JP2016098200A - Novel lipophilic n-substituted norcantharimide derivatives and use thereof - Google Patents
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Abstract
Description
本開示は、Ｎ−置換ノルカンタリミド誘導体の新規な合成化合物、及び癌を治療するための医薬又は医薬組成物を製造するためのそれらの使用に関する。 The present disclosure relates to novel synthetic compounds of N-substituted norcantalimide derivatives and their use to produce a medicament or pharmaceutical composition for treating cancer.
マダラゲンセイから単離される活性化合物の１つ、カンタリジンは、強力なセリン／トレオニンタンパク質ホスファターゼ１（ＰＰ１）及びホスファターゼ２Ａ（ＰＰ２Ａ）阻害剤であり、インビトロ及びインビボの双方で抗癌特性を有することが示されている。しかしながら、腎臓及び肝臓に対して毒性があることも発見された。過去の研究は、正常な組織に対する重要な細胞毒性のない抗癌活性を示すカンタリジンの類似体及び／又は誘導体を特定することが試みられ、例えば、ノルカンタリジン及びノルカンタリミドが製造されている。カンタリジンが脱メチル化された、ノルカンタリジンは、腎毒性をほとんど有さないことが発見されるが、脱メチル化反応もまた、低い生理活性となる。ノルカンタリミドに関して、Ｎ位に長いアルキル鎖を有するその類似体は、アルキル鎖の疎水性により、改良された生体吸収が与えられるため、高められた生理活性を有することが提案されている。 One of the active compounds isolated from Madara Gensei, cantharidin is a potent serine / threonine protein phosphatase 1 (PP1) and phosphatase 2A (PP2A) inhibitor and has been shown to have anti-cancer properties both in vitro and in vivo. Has been. However, it was also found to be toxic to the kidney and liver. Past studies have attempted to identify analogs and / or derivatives of cantharidin that exhibit anti-cancer activity without significant cytotoxicity to normal tissues, for example, norcantharidin and norcantalimide have been produced. Norcantharidin, in which cantharidin is demethylated, is found to have little nephrotoxicity, but demethylation reactions also have low bioactivity. With respect to norcantalimide, its analogs having a long alkyl chain at the N position have been proposed to have enhanced bioactivity because of the hydrophobicity of the alkyl chain, which provides improved bioabsorption.
従って、関連技術において、正常細胞ではなく、癌性細胞に対する、優れた選択的な細胞毒性を示すカンタリジンの類似体及び／又は誘導体の必要性が存在する。 Accordingly, there is a need in the related art for cantharidin analogs and / or derivatives that exhibit excellent selective cytotoxicity against cancerous cells rather than normal cells.
本開示は、２つのＮ−置換ノルカンタリミド誘導体が、癌性細胞の成長を阻害し得るとの予想外の発見に少なくとも部分的に基づく。本発明の結果は、特定された２つのＮ−置換ノルカンタリミド誘導体が、癌の治療のための治療薬としての使用に可能性があるリード化合物であるということを示唆する。 The present disclosure is based at least in part on the unexpected discovery that two N-substituted norcantalimide derivatives can inhibit the growth of cancerous cells. The results of the present invention suggest that the two identified N-substituted norcantalimide derivatives are potential lead compounds for use as therapeutics for the treatment of cancer.
従って、本開示の第１の態様は、式（Ｉ）の化合物を対象とする。
１つの例では、式（Ｉ）の化合物はＮ−ファルネシルオキシ−７−オキサビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２，３−ジカルボキシイミド（ＮＯＣ１５）である。別の例では、式（Ｉ）の化合物は、Ｎ−ファルネシル−７−オキサビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２，３−ジカルボキシイミド（ＮＣ１５）である。 In one example, the compound of formula (I) is N-farnesyloxy-7-oxabicyclo [2.2.1] heptane-2,3-dicarboximide (NOC15). In another example, the compound of formula (I) is N-farnesyl-7-oxabicyclo [2.2.1] heptane-2,3-dicarboximide (NC15).
本開示の第２の態様は、それゆえ、癌を治療するための医薬組成物を対象とする。医薬組成物は、上記の式（Ｉ）の化合物の有効量および薬学的に許容できる賦形剤を含む。 The second aspect of the present disclosure is therefore directed to a pharmaceutical composition for treating cancer. The pharmaceutical composition comprises an effective amount of a compound of formula (I) as described above and a pharmaceutically acceptable excipient.
本開示の医薬組成物によって治療され得る癌は、白血病、肝臓癌、膀胱癌、結腸癌、腎癌、卵巣癌、子宮頚部癌、子宮内膜癌、前立腺癌、すい臓癌、肺癌、乳癌、黒色腫、及び扁平上皮癌（ＳＣＣ）からなる群から選択される。１つの例では癌が白血病である。別の例では、癌が肝臓癌である。 Cancers that can be treated by the pharmaceutical composition of the present disclosure include leukemia, liver cancer, bladder cancer, colon cancer, kidney cancer, ovarian cancer, cervical cancer, endometrial cancer, prostate cancer, pancreatic cancer, lung cancer, breast cancer, black Selected from the group consisting of tumor and squamous cell carcinoma (SCC). In one example, the cancer is leukemia. In another example, the cancer is liver cancer.
本発明の化合物（すなわち、式（Ｉ）の化合物）は、医薬組成物の総重量に基づき、約０．１〜９９重量％のレベルで存在する。いくつかの実施形態において、本発明の化合物は医薬組成物の総重量に基づき、少なくとも１重量％のレベルで存在する。ある実施形態において、本発明の化合物は、医薬組成物の総重量に基づき、少なくとも５重量％のレベルで存在する。さらなる他の実施形態において、本発明の化合物は、医薬組成物の総重量に基づき、少なくとも１０重量％のレベルで存在する。さらにまた他の実施形態において、本発明の化合物は、医薬組成物の総重量に基づき、少なくとも２５重量％のレベルで存在する。 The compounds of the invention (ie, compounds of formula (I)) are present at a level of about 0.1-99% by weight, based on the total weight of the pharmaceutical composition. In some embodiments, the compound of the invention is present at a level of at least 1% by weight, based on the total weight of the pharmaceutical composition. In certain embodiments, the compound of the invention is present at a level of at least 5% by weight, based on the total weight of the pharmaceutical composition. In still other embodiments, the compounds of the invention are present at a level of at least 10% by weight, based on the total weight of the pharmaceutical composition. In yet other embodiments, the compounds of the invention are present at a level of at least 25% by weight, based on the total weight of the pharmaceutical composition.
いくつかの実施形態において、医薬又は医薬組成物は、癌の治療を改善し又は癌性細胞の成長の抑制を助けるのに知られる別の作用物質をさらに含む。好ましくは、本発明の医薬又は医薬組成物は、さらに化学療法剤を含む。 In some embodiments, the medicament or pharmaceutical composition further comprises another agent known to improve the treatment of cancer or to help suppress the growth of cancerous cells. Preferably, the medicament or pharmaceutical composition of the present invention further comprises a chemotherapeutic agent.
それゆえ、本開示の第３の態様は、癌を有する、又は有すると疑われる対象を治療する方法を提供する。その方法は、癌の成長を抑え又は妨げるために、対象に本開示の医薬組成物を投与する工程を含む。この方法によって治療しうる癌は、白血病、肝臓癌、膀胱癌、結腸癌、腎癌、卵巣癌，子宮頚部癌、子宮内膜癌、前立腺癌、すい臓癌、肺癌、乳癌、黒色腫、又は扁平上皮癌（ＳＣＣ）の何れかである。１つの例では、癌が白血病である。別の例では、癌が肝臓癌である。対象は、哺乳動物であってもよく、好ましくはヒトである。 Therefore, the third aspect of the present disclosure provides a method of treating a subject having or suspected of having cancer. The method includes administering to the subject a pharmaceutical composition of the present disclosure to suppress or prevent cancer growth. Cancers that can be treated by this method are leukemia, liver cancer, bladder cancer, colon cancer, kidney cancer, ovarian cancer, cervical cancer, endometrial cancer, prostate cancer, pancreatic cancer, lung cancer, breast cancer, melanoma, or squamous Any of epithelial cancer (SCC). In one example, the cancer is leukemia. In another example, the cancer is liver cancer. The subject may be a mammal, preferably a human.
いくつかの実施形態において、前記方法は、式（Ｉ）の化合物の投与前、その投与と一緒に、及び／又はその投与後、癌の治療を改良することが知られている別の作用物質を、対象に投与することをさらに含む。いくつかの例では、従来の医薬組成物は、化学療法剤と一緒に投与される。 In some embodiments, the method comprises another agent known to improve the treatment of cancer prior to, with and / or after administration of a compound of formula (I). Is further administered to the subject. In some examples, conventional pharmaceutical compositions are administered with a chemotherapeutic agent.
本発明の１以上の実施形態の詳細は、以下の本明細書において説明される。本発明の他の特徴及び利点は、詳細な説明から、及び特許請求の範囲から、明らかとなる。 The details of one or more embodiments of the invention are set forth in the description below. Other features and advantages of the invention will be apparent from the detailed description, and from the claims.
前述の一般的説明及び以下の詳細な説明の双方は、実例によるものであり、主張された本発明のさらなる説明を提供することを意図することを理解されたい。 It is to be understood that both the foregoing general description and the following detailed description are exemplary and are intended to provide further explanation of the claimed invention.
本特許又は出願書類は、カラーで製作された図を含む。カラーの図面と、本特許又は特許出願公開のコピーは、請求し、必要な手数料を支払うと、庁によって提供されるだろう。 This patent or application file contains a drawing made in color. Color drawings and copies of this patent or patent application publication will be provided by the Office upon request and payment of the necessary fee.
本発明の説明は、添付の図面を考慮して読まれる以下の詳細な説明から、より理解できるだろう。 The description of the present invention will be better understood from the following detailed description read in light of the accompanying drawings.
添付の図面に関連して以下に提供される詳細な説明は、本発明の説明として意図され、本発明が作成される又は利用され得る唯一の形態であることは意図されない。 The detailed description provided below in connection with the accompanying drawings is intended as a description of the present invention and is not intended to be the only form in which the present invention may be made or utilized.
便宜のため、詳細な説明、実施例、及び特許請求の範囲において採用される特定の用語は、ここに集められる。本明細書で特段の記載がない限り、本開示において採用される科学的及び技術的専門用語は、当業者によって共通に理解され、使用される意味を有すだろう。また、文脈によって特段の必要がない限り、単数の用語は、同じものの複数形を含み、複数の用語は単数を含むであろうことが理解されるだろう。特に、本願明細書及び特許請求の範囲で使用する場合、単数形「ａ」及び「ａｎ」は、文脈が明らかに、そうでないことを意図しない限り、複数の言及を含む。また、本願明細書、及び特許請求の範囲で使用する場合、「少なくとも１つの」及び「１以上の」との用語は、同じ意味を有し、１、２、３、又はそれより大きい数を含む。 For convenience, certain terms employed in the detailed description, examples, and claims are collected here. Unless otherwise stated herein, scientific and technical terminology employed in this disclosure will have the meanings commonly understood and used by those skilled in the art. It will also be understood that unless otherwise required by context, singular terms shall include the plural of the same and plural terms shall include the singular. In particular, as used in the specification and claims, the singular forms “a” and “an” include plural references unless the context clearly dictates otherwise. Also, as used in this specification and in the claims, the terms “at least one” and “one or more” have the same meaning and represent 1, 2, 3, or greater numbers. Including.
