JP2017215151A - Renal cell cancer marker and usage thereof - Google Patents

Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a new renal cell cancer marker.SOLUTION: There is provided a renal cell cancer marker made of the Serine/threonine-protein kinase greatwall(MASTL) protein or the MASTL gene. There is further provided a renal cell cancer diagnostic product having a specific binding material for the MASTL protein, a primer set capable of amplifying the MASTL gene, or a probe specifically hybridized with mRNA of the MASTL gene. There is furthermore provided a method for determining a biological sample, including the steps of: measuring the amount of the MASTL protein present in a biological sample; and determining that the biological sample is derived from a patient with renal cell cancer if the measured amount of the MASTL protein is larger than a reference amount.SELECTED DRAWING: None

Description

本発明は、腎細胞癌マーカー及びその使用に関する。より具体的には、腎細胞癌マーカー、腎細胞癌診断薬及び生体試料の判定方法に関する。   The present invention relates to a renal cell carcinoma marker and use thereof. More specifically, the present invention relates to a renal cell carcinoma marker, a renal cell carcinoma diagnostic agent, and a biological sample determination method.

腎細胞癌（ｒｅｎａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ、ＲＣＣ）は腎実質に発生する尿細管由来の悪性腫瘍である。腎細胞癌は、成人悪性腫瘍の２〜３％を占め、罹患率・死亡率ともに増加傾向にある（例えば、非特許文献１を参照。）。   Renal cell carcinoma (RCC) is a malignant tumor derived from tubules that develops in the renal parenchyma. Renal cell carcinoma accounts for 2-3% of adult malignant tumors, and both morbidity and mortality tend to increase (see, for example, Non-Patent Document 1).

Marumo K., et al., The prevalence of renal cell carcinoma: a nation-wide survey in Japan in 1997, Int. J. Urol., 8, 359-365, 2001.Marumo K., et al., The prevalence of renal cell carcinoma: a nation-wide survey in Japan in 1997, Int. J. Urol., 8, 359-365, 2001.

しかしながら、現在、腎細胞癌の早期発見のための有効な診断マーカーは知られていない。このため、腎細胞癌の診断は、超音波検査、コンピュータ断層撮影（Ｃｏｍｐｕｔｅｄ Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ、ＣＴ）、生検試料の病理検査等により行われている。そこで、本発明は、新たな腎細胞癌マーカーを提供することを目的とする。   However, there is currently no known effective diagnostic marker for early detection of renal cell carcinoma. For this reason, diagnosis of renal cell carcinoma is performed by ultrasonic examination, computed tomography (CT), pathological examination of biopsy samples, and the like. Then, an object of this invention is to provide a new renal cell carcinoma marker.

本発明は以下の態様を含む。
［１］Ｓｅｒｉｎｅ／ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ−ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ｇｒｅａｔｗａｌｌ（ＭＡＳＴＬ）タンパク質又はＭＡＳＴＬ遺伝子からなる腎細胞癌マーカー。
［２］ＭＡＳＴＬタンパク質に対する特異的結合物質、ＭＡＳＴＬ遺伝子を増幅可能なプライマーセット又はＭＡＳＴＬ遺伝子のｍＲＮＡに特異的にハイブリダイズするプローブを備える、腎細胞癌診断薬。
［３］生体試料中のＭＡＳＴＬタンパク質の存在量を測定する工程と、測定されたＭＡＳＴＬタンパク質の存在量が、対照と比較して多い場合に、前記生体試料は腎細胞癌患者由来のものであると判定する工程と、を備える、生体試料の判定方法。
［４］生体試料中のＭＡＳＴＬ遺伝子の発現量を測定する工程と、測定されたＭＡＳＴＬ遺伝子の発現量が、対照と比較して多い場合に、前記生体試料は腎細胞癌患者由来のものであると判定する工程と、を備える、生体試料の判定方法。 The present invention includes the following aspects.
[1] A renal cell carcinoma marker comprising a Serine / threonine-protein kinase grease wall (MASTL) protein or a MASTL gene.
[2] A diagnostic agent for renal cell cancer comprising a specific binding substance for MASTL protein, a primer set capable of amplifying MASTL gene, or a probe that specifically hybridizes to mRNA of MASTL gene.
[3] The step of measuring the abundance of MASTL protein in a biological sample and the biological sample is derived from a renal cell carcinoma patient when the abundance of the measured MASTL protein is larger than that of a control A method for determining a biological sample.
[4] When the expression level of the MASTL gene in the biological sample is measured and the measured expression level of the MASTL gene is larger than that of the control, the biological sample is derived from a renal cell carcinoma patient A method for determining a biological sample.

