JP2018501264A - 肥満主体のためのリンパ排出用組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
免疫系を維持し、調節する;
液体の恒常性を維持するために細胞外液を吸収し、再循環させる;
巨大分子を輸送する。
リンパ浮腫は、間質組織におけるリンパ液の蓄積であり、特に腕および脚のような四肢の重度の腫れを引き起こし、まれに体の他の部分の腫れも引きこす。リンパ浮腫は、原発性、すなわちリンパ系自体の変化によって引き起こされ得るか、または2次的に、***組織の除去に加えて、サテライトリンパ節も切除される乳腺切除など、外科的介入後のリンパ節の除去によって引き起こされ得る。
末梢微小血管障害は、リンパ浮腫組織に発生し、細胞外マトリックスで高いタンパク質含有量を有する液体の蓄積で血管の透過性の上昇を誘発する。液体の蓄積は、プレリンパチャネルの拡張を誘発し、その流出を減少させる。リンパ毛細管の形態学的および機能的変化、例えば、微小動脈瘤の形成も、経験される。
解剖学的異常、病変、閉塞または感染によって引き起こされるリンパ管不全は、病変組織における間質液およびタンパク質および脂質の蓄積を引き起こす。
1 慢性炎症は、シグナル伝達事象中に免疫細胞の活性化によって引き起こされる基本的なエネルギーの必要性を満たすために、脂肪組織質量の上昇を促進することがあり、
2 慢性炎症は、リンパ管形成の刺激によってより大きな脂肪生成を促進し、罹患した脂肪組織のリンパの放出を悪化させることがある。
肥満の対象は、状態を悪化させる体液を蓄積する傾向があり、リンパ排液の低下およびリンパ管および血管の透過性が上昇し、それに伴い、その後に細胞外マトリックスの劣化、炎症および肥満者に存在するレニン−アンジオテンシン−アルドステロン系の障害も介して、腎臓からのNa+の***の低下をもたらすことがこのスキームから明らかである。
i)血管およびリンパ管の透過性といった組織の炎症を呈する、肥満者の血管およびリンパ管の透過性に作用して、リンパ系からおよび循環系からの体液の漏出(すなわち、生理学的排出と比較して過剰な排出)を減少させ、それによってリンパ管内皮を生理的状態に戻す;
ii)リンパ系における適切なチャネリングを回復させ、その中の体液および炎症性分子の適切な再吸収を可能にし、その結果、リンパ管脂肪生成に関連する悪循環も減少させる;
iii)利尿効果を有する
組成物を提供する。
タラクサクム・オフィシナリス(Taraxacum officinalis)、ソバ(Fagopyrum esculentum)、ナギイカダ(Ruscus aculeatu)、ソリダゴ・ヴィルガウレア(Solidago virgaurea)およびクミスクチン(Orthosiphon stamineus)の抽出物からなる混合物、並びに
タラクサクム・オフィシナリス(Taraxacum officinalis)、ソバ(Fagopyrum esculentum)、ナギイカダ(Ruscus aculeatu)、ソリダゴ・ヴィルガウレア(Solidago virgaurea)およびクミスクチン(Orthosiphon stamineus)、並びにタラクサクム・オフィシナリス(Taraxacum officinalis)、ソバ(Fagopyrum esculentum)、ナギイカダ(Ruscus aculeatu)、ソリダゴ・ヴィルガウレア(Solidago virgaurea)およびクミスクチン(Orthosiphon stamineus)の抽出物からなる混合物に関する。
本発明はまた、唯一の有効成分として、タラクサクム・オフィシナリス(Taraxacum officinalis)、ソバ(Fagopyrum esculentum)、ナギイカダ(Ruscus aculeatu)、ソリダゴ・ヴィルガウレア(Solidago virgaurea)およびクミスクチン(Orthosiphon stamineus)の抽出物からなる混合物と、少なくとも1つの賦形剤または添加剤とを含む組成物に関する。
FBSウシ胎仔血清、COX−2シクロオキシゲナーゼ2、eNOS内皮一酸化窒素シンターゼ、HDLECヒト皮膚リンパ管内皮細胞、HDBECヒト皮膚血液内皮細胞、iNOS誘導性一酸化窒素シンターゼ、IL−1βインターロイキンβ、L−NMMAL−NG−モノメチルアルギニン、ROS活性酸素種、SOD−1スーパーキシドジムスターゼ1、TNFα腫瘍壊死因子α、ZO−1密着帯1。
