JP2016535734A - コリン及びその誘導体を含む組成物、その用途及び調製方法 - Google Patents

Abstract

本発明は、コリン及びその水溶性誘導体を含む組成物、自然源からのそれらの調製方法及びそれらの用途を提供する。

Description

本発明は、コリン及びその水溶性誘導体を含む組成物、その調製方法及び用途を提供する。

本明細書で開示した発明の主題の背景として関連があるとみなせる文献を以下に記載する：
１．Ｂｌｕｓｚｔａｊｎ ＪＫ． Ｃｈｏｌｉｎｅ， ａ ｖｉｔａｌ ａｍｉｎｅ． Ｓｃｉｅｎｃｅ １９９８； ２８１（５３７８）７９４−７９５．
２．Ｚｅｉｓｅｌ ＳＨ． Ｃｈｏｌｉｎｅ： ａｎ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｆｏｒ ｈｕｍａｎｓ． Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ２０００；１６（７−８）：６６９−６７１．
３．Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ Ｂｏａｒｄ， Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ． Ｃｈｏｌｉｎｅ． Ｉｎ： Ｄｉｅｔａｒｙ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｉｎｔａｋｅｓ ｆｏｒ Ｔｈｉａｍｉｎ， Ｒｉｂｏｆｌａｖｉｎ， Ｎｉａｃｉｎ， Ｖｉｔａｍｉｎ Ｂ６， Ｖｉｔａｍｉｎ Ｂ１２， Ｐａｎｔｏｔｈｅｎｉｃ Ａｃｉｄ， Ｂｉｏｔｉｎ， ａｎｄ Ｃｈｏｌｉｎｅ． Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ， Ｄ．Ｃ．： Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ Ｐｒｅｓｓ， １９９８：３９０−４２２．
４．Ｈｏｌｍｅｓ−ＭｃＮａｒｙ ＭＱ， Ｃｈｅｎｇ ＷＬ， Ｍａｒ ＭＨ， Ｆｕｓｓｅｌｌ Ｓ， Ｚｅｉｓｅｌ ＳＨ． Ｃｈｏｌｉｎｅ ａｎｄ ｃｈｏｌｉｎｅ ｅｓｔｅｒｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ａｎｄ ｒａｔ ｍｉｌｋ ａｎｄ ｉｎ ｉｎｆａｎｔ ｆｏｒｍｕｌａｓ． Ａｍ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｎｕｔｒ． １９９６ Ｏｃｔ；６４（４）：５７２−６．
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８．Ｆｌｏｒｉaｎ Ｊ． ａｎｄ Ｗａｒｓｈｅｌ． Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ｅｓｔｅｒ Ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ｉｎ Ａｑｕｅｏｕｓ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ： Ａｓｓｏｃｉａｔｉｖｅ ｖｅｒｓｕｓ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｖｅ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ． Ａ． Ｊ． Ｐｈｙｓ． Ｃｈｅｍ． Ｂ， １９９８， １０２ （４）， ｐｐ ７１９−７３４．
９．Ｋａｍｅｒｌｉｎ ＳＣ， Ｆｌｏｒｉaｎ Ｊ， Ｗａｒｓｈｅｌ Ａ． Ａｓｓｏｃｉａｔｉｖｅ ｖｅｒｓｕｓ ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｖｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｍｏｎｏｅｓｔｅｒ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ： ｏｎ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｐｒｅｔａｔｉｏｎ ｏｆ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｅｎｔｒｏｐｉｅｓ． Ｃｈｅｍｐｈｙｓｃｈｅｍ． ２００８ Ａｕｇ ２５；９（１２）：１７６７−７３．
１０．Ｖｉｎｃｅｎｔ ＪＢ， Ｃｒｏｗｄｅｒ ＭＷ， Ａｖｅｒｉｌｌ ＢＡ． Ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ｏｆ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｍｏｎｏｅｓｔｅｒｓ： ａ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｐｒｏｂｌｅｍ ｗｉｔｈ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ． Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｓｃｉ． １９９２ Ｍａｒ；１７（３）：１０５−１０．
１１．ＵＳ ２８６４８４８ Ａ１ − Ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ １−ａｌｐｈａ−ｇｌｙｃｅｒｙｌｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌｃｈｏｌｉｎｅ．
１２．ＷＯ ２００７０１０８９２ Ａ１ − Ｎｏｖｅｌ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ａｇｅｎｔ．
１３． Ｏｚａｒｄａ Ｙ１， Ｃａｎｓｅｖ Ｍ， Ｕｌｕｓ ＩＨ． Ｂｒｅａｓｔ ｍｉｌｋ ｃｈｏｌｉｎｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ａｒｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｓｔａｔｕｓ ｏｆ ｂｒｅａｓｔｆｅｅｄｉｎｇ ｗｏｍｅｎ． Ｊ Ｈｕｍ Ｌａｃｔ． ２０１４ Ｍａｙ；３０（２）：１６１−６．
１４． Ｏｚａｒｄａ Ｙ１， Ｃａｎｓｅｖ Ｍ， Ｕｌｕｓ ＩＨ． Ｒｅｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｂｒｅａｓｔｍｉｌｋ ｃｈｏｌｉｎｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｗｉｔｈ ｍａｔｅｒｎａｌ ｈｏｒｍｏｎａｌ ｓｔａｔｕｓ． Ｂｒｅａｓｔｆｅｅｄ Ｍｅｄ． ２０１４ Ｊａｎ−Ｆｅｂ；９（１）：３９−４１．
１５．Ｋａｎｎｅｒ Ｊ ａｎｄ Ｌａｐｉｄｏｔ Ｔ． Ｔｈｅ ｓｔｏｍａｃｈ ａｓ ａ ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ： ｄｉｅｔａｒｙ ｌｉｐｉｄ ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｇａｓｔｒｉｃ ｆｌｕｉｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｐｌａｎｔ−ｄｅｒｉｖｅｄ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ， Ｆｒｅｅ Ｒａｄｉｃａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ， Ｖｏｌｕｍｅ ３１， Ｉｓｓｕｅ １１， ２００１， Ｐａｇｅｓ １３８８−１３９５．
本明細書に記載した上記文献の承認は、これらの文献がいかなる形であれ、現在開示した発明の主題の特許性に関連があることを意味するものと推定されるべきではない。

コリンは必須の食事成分であり、哺乳動物は少量のコリンを合成できるが健康を維持するために消費する必要がある。例えば、ホスホコリン（ＰＣｈ）、グリセロホスホコリン（ＧＰＣ）及びコリン（遊離コリン及びコリン塩）のような水溶性コリン化合物は、細胞膜の構造的完全性の保持、細胞シグナル伝達、神経インパルス伝達、脂質（脂肪）輸送及び代謝を含む多くの基本的な生体機能に役立ち、かつメチル基源でもある。

１９９８年に、医学研究所の食品栄養委員会（ＦＮＢ）はコリンの適正摂取量を設定した（表１）。コリンのＡＩを確定する主な判定基準は肝臓障害の阻止であった。

現在の市販ＧＰＣ、ＰＣｈ及びコリン源は、自然発生または合成的に製造されたかのいずれかである。自然発生源は、ＧＰＣ、コリン及びＰＣｈ含量の変動が大きく、かつ最小レベルという本質的欠点（ＵＳＤＡ Ｄａｔａｂａｓｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃｈｏｌｉｎｅ Ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ Ｃｏｍｍｏｎ Ｆｏｏｄｓ、 ２００８を参照）を有しており、故に食事補給に適さない。

したがって、コントロールされた濃縮精製形態として得られるＧＰＣ、コリン及びＰＣｈ源の唯一の供給源は合成に由る。コリン、ＧＰＣ及びＰＣｈの合成供給源は異なる出発原料から化学的または酵素的方法で形成される。合成供給源は、一般に食品用途、特に幼児栄養で合成品の使用が制限される望ましくない出発原料または触媒のいずれかが使用される。

これらの合成品の限界以外にも、ＰＣｈ及びＧＰＣを含むリン酸エステル化合物は潜在的な不安定化合物であり、高温、酸素及び水に晒すと不安定化する予測データが以前に示された。更に、研究では金属イオンが燐酸の負電荷を中和し、求核攻撃をより受けやすくすることを示した。また、金属イオンは、以下：(ａ)配位による脱離基（ＲＯ−）の安定化、(ｂ)生理的ｐＨで有効なＯＨ−求核試薬の供給、及び(ｃ)効果的に分子内反応をさせるための反応物Ｈ_２Ｏ及びＲＯＰＯ_３ ^−２の構成、の一部または全部に起因してリン酸エステルの加水分解速度を加速する可能性があるが、これらの要因による制限を受けることを望むものではない。例えば、製造工程の間で特殊調整粉乳は、ＰＣｈ及びＧＰＣ化合物にとって問題のある高リスクパラメータ−である加水反応、高温、酸素及び金属イオンを全て含む環境に晒される。したがって、特殊調整粉乳へこれらの化合物が添加されると分解リスクが高いと言える。