本発明の幅広い範囲を説明する数値範囲及びパラメータが近似値であるにもかかわらず、具体例において説明する数値は、できるだけ正確に報告される。どんな数値でも、しかしながら、本質的に、それぞれの試験測定において発見される標準偏差から必ず生じる、ある一定の誤差が含まれる。また、本願明細書で使用する場合、「約」との用語は、一般に、与えられた数値又は範囲の１０％、５％、１％、又は０．５％内を意味する。あるいは、「約」との用語は、当業者によって考慮される際、許容できる平均値の標準誤差内を意味する。作用する／実施する例以外において、又は特段の明確な特定がない限り、本願明細書に開示される、数値範囲、量、値、並びに物質の量、継続時間、温度、動作状況、及び量の比などのパーセンテージのようなパーセンテージの全ては、「約」との用語によって、全ての場合において、調整されていることと理解されるだろう。従って、それと反対に示されない限り、本開示及び特許請求の範囲において説明する数値パラメータは、要望通り変更できる近似値である。少なくとも、それぞれの数値パラメータは、少なくとも、報告された有効数字を考慮して、及び通常の丸め技術を適用することによって、解釈されるべきである。 Although the numerical ranges and parameters describing the broad scope of the invention are approximate, the numerical values described in the examples are reported as accurately as possible. Any numerical value, however, inherently contains certain errors necessarily resulting from the standard deviation found in their respective testing measurements. Also, as used herein, the term “about” generally means within 10%, 5%, 1%, or 0.5% of a given numerical value or range. Alternatively, the term “about” means within an acceptable standard error of the average value when considered by one skilled in the art. Except for the example of working / implementing, or unless otherwise specified, numerical ranges, amounts, values, and quantities, durations, temperatures, operating conditions, and amounts of materials disclosed herein are It will be understood that all percentages, such as ratios, etc. are adjusted in all cases by the term “about”. Accordingly, unless indicated to the contrary, the numerical parameters set forth in the present disclosure and claims are approximations that can be varied as desired. At a minimum, each numerical parameter should be interpreted at least in view of the reported significant figures and by applying conventional rounding techniques.
「阻害すること又は阻害」又は「抑制すること又は抑制」との用語は、本願明細書で使用する場合、癌性細胞の、少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％の成長を止めるために、本発明の化合物を投与することを示し、それらの倍増を防ぎ、それゆえに、癌の大きさの縮小という結果になる；このように、「阻害すること又は阻害」又は「抑制すること又は抑制」との用語は、本願明細書で使用する場合も、癌性細胞を殺傷し、又はアポトーシスを誘導することを示す。 The terms “inhibit or inhibit” or “suppress or suppress” as used herein are at least 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70% of cancerous cells. %, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, or 99% of the compounds of the present invention are shown to be stopped, preventing their doubling and hence the size of the cancer As such, the terms “inhibit or inhibit” or “suppress or suppress”, as used herein, also kill cancerous cells or apoptosis. Indicates to induce.
本願明細書で使用する場合、「治療すること」との用語は、腫瘍に伴う症候、二次的障害又は病態を予防すること、改善すること、軽減すること、及び／又は管理することを、部分的に又は完全に、包含する。「治療すること」との用語は、本願明細書で使用する場合、部分的に又は完全に、腫瘍の１以上の症候、二次的障害、又は特徴について、緩和し、改善し、軽減し、発症を遅らせ、進行を抑制し、重症度を低減し、及び／又は発生率を低減する目的で、腫瘍に伴う症候、二次的障害、又は病態を有する対象への、本開示に従った、式（Ｉ）の化合物の適用又は投与を示す。腫瘍に伴う症候、二次的障害、及び／又は病態は、これらに限定されないが、説明ができない体重減少、熱、疲労、疼痛、及び身体機能の変化を含む。治療は、腫瘍に伴う症候、二次的障害、及び／又は病態を発症するリスクの減少を目的として、このような症候、障害、及び／又は病態の早期の兆候のみが存在する対象に投与されてもよい。治療は、一般的に、もし１以上の症候、又は臨床マーカーが減少されれば、本明細書で定義される用語として、「有効なもの」である。あるいは、もし、症候、障害、又は病態の進行が減少され、又は止められれば、治療が「有効なもの」である。 As used herein, the term “treating” refers to preventing, ameliorating, reducing and / or managing symptoms, secondary disorders or conditions associated with a tumor, Including partially or completely. The term “treating”, as used herein, alleviates, ameliorates, alleviates, partially or completely, one or more symptoms, secondary disorders, or characteristics of a tumor; In accordance with the present disclosure to subjects with symptoms, secondary disorders, or pathologies associated with tumors for the purpose of delaying onset, inhibiting progression, reducing severity, and / or reducing the incidence, Application or administration of a compound of formula (I) is shown. Symptoms, secondary disorders, and / or conditions associated with a tumor include, but are not limited to, weight loss, fever, fatigue, pain, and changes in physical function that cannot be explained. Treatment is administered to subjects with only early signs of such symptoms, disorders, and / or pathologies with the aim of reducing the risk of developing symptoms, secondary disorders, and / or pathologies associated with the tumor. May be. Treatment is generally “effective” as defined herein if one or more symptoms or clinical markers are reduced. Alternatively, treatment is “effective” if the progression of symptoms, disorders, or conditions is reduced or stopped.
「有効量」との用語は、本願明細書で使用する場合、癌の治療に関して所望の治療的に望ましい結果を達成するために、投薬時、及び必要な期間で有効となる量を示す。 The term “effective amount” as used herein refers to an amount that is effective at the time of dosing and for the required period of time to achieve the desired therapeutically desired result for the treatment of cancer.
「化合物」、「組成物」、「作用物質」、又は「医薬」との用語は、対象（ヒト又は動物）に投与される際、局部の及び／又は全身性の作用による所望の薬理学的な、及び／又は生理効果を引き起こす化合物又は組成物を示すため、本明細書においてほとんど同義で使用される。 The term “compound”, “composition”, “agent”, or “medicament” refers to a desired pharmacological effect due to local and / or systemic effects when administered to a subject (human or animal). Are used almost synonymously herein to indicate compounds or compositions that cause and / or cause physiological effects.
「投与される」、「投与する」、又は「投与」との用語は、本発明の化合物又は組成物を直接に投与すること、又は体内で当量の活性化合物を形成するプロドラッグ、誘導体、又は類似体を投与することの何れかの意味を示すため、本明細書において、ほとんど同義で使用される。 The terms “administered”, “administering”, or “administration” refer to the direct administration of a compound or composition of the invention, or a prodrug, derivative, or In this specification, it is used almost synonymously to indicate any meaning of administering an analog.
用語「対象」又は「患者」は、本発明の組成物及び／又は方法で治療可能であるヒトの種を含む動物を示す。「対象」又は「患者」は、一方の性別が特に示されていない限り、男性及び女性の双方を示すことを意図する。従って、「対象」又は「患者」との用語は、本開示の化合物による治療から利益を得られる、任意の哺乳動物、好ましくはヒトを含む。 The term “subject” or “patient” refers to an animal comprising a human species that is treatable with the compositions and / or methods of the invention. “Subject” or “patient” is intended to indicate both males and females unless one gender is specifically indicated. Thus, the term “subject” or “patient” includes any mammal, preferably a human, that would benefit from treatment with a compound of the present disclosure.
本開示は、２つの親油性のＮ−置換ノルカンタリミド誘導体が、正常な細胞に影響を及ぼさずに、癌性細胞、特に白血病の癌細胞の成長を阻害し得ることの予期しない発見に、少なくとも部分的に基づく。それゆえ、これらの２つのＮ−置換ノルカンタリミド誘導体は、白血病を含む、癌を治療するための治療薬として使用する、可能性のあるリード化合物である。 The present disclosure at least partially addresses the unexpected discovery that two lipophilic N-substituted norcantalimide derivatives can inhibit the growth of cancerous cells, particularly leukemia cancer cells, without affecting normal cells. Based on. Therefore, these two N-substituted norcantalimide derivatives are potential lead compounds for use as therapeutic agents for treating cancer, including leukemia.
本開示の１つの態様は、それゆえ、式（Ｉ）の化合物を対象とする。
１つの好ましい例は、式（Ｉ）の化合物が、Ｎ−ファルネシルオキシ−７−オキサビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２，３−ジカルボキシイミド（化合物９又はＮＯＣ１５）である。別の好ましい例は、式（Ｉ）の化合物が、Ｎ−ファルネシル−７−オキサビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２，３−ジカルボキシイミド（化合物１８又はＮＣ１５）である。 In one preferred example, the compound of formula (I) is N-farnesyloxy-7-oxabicyclo [2.2.1] heptane-2,3-dicarboximide (Compound 9 or NOC15). Another preferred example is that the compound of formula (I) is N-farnesyl-7-oxabicyclo [2.2.1] heptane-2,3-dicarboximide (Compound 18 or NC15).
ＮＯＣ１５及びＮＣ１５は、本開示の実施例１において説明する、それぞれの合成スキーム定義されている、以下の工程によって、それぞれ製造され得る。 NOC15 and NC15 can be respectively produced by the following steps defined in the respective synthesis schemes described in Example 1 of the present disclosure.
１つの実施形態によれば、スキーム１は、ＮＯＣ１５を含むＮＯ−置換ノルカンタリミド誘導体の製造が採用される。特に、５，６−デヒドロノルカンタリジン（５）は、出発物質として、フラン（３）及び無水マレイン酸（４）を用いた、以下のＤｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ反応によって、はじめに製造される。次いで、化合物５は、水素化されてノルカンタリジン（２）を与え、次いで、室温で、ドライメタノール中、ナトリウムメトキシドの存在下でヒドロキシルアミン塩酸塩と反応され、Ｎ−ヒドロキシノルカンタリミド（６）を製造する。Ｎ−ヒドロキシノルカンタリミド（６）は、次いで、Ｋ２ＣＯ３の存在下で、ファルネシル臭化物と反応され、Ｎ−ファルネシルオキシ−７−オキサビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２，３−ジカルボキシイミド（化合物９又はＮＯＣ１５）を製造する。 According to one embodiment, Scheme 1 employs the production of NO-substituted norcantalimide derivatives comprising NOC15. In particular, 5,6-dehydronorcantharidin (5) is initially prepared by the following Diels-Alder reaction using furan (3) and maleic anhydride (4) as starting materials. Compound 5 is then hydrogenated to give norcantharidin (2) and then reacted with hydroxylamine hydrochloride in the presence of sodium methoxide in dry methanol at room temperature to yield N-hydroxynorcantalimide ( 6) is manufactured. N- hydroxy nor canthaxanthin Li bromide (6), then, in the presence of K 2 CO 3, is reacted with farnesyl bromide, N- farnesyl-7-oxabicyclo [2.2.1] heptane-2,3 -Dicarboximide (compound 9 or NOC15) is prepared.
スキーム１。ＮＯＣ１５の合成。
スキーム１における試薬及び条件は、以下のとおりである：（ａ）エーテル、室温、４８時間；（ｂ）３ａｔｍ Ｈ２、１０％ Ｐｄ／Ｃ、ＴＨＦ、室温、８時間；（ｃ）ＮａＯＣＨ３、ＮＨ２ＯＨ・ＨＣｌ、ＭｅＯＨ、室温、２０時間；（ｄ）Ｋ２ＣＯ３、ファルネシル臭化物、アセトン、還流、８〜１０時間。 The reagents and conditions in Scheme 1 are as follows: (a) ether, room temperature, 48 hours; (b) 3 atm H 2 , 10% Pd / C, THF, room temperature, 8 hours; (c) NaOCH 3 , NH 2 OH · HCl, MeOH, room temperature, 20 hours; (d) K 2 CO 3 , farnesyl bromide, acetone, reflux, 8-10 hours.
別の実施形態によれば、スキーム２は、ＮＣ１５を含むＮ−置換ノルカンタリミド誘導体の製造に採用される。スキーム２は、フラン（３）及びマレイミド（１３）がトルエン中で反応することで開始され、ジヒドロキシノルカンタリミド（１４）を与える。次いで、ジヒドロキシノルカンタリミド（１４）は、水素化され、ノルカンタリミド（１５）を生成する。次いで、ノルカンタリミド（１５）は、Ｋ２ＣＯ３の存在下でファルネシル臭化物と反応され、Ｎ−ファルネシル−７−オキサビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２，３−ジカルボキシイミド（化合物１８又はＮＣ１５）を製造する。 According to another embodiment, Scheme 2 is employed for the preparation of N-substituted norcantalimide derivatives comprising NC15. Scheme 2 begins with furan (3) and maleimide (13) reacting in toluene to give dihydroxynorcantalimide (14). Dihydroxynorcantalimide (14) is then hydrogenated to produce norcantalimide (15). Norcantalimide (15) is then reacted with farnesyl bromide in the presence of K 2 CO 3 to give N-farnesyl-7-oxabicyclo [2.2.1] heptane-2,3-dicarboximide (compound 18 or NC15).
スキーム２。ＮＣ１５の合成。
スキーム２における試薬及び条件は、以下のとおりである：（ａ）トルエン、８０℃、６時間；（ｂ）３ａｔｍ Ｈ２、１０％ Ｐｄ／Ｃ、ＴＨＦ、室温、８〜４８時間；（ｃ）Ｋ２ＣＯ３、ファルネシル臭化物、アセトン、還流、８〜１０時間。 The reagents and conditions in Scheme 2 are as follows: (a) toluene, 80 ° C., 6 hours; (b) 3 atm H 2 , 10% Pd / C, THF, room temperature, 8-48 hours; (c) K 2 CO 3, farnesyl bromide, acetone, reflux, 8-10 hours.
