JP2017523957A - Ｄ−アルギニル−２，６−ジメチル−ｌ−チロシル−ｌ−リシル−ｌ−フェニルアラニンアミドの製造方法 - Google Patents

Abstract

本発明は、虚血性再灌流障害に対するミトコンドリアを標的とした療法をはじめとする、一般的な疾患および希少疾患の両方に対して使用される有効成分である、Ｄ−アルギニル−２，６−ジメチル−Ｌ−チロシル−Ｌ−リシル−Ｌ−フェニルアラニンアミドの液相合成の方法に関する。

Description

技術分野
本発明は、虚血性再灌流障害に対するミトコンドリアを標的とした療法をはじめとする、一般的な疾患および希少疾患の両方に対して、治験薬の商標名 Ｂｅｎｄａｖｉａ（登録商標）およびＯｃｕｖｉａ（登録商標）のもとで、Ｓｔｅａｌｔｈ ＢｉｏＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓによって開発された有効成分である、式（Ｉ）のＤ−アルギニル−２，６−ジメチル−Ｌ−チロシル−Ｌ−リシル−Ｌ−フェニルアラニンアミド（Ｈ−Ｄ−Ａｒｇ−（２，６−ジメチル）Ｔｙｒ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ_２と略称され、開発コード ＳＳ−３１、ＭＴＰ−１３１、ＲＸ−３１）を液相合成する方法に関する。

背景
この生成物は、いわゆる「Ｓｚｅｔｏ−Ｓｃｈｉｌｌｅｒペプチド」型に属する。Ｓｚｅｔｏ−Ｓｃｈｉｌｌｅｒペプチドまたは「ＳＳペプチド」は、細胞膜を容易に貫通することができる、US 6,703,483およびUS 7,576,061に開示されているような、小さい、芳香族-陽イオン性、水溶性、高極性のペプチドである。芳香族-陽イオン性ペプチドは、ペプチド結合により共有結合した、最少で２個のアミノ酸を含み、好ましくは、最少で４個のアミノ酸を含む。アミノ酸の最大数は、ペプチド結合により共有結合した約２０個のアミノ酸である。EP 2012/2436390によって記載されているように、最適には、ＳＳペプチドに存在するアミノ酸の数は、４個である。

Ｂｅｎｄａｖｉａ（登録商標）は、急性心筋梗塞（ＡＭＩ）を有する患者における虚血性再灌流障害の治療用途、高血圧症における急性腎障害（ＡＫＩ）および腎臓の微小血管機能障害の治療用途、骨格筋の機能障害の治療用途、ミトコンドリア筋症の治療用途、ならびに慢性心不全の治療用途について、試験されている。しばしば若年成人に突然の失明をもたらす、重篤な遺伝性疾患である、レーバー遺伝性視神経萎縮症（ＬＨＯＮ）を治療するために、Ｏｃｕｖｉａの可能性を評価する治験が進行中である。

ミトコンドリアは、細胞の動力室であり、生命を維持し、成長を支えるために我々の体に必要なエネルギーの９０％超を担っている。ミトコンドリアに由来するエネルギー機構は、健康生理機能を維持し、疾患を防止する。多くの一般的な疾患および稀な疾患では、機能不全ミトコンドリアが、疾患の進行の重要な要素である。

Ｄ−アルギニル−２，６−ジメチル−Ｌ−チロシル−Ｌ−リシル−Ｌ−フェニルアラニンアミドは、抗酸化作用を示し、ミトコンドリアの内膜中に集中される、細胞透過性のミトコンドリア標的のペプチドである。化合物（＜１ｎＭ）は、細胞内の活性酸素種を著しく減少させ、ミトコンドリアの活力を高め、Ｎ２ＡとＳＨ−ＳＹ５Ｙの両方の神経細胞系において、ｔＢＨＰ誘導アポトーシスを防止した。ラットでは、片側尿管閉塞の１日前、およびその後１４日間毎日の腹腔内処置（１および３ｍｇ／ｋｇ）によって、尿細管損傷、マクロファージの浸潤および間質性線維症が著しく減少した。化合物（３ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．、２週間ｑｄ）は、ストレプトゾトシンにより引き起こされるマウスの膵島におけるアポトーシスおよびインスリンの減少も防止した。

筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）のＧ９３Ａマウスモデルにおいて実施された、さらなる研究によって、化合物（５ｍｇ／ｋｇ／日 ｉ．ｐ． ３０日齢で開始）が、疾患の発症を著しく遅延させたことが実証された。ＡＬＳの治療に対して、潜在的に有用であり、加齢および酸化ストレスに伴う疾患の治療において有益でありうる。

ここ数年、式Iに示される、ペプチド Ｈ−Ｄ−Ａｒｇ−（２，６−ジメチル）Ｔｙｒ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ_２と、その治療活性が、いくつかの特許出願中に開示され、また、特許請求されている。

EP 2436390、US 2011/0245182およびUS 2011/0245183は、Ｓｚｅｔｏ−Ｓｃｈｉｌｌｅｒペプチドを含む、それぞれ疼痛管理または皮膚老化防止剤のために皮膚に適用するための局所麻酔組成物を特許請求しており、ＳＳ−３１は、有効成分として具体的に特許請求されている。一連の固相合成が、好ましい調製方法として示されている。

US 7,718,620は、有効量の芳香族陽イオン性ペプチドを投与することによって、哺乳動物における腎臓の虚血再灌流傷害を治療または防止する方法を特許請求している。ＳＳ−３１は、有効成分として具体的に特許請求されている。

WO 2005/001023は、分子を細胞に送達するための一般的方法、ならびに、分子およびＤ−Ａｒｇ−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ_２タイプの芳香族-陽イオン性ペプチドを含む、担体複合体を開示している。請求項１８には、テトラペプチドＳＳ−３１が、前記方法に有用な物質として、具体的に特許請求されている。

WO 2012/174117およびWO 2014/210056は、ＳＳペプチドに基づく治療用組成物および、その活性剤として、芳香族-陽イオン性ペプチドであるＤ−Ａｒｇ−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ_２を特許請求している。

WO 2013/086020、WO 2004/070054およびWO 2005/072295は、それを必要とする、哺乳動物、摘出臓器、または細胞において、ミトコンドリア透過性遷移を防止し、また、酸化損傷を低減する方法を提供しており、そして、ペプチドが、μオピオイド受容体アゴニスト活性を有さない、すなわち、Ｄ−Ａｒｇ−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ_２である方法を具体的に特許請求している。

WO 2009/108695は、対象の腎臓における血流の減少もしくは阻害、あるいは、造影剤色素等の腎毒性の薬剤への曝露が関連しているであろう、腎損傷から、腎臓を保護する方法を開示している。この方法は、それを必要とする対象に対する有効量の芳香族-陽イオン性ペプチドを、対象に投与することを含み、そして、選択されたペプチドの１つは、Ｄ−Ａｒｇ−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ_２である。

US 6,703,483は、発明者の実験室で広範に使用されてきたプロトコルおよびｐ−メチルベンズヒドリルアミン樹脂、ならびに固相技術を使用して、ＤＡＬＤＡ［Ｈ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ_２］の新規な類似体、すなわちＨ−Ｄｍｔ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ_２を調製するための詳細な手順を開示している。

化合物を調製するための、ほとんどの従来の方法は、通常、治療用途に求められる純度を得るために、クロマトグラフィーによるさらなる精製を具えた、従来から実施されているペプチド固相合成を含んでいる。

クロマトグラフィーによる精製を伴ている固相合成は、時間がかかり、非常に費用がかさみ、そして、工業的規模にスケールアップするのが非常に困難であることがよく知られており、したがって、大規模生産のための方法の開発の必要性は明らかである。化合物は、有機酸塩、例えば、酢酸塩またはトリフルオロ酢酸塩として単離される。

