JP2017525339A - 1又は複数の生物由来の染色体の断片をアセンブルする方法、装置、及びコンピュータプログラム - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、一般に、ゲノムアセンブリの分野に関する。より詳細には、本発明は、ハイスループット配列決定と組み合わせた染色体コンフォメーションキャプチャを用いて、1又は複数の生物の1又は複数のゲノムをアセンブルするための方法、装置、及びコンピュータプログラムに関する。
−前記少なくとも1つの染色体のDNA領域間の接触頻度を表す第1の値を取得する工程であり、ここで前記第1の値が、対応するDNA領域間の距離を表す第2の値と関連づけられる、工程;及び
−反復的に以下の工程を実行する工程:
−前記第1及び第2の値に基づき、かつ、DNA領域間の接触確率と、対応するDNA領域間の距離とを関連付ける理論モデルに基づいて、ゲノム構造を更新する工程であり、更新されたゲノム構造が、前記少なくとも1つの生物の前記少なくとも1つの染色体の前記少なくとも1つの断片の実際のゲノム構造を表す、工程;及び
−更新されたゲノム構造の関数として、前記理論モデルのパラメータを更新する工程、
を含む方法である。
−少なくとも1つの染色体の少なくとも1つの断片を含む調製された生物学的サンプルの染色体の断片を架橋する工程;
−少なくとも2つの異なるタイプの制限酵素を用いて、架橋された染色体を断片化する工程;及び
−断片化工程から生じる染色体の断片を配列決定する工程。
−少なくとも1つの染色体の少なくとも1つの断片を含む生物学的サンプルを調製する工程;
−調製された生物学的サンプルの染色体の断片を架橋する工程;
−少なくとも2つの異なるタイプの制限酵素を用いて架橋された染色体を断片化する工程;
−断片化工程から生じる染色体の断片を配列決定する工程;及び
−染色体の配列決定された断片をアセンブルする工程。
−生物学的サンプルから独立したウイルス粒子の集団を抽出する工程;
−請求項1〜17のいずれか1項に記載の方法に基づいて、独立したウイルス粒子の抽出集団のウイルスゲノム配列を同定し、同定されたウイルスゲノム配列がウイロームを形成する工程;
−生物学的サンプルのゲノムを形成するための請求項1〜17のいずれか一項に記載の方法に基づいて、ウイルス粒子の集団が抽出された生物学的サンプル中の細菌、プラスミド及びウイルスゲノム配列を同定する工程;及び、
−生物学的サンプルのウイロームとゲノムとの間の対応関係を、物理的接触に基づいて確立する工程。
本発明の一実施形態によれば、染色体コンフォメーションのメタゲノムキャプチャー(Meta3C)実験により測定できる、類似の細胞コンパートメントを共有する染色体が経験する頻繁な物理的接触は、メタ個体群(metapopulation)に存在するゲノムのより広範なスキャフォールドをアセンブルするために使用され得る。Meta3Cライブラリは、接触頻度に基づく広範なDNA領域をアセンブルすることが可能であるだけでなく、予備的に新規(de novo)アセンブル工程を実施するにより、読み取りが、それらを生成するために直接使用可能である。
に従うと仮定される。
−CPUと呼ばれるマイクロプロセッサのような中央処理装置1311;
−本発明を実施するためのコンピュータプログラムを記憶するための、ROMと示される、読み出し専用メモリ1307;
−本発明の実施形態の方法の実行可能コード並びに本発明の実施形態によるゲノム構造決定方法を実施するために必要な変数及びパラメータを記録するように適合されたレジスタを記憶するための、RAMと示される、ランダムアクセスメモリ1312;及び、
−通信ネットワーク1303に接続され、処理されるデジタルデータを送信可能な通信インターフェース1302。
−本発明の1つ又は複数の実施形態の方法を実施するためのコンピュータプログラムと、本発明の1つ又は複数の実施形態の実施中に使用又は生成されるデータとを格納するための、ハードディスクなどのデータ記憶手段1304;
