JP2018065760A - Composite particle containing anionic polymer and cationic polymer - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、皮膚外用剤の原料として利用され得るナノ粒子、及びそのナノ粒子の製造方法に関するものである。 The present invention relates to nanoparticles that can be used as a raw material for an external preparation for skin, and a method for producing the nanoparticles.
皮膚外用剤の有効成分を角質細胞層内に送達するためには、従来以下のような点が問題とされてきた。
皮膚の角層細胞層は、外界からの異物の侵入を防ぐためにバリア機能を有しており、有効成分が角層細胞層内に到達しにくい。特に、有効成分が高分子化合物である場合には、高分子化合物が低浸透性であるため角層細胞層内に浸透しにくく、有効成分が皮膚表面に残留してしまう。
In order to deliver the active ingredient of the external preparation for skin into the stratum corneum layer, the following points have conventionally been problematic.
The stratum corneum cell layer of the skin has a barrier function in order to prevent foreign substances from entering from the outside, and the active ingredient hardly reaches the stratum corneum cell layer. In particular, when the active ingredient is a polymer compound, the polymer compound has low permeability, so that it does not easily penetrate into the stratum corneum cell layer, and the active ingredient remains on the skin surface.
このような状況において、有効成分を角層細胞層内に送達するためのキャリアとして、ナノ粒子の開発が進められてきた。
特許文献１には、核酸、オリゴ核酸、又はその誘導体；カチオン性ポリマー又はカチオン性脂質若しくはそれを含む集合体；及びアニオン性ポリマーを含む複合体の凍結乾燥体が記載されている。
Under such circumstances, the development of nanoparticles has been promoted as a carrier for delivering an active ingredient into the stratum corneum cell layer.
Patent Document 1 describes a lyophilized product of a complex containing a nucleic acid, an oligonucleic acid, or a derivative thereof; a cationic polymer or a cationic lipid or an assembly containing the same; and an anionic polymer.
特許文献２には、直径１μｍ未満の活性成分の投与用のナノ粒子を得る方法であって、ａ）ヒアルロナン塩の水溶液を調製し、ｂ）カチオン性ポリマーの水溶液を調製し、ｃ）ポリアニオン塩を前記ヒアルロナン塩溶液に加え、ｄ）前記ｂ）およびｃ）において得られた溶液を撹拌混合し、自然発生的にナノ粒子を得ることを含んでおり、前記ａ）、ｂ）またはｃ）において得られた溶液のうち１つに、あるいは前記ｄ）において得られたナノ粒子の懸濁液に、前記活性成分を溶解させ、ナノ粒子に吸着させる、方法が記載されている。 Patent Document 2 discloses a method for obtaining nanoparticles for administration of an active ingredient having a diameter of less than 1 μm, in which a) an aqueous solution of hyaluronan salt is prepared, b) an aqueous solution of a cationic polymer is prepared, and c) a polyanion salt. To the hyaluronan salt solution and d) stirring and mixing the solution obtained in b) and c) to obtain nanoparticles spontaneously, in a), b) or c) A method is described in which the active ingredient is dissolved in one of the obtained solutions or in the nanoparticle suspension obtained in d) and adsorbed on the nanoparticles.
特許文献３には、生物学的に活性な分子を放出するためのナノ粒子を含んでなる系であって、前記ナノ粒子が、ａ）少なくとも５０重量％のキトサンまたはキトサン誘導体、およびｂ）５０重量％未満のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはＰＥＧ誘導体を含んでなる共役物を含んでおり、前記料成分ａ）とｂ）とが、キトサンアミノ基を介して共有結合しており、前記ナノ粒子が架橋剤により架橋していることを特徴とする系が記載されている。 US Pat. No. 6,057,049 is a system comprising nanoparticles for releasing biologically active molecules, the nanoparticles comprising a) at least 50% by weight chitosan or chitosan derivative, and b) 50. Containing a conjugate comprising less than% by weight of polyethylene glycol (PEG) or a PEG derivative, wherein the ingredients a) and b) are covalently bonded via a chitosan amino group, and the nanoparticles are A system is described which is characterized by being crosslinked by a crosslinking agent.
特許文献４には、平均サイズ１マイクロメートル未満のナノ粒子を含み、ナノ粒子がａ）ヒアルロナンまたはその塩；およびｂ）キトサンまたはその誘導体、を含む生物活性分子の放出のための系であって、キトサンまたはその誘導体の分子量が９０ｋＤａ未満であることを特徴とする系が記載されている。また、生物活性分子として核酸等を含む系、網状化剤としてトリポリリン酸塩を含む系が記載されている。 US Pat. No. 6,053,836 includes a system for the release of bioactive molecules comprising nanoparticles having an average size of less than 1 micrometer, wherein the nanoparticles comprise a) hyaluronan or a salt thereof; and b) chitosan or a derivative thereof. Describes a system characterized in that the molecular weight of chitosan or its derivatives is less than 90 kDa. In addition, a system containing nucleic acid or the like as a biologically active molecule and a system containing tripolyphosphate as a reticulating agent are described.
特許文献５には、ヒアルロナンとキトサンを含む二元複合体と、さらにアニオン性ポリマーを含む三元複合体が記載されている。 Patent Document 5 describes a binary complex containing hyaluronan and chitosan and a ternary complex containing an anionic polymer.
特許文献５に記載されているように、ヒアルロナンはキトサンと容易に複合粒子を形成する。しかし、キトサン以外にどのような特性のポリマーが、どのような条件でヒアルロナンと複合粒子を形成しうるのか不明であった。
そこで、本発明の解決しようとする課題は、ヒアルロナンを粒子化する新規の技術を提供することにある。
As described in Patent Document 5, hyaluronan easily forms composite particles with chitosan. However, it was unclear what characteristics other than chitosan can form composite particles with hyaluronan under what conditions.
Therefore, the problem to be solved by the present invention is to provide a novel technique for forming hyaluronan into particles.
本発明者らは鋭意研究努力により、ヒアルロナンと複合粒子を形成し得るカチオン性ポリマーの特性として、カチオン化度が重要であることを見出し、本発明を完成させた。
すなわち、上記課題を解決する本発明は、アニオン性ポリマー、並びに、カチオン化度が０．２以上であるカチオン性ポリマー（キトサンを除く）を含む複合粒子である。
本発明の複合粒子は、有効成分を皮膚内に送達するためのキャリアとして有用である。
As a result of diligent research efforts, the present inventors have found that the degree of cationization is important as a characteristic of a cationic polymer capable of forming composite particles with hyaluronan, and have completed the present invention.
That is, this invention which solves the said subject is a composite particle containing an anionic polymer and a cationic polymer (except chitosan) whose cationization degree is 0.2 or more.
The composite particles of the present invention are useful as carriers for delivering active ingredients into the skin.
本発明の好ましい形態では、アニオン性ポリマーが、ヒアルロナン及び／又はポリグルタミン酸である。
かかる形態の本発明の複合粒子は、保湿成分であるヒアルロナンやポリグルタミン酸を皮膚内部に送達することが可能である。
In a preferred form of the invention, the anionic polymer is hyaluronan and / or polyglutamic acid.
The composite particles of the present invention in such a form can deliver hyaluronan and polyglutamic acid, which are moisturizing components, into the skin.
