JP2017510592A - 高純度のリトスペルミン酸bマグネシウム及びその製造方法 - Google Patents
高純度のリトスペルミン酸bマグネシウム及びその製造方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2017510592A JP2017510592A JP2016560006A JP2016560006A JP2017510592A JP 2017510592 A JP2017510592 A JP 2017510592A JP 2016560006 A JP2016560006 A JP 2016560006A JP 2016560006 A JP2016560006 A JP 2016560006A JP 2017510592 A JP2017510592 A JP 2017510592A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- magnesium
- lithospermate
- salvia miltiorrhiza
- salt
- alcohol
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
- C07D307/77—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D307/78—Benzo [b] furans; Hydrogenated benzo [b] furans
- C07D307/86—Benzo [b] furans; Hydrogenated benzo [b] furans with an oxygen atom directly attached in position 7
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/34—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having five-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom, e.g. isosorbide
- A61K31/343—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having five-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom, e.g. isosorbide condensed with a carbocyclic ring, e.g. coumaran, bufuralol, befunolol, clobenfurol, amiodarone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/53—Lamiaceae or Labiatae (Mint family), e.g. thyme, rosemary or lavender
- A61K36/537—Salvia (sage)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
- A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Botany (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Furan Compounds (AREA)
Abstract
Description
a)Salvia miltiorrhizaの植物原料を第1のアルコール水溶液で抽出することにより、Salvia miltiorrhizaの液状抽出物を得ること、場合により、Salvia miltiorrhizaのアルコール水溶液抽出物を濃縮して、濃縮されたSalvia miltiorrhizaの液状抽出物を与えることと、
b)Salvia miltiorrhizaの液状抽出物又は濃縮されたSalvia miltiorrhizaの抽出液を、マクロ多孔質吸収樹脂でのクロマトグラフィーにより分離し、ここで、第2のアルコール水溶液を溶出に使用し、リトスペルミン酸Bマグネシウムを含有する溶出液を収集することとを含み、
ここで、前記マグネシウム塩を、下記:a)の第1のアルコール水溶液、b)のSalvia miltiorrhizaの液状抽出物又は濃縮されたSalvia miltiorrhizaの液状抽出物、及びb)の第2のアルコール水溶液の内の少なくとも1つに加える。
c)Salvia miltiorrhizaの抽出物を、マクロ多孔質吸収樹脂でのクロマトグラフィーにより分離し、ここで、第3のアルコール水溶液を溶出に使用し、リトスペルミン酸Bマグネシウムを含有する溶出液を収集することを含み、
ここで、前記マグネシウム塩を、前記Salvia miltiorrhizaの抽出物及び/又は第3のアルコール水溶液に加える。
実施例1
1kg Salvia miltiorrhizaの植物原料(Shanghai Traditional Chinese Medicine Co., Ltd.から購入:ロット番号:131001)を取得し、粉砕した。粉砕したSalvia miltiorrhizaの植物原料を、50% エタノール水溶液 7L、5L、及び3Lで、還流条件下において3回(それぞれ2時間)連続的に抽出した。抽出液を組み合わせ、アルコールが完全に除去されるまで、減圧下で濃縮した。得られた濃縮液をろ過して、ろ液 6L(相対密度1.02)を与えた。ついで、このろ液を、3kg マクロ多孔質樹脂D101(Tianjin Haiguang Chemical Engineering Co. Ltd.)による吸収クロマトグラフィーに供した。溶出を、6カラム容量の0%及び6% 水性エタノール−MgCl2を連続して(溶出液である6% エタノール/塩化マグネシウム水溶液は、合計500mg 塩化マグネシウムを含む)、ついで、2カラム容量の20% エタノール−水溶出液、続けて、完了まで、50% エタノール−水溶出液で行った。リトスペルミン酸Bマグネシウムを含む溶出液を収集し、アルコールが完全に除去されるまで、減圧下で濃縮した。ついで、濃縮されたリトスペルミン酸Bマグネシウム液のpHを、弱酸性に調整した。この濃縮液を、エチルアセタートで、連続的に向流抽出した。水溶液画分を収集し、リトスペルミン酸Bマグネシウムの濃度が約100mg/mLになるまで濃縮し、続けて、95% エタノールでアルコール沈殿し、ろ過した。ろ液を濃縮し、減圧下で乾燥させて、30.8g リトスペルミン酸Bマグネシウム固形物を与えた。リトスペルミン酸Bマグネシウムの含有量は、96.70%であり、収率は、植物原料に基づいて2.98%であった。主な不純物は、0.76% リトスペルミン酸及びその塩、0.62% ロスマリン酸及びその塩、ならびに0.12% ダンシェンス(danshensu)及びその塩であった。
1kg Salvia miltiorrhizaの植物原料(Shanghai Traditional Chinese Medicine Co., Ltd.から購入:ロット番号:131001)を取得し、粉砕した。粉砕したSalvia miltiorrhizaの植物原料を、70% エタノール水溶液 6L、5L、及び3Lで、還流条件下において3回(それぞれ2時間)連続的に抽出した。抽出液を組み合わせ、アルコールが完全に除去されるまで、減圧下で濃縮した。濃縮液に、200mg 塩化マグネシウムを、撹拌条件下において加え、ついで、この液体をろ過し、マクロ多孔質樹脂HPD−100(Bon Chemical Engineering Co. Ltd.)によるクロマトグラフィーに供した。溶出を、6カラム容量の0%及び6% エタノール水溶液を連続して、ついで、2カラム容量の20% エタノール−水溶液、続けて、完了まで、45% エタノール−水溶液で行った。リトスペルミン酸Bマグネシウムを含む溶出液を収集し、アルコールが完全に除去されるまで、減圧下で濃縮した。得られた濃縮されたリトスペルミン酸Bマグネシウム液のpHを、弱酸性に調整した。この濃縮液を、1倍量のエチルアセタートで3回抽出した。水溶液画分を収集し、リトスペルミン酸Bマグネシウムの濃度が約50mg/mLになるまで濃縮し、続けて、90% エタノールでアルコール沈殿し、ろ過した。ろ液を濃縮し、減圧下で乾燥させて、30.6g リトスペルミン酸Bマグネシウム固形物を与えた。リトスペルミン酸Bマグネシウムの含有量は、96.30%であり、収率は、植物原料に基づいて2.95%であった。主な不純物は、0.80% リトスペルミン酸及びその塩、0.71% ロスマリン酸及びその塩、ならびに0.13% ダンシェンス(danshensu)及びその塩であった。
