JP2018035146A - Extract of suberized ipomoea batatas or suberized arctium lappa - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、コルク化サツマイモ又はコルク化ゴボウの抽出物等に関する。 The present invention relates to an extract of cork sweet potato or cork burdock.
近年の健康ブームを受け、健康や抗老化のために抗酸化物質を摂取することが広まっている。多くの植物やその加工食品には抗酸化性を有するフェノール化合物が含まれており、このような植物や加工食品、及び含まれるフェノール化合物は人気が高い。ますます多くの抗酸化物質が必要とされている。 In response to the recent health boom, taking antioxidants for health and anti-aging has become widespread. Many plants and processed foods contain phenolic compounds having antioxidant properties, and such plants and processed foods and the phenolic compounds contained therein are very popular. More and more antioxidants are needed.
フェルラ酸、カフェ酸、シナピン酸、クマル酸などのＣ６−Ｃ３骨格を有するフェノール類はヒドロキシ桂皮酸類に分類される。これら天然のフェノール化合物は、抗酸化活性、抗腫瘍活性、抗炎症活性、抗菌活性などといった多彩な生理機能を有しており、健康への影響から多くの研究がなされてきた。とくに高齢化社会においてはアルツハイマー病や癌といった加齢にともなう疾病が社会問題ともなっており、予防医学の観点からの健康食品の進歩も期待されている。とりわけカフェ酸やクロロゲン酸はコーヒーなどで日常的に摂取しており、もっとも身近なポリフェノールと言える。これらのフェノール化合物は配糖体やタンパク質と結合した状態で存在し、細胞壁ポリマーとしても存在する。 Phenols having a C6-C3 skeleton such as ferulic acid, caffeic acid, sinapinic acid, and coumaric acid are classified as hydroxycinnamic acids. These natural phenol compounds have various physiological functions such as antioxidant activity, antitumor activity, anti-inflammatory activity, antibacterial activity, and the like, and many studies have been made for their influence on health. Particularly in an aging society, diseases associated with aging such as Alzheimer's disease and cancer have become social problems, and progress in health foods from the viewpoint of preventive medicine is also expected. In particular, caffeic acid and chlorogenic acid are taken on a daily basis, such as coffee, and are the most familiar polyphenols. These phenolic compounds exist in a state of being bound to glycosides and proteins, and also exist as cell wall polymers.
フェルラ酸やカフェ酸などのアルキル誘導体も植物に存在していることは知られているが、天然物としての安定的な供給源はほとんどなく、生理学的機能も完全に解明されていない。ヒドロキシ桂皮酸は長鎖アルコールと比較的容易にエステル化反応が可能で、様々な鎖長のアルキルエステルが合成され機能評価が行われてきた。例えば、非特許文献１に記載があるように、２７種のヒドロキシ桂皮酸誘導体の抗腫瘍活性を５種の癌細胞系を用いて評価したところ、カフェ酸パルミチルエステルはすべての癌細胞系で高い増殖抑制効果を示している。また、非特許文献２においては、４種の遊離型のヒドロキシ桂皮酸に加えて、それぞれの炭素数４、８、１６のアルキルエステルを合成し、βアミロイドの凝集抑制効果を評価している。その結果、カテコール構造を有しＣ１６の長鎖アルキル基を有するカフェ酸パルミチルエステルが最も高い活性を示した。 Alkyl derivatives such as ferulic acid and caffeic acid are known to exist in plants, but there are few stable sources as natural products, and their physiological functions have not been fully elucidated. Hydroxycinnamic acid can be esterified with long-chain alcohols relatively easily, and alkyl esters with various chain lengths have been synthesized and their functions have been evaluated. For example, as described in Non-Patent Document 1, the antitumor activity of 27 types of hydroxycinnamic acid derivatives was evaluated using 5 types of cancer cell lines. Caffeic acid palmityl ester was found in all cancer cell lines. It shows a high growth inhibitory effect. Further, in Non-Patent Document 2, in addition to four types of free hydroxycinnamic acid, alkyl esters having 4, 8 and 16 carbon atoms are synthesized to evaluate the β-amyloid aggregation inhibitory effect. As a result, caffeic acid palmityl ester having a catechol structure and a C16 long chain alkyl group showed the highest activity.
また、カフェ酸やフェルラ酸は抗酸化性やチロシナーゼ阻害活性を有することから化粧品として肌の美白や健常化にも効果が期待されるが、ヒドロキシ桂皮酸類は水溶性が高く、角質浸透性とそれにともなう機能発現は限定的である。一方、角質層は脂溶性が高いため、例えばビタミンＣ誘導体やトラネキサム酸セチルエステルなど元来水溶性成分を脂溶化した成分は経皮吸収性に優れることから高機能成分として化粧品に使われている。同様に、脂溶化されたカフェ酸やフェルラ酸などのヒドロキシ桂皮酸類の長鎖アルキルエステルも化粧品原料として高い効果が期待される。 Caffeic acid and ferulic acid have anti-oxidant and tyrosinase inhibitory activity, and are expected to be effective for skin whitening and health as cosmetics, but hydroxycinnamic acids are highly water-soluble and have keratinic permeability. Accompanying functional expression is limited. On the other hand, since the stratum corneum has high fat solubility, for example, components obtained by fat-solubilizing water-soluble ingredients such as vitamin C derivatives and tranexamic acid cetyl ester are used in cosmetics as highly functional ingredients because of their excellent transdermal absorbability. . Similarly, long-chain alkyl esters of hydroxycinnamic acids such as fat-solubilized caffeic acid and ferulic acid are expected to be highly effective as cosmetic raw materials.
このように、癌やアルツハイマーといった重大疾病の予防効果や、美容素材としても効果が期待されるヒドロキシ桂皮酸類長鎖アルキルエステルであるが、上記の通り、その安定大量供給は非常に難しく、例えば特許文献１（特開２０１５−１０５２７２号公報）において、紫芋焼酎もろみからカフェ酸長鎖アルキルエステルが抽出できることが記載されている程度であって、その他めぼしい技術は見当たらない。また、焼酎もろみはさつまいもを原料とした焼酎蒸留粕であり、焼酎工場で大量に発生するが、その発生時点における水分が９５％であり、腐敗もしやすく、原料として利用するためには大規模な固液分離や酸化させないためのマイルドな乾燥工程が必要で多くの労力とコストがかかる。また、そのエキス分には脂肪酸が大量に含まれるだけでなく特有の発酵臭が強く、用途が極めて限定される。 In this way, it is a hydroxycinnamic acid long-chain alkyl ester that is expected to be effective as a preventive agent for serious diseases such as cancer and Alzheimer's, and as a cosmetic material, but as mentioned above, its stable mass supply is very difficult. Reference 1 (Japanese Patent Application Laid-Open No. 2015-105272) only describes that caffeic acid long-chain alkyl ester can be extracted from purple koji shochu mash, and no other remarkable technique is found. Shochu moromi is a shochu-distilled rice cake made from sweet potatoes. It is produced in large quantities in the shochu factory, but its water content is 95%. A mild drying process is required to prevent solid-liquid separation and oxidation, which requires a lot of labor and cost. In addition, the extract contains not only a large amount of fatty acid but also a strong fermentation odor, and its use is extremely limited.
ところで、植物、特に表皮には傷害を受けた際の自己修復能力が備わっており、病原菌の侵入やそれに伴う腐敗などから身を守るために細胞壁をコルク化させ水や空気を通しにくくする。特に、サツマイモにおいては、収穫したてのサツマイモを貯蔵庫内で数日間（例えば約４日間）を通して室温又は室温より若干高め（例えば３２〜３６℃程度）、高湿度（例えば湿度９０％〜９５％）に保つことによって、サツマイモの皮膚下のコルク層を増加させる処置がしばしば採られる。これはキュアリング処理と呼ばれ、当該処理によりサツマイモの抵抗力が増し長く貯蔵できるようになる。 By the way, plants, particularly the epidermis, have a self-repairing ability when injured. To protect themselves against invasion of pathogenic bacteria and associated rot, the cell walls are corked to make it difficult for water and air to pass through. In particular, in sweet potatoes, freshly harvested sweet potatoes are kept at room temperature or slightly higher than room temperature (for example, about 32 to 36 ° C.) for several days (for example, about 4 days) in a storage, and high humidity (for example, 90% to 95% humidity). Treatments are often taken to increase the cork layer under the sweet potato skin by keeping This is called a curing process, and the resistance of the sweet potato is increased by the process so that it can be stored for a long time.
サツマイモを用いた最大の加工食品である干し芋製造においては、冬場の低温乾燥条件で天日乾燥させるため、収穫から数ヶ月間保存する必要があり、保存性を向上させるためにキュアリングの処理が取られる場合もある。 In the production of dried potatoes, the largest processed food using sweet potatoes, it is necessary to store for several months after harvesting in order to dry in the sun under low temperature drying conditions in winter. May be taken.
本発明は、抗酸化物質（特にヒドロキシ桂皮酸類アルキルエステル化合物）を簡便に製造する方法を提供することを課題とする。 An object of the present invention is to provide a method for easily producing an antioxidant substance (particularly, hydroxycinnamic acid alkyl ester compound).
本発明者らは、サツマイモをキュアリング処理することによって、サツマイモ中で抗酸化物質が産出されることを見出し、さらに改良を重ねて本発明を完成させるに至った。 The present inventors have found that an antioxidant is produced in sweet potatoes by curing the sweet potato, and the present invention has been completed with further improvements.
本発明は例えば以下の項に記載の主題を包含する。
項１．
サツマイモ又はゴボウをキュアリングする工程を含む、
抗酸化物質製造方法。
項２．
サツマイモ又はゴボウの組織の一部又は全部をコルク化する工程（好ましくは、サツマイモ又はゴボウを〔より好ましくは０．１〜１ｃｍ程度の厚さに〕削ぎ取って乾燥させる工程、あるいはサツマイモ又はゴボウを室温且つ高湿度下で数日〜数週間保存する工程）を含む、
抗酸化物質製造方法。
項３．
抗酸化物質がヒドロキシ桂皮酸類アルキルエステル化合物である、項１又は２に記載の方法。
項４．
サツマイモ又はゴボウのキュアリング部位抽出物、あるいは
サツマイモ又はゴボウのコルク化組織抽出物
を含む抗酸化組成物。
項５．
サツマイモ又はゴボウの皮部又は果肉部のキュアリング部位抽出物、あるいは
サツマイモ又はゴボウの皮部又は果肉部のコルク化組織抽出物
を含む項４に記載の抗酸化組成物。
項６．
医薬品組成物、化粧品組成物、又は食品組成物である、項４又は５に記載の抗酸化組成物。
The invention encompasses, for example, the subject matter described in the following sections.
Item 1.
Including curing sweet potato or burdock,
Antioxidant production method.
Item 2.
A step of corkizing part or all of the sweet potato or burdock tissue (preferably a step of scraping and drying the sweet potato or burdock to a thickness of about 0.1 to 1 cm, or drying a sweet potato or burdock, or Storing at room temperature and high humidity for several days to several weeks)
Antioxidant production method.
Item 3.
Item 3. The method according to Item 1 or 2, wherein the antioxidant is a hydroxycinnamic acid alkyl ester compound.
Item 4.
An antioxidant composition comprising a sweet potato or burdock curing site extract or a cork tissue extract of sweet potato or burdock.
Item 5.
Item 5. The antioxidant composition according to Item 4, comprising a sweetened potato or burdock skin part or pulp part curing site extract or a cork tissue extract of a sweet potato or burdock skin or fruit part.
