JP2018123110A - Virus absorbent, virus absorptive member and micro by-side containing absorbent - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、ウイルスの吸着剤に関し、特には、エイズウイルスを吸着することができる吸着剤に関する。本発明はまた、該吸着剤を含むマイクロバイサイドに関する。 The present invention relates to an adsorbent for viruses, and more particularly to an adsorbent capable of adsorbing AIDS virus. The present invention also relates to a microbyside comprising the adsorbent.
後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）が免疫細胞に感染し、免疫細胞を破壊して免疫不全を引き起こす病気である。ＡＩＤＳは、ＨＩＶを含む血液、***、膣分泌液、母乳といった体液が、感染相手の粘液部や傷口などに接触することにより感染する。
近年、ＨＩＶの増殖を阻止する抗ウイルス薬が開発され、ＡＩＤＳ発症の阻止又は抑制が可能となった。しかし、最も有効な手段は、接触による感染を防ぐことである。
Acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) is a disease in which human immunodeficiency virus (HIV) infects immune cells and destroys immune cells to cause immune deficiency. AIDS is infected when body fluids such as HIV-containing blood, semen, vaginal secretions, and breast milk come into contact with the mucus part or wound of an infected partner.
In recent years, antiviral drugs that inhibit the proliferation of HIV have been developed, and it has become possible to prevent or suppress the onset of AIDS. However, the most effective means is to prevent infection by contact.
サクランは、日本固有の食用藍藻であるスイゼンジノリから抽出される、重量平均分子量約１６００万の超高分子多糖体である。サクラン（スイゼンジノリ多糖体）は多くの硫酸基とカルボン酸基、アミノ基を有する両性電解質である。また、サクランは溶液中で濃度に応じて分子構造が変化し、低濃度領域ではナノメートルサイズの粒子状で存在するが、濃度の上昇に伴い、サクラン分子鎖が互いに相互作用し、液晶構造を形成する。
サクランは、単純ヘルペスウイルスを用いたプラークアッセイ法により、ウイルスの増殖抑制効果を示すことが報告されており、抗ウイルス剤としての用途が提案されている（特許文献１：特許第４０６６４４３号、特許文献２：特開２００９−２１１３６号）。
Sakuran is an ultra-high molecular weight polysaccharide with a weight average molecular weight of about 16 million, which is extracted from Japanese edible cyanobacteria, Suizendinori. Sakuran (Suizendinori polysaccharide) is an ampholyte having many sulfate groups, carboxylic acid groups, and amino groups. In addition, the molecular structure of sakuran changes depending on the concentration in the solution, and it exists in the form of nanometer-sized particles in the low concentration region. However, as the concentration increases, the sakuran molecular chains interact with each other, resulting in a liquid crystal structure. Form.
Sakura has been reported to exhibit a virus growth inhibitory effect by a plaque assay method using herpes simplex virus, and has been proposed for use as an antiviral agent (Patent Document 1: Patent No. 4066443, Patent Document 2: JP 2009-21136).
本発明は、ウイルスの接触による感染を予防または阻止することができるウイルス吸着剤を提供することを目的とする。より具体的には、ＨＩＶの接触による感染を予防または阻止することができるウイルス吸着剤を提供することを目的とする。 An object of this invention is to provide the virus adsorption agent which can prevent or inhibit the infection by virus contact. More specifically, an object of the present invention is to provide a virus adsorbent capable of preventing or preventing infection caused by HIV contact.
