JP2017517520A - Ｗｅｅ１阻害剤を用いた癌を処置する方法 - Google Patents

Abstract

本発明は一般に遺伝子変異の使用に関し、その変異の有無が抗増殖剤、特にＷＥＥ１阻害剤での処置に対する患者の応答を予測するのに有用である。ＴＰ５３遺伝子に対する変異の有無は、癌状態を呈する患者においてＷＥＥ１阻害剤での処置に対する応答を予測するために使用され得る。【選択図】図１

Description

本発明は一般に遺伝子変異の使用に関し、その変異の有無は、抗増殖剤、特にＷＥＥ１阻害剤での処置に対する患者の応答を予測するのに有用である。ＴＰ５３遺伝子に対する変異の有無は、癌状態を呈する患者におけるＷＥＥ１阻害剤による処置に対する応答を予測するために使用され得る。

一般的に使用される抗癌薬の多くは、***する細胞中のＤＮＡを無差別に標的とし、最終的にはＤＮＡ損傷を引き起こす。その結果、細胞でＤＮＡ複製または***が起こる前にＤＮＡが修復されるための時間を与えるという目的で、細胞周期の進行を（Ｇ１、Ｓ、またはＧ２／Ｍ期で）停止させる細胞周期チェックポイントの活性化を誘発する。治療的観点から、細胞周期停止を媒介するチェックポイントキナーゼの阻害は、化学的に誘導されたＤＮＡ損傷が修復される前に腫瘍細胞に細胞***を継続させ、最終的にアポトーシスまたは***期細胞死を引き起こし得る（非特許文献１）。細胞株研究はこの仮説を支持し、ＣＨＫ１、ＷＥＥ１、ＡＴＲ、およびＡＴＭを含むチェックポイントキナーゼ活性の薬理学的または遺伝子破壊によって化学増感および放射線増感を示す。これらのキナーゼに対する阻害剤は、治療的ＤＮＡ損傷に対する腫瘍細胞の感度を高めるそれらの能力について、前臨床および臨床開発の様々な段階にある。

チェックポイントキナーゼであるＷＥＥ１は、チロシン１５においてＣＤＫ１（ＣＤＣ２）およびＣＤＫ２の両方の阻害的リン酸化を触媒する（非特許文献２、非特許文献３）。ＣＤＫ１およびＣＤＫ２のＷＥＥ１依存性阻害は、外因的に誘導されたＤＮＡ損傷に応答して細胞周期を停止させる（非特許文献４）。ＷＥＥ１活性はまた、障害のない細胞周期にも必須である（非特許文献５、非特許文献６）。正常なヒト線維芽細胞での細胞同調研究により、Ｓ期およびＧ２／Ｍ期の両方で同様のＷＥＥ１タンパク質量が検出されたが、その活性が最大となるのは細胞周期のＳ期であったことが明らかとなった（非特許文献３）。さらに、マウス胚線維芽細胞（ＭＥＦ）におけるコンディショナルＷＥＥ１ノックアウト時に、細胞はゲノム不安定性、機能異常チェックポイント、および早期有糸***の証拠を示す（非特許文献６）。この表現型は部分的には、ＤＮＡ合成におけるＷＥＥ１の重要な役割を実証する最近の知見によって説明された。ＷＥＥ１のノックダウンは、ＤＮＡ損傷剤の非存在下では、特にＤＮＡ複製が起こるＳ期細胞においてＤＮＡ二本鎖切断の迅速かつ強力な検出に至った（非特許文献７、非特許文献８）。データは、ＷＥＥ１ノックダウンまたは阻害がＣＤＫ１および２の異常な高活性を招き、その結果、過剰なＤＮＡ複製起点の不適切な時間での始動をもたらし、ＷＥＥ１活性の非存在下でＤＮＡエキソヌクレアーゼの基質であってＤＮＡ二本鎖を切断するヌクレオチドプールを急速に枯渇させ、複製フォークの失速を招くという、ＷＥＥ１依存性ゲノム安定性のモデルを支持する（非特許文献９）。

制御されていないＷＥＥ１発現または活性は、いくつかのタイプの癌における病理の顕著な特徴であると考えられている。ＷＥＥ１は多くの場合に膠芽腫で過剰発現し、その活性が、この腫瘍タイプを***期細胞死から保護するので、高ＷＥＥ１レベルは予後不良と関連付けられる（非特許文献１０）。ＷＥＥ１の高発現は悪性黒色腫で見られ、この集団では無病生存不良と相関関係を示した（非特許文献１１）。異常なＷＥＥ１発現は、さらなる腫瘍タイプ、例えば肝細胞癌腫（非特許文献１２）、乳癌（非特許文献１３）、結腸癌腫（非特許文献１４）、肺癌腫（非特許文献１５）および頭頸部扁平上皮癌腫（非特許文献１６）などに関与している。ゲノム不安定性のレベル増加を伴う進行性腫瘍は、このような致死的ＤＮＡ損傷の修復を可能にするために機能的チェックポイントを必要とする場合がある。したがって、ＷＥＥ１は、その阻害が修復不可能なＤＮＡ損傷をもたらすと考えられる進行性腫瘍において魅力的な標的となる（非特許文献１７）。

ｐ５３タンパク質をコードするＴＰ５３遺伝子は、Ｇ_１チェックポイントの鍵となる制御因子として細胞周期の重要な制御因子であり、癌で最も頻繁に変異する遺伝子の１つである（非特許文献１８）。Ｇ_１チェックポイントの欠如した細胞は、ＷＥＥ１媒介ＳまたはＧ２チェックポイントに、より依存すると予測される。したがって、Ｇ_２チェックポイント抑止剤で処置されたｐ５３欠損腫瘍は、特にＤＮＡ損傷の影響を受けやすい可能性がある（非特許文献１９、非特許文献２０）。

Ｍｅｄｅｍａ，Ｒ．Ｈ．ａｎｄ Ｍａｃｕｒｅｋ，Ｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２０１２，３１（２１）：２６０１−２６１３ Ｐａｒｋｅｒ，Ｌ．Ｌ．ａｎｄ Ｐｉｗｎｉｃａ−Ｗｏｒｍｓ，Ｈ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９２，２５７（５０７８）：１９５５−１９５７ Ｗａｔａｎａｂｅ，Ｎ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｍｂｏ Ｊ．，１９９５，１４（９）：１８７８−１８９１ Ｈａｍｅｒ，Ｐ．Ｃ．Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，２０１１，１７（１３）：４２００−４２０７ Ｍｃｇｏｗａｎ，Ｃ．Ｈ．ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｐ．，Ｅｍｂｏ Ｊ．，１９９３，１２（１）：７５−８５ Ｔｏｍｉｎａｇａ，Ｙ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｓｃｉ．，２００６，２（４）：１６１−１７０ Ｂｅｃｋ，Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，２０１０，１８８（５）：６２９−６３８ Ｄｏｍｉｎｇｕｅｚ−Ｋｅｌｌｙ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，２０１１，１９４（４）：５６７−５７９ Ｂｅｃｋ，Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，２０１２ Ｍｉｒ，Ｓ．Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ，２０１０，１８（３）：２４４−２５７ Ｍａｇｎｕｓｓｅｎ，Ｇ．Ｉ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｌｏｓ Ｏｎｅ，２０１２，７（６） Ｍａｓａｋｉ，Ｔ．，ｅｔ ａｌ．，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２００３，３７（３）：５３４−５４３ Ｉｏｒｎｓ，Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｌｏｓ Ｏｎｅ，２００９，４（４） Ｂａｃｋｅｒｔ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｌ．，Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，１９９９，８２（６）：８６８−８７４） Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｔ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２００４，１５（２）：２５２−２５６ Ｗｕ，Ｚ．Ｘ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．＆Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ，２０１１，１０（１２） Ｓｏｒｅｎｓｅｎ，Ｃ．Ｓ．ａｎｄ Ｓｙｌｊｕａｓｅｎ，Ｒ．Ｇ．，Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２０１２，４０（２）：４７７−４８６ Ｍｏｌｉｎａｒｉ，Ｍ．，Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｌｉｆ．，２０００，３３：２６１−１７４ Ｋａｗａｂｅ，Ｔ．，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．，２００４，３：５１３−５１９ Ｂｕｃｈｅｒ，Ｎ．，ａｎｄ Ｂｒｉｔｔｅｎ，Ｃ．Ｄ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，２００８，９８：５２３−５２８

特に非応答性の患者または第１選択療法に対して屈折する可能性がある患者に対して、どの患者が特定の療法による処置に適しているのかを予測するのに使用できるバイオマーカーが必要である。したがって、本発明の目的は、ＷＥＥ１阻害剤での処置に応答する可能性がある患者を選択するためのバイオマーカーを提供することである。

本発明は概して、ＴＰ５３遺伝子変異の同定に関し、その変異の有無は、ＷＥＥ１阻害剤での処置について患者を評価し、分類するのに有用である。本発明の一実施形態では、機能の欠如をもたらすＴＰ５３遺伝子変異は、ＷＥＥ１阻害剤での処置に応答する可能性のある患者を同定するために使用される。別の実施形態では、本発明は、ＷＥＥ１関連癌と診断された患者をＷＥＥ１阻害剤で処置する方法であって、この患者の癌細胞は、ｐ５３を非機能的にするＴＰ５３の変異の存在を特徴とする。さらに別の実施形態では、本発明は、ＷＥＥ１阻害剤での処置に応答する、または応答すると予測される癌患者を処置する方法であって、この患者の癌細胞は、ｐ５３を非機能的にするＴＰ５３の変異の存在を特徴とする。

ＷＥＥ１−１と様々なＤＮＡ損傷剤との間で観察された相乗効果の程度に対するＴＰ５３変異状態の効果。

多くの抗癌治療はＤＮＡに損傷を与えることにより作用し、その後ＤＮＡ損傷応答（ＤＤＲ）を開始し、チェックポイントキナーゼを活性化して、ＤＮＡが修復される間に***を停止させる。チロシンキナーゼであるＷＥＥ１はＤＤＲにより活性化され、サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）１および２をリン酸化して阻害し、そのようにして細胞***を停止させる。ＷＥＥ１を阻害することは、細胞周期停止および適切なＤＮＡ修復を抑止することによりＤＮＡ損傷処置を増強する。

ＷＥＥ１−１は、２−アリル−１−［６−（１−ヒドロキシ−１−メチルエチル）ピリジン−２−イル］−６−｛［４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル］アミノ｝−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−オンとしても知られ、ＷＥＥ１の強力（ＩＣ_５０＝５．２ｎＭ）かつ選択的なＡＴＰ競合小分子阻害剤であり（Ｈｉｒａｉ，Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．，２００９，８（１１）：２９９２−３０００）、標準治療（ＳＯＣ）化学療法薬と組み合わせた抗腫瘍剤として現在臨床開発中である（Ｓｔａｔｈｉｓ，Ａ．ａｎｄ Ｏｚａ Ａ．，Ｄｒｕｇ Ｎｅｗｓ＆Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ，２０１０，２３（７）：４２５−４２９、Ｓｃｈｅｌｌｅｎｓ，Ｊ．Ｈ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．，２０１１，２９：２０１１（ｓｕｐｐｌ、ａｂｓｔｒ ３０６８）、Ｍｉｚｕａｒａｉ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ，２００９，８：３４）。ＷＥＥ１−１の先行研究は、最終的にアポトーシスまたは***期細胞死をもたらす不定期有糸***を強制するその能力によって、現在使用されている標準治療（ＳＯＣ）化学療法薬に対する補助剤または増感剤としてのその可能性を実証している（Ｈｉｒａｉ，Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌ．＆Ｔｈｅｒ．，２０１０，９（７）：５１４−５２２、Ａａｒｔｓ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，２０１２，２（６）：５２４−５３９、Ｉｎｄｏｖｉｎａ，Ｐ．ａｎｄ Ｇｉｏｒｄａｎｏ Ａ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌ．＆Ｔｈｅｒ．，２０１０，９（７）；５２３−５２５、Ｗａｎｇ，Ｙ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌ．＆Ｔｈｅｒ．，２００４，３（３）：３０５−３１３）。しかしながら、ＳＯＣ化学療法の非存在下におけるＷＥＥ１阻害の治療効果の可能性は、あまり明確にされていない。ＷＥＥ１のＲＮＡｉノックダウンは、癌細胞株の増殖を阻害し（Ｉｏｒｎｓ，Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｔａｒｇｅｔｓ，２００９，Ｐｌｏｓ Ｏｎｅ，４（４）、Ｍｕｒｒｏｗ，Ｌ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，２０１０，１２２（２）：３４７−３５７）、最近ではＷＥＥ１−１単独で、インビトロで処置された肉腫細胞株においてアポトーシスを誘導し得ることが実証された（Ｋｒｅａｈｌｉｎｇ，Ｊ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．，２０１２，１１（１）：１７４−１８２）。

