JP2016137217A - Detection method of eosinophil in bio-tissue using resonance raman spectroscopy, assay of eosinophil infiltration-related disease in tissue and detection device of eosinophil in bio-tissue - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、共鳴ラマン分光法を利用した生体組織内好酸球の検出方法、組織内好酸球浸潤性疾患の検査方法、及び生体組織内好酸球の検出装置に関する。 The present invention relates to a method for detecting eosinophils in living tissue using resonance Raman spectroscopy, a method for examining eosinophil infiltrating diseases in tissue, and an apparatus for detecting eosinophils in living tissue.
近年、好酸球性食道炎等の生体組織内への好酸球の浸潤に伴って発症する疾患の患者数は、増加傾向にある。この好酸球浸潤に伴う疾患は、消化管等の粘膜内に白血球の一種である好酸球が浸潤し、食物等に含まれる抗原に対して好酸球が反応することによって惹起されるアレルギー性疾患の一つであるといわれている。当該疾患を診断するためには、組織内に浸潤している好酸球を検出することが必要となるが、現在その検出は、好酸球が浸潤していると思われる組織を生検材料として、病理組織学的に好酸球の有無を検出する方法によって行われている。しかしながら、この病理組織学的検査は、病変組織の複数箇所から組織を採取する必要があり、出血を伴うことや、診断結果が分かるまでに数日要する等いくつかの課題を抱えている（非特許文献１）。 In recent years, the number of patients with diseases that develop with the infiltration of eosinophils into living tissues such as eosinophilic esophagitis has been increasing. This disease associated with eosinophil infiltration is an allergy caused by the infiltration of eosinophils, a type of white blood cell, into the mucous membrane of the digestive tract and the like, and the reaction of eosinophils with antigens contained in food and the like. It is said to be one of sex diseases. In order to diagnose the disease, it is necessary to detect eosinophils that have infiltrated into the tissue, but currently the detection is based on biopsy material that appears to be infiltrated with eosinophils. As a method of detecting the presence or absence of eosinophils histopathologically. However, this histopathological examination requires the collection of tissues from a plurality of locations of the diseased tissue, and has several problems such as bleeding and several days until the diagnosis result is known (non- Patent Document 1).
一方、ラマン散乱光は、物質に光を照射した際に生じる振動数の変化した散乱光であり、単色光を照射した場合、その振動数成分の集まり（ラマンスペクトル）は物質に固有のものとなる。このラマン散乱光の特性を利用し、レーザー光を使用したラマン分光法によって化合物の化学構造の解析や、結晶性の解析が行われている。また、近年ラマン分光法を利用した食道癌細胞の検出も試みられている（非特許文献２）。 On the other hand, Raman scattered light is scattered light whose frequency has changed when the material is irradiated with light. When monochromatic light is irradiated, the collection of frequency components (Raman spectrum) is unique to the material. Become. Utilizing the characteristics of this Raman scattered light, analysis of the chemical structure of compounds and analysis of crystallinity are performed by Raman spectroscopy using laser light. In recent years, attempts have also been made to detect esophageal cancer cells using Raman spectroscopy (Non-patent Document 2).
本発明は、生体組織内に浸潤している好酸球を特異的に検出する方法を提供することを課題とする。また、組織内に好酸球が浸潤する疾患を診断するために特異性の高い検査方法を提供することを課題とする。さらに、当該検出及び検査に必要な装置を提供することを課題とする。 An object of the present invention is to provide a method for specifically detecting eosinophils infiltrating a living tissue. Another object of the present invention is to provide a highly specific test method for diagnosing a disease in which eosinophils infiltrate into a tissue. Furthermore, it is an object to provide a device necessary for the detection and inspection.
本発明者らは、鋭意研究を重ねたところ、好酸球に特異的に存在する好酸球ペルオキシダーゼに光を照射すると特定のラマンスペクトルのピークが得られることを見出した。そして、共鳴ラマン分光法を利用し、当該ピークを検出することにより組織内に存在する好酸球を検出できることを見出した。 As a result of extensive research, the present inventors have found that a specific Raman spectrum peak can be obtained by irradiating light to eosinophil peroxidase that is present specifically in eosinophils. And it discovered that the eosinophil which exists in a structure | tissue can be detected by detecting the said peak using resonance Raman spectroscopy.
本発明は、当該知見に基づいて完成されたものであり、以下の態様を含む。
項１．（１）共鳴ラマン分光法により生体組織から得られたラマンスペクトルを解析する工程、及び
（２）前記ラマンスペクトルにおいて、好酸球ペルオキシダーゼに由来するラマンスペクトルピークが検出された場合に、当該生体組織内に好酸球が存在していると決定する工程を含む、
生体組織内における好酸球の検出方法。
項２．工程（１）の共鳴ラマン分光法が、６００〜８００ｎｍの範囲のいずれかの波長のレーザー光を励起光として照射する工程を有する方法であり、かつ
工程（２）において検出されるラマンスペクトルピークが、１，５００〜１，６５０ｃｍ−１及び７００〜８００ｃｍ−１の範囲内に検出される少なくとも１つのピークである、
項１に記載の検出方法。
項３．工程（１）の前に、下記工程を有する項１又は２に記載の検出方法：
（０）ラマンスペクトルのノイズを減少させる工程。
項４．（Ａ）共鳴ラマン分光法により生体組織から得られたラマンスペクトルを解析する工程、及び
（Ｂ）前記ラマンスペクトルにおいて好酸球ペルオキシダーゼに由来するラマンスペクトルピークが検出された場合に、当該生体組織内に好酸球が浸潤していると決定する工程を含む、
組織内好酸球浸潤性疾患の検査方法。
項５．工程（Ａ）において、生体組織から得られたラマンスペクトルが、６００〜８００ｎｍの範囲のいずれかの波長のレーザー光を励起光として照射して得られたものであり、かつ
工程（Ｂ）において検出するラマンスペクトルピークが、１，５００〜１，６５０ｃｍ−１及び７００〜８００ｃｍ−１の範囲内に検出される少なくとも１つのピークである、
項４に記載の検査方法。
項６．工程（Ａ）の前に、下記工程を有する項４又は５に記載の検査方法：
（ａ）ラマンスペクトルのノイズを減少させる工程。
項７．共鳴ラマン分光法により生体組織のラマンスペクトルを得る取得手段、及び
前記ラマンスペクトルにおいて、好酸球ペルオキシダーゼに由来するラマンスペクトルピークが検出された場合に、当該生体組織内に好酸球が存在又は浸潤していると決定する決定手段を含む、生体組織内における好酸球の検出装置。
項８．前記取得手段は、６００〜８００ｎｍの範囲のいずれかの波長のレーザー光を励起光として照射する照射手段を有し、かつ前記ラマンスペクトルピークが、１，５００〜１，６５０ｃｍ−１及び７００〜８００ｃｍ−１の範囲内に検出される少なくとも１つのピークである、項７に記載の検出装置。
項９．前記ラマンスペクトルのノイズを減少させるように、前記照射手段を制御する制御手段をさらに含む、項８に記載の検出装置。
This invention is completed based on the said knowledge, and contains the following aspects.
Item 1. (1) a step of analyzing a Raman spectrum obtained from a biological tissue by resonance Raman spectroscopy, and (2) when a Raman spectrum peak derived from eosinophil peroxidase is detected in the Raman spectrum. Including the step of determining that eosinophils are present therein,
A method for detecting eosinophils in a living tissue.
Item 2. The resonance Raman spectroscopy in step (1) is a method having a step of irradiating laser light having any wavelength in the range of 600 to 800 nm as excitation light, and the Raman spectrum peak detected in step (2) is , At least one peak detected in the range of 1,500-1,650 cm −1 and 700-800 cm −1 ,
Item 2. The detection method according to Item 1.
Item 3. Prior to step (1), the detection method according to item 1 or 2 having the following steps:
(0) A step of reducing Raman spectrum noise.
Item 4. (A) a step of analyzing a Raman spectrum obtained from a biological tissue by resonance Raman spectroscopy, and (B) when a Raman spectrum peak derived from eosinophil peroxidase is detected in the Raman spectrum, Including the step of determining that eosinophils are infiltrated,
Test method for eosinophil infiltrating disease in tissue.
Item 5. In step (A), the Raman spectrum obtained from the biological tissue is obtained by irradiating laser light having any wavelength in the range of 600 to 800 nm as excitation light, and is detected in step (B). The Raman spectral peak to be detected is at least one peak detected in the range of 1,500 to 1,650 cm −1 and 700 to 800 cm −1 .
Item 5. The inspection method according to Item 4.
Item 6. Before the step (A), the inspection method according to item 4 or 5 having the following steps:
(A) The process of reducing the noise of a Raman spectrum.
Item 7. Means for obtaining a Raman spectrum of biological tissue by resonance Raman spectroscopy, and when a Raman spectrum peak derived from eosinophil peroxidase is detected in the Raman spectrum, eosinophils are present or infiltrated in the biological tissue. A device for detecting eosinophils in a living tissue, comprising a determining means for determining that the target is living.