本発明者らは鋭意検討を重ねた結果、サクランが、ウイルスを吸着する活性を有することを見いだし、本発明を完成した。
本発明は以下を含むものである。
［１］サクランを有効成分とするウイルス吸着剤。
［２］サクランを、０．００１〜１．０重量％の濃度で含む上記［１］に記載のウイルス吸着剤。
［３］前記ウイルスがＨＩＶである上記［１］または［２］に記載のウイルス吸着剤。
［４］上記［１］〜［３］のいずれか一つに記載のウイルス吸着剤が塗布された部材。
［５］前記部材が、手袋またはコンドームである上記［４］に記載の部材。
［６］ウイルス吸着剤としてサクランを含む、ウイルスの感染を防御するための感染防御組成物。
［７］哺乳動物（好ましくはヒト）の皮膚に塗布するための水性溶液、クリーム状またはゼリー状である上記［６］に記載の組成物。
［８］ヒトのペニス又は膣又は外陰部に塗布するための水性溶液、クリーム状またはゼリー状である上記［６］に記載の組成物。
［９］サクランを０．００１〜１．０重量％の濃度で含む上記［６］〜［８］のいずれか一つに記載の組成物。
［１０］前記ウイルスがＨＩＶである上記［６］〜［９］のいずれか一つに記載の組成物。
［１１］ウイルス吸着剤としてサクランを含むウイルス感染予防剤。
［１２］サクランを、０．００１〜１．０重量％の濃度で含む上記［１１］に記載のウイルス感染予防剤。
［１３］前記ウイルスがＨＩＶである上記［１１］または［１２］に記載のウイルス感染予防剤。
［１４］さらに抗ウイルス剤を含む上記［１］〜［３］のいずれか一つに記載のウイルス吸着剤。
［１５］前記抗ウイルス剤が、ウイルスの侵入阻害剤である上記［１４］に記載のウイルス吸着剤。
［１６］前記抗ウイルス剤が、エファビレンツである上記［１４］に記載のウイルス吸着剤。
［１７］さらに抗ウイルス剤を含む上記［６］〜［１０］のいずれか一つに記載の組成物。
［１８］前記抗ウイルス剤が、ウイルスの侵入阻害剤である上記［１７］に記載の組成物。
［１９］前記抗ウイルス剤が、エファビレンツである上記［１７］に記載の組成物。
As a result of intensive studies, the present inventors have found that sakurans have an activity of adsorbing viruses, and have completed the present invention.
The present invention includes the following.
[1] A virus adsorbent containing cherry as an active ingredient.
[2] The virus adsorbent according to the above [1], which contains cherry at a concentration of 0.001 to 1.0% by weight.
[3] The virus adsorbent according to [1] or [2], wherein the virus is HIV.
[4] A member coated with the virus adsorbent according to any one of [1] to [3].
[5] The member according to [4], wherein the member is a glove or a condom.
[6] An infection protection composition for protecting against virus infection, comprising cherry as a virus adsorbent.
[7] The composition according to [6] above, which is an aqueous solution, cream or jelly for application to the skin of a mammal (preferably human).
[8] The composition according to [6] above, which is an aqueous solution, cream or jelly for application to a human penis or vagina or vulva.
[9] The composition according to any one of the above [6] to [8], wherein the cherry is contained at a concentration of 0.001 to 1.0% by weight.
[10] The composition according to any one of [6] to [9], wherein the virus is HIV.
[11] A virus infection preventive agent comprising cherry as a virus adsorbent.
[12] The virus infection preventive agent according to the above [11], which contains cherry at a concentration of 0.001 to 1.0% by weight.
[13] The virus infection preventive agent according to the above [11] or [12], wherein the virus is HIV.
[14] The virus adsorbent according to any one of the above [1] to [3], further comprising an antiviral agent.
[15] The virus adsorbent according to [14], wherein the antiviral agent is a virus entry inhibitor.
[16] The virus adsorbent according to [14], wherein the antiviral agent is efavirenz.
[17] The composition according to any one of [6] to [10], further comprising an antiviral agent.
[18] The composition according to [17] above, wherein the antiviral agent is a virus entry inhibitor.
[19] The composition according to [17] above, wherein the antiviral agent is efavirenz.
本発明により、ウイルス、特にはＨＩＶの吸着剤が提供される。本発明の吸着剤により、ウイルス、特にはＨＩＶが、保菌者から他者へと接触または移動することを防ぐことができ、ウイルスの感染予防に繋がる。 According to the present invention, an adsorbent for viruses, particularly HIV, is provided. By using the adsorbent of the present invention, it is possible to prevent a virus, particularly HIV, from contacting or moving from a carrier to another person, leading to prevention of virus infection.