本発明によれば、新たな腎細胞癌マーカーを提供することができる。   According to the present invention, a new renal cell carcinoma marker can be provided.

［腎細胞癌マーカー］
１実施形態において、本発明は、ＭＡＳＴＬタンパク質又はＭＡＳＴＬ遺伝子からなる腎細胞癌マーカーを提供する。 [Renal cell carcinoma marker]
In one embodiment, the present invention provides a renal cell carcinoma marker consisting of a MASTL protein or a MASTL gene.

本明細書では、遺伝子名ＭＡＳＴＬにより特定される遺伝子にコードされるタンパク質をＭＡＳＴＬタンパク質という。ＭＡＳＴＬタンパク質は、Ｓｅｒｉｎｅ／ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ−ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ｇｒｅａｔｗａｌｌ、又はＭｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｓｅｒｉｎｅ／ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ−ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ−ｌｉｋｅとも呼ばれるものである。ヒトＭＡＳＴＬタンパク質のＵｎｉＰｒｏｔＫＢデータベースのアクセッション番号はＱ９６ＧＸ５、Ｑ５Ｔ８Ｄ５、Ｑ５Ｔ８Ｄ７、Ｑ８ＮＣＤ６、Ｑ９６ＳＪ５等である。また、ヒトＭＡＳＴＬのｍＲＮＡのＲｅｆＳｅｑ ＩＤはＮＭ＿００１１７２３０３である。また、マウスＭＡＳＴＬタンパク質のＵｎｉＰｒｏｔＫＢデータベースのアクセッション番号はＱ８Ｃ０Ｐ０である。また、マウスＭＡＳＴＬのｍＲＮＡのＲｅｆＳｅｑ ＩＤはＮＭ＿０２５９７９である。   In the present specification, a protein encoded by a gene specified by the gene name MASTL is referred to as a MASTL protein. The MASTL protein is also referred to as Serine / threonine-protein kinase grease or Microtube-associated serine / threone-protein kinase-like. The accession numbers in the UniProtKB database for human MASTL protein are Q96GX5, Q5T8D5, Q5T8D7, Q8NCD6, Q96SJ5, and the like. The RefSeq ID of human MASTL mRNA is NM_001172303. In addition, the accession number of the UniProtKB database of mouse MASTL protein is Q8C0P0. The RefSeq ID of the mouse MASTL mRNA is NM_025979.

実施例において後述するように、発明者らは、腎細胞癌患者の手術前血清及び手術後血清のエクソソーム分画に含まれるタンパク質を液体クロマトグラフィー質量（ＬＣ／ＭＳ）分析法により網羅的に分析、比較し、腎細胞癌患者の手術前血清に特異的に存在するタンパク質としてＭＡＳＴＬタンパク質を同定した。したがって、ＭＡＳＴＬタンパク質又はＭＡＳＴＬ遺伝子を、腎細胞癌マーカーとして利用することができる。   As will be described later in the Examples, the inventors comprehensively analyzed proteins contained in the exosome fraction of preoperative serum and postoperative serum of renal cell carcinoma patients by liquid chromatography mass (LC / MS) analysis. In comparison, the MASTL protein was identified as a protein specifically present in the preoperative serum of patients with renal cell carcinoma. Therefore, MASTL protein or MASTL gene can be used as a renal cell carcinoma marker.

また、実施例において後述するように、ＭＡＳＴＬタンパク質は、膀胱癌患者の手術前血清中には検出されなかった。したがって、本実施形態のマーカーは腎細胞癌に特異的なマーカーである。   Further, as will be described later in Examples, MASTL protein was not detected in preoperative blood serum of bladder cancer patients. Therefore, the marker of this embodiment is a marker specific for renal cell carcinoma.

