JP2017031087A

JP2017031087A - PRODUCTION METHOD OF α-GLUCOSYLRUTIN-CONTAINING PTERIDINE DERIVATIVE NANOPARTICLE, AND α-GLUCOSYLRUTIN-CONTAINING PTERIDINE DERIVATIVE NANOPARTICLE

Info

Publication number: JP2017031087A
Application number: JP2015152068A
Authority: JP
Inventors: 和紀門田; Kazunori Kadota; 戸塚　裕一; Yuichi Totsuka; 裕一戸塚; 敦史長井; Atsushi Nagai; 相澤　恭; Yasushi Aizawa; 恭相澤
Original assignee: Toyo Sugar Refining Co Ltd
Current assignee: Toyo Sugar Refining Co Ltd
Priority date: 2015-07-31
Filing date: 2015-07-31
Publication date: 2017-02-09
Anticipated expiration: 2035-07-31
Also published as: JP6612081B2

Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To provide methods of producing a nanoparticle of a pteridine derivative, such as folic acid, which has a small particle diameter and in which temporal aggregation is suppressed.SOLUTION: A method of producing α-glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles comprises a step of making a particulate composition with a median diameter of 1000 nm or less (preferably 100 nm or less) by the grinding treatment of a mixture containing 0.9 pt.wt. or more of α-glucosylrutin, such as α-mono-glucosylrutin, with respect to 1 pt.wt. of a pteridine derivative, such as folic acid. As the grinding treatment, for example, wet grinding treatment using bead mill is preferable.SELECTED DRAWING: None

Description

本発明は、葉酸に代表されるプテリジン誘導体を含有するナノ粒子の製造方法、および典型的にはその製造方法によって得られる、プテリジン誘導体を含有するナノ粒子に関する。 The present invention relates to a method for producing nanoparticles containing a pteridine derivative typified by folic acid, and a nanoparticle containing a pteridine derivative, typically obtained by the production method.

葉酸は、核酸およびアミノ酸の合成および代謝において、１つの炭素原子を含む断片の受け渡しを担っている必須の要素であり、先天性神経管閉塞障害のリスクの低下、心血管疾のリスクの減少、精神疾患との関係などにおける役割について注目されている。また、葉酸は、特定保健用食品のうち、疾病リスク低減に資する旨の表示が許可されており、通常の食品からの摂取量を踏まえ、特定保健用食品では１日あたりの摂取目安量が４００〜１，０００μｇと設定されている。このように、葉酸は医薬品またはそれに準ずる用途において魅力的な効果を有するが、水に溶けにくく（１０μｇ／ｍＬ以下）、また光、酸素、温度等によって分解しやすいという欠点を持つ。そのため、葉酸の水に対する溶解性を改善し、物理化学的な安定性を向上させるための手法が求められている。 Folic acid is an essential element responsible for the delivery of fragments containing a single carbon atom in the synthesis and metabolism of nucleic acids and amino acids, reducing the risk of congenital neural tube obstruction, reducing the risk of cardiovascular disease, Attention has been focused on its role in relation to mental illness. In addition, the indication that folic acid contributes to the reduction of disease risk among the foods for specified health use is permitted, and based on the intake from normal foods, the recommended intake per day for food for specified health use is 400. It is set to ˜1,000 μg. As described above, folic acid has an attractive effect in pharmaceuticals or similar uses, but has a drawback that it is hardly soluble in water (less than 10 μg / mL) and is easily decomposed by light, oxygen, temperature, and the like. Therefore, a method for improving the solubility of folic acid in water and improving the physicochemical stability is required.

特許文献１（特開２０１２−２２９１９４号公報）には、酵素処理ルチンと、スチルベン誘導体（レスベラトロール等）、クルクミノイド（クルクミン等）、プテリジン誘導体（葉酸等）およびプリン誘導体（グアニン等）からなる群より選ばれる少なくとも１種の化合物とを含む溶解性組成物が記載されている。実施例では、そのような溶解性組成物を調製することで、酵素処理ルチンを水中で併存させることにより、葉酸等の上記所定の化合物の水に対する溶解度が向上するとともに、経時での沈殿の発生を抑制し、光照射に対する分解も抑制するといった溶解安定性も向上することが例証されている。また、特許文献１の実施例には、まず葉酸を５％ＮａＯＨ水溶液に溶解させて１％の葉酸溶液を調製し、該葉酸溶液に１％の酵素処理ルチンの水溶液を加えて攪拌した後、所定のｐＨのクエン酸緩衝液を加えることで得られた葉酸水溶液は、５時間静置しても沈殿が生じず、透明な溶液であることが開示されている。さらに葉酸の水溶液における光安定性も向上することが開示されている。いずれの実施例においても、葉酸に対して重量比で２倍以上の酵素処理ルチンが使用されている。また、実施例には、ＮａＯＨ水溶液を用いたのは、高ｐＨにすることにより、葉酸の溶解性を向上させるためであることが記載されている。 Patent Document 1 (Japanese Patent Application Laid-Open No. 2012-229194) includes enzyme-treated rutin, a stilbene derivative (resveratrol, etc.), a curcuminoid (curcumin, etc.), a pteridine derivative (folic acid, etc.), and a purine derivative (guanine, etc.). A soluble composition comprising at least one compound selected from the group is described. In the examples, by preparing such a soluble composition, the enzyme-treated rutin is allowed to coexist in water, so that the solubility of the predetermined compound such as folic acid in water is improved, and precipitation occurs over time. It has been demonstrated that the dissolution stability is also improved, such as the suppression of decomposition and the suppression of light irradiation degradation. In Examples of Patent Document 1, first, folic acid is dissolved in a 5% NaOH aqueous solution to prepare a 1% folic acid solution. After the 1% enzyme-treated rutin aqueous solution is added to the folic acid solution and stirred, It is disclosed that an aqueous folic acid solution obtained by adding a citrate buffer solution having a predetermined pH does not cause precipitation even when allowed to stand for 5 hours, and is a transparent solution. Furthermore, it is disclosed that the light stability in an aqueous solution of folic acid is also improved. In any of the Examples, enzyme-treated rutin having a weight ratio of 2 times or more with respect to folic acid is used. Moreover, it is described in the Examples that the NaOH aqueous solution was used to improve the solubility of folic acid by increasing the pH.

このように、特許文献１に開示の技術では、溶解安定性や光安定性の向上した葉酸の水溶液を得るためには、酵素処理ルチンの水溶液と混合する前に、高ｐＨの工程を経る必要がある。この場合、高ｐＨの工程を経るために、葉酸そのものが不安定になる環境に晒されるという問題や、高ｐＨの溶液に溶解しにくい化合物には適用できないという問題がある。また、溶解性の改善の効果にはまだ改良の余地もある。 Thus, in the technique disclosed in Patent Document 1, in order to obtain an aqueous solution of folic acid with improved dissolution stability and light stability, it is necessary to go through a high pH step before mixing with the aqueous solution of enzyme-treated rutin. There is. In this case, there is a problem that folic acid itself is exposed to an environment where it becomes unstable due to the high pH step, and it cannot be applied to a compound that is difficult to dissolve in a high pH solution. There is still room for improvement in the effect of improving solubility.

特許文献２（特開２０１５−０３０６９０号公報）には、酵素処理ルチンと、プテリジン誘導体（特に葉酸）を含有する、生体吸収性が向上した組成物が記載されている。特許文献２には、葉酸の水への溶解度についての記載はなく、また混合を粉砕処理によって行うことについての記載もないが、実施例では、酵素処理ルチン（αＧルチンＰＳ）９ｍｇと葉酸１ｍｇとデキストリン９０ｍｇとを常温かつ常圧で十分に混合して組成物を得たことが開示されている。 Patent Document 2 (Japanese Patent Laid-Open No. 2015-030690) describes a composition with improved bioabsorbability, which contains enzyme-treated rutin and a pteridine derivative (particularly folic acid). In Patent Document 2, there is no description about the solubility of folic acid in water, and there is no description about mixing by pulverization, but in the examples, 9 mg of enzyme-treated rutin (αG rutin PS) and 1 mg of folic acid It is disclosed that 90 mg of dextrin was sufficiently mixed at normal temperature and normal pressure to obtain a composition.

特許文献３（特表２０１３−５４０７３７号公報）には、その背景技術の記載において、難溶性薬物の溶解性を高めてその吸着（吸収）及び生物学的利用能を増加させるための一般的な方法として、薬物粒子サイズを縮小すること、すなわちナノ粒子化することが知られているが、高い表面エネルギーを有するナノ粒子は容易に凝集してしまうという問題点を有することが記載されている。そして、その問題を解消するための医薬または化粧品組成物として、ナノ多孔性葉酸（葉酸およびシリカ前駆体を含有する溶液を調製し、熱処理をしてシリカ前駆体を加水分解および凝集させることにより得られる、規則性メソポーラス材料：特許文献４（特表２０１１−５１４３０２号公報）参照）の粒子のナノ多孔性チャンネル内部に、難水溶性の医薬有効成分を組み込んだ組成物が開示されている。 In patent document 3 (Japanese translations of PCT publication No. 2013-540737 gazette), in description of the background art, it is general to improve the solubility (absorption) and bioavailability of a poorly soluble drug. As a method, it is known to reduce the drug particle size, that is, to form nanoparticles, but it is described that nanoparticles having high surface energy have a problem that they easily aggregate. Then, as a pharmaceutical or cosmetic composition for solving the problem, nanoporous folic acid (obtained by preparing a solution containing folic acid and a silica precursor, hydrolyzing and aggregating the silica precursor by heat treatment) Regular mesoporous materials: Patent Document 4 (see JP-T-2011-514302) discloses a composition in which a poorly water-soluble pharmaceutically active ingredient is incorporated inside a nanoporous channel of particles.

特開２０１２−２２９１９４号公報JP 2012-229194 A 特開２０１５−０３０６９０号公報Japanese Patent Laying-Open No. 2015-030690 特表２０１３−５４０７３７号公報Special table 2013-540737 gazette 特表２０１１−５１４３０２号公報Special table 2011-514302 gazette

本発明は、粒子径が小さくかつ経時的な凝集を抑制した、葉酸等のプテリジン誘導体のナノ粒子の製造方法、および典型的にはその製造方法によって得られる、プテリジン誘導体のナノ粒子を提供することを課題とする。 The present invention provides a method for producing nanoparticles of a pteridine derivative such as folic acid, which has a small particle size and suppresses aggregation over time, and a pteridine derivative nanoparticle typically obtained by the production method. Is an issue.