本発明の好ましい実施の形態では、カチオン性ポリマーが、アリル系アミン重合体及び／又はカチオン化多糖類である。
これらのカチオン性ポリマーを用いることによって、複合粒子の安定性を向上させることができる。
In a preferred embodiment of the present invention, the cationic polymer is an allylic amine polymer and / or a cationized polysaccharide.
By using these cationic polymers, the stability of the composite particles can be improved.
本発明の好ましい形態では、カチオン性ポリマーが、第１級〜第３級のアミンである。
第１級〜第３級のアミンであるカチオン性ポリマーを含む本発明の複合粒子は、皮膚内部に浸透後、崩壊する性質を有する。そのため、かかる形態の本発明の複合粒子は、本来、皮膚内部に浸透させることが不可能である非凝集状態のアニオン性ポリマーを、皮膚内部に導入することができる。
In a preferred form of the invention, the cationic polymer is a primary to tertiary amine.
The composite particle of the present invention containing a cationic polymer which is a primary to tertiary amine has a property of disintegrating after penetrating into the skin. Therefore, the composite particles of the present invention in such a form can introduce a non-aggregated anionic polymer that cannot originally penetrate into the skin into the skin.
本発明の好ましい形態では、カチオン性ポリマーが、ペプチドである。
ペプチドを用いることによって、複合粒子の安定性を向上させることができる。
In a preferred form of the invention, the cationic polymer is a peptide.
By using the peptide, the stability of the composite particle can be improved.
本発明は上述の複合粒子を含む皮膚外用組成物にも関する。
本発明の皮膚外用組成物は、アニオン性ポリマーを皮膚内部に浸透させることができる。
The present invention also relates to an external composition for skin comprising the composite particles described above.
The composition for external use of the present invention can penetrate an anionic polymer into the skin.
本発明は、上述の複合粒子の製造方法にも関する。すなわち、本発明の製造方法は、水系溶媒中において、アニオン性ポリマー、並びに、カチオン化度が０．２以上であるカチオン性ポリマー（キトサンを除く）を混合することを特徴とする。
本発明によれば、容易に上述の複合粒子を製造することができる。
The present invention also relates to a method for producing the above-described composite particles. That is, the production method of the present invention is characterized by mixing an anionic polymer and a cationic polymer (excluding chitosan) having a cationization degree of 0.2 or more in an aqueous solvent.
According to the present invention, the above-mentioned composite particles can be easily produced.
本発明の好ましい形態では、
（Ａ）アニオン性ポリマー水溶液と、
（Ｂ）前記カチオン性ポリマーの水溶液と、
を別途調製し、これら水溶液を混合することを特徴とする。
このように（Ａ）と（Ｂ）の水溶液を別途調製する形態とすることで、複合粒子の凝集を防ぐことができる。
In a preferred form of the invention,
(A) an anionic polymer aqueous solution;
(B) an aqueous solution of the cationic polymer;
Is prepared separately, and these aqueous solutions are mixed.
Thus, aggregation of the composite particles can be prevented by separately preparing the aqueous solutions of (A) and (B).
さらに、前記（Ａ）の水溶液における前記アニオン性ポリマーの濃度が、１．７ｍＭ以下であることが好ましい。
また、前記（Ｂ）の水溶液における前記カチオン性ポリマーの合計濃度が、１．７ｍＭ以下であることが好ましい。
（Ａ）と（Ｂ）の水溶液におけるポリマーの濃度を前記範囲とすることにより、凝集しにくい複合粒子を製造することができる。
Furthermore, it is preferable that the concentration of the anionic polymer in the aqueous solution (A) is 1.7 mM or less.
The total concentration of the cationic polymer in the aqueous solution (B) is preferably 1.7 mM or less.
By setting the concentration of the polymer in the aqueous solutions (A) and (B) within the above range, composite particles that are difficult to aggregate can be produced.
本発明は上述の製造方法により製造された複合粒子にも関する。
本発明の複合粒子は、安定性に優れる。
The present invention also relates to composite particles produced by the production method described above.
The composite particles of the present invention are excellent in stability.
本発明の複合粒子は、アニオン性ポリマーを皮膚内へ浸透させることできる。また、本発明の複合粒子の製造方法によれば、上述の複合粒子を容易に製造することができる。 The composite particles of the present invention can penetrate an anionic polymer into the skin. Moreover, according to the method for producing composite particles of the present invention, the above-described composite particles can be easily produced.
＜１＞複合粒子
（１）アニオン性ポリマー
本発明の複合粒子は必須要素としてアニオン性ポリマーを含む。アニオン性ポリマーとしては人体に対して害のない限り制限されることはないが、好適にはポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸等のアニオン性ポリアミノ酸、寒天、ヒアルロナン、コンドロイチン硫酸、デキストラン硫酸、ヘパラン硫酸、デルマタン硫酸、フコイダン、ケラタン硫酸、ヘパリン、カラギナン、サクシノグルカン、アラビアゴム、キサンタンガム、アルギン酸、ペクチン、カルボキシメチルセルロース等のアニオン性多糖類、ポリアクリル酸、並びに、これらの塩等を挙げることができる。特に、ヒアルロナン、ポリグルタミン酸及びこれらの塩を好適に例示することができる。
アニオン性ポリマーは、市販品を用いることが可能である。
<1> Composite Particle (1) Anionic Polymer The composite particle of the present invention contains an anionic polymer as an essential element. The anionic polymer is not limited as long as it is not harmful to the human body, but preferably an anionic polyamino acid such as polyglutamic acid and polyaspartic acid, agar, hyaluronan, chondroitin sulfate, dextran sulfate, heparan sulfate, Examples include anionic polysaccharides such as dermatan sulfate, fucoidan, keratan sulfate, heparin, carrageenan, succinoglucan, gum arabic, xanthan gum, alginic acid, pectin, carboxymethylcellulose, polyacrylic acid, and salts thereof. In particular, hyaluronan, polyglutamic acid and salts thereof can be preferably exemplified.
A commercially available product can be used as the anionic polymer.
ヒアルロナン塩及びポリグルタミン酸塩を形成する塩としては、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、マグネシウム、塩基性アミノ酸塩などが挙げられる。 Examples of the salt forming hyaluronan salt and polyglutamate include sodium, potassium, calcium, ammonium, magnesium, basic amino acid salt and the like.
本発明で用いられるアニオン性ポリマーの分子量は制限されないが、好ましくは１００〜１０００００ｋＤａ、より好ましくは２００〜５００００ｋＤａである。 Although the molecular weight of the anionic polymer used by this invention is not restrict | limited, Preferably it is 100-100000 kDa, More preferably, it is 200-50000 kDa.
より具体的には、アニオン性ポリマーとして、ヒアルロナン又はその塩を用いる場合には、分子量が、好ましくは１００〜２０００ｋＤａ、さらに好ましくは２００〜１５００ｋＤａのものを用いることができる。 More specifically, when hyaluronan or a salt thereof is used as the anionic polymer, a molecular weight of preferably 100 to 2000 kDa, more preferably 200 to 1500 kDa can be used.
また、アニオン性ポリマーとして、ポリグルタミン酸又はその塩を用いる場合には、分子量が、好ましくは５００〜３００００ｋＤａ、より好ましくは１０００〜２００００ｋＤａ、さらに好ましくは１５００〜１５０００ｋＤａのものを用いることができる。 Moreover, when using polyglutamic acid or its salt as an anionic polymer, molecular weight becomes like this. Preferably it is 500-30000 kDa, More preferably, it is 1000-20000 kDa, More preferably, 1500-15000 kDa can be used.
