JP2018036233A - Diagnostic marker for sensitivity to anti-cancer drugs and prognosis of cancer - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、癌に対する抗癌剤の有効性を判定するための方法、化学療法後の癌の予後を判定するための方法、及びこれらの方法に使用し得るマーカー、キット、及びデバイス等に関する。 The present invention relates to a method for determining the effectiveness of an anticancer agent against cancer, a method for determining the prognosis of cancer after chemotherapy, and markers, kits, devices, and the like that can be used in these methods.
癌は全世界において主要な死因の一つであり、その有効な治療法が求められている。近年、核小体ストレス応答が腫瘍化進展を制御する極めて重要な生体の癌防御機構であることが分かってきたことから（非特許文献１）、これまでに本発明者は、核小体ストレス応答を利用して抗癌剤を探索可能なスクリーニング方法を見出した（特許文献１）。 Cancer is one of the leading causes of death worldwide, and an effective treatment is required. In recent years, it has been found that nucleolar stress response is an extremely important biological cancer defense mechanism that controls the progression of tumorigenesis (Non-Patent Document 1). The screening method which can search for an anticancer agent using response was discovered (patent document 1).
癌を効果的に治療するためには、新規な抗癌剤を開発することに加えて、適切な治療法を選択することが重要であり、そのためには治療感受性や癌の予後を判断可能な診断方法を開発することが不可欠である。近年、癌に対する様々なマーカー因子が同定され、癌の診断方法は飛躍的に向上している。しかしながら、多種の癌に適応可能なマーカー、及び治療感受性及び／又は癌の予後を評価できるマーカーは乏しいのが現状であった。 In order to effectively treat cancer, in addition to developing new anticancer drugs, it is important to select an appropriate treatment method. To that end, a diagnostic method that can determine treatment sensitivity and cancer prognosis It is essential to develop. In recent years, various marker factors for cancer have been identified, and cancer diagnosis methods have been dramatically improved. However, there are currently few markers that can be applied to various types of cancer, and markers that can evaluate therapeutic sensitivity and / or prognosis of cancer.
本発明は、多種の癌に適応可能なマーカー、又は癌の予後及び／又は治療感受性を評価可能なマーカーを提供することを課題とする。また、本発明は、かかるマーカーを用いて癌の予後及び／又は治療感受性を判定するための方法を提供することを課題とする。 An object of the present invention is to provide a marker that can be applied to various cancers, or a marker that can evaluate the prognosis and / or treatment sensitivity of cancer. Another object of the present invention is to provide a method for determining the prognosis and / or treatment sensitivity of cancer using such a marker.
本発明者は、核小体ストレス応答制御タンパク質をコードする遺伝子又は該タンパク質をコードする遺伝子の発現量が、抗癌剤の感受性及び／又は癌の予後と相関があることを見出し、本願発明を完成させた。したがって、本願発明は、以下の態様を包含する。
（１）被験体由来のサンプルにおいて、核小体ストレス応答制御タンパク質又は該タンパク質をコードする遺伝子の発現量を測定する工程、及び
前記タンパク質又は遺伝子の発現量が、参照値と比べて高い場合、癌に対する抗癌剤の有効性が高いと決定する工程
を含む、被験体における癌に対する抗癌剤の有効性を判定するための方法。
（２）被験体由来のサンプルにおいて、核小体ストレス応答制御タンパク質又は該タンパク質をコードする遺伝子の発現量を測定する工程、及び
前記タンパク質又は遺伝子の発現量が、参照値と比べて高い場合、予後が良好であると決定する工程
を含む、被験体における化学療法後の癌の予後を判定するための方法。
（３）被験体由来のサンプルにおいて、核小体ストレス応答制御タンパク質又は該タンパク質をコードする遺伝子の発現量を測定する工程、及び
前記タンパク質又は遺伝子の発現量が、参照値と比べて高い場合、癌の再発のリスクが低いと決定する工程
を含む、被験体における化学療法後の癌の再発のリスクを判定するための方法。
（４）核小体ストレス応答制御タンパク質が、RPS6、RPS19、RPL29、RPL30、RPS3、RPS7、RPS14、RPS15、RPS20、RPS25、RPS26、RPS27、RPS27A、RPS27L、RPL3、RPL4、RPL5、RPL6、RPL11、RPL23、RPL26、RPL37、PICT1、IPO7、XPO1、UBTF1、TTF-1、ARF、Nucleostemin(NS)、PAK1IP1、UTP18、及びNucleophosmin(NPM)からなる群から選択されるタンパク質である、上記（１）〜（３）のいずれかに記載の方法。
（５）核小体ストレス応答制御タンパク質が、RPL11及び／又はRPL5である、上記（４）に記載の方法。
（６）癌が、乳癌、胃癌、肝臓癌、膵臓癌、大腸癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮頸癌、脳腫瘍、骨髄腫、骨肉腫、肺癌、白血病及び悪性リンパ腫からなる群から選択される、上記（１）〜（５）のいずれかに記載の方法。
（７）癌が、乳癌、胃癌、及び悪性リンパ腫からなる群から選択される、上記（６）に記載の方法。
（８）抗癌剤が、アクチノマイシンD、パクリタキセル、ビンブラスチン、アクラルビシン、ダウノルビシン、5-FU、シクロホスファミド、ドキソルビシン、及びビンクリスチンからなる群から選択される、上記（１）〜（７）のいずれかに記載の方法。
（９）核小体ストレス応答制御タンパク質又は該タンパク質をコードする遺伝子の、癌に対する抗癌剤の有効性を判定するためのマーカーとしての使用。
（１０）核小体ストレス応答制御タンパク質又は該タンパク質をコードする遺伝子の、被験体における化学療法後の癌の予後を判定するためのマーカーとしての使用。
（１１）核小体ストレス応答制御タンパク質に特異的に結合する抗体、又は該タンパク質をコードする遺伝子に対するプローブ若しくはプライマーの少なくとも一以上を含む、被験体における癌に対する抗癌剤の有効性を判定するためのキット。
（１２）核小体ストレス応答制御タンパク質に特異的に結合する抗体、又は該タンパク質をコードする遺伝子に対するプローブ若しくはプライマーの少なくとも一以上を含む、被験体における化学療法後の癌の予後を判定するためのキット。
（１３）核小体ストレス応答制御タンパク質をコードする遺伝子に対するプローブ若しくはプライマーの少なくとも一以上を含む、被験体における癌に対する抗癌剤の有効性を判定するためのデバイス。
（１４）核小体ストレス応答制御タンパク質をコードする遺伝子に対するプローブ若しくはプライマーの少なくとも一以上を含む、被験体における化学療法後の癌の予後を判定するためのデバイス。
The inventor has found that the gene encoding the nucleolar stress response control protein or the expression level of the gene encoding the protein correlates with the sensitivity of the anticancer agent and / or the prognosis of the cancer, and completed the present invention. It was. Accordingly, the present invention includes the following aspects.
(1) In a sample derived from a subject, the step of measuring the expression level of a nucleolar stress response control protein or a gene encoding the protein, and the expression level of the protein or gene is higher than a reference value, A method for determining the effectiveness of an anticancer agent against cancer in a subject comprising the step of determining that the anticancer agent is highly effective against cancer.
(2) In a sample derived from a subject, the step of measuring the expression level of a nucleolar stress response control protein or a gene encoding the protein, and the expression level of the protein or gene is higher than a reference value, A method for determining the prognosis of cancer after chemotherapy in a subject comprising determining that the prognosis is good.
(3) In a sample derived from a subject, the step of measuring the expression level of a nucleolar stress response control protein or a gene encoding the protein, and the expression level of the protein or gene is higher than a reference value, A method for determining a risk of cancer recurrence after chemotherapy in a subject comprising determining that the risk of cancer recurrence is low.
(4) Nucleolar stress response control protein is RPS6, RPS19, RPL29, RPL30, RPS3, RPS7, RPS14, RPS15, RPS20, RPS25, RPS26, RPS27, RPS27A, RPS27L, RPL3, RPL4, RPL5, RPL6, RPL11, A protein selected from the group consisting of RPL23, RPL26, RPL37, PICT1, IPO7, XPO1, UBTF1, TTF-1, ARF, Nucleostemin (NS), PAK1IP1, UTP18, and Nucleophosmin (NPM), (1) to The method according to any one of (3).
(5) The method according to (4) above, wherein the nucleolar stress response control protein is RPL11 and / or RPL5.
(6) The cancer is selected from the group consisting of breast cancer, stomach cancer, liver cancer, pancreatic cancer, colon cancer, prostate cancer, ovarian cancer, cervical cancer, brain tumor, myeloma, osteosarcoma, lung cancer, leukemia and malignant lymphoma The method according to any one of (1) to (5) above.
(7) The method according to (6) above, wherein the cancer is selected from the group consisting of breast cancer, gastric cancer, and malignant lymphoma.
(8) Any of (1) to (7) above, wherein the anticancer agent is selected from the group consisting of actinomycin D, paclitaxel, vinblastine, aclarubicin, daunorubicin, 5-FU, cyclophosphamide, doxorubicin, and vincristine The method described in 1.
(9) Use of a nucleolus stress response control protein or a gene encoding the protein as a marker for determining the effectiveness of an anticancer agent against cancer.
(10) Use of a nucleolus stress response control protein or a gene encoding the protein as a marker for determining the prognosis of cancer after chemotherapy in a subject.