人乳から採取したデータは、水溶性コリン化合物の濃度は、異なるコリン化合物間の比で一貫性がないことを示す。一部の研究ではＰＣｈが主化合物、その次がＧＰＣである一方、他の研究では正反対を示した。ＰＣｈとＧＰＣは人乳で最も一般的なコリン化合物であるが、水溶性コリン化合物の補給に関しては推奨や規制は定義されていない。特殊調整粉乳は、通常コリン塩、特に重酒石酸コリンと塩化コリンだけで補充されるため人乳と比較してコリン含量が非常に高い。

複数の研究で、コリンは腸管内菌叢による代謝を受け、代謝産物：トリメチルアミン（ＴＭＡ）とトリメチルアミンＮ-オキシド（ＴＭＡＯ）を生成することが示されたため、コリン補給は副作用を増進させる可能性がある。これらの分子は、独立の大規模臨床コホートでＣＶＤリスクが予測されており、アテローム性動脈硬化とＣＶＤリスクに関連する複数のマクロファージスカベンジャー受容体のアップレギュレーションを促進することが分かった。

本発明の第1態様においては、ＧＰＣ、ＰＣｈ及びコリンからなる群から選択される少なくとも1つの水溶性コリン化合物を含む組成物の提供がある。前記の少なくとも1つの可溶性コリン化合物は、少なくとも1つの自然源に由来し、前記の少なくとも1つの水溶性コリン化合物の濃度は、組成物の少なくとも０．５重量％（ｗ/ｗ）である。

「ｗ/ｗパーセンテージ」または「％ ｗ/ｗ」という用語は乾物重の重量百分率を意味する。

「水溶性コリン化合物」という用語は、例えばコリン（遊離コリンとコリン塩（例えば、塩化コリン、重酒石酸コリン及びクエン酸コリン）の両方を含む）、ＰＣｈ、ＧＰＣ及びその任意の誘導体を含む化合物のような水に溶解する任意のコリン誘導体を意味する。

「少なくとも１つの水溶性コリン化合物」という用語は、単一水溶性コリン化合物または上述したような水溶性コリン化合物誘導体の任意の組み合わせを意味する。したがって、少なくとも１つの水溶性コリン化合物は、コリン、ＰＣｈ、ＧＰＣから選択される１つの水溶性コリン化合物、または２つの水溶性コリン化合物（コリンとＰＣｈ、またはコリンとＧＰＣ、またはＧＰＣとＰＣｈ）、あるいは、３つの水溶性コリン化合物（コリンとＰＣｈとＧＰＣ）を意味してもよい。

本発明の全体を通して、「組成物」という用語は、対象に投与、代謝される目的で工業的手段によって製造されるか、一部の実施形態では自然源に由来してもよい、あらゆるタイプの医薬品、機能性食品、食品組成物または補助剤を包含するが、自然の生成物ではなく、例えば人乳のような任意の自然発生組成物を包含すると解釈することはできないと留意することが重要である。

本発明の第１態様で記載したように、前記の少なくとも１つの水溶性コリン化合物の濃度は、単一化合物または水溶性コリン化合物誘導体の組み合わせにかかわらず、少なくとも組成物の０．５重量％（ｗ/ｗ）である。いくつかの実施形態においては、前記の少なくとも１つの水溶性コリン化合物は組成物の少なくとも１重量％（ｗ/ｗ）、他の実施形態では組成物の少なくとも３重量％（ｗ/ｗ）、さらなる実施形態では組成物の５重量％（ｗ/ｗ）、さらに他の実施形態では組成物の少なくとも１０重量％（ｗ/ｗ）及び他の実施形態では組成物の少なくとも２０重量％（ｗ/ｗ）である。

いくつかの他の実施形態においては、前記組成物はＧＰＣ、ＰＣｈ、コリンまたはその任意の組み合わせ（すなわち、コリンとＧＰＣ、コリンとＰＣｈ、ＧＰＣとＰＣｈの組み合わせの任意の１つ）からなる群から選択される少なくとも２つの水溶性コリン化合物の組み合わせを含む。他の実施形態では、前記組成物はＧＰＣ、ＰＣｈ及びコリンからなる３つの水溶性コリン化合物の組み合わせを含む。

いくつかの実施形態では、前記水溶性コリン化合物はＰＣｈを含み、その濃度は組成物の少なくとも０．２重量％（ｗ/ｗ）である。いくつかの実施形態においては、本発明の組成物中のＰＣｈ濃度は、組成物の少なくとも０．５重量％（ｗ/ｗ）、他の実施形態では組成物の少なくとも１重量％（ｗ/ｗ）、さらに他の実施形態では組成物の少なくとも２％重量％（ｗ/ｗ）及び更なる実施形態では組成物の少なくとも５重量％（ｗ/ｗ）である。

いくつかの他の実施形態では、前記水溶性コリン化合物はＧＰＣを含み、その濃度は組成物の少なくとも０．５重量％（ｗ/ｗ）である。いくつかの実施形態においては、本発明の組成物のＧＰＣ濃度は、組成物の少なくとも１重量％（ｗ/ｗ）、他の実施形態では組成物の少なくとも３重量％（ｗ/ｗ）、更なる実施形態では組成物の５重量％（ｗ/ｗ）、他の実施形態では組成物の少なくとも１０重量％（ｗ/ｗ）、及び更に他の実施形態では組成物の少なくとも２０重量％（ｗ/ｗ）である。

更なる実施形態では、前記組成物は前記水溶性コリン化合物と同様、２種またはそれ以上の水溶性コリン化合物の組み合わせを含み、水溶性コリン化合物の１つはＧＰＣであり、前記ＧＰＣは前記水溶性コリン化合物の少なくとも２０重量％（ｗ/ｗ）を構成する。他の実施形態では、ＧＰＣは水溶性コリン化合物の約２０〜約７０重量％（ｗ/ｗ）を占める。他の実施形態では、ＧＰＣは水溶性コリン化合物の約３０〜約６０重量％（ｗ/ｗ）、さらに他の実施形態では水溶性コリン化合物の約４０〜約５０重量％（ｗ/ｗ）を占める。

いくつかの実施形態では、前記組成物は、前記水溶性コリン化合物と同様、ＰＣｈとコリンの組み合わせを（一部の他の実施形態ではＧＰＣ、ＰＣｈ及びコリンを共に）含み、ＰＣｈ及びコリンは、水溶性コリン化合物の少なくとも合計で１重量％（ｗ/ｗ）を構成する。更なる実施形態では、ＰＣｈ及びコリンは水溶性コリン化合物の約１〜約６０重量％（ｗ/ｗ）を占める。他の実施形態では、ＰＣｈ及びコリンは、水溶性コリン化合物の約１０〜約５０重量％（ｗ/ｗ）、さらに他の実施形態では水溶性コリン化合物の約２０〜約４０重量％（ｗ/ｗ）を占める。

いくつかの実施形態においては、前記組成物は、前記水溶性コリン化合物と同様、ＧＰＣ、ＰＣｈ及び任意選択でコリン、またはＧＰＣ、コリン及び任意選択でＰＣｈの組み合わせを含み、ＰＣｈ及びコリンは、水溶性コリン化合物の少なくとも合計で１重量％（ｗ/ｗ）を構成する。更なる実施形態では、ＰＣｈ及びコリンは水溶性コリン化合物の約１〜約６０重量％（ｗ/ｗ）を占める。他の実施形態では、ＰＣｈ及びコリンは水溶性コリン化合物の約１０〜約５０重量％（ｗ/ｗ）、さらに他の実施形態では水溶性コリン化合物の約２０〜約４０重量％（ｗ/ｗ）を占める。

前記の少なくとも１つの水溶性コリン化合物は「自然源に由来する」との事実に言及する場合、前記水溶性コリン化合物の起源は自然源であって、すなわち合成源ではないことを包含すると解釈すべきである。一部の実施形態では、前記の少なくとも１つの自然源は植物源、哺乳動物の乳、動物源、卵、海洋源、微生物または養殖生物及それらの任意の組み合わせからなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、自然源は哺乳動物の乳（牛乳、山羊乳、羊乳、水牛乳及びその他）を含み、一部の実施形態では自然源は牛乳を含む。