本発明者らは、葉酸等のプテリジン誘導体とα−グルコシルルチンとを特定の比率で含む混合物を粉砕処理することにより、粒子径がナノメートルオーダーの微粒子を調製することができること、それによって当該プテリジン誘導体の水中での凝集が抑制され、水に対する溶解性が著しく改善されること、さらには光に対する安定性も改善されることなどを見出し、本発明を完成させるに至った。 The present inventors can prepare fine particles having a particle diameter of nanometer order by pulverizing a mixture containing a pteridine derivative such as folic acid and α-glucosyl rutin in a specific ratio, and thereby the pteridine The inventors have found that the aggregation of the derivative in water is suppressed, the solubility in water is remarkably improved, and the stability to light is improved, and the present invention has been completed.

すなわち、本発明の一側面において、下記の［１］〜［９］に係るα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子の製造方法が提供され、別の側面において下記の［１０］〜［１８］に係るα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子が提供され、さらなる側面において下記の［１９］に係る食品、化粧品、医薬品または飼料が提供される。 That is, in one aspect of the present invention, a method for producing α-glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles according to the following [1] to [9] is provided, and in another aspect, the following [10] to [18] Such α-glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles are provided, and in a further aspect, a food, cosmetic, pharmaceutical or feed according to the following [19] is provided.

［１］
プテリジン誘導体１重量部に対してα−グルコシルルチンを０．９重量部以上含む混合物を、粉砕処理により、メディアン径が１０００ｎｍ以下の粒子状の組成物にする工程を含むことを特徴とする、α−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子の製造方法。 [1]
Characterized in that it comprises a step of converting a mixture containing 0.9 parts by weight or more of α-glucosyl rutin to 1 part by weight of a pteridine derivative into a particulate composition having a median diameter of 1000 nm or less by pulverization. -Method for producing glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles.

［２］
前記プテリジン誘導体が葉酸である、項１に記載のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子の製造方法。 [2]
Item 2. The method for producing α-glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles according to Item 1, wherein the pteridine derivative is folic acid.

［３］
前記α−グルコシルルチンがα−モノグルコシルルチンである、項１または２に記載のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子の製造方法。 [3]
Item 3. The method for producing α-glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles according to Item 1 or 2, wherein the α-glucosylrutin is α-monoglucosylrutin.

［４］
前記混合物がさらにイソケルシトリンを含有する、項３に記載のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子の製造方法。 [4]
Item 4. The method for producing α-glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles according to Item 3, wherein the mixture further contains isoquercitrin.

［５］
前記粒子状の組成物のメディアン径が１００ｎｍ以下である、項１〜４のいずれか一項に記載のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子の製造方法。 [5]
Item 5. The method for producing α-glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles according to any one of Items 1 to 4, wherein the median diameter of the particulate composition is 100 nm or less.

［６］
前記粉砕処理が湿式粉砕処理である、項１〜５のいずれか一項に記載のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子の製造方法。 [6]
Item 6. The method for producing α-glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles according to any one of Items 1 to 5, wherein the pulverization treatment is a wet pulverization treatment.

［７］
前記湿式粉砕処理がビーズミルを用いたものである、項１〜６のいずれか一項に記載のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子の製造方法。 [7]
Item 7. The method for producing α-glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles according to any one of Items 1 to 6, wherein the wet pulverization treatment uses a bead mill.

［８］
前記粉砕処理が湿式粉砕処理であり、前記粒子状の組成物にする工程の後に、前記粒子状の組成物を含有するスラリーを乾燥粉末処理する工程をさらに含む、項６または７に記載のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子の製造方法。 [8]
Item 8. The α according to Item 6 or 7, wherein the pulverization treatment is a wet pulverization treatment, and further includes a step of dry-powdering the slurry containing the particulate composition after the step of forming the particulate composition. -Method for producing glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles.

［９］
前記乾燥粉末処理が凍結乾燥法を用いたものである、項８に記載のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子の製造方法。 [9]
Item 9. The method for producing α-glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles according to Item 8, wherein the dry powder treatment uses a freeze-drying method.

［１０］
プテリジン誘導体１重量部に対してα−グルコシルルチンを０．９重量部以上含有する混合物を粉砕処理することにより得られる、メディアン径が１０００ｎｍ以下である粒子状の組成物であることを特徴とする、α−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子。 [10]
It is a particulate composition having a median diameter of 1000 nm or less, obtained by pulverizing a mixture containing 0.9 part by weight or more of α-glucosyl rutin with respect to 1 part by weight of a pteridine derivative. , Α-Glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles.

［１１］
前記プテリジン誘導体が葉酸である、項１０に記載のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子。 [11]
Item 11. The α-glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles according to Item 10, wherein the pteridine derivative is folic acid.

［１２］
前記α−グルコシルルチンがα−モノグルコシルルチンである、項１０または１１に記載のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子。 [12]
Item 12. The α-glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles according to Item 10 or 11, wherein the α-glucosylrutin is α-monoglucosylrutin.

［１３］
前記混合物がさらにイソケルシトリンを含有する、項１０〜１２のいずれか一項に記載のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子。 [13]
The α-glucosyl rutin-containing pteridine derivative nanoparticles according to any one of Items 10 to 12, wherein the mixture further contains isoquercitrin.

［１４］
前記粒子状物質のメディアン径が１００ｎｍ以下である、項１０〜１３のいずれか一項に記載のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子。 [14]
Item 14. The α-glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles according to any one of Items 10 to 13, wherein the particulate material has a median diameter of 100 nm or less.

［１５］
前記粉砕処理が湿式粉砕処理である、項１０〜１４のいずれか一項に記載のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子。 [15]
Item 15. The α-glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles according to any one of Items 10 to 14, wherein the pulverization treatment is a wet pulverization treatment.

［１６］
前記湿式粉砕処理がビーズミルを用いたものである、項１５に記載のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子。 [16]
Item 16. The α-glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles according to Item 15, wherein the wet pulverization treatment uses a bead mill.

［１７］
前記粉砕処理が湿式粉砕処理であり、前記粒子状の組成物が、それを含有するスラリーの乾燥粉末である、項１５または１６に記載のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子。 [17]
Item 17. The α-glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles according to Item 15 or 16, wherein the pulverization treatment is a wet pulverization treatment, and the particulate composition is a dry powder of a slurry containing the composition.

［１８］
前記乾燥粉末処理が凍結乾燥法を用いたものである、項１７に記載のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子。 [18]
Item 18. The α-glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles according to Item 17, wherein the dry powder treatment uses a freeze-drying method.

［１９］
項１０〜１８のいずれか一項に記載のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子を含有する、食品、化粧品、医薬品または飼料。 [19]
Item 19. A food, cosmetic, pharmaceutical product, or feed containing the α-glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles according to any one of Items 10 to 18.

なお、上記所定量のプテリジン誘導体およびα−グルコシルルチンを含む混合物を「粉砕処理することにより得られる」本発明に係る粒子状の組成物は、粉砕処理の過程において微粒子化されたプテリジン誘導体とα−グルコシルルチンとの間に相互作用が働いていると考えられ、その強度や形態は、単純に原末を混合したときとは相違している可能性があるが、現時点でその詳細は特定されていない。また、本発明に係る粒子状の組成物は、メディアン径が１０００ｎｍ以下であるという点で、メディアン径が通常１０００ｎｍよりも大きい、粉砕処理が施されていない葉酸の粉末（葉酸原末）からなる混合物とは異なる特性を有するが、そのようなメディアン径以外にも、たとえば“粉末Ｘ線回折により確認される葉酸に由来する回折ピークが葉酸原末よりも低い、ないしほとんど確認できない”（図５参照）といった特徴や、“粒度分布（体積分布）の形状が葉酸原末よりも正規分布に近い”（図２参照）といった特徴を有している。したがって、本発明に係る粒子状の組成物は、必要に応じて「粉砕処理することにより得られる」という文言を削除したり、当該文言に代えて“粉末Ｘ線回折により確認される葉酸に由来する回折ピークが葉酸原末よりも低い、ないしほとんど確認できない”および／または“粒度分布（体積分布）の形状が葉酸原末よりも正規分布に近い”などの文言を用いて規定したりすることも可能である。 In addition, the particulate composition according to the present invention “obtained by pulverizing a mixture containing the predetermined amount of pteridine derivative and α-glucosyl rutin” includes the pteridine derivative and α -It seems that there is an interaction with glucosylrutin, and its strength and form may be different from those when the bulk powder is simply mixed. Not. In addition, the particulate composition according to the present invention is composed of folic acid powder (folic acid bulk powder) that has a median diameter of 1000 nm or less and that is usually larger than 1000 nm and that has not been pulverized. Other than such median diameter, for example, “the diffraction peak derived from folic acid confirmed by powder X-ray diffraction is lower than that of folic acid bulk powder or hardly confirmed” (FIG. 5). For example) and “the shape of the particle size distribution (volume distribution) is closer to the normal distribution than the bulk of folic acid” (see FIG. 2). Therefore, the particulate composition according to the present invention may be deleted from the phrase “obtained by pulverization” as necessary, or may be derived from “folic acid confirmed by powder X-ray diffraction” instead of the phrase. The diffraction peak to be generated is lower than that of folic acid bulk powder or is hardly identifiable, and / or “The shape of particle size distribution (volume distribution) is closer to the normal distribution than folic acid bulk powder”. Is also possible.

本発明のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子は、プテリジン誘導体単独のナノ粒子よりも粒子径が小さくでき、かつ粒子の経時的な凝集も抑制することができる。さらに、プテリジン誘導体の溶解性も改善することができ、たとえばメディアン径が１００ｎｍ以下であるα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子を水中に分散させた状態は、実質的にプテリジン誘導体が水中に溶解しているのと同じような状態といえる。 The α-glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles of the present invention can have a smaller particle diameter than the pteridine derivative-only nanoparticles, and can also suppress aggregation of particles over time. Furthermore, the solubility of the pteridine derivative can also be improved. For example, when the α-glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles having a median diameter of 100 nm or less are dispersed in water, the pteridine derivative is substantially dissolved in water. It can be said that it is in the same state as it is.