1.リトスペルミン酸Bマグネシウムのクロマトグラフ分析及び検出
機器:Agilent 1260高速液体クロマトグラフィー、Empower2クロマトグラフィーワークステーション、全波長ダイオードアレイ検出器;Sartorius cp225D hundred thousandth電子天秤。
リトスペルミン酸B対照を、正確に秤量し、メスフラスコに移し、水で溶解させ、25℃の大気温度で十分に振とうし、目盛り線まで希釈した。
サンプルを、正確に秤量し、水で溶解させ、25℃の大気温度で十分に振とうし、目盛り線まで希釈した。
対照溶液を、正確に取り、液体クロマトグラフィーに注入した。クロマトグラムを生成し、記録した。サンプルを、正確に取り、液体クロマトグラフィーに注入した。ピーク面積比を算出した。
機器:DIONEX ICS900イオンクロマトグラフ、Thermo DS5導電率検出器;Inhibitor Thermo CSRS 300 4mm;ワークステーションChromeleon 7;SPE-C18小型カラム;Sartorius cp225D hundred thousandth電子天秤。
6つのカチオンII標準を、正確に秤量し、メスフラスコに移し、水で溶解させ、25℃で十分振とうし、目盛り線まで希釈した。
6つのカチオンII標準溶液を、正確に取り、イオンクロマトグラフに注入した。クロマトグラムを記録した。サンプルを、正確に取り、イオンクロマトグラフに注入した。ピーク面積比を算出した。
不純物を、本発明の実施例1のリトスペルミン酸Bマグネシウム生成物から、ゲルカラムクロマトグラフィー及びC18カラムにより分離し、エレクトロスプレーイオン化質量分析(ESI−MS)、核磁気共鳴法(NMR)、及び熱イオンクロマトグラフィーにより構造確認した。結果は、以下の通りであった。
1H NMR (D2O, 400MHz) δ: 6.79 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.67 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.59 (dd, J = 8.2, 2.0 Hz, 1H), 5.18 (dd, J = 8.4, 4.0 Hz, 1H), 3.42 (dd, J = 14.3, 4.0 Hz, 1H), 3.25 (dd, J = 14.3, 8.4 Hz, 1H); 13C NMR (D2O, 100MHz) δ: 174.1, 145.3, 144.1, 130.1, 121.7, 117.4, 116.3, 78.6, 39.4; ESI-MS (m/z) 221.2 [M+Na]+; IC: Na+
1H NMR (D2O, 400MHz) δ: 7.56 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 7.03 (d, J = 1.5Hz, 1H), 6.94 (d, J = 1.0Hz, 1H), 6.93 (d, J = 8.5Hz, 1H), 6.88 (dd, J = 8.5Hz, 1H), 6.86(d, J = 8.5Hz, 1H), 6.83 (dd, J = 8.0, 1.5 Hz, 1H), 6.81 (d, J = 8.5Hz, 1H), 6.76 (dd, J = 8.5, 1.0Hz, 1H), 6.20 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 5.81 (d, J = 6.0Hz, 1H), 4.98 (dd, J = 9.5, 3.5Hz, 1H), 4.23 (d, J = 5.5Hz, 1H), 3.13 (dd, J = 14.1, 3.5Hz), 3.05 (dd, J = 14.1, 9.5Hz, 1H); 13C NMR (D2O, 100MHz) δ: 182.3, 180.1, 171.4, 149.7, 147.3, 147.0, 146.8, 145.6, 145.3, 145.1, 136.3, 133.4, 131.6, 126.5, 124.6, 124,2, 121.3, 120.4, 119.8, 119.2, 119.1, 118.7, 116.2, 91.9, 79.7, 62.3, 40.0; ESI-MS (m/z) 561.1 [M+Na]+; IC: Mg2+.
1H NMR ((CD3)2CO, 400MHz) δ: 7.55 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.01 (dd, J = 8.2, 2.0 Hz, 1H), 6.84 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.83 (dd, J = 2.0 Hz, 1H), 6.68 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.59 (dd, J = 8.3, 2.0 Hz, 1H), 6.23 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 5.17 (br.d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.07 (br.d, J = 14.3 Hz, 1H), 2.93 (dd, J = 14.3, 8.0 Hz, 1H); 13C NMR ((CD3)2CO, 100MHz) δ: 171.1, 166.3, 148.5, 145.6, 145.4, 144.7, 143.3, 128.6, 126.7, 121.6, 120.7, 117.1, 115.3, 115.0, 114.6, 114.2, 72.6, 37.5; ESI-MS (m/z) 361.2 [M+H]+.
1H NMR (CD3OD, 500MHz) δ: 7.52 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.83 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.76 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 6.74 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 6.73 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 6.69 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.65 (dd, J = 8.2, 2.0 Hz, 1H), 6.61 (dd, J = 8.2, 1.9 Hz, 1H), 6.54 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.51 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 6.30 (dd, J = 8.1, 1.9 Hz, 1H), 6.20 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 5.85 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 5.20 - 5.15 (m, 2H), 4.35 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 3.06 (dd, J = 14.3, 4.3 Hz, 1H), 3.03 - 2.96 (m, 2H), 2.83 (dd, J = 14.3, 9.6 Hz, 1H); 13C NMR (CD3OD, 125 MHz) δ: 171.8, 170.7, 170.4, 166.2, 147.2, 144.9, 144.7, 144.2, 144.1, 143.4, 143.2, 141.7 131.8, 127.4, 127.1, 124.5, 122.8, 120.4, 120.2, 119.9, 116.5, 116.5, 115.7, 115.4, 114.7, 114.6, 114.5, 114.5, 111.5, 86.4, 73.7, 72.8, 56.1, 36.0, 35.6; ESI-MS (m/z) 741.2 [M+Na]+;IC: Mg2+.