「自然源」という用語は、任意の一般的な産物及び公知産物またはその原料に由来する食品（例えば、牛乳、脱脂牛粉乳などに由来するホエータンパク質）を含んでもよい。一般的食材は、一般に食材として食べられる材料を意味する。しかし、そのような一般的食品は任意選択で調製中に食品に加えられた他の物質を含んでよい。例えば、ホエータンパク質はチーズ調製工程の間で添加される多量の食塩を含有してもよい。

いくつかの実施形態では、前記組成物はＴＭＡ、ＴＭＡＯ、エチレンオキシド、グリシドール及びそれらの任意の組み合わせの少なくとも１つを最大限で１ｐｐｍ含む。他の実施形態においては、前記組成物は、ＴＭＡ、ＴＭＡＯ、エチレンオキシド、グリシドール及びそれらの任意の組み合わせの少なくとも１つを最大限で１０ｐｐｍ含み、前記組成物は、ＴＭＡ、ＴＭＡＯ、エチレンオキシド、グリシドール及び任意のそれらの組み合わせの少なくとも１つを最大限で２０ｐｐｍ含み、及びさらに他の実施形態では最大限で５０ｐｐｍ含む。

したがって、本発明は、少なくともいくつかの実施形態において、自然源、非合成的源から精製した濃縮水溶性コリン化合物を含む組成物を提供することによって先行技術の欠点を克服しており、故に合成的な調製物（例えば、エチレンオキシド、グリシドール、ＴＭＡなど）に使用される前駆体を含まないし、またそのような調製物を合成するために必要な物質、例えば最終生成物にわずかに残留または有害な副生物を生み出す可能性がある触媒（化学的または酵素的のどちらでも）も含まない。

更なる態様においては、本発明は、少なくとも１つの水溶性コリン化合物を含む組成物の調製方法を提供し、前記の少なくとも１つの水溶性コリン化合物は少なくとも１つの自然源に由来し、前記の少なくとも１つの水溶性コリン化合物の前記濃度は組成物の少なくとも０．５重量％（ｗ/ｗ）であり、前記方法は、以下の段階からなる：（ｉ）コリンの少なくとも１つの自然源を供給する、（ｉｉ）コリンの前記の少なくとも１つの自然源を精製する。

水溶性コリン化合物の既存の自然源は、当該化合物の非常に低濃度でかつ非常に変動しやすい濃度を有している。したがって、水溶性コリン化合物の投与用途には商業的に有用でない。

本発明者は、混合物の少数部（例えば、混合物の５０％未満）である不純物を除去することを目的とした技術は、非常に低残留レベルからのこれらの不純物の精製、出発原料の５０％以上、好ましくは混合物の８０％以上または９０％もの除去にも効果的であることを実証した。

本発明の方法のいくつかの実施形態においては、コリンの前記の少なくとも１つの自然源は、０．５重量％（ｗ/ｗ）未満のＧＰＣ、０．５重量％（ｗ/ｗ）ＰＣｈ、及び／または０．５重量％（ｗ/ｗ）コリンを含む。本発明の方法の更なる実施形態においては、コリンの前記の少なくとも１つの自然源は、最大限で１重量％（ｗ/ｗ）ＧＰＣ、０．５重量％（ｗ/ｗ）ＰＣｈ及び／または０．５重量％（ｗ/ｗ）コリンを含む。更なる実施形態では、コリンの前記の少なくとも１つの自然源は、最大限で０．４重量％（ｗ/ｗ）ＧＰＣ、０．４重量％（ｗ/ｗ）ＰＣｈ及び０．４重量％（ｗ/ｗ）コリンを含む。他の実施形態では、コリンの前記の少なくとも１つの自然源は、最大限で０．３重量％（ｗ/ｗ）ＧＰＣ、０．３重量％（ｗ/ｗ）ＰＣｈ及び０．３重量％（ｗ/ｗ）コリンを含む。他の実施形態では、コリンの前記の少なくとも１つの自然源は、最大限で０．２重量％（ｗ/ｗ）ＧＰＣ、０．２ 重量％（ｗ/ｗ）ＰＣｈ及び／または０．２重量％（ｗ/ｗ）コリンを含む。

本発明の方法の更なる実施形態では、前記精製としては、抽出、結晶化、クロマトグラフィー、イオン交換精製、膜精製、限外ろ過、ナノろ過、精密ろ過、電気透析または水洗浄が挙げられるが、これに限定されない。

別の実施形態では、本発明の方法は、（ｉｉｉ）１〜４の炭素原子のアルコールを含む有機溶媒で前記自然源を抽出する、段階を含む。

別の実施形態では、係る方法は、前記水溶性コリン化合物の濃度が制御可能な組成物をもたらす。「制御可能」とは、濃度が、例えば組成物の需要または最終用途（例えば、対象による摂取）に従って任意選択で増減してもよいことを意味する。

別の１つのその態様では、本発明は、ＧＰＣ、ＰＣｈ及びコリンからなる群から選択される少なくとも２つの水溶性コリン化合物からなる組成物を提供し、前記の少なくとも２つの水溶性コリン化合物は、組成物の少なくとも０．５重量％（ｗ/ｗ）を占め、ＰＣｈ及びコリンは、前記水溶性コリン化合物の少なくとも合計で１重量％（ｗ/ｗ）を占める。

組成物は、ＰＣｈまたはコリンの１つを含まない場合は、それらの濃度はゼロであることに留意する。したがって、いくつかの実施形態では、「ＰＣｈ及びコリン」という用語は２つの水溶性コリン化合物を意味し、他の実施形態では、ＰＣｈが組成物の水溶性コリン化合物の一部でない場合は、係る用語はコリンのみを述べ、さらに他の実施形態で、コリンが組成物の水溶性コリン化合物の一部でない場合は、係る用語はＰＣｈのみを述べる。

いくつかの実施形態では、組成物はＧＰＣ、ＰＣｈ及びコリンを含む。

いくつかの実施形態では、前記水溶性コリン化合物は前記組成物の約１〜１００重量％（ｗ/ｗ）を占める。他の実施形態では、前記水溶性コリン化合物は組成物の少なくとも１重量％（ｗ/ｗ）を占める。他の実施形態においては、前記水溶性コリン化合物は、組成物の少なくとも３重量％（ｗ/ｗ）、更なる実施形態では、組成物の５重量％（ｗ/ｗ）、更に他の実施形態では、組成物の少なくとも１０重量％（ｗ/ｗ）、及び他の実施形態では、組成物の少なくとも２０重量％（ｗ/ｗ）を占める。

いくつかの実施形態では、ＰＣｈ濃度は組成物の少なくとも０．２重量％（ｗ/ｗ）である。いくつかの実施形態においては、本発明の組成物中のＰＣｈ濃度は組成物の少なくとも０．５重量％（ｗ/ｗ）、他の実施形態では、組成物の少なくとも１重量％（ｗ/ｗ）、さらに他の実施形態では組成物の少なくとも２重量％（ｗ/ｗ）及び更なる実施形態では組成物の少なくとも５重量％（ｗ/ｗ）である。

いくつかの他の実施形態においては、ＧＰＣ濃度は、組成物の少なくとも０．５重量％（ｗ/ｗ）である。いくつかの実施形態においては、本発明の組成物のＧＰＣ濃度は、組成物の少なくとも１重量％（ｗ/ｗ）、他の実施形態では、組成物の少なくとも３重量％（ｗ/ｗ）、更なる実施形態では組成物の５重量％（ｗ/ｗ）、他の実施形態では組成物の少なくとも１０重量％（ｗ/ｗ）及びさらに他の実施形態では、組成物の２０重量％（ｗ/ｗ）である。

他の実施形態では、前記ＧＰＣは、前記水溶性コリン化合物の少なくとも２０重量％（ｗ/ｗ)を占める。他の実施形態では、前記ＧＰＣは前記水溶性コリン化合物の２０〜約７０重量％（ｗ/ｗ）を占める。他の実施形態では、前記ＧＰＣは水溶性コリン化合物の約３０〜約６０重量％（ｗ/ｗ）、さらに他の実施形態では、水溶性コリン化合物の約４０〜約５０重量％（ｗ/ｗ）を占める。