また、本発明のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子は粉砕処理、例えばビーズミルを用いた湿式粉砕処理により製造することができるが、α−グルコシルルチンが粉砕補助作用を発揮し、長時間（例えば３００分間）処理を継続しても粒子の凝集が起きず、平均粒子径を極めて小さな範囲（例えば１００ｎｍ以下）に収めることができる。さらに、湿式粉砕処理の際には比較的長時間に亘って（例えば１８０分間）光に曝されることがあるが、α−グルコシルルチンの作用によりプテリジン誘導体の光安定性も向上し、粉砕処理終了時点でも粉砕処理開始時点とほぼ同量のプテリジン誘導体の含有量を維持することができる。本発明においては、葉酸に対するα−グルコシルルチンの添加量が比較的少量でも、例えば葉酸：α−グルコシルルチンの重量比が１：０．９であっても、分散（溶解）安定性や光安定性についての作用効果が奏される。 The α-glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles of the present invention can be produced by a pulverization process, for example, a wet pulverization process using a bead mill. Even if the treatment is continued for 300 minutes, particle aggregation does not occur, and the average particle diameter can be kept within a very small range (for example, 100 nm or less). Furthermore, the wet milling process may be exposed to light for a relatively long time (for example, 180 minutes), but the light stability of the pteridine derivative is also improved by the action of α-glucosylrutin, and the milling process is performed. Even at the end, the content of the pteridine derivative can be maintained in substantially the same amount as that at the start of the grinding treatment. In the present invention, even when the amount of α-glucosyl rutin added to folic acid is relatively small, for example, even when the weight ratio of folic acid: α-glucosyl rutin is 1: 0.9, dispersion (dissolution) stability and light stability The effect about sex is played.

図１は、実験例１で測定した各試験物のメディアン径（Ｄ₅₀）の測定結果を表すグラフである。測定値は３サンプルの平均値であり、バーが付いているものはその標準誤差を表す。FIG. 1 is a graph showing the measurement result of the median diameter (D ₅₀ ) of each test sample measured in Experimental Example 1. The measured value is an average value of three samples, and those with bars represent the standard error. 図２は、実験例１で測定した葉酸原末および試料５（葉酸：αＧルチンＰＳ＝１：１０のビーズミル処理物）の粒子径分布を表すグラフである。FIG. 2 is a graph showing the particle size distribution of the folic acid bulk powder and sample 5 (folic acid: αG rutin PS = 1: 10 bead mill processed product) measured in Experimental Example 1. 図３は、実験例３で測定した各試験物中の葉酸の溶解度を表すグラフである。対照２〜５はいずれも、葉酸：αＧルチンＰＳ＝１：１０の混合物を用いて調製されたものである。ビーズミル処理物である試料４および５のカッコ内の数値は、葉酸：αＧルチンＰＳの比率を表す。FIG. 3 is a graph showing the solubility of folic acid in each test article measured in Experimental Example 3. Controls 2-5 were all prepared using a mixture of folic acid: αG rutin PS = 1: 10. Numerical values in parentheses of Samples 4 and 5 which are processed bead mills represent a ratio of folic acid: αG rutin PS. 図４は、実験例４で行った各試験物中の葉酸の光安定性試験の結果を表すグラフである。試料１〜４はいずれもビーズミル処理物であり、試料２，４，５のカッコ内の数値は葉酸：αＧルチンＰＳの比率を表す。FIG. 4 is a graph showing the results of a photostability test for folic acid in each test article performed in Experimental Example 4. Samples 1 to 4 are all bead mill processed products, and the numerical values in parentheses of samples 2, 4 and 5 represent the ratio of folic acid: αG rutin PS. 図５は、実験例５で測定した粉体Ｘ線回折の結果を表すチャートである。試料１〜４はいずれもビーズミル処理物であり、試料２，４および５ならびに「物理混合」のカッコ内の数値は葉酸：αＧルチンＰＳの比率を表す。FIG. 5 is a chart showing the results of powder X-ray diffraction measured in Experimental Example 5. Samples 1 to 4 are all bead-milled products, and the numerical values in parentheses of Samples 2, 4 and 5 and “physical mixing” represent the ratio of folic acid: αG rutin PS.

−α−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子−
本発明のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子（本明細書において「本発明のナノ粒子」と略称することもある。）は、プテリジン誘導体１重量部に対してα−グルコシルルチンを０．９重量部以上含有する混合物を粉砕処理することにより得られる、メディアン径が１０００ｎｍ以下である粒子状の組成物である。 -Pteridine derivative nanoparticles containing α-glucosyl rutin-
The α-glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles of the present invention (sometimes abbreviated as “the nanoparticle of the present invention” in the present specification) are 0.9% of α-glucosylrutin per 1 part by weight of the pteridine derivative. It is a particulate composition having a median diameter of 1000 nm or less, obtained by pulverizing a mixture containing at least parts by weight.

ここで、プテリジン誘導体の代表例である葉酸の分子量は約４４１であり、α−グルコシルルチンの典型例であるα−モノグルコシルルチンの分子量は約７７３であるので、「プテリジン誘導体１重量部に対してα−グルコシルルチンを０．９重量部以上」という規定は、上記代表例および典型例を用いた換算に基づいて、「プテリジン誘導体１モルに対して０．５モル以上」（４４１×０．９／７７３＝０．５１）と言い換えることができる。 Here, the molecular weight of folic acid, which is a typical example of a pteridine derivative, is about 441, and the molecular weight of α-monoglucosylrutin, which is a typical example of α-glucosylrutin, is about 773. The definition of “0.9 part by weight or more of α-glucosyl rutin” is based on the conversion using the above representative examples and typical examples, “0.5 moles or more per 1 mole of pteridine derivative” (441 × 0. In other words, 9/773 = 0.51).

プテリジン誘導体１重量部に対するα−グルコシルルチンの含有量の上限値は特に定められるものではなく、本発明の作用効果を奏する範囲で適宜調節することができる。例えば、本発明のナノ粒子は、プテリジン誘導体１重量部に対してα−グルコシルルチンを９重量部、またはそれ未満の量で含有する混合物を粉砕処理することにより得られるものであってもよい。 The upper limit of the content of α-glucosyl rutin relative to 1 part by weight of the pteridine derivative is not particularly defined, and can be appropriately adjusted within a range where the effects of the present invention are exhibited. For example, the nanoparticles of the present invention may be obtained by pulverizing a mixture containing 9 parts by weight of α-glucosyl rutin or less than 1 part by weight of the pteridine derivative.

＜プテリジン誘導体＞
プテリジン誘導体は、下記式（Ａ１）で表される化合物である。 <Pteridine derivative>
The pteridine derivative is a compound represented by the following formula (A1).

式（Ａ１）中の各記号の詳細は、以下のとおりである。

Details of each symbol in the formula (A1) are as follows.

Ｒ¹は、−ＯＨ、＝Ｏまたは−ＮＨ₂である。Ｒ²、Ｒ⁴およびＲ⁵は、それぞれ独立に水素原子または炭素数１〜５のアルキル基である。Ｒ³、Ｒ⁶およびＲ⁷は、それぞれ独立に水素原子、ハロゲン原子、アルキル基、ヒドロキシ基、アルコキシ基、アルコキシアルキル基、アルデヒド基、アルキルエステル基、アミノ基、アルキルアミノ基、シアノ基またはニトロ基である。ａ〜ｄは、それぞれ独立に０または１である。ｅは、０〜１０の整数である。 R ¹ is —OH, ═O or —NH ₂ . R ² , R ⁴ and R ⁵ are each independently a hydrogen atom or an alkyl group having 1 to 5 carbon atoms. R ³ , R ⁶ and R ⁷ are each independently a hydrogen atom, halogen atom, alkyl group, hydroxy group, alkoxy group, alkoxyalkyl group, aldehyde group, alkyl ester group, amino group, alkylamino group, cyano group or nitro group It is a group. a to d are each independently 0 or 1. e is an integer of 0-10.

（１）〜（５）の結合は、以下の場合を除き、単結合である。
（１）の結合は、Ｒ¹が＝Ｏ以外の基であり、かつ、ａが０の場合、二重結合である。
（２）の結合は、（１）の結合が単結合であり、かつ、ａが０の場合、二重結合である。
（３）の結合は、（２）の結合が単結合であり、かつ、ｂが０の場合、二重結合である。
（４）の結合は、ｃが０の場合、二重結合である。
（５）の結合は、ｄが０の場合、二重結合である。 The bonds (1) to (5) are single bonds except in the following cases.
The bond of (1) is a double bond when R ¹ is a group other than ═O and a is 0.
The bond (2) is a double bond when the bond (1) is a single bond and a is 0.
The bond of (3) is a double bond when the bond of (2) is a single bond and b is 0.
The bond of (4) is a double bond when c is 0.
The bond of (5) is a double bond when d is 0.

Ｒ³、Ｒ⁶およびＲ⁷において、アルキル基としては、例えば、炭素数１〜２０の直鎖状または分岐状の炭化水素基が挙げられ、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基およびペンチル基が挙げられ；アルコキシ基としては、例えば、メトキシ基およびエトキシ基が挙げられ；アルコキシアルキル基としては、例えば、ジエトキシメチル基が挙げられ；アルキルエステル基としては、例えば、メチルエステル基およびエチルエステル基が挙げられ；アルキルアミノ基としては、例えば、メチルアミノ基およびジメチルアミノ基が挙げられる。 In R ³ , R ⁶ and R ⁷ , examples of the alkyl group include linear or branched hydrocarbon groups having 1 to 20 carbon atoms, such as a methyl group, an ethyl group, a propyl group, an isopropyl group, and butyl. An alkoxy group includes, for example, a methoxy group and an ethoxy group; an alkoxyalkyl group includes, for example, a diethoxymethyl group; and an alkyl ester group includes, for example, a methyl ester Groups and ethyl ester groups; examples of alkylamino groups include methylamino and dimethylamino groups.

Ｒ²、Ｒ⁴およびＲ⁵における炭素数１〜５のアルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基およびブチル基が挙げられる。
Ｒ³は水素原子、アルキル基、ヒドロキシ基、アルコキシ基、アルコキシアルキル基またはアミノ基であることが好ましく、アミノ基であることがより好ましく、Ｒ⁶は水素原子またはアルデヒド基であることが好ましく、Ｒ⁷は水素原子、アルキル基、ヒドロキシ基、アルコキシ基、アルコキシアルキル基、アミノ基またはアルキルアミノ基であることが好ましく、水素原子またはアルキル基であることがより好ましく、ｅは１または２であることが好ましい。 Examples of the alkyl group having 1 to ⁵ carbon atoms in R ² , R ⁴ and R ⁵ include a methyl group, an ethyl group, a propyl group, an isopropyl group, and a butyl group.
R ³ is preferably a hydrogen atom, an alkyl group, a hydroxy group, an alkoxy group, an alkoxyalkyl group or an amino group, more preferably an amino group, and R ⁶ is preferably a hydrogen atom or an aldehyde group, R ⁷ is preferably a hydrogen atom, an alkyl group, a hydroxy group, an alkoxy group, an alkoxyalkyl group, an amino group or an alkylamino group, more preferably a hydrogen atom or an alkyl group, and e is 1 or 2. It is preferable.