1.リトスペルミン酸Bマグネシウムの収率におけるマグネシウム塩の効果
抽出及び分離プロセスの間に加えられたマグネシウム塩のリトスペルミン酸Bマグネシウムの収率における効果を調査するために、下記検証実験を行った。
100g Salvia miltiorrhizaの植物原料(Shanghai Traditional Chinese Medicine Co., Ltd.から購入:ロット番号:131001)を取得し、1回の抽出単位として、50gに分けた。各単位についての抽出工程は、下記の通りとした。
(1)50g Salvia miltiorrhizaの植物原料を、70% エタノール 300mLで、還流下において2時間抽出し、ろ過した。ろ液 180mLを収集した。残留物に、70% エタノール 250mLを更に加え、還流下で2時間抽出し、ろ過した。ろ液 235mLを収集した。残留物に、70% エタノール 250mLを更に加え、還流下で2時間抽出し、ろ過した。ろ液 225mLを収集した。これらのろ液を組み合わせた(640mL)。エタノールを回収し、82g 液状抽出物を、相対密度1.091(60℃)で得た。この抽出物を、相対密度1.02に水で希釈し、ろ過して、ろ液 305mLを得た。得られたろ液を、150g 1300−I(Yangzhou Pharmaceutical Co., Ltd.)マクロ多孔質樹脂吸収カラムに、ゆっくり充填した。吸収完了後、水 300mLを使用して、糖、タンパク質、及び無機塩を洗浄した。さらに、6% エタノール 300mLを使用して、リトスペルミン酸Bマグネシウムを除く他のサルビアノリン酸塩を除去した。最後に、20% エタノール 150mLを、溶出に使用した。各溶出液 10mLを、1つの画分として収集した。溶出液容量 120mLを、HPLC検出により確認した後に得た。この溶出液を、減圧下において、−0.07〜−0.1MPaの真空度及び80℃以下の温度で濃縮して、5.7g 抽出物を、相対密度1.15(50℃)で得た。
処理工程を、塩化カリウム(16mg、0.21mmol)を抽出プロセス中に加えたことを除いて、比較例1の処理工程と同様とした。3.17g リトスペルミン酸Bマグネシウムを、含有量84.23%及び収率2.67%(植物含量に基づく)で得た。
処理工程を、塩化マグネシウム(20mg、0.21mmol)を抽出プロセス中に加えたことを除いて、比較例1の処理工程と同様とした。3.86g リトスペルミン酸Bマグネシウムを、含有量86.36%及び収率3.33%(植物含量に基づく)で得た。
処理工程を、塩化マグネシウム(20mg、0.21mmol)を濃縮抽出液に加えたことを除いて、比較例1の処理工程と同様とした。4.07g リトスペルミン酸Bマグネシウムを、含有量84.21%及び収率3.42%(植物含量に基づく)で得た。
処理工程を、塩化マグネシウム(20mg、0.21mmol)をカラム分離中の水溶出相に加えたことを除いて、比較例1の処理工程と同様とした。3.95g リトスペルミン酸Bマグネシウムを、含有量85.31%及び収率3.37%(植物含量に基づく)で得た。
相対向上率=(収率−比較例1の収率)/収率×100%
比較例3
100g Salvia miltiorrhizaの植物原料(Shanghai Traditional Chinese Medicine Co., Ltd.から購入:ロット番号:131001)を粉砕し、煎じ、4倍容量、2倍容量、及び2倍容量の水で3回連続して、各2時間抽出した。抽出液を組み合わせ、室温に冷却し、遠心分離によりろ過した。ろ液を、3倍容量の1300−Iマクロ多孔質樹脂(Yangzhou Pharmaceutical Co., Ltd.)を充填した吸収カラムを、ゆっくり通過させた。吸収完了後、6倍容量の水を使用して、糖、タンパク質、及び無機塩を洗浄した。さらに、6倍容量の20% エタノールを使用して、リトスペルミン酸Bマグネシウムを除く他のサルビアノリン酸塩を除去した。最後に、3倍容量の50% エタノールを使用して、Salvia miltiorrhizaのサルビアノリン酸塩を溶出した。TLC検出に基づいて、50%までのエタノールによる溶出液に、大量のリトスペルミン酸Bマグネシウムが含まれていた。これを収集し、減圧下において、植物原料重量の1/10量まで濃縮した。その後、無水エタノールを、植物原料重量の9/10量に、撹拌条件下において、ゆっくり加えた。2時間の静置後、沈殿物を、遠心分離により廃棄した。ろ液を、植物原料重量の1/20量に濃縮し、ついで、無水エタノールを、植物原料重量の19/20量で加え、2時間静置し、遠心分離によりろ過した。ろ液を、減圧下において、乾燥するまで濃縮した。粉砕後、2.57g リトスペルミン酸Bマグネシウムを、含有量91.16%及び収率2.37%(植物原料に基づく)で得た。主な不純物は、0.78% リトスペルミン酸及びその塩、6.57% ロスマリン酸及びその塩、ならびに0.10% ダンシェンス(danshensu)及びその塩であった。
100g Salvia miltiorrhizaの植物原料(Shanghai Traditional Chinese Medicine Co., Ltd.から購入:ロット番号:131001)を粉砕し、煎じ、90〜100℃において、水 600、300、及び250mLで3回連続して、各2時間抽出した。抽出液を組み合わせ、遠心分離によりろ過した。ろ液を、減圧下において濃縮した。濃縮液(250mL)を、1300−Iマクロ多孔質樹脂(Yangzhou Pharmaceutical Co., Ltd.) 300mLを充填した吸収カラムを、ゆっくり通過させた。その後、水 800mLを使用して、不純物を除去するために、吸収カラムを洗浄した。さらに、50% エタノール 600mLを使用して、Salvia miltiorrhizaのサルビアノリン酸塩を溶出した。50% エタノールの溶出による溶出物を収集し、減圧下において、10mLに濃縮し、無水エタノール 90mLを、撹拌しながらゆっくり加えた。2時間の静置後、ついで、遠心分離し、沈殿物を廃棄した。上清を濃縮し、乾燥させ、粉砕して、80.56% リトスペルミン酸Bマグネシウムを含むサルビアノリン酸塩を与えた。主な不純物は、5.21% リトスペルミン酸及びその塩、8.64% ロスマリン酸及びその塩、ならびに0.62% ダンシェンス(danshensu)及びその塩であった。
100g Salvia miltiorrhizaの植物原料(Shanghai Traditional Chinese Medicine Co., Ltd.から購入:ロット番号:131001)を、6倍容量の60% エタノールで、還流下において2時間抽出した。この抽出を、合計3回行った。抽出液を組み合わせ、アルコールが完全に除去されるまで、減圧下において濃縮した。濃縮液を、ろ過後に、HP20マクロ多孔質樹脂カラムで分離した。溶出を、6カラム容量の0%及び6% エタノール水溶液で連続して、続けて、2カラム容量の20% エタノール水溶液、ついで、完了まで、50% エタノール水溶液で行った。HPLC検出により、リトスペルミン酸Bマグネシウムを含む50% エタノール溶出液を収集し、減圧下において、アルコール臭が検出されなくなるまで濃縮した。濃縮液のpHを、5に調整し、エチルアセタートによる逆抽出に3回供した。リトスペルミン酸Bマグネシウム画分を収集し、乾燥するまで、減圧下において濃縮した。2.41g リトスペルミン酸Bマグネシウムを、含有量96.21%及び収率2.32%(植物原料に基づく)で得た。主な不純物は、1.08% リトスペルミン酸及びその塩ならびに0.96% ロスマリン酸及びその塩であった。