Reddyら、Adv. Exp. Med. Biol.、2009、611、473は、アミノ酸構成要素に対する常用される側鎖保護基を必要とする、式Iの抗酸化ペプチド、ならびにその他の類似物（ＳＳ−０２、ＳＳ−２０）の液相合成について、一般的に記載している。グアニジン基は、ＮＯ_２で保護され、また、Ｌｙｓのε−ＮＨ_２は、Ｃｂｚまたは２−Ｃｌ−Ｃｂｚによって保護された。これらのペプチドは、Ｂｏｃ／Ｃｂｚの化学的性質およびＢＯＰ試薬カップリングを使用して合成された。Ｃ末端から開始して、Ｌｙｓ残基は、（文献の手順［Ueyamaら、Biopolymers、1992、32、1535、PubMed:1457730］に従って、市販のＢｏｃ−Ｌｙｓ（２−Ｃｌ−Ｃｂｚ）−ＯＨから、ＤＣＣ／ＨＯＢｔの存在下、ＮＨ_４ＨＣＯ_３を用いたアミド化、続くＴＦＡへの曝露による、二段階で調製される）Ｈ−Ｌｙｓ（２−Ｃｌ−Ｃｂｚ）−ＮＨ_２として保護した。ＮＯ_２基の存在下での２−Ｃｌ−Ｃｂｚの選択的な除去は、触媒移動水素化分解（ＣＴＨ）を使用して達成された［Gowdaら、Lett. Pept. Sci.、2002、9、153］。

有効なμアゴニスト［Ｄｍｔ］ＤＡＬＤＡの調製と、δオピオイドアゴニスト活性を増強するため、Ｄ−ＡｒｇをＴｉｃで置換して、有効なδアンタゴニストＨ−Ｄｍｔ−Ｔｉｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｚ）−ＯＨへの変換のための、標準的溶液ペプチド合成による段階的な手順が、Balboniら、J. Med. Chem.、2005、48、5608によって記載されている。同様のテトラペプチド［Ｄｍｔ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ_２］のための一般的な合成手順は、Balletら、J. Med. Chem. 2011、54、2467によって記載されている。

同様のＤＡＬＤＡ類似体テトラペプチドは、αアミノ基に対するＢｏｃ保護、ならびに、カップリング剤として、ＤＩＣ／ＨＯＢｔまたはＨＢＴＵ／ＤＩＥＡを使用する、手動の固相技術によって調製された［Berezowskaら、J. Med. Chem.、2009、52、6941；Olmaら、Acta Biochim. Polonica、 2001、48、4、1121；Schillerら、Eur. J. Med. Chem.、2000、35、895］。

固相手法における高い総合的な収量にもかかわらず、プロセスのスケールアップについて、例えば、下記のようないくつかの障害を有している。

ａ．樹脂からペプチドを切断するための、毒性が高く、腐食性の高いフッ化水素の適用、
ｂ．最終工程の成功のために必要であると検証されている、低い積載率（樹脂１ｇ当たり０．３〜０．３５ｍｍｏｌ）、および
ｃ．各工程における過剰量の試薬の使用（３倍量のＤＩＣ、２．４倍量のＨＯＢｔなど）［Ryakhovskyら、Beilstein J. Org. Chem.、2008、4(39)、1、doi：10.376/bjoc.4.39］

概要
本発明は、固相合成またはクロマトグラフィーによる精製のいずれかを回避して、大規模生産により適する、より効率的な方法に関する。本発明の方法は、スキームＡに記載される。

以下の略語が使用される。

Ｄｍｔ＝２，６−ジメチルチロシン；
Ｚ＝ベンジルオキシカルボニル；
ＭｅＳＯ_３Ｈ＝メタンスルホン酸；
Ｂｏｃ＝Ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル；
ＮＭＭ＝Ｎ−メチルモルホリン；
ＴＢＴＵ＝Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウム テトラフルオロボレート；
ＤＭＦ＝ジメチルホルムアミド；
ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸
スキームＡは、アミノ酸のＮ末端に対する一時的な保護として、それぞれ、Ｏ−ベンジル（Ｂｚｌ）基およびベンジルオキシカルボニル（Ｚ）基を使用している、テトラペプチドの主鎖の組み立て（反応スキーム）、それに続く、最終のアシドリシスのための、式１のペプチド１の液相合成のためのプロセスを示す。最終生成物は、有機酸塩、例えば、トリフルオロ酢酸塩として単離される。