本発明者らは、利尿作用(例えば、タラクサクム・オフィシナリス(Taraxacum officinalis)、ソバ(Fagopyrum esculentum))、またはリンパ管(lymphangion)の基底単位の収縮を誘導する活性(例えば、ナギイカダ(Ruscus aculeatu)などの所望の活性を有する様々な植物のリンパ管および血管の透過性についての効果を評価するために、(炎症性脂肪細胞によって生成された肥満者に存在するリンパ管および血管などの)炎症剤に曝露されリンパ管および血管の細胞モデルを使用した。
i)血管およびリンパ管といった組織の炎症を呈する肥満者の血管およびリンパ管の透過性に作用して、リンパ系からのおよび循環系からの体液の漏出(すなわち、生理学的排出と比較して過剰な排出)を軽減し;
ii)リンパ系における適切なチャンネリングを回復させ、体液およびその中の炎症性分子の適切な再吸収を可能にし、続いてリンパ脂質生成に関連する悪循環も減少させ;
iii)利尿作用を有し
且つ、同時に、特にリンパ管内皮の透過性に関して、本発明の混合物を形成する植物の単一抽出物に関連する望ましくない副作用を有しない。
植物の部分は、新鮮であることも、または乾燥されていることもある。
上記抽出物のそれぞれは、凍結乾燥形態であってもよい。
ソリダゴ・ヴィルガウレア(Solidago virgaurea)およびクミスクチン(Orthosiphon stamineus)は、好ましくは1:1、2:1または3:1または4:1、より好ましくは3:1の比である。
さらなる態様において、活性成分は、上記に示したような植物の混合物および上記に示したような抽出物の混合物を含み得る。
本発明の明細書において「6%〜12%」と記載されている場合、これは、記載の任意のポイントで、および混合物または混合物を含む組成物の任意の実施形態において:6%;6.5%;7%;7.5%;8%;8.5%;9%;9.5%;10%;10.5%;11%;11.5%;12%;およびそれらの間に含まれる他の小数も意味する。
さらなる態様によると、本発明の組成物は、局所使用に適しており、したがって、液体、気化可能な溶液、クリーム、軟膏、ゲル、エマルションの形態であり得る。
本発明の組成物の態様の非限定的な例およびその投与のための適切な用量の非限定的な例を、本明細書で提供する。
液体、単回投与約10〜20g
あるいは、上記組成物は、約3:1の比でソリダゴ・ヴィルガウレア(Solidago virgaurea)の抽出物とクミスクチン(Orthosiphon stamineus)の抽出物の混合物を含み得る。
使用された植物の大まかに刻まれた部分、1.5〜2.5gの単回投与による注入によって調製される。
上記組成物中の天然香味料および/または保存量は、例えば、オレンジピール、甘草根、レモンピールからの1つ以上であることができる。
そのような生成物の1日用量は、1.5〜2.5gに等しい。
経口固体(粉末、顆粒、カプセル、錠剤)の形態で、80〜100mgの単回投与。
そのような生成物の1日用量は、1.0〜1.4gに等しい。
詳細な材料と方法
細胞培養
商業的供給源から得られるリンパ管内皮細胞(腸)および血管(PromoCell、ドイツから入手可能な「ヒト皮膚リンパ管内皮細胞(HDLEC)」および「ヒト皮膚血管内皮細胞(HDBEC)」)を使用した。細胞を培養し、完全内皮細胞基礎培地MV2(Promocell、Heidelberg、ドイツ)で、37℃で、CO25%で、FBS10%でベンダーによって推奨されるように培養を維持し、1週間に2回、10回目まで1:3に分けた。
サンプルが損傷を受けていない細胞上でサンプル自体においてなんらかの効果を有するか、および試験された物質がIL1βによって誘導される透過性の上昇を逆転させることができるかを理解するために、サンプルを、未処理および1L1β(10ng/ml)で処理された細胞培養上で、2〜3濃度対賦形剤で評価した。
したがって、各細胞培養物および各抽出物について、評価されるべき点は、次の通りである:未処理対照、賦形剤を有する対照、抽出物用量A、抽出物用量B、IL1β、IL1β+用量A、IL1β+用量B、それぞれを3回繰りかえした。