白血病、肝臓癌、膀胱癌、結腸癌、腎癌、卵巣癌、子宮頚部癌、子宮内膜癌、前立腺癌、すい臓癌、肺癌、乳癌、黒色腫、及び扁平上皮癌（ＳＣＣ）のような癌性細胞の成長は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０μＭのような約１〜２０μＭの濃度で、式（Ｉ）の化合物によって阻害され、又は抑制され得る。１つの例では、肝臓癌性細胞のエキソビボ成長は、約８．２μＭのＮＯＣ１５（化合物９）で、約５０％阻害されるのに対して、正常な肝臓細胞は影響を受けない。さらに別の例では、肝臓癌性細胞のエキソビボ成長は、ＮＯＣ１５（化合物９）によって、約１０．７μＭの濃度で、約５０％阻害される。さらなる例では、白血病細胞のエキソビボ成長は、約８．３μＭで、約５０％抑制される。さらに別の例では、白血病細胞（Ｌ１２１０）のエキソビボ成長は、約１．６μＭのＮＣ１５（化合物１８）によって、約５０％抑制される。他の例では、Ｌ１２１０細胞のエキソビボ成長は、約２．６μＭのＮＣ１５（化合物１８）によって、約５０％抑制される。 Cancers such as leukemia, liver cancer, bladder cancer, colon cancer, kidney cancer, ovarian cancer, cervical cancer, endometrial cancer, prostate cancer, pancreatic cancer, lung cancer, breast cancer, melanoma, and squamous cell carcinoma (SCC) Sex cell growth is about 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, or 20 μM. It can be inhibited or suppressed by compounds of formula (I) at a concentration of 1-20 μM. In one example, ex vivo growth of liver cancerous cells is inhibited by about 50% with about 8.2 μM NOC15 (Compound 9), whereas normal liver cells are not affected. In yet another example, ex vivo growth of liver cancerous cells is inhibited by NOC15 (Compound 9) at a concentration of about 10.7 μM by about 50%. In a further example, ex vivo growth of leukemia cells is suppressed by about 50% at about 8.3 μM. In yet another example, ex vivo growth of leukemic cells (L1210) is inhibited by about 1.6% by about 1.6 μM NC15 (compound 18). In another example, ex vivo growth of L1210 cells is inhibited by about 50% by about 2.6 μM NC15 (Compound 18).
従って、本開示は、それらに限定されないが、白血病、肝臓癌、膀胱癌、結腸癌、腎癌、卵巣癌、子宮頚部癌、子宮内膜癌、前立腺癌、すい臓癌、肺癌、乳癌、黒色腫、及び扁平上皮癌（ＳＣＣ）を含む、癌を治療するのに好適な医薬組成物を提供する。１つの好ましい例において、癌は白血病である。別の好ましい例において、癌は肝臓癌である。 Accordingly, the present disclosure is not limited thereto, but includes leukemia, liver cancer, bladder cancer, colon cancer, kidney cancer, ovarian cancer, cervical cancer, endometrial cancer, prostate cancer, pancreatic cancer, lung cancer, breast cancer, melanoma And a pharmaceutical composition suitable for treating cancer, including squamous cell carcinoma (SCC). In one preferred example, the cancer is leukemia. In another preferred example, the cancer is liver cancer.
医薬組成物は、式（Ｉ）の化合物の有効量及び薬学的に許容できる賦形剤を含む。一般的に、式（Ｉ）の化合物は、医薬組成物の総重量に基づき約０．１〜９９重量％のレベルで存在する。いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、医薬組成物の総重量に基づき、少なくとも１重量％のレベルで存在する。ある実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、医薬組成物の総重量に基づき、少なくとも５重量％のレベルで存在する。さらなる他の実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、医薬組成物の総重量に基づき、少なくとも１０重量％のレベルで存在する。さらに他の実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、医薬組成物の総重量に基づき、少なくとも２５重量％のレベルで存在する。 The pharmaceutical composition comprises an effective amount of a compound of formula (I) and a pharmaceutically acceptable excipient. Generally, the compound of formula (I) is present at a level of about 0.1 to 99% by weight, based on the total weight of the pharmaceutical composition. In some embodiments, the compound of formula (I) is present at a level of at least 1% by weight, based on the total weight of the pharmaceutical composition. In certain embodiments, the compound of formula (I) is present at a level of at least 5% by weight, based on the total weight of the pharmaceutical composition. In still other embodiments, the compound of formula (I) is present at a level of at least 10% by weight, based on the total weight of the pharmaceutical composition. In still other embodiments, the compound of formula (I) is present at a level of at least 25% by weight, based on the total weight of the pharmaceutical composition.
本発明の医薬組成物は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，ｅｄ．Ａｌｆｏｎｏｓｏ Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ（１９８５）において説明されるような、許容できる製薬の手順に従って調製されてもよい。薬学的に許容できる賦形剤は、製剤において他の成分と親和性があり、生物学的に許容できるものである。 The pharmaceutical composition of the present invention is disclosed in Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th edition, ed. Alfonoso R.D. It may be prepared according to acceptable pharmaceutical procedures, as described in Gennaro, Mack Publishing Company, Easton, Pa (1985). Pharmaceutically acceptable excipients are those that are compatible with other ingredients in the formulation and biologically acceptable.
医薬組成物は、これらに限定されないが、錠剤、カプセル、及びサシェ剤を含む固形の剤形に製剤されてもよい。それぞれの錠剤は、微結晶セルロース、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、第二リン酸カルシウム、及びグリシンのような種々の賦形剤を；デンプン、アルギン酸、及び特定のケイ酸塩のような種々の崩壊剤と一緒に；ポリビニルピロリドン、スクロース、ゼラチン、及びアラビアゴムのような造粒結合剤と一緒に含んでもよい。加えて、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、及びタルクのような平滑剤が加えられてもよい。原料は、これに関しても、高分子量のポリエチレングリコールと同様に、ラクトース、又は乳糖を含む。前述の固形の剤形は、任意の成分の放散速度を調整するために、任意に、腸用コーティング、及びコーティングのようなコーティング、及びシェルを含有してもよい。そのようなコーティングの例は、当該技術分野で周知である。１つの例では、本開示の医薬組成物は、錠剤として製剤される。別の例において、本開示の医薬組成物は、軟質及び硬質ゼラチンカプセルに封入された、又は生分解性の医薬的サシェ剤に詰められた粉末である。水性懸濁液及び／又はエリキシル剤が、経口投与のために所望される際、有効成分は、種々の甘味料、又は着香剤、着色剤、又は染料と、もし所望するならの乳化及び／又は懸濁剤も、水、エタノール、プロピレングリコール、グリセリン、及びこれらの組合せのような希釈剤と一緒に組み合わせてもよい。 The pharmaceutical composition may be formulated into solid dosage forms including, but not limited to, tablets, capsules, and sachets. Each tablet contains various excipients such as microcrystalline cellulose, sodium citrate, calcium carbonate, dicalcium phosphate, and glycine; and various disintegrants such as starch, alginic acid, and certain silicates. Together; may be included with a granulating binder such as polyvinylpyrrolidone, sucrose, gelatin, and gum arabic. In addition, smoothing agents such as magnesium stearate, sodium lauryl sulfate, and talc may be added. In this respect as well, the raw material contains lactose or lactose as well as the high molecular weight polyethylene glycol. The aforementioned solid dosage forms may optionally contain a coating, such as an enteric coating, and a coating, and a shell to adjust the release rate of any component. Examples of such coatings are well known in the art. In one example, the pharmaceutical composition of the present disclosure is formulated as a tablet. In another example, the pharmaceutical composition of the present disclosure is a powder encapsulated in soft and hard gelatin capsules or packed in a biodegradable pharmaceutical sachet. When aqueous suspensions and / or elixirs are desired for oral administration, the active ingredient may be various sweeteners, or flavoring agents, coloring agents, or dyes, and if desired, emulsifying and / or Alternatively, suspending agents may also be combined with diluents such as water, ethanol, propylene glycol, glycerin, and combinations thereof.
いくつかの実施形態において、本開示の医薬組成物は、経口投与のための液体の剤形である。液体製剤は、所望のｐＨを維持するために、さらに、緩衝剤を含んでもよい。液体の剤形は、軟質ゼラチンカプセルに満たされてもよい。例えば、液体は、式（Ｉ）の化合物、それらの薬学的に許容できる誘導体、立体異性体、代謝産物、塩、又は溶媒和物、又はこれらの組合せを保有する、溶液、懸濁液、エマルション、マイクロエマルション、沈殿物、又は任意の所望の液体媒体を含んでもよい。液体は、放出時に薬品を含有するエマルション又は分散相を形成するために、式（Ｉ）の化合物の溶解性を改良するように設計されてもよい。そのような形態において、有効成分は、それらに限定されないが、上記のとおりのものを含む、少なくとも１つの薬学的に許容できる賦形剤と混合される。 In some embodiments, a pharmaceutical composition of the present disclosure is a liquid dosage form for oral administration. The liquid formulation may further comprise a buffer to maintain the desired pH. Liquid dosage forms may be filled into soft gelatin capsules. For example, a liquid can be a solution, suspension, emulsion that carries compounds of formula (I), pharmaceutically acceptable derivatives, stereoisomers, metabolites, salts, or solvates thereof, or combinations thereof. , Microemulsions, precipitates, or any desired liquid medium. The liquid may be designed to improve the solubility of the compound of formula (I) to form an emulsion or dispersed phase containing the drug upon release. In such form, the active ingredient is mixed with at least one pharmaceutically acceptable excipient, including but not limited to those described above.
いくつかの実施形態において、本開示の医薬組成物は、非経口投与のための、例えば、静脈内、筋肉内、皮下、又は腹腔内注射によって投与できる無菌液、又は懸濁液である液体の剤形である。無菌の注射剤又は懸濁液を製造するための、好適な希釈剤又は溶媒は、これらに限定されないが、１，３−ブタンジオール、マンニトール、水、リンガー溶液、及び等張性の塩化ナトリウム溶液を含む。オレイン酸、及びそのグリセリド誘導体のような脂肪酸も、オリーブ油又はヒマシ油のような天然の薬剤的に許容できる油として、注射剤を調製するために有用である。これらの油剤又は懸濁液は、アルコール希釈剤若しくはカルボキシメチルセルロース、又は同様の分散剤も含有してもよい。他の一般的に使用されるＴｗｅｅｎ若しくはＳｐａｎのような界面活性剤、若しくは他の同様の乳化剤、又は薬学的に許容できる剤形を製剤する際に一般的に使用される生物学的利用能促進剤も、製剤の目的で使用され得る。 In some embodiments, a pharmaceutical composition of the present disclosure is a liquid that is a sterile liquid or suspension that can be administered for parenteral administration, eg, by intravenous, intramuscular, subcutaneous, or intraperitoneal injection. It is a dosage form. Suitable diluents or solvents for making sterile injectable solutions or suspensions include, but are not limited to, 1,3-butanediol, mannitol, water, Ringer's solution, and isotonic sodium chloride solution including. Fatty acids such as oleic acid and its glyceride derivatives are also useful for preparing injections as natural pharmaceutically acceptable oils such as olive oil or castor oil. These oils or suspensions may also contain an alcohol diluent or carboxymethyl cellulose, or similar dispersing agents. Bioavailability enhancements commonly used in formulating other commonly used surfactants such as Tween or Span, or other similar emulsifiers, or pharmaceutically acceptable dosage forms Agents can also be used for formulation purposes.