アニオン性ポリマーのアニオン化度は特に限定されないが、カチオン性ポリマーとの複合粒子の形成を促進する観点から、下限は好ましくは０．１以上、より好ましくは０．２以上である。
一方、カチオン性ポリマーとの複合粒子形成の観点からは、アニオン性ポリマーのアニオン化度に特に上限はない。目安として、アニオン化度が２以下のアニオン性ポリマーを用いることができる。
The anionization degree of the anionic polymer is not particularly limited, but from the viewpoint of promoting the formation of composite particles with the cationic polymer, the lower limit is preferably 0.1 or more, more preferably 0.2 or more.
On the other hand, from the viewpoint of forming composite particles with a cationic polymer, there is no particular upper limit to the degree of anionization of the anionic polymer. As a guide, an anionic polymer having an anionization degree of 2 or less can be used.
ここで、「アニオン化度」とは、以下の式により算出することができる値のことをいう。
｛（ポリマーに含まれるアニオン性官能基の数）−（ポリマーに含まれるカチオン性官能基の数）｝／ポリマーを構成するモノマーの総量
Here, “degree of anionization” refers to a value that can be calculated by the following formula.
{(Number of anionic functional groups contained in polymer) − (Number of cationic functional groups contained in polymer)} / Total amount of monomers constituting the polymer
（２）カチオン性ポリマー
本発明においてカチオン性ポリマーとは、少なくとも水中でカチオン性を示すポリマーのことをいい、全体としてカチオン性となる両性ポリマーも含まれる。
(2) Cationic polymer In the present invention, the cationic polymer means a polymer that is cationic at least in water, and includes an amphoteric polymer that is cationic as a whole.
本発明においては、カチオン化度が０．２以上であるポリマーを用いる。かかるカチオン性ポリマーを用いることにより、容易にアニオン性ポリマーと複合粒子を形成させることができる。
一方、アニオン性ポリマーとの複合粒子形成の観点からは、カチオン性ポリマーのカチオン化度に特に上限はない。目安として、カチオン化度が２以下のカチオン性ポリマーを用いることができる。
In the present invention, a polymer having a cationization degree of 0.2 or more is used. By using such a cationic polymer, composite particles can be easily formed with an anionic polymer.
On the other hand, from the viewpoint of forming composite particles with an anionic polymer, there is no particular upper limit to the degree of cationization of the cationic polymer. As a guide, a cationic polymer having a cationization degree of 2 or less can be used.
ここで、「カチオン化度」とは、以下の式により算出することができる値のことをいう。
｛（ポリマーに含まれるカチオン性官能基の数）−（ポリマーに含まれるアニオン性官能基の数）｝／ポリマーを構成するモノマーの総量
Here, the “degree of cationization” refers to a value that can be calculated by the following equation.
{(Number of cationic functional groups contained in polymer) − (Number of anionic functional groups contained in polymer)} / Total amount of monomers constituting the polymer
本発明で用いられるカチオン性ポリマーは、カチオン性の官能基を有するものであるのならば、天然物でも合成物でも構わない。
カチオン性ポリマーに含まれるカチオン性官能基としては、アミノ基、グアニジノ基及びイミノ基等が挙げられる。本発明のカチオン性ポリマーは、これらの基をポリマーの側鎖、または主鎖中に含有するものである。
The cationic polymer used in the present invention may be a natural product or a synthetic product as long as it has a cationic functional group.
Examples of the cationic functional group contained in the cationic polymer include an amino group, a guanidino group, and an imino group. The cationic polymer of the present invention contains these groups in the side chain or main chain of the polymer.
アニオン性ポリマーとしては、カチオン化多糖類、アリル系アミン重合体、アミノ基含有（メタ）アクリル酸重合体などを例示でき、特にカチオン化多糖類、アリル系アミン重合体を好ましく例示できる。 Examples of the anionic polymer include a cationized polysaccharide, an allyl amine polymer, and an amino group-containing (meth) acrylic acid polymer, and a cationized polysaccharide and an allyl amine polymer are particularly preferable.
カチオン化多糖類としてはカチオン化セルロース、カチオン化グアーガム、カチオン化デンプンなどを例示できる。 Examples of the cationized polysaccharide include cationized cellulose, cationized guar gum, and cationized starch.
アリル系アミン重合体とは、アリル基とアミノ基を有する単量体が、アリル重合により重合したものである。単量体が有するアリル基の数は特に限定されないが、好ましくは１又は２である。
アリル系アミン重合体としては、アリルアミン塩酸塩重合体、アリルアミンアミド硫酸塩重合体、アリルアミン塩酸塩・ジアリルアミン塩酸塩共重合体、アリルアミン酢酸塩・ジアリルアミン酢酸塩共重合体、アリルアミン塩酸塩・ジアルキルアリルアミン塩酸塩共重合体、部分アルコキシカルボニル化アリルアミン重合体、部分アルキルカルボニル化アリルアミン酢酸塩重合体、部分尿素化ポリアリルアミン重合体、ジアリルアミン塩酸塩重合体、アルキルジアリルアミン塩酸塩重合体、アルキルジアリルアミンアミド硫酸塩重合体、アルキルジアリルアミン酢酸塩重合体、ジアリルジメチルアンモニウムクロリド重合体、ジアリルメチルエチルアンモニウムエチルサルフェイト重合体、ジアリルアミン塩酸塩・二酸化硫黄共重合体、ジアリルアミン酢酸塩・二酸化硫黄共重合体、ジアリルメチルエチルアンモニウムエチルサルフェイト・二酸化硫黄 共重合体、アルキルジアリルアミン塩酸塩・二酸化硫黄共重合体、ジアリルジアルキルアンモニウムクロリド・二酸化硫黄共重合体、ジアリルジアルキルアンモニウムクロリド・アクリルアミド共重合体等を例示することができる。
The allylic amine polymer is a product in which a monomer having an allyl group and an amino group is polymerized by allyl polymerization. The number of allyl groups possessed by the monomer is not particularly limited, but is preferably 1 or 2.
The allyl amine polymer includes allylamine hydrochloride polymer, allylamine amide sulfate polymer, allylamine hydrochloride / diallylamine hydrochloride copolymer, allylamine acetate / diallylamine acetate copolymer, allylamine hydrochloride / dialkylallylamine hydrochloride. Salt copolymer, partially alkoxycarbonylated allylamine polymer, partially alkylcarbonylated allylamine acetate polymer, partially urealated polyallylamine polymer, diallylamine hydrochloride polymer, alkyldiallylamine hydrochloride polymer, alkyldiallylamine amide sulfate heavy Polymer, alkyldiallylamine acetate polymer, diallyldimethylammonium chloride polymer, diallylmethylethylammonium ethyl sulfate polymer, diallylamine hydrochloride / sulfur dioxide copolymer, dia Luamine acetate / sulfur dioxide copolymer, diallylmethylethylammonium ethyl sulfate / sulfur dioxide copolymer, alkyldiallylamine hydrochloride / sulfur dioxide copolymer, diallyldialkylammonium chloride / sulfur dioxide copolymer, diallyldialkylammonium chloride -An acrylamide copolymer etc. can be illustrated.
