物を投与する前に適用してもよい。このような化合物は、例えば、米国特許出願公開第2003/0235909号公報に詳細に開示されており、その開示全体が本願に組み込まれる。
特定の態様において、本願により提供されるPRP、分離された血小板および組成物は、個体における疾患、障害または医学的状態を治療する際に有用である。例えば、PRP、分離された血小板または本願により提供される組成物を、創傷治癒を必要とする個体に投与することを含む、創傷治癒を促進する方法が本願により提供される。別の例においては、本願により提供される組成物を、組織または器官の修復または再生を必要とする個体に投与することを含む、組織または器官の修復または再生の促進を促進する方法が本願により提供される。特定の実施形態においては、本願により提供されるPRP、分離された血小板または組成物を、骨の修復または再生を必要とする個体に投与することを含む、骨の修復または再生の方法が本願により提供される。
本願に開示された組成物および方法は、本願に記載の特定の実施形態によって範囲が限定されるものではない。本願に実際に記載されたものに加えて、組成物および方法の様々な改変は、上記の説明および添付の図面から当業者には明らかであろう。このような改変は、添付の特許請求の範囲に記載の請求項に係る発明の範囲内に入ることが意図される。
Claims (37)
- 血液から血小板を分離する方法であって、血漿から赤血球を除去すること、および、血漿から白血球を分離することを含む方法。
- 赤血球は血液を遠心分離することによって除去される、請求項1に記載の方法。
- 赤血球は血漿容量拡張剤を血液中に導入することによって除去される、請求項2に記載の方法。
- 血漿容量拡張剤を血液に導入した後に赤血球が自発的に沈降する、請求項3に記載の方法。
- 血漿容量拡張剤を血液に導入した後に赤血球が遠心分離によって沈降する、請求項3に記載の方法。
- 前記血漿容量拡張剤が、ヘタスターチまたはペンタスターチである、請求項3〜5のいずれか1項に記載の方法。
- 血漿中の血小板から白血球を分離するために十分な時間、前記血漿を遠心分離し、これによって多血小板血漿(PRP)を生成する、請求項1〜6のいずれか1項に記載の方法。
- 血漿を約200xG〜約500xGで遠心分離する、請求項7に記載の方法。
- 血漿を約300xG〜約400xGで遠心分離する、請求項7または8に記載の方法。
- 血漿を約5分〜約30分間遠心分離する、請求項7〜9のいずれか1項に記載の方法。
- 血漿を約10分〜約30分間遠心分離する、請求項10に記載の方法。
- 血漿を約10分〜約20分間遠心分離する、請求項11に記載の方法。
- 血漿を約10分〜約15分間遠心分離する、請求項12に記載の方法。
- 血液から血小板を分離する方法であって、血液を約100xG〜約500xGで、約10分〜約30分間遠心分離し、これによりPRPを生成することを含む方法。
- 血液を約100xG〜約200xGで遠心分離することを含む、請求項14に記載の方法。
- 血液を約20分〜約25分間、遠心分離することを含む、請求項14または15に記載の方法。
- PRPを緩衝するステップをさらに含む、請求項7〜16のいずれか1項に記載の方法。
- PRPを低温保存することをさらに含む、請求項7〜17のいずれか1項に記載の方法。
- PRPを凍結することは、PRPを凍結することを含む、請求項18に記載の方法。
- PRPを凍結乾燥することは、PRPを凍結乾燥することを含む、請求項18に記載の方法。
- 凍結乾燥されたPRPを真空下で室温保存するステップをさらに含む、請求項20に記載の方法。
- 血小板をペレット化するために約500xG〜約4000xGで約20分〜約60分間、PRPを遠心分離すること、および、得られた上清を除去することをさらに含む、請求項7〜16のいずれか1項に記載の方法。
- PRPを約2000xG〜約4000xGで約10分〜約20分間、遠心分離し、血小板をペレット化すること、および、得られた上清を除去することを含む、請求項22に記載の方法。
- PRPを約2000xGで約15分間、遠心分離することを含む、請求項23の方法。
- 血小板を緩衝液中に再懸濁することをさらに含む、請求項22〜24のいずれか1項に記載の方法。
- 血小板を凍結保存することをさらに含む、請求項22〜25のいずれか1項に記載の方法。
- 血小板を凍結保存することは、血小板を凍結することを含む、請求項26に記載の方法。
- 血小板を凍結保存することは、血小板を凍結乾燥することを含む、請求項26に記載の方法。
- 凍結乾燥血小板を真空下で室温保存することをさらに含む、請求項28に記載の方法。
- 血液が臍帯血である、請求項1〜6のいずれか1項に記載の方法。
- 臍帯血がヒト臍帯血である、請求項31に記載の方法。
- 血液が胎盤由来である、請求項1〜6のいずれか1項に記載の方法。
- 血液がヒト胎盤由来である、請求項32に記載の方法。
- 血液が臍帯血である、請求項14〜16のいずれか1項に記載の方法。
- 臍帯血がヒト臍帯血である、請求項34に記載の方法。
- 血液が胎盤由来である、請求項14〜16のいずれか1項に記載の方法。
- 血液がヒト胎盤由来である、請求項36に記載の方法。
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