いくつかの他の実施形態において、本開示の医薬組成物は、経粘膜投与のための液体の剤形であり、本発明の前記医薬又は前記医薬組成物も、口腔粘膜経由の薬物送達のための投薬単位の口腔内及び／又は舌下薬品のような、粘膜適用のために、様々な剤形に製剤されてもよい。実に様々な生分解性の重合体の賦形剤は、薬学的に許容できる、好適な付着度、及び所望の薬品拡散プロファイルの双方を提供し、投与される活性薬剤、及び口腔内及び／又は舌下薬品の投薬単位において存在し得る、任意の他の構成成分と親和性があるものが使用されてもよい。一般的に、重合体の賦形剤は、口腔の粘膜の湿潤面に付着する親水性のポリマーを含む。重合体の賦形剤の例は、これらに限定されないが、アクリル酸ポリマー、及びコポリマー；加水分解ポリビニルアルコール；ポリエチレンオキシド；ポリアクリレート；ビニルポリマー及びコポリマー；ポリビニルピロリドン；デキストラン；グアーガム；ペクチン；デンプン；並びにセルロース誘導体ポリマーを含有する。 In some other embodiments, the pharmaceutical composition of the present disclosure is a liquid dosage form for transmucosal administration, and the medicament or the pharmaceutical composition of the present invention is also for drug delivery via the oral mucosa. The dosage unit may be formulated into various dosage forms for mucosal application, such as buccal and / or sublingual drugs. A wide variety of biodegradable polymer excipients provide both pharmaceutically acceptable, suitable adhesion, and desired drug diffusion profiles, active agents to be administered, and oral and / or Those that have an affinity for any other component that may be present in a sublingual dosage unit may be used. In general, polymeric excipients include a hydrophilic polymer that adheres to the moist surface of the oral mucosa. Examples of polymeric excipients include, but are not limited to, acrylic acid polymers and copolymers; hydrolyzed polyvinyl alcohol; polyethylene oxide; polyacrylates; vinyl polymers and copolymers; polyvinyl pyrrolidone; dextran; guar gum; As well as a cellulose derivative polymer.
加えて、本発明の医薬組成物も、局所の適用に対して様々な剤形に製剤されてもよく、当該技術分野においてよく知られている実に様々な皮膚科学的に許容できる不活性な賦形剤が、本発明の医薬組成物を調製するために採用されてもよい。局所の組成物は、液体、クリーム、ローション剤、軟膏剤、ゲル、噴霧剤、エアロゾル、皮膚パッチなどを含んでもよい。典型的な不活性な賦形剤は、例えば、水、エチルアルコール、ポリビニルピロリドン、プロピレングリコール、鉱油、ステアリルアルコール、及びゲル生成物質であってもよい。前述の剤形及び賦形剤の全ては、製薬の分野にとっては周知である。剤形の選択は、本願明細書に記載される組成物の有効性にとって重要ではない。 In addition, the pharmaceutical composition of the present invention may also be formulated into various dosage forms for topical application, and a variety of dermatologically acceptable inert formulations well known in the art. Forms may be employed to prepare the pharmaceutical compositions of the present invention. Topical compositions may include liquids, creams, lotions, ointments, gels, sprays, aerosols, skin patches, and the like. Typical inert excipients may be, for example, water, ethyl alcohol, polyvinyl pyrrolidone, propylene glycol, mineral oil, stearyl alcohol, and gel forming materials. All of the aforementioned dosage forms and excipients are well known in the pharmaceutical arts. The choice of dosage form is not critical to the effectiveness of the compositions described herein.
従って、本開示は、癌を有する又は有すると疑われる対象を治療する方法も提供する。その方法は、癌の成長及び／又は転移を抑制及び／又は阻害するために、式（Ｉ）の化合物の有効量を含む本開示の医薬組成物を患者に投与することを含む。本発明の方法によって治療できる癌の例は、これらに限定されないが、白血病、肝臓癌、膀胱癌、結腸癌、腎癌、卵巣癌、子宮頚部癌、子宮内膜癌、前立腺癌、すい臓癌、肺癌、乳癌、黒色腫、及び扁平上皮癌（ＳＣＣ）を含む。１つの好ましい例において、対象は白血病を有する。別の好ましい例において、対象は、肝臓癌を有する。 Accordingly, the present disclosure also provides a method of treating a subject having or suspected of having cancer. The method comprises administering to the patient a pharmaceutical composition of the present disclosure comprising an effective amount of a compound of formula (I) to suppress and / or inhibit cancer growth and / or metastasis. Examples of cancers that can be treated by the methods of the present invention include, but are not limited to, leukemia, liver cancer, bladder cancer, colon cancer, kidney cancer, ovarian cancer, cervical cancer, endometrial cancer, prostate cancer, pancreatic cancer, Includes lung cancer, breast cancer, melanoma, and squamous cell carcinoma (SCC). In one preferred example, the subject has leukemia. In another preferred example, the subject has liver cancer.
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物の有効量を含む、本発明の医薬組成物は、経口摂取、静脈内又は筋注射によって、対象の体重１Ｋｇ当たり約１〜１００ｍｇ、対象に投与される。好ましくは、本発明の組成物は、経口的に投与される。量は、１日当たり、対象の体重１Ｋｇ当たり約１、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、又は１００ｍｇで、好ましくは、１日当たり、対象の体重１Ｋｇ当たり３０、４０、５０、６０、又は７０ｍｇのような、対象の体重１Ｋｇ当たり約３０〜７０ｍｇで；及び、より好ましくは、１日当たり、対象の体重１Ｋｇ当たり約５０ｍｇで対象に投与される。用量は、単一の投薬量で、又は代わりに複数の投薬量で投与され得る。 In some embodiments, a pharmaceutical composition of the invention comprising an effective amount of a compound of formula (I) is administered to a subject by oral ingestion, intravenous or intramuscular injection, at about 1-100 mg / Kg subject body weight. Is done. Preferably, the composition of the present invention is administered orally. The amount is about 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, or 100 mg per kilogram of subject weight per day, preferably 30 per kilogram of subject weight per day. , 40, 50, 60, or 70 mg, such as about 30 to 70 mg per kg body weight of the subject; and more preferably about 50 mg per kg body weight of the subject per day. The dose can be administered in a single dosage, or alternatively in multiple dosages.
いくつかの実施形態において、方法は、本発明の医薬組成物（又は、本発明の式（Ｉ）の化合物）を投与する工程の前に、一緒に、及び／又はその後に、癌の治療を改良することが知られる別の作用物質を投与する工程をさらに含む。本発明の組成物又は式（Ｉ）の化合物と共に投与されてもよい作用物質は、アルキル化剤、トポイソメラーゼ阻害剤、細胞傷害性薬物、抗微小管薬及びその他のような化学療法剤である。 In some embodiments, the method comprises treating cancer before, together with, and / or after the step of administering a pharmaceutical composition of the invention (or a compound of formula (I) of the invention). The method further includes the step of administering another agent known to improve. Agents that may be administered with the compositions of the invention or compounds of formula (I) are chemotherapeutic agents such as alkylating agents, topoisomerase inhibitors, cytotoxic drugs, anti-microtubule agents and others.
一般に、本発明の組成物（又は式（Ｉ）の化合物）は、任意の好適な経路、例えば、カプセル、サシェ剤、懸濁液又は錠剤で経口によって；又は非経口的に投与されてもよい。非経口的に投与とは、例えば、口腔、筋肉内、静脈内、皮下、又は腹腔内注射のような全身投与を含み得る。組成物は、局所的に、又は吸入（例えば、気管支内、鼻腔内、口腔吸入、又は鼻腔内滴剤）による何れか、又は直腸に、単独、又は従来の薬学的に許容できる賦形剤と組み合わせて、経皮的に投与されてもよい。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象に対して、経口的に（例えば飲食で）投与される。 In general, the compositions of the invention (or compounds of formula (I)) may be administered orally or parenterally by any suitable route, such as capsules, sachets, suspensions or tablets; . Parenteral administration can include systemic administration such as, for example, buccal, intramuscular, intravenous, subcutaneous, or intraperitoneal injection. The composition can be either topically or by inhalation (eg, intrabronchial, intranasal, buccal inhalation, or intranasal drops) or rectally, alone or with a conventional pharmaceutically acceptable excipient. In combination, it may be administered transdermally. In a preferred embodiment, the composition of the present invention is administered to a subject orally (eg, by eating and drinking).
いくつかの好ましい実施形態において、本発明の組成物を受けた対象は、任意の対照対象（すなわち、本発明の組成物によって治療されていない対象）と比較したとき、寿命において少なくとも１０〜４０％の増加、腫瘍の大きさ、及び白血球数の減少を示す。 In some preferred embodiments, subjects who have received a composition of the invention have at least 10-40% in lifespan when compared to any control subject (ie, a subject not treated with a composition of the invention). Increase, tumor size, and decrease in white blood cell count.
本発明の化合物の投薬量は、選択される特定の化合物又は組成物、投与経路、及び患者において所望の反応を誘導する化合物（単独又は１つ以上の薬物と組み合わせて）の能力だけでなく、軽減される病態の病状若しくは重症度、患者の年齢、性別、体重、患者の状態及び治療される病態の重症度、患者によって続けられている併用医薬又は特別食などの要因並びに当業者が認識している他の要因によって患者ごとに変わることは理解され、最終的に適切な投薬量は主治医の判断による。投薬計画は、改良された治療反応を提供するために調整されてもよい。治療上有効量は、化合物又は組成物のあらゆる有毒な又は有害な効果を、治療的に有益な効果が上回る場合である。好ましくは、本発明の化合物又は組成物は、症候の数及び／又は重症度が低減されるような投薬量及び期間で投与される。 The dosage of the compounds of the invention is not only the specific compound or composition selected, the route of administration, and the ability of the compound (alone or in combination with one or more drugs) to induce the desired response in the patient, The condition or severity of the condition to be alleviated, the patient's age, sex, weight, patient condition and severity of the condition being treated, factors such as concomitant medications or special diets continued by the patient, and those skilled in the art It will be understood that this will vary from patient to patient depending on other factors, and ultimately the appropriate dosage will be at the discretion of the attending physician. Dosage schedules may be adjusted to provide improved therapeutic response. A therapeutically effective amount is when the therapeutically beneficial effect exceeds any toxic or deleterious effect of the compound or composition. Preferably, the compounds or compositions of the invention are administered at a dosage and duration such that the number and / or severity of symptoms is reduced.
本開示の幅広い範囲を説明する数値範囲及びパラメータが、近似値であるにもかかわらず、具体例で説明する数値はできるだけ正確に報告される。あらゆる数値は、しかしながら、本質的に、それぞれの試験測定において発見される標準偏差から必ず生じる、ある一定の誤差が含まれる。 Although the numerical ranges and parameters that describe the broad scope of this disclosure are approximate, the numerical values described in the examples are reported as accurately as possible. Any numerical value, however, inherently contains certain errors necessarily resulting from the standard deviation found in their respective testing measurements.
本発明は、限定よりはむしろ、説明の目的のために提供される以下の具体例を参照して、より具体的に説明されるだろう。 The invention will be described more specifically with reference to the following specific examples, which are provided for purposes of illustration rather than limitation.
材料及び方法
細胞培養及び動物
本開示において使用される細胞株は、ヒト肝臓癌細胞株ＨｅｐＧ２、ヒト膀胱癌細胞株ＢＦＴＣ９０５、ヒト結腸癌細胞株ＨＴ２９及びＳＷ４８０、及びヒト白血病細胞株ＨＬ６０及びＪｕｒｋａｔ Ｔ、及びマウスリンパ性白血病細胞株Ｌ１２１０を含む。それぞれの細胞株を培養し、Ｄｕｌｂｅｃｃｏ改変Ｅａｇｌｅ培地（ＤＭＥＭ）、又はＲＰＭＩ１６４０培地において、１０％熱失活したウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、１％のペニシリン／ストレプトマイシンを補充し、５％のＣＯ２／９５％の空気中、３７℃で維持した。
Materials and Methods Cell Culture and Animals The cell lines used in this disclosure are human liver cancer cell line HepG2, human bladder cancer cell line BFTC905, human colon cancer cell lines HT29 and SW480, and human leukemia cell lines HL60 and Jurkat T, And the mouse lymphocytic leukemia cell line L1210. Each cell line is cultured and supplemented with 10% heat-inactivated fetal bovine serum (FBS), 1% penicillin / streptomycin in Dulbecco's modified Eagle medium (DMEM) or RPMI 1640 medium, and 5% CO 2 / Maintained at 37 ° C. in 95% air.
ＤＢＡ／２マウス（約７週齢、１８〜２２ｇ）をＢｉｏＬＡＳＣＯ Ｔａｉｗａｎ Ｃｏ．，Ｌｔｄから得た。全てのマウスを、水及び飼料への接近を自由にして、特定病原体不在の状態で安置した。同系腫瘍を樹立するため、Ｌ１２１０細胞の溶液を、皮下組織中に注射した。あるいは、Ｌ１２１０細胞を、腹膜に注射した。全ての動物実験を、Ａｎｉｍａｌ Ｗｅｌｆａｒｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｆ Ｔａｉｐｅｉ Ｖｅｔｅｒａｎｓ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ （Ｔａｉｗａｎ， Ｒ．Ｏ．Ｃ．）のガイドラインに従って行った。 DBA / 2 mice (approximately 7 weeks of age, 18-22 g) were obtained from BioLASCO Taiwan Co. , Ltd. All mice were placed in the absence of specific pathogens, with free access to water and food. In order to establish syngeneic tumors, a solution of L1210 cells was injected into the subcutaneous tissue. Alternatively, L1210 cells were injected into the peritoneum. All animal experiments were performed according to the guidelines of the Animal Welfare Committee of Taipei Veterans General Hospital (Taiwan, R.O.C.).