アミノ基含有（メタ）アクリル酸重合体としては、（メタ）アクリル酸重合体のカルボキシル基部分に、アミノ基を含有する側鎖構造がエステル結合又はアミド結合により結合している構造のものであれば特に限定されない。当該側鎖構造は直鎖状であっても分岐状であっても構わない。側鎖に含まれるアミノ基は第１級〜第３級の何れであってもよく、第４級アンモニウムの形態であってもよい。 The amino group-containing (meth) acrylic acid polymer has a structure in which a side chain structure containing an amino group is bonded to the carboxyl group portion of the (meth) acrylic acid polymer by an ester bond or an amide bond. If it does not specifically limit. The side chain structure may be linear or branched. The amino group contained in the side chain may be any of primary to tertiary, and may be in the form of quaternary ammonium.
本発明の好ましい実施の形態では、第１級〜第３級のアミンであるカチオン性ポリマーを用いる。より好ましい実施形態では、第１級〜第３級のアミンであるアリル系アミン重合体を用いる。
第１級〜第３級のアリル系アミン重合体として、具体的には、アリルアミン塩酸塩重合体、アリルアミンアミド硫酸塩重合体、アリルアミン塩酸塩・ジアリルアミン塩酸塩共重合体、アリルアミン酢酸塩・ジアリルアミン酢酸塩共重合体、アリルアミン塩酸塩・ジアルキルアリルアミン塩酸塩共重合体、部分アルコキシカルボニル化アリルアミン重合体、部分アルキルカルボニル化アリルアミン酢酸塩重合体、部分尿素化ポリアリルアミン重合体、ジアリルアミン塩酸塩重合体、アルキルジアリルアミン塩酸塩重合体、アルキルジアリルアミンアミド硫酸塩重合体、アルキルジアリルアミン酢酸塩重合体、ジアリルアミン塩酸塩・二酸化硫黄共重合体、ジアリルアミン酢酸塩・二酸化硫黄共重合体、アルキルジアリルアミン塩酸塩・二酸化硫黄共重合体等を例示することができる。
In a preferred embodiment of the present invention, a cationic polymer that is a primary to tertiary amine is used. In a more preferred embodiment, an allylic amine polymer that is a primary to tertiary amine is used.
Specific examples of primary to tertiary allylic amine polymers include allylamine hydrochloride polymer, allylamine amide sulfate polymer, allylamine hydrochloride / diallylamine hydrochloride copolymer, allylamine acetate / diallylamine acetic acid. Salt copolymer, allylamine hydrochloride / dialkylallylamine hydrochloride copolymer, partially alkoxycarbonylated allylamine polymer, partially alkylcarbonylated allylamine acetate polymer, partially uread polyallylamine polymer, diallylamine hydrochloride polymer, alkyl Diallylamine hydrochloride polymer, alkyldiallylamine amide sulfate polymer, alkyldiallylamine acetate polymer, diallylamine hydrochloride / sulfur dioxide copolymer, diallylamine acetate / sulfur dioxide copolymer, alkyldiallylamine hydrochloride / sulfur dioxide It can be exemplified copolymers.
全体としてカチオン性となることからカチオン性ポリマーに分類できる両性ポリマーとしては、ジアルキルアミノエチルメタクリレート重合体の酢酸両性化物、メタクリロイルエチルベタイン／メタクリレートコポリマー、アクリル酸オクチルアクリルアミド／アクリル酸ヒドロキシプロピル／メタクリル酸ブチルアミノエチル共重合体、塩化ジメチルジアリルアンモニウム／アクリル酸共重合体、塩化ジメチルジアリルアンモニウム／アクリル酸／アクリルアミド共重合体、塩化メタクリルアミドプロピルトリメチルアンモニウム／アクリル酸／アクリル酸メチル共重合体を好ましく例示することができる。 Amphoteric polymers that can be classified as cationic polymers because they are cationic as a whole include acetic acid amphoteric compounds of dialkylaminoethyl methacrylate polymers, methacryloylethyl betaine / methacrylate copolymers, octyl acrylate acrylate / hydroxypropyl acrylate / butyl methacrylate Preferred examples include aminoethyl copolymer, dimethyldiallylammonium chloride / acrylic acid copolymer, dimethyldiallylammonium chloride / acrylic acid / acrylamide copolymer, and methacrylamidopropyltrimethylammonium chloride / acrylic acid / methyl acrylate copolymer. be able to.
また、カチオン性ポリマーとして、全体としてカチオン性を示すペプチドを用いることが好ましい。
ペプチドの種類は特に限定されないが、全アミノ酸残基に対する塩基性アミノ酸残基の割合が、好ましくは７０％以上、より好ましくは８０％以上、さらに好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９９％以上である塩基性ペプチドを用いることが好ましい。
特に塩基性アミノ酸残基のみから構成される塩基性ペプチドを好ましく例示できる。
Moreover, it is preferable to use the peptide which shows cationicity as a whole as a cationic polymer.
The type of peptide is not particularly limited, but the ratio of basic amino acid residues to all amino acid residues is preferably 70% or more, more preferably 80% or more, still more preferably 90% or more, and further preferably 99% or more. It is preferable to use a certain basic peptide.
In particular, a basic peptide composed only of basic amino acid residues can be preferably exemplified.
塩基性ペプチドとしては、アルギニン及びリジンにより構成されるペプチドを特に好適に例示できる。
具体的にはポリリジンやポリアルギニンを用いることが好ましい。
As the basic peptide, a peptide composed of arginine and lysine can be particularly preferably exemplified.
Specifically, polylysine or polyarginine is preferably used.
また、ペプチドとしては、単一のアミノ酸残基により構成されているペプチドと、２種以上のアミノ酸残基により構成されているペプチドの何れを用いてもよい。 Moreover, as a peptide, you may use any of the peptide comprised by the single amino acid residue, and the peptide comprised by 2 or more types of amino acid residues.
（３）複合粒子
本発明の複合粒子は、上述したアニオン性ポリマー及びカチオン性ポリマーを必須成分として含む。
複合粒子におけるアニオン性ポリマーと、カチオン性ポリマーの質量比は、仕込み量ベースで、好ましくは１０：１〜１：１０、より好ましくは５：１〜５：１、さらに好ましくは２：１〜１：２、さらに好ましくは１．５：１〜１：１．５である。
(3) Composite Particle The composite particle of the present invention contains the above-described anionic polymer and cationic polymer as essential components.
The mass ratio of the anionic polymer to the cationic polymer in the composite particles is preferably 10: 1 to 1:10, more preferably 5: 1 to 5: 1, and even more preferably 2: 1 to 1 on a charge basis. : 2, more preferably 1.5: 1 to 1: 1.5.
複合粒子には上記必須成分以外の任意の成分が含まれていてもよいが、複合粒子全体に占める、上記必須成分の総含有量は、好ましくは５０質量％以上、より好ましくは７０質量％以上、さらに好ましくは９０質量％以上、さらに好ましくは９９質量％以上である。 The composite particles may contain any component other than the essential components, but the total content of the essential components in the entire composite particles is preferably 50% by mass or more, more preferably 70% by mass or more. More preferably, it is 90% by mass or more, more preferably 99% by mass or more.