いくつかの実施形態では、前記ＰＣｈは前記水溶性コリン化合物の約１〜７０重量％（ｗ/ｗ）を占める。他の実施形態では、前記ＰＣｈは水溶性コリン化合物の約２０〜約６０重量％（ｗ/ｗ）、さらに他の実施形態では、水溶性コリン化合物の約３０〜約４０重量％（ｗ/ｗ）を占める。

他の実施形態では、前記コリンは前記水溶性コリン化合物の約１〜２５重量％（ｗ/ｗ）を占める。他の実施形態では、前記コリンは水溶性コリン化合物の約５〜約２０重量％、さらに他の実施形態では、水溶性コリン化合物の約１０〜約１５重量％（ｗ/ｗ）を占める。

この態様の下では、前記水溶性コリン化合物は、コリンまたはその組成物の任意の入手可能源に由来することを理解されたい。いくつかの実施形態では、前記ＧＰＣ、ＰＣｈまたはコリンの少なくとも１つは自然源に由来する。他の実施形態では、前記ＧＰＣ、ＰＣｈまたはコリンの前記の少なくとも１つは合成源に由来する。

いくつかの実施形態では、前記組成物はＴＭＡ、ＴＭＡＯ、エチレンオキシド、グリシドール及びその任意の組み合わせの少なくとも１つを最大限で１ｐｐｍ含む。他の実施形態では、前記組成物はＴＭＡ、ＴＭＡＯ、エチレンオキシド、グリシドール及びその任意の組み合わせの少なくとも１つを最大限で１０ｐｐｍ含む。他の実施形態においては、前記組成物はＴＭＡ、ＴＭＡＯ、エチレンオキシド、グリシドール及びその任意の組み合わせの少なくとも１つを最大限で２０ｐｐｍ、ＴＭＡ、ＴＭＡＯ、エチレンオキシド、グリシドール及びその任意の組み合わせの少なくとも１つを最大限で３０ｐｐｍ、更に他の実施形態では、最大限で５０ｐｐｍ含む。

更なる態様では、本発明はＧＰＣ及びＰＣｈを含む組成物を提供し、ＰＣｈのモル濃度はＧＰＣのモル濃度より大きい。

更なる態様では、本発明はＧＰＣ及びＰＣｈを含む組成物を提供し、ＰＣｈのモル濃度はＧＰＣのモル濃度に等しい。

いくつかの実施形態では、ＧＰＣ及びＰＣｈは組成物の少なくとも０．０５重量％（ｗ/ｗ）を占める。

いくつかの実施形態では、前記のＧＰＣ及びＰＣｈは、組成物の少なくとも０．１重量％（ｗ/ｗ）、他の実施形態では、組成物の少なくとも０．５重量％（ｗ/ｗ）、更なる実施形態では、組成物の少なくとも１重量％（ｗ/ｗ）、他の実施形態では、組成物の少なくとも２重量％（ｗ/ｗ）、更なる実施形態では、組成物の少なくとも５重量％（ｗ/ｗ）を占める。他の実施形態では、組成物の少なくとも１０重量％（ｗ/ｗ）、更なる実施形態では、組成物の少なくとも２０重量％（ｗ/ｗ）を占める。

更なる実施形態では、前記組成物は更にコリンを含み、ＧＰＣ、ＰＣｈ及びコリンは組成物の少なくとも０．０５重量％（ｗ/ｗ）を占める。

いくつかの実施形態では、前記ＧＰＣ、ＰＣｈ及びコリンは組成物の少なくとも０．１重量％（ｗ/ｗ）、他の実施形態では、組成物の少なくとも０．５重量％（ｗ/ｗ）、更なる実施形態では、組成物の少なくとも１重量％（ｗ/ｗ）、他の実施形態では、組成物の少なくとも２重量％（ｗ/ｗ）、更なる実施形態では、組成物の少なくとも５重量％（ｗ/ｗ）を占める。他の実施形態では、組成物の少なくとも１０重量％（ｗ/ｗ）、更なる実施形態では組成物の少なくとも２０重量％（ｗ/ｗ）。

いくつかの更なる実施形態では、前記組成物は少なくとも１２か月間、２０〜３０℃の貯蔵温度で化学的に安定であることができる。他の実施形態では、前記組成物は少なくとも１２か月間、２３〜２７℃の貯蔵温度で化学的に安定であることができる。他の実施形態では、前記組成物は少なくとも１２か月間、２５℃の貯蔵温度で化学的に安定であることができる。

別の実施形態では、ＧＰＣ及びＰＣｈ濃度（ｌｅｖｅｌ）は少なくとも３か月間、最高４２℃で安定であり、分解は最大で２０％である。更なる実施形態では、ＧＰＣ及びＰＣｈ濃度（ｌｅｖｅｌ）は少なくとも３か月間、３８〜４２℃で安定である。場合によっては、当該濃度（ｌｅｖｅｌ）は少なくとも４か月間安定である。場合によっては、当該濃度（ｌｅｖｅｌ）は最大６か月間安定である。

更なる実施形態では、前記安定性は、少なくとも１つの水溶性コリン化合物の分解レベルが２０重量％（ｗ/ｗ）未満であることを意味する。他の実施形態では、前記組成物は、少なくとも１つの水溶性コリン化合物の分解レベルが１５重量％（ｗ/ｗ）未満である。更なる実施形態においては、前記組成物は、少なくとも１つの水溶性コリン化合物の分解レベルが１０重量％（ｗ/ｗ）未満、更に別の実施形態では、５重量％（ｗ/ｗ）未満である。

更なる実施形態では、前記安定性は、ＧＰＣ及び／またはＰＣｈの分解レベルが２０重量％（ｗ/ｗ）または未満であることを意味する。他の実施形態では、前記組成物は、ＧＰＣ及び／またはＰＣｈの分解レベルが１５重量％（ｗ/ｗ）または未満である。更なる実施形態では、前記組成物は、ＧＰＣ及び／またはＰＣｈの分解レベルが１０重量％（ｗ/ｗ）または未満、更に別の実施形態では、５％または未満、好ましくは１％または未満である。

いくつかの更なる実施形態では、ＧＰＣのモル濃度はコリンのモル濃度より大きい（すなわち［ＰＣｈ］＞［ＧＰＣ］＞［コリン］）。他の実施形態では、コリンのモル濃度はＧＰＣのモル濃度より大きく、ＰＣｈのモル濃度より低い（すなわち［ＰＣｈ］＞［コリン］＞［ＧＰＣ］）。さらに他の実施形態では、コリンのモル濃度はＰＣｈのモル濃度より大きい（すなわち［コリン］＞［ＰＣｈ］＞［ＧＰＣ］）。更なる実施形態では、ＰＣｈのモル濃度はコリンのモル濃度より大きい。

更なる実施形態では、ＰＣｈ対ＧＰＣの重量比は少なくとも約０．７０である。いくつかの実施形態では、ＰＣｈ対ＧＰＣの重量比は少なくとも約０．８である。他の実施形態では、ＰＣｈ対ＧＰＣの重量比は少なくとも約１である。更なる実施形態では、ＰＣｈ対ＧＰＣの重量比は少なくとも約１．１または１．２である。他の実施形態では、少なくとも１．５、他の実施形態では、少なくとも２、さらに別の実施形態では、少なくとも約３である。

本発明のいくつかの実施形態では、組成物は更にベタインを含む。

他の実施形態では、本発明の前記組成物は、医薬品、栄養補助食品（ｄｉｅｔａｒｙ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）、医療食（ｍｅｄｉｃａｌ ｆｏｏｄ）、栄養組成物または栄養補助組成物（ｎｅｕｔｒａｃｅｕｔｉｃａｌ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）に調合される。

別の態様では、本発明は、医薬品、栄養補助食品、医療食、栄養組成物または栄養補助組成物の調製に使用するために、先に記載されている本発明の組成物を提供する。

別の態様では、本発明は、本発明の組成物を含む医薬品、栄養補助食品、医療食、栄養組成物または栄養補助組成物を提供する。

本明細書で使用する医療食は、病気、障害または、正常食単独では満たすことが困難な特別な栄養需要を有する状態に苦しむ対象の食事管理を目的に配合されている任意の食品である。

本発明のある特定の他の非限定的実施形態においては、本発明の組成物は、ビスケット、ペーストリー、ケーキ、パン、シリアル、バー（ｂａｒ）、スナック、丸剤、錠剤、粒剤、糖剤、カプセル、軟質ゲル、シロップ、特殊調整粉乳、粉ミルク、幼児用食品（ｔｏｄｄｌｅｒ ｆｏｏｄ）、成人用配合乳（ａｄｕｌｔ ｆｏｒｍｕｌａ）、医用栄養食品（ｍｅｄｉｃａｌ ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔ）、キャンディー、グミ（ｇｕｍｍｙ）または菓子類から選択される食品または栄養補助食品に配合される。