ＭＴＴアッセイ
ＭＴＴアッセイは、生細胞中で、（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）、黄色のテトラゾールを還元し、紫色のホルマザンにする酵素（すなわち、レダクターゼ）の活性を測定する比色分析である。この還元は、細胞が生きた状態のときだけ起こる；それゆえに、ＭＴＴアッセイは、一般的に、細胞の生存率及び増殖を測定するために使用される。簡単に、細胞を、４８時間、テストされた化合物（例えば、式（Ｉ）の化合物）の種々の用量で検証した。次いで、ＭＴＴ染料（５ｍｇ／ｍｌ、１０μＬ）を加え、イソプロパノール５００μｌの追加によって終わる前に、反応を１時間進めた。分光光度計によって、５４０ｎｍでの溶液の吸光度を測定した。ＩＣ５０値を、未治療の細胞の生存率を１００％と定めることにより、５０％の細胞増殖を阻害した薬品濃度として定義した。値を、少なくとも３つの独立した実験から、平均値±ＳＤとして表す。
MTT assay The MTT assay is an enzyme that reduces (3- (4,5-dimethylthiazol-2yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT), a yellow tetrazole, into a purple formazan in living cells. A colorimetric assay that measures the activity of (ie, reductase) This reduction occurs only when the cell is alive; therefore, the MTT assay generally measures cell viability and proliferation. Briefly, cells were validated with various doses of tested compounds (eg, compounds of formula (I)) for 48 hours, then MTT dye (5 mg / ml, 10 μL) was added The reaction was allowed to proceed for 1 hour before finishing with the addition of 500 μl of isopropanol.The absorbance of the solution at 540 nm was measured by a spectrophotometer. The C 50 value, by determining the viability of untreated cells as 100% was defined as the drug concentration that inhibited 50% of cell growth. Values, from at least three independent experiments, as the mean ± SD Represent.
白血病Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞モデルを活性化させるホルボール １２−ミリスタート １３−アセタート及びイオノマイシン（ＰＭＡＩ）
細胞生存率アッセイを、９６−ウェルプレートにおいて行った。１００μＬの細胞懸濁液（ＮＨＬ又はＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞、５×１０３細胞／ウェル、無血清培地）を、ウェルにおいて接種し、プレートを、培養器において、２４時間プレインキュベーションした（２２時間プレインキュベーションし、ＰＭＡＩ治療群において、ＰＭＡ５ｎｇ／ｍｌ及びイオノマイシン２５０ｎｇ／ｍｌで、２時間刺激した）。次いで、種々の濃度のノルカンタリジン（０、２、４、１５、３０、及び６０μＭ）又はＮＯＣ１５（０、０．２５、０．５、１、２及び４μＭ）を、ウェルの培地に加えた。インキュベーションの２４時間後、細胞計数キット−８（ＣＣＫ−８、Ｓｉｇｍａ）によって、ＮＨＬ及びＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞の細胞生存率を測定した。Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞及びＮＨＬ細胞上のノルカンタリジン及びＮＯＣ１５の５０％阻害濃度を算出した。
Phorbol 12-myristate 13-acetate and ionomycin (PMAI) activate the leukemia Jurkat T cell model
Cell viability assays were performed in 96-well plates. 100 μL of cell suspension (NHL or Jurkat T cells, 5 × 10 3 cells / well, serum-free medium) was inoculated in the wells and the plates were preincubated in an incubator for 24 hours (22 hours preincubation). In the PMAI treatment group, stimulation was performed with PMA 5 ng / ml and ionomycin 250 ng / ml for 2 hours). Various concentrations of norcantharidin (0, 2, 4, 15, 30, and 60 μM) or NOC15 (0, 0.25, 0.5, 1, 2, and 4 μM) were then added to the well media. After 24 hours of incubation, cell viability of NHL and Jurkat T cells was measured by Cell Count Kit-8 (CCK-8, Sigma). 50% inhibitory concentrations of norcantharidin and NOC15 on Jurkat T cells and NHL cells were calculated.
Ｈｏｅｃｈｓｔ３３５２８染色
Ｈｏｅｃｈｓｔ３３５２８を用いる染色を、これまでに記載された方法（Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２００９、５９、２０１−２０８）に従って実行した。簡単に、細胞を、４８時間、４０μＭノルカンタリジン、ＮＯＣ１５、又はＮＣ１５を用いて処理し、次いでＰＢＳ生理食塩水で洗浄し、Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３５２８（Ｓｉｇｍａ、セントルイス、ミズーリ州、アメリカ）を用いて、最終濃度１０μｇ／ｍＬで染色した。スライドを、蛍光顕微鏡の下で調べた。小さい核を備える細胞、高い蛍光強度（クロマチン凝縮による）、又は核断片化は、アポトーシスとみられる。
Hoechst 33528 staining Staining with Hoechst 33528 was performed according to previously described methods (Huang et al., Cytotechnology 2009, 59, 201-208). Briefly, cells are treated with 40 μM norcantharidin, NOC15, or NC15 for 48 hours, then washed with PBS saline and final concentration using Hoechst 33528 (Sigma, St. Louis, MO, USA). Stained at 10 μg / mL. Slides were examined under a fluorescence microscope. Cells with small nuclei, high fluorescence intensity (due to chromatin condensation), or nuclear fragmentation are seen as apoptosis.
細胞周期分析
本発明の化合物（すなわち、ノルカンタリジン、ＮＯＣ１５、又はＮＣ１５、１０〜６０μＭ、４８時間）の前処理がされ、又はされなかった培養細胞を、培養された培地から回収し、７５％の氷冷したエタノールを用いてインキュベートすることにより固定し、分析まで−２０℃で保存した。次いで、固定した細胞を、ＰＢＳで洗浄し、約１．５時間、３７℃で、ＤＮＡアーゼ（２００μｇ／ｍＬ、５００μＬ）を用いて処理した。沈殿した細胞を、遠心分離によって回収し、及びプロピジウムヨウ素（ＰＩ）（４０μｇ／ｍｌ）を含有する緩衝液溶液に再懸濁し、フローサイトメトリ分析に供する前に、暗所で、２０分間、２０〜２５℃でインキュベートし、フローサイトメトリ分析では、それぞれの細胞周期で細胞数を測定した。
Cell Cycle Analysis Cultured cells with or without pretreatment with compounds of the invention (ie, norcantharidin, NOC15, or NC15, 10-60 μM, 48 hours) are collected from the cultured medium and 75% Fix by incubating with ice-cold ethanol and store at -20 ° C until analysis. The fixed cells were then washed with PBS and treated with DNAase (200 μg / mL, 500 μL) for approximately 1.5 hours at 37 ° C. Precipitated cells are collected by centrifugation and resuspended in a buffer solution containing propidium iodine (PI) (40 μg / ml) for 20 minutes in the dark before being subjected to flow cytometry analysis. Incubation was performed at ˜25 ° C., and the number of cells was measured in each cell cycle in flow cytometry analysis.
アポトーシス細胞のパーセンテージを、アネキシン−Ｖ／ＦＩＴＣキット／ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）フローサイトメーターを使用することによる製造業者の手順に従って測定した。アポトーシスの検出を容易にするため、処置した細胞を、５分間、１，０００×ｇの速度で、室温において、遠心分離し、次いで再懸濁し、アネキシン−Ｖ／ＰＩ（アポトーシス検出キット、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、タイペイ、台湾）を用いて染色する前に、５ｍＬのＰＢＳを用いて１度洗浄した。 The percentage of apoptotic cells was measured according to the manufacturer's procedure by using an annexin-V / FITC kit / propidium iodide (PI) flow cytometer. To facilitate the detection of apoptosis, the treated cells are centrifuged for 5 minutes at a speed of 1,000 × g at room temperature, then resuspended and annexin-V / PI (apoptosis detection kit, R & D Systems). , Taipei, Taiwan) and washed once with 5 mL PBS.
同系腫瘍の発生、及びインビボ治療
腫瘍を接種するために、Ｌ１２１０細胞（１回の注射に対して１×１０６細胞）を、実験動物に対して皮下又は腹腔内の何れかに注射し、１日で腫瘍が発生した。７日後、ＮＯＣ１５又はＮＣ１５（生理食塩水に希釈した）を、１８ｍｇ／ｋｇの用量で、毎日７日間、腹腔内に投与した。動物の平均体重（ＢＷ）を、毎日測定した。
Generation of syngeneic tumors and in vivo treatment To inoculate tumors, L1210 cells (1 × 10 6 cells per injection) were injected either subcutaneously or intraperitoneally into experimental animals. A tumor developed on the day. Seven days later, NOC15 or NC15 (diluted in saline) was administered intraperitoneally at a dose of 18 mg / kg daily for 7 days. The average body weight (BW) of the animals was measured daily.
処置後、マウスを屠殺し、それらの腫瘍、肝臓及び脾臓を回収し、それぞれ、重量を測った；白血球（ＷＢＣ）数も測定した。 After treatment, mice were sacrificed and their tumors, liver and spleen were collected and weighed respectively; white blood cell (WBC) counts were also measured.
実施例１ 本発明の化合物の合成
１．１ Ｎ−ファルネシルオキシ−７−オキサビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２，３−ジカルボキシイミド（化合物９又はＮＯＣ１５）の製造
以下のスキームＩに従って、ＮＯＣ１５を合成した。
スキーム１における試薬及び条件は、以下のとおりである：（ａ）エーテル、室温、４８時間；（ｂ）３ａｔｍ Ｈ２、１０％Ｐｄ／Ｃ、ＴＨＦ、室温、８時間；（ｃ）ＮａＯＣＨ３、ＮＨ２ＯＨ・ＨＣｌ、ＭｅＯＨ、室温、２０時間；（ｄ）Ｋ２ＣＯ３、ファルネシル臭化物、アセトン、還流、８〜１０時間。 The reagents and conditions in Scheme 1 are as follows: (a) ether, room temperature, 48 hours; (b) 3 atm H 2 , 10% Pd / C, THF, room temperature, 8 hours; (c) NaOCH 3 , NH 2 OH · HCl, MeOH, room temperature, 20 hours; (d) K 2 CO 3 , farnesyl bromide, acetone, reflux, 8-10 hours.
７−オキサビシクロ［２．２．１］−５−ヘプテン−２，３−ジカルボン酸無水物（化合物５）。フラン（４０ｍＬ、５５０ｍｍｏｌ）及び無水マレイン酸（１０ｇ、１０２ｍｍｏｌ）溶液を、エーテル（１００ｍＬ）中で混合し、室温で、４８時間反応し、白色沈殿物を回収した後、乾燥して、無色の固体、収率９３．３％、ｍｐ１２１〜１２２℃として化合物５を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ６．５８（ｓ、２Ｈ、Ｈ−５，６）、５．４７（ｓ、２Ｈ、Ｈ−１，４）、３．１９（ｓ、２Ｈ、Ｈ−２，３）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ １７０．１（Ｃ＝Ｏ）、１３７．２（Ｃ−５、Ｃ−６）、８２．４（Ｃ−１、Ｃ−４）、４８．９（Ｃ−２、Ｃ−３）；；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ−、ｍ／ｚ）Ｃ８Ｈ６Ｏ４についての計算値：１６６．０３、実測値１６４．９０［Ｍ−Ｈ］−。 7-Oxabicyclo [2.2.1] -5-heptene-2,3-dicarboxylic anhydride (Compound 5). A solution of furan (40 mL, 550 mmol) and maleic anhydride (10 g, 102 mmol) was mixed in ether (100 mL), reacted at room temperature for 48 hours, and a white precipitate was collected and then dried to obtain a colorless solid. Compound 5 was produced in a yield of 93.3% and mp 121-122 ° C. 1 H NMR (CDCl 3) δ 6.58 (s, 2H, H-5, 6), 5.47 (s, 2H, H-1, 4), 3.19 (s, 2H, H-2, 3 ); 13 C NMR (CDCl 3) δ 170.1 (C═O), 137.2 (C-5, C-6), 82.4 (C-1, C-4), 48.9 (C—) 2, C-3) ;; LC-MS (ESI − , m / z) Calculated for C 8 H 6 O 4 : 166.03, found 164.90 [M−H] − .