この方法は、先行技術に対して注目に値する改善であり、その利点は以下のように要約することができる：
・ 合成は液相で行われ、特別な装置を必要とせずに、工業規模にスケールアップすることが可能である；
・ 構築単位中の保護基を選択することにより、各工程で非常に簡単な脱保護を伴う平易な合成を可能にし、望ましくない副生物の形成を最小化する；
・ 各中間体は結晶化することができ、次の工程に移行しない不純物の除去を可能とする；
・ 各中間体の純度は、非常に高く、通常、９９％近い。

詳細な説明
第１の形態において、本発明は、工業規模に適合しており、かつ、所望の生成物を高収率で提供する、ＳＳ−３１の塩、特には、トリフルオロ酢酸塩をもたらす、新規かつ効率的なプロセスを提供する。特に、本発明者らは、全ての脱保護工程がプロセスのｎ−１工程となる、プロセスを用いて、ＳＳ−３１のトリフルオロ酢酸塩が、都合よく得られることを見出した。

したがって、本発明の目的は、下記の工程を含む、式（Ｉ）のＨ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ_２を、トリフルオロ酢酸塩として調製する方法の提供することである。

− 化合物（II）Ｈ−Ｐｈｅ−ＮＨ_２を、

化合物（III）Ｚ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ：

とカップリングさせて、式（IV）の化合物、Ｚ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｈｅ−ＮＨ_２：

を得る工程；
− 触媒の存在下で、化合物（IV）を、水素およびメタンスルホン酸（Ｖ）
ＭｅＳＯ_３Ｈ（Ｖ）
と反応させて、遊離アミン塩（VI）ＭｅＳＯ_３Ｈ・Ｈ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｈｅ−ＮＨ_２：

を得る工程。

塩（VI）に、保護されたアミノ酸Ｚ−Ｄｍｔ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（VII）

を反応させて、保護されたトリペプチドＺ−Ｄｍｔ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｈｅ−ＮＨ_２（VIII）：

を得て、これを、水素およびメタンスルホン酸（Ｖ）で処理して、対応する塩ＭｅＳＯ_３・Ｈ−Ｄｍｔ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｈｅ−ＮＨ_２（IX）：

を得る。

酸塩（IX）に、Ｚ−Ｄ−Ａｒｇ−ＯＮａ（Ｘ）

をカップリングさせて、保護されたテトラペプチドＢｏｃ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄｍｔ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｈｅ−ＮＨ_２（XI）：

を形成する。

テトラペプチドＨ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ_２（Ｉ）は、（XI）の溶媒中において、トリフルオロ酢酸を用いて、脱保護、ならびに、さらに塩形成を行わせることによって得られる。脱保護は、最終化合物中におけるＰｄの存在の原因となりうる、Ｐｄ触媒を使用することなく、３つのＢｏｃ基の簡単なアシドリシスによって実施される。

同様のアシドリシスは、ＨＣｌまたはＨＢｒ等の他の酸を用いて実施することもでき、対応する塩となる。この方法により、そのまま製剤に使用することができる、あるいは、必要であれば、任意の他の塩に変換することもできる、ペプチドを、固形物として得ることを可能としている。このようにして得られる粗製の最終化合物の純度は、なんらのさらなる結晶化ないでも、９７％であり、そして、適当な結晶化混合物の選択により、容易に９９％まで改善することができる。

