JP2017189121A - METHOD FOR DETERMINING THE RISK OF DEVELOPING ANT-TNFα ANTIBODY IN TREATMENT WITH AN ANTI-TNFα ANTIBODY AND OLIGONUCLEOTIDE KIT FOR DETERMINATION THEREOF - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、抗ＴＮＦα抗体適応疾患の治療における抗ＴＮＦα抗体投与時反応の発症リスクを判定する方法、並びに該判定用オリゴヌクレオチドキットに関する。 The present invention relates to a method for determining the risk of developing an anti-TNFα antibody-induced response in the treatment of an anti-TNFα antibody indication disease, and the oligonucleotide kit for determination.
炎症性腸疾患は、大腸及び小腸の粘膜に慢性の炎症又は潰瘍を引き起こす原因不明の疾患の総称であり、根治治療はない。主に潰瘍性大腸炎（Ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ Ｃｏｌｉｔｉｓ：ＵＣ）及びクローン病（Ｃｒｏｈｎ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ：ＣＤ）が知られており、両者はいずれも若年者に発生することが多く、厚生労働省によって難病に指定されている。潰瘍性大腸炎は大腸粘膜にびらんや潰瘍ができ下血を伴う下痢や、頻繁に起こる腹痛が特徴的な症状として現れる。病変は直腸から連続的に、そして上行性（口側）に拡がる性質があり、最大で直腸から結腸全体に拡がる。一方、クローン病は全消化管に深い潰瘍が発生し、しばしば種々の臓器に瘻孔を形成する。痔瘻や難治性の膿瘍を形成することもある。 Inflammatory bowel disease is a general term for diseases of unknown cause that cause chronic inflammation or ulcers in the mucosa of the large and small intestines, and there is no curative treatment. Known mainly for ulcerative colitis (UC) and Crohn's Disease (CD), both of which often occur in young people and have been designated as intractable by the Ministry of Health, Labor and Welfare. Yes. Ulcerative colitis is characterized by erosions and ulcers on the mucosa of the large intestine and diarrhea with melena and frequent abdominal pain. The lesions have the property of spreading continuously from the rectum and ascending (oral), up to the rectum and the entire colon. Crohn's disease, on the other hand, causes deep ulcers in the entire digestive tract and often forms fistulas in various organs. It may form sputum or refractory abscess.
炎症性腸疾患の患者には、原則的には薬による内科的治療が行われる。現在、腸の炎症を抑制する治療方法として、５−アミノサリチル酸（５−ＡＳＡ）製剤、副腎皮質ステロイド剤等の薬物治療が知られている（特許文献１等）。また、炎症性腸疾患を含む炎症性疾患に対しては炎症性メディエーターの一種であるＴＮＦ−α（Ｔｕｍｏｒ Ｎｅｃｒｏｓｉｓ Ｆａｃｔｏｒ−α）の活性を中和し得る抗ＴＮＦα抗体の投与が有効であることが知られており、臨床的にもインフリキシマブ（製品名：レミケード（登録商標））が関節リウマチ、ベーチェット病、乾癬、強直性脊椎炎、川崎病、クローン病及び潰瘍性大腸炎の治療薬として使用されている。 Patients with inflammatory bowel disease are, in principle, treated with medicine. Currently, pharmacological treatments such as 5-aminosalicylic acid (5-ASA) preparations and corticosteroids are known as therapeutic methods for suppressing intestinal inflammation (Patent Document 1, etc.). In addition, for inflammatory diseases including inflammatory bowel disease, it is effective to administer an anti-TNFα antibody capable of neutralizing the activity of TNF-α (Tumor Necrosis Factor-α), which is a kind of inflammatory mediator. Known and clinically infliximab (product name: Remicade®) is used to treat rheumatoid arthritis, Behcet's disease, psoriasis, ankylosing spondylitis, Kawasaki disease, Crohn's disease and ulcerative colitis ing.
しかし、上記のような抗ＴＮＦα抗体の投与が有効であるとされる疾患、すなわち抗ＴＮＦα抗体適応疾患の治療において、抗ＴＮＦα抗体の投与によって症状が緩和する患者がいる一方で、低血圧、粘膜過敏、喉頭痙攣、頭痛、眩暈、嘔気、顔面紅潮、胸痛、呼吸苦等の急性症状又は関節痛や筋肉痛、熱発等の遅発性症状といった望ましくない投与時反応を示す患者も存在することが報告されている（非特許文献１及び２等）。このような抗ＴＮＦα抗体による投与時反応を回避するため、抗ＴＮＦα抗体適応疾患の治療にあたり、抗ＴＮＦα抗体の投与を開始する前に投与時反応の発症リスクを判定することは有益である。 However, in the treatment of diseases for which the administration of anti-TNFα antibody as described above is effective, that is, in the treatment of anti-TNFα antibody indication disease, there are patients whose symptoms are alleviated by the administration of anti-TNFα antibody, while low blood pressure, mucosa Some patients may have undesired administration reactions such as hypersensitivity, laryngeal spasms, headache, dizziness, nausea, flushing of the face, chest pain, respiratory distress, or acute symptoms such as joint pain, muscle pain, and fever. It has been reported (Non-Patent Documents 1 and 2, etc.). In order to avoid such a response at the time of administration by an anti-TNFα antibody, in the treatment of an anti-TNFα antibody indication disease, it is beneficial to determine the risk of developing a response at the time of administration before starting the administration of the anti-TNFα antibody.
しかし、生物学的製剤の投与時反応の原因は多岐にわたることもあり、抗ＴＮＦα抗体による投与時反応に関係するリスク因子は依然として不明である。 However, the causes of responses at the time of administration of biologics can vary widely, and the risk factors related to responses at the time of administration by anti-TNFα antibodies remain unclear.
本発明は、抗ＴＮＦα抗体適応疾患の治療に際し、抗ＴＮＦα抗体による投与時反応の発症リスクを判定する技術の確立を目的とするものである。 An object of the present invention is to establish a technique for determining the onset risk of a response at the time of administration by an anti-TNFα antibody in the treatment of an anti-TNFα antibody indication disease.
本発明者らは、抗ＴＮＦα抗体に対して投与時反応を示した炎症性腸患者における遺伝子多型の存在を解析することで、前記投与時反応と関連性のある複数の一塩基多型（Ｓｉｎｇｌｅ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ、ＳＮＰ）を見いだし、下記の各発明を完成させた。 The present inventors analyzed the presence of a gene polymorphism in an inflammatory bowel patient who showed a response at the time of administration to an anti-TNFα antibody, whereby a plurality of single nucleotide polymorphisms related to the response at the time of administration ( Single Nucleotide Polymorphism (SNP) was found and each of the following inventions was completed.
