JP2017012051A - Kit for cell culture, sampling method of content liquid of kit for cell culture, and sampling auxiliary tool - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、閉鎖系の環境を構築して細胞培養を行うに際し、閉鎖系を維持しながら内容液のサンプリングをすることができる細胞培養用キット、及び細胞培養用キット内容液のサンプリング方法、並びにサンプリング補助具に関する。 The present invention relates to a cell culture kit capable of sampling a content liquid while maintaining a closed system in constructing a closed system environment, and a method for sampling the content liquid of the cell culture kit, and It relates to a sampling aid.
近年、医薬品の生産や、遺伝子治療、再生医療、免疫療法等の分野において、細胞や組織、微生物などを人工的な環境下で効率良く大量に培養することが求められている。
このような細胞培養にあっては、複数の容器を接続して閉鎖系の環境を構築し、これら複数の容器間で送液を行う方法が採られる場合がある。
In recent years, in the fields of pharmaceutical production, gene therapy, regenerative medicine, immunotherapy, and the like, it has been required to efficiently culture a large amount of cells, tissues, microorganisms, and the like in an artificial environment.
In such cell culture, there is a case in which a plurality of containers are connected to construct a closed system environment and a liquid is fed between the plurality of containers.
ここで、特許文献１には、細胞を培養するための培養容器と、培地等を貯蔵しておくための培地貯蔵容器と、細胞を注入するための細胞注入容器と、培養後の細胞懸濁液を回収する細胞回収容器と、培養中の細胞懸濁液の一部をサンプリングするサンプリング容器とを移送用のチューブで接続した細胞培養用キットが開示されている。このような細胞培養用キットによれば、細胞注入から培地追加、サンプリング、回収までをキット内で閉鎖系を維持しながら行うことが可能となる。 Here, Patent Document 1 discloses a culture container for culturing cells, a medium storage container for storing a medium and the like, a cell injection container for injecting cells, and a cell suspension after culture. A cell culture kit is disclosed in which a cell collection container for collecting a liquid and a sampling container for sampling a part of a cell suspension being cultured are connected by a transfer tube. According to such a cell culture kit, it is possible to carry out from cell injection to medium addition, sampling, and collection while maintaining a closed system in the kit.
また、特許文献２には、ハウジングの開口部を閉塞する弾性シール部材にスリットを形成し、このスリット内にシリンジなどの雄ルアーを嵌挿することにより、雄ルアーの内部空間とハウジング内の液体通路とを連通させて輸液等の移送を可能とした医療用コネクタが開示されている。 In Patent Document 2, a slit is formed in an elastic seal member that closes the opening of the housing, and a male luer such as a syringe is inserted into the slit so that the internal space of the male luer and the liquid in the housing A medical connector that enables communication of an infusion or the like by communicating with a passage is disclosed.
ところで、本発明者らは、複数の培養容器と培地供給容器とを移送用チューブで接続し、培地供給容器から培養容器に培地を移送して、培養容器において細胞を培養し、培養した細胞及び培地を含む培養液（本発明では、細胞と培地を含むものを「培養液」という）を培養面積のより大きい培養容器に移送するとともに、当該培養容器に培地供給容器から培地を追加して、さらに細胞を増殖させることにより、閉鎖系を維持してコンタミネーションのリスクを低減しつつ、効率的に細胞培養を行う細胞培養システムについて検討を重ねてきた。 By the way, the present inventors connected a plurality of culture containers and a medium supply container with transfer tubes, transferred the medium from the medium supply container to the culture container, cultured the cells in the culture container, A culture solution containing a medium (in the present invention, a cell and a medium containing a medium is referred to as a “culture solution”) is transferred to a culture container having a larger culture area, and a culture medium is added to the culture container from a medium supply container. Furthermore, cell culture systems that perform cell culture efficiently have been studied by growing cells to maintain a closed system and reduce the risk of contamination.
そして、本発明者らは、かかる細胞培養システムにおいて、培地の状態、雑菌の混入の有無、細胞の状態などを検査する目的で、培養の途中で又は培養終了後に、容器中の内容液をサンプリングする方法について、さらなる検討を重ねた。
なお、培地の状態の検査には、例えば、細胞の種類によっては、低温保存状態でも分解する成分を含む培地を使用する場合があり、そのような成分が必要量残っているかを検査する検査項目などがある。また、細胞の状態の検査には、例えば、培養対象の細胞種が所定の細胞数に増殖しているかを検査する検査項目などがある。
In the cell culture system, the present inventors sample the content liquid in the container during or after the culture for the purpose of examining the state of the medium, the presence or absence of contamination, the state of the cells, and the like. Further studies were made on how to do this.