［腎細胞癌診断薬］
１実施形態において、本発明は、ＭＡＳＴＬタンパク質に対する特異的結合物質、ＭＡＳＴＬ遺伝子を増幅可能なプライマーセット又はＭＡＳＴＬ遺伝子のｍＲＮＡに特異的にハイブリダイズするプローブを備える、腎細胞癌診断薬を提供する。本実施形態の腎細胞癌診断薬は、診断用キットであるということもできる。 [Diagnostic for renal cell carcinoma]
In one embodiment, the present invention provides a diagnostic agent for renal cell cancer comprising a specific binding substance for a MASTL protein, a primer set capable of amplifying a MASTL gene, or a probe that specifically hybridizes to mRNA of a MASTL gene. It can also be said that the renal cell carcinoma diagnostic agent of this embodiment is a diagnostic kit.

（特異的結合物質）
ＭＡＳＴＬタンパク質に対する特異的結合物質としては、抗体、抗体断片、アプタマー等が挙げられる。抗体は、例えば、マウス等の動物にＭＡＳＴＬタンパク質又はその断片を抗原として免疫することによって作製することができる。あるいは、例えば、ファージライブラリーのスクリーニングにより作製することができる。抗体断片としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ等が挙げられる。 (Specific binding substance)
Specific binding substances for MASTL protein include antibodies, antibody fragments, aptamers and the like. An antibody can be produced, for example, by immunizing an animal such as a mouse with a MASTL protein or a fragment thereof as an antigen. Alternatively, for example, it can be prepared by screening a phage library. Examples of antibody fragments include Fv, Fab, scFv and the like.

抗ＭＡＳＴＬ抗体は、モノクローナル抗体であってもよく、ポリクローナル抗体であってもよい。また、市販の抗体であってもよい。   The anti-MASTL antibody may be a monoclonal antibody or a polyclonal antibody. A commercially available antibody may also be used.

アプタマーとは、標的物質に対する特異的結合能を有する物質である。アプタマーとしては、核酸アプタマー、ペプチドアプタマー等が挙げられる。標的ペプチドに特異的結合能を有する核酸アプタマーは、例えば、ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｇａｎｄ ｂｙ ｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌ ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ（ＳＥＬＥＸ）法等により選別することができる。また、標的ペプチドに特異的結合能を有するペプチドアプタマーは、例えば酵母を用いたＴｗｏ−ｈｙｂｒｉｄ法等により選別することができる。   An aptamer is a substance having a specific binding ability to a target substance. Examples of aptamers include nucleic acid aptamers and peptide aptamers. A nucleic acid aptamer having a specific binding ability to a target peptide can be selected by, for example, a systematic evolution of ligand by enrichment (SELEX) method. Peptide aptamers having specific binding ability to the target peptide can be selected, for example, by the two-hybrid method using yeast.

本実施形態の腎細胞癌診断薬は、被検者由来の血清、血漿、尿を含む体液、組織等を試料に用い、試料中のＭＡＳＴＬタンパク質を検出するものであってもよい。特に、血清、血漿又は尿は低侵襲で採取可能な生体試料であるため、患者の負担が少なく、容易に腎細胞癌に罹患しているか否かを診断することができる。   The diagnostic agent for renal cell carcinoma of the present embodiment may be one that detects serum, plasma, body fluid containing urine, tissue, etc. derived from a subject and detects MASTL protein in the sample. In particular, since serum, plasma, or urine is a biological sample that can be collected with minimal invasiveness, it can be easily diagnosed whether or not the patient suffers from renal cell carcinoma with less burden on the patient.

ＭＡＳＴＬタンパク質の検出方法としては、サンドイッチＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット、逆相タンパク質アレイを用いた検出、免疫組織化学染色等が挙げられる。なお、逆相タンパク質アレイを用いた検出とは、試料を固相にアレイ状に固定し、検出対象物質に特異的な抗体等を反応させることにより、試料中の検出対象物質を検出する解析方法である。   MASTL protein detection methods include sandwich ELISA, Western blot, detection using a reverse phase protein array, immunohistochemical staining, and the like. Detection using a reversed-phase protein array is an analysis method for detecting a detection target substance in a sample by immobilizing the sample on a solid phase in an array and reacting a specific antibody with the detection target substance. It is.