Item 6.
Item 6. The antioxidant composition according to Item 4 or 5, which is a pharmaceutical composition, a cosmetic composition, or a food composition.
本発明に包含される抗酸化物質製造方法により、サツマイモ又はゴボウから簡便かつ効率的に抗酸化物質（特にヒドロキシ桂皮酸類アルキルエステル化合物）を製造することができる。また、本発明に包含される抗酸化組成物により、抗酸化効果（例えば、生体内での過酸化脂質の生成や不飽和脂肪酸の酸化変性の予防又は抑制）が期待できる。 By the antioxidant substance manufacturing method included in the present invention, an antioxidant substance (particularly, hydroxycinnamic acid alkyl ester compound) can be easily and efficiently produced from sweet potato or burdock. In addition, the antioxidant composition included in the present invention can be expected to have an antioxidant effect (for example, prevention of or suppression of formation of lipid peroxides in the living body and oxidative modification of unsaturated fatty acids).
本発明は、抗酸化物質製造方法や抗酸化組成物等を包含する。以下、本発明の各実施形態について、さらに詳細に説明する。 The present invention includes a method for producing an antioxidant substance, an antioxidant composition, and the like. Hereinafter, each embodiment of the present invention will be described in more detail.
まず、サツマイモを用いる場合について説明する。 First, a case where sweet potato is used will be described.
本発明に係る抗酸化物質製造方法は、サツマイモをキュアリングする工程を含むか、あるいは、サツマイモの組織の一部又は全部をコルク化する工程を含む。 The method for producing an antioxidant according to the present invention includes a step of curing sweet potato, or a step of corking a part or all of the sweet potato tissue.
サツマイモとしては、特に制限されず、各種のサツマイモを用いることができる。例えば、紅あずま、高系１４号、紅こがね、鳴門金時、宮崎紅、五郎島金時、大栄愛娘、紅はるか、クイックスイート、紅天使、シルクスイート、アマアカリ、玉乙女、紅まさり、あいこまち、等が挙げられる。また、紫芋や果肉がオレンジ系のサツマイモも用いることができる。 The sweet potato is not particularly limited, and various sweet potatoes can be used. For example, Red Azuma, High Line No. 14, Beni Kogane, Naruto Kintoki, Miyazaki Beni, Gorojima Kintoki, Daiei Aimusume, Beni Haruka, Quick Suite, Beni Angel, Silk Suite, Amakaari, Tamotome, Beni Masari, Aikomachi , Etc. Moreover, purple sweet potatoes and orange sweet potatoes can be used.
サツマイモのキュアリングは、公知の方法により行うことができる。例えば、サツマイモを、数日間（例えば約１〜１０日間、好ましくは２〜８日間、より好ましくは３〜６日間程度）を通して、室温又は室温より若干高め（例えば２５〜４０℃、好ましくは２７〜３８℃、より好ましくは３２〜３６℃程度）、高湿度（例えば湿度８５〜１００％、好ましくは湿度９０％〜９５％程度）に保つことにより、行うことができる。なお、当該処理後、放熱させることが好ましい。例えば処理後１２〜２４時間以内に１３℃前後まで放熱させることが好ましい。キュアリング処理により、特に傷口部のコルク層形成が促進される。なお、コルク層が形成されることで感染を防止することができる。また、キュアリング処理により、特定の病原菌を死滅させることもできる。 The sweet potato can be cured by a known method. For example, the sweet potato is allowed to reach room temperature or slightly above room temperature (for example, 25 to 40 ° C., preferably 27 to 40 days) over several days (for example, about 1 to 10 days, preferably 2 to 8 days, more preferably about 3 to 6 days). 38 ° C., more preferably about 32 to 36 ° C.) and high humidity (for example, humidity 85 to 100%, preferably humidity about 90% to 95%). Note that it is preferable to dissipate heat after the treatment. For example, it is preferable to dissipate heat to around 13 ° C. within 12 to 24 hours after treatment. By the curing process, particularly the formation of a cork layer at the wound is promoted. In addition, infection can be prevented by forming a cork layer. In addition, a specific pathogen can be killed by a curing process.
サツマイモ組織の一部又は全部をコルク化する方法としては、例えば組織がサツマイモ表面の傷部周辺である場合には、上記キュアリング処理が好適に例示できる。また、例えば、コルク化したい部位を削ぎ取り、それを乾燥させコルク化させることもできる。コルク化させる部位としては、特に制限はされず、サツマイモの皮部でも果肉部でもよい。当該コルク化のための乾燥は、例えば、上記キュアリング処理と同様の処理で行うこともできるし、あるいはまた、削ぎ取ったサツマイモの組織を、室温（例えば２０〜３０℃、好ましくは２５℃前後）で数日間（２〜１０日間程度、好ましくは４〜６日間程度）乾燥させることで行うことができる。乾燥は自然乾燥／日陰乾燥／天日乾燥／送風乾燥のいずれであってもよい。（送風乾燥では、乾燥温度は例えば３５℃〜６０℃、好ましくは４０℃〜５０℃である。） As a method for corking part or all of the sweet potato tissue, for example, when the tissue is around a wound portion on the surface of the sweet potato, the above curing treatment can be preferably exemplified. Also, for example, a part to be corked can be scraped off and dried to be corked. The part to be corked is not particularly limited, and may be a sweet potato skin part or a pulp part. The drying for corking can be carried out, for example, by the same treatment as the above-mentioned curing treatment. Alternatively, the scraped sweet potato tissue is treated at room temperature (for example, 20 to 30 ° C., preferably around 25 ° C.). ) For several days (about 2 to 10 days, preferably about 4 to 6 days). Drying may be any of natural drying / shade drying / sun drying / air drying. (In blow drying, the drying temperature is, for example, 35 ° C. to 60 ° C., preferably 40 ° C. to 50 ° C.)
サツマイモを削ぎ取る方法としては、特に制限はされず、例えばピーラーを用いて、薄目（例えば０．１〜１ｃｍ程度の厚さ）に削ぎ取る方法が好ましく例示できる。また、専用の機械装置を用いて例えばスティック状、ダイス状、あるいはスライス状等にカット処理してもよい。 The method for scraping the sweet potato is not particularly limited, and for example, a method of scraping the sweet potato into a thin shape (for example, a thickness of about 0.1 to 1 cm) can be preferably exemplified. Alternatively, the cutting process may be performed into a stick shape, a die shape, a slice shape, or the like using a dedicated mechanical device.
サツマイモ（の組織の一部又は全部）をコルク化させることにより、当該コルク化部位において抗酸化物質が産生される。 By corkizing the sweet potato (a part or all of its tissue), an antioxidant is produced at the corkated site.
特に制限はされないが、特に好ましい抗酸化物質が産生され蓄積されたサツマイモ組織として、サツマイモ収穫時にサイズが小さいことにより規格外品とされる小サイズのサツマイモが例示できる。当該サツマイモは比較的細いためキュアリング処理によるコルク化のシグナルが内部に伝わりやすいため、一般的な加工法であるダイス状カットと低温送風乾燥で抗酸化物質を効率よく産生させることができる。またあるいは、干芋製造時におけるサツマイモ皮部も例示できる。干し芋製造においては、天日乾燥する場合は収穫してから冬場まで保存するために、通常、キュアリング処理を行い、冬場になった時点でキュアリング済みサツマイモを蒸煮して（あるいは蒸煮前に）皮を剥き（機械剥きしてよい）、得られた果肉部を用いる。つまり、干し芋製造ではキュアリングされたサツマイモ皮部は不要部である。よって、特に、蒸煮していない当該皮部をそのまま、あるいは天日乾燥等してさらにコルク化を進めて抗酸化物質を産出させるなどして、抗酸化物質を抽出する原料として好ましく用いることができる。 Although it does not restrict | limit in particular, As a sweet potato structure | tissue which produced and accumulate | stored the especially preferable antioxidant substance, the small sized sweet potato made into a nonstandard product by the small size at the time of sweet potato harvest can be illustrated. Since the sweet potato is relatively thin, the corkation signal due to the curing process is easily transmitted to the inside, and therefore, an antioxidant can be efficiently produced by dicing and low-temperature air drying, which are general processing methods. Alternatively, a sweet potato skin part at the time of producing dried potato can also be exemplified. In dried persimmon production, in order to dry in the sun, it is usually harvested and stored until winter, and curing is usually performed, and the cured sweet potato is steamed at the time of winter (or before cooking) ) Peel (may be machine peeled) and use the resulting pulp. In other words, the cured sweet potato skin part is an unnecessary part in the production of dried straw. Therefore, it can be preferably used as a raw material for extracting an antioxidant substance, for example, by subjecting the skin part not cooked as it is or by drying the sun to further cork to produce an antioxidant substance. .
サツマイモコルク化部位において産出され蓄積される抗酸化物質としては、主に、ヒドロキシ桂皮酸類アルキルエステル化合物が挙げられる。ヒドロキシ桂皮酸類アルキルエステル化合物は、コルク化していないサツマイモ皮部にわずかながら含まれるものの、サツマイモ果肉部にはほとんど含まれていない一方、キュアリング処理したサツマイモの皮部、およびコルク化させたサツマイモ組織においては、サツマイモ皮部及び果肉部のいずれにおいても、大量に含まれる。 Antioxidants produced and accumulated at the sweet potato corkation site mainly include hydroxycinnamic acid alkyl ester compounds. Hydroxycinnamic acid alkyl ester compounds are slightly contained in the uncorked sweet potato skin, but are hardly contained in the sweet potato flesh, while the cured sweet potato skin and the cork sweet potato tissue Is contained in a large amount in both the sweet potato skin part and the pulp part.
ヒドロキシ桂皮酸類アルキルエステル化合物は、ヒドロキシ桂皮酸類のアルキルエステルである。ヒドロキシ桂皮酸類としては、例えばカフェ酸（コーヒー酸）、クロロゲン酸、ジフェルラ酸、クマル酸、フェルラ酸等が挙げられ、中でもカフェ酸、クマル酸、フェルラ酸が好ましい。また、ヒドロキシ桂皮酸類アルキルエステル化合物のアルキル基としては、好ましくは炭素数１２〜２０（１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０）のアルキル基、より好ましくは炭素数１４〜１８のアルキル基である。また、アルキル基としては、直鎖状又は分岐鎖状であり得、より好ましくは直鎖状である。 The hydroxycinnamic acid alkyl ester compound is an alkyl ester of hydroxy cinnamic acid. Examples of hydroxycinnamic acids include caffeic acid (caffeic acid), chlorogenic acid, diferulic acid, coumaric acid, ferulic acid, and the like, among which caffeic acid, coumaric acid, and ferulic acid are preferable. Further, the alkyl group of the hydroxycinnamic acid alkyl ester compound is preferably an alkyl group having 12 to 20 carbon atoms (12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, or 20), more preferably carbon number. 14 to 18 alkyl groups. Moreover, as an alkyl group, it may be linear or branched, More preferably, it is linear.
ヒドロキシ桂皮酸類アルキルエステル化合物としては、より具体的には、以下の式（Ｉ）： More specifically, as the hydroxycinnamic acid alkyl ester compound, the following formula (I):
上記の抗酸化物質が産出、蓄積されたサツマイモ部位（より具体的には、サツマイモのキュアリング部位、又はサツマイモのコルク化組織）をそのまま利用してもよいし、あるいは抗酸化物質を抽出して用いることもできる。 The sweet potato site where the above antioxidants are produced and accumulated (more specifically, the sweet potato curing site or the sweet potato cork tissue) may be used as it is, or the antioxidants may be extracted. It can also be used.