In addition, for the inspection of the state of the medium, for example, depending on the type of cell, a medium containing a component that decomposes even in a low-temperature storage state may be used, and an inspection item for inspecting whether the necessary amount of such a component remains and so on. In addition, the examination of the state of the cell includes, for example, an examination item for examining whether the cell type to be cultured has grown to a predetermined number of cells.
すなわち、特許文献１の細胞培養用キットによれば、閉鎖系を維持しながらサンプリングを行うことも可能であるが、サンプリング容器は、移送用のチューブを介して培養容器に接続され、培養容器からサンプル容器への送液はチューブポンプにより行われるため、容器間で送液を行う流路制御が複雑となってしまうことが懸念される。特に、複数の培養容器を用いて、より培養面積の大きい培養容器に培養液を移送するとともに、当該培養容器に培地供給容器から培地を追加するようにした、本発明者らが検討する細胞培養システムのように、接続される容器の数が多くなるほど容器間で送液を行う流路の制御機構を簡易化するための工夫が求められ、かかる制御機構をより簡易なものとするには、チューブポンプを用いたりすることなく、これらの容器からその内容液を直接サンプリングすることが望まれる。 That is, according to the cell culture kit of Patent Document 1, it is possible to perform sampling while maintaining a closed system. However, the sampling container is connected to the culture container via a transfer tube, and from the culture container. Since liquid feeding to the sample container is performed by a tube pump, there is a concern that the flow path control for liquid feeding between the containers may be complicated. In particular, the cell culture studied by the present inventors using a plurality of culture containers, transferring the culture solution to a culture container having a larger culture area, and adding a medium from the medium supply container to the culture container As the number of connected containers increases as in the system, a device for simplifying the control mechanism of the flow path for feeding liquid between containers is required. To make such a control mechanism simpler, It is desirable to sample the contents of these containers directly from these containers without using a tube pump.
一方、容器内容液を直接サンプリングするには、特許文献２に開示されているような医療用コネクタを容器に取り付けて、シリンジなどを用いてサンプリングすることが考えられる。
しかしながら、このようにしたのでは、閉鎖系を維持しながら容器内容液をサンプリングすることができず、容器内容液をサンプリングする際には、シリンジを滅菌するとともに、無菌環境下での作業が必要となり、コンタミネーションのリスクを低減するには相応の手間がかかってしまう。
On the other hand, in order to directly sample the liquid in the container, it is conceivable to attach a medical connector as disclosed in Patent Document 2 to the container and perform sampling using a syringe or the like.
However, in this way, the container contents liquid cannot be sampled while maintaining a closed system, and when sampling the container contents liquid, it is necessary to sterilize the syringe and work in an aseptic environment. Therefore, it takes time and effort to reduce the risk of contamination.
本発明は、上記の事情に鑑みなされたものであり、複数の容器を接続して閉鎖系の環境を構築し、コンタミネーションのリスクを低減した細胞培養システムに好適に適用することができ、閉鎖系を維持しながらいずれかの容器の内容液をサンプリングできる細胞培養用キット、及び細胞培養用キット内容液のサンプリング方法、並びにサンプリング補助具の提供を目的とする。 The present invention has been made in view of the above circumstances, and can be suitably applied to a cell culture system in which a plurality of containers are connected to construct a closed environment and the risk of contamination is reduced. It is an object of the present invention to provide a cell culture kit capable of sampling the contents of any container while maintaining the system, a method for sampling the contents of the cell culture kit, and a sampling aid.
本発明に係る細胞培養用キットは、培養容器が、前記培養容器に供給される培地が格納された培地供給容器に接続され、閉鎖系の環境を構築して細胞培養を行う細胞培養用キットであって、前記培養容器及び前記培地供給容器の少なくともいずれか一つに、末端が閉塞された管状のサンプル取り出し流路を設けた構成としてある。 The cell culture kit according to the present invention is a cell culture kit in which a culture container is connected to a medium supply container in which a medium supplied to the culture container is stored, and a closed system environment is constructed to perform cell culture. In addition, at least one of the culture container and the culture medium supply container is provided with a tubular sample take-out flow path whose end is closed.