100g Salvia miltiorrhizaの植物原料(Shanghai Traditional Chinese Medicine Co., Ltd.から購入:ロット番号:131001)を、6倍容量の60% エタノールで、還流下において2時間抽出した。この抽出を、合計3回行った。抽出液を組み合わせ、アルコール臭が検出されなくなるまで、減圧下において濃縮した。濃縮液に、塩化マグネシウム(16mg、0.21mmol)を加え、30分間撹拌し、ついで、ろ過後に、HP20マクロ多孔質樹脂カラムで分離した。溶出を、6カラム容量の0%及び6% エタノール水溶液で連続して、続けて、2カラム容量の20% エタノール水溶液、ついで、完了するまで、50% エタノール水溶液で行った。HPLC検出により、リトスペルミン酸Bマグネシウムを含有する50% エタノール溶出液を収集し、減圧下において、アルコール臭が検出されなくなるまで濃縮した。濃縮液のpHを、5に調整し、エチルアセタートによる逆抽出に3回供した。リトスペルミン酸Bマグネシウム画分を収集し、乾燥するまで、減圧下において濃縮した。2.97g リトスペルミン酸Bマグネシウムを、含有量96.92%及び収率2.88%(植物原料に基づく)で得た。主な不純物は、0.92% リトスペルミン酸及びその塩ならびに0.81% ロスマリン酸及びその塩であった。
相対向上率=(収率−比較例3の収率)/収率×100%
実施例7
100g Salvia miltiorrhizaの植物原料(Shanghai Traditional Chinese Medicine Co., Ltd.から購入:ロット番号:131001)を、6倍容量の60% エタノールで、還流下において2時間抽出した。この抽出を、合計3回行った。抽出液を組み合わせ、アルコール臭が検出されなくなるまで、減圧下において濃縮した。濃縮液に、5mg 塩化マグネシウムを加え、30分間撹拌し、ついで、ろ過後に、HP20マクロ多孔質樹脂(Mitsubishi Chemical, Japan)カラムで分離し、6カラム容量の水、20% エタノール、及び40% エタノールで連続的に溶出した。HPLC検出により、リトスペルミン酸Bマグネシウムを含有する40% 溶出液を収集し、減圧下において、アルコール臭が検出されなくなるまで濃縮した。濃縮液のpHを、5に調整し、エチルアセタートによる逆抽出に3回供した。リトスペルミン酸Bマグネシウム画分を収集し、乾燥するまで、減圧下において濃縮した。2.62g リトスペルミン酸Bマグネシウムを、含有量96.63%及び収率2.52%(植物原料に基づく)で得た。
処置工程を、10mg 塩化マグネシウムを濃縮抽出液に加えたことを除いて、実施例7の処理工程と同様にした。2.91g リトスペルミン酸Bマグネシウムを、含有量95.35%及び収率2.77%(植物原料に基づく)で得た。
処置工程を、20mg 塩化マグネシウムを濃縮抽出液に加えたことを除いて、実施例7の処理工程と同様にした。3.05g リトスペルミン酸Bマグネシウムを、含有量96.81%及び収率2.95%(植物原料に基づく)で得た。
処置工程を、50mg 塩化マグネシウムを濃縮抽出液に加えたことを除いて、実施例7の処理工程と同様にした。3.25g リトスペルミン酸Bマグネシウムを、含有量94.11%及び収率3.06%(植物原料に基づく)で得た。
処置工程を、100mg 塩化マグネシウムを濃縮抽出液に加えたことを除いて、実施例7の処理工程と同様にした。3.52g リトスペルミン酸Bマグネシウムを、含有量92.56%及び収率3.26%(植物原料に基づく)で得た。
処置工程を、200mg 塩化マグネシウムを濃縮抽出液に加えたことを除いて、実施例7の処理工程と同様にした。3.48g リトスペルミン酸Bマグネシウムを、含有量93.17%及び収率3.24%(植物原料に基づく)で得た。
リトスペルミン酸Bマグネシウムの化学安定性を、ピーク面積(HPLC)の変動を検出することにより調査した。具体的な実験方法:リトスペルミン酸B(研究室で製造;ロット番号:20131017)及び本発明の実施例1において調製したリトスペルミン酸Bマグネシウムをそれぞれ、1mg/mL 水溶液に25℃で配合した。ついで、この水溶液を、10倍に希釈した。リトスペルミン酸Bのピーク面積の変動を、288nmにおいて、0、2、4、6、8、12、及び24時間の期間でそれぞれ、HPLCにより検出した。10マイクロリットルを、各時点で注入した。結果を、表4に示す。
実験実施例1.リトスペルミン酸B及びリトスペルミン酸Bマグネシウムについての細胞傷害性及び抗酸化活性の調査
1.1.1.細胞傷害性実験についての材料
サンプル及び対照
使用前に生理食塩水で配合した、リトスペルミン酸Bマグネシウム(本出願の実施例6において調製)、リトスペルミン酸B(研究室で製造;ロット番号20131017);溶媒対照としての生理食塩水を、Jiangsu Yabang Pharmaceutical Co., Ltd.から得た。他の試薬は全て、市販の分析純度の製品とした。
心筋芽細胞(H9C2);微小血管内皮細胞(HMEC−1);乳酸デヒドロゲナーゼ細胞傷害性検出キット、Beyotime Biotechnology Institute。
用量設定
リトスペルミン酸B及びリトスペルミン酸Bマグネシウムの用量を、10、50、100、200、400、800、1200、1600μMに設定し、培養時間を、本実験では24時間に設定した。
H9C2細胞及びHMEC−1細胞をそれぞれ、10% FBS含有の低糖類DMEM培地及びMCDB−131培地中において、37℃及び5% CO2で培養した。細胞を、96ウェル培養プレートに播種した。このプレートに、種々の濃度のリトスペルミン酸B溶液及びリトスペルミン酸Bマグネシウム溶液を、翌日(約80%融合)加えた。合計24時間の培養後、検出を、乳酸デヒドロゲナーゼ細胞傷害性検出キットの説明書に従って行った。
観察インジケータを、細胞中の乳酸デヒドロゲナーゼレベルとする。細胞生存率を、細胞内LDH含量比、すなわち(処理したサンプルウェルの吸光度−サンプル対照ウェルの吸光度)/(最大酵素活性を有する細胞の吸光度−サンプル対照ウェルの吸光度)×100により表した。
データを、平均±標準偏差(平均±SD)で表した。2群のデータ比較を、スチューデントt検定法により、統計学的に分析した。p<0.05は、統計学的差異を示す。