Item 8. The acquisition unit includes an irradiation unit that irradiates laser light having any wavelength in the range of 600 to 800 nm as excitation light, and the Raman spectrum peaks are 1500 to 1,650 cm −1 and 700 to 800 cm. Item 8. The detection device according to Item 7, wherein the detection device is at least one peak detected within a range of -1 .
Item 9. Item 9. The detection device according to Item 8, further comprising control means for controlling the irradiation means so as to reduce noise in the Raman spectrum.
本発明によれば、生体組織内に存在する好酸球を特異的に検出することができ、組織内に好酸球が浸潤する疾患を診断することができる。また、当該検出及び診断に必要な装置を提供することができる。さらに、生体組織内に浸潤した好酸球を被験者に侵襲を与えることなく検出することができる。 According to the present invention, eosinophils present in a living tissue can be specifically detected, and a disease in which eosinophils infiltrate into the tissue can be diagnosed. In addition, an apparatus necessary for the detection and diagnosis can be provided. Furthermore, eosinophils that have infiltrated the living tissue can be detected without invading the subject.
１．生体組織内における好酸球の検出方法
本発明は、以下の工程を含む生体組織内における好酸球の検出方法を含む：
（１）共鳴ラマン分光法により生体組織から得られたラマンスペクトルを解析する工程、及び
（２）前記ラマンスペクトルにおいて、好酸球ペルオキシダーゼに由来するラマンスペクトルピークが検出された場合に、当該生体組織内に好酸球が浸潤していると決定する工程。
1. TECHNICAL FIELD The present invention includes a method for detecting eosinophils in living tissue comprising the following steps:
(1) a step of analyzing a Raman spectrum obtained from a biological tissue by resonance Raman spectroscopy, and (2) when a Raman spectrum peak derived from eosinophil peroxidase is detected in the Raman spectrum. A step of determining that eosinophils are infiltrated in the inside.
ここで、「生体」とは、生きている生物の体を示す。生物として、好ましくは哺乳動物、鳥類等であり、より好ましくは哺乳動物である。また哺乳動物として好ましくはヒト、サル、イヌ、ネコ、ウサギ、ウシ、ヒツジ、ヤギ等であり、より好ましくはヒトである。 Here, “living body” refers to the body of a living organism. The organism is preferably a mammal, a bird or the like, more preferably a mammal. Preferred mammals include humans, monkeys, dogs, cats, rabbits, cows, sheep, goats, and the like, and more preferred are humans.
また、「組織」とは、生物の体の一部を示す。本発明が適用される組織の由来器官としては、口腔、咽頭、食道、胃、十二指腸、空腸、回腸、盲腸、虫垂、結腸、直腸、肛門、肝臓、胆嚢、膵臓等の消化器系；鼻腔、副鼻腔、喉頭、気管、気管支、肺等の呼吸器系；血管、心臓等の循環器系；腎臓、尿管、膀胱等の泌尿器系；末梢神経、中枢神経等の神経系；骨、軟骨、筋等の骨格系；骨髄、血液、リンパ節等の血液系；皮膚等の外皮系；副腎、下垂体、甲状腺、副甲状腺等の内分泌系；生殖器系；目、耳等の感覚器系が挙げられ、より好ましくは、消化器系、呼吸器系、循環器系、泌尿器系、神経系、外皮系、骨格系等が挙げられる。 The “tissue” refers to a part of a living body. Examples of organs to which the present invention is applied include oral cavity, pharynx, esophagus, stomach, duodenum, jejunum, ileum, cecum, appendix, colon, rectum, anus, liver, gallbladder, pancreas and the like; nasal cavity, Respiratory system such as sinuses, larynx, trachea, bronchi, and lung; Circulatory system such as blood vessels and heart; Urinary system such as kidney, ureter, and bladder; Nervous system such as peripheral nerve and central nerve; Bone, cartilage, Skeletal system such as muscle; Blood system such as bone marrow, blood, lymph node; Outer skin system such as skin; Endocrine system such as adrenal gland, pituitary gland, thyroid gland, parathyroid gland; Reproductive system; Sensory organ system such as eyes and ears More preferably, the digestive system, respiratory system, circulatory system, urinary system, nervous system, integumental system, skeletal system and the like can be mentioned.
さらに、本発明の組織は、生体内に存在していても、生体から採取されたものでもよいが、好ましくは生体から採取されたものである。 Furthermore, the tissue of the present invention may be present in a living body or collected from a living body, but is preferably collected from a living body.
本発明では、血管、骨髄等以外の本来であれば好酸球が存在しない組織を検出対象とすることが好ましい。 In the present invention, it is preferable that a tissue other than blood vessels, bone marrow, and the like that originally has no eosinophils is the detection target.
本発明の生体組織内における好酸球の検出方法において、共鳴ラマン分光法により生体組織のラマンスペクトルを得る方法は、励起光を対象とする生体組織に照射し、得られたラマン散乱光を波長毎に分光し、分光された波長ごとの光の強度を記録する工程を含む。 In the method for detecting eosinophils in a living tissue of the present invention, a method for obtaining a Raman spectrum of a living tissue by resonance Raman spectroscopy irradiates the living tissue targeted for excitation light with a wavelength of the obtained Raman scattered light. A step of spectrally dividing each time and recording the intensity of the light for each of the divided wavelengths.
照射する励起光としては、４００〜５００ｎｍ及び６００〜８００ｎｍの範囲のいずれかの波長のレーザー光であり、好ましくは６００〜８００ｎｍの範囲、より好ましくは６２０〜６５０ｎｍの範囲、さらに好ましくは６２５〜６３５ｎｍの範囲、最も好ましくは６３２〜６３３ｎｍである。 The excitation light to be irradiated is laser light having a wavelength in the range of 400 to 500 nm and 600 to 800 nm, preferably in the range of 600 to 800 nm, more preferably in the range of 620 to 650 nm, still more preferably 625 to 635 nm. The range is most preferably 632 to 633 nm.
共鳴ラマン効果は、励起光として６２０〜６５０ｎｍの範囲、より好ましくは６２５〜６３５ｎｍの範囲、さらに好ましくは６３２〜６３３ｎｍのレーザー光を照射した際に得られるため、この範囲の波長を用いることが特に好ましい。 The resonance Raman effect is obtained when the excitation light is irradiated with a laser beam in the range of 620 to 650 nm, more preferably in the range of 625 to 635 nm, and still more preferably in the range of 632 to 633 nm. preferable.
６００〜８００ｎｍの範囲の波長のレーザー光を照射するためのレーザーとしては、特に制限されず、公知の赤色レーザーを用いることができる。例えばヘリウム−ネオンレーザー、ＡｌＧａＩｎＰ（アルミニウム・ガリウム・インジウム・リン）系赤色半導体レーザー等が挙げられる。 The laser for irradiating laser light having a wavelength in the range of 600 to 800 nm is not particularly limited, and a known red laser can be used. Examples thereof include a helium-neon laser and an AlGaInP (aluminum / gallium / indium / phosphorus) red semiconductor laser.
レーザー光を照射する強さは、組織を損傷させない限りにおいて特に制限されないが、０．１〜１０ｍＷであり、好ましくは０．５〜５ｍＷであり、より好ましくは１〜３ｍＷである。また、照射時間も、組織を損傷させない限りにおいて等に制限されないが、１カ所当たり３〜２０秒であり、好ましくは５〜１５秒であり、より好ましくは、８〜１２秒である。 Although the intensity | strength which irradiates a laser beam is not restrict | limited especially unless a structure | tissue is damaged, it is 0.1-10 mW, Preferably it is 0.5-5 mW, More preferably, it is 1-3 mW. The irradiation time is not limited as long as the tissue is not damaged, but is 3 to 20 seconds per site, preferably 5 to 15 seconds, and more preferably 8 to 12 seconds.
さらに、レーザー光源と組織の光路の間に、特定の波長のレーザー光のみを透過するバンドパスフィルター等の光学フィルターを挟んでもよい。 Furthermore, an optical filter such as a band pass filter that transmits only laser light of a specific wavelength may be sandwiched between the laser light source and the optical path of the tissue.
組織に励起光を照射することによって生じた散乱光は、例えば公知の技術を使用して検出することができる。ここで励起光の照射によって生じる散乱光には、レイリー散乱光とラマン散乱光の２種類が存在する。ラマン散乱光はレイリー散乱光と比較して１００万分の１〜１億分の１程度の強さしかないため、ラマン散乱光を分光するためには、励起光を組織に照射して生じた散乱光を集光器等で取り込む前、又は取り込んだ後に、散乱光に含まれるレイリー散乱光を光学フィルター等で除去した上で、ラマン散乱光を分光器に取り込む必要がある。レイリー散乱光を除去するための光学フィルターとしては、公知のものを使用することができる。例えば、当該光学フィルターとしては、ダイクロイックフィルター；ロングパスフィルターやショートパスフィルター等のエッジフィルター；バンドパスフィルター等が挙げられる。 Scattered light generated by irradiating the tissue with excitation light can be detected using, for example, a known technique. Here, there are two types of scattered light generated by the irradiation of excitation light: Rayleigh scattered light and Raman scattered light. Since Raman scattered light is only about 1 / 100,000,000 / 100,000 compared to Rayleigh scattered light, in order to disperse Raman scattered light, the scattering caused by irradiating the tissue with excitation light Before or after capturing light with a condenser or the like, it is necessary to remove the Rayleigh scattered light contained in the scattered light with an optical filter or the like, and then capture the Raman scattered light into the spectroscope. As an optical filter for removing Rayleigh scattered light, a known filter can be used. For example, examples of the optical filter include a dichroic filter; an edge filter such as a long pass filter or a short pass filter; a band pass filter.
