JP2016121123A - Agent for inhibiting production of advanced glycation end products - Google Patents
Agent for inhibiting production of advanced glycation end products Download PDFInfo
- Publication number
- JP2016121123A JP2016121123A JP2015190018A JP2015190018A JP2016121123A JP 2016121123 A JP2016121123 A JP 2016121123A JP 2015190018 A JP2015190018 A JP 2015190018A JP 2015190018 A JP2015190018 A JP 2015190018A JP 2016121123 A JP2016121123 A JP 2016121123A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hamaudol
- formula
- oral
- pharmaceutical composition
- group
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Cosmetics (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Abstract
Description
本発明は、特定のハマウドール誘導体を有効成分として含有する終末糖化産物生成抑制剤に関する。また、本発明は、特定のハマウドール誘導体を有効成分として含有する、糖尿病もしくは糖尿病合併症の予防および／または治療のための医薬組成物に関する。さらに、本発明は、特定のハマウドール誘導体を有効成分として含有する、非ヒト動物用医薬組成物に関する。加えて、本発明は、特定のハマウドール誘導体を有効成分として含有する、皮膚老化の予防および／または改善のための皮膚外用剤に関する。 The present invention relates to a terminal glycation product production inhibitor containing a specific Hamaudol derivative as an active ingredient. The present invention also relates to a pharmaceutical composition for the prevention and / or treatment of diabetes or diabetic complications, which contains a specific Hamaudol derivative as an active ingredient. Furthermore, this invention relates to the pharmaceutical composition for non-human animals which contains a specific Hamaudol derivative as an active ingredient. In addition, the present invention relates to an external preparation for skin for preventing and / or improving skin aging, which contains a specific Hamaudol derivative as an active ingredient.
アミノ酸と還元糖の混合物を加熱すると褐変する現象は、一般にメイラード反応と呼ばれ、食品分野では、食品の加熱処理や貯蔵中に生じる現象として知られている。メイラード反応は、生体内においても発生しており、１９６８年にはグリコシルヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ）が生体内で同定されたことにより、糖尿病や老化の進行に伴い蛋白質の糖化反応が進行することが明らかにされた。そして、近年では、蛋白質の糖化反応における終末糖化産物（Ａｄｖａｎｃｅｄ ｇｌｙｃａｔｉｏｎ ｅｎｄ ｐｒｏｄｕｃｔｓ、以下「ＡＧＥｓ」とも称する）が糖尿病合併症や動脈硬化といった生活習慣病の発症や老化の進行に関与することが報告されている（非特許文献１〜３）。 The phenomenon of browning when a mixture of amino acid and reducing sugar is heated is generally called the Maillard reaction, and is known in the food field as a phenomenon that occurs during heat treatment and storage of food. The Maillard reaction also occurs in vivo, and it was clear that glycosylation hemoglobin (HbA1c) was identified in vivo in 1968, leading to the progress of protein glycation with the progress of diabetes and aging. It was done. In recent years, advanced glycation end products (hereinafter also referred to as “AGEs”) in protein glycation reactions have been reported to be involved in the onset of lifestyle-related diseases such as diabetic complications and arteriosclerosis and the progression of aging. (Non-Patent Documents 1 to 3).
生体内における蛋白質糖化反応の詳細は明らかとなっていないが、蛋白質に存在するアミノ基と還元糖に存在するアルデヒド基が反応し、シッフ塩基を形成した後、安定なアマドリ化合物を経由し、さらに長期の反応を経て、ＡＧＥｓに移行すると考えられている。 The details of the protein saccharification reaction in vivo are not clear, but the amino group present in the protein reacts with the aldehyde group present in the reducing sugar to form a Schiff base, which then passes through a stable Amadori compound. It is believed that the transition to AGEs will occur after a long-term reaction.
ＡＧＥｓは特定の物質を指すものではなく、その全容は未だ解明されていないが、蛍光性や架橋構造の有無によって、ペントシジン、ピロピリジン、ピラリン等、様々な物質の存在が確認されている。ＡＧＥｓの物理化学的な特徴としては、黄褐色で蛍光性（主に、Ｅｘ:３７０ｎｍ、Ｅｍ:４４０ｎｍ）を持ち、タンパク質間に架橋を形成することが挙げられる。しかし、ピラリンのように蛍光性を示さず、架橋構造を有しないＡＧＥｓも確認されている。 AGEs do not refer to specific substances, and the whole of them has not yet been elucidated, but the presence of various substances such as pentosidine, pyropyridine, and pyralin has been confirmed depending on the presence of fluorescence and cross-linking structure. The physicochemical characteristics of AGEs include yellowish brown and fluorescence (mainly Ex: 370 nm, Em: 440 nm) and the formation of crosslinks between proteins. However, AGEs that do not show fluorescence like pyralin and do not have a crosslinked structure have also been confirmed.
これらＡＧＥｓの体内蓄積は、腎糸球体組織硬化症や腎動脈硬化症などの糖尿病合併症だけでなく、アルツハイマー病などの神経変性疾患、皮膚の弾力性の低下や黄色化といった皮膚老化、骨の老化、眼球の老化、アルブミン蛋白の老化に深く関与することが報告されている（非特許文献４および５） The accumulation of these AGEs is not only due to diabetic complications such as glomerular tissue sclerosis and renal arteriosclerosis, but also neurodegenerative diseases such as Alzheimer's disease, skin aging such as reduced skin elasticity and yellowing, It is reported to be deeply involved in aging, ocular aging, and albumin protein aging (Non-patent Documents 4 and 5).
したがって、生体内の糖化反応を阻止することは、糖尿病合併症、動脈硬化、骨粗鬆症、変形性関節症などの疾患の発症・進展を防ぐ効果が期待される。また、糖化反応の阻止は、皮膚の弾力性の低下や黄色化等の予防・改善にも効果があるものと期待される。このため、さまざまな糖化反応阻害剤やＡＧＥｓ生成阻害剤が開発・検討されている。 Therefore, blocking the glycation reaction in the living body is expected to have an effect of preventing the onset and progression of diseases such as diabetic complications, arteriosclerosis, osteoporosis, and osteoarthritis. In addition, inhibition of the saccharification reaction is expected to be effective in preventing and improving skin elasticity and yellowing. For this reason, various saccharification reaction inhibitors and AGEs production inhibitors have been developed and studied.
特許文献１には、アミノグアニジン等の化合物を含むメイラード反応阻害剤が開示されている。アミノグアニジンは当該技術分野における医薬品の開発において最も研究されている、抗糖化作用を示す物質であるが、肝障害等の副作用を有することが確認されており、実用化には至っていない。 Patent Document 1 discloses a Maillard reaction inhibitor containing a compound such as aminoguanidine. Aminoguanidine is a substance exhibiting an anti-glycation effect that has been most studied in the development of pharmaceuticals in this technical field, but has been confirmed to have side effects such as liver damage and has not yet been put into practical use.
その他にも、特許文献２に記載のガンビールノキやシラカバ等の植物の抽出物によるメイラード反応阻害剤などが知られているが、有効性や安全性の点に課題を残すものであった。 In addition, the Maillard reaction inhibitor by the extract of plants, such as a ganbei tree and a birch described in patent document 2, etc. are known, but problems remain in terms of effectiveness and safety.
そこで、種々の疾患の発症や悪化ならびに皮膚老化等に関与するＡＧＥｓの生成を抑制することができ、かつ、重篤な副作用を有さない安全性の高い薬剤が求められている。 Therefore, there is a demand for highly safe drugs that can suppress the generation of AGEs involved in the onset and worsening of various diseases and skin aging, and that have no serious side effects.
本発明は、副作用の少ないＡＧＥｓ生成抑制剤を提供することを目的とする。本発明はまた、生活習慣病、特に糖尿病もしくは糖尿病合併症の予防および／または治療に有用であり、且つ副作用の少ない医薬組成物、ならびに皮膚老化、特に皮膚の弾力性低下や黄色化の予防および／または改善に有用であり、且つ副作用の少ない皮膚外用剤を提供することを目的とする。 An object of this invention is to provide the AGEs production inhibitor with few side effects. The present invention is also useful for the prevention and / or treatment of lifestyle-related diseases, particularly diabetes or diabetic complications, and has few side effects, as well as prevention of skin aging, particularly skin elasticity loss and yellowing. An object is to provide an external preparation for skin that is useful for improvement and / or has few side effects.
本発明者らは、抗糖化作用に優れ、且つ副作用が少ない物質について、天然物であり、食経験のある植物からのスクリーニングを試み、植物抽出物とその成分について検討した結果、特定のハマウドール誘導体に強いＡＧＥｓ生成抑制効果を見出し、本発明を完成させた。 The inventors of the present invention have tried to screen from a plant that is a natural product and has a dietary experience with respect to a substance having an excellent anti-glycation effect and few side effects, and as a result of studying a plant extract and its components, a specific Hamaudol derivative Thus, the present invention was completed.
すなわち本発明は、式（１）で表されるハマウドール誘導体：
本発明はまた、ハマウドール誘導体を有効成分として含有する、糖尿病もしくは糖尿病合併症の予防および／または治療のための医薬組成物（以下、「本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物」とも称する）を提供する。 The present invention also includes a pharmaceutical composition for preventing and / or treating diabetes or diabetic complications, which contains a Hamaudol derivative as an active ingredient (hereinafter also referred to as “the pharmaceutical composition for preventing / treating diabetes of the present invention”). I will provide a.
本発明はさらに、非ヒト動物における糖尿病もしくは糖尿病合併症の予防および／または治療のための、ハマウドール誘導体を有効成分として含む非ヒト動物用医薬組成物、ハマウドール誘導体を非ヒト動物に投与することを含む、非ヒト動物における糖尿病もしくは糖尿病合併症を予防および／または治療する方法、ハマウドール誘導体を飲食品に配合または添加することを特徴とする機能性飲食品の製造方法、ならびにハマウドール誘導体と担体を含有する経口摂取用組成物を提供する。 The present invention further provides a pharmaceutical composition for a non-human animal comprising a haumadol derivative as an active ingredient for the prevention and / or treatment of diabetes or diabetic complications in the non-human animal, the administration of the haumadol derivative to the non-human animal. Including a method for preventing and / or treating diabetes or diabetic complications in a non-human animal, a method for producing a functional food or drink characterized by adding or adding a Hamador derivative to a food or drink, and a Hamaudor derivative and a carrier A composition for oral consumption is provided.
本発明はさらに、ハマウドール誘導体を有効成分として含有する、皮膚老化の予防および／または改善のための皮膚外用剤（以下、「本発明の皮膚老化予防／改善用皮膚外用剤」とも称する）を提供する。 The present invention further provides a skin external preparation for preventing and / or improving skin aging (hereinafter also referred to as “the skin external preparation for skin aging prevention / amelioration of the present invention”) containing a Hamaudol derivative as an active ingredient. To do.
