JP2018019615A - Single-use culture device and culture method - Google Patents

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Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a single-use culture device and a culture method in which bubbles generated on liquid surface of culture solution is hard to overflow to an exhaust port of a culture vessel.SOLUTION: A single-use culture device 100 comprises: a culture vessel 1 which is capable of sealing a culture solution 7; submerged aeration means 13 which is arranged in a lower part in the culture vessel 1 and performs submerged aeration of oxygen into the culture solution 7 sealed in the culture vessel 1; an exhaust port 110 which is positioned in an upper part of the culture vessel 1 and exhausts gas in the culture vessel 1; and a shielding sheet 4 which is arranged below the exhaust port 110 and partitions between the exhaust port 110 and a liquid surface of the culture solution 7. A culture method is performed by sealing the culture solution 7 and a cell into the culture vessel 1 in the single-use culture device 100, culturing the cell while performing submerged aeration to the culture solution 7, and supplying fresh culture medium or antifoaming agent on the shielding sheet 4 while culturing the cell.SELECTED DRAWING: Figure 1

Description

本発明は、培養容器を単回使用して細胞を培養するシングルユース培養装置及び培養方法に関する。   The present invention relates to a single-use culture apparatus and a culture method for culturing cells by using a culture container once.

近年、生物由来の物質を有効成分とするバイオ医薬品の流通が拡大している。バイオ医薬品は、一般に、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）等に例示される細胞を培養し、物質を産生させることにより生産されている。また、各種の工業分野において、動物細胞、植物細胞、細菌類、菌類等を培養することにより多様な有用物質が生産されている。   In recent years, the distribution of biopharmaceuticals containing biologically-derived substances as active ingredients has been expanded. Biopharmaceuticals are generally produced by culturing cells exemplified by Chinese hamster ovary cells (CHO cells) and the like to produce substances. In various industrial fields, various useful substances are produced by culturing animal cells, plant cells, bacteria, fungi and the like.

従来、細胞の液体培養は、タンクやジャーファーメンタのような剛性が高い培養容器で行うのが一般的であった。培養容器には、培養液を攪拌するための攪拌装置や、酸素を通気するための通気装置が装着され、培養を行う毎に滅菌処理や洗浄処理が施されていた。攪拌装置としては、培養容器に軸封して挿着したシャフトで攪拌翼を回動させる機械式や、培養容器内に投入した攪拌子を磁力で回転させる磁力式が主に用いられていた。   Conventionally, liquid culture of cells is generally performed in a culture vessel having high rigidity such as a tank or a jar fermenter. The culture vessel was equipped with a stirring device for stirring the culture solution and an aeration device for ventilating oxygen, and sterilization treatment and washing treatment were performed every time the culture was performed. As a stirrer, a mechanical type in which a stirring blade is rotated by a shaft that is shaft-sealed and inserted in a culture vessel, or a magnetic type in which a stirrer charged in the culture vessel is rotated by a magnetic force has been mainly used.

一方、近年では、培養容器がシングルユース製品に代替されてきている。シングルユースの培養容器としては、折り畳み可能な可撓性を有する樹脂フィルム製の培養バッグや、樹脂成形されたボトル、ベッセル等が普及している。シングルユースの培養容器は、使用後の滅菌処理や洗浄処理を省略し、また、培養液や製品への異物の混入を防止する観点から、単回ないし単一工程のみ使用されて廃棄されている。   On the other hand, in recent years, culture containers have been replaced with single-use products. As a single-use culture container, a foldable flexible resin film culture bag, a resin-molded bottle, a vessel, and the like are widely used. Single-use culture containers are used and discarded only once or in a single step from the standpoint of eliminating sterilization and washing after use and preventing contamination of the culture medium and product. .

培養バッグ等においては、機械式や磁力式の攪拌装置の他、容器自体を揺動ないし旋回させる振盪式の攪拌装置も広く用いられている。動物細胞や好気性微生物を培養するための培養容器には、酸素を通気するための通気管が接続され、多くの場合、液中通気によって酸素が供給されている。また、培養容器の上部には、容器内の気体を排出できるように排気口が設けられている。   In culture bags and the like, in addition to mechanical and magnetic stirring devices, shaking stirring devices that swing or swivel the container itself are widely used. A culture vessel for culturing animal cells and aerobic microorganisms is connected to a vent tube for ventilating oxygen, and in many cases, oxygen is supplied by aeration in liquid. In addition, an exhaust port is provided in the upper part of the culture container so that the gas in the container can be discharged.

一般に、液中通気しながら細胞を培養すると、培養液の液面上に泡沫の層が形成される。泡沫の層が成長して培養容器の上部に達すると、気泡が排気口等から溢流してしまうため、気体を排出するための排気路が閉塞したり、培養液が気泡に随伴して液量が低下したりする問題が生じている。従来、このような問題に対処するために、液面上の気泡を破泡する技術が提案されている。   In general, when cells are cultured while aerated in the liquid, a foam layer is formed on the liquid surface of the culture liquid. When the foam layer grows and reaches the top of the culture vessel, the air bubbles overflow from the exhaust port, etc., so that the exhaust path for exhausting the gas is blocked, or the culture solution is accompanied by air bubbles. There has been a problem of lowering. Conventionally, in order to cope with such a problem, a technique for breaking bubbles on a liquid surface has been proposed.

例えば、特許文献１には、生物学的リアクターシステムの反応容器において、ヘッドスペースに含まれる泡を、モータにより回転されるインペラで壊す技術が開示されている。反応容器としては、折り畳み式の可撓性バッグを使用できることも記載されている。   For example, Patent Document 1 discloses a technique of breaking bubbles contained in a head space with an impeller rotated by a motor in a reaction vessel of a biological reactor system. It is also described that a foldable flexible bag can be used as the reaction container.

また、特許文献２には、培養槽の培養液面より上に、泡沫破泡層を設ける技術が開示されている。泡沫破泡層は、表面をポリシロキサンで疎水化したステンレス製金網からなり、液面上に形成された泡沫は、破泡層に接触した時点で破裂消滅して液滴となり、培養液中に戻るとされている。   Patent Document 2 discloses a technique for providing a foam-breaking layer above the culture liquid level of a culture tank. The foam-breaking layer consists of a stainless steel wire mesh whose surface is hydrophobized with polysiloxane, and the foam formed on the liquid surface bursts and disappears into droplets when it comes into contact with the foam-breaking layer. It is supposed to return.

また、特許文献３には、培養槽の液面上方に親水性毛管体を配置し、毛管効果によって気泡を破泡する技術が開示されている。親水性毛管体は、木綿により網目状に形成され、培養槽に固定連結した支持部材に支持されている。   Patent Document 3 discloses a technique in which a hydrophilic capillary body is disposed above the liquid level of a culture tank and bubbles are broken by a capillary effect. The hydrophilic capillary body is formed in a mesh shape with cotton and is supported by a support member fixedly connected to the culture tank.

特表２０１６−５００４３３号公報JP-T-2006-500433 特開平５−２５２９３３号公報JP-A-5-252933 特開平３−２４０４８３号公報JP-A-3-240483

シングルユースの培養容器には、脱着容易な小径のメンブレンフィルタ（ガス用フィルタ）を繋げた排気管が接続されることが多い。液中通気によって培養液の液面上に泡沫の層が成長し、気泡が液面側から排気口に溢流すると、排気路上のメンブレンフィルタに到達する。メンブレンフィルタは気泡で濡らされると閉塞してしまうため、泡沫の層の成長により培養容器が換気不全に陥り、適切な培養雰囲気で継続的に培養することが困難になるという課題がある。   In many cases, a single-use culture vessel is connected to an exhaust pipe connected with a small-diameter membrane filter (gas filter) that can be easily detached. A bubble layer grows on the liquid level of the culture medium due to aeration in the liquid, and when the bubbles overflow from the liquid level to the exhaust port, they reach the membrane filter on the exhaust path. Since the membrane filter is clogged when it is wetted with bubbles, there is a problem that the culture vessel is in a poorly ventilated state due to the growth of the foam layer, making it difficult to continuously culture in an appropriate culture atmosphere.

これに対して、液中通気する通気量を減らしたり、培養容器内の気相部に通気したり、培養液の液位を低くしたりすれば、このような問題に対処できる可能性がある。しかしながら、液中通気する通気量を減らしたり、気相部に通気したりする手法では、細胞に供給される酸素量が少なくなるため、細胞を高密度に増殖させることが困難である。また、培養液の液位を低くする手法では、培養液の液量が確保され難いため、得られる細胞数が少なくなってしまう。   On the other hand, there is a possibility that such problems can be dealt with by reducing the amount of aeration in the liquid, venting the gas phase in the culture vessel, or lowering the liquid level of the culture liquid. . However, with the technique of reducing the amount of air that flows through the liquid or the method of venting the gas phase, the amount of oxygen supplied to the cells decreases, and it is difficult to grow the cells at high density. Moreover, in the method of lowering the liquid level of the culture solution, since the amount of the culture solution is difficult to be ensured, the number of cells obtained is reduced.

また、特許文献１に開示されるようにインペラで泡を壊す手法では、培養容器の構造が複雑化し、製造コストが増大する虞が高い。泡を壊すための攪拌機構は、その目的上、培養液を攪拌する攪拌機構よりも高回転速度に設定する必要があるため、別体として設けることが望まれる。ところが、別体として設ける場合には、培養容器内にヘッドスペースを確保する、個別にメカニカルシールを設ける、シャフト同士の干渉を防止するといった種々の対応を要するため、培養容器の設計や製造について制約を受ける。   In addition, as disclosed in Patent Document 1, in the method of breaking bubbles with an impeller, the structure of the culture vessel is complicated, and the production cost is likely to increase. For the purpose, the stirring mechanism for breaking the bubbles needs to be set at a higher rotation speed than the stirring mechanism for stirring the culture solution, so that it is desired to be provided separately. However, when it is provided as a separate body, it requires various measures such as securing a head space in the culture vessel, individually providing a mechanical seal, and preventing interference between the shafts, and therefore, the design and production of the culture vessel are limited. Receive.

また、特許文献２や特許文献３に開示されるように泡沫破泡層や親水性毛管体を設ける手法では、培養容器の原価が高くなるため、シングルユース製品に適していない。特に、培養バッグに適用するには、泡沫破泡層や親水性毛管体を支持可能な強度を確保する必要がある。その他、発泡した培養液を培養容器外に取り出し、破泡した後に培養容器に戻して培養を続けるといった手法もある。しかしながら、このような手法では、装置の構成が複雑化し、培養操作も煩雑になってしまう。   Further, as disclosed in Patent Document 2 and Patent Document 3, the method of providing a foam-breaking layer or a hydrophilic capillary body is not suitable for a single-use product because the cost of the culture vessel increases. In particular, in order to apply to a culture bag, it is necessary to ensure the strength capable of supporting a foam-breaking layer or a hydrophilic capillary body. In addition, there is a technique in which the foamed culture solution is taken out of the culture vessel, bubbled, and then returned to the culture vessel to continue the culture. However, such a method complicates the configuration of the apparatus and makes the culture operation complicated.

本発明は、このような課題に鑑みてなされたものであって、培養液の液面上に生じた気泡が培養容器の排気口に溢流し難いシングルユース培養装置及び培養方法を提供することを目的とする。   The present invention has been made in view of such problems, and provides a single-use culture apparatus and a culture method in which bubbles generated on the liquid surface of the culture liquid are unlikely to overflow into the exhaust port of the culture container. Objective.

前記課題を解決するために本発明に係るシングルユース培養装置は、培養液を封入可能な培養容器と、前記培養容器内の下部に配置され、前記培養容器に封入された前記培養液に酸素を液中通気する液中通気手段と、前記培養容器の上部に位置し、前記培養容器内の気体を排気する排気口と、前記排気口の下方に配置され、前記排気口と前記培養液の液面とを隔てる遮蔽シートと、を備える。   In order to solve the above-mentioned problems, a single-use culture apparatus according to the present invention includes a culture vessel capable of enclosing a culture solution, and oxygen placed in the culture solution disposed in the lower part of the culture vessel and enclosed in the culture vessel. A submerged aeration means for venting the submerged liquid, an exhaust port located above the culture vessel and exhausting the gas in the culture vessel, and disposed below the exhaust port, the exhaust port and the culture solution liquid And a shielding sheet separating the surface.