また、本発明に係る細胞培養用キット内容液のサンプリング方法は、培養容器が、前記培養容器に供給される培地が格納された培地供給容器に接続され、閉鎖系の環境を構築して細胞培養を行う細胞培養用キットの内容液をサンプリングする細胞培養用キット内容液のサンプリング方法であって、前記培養容器及び前記培地供給容器のうち、サンプリング対象の内容液を格納する容器に、末端が閉塞された管状のサンプル取り出し流路を設けておき、培養の途中で又は培養終了後に、前記サンプル取り出し流路が設けられた容器に、前記サンプル取り出し流路の内容物を移動させる工程と、前記サンプル取り出し流路が設けられた容器の内容液の一部を前記サンプル取り出し流路に流入させる工程と、前記サンプル取り出し流路をヒートシールしつつ切断する工程とを含む方法としてある。 Further, in the method for sampling a cell culture kit content solution according to the present invention, the culture container is connected to a medium supply container storing a medium to be supplied to the culture container, and a closed system environment is constructed to perform cell culture. A cell culture kit content liquid sampling method for sampling a cell culture kit content liquid for sampling, wherein the end of the culture container and the medium supply container is closed in a container for storing the content liquid to be sampled A step of moving the contents of the sample take-out flow path to a container provided with the sample take-out flow path in the middle of or after completion of the culture, A step of allowing a part of the content liquid in the container provided with the extraction channel to flow into the sample extraction channel; and There a method comprising the step of cutting while.
さらに、本発明に係るサンプリング補助具は、上記細胞培養用キット内容液のサンプリング方法において、前記サンプル取り出し流路を押し潰して、その内容物を押し退けながら前記サンプル取り出し流路が設けられた容器に移動させ、次いで、前記サンプル取り出し流路を開放することで、前記サンプル取り出し流路が設けられた容器の内容液の一部を前記サンプル取り出し流路に流入させる際に用いるサンプリング補助具であって、前記サンプル取り出し流路の末端側を保持しつつ、前記サンプル取り出し流路を押し潰しながら巻き取る巻取軸と、前記巻取軸の軸受部とを備える構成としてある。 Furthermore, the sampling aid according to the present invention, in the sampling method of the cell culture kit content liquid, in the container provided with the sample extraction channel while crushing the sample extraction channel and pushing away the contents A sampling aid used for moving a part of the content liquid in a container provided with the sample take-out flow path into the sample take-out flow path by moving and then opening the sample take-out flow path; The winding shaft that winds while crushing the sample take-out channel while holding the end side of the sample take-out channel and a bearing portion of the take-up shaft are provided.
本発明によれば、閉鎖系を維持しながら細胞培養用キットが備える任意の容器の内容液をサンプリングできる。 According to the present invention, it is possible to sample the content liquid in an arbitrary container provided in the cell culture kit while maintaining a closed system.
以下、本発明の好ましい実施形態について、図面を参照しつつ説明する。 Hereinafter, preferred embodiments of the present invention will be described with reference to the drawings.
［細胞培養用キット］
まず、本実施形態に係る細胞培養用キットについて説明する。
図１は、細胞培養用キット１の一例を示しており、複数の培養容器２ａ，２ｂ，２ｃが、これらの培養容器２に供給される培地が格納された培地供給容器３に、移送用チューブ４，４ａ，４ｂ、及び三方活栓５ａ，５ｂを介して接続されている。
[Cell culture kit]
First, the cell culture kit according to this embodiment will be described.
FIG. 1 shows an example of a cell culture kit 1. A plurality of
図１に示す例において、培養容器２ａ，２ｂ，２ｃは、培地供給容器３側から順に、一次培養容器２ａ、二次培養容器２ｂ、三次培養容器２ｃとされ、この順に容積が大きくなっている。そして、培地供給容器３から三次培養容器２ｃに向かう移送用チューブ４の経路の途中には、二つの三方活栓５ａ，５ｂが取り付けられており、培地供給容器３側の一方の三方活栓５ａには、移送用チューブ４ａを介して一次培養容器２ａが接続され、他方の三方活栓５ｂには、移送用チューブ４ｂを介して二次培養容器２ｂが接続されている。
また、培養容器２ａ，２ｂ，２ｃ、及び培地供給容器３には、移送用のポートｐ１，ｐ２，ｐ３，ｐ４が一つずつ設けられており、これらのポートｐ１，ｐ２，ｐ３，ｐ４に移送用チューブ４，４ａ，４ｂが接続されている。
In the example shown in FIG. 1, the
The