（１）抗ＴＮＦα抗体適応疾患の患者から採取した生物学的試料において、米国バイオテクノロジー情報センター（ＮＣＢＩ）ＳＮＰデータベースに登録されているｒｓ番号で示されるＳＮＰであって、
ヒト第３番染色体上のＳＬＣＯ２Ａ１遺伝子におけるｒｓ３４５５００７４、
ヒト第６染色体上のＨＬＡ−Ａ遺伝子におけるｒｓ１１３７０７８、ｒｓ１１５２７０９２６、ｒｓ１１２８９３６８５、ｒｓ７６４１１９４７及びｒｓ１１２２５６３５５、
ヒト第６染色体上のＨＬＡ−ＤＰＢ１遺伝子におけるｒｓ１０４２１３３、ｒｓ１１６７６８０１０、ｒｓ１１４４６２６９８、ｒｓ１０４２１５１、ｒｓ１０４２１５３、ｒｓ７８３７７１８８及びｒｓ１１６１１９０８１、
ヒト第５染色体上のＰＣＳＫ１遺伝子におけるｒｓ６２３５、
ヒト第１３染色体上のＢＲＣＡ２遺伝子におけるｒｓ１４４８４８、
ヒト第１染色体上のＦＣＲＬ３遺伝子におけるｒｓ２２８２２８４、
ヒト第１１染色体上のＰ２ＲＸ３遺伝子におけるｒｓ２２７６０３８、
ヒト第１染色体上のＩＬ６Ｒ遺伝子におけるｒｓ２２２８１４５、並びに
ヒト第２染色体上のＧＣＫＲ遺伝子におけるｒｓ１２６０３２６
よりなる群から選択される一以上のＳＮＰ及び／又は該ＳＮＰと連鎖不平衡にあるＳＮＰを検出する工程を含む、抗ＴＮＦα抗体による投与時反応の発症リスクの判定方法。
（２）ｒｓ３４５５００７４、ｒｓ１１２２５６３５５及び／若しくはｒｓ２２７６０３８の塩基がチミンの場合に、
ｒｓ１１３７０７８、ｒｓ１１５２７０９２６、ｒｓ１１４４６２６９８、ｒｓ１０４２１５１及び／若しくはｒｓ６２３５の塩基がグアニンの場合に、
ｒｓ１１２８９３６８５、ｒｓ７６４１１９４７、ｒｓ１０４２１５３、ｒｓ７８３７７１８８及び／若しくはｒｓ１１６１１９０８１の塩基がアデニンの場合に、並びに／又は
ｒｓ１０４２１３３、ｒｓ１１６７６８０１０、ｒｓ１４４８４８、ｒｓ２２８２２８４、ｒｓ２２２８１４５及び／若しくはｒｓ１２６０３２６の塩基がシトシンの場合に、
抗ＴＮＦα抗体による投与時反応の発症リスクがあると判定する工程をさらに含む、（１）に記載の判定方法。
（３）ｒｓ３４５５００７４の塩基がチミンの場合に、抗ＴＮＦα抗体による投与時反応の発症リスクがあると判定する、（２）に記載の判定方法。
（４）抗ＴＮＦα抗体適応疾患が炎症性腸疾患である、（１）〜（３）のいずれかに記載の判定方法。
（５）以下のａ）又はｂ）のオリゴヌクレオチドの一種以上を含む、抗ＴＮＦα抗体による投与時反応の発症リスクの判定用キット。
ａ）（１）に記載のＳＮＰ及び／又は該ＳＮＰと連鎖不平衡にあるＳＮＰを含む塩基配列を選択的に増幅することができるプライマー用オリゴヌクレオチド
ｂ）（１）に記載のＳＮＰ及び／又は該ＳＮＰと連鎖不平衡にあるＳＮＰを含む連続する少なくとも１０塩基対からなる塩基配列に相補的な塩基配列を有するプローブ用オリゴヌクレオチド
（６）炎症性腸疾患の患者から採取した生物学的試料に対して用いられる、（５）に記載の判定用キット。
(1) In a biological sample collected from a patient with an anti-TNFα antibody indication disease, an SNP indicated by an rs number registered in the National Center for Biotechnology Information (NCBI) SNP database,
Rs34550074 in the SLCO2A1 gene on human chromosome 3,
Rs1137078, rs115270926, rs112893685, rs76411947 and rs112256355 in the HLA-A gene on human chromosome 6,
Rs1042133, rs116676810, rs114462698, rs1042151, rs1042153, rs78377188 and rs1161119081 in the HLA-DPB1 gene on human chromosome 6.
Rs6235 in the PCSK1 gene on human chromosome 5,
Rs144848 in the BRCA2 gene on human chromosome 13;
Rs2282284 in the FCRL3 gene on human chromosome 1,
Rs22776038 in the P2RX3 gene on human chromosome 11,
Rs2228145 in the IL6R gene on human chromosome 1, and rs1260326 in the GCKR gene on human chromosome 2.
A method for determining the onset risk of a response at the time of administration by an anti-TNFα antibody, comprising the step of detecting one or more SNPs selected from the group consisting of and / or SNPs in linkage disequilibrium with the SNPs.
(2) When the base of rs34550074, rs112256355 and / or rs2276038 is thymine,
When the base of rs1137078, rs115270926, rs114462698, rs1042151 and / or rs6235 is guanine,
when the base of rs112893685, rs76411947, rs1042153, rs78377188 and / or rs1161119081 is adenine and / or when the base of rs1042133, rs116768010, rs144848, rs2282284, rs2228145 and / or rs1260326 is cytosine,
The determination method according to (1), further comprising a step of determining that there is a risk of developing an on-response reaction with an anti-TNFα antibody.
(3) The determination method according to (2), wherein when the base of rs34550074 is thymine, it is determined that there is a risk of developing a response at the time of administration by the anti-TNFα antibody.
(4) The determination method according to any one of (1) to (3), wherein the anti-TNFα antibody indication disease is inflammatory bowel disease.
(5) A kit for determining the risk of onset of a response upon administration with an anti-TNFα antibody, comprising one or more of the following oligonucleotides a) or b).
a) Oligonucleotide for primer capable of selectively amplifying the SNP according to (1) and / or a base sequence containing a SNP in linkage disequilibrium with the SNP b) The SNP according to (1) and / or Oligonucleotide for probes having a base sequence complementary to a base sequence consisting of at least 10 consecutive base pairs including a SNP in linkage disequilibrium with the SNP (6) A biological sample collected from a patient with inflammatory bowel disease The determination kit according to (5), wherein the determination kit is used.
本発明におけるＳＮＰ及び／又は該ＳＮＰと連鎖不平衡にあるＳＮＰは、抗ＴＮＦα抗体適応疾患の治療における抗ＴＮＦα抗体投与時反応の発症リスクを判定するためのマーカーとして利用可能である。これにより、抗ＴＮＦα抗体を投与したときに望ましくない投与時反応が生じるか否かを事前に予測することが可能となる。その結果、投与時反応が生じるおそれのある抗ＴＮＦα抗体適応疾患の患者には抗ＴＮＦα抗体の投与を回避した方がよい等の、治療上有益な情報を提供することが可能となる。 The SNP and / or SNP in linkage disequilibrium with the SNP in the present invention can be used as a marker for determining the risk of developing a response upon administration of an anti-TNFα antibody in the treatment of an anti-TNFα antibody-adaptive disease. This makes it possible to predict in advance whether an undesirable administration response will occur when an anti-TNFα antibody is administered. As a result, it is possible to provide therapeutically useful information such as that it is better to avoid administration of anti-TNFα antibody to patients with anti-TNFα antibody-adaptive diseases that may cause a response upon administration.