複合粒子の平均粒子径は、好ましくは１０００ｎｍ以下、より好ましくは５００ｎｍ以下、より好ましくは３００ｎｍ以下、さらに好ましくは１００ｎｍ以下である。 The average particle size of the composite particles is preferably 1000 nm or less, more preferably 500 nm or less, more preferably 300 nm or less, and still more preferably 100 nm or less.
（４）複合粒子の製造方法
上述の複合粒子の製造方法は特に限定されないが、本発明の製造方法によって製造することが好ましい。以下、本発明の複合粒子の製造方法の具体的な実施形態について説明する。
(4) Manufacturing method of composite particle Although the manufacturing method of the above-mentioned composite particle is not specifically limited, It is preferable to manufacture with the manufacturing method of this invention. Hereinafter, specific embodiments of the method for producing composite particles of the present invention will be described.
本発明の製造方法は、水系溶媒中において、アニオン性ポリマー、並びに、カチオン化度が０．２以上であるカチオン性ポリマー（キトサンを除く）を混合することを特徴とする。
本発明の製造方法によれば、必須成分であるポリマーを水系溶媒中で混合するという簡易な操作によって複合粒子を製造することができる。
The production method of the present invention is characterized by mixing an anionic polymer and a cationic polymer (excluding chitosan) having a cationization degree of 0.2 or more in an aqueous solvent.
According to the production method of the present invention, composite particles can be produced by a simple operation of mixing a polymer as an essential component in an aqueous solvent.
水系溶媒とは、水（例えば、精製水、イオン交換水、水道水等）または水溶性成分の水溶液のことをいう。水溶性成分としては、本発明の効果を損なわないものであれば特に制限無く用いることができ、例えば、通常化粧料や医薬部外品等に配合される粉末類、保湿剤、増粘剤、防腐剤等の添加物が挙げられる。なお、高融点の水溶性成分を配合する場合は、予め加熱して水に均一溶解させておくことができるが、水溶性成分が溶解した後は水溶液を室温程度に戻してから複合粒子の製造に用いることが好ましい。 The aqueous solvent refers to water (for example, purified water, ion exchange water, tap water, etc.) or an aqueous solution of a water-soluble component. As the water-soluble component, it can be used without particular limitation as long as it does not impair the effects of the present invention. For example, powders, moisturizers, thickeners, etc. that are usually blended in cosmetics and quasi drugs, etc. Additives such as preservatives can be mentioned. In addition, when blending a water-soluble component having a high melting point, it can be heated in advance and dissolved uniformly in water, but after the water-soluble component is dissolved, the aqueous solution is returned to about room temperature and then the composite particles are produced. It is preferable to use for.
予めアニオン性ポリマー水溶液と、カチオン性ポリマー水溶液をそれぞれ別途調製し、これらを混合する実施の形態とすることが好ましい。
このように別途調製した各ポリマー水溶液を混合する形態とすることによって、複合粒子が凝集することを防ぐことができる。
It is preferable to prepare an embodiment in which an aqueous anionic polymer solution and a cationic polymer aqueous solution are separately prepared in advance and mixed.
Thus, it can prevent that a composite particle aggregates by setting it as the form which mixes each polymer aqueous solution prepared separately.
アニオン性ポリマー水溶液を予め調製する場合には、当該水溶液におけるアニオン性ポリマーの濃度は、好ましくは１．７ｍＭ以下、より好ましくは１ｍＭ以下、さらに好ましくは０．９ｍＭ以下であることが好ましい。
このような濃度に調節しておくことにより、後の工程でカチオン性ポリマーと混合した際に、粒子の不要な凝集を回避することができる。
When an anionic polymer aqueous solution is prepared in advance, the concentration of the anionic polymer in the aqueous solution is preferably 1.7 mM or less, more preferably 1 mM or less, and even more preferably 0.9 mM or less.
By adjusting to such a concentration, unnecessary aggregation of particles can be avoided when mixed with a cationic polymer in a later step.
カチオン性ポリマー水溶液を予め調製する場合には、当該水溶液における各ポリマーの濃度は、好ましくは１．７ｍＭ以下、より好ましくは１ｍＭ以下、さらに好ましくは０．９ｍＭ以下である。
このような濃度に調節しておくことにより、後の工程でアニオン性ポリマー水溶液と混合した際に、粒子の不要な凝集を回避することができる。
When a cationic polymer aqueous solution is prepared in advance, the concentration of each polymer in the aqueous solution is preferably 1.7 mM or less, more preferably 1 mM or less, and even more preferably 0.9 mM or less.
By adjusting to such a concentration, unnecessary agglomeration of particles can be avoided when mixed with an aqueous anionic polymer solution in a later step.
混合後の溶液に対するアニオン性ポリマーの濃度は、好ましくは０．９ｍＭ以下、より好ましくは０．５ｍＭ以下である。
混合後の溶液に対するカチオン性ポリマーの濃度は、好ましくは０．９以下、より好ましくは０．５ｍＭ以下である。
The concentration of the anionic polymer in the solution after mixing is preferably 0.9 mM or less, more preferably 0.5 mM or less.
The concentration of the cationic polymer with respect to the solution after mixing is preferably 0.9 or less, more preferably 0.5 mM or less.
混合の方法としては、各溶液を一度に混合する方法、一つの溶液に、他の溶液を滴下する方法などが挙げられる。いずれも、溶液を撹拌しながら混合を行うことが、凝集を回避する観点から好ましい。 Examples of the mixing method include a method of mixing each solution at a time, a method of dropping another solution into one solution, and the like. In any case, it is preferable to perform mixing while stirring the solution from the viewpoint of avoiding aggregation.
このように製造した複合粒子は、任意の成分と組み合わせることにより、皮膚外用組成物の形態とすることが好ましい。皮膚外用組成物としては、医薬品、医薬部外品、化粧品の何れの形態であってもよい。 The composite particles produced as described above are preferably used in the form of a composition for external use on skin by being combined with an arbitrary component. The external composition for skin may be in any form of pharmaceuticals, quasi drugs, and cosmetics.