本実施形態において、培養容器２ａ，２ｂ，２ｃ、及び培地供給容器３のそれぞれは、可撓性材料を用いて袋状（バッグ型）に形成してなり、細胞培養を閉鎖系で行うことができるとともに、培養容器２はＣＯ２インキュベータ内で使用する場合に必要な酸素及び二酸化炭素に対するガス透過性を有している。培地供給容器３は格納している培地のｐＨが変化しないように酸素及び二酸化炭素に対するガスバリア性を有している。さらに、これらの容器２ａ，２ｂ，２ｃ，３は、内容液を確認できるように、一部又は全部が透明性を有している。このような条件を満たす可撓性材料の具体例としては、ポリオレフィン、エチレン−酢酸ビニル共重合体、スチレン系エラストマー、ポリエステル系熱可塑性エラストマー、シリコーン系熱可塑性エラストマー、シリコーンゴムなどが挙げられる。
In the present embodiment, each of the
また、移送用チューブ４，４ａ，４ｂの材質は、使用環境に合わせて適宜選択すればよい。ＣＯ２インキュベータ内で使用する場合は、酸素及び二酸化炭素に対するガス透過性に優れるものが望ましいが、ＣＯ２インキュベータ外で使用する場合は、ガスバリア性に優れるものが望ましい。具体的には、例えば、シリコーンゴム、軟質塩化ビニル樹脂、ポリブタジエン樹脂、エチレン−酢酸ビニル共重合体、塩素化ポリエチレン樹脂、ポリウレタン系熱可塑性エラストマー、ポリエステル系熱可塑性エラストマー、シリコーン系熱可塑性エラストマー、スチレン系エラストマー等を用いることができる。また、スチレン系エラストマーとしては、例えば、ＳＢＳ（スチレン・ブタジエン・スチレン）、ＳＩＳ（スチレン・イソプレン・スチレン）、ＳＥＢＳ（スチレン・エチレン・ブチレン・スチレン）、ＳＥＰＳ（スチレン・エチレン・プロピレン・スチレン）等を用いることができる。
The material of the
このような細胞培養用キット１を用いて細胞培養を行うには、一次培養容器２ａに、無菌環境下で培養対象となる細胞と培地を含む培養液を注入し、培養容器２ａ，２ｂ，２ｃと培地供給容器３とを移送用チューブ４，４ａ，４ｂ、三方活栓５ａ，５ｂを介して図１に示すように接続し、これによって閉鎖系を構築する。そして、特に図示しないが、培地供給容器３の上方に、三次培養容器２ｃ、二次培養容器２ｂ、一次培養容器２ａの順に水平位置が高くなるように、これらの培養容器２ａ，２ｂ，２ｃを配置するとともに、移送用チューブ４の培地供給容器３と三方活栓５ａとの間の部位をチューブポンプＰに取り付ける。
In order to perform cell culture using such a cell culture kit 1, a culture solution containing cells and a medium to be cultured in a sterile environment is injected into the
これにより、三方活栓５ａを操作し、培地供給容器３と一次培養容器２ａとが連通した状態としてチューブポンプＰを駆動することによって、培地供給容器３と一次培養容器２ａとの間の送液が可能となる。
また、三方活栓５ａ，５ｂを操作して一次培養容器２ａと二次培養容器２ｂとが連通した状態とし、必要に応じて移送用チューブ４ａが接続された側が低くなるように一次培養容器２ａを傾けることで、一次培養容器２ａから二次培養容器２ｂへの自然送液による送液が可能となり、三方活栓５ａ，５ｂを操作し、培地供給容器３と二次培養容器２ｂとが連通した状態としてチューブポンプＰを駆動することによって、培地供給容器３と二次培養容器２ｂとの間の送液が可能となる。
同様に、三方活栓５ｂを操作して二次培養容器２ｂと三次培養容器２ｃとが連通した状態とし、必要に応じて移送用チューブ４ｂが接続された側が低くなるように二次培養容器２ｂを傾けることで、二次培養容器２ｂから三次培養容器２ｃへの自然送液による送液が可能となり、三方活栓５ａ，５ｂを操作し、培地供給容器３と三次培養容器２ｃとが連通した状態としチューブポンプＰを駆動することによって、培地供給容器３と三次培養容器２ｃとの間の送液が可能となる。
By operating the three-
Further, the three-
Similarly, the three-
本実施形態にあっては、このようにして容器間での送液を可能とした細胞培養用キット１において、容器間で送液を行う流路の制御機構の妨げとならずに、かつ、閉鎖系を維持しながら培養容器内の培養液（容器内容液）をサンプリングできるように、最後に培養が行われる三次培養容器２ｃに、末端が閉塞された管状のサンプル取り出し流路６を設けてある。
In the present embodiment, in the cell culture kit 1 that enables the liquid feeding between the containers in this way, without interfering with the control mechanism of the flow path for feeding the liquid between the containers, and In order to be able to sample the culture solution (container content solution) in the culture vessel while maintaining the closed system, a tubular sample take-out
このようなサンプル取り出し流路６を設けることにより、当該流路６に容器内容液の一部を流入させて、チューブシーラーなどを用いて、その基端側をヒートシールしつつ切断することによって、閉鎖系を維持した状態で容器内容液をサンプリングすることが可能となる。
なお、サンプル取り出し流路６に容器内容液の一部を流入させてサンプリングする具体的な方法については後述する。
By providing such a sample take-out
A specific method for sampling by sampling a part of the container contents liquid into the sample take-out
本実施形態において、サンプル取り出し流路６の具体的な形態は特に限定されない。培地の状態、雑菌の混入の有無、細胞の状態などを検査するには、通常、５ｍｌ程度のサンプル量を要することを考慮して、その長さや内径などを適宜選択すればよい。
なお、培地の状態の検査には、例えば、細胞の種類によっては、低温保存状態でも分解する成分を含む培地を使用する場合があり、そのような成分が必要量残っているかを検査する検査項目などがあり、細胞の状態の検査には、例えば、培養対象の細胞種が所定の細胞数に増殖しているかを検査する検査項目などがあるのは前述した通りである。
In the present embodiment, the specific form of the sample take-out
In addition, for the inspection of the state of the medium, for example, depending on the type of cell, a medium containing a component that decomposes even in a low-temperature storage state may be used, and an inspection item for inspecting whether the necessary amount of such a component remains As described above, the examination of the state of the cell includes, for example, an examination item for examining whether the cell type to be cultured has grown to a predetermined number of cells.