抽出方法は、上記抗酸化物質が抽出される限り、特に限定はされないが、例えば（好ましくは削ぎ取った）サツマイモコルク化部位を、好ましくは更に細かく破断したうえで、抽出溶媒に数分又は数時間〜４８時間程度静置、振とう、又は撹拌して抽出することができる。抽出溶媒としてはエタノール、又は含水エタノールが例示でき、含水エタノールが好ましく、より具体的には９０〜９９重量％含水エタノールがより好ましく、９５〜９９重量％含水エタノールがさらに好ましい。あるいはまた、ブチレングリコールやペンチレグリコールなども使用できる。ヘキサンやアセトン、その混合物でも抽出できる。本発明に係る抗酸化物質は脂溶性のものが主であるため、植物油で抽出してもよい。サラダ油、菜種油、コーン油、米油、オリーブ油、紅花油、椿油、アボカド油、マカダミア油など用途に応じて利用できる。超臨界抽出も利用できる。特に制限されないが、抽出溶媒はサツマイモが十分に浸漬する量を用いることが好ましく、例えば３〜５倍量用いることが好ましい。 The extraction method is not particularly limited as long as the antioxidant substance is extracted. For example, the sweet potato corkation site (preferably scraped off) is preferably further finely broken and then extracted in several minutes or several times in the extraction solvent. It can be extracted by standing, shaking or stirring for about 48 hours. Examples of the extraction solvent include ethanol or hydrous ethanol, hydrous ethanol is preferred, more specifically 90 to 99 wt% hydrous ethanol is more preferred, and 95 to 99 wt% hydrous ethanol is still more preferred. Alternatively, butylene glycol or pentylene glycol can also be used. Extraction can also be performed with hexane, acetone, or a mixture thereof. Since the antioxidant substance according to the present invention is mainly fat-soluble, it may be extracted with vegetable oil. Salad oil, rapeseed oil, corn oil, rice oil, olive oil, safflower oil, camellia oil, avocado oil, macadamia oil, etc. Supercritical extraction can also be used. Although it does not restrict | limit in particular, It is preferable to use the quantity which a sweet potato fully immerses for an extraction solvent, for example, it is preferable to use 3-5 times amount.
得られた抽出液は、そのまま用いることもできるし、さらにロータリーエバポレーター等によって濃縮乾固することもできる。得られた濃縮乾固物には、上記抗酸化物質が濃縮されており、好ましい。このような抽出液や濃縮乾固物は、サツマイモのキュアリング部位抽出物、又はサツマイモのコルク化組織抽出物の一形態ということができる。本発明は、これらの抽出物も包含する。 The obtained extract can be used as it is, or can be further concentrated and dried by a rotary evaporator or the like. The obtained concentrated dry product is preferable because the above-mentioned antioxidant is concentrated. Such an extract or concentrated dried product can be said to be one form of a sweet potato curing site extract or a sweetened cork tissue extract. The present invention also includes these extracts.
得られた抽出物は、抗酸化組成物に好ましく利用できる。当該抽出物そのものを抗酸化組成物として用いてもよいし、その他の成分と組み合わせて抗酸化組成物として用いてもよい。本発明は、当該抽出物を含む抗酸化組成物も包含する。 The obtained extract can be preferably used for an antioxidant composition. The extract itself may be used as an antioxidant composition, or may be used as an antioxidant composition in combination with other components. The present invention also includes an antioxidant composition containing the extract.
該他の成分として、当該抗酸化組成物を用いる分野に応じて適宜公知の成分を選択して用いることもできる。例えば、薬学的又は食品衛生学的に許容される担体を用いることができる。 As the other component, a known component can be appropriately selected and used depending on the field in which the antioxidant composition is used. For example, a pharmaceutically or food hygienically acceptable carrier can be used.
本発明に係る抗酸化組成物は、例えば医薬組成物、化粧品組成物、食品組成物（飲料組成物及び食品添加物組成物を包含する）等として好ましく用いることができる。 The antioxidant composition according to the present invention can be preferably used as, for example, a pharmaceutical composition, a cosmetic composition, a food composition (including a beverage composition and a food additive composition), and the like.
医薬組成物として用いる場合、他の成分としては、薬学的に許容される基剤、担体、及び／又は添加剤（例えば溶剤、分散剤、乳化剤、緩衝剤、安定剤、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤等）等が例示できる。また、当該医薬組成物の形態も特に制限されず、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤、クリーム剤、パップ剤等が例示できる。これらの形態の医薬組成物は、必要に応じて当該他の成分と、上記抽出物を組み合わせて常法により調製することができる。 When used as a pharmaceutical composition, other components include pharmaceutically acceptable bases, carriers, and / or additives (eg, solvents, dispersants, emulsifiers, buffers, stabilizers, excipients, binders). , Disintegrants, lubricants, etc.). The form of the pharmaceutical composition is not particularly limited, and examples thereof include tablets, pills, powders, solutions, suspensions, emulsions, granules, capsules, creams, and poultices. The pharmaceutical composition of these forms can be prepared by a conventional method by combining the above-mentioned extract with the other components as necessary.
化粧品組成物として用いる場合、他の成分としては、例えば、薬学的に許容される基剤、担体、及び／又は添加剤（例えば溶剤、分散剤、乳化剤、緩衝剤、安定剤、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤等）等が挙げられ、特に化粧品用として許容される媒体、基剤、担体、添加剤や、その他化粧品用として許容される成分、材料が好ましく挙げられる。当該化粧品組成物の形態も特に制限されず、例えば、乳液、化粧水、クリーム、オールインワン、美容オイル、美容液、ファンデーション、パック、日焼け止め、シャンプー、リンス、コンディショナー等が例示できる。これらの形態の化粧品組成物は、必要に応じて当該他の成分と、上記抽出物を組み合わせて常法により調製することができる。 When used as a cosmetic composition, other ingredients include, for example, pharmaceutically acceptable bases, carriers, and / or additives (eg, solvents, dispersants, emulsifiers, buffers, stabilizers, excipients, Binders, disintegrants, lubricants, etc.) and the like, and particularly acceptable media, bases, carriers, additives for cosmetics, and other components and materials acceptable for cosmetics are preferred. The form of the cosmetic composition is not particularly limited, and examples thereof include emulsions, lotions, creams, all-in-one, beauty oils, beauty liquids, foundations, packs, sunscreens, shampoos, rinses, conditioners and the like. The cosmetic composition of these forms can be prepared by a conventional method by combining the other components and the extract as necessary.
食品組成物として用いる場合、他の成分としては、食品衛生学上許容される基剤、担体、添加剤や、その他食品として利用され得る成分・材料が例示できる。また、当該食品組成物の形態も特に制限されず、例えば加工食品、健康食品（栄養補助食品、栄養機能食品、病者用食品、特定保健用食品、機能性表示商品等）、サプリメント、病者向け食品（病院食、病人食又は介護食等）等が例示できる。これらは常法により調製することができる。特に、健康食品（栄養補助食品、栄養機能食品、病者用食品、特定保健用食品、機能性表示商品等）、又はサプリメントとして、食品組成物を調製する場合は、継続的な摂取が行いやすいように、例えば顆粒、カプセル、タブレット、キャンディー、グミ、ゼリー、錠剤（チュアブル剤等を含む）、飲料（飲料パウダー、ドリンク剤等）等の形態で調製することが好ましい。なかでもカプセル（ハードカプセル、ソフトカプセル）、タブレット、顆粒、錠剤、飲料パウダー、ドリンク剤の形態が摂取の簡便さの点からは好ましいが、特にこれらに限定されるものではない。なお、食品組成物の中でも食品添加物組成物として用いる場合には、その形態として、例えば液状、粉末状、フレーク状、顆粒状、ペースト状のものが挙げられる。より具体的には、調味料（醤油、ソース、ケチャップ、ドレッシング等）、フレーク（ふりかけ）、焼き肉のたれ、スパイス、ルーペースト（カレールーペースト等）等が例示できる。これらの形態の食品組成物は、必要に応じて当該他の成分と、上記抽出物を組み合わせて常法により調製することができる。 When used as a food composition, examples of other components include bases, carriers, additives, and other components and materials that can be used as food. Also, the form of the food composition is not particularly limited. For example, processed foods, health foods (dietary supplements, nutritional functional foods, foods for the sick, foods for specified health, functional indication products, etc.), supplements, sick people Foods for hospitals (hospital foods, sick foods, nursing foods, etc.) can be exemplified. These can be prepared by conventional methods. In particular, when preparing a food composition as a health food (dietary supplement, nutritional functional food, food for the sick, food for specified health use, functional labeling product, etc.) or supplement, continuous intake is easy to perform. Thus, it is preferable to prepare in the form of, for example, granules, capsules, tablets, candies, gummi, jelly, tablets (including chewable agents), beverages (beverage powder, drinks, etc.). Among these, capsules (hard capsules, soft capsules), tablets, granules, tablets, beverage powders, and drinks are preferable from the viewpoint of ease of ingestion, but are not particularly limited thereto. When used as a food additive composition among food compositions, examples of the form include liquid, powder, flake, granule, and paste. More specifically, seasonings (soy sauce, sauce, ketchup, dressing, etc.), flakes (sprinkles), grilled meat sauce, spices, roux paste (carrere paste, etc.) and the like can be exemplified. The food composition of these forms can be prepared by a conventional method by combining the above extract with the other components as necessary.
得られた抽出物を、その他成分と組み合わせて抗酸化組成物として用いるにあたり、特に好ましい一実施形態は、その他成分として少なくともオリーブオイルを用いる場合である。このような、当該抽出物とオリーブオイルとを含む抗酸化組成物は、医薬組成物、化粧品組成物、又は食品組成物等として好ましく用いることができる。本明細書において、当該抽出物とオリーブオイルとを含む抗酸化組成物を、特にオリーブオイル含有抗酸化組成物とよぶことがある。
オリーブオイルとしては、特に制限はされないが、抗酸化成分をより多く含有するエクストラバージンオイルがより好ましい。また、オリーブオイルから脂溶性成分を分画した精製画分を用いてもよく、このような画分を得られた抽出物とともに含む抗酸化組成物も、オリーブオイル含有抗酸化組成物（すなわち、当該抽出物とオリーブオイルとを含む抗酸化組成物）に包含される。オリーブオイルの精製は、例えばクロマトグラフィーを用いて行うことができる。より具体的には、例えば、エクストラバージンオリーブオイルをケイ酸カラムクロマトグラフィーを用いて、クロロホルムでトリグリセリドを溶出した後、さらにクロロホルム／メタノール（２：１）とメタノールで溶出し、当該溶出画分をオリーブオイル脂溶性精製画分として用いることができる。
When the obtained extract is used as an antioxidant composition in combination with other components, one particularly preferred embodiment is when at least olive oil is used as the other components. Such an antioxidant composition containing the extract and olive oil can be preferably used as a pharmaceutical composition, a cosmetic composition, a food composition, or the like. In the present specification, an antioxidant composition containing the extract and olive oil is sometimes referred to as an olive oil-containing antioxidant composition.
Although it does not restrict | limit especially as olive oil, The extra virgin oil which contains more antioxidant components is more preferable. In addition, a purified fraction obtained by fractionating a fat-soluble component from olive oil may be used, and an antioxidant composition containing such a fraction together with an extract obtained is also an olive oil-containing antioxidant composition (that is, An antioxidant composition comprising the extract and olive oil). The olive oil can be purified using, for example, chromatography. More specifically, for example, after elution of triglyceride with chloroform using silica gel column chromatography with extra virgin olive oil, further elution with chloroform / methanol (2: 1) and methanol was performed. It can be used as an olive oil fat-soluble purified fraction.