以下、本発明を、例示的な実施態様を例として、本発明の実施において使用することができる好ましい方法および材料とともに説明する。なお、文中で特に断らない限り、本明細書で用いるすべての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般に理解されるのと同じ意味をもつ。また、本明細書に記載されたものと同等または同様の任意の材料および方法は、本発明の実施において同様に使用することができる。また、本明細書に記載された発明に関連して本明細書中で引用されるすべての刊行物および特許は、例えば、本発明で使用できる方法や材料その他を示すものとして、本明細書の一部を構成するものである。 The invention will now be described by way of example embodiments, together with preferred methods and materials that can be used in the practice of the invention. Unless otherwise noted in the text, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art to which this invention belongs. In addition, any materials and methods equivalent or similar to those described herein can be used as well in the practice of the invention. In addition, all publications and patents cited in this specification in relation to the invention described herein are hereby incorporated by reference, as examples of methods, materials and the like that can be used in the present invention. Part of it.
本明細書で、「Ａ〜Ｂ」というときは、下限としてＡを含み、上限としてＢを含む意味で用いられる。 In this specification, “A to B” is used to mean that A is included as the lower limit and B is included as the upper limit.
本発明で用いられるサクランは、スイゼンジノリ（Aphanothece sacrum）から抽出できる硫酸化多糖類であり、その平均分子量は、一般には約１６００万と報告されている。本発明においては用いることができるサクランは、スイゼンジノリから常法に従って抽出されるものであれば特に制限がなく、好ましくは平均分子量が約５００万以上、より好ましくは平均分子量が約１０００万以上、さらに好ましくは平均分子量が約１６００万以上の硫酸化多糖類である。 The cherry used in the present invention is a sulfated polysaccharide that can be extracted from Aphanothece sacrum, and its average molecular weight is generally reported to be about 16 million. The cherry that can be used in the present invention is not particularly limited as long as it is extracted from a sardine butter in accordance with a conventional method, preferably an average molecular weight of about 5 million or more, more preferably an average molecular weight of about 10 million or more, Preferred is a sulfated polysaccharide having an average molecular weight of about 16 million or more.
スイゼンジノリ（Aphanothece sacrum）は、多数のマユ型（大きさ：３．５〜４．０μ×６〜７μ）の単細胞が寒天質の中に埋没する状態で群体を形成する淡水性藍藻類であり、九州地方の熊本県、福岡県にのみ生育が確認されている。サクランは、ヘキソース構造を持つ糖構造体およびペントース構造を持つ糖構造体がα−グリコシド結合またはβ−グリコシド結合により直鎖状または分岐鎖状に連結した糖鎖ユニットの繰り返し構造を持ち、前記糖鎖ユニットが糖構造体として硫酸化ムラミン酸を含み、かつ、前記糖鎖ユニットにおいては、水酸基１００個当たり２．７個以上の水酸基が硫酸化され、あるいは全元素中で硫黄元素が１．５重量％以上を占める糖誘導体を含むことに特徴を有する。サクランの構造として、図１に示す構造が報告されている。 Suizenjinori (Aphanothece sacrum) is a freshwater cyanobacteria that forms colonies in the state that a large number of cocoon-type (size: 3.5-4.0μ × 6-7μ) single cells are buried in agar. Growth has been confirmed only in Kumamoto Prefecture and Fukuoka Prefecture in the Kyushu region. Sakuran has a repeating structure of a sugar chain unit in which a sugar structure having a hexose structure and a sugar structure having a pentose structure are linked in a linear or branched manner by α-glycoside bonds or β-glycoside bonds. The chain unit contains sulfated muramic acid as a sugar structure, and in the sugar chain unit, 2.7 or more hydroxyl groups per 100 hydroxyl groups are sulfated, or the sulfur element is 1.5% in all elements. It is characterized by containing a sugar derivative occupying at least% by weight. The structure shown in FIG. 1 has been reported as the cherry structure.