ｐ５３タンパク質は、ＴＰ５３遺伝子によりコードされる。前臨床研究は、ＷＥＥ１−１が、ｐ５３欠陥腫瘍を有する患者、すなわち患者の腫瘍がｐ５３を非機能的にするＴＰ５３の変異を持つ患者に選択的に効果がある可能性を示唆している。ＴＰ５３遺伝子では２５，０００を超える変異が報告されているが、全ての変異が機能の欠如を招くと予想されている訳ではない。さらに、機能の欠如と関連する変異についても、全ての変異がｐ５３の機能性を消滅させるそれらの能力において同等であるという訳ではない。

本明細書の出願人らは、変異の各タイプ（表１を参照のこと）に、変異がｐ５３の機能の欠如、および一実施形態では、ＷＥＥ１−１などのＷＥＥ１阻害剤による処置に対する感受性をもたらす可能性に関連したポイント値を割り当てることにより、「ｐ５３フィルター」と称される機能の欠如変異のサブセットを同定する方法を開発した。表３に示すように、各遺伝子変異の証拠スコアは、変異：終止コドン変異、スプライス部位変異、ドミナントネガティブ変異、ｐ５３シグネチャーｐ値＜０．０５、体細胞組織においてアミノ酸レベルで＞１０回報告された変異、体細胞組織においてヌクレオチドレベルで＞１０回報告された変異に関するポイント値の合計に基づいて計算された。患者のＴＰ５３変異スコアは、患者の癌細胞において表３の様々な遺伝子変異を同定し、同定した各遺伝子変異の証拠スコアを合計することにより計算される。

したがって、本発明の一実施形態では、患者のＴＰ５３変異スコアが表３によると２．０、３．０、４．０、５．０、６．０、７．０、８．０、９．０、１０．０またはそれを超える患者が、ＷＥＥ１阻害剤での処置に応答する可能性が最も高い患者として同定され、ＷＥＥ１阻害剤での処置のために選択される。本発明の別の実施形態では、ＷＥＥ１阻害剤で処置された患者のＴＰ５３変異スコアが表３によると２．０、３．０、４．０、５．０、６．０、７．０、８．０、９．０、１０．０またはそれを超える患者が、処置に応答し続ける可能性が最も高い患者として同定され、ＷＥＥ１阻害剤での処置を継続するために選択される。

ｐ５３タンパク質のＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号は、ＮＭ０００５４６である。ｐ５３遺伝子のＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号は、Ｘ５４１５６．１である。ＴＰ５３遺伝子配列は、ＩＡＲＣデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｐ５３．ｉａｒｃ．ｆｒ）からも入手可能である。異なるデータベースでは、異なるヌクレオチドまたはアミノ酸番号付けシステムを使用する場合もあるが、表３のヌクレオチドおよびアミノ酸情報に基づいて、当業者はｐ５３遺伝子における遺伝子変異およびその位置を容易に同定することができる。

本発明は、患者の癌を処置する方法または患者のＷＥＥ１活性を調節する方法を提供し、この方法は
１）癌細胞において表３による１つ以上のＴＰ５３遺伝子変異、ｐ５３タンパク質をコードする際にフレームシフトを引き起こし、機能の欠如をもたらすＴＰ５３遺伝子における少なくとも１つの塩基対挿入もしくは欠失、またはそれらの組み合わせを有する、癌と診断された患者を選択するステップ、
２）治療有効量のＷＥＥ１阻害剤および１種以上であってもよい追加の抗癌剤を、患者に投与するステップ
を含む。

本発明はまた、患者の癌を処置する方法または患者のＷＥＥ１活性を調節する方法も提供し、この方法では、患者は癌と診断され、癌細胞において表３による１つ以上のＴＰ５３遺伝子変異、ｐ５３タンパク質をコードする際にフレームシフトを引き起こし、機能の欠如をもたらすＴＰ５３遺伝子における少なくとも１つの塩基対挿入もしくは欠失、またはそれらの組み合わせを有しており、治療有効量のＷＥＥ１阻害剤および１種以上であってもよい追加の抗癌剤を、患者に投与するステップを含む。

本発明は、患者の癌を処置する方法または患者のＷＥＥ１活性を調節する方法をさらに提供し、この方法は治療有効量のＷＥＥ１阻害剤および１種以上であってもよい追加の抗癌剤を、患者に投与するステップを含み、患者が癌と診断され、癌細胞において表３による１つ以上のＴＰ５３遺伝子変異、ｐ５３タンパク質をコードする際にフレームシフトを引き起こし、機能の欠如をもたらすＴＰ５３遺伝子における少なくとも１つの塩基対挿入もしくは欠失、またはそれらの組み合わせを有する。一実施形態では、本発明は、患者の癌の処置または患者のＷＥＥ１活性の調節に使用するためのＷＥＥ１阻害剤を提供し、患者が癌と診断され、癌細胞において表３による１つ以上のＴＰ５３遺伝子変異、もしくはｐ５３タンパク質をコードする際にフレームシフトを引き起こし、機能の欠如をもたらすＴＰ５３遺伝子における少なくとも１つの塩基対挿入もしくは欠失、またはそれらの組み合わせを有し、処置は１種以上の追加の抗癌剤を含んでいてもよい。

一実施形態では、ｐ５３タンパク質をコードする際にフレームシフトを引き起こすＴＰ５３遺伝子における少なくとも１つの塩基対挿入または欠失は、ｐ５３のＤＮＡ結合ドメインを完全に排除する。

一実施形態では、ＴＰ５３遺伝子変異は、表３によると２．５以上の証拠スコアを有する。別の実施形態では、ＴＰ５３遺伝子変異は、表３によると３以上の証拠スコアを有する。別の実施形態では、ＴＰ５３遺伝子変異は、表３によると３．５以上の証拠スコアを有する。さらなる実施形態では、ＴＰ５３遺伝子変異は、表３によると４．０以上の証拠スコアを有する。またさらなる実施形態では、ＴＰ５３遺伝子変異は、表３によると４．５以上の証拠スコアを有する。さらに別の実施形態では、ＴＰ５３遺伝子変異は、表３によると５．０に等しい証拠スコアを有する。さらに別の実施形態では、患者は、表３によるＣ２３８Ｆ、Ｒ２４８ＷおよびＲ２７３Ｌから成る群から選択されるアミノ酸変化、ｐ５３タンパク質でＥ２９８をコードするコドンにおける終止コドン、またはｐ５３タンパク質でＶ１５７をコードするコドンにおける塩基対の欠失をもたらすＴＰ５３遺伝子変異のうち少なくとも１つを有する。

上記方法の別の実施形態では、ステップ１）は、癌細胞において表３による２つ以上のＴＰ５３遺伝子変異、または表３による３つ以上のＴＰ５３遺伝子変異を有する、癌と診断された患者を選択するステップである。

本発明の一実施形態では、ＡｍｐｌｉＣｈｉｐ ｐ５３アッセイ（Ｒｏｃｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．、プレザントン、カリフォルニア州）を使用して、ＴＰ５３関連癌と診断された患者からの試料中に存在するＴＰ５３変異を同定する。ＡｍｐｌｉＣｈｉｐ ｐ５３試験は、マイクロアレイに基づく再配列決定試験である。試験は、ホルマリン固定パラフィン包埋組織（ＦＦＰＥ）または新たに凍結した組織のいずれかで、ＴＰ５３遺伝子のコード領域全体およびエクソン２〜１１の隣接するスプライス部位における単一のヌクレオチド置換および１ｂｐの欠失を検出するように設計される。ＡｍｐｌｉＣｈｉｐ ｐ５３試験は、試料ＤＮＡおよび野生型参照ＤＮＡに対する一連のプローブについての、ハイブリダイゼーションパターンの比較分析により、配列変更の存在を検索する。非常に豊富なプローブのタイリング手法は、顕微解剖の必要なく、正常組織および腫瘍組織の混合物を含有する試料において著しく低い存在量のＴＰ５３変異を検出することができる。Ｌｉ ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，２００８，９，４６６−４７４を参照のこと。

当業者は、その他の方法、例えばサンガーシーケンシング、超並列シーケンシング（次世代シーケンシング）、質量分析、またはＰＣＲ技術などが、存在する遺伝子変異を同定するために用いられ得ると認識および理解するだろう。本明細書における本発明の方法は、特定のｐ５３機能の欠如変異またはこのような変異が一切存在しないことを同定するために使用される方法とは関連がない。

ＷＥＥ１阻害剤
本発明の一実施形態では、本発明の方法に使用するためのＷＥＥ１阻害剤は、ＷＥＥ１−１であり、その構造は以下に示される通りである。

ＷＥＥ１−１は、癌の処置に有用なＷＥＥ１阻害剤である。ＷＥＥ１−１は、２−アリル−１−［６−（１−ヒドロキシ−１−メチルエチル）ピリジン−２−イル］−６−｛［４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル］アミノ｝−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−オンとしても知られている。ＷＥＥ１−１は、米国特許第７，８３４，０１９号明細書に、ならびにＰＣＴ国際公開第２００７／１２６１２２号パンフレット、第２００７／１２６１２８号パンフレットおよび第２００８／１５３２０７号パンフレット（それら全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に記載されている。ＷＥＥ１−１の結晶形は、米国特許出願公開第２０１０−０１２４５４４号明細書およびＰＣＴ国際公開第２０１１／０３４７４３号パンフレット（それら全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に記載されている。

本発明の一実施形態では、本発明に使用するためのＷＥＥ１阻害剤は、ＷＥＥ１−２であり、その構造は以下に示される通りである。

ＷＥＥ１−２は、癌の処置に有用なＷＥＥ１阻害剤である。ＷＥＥ１−２は、３−（２，６−ジクロロフェニル）−４−イミノ−７−［（２’−メチル−２’，３’−ジヒドロ−１’Ｈ−スピロ［シクロプロパン−１，４’−イソキノリン］−７’−イル）アミノ］−３，４−ジヒドロピリミド［４，５−ｄ］ピリミジン−２（１Ｈ）−オンとしても知られている。ＷＥＥ１−２は、ＰＣＴ国際公開第２００８／１５３２０７号パンフレットおよび米国特許出願公開第２０１１−０１３５６０１号明細書（それら全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に記載されている。ＷＥＥ１−２の結晶形は、国際公開第２００９／１５１９９７号パンフレットおよび米国特許出願公開第２０１１−００９２５２０号明細書に記載されている。

一実施形態では、ＷＥＥ１阻害剤は、

であるか、またはその薬学的に許容される塩である。別の実施形態では、ＷＥＥ１阻害剤は、

であるか、またはその薬学的に許容される塩である。

本発明の方法に使用される化合物は、不斉中心、キラル軸、およびキラル面を有してよく（Ｅ．Ｌ．Ｅｌｉｅｌ ａｎｄ Ｓ．Ｈ．Ｗｉｌｅｎ，Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｃａｒｂｏｎ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９４，１１１９−１１９０頁に記載の通り）、ラセミ体、ラセミ混合物として、および個々のジアステレオマーとして光学異性体を含む全ての可能な異性体およびそれらの混合物と共に生じ、全てのこのような立体異性体が本発明に含まれる。加えて、本明細書で開示される化合物は、互変異性体として存在してよく、一方の互変異性構造しか図示されていなくとも、両方の互変異性形態が本発明の範囲に包含されることを意図する。