本発明におけるＳＮＰは、ヒトのゲノム配列において、国際標準配列（ＧＲＣｈ３７、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｒｏｊｅｃｔｓ／ｇｅｎｏｍｅ／ａｓｓｅｍｂｌｙ／ｇｒｃ／、又はｈｇ１９、ｈｔｔｐｓ：／／ｇｅｎｏｍｅ．ｕｃｓｃ．ｅｄｕ／ｃｇｉ−ｂｉｎ／ｈｇＧａｔｅｗａｙ？ｄｂ＝ｈｇ１９）と比較して母集団中１％以上の頻度で存在する、一塩基の多様性をいう。本明細書では、ＳＮＰは、ＮＣＢＩのＳＮＰデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｓｎｐ）のリファレンス番号であるｒｓ番号によって特定される。また、連鎖不平衡とは２つの密に連鎖した遺伝子座における特定の対立遺伝子の組み合わせ出現頻度が、それぞれの遺伝子頻度から推定される期待値と異なる場合をいい、本発明において連鎖不平衡にあるＳＮＰとは、本発明においてｒｓ番号で特定されるいずれかのＳＮＰとの間の連鎖不平衡係数（ｒ２）が０．８以上であるＳＮＰをいう。 The SNP in the present invention is an international standard sequence (GRCh37, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/genome/assembly/grc/, or hg19, https: // genome. ucsc.edu/cgi-bin/hgGateway?db=hg19) refers to the diversity of a single base present in the population at a frequency of 1% or more. In the present specification, the SNP is specified by an rs number that is a reference number of the NCBI SNP database (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/snp). Linkage disequilibrium refers to the case where the frequency of occurrence of a specific allele combination at two closely linked loci is different from the expected value estimated from the respective gene frequencies. SNP refers to an SNP having a linkage disequilibrium coefficient (r 2 ) of 0.8 or more with any SNP specified by the rs number in the present invention.
本発明は、抗ＴＮＦα抗体適応疾患の患者から採取した生物学的試料において、米国バイオテクノロジー情報センター（ＮＣＢＩ）ＳＮＰデータベースに登録されているｒｓ番号で示されるＳＮＰであって、
ヒト第３番染色体上のＳＬＣＯ２Ａ１遺伝子におけるｒｓ３４５５００７４、
ヒト第６染色体上のＨＬＡ−Ａ遺伝子におけるｒｓ１１３７０７８、ｒｓ１１５２７０９２６、ｒｓ１１２８９３６８５、ｒｓ７６４１１９４７及びｒｓ１１２２５６３５５、
ヒト第６染色体上のＨＬＡ−ＤＰＢ１遺伝子におけるｒｓ１０４２１３３、ｒｓ１１６７６８０１０、ｒｓ１１４４６２６９８、ｒｓ１０４２１５１、ｒｓ１０４２１５３、ｒｓ７８３７７１８８及びｒｓ１１６１１９０８１、
ヒト第５染色体上のＰＣＳＫ１遺伝子におけるｒｓ６２３５、
ヒト第１３染色体上のＢＲＣＡ２遺伝子におけるｒｓ１４４８４８、
ヒト第１染色体上のＦＣＲＬ３遺伝子におけるｒｓ２２８２２８４、
ヒト第１１染色体上のＰ２ＲＸ３遺伝子におけるｒｓ２２７６０３８、
ヒト第１染色体上のＩＬ６Ｒ遺伝子におけるｒｓ２２２８１４５、並びに
ヒト第２染色体上のＧＣＫＲ遺伝子におけるｒｓ１２６０３２６
よりなる群から選択される一以上のＳＮＰ及び／又は該ＳＮＰと連鎖不平衡にあるＳＮＰを検出する工程を含む、抗ＴＮＦα抗体による投与時反応の発症リスクの判定方法、特に炎症性腸疾患の治療における抗ＴＮＦα抗体投与時反応の発症リスクの判定方法に関する。
The present invention relates to a SNP indicated by an rs number registered in a National Biotechnology Information Center (NCBI) SNP database in a biological sample collected from a patient with an anti-TNFα antibody indication disease,
Rs34550074 in the SLCO2A1 gene on human chromosome 3,
Rs1137078, rs115270926, rs112893685, rs76411947 and rs112256355 in the HLA-A gene on human chromosome 6,
Rs1042133, rs116676810, rs114462698, rs1042151, rs1042153, rs78377188 and rs1161119081 in the HLA-DPB1 gene on human chromosome 6.
Rs6235 in the PCSK1 gene on human chromosome 5,
Rs144848 in the BRCA2 gene on human chromosome 13;
Rs2282284 in the FCRL3 gene on human chromosome 1,
Rs22776038 in the P2RX3 gene on human chromosome 11,
Rs2228145 in the IL6R gene on human chromosome 1, and rs1260326 in the GCKR gene on human chromosome 2.
A method for determining the risk of onset of a response upon administration with an anti-TNFα antibody, comprising a step of detecting one or more SNPs selected from the group consisting of and / or SNPs in linkage disequilibrium with the SNPs, particularly for inflammatory bowel disease The present invention relates to a method for determining the onset risk of a response at the time of administration of an anti-TNFα antibody in treatment.
後の実施例に詳細に説明するように、上記ＳＮＰは、抗ＴＮＦα抗体を投与されたときに、低血圧、粘膜過敏、喉頭痙攣、頭痛、眩暈、嘔気、顔面紅潮、胸痛、呼吸苦等の急性症状又は関節痛や筋肉痛、熱発等の遅発性症状といった望ましくない投与時反応を示した炎症性腸疾患患者において高い頻度で存在することが確認されたＳＮＰである。各ＳＮＰについて、遺伝子名、ｒｓ番号、染色体上の位置、塩基置換、及びＰ−ｖａｌｕｅを表１に示す。 As described in detail in the Examples below, the above SNPs, such as hypotension, mucosal hypersensitivity, laryngeal spasms, headache, dizziness, nausea, flushing of the face, chest pain, respiratory distress, etc., are administered when anti-TNFα antibody is administered. It is a SNP that has been confirmed to be frequently present in patients with inflammatory bowel disease that showed an undesirable symptom response such as acute symptoms or delayed symptoms such as joint pain, muscle pain, and fever. Table 1 shows the gene name, rs number, position on the chromosome, base substitution, and P-value for each SNP.