スイゼンジノリからサクランを抽出する方法の一例は、例えば、国際公開ＷＯ２００８／０６２５７４号に記載されている。例えば、８０℃の０．１Ｎ−ＮａＯＨ水溶液にスイゼンジノリを入れて数時間攪拌することによってスイゼンジノリからサクランを抽出できる。また、他の一例としては、スイゼンジノリの水分散液をオートクレーブ中において１３５℃で３０分間加熱することによってスイゼンジノリからサクランを抽出できる。抽出されたサクランは、遠心分離、ろ過、アルコール洗浄などによって精製してもよい。また、スイゼンジノリからサクランを抽出する前に、スイゼンジノリを凍結したのち融解させ、その後に色素を除去する工程を行ってもよい。
このように、サクランは、酸性多糖類であり、アルカリ溶液を用いることでスイゼンジノリから抽出できる。スイゼンジノリから抽出されるサクランはまた、グリーンサイエンス・マテリアル(株)から入手することができる。
An example of a method for extracting cherries from suizenjinori is described in, for example, International Publication No. WO2008 / 062574. For example, a cherry tree can be extracted from a suizenjinori by putting a suizendinori in a 0.1N NaOH aqueous solution at 80 ° C. and stirring for several hours. As another example, cherry blossoms can be extracted from the water lily by heating an aqueous dispersion of water lily in an autoclave at 135 ° C. for 30 minutes. The extracted cherry may be purified by centrifugation, filtration, alcohol washing or the like. Moreover, before extracting a cherry tree from a sardine sardine, you may freeze and melt | dissolve a sardine sardine, and may remove the pigment | dye after that.
Thus, cherry is an acidic polysaccharide and can be extracted from scorpionary using an alkaline solution. The cherry blossoms extracted from Suizenjinori can also be obtained from Green Science Material Co., Ltd.
本発明の吸着剤は、ウイルスを吸着する有効成分としてサクランを含む。本発明の吸着剤におけるサクランの含有量は特に制限されない。本発明の吸着剤は、水性溶液、ゲル、その他のいずれの形態（例えば、ゾル）でもよいが、好ましくは、水性溶液またはゾルである。ここでゲルとは、高粘性であって流動性のある不定形な状態、および寒天状、ゼリー状等のように、固形であって流動性を有しないが、簡易な混合作業により容易に不定形かつ半流動体となり得るものも含む。ここでゾルとは、液体を分散媒とするコロイドを言い、コロイド溶液のように流動性を有する。ここで水性溶液とは、主たる溶媒である水にサクランが溶解している状態を言うが、サクランが完全に溶解していない状態も含み意味であり、また、溶液の流動性を損なわないかぎり粘性があってもよい。 The adsorbent of the present invention contains cherry as an active ingredient that adsorbs viruses. The content of cherry in the adsorbent of the present invention is not particularly limited. The adsorbent of the present invention may be an aqueous solution, gel, or any other form (for example, sol), but is preferably an aqueous solution or sol. Here, the gel is a highly viscous and fluid amorphous state, and it is solid and does not have fluidity, such as agar-like, jelly-like, etc. Includes those that can be shaped and semi-fluid. Here, the sol refers to a colloid using a liquid as a dispersion medium and has fluidity like a colloid solution. Here, the aqueous solution refers to a state in which cherries are dissolved in water, which is the main solvent, but also includes a state in which cherries are not completely dissolved, and it is viscous as long as the fluidity of the solution is not impaired. There may be.
本発明の吸着剤は、例えば、サクランを、０．００１〜１．０重量％、好ましくは０．０５〜０．５重量％、より好ましくは０．２５〜１．０重量％含む吸着剤をあげあることができる。
水性溶液またはゾルの形態であれば、様々な部材に塗布が可能であり、容易に本発明の吸着剤を塗布したウイルス吸着部材を作製できる。また、水性溶液またはゾルの形態であれば、体の様々な部位に塗布が容易であり、ウイルスの感染を予防できる。
本発明の吸着剤を水性溶液またはゾル状で用いる場合は、例えば、サクランを、０．００１〜０．５重量％、好ましくは０．０１〜０．５重量％、より好ましくは０．０５〜０．２重量％含む吸着剤をあげあることができる。この範囲でサクランを含有する本発明の吸着剤は、液体状態またはゾル状態を取る。
The adsorbent of the present invention includes, for example, an adsorbent containing 0.001 to 1.0% by weight of cherry, preferably 0.05 to 0.5% by weight, more preferably 0.25 to 1.0% by weight. You can give it up.