(11) A method for determining the effectiveness of an anticancer agent against cancer in a subject, comprising at least one of an antibody that specifically binds to a nucleolar stress response control protein, or a probe or primer for a gene encoding the protein. kit.
(12) To determine the prognosis of cancer after chemotherapy in a subject, comprising at least one or more of an antibody that specifically binds to a nucleolar stress response control protein, or a probe or primer for a gene encoding the protein. Kit.
(13) A device for determining the effectiveness of an anticancer agent against cancer in a subject, comprising at least one probe or primer for a gene encoding a nucleolar stress response control protein.
(14) A device for determining the prognosis of cancer after chemotherapy in a subject, comprising at least one probe or primer for a gene encoding a nucleolar stress response control protein.
本発明によって、癌に対する化学療法の効果及び／又は化学療法後の癌の予後を予測することが可能となり得る。また、癌に対する化学療法の効果及び／又は癌の予後を予測するために用いられるマーカー等が提供される。 The present invention may be able to predict the effect of chemotherapy on cancer and / or the prognosis of cancer after chemotherapy. Moreover, the marker etc. which are used in order to estimate the effect of the chemotherapy with respect to cancer and / or the prognosis of cancer are provided.
１．癌に対する抗癌剤の有効性を判定するための方法
一態様において、本発明は、被験体における癌に対する抗癌剤の有効性を判定するための方法、又は該判定を補助するための方法に関する。本発明の抗癌剤の有効性を判定するための方法は、被験体由来のサンプルにおいて、核小体ストレス応答制御タンパク質又は該タンパク質をコードする遺伝子の発現量を測定する工程、及び前記タンパク質又は遺伝子の発現量が、参照値と比べて高い場合、癌に対する抗癌剤の有効性が高いと決定する工程を含む。
1. Method for Determining the Effectiveness of an Anticancer Agent Against Cancer In one aspect, the present invention relates to a method for determining the effectiveness of an anticancer agent against cancer in a subject, or a method for assisting in the determination. The method for determining the effectiveness of the anticancer agent of the present invention comprises the steps of measuring the expression level of a nucleolar stress response control protein or a gene encoding the protein in a sample derived from a subject, and the protein or gene When the expression level is higher than the reference value, a step of determining that the effectiveness of the anticancer agent against cancer is high is included.
本明細書において、「被験体」とは、本発明の方法に供される個体をいう。被験体の生物種としては、限定されるものではないが、哺乳動物、例えばヒト及びチンパンジー等の霊長類、ラット及びマウス等の実験動物、ブタ、ウシ、ウマ、ヒツジ、及びヤギ等の家畜動物、並びにイヌ及びネコ等の愛玩動物が挙げられ、好ましくはヒトである。本明細書において、被験体は、好ましくは化学療法を行っている、癌に罹患している個体である。 As used herein, “subject” refers to an individual subjected to the method of the present invention. The species of the subject is not limited, but mammals, for example, primates such as humans and chimpanzees, laboratory animals such as rats and mice, and livestock animals such as pigs, cows, horses, sheep, and goats. And pets such as dogs and cats, preferably humans. As used herein, a subject is an individual suffering from cancer, preferably undergoing chemotherapy.
本明細書において、癌の種類は、限定するものではないが、例えば、乳癌、胃癌、肝臓癌、膵臓癌、大腸癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮頸癌、脳腫瘍、骨髄腫、骨肉腫、肺癌、白血病、及びびまん性B細胞性リンパ腫等の悪性リンパ腫が挙げられる。癌は、好ましくは乳癌、胃癌、及びびまん性B細胞性リンパ腫等の悪性リンパ腫からなる群から選択される。 In the present specification, the type of cancer is not limited, for example, breast cancer, stomach cancer, liver cancer, pancreatic cancer, colon cancer, prostate cancer, ovarian cancer, cervical cancer, brain tumor, myeloma, osteosarcoma, Examples include malignant lymphomas such as lung cancer, leukemia, and diffuse B-cell lymphoma. The cancer is preferably selected from the group consisting of malignant lymphomas such as breast cancer, gastric cancer, and diffuse B-cell lymphoma.
本明細書において、抗癌剤は、核小体ストレス応答を介してその作用を発揮する抗癌剤であることが好ましい。抗癌剤の種類は、限定するものではないが、例えば、アクチノマイシンD、パクリタキセル、ビンブラスチン、アクラルビシン、ダウノルビシン、5-FU、シクロホスファミド、ドキソルビシン、及びビンクリスチンが挙げられる。抗癌剤は、好ましくは、パクリタキセル、5-FU、シクロホスファミド、ドキソルビシン、及びビンクリスチンであり、さらに好ましくはパクリタキセル又は5-FUである。 In the present specification, the anticancer agent is preferably an anticancer agent that exerts its action through a nucleolar stress response. The type of anticancer agent is not limited, and examples thereof include actinomycin D, paclitaxel, vinblastine, aclarubicin, daunorubicin, 5-FU, cyclophosphamide, doxorubicin, and vincristine. The anticancer agent is preferably paclitaxel, 5-FU, cyclophosphamide, doxorubicin, and vincristine, and more preferably paclitaxel or 5-FU.
本明細書において、「サンプル」とは、本発明の方法に供される生体試料を意味する。本発明において使用可能なサンプルとしては、限定するものではないが、例えば生体から単離した細胞又は組織、あるいは血液、リンパ液、尿、腹水、脳脊髄液等の体液が挙げられる。細胞の例として、例えば末梢血細胞、細胞を含むリンパ液及び組織液、毛母細胞、口腔細胞、鼻腔細胞、腸管細胞、膣内細胞、粘膜細胞、喀痰（肺胞細胞又は気肝細胞等を含み得る）が挙げられる。組織の例として、病変部位、例えば、***、胃、肝臓、膵臓、大腸、前立腺、卵巣、子宮、脳、骨髄、肺、及びリンパ節等が挙げられ、例えばこれらの組織の生検サンプルを用いることができる。 In the present specification, the “sample” means a biological sample subjected to the method of the present invention. Examples of the sample that can be used in the present invention include, but are not limited to, cells or tissues isolated from a living body, or bodily fluids such as blood, lymph, urine, ascites, and cerebrospinal fluid. Examples of cells include, for example, peripheral blood cells, lymph and tissue fluids containing cells, hair matrix cells, oral cells, nasal cells, intestinal cells, intravaginal cells, mucosal cells, sputum (may include alveolar cells or pneumohepatic cells) Is mentioned. Examples of tissues include lesion sites, such as breast, stomach, liver, pancreas, large intestine, prostate, ovary, uterus, brain, bone marrow, lung, and lymph nodes. For example, biopsy samples of these tissues are used. be able to.
本明細書において、「核小体ストレス応答」とは、RPL5、RPL11、RPL23、及びRPS7等のリボソームタンパク質が核小体から放出され、これが核小体外の領域である核質に存在するMDM2と結合し、MDM2活性を抑制する反応を指す。核小体ストレス応答は、薬剤によるrRNA不足、リボソームタンパク質の異常、栄養飢餓、及び細胞接触抑制等により誘導され、その応答の結果として細胞増殖抑制が生じることが知られている。 In the present specification, the term “nucleolar stress response” means that ribosomal proteins such as RPL5, RPL11, RPL23, and RPS7 are released from the nucleolus, and this is MDM2 present in the nucleolus, which is a region outside the nucleolus. Refers to a reaction that binds and suppresses MDM2 activity. It is known that the nucleolus stress response is induced by rRNA deficiency caused by drugs, ribosomal protein abnormalities, nutrient starvation, cell contact inhibition, and the like, and as a result of the response, cell growth inhibition occurs.
本明細書において、「核小体ストレス応答制御タンパク質」とは、上記のような核小体ストレス応答を制御するタンパク質を指し、例えばRPS6、RPS19、RPL29、RPL30、RPS3、RPS7、RPS14、RPS15、RPS20、RPS25、RPS26、RPS27、RPS27A、RPS27L、RPL3、RPL4、RPL5、RPL6、RPL11、RPL23、RPL26、RPL37、PICT1（GLTSCR2）、IPO7、XPO1、UBTF1、TTF-1、ARF(cdkn2a)、nucleostemin(NS)、PAK1IP1、UTP18、及びNucleophosmin(NPM)が挙げられる。核小体ストレス応答制御タンパク質は、好ましくは、PICT1、IPO7、XPO1、UBTF1、TIF1A、ARF、nucleostemin、PAK1IP1、UTP18、及びNucleophosmin、又はMDM2と結合可能なタンパク質、例えばRPS7、RPS19、RPL5、RPL11、及びRPL23等、さらに好ましくはRPL11又はRPL5、最も好ましくはRPL11である。 In the present specification, the `` nucleolar stress response control protein '' refers to a protein that controls the nucleolar stress response as described above, for example, RPS6, RPS19, RPL29, RPL30, RPS3, RPS7, RPS14, RPS15, RPS20, RPS25, RPS26, RPS27, RPS27A, RPS27L, RPL3, RPL4, RPL5, RPL6, RPL11, RPL23, RPL26, RPL37, PICT1 (GLTSCR2), IPO7, XPO1, UBTF1, TTF-1, ARF (cdkn2a), nucleostemin ( NS), PAK1IP1, UTP18, and Nucleophosmin (NPM). The nucleolar stress response control protein is preferably PICT1, IPO7, XPO1, UBTF1, TIF1A, ARF, nucleostemin, PAK1IP1, UTP18, and Nucleophosmin, or a protein capable of binding to MDM2, such as RPS7, RPS19, RPL5, RPL11, And RPL23, more preferably RPL11 or RPL5, and most preferably RPL11.