またラマン散乱には、ストークスラマン散乱とアンチストークスラマン散乱があり、どちらを検出してもよいが、好ましくはストークスラマン散乱である。 In addition, Raman scattering includes Stokes Raman scattering and anti-Stokes Raman scattering, which may be detected, but Stokes Raman scattering is preferred.
レイリー散乱光を除去した後のラマン散乱光を分光させるためには、例えば公知の回折格子等の分光器を使用することができる。分光されたラマン散乱光は、ＣＣＤ検知器等の公知の検知器を用いて検出することができる。また、検出されたラマン散乱光は、波長ごとに光の強度として電算機等に記録され、波長ごとの光の強度をラマンスペクトルとして外部機器又は内部機器に出力又は表示することができる。 In order to split the Raman scattered light after the Rayleigh scattered light is removed, for example, a spectroscope such as a known diffraction grating can be used. The spectrally scattered Raman scattered light can be detected using a known detector such as a CCD detector. The detected Raman scattered light is recorded in a computer or the like as the light intensity for each wavelength, and the light intensity for each wavelength can be output or displayed as a Raman spectrum on an external device or an internal device.
ラマンスペクトルを解析する方法は、モニターに表示されたラマンスペクトル、若しくは紙媒体等に印刷されたラマンスペクトルを目視によって解析する方法、又はラマンスペクトルの特定の波長の範囲にピークが現れた場合に、そのことを電算機等を用いて通知又は表示する方法等が含まれる。 The method of analyzing the Raman spectrum is a method of visually analyzing the Raman spectrum displayed on the monitor or the Raman spectrum printed on a paper medium, or when a peak appears in a specific wavelength range of the Raman spectrum. A method of notifying or displaying this using a computer or the like is included.
好酸球に特異的に存在する好酸球ペルオキシダーゼに上記波長の範囲内の励起光が照射されると、特定のラマンスペクトルのピークが得られる。このピークは、１，５００〜１，６５０ｃｍ−１及び７００〜８００ｃｍ−１の範囲内に検出される少なくとも１つのピークであり、好ましくは、１，５００〜１，５５０ｃｍ−１、１，６００〜１，６５０ｃｍ−１及び７３０〜７８０ｃｍ−１の範囲内に検出される少なくとも１つのピークであり、より好ましくは１，５３０〜１，５５０ｃｍ−１、１，６００〜１，６２０ｃｍ−１及び７４０〜７６０ｃｍ−１の範囲内に検出される少なくとも１つのピークであり、さらに好ましくは、１，５４５ｃｍ−１、１，６０６ｃｍ−１、及び７５３ｃｍ−１に検出される少なくとも一つのピークである。これら波長範囲に少なくとも一つのピークが検出されれば、励起光を照射した部位に好酸球ペルオキシダーゼが存在していると決定することができる。好酸球ペルオキシダーゼが存在する部位には好酸球が存在するため、上記ピークの少なくとも一つが検出されれば、励起光を照射した部位の組織に好酸球が存在していると決定することができる。また、好酸球は健常状態では、血管内や骨髄にしか存在しないため、これら以外の組織に、上記ピークの少なくとも一つが検出されれば、当該組織内に好酸球が存在していると決定することができる。 When excitation light within the above wavelength range is irradiated to eosinophil peroxidase specifically present in eosinophils, a specific Raman spectrum peak is obtained. This peak is at least one peak detected in the range of 1,500 to 1,650 cm −1 and 700 to 800 cm −1 , preferably 1,500 to 1,550 cm −1 , 1,600 to At least one peak detected in the range of 1,650 cm −1 and 730 to 780 cm −1 , more preferably 1,530 to 1,550 cm −1 , 1,600 to 1,620 cm −1 and 740 to It is at least one peak detected in the range of 760 cm −1 , more preferably at least one peak detected at 1,545 cm −1 , 1,606 cm −1 , and 753 cm −1 . If at least one peak is detected in these wavelength ranges, it can be determined that eosinophil peroxidase is present at the site irradiated with excitation light. Since eosinophils are present at sites where eosinophil peroxidase is present, if at least one of the above peaks is detected, it is determined that eosinophils are present in the tissue irradiated with the excitation light. Can do. In addition, since eosinophils are present only in blood vessels and bone marrow in a healthy state, if at least one of the above peaks is detected in other tissues, eosinophils are present in the tissues. Can be determined.
また、好酸球の検出の特異性を上げるために、上記ラマンスペクトルの範囲に少なくとも２つのピークが検出された場合に、好酸球が存在していると決定してもよい。この場合に選択されるラマンスペクトルの２つのピークは、一方が１，５００〜１，５５０ｃｍ−１の範囲内であり、もう一方が１，６００〜１，６５０ｃｍ−１の範囲内；好ましくは一方が１，５３０〜１，５５０ｃｍ−１の範囲内であり、もう一方が１，６００〜１，６２０ｃｍ−１の範囲内；さらに好ましくは、一方が１，５４５ｃｍ−１であり、もう一方が１，６０６ｃｍ−１である。 Further, in order to increase the specificity of detection of eosinophils, it may be determined that eosinophils are present when at least two peaks are detected in the range of the Raman spectrum. Two peaks of Raman spectra to be selected in this case, one is in the range of 1,500～1,550Cm -1, in the range other is 1,600~1,650cm -1; preferably Meanwhile Is in the range of 1,530 to 1,550 cm −1 and the other is in the range of 1,600 to 1,620 cm −1 ; more preferably, one is 1,545 cm −1 and the other is 1. , 606 cm −1 .
さらに、本発明の生体組織内における好酸球の検出方法は、組織に励起光を照射した際に発生する、好酸球ペルオキシダーゼ以外のタンパク質、脂質、核酸等の自家蛍光や散乱光等に由来するラマンスペクトルのノイズを減少させる工程を含んでもよい。 Furthermore, the method for detecting eosinophils in the living tissue of the present invention is derived from autofluorescence or scattered light such as proteins, lipids, and nucleic acids other than eosinophil peroxidase, which is generated when the tissue is irradiated with excitation light. The step of reducing the noise of the Raman spectrum may be included.
ノイズを減少させる方法としては、好酸球ペルオキシダーゼに由来するラマン散乱光を検出するのに先立って、あらかじめ対象とする生体組織にレーザー光を前照射すること等が挙げられる。 As a method for reducing noise, prior to detecting Raman scattered light derived from eosinophil peroxidase, preliminarily irradiating a target biological tissue with laser light and the like can be mentioned.
前照射に使用されるレーザー光は、特に制限されないが、前記励起光として照射するレーザー光と同じ波長のものを用いることが好ましい。 The laser beam used for the pre-irradiation is not particularly limited, but it is preferable to use a laser beam having the same wavelength as the laser beam irradiated as the excitation light.
レーザーの照射条件は、好酸球ペルオキシダーゼのラマン散乱光を得る時と同じであってもよいが、レーザーの強さは、前記ラマン散乱光を得る時の上記１．に記載した条件の１〜１．５倍が好ましく、より好ましくは１〜１．２倍である。 The laser irradiation condition may be the same as that for obtaining Raman scattered light of eosinophil peroxidase, but the intensity of the laser is the same as in 1. above for obtaining the Raman scattered light. Is preferably 1 to 1.5 times, more preferably 1 to 1.2 times.
また前照射におけるレーザー光の照射時間も、好酸球ペルオキシダーゼのラマン散乱光を得る時と同じ条件であってもよいが、前照射におけるレーザー光の照射時間は、前記ラマン散乱光を得る時の上記１．に記載した条件の１、２、３、４又は５回分が好ましく、より好ましくは１、２又は３回分である。前照射におけるレーザー照射は、「好酸球ペルオキシダーゼのラマン散乱光を得る時と同じ照射時間」に「１、２、３、４又は５回分」を乗じた時間を連続して照射してもよく、１回ごと上記回数を繰り返して照射してもよい。 In addition, the irradiation time of the laser light in the pre-irradiation may be the same conditions as when obtaining the Raman scattered light of eosinophil peroxidase, but the irradiation time of the laser light in the pre-irradiation is the same as that for obtaining the Raman scattered light. Above 1. 1, 2, 3, 4 or 5 times of the conditions described in 1. is preferred, more preferably 1, 2 or 3 times. Laser irradiation in pre-irradiation may be performed continuously by multiplying “same irradiation time as when obtaining Raman scattered light of eosinophil peroxidase” by “1, 2, 3, 4 or 5 times”. You may irradiate the said number of times every time.
このような前処理を行うことにより、組織の自家蛍光や散乱光等の非特異的な光を減少させることができ、結果として、ラマンスペクトルのノイズを減少させることができる。 By performing such pretreatment, nonspecific light such as autofluorescence of tissue and scattered light can be reduced, and as a result, noise in the Raman spectrum can be reduced.