該方法の一実施形態において、（II）と（III）の間のカップリングは、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）ウラニウム テトラフルオロボレート（ＴＢＴＵとして知られている）、ならびに、ＮＭＭ、トリエチルアミンおよびジイソプロピルアミン等の、第三級アミンの分類に属する有機塩基、ならびに、ＮＭＭ、ＤＭＦ、アセトニトリル、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、２−メチル−テトラヒドロフラン（２−Ｍｅ−ＴＨＦ）などの極性溶媒の存在下で実施される。

一実施形態において、（II）と（III）の間のカップリングは、０℃と６０℃の間、好ましくは、２０℃と３０℃の間の温度範囲で実施される。

（IV）の水素化は、均一系触媒による水素化（ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ ｃａｔａｌｙｔｉｃ ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｉｏｎ）、不均一系触媒による水素化（ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓ ｃａｔａｌｙｔｉｃ ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｉｏｎ）、あるいは、触媒移動による水素化（ｃａｔａｌｙｔｉｃ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｉｏｎ）などの種々の技法で達成することができる。特定の実施形態において、水素化は、Ｐｄ／炭素を触媒として、水素ガスを用いて実施される。

別の実施形態において、メタンスルホン酸塩（VI）の形成は、溶媒としてのジメチルホルムアミド中、メタンスルホン酸（Ｖ）を用いて得られ、そして、同じ溶媒から結晶化される。結晶化に適する他の溶媒は、ＴＨＦ、酢酸エチルおよびアセトニトリルである。

別の実施形態において、メタンスルホン酸塩（IX）の形成は、溶媒としての塩化メチレン中で得られ、同じ溶媒から結晶化される。結晶化のための他の溶媒は、ＴＨＦ、酢酸エチルおよびアセトニトリルである。

該方法の一実施形態において、化合物（VI）と化合物（VII）の間のカップリング反応は、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）ウラニウム テトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、ならびに、ＮＭＭ、トリエチルアミンおよびジイソプロピルアミン等の第三級アミンの分類に属する有機塩基、ならびに、ＮＭＭ、ＤＭＦ、アセトニトリル、ＴＨＦ、２−Ｍｅ−ＴＨＦ等の極性溶媒の存在下で実施される。

別の実施形態において、（VIII）の水素化は、均一系触媒による水素化、不均一系触媒による水素化、または触媒移動による水素化のような種々の技法で達成することができる。特定の実施形態において、水素化は、Ｐｄ／炭素を触媒として、水素ガスを用いて実施される。

別の実施形態において、メタンスルホン酸塩（IX）の形成は、溶媒としてのジメチルホルムアミド中のメタンスルホン酸（Ｖ）を用いて得られ、同じ溶媒から結晶化される。結晶化のための他の溶媒は、ＴＨＦ、酢酸エチルおよびアセトニトリルである。

該方法の一実施形態において、化合物（IX）と化合物（Ｘ）の間のカップリング反応は、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウム テトラフルオロボレート（ＴＢＴＵとして知られている）、ならびに、ＮＭＭ、トリエチルアミンおよびジイソプロピルアミン等の第三級アミンの分類に属する有機塩基、ならびに、ＮＭＭ、ＤＭＦ、アセトニトリル、ＴＨＦ、２−Ｍｅ−ＴＨＦ等の極性溶媒の存在下で行われる。一実施形態において、（ＸＩ）の脱保護は、トリフルオロ酢酸および溶媒を用いて実施される。最も適当な溶媒は、ヘプタン、ＩＰＡなどである。

該方法の一形態において、中間体（IV）、（VI）、（VIII）、（IX）および（XI）は、単離され、そして、結晶化される。該中間体が単離される際、それらの純度は、９８％を超える。

一つの好ましい形態において、中間体（VIII）、Ｚ−Ｄｍｔ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｈｅ−ＮＨ_２の結晶化により、重大な不純物が、それ以降のプロセス工程に移行するのを回避することができる。

一つの好ましい形態において、重大な不純物は、化合物（XII）、Ｈ−Ｄ−Ｄｍｔ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｈｅ−ＮＨ_２である。