本発明の判定方法は、表１に示されたｒｓ番号で示されるＳＮＰの少なくとも一つにおいて、同表中のＡｌｌｅｌｅに示される塩基置換が確認されたとき、そのＳＮＰを有する患者の治療において抗ＴＮＦα抗体投与時反応の発症リスクがあると判定するものである。具体的には、ｒｓ３４５５００７４、ｒｓ１１２２５６３５５及び／若しくはｒｓ２２７６０３８の塩基がチミン（Ｔ）の場合に、ｒｓ１１３７０７８、ｒｓ１１５２７０９２６、ｒｓ１１４４６２６９８、ｒｓ１０４２１５１及び／若しくはｒｓ６２３５の塩基がグアニン（Ｇ）の場合に、ｒｓ１１２８９３６８５、ｒｓ７６４１１９４７、ｒｓ１０４２１５３、ｒｓ７８３７７１８８及び／若しくはｒｓ１１６１１９０８１の塩基がアデニン（Ａ）の場合に、並びに／又はｒｓ１０４２１３３、ｒｓ１１６７６８０１０、ｒｓ１４４８４８、ｒｓ２２８２２８４、ｒｓ２２２８１４５及び／若しくはｒｓ１２６０３２６の塩基がシトシン（Ｃ）の場合に、抗ＴＮＦα抗体投与時反応の発症リスクがあると判定する。特に、ｒｓ３４５５００７４において塩基がＴであることが確認されたときは、高確度で抗ＴＮＦα抗体投与時反応の発症リスクがあると判定することができる。判定は表中のいずれか一つのＳＮＰを確認することで行ってもよく、又は任意の２以上のＳＮＰを確認することで行ってもよい。 In the determination method of the present invention, when at least one of the SNPs indicated by the rs numbers shown in Table 1 shows a base substitution shown in Allele in the same table, the determination method is effective in treating patients having the SNP. It is determined that there is a risk of onset of a reaction when TNFα antibody is administered. Specifically, when the base of rs34550074, rs112256355 and / or rs22760355 is thymine (T), rs112893685, rs764194947, rs764194947, , When rs78377188 and / or rs1161119081 is adenine (A), and / or when rs1042133, rs116676810, rs144848, rs2282284, rs2228145 and / or rs1260326 base is cytosine (C) Determined to be at risk of developing. In particular, when it is confirmed that the base is T in rs34550074, it can be determined with high accuracy that there is a risk of developing an anti-TNFα antibody response. The determination may be performed by confirming any one SNP in the table, or may be performed by confirming any two or more SNPs.
本発明において、抗ＴＮＦα抗体適応疾患とは、臨床的に抗ＴＮＦα抗体の投与の有効性が認められている疾患又はＴＮＦαが炎症の発症に関与している疾患をいい、例として関節リウマチ、ベーチェット病、乾癬、強直性脊椎炎、川崎病、炎症性腸疾患等の炎症性疾患を挙げることができる。本発明の判定方法は、特に炎症性腸疾患において有効である。 In the present invention, the anti-TNFα antibody-adaptive disease refers to a disease in which the effectiveness of administration of an anti-TNFα antibody is clinically recognized or a disease in which TNFα is involved in the development of inflammation, such as rheumatoid arthritis and Behcet. And inflammatory diseases such as psoriasis, ankylosing spondylitis, Kawasaki disease, and inflammatory bowel disease. The determination method of the present invention is particularly effective in inflammatory bowel disease.
本発明において、投与時反応とは、薬剤、すなわち抗ＴＮＦα抗体の投与により引き起こされる低血圧、粘膜過敏、喉頭痙攣、頭痛、眩暈、嘔気、顔面紅潮、胸痛、呼吸苦等の急性症状又は関節痛や筋肉痛、熱発等の遅発性症状をいう。また、「抗ＴＮＦα抗体による投与時反応の発症リスクがある」は、「抗ＴＮＦα抗体に対する投与時反応が生じるおそれがある」ことを意味し、これらの表現は交換可能に用いられる。 In the present invention, the response at the time of administration refers to acute symptoms such as hypotension, mucosal hypersensitivity, laryngeal spasm, headache, dizziness, nausea, flushing of the face, chest pain, respiratory distress, etc. caused by administration of a drug, ie anti-TNFα antibody, or joint pain It refers to delayed symptoms such as muscle pain and fever. Further, “there is a risk of onset of a response at the time of administration by an anti-TNFα antibody” means “there is a possibility that a response at the time of administration to the anti-TNFα antibody may occur”, and these expressions are used interchangeably.
本発明の判定方法において利用されるＳＮＰのうち、当該ＳＮＰを含む遺伝子にコードされるタンパク質のアミノ酸置換を伴うものは、かかるタンパク質の何らかの機能変化が抗ＴＮＦα抗体による投与時反応に関与するものと推察される。 Among the SNPs used in the determination method of the present invention, those accompanied by amino acid substitution of the protein encoded by the gene containing the SNP are those in which some functional change of the protein is involved in the response upon administration by the anti-TNFα antibody. Inferred.
例えば、ｒｓ３４５５００７４は、プロスタグランジンのトランスポーターであるｓｏｌｕｔｅ ｃａｒｒｉｅｒ ｏｒｇａｎｉｃ ａｎｉｏｎ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ ｆａｍｉｌｙ ｍｅｍｂｅｒ ２Ａ１（ＳＬＣＯ２Ａ１）のエクソン領域にある多型であり、したがってＳＬＣＯ２Ａ１の機能変化は抗ＴＮＦα抗体による投与時反応に関与するものと推察される。 For example, rs34550074 is a polymorphism in the exon region of the carrier carrier organic transporter family member 2A1 (SLCO2A1), which is a transporter of the prostaglandin, and thus the functional change of SLCO2A1 is related to the response when administered by an anti-TNFα antibody. Inferred.
本発明の方法による判定対象は、ヒト、特にアジア人種とりわけ日本人である。また、ＳＮＰの検出は、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、又はｍＲＮＡのいずれの核酸について行ってもよい。かかる核酸は、被験者から採取される任意の生物学的試料、例えば血液、唾液、リンパ液、気道粘液、骨髄液、尿、***、腹腔液等の体液、又はバイオプシー等によって得られる組織細胞等から、常法にしたがって抽出、精製、調製することができる。 The determination target by the method of the present invention is a human, particularly an Asian race, especially a Japanese. Moreover, you may perform detection of SNP about any nucleic acid of genomic DNA, cDNA, or mRNA. Such nucleic acid is obtained from any biological sample collected from a subject, such as blood, saliva, lymph, airway mucus, bone marrow, urine, semen, peritoneal fluid, tissue cells obtained by biopsy, etc. Extraction, purification, and preparation can be performed according to conventional methods.
本発明により特定されるＳＮＰ及び／又は該ＳＮＰと連鎖不平衡にあるＳＮＰは、当業者に知られた従来の方法にしたがって検出することができる。そのような方法としては、例えばＮＡＳＢＡ法、ＬＣＲ法、ＳＤＡ法、ＬＡＭＰ法、ＴａｑＭａｎ（登録商標）ＰＣＲ等の、ＰＣＲによる増幅断片を利用する方法、ＤＮＡシーケンサー等を用いたＳＮＰを含む塩基配列を直接決定する方法、ＤＮＡチップ、Ｇｅｎｅチップ、マイクロチップ、ビーズアレイ等を含むマイクロアレイによる検出方法、ミスマッチ部位の化学的切断を利用した方法（ＣＣＭ：ｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｌｅａｖａｇｅ ｏｆ ｍｉｓｍａｔｃｈｅｓ）、プライマー伸長法（ＰＥＸ）又はインベーダー法等を挙げることができるが、これらには限定されない。 SNPs identified by the present invention and / or SNPs in linkage disequilibrium with the SNPs can be detected according to conventional methods known to those skilled in the art. Such methods include, for example, NASBA method, LCR method, SDA method, LAMP method, TaqMan (registered trademark) PCR and other methods using PCR-amplified fragments, nucleotide sequences including SNPs using DNA sequencers, etc. Direct determination method, detection method by microarray including DNA chip, Gene chip, microchip, bead array, etc., method using chemical cleavage of mismatch site (CCM: chemical cleavage of mismatches), primer extension method (PEX) or An invader method and the like can be mentioned, but the method is not limited to these.