好酸球の検出は、組織内の一カ所について行ってもよいが、一つの組織内の複数箇所に対して行ってもよい。より検出効率を上げるためには、一つの組織内において０．０５〜１ｍｍ、好ましくは、０．１〜０．５ｍｍ程度の間隔ごとにラマンスペクトルを取得し、好酸球ペルオキシダーゼに由来するピークの有無を確認することが好ましい。 The detection of eosinophils may be performed at one place in the tissue, but may be performed at a plurality of places in one tissue. In order to further increase the detection efficiency, a Raman spectrum is acquired at intervals of about 0.05 to 1 mm, preferably about 0.1 to 0.5 mm in one tissue, and peaks derived from eosinophil peroxidase are obtained. It is preferable to check the presence or absence.
また、本発明の生体組織内における好酸球の検出方法は、後述３．の検出装置を用いて行うことができる。 The method for detecting eosinophils in the living tissue of the present invention is described later in 3. It can carry out using the detection apparatus of.
２．組織内好酸球浸潤性疾患の検査方法
本発明は、以下の工程を含む組織内好酸球浸潤性疾患の検査方法を含む：
（Ａ）共鳴ラマン分光法により生体組織から得られたラマンスペクトルを解析する工程、及び
（Ｂ）前記ラマンスペクトルにおいて好酸球ペルオキシダーゼに由来するラマンスペクトルピークが検出された場合に、当該生体組織内に好酸球が浸潤していると決定する工程。
2. BACKGROUND OF THE INVENTION The present invention includes a method for examining tissue eosinophil invasive disease comprising the following steps:
(A) a step of analyzing a Raman spectrum obtained from a biological tissue by resonance Raman spectroscopy, and (B) when a Raman spectrum peak derived from eosinophil peroxidase is detected in the Raman spectrum, Determining that eosinophils are infiltrated.
ここで「組織内好酸球浸潤性疾患」とは、血管、骨髄等以外の本来であれば好酸球が存在しない組織に好酸球が侵入し、炎症、細胞・組織障害、細胞・組織変性等の症状を来す疾患を示す。「炎症」、「障害」、「変性」の定義は、病理学の定義が適用される。 As used herein, “tissue eosinophil infiltrating disease” means that eosinophils invade tissues other than blood vessels, bone marrow, etc. that are otherwise free of eosinophils, causing inflammation, cell / tissue damage, cell / tissue Indicates a disease that causes symptoms such as degeneration. The definition of pathology applies to the definitions of “inflammation”, “disorder”, and “degeneration”.
組織内好酸球浸潤性疾患としては、例えば、消化器系、呼吸器系、循環器系、泌尿器系、神経系、外皮系、骨格等の組織内に好酸球が浸潤し炎症、変性等の症状を来す疾患が挙げられる。より具体的には、好酸球が関与する、喘息；花粉症；アレルギー性鼻炎；アレルギー性結膜炎；アトピー性皮膚炎；アレルギー性皮膚炎；好酸球性食道炎；好酸球性胃腸炎；好酸球性胆管炎；単純性肺好酸球症、急性好酸球性肺炎、慢性好酸球性肺炎等のPIE （Pulmonary infiltration of eosinophili）症候群；好酸球性気管支炎；好酸球性肉芽腫性多発血管炎；好酸球性心筋炎；尿細管間質性腎炎；好酸球性血管性浮腫；好酸球性筋膜炎；木村病；好酸球性皮膚炎；好酸球性膿疱性毛包炎；好酸球性副鼻腔炎；好酸球増多性鼻炎；好酸球性中耳炎等が挙げられる。 Examples of tissue eosinophil infiltrating diseases include inflammation, degeneration, etc. due to infiltration of eosinophils into tissues such as digestive system, respiratory system, circulatory system, urinary system, nervous system, integumental system, and skeleton. Diseases that cause these symptoms. More specifically, asthma involving eosinophils; hay fever; allergic rhinitis; allergic conjunctivitis; atopic dermatitis; allergic dermatitis; eosinophilic esophagitis; eosinophilic gastroenteritis; Eosinophilic cholangitis; PIE (Pulmonary infiltration of eosinophili) syndrome such as simple pulmonary eosinophilic disease, acute eosinophilic pneumonia, chronic eosinophilic pneumonia; eosinophilic bronchitis; eosinophilic Granulomatous polyangiitis; eosinophilic myocarditis; tubulointerstitial nephritis; eosinophilic angioedema; eosinophilic fasciitis; Kimura disease; eosinophilic dermatitis; eosinophils Pustular folliculitis; eosinophilic sinusitis; eosinophilia rhinitis; eosinophilic otitis media and the like.
本発明が適用される組織内好酸球浸潤性疾患として好ましくは、上記疾患のうち、喘息；アレルギー性鼻炎；花粉症；アトピー性皮膚炎；アレルギー性皮膚炎；好酸球性食道炎；好酸球性胃腸炎；好酸球性胆管炎； PIE症候群；好酸球性気管支炎；好酸球性肉芽腫性多発血管炎；好酸球性副鼻腔炎；好酸球増多性鼻炎；好酸球性中耳炎等であり、より好ましくは、喘息；アレルギー性鼻炎；花粉症；アトピー性皮膚炎；アレルギー性皮膚炎；好酸球性食道炎；好酸球性胃腸炎；好酸球性胆管炎； PIE症候群；好酸球性気管支炎である。 The tissue eosinophil infiltrating diseases to which the present invention is applied are preferably asthma; allergic rhinitis; hay fever; atopic dermatitis; allergic dermatitis; eosinophilic esophagitis; Eosinophilic gastroenteritis; eosinophilic cholangitis; PIE syndrome; eosinophilic bronchitis; eosinophilic granulomatous polyangiitis; eosinophilic sinusitis; eosinophilic rhinitis; Eosinophilic otitis media, etc. More preferably, asthma; allergic rhinitis; hay fever; atopic dermatitis; allergic dermatitis; eosinophilic esophagitis; eosinophilic gastroenteritis; Cholangitis; PIE syndrome; eosinophilic bronchitis.
上記工程（Ａ）の生体組織からラマンスペクトルを得る方法及びラマンスペクトルを解析する方法は特に制限されないが、例えば上記１．で述べた方法によって行うことができる。 The method for obtaining the Raman spectrum from the biological tissue in the step (A) and the method for analyzing the Raman spectrum are not particularly limited. It can be performed by the method described in.
ここで、本発明の検査方法は、生体内に存在している組織に適用してもよく、生体から採取された組織に適用してもよい。また組織は、正常組織であっても好酸球浸潤が疑われる組織であってもよいが、好酸球浸潤が疑われる組織が好ましい。「好酸球浸潤が疑われる」とは、目視、内視鏡検査等で炎症等の有無、血中の好酸球数等から好酸球浸潤の可能性があると判断されることをいう。 Here, the inspection method of the present invention may be applied to a tissue existing in a living body, or may be applied to a tissue collected from a living body. The tissue may be a normal tissue or a tissue suspected of eosinophil infiltration, but a tissue suspected of eosinophil infiltration is preferred. “Eosinophil infiltration is suspected” means that there is a possibility of eosinophil infiltration from the presence or absence of inflammation, the number of eosinophils in the blood, etc. by visual inspection or endoscopy. .
また、ラマンスペクトルを解析する方法は、モニターに表示されたラマンスペクトル、若しくは紙媒体等に印刷されたラマンスペクトルを目視によって解析する方法、又はラマンスペクトルの特定の波長の範囲にピークが現れた場合に、そのことを電算機等を用いて通知又は表示する方法等が含まれる。 In addition, the method of analyzing the Raman spectrum is a method of visually analyzing the Raman spectrum displayed on the monitor or the Raman spectrum printed on a paper medium, or when a peak appears in a specific wavelength range of the Raman spectrum. Includes a method of notifying or displaying such information using a computer or the like.
上記工程（Ｂ）では、上記工程（Ａ）の解析において、好酸球ペルオキシダーゼに由来する少なくとも一つのラマンスペクトルピークが検出された場合、当該生体組織内に好酸球が浸潤していると決定することができる。このピークは、１，５００〜１，６５０ｃｍ−１及び７００〜８００ｃｍ−１の範囲内に検出される少なくとも１つのピークであり、好ましくは、１，５００〜１，５５０ｃｍ−１、１，６００〜１，６５０ｃｍ−１及び７３０〜７８０ｃｍ−１の範囲内に検出される少なくとも１つのピークであり、より好ましくは１，５３０〜１，５５０ｃｍ−１、１，６００〜１，６２０ｃｍ−１及び７４０〜７６０ｃｍ−１の範囲内に検出される少なくとも１つのピークであり、さらに好ましくは、１，５４５ｃｍ−１、１，６０６ｃｍ−１、及び７５３ｃｍ−１に検出される少なくとも一つのピークである。これらのピークの少なくとも一つが検出されれば、励起光を照射した部位に好酸球ペルオキシダーゼが存在していると決定することができる。好酸球ペルオキシダーゼが存在する部位には好酸球が存在することを意味するため、上記ピークの少なくとも一つが検出されれば、励起光を照射した部位の組織に好酸球が存在していると決定することができる。また、好酸球は健常状態では、血管内や骨髄にしか存在しないため、これら以外の組織に、上記ピークの少なくとも一つが検出されれば、当該組織内に好酸球が浸潤していると決定することができる。 In the step (B), when at least one Raman spectrum peak derived from eosinophil peroxidase is detected in the analysis of the step (A), it is determined that eosinophils infiltrate the living tissue. can do. This peak is at least one peak detected in the range of 1,500 to 1,650 cm −1 and 700 to 800 cm −1 , preferably 1,500 to 1,550 cm −1 , 1,600 to At least one peak detected in the range of 1,650 cm −1 and 730 to 780 cm −1 , more preferably 1,530 to 1,550 cm −1 , 1,600 to 1,620 cm −1 and 740 to It is at least one peak detected in the range of 760 cm −1 , more preferably at least one peak detected at 1,545 cm −1 , 1,606 cm −1 , and 753 cm −1 . If at least one of these peaks is detected, it can be determined that eosinophil peroxidase is present at the site irradiated with excitation light. This means that eosinophils are present at the site where eosinophil peroxidase is present. Therefore, if at least one of the above peaks is detected, eosinophils are present in the tissue irradiated with the excitation light. Can be determined. In addition, since eosinophils are present only in blood vessels and bone marrow in a healthy state, if at least one of the above peaks is detected in other tissues, eosinophils infiltrate the tissues. Can be determined.