ＡＧＥｓは、種々の生活習慣病や皮膚老化との関連が示唆されている物質であり、特に、糖尿病およびその合併症の発症および／または進行、ならびに皮膚の弾力性低下および皮膚の黄色化の発生および／または進行に深く関与するものである。したがって、本発明者らによりＡＧＥｓの生成を抑制する作用が見出されたハマウドール誘導体は、糖尿病もしくは糖尿病合併症の予防および／または治療のための医薬組成物、または皮膚の弾力性低下もしくは黄色化等の皮膚老化の予防および／または改善のための皮膚外用剤における、副作用の少ない有効成分として有用である。 AGEs are substances that have been suggested to be associated with various lifestyle-related diseases and skin aging, and in particular, the onset and / or progression of diabetes and its complications, as well as the occurrence of reduced skin elasticity and skin yellowing. And / or are deeply involved in progression. Therefore, the Hamaudol derivative, which has been found to have an action of suppressing the generation of AGEs by the present inventors, is a pharmaceutical composition for the prevention and / or treatment of diabetes or diabetic complications, or skin elasticity reduction or yellowing. It is useful as an active ingredient with few side effects in an external preparation for skin for preventing and / or improving skin aging.
本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤、糖尿病予防／治療用医薬組成物、非ヒト動物用医薬組成物および皮膚老化予防／改善用皮膚外用剤は、ハマウドール誘導体を有効成分として含有するものである。 The AGEs production inhibitor, the pharmaceutical composition for preventing / treating diabetes, the pharmaceutical composition for non-human animals, and the external preparation for skin aging prevention / amelioration of the present invention contain a Hamaudol derivative as an active ingredient.
本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤の有効成分であるハマウドール誘導体は、合成品であってもよく、植物から抽出、単離されたものであってもよい。 The Hamaudol derivative, which is an active ingredient of the AGEs production inhibitor of the present invention, may be a synthetic product or extracted and isolated from a plant.
本明細書並びに特許請求の範囲において、式（１）で表されるハマウドール誘導体としてはそれぞれ単一の化合物である場合、複数の混合物である場合のいずれも包含する。 In the present specification and claims, the Hamaudol derivative represented by the formula (1) includes both a single compound and a mixture of plural compounds.
ハマウドール誘導体を植物から抽出、単離する場合、原料として用いることができる植物としては、これらは限定されないが、例えば、ハマボウフウ（Ｇｌｅｈｎｉａ ｌｉｔｔｏｒａｌｉｓ）、ボウフウ（Ｓａｐｏｓｈｎｉｋｏｖｉａ ｄｉｖａｒｉｃａｔａ Ｓｃｈｉｓｃｈｋｉｎ）、チョウセンオニウド（Ｏｓｔｅｒｉｃｕｍ ｋｏｒｅａｎｕｍ）等が挙げられる。これらの中でも、入手の容易さの点でハマボウフウまたはボウフウが好ましい。一つの態様において、本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤の有効成分であるハマウドール誘導体は、ハマボウフウ由来のｓｅｃ−Ｏ−グルコシルハマウドール、ボウフウ由来のハマウドールおよび３’−Ｏ−アンゲロイルハマウドールである。 In the case of extracting and isolating a Hamaudol derivative from a plant, the plant that can be used as a raw material is not limited. Etc. Among these, Hamabofu or Bofu is preferred from the viewpoint of availability. In one embodiment, the hamadole derivative, which is an active ingredient of the AGEs production inhibitor of the present invention, is a sec-O-glucosyl hamaudol derived from hamboufu, hamaudol derived from boufufu, and 3'-O-angeloyl hamaudol. .
抽出原料として用いる植物体は、開花期のものであっても栄養生長期のものであってもよく、生の状態であっても乾燥させたものであってもよい。また、抽出効率を高めるため、植物体を適宜細断ないし粉砕等したもの、例えば粉末状のものを抽出原料として用いてもよい。原料として用いる植物体の部位に関しては、花、葉、茎、根、またはこれらを含む全草のいずれを抽出原料として用いてもよい。 The plant used as the raw material for extraction may be in the flowering period or in the vegetative period, and may be in the raw state or dried. Further, in order to increase the extraction efficiency, a plant body that has been appropriately shredded or pulverized, for example, a powdered one, may be used as an extraction raw material. Regarding the plant part used as a raw material, any of flowers, leaves, stems, roots, or whole plants containing these may be used as an extraction raw material.
本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤、糖尿病予防／治療用医薬組成物、非ヒト動物用医薬組成物および皮膚老化予防／改善用皮膚外用剤の有効成分であるハマウドール誘導体を植物から抽出する場合、一般的な植物成分抽出方法を用いることができる。かかる抽出方法としては、例えば、熱水抽出法、煮沸抽出法、浸漬抽出法、振とう抽出法、ソックスレー抽出法、水蒸気蒸留法などが挙げられる。 When the AGEs production inhibitor of the present invention, a pharmaceutical composition for preventing / treating diabetes, a pharmaceutical composition for non-human animals and a skin external agent for preventing / ameliorating skin aging are extracted from plants, Any plant component extraction method can be used. Examples of the extraction method include a hot water extraction method, a boiling extraction method, a soaking extraction method, a shaking extraction method, a Soxhlet extraction method, and a steam distillation method.
抽出溶媒としては、水、メタノール、エタノール等の低級アルコール類、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコールなどの多価アルコール類、アセトン等のケトン類、ジエチルエーテル、アセトニトリル、酢酸エチル等のエステル類等を用いることができ、これらの中から抽出原料とする植物の種類、後に行う加工処理、抽出物の使用目的などを考慮した上で選択すれば良く、一つの態様において、メタノールが挙げられる。また、抽出物を食品用途等へ使用するため有機溶媒の含有が好ましくない場合においては、水のみを使用すれば良く、抽出後に除去しやすいエタノールを単独で、又は水との任意の割合の混液として使用しても良い。一つの態様において、好ましい抽出溶媒は、水またはエタノールである。 Extraction solvents include water, lower alcohols such as methanol and ethanol, polyhydric alcohols such as propylene glycol and 1,3-butylene glycol, ketones such as acetone, esters such as diethyl ether, acetonitrile, and ethyl acetate. These may be selected in consideration of the type of plant used as an extraction raw material, the processing to be performed later, the purpose of use of the extract, and the like. In one embodiment, methanol is used. In addition, in the case where it is not preferable to contain an organic solvent because the extract is used for food use etc., it is sufficient to use only water, ethanol alone that can be easily removed after extraction, or a mixture of water in any proportion with water. May be used as In one embodiment, the preferred extraction solvent is water or ethanol.
抽出溶媒の使用量は、重量比で、１：２〜１：３０（植物原料：抽出溶媒）が好ましく、１：３〜１：２５がより好ましく、１：４〜１：２０がさらに好ましい。 The use amount of the extraction solvent is preferably from 1: 2 to 1:30 (plant raw material: extraction solvent), more preferably from 1: 3 to 1:25, and even more preferably from 1: 4 to 1:20 by weight.
抽出温度は各溶媒によって適宜決定すれば良いが、水抽出の場合は４〜１３０℃が好ましく、２５〜１１０℃がより好ましく、４０〜１００℃がさらに好ましい。抽出温度が４℃未満の場合、活性成分が抽出されにくい傾向があり、１３０℃を越える場合、活性成分が分解されやすい傾向がある。エタノール抽出の場合、抽出温度は４〜１００℃が好ましく、１０〜８０℃がより好ましく、２０〜６０℃がさらに好ましい。抽出温度が４℃未満の場合、活性成分が抽出されにくい傾向があり、１００℃を越える場合、活性成分が分解されやすい傾向がある。 The extraction temperature may be appropriately determined depending on each solvent, but in the case of water extraction, it is preferably 4 to 130 ° C, more preferably 25 to 110 ° C, and further preferably 40 to 100 ° C. When the extraction temperature is less than 4 ° C, the active ingredient tends to be difficult to extract, and when it exceeds 130 ° C, the active ingredient tends to be easily decomposed. In the case of ethanol extraction, the extraction temperature is preferably 4 to 100 ° C, more preferably 10 to 80 ° C, further preferably 20 to 60 ° C. When the extraction temperature is less than 4 ° C., the active ingredient tends to be difficult to extract, and when it exceeds 100 ° C., the active ingredient tends to be easily decomposed.
また、抽出時間は、水抽出の場合は１分〜１５日間が好ましく、３分〜１日間がより好ましく、５分〜１時間がさらに好ましい。抽出時間が１分間未満の場合、活性成分が抽出されにくい傾向があり、１５日間を越える場合、活性成分が分解されやすい傾向がある。エタノール抽出の場合は１時間〜１５日間が好ましく、１２時間〜１０日間がより好ましく、１〜８日間がさらに好ましい。抽出時間が１時間未満の場合、活性成分が抽出されにくい傾向があり、１５日間を越える場合、活性成分が分解されやすい傾向がある。 In the case of water extraction, the extraction time is preferably 1 minute to 15 days, more preferably 3 minutes to 1 day, and further preferably 5 minutes to 1 hour. When the extraction time is less than 1 minute, the active ingredient tends to be difficult to extract, and when it exceeds 15 days, the active ingredient tends to be easily decomposed. In the case of ethanol extraction, 1 hour to 15 days is preferable, 12 hours to 10 days is more preferable, and 1 to 8 days is more preferable. When the extraction time is less than 1 hour, the active ingredient tends to be difficult to extract, and when it exceeds 15 days, the active ingredient tends to be easily decomposed.
本明細書において、「抽出物」の用語には、溶媒を用いる各種抽出方法によって得られる抽出液、該抽出液を濃縮した濃縮液、該抽出液を適当な溶媒で希釈した希釈液、該抽出液またはその濃縮液もしくは希釈液から加熱乾燥、減圧乾燥、凍結乾燥などの種々の方法によって溶媒を除くことにより得られる固形の抽出物（例えば粉末状や粒状のもの）、ならびに固形化剤やゲル化剤の添加等によって得られる固形もしくは半固形の抽出物が含まれるものとする。 In the present specification, the term “extract” includes an extract obtained by various extraction methods using a solvent, a concentrated solution obtained by concentrating the extract, a diluted solution obtained by diluting the extract with an appropriate solvent, and the extraction. Solid extract (for example, powdered or granular) obtained by removing the solvent from the liquid or its concentrated or diluted liquid by various methods such as heat drying, vacuum drying, freeze drying, etc., and solidifying agent or gel A solid or semi-solid extract obtained by addition of an agent is included.