As long as it is in the form of an aqueous solution or sol, it can be applied to various members, and a virus-adsorbing member coated with the adsorbent of the present invention can be easily produced. In addition, if it is in the form of an aqueous solution or sol, it can be easily applied to various parts of the body, and virus infection can be prevented.
When the adsorbent of the present invention is used in an aqueous solution or sol form, for example, sakuran is 0.001 to 0.5% by weight, preferably 0.01 to 0.5% by weight, more preferably 0.05 to 0.5%. An adsorbent containing 0.2% by weight can be mentioned. The adsorbent of the present invention containing cherry in this range takes a liquid state or a sol state.
本発明の吸着剤はまた、その他の成分、これに限定されないが、例えば、着色剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、香料等を含んでもよい。また、それらの他の成分は、塗布する部材または使用目的に応じて、適宜選択される。 The adsorbent of the present invention may also contain other components, such as, but not limited to, colorants, pH adjusters, preservatives, and fragrances. Moreover, those other components are suitably selected according to the member to be applied or the purpose of use.
本発明において、吸着対象となるウイルスは、ヒト等の哺乳動物を宿主とするウイルスをあげることができ、例えば、これに限定されないが、レトロウイルス、例えば、エイズウイルス、インフルエンザウイルスをあげることができるが、好ましくはエイズウイルスである。 In the present invention, the virus to be adsorbed can be a virus whose host is a mammal such as a human, for example, but is not limited thereto, and can be a retrovirus such as an AIDS virus or an influenza virus. However, it is preferably an AIDS virus.
本発明の吸着剤を塗布する部材は、特に限定されず、ウイルス感染の予防を目的とする部材に広く用いることができる。例えば、ウイルス感染者との接触が予想される医療関係者が着用する手袋やマスクをあげることができる。また、エイズの感染を予防する目的でコンドームに、インフルエンザウイルスの感染を予防する目的でマスクに用いることもできる。 The member to which the adsorbent of the present invention is applied is not particularly limited, and can be widely used as a member for the purpose of preventing virus infection. For example, gloves and masks worn by medical personnel who are expected to come into contact with a virus-infected person can be cited. It can also be used as a condom for the purpose of preventing AIDS infection and as a mask for the purpose of preventing influenza virus infection.
本発明の他の態様は、ウイルス吸着剤としてサクランを含む、ウイルスの感染を防御するための感染防御組成物である。
このような組成物はまた、局所的に適用することにより、ウイルスの感染を防ぐことができるので、マイクロバイサイドとなり得る。本発明の組成物は、いずれの形態も取りうるが、好ましくは、塗布が容易な形態である。これに限定されないが、例えば、水性溶液、クリーム、ゼリー、フィルム等の形態をあげることができる。本発明の感染防御組成物の好ましい態様は、例えば、(i)哺乳動物、例えばヒトの皮膚に塗布するための水性溶液、クリームまたはゼリー、(ii)男性のペニス、女性の膣や外陰部、その他の体の部位に塗布するための水性溶液、クリームまたはゼリーである。ウイルスの接触感染の危険のあるこれらの部位に塗布することにより、ウイルスを吸着し、感染を予防できる。
Another aspect of the present invention is an infection protection composition for protecting against viral infection, comprising cherry as a virus adsorbent.
Such a composition can also be microbyside because it can be applied topically to prevent viral infection. The composition of the present invention can take any form, but is preferably in a form that can be easily applied. Although not limited to this, For example, forms, such as an aqueous solution, cream, jelly, a film, can be mention | raise | lifted. Preferred embodiments of the infection protection composition of the present invention include, for example, (i) an aqueous solution, cream or jelly for application to the skin of a mammal, such as a human, (ii) a male penis, a female vagina or vulva, An aqueous solution, cream or jelly for application to other body parts. By applying to these areas where there is a risk of virus contact infection, the virus can be adsorbed and infection can be prevented.