別の好ましい形態において、保護されたテトラペプチド（XI）、Ｂｏｃ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄｍｔ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｈｅ−ＮＨ_２に対する結晶化プロセスにより、該生成物を９９％に近い純度を有する固形物として得ることができる。

別の好ましい形態において、最終の脱保護は、トリフルオロ酢酸との反応によって実施され、そして、きわめて高価であるが薬物としてのペプチドの製造に通常使用される、精製および単離プロセスであるＨＰＬＣ精製あるいは凍結乾燥を必要とすることなく、簡単な結晶化後に、トリフルオロ酢酸塩の結晶性固形物形態で、最終生成物を得ることが可能としている。

好ましい形態において、この方法は、そのまま製剤に使用することができる、あるいは、必要であれば任意の他の塩に容易に変換することができる、固形物として、該ペプチドを得ることを可能としている。このようにして得られる最終化合物の純度は、９９％であり、そして、各不純物は、およそ０．２％またはそれ以下である。

例
例１：Ｚ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｈｅ−ＮＨ_２（IV）の調製
１００ｍＬのＤＭＦ、９．５ｇのＨ−Ｐｈｅ−ＮＨ_２、２０ｇのＺ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨおよび１０．６ｇのＮ−メチルモルホリンを、フラスコ中に投入する。該混合物を、２０〜２２℃で１５分間撹拌する。１８．６ｇのＴＢＴＵを添加し、該混合物を室温で終夜撹拌する。該混合物中に、２００ｍＬのメタノールおよび２５０ｍＬの水を添加して、混合物を室温で１時間撹拌する。該混合物をろ過して、固形生成物を単離する。該濾塊を、２００ｍＬのメタノールが入っているフラスコ中に移す。該混合物を、１時間還流温度で加熱し、その後、室温まで冷却する。該混合物をろ過して、固形生成物を単離する。該濾塊を真空下で３５〜４０℃にて乾燥して、２０．５ｇの白色の固形生成物を得る。

例２：ＭｅＳＯ_３Ｈ・Ｈ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｈｅ−ＮＨ_２（VI）の調製
１００ｍＬのＤＭＦ、１２．５ｇの５％Ｐｄ／Ｃ（６０％の水分含量）、１０ｇのＺ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｈｅ−ＮＨ_２および１．８３ｇのメタンスルホン酸を、フラスコ中に投入する。フラスコの雰囲気を水素で置換する。該混合物を、１ａｔｍの水素下で、２０〜２５℃にて３時間撹拌する。ＨＰＬＣ分析は、全てのＺ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｈｅ−ＮＨ_２が変換されたことを示している。得られた混合物は、次の工程で直接使用された。

例３：Ｚ−Ｄｍｔ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｈｅ−ＮＨ_２（VIII）の調製
８．５ｇのＺ−Ｄｍｔ（Ｂｏｃ）−ＯＨおよび６．１ｇのＴＢＴＵを、直前の工程で得られたＭｅＳＯ_３Ｈ・Ｈ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｈｅ−ＮＨ_２のＤＭＦ溶液中に投入する。該混合物を室温で１５分間撹拌する。該混合物を、１０〜１５℃まで冷却する。５．８ｇのＮ−メチルモルホリンを、温度を２０℃未満に保ちながら、ゆっくりと添加する。混合物を１０〜１５℃で１８時間撹拌する。混合物をろ過して、Ｐｄ／Ｃ触媒と他の沈殿物を除去し、そして、該濾塊をＤＭＦで洗浄する。ろ液と洗浄液を合わせて、３２ｍＬの塩化メチレンをろ液に添加する。得られた溶液を、５００ｍＬの水が入っているフラスコ中に加え、次いで、該混合物を２０分間撹拌する。混合物をろ過して固形生成物を単離し、そして、該濾塊を水で３回洗浄する。濾塊を、４５０ｍＬのアセトンが入っているフラスコ中に移し、混合物を撹拌しながら、還流温度まで加熱する。還流温度で、撹拌しながら２００ｍＬのヘキサンを添加し、混合物を室温まで冷却する。混合物をろ過して、固形生成物を単離する。前述のワークアップ操作を繰り返す。得られた濾塊を、真空下、４０℃にて乾燥させ、１２．４ｇの生成物を得る。