抽出方法の例としては、（１）原料の植物体１重量部に対して２〜３０重量部、好ましくは３〜２５重量部の水を加え、４０〜９０℃で１０〜１２０分間静置、あるいは１００℃で５〜１５分間煮沸する方法や、（２）原料の植物体１重量部に対して２〜３０重量部、好ましくは３〜２５重量部のエタノールを加え、１０〜８０℃で１２時間〜１０日間静置、好ましくは２０〜６０℃で１〜８日間静置する方法等が挙げられる。 As an example of the extraction method, (1) 2 to 30 parts by weight, preferably 3 to 25 parts by weight of water is added to 1 part by weight of the plant material, and the mixture is allowed to stand at 40 to 90 ° C. for 10 to 120 minutes. Alternatively, a method of boiling at 100 ° C. for 5 to 15 minutes, or (2) 2 to 30 parts by weight, preferably 3 to 25 parts by weight of ethanol is added to 1 part by weight of the plant material, and 12 to 10 to 80 ° C. The method of leaving still for 10 days from time, Preferably leaving still at 20-60 degreeC for 1-8 days etc. are mentioned.
原料植物から得られた抽出物は、所望により、ハマウドール誘導体を単離する操作の前に精製処理に供してもよい。精製処理は、例えば、クロマトグラフ法、イオン交換樹脂を使用する溶離法、溶媒による分配抽出等を単独または組み合わせて採用することができる。クロマトグラフ法としては、順相クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、薄相クロマトグラフィー、遠心液体クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー等を挙げることができ、これらのいずれか、またはそれらを組み合わせて行う方法が挙げられる。分配抽出に用い得る溶媒としては、酢酸エチル、ヘキサン、１−ブタノール等が挙げられる。一つの態様において、吸着クロマトグラフィーにハマボウフウの粗抽出物を供した後、水、水：メタノール＝１：１の溶液、メタノールの順に通液させ、メタノール画分に回収される精製抽出物は、本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤、糖尿病もしくは糖尿病合併症の予防および／または治療のための医薬組成物、非ヒト動物用医薬組成物および皮膚老化の予防および／または改善のための皮膚外用剤の有効成分であるｓｅｃ−Ｏ−グルコシルハマウドールを豊富に含むものである。別の態様において、順相クロマトグラフィーにボウフウの粗抽出物を供した後、ヘキサン：アセトン＝８０：２０の溶液を通液し、回収液をさらに順相クロマトグラフィーに供した後、ヘキサン：酢酸エチル＝９０：１０の溶液を通液し回収される精製抽出物は、本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤、糖尿病もしくは糖尿病合併症の予防および／または治療のための医薬組成物、非ヒト動物用医薬組成物および皮膚老化の予防および／または改善のための皮膚外用剤の有効成分である３’−Ｏ−アンゲロイルハマウドールを豊富に含むものである。さらに別の態様において、順相クロマトグラフィーにボウフウの粗抽出物を供した後、ヘキサン：アセトン＝７５：２５の溶液を通液し、回収液をさらに順相クロマトグラフィーに供した後、ヘキサン：酢酸エチル＝８０：２０の溶液を通液し、回収液をさらに逆相クロマトグラフィーに供した後、メタノール：水＝６０：４０の溶液を通液し、回収される精製抽出物は、本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤、糖尿病もしくは糖尿病合併症の予防および／または治療のための医薬組成物、非ヒト動物用医薬組成物および皮膚老化の予防および／または改善のための皮膚外用剤の有効成分であるハマウドールを豊富に含むものである。 If desired, the extract obtained from the raw material plant may be subjected to a purification treatment prior to the operation of isolating the Hamaudol derivative. As the purification treatment, for example, a chromatographic method, an elution method using an ion exchange resin, partition extraction with a solvent, or the like can be employed alone or in combination. Examples of chromatographic methods include normal phase chromatography, reverse phase chromatography, adsorption chromatography, thin phase chromatography, centrifugal liquid chromatography, high performance liquid chromatography, etc., any of these or a combination thereof. The method to perform is mentioned. Solvents that can be used for partition extraction include ethyl acetate, hexane, 1-butanol and the like. In one embodiment, after supplying the crude extract of Hamaboufu to adsorption chromatography, water, water: methanol = 1: 1 solution, methanol is passed through in this order, and the purified extract recovered in the methanol fraction is: EFFECT OF THE AGE GENERATION INHIBITOR OF THE INVENTION, PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR PREVENTION AND / OR TREATMENT OF DIABETIC OR DIABETIC COMPOUND, PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR NON-HUMAN Veterinary, AND EFFECT OF EXTERNAL SKIN It contains abundant component sec-O-glucosylhamadol. In another embodiment, the crude extract of Bow Fuchu is subjected to normal phase chromatography, then passed through a solution of hexane: acetone = 80: 20, and the recovered solution is further subjected to normal phase chromatography, followed by hexane: acetic acid. A purified extract collected by passing a solution of ethyl = 90: 10 is an AGEs production inhibitor of the present invention, a pharmaceutical composition for the prevention and / or treatment of diabetes or diabetic complications, a pharmaceutical for non-human animals The composition contains abundantly 3'-O-angeloyl hamaudol, which is an active ingredient of a skin external preparation for preventing and / or improving skin aging. In yet another embodiment, the crude extract of Bowfu was subjected to normal phase chromatography, then a solution of hexane: acetone = 75: 25 was passed through, and the recovered solution was further subjected to normal phase chromatography. The purified extract obtained by passing a solution of ethyl acetate = 80: 20 and further subjecting the recovered solution to reverse phase chromatography and then passing a solution of methanol: water = 60: 40 and recovering the present invention is the present invention. AGEs inhibitors, pharmaceutical compositions for the prevention and / or treatment of diabetes or diabetic complications, active ingredients of non-human animal pharmaceutical compositions and skin external preparations for prevention and / or improvement of skin aging It is rich in a certain Hamaudoll.
本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤は、有効成分としてハマウドール誘導体を含有するものであればよく、ハマウドール誘導体によるＡＧＥｓ生成抑制効果を妨げない限り、さらに賦形剤等を含むものであってもよい。 The AGEs production inhibitor of the present invention is only required to contain a hamadole derivative as an active ingredient, and may further contain an excipient or the like as long as the AGEs production inhibitory effect by the hamaudol derivative is not hindered.
本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤中のハマウドール誘導体の割合は特に限定されない。例えば、本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤は、ハマウドール誘導体を４０重量％以上、４５重量％以上、５０重量％以上、６０重量％以上、７０重量％以上、８０重量％以上、８５重量％以上、９０重量％以上、９５重量％以上または９８重量％以上含むものであり得る。あるいは、本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤は、ハマウドール誘導体のみからなるものであってもよい。 The ratio of the haumadol derivative in the AGEs production inhibitor of the present invention is not particularly limited. For example, the AGEs production inhibitor of the present invention contains a Hamaudol derivative in an amount of 40% by weight or more, 45% by weight or more, 50% by weight or more, 60% by weight or more, 70% by weight or more, 80% by weight or more, 85% by weight or more, 90% It may contain at least 95% by weight, 95% by weight or 98% by weight. Or the AGEs production | generation inhibitor of this invention may consist only of a Hamaudol derivative.
本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤は、ペントシジン、クロスリン、ピロピリジン、グリオキサール由来リジンダイマー（ＧＯＬＤ）、メチルグリオキサール由来リジンダイマー（ＭＯＬＤ）等の蛍光性ＡＧＥｓおよびピラリン、カルボキシメチルリジン（ＣＭＬ）、３−デオキシグルコソン由来リジンダイマー（ＤＯＬＤ）、イミダゾロン化合物等の非蛍光性ＡＧＥｓを含む種々のＡＧＥｓの生成を抑制することができる。一つの態様において、本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤は、蛍光性ＡＧＥｓであるペントシジンの生成抑制のために用いられるものである。別の態様において、本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤は、非蛍光性ＡＧＥｓであるカルボキシメチルリジン（ＣＭＬ）の生成抑制のために用いられるものである。 The AGEs production inhibitor of the present invention includes fluorescent AGEs such as pentosidine, croslin, pyropyridine, glyoxal-derived lysine dimer (GOLD), methylglyoxal-derived lysine dimer (MOLD), pyralin, carboxymethyllysine (CML), 3-deoxyglucose. Generation of various AGEs including non-fluorescent AGEs such as son-derived lysine dimer (DOLD) and imidazolone compounds can be suppressed. In one embodiment, the AGEs production inhibitor of the present invention is used for inhibiting the production of pentosidine, which is a fluorescent AGE. In another embodiment, the AGEs production inhibitor of the present invention is used for inhibiting the production of carboxymethyllysine (CML), which is a non-fluorescent AGE.
本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物および皮膚老化予防／改善用皮膚外用剤は、本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤と同様、有効成分としてハマウドール誘導体を含有するものである。 The pharmaceutical composition for the prevention / treatment of diabetes and the external preparation for skin aging prevention / improvement of the present invention contain a Hamaudol derivative as an active ingredient, like the AGEs production inhibitor of the present invention.
本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物中に有効成分として含有させるハマウドール誘導体の量は、目的とする剤形等に応じて適宜設定することができるが、通常、１〜９８重量％程度であればよく、２〜９５重量％程度であることが好ましく、３〜９０重量％程度であることがより好ましい。 The amount of the haumadol derivative to be contained as an active ingredient in the pharmaceutical composition for preventing / treating diabetes of the present invention can be appropriately set according to the intended dosage form and the like, but is usually about 1 to 98% by weight. What is necessary is just about 2-95 weight%, and it is more preferable that it is about 3-90 weight%.
本明細書において、糖尿病もしくは糖尿病合併症の「治療」には、既に糖尿病もしくは糖尿病合併症に罹患している患者における症状の進行を阻止することも含まれる。 As used herein, “treatment” of diabetes or diabetic complications includes preventing the progression of symptoms in a patient already suffering from diabetes or diabetic complications.
本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物の投与方法は、経口投与または非経口投与のいずれであってもよい。また、投与時期は特に限定されず、食前、食中、食後、食間のいずれであってもよいが、例えば、糖類含有量が５ｇ以上である食事、またはアミノ酸および／または蛋白質含有量が２０ｇ以上である食事の食前、食中、食後および食間のいずれかに投与するのが好ましく、糖類ならびにアミノ酸および／または蛋白質を前記含有量以上含有する食事の食前、食中、食後および食間のいずれかに投与するのがより好ましい。前記アミノ酸としては、リジン、アルギニン等が挙げられ、その中でもＡＧＥｓ化し易いリジンおよび／またはアルギニンを前記含有量以上含有する食事の食前、食中、食後および食間のいずれかに投与するのが好ましい。また、前記蛋白質としては、卵白アルブミン、乳アルブミン、グリアジン、乳カゼイン、大豆カゼイン等が挙げられ、その中でもＡＧＥｓ化し易い卵白アルブミン、乳アルブミンおよび乳カゼインから選ばれる１種以上を前記含有量以上含有する食事の食前、食中、食後および食間のいずれかに投与するのが好ましい。ここで、一般的に「食事」とは、生存に必要な栄養分をとるために毎日の習慣として物を食べること（飲食行為）あるいはその飲食物を意味するが、本明細書において用いる「食事」の用語は、一回の飲食行為において摂取する一まとまりの飲食物を意味するものとする。 The method for administering the pharmaceutical composition for preventing / treating diabetes of the present invention may be either oral administration or parenteral administration. The administration time is not particularly limited and may be any of before, during, after, and between meals. For example, a meal having a saccharide content of 5 g or more, or an amino acid and / or protein content of 20 g or more. It is preferably administered before meal, during meal, after meal and between meals, and before meal, during meal, after meal and between meals of meal containing sugar and amino acid and / or protein above the above content. More preferably it is administered. Examples of the amino acid include lysine, arginine, and the like. Among them, lysine and / or arginine, which is easily converted to AGEs, is preferably administered before, during, after, and between meals. Examples of the protein include ovalbumin, milk albumin, gliadin, milk casein, soybean casein, and the like. Among them, one or more selected from ovalbumin, milk albumin, and milk casein which are easily converted to AGEs are contained in the above content. It is preferably administered before, during, after and between meals. Here, “meal” generally means eating (drinking action) or eating or drinking food as a daily habit for taking the nutrients necessary for survival, but “meal” as used herein. The term "" means a set of food and drink taken in a single eating and drinking act.