オリーブオイル含有抗酸化組成物は、当該抽出物とオリーブオイルとを含むことにより、特に優れた抗酸化効果を奏する。当該抽出物単独での抗酸化効果と、オリーブオイル単独での抗酸化効果とを、単に足し合わせた効果よりも、これら２成分を組み合わせて用いることにより、さらに優れた抗酸化効果（相乗効果）を得ることができる。 The olive oil-containing antioxidant composition exhibits a particularly excellent antioxidant effect by including the extract and olive oil. By using these two components in combination rather than simply adding the antioxidant effect of the extract alone and the antioxidant effect of olive oil alone, a further superior antioxidant effect (synergistic effect) Can be obtained.
本発明に係る抗酸化組成物は、上記抗酸化物質を含む。そして、上記抗酸化物質は、活性酸素（特にヒドロキシラジカル）除去に有用であり、活性酸素は生体内での過酸化脂質の生成や不飽和脂肪酸の酸化変性を通じて、動脈硬化、心筋梗塞、脳梗塞、発ガン、老化（特に皮膚のシミや白内障など）の促進、アルツハイマー病発症等に関わっているといわれていることから、当該抗酸化組成物も活性酸素（特にヒドロキシラジカル）除去に有効であって、生体内での過酸化脂質の生成や不飽和脂肪酸の酸化変性（ひいては前述の各症状）の防止、予防、又は抑制に好ましく用いることができる。また、上記抗酸化物質は脂溶性成分であるため、脂質で構成される細胞膜への浸透性に優れ、また、種々の酵素タンパク質の疎水ポケット（鍵穴）へのリガンド（鍵）として作用し、生体調節機能の正常化にも有用である。 The antioxidant composition according to the present invention contains the above antioxidant. The antioxidants are useful for removing active oxygen (especially hydroxy radicals), and the active oxygen can be used to generate arteriosclerosis, myocardial infarction, cerebral infarction through the generation of lipid peroxide and oxidative modification of unsaturated fatty acids in vivo. Therefore, the antioxidant composition is also effective in removing active oxygen (especially hydroxy radicals) because it is said to be involved in carcinogenesis, aging (especially skin spots and cataracts), and Alzheimer's disease. Thus, it can be preferably used for the prevention, prevention, or suppression of the formation of lipid peroxides in vivo and the oxidative modification of unsaturated fatty acids (and thus the aforementioned symptoms). In addition, since the above-mentioned antioxidant is a fat-soluble component, it has excellent permeability to cell membranes composed of lipids, and acts as a ligand (key) to the hydrophobic pockets (key holes) of various enzyme proteins. It is also useful for normalizing regulatory functions.
より詳細には、当該抗酸化組成物には、抗酸化効果、がん予防効果、抗腫瘍効果、抗腫瘍転移効果、抗炎症効果、抗菌効果、抗ウイルス効果、シクロオキシゲナーゼ−２阻害効果、滋養強壮効果、抗変異原効果、血圧調整効果、高脂血症予防効果、動脈硬化予防効果、肥満予防効果、肝機能保護効果、認知症予防効果、脳血管障害予防効果、脳機能改善・増強効果、アレルギー緩和効果、自己免疫疾患予防効果、抗乾癬効果、歯周病予防効果、美肌効果、美白効果、保湿効果、しわ予防・改善効果、コラーゲン分解阻害効果、エラスチン分解阻害効果、ヒアルロン酸分解阻害効果、乾燥性小じわ予防効果、光老化予防効果、アトピー性皮膚炎予防効果、皮膚がん予防効果等が期待できる。
中でも、当該抗酸化組成物の美白効果は優れており、メラニン生成抑制効果、チロシナーゼ活性阻害効果、メラニン関連遺伝子（例えばＴｙｒ、Ｍｉｔｆ、Ｐｍｅｌ１７等）発現抑制効果等を奏する。なお、Ｔｙｒ（チロシナーゼ）はチロシンからのメラニン生成の律速酵素である。Ｍｉｔｆ（Ｍｉｃｒｏｐｈｔｈａｌｍｉａ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ）は 色素細胞特異的転写因子でチロシナーゼの転写因子であり、悪性黒色腫の原因遺伝子でもある。Ｐｍｅｌ１７（プレメラノソーム１７）はメラニン色素を合成・貯蔵するメラノソームの構造タンパク質で、メラニン色素はＰｍｅｌ１７に沈着する。
More specifically, the antioxidant composition includes an antioxidant effect, a cancer prevention effect, an antitumor effect, an antitumor metastasis effect, an anti-inflammatory effect, an antibacterial effect, an antiviral effect, a cyclooxygenase-2 inhibitory effect, a nourishing tonic. Effect, antimutagenic effect, blood pressure adjustment effect, hyperlipidemia prevention effect, arteriosclerosis prevention effect, obesity prevention effect, liver function protection effect, dementia prevention effect, cerebrovascular disorder prevention effect, brain function improvement / enhancement effect, Allergy alleviation effect, autoimmune disease prevention effect, anti-psoriatic effect, periodontal disease prevention effect, skin beautifying effect, whitening effect, moisturizing effect, wrinkle prevention / improvement effect, collagen degradation inhibitory effect, elastin degradation inhibitory effect, hyaluronic acid degradation inhibitory effect In addition, it can be expected to have dry dry wrinkle preventive effect, photoaging preventive effect, atopic dermatitis preventive effect, skin cancer preventive effect and the like.
Especially, the whitening effect of the said antioxidant composition is excellent, and there exist melanin production inhibitory effect, tyrosinase activity inhibitory effect, melanin related gene (for example, Tyr, Mitf, Pmel17 etc.) expression inhibitory effect, etc. Tyr (tyrosinase) is a rate-limiting enzyme for producing melanin from tyrosine. Mitf (Microphthalmia-associated transcription factor) is a pigment cell-specific transcription factor, a transcription factor of tyrosinase, and a causative gene of malignant melanoma. Pmel17 (premelanosomes 17) is a structural protein of melanosomes that synthesizes and stores melanin pigments, and melanin pigments are deposited on Pmel17.
抗酸化組成物における上記抽出物の含有量は、特に制限されず、適宜設定することができる。例えば、１００〜０．００１重量％、又は９９〜０．１重量％等が例示できる。 The content of the extract in the antioxidant composition is not particularly limited and can be set as appropriate. For example, 100-0.001 weight% or 99-0.1 weight% etc. can be illustrated.
また、抗酸化組成物の適用対象も特に制限はされず、ヒトのみならずヒト以外の非ヒト哺乳動物であってもよい。例えば、ペット又は家畜、より具体的には、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、ニワトリ、ヒツジ等を挙げることができる。また、本発明に係る組成物の生体への適用方法は、経口又は経皮で適用する（つまり、経口組成物又は経皮組成物である）ことが好ましい。また適用量については、適宜設定することができ、例えばサツマイモ１個〜数個をコルク化し、これらから得た抽出物を含む組成物を、一日あたり１回成人に適用することができる。 The application target of the antioxidant composition is not particularly limited, and may be not only human but also non-human mammals other than human. For example, pets or livestock, more specifically dogs, cats, cows, pigs, chickens, sheep and the like can be mentioned. Moreover, it is preferable that the application method to the living body of the composition according to the present invention is applied orally or transdermally (that is, oral composition or transdermal composition). Moreover, about an application amount, it can set suitably, For example, the sweet potato 1-several can be cork-ized, and the composition containing the extract obtained from these can be applied to an adult once a day.
以上のサツマイモを用いる場合の説明は、全て、ゴボウを用いる場合にも当てはまり得る。 The above description of using sweet potatoes can all be applied to the use of burdock.
なお、本明細書において「含む」とは、「本質的にからなる」と、「からなる」をも包含する（The term "comprising" includes "consisting essentially of” and "consisting of."）。 In this specification, “including” includes “consisting essentially of” and “consisting of” (The term “comprising” includes “consisting essentially of” and “consisting of.”).
以下、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の例に限定されるものではない。 Hereinafter, the present invention will be specifically described, but the present invention is not limited to the following examples.
サツマイモ皮の傷害部位（コルク化部位）における抗酸化物質の解析
市販のサツマイモ青果の外皮おいて見られた健常部位及び傷害部位から、それぞれ脂質成分を抽出して分析した。サツマイモ皮から健常部２．２ｇと傷害部２．５ｇをピーラーで採取し、素早く裁断後、９５％エタノール１５ｍＬに浸漬し、一晩震盪抽出した。
Analysis of Antioxidants at Injured Sites (Corked Sites) of Sweet Potato Skin Lipid components were extracted and analyzed from healthy sites and damaged sites found in the outer skin of commercially available sweet potato fruits and vegetables. A healthy part (2.2 g) and an injured part (2.5 g) were collected from a sweet potato peel with a peeler, cut quickly, immersed in 15 mL of 95% ethanol, and extracted by shaking overnight.
抽出液をろ過（アドバンテックＮｏ．１ろ紙）後、ロータリーエバポレーターで濃縮乾固した。以下、このようにして得られる濃縮乾固物をエキスと表記することがある。エキス量は健常部で０．１６ｇ（７．３％）、傷害部で０．１５ｇ（５．９％）であった。得られたエキスをケイ酸薄層クロマトグラフィー（以下、ＴＬＣ）にて分析した。展開溶媒はクロロホルム／メタノール／水（９０：１０：１， ｖ／ｖ／ｖ）を用いた。０．５ｍＭのＤＰＰＨ溶液をプレートに噴霧したところ、脂溶性成分が展開されるＲｆ値０．５付近に強いラジカル消去活性を有する成分が検出された（図１ａのＡ）。また、この成分は健常部よりも傷害部で多かった。なお、当該ＴＬＣプレートを１０％硫酸に浸漬して加熱した結果を図１ａのＢに示す。また、「ＤＰＰＨ」は２，２−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−１−ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌを示す。 The extract was filtered (Advantech No. 1 filter paper) and then concentrated to dryness with a rotary evaporator. Hereinafter, the concentrated dried product obtained in this way may be referred to as an extract. The amount of extract was 0.16 g (7.3%) in the healthy part and 0.15 g (5.9%) in the injured part. The obtained extract was analyzed by silicic acid thin layer chromatography (hereinafter, TLC). The developing solvent used was chloroform / methanol / water (90: 10: 1, v / v / v). When a 0.5 mM DPPH solution was sprayed on the plate, a component having a strong radical scavenging activity was detected in the vicinity of an Rf value of 0.5 where the fat-soluble component was developed (A in FIG. 1a). In addition, this component was more in the injured part than in the healthy part. The result of heating the TLC plate immersed in 10% sulfuric acid is shown in FIG. “DPPH” represents 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl.
上記抽出液濃縮乾固物にクロロホルム／メタノール（２：１）９ｍＬを添加し溶解した後に、水２．２５ｍＬを添加して撹拌した。遠心分離（３０００ｒｐｍ、５分間、室温）した後、下層を採取してロータリーエバポレーターで濃縮乾固し、それを全脂質とした。全脂質の収量は健常皮部で１３．３ｍｇ（エキスあたり８．３％）、傷害皮部で１５．６ｍｇ（エキスあたり１０．４％）であった。 9 mL of chloroform / methanol (2: 1) was added and dissolved in the extract concentrated and dried, and then 2.25 mL of water was added and stirred. After centrifugation (3000 rpm, 5 minutes, room temperature), the lower layer was collected and concentrated to dryness on a rotary evaporator to obtain total lipid. The yield of total lipid was 13.3 mg (8.3% per extract) in healthy skin and 15.6 mg (10.4% per extract) in damaged skin.