（プライマーセット）
ＭＡＳＴＬ遺伝子を増幅可能なプライマーセットとは、ＭＡＳＴＬ遺伝子のｍＲＮＡをＲＴ−ＰＣＲ等により増幅することができるものであれば特に制限されない。 (Primer set)
The primer set capable of amplifying the MASTL gene is not particularly limited as long as it can amplify MASTL gene mRNA by RT-PCR or the like.

ＭＡＳＴＬ遺伝子のｍＲＮＡは、上述したＩＤで特定されるＲｅｆＳｅｑデータベースのエントリーに記載された塩基配列を有している。なお、ｍＲＮＡにはスプライシングバリアント等が存在する場合があるため、ＭＡＳＴＬ遺伝子のｍＲＮＡは上述したＲｅｆＳｅｑ ＩＤで特定されるものに限られるものではない。   The mRNA of the MASTL gene has the base sequence described in the entry of the RefSeq database specified by the ID described above. Since mRNA may contain splicing variants and the like, the mRNA of the MASTL gene is not limited to that specified by the above-described RefSeq ID.

例えば、被検者由来の組織等を試料に用い、本プライマーセットを用いたＲＴ−ＰＣＲ等を行うことにより、試料中のＭＡＳＴＬ遺伝子のｍＲＮＡを検出することができる。   For example, the mRNA of the MASTL gene in the sample can be detected by using tissue or the like derived from the subject as a sample and performing RT-PCR or the like using this primer set.

（プローブ）
プローブとしては、ＭＡＳＴＬ遺伝子のｍＲＮＡに特異的にハイブリダイズするものであれば特に限定されない。プローブは、担体上に固定されてＤＮＡマイクロアレイ等を構成していてもよい。例えば、上記のＤＮＡマイクロアレイに、被検者由来の組織から抽出したｍＲＮＡを接触させ、プローブにハイブリダイズしたＭＡＳＴＬ遺伝子のｍＲＮＡを検出することにより、被検者が腎細胞癌に罹患しているか否かを判定することができる。 (probe)
The probe is not particularly limited as long as it specifically hybridizes to the mRNA of the MASTL gene. The probe may be fixed on a carrier to constitute a DNA microarray or the like. For example, whether or not the subject suffers from renal cell carcinoma by contacting mRNA extracted from the tissue derived from the subject with the DNA microarray and detecting mRNA of the MASTL gene hybridized to the probe. Can be determined.

［生体試料の判定方法］
１実施形態において、本発明は、生体試料中のＭＡＳＴＬタンパク質の存在量を測定する工程と、測定されたＭＡＳＴＬタンパク質の存在量が、対照と比較して多い場合に、前記生体試料は腎細胞癌患者由来のものであると判定する工程と、を備える、生体試料の判定方法を提供する。 [Biological sample determination method]
In one embodiment, the present invention relates to a step of measuring the abundance of MASTL protein in a biological sample, and when the abundance of a measured MASTL protein is larger than that of a control, the biological sample is renal cell carcinoma. And a step of determining that the sample is derived from a patient.

本実施形態の判定方法により、生体試料が腎細胞癌患者由来のものであるか否かを判定することができる。すなわち、本実施形態の判定方法は、腎細胞癌の診断方法であるということもできる。本実施形態の判定方法によれば、腎細胞癌を特異的に検出することができる。   With the determination method of the present embodiment, it can be determined whether or not the biological sample is derived from a renal cell carcinoma patient. That is, it can also be said that the determination method of this embodiment is a diagnostic method for renal cell carcinoma. According to the determination method of the present embodiment, renal cell carcinoma can be specifically detected.