経口投与に適した医薬組成物及び栄養補助食品は、例えば丸剤、錠剤、カプセル、粉末または顆粒、あるいは溶液または懸濁液などの個別投与単位として提示されてもよい。

本発明は、本発明の組成物を含む配合乳を提供する。いくつかの実施形態では、前記配合乳は、生理的に許容される脂質、タンパク質、炭水化物、ビタミン、ミネラル、アミノ酸、ヌクレオチド及び活性または非活性な添加物の少なくとも１つを更に含む。いくつかの実施形態では、前記配合乳は特殊調整粉乳である。いくつかの実施形態では、前記調合乳は乳児用配合乳または幼児用配合乳である。いくつかの実施形態では、前記調合乳は小児用配合乳である。いくつかの実施形態では、前記実施形態は成人用配合乳である。

少なくとも一部の実施形態に従って、水溶性コリン化合物の安定性が維持される噴霧乾燥法を含めて、本明細書に記載したような医薬品組成物または栄養組成物の製造方法を提供する。

本発明のいくつかの実施形態に従って、配合乳の製造時に本発明の組成物を、ホモジナイゼーション（均質化）及び噴霧乾燥より前に他の全ミネラル及びビタミンと共に、または他の方法によって加える。

いくつかの実施形態においては、前記脂質は、パーム及びパーム核油、ダイズ油、パームオレイン、ヤシ油、カノーラ油、オリーブ油、綿実油、中鎖脂肪酸トリグリセリド（ＭＣＴ）油、ヒマワリ油、高オレイン酸ひまわり油、サフラワー油、高オレイン酸サフラワー油、藻オイル、魚油及びその組み合わせの１つまたはそれ以上を含み、前記タンパク質は、加水分解したタンパク質、一部加水分解したタンパク質、加水分解のないタンパク質または無傷のタンパク質、及びその任意の組み合わせを含み、アミノ酸は、アラニン、アルギニン、アスパラギン、カルニチン、アスパラギン酸、シスチン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、タウリン、スレオニン、トリプトファン、タウリン、チロシン、バリン、及びその組み合わせからなる群から選択され、炭水化物は、加水分解したコーンスターチ、無傷のコーンスターチ、自然的及び／または化学的に修飾したコーンスターチ、マルトデキストリン、グルコースポリマー、ショ糖、コーンシロップ、コーンシロップ固形物、コメまたはジャガイモ由来炭水化物、グルコース、フルクトース、ラクトース、高フルクトースコーンシロップ及び難消化性オリゴ糖（例えば、フルクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ））、及びその組み合わせの１つまたはそれ以上を含む。

少なくとも一部の実施形態に従って、本明細書に記載されているように、本発明の組成物を投与することを含めて、対象におけるリン脂質合成またはリポタンパク合成の発達を改善、促進または維持する方法を提供する。

少なくとも一部の実施形態に従って、本明細書に記載されているように、本発明の組成物を投与することを含めて、対象における適切な含硫アミノ酸代謝を改善、促進または維持する方法を提供する。

少なくとも一部の実施形態に従って、本明細書に記載されているように、本発明の組成物を投与することを含めて、対象におけるコリン血漿レベルを改善、促進または維持する方法を提供する。

少なくとも一部の実施形態に従って、本明細書に記載されているように、本発明の組成物を投与することを含めて、対象における浸透圧調整の強化を改善、促進または維持する方法を提供する。

別の態様では、本発明は、本発明の組成物を投与することを含めて、対象における成長ホルモンまたはケトン体の一方または両方の血漿レベルを改善、促進または維持する方法を提供する。

別の態様では、本発明は、本発明の組成物を投与することを含めて、対象におけるミネラル、微量元素、金属またはビタミンの腸管吸収を改善、促進または維持する方法を提供する。

更なる実施形態では、本発明は、本発明の組成物を投与することを含めて、対象におけるコリン血漿中濃度を改善、促進または維持する方法を提供する。

別の態様では、本発明は、本発明の組成物を投与することを含めて、対象における認知機能を改善、促進または維持する方法を提供する。

別の態様では、本発明は、本発明の組成物を投与することを含めて、対象におけるミネラルまたは金属吸収を改善、促進または維持する方法を提供する。

別の態様では、本発明は、本発明の組成物を投与することを含めて、対象における腸管内菌叢バランスを改善、促進または維持する方法を提供する。

更なる態様では、本発明は、本発明の組成物を投与することを含めて、以下：神経変性疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、痴呆、脳卒中、認知低下、化学療法関連の認知低下、栄養失調または偏った栄養、不十分な経口摂食、肝疾患、肝機能障害、アルコール性肝疾患または腎機能障害の症状を予防、治療または改善あるいは軽減する方法を提供する。

更なる態様においては、本発明は、本発明の組成物を前記対象に投与することを含めて、対象に少なくとも１つの水溶性コリン化合物を投与する方法を提供し、これにおいて、前記組成物の投与と同時に前記対象の消化管、血漿、尿、脳、肝臓及び腸または血漿中ＴＭＡまたはＴＭＡＯ濃度が維持または減少する。

本発明のいくつかの実施形態では、前記対象は幼児である。

本明細書で使用している幼児は、これらに限定されないが、新生児、早期及び満期産児、小さい早産児、超低出生体重（ＶＬＢＷ）または極低出生体重（ＥＬＢＷ）の幼児、例えば消化管に関して特に全体的に未熟な者、または当業者に公知の任意の他の健康リスクを有する者を含むヒト幼児を包含することを意味する。本発明のいくつかの実施形態では、対象は幼児である。本発明のいくつかの実施形態では、前記対象は子供である。他の実施形態では、前記対象は成人（男性、妊娠前後の出産可能年齢の女性、ティーンエージャー、高齢者対象を含む）である。他の実施形態では、前記対象は妊娠中または授乳中の女性である。

実施例１：発明に従った組成物の製造
Ａ．粉末生成物を得るために溶媒としてエタノールを使用する水溶性コリン化合物の抽出及び濃縮
酪農生産の乳清ストリームを水分蒸散で濃縮し、次いで結晶化し、母液から濾別してラクトース結晶を得た。母液を一部ナノろ過膜で脱塩し、噴霧乾燥によって乾燥し乾燥粉末を得た。

１０グラムの乾燥粉末を、２００ｍｌのエタノール９０％（水分１０％）と４０℃で２時間混合してスラリーを得た。ろ液と固形分を分離するためにスラリーをブフナー（Ｂｕｃｈｎｅｒ）フィルターでろ過した。ろ液を回転乾燥機によって減圧下で蒸発させて乾燥粉末を得た。得られた乾燥粉末は、５．５％のＧＰＣと０．５２％のＰＣｈ（^３１Ｐ−ＮＭＲによって測定）を含んだ。

Ｂ．イオン交換カラムによるＧＰＣの濃縮化
実施例１Ａの最終生成物（５．５％のＧＰＣと０．５２％のＰＣｈを含有）１０グラムを４０ｍｌの水に溶解し、次いで１００ｍｌの強アニオン***換樹脂（Ｄｏｃ２００１）を含むガラスカラムに通した。次いで、第１カラムから出てきた溶液を強カチオン樹脂（００１ｘ７）カラムに通して移し、ミネラルを除去し、中和されたろ液を得るために弱アニオン性樹脂（Ｄ３０１）カラムによって中和した。樹脂は全てＪＩＡＮＧＳＵ ＳＵＱＩＮＧ ＷＡＴＥＲ ＴＲＥＡＴＭＥＮＴ ＥＮＧＩＮＥＥＲＩＮＧ ＧＲＯＵＰ ＣＯ.から入手した。最後に、中和したろ液を回転乾燥機によって減圧下で蒸発させて２０．５％のＧＰＣと０．０３％のＰＣｈ（^３１Ｐ−ＮＭＲによって測定）を得た。