全脂質をＤＰＰＨを用いたラジカル消去活性試験に供した。すなわち、０．１ｍＭのＤＰＰＨエタノール溶液を調製し、そこから４０μｌを９６穴マイクロプレートに添加し、コントロールのエタノール１６０μｌ添加し、全脂質０．２ｍｇ／ｍｌエタノール溶液を５０μｌ、８０μｌ、１００μｌ、又は１６０μｌそれぞれ添加し、さらにエタノールを最終液量２００μｌになるように添加した。添加後混合し、暗所で３０分間静置し、５１７ｎｍに波長をマイクロプレートリーダー（ＴＥＣＡＮ ＳＰＡＲＫ １０Ｍ）で測定した。ラジカル消去活性は試料無添加のコントロールの吸光値に対する退色率（％）として求めた。傷害皮では健常皮よりも各濃度において高いラジカル消去活性を示した（図１ｂ）。 All lipids were subjected to a radical scavenging activity test using DPPH. That is, a 0.1 mM DPPH ethanol solution is prepared, from which 40 μl is added to a 96-well microplate, 160 μl of control ethanol is added, and a total lipid 0.2 mg / ml ethanol solution is 50 μl, 80 μl, 100 μl, or 160 μl. Each was added, and ethanol was added to a final volume of 200 μl. After the addition, the mixture was mixed, allowed to stand in the dark for 30 minutes, and the wavelength was measured at 517 nm with a microplate reader (TECAN SPARK 10M). The radical scavenging activity was determined as the color fading rate (%) relative to the absorbance value of the control with no sample added. Injured skin showed higher radical scavenging activity at each concentration than healthy skin (FIG. 1b).
キュアリングによるサツマイモ皮における抗酸化物質産出の解析
市販のキュアリング処理していないサツマイモ青果（鳴門金時）を試料とした。サツマイモの脂溶性画分の抗酸化性に及ぼすキュアリングの影響を見るため、一部をキュアリング処理した。すなわち、水を張ったメッシュ付きバットの上に水に直接触れないようにサツマイモを載せてラップをし、３５℃に設定した恒温機に入れ、５日間静置した。その後、未処理芋とともにピーラーで同じ厚さで皮を剥き、未処理芋で５．２ｇ、キュアリング品で３．４ｇの皮を得た。それを３倍容の９９％エタノールで上記と同様に抽出し、さらに抽出液をろ過（アドバンテックＮｏ．１ろ紙）後、ロータリーエバポレーターで濃縮乾固した。未処理芋で０．０３ｇ（収率０．５７％）、キュアリング品で０．０３ｇ（収率０．８８％）のエキスを得た。これを９ｍＬのクロロホルム／メタノール（２：１）で溶解した後に、水２．２５ｍＬを添加して撹拌した。遠心分離（３０００ｒｐｍ， ５分間，室温）した後、下層を採取してロータリーエバポレーターで濃縮乾固し、それを全脂質とした。全脂質の収量は未処理芋で１４．０ｍｇ（エキスあたり４６．７％）、キュアリング処理品で１３．５ｍｇ（エキスあたり４５．０％）であった。
Analysis of production of antioxidants in sweet potato skin by curing Sweet potato fruits and vegetables (at Naruto Kin) that were not treated with a curing product were used as samples. In order to see the effect of curing on the antioxidant properties of the fat-soluble fraction of sweet potato, some were cured. That is, sweet potatoes were placed on a bat with a mesh filled with water so as not to touch the water directly, wrapped, placed in a thermostatic oven set at 35 ° C., and allowed to stand for 5 days. Then, the peel was peeled off with the peeler together with the untreated wrinkles to obtain 5.2 g of the untreated wrinkles and 3.4 g of the cured product. It was extracted with 3 volumes of 99% ethanol in the same manner as described above, and the extract was filtered (Advantech No. 1 filter paper) and then concentrated to dryness with a rotary evaporator. 0.03 g (yield 0.57%) of extract was obtained with untreated koji, and 0.03 g (yield 0.88%) of extract was obtained with a cured product. This was dissolved in 9 mL of chloroform / methanol (2: 1), and 2.25 mL of water was added and stirred. After centrifugation (3000 rpm, 5 minutes, room temperature), the lower layer was collected and concentrated to dryness on a rotary evaporator to obtain total lipid. The total lipid yield was 14.0 mg (46.7% per extract) for the untreated koji, and 13.5 mg (45.0% per extract) for the cured product.
得られた全脂質をＴＬＣにて分析した（図２ａ）。展開溶媒はクロロホルム／メタノール／水（６５：１６：２， ｖ／ｖ／ｖ）を用いた。レーン１は上記非特許文献２（Ｈ． Ｋｏｎｄｏ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． Ａｐｐｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ．， Ｖｏｌｕｍｅ ６１， Ｎｕｍｂｅｒ ４， Ｐａｇｅｓ ４０１-４０７， ２０１４）に基づいて酵素反応により化学的に製造したカフェ酸パルミチル（以下、「ＣＡ１６」と表記することがある）１０μｇである。０．５ｍＭのＤＰＰＨ溶液をプレートに噴霧したところ、キュアリング処理した芋ではＣＡ１６と同じＲｆ値に強いラジカル消去活性を有する成分が検出された（以下、当該成分を「ＣＡ−Ａｌｋ」と表記することがある）。実施例１と同様にラジカル消去活性を評価すると（図２ｂ）、キュアリングサツマイモでは未処理のものよりも各濃度において高いラジカル消去活性を示した。 The total lipid obtained was analyzed by TLC (FIG. 2a). As a developing solvent, chloroform / methanol / water (65: 16: 2, v / v / v) was used. Lane 1 is palmitic acid caffeate chemically produced by an enzymatic reaction based on Non-Patent Document 2 (H. Kondo et al., Biotechnol. Appl Biochem., Volume 61, Number 4, Pages 401-407, 2014). Hereinafter, it may be expressed as “CA16”). When the plate was sprayed with 0.5 mM DPPH solution, a component having strong radical scavenging activity at the same Rf value as CA16 was detected in the cured soot (hereinafter, this component is referred to as “CA-Alk”). Sometimes). When the radical scavenging activity was evaluated in the same manner as in Example 1 (FIG. 2b), the curing sweet potato showed higher radical scavenging activity at each concentration than the untreated one.
キュアリング（専用工場手法）サツマイモの皮部と果肉部の比較
市販のキュアリング処理済みのサツマイモ（紅あずま）を試料とした。当該試料のキュアリングとは、産地の専用工場にて湿度９５％、３３℃で数日間貯蔵処理を行ったものである。皮部をピーラーで１〜２ｍｍ程度の厚さで剥き、７．８ｇの皮部を得た。果肉部については、ピーラーで５ｍｍ程度の厚さで皮をよく剥き、その後、皮のついていない果肉部として５０．１ｇを得た。果肉部は素早く細断し、そのうち８．２ｇにすぐに抽出溶媒を添加した。それぞれ３倍容の９５％エタノールで抽出し、上記と同様の操作を行い、皮部で０．１ｇ（１．３％）、果肉部で０．２ｇ（２．４％）のエキスを調製した。さらに、クロロホルム／メタノール（２：１）を用いて上記と同様に全脂質を調製した。全脂質の収量は、皮部では２１．９ｍｇ（エキスあたり２１．９％）、果肉部では２１．２ｍｇ（エキスあたり１０．６％）であった。
Curing (dedicated factory method) Comparison of sweet potato skin and pulp parts Commercially sweetened sweet potato (red bean) was used as a sample. The curing of the sample is a sample that has been stored for several days at a humidity of 95% and 33 ° C. in a dedicated factory in the production area. The skin part was peeled off with a peeler to a thickness of about 1 to 2 mm to obtain 7.8 g of skin part. As for the pulp part, the peel was peeled off with a peeler to a thickness of about 5 mm, and then 50.1 g was obtained as an unskinned pulp part. The pulp part was shredded quickly, and the extraction solvent was immediately added to 8.2 g. Each was extracted with 3 volumes of 95% ethanol, and the same operation as above was performed to prepare an extract of 0.1 g (1.3%) at the skin part and 0.2 g (2.4%) at the pulp part. . Further, total lipid was prepared in the same manner as described above using chloroform / methanol (2: 1). The total lipid yield was 21.9 mg (21.9% per extract) in the skin and 21.2 mg (10.6% per extract) in the flesh.
得られた全脂質をＴＬＣにて分析した（図３ａ）。展開溶媒はクロロホルム／メタノール／水（６５：１６：２， ｖ／ｖ／ｖ）を用いた。０．５ｍＭのＤＰＰＨ溶液をプレートに噴霧したところ、市販のキュアリングサツマイモでは、ＣＡ１６と同じＲｆ値およびその近傍に強いラジカル消去活性が認められ、キュアリングすることで青果（キュアリング無し）よりも抗酸化性が上がっていると考えられた。一方、果肉部では非常に弱い活性しか見られなかった。上記と同様にラジカル消去活性を評価すると（図３ｂ）、果肉部の活性は非常に弱く、キュアリングサツマイモ皮部では果肉部よりも各濃度において高いラジカル消去活性を示した。このことから、切断や傷害のないサツマイモであってもキュアリング処理することにより抗酸化性物質を皮部において産出すると考えられた。 The total lipid obtained was analyzed by TLC (FIG. 3a). As a developing solvent, chloroform / methanol / water (65: 16: 2, v / v / v) was used. When the plate was sprayed with 0.5 mM DPPH solution, the commercially available curing sweet potato showed the same Rf value as CA16 and a strong radical scavenging activity in the vicinity thereof. It was thought that the antioxidative property was increasing. On the other hand, only very weak activity was seen in the pulp part. When the radical scavenging activity was evaluated in the same manner as above (FIG. 3b), the activity of the pulp part was very weak, and the cured sweet potato skin showed higher radical scavenging activity at each concentration than the pulp part. From this, it was considered that even if sweet potatoes without cutting or injury were cured, an antioxidant substance was produced in the skin.
サツマイモ果肉部のキュアリングによる抗酸化物質産出の検討
市販キュアリングサツマイモから、果肉部がつかないようにピーラーで薄皮を採取した（サンプル１）。また、上記「キュアリング（専用工場手法）サツマイモの皮部と果肉部の比較」での操作と同様に、果肉部が５ｍｍ程度つくようにピーラーで厚皮を採取した（サンプル２）。サンプル１と２を採取後２日間室温で放置すると、表面がコルク化したので、さらにサンプルを採取した。サンプル１を採取後の果肉部を数ミリ厚になるようにピーラーで採取した（サンプル３）。サンプル２を採取後の果肉部を数ミリ厚になるようにピーラーで採取した（サンプル４）。サンプル１（２．７ｇ）、サンプル２（４．３ｇ）、サンプル３（７．５ｇ）およびサンプル４（６．２ｇ）を３倍容の９９％エタノールで抽出し、上記と同様の操作を行い、サンプル１で０．０４ｇ（１．５％）、サンプル２で０．０３ｇ（０．７％）、サンプル３で０．２１ｇ（２．８％）、サンプル４で０．１６ｇ（２．６％）のエキスを調製した。
Examination of production of antioxidant substances by curing sweet potato flesh part Peeled thin skin was peeled from a commercially available sweet potato so that the flesh part would not stick (Sample 1). Further, similar to the operation in the above-mentioned “Curing (dedicated factory method) comparison of sweet potato skin and flesh part”, thick skin was sampled with a peeler so that the flesh part is about 5 mm (sample 2). When samples 1 and 2 were allowed to stand at room temperature for 2 days after being collected, the surface was corked and samples were further collected. A sample 1 was collected with a peeler so that the pulp part was several millimeters thick (Sample 3). The sample 2 was collected with a peeler so that the pulp part was several millimeters thick (Sample 4). Sample 1 (2.7 g), sample 2 (4.3 g), sample 3 (7.5 g) and sample 4 (6.2 g) were extracted with 3 volumes of 99% ethanol, and the same operation was performed. 0.04 g (1.5%) for sample 1, 0.03 g (0.7%) for sample 2, 0.21 g (2.8%) for sample 3, 0.16 g (2.6 for sample 4) %) Extract was prepared.