例４：ＭｅＳＯ_３Ｈ・Ｈ−Ｄｍｔ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｈｅ−ＮＨ_２（IX）の調製
１２．４ｇのＺ−Ｄｍｔ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｈｅ−ＮＨ_２、１００ｍＬのＤＭＦ、１２．４ｇの５％Ｐｄ／Ｃ（６０％の水分含量）および１．４６ｇのメタンスルホン酸を、フラスコ中に投入する。フラスコの雰囲気を水素に置換する。該混合物を、１ａｔｍの水素下で、２０〜２５℃にて３時間撹拌する。ＨＰＬＣ分析は、全てのＺ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｈｅ−ＮＨ_２が変換されたことを示している（ＨＰＬＣ純度 ９８．１％）。得られた混合物は、次の工程で直接使用される。

例５：Ｂｏｃ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄｍｔ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｈｅ−ＮＨ_２（XI）の調製
８．５ｇのＢｏｃ−Ｄ−Ａｒｇ−ＯＨ、８．８４ｇのＴＢＴＵおよび９．７ｇのＮ−メチルモルホリンを、Ｈ−Ｄｍｔ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｈｅ−ＮＨ_２・ＭｅＳＯ_３ＨのＤＭＦ混合液中に、室温で、添加する。該混合物を、室温で４０時間撹拌する。混合物をろ過して、Ｐｄ／Ｃおよび他の沈殿物を除去する。２５０ｍＬの酢酸エチルを、ろ液に添加する。該有機溶液を、水で洗浄する（２００ｍＬ×４）。該有機溶液を、真空下、４０〜４５℃にて濃縮して、溶媒のほとんどを除去する。残渣に、１００ｍＬのＭＴＢＥを加え、そして、混合物を室温で１時間激しく撹拌する。該混合物をろ過して、固形生成物を単離する。該濾塊を、２００ｍＬの酢酸エチルが入っているフラスコ中に移す。該混合物を、撹拌しながら、３時間、５０〜５５℃で加熱し、その後、室温まで冷却する。混合物をろ過して、固形生成物を単離する。前述のワークアップ操作を繰り返す。該濾塊を、真空下、４０〜４５℃にて乾燥させ、１０．７ｇの白色の固形生成物を得る。ＨＰＬＣ純度 ９８．２％。

例６：Ｈ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ_２（Ｉ）、（ＭＴＰ−１３１）の調製
１．０ｇと１０ｍＬのＴＦＡをフラスコ中に投入する。該混合物を、室温で２０分間撹拌する。１０ｍＬのＩＰＡを、反応混合物に添加する。得られた混合物を、４０ｍＬのヘプタンが入っているフラスコ中に、激しく撹拌しながら、ゆっくりと添加する。混合物をろ過して、固形生成物を単離し、濾塊をＩＰＡで洗浄する。該濾塊を、真空下、４０〜４５℃にて乾燥させ、０．５ｇの固形生成物を得る。分析データ：ＨＰＬＣ純度：９６．６％

Claims (14)

1. トリフルオロ酢酸塩の形態の、式（Ｉ）のＨ−Ｄ−Ａｒｇ−（２，６−ジメチル）Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ_２
   

   

   を、液相において製造するための方法であって、
   下記の工程を含む：
   − 化合物（II）Ｈ−Ｐｈｅ−ＮＨ_２：
   

   

   を、化合物（III）Ｚ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ：
   

   

   とカップリングさせて、式（IV）の化合物、Ｚ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｈｅ−ＮＨ_２：
   

   

   を得る工程；
   − 触媒の存在下、化合物（IV）を、水素およびメタンスルホン酸（Ｖ）
   ＭｅＳＯ_３Ｈ（Ｖ）
   と反応させて、遊離アミン塩（VI）ＭｅＳＯ_３Ｈ・Ｈ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｈｅ−ＮＨ_２：
   