増幅断片を利用する方法の一つは、目的となるＳＮＰを有する場合にのみ増幅断片が生じるよう、センスプライマー又はアンチセンスプライマーの一方がそのＳＮＰにハイブリダイズするように設計されたプライマーセットを用いた方法を挙げることができる。かかるプライマーセットを使用することにより、増幅断片が生じたかどうかで目的とするＳＮＰを検出することが可能となる。 One method of using an amplified fragment is to use a primer set designed so that either a sense primer or an antisense primer hybridizes to that SNP so that an amplified fragment is generated only when the target SNP is present. Can be mentioned. By using such a primer set, it becomes possible to detect the target SNP depending on whether or not an amplified fragment is generated.
また、増幅断片を利用する別の方法は、目的とするＳＮＰを含む領域が増幅されるように設計されたプライマーセットを用いた方法である。かかるプライマーセットを用いたＰＣＲによる増幅断片のサイズ、塩基配列、高次構造等の差異に基づいて、ＳＮＰを検出することができる。例えば、アガロースゲル電気泳動、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、キャピラリー電気泳動等を用いたときの増幅断片の移動度の違いから、目的とするＳＮＰを検出することができる。 Another method using the amplified fragment is a method using a primer set designed to amplify a region containing the target SNP. SNPs can be detected based on differences in the size, base sequence, higher order structure, etc. of the amplified fragments by PCR using such primer sets. For example, the target SNP can be detected from the difference in mobility of amplified fragments when agarose gel electrophoresis, polyacrylamide gel electrophoresis, capillary electrophoresis, or the like is used.
また、制限酵素断片長多型（Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｌｅｎｇｔｈ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ；ＲＦＬＰ）を利用して検出することもできる。例えば、適当なプライマーセットを用いてＳＮＰを含む増幅断片を調製し、目的とするＳＮＰに応じて独特な長さの断片を生じることが知られている制限酵素で増幅断片を切断し、アガロースゲル電気泳動、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、キャピラリー電気泳動等を用いたときの切断物の移動度の違いから、目的とするＳＮＰを検出することができる。 It can also be detected using restriction fragment length polymorphism (RFLP). For example, an amplified fragment containing an SNP is prepared using an appropriate primer set, the amplified fragment is cleaved with a restriction enzyme known to produce a fragment of a unique length according to the target SNP, and an agarose gel The target SNP can be detected from the difference in mobility of the cut product when electrophoresis, polyacrylamide gel electrophoresis, capillary electrophoresis or the like is used.
なお、上記の増幅断片又は切断物の塩基配列を直接決定することによって、目的とするＳＮＰを検出してもよい。また、増幅断片又は切断物を熱変性によって一本鎖ＤＮＡとした後、これをゲル電気泳動によって分離し、塩基配列の変化による移動度の変化を解析する、ＰＣＲ−単鎖高次構造多型（ＳＳＣＰ）によって目的とするＳＮＰを検出してもよい。 In addition, the target SNP may be detected by directly determining the base sequence of the amplified fragment or the cleaved product. PCR-single-stranded conformation polymorphism, wherein the amplified fragment or cleaved product is converted into single-stranded DNA by heat denaturation, and then separated by gel electrophoresis, and the change in mobility due to the change in base sequence is analyzed. The target SNP may be detected by (SSCP).
ＳＮＰは、一のＳＮＰに特異的なプローブとのハイブリダイゼーションによって検出することもできる。プローブは、前記のＳＮＰを含み、生物学的試料から調製したＤＮＡ等とハイブリダイズし、採用する検出条件下に検出可能な程度の特異性を与えるものである限り、いかなるものでもよい。 SNPs can also be detected by hybridization with a probe specific for one SNP. The probe may be any probe as long as it contains the aforementioned SNP, hybridizes with DNA or the like prepared from a biological sample, and gives a detectable degree of specificity under the detection conditions employed.
プローブとしては、例えば前記ＳＮＰを含む連続する少なくとも１０塩基以上、好ましくは１０〜１００塩基の配列、より好ましくは１０〜５０塩基の配列にハイブリダイズすることのできるオリゴヌクレオチドを用いることができる。また、ＳＮＰがプローブのほぼ中心部に存在するようにオリゴヌクレオチドを選択するのが好ましい。該オリゴヌクレオチドは、プローブとして機能し得る限り、即ち、目的の遺伝子多型の配列とハイブリダイズするが、他の遺伝子多型の配列とはハイブリダイズしない条件下でハイブリダイズする限り、その配列において１又はそれ以上の置換、欠失、付加を含んでいてもよい。プローブは、必要に応じて、蛍光物質や放射性物質等の適当な手段により標識してもよい。 As the probe, for example, an oligonucleotide that can hybridize to a sequence of at least 10 bases, preferably 10 to 100 bases, more preferably 10 to 50 bases, including the SNP can be used. In addition, it is preferable to select the oligonucleotide so that the SNP is present almost at the center of the probe. As long as the oligonucleotide can function as a probe, that is, as long as it hybridizes with the sequence of the gene polymorphism of interest, but does not hybridize with the sequence of other gene polymorphisms, One or more substitutions, deletions, additions may be included. The probe may be labeled with an appropriate means such as a fluorescent substance or a radioactive substance, if necessary.
本発明に用いるハイブリダイゼーション条件は、遺伝子多型を区別するのに十分な条件である。例えば、生物学的試料から調製したＤＮＡ等が遺伝子多型の一のアレルである場合にはハイブリダイズするが、他のアレルである場合にはハイブリダイズしないような条件、例えばストリンジェントな条件である。 Hybridization conditions used in the present invention are conditions sufficient to distinguish gene polymorphisms. For example, when DNA or the like prepared from a biological sample is one allele of a genetic polymorphism, it hybridizes, but when it is another allele, it does not hybridize under conditions such as stringent conditions. is there.
プローブは、一端を基板に固定してＤＮＡチップとして用いることもできる。この場合、ＤＮＡチップには、遺伝子多型の一のアレルに対応するプローブのみが固定されていても、遺伝子多型の複数のアレルに対応するプローブが固定されていてもよい。 The probe can also be used as a DNA chip with one end fixed to a substrate. In this case, only a probe corresponding to one allele of the gene polymorphism may be fixed to the DNA chip, or probes corresponding to a plurality of alleles of the gene polymorphism may be fixed.
