JP2017113181A - Blood circulation column and centrifugal separator - Google Patents

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威 助川
Takeshi Sukegawa
威 助川
梢 伊藤
Kozue Ito
梢 伊藤
奈月 森島
Natsuki Morishima
奈月 森島
隆志 早川
Takashi Hayakawa
隆志 早川
楠　正人
Masato Kusunoki
正人 楠
荒木　俊光
Toshimitsu Araki
俊光 荒木
光司 田中
Koji Tanaka
光司 田中
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Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a blood circulation column capable of increasing a neutrophil cell viability in a peripheral blood.SOLUTION: The blood circulation column is filled with a carrier having an affinity to leukocyte including neutrophil and, when a neutrophil cell viability in the peripheral blood is less than 60%, is used to remove the neutrophil. Further, the blood circulation column has a configuration to have an affinity to the neutrophil more than that to lymphocyte and/or includes a polymer having an affinity to the neutrophil more than that to the lymphocyte, has a removal rate of the lymphocyte is 70% or less and has a passage rate of platelet is 75% or more.SELECTED DRAWING: None

Description

本発明は、血液循環用カラム及び遠心分離機に関する。   The present invention relates to a blood circulation column and a centrifuge.

好中球は、感染防御のファーストラインで中心的な役割を果たし、強力な細胞内殺菌作用を有している。好中球の細胞内殺菌作用として、侵入異物に走化していく走化能、オプソニン化された異物を付着させ、血管内皮細胞に膠着する付着能、付着した異物や細菌を細胞内に取り込む貧食能、貧食した異物を破壊し消化する殺菌能があり、貪食能及び殺菌能が代表的機能である。
好中球は生体防御や創傷治癒において重要な役割を担っているが、その一方、リンパ球やマクロファージ等他の免疫細胞に比べると自己と異物の識別能に劣るため、過剰な活性化や重要臓器への異常集積によって自己組織を障害し、臓器障害を引き起こす危険性もある。中でも、腸管や実質臓器の手術操作は臓器の虚血再灌流を招き、その際、好中球は、臓器障害の原因となりうる。 Neutrophils play a central role in the first line of infection defense and have a powerful intracellular bactericidal action. Neutrophil's intracellular bactericidal action, chemotaxis ability to chemotaxis to invading foreign bodies, adherence of opsonized foreign bodies, adhesion to vascular endothelial cells, poor uptake of adhered foreign bodies and bacteria into cells It has a sterilizing ability that destroys and digests edible foreign substances, and phagocytic ability and sterilizing ability are typical functions.
Neutrophils play an important role in biological defense and wound healing, but on the other hand, they are inferior in their ability to discriminate between self and foreign bodies compared to other immune cells such as lymphocytes and macrophages. There is also a risk of causing damage to the organs due to abnormal accumulation in the organs. Among them, surgical operation of the intestinal tract and parenchymal organs causes ischemia / reperfusion of the organs, and neutrophils can cause organ damage.

成人の末梢血内には概ね１０の１０乗個のオーダーの好中球が存在するとされ、体重５０ｋｇのヒトの場合、末梢血内に８０億個から３００億個程度の好中球が存在する。血液内での好中球の寿命は１日以内、概ね１０時間程とされ、組織内では数日である。また、血管壁や組織、肝臓等にも末梢血内に匹敵する量の好中球が辺縁プールとして存在する。さらに骨髄には末梢血内の１０から３０倍もの量の好中球の貯留プールが存在し、生体内すべてでは１０の１１乗のオーダーで、数千億個の好中球が存在する。
したがって、好中球の大きな貯留プールがある為、好中球を末梢血から除去しても貯留プール内の好中球が動員され、末梢血内の好中球数は速やかに増加する。 In the peripheral blood of adults, neutrophils on the order of 10 to the 10th power are considered to be present, and in the case of a human weighing 50 kg, there are 8 to 30 billion neutrophils in the peripheral blood. . The lifespan of neutrophils in the blood is within one day, approximately 10 hours, and is several days in the tissue. In addition, neutrophils in the blood vessel wall, tissue, liver, etc. are present in the peripheral pool as much as the peripheral blood. Furthermore, there is a pool of neutrophils in the bone marrow that is 10 to 30 times as much as that in peripheral blood, and there are hundreds of billions of neutrophils on the order of 10 11 in all living organisms.
Therefore, since there is a large pool of neutrophils, even if neutrophils are removed from the peripheral blood, the neutrophils in the pool are mobilized and the number of neutrophils in the peripheral blood increases rapidly.

一方、血小板は、骨髄で産生されてから肝臓、脾臓等の臓器で処理されるまで８〜１０日かかり、毎日１／８〜１／１０が入れ替わっている。末梢の血小板のうち約１／３は脾臓にプールされている。血液中には、通常、血小板が１０万から４０万個／μＬ程度含まれており、血小板数が１０万／μＬ未満になると出血時間の延長等が起こる。好中球と比較すると貯留プールが小さく、末梢血から血小板を除去すると血小板数が回復するのに時間がかかる。   On the other hand, it takes 8 to 10 days for platelets to be processed in organs such as liver and spleen after being produced in bone marrow, and 1/8 to 1/10 is changed every day. About 1/3 of the peripheral platelets are pooled in the spleen. Blood usually contains about 100,000 to 400,000 platelets / μL, and when the platelet count is less than 100,000 / μL, the bleeding time is prolonged. Compared to neutrophils, the pool is small, and removing platelets from peripheral blood takes time to recover the platelet count.

消化器外科手術では腹部の切開創や腸管の吻合部が存在し、これらの部分で適切な創傷治癒が生じる必要がある。創傷治癒は血液凝固期、炎症期、増殖期、組織再構築期といった一連の過程からなるが、好中球は特に炎症期に創部に滲出する。
非感染性の高度外科侵襲では、末梢血中の好中球の機能、すなわち遊走能や貧食能、活性酸素産生能、殺菌能の抑制が見られ、該抑制が侵襲後の易感染性に関与すると報告されている。 In digestive surgery, there are abdominal incisions and intestinal anastomoses, and appropriate wound healing needs to occur in these areas. Wound healing consists of a series of processes such as a blood coagulation phase, an inflammation phase, a proliferation phase, and a tissue remodeling phase.
In non-infectious advanced surgical invasion, the function of neutrophils in peripheral blood, that is, migratory ability, phagocytic ability, active oxygen production ability, and bactericidal ability is suppressed, and the suppression is considered to be easily infectious after invasion. It has been reported to be involved.

例えば、特許文献１には、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）患者は、高率にｓｕｒｇｉｃａｌ ｓｉｔｅ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ（ＳＳＩ）をはじめとする術後感染性合併症を来すことが開示されている。
ＵＣ患者は周術期のｃｙｔｏｋｉｎｅ産生が亢進しており、また、ｃｙｔｏｋｉｎｅは主に好中球で産生されており、好中球エラスターゼが高値であると術後ＳＳＩ発症リスクが高いことが知られている（非特許文献１）。
ＵＣの活動期における内科的治療として有効性が認められている白血球除去療法（Ｌｅｕｋｏｃｙｔａｐｈｅｒｅｓｉｓ；ＬＣＡＰ）を術直後に導入し、ＳＳＩ発症を抑制できる可能性が報告されている（非特許文献２及び３）。 For example, Patent Document 1 discloses that patients with ulcerative colitis (UC) frequently experience postoperative infectious complications such as surgical site infection (SSI).
UC patients have increased perioperative cytokine production, and cytokines are mainly produced by neutrophils, and high neutrophil elastase is known to have a high risk of developing SSI after surgery. (Non-Patent Document 1).
It has been reported that leukocytapheresis (LCAP), which is recognized as an effective medical treatment in the active phase of UC, can be introduced immediately after surgery to suppress the onset of SSI (Non-patent Documents 2 and 3). ).

特許第５０４８２２５号Patent No. 5048225

Ｄｉｇ Ｓｕｒｇ．２００６；２３（３）：１７９−８５Dig Surg. 2006; 23 (3): 179-85 日本消化器外科学会雑誌 ２００７；４０（７）：１００７Japanese Journal of Gastroenterological Surgery 2007; 40 (7): 1007 Ｓｕｒｇ Ｔｏｄａｙ ２００８；３８：６０９−６１７Surg Today 2008; 38: 609-617

本発明者らは、術直後の感染リスクの高い患者の末梢血顆粒球をフローサイトメーターで解析して、初期アポトーシス又は後期アポトーシスを起こした好中球が多数存在すること、並びに血液循環用カラムで多数存在する初期アポトーシス又は後期アポトーシスを起こした好中球を取り除くとｖｉａｂｌｅ好中球が増えることを見出した。特定の繊維状担体が充填された血液循環用カラムで処理すると、止血能を維持する範囲に体内循環血液中の血小板数を制御しながら、体内循環血液中の好中球生細胞率（全好中球に占めるｖｉａｂｌｅ好中球の割合）を高めることが可能である。
本発明が解決しようとする課題は、末梢血中の好中球生細胞率を増加させることのできる血液循環用カラムを提供することである。 The present inventors analyzed peripheral blood granulocytes of patients with a high risk of infection immediately after surgery using a flow cytometer, and there were many neutrophils that had undergone early or late apoptosis, and a column for blood circulation. It was found that the number of viable neutrophils increases when the neutrophils that have undergone early apoptosis or late apoptosis, which are present in large numbers in 1) are removed. When treated with a blood circulation column packed with a specific fibrous carrier, the rate of viable neutrophil cells in the circulating blood (total well-being) while controlling the number of platelets in the circulating blood within a range that maintains hemostasis. It is possible to increase the viable neutrophil ratio in the neutrophil.
The problem to be solved by the present invention is to provide a blood circulation column capable of increasing the neutrophil viable cell rate in peripheral blood.

本発明は以下のとおりである。
（１）好中球を含む白血球に対して親和性を有する担体を充填した血液循環用カラムであって、末梢血中の好中球生細胞率が６０％未満であるときに好中球除去に用いられる、血液循環用カラム。
（２）リンパ球よりも好中球と親和性がある形態を有する、及び／又はリンパ球よりも好中球と親和性がある高分子を有する、（１）に記載の血液循環用カラム。
（３）リンパ球の除去率が７０％以下である、（１）又は（２）に記載の血液循環用カラム。
（４）血小板の通過率が７５％以上である、（１）〜（３）のいずれかに記載の血液循環用カラム。
（５）血液循環用カラムに繊維状担体又は粒状担体が充填され、該担体の表面に親水性高分子を有する、（１）〜（４）のいずれかに記載の血液循環用カラム。
（６）親水性高分子が塩基性官能基と非イオン性親水基とを有する、（５）に記載の血液循環用カラム。
（７）塩基性官能基がジメチルアミノエチルメタクリレート由来であり、且つ非イオン性親水基が２−ヒドロキシエチルメタクリレート由来である、（６）に記載の血液循環用カラム。
（８）繊維状担体が平均繊維径１．４μｍ以上２．６μｍ以下である担体を含む繊維状担体が充填される、（１）〜（７）のいずれかに記載の血液循環用カラム。
（９）繊維状担体が平均繊維径８μｍ以上１４μｍ以下である担体をさらに含む、（８）に記載の血液循環用カラム。
（１０）繊維状担体が不織布である、（５）〜（９）のいずれかに記載の血液循環用カラム。
（１１）繊維状担体の臨界湿潤表面張力が生理的溶液の表面張力以上である、（５）〜（１０）のいずれかに記載の血液循環用カラム。
（１２）体外循環式遠心分離法で用いる遠心分離機からなり、末梢血中の好中球生細胞率が６０％未満であるあるときに好中球除去に用いられる、遠心分離機。
（１３）潰瘍性大腸炎、大腸穿孔、食道癌、直腸癌開腹術後患者であって創分類クラス２以上の患者若しくは手術侵襲の高い患者、又は感染症を有している患者のための、（１）〜（１１）のいずれかに記載の血液循環用カラム又は（１２）に記載の遠心分離機。
（１４）末梢血中の好中球生細胞率が６０％未満であることを血球測定手段で確認後に使用する、（１）〜（１１）若しくは（１３）のいずれかに記載の血液循環用カラム又は（１２）若しくは（１３）に記載の遠心分離機。 The present invention is as follows.
(1) A blood circulation column packed with a carrier having affinity for leukocytes containing neutrophils, and when neutrophil viable cell ratio in peripheral blood is less than 60%, neutrophil removal Used for blood circulation.
(2) The blood circulation column according to (1), having a form having affinity for neutrophils rather than lymphocytes and / or having a polymer having affinity for neutrophils rather than lymphocytes.
(3) The blood circulation column according to (1) or (2), wherein the lymphocyte removal rate is 70% or less.
(4) The blood circulation column according to any one of (1) to (3), wherein the platelet passage rate is 75% or more.
(5) The blood circulation column according to any one of (1) to (4), wherein the blood circulation column is filled with a fibrous carrier or a granular carrier and has a hydrophilic polymer on the surface of the carrier.
(6) The blood circulation column according to (5), wherein the hydrophilic polymer has a basic functional group and a nonionic hydrophilic group.
(7) The blood circulation column according to (6), wherein the basic functional group is derived from dimethylaminoethyl methacrylate and the nonionic hydrophilic group is derived from 2-hydroxyethyl methacrylate.
(8) The blood circulation column according to any one of (1) to (7), wherein the fibrous carrier is filled with a fibrous carrier containing a carrier having an average fiber diameter of 1.4 μm or more and 2.6 μm or less.
(9) The blood circulation column according to (8), wherein the fibrous carrier further comprises a carrier having an average fiber diameter of 8 μm or more and 14 μm or less.
(10) The blood circulation column according to any one of (5) to (9), wherein the fibrous carrier is a nonwoven fabric.
(11) The blood circulation column according to any one of (5) to (10), wherein the critical wet surface tension of the fibrous carrier is equal to or higher than the surface tension of the physiological solution.
(12) A centrifuge comprising a centrifuge used in an extracorporeal circulation centrifuge, and is used for neutrophil removal when the viable neutrophil cell rate in peripheral blood is less than 60%.
(13) For patients with ulcerative colitis, colon perforation, esophageal cancer, rectal cancer laparotomy, patients with wound classification class 2 or higher, patients with high surgical invasiveness, or patients with infections, The blood circulation column according to any one of (1) to (11) or the centrifuge according to (12).
(14) Used for blood circulation according to any one of (1) to (11) or (13), which is used after confirmation by a blood cell measurement means that the neutrophil viable cell rate in peripheral blood is less than 60% Column or the centrifuge according to (12) or (13).

本発明によれば、末梢血中の好中球生細胞率を増加させることのできる血液循環用カラムを提供することが可能である。   ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, it is possible to provide the blood circulation column which can increase the neutrophil viable cell rate in peripheral blood.