また、本発明に係る培養方法は、培養液を封入可能な培養容器と、前記培養容器内の下部に配置され、前記培養容器に封入された前記培養液に酸素を液中通気する液中通気手段と、前記培養容器の上部に位置し、前記培養容器内の気体を排気する排気口と、前記排気口の下方に配置され、前記排気口と前記培養液の液面とを隔てる遮蔽シートと、前記培養容器に接続され、前記培養容器内に液体を供給する給液管と、を備え、前記給液管の先端が、前記遮蔽シートの上方に位置するシングルユース培養装置において、前記培養容器に前記培養液及び細胞を封入し、前記培養液に液中通気しながら前記細胞を培養し、前記細胞の培養中に前記遮蔽シート上に新鮮培地又は消泡剤を供給する。   In addition, the culture method according to the present invention includes a culture vessel capable of enclosing a culture solution, and a submerged aeration device that is disposed in a lower part of the culture vessel and vents oxygen into the culture solution enclosed in the culture vessel. Means, an exhaust port located above the culture vessel and exhausting the gas in the culture vessel, and a shielding sheet disposed below the exhaust port and separating the exhaust port and the liquid level of the culture solution A single-use culture apparatus connected to the culture vessel and configured to supply a liquid into the culture vessel, the tip of the liquid supply tube being located above the shielding sheet. The culture solution and cells are sealed in, the cells are cultured while aeration is passed through the culture solution, and a fresh medium or an antifoaming agent is supplied onto the shielding sheet during the culture of the cells.

本発明によれば、培養液の液面上に生じた気泡が培養容器の排気口に溢流し難いシングルユース培養装置及び培養方法を提供することができる。   ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, the single use culture apparatus and culture | cultivation method which the bubble produced on the liquid level of a culture solution cannot overflow easily to the exhaust port of a culture container can be provided.

本発明の一実施形態に係るシングルユース培養装置の全体構成を示す断面図である。It is sectional drawing which shows the whole structure of the single use culture apparatus which concerns on one Embodiment of this invention. 培養容器の天井部の内面に架された遮蔽シートを示す斜視図である。It is a perspective view which shows the shielding sheet laid over the inner surface of the ceiling part of a culture container. 培養容器の側部の内面に架された遮蔽シートを示す斜視図である。It is a perspective view which shows the shielding sheet hung on the inner surface of the side part of a culture container. 培養容器の天井部の内面の全体を隔離する遮蔽シートを示す断面図である。It is sectional drawing which shows the shielding sheet which isolates the whole inner surface of the ceiling part of a culture container. 培養容器の天井部の内面の一部を隔離する遮蔽シートを示す斜視図である。It is a perspective view which shows the shielding sheet which isolates a part of inner surface of the ceiling part of a culture container. 本発明の他の実施形態に係るシングルユース培養装置の全体構成を示す断面図である。It is sectional drawing which shows the whole structure of the single use culture apparatus which concerns on other embodiment of this invention.

以下、本発明の一実施形態に係るシングルユース培養装置、及び、それを用いた培養方法について、図を参照しながら説明する。なお、以下の各図において共通する構成については同一の符号を付して重複した説明を省略する。上記した以外の課題、構成及び効果は、以下の実施形態の説明により明らかにされる。   Hereinafter, a single-use culture apparatus according to an embodiment of the present invention and a culture method using the same will be described with reference to the drawings. In addition, about the structure which is common in each following figure, the same code | symbol is attached | subjected and the overlapping description is abbreviate | omitted. Problems, configurations, and effects other than those described above will be clarified by the following description of embodiments.

図１は、本発明の一実施形態に係るシングルユース培養装置の全体構成を示す断面図である。
図１に示すように、本実施形態に係るシングルユース培養装置１００は、培養バッグ（培養容器）１と、ハウジング（ハウジング部）２と、支持架台３と、遮蔽シート４と、攪拌駆動用モータ５と、液中通気用ガス供給管（液中通気手段）８と、気相通気用ガス供給管９と、培地供給管（給液管）１０と、培養液排出管１１と、ガス排出管１２と、スパージャ１３と、ガス用フィルタ１４と、センサ１５と、位置固定化支持具１６と、液中通気用ガス供給装置１７と、気相通気用ガス供給装置１８と、制御装置１９と、天板２１と、磁性カップリング部材２２，２３と、シャフト２４と、攪拌翼２５ａ，２５ｂとを備えている。 FIG. 1 is a cross-sectional view showing the overall configuration of a single-use culture apparatus according to an embodiment of the present invention.
As shown in FIG. 1, a single-use culture apparatus 100 according to the present embodiment includes a culture bag (culture container) 1, a housing (housing) 2, a support frame 3, a shielding sheet 4, and a stirring drive motor. 5, gas supply pipe for submerged aeration (submergence vent means) 8, gas supply pipe for gas phase aeration 9, medium supply pipe (liquid supply pipe) 10, culture medium discharge pipe 11, and gas discharge pipe 12, a sparger 13, a gas filter 14, a sensor 15, a position fixing support 16, a submerged gas supply device 17, a gas phase supply gas supply device 18, a control device 19, A top plate 21, magnetic coupling members 22, 23, a shaft 24, and stirring blades 25a, 25b are provided.

シングルユース培養装置１００は、細胞の培養や、細胞による有用物質の生産に用いられる装置である。シングルユース培養装置１００は、シングルユース製品の培養容器を使用して行うシングルユース式の培養操作に使用することができる。すなわち、使用される培養バッグ１は、予め滅菌処理されて単回ないし単一工程のみ使用され、使用後には再使用されること無く廃棄される。   The single use culture apparatus 100 is an apparatus used for cell culture and production of useful substances using cells. The single-use culture apparatus 100 can be used for a single-use culture operation performed using a single-use product culture vessel. That is, the culture bag 1 to be used is sterilized in advance and used only once or in a single step, and is discarded without being reused after use.

シングルユース培養装置１００は、任意の細胞種の培養に用いることが可能である。例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞、ベイビーハムスター腎臓細胞、マウス骨髄腫細胞等の動物細胞、大腸菌、光合成細菌等の細菌、酵母、カビ等の菌類、植物細胞、昆虫細胞、微細藻類等の適宜の細胞種の培養に用いてよく、培養対象は特に限定されない。   The single-use culture apparatus 100 can be used for culturing any cell type. For example, animal cells such as Chinese hamster ovary cells, baby hamster kidney cells, mouse myeloma cells, bacteria such as Escherichia coli, photosynthetic bacteria, fungi such as yeast, mold, plant cells, insect cells, microalgae and other appropriate cell types The culture target is not particularly limited.

細胞に産生させる有用物質としては、例えば、バイオ医薬品等の有効成分として用いられる各種の生理活性物質、特に、抗体医薬品として用いられる抗体や、その他の工業的有用性を有する機能物質等が挙げられる。生理活性物質としては、例えば、血栓溶解剤としての用途がある組織型プラスミノーゲン活性化因子、エリスロポエチン、インターフェロン等が挙げられる。また、その他の機能物質としては、例えば、β−カロテン、アスタキサンチン等のカロチノイドや、フィコシアニン等のフィコビリンタンパク質や、クロロフィル、バクテリオクロロフィル等が挙げられる。   Examples of useful substances produced in cells include various physiologically active substances used as active ingredients such as biopharmaceuticals, in particular, antibodies used as antibody drugs and other functional substances having industrial utility. . Examples of the physiologically active substance include tissue-type plasminogen activator, erythropoietin, interferon and the like that have applications as thrombolytic agents. Examples of other functional substances include carotenoids such as β-carotene and astaxanthin, phycobilin proteins such as phycocyanin, chlorophyll, and bacteriochlorophyll.

培養バッグ１は、折り畳み可能な可撓性を有しており、培養液７を封入可能な容器となっている。培養バッグ１は、例えば、エチレンビニルアセテート、エチレンビニルアルコール等の多層フィルムで形成される。培養バッグ１は、使用前は、通常、内容物が封入されていない折り畳まれた状態であり、予め滅菌されて使用に供される。一方、使用時には、内部に培養液７や気体が封入されて立体的に膨らんだ状態とされる。培養バッグ１は、ハウジング２に収容可能であれば適宜の形状の容器としてよい。例えば、培養バッグ１は、立体的に膨らんだ状態において、円柱形状、四角柱形状、その他の多角柱形状等を呈してよい。   The culture bag 1 has the flexibility which can be folded and becomes a container which can enclose the culture solution 7. FIG. The culture bag 1 is formed of, for example, a multilayer film such as ethylene vinyl acetate or ethylene vinyl alcohol. Prior to use, the culture bag 1 is normally in a folded state in which the contents are not enclosed, and is sterilized in advance and provided for use. On the other hand, at the time of use, the culture solution 7 and gas are sealed inside and the three-dimensionally expanded state is obtained. The culture bag 1 may be an appropriately shaped container as long as it can be accommodated in the housing 2. For example, the culture bag 1 may exhibit a cylindrical shape, a quadrangular prism shape, other polygonal column shapes, etc. in a three-dimensionally inflated state.

培養バッグ１は、培養時には、図１に示すように、支持架台３に固定されたハウジング２に収容されて底面及び側面が支持される。ハウジング２の形状は、上部が開口している槽状であってもよいし、上部が塞がれ、側部が開口している箱状であってもよい。ハウジング２の材質は、荷重に耐える強度が確保される限り、金属、合成樹脂等の適宜の材質としてよい。   As shown in FIG. 1, the culture bag 1 is accommodated in a housing 2 fixed to a support frame 3 and supported at the bottom and side surfaces during culture. The shape of the housing 2 may be a tank shape with an open top, or a box shape with the top closed and the side open. The material of the housing 2 may be an appropriate material such as metal or synthetic resin as long as the strength to withstand the load is ensured.

培養バッグ１には、液中通気用ガス供給管８、気相通気用ガス供給管９、培地供給管１０、培養液排出管１１、及び、ガス排出管１２が接続される。これらの配管類には、途中部に開閉自在なコックが備えられている。培養バッグ１は、コックが閉じられて密閉されている状態では、滅菌後の無菌状態が保たれるようになっている。   The culture bag 1 is connected to a submerged gas supply tube 8, a gas phase supply gas supply tube 9, a culture medium supply tube 10, a culture solution discharge tube 11, and a gas discharge tube 12. These pipes are provided with cocks that can be opened and closed in the middle. The culture bag 1 is maintained in a sterilized state after sterilization in a state where the cock is closed and sealed.

図１に示すように、液中通気用ガス供給管８は、先端が、培養バッグ１内の下部に配されており、基端が、液中通気用ガス供給装置１７に接続されている。また、気相通気用ガス供給管９は、先端が、培養バッグ１内の上部に配されており、基端が、気相通気用ガス供給装置１８に接続されている。液中通気用ガス供給装置１７、及び、気相通気用ガス供給装置１８は、培養中の培養環境を調整するために、酸素や二酸化炭素等を含むガスを所定分圧で供給する。   As shown in FIG. 1, the submerged aeration gas supply pipe 8 has a distal end disposed at a lower portion in the culture bag 1 and a proximal end connected to a submerged aeration gas supply device 17. The gas-phase aeration gas supply pipe 9 has a distal end disposed in the upper part of the culture bag 1 and a proximal end connected to the gas-phase aeration gas supply device 18. The submerged aeration gas supply device 17 and the gas phase aeration gas supply device 18 supply a gas containing oxygen, carbon dioxide, or the like at a predetermined partial pressure in order to adjust the culture environment during culture.

液中通気用ガス供給管８の先端には、微細気泡を散気するスパージャ１３が取着されている。液中通気用ガス供給管８は、培養バッグ１に封入された培養液７に酸素を液中通気し、培養されている細胞に呼吸に必要な酸素を供給する。また、気相通気用ガス供給管９は、培養バッグ１の気相部に二酸化炭素等の気体を通気し、細胞の培養に適した培養雰囲気を維持する。   A sparger 13 which diffuses fine bubbles is attached to the tip of the gas supply pipe 8 for in-liquid ventilation. The submerged aeration gas supply pipe 8 ventilates oxygen into the culture solution 7 sealed in the culture bag 1 and supplies oxygen necessary for respiration to the cultured cells. In addition, the gas supply pipe 9 for gas-phase aeration supplies gas such as carbon dioxide to the gas-phase part of the culture bag 1 and maintains a culture atmosphere suitable for cell culture.

培地供給管１０は、先端が、培養バッグ１内の上部に配されている。培地供給管１０は、基端が、不図示の培地源等と接続され、培養バッグ１に培養液等の液体を供給し得るように設けられる。例えば、培養開始前には、培養対象の細胞が懸濁された培養液を供給し、培養開始後には、流加培養や灌流培養のための新鮮培地を供給する。また、培地供給管１０を通じて、培養対象の細胞を懸濁させた細胞懸濁液や消泡剤を供給するようにしてもよい。或いは、細胞懸濁液や消泡剤は、培地供給管１０と同様の配置で設けた他の給液管から供給するようにしてもよい。   A tip of the medium supply tube 10 is arranged at an upper portion in the culture bag 1. The medium supply pipe 10 is provided so that the base end is connected to a medium source (not shown) or the like and can supply a liquid such as a culture solution to the culture bag 1. For example, a culture solution in which cells to be cultured are suspended is supplied before the start of culture, and a fresh medium for fed-batch culture or perfusion culture is supplied after the start of culture. Further, a cell suspension or an antifoaming agent in which cells to be cultured are suspended may be supplied through the medium supply tube 10. Alternatively, the cell suspension and the antifoaming agent may be supplied from another liquid supply pipe provided in the same arrangement as the medium supply pipe 10.