７−オキサビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２，３−ジカルボン酸無水物（化合物２）。化合物５（４．７ｇ、２８．３ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（２００ｍＬ）溶液に、１０％Ｐｄ／Ｃ（４７０ｍｇ）を加え、及び混合物を、水素雰囲気（３ａｔｍ）下、室温で、８〜１２時間撹拌した。反応混合物を、セライト５４５を通してろ過し、真空条件下で濃縮し、無色の結晶、収率９１．４％、ｍｐ１１６〜１１８℃として、化合物２（すなわち、ノルカンタリジン）を得た。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ ５．０５（ｔ、Ｊ＝２．３Ｈｚ、２Ｈ、Ｈ−１、４）、３．１８（ｓ、２Ｈ、Ｈ−２，３）、１．９１−１．８９（ｍ、２Ｈ、Ｈ−５，６）、１．６５−１．６３（ｍ、２Ｈ、Ｈ−５，６）；１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ １７１．７、８０．２、５０．６、２８．１；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ−、ｍ／ｚ）Ｃ８Ｈ８Ｏ４についての計算値：１６８．０４、実測値１６６．８６［Ｍ−Ｈ］−。 7-Oxabicyclo [2.2.1] heptane-2,3-dicarboxylic anhydride (Compound 2). To a solution of compound 5 (4.7 g, 28.3 mmol) in tetrahydrofuran (THF) (200 mL) is added 10% Pd / C (470 mg), and the mixture is heated to 12-12 at room temperature under a hydrogen atmosphere (3 atm). Stir for hours. The reaction mixture was filtered through Celite 545 and concentrated under vacuum conditions to give compound 2 (ie, norcantharidin) as colorless crystals, 91.4% yield, mp 116-118 ° C. 1 H-NMR (CDCl 3): δ 5.05 (t, J = 2.3 Hz, 2H, H-1, 4), 3.18 (s, 2H, H-2, 3), 1.91-1 .89 (m, 2H, H-5,6), 1.65 to 1.63 (m, 2H, H-5,6); 13 C-NMR (CDCl3): δ 171.7, 80.2, 50.6, 28.1; LC-MS (ESI − , m / z) Calculated for C 8 H 8 O 4 : 168.04, found 166.86 [M−H] − .
Ｎ−ヒドロキシ−７−オキサビシクロ［２．２．１］−５−ヘプタン−２，３−ジカルボキシイミド（化合物６）。化合物２（５．０４ｇ、３０ｍｍｏｌ）のドライメタノール（２００ｍＬ）溶液に、ナトリウムメトキシド（１．６２ｇ、３０ｍｍｏｌ）及びヒドロキシルアミン塩酸塩（２．０８ｇ、３０ｍｍｏｌ）を加え、その混合物を、室温で２０時間撹拌した。次いで、反応混合物をろ過し、真空条件下で濃縮し、ＣＨＣｌ３を用いて再結晶化し、無色の結晶、収率６３％、ｍｐ１６８〜１６９℃として、化合物６を得た。１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δ ４．９３（ｓ、２Ｈ、Ｈ−１、４）、３．２１（ｓ、２Ｈ、Ｈ−２，３）、１．８９−１．８６（ｍ、２Ｈ、Ｈ−５，６）、１．７８−１．７４（ｍ、２Ｈ、Ｈ−５，６）；１３Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δ １７７．０、７８．８、４６．９、２８．０；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ＋、ｍ／ｚ）Ｃ８Ｈ９ＮＯ４についての計算値：１８３．０５、実測値２０６．００［Ｍ＋Ｎａ］＋。 N-hydroxy-7-oxabicyclo [2.2.1] -5-heptane-2,3-dicarboximide (Compound 6). To a solution of compound 2 (5.04 g, 30 mmol) in dry methanol (200 mL) was added sodium methoxide (1.62 g, 30 mmol) and hydroxylamine hydrochloride (2.08 g, 30 mmol) and the mixture was stirred at room temperature for 20 minutes. Stir for hours. The reaction mixture was then filtered, concentrated in vacuo, and recrystallized using CHCl 3 to give 6 as colorless crystals, 63% yield, mp 168-169 ° C. 1 H-NMR (D 2 O): δ 4.93 (s, 2H, H-1, 4), 3.21 (s, 2H, H-2, 3), 1.89-1.86 (m 2H, H-5,6), 1.78-1.74 (m, 2H, H-5,6); 13 C-NMR (D 2 O): δ 177.0, 78.8, 46. 9,28.0; LC-MS (ESI + , m / z) calculated for C 8 H 9 NO 4: 183.05 , Found 206.00 [M + Na] +.
Ｎ−ファルネシルオキシ−７−オキサビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２，３−ジカルボキシイミド（化合物９又はＮＯＣ１５）。撹拌された化合物６（１ｍｍｏｌ）のドライアセトン溶液に、ファルネシル臭化物（１ｍｍｏｌ）、及びＫ２ＣＯ３（３ｍｍｏｌ）を加え、その混合物を、８〜１０時間還流した。次いで、その混合物をろ過し、真空条件下で濃縮し、溶離液として酢酸エチル／ｎ−ヘキサンを有するシリカゲルを用いてカラムクロマトグラフィにより残渣を精製し、ＮＯＣ１５を製造した。無色の液体、収率２８％であった。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ ５．４２（ｔｄ、Ｊ＝０．９、７．７Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ−２’）、５．１１−５．０７（ｍ、２Ｈ、Ｈ−６’、１０’）、４．８５（ｑ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、２Ｈ、Ｈ−１，４）、４．６２（ｄ、Ｊ＝７．７Ｈｚ、２Ｈ、Ｈ−１’）、２．８３（ｓ、２Ｈ、Ｈ−２，３）、２．０９−２．０４（ｍ、６Ｈ、Ｈ−５，６、Ｈ−４’，８’）、１．９９−１．９６（ｍ、２Ｈ、Ｈ−５’）、１．８９−１．８６（ｍ、２Ｈ、Ｈ−６’）、１．７２（ｄ、Ｊ−０．７Ｈｚ、３Ｈ、ＣＨ３）、１．６８（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、１．６３−１．６２（ｍ、２Ｈ、Ｈ−５，６）、１．６０（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、１．５９（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）；１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ １７１．６、１４７．３、１３５．３、１３１．３、１２４．３、１２３．５、１１６．１、７８．５，７３．０、４７．４、３９．６５、３９．６３、２８．７、２６．７、２６．１、２５．７、１７．７、１６．６、１６．０；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ＋、ｍ／ｚ）Ｃ２３Ｈ３３ＮＯ４についての計算値：３８７．２４、実測値４１０．２１［Ｍ＋Ｎａ］＋。 N-farnesyloxy-7-oxabicyclo [2.2.1] heptane-2,3-dicarboximide (Compound 9 or NOC15). Farnesyl bromide (1 mmol) and K 2 CO 3 (3 mmol) were added to a stirred solution of compound 6 (1 mmol) in dry acetone, and the mixture was refluxed for 8-10 hours. The mixture was then filtered, concentrated under vacuum conditions, and the residue was purified by column chromatography using silica gel with ethyl acetate / n-hexane as eluent to produce NOC15. Colorless liquid, yield 28%. 1 H-NMR (CDCl 3 ): δ 5.42 (td, J = 0.9, 7.7 Hz, 1H, H-2 ′), 5.11-5.07 (m, 2H, H-6 ′) 10 ′), 4.85 (q, J = 2.4 Hz, 2H, H−1, 4), 4.62 (d, J = 7.7 Hz, 2H, H−1 ′), 2.83 ( s, 2H, H-2, 3), 2.09-2.04 (m, 6H, H-5, 6, H-4 ', 8'), 1.99-1.96 (m, 2H, H-5 ′), 1.89-1.86 (m, 2H, H-6 ′), 1.72 (d, J-0.7 Hz, 3H, CH3), 1.68 (s, 3H, CH 3), 1.63-1.62 (m, 2H , H-5,6), 1.60 (s, 3H, CH 3), 1.59 (s, 3H, CH 3); 13 C-NMR (CDCl 3): δ 171.6,147.3,135.3,131 3, 124.3, 123.5, 116.1, 78.5, 73.0, 47.4, 39.65, 39.63, 28.7, 26.7, 26.1, 25.7, 17.7,16.6,16.0; LC-MS (ESI + , m / z) calculated for C 23 H 33 NO 4: 387.24 , Found 410.21 [M + Na] +.
１．２ Ｎ−ファルネシル−７−オキサビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２，３−ジカルボキシイミド（化合物１８又はＮＣ１５）の製造
ＮＣ１５を、以下のスキームＩＩに従って合成した。
スキーム２における試薬及び条件は、以下のとおりである：（ａ）トルエン、８０℃、６時間；（ｂ）３ａｔｍ Ｈ２、１０％Ｐｄ／Ｃ、ＴＨＦ、室温、８〜４８時間；（ｃ）Ｋ２ＣＯ３、ファルネシル臭化物、アセトン、還流、８〜１０時間。 The reagents and conditions in Scheme 2 are as follows: (a) toluene, 80 ° C., 6 hours; (b) 3 atm H 2 , 10% Pd / C, THF, room temperature, 8-48 hours; (c) K 2 CO 3, farnesyl bromide, acetone, reflux, 8-10 hours.
７−オキサビシクロ［２．２．１］−５−ヘプテン−２，３−ジカルボキシイミド（化合物１４）。マレイミド（化合物１３）（１．５ｇ、１５ｍｍｏｌ）のドライトルエン（３０ｍＬ）溶液を８０℃で加熱し、次いで、フラン（５．４ｍＬ、７５ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で、６時間撹拌し、室温まで冷却し、白色沈殿物を回収し、溶離液として酢酸エチル／ｎ−ヘキサンを有するシリカゲルを用いてカラムクロマトグラフィによって精製し、無色の結晶、ｍｐ１６２〜１６３℃として、化合物１４（２．１ｇ、収率８７％）を製造した。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ ８．１３ （ｓ、１Ｈ、ＮＨ）、６．５０（ｓ、２Ｈ、Ｈ−５，６）、５．２９（ｓ、２Ｈ、Ｈ−１．４）、２．８７（ｓ、２Ｈ、Ｈ−２，３）；１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ １７６．２、１３６．８、８１．２、４８．９；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ−、ｍ／ｚ）Ｃ８Ｈ７ＮＯ３についての計算値：１６５．０４、実測値１６４．０２［Ｍ−Ｈ］−。 7-Oxabicyclo [2.2.1] -5-heptene-2,3-dicarboximide (Compound 14). A solution of maleimide (compound 13) (1.5 g, 15 mmol) in dry toluene (30 mL) is heated at 80 ° C., then furan (5.4 mL, 75 mmol) is added, stirred at 80 ° C. for 6 hours, and brought to room temperature. Upon cooling, the white precipitate was collected and purified by column chromatography using silica gel with ethyl acetate / n-hexane as eluent to give colorless crystals, mp 162-163 ° C., compound 14 (2.1 g, yield) 87%). 1 H-NMR (CDCl 3 ): δ 8.13 (s, 1H, NH), 6.50 (s, 2H, H-5, 6), 5.29 (s, 2H, H-1.4) 2.87 (s, 2H, H-2, 3); 13 C-NMR (CDCl 3 ): δ 176.2, 136.8, 81.2, 48.9; LC-MS (ESI − , m / Z) Calculated for C 8 H 7 NO 3 : 165.04, found 164.02 [M−H] − .