本発明の方法に使用される化合物では、原子はそれらの天然の同位体存在度を示してよい、または原子のうち１つ以上は、同じ原子番号を有するが原子質量もしくは質量数が主に天然に見られる原子質量もしくは質量数とは異なる特定の同位体に人工的に濃縮されてよい。本発明は、本明細書で開示される化合物の全ての好適な種類の同位体を含むことを意味する。例えば、水素（Ｈ）の異なる同位体形態としては、プロチウム（１Ｈ）および重水素（２Ｈ）が挙げられる。プロチウムは、天然に見られる主要な水素同位体である。重水素の濃縮によって、ある種の治療的利点、例えばインビボ半減期の増加もしくは必要投与量の減少などが得られてよい、または生体試料の特徴付けに対する基準として有用な化合物が提供されてよい。本明細書で開示される同位体濃縮化合物は、当業者に周知の従来技術によって過度な実験をすることなく調製され得る。

本発明の方法に使用されるＷＥＥ１阻害剤は、様々な結晶、非晶質物質、薬学的に許容される塩、水和物および溶媒和物としても存在してよい。さらに、本発明のＷＥＥ１阻害剤はプロドラッグとして提供されてよい。一般に、このようなプロドラッグは、生体によって必要とされる化合物に容易に変換され得る、本発明のＷＥＥ１阻害剤の機能的誘導体である。したがって、本発明における様々な癌の処置方法において、「投与」という用語は、特定の化合物の投与だけでなく、患者への投与後に生体内で特定の化合物に変換され得る化合物の投与も含む。好適なプロドラッグ誘導体の選択および製造に関する従来の方法は、例えば「Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｐｒｏｄｒｕｇｓ」，ｅｄ．Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９８５に記載され、これは本明細書で参照されて、本記載の一部として全体的に本明細書に組み込まれる。本化合物の代謝産物は、化合物を生物学的環境に置くことにより産生される活性化合物を含んでよく、これは本発明における化合物の範囲内である。

本発明の一実施形態では、ＷＥＥ１阻害剤は、１００ｍｇ／日〜２５０ｍｇ／日の間の用量で投与される。本発明の別の実施形態では、ＷＥＥ１阻害剤は、２日半にわたり１日２回（ＢＩＤ）（合計で５回用量）または２日間にわたり１日１回（ＱＤ）（合計で２回用量）投薬されてよい。

本発明の別の実施形態では、ＷＥＥ１阻害剤は、２００ｍｇ／日〜４００ｍｇ／日の間の用量、好ましくは２５０〜３５０ｍｇ／日の用量で投与される。本発明の一実施形態では、ＷＥＥ１阻害剤は、５日間にわたり１日１回（ＱＤ）投薬されてよい。

癌を処置する方法
ＷＥＥ１阻害剤によって処置され得る癌としては、心臓：肉腫（血管肉腫、線維肉腫、横紋筋肉腫、脂肪肉腫）、粘液腫、横紋筋腫、線維腫、脂肪腫および奇形腫、肺：気管支原性癌腫（扁平上皮細胞、未分化小細胞、未分化大細胞、腺癌）、肺胞（細気管支）癌腫、気管支腺腫、肉腫、リンパ腫、軟骨性過誤腫、中皮腫、胃腸：食道（扁平上皮癌腫、腺癌、平滑筋肉腫、リンパ腫）、胃（癌腫、リンパ腫、平滑筋肉腫）、膵臓（管腺癌、インスリノーマ、グルカゴノーマ、ガストリノーマ、カルチノイド腫瘍、ビポーマ）、小腸（腺癌、リンパ腫、カルチノイド腫瘍、カルポジ肉腫、平滑筋腫、血管腫、脂肪腫、神経線維腫、線維腫）、大腸（腺癌、管状腺腫、絨毛腺腫、過誤腫、平滑筋腫）結腸直腸、尿生殖路：腎臓（腺癌、ウィルムス腫瘍［腎芽細胞腫］、リンパ腫、白血病）、膀胱および尿道（扁平上皮癌腫、移行上皮癌腫、腺癌）、前立腺（腺癌、肉腫）、精巣（精上皮腫、奇形腫、胎児性癌腫、奇形癌、絨毛癌、肉腫、間質細胞癌腫、線維腫、線維腺腫、類腺腫瘍、脂肪腫）、肝臓：ヘパトーマ（肝細胞癌腫）、胆管癌、肝芽腫、血管肉腫、肝細胞腺腫、血管腫、骨：骨原性肉腫（骨肉腫）、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性リンパ腫（細網細胞肉腫）、多発性骨髄腫、悪性巨細胞腫瘍脊索腫、オステオクロンフロマ（骨軟骨性外骨腫）、良性軟骨腫、軟骨芽細胞腫、軟骨粘液線維腫、類骨骨腫および巨細胞腫瘍、神経系：頭蓋（骨腫、血管腫、肉芽腫、黄色腫、変形性骨炎）、髄膜（髄膜腫、髄膜肉腫、神経膠腫症）、脳（星細胞腫、髄芽腫、神経膠腫、上衣腫、胚細胞腫［松果体腫］、多形性膠芽腫、乏突起膠腫、神経鞘腫、網膜芽細胞腫、先天性腫瘍）、脊髄神経線維腫、髄膜腫、神経膠腫、肉腫）、婦人科的：子宮（子宮内膜癌腫）、子宮頸部（子宮頸癌腫、前腫瘍子宮頸部異形成）、卵巣（卵巣癌腫［漿液性嚢胞腺癌、粘液性嚢胞腺癌、未分類癌腫］、顆粒膜莢膜細胞腫瘍、セルトリ・ライディッヒ細胞腫瘍、未分化胚細胞腫、悪性奇形腫）、外陰部（扁平上皮癌腫、上皮内癌腫、腺癌、線維肉腫、黒色腫）、膣（明細胞癌腫、扁平上皮癌腫、ブドウ状肉腫（胎児性横紋筋肉腫）、卵管（癌腫）、***、血液学的：血液（骨髄性白血病［急性および慢性］、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、骨髄増殖性疾患、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群）、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫［悪性リンパ腫］、皮膚：悪性黒色腫、基底細胞癌腫、扁平上皮癌腫、カルポジ肉腫、黒子異形成母斑、脂肪腫、血管腫、皮膚線維腫、ケロイド、乾癬、ならびに副腎：神経芽細胞腫が挙げられるが、これらに限定されない。

「ＷＥＥ１キナーゼ関連癌」という用語は、本記載で言及される場合、ＷＥＥ１キナーゼの活性または阻害と関連する癌、例えば脳癌、頭頸部癌、食道癌、甲状腺癌、小細胞癌、非小細胞癌、乳癌、肺癌、胃癌、胆嚢／胆管癌、肝臓癌、膵臓癌、結腸癌、直腸癌、卵巣癌、絨毛癌、子宮体癌、子宮頸癌、腎盂／尿管癌、膀胱癌、前立腺癌、陰茎癌、精巣癌、胎児癌、ウィルムス癌、皮膚癌、悪性黒色腫、神経芽細胞腫、骨肉腫、ユーイング腫瘍、軟部肉腫、急性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫を含むが、これらに限定されない癌、またはこれらの癌の化学療法または放射線療法に対する増感剤として意味する。特に、本発明のＷＥＥ１阻害剤は、例えば乳癌、肺癌、膵臓癌、結腸癌、卵巣癌、急性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫に対する治療薬として、またはこれらの癌の化学療法または放射線療法に対する増感剤として有用である。

別の実施形態では、癌は、卵巣癌、黒色腫、肺癌、結腸直腸癌、結腸癌、直腸癌、前立腺癌、および乳癌から成る群から選択される。

さらなる実施形態では、癌は、卵巣癌腫、卵巣明細胞癌腫、卵巣腺癌、卵巣奇形癌、皮膚悪性黒色腫、悪性黒色腫、肺癌腫、大細胞肺癌、肺腺癌、非小細胞肺癌、肺扁平上皮癌腫、結腸直腸癌腫、結腸直腸腺癌、結腸癌腫、直腸腺癌、前立腺癌腫、乳管癌腫および乳癌から成る群から選択される。

さらに別の実施形態では、癌は卵巣癌である。さらなる実施形態では、癌は肺癌である。

本発明の別の実施形態では、患者においてＷＥＥ１活性を阻害する、または調節する方法が提供される。

「癌の処置」という用語は、本記載で言及される場合、患者において癌細胞の成長を阻害するように抗癌剤が癌患者に投与されることを意味する。

「患者」または「対象」という用語は、本記載で言及される場合、医学的介入または処置を必要とするレシピエントを意味する。哺乳動物および非哺乳動物患者または対象が含まれる。

併用療法
本発明の方法におけるＷＥＥ１阻害剤と治療剤、化学療法剤および抗癌剤との組み合わせは、本発明の範囲内である。ＷＥＥ１阻害剤はまた、１種以上の追加の抗癌剤と組み合わせて投与されてもよく、この量のＷＥＥ１阻害剤および抗癌剤は治療効果をもたらす。このような薬剤の例は、Ｖ．Ｔ．ＤｅｖｉｔａおよびＳ．Ｈｅｌｌｍａｎ（編集者）によるＣａｎｃｅｒ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，第６版（２００１年２月１５日），Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓに見出され得る。当業者は、関与する薬物および癌の特定の特性に基づいて、薬剤のどの組み合わせが有用であるかを判別することができるだろう。このような薬剤としては、以下のものが挙げられる：エストロゲン受容体モジュレーター、アンドロゲン受容体モジュレーター、レチノイド受容体モジュレーター、細胞傷害／細胞増殖抑制剤、抗増殖剤、プレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤およびその他の血管新生阻害剤、ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤、逆転写酵素阻害剤、細胞増殖および生存シグナル伝達の阻害剤、ビスホスホネート、アロマターゼ阻害剤、ｓｉＲＮＡ治療薬、γ−セクレターゼ阻害剤、受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）に干渉する薬剤ならびに細胞周期チェックポイントに干渉する薬剤。ＷＥＥ１阻害剤はまた、放射線療法と同時投与される場合も有用であってよい。ＷＥＥ１阻害剤は、抗癌剤と同じ投与単位で、または別々の投与単位で存在し得る。