本明細書において用いる場合、「糖類」とは、単糖および／または二糖を意味するものとする。これに対し「糖質」とは、炭水化物のうち食物繊維以外のものをいい、糖類の他に、オリゴ糖、多糖、糖アルコール等が含まれる。 As used herein, “saccharides” shall mean monosaccharides and / or disaccharides. On the other hand, “sugar” refers to carbohydrates other than dietary fiber, and includes oligosaccharides, polysaccharides, sugar alcohols and the like in addition to sugars.
本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物の投与量は、糖尿病またはその合併症の程度、その他の疾病の程度、年齢、性別等の条件に応じて適宜選択されるが、ＡＧＥｓの生成を抑制することができる量（以下、「ＡＧＥｓ生成抑制有効量」とも称する）のハマウドール誘導体を投与すればよい。ＡＧＥｓ生成抑制有効量は、当業者に周知の方法（各種の非臨床および／または臨床試験を含む）を用いて適宜決定することができる。 The dosage of the pharmaceutical composition for preventing / treating diabetes according to the present invention is appropriately selected according to conditions such as the degree of diabetes or its complications, the degree of other diseases, age, and sex, but suppresses the generation of AGEs. It is sufficient to administer an amount of the hamadole derivative (hereinafter also referred to as an “AGE generation suppression effective amount”). An effective amount for inhibiting the generation of AGEs can be appropriately determined using methods well known to those skilled in the art (including various non-clinical and / or clinical trials).
本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物は、ＡＧＥｓ生成抑制有効量のハマウドール誘導体を一度に投与するものであっても良く、間隔を置いて複数回に分けて投与するものであっても良い。複数回に分けて投与する場合は、一日に投与されるハマウドール誘導体の合計量がＡＧＥｓ生成抑制有効量となればよく、食事の回数に合わせて投与するのが好ましい。 The pharmaceutical composition for preventing / treating diabetes according to the present invention may be one in which an effective amount of AGEs is suppressed at once, or may be administered in multiple portions at intervals. . When administered in multiple doses, it is sufficient that the total amount of hamadole derivatives administered per day is an effective amount for inhibiting AGE generation, and it is preferable to administer the dose according to the number of meals.
本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物は、糖尿病もしくは糖尿病合併症に罹患した者、または健常者のいずれに対しても投与することができるが、ＡＧＥｓとの関連性が高い糖尿病に罹患した者に対して投与するのが好ましい。糖尿病に罹患した者とは、ヘモグロビンＡ１ｃが６．１％（ＪＤＳ値）以上で、且つ、以下の（１）〜（３）のいずれかに該当する者を指す：（１）空腹時血糖値が１２６ｍｇ／ｄＬ以上、（２）随時血糖値（空腹か食後かにかかわらず）が２００ｍｇ／ｄＬ以上、および（３）ブドウ糖負荷後２時間値が２００ｍｇ／ｄＬ以上。糖尿病診断基準の詳細は、日本糖尿病学会による「糖尿病の分類と診断基準に関する委員会報告」（同学会のホームページ等から入手可能）に記載されている。 The pharmaceutical composition for preventing / treating diabetes according to the present invention can be administered to either a person suffering from diabetes or diabetic complications or a healthy person, but suffering from diabetes having a high association with AGEs. It is preferably administered to a person. A person suffering from diabetes refers to a person whose hemoglobin A1c is 6.1% (JDS value) or more and falls under any of the following (1) to (3): (1) Fasting blood glucose level 126 mg / dL or more, (2) Adequate blood glucose level (whether fasting or after eating) is 200 mg / dL or more, and (3) 2 hours after glucose loading is 200 mg / dL or more. Details of the diagnostic criteria for diabetes are described in the “Report of the Committee on Diabetes Classification and Diagnostic Criteria” by the Japanese Diabetes Association (available from the association's website).
また、本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物は、糖尿病に伴って発症する糖尿病網膜症、糖尿病腎症、糖尿病神経障害、糖尿病血管合併症、動脈硬化症、腎不全、アルツハイマー病、神経変性疾患、がん等の糖尿病合併症の予防および／または治療のために用いることができる。これらの糖尿病合併症の中でも、発症率の高い糖尿病網膜症、糖尿病腎症および／または糖尿病神経障害の予防および／または治療のために用いることが好ましい。 Further, the pharmaceutical composition for preventing / treating diabetes of the present invention comprises diabetic retinopathy, diabetic nephropathy, diabetic neuropathy, diabetic vascular complications, arteriosclerosis, renal failure, Alzheimer's disease, neurodegeneration, which develops with diabetes. It can be used for the prevention and / or treatment of diabetic complications such as diseases and cancer. Among these diabetic complications, it is preferably used for the prevention and / or treatment of diabetic retinopathy, diabetic nephropathy and / or diabetic neuropathy with a high incidence.
さらに、本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物は、健常者に投与することにより、糖尿病およびその合併症を効果的に予防することができる。 Furthermore, diabetes and its complications can be effectively prevented by administering the pharmaceutical composition for preventing / treating diabetes of the present invention to healthy individuals.
本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物は、ハマウドール誘導体による糖尿病もしくは糖尿病合併症の予防および／または治療効果を妨げない範囲であれば、ハマウドール誘導体の他にさらに賦形剤、安定剤、保存剤、緩衝剤、矯味剤、懸濁化剤、乳化剤、着香剤、溶解補助剤、着色剤、粘稠剤等の一般的な医薬品に配合される成分を添加して各種の剤形とすることができる。 The pharmaceutical composition for preventing / treating diabetes according to the present invention may further contain excipients, stabilizers, storages in addition to the Hamaudol derivative, as long as the effect of preventing and / or treating diabetes or diabetic complications by the Hamoudol derivative is not hindered. Ingredients added to general pharmaceuticals such as agents, buffers, flavoring agents, suspending agents, emulsifiers, flavoring agents, solubilizing agents, coloring agents, thickeners, etc. are added to form various dosage forms be able to.
本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物の剤形としては、錠剤（口腔内崩壊錠、チュアブル錠、発泡錠、分散錠、溶解錠）、カプセル剤、顆粒剤（発泡顆粒剤）、散剤、経口液剤（エリキシル剤、懸濁剤、乳剤、リモナーデ剤）、シロップ剤（シロップ用剤）、経口ゼリー剤、口腔用錠剤（トローチ剤、舌下錠、バッカル錠、付着錠、ガム剤）、口腔用スプレー剤、口腔用半固形剤、含嗽剤、注射剤（輸液剤、埋め込み注射剤、持続性注射剤）、透析用剤（腹膜透析用剤、血液透析用剤）、吸入剤（吸入粉末剤、吸入液剤、吸入エアゾール剤）、坐剤、直腸用半固形剤、注腸剤、点眼剤、眼軟膏剤、点耳剤、点鼻剤（点鼻粉末剤、点鼻液剤）、膣錠、膣用坐剤、外用固形剤（外用散剤）、外用液剤（リニメント剤、ローション剤）、スプレー剤（外用エアゾール剤、ポンプスプレー剤）、軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤、貼付剤（テープ剤、パップ剤）等が挙げられる。これらの中でも経口投与のし易さの点で、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、経口液剤、シロップ剤、経口ゼリー剤、口腔用錠剤、口腔用スプレー剤、口腔用半固形剤および含嗽剤が好ましく、生体内に吸収され易い点で、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤がより好ましい。 Examples of the dosage form of the pharmaceutical composition for prevention / treatment of diabetes of the present invention include tablets (orally disintegrating tablets, chewable tablets, effervescent tablets, dispersible tablets, dissolving tablets), capsules, granules (expanded granules), powders, Oral solution (elixir, suspension, emulsion, limonade), syrup (syrup), oral jelly, oral tablet (troche, sublingual, buccal, adhesive tablet, gum), oral Spray, oral semi-solid preparation, mouthwash, injection (infusion solution, implantable injection, continuous injection), dialysis agent (peritoneal dialysis agent, hemodialysis agent), inhalant (inhalation powder) , Inhalants, aerosols), suppositories, rectal semisolids, enemas, eye drops, eye ointments, ear drops, nasal drops (nasal powders, nasal drops), vaginal tablets, Vaginal suppository, external solid preparation (external powder), external liquid (liniment, lotion), spray (External aerosols, pump sprays), ointments, creams, gels, patches (tape, cataplasms), and the like. Among these, tablets, capsules, granules, powders, oral solutions, syrups, oral jelly, oral tablets, oral sprays, oral semisolids and mouthwashes are easy to administer. From the viewpoint of being easily absorbed in the living body, tablets, capsules, granules, and powders are more preferable.
また、本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物は、エキス剤、丸剤、酒精剤、浸剤・煎剤、茶剤、チンキ剤、芳香水剤、流エキス剤等の生薬関連製剤に本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤を添加した剤形で使用することもできる。これら剤形は、糖尿病またはその合併症の程度、その他の疾病の程度、年齢、性別等の条件に応じて適宜選択される。 Further, the pharmaceutical composition for preventing / treating diabetes of the present invention can be applied to herbal medicine-related preparations such as extracts, pills, spirits, soaking agents, decoction, teas, tinctures, fragrances, and flow extracts. It can also be used in a dosage form to which an AGEs production inhibitor is added. These dosage forms are appropriately selected according to conditions such as the degree of diabetes or its complications, the degree of other diseases, age, and sex.
更に、本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物は、ＡＧＥｓ生成抑制効果を有する他の薬剤をさらに含むものとすることができる。これらの薬剤としては、例えば、インスリン抵抗性改善薬、脂質異常症治療薬、アンジオテンシンII１型受容体拮抗薬、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、メトホルミン等が例示される。 Furthermore, the pharmaceutical composition for preventing / treating diabetes according to the present invention may further contain other drugs having an AGEs production inhibitory effect. Examples of these drugs include insulin resistance improving drugs, dyslipidemic drugs, angiotensin II type 1 receptor antagonists, angiotensin converting enzyme inhibitors, metformin, and the like.