完全培地(10%血清)を有するプレートに保持された内皮細胞を、トリプシン/EDTAで分離し、トランスウェルプレートに、8×104細胞/トランスウェルの密度で、12ウェルマルチプレートに収容される0.4ミクロンの直径を有する孔を有するPETにプレートした。細胞を72時間増殖させて、倒立顕微鏡下で評価されることができる完全な単層を形成させた。コンフルエンスに到達したら、培地を除去し、抽出物を18時間添加した。細胞培地を変更せずに、IL1β(10ng/ml、1時間)を、プロトコルに示されているところに添加した。刺激時間が経過したら、培地を除去し、500μlのFITCH−デキストラン(3kDa、PBS中で希釈された10μM)をトランスウェル中で添加し、1.5mlのPBSを、下のマルチプレートのウェルに導入した。15分後ごとに、100μl×3(三重)を、マルチプレートのウェルからサンプリングし、蛍光分光光度計測定値を採った(485nm励起、535nm発光)。これは、内皮細胞によって形成されるバリアを通過したFITC−デキストランを測定することを可能にする。結果は、測定された蛍光の相対値として表される。
試験はまた、本発明に係る抽出物の混合物で実施された。
動物を、代謝ケージ(3匹マウス/ケージ)に入れ、食物および飲料水(市販のオリゴミネラルウォーター)に自由に接近させることを可能にした。水和の同様の生理学的状態を得るために、2.5%体重のオリゴミネラルウォーターのチューブによる栄養補給を、実験の2時間前の動物の全ての群に投与した。
1.Untr:未処理群
2.H2O:100μl/マウスのオリゴミネラルH2Oを、t=0で胃グローブによって投与した(陰性対照)
3.フロセミド:100μl/マウスのフロセミドを、t=0で胃グローブによってオリゴミネラルウォーター中で10mg/kgで投与した(陽性対照)
4.ゴールデンロッド:100μl/マウスのゴールデンロッド抽出物(オリゴミネラルウォーター中200mg/kg体重)を、t=0で胃グローブによって投与した
5.クミスチン(Orthosiphon):クミスチン(Orthosiphon)の抽出物の100μl/マウス(オリゴミネラルウォーター中200mg/kg体重)を、t=0で投与した
6.ゴールデンロッド:クミスチン(Orthosiphon)(3:1):100μl/マウスの共抽出物ゴールデンロッド+クミスチン(Orthosiphon)(オリゴミネラルウォーター中200mg/kg体重)を、t=0で胃グローブによって投与した。
動物の体重とは独立して、尿排出量を、総利尿を投与された総液体量で割ったものとして計算した。
尿排出量=総利尿の体積(ml/100g体重)/消費された総液体
未処理マウスにおける尿排出量は約1.9mlであり、オリゴミネラルウォーターのみで処理されたマウスにおいて、それは約2.25mlであり、10mg/kgのフロセミド処理されたマウスにおいて、それは約3.9mlであった。
ROS分析を、96ウェルプレートでHDLEC細胞1.5×103を置くことによって実施し、前記細胞を、接着後、18時間、本発明の混合物の10μg/mlで、次に、フェノールレッドなしの培地でIL−1β(1時間10ng/ml)で前処理した。DCFH2−DA(2.7−ジクロロジヒドロフルオレセインジアセテートInvitrogen, Milan、イタリア)を30分間、10μMの量で加え、ROSの細胞レベルを、マイクロプレートリーダー(励起/発光 495/527、SpectraFluor、Tecan)を使用して、光度的に評価した。結果を、接触した細胞の数に対して補正されたRFU(相対蛍光単位)として記録した。
細胞表面上に発現される閉塞密着および密着帯1(ZO−1)のタンパク質を、共焦点分析を使用して視覚化した。細胞を、1cmの円形ガラススライド上に5×104置いた。24時間後、細胞を洗浄し、上記の刺激で処理した。免疫蛍光分析を、Montiら、Pharmacol Res 2013; 76:171−81の材料および方法で報告されるように実施した。
細胞(3×105/プレート6cm)、90%コンフルエンスを、本発明の混合物(10μg/ml、18時間)で処理または処理しなかった。炎症経路(iNOS、eNOS、COX−2)のマーカーの発現および抗酸化剤/酸化促進剤酵素系(SOD−1、カタラーゼ、p22 phox)のマーカーの発現を、Terzuoliら、2014年の材料および方法で記載されるように、ウエスタンブロット法によって評価した。PLoS One 9:e84358、Montiら、2014年 J PharmacolExp Ther.;351(3):500−9。データを、対照として使用したβ−アクチンと比較して、標的タンパク質の任意の濃度単位(A.D.U.)として記録した。