好適な抗癌剤の非限定的例としては、以下の通り、癌および腫瘍性疾患に対する細胞増殖抑制剤、細胞傷害剤、標的治療剤（小分子、生物製剤、ｓｉＲＮＡおよびマイクロＲＮＡ）が挙げられる：
１）代謝拮抗剤（メトトレキサート、５−フルオロウラシル、ゲムシタビン、フルダラビン、カペシタビンなど）、
２）アルキル化剤、例えばテモゾロミドおよびシクロホスファミドなど、
３）ＤＮＡ相互作用剤およびＤＮＡ損傷剤、例えばシスプラチン、オキサリプラチンおよびドキソルビシンなど、
４）電離放射線照射、例えば放射線療法など、
５）トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、例えばエトポシドおよびドキソルビシンなど、
６）トポイソメラーゼＩ阻害剤、例えばイリノテカンおよびトポテカンなど、
７）チューブリン相互作用剤、例えばパクリタキセル、ドセタキセル、アブラキサンおよびエポチロンなど、
８）キネシンスピンドルタンパク質阻害剤、
９）スピンドルチェックポイント阻害剤、
１０）ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害剤、例えばオラパリブ、ＭＫ−４８２７およびベリパリブなど、
１１）マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害剤、
１２）プロテアーゼ阻害剤、例えばカテプシンＤおよびカテプシンＫ阻害剤など、
１３）プロテオソームまたはユビキチン化阻害剤、例えばボルテゾミブなど、
１４）その野生型ｐ５３活性を回復させる変異体ｐ５３の活性化剤、
１５）アデノウイルス−ｐ５３、
１６）Ｂｃｌ−２阻害剤、例えばＡＢＴ−２６３など、
１７）熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）モジュレーター、例えばゲルダナマイシンおよび１７−ＡＡＧなど、
１８）ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤、例えばボリノスタット（ＳＡＨＡ）など、
１９）性ホルモン調節剤、
ａ．抗エストロゲン、例えばタモキシフェンおよびフルベストラントなど、
ｂ．選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）、例えばラロキシフェンなど、
ｃ．抗アンドロゲン、例えばビカルタミドおよびフルタミドなど、
ｄ．ＬＨＲＨアゴニスト、例えばロイプロリドなど、
ｅ．５α−レダクターゼ阻害剤、例えばフィナステリドなど、
ｆ．シトクロムＰ４５０ Ｃ１７リアーゼ（ＣＹＰ４５０ｃ１７、１７α−ヒドロキシラーゼ／１７，２０ライセースとも呼ばれる）阻害剤、例えばアビラテロン酢酸エステル、ＶＮ／１２４−１およびＴＡＫ−７００など、
ｇ．アロマターゼ阻害剤、例えばレトロゾール、アナストロゾールおよびエキセメスタンなど、
２０）ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤、例えばゲフチニブ、エルロチニブおよびラプチニブなど、
２１）二重ｅｒｂＢ１およびｅｒｂＢ２阻害剤、例えばラパチニブなど、
２２）多重標的キナーゼ（セリン／スレオニンおよび／またはチロシンキナーゼ）阻害剤、
ａ．ＡＢＬキナーゼ阻害剤、イマチニブ、ニロチニブおよびダサチニブ、
ｂ．ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、ＰＤＧＦＲ、ＫＤＲ、ＦＬＴ、ｃ−Ｋｉｔ、Ｔｉｅ２、Ｒａｆ、ＭＥＫおよびＥＲＫ阻害剤、例えばスニチニブ、ソラフェニブ、バンデタニブ、パゾパニブ、ＰＬＸ−４０３２、アキシチニブ、ＰＴＫ７８７およびＧＳＫ−１１２０２１２など、
ｃ．ポロ様キナーゼ阻害剤、
ｄ．オーロラキナーゼ阻害剤、
ｅ．ＪＡＫ阻害剤、
ｆ．ｃ−ＭＥＴキナーゼ阻害剤、
ｇ．サイクリン依存性キナーゼ阻害剤、例えばＣＤＫ１およびＣＤＫ２阻害剤のＳＣＨ７２７９６５など、
ｈ．ＰＩ３ＫおよびｍＴＯＲ阻害剤、例えばＧＤＣ−０９４１、ＢＥＺ−２３５、ＢＫＭ−１２０およびＡＺＤ−８０５５など、
ｉ．ラパマイシンおよびその類似体、例えばテムシロリムス、エベロリムス、およびデフォロリムスなど、
２３）ならびにその他の抗癌（抗新生物薬としても知る）剤としては、ａｒａ−Ｃ、アドリアマイシン、シトキサン、カルボプラチン、ウラシルマスタード、クロルメチン、イホスフスミド、メルファラン、クロラムブシル、ピポブロマン、トリエチレンメラミン、トリエチレンチオホスホラミン、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン、ダカルバジン、フロクスウリジン、シタラビン、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、リン酸フルダラビン、ペントスタチン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、ナベルビン、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、テニポシド、シタラビン、ペメトレキセド、イダルビシン、ミトラマイシン、デオキシコホルマイシン、マイトマイシン−Ｃ、ｌ−アスパラギナーゼ、テニポシド、エチニルエストラジオール、ジエチルスチルベストロール、テストステロン、プレドニゾン、フルオキシメステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、テストラクトン、酢酸メゲストロール、メチルプレドニソロン、メチルテストステロン、プレドニソロン、トリアムシノロン、クロロトリアニセン、ヒドロキシプロゲステロン、アミノグルテチミド、エストラムスチン、フルタミド酢酸メドロキシプロゲステロン、トレミフェン、ゴセレリン、カルボプラチン、ヒドロキシ尿素、アムサクリン、プロカルバジン、ミトタン、ミトキサントロン、レバミソール、ドロロキサフィン、ヘキサメチルメラミン、ベキサール、ゼバリン、トリセノックス、プロフィマー、チオテパ、アルトレタミン、ドキシル、オンタック、デポサイト、アラネスプ、ニューポジェン、ニューラスタおよびケピバンスが挙げられるが、これらに限定されず、
２４）ファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、例えばＳＡＲＡＳＡＲ（商標）（４−［２−［４−［（１１Ｒ）−３，１０−ジブロモ−８−クロロ−６，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［５，６］シクロヘプタ［１，２−ｂ］ピリジン−１１−イル−］−１−ピペリジニル］−２−オキソエチル］−ピペリジンカルボキサミドおよびチピファルニブなど、
２５）インターフェロン、例えばイントロンＡおよびＰｅｇ−イントロンなど、
２６）抗ｅｒｂＢ１抗体、例えばセツキシマブおよびパニツムマブなど、
２７）抗ｅｒｂＢ２抗体、例えばトラスツズマブなど、
２８）抗ＣＤ５２抗体、例えばアレムツズマブなど、
２９）抗ＣＤ２０抗体、例えばリツキシマブなど、
３０）抗ＣＤ３３抗体、例えばゲムツズマブオゾガマイシンなど、
３１）抗ＶＥＧＦ抗体、例えばアバスチンなど、
３２）ＴＲＩＡＬリガンド、例えばレクサツムマブ、マパツムマブ、およびＡＭＧ−６５５など、
３３）抗ＣＴＬＡ−４抗体、例えばイピリムマブなど、
３４）ＣＴＡ１、ＣＥＡ、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ４４、ＣＤ４４Ｖ６、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、ＭＨＣＩＩ、ＨＧＦ、ＩＬ−６、ＭＵＣ１、ＰＳＭＡ、ＴＡＬ６、ＴＡＧ−７２、ＴＲＡＩＬＲ、ＶＥＧＦＲ、ＩＧＦ−２およびＦＧＦに対する抗体、ならびに
３５）抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体、例えばダロツズマブ（ＭＫ−０６４６）およびロバツムマブ（ＳＣＨ７１７４５４）など。

固定用量として製剤化される場合、このような組み合わせ生成物は、本明細書に記載される投与量範囲内で本発明において投与されるＷＥＥ１阻害剤およびその投与量範囲内でその他の薬学的活性剤または処置を用いる。ＷＥＥ１阻害剤はまた、組み合わせ製剤が不適切である場合には、既知の抗癌剤または細胞傷害剤と連続して投与されてよい。本発明は投与の順序について限定されず、ＷＥＥ１阻害剤は、既知の抗癌剤または細胞傷害剤の投与と同時、投与前または投与後のいずれかで投与されてよい。このような技術は、当業者ならびに主治医の技能の範囲内である。

したがって、一態様では、本発明は、ある量のＷＥＥ１阻害剤、またはその薬学的に許容される塩、ならびに上にまたは下に列挙されるある量の１種以上の抗癌処置および抗癌剤を含む、本発明に使用するための組み合わせを含み、この量の化合物／処置は可能な治療効果をもたらす。一実施形態では、抗癌剤は、５−ＦＵ、カルボプラチン、ドキソルビシン、エトポシド、ゲムシタビン、イリノテカン、マイトマイシン、テモゾルミドおよびトポテカンから成る群から選択される。別の実施形態では、抗癌剤はカルボプラチンである。別の実施形態では、抗癌剤は、カルボプラチンおよびパクリタキセルである。

「エストロゲン受容体モジュレーター」は、機序にかかわらず、エストロゲンと受容体との結合に干渉する、またはそれを阻害する化合物を指す。エストロゲン受容体モジュレーターの例としては、タモキシフェン、ラロキシフェン、イドキシフェン、ＬＹ３５３３８１、ＬＹ１１７０８１、トレミフェン、フルベストラント、４−［７−（２，２−ジメチル−１−オキソプロポキシ−４−メチル−２−［４−［２−（１−ピペリジニル）エトキシ］フェニル］−２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−イル］−フェニル−２，２−ジメチルプロパノエート、４，４’−ジヒドロキシベンゾフェノン−２，４−ジニトロフェニル−ヒドラゾン、およびＳＨ６４６が挙げられるが、これらに限定されない。

「アンドロゲン受容体モジュレーター」は、機序にかかわらず、アンドロゲンと受容体との結合に干渉する、またはそれを阻害する化合物を指す。アンドロゲン受容体モジュレーターの例としては、フィナステリドおよびその他の５α−レダクターゼ阻害剤、ニルタミド、フルタミド、ビカルタミド、リアロゾール、ならびにアビラテロン酢酸エステルが挙げられる。

「レチノイド受容体モジュレーター」は、機序にかかわらず、レチノイドと受容体との結合に干渉する、またはそれを阻害する化合物を指す。このようなレチノイド受容体モジュレーターの例としては、ベキサロテン、トレチノイン、１３−シス−レチノイン酸、９−シス−レチノイン酸、α−ジフルオロメチルオルニチン、ＩＬＸ２３−７５５３、トランス−Ｎ−（４’−ヒドロキシフェニル）レチナミド、およびＮ−４−カルボキシフェニルレチナミドが挙げられる。

「細胞傷害／細胞増殖抑制剤」は、主に細胞の機能に直接干渉することにより細胞死を引き起こす、もしくは細胞増殖を阻害する化合物、または細胞の有糸***を阻害する、もしくはそれに干渉する化合物を指し、アルキル化剤、腫瘍壊死因子、インターカレーター、低酸素活性化可能化合物、微小管阻害剤／微小管安定化剤、有糸***キネシンの阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、有糸***の進行に関与するキナーゼの阻害剤、成長因子およびサイトカインのシグナル伝達経路に関与するキナーゼの阻害剤、代謝拮抗剤、生物学的応答調節剤、ホルモン／抗ホルモン治療剤、造血成長因子、モノクローナル抗体標的治療剤、トポイソメラーゼ阻害剤、プロテオソーム阻害剤、ユビキチンリガーゼ阻害剤、ならびにオーロラキナーゼ阻害剤を含む。

細胞傷害／細胞増殖抑制剤の例としては、白金配位化合物、セルテネフ、カケクチン、イホスファミド、タソネルミン、ロニダミン、カルボプラチン、アルトレタミン、プレドニムスチン、ジブロモズルシトール、ラニムスチン、フォテムスチン、ネダプラチン、オキサリプラチン、テモゾロミド、ヘプタプラチン、エストラムスチン、トシル酸インプロスルファン、トロホスファミド、ニムスチン、塩化ジブロスピジウム、プミテパ、ロバプラチン、サトラプラチン、プロフィロマイシン、シスプラチン、イロフルベン、デキシホスファミド、シス−アミンジクロロ（２−メチル−ピリジン）白金、ベンジルグアニン、グルフォスファミド、ＧＰＸ１００、（トランス、トランス、トランス）−ビス−ミュー−（ヘキサン−１，６−ジアミン）−ミュー−［ジアミン−白金（ＩＩ）］ビス［ジアミン（クロロ）白金（ＩＩ）］テトラクロリド、ジアリジジニルスペルミン、三酸化ヒ素、１−（１１−ドデシルアミノ−１０−ヒドロキシウンデシル）−３，７−ジメチルキサンチン、ゾルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、ビサントレン、ミトキサントロン、ピラルビシン、ピナフィド、バルルビシン、アムルビシン、アンチネオプラストン、３’−デアミノ−３’−モルホリノ−１３−デオキソ−１０−ヒドロキシカルミノマイシン、アナマイシン、ガラルビシン、エリナフィド、ＭＥＮ１０７５５、４−デメトキシ−３−デアミノ−３−アジリジニル−４−メチルスルホニル−ダウノルビシン（国際公開第００／５００３２号パンフレットを参照のこと）が挙げられるが、これらに限定されない。