７−オキサビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２，３−ジカルボキシイミド（化合物１５）。化合物１４（０．５ｇ、２．８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）溶液へ１０％Ｐｄ／Ｃ（５０ｍｇ）を加え、その混合物を、室温で、水素環境下、４時間撹拌した。反応混合物を、セライトを通してろ過し、真空条件下で濃縮し、無色の結晶、ｍｐ１８８〜１９０℃として、ＮＣ１５（４２４ｍｇ、収率８４％）を製造した。１Ｈ−ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３）：δ ８．６０（ｓ、１Ｈ、ＮＨ）、４．９１（ｄｄ、Ｊ＝２．４、３．３Ｈｚ、２Ｈ、Ｈ−１，４）、２．９２（ｓ、２Ｈ、Ｈ−２，３）、１．８９−１．８５（ｍ、２Ｈ、Ｈ−５，６）、１．６１−１．５７ （ｍ、２Ｈ、Ｈ−５，６）；１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ １７７．２、７９．１、５１．３、２８．５；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ−、ｍ／ｚ）Ｃ８Ｈ９ＮＯ３についての計算値：１６７．０６、実測値１６６．０３［Ｍ−Ｈ］−。 7-Oxabicyclo [2.2.1] heptane-2,3-dicarboximide (Compound 15). To a solution of compound 14 (0.5 g, 2.8 mmol) in THF (20 mL) was added 10% Pd / C (50 mg), and the mixture was stirred at room temperature in a hydrogen environment for 4 hours. The reaction mixture was filtered through celite and concentrated in vacuo to produce NC15 (424 mg, 84% yield) as colorless crystals, mp 188-190 ° C. 1 H-NMR (CDCl 3 ): δ 8.60 (s, 1H, NH), 4.91 (dd, J = 2.4, 3.3 Hz, 2H, H-1, 4), 2.92 ( s, 2H, H-2,3) , 1.89-1.85 (m, 2H, H-5,6), 1.61-1.57 (m, 2H, H-5,6); 13 C-NMR (CDCl 3 ): δ 177.2, 79.1, 51.3, 28.5; LC-MS (ESI − , m / z) calculated for C 8 H 9 NO 3 : 167.06 , Found 166.03 [M−H] − .
Ｎ−ファルネシル−７−オキサビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２，３−ジカルボキシイミド（化合物１８又はＮＣ１５）。化合物１５（１．０ｍｍｏｌ）のドライアセトン（２５ｍＬ）中の混合物において、ファルネシル臭化物（１ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（３ｍｍｏｌ）を加え、その混合物を、８〜１０時間還流した。次いで、混合物をろ過し、真空条件下で濃縮し、溶離液として酢酸エチル／ｎ−ヘキサンを有するシリカゲルを用いるカラムクロマトグラフィによって、残渣を精製し、無色の液体、収率２０％として、ＮＣ１５を製造した。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ ５．１０−５．０２（ｍ、３Ｈ、Ｈ−２’、６’、１０’）、４．８４（ｄｄ、Ｊ＝２．２、２．３Ｈｚ、２Ｈ、Ｈ−１，４）、４．０３（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、２Ｈ、Ｈ−１’）、２．８２（ｓ、２Ｈ、Ｈ−２，３）、２．０６−２．０１（ｍ、４Ｈ、Ｈ−４’，８’）、１．９７−１．９２（ｍ、４Ｈ、Ｈ−５’、９’）、１．８４−１．８１（ｍ、２Ｈ、Ｈ−５，６）、１．７５（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、１．６７（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、１．６０（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、１．５９（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、１．５８−１．５５（ｍ、２Ｈ、Ｈ−５，６）；１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ １７６．８、１４０．９、１３５．３、１３１．２、１２４．３、１２３．７、１１７．２、７８．９、５０．０、３９．７、３９．５、３７．０、２８．６、２６．８、２６．３、２５．７、１７．７、１６．４、１６．０；ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ＋、ｍ／ｚ）Ｃ２３Ｈ３３ＮＯ３についての計算値：３７１．２５、実測値３９４．２［Ｍ＋Ｎａ］＋。 N-farnesyl-7-oxabicyclo [2.2.1] heptane-2,3-dicarboximide (Compound 18 or NC15). In a mixture of compound 15 (1.0 mmol) in dry acetone (25 mL), farnesyl bromide (1 mmol) and K 2 CO 3 (3 mmol) were added and the mixture was refluxed for 8-10 hours. The mixture is then filtered, concentrated under vacuum conditions, and the residue is purified by column chromatography using silica gel with ethyl acetate / n-hexane as eluent to produce NC15 as a colorless liquid, yield 20%. did. 1 H-NMR (CDCl 3 ): δ 5.10-5.02 (m, 3H, H-2 ′, 6 ′, 10 ′), 4.84 (dd, J = 2.2, 2.3 Hz, 2H, H-1,4), 4.03 (d, J = 7.0 Hz, 2H, H-1 ′), 2.82 (s, 2H, H-2,3), 2.06-2. 01 (m, 4H, H-4 ', 8'), 1.97-1.92 (m, 4H, H-5 ', 9'), 1.84-1.81 (m, 2H, H- 5,6), 1.75 (s, 3H , CH 3), 1.67 (s, 3H, CH 3), 1.60 (s, 3H, CH 3), 1.59 (s, 3H, CH 3 ), 1.58-1.55 (m, 2H, H-5, 6); 13 C-NMR (CDCl 3 ): δ 176.8, 140.9, 135.3, 131.2, 124. 3, 123.7, 117.2, 78.9, 50.0 39.7,39.5,37.0,28.6,26.8,26.3,25.7,17.7,16.4,16.0; LC-MS (ESI + , m / z ) calculated for C 23 H 33 NO 3: 371.25 , Found 394.2 [M + Na] +.
実施例２ 本発明の化合物の抗増殖性活性
ＨｅｐＧ２細胞（肝臓癌）、ＢＦＴＣ９０５（膀胱癌）、ＨＴ２９（結腸癌）、ＳＷ４８０（結腸癌）、及びＨＬ６０（白血病）に対する、本開示の式（Ｉ）の化合物、特に、ＮＯＣ１５及びＮＣ１５の効果を、化合物２、並びに５−ＦＵ、シスプラチン、及びドキソルビシンを含む、他の知られている抗癌剤をそれぞれ、陽性対照として使用して、上記の手順に従った細胞生存率分析によって分析した。結果を表１にまとめる。
Example 2 Antiproliferative Activity of Compounds of the Invention Formula (I) of this disclosure against HepG2 cells (liver cancer), BFTC905 (bladder cancer), HT29 (colon cancer), SW480 (colon cancer), and HL60 (leukemia). ), In particular NOC15 and NC15, according to the above procedure, using compound 2 and other known anticancer agents, including 5-FU, cisplatin and doxorubicin, respectively, as positive controls. Analysis by cell viability analysis. The results are summarized in Table 1.
種々の癌細胞株上の増殖阻害
ＮＤは、１００μＭでの最大濃度の処置の際、検知できる阻害値（ＩＣ５０）を観察することができなかったことを示す。
Growth inhibition on various cancer cell lines
ND indicates that no detectable inhibition value (IC 50 ) could be observed during treatment at the maximum concentration at 100 μM.
表１に示されたデータから分かるように、ＮＯＣ１５及びＮＣ１５の双方は肝臓、膀胱、結腸、及び白血病癌細胞を含む５つの異なる型の癌細胞株に対して細胞毒性があり；それぞれ化合物は、少なくとも、５−ＦＵ、シスプラチン、及びドキソルビシンのような、他の知られている抗癌剤に対して、同じ効力があり、又はより優れた効力がある。白血病細胞株ＨＬ６０は、５−ＦＵ又はシスプラチンの処置によく反応しなかったがＮＯＣ１５又はＮＣ１５の処置には反応したことは、さらに留意されたい。 As can be seen from the data shown in Table 1, both NOC15 and NC15 are cytotoxic to five different types of cancer cell lines including liver, bladder, colon, and leukemia cancer cells; At least the same or better efficacy against other known anti-cancer agents such as 5-FU, cisplatin, and doxorubicin. It is further noted that the leukemia cell line HL60 did not respond well to 5-FU or cisplatin treatment but to NOC15 or NC15 treatment.
実施例３ ヒト肝臓癌上のＮＯＣ１５及びＮＣ１５の抗増殖活性
３．１ 細胞生存率分析
この実施例において、化合物２を陽性対照として使用して、上記の手順に従って細胞生存率分析により、ＨｅｐＧ２細胞に対するＮＯＣ１５又はＮＣ１５の効果を分析した。結果を表２にまとめる。
Example 3 Anti-proliferative activity of NOC15 and NC15 on human liver cancer 3.1 Cell viability analysis In this example, compound 2 was used as a positive control and by cell viability analysis according to the procedure described above, against HepG2 cells The effect of NOC15 or NC15 was analyzed. The results are summarized in Table 2.
肝臓癌細胞における増殖阻害
ＮＯＣ１５及びＮＣ１５は、それぞれ、化合物２より少なくとも３〜４倍効力があり、細胞数の減少に関して同じ阻害のレベルが、化合物２の用量の１／３〜１／４で達成できることが、表２から分かる。 It can be seen from Table 2 that NOC15 and NC15 are each at least 3-4 times more potent than Compound 2, and that the same level of inhibition with respect to cell number reduction can be achieved at 1/3 to 1/4 of the dose of Compound 2. I understand.
３．２ 核の形態学的な変化
ＮＯＣ１５及びＮＣ１５の細胞毒性における、アポトーシスの役割をさらに調べるために、ＨｅｐＧ２細胞を、化合物 ２、ＮＯＣ１５及びＮＣ１５、それぞれで、４８時間インキュベートした；次いで、Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３５２８を用いて染色し、任意の局所の形態学的な変化について、蛍光顕微鏡により調べた。
3.2 Nuclear Morphological Changes To further investigate the role of apoptosis in the cytotoxicity of NOC15 and NC15, HepG2 cells were incubated with Compound 2, NOC15 and NC15, respectively, for 48 hours; then Hoechst 33528 And any local morphological changes were examined by fluorescence microscopy.
図１の写真は、それぞれ、化合物２、ＮＯＣ１５、及びＮＣ１５、で処置した細胞の核を示す。細胞収縮、クロマチン凝縮、及びＤＮＡ断片化を含む、アポトーシスのかなりの形態学的な特徴を、処置された細胞（化合物２、ＮＯＣ１５、及びＮＣ１５を含む）において、それらの対照細胞と比較したとき、発見した。 The photographs in FIG. 1 show the nuclei of cells treated with Compound 2, NOC15, and NC15, respectively. When compared to their control cells in treated cells (including Compound 2, NOC15, and NC15) significant morphological features of apoptosis, including cell contraction, chromatin condensation, and DNA fragmentation, discovered.
３．３ 細胞周期分布及びアポトーシスの分析
ＨｅｐＧ２細胞を、１０〜６０μＭの試験化合物で、４８時間処置し、次いで、細胞周期分布及びアポトーシス分析を、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）で染色したｓｕｂＧ１相を有するフローサイトメトリにより分析した。結果を図２及び３に図示する。
3.3 Analysis of cell cycle distribution and apoptosis HepG2 cells are treated with 10-60 μM of test compound for 48 hours and then cell cycle distribution and apoptosis analysis has subG1 phase stained with propidium iodide (PI). Analyzed by flow cytometry. The results are illustrated in FIGS.
図２に示すように、アポトーシスを起こした細胞のごく一部だけを、低濃度（すなわち、１０μＭ）の化合物２で処置した細胞と同様に、対照細胞（すなわち、処置していない）中に検出した。化合物２の濃度が２０μＭから６０μＭまで増加した場合、アポトーシスを起こした細胞の割合が、用量依存的な様式において１．６％から１６．７％に増加した。同様に、細胞を１０μＭから６０μＭ（３．７％から１９．８％）に増加した化合物１８の濃度で処置したとき、かなりの割合のアポトーシスを起こした細胞を発見した。さらに、化合物９及び１８（すなわち、ＮＯＣ１５及びＮＣ１５）の双方は、Ｇ２／Ｍ相において細胞の蓄積を誘導することができる。 As shown in FIG. 2, only a small percentage of apoptotic cells were detected in control cells (ie, untreated), as were cells treated with a low concentration (ie, 10 μM) of Compound 2. did. When the concentration of Compound 2 was increased from 20 μM to 60 μM, the percentage of cells undergoing apoptosis increased from 1.6% to 16.7% in a dose-dependent manner. Similarly, when cells were treated with increasing concentrations of Compound 18 from 10 μM to 60 μM (3.7% to 19.8%), a significant percentage of apoptotic cells were found. Furthermore, both compounds 9 and 18 (ie NOC15 and NC15) can induce cellular accumulation in the G2 / M phase.
図３に示すデータから分かるように、細胞死は、用量依存的であるように見えるＮＯＣ１５又はＮＣ１５の処置の結果であり、アポトーシスを起こした細胞のパーセンテージは、ＮＯＣ１５又はＮＣ１５の濃度の増加と共に増加した。化合物２について、高濃度の化合物２を使用したとき（すなわち、６０μＭ）、細胞毒性効果を唯一観察した。 As can be seen from the data shown in FIG. 3, cell death is the result of treatment with NOC15 or NC15 that appears to be dose-dependent, and the percentage of cells undergoing apoptosis increases with increasing concentrations of NOC15 or NC15. did. For compound 2, the only cytotoxic effect was observed when high concentrations of compound 2 were used (ie 60 μM).