本発明において好ましい方法は、ＰＣＲによる遺伝子増幅を用いた方法、特に操作が簡便で且つ信頼性の高いＴａｑＭａｎ（登録商標）ＰＣＲである。具体的には、目的とするＳＮＰを含む領域を増幅できるプライマーオリゴヌクレオチドセットと、各アレルに相補的な配列を有する、ＳＮＰの塩基変異に対応するＴａｑＭａｎ（登録商標）プローブ２種類を用いて、ＰＣＲを行なう。 A preferable method in the present invention is a method using gene amplification by PCR, particularly TaqMan (registered trademark) PCR, which is easy to operate and highly reliable. Specifically, using a primer oligonucleotide set that can amplify a region containing the target SNP and two types of TaqMan (registered trademark) probes corresponding to SNP base mutations having a sequence complementary to each allele, Perform PCR.
上記のＳＮＰを検出する方法の多くは、それぞれの原理に応じたオリゴヌクレオチド、例えば遺伝子増幅のためのプライマーオリゴヌクレオチド、又はハイブリダイゼーション用のプローブオリゴヌクレオチドを必要とする。これらは、各方法の原理及び検出対象となるＳＮＰの具体的な塩基配列に基づいて、当業者が適宜設計し、合成することができる。本発明にかかる特定のＳＮＰの検出のためのオリゴヌクレオチドもまた、採用される検出方法の原理及び本発明で特定されるＳＮＰの具体的な塩基配列に基づいて、当業者が適宜設計し、合成することができる。 Many of the above methods for detecting SNPs require oligonucleotides according to the respective principles, such as primer oligonucleotides for gene amplification, or probe oligonucleotides for hybridization. These can be appropriately designed and synthesized by those skilled in the art based on the principle of each method and the specific base sequence of the SNP to be detected. Oligonucleotides for detecting specific SNPs according to the present invention are also designed and synthesized by those skilled in the art as appropriate based on the principle of the detection method employed and the specific base sequence of the SNP specified in the present invention. can do.
本発明は、抗ＴＮＦα抗体による投与時反応の発症リスクの判定用キットを提供し、該キットは、ａ）前記ＳＮＰ及び／又は該ＳＮＰと連鎖不平衡にあるＳＮＰを含む塩基配列を選択的に増幅することができるプライマー用オリゴヌクレオチド、又はｂ）前記ＳＮＰ及び／又は該ＳＮＰと連鎖不平衡にあるＳＮＰを含む連続する少なくとも１０塩基対からなる塩基配列に相補的な塩基配列を有するプローブ用オリゴヌクレオチドを含む。本発明のキットは、抗ＴＮＦα抗体適応疾患、特に炎症性腸疾患の患者から採取した生物学的試料に対して用いられる。 The present invention provides a kit for determining the risk of onset of a response at the time of administration with an anti-TNFα antibody, wherein the kit selectively a) a base sequence containing the SNP and / or a SNP in linkage disequilibrium with the SNP. Oligonucleotide for primer that can be amplified, or b) Oligo for probe having a base sequence complementary to a base sequence consisting of at least 10 consecutive base pairs including the SNP and / or SNP in linkage disequilibrium with the SNP Contains nucleotides. The kit of the present invention is used for biological samples collected from patients with anti-TNFα antibody indication diseases, particularly inflammatory bowel disease.
本発明のキットに含まれるオリゴヌクレオチドは、ＳＮＰの検出方法において説明したように、採用される検出方法の原理及び本発明で特定されるＳＮＰの具体的な塩基配列に基づいて、当業者が適宜設計し、合成することができる。 As described in the SNP detection method, the oligonucleotide contained in the kit of the present invention is appropriately selected by those skilled in the art based on the principle of the detection method employed and the specific base sequence of the SNP specified in the present invention. Can be designed and synthesized.
本発明のキットは、上記オリゴヌクレオチドの他に、遺伝子多型を検出する各方法に適した試薬、反応成分その他を含んでいてもよい。例えば、酵素緩衝液、ｄＮＴＰ、コントロール用試薬（例えば、組織サンプル、ポジティブ及びネガティブコントロール用標的オリゴヌクレオチド等）、標識用又は検出用試薬、固相支持体、説明書等が挙げられる。また、上記オリゴヌクレオチドは、支持体に固定化されたマイクロアレイとしてキットに含まれてもよい。 The kit of the present invention may contain reagents, reaction components and the like suitable for each method for detecting a gene polymorphism in addition to the above-mentioned oligonucleotide. For example, enzyme buffer, dNTP, control reagent (eg, tissue sample, target oligonucleotide for positive and negative control, etc.), labeling or detection reagent, solid phase support, instructions and the like. The oligonucleotide may be included in the kit as a microarray immobilized on a support.
本発明の判定方法及び判定用キットにより、抗ＴＮＦα抗体適応疾患、特に炎症性腸疾患の治療における抗ＴＮＦα抗体投与時反応の発症リスクを簡便かつ迅速に診断することが可能となり、その診断結果に応じて適切な処置を施すことができる。 With the determination method and determination kit of the present invention, it becomes possible to easily and quickly diagnose the onset risk of the response at the administration of anti-TNFα antibody in the treatment of anti-TNFα antibody indication disease, particularly inflammatory bowel disease. Appropriate measures can be taken accordingly.
本発明はまた、上述のＳＮＰを検出する工程、該ＳＮＰが検出された場合に投与時反応の発症リスクが高いと判定する工程、及び投与時反応の発症リスクが高いと判定された患者に対して抗ＴＮＦα抗体投与前に投与時反応を抑制する薬剤を投与する、又は抗ＴＮＦα抗体を中止してこれ以外の治療を行う工程を含む、抗ＴＮＦα抗体適応疾患の治療方法を提供する。本発明はさらに、上述のＳＮＰを検出する工程、該ＳＮＰが検出されない場合に投与時反応の発症リスクが低いと判定する工程、及び投与時反応の発症リスクが低いと判定された患者に対して抗ＴＮＦα抗体を投与する工程を含む、抗ＴＮＦα抗体適応疾患の治療方法を提供する。 The present invention also includes a step of detecting the above-described SNP, a step of determining that the onset risk of an on-response reaction is high when the SNP is detected, and a patient determined to have an onset risk of an on-response response. The present invention provides a method for treating an anti-TNFα antibody-adaptive disease, comprising a step of administering a drug that suppresses a response at the time of administration before administering an anti-TNFα antibody, or discontinuing an anti-TNFα antibody and performing other treatment. The present invention further includes a step of detecting the above-described SNP, a step of determining that the risk of onset response is low when the SNP is not detected, and a patient determined to have a low risk of onset of response at the time of administration. A method of treating an anti-TNFα antibody-adaptive disease comprising the step of administering an anti-TNFα antibody.
以下の実施例によって本発明をさらに詳細に説明する。 The following examples further illustrate the present invention.