本発明の感染防御組成物は、任意の形態をとるために、当該技術分野で用いられている、各種添加剤を含んでもよい。これに限定されないが、例えば、水性溶液の場合は、水溶性高分子、エタノール、エチレングリコール、グリセリン等の水溶性有機溶剤が添加されても良い。更に本発明の組成物には保湿剤、色料、香料、清涼剤等が添加されてもよい。また、塗布性や塗布後の潤滑性を付与する目的で、オイルが添加されてもよい。 The infection protection composition of the present invention may contain various additives used in the art to take an arbitrary form. Although not limited thereto, for example, in the case of an aqueous solution, a water-soluble organic solvent such as a water-soluble polymer, ethanol, ethylene glycol, or glycerin may be added. Furthermore, a humectant, a colorant, a fragrance, a refreshing agent and the like may be added to the composition of the present invention. Oil may be added for the purpose of imparting coating properties and lubricity after coating.
本発明の吸着剤または組成物はまた、ウイルスの増殖を抑制または阻止する活性を有する抗ウイルス剤とともに用いることができる。本発明の吸着剤とともに用いることができる抗ウイルス剤は、特に限定されず使用目的に応じて適宜選択できる。例えば、エイズへの感染を予防する目的の場合は、抗エイズ薬をあげあることができる。用いることできる抗エイズ薬としてはこれに限定されないが、例えば、エファビレンツ（ＥＦＶ）、ウイルス侵入抑制剤をあげることができる。
本発明の吸着剤を抗ウイルス剤とともに用いた場合は、サクランの効果と抗ウイルス剤の効果が相乗的に働き、より強い抗ウイルス作用を示し、感染の防止及び／又は予防が可能となる。かかる場合は、より低濃度のサクランを含有する吸着剤でも十分な効果が発揮できる。
The adsorbent or composition of the present invention can also be used together with an antiviral agent having an activity of suppressing or preventing virus growth. The antiviral agent that can be used with the adsorbent of the present invention is not particularly limited and can be appropriately selected depending on the purpose of use. For example, for the purpose of preventing infection with AIDS, anti-AIDS drugs can be listed. Examples of anti-AIDS drugs that can be used include, but are not limited to, efavirenz (EFV) and virus entry inhibitors.
When the adsorbent of the present invention is used together with an antiviral agent, the effects of cherry and the antiviral agent work synergistically, exhibiting a stronger antiviral action, and can prevent and / or prevent infection. In such a case, a sufficient effect can be exhibited even with an adsorbent containing a lower concentration of cherry.
以下、実施例により、本発明を具体的に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
材料：
サクランは、Green Science Material (Kumamoto, Japan) から入手し、脱イオン蒸留水 (deionized double distilled water) に、０．２５％〜１％の濃度（ｗ／ｖ）になるように溶解して以下の実験に用いた。ＨＩＶ (HIV-1LAI) は、NIH AIDS Research and Reference Reagent Program から入手し、Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) に溶解（濃度：2μg/mL）して以下の実験に用いた。
EXAMPLES Hereinafter, although an Example demonstrates this invention concretely, this invention is not limited to a following example.
material:
Cherry is obtained from Green Science Material (Kumamoto, Japan) and dissolved in deionized double distilled water to a concentration (w / v) of 0.25% to 1%. Used for experiments. HIV (HIV-1 LAI ) was obtained from the NIH AIDS Research and Reference Reagent Program, dissolved in Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) (concentration: 2 μg / mL), and used in the following experiments.