Ｃ．シリカクロマトグラフィー手順によるＧＰＣの濃縮化
実施例１Ａの最終生成物（５．５％のＧＰＣを含有）１０グラムを２０ｍｌのエタノール：水（８０％：２０％ 体積／体積（ｖ/ｖ））溶液に溶解し、７０グラムのＧｒａｃｅ Ｃｏｍｐａｎｙ製Ｄａｖｉｓｉｌ「ＬＣ６０Ａ ２０−４５μｍ」を充填したシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供給した。次いで、ＧＰＣ含有画分からラクトース含有画分を分離するために５００ｍｌのエタノール：水（８０％：２０％ 体積／体積（ｖ/ｖ））をカラムに通して移した。エタノール含有溶媒の最初の２００ｍｌをカラムに適用した後、ろ液のＧＰＣ含有画分の収集を開始した。次いで、ＧＰＣ含有画分を回転乾燥機によって減圧下で蒸発させて乾燥粉末を得た。得られた乾燥粉末をＨＰＬＣに注入し、同濃度で実施例１Ａの生成物試料に対する検出をＥＬＳ検出器で行った。ＧＰＣの相対ピーク面積は、例１Ａの生成物と比較して精製生成物では約５倍であった。

Ｄ．粉末生成物を得るために溶媒としてメタノールを使用する乳清ストリームからのコリン化合物の精製
酪農生産の乳清ストリームを使用し、限外ろ過膜を用いた透析ろ過によって濃縮ホエータンパク質を製造した。膜からの透過水を電気透析によって脱塩した。ミネラルを含まないストリームを噴霧乾燥器によって乾燥し、粉末を製造した。５グラムの乾燥粉末を２５℃で２時間、４０ｍｌのメタノールと混合した。次いで、溶液と固形分を分離するために試料全部を６０００ＲＰＭで５分間、遠心分離した。溶液を回転乾燥機によって減圧下で蒸発させて乾燥粉末を得た。得られた乾燥粉末は７．６％のＧＰＣと０．４％のＰＣｈ（^３１Ｐ−ＮＭＲによる）を含んだ。

Ｅ．「Ｌａｃｔｏｓａｌｔ Ｏｐｔｉｔａｓｅ」からのＧＰＣの精製
約８５％の塩、５％の水分及び０．５％のタンパク質を含む「Ｌａｃｔｏｓａｌｔ Ｏｐｔｉｔａｓｅ」（Ａｒｍｏｒ）と呼ばれる乳製品塩類画分を電気透析によって精製した。精製は、ＰＣＣｅｌｌ ＥＤ ６４−４電気透析セルユニットを使用して達成した。このユニットは、１０列の平行セル対スタック構造を有している。各々の膜の有効寸法（ａｃｔｉｖｅ ｓｉｚｅ）は８Ｘ８ｃｍ（０．００６４ｍ２の有効領域（ａｃｔｉｖｅ ａｒｅａ））である。したがって、総有効領域は０．０６４ｍ^２である。

電解液系統には０．２５Ｍの硫酸ナトリウムを使用した。陽極液室と陰極液室を直列に接続した。循環ＮａＣｌ溶液を濃縮液として使用した。その初期濃度は、およそ１０００ｍｇ／リットル（ｌｉｔ）であった。脱塩水に溶解した１０グラムの「Ｌａｃｔｏｓａｌｔ Ｏｐｔｉｔａｓｅ」を含む溶液の１リットルを循環室に供給した。電圧は、最大値（スタックに対し３６．５ボルト）にプリセットした。塩溶液中で電気伝導度の更なる有意な低下が観察されない時点で再循環を停止した。精製溶液の試料を回転乾燥機によって減圧下で乾燥させて乾燥状態にした。得られた乾燥生成物をＨＰＬＣに注入し、同濃度の元の「Ｌａｃｔｏｓａｌｔ Ｏｐｔｉｔａｓｅ」試料に対する検出をＥＬＳ検出器で行った。ＧＰＣ相対ピーク面積は精製生成物が原料と比較して約１０倍大きかった。

Ｆ．オキアミ粉末（Ｋｒｉｌｌ ｍｅａｌ）の精製
２００グラムのオキアミ粉末（Ｋｒｉｌｌ ｍｅａｌ）を２５℃で１時間、１リットルのメタノールと共に混合した。次いで、ろ液と固形分を分離するために溶液全部をブフナー（Ｂｕｃｈｎｅｒ）フィルターでろ過した。ろ液を回転乾燥機によって蒸発させて３５グラムのオイルを得た。３５ｍｌの精製水と３５ｍｌのブタノールをオイルに加えて、溶液を数分間混合した。相分離を分液漏斗で達成した。下相を蒸発させて７．１％のＧＰＣ（^３１Ｐ−ＮＭＲによる）を含む２．７８グラムを得た。

Ｇ．ＧＰＣを含むグミベア（Ｇｕｍｍｙ ｂｅａｒｓ）の調製
０．４グラムのクエン酸と０．３７グラムのクエン酸三ナトリウムを撹拌しながら３０ｍｌの水に溶解した。溶液を最高７５℃まで加熱し、次いで５グラムの白砂糖（ショ糖）と１．５グラムのシトラスペクチン（Ｃｉｔｒｕｓ Ｐｅｃｔｉｎ）を加えた。混合液を１００℃まで加熱し、１００℃で２〜３分間撹拌した。３０グラムのグルコースシロップ８０％と５０グラムの白砂糖（ショ糖）を加えて、混合液を、完全に溶解し、糖度（Ｂｘ）７８°が得られるまで連続撹拌下で最高１０８℃まで加熱した（約４０〜５０分）。溶液を１００℃に冷却し、実施例番号１Ａの生成物１．０６グラムを加えた。撹拌を１００℃で２〜３分間継続し、以下の香料と着色剤を加えた：０．５グラムのアジピン酸、０．１５グラムのイチゴフレーバーエッセンス、０．５ｍｌのレモン汁、０．１５グラムのシェードルビーレッド（ｓｈａｄｅ ｒｕｂｙ ｒｅｄ）エッセンス、０．７７グラムのクエン酸５０％。撹拌を１００℃で、２〜３分以上継続し、次いで、熱源を停止し、得られた生成物を９０〜１００℃で金型に注入した。金型は、乾燥のために空調付きの部屋に約４８時間置いた。

実施例２：胃モデルにおける自然対合成コリン組成物のＧＰＣ安定性
経口投与したＧＰＣの９０％超が腸から吸収される。一旦吸収されると、ＧＰＣは急速に全器官に循環し、細胞内に取り込まれる。したがって、ＧＰＣは胃腸状態による影響を最小限受けるが、その活性及び効能に影響を及ぼす可能性がある修飾を何も受けずに無傷で残るのが望ましい。

発明に従って自然の水溶性コリン化合物の胃腸安定性を試験するために、合成の従来型コリン化合物との比較でインビトロの胃（ｓｔｏｍａｃｈ）モデルを使用した。

インビトロ胃モデルは、胃状態を表す目的で人工溶出溶媒として人工胃液（Ｓｉｍｕｌａｔｅｄ Ｇａｓｔｒｉｃ Ｆｌｕｉｄ）（ＳＧＦ）を使用して、以前にＫａｎｎｅｒ ａｎｄ Ｌａｐｉｄｏｔ ２００１が記述した通りに実行した。ＳＧＦは、０．２重量％（ｗ/ｗ）の塩化ナトリウムと０．３２重量％（ｗ/ｗ）の精製ペプシン（豚の胃粘液に由来）を酸性水、ｐＨ約１．２に溶解し、米国薬局方に従って調製した。

コリン化合物をラクトース結晶化の母液から精製した。精製は以下の２段階を含んだ：第１段階の膜精製と第２段階の結晶化。

合成水溶性コリン化合物は、触媒にナトリウムメトキシドを使用した反応でダイズレシチンから製造し、ＧＰＣとメチルエステルを得た。メチルエステルとＧＰＣの分離を数回の精製段階を経て達成した。加えて、ミネラルの除去段階はイオン交換体を使用して行った。

自然の水溶性コリン化合物と合成水溶性コリン化合物（組成物を表２に詳述した）の両方を振とう恒温水槽（シェイキングバス）中、３７℃で１８０分間、ＳＧＦと共に保温し、次いで試料をＨＰＬＣによってＧＰＣ量について分析した。

表２に提示した結果は、乳製品源由来の自然水溶性コリン化合物を約５重量％（ｗ/ｗ）含有する組成物は、胃モデル条件下で１８０分間保温した後に少しのＧＰＣ分解もない（ＧＰＣ量は一定のままであった）ことの例証を示す。他方、合成水溶性コリン化合物を含有した組成物は、ＧＰＣの約５．４重量％（ｗ/ｗ）の分解率（３０．５０ｍｇ ＧＰＣから２８．８４ｍｇ ＧＰＣへ）を示した。