さらに、クロロホルム／メタノール（２：１）を用いて上記と同様に全脂質を調製した。全脂質の収量は、サンプル１で１５ｍｇ（エキスあたり３７．５％）、サンプル２で１４ｍｇ（エキスあたり４６．６％）、サンプル３で３０ｍｇ（エキスあたり１４．２％）、サンプル４で４４ｍｇ（エキスあたり２７．８％）であった。 Further, total lipid was prepared in the same manner as described above using chloroform / methanol (2: 1). The total lipid yield was 15 mg (37.5% per extract) for sample 1, 14 mg (46.6% per extract) for sample 2, 30 mg (14.2% per extract) for sample 3, 44 mg (4% for extract) 27.8% per extract).
得られた全脂質をＴＬＣにて分析した（図４ａ）。サンプル１、２、３、及び４を、それぞれ、レーン１、２、３、及び４において展開した。展開溶媒はクロロホルム／メタノール／水（６５：１６：２， ｖ／ｖ／ｖ）を用いた。０．５ｍＭのＤＰＰＨ溶液をプレートに噴霧したところ、サンプル１ではＣＡ１６の位置に相当するスポットはほとんど見られず（レーン１）、薄皮下の果肉部に多いことが分かった（レーン２）。さらに、上記「キュアリング（専用工場手法）サツマイモの皮部と果肉部の比較」では果肉部での脂溶性抗酸化活性は非常に低かったが、コルク化した果肉部では抗酸化成分が増加することが分かった（レーン３と４）。また、上記と同様にラジカル消去活性を評価すると、未処理の果肉部はほとんど抗酸化性を示さなかったが、コルク化により強い抗酸化活性（ラジカル消去活性）を示すことが分かった（図４ｂ）。なお、図４ｂにおける未処理果肉部の活性データは図３ｂにおける果肉部の活性データと同じであり、また図４ｂにおけるコルク化果肉部のデータはサンプル４を用いて得たデータである。 The total lipid obtained was analyzed by TLC (FIG. 4a). Samples 1, 2, 3, and 4 were developed in lanes 1, 2, 3, and 4, respectively. As a developing solvent, chloroform / methanol / water (65: 16: 2, v / v / v) was used. When a 0.5 mM DPPH solution was sprayed on the plate, it was found that in sample 1, spots corresponding to the CA16 position were hardly seen (lane 1), and there were many spots in the thin subcutaneous pulp (lane 2). Furthermore, in the above-mentioned “Curing (dedicated factory method) comparison of sweet potato skin and pulp part”, the fat-soluble antioxidant activity in the pulp part was very low, but the antioxidant component increased in the corked pulp part. (Lanes 3 and 4). When the radical scavenging activity was evaluated in the same manner as described above, it was found that the untreated pulp part showed almost no antioxidant property, but exhibited strong antioxidant activity (radical scavenging activity) due to corkation (FIG. 4b). ). The activity data of the untreated pulp part in FIG. 4b is the same as the activity data of the pulp part in FIG. 3b, and the data of the corkified pulp part in FIG. 4b is data obtained using the sample 4.
脂溶性抗酸化成分の製剤化のための基剤の検討
サツマイモは果肉の内部までコルク化し抗酸化物質を産出することが分かったので、サツマイモ全体を用いて検討を行った。市販のサツマイモ青果２個（紅あずま、４９０ｇ）をピーラーで皮を剥き、１時間放置した後、果肉部を包丁で３〜５ｍｍ厚程度にスライスした。重ならないように５日間約２５℃で静置した。サツマイモは徐々にコルク化しながら乾燥し、果肉部で１８５ｇ、皮部で１４ｇが得られた。ミルサーで粉砕後、果肉部と皮部にそれぞれ９９％エタノールを７４０ｍＬと５７ｍＬ添加し、抽出を行い、濃縮乾固した。得られた抽出物重量は果肉部と皮部でそれぞれ２．５ｇ（１．３５％）と０．２６ｇ（１．８０％）であった。果肉部抽出物はさらに９９％エタノール１２５ｍＬに溶解して自然ろ過（アドバンテックＮｏ．１）し、濃縮乾固後、１．６７ｇのエキスが得られ、それをエタノール３３ｍｌに溶解した（定量用サンプル）。そこから一部を１００ｍＬナスフラスコ２個にそれぞれ分取し、濃縮乾固した。得られたエキスの重量は０．３２ｇと０．３５ｇであった。皮部抽出物０．２６ｇは９９％エタノール１３ｍＬを添加して同様にろ過・濃縮乾固した。得られたエキスの重量は０．２２ｇであった。
Examination of base for formulation of fat-soluble antioxidant component It was found that sweet potato corks to the inside of the pulp to produce an antioxidant, so the whole sweet potato was examined. Two commercially available sweet potato fruits and vegetables (red apricot 490 g) were peeled with a peeler and allowed to stand for 1 hour, and then the pulp was sliced to a thickness of about 3 to 5 mm with a knife. It was allowed to stand at about 25 ° C for 5 days so as not to overlap. The sweet potato was dried while being gradually corked to obtain 185 g in the pulp part and 14 g in the skin part. After pulverization with a miller, 740 mL and 57 mL of 99% ethanol were added to the pulp part and skin part, respectively, followed by extraction and concentration to dryness. The weight of the obtained extract was 2.5 g (1.35%) and 0.26 g (1.80%) in the pulp part and the skin part, respectively. The pulp extract was further dissolved in 125 mL of 99% ethanol and naturally filtered (Advantech No. 1). After concentration to dryness, 1.67 g of extract was obtained, which was dissolved in 33 mL of ethanol (quantitative sample) . A portion thereof was separated into two 100 mL eggplant flasks and concentrated to dryness. The weight of the obtained extract was 0.32 g and 0.35 g. 0.26 g of the skin extract was added with 13 mL of 99% ethanol and similarly filtered and concentrated to dryness. The weight of the obtained extract was 0.22 g.
エキス中に含まれる脂溶性抗酸化成分の製剤化を検討するために、オリーブ油と１，３−ブチレングリコール（１，３−ＢＧ）への溶解性試験を行った。果肉エキス０．３２ｇにオリーブオイル２．１６ｇを、皮エキス０．２２ｇにオリーブオイル１．４６ｇを添加した。また、果肉エキス０．３５ｇには１，３−ＢＧを２．３４ｇ添加した。すべて６０℃に保温しながら撹拌した。果肉エキスはでんぷん質を含み溶液中での分散性が悪いため、エタノール２ｍＬを添加して全体を溶解した。その後、ロータリーエバポレーターでエタノールを完全に留去した。各サンプルを試験管に移し、室温に戻してから遠心分離（５０００ｒｐｍ、１５分間、２５℃）し、液層を丁寧に回収した。沈殿物はＴＬＣ分析のためにエタノール０．５ｍＬを添加してよく撹拌し、液部を回収した。
各サンプルをＴＬＣ分析（展開溶媒はクロロホルム／メタノール／水（９０：１０：１， ｖ／ｖ／ｖ））に供し上記と同様にして脂溶性抗酸化成分を検出した。０．５ｍＭ ＤＰＰＨ溶液噴霧結果を図５に示す。図５における各レーンで展開したサンプルは、次の通りである。
１． コルク化皮エキス−オリーブオイル抽出
２． コルク化果肉エキス−オリーブオイル抽出
３． コルク化果肉エキス−ＢＧ抽出（ＢＧ濃縮除去エタノール溶液）
４． １の遠心沈殿物エタノール溶液
５． ２の遠心沈殿物エタノール溶液
６． ３の遠心沈殿物エタノール溶液
In order to examine the formulation of the fat-soluble antioxidant component contained in the extract, a solubility test in olive oil and 1,3-butylene glycol (1,3-BG) was performed. 2.16 g of olive oil was added to 0.32 g of the pulp extract, and 1.46 g of olive oil was added to 0.22 g of the skin extract. Further, 2.34 g of 1,3-BG was added to 0.35 g of the pulp extract. All were stirred while keeping the temperature at 60 ° C. Since the pulp extract contains starch and has poor dispersibility in the solution, 2 mL of ethanol was added to dissolve the whole. Thereafter, ethanol was completely distilled off using a rotary evaporator. Each sample was transferred to a test tube, returned to room temperature, centrifuged (5000 rpm, 15 minutes, 25 ° C.), and the liquid layer was carefully collected. For the TLC analysis, 0.5 mL of ethanol was added to the precipitate and stirred well, and the liquid part was recovered.
Each sample was subjected to TLC analysis (developing solvent: chloroform / methanol / water (90: 10: 1, v / v / v)) to detect a fat-soluble antioxidant component in the same manner as described above. The result of spraying 0.5 mM DPPH solution is shown in FIG. Samples developed in each lane in FIG. 5 are as follows.
1. Cork peel extract-olive oil extraction2. 2. Cork pulp extract-olive oil extraction Cork pulp extract-BG extraction (BG solution with concentrated BG removal)
4). 1. Centrifugal precipitate ethanol solution of 1. 2. Centrifugal precipitate ethanol solution of 2. 3 Centrifugal precipitate ethanol solution
コルク化果肉エキスに含まれていたＣＡ−Ａｌｋは、オリーブオイルの沈殿部（レーン５）には検出されず、すべてオイル中に回収されていた（レーン２）。しかし、ＴＬＣ上のＲｆ値０〜０．１５付近の高極性抗酸化成分の一部は沈殿部で検出された。一方、１，３−ＢＧ抽出では液部にもＣＡ−Ａｌｋが検出されたが（レーン３）、沈殿部にも多くのＣＡ−Ａｌｋが検出され、さらに低極性成分も含まれていた（レーン６）。 The CA-Alk contained in the cork pulp extract was not detected in the olive oil sediment (lane 5) and was all recovered in the oil (lane 2). However, a part of the highly polar antioxidant component having an Rf value around 0 to 0.15 on TLC was detected in the precipitate. On the other hand, in the 1,3-BG extraction, CA-Alk was detected in the liquid part (lane 3), but a lot of CA-Alk was also detected in the precipitation part, and low-polar components were also contained (lane). 6).
サツマイモをコルク化処理したエキス（上記、定量用サンプル）中のＣＡ−ＡｌｋをＴＬＣデンシトメトリー法により定量すると２．７％であった。 The amount of CA-Alk in the extract obtained by corkizing sweet potato (the above sample for quantification) was 2.7% when quantified by the TLC densitometry method.