以下、本発明を実施する形態（以下、「実施形態」という）について詳細に説明する。なお、以下に説明する実施形態は、本発明を限定するものではない。   Hereinafter, embodiments for carrying out the present invention (hereinafter referred to as “embodiments”) will be described in detail. Note that the embodiments described below do not limit the present invention.

本実施形態の血液循環用カラムは、好中球を含む白血球に対して親和性を有する担体を充填したカラムであり、末梢血中の好中球生細胞率が６０％未満であるときに好中球を除去するために使用する。
本実施形態においては、顆粒球の除去率が高くなくても、本実施形態の血液循環用カラムを１回以上使用することにより６０％未満の好中球生細胞率を６０％以上に増加することが可能である。 The blood circulation column of this embodiment is a column packed with a carrier having affinity for leukocytes containing neutrophils, and is preferred when the neutrophil viable cell rate in peripheral blood is less than 60%. Used to remove the middle sphere.
In this embodiment, even if the removal rate of granulocytes is not high, the neutrophil viable cell ratio of less than 60% is increased to 60% or more by using the blood circulation column of this embodiment once or more. It is possible.

好中球は、急性細菌感染症や特定の真菌感染症に対して体を守るという大きな役割を果たす。一般に、好中球は、血液中にある全白血球の約４５〜７５％を占めている。血液１マイクロリットルあたりの好中球数が１，０００個未満になると、感染のリスクが高くなり、５００個未満になると、感染のリスクは大幅に上昇する。好中球による重要な防御がなくなると、感染症に対する制御がきかなくなり、感染症で死亡するリスクが高まる。成人の健康基準範囲とされる白血球数は、血液１マイクロリットルあたり４，０００〜９，０００個である。白血球数の健康基準範囲の下限値である４，０００個の内の４５％が好中球であるとすると１，８００個が健康維持に必要な好中球数であると算出される。この内１，０００個が必ず機能しないと感染のリスクが高くなることから、（１，８００個×６０％＝１，０８０個と算出されるので）末梢血中の好中球生細胞率を６０％以上にする必要がある。   Neutrophils play a major role in protecting the body against acute bacterial infections and certain fungal infections. In general, neutrophils account for about 45-75% of the total white blood cells in the blood. When the number of neutrophils per microliter of blood is less than 1,000, the risk of infection increases, and when it is less than 500, the risk of infection increases significantly. The loss of important neutrophil protection prevents the infection from being controlled and increases the risk of dying from the infection. The number of leukocytes considered as the adult health reference range is 4,000 to 9,000 per microliter of blood. Assuming that 45% of 4,000, which is the lower limit of the health reference range of white blood cell count, is neutrophil, 1,800 is calculated to be the neutrophil count necessary for maintaining health. If 1,000 of these cells do not always function, the risk of infection increases, so the percentage of viable neutrophils in peripheral blood is calculated (because it is calculated as 1,800 × 60% = 1,080). It is necessary to make it 60% or more.

本実施形態においては、本実施形態の血液循環用カラムと同様の、体外循環式遠心分離法で用いる遠心分離機からなり、末梢血中の好中球生細胞率が６０％未満であるあるときに好中球除去に用いられる、遠心分離機も提供する。
体外循環式遠心分離法で用いる遠心分離機では、以下に記載する遠心分離法が採用されている。該遠心分離法では、供血者から全血を採取して遠心分離機内に収集し、高密度、中間密度及び低密度の各成分に分離するいわゆる「ドロー」ステップに始まり、所要血液成分を分取した後、使い捨てシステム内に残った血液成分を供血者に戻すいわゆる「リターン」ステップで終わる。現在では間歇血流方式が主流であり、アフェレーシス中に供血者と装置の間で行われる流体のやりとりは、単一の、例えば採血針のような経路を通して行われる。
これまで遠心分離法は種々の手法により改良されている。改良手法として、遠心分離機外に分取した低密度成分を遠心分離機に短期間再循環させるいわゆる「ドウェル」ステップや、低密度成分をサージ流量、即ち時間と共に増大する流量で遠心分離機内に再循環させ、中間密度成分から血小板等を優先的に流出させるいわゆる「サージ」ステップ等が挙げられる。現在一般には、遠心分離法は、上述のステップを組み合わせて構成され、平均して１５分程度を擁する１サイクルを数サイクル繰り返し、所定の血液成分を採取するように行われている。
また、「ドロー」ステップ自体にも改良が加えられている。「ドロー」ステップの改良手法として、「ドロー」ステップ中に遠心分離機内を通過する血漿流速や遠心回転数を供血者に応じて選択し、１サイクル当たりの全血処理量を個々の供血者に最適となるよう制御すること等が挙げられる。
体外循環式遠心分離法で用いることができる具体的な遠心分離機としては、血液成分採血装置のヘモネティクスコンポーネントコレクションシステムＣＣＳ（Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ，Ｈａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ Ｃｏ．，Ｂｒａｉｎｔｒｅｅ，ＭＡ ＵＳ）等が挙げられる。このシステムでは、抗凝固剤としてはクエン酸デキストロース（ＡＣＤ，Ａｃｉｄ Ｃｉｔｒａｔｅ Ｄｅｘｔｒｏｓｅ）液等を用い、Ｂｌｏｏｄ ａｃｃｅｓｓは肘静脈などに１本留置し、このルートより脱血・返血を行うことができる。
体外循環式遠心分離機が使用できない場合は、バッチ式遠心分離法を用いてもよい。バッチ式遠心分離機においては、供血者の全血を一端取り出し、遠心分離によって白血球成分を分離除去したのち、白血球を除いた血液を供血者に返血する。 In this embodiment, it is composed of a centrifuge used in the extracorporeal circulation centrifugal method similar to the blood circulation column of this embodiment, and the viable neutrophil cell rate in the peripheral blood is less than 60% Also provided is a centrifuge for use in neutrophil removal.
In the centrifuge used in the extracorporeal circulation centrifugal method, the centrifugal method described below is adopted. The centrifugation method begins with a so-called “draw” step in which whole blood is collected from a donor, collected in a centrifuge, and separated into high-density, intermediate-density and low-density components. After that, it ends with a so-called “return” step that returns the blood components remaining in the disposable system to the donor. Currently, the intermittent blood flow method is the mainstream, and the fluid exchange between the blood donor and the device during apheresis is performed through a single path such as a blood collection needle.
So far, the centrifugal separation method has been improved by various methods. As an improved method, the so-called “dwell” step in which low-density components separated out of the centrifuge are recirculated to the centrifuge for a short period of time, or low-density components are put into the centrifuge at a surge flow rate, that is, a flow rate that increases with time. There is a so-called “surge” step that recirculates and preferentially discharges platelets and the like from the intermediate density component. Currently, the centrifugal separation method is configured by combining the above-described steps, and is performed so as to collect a predetermined blood component by repeating one cycle having an average of about 15 minutes for several cycles.
Improvements have also been made to the “draw” step itself. As an improved technique for the “draw” step, the plasma flow rate and the number of rotations that pass through the centrifuge during the “draw” step are selected according to the donor, and the whole blood throughput per cycle is determined for each donor. For example, it may be controlled to be optimal.
Specific examples of the centrifuge that can be used in the extracorporeal circulation centrifugal method include a hemodynamic component collection system CCS (Component Collection System, Haemonetics Co., Braintree, MA US) of a blood component blood collection device. In this system, a citrate dextrose (ACD, Acid Citrate Dextrose) solution or the like is used as an anticoagulant, and one Blood access is placed in the elbow vein or the like, and blood removal / return can be performed through this route.
If an extracorporeal circulation centrifuge cannot be used, a batch centrifuge may be used. In the batch type centrifuge, the whole blood of the donor is taken out once, and the leukocyte component is separated and removed by centrifugation, and then the blood excluding the leukocytes is returned to the donor.

本実施形態において、血液循環用カラムは、末梢血中の好中球生細胞率が６０％未満であるときに好中球除去に使用される。
血液循環用カラムとは、全血を通過させることが可能なカラムであって、体内を循環する血液を体外に取り出して該カラムに通し、再び体内に戻すことが可能なカラムを意味する。
本実施形態において、血液循環用カラムには、好中球を含む白血球に対して親和性を有する担体が充填される。 In this embodiment, the blood circulation column is used for neutrophil removal when the viable neutrophil cell rate in peripheral blood is less than 60%.
The blood circulation column refers to a column through which whole blood can pass, and blood that circulates inside the body can be taken out of the body, passed through the column, and returned to the body again.
In this embodiment, the blood circulation column is packed with a carrier having affinity for leukocytes including neutrophils.

好中球を含む白血球に対して親和性を有する担体としては、繊維状、粒状、スポンジ状多孔質体、平板等が挙げられる。中でも、体積当たりの表面積が大きいという観点から、繊維状担体又は粒状担体が好ましく、血液の通液性、除去効率、充填の容易さという観点から、繊維状担体がより好ましい。   Examples of the carrier having affinity for leukocytes including neutrophils include fibrous, granular, sponge-like porous bodies, flat plates and the like. Among these, a fibrous carrier or a granular carrier is preferable from the viewpoint of a large surface area per volume, and a fibrous carrier is more preferable from the viewpoint of blood permeability, removal efficiency, and ease of filling.

血液循環用カラムは、リンパ球よりも好中球と親和性がある形態を有しているか、及び／又はリンパ球よりも好中球と親和性がある高分子を有していることが好ましい。
リンパ球よりも好中球と親和性がある形態としては、担体が挙げられ、担体の形状としては、繊維状、粒状、スポンジ状多孔質体、平板等が挙げられる。中でも、体積当たりの表面積が大きいという観点から、繊維状担体又は粒状担体が好ましく、血液の通液性、除去効率、充填の容易さという観点から、繊維状担体がより好ましい。リンパ球よりも好中球と親和性がある高分子としては、非イオン性親水基及び重合性官能基を有するモノマーと、塩基性官能基及び重合性官能基を有するモノマーとの共重合体が好ましく、例えば、非イオン性親水基を有する（メタ）アクリル酸誘導体と、塩基性官能基を有する（メタ）アクリル酸誘導体との共重合体が挙げられる。 It is preferable that the blood circulation column has a form having affinity for neutrophils rather than lymphocytes and / or a polymer having affinity for neutrophils rather than lymphocytes. .
Examples of forms having affinity for neutrophils rather than lymphocytes include carriers, and examples of the shape of carriers include fibrous, granular, sponge-like porous bodies, and flat plates. Among these, a fibrous carrier or a granular carrier is preferable from the viewpoint of a large surface area per volume, and a fibrous carrier is more preferable from the viewpoint of blood permeability, removal efficiency, and ease of filling. As a polymer having affinity for neutrophils rather than lymphocytes, a copolymer of a monomer having a nonionic hydrophilic group and a polymerizable functional group and a monomer having a basic functional group and a polymerizable functional group is available. Preferable examples include a copolymer of a (meth) acrylic acid derivative having a nonionic hydrophilic group and a (meth) acrylic acid derivative having a basic functional group.

繊維状担体や粒状担体を充填した血液循環用カラムは、血液循環用カラムとして用いることができる。好中球に対して親和性が高く、血小板に対して親和性が低い血液循環用カラムとすることができる観点から、繊維状担体を充填した血液循環用カラムを用いることが好ましい。血小板の通過率が７５％以上であれば、３Ｌの血液処理でも血小板数は術前の９０％以上に維持されることから、血液循環用カラムの血小板の通過率を７５％以上にすることが好ましい。   A blood circulation column packed with a fibrous carrier or a granular carrier can be used as a blood circulation column. From the viewpoint of being able to provide a blood circulation column having a high affinity for neutrophils and a low affinity for platelets, it is preferable to use a blood circulation column packed with a fibrous carrier. If the platelet passage rate is 75% or higher, the platelet count is maintained at 90% or higher even before 3L blood treatment, so the platelet passage rate of the blood circulation column may be 75% or higher. preferable.

繊維状担体又は粒状担体を充填した血液循環用カラムは、具体的には、通液される血液の入口と出口を有する容器と、該容器に充填された繊維状担体又は粒状担体から構成される。
繊維状担体とは、水不溶性であって、繊維状基材からなる担体である、織布、不織布、綿状、糸状、束状等の繊維構造体を意味する。中でも、血液細胞の吸着性、分離材としての取り扱い性の観点から、織布、不織布が好ましく、血液細胞との多点的な接触が可能である点で不織布がより好ましい。 A blood circulation column filled with a fibrous carrier or a granular carrier is specifically composed of a container having an inlet and an outlet for blood to be circulated and a fibrous carrier or a granular carrier filled in the container. .
The fibrous carrier means a fibrous structure such as a woven fabric, a nonwoven fabric, a cotton shape, a thread shape, a bundle shape, and the like, which is a water-insoluble carrier made of a fibrous base material. Among these, woven fabrics and nonwoven fabrics are preferable from the viewpoint of blood cell adsorbability and handleability as a separating material, and nonwoven fabrics are more preferable because they can be contacted with blood cells in a multipoint manner.

繊維状担体は、繊維状基材と、該繊維状基材の表面に固着された親水性高分子を有することが好ましい。
繊維状基材として、血液を濾過し得るものであれば、血液細胞にダメージを与えにくいものであれば特に限定されないが、有機高分子材料が切断等の加工性に優れるため好ましい。 The fibrous carrier preferably has a fibrous base material and a hydrophilic polymer fixed to the surface of the fibrous base material.
The fibrous base material is not particularly limited as long as it can filter blood, and is not particularly limited as long as it does not easily damage blood cells. However, an organic polymer material is preferable because it has excellent processability such as cutting.

有機高分子材料としては、例えば、ポリエステル、ポリオレフィン、ポリアクリロニトリル、ポリアミド、ポリスチレン、ポリメチルメタアクリレート、ポリ弗化ビニル、ポリウレタン、ポリビニルアルコール、ポリビニルアセタール、ポリスルホン、ポリ弗化ビニリデン、ポリトリフルオロクロロビニル、弗化ビニリデン−テトラフルオロエチレン共重合体、ポリエーテルスルホン、ポリアクリレート、ブタジエン−アクリロニトリル共重合体、ポリエーテル−ポリアミドブロック共重合体、エチレン−ビニルアルコール共重合体、セルロース、セルロースアセテート等が挙げられる。
有機高分子材料としては、容易に繊維状基材とすることができるため、好ましくはポリエステル、ポリオレフィンであり、より好ましくはポリエステルである。 Examples of the organic polymer material include polyester, polyolefin, polyacrylonitrile, polyamide, polystyrene, polymethyl methacrylate, polyvinyl fluoride, polyurethane, polyvinyl alcohol, polyvinyl acetal, polysulfone, polyvinylidene fluoride, and polytrifluorochlorovinyl. , Vinylidene fluoride-tetrafluoroethylene copolymer, polyethersulfone, polyacrylate, butadiene-acrylonitrile copolymer, polyether-polyamide block copolymer, ethylene-vinyl alcohol copolymer, cellulose, cellulose acetate, etc. It is done.
The organic polymer material is preferably a polyester or polyolefin, more preferably a polyester, since it can easily be a fibrous base material.