例えば、サンプル取り出し流路６の長さは、５０〜３００ｍｍとするのが好ましい。上記範囲に満たないと、必要なサンプル量を確保するために内径を大きくしなければならず、サンプル取り出し流路６をヒートシールしつつ切断する作業に支障をきたす虞がある。上記範囲を超えてサンプル取り出し流路６が長くなってしまうと、ハンドリングの邪魔になる虞があるとともに、サンプル量を必要最低限にして無駄をなくそうとすると内径が小さくなってしまい、容器内容液を流入させ難くなる虞がある。
一方、サンプル取り出し流路６をヒートシールしつつ切断する際の作業性や、容器内容液の流入し易さを考慮すると、サンプル取り出し流路６の内径は、３〜１０ｍｍであるのが好ましい。
For example, the length of the sample take-out
On the other hand, in consideration of workability when cutting the sample take-out
サンプル取り出し流路６の基端側をヒートシールしつつ切断したときに、検査に必要なサンプル量が確保できるように、サンプル取り出し流路６の容積を適宜設定しておけば、サンプリングする容器内容液の量が多すぎたり、少なすぎたりすることもなく、適量を容易にサンプリングすることができるが、これに限定されない。例えば、容器内容液の経時的な状態変化を検査する場合などには、そのサンプリング回数に応じて、サンプル取り出し流路６を複数回に分けてヒートシールしつつ切断できるように、ハンドリングの邪魔にならない程度にサンプル取り出し流路６を長くすることもできる。この場合、サンプル取り出し流路６には、長手方向に沿って所定の間隔で目盛を付すなどして、切断する位置によって、どの程度の量のサンプルが確保できるかが容易に分かるようにしておくのが好ましい。
また、複数回のサンプリングが要求される場合には、一つの容器に対して複数のサンプル取り出し流路６を設けてもよい。
Container contents to be sampled if the volume of the sample take-
When a plurality of samplings are required, a plurality of sample take-out
また、サンプル取り出し流路６の材質は、移送用チューブ４，４ａ，４ｂと同様とすることができ、移送用チューブ４，４ａ，４ｂの材質として例示したものの中から、ヒートシール性が良好なものを適宜選択すればよいが、サンプリングした内溶液の変質を防止する観点から、ガスバリア性にも優れているのが好ましい。
The material of the sample take-out
また、サンプル取り出し流路６は、例えば、図１に示すように、移送用のポートｐ１，ｐ２，ｐ３，ｐ４と同様のサンプル取り出し用ポートｐ０を三次培養容器２ｃに取り付けておき、移送用チューブ４，４ａ，４ｂに用いたのと同様のチューブを所定の長さに切断するとともに、その末端をヒートシールするなどして閉塞したものを、当該ポートｐ０に接続することによって設けることができるが、これに限定されない。末端が閉塞された管状の部材を、三次培養容器２ｃを製袋する際に直接取り付けることによって設けてもよい。
Further, as shown in FIG. 1, the sample take-out
［細胞培養用キット内容液のサンプリング方法］
次に、本実施形態に係る細胞培養用キット内容液のサンプリング方法について説明する。
本実施形態では、前述した細胞培養用キット１を用いて細胞培養を行い、培養の途中で又は培養終了後に、最後に培養が行われる三次培養容器２ｃ内の培養液をサンプリング対象としてサンプリングする。
[Sampling method for cell culture kit contents]
Next, a method for sampling the cell culture kit content solution according to this embodiment will be described.