本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤またはその有効成分であるハマウドール誘導体は、非ヒト動物における糖尿病もしくは糖尿病合併症を予防および／または治療するために用いることもできる。したがって、本発明の一態様において、非ヒト動物における糖尿病もしくは糖尿病合併症の予防および／または治療のための、ハマウドール誘導体を含む非ヒト動物用医薬組成物（以下、本発明の非ヒト動物用医薬組成物とも称する）が提供される。また、ハマウドール誘導体を非ヒト動物に投与することを含む、非ヒト動物における糖尿病もしくは糖尿病合併症を予防および／または治療する方法も提供される。非ヒト動物としては、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ニワトリ等の家畜類や、イヌ、ネコ等のペットとして飼育される動物等が例示される。 The AGEs production inhibitor of the present invention or a Hamaudol derivative that is an active ingredient thereof can also be used to prevent and / or treat diabetes or diabetic complications in non-human animals. Therefore, in one embodiment of the present invention, a non-human animal pharmaceutical composition comprising a hamaudol derivative for the prevention and / or treatment of diabetes or diabetic complications in a non-human animal (hereinafter referred to as the non-human animal pharmaceutical of the present invention). Also referred to as a composition). Also provided is a method for preventing and / or treating diabetes or diabetic complications in a non-human animal comprising administering a Hamaudol derivative to the non-human animal. Examples of non-human animals include livestock such as cows, horses, pigs, sheep, goats and chickens, and animals raised as pets such as dogs and cats.
本発明の非ヒト動物用医薬組成物に含有させるハマウドール誘導体の量、該医薬組成物の投与方法、投与時期、投与量および剤形、該医薬組成物においてハマウドール誘導体と併用可能な他の薬剤、天然物および天然由来物質、ならびに本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤を非ヒト動物に投与する場合における投与方法、投与時期、投与量等については、「本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物」について上述した内容と同様である。または、本発明の非ヒト動物用医薬組成物は飼料や飲用水に配合して投与してもよい。 The amount of the haumadol derivative to be contained in the non-human animal pharmaceutical composition of the present invention, the method of administering the pharmaceutical composition, the timing of administration, the dosage and the dosage form, and other drugs that can be used in combination with the haumadol derivative in the pharmaceutical composition; Regarding the administration method, administration time, dosage, etc. in the case of administering the natural product and the naturally-derived substance and the AGEs production inhibitor of the present invention to a non-human animal, the “pharmaceutical composition for diabetes prevention / treatment of the present invention” This is the same as described above. Or you may mix and administer the pharmaceutical composition for non-human animals of this invention in feed or drinking water.
また本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤は、食品添加剤として用いることもできる。ハマウドール誘導体を飲食品に配合または添加することにより、ＡＧＥｓの生成を抑制する機能性飲食品を提供することができる。また、ハマウドール誘導体と担体を含む経口摂取用組成物は、ＡＧＥｓ生成を抑制するサプリメントとして用い得る。なお、本願において「担体」は液体製剤を製造するためのハマウドール誘導体を溶解あるいは懸濁させることのできる生理的に許容される媒体または固形製剤を製造するための賦形剤を意味する。担体は組成物の剤形に応じて、通常医薬品やサプリメントの製造に用いられる成分を適宜選択すればよい。該組成物にはＡＧＥｓ生成抑制作用を妨げない限り、担体に加えて安定剤、保存剤、緩衝剤、矯味剤、懸濁化剤、乳化剤、着香剤、溶解補助剤、着色剤、粘稠剤等の通常医薬品やサプリメントに用いられる成分を添加してもよい。 Moreover, the AGEs production | generation inhibitor of this invention can also be used as a food additive. The functional food / beverage products which suppress the production | generation of AGEs can be provided by mix | blending or adding a Hamaudol derivative to food / beverage products. Moreover, the composition for oral consumption containing a hammadol derivative and a carrier can be used as a supplement that suppresses the generation of AGEs. In the present application, “carrier” means a physiologically acceptable medium capable of dissolving or suspending a haumadol derivative for producing a liquid preparation or an excipient for producing a solid preparation. The carrier may be appropriately selected from components that are usually used in the production of pharmaceuticals and supplements according to the dosage form of the composition. In addition to the carrier, the composition contains a stabilizer, a preservative, a buffering agent, a corrigent, a suspending agent, an emulsifier, a flavoring agent, a solubilizing agent, a colorant, a viscous agent, as long as it does not interfere with the AGEs formation inhibiting action You may add the component normally used for pharmaceuticals and supplements, such as an agent.
本発明の経口摂取用組成物に含有させるハマウドール誘導体の合計量は、目的とする剤形等に応じて適宜設定することができるが、通常、１〜９８重量％程度であればよく、２〜９５重量％程度であることが好ましく、３〜９０重量％程度であることがより好ましい。 The total amount of the Hamaudol derivative to be contained in the composition for oral intake of the present invention can be appropriately set according to the target dosage form and the like, but is usually about 1 to 98% by weight. It is preferably about 95% by weight, and more preferably about 3 to 90% by weight.
経口摂取用組成物の剤形としては、上記で医薬組成物の剤形として列挙したもののうち、経口摂取することができるものであればよく、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、経口液剤、シロップ剤、経口ゼリー剤、口腔用錠剤、口腔用スプレー剤、口腔用半固形剤および含嗽剤が好ましく、生体内に吸収され易い点で、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤がより好ましい。 As the dosage form of the composition for oral intake, any of those listed above as dosage forms of the pharmaceutical composition may be used as long as it can be taken orally, and tablets, capsules, granules, powders, oral liquids, Syrups, oral jelly preparations, oral tablets, oral sprays, oral semisolid preparations and gargles are preferred, and tablets, capsules, granules and powders are more preferred in that they are easily absorbed in vivo.
本発明の経口摂取用組成物は健康を維持することを目的とするサプリメントとして摂取させることができる。経口摂取用組成物の摂取方法、摂取時期、摂取量等は「本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物」について投与方法、投与時期、投与量等として上述した内容と同様である。 The composition for oral intake of the present invention can be ingested as a supplement intended to maintain health. The ingestion method, ingestion time, ingestion amount and the like of the composition for oral intake are the same as those described above for the “pharmaceutical composition for prevention / treatment of diabetes of the present invention” as the administration method, administration time, dosage and the like.
さらに、ハマウドール誘導体は、皮膚老化の予防／改善のための皮膚外用剤の有効成分として用いることもできる。本発明の皮膚老化予防／改善用皮膚外用剤中に含有させるハマウドール誘導体の量は、目的とする剤形等に応じて適宜設定することができるが、通常、０．０１〜２０重量％程度であればよく、０．０５〜１５重量％程度であることが好ましく、０．１〜１０重量％程度であることがより好ましい。 Furthermore, the Hamaudol derivative can also be used as an active ingredient of an external preparation for skin for preventing / improving skin aging. The amount of the haumadol derivative to be contained in the skin external preparation for preventing / ameliorating skin aging according to the present invention can be appropriately set according to the intended dosage form, but is usually about 0.01 to 20% by weight. What is necessary is just about 0.05 to 15 weight%, and it is more preferable that it is about 0.1 to 10 weight%.
本発明の皮膚老化予防／改善用皮膚外用剤の皮膚への適用量は、皮膚老化の程度、その他の皮膚トラブルの程度、年齢、性別等の条件に応じて適宜選択されるが、ＡＧＥｓの生成を抑制することができる量（ＡＧＥｓ生成抑制有効量）を適用すればよい。ＡＧＥｓ生成抑制有効量は、当業者に周知の方法（各種の非臨床および／または臨床試験を含む）を用いて適宜決定することができる。 The applied amount of the external preparation for skin aging prevention / improvement of the present invention to the skin is appropriately selected according to conditions such as the degree of skin aging, the degree of other skin troubles, age, and sex, but the generation of AGEs It is sufficient to apply an amount that can suppress the amount (AGEs generation suppression effective amount). An effective amount for inhibiting the generation of AGEs can be appropriately determined using methods well known to those skilled in the art (including various non-clinical and / or clinical trials).
本発明の皮膚老化予防／改善用皮膚外用剤は、ＡＧＥｓ生成抑制有効量のハマウドール誘導体を一度に適用するものであっても良く、間隔を置いて複数回に分けて適用するものであっても良い。複数回に分けて適用する場合は、一日に適用されるハマウドール誘導体の合計量がＡＧＥｓ生成抑制有効量となればよい。 The skin external preparation for skin aging prevention / improvement according to the present invention may be one in which an effective amount of AGEs is suppressed at once, or may be applied multiple times at intervals. good. In the case where it is applied in a plurality of times, the total amount of the Hamaudol derivative applied per day may be an effective amount for inhibiting the generation of AGEs.
本発明の皮膚老化予防／改善用皮膚外用剤は、塗布等の方法で皮膚に適用することにより、皮膚老化、例えば皮膚の弾力性低下や黄色化を効果的に予防することができるほか、これら皮膚老化を改善し、または皮膚老化の進行を阻止することができる。 The skin external preparation for skin aging prevention / improvement of the present invention can effectively prevent skin aging, for example, skin elasticity reduction or yellowing, by applying to the skin by a method such as application. It can improve skin aging or prevent the progression of skin aging.
本発明の皮膚老化予防／改善用皮膚外用剤は、ハマウドール誘導体による皮膚老化の予防および／または改善効果を妨げない範囲であれば、ハマウドール誘導体の他にさらに安定剤、防腐剤、緩衝剤、酸化防止剤、懸濁化剤、界面活性剤、溶解補助剤、着色剤、粘稠剤、香料等の成分を添加して各種の剤形とすることができる。 The skin external preparation for skin aging prevention / improvement according to the present invention has a stabilizer, preservative, buffering agent, oxidation agent, in addition to the Hamaudol derivative, as long as the effect of preventing and / or improving skin aging by the Hamaudol derivative is not disturbed. Components such as an inhibitor, a suspending agent, a surfactant, a solubilizing agent, a colorant, a thickener, and a fragrance can be added to form various dosage forms.
本発明の皮膚老化予防／改善用皮膚外用剤は、化粧料または医薬組成物であり得る。該化粧料は、通常、化粧品もしくは医薬部外品として提供され得るものである。 The skin external preparation for preventing / ameliorating skin aging according to the present invention may be a cosmetic or a pharmaceutical composition. The cosmetics can be usually provided as cosmetics or quasi drugs.