任意の成分としては、例えば、脂肪酸セッケン（ラウリン酸ナトリウム、パルミチン酸ナトリウム等）、ラウリル硫酸カリウム、アルキル硫酸トリエタノールアミンエーテル等のアニオン界面活性剤類、塩化ステアリルトリメチルアンモニウム、塩化ベンザルコニウム、ラウリルアミンオキサイド等のカチオン界面活性剤類、イミダゾリン系両性界面活性剤（２−ココイル−２−イミダゾリニウムヒドロキサイド−１−カルボキシエチロキシ２ナトリウム塩等）、ベタイン系界面活性剤（アルキルベタイン、アミドベタイン、スルホベタイン等）、アシルメチルタウリン等の両性界面活性剤類、ソルビタン脂肪酸エステル類（ソルビタンモノステアレート、セスキオレイン酸ソルビタン等）、グリセリン脂肪酸類（モノステアリン酸グリセリン等）、プロピレングリコール脂肪酸エステル類（モノステアリン酸プロピレングリコール等）、硬化ヒマシ油誘導体、グリセリンアルキルエーテル、ＰＯＥソルビタン脂肪酸エステル類（ＰＯＥソルビタンモノオレエート、モノステアリン酸ポリオキエチレンソルビタン等）、ＰＯＥソルビット脂肪酸エステル類（ＰＯＥ−ソルビットモノラウレート等）、ＰＯＥグリセリン脂肪酸エステル類（ＰＯＥ−グリセリンモノイソステアレート等）、ＰＯＥ脂肪酸エステル類（ポリエチレングリコールモノオレート、ＰＯＥジステアレート等）、ＰＯＥアルキルエーテル類（ＰＯＥ２−オクチルドデシルエーテル等）、ＰＯＥアルキルフェニルエーテル類（ＰＯＥノニルフェニルエーテル等）、プルロニック型類、ＰＯＥ・ＰＯＰアルキルエーテル類（ＰＯＥ・ＰＯＰ２−デシルテトラデシルエーテル等）、テトロニック類、ＰＯＥヒマシ油・硬化ヒマシ油誘導体（ＰＯＥヒマシ油、ＰＯＥ硬化ヒマシ油等）、ショ糖脂肪酸エステル、アルキルグルコシド等の非イオン界面活性剤類、ピロリドンカルボン酸ナトリウム、乳酸、乳酸ナトリウム等の保湿成分類、表面処理されていても良い、マイカ、タルク、カオリン、合成雲母、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、無水ケイ酸（シリカ）、酸化アルミニウム、硫酸バリウム等の粉体類、表面処理されていても良い、酸化コバルト、群青、紺青、酸化亜鉛の無機顔料類、表面処理されていても良い、酸化鉄二酸化チタン焼結体等の複合顔料、表面処理されていても良い、雲母チタン、魚燐箔、オキシ塩化ビスマス等のパール剤類、レーキ化されていても良い赤色２０２号、赤色２２８号、赤色２２６号、黄色４号、青色４０４号、黄色５号、赤色５０５号、赤色２３０号、赤色２２３号、橙色２０１号、赤色２１３号、黄色２０４号、黄色２０３号、青色１号、緑色２０１号、紫色２０１号、赤色２０４号等の有機色素類、ポリエチレン末、ポリメタクリル酸メチル、ナイロン粉末、オルガノポリシロキサンエラストマー等の有機粉体類、エタノール、イソプロパノール等の低級アルコール類、ビタミンＡ又はその誘導体、ビタミンＢ６塩酸塩，ビタミンＢ６トリパルミテート，ビタミンＢ６ジオクタノエート，ビタミンＢ２又はその誘導体，ビタミンＢ１２，ビタミンＢ１５又はその誘導体等のビタミンＢ類、α−トコフェロール，β−トコフェロール，γ−トコフェロール，ビタミンＥアセテート等のビタミンＥ類、ビタミンＤ類、ビタミンＨ、パントテン酸、パンテチン、ピロロキノリンキノン等のビタミン類などが例示できる。 Optional ingredients include, for example, fatty acid soap (sodium laurate, sodium palmitate, etc.), anionic surfactants such as potassium lauryl sulfate, alkylsulfuric triethanolamine ether, stearyltrimethylammonium chloride, benzalkonium chloride, lauryl Cationic surfactants such as amine oxides, imidazoline-based amphoteric surfactants (such as 2-cocoyl-2-imidazolinium hydroxide-1-carboxyethyloxy disodium salt), betaine surfactants (alkylbetaines, amides) Amphoteric surfactants such as acyl methyl taurine, sorbitan fatty acid esters (such as sorbitan monostearate, sorbitan sesquioleate), glycerin fatty acids (glyceryl monostearate) Propylene glycol fatty acid esters (such as propylene glycol monostearate), hydrogenated castor oil derivatives, glycerin alkyl ether, POE sorbitan fatty acid esters (POE sorbitan monooleate, polyoxyethylene sorbitan monostearate, etc.), POE sorbit Fatty acid esters (POE-sorbitol monolaurate, etc.), POE glycerin fatty acid esters (POE-glycerin monoisostearate, etc.), POE fatty acid esters (polyethylene glycol monooleate, POE distearate, etc.), POE alkyl ethers (POE2) -Octyldodecyl ether, etc.), POE alkyl phenyl ethers (POE nonyl phenyl ether, etc.), Pluronic types, POE / POP alkyl ether Nonionic surface actives such as POE / POP2-decyltetradecyl ether, Tetronics, POE castor oil / hardened castor oil derivatives (POE castor oil, POE hardened castor oil, etc.), sucrose fatty acid esters, alkyl glucosides, etc. Agents, moisturizing ingredients such as sodium pyrrolidonecarboxylate, lactic acid, sodium lactate, surface treated, mica, talc, kaolin, synthetic mica, calcium carbonate, magnesium carbonate, anhydrous silicic acid (silica), aluminum oxide , Powders such as barium sulfate, surface treated, cobalt oxide, ultramarine, bitumen, zinc oxide inorganic pigments, surface treated, composite pigments such as iron oxide titanium dioxide sintered body May be surface-treated, pearl agents such as titanium mica, fish phosphorus foil, bismuth oxychloride, rake Red 202, Red 228, Red 226, Yellow 4, Blue 404, Yellow 5, Red 505, Red 230, Red 223, Orange 201, Red 213, Yellow Organic powders such as No. 204, Yellow No. 203, Blue No. 1, Green No. 201, Purple No. 201, Red No. 204, organic powders such as polyethylene powder, polymethyl methacrylate, nylon powder, organopolysiloxane elastomer, Lower alcohols such as ethanol, isopropanol, vitamin A or derivatives thereof, vitamin B6 hydrochloride, vitamin B6 tripalmitate, vitamin B6 dioctanoate, vitamin B2 or derivatives thereof, vitamin B such as vitamin B12, vitamin B15 or derivatives thereof, α-tocopherol, β-tocopherol, γ-tocopherol, bi Vitamin E such as Min E acetate, vitamin D, vitamin H, pantothenic acid, pantethine, vitamins such as pyrroloquinoline quinone, and others.
＜試験例１＞
表１に示すアニオン性ポリマー、カチオン性ポリマーの水溶液をそれぞれ別途調製した。アニオン性ポリマー水溶液は０．２ｍＭ、カチオン性ポリマー水溶液は０．２〜２ｍＭ（うちペプチド水溶液は０．１〜０．２ｍＭ）となるように調製した。
次いで攪拌しながら各アニオン性ポリマー水溶液に、各カチオン性ポリマーの水溶液を滴下することで混合溶液を調製した。アニオン性ポリマー水溶液と、カチオン性ポリマーの水溶液の混合比は１：１とした。
<Test Example 1>
Separately, aqueous solutions of the anionic polymer and the cationic polymer shown in Table 1 were prepared. The aqueous anionic polymer solution was 0.2 mM, and the cationic polymer aqueous solution was 0.2 to 2 mM (of which the peptide aqueous solution was 0.1 to 0.2 mM).
Next, a mixed solution was prepared by dropwise adding an aqueous solution of each cationic polymer to each aqueous anionic polymer solution while stirring. The mixing ratio of the anionic polymer aqueous solution and the cationic polymer aqueous solution was 1: 1.
調製した各混合溶液をＥＬＳ−Ｚ２（大塚電子株式会社）を用いて測定し（動的光散乱法）、ブラウン運動が観測された場合には複合粒子が形成されたものと判定した。結果を表２に示す。 Each prepared mixed solution was measured using ELS-Z2 (Otsuka Electronics Co., Ltd.) (dynamic light scattering method), and it was determined that composite particles were formed when Brownian motion was observed. The results are shown in Table 2.