培養液排出管１１は、培養バッグ１内の培養液７を抜き取り、培養された細胞や有用物質を回収するために用いられる。ガス排出管１２は、一端が、培養バッグ１内の気相部に開口しており、他端が、培養バッグ１の外部に開口している。ガス排出管１２は、培養バッグ１の気相部の気体を排出するための排気路を形成している。培養容器外からの通気や細胞の呼吸によって気相部に溜まった気体は、ガス排出管１２を通じて排気される。   The culture solution discharge pipe 11 is used for extracting the culture solution 7 in the culture bag 1 and collecting the cultured cells and useful substances. One end of the gas exhaust pipe 12 is opened to the gas phase portion in the culture bag 1, and the other end is opened to the outside of the culture bag 1. The gas discharge pipe 12 forms an exhaust path for discharging the gas in the gas phase portion of the culture bag 1. The gas accumulated in the gas phase due to ventilation from the outside of the culture vessel or cell breathing is exhausted through the gas exhaust pipe 12.

液中通気用ガス供給管８、気相通気用ガス供給管９、及び、ガス排出管１２は、途中部に、微生物等の異物の侵入を阻止するガス用フィルタ１４を備えている。ガス用フィルタ１４は、例えば、各管の途中部に連結可能な筺体と、筺体内に収容された精密濾過用の濾材とを備えて構成される。一般に、濾材は、ポリテトラフルオロエチレン、ポリオレフィン、ポリアミド、セルロース等で形成され、孔径は、凡そ０．１μｍから１．０μｍ程度である。   The submerged gas supply pipe 8, the gas-phase gas supply pipe 9, and the gas discharge pipe 12 include a gas filter 14 that prevents foreign substances such as microorganisms from entering in the middle. The gas filter 14 includes, for example, a housing that can be connected to the middle portion of each pipe, and a filter material for microfiltration accommodated in the housing. In general, the filter medium is formed of polytetrafluoroethylene, polyolefin, polyamide, cellulose or the like, and the pore diameter is about 0.1 μm to 1.0 μm.

センサ１５は、培養液７のｐＨ、温度、溶存酸素濃度、二酸化炭素濃度等を計測する計測器である。センサ１５は、通常、各物理量を計測するために複数器が備えられ、培養バッグ１に対して内外を貫通して液密に挿着される。なお、センサ１５としては、培養液７に対して非接触の状態で使用される光学センサ等が備えられてもよい。   The sensor 15 is a measuring instrument that measures the pH, temperature, dissolved oxygen concentration, carbon dioxide concentration, etc. of the culture solution 7. The sensor 15 is usually provided with a plurality of devices for measuring each physical quantity, and is inserted into the culture bag 1 through the inside and outside in a liquid-tight manner. The sensor 15 may be provided with an optical sensor or the like that is used in a non-contact state with respect to the culture solution 7.

攪拌翼２５ａ，２５ｂは、培養バッグ１内に備えられており、培養中に駆動されて培養液７を攪拌する。図１において、培養バッグ１の頂部には、天板２１が接合されている。そして、天板２１を挟んで、培養バッグ１の内側及び外側のそれぞれに、一対の磁性カップリング部材２２，２３が配されている。   The stirring blades 25a and 25b are provided in the culture bag 1, and are driven during the culture to stir the culture solution 7. In FIG. 1, a top plate 21 is joined to the top of the culture bag 1. A pair of magnetic coupling members 22 and 23 are arranged on the inside and outside of the culture bag 1 with the top plate 21 interposed therebetween.

内側の磁性カップリング部材２２は、先端側に攪拌翼２５ａ，２５ｂを有するシャフト２４と連結されている。一方、外側の磁性カップリング部材２３は、支持架台３側に固定支持された攪拌駆動用モータ５と連結されている。これら磁性カップリング部材２２，２３は、磁力による相互作用により、互いに非接触の状態でトルクを伝達することができる。そのため、攪拌駆動用モータ５が駆動されると、シャフト２４が回転し、攪拌翼２５ａ，２５ｂが旋回して培養液７が攪拌される。   The inner magnetic coupling member 22 is connected to a shaft 24 having stirring blades 25a and 25b on the tip side. On the other hand, the outer magnetic coupling member 23 is connected to the stirring drive motor 5 fixedly supported on the support frame 3 side. These magnetic coupling members 22 and 23 can transmit torque in a non-contact state due to interaction by magnetic force. Therefore, when the agitation drive motor 5 is driven, the shaft 24 rotates and the agitation blades 25a and 25b rotate to agitate the culture solution 7.

制御装置１９は、培養バッグ１における培養環境を制御する装置である。制御装置１９は、例えば、攪拌駆動用モータ５の回転速度を調節して、攪拌翼２５ａ，２５ｂによる攪拌速度を所定の速度に調整する。また、センサ１５が取得した計測結果を参照して、液中通気用ガス供給装置１７や、気相通気用ガス供給装置１８によるガス供給量を調節し、培養環境の酸素や二酸化炭素を所定の濃度範囲に維持する。制御装置１９は、培養液７のｐＨや液温に基いて、不図示のｐＨ調整用液注装置や、培養液用温調装置を制御するように設けてもよい。   The control device 19 is a device that controls the culture environment in the culture bag 1. For example, the control device 19 adjusts the rotational speed of the stirring drive motor 5 to adjust the stirring speed by the stirring blades 25a and 25b to a predetermined speed. In addition, referring to the measurement result acquired by the sensor 15, the gas supply amount by the gas supply device 17 for submerged aeration and the gas supply device 18 for gas-phase aeration is adjusted, and oxygen and carbon dioxide in the culture environment are set to a predetermined level. Maintain concentration range. The control device 19 may be provided so as to control a pH adjustment liquid injection device (not shown) or a culture solution temperature control device based on the pH and temperature of the culture solution 7.

図１に示すように、シングルユース培養装置１００は、培養液７が封入されて気相部が残される培養バッグ１内の上側に、遮蔽シート４を備えている。遮蔽シート４は、培養バッグ１に封入されている培養液７の液面よりも上方に位置しており、培養バッグ１内の気相部に配置されている。遮蔽シート４は、例えば、図２に示すように、培養容器（培養バッグ１）の天井部の内面に架して配置させることができる。   As shown in FIG. 1, the single-use culture apparatus 100 includes a shielding sheet 4 on the upper side in the culture bag 1 in which the culture solution 7 is sealed and the gas phase portion is left. The shielding sheet 4 is located above the liquid surface of the culture solution 7 sealed in the culture bag 1 and is disposed in the gas phase portion in the culture bag 1. For example, as shown in FIG. 2, the shielding sheet 4 can be disposed so as to be laid over the inner surface of the ceiling portion of the culture container (culture bag 1).

図２は、培養容器の天井部の内面に架された遮蔽シートを示す斜視図である。
図２においては、培養液７が封入された培養バッグ１の上部を斜め上方から視た斜視図が示されている。培養バッグ１は、略円柱形状の容器であり、培養バッグ１の天井部の内面（天井面）に接合された状態の遮蔽シート４が、培養バッグ１を透視して示されている。 FIG. 2 is a perspective view showing a shielding sheet hung on the inner surface of the ceiling portion of the culture vessel.
In FIG. 2, the perspective view which looked at the upper part of the culture bag 1 with which the culture solution 7 was enclosed from diagonally upward is shown. The culture bag 1 is a substantially cylindrical container, and the shielding sheet 4 in a state joined to the inner surface (ceiling surface) of the ceiling portion of the culture bag 1 is shown through the culture bag 1.

図２に示すように、培地供給管１０やガス排出管１２は、ポートコネクタＣを貫通して挿着されている。ポートコネクタＣは、培養バッグ１の天井部に、培養バッグ１の内外を貫通して接合されている。培地供給管１０及びガス排出管１２は、培養バッグ１の内部に開口しており、ガス排出管１２の先端は、培養バッグ１の気相部の気体を容器外に排出するための排気口１１０を形成している。排気口１１０は、培養バッグ１の上部に位置しており、培養液７の液面よりも高い位置にある。   As shown in FIG. 2, the medium supply pipe 10 and the gas discharge pipe 12 are inserted through the port connector C. The port connector C is joined to the ceiling portion of the culture bag 1 through the inside and outside of the culture bag 1. The culture medium supply pipe 10 and the gas discharge pipe 12 are opened inside the culture bag 1, and the tip of the gas discharge pipe 12 has an exhaust port 110 for discharging the gas in the gas phase portion of the culture bag 1 to the outside of the container. Is forming. The exhaust port 110 is located above the culture bag 1 and is higher than the liquid level of the culture solution 7.

図２に示すように、遮蔽シート４は、薄板状又は膜状のシート体からなる本体部４１と、本体部４１を培養バッグ１の内側に支持する支持部４２，４２とを有している。支持部４２，４２は、本体部４１の一辺及び対辺のそれぞれに連なって設けられており、培養バッグ１の天井部に接合されている。本体部４１は、支持部４２，４２が設けられた両辺付近のそれぞれを基点として湾曲しており、中央部分が培養バッグ１の内側に張り出した状態で支持されている。   As shown in FIG. 2, the shielding sheet 4 includes a main body portion 41 made of a thin plate-like or film-like sheet body, and support portions 42 and 42 that support the main body portion 41 inside the culture bag 1. . The support portions 42 are provided continuously to one side and the opposite side of the main body portion 41, and are joined to the ceiling portion of the culture bag 1. The main body 41 is curved with the bases near both sides where the support portions 42 and 42 are provided as the base points, and is supported in a state in which the central portion protrudes inside the culture bag 1.

遮蔽シート４の本体部４１は、両辺が支持された状態で張り出すことにより、排気口１１０の下方に配置され、排気口１１０と培養液７の液面とを隔てている。遮蔽シート４で排気口１１０と液面とが隔てられることにより、培養液７の液面上に泡沫の層が立ち上がったとき、気泡が排気口１１０に達するのが防止されるようになっている。   The main body portion 41 of the shielding sheet 4 protrudes in a state where both sides are supported, so that it is disposed below the exhaust port 110 and separates the exhaust port 110 from the liquid surface of the culture solution 7. By separating the exhaust port 110 from the liquid level by the shielding sheet 4, when a foam layer rises on the liquid level of the culture solution 7, the bubbles are prevented from reaching the exhaust port 110. .

遮蔽シート４の本体部４１は、気体を通す通路１２０ａ，１２０ｂを隙間状に形成している。通路１２０ａ，１２０ｂは、培養バッグ１の天井面と、培養バッグ１に接合されていない本体部４１の残りの二辺との間に残されており、排気口１１０側と培養液７の液面側とを通じている。通路１２０ａ，１２０ｂを残して遮蔽シート４が配置されることで、培養液７の液面側から排気口１１０に向かう排気経路が確保され、気相部の換気不全が防止されるようになっている。   The main body portion 41 of the shielding sheet 4 forms passages 120a and 120b through which gas passes in a gap shape. The passages 120a and 120b are left between the ceiling surface of the culture bag 1 and the remaining two sides of the main body 41 not joined to the culture bag 1, and the exhaust port 110 side and the liquid level of the culture solution 7 are left. Through with the side. By disposing the shielding sheet 4 while leaving the passages 120a and 120b, an exhaust path from the liquid surface side of the culture solution 7 to the exhaust port 110 is secured, and insufficiency of ventilation in the gas phase portion is prevented. Yes.

遮蔽シート４の本体部４１は、気体を通す複数の通路１２０ａ，１２０ｂを形成しており、複数の通路１２０ａ，１２０ｂは、培養バッグ１の平面視において、排気口１１０に対して略対称な位置に配置され、排気口１１０の側面視において左右対称な略Ｖ字型に形成されている。そのため、培養液７の液面上に泡沫の層が立ち上がったとき、一方が気泡で覆われるようなことがあっても、他方に気体が通り易い排気経路が確保されるようになっている。   The main body 41 of the shielding sheet 4 forms a plurality of passages 120a and 120b through which gas passes, and the plurality of passages 120a and 120b are substantially symmetrical positions with respect to the exhaust port 110 in the plan view of the culture bag 1. And is formed in a substantially V-shape that is symmetrical in the side view of the exhaust port 110. For this reason, when a foam layer rises on the liquid surface of the culture solution 7, even if one of the layers is covered with bubbles, an exhaust path through which gas can easily pass is ensured.