プテリジン誘導体の具体例としては、プテロイルモノグルタミン酸（葉酸）、プテロイルジ−γ−グルタミン酸、プテロイルトリグルタミン酸、プテロイルヘプタグルタミン酸、ホルミルテトラヒドロ葉酸、キサントプテリン、１０−ホルミルプテロイン酸、フォリン酸、メトトレキサートが挙げられる。これらの中でも、酵素処理ルチンを用いてナノ粒子化したときの、水に対する溶解性の改善効果に優れる観点から、また食品等の用途に対する有用性の観点から、葉酸（下記式参照）が好ましい。 Specific examples of pteridine derivatives include pteroyl monoglutamic acid (folic acid), pteroyldi-γ-glutamic acid, pteroyltriglutamic acid, pteroylheptaglutamic acid, formyltetrahydrofolic acid, xantopterin, 10-formylpteroic acid, folinic acid, Methotrexate is mentioned. Among these, folic acid (see the following formula) is preferable from the viewpoint of excellent solubility improvement effect in water when it is made into nanoparticles using enzyme-treated rutin and from the viewpoint of utility for foods and the like.

＜α−グルコシルルチンおよびイソケルシトリン＞

<Α-Glucosyl rutin and isoquercitrin>

α−グルコシルルチンは、「酵素処理ルチン」（「糖転移ルチン」と呼ばれることもある。）として知られている製品に主成分として含まれている化合物であって、式（III）で表される構造を有する化合物、すなわちルチンが有するルチノース残基中のグルコース残基に、α１→４結合により１または複数（２〜２０程度）のグルコースが結合した化合物である。本明細書において、α−グルコシルルチンのうち、グルコースが１つだけ結合したものを「α−モノグルコシルルチン」と称し、グルコースが２つ以上結合したものを「α−ポリグルコシルルチン」と称する。つまり、式（III）において、α−グルコシルルチンは一般的にｎが１〜２０の化合物であり、α−モノグルコシルルチンはｎが１の化合物であり、α−ポリグルコシルルチンは一般的にｎが２〜２０の化合物である。α−モノグルコシルルチンであっても、本発明の作用効果およびα−グルコシルルチンについての一般的な作用効果は問題なく発揮され、α−モノグルコシルルチンの分子量はα−ポリグルコシルルチンの分子量よりも小さいため、単位質量あたりの分子数はα−モノグルコシルルチンの方が多くなり、作用効果の上で有利であると考えられる。したがって、α−グルコシルルチンの一部または全部は、α−モノグルコシルルチンであることが好ましい。

α-Glucosylrutin is a compound contained as a main component in a product known as “enzyme-treated rutin” (sometimes referred to as “sugar-transferred rutin”), and is represented by the formula (III). That is, a compound in which one or more (about 2 to 20) glucoses are bonded to a glucose residue in a rutinose residue of rutin by an α1 → 4 bond. In the present specification, among α-glucosyl rutins, those in which only one glucose is bound are referred to as “α-monoglucosyl rutin”, and those in which two or more glucoses are bound are referred to as “α-polyglucosyl rutin”. That is, in the formula (III), α-glucosyl rutin is generally a compound having n of 1 to 20, α-monoglucosyl rutin is a compound having n of 1, and α-polyglucosyl rutin is generally n. Is a compound of 2-20. Even with α-monoglucosyl rutin, the effects of the present invention and the general effects of α-glucosyl rutin are exhibited without problems, and the molecular weight of α-monoglucosyl rutin is higher than the molecular weight of α-polyglucosyl rutin. Since it is small, α-monoglucosylrutin has a larger number of molecules per unit mass, which is considered advantageous in terms of action and effect. Accordingly, part or all of α-glucosylrutin is preferably α-monoglucosylrutin.

酵素処理ルチンは、α−グルコシル糖化合物（サイクロデキストリン、澱粉部分分解物など）の共存下で、ルチンに糖転移酵素（サイクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ（CGTase, EC 2.4.1.19）など、ルチンにグルコースを付加する機能を有する酵素）を作用させることにより得られる生成物（本明細書において「第１酵素処理ルチン」と呼ぶ。）である。第１酵素処理ルチンは、結合したグルコースの個数が異なる様々なα−グルコシルルチン、すなわちα−モノグルコシルルチンおよびそれ以外のα−グルコシルルチンからなる集合体と、未反応物であるルチンとを含有する組成物である。必要に応じて、例えば多孔性合成吸着材と適切な溶出液を用いて、第１酵素処理ルチンを精製することにより、糖供与体およびその他の不純物を除去し、さらにルチンの含有量を減らし、α−グルコシルルチンの純度を高めた第１酵素処理ルチン（α−グルコシルルチン精製物）が得られる。 Enzyme-treated rutin can be used in the presence of α-glucosyl sugar compounds (cyclodextrin, partially decomposed starch, etc.), and glycosyltransferases (cyclodextrin glucanotransferase (CGTase, EC 2.4.1.19), etc.) in rutin and glucose in rutin. It is a product (referred to herein as “first enzyme-treated rutin”) obtained by acting an enzyme having an additional function. The first enzyme-treated rutin contains various α-glucosylrutins having different numbers of bound glucose, that is, aggregates composed of α-monoglucosylrutin and other α-glucosylrutins, and unreacted rutin. Composition. If necessary, for example, by purifying the first enzyme-treated rutin using a porous synthetic adsorbent and an appropriate eluent, sugar donors and other impurities are removed, and the content of rutin is further reduced. The 1st enzyme processing rutin (alpha-glucosyl rutin refinement | purification product) which raised the purity of (alpha) -glucosyl rutin is obtained.

また、第１酵素処理ルチンを、α-１,４-グルコシド結合をグルコース単位で切断するグルコアミラーゼ活性を有する酵素、たとえばグルコアミラーゼ（EC 3.2.1.3）で処理し、複数のグルコースが付加されたα−グルコシルルチンにおいて、ルチン自体の（ルチノース残基中の）グルコース残基に直接付加されたグルコース残基を１つだけ残してそれ以外のグルコース残基を切断することにより、α−モノグルコシルルチンを多く含有する酵素処理ルチン（本明細書において「第２酵素処理ルチン」と呼ぶ。）を得ることができる。この酵素処理によって、ケルセチン骨格に直接結合しているルチノース残基中のグルコース残基が、ケルセチン骨格から切断されることはない。 In addition, the first enzyme-treated rutin was treated with an enzyme having a glucoamylase activity, such as glucoamylase (EC 3.2.1.3), which cleaves an α-1,4-glucoside bond in glucose units, and a plurality of glucoses were added. In α-glucosyl rutin, α-monoglucosyl rutin is cleaved by leaving only one glucose residue directly added to the glucose residue (in the rutinose residue) of rutin itself, leaving the other glucose residues cleaved. Can be obtained. In this specification, enzyme-treated rutin (referred to herein as “second enzyme-treated rutin”) can be obtained. By this enzyme treatment, the glucose residue in the rutinose residue directly bonded to the quercetin skeleton is not cleaved from the quercetin skeleton.

一方、イソケルシトリン（「イソクエルシトリン」と呼ばれることもある。）は、式（II）で表される構造を有する化合物、すなわちケルセチン骨格の７位の水酸基にβ−Ｄ−グルコースが結合した化合物、言い換えればルチンのルチノース残基中のラムノース残基が切断された化合物である。イソケルシトリンは、ルチンにラムノシダーゼ活性を有する酵素（たとえばヘスペリジナーゼ、ナリンギナーゼ）を作用させることにより産生することができるほか、次に述べるα−グルコシルイソケルシトリンを、α-１,４-グルコシド結合をグルコース単位で切断するグルコアミラーゼ活性を有する酵素、たとえばグルコアミラーゼ（EC 3.2.1.3）で処理し、ケルセチン骨格に直接結合するグルコース残基（もともとルチンにおけるルチノース残基に含まれていたグルコース残基）のみを残してそれ以外のグルコース残基を切断することにより産生することもできる。 On the other hand, isoquercitrin (sometimes called "isoquercitrin") is a compound having a structure represented by the formula (II), that is, β-D-glucose is bonded to the hydroxyl group at the 7-position of the quercetin skeleton. A compound, in other words, a compound in which the rhamnose residue in the rutinose residue of rutin is cleaved. Isoquercitrin can be produced by reacting rutin with an enzyme having rhamnosidase activity (for example, hesperidinase or naringinase). In addition, α-glucosylisoquercitrin described below can be converted into an α-1,4-glucoside bond. Glucose residue (glucose residue originally contained in the rutinose residue in rutin) treated with an enzyme with glucoamylase activity that cleaves at the glucose unit, such as glucoamylase (EC 3.2.1.3), and directly bound to the quercetin skeleton It can also be produced by cleaving other glucose residues, leaving only

また、α−グルコシルイソケルシトリンは、式（IV）で表される構造を有する化合物、すなわちイソケルシトリンが有する（ルチノース残基に含まれていた）グルコース残基に、α１→４結合により１または複数（２〜２０程度）のグルコースが結合した化合物である。α−グルコシルイソケルシトリンは、α−グルコシルルチンにラムノシダーゼ活性を有する酵素（たとえばヘスペリジナーゼ、ナリンギナーゼ）を作用させることにより、またはイソケルシトリンに糖転移酵素（例えばサイクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ（CGTase, EC 2.4.1.19））などを作用させることにより産生することができる。 Further, α-glucosyl isoquercitrin is a compound having a structure represented by the formula (IV), that is, a glucose residue (contained in a rutinose residue) possessed by isoquercitrin is linked by α1 → 4 bond. Or it is the compound which multiple (about 2-20) glucose couple | bonded. α-Glucosyl isoquercitrin is produced by allowing an enzyme having rhamnosidase activity (for example, hesperidinase or naringinase) to act on α-glucosyl rutin, or glycosyltransferase (for example, cyclodextrin glucanotransferase (CGTase, EC 2.4) to isoquercitrin. .1.19)) and the like can be produced.