＜実施例１＞
２００２年２月〜２０１５年４月の期間に抗ＴＮＦα抗体投与の治療歴を有するクローン病患者を検討対象とし、抗ＴＮＦα抗体投与を２年以上継続できており、投与時反応が観察されなかったクローン病患者２０名をコントロール群として、及び症状出現の時期を問わず抗ＩＦＮα抗体投与後に急性あるいは遅発性の投与時反応（頭痛・悪心・嘔吐・発熱・発汗・皮疹・胸苦・関節痛の症状）を示し、抗ＴＮＦα抗体の使用中止もしくはステロイドの前投与を要したクローン病患者２０名を症例群として、それぞれ選別した。コントロール群及び症例群それぞれから末梢血８ｍＬを採取し、Ｆｉｃｏｌｌ比重遠心法により単核球を分離後、シリカゲルカラムを用いてＤＮＡを抽出、精製した。なお、上記患者はいずれも、ヒトゲノム・遺伝子解析研究に関する倫理指針を準拠し、旭川医科大学の倫理委員会で審査され承認された本研究の内容を理解し、研究協力に同意した者である。
<Example 1>
Targeting Crohn's disease patients with a history of treatment with anti-TNFα antibody during the period from February 2002 to April 2015, administration of anti-TNFα antibody has been continued for over 2 years, and no response was observed during administration 20 patients with Crohn's disease as a control group and acute or delayed response after administration of anti-IFNα antibody (headache, nausea, vomiting, fever, sweating, skin rash, chest pain, joint pain, regardless of the timing of symptoms) 20 patients with Crohn's disease who required discontinuation of use of anti-TNFα antibody or pre-administration of steroids were selected as case groups. 8 mL of peripheral blood was collected from each of the control group and the case group, and mononuclear cells were separated by Ficoll specific gravity centrifugation, and then DNA was extracted and purified using a silica gel column. All of the above patients comply with the ethical guidelines for human genome / gene analysis research, understand the content of this research that was reviewed and approved by the ethics committee of Asahikawa Medical University, and agreed to research cooperation.
炎症性腸疾患、膵疾患、肝疾患症、血液疾患及び金属代謝疾患の各疾患との関連性が報告されている遺伝子、ならびに前記各疾患に関連する代謝、免疫又はシグナル伝達に関連する遺伝子を選出し、ここから重複する遺伝子及びアンプリコン（ａｍｐｌｉｃｏｎ）の設定が不可能な遺伝子を削除した計１０３１遺伝子を、ＳＮＰを解析する対象遺伝子として決定した。対象遺伝子の全エクソン領域をカバーするように、計１２６０９個のアンプリコンに分割し、それぞれに対するプライマーセットを作成した。 Genes that have been reported to be associated with inflammatory bowel disease, pancreatic disease, liver disease, blood disease, and metal metabolism disease, and genes related to metabolism, immunity, or signal transduction associated with each disease A total of 1031 genes that were selected and from which duplicate genes and genes for which amplicons cannot be set were deleted were determined as target genes for SNP analysis. A total of 12609 amplicons were divided to cover the entire exon region of the target gene, and primer sets for each were prepared.
５０ｎｇのＤＮＡをテンプレートとし、５つのプライマープールを用いてＰＣＲを行ってアンプリコンを作成した後、製造者のプロトコルに従って高出力シークエンサーＩｏｎ Ｐｒｏｔｏｎ（Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を利用してＤＮＡ配列を解析し、上記１０３１遺伝子に関するＳＮＰ解析を行った。解析にあたって、予備的シークエンスを２回施行し、各アンプリコンの解析長と被覆率が検討に十分なことを確認した。 Using 50 ng of DNA as a template, PCR was performed using 5 primer pools to create an amplicon, and then the DNA sequence was analyzed using a high-power sequencer Ion Proton (Life technologies) according to the manufacturer's protocol. SNP analysis on the 1031 gene was performed. In the analysis, a preliminary sequence was performed twice, and it was confirmed that the analysis length and the coverage of each amplicon were sufficient for examination.
全サンプルで国際標準配列（リファレンス）とシークエンス配列とを比較し、コントロール群と症例群において計４０４３のリファレンスとの相違を検出した。この相違から、コントロール群と症例群との遺伝子異常の出現頻度の差をフィッシャー検定におけるｐ値＜０．０５を有意として、かつアミノ酸置換を伴う遺伝子多型を候補遺伝子として、前記表１に示す１９種類のＳＮＰが抽出された。 In all samples, the international standard sequence (reference) was compared with the sequence sequence, and differences between the reference group of 4043 in the control group and the case group were detected. From this difference, the difference in the frequency of occurrence of gene abnormality between the control group and the case group is shown in Table 1 above, with p value <0.05 in the Fisher test being significant and gene polymorphism with amino acid substitution as a candidate gene. Nineteen types of SNPs were extracted.
１９種類のＳＮＰのうち、コントロール群と症例群との間で最も発現頻度に差があったＳＮＰはｒｓ３４５５００７４であった。ｒｓ３４５５００７４について、コントロール群及び症例群それぞれの患者の末梢血から調製されたＤＮＡを鋳型としたＲｅａｌ ｔｉｍｅＰＣＲ法及びシークエンサーでの塩基配列解析を行って検証を行ったところ、いずれの方法を用いた場合にもコントロール群においてヘテロ型のＳＮＰが１名、症例群においてヘテロ型のＳＮＰが１０名、及びホモ型のＳＮＰが１名それぞれ確認された。この結果から、ｒｓ３４５５００７４を指標とした投与時反応発症予測における感度は約７０％、特異度が９３．８％と算出された。 Of the 19 types of SNPs, the SNP with the greatest difference in expression frequency between the control group and the case group was rs34550074. When rs34550074 was verified by performing a real time PCR method using a DNA prepared from the peripheral blood of patients in each of the control group and the case group as a template, and performing a base sequence analysis with a sequencer, either method was used. In the control group, one hetero-type SNP was confirmed, and in the case group, ten hetero-type SNPs and one homo-type SNP were confirmed. From this result, the sensitivity in predicting the onset of response at the time of administration using rs34550074 as an index was calculated to be about 70% and the specificity was 93.8%.
＜試験例＞
ＳＬＣＯ２Ａ１遺伝子内にｒｓ３４５５００７４と同じＳＮＰを有するＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（日本チャールス・リバー株式会社）３０匹を３群に分け、ＰＢＳ（コントロール群）、ラットＩｇＧ抗体（コントロール抗体投与群）、ラット抗マウスＴＮＦα抗体（抗ＴＮＦα抗体投与群）をそれぞれ腹腔内投与した。各抗体の投与量は１００μｇ／ｍｏｕｓｅ／ｄａｙである。
<Test example>
30 C57BL / 6J mice (Nippon Charles River Co., Ltd.) having the same SNP as rs34550074 in SLCO2A1 gene were divided into 3 groups, PBS (control group), rat IgG antibody (control antibody administration group), rat anti-mouse TNFα Each antibody (anti-TNFα antibody administration group) was intraperitoneally administered. The dose of each antibody is 100 μg / mouse / day.