遮蔽シート４は、合成樹脂製とされている。合成樹脂製であるため、軽量であり、シングルユースに適して低廉な培養バッグ１が形成されている。なお、合成樹脂としては、例えば、培養バッグ１の本体と同様のエチレンビニルアセテート、エチレンビニルアルコール等の多層フィルムや、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリカーボネート、ポリエステル、ポリアミド、シリコーン等の適宜の樹脂が用いられる。   The shielding sheet 4 is made of synthetic resin. Since it is made of a synthetic resin, the culture bag 1 is formed that is lightweight and inexpensive and suitable for single use. As the synthetic resin, for example, a multilayer film such as ethylene vinyl acetate and ethylene vinyl alcohol similar to the main body of the culture bag 1, or an appropriate resin such as polyethylene, polypropylene, polystyrene, polycarbonate, polyester, polyamide, silicone, or the like is used. It is done.

遮蔽シート４は、撥水性の表面を有するように設けられてもよい。遮蔽シート４が撥水性であれば、遮蔽シート４に接触した気泡を直ちに破泡させることができるので、気泡が排気口１１０に達するのが確実に阻止される。遮蔽シート４は、撥水性の表面を、排気口１１０側に有していてもよいし、培養液７の液面側に有していてもよいし、これら両面に有していてもよい。気泡が排気口１１０に達するのを確実に阻止する観点からは、少なくとも排気口１１０側に撥水性の表面を有していることが好ましい。   The shielding sheet 4 may be provided so as to have a water-repellent surface. If the shielding sheet 4 is water-repellent, the bubbles contacting the shielding sheet 4 can be immediately broken, so that the bubbles are reliably prevented from reaching the exhaust port 110. The shielding sheet 4 may have a water-repellent surface on the exhaust port 110 side, on the liquid surface side of the culture solution 7, or on both surfaces thereof. From the standpoint of reliably preventing bubbles from reaching the exhaust port 110, it is preferable that at least the exhaust port 110 side has a water-repellent surface.

遮蔽シート４は、表面処理によって撥水性を付与されていてもよいし、撥水性材料の塗布によって撥水性を付与されていてもよい。撥水性を付与する表面処理としては、例えば、ポリテトラフルオロエチレン、ポリクロロトリフルオロエチレン等のフッ素化合物を表面に成膜する処理、表面をプラズマ放電、コロナ放電等でフッ素化する処理、表面に凹凸を形成して粗面化する処理等が挙げられる。また、撥水性材料としては、例えば、パーフルオロアルキルシラン、ポリシロキサン等を成分とするシリコン系、パーフルオロアルキルポリエーテル等を成分とするポリエーテル系等が挙げられる。   The shielding sheet 4 may be provided with water repellency by surface treatment, or may be provided with water repellency by application of a water repellent material. Examples of the surface treatment for imparting water repellency include a treatment for forming a fluorine compound such as polytetrafluoroethylene and polychlorotrifluoroethylene on the surface, a treatment for fluorinating the surface with plasma discharge, corona discharge, etc. Examples include a process of forming irregularities to roughen the surface. Examples of the water-repellent material include silicon-based materials containing perfluoroalkylsilane, polysiloxane and the like, and polyether-based materials containing perfluoroalkyl polyether and the like.

図２に示すように、培地供給管（給液管）１０の先端は、培養バッグ１の内部において、遮蔽シート４（本体部４１）の上方に位置している。培地供給管１０は、培養中の培養バッグ１に新鮮培地を供給し得るように設けられている。そのため、泡沫の層が培養液７の液面上に立ち上がり、気泡が遮蔽シート４上に達しているとき、遮蔽シート４の上方に位置する培地供給管１０から遮蔽シート４上に新鮮培地が供給されることにより、遮蔽シート４に付着している気泡が液流で流し落とされるようになっている。また、排気口１１０を挟んで略対称的な位置に通路１２０ａ，１２０ｂが形成されているため、一方に新鮮培地が流れていても、他方に気体が通り易い排気経路が確保されるようになっている。   As shown in FIG. 2, the tip of the medium supply pipe (liquid supply pipe) 10 is located above the shielding sheet 4 (main body 41) inside the culture bag 1. The culture medium supply tube 10 is provided so that a fresh culture medium can be supplied to the culture bag 1 during the culture. Therefore, when the foam layer rises on the liquid surface of the culture solution 7 and the bubbles reach the shielding sheet 4, fresh medium is supplied onto the shielding sheet 4 from the medium supply pipe 10 located above the shielding sheet 4. By doing so, the bubbles adhering to the shielding sheet 4 are caused to flow off by the liquid flow. Further, since the passages 120a and 120b are formed at substantially symmetrical positions with the exhaust port 110 in between, even if a fresh medium flows on one side, an exhaust path through which gas can easily pass is secured on the other side. ing.

図２に示すように、培地供給管１０は、新鮮培地を遮蔽シート４上に噴出させる噴射ノズル（ノズル部）ｎを先端に有している。噴射ノズルｎは、培地供給管１０の内径よりも狭い口径を有しており、通常の流量で高い圧力の液体を噴出する。このような噴射ノズルｎから新鮮培地が噴出することにより、遮蔽シート４に付着している気泡が液圧で破泡したり、液流で流し落とされたりするようになっている。   As shown in FIG. 2, the culture medium supply tube 10 has an injection nozzle (nozzle part) n that ejects a fresh culture medium onto the shielding sheet 4 at the tip. The injection nozzle n has a narrower diameter than the inner diameter of the culture medium supply pipe 10 and ejects a high-pressure liquid at a normal flow rate. When the fresh culture medium is ejected from such an injection nozzle n, bubbles adhering to the shielding sheet 4 are broken by liquid pressure or are washed away by liquid flow.

噴射ノズルｎは、液体を扁平な形状に噴出する噴板を備え、噴板による扁平な噴射パターンを排気口１１０（排気口１１０と噴射ノズルｎとを通る鉛直面）に対して垂直に噴射する向きに配置されていることが好ましい。このような向きで扁平な噴射パターンの新鮮培地を噴出させれば、遮蔽シート４に付着している気泡を、少ない液量で確実に流し落とすことができる。   The injection nozzle n includes an injection plate that ejects liquid into a flat shape, and injects a flat injection pattern by the injection plate perpendicularly to the exhaust port 110 (a vertical plane passing through the exhaust port 110 and the injection nozzle n). It is preferable to arrange in the direction. If a fresh culture medium having a flat spray pattern is ejected in such a direction, bubbles adhering to the shielding sheet 4 can be surely flowed down with a small amount of liquid.

遮蔽シート４の本体部４１（本体部４１の谷筋）は、培養バッグ１の天井面に架された状態において、培養液７の液面（水平面）に対して傾斜している。遮蔽シート４が傾斜していることにより、遮蔽シート４上に供給された新鮮培地が、遮蔽シート４上を容易に流下することができるようになっている。そのため、遮蔽シート４の上側の表面に付着している気泡は、強い液流で確実に流し落とされる。遮蔽シート４（本体部４１の谷筋）の液面に対する傾斜角度θは、０度（水平）を超え４５度以下にすることが好ましく、排気口１１０が液面に露出するのを避ける観点からは、３０度以下にすることがより好ましく、１５度以下にすることがさらに好ましい。   The main body 41 (the valley of the main body 41) of the shielding sheet 4 is inclined with respect to the liquid surface (horizontal plane) of the culture solution 7 in a state of being laid on the ceiling surface of the culture bag 1. Since the shielding sheet 4 is inclined, the fresh medium supplied on the shielding sheet 4 can easily flow down on the shielding sheet 4. Therefore, the bubbles adhering to the upper surface of the shielding sheet 4 are surely washed off with a strong liquid flow. The inclination angle θ with respect to the liquid level of the shielding sheet 4 (the valley of the main body 41) is preferably more than 0 degree (horizontal) and 45 degrees or less, from the viewpoint of avoiding the exhaust port 110 being exposed to the liquid level. Is more preferably 30 degrees or less, and further preferably 15 degrees or less.

次に、シングルユース培養装置１００を用いた培養方法の一例について説明する。   Next, an example of a culture method using the single use culture apparatus 100 will be described.

シングルユース培養装置１００により培養を行うにあたっては、はじめに、培養バッグ１をハウジング２に収容し、位置固定化支持具１６によって位置決めして据え付ける。培養バッグ１は、攪拌翼２５ａ，２５ｂを有するシャフト２４が連結している磁性カップリング部材２２を内部に収容し、ガンマ線、紫外線、エチレンオキシドガス等によって予め滅菌しておく。   In culturing with the single-use culture apparatus 100, first, the culture bag 1 is accommodated in the housing 2 and positioned and installed by the position fixing support 16. The culture bag 1 contains therein a magnetic coupling member 22 to which a shaft 24 having stirring blades 25a and 25b is connected, and is sterilized in advance with gamma rays, ultraviolet rays, ethylene oxide gas, or the like.

ハウジング２に収容した培養バッグ１は、液中通気用ガス供給装置１７や、気相通気用ガス供給装置１８と無菌的に接続し、液中通気用ガス供給管８や、気相通気用ガス供給管９を通じて給気可能な状態とする。また、培養バッグ１には、培地供給管１０、センサ１５等を無菌的に接続し、細胞懸濁液や培養液７を注液すると共に、必要に応じてガスも注入する。なお、培養液７としては、培養対象の増殖や生育に適したものであれば、適宜の種類の液体培地を使用することが可能である。   The culture bag 1 accommodated in the housing 2 is aseptically connected to the submerged aeration gas supply device 17 and the gas phase aeration gas supply device 18, and the submerged aeration gas supply pipe 8 and the gas phase aeration gas. Air can be supplied through the supply pipe 9. In addition, the culture bag 1 is aseptically connected to the culture medium supply tube 10, the sensor 15, and the like, and a cell suspension and a culture solution 7 are injected, and a gas is also injected as necessary. In addition, as a culture solution 7, if it is a thing suitable for the proliferation and growth of culture | cultivation object, it is possible to use an appropriate kind of liquid culture medium.

培養バッグ１に培養液７や、所要の細胞を封入した後、液中通気用ガス供給管８による液中通気と、気相通気用ガス供給管９による通気とを開始し、細胞の増殖や生育に適した所定の培養環境を維持しながら細胞を培養する。また、攪拌駆動用モータ５を稼働させることにより、培養バッグ１に封入した培養液７を攪拌する。   After the culture solution 7 and necessary cells are sealed in the culture bag 1, the in-liquid aeration by the in-liquid aeration gas supply pipe 8 and the aeration by the gas-phase aeration gas supply pipe 9 are started, The cells are cultured while maintaining a predetermined culture environment suitable for growth. Moreover, the culture solution 7 enclosed in the culture bag 1 is stirred by operating the stirring drive motor 5.

一般に、培養バッグ１において培養が進行し、細胞の増殖や有用物質の産生が進むと、培養液７中には、生細胞が分泌した物質や、死細胞から放出された物質が蓄積される。そのため、培養液の起泡性が高くなると共に、自然には気泡が消失し難くなる。取り分け、動物細胞等の培養においては、血清培地や、起泡性が高いアルブミン、各種成長因子等を添加した無血清培地が使用されることが多いため、培養液７の発泡性は高くなる傾向がある。   In general, when culture proceeds in the culture bag 1 and cell growth and production of useful substances progress, substances secreted by living cells and substances released from dead cells accumulate in the culture solution 7. For this reason, the foamability of the culture broth becomes high and bubbles are hardly lost naturally. In particular, in the culture of animal cells and the like, a serum medium, a serum-free medium supplemented with highly foaming albumin, various growth factors, and the like are often used, so the foamability of the culture solution 7 tends to increase. There is.

また、培養バッグ１において培養が進行し、細胞数の増加によって酸素の消費速度が増大してくると、溶存酸素濃度を維持するために液中通気量を増加せざるを得なくなり、培養液７の発泡が強くなることが多い。このような状態の培養液７に対して、液中通気を継続したり、液中通気量を増量したりすると、気泡が重なって泡沫の層が成長し、液面上に高く立ち上がるようになる。その結果、気泡が排気口１１０に達して排気口１１０に溢流し、ガス用フィルタ１４が気泡に濡らされて排気路が閉塞する事態が生じる。   Further, when the culture proceeds in the culture bag 1 and the oxygen consumption rate increases due to the increase in the number of cells, the amount of aeration in the liquid must be increased in order to maintain the dissolved oxygen concentration. In many cases, foaming of the resin becomes stronger. When the aeration in the liquid is continued or the aeration volume in the liquid is increased with respect to the culture solution 7 in such a state, bubbles are overlapped and a foam layer grows and rises high on the liquid surface. . As a result, the bubbles reach the exhaust port 110 and overflow into the exhaust port 110, and the gas filter 14 is wetted by the bubbles and the exhaust path is blocked.

これに対して、シングルユース培養装置１００においては、遮蔽シート４が培養液７の液面と排気口１１０とを隔てているので、液面に生じた泡沫の層が遮蔽シート４よりも上方に成長するのが妨げられる。そのため、気泡が排気口１１０に達し難くなり、排気路が閉塞するのが防止される。   On the other hand, in the single-use culture apparatus 100, since the shielding sheet 4 separates the liquid surface of the culture solution 7 from the exhaust port 110, the foam layer generated on the liquid surface is located above the shielding sheet 4. It is prevented from growing. Therefore, it is difficult for bubbles to reach the exhaust port 110 and the exhaust path is prevented from being blocked.