実施例１：ウイルス透過試験−１
トランズウェル（登録商標）（２４ウェルプレート、コーニング社製）を用いて、サクランからなる層に対するＨＩＶの透過性を確認した。
アッパーチャンバー内に種々の濃度のサクラン溶液（終濃度０％、０．５％、１％）50μＬを添加しメンブレンを処理した。サクランは、メンブレンを透過せず、メンブレン上に積層される。形成したサクランの層のポアサイズは８μｍであった。サクランの層の上に、50μＬのＨＩＶ溶液を重層した（ＨＩＶ粒子の直径は、１００ｎｍである）。ローワーチャンバー内には600μＬのDMEMを添加し、Total volumeを700μＬとした。２４時間後に、インサートメンブレンを通過したウイルス粒子を含む溶液（ローワーチャンバー内の溶液）、及びアッパーチャンバー内に残ったサクランを含む溶液を回収し、それぞれの溶液中のＨＩＶ−１ｇａｇタンパク質であるｐ２４抗原量をp24 antigen ELISA kit（ZeptoMetrix Corp., Buffalo, NY）により検出した。
結果を図２に示す。Ａは、メンブレンを通過したウイルスの量（ローワーチャンバー内の溶液中のウイルス量）、Ｂは、メンブレンを通過しなかったウイルスの量（アッパーチャンバー内の溶液中のウイルス量）を示している。サクランの層のポアサイズが、ＨＩＶの粒子径に比べて遥かに大きいにもかかわらず、ＨＩＶがサクランの層を通過せず、サクランに吸着または捕獲されたことが確認された。
Example 1: Virus penetration test-1
Using Transwell (registered trademark) (24-well plate, manufactured by Corning), the permeability of HIV to the layer made of cherry was confirmed.
50 μL of various concentrations of cherry solution (
The results are shown in FIG. A shows the amount of virus that passed through the membrane (the amount of virus in the solution in the lower chamber), and B shows the amount of virus that did not pass through the membrane (the amount of virus in the solution in the upper chamber). Although the pore size of the cherry layer was much larger than the particle size of HIV, it was confirmed that HIV did not pass through the cherry layer and was adsorbed or captured by the cherry.
実施例２：ウイルス透過試験−２
種々の濃度のサクランを用いてＨＩＶの透過性を確認した。
９６ウェルのトランズウェル（登録商標）（コーニング社製）を用い、種々の濃度のサクラン溶液（終濃度０％、０．２５％、０．５％、０．７５％、１％）の37.5μＬを、アッパーチャンバー内に入れ、メンブレンを処理した。サクラン層の上に37.5μＬのＨＩＶ溶液を重層した。ローワーチャンバー内には235μＬのDMEMを添加し、Total volume 310μＬとした。２４時間後に、インサートメンブレンを通過したウイルス粒子を含む溶液（ローワーチャンバー内の溶液）を回収し、実施例１と同様にしてｐ２４抗原量をＥＬＩＳＡより検出した。さらに、回収した溶液を、予め用意しておいたＴＺＭ−ｂｌ細胞に処理し、βガラクトシダーゼ法にてＨＩＶ−１感染効率を評価した。結果を、図３に示す。０．２５％の濃度のサクラン溶液を処理したメンブレンは、ウイルスの透過を妨げた。
以上の結果より、サクランは、ウイルスを吸着し、ウイルスの拡散や透過を防ぐ効果があることが確認された。
Example 2: Virus penetration test-2
The permeability of HIV was confirmed using various concentrations of cherry.
Using 96-well Transwell (registered trademark) (manufactured by Corning), 37.5 μL of various concentrations of cherry solution (
From the above results, it was confirmed that Sakuran has the effect of adsorbing viruses and preventing the spread and transmission of viruses.
実施例３：サクランの抗ウイルス薬との併用効果の確認
９６ウェルのトランズウェル（登録商標）（コーニング社製）を用い、サクランを抗ウイルス薬と併用した場合の効果を、実施例２と同様にして確認した。メンブレンの処理は、サクラン（０．０００００１％〜０．００１％）、抗ウイルス薬（エファビレンツ（東京化成工業より入手）：ＥＦＶ）（３ｎＭ〜３０ｎＭ）、およびサクランとＥＦＶとの併用の３つの条件で行った。
上記各条件でメンブレンを処理した後、ＨＩＶ溶液を重層した。２４時間後に、インサートメンブレンを通過したウイルス粒子を含む溶液（ローワーチャンバー内の溶液）を回収し、実施例２と同様にして、予め用意しておいたＴＺＭ−ｂｌ細胞に処理し、βガラクトシダーゼ法にてＨＩＶ−１感染効率を評価した。結果を、図４〜図７に示す。サクランとＥＦＶとの相乗効果は、ソフトウエア：ＣｏｍｐｕＳｙｎ（www.combosyn.com）を用いて解析した。Ｃｌ（Combination Index）が＜１であることから、サクランとＥＦＶとの相乗効果が確認された。
Example 3: Confirmation of combined use effect of Sakuran with antiviral agent Using 96-well Transwell (registered trademark) (manufactured by Corning), the effect of using Sakuran together with an antiviral agent is the same as in Example 2. I confirmed it. The membrane treatment was performed under three conditions: Sakuran (0.000001% to 0.001%), antiviral drug (Efavirenz (obtained from Tokyo Chemical Industry): EFV) (3 nM to 30 nM), and combined use of Sakuran and EFV. I went there.