本実施形態の判定方法において、生体試料は、血清、血漿又は血清若しくは血漿から精製されたエクソソームであってもよい。生体試料中のＭＡＳＴＬタンパク質の存在量を測定する工程は、上述したＭＡＳＴＬタンパク質に対する特異的結合物質を用いた、サンドイッチＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット、逆相タンパク質アレイを用いた検出、免疫組織化学染色等により行うことができる。ここで、測定したＭＡＳＴＬタンパク質の存在量は、段階希釈した既知濃度のＭＡＳＴＬタンパク質を基準に用いて定量値に換算してもよい。   In the determination method of the present embodiment, the biological sample may be serum, plasma, or exosomes purified from serum or plasma. The step of measuring the abundance of MASTL protein in a biological sample is performed by sandwich ELISA, Western blot, detection using a reverse phase protein array, immunohistochemical staining, etc., using the above-mentioned specific binding substance for MASTL protein. be able to. Here, the abundance of the measured MASTL protein may be converted into a quantitative value by using a known concentration of MASTL protein diluted serially as a reference.

本実施形態の判定方法では、生体試料中のＭＡＳＴＬタンパク質の存在量が、対照試料中のＭＡＳＴＬタンパク質の存在量と比較して多い場合に、前記生体試料は腎細胞癌患者由来のものであると判定する。対照としては、例えば健常人由来の生体試料が挙げられる。あるいは、予め健常人由来の生体試料中に存在するＭＡＳＴＬタンパク質の量に基づいて基準値を設定しておき、当該基準値と比較してＭＡＳＴＬタンパク質の量が多い場合に、生体試料は腎細胞癌患者由来のものであると判定してもよい。   In the determination method of this embodiment, when the amount of MASTL protein in the biological sample is large compared to the amount of MASTL protein in the control sample, the biological sample is derived from a renal cell carcinoma patient. judge. As a control, for example, a biological sample derived from a healthy person can be mentioned. Alternatively, when a reference value is set in advance based on the amount of MASTL protein present in a biological sample derived from a healthy person, and the amount of MASTL protein is larger than the reference value, the biological sample is renal cell carcinoma You may determine that it originates from a patient.

本実施形態の判定方法は、生体試料中のＭＡＳＴＬ遺伝子の発現量を測定する工程と、測定されたＭＡＳＴＬ遺伝子の発現量が、対照と比較して多い場合に、前記生体試料は腎細胞癌患者由来のものであると判定する工程と、を備えるものであってもよい。   In the determination method of the present embodiment, when the expression level of the MASTL gene in the biological sample is measured and the measured expression level of the MASTL gene is larger than that of the control, the biological sample is a renal cell carcinoma patient. And a step of determining that it is derived.

本実施形態の判定方法において、生体試料は、被検者由来の組織等であってもよい。生体試料中のＭＡＳＴＬ遺伝子の発現量を測定する工程は、上述したプライマーセットを用いたＲＴ−ＰＣＲ、定量的ＲＴ−ＰＣＲ等により行うことができる。あるいは、上述したプローブを用いたＤＮＡマイクロアレイ解析、ノーザンブロッティング等により、ＭＡＳＴＬ遺伝子の発現量を測定してもよい。ここで、測定したＭＡＳＴＬ遺伝子の発現量は、段階希釈した既知濃度のＭＡＳＴＬ遺伝子断片等を基準に用いて定量値に換算してもよい。   In the determination method of the present embodiment, the biological sample may be a tissue derived from a subject. The step of measuring the expression level of the MASTL gene in the biological sample can be performed by RT-PCR using the primer set described above, quantitative RT-PCR, or the like. Alternatively, the expression level of the MASTL gene may be measured by DNA microarray analysis using the probe described above, Northern blotting, or the like. Here, the measured expression level of the MASTL gene may be converted into a quantitative value by using a serially diluted MASTL gene fragment with a known concentration as a reference.

