JP2016193861A

JP2016193861A - マスト細胞活性化を抑制するための医薬組成物

Info

Publication number: JP2016193861A
Application number: JP2015074508A
Authority: JP
Inventors: 篤人中尾; Atsuhito Nakao
Original assignee: University of Yamanashi NUC
Current assignee: University of Yamanashi NUC
Priority date: 2015-03-31
Filing date: 2015-03-31
Publication date: 2016-11-17

Abstract

【課題】
本発明は、アレルギー疾患の治療・予防薬として有用なカゼインキナーゼ阻害剤を提供することである。
【解決手段】
下記式で表される化合物

（4-[1-cyclohexyl-4-(4-fluorophenyl)-1H-imidazol-5-yl]-2-pyrimidinamine,dihydrochloride）、若しくはその塩又はそれらの溶媒和物若しくはそれらの水和物を有効成分とする、カゼインキナーゼ1δの阻害剤であって、カゼインキナーゼ1δの酵素活性化機序が病態に関与するアレルギー疾患の治療のための医薬組成物。
【選択図】図１

Description

本発明は、本発明は、カゼインキナーゼIδ（CK1δ）の選択的阻害剤を投与することによってマスト細胞の活性化を抑制するための医薬組成物に関する。

花粉症は早朝に症状が悪化し（モーニングアタック）、蕁麻疹や喘息の発作は夜間に頻発する。このようにアレルギー性疾患では、症状が１日のある特定の時間帯に重症化しやすいという明瞭な約24時間の周期性（概日リズム）を示すことが特徴である。しかしながら、その概日リズムを生み出すメカニズムはよくわかっていない。

発明者は、この現象に概日リズム性の生理現象（睡眠や覚醒、血圧や体温、ホルモン分泌の日内リズム等々）をつかさどる「時計遺伝子」が関与していると考え、研究を行った。

その結果、ＩｇＥ/マスト細胞依存性の皮膚や全身性の脱顆粒反応には概日リズムがあり、主要な時計遺伝子であるPeriod2やClockあるいは視床下部にある中枢時計によって、この概日リズムが制御されていることを明らかにした。特にマスト細胞自身に発現するこれらの時計遺伝子がマスト細胞のＩｇＥ受容体の発現レベルを時間依存的に調節しており、この現象の中心的役割を果たしていることが明らかとなった。

カゼインキナーゼ１はセリンスレオニンキナーゼ（ある場合にはチロシン残基をもリン酸化する）に属し、哺乳類でのそのアイソフォーム（isoforms）として、α、β、γ１、γ２、γ３、δ及びεの７種が知られている。これらのアイソフォームは種々の異なる基質タンパク質をリン酸化し、そのタンパク質の機能を活性化したりあるいは不活性化したりあるいは安定化あるいは不安定化したりすることにより、種々の異なる生体の機能の調節に関与していることが知られている。哺乳類のカゼインキナーゼ１δあるいはカゼインキナーゼ１εは、その構造として他のアイソフォームと類似したキナーゼドメインを有するが、Ｎ端末及びＣ端末ドメインにおいて他のアイソフォームと異なる。すなわち、Ｃ端末ドメインには複数の自己リン酸化部位があり自己酵素活性の調節に関与すると考えられている。また、キナーゼドメインには、核内移行に関与すると思われる配列（NLS: nuclear location signal）とキネシン様ドメイン（KHD：kinesin homology domain）が存在する。

カゼインキナーゼ１δ及びカゼインキナーゼ１εが概日リズム周期障害に、またカゼインキナーゼ１δ及びカゼインキナーゼ１εが中枢神経変性疾患に、またカゼインキナーゼ１δ及びカゼインキナーゼ１εが癌に、それぞれ関与していることが知られており、それらの病態への関与の詳細は対応するカゼインキナーゼ１δ及びカゼインキナーゼ１εに対する基質タンパク質など相互作用する対象タンパク質とカゼインキナーゼ１δ及びカゼインキナーゼ１εとの相互作用の研究において知られる事となりつつある。具体的にカゼインキナーゼ１δ及びカゼインキナーゼ１εがリン酸化する基質タンパク質として、例示するならば、ピリオドタンパク質（Per）、タウタンパク質（tau）、ｐ５３、ベータカテニン（β-catenin）などをあげることができる。