投与後、マウスから血液、皮膚、肺、心臓、肝臓、腎臓、脾臓、膵臓、胃、小腸、大腸及び骨格筋をそれぞれ摘出し、プロスタグランジンＤ２の血中濃度、遺伝子発現、タンパク質発現及び組織像を分析した。その結果、コントロール群のマウスと比較して、抗ＴＮＦα抗体投与群でアレルギー関連物質であるプロスタグランジンＤ２の血中濃度が有意に上昇していることが確認された（図１）。以上から、ＳＬＣＯ２Ａ１遺伝子の多型が投与時反応の病態へ関与している可能性が示唆された。 After administration, blood, skin, lung, heart, liver, kidney, spleen, pancreas, stomach, small intestine, large intestine and skeletal muscle were removed from each mouse, and blood concentration of prostaglandin D2, gene expression, protein expression and tissue The image was analyzed. As a result, it was confirmed that the blood concentration of prostaglandin D2, which is an allergy-related substance, was significantly increased in the anti-TNFα antibody administration group as compared to the control group mice (FIG. 1). From the above, it was suggested that the polymorphism of the SLCO2A1 gene may be involved in the pathology of the response at the time of administration.
本発明は、特定のＳＮＰの有無を評価することで抗ＴＮＦα抗体による投与時反応の発症リスクを判定することができ、投与時反応の発症リスクがあると判定された患者に対して、抗ＴＮＦα抗体投与前に抗ヒスタミン薬やステロイドの予防投与を行う、又は抗ＴＮＦα抗体の投与を中止する等の、医師による判断の参考情報を提供する手段としての産業上の利用可能性を有する。
The present invention can determine the onset risk of the response at the time of administration by the anti-TNFα antibody by evaluating the presence or absence of a specific SNP, and anti-TNFα is determined for patients who are determined to be at the risk of onset of the response at the time of administration. The present invention has industrial applicability as a means for providing reference information for judgment by doctors, such as preventive administration of antihistamines and steroids prior to antibody administration, or discontinuation of anti-TNFα antibody administration.
Claims (6)
ヒト第３番染色体上のＳＬＣＯ２Ａ１遺伝子におけるｒｓ３４５５００７４、
ヒト第６染色体上のＨＬＡ−Ａ遺伝子におけるｒｓ１１３７０７８、ｒｓ１１５２７０９２６、ｒｓ１１２８９３６８５、ｒｓ７６４１１９４７及びｒｓ１１２２５６３５５、
ヒト第６染色体上のＨＬＡ−ＤＰＢ１遺伝子におけるｒｓ１０４２１３３、ｒｓ１１６７６８０１０、ｒｓ１１４４６２６９８、ｒｓ１０４２１５１、ｒｓ１０４２１５３、ｒｓ７８３７７１８８及びｒｓ１１６１１９０８１、
ヒト第５染色体上のＰＣＳＫ１遺伝子におけるｒｓ６２３５、
ヒト第１３染色体上のＢＲＣＡ２遺伝子におけるｒｓ１４４８４８、
ヒト第１染色体上のＦＣＲＬ３遺伝子におけるｒｓ２２８２２８４、
ヒト第１１染色体上のＰ２ＲＸ３遺伝子におけるｒｓ２２７６０３８、
ヒト第１染色体上のＩＬ６Ｒ遺伝子におけるｒｓ２２２８１４５、並びに
ヒト第２染色体上のＧＣＫＲ遺伝子におけるｒｓ１２６０３２６
よりなる群から選択される一以上の一塩基多型及び／又は該一塩基多型と連鎖不平衡にある一塩基多型を検出する工程を含む、抗ＴＮＦα抗体による投与時反応の発症リスクの判定方法。 In a biological sample collected from a patient with an anti-TNFα antibody indication disease, a single nucleotide polymorphism indicated by an rs number registered in the National Center for Biotechnology Information (NCBI) SNP database,
Rs34550074 in the SLCO2A1 gene on human chromosome 3,
Rs1137078, rs115270926, rs112893685, rs76411947 and rs112256355 in the HLA-A gene on human chromosome 6,
Rs1042133, rs116676810, rs114462698, rs1042151, rs1042153, rs78377188 and rs1161119081 in the HLA-DPB1 gene on human chromosome 6.
Rs6235 in the PCSK1 gene on human chromosome 5,
Rs144848 in the BRCA2 gene on human chromosome 13;
Rs2282284 in the FCRL3 gene on human chromosome 1,
Rs22776038 in the P2RX3 gene on human chromosome 11,
Rs2228145 in the IL6R gene on human chromosome 1, and rs1260326 in the GCKR gene on human chromosome 2.
Including the step of detecting one or more single nucleotide polymorphisms selected from the group consisting of and / or single nucleotide polymorphisms in linkage disequilibrium with the single nucleotide polymorphisms, Judgment method.
ｒｓ１１３７０７８、ｒｓ１１５２７０９２６、ｒｓ１１４４６２６９８、ｒｓ１０４２１５１及び／若しくはｒｓ６２３５の塩基がグアニンの場合に、
ｒｓ１１２８９３６８５、ｒｓ７６４１１９４７、ｒｓ１０４２１５３、ｒｓ７８３７７１８８及び／若しくはｒｓ１１６１１９０８１の塩基がアデニンの場合に、並びに／又は
ｒｓ１０４２１３３、ｒｓ１１６７６８０１０、ｒｓ１４４８４８、ｒｓ２２８２２８４、ｒｓ２２２８１４５及び／若しくはｒｓ１２６０３２６の塩基がシトシンの場合に、
抗ＴＮＦα抗体による投与時反応の発症リスクがあると判定する工程をさらに含む、請求項１に記載の判定方法。 When the base of rs34550074, rs112256355 and / or rs2276038 is thymine,
When the base of rs1137078, rs115270926, rs114462698, rs1042151 and / or rs6235 is guanine,
when the base of rs112893685, rs76411947, rs1042153, rs78377188 and / or rs1161119081 is adenine and / or when the base of rs1042133, rs116768010, rs144848, rs2282284, rs2228145 and / or rs1260326 is cytosine,
The determination method according to claim 1, further comprising a step of determining that there is a risk of developing a response at the time of administration with an anti-TNFα antibody.
ａ）請求項１に記載の一塩基多型及び／又は該一塩基多型と連鎖不平衡にある一塩基多型を含む塩基配列を選択的に増幅することができるプライマー用オリゴヌクレオチド
ｂ）請求項１に記載の一塩基多型及び／又は該一塩基多型と連鎖不平衡にある一塩基多型を含む連続する少なくとも１０塩基対からなる塩基配列に相補的な塩基配列を有するプローブ用オリゴヌクレオチド A kit for determining the onset risk of a response at the time of administration with an anti-TNFα antibody, comprising one or more of the following oligonucleotides a) or b).
a) Oligonucleotide for primer capable of selectively amplifying a single nucleotide polymorphism according to claim 1 and / or a nucleotide sequence comprising a single nucleotide polymorphism in linkage disequilibrium with the single nucleotide polymorphism b) claim The oligo for a probe which has a base sequence complementary to the base sequence which consists of at least 10 base pairs continuous including the single nucleotide polymorphism of claim | item 1 and / or the single nucleotide polymorphism which is a linkage disequilibrium with this single nucleotide polymorphism. nucleotide
The determination kit according to claim 5, which is used for a biological sample collected from a patient with inflammatory bowel disease.
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2016
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