細胞培養のための試薬、すなわち、ルチンおよびL−NMMAは、Sigma Aldrich(St. Louis, MO, USA)であった。ウシ胎仔血清は、Hyclone(Euroclone, Milan, イタリア)であった。3kDaのFITC−デキストランは、Life Technologies(Carlsbad, CA, USA)であった。抗ZO−1および抗e−NOSは、BD Transduction Laboratories, Milan, イタリアであった。抗オクルディンは、Zymed− Life Technologies(Carlsbad, CA, USA)であった。抗iNOSおよび抗p22 phoxは、Santa Cruz Biotechnology, Inc. (Dallas, TX, USA)であった。抗COX−2は、Cayman Chemical Company (Ann Arbor, MI, USA)であった。抗SOD−1は、Millipore (Temecula, CA, USA)であった。抗カタラーゼおよび抗βアクチンは、Sigma−Aldrich (St. Louis, MO, USA)であった。
結果を、各サンプルについて3回実施した少なくとも3つの独立した実験を代表するか、または平均した。統計分析を、ANOVA検定、続いて適切な場合にはボンフェローニ検定およびstudentのt検定を使用して行った(GraphPad)。P<0.05は、統計的に有意であると考えられた。
Claims (17)
- タラクサクム・オフィシナリス(Taraxacum officinalis)、ソバ(Fagopyrum esculentum)、ナギイカダ(Ruscus aculeatu)、ソリダゴ・ヴィルガウレア(Solidago virgaurea)およびクミスクチン(Orthosiphon stamineus)または前記植物の抽出物、または前記植物および前記植物の抽出物からなる混合物。
- 前記タラクサクム・オフィシナリス(Taraxacum officinalis)は、前記混合物の12%〜33%からなり、前記ソバ(Fagopyrum esculentum)は、前記混合物の12〜25%からなり、前記ナギイカダ(Ruscus aculeatu)は、前記混合物の6%〜25%からなり、前記ソリダゴ・ヴィルガウレア(Solidago virgaurea)および前記クミスクチン(Orthosiphon stamineus)は、全体として、前記混合物の35%〜55%からなる、請求項1に記載の混合物。
- 前記タラクサクム・オフィシナリス(Taraxacum officinalis)の抽出物は、前記混合物の23%〜33%からなり、前記ソバ(Fagopyrum esculentum)の抽出物は、前記混合物の12〜25%からなり、前記ナギイカダ(Ruscus aculeatu)の抽出物は、前記混合物の6%〜25%からなり、前記ソリダゴ・ヴィルガウレア(Solidago virgaurea)および前記クミスクチン(Orthosiphon stamineus)の抽出物は、全体として、前記混合物の35%〜55%からなる、請求項1または2いずれかに記載の混合物。
- リンパ管過透過性に関連する病状の治療における使用のための請求項1〜3のいずれか一項に記載の混合物。
- 前記病状は、リンパ管内皮の完全性の統制逸脱(deregulation of the integrity)を示す、請求項4に記載の使用のための混合物。
- 前記病状は、特に肥満に関連する、慢性炎症、リンパ浮腫、脂肪性浮腫、および水分保持病理から選択される、請求項5に記載の使用のための混合物。
- 唯一の有効成分として、
タラクサクム・オフィシナリス(Taraxacum officinalis)、ソバ(Fagopyrum esculentum)、ナギイカダ(Ruscus aculeatu)、ソリダゴ・ヴィルガウレア(Solidago virgaurea)およびクミスクチン(Orthosiphon stamineus)、またはタラクサクム・オフィシナリス(Taraxacum officinalis)、ソバ(Fagopyrum esculentum)、ナギイカダ(Ruscus aculeatu)、ソリダゴ・ヴィルガウレア(Solidago virgaurea)およびクミスクチン(Orthosiphon stamineus)の抽出物からなる混合物、或いは