シングルユース培養装置１００においては、細胞の培養中に遮蔽シート４上に新鮮培地又は消泡剤を供給することも可能である。新鮮培地や消泡剤は、培地供給管（給液管）１０から供給してもよいし、不図示の他の給液管から供給してもよい。また、新鮮培地及び消泡剤のいずれか一方のみを供給してもよいし、消泡剤を添加した新鮮培地を供給してもよい。   In the single-use culture apparatus 100, it is also possible to supply a fresh medium or an antifoaming agent on the shielding sheet 4 during cell culture. The fresh medium and the antifoaming agent may be supplied from the medium supply pipe (liquid supply pipe) 10 or may be supplied from another liquid supply pipe (not shown). Moreover, you may supply only any one of a fresh culture medium and an antifoamer, and you may supply the fresh culture medium which added the antifoamer.

消泡剤としては、例えば、シリコーン系消泡剤、ポリエーテル系消泡剤、界面活性剤等が挙げられる。遮蔽シート４上に消泡剤を供給すれば、培養液７の液面に直接的に供給する場合と比較して、少量の消泡剤で気泡が排気口１１０に達するのを阻止することができる。そのため、細胞の増殖や有用物質の産生が消泡剤によって阻害されるのを抑制することができるし、薬注のコストを安く抑えることができる。   Examples of the antifoaming agent include a silicone-based antifoaming agent, a polyether-based antifoaming agent, and a surfactant. If the antifoaming agent is supplied onto the shielding sheet 4, it is possible to prevent bubbles from reaching the exhaust port 110 with a small amount of antifoaming agent as compared with the case where the antifoaming agent is supplied directly to the liquid surface of the culture solution 7. it can. Therefore, cell growth and production of useful substances can be inhibited from being inhibited by the antifoaming agent, and the cost of drug injection can be reduced.

細胞の増殖や有用物質の産生に必要とされる所定の培養時間が経過すると、撹拌駆動装置５、液中通気用ガス供給装置１７、気相通気用ガス供給装置１８、制御装置１９等の稼働が停止される。そして、培養液７は、培養液排出管１１から抜き取られ、培養された細胞や有用物質は、細胞分離処理や精製処理を経て回収される。また、培養液７が抜き取られた培養バッグ１は、ハウジング２から取り外されて廃棄される一方、次の培養に際しては、滅菌済みの新たな培養バッグ１が使用される。   When a predetermined culture time required for cell growth and production of useful substances has elapsed, the agitation drive device 5, the gas supply device 17 for in-liquid aeration, the gas supply device 18 for gas-phase aeration, and the control device 19 are operated. Is stopped. Then, the culture solution 7 is extracted from the culture solution discharge tube 11, and the cultured cells and useful substances are recovered through cell separation processing and purification processing. The culture bag 1 from which the culture solution 7 has been removed is removed from the housing 2 and discarded, while a new sterilized culture bag 1 is used for the next culture.

以上のシングルユース培養装置によると、排気口と培養液の液面とを隔てる遮蔽シートが備えられているため、培養液の液面上に泡沫の層が立ち上がったとき、気泡が排気口に達するのが妨げられ、培養液の液面上に生じた気泡が液面側から排気口に溢流し難くなる。そのため、排気路が気泡で閉塞するのが防止され、培養容器が換気不全に陥るのが抑制される。つまり、培養容器内の培養雰囲気が通気により置換されて適正に維持されるようになるので、適切な培養雰囲気で継続的に培養を続けることが可能になる。例えば、細胞を高密度に増殖させることができるし、培養期間の長期化や有用物質の産生量の低下を抑制できるので、培養装置の運転コストの削減や、目的とする有用物質の収率の向上を図ることが可能である。また、単純な構造、且つ、低コストで排気路の閉塞が防止されたシングルユース培養装置を提供することができる。   According to the above single-use culture apparatus, since the shielding sheet that separates the exhaust port from the liquid level of the culture solution is provided, when the foam layer rises on the liquid level of the culture solution, the bubbles reach the exhaust port. This prevents air bubbles generated on the liquid level of the culture medium from overflowing from the liquid level side to the exhaust port. Therefore, the exhaust path is prevented from being blocked with bubbles, and the culture vessel is prevented from falling into a ventilation failure. That is, since the culture atmosphere in the culture container is replaced and properly maintained by aeration, the culture can be continuously continued in an appropriate culture atmosphere. For example, cells can be grown at a high density, and the cultivation period can be prolonged and the production amount of useful substances can be suppressed. It is possible to improve. In addition, it is possible to provide a single-use culture apparatus that has a simple structure and is low in cost and in which the exhaust passage is prevented from being blocked.

また、以上のシングルユース培養装置を用いた培養方法によると、細胞を液中通気培養している間に、遮蔽シート上に新鮮培地又は消泡剤が供給されるので、遮蔽シート上に達した気泡を積極的に流し落としたり、破泡させたりすることができる。そのため、培養液の液面上に生じた気泡が液面側から排気口に溢流し難くなり、排気路が閉塞するのが能動的に防止される。例えば、流加培養等を行うとき、遮蔽シートに付着している気泡を定期的に排除することができるため、適切な培養雰囲気で継続的に培養を続けることが可能になる。   In addition, according to the culture method using the above single-use culture apparatus, the fresh medium or the antifoaming agent is supplied onto the shielding sheet while the cells are cultured in aeration in the liquid, so that the cell reaches the shielding sheet. Air bubbles can be actively washed away or broken. For this reason, bubbles generated on the liquid surface of the culture liquid are unlikely to overflow from the liquid surface side to the exhaust port, and the exhaust path is actively prevented from being blocked. For example, when performing fed-batch culture or the like, air bubbles adhering to the shielding sheet can be periodically removed, so that the culture can be continuously continued in an appropriate culture atmosphere.

また、図１に示したように、磁性カップリング部材２２，２３を介してシャフト２４を回転させる攪拌方式によると、メカニカルシールのような軸封機構が不要になるので、培養バッグ１の製造コストが低減されたり、培養バッグ１内の無菌性が維持され易くなる等の利点がある。   In addition, as shown in FIG. 1, according to the stirring method in which the shaft 24 is rotated via the magnetic coupling members 22 and 23, a shaft sealing mechanism such as a mechanical seal becomes unnecessary, so that the manufacturing cost of the culture bag 1 is reduced. Are reduced, and sterility in the culture bag 1 is easily maintained.

また、図２に示したように、遮蔽シート４を培養バッグ１の天井面に架す構造によると、培養液７の液面と排気口１１０とを簡素な構造で隔てることができる。特に、気体を通す通路１２０ａ，１２０ｂが培養バッグ１の天井面の近くに確保されるので、通路１２０ａ，１２０ｂが気泡で覆われるようなことが少なくなり、培養バッグ１の気相部の換気不全が適切に防止されるようになる。また、気体を通す通路１２０ａ，１２０ｂが比較的大きい開口面積をもって確保されるので、培地供給管１０によって供給された新鮮培地を確実に液面に流すことができる。   In addition, as shown in FIG. 2, according to the structure in which the shielding sheet 4 is mounted on the ceiling surface of the culture bag 1, the liquid level of the culture solution 7 and the exhaust port 110 can be separated with a simple structure. In particular, since the passages 120a and 120b through which the gas passes are secured near the ceiling surface of the culture bag 1, the passages 120a and 120b are less likely to be covered with bubbles, and ventilation failure of the gas phase portion of the culture bag 1 Will be properly prevented. Further, since the passages 120a and 120b through which the gas passes are secured with a relatively large opening area, the fresh culture medium supplied by the culture medium supply pipe 10 can be reliably flowed to the liquid surface.

次に、シングルユース培養装置に備えられる遮蔽シートの他の形態について説明する。   Next, another form of the shielding sheet provided in the single-use culture apparatus will be described.

遮蔽シート４は、図２においては、培養容器（培養バッグ１）の天井面に架されている。しかしながら、遮蔽シート４は、図３に示すように、培養容器（培養バッグ１）の側部の内面に架してもよい。すなわち、遮蔽シート４は、排気口１１０の下方、且つ、培養液７の液面よりも上方であれば、排気口１１０と培養液の液面とが隔てられる限り、排気口１１０の位置に応じて、適宜の位置に配置することが可能である。   In FIG. 2, the shielding sheet 4 is suspended on the ceiling surface of the culture container (culture bag 1). However, the shielding sheet 4 may be laid on the inner surface of the side portion of the culture vessel (culture bag 1) as shown in FIG. That is, as long as the shielding sheet 4 is below the exhaust port 110 and above the liquid level of the culture solution 7, the shielding sheet 4 corresponds to the position of the exhaust port 110 as long as the exhaust port 110 is separated from the liquid level of the culture solution. Thus, it can be arranged at an appropriate position.

図３は、培養容器の側部の内面に架された遮蔽シートを示す斜視図である。
図３においては、培養液７が封入された培養バッグ１の側部の上側を斜め上方から視た斜視図が示されている。培養バッグ１は、略円柱形状の容器であり、培養バッグ１の側部の内面に接合された状態の遮蔽シート４が、培養バッグ１を透視して示されている。排気口１１０は、培養バッグ１の上部の側部寄りに位置している。 FIG. 3 is a perspective view showing a shielding sheet hung on the inner surface of the side portion of the culture vessel.
In FIG. 3, the perspective view which looked at the upper side of the side part of the culture bag 1 with which the culture solution 7 was enclosed from diagonally upward is shown. The culture bag 1 is a substantially cylindrical container, and the shielding sheet 4 joined to the inner surface of the side portion of the culture bag 1 is shown through the culture bag 1. The exhaust port 110 is located near the upper side of the culture bag 1.

図３に示す遮蔽シート４は、薄板状又は膜状のシート体からなる本体部４１と、本体部４１を培養バッグ１の内側に支持する支持部４２，４２とを有している。本体部４１は、支持部４２，４２が設けられた両辺付近のそれぞれを起点として湾曲しており、上部側は培養バッグ１の内側に大きく張り出す一方、下部側は培養バッグ１の内側に小さく張り出している。そのため、図３に示す遮蔽シート４は、培養バッグ１の内側に臨む面が培養液７の液面側を向く方向に傾いており、培養バッグ１の側部の内面に接合して袋状を呈している。   The shielding sheet 4 shown in FIG. 3 includes a main body portion 41 made of a thin plate or film-like sheet body, and support portions 42 and 42 that support the main body portion 41 inside the culture bag 1. The main body 41 is curved starting from both sides near the support portions 42, 42, and the upper side protrudes greatly inside the culture bag 1, while the lower side is small inside the culture bag 1. It is overhanging. Therefore, the shielding sheet 4 shown in FIG. 3 is inclined so that the surface facing the inside of the culture bag 1 faces the liquid surface side of the culture solution 7 and is joined to the inner surface of the side portion of the culture bag 1 to form a bag shape. Presents.

遮蔽シート４の本体部４１は、排気口１１０が袋状の空間に収納されるように、排気口１１０の下方に配置され、排気口１１０と培養液７の液面とを隔てている。遮蔽シート４で排気口１１０と液面とが隔てられることにより、培養液７の液面上に泡沫の層が立ち上がったとき、気泡が排気口１１０に達するのが防止されるようになっている。   The main body 41 of the shielding sheet 4 is disposed below the exhaust port 110 so that the exhaust port 110 is accommodated in the bag-like space, and separates the exhaust port 110 and the liquid surface of the culture solution 7. By separating the exhaust port 110 from the liquid level by the shielding sheet 4, when a foam layer rises on the liquid level of the culture solution 7, the bubbles are prevented from reaching the exhaust port 110. .

遮蔽シート４の本体部４１は、気体を通す通路１２０ｃ，１２０ｄを隙間状に形成している。大きく張り出している本体部４１の上部側には、培養バッグ１の内面との間に、開口面積が大きい通路１２０ｃが残されており、排気口１１０側と培養液７の液面側とを通じている。一方、小さく張り出している本体部４１の下部側には、培養バッグ１の内面との間に、開口面積がより小さい通路１２０ｄが残されており、排気口１１０側と培養液７の液面側とを通じている。通路１２０ｃ，１２０ｄを残して遮蔽シート４が配置されることで、培養液７の液面側から排気口１１０に向かう排気経路が確保され、気相部の換気不全が防止されるようになっている。   The main body 41 of the shielding sheet 4 forms passages 120c and 120d through which gas passes, in a gap shape. A passage 120c having a large opening area is left between the upper portion of the main body portion 41 that protrudes greatly and the inner surface of the culture bag 1, and passes through the exhaust port 110 side and the liquid surface side of the culture solution 7. . On the other hand, a passage 120d having a smaller opening area is left between the lower portion of the main body 41 projecting small and the inner surface of the culture bag 1, and the exhaust port 110 side and the liquid surface side of the culture solution 7 are left. And through. By disposing the shielding sheet 4 while leaving the passages 120c and 120d, an exhaust path from the liquid surface side of the culture solution 7 to the exhaust port 110 is secured, and ventilation failure of the gas phase portion is prevented. Yes.