   

   を得る工程；
   − 塩（VI）を、保護されたアミノ酸Ｚ−Ｄｍｔ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（VII）
   

   

   と反応させて、保護されたトリペプチドＺ−Ｄｍｔ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｈｅ−ＮＨ_２（VIII）：
   

   

   を得る工程；
   − 化合物（VIII）を、水素およびメタンスルホン酸（Ｖ）で処理して、対応する塩 ＭｅＳＯ_３・Ｈ−Ｄｍｔ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｈｅ−ＮＨ_２（IX）：
   

   

   を得る工程；
   − 酸塩（IX）を、Ｚ−Ｄ−Ａｒｇ−ＯＮａ（Ｘ）
   

   

   とカップリングさせて、保護されたテトラペプチドＢｏｃ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄｍｔ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｈｅ−ＮＨ_２（XI）：
   

   

   を形成する工程；
   − 化合物（XI）を脱保護して、テトラペプチドＨ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ_２（Ｉ）を得、さらに溶媒中のトリフルオロ酢酸でそれを塩化する工程；
   ことを特徴とする、方法。
2. 脱保護が、有機酸を用いて、３つのＢｏｃ基を同時にアシドリシスすることによって実施される
   ことを特徴とする、請求項１に記載の方法。
3. 脱保護が、Ｐｄ触媒を使用することなく、トリフルオロ酢酸を用いて、３つのＢｏｃ基を同時にアシドリシスすることによって実施される
   ことを特徴とする、請求項１に記載の方法。
4. アシドリシスは、ＨＣｌまたはＨＢｒ等の他の酸を用いて、実施することができ、対応する塩となる
   ことを特徴とする、請求項１に記載の方法。
5. 最終生成物（Ｉ）が、ＨＰＬＣ精製あるいは凍結乾燥を必要とせずに、簡単な結晶化の後、トリフルオロ酢酸塩の固形結晶形態で得られる
   ことを特徴とする、請求項１に記載の方法。
6. （II）と（III）の間のカップリングが、
   Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）ウラニウム テトラフルオロボレート（ＴＢＴＵとして知られている）、ならびに、ＮＭＰ、ＤＭＦ、アセトニトリル、ＤＭＳＯおよびＴＨＦ等の極性溶媒の存在下で実施される
   ことを特徴とする、請求項１に記載の方法。
7. （II）と（III）の間のカップリングが、
   −１０℃と５０℃の間、好ましくは、５℃と１５℃の間の温度範囲で実施される
   ことを特徴とする、請求項１に記載の方法。
8. メタンスルホン酸塩（VI）の形成が、溶媒としてのメタノール、ＮＭＰ、アセトニトリルまたはＴＨＦ中で得られ、同じ溶媒から結晶化される
   ことを特徴とする、請求項１に記載の方法。
9. 化合物（IX）と化合物（Ｘ）の間のカップリング反応が、
   Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）ウラニウム テトラフルオロボレート（ＴＢＴＵとして知られている）、ならびに、ＮＭＰ、ＤＭＦ、アセトニトリル、ＤＭＳＯおよびＴＨＦから選択される極性溶媒の存在下で実施される
   ことを特徴とする、請求項１に記載の方法。
10. 式（IV）の化合物：Ｚ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｈｅ−ＮＨ_２。
    

    
11. 式（ＸIII）の化合物Ｈ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｈｅ−ＮＨ_２ またはその塩。
    

    
12. 式（VIII）の化合物 Ｚ−（２，６−ジメチル）Ｔｙｒ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｈｅ−ＮＨ_２。
    

    
13. 式（XIV）の化合物 Ｈ−（２，６−ジメチル）Ｔｙｒ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｈｅ−ＮＨ_２ またはその塩。
    

    
14. 式（XI）の化合物 Ｂｏｃ−Ｄ−Ａｒｇ−（２，６−ジメチル）Ｔｙｒ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｈｅ−ＮＨ_２。