上記の核小体ストレス応答制御タンパク質のアミノ酸配列、及び上記のタンパク質をコードする遺伝子の塩基配列は、当技術分野で公知の任意の方法により、例えば公のデータベース（例えば、NCBI（米国）、DDBJ（日本）、EMBL（欧州））より、入手することができる。例えば、ヒトRPL11タンパク質は、配列番号9（NP_000966）のアミノ酸配列を含み、ヒトRPL11タンパク質をコードする遺伝子は、配列番号10（NM_000975）の塩基配列を含むものであってよい。同様に、ヒトRPL5タンパク質は、配列番号11（NP_000960）のアミノ酸配列を含み、ヒトRPL5タンパク質をコードする遺伝子は、配列番号12（NM_000969）の塩基配列を含むものであってよい。同様に、ヒトの核小体ストレス応答制御タンパク質をコードする遺伝子の塩基配列が、以下の通りデータベースに開示されている：RPS6；NM_001010、RPS14；NM_001025071、RPS19；AH007336、RPL29；NM_000992、RPL30；NM_000989、RPS3；NM_001005、RPS7；NM_001011、RPS14；NM_001025071、RPS15；NM_001308226、RPS20；NM_001146227、RPS25；NM_001028、RPS26；NM_001029、RPS27；NM_001030、RPS27A；NM_002954、RPS27L；NM_015920、RPL3；CR456566、RPL4；NM_000968、RPL6；NM_001024662、RPL23；AB061827、RPL26；AB061829、RPL37；AB061834、PICT1；NM_015710、IPO7；NM_006391、XPO1；NM_003400、UBTF1；NM_014233、TTF-1；HSU33749、ARF；AF208864、Nucleostemin（NS）；AY825265、PAK1IP1；NM_017906、UTP18；NM_016001、及びNucleophosmin（NPM）；AY347529。 The amino acid sequence of the nucleolar stress response control protein and the base sequence of the gene encoding the protein can be determined by any method known in the art, for example, a public database (for example, NCBI (USA), DDBJ (Japan), EMBL (Europe)). For example, the human RPL11 protein may include the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9 (NP_000966), and the gene encoding the human RPL11 protein may include the base sequence of SEQ ID NO: 10 (NM_000975). Similarly, the human RPL5 protein may include the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11 (NP_000960), and the gene encoding the human RPL5 protein may include the base sequence of SEQ ID NO: 12 (NM_000969). Similarly, the nucleotide sequences of genes encoding human nucleolar stress response control proteins are disclosed in the database as follows: RPS6; NM_001010, RPS14; NM_001025071, RPS19; AH007336, RPL29; NM_000992, RPL30; NM_000989 , RPS3; NM_001005, RPS7; NM_001011, RPS14; NM_001025071, RPS15; NM_001308226, RPS20; NM_001146227, RPS25; NM_001028, RPS26; NM_001029, RPS27; NM_001030, RPS27A; NM_002954, RPS27L; NM3 NM_001024662, RPL23; AB061827, RPL26; AB061829, RPL37; AB061834, PICT1; NM_015710, IPO7; NM_006391, XPO1; NM_003400, UBTF1; NM_014233, TTF-1; HSU33749, ARF; AF208864, Nucleoste825 (265); NM_017906, UTP18; NM_016001, and Nucleophosmin (NPM); AY347529.
上記核小体ストレス応答制御タンパク質のアミノ酸配列は、上記各アミノ酸配列に対して、例えば70%以上、80%以上、好ましくは90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、若しくは99%以上の同一性を有するアミノ酸配列、又は上記各アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が付加、欠失、及び／若しくは置換されたアミノ酸配列を含むものであってよい。同様に、核小体ストレス応答制御タンパク質をコードする遺伝子の塩基配列は、上記各塩基配列に対して、例えば70%以上、80%以上、好ましくは90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、若しくは99%以上の同一性を有する塩基酸配列、又は上記各塩基配列において1若しくは数個の塩基が付加、欠失、及び／若しくは置換された塩基配列を含むものであってよい。本明細書において、同一性の値は、複数の配列間の同一性を演算するソフトウェア（例えば、FASTA、DANASYS、及びBLAST）を用いてデフォルトの設定で算出した値を示す。同一性の決定方法の詳細については、例えばAltschul et al, Nuc. Acids. Res. 25, 3389-3402, 1977及びAltschul et al, J. Mol. Biol. 215, 403-410, 1990を参照されたい。また、本明細書において、「１若しくは数個」の範囲は、1から10個、好ましくは1から7個、さらに好ましくは1から5個、特に好ましくは1から3個、あるいは1個又は2個である。 The amino acid sequence of the nucleolar stress response control protein is, for example, 70% or more, 80% or more, preferably 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more, or 99% of each amino acid sequence. It may contain an amino acid sequence having% or more identity, or an amino acid sequence in which one or several amino acids are added, deleted, and / or substituted in each amino acid sequence. Similarly, the base sequence of a gene encoding a nucleolar stress response control protein is, for example, 70% or more, 80% or more, preferably 90% or more, 95% or more, 97% or more with respect to each of the above base sequences, It may contain a base acid sequence having 98% or more, or 99% or more identity, or a base sequence in which one or several bases are added, deleted, and / or substituted in each of the above base sequences. . In the present specification, the identity value indicates a value calculated by default setting using software (for example, FASTA, DANASYS, and BLAST) that calculates identity between a plurality of sequences. For details of how identity is determined, see, for example, Altschul et al, Nuc. Acids. Res. 25, 3389-3402, 1977 and Altschul et al, J. Mol. Biol. 215, 403-410, 1990. . In the present specification, the range of “one or several” is 1 to 10, preferably 1 to 7, more preferably 1 to 5, particularly preferably 1 to 3, or 1 or 2 It is a piece.
したがって、例えば、RPL11タンパク質は、配列番号9で示されるアミノ酸配列に対して、例えば70%以上、80%以上、好ましくは90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、若しくは99%以上の同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号9で示されるアミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が付加、欠失、及び／若しくは置換されたアミノ酸配列を含んでよい。RPL11タンパク質をコードする遺伝子は、配列番号10で示される塩基配列に対して、例えば70%以上、80%以上、好ましくは90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、若しくは99%以上の同一性を有する塩基配列、又は配列番号10で示される塩基配列において1若しくは数個の塩基が付加、欠失、及び／若しくは置換された塩基配列を含んでよい。同様に、RPL5タンパク質は、配列番号11で示されるアミノ酸配列に対して、例えば70%以上、80%以上、好ましくは90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、若しくは99%以上の同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号11で示されるアミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が付加、欠失、及び／若しくは置換されたアミノ酸配列を含んでよい。RPL5タンパク質をコードする遺伝子は、配列番号12で示される塩基配列に対して、例えば70%以上、80%以上、好ましくは90%以上、95%以上、97%以上、98%以上、若しくは99%以上の同一性を有する塩基配列、又は配列番号12で示される塩基配列において1若しくは数個の塩基が付加、欠失、及び／若しくは置換された塩基酸配列を含んでよい。 Thus, for example, the RPL11 protein is, for example, 70% or more, 80% or more, preferably 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more, or 99% with respect to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9. The amino acid sequence having the above identity, or an amino acid sequence in which one or several amino acids are added, deleted, and / or substituted in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 may be included. The gene encoding RPL11 protein is, for example, 70% or more, 80% or more, preferably 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more, or 99% with respect to the base sequence represented by SEQ ID NO: 10. The base sequence having the above identity or the base sequence represented by SEQ ID NO: 10 may include a base sequence in which one or several bases are added, deleted, and / or substituted. Similarly, the RPL5 protein is, for example, 70% or more, 80% or more, preferably 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more, or 99% or more with respect to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11. Or an amino acid sequence in which one or several amino acids are added, deleted, and / or substituted in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11. The gene encoding RPL5 protein is, for example, 70% or more, 80% or more, preferably 90% or more, 95% or more, 97% or more, 98% or more, or 99% with respect to the base sequence represented by SEQ ID NO: 12. The base sequence having the above identity, or a base acid sequence in which one or several bases are added, deleted, and / or substituted in the base sequence represented by SEQ ID NO: 12 may be included.
本発明の方法における、核小体ストレス応答制御タンパク質又は該タンパク質をコードする遺伝子の発現量の測定工程は、当業者に公知の方法により行うことができる。例えば、核小体ストレス応答制御タンパク質の発現量を測定する工程は、これらのタンパク質に対する抗体を用いる免疫学的測定法又は酵素活性測定法等を行うことにより、実施できる。好適には、前記タンパク質に特異的なモノクローナル抗体又はポリクローナル抗体を用いた、酵素免疫測定法、2抗体サンドイッチELISA法、蛍光免疫測定法、放射免疫測定法、及びウエスタンブロッティング法等の手法を用いることができる。抗体は、当業者に公知の方法により得ることができ、例えば哺乳動物に前記タンパク質を免疫し、その血清から当業者に知られる任意の方法を用いて抗体を精製することによって、又はハイブリドーマを介して生産することができる。 In the method of the present invention, the step of measuring the expression level of the nucleolar stress response control protein or the gene encoding the protein can be performed by methods known to those skilled in the art. For example, the step of measuring the expression level of a nucleolar stress response control protein can be performed by performing an immunological measurement method or an enzyme activity measurement method using an antibody against these proteins. Preferably, a method such as an enzyme immunoassay, a two-antibody sandwich ELISA, a fluorescence immunoassay, a radioimmunoassay, or a Western blotting method using a monoclonal antibody or a polyclonal antibody specific for the protein is used. Can do. The antibody can be obtained by methods known to those skilled in the art, for example, by immunizing a mammal with the protein and purifying the antibody from its serum using any method known to those skilled in the art, or via a hybridoma Can be produced.