−ディスクドライブはディスク1306からのデータの読み出し、又は前記ディスクへのデータの書き込みに適した、ディスク1306に対するディスクドライブ1305;
−キーボード1310又は任意の他のポインティング手段を用いて、データを表示する、及び/又はユーザとのグラフィカルインタフェースとして機能するための画面1309。
Claims (25)
- 少なくとも1つのライブラリの全てのDNAフラグメントを表す未処理のサブ配列のセットに基づき、少なくとも1つの生物の少なくとも1つの染色体の少なくとも1つの断片を表す少なくとも1つの配列をアセンブルするためのコンピュータのための方法であって、前記少なくとも1つのライブラリが、前記少なくとも1つの染色体の連続したヌクレオチドの鎖を含むDNAフラグメントを含み、かつ、前記少なくとも1つの染色体の連続するヌクレオチドの少なくとも2つの鎖の組合せを含むDNAフラグメントを含むものであり、
前記方法が、以下の工程:
−前記少なくとも1つの染色体のDNA領域間の接触頻度を表す第1の値を得る工程であり、ここで前記第1の値が、対応するDNA領域間の距離を表す第2の値と関連づけられる、工程;及び
−反復して以下の工程を実行する工程:
−前記第1及び第2の値に基づいて、及び、DNA領域間の接触確率と対応するDNA領域間の距離とを関連付ける理論モデルに基づいて、ゲノム構造を更新する工程であって、更新されたゲノム構造が、前記少なくとも1つの生物の前記少なくとも1つの染色体の前記少なくとも1つの断片の実際のゲノム構造を表す、工程;及び
−前記更新されたゲノム構造の関数として、前記理論的モデルのパラメータを更新する工程、
を含む、方法。 - 2つのDNA領域間の距離が、所定の経路に沿った2つのDNA領域間の距離及び/又は2つのDNA領域間の空間距離の関数として決定される、請求項1に記載の方法。
- 少なくとも1つのライブラリの全てのDNAフラグメントを表す未処理のサブ配列を、複数のビンに分割する工程をさらに含む、請求項1又は2に記載の方法。
- 複数のゲノム候補構造を生成する工程と、生成された候補ゲノム構造のそれぞれについて、実際のゲノム構造に近い明示的尤度値を計算する工程をさらに含む、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
- 前記複数のゲノム候補構造を生成する工程が、転座、欠失、逆位及び重複の少なくとも1つの変異を含む所定の構造変化に基づく、請求項4に記載の方法。
- 前記生成されたゲノム候補構造の1つが、複数試行メトロポリスタイプ(multiple try Metropolis type)の法則に従って、関連する尤度値の関数として選択される、請求項4又は請求項5に記載の方法。
- 前記ゲノム候補構造が、ビンの構造的変異によって決定される、請求項3に従属する請求項4〜6のいずれか1項に記載の方法。
- 前記理論モデルパラメータを更新する工程が、ギブスサンプラタイプ(Gibbs sampler type)のアルゴリズムに基づく、請求項1〜7のいずれか1項に記載の方法。
- 前記理論モデルが、DNA領域間の染色体内及び染色体間接触からDNA領域間の染色体内接触を識別するために使用される閾値を表す少なくとも1つのパラメータを含む、請求項1〜8のいずれか1項に記載の方法。
- 前記理論的モデルは、DNA領域間の染色体内接触又はDNA領域間の染色体内及び染色体間接触と、異なる生物間の接触とを識別するために使用される閾値を表す少なくとも1つのパラメータを含む、請求項1〜9のいずれか1項に記載の方法。
- 前記少なくとも1つのライブラリのDNAフラグメントをクラスタ化する工程をさらに含み、各クラスタが特定の生物に関連し、クラスタ化されたDNAフラグメントに対応する未処理のサブ配列がクラスタベースの配列決定用に処理される、請求項1〜9のいずれか1項に記載の方法。
- 前記ライブラリのDNAフラグメントをクラスタ化する工程が、ルーバインタイプ(Louvain type)のアルゴリズムに基づく、請求項11に記載の方法。