実施例４ 白血病におけるＮＯＣ１５の抗増殖活性
４．１ 細胞生存率分析
この実施例において、白血病Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞モデルを活性化する、ホルボール １２−ミリスタート １３−アセタート及びイオノマイシン（ＰＭＡＩ）のモデルを、ヒト白血病細胞（Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞）及びヒトリンパ芽球細胞（ＮＨＬ）に対するＮＯＣ１５の効果を調査するために採用した。
Example 4 Antiproliferative Activity of NOC15 in Leukemia 4.1 Cell Viability Analysis In this example, a model of phorbol 12-myristate 13-acetate and ionomycin (PMAI), which activates the leukemia Jurkat T cell model, was It was employed to investigate the effect of NOC15 on leukemia cells (Jurkat T cells) and human lymphoblasts (NHL).
図４Ａに示すように、化合物２のみ、正常なリンパ細胞に対して重大な細胞毒性を有していないが、白血病癌Ｊｕｋａｔ Ｔ細胞に対して有毒である。さらに、生細胞のパーセンテージは、細胞を、アポトーシスから細胞を保護することが知られている作用物質、ホルボール １２−ミリスタート １３−アセタート（ＰＭＡ）で前処理すれば、わずかに増加した。同様の結果を、ＮＯＣ１５処置した細胞でも観察した（図４Ｂ）。その知見は、化合物２及びＮＯＣ１５の双方が、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ経路を妨げることにより、細胞増殖を抑制することを確証した。 As shown in FIG. 4A, Compound 2 alone does not have significant cytotoxicity against normal lymphocytes, but is toxic to leukemia cancer Jukat T cells. Furthermore, the percentage of living cells increased slightly when cells were pretreated with phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA), an agent known to protect cells from apoptosis. Similar results were observed with cells treated with NOC15 (FIG. 4B). That finding confirmed that both Compound 2 and NOC15 inhibit cell proliferation by interfering with the mitogen-activated protein kinase pathway.
４．２ 細胞周期分布の分析
細胞周期分布を、「材料及び方法」の節において説明したようにフローサイトメトリにより測定した。結果を図５に示す。
4.2 Analysis of cell cycle distribution Cell cycle distribution was measured by flow cytometry as described in the "Materials and Methods" section. The results are shown in FIG.
対照細胞のごく一部だけがｓｕｂＧ１相（図５Ａ）にあることが見出されたが、ｓｕｂＧ１相における細胞のパーセンテージは、それらをＮＯＣ１５で、２４時間（図５Ｂ）及び４８時間（図５Ｃ）それぞれ前処理すれば増加した。Ｇ２／Ｍ相における白血病細胞のパーセンテージは、ＮＯＣ１５で４８時間（図５Ｃ）処理したとき増加したことも留意されたい。図５Ｄは、図５Ａ〜５Ｃにおける知見の定量分析を与える。 Although only a small percentage of the control cells were found to be in the subG1 phase (FIG. 5A), the percentage of cells in the subG1 phase was NOC15, 24 hours (FIG. 5B) and 48 hours (FIG. 5C). Increased with each pretreatment. Note also that the percentage of leukemic cells in the G2 / M phase increased when treated with NOC15 for 48 hours (FIG. 5C). FIG. 5D provides a quantitative analysis of the findings in FIGS.
実施例５ 白血病におけるＮＣ１５の抗増殖活性
５．１ 細胞生存率分析
図６における棒グラフは、正常なヒトリンパ芽球細胞（ＮＨＬ）及びヒト白血病Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞に対するＮＣ１５の細胞傷害効果を図示する。化合物２及びＮＯＣ１５の効果と同様に、ＮＣ１５のみ、正常なリンパ芽球細胞に対する重大な細胞毒性を有していないが、ヒト白血病Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞に対して有毒であり、その効果は、用量依存的であるように見えた。細胞をＮＣ１５で２４時間処理したとき、生細胞の数は、ＮＣ１５の濃度の増加につれて減少した（図６Ａ）；細胞を４８時間処理したとき、同様の結果を観察した（図６Ｂ）。
Example 5 NC15 Antiproliferative Activity in Leukemia 5.1 Cell Viability Analysis The bar graph in FIG. 6 illustrates the cytotoxic effect of NC15 on normal human lymphoblastoid cells (NHL) and human leukemia Jurkat T cells. Similar to the effects of Compound 2 and NOC15, NC15 alone does not have significant cytotoxicity on normal lymphoblasts but is toxic to human leukemia Jurkat T cells, the effect of which is dose-dependent Seemed to be. When cells were treated with NC15 for 24 hours, the number of viable cells decreased with increasing concentration of NC15 (FIG. 6A); similar results were observed when cells were treated for 48 hours (FIG. 6B).
５．２ 細胞周期分析
この実施例において、細胞周期分析に供する前に、Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞をＮＣ１５（２．５１３μＭ）で、２４時間又は４８時間処置し、又は処置しなかった。結果を図７に示す。
5.2 Cell cycle analysis In this example, Jurkat T cells were or were not treated with NC15 (2.513 μM) for 24 or 48 hours before being subjected to cell cycle analysis. The results are shown in FIG.
対照細胞のほとんどがＧ０／Ｇ１相にあり、ＮＣ１５で２４時間処置した後、ｓｕｂＧ１相における細胞のパーセンテージは、増加し始め（図７Ｂ）；４８時間の処置によって、ｓｕｂＧ１相における細胞集団は、かなりのレベルに達した（図７Ｃ）、一方で、Ｇ０／Ｇ１相における細胞数は、対照のものと比較して減少した（図７Ｄ）。 Most of the control cells are in the G0 / G1 phase, and after 24 hours treatment with NC15, the percentage of cells in the subG1 phase begins to increase (FIG. 7B); with 48 hours treatment, the cell population in the subG1 phase While the number of cells in the G0 / G1 phase decreased compared to that of the control (FIG. 7D).
５．３ ヒト白血病癌細胞株（Ｌ１２１０）が移植された動物においてＮＯＣ１５及び／又はＮＣ１５は腫瘍の大きさを縮小する
マウスにて、「材料及び方法」の節において説明した手順に従って、Ｌ１２１０腫瘍細胞を接種した。インビボ治療のため、動物に、腹腔内の経路により、少なくとも７日間、１８ｍｇ／ＫｇのＮＯＣ１５又はＮＣ１５を与えた。次いで、それぞれの動物の、腫瘍の大きさ、動物の体重、肝臓及び脾臓のそれぞれの重量、白血球数を同様に、指示された時間で、それぞれ測定した。結果を、それぞれ図８〜１１に示す。
5.3 NOC15 and / or NC15 reduce tumor size in animals transplanted with human leukemia cancer cell line (L1210) L1210 tumor cells in mice according to the procedure described in the “Materials and Methods” section Was inoculated. For in vivo treatment, animals were given 18 mg / Kg NOC15 or NC15 for at least 7 days by intraperitoneal route. Subsequently, the size of the tumor, the body weight of the animal, the weight of each of the liver and spleen, and the number of white blood cells of each animal were similarly measured at the indicated times. The results are shown in FIGS.
腫瘍を（Ａ）ＳＣ−又は（Ｂ）ＩＰ−接種した動物の生存率を縦軸に、ＮＯＣ１５及びＮＣ１５の効果を、図８に図示した。ＮＯＣ１５及びＮＣ１５の双方は、腫瘍をＳＣ−接種した動物の寿命において約４０％の増加、及び腫瘍をＩＰ−接種した動物において約１４〜１８％の増加で、うまく動物の寿命を延ばすことができた。ＮＯＣ１５又はＮＣ１５で処置した動物において、皮下注射腫瘍の重量における有意な減少を観察し（図９Ａ）、一方、腫瘍をＩＰ−接種した動物における肝臓及び脾臓のそれぞれの重量が、ＮＯＣ１５又はＮＣ１５で処置したとき、有意に改善した（図９Ｂ及び９Ｃ）。白血球（ＷＢＣ）数における有意な減少も、ＮＯＣ１５及びＮＣ１５処置した動物において、１４日目に観察した（図１０）。 The survival rate of (A) SC- or (B) IP-inoculated animals with tumors is plotted on the vertical axis, and the effects of NOC15 and NC15 are illustrated in FIG. Both NOC15 and NC15 can successfully extend the lifespan of animals with an increase of about 40% in the life of animals SC-inoculated with tumors and about 14-18% in animals IP-inoculated with tumors. It was. In animals treated with NOC15 or NC15, a significant decrease in the weight of the subcutaneously injected tumor was observed (FIG. 9A), while the weights of the liver and spleen in the IP-inoculated animals were treated with NOC15 or NC15, respectively. Significantly improved (Figures 9B and 9C). A significant decrease in white blood cell (WBC) counts was also observed on day 14 in NOC15 and NC15 treated animals (FIG. 10).
従来の化学療法における１つ主要な欠点は、もし、受容者が健康な体重を維持するのに失敗したなら、治療の効果を損なう体重減少に、受容者がしばしば苦しむことである。ここで図１１Ａを参照すると、ＮＯＣ１５又はＮＣ１５を摂取していない健康な正常な動物である対照のものと比較したとき、１８ｍｇ／Ｋｇの用量で与えられたＮＯＣ１５では、治療過程に従って、徐々に総体重を改善した；ところが、同じ用量で与えられたＮＣ１５では、最終的に動物の体重が対照と同様のレベルになった（図１１Ｂ）。そのデータは、ＮＣ１５では腫瘍成長を抑制することができ、さらに、一般に化学療法剤の使用に伴う従来の「体重減少」問題がない；このように、ＮＣ１５は優れた抗癌剤の候補になる。 One major drawback of conventional chemotherapy is that if the recipient fails to maintain a healthy weight, the recipient often suffers from weight loss that impairs the effectiveness of the treatment. Referring now to FIG. 11A, NOC15 given at a dose of 18 mg / Kg is gradually totalized according to the course of treatment when compared to that of a healthy normal animal that has not taken NOC15 or NC15. Body weight improved; however, NC15 given at the same dose eventually resulted in animal body weights similar to controls (FIG. 11B). The data shows that NC15 can suppress tumor growth and, moreover, is generally free of the traditional “weight loss” problem associated with the use of chemotherapeutic agents; thus, NC15 is a good candidate for an anticancer agent.
先に示したデータをまとめると、２つの新規に合成されたＮ−置換ノルカンタリミド誘導体が、それぞれ種々の癌細胞株に対する、細胞毒性の、抗増殖性の、及びアポトーシスの効果を有する；さらに、それらは正常なリンパ細胞に対して効果がほとんど又は全くなく、このようにそれらを次世代の抗癌剤に可能性のある候補にしていることを確証した。 In summary of the data presented above, two newly synthesized N-substituted norcantalimide derivatives have cytotoxic, antiproliferative and apoptotic effects, respectively, on various cancer cell lines; Confirmed little or no effect on normal lymphocytes, thus making them potential candidates for the next generation of anticancer agents.
本開示の種々の実施形態の前述の説明は、例証及び説明の目的で示されている。それは、網羅的であること、又は本開示を開示されたまさにその実施形態に限定することを示すものではない。前述の技術を考慮して、多くの変更又は変化は可能である。開示された実施形態は、本開示の原理の最良な例証、及びこれにより、種々の実施形態、及び企図する特定の用途に適するように種々の変更をした実施形態において、当業者が本開示を利用することを可能することの現実的応用を提供するために選ばれ、説明された。公平に、適法に、及び公正に権利が与えられた広さに従って解釈される際、全てのそのような変更及び変化は、特許請求の範囲によって決められる本開示の範囲内である。 The foregoing descriptions of various embodiments of the present disclosure have been presented for purposes of illustration and description. It is not intended to be exhaustive or to limit the present disclosure to the precise embodiments disclosed. Many modifications or variations are possible in view of the above techniques. The disclosed embodiments are provided by those of ordinary skill in the art to best illustrate the principles of the present disclosure, and thereby various embodiments and various modifications to suit the particular application contemplated. It was chosen and explained to provide a realistic application of being able to take advantage of. All such changes and modifications are within the scope of the present disclosure as determined by the following claims, when interpreted in a fair, lawful and fair manner.
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式（Ｉ）の化合物。
A compound of formula (I).
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20160816 |