また、核小体ストレス応答制御タンパク質をコードする遺伝子の発現量を測定する工程は、公知の遺伝子解析法（例えば遺伝子検出法として常用されるPCR法、RT-PCR法、Real-time PCR法、LCR(Ligase chain reaction)、LAMP(Loop-mediated isothermal amplification)法、マイクロアレイ法、ノーザンハイブリダイゼーション法、ドットブロット法、in situ hybridization法、及び次世代シークエンサーによる解析等）に従って実施することができる。例えば、被験体から得られたサンプル由来の核酸、例えばmRNA等を用いて、適当なプライマーを用いる遺伝子増幅技術、又は適当なプローブを用いるハイブリダイゼーション技術等を利用することができる。プライマー及びプローブは、当業者であれば、上記核小体ストレス応答制御タンパク質をコードする遺伝子の配列に基づいて適宜作製することができる。プライマー及びプローブの設計の詳細については、下記「４．キット」に記載の通りに行うことができる。 In addition, the step of measuring the expression level of the gene encoding the nucleolar stress response control protein can be performed by a known gene analysis method (for example, a PCR method commonly used as a gene detection method, an RT-PCR method, a Real-time PCR method, LCR (Ligase chain reaction), LAMP (Loop-mediated isothermal amplification) method, microarray method, Northern hybridization method, dot blot method, in situ hybridization method, analysis by next-generation sequencer, etc.). For example, using a nucleic acid derived from a sample obtained from a subject, for example, mRNA or the like, a gene amplification technique using an appropriate primer, a hybridization technique using an appropriate probe, or the like can be used. Primers and probes can be appropriately prepared by those skilled in the art based on the sequence of the gene encoding the nucleolar stress response control protein. The details of primer and probe design can be performed as described in “4. Kit” below.
本発明の測定工程では、一つの核小体ストレス応答制御タンパク質又は該タンパク質をコードする遺伝子を測定してもよいが、二以上、例えば三以上、四以上、又は五以上の上記タンパク質又は遺伝子を測定してもよい。二以上の核小体ストレス応答制御タンパク質又は該タンパク質をコードする遺伝子を測定することによって、本発明の方法の精度をさらに高めることができる。また、タンパク質と遺伝子の両方を測定することによっても、本発明の方法の精度をさらに高めることができる。 In the measurement step of the present invention, one nucleolar stress response control protein or a gene encoding the protein may be measured, but two or more, for example, three or more, four or more, or five or more of the proteins or genes described above are used. You may measure. By measuring two or more nucleolar stress response control proteins or genes encoding the proteins, the accuracy of the method of the present invention can be further improved. Moreover, the accuracy of the method of the present invention can be further improved by measuring both proteins and genes.
本発明の測定工程では、核小体ストレス応答制御タンパク質又は該タンパク質をコードする遺伝子のいずれの発現量を測定してもよいが、好ましくは遺伝子の発現量を測定する。 In the measurement step of the present invention, the expression level of either the nucleolar stress response control protein or the gene encoding the protein may be measured, but preferably the expression level of the gene is measured.
本発明の癌に対する抗癌剤の有効性を判定するための方法は、上記タンパク質又は遺伝子の発現量が、参照値と比べて好ましくは統計的に有意に高い場合、癌に対する抗癌剤の有効性が高いと決定する工程を含む。本明細書において、「参照値」とは、各タンパク質又は遺伝子の発現量について、あらかじめ定められた標準値を意味する。参照値は、例えば複数（例えば、3以上、4以上、又は5以上、好ましくは10以上、50以上、100以上、200以上、又は300以上）の被験体、例えば癌に罹患し、化学療法を行っている被験体における各タンパク質又は遺伝子の発現量の中央値又は平均値、好ましくは中央値であってよい。当業者であれば、各タンパク質又は遺伝子の発現量と抗癌剤の有効性に基づいて、適切な参照値を定めることができる。本発明において、「癌に対する抗癌剤の有効性が高い」とは、定められた参照値以下のタンパク質又は遺伝子の発現量を有する集団に対して、癌に対する抗癌剤の有効性が高いことを意味し得る。 The method for determining the effectiveness of an anticancer agent against cancer of the present invention is such that when the expression level of the protein or gene is preferably statistically significantly higher than the reference value, the effectiveness of the anticancer agent against cancer is high. Determining. In the present specification, the “reference value” means a predetermined standard value for the expression level of each protein or gene. The reference value may be, for example, multiple (eg, 3 or more, 4 or more, or 5 or more, preferably 10 or more, 50 or more, 100 or more, 200 or more, or 300 or more) subjects, eg, cancer, and chemotherapy It may be a median value or an average value, preferably a median value, of the expression level of each protein or gene in the subject in question. A person skilled in the art can determine an appropriate reference value based on the expression level of each protein or gene and the effectiveness of the anticancer agent. In the present invention, “high effectiveness of an anticancer agent against cancer” may mean that the anticancer agent against cancer is highly effective against a population having a protein or gene expression level equal to or less than a predetermined reference value. .
本発明の被験体における癌に対する抗癌剤の有効性を判定するための方法は、化学療法を行っている被験体又は行っていない被験体のいずれに対しても実施することができるが、好ましくは、化学療法を行っている被験体に対して実施する。化学療法を行っている被験体に対して本発明の方法を実施することにより、現在行っている化学療法が適切であるか判断し、放射線療法、ホルモン療法等の他の療法を利用すべきか判断するために役立てることができる。また、化学療法を行っていない被験体に対して本発明の方法を実施することにより、化学療法、放射線療法、ホルモン療法等のうち、どの療法を利用すべきか判断するために役立てることができる。 The method for determining the effectiveness of an anticancer agent against cancer in a subject of the present invention can be performed on either a subject undergoing chemotherapy or a subject not undergoing chemotherapy, preferably, Perform on subjects undergoing chemotherapy. By carrying out the method of the present invention on a subject undergoing chemotherapy, it is determined whether the current chemotherapy is appropriate, and whether other therapies such as radiation therapy or hormone therapy should be used. Can help you to. In addition, by performing the method of the present invention on a subject who has not been subjected to chemotherapy, it can be used to determine which therapy should be used among chemotherapy, radiation therapy, hormone therapy and the like.
本発明の癌に対する抗癌剤の有効性を判定するための方法は、癌の治療方法にも利用することができる。これにより、抗癌剤が有効であると考えられる被験体に対して抗癌剤による治療を適用することが可能となり得る。したがって、一実施形態において、本発明は、被験体由来のサンプルにおいて、核小体ストレス応答制御タンパク質又は該タンパク質をコードする遺伝子の発現量を測定する工程、前記タンパク質又は遺伝子の発現量が、参照値と比べて好ましくは統計的に有意に高い場合、癌に対する抗癌剤の有効性が高いと決定する工程、及び被験体に抗癌剤を投与する工程、を含む被験体における癌の治療方法に関する。 The method for determining the effectiveness of an anticancer agent for cancer according to the present invention can also be used as a method for treating cancer. Thereby, it may be possible to apply treatment with an anticancer agent to a subject for which the anticancer agent is considered effective. Therefore, in one embodiment, the present invention relates to a step of measuring the expression level of a nucleolar stress response control protein or a gene encoding the protein in a sample derived from a subject, and the expression level of the protein or gene is referred to Preferably, if it is statistically significantly higher than the value, the present invention relates to a method for treating cancer in a subject comprising the steps of determining that the effectiveness of the anticancer agent against cancer is high and administering the anticancer agent to the subject.
２．癌の予後を判定するための方法
一態様において、本発明は、被験体における化学療法後の癌の予後を判定するための方法、又は該判定を補助するための方法に関する。本方法は、被験体由来のサンプルにおいて、核小体ストレス応答制御タンパク質又は該タンパク質をコードする遺伝子の発現量を測定する工程、及び前記タンパク質又は遺伝子の発現量が、参照値と比べて好ましくは統計的に有意に高い場合、予後が良好であると決定する工程を含む。被験体由来のサンプルにおいて、核小体ストレス応答制御タンパク質又は該タンパク質をコードする遺伝子の発現量を測定する工程については、上記１において記載した通りであるからここでは記載を省略する。
2. Methods for Determining Cancer Prognosis In one aspect, the invention relates to a method for determining the prognosis of cancer after chemotherapy in a subject, or a method for assisting in the determination. The method preferably comprises a step of measuring the expression level of a nucleolar stress response control protein or a gene encoding the protein in a sample derived from a subject, and the expression level of the protein or gene is preferably compared to a reference value. If it is statistically significant, it includes determining that the prognosis is good. The step of measuring the expression level of the nucleolar stress response control protein or the gene encoding the protein in the sample derived from the subject is the same as described in 1 above, and is therefore omitted here.