プロテオソーム阻害剤の例としては、ラクタシスチンおよびＭＬＮ−３４１（Ｖｅｌｃａｄｅ）が挙げられるが、これらに限定されない。

微小管阻害剤／微小管安定化剤の例としては、一般にタキサンが挙げられる。特定の化合物としては、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、硫酸ビンデシン、３’，４’−ジデヒドロ−４’−デオキシ−８’−ノルビンカロイコブラスチン、ドセタキソール（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、リゾキシン、ドラスタチン、イセチオン酸ミボブリン、アウリスタチン、セマドチン、ＲＰＲ１０９８８１、ＢＭＳ１８４４７６、ビンフルニン、クリプトフィシン、２，３，４，５，６−ペンタフルオロ−Ｎ−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）ベンゼンスルホンアミド、アンヒドロビンブラスチン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−バリル−Ｌ−バリル−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリル−Ｌ−プロリン−ｔ−ブチルアミド、ＴＤＸ２５８、エポチロン（例えば、米国特許第６，２８４，７８１号明細書および第６，２８８，２３７号明細書を参照のこと）およびＢＭＳ１８８７９７が挙げられる。

トポイソメラーゼ阻害剤のいくつかの例は、トポテカン、ヒカプタミン、イリノテカン、ルビテカン、６−エトキシプロピオニル−３’，４’−Ｏ−エキソ−ベンジリデン−チャートロイシン、９−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−５−ニトロピラゾロ［３，４，５−ｋｌ］アクリジン−２−（６Ｈ）プロパンアミン、１−アミノ−９−エチル−５−フルオロ−２，３−ジヒドロ−９−ヒドロキシ−４−メチル−１Ｈ，１２Ｈ−ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：ｂ，７］−インドリジノ［１，２ｂ］キノリン−１０，１３（９Ｈ，１５Ｈ）ジオン、ルルトテカン、７−［２−（Ｎ−イソプロピルアミノ）エチル］−（２０Ｓ）カンプトテシン、ＢＮＰ１３５０、ＢＮＰＩ１１００、ＢＮ８０９１５、ＢＮ８０９４２、リン酸エトポシド、テニポシド、ソブゾキサン、２’−ジメチルアミノ−２’−デオキシ−エトポシド、ＧＬ３３１、Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−９−ヒドロキシ−５，６−ジメチル−６Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］カルバゾール−１−カルボキサミド、アスラクリン、（５ａ，５ａＢ，８ａａ，９ｂ）−９−［２−［Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−Ｎ−メチルアミノ］エチル］−５−［４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシフェニル］−５，５ａ，６，８，８ａ，９−ヘキソヒドロフロ（３’，４’：６，７）ナフト（２，３−ｄ）−１，３−ジオキソール−６−オン、２，３−（メチレンジオキシ）−５−メチル−７−ヒドロキシ−８−メトキシベンゾ［ｃ］−フェナントリジニウム、６，９−ビス［（２−アミノエチル）アミノ］ベンゾ［ｇ］イソギノリン−５，１０−ジオン、５−（３−アミノプロピルアミノ）−７，１０−ジヒドロキシ−２−（２−ヒドロキシエチルアミノメチル）−６Ｈ−ピラゾロ［４，５，１−ｄｅ］アクリジン−６−オン、Ｎ−［１−［２（ジエチルアミノ）エチルアミノ］−７−メトキシ−９−オキソ−９Ｈ−チオキサンテン−４−イルメチル］ホルムアミド、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）アクリジン−４−カルボキサミド、６−［［２−（ジメチルアミノ）エチル］アミノ］−３−ヒドロキシ−７Ｈ−インデノ［２，１−ｃ］キノリン−７−オン、およびジメスナである。

有糸***キネシン、特にヒト有糸***キネシンＫＳＰの阻害剤の例は、国際公開第０３／０３９４６０号パンフレット、第０３／０５００６４号パンフレット、第０３／０５０１２２号パンフレット、第０３／０４９５２７号パンフレット、第０３／０４９６７９号パンフレット、第０３／０４９６７８号パンフレット、第０４／０３９７７４号パンフレット、第０３／０７９９７３号パンフレット、第０３／０９９２１１号パンフレット、第０３／１０５８５５号パンフレット、第０３／１０６４１７号パンフレット、第０４／０３７１７１号パンフレット、第０４／０５８１４８号パンフレット、第０４／０５８７００号パンフレット、第０４／１２６６９９号パンフレット、第０５／０１８６３８号パンフレット、第０５／０１９２０６号パンフレット、第０５／０１９２０５号パンフレット、第０５／０１８５４７号パンフレット、第０５／０１７１９０号パンフレット、米国特許出願公開第２００５／０１７６７７６号明細書に記載されている。一実施形態では、有糸***キネシンの阻害剤としては、ＫＳＰの阻害剤、ＭＫＬＰ１の阻害剤、ＣＥＮＰ−Ｅの阻害剤、ＭＣＡＫの阻害剤およびＲａｂ６−ＫＩＦＬの阻害剤が挙げられるが、これらに限定されない。

「ヒストンデアセチラーゼ阻害剤」の例としては、ＳＡＨＡ、ＴＳＡ、オキサムフラチン、ＰＸＤ１０１、ＭＧ９８およびスクリプタイドが挙げられるが、これらに限定されない。その他のヒストンデアセチラーゼ阻害剤へのさらなる言及は、次の原稿、Ｍｉｌｌｅｒ，Ｔ．Ａ．ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４６（２４）：５０９７−５１１６（２００３）に見出されてよい。

「有糸***の進行に関与するキナーゼの阻害剤」としては、オーロラキナーゼの阻害剤、ポロ様キナーゼの阻害剤（ＰＬＫ、特にＰＬＫ−１の阻害剤）、ｂｕｂ−１の阻害剤およびｂｕｂ−Ｒ１の阻害剤が挙げられるが、これらに限定されない。「オーロラキナーゼ阻害剤」の一例は、ＶＸ−６８０である。

「抗増殖剤」としては、アンチセンスＲＮＡおよびＤＮＡオリゴヌクレオチド、例えばＧ３１３９、ＯＤＮ６９８、ＲＶＡＳＫＲＡＳ、ＧＥＭ２３１、およびＩＮＸ３００１など、ならびに代謝拮抗剤、例えばエノシタビン、カルモフール、テガフール、ペントスタチン、ドキシフルリジン、トリメトレキサート、フルダラビン、カペシタビン、ガロシタビン、シタラビンオクホスファート、フォステアビンナトリウム水和物、ラルチトレキセド、パルチトレキシド、エミテフール、チアゾフリン、デシタビン、ノラトレキセド、ペメトレキセド、ネルザラビン、２’−デオキシ−２’−メチリデンシチジン、２’−フルオロメチレン−２’−デオキシシチジン、Ｎ−［５−（２，３−ジヒドロ−ベンゾフリル）スルホニル］−Ｎ’−（３，４−ジクロロフェニル）尿素、Ｎ６−［４−デオキシ−４−［Ｎ２−［２（Ｅ），４（Ｅ）−テトラデカジエノイル］グリシルアミノ］−Ｌ−グリセロ−Ｂ−Ｌ−マンノ−ヘプトピラノシル］アデニン、アプリジン、エクテイナシジン、トロキサシタビン、４−［２−アミノ−４−オキソ−４，６，７，８−テトラヒドロ−３Ｈ−ピリミジノ［５，４−ｂ］［１，４］チアジン−６−イル−（Ｓ）−エチル］−２，５−チエノイル−Ｌ−グルタミン酸、アミノプテリン、５−フルロウラシル、アラノシン、１１−アセチル−８−（カルバモイルオキシメチル）−４−ホルミル−６−メトキシ−１４−オキサ−１，１１−ジアザテトラシクロ（７．４．１．０．０）−テトラデカ−２，４，６−トリエン−９−イル酢酸エステル、スワインソニン、ロメトレキソール、デクスラゾキサン、メチオニナーゼ、２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−Ｂ−Ｄ−アラビノフラノシルシトシン、３−アミノピリジン−２−カルボキシアルデヒドチオセミカルバゾンおよびトラスツズマブなどが挙げられる。

モノクローナル抗体標的治療剤の例としては、癌細胞特異的または標的細胞特異的モノクローナル抗体に結合される細胞傷害剤または放射性同位体を有する、これらの治療剤が挙げられる。例としては、Ｂｅｘｘａｒが挙げられる。

「ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤」は、３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−ＣｏＡレダクターゼの阻害剤を指す。使用されてよいＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤の例としては、ロバスタチン（ＭＥＶＡＣＯＲ（登録商標）、米国特許第４，２３１，９３８号明細書、第４，２９４，９２６号明細書および第４，３１９，０３９号明細書を参照のこと）、シンバスタチン（ＺＯＣＯＲ（登録商標）、米国特許第４，４４４，７８４号明細書、第４，８２０，８５０号明細書および第４，９１６，２３９号明細書を参照のこと）、プラバスタチン（ＰＲＡＶＡＣＨＯＬ（登録商標）、米国特許第４，３４６，２２７号明細書、第４，５３７，８５９号明細書、第４，４１０，６２９号明細書、第５，０３０，４４７号明細書および第５，１８０，５８９号明細書を参照のこと）、フルバスタチン（ＬＥＳＣＯＬ（登録商標）、米国特許第５，３５４，７７２号明細書、第４，９１１，１６５号明細書、第４，９２９，４３７号明細書、第５，１８９，１６４号明細書、第５，１１８，８５３号明細書、第５，２９０，９４６号明細書および第５，３５６，８９６号明細書を参照のこと）、アトルバスタチン（ＬＩＰＩＴＯＲ（登録商標）、米国特許第５，２７３，９９５号明細書、第４，６８１，８９３号明細書、第５，４８９，６９１号明細書および第５，３４２，９５２号明細書を参照のこと）およびセリバスタチン（リバスタチンおよびＢＡＹＣＨＯＬ（登録商標）としても知られる、米国特許第５，１７７，０８０号明細書を参照のこと）が挙げられるが、これらに限定されない。本方法で使用されてよい、これらのおよびさらなるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤の構造式は、Ｍ．Ｙａｌｐａｎｉ，「Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ Ｌｏｗｅｒｉｎｇ Ｄｒｕｇｓ」，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ＆Ｉｎｄｕｓｔｒｙ，ｐｐ．８５−８９（１９９６年２月５日）の８７頁、ならびに米国特許第４，７８２，０８４号明細書および第４，８８５，３１４号明細書に記載されている。ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤という用語は、本明細書で使用する場合、全ての薬学的に許容されるラクトンおよびオープンアシッド型（すなわち、ラクトン環が開いて遊離酸を形成する）ならびにＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害活性を有する化合物の塩およびエステル型を含み、このような塩、エステル、オープンアシッドおよびラクトン型のそのための使用が本発明の範囲内に含まれる。

「プレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤」は、ファルネシル−タンパク質トランスフェラーゼ（ＦＰＴａｓｅ）、ゲラニルゲラニル−タンパク質トランスフェラーゼＩ型（ＧＧＰＴａｓｅ−Ｉ）、およびゲラニルゲラニル−タンパク質トランスフェラーゼＩＩ型（ＧＧＰＴａｓｅ−ＩＩ、Ｒａｂ ＧＧＰＴａｓｅとも呼ばれる）を含む、プレニル−タンパク質トランスフェラーゼ酵素のいずれか１つまたはいずれかの組み合わせを阻害する化合物を指す。

プレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤の例は、次の刊行物および特許：国際公開第９６／３０３４３号パンフレット、第９７／１８８１３号パンフレット、第９７／２１７０１号パンフレット、第９７／２３４７８号パンフレット、第９７／３８６６５号パンフレット、第９８／２８９８０号パンフレット、第９８／２９１１９号パンフレット、第９５／３２９８７号パンフレット、米国特許第５，４２０，２４５号明細書、米国特許第５，５２３，４３０号明細書、米国特許第５，５３２，３５９号明細書、米国特許第５，５１０，５１０号明細書、米国特許第５，５８９，４８５号明細書、米国特許第５，６０２，０９８号明細書、欧州特許出願公開第０６１８２２１号明細書、欧州特許出願公開第０６７５１１２号明細書、欧州特許出願公開第０６０４１８１号明細書、欧州特許出願公開第０６９６５９３号明細書、国際公開第９４／１９３５７号パンフレット、第９５／０８５４２号パンフレット、第９５／１１９１７号パンフレット、第９５／１２６１２号パンフレット、第９５／１２５７２号パンフレット、第９５／１０５１４号パンフレット、米国特許第５，６６１，１５２号明細書、国際公開第９５／１０５１５号パンフレット、第９５／１０５１６号パンフレット、第９５／２４６１２号パンフレット、第９５／３４５３５号パンフレット、第９５／２５０８６号パンフレット、第９６／０５５２９号パンフレット、第９６／０６１３８号パンフレット、第９６／０６１９３号パンフレット、第９６／１６４４３号パンフレット、第９６／２１７０１号パンフレット、第９６／２１４５６号パンフレット、第９６／２２２７８号パンフレット、第９６／２４６１１号パンフレット、第９６／２４６１２号パンフレット、第９６／０５１６８号パンフレット、第９６／０５１６９号パンフレット、第９６／００７３６号パンフレット、米国特許第５，５７１，７９２号明細書、国際公開第９６／１７８６１号パンフレット、第９６／３３１５９号パンフレット、第９６／３４８５０号パンフレット、第９６／３４８５１号パンフレット、第９６／３００１７号パンフレット、第９６／３００１８号パンフレット、第９６／３０３６２号パンフレット、第９６／３０３６３号パンフレット、第９６／３１１１１号パンフレット、第９６／３１４７７号パンフレット、第９６／３１４７８号パンフレット、第９６／３１５０１号パンフレット、第９７／００２５２号パンフレット、第９７／０３０４７号パンフレット、第９７／０３０５０号パンフレット、第９７／０４７８５号パンフレット、第９７／０２９２０号パンフレット、第９７／１７０７０号パンフレット、第９７／２３４７８号パンフレット、第９７／２６２４６号パンフレット、第９７／３００５３号パンフレット、第９７／４４３５０号パンフレット、第９８／０２４３６号パンフレット、および米国特許第５，５３２，３５９号明細書に見出され得る。血管新生におけるプレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤の役割の例については、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊ．ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ，Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．９，ｐｐ．１３９４−１４０１（１９９９）を参照のこと。

「血管新生阻害剤」は、機序にかかわらず、新しい血管の形成を阻害する化合物を指す。血管新生阻害剤の例としては、チロシンキナーゼ阻害剤、例えばチロシンキナーゼ受容体Ｆｌｔ−１（ＶＥＧＦＲ１）およびＦｌｋ−１／ＫＤＲ（ＶＥＧＦＲ２）の阻害剤など、上皮由来、線維芽細胞由来、または血小板由来増殖因子の阻害剤、ＭＭＰ（マトリックスメタロプロテアーゼ）阻害剤、インテグリンブロッカー、インターフェロン−α、インターロイキン−１２、ポリ硫酸ペントサン、アスピリンおよびイブプロフェンのような非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）ならびにセレコキシブおよびロフェコキシブのような選択的シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤を含む、シクロオキシゲナーゼ阻害剤（ＰＮＡＳ，Ｖｏｌ．８９，ｐ．７３８４（１９９２）、ＪＮＣＩ，Ｖｏｌ．６９，ｐ．４７５（１９８２）、Ａｒｃｈ．Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ．，Ｖｏｌ．１０８，ｐ．５７３（１９９０）、Ａｎａｔ．Ｒｅｃ．，Ｖｏｌ．２３８，ｐ．６８（１９９４）、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ，Ｖｏｌ．３７２，ｐ．８３（１９９５）、Ｃｌｉｎ，Ｏｒｔｈｏｐ．Ｖｏｌ．３１３，ｐ．７６（１９９５）、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．，Ｖｏｌ．１６，ｐ．１０７（１９９６）、Ｊｐｎ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，Ｖｏｌ．７５，ｐ．１０５（１９９７）、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，Ｖｏｌ．５７，ｐ．１６２５（１９９７）、Ｃｅｌｌ，Ｖｏｌ．９３，ｐ．７０５（１９９８）、Ｉｎｔｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．，Ｖｏｌ．２，ｐ．７１５（１９９８）、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．２７４，ｐ．９１１６（１９９９））、ステロイド性抗炎症薬（例えば、コルチコステロイド、鉱質コルチコイド、デキサメタゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレド、ベタメタゾンなど）、カルボキシアミドトリアゾール、コンブレタスタチンＡ−４、スクアラミン、６−Ｏ−クロロアセチル−カルボニル）−フマギロール、サリドマイド、アンジオスタチン、トロポニン−１、アンジオテンシンＩＩアンタゴニスト（Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１０５：１４１−１４５（１９８５）を参照のこと）、ならびにＶＥＧＦに対する抗体（Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１７，ｐｐ．９６３−９６８（１９９９年１０月）、Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６２，８４１−８４４（１９９３）、国際公開第００／４４７７７号パンフレット、および第００／６１１８６号パンフレットを参照のこと）が挙げられるが、これらに限定されない。

血管新生阻害剤のその他の例としては、エンドスタチン、ウクライン、ランピルナーゼ、ＩＭ８６２、５−メトキシ−４−［２−メチル−３−（３−メチル−２−ブテニル）オキシラニル］−１−オキサスピロ［２，５］オクト−６−イル（クロロアセチル）カルバメート、アセチルジナナリン、５−アミノ−１−［［３，５−ジクロロ−４−（４−クロロベンゾイル）フェニル］メチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミド、ＣＭ１０１、スクアラミン、コンブレタスタチン、ＲＰＩ４６１０、ＮＸ３１８３８、硫酸化リン酸マンノペンタオース、７，７−（カルボニル−ビス［イミノ−Ｎ−メチル−４，２−ピロロカルボニルイミノ［Ｎ−メチル−４，２−ピロール］−カルボニルイミノ］−ビス−（１，３−ナフタレンジスルホネート）、および３−［（２，４−ジメチルピロール−５−イル）メチレン］−２−インドリノン（ＳＵ５４１６）が挙げられるが、これらに限定されない。

血管新生を調節または阻害し、ＷＥＥ１阻害剤と組み合わせて使用されてもよい、その他の治療剤としては、凝固および線維素溶解系を調節または阻害する薬剤が挙げられる（Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｌａ．Ｍｅｄ．３８：６７９−６９２（２０００）の概説を参照のこと）。凝固および線維素溶解経路を調節または阻害するこのような薬剤の例としては、ヘパリン（Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．８０：１０−２３（１９９８）を参照のこと）、低分子量ヘパリンおよびカルボキシペプチダーゼＵ阻害剤（活性型トロンビン活性化可能線維素溶解阻害因子［ＴＡＦＩａ］の阻害剤としても知られる）（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ Ｒｅｓ．１０１：３２９−３５４（２００１）を参照のこと）が挙げられるが、これらに限定されない。ＴＡＦＩａ阻害剤は、米国特許出願第６０／３１０，９２７号明細書（２００１年８月８日出願）および第６０／３４９，９２５号明細書（２００２年１月１８日出願）に記載されている。

「細胞周期チェックポイントに干渉する薬剤」は、細胞周期チェックポイントシグナルを伝達するタンパク質キナーゼを阻害し、それによってＤＮＡ損傷剤に対する癌細胞の感度を高める化合物を指す。このような薬剤としては、ＡＴＲ、ＡＴＭ、ＣＨＫ１１およびＣＨＫ１２キナーゼの阻害剤ならびにｃｄｋおよびｃｄｃキナーゼ阻害剤が挙げられ、特に７−ヒドロキシスタウロスポリン、フラボピリドール、ＣＹＣ２０２（Ｃｙｃｌａｃｅｌ）およびＢＭＳ−３８７０３２によって例示される。

「受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）に干渉する薬剤」は、ＲＴＫを阻害し、したがって発癌および腫瘍進行に関与する機序を阻害する化合物を指す。このような薬剤としては、ｃ−Ｋｉｔ、Ｅｐｈ、ＰＤＧＦ、Ｆｌｔ３およびｃ−Ｍｅｔの阻害剤が挙げられる。さらなる薬剤としては、Ｂｕｍｅ−Ｊｅｎｓｅｎ ａｎｄ Ｈｕｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ，４１１：３５５−３６５，２００１で記載されているようなＲＴＫの阻害剤が挙げられる。

「細胞増殖および生存シグナル伝達経路の阻害剤」は、細胞表面受容体の下流のシグナル伝達カスケードを阻害する化合物を指す。このような薬剤としては、セリン／スレオニンキナーゼの阻害剤（Ａｋｔの阻害剤、例えば国際公開第０２／０８３０６４号パンフレット、第０２／０８３１３９号パンフレット、第０２／０８３１４０号パンフレット、米国特許出願公開第２００４−０１１６４３２号明細書、国際公開第０２／０８３１３８号パンフレット、米国特許出願公開第２００４−０１０２３６０号明細書、国際公開第０３／０８６４０４号パンフレット、第０３／０８６２７９号パンフレット、第０３／０８６３９４号パンフレット、第０３／０８４４７３号パンフレット、第０３／０８６４０３号パンフレット、第２００４／０４１１６２号パンフレット、第２００４／０９６１３１号パンフレット、第２００４／０９６１２９号パンフレット、第２００４／０９６１３５号パンフレット、第２００４／０９６１３０号パンフレット、第２００５／１００３５６号パンフレット、第２００５／１００３４４号パンフレット、米国特許出願公開第２００５／０２９９４１号明細書、第２００５／４４２９４号明細書、第２００５／４３３６１号明細書、第６０／７３４１８８号明細書、第６０／６５２７３７号明細書、第６０／６７０４６９号明細書に記載されているものなどを含むが、これらに限定されない）、Ｒａｆキナーゼの阻害剤（例えば、ＰＬＸ−４０３２）、ＭＥＫの阻害剤（例えば、Ａｒｒｙ−１６２、ＲＯ−４９８７６５５およびＧＳＫ−１１２０２１２）、ｍＴＯＲの阻害剤（例えば、ＡＺＤ−８０５５、ＢＥＺ−２３５およびエベロリムス）、およびＰＩ３Ｋの阻害剤（例えば、ＧＤＣ−０９４１、ＢＫＭ−１２０）が挙げられる。

上で使用する場合、「インテグリンブロッカー」は、生理的リガンドとα_ｖβ_３インテグリンとの結合に選択的に拮抗する、その結合を阻害する、または抑制する化合物、生理的リガンドとα_ｖβ_５インテグリンとの結合に選択的に拮抗する、その結合を阻害する、または抑制する化合物、生理的リガンドとα_ｖβ_３インテグリンおよびα_ｖβ_５インテグリンの両方との結合に拮抗する、その結合を阻害する、または抑制する化合物、ならびに毛細血管内皮細胞上で発現される特定の（１または複数の）インテグリンの活性に拮抗する、その活性を阻害する、または抑制する化合物を指す。この用語はまた、α_ｖβ_６、α_ｖβ_８、α_１β_１、α_２β_１、α_５β_１、α_６β_１およびα_６β_４インテグリンのアンタゴニストも指す。

チロシンキナーゼ阻害剤のいくつかの具体例としては、Ｎ−（トリフルオロメチルフェニル）−５−メチルイソオキサゾール−４−カルボキサミド、３−［（２，４−ジメチルピロール−５−イル）メチリデニル）インドリン−２−オン、１７−（アリルアミノ）−１７−デメトキシゲルダナマイシン、４−（３−クロロ−４−フルオロフェニルアミノ）−７−メトキシ−６−［３−（４−モルホリニル）プロポキシル］キナゾリン、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−４−キナゾリンアミン、ＢＩＢＸ１３８２、２，３，９，１０，１１，１２−ヘキサヒドロ−１０−（ヒドロキシメチル）−１０−ヒドロキシ−９−メチル−９，１２−エポキシ−１Ｈ−ジインドロ［１，２，３−ｆｇ：３’，２’，１’−ｋｌ］ピロロ［３，４−ｉ］［１，６］ベンゾジアゾシン−１−オン、ＳＨ２６８、ゲニステイン、ＳＴＩ５７１、ＣＥＰ２５６３、４−（３−クロロフェニルアミノ）−５，６−ジメチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンメタンスルホネート、４−（３−ブロモ−４−ヒドロキシフェニル）アミノ−６，７−ジメトキシキナゾリン、４−（４’−ヒドロキシフェニル）アミノ−６，７−ジメトキシキナゾリン、ＳＵ６６６８、ＳＴＩ５７１Ａ、Ｎ−４−クロロフェニル−４−（４−ピリジルメチル）−１−フタラジンアミン、およびＥＭＤ１２１９７４が挙げられる。