遮蔽シート４の本体部４１は、気体を通す複数の通路１２０ｃ，１２０ｄを形成しており、複数の通路１２０ｃ，１２０ｄは、培養バッグ１の側面視において、排気口１１０に対して略対称な位置に配置され、排気口１１０の平面視において左右対称な略Ｖ字型に形成されている。そのため、一方が気泡で覆われたり、新鮮培地の流れで塞がれたりするようなことがあっても、他方に気体が通り易い排気経路が確保されるようになっている。   The main body 41 of the shielding sheet 4 forms a plurality of passages 120c and 120d through which gas passes, and the plurality of passages 120c and 120d are substantially symmetrical positions with respect to the exhaust port 110 in a side view of the culture bag 1. And is formed in a substantially V-shape that is symmetrical in the plan view of the exhaust port 110. Therefore, even if one side is covered with bubbles or blocked by the flow of fresh medium, an exhaust path through which gas can easily pass is secured.

遮蔽シート４の本体部４１（本体部４１の谷筋）は、培養バッグ１の側部の内面に架された状態において、培養液７の液面（水平面）に対して傾斜している。遮蔽シート４が傾斜していることにより、遮蔽シート４上に供給された新鮮培地が、遮蔽シート４上を容易に流下することができるようになっている。そのため、遮蔽シート４の内側の表面に付着している気泡は、強い液流で確実に流し落とされる。遮蔽シート４（本体部４１の谷筋）の液面に対する傾斜角度θは、４５度以上９０度未満にすることが好ましく、排気口１１０が液面に露出するのを避ける観点からは、６０度以上にすることがより好ましく、７５度以上にすることがさらに好ましい。   The main body 41 (the valley of the main body 41) of the shielding sheet 4 is inclined with respect to the liquid surface (horizontal plane) of the culture solution 7 in a state of being laid on the inner surface of the side portion of the culture bag 1. Since the shielding sheet 4 is inclined, the fresh medium supplied on the shielding sheet 4 can easily flow down on the shielding sheet 4. Therefore, the bubbles adhering to the inner surface of the shielding sheet 4 are surely washed off with a strong liquid flow. The inclination angle θ with respect to the liquid surface of the shielding sheet 4 (the valley of the main body portion 41) is preferably 45 degrees or more and less than 90 degrees. From the viewpoint of avoiding the exhaust port 110 being exposed to the liquid surface, 60 degrees. More preferably, it is more preferably 75 degrees or more.

図３に示したように、遮蔽シート４を培養バッグ１の側部の内面に架す構造によると、培養バッグ１の天井面が広く開放されるため、攪拌機構や各種のポート等が配置し易くなる利点がある。遮蔽シート４の下部側に、開口面積が小さい通路１２０ｄを形成すれば、培養液７の液面上に生じた気泡が排気口１１０側に侵入し難くなる一方、培地供給管１０によって供給された新鮮培地を液面に速やかに流すことができる。   As shown in FIG. 3, according to the structure in which the shielding sheet 4 is laid on the inner surface of the side portion of the culture bag 1, the ceiling surface of the culture bag 1 is widely opened, so that a stirring mechanism and various ports are arranged. There is an advantage which becomes easy. If a passage 120d having a small opening area is formed on the lower side of the shielding sheet 4, air bubbles generated on the liquid surface of the culture solution 7 are difficult to enter the exhaust port 110 side, while being supplied by the medium supply pipe 10 A fresh medium can be quickly poured over the liquid surface.

遮蔽シート４は、図２及び図３においては、培養容器（培養バッグ１）の内面との間に隙間状の通路を残して排気口１１０と培養液７の液面とを隔てている。しかしながら、遮蔽シート４は、図４に示すように、培養容器（培養バッグ１）の天井部の内面の全体を液面側から隔離し、排気口１１０が培養液７とは別室に収納されるように設けてもよい。すなわち、遮蔽シート４は、排気口１１０と培養液７の液面とが隔てられる限り、適宜の形状で設けることが可能である。   In FIG. 2 and FIG. 3, the shielding sheet 4 separates the exhaust port 110 from the liquid level of the culture solution 7 while leaving a gap-like passage between the shield sheet 4 and the inner surface of the culture vessel (culture bag 1). However, as shown in FIG. 4, the shielding sheet 4 isolates the entire inner surface of the ceiling portion of the culture container (culture bag 1) from the liquid surface side, and the exhaust port 110 is stored in a separate chamber from the culture solution 7. It may be provided as follows. That is, the shielding sheet 4 can be provided in an appropriate shape as long as the exhaust port 110 is separated from the liquid level of the culture solution 7.

図４は、培養容器の天井部の内面の全体を隔離する遮蔽シートを示す断面図である。
図４においては、培養液７が封入された培養バッグ１の上部の部分縦断面が示されている。培養バッグ１は、略円柱形状の容器である。 FIG. 4 is a cross-sectional view showing a shielding sheet that isolates the entire inner surface of the ceiling of the culture vessel.
FIG. 4 shows a partial vertical section of the upper part of the culture bag 1 in which the culture solution 7 is enclosed. The culture bag 1 is a substantially cylindrical container.

図４に示す遮蔽シート４は、薄板状又は膜状のシート体からなる本体部４４と、本体部４４を培養バッグ１の内側に支持する支持部４５，４６とを有している。本体部４４は、培養バッグ１の内径と略同等の最大径を有する逆漏斗形状を呈している。一方の支持部４５は、本体部４４の下部側の周縁に連なって設けられており、培養バッグ１の側部の内面に接合されている。また、他方の支持部４６は、本体部４４の縮径している上部側に連なって設けられており、培養バッグ１の天井部に接合されている。遮蔽シート４は、中央側が支持部４６を介して培養バッグ１の天井部から吊り下げられ、天井面と側部の内面との間に架された状態である。   The shielding sheet 4 shown in FIG. 4 has a main body portion 44 made of a thin plate-like or film-like sheet body, and support portions 45 and 46 that support the main body portion 44 inside the culture bag 1. The main body 44 has a reverse funnel shape having a maximum diameter substantially equal to the inner diameter of the culture bag 1. One support portion 45 is provided continuously to the lower peripheral edge of the main body portion 44, and is joined to the inner surface of the side portion of the culture bag 1. Further, the other support portion 46 is provided continuously to the upper side of the main body portion 44 whose diameter is reduced, and is joined to the ceiling portion of the culture bag 1. The shielding sheet 4 is in a state where the center side is suspended from the ceiling portion of the culture bag 1 via the support portion 46 and is suspended between the ceiling surface and the inner surface of the side portion.

遮蔽シート４の本体部４４は、培養液７の液面よりも上方、且つ、排気口１１０の下方に配置され、排気口１１０と培養液７の液面とを隔てている。遮蔽シート４で排気口１１０と液面とが隔てられることにより、培養液７の液面上に泡沫の層が立ち上がったとき、気泡が排気口１１０に達するのが防止されるようになっている。なお、本体部４４や支持部４５，４６自体の構成は、前記の本体部４１や支持部４２についてと同様である。   The main body 44 of the shielding sheet 4 is disposed above the liquid level of the culture solution 7 and below the exhaust port 110, and separates the exhaust port 110 and the liquid level of the culture solution 7. By separating the exhaust port 110 from the liquid level by the shielding sheet 4, when a foam layer rises on the liquid level of the culture solution 7, the bubbles are prevented from reaching the exhaust port 110. . The configuration of the main body portion 44 and the support portions 45 and 46 themselves is the same as that of the main body portion 41 and the support portion 42 described above.

遮蔽シート４の本体部４４は、気体を通す通路１２０ｅ，１２０ｆを形成している。本体部４４の中央には、排気口１１０側と培養液７の液面側とを連通する貫通孔が設けられ、開口面積が大きい通路１２０ｅを形成している。また、本体部４４の周縁付近には、排気口１１０側と培養液７の液面側とを連通する貫通孔が設けられ、開口面積がより小さい通路１２０ｆを形成している。通路１２０ｅ，１２０ｆが形成されることで、培養液７の液面側から排気口１１０に向かう排気経路が確保され、気相部の換気不全が防止されるようになっている。   The main body 44 of the shielding sheet 4 forms passages 120e and 120f through which gas passes. In the center of the main body 44, a through-hole that communicates the exhaust port 110 side and the liquid surface side of the culture solution 7 is provided to form a passage 120e having a large opening area. Further, in the vicinity of the peripheral edge of the main body portion 44, a through-hole that communicates the exhaust port 110 side and the liquid surface side of the culture solution 7 is provided to form a passage 120f having a smaller opening area. By forming the passages 120e and 120f, an exhaust path from the liquid surface side of the culture solution 7 toward the exhaust port 110 is secured, and ventilation failure of the gas phase portion is prevented.

遮蔽シート４の本体部４４は、気体を通す複数の通路１２０ｅ，１２０ｆを形成しており、複数の通路１２０ｅ，１２０ｆは、排気口１１０に対して略対称な位置に配置されている。そのため、一方が気泡で覆われたり、新鮮培地の流れで塞がれたりするようなことがあっても、他方に気体が通り易い排気経路が確保されるようになっている。   The main body portion 44 of the shielding sheet 4 forms a plurality of passages 120e and 120f through which gas passes, and the plurality of passages 120e and 120f are disposed at substantially symmetrical positions with respect to the exhaust port 110. Therefore, even if one side is covered with bubbles or blocked by the flow of fresh medium, an exhaust path through which gas can easily pass is secured.

遮蔽シート４の本体部４４は、培養バッグ１の天井面と側部の内面との間に架された状態において、培養液７の液面（水平面）に対して傾斜している。遮蔽シート４が傾斜していることにより、遮蔽シート４上に供給された新鮮培地が、遮蔽シート４上を容易に流下することができるようになっている。そのため、遮蔽シート４の上側の表面に付着している気泡は、強い液流で確実に流し落とされる。遮蔽シート４（本体部４４の培地供給管１０の直下の接線）の水平面に対する傾斜角度θは、０度を超え４５度以下にすることが好ましく、培養バッグ１の気相部に収まるように遮蔽シート４の高さを低くする観点からは、３０度以下にすることがより好ましく、１５度以下にすることがさらに好ましい。   The main body 44 of the shielding sheet 4 is inclined with respect to the liquid surface (horizontal plane) of the culture solution 7 in a state of being bridged between the ceiling surface of the culture bag 1 and the inner surface of the side portion. Since the shielding sheet 4 is inclined, the fresh medium supplied on the shielding sheet 4 can easily flow down on the shielding sheet 4. Therefore, the bubbles adhering to the upper surface of the shielding sheet 4 are surely washed off with a strong liquid flow. The inclination angle θ of the shielding sheet 4 (tangent line directly below the medium supply pipe 10 of the main body 44) with respect to the horizontal plane is preferably more than 0 degree and not more than 45 degrees, and is shielded so as to be within the gas phase part of the culture bag 1. From the viewpoint of reducing the height of the sheet 4, it is more preferably 30 degrees or less, and further preferably 15 degrees or less.

図４に示したように、培養バッグ１の天井部の内面の全体を培養液７の液面側から隔離する構造によると、培養バッグ１や遮蔽シート４が可撓性であっても排気口１１０の付近に広い空間が保たれるので、培養バッグ１の気相部の気体が、培養液７の発泡の状態に関わらず排気口１１０から排出され易くなる利点がある。遮蔽シート４の中央に、開口面積が大きい通路１２０ｅを形成すれば、培養バッグ１の上部側に攪拌機構が設置される場合に、シャフト２４を挿通させることができる。また、遮蔽シート４の周縁に、開口面積が小さい通路１２０ｆを一箇所、又は、全周にわたって適宜の間隔で数箇所形成するか、或いは、全周にわたって通路１２０ｆと支持部４５とを交互に配置すれば、培養液７の液面上に生じた気泡が排気口１１０側に侵入し難くなる一方、培地供給管１０によって供給された新鮮培地を液面に速やかに流すことができる。   As shown in FIG. 4, according to the structure in which the entire inner surface of the ceiling portion of the culture bag 1 is isolated from the liquid surface side of the culture solution 7, even if the culture bag 1 and the shielding sheet 4 are flexible, the exhaust port Since a wide space is maintained in the vicinity of 110, there is an advantage that the gas in the gas phase portion of the culture bag 1 can be easily discharged from the exhaust port 110 regardless of the foaming state of the culture solution 7. If the passage 120e having a large opening area is formed in the center of the shielding sheet 4, the shaft 24 can be inserted when the stirring mechanism is installed on the upper side of the culture bag 1. In addition, the passage 120f having a small opening area is formed at one periphery or several places at an appropriate interval on the entire periphery of the shielding sheet 4, or the passages 120f and the support portions 45 are alternately arranged on the entire periphery. In this case, bubbles generated on the liquid level of the culture solution 7 are difficult to enter the exhaust port 110 side, while the fresh medium supplied by the medium supply pipe 10 can be quickly flowed to the liquid level.