本発明の皮膚老化予防／改善用皮膚外用剤の形態としては、乳液、美容液、ローション、パック、クリーム、ハンドクリームなどの基礎化粧料、ファンデーション、化粧下地、リップクリーム、口紅などのメークアップ化粧料、洗顔料、石鹸、メイク落とし、ボディーシャンプーなどの洗浄用化粧料、ヘアートニック、ヘアーローションなどの頭髪用化粧料、入浴剤などが挙げられる。 The form of the external preparation for skin aging prevention / improvement of the present invention includes basic cosmetics such as milky lotion, cosmetic liquid, lotion, pack, cream and hand cream, makeup makeup such as foundation, makeup base, lip balm and lipstick. Cosmetics, facial cleansers, soaps, makeup removers, body cosmetics such as body shampoos, hair cosmetics such as hair nicks and hair lotions, and bath preparations.
また、本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物、非ヒト動物用医薬組成物、食品添加剤および皮膚老化予防／改善用皮膚外用剤は、ＡＧＥｓ生成抑制効果を有する天然物または天然由来物質をさらに含むものとすることもできる。これらの天然物または天然由来物質としては、例えば、ドクダミ、セイヨウサンザシ、カモミール、ブドウ葉等のハーブ類、桜の花、トウモロコシの花柱および柱頭、セイヨウオオバコ種子、マロニエ、シャクヤク、バラの花、梅果実、山ぶどう、紫菊花、小麦胚芽、小麦胚芽由来のポリアミン、マンゴスチン等が例示される。 In addition, the pharmaceutical composition for preventing / treating diabetes, the pharmaceutical composition for non-human animals, the food additive, and the external preparation for skin aging prevention / amelioration of the present invention are natural products or naturally derived substances having an AGEs production inhibitory effect. It can also be included. Examples of these natural products or naturally-derived substances include herbs such as dokudami, hawthorn, chamomile, grape leaves, cherry blossoms, corn stigma and stigmas, plantain seeds, maronier, peonies, rose flowers, plum fruit , Mountain grape, purple chrysanthemum flower, wheat germ, wheat germ-derived polyamine, mangosteen and the like.
以下、実施例を挙げて、本発明を具体的に説明するが、本発明はこれら記載に限定されるものではない。 EXAMPLES Hereinafter, although an Example is given and this invention is demonstrated concretely, this invention is not limited to these description.
実施例１
ハマボウフウからの有効成分の抽出と単離（水による抽出）
２〜１０ｍｍ四方の大きさに細断したハマボウフウの葉（３４１．９ｇ）に水（２７３５．９ｇ）を加え、１００℃で５分間煮沸して抽出を行い、濾過にて抽出液と残渣に分け、抽出液を得た（素材と抽出溶媒の重量比は１：８）。抽出液を凍結乾燥にて乾燥し、固形抽出物（１５．７ｇ）を得た。以下、かかる熱水抽出物をハマボウフウ抽出物（Ｗ）と表記する。
次に、かかる抽出物５ｇを水２０ｍｌに懸濁させ、１００ｍｌのＤＩＡＩＯＮ ＨＰ−２０（三菱化学株式会社製）を充填したカラムに供した。次に、２００ｍｌの水をカラムに通液させ水画分を得たのち、２００ｍｌの水：メタノール＝１：１の溶液をカラムに通液させ水：メタノール＝１：１画分を得て、さらに３００ｍｌのメタノールを通液させメタノール画分を得た。メタノール画分を減圧下溶媒留去し、０．５ｇの乾燥固形物を得た。
次に、かかる固形物３８０ｍｇをシリカゲル薄層（ＭＥＲＣＫ社 ＴＬＣ Ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌ ６０ ＲＰ−１８ Ｆ２５４Ｓ）を用いてアセトニトリル：水＝１：１．５の溶媒で展開させた。Ｒｆ値＝０．３４のスポットを２５４ｎｍＵＶランプを用いて確認し、回収することにより単一の成分を得た。このように単離した成分を、減圧下溶媒留去し、１５ｍｇの乾燥固形物を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲを測定し、文献（Ｃｈｅｍ． Ｐｈａｒｍ． Ｂｕｌｌ．，３０（１０）， ３５５５−３５６２（１９８２））のスペクトルデータにより、単離された成分をｓｅｃ−Ｏ−グルコシルハマウドールと同定した。
Example 1
Extraction and isolation of active ingredients from kingfisher (water extraction)
Water (2735.9 g) is added to the leaf of kingfisher (341.9 g) shredded to a size of 2 to 10 mm square, boiled at 100 ° C. for 5 minutes, extracted, and separated into an extract and a residue by filtration. An extract was obtained (weight ratio of material to extraction solvent was 1: 8). The extract was lyophilized to obtain a solid extract (15.7 g). Hereinafter, such a hot water extract will be referred to as a hamboufu extract (W).
Next, 5 g of the extract was suspended in 20 ml of water and applied to a column packed with 100 ml of DIAION HP-20 (manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation). Next, 200 ml of water was passed through the column to obtain a water fraction, and then 200 ml of water: methanol = 1: 1 was passed through the column to obtain water: methanol = 1: 1 fraction. Further, 300 ml of methanol was passed through to obtain a methanol fraction. The solvent was distilled off from the methanol fraction under reduced pressure to obtain 0.5 g of a dry solid.
Next, 380 mg of the solid was developed with a solvent of acetonitrile: water = 1: 1.5 using a thin layer of silica gel (MERC TLC Silica gel 60 RP-18 F254S). A spot having an Rf value = 0.34 was confirmed using a 254 nm UV lamp and recovered to obtain a single component. The component thus isolated was evaporated under reduced pressure to obtain 15 mg of a dry solid.
1 H-NMR and 13 C-NMR were measured, and the isolated component was determined to be sec-O-glucosyl according to the spectral data of the literature (Chem. Pharm. Bull., 30 (10), 3555-3562 (1982)). Identified as Hamaudor.
実施例２
ボウフウからの有効成分の抽出と単離（メタノールによる抽出）（１）
２〜５ｍｍ四方の大きさに細断したボウフウの根（９８．５ｇ）にメタノール（９８５ｍｌ）を加え、水温６０℃に設定したウォーターバス中でジムロート冷却器を使用して２時間還流した。還流処理後、濾過にて抽出液を残渣に分け、メタノール抽出液を得た。メタノール抽出液を減圧下溶媒留去したのち、１９．５ｇの乾燥エキスを得た。
次に、かかるエキス１０ｇを水２００ｍｌに分散させ、２００ｍｌの酢酸エチルを加え良く振とうした後、分液し酢酸エチル層を取り出した。取り出した酢酸エチル層を減圧下溶媒留去したのち、７．５ｇの乾燥固形物を得た。
次に、かかる固形物４ｇを酢酸エチル２０ｍｌに溶解し、シリカゲルクロマトグラフィー（１００ｍｌ）に供した。次に３００ｍｌのヘキサン：アセトン＝７５：２５の溶液を通液させ、回収液を減圧下溶媒留去し、２．３ｇの乾燥固形分を得た。
次に、かかる固形分２ｇをヘキサン１０ｍｌに溶解し、シリカゲルクロマトグラフィー（１００ｍｌ）に供した。次に３００ｍｌのヘキサン：酢酸エチル＝８０：２０の溶液を通液させ、回収液を減圧下溶媒留去し、０．７ｇの乾燥固形分を得た。
次に、かかる固形分０．５ｇをメタノール５ｍｌに溶解し、ＯＤＳクロマトグラフィー（５０ｍｌ）に供した。次に１５０ｍｌのメタノール：水＝６０：４０の溶液を通液させ、回収液を減圧下溶媒留去し、１８ｍｇの乾燥固形分を得た。
得られた乾燥固形分の１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲを測定し、文献（Ｃｈｅｍ． Ｐｈａｒｍ． Ｂｕｌｌ．，３０（１０）， ３５５５−３５６２（１９８２））のスペクトルデータと比較しハマウドールと同定した。
Example 2
Extraction and isolation of active ingredients from Bow Fu (extraction with methanol) (1)
Methanol (985 ml) was added to Bowfu root (98.5 g) shredded to a size of 2 to 5 mm square, and the mixture was refluxed for 2 hours using a Jimroth cooler in a water bath set at a water temperature of 60 ° C. After the reflux treatment, the extract was separated into residues by filtration to obtain a methanol extract. After evaporating the solvent of the methanol extract under reduced pressure, 19.5 g of a dry extract was obtained.
Next, 10 g of the extract was dispersed in 200 ml of water, 200 ml of ethyl acetate was added and shaken well, and the mixture was separated to take out the ethyl acetate layer. The ethyl acetate layer taken out was distilled off under reduced pressure to obtain 7.5 g of a dry solid.
Next, 4 g of the solid was dissolved in 20 ml of ethyl acetate and subjected to silica gel chromatography (100 ml). Next, 300 ml of a hexane: acetone = 75: 25 solution was passed through, and the recovered solution was evaporated under reduced pressure to obtain 2.3 g of a dry solid.
Next, 2 g of this solid content was dissolved in 10 ml of hexane and subjected to silica gel chromatography (100 ml). Next, 300 ml of a hexane: ethyl acetate = 80: 20 solution was passed through, and the recovered solution was evaporated under reduced pressure to obtain 0.7 g of a dry solid.
Next, 0.5 g of the solid content was dissolved in 5 ml of methanol and subjected to ODS chromatography (50 ml). Next, 150 ml of methanol: water = 60: 40 solution was passed through, and the recovered solution was evaporated under reduced pressure to obtain 18 mg of a dry solid.
1 H-NMR and 13 C-NMR of the obtained dry solid were measured and compared with spectral data in the literature (Chem. Pharm. Bull., 30 (10), 3555-3562 (1982)), and identified as Hamaudol. did.
ボウフウからの有効成分の抽出と単離（メタノールによる抽出）（２）
上記（１）と同様に抽出、分液、溶媒留去して得られた乾燥固形分４ｇをヘキサン２０ｍｌに溶解し、シリカゲルクロマトグラフィー（１００ｍｌ）に供した。次に３００ｍｌのヘキサン：アセトン＝８０：２０の溶液を通液させ、回収液を減圧下溶媒留去し、１．３ｇの乾燥固形分を得た。
次に、かかる固形分０．５ｇをヘキサン５ｍｌに溶解し、シリカゲルクロマトグラフィー（５０ｍｌ）に供した。次に１５０ｍｌのヘキサン：酢酸エチル＝９０：１０の溶液を通液させ、回収液を減圧下溶媒留去し、３８ｍｇの乾燥固形分を得た。
得られた乾燥固形分の１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲを測定し、文献（Ｃｈｅｍ． Ｐｈａｒｍ． Ｂｕｌｌ．，３０（１０）， ３５５５−３５６２（１９８２））のスペクトルデータと比較し３’−Ｏ−アンゲロイルハマウドールと同定した。
Extraction and isolation of active ingredients from Bow-fu (extraction with methanol) (2)
In the same manner as in the above (1), 4 g of the dried solid content obtained by extraction, liquid separation and solvent distillation was dissolved in 20 ml of hexane and subjected to silica gel chromatography (100 ml). Next, 300 ml of a hexane: acetone = 80: 20 solution was passed through, and the recovered solution was evaporated under reduced pressure to obtain 1.3 g of a dry solid.