ＷＥＥ１阻害剤と、ＰＰＡＲ−γ（すなわち、ＰＰＡＲ−ガンマ）アゴニストおよびＰＰＡＲ−δ（すなわち、ＰＰＡＲ−デルタ）アゴニストとの組み合わせは、ある種の悪性腫瘍の処置に有用であってよい。ＰＰＡＲ−γおよびＰＰＡＲ−δは、核ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γおよびδである。内皮細胞上でのＰＰＡＲ−γの発現および血管新生におけるその関与は、文献で報告されている（Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９８；３１：９０９−９１３、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９９；２７４：９１１６−９１２１、Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．２０００；４１：２３０９−２３１７を参照のこと）。より最近では、ＰＰＡＲ−γアゴニストは、インビトロでＶＥＧＦに対する血管新生応答を阻害することが示されていて、トログリタゾンおよびマレイン酸ロシグリタゾンの両方とも、マウスにおける網膜新血管形成の発生を阻害する。（Ａｒｃｈ．Ｏｐｈｔｈａｍｏｌ．２００１；１１９：７０９−７１７）。ＰＰＡＲ−γアゴニストおよびＰＰＡＲ−γ／αアゴニストの例としては、チアゾリジンジオン（ＤＲＦ２７２５、ＣＳ−０１１、トログリタゾン、ロシグリタゾン、およびピオグリタゾンなど）、フェノフィブラート、ゲムフィブロジル、クロフィブラート、ＧＷ２５７０、ＳＢ２１９９９４、ＡＲ−Ｈ０３９２４２、ＪＴＴ−５０１、ＭＣＣ−５５５、ＧＷ２３３１、ＧＷ４０９５４４、ＮＮ２３４４、ＫＲＰ２９７、ＮＰ０１１０、ＤＲＦ４１５８、ＮＮ６２２、ＧＩ２６２５７０、ＰＮＵ１８２７１６、ＤＲＦ５５２９２６、２−［（５，７−ジプロピル−３−トリフルオロメチル−１，２−ベンゾイソオキサゾール−６−イル）オキシ］−２−メチルプロピオン酸、および２（Ｒ）−７−（３−（２−クロロ−４−（４−フルオロフェノキシ）フェノキシ）プロポキシ）−２−エチルクロマン−２−カルボン酸が挙げられるが、これらに限定されない。

本発明の別の実施形態は、癌の可能な処置のための、遺伝子治療と組み合わせたＷＥＥ１阻害剤の使用である。癌を処置するための遺伝的戦略の概要については、Ｈａｌｌ ｅｔ ａｌ（Ａｍ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．６１：７８５−７８９，１９９７）およびＫｕｆｅ ｅｔ ａｌ（Ｃａｎｃｅｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，５ｔｈ Ｅｄ，ｐｐ８７６−８８９，ＢＣ Ｄｅｃｋｅｒ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ ２０００）を参照のこと。遺伝子治療は、任意の腫瘍抑制遺伝子を送達するために使用され得る。このような遺伝子の例としては、組換えウイルス媒介遺伝子導入により送達され得るｐ５３（例えば、米国特許第６，０６９，１３４号明細書を参照のこと）、ｕＰＡ／ｕＰＡＲアンタゴニスト（「Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ａ ｕＰＡ／ｕＰＡＲ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ Ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｔｕｍｏｒ Ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ Ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｉｏｎ ｉｎ Ｍｉｃｅ」，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，１９９８年８月；５（８）：１１０５−１３）、およびインターフェロンガンマ（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０００；１６４：２１７−２２２）が挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書に開示される本発明は、本開示の範囲を限定すると解釈されるべきではない以下の実施例によって例示される。

［実施例］
［実施例１］
３１の細胞株を、細胞成長アッセイにおいてＷＥＥ１−１を用いて、または用いずに様々なＤＮＡ損傷剤で処置した。細胞を播種した直後、各薬物を４つの濃度で、組み合わせ当たり合計で１６の処置条件（格子状に４×４用量）で添加した。処置の９６時間後、細胞成長を処置試料において、ビヒクル（ＤＭＳＯ）処置試料と比較してＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）で評価した。相乗効果は、２種の薬物について予測した相加的成長阻害（Ｂｌｉｓｓ相加モデルを使用）を、２種の薬物について観察された成長阻害から差し引いたものとして定量化した。したがって、大きな正の正味差は、より高い相乗効果を示し、負の差は拮抗作用を示し、０値または０の近似値はＢｌｉｓｓモデルで予測した相加を示す。スケールを図１の左上隅に表示し、最も濃い灰色は強力な相乗効果を表し、薄灰色は中程度の相乗効果を表し、濃灰色は相乗的ではなく相加的と考えられる値を表す。各縦列は異なる細胞株を表し、各横列はＷＥＥ１−１と異なるＤＮＡ損傷剤との対を表す。細胞株の名称を縦列の上に示し、細胞株が由来した組織タイプを縦列の下に示す。左端の１２の縦列はＴＰ５３野生型であると報告されている細胞株を表し、右端の１９の縦列はＴＰ５３に変異を有すると報告されている細胞株を表す。データを表の右側にまとめる。ｐ５３＋／＋縦列は、アッセイで相乗効果を示したｐ５３＋／＋細胞株のパーセンテージ（すなわち、横列の最も濃い灰色および薄灰色の正方形の数を１２で割ったもの）をまとめている。ｐ５３−／−縦列は、アッセイで相乗効果を示したｐ５３−／−細胞株のパーセンテージ（すなわち、横列の最も濃い灰色および薄灰色の正方形の数を１９で割ったもの）をまとめている。全体として、相乗効果を示したｐ５３野生型細胞株のパーセンテージは、１５／（１２×９）＝１４％であって、相乗効果を示したＰ５３変異体細胞株のパーセンテージは、５０／（１９×９）＝２９％であった。したがって、ＤＮＡ損傷剤と組み合わせたＷＥＥ１−１は、ＴＰ５３に欠陥のある細胞株で相乗的な成長阻害を生じる可能性が高い。

［実施例２］
機能の欠如変異の同定
非機能的ｐ５３タンパク質をもたらす可能性が最も高いであろう変異の一覧表を開発するための複数ステップ手法を実施した。最初に、ｐ５３機能の欠如をもたらすと予測した変異の異なるタイプを、以下の表１に示すように相対的ポイント値に割り当てた。例えば、３ポイントを、ｐ５３のＤＮＡ結合ドメインを、すなわちアミノ酸３０６前で完全に排除するだろう切断、フレームシフトまたはスプライス部位欠陥をもたらす、いずれかの変異に割り当てた。（フレームシフト変異は、リボソームにｍＲＮＡ上の異なるリーディングフレームを使用させる変異である。例えば、フレームシフトは１つまたは２つの塩基対挿入または欠失から生じ得る）。２番目に、国際癌研究機関（ＩＡＲＣ）データベースの公開されたデータ（Ａ．Ｐｅｔｉｊｅａｎ ｅｔ ａｌ．Ｈｕｍ Ｍｕｔａｔ．２００７，２８（６）：６２２−９）を使用して、ｐ５３機能（ドミナントネガティブタンパク質またはトランス活性化機能）に対する可能な各変異の影響を判定した。モデル系においてドミナントネガティブ活性を表示することが示された変異を、２．０ポイントのポイント値に割り当てた一方で、タンパク質のトランス活性化機能を減少させる、または排除する変異を１ポイント値に割り当てた。３番目に、体内遺伝子発現データベースおよび６５０の癌細胞株の細胞株バイオマーカー探索（ＣＢＤ）発現データベースからのデータを使用して、ｐ５３機能の欠如を示す遺伝子発現パターンをもたらしたＴＰ５３の変異を同定した。これらの変異を１ポイントに割り当てた。最後に、ＩＡＲＣデータベースに報告された腫瘍試料の変異分析を使用して、１０を超える体細胞（すなわち腫瘍）試料で観察された変異を同定し、この変異を０．５ポイントのポイント値に割り当てた。

参照表（表２）のＴＰ５３変異は、変異の証拠スコアが２．０以上のものを含む。ＴＰ５３変異の拡張表（表３）は、変異の位置およびタイプ、ならびに変異に割り当てたポイント値を示す。

［実施例２］
カルボプラチン−パクリタキセル併用療法による標準的第１選択処置中に早期再発（＜３か月）または進行を示す、ｐ５３変異型上皮性卵巣癌を有する患者において、ＷＥＥ１−１阻害剤をカルボプラチンと組み合わせて用い、第ＩＩ相研究を実施した。患者は、ＡｍｐｌｉＣｈｉｐ ｐ５３アッセイで決定した、腫瘍のＴＰ５３遺伝子配列に基づいて登録した。

ＡｍｐｌｉＣｈｉｐ ｐ５３試験試薬を使用して、参照野生型ＤＮＡを含む全ての試料について、２つの反応物（ＡおよびＢ）でｐ５３遺伝子のコード領域を包含する生成物を増幅する。エクソン２、５、８、および１０、エクソン４の上流配列、ならびに内部対照は、プライマーミックスＡ中にある。プライマーミックスＢを設計し、エクソン３、６、７、９、および１１、エクソン４の下流配列、ならびに内部対照のプライマーを含有した。熱サイクル後、プライマーミックスＡおよびＢからの生成物を組み合わせる。ＡおよびＢ反応物から生成した生成物を、ＤＮａｓｅ Ｉを含有する混合物で切断する。組換えＤＮａｓｅ Ｉによって断片化を実施し、平均サイズが５０〜１００ヌクレオチドの小さなＤＮＡ断片を生成する。ワーキング断片化ミックス中のアルカリホスファターゼが、増幅反応物の残留ｄＮＴＰを破壊する。その後、断片化ＤＮＡアンプリコンを、ＡｍｐｌｉＣｈｉｐ ＴｄＴ標識試薬を基質として使用しターミナルトランスフェラーゼの作用により、それらの３’末端においてビオチンで標識する。ビオチン標識ｐ５３標的ＤＮＡ断片を、ハイブリダイゼーション対照として機能するＡｍｐｌｉＣｈｉｐオリゴヌクレオチド溶液を含有するハイブリダイゼーション緩衝液に添加する。混合物を、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ ＧｅｎｅＣｈｉｐ Ｆｌｕｉｄｉｃｓ Ｓｔａｔｉｏｎ ４５０ＤｘおよびＡｍｐｌｉＣｈｉｐ ｐ５３の特定のプロトコールを使用して、ＡｍｐｌｉＣｈｉｐ ｐ５３マイクロアレイ上に位置するオリゴヌクレオチドにハイブリダイズする。ハイブリダイズしたＡｍｐｌｉＣｈｉｐ ｐ５３マイクロアレイを洗浄して、ストレプトアビジン複合化蛍光色素で染色する。