α−グルコシルルチンは、例えば東洋精糖株式会社の製品「αＧルチンＰＳ」、「αＧルチンＰ」、「αＧルチンＨ」などに主成分として含まれている。このうち「αＧルチンＰＳ」は、α−モノグルコシルルチンを８０〜９０重量％、イソケルシトリンを５〜１０重量％含有する組成物である。このような組成物は、（ｉ）上述した第１酵素処理ルチンを調製する、（ｉｉ）第１酵素処理ルチンを、グルコアミラーゼ活性を有する酵素で処理し、α−グルコシルルチンをほとんど全てα−モノグルコシルルチンに変換する、（ｉｉｉ）同時にラムノシダーゼ活性を有する酵素で処理し、未反応のルチンをほとんど全てイソケルシトリンに変換する、という手順により製造することができる。本発明のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子を製造するための、粉砕処理に供される混合物を調製する際には、α−グルコシルルチンとして上記の各製品、例えば「αＧルチンＰＳ」を配合することができる。したがって、粉砕処理に供される混合物は、α−グルコシルルチンに加えて、さらにイソケルシトリンを含有していてもよい。 α-Glucosylrutin is contained as a main component in, for example, products “αG rutin PS”, “αG rutin P”, “αG rutin H” manufactured by Toyo Seika Co., Ltd. Among them, “αG rutin PS” is a composition containing 80 to 90% by weight of α-monoglucosyl rutin and 5 to 10% by weight of isoquercitrin. Such a composition comprises (i) preparing the first enzyme-treated rutin described above, (ii) treating the first enzyme-treated rutin with an enzyme having glucoamylase activity, and almost all α-glucosylrutin is α- It can be produced by the procedure of converting to monoglucosylrutin, (iii) simultaneously treating with an enzyme having rhamnosidase activity, and converting almost all unreacted rutin to isoquercitrin. When preparing the mixture to be subjected to the pulverization treatment for producing the α-glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles of the present invention, the above products such as “αG rutin PS” are blended as α-glucosylrutin can do. Therefore, the mixture subjected to the pulverization treatment may further contain isoquercitrin in addition to α-glucosyl rutin.

なお、上述したような組成物ないし製品について、そこに含まれるルチン、α−グルコシルルチン、イソケルシトリンなどの成分はＨＰＬＣのクロマトグラムによって確認することができ、各成分の含有量、または特定の成分の純度は、クロマトグラムのピーク面積から算出することができる。 In addition, components such as rutin, α-glucosyl rutin, and isoquercitrin contained in the composition or product as described above can be confirmed by HPLC chromatogram, and the content of each component or a specific The purity of the component can be calculated from the peak area of the chromatogram.

＜ナノ粒子＞
本発明のナノ粒子のメディアン径（Ｄ₅₀）は１０００ｎｍ以下であり、好ましくは１００ｎｍ以下である。本発明におけるメディアン径（Ｄ₅₀）は、動的光散乱法に従って測定を行う装置、例えば「ナノトラック粒度分析計」（日機装株式会社）を用いて測定された、粒子径分布に基づいて算出される値として定義される。 <Nanoparticles>
The median diameter (D ₅₀ ) of the nanoparticles of the present invention is 1000 nm or less, preferably 100 nm or less. The median diameter (D ₅₀ ) in the present invention is calculated based on the particle diameter distribution measured using a device that performs measurement according to the dynamic light scattering method, for example, “Nanotrack particle size analyzer” (Nikkiso Co., Ltd.). Defined as a value.

本発明のナノ粒子は、プテリジン誘導体およびα−グルコシルルチンを所定の割合で含有する混合物を粉砕処理することによって得られるものである。そのような粉砕処理物は、メディアン径が１０００ｎｍ以下、好ましくは１００ｎｍ以下であるとともに、“粉末Ｘ線回折により確認される葉酸に由来する回折ピークが葉酸原末よりも低い、ないしほとんど確認できない”（図５参照）といった特徴や、“粒度分布（体積分布）の形状が葉酸原末よりも正規分布に近い”（図２参照）といった特徴を有している。 The nanoparticles of the present invention are obtained by pulverizing a mixture containing a pteridine derivative and α-glucosyl rutin in a predetermined ratio. Such a pulverized product has a median diameter of 1000 nm or less, preferably 100 nm or less, and “a diffraction peak derived from folic acid confirmed by powder X-ray diffraction is lower than that of folic acid bulk powder or hardly identifiable”. (Refer to FIG. 5) and “the shape of the particle size distribution (volume distribution) is closer to the normal distribution than the bulk folic acid” (refer to FIG. 2).

また、本発明のナノ粒子、すなわち粉砕処理により得られる粒子状の組成物の携帯は特に限定されるものではなく、たとえば粉砕処理が（特にビーズミルを用いた）湿式粉砕処理により得られるものであれば、湿式粉砕処理後のスラリー状のままの組成物であってもよいし、そのスラリーを乾燥して粉体化した組成物であってもよい。 Further, the carrying of the nanoparticle of the present invention, that is, the particulate composition obtained by pulverization treatment is not particularly limited. For example, the pulverization treatment may be obtained by wet pulverization treatment (especially using a bead mill). For example, it may be a composition in the form of a slurry after the wet pulverization treatment, or may be a composition obtained by drying and pulverizing the slurry.

−α−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子の製造方法−
本発明のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子の製造方法は、プテリジン誘導体１重量部に対してα−グルコシルルチンを０．９重量部以上含む混合物を、粉砕処理により、メディアン径が１０００ｎｍ以下、好ましくは１００ｎｍ以下の粒子状の組成物にする工程を含む。 -Method for producing α-glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles-
The method for producing α-glucosyl rutin-containing pteridine derivative nanoparticles of the present invention is a mixture containing 0.9 part by weight or more of α-glucosyl rutin with respect to 1 part by weight of the pteridine derivative. Preferably, the method includes a step of forming a particulate composition of 100 nm or less.

上記の混合物からメディアン径が上記の範囲にある粒子状の組成物が得られる限り、粉砕処理のための手法は特に限定されるものではないが、例えば湿式粉砕処理、特にビーズミルを用いた湿式粉砕処理は、そのような範囲のメディアン径を有する粒子状の組成物を調製しやすいことから、本発明のナノ粒子を製造するための手法として好ましい。 The method for pulverization is not particularly limited as long as a particulate composition having a median diameter in the above range can be obtained from the above mixture. For example, wet pulverization, particularly wet pulverization using a bead mill. The treatment is preferable as a method for producing the nanoparticle of the present invention because it is easy to prepare a particulate composition having a median diameter in such a range.

ビーズミルを用いた湿式粉砕処理を行うための装置は特に限定されるものではなく、ナノサイズの粒子を調製できるもの（いわゆるナノ分散機）の中から適宜選択することができるが、例えば「ウルトラアペックスミル」（寿工業株式会社）が好ましい装置の一つとして挙げられる。ウルトラアペックスミルは、ビーズとスラリーの分離に遠心力のみを利用したセントリセパレータ（スクリーンレス）とビーズを撹拌するロータピンから構成された、非常にシンプルな装置である。運転により、ミル内に充填したビーズがロータピンにより撹拌されている中、凝集粒子スラリー（すなわちあらかじめ調製しておいた前記所定の混合物）が分散機下部より投入され、機内で激しく運動しているビーズとの接触により分散されながら分散機上部に到達する。到達した製品スラリー（すなわち本発明による粒子状の組成物）とビーズは、セントリセパレータにより比重差で遠心分離され、ビーズは機内に留まり、製品スラリーのみが中空軸を経由して、機外に排出される。ミル以外の構成要素として原液ポンプ、スラリータンクがあり、一般的な運転方法として、排出された製品スラリーは、スラリータンクに戻り、再度、原液ポンプによりミルに戻される循環運転方式になっている。このような「ウルトラアペックスミル」は、ナノ分散を効率的に行えること、α−グルコシルルチンおよびプテリジン誘導体に対する熱的影響が小さいこと、ビーズの詰まりや噛み込みが起こらず安定した運転が行えること、原料スラリーの前分散をほとんど必要とせず工程の簡略化が図れること、などの特徴を有する。 An apparatus for performing wet pulverization using a bead mill is not particularly limited and can be appropriately selected from those capable of preparing nano-sized particles (so-called nano-dispersing machine). For example, “Ultra Apex "Mill" (Koto Kogyo Co., Ltd.) is mentioned as one of the preferable devices. The ultra apex mill is a very simple device composed of a sentry separator (screenless) that uses only centrifugal force to separate beads and slurry, and a rotor pin that stirs the beads. While the beads filled in the mill are being stirred by the rotor pin by operation, the aggregated particle slurry (that is, the predetermined mixture prepared in advance) is charged from the lower part of the disperser, and the beads are moving vigorously in the machine It reaches the upper part of the disperser while being dispersed by contact. The reached product slurry (ie, the particulate composition according to the present invention) and the beads are centrifuged at a specific gravity difference by a sentry separator, the beads remain in the machine, and only the product slurry is discharged out of the machine via a hollow shaft. Is done. Constituent elements other than the mill include a stock solution pump and a slurry tank. As a general operation method, the discharged product slurry returns to the slurry tank and is returned to the mill by the stock solution pump again. Such “Ultra Apex Mill” can efficiently perform nano-dispersion, has a small thermal effect on α-glucosylrutin and pteridine derivatives, can be stably operated without clogging or biting of beads, It has features such that the pre-dispersion of the raw material slurry is hardly required and the process can be simplified.

ビーズミルを用いた湿式粉砕処理のための適切な条件、例えば用いるビーズの粒子径および量、回転速度、原料スラリーの供給速度などは、使用する装置などに応じて、当業者であれば適宜調節することができる。 Appropriate conditions for wet pulverization using a bead mill, for example, the particle diameter and amount of beads to be used, the rotation speed, the feed rate of the raw slurry, etc. are appropriately adjusted by those skilled in the art depending on the equipment used. be able to.

本発明の製造方法は、所定の粉砕処理、好ましくは湿式粉砕処理、特にビーズミルを用いた湿式粉砕処理の工程を行った後、必要に応じて、製品スラリーを乾燥粉末処理するための工程をさらに含んでいてもよい。この際の乾燥粉末処理は、一般的な乾燥法に従って行うことができるが、例えば凍結乾燥法（フリーズドライ法）は、プテリジン誘導体に熱によるダメージを与えることなく、良好な再分散性を呈する粉体を調製することができることから、本発明のナノ粒子を粉体化するための手法として好ましい。凍結乾燥法およびその他の乾燥法の適切な条件も、使用する装置などに応じて、当業者であれば適宜調節することができる。 The production method of the present invention further includes a step of subjecting the product slurry to a dry powder treatment, if necessary, after performing a predetermined pulverization process, preferably a wet pulverization process, particularly a wet pulverization process using a bead mill. May be included. The dry powder treatment at this time can be performed according to a general drying method. For example, the freeze-drying method (freeze-drying method) is a powder that exhibits good redispersibility without causing heat damage to the pteridine derivative. Since the body can be prepared, it is preferable as a technique for powdering the nanoparticles of the present invention. Appropriate conditions for the freeze-drying method and other drying methods can be appropriately adjusted by those skilled in the art depending on the apparatus used.