種々の濃度のリトスペルミン酸B及びリトスペルミン酸Bマグネシウムを、細胞と共に24時間培養した。細胞内LDH含有量検出の結果から、心筋芽細胞H9C2について、400、800、1200、1600μM リトスペルミン酸B及び800、1200、1600μM リトスペルミン酸Bマグネシウムにより、細胞内LDH含有量が、正常な対照ウェルと比較して有意に減少し(P<0.05又はP<0.01);内皮細胞HMEC−1について、1200及び1600μM リトスペルミン酸B及び1200及び1600μM リトスペルミン酸Bマグネシウムにより、細胞内LDH含有量が、正常な対照ウェルと比較して有意に減少した(P<0.05又はP<0.01)ことが示された。表5、図5、及び図6を参照のこと。
高用量のリトスペルミン酸B及びリトスペルミン酸Bマグネシウムは、心筋芽細胞及び内皮細胞の両方に毒作用を有したが、リトスペルミン酸Bマグネシウムは、特に内皮細胞株において、リトスペルミン酸より低い毒性を示した。
1.2.1 in vitroでの抗脂質過酸化実験のための材料
サンプル及び対照
使用前に生理食塩水で配合した、リトスペルミン酸Bマグネシウム(本願の実施例6において調製)、リトスペルミン酸B(研究室で製造;ロット番号:20131017);溶媒対照としての生理食塩水を、Jiangsu Yabang Pharmaceutical Co., Ltd.から得た。他の試薬は全て、市販の分析純度の製品とした。Tris塩基、塩化カリウム、リン酸二カリウム、グリセロール等(Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.);クーマシーブリリアントブルーG−250、ウシ血清アルブミン(Shanghai Lanji Technology Development Co., Ltd.)。
種及び系統:SDラット;供給元:Shanghai SLAC Laboratory Animal Co., Ltd.、実験動物産生ライセンス:SCXK (Shanghai) 2012-0002;数及び性別:2匹、オス;動物体重:200〜250g。
肝臓ミクロソームを調製するための手順
肝臓組織を採取し、細かく切り、バッファーAで洗浄し、拭き、8g分秤量した。組織1g当たりに、バッファーA 10mLを加えることにより、合計で80mLを加え、続けて、自動ホモジナイゼーションし、手動ホモジナイザーで更にホモジナイゼーションした。このホモジネートを、10,000g及び4℃で、30分間遠心分離した。上清を採取した。この上清を、105,000g及び4℃で、60分間遠心分離した。得られた沈殿物を、ミクロソームとした。ついで、このミクロソームに、バッファーBを加えて、ミクロソーム懸濁液を得た。この懸濁液を、2mLの小型チューブにアリコートし、更なる使用のために−70℃の冷蔵庫で保存した。タンパク質含有量の測定:ブラッドフォード法(クーマシーブリリアントブルーG−250法)を使用。
肝臓ミクロソーム 1mLを、各チューブに加え、続けて、種々の濃度の試薬溶液を加えた。混合物を、十分振とうし、37℃の水浴で90分間培養した。チューブを取り出した後、10% トリクロロ酢酸(TCA) 1mL及び0.67% チオバルビツール酸(TBA) 1mLを、各チューブに加えた。このチューブを、沸騰した水浴に15分間入れ、ついで、流水で冷却し、3000rpmで10分間遠心分離した。上清を、532nmでの比色測定に供した。含有量を、テトラエトキシプロパン標準で算出し、タンパク質 1mg当たりの含有量で表した。
MDA含有量(nmol/mg タンパク質)={[(Aサンプル−Aブランク)÷(A標準−Aブランク)]×10nmol/mL}÷タンパク質含有量
阻害率%=(MDAブランク−MDAサンプル)/MDAブランク×100%
結果を、表6に示す。薬剤濃度 100μMにおいて、リトスペルミン酸B及びリトスペルミン酸Bマグネシウムは、かなりの抗脂質過酸化効果を示した。この場合、阻害率は、85%付くに達した。このことは、これらの化合物の抗酸化が、化学構造中のフェノール性ヒドロキシによるが、塩形態は、これに関して影響を及ぼさないことを示している。
2.1.1 実験材料
サンプル及び対照
使用前に生理食塩水で配合した、リトスペルミン酸B、リトスペルミン酸B二カリウム、Salvia miltiorrhizaのデプシド塩(85% リトスペルミン酸Bマグネシウムを含む)、リトスペルミン酸Bマグネシウム;溶媒対照としての生理食塩水を、Jiangsu Yabang Pharmaceutical Co., Ltd.から得た。他の試薬は全て、市販の分析純度の製品とした。
種及び系統:SDラット;供給元:Shanghai SLAC Laboratory Animal Co., Ltd.、実験動物産生ライセンス:SCXK (Shanghai) 2012-0002;数及び性別:50匹、オス;動物体重:120〜200g。
用量設定
リトスペルミン酸種の試薬の用量を、本実験では、50及び100mg/kgに設定した。生理食塩水を、更なる溶媒対照として与えた。尾切断のタイミングを、投与後2分とした。
動物に、水のみを与えて、一晩絶食させた。50mg/kg ペントバルビタールナトリウムを、実験前に麻酔するために、腹腔内に注入した。動物の麻酔後、マーカーを、マーカーペン及び定規で、ラットの尾の先端から4mmに付けた。薬剤を、動物の大腿静脈から注入した。2分後、尾を、動物の尾におけるマーカーを付けた位置において、外科用メスにより迅速に切断した。残った動物の尾を、37℃の水浴中に準備した生理食塩水チューブに素早く入れ、計時を開始した。動物の尾の出血を観察した。30秒以内に出血がそれ以上観察されなかった時点で、時間を、動物の凝固時間(単位:秒)として記録した。30分で出血が観察されなかった場合、実験を停止し、1800秒と記録した。
実験データを、x±SDで表した。GraphPad Prism 51 の一元ANOVAを、有意差検定に適用した。
表7に示されたように、50及び100mg/kg リトスペルミン酸種の化合物をSDラットに対して静脈内注射により投与することにより、ラットの切断した尾の出血時間を、有意に伸ばすことができる。同じ用量のリトスペルミン酸B又はリトスペルミン酸BマグネシウムをSDラットに対して静脈内注射により投与することにより、リトスペルミン酸Bマグネシウム投与群におけるラットの切断した尾の出血時間は、リトスペルミン酸B投与群よりかなり長かった。加えて、同じ用量において、リトスペルミン酸Bマグネシウム投与群におけるラットの切断した尾の出血時間は、リトスペルミン酸B二カリウム及びSalvia miltiorrhizaのデプシド塩(比較例4の段落1における記述に基づいて得られる、80.56% リトスペルミン酸Bマグネシウムを含む)より有意に長かった。
Claims (20)
- リトスペルミン酸Bマグネシウムの製造方法であって、リトスペルミン酸Bマグネシウムを、Salvia miltiorrhizaの植物原料又はSalvia miltiorrhizaの抽出物から、加えられたマグネシウム塩の存在下において、抽出又は精製する、製造方法。