前記タンパク質又は遺伝子の発現量が、参照値と比べて好ましくは統計的に有意に高い場合、予後が良好であると決定する工程における適切な参照値は、当業者であれば、各タンパク質又は遺伝子の発現量と予後に基づいて定めることができる。本発明において、「予後が良好である」とは、定められた参照値以下のタンパク質又は遺伝子の発現量を有する集団に対して、予後が良好であることを意味し得る。 If the expression level of the protein or gene is preferably statistically significantly higher than the reference value, an appropriate reference value in the step of determining a good prognosis is determined by those skilled in the art for each protein or gene. Can be determined based on the expression level and prognosis. In the present invention, “good prognosis” may mean that the prognosis is good for a population having a protein or gene expression level equal to or less than a predetermined reference value.
本明細書において、「予後」とは、化学療法を行った後の腫瘍量の低減、腫瘍増殖の抑制、化学療法後の経過又は結末（例えば、再発の有無、生死等）、好ましくは生存期間、特に無再発生存期間の長さ、再発のリスクの高低を意味する。本明細書において、「癌の予後が良好である」とは、化学療法後の経過又は結末が良好であること、例えば生存期間、特に無再発生存期間が長いこと、及び／又は再発のリスクが低いことを意味する。 In this specification, “prognosis” means reduction of tumor volume after chemotherapy, suppression of tumor growth, progress or outcome after chemotherapy (for example, presence or absence of recurrence, life and death, etc.), preferably survival time , Especially the length of relapse-free survival, which means high or low risk of recurrence. In the present specification, “good prognosis of cancer” means that the course or outcome after chemotherapy is good, for example, the survival period, in particular, the long recurrence-free survival period, and / or the risk of recurrence. Means low.
したがって、一実施形態において、本発明の癌の予後を判定するための方法は、被験体における化学療法後の癌の再発のリスク、又は無再発生存期間を判定するための方法、又は該判定を補助するための方法に関する。 Accordingly, in one embodiment, the method for determining cancer prognosis of the present invention comprises a method for determining the risk of cancer recurrence after chemotherapy in a subject, or a recurrence free survival, or the determination. It relates to a method for assisting.
本発明の癌の予後を判定するための方法は、癌の治療方法にも利用することができる。これにより、化学療法後の癌の予後が良好になると考えられる被験体に対して抗癌剤による治療を適用することが可能となり得る。したがって、一実施形態において、本発明は、被験体由来のサンプルにおいて、核小体ストレス応答制御タンパク質又は該タンパク質をコードする遺伝子の発現量を測定する工程、前記タンパク質又は遺伝子の発現量が、参照値と比べて好ましくは統計的に有意に高い場合、予後が良好であると決定する工程、及び被験体に抗癌剤を投与する工程、を含む被験体における癌の治療方法に関する。 The method for determining the prognosis of cancer of the present invention can also be used as a method for treating cancer. This may make it possible to apply treatment with anti-cancer agents to a subject that is considered to have a better cancer prognosis after chemotherapy. Therefore, in one embodiment, the present invention relates to a step of measuring the expression level of a nucleolar stress response control protein or a gene encoding the protein in a sample derived from a subject, and the expression level of the protein or gene is referred to Preferably, if it is statistically significantly higher than the value, it relates to a method of treating cancer in a subject comprising determining a good prognosis and administering an anticancer agent to the subject.
３．マーカー
一態様において、本発明は、核小体ストレス応答制御タンパク質又は該タンパク質をコードする遺伝子の、癌に対する抗癌剤の有効性を判定するためのマーカーとしての使用に関する。別の態様において、本発明は、核小体ストレス応答制御タンパク質又は該タンパク質をコードする遺伝子の、被験体における化学療法後の、生存期間の長さ又は再発のリスク等の癌の予後を判定するためのマーカーとしての使用に関する。
3. Marker In one aspect, the present invention relates to the use of a nucleolar stress response control protein or a gene encoding the protein as a marker for determining the effectiveness of an anticancer agent against cancer. In another aspect, the invention determines the prognosis of a cancer, such as length of survival or risk of recurrence, following chemotherapy in a subject of a nucleolar stress response control protein or gene encoding the protein. For use as a marker.
核小体ストレス応答制御タンパク質又は該タンパク質をコードする遺伝子、癌の種類、抗癌剤、及び予後については上記１又は２で記載した通りであるから、ここでは記載を省略する。 Since the nucleolar stress response control protein or the gene encoding the protein, the type of cancer, the anticancer agent, and the prognosis are as described in 1 or 2 above, description thereof is omitted here.
これらのマーカーは、上記１に記載の癌に対する抗癌剤の有効性を判定するための方法又は上記２に記載の癌の予後を判定するための方法において用いることができる。 These markers can be used in the method for determining the effectiveness of an anticancer agent against cancer described in 1 above or the method for determining the prognosis of cancer described in 2 above.
４．キット
一態様において、本発明は、抗癌剤の有効性を判定するためのキット、又は生存期間の長さ又は再発のリスク等の癌の予後を判定するためのキットに関する。
4). Kit In one aspect, the present invention relates to a kit for determining the effectiveness of an anticancer agent, or a kit for determining the prognosis of cancer, such as the length of survival or the risk of recurrence.
本キットは、核小体ストレス応答制御タンパク質に特異的に結合する抗体、又は該タンパク質をコードする遺伝子に対するプローブ若しくはプライマーの少なくとも一以上を含む。核小体ストレス応答制御タンパク質及び該タンパク質をコードする遺伝子については、上記１において記載した通りであるからここでは記載を省略する。 This kit includes at least one or more of an antibody that specifically binds to a nucleolar stress response control protein, or a probe or primer for a gene encoding the protein. Since the nucleolar stress response control protein and the gene encoding the protein are as described in 1 above, description thereof is omitted here.
抗体は、ポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体のいずれであってもよい。抗体は、当業者に公知の方法により得ることができ、例えば哺乳動物に前記タンパク質を免疫し、その血清から当業者に知られる任意の方法を用いて抗体を精製することによって、又はハイブリドーマを介して生産することができる。 The antibody may be a polyclonal antibody or a monoclonal antibody. The antibody can be obtained by methods known to those skilled in the art, for example, by immunizing a mammal with the protein and purifying the antibody from its serum using any method known to those skilled in the art, or via a hybridoma Can be produced.
プライマー及びプローブは、当業者であれば、核小体ストレス応答制御タンパク質をコードする遺伝子の配列に基づいて適宜作製することができる。例えば、RPL11をコードする遺伝子を検出するためのプローブは、RPL11遺伝子を検出できるものであれば特に限定しないが、例えば、（１）配列番号10の配列の連続する少なくとも14、例えば少なくとも20、好ましくは少なくとも30、また60以下、50以下、又は40以下の塩基配列からなるポリヌクレオチド、又は（２）配列番号10の連続する少なくとも14、例えば少なくとも20、好ましくは少なくとも30、また60以下、50以下、又は40以下の塩基配列に相補的な配列からなるポリヌクレオチドから構成されることが好ましい。同様に、RPL5をコードする遺伝子を検出するためのプローブは、RPL5遺伝子を検出できるものであれば特に限定しないが、例えば、（１）配列番号12の配列の連続する少なくとも14、例えば少なくとも20、好ましくは少なくとも30、また60以下、50以下、又は40以下の塩基配列からなるポリヌクレオチド、又は（２）配列番号12の連続する少なくとも14、例えば少なくとも20、好ましくは少なくとも30、また60以下、50以下、又は40以下の塩基配列に相補的な配列からなるポリヌクレオチドから構成されることが好ましい。 Primers and probes can be appropriately prepared by those skilled in the art based on the sequence of a gene encoding a nucleolar stress response control protein. For example, the probe for detecting the gene encoding RPL11 is not particularly limited as long as it can detect the RPL11 gene. For example, (1) at least 14, for example, at least 20 of the sequence of SEQ ID NO: 10, preferably Is a polynucleotide comprising a nucleotide sequence of at least 30, or not more than 60, not more than 50, or not more than 40, or (2) at least 14, consecutive at least 14, preferably at least 20, preferably at least 30, or not more than 60, 50 or less of SEQ ID NO: 10. Or a polynucleotide comprising a sequence complementary to 40 or less base sequences. Similarly, the probe for detecting the gene encoding RPL5 is not particularly limited as long as it can detect the RPL5 gene. For example, (1) at least 14, the sequence of SEQ ID NO: 12 is continuous, for example, at least 20, Preferably, a polynucleotide comprising a base sequence of at least 30, and not more than 60, not more than 50, or not more than 40, or (2) at least 14, consecutively at least 14, preferably at least 30, preferably not more than 30, and not more than 60, 50 of SEQ ID NO: 12. It is preferably composed of a polynucleotide comprising a sequence complementary to a nucleotide sequence of 40 or less or less.