また、好酸球の検出の特異性を上げるために、上記ラマンスペクトルの範囲に少なくとも２つのピークが検出された場合に、好酸球が浸潤していると決定してもよい。この場合に選択されるラマンスペクトルの２つのピークは、一方が１，５００〜１，５５０ｃｍ−１の範囲内であり、もう一方が１，６００〜１，６５０ｃｍ−１の範囲内；好ましくは一方が１，５３０〜１，５５０ｃｍ−１の範囲内であり、もう一方が１，６００〜１，６２０ｃｍ−１の範囲内；さらに好ましくは、一方が１，５４５ｃｍ−１であり、もう一方が１，６０６ｃｍ−１である。 In order to increase the specificity of eosinophil detection, it may be determined that eosinophils are infiltrated when at least two peaks are detected in the range of the Raman spectrum. Two peaks of Raman spectra to be selected in this case, one is in the range of 1,500～1,550Cm -1, in the range other is 1,600~1,650cm -1; preferably Meanwhile Is in the range of 1,530 to 1,550 cm −1 and the other is in the range of 1,600 to 1,620 cm −1 ; more preferably, one is 1,545 cm −1 and the other is 1. , 606 cm −1 .
特に組織内好酸球浸潤性疾患が疑われた被験者の好酸球浸潤が疑われる組織から取得したラマンスペクトルにおいて、上記ピークが検出された場合には、前記被験体が組織内好酸球浸潤性疾患であると決定することができる。 In particular, in the Raman spectrum obtained from a tissue suspected of eosinophil infiltration in a subject suspected of having an eosinophil infiltrating disease in the tissue, when the peak was detected, the subject It can be determined that this is a sex disorder.
さらに、本発明の組織内好酸球浸潤性疾患の検査方法は、上記１．で述べたラマンスペクトルのノイズを減少させる工程を含んでもよい。 Further, the method for examining an eosinophil infiltrating disease in a tissue according to the present invention comprises The step of reducing the noise of the Raman spectrum described in (1) may be included.
また本発明の組織内好酸球浸潤性疾患の検査方法は、後述３．の検出装置を使用して行ってもよい。 The method for examining an eosinophil infiltrating disease in tissue of the present invention is described later in 3. This may be performed using a detection device.
３．生体組織内における組織内浸潤好酸球の検出装置
本発明の組織内浸潤好酸球の検出装置の実施形態について、図１および図２を参照して説明する。
3. Apparatus for detecting tissue-infiltrating eosinophils in living tissue An embodiment of the apparatus for detecting tissue-infiltrating eosinophils of the present invention will be described with reference to FIGS. 1 and 2.
検出装置１
図１は、本発明の組織内好酸球の検出装置の一例である検出装置１の概略構成図である。検出装置１は、生体内に存在している組織内好酸球を検出するように構成されており、内視鏡２、レーザー光源３、バンドパスフィルター４、エッジフィルター５、分光器６、検知器７、コンピュータ８、モニタ画面９、白色光源１０、光学映像ビデオカメラ１１、及び鉗子操作用ハンドル１２を備えている。
Detection device 1
FIG. 1 is a schematic configuration diagram of a detection apparatus 1 that is an example of a detection apparatus for tissue eosinophils according to the present invention. The detection apparatus 1 is configured to detect tissue eosinophils present in a living body, and includes an endoscope 2, a laser light source 3, a bandpass filter 4, an edge filter 5, a spectroscope 6, and a detection. A device 7, a computer 8, a monitor screen 9, a white light source 10, an optical video camera 11, and a forceps operation handle 12.
また、内視鏡２は、ラマン分光測定用光ファイバＦ１、照明用光ファイバＦ２、光学モニタ用光ファイバＦ３、及び鉗子用チューブＴを備えている。ラマン分光測定用光ファイバＦ１は、ダブルコア光ファイバであり、一方のコアは、バンドパスフィルター４を介してレーザー光源３に接続され、他方のコアは、エッジフィルター５を介して分光器６及び検知器７に接続されている。照明用光ファイバＦ２及び光学モニタ用光ファイバＦ３は、白色光源１０及び光学映像ビデオカメラ１１にそれぞれ接続されている。鉗子用チューブＴには、鉗子操作用ハンドル１２に接続された鉗子ユニットが挿入される。 The endoscope 2 includes a Raman spectroscopic measurement optical fiber F1, an illumination optical fiber F2, an optical monitor optical fiber F3, and a forceps tube T. The optical fiber F1 for Raman spectroscopic measurement is a double core optical fiber, one core is connected to the laser light source 3 via the band pass filter 4, and the other core is connected to the spectroscope 6 and the detection via the edge filter 5. Connected to the device 7. The illumination optical fiber F2 and the optical monitor optical fiber F3 are connected to the white light source 10 and the optical video camera 11, respectively. A forceps unit connected to the forceps operation handle 12 is inserted into the forceps tube T.
レーザー光源３は、４００〜５００ｎｍ及び６００〜８００ｎｍの範囲のいずれかの波長のレーザー光を励起光として照射する光源であり、検出装置１では、最も好ましい６３３ｎｍの波長の励起光Ｅを照射する。バンドパスフィルター４は、波長が６３３ｎｍの励起光Ｅのみを通過させる光学フィルターである。 The laser light source 3 is a light source that irradiates laser light having a wavelength in the range of 400 to 500 nm and 600 to 800 nm as excitation light, and the detection apparatus 1 irradiates excitation light E having the most preferable wavelength of 633 nm. The bandpass filter 4 is an optical filter that allows only excitation light E having a wavelength of 633 nm to pass.
励起光Ｅを生体組織に照射することによって生じる散乱光には、レイリー散乱光とラマン散乱光の２種類が存在するが、ラマン散乱光はレイリー散乱光と比較して１００万分の１〜１億分の１程度の強さしかない。そのため、エッジフィルター５は、レイリー散乱光、及び励起光Ｅの波長である６３３ｎｍの成分をカットする特性を有している。エッジフィルター５としては、ダイクロイックフィルター；ロングパスフィルターやショートパスフィルター等のエッジフィルター；バンドパスフィルター等の公知の光学フィルターを使用することができる。 There are two types of scattered light generated by irradiating the living tissue with the excitation light E. Rayleigh scattered light and Raman scattered light exist, and Raman scattered light is 1 to 100 million parts per million compared to Rayleigh scattered light. It is only about 1 / min strong. Therefore, the edge filter 5 has a characteristic of cutting the component of 633 nm that is the wavelength of the Rayleigh scattered light and the excitation light E. As the edge filter 5, a dichroic filter; an edge filter such as a long pass filter or a short pass filter; a known optical filter such as a band pass filter can be used.
分光器６は、ラマン散乱光を分光するものであり、例えば公知の回折格子を使用することができる。 The spectroscope 6 separates Raman scattered light, and for example, a known diffraction grating can be used.
検知器７は、分光されたラマン散乱光を検知するものであり、ＣＣＤ検知器等の公知の検知器を用いることができる。 The detector 7 detects the spectrally scattered Raman scattered light, and a known detector such as a CCD detector can be used.
コンピュータ８は、例えば汎用のパーソナルコンピュータで構成されており、制御部８１、取得部８２、及び決定部８３を備えている。制御部８１、取得部８２、及び決定部８３は、コンピュータ８に組織内好酸球検出プログラムをインストールすることにより実現する機能ブロックである。なお、これらの各部を論理回路等によってハードウェア的に構成してもよい。 The computer 8 is constituted by a general-purpose personal computer, for example, and includes a control unit 81, an acquisition unit 82, and a determination unit 83. The control unit 81, the acquisition unit 82, and the determination unit 83 are functional blocks realized by installing the tissue eosinophil detection program in the computer 8. Note that each of these units may be configured in hardware by a logic circuit or the like.