これらの結果は、本発明に従った水溶性コリン化合物を含む組成物は、従来型コリン化合物を含む他の組成物より胃条件下で安定であることを示す。

実施例３−コリンの生体有用性（ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ）への異なる水溶性コリン化合物の影響
研究デザイン
異なる水溶性コリン化合物の生体有用性は、３〜５日齢の新生児Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラットの動物モデルで調査した。動物を１群当たり１２匹のラットにして、３種類の食事の１つに無作為割付けした。同腹児（ｌｉｔｔｅｒ）内の動物を治療全体で無作為割付けした。

研究群は以下の通りであった：
Ａ群：コリンを含む配合乳
塩化コリンをＳｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙから購入した。
Ｂ群：ＧＰＣとホスホコリン（ホスホコリン＞ＧＰＣ）を含む配合乳

合成水溶性コリン化合物は、触媒にナトリウムメトキシドを使用した反応でダイズレシチンから製造し、ＧＰＣとメチルエステルを得た。メチルエステルとＧＰＣを分離するために数回の精製工程を実行した。加えて、ミネラル除去工程をイオン交換体を使用して行った。ホスホコリンクロリドカルシウム塩四水和物は、Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙから購入した。

Ｃ群：ＧＰＣ（ＧＰＣ＞ホスホコリン）を含む配合乳
コリン化合物をラクトース結晶化の母液から精製した。精製は次の２工程を含んだ：強カチオン樹脂（００１ｘ７）カラムと弱アニオン性樹脂（Ｄ３０１）カラムを使用するイオン交換精製（全樹脂をＪＩＡＮＧＳＵ ＳＵＱＩＮＧ ＷＡＴＥＲ ＴＲＥＡＴＭＥＮＴ ＥＮＧＩＮＥＥＲＩＮＧ ＧＲＯＵＰ ＣＯ．から得た)、及びＤｉａｉｏｎ社製ＵＢＫ５３５Ｋ樹脂に基づくクロマトグラフィー精製。

全食事が、異なる水溶性コリン化合物を起源にした同量の添加コリン当量を含んだ。各々の食事の水溶性コリン化合物組成物を表３に詳述した。

胃瘻管で給餌した幼若ラット：配合乳を供給する幼児を模倣するために、胃瘻造設術管を通して食物を与えられる子ラットをモデルにする。新生仔ラットの人工栄養飼育の困難性を克服するために経管栄養法を使用する。調乳はラット乳汁をベースに研究目的に合致するよう成分を修正した。本モデルでは体積、したがって栄養摂取量が完全にコントロールできる。これによって、処理群にわたる不定の摂取量に起因する困難性が回避される。動物に生後３〜５日から１８〜２０日までミルクで給餌して飼育した。ミルクの体積は動物の体重ベースで毎日計算した。

血漿及び組織採取：血液試料を２０００ｇｘ１０分で遠心分離し、血漿を回収した。全動物の組織試料を採取した位置を標準化するために、組織試料採取を同じプロトコルに従って行った。

分析リスト：血漿中：ホスファチジコリン、コレステロール、トリグリセリド、ＴＭＡ/ＴＭＡＯ、遊離コリン、グリセロホスホコリン、ホスホコリン、ベタイン、ＤＭＧ、ホモシステイン、メチオニン、システイン、ＶＬＤＬ+ＬＤＬ、ＨＤＬコレステロール、ＴＡＧ、成長ホルモン、インシュリン成長因子１（ＩＧＦ−１）、ケト体、葉酸塩。
尿中：ＴＭＡ/ＴＭＡＯ。
肝臓中：Ｓアデノシルメチオニン及びＳアデノシルホモシステイン、トリグリセリド。

結果
血漿試料は、コリン濃度について分析した。結果は、表４に提示し、Ａ群に比べてＢ群のコリンの生体有用性が高いことを示す。

加えて、Ａ群と比較して、Ｂ群及びＣ群は以下を有した：血漿中及び尿中のＴＭＡ濃度及びＴＭＡＯ濃度の低下、ホスファチジルコリン合成、リン脂質/トリグリセリド比及び重要脂質（例えば、コレステロール、脂溶性ビタミン、ホルモン及びカロチノイド）の吸収増加、一方でカイロミクロン粒度の減少、血漿脂質プロファイルの改善、肝臓及び血漿中のメチオニン量の増加及びホモシステイン量の減少、成長ホルモン分泌、脂肪肝の肝臓酸化、ケトン体レベル及びミネラルならびに金属吸収の増加。これらはＣＶＤ及びアテローム性動脈硬化発症リスクの低下と関連し、認知能力及び中枢神経系機能を改善する。

結論
上記の結果は、本発明（Ｂ群）の組成物を含む配合乳を給餌した動物は、対照配合乳（Ａ群）を給餌した動物に比してコリンの高い生体有用性を有していることを示す。

実施例４−従来型水溶性コリン化合物含有特殊調整粉乳と比較した、本発明に従った水溶性コリン化合物含有特殊調整粉乳におけるＧＰＣ安定性

２種類の特殊調整粉乳を以下の方法によってパイロット規模で調製した：脱脂乳粉末、ラクトース、濃縮乳清タンパク質（８０％）を蒸留水に高速撹拌で混合し、６５〜７０℃に暖めた。５分間の混合の後に、配合処方が異なる、水溶性コリン化合物、ミネラル、ヌクレオチド、アミノ酸及びビタミンを加えた。更に１５分経過後に、ＡＲＡ（アラキドン酸）油とＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）油を含む植物油を含有する油性混合物を加えた。更に１５分間混合し続けた。次いで、二段階アセンブリー構造を持つ「ＡＰＶ Ｒａｎｎｉ圧力ホモジナイザー」で混合液を均質化した：１段階が７０バール、２段階が２４０バール。次に、均質化した混合液を、典型的な「噴霧乾燥器」によって２０リットル／時間の速度で噴霧乾燥し、空気入口温度は約１８０℃、空気出口温度は約８０℃であった。乾燥粉末を収集し、ミネラルと元素物質のプレミックス（約０．３７％）を乾燥粉末にドライブレンドした。

この工程の終了時点では、２種類の配合乳には以下の異なるコリン化合物組成物が含まれていた：配合乳番号３４８−８０−６はＧＰＣ＜ＰＣｈのモル比に対し、３４８−８０−１はＧＰＣ＞ＰＣｈのモル比を有した。

各々の配合乳の一定分量１００グラムを気密保存アルミ袋に窒素環境下で包装し、温度と湿度が制御された貯蔵室に２５℃±２（湿度６０％±５％）で貯蔵した。
ベースラインと１２か月間貯蔵後の時点で試料をＧＰＣとＰＣｈ含量について分析した。

表５は、２５℃±２（湿度６０％±５％）で１２か月後の安定性結果を示す。ＰＣｈ＞ＧＰＣ比をもつ試料３４８−８０−６が少量のＧＰＣ分解レベル（約４％）を示したが、ＧＰＣ＞ＰＣｈ比をもつ配合乳３４８−８０−１は、約３８％のＧＰＣ分解を生じた。これらの結果は、本発明に従った水溶性コリン化合物含有組成物は、他の従来型コリン化合物含有組成物より安定であることを示す。

Claims (49)