また、本実施形態の判定方法では、生体試料中のＭＡＳＴＬ遺伝子の発現量が、対照試料中のＭＡＳＴＬ遺伝子の発現量と比較して多い場合に、前記生体試料は腎細胞癌患者由来のものであると判定する。対照としては、例えば健常人由来の生体試料が挙げられる。あるいは、予め健常人由来の生体試料におけるＭＡＳＴＬ遺伝子の発現量に基づいて基準値を設定しておき、当該基準値と比較してＭＡＳＴＬ遺伝子の発現量が多い場合に、生体試料は腎細胞癌患者由来のものであると判定してもよい。   In the determination method of the present embodiment, when the expression level of the MASTL gene in the biological sample is larger than the expression level of the MASTL gene in the control sample, the biological sample is derived from a renal cell carcinoma patient. Judge that there is. As a control, for example, a biological sample derived from a healthy person can be mentioned. Alternatively, when a reference value is set in advance based on the expression level of the MASTL gene in a biological sample derived from a healthy person, and the expression level of the MASTL gene is larger than the reference value, the biological sample is a renal cell carcinoma patient You may determine with the origin.

次に実施例を示して本発明を更に詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。   EXAMPLES Next, although an Example is shown and this invention is demonstrated further in detail, this invention is not limited to a following example.

２０症例の腎細胞癌患者の手術前血清と手術後血清を採取した。続いて、２０症例の手術前血清の混合血清試料、及び２０症例の手術後血清の混合血清試料を作製し、これらの混合血清を用いたプロテオーム解析を行い、腎細胞癌患者の手術前血清に特異的に存在するタンパク質を探索した。   Preoperative and postoperative sera from 20 patients with renal cell carcinoma were collected. Subsequently, a mixed serum sample of 20 cases of preoperative blood serum and a mixed serum sample of 20 cases of postoperative blood serum were prepared, and proteome analysis using these mixed sera was conducted to obtain preoperative blood serum of renal cell carcinoma patients. We searched for proteins that exist specifically.

具体的には、まず、手術前、手術後の各々の混合血清２００μＬにリン酸緩衝液１１００μＬを添加して、１９，０００×ｇ、４℃で３０分間遠心し、上清を回収した。続いて、回収した上清を１００，０００×ｇ、４℃で９０分間超遠心し、沈殿を回収した。続いて、回収した沈殿を２回洗浄し、エクソソーム画分とした。   Specifically, first, 1100 μL of phosphate buffer was added to 200 μL of each mixed serum before and after surgery, and centrifuged at 19,000 × g for 30 minutes at 4 ° C., and the supernatant was collected. Subsequently, the collected supernatant was ultracentrifuged at 100,000 × g and 4 ° C. for 90 minutes to collect the precipitate. Subsequently, the collected precipitate was washed twice to obtain an exosome fraction.

続いて、回収したエクソソーム画分に界面活性剤であるデオキシコール酸ナトリウムを含む溶液を加えて加熱処理し、超音波破砕機で溶解後、トリプシン消化した。続いて、手術前血清由来のサンプルと手術後血清由来のサンプルを安定同位体標識試薬（型式「Ｔａｎｄｅｍ Ｍａｓｓ Ｔａｇ ２−ｐｌｅｘ」、サーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社）でそれぞれ標識して等量混合し、陽イオン交換カラムで８つのフラクションに分画した。続いて得られたフラクションの各々を液体クロマトグラフィー（型式「Ｅａｓｙ−ｎＬＣ １０００」、サーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社）及び四重極・フーリエ変換ハイブリッド質量分析計（型式「Ｑ−Ｅｘａｃｔｉｖｅ」、サーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社）を組み合わせた液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ／ＭＳ）により解析し、比較した。   Subsequently, a solution containing sodium deoxycholate as a surfactant was added to the collected exosome fraction, heat-treated, dissolved in an ultrasonic crusher, and digested with trypsin. Subsequently, the pre-operative serum-derived sample and the post-operative serum-derived sample are labeled with a stable isotope labeling reagent (type “Tandem Mass Tag 2-plex”, Thermo Fisher Scientific Co., Ltd.) and mixed in equal amounts. Fractionated into 8 fractions on a cation exchange column. Subsequently, each of the obtained fractions was subjected to liquid chromatography (model “Easy-nLC 1000”, Thermo Fisher Scientific Co., Ltd.) and a quadrupole / Fourier transform hybrid mass spectrometer (model “Q-Exactive”, thermo fisher). Analysis and comparison by liquid chromatography mass spectrometry (LC / MS) combined with Scientific Co.).

その結果、腎細胞癌患者の手術前血清に手術後血清の約３．３倍多く含まれているタンパク質としてＭＡＳＴＬタンパク質を見出した。ＭＡＳＴＬタンパク質は、世界ヒトプロテオーム機構がまとめた、血中タンパク質リスト（Ｈｕｍａｎ Ｐｅｏｔｅｏｍｅ Ｐｌａｓｍａ Ｐｒｏｊｅｃｔ：ＨＰＰＰ）中の約２０００種類のタンパク質に含まれていなかった。更に、ＭＡＳＴＬタンパク質は、世界ヒトプロテオーム機構がまとめた、血中タンパク質データベース（Ｐｌａｓｍａ Ｐｒｏｔｅｏｍｅ Ｄａｔａｂａｓｅ：ＰＰＤ）中の約１０５００種類のタンパク質にも含まれていなかった。したがって、ＭＡＳＴＬタンパク質が血液中に存在することは発明者らが今回初めて明らかにしたことである。   As a result, the MASTL protein was found as a protein contained in the serum before surgery of renal cell carcinoma patients about 3.3 times more than the serum after surgery. The MASTL protein was not included in about 2000 proteins in the blood protein list (HPPP) compiled by the World Human Proteome Organization. Furthermore, the MASTL protein was not contained in about 10500 proteins in the blood protein database (PPD) compiled by the World Human Proteome Organization. Therefore, the present inventors have revealed for the first time that MASTL protein is present in blood.

また、膀胱癌患者の手術前及び手術後の血清を用いて上記と同様の解析を行った結果、ＭＡＳＴＬタンパク質は、膀胱癌患者の手術前及び手術後の血清中には検出されないことが明らかとなった。この結果はＭＡＳＴＬタンパク質が腎細胞癌特異的なマーカーであることを示す。   In addition, as a result of the same analysis as described above using serum before and after surgery for bladder cancer patients, it is clear that MASTL protein is not detected in serum before and after surgery for bladder cancer patients. became. This result indicates that the MASTL protein is a renal cell carcinoma specific marker.

本発明によれば、新たな腎細胞癌マーカーを提供することができる。   According to the present invention, a new renal cell carcinoma marker can be provided.

Claims (4)

Ｓｅｒｉｎｅ／ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ−ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ｇｒｅａｔｗａｌｌ（ＭＡＳＴＬ）タンパク質又はＭＡＳＴＬ遺伝子からなる腎細胞癌マーカー。   A renal cell carcinoma marker comprising a Serine / threonine-protein kinase grease wall (MASTL) protein or a MASTL gene. ＭＡＳＴＬタンパク質に対する特異的結合物質、ＭＡＳＴＬ遺伝子を増幅可能なプライマーセット又はＭＡＳＴＬ遺伝子のｍＲＮＡに特異的にハイブリダイズするプローブを備える、腎細胞癌診断薬。   A diagnostic agent for renal cell cancer comprising a specific binding substance for MASTL protein, a primer set capable of amplifying MASTL gene, or a probe that specifically hybridizes to mRNA of MASTL gene. 生体試料中のＭＡＳＴＬタンパク質の存在量を測定する工程と、
測定されたＭＡＳＴＬタンパク質の存在量が、対照と比較して多い場合に、前記生体試料は腎細胞癌患者由来のものであると判定する工程と、
を備える、生体試料の判定方法。 Measuring the abundance of MASTL protein in the biological sample;
Determining that the biological sample is from a renal cell carcinoma patient when the abundance of the measured MASTL protein is high compared to a control;
A method for determining a biological sample. 生体試料中のＭＡＳＴＬ遺伝子の発現量を測定する工程と、
測定されたＭＡＳＴＬ遺伝子の発現量が、対照と比較して多い場合に、前記生体試料は腎細胞癌患者由来のものであると判定する工程と、
を備える、生体試料の判定方法。 Measuring the expression level of the MASTL gene in the biological sample;
A step of determining that the biological sample is derived from a renal cell carcinoma patient when the measured expression level of the MASTL gene is large compared to a control;
A method for determining a biological sample.