概日リズム発生中核装置（central generator of the
circadian rhythm）としての中核体内時計（the core of the biological
clock）は、およそ１０種のいわゆる時計遺伝子(clock genes)と呼ばれる遺伝子の相互作用ネットワークからなると今日では考えられている。これらの１０種の遺伝子グループのうち、Ｐｅｒ１，２，３（Period 1，2，3）及びＣｒｙ１，２（cryptochrome 1，2）及びＢｍａｌ１（brain and muscle ARNT-like1）及びＣｌｏｃｋ（circadian
locomotor output cycles kaput）は転写因子をコードし、また、ＣＫ１δ、εはこれらの転写因子をリン酸化するカゼインキナーゼ１δ及びカゼインキナーゼ１εをコードする。これらの時計遺伝子の機能的異常がヒトを含めた各種の動物の概日リズム表現型に影響を及ぼすことが知られている。この体内時計の分子機構は種を越えてよく保存されている為、ヒトでの概日リズム表現型の異常について時計遺伝子の研究をｉｎｖｉｔｒｏ試験でも行い得る有利性がある。Ｃｌｏｃｋは体内時計相互作用ネットワークのうち活性化信号を発する経路を司り、ＰｅｒやＣｒｙその他の下流標的遺伝子を活性化する。他方、調節性信号を発する経路を司るＰｅｒ及びＣｒｙはＣｌｏｃｋ活性を抑制するように働く。カゼインキナーゼ１δ及びカゼインキナーゼ１εはＰｅｒ及びＣｒｙをリン酸化することによりＰｅｒの細胞質内分解を促進する。また、これらのリン酸化の結果は、これら転写因子の核内移行及び核内での安定性の制御に関与する。このように、生体内における内在性の分子振動リズムが司られていると考えられている。哺乳類における中枢体内時計は視床叉上核(SCN：suprachiasmatic nucleus)にあるが、このＳＣＮ体内時計はＳＣＮ以外の中枢及び末梢組織の遺伝子発現体内時計と連動している。

Ｐｅｒは、生体内における概日リズム調節タンパク質として知られている。ＰｅｒのｍＲＮＡ及びタンパク質レベルは概日リズムに応答して振動し、体内時計の制御に密接に関与する。例えばヒトＰｅｒ２リン酸化部位変異(S662G)を有する遺伝子疾患では、カゼインキナーゼ１εあるいはカゼインキナーゼ１δによるリン酸化の低下に伴い家族性睡眠相前進症候群(FASPS: familial
advanced sleep phase syndrome )となることが知られており、これはＰｅｒが睡眠調節に重要な役割を果たすことを示している。Ｐｅｒの細胞内タンパク質量の変化はカゼインキナーゼ１εあるいはカゼインキナーゼ１δによるリン酸化により制御されていることが知られている。すなわち、これらのキナーゼによりＰｅｒがリン酸化されると、著しくタンパク質の安定性が低下することが知られている。

特許文献１には、カゼインキナーゼ阻害剤としてのイミダゾール誘導体に関する技術が記載されている。イミダゾール誘導体が睡眠障害の治療のための医薬組成物としての効果を持つことが記載されている。

特願２０１２−５３５９７７

マスト細胞自身に発現する時計遺伝子がマスト細胞のＩｇＥ受容体の発現レベルを時間依存的に調節しており、この現象の中心的役割を果たしていることを明らかにした。またカゼインキナーゼがＩｇＥ依存性のアレルギー疾患の病態を維持している重要な分子であることを見出し、さらにカゼインキナーゼ阻害剤がアレルギー疾患の治療・予防薬として有用であることを見出した。