上述の構成要素のうち、取得部８２は、「共鳴ラマン分光法により生体組織のラマンスペクトルを得る取得手段」に相当し、決定部８３は、「前記ラマンスペクトルにおいて、好酸球ペルオキシダーゼに由来するラマンスペクトルピークが検出された場合に、当該生体組織内に好酸球が存在又は浸潤していると決定する決定手段」に相当する。また、レーザー光源３は、「６００〜８００ｎｍの範囲のいずれかの波長のレーザー光を励起光として照射する照射手段」に相当し、制御部８１は、「前記ラマンスペクトルのノイズを減少させるように、前記照射手段を制御する制御手段」に相当する。 Among the above-described components, the acquisition unit 82 corresponds to “acquisition means for obtaining a Raman spectrum of biological tissue by resonance Raman spectroscopy”, and the determination unit 83 is derived from “eosinophil peroxidase in the Raman spectrum”. This corresponds to “determination means for determining that eosinophils are present or infiltrated in the living tissue when a Raman spectrum peak is detected”. Further, the laser light source 3 corresponds to “irradiation means for irradiating laser light having any wavelength in the range of 600 to 800 nm as excitation light”, and the control unit 81 is configured to “reduce noise in the Raman spectrum. Corresponds to “control means for controlling the irradiation means”.
検出装置１は、本発明の生体組織内における組織内好酸球の検出方法、及び組織内好酸球浸潤性疾患の各工程を実施するために、例えば、以下のように動作する。 The detection apparatus 1 operates as follows, for example, in order to carry out the steps of the method for detecting eosinophils in a living tissue and the tissue eosinophil infiltrating disease of the present invention.
工程（１）
工程（１）は、共鳴ラマン分光法により生体組織のラマンスペクトルを得る工程である。この工程では、内視鏡２を生体内（例えばヒトの食道内）に挿入し、制御部８１によってレーザー光源３を駆動させ、レーザー光源３は励起光Ｅを出射する。励起光Ｅはバンドパスフィルター４を通過して、ラマン分光測定用光ファイバＦ１の端部から食道粘膜Ｃに照射される。これにより、食道粘膜Ｃから散乱光Ｓが発生し、ラマン分光測定用光ファイバＦ１の端部に形成された集光（コレクタ）レンズに入射する。散乱光Ｓはラマン分光測定用光ファイバＦ１を通り、散乱光Ｓのうちレイリー散乱光のみがエッジフィルター５を通過する。レイリー散乱光は分光器６によって分光され、検知器７によって電気信号に変換される。当該電気信号はコンピュータ８の取得部８２に入力される。取得部８２は、検知器７からの電気信号に基づき、レイリー散乱光の波長ごとの強度を解析してラマンスペクトルを得る。
Process (1)
Step (1) is a step of obtaining a Raman spectrum of a living tissue by resonance Raman spectroscopy. In this step, the endoscope 2 is inserted into a living body (for example, a human esophagus), the laser light source 3 is driven by the control unit 81, and the laser light source 3 emits excitation light E. Excitation light E passes through the bandpass filter 4 and is irradiated to the esophageal mucosa C from the end of the optical fiber F1 for Raman spectroscopy measurement. Thereby, scattered light S is generated from the esophageal mucosa C and is incident on a condensing (collector) lens formed at the end of the optical fiber F1 for Raman spectroscopy measurement. The scattered light S passes through the optical fiber F1 for Raman spectroscopic measurement, and only Rayleigh scattered light among the scattered light S passes through the edge filter 5. Rayleigh scattered light is split by the spectroscope 6 and converted into an electrical signal by the detector 7. The electrical signal is input to the acquisition unit 82 of the computer 8. The acquisition part 82 analyzes the intensity | strength for every wavelength of Rayleigh scattered light based on the electrical signal from the detector 7, and acquires a Raman spectrum.
工程（２）
工程（２）は、前記ラマンスペクトルにおいて、好酸球ペルオキシダーゼに由来するラマンスペクトルピークが検出された場合に、当該生体組織内に好酸球が存在又は浸潤していると決定する工程である。この工程では、決定部８３が、取得部８２によって得られたラマンスペクトル、好酸球ペルオキシダーゼに由来するラマンスペクトルピークである１，５４５ｃｍ−１、１，６０６ｃｍ−１、及び７５３ｃｍ−１のピークの有無を検出する。そして、決定部８３は、これらのピークの少なくとも一つを検出した場合、励起光を照射した食道粘膜Ｃの部位に好酸球ペルオキシダーゼが存在していると決定する。
Step (2)
Step (2) is a step of determining that eosinophils are present or infiltrated in the living tissue when a Raman spectrum peak derived from eosinophil peroxidase is detected in the Raman spectrum. In this process, determination unit 83, a Raman spectrum obtained by the acquisition unit 82, 1,545cm -1, 1,606cm -1, and the peak of 753cm -1 Raman spectra peak derived from eosinophil peroxidase Detect the presence or absence. And when the determination part 83 detects at least one of these peaks, it determines that the eosinophil peroxidase exists in the site | part of the esophageal mucosa C which irradiated the excitation light.
工程（０）
工程（０）は、ラマンスペクトルのノイズを減少させる工程であり、工程（１）の前に実施される。工程（０）では、制御部８１は、レーザー光源３に対し、ラマンスペクトルを得るための励起光Ｅを出射するのに先立って、当該励起光Ｅよりも強いレーザー光を出射するように制御する。本実施形態では、このレーザー光は、例えば、強さが励起光Ｅの１〜１．５倍であり、照射時間が連続的で又は断続的に１０〜４０秒であり、波長が励起光Ｅと同じ６３３ｎｍである。
Process (0)
Step (0) is a step of reducing noise in the Raman spectrum, and is performed before step (1). In step (0), the control unit 81 controls the laser light source 3 to emit laser light stronger than the excitation light E before emitting the excitation light E for obtaining a Raman spectrum. . In this embodiment, for example, the intensity of the laser light is 1 to 1.5 times that of the excitation light E, the irradiation time is continuous or intermittently 10 to 40 seconds, and the wavelength is the excitation light E. Same as 633 nm.
検出装置１’
図２は、本発明の組織内好酸球の検出装置の他の例である検出装置１’の概略構成図である。検出装置１’は、生体から採取された組織内の好酸球を検出するように構成されており、図１に示される検出装置１から、内視鏡２、白色光源１０、光学映像ビデオカメラ１１、及び鉗子操作用ハンドル１２を省略した構成である。検出装置１’では、採取された生体組織である食道粘膜Ｃを保持部材１３上に保持し、ラマン分光測定用光ファイバＦ１によって食道粘膜Ｃのラマンスペクトルを得る。得られたラマンスペクトルに基づいて食道粘膜Ｃ内に好酸球が存在又は浸潤していると決定する具体的な方法は、図１に示す検出装置１と同様である。
Detection device 1 '
FIG. 2 is a schematic configuration diagram of a detection apparatus 1 ′ that is another example of the detection apparatus for tissue eosinophils according to the present invention. The detection device 1 ′ is configured to detect eosinophils in tissue collected from a living body. From the detection device 1 shown in FIG. 1, the endoscope 2, the white light source 10, an optical video camera. 11 and the forceps operation handle 12 are omitted. In the detection apparatus 1 ′, the collected esophageal mucosa C, which is a living tissue, is held on the holding member 13, and the Raman spectrum of the esophageal mucosa C is obtained by the optical fiber F1 for Raman spectroscopy measurement. A specific method for determining that eosinophils are present or infiltrate in the esophageal mucosa C based on the obtained Raman spectrum is the same as the detection apparatus 1 shown in FIG.
以下、実施例を示して本発明をより詳細に説明するが、本発明は実施例に限定されて解釈されるものではない。 EXAMPLES Hereinafter, although an Example is shown and this invention is demonstrated in detail, this invention is limited to an Example and is not interpreted.
なお、実施例に示される動物実験は、島根大学動物実験規則に則って行った。 The animal experiments shown in the examples were performed in accordance with the Shimane University Animal Experiment Rules.
実験例１：ヒツジ白血球の共鳴ラマン分光法によるラマンスペクトル解析
白血球のラマンスペクトルを解析するため、ヒツジの全血を抗凝固剤存在下で採血した。採血した血液をＦｉｃｏｌｌ−ＰａｑｕｅＴＭ ＰＬＵＳ（ＧＥヘルスケアライフサイエンス）を使用して白血球を分離した。分離方法は、メーカー提供のプロトコールにしたがった。
Experimental Example 1: Analysis of Raman spectrum of sheep leukocytes by resonance Raman spectroscopy In order to analyze the Raman spectrum of leukocytes, whole blood of sheep was collected in the presence of an anticoagulant. White blood cells were separated from the collected blood using Ficoll-Paque ™ PLUS (GE Healthcare Life Science). The separation method followed the manufacturer's protocol.
単離した白血球を共焦点ラマン顕微鏡で観察した。観察条件は、励起光６３３ｎｍ、２ｍＷ、照射時間１０秒／ｐｏｉｎｔである。 Isolated leukocytes were observed with a confocal Raman microscope. The observation conditions are excitation light of 633 nm, 2 mW, and irradiation time of 10 seconds / point.
得られたラマンスペクトルを図３に示す。 The obtained Raman spectrum is shown in FIG.