In the present embodiment, cell culture is performed using the above-described cell culture kit 1, and the culture solution in the
サンプリングは、三次培養容器２ｃに設けたサンプル取り出し流路６に、三次培養容器２ｃ内の培養液の一部を流入させて行うが、多くの場合、サンプル取り出し流路６には、三次培養容器２ｃに最初に培養液を移送したときに、その一部が空気とともに成り行き任せで入り込んだままの状態になっており、サンプリングに適した状態となっていない。
Sampling is performed by allowing a part of the culture solution in the
サンプル取り出し流路６が、三次培養容器２ｃ内の培養液と同じ状態の培養液で満たされていなければ、サンプリングの目的を果たせないので、本実施形態では、まず、サンプル取り出し流路６をしごくなどして、サンプル取り出し流路６を押し潰して、その内容物（サンプル取り出し流路６内に入り込んだ空気を含む）を押し退けながら三次培養容器２ｃに移動させる（図２（ａ）参照）。次いで、必要に応じてサンプル取り出し流路６が下側となるように三次培養容器２ｃを傾けるなどしつつ、サンプル取り出し流路６を開放する（図２（ｂ）参照）。
If the sample take-out
これにより、三次培養容器２ｃ内の培養液の一部がサンプル取り出し流路６に流入し、サンプル取り出し流路６が、三次培養容器２ｃ内の培養液と同じ状態の培養液で満たされた状態となる（図２（ｃ）参照）。このような状態としてから、サンプル取り出し流路６の基端側を、チューブシーラーＴなどを用いて、ヒートシールしつつ切断する（図２（ｄ）参照）。
Thereby, a part of the culture solution in the
これによって、閉鎖系を維持した状態で培養液をサンプリングすることが可能となり、切断されたサンプル取り出し流路６は、そのまま検査工程に搬送することができる。
また、このようにして三次培養容器２ｃ内の培養液をサンプリングするに際し、サンプル取り出し流路６の容積を適宜設定しておけば、サンプリングする培養液の量が多すぎたり、少なすぎたりすることもなく、適量の培養液を容易にサンプリングすることができる。
なお、サンプリング回数に応じて、サンプル取り出し流路６を長くして複数回に分けてヒートシールしつつ切断できるようにしてもよいのは、前述した通りである。
As a result, the culture solution can be sampled in a state where the closed system is maintained, and the cut sample take-out
Further, when the culture medium in the
Note that, as described above, the sample take-out
サンプル取り出し流路６の内容物を三次培養容器２ｃに移動させるには、例えば、チューブローラ鉗子などを用いることができる。具体的には、チューブローラ鉗子のローラ部Ｒでサンプル取り出し流路の末端側を挟み、基端側に向かってしごいていくことによって、内容物を押し退けながら三次培養容器２ｃに移動させることができる（図２（ａ）参照）。
In order to move the contents of the sample take-out
また、作業性よく、より容易にサンプル取り出し流路６の内容物を三次培養容器２ｃに移動させるには、図３に示すようなサンプリング補助具１０を用いるのが好ましい。
図３に示すサンプリング補助具１０は、サンプル取り出し流路６の末端側を保持しつつ、サンプル取り出し流路６を押し潰しながら巻き取る巻取軸１１と、この巻取軸１１の軸受部１２とを備えている。
なお、図３は、本実施形態に係るサンプリング補助具の概略を示す説明図であり、図３（ａ）は、その斜視図、図３（ｂ）は、正面図、図３（ｃ）は、側面図である。図３（ｂ）には、巻取軸１１に巻取られたサンプル取り出し流路６を一点鎖線で示している。
Further, in order to move the contents of the sample take-out
A sampling
FIG. 3 is an explanatory view showing an outline of the sampling aid according to the present embodiment. FIG. 3 (a) is a perspective view, FIG. 3 (b) is a front view, and FIG. FIG. In FIG. 3B, the sample take-out
図３に示すサンプリング補助具１０において、巻取軸１１には、サンプル取り出し流路６の末端側を挟持して保持する保持溝１１ａが形成されているが、サンプル取り出し流路６の末端側を保持する機構は、これに限定されない。バネ弾性を利用したクリップ状の機構によって、サンプル取り出し流路６の末端側を保持するようにしてもよい。
In the sampling
また、サンプリング補助具１０は、巻取軸１１を軸周りに回転させるハンドル１３を備えているのが好ましい。サンプル取り出し流路６を巻き取るに際し、巻取軸１１は、モータなどを利用して電動で回転するようにしてもよいが、かかるハンドル１３を備えることで、作業者は、サンプル取り出し流路６の巻き取り具合を適宜確認しつつ、力を加減しながら手動で巻き取ることができる。
The
また、図３に示すサンプリング補助具１０にあっては、円形状とされた軸受部１２の周縁に沿ってガイド壁１４を立設してある。そして、このガイド壁１４には、サンプル取り出し流路６を巻き取る際に、サンプル取り出し流路６を案内しつつガイド壁１４の内側に引き込むための切り欠き１４ａが形成されている。
Further, in the
かかる切り欠き１４ａは、サンプリング対象の内容液が満たされた状態のサンプル取り出し流路６の外径よりも若干大きい幅で形成するのが好ましい。このようにすることで、案内されるサンプル取り出し流路６が切り欠き１４ａの端縁に引っ掛り難くして、案内が妨げられないようにすることができる。
The
また、図３に示すサンプリング補助具１０では、軸受部１２を円形状としているが、軸受部１２は、図４に示すように方形状としてもよく、その具体的な形状は限定されない。ただし、ガイド壁１４を軸受部１２の周縁に沿って立設する場合には、ガイド壁１４の内周面を円筒状に形成するのが好ましい。
なお、図４は、本実施形態に係るサンプリング補助具の変形例の概略を示す説明図であり、図４（ａ）は、斜視図、図４（ｂ）は、正面図、図４（ｃ）は、側面図である。
Further, in the
FIG. 4 is an explanatory diagram showing an outline of a modification of the sampling aid according to the present embodiment. FIG. 4 (a) is a perspective view, FIG. 4 (b) is a front view, and FIG. ) Is a side view.