Next, 0.5 g of the solid content was dissolved in 5 ml of hexane and subjected to silica gel chromatography (50 ml). Next, 150 ml of a solution of hexane: ethyl acetate = 90: 10 was passed through, and the recovered solution was evaporated under reduced pressure to obtain 38 mg of a dry solid.
1 H-NMR and 13 C-NMR of the obtained dry solid were measured and compared with spectral data of literature (Chem. Pharm. Bull., 30 (10), 3555-3562 (1982)). Identified as O-angeloyl haumadol.
実施例３
蛍光性ＡＧＥｓ強度の測定
実施例１および２で得たハマウドール誘導体を用いて、ＡＧＥｓ生成抑制効果を確認するため下記方法で蛍光性ＡＧＥｓ強度を測定した。７．５ｍｇ／ｍｌＢｏｃ−リジンおよび７．５ｍｇ／ｍｌＢｏｃ−アルギニンを含有する０．５Ｍリン酸バッファー液（ｐＨ７．２）（以下、アミノ酸液とする）１．０ｍｌ、５４ｍｇ／ｍｌＤＬ−グリセルアルデヒド液（以下、糖液とする）０．２５ｍｌおよび表１に示す組成のサンプル溶液０．２５ｍｌを混合し、３７℃で７日間静置した。反応液の蛍光強度（励起波長３８０ｎｍ、蛍光波長４００−６００ｎｍ）を９６ウエルマイクロプレートリーダーを用いて測定し、この値を以下に示す蛍光性ＡＧＥｓ強度計算式中のａ２とした。該計算式中のｂ２〜ｄ２についても同様の条件で反応させて蛍光強度を測定し、蛍光性ＡＧＥｓ強度を算出した。ブランクは、サンプル溶液を加える代わりに、溶媒を加え測定した。
蛍光性ＡＧＥｓ強度＝ａ２−ｂ２−ｃ２−ｄ２
ａ２：各試験区のサンプル溶液０．２５ｍＬ＋アミノ酸液１．０ｍＬ＋糖液０．２５ｍｌ
ｂ２：各試験区のサンプル溶液０．２５ｍＬ＋０．５Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７．２）１．２５ｍｌ
ｃ２：アミノ酸液１．０ｍｌ＋０．５Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７．２）０．５ｍｌ
ｄ２：糖液０．２５ｍｌ＋０．５Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７．２）１．２５ｍｌ
Example 3
Measurement of fluorescent AGE intensity The fluorescent AGE intensity was measured by the method described below in order to confirm the AGE generation inhibitory effect using the haumadol derivatives obtained in Examples 1 and 2. 0.5 ml phosphate buffer solution (pH 7.2) (hereinafter referred to as amino acid solution) containing 7.5 mg / ml Boc-lysine and 7.5 mg / ml Boc-arginine 1.0 ml, 54 mg / ml DL-glyceraldehyde solution 0.25 ml (hereinafter referred to as a sugar solution) and 0.25 ml of a sample solution having the composition shown in Table 1 were mixed and allowed to stand at 37 ° C. for 7 days. The fluorescence intensity (excitation wavelength: 380 nm, fluorescence wavelength: 400-600 nm) of the reaction solution was measured using a 96-well microplate reader, and this value was defined as a2 in the fluorescent AGEs intensity calculation formula shown below. Regarding b2 to d2 in the calculation formula, the fluorescence intensity was measured by reacting under the same conditions, and the fluorescence AGEs intensity was calculated. The blank was measured by adding a solvent instead of adding the sample solution.
Fluorescence AGE intensity = a2-b2-c2-d2
a2: 0.25 mL of sample solution in each test group + 1.0 mL of amino acid solution + 0.25 mL of sugar solution
b2: 0.25 ml of sample solution of each test group + 1.25 ml of 0.5 M phosphate buffer (pH 7.2)
c2: Amino acid solution 1.0 ml + 0.5 M phosphate buffer (pH 7.2) 0.5 ml
d2: 1.25 ml of sugar solution 0.25 ml + 0.5 M phosphate buffer (pH 7.2)
ハマウドール誘導体を用いた試験区では、ブランクに比べ蛍光性ＡＧＥｓ強度が低下しており、ハマウドール誘導体が蛍光性ＡＧＥｓの生成を抑制していることが確認された。結果を表２に示す。 In the test group using the Hamaudol derivative, the fluorescent AGEs intensity was lower than that of the blank, and it was confirmed that the Hamaudol derivative suppressed the generation of the fluorescent AGEs. The results are shown in Table 2.
実施例４
ＣＭＬ生成量の測定
実施例１で得たｓｅｃ−Ｏ−グルコシルハマウドールを用いて、ＡＧＥｓ抑制効果を確認するため下記方法でＣＭＬ生成量を測定した。７．５ｍｇ／ｍｌＢｏｃ−リジンおよび７．５ｍｇ／ｍｌＢｏｃ−アルギニンを含有する０．５Ｍリン酸バッファー液（ｐＨ７．２）（以下、アミノ酸液とする）１．０ｍｌ、５４ｍｇ／ｍｌＤＬ−グリセルアルデヒド液（以下、糖液とする）０．２５ｍｌおよび表１に示す組成のサンプル溶液０．２５ｍｌを混合し、３７℃で７日間静置した。反応液のＣＭＬ生成量をＣｉｒｃｕＬｅｘ ＣＭＬ／Ｎε−（ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ｌｙｓｉｎｅ ＥＬＩＳＡ ｋｉｔ（株式会社サイクレックス製）を用いて測定した。まず、反応液６０μＬに第一次抗体液６０μＬを加え混合した。次にＣＭＬ固層化プレートに混合液１００μＬを添加し、２５℃、３００ｒｐｍで１時間振とうした。プレートを洗浄液でよく洗浄した後、第二次抗体液１００μＬを加え、２５℃、３００ｒｐｍで１時間振とうした。プレートを洗浄液でよく洗浄した後、発色液１００μＬを添加し、２５℃、３００ｒｐｍで１０分間振とうした。その後、プレートに反応停止液１００μＬを加え、２５℃、３００ｒｐｍで１分間振とうし、２５℃で４分間静置した。９６ウエルマイクロプレートリーダーを用いて４５０ｎｍの吸光度を測定し、各反応液に含まれるＣＭＬ量を検量線を用いて計算した。ブランクは、サンプル溶液を加える代わりに、溶媒を加え測定した。
Example 4
Measurement of CML production amount Using the sec-O-glucosylhamadol obtained in Example 1, the CML production amount was measured by the following method in order to confirm the AGEs inhibitory effect. 0.5 ml phosphate buffer solution (pH 7.2) (hereinafter referred to as amino acid solution) containing 7.5 mg / ml Boc-lysine and 7.5 mg / ml Boc-arginine 1.0 ml, 54 mg / ml DL-glyceraldehyde solution 0.25 ml (hereinafter referred to as a sugar solution) and 0.25 ml of a sample solution having the composition shown in Table 1 were mixed and allowed to stand at 37 ° C. for 7 days. The amount of CML produced in the reaction solution was measured using CircuLex CML / Nε- (carbomethyl) lysine ELISA kit (manufactured by Cyclex Co., Ltd.). First, 60 μL of the primary antibody solution was added to 60 μL of the reaction solution and mixed. Next, 100 μL of the mixed solution was added to the CML solidified plate and shaken at 25 ° C. and 300 rpm for 1 hour. After thoroughly washing the plate with a washing solution, 100 μL of a secondary antibody solution was added and shaken at 25 ° C. and 300 rpm for 1 hour. After thoroughly washing the plate with a washing solution, 100 μL of a coloring solution was added and shaken at 25 ° C. and 300 rpm for 10 minutes. Thereafter, 100 μL of a reaction stop solution was added to the plate, shaken at 25 ° C. and 300 rpm for 1 minute, and allowed to stand at 25 ° C. for 4 minutes. Absorbance at 450 nm was measured using a 96-well microplate reader, and the amount of CML contained in each reaction solution was calculated using a calibration curve. The blank was measured by adding a solvent instead of adding the sample solution.
ｓｅｃ−Ｏ−グルコシルハマウドールを用いた試験区では、ブランクに比べＣＭＬ生成量が減少しており、ｓｅｃ−Ｏ−グルコシルハマウドールがＣＭＬの生成を抑制していることが確認された。結果を表３に示す。 In the test section using sec-O-glucosyl hamaudol, the amount of CML produced was reduced compared to the blank, and it was confirmed that sec-O-glucosyl hamaudol suppressed the production of CML. The results are shown in Table 3.
実施例５
ペントシジン生成量の測定
実施例１で得たｓｅｃ−Ｏ−グルコシルハマウドールを用いて、ＡＧＥｓ抑制効果を確認するため下記方法でペントシジン生成量を測定した。７．５ｍｇ／ｍｌＢｏｃ−リジンおよび７．５ｍｇ／ｍｌＢｏｃ−アルギニンを含有する０．５Ｍリン酸バッファー液（ｐＨ７．２）（以下、アミノ酸液とする）１．０ｍｌ、５４ｍｇ／ｍｌＤＬ−グリセルアルデヒド液（以下、糖液とする）０．２５ｍｌおよび表１に示す組成のサンプル溶液０．２５ｍｌを混合し、３７℃で７日間静置した。反応液のペントシジン生成量を、ペントシジン測定キット「ＦＳＫペントシジン(登録商標)」（株式会社伏見製薬所）を用いて測定した。まず、反応液５０μＬを酵素剤チューブに添加し、５５℃で９０分間反応させた。つぎに、１００℃で１５分間処理し酵素を失活させた。室温まで冷却した後、補助剤５０μＬを添加し混合した。次に抗原固層プレートに混合液５０μＬおよび第一次抗体液５０μＬを添加した後、２５℃、３００ｒｐｍで１分間振とうし、３７℃で１時間静置した。プレートを洗浄液でよく洗浄した後、第二次抗体液１００μＬを加え、２５℃、３００ｒｐｍで１分間振とうした後、２５℃で１時間静置した。プレートを洗浄液でよく洗浄した後、発色液１００μＬを添加し、２５℃、３００ｒｐｍで１分間振とうした後、２５℃で９分間静置した。その後、反応停止液１００μＬを加え、２５℃、３００ｒｐｍで１分間振とうし、２５℃で４分間静置した。９６ウエルマイクロプレートリーダーを用いて４５０ｎｍの吸光度を測定し、各反応液に含まれるペントシジン量を検量線を用いて計算した。ブランクは、サンプル溶液を加える代わりに、溶媒を加え測定した。
Example 5
Measurement of Pentosidine Production Amount Using the sec-O-glucosylhamadol obtained in Example 1, the pentosidine production amount was measured by the following method in order to confirm the AGEs inhibitory effect. 0.5 ml phosphate buffer solution (pH 7.2) (hereinafter referred to as amino acid solution) containing 7.5 mg / ml Boc-lysine and 7.5 mg / ml Boc-arginine 1.0 ml, 54 mg / ml DL-glyceraldehyde solution 0.25 ml (hereinafter referred to as a sugar solution) and 0.25 ml of a sample solution having the composition shown in Table 1 were mixed and allowed to stand at 37 ° C. for 7 days. The amount of pentosidine produced in the reaction solution was measured using a pentosidine measurement kit “FSK Pentosidine (registered trademark) ” (Fushimi Pharmaceutical Co., Ltd.). First, 50 μL of the reaction solution was added to the enzyme agent tube and reacted at 55 ° C. for 90 minutes. Next, the enzyme was inactivated by treatment at 100 ° C. for 15 minutes. After cooling to room temperature, 50 μL of adjuvant was added and mixed. Next, 50 μL of the mixed solution and 50 μL of the primary antibody solution were added to the antigen solid layer plate, and then shaken at 25 ° C. and 300 rpm for 1 minute and allowed to stand at 37 ° C. for 1 hour. After thoroughly washing the plate with a washing solution, 100 μL of the secondary antibody solution was added, shaken at 25 ° C. and 300 rpm for 1 minute, and then allowed to stand at 25 ° C. for 1 hour. After thoroughly washing the plate with a washing solution, 100 μL of a coloring solution was added, shaken at 25 ° C. and 300 rpm for 1 minute, and then allowed to stand at 25 ° C. for 9 minutes. Thereafter, 100 μL of the reaction stop solution was added, shaken at 25 ° C. and 300 rpm for 1 minute, and allowed to stand at 25 ° C. for 4 minutes. Absorbance at 450 nm was measured using a 96-well microplate reader, and the amount of pentosidine contained in each reaction solution was calculated using a calibration curve. The blank was measured by adding a solvent instead of adding the sample solution.