−α−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子の用途−
本発明のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子水溶性組成物は、それに含まれるプテリジン誘導体、例えば葉酸の用途に応じて、各種の食品、化粧品、医薬品および飼料などに添加して用いることができる。食品、化粧品、医薬品および飼料は、それ自体が水溶液または分散液の形態であってもよいし、それ自体は水溶液または分散液ではないが、プテリジン誘導体が有効成分として生体内に吸収されることを意図して摂取されるまたは体内もしくは体外に適用される、固形状、あるいは水溶液または分散液以外の液状の形態であってもよい。 -Use of α-glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles-
The α-glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticle water-soluble composition of the present invention can be used by adding to various foods, cosmetics, pharmaceuticals, feeds, and the like depending on the use of the pteridine derivative contained therein, for example, folic acid. . Foods, cosmetics, pharmaceuticals and feeds may be in the form of aqueous solutions or dispersions themselves, but are not themselves aqueous solutions or dispersions, but pteridine derivatives are absorbed in vivo as active ingredients. It may be in a solid form or liquid form other than an aqueous solution or dispersion, which is intentionally ingested or applied inside or outside the body.

食品（栄養機能食品、特定保健用食品、機能性表示食品、およびそれ以外のいわゆる健康食品を含む。）としては、例えば、発酵食品、パン類、漬物、乾物、練り製品、粉類、缶詰、冷凍食品、レトルト食品、インスタント食品（即席麺、ドライ・フーズ、粉末飲料等）、乳製品（加工乳、脱脂粉乳等）、魚肉加工品、畜産加工品等の加工食品；菓子類等の嗜好食品；油脂類、甘味料、調味料、香辛料等の調理・調味用材料；サプリメント；特別用途食品（病者用食品、高齢者用食品、育児用食品）；ゲル化剤や膨張剤等の加工材料；保存食；非常食；宇宙食；水、清涼飲料水、アルコール飲料、茶、コーヒー等の飲料などが挙げられる。 Examples of foods (including nutritional functional foods, foods for specified health use, functional labeling foods, and other so-called health foods) include fermented foods, breads, pickles, dried foods, paste products, flours, canned foods, frozen foods Foods, retort foods, instant foods (instant noodles, dry foods, powdered beverages, etc.), dairy products (processed milk, skim milk powder, etc.), processed fish products, processed livestock products, etc .; Cooking and seasoning materials such as fats and oils, sweeteners, seasonings, spices; supplements; special-purpose foods (food for the sick, food for the elderly, food for childcare); processed materials such as gelling agents and swelling agents; Preserved food; emergency food; space food; beverages such as water, soft drinks, alcoholic beverages, tea and coffee.

化粧品（医薬部外品に該当する薬用化粧品を含む。）としては、例えば、パウダー、乳液、リキッド、クリーム、ローション等の皮膚外用剤（ファンデーション、日焼け止め、スキンローション、口紅、香水等）；歯磨剤、マウスウォッシュ、うがい薬等の口腔用組成物；石鹸、ボディソープ、シャンプー、リンス等の洗浄用組成物；頭髪剤、育毛剤等の頭髪用組成物などが挙げられる。 Examples of cosmetics (including medicinal cosmetics that fall under quasi-drugs) include, for example, powders, emulsions, liquids, creams, lotions, and other skin external preparations (foundations, sunscreens, skin lotions, lipsticks, perfumes, etc.); Oral compositions such as agents, mouthwashes, mouthwashes; cleaning compositions such as soaps, body soaps, shampoos and rinses; hair compositions such as hair preparations and hair restorers.

医薬品としては、例えば、錠剤、散剤（細粒剤、顆粒剤等）、カプセル剤、ドリンク剤、シロップ剤、トローチ剤等の内服薬；外用薬；および注射剤が挙げられる。
飼料としては、例えば、実験用、家畜・養殖用または愛玩・観賞用（ペット）の哺乳類またはその他の動物用の飼料が挙げられる。 Examples of pharmaceuticals include tablets, powders (fine granules, granules, etc.), capsules, drinks, syrups, lozenges, and other internal medicines; external medicines; and injections.
Examples of the feed include feed for mammals used for experiments, livestock / culture, pets / watching (pets), or other animals.

このような本発明の食品、化粧品、医薬品および飼料に配合される、本発明のナノ粒子の添加量は、それに含まれるプテリジン誘導体、α−グルコシルルチン、およびその他の成分の効能を考慮して適宜設定すればよい。また、本発明の食品、化粧品、医薬品および飼料は、適切な段階で本発明の水溶性組成物を添加すること以外は、基本的には従来と同じ方法で製造することができ、必要に応じて各種の添加剤を併用することもできる。 The addition amount of the nanoparticles of the present invention blended in such foods, cosmetics, pharmaceuticals and feeds of the present invention is appropriately determined in consideration of the efficacy of the pteridine derivative, α-glucosyl rutin and other components contained therein. You only have to set it. The food, cosmetics, pharmaceuticals and feed of the present invention can be basically produced by the same method as before except that the water-soluble composition of the present invention is added at an appropriate stage. Various additives can also be used in combination.

以下の実施例等で用いた東洋精糖(株)製の商品「αＧルチンＰＳ」は、α−モノグルコシルルチン９０重量％、イソケルシトリン１０重量％を含有する組成物である。
［実験例１］メディアン径（Ｄ₅₀）の測定
原料１：葉酸５００ｍｇを水５００ｍＬに分散させた分散液（１ｍｇ葉酸／ｍＬ）
原料２：葉酸５００ｍｇおよび「αＧルチンＰＳ」５０ｍｇを水５００ｍＬに分散させた分散液（１ｍｇ葉酸／ｍＬ，葉酸：α−グルコシルルチン＝１：０．０９）
原料３：葉酸５００ｍｇおよび「αＧルチンＰＳ」２５０ｍｇを水５００ｍＬに分散させた分散液（１ｍｇ葉酸／ｍＬ，葉酸：α−グルコシルルチン＝１：０．４５）
原料４：葉酸５００ｍｇおよび「αＧルチンＰＳ」５００ｍｇを水５００ｍＬに分散させた分散液（１ｍｇ葉酸／ｍＬ，葉酸：α−グルコシルルチン＝１：０．９）
原料５：葉酸５００ｍｇおよび「αＧルチンＰＳ」５０００ｍｇを水５００ｍＬに分散させた分散液（１ｍｇ葉酸／ｍＬ，葉酸：α−グルコシルルチン＝１：９）
上記原料１〜５を調製した後、それぞれをナノ分散機「ウルトラアペックスミル」（壽工業株式会社、ビーズ：φ０．１ｍｍのジルコニアビーズ、４００ｇ；回転速度：４１．６Ｈｚ；供給速度：１５０ｍＬ／分）に供給し、ビーズミルを用いた湿式粉砕処理を３００分間行った。湿式粉砕処理の開始時、終了時、および途中の所定の時点で試料を３つずつ採取し、動的光散乱式ナノトラック粒度分析計「ＵＰＡ−ＵＴ１５１」（日機装株式会社）を用いて粒子径分布を測定し、メディアン径を算出した。 The product “αG rutin PS” manufactured by Toyo Seika Co., Ltd. used in the following examples and the like is a composition containing 90% by weight of α-monoglucosyl rutin and 10% by weight of isoquercitrin.
[Experiment 1] Measurement of median diameter (D ₅₀ ) Raw material 1: Dispersion liquid (1 mg folic acid / mL) in which 500 mg of folic acid was dispersed in 500 mL of water
Raw material 2: Dispersion liquid in which 500 mg of folic acid and 50 mg of “αG rutin PS” are dispersed in 500 mL of water (1 mg folic acid / mL, folic acid: α-glucosyl rutin = 1: 0.09)
Raw material 3: Dispersion liquid in which 500 mg of folic acid and 250 mg of “αG rutin PS” were dispersed in 500 mL of water (1 mg folic acid / mL, folic acid: α-glucosyl rutin = 1: 0.45)
Raw material 4: Dispersion liquid in which 500 mg of folic acid and 500 mg of “αG rutin PS” are dispersed in 500 mL of water (1 mg folic acid / mL, folic acid: α-glucosyl rutin = 1: 0.9)
Raw material 5: Dispersion in which 500 mg of folic acid and 5000 mg of “αG rutin PS” are dispersed in 500 mL of water (1 mg folic acid / mL, folic acid: α-glucosyl rutin = 1: 9)
After preparing the above raw materials 1 to 5, each of them was nano-dispersed machine “Ultra Apex Mill” (Sakai Industry Co., Ltd., beads: φ0.1 mm zirconia beads, 400 g; rotational speed: 41.6 Hz; supply speed: 150 mL / min. And wet pulverization using a bead mill was performed for 300 minutes. Three samples were collected at the start, end, and halfway of the wet pulverization process, and the particle size was measured using a dynamic light scattering nanotrack particle size analyzer “UPA-UT151” (Nikkiso Co., Ltd.). The distribution was measured and the median diameter was calculated.

各原料に対応するビーズミル処理物（試料１〜５）のメディアン径の測定結果を図１に示す。また、３００分処理後の試料１および２の粒子径分布を図２に示す。試料４および５は、処理開始から３００分の時点（終了時点）で、処理工程を通じての最小値である、約８０ｎｍのメディアン径に到達した。一方、試料１，２および３は、途中まではメディアン径が減少していったが、処理開始から２５０分および３００分の時点ではメディアン径が増加に転じ、粉砕処理物の凝集が起きたことが示唆されている。これらの結果から、葉酸１重量部に対してα−グルコシルルチンを０．９重量部以上配合した場合に、α−グルコシルルチンの粉砕補助作用が認められ、１００ｎｍ以下のメディアン径を達成できることが分かる。 The measurement result of the median diameter of the bead mill processed material (samples 1 to 5) corresponding to each raw material is shown in FIG. Moreover, the particle size distribution of Samples 1 and 2 after 300 minutes treatment is shown in FIG. Samples 4 and 5 reached a median diameter of about 80 nm, which is the minimum value throughout the treatment process, at 300 minutes from the start of treatment (end time). On the other hand, in Samples 1, 2 and 3, the median diameter decreased until halfway, but at the time of 250 minutes and 300 minutes from the start of processing, the median diameter started to increase, and the pulverized processed material was agglomerated. Has been suggested. From these results, it can be seen that when 0.9 part by weight or more of α-glucosylrutin is blended with 1 part by weight of folic acid, an auxiliary action of crushing α-glucosylrutin is recognized, and a median diameter of 100 nm or less can be achieved. .