1. ＧＰＣ、ＰＣｈ及びコリンからなる群から選択した少なくとも１つの水溶性コリン化合物を含む組成物であって、前記の少なくとも１つの水溶性コリン化合物は、少なくとも１つの自然源に由来し、前記の少なくとも１つの水溶液コリン化合物の濃度は、前記組成物の少なくとも０．５重量％（ｗ/ｗ）である、前記組成物。
2. 前記の少なくとも１つの自然源は、植物源、哺乳動物の乳、動物源、卵、海洋源、微生物または養殖生物及びその任意の組み合わせから選択される、請求項１に記載の組成物。
3. 前記の少なくとも１つの水溶性コリン化合物は、ＧＰＣ、ＰＣｈ及びコリンからなる、請求項１または請求項２に記載の組成物。
4. ＰＣｈは、前記組成物の少なくとも０．２重量％（ｗ/ｗ）を占める、請求項１〜３に記載の組成物。
5. ＧＰＣは、前記組成物の少なくとも０．５重量％（ｗ/ｗ）を占める、請求項１〜４に記載の組成物。
6. ＧＰＣは、前記の少なくとも１つの水溶性コリン化合物の少なくとも２０重量％（ｗ/ｗ）を占める、請求項５に記載の組成物。
7. ＧＰＣは、前記の少なくとも１つの水溶性のコリン化合物の約２０重量％（ｗ/ｗ）〜約７０重量％（ｗ/ｗ）を占める、請求項５に記載の組成物。
8. ＰＣｈ及びコリンは、前記の少なくとも１つの水溶性コリン化合物の少なくとも１重量％（ｗ/ｗ）を占める、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
9. ＰＣｈ及びコリンは、前記の少なくとも１つの水溶性コリン化合物の約１重量％（ｗ/ｗ）〜約６０重量％（ｗ/ｗ）を占める、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
10. ＴＭＡ、ＴＭＡＯ、エチレンオキシド、グリシドール及びその任意の組み合わせの少なくとも１つを最大限で５０ｐｐｍ含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
11. (ｉ)コリンの少なくとも1つの自然源を供給する、(ｉｉ)コリンの前記の少なくとも１つのコリン源を精製する、工程を含む、請求項１〜１０に記載の組成物の調製方法。
12. コリンの前記の少なくとも１つの自然源は、０．５重量％（ｗ/ｗ）未満のＧＰＣ、０．５重量％（ｗ/ｗ）ＰＣｈ及び／または０．５重量％（ｗ/ｗ）コリンを含む、請求項１１に記載の方法。
13. 精製法は、抽出、結晶化、クロマトグラフィー、イオン交換精製、膜精製、限外ろ過膜、ナノろ過、精密ろ過、電気透析または水洗浄を含む、請求項１１または請求項１２に記載の方法。
14. (ｉｉｉ)前記自然源を１〜４の炭素原子のアルコールを含む有機溶剤で抽出する工程を更に含む、請求項１１〜１３に記載の方法。
15. ＧＰＣ、ＰＣｈ及びコリンからなる群から選択した少なくとも２つの水溶性コリン化合物を含む組成物であって、前記の少なくとも２つの水溶性コリン化合物は、前記組成物の少なくとも０．５重量％（ｗ/ｗ）を占め、ＰＣｈ及びコリンは前記水溶性コリン化合物の少なくとも１重量％（ｗ/ｗ）を占める、前記組成物。
16. 前記の少なくとも２つの水溶性コリン化合物は、前記組成物の少なくとも１重量％（ｗ/ｗ）を占める、請求項１５に記載の組成物。
17. ＧＰＣ、ＰＣｈ及びコリンを含む、請求項１５または請求項１６に記載の組成物。
18. 前記ＧＰＣは、前記コリン化合物の少なくとも２０重量％（ｗ/ｗ）を占める、請求項１５〜１７に記載の組成物。
19. 前記ＧＰＣは、前記水溶性コリン化合物の２０重量％（ｗ/ｗ）〜約７０重量％（ｗ/ｗ）を占める、請求項１５〜１８のいずれか一項に記載の組成物。
20. ＰＣｈは、前記水溶性コリン化合物の約１重量％（ｗ/ｗ）〜７０重量％（ｗ/ｗ）を占める、請求項１５〜１９のいずれか一項に記載の組成物。
21. コリンは、前記水溶性コリン化合物の約１重量％（ｗ/ｗ）〜２５重量％（ｗ/ｗ）を占める、請求項１５〜２０のいずれか一項に記載の組成物。
22. 前記ＧＰＣ、ＰＣｈまたはコリンの少なくとも１つは、自然源に由来する、請求項１５〜２１のいずれか一項に記載の組成物。
23. 前記ＧＰＣ、ＰＣｈまたはコリンの少なくとも１つは、合成源に由来する、請求項１５〜２２のいずれか一項に記載の組成物。
24. ＰＣｈのモル濃度は、ＧＰＣのモル濃度より大きい、請求項１５〜２３に記載の組成物。
25. ＰＣｈのモル濃度は、ＧＰＣのモル濃度に等しいかまたはより大きい、ＧＰＣ及びＰＣｈを含む組成物。
26. ＧＰＣ及びＰＣｈの濃度は、前記組成物の少なくとも０．０５重量％（ｗ/ｗ）である、請求項２５に記載の組成物。
27. コリンを更に含む組成物であって、ＧＰＣ、ＰＣｈ及びコリンの濃度は、前記組成物の少なくとも０．０５重量%（ｗ/ｗ）である、請求項２５または請求項２６に記載の組成物。
28. ２０〜３０℃の貯蔵温度で少なくとも１２か月間、化学的に安定であることができる、請求項２５〜２７に記載の組成物。
29. 各々の前記水溶性コリン化合物の２０重量％（ｗ/ｗ）未満の分解レベルを有する、請求項２８に記載の組成物。
30. ＧＰＣのモル濃度は、コリンのモル濃度より大きい、請求項２７に記載の組成物。
31. コリンのモル濃度は、ＧＰＣのモル濃度より大きく、かつ、ＰＣｈの濃度より小さい、請求項２７に記載の組成物
32. コリンのモル濃度は、ＰＣｈのモル濃度より大きい、請求項２７に記載の組成物。
33. ＰＣｈのモル濃度は、コリンのモル濃度より大きい、請求項２７に記載の組成物。
34. ＰＣｈ/ＧＰＣ重量比は、少なくとも約０．７０である、請求項１〜３３に記載の組成物。
35. ベタインを更に含む、請求項１〜３４のいずれかに記載の組成物。
36. 医薬品、栄養補助食品、医療食または栄養補助組成物である、請求項１〜３５のいずれかに記載の組成物。
37. 医薬品、栄養補助食品、医療食または栄養補助組成物の調製に使用する、請求項１〜３６のいずれか一項に記載の組成物。
38. 請求項１〜３７のいずれかに記載の組成物を含む医薬品、栄養補助食品、医療食または栄養補助組成物。
39. 請求項１〜３８のいずれかに記載の組成物を含む特殊調整粉乳。
40. 生理的に許容される脂質、タンパク質、炭水化物、ビタミン、ミネラル、アミノ酸、ヌクレオチド及び活性または非活性添加物の少なくとも１つを更に含む、請求項３８に記載の配合乳。
41. 前記脂質は、パーム及びパーム核油、ダイズ油、パームオレイン、ヤシ油、カノーラ油、オリーブ油、綿実油、中鎖脂肪酸トリグリセリド（ＭＣＴ）油、ヒマワリ油、高オレイン酸ひまわり油、サフラワー油、高オレイン酸サフラワー油、藻オイル、魚油及びその組み合わせの１つまたはそれ以上を含み、前記タンパク質は、加水分解したタンパク質、一部加水分解したタンパク質、加水分解のないタンパク質または無傷のタンパク質、及びその任意の組み合わせを含み、アミノ酸は、アラニン、アルギニン、アスパラギン、カルニチン、アスパラギン酸、シスチン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、タウリン、スレオニン、トリプトファン、タウリン、チロシン、バリン、及びその組み合わせからなる群から選択され、炭水化物は、加水分解したコーンスターチ、無傷のコーンスターチ、自然的及び／または化学的に修飾したコーンスターチ、マルトデキストリン、グルコースポリマー、ショ糖、コーンシロップ、コーンシロップ固形物、コメまたはジャガイモ由来炭水化物、グルコース、フルクトース、ラクトース、高フルクトースコーンシロップ及び難消化性オリゴ糖（例えば、フルクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ））、及びその組み合わせの１つまたはそれ以上を含む、請求項４０に記載の配合乳。
42. 上記請求項のいずれか一項に記載の組成物を投与することを含む、対象における成長ホルモンまたはケトン体の一方または両方の血漿中濃度を改善、促進または維持する方法。
43. 上記請求項のいずれか一項に記載の組成物を投与することを含む、対象におけるコリン血漿中濃度を改善、促進または維持する方法。
44. 上記請求項のいずれか一項に記載の組成物を投与することを含む、対象における認知機能を改善、促進または維持する方法。
45. 上記請求項のいずれか一項に記載の組成物を投与することを含む、対象におけるミネラルまたは金属吸収を改善、促進または維持する方法。
46. 上記請求項のいずれか一項に記載の組成物を投与することを含む、以下：神経変性疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、痴呆、脳卒中、認知低下、化学療法関連の認知低下、栄養失調または偏った栄養、不十分な経口摂食、肝疾患、肝機能障害、アルコール性肝疾患または腎機能障害の症状を予防、治療または改善あるいは軽減する方法。
47. 対象は、幼児である、上記請求項のいずれかに記載の治療方法。
48. 対象は、成人である、上記請求項のいずれかに記載の治療方法。
49. 対象は、妊娠中または授乳中の女性である、上記請求項のいずれかに記載の治療方法。