繊維状担体が、その表面に親水性高分子を有する場合、親水性高分子のコート量は、繊維状担体１ｇ当たり１ｍｇ〜９０ｍｇであれば好ましく、より好ましくは繊維状担体１ｇ当たり４ｍｇ〜５０ｍｇである。
親水性高分子としては、繊維状基材表面に固着できる親水性の高分子であれば特に限定されないが、塩基性官能基と非イオン性親水基とを有する化合物であることが好ましい。 When the fibrous carrier has a hydrophilic polymer on its surface, the coating amount of the hydrophilic polymer is preferably 1 mg to 90 mg per 1 g of the fibrous carrier, more preferably 4 mg to 50 mg per 1 g of the fibrous carrier. is there.
The hydrophilic polymer is not particularly limited as long as it is a hydrophilic polymer that can be fixed to the surface of the fibrous base material, but is preferably a compound having a basic functional group and a nonionic hydrophilic group.

塩基性官能基とは、正の荷電を有する官能基を意味する。
塩基性官能基としては、例えば、第一級アミノ基、第二級アミノ基、第三級アミノ基、四級アンモニウム基等のアミノ基、及びピリジル基、イミダゾール基等の含窒素芳香族基等が挙げられ、中でも、アミノ基が好ましい。
塩基性官能基は正の荷電を有しているため、生理的条件下で負に荷電している好中球を静電的な相互作用によって吸着する効果がある。 The basic functional group means a functional group having a positive charge.
Examples of basic functional groups include amino groups such as primary amino groups, secondary amino groups, tertiary amino groups, and quaternary ammonium groups, and nitrogen-containing aromatic groups such as pyridyl groups and imidazole groups. Among them, an amino group is preferable.
Since the basic functional group has a positive charge, it has an effect of adsorbing negatively charged neutrophils under physiological conditions by electrostatic interaction.

非イオン性親水基とは、極めてイオン化し難く、親水性の高い形態の構造を有する官能基を意味する。
非イオン性親水基としては、例えば、水酸基、エチレンオキシド鎖、アミド基等が挙げられ、中でも、水酸基が好ましい。水酸基には補体が活性化されて生成したＣ３ｂが結合し、Ｃ３ｂの受容体ＣＲ１（ＣＤ３５）を有する好中球を吸着する。非イオン性親水基が繊維状基材表面に存在すると、繊維状担体が血液と接触したときに濡れ易くなるため、血液の片流れを防止する効果があり、その結果、繊維状担体における血液の流れ面積が増加し、好中球除去能向上にも寄与することができる。 The nonionic hydrophilic group means a functional group that is very difficult to ionize and has a highly hydrophilic structure.
Examples of the nonionic hydrophilic group include a hydroxyl group, an ethylene oxide chain, an amide group, etc. Among them, a hydroxyl group is preferable. C3b produced by activation of complement binds to the hydroxyl group, and adsorbs neutrophils having C3b receptor CR1 (CD35). When the nonionic hydrophilic group is present on the surface of the fibrous base material, the fibrous carrier is easily wetted when it comes into contact with blood, so that there is an effect of preventing a single flow of blood. As a result, the blood flow in the fibrous carrier The area increases, which can contribute to the improvement of neutrophil removal ability.

繊維状基材表面への親水性高分子のコート方法としては、例えば、放射線グラフトやプラズマグラフト等のグラフト法、ポリマーによるコーティング法等が挙げられる。
操作が簡便で、製造性に優れる観点から、コーティング法が好ましい。
コーティング法に用いることのできるポリマーは、ビニル基等の重合性官能基を有するモノマーより通常のラジカル重合、アニオン重合等によって合成することができる。また、２種以上のモノマーをランダム共重合、ブロック共重合させて合成してもよい。 Examples of the coating method of the hydrophilic polymer on the surface of the fibrous base material include a grafting method such as radiation grafting and plasma grafting, and a coating method using a polymer.
From the viewpoint of simple operation and excellent productivity, a coating method is preferred.
The polymer that can be used in the coating method can be synthesized from a monomer having a polymerizable functional group such as a vinyl group by ordinary radical polymerization, anionic polymerization, or the like. Further, two or more types of monomers may be synthesized by random copolymerization or block copolymerization.

コーティング用ポリマーを合成しうるモノマーとしては、例えば、塩基性官能基を有するジアルキルアミノエチル（メタ）アクリレート等の（メタ）アクリル酸誘導体等が挙げられるが、中でも、ジメチルアミノエチルメタクリレートが好ましい。
コーティング用ポリマーを合成しうるモノマーとしては、例えば、非イオン性親水基を有する２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート、ヒドロキシメチル（メタ）アクリレート、メトキシポリエチレングリコール（メタ）アクリレート、（メタ）アクリルアミド等が挙げられるが、中でも、２−ヒドロキシエチルメタクリレートが好ましい。
塩基性官能基と非イオン性親水基とを有する化合物として、塩基性官能基を有するモノマーと、非イオン性親水基を有するモノマーとの共重合体が好ましい。 Examples of the monomer capable of synthesizing the coating polymer include (meth) acrylic acid derivatives such as dialkylaminoethyl (meth) acrylate having a basic functional group, among which dimethylaminoethyl methacrylate is preferable.
Examples of the monomer capable of synthesizing the coating polymer include 2-hydroxyethyl (meth) acrylate having a nonionic hydrophilic group, hydroxymethyl (meth) acrylate, methoxypolyethylene glycol (meth) acrylate, and (meth) acrylamide. Among them, 2-hydroxyethyl methacrylate is preferable.
As the compound having a basic functional group and a nonionic hydrophilic group, a copolymer of a monomer having a basic functional group and a monomer having a nonionic hydrophilic group is preferable.

顆粒球の９０％から９５％は好中球である。顆粒球を除去すると体内循環血液中に存在する初期アポトーシス、ネクローシス、後期アポトーシスを起こしている好中球（以上をまとめて、ｎｏｎ−ｖｉａｂｌｅ好中球という）が除去され、体内貯留プールから体内循環血液中に好中球が動員されて、体内循環血液の好中球生細胞率が増加する。体内循環血液の好中球生細胞率が増加すると、感染リスクの高い患者の細菌感染抵抗性が増し、感染リスクが低下する。   90% to 95% of granulocytes are neutrophils. When granulocytes are removed, neutrophils that have undergone early apoptosis, necrosis, and late apoptosis (collectively referred to as non-viable neutrophils) present in the blood circulating in the body are removed, and circulation from the body pool is performed. Neutrophils are mobilized in the blood, and the neutrophil viable cell rate in the circulating blood increases. Increasing the viable neutrophil viable cell rate in the body's circulating blood increases the resistance to bacterial infection in patients at high risk of infection and decreases the risk of infection.

既に感染の起こっている患者では、体内循環血液中のｎｏｎ−ｖｉａｂｌｅ好中球の数が多いが、血液循環用カラムを用いて好中球除去を施行することにより、ｎｏｎ−ｖｉａｂｌｅ好中球の数は減少し、好中球生細胞率が増加して感染菌の排除効率が著しく上がる。ｎｏｎ−ｖｉａｂｌｅ好中球はＰｒｏｐｉｄｉｕｍ Ｉｏｄｉｄｅ（ＰＩ）又はＡｎｎｅｘｉｎ Ｖを結合するので、ＰＩと、蛍光標識又はビオチン標識したＡｎｎｅｘｉｎ Ｖで二重染色した好中球をフローサイトメーターで分析することによりｎｏｎ−ｖｉａｂｌｅ好中球を測定できる。   In patients already infected, the number of non-viable neutrophils in the blood circulating in the body is large, but by performing neutrophil removal using a blood circulation column, non-viable neutrophils The number decreases, the neutrophil viable cell ratio increases, and the elimination efficiency of the infecting bacteria increases remarkably. Since non-viable neutrophils bind Propidium Iodide (PI) or Annexin V, analysis of neutrophils double-stained with PI and fluorescent-labeled or biotin-labeled Annexin V by a flow cytometer results in non- Viable neutrophils can be measured.

血液循環用カラムに充填される繊維状担体はどのような形状であってもよいが、血液の体外循環治療中に繊維状担体が目詰まりを起こさずに十分な量の顆粒球を除去するためには、顆粒球を選択的に除去するためのフィルタとして、繊維状担体が、平均繊維径１．４μｍ以上である担体から構成されることが好ましい。
繊維状担体が、平均繊維径１．４μｍ以上である担体から構成されるとは、平均繊維径１．４μｍ未満の担体を含まないことを意味する。
繊維状担体は、繊維状基材からなるが、１種類の繊維状基材からなっていてもよく、２種類以上の繊維状基材からなっていてもよい。繊維状担体を構成する各担体は、各担体間で、平均繊維径が異なっていてもよい。
平均繊維径が１．４μｍ以上であるとは、繊維状担体を構成する担体１つ１つにおいて、平均繊維径が１．４μｍ以上であり、繊維状担体を構成する担体単位ごとに平均繊維径が１．４μｍ以上であることを意味している。
したがって、２種類以上の担体からなる場合、構成する担体の平均繊維径は異なることがあるが、平均繊維径が異なる場合でも、各担体において平均繊維径は１．４μｍ以上である。
繊維状担体を１つ１つの担体に分離した後、各担体の平均繊維径を測定し、最小の平均繊維径が１．４μｍ以上である場合に、繊維状担体が、平均繊維径１．４μｍ以上である担体を含むといえる。
繊維状担体において、最小平均繊維径が１．４μｍ以上であることにより、血液が通過するに伴う圧力損失の増大を抑制し血液を流し続けることが可能になる。 The fibrous carrier filled in the blood circulation column may have any shape, but in order to remove a sufficient amount of granulocytes without causing clogging of the fibrous carrier during the extracorporeal circulation of blood. For the filter for selectively removing granulocytes, the fibrous carrier is preferably composed of a carrier having an average fiber diameter of 1.4 μm or more.
That the fibrous carrier is composed of a carrier having an average fiber diameter of 1.4 μm or more means that a carrier having an average fiber diameter of less than 1.4 μm is not included.
The fibrous carrier is made of a fibrous base material, but may be made of one kind of fibrous base material, or may be made of two or more kinds of fibrous base materials. Each carrier constituting the fibrous carrier may have a different average fiber diameter between the carriers.
An average fiber diameter of 1.4 μm or more means that, in each carrier constituting the fibrous carrier, the average fiber diameter is 1.4 μm or more, and the average fiber diameter for each carrier unit constituting the fibrous carrier. Is 1.4 μm or more.
Therefore, in the case of comprising two or more types of carriers, the average fiber diameter of the constituent carriers may be different, but even if the average fiber diameter is different, the average fiber diameter is 1.4 μm or more in each carrier.
After separating the fibrous carrier into individual carriers, the average fiber diameter of each carrier is measured, and when the minimum average fiber diameter is 1.4 μm or more, the fibrous carrier has an average fiber diameter of 1.4 μm. It can be said that the above carrier is included.
In the fibrous carrier, when the minimum average fiber diameter is 1.4 μm or more, an increase in pressure loss accompanying the passage of blood can be suppressed and blood can continue to flow.

血液循環用カラムのリンパ球除去性能を抑え、より顆粒球を選択的に除去するために、血液循環用カラムが、平均繊維径が２．０μｍ以上である担体からなることが好ましい。
リンパ球の除去性能として、リンパ球の除去率が７０％以下であれば、免疫記憶を司るリンパ球に重大な障害を与えることはないので、感染症発症抑制の観点からはより好ましい。
繊維状担体は顆粒球の除去性能を高めるために、平均繊維径２．６μｍ以下の繊維状担体を含むことが好ましい。繊維状担体の平均繊維径は、好ましくは１．４μｍ以上２．６μｍ以下であり、より好ましくは２．０μｍ以上２．６μｍ以下である。リンパ球の除去率が７０％以下であれば、免疫記憶を司るリンパ球に重大な障害を与えることはないので、感染症発症抑制の観点からはより好ましい。 In order to suppress the lymphocyte removal performance of the blood circulation column and more selectively remove granulocytes, the blood circulation column is preferably composed of a carrier having an average fiber diameter of 2.0 μm or more.
As the lymphocyte removal performance, if the lymphocyte removal rate is 70% or less, it is more preferable from the viewpoint of suppressing the onset of infectious diseases because lymphocytes responsible for immune memory are not seriously damaged.
The fibrous carrier preferably contains a fibrous carrier having an average fiber diameter of 2.6 μm or less in order to enhance the removal performance of granulocytes. The average fiber diameter of the fibrous carrier is preferably 1.4 μm or more and 2.6 μm or less, and more preferably 2.0 μm or more and 2.6 μm or less. If the removal rate of lymphocytes is 70% or less, there is no serious damage to lymphocytes that control immune memory, which is more preferable from the viewpoint of suppressing the onset of infectious diseases.

また、血液循環用カラムは好中球を除去するためのフィルタに加え、凝集物を除去するためのプレフィルタとして平均繊維径８μｍ以上１４μｍ以下の比較的目の粗い担体をさらに含むことがより好ましい。
平均繊維径、リンパ球の除去率及び血小板の通過率は、実施例に記載の方法により測定することができる。 In addition to the filter for removing neutrophils, the blood circulation column preferably further includes a relatively coarse carrier having an average fiber diameter of 8 μm to 14 μm as a prefilter for removing aggregates. .
The average fiber diameter, lymphocyte removal rate, and platelet passage rate can be measured by the methods described in the Examples.