ｓｅｃ−Ｏ−グルコシルハマウドールを用いた試験区では、ブランクに比べペントシジン生成量が減少しており、ｓｅｃ−Ｏ−グルコシルハマウドールがペントシジンの生成を抑制していることが確認された。結果を表４に示す。 In the test section using sec-O-glucosyl hamaudol, the amount of pentosidine produced was reduced compared to the blank, and it was confirmed that sec-O-glucosyl hamaudol suppressed the production of pentosidine. The results are shown in Table 4.
実施例６
散剤の製造
表５に示す割合で原材料を混合し、散剤を製造した。該散剤は、本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤、本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物、または本発明の経口摂取用組成物の一形態である。
Example 6
Production of powder The raw materials were mixed in the ratio shown in Table 5 to produce a powder. The powder is one form of the AGEs production inhibitor of the present invention, the pharmaceutical composition for preventing / treating diabetes of the present invention, or the composition for oral consumption of the present invention.
実施例７
錠剤の製造
表６に示す割合で原材料を混合した後、連続式打錠機（Ｐｉｃｃｏｌａ Ｂ−１０／ＲＩＶＡ社製）を用い、杵金型（φ８ｍｍ、Ｒ１２ｍｍ）、１錠あたりの重量１５０〜２００ｍｇ、回転盤の回転数１２ｒｐｍ、打錠圧４ｋＮの打錠条件で直接打錠し、錠剤を製造した。該錠剤は、本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤、本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物、または本発明の経口摂取用組成物の一形態である。
Example 7
Preparation of tablets After mixing the raw materials in the proportions shown in Table 6, using a continuous tableting machine (Piccola B-10 / RIVA), a die (φ8 mm, R12 mm), weight of 150 to 200 mg per tablet Tablets were manufactured directly by tableting under the tableting conditions of 12 rpm and a tableting pressure of 4 kN. The tablet is one form of the AGE production inhibitor of the present invention, the pharmaceutical composition for preventing / treating diabetes of the present invention, or the composition for oral consumption of the present invention.
実施例８
経口液剤の製造
表７に示す割合で原材料を蒸留水に溶解し、経口液剤を製造した。該経口液剤は、本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物、または経口摂取用組成物の一形態である。
Example 8
Production of oral solution The raw materials were dissolved in distilled water at the ratio shown in Table 7 to produce an oral solution. The oral solution is a form of the pharmaceutical composition for preventing / treating diabetes or the composition for oral intake of the present invention.
実施例９
化粧水の製造
表８に示す割合で原材料を蒸留水に溶解し、化粧水を製造した。該化粧水は、本発明の皮膚老化予防／改善用皮膚外用剤の一形態である。
Example 9
Manufacture of lotion The raw materials were dissolved in distilled water at the ratio shown in Table 8 to prepare lotion. The lotion is one form of the external preparation for skin aging prevention / amelioration of the present invention.
実施例１０
乳液の製造
表９に示す割合で原材料を混合し、乳液を製造した。該乳液は、本発明の皮膚老化予防／改善用皮膚外用剤の一形態である。
Example 10
Production of emulsion The raw materials were mixed in the proportions shown in Table 9 to produce an emulsion. The emulsion is one form of the external preparation for skin aging prevention / amelioration of the present invention.
実施例１１
散剤の製造
表１０に示す割合で原材料を混合し、散剤を製造した。該散剤は、本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤、本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物、または本発明の経口摂取用組成物の一形態である。
Example 11
Production of powder The raw materials were mixed in the proportions shown in Table 10 to produce a powder. The powder is one form of the AGEs production inhibitor of the present invention, the pharmaceutical composition for preventing / treating diabetes of the present invention, or the composition for oral consumption of the present invention.
実施例１２
化粧水の製造
表１１に示す割合で原材料を蒸留水に溶解し、化粧水を製造した。該化粧水は、本発明の皮膚老化予防／改善用皮膚外用剤の一形態である。
Example 12
Manufacture of lotion The raw materials were dissolved in distilled water at the ratio shown in Table 11 to prepare lotion. The lotion is one form of the external preparation for skin aging prevention / amelioration of the present invention.
Claims (19)
を有効成分として含有する終末糖化産物生成抑制剤。 Hamaudol derivatives represented by formula (1):
A terminal glycation product production inhibitor containing as an active ingredient.
を有効成分として含有する、糖尿病もしくは糖尿病合併症の予防および／または治療のための医薬組成物。 Hamaudol derivatives represented by formula (1):
A pharmaceutical composition for the prevention and / or treatment of diabetes or diabetic complications.
を有効成分として含有する非ヒト動物用医薬組成物。 Hamoudol derivatives represented by formula (1) for the prevention and / or treatment of diabetes or diabetic complications in non-human animals:
A pharmaceutical composition for non-human animals, containing as an active ingredient.
を非ヒト動物に投与することを含む、非ヒト動物における糖尿病もしくは糖尿病合併症を予防および／または治療する方法。 Hamaudol derivatives represented by formula (1):
A method for preventing and / or treating diabetes or diabetic complications in a non-human animal, comprising administering to the non-human animal.
を飲食品に配合または添加することを特徴とする、機能性飲食品の製造方法。 Hamaudol derivatives represented by formula (1):
A method for producing a functional food or drink, comprising blending or adding to the food or drink.
と担体を含有し、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、経口液剤、シロップ剤、経口ゼリー剤、口腔用錠剤、口腔用スプレー剤、口腔用半固形剤および含嗽剤からなる群より選ばれる剤形で提供される経口摂取用組成物。 Hamaudol derivatives represented by formula (1):
And a carrier, and an agent selected from the group consisting of tablets, capsules, granules, powders, oral solutions, syrups, oral jelly, oral tablets, oral sprays, oral semisolids, and mouthwashes A composition for oral consumption provided in a form.
を有効成分として含有する、皮膚老化の予防および／または改善のための皮膚外用剤。 Hamaudol derivatives represented by formula (1):
A topical skin preparation for the prevention and / or improvement of skin aging.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2014262462 | 2014-12-25 | ||
| JP2014262462 | 2014-12-25 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2016121123A true JP2016121123A (en) | 2016-07-07 |
Family
ID=56328069
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2015190018A Pending JP2016121123A (en) | 2014-12-25 | 2015-09-28 | Agent for inhibiting production of advanced glycation end products |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2016121123A (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107864860A (en) * | 2017-12-06 | 2018-04-03 | 赵腾骅 | A kind of cultural method for improving sec-o-glucosylhamaudol content in windproof callus |
| CN107951880A (en) * | 2017-12-05 | 2018-04-24 | 赵腾骅 | A kind of benzopyrone is used for the purposes that for aristolochic acid and the Chinese medicine containing aristolochic acid is attenuated |
-
2015
- 2015-09-28 JP JP2015190018A patent/JP2016121123A/en active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107951880A (en) * | 2017-12-05 | 2018-04-24 | 赵腾骅 | A kind of benzopyrone is used for the purposes that for aristolochic acid and the Chinese medicine containing aristolochic acid is attenuated |
| CN107864860A (en) * | 2017-12-06 | 2018-04-03 | 赵腾骅 | A kind of cultural method for improving sec-o-glucosylhamaudol content in windproof callus |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5538611B2 (en) | Maillard reaction inhibitor | |
| JP2018524398A (en) | Composition for preventing, improving or treating muscle diseases or improving muscle function | |
| JP5969738B2 (en) | Anti-glycation agent | |
| JP2015024982A (en) | Advanced glycation end products formation inhibitor | |
| WO2011043212A1 (en) | Ceramide production enhancer and moisturizing agent | |
| JP2016121123A (en) | Agent for inhibiting production of advanced glycation end products | |
| KR20200145757A (en) | A composition for preventing, improving or treating alcoholic gastritis comprising fraction of Apios Americana tuber extract and a method for preparing the same | |
| JP2017066052A (en) | Agent for inhibiting production of advanced glycation end product | |
| JP5403582B2 (en) | ATP production promoter | |
| JP2013107852A (en) | Maillard reaction inhibitor | |
| JP2013184974A (en) | Maillard reaction inhibitor and use thereof | |
| JP6122200B1 (en) | Anti-glycation composition | |
| JP2020143034A (en) | Maillard reaction inhibitor and ages cross-link cleavage accelerator | |
| JP2017066051A (en) | Agent for inhibiting production of advanced glycation end product | |
| JP6189080B2 (en) | Saccharification product formation inhibitor | |
| JP2014108931A (en) | Inhibitor of production of advanced glycation end product | |
| JP7398207B2 (en) | Toxic AGEs generation inhibitor | |
| JP2017066050A (en) | Agent for inhibiting production of advanced glycation end product | |
| JP6078348B2 (en) | CGI-58 expression promoter | |
| JP2011032177A (en) | Inhibitor of kit cleavage | |
| JP6101060B2 (en) | Saccharification product formation inhibitor | |
| JP6866354B2 (en) | Tie2 activation composition | |
| JP6306825B2 (en) | Saccharification product formation inhibitor | |
| JP7166840B2 (en) | Composition for promoting hair growth, preventing hair loss or improving cuticle, and wound healing agent | |
| JP7455350B2 (en) | Damage inhibitors, cosmetics, and food and beverages caused by air pollutants |