他の植物との比較
メロンの表面のコルク化組織を採取した。ジャガイモは１ｃｍ角に細切りし、５日間自然乾燥させコルク化させた。他にジャガイモ表面に包丁で傷をつけ、日光にあたるように５日間自然乾燥させた。その後、傷をつけたジャガイモは皮部、皮直下の果肉部、果肉部に分けた。ゴボウはピーラーで皮を剥き皮部と果肉部に分け、粗く切った後すぐに加熱真空乾燥してコントロールとした。そのまま３ｃｍほどの長さに切断したもの、およびピーラーで皮と果肉部（３ｃｍほど）に分けたものをそれぞれ４日間室温に放置しコルク化させた。これらの試料をすべて真空乾燥処理した後、粉砕して９９％エタノールで抽出した。上記と同様に全脂質を調製しＴＬＣで分析した（図６）。メロンや、コルク化したジャガイモと傷ジャガイモ皮直下には図６のＢで示されるように抗酸化成分がわずかに検出されるのみで、サツマイモで見られるＣＡ−Ａｌｋに相当するスポットは検出されなかった。ゴボウの果肉部ではＣＡ−Ａｌｋよりも低極性であるが、未処理の果肉部にはない抗酸化成分がコルク化ゴボウに複数含まれていた（図６のＣ）。
Comparison with other plants Cork tissues on the surface of melon were collected. Potatoes were cut into 1 cm squares and air-dried for 5 days to cork. In addition, the surface of the potato was scratched with a knife and allowed to dry naturally for 5 days so as to be exposed to sunlight. Thereafter, the damaged potato was divided into a skin part, a pulp part directly under the skin, and a pulp part. The burdock was peeled off with a peeler and divided into a skin part and a flesh part, and after cutting it roughly, it was heated and vacuum dried to control. A piece cut into a length of about 3 cm and a piece separated into a peel and a flesh (about 3 cm) with a peeler were left at room temperature for 4 days to cork. All of these samples were vacuum-dried, pulverized and extracted with 99% ethanol. Total lipids were prepared as described above and analyzed by TLC (FIG. 6). As shown in FIG. 6B, only a small amount of antioxidant components are detected just below the melon, cork potato and wounded potato skin, and no spots corresponding to CA-Alk found in sweet potato are detected. It was. The burdock pulp part has a lower polarity than CA-Alk, but the cork burdock contains a plurality of antioxidant components not present in the untreated pulp part (C in FIG. 6).
脂溶性抗酸化成分の構造解析
展開溶媒としてヘキサン／ジエチルエーテル／酢酸（７０：３０：１、ｖ／ｖ／ｖ）を用いてＴＬＣで脂溶性抗酸化成分（コルク化処理したサツマイモ果肉部から抽出したもの）を分離し（図７のＡ；右側がＤＰＰＨ溶液噴霧処理、左側が１０％硫酸浸漬加熱処理）、さらにＬＣ−ＭＳおよびＧＣ−ＭＳで分析した。分析条件は次の通りである。
装置：島津 Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ−ｉ ＬＣ−２０３０Ｃ、検出器：島津ＬＣＭＳ−２０２０ ＥＳＩ、スキャンモード ｍ／ｚ １５０−６００、ネガティブイオンモード、インターフェイス温度：３５０℃、ネブライザー流量１．５Ｌ／ｍｉｎ、ヒートブロック温度：２００℃、Ａ液：５ｍＭギ酸アンモニウム／メタノール、Ｂ液：５ｍＭギ酸アンモニウム、アイソクラティック条件 （Ａ／Ｂ＝９８：２）、フローインジェクション、流速：０．２ｍｌ／ｍｉｎ。
Structure analysis of fat-soluble antioxidant component Extracted from fat-soluble antioxidant component (cork-treated sweet potato pulp) by TLC using hexane / diethyl ether / acetic acid (70: 30: 1, v / v / v) as a developing solvent (A in FIG. 7; DPPH solution spray treatment on the right side, 10% sulfuric acid immersion heat treatment on the left side), and further analyzed by LC-MS and GC-MS. The analysis conditions are as follows.
Apparatus: Shimadzu Prominence-i LC-2030C, detector: Shimadzu LCMS-2020 ESI, scan mode m / z 150-600, negative ion mode, interface temperature: 350 ° C., nebulizer flow rate 1.5 L / min, heat block temperature: 200 ° C., A solution: 5 mM ammonium formate / methanol, B solution: 5 mM ammonium formate, isocratic conditions (A / B = 98: 2), flow injection, flow rate: 0.2 ml / min.
ＬＣ−ＭＳ解析により、ＣＡ−Ａｌｋに相当するスポットＸからは主に２つのピークが検出され、Ｍ−１のイオンとして４０３と４３１であった（図７のＢ）。 According to LC-MS analysis, two peaks were mainly detected from the spot X corresponding to CA-Alk, and were 403 and 431 as ions of M-1 (B in FIG. 7).
ＴＬＣにおけるスポットＸをトリメチルシリルエーテル誘導体化してＧＣ−ＭＳ（装置：島津ＱＰ２０１０、カラム：ＵＬＢＯＮ ＨＲ−１）にて分析した。ＬＣ−ＭＳの結果と同様に主に２つのピークが検出され、そのうち分子量５４８のマススペクトルの結果を図７のＣに示す。マススペクトルの解析の結果から、カフェ酸パルミチルエステルのトリメチルシリル誘導体であることが分かった。これらの結果から、スポットＸには、分子量４０４のカフェ酸パルミチルと分子量４３２のカフェ酸ステアリルが多く含まれることが分かった。 The spot X in TLC was derivatized with trimethylsilyl ether and analyzed by GC-MS (apparatus: Shimadzu QP2010, column: ULBON HR-1). Similar to the LC-MS result, two main peaks are detected, and the result of the mass spectrum having a molecular weight of 548 is shown in FIG. From the results of mass spectrum analysis, it was found to be a trimethylsilyl derivative of caffeic acid palmityl ester. From these results, it was found that spot X contained a large amount of palmitic acid caffeate having a molecular weight of 404 and stearyl caffeate having a molecular weight of 432.
同様に解析した結果、スポットＹからはフェルラ酸アルキルが、スポットＺからはクマル酸アルキルが検出された（図７のＤ）。 As a result of the same analysis, an alkyl ferulate was detected from the spot Y, and an alkyl coumarate was detected from the spot Z (D in FIG. 7).
以上のことから、スポットＸの主成分はカフェ酸誘導体であり、スポットＹの主成分はフェルラ酸誘導体であり、スポットＺの主成分はクマル酸誘導体であると考えられた。 From the above, it was considered that the main component of spot X is a caffeic acid derivative, the main component of spot Y is a ferulic acid derivative, and the main component of spot Z is a coumaric acid derivative.
コルク化サツマイモ抽出物とオリーブオイルとの組み合わせによる効果の検討
キュアリング処理（３３℃、湿度９５％、１００時間）したサツマイモを水で洗浄後、約１ｃｍ角のダイス状にカットし４０℃で送風乾燥した。乾燥イモを粉砕機で粉砕後、５倍容の９５％エタノールで抽出した。吸引ろ過により固液分離した液部を濃縮し、エキスを得た。エキスはクロロホルム／メタノール／水（８：４：３）の比率で２層分配し、下層を濃縮乾固後、全脂質とした。本全脂質をＴＬＣ−デンシトメトリー法で定量したところ、ＣＡ−Ａｌｋは４％含まれていた。全脂質を５ｍｇ／ｍｌエタノール溶液として調製し、ここから脂質として１５０μｇをとり、コルク化サツマイモ抽出物被験サンプルとした。
また、市販オリーブオイルをケイ酸カラムクロマトグラフィーで分画して得たオリーブオイル精製画分を秤量し、５ｍｇ／ｍｌになるようにエタノールに溶解し、そこから２５μｇをとり、これをオリーブオイル被験サンプルとした。
なお、市販オリーブオイルの分画は、次のようにして行った。ケイ酸カラムクロマトグラフィーにオリーブオイル２ｇを供し、クロロホルムで油脂を溶出した後、さらにクロロ
ホルム／メタノール（２：１）とメタノールで溶出して、当該溶出画分をオリーブオイル精製画分とした。
Examination of the effect of a combination of cork sweet potato extract and olive oil Cured sweet potatoes (33 ° C, humidity 95%, 100 hours) are washed with water, then cut into approximately 1 cm square dice and blown at 40 ° C. Dried. The dried potatoes were pulverized with a pulverizer and extracted with 5 volumes of 95% ethanol. The liquid part obtained by solid-liquid separation by suction filtration was concentrated to obtain an extract. The extract was divided into two layers at a ratio of chloroform / methanol / water (8: 4: 3), and the lower layer was concentrated to dryness to obtain total lipids. When this total lipid was quantified by TLC-densitometry, 4% of CA-Alk was contained. Total lipid was prepared as a 5 mg / ml ethanol solution, from which 150 μg of lipid was taken and used as a corkated sweet potato extract test sample.
In addition, the olive oil purified fraction obtained by fractionating commercially available olive oil by silicic acid column chromatography was weighed and dissolved in ethanol to 5 mg / ml. A sample was used.
The fractionation of commercially available olive oil was performed as follows. After 2 g of olive oil was applied to silicic acid column chromatography and oil and fat were eluted with chloroform, it was further eluted with chloroform / methanol (2: 1) and methanol, and the eluted fraction was used as an olive oil purified fraction.
コルク化サツマイモ抽出物被験サンプル単独（図８では「ＣＡ−Ａｌｋ」）、オリーブオイル被験サンプル単独（図８では「Ｏｌｖ」）、又はコルク化サツマイモ抽出物被験サンプル及びオリーブオイル被験サンプルの組み合わせ（図８では「Ｏｌｖ＋ＣＡ−Ａｌｋ」）、を上記と同様にしてＤＰＰＨを用いたラジカル消去活性試験に供し、それぞれのラジカル消去活性を測定した。結果を図８に示す。ラジカル消去活性は、コルク化サツマイモ抽出物被験サンプル単独では１３．５％、オリーブオイル被験サンプル単独では４．７％であった。図８の左側グラフは、これらのラジカル消去活性を単純に足し合わせた結果を示す。一方、コルク化サツマイモ抽出物被験サンプル及びオリーブオイル被験サンプルの組み合わせでは２８．２％であった。図８の右グラフは、この組み合わせのラジカル消去活性を示す。このことから、コルク化サツマイモ抽出物とオリーブオイルとを組み合わせることにより、それぞれ単独で用いる場合に比べて、抗酸化効果が著しく向上することがわかった。 Corkated sweet potato extract test sample alone (“CA-Alk” in FIG. 8), olive oil test sample alone (“Olv” in FIG. 8), or a combination of corkated sweet potato extract test sample and olive oil test sample (FIG. No. 8 “Olv + CA-Alk”) was subjected to a radical scavenging activity test using DPPH in the same manner as described above, and each radical scavenging activity was measured. The results are shown in FIG. The radical scavenging activity was 13.5% for the corked sweet potato extract test sample alone and 4.7% for the olive oil test sample alone. The left graph of FIG. 8 shows the result of simply adding these radical scavenging activities. On the other hand, it was 28.2% in the combination of the corkated sweet potato extract test sample and the olive oil test sample. The right graph of FIG. 8 shows the radical scavenging activity of this combination. From this, it was found that by combining the cork sweet potato extract and olive oil, the antioxidant effect was remarkably improved as compared with the case where each was used alone.