血液循環用カラムがプレフィルタを含む場合は、プレフィルタが容器の血液入口側に配置され、好中球を除去するためのフィルタは容器の血液出口側に配置されることが好ましい。
繊維状担体の臨界湿潤表面張力（ＣＷＳＴ）は血液循環用カラムをプライミングする際に使用する生理的溶液の表面張力以上であることが好ましい。生理的溶液の表面張力は、表面をアルコールランプ等で充分に赤熱し清浄化した白金プレートを用意し、この白金プレートを生理的溶液に浸漬して引き出す時の抵抗を測定する、いわゆるＷｉｌｈｅｌｍｙ法を用いて測定する。表面張力計としては、例えば、ＦＡＣＥ ＳＵＲＦＡＣＥ ＴＥＮＳＩＯＭＥＴＥＲ ＣＢＶＰ−Ａ３（協和界面科学社株式会社）を用いることができる。
本方法で生理的溶液の表面張力を測定すると、例えば、生理食塩液や、チトラミン（扶桑薬品工業株式会社）、ＡＣＤ−Ａ液（テルモ株式会社）、フサン（登録商標：鳥居薬品株式会社）等の抗凝固剤を含む生理食塩液の表面張力は、７２ｄｙｎ／ｃｍとなる。 In the case where the blood circulation column includes a prefilter, the prefilter is preferably disposed on the blood inlet side of the container, and the filter for removing neutrophils is preferably disposed on the blood outlet side of the container.
The critical wet surface tension (CWST) of the fibrous carrier is preferably equal to or greater than the surface tension of the physiological solution used when priming the blood circulation column. The surface tension of a physiological solution is a so-called Wilhelmy method in which a platinum plate whose surface is sufficiently red-hot and cleaned with an alcohol lamp or the like is prepared, and the resistance when the platinum plate is immersed in a physiological solution is measured. Use to measure. As the surface tension meter, for example, FACE SURFACE TENSIOMETER CBVP-A3 (Kyowa Interface Science Co., Ltd.) can be used.
When the surface tension of a physiological solution is measured by this method, for example, physiological saline, titramine (Fuso Pharmaceutical Co., Ltd.), ACD-A solution (Terumo Co., Ltd.), Fusan (registered trademark: Torii Pharmaceutical Co., Ltd.), etc. The surface tension of the physiological saline containing the anticoagulant is 72 dyn / cm.

繊維状担体のＣＷＳＴは７２ｄｙｎ／ｃｍ以上であることが好ましく、より好ましくは７２ｄｙｎ／ｃｍ以上１１５ｄｙｎ／ｃｍ以下である。
繊維状担体のＣＷＳＴは、以下の方法によって求められる値をいう。
２ないし４ｄｙｎ／ｃｍずつ表面張力が変化するように水酸化ナトリウム、塩化カルシウム、硝酸ナトリウム、酢酸及びエタノールの濃度の異なる水溶液を調整する。各水溶液の表面張力（ｄｙｎ／ｃｍ）は、水酸化ナトリウム水溶液で９４〜１１５、塩化カルシウム水溶液で９０〜９４、硝酸ナトリウム水溶液で７５〜８７、純粋な水で７２．４、酢酸水溶液で３８〜６９、エタノール水溶液で２２〜３５のものが得られる（「化学便覧 基礎編ＩＩ」改訂２版、日本化学会編、丸善、１６４（１９７５））。また、水酸化ナトリウムで、表面張力が７４〜１００ｄｙｎ／ｃｍの水溶液を調製してもよい。このようにして得られた表面張力が２ないし４ｄｙｎ／ｃｍ異なる水溶液を表面張力が低いものから順番にフィルタ材上に１０滴ずつ乗せ１０分間放置する。１０分間放置後、１０滴中９滴以上がフィルタ材に吸収された場合に湿潤した状態であると定義し、吸収が１０滴中９滴未満である場合に非湿潤状態であると定義する。このようにしてフィルタ材上に表面張力が小さい液体から順次測定していくと湿潤状態と非湿潤状態が出現する。この時湿潤状態を観察した液体の表面張力の値と非湿潤状態を観察した液体の表面張力の値の平均値をそのフィルタ材のＣＷＳＴ値とする。
例えば、６４ｄｙｎ／ｃｍの表面張力を有する液体で湿潤し、６６ｄｙｎ／ｃｍの表面張力を有する液体で非湿潤であった場合、そのフィルタ材のＣＷＳＴ値は６５ｄｙｎ／ｃｍとなる。
繊維状担体は、同一のフィルタ材からなっていてもよく、異なるフィルタ材からなっていてもよい。 The CWST of the fibrous carrier is preferably 72 dyn / cm or more, more preferably 72 dyn / cm or more and 115 dyn / cm or less.
CWST of the fibrous carrier refers to a value obtained by the following method.
Aqueous solutions having different concentrations of sodium hydroxide, calcium chloride, sodium nitrate, acetic acid and ethanol are prepared so that the surface tension changes by 2 to 4 dyn / cm. The surface tension (dyn / cm) of each aqueous solution is 94 to 115 with an aqueous sodium hydroxide solution, 90 to 94 with an aqueous calcium chloride solution, 75 to 87 with an aqueous sodium nitrate solution, 72.4 with pure water, and 38 to 38 with an aqueous acetic acid solution. 69, 22 to 35 ethanol aqueous solution can be obtained ("Chemical Handbook Basic Edition II" revised 2nd edition, The Chemical Society of Japan, Maruzen, 164 (1975)). Moreover, you may prepare the aqueous solution whose surface tension is 74-100 dyn / cm with sodium hydroxide. The aqueous solutions having different surface tensions of 2 to 4 dyn / cm thus obtained are placed on the filter material in order of decreasing surface tension and left for 10 minutes. After standing for 10 minutes, it is defined as a wet state when 9 or more of 10 drops are absorbed by the filter material, and is defined as a non-wet state when the absorption is less than 9 of 10 drops. In this manner, when the liquid is sequentially measured from the liquid having a small surface tension on the filter material, a wet state and a non-wet state appear. At this time, the average value of the surface tension value of the liquid observed in the wet state and the surface tension value of the liquid observed in the non-wet state is defined as the CWST value of the filter material.
For example, when wetted with a liquid having a surface tension of 64 dyn / cm and non-wet with a liquid having a surface tension of 66 dyn / cm, the CWST value of the filter material is 65 dyn / cm.
The fibrous carrier may be made of the same filter material or different filter materials.

血液循環用カラムの容器内容積は、血液を体外循環処理する血液浄化器として使用できる範囲内であれば特に限定されないが、通常、５０ｍＬ〜５００ｍＬであり、好ましくは７０ｍＬ〜４００ｍＬであり、より好ましくは９０ｍＬ〜３００ｍＬである。   The internal volume of the blood circulation column is not particularly limited as long as it is within a range that can be used as a blood purifier for circulating blood extracorporeally, but is usually 50 mL to 500 mL, preferably 70 mL to 400 mL, and more preferably. Is 90 mL to 300 mL.

本実施形態の血液循環用カラムは、放射線滅菌、エチレンオキサイドガス滅菌、オートクレーブ滅菌のいずれかの方法で滅菌されていることが好ましい。安全性、環境負荷、熱によるカラムへの影響の観点から放射線滅菌されていることがより好ましい。
血液循環用カラムを放射線滅菌する場合は、繊維状担体が酸素濃度１％以下の雰囲気にある状態で放射線滅菌されることが好ましい。
滅菌に使用される放射線としては、例えば、γ線、電子線、Ｘ線等が挙げられ、線種は特に限定されない。
血液循環用カラムの好中球の除去性能や血小板の透過性への影響の観点から、滅菌後も繊維状担体が酸素濃度１％以下の雰囲気の中に維持されていることが好ましい。 The blood circulation column of this embodiment is preferably sterilized by any one of radiation sterilization, ethylene oxide gas sterilization, and autoclave sterilization. It is more preferable that radiation sterilization is performed from the viewpoint of safety, environmental load, and influence of heat on the column.
When the blood circulation column is subjected to radiation sterilization, it is preferable that the fibrous carrier is radiation sterilized in an atmosphere having an oxygen concentration of 1% or less.
Examples of radiation used for sterilization include γ-rays, electron beams, and X-rays, and the line type is not particularly limited.
From the viewpoint of the neutrophil removal performance of the blood circulation column and the effect on platelet permeability, the fibrous carrier is preferably maintained in an atmosphere having an oxygen concentration of 1% or less after sterilization.

本実施形態においては、血液循環用カラムは、粒状担体が充填されていてもよい。粒状担体とは、均一な単層構造又は外層と内層とを有する多層構造で構成されていてもよく、例えば、ビーズ、微粒子等が挙げられる。内層の構造は、特に限定されず、外層と内層との間に１以上の中間層が形成されていてもよい。
外層を構成する材料として、生体適合性材料が用いられる。生体適合性材料としては、セルロース類（例えば、酢酸セルロース、再生セルロース等）、ナイロン類（例えば、６−ナイロン、１１−ナイロン等）、ポリスチレン、ポリトリフルオロエチレン、ポリエチレンテレフタレート、２−ヒドロキシエチルメタクリレート、ポリメタクリル酸メチル、ポリビニルアルコール等の様々な樹脂材料が挙げられる。
内層を構成する材料としては、例えば、外層に用いられる生体適合性材料、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリカーボネート等の合成樹脂、鉄、アルミ、銅等の金属、セラミックス又はガラス等の無機材料等が挙げられる。
また、粒状担体は、粒状担体の表面に固着された親水性高分子を有することが好ましい。ここで用いられる親水性高分子としては、繊維状担体について記載した親水性高分子等が挙げられる。 In this embodiment, the blood circulation column may be filled with a granular carrier. The granular carrier may be composed of a uniform single layer structure or a multilayer structure having an outer layer and an inner layer, and examples thereof include beads and fine particles. The structure of the inner layer is not particularly limited, and one or more intermediate layers may be formed between the outer layer and the inner layer.
A biocompatible material is used as a material constituting the outer layer. Biocompatible materials include celluloses (eg, cellulose acetate, regenerated cellulose, etc.), nylons (eg, 6-nylon, 11-nylon, etc.), polystyrene, polytrifluoroethylene, polyethylene terephthalate, 2-hydroxyethyl methacrylate. And various resin materials such as polymethyl methacrylate and polyvinyl alcohol.
Examples of the material constituting the inner layer include biocompatible materials used for the outer layer, synthetic resins such as polypropylene, polyethylene, and polycarbonate, metals such as iron, aluminum, and copper, and inorganic materials such as ceramics or glass.
The granular carrier preferably has a hydrophilic polymer fixed on the surface of the granular carrier. Examples of the hydrophilic polymer used here include the hydrophilic polymers described for the fibrous carrier.

粒状担体の機械的強度を高めるためには、内層を構成する材料として、外層を構成している材料よりも機械的強度の高い材料を用いることが好ましく、金属や機械的強度に優れた合成樹脂を用いることが好ましく、中でも、ポリカーボネートを用いることが好適である。溶出物を発生しないほうが安全性の点で好ましいため、溶出物を発生し難い、ガラス等を内層を構成する材料として用いてもよい。   In order to increase the mechanical strength of the granular carrier, it is preferable to use a material having a higher mechanical strength than the material constituting the outer layer as the material constituting the inner layer, and a metal or synthetic resin excellent in mechanical strength. It is preferable to use, and among these, it is preferable to use polycarbonate. Since it is preferable from the viewpoint of safety that no eluate is generated, glass or the like that does not easily generate eluate may be used as a material constituting the inner layer.

外層を構成する材料として酢酸セルロースを用い、内層を構成する材料としてポリカーボネートを用いた多層構造の粒状担体を形成する方法として、例えば、特開昭５９−２２０３４２号公報や特開昭６２−１５６９１７号公報に記載の製造方法を用いてもよい。   As a method of forming a granular carrier having a multilayer structure using cellulose acetate as a material constituting the outer layer and polycarbonate as a material constituting the inner layer, for example, Japanese Patent Laid-Open Nos. 59-220342 and 62-156717 are disclosed. You may use the manufacturing method described in the gazette.

本実施形態の血液循環用カラムを用いて血液を体外循環処理する際には、抗凝固剤を使用してもよいし、体外循環回路内で血液が凝固する恐れがなければ抗凝固剤を使用しなくてもよい。
血液の抗凝固剤としては、ヘパリン等の抗トロンビン活性を示すもの、クエン酸及びその塩等の二価金属イオンと錯体を形成することによって抗凝固活性を示すもの、メシル酸ナファモスタット（Ｎａｆａｍｏｓｔａｔ Ｍｅｓｉｌａｔｅ）等の蛋白分解酵素阻害剤等のいずれも使用できるが、好ましくは二価金属イオンと錯体を形成する抗凝固剤であり、より好ましくはクエン酸及びその塩を含む抗凝固剤である。
クエン酸及びその塩を主成分とする抗凝固剤としては、例えば、チトラミン（扶桑薬品工業株式会社）、ＡＣＤ−Ａ液（テルモ株式会社）等が挙げられる。 When blood is extracorporeally treated using the blood circulation column of this embodiment, an anticoagulant may be used, or an anticoagulant is used if there is no risk of blood coagulating in the extracorporeal circuit. You don't have to.
Examples of blood anticoagulants include those that exhibit antithrombin activity such as heparin, those that exhibit anticoagulant activity by forming a complex with divalent metal ions such as citric acid and its salts, and nafamostat mesylate (Nafamostat Mesilate). Any of proteolytic enzyme inhibitors such as) can be used, but preferably an anticoagulant that forms a complex with a divalent metal ion, more preferably an anticoagulant containing citric acid and its salt.
Examples of the anticoagulant mainly composed of citric acid and its salts include titramine (Fuso Pharmaceutical Co., Ltd.), ACD-A solution (Terumo Corporation) and the like.

本実施形態の血液循環用カラム又は遠心分離機を、ＵＣ、大腸穿孔、食道癌、直腸癌開腹術後患者等感染リスクの高い患者や感染症を有している患者に対して使用すると、体内循環血液中の好中球生存率を増加させ、好中球の感染防御機能を正常化させるので、感染リスクが低下し、あるいは感染菌排除の効率が著しく高まるので有用である。
ＵＣ、大腸穿孔、食道癌、直腸癌開腹術後患者等感染リスクの高い患者として、ＵＣ、大腸穿孔、食道癌、直腸癌開腹術後患者の内、創分類クラス２以上の患者、栄養状態及び／又は全身状態が不良の患者、手術侵襲が高い患者等が挙げられる。
ここで創分類クラス２以上の患者とは、清潔創１段階以外の準清潔創（クラス２）、汚染創（クラス３）、感染・不潔創（クラス４）の患者を指す。 When the blood circulation column or centrifuge of the present embodiment is used for a patient having a high infection risk such as UC, colon perforation, esophageal cancer, and post-rectal cancer laparotomy, or a patient having an infection, This is useful because it increases the survival rate of neutrophils in the circulating blood and normalizes the neutrophil infection defense function, thereby reducing the risk of infection or significantly increasing the efficiency of eliminating infected bacteria.
Patients with high risk of infection such as UC, colon perforation, esophageal cancer, post-rectal cancer laparotomy patients, UC, colon perforation, esophageal cancer, patients after rectal cancer laparotomy, patients with wound classification class 2 or higher, nutritional status and Examples include patients with poor general condition and patients with high surgical invasion.
Here, patients with wound classification class 2 or higher refer to patients with semi-clean wounds (class 2), contaminated wounds (class 3), and infected / unclean wounds (class 4) other than the first stage of clean wounds.