好中球では矢印で示す部分に好中球ペルオキシダーゼに由来すると思われる広範囲のピークが観察された（図３Ａ）。これに対して、好酸球では、７５３ｃｍ−１、１５４５ｃｍ−１及び１６０６ｃｍ−１の３カ所に狭い範囲の好酸球ペルオキシダーゼに由来するピークが認められた（図３Ｂ）。図３Ｃには、リンパ球、好中球、好酸球から上記条件で得られたラマンスペクトルを並べて示した。この結果から、６３３ｎｍの波長のレーザー光を励起光として照射した場合に得られる７５３ｃｍ−１、１５４５ｃｍ−１及び１６０６ｃｍ−１のラマンスペクトルのピークは、好酸球に特異的であることが明らかとなった。 In neutrophils, a wide range of peaks thought to be derived from neutrophil peroxidase were observed in the part indicated by the arrow (FIG. 3A). In contrast, in eosinophils, peaks derived from a narrow range of eosinophil peroxidase were observed at three locations of 753 cm −1 , 1545 cm −1 and 1606 cm −1 (FIG. 3B). FIG. 3C shows Raman spectra obtained from lymphocytes, neutrophils, and eosinophils under the above conditions. This result, 753cm -1 obtained when irradiated with a laser beam having a wavelength of 633nm as the excitation light, the peak of the Raman spectrum of 1545 cm -1 and 1606 cm -1 is clear that is specific to eosinophils became.
実験例２：正常食道組織の共鳴ラマン分光法によるラマンスペクトル解析
次に、正常の食道組織のラマンスペクトルを解析するため、麻酔下のＢＡＬＢ／ｃマウス（チャールスリバー社、６週齢、メス）から、食道組織を採取して上下方向に切開し、粘膜面がラマン顕微鏡の対物レンズ側にくるようにステージにセットした。６３３ｎｍの波長のレーザー光を励起光として、２ｍＷで照射時間１０秒／ｐｏｉｎｔで照射し、ラマンスペクトルを得た。
Experimental example 2: Raman spectrum analysis by resonance Raman spectroscopy of normal esophageal tissue Next, in order to analyze the Raman spectrum of normal esophageal tissue, from an anesthetized BALB / c mouse (Charles River, 6 weeks old, female) The esophageal tissue was collected and incised in the vertical direction, and set on the stage so that the mucosal surface was on the objective lens side of the Raman microscope. Using a laser beam having a wavelength of 633 nm as excitation light, irradiation was performed at 2 mW and an irradiation time of 10 seconds / point to obtain a Raman spectrum.
その結果を、実験例１で得た好酸球のラマンスペクトルと並べて図４に示す。 The results are shown in FIG. 4 along with the Raman spectrum of eosinophils obtained in Experimental Example 1.
正常食道組織（図４Ｂ）には、好酸球（図４Ａ）に特徴的な１５４５ｃｍ−１及び１６０６ｃｍ−１にピークは認められなかった。この結果から、６３３ｎｍの波長のレーザー光を励起光として使用する共鳴ラマン分光法によって、組織中に存在する好酸球を検出できる可能性が示された。 The normal esophageal tissue (FIG. 4B), peaks characteristic 1545 cm -1 and 1606 cm -1 in eosinophils (Figure 4A) was observed. From this result, it was shown that eosinophils present in tissue can be detected by resonance Raman spectroscopy using laser light having a wavelength of 633 nm as excitation light.
実施例１：マウス好酸球性食道炎モデルを用いた共鳴ラマン分光法による組織内好酸球の検出
マウス好酸球性食道炎モデルを用いて、共鳴ラマン分光法によって組織内に浸潤した好酸球の検出を試みた。
（１）方法
マウス好酸球性食道炎モデルは、以下の方法により作成した。
Example 1 Detection of Tissue Eosinophils by Resonance Raman Spectroscopy Using a Mouse Eosinophilic Esophagitis Model Attempts were made to detect acid spheres.
(1) Method A mouse eosinophilic esophagitis model was prepared by the following method.
ＢＡＬＢ／ｃマウス（チャールスリバー社、６週齢、メス）にＩＬ−３３を０．０５ｍｇ／ｋｇで腹腔内投与した。投与後８日後にマウスから食道組織を採取した。陰性対照は、ＩＬ−３３を投与しない正常マウスとした。採取した組織について、実験例２の方法に従って、ラマンスペクトルを取得し解析した。この時、ラマンスペクトルの取得は、０．５ｍｍ×０．４ｍｍの範囲で、０．１ｍｍ間隔で３０カ所について行った。 IL-33 was intraperitoneally administered at 0.05 mg / kg to BALB / c mice (Charles River, 6 weeks old, female). Esophageal tissue was collected from the mice 8 days after administration. Negative controls were normal mice that did not receive IL-33. For the collected tissue, a Raman spectrum was obtained and analyzed according to the method of Experimental Example 2. At this time, Raman spectra were acquired at 30 locations at intervals of 0.1 mm within a range of 0.5 mm × 0.4 mm.
また、採取した組織はラマンスペクトルを取得した後、ホルマリン固定を行いパラフィン包埋切片を作成しＨＥ染色を行って、好酸球の有無を光学顕微鏡下で観察した。
（２）結果
正常マウスの食道組織のラマンスペクトルを図５に示す。測定した３０カ所のうち３カ所のラマンスペクトルを示した。好酸球が存在していれば、図中の点線で囲んだ領域に好酸球に由来するピークが出現するが、正常マウスの食道組織ではピークは認められなかった。
In addition, after obtaining a Raman spectrum of the collected tissue, formalin fixation was performed to prepare a paraffin-embedded section, HE staining was performed, and the presence or absence of eosinophils was observed under an optical microscope.
(2) Results FIG. 5 shows the Raman spectrum of the normal mouse esophageal tissue. Three Raman spectra were shown out of 30 measured. If eosinophils were present, a peak derived from eosinophils appeared in the region surrounded by the dotted line in the figure, but no peak was observed in the esophageal tissue of normal mice.
好酸球性食道炎を起こしたマウスの食道組織のラマンスペクトルを図６に示す。図６Ａには測定した３０カ所のうち３カ所のラマンスペクトルを示した。正常と同様に図６Ａの（１）及び（３）のラマンスペクトルの点線で囲んだ領域にはピークは認められないが、（２）のラマンスペクトルの点線で囲んだ領域にはピークが検出された。図６Ａのラマンスペクトルの点線で囲んだ領域を拡大した図を図６Ｂに示す。（１）及び（３）のラマンスペクトルにピークは認められず陰性対照とおなじスペクトルを示しているが、（２）では、１５４５ｃｍ−１及び１６０６ｃｍ−１にピークが認められた。 FIG. 6 shows the Raman spectrum of the esophageal tissue of a mouse having eosinophilic esophagitis. FIG. 6A shows Raman spectra at three of the 30 measured positions. As in the normal case, no peak is observed in the region surrounded by the dotted line of the Raman spectrum of (1) and (3) in FIG. 6A, but a peak is detected in the region surrounded by the dotted line of the Raman spectrum of (2). It was. FIG. 6B shows an enlarged view of the region surrounded by the dotted line of the Raman spectrum in FIG. 6A. No peaks were observed in the Raman spectra of (1) and (3), indicating the same spectrum as the negative control, but in (2), peaks were observed at 1545 cm −1 and 1606 cm −1 .
ラマンスペクトルで好酸球のピークが検出されなかった組織と、好酸球のピークが検出された組織のＨＥ染色像を図７に示す。図７上段は、ラマンスペクトルで好酸球のピークが検出されなかった組織であり、好酸球の存在は確認できなかった。図７下段は、ラマンスペクトルで好酸球のピークが検出された組織であり、矢頭で示すように多数の好酸球の浸潤が確認された。 FIG. 7 shows HE-stained images of tissues in which no eosinophil peak was detected in the Raman spectrum and tissues in which eosinophil peaks were detected. The upper part of FIG. 7 shows a tissue where no eosinophil peak was detected in the Raman spectrum, and the presence of eosinophils could not be confirmed. The lower part of FIG. 7 shows the tissue in which the peak of eosinophils was detected in the Raman spectrum. As shown by the arrowheads, infiltration of many eosinophils was confirmed.
この結果から、共鳴ラマン分光法により組織内に浸潤している好酸球を検出できることが示された。 From this result, it was shown that eosinophils infiltrating the tissue can be detected by resonance Raman spectroscopy.
実施例２：ラマンスペクトルのノイズの低減
次に、ラマンスペクトルのノイズを減少させるため、ラマンスペクトルを得る前に、６３３ｎｍの波長のレーザー光を２ｍＷで照射時間１０秒／ｐｏｉｎｔで１〜４回照射し、ラマンスペクトルを得た。照射時間ごとのラマンスペクトルは図８中ａ（１回目照射後）、ｂ（２回目照射後）、ｃ（３回目照射後）、ｄ（４回目照射後）の矢印で示す。図８中（１）、（２）及び（３）は、ラマンスペクトルを取得した３カ所の番号を示す。
Example 2: Reduction of Raman Spectrum Noise Next, in order to reduce Raman spectrum noise, before obtaining a Raman spectrum, a laser beam having a wavelength of 633 nm was irradiated 1 to 4 times at 2 mW at an irradiation time of 10 seconds / point. A Raman spectrum was obtained. The Raman spectrum for each irradiation time is indicated by arrows a (after the first irradiation), b (after the second irradiation), c (after the third irradiation), and d (after the fourth irradiation) in FIG. In FIG. 8, (1), (2), and (3) indicate the numbers of three places where the Raman spectrum was acquired.