遮蔽シート４は、図４においては、培養容器（培養バッグ１）の天井部の内面の全体を培養液７の液面側から隔離している。しかしながら、遮蔽シート４は、図５に示すように、排気口１１０が位置する培養容器（培養バッグ１）の天井部の内面の一部のみを液面側から隔離し、排気口１１０が培養液７とは別室に収納されるように設けてもよい。すなわち、遮蔽シート４は、排気口１１０と培養液７の液面とが隔てられる限り、適宜の形状や大きさで設けることが可能である。   In FIG. 4, the shielding sheet 4 isolates the entire inner surface of the ceiling portion of the culture vessel (culture bag 1) from the liquid surface side of the culture solution 7. However, as shown in FIG. 5, the shielding sheet 4 isolates only a part of the inner surface of the ceiling portion of the culture vessel (culture bag 1) where the exhaust port 110 is located from the liquid surface side, and the exhaust port 110 serves as a culture solution. 7 may be provided so as to be stored in a separate room. That is, the shielding sheet 4 can be provided in an appropriate shape and size as long as the exhaust port 110 and the liquid level of the culture solution 7 are separated.

図５は、培養容器の天井部の内面の一部を隔離する遮蔽シートを示す斜視図である。
図５においては、培養液７が封入された培養バッグ１の上部を斜め上方から視た斜視図が示されている。培養バッグ１は、略円柱形状の容器であり、培養バッグ１の天井面に接合された状態の遮蔽シート４が、培養バッグ１を透視して示されている。 FIG. 5 is a perspective view showing a shielding sheet for isolating a part of the inner surface of the ceiling portion of the culture vessel.
In FIG. 5, the perspective view which looked at the upper part of the culture bag 1 with which the culture solution 7 was enclosed from diagonally upward is shown. The culture bag 1 is a substantially cylindrical container, and the shielding sheet 4 joined to the ceiling surface of the culture bag 1 is shown through the culture bag 1.

図５に示す遮蔽シート４は、薄板状又は膜状のシート体からなる底部（本体部）４７と、底部４７を培養バッグ１の内側に支持する壁部（支持部）４８とを有している。底部４７は、矩形状に設けられており、培養バッグ１の内部で略平面を呈している。壁部４８は、底部４７の各辺に連なって設けられており、底部４７の各辺から立ち上がって培養バッグ１の天井部に接合されている。底部４７と壁部４８と培養バッグ１の天井面とによって、培養バッグ１の気相部に箱状の空間が形成されている。遮蔽シート４は、底部４７が壁部４８を介して培養バッグ１の天井部から吊り下げられ、天井面に架された状態である。   The shielding sheet 4 shown in FIG. 5 has a bottom portion (main body portion) 47 made of a thin or film-like sheet body, and a wall portion (support portion) 48 that supports the bottom portion 47 inside the culture bag 1. Yes. The bottom 47 is provided in a rectangular shape and has a substantially flat surface inside the culture bag 1. The wall portion 48 is provided continuously to each side of the bottom portion 47, rises from each side of the bottom portion 47, and is joined to the ceiling portion of the culture bag 1. A box-shaped space is formed in the gas phase portion of the culture bag 1 by the bottom 47, the wall 48, and the ceiling surface of the culture bag 1. The shielding sheet 4 is in a state where the bottom 47 is suspended from the ceiling of the culture bag 1 via the wall 48 and is suspended on the ceiling.

遮蔽シート４の底部４７は、排気口１１０が箱状の空間に収納されるように、排気口１１０の下方に配置され、排気口１１０と培養液７の液面とを隔てている。遮蔽シート４で排気口１１０と液面とが隔てられることにより、培養液７の液面上に泡沫の層が立ち上がったとき、気泡が排気口１１０に達するのが防止されるようになっている。なお、底部４７や壁部４８自体の構成は、前記の本体部４１や支持部４２についてと同様である。   The bottom 47 of the shielding sheet 4 is disposed below the exhaust port 110 so that the exhaust port 110 is accommodated in a box-shaped space, and separates the exhaust port 110 from the liquid surface of the culture solution 7. By separating the exhaust port 110 from the liquid level by the shielding sheet 4, when a foam layer rises on the liquid level of the culture solution 7, the bubbles are prevented from reaching the exhaust port 110. . The configurations of the bottom 47 and the wall 48 themselves are the same as those of the main body 41 and the support 42 described above.

遮蔽シート４の壁部４８は、気体を通す通路１２０ｇ，１２０ｈを形成している。壁部４８の一面の下端には、排気口１１０側と培養液７の液面側とを連通する貫通孔が設けられ、通路１２０ｇを形成している。また、その対面の上部側には、排気口１１０側と培養液７の液面側とを連通する貫通孔が設けられ、通路１２０ｈを形成している。通路１２０ｇ，１２０ｈが形成されることで、培養液７の液面側から排気口１１０に向かう排気経路が確保され、気相部の換気不全が防止されるようになっている。   The wall portion 48 of the shielding sheet 4 forms passages 120g and 120h through which gas passes. At the lower end of one surface of the wall portion 48, a through-hole that communicates the exhaust port 110 side and the liquid surface side of the culture broth 7 is provided to form a passage 120g. In addition, a through-hole that communicates the exhaust port 110 side with the liquid surface side of the culture solution 7 is provided on the upper side of the facing surface to form a passage 120h. By forming the passages 120g and 120h, an exhaust path from the liquid surface side of the culture solution 7 toward the exhaust port 110 is secured, and insufficiency in the gas phase is prevented.

遮蔽シート４の壁部４８は、気体を通す複数の通路１２０ｇ，１２０ｈを形成しており、複数の通路１２０ｇ，１２０ｈは、排気口１１０に対して略対称な位置に配置されている。そのため、一方が気泡で覆われたり、新鮮培地の流れで塞がれたりするようなことがあっても、他方に気体が通り易い排気経路が確保されるようになっている。   The wall portion 48 of the shielding sheet 4 forms a plurality of passages 120 g and 120 h through which gas passes, and the plurality of passages 120 g and 120 h are arranged at positions that are substantially symmetrical with respect to the exhaust port 110. Therefore, even if one side is covered with bubbles or blocked by the flow of fresh medium, an exhaust path through which gas can easily pass is secured.

遮蔽シート４の底部４７は、培養バッグ１の天井面に架された状態において、培養液７の液面（水平面）に対して傾斜している。遮蔽シート４が傾斜していることにより、遮蔽シート４上に供給された新鮮培地が、遮蔽シート４上を容易に流下することができるようになっている。そのため、遮蔽シート４の上側の表面に付着している気泡は、強い液流で確実に流し落とされる。遮蔽シート４（底部４７）の水平面に対する傾斜角度θは、０度を超え４５度以下にすることが好ましく、排気口１１０が液面に露出するのを避ける観点からは、３０度以下にすることがより好ましく、１５度以下にすることがさらに好ましい。   The bottom 47 of the shielding sheet 4 is inclined with respect to the liquid surface (horizontal plane) of the culture solution 7 in a state of being laid on the ceiling surface of the culture bag 1. Since the shielding sheet 4 is inclined, the fresh medium supplied on the shielding sheet 4 can easily flow down on the shielding sheet 4. Therefore, the bubbles adhering to the upper surface of the shielding sheet 4 are surely washed off with a strong liquid flow. The inclination angle θ of the shielding sheet 4 (bottom 47) with respect to the horizontal plane is preferably more than 0 degree and not more than 45 degrees, and from the viewpoint of avoiding that the exhaust port 110 is exposed to the liquid level, it should be 30 degrees or less. Is more preferable, and it is more preferable to set it to 15 degrees or less.

図５に示したように、培養バッグ１の天井部の内面の一部のみを培養液７の液面側から隔離する構造によると、排気口１１０が収納された箱状の遮蔽シート４の外側に広い空間が確保されるので、培養バッグ１の上部側に、攪拌機構やその他のポート等を自由に設置できる利点がある。箱状の遮蔽シート４の壁部４８に、気体を通す通路１２０ｇを形成すれば、培地供給管１０によって供給された新鮮培地を液面に速やかに流すことができる。   As shown in FIG. 5, according to the structure in which only a part of the inner surface of the ceiling portion of the culture bag 1 is isolated from the liquid surface side of the culture solution 7, the outside of the box-shaped shielding sheet 4 in which the exhaust port 110 is accommodated. Therefore, there is an advantage that a stirring mechanism and other ports can be freely installed on the upper side of the culture bag 1. If a passage 120g through which gas passes is formed in the wall portion 48 of the box-shaped shielding sheet 4, the fresh medium supplied by the medium supply pipe 10 can be quickly flowed to the liquid surface.

次に、本発明の他の実施形態に係るシングルユース培養装置について説明する。   Next, a single-use culture apparatus according to another embodiment of the present invention will be described.

図６は、本発明の他の実施形態に係るシングルユース培養装置の全体構成を示す断面図である。
図６に示すように、本実施形態に係るシングルユース培養装置２００は、前記のシングルユース培養装置１００と同様に、培養バッグ（培養容器）１と、ハウジング（ハウジング部）２と、支持架台３と、遮蔽シート４と、攪拌駆動用モータ５と、液中通気用ガス供給管（液中通気手段）８と、気相通気用ガス供給管９と、培地供給管１０と、培養液排出管１１と、ガス排出管１２と、スパージャ１３と、ガス用フィルタ１４と、センサ１５と、位置固定化支持具１６（１６ａ，１６ｂ）と、液中通気用ガス供給装置１７と、気相通気用ガス供給装置１８と、制御装置１９とを備えている。 FIG. 6 is a cross-sectional view showing the overall configuration of a single-use culture apparatus according to another embodiment of the present invention.
As shown in FIG. 6, the single-use culture apparatus 200 according to the present embodiment is similar to the single-use culture apparatus 100 described above, the culture bag (culture container) 1, the housing (housing part) 2, and the support frame 3. A shielding sheet 4, a stirring drive motor 5, a submerged aeration gas supply pipe (submerged aeration means) 8, a gas phase aeration gas supply pipe 9, a culture medium supply pipe 10, and a culture solution discharge pipe. 11, gas discharge pipe 12, sparger 13, gas filter 14, sensor 15, position fixing support 16 (16 a, 16 b), submerged aeration gas supply device 17, and vapor phase aeration A gas supply device 18 and a control device 19 are provided.

本実施形態に係るシングルユース培養装置２００が、前記のシングルユース培養装置１００と異なる点は、磁性カップリング部材２２，２３を介してシャフト２４を回転させる攪拌方式に代えて、培養バッグ１自体を旋回させて振盪する振盪式の攪拌方式が採用されている点である。   The single-use culture apparatus 200 according to the present embodiment is different from the single-use culture apparatus 100 described above in that the culture bag 1 itself is replaced with a stirring method that rotates the shaft 24 via the magnetic coupling members 22 and 23. A shaking-type stirring method that swirls and shakes is adopted.

図６に示すように、シングルユース培養装置２００においては、ハウジング２の底部に攪拌駆動用モータ５が連結されている。攪拌駆動用モータ５は、回転軸が偏心してハウジング２と連結されており、ハウジング２を偏心回転させることができる。攪拌駆動用モータ５が駆動されると、ハウジング２が偏心円運動することによって、培養バッグ１内の培養液７に旋回流が生じるようになっている。   As shown in FIG. 6, in the single-use culture apparatus 200, a stirring drive motor 5 is connected to the bottom of the housing 2. The agitation drive motor 5 is connected to the housing 2 with its rotational axis eccentric, and can rotate the housing 2 eccentrically. When the agitation drive motor 5 is driven, the housing 2 moves eccentrically so that a swirling flow is generated in the culture solution 7 in the culture bag 1.

シングルユース培養装置２００においては、前記のシングルユース培養装置１００と同様に、遮蔽シート４が培養液７の液面と排気口１１０とを隔てているので、液面に生じた泡沫の層が遮蔽シート４よりも上方に成長するのが妨げられる。そのため、気泡が排気口１１０に達し難くなり、排気路が閉塞するのが防止される。また、遮蔽シート４上に気泡が付着したとしても、培地供給管１０から新鮮培地を供給することで排除できるため、気泡が排気口１１０に達するのを能動的に阻止することができる。   In the single-use culture apparatus 200, as in the single-use culture apparatus 100, the shielding sheet 4 separates the liquid surface of the culture solution 7 from the exhaust port 110, so that the foam layer generated on the liquid surface is shielded. It is prevented from growing above the sheet 4. Therefore, it is difficult for bubbles to reach the exhaust port 110 and the exhaust path is prevented from being blocked. Further, even if bubbles adhere to the shielding sheet 4, it can be eliminated by supplying a fresh medium from the medium supply pipe 10, so that bubbles can be actively prevented from reaching the exhaust port 110.