また、本実施形態の血液循環用カラム又は遠心分離機を、感染症を有している患者で、末梢血中のアポトーシス細胞の割合が正常値より高い患者に施行すると、ｖｉａｂｌｅ好中球の割合が増え、アポトーシス好中球の割合が減少し、ｖｉａｂｌｅ好中球／アポトーシス好中球の割合が顕著に増加するので、好中球機能が正常化し、感染菌の排除効率が著しく上がるので有用である。   Further, when the blood circulation column or the centrifuge of this embodiment is applied to a patient having an infectious disease and the proportion of apoptotic cells in peripheral blood is higher than the normal value, the proportion of viable neutrophils It is useful because the ratio of apoptotic neutrophils is decreased and the ratio of viable neutrophils / apoptotic neutrophils is significantly increased. is there.

本実施形態においては、末梢血中の好中球生細胞率を容易に判定することが可能である。
末梢血中の好中球生細胞率が６０％未満であることを定時間内に光学的に識別する血球測定手段を用いることにより末梢血中の好中球生細胞率を容易に判定することが可能である。 In this embodiment, it is possible to easily determine the neutrophil viable cell rate in peripheral blood.
Easily determine the neutrophil viable cell rate in peripheral blood by using a blood cell measuring means that optically discriminates within a fixed time that the neutrophil viable cell rate in peripheral blood is less than 60% Is possible.

本実施形態においては、末梢血中の好中球生細胞率が６０％未満であることを血球測定手段で確認後に、末梢血中の好中球を除去することが好ましい。
血球測定手段は、末梢血中の白血球の濃縮手段、好中球生細胞の染色手段、染色した好中球生細胞の濃縮手段、染色した好中球生細胞濃縮物の比色分析手段からなる。 In the present embodiment, it is preferable to remove neutrophils in peripheral blood after confirming with a blood cell measuring means that the neutrophil viable cell rate in peripheral blood is less than 60%.
The blood cell measurement means comprises a means for concentrating leukocytes in peripheral blood, a means for staining live neutrophil cells, a means for concentrating stained live neutrophil cells, and a colorimetric analysis means for staining live neutrophil cell concentrates. .

末梢血中の白血球の濃縮手段とは、血液中に存在する赤血球、白血球、血小板、血漿タンパク質から白血球を分離・採取する手段を意味する。白血球吸着フィルタ、遠心分離機等の機器により白血球を濃縮分離した後、洗浄により他の血球とタンパク質を除去することが可能である。   The means for concentrating white blood cells in peripheral blood means means for separating and collecting white blood cells from red blood cells, white blood cells, platelets and plasma proteins present in the blood. After the leukocytes are concentrated and separated by a device such as a leukocyte adsorption filter and a centrifuge, other blood cells and proteins can be removed by washing.

好中球生細胞の染色手段とは、好中球の生細胞を染色する試薬を意味する。好中球の生細胞の染色試薬としてはローズベンガル溶液を例示することができる。なお、好中球の非生細胞の染色試薬としてはトリパンブルー溶液を例示することができる。   The means for staining live neutrophil cells means a reagent for staining live cells of neutrophils. An example of a staining reagent for living neutrophil cells is rose bengal solution. An example of a staining reagent for non-viable neutrophil cells is trypan blue solution.

染色した好中球生細胞の濃縮手段とは、好中球生細胞と染色試薬の混合物から脱液して好中球生細胞を取り出す手段を意味する。濾紙、精密ろ過膜、限外濾過膜、遠心分離機等を例示することができる。   The means for concentrating stained viable neutrophil cells means a means for removing the viable neutrophil cells by draining from the mixture of viable neutrophil cells and staining reagent. Examples include filter paper, microfiltration membranes, ultrafiltration membranes, and centrifugal separators.

染色した好中球生細胞濃縮物の比色分析手段とは、染色した好中球生細胞濃縮物の濃度を色調変化から決定する化学分析手段を意味する。物質の色の濃さ又は色調を、標準物質の色調と比較して、その物質を定量する分析手段である。標準物質としては、写真、紙等の標本が例示される。必要に応じて、光学顕微鏡の使用、紫外線、赤外線の使用、光度計及び分光法の使用、或いはこれらの組み合わせも可能である。   The colorimetric analysis means for the stained neutrophil live cell concentrate means a chemical analysis means for determining the concentration of the stained neutrophil live cell concentrate from the color tone change. It is an analytical means for quantifying a substance by comparing the color intensity or tone of the substance with that of a standard substance. Examples of the standard material include specimens such as photographs and paper. If necessary, use of an optical microscope, use of ultraviolet rays and infrared rays, use of a photometer and spectroscopy, or a combination thereof is also possible.

本実施形態においては、血球測定手段により末梢血中の好中球生細胞率を測定することができる。
末梢血中の好中球生細胞率の測定方法は、末梢血中の白血球を濃縮する工程、好中球生細胞を染色する工程、染色した好中球生細胞を濃縮する工程、及び染色した好中球生細胞濃縮物を比色分析する工程を含む。 In this embodiment, the neutrophil viable cell rate in the peripheral blood can be measured by the blood cell measuring means.
The method for measuring the ratio of viable neutrophils in peripheral blood includes a step of concentrating white blood cells in peripheral blood, a step of staining viable neutrophil cells, a step of concentrating stained viable neutrophil cells, and staining Colorimetrically analyzing a live neutrophil cell concentrate.

以下、本発明を実施例によって、さらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例によって何ら制限されるものではない。本実施例における測定法は以下のとおりである。   EXAMPLES Hereinafter, although an Example demonstrates this invention further in detail, this invention is not restrict | limited at all by these Examples. The measuring method in this example is as follows.

（１）末梢血中の好中球生細胞率の簡易測定
以下の手順により好中球生細胞率を簡易判定した。
抗凝固剤を添加した末梢血３０ｍＬを室温で２０００Gにて１０分間遠心分離してバフィーコートを得た。バフィーコートにリン酸緩衝生理食塩水（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ、ＰＢＳ）を加え、好中球濃度が１×１０6個／ｍＬ〜３×１０6個／ｍＬとなるように調整して、細胞懸濁液を得た。細胞懸濁液５００μＬに０．００３％のローズベンガル溶液（東京化成工業株式会社）を加え、３７℃で１０分間培養した。培養液を４００Ｇで１０分間遠心して脱液することによりペレットを得た。ペレットにリン酸緩衝生理食塩水を５００μＬ加えて再懸濁し、懸濁液を再度４００Ｇで１０分間遠心して脱液することによりペレットを得た。得られたペレットを予め用意した色見本（写真）と比較することにより好中球生細胞率を簡易判定した。 (1) Simplified measurement of neutrophil viable cell rate in peripheral blood The neutrophil viable cell rate was simply determined by the following procedure.
30 mL of peripheral blood to which an anticoagulant was added was centrifuged at 2000 G for 10 minutes at room temperature to obtain a buffy coat. Buffy phosphate buffered saline coat (Phosphate buffered saline, PBS) added, neutrophil concentration was adjusted to 1 × 10 6 cells / mL~3 × 10 6 cells / mL, cell suspension A liquid was obtained. A 0.003% rose bengal solution (Tokyo Kasei Kogyo Co., Ltd.) was added to 500 μL of the cell suspension and cultured at 37 ° C. for 10 minutes. The culture solution was centrifuged at 400 G for 10 minutes to remove the liquid, thereby obtaining a pellet. The pellet was resuspended by adding 500 μL of phosphate buffered saline, and the suspension was again centrifuged at 400 G for 10 minutes to remove the liquid, thereby obtaining a pellet. The viable neutrophil cell rate was simply determined by comparing the obtained pellets with a color sample (photo) prepared in advance.

（２）血球性能及び圧力損失
７質量％となるように、ＡＣＤ−Ａ液（テルモ株式会社）を添加した豚血を調整し、血液分析装置（シスメックス株式会社 ＴＸ−１８００ｉ）により、血液循環用カラム通過
前の顆粒球、リンパ球及び血小板の各濃度を測定した。
豚血を３７±１℃に加温して、血液ポンプにて５０ｍＬ／ｍｉｎの流速で、２Ｌの加温した豚血を血液循環用カラムに流し、血液循環用カラム出口から流出した血液を全て捕集した。捕集した血液について、顆粒球、リンパ球及び血小板の各濃度を測定した。
血液循環用カラム通過前後での各成分の除去率又は通過率を求めた。
２Ｌの血液を処理した時点の血液循環用カラム入口圧と血液循環用カラム出口圧を測定し、入口圧から出口圧を引いた値を圧力損失とした。 (2) Blood cell performance and pressure loss Swine blood added with ACD-A solution (Terumo Corporation) is adjusted to 7% by mass, and is used for blood circulation with a blood analyzer (Sysmex Corporation TX-1800i). Each concentration of granulocytes, lymphocytes and platelets before passing through the column was measured.
Heat porcine blood to 37 ± 1 ° C, and flow 2 L of warm porcine blood to the blood circulation column with a blood pump at a flow rate of 50 mL / min. I collected it. Concentrations of granulocytes, lymphocytes and platelets were measured for the collected blood.
The removal rate or passage rate of each component before and after passing through the blood circulation column was determined.
The blood circulation column inlet pressure and the blood circulation column outlet pressure at the time when 2 L of blood was processed were measured, and the value obtained by subtracting the outlet pressure from the inlet pressure was defined as the pressure loss.

（３）繊維状担体の総表面積
血液循環用カラムに充填された繊維状担体の総表面積は、繊維状担体の平均繊維径から算出される繊維状担体の比表面積と、充填される繊維状担体の重量との積の合計として算出した。複数種のフィルタ材を用いて繊維状担体としている場合には、フィルタ材ごとに表面積を算出して、その総和を繊維状担体の総表面積とした。
繊維状担体の比表面積（ｍ2／ｇ）は、平均繊維径をＤ（μｍ）、担体の材料の密度をρとすると、４／（ρ×Ｄ）で算出した。繊維状担体の基材密度は、ＪＩＳ Ｚ ８８０７：２０１２に従って測定した。 (3) Total surface area of fibrous carrier The total surface area of the fibrous carrier packed in the blood circulation column is the specific surface area of the fibrous carrier calculated from the average fiber diameter of the fibrous carrier and the filled fibrous carrier It was calculated as the sum of the product with the weight of. When a fibrous carrier is used by using a plurality of types of filter materials, the surface area is calculated for each filter material, and the sum is taken as the total surface area of the fibrous carrier.
The specific surface area (m 2 / g) of the fibrous carrier was calculated as 4 / (ρ × D) where D (μm) is the average fiber diameter and ρ is the density of the material of the carrier. The substrate density of the fibrous carrier was measured according to JIS Z 8807: 2012.

（４）親水性高分子のコート量
親水性高分子をコートした繊維状担体を、フィルタ材ごとに、一定量採取し、重量（Ｗ０）を測定した。
親水性高分子を溶解し、かつ基材を溶解しない溶媒に、重量測定後の繊維状担体を浸漬し５分間振盪撹拌した。撹拌後、溶媒を交換し、再度５分間振盪撹拌した。溶媒の交換と振盪撹拌を計３回繰り返した後、溶媒を廃棄し、繊維状担体を２４時間５０℃で真空乾燥した。乾燥後の重量（Ｗ１）を測定した。
コート量を（Ｗ１−Ｗ０）／Ｗ０により算出した。 (4) Coating amount of hydrophilic polymer A certain amount of the fibrous carrier coated with the hydrophilic polymer was sampled for each filter material, and the weight (W0) was measured.
The fibrous carrier after weight measurement was immersed in a solvent in which the hydrophilic polymer was dissolved and the substrate was not dissolved, and the mixture was shaken and stirred for 5 minutes. After stirring, the solvent was changed, and the mixture was again stirred with shaking for 5 minutes. After exchanging the solvent and shaking and stirring a total of three times, the solvent was discarded and the fibrous carrier was vacuum-dried at 50 ° C. for 24 hours. The weight (W1) after drying was measured.
The coating amount was calculated by (W1-W0) / W0.

（５）平均繊維径
フィルタ材ごとに、走査電子顕微鏡を用いて拡大倍率２５００倍で、合計本数が１００本を超えるまで視野を変えながら繊維状担体の写真を撮影した。撮影した、それぞれの繊維の繊維軸に直角な繊維の幅を、その繊維の直径として測定した。測定した繊維の直径の総和を、直径を測定した繊維の総本数で割った値を平均繊維径として算出した。 (5) Average fiber diameter For each filter material, photographs of the fibrous carrier were taken while changing the field of view until the total number exceeded 100 at a magnification of 2500 using a scanning electron microscope. The width of the fiber taken perpendicular to the fiber axis of each fiber was measured as the diameter of the fiber. A value obtained by dividing the total diameter of the measured fibers by the total number of fibers whose diameters were measured was calculated as an average fiber diameter.

（６）ＣＷＳＴ
繊維状担体をフィルタ材ごとに、１００ｍｍ四方に切断した。表面張力が９０ｄｙｎ／ｃｍから１００ｄｙｎ／ｃｍの範囲で、２ｄｙｎ／ｃｍずつ異なる水酸化ナトリウム水溶液を表面張力が低いものから順番にフィルタ材上に１０滴ずつ乗せ１０分間放置した。１０分放置後、１０滴中９滴以上がフィルタ材に吸収された場合に湿潤状態であるとし、吸収が１０滴中９滴未満である場合に非湿潤状態であるとして、湿潤状態であると観察された内で水酸化ナトリウム水溶液の最大の表面張力値と、非湿潤状態であると観察された内で水酸化ナトリウムの最小の表面張力値を平均し、繊維状担体のＣＷＳＴ値として測定した。 (6) CWST
The fibrous carrier was cut into 100 mm squares for each filter material. When the surface tension was in the range of 90 dyn / cm to 100 dyn / cm, 10 aqueous sodium hydroxide solutions differing by 2 dyn / cm were placed on the filter material in descending order of surface tension and left for 10 minutes. After standing for 10 minutes, when 9 or more drops out of 10 drops are absorbed by the filter material, it is assumed to be in a wet state, and when absorption is less than 9 drops out of 10 drops, it is assumed to be in a non-wet state. Among the observed values, the maximum surface tension value of the aqueous sodium hydroxide solution and the minimum surface tension value of sodium hydroxide among the observed non-wet conditions were averaged and measured as the CWST value of the fibrous carrier. .