×・・・複合粒子が形成されていない
表２に示すように、カチオン化度が０．２未満のカチオン性ポリマーは何れも、ヒアルロン酸ナトリウム及びポリグルタミン酸ナトリウムと複合粒子を形成しなかった。一方、カチオン化度が０．２以上のカチオン性ポリマーは何れも、ヒアルロン酸ナトリウム及びポリグルタミン酸ナトリウムと複合粒子を形成した。
この結果は、アニオン性ポリマーとの複合粒子の形成については、カチオン性ポリマーのカチオン化度が０．２以上であることが重要であることを示している。
As shown in Table 2, none of the cationic polymers having a degree of cationization of less than 0.2 formed composite particles with sodium hyaluronate and sodium polyglutamate. On the other hand, any cationic polymer having a cationization degree of 0.2 or more formed composite particles with sodium hyaluronate and sodium polyglutamate.
This result shows that it is important that the degree of cationization of the cationic polymer is 0.2 or more for the formation of composite particles with the anionic polymer.
＜試験例２＞
表３に示す濃度でヒアルロン酸ナトリウム水溶液とジアリルジメチルアミン塩酸塩重合体水溶液をそれぞれ別途調製し、これらを混合することにより実施例１〜６の複合粒子の水溶液を調製した。
実施例１〜６の水溶液中に形成された複合粒子の粒子径をＥＬＳ−Ｚ２（大塚電子株式会社）を用いて測定した（動的光散乱法）。結果を表３に示す。
<Test Example 2>
A sodium hyaluronate aqueous solution and a diallyldimethylamine hydrochloride polymer aqueous solution were separately prepared at the concentrations shown in Table 3, and these were mixed to prepare aqueous solutions of the composite particles of Examples 1-6.
The particle diameters of the composite particles formed in the aqueous solutions of Examples 1 to 6 were measured using ELS-Z2 (Otsuka Electronics Co., Ltd.) (dynamic light scattering method). The results are shown in Table 3.
表３に示すように、実施例１及び２の水溶液中には粒径が顕著に大きい粒子が確認できたことから、形成した複合粒子が凝集しているものと認められる。
実施例３の水溶液については、調製直後は比較的粒径の小さな複合粒子の形成が確認できた。しかし、３０分間放置後に粒径の増大がみられたことから、水溶液の静置により複合粒子が凝集してしまうものと認められる。
一方、実施例４〜６の水溶液では２００ｎｍ未満の小さな粒径の複合粒子が形成されていることが確認できた。また、これを３０分以上放置しても粒径の増大が確認されなかった。
As shown in Table 3, particles having a remarkably large particle size were confirmed in the aqueous solutions of Examples 1 and 2, and thus it is recognized that the formed composite particles are aggregated.
About the aqueous solution of Example 3, formation of the composite particle with a comparatively small particle diameter was confirmed immediately after preparation. However, since the particle size increased after being allowed to stand for 30 minutes, it is recognized that the composite particles aggregate when the aqueous solution is allowed to stand.
On the other hand, in the aqueous solutions of Examples 4 to 6, it was confirmed that composite particles having a small particle size of less than 200 nm were formed. Further, no increase in particle size was confirmed even when this was left for 30 minutes or longer.
以上の結果は、アニオン性ポリマー水溶液と、カチオン性ポリマー水溶液を予め調製し、これらを混合することで複合粒子を製造するにあたっては、アニオン性ポリマー水溶液は１．７ｍＭ以下、また、カチオン性ポリマー水溶液又はペプチド水溶液は１．７ｍＭ以下の濃度で調製することが、複合粒子の凝集を回避する観点から好ましいことを示している。 The above results show that an anionic polymer aqueous solution and a cationic polymer aqueous solution are prepared in advance and mixed to produce composite particles. The anionic polymer aqueous solution is 1.7 mM or less, and the cationic polymer aqueous solution. Alternatively, it is shown that the aqueous peptide solution is preferably prepared at a concentration of 1.7 mM or less from the viewpoint of avoiding the aggregation of the composite particles.
＜試験例３＞
試験例１と同様の方法で、ヒアルロン酸ナトリウムと、表４に示す第１級アミン又は第４級アンモニウムであるカチオン性ポリマーとの複合粒子を含む水溶液を調製した。
<Test Example 3>
In the same manner as in Test Example 1, an aqueous solution containing composite particles of sodium hyaluronate and a cationic polymer which is a primary amine or quaternary ammonium shown in Table 4 was prepared.
調製した複合粒子の水溶液に、生体内で普遍的に見出されるイオンで構成されるＰＢＳ緩衝液を添加することによって、生体内を模倣した環境下に置かれた複合粒子がどのような挙動を示すのか調べた。
具体的には、調製した複合粒子の水溶液にＰＢＳを添加し、試験例２と同様の方法により水溶液中の複合粒子の粒径を測定した。結果を図１に示す。
By adding a PBS buffer composed of ions that are universally found in the living body to the prepared aqueous solution of the composite particles, the behavior of the composite particles placed in an environment that mimics the living body is shown. I investigated.
Specifically, PBS was added to the prepared aqueous solution of composite particles, and the particle size of the composite particles in the aqueous solution was measured by the same method as in Test Example 2. The results are shown in FIG.
図１に示すように、ヒアルロン酸ナトリウムと、第４級アンモニウムであるジアリルジメチルアミン塩酸塩重合体またはカチオン化デンプンとの複合粒子は、ＰＢＳの添加により粒径が増大した。
一方、ヒアルロン酸ナトリウムと、第１級アミンであるプロタミンまたはポリリジンとの複合粒子は、ＰＢＳの添加量が１００％のとき（皮膚内と同一の環境）に粒径がほぼ測定できない状態となった。
As shown in FIG. 1, the composite particles of sodium hyaluronate and quaternary ammonium diallyldimethylamine hydrochloride polymer or cationized starch were increased in particle size by the addition of PBS.
On the other hand, the composite particles of sodium hyaluronate and primary amines, protamine or polylysine, became incapable of measuring the particle size when the amount of PBS added was 100% (same environment as in the skin). .
この結果は、アニオン性ポリマーと、第４級以外の第１級〜第３級アミンであるカチオン性ポリマーとの複合粒子は、皮膚内などの生体環境下において崩壊することを示している。
つまり、この結果は、当該複合粒子が皮膚浸透性を有しながらも皮膚内部への到達後には崩壊し、構成要素であるポリマーを拡散する性質を有することを示唆している。
This result shows that the composite particles of the anionic polymer and the cationic polymer that is a primary to tertiary amine other than the quaternary disintegrate in a biological environment such as in the skin.
In other words, this result suggests that the composite particles have a property of diffusing the polymer as a constituent element by disintegrating after reaching the inside of the skin while having skin permeability.
＜試験例４＞
表５に示す処方の乳化製剤を作製した。すなわち、水相をホモミキサーにて撹拌下、油相を投入し、乳化製剤を得た。
フルオレセインアミン標識ヒアルロン酸ナトリウムは、平均分子量 １２０万の岩井化学薬品社製のものを使用した。なお、フルオレセインアミン標識ヒアルロン酸ナトリウムは、文献Ｊ Ｇｅｎｅ Ｍｅｄ ２００８； １０： ７０−８０に記載のある方法に従い、合成することもできる。
また、水相成分は、フルオレセインアミン標識ヒアルロン酸ナトリウム水溶液とポリリジン水溶液を先に撹拌混合し、そこへクエン酸溶液を添加した後にその他の水性成分を投入することにより調製した。
<Test Example 4>
An emulsified preparation having the formulation shown in Table 5 was prepared. That is, the oil phase was added while stirring the aqueous phase with a homomixer to obtain an emulsified preparation.