シングルユース培養装置２００において、遮蔽シート４は、培養バッグ１の天井面に架してもよいし、培養バッグ１の内部の側面に架してもよい。また、培養バッグ１の天井面の全体を液面側から隔離してもよいし、培養バッグ１の天井面の一部のみを液面側から隔離してもよい。また、その他、遮蔽シート４や培地供給管１０等については、前記のシングルユース培養装置１００と同様にして、配置及び構成することができる。培養バッグ１には、シャフト２４が挿通されないため、図４に示すように、培養バッグ１の天井面の全体を液面側から隔離する場合には、遮蔽シート４の中央に開口面積が大きい通路１２０ｅを形成する必要が無い。   In the single-use culture apparatus 200, the shielding sheet 4 may be hung on the ceiling surface of the culture bag 1 or on the inner side surface of the culture bag 1. Moreover, the whole ceiling surface of the culture bag 1 may be isolated from the liquid surface side, or only a part of the ceiling surface of the culture bag 1 may be isolated from the liquid surface side. In addition, the shielding sheet 4 and the medium supply pipe 10 can be arranged and configured in the same manner as the single-use culture apparatus 100 described above. Since the shaft 24 is not inserted into the culture bag 1, as shown in FIG. 4, when the entire ceiling surface of the culture bag 1 is isolated from the liquid surface side, a passage having a large opening area in the center of the shielding sheet 4 There is no need to form 120e.

以上、本発明の実施形態について説明したが、本発明は、前記の実施形態に限定されるものではなく、本発明の趣旨を逸脱しない範囲において種々の変更が可能である。例えば、本発明は、必ずしも前記の実施形態が備える全ての構成を備えるものに限定されるものではない。或る実施形態の構成の一部を他の実施形態の構成に置き換えたり、或る実施形態の構成の一部を他の実施形態に追加したり、或る実施形態の構成の一部を省略したりすることも可能である。   Although the embodiments of the present invention have been described above, the present invention is not limited to the above-described embodiments, and various modifications can be made without departing from the spirit of the present invention. For example, the present invention is not necessarily limited to the one having all the configurations included in the embodiment. A part of a configuration of an embodiment is replaced with a configuration of another embodiment, a part of a configuration of an embodiment is added to another embodiment, or a part of a configuration of an embodiment is omitted. It is also possible to do.

例えば、前記のシングルユース培養装置１００，２００において、遮蔽シート４は、培養バッグ１に対して、溶着して接合されていてもよいし、接着剤により接着して接合されていてもよい。或いは、培養バッグ１の内外を貫通して備えられる天板２１や、ポートコネクタＣ等と溶着又は接着されていてもよい。また、遮蔽シート４は、可撓性を呈するように設けられてもよいし、剛性を呈するように設けられてもよい。例えば、培養バッグ１と同等の折り畳み可能な可撓性を持たせてもよいし、可撓性を有しつつも自重で撓まない程度の剛性を持たせてもよいし、外力により容易に変形しない程度の剛性を持たせてもよい。   For example, in the single-use culture apparatuses 100 and 200 described above, the shielding sheet 4 may be welded and bonded to the culture bag 1 or may be bonded and bonded with an adhesive. Alternatively, it may be welded or bonded to the top plate 21, the port connector C, or the like provided through the culture bag 1. Moreover, the shielding sheet 4 may be provided so as to exhibit flexibility, or may be provided so as to exhibit rigidity. For example, the foldable flexibility equivalent to that of the culture bag 1 may be provided, or the flexible bag may be provided with rigidity that does not bend due to its own weight while being flexible. You may give the rigidity of the grade which does not deform | transform.

また、前記のシングルユース培養装置１００，２００において、遮蔽シート４は、毛管現象を呈さない程度の孔径の孔部が形成されていてもよい。孔部の形状、個数及び配列は、気泡が侵入しない限り適宜のものとすることができる。また、遮蔽シート４の支持部４２，４５，４６、及び、壁部４８は、紐状、柱状、蛇腹状、折板状等の適宜の形状であってよい。また、気体を通す通路は、少なくとも一箇所あれば、形状、個数及び配置は、適宜のものとすることができる。   In the single-use culture apparatuses 100 and 200, the shielding sheet 4 may be formed with a hole having a diameter that does not exhibit capillary action. The shape, number and arrangement of the holes can be set appropriately as long as bubbles do not enter. Moreover, the support parts 42, 45, 46 and the wall part 48 of the shielding sheet 4 may have an appropriate shape such as a string shape, a column shape, a bellows shape, or a folded plate shape. In addition, if there is at least one passage through which gas passes, the shape, number, and arrangement can be set appropriately.

また、前記のシングルユース培養装置１００，２００において、遮蔽シート４の本体部４１，４４、支持部４２，４５，４６、底部４７、及び、壁部４８は、互いに一体に設けられてもよいし、同じ材料で別体に設けられて接着又は溶着されてもよいし、異なる材料で設けられて接着又は溶着されてもよい。本体部４１，４４や、底部４７に可撓性、支持部４２，４５，４６、及び、壁部４８に剛性を持たせてもよいし、これと反対に、剛性や可撓性を持たせてもよい。   In the single-use culture apparatuses 100 and 200, the main body portions 41 and 44, the support portions 42, 45, and 46, the bottom portion 47, and the wall portion 48 of the shielding sheet 4 may be provided integrally with each other. They may be provided separately in the same material and bonded or welded, or may be provided in different materials and bonded or welded. The body portions 41 and 44 and the bottom portion 47 may be flexible, and the support portions 42, 45, and 46 and the wall portion 48 may be rigid. Conversely, the body portions 41 and 44 and the bottom portion 47 may be rigid and flexible. May be.

また、前記のシングルユース培養装置１００，２００において、排気口１１０の配置及び構造は特に制限されない。例えば、排気口１１０は、チューブ状の配管の管端では無く、培養容器の天井部や側部に内外を貫通して接合されたポート等に直接に形成されていてもよい。   In the single-use culture apparatuses 100 and 200, the arrangement and structure of the exhaust port 110 are not particularly limited. For example, the exhaust port 110 may be formed not directly at the tube end of the tubular pipe, but directly at a port or the like that penetrates the inside and outside of the ceiling or side of the culture vessel.

また、前記のシングルユース培養装置１００，２００において、折り畳み可能な可撓性を有する培養バッグ１に代えて、ボトル、ベッセル、フラスコ等の剛性が高いシングルユースの培養容器を備えてもよい。このとき、遮蔽シート４は、前記と同様にして、配置及び構成してよく、可撓性を呈するように設けられてもよいし、剛性を呈するように設けられてもよい。   The single-use culture apparatuses 100 and 200 may include a single-use culture container having high rigidity such as a bottle, a vessel, or a flask instead of the flexible culture bag 1 that can be folded. At this time, the shielding sheet 4 may be arranged and configured in the same manner as described above, and may be provided so as to exhibit flexibility or may be provided so as to exhibit rigidity.

１００ シングルユース培養装置
１ 培養バッグ（培養容器）
２ ハウジング（ハウジング部）
３ 支持架台
４ 遮蔽シート
５ 攪拌駆動用モータ
８ 液中通気用ガス供給管（液中通気手段）
９ 気相通気用ガス供給管
１０ 培地供給管（給液管）
１１ 培養液排出管
１２ ガス排出管
１３ スパージャ
１４ ガス用フィルタ
１５ センサ
１６ 位置固定化支持具
１７ 液中通気用ガス供給装置
１８ 気相通気用ガス供給装置
１９ 制御装置
２１ 天板
２２ 磁性カップリング部材
２３ 磁性カップリング部材
２５ 攪拌翼
１１０ 排気口
Ｃ ポートコネクタ
ｎ ノズル（ノズル部） 100 Single-use culture equipment 1 Culture bag (culture container)
2 Housing (housing)
3 Supporting frame 4 Shielding sheet 5 Stirring drive motor 8 Gas supply pipe for liquid aeration (liquid aeration means)
9 Gas supply pipe for gas phase ventilation 10 Medium supply pipe (liquid supply pipe)
DESCRIPTION OF SYMBOLS 11 Culture liquid discharge pipe 12 Gas discharge pipe 13 Sparger 14 Gas filter 15 Sensor 16 Position fixation support 17 Gas supply apparatus 18 for liquid ventilation | gas_flowing Gas supply apparatus 19 for gaseous-phase ventilation 19 Control apparatus 21 Top plate 22 Magnetic coupling member 23 Magnetic coupling member 25 Stirrer blade 110 Exhaust port C Port connector n Nozzle (nozzle part)

Claims (8)

培養液を封入可能な培養容器と、
前記培養容器内の下部に配置され、前記培養容器に封入された前記培養液に酸素を液中通気する液中通気手段と、
前記培養容器の上部に位置し、前記培養容器内の気体を排気する排気口と、
前記排気口の下方に配置され、前記排気口と前記培養液の液面とを隔てる遮蔽シートと、
を備えるシングルユース培養装置。 A culture vessel capable of enclosing a culture solution;
A submerged aeration means disposed in the lower part of the culture vessel, for ventilating oxygen into the culture broth enclosed in the culture vessel;
An exhaust port located at the top of the culture vessel and exhausting the gas in the culture vessel;
A shielding sheet that is disposed below the exhaust port and separates the exhaust port and the liquid level of the culture solution;
A single-use culture device. 前記培養容器が、折り畳み可能な可撓性を有する培養バッグであり、
前記培養バッグを収容して支持するハウジング部をさらに備える請求項１に記載のシングルユース培養装置。 The culture container is a foldable flexible culture bag;
The single-use culture apparatus according to claim 1, further comprising a housing portion that accommodates and supports the culture bag. 前記培養容器に接続され、前記培養容器内に液体を供給する給液管を備え、
前記給液管の先端が、前記遮蔽シートの上方に位置する請求項１に記載のシングルユース培養装置。 A liquid supply pipe connected to the culture vessel and supplying a liquid into the culture vessel;
The single-use culture apparatus according to claim 1, wherein a tip of the liquid supply pipe is positioned above the shielding sheet. 前記給液管が、前記新鮮培地を前記遮蔽シート上に噴出させるノズル部を有する請求項３に記載のシングルユース培養装置。   The single-use culture apparatus according to claim 3, wherein the liquid supply pipe has a nozzle portion that ejects the fresh medium onto the shielding sheet. 前記遮蔽シートが、撥水性の表面を有する請求項１に記載のシングルユース培養装置。   The single-use culture apparatus according to claim 1, wherein the shielding sheet has a water-repellent surface. 前記遮蔽シートが、前記気体を通す複数の通路を形成している請求項１に記載のシングルユース培養装置。   The single-use culture apparatus according to claim 1, wherein the shielding sheet forms a plurality of passages through which the gas passes. 前記遮蔽シートが、前記培養容器の天井面に架されている請求項１に記載のシングルユース培養装置。   The single-use culture apparatus according to claim 1, wherein the shielding sheet is suspended on a ceiling surface of the culture container. 培養液を封入可能な培養容器と、
前記培養容器内の下部に配置され、前記培養容器に封入された前記培養液に酸素を液中通気する液中通気手段と、
前記培養容器の上部に位置し、前記培養容器内の気体を排気する排気口と、
前記排気口の下方に配置され、前記排気口と前記培養液の液面とを隔てる遮蔽シートと、
前記培養容器に接続され、前記培養容器内に液体を供給する給液管と、
を備え、
前記給液管の先端が、前記遮蔽シートの上方に位置するシングルユース培養装置において、
前記培養容器に前記培養液及び細胞を封入し、
前記培養液に液中通気しながら前記細胞を培養し、
前記細胞の培養中に前記遮蔽シート上に新鮮培地又は消泡剤を供給する培養方法。 A culture vessel capable of enclosing a culture solution;
A submerged aeration means disposed in the lower part of the culture vessel, for ventilating oxygen into the culture broth enclosed in the culture vessel;
An exhaust port located at the top of the culture vessel and exhausting the gas in the culture vessel;
A shielding sheet that is disposed below the exhaust port and separates the exhaust port and the liquid level of the culture solution;
A liquid supply pipe connected to the culture vessel and supplying a liquid into the culture vessel;
With
In the single-use culture apparatus in which the tip of the liquid supply pipe is located above the shielding sheet,
Enclosing the culture medium and cells in the culture vessel;
Culturing the cells while aeration in the culture medium,
A culture method for supplying a fresh medium or an antifoaming agent onto the shielding sheet during the cultivation of the cells.
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