（７）好中球画分の測定法
遠心チューブに血球分離溶液を入れ、同量の採取した血液を重層した。遠心チューブ内の溶液を遠心し、多核顆粒球浮遊液を採取した。リン酸緩衝生理食塩水を加えて混和し、再度遠心して、上清を除去し、残った多核顆粒球をリン酸緩衝生理食塩水で懸濁して検体とした。
次に検体にＰｒｏｐｉｄｉｕｍ ｉｏｄｉｄｅ（ＰＩ）とＦＩＴＣ標識したＡｎｎｅｘｉｎ−Ｖを加えて反応、染色した。フローサイトメーターでＰＩ及びＡｎｎｅｘｉｎ−Ｖともに陰性の細胞（ＰＩ及びＡｎｎｅｘｉｎ−Ｖのいずれでも染色されない細胞）の割合を測定し、それを好中球生細胞率とした。
また、ＰＩ陰性且つＡｎｎｅｘｉｎ−Ｖ陽性の細胞を初期アポトーシス好中球、ＰＩ陽性且つＡｎｎｅｘｉｎ−Ｖ陰性の細胞をネクローシス好中球、ＰＩ及びＡｎｎｅｘｉｎ−Ｖともに陽性の細胞を後期アポトーシス好中球とした。 (7) Method for measuring neutrophil fraction A blood cell separation solution was placed in a centrifuge tube, and the same amount of collected blood was overlaid. The solution in the centrifuge tube was centrifuged to collect a polynuclear granulocyte suspension. Phosphate buffered saline was added and mixed, centrifuged again, the supernatant was removed, and the remaining polynuclear granulocytes were suspended in phosphate buffered saline to prepare a sample.
Next, Propidium iodide (PI) and FITC-labeled Annexin-V were added to the specimen for reaction and staining. The proportion of cells that were negative for both PI and Annexin-V (cells that were not stained with either PI or Annexin-V) was measured using a flow cytometer, and this was used as the neutrophil viable cell rate.
In addition, PI-negative and Annexin-V-positive cells were designated as early apoptotic neutrophils, PI-positive and Annexin-V-negative cells were designated as necrotic neutrophils, and PI and Annexin-V-positive cells were designated as late apoptotic neutrophils. .

（８）感染リスクの高い患者又は感染症を有している患者に対する血液循環用カラムの使用
血液循環用カラムをＵＣ、大腸穿孔、食道癌、直腸癌開腹術後患者等感染リスクの高い患者や感染症を有している患者に対して施行し、患者好中球の機能を評価する非盲検試験を実施した。
感染リスクの高い患者又は感染症を有している患者とは、１）選択基準のいずれかに該当し、２）除外基準のいずれにも該当しない患者のことである。
１）選択基準
・ＵＣ、大腸穿孔、食道癌、直腸癌開腹術後患者の内、創分類クラス２以上の患者
・ＵＣ、大腸穿孔、食道癌、直腸癌開腹術後患者の内、栄養状態及び／又は全身状態が不良の患者
・ＵＣ、大腸穿孔、食道癌、直腸癌開腹術後患者の内、手術侵襲が高い患者
・感染症を有している患者
２）除外基準
・心疾患（発症後６ヶ月以内の急性心筋梗塞、虚血性心疾患、加療を要する不整脈）の患者
・脳梗塞・脳出血等の脳血管障害の合併、既往を有する患者
・低血圧症又は収縮期血圧８０ｍｍＨｇ以下の患者
・妊娠中、授乳中の女性、妊娠している可能性のある女性
・認知症の患者
・体外循環治療中にショックの既往歴を有する患者
・アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害薬を服用しており、体外循環施行に先立って服用中止が困難な患者
ここで創分類クラス２以上の患者とは、清潔創１段階以外の準清潔創（クラス２）、汚染創（クラス３）、感染・不潔創（クラス４）の患者を指す。
実施の選択は手術予定症例では術前、感染症発生症例では感染症治療実施中に本試験の説明を行い、血液循環用カラム使用の同意が得られた場合には実施群、使用には同意が得られないものの、好中球機能評価について同意が得られた場合には非実施群（対照群）とした。 (8) Use of blood circulation column for patients with high risk of infection or patients with infections Blood circulation columns can be used for patients with high infection risk such as UC, colon perforation, esophageal cancer, post-rectal cancer laparotomy patients, etc. An open-label study was conducted to assess the function of neutrophils in patients with infections.
A patient with a high risk of infection or a patient with an infection is a patient who meets 1) any of the selection criteria and 2) does not meet any of the exclusion criteria.
1) Selection criteria ・ UC, colon perforation, esophageal cancer, patients after rectal cancer laparotomy, wound classification class 2 or more ・ UC, colon perforation, esophageal cancer, patients after rectal cancer laparotomy, nutritional status and Patients with poor general condition, UC, colon perforation, esophageal cancer, patients after rectal cancer laparotomy, patients with high surgical invasion, patients with infectious disease 2) exclusion criteria, heart disease (after onset Patients with acute myocardial infarction within 6 months, ischemic heart disease, arrhythmia requiring treatment), patients with cerebral infarction, cerebrovascular disorder such as cerebral hemorrhage, etc., patients with hypotension or systolic blood pressure of 80 mmHg or less Pregnant, breastfeeding women, women who may be pregnant, patients with dementia, patients with a history of shock during extracorporeal circulation treatment, taking angiotensin converting enzyme (ACE) inhibitor, Difficult to discontinue taking before extracorporeal circulation Patients and here wound classification class 2 or more patients, semi-clean wounds other than clean wounds one level (class 2), contaminated wounds (class 3), refers to a patient infected, unclean wounds (Class 4).
The choice of implementation will be explained before the operation for patients scheduled to undergo surgery, and during the treatment of infection in cases where infection has occurred, and this study will be explained, and if consent to use the column for blood circulation is obtained, the treatment group will agree However, when consent was obtained for the evaluation of neutrophil function, a non-implementation group (control group) was used.

［血液循環用カラムを用いた施行条件］
１）繊維状担体が充填される血液循環用カラムの使用時
時期は術直後とし、実施回数は１回とした。抗凝固剤としてはチトラミン（扶桑薬品工業株式会社）を用いた。施行条件は血液流量５０ｍＬ／分、体外循環時間約１時間、目標血液処理量３，０００ｍＬとした。
２）粒状担体が充填される血液循環用カラムの使用時
時期は術直後とし、実施回数は１回とした。抗凝固剤としてはヘパリン（扶桑薬品工業株式会社）を用いた。施行条件は血液流量３０ｍＬ／分、体外循環時間約１時間、目標血液処理量１，８００ｍＬとした。
３）遠心分離機の使用時
抹消血中から白血球のみを除去する設定とした体外循環式遠心分離法で用いる遠心分離機として体外循環型遠心分離機ヘモネティクスコンポーネントコレクションシステムＣＣＳ（Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ，Ｈａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ Ｃｏ．，Ｂｒａｉｎｔｒｅｅ，ＭＡ ＵＳ）を使用した。抗凝固剤としてクエン酸デキストロース（ＡＣＤ，Ａｃｉｄ Ｃｉｔｒａｔｅ Ｄｅｘｔｒｏｓｅ）を使用し、血液流量に対して６％となるように添加した。血液処理量は３．０Ｌ、施行時間は１時間で行った。 [Conditions for using blood circulation column]
1) When using a blood circulation column filled with a fibrous carrier, the timing was immediately after the operation, and the number of implementations was one. As an anticoagulant, titramine (Fuso Pharmaceutical Co., Ltd.) was used. The enforcement conditions were a blood flow rate of 50 mL / min, an extracorporeal circulation time of about 1 hour, and a target blood throughput of 3,000 mL.
2) When using a blood circulation column packed with a granular carrier, the timing was immediately after the operation, and the number of implementations was one. Heparin (Fuso Pharmaceutical Co., Ltd.) was used as an anticoagulant. The enforcement conditions were a blood flow rate of 30 mL / min, an extracorporeal circulation time of about 1 hour, and a target blood throughput of 1,800 mL.
3) When using a centrifuge Extracorporeal circulation centrifuge hemodynamics component collection system CCS (Component Collection System, Haemonetics) as a centrifuge to be used in an extracorporeal circulation centrifuge set to remove only white blood cells from peripheral blood Co., Braintree, MA US). Citrate dextrose (ACD, Acid Citrate Dextrose) was used as an anticoagulant and added to 6% of the blood flow rate. The blood treatment amount was 3.0 L, and the operation time was 1 hour.

＜親水性高分子の合成＞
２−ヒドロキシエチルメタクリレート（ＨＥＭＡ）とジメチルアミノエチルメタクリレート（ＤＭ）とをモル比で９７：３の割合で混合し、エタノール中の総モノマー濃度を１．０モル／Ｌとして、１／２００モル／Ｌのアゾビスイソブチロニトリルの重合開始剤の存在下、６０℃で８時間、溶液ラジカル重合することによって親水性高分子（以下、ＨＭ−３と略称する）を合成した。 <Synthesis of hydrophilic polymer>
2-hydroxyethyl methacrylate (HEMA) and dimethylaminoethyl methacrylate (DM) are mixed at a molar ratio of 97: 3, and the total monomer concentration in ethanol is 1.0 mol / L, 1/200 mol / L. A hydrophilic polymer (hereinafter abbreviated as HM-3) was synthesized by solution radical polymerization at 60 ° C. for 8 hours in the presence of a polymerization initiator of L azobisisobutyronitrile.

＜繊維状担体の作成＞
フィルタ材（Ａ）
ＨＭ−３濃度が０．４質量％となるように、ＨＭ−３を５０％エタノール水溶液に溶解した。得られた溶液に、平均繊維径１２μｍ、目付１００ｇ／ｍ2、厚み０．４７ｍｍのポリエチレンテレフタレート製不織布を浸漬し、余分な液を除去した後に、５０℃で２０分間乾燥して、フィルタ材（Ａ）を得た。ポリエチレンテレフタレートの密度は、１．３８ｇ／ｃｍ3であった。
フィルタ材（Ａ）のＣＷＳＴ値は９５ｄｙｎ／ｃｍであった。フィルタ材（Ａ）の親水性高分子のコート量を、溶媒に５０％エタノール水溶液を用いて測定したところ、繊維状担体１ｇ当たり１７ｍｇであった。 <Creation of fibrous carrier>
Filter material (A)
HM-3 was dissolved in a 50% aqueous ethanol solution so that the HM-3 concentration was 0.4 mass%. A polyethylene terephthalate non-woven fabric having an average fiber diameter of 12 μm, a basis weight of 100 g / m 2 , and a thickness of 0.47 mm is immersed in the resulting solution to remove excess liquid, and then dried at 50 ° C. for 20 minutes to obtain a filter material ( A) was obtained. The density of polyethylene terephthalate was 1.38 g / cm 3 .
The CWST value of the filter material (A) was 95 dyn / cm. When the coating amount of the hydrophilic polymer of the filter material (A) was measured using a 50% aqueous ethanol solution as a solvent, it was 17 mg per 1 g of the fibrous carrier.

フィルタ材（Ｂ）
ＨＭ−３濃度が０．４質量％となるように、ＨＭ−３を５０％エタノール水溶液に溶解した。得られた溶液に、平均繊維径１２μｍ、目付３０ｇ／ｍ2、厚み０．２０ｍｍのポリエチレンテレフタレート製不織布を浸漬し、余分な液を除去した後に５０℃で２０分間乾燥して、フィルタ材（Ｂ）を得た。
フィルタ材（Ｂ）のＣＷＳＴ値は９５ｄｙｎ／ｃｍであった。フィルタ材（Ｂ）の親水性高分子のコート量を、溶媒に５０％エタノール水溶液を用いて測定したところ、繊維状担体１ｇ当たり８ｍｇであった。 Filter material (B)
HM-3 was dissolved in a 50% aqueous ethanol solution so that the HM-3 concentration was 0.4 mass%. A nonwoven fabric made of polyethylene terephthalate having an average fiber diameter of 12 μm, a basis weight of 30 g / m 2 , and a thickness of 0.20 mm is immersed in the obtained solution, and the excess liquid is removed, followed by drying at 50 ° C. for 20 minutes to obtain a filter material (B )
The CWST value of the filter material (B) was 95 dyn / cm. When the coating amount of the hydrophilic polymer of the filter material (B) was measured using a 50% ethanol aqueous solution as a solvent, it was 8 mg per 1 g of the fibrous carrier.

フィルタ材（Ｃ）
ＨＭ−３濃度が０．４質量％となるように、ＨＭ−３を５０％エタノール水溶液に溶解した。得られた溶液に、平均繊維径２．３μｍ、目付６０ｇ／ｍ2、厚み０．３０ｍｍのポリエチレンテレフタレート製不織布を浸漬し、余分な液を除去した後に５０℃で２０分間乾燥して、フィルタ材（Ｃ）を得た。
フィルタ材（Ｃ）のＣＷＳＴ値は９５ｄｙｎ／ｃｍであった。フィルタ材（Ｃ）の親水性高分子のコート量を、溶媒に５０％エタノール水溶液を用いて測定したところ、繊維状担体１ｇ当たり３２ｍｇであった。 Filter material (C)
HM-3 was dissolved in a 50% aqueous ethanol solution so that the HM-3 concentration was 0.4 mass%. A polyethylene terephthalate nonwoven fabric having an average fiber diameter of 2.3 μm, a basis weight of 60 g / m 2 , and a thickness of 0.30 mm is immersed in the obtained solution, and after removing excess liquid, it is dried at 50 ° C. for 20 minutes to obtain a filter material. (C) was obtained.
The CWST value of the filter material (C) was 95 dyn / cm. When the coating amount of the hydrophilic polymer of the filter material (C) was measured using a 50% ethanol aqueous solution as a solvent, it was 32 mg per 1 g of the fibrous carrier.

フィルタ材（Ｄ）
ＨＭ−３濃度が０．４質量％となるように、ＨＭ−３を５０％エタノール水溶液に溶解した。得られた溶液に、平均繊維径１．４μｍ、目付６６ｇ／ｍ2、厚み０．４０ｍｍのポリエチレンテレフタレート製不織布を浸漬し、余分な液を除去した後に５０℃で２０分間乾燥して、フィルタ材（Ｄ）を得た。
フィルタ材（Ｄ）のＣＷＳＴ値は９１ｄｙｎ／ｃｍであった。フィルタ材（Ｄ）の親水性高分子のコート量を、溶媒に５０％エタノール水溶液を用いて測定したところ、繊維状担体１ｇ当たり２７ｍｇであった。 Filter material (D)
HM-3 was dissolved in a 50% aqueous ethanol solution so that the HM-3 concentration was 0.4 mass%. A polyethylene terephthalate nonwoven fabric having an average fiber diameter of 1.4 μm, a basis weight of 66 g / m 2 , and a thickness of 0.40 mm is immersed in the obtained solution, and after removing excess liquid, it is dried at 50 ° C. for 20 minutes. (D) was obtained.
The CWST value of the filter material (D) was 91 dyn / cm. When the coating amount of the hydrophilic polymer of the filter material (D) was measured using a 50% ethanol aqueous solution as a solvent, it was 27 mg per 1 g of the fibrous carrier.