［実験例２］分散安定性試験
実験例１で得られた試料１〜５（３００分処理後）を用いてフリーズドライを行い、それぞれの凍結乾燥粉末を得た。フリーズドライは、まず低温水層「ＰＦＲ−１０００」（ＥＹＥＬＡ）で予備凍結（−４０℃）し、その後、凍結乾燥器「ＦＤＵ−８３０」（ＥＹＥＬＡ）にて３０Ｐａ以下に減圧し、２４時間処理をすることにより行った。各凍結乾燥粉末について、葉酸の含有量が５ｍｇに相当する量を水９００ｍＬに添加し、日本薬局方（ＪＰ１６）に対応した溶出試験機「ＮＴＲ−８０００ＡＣ」（富山産業株式会社）を用いて、３７℃でパドル法（５０ｒｐｍ）により撹拌し、再分散させた。 [Experimental Example 2] Dispersion Stability Test Samples 1 to 5 (after treatment for 300 minutes) obtained in Experimental Example 1 were freeze-dried to obtain respective freeze-dried powders. Freeze-drying is first pre-frozen (−40 ° C.) in a low-temperature water layer “PFR-1000” (EYELA), then decompressed to 30 Pa or less in a freeze-dryer “FDU-830” (EYELA), and treated for 24 hours. It was done by doing. For each freeze-dried powder, an amount corresponding to 5 mg of folic acid was added to 900 mL of water, and using a dissolution tester “NTR-8000AC” (Toyama Sangyo Co., Ltd.) corresponding to the Japanese Pharmacopoeia (JP16), The mixture was stirred at 37 ° C. by the paddle method (50 rpm) and redispersed.

３００分のビーズミル処理直後の試料１〜５と、それぞれに対応する、２４時間室温で放置した後の試料および上記のようにして得られた凍結乾燥粉末の再分散液について、実験例１と同じ装置を用いて粒子径分布を測定し、メディアン径（Ｄ₅₀）を算出した。 Samples 1 to 5 immediately after bead milling for 300 minutes, samples after being allowed to stand at room temperature for 24 hours, and re-dispersed liquid of lyophilized powder obtained as described above are the same as in Experimental Example 1. The particle size distribution was measured using an apparatus, and the median diameter (D ₅₀ ) was calculated.

結果を表１に示す。試料４および５については、室温放置２４時間後においても凝集は認められなかった。このことから、葉酸１重量部に対して「αＧルチンＰＳ」を１重量部以上、つまりα−グルコシルルチンに換算すると０．９重量部以上含有する混合物を粉砕処理することにより得られるナノ粒子は、凍結乾燥粉末にしても良好な再分散性を呈することが分かる。 The results are shown in Table 1. Samples 4 and 5 showed no aggregation even after 24 hours at room temperature. From this, nanoparticles obtained by pulverizing a mixture containing 1 part by weight or more of “αG rutin PS” per 1 part by weight of folic acid, that is, 0.9 part by weight or more in terms of α-glucosyl rutin, It can be seen that even when freeze-dried, it exhibits good redispersibility.

［実験例３］溶解度の測定
実験例２と同様の手順で得られた試料１（葉酸のビーズミル処理物）、試料４（葉酸：αＧルチンＰＳ＝１：１のビーズミル処理物）および試料５（葉酸：αＧルチンＰＳ＝１：１０のビーズミル処理物）それぞれの凍結乾燥粉末について、葉酸の含有量が５０ｍｇに相当する量を３７℃の水２５ｍＬに添加し（葉酸の仕込み量２ｍｇ／ｍＬ）、１００ストローク／分でインキュベーションを行った。また、下記の対照１〜５についても、上記と同様にしてインキュベーションを行った。 [Experimental Example 3] Solubility Measurement Sample 1 (bead milled product of folic acid), sample 4 (folic acid: αG rutin PS = 1: 1 bead milled product) and sample 5 (by a bead milled product of folic acid) obtained in the same procedure as Experimental Example 2 Folic acid: αG rutin PS = 1: 10 bead mill processed product) For each lyophilized powder, an amount corresponding to 50 mg of folic acid was added to 25 mL of water at 37 ° C. (folic acid charge 2 mg / mL), Incubation was performed at 100 strokes / minute. In addition, the following controls 1 to 5 were also incubated in the same manner as described above.

対照１：葉酸原末。
対照２：葉酸５００ｍｇおよび「αＧルチンＰＳ」５０００ｍｇ（重量比１：１０）を、粉末のまま乳鉢で混合した物理混合粉末。
対照３：葉酸１００ｍｇおよび「αＧルチンＰＳ」１０００ｍｇ（重量比１：１０）を、ボールミルで粉砕処理して得られた粉砕処理物。上記原料および精製水２ｍＬを遊星型ボールミル「Ｐ−６クラシックライン」（フリッチュ・ジャパン株式会社；ボール：ジルコニア製，φ＝５ｍｍ，１０個；回転数：５００ｒｐｍ）に供給し、ボールミルを用いた粉砕処理を３０分間行った。
対照４：葉酸２００ｍｇおよび「αＧルチンＰＳ」２０００ｍｇ（重量比１：１０）を含有する溶液を、ロータリーエバポレーターで蒸発させて得られた粉末。原料溶液は次の手順（ｉ）〜（iii）により調製した。（ｉ）葉酸２００ｍｇをエタノール７５ｍＬに溶解、懸濁した。（ii）「αＧルチンＰＳ」２０００ｍｇを水１００ｍＬに溶解した。（iii）上記（ｉ）および（ｉｉ）の溶液を混合し、原料溶液とした。この原料溶液を、ロータリーエバポレーター「Ｒｏｔａｖａｐｏｒ（登録商標）Ｒ−３」（Ｂｕｃｈｉ社）に供給し、エバポレーションを行った。
対照５：葉酸２００ｍｇおよび「αＧルチンＰＳ」２０００ｍｇ（重量比１：１０）を含有する溶液を、スプレードライヤーで噴霧乾燥して得られた粉末。原料溶液は次の手順（ｉ）〜（iii）により調製した。（ｉ）葉酸２００ｍｇをエタノール７５ｍＬに溶解、懸濁した。（ii）「αＧルチンＰＳ」２０００ｍｇをエタノール１７５ｍＬに溶解した。（iii）上記（ｉ）および（ｉｉ）の溶液を混合し、原料溶液とした。この原料溶液を、スプレードライヤー「ＭｉｎｉＳｐｒａｙＤｒｙｅｒＢ−２９０」（Ｂｕｃｈｉ社；フローレート：３５Ｌ／分、ポンプレート：５．５Ｌ／分；入口温度：１２０℃、出口温度：６５〜７５℃；アスピレーション：１００％，ポンプ：３０％）にて噴霧乾燥した。 Control 1: folic acid bulk powder.
Control 2: Physical mixed powder in which 500 mg of folic acid and 5000 mg of “αG rutin PS” (weight ratio 1:10) were mixed in a mortar as powder.
Control 3: A ground product obtained by grinding 100 mg of folic acid and 1000 mg of “αG rutin PS” (weight ratio 1:10) with a ball mill. Supply 2 mL of the above raw material and purified water to a planetary ball mill “P-6 Classic Line” (Fritch Japan Co., Ltd .; ball: manufactured by zirconia, φ = 5 mm, 10 pieces; number of revolutions: 500 rpm), and pulverization using a ball mill The treatment was performed for 30 minutes.
Control 4: Powder obtained by evaporating a solution containing 200 mg of folic acid and 2000 mg of “αG rutin PS” (weight ratio 1:10) on a rotary evaporator. The raw material solution was prepared by the following procedures (i) to (iii). (I) 200 mg of folic acid was dissolved and suspended in 75 mL of ethanol. (Ii) 2000 mg of “αG rutin PS” was dissolved in 100 mL of water. (Iii) The above solutions (i) and (ii) were mixed to obtain a raw material solution. This raw material solution was supplied to a rotary evaporator “Rotavapor (registered trademark) R-3” (Buchi Corporation) for evaporation.
Control 5: Powder obtained by spray-drying a solution containing 200 mg of folic acid and 2000 mg of “αG rutin PS” (weight ratio 1:10) with a spray dryer. The raw material solution was prepared by the following procedures (i) to (iii). (I) 200 mg of folic acid was dissolved and suspended in 75 mL of ethanol. (Ii) 2000 mg of “αG rutin PS” was dissolved in 175 mL of ethanol. (Iii) The above solutions (i) and (ii) were mixed to obtain a raw material solution. This raw material solution was added to a spray dryer “Mini Spray Dryer B-290” (Buchi; flow rate: 35 L / min, pump rate: 5.5 L / min; inlet temperature: 120 ° C., outlet temperature: 65 to 75 ° C .; Spray drying: 100%, pump: 30%).

インキュベーション開始時と、２４時間のインキュベーション終了時に、試料１，４および５ならびに対照１〜５の各溶液に含まれる葉酸の量をＨＰＬＣを用いて測定した。
結果を図３に示す。試料４および５については、葉酸の溶解性が大幅に改善され、葉酸原末と比較して溶解度は１００倍以上（最大１８３倍）に向上することが分かる。 At the start of the incubation and at the end of the 24 hour incubation, the amount of folic acid contained in each solution of Samples 1, 4 and 5 and Controls 1-5 was measured using HPLC.
The results are shown in FIG. For samples 4 and 5, it can be seen that the solubility of folic acid is greatly improved, and the solubility is improved to 100 times or more (up to 183 times) as compared with the bulk of folic acid.