ＡｍｐｌｉＣｈｉｐ ｐ５３マイクロアレイの設計
マイクロアレイは、２２８，４８４プローブを含む、一辺が各々１１ミクロンの正方形の格子から成る。各プローブは、特定のオリゴヌクレオチド配列の、複数のコピーを含有する。照会する塩基位置についての単一のプローブセットは５種類のプローブを含み、１つは野生型にハイブリダイズするためのプローブ、３つは３つの可能な単一塩基対変異を検出するためのプローブ、１つは単一の欠失を検出するためのプローブである。各ヌクレオチド位置について、センスおよびアンチセンスプローブ配列の両方を含む、少なくとも２４のプローブセットが存在する。エクソン２〜１１のコード領域における合計で１３００のヌクレオチド位置が、ＡｍｐｌｉＣｈｉｐ ｐ５３上にタイル状に並べられている。ＡｍｐｌｉＣｈｉｐ ｐ５３マイクロアレイは、フォトリソグラフィー法とコンビナトリアルケミストリーとを組み合わせる技術を使用して製造される。２２０，０００を超える異なるオリゴヌクレオチドプローブがガラス表面上で合成され、増幅した標的ＤＮＡ検体のセンス鎖およびアンチセンス鎖の両方を分析する。１１×１１μｍ^２のプローブマイクロアレイ内で、各プローブタイプはプローブセルと呼ばれる特定の領域に配置され、所与のプローブのおよそ１０６コピーを含有している。プローブマイクロアレイは、一連のサイクルで光指向性コンビナトリアルケミストリーにより製造される。ガラス基材は、感光性保護基を含有するリンカーでコーティングされる。次いでマスクが置かれて、プローブマイクロアレイの選択された部分を露光する。照射によって感光性保護基が除去され、その前に露光した部位にのみ、選択的ヌクレオシドホスホラミダイトの付加が可能となる。次に、異なるマスクが置かれて、照射および化学結合のサイクルが再度実施される。このサイクルを繰り返すことにより、既知の位置に各プローブタイプを有するオリゴヌクレオチドプローブの特定のセットが合成される。完成したプローブマイクロアレイは、ＧｅｎｅＣｈｉｐ Ｆｌｕｉｄｉｃｓ Ｓｔａｔｉｏｎ ４５０Ｄｘに対応するカートリッジにパッケージ化される。染色後、ＡｍｐｌｉＣｈｉｐ ｐ５３マイクロアレイを、ハイブリダイズしたｐ５３標的ＤＮＡ断片に結合した蛍光標識を励起するレーザーを使用するＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ ＧｅｎｅＣｈｉｐ Ｓｃａｎｎｅｒ ３０００Ｄｘでスキャンする。発光量は、プローブマイクロアレイ上の各位置における結合した標的ＤＮＡに比例する。

マイクロアレイシグナルのデータ分析。

ｐ５３変異状態を、野生型ｐ５３ＤＮＡプローブ強度のバックグラウンドにおいて試料の単一塩基対置換および単一塩基対欠失を検出するように設計したｐ５３変異検出アルゴリズムによって決定する。アルゴリズムは最初に、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘにより提供されるＧｅｎｅＣｈｉｐ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｓｏｆｔｗａｒｅのバージョン１．１により生成したプローブ強度を読む。生データに基づいて、アルゴリズムは最初のエクソン特性試験を実施し、各ＰＣＲ生成物中の明らかな問題を検出する。エクソンが最初の特性試験で不合格になる場合、エクソン不良と報告されて、さらなる分析は行わない。エクソンが試験に合格した場合、プローブ強度を、アレイ間での変動を補正するために分位正規化を使用して正規化する。

次いで、各プローブセットの特性を検査し、さらなる計算のために信頼できないプローブセットデータを排除する。特性試験に合格したプローブセットを使用して、アルゴリズムは各塩基位置について一時的な呼び出しを行う。各ヌクレオチド位置についての可能な塩基呼び出しは、野生型、単一塩基置換、単一塩基欠失、または呼び出し無し（呼び出しを行うことができない）である。単一塩基置換の場合、アルゴリズムは変異型塩基（例えば、Ｇ（登録商標）Ａ）を同定する。一時的な呼び出しを行った後、各塩基呼び出しの信頼性をアルゴリズムによって再検査し、隣接する塩基位置から計算した様々なパラメータを使用して呼び出しを微調整する。各エクソン特性もまた、最終の塩基呼び出しに基づいて再検査する。１つのエクソンに存在する呼び出し無しおよび／または変異呼び出しが多すぎる場合、データは「ノイズが多い」と考えられて、エクソンは特性試験で不合格になる。エクソンが不合格になる場合、エクソン不良と報告されて、そのエクソンについては呼び出し無しと報告される。

腫瘍応答評価
患者は、第２処置サイクル（少なくとも６週間）の最後に少なくとも１回のフォローアップ検査を実施した場合、研究処置に対する応答について評価可能であった。腫瘍応答を、ＲＥＣＩＳＴ１．０基準（付録ＩＶ）による測定可能または評価可能ないずれかの腫瘍病変において判定した。安定疾患の場合、最初の判定から６〜８週間以内に確定が必要であった。処置の最後で安定疾患の場合または許容できない有害事象のために中止する場合、２か月ごとに評価を行ってＣＡ−１２５（癌抗原）を決定した。ＣＡ−１２５増加の場合、ＣＴスキャンを実施した。自身のＣＡ−１２５が良好なマーカーではない患者では、疾患進行まで２か月ごとにＣＴスキャンを実施した。放射線で測定可能な疾患を有しない患者は、開始前に上昇したＣＡ−１２５を有し、ＣＡ−１２５レベルに基づいて評価した。これらの患者においては、ＣＴスキャンも実施した。Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｔｅｒｇｒｏｕｐ（ＧＣＩＧ）のＣＡ−１２５応答基準によれば、第１療法に対する完全奏効後の進行性疾患は、以下の通りに定義される：正常値上限（ＵＬＮ）の２倍まで（少なくとも１週間あけて２回記録された）ＣＡ−１２５が最初に上昇した日付。持続的に上昇したＣＡ−１２５レベルを有する患者については、疾患の進行は、最低値の≧２倍のＣＡ−１２５が１週間以上あけて２回記録された初日と定義される。ＮＫＩでのＣＡ−１２５のＵＬＮは、３５Ｕ／ｍＬである。しかしながら、本研究においてＣＡ−１２５の最低値が≦１０Ｕ／ｍＬの患者については、≧２０Ｕ／ｍＬの確定値がＣＡ−１２５進行の早期シグナルとしての役割を果たし、最低値が１０Ｕ／ｍＬ超の患者については、確定値は最低値の≧２倍であった。疾患進行の定義には、標準的なＲＥＣＩＳＴ基準および上で定義されるようなＣＡ−１２５基準の両方を含み、最初に適用されるのがどちらであってもよい。ＣＡ−１２５に関する応答は、処置中におけるＣＡ−１２５の５０％減少が基準と定義される。

以下の表は、上記の臨床試験における応答者のｐ５３アミノ酸変異情報についてまとめている。

［実施例４］
白金感受性ｐ５３変異体卵巣癌を有する成人患者において、パクリタキセルおよびカルボプラチンと組み合わせたＷＥＥ１−１対パクリタキセルおよびカルボプラチン単独を評価する無作為化した第ＩＩ相研究では、患者登録は表３における１つ以上の変異の存在に基づいた。検体がＴＰ５３遺伝子に全く変異を有しない場合、または検体が変異参照表３に列挙されていない変異を含有する場合、患者は本研究に対して適格ではないだろう。検体が変異参照表３に列挙されている少なくとも１つの変異を有した場合、患者は本研究への登録に対して適格であった。

ＡｍｐｌｉＣｈｉｐ ｐ５３アッセイを使用した患者の腫瘍組織試料の分析を、Ｃａｒｉｓ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（フェニックス、アリゾナ州）によって実施した。ＡｍｐｌｉＣｈｉｐ ｐ５３アッセイは、各検体を「変異非検出」、「変異検出」または「試験無効」と特徴付けた。同義コドンへの塩基変化は、変化によってアミノ酸が変更されないので変異非検出呼び出しとして扱う。ＡｍｐｌｉＣｈｉｐ５３のタイル状に並べられたヌクレオチド位置内に、７つの一塩基多型が存在することが、ＩＡＲＣデータベースＲ１５（２０１０年公開）で報告されている。３つはアミノ酸変化をもたらさないが（コドン３４、３６および２１３）、それ以外の４つは次のアミノ酸変化：Ｐ４７Ｓ、Ｐ７２Ｒ、Ｖ２１７ＭおよびＧ３６０Ａをもたらす。これらは全て変異非検出として扱い、報告されない。少なくとも１つの変異を検出する場合、試料を「変異検出」と呼び、検出したヌクレオチド変化を、ｐ５３タンパク質における対応するアミノ酸変化と共に報告する。塩基変化を全く検出せず、かつ試験が有効である場合、試料は「変異非検出」と呼ぶ。

Claims (17)

1. 患者の癌を処置する方法であって、
   １）癌細胞において表３による１つ以上のＴＰ５３遺伝子変異、もしくはｐ５３タンパク質をコードする際にフレームシフトを引き起こし、機能の欠如をもたらす前記ＴＰ５３遺伝子における少なくとも１つの塩基対挿入もしくは欠失、またはそれらの組み合わせを有する、癌と診断された患者を選択するステップ、
   ２）治療有効量のＷＥＥ１阻害剤および１種以上であってもよい追加の抗癌剤を、前記患者に投与するステップを含む、方法。
2. 患者の癌を処置する方法であって、
   前記患者が癌と診断され、前記癌細胞において表３による１つ以上のＴＰ５３遺伝子変異、もしくは前記ｐ５３タンパク質をコードする際にフレームシフトを引き起こし、機能の欠如をもたらす前記ＴＰ５３遺伝子における少なくとも１つの塩基対挿入もしくは欠失、またはそれらの組み合わせを有し、
   治療有効量のＷＥＥ１阻害剤および１種以上であってもよい追加の抗癌剤を、前記患者に投与するステップを含む、方法。
3. 患者の癌を処置する方法であって、
   治療有効量のＷＥＥ１阻害剤および１種以上であってもよい追加の抗癌剤を、前記患者に投与するステップを含み、
   前記患者が癌と診断され、前記癌細胞において表３による１つ以上のＴＰ５３遺伝子変異、もしくは前記ｐ５３タンパク質をコードする際にフレームシフトを引き起こし、機能の欠如をもたらす前記ＴＰ５３遺伝子における少なくとも１つの塩基対挿入もしくは欠失、またはそれらの組み合わせを有する、方法。
4. 前記ＴＰ５３遺伝子変異が、表３によると２．５以上の証拠スコアを有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
5. 前記ＴＰ５３遺伝子変異が、表３によると３以上の証拠スコアを有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
6. 前記ＴＰ５３遺伝子変異が、表３によると３．５以上の証拠スコアを有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
7. 前記ＴＰ５３遺伝子変異が、表３によると４．０以上の証拠スコアを有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
8. 前記ＴＰ５３遺伝子変異が、表３によると４．５以上の証拠スコアを有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
9. 前記ＴＰ５３遺伝子変異が、表３によると５．０に等しい証拠スコアを有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
10. 前記患者が、
    表３によるＣ２３８Ｆ、Ｒ２４８ＷおよびＲ２７３Ｌから成る群から選択されるアミノ酸変化、
    前記ｐ５３タンパク質でＥ２９８をコードするコドンにおける終止コドン、または
    前記ｐ５３タンパク質でＶ１５７をコードするコドンにおける塩基対の欠失
    をもたらす前記ＴＰ５３遺伝子変異のうち少なくとも１つを有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
11. 前記ＷＥＥ１阻害剤が、
    

    

    であるか、またはその薬学的に許容される塩である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
12. 前記ＷＥＥ１阻害剤が、
    

    

    であるか、またはその薬学的に許容される塩である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
13. 前記癌が、卵巣癌、黒色腫、肺癌、結腸直腸癌、結腸癌、直腸癌、前立腺癌、および乳癌から成る群から選択される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
14. 前記癌が卵巣癌である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
15. 前記癌が肺癌である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
16. 前記抗癌剤が、５−ＦＵ、カルボプラチン、ドキソルビシン、エトポシド、ゲムシタビン、イリノテカン、マイトマイシン、テモゾロミドおよびトポテカンから成る群から選択される、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
17. 前記抗癌剤が、カルボプラチンおよびパクリタキセルである、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。

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