本発明は、アレルギー疾患の治療・予防薬として有用なカゼインキナーゼ阻害剤を提供することである。

本発明によれば、下記一般式（１）で表される化合物
（4-[1-cyclohexyl-4-(4-fluorophenyl)-1H-imidazol-5-yl]-2-pyrimidinamine,dihydrochloride
:商品名PF670462）、若しくはその塩又はそれらの溶媒和物若しくはそれらの水和物を有効成分とする、カゼインキナーゼ1δの阻害剤であって、カゼインキナーゼ1δの酵素活性化機序が病態に関与するアレルギー疾患の治療のための医薬組成物である。

また本発明はアレルギー疾患がアレルギー性鼻炎、蕁麻疹、喘息、食物アレルギー、アナフィラキシーショックである。

分子時計機構の概念図を示す。マスト細胞内のPer2タンパク質の発現を示す。 PF670462投与によるアレルギー性鼻炎モデルのアレルギー症状抑制効果を示す。左図は、OVA感作マウスを用いた鼻腔内投与の方法について示す。右図は、マウスの血清中のOVA特異的IgEレベルを示す。

以下、本発明の実施の形態について、図面を用いて説明する。

以下、本発明を実施例によりさらに説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
全てのマウスは、12時間/ 12時間の明暗条件で飼育された。照明は午前6時に点灯し、Zeitgeber時間（ZT 0）とした。
PF670462試薬（Merck Millipore, Darmstadt, Germany）を用いた。

マスト細胞欠損マウスの皮下にPer2-Lucifearseノックインマウスから作製したBMMCｓを移入し、in vivoイメージング法を使い、マスト細胞内のPer2タンパク質の発現をルシフェラーゼ発現を指標にモニターした。図2に示す。図2(a)では、ZT4においてPF670462を50mg / kg投与、またはビヒクル投与とし、ZT8の発現じょうきょうを示している。図2(b)は、ZT8におけるPer２発現量を示す。図2(c)は、上図はZT8における皮膚色反応の写真を示す。下図はデジタル化した画像を示す。図2（d）は、図2(c)下図を濃度値として評価したものである。

次に、PF670462投与によりアレルギー性鼻炎モデルにおいてIgE依存性のアレルギー症状の抑制について、確認試験を行った。図3左図は、OVA感作マウスを用いた鼻腔内投与の方法について示す。6日間、鼻腔内に一日一回ZT8に、10μL PBS中10μL PBSまたは100μgの OVAチャレンジを行った。ZT8の最後のOVAチャレンジの前にPF670462（1または10μｇ/mouse）、DEX（10μｇ/mouse）を投与した。またビヒクルはZT4で鼻腔内に投与した。図3右図は PBSまたはOVAチャレンジ（PBSまたはOVA）の未感作（正常）または増感（ARモデル）マウスの血清中のOVA特異的IgEレベルを示す。マウスは、ビヒクルまたはPF670462、DEXの投与は最後のOVAチャレンジの4時間前に鼻腔内に投与した。マウスの屠殺後、血清中のOVA特異的IgEレベルは、ELISAによって評価した。

以上、本発明を実施例に基づいて説明した。この実施例はあくまで例示であり、種々の変形例が可能なこと、またそうした変形例も本発明の範囲にあることは当業者に理解されるところである。

Claims

下記一般式（１）で表される化合物

（4-[1-cyclohexyl-4-(4-fluorophenyl)-1H-imidazol-5-yl]-2-pyrimidinamine,dihydrochloride）、若しくはその塩又はそれらの溶媒和物若しくはそれらの水和物を有効成分とする、カゼインキナーゼ1δの阻害剤であって、カゼインキナーゼ1δの酵素活性化機序が病態に関与するアレルギー疾患の治療のための医薬組成物。
前記アレルギー疾患がアレルギー性鼻炎、蕁麻疹、喘息、食物アレルギー、アナフィラキシーショックであることを特徴とする請求項１に記載のアレルギー疾患の治療のための医薬組成物。