また、ガイド壁１４の上端側には、巻取軸１１に巻取られるサンプル取り出し流路６を覆う蓋部１５を設けるのが好ましい（図３（ｃ）参照）。このとき、軸受部１２から突出する巻取軸１１の高さと、ガイド壁１４の高さが、サンプル取り出し流路６を押し潰したときの幅よりも若干高くなるように適宜調整することで、サンプル取り出し流路６に巻崩れが生じてしまうのを有効に回避することができる。
サンプリング補助具１０を、このような態様とする場合、少なくとも蓋部１５とガイド壁１４の両方又は一方は、サンプル取り出し流路６の巻き取り具合を目視できる程度の透明性を有しているのが好ましい。
Moreover, it is preferable to provide the
In the case where the sampling
また、操作性を良好なものとするために、サンプリング補助具１０は、図５に示すように巻取軸１１の軸方向と直交する方向に延在する把持部１６を備えているのが好ましい。このような把持部１６を備えることで、例えば、作業者は、一方の手で把持部１６を把持し、他方の手でハンドル１３を操作することによって、その巻き具合を適宜確認しつつ、サンプル取り出し流路６を押し潰しながら巻取軸１１に巻き取っていくことができる。
サンプリング補助具１０が把持部１６を備える態様とする場合、その操作性を考慮すると、ガイド壁１４に形成した切り欠き１４ａと巻取軸１１とを結ぶ方向が、把持部１６が延在する方向に対して斜めに傾くように、当該切り欠き１４ａを形成するのが好ましい（図５（ｃ）参照）。
なお、図５は、本実施形態に係るサンプリング補助具の他の変形例の概略を示す説明図であり、図５（ａ）は、斜視図、図５（ｂ）は、正面図、図５（ｃ）は、側面図である。
Further, in order to improve the operability, it is preferable that the
When the
FIG. 5 is an explanatory diagram showing an outline of another modification example of the sampling aid according to the present embodiment. FIG. 5 (a) is a perspective view, FIG. 5 (b) is a front view, and FIG. (C) is a side view.
このようなサンプリング補助具１０を用いて、サンプル取り出し流路６を巻取軸１１に巻き取った後は、巻き取りを解除してサンプル取り出し流路６を開放する。これにより、サンプリング対象の内容液がサンプル取り出し流路６に流入し、サンプル取り出し流路６がサンプリング対象の内容液で満たされた状態になったら、サンプル取り出し流路６をヒートシールしつつ切断するのは前述した通りである。
After winding the sample take-out
以上、本発明について、好ましい実施形態を示して説明したが、本発明は、前述した実施形態に限定されるものではなく、本発明の範囲で種々の変更実施が可能であることは言うまでもない。 While the present invention has been described with reference to the preferred embodiment, it is needless to say that the present invention is not limited to the above-described embodiment, and various modifications can be made within the scope of the present invention.