［実験例４］光安定性試験
［４−１］
前記原料１（葉酸のみ）および前記原料４（葉酸：αＧルチンＰＳ＝１：１の混合物）について、実験例１に準じて、ビーズミルを用いた湿式粉砕処理を１８０分間行い、湿式粉砕処理の前後における葉酸の含有量をＨＰＬＣによって測定した。なお、湿式粉砕処理をする際に、光の照射に対する保護は行わなかった。その結果、原料１を用いた場合は湿式粉砕処理後の葉酸の含有量は湿式粉砕処理前の約５０％に減少したのに対し、原料４を用いた場合は湿式粉砕処理後の葉酸の含有量は湿式粉砕処理前の約１００％を保持していた。 [Experimental Example 4] Light Stability Test [4-1]
The raw material 1 (folic acid only) and the raw material 4 (folic acid: αG rutin PS = 1: 1 mixture) were subjected to a wet grinding process using a bead mill for 180 minutes in accordance with Experimental Example 1, before and after the wet grinding process. The content of folic acid in was measured by HPLC. In the wet pulverization treatment, protection against light irradiation was not performed. As a result, when the raw material 1 was used, the content of folic acid after the wet grinding treatment was reduced to about 50% before the wet grinding treatment, whereas when the raw material 4 was used, the content of folic acid after the wet grinding treatment was included. The amount retained about 100% before the wet grinding process.

［４−２］
実験例２と同様の手順で得られた試料１，２，４および５（３００分処理後）それぞれの凍結乾燥粉末を用いて、凍結乾燥粉末（固体状態）およびその再分散液（溶液状態）の光安定性を試験した。この光安定性試験は、「新原薬及び新製剤の光安定性試験ガイドライン」（ＩＣＨ−Ｑ１Ｂ）に準拠した条件で行った。すなわち、総照射量１２０万Ｌｘ・ｈ、総照射エネルギー２００Ｗ／ｍ²の光を固体状態、溶液状態それぞれの試料に照射し、照射前後における葉酸の含有量をＨＰＣＬによって測定した。結果を図４に示す。固体状態では照射の前後で葉酸の含有量の低下はほとんど認められないが、溶液状態では、試料１および２においてほぼ全ての葉酸が分解した。試料４および５では葉酸はほとんど分解しなかったことから、葉酸１重量部に対して「αＧルチンＰＳ」を１重量部以上、つまりα−グルコシルルチンに換算すると０．９重量部以上を添加することにより、葉酸の光安定性は顕著に改善されることが分かる。 [4-2]
Samples 1, 2, 4 and 5 (after treatment for 300 minutes) obtained in the same procedure as in Experimental Example 2 were used to prepare a freeze-dried powder (solid state) and a re-dispersed liquid (solution state). The photostability was tested. This photostability test was performed under conditions based on “Guidelines for testing photostability of new drug substance and new preparation” (ICH-Q1B). That is, samples with a total irradiation amount of 1,200,000 Lx · h and a total irradiation energy of 200 W / m ² were irradiated to the solid and solution samples, and the folic acid content before and after irradiation was measured by HPCL. The results are shown in FIG. In the solid state, almost no decrease in the content of folic acid was observed before and after irradiation, but in the solution state, almost all folic acid was decomposed in Samples 1 and 2. In Samples 4 and 5, folic acid hardly decomposed, so 1 part by weight of “αG rutin PS” is added to 1 part by weight of folic acid, that is, 0.9 part by weight or more in terms of α-glucosyl rutin. This shows that the photostability of folic acid is significantly improved.

［実験例５］結晶性の確認
葉酸原末および「αＧルチンＰＳ」原末、ならびに実験例２と同様にして調製した試料１（葉酸のビーズミル処理物）、試料２（葉酸：αＧルチンＰＳ＝１：０．１のビーズミル処理物）、試料４（葉酸：αＧルチンＰＳ＝１：１のビーズミル処理物）および試料５（葉酸：αＧルチンＰＳ＝１：１０のビーズミル処理物）それぞれの凍結乾燥粉末について、粉末Ｘ線回折を行った。粉末Ｘ線回折は、Ｘ線回折装置「Ｍｉｎｉｆｌｅｘ６００」（株式会社リガク）を用いて、４°／分、４〜３５°（ステップ：０．０２°）の測定条件で行った。結果を図５に示す。葉酸原末では葉酸に由来する回折ピークが認められたが、ビーズミル処理物では回折強度の低下が認められた。これは、混合粉砕処理を利用したナノ粒子化により、葉酸の結晶の粒子径が減少したことに起因するものと考えられる。なお、物理混合粉末（葉酸：αＧルチンＰＳ＝１：１０）についても、葉酸に由来する回折ピークが認められた。 [Experimental Example 5] Confirmation of crystallinity Folic acid bulk powder and “αG rutin PS” bulk powder, as well as Sample 1 (folate milled product of folic acid) and Sample 2 (folic acid: αG rutin PS = 1: 0.1 bead mill processed product), sample 4 (folic acid: αG rutin PS = 1: 1 bead mill processed product) and sample 5 (folic acid: αG rutin PS = 1: 10 bead mill processed product) Powder X-ray diffraction was performed on the powder. Powder X-ray diffraction was performed under the measurement conditions of 4 ° / min and 4 to 35 ° (step: 0.02 °) using an X-ray diffractometer “Miniflex 600” (Rigaku Corporation). The results are shown in FIG. In the folic acid bulk powder, a diffraction peak derived from folic acid was observed, but in the bead mill treated product, a decrease in diffraction intensity was observed. This is considered to be due to the decrease in the particle size of the folic acid crystals due to the formation of nanoparticles using the mixed pulverization treatment. A diffraction peak derived from folic acid was also observed in the physical mixed powder (folic acid: αG rutin PS = 1: 10).

Claims

プテリジン誘導体１重量部に対してα−グルコシルルチンを０．９重量部以上含む混合物を、粉砕処理により、メディアン径が１０００ｎｍ以下の粒子状の組成物にする工程を含むことを特徴とする、α−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子の製造方法。 Characterized in that it comprises a step of converting a mixture containing 0.9 parts by weight or more of α-glucosyl rutin to 1 part by weight of a pteridine derivative into a particulate composition having a median diameter of 1000 nm or less by pulverization. -Method for producing glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles.

前記プテリジン誘導体が葉酸である、請求項１に記載のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子の製造方法。 The method for producing α-glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles according to claim 1, wherein the pteridine derivative is folic acid.

前記α−グルコシルルチンがα−モノグルコシルルチンである、請求項１または２に記載のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子の製造方法。 The method for producing α-glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles according to claim 1 or 2, wherein the α-glucosylrutin is α-monoglucosylrutin.

前記混合物がさらにイソケルシトリンを含有する、請求項３に記載のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子の製造方法。 The method for producing α-glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles according to claim 3, wherein the mixture further contains isoquercitrin.

前記粒子状の組成物のメディアン径が１００ｎｍ以下である、請求項１〜４のいずれか一項に記載のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子の製造方法。 The manufacturing method of the alpha-glucosyl rutin containing pteridine derivative nanoparticle as described in any one of Claims 1-4 whose median diameter of the said particulate composition is 100 nm or less.

前記粉砕処理が湿式粉砕処理である、請求項１〜５のいずれか一項に記載のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子の製造方法。 The manufacturing method of the alpha-glucosyl rutin containing pteridine derivative nanoparticle as described in any one of Claims 1-5 whose said grinding | pulverization process is a wet grinding process.

前記湿式粉砕処理がビーズミルを用いたものである、請求項１〜６のいずれか一項に記載のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子の製造方法。 The method for producing α-glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles according to any one of claims 1 to 6, wherein the wet pulverization treatment uses a bead mill.

前記粉砕処理が湿式粉砕処理であり、前記粒子状の組成物にする工程の後に、前記粒子状の組成物を含有するスラリーを乾燥粉末処理する工程をさらに含む、請求項６または７に記載のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子の製造方法。 The pulverization process is a wet pulverization process, and further includes a step of dry-powdering the slurry containing the particulate composition after the step of forming the particulate composition. A method for producing α-glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles.

前記乾燥粉末処理が凍結乾燥法を用いたものである、請求項８に記載のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子の製造方法。 The method for producing α-glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles according to claim 8, wherein the dry powder treatment uses a freeze-drying method.

プテリジン誘導体１重量部に対してα−グルコシルルチンを０．９重量部以上含有する混合物を粉砕処理することにより得られる、メディアン径が１０００ｎｍ以下である粒子状の組成物であることを特徴とする、α−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子。 It is a particulate composition having a median diameter of 1000 nm or less, obtained by pulverizing a mixture containing 0.9 part by weight or more of α-glucosyl rutin with respect to 1 part by weight of a pteridine derivative. , Α-Glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles.

前記プテリジン誘導体が葉酸である、請求項１０に記載のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子。 The α-glucosyl rutin-containing pteridine derivative nanoparticles according to claim 10, wherein the pteridine derivative is folic acid.

前記α−グルコシルルチンがα−モノグルコシルルチンである、請求項１０または１１に記載のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子。 The α-glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles according to claim 10 or 11, wherein the α-glucosylrutin is α-monoglucosylrutin.

前記混合物がさらにイソケルシトリンを含有する、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子。 The α-glucosyl rutin-containing pteridine derivative nanoparticles according to any one of claims 10 to 12, wherein the mixture further contains isoquercitrin.

前記粒子状の組成物のメディアン径が１００ｎｍ以下である、請求項１０〜１３のいずれか一項に記載のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子。 The α-glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles according to any one of claims 10 to 13, wherein the median diameter of the particulate composition is 100 nm or less.

前記粉砕処理が湿式粉砕処理である、請求項１０〜１４のいずれか一項に記載のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子。 The α-glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles according to any one of claims 10 to 14, wherein the pulverization treatment is a wet pulverization treatment.

前記湿式粉砕処理がビーズミルを用いたものである、請求項１５に記載のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子。 The α-glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles according to claim 15, wherein the wet pulverization treatment uses a bead mill.

前記粉砕処理が湿式粉砕処理であり、前記粒子状の組成物が、それを含有するスラリーの乾燥粉末である、請求項１５または１６に記載のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子。 The α-glucosylrutin-containing pteridine derivative nanoparticles according to claim 15 or 16, wherein the pulverization treatment is a wet pulverization treatment, and the particulate composition is a dry powder of a slurry containing it.

前記乾燥粉末処理が凍結乾燥法を用いたものである、請求項１７に記載のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子。 The α-glucosyl rutin-containing pteridine derivative nanoparticles according to claim 17, wherein the dry powder treatment uses a freeze-drying method.

請求項１０〜１８のいずれか一項に記載のα−グルコシルルチン含有プテリジン誘導体ナノ粒子を含有する、食品、化粧品、医薬品または飼料。 A food, cosmetic, pharmaceutical or feed containing the α-glucosyl rutin-containing pteridine derivative nanoparticles according to any one of claims 10 to 18.