コルク化サツマイモ抽出物のメラニン生成抑制効果の検討
マウスＢ１６メラノーマ細胞（以下「Ｂ１６細胞」）を用いて、コルク化サツマイモ抽出物のチロシナーゼ活性阻害効果、メラニン生成抑制効果、及びメラニン関連遺伝子発現抑制効果、について、次のようにして検討した。なお、以下の各検討で用いた４００μｇ／ｍＬ ＣＡ−Ａｌｋ溶液は、全脂質エタノール溶液から１０ｍｇ（４％のＣＡ−Ａｌｋを含有）を取り、窒素乾固後に１ｍＬのＤＭＳＯに溶解して調製したものである。
Examination of melanin production inhibitory effect of cork sweet potato extract Using mouse B16 melanoma cells (hereinafter “B16 cells”), tyrosinase activity inhibitory effect, melanin production inhibitory effect, and melanin related gene expression inhibitory effect of cork sweet potato extract Was examined as follows. The 400 μg / mL CA-Alk solution used in each of the following studies was prepared by taking 10 mg (containing 4% CA-Alk) from the total lipid ethanol solution, dissolving in nitrogen and then dissolving in 1 mL DMSO. Is.
＜チロシナーゼ活性阻害効果の検討＞
９６ウェルプレートにＢ１６細胞を１．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ播種し、２４時間培養した。
ＤＭＳＯにより４００μｇ／ｍＬ ＣＡ−Ａｌｋ溶液を公比２で連続希釈し、計３濃度調製した（１００、２００、又は４００μｇ／ｍＬ）。１０ｎｇ／ｍＬ αＭＳＨ（α-メラノサイト刺激ホルモン）含有ＤＭＥＭにより上記ＣＡ−Ａｌｋ溶液を２００倍希釈した（０．５、１、又は２μｇ／ｍＬ）。陰性対照にはＤＭＳＯ、比較対照にはメラニン色素生成抑制効果を有する美白成分として知られるβアルブチンを使用した（０．５、１、又は２μｇ／ｍＬ）。
２４時間後、ＰＢＳにより９６ウェルプレートを洗浄し、上記のようにして調製したαＭＳＨおよび被験物質含有ＤＭＥＭを加え７２時間培養した。７２時間後、０．５％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００および１０ｍＭ Ｌ−ＤＯＰＡ溶液を添加し、Ｌ−ＤＯＰＡ添加直後の４７５ｎｍの吸光度（ＯＤ４７５）および３７℃、６０分間反応させた後のＯＤ４７５からチロシナーゼ活性（αＭＳＨ添加無し陰性対照を１００としたときの相対値）を測定した。
結果を図９に示す。図９中、＊はαＭＳＨ添加無し陰性対照と比べて有意（ｐ＜０．０５）であることを、＊＊はαＭＳＨ添加無し陰性対照と比べて有意（ｐ＜０．０１）であることを、それぞれ示す。
<Examination of tyrosinase activity inhibitory effect>
B16 cells were seeded at 1.0 × 10 4 cells / well in a 96-well plate and cultured for 24 hours.
A 400 μg / mL CA-Alk solution was serially diluted with DMSO at a common ratio of 2 to prepare a total of 3 concentrations (100, 200, or 400 μg / mL). The CA-Alk solution was diluted 200-fold with DMEM containing 10 ng / mL αMSH (α-melanocyte stimulating hormone) (0.5, 1, or 2 μg / mL). DMSO was used as a negative control, and β-arbutin known as a whitening component having an inhibitory effect on melanin pigment formation was used as a comparative control (0.5, 1, or 2 μg / mL).
After 24 hours, the 96-well plate was washed with PBS, and αMSH prepared as described above and DMEM containing a test substance were added and cultured for 72 hours. 72 hours later, 0.5% Triton X-100 and 10 mM L-DOPA solution were added, absorbance at 475 nm (OD475) immediately after addition of L-DOPA and tyrosinase activity (αMSH from OD475 after reaction at 37 ° C. for 60 minutes. The relative value when the negative control without addition was set to 100 was measured.
The results are shown in FIG. In FIG. 9, * is significant (p <0.05) compared to the negative control without αMSH addition, and ** is significant (p <0.01) compared to the negative control without αMSH addition. , Respectively.
＜メラニン生成抑制効果の検討＞
６ウェルプレートにＢ１６細胞を１．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ播種し、２４時間培養した。
ＤＭＳＯにより４００μｇ／ｍＬ ＣＡ−Ａｌｋ溶液を公比２で連続希釈し、計３濃度調製した（１００、２００、又は４００μｇ／ｍＬ）。１０ｎｇ／ｍＬ αＭＳＨ含有ＤＭＥＭにより上記リポフェノール溶液を２００倍希釈した（０．５、１、又は２μｇ／ｍＬ）。陰性対照にはＤＭＳＯ、比較品にβアルブチン（２μｇ／ｍＬ）を使用した。
２４時間後、ＰＢＳにより６ウェルプレートを洗浄し、上記のようにして調製したαＭＳＨおよび被験物質含有ＤＭＥＭを加え７２時間培養した。７２時間後、ＰＢＳにより６ウェルプレートを洗浄し、トリプシンにより細胞をはがして細胞数を測定した。具体的には、１０５ｃｅｌｌｓあたり１００μＬの２Ｍ ＮａＯＨを加え、６０℃、３分間加熱してメラニンを可溶化し、このようにして得られた５０μＬの可溶化メラニンを１５０μＬ ＰＢＳに溶解し、マイクロプレートリーダーにより５００ｎｍの吸光度を測定した。また、可溶化メラニンの画像を撮影した。結果を図１０に示す。
<Examination of melanin production inhibitory effect>
B16 cells were seeded on a 6-well plate at 1.0 × 10 5 cells / well and cultured for 24 hours.
A 400 μg / mL CA-Alk solution was serially diluted with DMSO at a common ratio of 2 to prepare a total of 3 concentrations (100, 200, or 400 μg / mL). The lipophenol solution was diluted 200-fold with DMEM containing 10 ng / mL αMSH (0.5, 1, or 2 μg / mL). DMSO was used as a negative control, and β-arbutin (2 μg / mL) was used as a comparative product.
After 24 hours, the 6-well plate was washed with PBS, and αMSH prepared as described above and DMEM containing a test substance were added and cultured for 72 hours. After 72 hours, the 6-well plate was washed with PBS, the cells were detached with trypsin, and the number of cells was measured. Specifically, 100 μL of 2M NaOH was added per 10 5 cells, heated at 60 ° C. for 3 minutes to solubilize melanin, 50 μL of the solubilized melanin thus obtained was dissolved in 150 μL PBS, Absorbance at 500 nm was measured with a plate reader. An image of solubilized melanin was also taken. The results are shown in FIG.
＜メラニン関連遺伝子発現抑制効果の検討＞
３５ｍｍデッシュにＢ１６細胞を１．５×１０５ｃｅｌｌｓ／ｄｉｓｈ播種し、２４時間培養した。
ＤＭＳＯにより４００μｇ／ｍＬ ＣＡ−Ａｌｋ溶液を希釈し、１００μｇ／ｍＬに調製した。１０ｎｇ／ｍＬ αＭＳＨ含有ＤＭＥＭにより上記ＣＡ−Ａｌｋ溶液を２００倍希釈した（０．５μｇ／ｍＬ）。陰性対照にはＤＭＳＯ、比較品にβアルブチンを使用した。
２４時間後、ＰＢＳにより３０ｍｍディッシュを洗浄し、上記のようにして調製したαＭＳＨおよび被験物質含有ＤＭＥＭを加え４８時間培養した。４８時間後、ＰＢＳにより３０ｍｍディッシュを洗浄し、Ｂ１６細胞からＲＮＡ抽出しｃＤＮＡを合成した。合成したｃＤＮＡを用いてＲＴ−ｑＰＣＲを行い、各遺伝子の発現状況を測定した。なお、測定した遺伝子はＴｙｒ、Ｍｉｔｆ、Ｐｍｅｌ１７である。また、ＲＴ−ｑＰＣＲは、キット：ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎTM Ｃｕｓｔｏｍ ＤＮＡ Ｏｌｉｇｏｓ（サーモフィッシャーサイエンティフィック）を用いて行った。当該キットにおける各遺伝子検出用のプライマーの塩基配列は次の通りであった。
Tyr（foward: CCAGAAGCCAATGCACCTAT, reverse: ATAACAGCTCCCACCAGTGC）
Mitf (foward: CTAGAGCGCATGGACTTTCC, reverse: AAGTTGGAGCCCATCTTCCT)
Pmel17 (foward: TTGTTGTTGCTGGTCAAGACG, reverse: GAAACTGAGCCCTGCTTCTTA)
Gapdh (foward: AGGTCGGTGTGAACGGATTTG, reverse:TGTAGACCATGTAGTTGAGGTCA)
（Gapdhはコントロールとして使用した。）
結果を図１１に示す。
<Examination of melanin-related gene expression suppression effect>
B16 cells were seeded at 1.5 × 10 5 cells / dish in a 35 mm dish and cultured for 24 hours.
The 400 μg / mL CA-Alk solution was diluted with DMSO to prepare 100 μg / mL. The CA-Alk solution was diluted 200-fold with DMEM containing 10 ng / mL αMSH (0.5 μg / mL). DMSO was used as a negative control, and β-arbutin was used as a comparative product.
After 24 hours, the 30 mm dish was washed with PBS, and αMSH prepared as described above and DMEM containing a test substance were added and cultured for 48 hours. After 48 hours, the 30 mm dish was washed with PBS, and RNA was extracted from B16 cells to synthesize cDNA. RT-qPCR was performed using the synthesized cDNA, and the expression status of each gene was measured. The measured genes are Tyr, Mitf and Pmel17. RT-qPCR was performed using a kit: Invitrogen ™ Custom DNA Oligos (Thermo Fisher Scientific). The base sequences of the primers for detecting each gene in the kit were as follows.
Tyr (foward: CCAGAAGCCAATGCACCTAT, reverse: ATAACAGCTCCCACCAGTGC)
Mitf (foward: CTAGAGCGCATGGACTTTCC, reverse: AAGTTGGAGCCCATCTTCCT)
Pmel17 (foward: TTGTTGTTGCTGGTCAAGACG, reverse: GAAACTGAGCCCTGCTTCTTA)
Gapdh (foward: AGGTCGGTGTGAACGGATTTG, reverse: TGTAGACCATGTAGTTGAGGTCA)
(Gapdh was used as a control.)
The results are shown in FIG.
Claims (8)
抗酸化物質製造方法。 Including curing sweet potato or burdock,
Antioxidant production method.
抗酸化物質製造方法。 Including corkating part or all of the sweet potato or burdock tissue,
Antioxidant production method.
サツマイモ又はゴボウのコルク化組織抽出物
を含む抗酸化組成物。 An antioxidant composition comprising a sweet potato or burdock curing site extract or a cork tissue extract of sweet potato or burdock.
サツマイモ又はゴボウの皮部又は果肉部のコルク化組織抽出物
を含む請求項４に記載の抗酸化組成物。 The antioxidant composition according to claim 4, comprising a sweetened potato or burdock skin part or pulp part curing site extract, or a sweet potato or burdock skin or fruit part cork tissue extract.
サツマイモ又はゴボウのコルク化組織抽出物
を含む美白組成物。 A whitening composition comprising a sweet potato or burdock curing site extract or a cork tissue extract of sweet potato or burdock.
The antioxidant composition according to any one of claims 4 to 6, or the whitening composition according to claim 7, which is a pharmaceutical composition, a cosmetic composition, or a food composition.
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