＜血液循環用カラムの作成＞
血液循環用カラム（１）
フィルタ材（Ｃ）を１０枚積層し、その上にフィルタ材（Ａ）を９枚、フィルタ材（Ｂ）を４枚重ねてシート状フィルタを作成した。シート状フィルタを９７ｍｍ四方に切断して、液体の第１出入口と第２出入口とをそれぞれ対向の頂角部に有する容量１２５ｍＬの四角形状扁平型容器へ、フィルタ材（Ａ）が第２出入口側になるように充填して、超音波溶着を行うことで扁平型のカラムを作製した。カラムを脱酸素剤（三菱瓦斯化学株式会社、エージレス（登録商標）ＳＳ２００）と共にナイロン、アルミ、ポリエチレンの積層フィルムによって作られた包装袋に入れ、包装袋をヒートシールすることで密閉した。
包装袋内の酸素濃度を酸素濃度計（飯島電子工業株式会社、ＲＯ−１０２−ＳＤＰ）を用いて測定し、酸素濃度が１％以下になった後、２５ｋＧｙのγ線を照射し滅菌を行い、血液循環用カラム（１）を得た。繊維状担体の総表面積並びにカラムの圧力損失は、それぞれ９ｍ2、１ｋＰａであった。 <Creation of blood circulation column>
Blood circulation column (1)
Ten filter materials (C) were stacked, and nine filter materials (A) and four filter materials (B) were stacked thereon to form a sheet-like filter. The sheet-like filter is cut into a 97 mm square, and the filter material (A) is moved to the second inlet / outlet side into a 125 mL square flat container having a first inlet / outlet and a second inlet / outlet at the opposite apex portions. A flat column was prepared by performing ultrasonic welding. The column was put in a packaging bag made of a laminated film of nylon, aluminum, and polyethylene together with an oxygen scavenger (Mitsubishi Gas Chemical Co., Ltd., Ageless (registered trademark) SS200), and the packaging bag was sealed by heat sealing.
The oxygen concentration in the packaging bag was measured using an oxygen concentration meter (Iijima Electronics Co., Ltd., RO-102-SDP). After the oxygen concentration became 1% or less, sterilization was performed by irradiating 25 kGy of γ rays. A column for blood circulation (1) was obtained. The total surface area of the fibrous carrier and the pressure loss of the column were 9 m 2 and 1 kPa, respectively.

血液循環用カラム（２）
フィルタ材（Ｃ）を１２枚積層し、その上にフィルタ材（Ａ）を９枚、フィルタ材（Ｂ）を４枚重ねてシート状フィルタを作成した。シート状フィルタを９７ｍｍ四方に切断して、液体の第１出入口と第２出入口とをそれぞれ対向の頂角部に有する容量１２５ｍＬの四角形状扁平型容器へ、フィルタ材（Ａ）が第２出入口側になるように充填して、超音波溶着を行うことで扁平型のカラムを作製した。カラムを脱酸素剤（三菱瓦斯化学株式会社、エージレス（登録商標）ＳＳ２００）と共にナイロン、アルミ、ポリエチレンの積層フィルムによって作られた包装袋に入れ、包装袋をヒートシールすることで密閉した。
包装袋内の酸素濃度を酸素濃度計（飯島電子工業株式会社、ＲＯ−１０２−ＳＤＰ）を用いて測定し、酸素濃度が１％以下になった後、２５ｋＧｙのγ線を照射し滅菌を行い、血液循環用カラム（２）を得た。繊維状担体の総表面積並びにカラムの圧力損失は、それぞれ１０ｍ2、１ｋＰａであった。 Blood circulation column (2)
Twelve filter materials (C) were laminated, and nine filter materials (A) and four filter materials (B) were stacked thereon to form a sheet-like filter. The sheet-like filter is cut into a 97 mm square, and the filter material (A) is moved to the second inlet / outlet side into a 125 mL square flat container having a first inlet / outlet and a second inlet / outlet at the opposite apex portions. A flat column was prepared by performing ultrasonic welding. The column was put in a packaging bag made of a laminated film of nylon, aluminum, and polyethylene together with an oxygen scavenger (Mitsubishi Gas Chemical Co., Ltd., Ageless (registered trademark) SS200), and the packaging bag was sealed by heat sealing.
The oxygen concentration in the packaging bag was measured using an oxygen concentration meter (Iijima Electronics Co., Ltd., RO-102-SDP). After the oxygen concentration became 1% or less, sterilization was performed by irradiating 25 kGy of γ rays. A column for blood circulation (2) was obtained. The total surface area of the fibrous carrier and the pressure loss of the column were 10 m 2 and 1 kPa, respectively.

血液循環用カラム（３）
フィルタ材（Ｄ）を１８枚積層し、その上にフィルタ材（Ａ）を９枚、フィルタ材（Ｂ）を４枚重ねてシート状フィルタを作成した。シート状フィルタを９７ｍｍ四方に切断して、液体の第１出入口と第２出入口とをそれぞれ対向の頂角部に有する容量１２５ｍＬの四角形状扁平型容器へ、フィルタ材（Ｃ）が第２出入口側になるように充填して、超音波溶着を行うことで扁平型のカラムを作製した。カラムを脱酸素剤（三菱瓦斯化学株式会社、エージレス（登録商標）ＳＳ２００）と共にナイロン、アルミ、ポリエチレンの積層フィルムによって作られた包装袋に入れ、包装袋をヒートシールすることで密閉した。
包装袋内の酸素濃度を酸素濃度計（飯島電子工業株式会社、ＲＯ−１０２−ＳＤＰ）を用いて測定し、酸素濃度が１％以下になった後、２５ｋＧｙのγ線を照射し滅菌を行い、血液循環用カラム（３）を得た。繊維状担体の総表面積並びにカラムの圧力損失は、それぞれ２１ｍ2、４ｋＰａであった。 Blood circulation column (3)
Eighteen filter materials (D) were stacked, and nine filter materials (A) and four filter materials (B) were stacked thereon to form a sheet-like filter. The sheet filter is cut into a 97 mm square, and the filter material (C) is moved to the second inlet / outlet side into a 125 mL square flat container having a first inlet / outlet and a second inlet / outlet at opposite apex portions. A flat column was prepared by performing ultrasonic welding. The column was put in a packaging bag made of a laminated film of nylon, aluminum, and polyethylene together with an oxygen scavenger (Mitsubishi Gas Chemical Co., Ltd., Ageless (registered trademark) SS200), and the packaging bag was sealed by heat sealing.
The oxygen concentration in the packaging bag was measured using an oxygen concentration meter (Iijima Electronics Co., Ltd., RO-102-SDP). After the oxygen concentration became 1% or less, sterilization was performed by irradiating 25 kGy of γ rays. A column for blood circulation (3) was obtained. The total surface area of the fibrous carrier and the pressure loss of the column were 21 m 2 and 4 kPa, respectively.

［実施例１］
４７才女性、創分類クラス２、栄養状態良好、ＡＳＡ分類１のクローン患者に対して、待機手術を行った。
ここで、ＡＳＡ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｉｓｔｓ）分類とはアメリカ麻酔科学会における全身状態分類のことである。ＡＳＡ分類１は、器質的、生理的、生化学的あるいは精神的な異常がなく、手術の対象となる疾患は局在的であって、全身的（系統的）な障害を惹き起こさないものである。ＡＳＡ分類２は、軽度〜中程度の系統的な障害があるものをいう。その原因は、外科的治療の対象となった疾患、又は、それ以外の病態生理学的な原因によるものである。ＡＳＡ分類３は、重症の系統的疾患があるものをいう。この場合，系統的な障害を起こす原因は何であってもよいし、はっきりした障害の程度を決められない場合でも差し支えない。ＡＳＡ分類４は、それによって生命がおびやかされつつあるような高度の系統的疾患があって、手術をしたからといって、その病変を治療できるとは限らないものである。ＡＳＡ分類５は、瀕死の状態の患者で助かる可能性は少ないが、手術をしなければならないものをいう。ＡＳＡ分類６は脳死患者を指す。
手術は内視鏡下手術で、手術時間は２２０分であった。手術侵襲のやや高い患者であり、輸血は無かった。手術終了１時間後に、血液循環用カラム（１）を用いて好中球除去を開始した。抗凝固剤としてチトラミン（扶桑薬品工業株式会社）を使用し、血液流量に対して６％となるように添加した。血液処理量は３．０Ｌ、施行時間は１時間であった。
好中球除去施行前後で末梢血を採取し、末梢血好中球生細胞率、後期アポトーシス好中球、及び血小板数を測定した。
施行前の末梢血中の好中球生細胞率の簡易測定した結果、生細胞率は６０％未満であった。 [Example 1]
A elective surgery was performed on a 47-year-old woman, wound classification class 2, nutritional condition, ASA classification 1 clone patient.
Here, the ASA (American Society of Anesthesiologists) classification is a general state classification in the American Society of Anesthesiology. ASA category 1 has no organic, physiological, biochemical or mental abnormalities, and the disease targeted for surgery is localized and does not cause systemic (systematic) damage. is there. ASA classification 2 refers to those with mild to moderate systematic impairment. The cause is due to a disease subjected to surgical treatment or other pathophysiological causes. ASA classification 3 refers to those with severe systemic disease. In this case, the cause of systematic failure may be anything, and even if the degree of clear failure cannot be determined. ASA classification 4 has a high degree of systematic disease that is being threatened by life, and just because an operation is performed, the lesion cannot always be treated. ASA Category 5 refers to those who are less likely to be saved in moribund patients but who must be operated on. ASA classification 6 refers to patients with brain death.
The operation was an endoscopic operation, and the operation time was 220 minutes. The patient had a slightly higher surgical invasiveness and no blood transfusion. One hour after the operation, neutrophil removal was started using the blood circulation column (1). Titoramine (Fuso Pharmaceutical Co., Ltd.) was used as an anticoagulant and added so as to be 6% of the blood flow rate. The blood throughput was 3.0 L, and the duration was 1 hour.
Peripheral blood was collected before and after neutrophil removal, and the peripheral blood neutrophil viable cell rate, late apoptotic neutrophils, and platelet count were measured.
As a result of simple measurement of the neutrophil viable cell rate in the peripheral blood before the operation, the viable cell rate was less than 60%.

［実施例２］
４０才女性、創分類クラス２、栄養状態良好、ＡＳＡ分類１のクローン患者に対して、待機手術を行った。手術時間は２７９分で、手術侵襲のやや高い患者であった。輸血は無かった。手術終了１時間後に、血液循環用カラム（２）を用いて好中球除去を開始した。抗凝固剤としてチトラミン（扶桑薬品工業株式会社）を使用し、血液流量に対して６％となるように添加した。血液処理量は３．０Ｌ、施行時間は１時間であった。
好中球除去施行前後で末梢血を採取し、末梢血好中球生細胞率、後期アポトーシス好中球、及び血小板数を測定した。
施行前の末梢血中の好中球生細胞率の簡易測定した結果、生細胞率は６０％未満であった。 [Example 2]
A elective surgery was performed on a 40-year-old female, wound classification class 2, nutritional status, ASA classification 1 clone patient. The operation time was 279 minutes, and the patient was slightly high in surgical invasion. There was no blood transfusion. One hour after the operation, neutrophil removal was started using the blood circulation column (2). Titoramine (Fuso Pharmaceutical Co., Ltd.) was used as an anticoagulant and added so as to be 6% of the blood flow rate. The blood throughput was 3.0 L, and the duration was 1 hour.
Peripheral blood was collected before and after neutrophil removal, and the peripheral blood neutrophil viable cell rate, late apoptotic neutrophils, and platelet count were measured.
As a result of simple measurement of the neutrophil viable cell rate in the peripheral blood before the operation, the viable cell rate was less than 60%.

［実施例３］
５１才男性、創分類クラス２、栄養状態良好、ＡＳＡ分類１のクローン患者に対して、待機手術を行った。手術時間は２３０分で、手術侵襲のやや高い患者であった。輸血は無かった。手術終了１時間後に、血液循環用カラム（３）を用いて好中球除去を開始した。抗凝固剤としてチトラミン（扶桑薬品工業株式会社）を使用し、血液流量に対して６％となるように添加した。血液処理量は３．０Ｌ、施行時間は１時間であった。
好中球除去施行前後で末梢血を採取し、末梢血好中球生細胞率、後期アポトーシス好中球、及び血小板数を測定した。
施行前の末梢血中の好中球生細胞率の簡易測定した結果、生細胞率は６０％未満であった。 [Example 3]
A 51-year-old male, wound classification class 2, good nutritional status, ASA classification 1 clone patient was subjected to elective surgery. The operation time was 230 minutes, and the patient was slightly invasive. There was no blood transfusion. One hour after the end of the operation, neutrophil removal was started using the blood circulation column (3). Titoramine (Fuso Pharmaceutical Co., Ltd.) was used as an anticoagulant and added so as to be 6% of the blood flow rate. The blood throughput was 3.0 L, and the duration was 1 hour.
Peripheral blood was collected before and after neutrophil removal, and the peripheral blood neutrophil viable cell rate, late apoptotic neutrophils, and platelet count were measured.
As a result of simple measurement of the neutrophil viable cell rate in the peripheral blood before the operation, the viable cell rate was less than 60%.

［実施例４］
４４才男性、創分類クラス３、栄養状態良好、ＡＳＡ分類３の全大腸炎型ＵＣ患者に対して、待機手術を行った。手術時間は２４５分で、手術侵襲のやや高い患者であった。輸血は無かった。手術終了１時間後に、血液循環用カラム（１）を用いて好中球除去を開始した。抗凝固剤としてチトラミン（扶桑薬品工業株式会社）を使用し、血液流量に対して６％となるように添加した。血液処理量は３．０Ｌ、施行時間は１時間であった。
好中球除去施行前後で末梢血を採取し、末梢血好中球生細胞率、後期アポトーシス好中球、及び血小板数を測定した。
施行前の末梢血中の好中球生細胞率の簡易測定した結果、生細胞率は６０％未満であった。 [Example 4]
A 44-year-old male, wound classification class 3, good nutritional state, ASA classification 3 all colitis type UC patient was subjected to elective surgery. The operation time was 245 minutes, and the patient was slightly invasive. There was no blood transfusion. One hour after the operation, neutrophil removal was started using the blood circulation column (1). Titoramine (Fuso Pharmaceutical Co., Ltd.) was used as an anticoagulant and added so as to be 6% of the blood flow rate. The blood throughput was 3.0 L, and the duration was 1 hour.
Peripheral blood was collected before and after neutrophil removal, and the peripheral blood neutrophil viable cell rate, late apoptotic neutrophils, and platelet count were measured.
As a result of simple measurement of the neutrophil viable cell rate in the peripheral blood before the operation, the viable cell rate was less than 60%.