タラクサクム・オフィシナリス(Taraxacum officinalis)、ソバ(Fagopyrum esculentum)、ナギイカダ(Ruscus aculeatu)、ソリダゴ・ヴィルガウレア(Solidago virgaurea)およびクミスクチン(Orthosiphon stamineus)並びにタラクサクム・オフィシナリス(Taraxacum officinalis)、ソバ(Fagopyrum esculentum)、ナギイカダ(Ruscus aculeatu)、ソリダゴ・ヴィルガウレア(Solidago virgaurea)およびクミスクチン(Orthosiphon stamineus)の抽出物からなる混合物と、
少なくとも1つの担体および/または1つの添加剤とを含む組成物。 - 前記タラクサクム・オフィシナリス(Taraxacum officinalis)は、前記混合物の12%〜33%からなり、前記ソバ(Fagopyrum esculentum)は、前記混合物の12〜25%からなり、前記ナギイカダ(Ruscus aculeatu)は、前記混合物の6%〜25%からなり、前記ソリダゴ・ヴィルガウレア(Solidago virgaurea)およびクミスクチン(Orthosiphon stamineus)は、全体として、前記混合物の35%〜55%からなる、請求項7に記載の組成物。
- 前記タラクサクム・オフィシナリス(Taraxacum officinalis)の抽出物は、前記混合物の23%〜33%からなり、前記ソバ(Fagopyrum esculentum)の抽出物は、前記混合物の12〜25%からなり、前記ナギイカダ(Ruscus aculeatu)の抽出物は、前記混合物の6%〜12%からなり、前記ソリダゴ・ヴィルガウレア(Solidago virgaurea)および前記クミスクチン(Orthosiphon stamineus)の抽出物は、全体として、前記混合物の35%〜55%からなる、請求項7または8のいずれかに記載の組成物。
- 少なくとも1つの天然香味料および/または1つの天然防腐剤をさらに含む、請求項7〜9のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記少なくとも1つの担体または添加剤は、経口投与または局所投与に適している、請求項10に記載の組成物。
- 前記経口使用のための組成物は、液体、ハーブティー、煎じ薬、浸軟物質、錠剤、顆粒、カプセル、懸濁剤、エマルション、溶液、粉末、蓋(operculum)の形態であり、
前記局所使用のための投与に適した組成物は、液体、気化可能な溶液、クリーム、軟膏、ゲル、エマルションの形態である、請求項10または11のいずれかに記載の組成物。 - 前記組成物は、経口使用のためであり、前記天然香味料および/または前記天然保存料は、オレンジ天然香味料、ブラックベリー天然香味料、甘草抽出物、オレンジピール、オレンジジュース、タンジェリンジュース、ジュース、グレープジュース、ブラックベリージュース、ニワトコの花ジュース、ブルーベリージュース、パイナップルジュース、グレープフルーツジュース、スグリジュース、ラズベリージュース、リンゴジュース、レモンジュースから選択される、請求項10〜12のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記少なくとも1つの添加剤または担体は、アラビアゴム、グアーガム、キサンタンガム;蜂蜜、褐色糖および精製糖、セルロース、コメデンプン、ジャガイモデンプンおよびコーンスターチ;カルナウバワックス、ミツロウ、スイートアーモンド油、ヒマワリ油、ショ糖のエステル、ステアリン酸のエステルの1つ以上から選択される、請求項7〜13のいずれか一項に記載の組成物。
- リンパ管過透過性に関連する病状の治療における使用のための請求項7〜14のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記病状は、リンパ管内皮の完全性の統制逸脱を示す、請求項15に記載の使用のための組成物。
- 前記病状は、特に肥満に関連する、慢性炎症、リンパ浮腫、脂肪性浮腫、および水分保持病理から選択される、請求項16に記載の使用のための組成物。
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