- a)Salvia miltiorrhizaの植物原料を第1のアルコール水溶液で抽出することにより、Salvia miltiorrhizaの液状抽出物を得ること、場合により、Salvia miltiorrhizaの液状抽出物を濃縮して、濃縮されたSalvia miltiorrhizaの液状抽出物を与えることと、
b)Salvia miltiorrhizaの液状抽出物又は濃縮されたSalvia miltiorrhizaの抽出液を、マクロ多孔質吸収樹脂でのクロマトグラフィーにより分離し、ここで、第2のアルコール水溶液を溶出に使用し、リトスペルミン酸Bマグネシウムを含有する溶出液を収集することとを含み、
ここで、前記マグネシウム塩を、下記:a)の第1のアルコール水溶液、b)のSalvia miltiorrhizaの液状抽出物又は濃縮されたSalvia miltiorrhizaの液状抽出物、及びb)の第2のアルコール水溶液の内の少なくとも1つに加える、請求項1記載の製造方法。 - c)Salvia miltiorrhizaの抽出物を、マクロ多孔質吸収樹脂でのクロマトグラフィーにより分離し、ここで、第3のアルコール水溶液を溶出に使用し、リトスペルミン酸Bマグネシウムを含有する溶出液を収集することを含み、
ここで、前記マグネシウム塩を、Salvia miltiorrhizaの抽出物及び/又は第3のアルコール水溶液に加える、請求項1記載の製造方法。 - 前記マグネシウム塩が、下記化合物:MgSO4、Mg(Ac)2、MgCl2、MgBr2、MgCO3、及びMg(HCO3)2の内の1つ以上である、請求項1〜3のいずれか一項記載の製造方法。
- 加えられるマグネシウム塩の量が、Salvia miltiorrhizaの植物原料又はSalvia miltiorrhizaの抽出物100g当たりに、5〜200mgである、請求項1〜4のいずれか一項記載の製造方法。
- さらに、b)又はc)において収集された溶出液を濃縮して、濃縮溶出液を与え、濃縮溶出液のpH値を3〜7に調整し、ついで、有機溶媒で抽出して、リトスペルミン酸Bマグネシウムを含むラフィネートを得ることを含む、請求項2又は3記載の製造方法。
- 有機溶媒が、C3〜C6アルコール、C1〜C6アルキルC1〜C3カルボキシラート、及びジ(C1〜C5アルキル)エーテルから選択される、請求項6記載の製造方法。
- 有機溶媒が、下記溶媒:n−ブチルアルコール、メチルアセタート、エチルアセタート、プロピルアセタート、ブチルアセタート、メチルt−ブチルエーテル、及びジエチルエーテルから選択される1つ以上である、請求項7記載の製造方法。
- さらに、リトスペルミン酸Bマグネシウムを含むラフィネートを濃縮し、続けて、アルコール沈殿し、ろ過し、乾燥させて、リトスペルミン酸Bマグネシウム固形物を得ることを含む、請求項6〜8のいずれか一項記載の製造方法。
- アルコール沈殿に使用される溶媒が、エタノール又はエタノール水溶液である、請求項9記載の製造方法。
- 第1のアルコール水溶液及び第2のアルコール水溶液が、同じか又は異なり、濃度が0〜80%である、C1〜C4アルコールの水溶液から独立して選択される、請求項2記載の製造方法。
- 第3のアルコール水溶液が、濃度が0〜80%である、C1〜C4アルコールの水溶液から選択される、請求項3記載の製造方法。
- マクロ多孔質樹脂が、下記樹脂:HP20、HPD−80、HPD−100、HPD−100B、HPD−200A、HPD−300、HPD−450、HPD−722、HPD−826、ADS−5、ADS−8、ADS−21、D101、AB−8、及び1300−Iの内の1つ以上を含む、請求項2〜12のいずれか一項記載の製造方法。
- リトスペルミン酸Bマグネシウム生成物からリトスペルミン酸Bマグネシウムに混入した不純物を除去するための方法であって、
リトスペルミン酸Bマグネシウム生成物の水溶液を、酸性又は中性pH条件下、好ましくはpH3〜7で、有機溶媒により抽出する、方法。 - リトスペルミン酸Bマグネシウム生成物を、好ましくは、Salvia miltiorrhizaの植物原料から抽出することにより取得し、ここで、リトスペルミン酸Bマグネシウムの含有量が、50%以上、好ましくは、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、又は95%以上であり、かつ、99%、98%、97%、96%、又は95%未満である、請求項14記載の方法。
- 混入した不純物が、ダンシェンス(danshensu)又はその塩、リトスペルミン酸又はその塩、及びロスマリン酸又はその塩を含む、請求項14又は15記載の方法。
- 有機溶媒が、C3〜C6アルコール、C1〜C6アルキルC1〜C3カルボキシラート、及びジ(C1〜C5アルキル)エーテルから選択される、請求項14記載の方法。
- 有機溶媒が、下記溶媒:n−ブチルアルコール、メチルアセタート、エチルアセタート、プロピルアセタート、ブチルアセタート、メチルt−ブチルエーテル、及びジエチルエーテルから選択される1つ以上である、請求項17記載の方法。
- 薬学的に活性な成分と、薬学的許容し得る担体又は賦形剤とを含み、ここで、薬学的に活性な成分が、Salvia miltiorrhizaの植物原料からの抽出により得られたリトスペルミン酸Bマグネシウム生成物であり、リトスペルミン酸Bマグネシウムの含有量が、95重量%超であり、ダンシェンス(danshensu)及びその塩の含有量が、0.5%未満であり、リトスペルミン酸及びその塩の含有量が、2.0%未満であり、ロスマリン酸及びその塩の含有量が、2.0%未満である、医薬組成物。
- リトスペルミン酸Bマグネシウム生成物が、含有量0.01%超のダンシェンス(danshensu)及びその塩、含有量0.1%超のリトスペルミン酸及びその塩、並びに含有量0.1%超のロスマリン酸及びその塩を有する、請求項19記載の医薬組成物。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410137310.8 | 2014-04-01 | ||
CN201410137310.8A CN104974119B (zh) | 2014-04-01 | 2014-04-01 | 一种高纯度丹酚酸b镁及其制备方法 |
PCT/CN2015/072539 WO2015149589A1 (zh) | 2014-04-01 | 2015-02-09 | 一种高纯度丹酚酸b镁及其制备方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2017510592A true JP2017510592A (ja) | 2017-04-13 |
JP6839540B2 JP6839540B2 (ja) | 2021-03-10 |
Family
ID=54239374
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016560006A Active JP6839540B2 (ja) | 2014-04-01 | 2015-02-09 | 高純度のリトスペルミン酸bマグネシウム及びその製造方法 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US10259798B2 (ja) |