［実施例５］
３９才女性、創分類クラス３、栄養状態良好、ＡＳＡ分類２の腹腔内膿瘍患者に対して、待機手術を行った。手術時間は２２８分で、手術侵襲のやや高い患者であった。輸血は無かった。手術終了１時間後に、血液循環用カラム（１）を用いて好中球除去を開始した。抗凝固剤としてチトラミン（扶桑薬品工業株式会社）を使用し、血液流量に対して６％となるように添加した。血液処理量は３．０Ｌ、施行時間は１時間であった。
好中球除去施行前後で末梢血を採取し、末梢血好中球生細胞率、及び後期アポトーシス好中球を測定した。
施行前の末梢血中の好中球生細胞率の簡易測定した結果、生細胞率は６０％未満であった。 [Example 5]
A 39-year-old woman, wound classification class 3, nutritional condition, ASA classification 2 intraperitoneal abscess patient was subjected to elective surgery. The operation time was 228 minutes, and the patient was slightly more invasive. There was no blood transfusion. One hour after the operation, neutrophil removal was started using the blood circulation column (1). Titoramine (Fuso Pharmaceutical Co., Ltd.) was used as an anticoagulant and added so as to be 6% of the blood flow rate. The blood throughput was 3.0 L, and the duration was 1 hour.
Peripheral blood was collected before and after the removal of neutrophils, and the peripheral blood neutrophil viable cell rate and late apoptotic neutrophils were measured.
As a result of simple measurement of the neutrophil viable cell rate in the peripheral blood before the operation, the viable cell rate was less than 60%.

［実施例６］
３７才女性、創分類クラス２、栄養状態良好、ＡＳＡ分類１のクローン患者に対して、待機手術を行った。手術時間は２１０分で、手術侵襲のやや高い患者であった。輸血は無かった。手術終了１時間後に、生理食塩水８００ｍＬ及びヘパリン添加生理食塩水５００ｍＬ（２０００単位／５００ｍＬ）で洗浄及びプライミングを行ったアダカラム（ＪＩＭＲＯ社製、直径約２ｍｍのセルローストリアセテートビーズ（粒状担体）、Ｒａ＝１３３ｎｍ）を用いて好中球除去を開始した。抗凝固剤としてヘパリン（扶桑薬品工業株式会社）を用い、循環中ヘパリンを１８００単位／時間で抗凝固剤注入ラインから持続注入した。血液処理量は１．８Ｌ、施行時間は１時間であった。
好中球除去施行前後で末梢血を採取し、末梢血好中球生細胞率、後期アポトーシス好中球、及び血小板数を測定した。
施行前の末梢血中の好中球生細胞率の簡易測定した結果、生細胞率は６０％未満であった。 [Example 6]
A elective surgery was performed on a 37-year-old female, wound classification class 2, good nutritional state, ASA classification 1 clone patient. The operation time was 210 minutes, and the patient was slightly high in surgical invasion. There was no blood transfusion. One hour after the end of the operation, Adacolumn (JIMRO, cellulose triacetate beads (granular carrier) having a diameter of about 2 mm, which was washed and primed with 800 mL of physiological saline and 500 mL of heparinized physiological saline (2000 units / 500 mL), Ra = 133 nm) was used to initiate neutrophil removal. Heparin (Fuso Pharmaceutical Co., Ltd.) was used as an anticoagulant, and circulating heparin was continuously injected from the anticoagulant injection line at 1800 units / hour. The amount of blood treatment was 1.8 L, and the operation time was 1 hour.
Peripheral blood was collected before and after neutrophil removal, and the peripheral blood neutrophil viable cell rate, late apoptotic neutrophils, and platelet count were measured.
As a result of simple measurement of the neutrophil viable cell rate in the peripheral blood before the operation, the viable cell rate was less than 60%.

［実施例７］
３０才男性、創分類クラス２、栄養状態良好、ＡＳＡ分類１のクローン患者に対して、待機手術を行った。手術時間は２０３分で、手術侵襲のやや高い患者であった。輸血は無かった。手術終了１時間後に、体外循環型遠心分離機ヘモネティクスコンポーネントコレクションシステムＣＣＳ（Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ，Ｈａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ Ｃｏ．，Ｂｒａｉｎｔｒｅｅ，ＭＡ ＵＳ）を使用した。抗凝固剤としてクエン酸デキストロース（ＡＣＤ，Ａｃｉｄ Ｃｉｔｒａｔｅ Ｄｅｘｔｒｏｓｅ）を使用し、血液流量に対して６％となるように添加した。血液処理量は３．０Ｌ、施行時間は１時間であった。 [Example 7]
A elective surgery was performed on a 30-year-old male, wound classification class 2, nutritional status good, ASA classification 1 clone patient. The operation time was 203 minutes, and the patient was slightly invasive. There was no blood transfusion. One hour after the operation, an extracorporeal centrifuge hemodynamic component collection system CCS (Component Collection System, Haemonetics Co., Braintree, MA US) was used. Citrate dextrose (ACD, Acid Citrate Dextrose) was used as an anticoagulant and added to 6% of the blood flow rate. The blood throughput was 3.0 L, and the duration was 1 hour.

施行前後で末梢血を採取し、末梢血好中球生細胞率、後期アポトーシス好中球、及び血小板数を測定した。
施行前の末梢血中の好中球生細胞率の簡易測定した結果、生細胞率は６０％未満であった。 Peripheral blood was collected before and after the operation, and the peripheral blood neutrophil viable cell rate, late apoptotic neutrophils, and platelet count were measured.
As a result of simple measurement of the neutrophil viable cell rate in the peripheral blood before the operation, the viable cell rate was less than 60%.

［比較例１］
４７才男性、創分類クラス２、ＡＳＡ分類１の全大腸炎型ＵＣ患者に対して、待機手術を行った。手術は内視鏡下手術で、手術時間は２９９分、手術侵襲のやや高い患者であった。輸血は無かった。
施行前の末梢血中の好中球生細胞率の簡易測定した結果、生細胞率は６０％未満であった。
手術終了１時間後及び２時間後に末梢血を採取し、末梢血好中球生細胞率、後期アポトーシス好中球、及び血小板数を測定した。
以上の結果をまとめて表１に示す。併せて、好中球除去に用いた血液循環用カラムの顆粒球／リンパ球の除去率、血小板の通過率、の結果を表１に示す。 [Comparative Example 1]
A elective surgery was performed on a 47-year-old male, all-colitis UC patient of wound classification class 2, ASA classification 1. The operation was an endoscopic operation, and the operation time was 299 minutes. There was no blood transfusion.
As a result of simple measurement of the neutrophil viable cell rate in the peripheral blood before the operation, the viable cell rate was less than 60%.
Peripheral blood was collected 1 hour and 2 hours after the end of surgery, and the peripheral blood neutrophil viable cell rate, late apoptotic neutrophils, and platelet count were measured.
The above results are summarized in Table 1. In addition, Table 1 shows the results of granulocyte / lymphocyte removal rate and platelet passage rate of the blood circulation column used for neutrophil removal.

Figure 2017113181
Figure 2017113181

クローン病患者５例、ＵＣ患者１例、腹腔内膿瘍患者１例の計７例で、好中球除去の施行後、好中球生細胞率は６０％未満から６０％以上に増加した。血液循環用カラムの血小板通過率が７５％以上であれば、３Ｌの血液処理でも血小板数は術前の９０％以上に維持されていることを確認した。施行により後期アポトーシス好中球数は減少した。
好中球除去の施行により、患者末梢血中の後期アポトーシス好中球の数が減少することも確認された。
本発明の血液循環用カラムを用いて感染リスクの高い患者の末梢血を体外循環処理すると、末梢血中の好中球生細胞率が増加し、感染リスクを低下させることができる。また、本発明の血液循環用カラムを用いて既に感染の起こっている患者の末梢血を体外循環処理すると、末梢血中の好中球生細胞率が増加し、感染菌の排除効率を著しく上げることができる。
本発明の血液循環用カラムを用いると、血小板の通過率が高く、止血能を維持する範囲に体内循環血液中の血小板数をコントロールすることができる。
本発明の遠心分離機においても、本発明の血液循環用カラムを用いた場合と同様の結果が得られた。
末梢血中の好中球生細胞率を測定した結果、フローサイトメーター測定で生細胞率が６０％未満のものは簡易測定でも６０％未満であった。抗凝固剤を含んだ末梢血を用いて簡易測定による生細胞率の判断に要する時間は、何れの例でも１時間以内であった。 In 7 cases, including 5 Crohn's disease patients, 1 UC patient, and 1 abdominal abscess patient, the neutrophil viable cell rate increased from less than 60% to more than 60% after neutrophil removal. When the platelet circulation rate of the blood circulation column was 75% or more, it was confirmed that the platelet count was maintained at 90% or more before the operation even with 3 L blood treatment. The number of late apoptotic neutrophils was reduced by the administration.
It was also confirmed that the number of late apoptotic neutrophils in the patient's peripheral blood was reduced by neutrophil removal.
When the peripheral blood of a patient with a high risk of infection is treated by extracorporeal circulation using the blood circulation column of the present invention, the viable neutrophil cell rate in the peripheral blood increases and the risk of infection can be reduced. Further, when the peripheral blood of an already infected patient is treated by extracorporeal circulation using the blood circulation column of the present invention, the ratio of viable neutrophil cells in the peripheral blood is increased, and the elimination efficiency of infectious bacteria is remarkably increased. be able to.
When the column for blood circulation of the present invention is used, the platelet passage rate is high, and the number of platelets in the blood circulating in the body can be controlled within a range where the hemostatic ability is maintained.
In the centrifuge of the present invention, the same result as that obtained when the blood circulation column of the present invention was used was obtained.
As a result of measuring the neutrophil viable cell ratio in the peripheral blood, those having a viable cell ratio of less than 60% by flow cytometer measurement were less than 60% even by simple measurement. The time required for the determination of the viable cell ratio by simple measurement using peripheral blood containing an anticoagulant was within 1 hour in any example.

本発明における血液循環用カラム又は遠心分離機を用いることで、末梢血中の好中球生細胞率が６０％未満である適用対象において、好中球生細胞率を６０％以上にすることができ、医療分野において産業上の利用可能性を有する。   By using the blood circulation column or the centrifuge in the present invention, the neutrophil viable cell rate may be 60% or more in the application target in which the peripheral neutrophil viable cell rate is less than 60%. And has industrial applicability in the medical field.

Claims (14)

好中球を含む白血球に対して親和性を有する担体を充填した血液循環用カラムであって、末梢血中の好中球生細胞率が６０％未満であるときに好中球除去に用いられる、血液循環用カラム。   A column for blood circulation packed with a carrier having affinity for leukocytes including neutrophils, and used for neutrophil removal when the percentage of viable neutrophils in peripheral blood is less than 60% , Blood circulation column. リンパ球よりも好中球と親和性がある形態を有する、及び／又はリンパ球よりも好中球と親和性がある高分子を有する、請求項１に記載の血液循環用カラム。   The blood circulation column according to claim 1, wherein the blood circulation column has a form having affinity for neutrophils rather than lymphocytes and / or a polymer having affinity for neutrophils rather than lymphocytes. リンパ球の除去率が７０％以下である、請求項１又は２に記載の血液循環用カラム。   The blood circulation column according to claim 1 or 2, wherein the removal rate of lymphocytes is 70% or less. 血小板の通過率が７５％以上である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の血液循環用カラム。   The blood circulation column according to any one of claims 1 to 3, wherein a platelet passage rate is 75% or more. 繊維状担体又は粒状担体が充填され、該担体の表面に親水性高分子を有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の血液循環用カラム。   The column for blood circulation according to any one of claims 1 to 4, which is filled with a fibrous carrier or a granular carrier and has a hydrophilic polymer on the surface of the carrier. 親水性高分子が塩基性官能基と非イオン性親水基とを有する、請求項５に記載の血液循環用カラム。   The blood circulation column according to claim 5, wherein the hydrophilic polymer has a basic functional group and a nonionic hydrophilic group. 塩基性官能基がジメチルアミノエチルメタクリレート由来であり、且つ非イオン性親水基が２−ヒドロキシエチルメタクリレート由来である、請求項６に記載の血液循環用カラム。   The blood circulation column according to claim 6, wherein the basic functional group is derived from dimethylaminoethyl methacrylate and the nonionic hydrophilic group is derived from 2-hydroxyethyl methacrylate. 繊維状担体が平均繊維径１．４μｍ以上２．６μｍ以下である担体を含む、請求項５〜７のいずれか１項に記載の血液循環用カラム。   The blood circulation column according to any one of claims 5 to 7, wherein the fibrous carrier includes a carrier having an average fiber diameter of 1.4 µm or more and 2.6 µm or less. 繊維状担体が平均繊維径８μｍ以上１４μｍ以下である担体をさらに含む、請求項８に記載の血液循環用カラム。   The blood circulation column according to claim 8, wherein the fibrous carrier further comprises a carrier having an average fiber diameter of 8 µm to 14 µm. 繊維状担体が不織布である、請求項５〜９のいずれか１項に記載の血液循環用カラム。   The blood circulation column according to any one of claims 5 to 9, wherein the fibrous carrier is a nonwoven fabric. 繊維状担体の臨界湿潤表面張力が生理的溶液の表面張力以上である、請求項５〜１０のいずれか１項に記載の血液循環用カラム。   The blood circulation column according to any one of claims 5 to 10, wherein the critical wet surface tension of the fibrous carrier is equal to or higher than the surface tension of the physiological solution. 体外循環式遠心分離法で用いる遠心分離機からなり、末梢血中の好中球生細胞率が６０％未満であるあるときに好中球除去に用いられる、遠心分離機。   A centrifuge comprising a centrifuge used in an extracorporeal circulation centrifuge, and used for neutrophil removal when the viable neutrophil cell rate in peripheral blood is less than 60%. 潰瘍性大腸炎、大腸穿孔、食道癌、直腸癌開腹術後患者であって創分類クラス２以上の患者若しくは手術侵襲の高い患者、又は感染症を有している患者のための、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の血液循環用カラム又は請求項１２に記載の遠心分離機。   For patients with ulcerative colitis, colon perforation, esophageal cancer, rectal cancer laparotomy, patients with wound class 2 or higher, patients with high surgical invasiveness, or patients with infection The column for blood circulation of any one of -11, or the centrifuge of Claim 12. 末梢血中の好中球生細胞率が６０％未満であることを血球測定手段で確認後に使用する、請求項１〜１１若しくは１３のいずれか１項に記載の血液循環用カラム又は請求項１２若しくは１３に記載の遠心分離機。   The blood circulation column according to any one of claims 1 to 11 or 13, which is used after confirmation by a blood cell measurement means that the neutrophil viable cell ratio in peripheral blood is less than 60%. Or the centrifuge of 13.
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