- 前記少なくとも1つの生物の前記少なくとも1つの染色体の前記少なくとも1つの断片を表す前記少なくとも1つの配列中の少なくとも1つのDNA配列を同定する工程をさらに含む、請求項1〜12のいずれか1項に記載の方法。
- 少なくとも1つの生物の全体的な染色体構造を特徴付けるための、請求項1〜12のいずれか1項に記載の方法であって、全体的な染色体構造が対応するゲノムの三次元構造から特徴付けられる、前記少なくとも1つの生物の代謝状態を推測する工程をさらに含む、方法。
- 生物学的サンプル中の真核細胞、原核細胞、又は微生物のゲノムを同定するための方法であって、前記方法が、請求項1〜14のいずれか1項に記載の少なくとも1つの生物の少なくとも1つの染色体の少なくとも1つの断片をアセンブルする方法の各工程を含む、方法。
- 生物学的サンプル中の微生物のゲノムを同定するための請求項15に記載の方法であり、前記微生物が、寄生生物、細菌、古細菌、真菌、酵母及びウイルスタイプの1つである、方法。
- 請求項1〜16のいずれか1項に記載の方法であり、さらに、以下の工程:
−少なくとも1つの染色体の少なくとも1つの断片を含む、調製された生物学的サンプルの染色体断片を架橋する工程;
−少なくとも2つの異なるタイプの制限酵素を用いて架橋された染色体を断片化する工程;及び
−断片化工程から得られる染色体の断片を配列決定する工程、
を含む方法。 - 少なくとも1つの生物の少なくとも1つの染色体の少なくとも1つの断片をアセンブルする方法であり、前記方法が、以下の工程:
−少なくとも1つの染色体の少なくとも1つの断片を含む生物学的サンプルを調製する工程;
−調製された生物学的サンプルの染色体の断片を架橋する工程;
−少なくとも2つの異なるタイプの制限酵素を用いて架橋された染色体を断片化する工程;
−断片化工程から生じる染色体の断片を配列決定する工程;及び
−染色体の配列決定された断片をアセンブルする工程、
を含む、方法。 - 調製された生物学的サンプルの染色体の断片の架橋が、3%の最終濃度を有するホルムアルデヒドを用いて実施される、請求項18に記載の方法。
- 架橋した染色体のガラスビーズ又はセラミックビーズに基づく機械的溶解工程をさらに含み、機械的溶解が、少なくとも2つの異なるタイプの制限酵素を用いて断片化する前に実施される、請求項18又は19に記載の方法。
- 生物学的サンプルのウイローム(virome)とゲノムとの間の対応関係(correspondence)を確立する方法であり、前記方法が以下の工程:
−生物学的サンプルから独立したウイルス粒子の集団を抽出する工程;
−請求項1〜17のいずれか1項に記載の方法に基づいて、独立したウイルス粒子の抽出された集団のウイルスゲノム配列を同定する工程であって、同定されたウイルスゲノム配列がウイロームを形成する、工程;
−生物学的サンプル中の細菌、プラスミド及びウイルスゲノム配列を同定する工程であって、ここで、生物学的サンプルのゲノムを形成するために、請求項1〜17のいずれか1項に記載の方法に基づいて、ウイルス粒子の集団が抽出されたものである、工程;及び
−生物学的サンプルのウイロームとゲノムとの間の対応関係を、物理的接触に基づいて確立する工程、
を含む、方法。 - 前記ウイロームがファージオーム(phageome)であり、かつ、前記ウイルス粒子がバクテリオファージ粒子である、請求項21に記載の方法。
- 抽出されたバクテリオファージ粒子集団のバクテリオファージを溶解する工程、溶解されたバクテリオファージのDNAを抽出する工程、及び抽出されたDNAからクロマチンを再構築する工程、をさらに含む、請求項22に記載の方法。
- 請求項1〜23のいずれか1項に記載の方法の各工程を実行するように構成された手段を含む装置。
- プログラム可能な装置のためのコンピュータプログラム製品であり、プログラムがプログラム可能な装置によってロードされて実行された場合、前記コンピュータプログラム製品が、請求項1〜16のいずれか一項に記載の方法の各工程を実行するための命令を含む、コンピュータプログラム製品。
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