図８（１）及び（２）に好酸球が存在している組織のラマンスペクトルを、（３）に正常組織のラマンスペクトルを示した。レーザー光の照射時間を長くするほどバックグラウンドが下がってくることが示された。この結果から、レザー光を前照射することによって、ラマンスペクトルのノイズを減少させることができることが示された。 8 (1) and (2) show the Raman spectrum of the tissue in which eosinophils are present, and (3) shows the Raman spectrum of the normal tissue. It was shown that the background decreased as the irradiation time of the laser beam was increased. From this result, it was shown that the noise in the Raman spectrum can be reduced by pre-irradiating the leather light.
１ 検出装置
１’ 検出装置
２ 内視鏡
３ レーザー光源
４ バンドパスフィルター
５ エッジフィルター
６ 分光器
７ 検知器
８ コンピュータ
９ モニタ画面
１０ 白色光源
１１ 光学映像ビデオカメラ
１２ 鉗子操作用ハンドル
１３ 保持部材
８１ 制御部
８２ 取得部
８３ 決定部
Ｃ 食道粘膜
Ｅ 励起光
Ｆ１ ラマン分光測定用光ファイバ
Ｆ２ 照明用光ファイバ
Ｆ３ 光学モニタ用光ファイバ
Ｓ 散乱光
Ｔ 鉗子用チューブ
DESCRIPTION OF SYMBOLS 1 Detection apparatus 1 'Detection apparatus 2 Endoscope 3 Laser light source 4 Band pass filter 5 Edge filter 6 Spectroscope 7 Detector 8 Computer 9 Monitor screen 10 White light source 11 Optical image video camera 12 Forceps operation handle 13 Holding member 81 Control Unit 82 Acquisition unit 83 Determination unit C Esophageal mucosa E Excitation light F1 Raman spectroscopic measurement optical fiber F2 Illumination optical fiber F3 Optical monitor optical fiber S Scattered light T Forceps tube
Claims (9)
（２）前記ラマンスペクトルにおいて、好酸球ペルオキシダーゼに由来するラマンスペクトルピークが検出された場合に、当該生体組織内に好酸球が存在していると決定する工程を含む、生体組織内における好酸球の検出方法。 (1) a step of analyzing a Raman spectrum obtained from a biological tissue by resonance Raman spectroscopy, and (2) when a Raman spectrum peak derived from eosinophil peroxidase is detected in the Raman spectrum. A method for detecting eosinophils in a living tissue, comprising a step of determining that eosinophils are present therein.
工程（２）において検出されるラマンスペクトルピークが、１，５００〜１，６５０ｃｍ−１及び７００〜８００ｃｍ−１の範囲内に検出される少なくとも１つのピークである、
請求項１に記載の検出方法。 The resonance Raman spectroscopy in step (1) is a method having a step of irradiating laser light having any wavelength in the range of 600 to 800 nm as excitation light, and the Raman spectrum peak detected in step (2) is , At least one peak detected in the range of 1,500-1,650 cm −1 and 700-800 cm −1 ,
The detection method according to claim 1.
（０）ラマンスペクトルのノイズを減少させる工程。 The detection method according to claim 1 or 2, comprising the following steps before step (1):
(0) A step of reducing Raman spectrum noise.
（Ｂ）前記ラマンスペクトルにおいて好酸球ペルオキシダーゼに由来するラマンスペクトルピークが検出された場合に、当該生体組織内に好酸球が浸潤していると決定する工程を含む、組織内好酸球浸潤性疾患の検査方法。 (A) a step of analyzing a Raman spectrum obtained from a biological tissue by resonance Raman spectroscopy, and (B) when a Raman spectrum peak derived from eosinophil peroxidase is detected in the Raman spectrum, A method for examining an eosinophil-infiltrating disease in a tissue, comprising a step of determining that eosinophils are infiltrated into the tissue.
工程（Ｂ）において検出するラマンスペクトルピークが、１，５００〜１，６５０ｃｍ−１及び７００〜８００ｃｍ−１の範囲内に検出される少なくとも１つのピークである、請求項４に記載の検査方法。 In step (A), the Raman spectrum obtained from the biological tissue is obtained by irradiating laser light having any wavelength in the range of 600 to 800 nm as excitation light, and is detected in step (B). The inspection method according to claim 4, wherein the Raman spectrum peak to be detected is at least one peak detected in the range of 1,500 to 1,650 cm −1 and 700 to 800 cm −1 .
（ａ）ラマンスペクトルのノイズを減少させる工程。 Before the step (A), the inspection method according to claim 4 or 5 having the following steps:
(A) The process of reducing the noise of a Raman spectrum.
前記ラマンスペクトルにおいて、好酸球ペルオキシダーゼに由来するラマンスペクトルピークが検出された場合に、当該生体組織内に好酸球が存在又は浸潤していると決定する決定手段
を含む、生体組織内における好酸球の検出装置。 Means for obtaining a Raman spectrum of biological tissue by resonance Raman spectroscopy, and when a Raman spectrum peak derived from eosinophil peroxidase is detected in the Raman spectrum, eosinophils are present or infiltrated in the biological tissue. A device for detecting eosinophils in a living tissue, comprising a determining means for determining that the target is living.
前記ラマンスペクトルピークが、１，５００〜１，６５０ｃｍ−１及び７００〜８００ｃｍ−１の範囲内に検出される少なくとも１つのピークである、
請求項７に記載の検出装置。 The acquisition unit includes an irradiation unit that irradiates laser light having any wavelength in the range of 600 to 800 nm as excitation light, and the Raman spectrum peaks are 1500 to 1,650 cm −1 and 700 to 800 cm. At least one peak detected within a range of −1 ,
The detection device according to claim 7.
The detection apparatus according to claim 8, further comprising control means for controlling the irradiation means so as to reduce noise in the Raman spectrum.
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Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2019004099A1 (en) * | 2017-06-26 | 2019-01-03 | 株式会社ニコン | Measuring method and measuring device |
| WO2019073666A1 (en) * | 2017-10-11 | 2019-04-18 | 株式会社ニコン | Determination device, determination method, and determination program |
| JP2022119151A (en) * | 2021-02-03 | 2022-08-16 | 清華大学 | Detection device and method of two-wavelength enhanced type raman endoscopic non-invasive pathology |
| WO2023068081A1 (en) * | 2021-10-21 | 2023-04-27 | 国立大学法人北海道大学 | Biomarker for diagnosing, assisting diagnosis of, determining and/or assisting determination of at least one of eosinophilic otitis media, eosinophilic paranasal sinusitis, and granulomatosis with eosinophilic polyangiitis; method associated with said biomarker; and kit |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20120200850A1 (en) * | 2005-06-09 | 2012-08-09 | Chemimage Corporation | Cytological methods for detecting a condition such as transplant efficiency by raman spectroscopic imaging |
| WO2014130736A1 (en) * | 2013-02-20 | 2014-08-28 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Wide field raman imaging apparatus and associated methods |
-
2015
- 2015-01-29 JP JP2015015612A patent/JP2016137217A/en active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20120200850A1 (en) * | 2005-06-09 | 2012-08-09 | Chemimage Corporation | Cytological methods for detecting a condition such as transplant efficiency by raman spectroscopic imaging |
| WO2014130736A1 (en) * | 2013-02-20 | 2014-08-28 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Wide field raman imaging apparatus and associated methods |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| SAIMASO B L N , ET AL.: "Resonance Raman Microspectroscopic Characterization of Eosinophil Peroxidase in Human Eosinophilic G", BIOPHYSICAL JOURNAL, vol. Volume 67, JPN6018048130, July 1994 (1994-07-01), pages 436 - 446 * |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2019004099A1 (en) * | 2017-06-26 | 2019-01-03 | 株式会社ニコン | Measuring method and measuring device |
| WO2019073666A1 (en) * | 2017-10-11 | 2019-04-18 | 株式会社ニコン | Determination device, determination method, and determination program |
| JPWO2019073666A1 (en) * | 2017-10-11 | 2020-12-03 | 株式会社ニコン | Judgment device, judgment method, and judgment program |
| JP2022119151A (en) * | 2021-02-03 | 2022-08-16 | 清華大学 | Detection device and method of two-wavelength enhanced type raman endoscopic non-invasive pathology |
| JP7201738B2 (en) | 2021-02-03 | 2023-01-10 | 清華大学 | DUAL-WAVELENGTH-ENHANCED RAMAN ENDOSCOPIC NON-INVASIVE PATHOLOGICAL DETECTION APPARATUS AND DETECTION METHOD |
| WO2023068081A1 (en) * | 2021-10-21 | 2023-04-27 | 国立大学法人北海道大学 | Biomarker for diagnosing, assisting diagnosis of, determining and/or assisting determination of at least one of eosinophilic otitis media, eosinophilic paranasal sinusitis, and granulomatosis with eosinophilic polyangiitis; method associated with said biomarker; and kit |
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