例えば、RPL11をコードする遺伝子を検出するためのプライマーは、RPL11遺伝子を検出できるものであれば特に限定しないが、配列番号10、又は配列番号10の配列に相補的な配列の連続する14〜30塩基、例えば16〜28塩基、好ましくは18〜26塩基からなるポリヌクレオチドであり得る。例えば、本発明のキットは、フォワードプライマーが配列番号10の連続する14〜30塩基、例えば16〜28塩基、好ましくは18〜26塩基を含むヌクレオチドからなり、リバースプライマーが配列番号10の配列の相補的な配列の連続する14〜30塩基、例えば16〜28塩基、好ましくは18〜26塩基を含むヌクレオチドからなる、フォワードプライマー及びリバースプライマーを含むプライマーセットを含み得る。同様に、RPL5をコードする遺伝子を検出するためのプライマーは、RPL5遺伝子を検出できるものであれば特に限定しないが、配列番号12、又は配列番号12の配列に相補的な配列の連続する14〜30塩基、例えば16〜28塩基、好ましくは18〜26塩基からなるポリヌクレオチドであり得る。例えば、本発明のキットは、フォワードプライマーが配列番号12の連続する14〜30塩基、例えば16〜28塩基、好ましくは18〜26塩基を含むヌクレオチドからなり、リバースプライマーが配列番号12の配列の相補的な配列の連続する14〜30塩基、例えば16〜28塩基、好ましくは18〜26塩基を含むヌクレオチドからなる、フォワードプライマー及びリバースプライマーを含むプライマーセットを含み得る。 For example, the primer for detecting the gene encoding RPL11 is not particularly limited as long as it can detect the RPL11 gene. However, SEQ ID NO: 10 or 14-30 consecutive sequences complementary to the sequence of SEQ ID NO: 10 It may be a polynucleotide comprising a base, for example, 16 to 28 bases, preferably 18 to 26 bases. For example, in the kit of the present invention, the forward primer comprises nucleotides comprising 14 to 30 consecutive nucleotides of SEQ ID NO: 10, for example, 16 to 28 nucleotides, preferably 18 to 26 nucleotides, and the reverse primer is complementary to the sequence of SEQ ID NO: 10. A primer set comprising a forward primer and a reverse primer consisting of nucleotides comprising 14 to 30 bases, such as 16 to 28 bases, preferably 18 to 26 bases, of a contiguous sequence may be included. Similarly, the primer for detecting the gene encoding RPL5 is not particularly limited as long as it can detect the RPL5 gene. However, SEQ ID NO: 12 or a sequence of 14 to 14 consecutively complementary to the sequence of SEQ ID NO: 12 It may be a polynucleotide comprising 30 bases, such as 16 to 28 bases, preferably 18 to 26 bases. For example, in the kit of the present invention, the forward primer consists of nucleotides comprising 14 to 30 consecutive nucleotides of SEQ ID NO: 12, for example, 16 to 28 nucleotides, preferably 18 to 26 nucleotides, and the reverse primer is complementary to the sequence of SEQ ID NO: 12. A primer set comprising a forward primer and a reverse primer consisting of nucleotides comprising 14 to 30 bases, such as 16 to 28 bases, preferably 18 to 26 bases, of a contiguous sequence may be included.
RPL11及びRPL5以外の核小体ストレス応答制御タンパク質をコードする遺伝子についても、同様にプローブ又はプライマーを設計することができる。 Probes or primers can be similarly designed for genes encoding nucleolar stress response control proteins other than RPL11 and RPL5.
プライマー及びプローブは、当業者に知られる公知の方法により調製することができ、限定されるものではないが、例えば化学合成法によって調製することができる。 Primers and probes can be prepared by known methods known to those skilled in the art, and are not limited, and can be prepared by, for example, chemical synthesis methods.
本キットは、上記１に記載の癌に対する抗癌剤の有効性を判定するための方法、又は上記２に記載の癌の予後を判定するための方法において用いることができる。 This kit can be used in the method for determining the effectiveness of an anticancer agent against cancer described in 1 above or the method for determining the prognosis of cancer described in 2 above.
本キットは、上記抗体、プローブ、又はプライマーの一以上に加えて、説明書、バッファー、発色試薬若しくは蛍光試薬及び／又は標準サンプル等を含んでよい。 In addition to one or more of the above-described antibodies, probes, or primers, the kit may contain instructions, a buffer, a coloring reagent, a fluorescent reagent, and / or a standard sample.
５．デバイス
一態様において、本発明は、抗癌剤の有効性を判定するための、又は生存期間の長さ又は再発のリスク等の癌の予後を判定するための、チップ及びアレイ等のデバイスに関する。
5. Devices In one aspect, the present invention relates to devices such as chips and arrays for determining the effectiveness of anti-cancer agents or for determining the prognosis of cancer, such as length of survival or risk of recurrence.
本発明のデバイスは、核小体ストレス応答制御タンパク質をコードする遺伝子に対するプローブ若しくはプライマーの少なくとも一以上を含む。核小体ストレス応答制御タンパク質をコードする遺伝子に対するプローブ若しくはプライマーについては、上記４において記載した通りである。 The device of the present invention includes at least one probe or primer for a gene encoding a nucleolar stress response control protein. The probe or primer for the gene encoding the nucleolar stress response control protein is as described in 4 above.
本発明のデバイスは、核小体ストレス応答制御タンパク質をコードする遺伝子に対するプローブ若しくはプライマーの少なくとも一以上を含み、その発現量を測定する測定部を含み得る。本発明のデバイスは、測定部で測定された発現量が、参照値と比べて好ましくは統計的に有意に高い場合、癌に対する抗癌剤の有効性が高い、又は化学療法後の予後が良好であると決定する判断部をさらに含み得る。 The device of the present invention may include a measurement unit that includes at least one probe or primer for a gene encoding a nucleolar stress response control protein and measures the expression level thereof. In the device of the present invention, when the expression level measured by the measurement unit is preferably statistically significantly higher than the reference value, the effectiveness of the anticancer agent for cancer is high, or the prognosis after chemotherapy is good. It may further include a determination unit that determines.
＜実施例１：核小体ストレス応答依存性抗癌剤による癌抑制＞
（１）発現ベクターの構築
以下の工程により、リボソームタンパク質であるRPL11とMontiRedを融合させたタンパク質を発現するベクター、及びMDM2とAsh配列を融合させたタンパク質を発現するベクターを構築した。
<Example 1: Cancer suppression by nucleolar stress response-dependent anticancer agent>
(1) Construction of expression vector By the following steps, a vector expressing a protein in which RPL11, which is a ribosomal protein, and MontiRed were fused, and a vector expressing a protein in which MDM2 and an Ash sequence were fused were constructed.
Human RPL11 cDNAは、以下に記載のRPL11 F1 primer及びRPL11 R1 primerを用いてPCRで増幅後、pMontiRedベクター（Amalgaam社、日本）へ挿入した（pMontiRed RPL11 IRES Bsd）。 Human RPL11 cDNA was amplified by PCR using the RPL11 F1 primer and RPL11 R1 primer described below, and then inserted into a pMontiRed vector (Amalgaam, Japan) (pMontiRed RPL11 IRES Bsd).
Human MDM2cDNAは、以下に記載のMDM2 F primer及びMDM2 R primerを用いてPCRで増幅後、pAsh-MCLベクター（Amalgaam社、日本）へ挿入した（pAshC-MDM2）。 Human MDM2 cDNA was amplified by PCR using the MDM2 F primer and MDM2 R primer described below, and then inserted into a pAsh-MCL vector (Amalgaam, Japan) (pAshC-MDM2).
発現ベクターの構築にあたって使用したプライマーを以下に示す。
RPL11 F1 primer：TCGAATTCGatggcgcaggatcaaggtg（配列番号1）
RPL11 R1 primer：TACTCGAGttatttgccaggaaggatg（配列番号2）
MDM2 F primer：TACTCGAGCTatggtgaggagcaggcaaatgtgc（配列番号3）
MDM2 R primer：CAGAATTCGGGCGGCCGCggggaaataagttagcacaatc（配列番号4）
The primers used in the construction of the expression vector are shown below.
RPL11 F1 primer: TCGAATTCGatggcgcaggatcaaggtg (SEQ ID NO: 1)
RPL11 R1 primer ： TACTCGAGttatttgccaggaaggatg (SEQ ID NO: 2)
MDM2 F primer: TACTCGAGCTatggtgaggagcaggcaaatgtgc (SEQ ID NO: 3)
MDM2 R primer: CAGAATTCGGGCGGCCGCggggaaataagttagcacaatc (SEQ ID NO: 4)
なお、PCRは、PrimeSTAR（登録商標）GXL DNA Polymerase(タカラバイオ、日本)を用いて、添付のマニュアルに従って、以下の組成の反応液を用いて行った。
5×PrimeSTAR GXL Buffer 10 μl
dNTP Mixture（2.5 mM each） 4 μl
Forward primer 15 pmol
Reverse primer 15 pmol
Template 10ng DNA
PrimeSTAR GXL DNA Polymerase 1 μl
滅菌蒸留水 総量を50μlとする量
In addition, PCR was performed using PrimeSTAR (registered trademark) GXL DNA Polymerase (Takara Bio, Japan) using a reaction solution having the following composition according to the attached manual.
5 ×
dNTP Mixture (2.5 mM each) 4 μl
Template 10ng DNA
PrimeSTAR GXL DNA Polymerase 1 μl
Amount to make the total volume of sterile distilled
具体的には上記反応液を調製後、サーマルサイクラーにて下記の温度条件でPCR反応を行った。
（98℃ 10 sec、60℃ 15 sec、68℃ 1 min./kb）×25サイクル
Specifically, after preparing the reaction solution, a PCR reaction was performed with a thermal cycler under the following temperature conditions.