As the fluoresceinamine-labeled sodium hyaluronate, an average molecular weight of 1.2 million manufactured by Iwai Chemical Co., Ltd. was used. In addition, a fluorescein amine labeled sodium hyaluronate can also be synthesize | combined according to a certain method as described in literature J Gene Med 2008; 10: 70-80.
The aqueous phase component was prepared by first stirring and mixing a fluoresceinamine-labeled sodium hyaluronate aqueous solution and an aqueous polylysine solution, adding the citric acid solution thereto, and then adding the other aqueous components.
ヒト皮膚片（バイオプレディック社）を、有効透過面積１．７７ｃｍ２の縦型拡散セルに装着し、レシーバー側（真皮側）にＰＢＳ ４ｍＬを適用した。その後、実施例７及び比較例１の製剤をドナー側に１ｍＬ適用し、２４時間の処理を行った。 A human skin piece (Biopredic) was attached to a vertical diffusion cell having an effective permeation area of 1.77 cm 2 , and 4 mL of PBS was applied to the receiver side (dermis side). Thereafter, 1 mL of the preparation of Example 7 and Comparative Example 1 was applied to the donor side, and the treatment was performed for 24 hours.
処理した皮膚を回収し、皮膚表層の余剰製剤を純水で数回洗い流した後、５０％メタノール水溶液中でホモジナイズした後、遠心分離することで（１５４００×ｇ、２５℃、５分）、皮膚抽出液を得た。 The treated skin is collected, the excess preparation on the surface of the skin is washed away several times with pure water, homogenized in a 50% aqueous methanol solution, and then centrifuged (15400 × g, 25 ° C., 5 minutes) to obtain the skin. An extract was obtained.
この皮膚抽出液と、フルオレセインアミン標識ヒアルロン酸ナトリウム単独の標準水溶液を以下の条件でＨＰＬＣ分析した。図２に実施例７および比較例１の各製剤を適用した皮膚抽出液中の蛍光強度測定結果を示す。なお、本蛍光は上記標準水溶液を分析した結果得られたフルオレセインアミン標識ヒアルロン酸ナトリウム由来のピークに一致したもののみから算出した。
・分析装置：Ａｇｉｌｅｎｔ１２６０
・カラム：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ Ｄｉｏｌ−３００、３００×８．０ｍｍｌ．Ｄ．，Ｓ−５μｍ，３０ｎｍ
・移動相：１０ｍＭ 酢酸アンモニウム／メタノール＝８０／２０
・流速：１．０ｍＬ／分
・温度：４０℃
・波長：λｅｘ＝４９４ｎｍ，λｅｍ＝５２１ｎｍ
This skin extract and a standard aqueous solution of fluoresceinamine-labeled sodium hyaluronate alone were subjected to HPLC analysis under the following conditions. FIG. 2 shows the fluorescence intensity measurement results in the skin extract to which the preparations of Example 7 and Comparative Example 1 were applied. In addition, this fluorescence was computed only from what corresponded to the peak derived from the fluorescein amine labeled sodium hyaluronate obtained as a result of analyzing the said standard aqueous solution.
・ Analyzer: Agilent 1260
Column: YMC-Pack Diol-300, 300 × 8.0 ml. D. , S-5μm, 30nm
Mobile phase: 10 mM ammonium acetate / methanol = 80/20
・ Flow rate: 1.0 mL / min ・ Temperature: 40 ° C.
・ Wavelength: λ ex = 494 nm, λ em = 521 nm
さらに、実施例７の製剤を適用した皮膚抽出液と、フルオレセインアミン標識ヒアルロン酸ナトリウムとポリリジンを含む複合粒子の標準水溶液、フルオレセインアミン標識ヒアルロン酸ナトリウム単独の標準水溶液を以下の条件でＦＦＦ分析した。
・分析装置：ＡＦ２０００ＭＦＦｌｏｗＦＦＦＳｙｓｔｅｍ（ＡＦ４）
・分離チャネル： ＡＦ２０００Ａｎａｌｙｔｉｃａｌｃｈａｎｎｅｌ（ＡＦ４）３５０μｍ
・移動相：１０ｍＭ 酢酸アンモニウム／メタノール＝８０／２０
・検出流速：０．５ｍＬ／分
・クロスフロー流速：１．０ｍＬ／分
・波長：λｅｘ＝４９４ｎｍ，λｅｍ＝５２１ｎｍ
Furthermore, FFF analysis was performed on the skin extract to which the preparation of Example 7 was applied, a standard aqueous solution of composite particles containing fluoresceinamine-labeled sodium hyaluronate and polylysine, and a standard aqueous solution of fluoresceinamine-labeled sodium hyaluronate alone under the following conditions.
・ Analyzer: AF2000MFFlowFFFSystem (AF4)
-Separation channel: AF2000 Analytical channel (AF4) 350 μm
Mobile phase: 10 mM ammonium acetate / methanol = 80/20
Detection flow rate: 0.5 mL / min Cross flow flow rate: 1.0 mL / min Wavelength: λ ex = 494 nm, λ em = 521 nm
図３に示すように、実施例７の製剤を適用した皮膚抽出液とフルオレセインアミン標識ヒアルロン酸ナトリウム単独の標準水溶液の溶出時間−強度曲線はほぼ一致している。
この結果は、フルオレセインアミン標識ヒアルロン酸ナトリウムとポリリジンからなる複合粒子は皮膚への浸透後に崩壊し、皮膚内に非凝集状態のヒアルロナンを放出することを示している。
As shown in FIG. 3, the elution time-intensity curves of the skin extract to which the preparation of Example 7 was applied and the standard aqueous solution of fluoresceinamine-labeled sodium hyaluronate alone are almost the same.
This result indicates that the composite particles composed of fluoresceinamine-labeled sodium hyaluronate and polylysine disintegrate after permeation into the skin, and release non-aggregated hyaluronan into the skin.
試験例３及び４の結果は、アニオン性ポリマーと、第１級〜第３級アミンであるカチオン性ポリマーとの複合粒子は、内在性のアニオン性ポリマー（ヒアルロナンなど）と同じ状態のアニオン性ポリマーを皮膚内部に導入することができ、皮膚のバリア機能を向上させることができることを示している。 The results of Test Examples 3 and 4 show that the composite particles of an anionic polymer and a cationic polymer that is a primary to tertiary amine are in the same state as an endogenous anionic polymer (such as hyaluronan). Can be introduced into the skin, and the barrier function of the skin can be improved.
本発明は化粧料に応用することができる。 The present invention can be applied to cosmetics.
Claims (11)
（Ｂ）前記カチオン性ポリマーの水溶液と、
を別途調製し、これら水溶液を混合することを特徴とする、請求項７に記載の製造方法。 (A) an anionic polymer aqueous solution;
(B) an aqueous solution of the cationic polymer;
The method according to claim 7, wherein the aqueous solution is prepared separately and these aqueous solutions are mixed.
The composite particle manufactured by the manufacturing method as described in any one of Claims 8-10.
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