EP (1) | EP3127905B1 (ja) |
JP (1) | JP6839540B2 (ja) |
CN (1) | CN104974119B (ja) |
RS (1) | RS61592B1 (ja) |
WO (1) | WO2015149589A1 (ja) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105481809B (zh) * | 2015-12-29 | 2018-01-05 | 山东大学 | 一种丹酚酸b的分离纯化方法及丹酚酸b镁盐的制备方法 |
CN111686103A (zh) * | 2019-03-11 | 2020-09-22 | 中国科学院上海药物研究所 | 丹参乙酸镁或含有丹参乙酸镁的药物组合物对于肝脏缺血再灌注的保护作用及应用 |
Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH01268682A (ja) * | 1988-04-21 | 1989-10-26 | Minofuaagen Seiyaku Honpo:Goushi | 腎機能改善剤及びリソスペルミン酸塩の製造方法 |
JPH02131423A (ja) * | 1988-07-08 | 1990-05-21 | Terumo Corp | 5−リポキシゲナーゼ作用阻害剤 |
JP2002518455A (ja) * | 1998-06-25 | 2002-06-25 | ジョージタウン ユニバーシティ | サルビア種から得られる抗ウイルス活性を有する化合物 |
JP2003510286A (ja) * | 1999-09-29 | 2003-03-18 | シヴァ バイオメディカル,エルエルシー | 糖尿病性腎症および微量アルブミン尿症の治療 |
CN1911272A (zh) * | 2005-08-12 | 2007-02-14 | 上海绿谷制药有限公司 | 高含量丹参多酚酸盐粉针剂及其制备方法 |
US20100048618A1 (en) * | 2008-08-19 | 2010-02-25 | Scinopharm Taiwan Ltd. | Derivatives of 8-epiblechnic Acid and their Effects on Down-Regulation of Endothelin (ETA) receptor mRNA |
US20100174097A1 (en) * | 2007-03-28 | 2010-07-08 | Man Kil Jung | Method for isolation of high concentration of magnesium lithospermate b from salviae miltiorrhizae |
CN102058599A (zh) * | 2009-11-17 | 2011-05-18 | 中国科学院上海药物研究所 | 丹参多酚酸盐及其制备方法和用途 |
CN102204955A (zh) * | 2011-05-04 | 2011-10-05 | 长沙理工大学 | 一种同时提取丹参中酮类物质和丹酚酸类物质的方法 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103417526A (zh) * | 2012-05-15 | 2013-12-04 | 上海绿谷制药有限公司 | 丹参多酚酸盐在制备肾保护剂药物中的应用 |
-
2014
- 2014-04-01 CN CN201410137310.8A patent/CN104974119B/zh active Active
-
2015
- 2015-02-09 US US15/301,265 patent/US10259798B2/en active Active
- 2015-02-09 WO PCT/CN2015/072539 patent/WO2015149589A1/zh active Application Filing
- 2015-02-09 JP JP2016560006A patent/JP6839540B2/ja active Active
- 2015-02-09 RS RS20210192A patent/RS61592B1/sr unknown
- 2015-02-09 EP EP15772459.2A patent/EP3127905B1/en active Active
Patent Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH01268682A (ja) * | 1988-04-21 | 1989-10-26 | Minofuaagen Seiyaku Honpo:Goushi | 腎機能改善剤及びリソスペルミン酸塩の製造方法 |
JPH02131423A (ja) * | 1988-07-08 | 1990-05-21 | Terumo Corp | 5−リポキシゲナーゼ作用阻害剤 |
JP2002518455A (ja) * | 1998-06-25 | 2002-06-25 | ジョージタウン ユニバーシティ | サルビア種から得られる抗ウイルス活性を有する化合物 |
JP2003510286A (ja) * | 1999-09-29 | 2003-03-18 | シヴァ バイオメディカル,エルエルシー | 糖尿病性腎症および微量アルブミン尿症の治療 |
CN1911272A (zh) * | 2005-08-12 | 2007-02-14 | 上海绿谷制药有限公司 | 高含量丹参多酚酸盐粉针剂及其制备方法 |
US20100174097A1 (en) * | 2007-03-28 | 2010-07-08 | Man Kil Jung | Method for isolation of high concentration of magnesium lithospermate b from salviae miltiorrhizae |
US20100048618A1 (en) * | 2008-08-19 | 2010-02-25 | Scinopharm Taiwan Ltd. | Derivatives of 8-epiblechnic Acid and their Effects on Down-Regulation of Endothelin (ETA) receptor mRNA |
CN102058599A (zh) * | 2009-11-17 | 2011-05-18 | 中国科学院上海药物研究所 | 丹参多酚酸盐及其制备方法和用途 |
CN102204955A (zh) * | 2011-05-04 | 2011-10-05 | 长沙理工大学 | 一种同时提取丹参中酮类物质和丹酚酸类物质的方法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