(98 ℃ 10 sec, 60 ℃ 15 sec, 68 ℃ 1 min./kb) x 25 cycles
（２）細胞培養
ヒトグリオーマ細胞株U251（JCRB細胞バンクより入手）及びヒト骨肉腫細胞株U2OS（ATCCより入手）を37℃、5% CO2条件下で、10% Fetal Bovine Serum (FBS)、Penicillin-Streptomycin (P/S)、及びピルビン酸ナトリウムを含むDulbecco's Modified Eagle's Medium（DMEM、Nissui、日本）を用いて培養した。
(2) Cell culture Human glioma cell line U251 (obtained from JCRB cell bank) and human osteosarcoma cell line U2OS (obtained from ATCC) under conditions of 37 ° C, 5% CO 2 , 10% Fetal Bovine Serum (FBS), The cells were cultured using Penicillin-Streptomycin (P / S) and Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM, Nissui, Japan) containing sodium pyruvate.
（３）遺伝子導入と安定発現株の作製
6×105の細胞を35mm ディッシュに播種し、その翌日、PEI Max（Polysciences, 米国)を用いて標準的なプロトコールに従い遺伝子導入を行った。すなわち、2μgのDNAを無血清DMEM 200μLに加え、さらに6μLのPEI Maxを加え、攪拌により混合した後、10分間インキュベートした。細胞から培地を除き、DNA/PEI Max混合溶液を培養細胞に加えた。血清は形成された後の複合体には影響を与えないため、通常の増殖培地を加えて、培養を行った。
(3) Gene transfer and production of stable expression strain
6 × 10 5 cells were seeded in a 35 mm dish, and the next day, gene transfer was performed using PEI Max (Polysciences, USA) according to a standard protocol. That is, 2 μg of DNA was added to 200 μL of serum-free DMEM, 6 μL of PEI Max was further added, mixed by stirring, and then incubated for 10 minutes. The medium was removed from the cells, and the DNA / PEI Max mixed solution was added to the cultured cells. Since serum does not affect the complex after it is formed, it was cultured with the addition of a normal growth medium.
遺伝子導入後、２週間、300μg/mLのG418、20μg/mLのBlasticidinを含む培養液で導入細胞を選択し、得られたコロニーを単離し、安定導入細胞を作製した。 For 2 weeks after gene introduction, introduced cells were selected with a culture solution containing 300 μg / mL G418 and 20 μg / mL Blasticidin, and the resulting colonies were isolated to prepare stably introduced cells.
（４）蛍光輝点計測によるスクリーニング
上記で得られたFluoppiプローブを安定発現するU251細胞へ、5nMのアクチノマイシンD(Wako Chemical, 日本)、又は10μMの標準阻害剤キット（文部科学省・新学術領域研究『がん研究分野の特性等を踏まえた支援活動』化学療法基盤支援活動班より供与）を含む培養液を加え24時間培養した。その後、細胞を4%ホルマリンで固定後、共焦点レーザー顕微鏡（LSM700; Carl Zeiss)、又はCellincyte(Thermo Fisher Scientific) にてMontiRed蛍光シグナル（励起波長：548 nm、蛍光波長：607nm）を計測し、得られた画像から蛍光輝点の有無や、蛍光輝点強度を算出した。
(4) Screening by fluorescence spot measurement To U251 cells stably expressing the Fluoppi probe obtained above, 5nM actinomycin D (Wako Chemical, Japan) or 10μM standard inhibitor kit (Ministry of Education, Culture, Sports, Science and Technology, New Science) The culture solution containing the area research “support activities based on the characteristics of the cancer research field, etc.” (provided by the Chemotherapy Foundation Support Activity Group) was added and cultured for 24 hours. Then, after fixing the cells with 4% formalin, the MontiRed fluorescence signal (excitation wavelength: 548 nm, fluorescence wavelength: 607 nm) was measured with a confocal laser microscope (LSM700; Carl Zeiss) or Cellincyte (Thermo Fisher Scientific). The presence or absence of fluorescent luminescent spots and the fluorescent luminescent spot intensity were calculated from the obtained images.
（５）MTTアッセイによる細胞生存性試験
Scramble siRNA（5’-UUCUCCGAACGUGUCACGUdTdT-3’（配列番号5）、5’-ACGUGACACGUUCGGAGAAdTdT-3’（配列番号6））及びRPL11siRNA（5’-GGUGCGGGAGUAUGAGUUAdTdT-3’（配列番号7）、5’-UAACUCAUACUCCCGCACCdTdT-3’（配列番号8））は、FASMAC社(Japan)で受託合成した。ヒト骨肉腫細胞株U2OS細胞へlipofectamine RNAiMax（ThermoFisher Scientific, 米国）を用いて製造業者の説明書に従い上記Scramble siRNA又はRPL11 siRNAを導入し、24時間後、DMSO（コントロール）、1μM パクリタキセル、又は5nM アクチノマイシンDを含む培養液に交換し、72時間培養した。その後、標準的なプロトコールに従い、MTT（3-(4,5-di-methylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, yellow tetrazole）試験によって細胞数を測定した（Chen ZS et al., International journal of cancer Journal international du cancer, 2001; 93(1):107-113）。パクリタキセル又はアクチノマイシンDの処理による生存性を表す数値は、溶媒であるDMSOを処理したMTTアッセイの測定値を1とした相対値から算出した。
(5) Cell viability test by MTT assay
Scramble siRNA (5'-UUCUCCGAACGUGUCACGUdTdT-3 '(SEQ ID NO: 5), 5'-ACGUGACACGUUCGGAGAAdTdT-3' (SEQ ID NO: 6)) and RPL11 siRNA (5'-GGUGCGGGAGUAUGAGUUAdTdT-3 '(SEQ ID NO: 7), 5'-UAACUCAUTUCCC 3 ′ (SEQ ID NO: 8)) was synthesized by commissioning at FASMAC (Japan). The above Scramble siRNA or RPL11 siRNA is introduced into human osteosarcoma cell line U2OS cells using lipofectamine RNAiMax (ThermoFisher Scientific, USA) according to the manufacturer's instructions, and after 24 hours, DMSO (control), 1 μM paclitaxel, or 5 nM actino The medium was replaced with a medium containing mycin D and cultured for 72 hours. Thereafter, according to a standard protocol, the number of cells was measured by MTT (3- (4,5-di-methylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide, yellow tetrazole) test (Chen ZS et al., International journal of cancer Journal international du cancer, 2001; 93 (1): 107-113). The numerical value representing the viability by the treatment with paclitaxel or actinomycin D was calculated from a relative value with the measured value of the MTT assay treated with DMSO as a solvent as 1.
（６）ウエスタンブロッティング
培養細胞を、1%TritonX100を含むbuffer A (20 mM Tris-HCl, pH 7.5, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM Na3VO4, 50 mM NaF, protease inhibitorsを含む)で回収し、30分間超音波破砕させた後、30分間15000rpmで遠心後、上清を回収した。得られた蛋白質を1/5量の6×SDS sample buffer（200mM Tris-HCl (pH6.8), 8% SDS, 0.4% bromophenol blue, 40% glycerol, 10% mercaptpethanol）を加えて撹拌し、98℃で5分間熱処理し、サンプル調製を行った。サンプルはSDS pageにて展開し、ウェット式電気転写装置(BioRad USA)を用いて、添付の説明書に従いメンブレンに転写し、以下の通りウエスタンブロッティングを行った。
(6) Western Blotting Cultured cells are buffered with 1% TritonX100 (containing 20 mM Tris-HCl, pH 7.5, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM Na 3 VO 4 , 50 mM NaF, protease inhibitors) And then sonicated for 30 minutes and centrifuged at 15000 rpm for 30 minutes, and the supernatant was collected. 1/5 volume of 6 × SDS sample buffer (200 mM Tris-HCl (pH 6.8), 8% SDS, 0.4% bromophenol blue, 40% glycerol, 10% mercaptpethanol) was added to the obtained protein and stirred. Samples were prepared by heat treatment at 5 ° C. for 5 minutes. The sample was developed on the SDS page, transferred to a membrane according to the attached instruction using a wet type electric transfer device (BioRad USA), and Western blotting was performed as follows.
ブロッキングは2% BSA-TBS-T（Albumin Bovine Serum FractionV (和光純薬), pH8.0 Tris aminomethane, NaCl, 10% Tween20）を用いた。actin抗体 (BioMatrix Research Inc., Japan)、p53抗体（Santacruz）は1％BSA TBS-T で希釈し用いた。翌日、TBS-Tで10分間洗浄を4回繰り返し、2次抗体HRP結合抗マウス(ラビット)IgG抗体（Cell Signaling）含有1％BSA TBS-T溶液にメンブレンを反応後、TBS-Tで洗浄し、検出溶液ケミルミワンUltra (Nacalai tesque, Japan)と反応させ、X線フィルムにて検出を行った。 For blocking, 2% BSA-TBS-T (Albumin Bovine Serum Fraction V (Wako Pure Chemical Industries), pH 8.0 Tris aminomethane, NaCl, 10% Tween 20) was used. Actin antibody (BioMatrix Research Inc., Japan) and p53 antibody (Santacruz) were diluted with 1% BSA TBS-T. The next day, washing with TBS-T for 10 minutes was repeated 4 times, and the membrane was reacted with 1% BSA TBS-T solution containing secondary antibody HRP-conjugated anti-mouse (rabbit) IgG antibody (Cell Signaling) and then washed with TBS-T. Then, it was reacted with a detection solution Chemil Miwan Ultra (Nacalai tesque, Japan) and detected with an X-ray film.