例えば、前述した実施形態では、複数の培養容器２ａ，２ｂ，２ｃが培地供給容器３に接続された細胞培養用キット１を一例として示したが、本発明は、このような構成の細胞培養用キット１に限定されることなく実施することができる。
すなわち、少なくとも一つの培養容器が培地供給容器に接続された細胞培養用キットにおいて、いずれかの容器に格納される内容液をサンプリングする場合に広く適用することできる。また、培地供給容器は一つに限らず、複数の培地供給容器から培養容器に培地を供給できるように細胞培養用キットを構成することもできる。
For example, in the above-described embodiment, the cell culture kit 1 in which a plurality of
That is, in the cell culture kit in which at least one culture container is connected to the culture medium supply container, the present invention can be widely applied to the case where the content liquid stored in any container is sampled. Further, the number of medium supply containers is not limited to one, and the cell culture kit can be configured so that the medium can be supplied from a plurality of medium supply containers to the culture container.
また、前述した実施形態では、最後に培養が行われる三次培養容器２ｃにサンプル取り出し流路６を設けた例について説明したが、他の培養容器２ａ，２ｂの一方又は両方にもサンプル取り出し流路６を設けて、他の培養容器２ａ，２ｂ内の培養液のサンプリングができるようにすることもできる。さらに、培地供給容器３にサンプル取り出し流路６を設けて、培地供給容器３内の培地のサンプリングができるようにすることもできる。換言すれば、サンプリング対象の内容液を格納する容器にサンプル取り出し流路６を設けておくことにより、当該内容液をサンプリングすることができる。
In the above-described embodiment, the example in which the sample take-out
本発明は、細胞培養容器を用いて、無菌的かつ簡便に閉鎖系で細胞を培養する遺伝子治療、免疫療法、再生医療、抗体医薬生産などに好適に利用することが可能である。 The present invention can be suitably used for gene therapy, immunotherapy, regenerative medicine, antibody drug production, etc., in which cells are cultured in a closed system aseptically and simply using a cell culture container.
１ 細胞培養用キット
２ａ，２ｂ，２ｃ 培養容器
３ 培地供給容器
６ サンプル取り出し流路
１０ サンプリング補助具
１１ 巻取軸
１２ 軸受部
１３ ハンドル
１４ ガイド壁
１４ａ 切り欠き
１５ 蓋部
１６ 把持部
DESCRIPTION OF SYMBOLS 1
Claims (11)
前記培養容器及び前記培地供給容器の少なくともいずれか一つに、末端が閉塞された管状のサンプル取り出し流路を設けたことを特徴とする細胞培養用キット。 A culture vessel is connected to a culture medium supply container in which a culture medium supplied to the culture container is stored, and is a cell culture kit for constructing a closed system environment and performing cell culture,
A cell culture kit, wherein at least one of the culture container and the culture medium supply container is provided with a tubular sample take-out channel with a closed end.
前記培養容器及び前記培地供給容器のうち、サンプリング対象の内容液を格納する容器に、末端が閉塞された管状のサンプル取り出し流路を設けておき、
培養の途中で又は培養終了後に、
前記サンプル取り出し流路が設けられた容器に、前記サンプル取り出し流路の内容物を移動させる工程と、
前記サンプル取り出し流路が設けられた容器の内容液の一部を前記サンプル取り出し流路に流入させる工程と、
前記サンプル取り出し流路をヒートシールしつつ切断する工程と
を含むことを特徴とする細胞培養用キット内容液のサンプリング方法。 Cell culture kit contents for sampling the contents of a cell culture kit that is connected to a culture medium supply container in which a culture medium supplied to the culture container is stored, constructs a closed environment, and performs cell culture A liquid sampling method,
Among the culture container and the culture medium supply container, a container for storing the content liquid to be sampled is provided with a tubular sample extraction flow path whose end is closed,
During or after culturing,
Moving the contents of the sample removal channel to a container provided with the sample removal channel;
Flowing a part of the content liquid in the container provided with the sample take-out flow path into the sample take-out flow path;
And a step of cutting the sample take-out flow path while heat-sealing, and a method for sampling a cell culture kit content solution.
前記サンプル取り出し流路の末端側を保持しつつ、前記サンプル取り出し流路を押し潰しながら巻き取る巻取軸と、
前記巻取軸の軸受部と
を備えることを特徴とするサンプリング補助具。 A sampling aid for use in the method for sampling a cell culture kit content solution according to claim 6,
A winding shaft that winds while crushing the sample take-off channel while holding the end side of the sample take-out channel,
A sampling auxiliary tool comprising a bearing portion of the winding shaft.
前記サンプル取り出し流路を巻き取る際に、前記サンプル取り出し流路を案内しつつ前記ガイド壁の内側に引き込むための切り欠きを前記ガイド壁に形成した請求項７又は８に記載のサンプリング補助具。 A guide wall is erected along the peripheral edge of the bearing portion,
The sampling auxiliary tool according to claim 7 or 8, wherein when the sample take-out flow path is wound, a notch is formed in the guide wall for guiding the sample take-out flow path to be drawn inside the guide wall.
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