JUNG, MANKIL ET AL.: "Effective isolation of magnesium lithospermate B and its inhibition of aldose reductase and fibronec", CHEMICAL & PHARMACEUTICAL BULLETIN, vol. 50(8), JPN6018043261, 2002, pages 1135 - 1136 * |
LI, XIAOCHUAN ET AL.: "Liquid chromatography/tandem mass spectrometry for the determination of magnesium lithospermate B in", JOURNAL OF PHARMACEUTICAL AND BIOMEDICAL ANALYSIS, vol. 38(1), JPN6018043263, 2005, pages 107 - 111 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20170137399A1 (en) | 2017-05-18 |
WO2015149589A1 (zh) | 2015-10-08 |
EP3127905A4 (en) | 2018-01-03 |
JP6839540B2 (ja) | 2021-03-10 |
CN104974119B (zh) | 2018-10-19 |
US10259798B2 (en) | 2019-04-16 |
CN104974119A (zh) | 2015-10-14 |
EP3127905B1 (en) | 2021-01-27 |
EP3127905A1 (en) | 2017-02-08 |
RS61592B1 (sr) | 2021-04-29 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN110563781B (zh) | 一种合欢皮新木脂体单体化合物的制备方法 | |
EP3449924B1 (en) | Composition, crocins active site, and uses thereof | |
Shao et al. | New iridoid glycosides from the fruits of Forsythia suspensa and their hepatoprotective activities | |
JP6839540B2 (ja) | 高純度のリトスペルミン酸bマグネシウム及びその製造方法 | |
CN109694366A (zh) | 一种分离提纯甘木通有效成分的方法 | |
CN106008485A (zh) | 格列美脲的药物组合物及其在生物医药中的应用 | |
CN102335348A (zh) | 一种用于防治帕金森氏病的天麻植物提取物及其制备方法 | |
CN105837595A (zh) | 阿替洛尔的药物组合物及其在生物医药中的应用 | |
CN103145792A (zh) | 紫菀酮型三萜及其药物组合物和其制备方法与应用 | |
CN105820144A (zh) | 一种头孢地尼的药物组合物及其医药用途 | |
CN113105471B (zh) | 一种具有抗氧化活性的酚酸类化合物及其应用 | |
CN112898357B (zh) | 金莲花中一种二萜苷类新化合物及其分离纯化方法和应用 | |
CN104140391A (zh) | 一种从千金子中分离制备高纯度千金二萜醇二乙酸烟酸酯的方法 | |
EP2999480B1 (en) | Extract of hippeastrum papilio rich in galanthamine | |
CN105884716A (zh) | 一种格列本脲的药物组合物及其医药用途 | |
CN111110687A (zh) | 一种抗脂代谢紊乱的合欢皮新木脂体化合物 | |
CN111909228A (zh) | 一种生物碱类化合物及其制备方法和应用 | |
CN113402384B (zh) | 澜沧黄杉中不同萜类分子间加合物及其制备方法和制药用途 | |
CN105078938A (zh) | 大环吉马烷型倍半萜类化合物在制备抗补体药物中的用途 | |
CN116284038B (zh) | 一种柠檬苦素类化合物Munronin V及其制备方法、衍生物和药物组合物及应用 | |
CN106117281A (zh) | 从红景天中提取红景天苷的方法 | |
TWI466674B (zh) | 臺灣梭羅木之生物活性組合物 | |
CN104231019B (zh) | 单萜苷类化合物在制备抗补体药物中的用途 | |
CN106854227B (zh) | 苯丙酸苷类化合物及其制备方法和应用 | |
CN118059090A (zh) | 金不换甲醚在制备治疗银屑病药物中的应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20180207 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20181018 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20181106 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20190125 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190403 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20191001 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20191219 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20200219 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200331 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20200818 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20201112 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210115 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20210202 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20210215 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6839540 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |