JP2017213006A5

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Publication number: JP2017213006A5
Application number: JP2017177761A
Authority: JP
Filing date: 2017-09-15
Publication date: 2018-04-05
Anticipated expiration: 2035-05-28

Claims

げっ歯類であって、前記げっ歯類のゲノムは、改変ＤＰＰ４遺伝子を形成するための、内在性げっ歯類Ｄｐｐ４遺伝子座での、げっ歯類Ｄｐｐ４遺伝子のゲノム断片のヒトＤＰＰ４遺伝子のゲノム断片での置換を含み、前記改変ＤＰＰ４遺伝子は、ヒトＤＰＰ４タンパク質をコードし、前記改変ＤＰＰ４遺伝子の発現は、前記内在性げっ歯類Ｄｐｐ４遺伝子座におけるげっ歯類調節エレメントの制御下にあり、前記げっ歯類は、マウスまたはラットであり、前記げっ歯類は、中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ−ＣｏＶ）に感染した場合に肺の炎症を示す、げっ歯類。
前記ヒトＤＰＰ４遺伝子のゲノム断片が、前記ヒトＤＰＰ４遺伝子のエクソン２からエクソン２６を含む、請求項１に記載のげっ歯類。
置換される前記げっ歯類Ｄｐｐ４遺伝子のゲノム断片が、前記げっ歯類Ｄｐｐ４遺伝子のエクソン２からエクソン２６を含む、請求項１または２に記載のげっ歯類。
前記げっ歯類がマウスであり、前記改変ＤＰＰ４遺伝子が、前記ヒトＤＰＰ４遺伝子の前記ゲノム断片に作動可能に連結される内在性マウスＤｐｐ４のエクソン１を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載のげっ歯類。
前記げっ歯類が、マウスＤｐｐ４タンパク質を発現することができないマウスである、請求項１から４のいずれか一項に記載のげっ歯類。
前記げっ歯類が、改変ＤＰＰ４遺伝子についてヘテロ接合性である、請求項１から５のいずれか一項に記載のげっ歯類。
前記げっ歯類が、改変ＤＰＰ４遺伝子についてホモ接合性である、請求項１から５のいずれか一項に記載のげっ歯類。
ヒト化げっ歯類を作製するための方法であって、内在性げっ歯類Ｄｐｐ４遺伝子座におけるげっ歯類Ｄｐｐ４遺伝子のゲノム断片を、ヒトＤＰＰ４遺伝子のゲノム断片で置換して、改変ＤＰＰ４遺伝子を形成する工程を含み、前記改変ＤＰＰ４遺伝子は、ヒトＤＰＰ４タンパク質をコードし、前記改変ＤＰＰ４遺伝子の発現は、前記内在性げっ歯類Ｄｐｐ４遺伝子座におけるげっ歯類調節エレメントの制御下にあり、前記げっ歯類は、マウスまたはラットであり、前記げっ歯類は、ＭＥＲＳ−ＣｏＶに感染した場合に肺の炎症を示す、方法。
ヒト化げっ歯類を作製するための方法であって、
（ｉ）げっ歯類胚性幹細胞における内在性げっ歯類Ｄｐｐ４遺伝子座においてげっ歯類Ｄｐｐ４遺伝子のゲノム断片を、ヒトＤＰＰ４遺伝子のゲノム断片で置換して、改変ＤＰＰ４遺伝子を形成する工程を含み、前記改変ＤＰＰ４遺伝子は、ヒトＤＰＰ４タンパク質をコードし、前記改変ＤＰＰ４遺伝子の発現は、前記内在性げっ歯類Ｄｐｐ４遺伝子座におけるげっ歯類調節エレメントの制御下にあり、前記げっ歯類は、マウスまたはラットである、工程、および
（ｉｉ）工程（ｉ）の前記げっ歯類胚性幹細胞からげっ歯類を生成する工程であって、前記げっ歯類が、ＭＥＲＳ−ＣｏＶに感染した場合に肺の炎症を示す、工程
を含む、方法。
前記ヒトＤＰＰ４遺伝子のゲノム断片が、前記ヒトＤＰＰ４遺伝子のエクソン２からエクソン２６を含む、請求項８または９に記載の方法。
置換される前記げっ歯類Ｄｐｐ４遺伝子のゲノム断片が、前記げっ歯類Ｄｐｐ４遺伝子のエクソン２からエクソン２６を含む、請求項８から１０のいずれか一項に記載のげっ歯類。
前記げっ歯類がマウスであり、前記改変ＤＰＰ４遺伝子が、前記ヒトＤＰＰ４遺伝子の前記ゲノム断片に作動可能に連結される内在性マウスＤｐｐ４のエクソン１を含む、請求項８から１１のいずれか一項に記載の方法。
前記げっ歯類が、マウスＤｐｐ４タンパク質を発現することができないマウスである、請求項８から１２のいずれか一項に記載の方法。
前記げっ歯類が、改変ＤＰＰ４遺伝子についてヘテロ接合性である、請求項８から１３のいずれか一項に記載の方法。
前記げっ歯類が、改変ＤＰＰ４遺伝子についてホモ接合性である、請求項８から１３のいずれか一項に記載の方法。
げっ歯類において、ヒト特異的ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ４）拮抗薬のインビボ治療有効性を決定するための方法であって、
（ａ）ＤＰＰ４拮抗薬を、請求項１から７のいずれか一項に記載のげっ歯類に投与する工程、および
（ｂ）前記ＤＰＰ４拮抗薬が、ＤＰＰ４拮抗薬が投与されていないＭＥＲＳ−ＣｏＶに感染した対照げっ歯類と比較して、前記げっ歯類がＭＥＲＳ−ＣｏＶに感染した場合に、ＭＥＲＳ−ＣｏＶ感染の１つ以上の症状を治療又は予防するかを決定する工程
を含む、方法。
前記ＤＰＰ４拮抗薬が小分子である、請求項１６に記載の方法。
前記ＤＰＰ４拮抗薬がペプチドまたは抗体である、請求項１６に記載の方法。
前記ＤＰＰ４拮抗薬が、ＭＥＲＳ−ＣｏＶタンパク質に対する抗体である、請求項１６または１８に記載の方法。
前記ＭＥＲＳ−ＣｏＶタンパク質が、ＭＥＲＳ−ＣｏＶスパイクタンパク質である、請求項１９に記載の方法。
前記拮抗薬が、ＭＥＲＳ−ＣｏＶ感染前に投与される、請求項１６から２０のいずれか一項に記載の方法。
前記拮抗薬が、ＭＥＲＳ−ＣｏＶ感染後に投与される、請求項１６から２０のいずれか一項に記載の方法。
前記拮抗薬が、ＭＥＲＳ−ＣｏＶ感染と同時に投与される、請求項１６から２０のいずれか一項に記載の方法。
工程（ｂ）における決定する工程が、ウイルス力価またはＲＮＡレベルを測定することを含む、請求項１６から２３のいずれか一項に記載の方法。
ウイルス力価又はＲＮＡレベルが、ｑＰＣＲ、ノーザンブロット、プラークアッセイ、及びインサイチュハイブリダイゼーションからなる群から選択される１つ以上の方法により査定される、請求項２４に記載の方法。
ＭＥＲＳ−ＣｏＶ感染の１つ以上の症状が、肺の炎症を含む、請求項１６から２３のいずれか一項に記載の方法。
肺の炎症が、組織化学的に評価される、請求項２６に記載の方法。
ＭＥＲＳ−ＣｏＶ感染の１つ以上の症状が、体重減少を含む、請求項１６から２３のいずれか一項に記載の方法。
遺伝子改変マウスであって、前記マウスのゲノムは、ヒト化ＤＰＰ４遺伝子を形成するための、マウスＤｐｐ４遺伝子のエクソン２から２６を含むマウスゲノム断片の、ヒトＤＰＰ４遺伝子のエクソン２から２６を含むヒトゲノム断片による置換を含み、前記置換は、内在性マウスＤｐｐ４遺伝子座におけるものであり、前記ヒト化ＤＰＰ４遺伝子は、前記内在性Ｄｐｐ４遺伝子座における内在性マウスＤｐｐ４プロモーターの制御下にあり、前記マウスは、ＭＥＲＳ−ＣｏＶに感染した場合に肺の炎症を示す、マウス。
前記マウスが、マウスＤｐｐ４タンパク質を発現することができない、請求項２９に記載のマウス。
前記マウスが、前記置換についてヘテロ接合性である、請求項２９または３０に記載のマウス。
前記マウスが、前記置換についてホモ合性である、請求項２９または３０に記載のマウス。
マウスにおいて、ヒト特異的ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ４）拮抗薬のインビボ治療有効性を決定するための方法であって、
（ａ）ＤＰＰ４拮抗薬を、請求項２９から３２のいずれか一項に記載のマウスに投与する工程、および
（ｂ）前記ＤＰＰ４拮抗薬の効果を決定する工程であって、ＤＰＰ４拮抗薬が投与されていないＭＥＲＳ−ＣｏＶに感染した対照マウスと比較して、ＭＥＲＳ−ＣｏＶに感染した場合に、マウスにおけるＭＥＲＳ−ＣｏＶ感染の１つ以上の症状を低減させる、工程
を含む、方法。
前記ＤＰＰ４拮抗薬が小分子である、請求項３３に記載の方法。
前記ＤＰＰ４拮抗薬がペプチドまたは抗体である、請求項３３に記載の方法。
前記ＤＰＰ４拮抗薬が、ＭＥＲＳ−ＣｏＶタンパク質に対する抗体である、請求項３３または３５に記載の方法。
前記ＭＥＲＳ−ＣｏＶタンパク質が、ＭＥＲＳ−ＣｏＶスパイクタンパク質である、請求項３６に記載の方法。
前記拮抗薬が、ＭＥＲＳ−ＣｏＶ感染前に投与される、請求項３３から３７のいずれか一項に記載の方法。
前記拮抗薬が、ＭＥＲＳ−ＣｏＶ感染後に投与される、請求項３３から３７のいずれか一項に記載の方法。
前記拮抗薬が、ＭＥＲＳ−ＣｏＶ感染と同時に投与される、請求項３３から３７のいずれか一項に記載の方法。
決定する工程が、ウイルス力価またはＲＮＡレベルを測定することを含む、請求項３３から４０のいずれか一項に記載の方法。
前記１つ以上の症状が肺の炎症を含む、請求項３３から４０のいずれか一項に記載の方法。
前記マウスが、体重減少をさらに示す、請求項２９に記載のマウス。
肺の炎症が、組織化学的に評価される、請求項２９に記載の方法。
組織または細胞のゲノムが置換を含む、請求項１から７のいずれか一項に記載のげっ歯類の単離された組織または細胞。
改変ＤＰＰ４遺伝子を形成するための、内在性げっ歯類Ｄｐｐ４遺伝子座での、げっ歯類Ｄｐｐ４遺伝子のゲノム断片の、ヒトＤＰＰ４遺伝子のゲノム断片での置換を含む、単離されたげっ歯類胚性幹（ＥＳ）細胞であって、前記改変ＤＰＰ４遺伝子がヒトＤＰＰ４タンパク質をコードし、前記改変ＤＰＰ４遺伝子の発現は、内在性げっ歯類Ｄｐｐ４遺伝子座におけるげっ歯類制御エレメントの制御下にあり、前記げっ歯類ＥＳ細胞がマウスまたはラットのＥＳ細胞である、げっ歯類ＥＳ細胞。
前記ヒトＤＰＰ４遺伝子のゲノム断片が、前記ヒトＤＰＰ４遺伝子のエクソン２からエクソン２６を含む、請求項４６に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
置換される前記げっ歯類Ｄｐｐ４遺伝子のゲノム断片が、前記げっ歯類Ｄｐｐ４遺伝子のエクソン２からエクソン２６を含む、請求項４６または４７に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
前記げっ歯類ＥＳ細胞がマウスＥＳ細胞であり、前記改変ＤＰＰ４遺伝子が、前記ヒトＤＰＰ４遺伝子の前記ゲノム断片に作動可能に連結される内在性マウスＤｐｐ４のエクソン１を含む、請求項４６から４８のいずれか一項に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
前記げっ歯類ＥＳ細胞が、前記改変ＤＰＰ４遺伝子についてヘテロ接合性である、請求項４６から４９のいずれか一項に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
前記げっ歯類ＥＳ細胞が、前記改変ＤＰＰ４遺伝子についてホモ接合性である、請求項４６から４９のいずれか一項に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
請求項４６から５１のいずれか一項に記載のげっ歯類ＥＳ細胞から生成される、げっ歯類胚。
ヒト化ＤＰＰ４げっ歯類胚であって、前記胚のゲノムは、改変ＤＰＰ４遺伝子を形成するための、内在性げっ歯類Ｄｐｐ４遺伝子座での、内在性げっ歯類Ｄｐｐ４遺伝子のゲノム断片の、ヒトＤＰＰ４遺伝子のゲノム断片での置換を含み、前記改変ＤＰＰ４遺伝子は、ヒトＤＰＰ４タンパク質をコードし、前記改変ＤＰＰ４遺伝子の発現は、前記内在性げっ歯類Ｄｐｐ４遺伝子座における内在性げっ歯類調節エレメントの制御下にあり、前記げっ歯類胚は、マウス胚またはラット胚である、ヒト化ＤＰＰ４げっ歯類胚。
前記ヒトＤＰＰ４遺伝子のゲノム断片が、前記ヒトＤＰＰ４遺伝子のエクソン２からエクソン２６を含む、請求項５３に記載の胚。
置換される前記げっ歯類Ｄｐｐ４遺伝子のゲノム断片が、前記げっ歯類Ｄｐｐ４遺伝子のエクソン２からエクソン２６を含む、請求項５３または５４に記載の胚。
前記げっ歯類胚がマウス胚であり、前記改変ＤＰＰ４遺伝子が、前記ヒトＤＰＰ４遺伝子の前記ゲノム断片に作動可能に連結される内在性マウスＤｐｐ４のエクソン１を含む、請求項５３から５５のいずれか一項に記載の胚。
前記げっ歯類胚が、マウスＤｐｐ４タンパク質を発現することができないマウス胚である、請求項５３から５６のいずれか一項に記載の胚。
前記げっ歯類胚が改変ＤＰＰ４遺伝子についてヘテロ接合性である、請求項５３から５７のいずれか一項に記載の胚。
前記げっ歯類胚が改変ＤＰＰ４遺伝子についてホモ接合性である、請求項５３から５７のいずれか一項に記載の胚。
前記げっ歯類胚がマウス胚であり、前記マウスが、
（ａ）Ｃ５７ＢＬ／Ａ、Ｃ５７ＢＬ／Ａｎ、Ｃ５７ＢＬ／ＧｒＦａ、Ｃ５７ＢＬ／ＫａＬｗＮ、Ｃ５７ＢＬ／６、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ、Ｃ５７ＢＬ／６ＢｙＪ、Ｃ５７ＢＬ／６ＮＪ、Ｃ５７ＢＬ／１０、Ｃ５７ＢＬ／１０ＳｃＳｎ、Ｃ５７ＢＬ／１０Ｃｒ、及びＣ５７ＢＬ／Ｏｌａからなる群から選択されるＣ５７ＢＬ系統、
（ｂ）１２９Ｐ１、１２９Ｐ２、１２９Ｐ３、１２９Ｘ１、１２９Ｓ１（例えば１２９Ｓ１／ＳＶ、１２９Ｓ１／Ｓｖｌｍ）、１２９Ｓ２、１２９Ｓ４、１２９Ｓ５、１２９Ｓ９／ＳｖＥｖＨ、１２９Ｓ６（１２９／ＳｖＥｖＴａｃ）、１２９Ｓ７、１２９Ｓ８、１２９Ｔ１、１２９Ｔ２からなる群から選択される１２９系統、
（ｃ）１２９系統とＣ５７ＢＬ／６系統との混合物、
（ｄ）１２９系統の混合、または
（ｅ）ＢＬ／６系統の混合
である、請求項５３から５９のいずれか一項に記載の胚。