（７）結果
上記蛍光輝点計測によるスクリーニングによって化合物ライブラリー（標準阻害剤キット）をスクリーニングしたところ、核小体ストレス応答を誘導すると考えられる複数のヒット化合物を得た。これらのヒット化合物は、アクチノマイシンD、パクリタキセル、ビンブラスチン、アクラルビシン、及びダウノルビシン等の抗癌剤として使用されている化合物を含んでいた。
(7) Results When a compound library (standard inhibitor kit) was screened by screening by the above fluorescent luminescent spot measurement, a plurality of hit compounds thought to induce nucleolar stress response were obtained. These hit compounds included compounds used as anticancer agents such as actinomycin D, paclitaxel, vinblastine, aclarubicin, and daunorubicin.
次に、これらの抗癌剤が核小体ストレス応答への作用を検討したところ、アクチノマイシンD及びパクリタキセルによってp53の発現が増加し、siRNAでRPL11の発現を低下させ核小体ストレス応答を抑制するとp53の増加が著しく抑えられたことから（図1）、これらの抗癌剤は核小体ストレス応答を介してp53を増加させることが示された。 Next, when the effects of these anticancer agents on the nucleolar stress response were examined, the expression of p53 was increased by actinomycin D and paclitaxel. The increase in p53 was significantly suppressed (FIG. 1), indicating that these anticancer agents increase p53 through the nucleolar stress response.
さらに、アクチノマイシンD及びパクリタキセルは癌細胞の生存性を低下させるが、RPL11 siRNAにより核小体ストレス応答を抑制すると、これら抗癌剤の効果が低下することから、これらの抗癌剤の作用が部分的に核小体ストレス応答に依存性であることも示された（図2）。このように様々な抗癌剤が核小体ストレス応答を誘導することが示された。また抗癌剤の少なくとも一部において、核小体ストレス応答を低下させると、癌細胞の殺傷作用、すなわち治療感受性が減弱すると考えられた。 In addition, actinomycin D and paclitaxel reduce cancer cell viability, but suppression of the nucleolar stress response by RPL11 siRNA reduces the effectiveness of these anticancer agents, so the effects of these anticancer agents are partially nucleated. It was also shown to be dependent on the body stress response (Figure 2). Thus, various anticancer agents have been shown to induce nucleolar stress response. Moreover, it was thought that at least a part of the anticancer drug reduced the nucleolar stress response, the cancer cell killing action, that is, the therapeutic sensitivity was attenuated.
＜実施例２：RPL11の発現と抗癌剤投与による生存期間の相関試験＞
乳癌又は胃癌の、抗癌剤又はホルモン剤投与、又は外科手術時における無再発生存期間又は全生存期間と腫瘍組織サンプルにおけるRPL11の発現量との相関は以下の公共データベースを用いて検索を行った。
KaplanMier Plotter Breast Cancer (http://kmplot.com/analysis/index.php?p=service&cancer=breast)、KaplanMier Plotter Gastric Cancer (http://kmplot.com/analysis/index.php?p=service&cancer=gastric)。
RPL11の発現量は、患者群における発現量の中央値より高い群をHighとし、低い群をLowとした（図3〜4）。
<Example 2: Correlation test of RPL11 expression and survival time by administration of anticancer agent>
The correlation between RPL11 expression level in tumor tissue samples and the recurrence-free survival period or total survival period at the time of anticancer drug or hormonal drug administration or surgery for breast cancer or gastric cancer was searched using the following public database.
KaplanMier Plotter Breast Cancer (http://kmplot.com/analysis/index.php?p=service&cancer=breast), KaplanMier Plotter Gastric Cancer (http://kmplot.com/analysis/index.php?p=service&cancer=gastric ).
As for the expression level of RPL11, a group higher than the median expression level in the patient group was set to High, and a low group was set to Low (FIGS. 3 to 4).
その結果、パクリタキセルを含む化学療法を行ったヒト乳癌患者ではRPL11発現が低い患者群において無再発生存期間が有意に短縮したが（図3A）、化学療法を行わなかった患者群ではこのような相関はみられなかった（図3B）。これと同様に、5-FU投与による化学療法を行ったヒト胃癌患者では、RPL11発現が低い患者群において全生存期間が有意に短縮したが（図4A）、化学療法を行わなかった患者群ではこのような相関はみられなかった（図4B）。 As a result, relapse-free survival was significantly shortened in patients with low RPL11 expression in patients with breast cancer who received chemotherapy with paclitaxel (Figure 3A), but such correlations were observed in patients who did not receive chemotherapy. Was not observed (FIG. 3B). Similarly, in human gastric cancer patients who received chemotherapy with 5-FU, overall survival was significantly reduced in patients with low RPL11 expression (Figure 4A), but in patients who did not receive chemotherapy Such correlation was not observed (FIG. 4B).
続いて、GEOよりビンクリスチンを含む治療（R-CHOP療法（3種類の抗癌剤（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン）に副腎皮質ホルモン（プレドニゾロン）を組み合わせたCHOP療法に、さらにリツキサン投与を加えた療法））を行ったびまん性大細胞型B細胞リンパ腫（diffuse large B-cell lymphoma：DLBCL）患者のマイクロアレイ遺伝子発現データ（GSE10846）を取得した(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/query/acc.cgi?acc=GSE10846)。 Subsequently, treatment including vincristine from GEO (R-CHOP therapy (3 types of anticancer drugs (cyclophosphamide, doxorubicin, vincristine) combined with adrenocortical hormone (prednisolone), plus Rituxan) )) To obtain microarray gene expression data (GSE10846) from diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) patients (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ geo / query / acc.cgi? acc = GSE10846).
全414検体においてRPL11又はRPL5の遺伝子発現スコアをもとに中央値より高い群（High）と低い群（Low）に分けた（高発現群207 cases、低発現群207 cases）。生存期間、生死の有無が記載されたクリニカルデータをそれぞれの検体に対応付けた。RPL11及びRPL5の発現によって分けられた2つの群における全生存期間（Overall Survival：OS）について、統計ソフトウェアRを用いてKaplan-Meiyer plotを図示した。 All 414 specimens were divided into a higher group (High) and a lower group (Low) than the median based on the gene expression score of RPL11 or RPL5 (high expression group 207 cases, low expression group 207 cases). Clinical data describing the survival period and the presence or absence of life or death was associated with each specimen. Kaplan-Meiyer plots were plotted using statistical software R for Overall Survival (OS) in the two groups separated by RPL11 and RPL5 expression.
その結果、びまん性B細胞性リンパ腫（DLBCL）患者においても、RPL11発現が低い患者群（図5）及びRPL5発現が低い患者群（図6）では全生存率が有意に短縮した。 As a result, even in patients with diffuse B-cell lymphoma (DLBCL), the overall survival rate was significantly shortened in the patient group with low RPL11 expression (FIG. 5) and the patient group with low RPL5 expression (FIG. 6).
これらの結果は、RPL11及びRPL5の発現の低下が化学療法への感受性の低下、耐性化を起こし、再発や生存期間の短縮をもたらすことを示している。 These results indicate that a decrease in the expression of RPL11 and RPL5 causes a decrease in sensitivity to chemotherapy and resistance, resulting in recurrence and shortening of survival time.
本発明によって、乳癌及び大腸癌等の様々な癌の化学療法の効果及び／又は予後を予測することが可能となり得る。これによって、治療の方針決定が可能となり、癌の個別化医療の実現等に大きく貢献できることが期待される。 The present invention may be able to predict the effects and / or prognosis of chemotherapy for various cancers such as breast cancer and colon cancer. This makes it possible to determine the treatment policy and is expected to make a significant contribution to the realization of personalized medicine for cancer.
Claims (14)
前記タンパク質又は遺伝子の発現量が、参照値と比べて高い場合、癌に対する抗癌剤の有効性が高いと決定する工程
を含む、被験体における癌に対する抗癌剤の有効性を判定するための方法。 A step of measuring an expression level of a nucleolar stress response control protein or a gene encoding the protein in a sample derived from a subject, and when the expression level of the protein or gene is higher than a reference value, an anticancer agent for cancer A method for determining the effectiveness of an anticancer agent against cancer in a subject comprising the step of determining that the efficacy of the anticancer agent is high.
前記タンパク質又は遺伝子の発現量が、参照値と比べて高い場合、予後が良好であると決定する工程
を含む、被験体における化学療法後の癌の予後を判定するための方法。 In a sample derived from a subject, measuring the expression level of a nucleolar stress response control protein or a gene encoding the protein, and if the expression level of the protein or gene is higher than a reference value, the prognosis is good A method for determining the prognosis of cancer after chemotherapy in a subject comprising determining to be.
前記タンパク質又は遺伝子の発現量が、参照値と比べて高い場合、癌の再発のリスクが低いと決定する工程
を含む、被験体における化学療法後の癌の再発のリスクを判定するための方法。 In a sample derived from a subject, a step of measuring the expression level of a nucleolar stress response control protein or a gene encoding the protein, and when the expression level of the protein or gene is higher than a reference value, cancer recurrence A method for determining a risk of recurrence of cancer after chemotherapy in a subject comprising determining that the risk of cancer is low.
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