After treating the membrane under the above conditions, an HIV solution was overlaid. After 24 hours, the solution containing the virus particles that passed through the insert membrane (the solution in the lower chamber) was collected, treated in the same manner as in Example 2, and treated with TZM-bl cells prepared in advance, and β-galactosidase method The HIV-1 infection efficiency was evaluated. The results are shown in FIGS. The synergistic effect of Sakuran and EFV was analyzed using the software: CompuSyn (www.combosyn.com). Since Cl (Combination Index) is <1, the synergistic effect of Sakuran and EFV was confirmed.
実施例４：サクランの抗ウイルス薬との併用効果の確認
９６ウェルのトランズウェル（登録商標）（コーニング社製）を用い、サクランを抗ウイルス薬である侵入阻害剤（Entry Inhibitor）と併用した場合の効果を、実施例３と同様にして確認した。メンブレンの処理は、サクラン（０．００００１％〜０．００１％）、侵入阻害剤であるＣＸＣＲ４アンタゴニスト（ＡＭＤ３１００（NIH AIDS Research and Reference Reagent Programより入手）：１０ｎＭ〜５０ｎＭ）またはｇｐ４１阻害剤（Ｔ−２０（NIH AIDS Research and Reference Reagent Programより入手）：３０ｎＭ〜１００ｎＭ）、およびサクランと侵入阻害剤との併用の３つの条件で行った。結果を、図８〜９に示す。サクランと侵入阻害剤との相乗効果は、Ｃｌ（Combination Index）が＜１であることから、サクランとＥＦＶとの相乗効果が確認された。
Example 4: Confirmation of combined use effect of Sakuran with antiviral agent When 96-well Transwell (registered trademark) (manufactured by Corning) was used, Sakuran was used in combination with an antiviral entry inhibitor (Entry Inhibitor). The effect was confirmed in the same manner as in Example 3. Membrane treatment was performed using cherry (0.00001% to 0.001%), CXCR4 antagonist (AMD3100 (obtained from NIH AIDS Research and Reference Reagent Program): 10 nM to 50 nM) or gp41 inhibitor (T− 20 (obtained from NIH AIDS Research and Reference Reagent Program): 30 nM to 100 nM), and a combination of cherry and invasion inhibitor. The results are shown in FIGS. As for the synergistic effect between the cherry and the invasion inhibitor, since the Cl (Combination Index) is <1, the synergistic effect between the cherry and the EFV was confirmed.
上記の詳細な記載は、本発明の目的及び対象を単に説明するものであり、添付の特許請求の範囲を限定するものではない。添付の特許請求の範囲から離れることなしに、記載された実施態様に対しての、種々の変更及び置換は、本明細書に記載された教示より当業者にとって明らかである。 The above detailed description is merely illustrative of the objects and objects of the invention and is not intended to limit the scope of the appended claims. Various changes and substitutions to the described embodiments will be apparent to those skilled in the art from the teachings described herein without departing from the scope of the appended claims.
本発明のサクランを含むウイルス吸着剤は、ウイルスを吸収・捕獲することができるので、ウイルス、特にはＨＩＶの感染防止の用途に有用である。 Since the virus adsorbent containing the cherry of the present invention can absorb and capture the virus, it is useful for preventing infection of viruses, particularly HIV.
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